特表 2023-535993 新型コロナ肺炎による肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-22

(54)【発明の名称】新型コロナ肺炎による肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/28 20150101AFI20230815BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230815BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230815BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20230815BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20230815BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230815BHJP

【ＦＩ】

A61K35/28

A61P11/00

A61P31/12

A61P31/04

A61P31/10

A61P31/14

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023507295

(86)(22)【出願日】2021-07-30

(85)【翻訳文提出日】2023-03-07

(86)【国際出願番号】 CN2021109807

(87)【国際公開番号】W WO2022022707

(87)【国際公開日】2022-02-03

(31)【優先権主張番号】202010747824.0

(32)【優先日】2020-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523033567

【氏名又は名称】中国人民解放▲軍▼▲總▼医院第五医学中心

(71)【出願人】

【識別番号】523033578

【氏名又は名称】中源▲協▼和▲細▼胞基因工程股▲フン▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】王 福生

(72)【発明者】

【氏名】石 磊

(72)【発明者】

【氏名】徐 若男

(72)【発明者】

【氏名】苑 ▲シン▼

(72)【発明者】

【氏名】▲張▼ 宇

(72)【発明者】

【氏名】姚 惟▲チ▼

【テーマコード（参考）】

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB63

4C087BB64

4C087MA23

4C087MA66

4C087NA14

(57)【要約】

本願は、新型コロナ肺炎による肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用を提供する。本願では、間葉系幹細胞がウイルス性肺炎、特に新型コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染による重症肺炎対象の肺損傷の修復に優れた効果を示し、対象の固形肺病変の体積を著しく減少させて肺組織を修復することを臨床試験により初めて証明し、６分間歩行テストにより被験者の心肺機能、有酸素能力を著しく修復することを証明し、被験者の心肺機能や有酸素運動能力を著しく向上させることが確認されており、抗ウイルス剤治療後の後遺症を効果的に軽減し、被験者の健康や普段の生活を改善することができる。また、間葉系幹細胞は安全性が高く、明らかな副作用は発見されていない。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用であって、前記肺障害は肺機能障害及び／又は肺組織障害を含む、応用。

【請求項2】

前記間葉系幹細胞は、対象の呼吸器感染症による肺障害に応用される、請求項１に記載の応用。

【請求項3】

前記肺障害は、肺線維症を含む、請求項１に記載の応用。

【請求項4】

前記呼吸器感染症は、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎または真菌性感染症を含む、請求項３に記載の応用。

【請求項5】

前記ウイルス性肺炎は、コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２、ＳＡＲＳ-ＣｏｖまたはＭＥＲＳ-Ｃｏｖのいずれか1つ以上の感染によって引き起こされる重態又は重篤な肺炎である、請求項４に記載の応用。

【請求項6】

前記間葉系幹細胞は、骨髄組織、脂肪組織、筋肉組織、生育組織、皮膚組織、骨組織、及び歯組織のいずれか1つ以上の人体組織から得られ、又は人の細胞が分離または誘導されることにより製造され、生育組織は、経血、羊膜、羊水、または臍帯組織を含む、請求項１または請求項５に記載の応用。

【請求項7】

前記間葉系幹細胞は、均質な組成物または間葉系幹細胞を含む混合細胞集団である、請求項１に記載の応用。

【請求項8】

前記肺障害の修復薬は、９５質量％より多い、好ましくは約９８質量％より多い間葉系幹細胞を含有する、請求項１に記載の応用。

【請求項9】

前記肺障害の修復薬は、注射用製剤である、請求項１に記載の応用。

【請求項10】

前記肺障害の修復薬は前記間葉系幹細胞の生理食塩水懸濁液であり、前記懸濁液中の細胞の濃度は、０．５～５．０×１０^５個/ｍＬである、請求項９に記載の応用。

【請求項11】

肺障害を修復するための治療方法であって、前記治療方法は間葉系幹細胞を肺障害の対象へ投与することを含む、治療方法。

【請求項12】

前記対象は、肺機能障害及び／又は肺組織障害を有する哺乳類である、請求項１１に記載の治療方法。

【請求項13】

前記肺機能障害及び／又は肺組織障害は、呼吸器感染症による肺障害を含む、請求項１２に記載の治療方法。

【請求項14】

前記肺障害は、肺線維症を含む、請求項１２に記載の治療方法。

【請求項15】

前記呼吸器感染症は、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎または真菌性感染症を含む、請求項１３に記載の治療方法。

【請求項16】

前記ウイルス性肺炎は、コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２、ＳＡＲＳ-ＣｏｖまたはＭＥＲＳ-Ｃｏｖのいずれか1つ以上の感染によって引き起こされる重態又は重篤な肺炎である、請求項１５に記載の治療方法。

【請求項17】

前記間葉系幹細胞は、骨髄組織、脂肪組織、筋肉組織、生育組織、皮膚組織、骨組織、及び歯組織のいずれか1つ以上の人体組織から得られ、又は人の細胞が分離または誘導されることにより製造され、生育組織は、経血、羊膜、羊水、または臍帯組織を含む、請求項１１に記載の治療方法。

【請求項18】

前記間葉系幹細胞は、均質な組成物または間葉系幹細胞を含む混合細胞集団である、請求項１７に記載の治療方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は生物医学の技術分野に属し、間葉系幹細胞の応用、特に肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用に関する。

【背景技術】

【0002】

新型コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２による新型コロナウイルス感染症ＣＯＶＩＤ-１９（Ｃｏｒｏｎａ Ｖｉｒｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９）の主な症状は、呼吸困難と肺障害になる。ＣＯＶＩＤ-１９は、サイトカインと免疫介在性の過剰炎症が持続し、重度な呼吸器疾患を引き起こすことが特徴で、死亡率が２～５％に達す。ＣＯＶＩＤ-１９の重症患者は、複数の炎症細胞が放出されることにより、炎症性サイトカインが引き起こされやすく、肺の微小血管透過性の上昇と肺水腫が引き起こされ、その結果、急性肺障害が引き起こされる。同時に、ＣＯＶＩＤ-１９の重症患者はＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２ウイルス感染により、滲出性肺病変が引き起こされ、肺線維症に発展する。

【0003】

人の間葉系幹細胞は、骨髄、臍帯、脂肪などの哺乳類組織に存在する異種幹細胞であり、脂肪細胞、軟骨細胞、骨細胞など様々な多能性幹細胞に分化することができる。間葉系幹細胞は、ケモカインとサイトカイン受容体を大量に表現し、局所組織の炎症に対抗できることが知られている。ケモカインとサイトカインは、炎症過程で放出され、炎症反応を開始させる。これらの同じシグナル伝達分子は、ＭＳＣがＭＳＣの表面にあるＣＸＣＲ４受容体によって、炎症部位を探すことを促進することができる。さらに、ＭＳＣは、シグナル伝達により樹状細胞を抗炎症性Ｔ細胞反応にターゲティングすることで、あるいはナチュラルキラー細胞の機能を阻害することで、自然免疫反応を制御することができる。また、ＭＳＣは、活性化されたＣＤ４+Ｔ細胞と直接相互作用して適応免疫反応に影響を与えることにより免疫調節作用を発揮する。そのため、間葉系幹細胞は、抗炎症または免疫療法に使用されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

ウイルス性肺炎の重症例に対し、対症療法により炎症因子を抑制しても、肺機能低下や間質性肺病変などの症状が長く続き、普段の生活に重大な影響を与える。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本願は肺障害の修復薬の製造における間葉系幹細胞の応用を提供しており、該肺障害は肺機能障害及び／又は肺組織障害を含む。

【0006】

本願は肺機能障害を修復するための治療方法を提供しており、該治療方法は間葉系幹細胞を対象へ投与することを含む。

【0007】

本願はさらに肺線維症を治療または修復する方法を提供しており、該方法は間葉系幹細胞を対象へ投与することを含む。

【0008】

本願によれば、前記肺組織障害は、あらゆる原因による肺の画像での固形病変またはすりガラス病変を含む。

【0009】

本願によれば、前記肺機能障害は、呼吸困難（ＲＲ≧３０回／分）、安静な状態で指酸素飽和度≦９３％、動脈血酸素分圧（ＰａＯ_２）／酸素摂取濃度（ＦｉＯ_２）≦３００ｍｍＨｇの少なくとも1つを含むことを特徴とする。

【発明の効果】

【0010】

本願の発明者は、間葉系幹細胞が、特に肺機能障害や肺組織障害などの、ウイルス感染によって引き起こされる肺障害の修復に応用できることを見出した。本願では、間葉系幹細胞がウイルス性肺炎、特に新型コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染による重症肺炎の被験者の肺損傷の修復に優れた効果を示し、被験者の固形肺病変の体積を著しく減少させて肺組織を修復することを臨床試験により初めて証明し、６分間歩行の実験により被験者の心肺機能、有酸素能力を著しく修復することを証明し、被験者の心肺機能や有酸素運動能力を著しく向上させることが確認されており、抗ウイルス剤治療後の後遺症を効果的に軽減し、被験者の健康や普段の生活を改善することができる。また、間葉系幹細胞は安全性が高く、明らかな副作用は発見されていない。

【図面の簡単な説明】

【0011】

以下では、図面を参照して本願の具体的な実施形態に対して説明することで、本願の技術的方案及び他の有益な効果が明らかになる。

【図1】被験者の６分間歩行距離に関するデータの分布ヒストグラムである。

【図2】被験者の６分間歩行距離に関するデータの分布の箱ひげ図、縦軸単位：メートルである。

【図3】被験者の全肺容積に占める全病巣容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布ヒストグラムである。

【図4】被験者の全肺容積に占める全病巣容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布の箱ひげ図である。

【図5】全肺容積に占める固形病変の総容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布ヒストグラムである。

【図6】全肺容積に占める固形病変の総容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布の箱ひげ図である。

【図7】全肺容積に占めるすりガラス病変の総容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布ヒストグラムである。

【図8】全肺容積に占めるすりガラス病変の総容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布の箱ひげ図である。

【図9】人の臍帯の間葉系幹細胞（ＵＣ-ＭＳＣｓ）のＣＯＶＩＤ-１９の重症患者に対する修復効果を示すための図である。ａはベースラインから２８日目までの全肺容積に占める総病巣の容積比率（％）と全肺容積に占める固形病変の容積比率（％）の変化の群間での中央値差を示すものとし、ｂはベースラインから２８日目までの全肺容積に占める総病巣の容積比率（％）と全肺容積に占める固形病変の容積比率（％）の変化に関する箱ひげ図であり、Ｑ１は第１の四分位数、Ｑ３は第３の四分位数、Iバーが最小値と最大値、ｃはベースラインから２８日目までの全肺容積に占める総病巣の容積比率（％）と全肺容積に占める固形病変の容積比率（％）の平均絶対変化、Iバーが標準誤差を示すものとする。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下、本願の実施例における図面を参照して、本願の実施例における技術的方案をより明確で完全に説明する。明らかなことは、説明された実施例はすべでの実施例ではなく、ただ本願の一部の実施例に過ぎない。当業者が創造的な努力をしない前提下で、本願の実施例により得られた他のすべての実施例は共に本願の保護範囲に属する。

【0013】

本願によれば、前記間葉系幹細胞は、特に被験者の呼吸器感染症による肺障害に応用される。前記呼吸器感染症は、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎または真菌性感染症を含む。一実施形態において、前記ウイルス性肺炎は、コロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２、ＳＡＲＳ-ＣｏｖまたはＭＥＲＳ-Ｃｏｖのいずれか1つ以上の感染によって引き起こされる重態又は重篤な肺炎である。好ましい実施形態において、前記間葉系幹細胞は、特にコロナウイルスＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染による肺障害を修復するのに有効である。

【0014】

本願によれば、前記間葉系幹細胞は、多能性幹細胞（即ち、亜細胞型に分化可能な細胞）であり、様々な細胞型に分化することが可能な細胞である。前記間葉系幹細胞は、骨髄組織、脂肪組織、筋肉組織、生育組織（経血、羊膜、羊水、臍帯組織等）、皮膚組織、骨組織、歯組織などの人体組織を含む種々な組織から得られるが、これらに制限されない。また、前記間葉系幹細胞は、生殖細胞、胚細胞、成体細胞などの様々な他の種類の人の細胞が分離または誘導されることにより得られることも可能である。前記間葉系幹細胞は、当技術分野で公知の技術である間葉系幹細胞の分離、精製及び培養拡大の技術を用いて得ることができる。前記間葉系幹細胞は、自己同源、同種異体または異種源などから得られてもよい。

【0015】

本願によれば、前記間葉系幹細胞は、均質な組成物であってもよいし、ＭＳＣ（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ, ＭＳＣ）を含むまたは富む混合細胞集団であってもよい。適切なＭＳＣは、臍帯組織から得ることができる。いくつかの実施形態において、間葉系幹細胞の組成物は、臍帯ウォートンゼリーを適切な培地の中で壁に貼って培養することによって得られる。ＭＳＣは、特定の細胞表面のマーカーによって識別される。

【0016】

本願によれば、前記肺障害の修復薬は注射剤であり、様々な投与方法で対象に投与することが可能である。いくつかの実施形態において、間葉系幹細胞は全身投与、例えば静脈内、動脈内、局所などによって投与する。

【0017】

投与する間葉系幹細胞の量は、対象の年齢、体重と性別、肺障害の重症度など、さまざまな要因に左右される。当該分野の資格のある医者は、対象の状況に応じて治療上の有効な量を決定することができ、例えば、１×１０^５細胞／ｋｇ体重～１×１０^８細胞／ｋｇ体重の量で投与する。

【0018】

本願によれば、前記肺障害の修復薬は、間葉系幹細胞と薬学的に許容される薬物担体を含む。例えば、前記間葉系幹細胞は、静脈内注射または局所投与可能な液体分散剤またはゲルに分散された細胞懸濁液の形態である。一実施形態において、前記液体分散剤は生理食塩水であり、前記肺障害の修復薬は、間葉系幹細胞の生理食塩水懸濁液である。前記間葉系幹細胞の前記生理食塩水懸濁液は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及び／又は人の血清アルブミンなどの他の許容される成分を含んでいてもよい。

【0019】

一実施形態において、前記間葉系幹細胞の生理食塩水懸濁液中の細胞の濃度は、０．５～５．０×１０^５個/ｍＬ、好ましくは４×１０^５個/ｍＬである。

【0020】

本願によれば、前記肺障害の修復薬は、９５質量％より多い、好ましくは約９８質量％より多い間葉系幹細胞を含有する。

【0021】

本願に言及される「対象」、「被験者」、「患者」とは、いずれも本願の明細書に記載の薬物組成物の投与によって治療できる障害を患っている、または発症する傾向がある生体のことであり、非限定的な例としては、人、非人の霊長類、または他の哺乳類などが挙げられる。例えば、本願の対象としては、成人および乳幼児、小児などが挙げられ、その他の温血哺乳動物としては、チンパンジー、他の類人猿またはサル、及び他の動物園の動物、家畜哺乳動物または実験室動物、例えば猫、豚、犬、牛、羊、マウス、ラット、モルモットなどの非人の霊長類が挙げられ、これらに制限されない。好ましくは、本願の「対象」は人である。

【0022】

本願に言及される「修復」とは、組織または臓器の機能障害が生じ、その状態が正常者の平均値以下である場合に、対象に対して行われる医学的処置により、その障害の悪化を防止または停止し、その障害の程度をできる限り軽減または緩和して、生じた障害を健康状態に転換させることである。一実施形態において、肺障害の修復は、肺病変組織の減少及び／又は心肺機能の改善を含み、安静時及び／又は運動時の呼吸困難の緩和、酸素化指数の増加、肺の固形病変の容積の減少、及び有酸素運動能力の向上などが挙げられ、これらに制限されない。本願の実施形態において、主に肺の画像で得られた肺の固形病変の体積により肺組織の修復の有効性を評価し、６分間歩行距離により肺の呼吸機能の改善効果を評価する。

【0023】

本願に記載された重態又は重篤な肺炎は、当技術分野で既知の肺炎の分類基準によって決定される。いくつかの実施形態において、成人の患者は、以下の基準のいずれかに該当する場合、重症患者として分類される：（１）息切れが出現し、ＲＲ≧３０回／分であること；（２）安静な状態で指酸素飽和度≦９３％であること；（３）動脈血酸素分圧（ＰａＯ_２）／酸素摂取濃度（ＦｉＯ_２）≦３００ｍｍＨｇであること；（４）肺の画像で２４～４８時間の中に病変発展＞５０％が表現されること。乳幼児または小児の患者は、以下の基準のいずれかに該当する場合、重症患者として分類される：（１）発熱と泣きの影響を除く、息切れが出現すること（＜２ヵ月の場合に、ＲＲ≧６０回／分；２～１２ヵ月の場合に、ＲＲ≧５５回／分；１～５オの場合に、ＲＲ≧４０回／分；＞５オの場合に、ＲＲ≧３０回／分）；（２）安静な状態で酸素飽和度≦９２％であること；（３）呼吸補助（うめき声、鼻鳴らし、吸気性呼吸困難）、チアノーゼ、間欠的無呼吸であること；（４）眠気、けいれんが出現すること；（５）脱水症状を伴う摂食拒否または摂食障害が出現すること。いくつかの実施形態において、以下のいずれかに該当する場合、重篤な患者として分類される：（１）呼吸不全が出現し、また機械での呼吸補助を必要とすること；（２）ショックが出現すること；（３）ＩＣＵでの状態管理を必要とする他の臓器不全の併発であること。

【0024】

以下、具体的な実施例に基づいて本願についてさらに説明するが、本願は以下の実施例に制限されない。後述の方法は特に説明がない場合に、通常の方法である。後述の材料は特に説明がない場合に、公開手段で得られる。

【0025】

実験方案：
本実験は、検証を重ね、倫理審査、規制当局への登録(ＮＣＴ０４２８８１０２)を経て実施されたものである。退院後の対象を訪問することを行う。本実験は、プラセボ対照群を含むランダム化二重盲検臨床試験である。本実験は、被験者または被験者の法的代理人から書面によるインフォームドコンセントを得た。

【0026】

被験者: 新型コロナウイルス感染症ＣＯＶＩＤ-１９の重態又は重篤な患者であり、肺画像で肺線維症の程度が評価される。

【0027】

被験者は、鼻咽頭スワブＲＴ－ＰＣＲによりＣＯＶＩＤ-１９ウイルスの核酸を検出し、血清特異的ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体の検出、および肺画像ＣＴの検出と組み合わせて診断された。

【0028】

被験者の症状および生理学的指標は、次のいずれかの条件を満たす: １）呼吸困難であること(ＲＲ≧３０回／分)；２）安静な状態で指酸素飽和度≦９３％であること；３）動脈血酸素分圧（ＰａＯ_２）／酸素摂取濃度（ＦｉＯ_２）≦３００ｍｍＨｇであること；４）肺の画像で２４～４８時間の中に病変発展＞５０％が表現され、且つ胸部Ｘ線断層撮影画像で肺炎と間質性肺障害が確認されたこと。

【0029】

実験群と対照群の対象の基本情報と基線特徴を表１に示す。

【表1】

【0030】

間葉系幹細胞の提供元: Ｚｈｏｎｇｙｕａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｃｅｌｌ＆ｇｅｎｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｌｔｄ．。ＭＳＣは、保護者の同意を得て満期産の新生児の臍帯から採取されたもの(ＵＣ－ＭＳＣ)である。臍帯を７５％のエタノールに１０秒間浸した後、リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)で洗浄して血管を除去し、ＰＢＳに５分間浸すことを３回繰り返す。ＵＣ－ＭＳＣの分離と培養は、無菌条件下の層流フードの中で行う。臍帯を１～２ｃｍの塊状に切り、臍帯組織を露出させる。次に、ウォートンゼリー (ＷＪ)組織を臍帯組織から２ｍｍ^３の片状に切り、組織培養フラスコ(７５フラスコ ｃｍ^２)に逆さまに置き、当該培養フラスコを４ｍＬのＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で培養し、ウシ胎児血清(１０％ＦＢＳ，ＢＩ，イスラエル)を加えて３７°Ｃ、５％ＣＯ^２の条件下で４時間放置する。そして、フラスコを逆さまにして正しい向きに戻し、１０ｍＬの培地を加える。６０～８０％のコンフルエンシーが達成されるまで、４～５日ごとに培地を徹底的に更新することを行う。培養した８～１０日後に、組織外の植体を取り出す。接着した細胞を１×ＴｒｙｐＬＥ（ＧＩＢＣＯ，ＵＳＡ）で剥がし、さらに増殖させるために１ｃｍ^２あたり６～８×１０^３個細胞の密度で再設置する。コア細胞バンクと作業細胞バンクを最高レベルに設定し、本研究のすべての実験において、これらの培養細胞の均一な集団を５世代(Ｐ５)で使用する。収穫された細胞は、ＩＳＣＴ１３によって推奨される最小基準に従って特徴付けられ、膜形成の能力を備えた線維芽細胞様の形態を示し、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４５、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＨＬＡ－ＤＲなどの細胞表面マーカーは、従来の研究に基づいてフローサイトメトリー(ＢＤ，ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ，ＵＳＡ)で分析される。

【0031】

ＵＣ－ＭＳＣ製品はほぼ無色の懸濁液であり、１袋あたり４．０×１０^７個のＭＳＣを含み、１００ｍＬ／袋の容量である。プラセボはパッケージの外観が同じである。

【0032】

薬投与方案：
実験群の薬投与量は治療量が４．０×１０^７(１袋)／回とし、無作為割付後、０日目、３日目、６日目に各被験者に３回ずつ投与する。対照群には、同じ用量のプラセボを投与する。各被験者のＵＣ－ＭＳＣまたはプラセボの注入総量は１００ｍＬであり、注入は孔径１７０μｍの標準的な血液フィルターチューブから開始される。心電図の監視下で、薬物は重力の作用下で静脈注射され、総注射時間は６０分以上である。

【0033】

被験者は、入群した後の１０日目と２８日目に胸部ＣＴ検査を受ける。

【0034】

６分間歩行テスト(６ＭＷＴ)は、主に中等度、重度の心肺疾患患者の治療介入の有効性を評価し、患者の機能状態を測定するために使用され、臨床試験における重要な観察指標の１つとして使用でき、患者の生存の予測因子の１つである。本研究では、治療群と対照群との間に心機能の有意差は認められなかったため、本研究では６ＭＷＴは両群間の肺機能の差を評価する指標として適用される。

【0035】

全肺容積に占める病巣容積の比率は肺組織の修復を評価するために適用される。全病巣容積は固形病変とすりガラス病変を含み、その定量は肺の画像検査によって決定される。本実施例では、肺ＣＴによって肺病変の画像データを取り、肺撮影ソフトウェアと放射線科医師の分析による集中画像解析を通じて定量し、画像データはソフトウェアでのサポートによる肺活量測定と光学密度測定法から得られる。

【0036】

実施例１
本願の実施例１では、表１の被験者からランダムに選択された臍帯の間葉系幹細胞(ＵＣ－ＭＳＣ)グループ(実験群)の３０名とプラセボグループ(対照群)の１５名が含まれ、それらの基線特徴は表１の範囲内にあり、２つのグループの被験者は基線特徴についてバランスが取れており、比較可能である。

【0037】

主な結果分析である基線(１０日目)から２８日目まで、全肺容積における病変の割合(％)の変化は、正常性の仮定が満たされる場合に、ＵＣ－ＭＳＣとプラセボグループとの間の差はt検定でテストする。それ以外の場合に、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙでテストする。

【0038】

１. 正規分布検定と分散均一性検定
実験結果に対して正規分布検定と分散均一性検定を行い、結果をそれぞれ表２と表３に示す。

【0039】

表２と表３によると、実験群の６分間歩行距離のデータは正規分布に従わなく(ｐ＜０．０５)、対照群の全肺容積に占める固形病変の総容積の比率の相対的変化値に関するデータの分布は正規分布に従わない(ｐ＜０．０５)ため、６分間歩行距離及び全肺容積に占める固形病変の総容積の比率の相対的変化値の群間差を比較する場合に、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの順位和検定を用いた。全肺容積に占める全病巣容積の比率の相対変化値及び全肺容積に占めるすりガラス病変の総容積の比率の相対変化値の群間差を比較する場合には、t検定を用いた。

【表2】

【表3】

【0040】

２. 実験群と対照群のマッチング分析
年齢、最高体温、発症から入院までの日数、性別、心疾患の既往歴、高血圧の既往歴、糖尿病の既往歴、慢性閉塞性肺疾患の既往歴、及び発熱、疲労、から咳などの症状については、実験群と対照群との間の違いに統計的に有意差がなく(ｐ＞０．０５)、２つのグループの被験者は基線特徴についてバランスが取れており、比較可能である(表１を参照)。

【0041】

６分間歩行距離と全病巣容積などの重要な指標に関する実験群と対照群の比較を表４に示す。

【表4】

【0042】

表４と図３～４を合わせると、全肺容積に占める全病巣容積の比率の相対的変化値について、実験群の回復度が対照群の回復度より優れ、且つ、結果は統計的に有意である（－３３．１４ ｖｓ １．７２，ｐ＝＜０．００４＜０．０５）。図５と図６によると、全肺容積に占める固形病変の総容積の比率の相対的変化値について、実験群の回復度が対照群の回復度より優れ、且つ、結果は統計的に有意である（－７６．５９ ｖｓ ２９．３０，ｐ＜０．００１）。図７と図８は、実験群と対照群における患者のすりガラス病変の変化状況を示す。基線の１０日目から２８日目まで、プラセボ（ＩＴＴ）と比較すると、ＵＣ－ＭＳＣｓを投与された被験者の肺病変の比率（％）の変化は、プラセボを投与された被験者と比較して数値的に改善される。図３～図８によると、本実験では、ＵＣ－ＭＳＣは基線から２８日目までの間質性肺病変を有する重症患者集団において全肺容積に占める固形病変の比率（％）の変化を著しく改善することが明らかになる。間質性肺障害（肺線維症）は、数百種類の非腫瘍性肺疾患から構成されており、その臨床症状、形態、傾向は様々で、間質性肺障害はＣＯＶＩＤ-１９の重度患者によく見られる症状であり、重度のＣＯＶＩＤ-１９による間質性肺障害は対象の回復後の生活の質に重大な影響を与える。ＭＳＣｓ群の残存病変はプラセボ群の残存病変より著しく低く、これはＭＳＣｓの潜在的な肺線維化効果を反映したものであり、間質性肺障害を有効に修復することができる。実験群と対照群は、６分間歩行距離（単位：メートル）について統計的に有意差はないが、図１と図２によると、実験群における対象は６分間歩行距離が対照群より著しく優れ、彼らの肺機能の回復は良好である。

【0043】

実施例２
肺線維症修復治療における間葉系幹細胞の有効性をさらに実証するため、本実施例では、ｍｏｄｉｆｉｅｄ-ＩＴＴ（ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ－ｔｏ ｔｒｅａｔ, ｍＩＴＴ）分析集団に対して統計解析を行う。ｍＩＴＴは、実験群の６５名、対照群の３５名とし、そのうち、実際にｐｅｒ ｐｒｏｔｏｃｏｌ解析（ＰＰ）を満たす対象集団となったのは実験群の４９名、対照群の２５名である。

【0044】

すべては前述のような治療方案を採用する。本臨床実験の主な終点と副次終点の違いを評価するため、放射線科医師の評価と肺撮影スマートソフトウェアに基づき、高解像度ＣＴ画像の変化を分析および評価して病変状況を測定する。Ｈｏｄｇｅｓ－Ｌｅｈｍａｎｎ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎにより、全肺容積に占める全病巣容積の総比率と全肺容積に占める固形病変の総容積の総比率を推定し、その結果を図９と表５に示す。

【表5】

２８日目のＶＣｍａｘ（Ｌ）は、実験群の５３例と対照群の３１例から取得される。
２８日目のＤＬｃｏ（Ｌ）は、実験群の５３例と対照群の２７例から取得される。
酸素療法の実施期間におけるデータは、実験群の２９例と対照群の１１例から取得される。
２８日間の安静時に指の脈拍の酸素飽和度のデータは、実験群の６１例と対照群の３５例から取得される。
ｍＭＲＣ呼吸困難の評価は、実験群の６１例と対照群の３５例から取得される。

【0045】

表５と図９の結果によると、基線から２８日目まで、実験群における全肺容積に占める病巣容積の総比率の偏差の中央値が－１９．４０％であり（９５％ＣＩ，－５３．４０％，－２．６２％）、対照群は－７．３０％（９５％ＣＩ，－４６．５９％，１９．１２％）であるため、２群間の偏差は－１３．３１％（９５％ＣＩ，－２９．１４％，２．１３％，Ｐ＝０．０８０）である。一方、全肺容積に占める固形病変の容積の総比率を対象として、実験群の中央値が－５７．７０％であり（９５％ＣＩ，－７４．９５％，－３６．５６％）、対照群は－４４．４５％（９５％ＣＩ，－６２．２４％，－８．８２％）であるため、２群間の偏差は－１５．４５％（９５％ＣＩ，－３０．８２％，－０．３９％，Ｐ＝０．０４３）である。また、実験群でのすりガラス病変が減少することがさらに見られた。それによって、実験群では肺障害と病変容積が著しく減少し、対照群より優れた効果を有する。実験群の２８日目の６分間歩行距離は対照群より長いため、実験群は対照群より肺機能の回復が優れる。

【0046】

なお、実験期間中の有害事象の発生率は、実験群で５５．３８％、対照群で６０％、大体一致である。実験群でよく発生する有害事象は乳酸脱水素酵素の増加を含み、その発生率は、実験群で１３．８５％、対照群で２０％；血清アラニンアミノトランスフェラーゼの増加の発生率は、実験群で１０．７７％、対照群で１１．４３％；低カリウム血症の増加の発生率は、実験群で９．２３％、対照群で２．８６％；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加の発生率は、実験群で７．６９％、対照群で１１．４３％；高尿酸血症の発生率は、実験群で７．６９％、対照群で８．７５％である。実験群で３レベルの有害事象（気胸）が発生したのは１例のみで、保存的療法で回復した。観察期間中の有害事象は、間葉系幹細胞の投与に関連するものではない。本実験では死亡した患者なし。そのため、本願により提供された間葉系幹細胞を用いた肺障害修復の方案は良好な安全性を有する。

【0047】

上記のとおり、本願は間葉系幹細胞を用いて肺障害を修復する応用を提供する。本願によれば、新型コロナウイルスによって引き起こされた肺障害を著しく修復することができ、良好な安全性を有する。

【0048】

以上、本願の実施形態について詳細に説明したが、本願は上記の実施形態に限られない。本願の思想と原則下でなされた修正、均等な代替、改良などはいずれも本願の保護範囲に含まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】