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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-21
(54)【発明の名称】普遍的な細胞療法のための武装ＮＫ細胞
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20230814BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20230814BHJP
A61K 35/15 20150101ALI20230814BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20230814BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20230814BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230814BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230814BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230814BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20230814BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C12N5/0783
A61K35/15
A61K35/17
A61P31/00
A61P35/00
A61P37/02
A61K39/395 N
A61K47/68
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023507231
(86)(22)【出願日】2021-08-02
(85)【翻訳文提出日】2023-03-28
(86)【国際出願番号】 EP2021071586
(87)【国際公開番号】W WO2022023581
(87)【国際公開日】2022-02-03
(31)【優先権主張番号】2008211
(32)【優先日】2020-07-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516344465
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ ドゥ モンペリエ
(71)【出願人】
【識別番号】509000747
【氏名又は名称】アンスティトゥー ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ レシェルシュ メディカル（イエヌエスエエールエム）
(71)【出願人】
【識別番号】523032412
【氏名又は名称】サントル オスピタリエ ユニヴェルシテ ドゥ モンペリエ （セアッシュユエム）
(71)【出願人】
【識別番号】523032423
【氏名又は名称】イセエム（アンスティトゥー ドゥ キャンサロロジー ドゥ モンペリエ）
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ヴィヤルバ マルタン
(72)【発明者】
【氏名】ヨルゲンセン クリスチャン
(72)【発明者】
【氏名】ロベール ブリュノ
(72)【発明者】
【氏名】マルティノー ピエール
(72)【発明者】
【氏名】エルナンデス フランシスコ ハビエル
(72)【発明者】
【氏名】プレズミー ジェシー
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AC20
4B065BD50
4B065CA24
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF67
4C076FF70
4C085AA14
4C085BB36
4C085DD62
4C085EE03
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BB37
4C087BB65
4C087CA04
4C087CA12
4C087NA05
4C087NA06
4C087NA13
4C087ZB07
4C087ZB26
4C087ZB32
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA75
4H045DA76
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、治療法、特にＣＤ１６＋細胞及びＮＫ（ナチュラルキラー）細胞をベースにした細胞療法の分野に関する。特に、本発明は、改変Ｆｃ領域、特に改変ＣＨ２ドメインを含む組換えポリペプチドと組み合わせた、ＣＤ１６＋細胞、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物に関する。特に、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ細胞を含む組成物であって、組換えポリペプチドは、ＣＤ１６＋細胞によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に非共有結合しており、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、リガンド結合ドメインは、標的リガンドに結合することができる配列を含み、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞を含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、前記ＣＤ１６＋細胞によって発現される前記ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に非共有結合しており、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
前記リガンド結合ドメインが、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物。
【請求項2】
前記改変ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表される前記野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して改変されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質が、ＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｇ２３６Ａ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項5】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項6】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項7】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項8】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項9】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項10】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項11】
野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関する前記ＣＨ２ドメインの前記改変が、突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅのみからなる、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項12】
前記ＣＤ１６＋細胞が、ＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
前記組換えポリペプチドが抗体であり、前記ＣＨ２ドメインにおける前記改変が、前記抗体を構成する前記ＣＨ２ドメインの対（又は重鎖の対）に関して対称的、又は非対称的である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
前記組換えポリペプチドが、前記改変ＣＨ２ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記組換えポリペプチドが、請求項１～６のいずれか一項に記載の改変ＣＨ２ドメイン、又は請求項１４に記載のＦｃ領域と、以下の抗体：アバゴボマブ、アバタセプト、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフリベルセプト、アフツジマブ、アラシズマブ、アレファセプト、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アネツマブ、アニフロムマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アルチズマブ、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベラタセプト、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチシズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブ、カプラシズマブ、カプロマブ、カルルマブ、カツマキソマブ、セデリズマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コドリツズマブ、コルツキシマブ、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブ、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブ、デノスマブ、デルロチクスマブ、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ、ドリノマブ、ドロジツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンホルツマブ、エンリモマブ、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタネルセプト、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、イマルマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ、インデュサツマブ、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブ、リゲリズマブ、リロトマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブ、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マパツズマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミネツモマブ、ミルベツキシマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブ、ナミルマブ、ナプツモマブ、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オルテルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブ、ピンツモマブ、ポラツズマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロナセプト、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブ、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セヴィルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブ、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブ、タレクスツマブ、テフィバズマブ、テリモマブ・アリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テシドルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、チルドラキズマブ、ティガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンドルツズマブ、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ジブ－アフリベルセプト、及びゾリモマブのいずれかのリガンド結合ドメインから選択されるリガンド結合ドメインとを含む抗体又はそのフラグメントである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
医薬として使用される、好ましくは医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物を含み、任意に賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物。
【請求項18】
前記ＣＤ１６＋細胞が、ＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系であり、医薬として使用される、好ましくは医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項19】
ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞を含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、前記ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞によって発現される前記ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に非共有結合しており、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
前記リガンド結合ドメインが、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物。
【請求項20】
前記改変ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表される前記野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して改変されている、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｇ２３６Ａ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項22】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項23】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項24】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項25】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項26】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項27】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項28】
野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関する前記ＣＨ２ドメインの前記改変が、突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅのみからなる、請求項２０に記載の組成物。
【請求項29】
前記ＣＤ１６細胞が、ＣＤ１６細胞を必要とする個体に関して同種異系である、請求項１９～２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項30】
前記組換えポリペプチドが抗体であり、前記ＣＨ２ドメインにおける前記改変が、前記抗体を構成する前記ＣＨ２ドメインの対（又は重鎖の対）に関して対称的、又は非対称的である、請求項１９～２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項31】
前記組換えポリペプチドが、前記改変ＣＨ２ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域を含む、請求項１９～３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項32】
前記組換えポリペプチドが、請求項１９～３１のいずれか一項に記載のＣＨ２ドメインと、以下の抗体：アバゴボマブ、アバタセプト、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフリベルセプト、アフツジマブ、アラシズマブ、アレファセプト、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アネツマブ、アニフロムマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アルチズマブ、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベラタセプト、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチシズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブ、カプラシズマブ、カプロマブ、カルルマブ、カツマキソマブ、セデリズマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コドリツズマブ、コルツキシマブ、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブ、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブ、デノスマブ、デルロチクスマブ、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ、ドリノマブ、ドロジツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンホルツマブ、エンリモマブ、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタネルセプト、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、イマルマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ、インデュサツマブ、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブ、リゲリズマブ、リロトマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブ、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マパツズマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミネツモマブ、ミルベツキシマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブ、ナミルマブ、ナプツモマブ、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オルテルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブ、ピンツモマブ、ポラツズマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロナセプト、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブ、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セヴィルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブ、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブ、タレクスツマブ、テフィバズマブ、テリモマブ・アリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テシドルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、チルドラキズマブ、ティガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンドルツズマブ、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ジブ－アフリベルセプト、及びゾリモマブのいずれかのリガンド結合ドメインから選択されるリガンド結合ドメインとを含む抗体又はそのフラグメントである、請求項１９～３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項33】
医薬として使用される、好ましくは医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用される、請求項１９～３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項34】
請求項１９～３２のいずれか一項に記載の組成物を含み、任意に賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物。
【請求項35】
前記ＣＤ１６細胞が、ＣＤ１６細胞を必要とする個体に関して同種異系であり、医薬として使用される、好ましくは医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用される、請求項１９～３２のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項36】
組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞を含む薬学的組成物であって、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、前記Ｆｃ領域が、前記ＮＫ細胞に結合することができ、野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含み、前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、薬学的組成物。
【請求項37】
前記改変ＣＨ２ドメインが、配列番号１で表される前記野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して改変されている、請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項38】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｇ２３６Ａ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項39】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項40】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む、請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項41】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項42】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項43】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む、請求項３９に記載の薬学的組成物。
【請求項44】
前記改変ＣＨ２ドメインが、野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔを含む、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項45】
野生型ヒトＩｇＧ１の前記ＣＨ２ドメインに関する前記ＣＨ２ドメインの前記改変が、突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅのみからなる、請求項３７に記載の薬学的組成物。
【請求項46】
賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項47】
医薬として使用される、請求項３６～４６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項48】
組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞であって、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）結合ドメインとを含み、前記Ｆｃ領域が、前記ＮＫ細胞に結合することができ、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞。
【請求項49】
ＣＤ１６＋細胞、好ましくはＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系のＣＤ１６＋細胞を含む第１の部分と、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用される、キット。
【請求項50】
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、請求項１９～３２のいずれか一項に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用される、キット。
【請求項51】
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、前記Ｆｃ領域が、前記ＮＫ細胞に結合することができ、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含む、第２の部分と、
を含む、医薬として使用される、キット。
【請求項52】
組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞を含む薬学的組成物であって、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）Ｆｃ領域のアミノ酸配列上の改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、前記Ｆｃ領域が、前記ＣＤ１６＋細胞に結合することができ、賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物。
【請求項53】
前記組換えポリペプチドが、前記ＣＤ１６＋細胞に非共有結合している、請求項５２に記載の薬学的組成物。
【請求項54】
組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、前記組換えポリペプチドが、（ｉ）Ｆｃ領域のアミノ酸配列上の改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、前記Ｆｃ領域が、前記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物。
【請求項55】
前記組換えポリペプチドが、前記ＮＫ細胞に非共有結合している、請求項５４に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、治療法、特にＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞及び／又はＮＫ細胞前駆体をベースにした細胞療法の分野に関する。特に、本発明は、改変Ｆｃ領域、特に改変ＣＨ２ドメインを含む組換えポリペプチドと組み合わせた、ＣＤ１６＋細胞、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
細胞療法の開発は、癌、重篤な感染症、又は臓器移植若しくは幹細胞移植後の移植片拒絶反応等の進行性疾患の治療に全面的に拡張されつつある。ほとんどの科学的及び臨床的なブレークスルーは、主に癌に対して得られている。細胞療法は、特にＢ細胞リンパ増殖性障害の治療において、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）と呼ばれるキメラ受容体を用いて遺伝子改変されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）により得られた臨床的成功から、癌に対する非常に有望な治療選択肢として浮上した。
【0003】
現在、ＦＤＡ（食品医薬品局）によって承認されているＣＡＲ－Ｔ細胞は、患者への放出及び再注入の前に、認証されたリファレンスセンターで遺伝子改変された自己Ｔ細胞（患者由来）に基づいている。それにもかかわらず、かなりの数の患者において、ＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた治療は、その後の副作用、更には致死的な影響と関連している（非特許文献１）。さらに、このタイプの治療のロジスティクス及びコストによって、それらの広範な使用が妨げられている。したがって、より多くの患者がこれらのタイプの細胞療法から恩恵を得ることができるように、ＣＡＲ－Ｔ細胞の欠点を克服し、新しい治療選択肢を利用できることを可能にする代替手段を考案することが不可欠である。
【0004】
研究されている代替手段の１つは、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の使用である。ＮＫ細胞は、事前の抗原刺激なしに標的細胞を破壊できる細胞傷害性リンパ球である。それにもかかわらず、多くの基本的な前臨床及び臨床結果は、ＮＫ細胞単独では、種々の血液学的及び非血液学的な悪性病変の治療に有効ではないことを示している。具体的には、これらのＮＫ細胞は、それらの標的を認識するのに十分に有効ではなく、及び／又は所望の治療効果を生じさせるのに十分な細胞傷害性がない。ＮＫ細胞の有効性を高める目的で、これらのＮＫ細胞は、標的細胞特異的抗原を認識するために「武装（armed）」させることができる（非特許文献２）。
【0005】
しかしながら、副作用を誘発しないか、又は副作用をほとんど誘発せず、より安価で、経時的に非常に安定で、大多数の患者及び大多数の病変に適した、細胞療法における新しい組成物を有することが依然として求められている。
【0006】
また、関連する標的に確実に対処でき、副作用を軽減する、治療用抗体及び他の治療用化合物等の治療用化合物の新しい投与手段を提供する必要がある。
【0007】
本発明の目的は、これらの要求の全て又は一部を満たすことである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Santomasso B, Bachier C, Westin J, Rezvani K, Shpall EJ. The Other Side of CAR T-Cell Therapy: Cytokine Release Syndrome, Neurologic Toxicity, and Financial Burden. Am Soc Clin Oncol Educ Book. 2019; 39: 433-444. doi: 10.1200/EDBK_238691
【非特許文献2】Sanchez-Martinez et al., Theranostics 8(14):3856-3869, June 2018
【発明の概要】
【0009】
本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に関し、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ領域、好ましくはＣＨ２ドメインに少なくとも１つの改変を有する改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記改変Ｆｃ領域は、上記細胞又はそれらの前駆体に結合することができる。
【0010】
以下の実施例に示すように、本発明者らは、１つ又は複数のリガンドに結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞、特にＮＫ細胞が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで数日間安定したままであることに注目した。さらに、これらの武装したＣＤ１６＋細胞、特にＮＫ細胞が、この結果として、適切なリガンド（複数の場合もある）の認識を介して標的細胞を特異的に標的化することができたことに注目した。
【0011】
ＣＤ１６細胞表面マーカーは、本明細書ではＦｃγＲＩＩＩ表面受容体とも呼ばれる。
【0012】
目的の１つによれば、本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＣＤ１６＋細胞に結合することができる、薬学的組成物に関する。
【0013】
目的の１つによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、薬学的組成物に関する。
【0014】
本発明者らは、予想外なことであったが、個体から採取され、本発明に記載の組換えポリペプチドでｉｎ ｖｉｔｒｏで武装したＣＤ１６＋細胞であるＮＫ細胞が、標的細胞に対するＮＫ細胞の細胞傷害性を増加させることを可能にすることに注目した。驚くべきことに、Moore et al. 2010の教示に反して、ＮＫ細胞のＦｃ受容体と本発明による組換えポリペプチドとの間の結合は、数日間、特に少なくとも７日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで安定及び特異的なままである。したがって、ＮＫ細胞と本明細書に記載の組換えポリペプチドとのこの組み合わせは、「武装ＮＫ細胞」と呼ばれ、治療が対象標的細胞の破壊を意味する任意の疾患に対する有効な治療解決策であることを証明する。この治療解決策は、Wang et al.（Luyao Wang, Mei Dou, Qingxia Ma, Ruixue Yao, Jia Liu; Chimeric antigen receptor (CAR)-modified NK cells against cancer: Opportunities and challenges; International Immunopharmacology 74 (2019) 105695）のレビューで具体的に記載されているＮＫ－ＣＡＲ細胞とは異なり、ＮＫ細胞の遺伝子改変を必要としないため、この組み合わせは、ＮＫ－ＣＡＲ細胞よりも使用がはるかに簡単になる。実際、例えば臍帯血から採取されたＮＫ細胞の単一試料は、適切なリガンドを特定できるありとあらゆる標的化特異性について、任意の個体を治療するのに十分である。
【0015】
したがって、本発明者らは、特にナチュラルキラー細胞系統に相当し得るＣＤ１６＋細胞を、改変Ｆｃ領域を含む組換えポリペプチドと効率的に、かつ安定した方法で組み合わせることができるという実験的証拠を提供する。
【0016】
さらに、本明細書に開示される組換えポリペプチドは、長期間にわたってＣＤ１６受容体、特にＣＤ１６ａ受容体に対する高い親和性を有することが、本発明において実証されている。
【0017】
本発明者らはまた、組換えポリペプチドが非共有結合的に結合している場合、列挙された細胞への付着も安定であり、更には治療においても適しているという実験的証拠を提供する。したがって、列挙された組換えポリペプチドのＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ細胞又はＮＫ前駆体への「結合」又は「付着」は、好ましくは「非共有結合」と見なされる。
【0018】
本発明者らはまた、対応する戦略が、用量を減らす及び／又は副作用を軽減する治療用化合物を投与するのに適していることを提案する。
【0019】
本発明者らはまた、本発明の意味において、対応する戦略が、そのようなＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ細胞及び／又はそれらの前駆体と、改変Ｆｃ領域を有する複数の組換えポリペプチドとの結合、特に非共有結合に適していることを提案する。
【0020】
これらの目的の１つによれば、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質、好ましくはＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質に結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞を含む組成物であって、組換えポリペプチドは、ＣＤ１６＋細胞によって発現される、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質、好ましくはＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質に非共有結合しており、上記組換えポリペプチドは、
（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
リガンド結合ドメインは、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物に関する。
（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
リガンド結合ドメインは、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物に関する。
【0021】
いくつかの実施の形態によれば、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインは、配列番号１で表される。したがって、いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表される野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して改変されている。
【0022】
いくつかの実施の形態によれば、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質は、ＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質である。
【0023】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｇ２３６Ａ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む。
【0024】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む。
【0025】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔからなる群より選択される少なくとも１種の更なる突然変異を含む。
【0026】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0027】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0028】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0029】
いくつかの実施の形態によれば、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0030】
いくつかの実施の形態によれば、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関するＣＨ２ドメインの改変は、突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅのみからなる。
【0031】
いくつかの実施の形態によれば、ＣＤ１６＋細胞は、ＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系である。
【0032】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは抗体であり、ＣＨ２ドメインにおける改変は、抗体を構成するＣＨ２ドメインの対（又は重鎖の対）に関して対称的、又は非対称的である。
【0033】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは、改変ＣＨ２ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域を含む。
【0034】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは、本明細書に記載の改変ＣＨ２ドメイン、又は本明細書に記載のＦｃ領域と、以下の抗体：アバゴボマブ（Abagovomab）、アバタセプト（Abatacept）、アブシキシマブ（Abciximab）、アビツズマブ（Abituzumab）、アブリルマブ（Abrilumab）、アクトクスマブ（Actoxumab）、アダリムマブ（Adalimumab）、アデカツムマブ（Adecatumab）、アデュカヌマブ（Aducanumab）、アフリベルセプト（Aflibercept）、アフツジマブ（Afutuzymab）、アラシズマブ（Alacizumab）、アレファセプト（Alefacept）、アレムツズマブ（Alemtuzumab）、アリロクマブ（Alirocumab）、アルツモマブ（Altumomab）、アマツキシマブ（Amatixumab）、アナツモマブ（Anatumomab）、アネツマブ（Anetumab）、アニフロムマブ（Anifromumab）、アンルキンズマブ（Anrukinzumab）、アポリズマブ（Apolizumab）、アルシツモマブ（Arcitumomab）、アスクリンバクマブ（Ascrinvacumab）、アセリズマブ（Aselizumab）、アテゾリズマブ（Atezolizumab）、アチヌマブ（Atinumab）、アルチズマブ（Altizumab）、アトロリムマブ（Atorolimumab）、バピネウズマブ（Bapineuzumab）、バシリキシマブ（Basiliximab）、バビツキシマブ（Bavituximab）、ベクツモマブ（Bectumomab）、ベゲロマブ（Begelomab）、ベラタセプト（Belatacept）、ベリムマブ（Belimumab）、ベンラリズマブ（Benralizumab）、ベルチリムマブ（Bertilimumab）、ベシレソマブ（Besilesomab）、ベバシズマブ（Bevacizumab）、ベズロトクスマブ（Bezlotoxumab）、ビシロマブ（Biciromab）、ビマグルマブ（Bimagrumab）、ビメキズマブ（Bimekizumab）、ビバツズマブ（Bivatuzumab）、ブリナツモマブ（Blinatumomab）、ブロソズマブ（Blosozumab）、ボコシズマブ（Bococizumab）、ブレンツキシマブ（Brentuximab）、ブリアキヌマブ（Briakimumab）、ブロダルマブ（Brodalumab）、ブロルシズマブ（Brolucizumab）、ブロンチシズマブ（Bronticizumab）、カナキヌマブ（Canakinumab）、カンツズマブ（Cantuzumab）、カプラシズマブ（Caplacizumab）、カプロマブ（Capromab）、カルルマブ（Carlumab）、カツマキソマブ（Catumaxomab）、セデリズマブ（Cedelizumab）、セルトリズマブ（Certolizumab）、セツキシマブ（Cetixumab）、シタツズマブ（Citatuzumab）、シクスツムマブ（Cixutumumab）、クラザキズマブ（Clazakizumab）、クレノリキシマブ（Clenoliximab）、クリバツズマブ（Clivatuzumab）、コドリツズマブ（Codrituzumab）、コルツキシマブ（Coltuximab）、コナツムマブ（Conatumumab）、コンシズマブ（Concizumab）、クレネズマブ（Crenezumab）、ダセツズマブ（Dacetuzumab）、ダクリズマブ（Daclizumab）、ダロツズマブ（Dalotuzumab）、ダピロリズマブ（Dapirolizumab）、ダラツムマブ（Daratumumab）、デクトレクマブ（Dectrekumab）、デムシズマブ（Demcizumab）、デニンツズマブ（Denintuzumab）、デノスマブ（Denosumab）、デルロチクスマブ（Derlotixumab）、デツモマブ（Detumomab）、ジヌツキシマブ（Dinutuximab）、ジリダブマブ（Diridavumab）、ドリノマブ（Dorlinomab）、ドロジツマブ（Drozitumab）、デュピルマブ（Dupilumab）、デュルバルマブ（Durvalumab）、デュシギツマブ（Dusigitumab）、エクロメキシマブ（Ecromeximab）、エクリズマブ（Eculizumab）、エドバコマブ（Edobacomab）、エドレコロマブ（Edrecolomab）、エファリズマブ（Efalizumab）、エファングマブ（Efungumab）、エルデルマブ（Eldelumab）、エルゲムツマブ（Elgemtumab）、エロツズマブ（Elotuzumab）、エルシリモマブ（Elsilimomab）、エマクツズマブ（Emactuzumab）、エミベツズマブ（Emibetuzumab）、エナバツズマブ（Enavatuzumab）、エンホルツマブ（Enfortumab）、エンリモマブ（Enlimomab）、エノブリツズマブ（Enoblituzumab）、エノキズマブ（Enokizumab）、エノチクマブ（Enoticumab）、エンシツキシマブ（Ensituximab）、エピツモマブ（Epitumomab）、エプラツズマブ（Epratuzomab）、エルリズマブ（Erlizumab）、エルツマキソマブ（Ertumaxomab）、エタネルセプト（Etanercept）、エタラシズマブ（Etaracizumab）、エトロリズマブ（Etrolizumab）、エビナクマブ（Evinacumab）、エボロクマブ（Evolocumab）、エクスビビルマブ（Exbivirumab）、ファノレソマブ（Fanolesomab）、ファラリモマブ（Faralimomab）、ファルレツズマブ（Farletuzomab）、ファシヌマブ（Fasimumab）、フェルビズマブ（Felvizumab）、フェザキヌマブ（Fezkimumab）、フィクラツズマブ（Ficlatuzumab）、フィギツムマブ（Figitumumab）、フィリブマブ（Firivumab）、フランボツマブ（Flanvotumab）、フレチクマブ（Fletikumab）、フォントリズマブ（Fontolizumab）、フォラルマブ（Foralumab）、フォラビルマブ（Foravirumab）、フレソリムマブ（Fresolimumab）、フルラヌマブ（Fulramumab）、フツキシマブ（Futuximab）、ガリキシマブ（Galiximab）、ガニツマブ（Ganitumab）、ガンテネルマブ（Gantenerumab）、ガビリモマブ（Gavilimomab）、ゲムツズマブ（Gemtuzumab）、ゲボキズマブ（Gevokizumab）、ギレンツキシマブ（Girentuximab）、グレンバツムマブ（Glembatumumab）、ゴリムマブ（Golimumab）、ゴミリキシマブ（Gomiliximab）、グセルクマブ（Guselkumab）、イバリズマブ（Ibalizumab）、イブリツモマブ（Ibritumomab）、イクルクマブ（Icrucumab）、イダルシズマブ（Idarucizumab）、イゴボマブ（Igovomab）、イマルマブ（Imalumab）、イムシロマブ（Imciromab）、イムガツズマブ（Imgatuzumab）、インクラクマブ（Inclacumab）、インダツキシマブ（Indatuximab）、インデュサツマブ（Indusatumab）、インフリキシマブ（Infliximab）、インテツムマブ（Intetumumab）、イノリモマブ（Inolimomab）、イノツズマブ（Inotuzumab）、イピリムマブ（Ipilimumab）、イラツムマブ（Iratumumab）、イサツキシマブ（Isatuximab）、イトリズマブ（Itolizumab）、イキセキズマブ（Ixekizumab）、ケリキシマブ（Keliximab）、ラベツズマブ（Labetuzumab）、ランブロリズマブ（Lambrolizumab）、ランパリズマブ（Lampalizumab）、レブリキズマブ（Lebrikizumab）、レマレソマブ（Lemalesomab）、レンジルマブ（Lenzilumab）、レルデリムマブ（Lerdelimumab）、レキサツムマブ（Lexatumumab）、リビビルマブ（Libivirumab）、リファスツズマブ（Lifastuzumab）、リゲリズマブ（Ligelizumab）、リロトマブ（Lilotomab）、リンツズマブ（Lintuzumab）、リリルマブ（Lirilumab）、ロデルシズマブ（Lodelcizumab）、ロキベトマブ（Lokivetmab）、ロルボツズマブ（Lorvotuzumab）、ルカツムマブ（Lucatumumab）、ルリズマブ（Lulizumab）、ルミリキシマブ（Lumiliximab）、ルムレツズマブ（Lumretuzumab）、マパツズマブ（Mapatumumab）、マルゲツキシマブ（Margetuximab）、マスリモマブ（Maslimomab）、マブリリムマブ（Mavrilimumab）、マツズマブ（Matuzumab）、メポリズマブ（Mepolizumab）、メテリムマブ（Metelimumab）、ミラツズマブ（Milatuzumab）、ミネツモマブ（Minetumomab）、ミルベツキシマブ（Mirvetuximab）、ミツモマブ（Mitumomab）、モガムリズマブ（Mogamulizumab）、モロリムマブ（Morolimumab）、モタビズマブ（Motavizumab）、モキセツモマブ（Moxetumomab）、ムロモナブ－ＣＤ３（Muromonab-CD3）、ナコロマブ（Nacolomab）、ナミルマブ（Namilumab）、ナプツモマブ（Naptumomab）、ナルナツマブ（Narnatumab）、ナタリズマブ（Natalizumab）、ネバクマブ（Nebacumab）、ネシツムマブ（Necitumumab）、ネモリズマブ（Nemolizumab）、ネレリモマブ（Nerelimomab）、ネスバクマブ（Nesvacumab）、ニモツズマブ（Nimotuzumab）、ニボルマブ（Nivolumab）、ノフェツモマブ（Nofetumomab）、オビルトキサキシマブ（Obiltoxaximab）、オビヌツズマブ（Obinutuzumab）、オカラツズマブ（Ocaratuzumab）、オクレリズマブ（Ocrelizumab）、オデュリモマブ（Odulimomab）、オファツムマブ（Ofatumumab）、オララツマブ（Olaratumab）、オロキズマブ（Olokizumab）、オマリズマブ（Omalizumab）、オナルツズマブ（Onartuzumab）、オンツキシズマブ（Ontuxizumab）、オピシヌマブ（Opicinumab）、オポルツズマブ（Oportuzumab）、オレゴボマブ（Oregovomab）、オルチクマブ（Orticumab）、オテリキシズマブ（Otelixizumab）、オルテルツズマブ（Oltertuzumab）、オキセルマブ（Oxelumab）、オザネズマブ（Ozanezumab）、オゾラリズマブ（Ozoralizumab）、パギバキシマブ（Pagibaximab）、パリビズマブ（Palivizumab）、パニツムマブ（Panitumumab）、パンコマブ（Pankomab）、パノバクマブ（Panobacumab）、パルサツズマブ（Parsatuzumab）、パスコリズマブ（Pascolizumab）、パソツキシズマブ（Pasotuxizumab）、パテクリズマブ（Pateclizumab）、パトリツマブ（Patritumab）、ペムブロリズマブ（Pembrolizumab）、ペムツモマブ（Pemtumomab）、ペラキズマブ（Perakizumab）、ペルツズマブ（Pertuzumab）、パキセリズマブ（Pexelizumab）、ピディリズマブ（Pidilizumab）、ピナツズマブ（Pinatuzumab）、ピンツモマブ（Pintumomab）、ポラツズマブ（Polatuzumab）、ポネズマブ（Ponezumab）、プリリキシマブ（Priliximab）、プリツムマブ（Pritumumab）、キリズマブ（Quilizumab）、ラコツモマブ（Racotumomab）、ラドレツマブ（Radretumab）、ラフィビルマブ（Rafivirumab）、ラルパンシズマブ（Ralpancizumab）、ラムシルマブ（Ramucirumab）、ラニビズマブ（Ranibizumab）、ラキシバクマブ（Raxibacumab）、レファネズマブ（Refanezumab）、レガビルマブ（Regavirumab）、レスリズマブ（Reslizumab）、リロナセプト（Rilonacept）、リロツムマブ（Rilotumumab）、リヌクマブ（Rinucumab）、リツキシマブ（Rituximab）、ロバツムマブ（Robatumumab）、ロレデュマブ（Roledumab）、ロモソズマブ（Romosozumab）、ロンタリズマブ（Rontalizumab）、ロベリズマブ（Rovelizumab）、ルプリズマブ（Ruplizumab）、サシツズマブ（Sacituzumab）、サマリズマブ（Samalizumab）、サリルマブ（Sarilumab）、サツモマブ（Satumomab）、セクキヌマブ（Secukimumab）、セリバンツマブ（Seribantumab）、セトキサキシマブ（Setoxaximab）、セヴィルマブ（Sevirumab）、シブロツズマブ（Sibrotuzumab）、シファリムマブ（Sifalimumab）、シルツキシマブ（Siltuximab）、シプリズマブ（Siplizumab）、シルクマブ（Sirukumab）、ソフィツズマブ（Sofituzumab）、ソラネズマブ（Solanezumab）、ソリトマブ（Solitomab）、ソネプシズマブ（Sonepcizumab）、ソンツズマブ（Sontuzumab）、スタムルマブ（Stamulumab）、スレソマブ（Sulesomab）、スビズマブ（Suvizumab）、タバルマブ（Tabalumab）、タカツズマブ（Tacatuzumab）、タドシズマブ（Tadocizumab）、タリズマブ（Talizumab）、タネズマブ（Tanezumab）、タプリツモマブ（Taplitumomab）、タレクスツマブ（Tarextumab）、テフィバズマブ（Tefibazumab）、テリモマブ・アリトクス（Telimomab aritox）、テナツモマブ（Tenatumomab）、テネリキシマブ（Teneliximab）、テプリズマブ（Teplizumab）、テシドルマブ（Tesidolumab）、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（Ticlimumab）、チルドラキズマブ（Tildrakizumab）、ティガツズマブ（Tigatuzumab）、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ（Tocilizumab）、トラリズマブ（Toralizumab）、トサトクスマブ（Tosatoxumab）、トシツモマブ（Tositumomab）、トベツマブ（Tovetumab）、トラロキヌマブ（Tralokimumab）、トラスツズマブ（Trastuzumab）、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ（Tregalizumab）、トレメリムマブ（Tremelimumab）、トレボグルマブ（Trevogrumab）、ツコツズマブ（Tucotuzumab）、ツビルマブ（Tuvirumab）、ウブリツキシマブ（Ublituximab）、ウロクプルマブ（Ulocuplumab）、ウレルマブ（Urelumab）、ウルトキサズマブ（Urtoxazumab）、ウステキヌマブ（Ustekimumab）、バンドルツズマブ（Vandortuzumab）、バンチクツマブ（Vantictumab）、バヌシズマブ（Vanucizumab）、バパリキシマブ（Vapaliximab）、バルリルマブ（Varlimumab）、バテリ
ズマブ（Vatelizumab）、ベドリズマブ（Vedolizumab）、ベルツズマブ（Veltuzumab）、ベパリモマブ（Vepalimomab）、ベセンクマブ（Vesencumab）、ビジリズマブ（Visilizumab）、ボロシキシマブ（Volocixumab）、ボルセツズマブ（Vorsetuzumab）、ボツムマブ（Votumumab）、ザルツムマブ（Zalutumimab）、ザノリムマブ（Zanolimumab）、ザツキシマブ（Zatuximab）、ジラリムマブ（Ziralimumab）、ジブ－アフリベルセプト（Ziv-Aflibercept）、及びゾリモマブ（Zolimomab）のいずれかのリガンド結合ドメインから選択されるリガンド結合ドメインとを含む抗体又はそのフラグメントである。
ズマブ（Vatelizumab）、ベドリズマブ（Vedolizumab）、ベルツズマブ（Veltuzumab）、ベパリモマブ（Vepalimomab）、ベセンクマブ（Vesencumab）、ビジリズマブ（Visilizumab）、ボロシキシマブ（Volocixumab）、ボルセツズマブ（Vorsetuzumab）、ボツムマブ（Votumumab）、ザルツムマブ（Zalutumimab）、ザノリムマブ（Zanolimumab）、ザツキシマブ（Zatuximab）、ジラリムマブ（Ziralimumab）、ジブ－アフリベルセプト（Ziv-Aflibercept）、及びゾリモマブ（Zolimomab）のいずれかのリガンド結合ドメインから選択されるリガンド結合ドメインとを含む抗体又はそのフラグメントである。
【0035】
いくつかの実施の形態によれば、本明細書に記載の組成物は、医薬として使用することができる。
【0036】
いくつかの好ましい実施の形態によれば、本明細書に記載の組成物は、医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用することができる。
【0037】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、本明細書に記載の組成物を含み、任意に賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物に関する。
【0038】
いくつかの実施の形態によれば、ＣＤ１６＋細胞は、ＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系であり、医薬として使用することができる。
【0039】
いくつかの好ましい実施の形態によれば、本明細書に記載の薬学的組成物は、医薬を必要とする個体における癌、自己免疫疾患、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用することができる。
【0040】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に結合することができる組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞を含む組成物であって、組換えポリペプチドは、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に非共有結合しており、上記組換えポリペプチドは、
（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
リガンド結合ドメインは、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物に関する。
（ｉ）任意にリンカーを介して（ｉｉ）に結合した、野生型ヒトＩｇＧ１の改変ＣＨ２ドメインと、
（ｉｉ）リガンド結合ドメインと、
を含み、
リガンド結合ドメインは、標的リガンドに結合することができる配列を含み、
改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、組成物に関する。
【0041】
いくつかの実施の形態によれば、ＣＤ１６＋細胞は、ＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系である。
【0042】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは抗体であり、ＣＨ２ドメインにおける改変は、抗体を構成するＣＨ２ドメインの対（又は重鎖の対）に関して対称的、又は非対称的である。
【0043】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは、改変ＣＨ２ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域を含む。
【0044】
いくつかの実施の形態によれば、組換えポリペプチドは、本明細書に記載のＣＨ２ドメインと、本明細書に記載の抗体のいずれかのリガンド結合ドメインから選択されるリガンド結合ドメインとを含む抗体又はそのフラグメントである。
【0045】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞に結合することができ、野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含み、改変ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含むことにより特徴付けられ、野生型ヒトＩｇＧ１の上記ＣＨ２ドメインは、配列番号１で表されるか、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性のパーセンテージを有する配列で表され、ＥＵ番号付けによる配列位置２３１～３４０を含む、薬学的組成物に関する。
【0046】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞に結合することができ、本明細書に記載の野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞に関する。
【0047】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、
ＣＤ１６＋細胞、好ましくはＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系のＣＤ１６＋細胞を含む第１の部分と、
本明細書に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＣＤ１６＋細胞、好ましくはＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系のＣＤ１６＋細胞を含む第１の部分と、
本明細書に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0048】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、
本明細書に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、
本明細書に記載の組換えポリペプチドを含む第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0049】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞に結合することができ、本明細書に記載の野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含む、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系のＮＫ細胞を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞に結合することができ、本明細書に記載の野生型ヒトＩｇＧ１の少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメインを含む、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0050】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドと組み合わせたＣＤ１６＋細胞を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）Ｆｃ領域のアミノ酸配列上の改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＣＤ１６＋細胞に結合することができ、賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物に関する。
【0051】
これらの目的の別のものによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）Ｆｃ領域のアミノ酸配列上の改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含む、薬学的組成物に関する。
【0052】
これらの目的の別の１つによれば、本発明はまた、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0053】
これらの目的の別の１つによれば、本発明は、
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0054】
これらの目的の別の１つによれば、本発明はまた、医薬として使用される本発明による薬学的組成物の使用に関する。
【0055】
これらの目的の別の１つによれば、本発明はまた、本発明による薬学的組成物、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、又はキットを、上記同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を標的細胞に近づけることが上記標的細胞を破壊するために有益である、疾患を治療又は予防する方法において使用することに関する。
【0056】
これらの目的の別の１つによれば、本発明はまた、本発明による薬学的組成物、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、又はキットを、それらを必要とする個体における癌、自己免疫疾患及びその派生的なもの、又は感染性疾患を治療又は予防する方法において使用することに関する。
【0057】
これらの目的の別の１つによれば、本発明は、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物を調製するｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏの方法であって、ａ）ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を提供する工程と、ｂ）上記ＮＫ細胞又は上記ＮＫ細胞前駆体を、組換えポリペプチドと接触させる工程であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、工程とを含む方法に関する。
【0058】
１つの実施の形態によれば、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、賦形剤又は薬理学的に許容されるビヒクルを更に含むことができる、薬学的組成物である。
【0059】
１つの実施の形態によれば、改変Ｆｃ領域は、配列番号２～配列番号１３の任意の１つのアミノ酸配列を含むことができる。
【0060】
１つの実施の形態によれば、改変Ｆｃ領域は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性、特に配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性、特に配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、改変Ｆｃ領域は、配列番号２と１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0061】
１つの実施の形態によれば、組換えポリペプチドの改変Ｆｃ領域は、少なくとも１つの改変ＣＨ２ドメイン含むことができる。
【0062】
特定の実施の形態によれば、組換えポリペプチドのＦｃ領域の改変ＣＨ２ドメインは、配列番号２～配列番号１３の任意の１つのアミノ酸配列、又は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性、特に配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性、特に配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、改変ＣＨ２ドメインは、配列番号２と１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0063】
１つの実施の形態によれば、ＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ細胞は、それらを必要とする個体に関して同種異系であり得る。
【図面の簡単な説明】
【0064】
【図1】ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞（臍帯血由来のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＫ細胞）と組み合わせたＦｃ ＳＤＨ、Ｆｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチド並びに抗体の結合特異性を表す図である。
【図2】Ｆｃ ＳＤＨ、Ｆｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチドと、ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞のＦｃ受容体（ＣＤ１６Ａ）との間の結合安定性を表す図である。
【図3】Ｆｃ ＳＤＨ及びＦｃ ＷＴポリペプチドによるＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＦｃ受容体の飽和状態を表す図である。
【図4】乳癌細胞（ＢＴ２０細胞株）の生残に対するＦｃ ＳＤＨ又はＦｃ ＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞の細胞傷害性及び脱顆粒レベルを表す図である。
【図5】武装ｅＮＫ細胞の膜表面におけるＦｃ ＳＤＨ及びＦｃ ＷＴ抗体（トラスツズマブ）の存在を表す図である。
【図6】（ｉ）Ｆｃなし、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７抗体、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７抗体又は（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体で武装したｅＮＫ細胞の表面でのＣＤ１６受容体の発現を表す図である。
【図7A】成体スイスヌードマウスから採取した腹水試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す図である。
【図7B】成体スイスヌードマウスから採取した腹水試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す図である。
【図7C】成体スイスヌードマウスの血液、骨髄及び脾臓試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す図である。
【図7D】成体スイスヌードマウスの血液、骨髄及び脾臓試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す図である。
【図8】本発明による組換えポリペプチドを示す２つの実施形態を表す図である。
【図9A】ＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂ受容体に対する、Ｆｃ ＷＴ（野生型）と比較した組換えＦｃポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性を表す図である。
【図9B】武装後１時間～７２時間の種々の組換えＦｃポリペプチドのＣＤ１６＋細胞に対する結合の動態を表す図である。
【図10】ＣＤ１６＋細胞上に含有する２つの組換えＦｃ ＳＤＨ抗体による同時武装を表す図である。
【図11】ＣＤ２０陽性癌細胞に対する組換えＦｃ ＳＤＨリツキシマブを用いたｅｘ ｖｉｖｏ武装ＣＤ１６＋細胞の有効性を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【0065】
図１において、ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞（臍帯血由来のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＫ細胞）と組み合わせたＦｃ ＳＤＨ、Ｆｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチド並びに抗体の結合特異性を表す。１Ａの上のグラフは、ｅＮＫ細胞上のＦｃ Ａ６４７マーカーの結果を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ６４７の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。１Ａの下のグラフ。Ｙ軸：Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７に対して正規化した改変Ｆｃ Ａ６４７の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。Ｘ軸：（左から右へ）ポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７及び（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７で武装したｅＮＫ細胞。４人のドナー由来のｅＮＫ細胞を使用した３つの独立した実験の結果を表す。＊＝ｐ＜０．０５。一方向ＡＮＯＶＡ。１Ｂの上のグラフは、抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣマーカーの結果を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）抗体なし（細胞のみ）、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴトラスツズマブ抗体及び（ｉｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体に付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：ＦＩＴＣの平均蛍光強度。１Ｂの下のグラフ。Ｙ軸：ＦＩＴＣの平均蛍光強度。Ｘ軸：（ｉ）Ｆｃ ＷＴトラスツズマブ抗体及び（ｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体に付着したｅＮＫ細胞。３人のドナー由来のｅＮＫを使用した２つの独立した実験の結果を表す。１Ｃの中央のグラフ。Ｙ軸：ｅＮＫ細胞上のＡ６４７マーカーの平均蛍光強度。Ｘ軸：ポリペプチド（左から右へ）（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７又は（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞。１Ｃの右グラフ。Ｙ軸：ＣＤ１６－ ｅＮＫ細胞試料及びＣＤ１６＋細胞試料におけるＦｃ＋ ｅＮＫ細胞のパーセンテージ。Ｘ軸：ポリペプチド（左から右へ）（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７又は（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞。４人のドナー由来のｅＮＫを使用した３つの独立した実験の結果を表す。＊＝ｐ＜０．０５；＊＊＊＝ｐ＜０．００１；＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１；双方向ＡＮＯＶＡ。
【0066】
図２において、Ｆｃ ＳＤＨ、Ｆｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチドと、ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞のＦｃ受容体（ＣＤ１６Ａ）との間の結合安定性を表す。結果は、２日目及び３日目に４人のドナー、７日目に３人のドナー由来のＮＫ細胞を使用した３つの独立した実験を表している。グラフ２Ａは、Ａ６４７マーカーの結果を表すヒストグラムである。Ｙ軸：ポリペプチド（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ６４７の平均蛍光強度。グラフ２Ｂ。Ｙ軸：２日間のインキュベーション後（明灰色）、３日間のインキュベーション後（中灰色）、及び７日間のインキュベーション後（暗灰色）のＦｃ＋（ＣＤ１６＋）ｅＮＫ細胞のパーセンテージ。Ｘ軸：ポリペプチド（左から右へ）（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７及び（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞。グラフ２Ｃ。Ｙ軸：３７℃でのインキュベーション２日間のインキュベーション後（明灰色）、３日間のインキュベーション後（中灰色）、及び７日間のインキュベーション後（暗灰色）のＡ６４７の平均蛍光強度。Ｘ軸：ポリペプチド（左から右へ）（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７及び（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７に付着したｅＮＫ細胞。
【0067】
図３において、Ｆｃ ＳＤＨ及びＦｃ ＷＴポリペプチドによるＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＦｃ受容体の飽和状態を表す。グラフ３Ａは、０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ又は４０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴ Ａ６４７又はＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドによるｅＮＫ細胞のＦｃ受容体の飽和状態を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）１μｇ／ｍｌ、（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌ、（ｉｖ）２０μｇ／ｍｌ、（ｖ）３０μｇ／ｍｌ又は（ｖｉ）４０μｇ／ｍｌのＦｃ ＷＴ Ａ６４７又はＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドに付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ６４７の平均蛍光強度。グラフ３Ｂは、０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ又は４０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８ポリペプチドによるｅＮＫ細胞のＦｃ受容体の飽和状態を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）１μｇ／ｍｌ、（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌ、（ｉｖ）２０μｇ／ｍｌ、（ｖ）３０μｇ／ｍｌ又は（ｖｉ）４０μｇ／ｍｌのＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８に付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ４８８の平均蛍光強度。結果は、１人のドナー由来のｅＮＫを使用した１つの実験を表している（２回の疑似繰り返し）。グラフ３Ｃは、２０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴ、Ｆｃ ＳＤＨ、Ｆｃブロック非標識競合ポリペプチド及び抗ＣＤ１６抗体による、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ４８８ポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞上のＦｃ受容体の競合状態を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）２０μｇ／ｍｌでの（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）競合体なし、（ｉｉｉ）Ｆｃブロック、（ｉｖ）Ｆｃ ＷＴ、（ｖ）Ｆｃ ＳＤＨ及び（ｖｉ）抗ＣＤ１６抗体と共に、３７℃で１時間インキュベートした、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ４８８ポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ４８８の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。グラフ３Ｄは、２０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＳＤＨ、Ｆｃブロック非標識競合ポリペプチド及び抗ＣＤ１６抗体による、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞のＦｃ受容体の競合状態を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）２０μｇ／ｍｌでの（ｉ）Ｆｃなし（細胞のみ）、（ｉｉ）競合体なし、（ｉｉｉ）Ｆｃブロック、（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ及び（ｖ）抗ＣＤ１６抗体と共にインキュベートした、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ６４７の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。結果は、２回の繰り返しで１人のドナー由来のｅＮＫを使用した１つの実験を表している。
【0068】
図４において、乳癌ＢＴ２０細胞株由来の細胞の細胞生残に対するＦｃ ＳＤＨ又はＦｃ ＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞の細胞傷害性及び脱顆粒レベルを表す。グラフ４Ａ。Ｙ軸：武装ｅＮＫ細胞のみを観察するために、１時間武装させ、１回の洗浄サイクルを経たｅＮＫ細胞と共に１時間インキュベートした後のＢＴ２０標的細胞の細胞生残率（パーセンテージで表す）。Ｘ軸：（左から右へ）（ｉ）武装ｅＮＫ細胞なし、（ｉｉ）非武装ｅＮＫ細胞、洗浄していない（すなわち、遊離抗体が存在する）（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｉｖ）１０μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｖ）１μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、及び（ｖｉ）１μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞と共にインキュベートしたＢＴ２０標的細胞。グラフ４Ｂ。Ｙ軸：１時間武装させ、洗浄していないｅＮＫ細胞と共に１時間インキュベートした後のＢＴ２０細胞の細胞生残率（武装ｅＮＫ細胞だけでなく、遊離Ｆｃの効果も観察できる）。Ｘ軸：（左から右へ）（ｉ）武装ｅＮＫ細胞なし、（ｉｉ）非武装ｅＮＫ細胞、（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｉｖ）１０μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｖ）１μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｖｉ）１μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞と共にインキュベートしたＢＴ２０標的細胞。グラフは、４人のドナー由来のｅＮＫを使用した３つの独立した実験を表している。グラフ４Ｃ。Ｙ軸：２４時間武装させたｅＮＫ細胞と共に１時間インキュベートした後のＢＴ２０標的細胞の細胞生残率（パーセンテージで表す）。Ｘ軸：（左から右へ）（ｉ）武装ｅＮＫ細胞なし、（ｉｉ）非武装ｅＮＫ細胞、（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｉｖ）１０μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞、（ｖ）１μｇ／ｍｌのＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞、及び（ｖｉ）１μｇ／ｍｌのＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞と共にインキュベートしたＢＴ２０標的細胞。グラフ４Ｄ。標的細胞の存在下に置いた（下のグラフ）又は標的細胞なしでの（４Ｄの上のグラフ）武装ｅＮＫ細胞。Ｙ軸：武装ｅＮＫ細胞の表面におけるＣＤ１０７ａの発現率（パーセンテージで表す）。Ｘ軸（左から右へ）：（ｉ）抗体なし、（ｉｉ）１０μｇ／ｍｌのＦｃ ＷＴ抗体、（ｉｉｉ）１０μｇ／ｍｌのＦｃ ＳＤＨ抗体、（ｉｖ）１μｇ／ｍｌのＦｃ ＷＴ抗体、（ｖ）１μｇ／ｍｌのＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞。結果は、３人のドナー由来のｅＮＫを使用した２つの独立した実験を表している。
【0069】
図５において、武装ｅＮＫ細胞の膜表面におけるＦｃ ＳＤＨ及びＦｃ ＷＴ抗体（トラスツズマブ）の存在を表す。グラフ５Ａ。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）膜表面に存在する抗体と組み合わせた、及び（ｉｉ）細胞内ドメインに存在する抗体と組み合わせた、ｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：（左から右へ）（ｉ）抗体なし、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ抗体、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ抗体に付着した抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣマーカーの平均蛍光強度（ＭＦＩ）。グラフ５Ｂ及びグラフ５Ｃは、（ｉ）Ｆｃブロックポリペプチド；（ｉｉ）抗ＣＤ３２抗体；（ｉｉｉ）抗ＣＤ１６抗体クローンＢ７３．１；（ｉｖ）抗ＣＤ１６抗体に対する、Ａ４８８（グラフ５Ｂ）又はＡ６４７（グラフ５Ｃ）Ｆｃ ＳＤＨ標識抗体で武装したｅＮＫ細胞のＦｃ受容体（ＣＤ１６Ａ）の競合状態を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし、（ｉｉ）競合体なし、（ｉｉｉ）Ｆｃブロックポリペプチド、（ｉｖ）抗ＣＤ３２抗体、（ｖ）抗ＣＤ１６抗体クローンＢ７３．１、及び（ｖｉ）抗ＣＤ１６抗体と共にインキュベートした、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ｆｃ Ａ４８８（グラフ５Ｂ）及びＦｃ Ａ６４７（グラフ５Ｃ）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）。結果は、１人のドナー由来のｅＮＫ細胞を使用した１つの実験を表している（ドナー当たり２回の疑似繰り返し）。
【0070】
図６において、（ｉ）Ｆｃなし、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７抗体、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７抗体又は（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体で武装したｅＮＫ細胞の表面でのＣＤ１６受容体の発現を表す。結果は、１人のドナー由来のｅＮＫ細胞を使用した３つの実験を表している。グラフ６Ａは、武装ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ＮＫ細胞上のＣＤ１６表面マーカーの結果を表すヒストグラムである。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃなし、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７抗体、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７抗体、（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体で武装したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：ＣＤ１６の平均蛍光強度。グラフ６Ｂは、武装ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＣＤ１６表面マーカーの発現を表すグラフである。Ｙ軸：武装ｅＮＫ細胞上のＣＤ１６マーカーのパーセンテージでの発現。Ｘ軸：各条件について２日目、３日目及び７日目の（左から右へ）（ｉ）抗体Ｆｃなし、（ｉｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７抗体、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７抗体、（ｉｖ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体で武装したｅＮＫ細胞。
【0071】
図７Ａにおいて、成体スイスヌードマウスから採取した腹水試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す。Ｙ軸：ＣＤ４５＋（左）、ＣＤ５６＋（中央）、ＣＤ１６－／ｌｏｗ又はＣＤ１６＋（右）武装ｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：（ｉ）ＳＳＣ－Ａ（左）、ＣＤ１６（中央）、Ｆｃ Ａ６４７（右）細胞の粒度測定。
【0072】
図７Ｂにおいて、成体スイスヌードマウスから採取した腹水試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す。ｉｎ ｖｉｖｏ注射前後の全ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋ ｅＮＫ細胞内の細胞Ｆｃ Ａ６４７＋の比較。Ｙ軸：（上から下へ）（ｉ）Ｆｃポリペプチドなし、（ｉｉ）注射前のＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチド、（ｉｉｉ）注射の２４時間後のＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドに付着したｅＮＫ細胞の数。Ｘ軸：Ａ６４７の平均蛍光強度。
【0073】
図７Ｃにおいて、成体スイスヌードマウスの血液、骨髄（グラフ７Ｃ）及び脾臓（グラフ７Ｄ）試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す。Ｙ軸：血液（左）又は骨髄（右）試料中のＣＤ４５＋細胞の数。Ｘ軸：ＳＳＣ－Ａの平均蛍光強度。
【0074】
図７Ｄにおいて、成体スイスヌードマウスの血液、骨髄（グラフ７Ｃ）及び脾臓（グラフ７Ｄ）試料中のｅＮＫ細胞－Ｆｃ ＳＤＨのｉｎ ｖｉｖｏでの結合安定性を表す。Ｙ軸：脾臓試料中のＣＤ４５＋（左）、及びＣＣＤ１６－／ｌｏｗ又はＣＤ１６＋ Ａ６４７標識（数、右）細胞の数。Ｘ軸：ＳＳＣ－Ａ（左）、Ｆｃ Ａ６４７（右）の平均蛍光強度。
【0075】
図８は、本発明による組換えポリペプチドの２つの例証的な実施形態を表す。
【0076】
図９Ａにおいて、ＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂに対する、Ｆｃ ＷＴ抗体形態と比較した組換えＦｃ ＳＤ（Ａ）、Ｆｃ ＩＥ（Ｂ）、Ｆｃ ＳＤＩＥ（Ｃ）、Ｆｃ ＡＬ（Ｄ）、Ｆｃ ＡＬＩＥ（Ｅ）、Ｆｃ ＧＡＳＤ（Ｆ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＩＥ（Ｈ）、Ｆｃ ＳＤＡＬＩＥ（Ｉ）、Ｆｃ ＳＤＨＦＩＥ（Ｊ）、Ｆｃ ＳＤＳＴＩＥ（Ｋ）及びＦｃ ＳＤＨ（Ｌ）抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性を表す。グラフは、参照値である組換えＦｃ ＷＴ抗体（ＲＴＸ－ＷＴ）と比較した、ＣＤ１６ａ（明灰色）及びＣＤ１６ｂ（暗灰色）に対する親和性を表す。Ｙ軸：Ｆｃ ＷＴ（ＲＴＸ－ＷＴ）と比較した親和性の改善の倍率。Ｘ軸：（左から右へ）Ｆｃ ＷＴ抗体（ＲＴＸ－ＷＴ）、Ｆｃ ＳＤ抗体（ＲＴＸ Ａ）、Ｆｃ ＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｂ）、Ｆｃ ＳＤＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｃ）、Ｆｃ ＡＬ抗体（ＲＴＸ－Ｄ）、Ｆｃ ＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｅ）、Ｆｃ ＧＡＳＤ抗体（ＲＴＸ－Ｆ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｇ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｈ）、Ｆｃ ＳＤＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｉ）、Ｆｃ ＳＤＨＦＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｊ）、Ｆｃ ＳＤＳＴＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｋ）及びＦｃ ＳＤＨ抗体（ＲＴＸ－Ｌ）。
【0077】
図９Ｂにおいて、ＣＤ１６＋細胞との抗体武装後、１時間～７２時間の種々の組換えＦｃ抗体のＣＤ１６＋細胞、すなわち、ｅＮＫ細胞に対する結合の動態を表す。グラフは、武装後１時間、２４時間、４８時間又は７２時間での、表面をＦｃ ＷＴ抗体（ＲＴＸ－ＷＴ）又は各組換えＦｃ抗体でコーティングさせたＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞のパーセントを表す。Ｙ軸：各組換えＦｃ抗体で武装したｅＮＫ細胞の頻度のパーセンテージ。Ｘ軸：１時間、２４時間、４８時間（未測定のＲＴＸ－Ｌ－Ｔを除く）及び７２時間での、（左から右へ）Ｆｃ ＷＴ抗体（ＲＴＸ－ＷＴ）、Ｆｃ ＳＤ抗体（ＲＴＸ－Ａ）、Ｆｃ ＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｂ）、Ｆｃ ＳＤＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｃ）、Ｆｃ ＡＬ抗体（ＲＴＸ－Ｄ）、Ｆｃ ＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｅ）、Ｆｃ ＧＡＳＤ抗体（ＲＴＸ－Ｆ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｇ）、Ｆｃ ＧＡＳＤＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｈ）、Ｆｃ ＳＤＡＬＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｉ）、Ｆｃ ＳＤＨＦＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｊ）、Ｆｃ ＳＤＳＴＩＥ抗体（ＲＴＸ－Ｋ）、Ｇ１ｍ１７，１アロタイプのＦｃ ＳＤＨ抗体（ＲＴＸ－Ｌ－Ｒ）及びｎＧ１ｍ１アロタイプのＦｃ ＳＤＨ抗体（ＲＴＸ－Ｌ－Ｔ）で武装したｅＮＫ細胞。グラフは、４人のドナー由来のＮＫ細胞を使用した３つの独立した実験を表している。
【0078】
図１０において、ＣＨ２ドメインにＦｃ ＳＤＨ突然変異を含有する２つの異なる抗体によるＣＤ１６＋細胞、すなわち、ｅＮＫ細胞の共武装を表す。ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞を、抗トラスツズマブ抗体（Ｙ軸：トラスツズマブ－Ｆｃ ＳＤＨで武装したＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞の数）で、又は抗リツキシマブ抗体（Ｘ軸：リツキシマブ－Ｆｃ ＳＤＨで武装したＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞の数）で分析した。左パネル：武装していないｅＮＫ細胞；中央パネル：ＲＴＸ－ＳＤＨのみで又はＴＲＡＳＴ－ＳＤＨのみで武装したｅＮＫ細胞；右パネル：ＲＴＸ－ＳＤＨ及びＴＲＡＳＴ－ＳＤＨの両方で武装したｅＮＫ細胞。ＲＴＸ－ＳＤＨは組換えＦｃ ＳＤＨリツキシマブに対応し、ＴＲＡＳＴ－ＳＤＨは組換えＦｃ ＳＤＨトラスツズマブに対応する。
【0079】
図１１において、ＣＤ２０＋癌細胞に対する組換えＦｃ ＳＤＨリツキシマブによるｅｘ ｖｉｖｏ武装ＣＤ１６＋細胞、すなわち、ｅＮＫ細胞の有効性を表す。Ｙ軸：１６時間インキュベーション後のＢリンパ腫原発癌細胞に対するＲＴＸ－ＳＤＨで武装したＮＫ細胞が誘導した特異的抗体媒介細胞傷害性のパーセンテージ。Ｘ軸：患者試料１～７。グラフは、４人のドナー由来のＮＫ細胞を使用した４つの独立した実験を表している。
【0080】
詳細な説明
以下の実施例において詳細に説明するように、本発明者らは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドで武装したＮＫ細胞が、ｉｎ ｖｉｔｒｏの生理学的条件下で経時的に安定であったが、マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでも経時的に安定であったことに注目した。具体的には、組換えポリペプチドをＮＫ細胞上に武装させたときに、生理学的条件下で組換えポリペプチドを移動又は置換させることができないことが示された。より具体的には、本発明者らは、本発明による組換えポリペプチドで武装したこれらのＮＫ細胞が、乳癌ＢＴ２０標的細胞に対する強力な細胞傷害性を誘導する能力を示した。
以下の実施例において詳細に説明するように、本発明者らは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドで武装したＮＫ細胞が、ｉｎ ｖｉｔｒｏの生理学的条件下で経時的に安定であったが、マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでも経時的に安定であったことに注目した。具体的には、組換えポリペプチドをＮＫ細胞上に武装させたときに、生理学的条件下で組換えポリペプチドを移動又は置換させることができないことが示された。より具体的には、本発明者らは、本発明による組換えポリペプチドで武装したこれらのＮＫ細胞が、乳癌ＢＴ２０標的細胞に対する強力な細胞傷害性を誘導する能力を示した。
【0081】
本発明の文脈において、（ナチュラルキラー）ＮＫ細胞は、本明細書に開示されるＣＤ１６＋細胞の一例である。
【0082】
有利には、本発明によれば、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系又は自系のＮＫ細胞を、体内の細胞障害に関連する任意の疾患の治療又は予防に使用することができる。
【0083】
本明細書において使用される用語は、対象としている技術分野における共通の意味で使用され、用語が使用される明細書の文脈に関して使用される。或る特定の用語は、本発明及びそれらの使用に関して追加の指示を提供するために、以下か、又は本明細書の他の箇所で更に議論される。以下の定義は、本明細書及び特許請求の範囲に対して提供される。
【0084】
本発明の種々の実施形態の説明は、「含む」、「有する」、「のみからなる」及び「のみから本質的になる」を含む実施形態を含む。「有する（to have）」及び「含む（to comprise）」という用語、又は「有する（has）」、「有する（have）」、「含む（comprises）」若しくは「含む（comprising）」等の変化形は、記載された１つ又は複数の要素（組成物の要素であるもの又は方法の工程であるもの等）を含むが、他の要素を除外しないものを意味するものとして理解されるべきである。「のみからなる」という用語は、任意の追加の要素を除く、記載された１つ又は複数の要素を含むことを意味する。「のみから本質的になる」という表現は、記載された要素、及び他の要素が発明の新規及び基本的な特性に実質的に影響しない場合、潜在的に他の要素を含むことを意味する。文脈によれば、「含む」という用語は、記載された特性、整数、工程又は構成要素を厳密に含むこともでき、したがって、この場合、「のみからなる」に置き換えることができる。
【0085】
数値に関して本明細書で使用される「約（about）」又は「およそ（approximately）」という用語は、通常、対象としている技術分野における当業者によって特定される、対象としている値の一般的な誤差間隔を指す。特定の値又はパラメータに関する「約」という用語の使用には、この値又はこのパラメータが含まれ、そのように説明される。「約」という用語は、所与の値の±１０％を指す。しかしながら、問題になっている値が、更に分割するとその同一性が失われる分割不可能な対象を指す場合は常に、「約」は分割不可能な対象の±１を指す。
【0086】
本明細書で使用される「個体」又は「患者」という用語は、特に哺乳類を指す。対象となる哺乳類としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類）、ウサギ及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によれば、個体、又は患者はヒトである。
【0087】
本発明の文脈において、生理学的障害又は疾患に関して、「予防する」、「予防」という用語（及びこれらの表現の変化形）は、例えば、この疾患若しくは障害を有することが疑われる、又はこの疾患若しくは障害を発症するリスクがある個体における、疾患又は障害の予防的治療を指す。予防には、疾患の発症を予防すること又は遅らせること、及び／又は疾患の１つ又は複数の症状を所望のレベル又はより低いレベルに維持することが含まれるが、これらに限定されない。「予防する」という用語は、疾患又は障害の発生の可能性又は確率を１００％排除することを必要としない。むしろ、この用語は、所与の現象が発生するリスク又は確率の程度をより低く抑えることを指す。示されるように、予防は完全であることができ、すなわち、検出可能な症状若しくは疾患がないか、又は症状が少ないか、若しくは症状が軽度であるような部分的なものであることができる。
【0088】
本発明の文脈において、「治療的有効量」及び「予防的有効量」という用語は、対象としている病的状態の治療、予防又は管理において治療的利点を提供する量を指す。治療的に有効である特定の量は、医師が容易に決定することができ、対象としている病的状態の種類及び段階、患者の治療歴、性別、体重及び年齢、患者の食事、並びに他の治療剤の投与等の要因に応じて変えることができる。
【0089】
本発明の意味において、変化の文脈で使用される「著しく（significantly）」という用語又は任意の派生用語は、観察された変化が顕著であるか、又は統計的有意性を有することを意味する。
【0090】
本発明の文脈において、「治療すること」、「治療」、「療法」又は「治療的」という用語は、有効成分、すなわち本発明による武装ＮＫ細胞、又はそのような有効成分を含む薬学的組成物を、疾患若しくは病理学的障害、又は１つ若しくは複数の関連症状を治癒、緩和、軽減若しくは減弱、又は改善する目的で、又はこの１つ若しくは複数の症状又はこの疾患の進行を予防又は遅らせるために、又はこの１つ若しくは複数の症状、又はこの疾患又はこの病理学的障害の発症を停止するために、統計的に有意な方法で投与又は消費することを指す。より具体的には、「治療すること」又は「治療」には、個体における疾患に関して有益な効果又は所望の結果を得るための任意のアプローチが含まれる。有益な又は所望の臨床結果としては、疾患又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の減弱又は改善；疾患の程度の減少又は軽減、安定化、すなわち、疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の悪化がないこと；疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の予防；疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の伝播の予防；疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状、又はそのような疾患の１つ以上の症状の進行を遅らせること；関連する疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の再発の減少；及び疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状の中断を挙げることができるが、これらに限定されない。換言すれば、本明細書で使用される「治療」は、疾患、又はそのような疾患の１つ若しくは複数の症状のあらゆる回復、改善、軽減又は中断を含む。症状又は疾患の「軽減」とは、疾患若しくは症状の重症度若しくは頻度の減少、又は疾患若しくは症状の排除を意味する。
【0091】
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「a」、「an」、及び「the」は、文脈において特に明示的に示されない限り、複数形を含む。
【0092】
「薬学的に許容される」又は「生理学的に許容される」とは、ビヒクル（担体、希釈剤、又は賦形剤）が製剤の他の成分と適合性があり、それを含む組成物が投与される個体に対して無害でなければならないことを意味する。薬学的に許容されるビヒクルは、具体的には、薬学分野で使用するのに必要とされる安全性、適合性、及び不活性の基準に従って、申し分のないものとして知られているビヒクルである。薬学的に許容されるビヒクルの例として、滅菌水、スクロース若しくはサッカロース等の糖類、デンプン、ソルビトール等の糖アルコール、ＰＶＰ若しくはＰＥＧ等のポリマー、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、防腐剤、染色剤又は香料を挙げることができる。
【0093】
本発明の文脈において、「生理学的に許容されるビヒクル」という表現は、本発明の有効成分が投与される個体の生物と適合性がある任意の物質又は組成物を指すことを目的とする。特に、生理学的に許容されるビヒクルは、個体への投与が著しい有害作用をもたらさない物質又は組成物である。例えば、水又は生理食塩水等の毒性のない溶媒であり得る。特に、そのようなビヒクルは、経口又は直腸投与と適合性があり、経口投与に適合することが好ましい。
【0094】
以下に示される原料、成分及び構成要素のリストは、本発明の文脈において、それらの任意の組み合わせ及び混合物も検討されるように記載されていると理解される。
【0095】
本明細書に示されている任意の最大数値限定は、任意のより低い数値限定を含み、これらのより低い数値限定が明示的に記載されているものとして理解される。本明細書に示されている任意の最小数値限定は、任意のより高い数値限定を含み、これらのより高い数値限定が明示的に記載されていると考える。本明細書の全体を通して示されている任意の数値間隔は、そのようなより広い数値間隔に含まれる任意のより狭い数値間隔を含み、これらのより狭い数値間隔が全て明示的に記載されていると考える。
【0096】
例えば、成分のリスト等の本明細書に示される任意のリストは、マーカッシュ群として意図されており、そのように解釈されるべきである。したがって、任意のリストは、要素のリスト「からなる群より選択される」要素「並びにそれらの組み合わせ及び混合物」として読み取られ、解釈することができる。
【0097】
以下、本明細書において使用されるいくつかの成分を含む構成要素の商標名を参照することができる。本発明者らは、特定の商標名を有する材料に限定することを意図していない。商標名を用いて本明細書に示したものと同等の材料（例えば、異なる名称又は参照番号を有する異なる供給元から入手したもの）は、以下の説明で置換及び使用することができる。
【0098】
「非経口投与」という用語は、経腸及び局所投与以外の、一般的には注射による、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内経路による投与経路を指し、注射及び灌流を含むが、これらに限定されない。
【0099】
本発明の文脈において、本発明の意味における２つの核酸又はアミノ酸配列間の「同一性パーセンテージ」とは、比較される２つの配列間で同一であるヌクレオチド又はアミノ酸残基のパーセンテージを指すことを意味し、最良のアラインメント（最適なアラインメント）の後に得られ、このパーセンテージは単に統計的なものであり、２つの配列間の差異はそれらの長さ全体を通してランダムに分布する。２つの核酸又はアミノ酸配列間の配列比較は、従来より、最適に位置合わせされた後にこれらの配列を比較して実施され、上記比較は、セグメント又は「比較域（comparison window）」によって実施することができる。比較のための配列の最適なアラインメントは、手動以外に、ＢＬＡＳＴ等の比較ソフトウェアを用いて実施することができる。したがって、「少なくとも約７０％の配列同一性パーセンテージ」には、具体的には、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性パーセンテージが含まれる。
【0100】
本明細書で使用される場合、「＋」は、特定の細胞マーカーの存在を示すために使用される場合、細胞マーカーが、アイソタイプ対照に対して蛍光活性化セルソーティングによって検出可能であるか、又は定量若しくは半定量ＲＴ－ＰＣＲにおいて、又はマーカー検出を可能にする任意の他のよく知られた技術を使用してバックグラウンドを超えて検出可能であることを意味する。
【0101】
本発明の文脈において、「ＣＤ１６＋細胞」とは、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６について「＋」／「陽性」である細胞又は細胞の集団を意味し、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６の細胞上又は細胞内の検出可能な存在を指す。任意の起源、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト由来のＣＤ１６＋細胞。「ＣＤ１６＋細胞」はまた、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６を自然に発現する非改変細胞、又はＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６の発現若しくは過剰発現を可能にするように一時的に改変された細胞、又はＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６を発現若しくは過剰発現するように安定に形質転換された細胞を指す。一時的又は安定な改変は、細胞を化学的若しくは生物学的試薬（複数の場合もある）に、又はヌクレオチド剤をトランスフェクトすることによる遺伝子改変細胞に曝露する等の科学的知識からよく知られた改変を指すが、これらに限定されない）。例えば、「ＣＤ１６＋細胞」という用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、単球、樹状細胞及びマクロファージを包含する。
【0102】
本発明の文脈において、「武装ＣＤ１６＋細胞」とは、組換えポリペプチドと組み合わせた、ＣＤ１６＋細胞、好ましくはＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系又は自系のＣＤ１６＋細胞、より好ましくはＣＤ１６＋細胞を必要とする個体に関して同種異系のＣＤ１６＋細胞を意味し、（ｉ）改変Ｆｃ領域又はその変異体、好ましくは改変ＣＨ２ドメインを含むものと、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む。
【0103】
「武装ＣＤ１６＋細胞」とは、［ＣＤ１６＋細胞］－［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］等のコンストラクト（Ｃ）の化合物を意味する。したがって、「武装ＣＤ１６＋細胞」は、コンストラクト（Ｄ）：［ＣＤ１６＋細胞］－［［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］］の化合物を包含する。
【0104】
コンストラクトＣ又はＤのそれぞれにおいて、式（Ｉ）の組換えポリペプチドは、共有結合によってＣＤ１６＋細胞に付着していない。これに対して、コンストラクト（Ｃ）又は（Ｄ）のそれぞれにおいて、式（Ｉ）のペプチドは、特に受容体／受容体リガンド型の会合によって、非共有結合様式でＣＤ１６＋細胞に付着している。
【0105】
本発明の文脈において、「抗体」又は「抗原結合ポリペプチド」は、１つ以上の抗原を特異的に認識し、結合するポリペプチド又はポリペプチド複合体を指す。抗体は、抗体全体又は任意の抗原結合フラグメント又はそれらの単鎖であり得る。したがって、「抗体」という用語には、抗原に結合する生物活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質又はペプチドが含まれる。例としては、重鎖／軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）若しくはそのリガンド結合部分、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域若しくはその任意の一部、又は結合タンパク質の少なくとも一部が挙げられるが、これらに限定されない。抗体という用語はまた、活性化時に抗原結合能力を有するポリペプチド又はポリペプチド複合体を包含する。本明細書で使用される「抗体フラグメント」又は「抗原結合フラグメント」という用語は、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）等の抗体、例えば、二重特異性抗体の一部である。構造に関係なく、抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される同じ抗原に結合する。
【0106】
他のリガンド結合ドメイン、及び抗体フラグメント」の代替物には、アプタマー及びシュピーゲルマー（spiegelmers）等の核酸ベースのリガンドが含まれる場合がある。
【0107】
「抗体フラグメント」という用語にはまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する、任意の合成又は遺伝子操作されたタンパク質、又はポリペプチドが含まれる。本発明による抗体、抗原結合ポリペプチド、又はそれらの変異体若しくは誘導体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体（primatized antibody）又はキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ＶＫ又はＶＨドメインを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーから生成されたフラグメント、及び抗Ｉｄ抗体（例えば、本明細書に開示される抗Ｉｄ抗体及びＬＩＧＨＴ抗体を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の免疫グロブリン又は抗体分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、種（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）又はサブタイプの免疫グロブリン分子であってもよい。
【0108】
本発明の文脈において、「抗体由来のリガンド結合ドメイン」は、標的物質、標的化合物、標的分子、又は更に標的細胞等の標的リガンドに結合することができる配列を指し、（ｉ）例えば、標的細胞の特異的抗原に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは上記標的に結合することができる抗体の抗原結合ドメイン等の、天然若しくは腫瘍抗原に結合することができる配列、又は（ｉｉ）例えば、細胞受容体に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは抗体の抗原結合ドメインに結合することができるリガンド結合ドメインであり、その場合には、リガンド結合ドメインは、上記抗体の抗原結合ドメインによって認識される抗原を含むか、又はそれのみからなる。
【0109】
本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」又は「抗原結合ドメイン」又は「抗体由来のリガンド結合ドメイン」という用語は、特に、所与の抗原／リガンドに特異的に結合する能力を保持するインタクトな抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、インタクトな抗体のフラグメントによって行うことができる。抗体の抗原結合フラグメントという用語内に包含される結合フラグメントの例としては、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインのみからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域のみからなる一価フラグメントであるＦａｂ’フラグメント；ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；抗体の単一アーム（single arm）のＶＨドメインのみからなるＦｄフラグメント；ＶＨドメイン又はＶＬドメインのみからなる単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）フラグメント（Ward et al., 1989 Nature 341:544-546）；及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、それらを、ＶＬ領域及びＶＨ領域を対にして一価の分子（単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）として知られている；例えば、Bird et al., 1989 Science 242:423-426、及びHuston et al., 1988 proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883を参照のこと）を形成する単一のタンパク質鎖として作製することができる人工ペプチドリンカーにより、組換え法を使用することで、それらを結合することができる。「ｄｓＦｖ」は、ジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。二価及び多価抗体フラグメントは、一価ｓｃＦｖの会合によって自発的に形成されるか、又は二価ｓｃ（Ｆｖ）２等、ペプチドリンカーによって一価ｓｃＦｖをカップリングすることによって生成することができる。そのような単鎖抗体には、抗体の１つ以上の抗原結合部分又はフラグメントが含まれる。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている従来技術を使用して得られ、フラグメントはインタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。ユニボディは、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く別のタイプの抗体フラグメントである。ヒンジ領域の欠失により、分子は基本的に従来のＩｇＧ４抗体のサイズの半分になり、ＩｇＧ４抗体の二価結合領域ではなく一価結合領域を有するようになる。抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、マキシボディ（maxibodies）、ミニボディ（minibodies）、細胞内抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体（triabodies）及び四重特異性抗体（tetrabodies）中へ組み込むことができる（例えば、Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136を参照のこと）。「二重特異性抗体」、「三重特異性抗体」又は「四重特異性抗体」という用語は、多価抗原結合部位（２つ、３つ又は４つ）を有する小さな抗体フラグメントを指し、そのフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）における軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間でペアリングを可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは別の鎖の相補的なドメインと強制的にペアリングされ、２つの抗原結合部位を生成する。抗原結合フラグメントは、一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む単鎖分子中へ組み込むことができ、これは、相補的軽鎖ポリペプチドと共に、一対の抗原結合領域を形成する（Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8(10); 1057-1062及び米国特許第５，６４１，８７０号）。
【0110】
本発明のＦａｂは、標的抗原／リガンドと特異的に反応する抗体をプロテアーゼであるパパインで処理することによって得ることができる。また、抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核生物発現系用ベクター、又は真核生物発現系用ベクターに挿入し、ベクターを原核生物又は真核生物に（必要に応じて）に導入して、Ｆａｂを発現させることにより、Ｆａｂを製造することができる。
【0111】
本発明のＦ（ａｂ’）２は、標的抗原と特異的に反応する抗体をプロテアーゼであるペプシンで処理することによって得ることができる。また、Ｆ（ａｂ’）２は、以下で説明するＦａｂ’をチオエーテル結合又はジスルフィド結合を介して結合させることにより製造することができる。
【0112】
本発明のＦａｂ’は、標的抗原と特異的に反応するＦ（ａｂ’）２を還元剤であるジチオスレイトールで処理することによって得ることができる。
【0113】
本発明の文脈において、「ＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質」は、主に免疫細胞の細胞表面に発現する、ＦｃγＲＩＩＩＡとしても知られている活性化受容体ＣＤ１６ａを指す。ＣＤ１６ａは、免疫細胞の抗体依存性細胞傷害活性を引き起こす活性化受容体である。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ表面タンパク質細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球のサブセット、樹状細胞、及び希少Ｔ細胞を包含する。
【0114】
本発明の文脈において、「ＦｃγＲＩＩＩｂ／ＣＤ１６ｂ表面タンパク質」は、主に白血球の細胞表面に発現する、ＦｃγＲＩＩＩＢとしても知られている活性化受容体ＣＤ１６Ｂを指す。例えば、ＦｃγＲＩＩＩｂ／ＣＤ１６ｂ表面タンパク質細胞は、ＮＫ細胞及び好中球を包含する。
【0115】
本発明の文脈において、「武装ＮＫ細胞」とは、組換えポリペプチドと組み合わせた、ＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系又は自系のＮＫ細胞を意味し、（ｉ）改変Ｆｃ領域又はその変異体、好ましくは改変ＣＨ２ドメインを含むものと、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む。
【0116】
「武装ＮＫ細胞」とは、［ＮＫ細胞］－［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］等のコンストラクト（Ａ）の化合物を意味する。したがって、「武装ＮＫ細胞」は、コンストラクト（Ｂ）：［ＮＫ細胞］－［［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］］の化合物を包含する。
【0117】
コンストラクトＡ又はＢのそれぞれにおいて、式（Ｉ）の組換えポリペプチドは、共有結合によってＮＫ細胞に付着していない。これに対して、コンストラクト（Ａ）又は（Ｂ）のそれぞれにおいて、式（Ｉ）のペプチドは、特に受容体／受容体リガンド型の会合によって、非共有結合様式でＮＫ細胞に付着している。
【0118】
「リガンド結合ドメイン」単位を含む式（Ｉ）のポリペプチドにおいて、上記「リガンド」は、（ｉ）式（Ｉ）の組換えポリペプチドに含まれる上記リガンド結合ドメインが上記リガンドを結合することができる限り、任意のタイプであることができる。
【0119】
式（Ｉ）のポリペプチドの或る特定の実施形態において、リガンド結合ドメインは、受容体によって認識される分子、例えば、標的細胞によって発現される受容体によって認識される分子、又は更に抗体の抗原結合ドメインによって認識される分子からなり得る。最後の場合において、抗体の抗原結合ドメインによって認識される式（Ｉ）の組換えポリペプチドに含まれるリガンド結合ドメインは、「抗原」と呼ばれることもある。
【0120】
式（Ｉ）のポリペプチドの他の実施形態において、リガンド結合ドメインは、抗体の抗原結合ドメインを含む。これらの他の実施形態において、リガンドは、標的細胞によって発現される分子、例えば、標的腫瘍抗原、標的細胞マーカータンパク質、又は更に標的細胞受容体等の、上記抗体結合ドメインによって認識される分子である。
【0121】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、少なくとも１種類の動物抗体の重鎖又は軽鎖抗体の可変ドメインのうちの少なくとも１つと実質的な相同性を含有するか、又は保存するドメインに結合する少なくとも１つのリガンドを含むＦｃドメインを含むポリペプチドの特定の形態である。野生型ヒトＩｇＧサブクラスの定常配列は、Ｐ０１８５７（ＩｇＧ１）、Ｐ０１８５９（ＩｇＧ２）、Ｐ０１８６０（ＩｇＧ３）及びＰ０１８６１（ＩｇＧ４）の名称にてオンラインで利用可能なＵｎｉＰｒｏｔデータベースにおいて分類されている。本明細書において、「野生型ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域」という表現は、配列番号１５のアミノ酸配列又はこの配列番号１５のフラグメントによって示すことができるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を指す。
【0122】
本明細書において、「野生型ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域」という表現は、配列番号１６のアミノ酸配列又はこの配列番号１６のフラグメントによって示すことができるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を指す場合もある。
【0123】
本明細書において、「野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン」という表現は、配列番号１のアミノ酸配列又はこの配列番号１のフラグメントによって示すことができるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の一部に関する。
【0124】
具体的には、配列番号１５又は配列番号１６は、配列番号１を含む。
【0125】
配列番号１６は、配列番号１７を含む。
【0126】
「ＩｇＧのＦｃ領域のリガンド」とは、ＩｇＧ型、特にＩｇＧ１型抗体のＦｃ領域を結合して非共有結合複合体を形成するのに適した分子、好ましくはポリペプチドを意味する。非限定的な方法において、そのようなＦｃリガンドには、ポリペプチドＦｃγＲ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ブドウ球菌プロテインＡ、連鎖球菌プロテインＧ、及びウイルス起源ＦｃγＲが含まれる。Ｆｃリガンドには、特に、Ｆｃ受容体ホモログ（ＦｃＲＨ）（Davis et al., 2002, Immunological Reviews 190:123-136）が含まれる。
【0127】
「Ｆｃγ受容体」又は「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃγＲ」、又は「ＦｃガンマＲ」とは、ＦｃγＲ遺伝子によってコードされ、ＩｇＧ型、より具体的にはＩｇＧ１型抗体のＦｃ領域の結合に適したタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃのアイソフォームを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；ＦｃγＲＩＩａ（Ｈ１３１及びＲ１３１のアロタイプを含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃのアイソフォームを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８及びＦ１５８のアロタイプを含む）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２のアロタイプを含む）のアイソフォームを含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）が含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、具体的にはヒト、マウス、ラット及びサルを含む、任意の種類の生物に由来することができる。
【0128】
本発明による改変Ｆｃ領域を認識するのに適した最も具体的なＦｃγＲ受容体は、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）受容体及びそのアイソフォームである。
【0129】
「Ｆｃ領域」とは、抗体Ｆｃフラグメントの全部若しくは一部、又は「フラグメント結晶化可能領域（Ｆｃ領域）」を意味し、一般に、ヒンジ部分を越えた重鎖定常部分からなり、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン、すなわち、それぞれ「重鎖定常ドメイン２」及び「重鎖定常ドメイン３」を含む。また、この用語は、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ型免疫グロブリンの最後の２つの定常領域、ＩｇＭ及びＩｇＥ型免疫グロブリンの最後の３つの定常領域、並びに上記領域のＮ末端ヒンジ部分を包含する。
【0130】
具体的には、ヒトＩｇＧ型抗体、最も具体的にはＩｇＧ１型抗体のＦｃフラグメントの全部又は一部を意味する。
【0131】
或る特定の具体的な実施形態によれば、上記Ｆｃ領域は、ＣＨ２－ＣＨ３領域、ＣＨ２領域、又はＣＨ３領域の全部又は一部を含むことができる。
【0132】
「改変Ｆｃ領域」又は「変異Ｆｃ領域」とは、ヒトＩｇＧ１の参照Ｆｃ領域等の参照Ｆｃ領域の改変型に対応するポリペプチド配列を意味する。したがって、本発明の意味における改変Ｆｃ領域は、抗体Ｆｃフラグメント、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントの参照配列とは、１つ又は複数のアミノ酸改変により異なる。そのような改変領域は、組換えポリペプチド、上記組換えポリペプチドを含む組成物（例えば、薬学的組成物）に無差別に関連することができる。
【0133】
或る特定の実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、上記参照配列（特に、ヒトＩｇＧ１の上記参照配列）に関して少なくとも１つのアミノ酸改変を有し、これは、上記参照配列に関して少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つ以上の改変を包含する。或る特定の実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、上記参照（特に、ヒトＩｇＧ１の上記参照配列）に関して少なくとも７０％の配列同一性を含む。
【0134】
好ましい実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、ＣＤ１６＋細胞によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に関して調節された親和性を有する。
【0135】
好ましい実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、ＣＤ１６＋細胞によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に関して、増加又は減少した親和性を有する。
【0136】
或る特定の好ましい代表的実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、ＮＫ細胞、又は必要に応じて、任意のその前駆体によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に関して調節された親和性を有する。
【0137】
特に、これらの実施形態のいくつかによれば、上記改変Ｆｃ領域は、ＮＫ細胞、又は必要に応じて、任意のその前駆体によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に関して増加した親和性を有する。
【0138】
或る特定の代替的実施形態によれば、上記改変Ｆｃ領域は、ＮＫ細胞、又は必要に応じて、任意のその前駆体によって発現されるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）表面タンパク質に関して減少した親和性を有する。
【0139】
先の発明の文脈において議論された、及び配列番号１に関して配列番号２～配列番号１４の配列で定義されるもの等のＦｃ領域内の改変に関連する全ての位置について、特に明示のない限り、Edelman（Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85、引用することにより本明細書の一部をなす）を参照することによりＥＵ番号付けが参照される。特に、上記改変は、付加、欠失又は置換であることができる。置換には、特に任意の天然又は非天然アミノ酸を含めることができる。
【0140】
「１～１００アミノ酸」を含むポリペプチド配列には、具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９及び１００アミノ酸のアミノ酸配列が含まれる。
【0141】
本発明の文脈において、「アミノ酸の改変」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失を意味する。「アミノ酸置換」又は「置換」とは、野生型ポリペプチド配列における特定の位置にあるアミノ酸を別のアミノ酸で置換することを意味する。例えば、Ｓ２３９Ｄ置換は、２３９位のセリンがアスパラギン酸で置換された変異ポリペプチド、この場合はＦｃ変異体を指す。本明細書の意味における「アミノ酸の挿入」又は「挿入」は、親ポリペプチド配列における特定の位置へのアミノ酸の付加である。例えば、Ｇ＞２３５～２３６の挿入は、２３５位と２３６位との間のグリシンの挿入を指す。本明細書における「アミノ酸の欠失」又は「欠失」とは、親ポリペプチド配列におけるレベルでのアミノ酸の除去を意味する。例えば、Ｇ２３６は、２３６位におけるグリシンの欠失を指す。
【0142】
本明細書における「位置」とは、タンパク質又はポリペプチド配列における位置を意味する。位置には、順番に番号を付けることも、例えば、カバットにおけるようなＥＵインデックスのように、確立された形式に従って番号を付けることもできる。本発明においてアプローチされる任意の位置について、番号付けは、ＥＵ抗体の番号付けに関するＥＵ番号付けに従う（Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）。カバット番号付けとの対応関係は、対応表によって確立することができる。IMGT unique numbering for C-DOMAIN（http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html）。
【0143】
本明細書における「ＩｇＧ」とは、認識されたガンマ免疫グロブリン遺伝子によって本質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを意味する。ヒトにおいて、このＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のサブクラス又はアイソタイプを含む。マウスにおいて、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３を含む。本明細書における「アイソタイプ」とは、その定常領域の化学的及び抗原的特性によって定義される任意の免疫グロブリンサブクラスを意味する。ヒト免疫グロブリンの既知のアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥである。
【0144】
「抗体依存性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、分泌されたＩｇが或る特定の細胞傷害性（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ））細胞上に存在するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に付着し、上記細胞傷害性細胞が抗原に特異的に結合することを可能にし、次いで、標的細胞を細胞毒で破壊するための細胞傷害性の形態を指す。標的細胞表面を標的とするリガンドに特異的なＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を刺激し、その死滅に必要である。標的溶解は細胞外で行われ、細胞間の直接接触を必要とし、いかなる補体を意味するものではない。ＡＤＣＣによる標的細胞溶解を媒介する任意の抗体又はポリペプチドの能力を試験することができる。ＡＤＣＣを評価するために、対象抗体を、標的リガンドを提示する標的細胞に添加し、抗原－抗体複合体によって活性化することができるエフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞）と組み合わせて、標的細胞の細胞溶解を引き起こす。細胞溶解は一般に、溶解した細胞のマーカー（例えば、放射性基質、蛍光色素（Ａ６４７又はＡ６８８）又は天然の細胞内タンパク質）の放出により検出される。これらの分析に有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞を含む。ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣ試験の具体例は、Wisecarver et al., 1985, 19: 211、Bruggemann et al., 1987, J Exp Med 166:1351、Wilkinson et al., 2001, J Immunol Methods 258:183、Patel et al., 1995 J Immunol Methods 184:29に記載されている。代替的に、又はさらに、対象抗体のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes et al., 1998, PNAS USA 95:652に開示されているもの等の動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。
【0145】
本明細書における「標的細胞」とは、本発明による武装ＮＫ細胞によって認識することができる標的抗原を発現する細胞、又は本発明による武装ＮＫ細胞によって提示される抗原を認識することができる抗体を発現する細胞を意味する。例えば、標的細胞は、癌細胞、病原体に感染した細胞、自己反応性Ｂ細胞、自己反応性Ｔ細胞であり得る。
【0146】
「野生型又はＷＴ」とは、本明細書において、対立遺伝子変異を含む、自然界に見られるアミノ酸配列を意味する。ＷＴタンパク質、ポリペプチド、抗体、免疫グロブリン、ＩｇＧ等、意図的に改変されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列。
【0147】
組換えポリペプチド
本発明は、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に付着するのに適した組換えポリペプチドを使用する。
本発明は、ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に付着するのに適した組換えポリペプチドを使用する。
【0148】
この組換えポリペプチドは、（ｉ）野生型の同じポリペプチドに関して組換えポリペプチドの結合特性を改善する改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む。例えば、そのような改変Ｆｃ領域を含むポリペプチドは、Ｆｃ受容体に関して、より具体的にはＦｃγＲＩＩＩ受容体（ＣＤ１６）に関して、増加した安定性及び結合特異性を有する。さらに、そのような改変Ｆｃ領域を含む組換えポリペプチドは、細胞膜で上記ポリペプチドを安定化させ、ポリペプチドの内部移行を阻害することを可能にする。したがって、本発明の組換えポリペプチドは、親の非改変ポリペプチド、すなわち、野生型ポリペプチドの最適化バージョンである。より正確には、組換えポリペプチドは、（ｉ）Ｆｃ受容体への付着を可能にする、２つのＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（ＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメイン）を含むヒンジ部分を越えた定常重鎖部分のみからなるＦｃ領域と、（ｉｉ）標的細胞の認識を可能にする、リガンドに結合することができる領域とを含む。
【0149】
ＩｇＧ抗体の文脈において、ＩｇＧアイソタイプのそれぞれは、３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの文脈における「ＣＨ」ドメインは以下の通りである。「ＣＨ１」は、ＥＵ番号付けによる１１８位～２１５位を指す。「ＣＨ２」は、ＥＵ番号付けによる２３１位～３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＥＵ番号付けによる３４１位～４４６位を指す。
【0150】
或る特定の実施形態によれば、本発明による組換えポリペプチドは、式（Ｉ）：
［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］
を有し、
式中、
［改変Ｆｃ領域］は、本明細書に記載の、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域の改変ＣＨ２ドメインの種々の実施形態から選択され、
Ｘは、０又は１に相当する整数であり、
［リンカー］は、１～１００アミノ酸を有するポリペプチド配列を含み、
［リガンド結合ドメイン］は、標的物質、標的化合物、標的分子、又は更に標的細胞等の標的リガンドに結合することができる配列を含み、（ｉ）例えば、標的細胞の特異的抗原に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは上記標的に結合することができる抗体の抗原結合ドメイン等の、天然若しくは腫瘍抗原に結合することができる配列、又は（ｉｉ）例えば、細胞受容体に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは抗体の抗原結合ドメインに結合することができるリガンド結合ドメインであり、その場合には、リガンド結合ドメインは、上記抗体の抗原結合ドメインによって認識される抗原を含むか、又はそれのみからなる。
［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］
を有し、
式中、
［改変Ｆｃ領域］は、本明細書に記載の、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域の改変ＣＨ２ドメインの種々の実施形態から選択され、
Ｘは、０又は１に相当する整数であり、
［リンカー］は、１～１００アミノ酸を有するポリペプチド配列を含み、
［リガンド結合ドメイン］は、標的物質、標的化合物、標的分子、又は更に標的細胞等の標的リガンドに結合することができる配列を含み、（ｉ）例えば、標的細胞の特異的抗原に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは上記標的に結合することができる抗体の抗原結合ドメイン等の、天然若しくは腫瘍抗原に結合することができる配列、又は（ｉｉ）例えば、細胞受容体に結合することができるリガンド結合ドメイン、若しくは抗体の抗原結合ドメインに結合することができるリガンド結合ドメインであり、その場合には、リガンド結合ドメインは、上記抗体の抗原結合ドメインによって認識される抗原を含むか、又はそれのみからなる。
【0151】
改変Ｆｃ領域は、例えば、ヒンジ領域又はＣＨ２又はＣＨ３において、野生型アミノ酸配列に関して１つ又は複数の（例えば、１～１０以上）のアミノ酸置換又は欠失を有する野生型アミノ酸配列であり得る。したがって、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、野生型ポリペプチドのＦｃ領域のアミノ酸配列（例えば、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して、「Ｆｃ ＷＴ」と呼ばれ、配列番号１を含む）と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上（すなわち、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）のアミノ酸配列同一性を有する。
【0152】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域は、野生型ポリペプチドのＦｃ領域のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５又は代替的に配列番号１６）と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。アミノ酸配列は、例えば、ジスルフィド結合の形成を減少させる、他の改変を更に含むことができる。或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域に関して１つ又は複数のアミノ酸の置換を含む。
【0153】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧのＣＨ２ドメイン、例えば、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＣＨ２ドメインは、他の改変（例えば、エフェクター機能の軽減又は除去）を含有することができる。
【0154】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域は、ＩｇＧのＣＨ３ドメイン、例えば、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＣＨ３ドメインは、特定のアロタイプを付与するための他の改変を更に含むことができる。一方、ＣＨ３ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１の異なるアロタイプに関して改変を含むことができる。或る特定の場合において、ＣＨ３ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインのアミノ酸配列に対応する。
【0155】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域は、２３０、２３３、２３４、２３５、２３６、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２６８、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２及び３３５からなる群より選択される位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、Ｆｃ領域におけるアミノ酸番号付けはＥＵ番号付けに従う。或る特定の好ましい実施形態において、上記改変Ｆｃ領域は、Ｐ２３０Ｅ、Ｐ２３０Ｙ、Ｐ２３０Ｇ、Ｅ２３３Ｎ、Ｅ２３３Ｑ、Ｅ２３３Ｋ、Ｅ２３３Ｒ、Ｅ２３３Ｓ、Ｅ２３３Ｔ、Ｅ２３３Ｈ、Ｅ２３３Ａ、Ｅ２３３Ｖ、Ｅ２３３Ｌ、Ｅ２３３Ｉ、Ｅ２３３Ｆ、Ｅ２３３Ｍ、Ｅ２３３Ｙ、Ｅ２３３Ｗ、Ｅ２３３Ｇ、Ｌ２３４Ｋ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｗ、Ｌ２３４Ｐ、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｋ、Ｌ２３５Ｒ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｍ、Ｌ２３５Ｗ、Ｌ２３５Ｐ、Ｌ２３５Ｇ、Ｇ２３６Ｄ、Ｇ２３６Ｅ、Ｇ２３６Ａ、Ｇ２３６Ｎ、Ｇ２３６Ｑ、Ｇ２３６Ｋ、Ｇ２３６Ｒ、Ｇ２３６Ｓ、Ｇ２３６Ｔ、Ｇ２３６Ｈ、Ｇ２３６Ａ、Ｇ２３６Ｖ、Ｇ２３６Ｌ、Ｇ２３６Ｉ、Ｇ２３６Ｆ、Ｇ２３６Ｍ、Ｇ２３６Ｙ、Ｇ２３６Ｗ、Ｇ２３６Ｐ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｋ、Ｓ２３９Ｒ、Ｓ２３９Ｖ、Ｓ２３９Ｌ、Ｓ２３９Ｉ、Ｓ２３９Ｍ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｗ、Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２３９Ｇ、Ｆ２４３Ｅ、Ｖ２６４Ｄ、Ｖ２６４Ｅ、Ｖ２６４Ｎ、Ｖ２６４Ｑ、Ｖ２６４Ｋ、Ｖ２６４Ｒ、Ｖ２６４Ｓ、Ｖ２６４Ｈ、Ｖ２６４Ｗ、Ｖ２６４Ｐ、Ｖ２６４Ｇ、Ｈ２６８Ｄ、Ｈ２６８Ｅ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｋ、Ｈ２６８Ｒ、Ｈ２６８Ｔ、Ｈ２６８Ｖ、Ｈ２６８Ｌ、Ｈ２６８Ｉ、Ｈ２６８Ｆ、Ｈ２６８Ｍ、Ｈ２６８Ｗ、Ｈ２６８Ｐ、Ｈ２６８Ｇ、Ｅ２７２Ｄ、Ｅ２７２Ｒ、Ｅ２７２Ｔ、Ｅ２７２Ｈ、Ｅ２７２Ｖ、Ｅ２７２Ｌ、Ｅ２７２Ｆ、Ｅ２７２Ｍ、Ｅ２７２Ｗ、Ｅ２７２Ｐ、Ｅ２７２Ｇ、Ｋ２７４Ｄ、Ｋ２７４Ｎ、Ｋ２７４Ｓ、Ｋ２７４Ｈ、Ｋ２７４Ｖ、Ｋ２７４Ｉ、Ｋ２７４Ｆ、Ｋ２７４Ｍ、Ｋ２７４Ｗ、Ｋ２７４Ｐ、Ｋ２７４Ｇ、Ｆ２７５Ｌ、Ｎ２７６Ｄ、Ｎ２７６Ｔ、Ｎ２７６Ｈ、Ｎ２７６Ｖ、Ｎ２７６Ｉ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｗ、Ｎ２７６Ｐ、Ｎ２７６Ｇ、２７８Ｄ、Ｙ２７８Ｎ、Ｙ２７８Ｑ、Ｙ２７８Ｒ、Ｙ２７８Ｓ、Ｙ２７８Ｈ、Ｙ２７８Ｖ、Ｙ２７８Ｌ、Ｙ２７８Ｉ、Ｙ２７８Ｍ、Ｙ２７８Ｐ、Ｙ２７８Ｇ、Ｅ３１８Ｑ、Ｅ３１８Ｈ、Ｅ３１８Ｌ、Ｅ３１８Ｙ、Ｓ３２４Ｈ、Ｓ３２４Ｆ、Ｓ３２４Ｍ、Ｓ３２４Ｗ、Ｓ３２４Ｐ、Ｓ３２４Ｇ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ３２５Ｋ、Ｎ３２５Ｒ、Ｎ３２５Ｓ、Ｎ３２５Ｆ、Ｎ３２５Ｍ、Ｎ３２５Ｙ、Ｎ３２５Ｗ、Ｎ３２５Ｐ、Ｎ３２５Ｇ、Ｋ３２６Ｐ、Ａ３２７Ｅ、Ａ３２７Ｋ、Ａ３２７Ｒ、Ａ３２７Ｈ、Ａ３２７Ｖ、Ａ３２７Ｉ、Ａ３２７Ｆ、Ａ３２７Ｍ、Ａ３２７Ｙ、Ａ３２７Ｗ、Ａ３２７Ｐ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｋ、Ｌ３２８Ｒ、Ｌ３２８Ｓ、Ｌ３２８Ｔ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｙ、Ｌ３２８Ｗ、Ｌ３２８Ｐ、Ｌ３２８Ｇ、Ｐ３２９Ｄ、Ｐ３２９Ｅ、Ｐ３２９Ｎ、Ｐ３２９Ｑ、Ｐ３２９Ｋ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒ、Ｐ３２９Ｓ、Ｐ３２９Ｔ、Ｐ３２９Ｈ、Ｐ３２９Ｖ、Ｐ３２９Ｌ、Ｐ３２９Ｉ、Ｐ３２９Ｍ、Ｐ３２９Ｙ、Ｐ３２９Ｗ、Ｐ３２９Ｇ、Ａ３３０Ｅ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｎ、Ａ３３０Ｔ、Ａ３３０Ｐ、Ａ３３０Ｇ、Ｐ３３１Ｄ、Ｐ３３１Ｑ、Ｐ３３１Ｒ、Ｐ３３１Ｔ、Ｐ３３１Ｌ、Ｐ３３１Ｉ、Ｐ３３１Ｆ、Ｐ３３１Ｍ、Ｐ３３１Ｙ、Ｐ３３１Ｗ、Ｉ３３２Ｋ、Ｉ３３２Ｒ、Ｉ３３２Ｓ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｖ、Ｉ３３２Ｌ、Ｉ３３２Ｆ、Ｉ３３２Ｍ、Ｉ３３２Ｗ、Ｉ３３２Ｐ、Ｉ３３２Ｇ、Ｅ３３３Ｌ、Ｅ３３３Ｆ、Ｅ３３３Ｍ、Ｅ３３３Ｐ、Ｋ３３４Ｐ、Ｔ３３５Ｎ、Ｔ３３５Ｓ、Ｔ３３５Ｈ、Ｔ３３５Ｖ、Ｔ３３５Ｌ、Ｔ３３５Ｉ、Ｔ３３５Ｆ、Ｔ３３５Ｍ、Ｔ３３５Ｗ、Ｔ３３５Ｐ、及びＴ３３５Ｇからなる群より選択されるアミノ酸置換を含み、Ｆｃ領域におけるアミノ酸番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【0156】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄを含む。
【0157】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅを含む。
【0158】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔを含む。
【0159】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８Ｆを含む。
【0160】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌを含む。
【0161】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｇ２３６Ａを含む。
【0162】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含む。
【0163】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0164】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0165】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0166】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ及びＧ２３６Ａを含む。
【0167】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0168】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0169】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0170】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ及びＧ２３６Ａを含む。
【0171】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0172】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0173】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ及びＧ２３６Ａを含む。
【0174】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８ＦＬ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0175】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８Ｆ及びＧ２３６Ａを含む。
【0176】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌ及びＧ２３６Ａを含む。
【0177】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0178】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0179】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0180】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ及びＧ２３６Ａを含む。
【0181】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｓ３２４Ｔ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0182】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0183】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｓ３２４Ｔ及びＧ２３６Ａを含む。
【0184】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｈ２６８Ｆ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0185】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｈ２６８Ｆ及びＧ２３６Ａを含む。
【0186】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＧ２３６Ａを含む。
【0187】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0188】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0189】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＧ２３６Ａを含む。
【0190】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ２３９Ｄを含む。
【0191】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0192】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＧ２３６Ａを含む。
【0193】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８Ｆ、Ａ３３０Ｌ及びＳ２３９Ｄを含む。
【0194】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８Ｆ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含む。
【0195】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｈ２６８Ｆ、Ａ３３０Ｌ及びＧ２３６Ａを含む。
【0196】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌ、Ｇ２３６Ａ及びＳ２３９Ｄを含む。
【0197】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３２Ｅを含む。
【0198】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌ、Ｇ２３６Ａ及びＳ３２４Ｔを含む。
【0199】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ａ３３０Ｌ、Ｇ２３６Ａ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0200】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＨ２６８Ｆを含む。
【0201】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0202】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ及びＧ２３６Ａを含む。
【0203】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0204】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＧ２３６Ａを含む。
【0205】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ及びＧ２３６Ａを含む。
【0206】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0207】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＧ２３６Ａを含む。
【0208】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ、Ａ３３０Ｌ及びＧ２３６Ａを含む。
【0209】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、Ｆｃ ＷＴ領域、すなわち、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン（例えば、配列番号１）に関して、ＥＵ番号付けによるアミノ酸置換Ｉ３３２Ｅ、Ｓ３２４Ｔ、Ｈ２６８Ｆ及びＡ３３０Ｌを含む。
【0210】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域の変異体は、Ｓ２３９Ｄ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ３２４Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｈ２６８Ｆ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇからなる群より選択され、Ｆｃ領域における残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【0211】
或る特定の実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２～配列番号１３の任意の１つに示されるアミノ酸配列に対応する。
【0212】
或る特定の代替的実施形態において、改変Ｆｃ領域の変異体には、Ａ３３０Ｌ等のＡ３３０改変が含まれず、Ｆｃ領域における残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【0213】
好ましくは、式（Ｉ）のポリペプチドの［改変Ｆｃ領域］は、配列番号２～配列番号１３の任意の１つに示されるアミノ酸配列から選択される。
【0214】
好ましい実施形態において、改変Ｆｃ領域及び／又は改変Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、Ｆｃ ＳＤＨ領域と呼ばれる配列番号２に示されるアミノ酸配列に対応する。
【0215】
或る特定の実施形態において、本発明による組換えポリペプチドは、改変Ｆｃ領域を含み、ＣＨ２ドメインは他の改変を含有するか、又は含有しない。
【0216】
或る特定の実施形態において、本発明による組換えポリペプチドは、改変Ｆｃ領域を含み、ＣＨ３ドメインは改変を含むか、又は含まない。
【0217】
或る特定の実施形態において、本発明による組換えポリペプチドは、改変Ｆｃ領域を含み、ヒンジ領域は、置換の有無にかかわりなく野生型ＩｇＧ１のヒンジ領域であることができる。
【0218】
或る特定の実施形態において、本発明による組換えポリペプチドは、改変Ｆｃ領域を含み、（ａ）ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに関して１つ若しくは複数の改変を含むか、又は（ｂ）ＣＨ３ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインに関して１つ若しくは複数の改変を含むか、又は（ｃ）２つのＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、それぞれ野生型ヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関して１つ若しくは複数の改変を含む。
【0219】
本発明による組換えポリペプチドの或る特定の実施形態において、その中に含まれるリガンド結合ドメインは、以下の標的リスト：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦ１ａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａ１アデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－１－アンチトリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、ＡＳＰＡＲＴＩＣ、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｃｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６、Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＡＤＮ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ１０、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣＩ、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）毒素、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）毒素、ＣＫｂ８－１、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、ＤＮａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮＡ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＡＮＤ－１、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲ１、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、ＦＩｔ－３、ＦＩｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルカイン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、グルカゴン、Ｇｌｕｔ４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐ１３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰ－ｃａｐ又はＮＩＰ－ｃａｐ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ Ｂ ｇｐ１２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ １２０ Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、ヒト心筋ミオシン、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ＨＶＥＭ、Ｉ－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２３、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、Ｉ－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ ｂｐ１、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、レフティー、ルイス－Ｙ抗原、ルイス－Ｙ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、ＭＥＴＡＬＬＯＰＲＯＴＥＡＳＥＳ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃ１）、ＭＵＣ１８、ミュラー管抑制物質（Muellerian-inhibitin substance）、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリライシン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、又はニューロトロフィン－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐ１５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、ＰＩＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロレラキシン、プロテインＣ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、レラキシンＡ鎖、レラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器（リガンド ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫ ＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＡＮＤ ＨＶＥＭ ＬＩＧＨＴ、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンド ＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ－ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド ｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド ＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（Ｆａｓリガンド Ａｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド ＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド ＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェート受容体（transfert receptor）、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、ＣＡ１２５腫瘍関連抗原、ルイスＹ関連糖質を発現する腫瘍関連抗原、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥカドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧ
Ｉ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、並びにホルモン及び成長因子受容体等に属するタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ及び／又はエピトープを含有するが、これらに限定されない。
Ｉ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、並びにホルモン及び成長因子受容体等に属するタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ及び／又はエピトープを含有するが、これらに限定されない。
【0220】
本発明による組換えポリペプチドの或る特定の実施形態において、その中に含まれるリガンド結合ドメインは、以下の標的リスト：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦ１ａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａ１アデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－１－アンチトリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、ＡＳＰＡＲＴＩＣ、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｃｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６、Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＡＤＮ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ１０、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣＩ、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌毒素、ウェルシュ菌毒素、ＣＫｂ８－１、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、ＤＮａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮＡ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＡＮＤ－１、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲ１、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、ＦＩｔ－３、ＦＩｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルカイン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、グルカゴン、Ｇｌｕｔ４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐ１３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰ－ｃａｐ又はＮＩＰ－ｃａｐ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ Ｂ ｇｐ１２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ １２０ Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、ヒト心筋ミオシン、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ＨＶＥＭ、Ｉ－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２３、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、Ｉ－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ ｂｐ１、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、レフティー、ルイス－Ｙ抗原、ルイス－Ｙ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、ＭＥＴＡＬＬＯＰＲＯＴＥＡＳＥＳ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃ１）、ＭＵＣ１８、ミュラー管抑制物質、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリライシン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、又はニューロトロフィン－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐ１５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、ＰＩＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロレラキシン、プロテインＣ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、レラキシンＡ鎖、レラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶ Ｆｇｐ、Ｒｅｔ、リウマチ因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ－１、ＳＥＲＩＮＥ、血清アルブミン、ｓＦＲＰ－３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ－１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ－ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質－７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ－３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、精巣ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異的、ＴＧＦ－ベータＲＩ（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲＩＩ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ－１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬ Ｒ１ Ａｐｏ－２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ－２Ａ、ＴＲＩＣＫ－Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬ Ｒ３ ＤｃＲ１、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬ Ｒ４ ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫ ＯＤＦ Ｒ、ＴＲＡＮＣＥ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ（ＯＰＧ ＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ｒ ＦＮ１４
）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ（ＴＮＦ ＲＩ ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ ＲＩＩ ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ ＴＮＦ ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ Ａｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３ Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ ＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ１ ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３ Ａｐ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（リガンド Ａｐｏ－２ ＴＲＡＩＬ、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（リガンド ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫ ＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＡＮＤ ＨＶＥＭ ＬＩＧＨＴ、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンド ＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ－ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド ｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド ＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（Ｆａｓリガンド Ａｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド ＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド ＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェート受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、ＣＡ１２５腫瘍関連抗原、ルイスＹ関連糖質を発現する腫瘍関連抗原、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥカドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、並びにホルモン及び成長因子受容体等に属するタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ及び／又はエピトープによって定義されるが、これらに限定されないリガンドに結合することができる。
）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ（ＴＮＦ ＲＩ ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ ＲＩＩ ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ ＴＮＦ ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ Ａｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３ Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ ＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ１ ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３ Ａｐ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（リガンド Ａｐｏ－２ ＴＲＡＩＬ、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（リガンド ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫ ＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＡＮＤ ＨＶＥＭ ＬＩＧＨＴ、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンド ＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ－ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド ｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド ＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（Ｆａｓリガンド Ａｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド ＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド ＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェート受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、ＣＡ１２５腫瘍関連抗原、ルイスＹ関連糖質を発現する腫瘍関連抗原、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥカドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、並びにホルモン及び成長因子受容体等に属するタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ及び／又はエピトープによって定義されるが、これらに限定されないリガンドに結合することができる。
【0221】
組換えポリペプチドの好ましい実施形態によれば、リガンド結合ドメインは、抗体等の標的分子に結合することができる。この実施形態によれば、リガンド結合ドメインは、抗体、最も具体的には抗体の可変領域への結合に適している。
【0222】
１つの実施形態によれば、本発明の組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンドに結合することができるリガンド結合ドメインとを有するポリペプチドであり、抗体ではない。
【0223】
特に、１つの実施形態によれば、本発明の組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを有するポリペプチドであり、抗体の可変領域又は超可変領域を有しない。
【0224】
１つの実施形態によれば、本発明の組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを有するポリペプチドであり、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、抗体であり得る。
【0225】
１つの実施形態において、本発明の組換えポリペプチドは、完全ヒト抗体又はヒト化抗体であり得ることに加えて、改変Ｆｃ領域を有しない同じ抗体と比較して、１つ又は複数の改善された、又は改変された特性を有することができる。これらの特性は、ＮＫ細胞又はＦｃγＲＩＩＩ受容体を発現する任意の細胞のＦｃγＲＩＩＩ受容体に対する結合特異性、又は抗体依存性細胞傷害の改善を含む。
【0226】
或る特定の実施形態において、本発明による組換えポリペプチドが抗体、又はそのフラグメントである場合、既知の構造を有し、そのＦｃ部分が本明細書に記載の通り改変された出発抗体であり得る。既知の構造を有する出発抗体は、アバゴボマブ、アバタセプト、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフリベルセプト、アフツジマブ、アラシズマブ、アレファセプト、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アネツマブ、アニフロムマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アルチズマブ、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベラタセプト、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチシズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブ、カプラシズマブ、カプロマブ、カルルマブ、カツマキソマブ、セデリズマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コドリツズマブ、コルツキシマブ、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブ、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブ、デノスマブ、デルロチクスマブ、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ、ドリノマブ、ドロジツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンホルツマブ、エンリモマブ、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタネルセプト、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、イマルマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ、インデュサツマブ、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブ、リゲリズマブ、リロトマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブ、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マパツズマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミネツモマブ、ミルベツキシマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブ、ナミルマブ、ナプツモマブ、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オルテルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブ、ピンツモマブ、ポラツズマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロナセプト、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブ、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セヴィルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブ、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブ、タレクスツマブ、テフィバズマブ、テリモマブ・アリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テシドルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、チルドラキズマブ、ティガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンドルツズマブ、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ジブ－アフリベルセプト、及びゾリモマブから選択することができる。
【0227】
ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞
これらの目的の１つにおいて、本発明は、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を使用する。
これらの目的の１つにおいて、本発明は、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体を使用する。
【0228】
ＮＫ細胞は、ＭＨＣクラス１分子を含む標的細胞を自発的に破壊することができるリンパ球である。これらのＮＫ細胞の特異性は、事前の活性化を必要とせず、病原体と接触することなく、罹患細胞を溶解できることである。
【0229】
本発明のＮＫ細胞は、そのような細胞を含む任意の供給源に由来することができる。ＮＫ細胞は多くの組織に見られ、例えば、リンパ節、脾臓、肝臓、肺、腸、脱落膜から得ることができ、ｉＰＳ細胞又は胚性幹細胞（ＥＳＣ）からも得ることができる。一般に、研究及び臨床使用のための多数のＮＫ細胞を提供するために、異種リンパ球細胞集団を含有する臍帯血、末梢血、動員末梢血及び骨髄が使用される。
【0230】
したがって、本発明の或る特定の実施形態によれば、方法は、以下の要素：臍帯血、末梢血又は骨髄の１つ、好ましくは臍帯血に由来する、ＮＫ細胞集団、好ましくはＮＫ細胞集団を必要とする個体に関して同種異系又は自系のＮＫ細胞集団を培養することを含む。或る特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞、ＣＤ３－細胞及びＣＤ３＋細胞を含む異種細胞集団から培養される。別の変形において、ＮＫ細胞集団は、ＮＫ細胞に関してスクリーニング又は濃縮される。或る特定の場合において、ＮＫ細胞は、新鮮な細胞集団から増殖させることができるが、別の場合には、ストックされた細胞集団（例えば凍結保存及び解凍された細胞）から、又は以前に培養された細胞集団からＮＫ細胞を増殖させる。
【0231】
ＮＫ細胞は、臍帯血又は末梢血又は骨髄由来の単核球の画分と関連している。１つの実施形態において、上記ＮＫ細胞を含む細胞集団は、ＣＤ３＋細胞又はＣＤ３＋／ＣＤ１９＋細胞が枯渇した単核球集団又は全核細胞集団である。
【0232】
別の実施形態において、ＮＫ細胞を含む細胞集団は、非スクリーニングＮＫ細胞集団である。別の実施形態において、細胞はスクリーニングされ、ＮＫ細胞は、ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－及び／又はＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－／ＣＤ１６＋細胞を含む。表現型に基づいてＮＫ細胞をスクリーニングする方法（例えば、フローサイトメトリーによる免疫検出及び分析）は、当業者によく知られている。
【0233】
最も頻繁には、臍帯血又は骨髄試料を処理して、細胞集団を得てから、ＮＫ細胞を培養培地（又はバッファー）に入れる。例えば、臍帯血試料を処理して、特定の定義された細胞集団を濃縮又は精製又は分離することができる。「精製する」及び「分離する」という用語は、絶対的な純度を必要とせず、むしろ、それらは相対的な用語である。したがって、例えば、精製されたＮＫ細胞集団は、特定の細胞がそれらの元の組織において見られるものよりも濃縮されている集団である。実質的に純粋なＮＫ細胞調製物は、所望の細胞が調製物中に存在する全細胞の少なくとも５０％を占めるように濃縮することができる。或る特定の調製物の種類において、実質的に純粋なＮＫ細胞集団は、調製物中に存在する全細胞の少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％又は９５％以上を占める。
【0234】
リンパ球（ＣＤ４５＋細胞）を濃縮及び分離する方法は、当該分野においてよく知られている。例えば、１つの実施形態によれば、リンパ球のみを保持するために、生物学的試料から赤血球を除去する。最も単純な形態において、赤血球の除去は、凝固していない全血又は骨髄の遠心分離を意味する場合がある。密度に基づいて、赤血球は、リンパ球及び他の細胞から分離される。その後、リンパ球が豊富な画分を選択的に回収することができる。リンパ球及びそれらの前駆細胞は、いくつかの商業的供給源から入手可能な標準的なリンパ球分離培地（ＬＳＭ）等の分離培地を使用する遠心分離によって濃縮することもできる。リンパ球及びそれらの前駆細胞は、親和性に基づくいくつかの手順を使用して濃縮することもできる。抗体にコンジュゲートした電磁ビーズ等、抗体に基づく多くのアフィニティー分離法が当該技術分野において知られている。ＦＩＣＯＬＬ－ＨＹＰＡＱＵＥ（商標）及びＮＫ細胞の濃縮のために配合された他の密度勾配培地等の、好ましくない細胞のネガティブセレクション用に市販されている調製物によってリンパ球を濃縮することもできる。
【0235】
血液、骨髄又は組織試料からＮＫ細胞を選択する方法は、当該分野においてよく知られている（例えば、Litwin et al.による米国特許第５７７０３８７号を参照のこと）。最も一般的に使用されるプロトコルは、一般に単核球を分画した後のＣＤ５６＋細胞の分離及び精製、並びに例えばＣＤ３＋、ＣＤ３４＋、ＣＤ１３３＋等の非ＮＫ細胞の枯渇に基づいている。２つ以上のプロトコルの組み合わせを使用して、非ＮＫ夾雑物に関してより高い純度を有するＮＫ細胞集団を提供することができる。ＮＫ細胞を分離するための市販されているキットは、１工程の手順（例えば、Miltenyi Biotec（カリフォルニア州オーバーン）のＣＤ５６マイクロビーズ及びＣＤ５６＋、ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋を分離するためのキット）と、ＣＤ３＋の枯渇、若しくは部分的な枯渇、又はＴ細胞（例えば、ＯＫＴ－３）、Ｂ細胞、幹細胞、樹状細胞、単球、顆粒球及び赤血球細胞を認識及び除去する非ＮＫ細胞抗体による枯渇を含むいくつかの工程における手順とを含む。したがって、或る特定の実施において、ＮＫ細胞は、ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋ＣＤ３－、ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－／ＣＤ１６＋、ＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－／ＣＤ１６－、好ましくはＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－／ＣＤ１６＋についてスクリーニングされる。
【0236】
次に、ＮＫ細胞を当業者に既知の任意の方法によって培養及び維持した後、本発明の組換えポリペプチドとインキュベートして、武装ＮＫ細胞を得る。ＮＫ細胞は、「武装」する前に最大７日間、又は最大３週間維持することができる。したがって、或る特定の実施形態において、ＮＫ細胞集団は、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも７日間、潜在的に１０日間、潜在的に１２日間、潜在的に１４日間、潜在的に１６日間、潜在的に１８日間、潜在的に２０日間及び潜在的に２１日間、又は１週間、２週間又は３週間、４週間、５週間、６週間、又はそれ以上培養される。
【0237】
ＮＫ細胞集団は、いくつかの方法及びデバイスを用いて培養することができる。培養装置の選択は、一般に、培養の規模及び目的に基づく。細胞培養のスケーリングは、好ましくは専用の装置の使用を意味する。ＮＫ細胞の大規模及び臨床的な品質の生産のための装置は、例えば、Spanholtz et al. (PLoS ONE 2010; 5: e9221)及びSutlu et al. (Cytotherapy 2010, Early Online 1-12)に詳細に記載されている。
【0238】
或る特定の実施形態において、本発明で使用されるＮＫ細胞は、同種異系と呼ばれる、治療される個体以外のヒト由来の細胞である。
【0239】
或る特定の実施形態において、本発明で使用されるＮＫ細胞は、自系と呼ばれる、治療される個体自身由来の細胞である。
【0240】
組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ細胞
これらの目的の１つによれば、本出願は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）抗原に結合することができるドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
これらの目的の１つによれば、本出願は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）抗原に結合することができるドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0241】
本発明による組換えポリペプチドの２つの実施形態を図８に示す。本発明による組換えポリペプチドは、図８の左側に表され、（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、リガンド結合ドメインは、抗原を含むか、又は抗原のみからなる。本発明による組換えポリペプチドは、図８の右側に表され、（ｉ）改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、リガンド結合ドメインは、抗体の抗原結合ドメインを含むか、又は抗体の抗原結合ドメインのみからなる。したがって、本発明者らは、ＮＫ細胞をベースにした普遍的な細胞療法製品を実現した。ＣＡＲ－Ｔ細胞と対照的に、標的細胞を破壊する特異性は、ＮＫ細胞自体によってではなく、これらの標的細胞を認識する特定のペプチドによって得られる。したがって、本組み合わせであるＮＫ細胞－組換えポリペプチドは、特定のポリペプチドを設計し、特定の抗原を本発明の組換えポリペプチドに特異的に組み合わせることによって、あらゆる種類の病変に拡張することができる。
【0242】
本発明は、
［ＮＫ細胞］－［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］
等のコンストラクト（Ａ）の化合物を提供する。
［ＮＫ細胞］－［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］
等のコンストラクト（Ａ）の化合物を提供する。
【0243】
本発明は、コンストラクト（Ｂ）：
［ＮＫ細胞］－［［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］］
の化合物を包含し、
式中、［ＮＫ細胞］は、本出願において先に記載されたＮＫ細胞であり、［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］は、本出願において先に記載されたポリペプチド又は抗体である。
［ＮＫ細胞］－［［改変Ｆｃ領域］－［リンカー］ｘ－［リガンド結合ドメイン］］
の化合物を包含し、
式中、［ＮＫ細胞］は、本出願において先に記載されたＮＫ細胞であり、［式（Ｉ）の組換えポリペプチド］は、本出願において先に記載されたポリペプチド又は抗体である。
【0244】
１つの実施形態において、リガンド結合ドメインは、抗原型リガンドに結合することができ、抗原は、ウイルス抗原、腫瘍抗原、感染性疾患抗原、自己免疫抗原、毒素又はそれらの組み合わせから選択することができる。
【0245】
或る特定の実施形態において、リガンド結合ドメインは、ペプチドコンカテマーであるリガンドに結合することができる。或る特定の実施形態において、リガンド結合ドメインは、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５（ＧＡＤ６５）、天然ＤＮＡ、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンプロテオリピドタンパク質、アセチルコリン受容体成分、サイログロブリン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）受容体及びシトルリン化ペプチドから選択されるリガンドに結合することができる。或る特定の他の実施形態において、リガンド結合ドメインは、抗原型リガンドに結合することができ、抗原は、癌抗原、細菌、ウイルス、寄生生物及び真菌抗原から選択される感染性疾患抗原、自己免疫疾患抗原及びそれらの誘導体から選択される。
【0246】
１つの実施形態によれば、本発明による組換えポリペプチドのリガンド結合ドメインが結合することができる癌抗原は、黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌、卵巣癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、腟癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿道癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、ＣＮＳ原発性リンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔリンパ球リンパ腫、環境によって誘発される癌、及び上記癌の組み合わせから選択される癌の抗原であり得る。
【0247】
或る特定の実施形態によれば、本発明による組換えポリペプチドのリガンド結合ドメインが結合することができる感染性疾患抗原は、（ａ）インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア症、マラリア及びリーシュマニア症から選択される疾患；（ｂ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス（cornovirus）、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス（molluscum virus）、ポリオウイルス（poliomyelitis virus）、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス及びアルボウイルス脳炎ウイルスから選択されるウイルスによる病原体感染症；（ｃ）クラミジア属、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌及び淋菌、クレブシエラ属、プロテウス属、セラチア属、シュードモナス属、レジオネラ属、ジフテリア属（Diphtheria）、サルモネラ属、バチルス属、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭素病（carbon disease）、ペスト、レプトスピラ症及びライム病細菌から選択される細菌による病原体感染症；（ｄ）カンジダ属、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、アスペルギルス属、ケカビ目の属（Genus Mucorales）、スポロトリックス・シェンキー（Sporothrix schenkue）、ブラストミセス・デルマチチジス（Blastomyces dermatitidis）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシキス（Paracoccidioides brasiliensis）、コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）及びヒストプラズマ・カプスラーツム（Histoplasma capsulatum）から選択される真菌による病原体感染症；又は（ｅ）エントアメーバ・ヒストリチカ（Entamoeba histolytica）、バランチジウム・コリ（Balantidium coli）、ネグレリア・フォーレリ（Naegleria fowleri）、アカンソアメーバ属の種（Acanthamoeba sp.）、ジアルジア・ランビア（Giardia lamblia）、クリプトスポリジウム属の種（Cryptosporidium sp.）、ニューモシスチス・カリニ（Pneumocystis carinue）、プラスモディウム・ビラックス（Plasmodium virax）、バベシア・ミクロチ（Babesia microti）、トリパノソーマ・ブルセイ（Trypanosoma brucei）、トリパノソーマ・クルージ（Trypanosoma cruzi）、リーシュマニア・ドノバン（Leishmania donovani）、トキソプラズマ・ゴンディ（Toxoplasma gondue）及びニッポストロンギルス・ブラシリエンシス（Nippostrongylus brasiliensis）から選択される寄生生物による病原体感染症から選択される感染性疾患抗原であり得る。
【0248】
或る特定の実施形態によれば、本発明による組換えポリペプチドのリガンド結合ドメインが結合することができる自己免疫疾患抗原又はそれらの誘導体は、以下の疾患：臓器移植片拒絶反応、移植片対宿主病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、原始シェーグレン症候群（primitive Sjogren's syndrome）（又はグージェロー・シェーグレン症候群）、多発性硬化症等の自己免疫性多発ニューロパチー、Ｉ型糖尿病、自己免疫性肝炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、痛風性関節炎、セリアック病、クローン病、橋本甲状腺炎、アジソン病、自己免疫性肝炎、バセドウ病、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ（抗好中球細胞質抗体）関連全身性血管炎等の血管炎、成人及び小児における自己免疫性血球減少症及び他の血液系の合併症、例えば急性又は慢性の自己免疫性血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、新生児溶血性疾患（ＨＤＮ）、寒冷凝集素症、血栓性血小板減少性紫斑病及び自己免疫性後天性血友病、グッドパスチャー症候群、膜外腎症（extramembranous nephropathy）、自己免疫性脂性肌疾患（autoimmune oily skin conditions）、難治性筋無力症、混合型クリオグロブリン血症、乾癬、若年性特発性関節炎、炎症性筋炎、皮膚筋炎、及び抗リン脂質症候群を含む小児における全身性自己免疫疾患から選択される抗原又は誘導体であり得る。
【0249】
或る特定の実施形態によれば、本発明による組換えポリペプチドのリガンド結合ドメインが結合することができる抗原は、以下の疾患：血小板血症、骨髄異形成症候群、良性腫瘍、及び老化細胞の除去から選択される抗原又は誘導体であり得る。
【0250】
或る特定の実施形態において、本発明の武装ＮＫ細胞は、本発明の組換えポリペプチドによって認識することができる抗原を担持する標的細胞、例えば、癌細胞を溶解するために使用される。
【0251】
或る特定の実施形態において、本発明の武装ＮＫ細胞は、本発明の組換えポリペプチドに付着した抗原を認識する標的細胞、例えば、自己反応性Ｂ細胞を溶解するために使用される。
【0252】
或る特定の実施形態によれば、武装ＮＫ細胞は、武装ＮＫ細胞を必要とする個体に注入される前に、最大７日間、又は最大３週間維持することができる。したがって、或る特定の実施形態において、武装ＮＫ細胞集団は、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも７日間、潜在的に１０日間、潜在的に１２日間、潜在的に１４日間、潜在的に１６日間、潜在的に１８日間、潜在的に２０日間及び潜在的に２１日間、又は１週間、２週間又は３週間、４週間、５週間、６週間、又はそれ以上培養される。本出願の実施例に詳細に記載されているように、例示的及び非限定的な培養期間は、少なくとも３日間及び少なくとも７日間である。
【0253】
薬学的組成物
組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む組成物、特に薬学的組成物も提供され、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、薬理学的又は薬学的に許容される賦形剤又はビヒクルで配合される。これらの組成物は、本発明による組換えポリペプチドで武装したＮＫ細胞の１つ又は複数の組み合わせ（例えば、２つ以上の異なるもの）を含むことができる。例えば、本明細書に記載の薬学的組成物は、標的抗原上の異なるエピトープ又は補完的な活性を有する抗体（又はイムノコンジュゲート若しくは二重特異性化合物）に結合する武装ＮＫ細胞の組み合わせを含むことができる。
組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む組成物、特に薬学的組成物も提供され、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができ、薬理学的又は薬学的に許容される賦形剤又はビヒクルで配合される。これらの組成物は、本発明による組換えポリペプチドで武装したＮＫ細胞の１つ又は複数の組み合わせ（例えば、２つ以上の異なるもの）を含むことができる。例えば、本明細書に記載の薬学的組成物は、標的抗原上の異なるエピトープ又は補完的な活性を有する抗体（又はイムノコンジュゲート若しくは二重特異性化合物）に結合する武装ＮＫ細胞の組み合わせを含むことができる。
【0254】
或る特定の場合において、組成物は、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ～３００ｍｇ／ｍｌ又は１００ｍｇ／ｍｌ～３００ｍｇ／ｍｌの武装ＮＫ細胞を含む。
【0255】
本明細書に記載の薬学的組成物は、併用療法において、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、少なくとも別の抗病原体剤及び／又はＮＫ細胞に対する刺激剤（例えば、活性化因子）と組み合わせた本明細書に記載の武装ＮＫ細胞を含むことができる。組み合わせて使用することができる治療剤の例は、本出願に記載の武装ＮＫ細胞の使用に関する項において、以下により詳細に記載されている。
【0256】
或る特定の場合において、本明細書に記載の薬学的組成物は、癌、自己免疫疾患及びその派生的なもの又は感染性疾患等の病変を治療するために使用される他の化合物、薬剤及び／又は医薬を含むことができる。これらの化合物、薬剤及び／又は医薬としては、例えば、化学療法剤、低分子薬剤又は所与の癌に対する免疫応答を刺激する抗体を挙げることができる。
【0257】
本明細書に記載の薬学的組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容される塩を含むことができる。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保存し、望ましくない毒性作用を伝達しない塩を意味する。酸付加塩及び塩基付加塩は塩の例である。酸付加塩は、無毒の無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸及びモノカルボン脂肪族酸及びジカルボン脂肪族酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカンを含む。酸、芳香族酸、芳香族及び脂肪族スルホン酸等の無毒の有機酸に由来する塩が含まれる。塩基付加塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム及びカルシウム等のアルカリ土類金属、並びにＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等を含む。有毒な有機アミンに由来する塩が含まれる。
【0258】
本明細書に記載の薬学的組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤も含むことができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例は、（１）水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、（２）油溶性抗酸化剤、酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロール等を含み、（３）金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が含まれる。
【0259】
本明細書に記載の薬学的組成物に使用することができる好適な水性又は非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）及びそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注入可能な有機エステルを含む。好適な流動性は、例えば、分散液の場合に必要な粒径を保つこと、及び界面活性剤を使用することで維持することができる。これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントも含有することができる。微生物の存在の予防は、後述の滅菌方法と、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等のいくつかの抗細菌剤及び抗真菌剤を含めることとの両方により確実にすることができる。組成物中に、糖、塩化ナトリウム等の等張剤を含めることも望ましい場合がある。さらに、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収遅延剤を含めると、注射用薬学的形態の吸収を遅らせることができる。
【0260】
薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。薬学的活性物質へのそのような担体及び薬剤の使用は、当該分野においてよく知られている。従来の培地又は薬剤が有効成分と適合しない場合を除き、本明細書に記載の薬学的組成物におけるそれらの使用が検討される。補完的な活性物質も組成物に組み込むことができる。
【0261】
薬学的組成物は、一般に、製造及び保管条件下で無菌及び安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高い医薬濃度に適した他の秩序構造の形態で配合することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、液体グリセロール、プロピレングリコール及びポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。好適な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合に必要な粒径を保つことよって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール及びソルビトール等のポリアルコール、又は塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の遅延吸収は、組成物中に、吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【0262】
滅菌注射用溶液は、活性化合物、すなわち、武装ＮＫ細胞を、必要量で好適な溶媒中に含めて、場合により以下に列挙される成分の１つ又はそれらの組み合わせと共に調整し、次いで精密濾過を用いて滅菌することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒と、以下に列挙されるものからの他の必要な成分とを含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことで調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空下で乾燥させる方法であり、有効成分の粉末と任意の他の所望の成分は、あらかじめ滅菌及び濾過された溶液から調製され、凍結乾燥される。
【0263】
単位剤形を調製するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される対象及び特定の投与様式に従って変えることができる。単位剤形を調製するために担体材料と組み合わせることができる有効成分、すなわち、武装ＮＫ細胞の量は、一般に、治療効果を引き起こす組成物の量である。或る特定の実施形態によれば、有効成分、すなわち、武装ＮＫ細胞の量は、大抵の場合、薬学的に許容される担体と組み合わせて、最終組成物量に対して約０．０１％～約９９％、好ましくは最終組成物量に対して約０．１％～約７０％である。
【0264】
投与計画は、所望の最適な反応（例えば、治療反応）を得るために調整される。或る特定の実施形態によれば、単回のボーラス投与が可能であり、複数の分割用量を長期間にわたって投与することができ、又は差し迫った治療の状況で示されるように用量を比例的に減少又は増加させることができる。好ましくは、非経口組成物の配合物は、特に投与及び投与量の均一性を容易にするために、単位用量の形態である。
【0265】
或る特定の実施形態によれば、単位剤形は、治療される個体の単位用量として便利な物理単位を指し、必要とされる薬学的担体に関連する各単位は、所望の治療効果を引き起こす。
【0266】
或る特定の実施形態によれば、抗原と組み合わせて、又は抗原なしで武装ＮＫ細胞を投与する場合、投与量は、宿主の体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ～１００ｍｇ、より一般的には０．０１ｍｇ～５ｍｇの範囲である。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／体重１ｋｇ、１ｍｇ／体重１ｋｇ、３ｍｇ／体重１ｋｇ、５ｍｇ／体重１ｋｇ、若しくは１０ｍｇ／体重１ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間である。
【0267】
或る特定の実施形態によれば、治療レジメンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、又は３ヶ月～６ヶ月に１回の１回の投与であり得る。
【0268】
或る特定の実施形態によれば、本発明による薬学的組成物の投与のための好ましい投与計画は、静脈内投与当たり、１ｍｇ／体重１ｋｇ又は３ｍｇ／体重１ｋｇを含む。具体的には、組成物は、（ｉ）４週間に１回、続いて（ｉｉ）３ヶ月に１回投与される。
【0269】
或る特定の実施形態において、異なる結合特異性を有する２つ以上の武装ＮＫ細胞が同時に投与され、その場合、投与される各武装ＮＫ細胞の用量は、示された範囲内である。武装ＮＫ細胞は、通常、数回投与される。単位用量の間隔は、例えば、１週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月毎、又は１年に１回であり得る。さらに、間隔は不規則であり得る。或る特定の実施形態において、投与量は、約１μｇ／ｍｌ～１０００μｇ／ｍｌの武装ＮＫ細胞血漿濃度、或る特定の実施形態において、約２５μｇ／ｍｌ～３００μｇ／ｍｌの武装ＮＫ細胞血漿濃度を得るために調整される。
【0270】
武装ＮＫ細胞は、徐放性配合物の形態で投与することができ、その場合、頻繁な投与を必要とすることは少なくなる。投与量及び頻度は、患者における武装ＮＫ細胞の半減期に応じて異なる。本発明の武装ＮＫ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏでせいぜい約３日、最大約７日の半減期を有する。
【0271】
或る特定の実施形態によれば、薬学的組成物は、予防的又は治療的処置に使用される。投与量及び投与頻度は、治療が予防的か治療的かに基づいて変えることができる。予防的用途において、比較的低い用量が、比較的低頻度間隔にて長期間にわたって投与される。或る特定の患者は、生涯にわたって治療を受け続ける。治療的用途において、疾患の進行が軽減又は停止するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔にて比較的高い用量が必要とされる可能性がある。その後、患者に予防的レジメンを投与することができる。
【0272】
本発明による薬学的組成物の有効成分の実際の投与量レベルは、個体、特に組成物及び投与様式について所望の治療反応を得るために、患者にとって有毒ではない。有効量の有効成分を得るために、同一に変えることが可能である。選択される投与量レベルは、使用される特定の組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時期、使用される特定の化合物の消失速度、治療期間、特定の組成物と組み合わせて使用される他の医薬、化合物及び／又は物質、治療される個体の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態及び病歴、並びに医療分野においてよく知られている同様の要因に依存する。投与量レベルは、いくつかの薬物動態学的要因に応じて変えることもできる。
【0273】
或る特定の実施形態によれば、治療的有効用量は、病変の発生を予防又は遅らせることができる。例えば、疾患の診断に使用される臨床検査は、化学的、血液学的、血清学的及び放射線学的なものを含む。したがって、上記の要素の１つをモニターする臨床分析又は生化学分析は、特定の治療が疾患を治療するための治療的有効用量であるかどうかを決定するために使用することができる。当業者は、個体の大きさ、個体の症状の重症度、及び選択された特定の組成物又は投与経路等の要因に応じて、そのような量を決定することができる。
【0274】
本発明による薬学的組成物は、１つ又は複数の投与経路により、当該技術分野において既知の１つ又は複数の方法に従って投与することができる。当業者によって理解されるように、投与経路及び／又は投与様式は、所望の結果に応じて異なる。
【0275】
或る特定の好ましい実施形態によれば、本発明による武装ＮＫ細胞の投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄経路、又は注射若しくは灌流等の任意の他の非経口投与経路による投与を含む。
【0276】
本発明による武装ＮＫ細胞は、局所、上皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下又は局所等の非経口経路により投与することもできる。
【0277】
活性化合物は、インプラント、経皮パッチ及びマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御配合物等の、速い放出から化合物を保護する担体で調製することができる。エチレン－酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸等の生分解性及び生体適合性ポリマーを使用することができる。これらの配合物の調製方法の多くは、特許取得されているか、又は当業者に一般的に知られている（例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc, New York, 1978を参照のこと）。
【0278】
治療用組成物は、当該分野において既知の医療機器によって投与することができる。本発明の或る特定の具体的な実施形態によれば、本発明による治療用組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、米国特許第５，３８３，８５１号、米国特許第５，３１２，３３５号、米国特許第０６４，４１３号、米国特許第４，９４１，８８０号、米国特許第４，７９０，８２４号に記載の装置、又は米国特許第４，５９６，５５６号に記載の装置等の針のない皮下注射装置を含む。
【0279】
本発明による武装ＮＫ細胞と共に使用されることがよく知られているインプラント及びモジュールの例のうち、以下のもの：制御された流速で医薬を投与するための埋め込み型微小灌流ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療用装置を開示する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な灌流速度で医薬を投与するための灌流ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；医薬の連続投与のための可変流速埋め込み型灌流装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号；及び浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，１９６号を挙げることができる。これらの特許文献は、引用することにより本明細書の一部をなす。このタイプの他の多くのインプラント、送達システム及びモジュールは、当業者に知られている。
【0280】
或る特定の場合において、本発明による武装ＮＫ細胞は、良好なｉｎ ｖｉｖｏ分布を確保するために配合することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性の化合物を排除する。本発明による治療用化合物がＢＢＢを通過することを確保するために（所望であれば）、例えば、リポソームに配合することができる（例えば、リポソームの調製方法については、米国特許第４，５２２，８１１号、米国特許第５，３７４，５４８号及び米国特許第５，３９９，３３１号を参照のこと）。リポソームは、特定の細胞又は臓器に選択的に輸送される１つ又は複数の物質を含有することができるため、医薬の標的投与を改善することができる（例えば、VV Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685を参照のこと）。
【0281】
治療方法
前述したように、本発明による組換えポリペプチドに結合することができる、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体と、上記組換えポリペプチドとの上記組み合わせは、医薬として使用することができる有効成分である。
前述したように、本発明による組換えポリペプチドに結合することができる、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体と、上記組換えポリペプチドとの上記組み合わせは、医薬として使用することができる有効成分である。
【0282】
１つの実施形態によれば、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系の上記ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、及び上記組換えポリペプチドは、同時投与することができる。
【0283】
１つの実施形態によれば、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系の上記ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、及び上記組換えポリペプチドは、順次投与することができる。
【0284】
１つの実施形態によれば、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系の上記ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、及び上記組換えポリペプチドは、非共有結合複合体内で投与することができる。したがって、１つの主要な実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる、医薬として使用される、薬学的組成物に関する。
【0285】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合している、医薬として使用される、薬学的組成物に関する。
【0286】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる、医薬として使用される、薬学的組成物に関する。
【0287】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ（ナチュラルキラー）細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む薬学的組成物であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含み、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合している、医薬として使用される、薬学的組成物に関する。
【0288】
別の主要な実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0289】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合した改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0290】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合することができる、改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0291】
特定の実施形態によれば、本発明は、組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体であって、上記組換えポリペプチドは、（ｉ）上記ＮＫ細胞又はその前駆体に結合した、改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む、医薬として使用される、ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体に関する。
【0292】
別の主要な実施形態によれば、本発明は、
ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0293】
特定の実施形態によれば、本発明は、
ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体を含む第１の部分と、
（ｉ）改変ＣＨ２ドメインを含む改変Ｆｃ（フラグメント結晶化可能）領域と、（ｉｉ）リガンド結合ドメインとを含む組換えポリペプチドを含む第２の部分であって、上記Ｆｃ領域は、上記ＮＫ細胞又はＮＫ細胞前駆体に結合することができる、第２の部分と、
を含む、医薬として使用されるキットに関する。
【0294】
本発明の別の目的によれば、本発明による薬学的組成物、本発明による同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体、又は本発明によるキットは、具体的には、それらを必要とする個体における癌、自己免疫疾患及びその派生的なもの、又は感染性疾患を治療又は予防する治療方法において使用される。
【0295】
本発明に従って検討される個体又は患者は、哺乳類であり得る。本発明が意図する哺乳類は、例えば、家畜（ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ等）、具体的には、ネコ及びイヌ、霊長類、例えばヒト及び非ヒト霊長類、ウサギ、及び齧歯類、例えばマウス及びラットから選択することができる。１つの実施形態によれば、本発明が意図する個体又は患者は、ヒトであり得る。
【0296】
本発明による組換えポリペプチドと組み合わせたＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体は、癌を治療又は予防する方法、具体的にはそれらを必要とする個体における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法で使用するのに特に適切であり得る。
【0297】
１つの実施形態によれば、癌又は癌に関連する腫瘍細胞は、黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌、卵巣癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、腟癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿道癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、ＣＮＳ原発性リンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔリンパ球リンパ腫、環境によって誘発される癌、及び上記癌の組み合わせの一部であり得る。
【0298】
本発明による組換えポリペプチドに付着した、ＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体は、感染性疾患を治療又は予防する方法、具体的には感染性病原体に感染した細胞を阻害又は破壊する方法で使用するのに特に適切であり得る。
【0299】
１つの実施形態によれば、感染性疾患は、（ａ）インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア症、マラリア及びリーシュマニア症から選択される疾患；（ｂ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス及びアルボウイルス脳炎ウイルスから選択されるウイルスによる病原体感染症；（ｃ）クラミジア属、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌及び淋菌、クレブシエラ属、プロテウス属、セラチア属、シュードモナス属、レジオネラ属、ジフテリア属、サルモネラ属、バチルス属、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭素病、ペスト、レプトスピラ症及びライム病細菌から選択される細菌による病原体感染症；（ｄ）カンジダ属、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス属、ケカビ目の属、スポロトリックス・シェンキー、ブラストミセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシキス、コクシジオイデス・イミチス及びヒストプラズマ・カプスラーツムから選択される真菌による病原体感染症；又は（ｅ）エントアメーバ・ヒストリチカ、バランチジウム・コリ、ネグレリア・フォーレリ、アカンソアメーバ属の種、ジアルジア・ランビア、クリプトスポリジウム属の種、ニューモシスチス・カリニ、プラスモディウム・ビラックス、バベシア・ミクロチ、トリパノソーマ・ブルセイ、トリパノソーマ・クルージ、リーシュマニア・ドノバン、トキソプラズマ・ゴンディ及びニッポストロンギルス・ブラシリエンシスから選択される寄生生物による病原体感染症であり得る。
【0300】
具体的には、肝炎ウイルスは、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスであり、ヘルペスウイルスは、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ及びＣＭＶ又はエプスタイン・バーウイルスであり、真菌のカンジダ属は、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、カンジダ・クルセイ（Candida krusei）、カンジダ・グラブラタ（Candida glabrata）又はカンジダ・トロピカリス（Candida tropicalis）であり、真菌のアスペルギルス属は、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumigatus）又はアスペルギルス・ニゲル（Aspergillus niger）であり、真菌のケカビ目は、ケカビ属（mucor）、アブシディア属（absidia）又はクモノスカビ属（rhizophus）である。
【0301】
本発明による組換えポリペプチドに付着したＮＫ細胞、好ましくはＮＫ細胞を必要とする個体に関して同種異系若しくは自系のＮＫ細胞、又はＮＫ細胞前駆体はまた、自己免疫疾患又はその派生的なもの、具体的には、臓器又は全身に特異的で、病原性自己抗体に関連又は関連しない原始又は二次自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を治療又は予防する方法で使用するのに特に便利であり得る。
【0302】
例として、臓器移植片拒絶反応、移植片対宿主病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、原始シェーグレン症候群（又はグージェロー・シェーグレン症候群）、多発性硬化症等の自己免疫性多発ニューロパチー、Ｉ型糖尿病、自己免疫性肝炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、痛風性関節炎、セリアック病、クローン病、橋本甲状腺炎、アジソン病、自己免疫性肝炎、バセドウ病、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ（抗好中球細胞質抗体）関連全身性血管炎等の血管炎、成人及び小児における自己免疫性血球減少症及び他の血液系の合併症、例えば急性又は慢性の自己免疫性血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、新生児溶血性疾患（ＨＤＮ）、寒冷凝集素症、血栓性血小板減少性紫斑病及び自己免疫性後天性血友病、グッドパスチャー症候群、膜外腎症、自己免疫性脂性肌疾患、難治性筋無力症、混合型クリオグロブリン血症、乾癬、若年性特発性関節炎、炎症性筋炎、皮膚筋炎、及び抗リン脂質症候群を含む小児における全身性自己免疫疾患を挙げることができる。
【0303】
治療及び／又は予防を必要とする個体における癌、自己免疫疾患及びその派生的なもの、又は感染性疾患を治療及び／又は予防する方法も提供され、該方法は、個体において治癒される癌、自己免疫疾患及びその派生的なもの、又は感染性疾患について特異的な抗原と組み合わせて、又は抗原なしで、本発明による武装ＮＫ細胞を個体に投与することを含む。
【0304】
本発明による治療法以外に、本発明による武装ＮＫ細胞は、別の治療法と組み合わせて使用することもできる。例えば、癌の治療のために、本発明による武装ＮＫ細胞は、化学療法、放射線療法、手術又は遺伝子治療等の癌に対する別の治療も受けている個体に投与することができる。
【実施例】
【0305】
以下の実施例は、ｅＮＫ細胞と改変Ｆｃポリペプチド、特にＦｃ ＳＤＨポリペプチド（Ｆｃ－ＳＤＨＴＳＦＴＩＥ）との間の結合特異性、及び疾患に関与する細胞を標的とするその能力を示す。
【0306】
実施例１：材料及び方法
ＰＢＭＣ細胞の調製
ＰＢＭＣ細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球）は、モンペリエのＣＨＵの健常ドナーから得られた。細胞は、末梢血試料（Ｂ細胞、Ｔ細胞及び単球）及び臍帯血（ＮＫ細胞）から採取された（Sanchez-Martinez et al. 2016、非特許文献２）。
ＰＢＭＣ細胞の調製
ＰＢＭＣ細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球）は、モンペリエのＣＨＵの健常ドナーから得られた。細胞は、末梢血試料（Ｂ細胞、Ｔ細胞及び単球）及び臍帯血（ＮＫ細胞）から採取された（Sanchez-Martinez et al. 2016、非特許文献２）。
【0307】
ＰＢＭＣ細胞マーカー
ＣＤ４５＋は、リンパ球の一般的なマーカーである。ＣＤ５６＋は、ＮＫ細胞の特異的マーカーである。ＣＤ３－は、Ｔリンパ球を識別するマーカーである。ＣＤ１６＋は、ＮＫ細胞の特異的マーカーであり、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を可能にする。
ＣＤ４５＋は、リンパ球の一般的なマーカーである。ＣＤ５６＋は、ＮＫ細胞の特異的マーカーである。ＣＤ３－は、Ｔリンパ球を識別するマーカーである。ＣＤ１６＋は、ＮＫ細胞の特異的マーカーであり、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を可能にする。
【0308】
ＮＫ細胞の単離及び活性化
まず、モンペリエのＣＨＵの健常ドナーからリンパ球を得た。ＰＢＭＣ及びＵＣＢ（ＵＣＢＭＣ）は、それぞれＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Sigma）を使用して末梢血試料及びＵＣＢユニットにおいて採取された。本質的に、１３ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅを５０ｍｌの遠心管に加え、ＲＰＭＩ（Invitrogen）で１／２に希釈した３０ｍｌの血液を上からゆっくりと加えた。遠心管を、途切れることなく、２０℃で３０分間、１６００回転／分にて遠心分離した。
まず、モンペリエのＣＨＵの健常ドナーからリンパ球を得た。ＰＢＭＣ及びＵＣＢ（ＵＣＢＭＣ）は、それぞれＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Sigma）を使用して末梢血試料及びＵＣＢユニットにおいて採取された。本質的に、１３ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅを５０ｍｌの遠心管に加え、ＲＰＭＩ（Invitrogen）で１／２に希釈した３０ｍｌの血液を上からゆっくりと加えた。遠心管を、途切れることなく、２０℃で３０分間、１６００回転／分にて遠心分離した。
【0309】
遠心分離後、単核細胞を白色の中間層（interlayer ring）から取り出し、ＲＰＭＩで洗浄し、１０％のＦＢＳ（Invitrogen）を追加したＲＰＭＩ培地に懸濁した。次に、リンパ球を液体窒素で凍結した。次に、ポジティブセレクションキットＣＤ３ ＥａｓｙＳｅｐ（商標）（STEMCELL technologies）を使用して、凍結リンパ球からＴ細胞を除去した。細胞を、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、又はＩＬ－２のみ（１０００Ｕ／ｍｌ）で、ＮＫ細胞／照射ＰＬＨ細胞比１：１にて、γ照射ＰＬＨ細胞と共に１０日～２０日間培養した。ＰＬＨ細胞は４日毎に、新鮮なサイトカインは２日毎に加えた。処理終了時、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ３－）の純度は常に９０％超であった。
【0310】
改変Ｆｃ領域を含むＩｇＧ１抗体
使用されるＩｇＧ１抗体は、トラスツズマブ（ハーセプチン）又はリツキシマブ（リツキサン）である。改変Ｆｃ領域を次表に示す。
使用されるＩｇＧ１抗体は、トラスツズマブ（ハーセプチン）又はリツキシマブ（リツキサン）である。改変Ｆｃ領域を次表に示す。
【0311】
【表1】
【0312】
配列番号１７のアミノ酸配列は、配列番号１６のアミノ酸配列に包含される。上記２つのアミノ酸配列の違いは、配列番号１６のアミノ酸配列の最初の１０個のアミノ酸が、配列番号１７のアミノ酸配列から除去されていることにある。
【0313】
蛍光分子によるＦｃポリペプチド及びＦｃ抗体の標識
Ｆｃポリペプチド及びＦｃ抗体を標識し、それらのＮＫ細胞への結合を調べるために、ポリペプチド及び抗体を蛍光分子に結合させる。使用される蛍光分子は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒｓ６４７（Ａ６４７）及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒｓ４８８（Ａ４８８）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である。
Ｆｃポリペプチド及びＦｃ抗体を標識し、それらのＮＫ細胞への結合を調べるために、ポリペプチド及び抗体を蛍光分子に結合させる。使用される蛍光分子は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒｓ６４７（Ａ６４７）及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒｓ４８８（Ａ４８８）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である。
【0314】
フローサイトメトリー分析
表現型の分析では、生細胞及び表面マーカーに対する抗体ＣＤ２５－ＦＩＴＣ、ＣＤ４５ＲＯ－ＦＩＴＣ、ＣＤ６９－ＰＥ、ＣＤ６２Ｌ－ＰＥ、ＣＤ１９－ＰＥ、ＣＤ３－ＰＥ、ＣＤ１９－ＥＣＤ、ＣＤ５６－ＰＥＣｙ７、ＣＤ５６－ＡＰＣ、ＣＤ３－ＡＰＣ、ＣＤ４５－ＡＰＣＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＣＤ１６－ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ、ＣＤ５７－ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ、ＣＤ４５－ＫｒｏｍｅＯｒａｎｇｅ、ＣＤ１６－ＫｒｏｍｅＯｒａｎｇｅ（Beckman）、ＣＤ１５８ｂ－ＦＩＴＣ、ＣＤ１５８ａ－ＰＥ、ＣＤ１０７ａ－ＨＶ５００（BD Biosciences）、ＣＤ１５８ｅ－Ｖｉｏｂｌｕｅ（Miltenyi）を特定するために、細胞を７ＡＡＤ（Beckman）で染色した。１×１０５～３×１０５の細胞を、２．５％のＰＢＳを含有するＰＢＳ中で種々の抗体と共に、４℃で２０分～３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、２００μｌ～２５０μｌの同じ培地の懸濁液に入れた。染色を、Ｋａｌｕｚａソフトウェアを用いてＧａｌｌｉｏｓフローサイトメトリー（Beckman）によって分析した。生リンパ球をＦＳＣ／ＳＳＣ及び７ＡＡＤ染色した。Ｂリンパ球（ＣＤ１９＋）、Ｔリンパ球（ＣＤ３＋／ＣＤ５６－）及びＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ３－）は、それぞれＣＤ１９、ＣＤ３及びＣＤ５６抗体を使用して識別された。
表現型の分析では、生細胞及び表面マーカーに対する抗体ＣＤ２５－ＦＩＴＣ、ＣＤ４５ＲＯ－ＦＩＴＣ、ＣＤ６９－ＰＥ、ＣＤ６２Ｌ－ＰＥ、ＣＤ１９－ＰＥ、ＣＤ３－ＰＥ、ＣＤ１９－ＥＣＤ、ＣＤ５６－ＰＥＣｙ７、ＣＤ５６－ＡＰＣ、ＣＤ３－ＡＰＣ、ＣＤ４５－ＡＰＣＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＣＤ１６－ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ、ＣＤ５７－ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ、ＣＤ４５－ＫｒｏｍｅＯｒａｎｇｅ、ＣＤ１６－ＫｒｏｍｅＯｒａｎｇｅ（Beckman）、ＣＤ１５８ｂ－ＦＩＴＣ、ＣＤ１５８ａ－ＰＥ、ＣＤ１０７ａ－ＨＶ５００（BD Biosciences）、ＣＤ１５８ｅ－Ｖｉｏｂｌｕｅ（Miltenyi）を特定するために、細胞を７ＡＡＤ（Beckman）で染色した。１×１０５～３×１０５の細胞を、２．５％のＰＢＳを含有するＰＢＳ中で種々の抗体と共に、４℃で２０分～３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、２００μｌ～２５０μｌの同じ培地の懸濁液に入れた。染色を、Ｋａｌｕｚａソフトウェアを用いてＧａｌｌｉｏｓフローサイトメトリー（Beckman）によって分析した。生リンパ球をＦＳＣ／ＳＳＣ及び７ＡＡＤ染色した。Ｂリンパ球（ＣＤ１９＋）、Ｔリンパ球（ＣＤ３＋／ＣＤ５６－）及びＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ３－）は、それぞれＣＤ１９、ＣＤ３及びＣＤ５６抗体を使用して識別された。
【0315】
ＭＴＴ試験
採取したての、又は凍結した（液体窒素で保存）ＮＫ細胞を、３μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ ＢＭＱＣ Ｄｙｅ（Life Technologies）で標識し、異なるＥ：Ｔ比にてＢＴ２０標的細胞と共に一晩インキュベートした。その後、アネキシンＶ－ＦＩＴＣ（Immunostep）及び７ＡＡＤ（BD Biosciences）又はヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用したフローサイトメトリーによって、紫色蛍光陰性の標的細胞集団におけるホスファチジルセリン（ＰＳ）の転座及び膜損傷を分析した。アネキシン－Ｖ及び／又はＰＩ（又は７－ＡＡＤ）について陽性の全て細胞は、死細胞（又は瀕死の細胞）と見なされた。
採取したての、又は凍結した（液体窒素で保存）ＮＫ細胞を、３μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ ＢＭＱＣ Ｄｙｅ（Life Technologies）で標識し、異なるＥ：Ｔ比にてＢＴ２０標的細胞と共に一晩インキュベートした。その後、アネキシンＶ－ＦＩＴＣ（Immunostep）及び７ＡＡＤ（BD Biosciences）又はヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用したフローサイトメトリーによって、紫色蛍光陰性の標的細胞集団におけるホスファチジルセリン（ＰＳ）の転座及び膜損傷を分析した。アネキシン－Ｖ及び／又はＰＩ（又は７－ＡＡＤ）について陽性の全て細胞は、死細胞（又は瀕死の細胞）と見なされた。
【0316】
ＡＤＣＣ実験において、ＢＴ２０標的細胞を５μｇ／ｍｌでの抗体トラスツズマブと共に、３７℃で３０分間インキュベートした。ＮＫ細胞が抗体で武装されている場合、細胞を同一の抗体濃度でインキュベートしてから、それらを洗浄し、ＢＴ２０標的細胞と共にインキュベートする。ＥＧＴＡ（エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸）を１ｍＭで使用して、顆粒エキソサイトーシス放出経路（granular exocytose route）を遮断し、１．５ｍＭでのＭｇＣｌ２で浸透圧を維持した。テトラゾリウムＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）色素を使用して、細胞生存率を決定した。次に、１０μＬのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）を接着細胞（ＰＢＳで２回洗浄後、１００μＬの培地）に加え、次に、細胞を３７℃で１時間インキュベートした。１時間後、１００μＬの０．０５Ｍ ＨＣｌをイソプロパノールに加えて、結晶を溶解させ、分光光度計で５５０ｎｍにて色を定量化した。全ての実験において、モノクローナル抗体の有無における基底細胞死を計算した。これらの値を、それぞれＮＫ細胞又は特異的なＡＤＣＣを生じる抗体で武装したＮＫ細胞で処理した後に得られた値から差し引いた。
【0317】
統計分析
全ての実験は、ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＮＴＯ ＩＩで実施し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアで分析した。
全ての実験は、ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＮＴＯ ＩＩで実施し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアで分析した。
【0318】
実施例２ 研究設計
ＦｃポリペプチドとｅＮＫ細胞との組み合わせ（グラフ１Ａ）
臍帯血由来のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＫ細胞（ｅＮＫ）を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＮＫマーカーに対して染色した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。Ａ６４７で標識した種々のＦｃポリペプチド（Ｆｃ Ａ６４７）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を分析し、Ｆｃ ＷＴポリペプチドに対して正規化した。
ＦｃポリペプチドとｅＮＫ細胞との組み合わせ（グラフ１Ａ）
臍帯血由来のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＫ細胞（ｅＮＫ）を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＮＫマーカーに対して染色した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。Ａ６４７で標識した種々のＦｃポリペプチド（Ｆｃ Ａ６４７）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を分析し、Ｆｃ ＷＴポリペプチドに対して正規化した。
【0319】
Ｆｃトラスツズマブ抗体とｅＮＫ細胞との組み合わせ（グラフ１Ｂ）
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴトラスツズマブ抗体、Ｆｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又はＦｃ抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＦＩＴＣに結合した二次抗ヒトＦｃ ＩｇＧ抗体（抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣ）で標識した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。種々の抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣのＭＦＩを分析し、Ｆｃ ＷＴに対して正規化した。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴトラスツズマブ抗体、Ｆｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又はＦｃ抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＦＩＴＣに結合した二次抗ヒトＦｃ ＩｇＧ抗体（抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣ）で標識した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。種々の抗Ｆｃ ＩｇＧ ＦＩＴＣのＭＦＩを分析し、Ｆｃ ＷＴに対して正規化した。
【0320】
ＦｃポリペプチドとｅＮＫ細胞のＦｃ受容体（ＣＤ１６）との結合特異性（グラフ１Ｃ）
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＮＫマーカーに対して染色した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－及びＣＤ１６＋又はＣＤ１６－により特定した。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、ＮＫマーカーに対して染色した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－及びＣＤ１６＋又はＣＤ１６－により特定した。
【0321】
Ｆｃ＋ ｅＮＫ細胞の頻度及びＭＦＩ（Ｆｃ ＷＴに対して正規化）を、ＣＤ１６－ ＮＫ細胞及びＣＤ１６＋ ＮＫ細胞において分析した。
【0322】
実施例３ 研究設計
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で２日、３日、又は７日間インキュベートした。示した日に、ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＦｃポリペプチドの結合を、フローサイトメトリーによって分析した（グラフ２Ａ）。Ｆｃ＋ ｅＮＫ細胞の頻度及びＦｃ Ａ６４７のＭＦＩ（Ｆｃ ＷＴに対して正規化）（グラフ２Ｂ）を、ｅＮＫ細胞で測定した。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＬＡＬＡ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で２日、３日、又は７日間インキュベートした。示した日に、ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＦｃポリペプチドの結合を、フローサイトメトリーによって分析した（グラフ２Ａ）。Ｆｃ＋ ｅＮＫ細胞の頻度及びＦｃ Ａ６４７のＭＦＩ（Ｆｃ ＷＴに対して正規化）（グラフ２Ｂ）を、ｅＮＫ細胞で測定した。
【0323】
実施例４ 研究設計
効率的な付着のためのＦｃ ＳＤＨの用量（グラフ３Ａ及びグラフ３Ｂ）
全てのＣＤ１６Ａ受容体（又はＦｃγＲＩＩＩａ）がＦｃ ＳＤＨポリペプチドによって飽和され得るかどうかを試験するために、ｅＮＫ細胞を、漸増濃度のＦｃ ＷＴポリペプチド又はＦｃ ＳＤＨポリペプチドと共にインキュベートした。
効率的な付着のためのＦｃ ＳＤＨの用量（グラフ３Ａ及びグラフ３Ｂ）
全てのＣＤ１６Ａ受容体（又はＦｃγＲＩＩＩａ）がＦｃ ＳＤＨポリペプチドによって飽和され得るかどうかを試験するために、ｅＮＫ細胞を、漸増濃度のＦｃ ＷＴポリペプチド又はＦｃ ＳＤＨポリペプチドと共にインキュベートした。
【0324】
具体的には、ｅＮＫ細胞を、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌでのポリペプチド（ｉ）Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７、（ｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７若しくは（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ Ａ４８８と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。一度Ｆｃポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞を洗浄し、ＮＫマーカーに対して染色した。武装ｅＮＫ細胞は、フローサイトメトリーによってＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－と特定された。Ｆｃ Ａ６４７（グラフ３Ａ）又はＦｃ Ａ４８８（グラフ３Ｂ）のＭＦＩを分析した。
【0325】
Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドと競合体との組み合わせ（グラフ３Ｃ及びグラフ３Ｄ）
上記の実施例は、ｅＮＫ細胞上でのＦｃ ＳＤＨポリペプチドの長期安定性を示しているが、この付着が、ｉｎ ｖｉｖｏに注入されたときに別のＦｃポリペプチドによって置換され得るかどうかは、答えが出ていない。この状態を研究するために、ｅＮＫ細胞を、２０μｇ／ｍｌでのポリペプチドＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８（グラフ３Ｃ）若しくはＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７（グラフ３Ｄ）と共に飽和状態下で、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、一度Ｆｃポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞を洗浄し、ＣＤ１６Ａ受容体競合体のリガンドを３７℃で１時間添加した。（ｉ）Ｆｃブロック；（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ；（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ；抗ＣＤ１６抗体。次に、ｅＮＫ細胞を、ＮＫマーカーに対して染色した。ｅＮＫ細胞は、フローサイトメトリーによってＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－と定義された。Ｆｃ Ａ４８８（グラフ３Ｃ）又はＦｃ Ａ６４７（グラフ３Ｄ）のＭＦＩを分析した。
上記の実施例は、ｅＮＫ細胞上でのＦｃ ＳＤＨポリペプチドの長期安定性を示しているが、この付着が、ｉｎ ｖｉｖｏに注入されたときに別のＦｃポリペプチドによって置換され得るかどうかは、答えが出ていない。この状態を研究するために、ｅＮＫ細胞を、２０μｇ／ｍｌでのポリペプチドＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８（グラフ３Ｃ）若しくはＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７（グラフ３Ｄ）と共に飽和状態下で、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、一度Ｆｃポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞を洗浄し、ＣＤ１６Ａ受容体競合体のリガンドを３７℃で１時間添加した。（ｉ）Ｆｃブロック；（ｉｉ）Ｆｃ ＷＴ；（ｉｉｉ）Ｆｃ ＳＤＨ；抗ＣＤ１６抗体。次に、ｅＮＫ細胞を、ＮＫマーカーに対して染色した。ｅＮＫ細胞は、フローサイトメトリーによってＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－と定義された。Ｆｃ Ａ４８８（グラフ３Ｃ）又はＦｃ Ａ６４７（グラフ３Ｄ）のＭＦＩを分析した。
【0326】
実施例５ 研究設計
Ｆｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞の存在下における癌細胞の生残（グラフ４Ａ、グラフ４Ｂ及びグラフ４Ｃ）
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌ若しくは１μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴトラスツズマブ抗体若しくはＦｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、Ｆｃ抗体で武装したｅＮＫ細胞を洗浄し（グラフ４Ｂ及びグラフ４Ｃ）、又は洗浄せずに（グラフ４Ａ）、３７℃で１時間（グラフ４Ａ及びグラフ４Ｂ）又は２４時間（グラフ４Ｃ）インキュベートし、次に、ＢＴ２０細胞の存在下に１：１の比率にて３７℃で２４時間置いた。生残パーセンテージで表される細胞生存率は、ＭＴＴ試験によって測定された。
Ｆｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞の存在下における癌細胞の生残（グラフ４Ａ、グラフ４Ｂ及びグラフ４Ｃ）
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌ若しくは１μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴトラスツズマブ抗体若しくはＦｃ ＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、Ｆｃ抗体で武装したｅＮＫ細胞を洗浄し（グラフ４Ｂ及びグラフ４Ｃ）、又は洗浄せずに（グラフ４Ａ）、３７℃で１時間（グラフ４Ａ及びグラフ４Ｂ）又は２４時間（グラフ４Ｃ）インキュベートし、次に、ＢＴ２０細胞の存在下に１：１の比率にて３７℃で２４時間置いた。生残パーセンテージで表される細胞生存率は、ＭＴＴ試験によって測定された。
【0327】
武装ｅＮＫ細胞による非特異的活性化（グラフ４Ｄ）
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌ若しくは１μｇ／ｍｌでのＷＴトラスツズマブ抗体若しくはＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、抗体で武装したｅＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で１時間インキュベートし、次に、ＢＴ２０細胞の存在下に１：１の比率にて、ＣＤ１０７ａを検出するための抗体と共に３７℃で置いた。１時間のインキュベーション後、ＣＤ１０７ａの分解をブロックするために、モネンシン及びブレフェルジンＡ型化合物を更に５時間加えた。ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＣＤ１０７ａ発現の分析を、フローサイトメトリーによって実施した。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌ若しくは１μｇ／ｍｌでのＷＴトラスツズマブ抗体若しくはＳＤＨトラスツズマブ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、抗体で武装したｅＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で１時間インキュベートし、次に、ＢＴ２０細胞の存在下に１：１の比率にて、ＣＤ１０７ａを検出するための抗体と共に３７℃で置いた。１時間のインキュベーション後、ＣＤ１０７ａの分解をブロックするために、モネンシン及びブレフェルジンＡ型化合物を更に５時間加えた。ＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞上のＣＤ１０７ａ発現の分析を、フローサイトメトリーによって実施した。
【0328】
実施例６ 研究設計
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴ若しくはＦｃ ＳＤＨ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、２つの試料に分割した。膜表面に存在する抗体を検出するために、第１の試料の武装ｅＮＫ細胞を抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した。膜表面及び細胞内媒体（intracellular medium）に存在する抗体を検出するために、第２の試料のｅＮＫ細胞を固定及び透過処理してから抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した種々のＦｃ抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した（グラフ５Ａ）。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴ若しくはＦｃ ＳＤＨ抗体と共に、又は抗体なしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、２つの試料に分割した。膜表面に存在する抗体を検出するために、第１の試料の武装ｅＮＫ細胞を抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した。膜表面及び細胞内媒体（intracellular medium）に存在する抗体を検出するために、第２の試料のｅＮＫ細胞を固定及び透過処理してから抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した。次に、武装ｅＮＫ細胞を、フローサイトメトリーによって表面マーカーＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－により特定した。抗Ｆｃ ＩｇＧで標識した種々のＦｃ抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した（グラフ５Ａ）。
【0329】
ｅＮＫ細胞を、２０μｇ／ｍｌでのポリペプチドＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８（グラフ５Ｂ）若しくはＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７（グラフ５Ｃ）と共に、又はＦｃなしで、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で３日間インキュベートした。その後、競合体ＣＤ１６Ａリガンドを３７℃で１時間添加した。（ｉ）Ｆｃブロック；（ｉｉ）抗ＣＤ３２抗体；（ｉｉｉ）抗ＣＤ１６クローンＢ７３．１、（ｉｖ）抗ＣＤ１６抗体。細胞を、ＮＫマーカーに対して染色した。ｅＮＫ細胞は、フローサイトメトリーによってＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３－と定義され、Ｆｃ Ａ４８８（グラフ５Ｂ）又はＦｃ Ａ６４７（グラフ５Ｃ）のＭＦＩが分析された。
【0330】
実施例７ 研究設計
事前に凍結したｅＮＫ細胞を、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチド１０μｇ／ｍｌと共に、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、１５×１０６個のｅＮＫを成体スイスヌードマウスに腹腔内注射した。マウスを２４時間後に屠殺し、分析のために腹水及びいくつかの臓器（血液、骨髄、及び脾臓）を摘出した（図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、及び図７Ｄ）。細胞を染色してＮＫマーカーを検出した。フローサイトメトリーを使用して、ｅＮＫ細胞をＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ１６ｌｏｗ又はＣＤ１６＋と定義し、腹腔細胞におけるＦｃ Ａ６４７蛍光を分析した。ｉｎ ｖｉｖｏ注射前後の全ＣＤ５６＋ ｅＮＫ細胞内のＦｃ Ａ６４７＋ ｅＮＫ細胞を比較（図７Ｂ）。
事前に凍結したｅＮＫ細胞を、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチド１０μｇ／ｍｌと共に、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ｅＮＫ細胞を洗浄し、１５×１０６個のｅＮＫを成体スイスヌードマウスに腹腔内注射した。マウスを２４時間後に屠殺し、分析のために腹水及びいくつかの臓器（血液、骨髄、及び脾臓）を摘出した（図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、及び図７Ｄ）。細胞を染色してＮＫマーカーを検出した。フローサイトメトリーを使用して、ｅＮＫ細胞をＣＤ４５＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ１６ｌｏｗ又はＣＤ１６＋と定義し、腹腔細胞におけるＦｃ Ａ６４７蛍光を分析した。ｉｎ ｖｉｖｏ注射前後の全ＣＤ５６＋ ｅＮＫ細胞内のＦｃ Ａ６４７＋ ｅＮＫ細胞を比較（図７Ｂ）。
【0331】
実施例８ 研究設計
８．１．ＮＫ細胞上のＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂ受容体に対する、野生型抗体と比較したＦｃ領域に改変ＣＨ２を有する試験した組換え抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性（図９Ａ）
ＣＤ１６ａ又はＣＤ１６ｂに対する試験した組換え抗体の結合特性を、Ｆｃ領域、特にＣＨ２配列にアミノ酸突然変異のない野生型抗体（リツキシマブモノクローナル抗体、アロタイプＧ１ｍ１７，１を使用）と、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）によって比較した（図９Ａ）。
８．１．ＮＫ細胞上のＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂ受容体に対する、野生型抗体と比較したＦｃ領域に改変ＣＨ２を有する試験した組換え抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性（図９Ａ）
ＣＤ１６ａ又はＣＤ１６ｂに対する試験した組換え抗体の結合特性を、Ｆｃ領域、特にＣＨ２配列にアミノ酸突然変異のない野生型抗体（リツキシマブモノクローナル抗体、アロタイプＧ１ｍ１７，１を使用）と、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）によって比較した（図９Ａ）。
【0332】
抗ポリヒスチジン抗体（R&D Systems）は、製造業者の説明書（GE Healthcare）に従って、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化を使用してＣＭ５センサーチップ上で１０μｌ／分の流速にてＨＢＳ－ＥＰ中で２５℃にてＴ２００装置で固定化した。それらをフローセルＦｃ２上に６７００ＲＵレベルにて共有結合的に固定化し、同じ化学処理を使用するが抗体なしで対照参照表面（フローセルＦｃ１）を調製した。Ｆｃ１及びＦｃ２における全ての動態測定は、１００μｌ／分にてＨＢＳ－ＥＰ中で２５℃にてＴ２００装置で単一サイクル滴定によって実施した。各ヒトガンマ受容体（R&D Systems）を、固定化抗ポリヒスチジン抗体上で２０ｎＭにて６０秒間捕捉した。５つの漸増濃度の抗体を注入した（注入時間＝１２０秒）。ランニングバッファー中にて６００秒の解離工程の後、５μｌのグリシン－ＨＣｌ ｐＨ１．７を使用してセンサー表面を再生した。全てのセンサーグラムは、対照参照表面及びバッファーブランク注入から低シグナルを差し引くことによって修正した。動態パラメータは、Ｔ２００評価ソフトウェアの２つの状態モデルを使用して、センサーグラムから評価した。
【0333】
結果は、受容体に対するＷＴ抗体の親和性に関して正規化される。
【0334】
８．２．ＣＤ１６武装後１時間～７２時間の、試験した組換え抗体のＣＤ１６＋細胞に対する結合の動態（図９Ｂ）
ＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）の細胞表面での非共有結合動態を、ＦＡＣＳによって評価した。ｅＮＫを、１０μｇ／ｍＬでのリツキシマブＷＴと共に、又は組換え抗体を担持させて、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で１時間、２４時間、４８時間又は７２時間インキュベートした。
ＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）の細胞表面での非共有結合動態を、ＦＡＣＳによって評価した。ｅＮＫを、１０μｇ／ｍＬでのリツキシマブＷＴと共に、又は組換え抗体を担持させて、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＮＫ細胞を洗浄し、３７℃で１時間、２４時間、４８時間又は７２時間インキュベートした。
【0335】
フローサイトメトリーを使用して、抗イディオタイプ抗体を使用してＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞に対するｍＡｂ結合を分析した。平均武装ＮＫ細胞（％）をグラフにて報告する。全ての実験は、ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＮＴＯ ＩＩで実施し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアで分析した。
【0336】
実施例９ 研究設計
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍＬでの組換えリツキシマブＳＤＨ（ＲＴＸ－Ｆｃ ＳＤＨ）及び／又は組換えトラスツズマブＳＤＨ（ＴＲＡＳＴ－Ｆｃ ＳＤＨ）と共に、３７℃で１時間インキュベートした。
ｅＮＫ細胞を、１０μｇ／ｍＬでの組換えリツキシマブＳＤＨ（ＲＴＸ－Ｆｃ ＳＤＨ）及び／又は組換えトラスツズマブＳＤＨ（ＴＲＡＳＴ－Ｆｃ ＳＤＨ）と共に、３７℃で１時間インキュベートした。
【0337】
次に、ＮＫ細胞を洗浄し、抗イディオタイプ抗体を使用してＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞に対するＡｂ結合についてフローサイトメトリーによって分析した。全ての実験は、ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＮＴＯ ＩＩで実施し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアで分析した。
【0338】
実施例１０ 研究設計
ＣＤ１６＋ ＮＫ細胞を、組換えＲＴＸ－ＳＤＨ又は非組換えのもの（Ｆｃ ＷＴ）で武装し、次に、マントルリンパ腫患者（１、２、３）、ＤＬＢＣＬ患者（４、５）、濾胞性リンパ腫患者（６、７）由来のＢリンパ腫初代細胞と共に、Ｅ：Ｔ ３：１の比率で１６時間インキュベートした。
ＣＤ１６＋ ＮＫ細胞を、組換えＲＴＸ－ＳＤＨ又は非組換えのもの（Ｆｃ ＷＴ）で武装し、次に、マントルリンパ腫患者（１、２、３）、ＤＬＢＣＬ患者（４、５）、濾胞性リンパ腫患者（６、７）由来のＢリンパ腫初代細胞と共に、Ｅ：Ｔ ３：１の比率で１６時間インキュベートした。
【0339】
フローサイトメトリーを使用して、ＮＫ細胞の自然な細胞傷害性を差し引いた後の武装ＣＤ１６＋ ＮＫ細胞のＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）のパーセンテージを決定した（試験したｅＮＫドナーｎ＝２～４、点）。バーは平均±ＳＥＭを表す。Ｂリンパ腫の種類及び患者にかからわず、ＲＴＸ－ＳＤＨで武装したＣＤ１６＋細胞は、ＣＤ１６＋細胞単独よりも多くの標的細胞を死滅させる（２０％～７０％超の細胞傷害性効果）。
【0340】
結果
実施例２：Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドの付着は野生型Ｆｃ（ＷＴ）の付着よりも効率的である
Ｆｃ ＬＡＬＡポリペプチドのｅＮＫ細胞への弱い付着（グラフ１Ａ）、及びＦｃ ＷＴ抗体のｅＮＫ細胞への弱い付着（グラフ１Ｂ）を観察することができる。一方、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドのｅＮＫ細胞への強い付着が、陽性対照（Ｆｃ ＷＴ）と比較して、単離されたポリペプチド（グラフ１Ａ）に関しても、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域（グラフ１Ｂ）に関しても観察される。
実施例２：Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドの付着は野生型Ｆｃ（ＷＴ）の付着よりも効率的である
Ｆｃ ＬＡＬＡポリペプチドのｅＮＫ細胞への弱い付着（グラフ１Ａ）、及びＦｃ ＷＴ抗体のｅＮＫ細胞への弱い付着（グラフ１Ｂ）を観察することができる。一方、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドのｅＮＫ細胞への強い付着が、陽性対照（Ｆｃ ＷＴ）と比較して、単離されたポリペプチド（グラフ１Ａ）に関しても、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域（グラフ１Ｂ）に関しても観察される。
【0341】
さらに、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドの蛍光強度は、ＣＤ１６－ ｅＮＫ細胞集団（３）に対して、ＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞集団（３０）において有意に高いことが注目されている（グラフ１Ｃ、左）。また、Ｆｃ＋ ｅＮＫ細胞のパーセンテージは、Ｆｃ ＳＤＨで武装したＣＤ１６－ ｅＮＫ細胞集団（４０％）に対して、Ｆｃ ＳＤＨで武装したＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞集団（１００％）において有意に高い。したがって、ポリペプチドのＦｃ ＳＤＨ領域の付着は、ＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞集団に対して非常に特異的であり（グラフ１Ｃ）、Ｆｃ ＷＴ又はＦｃ ＳＤＨによって使用される主なＦｃ受容体がＣＤ１６Ａであることを示唆している。
【0342】
Ｆｃ ＳＤＨポリペプチド－ｅＮＫ細胞の結合特異性は、ＳＤＨ突然変異の結果としてＦｃ ＷＴポリペプチドの付着に関して大幅に改善される（Ｆｃ ＳＤＨで武装したＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞の１００％に対して、Ｆｃ ＷＴで武装したＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞の４０％、グラフ１Ｃ、右）。
【0343】
蛍光分子に付着したＦｃ ＳＤＨで武装したｅＮＫ細胞は、これらの武装ｅＮＫ細胞が任意の低分子、例えば、対象抗原に結合し、疾患に関与する標的細胞の認識及び除去を可能にする能力を示す。
【0344】
実施例３：Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドの付着は経時的に安定である
フローサイトメトリー分析は、陰性対照（Ｆｃなし）と比較して、２日間のインキュベーション後に、ｅＮＫ細胞が実質的にＦｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチドを欠乏していることを示す。これに対して、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドは、７日間のインキュベーション後もｅＮＫ細胞に強く付着したままである（グラフ２Ａ）。
フローサイトメトリー分析は、陰性対照（Ｆｃなし）と比較して、２日間のインキュベーション後に、ｅＮＫ細胞が実質的にＦｃ ＬＡＬＡ及びＦｃ ＷＴポリペプチドを欠乏していることを示す。これに対して、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドは、７日間のインキュベーション後もｅＮＫ細胞に強く付着したままである（グラフ２Ａ）。
【0345】
さらに、ｅＮＫ細胞の８０％超が７日後もＦｃ ＳＤＨポリペプチドを担持したままであるのに対して、Ｆｃ ＷＴポリペプチドの付着はインキュベーション２日目には非常に弱く、約１０％の細胞がＦｃ ＷＴポリペプチドを依然として保持していることが注目される（グラフ２Ｂ）。
【0346】
結論として、Ｆｃ ＳＤＨ－ｅＮＫ細胞間の付着は、少なくともインキュベーション７日目までは極めて安定したままである。
【0347】
実施例４：Ｆｃ ＳＤＨ－ＮＫ細胞の組み合わせは飽和しており、通常の生理学的条件下では置換できない
ＮＫ細胞受容体を飽和させるには低用量のＦｃ ＳＤＨポリペプチドが必要である。
ＮＫ細胞受容体を飽和させるには低用量のＦｃ ＳＤＨポリペプチドが必要である。
【0348】
Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドは、１０μｇ／ｍｌでの開始によりＣＤ１６Ａ部位を速やかに飽和させるのに対して、Ｆｃ ＷＴ Ａ６４７ポリペプチドは４０μｇ／ｍｌでも飽和に達しない（グラフ３Ａ）。同様に、Ａ４８８以外の蛍光分子に付着したＦｃ ＳＤＨポリペプチドは、１０μｇ／ｍｌでの開始によりｅＮＫ細胞を飽和させる（グラフ３Ｂ）。
【0349】
したがって、ＮＫ細胞を飽和させるには低用量のＦｃ ＳＤＨポリペプチドが必要である。
【0350】
Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドの付着は、生理学的条件下では除去できない。
【0351】
データは、野生型Ｆｃポリペプチドの２つの形態（Ｆｃブロック及びＦｃ ＷＴ Ａ６４７）が、付着したＦｃ ＳＤＨポリペプチドのレベルを改変していないことを示している。これに対して、別のＦｃ ＳＤＨポリペプチドは、ＣＤ１６Ａに対する同じ親和性のために、蛍光色素Ａ４８８及びＡ６４７の２つの組み合わせに最初に付着したＦｃ ＳＤＨのレベルを低下させた。抗ＣＤ１６抗体を使用した場合に最大の置換が観察され、これは、Ｆｃ ＳＤＨの付着がＣＤ１６Ａ受容体に依存することを意味する（グラフ３Ｃ及びグラフ３Ｄ）。
【0352】
したがって、一度ＣＤ１６Ａに付着したＦｃ ＳＤＨポリペプチドは、Ｆｃ ＷＴポリペプチドによって除去することができず、これは、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞をｉｎ ｖｉｖｏに注入したときに、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドは安定してＮＫ細胞に付着したままであることを示唆している。
【0353】
実施例５：Ｆｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、より細胞傷害性が高く、高い脱顆粒レベルを示す
Ｆｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、ｅＮＫ細胞単独又はＦｃ ＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞よりも高い細胞傷害性を示す。
Ｆｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、ｅＮＫ細胞単独又はＦｃ ＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞よりも高い細胞傷害性を示す。
【0354】
武装ｅＮＫ細胞の細胞傷害性を試験するために、ＢＴ２０乳癌細胞株を含む癌細胞の表面に発現するＨＥＲ２タンパク質に特異的な改変トラスツズマブ抗体を使用することが選択された。これらの細胞株は武装ｅＮＫの標的となる。結果は、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、ｅＮＫ細胞単独又は１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＷＴ抗体で武装したｅＮＫ細胞よりも細胞傷害性が高いことを示している（グラフ４Ａ及びグラフＡＢ）。Ｆｃ ＳＤＨ抗体で２４時間武装したｅＮＫ細胞でも同じ結果が得られる（グラフ４Ｃ）。１μｇ／ｍｌでの抗体の投与量は、それほど強力な効果を示さなかった。Ｆｃ ＷＴ抗体は、ｅＮＫ細胞単独（抗体なし）に対して効果がないように思われる。したがって、ｅＮＫ細胞の細胞傷害性レベルは、Ｆｃ ＳＤＨ抗体によって改善される。
【0355】
抗体Ｆｃ ＳＤＨで武装したｅＮＫ細胞の高い脱顆粒レベル
ｅＮＫ細胞の細胞傷害性は、脱顆粒によって媒介される。この機構は、ＣＤ１０７ａの発現によって測定することができる。ＣＤ１０７ａの膜発現は、ＮＫ細胞の細胞傷害活性のマーカーである。したがって、標的細胞（ＢＴ２０細胞）の有無にて、Ｆｃ ＷＴ抗体又はＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞でのフローサイトメトリーによってＣＤ１０７ａの発現を分析した。結果は、ＣＤ１０７ａは標的細胞なしの武装ｅＮＫ細胞では誘導されないことを示しており（グラフ４Ｃ、上）、これは、ＣＤ１６Ａに対する抗体の付着が、標的細胞の不存在下で武装ｅＮＫ細胞の活性化を伴わないことを示唆している。次に、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、Ｆｃ ＷＴ抗体又は抗体の不存在下のものよりも高いＣＤ１０７ａ発現を示す（グラフ４Ｄ、下）。
ｅＮＫ細胞の細胞傷害性は、脱顆粒によって媒介される。この機構は、ＣＤ１０７ａの発現によって測定することができる。ＣＤ１０７ａの膜発現は、ＮＫ細胞の細胞傷害活性のマーカーである。したがって、標的細胞（ＢＴ２０細胞）の有無にて、Ｆｃ ＷＴ抗体又はＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞でのフローサイトメトリーによってＣＤ１０７ａの発現を分析した。結果は、ＣＤ１０７ａは標的細胞なしの武装ｅＮＫ細胞では誘導されないことを示しており（グラフ４Ｃ、上）、これは、ＣＤ１６Ａに対する抗体の付着が、標的細胞の不存在下で武装ｅＮＫ細胞の活性化を伴わないことを示唆している。次に、１０μｇ／ｍｌでのＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞は、Ｆｃ ＷＴ抗体又は抗体の不存在下のものよりも高いＣＤ１０７ａ発現を示す（グラフ４Ｄ、下）。
【0356】
Ｆｃ抗体で武装したｅＮＫ細胞が使用する機構の１つは脱顆粒であり、この機構はＦｃ ＳＤＨ抗体で武装したｅＮＫ細胞でより効果的である。
【0357】
実施例６：ｅＮＫ細胞のＦｃ受容体（ＣＤ１６）に付着したＦｃ ＳＤＨ抗体は内部移行されない
３日間のインキュベーション後、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体又はＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８抗体は、競合する抗ＣＤ１６抗体によって除去されることが注目された。一方、抗ＣＤ３２抗体は、最初にＦｃ受容体に付着したＦｃ ＳＤＨ抗体を置換しない。そのため、Ｆｃ ＳＤＨ抗体はｅＮＫ細胞の表面に存在したままであるため、内部移行されないことが注目されている（図５）。
３日間のインキュベーション後、Ｆｃ ＳＤＨ Ａ６４７抗体又はＦｃ ＳＤＨ Ａ４８８抗体は、競合する抗ＣＤ１６抗体によって除去されることが注目された。一方、抗ＣＤ３２抗体は、最初にＦｃ受容体に付着したＦｃ ＳＤＨ抗体を置換しない。そのため、Ｆｃ ＳＤＨ抗体はｅＮＫ細胞の表面に存在したままであるため、内部移行されないことが注目されている（図５）。
【0358】
さらに、いくつかの研究では、ＮＫ細胞の活性化中のＣＤ１６受容体の排出又は内部移行が報告されている（Romee et al., 2013、Capuano et al., 2017）。Ｆｃ領域への付着がＣＤ１６Ａ受容体の発現を妨害するかどうかを測定するために、エピトープがＣＤ１６分子の最初のＩｇ型遠位膜ドメインにあるため、付着がＦｃのマスキングの影響を受けないと考えられる抗ＣＤ１６クローンＢ７３．１を使用した（Grier et al., 2012）。しかしながら、この抗体がＦｃ ＳＤＨ抗体を置換できることは、グラフ３Ｃ及びグラフ３Ｄにおいて見ることができる。したがって、図５の結果は、ＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞の頻度が経時的に変化せず、Ｆｃの条件によっても変化しないことを示している。
【0359】
実施例７：ｅＮＫ細胞上のＦｃ ＳＤＨ領域の付着はｉｎ ｖｉｖｏで安定である
ｉｎ ｖｉｖｏ条件下でのＦｃ ＳＤＨ－ｅＮＫ細胞の結合安定性を確保するために、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞を、成体スイスヌードマウスに腹腔内注射した。多くのｅＮＫ細胞（全細胞の１５％）が腹腔に見られることが注目されている（図７Ａ）。これらの細胞は依然として大部分がＣＤ１６＋（７９％）であり、ＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞の大部分はＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドで武装されていた（８７％）。注射前に、全ｅＮＫ細胞の８４％がＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドを備え、それらの７３％はｉｎ ｖｉｖｏで２４時間後も陽性のままであった（図７Ｂ）。さらに、注射の２４時間後、少数のｅＮＫ細胞が血液又は骨髄中に存在することが注目された（図７Ｃ）。しかしながら、若干のＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞は脾臓に向かって移動し、脾臓においてＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７で武装したまま（８８％）である（図７Ｄ）。
ｉｎ ｖｉｖｏ条件下でのＦｃ ＳＤＨ－ｅＮＫ細胞の結合安定性を確保するために、Ｆｃ ＳＤＨポリペプチドで武装したｅＮＫ細胞を、成体スイスヌードマウスに腹腔内注射した。多くのｅＮＫ細胞（全細胞の１５％）が腹腔に見られることが注目されている（図７Ａ）。これらの細胞は依然として大部分がＣＤ１６＋（７９％）であり、ＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞の大部分はＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドで武装されていた（８７％）。注射前に、全ｅＮＫ細胞の８４％がＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７ポリペプチドを備え、それらの７３％はｉｎ ｖｉｖｏで２４時間後も陽性のままであった（図７Ｂ）。さらに、注射の２４時間後、少数のｅＮＫ細胞が血液又は骨髄中に存在することが注目された（図７Ｃ）。しかしながら、若干のＣＤ１６＋ ｅＮＫ細胞は脾臓に向かって移動し、脾臓においてＦｃ ＳＤＨ Ａ６４７で武装したまま（８８％）である（図７Ｄ）。
【0360】
したがって、これらの結果は、Ｆｃ ＳＤＨの付着がｉｎ ｖｉｖｏでの注射後にｅＮＫ細胞上で安定したままであることを示している。
【0361】
実施例８：
８．１．ＣＤ１６Ａ及びＣＤ１６Ｂに対する、野生型形態と比較した種々のＣＨ２突然変異体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性（図９Ａ）
図９Ａは、参照値抗体ＲＴＸ－Ｆｃ ＷＴと比較した、ＣＤ１６ａ（明灰色）及びＣＤ１６ｂ（暗灰色）に対する試験した組換え抗体の親和性を表す。データは、組換え抗体Ｄ（Ｆｃ ＡＬ－配列番号８）を除き、他の全ての組換え抗体がＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂ受容体への改善されたｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合を示すことを実証する（図９Ａ）。
８．１．ＣＤ１６Ａ及びＣＤ１６Ｂに対する、野生型形態と比較した種々のＣＨ２突然変異体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合親和性（図９Ａ）
図９Ａは、参照値抗体ＲＴＸ－Ｆｃ ＷＴと比較した、ＣＤ１６ａ（明灰色）及びＣＤ１６ｂ（暗灰色）に対する試験した組換え抗体の親和性を表す。データは、組換え抗体Ｄ（Ｆｃ ＡＬ－配列番号８）を除き、他の全ての組換え抗体がＣＤ１６ａ及びＣＤ１６ｂ受容体への改善されたｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合を示すことを実証する（図９Ａ）。
【0362】
試験した組換え抗体の全ての中で、Ｃ（Ｆｃ ＳＤＩＥ－配列番号５）、Ｉ（Ｆｃ ＳＤＡＬＩＥ－配列番号１３）、Ｊ（Ｆｃ ＳＤＨＦＩＥ－配列番号７）、Ｋ（Ｆｃ ＳＤＳＴＩＥ－配列番号６）及びＬ（Ｆｃ ＳＤＨ－配列番号２）は、ＷＴ抗体と比較して親和性が８倍近く又は８倍を超えて増加し、ＣＤ１６ａに対する最も高い結合を示す。組換え抗体Ｅ（Ｆｃ ＡＬＩＥ－配列番号９）、Ｇ（Ｆｃ ＧＡＳＤＡＬＩＥ－配列番号１１）及びＨ（Ｆｃ ＧＡＳＤＩＥ－配列番号１２）は５倍～６倍増加した結合を示し、組換え抗体Ａ（Ｆｃ ＳＤ－配列番号３）、Ｂ（Ｆｃ ＩＥ－配列番号４）、及びＦはＣＤ１６ａへの結合が２倍～３倍増加したより小さな改善を示す。
【0363】
具体的には、組換え抗体Ｊ、Ｋ及びＬは、同じ突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ並びに１つ又は２つの更なる突然変異を共有し、同じ突然変異Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを共有する他の組換え抗体Ｃ、Ｇ、Ｈ又はＩを含む他の全ての組換え抗体と比較して、顕著な結合親和性を示す。したがって、組換え抗体Ｊ、Ｋ及びＬにおけるこれらの更なる突然変異は、これらの抗体がＣＤ１６＋細胞及び／又はＮＫ細胞と接触したときに利点をもたらす可能性がある。
【0364】
組換え抗体Ｌ（Ｆｃ ＳＤＨ－配列番号２）には、突然変異Ｓ２３９Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＩ３３２Ｅが含まれる。突然変異Ｈ２６８Ｆは組換え抗体Ｊに含まれ、これに対して、突然変異Ｓ３２４Ｔは組換え抗体Ｋに含まれる。したがって、突然変異Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔはまた、ＣＤ１６ａ受容体に対する抗体の結合親和性を高めることを可能にする。
【0365】
ＣＤ１６ｂに関する結果は、ＣＤ１６ｂが突然変異体Ｃ及びＬとの結合をより低い程度で改善することが観察されることを除いて、比較的類似している。
【0366】
８．２．ＣＤ１６武装後１時間～７２時間の、Ｆｃ領域に改変ＣＨ２を有する試験した組換え抗体のＣＤ１６＋細胞に対する結合の動態（図９Ｂ）
図９Ｂは、武装後１時間、２４時間、４８時間又は７２時間での、表面をＲＴＸ－Ｆｃ ＷＴ又は各組換え抗体（ＲＴＸ）でコーティングさせたＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞のパーセンテージを表す。
図９Ｂは、武装後１時間、２４時間、４８時間又は７２時間での、表面をＲＴＸ－Ｆｃ ＷＴ又は各組換え抗体（ＲＴＸ）でコーティングさせたＣＤ５６＋／ＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ３－ ｅＮＫ細胞のパーセンテージを表す。
【0367】
１時間後にＲＴＸ－ＦｃＷＴ及び組換え抗体ＤでコーティングされたＣＤ１６＋細胞は２０％未満であり、２４時間後からほとんどのＮＫ細胞（ＣＤ１６＋細胞）はその表面に抗体が存在しない（図９Ｂ）。
【0368】
他の全ての組換え抗体は、１時間で５０％超のＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）に結合することができるが、それらの結合の動態に関して食い違いが観察される。組換え抗体Ａ、Ｂ、Ｅ及びＦの結合は２４時間で大幅に減少し、１時間と比較して５０％超が失われる。これは、組換え抗体Ｃ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ及びＬの場合には当てはまらず、７２時間までの時間にわたって安定した結合が観察され、１時間と比較して５０％超のＣＤ１６＋細胞が抗体でコーティングされたままである。ＣＤ１６に対する最も高い親和性を有する組換え抗体は、ＣＤ１６＋細胞に対して最良の武装であり、逆の武装であると予想される。しかし、突然変異体Ｅは、突然変異体Ｈ及び突然変異体ＧよりもＣＤ１６に対する高い親和性を示す一方で、ＣＤ１６＋細胞に対して安定的な結合を示さない。
【0369】
同じ突然変異Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅと共に１つの更なる突然変異を共有する組換え抗体Ｉ、Ｊ及びＫは、組換え抗体とＮＫ細胞（ＣＤ１６＋細胞）との間のＣＤ１６受容体への耐久性のある安定した持続性結合を有することに注目する必要がある。
【0370】
図９ＢのＲＴＸ－Ｌ－Ｒ（Ｇ１ｍ１７，１アロタイプ）及びＲＴＸ－Ｌ－Ｔ（ｎＧ１ｍ１アロタイプ）を比較することによって示されるように、アロタイプが組換え抗体の長期の安定した結合に影響を与えないことに注目することも重要である。
【0371】
【0372】
実施例９：ＣＤ１６＋細胞のマルチ武装効率
図１０に示した結果は、ＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）が、ＣＨ２ドメインでそれぞれ突然変異した２つのｍＡｂで共武装できることを示す。この二重武装は、単一武装と同じ結合効率を有する。
図１０に示した結果は、ＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）が、ＣＨ２ドメインでそれぞれ突然変異した２つのｍＡｂで共武装できることを示す。この二重武装は、単一武装と同じ結合効率を有する。
【0373】
実施例１０：組換えリツキシマブＦｃ ＳＤＨで武装したＣＤ１６＋細胞の細胞傷害性の増加
図１１に示した結果は、Ｆｃ ＳＤＨ突然変異（配列番号２で表される）を含有するモノクローナル抗体によるＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）のｅｘ ｖｉｖｏ武装が、標的癌細胞に対する強力なＡＤＣＣをもたらす可能性があることを示している。
図１１に示した結果は、Ｆｃ ＳＤＨ突然変異（配列番号２で表される）を含有するモノクローナル抗体によるＣＤ１６＋細胞（すなわち、ＮＫ細胞）のｅｘ ｖｉｖｏ武装が、標的癌細胞に対する強力なＡＤＣＣをもたらす可能性があることを示している。
【0374】
先行技術文献
Capuano, C., C. Pighi, R. Molfetta, R. Paolini, S. Battella, G. Palmieri, G. Giannini, F. Belardinilli, A. Santoni & R. Galandrini (2017) Obinutuzumab-mediated high-affinity ligation of FcγRIIIA/CD16 primes NK cells for IFNγ production. Oncoimmunology, 6, e1290037.
Grier, J. T., L. R. Forbes, L. Monaco-Shawver, J. Oshinsky, T. P. Atkinson, C. Moody, R. Pandey, K. S. Campbell & J. S. Orange (2012) Human immunodeficiency-causing mutation defines CD16 in spontaneous NK cell cytotoxicity. J Clin Invest, 122, 3769-80.
Moore, G. L., H. Chen, S. Karki & G. A. Lazar (2010) Engineered Fc variant antibodies with enhanced ability to recruit complement and mediate effector functions. MAbs, 2, 181-9.
Romee, R., B. Foley, T. Lenvik, Y. Wang, B. Zhang, D. Ankarlo, X. Luo, S. Cooley, M. Verneris, B. Walcheck & J. Miller (2013) NK cell CD16 surface expression and function is regulated by a disintegrin and metalloprotease-17 (ADAM17). Blood, 121, 3599-608.
Sanchez-Martinez, D., N. Allende-Vega, S. Orecchioni, G. Talarico, A. Cornillon, D. N. Vo, C. Rene, Z. Y. Lu, E. Krzywinska, A. Anel, E. M. Galvez, J. Pardo, B. Robert, P. Martineau, Y. Hicheri, F. Bertolini, G. Cartron & M. Villalba (2018) Expansion of allogeneic NK cells with efficient antibody-dependent cell cytotoxicity against multiple tumors. Theranostics, 8, 3856-3869.
Capuano, C., C. Pighi, R. Molfetta, R. Paolini, S. Battella, G. Palmieri, G. Giannini, F. Belardinilli, A. Santoni & R. Galandrini (2017) Obinutuzumab-mediated high-affinity ligation of FcγRIIIA/CD16 primes NK cells for IFNγ production. Oncoimmunology, 6, e1290037.
Grier, J. T., L. R. Forbes, L. Monaco-Shawver, J. Oshinsky, T. P. Atkinson, C. Moody, R. Pandey, K. S. Campbell & J. S. Orange (2012) Human immunodeficiency-causing mutation defines CD16 in spontaneous NK cell cytotoxicity. J Clin Invest, 122, 3769-80.
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Romee, R., B. Foley, T. Lenvik, Y. Wang, B. Zhang, D. Ankarlo, X. Luo, S. Cooley, M. Verneris, B. Walcheck & J. Miller (2013) NK cell CD16 surface expression and function is regulated by a disintegrin and metalloprotease-17 (ADAM17). Blood, 121, 3599-608.
Sanchez-Martinez, D., N. Allende-Vega, S. Orecchioni, G. Talarico, A. Cornillon, D. N. Vo, C. Rene, Z. Y. Lu, E. Krzywinska, A. Anel, E. M. Galvez, J. Pardo, B. Robert, P. Martineau, Y. Hicheri, F. Bertolini, G. Cartron & M. Villalba (2018) Expansion of allogeneic NK cells with efficient antibody-dependent cell cytotoxicity against multiple tumors. Theranostics, 8, 3856-3869.
【0375】
［配列表］
配列番号１（＝Ｆｃ ＷＴ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２））
配列番号２（＝Ｆｃ ＳＤＨ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ．Ｈ２６８Ｆ．Ｓ３２４Ｔ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号３（＝Ｆｃ ＳＤＨ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ））
配列番号４（＝Ｆｃ ＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号５（＝Ｆｃ ＳＤＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号６（＝Ｆｃ ＳＤＳＴＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ．Ｓ３２４Ｔ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号７（＝Ｆｃ ＳＤＨＦＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ．Ｈ２６８Ｆ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号８（＝Ｆｃ ＡＬ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ａ３３０Ｌ））
配列番号９（＝Ｆｃ ＡＬＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ａ３３０Ｌ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号１０（＝Ｆｃ ＧＡＳＤ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｇ２３６Ａ．Ｓ２３９Ｄ））
配列番号１１（＝Ｆｃ ＧＡＳＤＡＬＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｇ２３６Ａ．Ｓ２３９Ｄ．Ａ３３０Ｌ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号１２（＝Ｆｃ ＧＡＳＤＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｇ２３６Ａ．Ｓ２３９Ｄ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号１３（＝Ｆｃ ＳＤＡＬＩＥ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｓ２３９Ｄ．Ａ３３０Ｌ．Ｉ３３２Ｅ））
配列番号１４（＝Ｆｃ ＬＡＬＡ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２．Ｌ２３４Ａ．Ｌ２３５Ａ））
配列番号１５（＝Ｆｃ ＷＴ領域（ＩｇＧ１）アロタイプｎＧ１ｍ１））
配列番号１６（＝Ｆｃ ＷＴ領域（ＩｇＧ１）アロタイプＧ１ｍ１７，１）
配列番号１７（＝配列番号１６に包含されるＦｃ ＷＴ領域（ＩｇＧ１）アロタイプＧ１ｍ１７，１）
配列番号１（＝Ｆｃ ＷＴ領域（ＩｇＧ１－ＣＨ２））
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【配列表】
【国際調査報告】