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特表2023-534870バイオアベイラビリティを高めるためのカロテノイド製剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-14
(54)【発明の名称】バイオアベイラビリティを高めるためのカロテノイド製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/22 20060101AFI20230804BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20230804BHJP
A61K 9/127 20060101ALI20230804BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20230804BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20230804BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20230804BHJP
A61K 47/44 20170101ALI20230804BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20230804BHJP
【ＦＩ】
A61K31/22
A61P27/02
A61K9/127
A61K47/02
A61K47/24
A61K9/48
A61K47/44
A61K47/22
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023504665
(86)(22)【出願日】2021-07-20
(85)【翻訳文提出日】2023-03-23
(86)【国際出願番号】 IB2021056562
(87)【国際公開番号】W WO2022018642
(87)【国際公開日】2022-01-27
(31)【優先権主張番号】63/054,653
(32)【優先日】2020-07-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】17/377,092
(32)【優先日】2021-07-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】506138904
【氏名又は名称】インダストリアル オーガニカ エス．アー． デ サー．ヴェ．
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＤＵＳＴＲＩＡＬ ＯＲＧＡＮＩＣＡ Ｓ．Ａ． ＤＥ Ｃ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ａｖ． Ａｌｍａｚａｎ Ｎｏ． １００， Ｃｏｌ． Ｔｏｐｏ Ｃｈｉｃｏ ６４２６０， Ｍｏｎｔｅｒｒｅｙ， Ｎ．Ｌ． Ｍｅｘｉｃｏ
(74)【代理人】
【識別番号】110000176
【氏名又は名称】弁理士法人一色国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ノーラン，ジョン
(72)【発明者】
【氏名】プラド－カブレロ，アルフォンソ
(72)【発明者】
【氏名】グリーン，マリナ
(72)【発明者】
【氏名】トルレス キローガ，ホセ
(72)【発明者】
【氏名】トルレス ゴメス，カルロス
(72)【発明者】
【氏名】マルケス サンタクルス，ジャスミン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C076AA19
4C076AA56
4C076BB01
4C076CC10
4C076DD29
4C076DD59
4C076DD63
4C076EE53
4C076FF16
4C076FF34
4C076FF35
4C206AA01
4C206AA02
4C206DB04
4C206DB56
4C206KA01
4C206MA03
4C206MA05
4C206MA72
4C206NA05
4C206NA11
4C206ZA33
(57)【要約】
キサントフィルカロテノイドジアセテートと、遷移金属塩と、リン脂質と、を含む組成物が提供される。この組成物は、ミセルを含まず、エマルジョンでもない。この組成物を使用して、目の健康を助ける必要のある対象において目の健康を助ける方法も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
キサントフィルカロテノイドジアセテートと、遷移金属塩と、
リン脂質と、を含む組成物であって、
ミセルを含まず、エマルジョンではない、組成物。
【請求項2】
前記リン脂質は、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスホイノシチド、ホスホスフィンゴ脂質およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記キサントフィルカロテノイドジアセテートは、メソゼアキサンチンジアセテートを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテートまたはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項5】
（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、メソゼアキサンチン、それらのエステルおよびそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記組成物が対象に経口投与された後、前記対象の消化管内で、フリー体のキサントフィルカロテノイドを内包したミセルが形成されるように構成されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
抗酸化剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項8】
前記遷移金属塩は、酸化亜鉛、酸化第二銅、酸化第一銅またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
請求項１に記載の組成物を含む、ソフトゲルカプセル。
【請求項10】
良好な目の健康を助ける必要のある対象において良好な目の健康を助ける方法であって、安全で有効量のカロテノイド組成物を前記対象に投与することを含み、
前記カロテノイド組成物は、
キサントフィルカロテノイドジアセテートと、
遷移金属塩と、
リン脂質と、を含み、
前記カロテノイド組成物はミセルを含まず、
前記カロテノイド組成物はエマルジョンではなく、
フリー体のキサントフィルカロテノイドを内包したミセルが、前記対象の消化管内で、前記リン脂質から形成される、方法。
【請求項11】
前記対象は、黄斑色素が正常レベル未満であるか、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）を発症する危険性のあるヒトまたはヒト以外の哺乳動物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記キサントフィルカロテノイドジアセテートは、メソゼアキサンチンジアセテートであり、前記カロテノイド組成物は、約１％（ｗ／ｗ）以上約３０％（ｗ／ｗ）以下のメソゼアキサンチンジアセテートを含むゲルカプセルである、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
前記カロテノイド組成物はさらに、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインおよび（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンを含み、前記（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインおよび前記（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンは、ジアセテート体であってもよく、前記メソゼアキサンチンジアセテートおよび前記（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインは、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインの比を約１：１０～約１０：１として提供され、前記メソゼアキサンチンジアセテートおよび前記（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンは、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１：１～約２０：１として提供される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記カロテノイド組成物は、前記メソゼアキサンチンジアセテートと、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインと、前記（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンとを、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１０：１０：２として含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項15】
前記遷移金属塩は、亜鉛および銅のうちの少なくとも一方を含み、前記カロテノイド組成物はさらに、ヒマワリ種子油と、ビタミンＣおよびビタミンＥのうちの少なくとも一方と、を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項16】
対象におけるメソゼアキサンチンのバイオアベイラビリティを改善する方法であって、前記対象の消化管内で、メソゼアキサンチンジアセテートをフリー体のメソゼアキサンチンに変換し、
前記対象の前記消化管内で、フリー体の前記メソゼアキサンチンを内包したリン脂質の単層を含むミセルを形成することを含み、
フリー体の前記メソゼアキサンチンは、結晶形態で前記対象に投与された場合の対応するメソゼアキサンチンよりも多く前記対象の血流内で生物学的に利用可能なまま維持される、方法。
【請求項17】
前記対象の前記消化管内でミセルが形成されるのは、安全で有効量のカロテノイド組成物を前記対象に投与した結果であり、前記カロテノイド組成物は、前記リン脂質と、前記メソゼアキサンチンジアセテートと、遷移金属塩と、を含み、前記カロテノイド組成物は、投与されたときにエマルジョンではなく、ミセルを含んでいない、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記カロテノイド組成物は、グルテンを含まない、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記カロテノイド組成物はさらに、メソゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインまたはそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項20】
前記対象は、黄斑色素レベルを維持または改善することが望ましいヒトまたはヒト以外の哺乳動物である、請求項１６に記載の方法。
【請求項21】
前記対象は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）であるか、ＡＭＤを発症する危険性のあるヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項１６に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願へのクロスリファレンス
【0002】
本出願は、２０２１年７月１５日に出願された米国特許出願第１７／３７７，０９２号の優先権を主張し、かつ、２０２０年７月２１日に出願された米国特許仮出願第６３／０５４，６５３号の利益を主張するものである。上記出願の開示内容全体を本明細書に援用する。
【0003】
本開示は、カロテノイドのバイオアベイラビリティを高めることに関する。
【背景技術】
【0004】
背景技術では、必ずしも先行技術ではない、本開示に関連する背景情報を提供する。
【0005】
網膜は、光に敏感なニューロンを含む組織層である。網膜は目の奥にあり、そこで光が像を結ぶ。像は視神経によって脳に伝達され、脳で視覚的知覚が作り出される。
【0006】
網膜の中心には、錐体として知られる光受容体細胞が密集した領域である黄斑部がある。黄斑部は、中心視力、大半の色覚、細部まで細かく見えるようにする機能を支えている。
【0007】
黄斑部は、キサントフィルカロテノイドによって提供される黄色い色素を有する。キサントフィルカロテノイドとしては、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、メソゼアキサンチンがあげられる。この色素は青色光を吸収し、黄斑部を酸化傷害から保護する。この色素が破壊されたり劣化したりすると、酸化による黄斑部の損傷が大きくなり、中心部の鮮明な視力が損なわれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
黄斑変性症すなわち加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、黄斑部の変性を特徴とする慢性の進行性眼疾患であり、中心視力の低下につながる。この疾患は、北米などの社会で５０歳を超えた人々の後天性法的盲および視覚障害の主な原因となっている。色素は短波長の青色光をフィルタリングすることで黄斑部を保護し、抗酸化作用や光学特性を持つことから、キサントフィルカロテノイドを補給することでＡＭＤを治療することができる。黄斑部の色素を増やせば、ＡＭＤ患者や網膜の病変がない人の視機能が高まることが分かっている。しかしながら、キサントフィルカロテノイドの中には、高レベルで排泄されてしまい、血清中に吸収されて黄斑部まで運ばれる分がほとんど残らないものがある。したがって、キサントフィルカロテノイドのバイオアベイラビリティを高めることが望まれている。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本セクションは、本開示の一般的な概要を提供するものであり、本開示の全範囲またはその特徴のすべてを包括的に開示するものではない。
【0010】
様々な態様において、現在の技術は、キサントフィルカロテノイドジアセテートと、遷移金属塩と、リン脂質と、を含む組成物であって、ミセルを含まず、エマルジョンではない、組成物を提供する。
【0011】
一態様において、リン脂質は、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスホイノシチド、ホスホスフィンゴ脂質およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0012】
一態様において、キサントフィルカロテノイドジアセテートは、メソゼアキサンチンジアセテートを含む。
【0013】
一態様において、組成物は、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテートまたはそれらの組み合わせも含む。
【0014】
一態様において、組成物は、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、メソゼアキサンチン、それらのエステル、それらのジアセテートおよびそれらの組み合わせも含む。
【0015】
一態様において、組成物は、当該組成物が対象に経口投与された後、対象の消化管内で、フリー体のキサントフィルカロテノイドを内包したミセルが形成されるように構成されている。
【0016】
一態様において、組成物は、抗酸化剤も含む。
【0017】
一態様において、遷移金属塩は、酸化亜鉛、酸化第二銅、酸化第一銅またはそれらの組み合わせを含む。
【0018】
一態様において、組成物は、ソフトゲルカプセルで提供される。
【0019】
様々な態様において、現在の技術は、良好な目の健康を助ける必要のある対象において良好な目の健康を助ける方法であって、安全で有効量のカロテノイド組成物を対象に投与することを含み、カロテノイド組成物は、キサントフィルカロテノイドジアセテートと、遷移金属塩と、リン脂質と、を含み、カロテノイド組成物はミセルを含まず、組成物はエマルジョンではなく、フリー体のキサントフィルカロテノイドを内包したミセルが、対象の消化管内で、リン脂質から形成される、方法を提供する。
【0020】
一態様において、対象は、黄斑色素が正常レベル未満であるか、ＡＭＤを発症する危険性のあるヒトまたはヒト以外の哺乳動物である。
【0021】
一態様において、キサントフィルカロテノイドジアセテートは、メソゼアキサンチンジアセテートであり、カロテノイド組成物は、約１％（ｗ／ｗ）以上約３０％（ｗ／ｗ）以下のメソゼアキサンチンジアセテートを含むゲルカプセルである。
【0022】
一態様において、カロテノイド組成物はさらに、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインおよび（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンを含み、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインおよび（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンは、ジアセテート体であってもよく、メソゼアキサンチンジアセテートおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインは、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインの比を約１：１０～約１０：１として提供され、メソゼアキサンチンジアセテートおよび（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンは、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１：１～約２０：１として提供される。
【0023】
一態様において、カロテノイド組成物は、メソゼアキサンチンジアセテートと、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインと、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンとを、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１０：１０：２として含む。
【0024】
一態様において、遷移金属塩は、亜鉛および銅のうちの少なくとも一方を含み、カロテノイド組成物はさらに、ヒマワリ種子油と、ビタミンＣおよびビタミンＥのうちの少なくとも一方と、を含む。
【0025】
様々な態様において、現在の技術はさらに、対象におけるメソゼアキサンチンのバイオアベイラビリティを改善する方法であって、対象の消化管内で、メソゼアキサンチンジアセテートをフリー体のメソゼアキサンチンに変換し、対象の消化管内で、フリー体のメソゼアキサンチンを内包したリン脂質の単層を含むミセルを形成することを含み、フリー体のメソゼアキサンチンは、結晶形態で対象に投与された場合の対応するメソゼアキサンチンよりも多く対象の血流内で生物学的に利用可能なまま維持される、方法を提供する。
【0026】
一態様において、対象の消化管内でミセルが形成されるのは、安全で有効量のカロテノイド組成物を対象に投与した結果であり、カロテノイド組成物は、リン脂質と、メソゼアキサンチンジアセテートと、遷移金属塩と、を含み、カロテノイド組成物は、投与されたときにエマルジョンではなく、ミセルを含んでいない。
【0027】
一態様において、カロテノイド組成物は、グルテンを含まない。
【0028】
一態様において、カロテノイド組成物はさらに、メソゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインまたはそれらの組み合わせを含む。
【0029】
一態様において、対象は、黄斑色素レベルを維持または改善することが望ましいヒトまたは非ヒト哺乳動物である。
【0030】
一態様において、対象は、ＡＭＤであるか、ＡＭＤを発症する危険性のあるヒトまたは非ヒト哺乳動物である。
【0031】
さらに適用可能な領域が、本明細書で提供される説明から明らかになるであろう。課題を解決するための手段における説明と具体例は、説明のみを目的とし、本開示の範囲を限定することを意図したものではない。
【0032】
本明細書に記載の図面は、すべての可能な実施形態ではなく、選択された実施形態を例示することだけを目的とするものであり、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0033】
【図2】図２は、現在の技術の様々な態様による、エステル体の（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン（２Ａ）、フリー体の（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン（２Ｂ）、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート（２Ｃ）の構造を示す図である。
【図3】図３は、現在の技術の様々な態様による、エステル体の（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン（３Ａ）、フリー体の（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン（３Ｂ）、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテート（３Ｃ）の構造を示す図である。
【図5】図５は、栄養補助用サプリメント中のルテインジアセテート可溶化溶質および結晶化カロテノイドを示す。製剤には、マリーゴールドの花から得られる（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインが、ジアセテート誘導体の微結晶として含まれる。（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインは、脂肪酸とエステル結合した状態で花の中に存在する。このカロテノイドを抽出するには、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインを脱エステル化し、結晶化して精製する。この結晶を可溶化し、消化器系で吸収しやすくするために、結晶化時に（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインや他のヒドロキシカロテノイドを酢酸やプロピオン酸で再度エステル化して、花の脂質マトリックスに再懸濁させて界面活性剤を加え、周囲条件でカロテノイドの可溶性を維持することができる。図５では（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインを示したが、メソゼアキサンチンおよびゼアキサンチンでも同様の経路になる。
【図6】図６は、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン（Ｌ）、メソゼアキサンチン（ＭＺ）、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン（Ｚ）を割り当てられた被験者のスクリーニング、無作為化、フォローアップを示すフローチャートである。合計２名の参加者が、絶食状態で摂取した際の胃腸症状、膨満感、胃部不快感に関する有害事象のために介入を中止した。フォローアップがないのは、連絡が取れなくなったためである。
【図8】図８は、異なる製剤の血清濃度の変化に対する効果を示すグラフである（群１＝Ｌ１０ｍｇ＋ＭＺ１０ｍｇ＋Ｚ１０ｍｇ、群２＝Ｌ１０ｍｇ＋ＭＺ１０ｍｇ＋Ｚ１０ｍｇ分割投与、群３＝Ｌ１０ｍｇ＋ＭＺ１０ｍｇ＋オメガ、群４＝Ｌ１０ｍｇ＋ＭＺ１０ｍｇ＋Ｚ１０ｍｇジアセテート、群５＝プラセボ。（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン（Ｚ）血清濃度（図８Ａ）およびメソゼアキサンチン（ＭＺ）血清濃度（図８Ｂ）の変化の群間差を、ベースラインと６ヶ月の時点からの変化として表してある。群４のＺおよびＭＺの血清での応答が、他の積極的な介入およびプラセボと比較して有意に高かった（ｐ＜０．０００～ｐ＝０．０１９）。
【図9】図９は、０ヶ月～６ヶ月のあいだの黄斑色素光学密度（ＭＰＯＶ）の変化を示すグラフである。ＭＰＯＶの応答が、群５（プラセボ）と比較して、群１および４で有意に高く、ｐ＝０．００１～ｐ＝０．０３９であった。
【図10A】図１０Ａは、カロテノイド血清濃度の変化と組織の変化（応答）との関係を示すグラフであり、総カロテノイド血清濃度とカロテノイド皮膚スコア（ｒ＝０．５２８、ｐ＜０．００１）の線形回帰分析結果を示してある。介入は、以下の通りである。群１：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を１カプセルで提供。群２：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を２カプセルで提供。群３：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）をＤＨＡ（４３０ｍｇ）およびＥＰＡ（９０ｍｇ）中、２カプセルで提供。群４：Ｌジアセテート（１０ｍｇ）＋ＭＺジアセテート（１０ｍｇ）＋Ｚジアセテート（２ｍｇ）１カプセルまたは群５：プラセボ（ヒマワリ油）。
【発明を実施するための形態】
【0034】
本開示の内容を十分に示し、当業者にその範囲を完全に伝えるように、例示的な実施形態を提供する。本開示の実施形態についての十分な理解を提供するために、具体的な組成物、成分および方法の例など、多数の具体的な詳細を記載してある。具体的な詳細を採用しなくてもよいこと、例示的な実施形態を多くの異なる形態で実施し得ること、いずれも本開示の範囲を限定するように解釈されるべきではないことは、当業者には明らかであろう。いくつかの例示的な実施形態では、周知のプロセス、周知の装置構造および周知の技術についての詳細までは説明していない。
【0035】
本明細書で使用する用語は、特定の例示的な実施形態を説明する目的だけのものであり、限定することを意図するものではない。本明細書で使用する場合、単数形「a」、「an」および「the」は、文脈が明らかに複数形を含まないことを示していない限り、複数形も含むと意図される場合がある。「含む（comprises）」、「含む（comprising）」、「含む（including）」および「有する（having）」という表現は、包括的であるため、記載された特徴、要素、組成物、工程、整数、操作および／または成分の存在を規定するが、１つ以上の他の特徴、整数、工程、操作、要素、成分および／またはそれらの群の存在または付加を排除するものではない。オープンエンドの「含む（comprising）」という語は、本明細書に記載の様々な実施形態を説明し、権利を請求するのに用いられる非制限的な用語として理解されるべきであるが、態様によっては、この用語を、「～からなる（consisting of）」または「本質的に～からなる（consisting essentially of）」などの一層限定的かつ制限的な用語であると理解することができる。したがって、組成物、材料、成分、要素、特徴、整数、操作および／またはプロセスの工程を記載した所与の実施形態のいずれについても、本開示は、そのような記載された組成物、材料、成分、要素、特徴、整数、操作および／またはプロセスの工程からなる、または本質的にこれからなる実施形態も明確に含んでいる。「～からなる（consisting of）」の場合、別の実施形態では、追加の組成物、材料、成分、要素、特徴、整数、操作および／またはプロセスの工程を除外するのに対し、「本質的に～からなる（consisting essentially of）」の場合、基本的な特性および新規な特性に実質的に影響を及ぼす追加の組成物、材料、成分、要素、特徴、整数、操作および／またはプロセスの工程を実施形態から除外するが、基本的な特性および新規な特性に実質的に影響しない組成物、材料、成分、要素、特徴、整数、操作および／またはプロセスの工程は実施形態に含めることが可能である。
【0036】
本明細書に記載した方法の工程は、実行の順序を具体的に特定した場合を除いて、必ずしも説明または図示した特定の順序で実行する必要があると解釈されることはない。また、別途明記しない限り、追加の工程または代わりの工程を採用してもよいことも理解されよう。
【0037】
本明細書では、第１、第２、第３などの用語を使用して様々な工程、要素、成分、領域、層および／またはセクションを説明する場合があるが、これらの工程、要素、成分、領域、層および／またはセクションは、別途明記しない限り、これらの用語によって限定されるべきものではない。これらの用語は、ある工程、要素、成分、領域、層またはセクションを別の工程、要素、成分、領域、層またはセクションと区別するためにのみ使用される場合がある。本明細書で使用する場合、「第１」、「第２」および他の数値用語などは、文脈によって明確に示されない限り、順序または順番を意味しない。よって、後述する第１の工程、要素、成分、領域、層またはセクションを、例示的な実施形態の教示内容から逸脱することなく、第２の工程、要素、成分、領域、層またはセクションと称することができる。
【0038】
数値は、本開示全体を通して、所与の値からのわずかな誤差、言及した値とほぼ同じになる実施形態、言及した値そのものになる実施形態を包含するために、近似値または範囲の限界を表す。詳細な説明の最後にあげた実施例以外では、添付の特許請求の範囲を含む本明細書における（例えば、量または条件の）パラメータの数値はいずれも、数値の前に実際に「約」があるか否かを問わず、すべての場合において「約」という語によって修飾されているものと理解される。「約」は、記載された数値が若干の不正確さ（ちょうどの数値にある程度近い、ある数値におおよそ近いまたは適度に近い、ほぼ）を許容することを示す。「約」によって生じる不正確さが、この通常の意味では当技術分野で他に理解されない場合、本明細書で使用する「約」は、少なくとも、そのようなパラメータに対する通常の測定方法と使用方法で生じる可能性のある変動を示す。例えば、「約」には、５％以下、任意に４％以下、任意に３％以下、任意に２％以下、任意に１％以下、任意に０．５％以下、態様によっては任意に０．１％以下の変動が含まれていてもよい。
【0039】
さらに、範囲の開示は、当該範囲に対して与えられた端点とサブレンジをはじめとして、範囲全体のすべての値と、これらをさらに分割した範囲の開示を含む。本明細書で言及するように、特に明記しない限り、範囲は端点を含み、範囲全体のすべての異なる値およびこれらをさらに分割した範囲の開示を含む。したがって、例えば「ＡからＢまで」または「約Ａから約Ｂまで」の範囲は、ＡおよびＢを含む。
【0040】
次に、添付の図面を参照して、例示的な実施形態について、さらに十分に説明する。
【0041】
黄斑部のキサントフィルカロテノイドを補給することによって、目の健康を維持し、ＡＭＤの退行作用を遅らせたり最小にしたりすることができる。しかしながら、キサントフィルカロテノイドの補給による好ましい効果を十分に実現するためには、黄斑部に到達して色素を回復できるように、キサントフィルカロテノイドのバイオアベイラビリティが高くなければならない。よって、現在の技術は、既知のカロテノイド組成物に比べてキサントフィルカロテノイドのバイオアベイラビリティが改善されたカロテノイド組成物を提供する。
【0042】
キサントフィルカロテノイドは、マリーゴールドなどの様々な植物から得られる抽出物に含まれる。抽出時、キサントフィルカロテノイドは、エステル体である。図１Ａ、図２Ａおよび図３Ａは、それぞれ、キサントフィルカロテノイドのメソゼアキサンチンエステル、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンエステルおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインエステルを示し、Ｒはアルキル鎖である。現在の技術に従って、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンエステルおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインエステルを鹸化処理し、図２Ｂおよび図３Ｂにそれぞれ示すようなフリー体の構造にする。フリー体のメソゼアキサンチンは、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインの塩基触媒による異性化反応によって得られる。次に、フリー体のメソゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインをアセチル化し、図１Ｃ、図２Ｃおよび図３Ｃにそれぞれ示すようなメソゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテートおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテートを形成する。現在の技術は、これらのキサントフィルカロテノイドジアセテートのうちの少なくとも１つを含む組成物を提供する。この組成物は、リン脂質も含む。
【0043】
ある態様において、現在の技術は、キサントフィルカロテノイドジアセテートとリン脂質とを含むカロテノイド組成物を提供する。キサントフィルカロテノイドジアセテートは、メソゼアキサンチンジアセテート（図１Ｃ）、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート（図２Ｃ）、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテート（図３Ｃ）またはそれらの組み合わせを含む。ある態様において、キサントフィルカロテノイドは、メソゼアキサンチンジアセテートを含み、任意に、少なくとも１種類の他のキサントフィルカロテノイドをさらに含む。存在する場合、少なくとも１種類の他のキサントフィルカロテノイドは、非限定的な例として、メソゼアキサンチン、メソゼアキサンチンエステル、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンエステル、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン、（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインエステルまたはそれらの組み合わせであってもよい。組成物のキサントフィルカロテノイドの内容および／またはカロテノイドの内容は、メソゼアキサンチンジアセテートあるいは、メソゼアキサンチンジアセテートと本明細書で述べる他の例示的カロテノイドの任意の組み合わせから本質的になるものであってもよいし、これらからなるものであってもよいことが理解されよう。「本質的に～からなる（consists essentially of）」とは、キサントフィルカロテノイドをはじめとするカロテノイドを意図的に追加で組成物に含めることはないが、（カロテノイド組成物の総重量を基準にして）約５％（ｗ／ｗ）以下、約２．５％（ｗ／ｗ）以下または約１％（ｗ／ｗ）以下などの濃度で、追加のカロテノイドが意図せずして不純物として含まれる場合があることを意味する。キサントフィルカロテノイドを含むものとして本明細書に記載した例示的な組成物は、キサントフィルカロテノイドから本質的になる、またはキサントフィルカロテノイドからなる対応の組成物を含むことが理解される。
【0044】
様々な態様において、カロテノイド組成物は、メソゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインのうちの少なくとも１つを含み、メソゼアキサンチン、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインは、個々に独立して、塩基体、エステル体、ジアセテート体またはそれらの組み合わせであり、ただし、組成物は、メソゼアキサンチンジアセテート、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンジアセテートおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテートのうちの少なくとも１つを含む。存在する場合、（ジアセテート体、エステル体、ジアセテート体またはそれらの組み合わせでの）メソゼアキサンチンおよび（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインは、メソゼアキサンチン：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインの比を約１：１０～約１０：１として提供される。存在する場合、（ジアセテート体、エステル体、ジアセテート体またはそれらの組み合わせでの）メソゼアキサンチンおよび（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンは、メソゼアキサンチン：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１：１～約２０：１として提供される。非限定的な例として、カロテノイド組成物は、メソゼアキサンチンジアセテートと、（フリー体、エステル体および／またはジアセテート体での）（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインと、（フリー体、エステル体および／またはジアセテート体での）（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンとを、メソゼアキサンチンジアセテート：（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン：（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンの比を約１０：１０：２として含む。他の態様では、カロテノイド組成物中に存在する各キサントフィルカロテノイドは、個々に独立して、約１％（ｗ／ｗ）以上約３０％（ｗ／ｗ）以下の濃度で含まれる。
【0045】
カロテノイド組成物は、水を含まないか、実質的に含まない。ここで、「水を実質的に含まない」とは、エマルジョンを形成するには低すぎる濃度、例えば、（カロテノイド組成物の総重量を基準にして）約５％（ｗ／ｗ）以下または約２．５％（ｗ／ｗ）以下の濃度で水が含まれている場合もあることを意味する。このように、いくつかの態様では、カロテノイド組成物は、０％（ｗ／ｗ）、約０．００１％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）または約５％（ｗ／ｗ）の水を含むが、これは、湿度が原因で意図せずして含まれてしまう場合があるものである。したがって、いくつかの態様では、カロテノイド組成物はエマルジョンではなく、むしろ、顕著なすなわち観察可能な相の違いがない、均質または均一な組成物である。あるいは、カロテノイド組成物は、少なくとも部分的にリン脂質によって規定される脂質マトリックス中の非ミセル粒子の懸濁液であってもよい。
【0046】
ある態様において、カロテノイド組成物は、質量が約２５０ｍｇ以上から約７５０ｍｇ以下、例えば質量が約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇまたは約７５０ｍｇの錠剤またはカプセル（ゲルカプセルなど）の形態である。錠剤またはカプセルは、存在するキサントフィルカロテノイドジアセテートを各々約０．５ｍｇ以上から約２０ｍｇ以下の量で含む。非限定的な例では、錠剤またはカプセルは、メソゼアキサンチンジアセテート約１０ｍｇ、（塩基体、エステル体および／またはジアセテート体での）（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン約１０ｍｇおよび（塩基体、エステル体および／またはジアセテート体での）（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン約２ｍｇを含む。
【0047】
リン脂質は、約０．１％（ｗ／ｗ）以上から約１０％（ｗ／ｗ）以下、約０．１％（ｗ／ｗ）以上から約５％（ｗ／ｗ）以下または約０．１％（ｗ／ｗ）以上から約２．５％（ｗ／ｗ）以下の濃度でカロテノイド組成物に含まれる。リン脂質は、ミセルを形成することができる当技術分野で公知の任意の両親媒性リン脂質分子を含むことができる。そのような分子の非限定的な例として、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスホイノシチド、ホスホスフィンゴ脂質およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0048】
ホスファチジルコリンの非限定的な例としては、１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＤＰＣ）、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＯＰＣ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、卵－ＰＣ（ＥＰＣ）、水添卵ＰＣ（ＨＥＰＣ）、高純度水添大豆ＰＣ（ＨＳＰＣ）、水添大豆ＰＣ（ＨＳＰＣ）、１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ ３－ホスホコリン（牛乳由来スフィンゴミエリンＭＰＰＣ）、１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３-ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３-ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３-ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３-ホスホコリン（ＳＭＰＣ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、１－ステアロイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＰＰＣ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0049】
リゾホスファチジルコリンの非限定的な例としては、１－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬＹＳＯＰＣ ＭＹＲＩＳＴＩＣ）、１－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬＹＳＯＰＣ ＰＡＬＭＩＴＩＣ）、１－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬＹＬＳＯＰＣ ＳＴＥＡＲＩＣ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0050】
ホスファチジン酸の非限定的な例としては、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＥＰＡ－ＮＡ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＬＰＡ－ＮＡ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＭＰＡ－ＮＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＯＰＡ－ＮＡ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＰＰＡ－ＮＡ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＳＰＡ－ＮＡ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0051】
ホスファチジルエタノールアミンの非限定的な例としては、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0052】
ホスファチジルグリセロールの非限定的な例としては、１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＥＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＬＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（アンモニウム塩）（ＤＬＰＧ－ＮＨ４、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（アンモニウム塩）（ＤＭＰＧ－ＮＨ４）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム／アンモニウム塩）（ＤＭＰＧ－ＮＨ４／ＮＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＯＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＰＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（アンモニウム塩）（ＤＰＰＧ－ＮＨ４）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（ナトリウム塩）（ＤＳＰＧ－ＮＡ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール．．．）（アンモニウム塩）（ＤＳＰＧ－ＮＨ４）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）．．．］（ナトリウム塩）（ＰＯＰＧ－ＮＡ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0053】
ホスファチジルセリンの非限定的な例としては、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホセリン（ナトリウム塩）（ＤＬＰＳ－ＮＡ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホセリン（ナトリウム塩）（ＤＭＰＳ－ＮＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホセリン（ナトリウム塩）（ＤＯＰＳ－ＮＡ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホセリン（ナトリウム塩）（ＤＰＰＳ－ＮＡ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホセリン（ナトリウム塩）（ＤＳＰＳ－ＮＡ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0054】
ホスホイノシチドの非限定的な例としては、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトール ４－ホスフェート（ＰＩＰ４）、ホスファチジルイノシトール ５－ホスフェート（ＰＩＰ５）、ホスファチジルイノシトール ３，４－ビスホスフェート（ＰＩ（３，４）Ｐ２）、ホスファチジルイノシトール ３，５－ビスホスフェート（ＰＩ（３，５）Ｐ２）、ホスファチジルイノシトール ４，５－ビスホスフェート（ＰＩ（４，５）Ｐ２）、ホスファチジルイノシトール ３，４，５－トリホスフェート（ＰＩ（３，４，５）Ｐ３）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0055】
ホスホスフィンゴ脂質の非限定的な例としては、セラミドホスホリルコリン（スフィンゴミエリン）（ＳＰＨ）、セラミドホスホリルエタノールアミン（スフィンゴミエリン）（Ｃｅｒ－ＰＥ）、セラミドホスホリル脂質、セレブロシド、ガングリオシドおよびそれらの組み合わせがあげられる。
【0056】
組成物は、ミセルを含まないか、実質的に含まないか、キサントフィルカロテノイドジアセテート（複数のキサントフィルカロテノイドジアセテートが存在する場合は当該複数のキサントフィルカロテノイドジアセテート）を内包したミセルを含まないか、実質的に含まないかのいずれかである。「実質的に含まない」とは、低レベルのミセルが存在する可能性はあるが、組成物が意図的に添加されたミセルまたは意図的に形成されたミセルを含まないことを意味する。例えば、ミセルを実質的に含まない組成物は、（カロテノイド組成物の総重量を基準にして）約５％（ｗ／ｗ）以下のミセルを含んでもよい。
【0057】
しかしながら、本組成物は、消化管内で見られる、より詳細には胃および／または小腸で見られるような酸性条件下におかれたときに、キサントフィルカロテノイドジアセテートを内包したミセルを形成するように構成されている。これらの酸性条件としては、約３．５以下、約３以下または約２以下のｐＨを含む。ｐＨは、約１以上から約３．５以下または約２以上から約３以下のｐＨの範囲内であってもよい。例示的な酸性ｐＨは、約１、約１．５、約２、約２．５、約３および約３．５である。また、酸性条件として、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃および約４５℃などの温度をはじめとして、約３０℃以上から約４５℃以下の温度を含む。よって、組成物は、対象に経口投与された後、すなわち消費されるまたは飲み込まれた後に、キサントフィルカロテノイドジアセテートを内包し、任意に、塩基体、エステル体、ジアセテート体またはそれらの組み合わせの少なくとも１つの他のキサントフィルカロテノイドを内包したミセルが、対象の消化管内に形成されるように構成されている。消化管内で組成物から形成されるミセルは、平均直径が約１０ｎｍ以上から約５００ｎｍ以下、約２０ｎｍ以上から約２５０ｎｍ以下または約４０ｎｍ以上から約１００ｎｍ以下である。
【0058】
消化とミセル形成の過程を図４Ａに示す。キサントフィルカロテノイド組成物の経口投与後、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０と、キサントフィルカロテノイド組成物からのリン脂質１４を含む脂質滴１２とが、胃１６の中で放出されることが示されている。キサントフィルカロテノイドジアセテート１０は、コレステロールや脂肪酸などの他の親油性分子と一緒に大きな脂肪滴を形成する。図４Ｂに示すように、脂質滴１２中のキサントフィルカロテノイドジアセテート１０と水との混合物は、小腸の十二指腸１８に移動し、十二指腸でミセル２０が形成されて溶解（すなわち、分配または拡散）と吸収が行われる。十二指腸１８では、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０の少なくとも一部が膵臓リパーゼおよび膵臓カルボキシルエステルリパーゼ（ＣＥＬ）によって加水分解されてフリー体１１になり、一層効率的にミセル２０に取り込まれて輸送される。しかしながら、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０およびエステルがミセル２０に内包されていてもよい。また、親水性部分２４と疎水性部分２６とを含む胆汁酸２２がリン脂質１４と結合し、親油性分子（リン脂質１４、胆汁酸２２など）の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）に達したときにキサントフィルカロテノイドジアセテート１０とフリー体１１とを含むミセル２０を形成する。ここではリン脂質１４を１本の疎水性テールを持つものとして示してあるが、リン脂質は２本のテールを含み得ることが理解される。次に、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０を含むミセル２０の細胞への取り込み、すなわち吸収または資化（assimilation）が起こる。細胞への取り込みは、ＳＲＢ１受容体を介した受容体による（能動的な）輸送と受動輸送の両方で行われる。図４Ｃに示すように、ミセルがエンテロサイト２８に接触し、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０および／またはフリー体１１は、トランスポータータンパク質３０によってエンテロサイト２８に進入する。キサントフィルカロテノイドのフリー体１１はエンテロサイト２８によって取り込まれるが、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０およびエステルもエンテロサイト２８に拡散する。キサントフィルカロテノイドは、キサントフィルカロテノイドジアセテート１０およびフリー体１１を含めて、ゴルジ装置３２によって荷電され、カイロミクロン３４としてリンパ系に放出される。
【0059】
ある態様において、単一のミセルによって、単一のキサントフィルカロテノイドの複数の分子を内包するか、少なくとも１種類のキサントフィルカロテノイドがジアセテート体である少なくとも２種類のキサントフィルカロテノイドの複数の分子を内包することができる。よって、このカロテノイド組成物は、（カロテノイド組成物の総重量を基準にして）約５％（ｗ／ｗ）以上の濃度でキサントフィルカロテノイドとしてメソゼアキサンチンジアセテートを内包したミセルを含む組成物をはじめとして、キサントフィルカロテノイドジアセテートを内包したミセルを含む対応するカロテノイド組成物よりも改善されたバイオアベイラビリティを提供する。
【0060】
様々な態様において、組成物はさらに、約１％（ｗ／ｗ）以上から約１０％（ｗ／ｗ）以下の濃度で、少なくとも１種類の界面活性剤などの乳化安定化剤を含む。乳化安定化剤の非限定的な例として、アラビアガム、キサンタンガム、グアーガム、アルギン酸塩ペクチン、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０、ポリソルベート６５、ポリソルベート６０、ポリソルベート２０およびそれらの組み合わせであり、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）ポリソルベート８０、６５、６０および／または２０を含む）、オレイン酸、中鎖トリグリセリド、モノグリセリド、ジグリセリド、ポリリシノレイン酸ポリグリセロール、ジステアリン酸スクロース、ソルビタン（例えば、ステアリン酸ソルビタン、ラウリン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、オレイン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタンおよびそれらの組み合わせ）およびそれらの組み合わせがあげられる。
【0061】
様々な他の態様において、組成物は、任意に、抗酸化剤をさらに含む。抗酸化剤は、非限定的な例として、ビタミンＥ、ビタミンＣ、パルミチン酸アスコルビル、ローズマリー抽出物、クエン酸、アスコルビン酸、酒石酸、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ソルビン酸カリウムまたはそれらの組み合わせであってもよい。したがって、組成物は、少なくとも１種類の抗酸化剤を含むことができる。存在する場合、各抗酸化剤は、個々に独立して、約２０ｍｇ／ｋｇ以上から約２０ｇ／ｋｇ以下、約２０ｍｇ／ｋｇ以上から約１０ｇ／ｋｇ以下または約１０ＩＵ以上から約５００ＩＵ以下の濃度で含まれる。
【0062】
様々な他の態様において、組成物はさらに、非限定的な例として、亜鉛（Ｚｎ）、亜鉛イオン（例えば、Ｚｎ２＋）、銅（Ｃｕ）、銅イオン（例えば、Ｃｕ２＋、Ｃｕ３＋またはそれらの組み合わせ）、マンガンイオン、鉄イオンまたはそれらの組み合わせなどのアルカリ金属、アルカリ土類金属または遷移金属もしくは遷移金属イオンを含む。アルカリ金属は、リチウム（Ｌｉ、Ｌｉ＋）、ナトリウム（Ｎａ、Ｎａ＋）またはカリウム（Ｋ、Ｋ＋）のイオンまたは塩として提供すればよい。アルカリ土類金属は、マグネシウム（Ｍｇ、Ｍｇ２＋）またはカルシウム（Ｃａ、Ｃａ２＋）のイオンまたは塩として提供すればよい。遷移金属イオンは、例えば、非限定的な例として、酸化物、硫酸塩、塩化物、グルコン酸塩、ステアリン酸塩およびそれらの組み合わせを含む遷移金属塩として提供すればよい。例示的な遷移金属塩としては、酸化亜鉛、酸化第二銅、酸化第一銅、酸化鉄およびそれらの組み合わせがあげられる。よって、組成物は、少なくとも１種類の遷移金属塩を含むことができる。存在する場合、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩および／または遷移金属塩は、約２ｍｇ／ｋｇ以上から約２００ｍｇ／ｋｇ以下または約２０ｍｇ／ｋｇ以上から約１００ｍｇ／ｋｇ以下の個別かつ独立した濃度で、組成物中に存在する。
【0063】
また、カロテノイド組成物は、（カロテノイド組成物の総重量を基準にして）約５０％（ｗ／ｗ）以上から約９０％（ｗ／ｗ）以下の濃度でキャリアを含む。非限定的な例として、キャリアは、植物抽出物（例えば、非限定的な例として、ヒマワリ油、大豆油、キャノーラ油、コーン油、サフラワー油、オリーブ油、シトラス油またはそれらの組み合わせなど）、植物油、鉱物油、動物油（魚油など）またはそれらの組み合わせを含むことができる。他のキャリアとしては、グリセリン、ゼラチン（例えば、牛肉および／または豚肉のゼラチン）、蜜蝋および脂肪酸があげられる。ある態様において、カロテノイド組成物は、グルテンを実質的に含まない。
【0064】
ジアセテートの製造方法は、米国特許第５，９５９，１３８号に記載されており、そその内容全体を本明細書に援用する。
【0065】
また、本技術は、良好な目の健康を助ける必要のある対象において良好な目の健康を助ける方法を提供する。本明細書で使用する場合、良好な目の健康を助けることは、黄斑部のカロテノイドを補給すること、対象において低下した（例えば、正常レベル未満の）カロテノイドレベルを回復することおよび／または対象において黄斑色素（正常レベル未満の黄斑色素など）を回復させることを含む。このように、本方法は、ＡＭＤを治療する、ＡＭＤの進行を遅らせる、あるいは、ＡＭＤまたは他の黄斑関連疾患にかかる機会を最小限に抑える（またはＡＭＤまたは他の黄斑関連疾患を予防する）ものである。対象は、ＡＭＤを有するか、ＡＭＤを有する危険性のあるヒトまたは非ヒト哺乳動物とすることができる。ある態様において、組成物は、対象における視力を維持し、助け、あるいは高める。
【0066】
本方法は、安全で治療有効量の本明細書に記載のカロテノイド組成物を対象に投与することを含む。本明細書で使用する場合、「治療有効量」という語は、ＡＭＤのある対象、ＡＭＤを有する危険性がある対象または黄斑部の健康を助けることを望む対象に投与した場合、単独でまたは追加の治療と組み合わせて、ＡＭＤを治療するか、そうでなければ少なくとも１種類のカロテノイドを、助けになるレベルで黄斑部に提供するのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、例えば、化合物、医薬組成物または医薬剤形、治療対象となる状態とその重症度、治療対象となる患者の年齢および体重などに応じて変動することになる。様々な態様において、治療有効量の組成物は、含有されるカロテノイドごとに約０．５ｍｇ以上から約２５ｍｇ以下の用量を提供する。
【0067】
また、現在の技術は、非限定的な例として、対象におけるメソゼアキサンチンなどのキサントフィルカロテノイドのバイオアベイラビリティを改善する方法を提供するものである。対象は、良好な目の健康を助けることを望むヒトまたは非ヒト哺乳動物の対象、ＡＭＤのある対象、ＡＭＤを有する危険性がある対象または別の黄斑関連状態があるか、別の黄斑関連状態を有する危険性がある対象であってもよい。
【0068】
本方法は、対象の消化管内で、キサントフィルカロテノイドジアセテートをフリー体のキサントフィルカロテノイドに変換し、対象の消化管内（例えば、胃および／または小腸によって提供される酸環境内）で、フリー体のキサントフィルカロテノイドを内包したリン脂質の単層を含むミセルを形成することを含む。消化管内でキサントフィルカロテノイドを含むミセルを形成することにより、キサントフィルカロテノイドが対象の消化管内でミセルに被包されていない場合に生物学的に利用可能であろう量よりも、一層多くのキサントフィルカロテノイドが対象の血流内で生物学的に利用可能である。このように、投与されたキサントフィルカロテノイドのうち、より多くが、結晶の形態で投与された場合に利用可能であるよりも、対象の黄斑部で利用可能な状態に保たれる。
【0069】
対象の消化管内でミセルが形成されるのは、上述したように安全で有効量のカロテノイド組成物を対象に投与した結果である。よって、カロテノイド組成物は、本明細書に記載されるどのカロテノイド組成物であってもよい。
【実施例】
【0070】
本技術の実施形態を、以下の非限定的な例を通してさらに説明する。
実施例１
実施例１
【0071】
（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン（Ｌ）、（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチン（Ｚ）、およびメソゼアキサンチン（ＭＺ）は、人間の健康における用途の点で研究と商業的関心の的になっている。これらの物質のバイオアベイラビリティを向上させるための製剤に関する研究が必要とされている。８１名の健康なボランティアが関与した６ヶ月間の無作為化プラセボ対照試験では、ヒマワリ油またはオメガ－３油中のＬ結晶、Ｚ結晶およびＭＺ結晶と、マイクロミセル前駆体製剤中のＬジアセテート、ＺジアセテートおよびＭＺジアセテート（Ｌｄ、ＺｄおよびＭＺｄ）の５種類の製剤のバイオアベイラビリティを比較した。ここで、「マイクロミセル前駆体」という用語には、対象の消化管内でフリー体のキサントフィルカロテノイドを含むミセルを形成する製剤の能力が反映されている。ベースラインと６ヶ月間の空腹時血清カロテノイド、黄斑色素、皮膚のカロテノイドスコアを分析した。プラセボと比較して、すべての積極的な介入で血清中のＬ、Ｚ、ＭＺ濃度が増加した（ｐ＜０．００１～ｐ＝０．００８）。ジアセテートマイクロミセル前駆体製剤では、他の積極的な介入と比較して、ＺとＭＺの血清濃度の平均応答が有意に大きかった（ｐ＝０．００２～０．０１９）。可溶化したＺジアセテートとＭＺジアセテートを含むマイクロミセル前駆体製剤は、従来のカロテノイド製剤と比較して、これらのカロテノイドのバイオアベイラビリティを向上させる技術の進歩である。
緒言
緒言
【0072】
Ｌ、ＺおよびＭＺは、ヒトの黄斑に極めて多く沈着するキサントフィルカロテノイド（ＸＣ）であり、黄斑色素（ＭＰ）として知られている。ＬとＺは食餌だけから摂取される。ＭＺは網膜色素上皮におけるＬの内因性変換によって得られるが、食餌にも微量に含まれている場合がある。過去２０年にわたって、人間の健康におけるＬ、Ｚ、ＭＺの役割が、栄養補助用サプリメントを使用して、介入試験によって研究されてきた。報告によれば、これらのカロテノイドが視覚特性や認知機能を高め、非進行性ＡＭＤなどの網膜病変の予防薬や治療薬となる可能性があることが確認されている。
【0073】
栄養補助用サプリメントに用いられるＬは、マリーゴールドの花（Tagetes erecta L．）から抽出されるのに対し、Ｚは、この花とコショウ属やナス科トウガラシ属の特定の品種から得られる。ＭＺは、Ｌのε環をβ環にする二重結合の移動を促進する過程を経て、Ｌから得られる。いずれの場合も、最終的な精製工程でＸＣの微結晶を形成し、それをさらに加工して可溶化ＸＣを作る。（図５）。栄養補助食品企業は、これらの微結晶を酸化から保護し、水性マトリックスへの溶解性を向上させ、消化器系でのバイオアベイラビリティを高めるための新たな方法を開発しようとしつづけている。ＸＣ微結晶を保護する最も一般的な方法には、食用油への分散やバイオポリマーによるカプセル化がある。バイオアベイラビリティと異なるマトリックスへの溶解性とを高めるために、研究者らは、様々な方法でＸＣを乳化状態にする。しかしながら、どの方法でも、微結晶を完全に溶解させることはできなかった。最近になって、短い有機酸を用いてＸＣをエステル化する新たな方法が、環境条件下の温度と圧力で、微結晶を形成することなくＸＣを可溶化状態に保つとの主張がなされた。このプロセスでは、酢酸またはプロピオン酸でＸＣをエステル化し、Ｌ、Ｚ、ＭＺのジアセテート（それぞれＬｄ、Ｚｄ、ＭＺｄ）を形成する。この反応がなされた後、ＸＣを可溶性のまま保つために、脂質、リン脂質、脂肪酸および乳化剤の存在下で、元の自然のままの花のマトリックス中でＸＣ誘導体を均質化する。消化器系では、この可溶性の状態であれば、界面活性剤として知られる両親媒性化合物の存在下で、脂質分子の球状凝集体であるマイクロミセルにＸＣが取り込まれやすくなる。この製剤では、過去に臨床試験が行われ、結晶化製剤（フリーＬ）と比較されている。
【0074】
本実施例は、マイクロミセル前駆体製剤中のＬｄ、ＺｄおよびＭＺｄのバイオアベイラビリティを、遊離カロテノイドを油中に懸濁した微結晶として含む従来の製剤と比較するために実施したカロテノイド－オメガアベイラビリティ研究（ＣＯＡＳＴ）による知見を示すものである。
材料および方法
材料および方法
【0075】
設計と被験者
【0076】
ＣＯＡＳＴは、１８歳から６５歳の健康な参加者８１名が関与した、６ヶ月間の二重盲検ブロック無作為化プラセボ対照試験であった。参加者の募集と評価を２０１７年１２月に開始し、２０１８年１２月に終了した。この募集は、ウォーターフォード工科大学（Waterford Institute of Technology）、地元のフィットネスセンター、さらにはアイルランドのウォーターフォードに拠点をおく産業の従業員による地元メディアと広告を通じて行われた。重症または急性疾患の医学的診断を受けている参加者および／またはＬ、Ｚ、ＭＺまたはオメガ３脂肪酸を含む栄養補助用サプリメントを摂取している参加者は除外した。この試験に登録した参加者は、全員が開始前に書面によるインフォームドコンセントを行った。試験プロトコールには、２０１７年５月に、ウォーターフォード工科大学（アイルランドのウォーターフォード）およびＨＳＥ、南東地域（アイルランドのウォーターフォードにある大学病院ウォーターフォード（University Hospital Waterford））の研究倫理委員会（Research Ethics Committees）による承認を受けた。栄養補助用サプリメントの製造業者であるIndustrial Organica, S.A. de C.V.は、試験の設計、データの収集と分析、原稿の作成に一切関与していない。データの正確さと、試験がプロトコールを遵守していることを、全員が保証する。
【0077】
介入
【0078】
ＣＯＡＳＴは５群の介入試験であり、参加者を等確率で男女別々に４つの積極的介入群の１つまたはプラセボ群のいずれかに無作為に割り当てた。介入に用いたサプリメントに含まれる栄養成分のラベル表示は、群１：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を１カプセル、群２：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を２カプセル、群３：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）をＤＨＡ（４３０ｍｇ）およびＥＰＡ（９０ｍｇ）中で２カプセル、群４：Ｌｄ（１０ｍｇ）＋ＭＺｄ（１０ｍｇ）＋Ｚｄ（２ｍｇ）をマイクロミセル前駆体製剤で１カプセルまたは群５：プラセボ（ヒマワリ油）であった。なお、研究所で行った群ごとのサプリメントの分析では、カロテノイドの濃度がラベルの表示とわずかに異なることが示された（表１参照）。分析で得られた濃度とラベルに表示された濃度とを比較するために実施した統計解析では、有意な差異は認められなかった。したがって、製剤の用量についてはラベル表示の記載に従うことにした。Ｌ、ＺおよびＭＺは、ミセル化用に調製した可溶化溶質中のＬ、ＺおよびＭＺのジアセテートとして提供した群４以外、いずれもヒマワリ油懸濁液中のフリー体で提供した。群３のＬ、ＺおよびＭＺを、Epax社（ノルウェーのオーレスン；製品番号：ＥＰＡＸ１０５０ＴＧ）から供与されたＤＨＡおよびＥＰＡに溶解した。ビタミンＥ（酢酸ＤＬ－α－トコフェロール；５ｇ／ｋｇ）を保存料として添加した。サプリメントを密閉容器に入れて参加者に提供し、すべての介入群のカプセルの見た目は同一であった。被験者には、介入群に応じて１日１カプセルまたは２カプセルを食事と一緒に摂取するように指示した。サプリメントはIndustrial Organica（メキシコのモンテレイ）から試験用に無償で供与された。
【0079】
【表1】
【0080】
試験の評価
【0081】
人口統計、生活様式、医療および食事の評価。標準化された症例報告書を使用して、ベースラインと補給後６ヶ月の２つの時点における人口統計、生活様式、病歴および身体計測結果を記録した。喫煙については、喫煙状態に応じて、過去に１００本より多く吸ったことがない場合は「なし」、過去１年間に１００本より多く吸っていたが前月には吸わなかった場合は「以前」、そうでなければ「現在」として記録した。学歴には、高校以下、学士号または大学院のいずれかを記録した。身体検査では、身長と体重を測定し、ボディマス指数（ＢＭＩ、ｋｇ／ｍ２）を求めた。標準、過体重および肥満の国際的なカットオフ値を使用した。
【0082】
アウトカム測定。血清濃度および組織濃度の応答としてのＬ、ＺおよびＭＺのバイオアベイラビリティについての測定結果が、試験の主なアウトカムであった。血清カロテノイド濃度については、血清中の各カロテノイドの総濃度（μｍｏｌ／Ｌ）として分析した。カロテノイドの総濃度は、Ｌの濃度と、Ｚの濃度と、ＭＺの濃度とを合計して求めた。Ｌ、ＺおよびＭＺの組織濃度は、ＭＰと皮膚のカロテノイドスコアの合成値として測定した。すべての方法を以下に述べる。ベースラインと６ヵ月後の時点で、アウトカムの可変量を記録した。
【0083】
ＭＰの測定。Spectralis治験用ＭＰ光学密度（ＭＰＯＤ）モジュール（ドイツのハイデルベルグのHeidelberg Engineering GmbH）を用いて、二波長ＡＦでＭＰを測定した。技術および画像取得に関する仕様と詳細については、過去に説明がなされている。簡単に述べると、ＭＰ測定の前に瞳孔を広げ、患者の詳細をHeidelberg Eye Explorer（HEYEXバージョン１．７．１．０）ソフトウェアに入力した。まず、近赤外反射モードで、アライメント、フォーカス、カメラの感度を最適化した。次に、ＢＡＦ＋ＧＡＦ（青と緑の同時ＡＦ）動画を取得した。一方、HEYEXソフトウェアでは、ＭＰ密度マップを作成するために、これらの画像の適切なアライメントと平均化とを保証した。基準とする離心角を、定点からの網膜離心角７°（ここでＭＰＯＤはゼロと定義）に定めた。ＭＰの測定値は、すでに標準化されているように、ＭＰＯＶで報告される。
【0084】
皮膚のカロテノイド濃度。ラマン分光技術を使用する非侵襲的機器であるNu Skin Pharmanex S3スキャナーを使用して、皮膚中の総カロテノイド濃度を得た。この技術では、Pharmanex BioPhotonic Scanner装置を使用して、右手の小指の真下にある最大（maximal）手掌皮線と遠位手掌皮線の間の皮膚のカロテノイド濃度を測定することにより、皮膚のカロテノイドスコア（ＳＣＳ）を生成する。
【0085】
カロテノイドの血清濃度。ＸＣ血清分析のために、０ヶ月目、３ヶ月目および６ヶ月目に、絶食（９時間よりも長く一晩絶食）血液試料を採取した。血液試料は、標準的な静脈穿刺技術によって、「Z Serum Sep Clot Activator」の入った９ｍＬの採血管（BD Vacutainer SST血清分離用チューブ）に採取した。採血管の血栓溶解剤（clot activator）を十分に混合した。血液試料を室温で３０分間放置して凝固させた後、GruppeGC12遠心機（Desaga Sarstedt）にて７２５ｇで１０分間遠心処理し、血清を全血から分離した。遠心処理後、血清を耐光性マイクロチューブに移し、バッチ分析を行うときまで約－８０℃で保存した。血清のカロテノイド分析は、過去に説明がなされている方法を用いて、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）で実施した。使用した検量線、定量下限値および定量上限値（それぞれＬＬＯＱおよびＵＬＯＱ）は、過去に実施されているものと同様である。１６の独立したバッチで血清カロテノイド分析を完了したところ、最大日内精度は７．２８％（ＲＳＤとして測定）、日間精度は３．１６％（ＲＳＤ）であった。
【0086】
本試験で使用したサプリメントのカロテノイド含有量を、既知のプロトコールに沿って分析した。ジアセテートカロテノイドを含む製剤のカロテノイド含有量については、ヘキサン：イソプロパノールの比が９９：１（ｖ／ｖ）になるように移動相を調整する必要がある。
【0087】
フォローアップおよびアドヒアランス
【0088】
ベースラインの３ヶ月後の時点と、６ヶ月の時点（端点）に、フォローアップ試験のための訪問が計画された。治療計画に対するアドヒアランスを、各訪問時の錠剤数と３ヶ月の時点での血清分析によって評価した。それぞれの訪問時に、生活習慣や健康状態の変化ならびに有害事象に関する情報を収集した。有害事象の収集は、未検証の質問票によって実施した。
【0089】
統計解析
【0090】
データについては、量的な可変量には平均（±ＳＤ）、中央値、最小値、最大値を、質的な可変量には頻度と百分率を、通常の統計を用いて記述した。ベースライン時点での群間差については、量的な可変量には分散分析またはクラスカルウォリス検定を適宜使用して、質的な可変量にはカイ二乗検定を用いて分析した。ベースライン時のＢＭＩに群間で有意差が認められ、ANCOVAを用いてこれをさらにコントロールした。しかしながら、これらのモデルにおけるＢＭＩは、どのアウトカムの可変量にも有意に関連してはいなかったため、後にそれぞれのモデルから削除した。よって、以下に報告する結果はいずれも、アウトカムの可変量の変化を介入だけに関連させた、より単純なモデルに対するものである。
【0091】
主なアウトカムの可変量の変化（カロテノイド血清濃度、ＭＰＯＶ、皮膚カロテノイドスコアそれぞれの変化）を分析するために、一般線形モデルを使用した。これらの変化を、ベースラインおよび６ヶ月からのアウトカムの可変量の差として分析した。ここで、（ａ）積極的介入群（無関係な治療）はいずれも、プラセボ群と比較して、６ヵ月後の血清濃度および組織濃度の平均応答が増すであろうこと、（ｂ）ジアセテートマイクロミセル前駆体製剤は、他の積極的介入と比較して、平均応答が大きくなるであろうという仮説を立てた。これらの仮説のうち、１つ目はフィットさせた線形モデルから直接調べ、２番目は、両側独立標本Ｔ検定に基づく一対の比較によって調べた。多重比較の調整は、いずれも適切ではないと判断した。カロテノイド濃度の血清中の変化と組織中の変化との間の関係を調べるために、ピアソン係数を使用した。統計パッケージIBM SPSSバージョン２５（ニューヨーク州アーモンク）を使用し、５％の有意水準を全体に適用した。
結果
結果
【0092】
ベースラインの時点で合計８１名の参加者が登録され、６ヶ月目に６８名（８４％）の参加者が最終評価を完了した。９名（１１％）の参加者がフォローアップを受けず、４名（５％）の参加者が試験を中止した。このうち１名は妊娠、２名は軽度の有害事象、１名は一般開業医の依頼による中止であった（図６参照）。６ヶ月間の試験を通して報告された有害事象はいずれも、腹部膨満感、酸逆流、不快感などの軽度の胃腸症状に関連するものであった。積極的な介入とプラセボとの間に統計的な差異は認められなかった（ｐ＞０．０５）。プラセボ群に割り当てられた１名の参加者は、試験期間中にカロテノイドの補給を報告しており、６ヵ月目の時点で血清中に高濃度のＭＺが検出されたことから、分析対象外とした。
【0093】
ベースラインデータ
【0094】
参加者の平均（範囲）年齢は４４．２歳（２５～６２歳）であり、５０％（ｎ＝４０）が女性であった。ベースラインの特徴は、ＢＭＩ（ｐ＝０．００８）を除いて５つの群で統計的に同等であり、ＢＭＩは群２と群５では正常範囲内であったが、群１、群３、群４では高かった（表２参照）。
【0095】
試験栄養素のベースライン血清および組織レベルは、表２に示すように、治療群間でバランスが取れていた。参加者全員、ＭＺ濃度がベースラインで検出されなかった。このことから、ＭＺ補給の除外基準が確認される。
【0096】
【表2】
【0097】
Ｌ、Ｚ、ＭＺの血清濃度
【0098】
すべての積極的な群におけるＬ、ＺおよびＭＺの血清濃度の増加は、群２（ｐ＝０．３６６）を除いて、プラセボと比較して統計的に有意であった（ｐ＜０．００１からｐ＝０．００８）（表３）。０ヶ月目と６ヶ月目のＬ、Ｚ、ＭＺの血清濃度を示すグラフを、それぞれ図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃに示す。また、群４（ジアセテートマイクロミセル前駆体製剤）のＺおよびＭＺの血清濃度の増加は、他の３つの積極的な群と比較して有意に大きかった（ｐ＝０．００２～０．０１９）。データを表４に示し、群のＺとＭＺの血清濃度を比較した棒グラフを、それぞれ図８Ａおよび図８Ｂに示す。
【0099】
【表3】
Ｌは（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテイン血清濃度、μｍｏｌ／Ｌ）を示し、Ｚはゼアキサンチン血清濃度、μｍｏｌ／Ｌ）を示し、ＭＺはメソゼアキサンチン血清濃度、μｍｏｌ／Ｌ）；ＭＰＯＶは黄斑色素光学密度、Skinは皮膚カロテノイドスコアを示す。
２ 各介入群とプラセボのベースラインからの変化を比較する群間差については、独立標本ｔ検定を用いて解析した。変化をベースラインからの差として求めた。
介入は、以下のとおりとした。群１：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を１カプセル、群２：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を２カプセル、群３：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）をＤＨＡ（４３０ｍｇ）およびＥＰＡ（９０ｍｇ）中で２カプセル、群４：Ｌｄ（１０ｍｇ）＋ＭＺｄ（１０ｍｇ）＋Ｚｄ（２ｍｇ）を１カプセルまたは群５：プラセボ（ヒマワリ油）。
【0100】
【表4】
略語：Ｌはルテイン（Ｌ血清濃度、μｍｏｌ／Ｌを示す）、Ｚはゼアキサンチン（Ｚ血清濃度、μｍｏｌ／Ｌを示す）、ＭＺはメソゼアキサンチン（ＭＺ血清濃度、μｍｏｌ／Ｌを示す）、ＭＰＯＶは黄斑色素光学密度、Skinは皮膚カロテノイドスコアを示す。
群間差は、独立標本ｔ検定を用いて、群４と他の３つの積極的な群との比較により分析した。介入は、以下のとおりとした。群１：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を１カプセル、群２：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）を２カプセル、群３：Ｌ（１０ｍｇ）＋ＭＺ（１０ｍｇ）＋Ｚ（２ｍｇ）をＤＨＡ（４３０ｍｇ）およびＥＰＡ（９０ｍｇ）中で２カプセル、群４：Ｌｄ（１０ｍｇ）＋ＭＺｄ（１０ｍｇ）＋Ｚｄ（２ｍｇ）を１カプセルまたは群５：プラセボ（ヒマワリ油）。
【0101】
Ｌ、Ｚ、ＭＺの組織濃度
【0102】
ＭＰおよびＭＰＯＶ。全群におけるＭＰＯＶの増加は、プラセボと比較して統計的に有意であった（表３参照）。ＭＰＯＶの経時変化を示すグラフを図９に示す。興味深いことに、総血清カロテノイドの変化とＭＰＯＶとの相関は、ｒ＝０．４０８、ｐ＝０．００１であった（図１０Ａおよび図１０Ｂを参照のこと）。ＭＰＯＶの改善を比較すると、４つの積極的介入群間に有意差はなかった。
【0103】
カロテノイド皮膚濃度。皮膚カロテノイド濃度の変化は、血清濃度の総変化量と正の相関があった（ｒ＝０．５２８、ｐ＜０．００１）（図４）。皮膚カロテノイド濃度の変化は、プラセボと比較して、群１と群４のみ統計的に有意であった（それぞれｐ＝０．０２４、ｐ＝０．０１２）（表３参照）。また、群４における皮膚カロテノイドスコアの増加は、群２と比較して有意に大きかった（ｐ＝０．０３４）（表４参照）。群１～５における皮膚カロテノイド濃度の経時変化を示すグラフを図１１に示す。
考察
考察
【0104】
この多群無作為化臨床試験において、異なる製剤を用いたＬ、ＺおよびＭＺの組み合わせによる毎日の補給は、プラセボと比較して、これらの栄養素の血清濃度を有意に増加させた。６ヶ月の補給後、Ｌの血清濃度の中央値は２０２％、Ｚの血清濃度の中央値は３６％増加した。この用量応答効果は、サプリメントで提供したＬとＺの比（すなわち、約５：１）と整合している。また、ＭＺの血清濃度は、ベースラインから有意に増加した。血清でのこれらの増加率は、類似のカロテノイド製剤と量を使用した以前の試験と同等であった。例えば、ＬはＡＲＥＤＳ ２試験で２００％、ＣＲＥＳＴ ＡＭＤ試験で３０４％増加した。
【0105】
ジアセテートマイクロミセル前駆体製剤が摂取されたカロテノイドの吸収に与える影響は、注目に値する。本試験では、ＺｄおよびＭＺｄ（群４、事前に可溶化したアセテートエステル化ＸＣ）に対する血清の応答が、遊離カロテノイドを結晶として含む製剤と比較して著しく大きかった。しかしながら、Ｌｄに対する血清応答が遊離Ｌの場合と同程度にとどまったことは印象的であった。これは、以前の臨床試験で、Ｌｄに対する血清応答が遊離Ｌを補給した群と比較してわずかに高く、統計的な差異はないと報告されたことと一致している。
【0106】
補給の６ヶ月後、組織における平均ＭＰＯＶは、プラセボと比較して、すべての介入について平均３３％有意に増加したが、積極的な介入間の経時的な改善には、（すべての介入においてＭＰＯＶが改善したため）有意差はなかった（表３参照）。しかしながら、群２、群３、群４でＭＰＯＶの最大の増加が見られ、群１のＭＰＯＶの増加と比較するとほぼ２倍であった点に留意すべきである。それにもかかわらず、製剤中のカロテノイド量が最も少ない群４（表１参照）が最大の応答を示した（表３参照）。ＭＰＯＶの応答と機能的利点の観点から、これらの介入間の長期的な差異を評価するには、より長期間にわたる補給が必要である。皮膚カロテノイドスコアに関しては、プラセボと比較して統計的に有意な改善は、群２と群４だけで見られた。しかしながら、群４のほうが群２より有意に優れていた（表４参照）。この知見は、マイクロミセル前駆体製剤でＺｄとＭＺｄのバイオアベイラビリティが高まったことに起因する可能性が高い。
【0107】
上述したように、これらの結果は、Ｌｄを補給した対象の血清中のＬが、遊離Ｌの場合と比較して大きいが、有意ではない増加を示した以前の報告と一致する。ＭＰＯＤの改善という点で、遊離Ｌの補給と比較した場合のＬｄの有意で優れた応答が報告されている。この試験では、有意な増加を推進したのが高齢の対象であったことが示唆されている。なお、本試験の対象の平均年齢は４４歳であった。興味深いことに、ジアセテートカロテノイドのバイオアベイラビリティを研究するための雌鶏での試験では、本試験と同様の結果になった。簡単に言うと、ＺｄおよびＭＺｄは、これらのカロテノイドのフリー体を補給する場合と比較して、卵黄中のＺおよびＭＺの沈着を増加させる能力が大きかった。上記で提供したように、Ｌｄによって達成された増加は、遊離Ｌで観察された増加と同様であった。
【0108】
この試験において、ＸＣ濃度の経時的な増加は、すべての群で血清および組織において有意に相関した（それぞれ、ｒ＝０．４０８、ｐ＝０．００１およびｒ＝０．５２８、ｐ＜０．００１）。なお、過去の介入試験では、血清カロテノイドの変化はＭＰの変化との相関が低く、血液／網膜の非奏功者にも見られたため、これは重要な結果である。したがって、今回の知見は、血中のカロテノイドの存在量が多いほど、これらの栄養素が組織中に発生しやすいことを意味するという直感的な考えを支持し、一層確実な結果を追求するために、これらのパラメータを測定することの難しさを克服し得ることを示唆している。
【0109】
群４で使用した製剤は、アセテートエステル化ＸＣと、微結晶を形成することなくこれらのカロテノイド誘導体をカプセル中で可溶化した状態に保つのを助ける一連の脂質および界面活性剤とを含有していた。これらの事前に可溶化したＸＣは、腸管粘膜での吸収用に消化器系でミセル形成の準備が整うことになる。一方、遊離カロテノイドは結晶を形成し、ミセルに取り込む前に消化器系で可溶化する必要がある。事前に可溶化したアセテートエステル化ＸＣのこの利点は、これらのカロテノイドの微結晶体と比較して、ＺｄおよびＭＺｄの血清ＺおよびＭＺレベルの増加効率が高いことを説明できるだろう。したがって、微結晶に対するアセテートエステル化ＸＣの理論的優位性が、ＺｄとＭＺｄでは評価されるが、Ｌｄでは評価されないのは、驚くべきことである。Ｌｄが吸収を促進するのを複数の機序が妨げている可能性がある。例えば、ＬはＺやＭＺのβ環とは配向が異なるε環を含み、これが脂質膜でこのＸＣが占める位置に影響しているように思われる。Ｌｄではε環にアセテート基が付加されているため、できたばかりのミセルではＺｄやＭＺｄより位置が悪く、腸管細胞への取り込みのためのＣＥＬによるプロセッシングやその後のスカベンジャー受容体クラスＢタイプ１（ＳＲＢ－１）との接触が制限されている可能性がある。一方、Ｌｄの異なる挙動を説明するために、Ｌの微結晶が消化管内で十分に処理され、ミセル形成のために可溶性の遊離Ｌが効率的に得られるという別の仮説が提示された。このように、Ｌｄは、ＺｄやＭＺｄで見られたようなＬ微結晶に対する優位性を持たないことになる。この仮説を検証するためには、これらのキサントフィルの消化器系における結晶体の物理化学的挙動を理解する必要があるだろう。
【0110】
この試験では、ミセル化用に調製した可溶化溶質中のジアセテート製剤の挙動を、結晶性製剤と比較して、黄斑部のカロテノイドで説明する。この試験は、学際的なアプローチで評価された栄養および栄養補助用サプリメントの分野に質の高いエビデンスを提供する二重盲検プラセボ対照試験であった。本発明者らによる知見は、ＸＣのバイオアベイラビリティに追加のエビデンスを提供するものである。ＺｄとＭＺｄに対して応答が改善されたことは、ＺとＭＺがＬより優先的にヒトの網膜に蓄積されることを示唆している、時宜を得た最近の研究である。しかしながら、Ｌを含む３種類のカロテノイドは、まとめてＭＰの形成に寄与し、これらのカロテノイドの重要性が認められている。
【0111】
本試験の一つの限界は、複数の介入を比較するために、各群のサンプルサイズを小さくしなければならなかったことである。しかしながら、多群ＲＣＴ設計を用いることで、サンプルの制約を克服することができた。他の試験では、より長期間にわたる血清と組織の経時変化を報告しており、これらの報告は、ＭＰＯＶと機能的アウトカムを最大限に改善するためには、カロテノイドの持続的な補給が必要であることを示唆している。より長期の研究であれば、ＭＰＯＶにより大きな改善が見られる可能性が高いにもかかわらず、今回の６ヶ月間の介入で、プラセボと比較してＭＰＯＶ（全群）および皮膚カロテノイドスコア（群１および群４）に有意な改善が生じている。このような臨床試験で直面するもう一つの課題は、コンプライアンスである。錠剤を数えることでＲＣＴガイドラインを遵守したが、追加のコンプライアンスマーカーとして、３ヶ月の時点で血清中のＸＣ濃度を追加で測定した。最後に、本試験の参加者は、既知の疾患のない健康なアイルランド人の成人であった。このため、同じ生物学的機序が作用していると推測されるものの、他の民族、疾患または小児において同様の結果が得られるか否かは不明である。
結論
結論
【0112】
結論として、マイクロミセル前駆体製剤中のＺジアセテートおよびＭＺジアセテートは、ミセル化および吸収効率の改善による可能性が最も高い、バイオアベイラビリティの増加を示した。この製剤は、従来のカロテノイドサプリメントと比較して、ＺおよびＭＺのバイオアベイラビリティを高める技術の進歩である。
実施例２
実施例２
【0113】
現在の技術によるメソゼアキサンチンジアセテートを含むミセルフリー組成物、結晶性（３Ｒ，３’Ｒ）－ゼアキサンチンを含む比較組成物およびプラセボ（ヒマワリ油）を提供した。これらの組成物を、錠剤として対象に投与する。
【0114】
結果を図１２に示す。ミセルフリー組成物は、６ヶ月後、プラセボおよび比較結晶性組成物より高いレベルで生物学的に利用可能な状態を維持していることが分かる。
【0115】
（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインジアセテートを含むミセルフリー組成物、結晶性（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインを含む比較組成物およびプラセボ（ヒマワリ油）も提供する。これらの組成物を、錠剤として対象に投与する。
【0116】
結果を図１３に示す。ミセルフリー組成物と比較結晶実施例のどちらも、６ヶ月後に、プラセボより高いレベルで生物学的に利用可能な状態を維持していることが分かる。しかしながら、ミセルフリー組成物および比較例によって提供される（３Ｒ，３’Ｒ，６Ｒ）－ルテインのレベルは、似たようなものである。
【0117】
この実施例は、予想外かつ驚くべきことに、現在の技術によるメソゼアキサンチンジアセテートを含むミセルを含まない組成物のほうが、メソゼアキサンチンを含む結晶性組成物よりも多く生物学的に利用可能であることを実証している。
【0118】
上記の実施形態の説明は、例示および説明の目的で提供されている。この説明は、網羅的であることや、本開示を限定することを意図したものではない。特定の実施形態の個々の要素または特徴は、一般に、その特定の実施形態に限定されないが、該当する場合は入れ替えが可能であり、具体的に図示または説明されていなくても、選択された実施形態で使用することが可能である。また、同じものを多くの方法で変更することができる。そのような変形例は、本開示からの逸脱とみなされることはなく、そのような改変はいずれも本開示の範囲内に含まれることが意図されている。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図11】
【図12】
【図13】
【国際調査報告】