特表 2023-535007 多価ベータコロナウイルスワクチン、それらの設計及び使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-15

(54)【発明の名称】多価ベータコロナウイルスワクチン、それらの設計及び使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/215 20060101AFI20230807BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230807BHJP

   C07K 14/165 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/50 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/86 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/861 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/863 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/867 20060101ALN20230807BHJP

【ＦＩ】

A61K39/215

A61P31/14

C07K14/165

C12N15/50

C12N15/86 Z

C12N15/861 Z

C12N15/863 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/867 Z

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023504205

(86)(22)【出願日】2021-07-22

(85)【翻訳文提出日】2023-03-14

(86)【国際出願番号】 US2021042795

(87)【国際公開番号】W WO2022020604

(87)【国際公開日】2022-01-27

(31)【優先権主張番号】63/055,139

(32)【優先日】2020-07-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522382691

【氏名又は名称】グレフェックス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】シュテルツ， ウーベ ディー．

(72)【発明者】

【氏名】カル， ジャネイ ウィーラー

(72)【発明者】

【氏名】プレストン， ダニエル エフ．

(72)【発明者】

【氏名】チー， ヤン

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085BA71

4C085CC03

4C085CC05

4C085CC07

4C085EE03

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG08

4C085GG10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む。ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、タンパク質抗原、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、又は遺伝子ベクター内の遺伝子情報である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む、ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチン。

【請求項2】

ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、タンパク質抗原、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、遺伝子ベクター内の遺伝子情報、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項3】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶ粒子上に、又はＣｏＶ粒子によって発現されるタンパク質である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項4】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶに感染した細胞上に、又はＣｏＶに感染した細胞によって発現されるタンパク質である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項5】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、タンパク質を産生するためにＣｏＶ遺伝子情報でトランスフェクトされた産生細胞から得られるタンパク質である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項6】

産生細胞が真核細胞である、請求項５に記載の多価ワクチン。

【請求項7】

産生細胞が細菌である、請求項５に記載の多価ワクチン。

【請求項8】

産生細胞が真菌である、請求項５に記載の多価ワクチン。

【請求項9】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項10】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項11】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、遺伝子ベクター内の遺伝子情報である、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項12】

遺伝子ベクターがウイルス遺伝子ベクターである、請求項１１に記載の多価ワクチン。

【請求項13】

ウイルス遺伝子ベクターが、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポリオーマウイルス、アルファ－ウイルスベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の多価ワクチン。

【請求項14】

ウイルス遺伝子ベクターが細菌である、請求項１２に記載の多価ワクチン。

【請求項15】

遺伝子ベクターが細菌遺伝子ベクターである、請求項１１に記載の多価ワクチン。

【請求項16】

ＣｏＶがβ－ＣｏＶである、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項17】

β－ＣｏＶが、ＳＡＲＳｒウイルス、ＭＥＲＳウイルス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１６に記載の多価ワクチン。

【請求項18】

β－ＣｏＶがＳＡＲＳｒウイルスである、請求項１７に記載の多価ワクチン。

【請求項19】

ＳＡＲＳｒが、ＳＡＲＳ－１ウイルス、ＳＡＲＳ－２ウイルス、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の多価ワクチン。

【請求項20】

ＳＡＲＳｒウイルスがＳＡＲＳ－２ウイルスである、請求項１９に記載の多価ワクチン。

【請求項21】

β－ＣｏＶがＭＥＲＳウイルスである、請求項１７に記載の多価ワクチン。

【請求項22】

ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも３つの異なるタンパク質抗原を含む、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項23】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ＣｏＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ＣｏＶエンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、及びＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項24】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する、請求項２３に記載の多価ワクチン。

【請求項25】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｍタンパク質に由来する、請求項２３に記載の多価ワクチン。

【請求項26】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｎタンパク質に由来する、請求項２３に記載の多価ワクチン。

【請求項27】

ワクチンが、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原と、ＣｏＶ Ｍタンパク質、ＣｏＶ Ｎタンパク質及びＣｏＶ Ｅタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む、請求項１に記載の多価ワクチン。

【請求項28】

対象における免疫応答を刺激する方法であって、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む有効量の組成物を対象に投与することを含む方法。

【請求項29】

ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、タンパク質抗原、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、遺伝子ベクター内の遺伝子情報、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶ粒子上に、又はＣｏＶ粒子によって発現されるタンパク質である、請求項２８に記載の方法。

【請求項31】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶに感染した細胞上に、又はＣｏＶに感染した細胞によって発現されるタンパク質である、請求項２８に記載の方法。

【請求項32】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、タンパク質を産生するためにＣｏＶ遺伝子情報でトランスフェクトされた産生細胞から得られるタンパク質である、請求項２８に記載の方法。

【請求項33】

産生細胞が真核細胞である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

産生細胞が細菌である、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

産生細胞が真菌である、請求項３２に記載の方法。

【請求項36】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報である、請求項２８に記載の方法。

【請求項37】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報である、請求項２８に記載の方法。

【請求項38】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、遺伝子ベクター内の遺伝子情報である、請求項２８に記載の方法。

【請求項39】

遺伝子ベクターがウイルス遺伝子ベクターである、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ウイルス遺伝子ベクターが、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポリーマウイルス、アルファ－ウイルスベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

ウイルス遺伝子ベクターが細菌である、請求項３９に記載の方法。

【請求項42】

遺伝子ベクターが細菌遺伝子ベクターである、請求項３８に記載の方法。

【請求項43】

ＣｏＶがβ－ＣｏＶである、請求項２８に記載の方法。

【請求項44】

β－ＣｏＶが、ＳＡＲＳｒウイルス、ＭＥＲＳウイルス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

β－ＣｏＶがＳＡＲＳｒウイルスである、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

ＳＡＲＳｒが、ＳＡＲＳ－１ウイルス、ＳＡＲＳ－２ウイルス、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

ＳＡＲＳｒウイルスがＳＡＲＳ－２ウイルスである、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

β－ＣｏＶがＭＥＲＳウイルスである、請求項４４に記載の方法。

【請求項49】

組成物が、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも３つの異なるタンパク質抗原を含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項50】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つが、ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ＣｏＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ＣｏＶエンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、及びＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項２８に記載の方法。

【請求項51】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｍタンパク質に由来する、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つがＣｏＶ Ｎタンパク質に由来する、請求項５０に記載の方法。

【請求項54】

組成物が、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原と、ＣｏＶ Ｍタンパク質、ＣｏＶ Ｎタンパク質及びＣｏＶ Ｅタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項55】

対象が哺乳動物対象である、請求項２８に記載の方法。

【請求項56】

対象がヒト対象である、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

投与することが筋肉内、皮内又は皮下注射によるものである、請求項２８に記載の方法。

【請求項58】

投与することが経口投与又は鼻腔内投与によるものである、請求項２８に記載の方法。

【請求項59】

ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチンであって、（ｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原、（ｉｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報、（ｉｉｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報、（ｉｖ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードする遺伝子ベクター内の遺伝子情報のうちの２つ以上を含む、多価ワクチン。

【請求項60】

第１のＣｏＶゲノムが、ＳＡＲＳｒゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択される、請求項５９に記載の多価ワクチン。

【請求項61】

（ｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原、（ｉｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報、（ｉｉｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報、（ｉｖ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードする遺伝子ベクター内の遺伝子情報のうちの２つ以上をさらに含む、請求項５９に記載の多価ワクチン。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０２０年７月２２日に出願された仮出願第６３，０５５，１３９号の優先権を主張し、非仮出願である。

【0002】

本開示は、β－コロナウイルスのワクチンに関し、より詳細には、β－コロナウイルス感染症に対する免疫応答を誘導するための特異的抗原の設計及び組立てに関する。

【背景技術】

【0003】

コロナウイルス（ＣｏＶ）は、アルファ－、ベータ－、ガンマ－及びデルタ－コロナウイルスの４つの属に分類される。β－ＣｏＶは、哺乳動物、一般にコウモリ及びげっ歯類に感染することができるエンベロープ型のプラス鎖ＲＮＡ（３０ｋｂ）ウイルスであるが、多くのβ－ＣｏＶはヒトにも感染することが知られている。ウイルスは、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を介して宿主細胞に入る。それらの４つの主要な構造タンパク質のうち、Ｓタンパク質は細胞受容体結合を媒介する。これは、フラン切断部位によって分離されたＳＩ鎖及びＳ２鎖に分けられる。ＳＡＲＳ受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）はＳＩに位置し、膜融合セクションはＳ２に位置する。他の主要なタンパク質としては、Ｍ、Ｎ及びエンベロープ（Ｅ）タンパク質が挙げられる。

【0004】

ヒト及び動物におけるＣｏＶによる感染症は、一般に、短期間の軽度から中等度の上気道疾病を引き起こす。例外は、重度でしばしば致死的な症状を特徴とする重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ－１）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、及び武漢起源ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＳＡＲＳ－２）（ＣＯＶＩＤ－１９とも呼ばれる）である。ＭＥＲＳの最初の症例は、２０１２年９月にサウジアラビアで報告され、２０１４年及び２０１５年に爆発的流行があり、続いて小規模の季節的流行が発生した。
ＭＥＲＳと確認された２，４９４例がこれまでに観察され、８５８人の患者が死亡した（３４．３％の致死率；ＷＨＯ）。ＳＡＲＳ－２感染症の最初の症例は２０１９年１２月に見られた。２０２０年４月１６日現在、米国だけで、疾病対策予防センター（ＣＤＣ）によって報告された推定６３２，０００例の症例及び推定３１，０００例の死亡があり、４．９％の致死率をもたらした。ＳＡＲＳ－２はヒトに対して感染性が非常に高く、Ｒ_０は約３と推定される（Ｌｉｕ ２０２０）。世界保健機関（ＷＨＯ）は、２０２０年１月３０日に、ＳＡＲＳ－２の世界的大流行を世界保健緊急事態と宣言した。

【0005】

米国では、ＳＡＲＳ－２は、５０州すべて、ワシントンＤ．Ｃ．及び少なくとも４つの準州で報告されている。長期ケア施設及びホームレスシェルターにおける流行は、集合環境における曝露及び感染のリスクを強調している。直接的又は飛沫を介した人から人への伝染が、ＳＡＲＳ－２の主な伝染手段であると思われる。

【0006】

ＳＡＲＳ－２は一般に軽度の疾病として現れ、最も一般的な症状は、発熱、咳又は胸部圧迫感、及び呼吸困難であるが、この疾患は、より高齢で多疾患の患者にとって最も致命的である。重度の合併症としては、肺炎、凝固亢進、多臓器機能障害（心筋傷害及び腎臓を含む）及び最終的には死が挙げられる。小児において、多系統炎症性症候群（ＭＩＳ－Ｃ）は、心臓、血管、腎臓、消化器系、脳、皮膚又は眼などのいくつかの身体部分が炎症を起こす重篤な状態である。

【0007】

ＳＡＲＳ－２のための具体的な処置は整っていないが、調査中である。現在推奨されているのは、無症候性又は軽度の疾病を有する患者を観察することである。疾患のさらなる伝播を防止するための最良の手法は、特定のワクチンの開発である。不活化ウイルスワクチンに加えて、ＲＮＡベースのウイルスベクター化ワクチン及び遺伝子ワクチンに重点を置いて、異なる手法の操作されたワクチンが調査されている。これらのワクチンのほとんどは、主要抗原としてＳＡＲＳ－２スパイク（Ｓ）タンパク質を使用する。動物試験並びに早期臨床治験からのデータが公開されている。プライム／ブースト免疫化プロトコールが、強い中和抗体応答を誘導するために必要であった。しかしながら、多くの患者は、複数回投与又はブースターを必要とするレジメンよりも単回投与レジメンを好むであろう。単一抗原を超える操作されたワクチンが、単回投与後に免疫保護をさらに増強するかどうかを調査する必要がある。

【0008】

ＣｏＶは体液性及び細胞性免疫応答の両方を誘導する。動物及び臨床研究は、ＳＡＲＳ－１及びＭＥＲＳ感染症がＳタンパク質に対する強力な中和抗体応答を引き起こすことを実証している。さらに、ＳＡＲＳ－２体液性応答は、同様にＳタンパク質を標的とし、他の抗体はＭタンパク質に結合した。Ｍタンパク質は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の中心としても機能する。抗ＳＡＲＳ－２ ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、主にＮ抗原及びＳ抗原の両方を見る。不活化ウイルスワクチンは本質的に多価である。それらは、単一Ｓタンパク質ワクチンよりも強いＳＡＲＳ－２応答を提供し得る。動物研究は、不活化ウイルスワクチンがＴｈ２型のおそらく抗Ｎ疾患増強免疫応答を誘導しやすいことを示唆している。Ｓベース成分ワクチンでも疾患増強が観察されたが、ウイルスベクター化抗Ｓワクチンでは明らかではなかった。ＦＤＡは、強力な中和抗体とともにＴｈ１型Ｔ細胞の極性化を示すＳＡＲＳ－２ワクチンを好む。

【0009】

ＳＡＲＳ関連（ＳＡＲＳｒ）ウイルスの全体的な変異率は、０．１変異／世代で計算されている。動物ＳＡＲＳｒウイルスのＳ受容体結合ドメインのわずかな変化は、ヒトＡＣＥ２への結合を増強し、したがってヒト集団への跳躍を促進し得る。Ｓタンパク質配列のアラインメントは、Ｓ２領域内に有意な安定領域を有する遺伝子全体の有意な分岐を明らかにするが、ＳＡＲＳｒウイルスのＭ及びＮは全体的に有意に低い変異率を示す。したがって、多価ワクチンは、ＳＡＲＳ－２バリアントに対するより良好な保護を提供するであろう。

【0010】

Ａｄベクターとして操作された現在のワクチンは、他のワクチン系と比較してより高い及びより多くの持続免疫原性を繰り返し実証している。最小限に改変された初期世代（ｅｇ）Ａｄベクターは、多数の内因性Ａｄ遺伝子を有し、これに対して活発な体液性及び細胞性免疫応答が誘導される。したがって、ｅｇａｄワクチンを用いたプライム／ブーストワクチン接種レジメンは、２回目の投与について異なる設計のワクチンを見込んでいた。しかし、最近の臨床治験では、動物由来のｅｇ Ａｄワクチンは、ブースト注射後に免疫応答の増加が見られた。抗Ａｄ応答は、すべての内因性Ａｄ遺伝子が完全に欠失した（ｆｄ）Ａｄベクターによって最も効率的に最小化されている。そのようなｆｄＡｄベクターは、導入遺伝子発現の増強、ｉｎ ｖｉｖｏでの長期維持、及び免疫原性の改善が見られた。ｆｄＡｄゲノムの包装情報は、もとは、第２のウイルスコンストラクト、ハイブリッドバキュロウイルス－アデノウイルス又はヘルパーウイルスとともに送達され、複製能のあるＡｄ（ＲＣＡ）又はヘルパーウイルスによる汚染がもたらされた。

【0011】

これらの問題を回避するために、ヘルパーウイルスに依存しない技術が開発されている。ヘルパーウイルス非依存性ワクチンは、すべての内因性遺伝子の完全欠失及びヒトＡｄ６などの希少なステレオタイプのカプシドへの包装によって、既存の及び誘導された干渉性抗Ａｄ応答を最小限に抑える。現在のヘルパーウイルス非依存性技術は、２つの独立して改変可能な成分、（ｉ）ＩＴＲ及び包装シグナルを有する最大３３ｋｂの導入遺伝子コンストラクトを受け入れることができるベースベクターモジュール、及び（ｉｉ）Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ６及びＡｄ３５ステレオタイプに基づく異なる環状包装プラスミド（ｐＰａＣ２／５／６及びｐＰａＢ３５）に基づいて構築される。ベースベクターモジュールは、すべてのＡｄ遺伝子を除去し、ヒトハウスキーピング遺伝子５－アミノイミダゾール－４－カルボキサミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ遺伝子（ＡＴＩＣ）の断片に由来するサイズ補償スタッファーに置き換えた。環状包装プラスミドでは、左ＩＴＲ、包装シグナル、並びにＥ１、Ｅ３及びタンパク質ＩＸ遺伝子が欠失している。ベクターモジュールを、ＨＥＫ－２９３由来のＨＴＰ７／Ｑ７包装細胞を使用する最適化された１週間同時トランスフェクションプロトコールによってカプセル化する。この同じ技術を使用して、強力な免疫原性を有し、広範囲のＣｏＶに対する保護を提供するために単回投与を必要とするＣｏＶワクチンを提供することが望ましい。

【発明の概要】

【0012】

一実施形態では、本開示は多価ワクチンを提供する。本開示の実施形態によれば、ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む。

【0013】

別の実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、タンパク質抗原、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、遺伝子ベクター内の遺伝子情報、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ粒子上に、又はＣｏＶ粒子によって発現されるタンパク質である。なおさらなる実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶに感染した細胞上に、又はＣｏＶに感染した細胞によって発現されるタンパク質である。

【0014】

なおさらなる実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、タンパク質を産生するためにＣｏＶ遺伝子情報をトランスフェクトされた産生細胞から得られるタンパク質である。一実施形態では、産生細胞は真核細胞である。別の実施形態では、産生細胞は細菌である。別の実施形態では、産生細胞は真菌である。

【0015】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報である。別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報である。

【0016】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、遺伝子ベクター内の遺伝子情報である。別の実施形態では、遺伝子ベクターはウイルス遺伝子ベクターである。さらに別の実施形態では、ウイルス遺伝子ベクターは、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポリオーマウイルス、アルファ－ウイルスベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、ウイルス遺伝子ベクターは細菌である。さらに別の実施形態では、遺伝子ベクターは細菌遺伝子ベクターである。

【0017】

一実施形態では、ＣｏＶはβ－ＣｏＶである。さらなる実施形態では、β－ＣｏＶは、ＳＡＲＳｒウイルス、ＭＥＲＳウイルス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。なおさらなる実施形態では、β－ＣｏＶはＳＡＲＳｒウイルスである。別の実施形態では、ＳＡＲＳｒは、ＳＡＲＳ－１ウイルス、ＳＡＲＳ－２ウイルス、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＡＲＳｒウイルスはＳＡＲＳ－２ウイルスである。なおさらなる実施形態では、β－ＣｏＶはＭＥＲＳウイルスである。

【0018】

一実施形態では、多価ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも３つの異なるタンパク質抗原を含む。

【0019】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ＣｏＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ＣｏＶエンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、及びＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する。一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する。別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｍタンパク質に由来する。さらなる実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｎタンパク質に由来する。

【0020】

一実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原と、ＣｏＶ Ｍタンパク質、ＣｏＶ Ｎタンパク質及びＣｏＶ Ｅタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む。

【0021】

一実施形態では、本開示は、対象において免疫応答を刺激する方法を提供する。本開示の実施形態によれば、対象における免疫応答を刺激する方法は、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む有効量の組成物を対象に投与することを含む。

【0022】

一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、タンパク質抗原、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、遺伝子ベクター内の遺伝子情報、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ粒子上に、又はＣｏＶ粒子によって発現されるタンパク質である。さらに別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶに感染した細胞上に、又はＣｏＶに感染した細胞によって発現されるタンパク質である。

【0023】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、タンパク質を産生するためにＣｏＶ遺伝子情報をトランスフェクトされた産生細胞から得られるタンパク質である。さらなる実施形態では、産生細胞は真核細胞である。別の実施形態では、産生細胞は細菌である。なおさらなる実施形態では、産生細胞は真菌である。

【0024】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報である。一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つの発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報である。

【0025】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、遺伝子ベクター内の遺伝子情報である。一実施形態では、遺伝子ベクターはウイルス遺伝子ベクターである。別の実施形態では、ウイルス遺伝子ベクターは、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポリーマウイルス、アルファ－ウイルスベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらに別の実施形態では、ウイルス遺伝子ベクターは細菌である。さらなる実施形態では、遺伝子ベクターは細菌遺伝子ベクターである。

【0026】

一実施形態では、ＣｏＶはβ－ＣｏＶである。さらなる実施形態では、β－ＣｏＶは、ＳＡＲＳｒウイルス、ＭＥＲＳウイルス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。なおさらなる実施形態では、β－ＣｏＶはＳＡＲＳｒウイルスである。さらに別の実施形態では、ＳＡＲＳｒは、ＳＡＲＳ－１ウイルス、ＳＡＲＳ－２ウイルス、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＡＲＳｒウイルスはＳＡＲＳ－２ウイルスである。なおさらなる実施形態では、β－ＣｏＶはＭＥＲＳウイルスである。

【0027】

一実施形態では、組成物は、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも３つの異なるタンパク質抗原を含む。

【0028】

一実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ＣｏＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ＣｏＶエンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、及びＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する。別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する。さらに別の実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｍタンパク質に由来する。さらなる実施形態では、２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ＣｏＶ Ｎタンパク質に由来する。一実施形態では、組成物は、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原と、ＣｏＶ Ｍタンパク質、ＣｏＶ Ｎタンパク質及びＣｏＶ Ｅタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む。

【0029】

一実施形態では、対象は哺乳動物対象である。別の実施形態では、対象はヒト対象である。

【0030】

一実施形態では、投与することは、筋肉内、皮内又は皮下注射によるものである。さらなる実施形態では、投与することは、経口投与又は鼻腔内投与によるものである。

【0031】

一実施形態では、本開示は、ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチンを提供する。本開示の実施形態によれば、ＣｏＶ感染症を予防するための多価ワクチンは、（ｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原、（ｉｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報、（ｉｉｉ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報、（ｉｖ）第１のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードする遺伝子ベクター内の遺伝子情報のうちの２つ以上を含む。

【0032】

一実施形態では、第１のＣｏＶゲノムは、ＳＡＲＳｒゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択される。一実施形態では、ワクチンは、（ｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原、（ｉｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＲＮＡコード遺伝子情報、（ｉｉｉ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードするＤＮＡコード遺伝子情報、（ｉｖ）第２のＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来するタンパク質抗原の発現をコードする遺伝子ベクター内の遺伝子情報のうちの２つ以上をさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0033】

なし

【発明を実施するための形態】

【0034】

本開示の任意の実施形態を詳細に説明する前に、本開示は、その適用において、以下の説明に記載されるか又は図面に示される構成要素の構成及び配置の詳細に限定されないことを理解されたい。本開示は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実施又は実行することができる。また、本明細書で使用される表現及び用語は、説明のためのものであり、限定するものと見なされるべきではないことが理解される。本明細書における「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」又は「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及びそれらの変形の使用は、その後に列挙される項目及びその均等物並びに追加の項目を包含することを意味する。本明細書における「本質的に含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」及び「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及びその変形の使用は、その後に列挙される項目、並びに等価物及び追加の項目を、そのような等価物及び追加の項目が全体の特性、使用又は製造を本質的に変更しない限りにおいて、包含することを意味する。本明細書における「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及びその変形の使用は、その後に列挙される項目及びそれらの項目のみを含むことを意味する。

【0035】

図面を参照するとき、全体を通して、同様の番号は同様の要素を指す。第１、第２などの用語は、様々な要素、構成要素、領域、及び／又はセクションを説明するために本明細書で使用され得るが、これらの要素、構成要素、領域、及び／又はセクションは、これらの用語によって限定されるべきではないことが理解されよう。これらの用語は、１つの要素、構成要素、領域及び／又はセクションを別の要素、構成要素、領域及び／又はセクションと区別するためにのみ使用される。したがって、第１の要素、構成要素、領域又はセクションは、本開示から逸脱することなく、第２の要素、構成要素、領域又はセクションと呼ぶことができる。

【0036】

本開示における数値範囲は近似値であり、別途指示がない限り範囲外の値を含んでもよい。数値範囲は、任意のより低い値と任意のより高い値との間に少なくとも２つの一位数の分離があるという条件で、（特に明記しない限り）一位数の増分において、より低い値及びより高い値からの、及びこれらを含むすべての値を含む。一例として、例えば重量による成分の量などの組成的、物理的又は他の特性が１０～１００である場合、１０、１１、１２などのすべての個々の値、及び１０～４４、５５～７０、９７～１００などの部分範囲が明示的に列挙されることが意図される。明示的な値を含む範囲（例えば、１、又は２、又は３から５、又は６、又は７の範囲）の場合、任意の２つの明示的な値の間の任意の部分範囲が含まれる（例えば、上記の範囲１～７は部分範囲１～２；２～６；５～７；３～７；５～６などを含む）。１未満の値を含む範囲又は１より大きい分数を含む範囲（例えば、１．１、１．５など）については、一位数は、適切には０．０００１、０．００１、０．０１又は０．１であると考えられる。１０未満の一桁の数を含む範囲（例えば、１～５）については、一位数は通常０．１であると見なされる。これらは、具体的に意図されるものの例にすぎず、列挙された最低値と最高値との間の数値のすべての可能な組み合わせは、本開示において明示的に述べられていると見なされるべきである。

【0037】

「下（ｂｅｎｅａｔｈ）」、「下方（ｂｅｌｏｗ）」、「下部（ｌｏｗｅｒ）」、「上方（ａｂｏｖｅ）」、「上部（ｕｐｐｅｒ）」などの空間的用語は、本明細書では、図に示すように、１つの要素又は特徴と別の要素又は特徴との関係を記載するための説明を容易にするために使用され得る。空間的に相対的な用語は、使用又は例示における向きに応じて異なる向きを包含することを意図していることが理解されよう。例えば、図中の装置をひっくり返した場合、他の要素又は特徴の「下方（ｂｅｌｏｗ）」又は「下（ｂｅｎｅａｔｈ）」にあると記載された要素は、他の要素又は特徴の「上方（ａｂｏｖｅ）」にある。したがって、例示的な「下方（ｂｅｌｏｗ）」という用語は、上方及び下方の両方の向きを包含することができる。装置は、他の方向に向けられ（９０°又は他の向きに回転され）てもよく、本明細書で使用される空間的に相対的な記述子はそれに応じて解釈される。

【0038】

本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語は、関連する列挙された項目のうちの１つ以上のありとあらゆる組み合わせを含む。例えば、「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される場合、「及び／又は」という語句は、Ａ及びＢの両方；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の実施形態「Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。

【0039】

一実施形態では、本開示は、ＣｏＶ感染症に対する多価ワクチンを提供し、多価ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む。

【0040】

一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原は、ワクチン中のタンパク質として送達され、ワクチン中のＲＮＡコード遺伝子情報として送達され、ワクチン中のＤＮＡコード遺伝子情報として送達され、及び／又はワクチン中の遺伝子ベクター内の遺伝子情報として送達される。

【0041】

タンパク質抗原
一実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を含む。一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原は、（ｉ）ＣｏＶ上に、若しくはＣｏＶによって発現される抗原、（ｉｉ）ＣｏＶに感染した細胞上に、若しくはＣｏＶに感染した細胞によって発現される抗原、及び／又は（ｉｉｉ）タンパク質抗原を産生するように操作された産生細胞上に、若しくはタンパク質抗原を産生するように操作された産生細胞によって発現される抗原である。

【0042】

本明細書で使用される場合、「２つ以上」という用語は、少なくとも２つの異なる成分、例えばＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つの異なるタンパク質抗原を指すために使用される。一実施形態では、「２つ以上」とは、少なくとも２つ、３つ以上、少なくとも３つ、４つ以上、少なくとも４つ、５つ以上、少なくとも５つ、６つ以上などであり得る。特定の実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上、又は少なくとも２つ、又は３つ以上、又は少なくとも３つ、又は４つ以上、又は少なくとも４つ、又は５つ以上、又は少なくとも５つ～６つ以上の異なるタンパク質抗原を含む。

【0043】

ＣｏＶは、β－ＣｏＶ、ＳＡＲＳｒウイルス、より具体的にはＳＡＲＳ－２ウイルスを含む任意のＣｏＶであり得る。一実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を含み、２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原はそれぞれ同じＣｏＶ株に由来する。特定の実施形態では、各ＣｏＶタンパク質抗原は、ＳＡＲＳｒゲノム及びａＭＥＲＳゲノム、又はより具体的にはＳＡＲＳ－１ゲノム、ＳＡＲＳ－２ゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択されるＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する。別の実施形態では、ワクチンは、第１のＣｏＶゲノムに由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原及び第２のＣｏＶゲノムに由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を含む。例えば、一実施形態では、ワクチンは、ＳＡＲＳ－１ゲノム、ＳＡＲＳ－２ゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択される第１のＣｏＶゲノムに由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原と、ＳＡＲＳ－１ゲノム、ＳＡＲＳ－２ゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択される第２のＣｏＶゲノムに由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原とを含み、第１及び第２のＣｏＶゲノムは同じではない。

【0044】

別の実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含み、第１のタンパク質抗原は第１のＣｏＶゲノムに由来し、第２のタンパク質抗原は第２のＣｏＶゲノムに由来し、第１及び第２のＣｏＶゲノムは異なり、それぞれがＳＡＲＳ－１ゲノム、ＳＡＲＳ－２ゲノム及びＭＥＲＳゲノムからなる群から選択される。

【0045】

一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原は、ＳＡＲＳｒウイルスゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原、又はＳＡＲＳ－２ウイルスゲノム内でコードされた抗原に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原を含む。別の実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ、又は３つ、又は４つ以上のタンパク質抗原を含み、タンパク質抗原の１つ、一部又は全部は、ＳＡＲＳｒウイルスゲノム又はＳＡＲＳ－２ウイルスゲノム内でコードされた抗原に由来する。

【0046】

一実施形態では、タンパク質抗原は、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、エンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、並びにＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質に由来する。

【0047】

ワクチン
ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の少なくとも１つは、ワクチン中のタンパク質として送達され、ワクチン中のＲＮＡコード遺伝子情報として送達され、ワクチン中のＤＮＡコード遺伝子情報として送達され、及び／又はワクチン中の遺伝子ベクター内の遺伝子情報として送達される。

【0048】

一実施形態では、タンパク質抗原は、ワクチン中のタンパク質として送達される。タンパク質抗原は、ＣｏＶ上に、又はＣｏＶによって発現されるタンパク質であり得る。一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原の１つ、一部又は全部は、ＣｏＶ上に、又はＣｏＶによって発現される。

【0049】

別の実施形態では、タンパク質抗原は、ＣｏＶに感染した細胞によって発現される。一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原の１つ、一部又は全部は、ＣｏＶに感染した細胞によって発現される。

【0050】

一実施形態では、タンパク質抗原は、ＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を使用して産生細胞内でタンパク質抗原を産生するように産生系を操作することによって作製される。産生細胞は、動物細胞及び植物細胞を含むがこれらに限定されない細菌又は真核細胞であり得る。動物細胞は、ヒト細胞、昆虫細胞、並びにヒト及び昆虫以外の動物の細胞から選択され得る。植物細胞には、生きている植物の細胞が含まれる。一実施形態では、産生細胞は、真核細胞、細菌細胞、真菌細胞、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、ＣｏＶタンパク質抗原の１つ、一部又は全部は、ＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を使用して産生細胞内でタンパク質抗原を産生するように産生系を操作することによって作製される。

【0051】

ワクチンでの使用のためにＣｏＶ上に、又はＣｏＶによって発現される１つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を得るために、精製ＣｏＶ、又は精製ＳＡＲＳｒウイルス、又は精製ＳＡＲＳ－２ウイルスからタンパク質抗原を抽出する。一実施形態では、タンパク質抗原は、抽出後にさらに精製されることなく混合物として使用される。別の実施形態では、抽出されたタンパク質抗原は精製され、精製混合物として使用される。なおさらなる実施形態では、タンパク質抗原は、精製及び分離されてカスタム混合物を形成するか、又は個別に使用され得る。

【0052】

ＣｏＶに感染した細胞によって発現される１つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を得るために、ＣｏＶ感染細胞、又はＳＡＲＳｒ感染細胞、又はＳＡＲＳ－２感染細胞からタンパク質抗原を抽出する。一実施形態では、ＣｏＶ感染細胞は抽出前に精製される。一実施形態では、タンパク質抗原は、抽出後にさらに精製されることなく混合物として使用される。別の実施形態では、抽出されたタンパク質抗原は精製され、精製混合物として使用される。なおさらなる実施形態では、タンパク質抗原は、精製及び分離されてカスタム混合物を形成するか、又は個別に使用され得る。

【0053】

ＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を使用して産生細胞内でタンパク質抗原を産生するように産生系を操作することによって作製された１つ以上のＣｏＶタンパク質抗原を得るために、産生細胞に、２つ以上のＣｏＶタンパク質抗原の少なくとも１つをコードする遺伝子発現ベクターをトランスフェクトする。次いで、タンパク質抗原を産生細胞から抽出する。一実施形態では、タンパク質抗原は、抽出後にさらに精製されることなく混合物として使用される。別の実施形態では、抽出されたタンパク質抗原は精製され、精製混合物として使用される。なおさらなる実施形態では、タンパク質抗原は、精製及び分離されてカスタム混合物を形成するか、又は個別に使用され得る。

【0054】

一実施形態では、ワクチンは、タンパク質抗原の発現をコードする遺伝子コンストラクトを操作するためにＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を含む。そのような遺伝子コンストラクトには、限定されないが、ＲＮＡ及びＤＮＡコンストラクトが含まれる。一実施形態では、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原の１つ、一部又は全部は、ＲＮＡコード遺伝子情報、ＤＮＡコード遺伝子情報、及びそれらの組み合わせとしてワクチンによって送達される。

【0055】

遺伝子コンストラクトの作製は公知であり、本ワクチンに有用な遺伝子コンストラクトは、当技術分野で公知の同様の手段で得ることができる。

【0056】

ワクチンが、タンパク質抗原の発現をコードする遺伝子コンストラクトを操作するためにＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を含む実施形態では、タンパク質抗原は、遺伝子コンストラクトによるワクチンを受けたことに応答してワクチンレシピエントによって作製される。

【0057】

一実施形態では、ワクチンは、タンパク質抗原の発現をコードする導入遺伝子発現カセットを有する発現ベクターを操作するためにＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を含む。そのような発現ベクターは、プラスミド型ベクター及びウイルスベクター、例えば、限定されないが、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＳＶ４０由来ベクター、ＶＳＶ型ベクター、ワクシニア由来ベクター及び細菌ベクターである。特定の実施形態では、ワクチンは遺伝子ベクター中に遺伝子情報を含む。さらなる実施形態では、遺伝子ベクターは、ウイルス遺伝子ベクター、細菌遺伝子ベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、ウイルス遺伝子ベクターは、アデノウイルス関連ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポリオーマウイルス、アルファ－ウイルスベクター、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるウイルスベクターである。

【0058】

例示的なベクターは、ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／２８１８７及びＰＣＴ／ＵＳ２０２１／３１９７４に記載されており、いずれもその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0059】

ワクチンが、タンパク質抗原の発現をコードする導入遺伝子発現カセットを有する発現ベクターを操作するためにＣｏＶゲノム内でコードされた遺伝子情報を含む実施形態では、タンパク質抗原は、発現ベクターによるワクチンを受けたことに応答してワクチンレシピエントによって作製される。

【0060】

前述のように、ワクチンは、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む。一実施形態では、少なくとも１つのタンパク質抗原は、ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質、ＣｏＶ膜（Ｍ）タンパク質、ＣｏＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質、ＣｏＶエンベロープ（Ｅ）タンパク質、レプリカーゼ１ａ／１ｂタンパク質、及びＯＲＦ４、９、１０及び１３コードタンパク質からなる群から選択されるタンパク質に由来する。特定の実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶ Ｓタンパク質、ＣｏＶ Ｍタンパク質、及びＣｏＶ Ｎタンパク質に由来するタンパク質抗原を含む。さらなる実施形態では、ワクチンは、ＣｏＶ Ｓタンパク質に由来するタンパク質抗原と、ＣｏＶ Ｍタンパク質、ＣｏＶ Ｎタンパク質、及びＣｏＶ Ｅタンパク質に由来する少なくとも１つの他のタンパク質抗原とを含む。

【0061】

免疫応答を刺激する方法
一実施形態では、本開示は、対象において免疫応答を刺激する方法を提供する。本方法は、ＣｏＶゲノム内でコードされた抗原に由来する２つ以上のタンパク質抗原を含む有効量の組成物を対象に投与することを含む。一実施形態では、本組成物は、本明細書に記載の任意の実施形態又は実施形態の組み合わせによるワクチン組成物である。

【0062】

ワクチンは、特定の状況によって決定される定義された用量及び定義された投与回数（すなわち、「有効量」）で、哺乳動物対象又はより具体的にはヒト対象などの動物対象に送達され得る。

【0063】

ワクチンは、限定されないが、筋肉内注射、皮下注射、皮内注射、経口投与及び鼻腔内投与などの様々な経路によって投与され得る。

【実施例】

【0064】

二価ＣｏＶワクチンは、ＳＡＲＳ－２ Ｓ抗原のための導入遺伝子発現カセットと、ＳＡＲＳ－２ Ｍ抗原のための導入遺伝子発現カセットとを含む。このワクチンは、強力な体液性（抗Ｓ及び抗Ｍ）及び細胞性（ＣＤ４^＋Ｔ細胞：抗Ｓ；ＣＤ８^＋Ｔ細胞：抗Ｍ）免疫応答を誘導することが予想される。アデノウイルスでベクター化されたワクチンとしての二価ワクチンは、その後のＳＡＲＳ－２感染時に疾患過程の増強をもたらすことなく、Ｔｈ１型Ｔ細胞の極性化を示すであろう。ワクチン中のベクターゲノムは、ヒトコドン最適化Ｓ抗原及びＭ抗原の発現を誘導する導入遺伝子発現カセットを有する。発現カセットは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター／エンハンサーから駆動され、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）遺伝子に由来するポリアデニル化部位によって終結される。２つの導入遺伝子は、ヒト脳脊髄炎ウイルス内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）によって分離されている。

【0065】

第３の抗原（ＳＡＲＳ－２ Ｎ抗原）を含めると、二価ワクチンと比較してワクチンの有効性がさらに増強されることが企図される。

【0066】

ワクチンの複数の実施形態が本明細書に詳細に記載されているが、それらの改変及び変形が可能であり、それらのすべてが本発明の真の精神及び範囲内に入ることは明らかである。特に、ワクチンはβ－ＣｏＶ、より具体的にはＳＡＲＳｒウイルス及びＳＡＲＳ－２ウイルスに関して詳細に記載されているが、ワクチンは、他のクラスのコロナウイルス、例えば、ａ－ＣｏＶ、ｇ－ＣｏＶ、及び５－ＣｏＶなどに適用するために当業者に従って改変され得ることが理解されよう。さらに、多数の改変及び変更が当業者には容易に思い浮かぶので、本発明を図示及び説明された正確な構成及び動作に限定することは望ましくなく、したがって、すべての適切な改変及び等価物が本開示の範囲内にあり、再分類され得る。

【国際調査報告】