特表2023-536267アルファ放射標識ガストリンアナログおよびＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法におけるその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-24
(54)【発明の名称】アルファ放射標識ガストリンアナログおよびＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法におけるその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 7/08 20060101AFI20230817BHJP
A61K 51/08 20060101ALI20230817BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20230817BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230817BHJP
【ＦＩ】
C07K7/08 ZNA
A61K51/08 100
A61K47/64
A61P35/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023506231
(86)(22)【出願日】2021-07-30
(85)【翻訳文提出日】2023-03-30
(86)【国際出願番号】 EP2021071463
(87)【国際公開番号】W WO2022023554
(87)【国際公開日】2022-02-03
(31)【優先権主張番号】PCT/EP2020/071730
(32)【優先日】2020-07-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】PCT/EP2020/075956
(32)【優先日】2020-09-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】501494414
【氏名又は名称】パウル・シェラー・インスティトゥート
(74)【代理人】
【識別番号】100114890
【弁理士】
【氏名又は名称】アインゼル・フェリックス＝ラインハルト
(74)【代理人】
【識別番号】100098501
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 拓
(74)【代理人】
【識別番号】100116403
【弁理士】
【氏名又は名称】前川 純一
(74)【代理人】
【識別番号】100134315
【弁理士】
【氏名又は名称】永島 秀郎
(74)【代理人】
【識別番号】100162880
【弁理士】
【氏名又は名称】上島 類
(72)【発明者】
【氏名】ミハル グルズミル
(72)【発明者】
【氏名】ローガー シブリ
(72)【発明者】
【氏名】マーティン ベーエ
(72)【発明者】
【氏名】アラン ブラン
(72)【発明者】
【氏名】ユン チン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF70
4C084AA12
4C084NA13
4C084ZB26
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA16
4H045BA71
4H045CA40
4H045DA30
4H045EA20
4H045FA34
4H045GA25
(57)【要約】
本発明は、アルファ放射標識ガストリンアナログおよびペプチド受容体放射性核種療法（ＰＲＲＴ）用途でのその使用に関する。特に、本発明は、健康な組織に対する毒性を防止および／または低減しつつ、優れた生体内分布および治療効果を示すアルファ放射標識ガストリンアナログに関する。本発明はまた、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法におけるアルファ放射標識ガストリンアナログの使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（１）：Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、
Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］
を有するアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項2】
Ａｘｘが、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、２－アミノ－５－ヘプテン酸、ホモノルロイシン（ホモＮＩｅ）、ホモシステイン（ホモＣｙｓ）、２－アミノ－４－メトキシブタン酸、テルロメチオニン（Ｔｅ－Ｍｅｔ）、セレノメチオニン（Ｓｅ－Ｍｅｔ）およびフェニルグリシン（Ｐｈｇ）からなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＮｌｅを表す、請求項１記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項3】
Ｙが、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ）、２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ－ＮＣＳ）、［６，６’－（｛９－ヒドロキシ－１，５－ビス（メトキシカルボニル）－２，４－ジ（ピリジン－２－イル）－３，７－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－３，７－ジイル｝ビス（メチレン）ジピコリン酸］（Ｈ２Ｂｉｓｐａ２）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｍａｃｒｏｐａ）、６－［［１６－［（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル］－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカ－７－イル］メチル］－４－イソチオシアナトピリジン－２－カルボン酸（Ｍａｃｒｏｐａ－ＮＣＳ）、ビス（フェニルイミノジアセテート）－ジアザクラウンエーテル（Ｍａｃｒｏｐｉｄ）またはｔ－Ｂｕ－カリックス［４］アレーンテトラカルボン酸から、好ましくはＤＯＴＡまたはＨＥＨＡから、より好ましくはＤＯＴＡから誘導される部分である、請求項１または２記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項4】
前記アルファ放射性核種が、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈ、好ましくは２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈから、より好ましくは２１３Ｂｉ、２２５Ａｃおよび１４９Ｔｂから選択される、請求項１から３までのいずれか１項記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項5】
前記アルファ放射性核種が２２５Ａｃである、請求項１から４までのいずれか１項記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項6】
前記アルファ放射性核種が、以下の（ｉ）および（ｉｉ）：（ｉ）２０ｋｅＶ／μｍ～１９０ｋｅＶ／μｍ、好ましくは３０ｋｅＶ／μｍ～１６０ｋｅＶ／μｍ、より好ましくは５０ｋｅＶ／μｍ～１５０ｋｅＶ／μｍ、特に約８０ｋｅＶ／μｍの線エネルギー付与（ＬＥＴ）；ならびに
（ｉｉ）２０μｍ～１５０μｍ、好ましくは３０μｍ～１２０μｍ、より好ましくは４０μｍ～１００μｍの組織浸透範囲（ＴＰＲ）
のうちの少なくとも１つを満たす、請求項１から５までのいずれか１項記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項7】
下記式（２）：Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、請求項１から６までのいずれか１項記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項8】
ＣＣＫＢ受容体陽性疾患と診断されたヒト対象に治療有効線量のアルファ放射標識ガストリンアナログを投与するステップを含む１つ以上のＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法における使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログであって、前記アルファ放射標識ガストリンアナログが請求項１から７までのいずれか１項に定義されるとおりである、アルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項9】
前記アルファ放射標識ガストリンアナログが、下記式（２）：Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、請求項８記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項10】
前記ＣＣＫＢ受容体陽性疾患が、胃癌（ＧＣ）、膵臓腺癌（ＰＡＤＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、肺外小細胞癌（ＥＰＳＣＣ）、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）、グリオーマ、胃腸膵神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、結腸癌、卵巣癌、乳癌、および任意のＣＣＫＢ受容体陽性癌または腫瘍から選択される、請求項８または９記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項11】
前記ＣＣＫＢ受容体陽性疾患が、ＳＣＬＣ、ＥＰＳＣＣおよびＭＴＣから、好ましくはＳＣＬＣおよびＭＴＣから選択され、より好ましくはＭＴＣである、請求項８から１０までのいずれか１項記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項12】
ヒト対象に投与される治療有効線量が、１０～４０，０００ｋＢｑ／ｋｇ、好ましくは３０～１，０００ｋＢｑ／ｋｇ、より好ましくは５０～２００ｋＢｑ／ｋｇである、請求項８から１１までのいずれか１項記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【請求項13】
治療有効線量のアルファ放射標識ガストリンアナログを、アルファ放射標識ガストリンアナログを必要とするヒト対象に投与するステップを含むＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法であって、前記アルファ放射標識ガストリンアナログが請求項１から７までのいずれか１項に定義されるとおりであり、好ましくは請求項７に定義されるとおりである、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アルファ放射標識ガストリンアナログおよびペプチド受容体放射性核種療法（ＰＲＲＴ）用途でのその使用に関する。特に、本発明は、健康な組織に対する毒性を防止および／または低減しつつ、優れた生体内分布および治療効果を示すアルファ放射標識ガストリンアナログ、例えば、アクチニウム－２５５で標識されたガストリンアナログに関する。本発明はまた、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患、例えば腫瘍または癌の処置方法におけるアルファ放射標識ガストリンアナログの使用に関する。
【0002】
発明の背景
Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）は、細胞膜を横切って化学シグナルを伝達する機能を担う膜タンパク質のスーパーファミリーを構成している。ＧＰＣＲにリガンドが結合すると、ＧＰＣＲの立体構造に変化が起こり、Ｇタンパク質を活性化および放出できるようになり、その後シグナル伝達経路がトリガーされる。
Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）は、細胞膜を横切って化学シグナルを伝達する機能を担う膜タンパク質のスーパーファミリーを構成している。ＧＰＣＲにリガンドが結合すると、ＧＰＣＲの立体構造に変化が起こり、Ｇタンパク質を活性化および放出できるようになり、その後シグナル伝達経路がトリガーされる。
【0003】
ペプチドリガンドと選択的に結合するＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）の過剰発現により、ヒトの癌に対するペプチド受容体放射性核種療法（ＰＲＲＴ）の開発が可能になる（Lappano et al. Nat Rev Drug Discov. 2011, 10(1), 47-60）。ＰＲＲＴの最も重要な目標の一つは、放射標識リガンドを標的細胞（例えば、癌細胞）に多く取り込ませ、そうして放射線に誘発されたＤＮＡ損傷および細胞死をもたらすことである。したがって、周囲の健康な組織を副作用から守る一方で、放射性医薬品の標的細胞への取り込みを増加させる戦略が検討されてきた。
【0004】
アゴニストリガンドベースの治療薬の標的となるＧＰＣＲは立体構造の変化を受け、Ｇタンパク質アルファサブユニット（Ｇａ）上でＧＤＰからＧＴＰへの交換をもたらす。その後、ＧαおよびＧβγサブユニットが受容体から解離すると、プロテインキナーゼＡおよびＣ（ＰＫＡ；ＰＫＣ）ならびにホスホイノシチド３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を含む様々なキナーゼシグナル経路が活性化する（O’Hayre et al. Curr Opin Cell Biol. 2014, 27, 126-135）。その後、活性化されたＧＰＣＲは、アレスチン媒介性の内在化プロセスを介して脱感作を受け、それによってＧＰＣＲは、分解のためにリソゾームへ、または細胞表面へリサイクルし戻すためにエンドゾームへ輸送され得る（Rajagopal et al. Cell Signal. 2018, 41, 9-16）。この内在化プロセスにより、リガンドコンジュゲート型の放射性核種を標的細胞、例えば癌細胞へ送達することが可能になる。
【0005】
甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）は、カルシトニン産生Ｃ細胞に由来する神経内分泌腫瘍である。甲状腺癌全体の３～５％を占めており、ＭＴＣは比較的稀な癌である（Hadoux et al. Lancet Diabetes Endocrinol. 2016, 4(1), 64-71）。残念ながら、従来の化学療法（通常はドキソルビシン単独またはシスプラチンとの併用）に対する反応は一過性に過ぎず、有用性は少数の患者に限られている。さらに、ＭＴＣ細胞はヨウ素を集積しないため、放射性ヨウ素処置には反応しない（Verburg et al. Methods. 201, 55(3), 230- 237）。現在、ＭＴＣは甲状腺癌関連死亡の１４％を占めており、これは、特に転移した患者においてより良好な処置が必要であることを示唆している（Roman et al. Cancer. 2006, 107(9), 2134-2142）。
【0006】
小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）は、肺に発生することが最も多い悪性度の高い癌である。通常、その癌は、中心部に位置する気管気管支気道から発生しかつ縦隔に浸潤する大型で急速に進展する病変を呈する。限局病期のＳＣＬＣと診断された患者の１／３は、化学放射線療法により約２５％の治癒率が得られている。一方、進行期および再発性のＳＣＬＣのいずれも、しばしば不治の病とみなされ、利用可能な処置、例えば化学療法は、通常、緩和を目的として施される。再発性のＳＣＬＣ患者の予後は依然としてひどく、全生存期間の中央値は約６カ月である（Travis et al. J Thorac Oncol. 2015, 10(9), 1243- 1260）。
【0007】
肺外小細胞癌（ＥＰＳＣＣ）とは、肺の外に発生する小細胞癌を指す。それらは消化器系および泌尿器系に現れることが最も多い。ＥＰＳＣＣは、小細胞癌全体の２．５％～５．０％、癌全体の０．１％～０．４％を占める稀な新生物である。ＥＰＳＣＣは、急速な局所進行、早期の広範囲転移、および処置後の再発を特徴とする攻撃的な自然史を有している。ＥＰＳＣＣと診断された患者の予後は、化学療法にもかかわらず比較的不良で、生存期間の中央値は３～２７カ月で、全５年生存率は約１３％である（Nakazawa et al. Oncol Lett. 2012, 4(4), 617-620）。
【0008】
ＧＰＣＲファミリーに属するコレシストキニンＢ受容体（ＣＣＫＢＲ、時にＣＣＫ２Ｒとも呼ばれる）の高発現が、ＭＴＣ、グリオーマ、ＳＣＬＣ、結腸癌、卵巣癌等を含む様々な癌で検証されている（Reubi et al. Cancer Res. 1997, 57(7), 1377-1386）。さらに、小さなペプチドホルモン「ミニガストリン」は、ＣＣＫＢＲと高い親和性で結合することが知られている。したがって、これまでの研究では、ＰＲＲＴ、特に「セラノスティクス（theranostics）」（治療と診断）用途のための放射標識ガストリンアナログの使用が提案されている。
【0009】
Ｂｅｈｒらは、ベータ放射源（例えば、９０Ｙ、１５３Ｓｍ）、オージェ電子放射源（例えば、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ）およびアルファ放射源（例えば、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ）を含む様々な放射性核種に対する安定性に優れたキレート部分（ＤＴＰＡ）を含むミニガストリンアナログの使用を提案している。しかしながら、放射標識ガストリンアナログは、使用される放射性核種に関わらず、ＣＣＫＢＲを内因性に発現する健康な組織、特に胃に集積する傾向があることが分かっている。この集積は、出血性胃炎などの健康な組織における有害な副作用（毒性）をもたらす可能性があり、その結果、処置を必要とする対象に投与され得る放射線の線量を制限する場合がある（J Nucl Med. 2001, 42(5):68P; Semin Nucl Med. 2002, 32(2), 97-109）．
【0010】
国際公開第２０１５／０６７４７３号は、１７７Ｌｕ（以下、「１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ」という）で標識された式ＤＯＴＡ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２（ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）のガスリンアナログを記載しており、これは腎臓における低い集積と同様に良好な腫瘍取り込み、すなわち良好な「腫瘍対腎臓比」を示す。しかしながら、最近の研究では、この化合物は、それらの内因性ＣＣＫＢＲ発現に起因して健康な組織（すなわち胃の中）に集積する可能性があり、それによって放射線量を制限し、かつ／または有害な副作用をもたらすことが分かっている（Sauter et al. J Nucl Med. 2019, 60(3), 393-399; Rottenburger et al. J Nucl Med. 2020, 61(4), 520-526）。さらに、ルテチウム－１７７は、その長い組織浸透範囲（クロスファイア効果（cross-fire effect））に起因して周囲の健康な細胞に損傷を与え、特に小型の新生物および／または（微小）転移などの進行（転移）期の疾患の処置において、ＤＮＡ損傷が不十分であることに起因して制限された効果を示す可能性があることが分かっている。
【0011】
上記に鑑みて、本発明の目的は、優れた生体内分布および治療効果を有し、そのうえ、健康な組織に対する毒性が低いＰＲＲＴ用途の化合物を提供することである。さらに、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患、特に進行期のＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法に使用することができる化合物を提供することを目的とする。
【0012】
発明の概要
本発明は、優れた生体内分布および治療効果を有し、そのうえ、健康な組織に対する毒性が低い（または毒性がない）化合物、すなわちアルファ放射標識ガストリンアナログを提供する。特に、本発明者らは、特定のガストリンアナログをアルファ放射性核種で標識することにより、優れた生体内分布および治療効果を達成可能にしつつ、ＣＣＫＢＲを内因的に発現する健康な組織（例えば、胃の中）における放射性化合物の集積および標的細胞周囲の健康な組織の照射に起因する有害な副作用を防止および／または低減できることを見出した。アルファ放射性核種標識ガストリン化合物は、健康な組織、特に胃の中で、その高い内因性ＣＣＫＢＲ発現に起因して毒性が増加することと関連しているので、これらの発見は特に驚くべきことである。
本発明は、優れた生体内分布および治療効果を有し、そのうえ、健康な組織に対する毒性が低い（または毒性がない）化合物、すなわちアルファ放射標識ガストリンアナログを提供する。特に、本発明者らは、特定のガストリンアナログをアルファ放射性核種で標識することにより、優れた生体内分布および治療効果を達成可能にしつつ、ＣＣＫＢＲを内因的に発現する健康な組織（例えば、胃の中）における放射性化合物の集積および標的細胞周囲の健康な組織の照射に起因する有害な副作用を防止および／または低減できることを見出した。アルファ放射性核種標識ガストリン化合物は、健康な組織、特に胃の中で、その高い内因性ＣＣＫＢＲ発現に起因して毒性が増加することと関連しているので、これらの発見は特に驚くべきことである。
【0013】
したがって、本発明は、下記式（１）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、
Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］
を有するアルファ放射標識ガストリンアナログに関する。
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、
Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］
を有するアルファ放射標識ガストリンアナログに関する。
【0014】
本発明の化合物は、ＰＲＲＴ用途で使用することができる。したがって、本発明はまた、ＣＣＫＢＲ陽性疾患、特にＧＣ、ＰＡＤＣ、ＳＣＬＣ、ＥＰＳＣＣ、ＭＴＣ、グリオーマ、ＧＥＰ－ＮＥＴ、結腸癌、卵巣癌、乳癌、および任意のＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法における使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログに関する。
【0015】
本発明は、特に、以下の実施形態（以下、「項目」という）を含む：
１．下記式（１）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、
Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］
を有するアルファ放射標識ガストリンアナログ。
１．下記式（１）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、
Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］
を有するアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0016】
２．Ａｘｘが、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、２－アミノ－５－ヘプテン酸、ホモノルロイシン（ホモＮＩｅ）、ホモシステイン（ホモＣｙｓ）、２－アミノ－４－メトキシブタン酸、テルロメチオニン（Ｔｅ－Ｍｅｔ）、セレノメチオニン（Ｓｅ－Ｍｅｔ）およびフェニルグリシン（Ｐｈｇ）からなる群から選択されるアミノ酸、好ましくはＮｌｅを表す、項目１記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0017】
３．Ｙが、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ）、２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ－ＮＣＳ）、［６，６’－（｛９－ヒドロキシ－１，５－ビス（メトキシカルボニル）－２，４－ジ（ピリジン－２－イル）－３，７－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－３，７－ジイル｝ビス（メチレン）ジピコリン酸］（Ｈ２Ｂｉｓｐａ２）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｍａｃｒｏｐａ）、６－［［１６－［（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル］－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカ－７－イル］メチル］－４－イソチオシアナトピリジン－２－カルボン酸（Ｍａｃｒｏｐａ－ＮＣＳ）、ビス（フェニルイミノジアセテート）－ジアザクラウンエーテル（Ｍａｃｒｏｐｉｄ）またはｔ－Ｂｕ－カリックス［４］アレーンテトラカルボン酸から、好ましくはＤＯＴＡまたはＨＥＨＡから、より好ましくはＤＯＴＡから誘導される部分である、項目１または２記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0018】
４．アルファ放射性核種が、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈ、好ましくは２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈから、より好ましくは２１３Ｂｉ、２２５Ａｃおよび１４９Ｔｂから選択される、項目１から３までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0019】
５．アルファ放射性核種が２２５Ａｃである、項目１から４までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0020】
６．アルファ放射性核種が、以下の（ｉ）および（ｉｉ）：
（ｉ）２０ｋｅＶ／μｍ～１９０ｋｅＶ／μｍ、好ましくは３０ｋｅＶ／μｍ～１６０ｋｅＶ／μｍ、より好ましくは５０ｋｅＶ／μｍ～１５０ｋｅＶ／μｍ、特に約８０ｋｅＶ／μｍの線エネルギー付与（ＬＥＴ）；ならびに
（ｉｉ）２０μｍ～１５０μｍ、好ましくは３０μｍ～１２０μｍ、より好ましくは４０μｍ～１００μｍの組織浸透範囲（ＴＰＲ）
のうちの少なくとも１つを満たす、項目１から５までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
（ｉ）２０ｋｅＶ／μｍ～１９０ｋｅＶ／μｍ、好ましくは３０ｋｅＶ／μｍ～１６０ｋｅＶ／μｍ、より好ましくは５０ｋｅＶ／μｍ～１５０ｋｅＶ／μｍ、特に約８０ｋｅＶ／μｍの線エネルギー付与（ＬＥＴ）；ならびに
（ｉｉ）２０μｍ～１５０μｍ、好ましくは３０μｍ～１２０μｍ、より好ましくは４０μｍ～１００μｍの組織浸透範囲（ＴＰＲ）
のうちの少なくとも１つを満たす、項目１から５までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0021】
７．下記式（２）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、項目１から６までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、項目１から６までのいずれか１つ記載のアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0022】
８．ＣＣＫＢ受容体陽性疾患と診断されたヒト対象に治療有効線量のアルファ放射標識ガストリンアナログを投与するステップを含む１つ以上のＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法における使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログであって、
アルファ放射標識ガストリンアナログが項目１から７までのいずれか１つに定義されるとおりである、アルファ放射標識ガストリンアナログ。
アルファ放射標識ガストリンアナログが項目１から７までのいずれか１つに定義されるとおりである、アルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0023】
９．アルファ放射標識ガストリンアナログが、下記式（２）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、項目８記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］
で表される、項目８記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0024】
１０．ＣＣＫＢ受容体陽性疾患が、胃癌（ＧＣ）、膵臓腺癌（ＰＡＤＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、肺外小細胞癌（ＥＰＳＣＣ）、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）、グリオーマ、胃腸膵神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、結腸癌、卵巣癌、乳癌、および任意のＣＣＫＢ受容体陽性癌または腫瘍から選択される、項目８または９記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0025】
１１．ＣＣＫＢ受容体陽性疾患が、ＳＣＬＣ、ＥＰＳＣＣおよびＭＴＣから、好ましくはＳＣＬＣおよびＭＴＣから選択され、より好ましくはＭＴＣである、項目８から１０までのいずれか１つ記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0026】
１２．ヒト対象に投与される治療有効線量が、１０～１０，０００ｋＢｑ／ｋｇ、好ましくは３０～１０００ｋＢｑ／ｋｇ、より好ましくは５０～２００ｋＢｑ／ｋｇである、項目８から１１までのいずれか１つ記載の使用のためのアルファ放射標識ガストリンアナログ。
【0027】
１３．治療有効線量のアルファ放射標識ガストリンアナログを、アルファ放射標識ガストリンアナログを必要とするヒト対象に投与するステップを含むＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法であって、
アルファ放射標識ガストリンアナログが項目１から７までのいずれか１つに定義されるとおりであり、好ましくは項目７に定義されるとおりである、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法。
アルファ放射標識ガストリンアナログが項目１から７までのいずれか１つに定義されるとおりであり、好ましくは項目７に定義されるとおりである、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図1】Ａ４３１／ＣＣＫＢＲ細胞における１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎおよび２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの内在化を示す図であり、内在化および細胞結合活性を、１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎまたは２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎと２時間インキュベーションした後に測定し、すべての実験は３連でアッセイし、各棒は平均値±ＳＤを表す。
【図2】異種移植ヌードマウスにおける２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの生体内分布を示す図であり、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ投与から１、４、２４、４８時間および７日間後の腫瘍、腎臓、胃、肝臓、骨および血液における放射能取り込みを組織１グラム当たりの総注入放射能の割合（％ｉ．Ａ．（注入放射能）／ｇ）として示し、各棒は、平均値±ＳＤ、各時点でｎ＝４を表す。
【図3】異種移植ヌードマウスにおける２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎおよび１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの生体内分布を示す図であり、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（黒棒）および１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（白棒）の注射から４時間後の指定臓器での放射能取り込みの比較分析であり、各棒は、平均値±ＳＤ、ｎ＝４、＊Ｐ＜０．０１、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１を表す。
【図4】
２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置したマウスにおける腫瘍成長抑制および寿命延長を示す図であり、腫瘍移植後、ＰＢＳまたは３０、４５、６０、９０および１２０ｋＢｑの精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１ＮをＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウス群に指示どおり投与し（ｎ＝９を対照群および６０ｋＢｑ群から除外：ｎ＝１８）、異なる処置群における腫瘍成長曲線であり、値は平均値±ＳＤで表される。
【図5】処置後の腎臓および胃の切片の組織学的分析を示す図であり、対照、６０および１２０ｋＢｑの２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置したＡ４３１／ＣＣＫＢＲ異種移植ヌードマウスから単離した臓器のＨＥ染色の代表画像である。
【図6】４５ｋＢｑまたは６０ｋＢｑの２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置後のＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を示す図であり、４５ｋＢｑ（左）および６０ｋＢｑ（右）の２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置後に腫瘍が検出されなかったマウス２匹の１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１ＮによるＳＰＥＣＴ－ＣＴ画像である。
【図7】
２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの品質管理を示す図であり、ＨＰＬＣ精製中に回収したフラクションからのサンプルを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレート（水／アセトニトリル、４０／６０、ｖ／ｖ中の０．１Ｍコハク酸）に溶出し、溶出を停止し、溶出から３０分後に蛍光体スクリーン（ＭｕｌｔｉＳｅｎｓｉｔｉｖｅ；PerkinElmer社から入手可能）をＴＬＣプレートに露光し（露光時間：２分）、次いでＣｙｃｌｏｎｅ Ｐｌｕｓ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ（PerkinElmer社製）を用いて３００ｄｐｉの解像度でスキャンし、活性分布を測定し、（Ａ）主に未結合の放射性核種（２２１Ｆｒ、２１３、Ｂｉ、２０９Ｔｌ）に起因するガンマ線放出が観測され、（Ｂ）蛍光体スクリーン（ＭｕｌｔｉＳｅｎｓｉｔｉｖｅ；PerkinElmer社製）を溶出から２４時間後に同じＴＬＣプレートに露光し（露光時間：２分）、スキャンして活性分布を測定したところ、α崩壊した２２５Ａｃに由来する娘核種のみを示すようになった。
【0029】
発明の詳細な説明
１．定義
本明細書で使用される「ガストリンアナログ」という表現は、内因性ペプチドホルモン「ガストリン」に構造的に関連し、ＣＣＫＢＲに結合することができる化合物（ペプチド）のクラスを意味する。特に、「ガストリンアナログ」という表現は、Ｃ末端ペンタペプチドＧｌｙ－Ｔｒｐ－Ｄｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２を含む化合物を定義し、式中、Ｄｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸であり、ガストリン、コレシストキニン（ＣＣＫ）およびミニガストリンなどのＣＣＫＢＲ結合内因性ペプチドホルモンに見られるＣ末端アミノ酸配列（Ｌｅｕ－（Ｇｌｕ）５－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２）と類似している。ガストリンアナログは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）などの放射性金属用のキレート部分を共有結合できるように化学的に修飾することが可能である。
１．定義
本明細書で使用される「ガストリンアナログ」という表現は、内因性ペプチドホルモン「ガストリン」に構造的に関連し、ＣＣＫＢＲに結合することができる化合物（ペプチド）のクラスを意味する。特に、「ガストリンアナログ」という表現は、Ｃ末端ペンタペプチドＧｌｙ－Ｔｒｐ－Ｄｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２を含む化合物を定義し、式中、Ｄｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸であり、ガストリン、コレシストキニン（ＣＣＫ）およびミニガストリンなどのＣＣＫＢＲ結合内因性ペプチドホルモンに見られるＣ末端アミノ酸配列（Ｌｅｕ－（Ｇｌｕ）５－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２）と類似している。ガストリンアナログは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）などの放射性金属用のキレート部分を共有結合できるように化学的に修飾することが可能である。
【0030】
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、少なくとも１つのアミノ基と少なくとも１つの酸性基、好ましくはカルボキシル基とを含むか、またはそれらから誘導される化合物を指す。アミノ基と酸性基との間の距離は、特に限定されない。α－、β－、およびγ－アミノ酸が適しているが、α－アミノ酸、特にα－アミノカルボン酸が特に好ましい。この用語は、天然に存在するアミノ酸だけでなく、天然には見られない合成アミノ酸も包含する。他に規定がない限り、または文脈によって他に指示されない限り、隣接するアミノ酸基の間のすべての接続は、ペプチド（骨格アミド）結合によって形成される。本明細書に記載されるペプチドは、左から右へ従来のアミノ→カルボキシ方向で列挙される。
【0031】
本明細書で使用される「メチオニンと等価なアミノ酸」（または「メチオニン生物学的等価体」）という表現は、メチオニンと同様の形状および／または電子特性を有する天然もしくは非天然アミノ酸を指す。その結果、メチオニン残基がメチオニンと等価なアミノ酸で置き換えられた化合物は、メチオニンを含む元の化合物と同様の特性、例えば、結合親和性、アゴニスト活性等を示すようになる。ここで、「等価」という用語は、前述のアミノ酸の骨格および／または側鎖が、例えば、立体的、電子的等にメチオニンを模倣するように定義されているという点でメチオニンと本質的に等価である、すべてのアミノ酸を包含することを意味する。メチオニンと等価なアミノ酸の例としては、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン（ホモＣｙｓ）、２－アミノ－５－ヘプテン酸、ホモノルロイシン（ホモＮＩｅ）、２－アミノ－４－メトキシブタン酸、テルロメチオニン（Ｔｅ－Ｍｅｔ）、セレノメチオニン（Ｓｅ－Ｍｅｔ）およびフェニルグリシン（Ｐｈｇ）等が挙げられる。いくつかの態様において、「メチオニンと等価なアミノ酸」という表現は、ミニガストリンのアミノ酸配列においてメチオニンを置き換えた場合、ＣＣＫＢＲに対するミニガストリンの薬理（アゴニスト）活性の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％を保持するガストリンアナログを生成するアミノ酸残基を意味する。薬理活性は、Ｂｌａｅｋｅｒら（Regulatory Peptides 2004, 118, 111-117）により記載されているように、ガストリンアナログ刺激細胞におけるカルシトニンレベルの細胞内上昇を測定することにより決定することができる。
【0032】
本明細書で使用される「アルファ放射性核種を構成する部分」（または「アルファ放射性核種をキレートもしくは（共有）結合する部分」）という表現は、（ｉ）アルファ放射性核種に電子を供与してそれと配位錯体を形成することができる、すなわち、少なくとも１つの配位共有結合（双極子結合）をそれと形成することによって、または（ｉｉ）２１１Ａｔおよび２２３Ｒａなどのアルファ放射性核種を共有結合することができる部分（キレート剤もしくはリガンド）を指す。キレート機構は、キレート剤および／または放射性核種に依存する。例えば、ＤＯＴＡは、カルボキシレート基およびアミノ基（供与基）を介して放射性核種、例えば２２５Ａｃを配位させ、それによって高い安定性を有する錯体を形成すると考えられている（Dai et al. Nature Com. 2018, 9, 857）。２２５Ａｃなどのアルファ放射性核種をキレートすることができる部分の非限定的な例としては、ＤＯＴＡ、１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ）、２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ－ＮＣＳ）、［６，６’－（｛９－ヒドロキシ－１，５－ビス（メトキシカルボニル）－２，４－ジ（ピリジン－２－イル）－３，７－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－３，７－ジイル｝ビス（メチレン）ジピコリン酸］（Ｈ２Ｂｉｓｐａ２）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｍａｃｒｏｐａ）、６－［［１６－［（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル］－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカ－７－イル］メチル］－４－イソチオシアナトピリジン－２－カルボン酸（Ｍａｃｒｏｐａ－ＮＣＳ）、ビス（フェニルイミノジアセテート）－ジアザクラウンエーテル（Ｍａｃｒｏｐｉｄ）、ｔ－Ｂｕ－カリックス［４］アレーンテトラカルボン酸が挙げられる。
【0033】
本明細書で使用される「化合物から誘導される部分」という表現は、隣接する部分に結合した部分（Ｙ）を指し、この部分（Ｙ）は、隣接する部分への結合を担う構造要素によってのみ、それが誘導される分子と異なる。これは、既存の官能基によって形成された共有結合、またはこの目的のために新たに導入された共有結合と隣接する官能基とを含むことができる。例えば、「１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）から誘導される部分」という表現は、ペプチド＊－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２のＮ末端にカルボキシル基を介して共有結合し、ペプチド（アミド）結合を形成したＤＯＴＡ分子を指す（＊はＤＯＴＡ部分への共有結合を示す）。
【0034】
この関連における「アルファ放射性核種」（または「アルファ粒子放出核種」、「アルファ放射源」、「アルファ」）という表現は、アルファ粒子を放出することによって放射性崩壊を受ける不安定な元素（放射性核種）を意味する。アルファ放射性核種の非限定的な例としては、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈが挙げられる。
【0035】
本明細書で使用される「癌」という用語は、哺乳類の組織において、細胞が異常に成長して悪性腫瘍を形成することを特徴とする病理状態を意味し、この腫瘍は、他の組織または身体の一部に浸潤するかまたは広がり、転移として知られる「二次」腫瘍を形成する可能性がある。腫瘍は１つ以上の癌細胞を含む。
【0036】
本明細書で使用される「内在化」という用語は、分子、例えばアルファ放射標識ガストリンアナログが細胞膜に抱き込まれ、細胞内に引き込まれる生物学的プロセスを指す。その結果、分子、例えばアルファ放射標識ガストリンアナログは、細胞内に存在するようになる。
【0037】
「細胞取り込み」という表現は、分子が細胞膜に内在化および／または結合される生物学的プロセスを指す。その結果、分子は、細胞内だけでなく細胞膜にも存在することができるようになる。類似の方法で、「腫瘍取り込み」（または「腫瘍細胞取り込み」）という表現は、分子、例えば放射標識ガストリンアナログが腫瘍（癌）細胞によって取り込まれる生物学的プロセスを指す。その結果、分子、例えば放射標識ガストリンアナログは、腫瘍（癌）細胞内および／または細胞膜に存在することができるようになる。
【0038】
本明細書で使用される「ＣＣＫＢ受容体陽性疾患」という表現は、細胞表面上のＣＣＫＢＲの（過剰）発現を特徴とする疾患、例えば腫瘍または癌を指す（Reubi et al. Cancer Res. 1997, 57(7), 1377-1386; Dufresne et al. Physiol Rev 2006, 86, 805-847）。ＣＣＫＢＲの（過剰）発現、特に細胞表面上の発現は、当該技術分野で知られている技術、例えば、以下にさらに記載するような免疫組織化学またはウェスタンブロット分析によって決定することができる。ＣＣＫＢＲ陽性疾患の非限定的な例としては、胃（stomach）癌（ＧＣ）、膵臓腺癌（ＰＡＤＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、肺外小細胞癌（ＥＰＳＣＣ）、甲状腺髄質癌（ＭＴＣ）、グリオーマ、胃腸膵神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、結腸癌、卵巣癌、乳癌が挙げられる。本開示の文脈では、「ＣＣＫＢ受容体陽性疾患」という表現は、原発腫瘍が身体の別の部分に転移して広がることによって生じる疾患、すなわち進行期疾患を包含することを意味する。例えば、ＣＣＫＢ受容体（陽性）疾患（癌）が大腸に生じ、身体の別の部分に転移する場合、この身体の別の部分に見出される癌細胞は、（ＣＣＫＢＲ陽性）結腸癌細胞である。
【0039】
本明細書で使用される「ＣＣＫＢＲ陽性疾患と診断されたヒト対象」という表現は、前述のＣＣＫＢＲ陽性疾患の少なくとも１つに関して陽性診断、例えばＭＴＣまたはＳＣＬＣの陽性診断を有するヒト対象を指す。これに関連して、疾患の診断および状態は、例えば米国癌協会（ＡＣＳ）から入手可能なような確立されたスクリーニングガイドラインに基づいて医師によって決定可能である。例えば、「陽性診断」は、対象が組織学的および／または細胞学的な疾患の状態、ならびに任意選択で以下のうちの１つ以上を有することを意味し得る：
（１）少なくとも１つの全身処置レジメン後の、Ｘ線写真で記録された疾患の進行または再発、
（２）最後の抗癌剤治療後に、固形腫瘍の応答評価規準１．１（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1）（ＲＥＣＩＳＴ１．１）に従って記録された、少なくとも１つの非照射頭蓋外測定可能標的病変、
（３）固形腫瘍の陽電子放出断層撮影応答規準１．０（Positron Emission Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1）（ＰＥＲＣＩＳＴ１．０）に従った少なくとも１つの腫瘍病変、および
（４）米国東海岸癌臨床試験グループ（Eastern Cooperative Oncology Group）（ＥＣＯＧ）スコアが０～２であること。
（１）少なくとも１つの全身処置レジメン後の、Ｘ線写真で記録された疾患の進行または再発、
（２）最後の抗癌剤治療後に、固形腫瘍の応答評価規準１．１（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1）（ＲＥＣＩＳＴ１．１）に従って記録された、少なくとも１つの非照射頭蓋外測定可能標的病変、
（３）固形腫瘍の陽電子放出断層撮影応答規準１．０（Positron Emission Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1）（ＰＥＲＣＩＳＴ１．０）に従った少なくとも１つの腫瘍病変、および
（４）米国東海岸癌臨床試験グループ（Eastern Cooperative Oncology Group）（ＥＣＯＧ）スコアが０～２であること。
【0040】
本明細書で使用される「有効線量」（または「有効量」）という表現は、疾患の処置を行うために対象（患者）に投与される放射能の総量（ベクレル／キログラム単位）、例えば、癌細胞の増殖を低減もしくは停止するため、および／または増殖する癌細胞の数を低減するために必要な線量を指す。処置の過程中に１つ以上の（投与）サイクルを含む場合、有効線量は、過程全体にわたって、すなわちすべてのサイクルにわたって対象に投与される放射能の総量を指す。この関連における「サイクル」という用語は、化合物を対象に投与し（処置時間）、次いで、別のサイクルに入る前に患者を休息させる（休息時間）期間を指す。処置は、１つ以上のサイクル、例えば最大１０サイクルを含むことができる。一連のサイクルは、「過程」と通常呼ばれ、各サイクルの長さに応じて、数ヶ月、例えば３～６ヶ月にわたって継続され得る。有効線量は、線量測定に基づき医師によって決定可能である。任意の特定の対象／患者に対する有効線量および投与頻度は変化し得、患者の年齢、体重、総合的な健康状態、性別、食事、投与の方式および時間、排泄率、疾患の重症度、ならびに治療を受けている個体を含む様々な要因に依存する。これらの要因は、有効線量を決定する際に医師によって考慮される。
【0041】
本明細書で「好ましい」実施形態／特徴に言及する場合、これらの「好ましい」実施形態／特徴の組み合わせも、この「好ましい」実施形態／特徴の組み合わせが技術的に意味を持つ限り、開示されているとみなされるものとする。
【0042】
以下、本発明の説明および特許請求の範囲において、「含む」および「備える」という用語の使用は、言及された要素に加えて、追加の言及されていない要素が存在し得るように理解されるものとする。しかしながら、これらの用語は、より限定された実施形態として、技術的に意味がある限り、追加の言及されていない要素が存在しなくてもよいように、「からなる」という用語も開示するものと理解されたい。
【0043】
文脈が他に指示せず、かつ／または代替的な意味が本明細書に明示的に提供されない限り、すべての用語は、ｌＵＰＡＣゴールドブック（２０１７年１１月１日のステータス）、またはＴｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｏｘｆｏｒｄ，６ｔｈ Ｅｄ．によって反映される、当該技術分野で一般的に受け入れられている意味を有することが意図される。
【0044】
２．概要
本発明は、特定のガストリンアナログ（すなわち式（１）のガストリンアナログ）をアルファ放射性核種、特に２２５Ａｃで標識することにより、標的細胞、例えば癌細胞への優れた取り込みをもたらし、優れた生体内分布および治療効果が生じながら、健康な組織、すなわちＣＣＫＢＲを内因的に発現する組織および／または標的細胞周囲の組織に対する毒性（有害な副作用）は防止および／または低減されるという発見に基づいている。アルファ標識化合物の使用は、細胞毒性副作用、例えば放射線性腎症、出血性胃炎等と関連しており、おそらく放出されたアルファ粒子の高エネルギーに起因しているので、これらの結果は特に驚くべきことである。
本発明は、特定のガストリンアナログ（すなわち式（１）のガストリンアナログ）をアルファ放射性核種、特に２２５Ａｃで標識することにより、標的細胞、例えば癌細胞への優れた取り込みをもたらし、優れた生体内分布および治療効果が生じながら、健康な組織、すなわちＣＣＫＢＲを内因的に発現する組織および／または標的細胞周囲の組織に対する毒性（有害な副作用）は防止および／または低減されるという発見に基づいている。アルファ標識化合物の使用は、細胞毒性副作用、例えば放射線性腎症、出血性胃炎等と関連しており、おそらく放出されたアルファ粒子の高エネルギーに起因しているので、これらの結果は特に驚くべきことである。
【0045】
本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲ陽性疾患、特にＧＣ、ＰＡＤＣ、ＳＣＬＣ、ＥＰＳＣＣ、ＭＴＣ、グリオーマ、ＧＥＰ－ＮＥＴ、結腸癌、卵巣癌、乳癌、および任意のＣＣＫＢ受容体陽性疾患の処置方法に使用することができる。さらに、本発明の化合物は、例えば、転移性ＭＴＣまたは転移性ＳＣＬＣの進行（転移）期に達したＣＣＫＢＲ陽性疾患の処置に特に適していることが予想される。
【0046】
３．アルファ放射標識ガストリンアナログ
本発明は、アルファ放射性核種、すなわち２２５Ａｃで標識されたガストリンアナログ（化合物）に関する。本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲを発現する標的細胞、例えば癌細胞に対して優れたインビボ生体内分布および治療効果を示す。さらに、本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲを内因的に発現する組織および／または標的細胞周囲の組織に対して低い毒性を示す（または毒性を示さない）。
本発明は、アルファ放射性核種、すなわち２２５Ａｃで標識されたガストリンアナログ（化合物）に関する。本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲを発現する標的細胞、例えば癌細胞に対して優れたインビボ生体内分布および治療効果を示す。さらに、本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲを内因的に発現する組織および／または標的細胞周囲の組織に対して低い毒性を示す（または毒性を示さない）。
【0047】
いかなる理論にも縛られることなく、式（１）のガストリンアナログを使用することにより、ＣＣＫＢＲを発現する細胞における優れた標的化および取り込み効果を達成可能にして優れた生体内分布が得られる一方で、アルファ放射性核種で標識することにより、放出されるアルファ粒子の高エネルギーに起因する優れた治療効果（すなわち、標的細胞におけるＤＮＡ損傷のレベルの高さ）を達成可能にすると考えられている。さらに、本発明者らは、驚くべきことに、アルファ放射標識ガストリンアナログの使用は、ＣＣＫＢＲを内因的に発現する健康な組織（例えば、胃の中）および／または標的細胞周囲において有害な副作用（毒性）をもたらさないことを観察した。これらの結果は、本発明の化合物が健康な組織において低レベルの集積を示し、また、アルファ放射性核種の短い浸透範囲（すなわち、クロスファイア効果の減少）に起因して、周辺組織へのアルファ放射性核種の好ましくない放射も有意に減少すると推測される。これは、１７７Ｌｕなどの他の放射性核種が、その長い浸透範囲（クロスファイア効果）に起因して、周囲の健康な組織に損傷を与える可能性があることと対照的である。
【0048】
本発明のアルファ放射標識ガストリンアナログは、下記式（１）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］で表される化合物である。
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｘｘ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （１）
［式中、
Ａｘｘは、メチオニンと等価なアミノ酸を表し、Ｙは、アルファ放射性核種をキレートする部分を表す］で表される化合物である。
【0049】
一実施形態において、Ａｘｘは、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、２－アミノ－５－ヘプテン酸、ホモノルロイシン（ホモＮＩｅ）、ホモシステイン（ホモＣｙｓ）、２－アミノ－４－メトキシブタン酸、テルロメチオニン（Ｔｅ－Ｍｅｔ）、セレノメチオニン（Ｓｅ－Ｍｅｔ）およびフェニルグリシン（Ｐｈｇ）からなる群から選択されるメチオニンと等価なアミノ酸を表す。好ましくは、Ａｘｘは、Ｎｌｅである。
【0050】
一実施形態において、Ｙは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ）、２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－１，４，７，１０，１３，１６－六酢酸（ＨＥＨＡ－ＮＣＳ）、［６，６’－（｛９－ヒドロキシ－１，５－ビス（メトキシカルボニル）－２，４－ジ（ピリジン－２－イル）－３，７－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－３，７－ジイル｝ビス（メチレン）ジピコリン酸］（Ｈ２Ｂｉｓｐａ２）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｍａｃｒｏｐａ）、６－［［１６－［（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル］－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカ－７－イル］メチル］－４－イソチオシアナトピリジン－２－カルボン酸（Ｍａｃｒｏｐａ－ＮＣＳ）、ビス（フェニルイミノジアセテート）－ジアザクラウンエーテル（Ｍａｃｒｏｐｉｄ）またはｔ－Ｂｕ－カリックス［４］アレーンテトラカルボン酸から誘導される部分を表す。好ましくは、Ｙは、ＤＯＴＡまたはＨＥＨＡから誘導される部分を表す。より好ましくは、Ｙは、ＤＯＴＡである。
【0051】
好ましい実施形態において、ＡｘｘはＮｌｅであり、ＹはＤＯＴＡである。以下において、この化合物は、「ＰＰ－Ｆ１１Ｎ」と表記する。
【0052】
一実施形態において、アルファ放射性核種は、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈから選択される。好ましくは、アルファ放射性核種は、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、２２５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２１２Ｐｂ、２２６Ｔｈおよび２２７Ｔｈから選択される。より好ましくは、アルファ放射性核種は、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃおよび１４９Ｔｂから選択され、最も好ましくは、アルファ放射性核種は２２５Ａｃである。
【0053】
一実施形態において、アルファ放射性核種は、以下の（ｉ）および（ｉｉ）：
（ｉ）２０ｋｅＶ／μｍ～１９０ｋｅＶ／μｍ、好ましくは３０ｋｅＶ／μｍ～１６０ｋｅＶ／μｍ、より好ましくは５０ｋｅＶ／μｍ～１５０ｋｅＶ／μｍ、特に約８０ｋｅＶ／μｍの線エネルギー付与（ＬＥＴ）；ならびに
（ｉｉ）２０μｍ～１５０μｍ、好ましくは３０μｍ～１２０μｍ、より好ましくは４０μｍ～１００μｍの組織浸透範囲（ＴＰＲ）
のうちの少なくとも１つ、好ましくは両方を満たす。
（ｉ）２０ｋｅＶ／μｍ～１９０ｋｅＶ／μｍ、好ましくは３０ｋｅＶ／μｍ～１６０ｋｅＶ／μｍ、より好ましくは５０ｋｅＶ／μｍ～１５０ｋｅＶ／μｍ、特に約８０ｋｅＶ／μｍの線エネルギー付与（ＬＥＴ）；ならびに
（ｉｉ）２０μｍ～１５０μｍ、好ましくは３０μｍ～１２０μｍ、より好ましくは４０μｍ～１００μｍの組織浸透範囲（ＴＰＲ）
のうちの少なくとも１つ、好ましくは両方を満たす。
【0054】
より好ましい実施形態において、アルファ放射標識ガストリンアナログは、下記式（２）：
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］で表される。以下において、この化合物は、「２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ」と表記する。
Ｙ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２ （２）
［式中、Ｙは、２２５ＡｃをキレートするＤＯＴＡから誘導される部分を表す］で表される。以下において、この化合物は、「２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ」と表記する。
【0055】
アルファ放射標識ガストリンアナログは、ヒトの医学における使用のための医薬組成物の形態で提供することができる。そのような組成物は、典型的には、治療有効線量の本発明のアルファ放射標識ガストリンアナログと、１つ以上の他の成分、例えば担体、希釈剤等とを含む。一態様において、医薬組成物は、ｍＴＯＲ阻害剤、特にラパマイシンおよび／またはラパログ（rapalog）を含むことができる。別の態様において、医薬組成物は、ｍＴＯＲ阻害剤、特にラパマイシンおよび／またはラパログを含まない。この関連における「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）を阻害する化合物を指す。「ラパマイシン」（シロリムス）という用語は、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）を阻害することによって免疫抑制特性を示すことが当該技術分野で知られているマクロライド化合物を指し、一方、「ラパログ」（「ラパマイシン－アナログ」の略）という用語は、ＦＫ結合タンパク質１２に結合することによって複合体１（ｍＴＯＲＣ１）の哺乳類ラパマイシン標的タンパク質を阻害することが知られているラパマイシンに構造的に関連する化合物のクラスを指す。ラパログの例としては、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、テムシロリムス（ＣＣＩ－７７９）およびリダホロリムス（ＡＰ－２３５７３、ＭＫ－８６６９）が挙げられる。
【0056】
４．疾患の処置方法における化合物の使用
本発明の化合物は、１つ以上のＣＣＫＢＲ陽性疾患の処置方法に使用することができる。処置は、治療的および／または予防的処置とすることができ、その目的は、腫瘍細胞の標的破壊を介してＣＣＫＢＲ陽性疾患の進行を予防、低減または停止することである。いくつかの態様において、処置は、処置を受けない場合に予想される生存期間と比較して、患者の生存期間を延長することができる。
本発明の化合物は、１つ以上のＣＣＫＢＲ陽性疾患の処置方法に使用することができる。処置は、治療的および／または予防的処置とすることができ、その目的は、腫瘍細胞の標的破壊を介してＣＣＫＢＲ陽性疾患の進行を予防、低減または停止することである。いくつかの態様において、処置は、処置を受けない場合に予想される生存期間と比較して、患者の生存期間を延長することができる。
【0057】
ＣＣＫＢＲ陽性疾患の処置方法は、１つ以上のＣＣＫＢＲ陽性疾患と診断されたヒト対象に、治療有効線量のアルファ放射標識ガストリンアナログ（またはそれを含む医薬組成物）を投与するステップを含む。対象に投与されるアルファ放射標識ガストリンアナログは、上述の式（１）で表される化合物である。好ましくは、対象に投与される化合物は、アルファ放射性核種で標識されたＰＰ－Ｆ１１Ｎである。
【0058】
好ましい一実施形態において、対象に投与されるアルファ放射標識ガストリンアナログは、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎである。
【0059】
処置すべきＣＣＫＢ受容体（陽性）疾患は、標的細胞がＣＣＫＢＲの発現によって特徴付けられる（ＣＣＫＢＲ陽性）ことを条件として、特に限定されない。一実施形態において、処置すべきＣＣＫＢ受容体陽性疾患は、胃（stomach）癌（ＧＣ）、膵臓腺癌（ＰＡＤＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、肺外小細胞癌（ＥＰＳＣＣ）、甲状腺髄質癌（ＭＴＣ）、グリオーマ（例えば星状細胞腫）、胃腸膵神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、結腸癌、卵巣癌、乳癌、および任意のＣＣＫＢ受容体陽性癌または腫瘍から選択される。
【0060】
一実施形態において、処置すべきＣＣＫＢ受容体陽性疾患は、ＳＣＬＣ、ＥＰＳＣＣおよびＭＴＣから選択される。好ましくは、処置すべきＣＣＫＢ受容体陽性疾患は、ＳＣＬＣおよび／またはＭＴＣである。より好ましくは、ＣＣＫＢ受容体陽性疾患は、ＭＴＣである。
【0061】
さらに、本発明の化合物、例えば、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎは、進行（転移）期に達した前述の疾患のうちの少なくとも１つと診断された対象に投与した場合に、放出されたアルファ粒子が、播種性癌細胞において高レベルのＤＮＡ二本鎖切断をもたらすことができるため、優れた治療効果を示すことが予想される。これは、ルテチウム－１７７などの他の放射性核種が、ＤＮＡ修復機構の活性化および放射線抵抗性におそらく起因して、播種性疾患処置の効果が不十分であり得るのとは対照的である。したがって、処置すべき疾患は、進行期の任意のＣＣＫＢ受容体陽性疾患、好ましくは進行期の前述のＣＣＫＢ受容体陽性疾患、特に転移性ＭＴＣまたは転移性ＳＣＬＣから選択される１つ以上であり得る。
【0062】
観察される治療効果は、癌細胞数の減少、腫瘍サイズの縮小、癌細胞の末梢臓器への浸潤の抑制もしくは遅延、腫瘍増殖の抑制、および／またはＣＣＫＢＲ陽性疾患に関連する症候の１つ以上の緩和であり得る。
【0063】
治療有効線量は、日常的に医師によって決定可能である。任意の特定の対象／患者に対する線量レベルおよび投与頻度は変化し得、使用される化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用時間、患者の年齢、体重、総合的な健康状態、性別、食事、投与の方式および時間、排泄率、薬物の組み合わせ、特定の症状の重症度、ならびに治療を受けている個体を含む様々な要因に依存する。これらの要因は、治療有効線量を決定する際に医師によって考慮される。
【0064】
一実施形態において、患者に投与されるアルファ放射標識ガストリンアナログの治療有効線量は、１０～４０，０００ｋＢｑ／ｋｇのものである。好ましくは、治療有効線量は、３０～１，０００ｋＢｑ／ｋｇ、より好ましくは、５０～２００ｋＢｑ／ｋｇのものである。アルファ放射標識ガストリンアナログは、１日１回または数回投与することができる。
【0065】
分子は、１回で、または一連の処置にわたって、すなわち１回以上の投与サイクルにわたって患者に投与することができる。特に、本化合物は、２～１０週間のサイクルごとに１回または２回、好ましくは４～８週間のサイクルごとに１回、より好ましくは６週間のサイクルごとに１回または８週間のサイクルごとに１回、対象に投与することができる。化合物が１サイクル当たり２回投与される場合、治療有効線量は２つの半線量に分割され、これらがサイクルの経過にわたって別々に投与される。サイクルの数は、１サイクル～最大１０サイクル、好ましくは２サイクル～８サイクル、より好ましくは４サイクル～６サイクルとすることができる。
【0066】
一態様において、本化合物は、以下の投与パターンのうちの１つに従って対象に投与される：
（Ａ）少なくとも２回の６週間サイクルについて６週間サイクルごとに１回、好ましくは３回の６週間サイクルについて６週間サイクルごとに１回；または
（Ｂ）少なくとも２回の８週間サイクルについて８週間サイクルごとに１回、好ましくは、３回の８週間サイクルについて８週間サイクルごとに１回。
（Ａ）少なくとも２回の６週間サイクルについて６週間サイクルごとに１回、好ましくは３回の６週間サイクルについて６週間サイクルごとに１回；または
（Ｂ）少なくとも２回の８週間サイクルについて８週間サイクルごとに１回、好ましくは、３回の８週間サイクルについて８週間サイクルごとに１回。
【0067】
一実施形態において、１つ以上のＣＣＫＢＲ陽性疾患と診断された患者は、本化合物の投与前に、以下の（ａ）～（ｈ）のうちの１つ以上を満たす：
（ａ）１．５×ＵＬＮ以下の血清クレアチニンまたは慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ－ＥＰＩ）式に基づく５０ｍＬ／分超の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
（ｂ）１５００細胞／μＬ以上の血中絶対好中球数（ＡＮＣ）；
（ｃ）１００，０００細胞／μＬ以上の血小板数；
（ｄ）９ｇ／ｄＬ以上の血中ヘモグロビン；
（ｅ）３×ＵＬＮ以下のＡＳＴまたはＡＬＴ；
（ｆ）２０ｇ／Ｌ超の血清アルブミン；
（ｇ）２．５ｍｇ／ｄＬ以下の総ビリルビン；
（ｈ）５×ＵＬＮ未満のアルカリフォスファターゼ。
（ａ）１．５×ＵＬＮ以下の血清クレアチニンまたは慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ－ＥＰＩ）式に基づく５０ｍＬ／分超の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
（ｂ）１５００細胞／μＬ以上の血中絶対好中球数（ＡＮＣ）；
（ｃ）１００，０００細胞／μＬ以上の血小板数；
（ｄ）９ｇ／ｄＬ以上の血中ヘモグロビン；
（ｅ）３×ＵＬＮ以下のＡＳＴまたはＡＬＴ；
（ｆ）２０ｇ／Ｌ超の血清アルブミン；
（ｇ）２．５ｍｇ／ｄＬ以下の総ビリルビン；
（ｈ）５×ＵＬＮ未満のアルカリフォスファターゼ。
【0068】
一実施形態において、本方法は、対象が上記（ａ）～（ｈ）の１つ以上を満たすかどうかを判定するステップを含むことができる。
【0069】
一実施形態において、化合物は、注射によって、特に静脈内注射によって、対象に投与される。これに関連して、化合物は、水性担体（例えば、水または０．９％塩化ナトリウム）などの薬学的に許容され得る注射用担体中の溶液として提供することができる。有効線量は、１～２００ｍＬ、好ましくは５～５０ｍＬ、例えば約１０ｍＬの容量で投与することができる。注入速度は、３５～６０ｍＬ／ｈ、例えば約５０ｍＬ／ｈとすることができる。
【0070】
一実施形態によれば、本方法は、以下のステップ：
（α）薬学的に許容され得る注射用担体に化合物を溶解して化合物の注射用溶液を得ることによって、化合物の注射用溶液を調製するステップと、
（β）ステップ（α）から得られた化合物の注射用水溶液を、好ましくは、２０～６０分、例えば３０～４５分の注入期間にわたって３５～６０ｍＬ／ｈ、例えば５０ｍＬ／ｈの注入速度で患者に投与するステップと
を含む。
（α）薬学的に許容され得る注射用担体に化合物を溶解して化合物の注射用溶液を得ることによって、化合物の注射用溶液を調製するステップと、
（β）ステップ（α）から得られた化合物の注射用水溶液を、好ましくは、２０～６０分、例えば３０～４５分の注入期間にわたって３５～６０ｍＬ／ｈ、例えば５０ｍＬ／ｈの注入速度で患者に投与するステップと
を含む。
【0071】
更なる一実施形態によれば、本化合物は、化学療法剤、免疫調節剤、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）またはヒスタミンＨ２受容体拮抗剤などの１つ以上の他の治療剤もしくは治療と同時に、その前および／または後に投与される。
【0072】
一態様において、化合物（またはそれを含む医薬組成物）は、ラパマイシンおよび／またはラパログと組み合わせて（すなわち、同時に、その前および／または後に）投与される。更なる一態様では、本化合物は、エベロリムスと組み合わせて（すなわち、同時に、その前および／または後に）投与される。さらに別の態様では、本化合物は、ラパマイシンおよび／またはラパログと組み合わせて（すなわち、同時に、その前および／または後に）投与されることはない。
【0073】
一実施形態において、本発明の化合物は、化学療法剤および／または免疫調節剤などの１つ以上の他の治療剤もしくは治療と同時に、その前または後に投与することができる。使用され得る治療剤または治療薬の例としては、アルキル化剤、アルカロイドまたはキナーゼ阻害剤などの抗腫瘍剤、免疫調節剤、およびそれらの薬学的に許容され得る塩および誘導体が挙げられる。
【0074】
５．アルファ放射標識ガストリンアナログの調製
以下では、放射標識ガストリンアナログの調製のための方法を提供する。ガストリンアナログは、オンレジンペプチドカップリングおよび収束戦略を含む、標準的なＦｍｏｃベースの固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）に依存して合成することができる。本発明のガストリンアナログを調製し、放射標識するために使用することができる一般的な戦略および方法論は、当業者によく知られており、また、以下にさらに記載される。
以下では、放射標識ガストリンアナログの調製のための方法を提供する。ガストリンアナログは、オンレジンペプチドカップリングおよび収束戦略を含む、標準的なＦｍｏｃベースの固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）に依存して合成することができる。本発明のガストリンアナログを調製し、放射標識するために使用することができる一般的な戦略および方法論は、当業者によく知られており、また、以下にさらに記載される。
【0075】
いくつかの態様において、本開示は、２２５Ａｃなどのアルファ放射性核種で標識された化合物を精製し、その純度を測定するための方法を提供する。アルファ放射標識化合物、例えば２２５Ａｃ標識化合物の精製および品質管理は、アルファ放射性核種が通常α崩壊を示すが、場合によってはγ放出を示さない短距離放射源であるため、特に困難である可能性がある。したがって、アルファ放射性核種で標識された化合物は、従来の放射線写真撮影システムでは（直接）検出できない可能性がある。さらに、精製溶液中の濃度が低い（典型的には、ピコモル範囲）ため、標準的な検出方法、例えば紫外線吸光法によるアルファ放射標識化合物の検出が不可能な場合もある。
【0076】
したがって、本発明者らは、アルファ放射標識化合物を精製し、その純度を測定する方法を開発した。この方法を、２２５Ａｃで標識されたＤＯＴＡ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２（２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）を例示的な化合物として用いて以下に記載する。
【0077】
（１）キレート部分を含む化合物（例えば、ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）を２２５Ａｃで標識し（例えば、後述のように溶液中で化合物を２２５Ａｃと反応させて）、標識液をクロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）により精製し、溶出液のフラクションを回収する。
【0078】
（２）フラクションをサンプリングし、適切な溶媒系（例えば、水／アセトニトリル、４０／６０、ｖ／ｖ中の０．１Ｍコハク酸）を用いて、固定相を含む固体支持体上（例えば、ＴＬＣプレート上）で個別に展開（溶出）し、その後、標識溶液中に存在する（結合していない）γ線放出核種が減衰し、２２５Ａｃに由来する娘核種（２２５Ａｃのα崩壊により生成）のみが存在するまで、所定の期間（例えば、６～２４時間の期間）静置させる。
【0079】
（３）プレートの活性分布を測定し、フラクションに含まれる２２５Ａｃ－標識化合物の純度を測定することができる。
【0080】
ＴＬＣ上の活性分布は、Ｃｙｃｌｏｎｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｓｔｏｒａｇｅ蛍光体システムおよびＭｕｌｔｉＳｅｎｓｉｔｉｖｅまたはＳｕｐｅｒ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｔｏｒａｇｅ蛍光体スクリーン（PerkinElmer社（スイス国）から入手可能）を使用して測定することができ、これらは適切に較正されていてもよい。測定を行うには、蛍光体スクリーン（白色ライトボックスで予備的消去）をＴＬＣプレートに照射し、Ｃｙｃｌｏｎｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ放射性物質画像撮影システムに設置し、スキャンする。露光時間（蛍光体スクリーン→ＴＬＣプレート）は、１～６０分、好ましくは２～１０分、より好ましくは２分とすることができる。回収したフラクション中の化合物の純度／定量の測定は、ＯｐｔｉＱｕａｎｔ（登録商標）ソフトウェアを用いて行うことができる。
【0081】
上記の方法により、アルファ放射標識化合物を高感度で検出および定量することができる。
【0082】
６．実施例
６．１略語のリスト
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ変法イーグル培地
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＴＴ：ジチオスレイトール
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化法
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
ＨＡＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＢＴＵ：３－［ビス（ジメチルアミノ）メチリウミル］－３Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＵ：国際単位
ＭＳ：質量分析
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＳＱＤ：シングル四重極検出器
ＳＰＥＣＴ：単光子放射型コンピュータ断層撮影法
ＳＰＰＳ：固相ペプチド合成法
ＴＢＳＴ：Ｔｗｅｅｎ２０入りトリス緩衝生理食塩水
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー
６．１略語のリスト
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ変法イーグル培地
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＴＴ：ジチオスレイトール
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化法
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
ＨＡＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＢＴＵ：３－［ビス（ジメチルアミノ）メチリウミル］－３Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＵ：国際単位
ＭＳ：質量分析
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＳＱＤ：シングル四重極検出器
ＳＰＥＣＴ：単光子放射型コンピュータ断層撮影法
ＳＰＰＳ：固相ペプチド合成法
ＴＢＳＴ：Ｔｗｅｅｎ２０入りトリス緩衝生理食塩水
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー
【0083】
６．２ 材料および方法
本発明の化合物の調製および評価には、以下の材料および方法を使用することができる。
本発明の化合物の調製および評価には、以下の材料および方法を使用することができる。
【0084】
６．２．１ 細胞培養、トランスフェクションおよび処理
前述（Aloj et al., J Nucl Med 2004, 45(3), 485-94）のとおり生成されたＣＣＫＢＲを過剰発現するヒト類表皮癌Ａ４３１安定細胞株を、１０％ＦＢＳ（Bio Concept社、スイス国）、２ｍＭグルタミンおよび抗生物質（０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ＩＵペニシリン）を添加したＤＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２を含む加湿型インキュベーター内で培養することができる。
前述（Aloj et al., J Nucl Med 2004, 45(3), 485-94）のとおり生成されたＣＣＫＢＲを過剰発現するヒト類表皮癌Ａ４３１安定細胞株を、１０％ＦＢＳ（Bio Concept社、スイス国）、２ｍＭグルタミンおよび抗生物質（０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ＩＵペニシリン）を添加したＤＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２を含む加湿型インキュベーター内で培養することができる。
【0085】
６．２．２ ガストリンアナログの調製
本明細書に記載されるガストリンアナログは、Ａｃｔｉｖｏ－Ｐ－１１自動ペプチド合成装置（Activotec社）およびリンクアミドレジン（投入：０．６０ｍｍｏｌ／ｇ；Novabiochem社）を用いたオンレジンペプチドカップリングおよび収束戦略を含む標準ＦｍｏｃベースのＳＰＰＳによって調製することができる。
本明細書に記載されるガストリンアナログは、Ａｃｔｉｖｏ－Ｐ－１１自動ペプチド合成装置（Activotec社）およびリンクアミドレジン（投入：０．６０ｍｍｏｌ／ｇ；Novabiochem社）を用いたオンレジンペプチドカップリングおよび収束戦略を含む標準ＦｍｏｃベースのＳＰＰＳによって調製することができる。
【0086】
アミド結合形成のためのカップリング反応は、ＤＩＥＡ（６当量）の存在下、ＨＢＴＵ（２．９当量）で活性化した３当量のＦｍｏｃアミノ酸を用いて室温で３０分かけて行う。Ｆｍｏｃ脱保護は、ＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液で行う。Ｎ末端標識部分のカップリングは、ＤＩＥＡ（６当量）の存在下、ＨＡＴＵ（２．９当量）で活性化した３当量のＤＯＴＡトリス－ｔ－Ｂｕエステル（Novabiochem社）を用いて室温で３０分かけて行う。
【0087】
ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９５／２．５／２．５、ｖ／ｖ／ｖ）で６０分間処理し、側鎖を同時に脱保護した状態でレジンからペプチドを切断する。切断混合物を濃縮した後、粗ペプチドを冷ジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離を行う。
【0088】
ペプチドは、ＸＳｅｌｅｃｔペプチドＣＳＨ Ｃ１８ ＯＢＤ Ｐｒｅｐカラム（１３０Å、５μｍ、１９ｍｍ×１５０ｍｍ）を備えたＳＱＤ質量分析計に結合したＷａｔｅｒｓ Ａｕｔｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＨＰＬＣシステムで、溶媒系Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）およびＢ（アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ）を用いて流速２５ｍＬ／分で３０分にわたってＢの２０～６０％グラジエントで精製することができる。適切なフラクションを関連付け、濃縮し、凍結乾燥する。純度は、ＣＳＨ Ｃ１８カラム（１３０Å、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）を備えたＳＱＤ質量分析計に結合したＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムで、溶媒系Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）およびＢ（アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ）を用いて流速０．６ｍＬ／分で５分にわたってＢの５～８５％グラジエントで決定する。
【0089】
ＭＳ分析は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェースを用いて、ポジティブモードおよびネガティブモードで行うことができる。
【0090】
６．２．３ ガストリンアナログの放射標識化
（ａ）アルファ放射性核種、すなわちアクチニウム－２２５で放射標識したガストリンアナログを調製するために、金属不含水中のＮ末端ＤＯＴＡコンジュゲート型のガストリンアナログＤＯＴＡ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２（ＰＰ－Ｆ１１Ｎ；上記セクション６．２．１に記載の方法で調製）のストック溶液を調製し、－２０℃で保存する（濃度：０．５８ｍＭ）。
（ａ）アルファ放射性核種、すなわちアクチニウム－２２５で放射標識したガストリンアナログを調製するために、金属不含水中のＮ末端ＤＯＴＡコンジュゲート型のガストリンアナログＤＯＴＡ－（ＤＧｌｕ）６－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－ＮＨ２（ＰＰ－Ｆ１１Ｎ；上記セクション６．２．１に記載の方法で調製）のストック溶液を調製し、－２０℃で保存する（濃度：０．５８ｍＭ）。
【0091】
６μＬの２２５Ａｃ溶液（０．１Ｍ ＨＣｌ中６ＭＢｑ；ITG GmbH社（ドイツ国）から入手可能）、１００μＬのＰＰ－Ｆ１１Ｎストック溶液（０．５８ｍｍｏｌ）、１２０μＬの酢酸アンモニウム（０．４Ｍ、ｐＨ５．５）および２１μＬのアスコルビン酸（酢酸ナトリウム緩衝液で新たに調製した１００ｍｇ／ｍＬ；全ｐＨ＝５～５．５）を、清潔で滅菌したＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）チューブ（１．５ｍＬ）中で９０℃にて１５分間加熱した。次いで、反応混合物中の任意の遊離金属を錯形成させるために、金属不含水中の０．５ｍＭ ＥＤＴＡ２μＬを加える。
【0092】
反応バッチは、オートサンプラー、放射線モニター（ＲＭ－１９、EBERLINE Instrument Corporation社、ニューメキシコ州サンタフェ）、ＵＶ検出器（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ－ＵＶ－Ｍ ＩＩ）、Dr. Maisch社製の逆相Ｃ－１８ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ＢＳ－Ｃ２３カラム（１５０×４．６ｍｍ）（５μｍ、１５０×４．６ｍｍ、ＸｔｅｒｒａＴＭ、ＭＳ、Waters社、米国）を接続した５１５ ＨＰＬＣポンプおよびＬ－７１００ポンプを備え付けたMerck Hitachi社製ＬａＣｈｒｏｍ ２Ｄ ＨＰＬＣシステムを用いて浄化することができる。移動相は、金属不含水（Ａ）およびアセトニトリル（VWR Chemicals社、米国；ＨＰＬＣ－グレード）（Ｂ）中で０．１％ＴＦＡ（Sigma-Aldrich社、米国）からなる。サンプルの注射後、溶媒Ｂ中の溶媒Ａ（６８％）を流速３ｍＬ／分で５分間かけて適用して、すべてのサンプルをカラム上に投入する。次いで、溶媒Ｂ中の溶媒Ａ（５０～１０％）のグラジエントを流速１ｍＬ／分で２５分間かけて適用し、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎと非標識ＰＰ－Ｆ１１Ｎとを分離する。２２５Ａｃ標識ＰＰ－Ｆ１１Ｎの溶出時間は、非標識ＰＰ－Ｆ１１ＮのＵＶピークの後、非標識ＰＰ－Ｆ１１Ｎよりも長くなっている。清潔で滅菌したＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）チューブに２５０μＬ １００ｍｇ／ｍＬの新鮮な酢酸ナトリウム緩衝液を入れて２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎフラクションを回収することができる。
【0093】
得られた２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎフラクションの純度は、そのサンプルを、水／アセトニトリル４０／６０（ｖ／ｖ）中の０．１Ｍコハク酸を溶離液として用いてＴＬＣプレート（ＲＰ－１８修飾シリカゲル６０でコートしたＴＬＣプレート、５×１０ｃｍ；Merck社）上で展開することにより測定することができる。ＴＬＣプレートを２４時間静置させ、その後、ＭｕｌｔｉＳｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｓｔｏｒａｇｅ蛍光体スクリーン（PerkinElmer社から入手可能）を含むカセットに設置する。２分後、蛍光体スクリーンをＣｙｃｌｏｎｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｓｔｏｒａｇｅ蛍光体システムに入れ、活性分布が測定される。
【0094】
以下の実験で使用した回収フラクション中の２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ化合物の純度は９７％であることが確認された（図７）。
【0095】
（ｂ）インジウム－１１１で放射標識したガストリンアナログ（２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処理後のＳＰＥＣＴイメージングに使用）を調製するために、２３．４ｎｍｏｌのＰＰ－Ｆ１１Ｎと１２０ＭＢｑの１１１Ｉｎ（６９．５ｐｍｏｌ、ITG GmbH社（ドイツ国）から入手可能）を０．４Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．５）９２μＬ中で調製し、０．５Ｍアスコルビン酸６６μＬを添加して９５℃で２０分標識化を行った。次いで、反応混合物中の任意の遊離金属を錯形成させるために、金属不含水中の０．５ｍＭ ＥＤＴＡ２μＬを添加する。
【0096】
インジウム取り込みは、Ｃ１８カラムを用いた標準的なＨＰＬＣで分析することができ、９５％を上回る効率に達した。標識化後に直接、ガンマカウンターを用いて、標的放射線実験用の放射標識ガストリンアナログの適切な希釈物を調製する。
【0097】
（ｃ）ルテチウム－１７７で放射標識したガストリンアナログ（比較実験に使用）を調製するために、核種／ペプチド比１：３０のＰＰ－Ｆ１１Ｎと１７７Ｌｕ（ITG GmbH社（ドイツ国）から入手可能）との溶液を０．４Ｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．５）中に調製し、９０℃で１５分間標識化を行った。
【0098】
ルテチウム取り込みは、Ｃ１８カラムを用いた標準的なＨＰＬＣで分析することができ、９５％を上回る効率に達した。標識化後に直接、ガンマカウンターを用いて、標的放射線実験用の放射標識ガストリンアナログの適切な希釈物を調製する。
【0099】
６．２．４ インビトロ放射標識ペプチド内在化アッセイ
内在化アッセイでは、１×１０６個の細胞／ウェルを６ウェルプレートで一晩培養する。翌日、ＰＢＳで洗浄した細胞を１６０Ｂｑの精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（または１００．０００ｃｐｍの１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）と共に、０．１％ＢＳＡ入りＤＭＥＭで標準組織培養条件下で２時間インキュベートした。ブロッキング実験には４μＭ ＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦペプチドを使用した。
内在化アッセイでは、１×１０６個の細胞／ウェルを６ウェルプレートで一晩培養する。翌日、ＰＢＳで洗浄した細胞を１６０Ｂｑの精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（または１００．０００ｃｐｍの１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）と共に、０．１％ＢＳＡ入りＤＭＥＭで標準組織培養条件下で２時間インキュベートした。ブロッキング実験には４μＭ ＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦペプチドを使用した。
【0100】
インキュベーション後、上清を（２×ＰＢＳ洗浄液と一緒に）回収する。次いで、細胞を０．０５Ｍ氷冷グリシン緩衝液（ｐＨ＝２）で５分間、２回インキュベートし、その後、１Ｍ ＮａＯＨで３７℃にて１５分間溶解する。回収した３つのフラクション（上清／ＰＢＳ；グリシン溶液；溶解した細胞）はすべて、Ｐａｃｋａｒｄ Ｃｏｂｒａ ＩＩ Ａｕｔｏ－Ｇａｍｍａ ｃｏｕｎｔｅｒ（PerkinElmer社、スイス国）で測定することができる。２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの内在化フラクションと膜結合フラクションとは、総活性に対する割合で示す。ブロッキングペプチドを用いた実験からの非特異的な膜結合（グリシンフラクション）または内在化（ＮａＯＨ溶解細胞）は、得られた結果から差し引いたものである。
【0101】
６．２．５ 増殖アッセイ
細胞増殖アッセイでは、４×１０３個の細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種した。翌日、異なる放射能レベルの２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（０．０１～３１６．２３ｋＢｑ／ｍＬ）をＡ４３１／ＣＣＫＢＲ細胞に加えた。２時間のインキュベーションの後、結合していない２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを含む培地を除去し、細胞を新鮮な培地でさらに２４時間インキュベートする。
細胞増殖アッセイでは、４×１０３個の細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種した。翌日、異なる放射能レベルの２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（０．０１～３１６．２３ｋＢｑ／ｍＬ）をＡ４３１／ＣＣＫＢＲ細胞に加えた。２時間のインキュベーションの後、結合していない２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを含む培地を除去し、細胞を新鮮な培地でさらに２４時間インキュベートする。
【0102】
細胞増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ非放射性細胞増殖キット（Promega AG社、スイス国）を用いて、製造者の指示に従って分析することができる。ホルマザン生成物の吸光度は、マイクロプレートリーダー（PerkinElmer社、スイス国）を用いて、６５０ｎｍを基準として５７０ｎｍで測定される。対照（未処理）細胞の吸光度を１００％の細胞生存率とする。細胞生存率５０％をもたらす２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの活性レベルを計算し、細胞殺傷における半最大有効活性レベル（ＥＡ５０）として表示した。アッセイは３回に分けて行った。
【0103】
６．２．６ＷＢ解析
ＣＣＫＢＲの発現レベルは、以下のようにウェスタンブロット解析により決定することができる：
ＣＣＫＢＲの発現レベルは、以下のようにウェスタンブロット解析により決定することができる：
【0104】
ＣＣＫＢＲに対する抗体（ａｂ７７０７７）はAbcam社（英国）から入手可能である。細胞を溶解緩衝液（５０ｍＭトリス－ＨＣｌ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ、１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、１ｍＭ ＮａＦおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Roche社）を添加したＳＤＳ０．１％）中でホモジナイズする。５０μｇのタンパク質抽出物のアリコートをＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離し、エレクトロブロッティングによりＰＶＤＦ膜（Millipore社）に転写する。膜はＴＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）中の５％スキムミルクで１時間ブロックし、ＴＢＳＴ中の２％ＢＳＡで一晩一次抗体をインキュベートし、その後ＨＲＰコンジュゲート型の二次抗体で２時間インキュベートする。タンパク質特異的なシグナルは化学発光試薬（ＥＣＬ）によって検出でき、シグナルはＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＲＴ ＥＣＬ Ｉｍａｇｅｒ（GE Healthcare社）を用いて取得できる。
【0105】
ＣＣＫＢＲ検出の前に、タンパク質ライセートを脱グリコシル化に供する。簡単に言うと、１８μＬの全細胞ライセート（約５０μｇ）を２μＬの１０×変性緩衝液（５％ＳＤＳ、０．４Ｍ ＤＴＴ）と混合し、室温で１０分間インキュベートする。次に、４μＬの１０×Ｇｌｙｃｏｂｕｆｆｅｒ（０．５Ｍ リン酸ナトリウム、ｐＨ７．５）、４μＬの１０％ Ｔｗｅｅｎ－２０、１０μＬの水を加えた。最後に２μＬのＰＮＧａｓｅ Ｆ（Sigma社）を加え、混合し、遠心分離で回収する。反応は３７℃で一晩行い、ＷＢ解析を行う。
【0106】
６．２．７ 動物実験
本研究では、ヒトＡ４３１／ＣＣＫＢＲ異種移植マウスモデルを使用する。重要なのは、Ａ４３１－ＣＣＫ２Ｒ異種移植片を持つ免疫不全マウスが、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）患者における第１相臨床試験の規制承認に必要な放射標識ミニガストリンアナログの薬物動態、生体内分布、線量測定または毒性の前臨床評価に以前に使用されていることである（Maina et al., Eur J Pharm Sci. 2016;91:236-42）。
本研究では、ヒトＡ４３１／ＣＣＫＢＲ異種移植マウスモデルを使用する。重要なのは、Ａ４３１－ＣＣＫ２Ｒ異種移植片を持つ免疫不全マウスが、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）患者における第１相臨床試験の規制承認に必要な放射標識ミニガストリンアナログの薬物動態、生体内分布、線量測定または毒性の前臨床評価に以前に使用されていることである（Maina et al., Eur J Pharm Sci. 2016;91:236-42）。
【0107】
生体内分布研究のために、０．１ｍＬの滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の２×１０６個のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ細胞を、麻酔したヌードマウス（免疫不全ＣＤ－１雌ヌードマウス；Charles Rivers社、ドイツ国）の左右脇腹（動物１匹あたり２個の腫瘍）に皮下注射（ｓ．ｃ．）する。移植から１２～１４日後、約０．１～０．２ｃｍ３のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウスに、３８ｋＢｑのＨＰＬＣ精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（０．０８ｐｍｏｌ）または１５０ｋＢｑのＨＰＬＣ精製１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（０．２１ｐｍｏｌ）を静脈内投与する。放射標識したペプチドの投与から１、４、２４、４８時間および７日後にマウスを犠牲にし、死後解剖した腫瘍および臓器の重量を測定し、それらの活性をガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｃｏｂｒａ ＩＩ Ａｕｔｏ Ｇａｍｍａ、PerkinElmer社、スイス国）で測定する。
【0108】
治療研究では、ヌードマウスに５×１０６個のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ細胞を左肩に皮下注射する。腫瘍移植の５～７日後、約０．１～０．２ｃｍ３のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウスをランダムにグループ分けし、ＰＢＳ１００μＬ中のＨＰＬＣ精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを３０、４５、６０、９０、１２０ｋＢｑ静脈内投与する。対照群にはＰＢＳ１００μＬを注射する。腫瘍の直径とマウスの体重は、作業日の間、毎日記録する。腫瘍体積は、式Ｖ＝（Ｗ２×Ｌ）／２を用いて計算する（Faustino-Rocha et al. Lab Anim. 2013, 42(6), 217-224）。ヌードマウスは、腫瘍体積が１．５ｃｍ３を超えた時点で犠牲にする。データは、対照群、３０、４５、６０ｋＢｑ群および対照群、６０、９０、１２０ｋＢｑ処置群を含む２セットの実験から得られる。
【0109】
すべての実験はスイスの動物保護法に従って行われる。
【0110】
６．２．８ ＳＰＥＣＴ／ＣＴ
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ実験では、ＨＰＬＣで精製した放射標識１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１ＮをＳｐｅｅｄＶａｃで濃縮し、ＰＢＳ１００μＬ当たり１３ＭＢｑに希釈してヌードマウスに静脈内投与した（マウス当たり１３ＭＢｑ／１００μＬ）。３０、４５および６０ｋＢｑの２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎで処置した後のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウスにおける１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの画像化は、Ｘ線コンピュータ断層撮影法と組み合わせた単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）によって行う（ｍｕｌｔｉｐｉｎｈｏｌｅ ｓｍａｌｌ－ａｎｉｍａｌ Ｎａｎｏ ＳＰＥＣＴ／ＣＴカメラ、Mediso Medical Imaging Systems社）。すべてのマウスは注射の２時間後に犠牲にし、７．５分のＣＴに続いて４５分のＳＰＥＣＴスキャンに直接使用する。画像再構成および処理は、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ ３．０ Ｐａｔｃｈ １ソフトウェアを使用することにより行う。
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ実験では、ＨＰＬＣで精製した放射標識１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１ＮをＳｐｅｅｄＶａｃで濃縮し、ＰＢＳ１００μＬ当たり１３ＭＢｑに希釈してヌードマウスに静脈内投与した（マウス当たり１３ＭＢｑ／１００μＬ）。３０、４５および６０ｋＢｑの２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎで処置した後のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウスにおける１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの画像化は、Ｘ線コンピュータ断層撮影法と組み合わせた単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）によって行う（ｍｕｌｔｉｐｉｎｈｏｌｅ ｓｍａｌｌ－ａｎｉｍａｌ Ｎａｎｏ ＳＰＥＣＴ／ＣＴカメラ、Mediso Medical Imaging Systems社）。すべてのマウスは注射の２時間後に犠牲にし、７．５分のＣＴに続いて４５分のＳＰＥＣＴスキャンに直接使用する。画像再構成および処理は、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ ３．０ Ｐａｔｃｈ １ソフトウェアを使用することにより行う。
【0111】
６．２．９ 免疫化学
ホルマリン固定したＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍のパラフィン切片を脱パラフィン化に供した。再水和したスライドは、１０ｍＭクエン酸緩衝液、ｐＨ６．０、９８℃で６０分間前処理した後、ＰＢＳ中４％無脂肪乳で９０分間インキュベートした。アビジン／ビオチンブロッカー（Invitrogen社）処理および検出には、製造元の指示に従いＡＢＣ法を用いた。Ｋｉ６７に対するモノクローナル抗体（Thermo Scientific社、ＳＰ６）については、ユーザーマニュアルに従い、自動機器試薬システム（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＸＴ、Ventana Medical System Inc.社）を使用してシグナルを記録した。ヘマトキシリンでカウンター染色した切片の画像を撮影し（ニコン社、ＹＴＨＭ）、ＩｍａｇｅＡｃｃｅｓｓ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ７およびＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて解析した（Schneider et al. Nat Methods 2012, 9(7), 671-675）。
ホルマリン固定したＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍のパラフィン切片を脱パラフィン化に供した。再水和したスライドは、１０ｍＭクエン酸緩衝液、ｐＨ６．０、９８℃で６０分間前処理した後、ＰＢＳ中４％無脂肪乳で９０分間インキュベートした。アビジン／ビオチンブロッカー（Invitrogen社）処理および検出には、製造元の指示に従いＡＢＣ法を用いた。Ｋｉ６７に対するモノクローナル抗体（Thermo Scientific社、ＳＰ６）については、ユーザーマニュアルに従い、自動機器試薬システム（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＸＴ、Ventana Medical System Inc.社）を使用してシグナルを記録した。ヘマトキシリンでカウンター染色した切片の画像を撮影し（ニコン社、ＹＴＨＭ）、ＩｍａｇｅＡｃｃｅｓｓ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ７およびＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて解析した（Schneider et al. Nat Methods 2012, 9(7), 671-675）。
【0112】
６．２．１０ バイオインフォマティクス解析および統計解析
すべての統計解析にＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．００ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓを使用した。生物学的分布研究では２つの群に対して両側不均一分散でのＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を行い、一方、治療研究では対照群とすべての２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群とを比較するためにダネットの多重比較検定と組み合わせた一元配置分散分析を用いた。Ｌｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定とＧｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定とは、処置群と対照群との異なる生存曲線を比較するために行った。エンドポイントは、生存曲線における死亡と定義した。Ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意であるとみなされる。結果は、少なくとも３つの独立した複製の平均値±標準偏差として報告される。
すべての統計解析にＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．００ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓを使用した。生物学的分布研究では２つの群に対して両側不均一分散でのＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を行い、一方、治療研究では対照群とすべての２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群とを比較するためにダネットの多重比較検定と組み合わせた一元配置分散分析を用いた。Ｌｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定とＧｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定とは、処置群と対照群との異なる生存曲線を比較するために行った。エンドポイントは、生存曲線における死亡と定義した。Ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意であるとみなされる。結果は、少なくとも３つの独立した複製の平均値±標準偏差として報告される。
【0113】
実施例１：２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎのインビトロでの内在化および細胞毒性効果
本発明のアルファ放射標識ガストリンアナログのＣＣＫＢＲに対する親和性および特異性を評価するために、精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（上記のように調製）を用いて、上記のインビトロ内在化アッセイを実施した。２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの内在化率は４５％に達し、膜結合活性は全活性に対して１％であった。その結果を図１に示す。ブロッキングペプチド（ＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦ）が存在すると、内在化率は１．４％に抑制され、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１ＮがＣＣＫＢＲ特異的に細胞内に取り込まれることが示された。１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（上記のように調製）を用いて実験を繰り返した。その結果、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎと１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎとの両化合物は、インビトロで同程度の内在化率を示すことが判明した。
本発明のアルファ放射標識ガストリンアナログのＣＣＫＢＲに対する親和性および特異性を評価するために、精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（上記のように調製）を用いて、上記のインビトロ内在化アッセイを実施した。２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの内在化率は４５％に達し、膜結合活性は全活性に対して１％であった。その結果を図１に示す。ブロッキングペプチド（ＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦ）が存在すると、内在化率は１．４％に抑制され、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１ＮがＣＣＫＢＲ特異的に細胞内に取り込まれることが示された。１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ（上記のように調製）を用いて実験を繰り返した。その結果、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎと１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎとの両化合物は、インビトロで同程度の内在化率を示すことが判明した。
【0114】
細胞毒性効果を分析するために、上述の細胞増殖アッセイを実施した。ＥＡ５０値を計算し、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置後２４時間で６．２±１．１ｋＢｑ／ｍＬに達した（データは示さず）。最大細胞毒性効果（細胞生存率０％）は、１００ｋＢｑ／ｍＬで達した。
【0115】
これらの結果は、本発明の化合物がＣＣＫＢＲ特異的な細胞取り込み（内在化率４５％）と強力な細胞毒性効果とを示すことを実証している。
【0116】
実施例２：２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎのインビボ生体内分布
本発明の化合物のインビボ生体内分布は、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを用いて上述の生体内分布研究を行うことにより評価した。
本発明の化合物のインビボ生体内分布は、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを用いて上述の生体内分布研究を行うことにより評価した。
【0117】
放射性医薬品適用から１、４、２４、４８時間後および７日後の生体内分布研究は、Ａ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を持つヌードマウスで実施した。２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの高い腫瘍取り込みが注射後１時間および４時間で観察され、それぞれ注射した活性の１３％および１１．２％／ｇ（％ｉ．Ａ．（注入放射能）／ｇ）に達した（図２）。２４時間後、４８時間後および７日後、腫瘍取り込みは予想通り減少し、それぞれ７．２％、５．７％および４．５％ｉ．Ａ．／ｇであった。健康な臓器の分析では、ＣＣＫＢＲの内因性発現により、注射１時間後（ｐ．ｉ．）に胃で１．５％ｉ．Ａ．／ｇを示した。胃の活性は２４時間以内ではほぼ同じであったが（４時間と２４時間で１．３％と１．２％ｉ．Ａ．／ｇ）、注射後４８時間と７日後では０．８％と０．３％ｉ．Ａ．／ｇに減少した。腎臓では最初の４時間で放射標識ガストリンの集積が８．１％から４．２％ｉ．Ａ．／ｇに５０％低下していることが確認された。さらに、注射後４８時間および１週間で、活性レベルは３．８％から１．２％に減少した。分析したその他の臓器では、注射後１時間で最大０．３８％から０．０２％ｉ．Ａ．／ｇに達し、１週間で０．１５％から０．０１％に減少した。
【0118】
さらに、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎは、ルテチウム－１７７標識ミニガストリンアナログ（１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ）と注射後４時間で同様の生体内分布プロファイルを示した（図３）。腫瘍への取り込みはほぼ同じであったが、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎは１７７Ｌｕ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎに比べて肝臓と骨で中程度の高い非特異的取り込みを示し、すべての分析時点において２％ｉ．Ａ．／ｇ未満に達した。
【0119】
本発明の化合物は、優れた生体内分布特性、すなわち解析された時点における優れた腫瘍－腎臓および腫瘍－胃の比率を示し、腫瘍組織における２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの特異的集積およびＣＣＫＢＲを内因的に発現する器官における２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの低い集積を示すことが判明した。さらに、身体または臓器の重量、総合的な健康状態または解剖学的構造における有意な差は観察されなかった。
【0120】
実施例３：２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎのインビボ治療効果
本発明の化合物の治療効果を評価するために、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを用いて上述の治療試験を行った。精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの５種類の用量を投与した後、免疫不全のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を有するヌードマウスの腫瘍成長および平均生存時間の評価を行った。
本発明の化合物の治療効果を評価するために、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎを用いて上述の治療試験を行った。精製２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの５種類の用量を投与した後、免疫不全のＡ４３１／ＣＣＫＢＲ腫瘍を有するヌードマウスの腫瘍成長および平均生存時間の評価を行った。
【0121】
図４に示すように、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎでの処置は、用量依存的に腫瘍の成長を有意に阻害した。全群ですべてのマウスがまだ存在する１１日目に、対照群の平均腫瘍体積は０．７８ｃｍ３に達したが、３０、４５、６０、９０および１２０ｋＢｑ２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置マウスの平均腫瘍サイズはそれぞれ０．５４（Ｐ＝０．０１４２）、０．３１（Ｐ＜０．００１）、０．１２（Ｐ＜０．００１）、０．１１（Ｐ＜０．００１）および０．０７ｃｍ３（Ｐ＜０．００１）まで縮小された。対照群では、ＰＢＳ注射後１１日目に腫瘍体積１．５ｃｍ３（エンドポイント）を超えたため、最初のマウスを安楽死させたが、３０、４５、６０、９０、１２０ｋＢｑ２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群では、最初の腫瘍がそれぞれ１２、１３、２１、３３および４４日目に１．５ｃｍ３を超えた。投与中、体重減少やその他の細胞毒性症候はなく、全群で体重の増加が観察された。対照群では体重の中等度の増加が観察されたが、これは腫瘍の成長が速かったことに起因すると推定される。
【0122】
さらに、２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎで処置すると、用量依存的に寿命が延びることが確認された。対照群の平均生存期間は１７日であったが、３０、４５、６０、９０および１２０ｋＢｑ２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ－処置マウスの平均生存期間は、それぞれ２２、２７、３４、４４および５８日に延長された。その結果を以下の表１に示す。
【0123】
【表1】
【0124】
（＊）Ｐ値は、Ｌｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定により、処置群と対照群との生存曲線の違いを比較することで取得した。
【0125】
以上の結果より、本発明の化合物は、優れた治療効果を示すと共に、健康な組織への化合物の集積による有害な副作用を防止できることが明らかとなった。
【0126】
実施例４：病理組織学的解析およびＰＥＴ／ＳＰＥＣＴイメージング
健康な臓器に対する２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの副作用（毒性）をさらに分析するために、実施例３の対照および２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置マウスから分離した腎臓および胃を、治療後期にヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）で染色した。対照群由来の臓器はＰＢＳ注射後１１～２６日目に分離されたが、６０ｋＢｑおよび１２０ｋＢｑ２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群からは３４～４９日の間に分離された。ＨＥ染色では、対照群と２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群とに差がなく（図５）、胃および腎臓におけるアルファ線治療中の急性放射線毒性の徴候がないことが示された。
健康な臓器に対する２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎの副作用（毒性）をさらに分析するために、実施例３の対照および２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置マウスから分離した腎臓および胃を、治療後期にヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）で染色した。対照群由来の臓器はＰＢＳ注射後１１～２６日目に分離されたが、６０ｋＢｑおよび１２０ｋＢｑ２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群からは３４～４９日の間に分離された。ＨＥ染色では、対照群と２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群とに差がなく（図５）、胃および腎臓におけるアルファ線治療中の急性放射線毒性の徴候がないことが示された。
【0127】
図６に示すように、４５ｋＢｑ（左の写真）および６０ｋＢｑ（右の写真）２２５Ａｃ－ＰＰ－Ｆ１１Ｎ処置群の腫瘍のないマウスにおける１１１Ｉｎ－ＰＰ－Ｆ１１ＮのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、検出できる腫瘍がないことを示している。腎臓や膀胱などの排泄器官にのみ放射性シグナルが検出された。
【0128】
これらの結果は、本発明の化合物によって達成される優れた治療効果だけでなく、健康な組織、特に胃に対する低毒性も実証するものである。アルファ放射標識ガストリン化合物の使用は、以前は出血性胃炎などの細胞毒性副作用と関連していたので、胃に対する毒性がないことは驚くべきことである（Semin Nucl Med. 2002, 32(2), 97-109）。したがって、本発明の化合物は、ＣＣＫＢＲ陽性疾患、特にＭＴＣのようなＣＣＫＢＲ陽性癌の治療方法に有効に使用することができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】
【国際調査報告】