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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-25
(54)【発明の名称】新規イミプリドン誘導体の合成とその抗癌活性の評価
(51)【国際特許分類】
C07D 471/14 20060101AFI20230818BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230818BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20230818BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230818BHJP
C07F 17/02 20060101ALI20230818BHJP
【ＦＩ】
C07D471/14 102
A61P35/00
A61K31/519
A61P43/00 111
C07F17/02 CSP
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023508532
(86)(22)【出願日】2021-08-05
(85)【翻訳文提出日】2023-04-04
(86)【国際出願番号】 HU2021050047
(87)【国際公開番号】W WO2022029459
(87)【国際公開日】2022-02-10
(31)【優先権主張番号】P2000255
(32)【優先日】2020-08-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】HU
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520404779
【氏名又は名称】エトヴェシュ ロラーンド トゥドマニュジェテム
(71)【出願人】
【識別番号】523041632
【氏名又は名称】センメルベイス エジェテム
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】アンタル チャンパイ
(72)【発明者】
【氏名】ペーター バラニー
(72)【発明者】
【氏名】タマース チュッチ
(72)【発明者】
【氏名】イムレ コバーチェー
(72)【発明者】
【氏名】バーリント アダミス
(72)【発明者】
【氏名】ゾーフィア ネーメス
(72)【発明者】
【氏名】ジョーセフ ムラーニー
(72)【発明者】
【氏名】リタ オラーネー ザボー
(72)【発明者】
【氏名】シルビア ベースエ
(72)【発明者】
【氏名】ガーボル メズー
(72)【発明者】
【氏名】ラーズロー コーヒダイ
(72)【発明者】
【氏名】エスター ライコー
(72)【発明者】
【氏名】アンゲーラ タカーツェー
(72)【発明者】
【氏名】オルソルヤ ラーン
(72)【発明者】
【氏名】ダイアーナ メゾー
【テーマコード（参考）】
4C065
4C086
4H050
【Ｆターム（参考）】
4C065AA05
4C065BB06
4C065CC06
4C065DD04
4C065EE03
4C065HH09
4C065JJ01
4C065KK09
4C065LL01
4C065PP03
4C065PP08
4C065PP09
4C065PP10
4C065PP13
4C065PP14
4C065QQ01
4C065QQ02
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB09
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC02
4H050AA01
4H050AA03
4H050AB20
4H050AB28
(57)【要約】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容し得る塩及び立体異性体（鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）に関し、これらは癌疾患の治療への使用に適用可能である。本発明はさらに、上記化合物を含む医薬組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物【化1】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロフェニル－メチル（化合物Ｉ／４４）、３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／５８）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６２）、３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９０）、４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９６）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０２）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０４）、（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニル（化合物Ｉ／１２１）、又は：
【化2】
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェロセニル（化合物Ｉ／５２）、３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６０）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６３）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０５）、又は４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０６）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６１）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６４）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１２７）、（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニル（化合物Ｉ／１３２）であり；又は
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６８）であり；又は
Ｙが３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／７３）であり；又は
Ｙが３－フルオロフェニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／４５）であり；又は
Ｙが３－（アミノメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５９）、フェロセニル（化合物Ｉ／６７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／６９）、又はフェロセニルメチル（化合物Ｉ／７０）であり；又は
Ｙがフェロセニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６５）であり；又は
Ｙがフェロセニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６６）であり；又は
Ｙが３－（メトキシカルボニルアミノメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘはフェロセニルメチル（化合物Ｉ／７１）又はフェロセニル（化合物Ｉ／７２）であり；又は
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９１）又は４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９３）であり；又は
Ｙが３－アゼチジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９２）あり；又は
Ｙが４－ピペリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９４）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９５）であり；又は
Ｙが３－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９７）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９８）であり；又は
Ｙが２－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９９）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１００）であり；又は
Ｙが４－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１０１）；３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１０８）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１０９）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１０）、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１４）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１５）、３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／１１６）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１１７）、３－アゼチジニル（化合物Ｉ／１１８）、又は４－ピペリジニル（化合物Ｉ／１１９）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１０３）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１２）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１３）、又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）であり；又は
Ｙが（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１２０）あり；又は
Ｙが
【化3】
Ｙが３，５－ジアジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３８）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３９）であり；又は
Ｙが３－チオシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４２）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４３）であり；又は
Ｙが３－セレノシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４５）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４６）でありる］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項2】
請求項１に記載の化合物［ここで、Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０６）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）であり；又は
Ｙが３，５－ジアジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３８）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３９）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項3】
請求項１に記載の化合物であって、Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項4】
医薬として使用するための、式（Ｉ）の化合物【化4】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３１）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／４６）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４９）、２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）、又は４－アミノフェニル（化合物Ｉ／８４）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／３８）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／５０）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／１２６）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
Ｙが２－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２６）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５４）であり；又は
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２７）であり；又は
Ｙが４－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２８）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５５）であり；又は
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／８１）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８６）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／８７）、又は３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／８９）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、Ｚがヒドロキシメチルである場合、Ｘは４－クロロフェニル（ラセミ体）（化合物Ｉ／１２８）、４－フルオロフェニル（Ｒ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ））、又は４－フルオロフェニル（Ｓ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｓ））であり；
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項5】
癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物【化5】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３１）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／４６）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４９）、２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）、又は４－アミノフェニル（化合物Ｉ／８４）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／３８）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／５０）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／１２６）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
Ｙが２－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２６）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５４）であり；又は
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２７）であり；又は
Ｙが４－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２８）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５５）であり；又は
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／８１）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８６）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／８７）、又は３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／８９）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、Ｚがヒドロキシメチルである場合、Ｘは４－クロロフェニル（ラセミ体）（化合物Ｉ／１２８）、４－フルオロフェニル（Ｒ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ））、又は４－フルオロフェニル（Ｓ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｓ））であり；
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
又は、立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、又はその医薬的に許容し得る塩。
【請求項6】
癌が、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、神経膠腫、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌からなる群から選択される、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項7】
請求項４～６に記載の使用のための化合物［ここで、Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物 若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項8】
請求項４～６に記載の使用のための化合物［ここで、Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【請求項9】
薬剤として使用するための、請求項１～３に記載の化合物。
【請求項10】
癌の治療に使用するための、請求項１～３に記載の化合物。
【請求項11】
癌が、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、神経膠腫、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、式（Ｉ）
の化合物、又はその医薬的に許容し得る塩及び立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ体混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）に関し、これらは、癌疾患の治療における使用に適用可能である。本発明はさらに、上記化合物を含む医薬組成物に関する。
本発明は、式（Ｉ）
【化1】
【背景技術】
【0002】
発明の背景
クラス初の低分子抗癌化合物であるイミプリドンは、置換基を有する２つの骨格窒素原子で塩基性が強化された角張った３環式複素環フレームワークを含む［式（Ｉ）で表される一般的構造を参照］。この適切に配置された理想的な数の塩基性中心と、均等に分散された潜在的な結合部位として突き出た調整可能な芳香環を含むラクタム部分とを含み、これらの明確に定義された作用機序に不可欠なイミプリドンに、多標的特徴と理想的な薬物特性を与える。癌細胞における重要なシグナル伝達経路を制御する特異的なＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、ＤＲＤ２ドーパミン受容体と呼ばれるＧＰＣＲに直接拮抗する臨床開発に関係する最初のイミプリドンであるＯＮＣ２０１（参照化合物１）の重要な標的である［１］。
クラス初の低分子抗癌化合物であるイミプリドンは、置換基を有する２つの骨格窒素原子で塩基性が強化された角張った３環式複素環フレームワークを含む［式（Ｉ）で表される一般的構造を参照］。この適切に配置された理想的な数の塩基性中心と、均等に分散された潜在的な結合部位として突き出た調整可能な芳香環を含むラクタム部分とを含み、これらの明確に定義された作用機序に不可欠なイミプリドンに、多標的特徴と理想的な薬物特性を与える。癌細胞における重要なシグナル伝達経路を制御する特異的なＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、ＤＲＤ２ドーパミン受容体と呼ばれるＧＰＣＲに直接拮抗する臨床開発に関係する最初のイミプリドンであるＯＮＣ２０１（参照化合物１）の重要な標的である［１］。
【化2】
【0003】
この分子は、アポトーシス促進性タンパク質である腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びその受容体の効率的な活性化因子としても出現し、幅広い治療指数を示す［２～４］。Klineらは、ＯＮＣ２０１が多くの悪性細胞株（例えば、ＨＣＴ－１１６、ＨＥＰＧ－２、ＭＣＦ－７、及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８）で、ＡＫＴ及び細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）経路の２重阻害を引き起こすことを明らかにし、ＯＮＣ２０１は、サブＧ１画分とカスパーゼ活性化によって測定されるアポトーシスに加えてまた、処理後２４時間という早い時期に試験された細胞株で細胞周期停止を誘導することを証明した［２］。
【0004】
前述の引用文献［１～４］は、ＯＮＣ２０１のみに関連し、他のイミプリドン誘導体を開示していない。
【0005】
著者らはまた、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）標識実験により、細胞の増殖がＯＮＣ２０１によって阻害され、このイミプリドンによる治療への反応として、４８時間以内に早期の細胞周期停止により、アポトーシスを起こさなかったもの（例えば、Ａ－５４９やＳＮＶ－４４９）も含めて、生存細胞数が大幅に減少することも確認した［２］。前臨床研究は、多種多様な癌細胞株（例えば、ＰＡＮＣ－１、ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ－ＭＢ－２３、Ｕ８７、ＨＦＦ、ＭＲＣ５、及びＷＩ－３８）に対して顕著な活性を有する非常に有望なアポトーシス抗癌剤としてのその効力を証明した［５～８］。さらに、第ＩＩ相臨床試験では、この化合物が広範囲の進行性悪性腫瘍の患者の治療に有益であることが証明されている［９］。
【0006】
上記の参考文献［５～９］に関して、これらはＯＮＣ２０１のみに関連し、他のイミプリドン誘導体を開示していないと述べることもできる。ＯＮＣ２０１の他に、WagnerらはＯＮＣ２０１の異性体を開示しており、この異性体は直鎖［４，３－ｄ］構造を有しているため本発明の対象外であるとしている［５］。Zhe-Zhu JinらはＡＺＤ－８０５５と組み合わせたＯＮＣ２０１の使用を開示しているが、これはピリド［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体であるため、本発明の対象外である［７］。
【0007】
類似体の徹底的な検索［１０］により、ＯＮＣ２１２（参照化合物２）と名付けられたトリフルオロメチル化誘導体が、ＧＰＣＲターゲティング及び腫瘍細胞死への選択的関与が強化された、より強力なイミプリドンとして特定された。
【化3】
【0008】
この化合物は、多くの異なる悪性細胞株、固形腫瘍、及び血液悪性腫瘍に対して、ナノモル濃度で著しく増強された活性をもたらした［１０］。引用文献［１０］は、Ｎ－７位に置換ベンジル基を有する、そのようなＯＮＣ２０１誘導体を開示していない。
【0009】
ＯＮＣ２０１が、ＯＮＣ２０１抵抗性腫瘍を含むいくつかのインビボモデル、例えばＰＡＮＣ－１及びｃＡＰＡＮ－２ヒト膵臓癌異種移植モデルで、膵臓癌、黒色腫、及び肝細胞癌に対する前臨床効果の改善を示したことも重要である［１１］。前記参考文献［１１］は、ＯＮＣ２０１とその誘導体ＯＮＣ２１２のみに関連し、他のイミプリドンを開示していない。Gravesらは、ＯＮＣ２０１といくつかの関連類似体がＣｌｐＰの非常に強力な活性化因子であることを示した［１２］。この引用文献［１２］は、Ｎ－７位に二置換又は三置換ベンジル基を有するＯＮＣ２０１誘導体を開示していない。
【0010】
ＴＲＡＩＬと癌に関与する酸化還元シグナル伝達経路との間の相互作用について説得力のある前臨床的証拠が開示されているため［１７］、本発明の発明者らは以前の研究［２１］で、反応性酸素種（ＲＯＳ）を生成することができるフェロセン含有置換基を有する抗増殖性イミプリドンを同定しようと試みた。一酸化窒素、スーパーオキシドアニオン、その他の形態のフリーラジカルなどの反応性酸素種（ＲＯＳ）［１８、１９］は、プログラムされた細胞死（アポトーシス）につながる生物学的調節プロセスに関与することが示されている［２０］。参考文献［２１］に基づいて、フェロセン含有１級アミンとベンジルアミンの選択から始めて、フェロセン含有誘導体と純粋な有機類似体の小さなライブラリ（ＲＯＳ生成の可能性のない参照モデルとして機能するＯＮＣ２０１及びＯＮＣ２１２を含む）が合成され試験された［２１］。インビトロ抗増殖試験の結果は、有機金属イミプリドン、特に２つのフェロセン単位を有する化合物（例えば７ｄｅ）が、ヒト悪性細胞株ＨＴ－２９、ＨＥＰＧ２、ＰＡＮＣ１、ＣＯＬＯ２０５、Ａ２０５８、及びＥＢＣ１に対して、ＯＮＣ２０１に匹敵する顕著な細胞傷害性を示すが、これらの効果は、ＯＮＣ２１２によって発揮される効果よりもかなり小さいことを示す。一方、有機イミプリドン７ａｈ及び７ａｉの効果は、ＯＮＣ２１２の効果に匹敵することが証明された［２１］。
【0011】
米国特許第１０，２３９，８７７号は、ＯＮＣ２０１として知られるリード化合物及びそのいくつかの別の置換類似体を含む、新しいクラスの４，７－ベンジル置換イミプリドン誘導体を開示している。開示された化合物は、癌治療に使用できる強力なＴＲＡＩＬ誘導物質である。
【0012】
米国特許第９，３７６，４３７号は、以下の式（参照式１）の新しい置換イミプリドン誘導体を開示している：
［ここで、Ｒ１及びＲ２は独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、カルボキシル、ハロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アラルコキシ、アラルキルチオ、アルカノイル、メルカプト、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリール、アシル、及び複素環基であり、及びここで、Ｒ１がＣＨ２－Ｐｈを表す場合、Ｒ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）を表さない］。
【化4】
【0013】
好適な化合物において、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－Ｃｌ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－チエニル）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－（４－Ｎ－ベンジル－ピペラジン）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２，４－ジ－Ｆ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＨであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）である。
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－Ｃｌ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－チエニル）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－（４－Ｎ－ベンジル－ピペラジン）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２，４－ジ－Ｆ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＨであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）である。
【0014】
米国特許第９，８４５，３２４号は、上記参照式１の他の新規置換イミプリドン誘導体を開示しており、ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アルキルフェニル、アルキルフェニルケトン、ベンジルピペラジン、アルキルチエニル、アルキルピリジニル、アルキルイソキサゾリジニル、アルキルモルホリニル、アルキルチアゾリル、及びアルキルピラジニルからなる群から選択され、ここで、アルキル、アルキルフェニル、アルキルフェニルケトン、ベンジルピペラジン、アルキルチエニル、アルキルピリジニル、アルキルイソキサゾリジニル、アルキルモルホリニル、アルキルチアゾリル、及びアルキルピラジニルは、アルキル、アルコキシル、ヒドロキシル、ペルハロゲン化アルキル、又はハロゲンで任意選択的に置換され、及びここで、Ｒ２は、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキルアルキル、好ましくはモルホリノアルキル若しくはピペラジニルアルキル基であるか、又はここで、Ｒ２は、置換ヘテロアリールアルキル、好ましくはピリジルアルキル若しくはイソキサゾリジニルアルキル基である。さらに上記引用文書は、引用文献で定義されている参照式２及び参照式３の化合物を開示している：
【化5】
【0015】
米国特許出願第２０１６／０２６４５７４号は、上記参照式１の新規置換イミプリドン誘導体を開示しており、ここでＲ１及びＲ２は、独立して水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、カルボキシル、ハロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アラルコキシ、アラルキルチオ、アルカノイル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリール、アシル、及び複素環基であり、及びここで、Ｒ１がＣＨ２－Ｐｈを表す場合、Ｒ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）を表さない。
【0016】
好適な化合物において、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－Ｃｌ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－チエニル）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－（４－Ｎ－ベンジル－ピペラジン）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２，４－ジ－Ｆ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＨであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯＯＣ（ＣＨ３）３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）である。
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－Ｃｌ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－チエニル）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２ＣＨ２－（４－Ｎ－ベンジル－ピペラジン）であり、
Ｒ１はＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２，４－ジ－Ｆ－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＨであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２－Ｐｈであり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯＯＣ（ＣＨ３）３であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）であり、
Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、及びＲ２はＣＨ２－（２－ＣＨ３－Ｐｈ）である。
【0017】
米国特許第１０，２６６，５３３号は、上記式（参照式１、参照式２、及び参照式３）の置換イミプリドン誘導体［ここで、参照式１において、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、アルキル、アルキルフェニル、アルキルフェニルケトン、ベンジルピペラジン、アルキルチエニル、アルキルピリジニル、アルキルイソキサゾリジニル、アルキルモルホリニル、アルキルチアゾリル、及びアルキルピラジニルからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル、アルキルフェニル、アルキルフェニルケトン、ベンジルピペラジン、アルキルチエニル、アルキルピリジニル、アルキルイソキサゾリジニル、アルキルモルホリニル、アルキルチアゾリル、及びアルキルピラジニルは、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、ペルハロゲン化アルキル、又はハロゲンで任意選択的に置換され、及びここで、Ｒ２は置換又は非置換ヘテロアリールアルキルであり；又は参照式２において、Ｒ１は水素であり；及び、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ独立して、水素、Ｘ、－ＣＨ３、－ＮＯ２、－ＯＣＨ３、－ＣＮ、－ＣＸＨ２、－ＣＸ２Ｈ、Ｃ２～Ｃ４アルキル、－ＣＸ３、－ＣＨ２（ＣＸ３）、－ＣＨ（ＣＸ３）２、－Ｃ（ＣＸ３）３、－ＣｐＸ２ｐ＋１、－ＯＣＸ３、－ＯＣｐＨ２ｐ＋１、－ＯＣｐＸ２ｐ＋１、ＯＲｍ、ＳＲｍ、ＮＲｍＲｎ、ＮＲｍＣ（Ｏ）Ｒｎ、ＳＯＲｍ、ＳＯ２Ｒｍ、Ｃ（Ｏ）Ｒｍ、及びＣ（Ｏ）ｍからなる群から選択され；ここで、Ｒｍ及びＲｎは、水素又はＣ１～Ｃ４アルキルから独立して選択され；及び、Ｘはハロゲンを表す］；又は、参照式４の誘導 体を開示している
［ここで、Ｒａ１、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びＲａ２及びＲａ１はそれぞれ塩素であり、又は
Ｒａ１、Ｒａ３、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ２及びＲａ４はフッ素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１及びＲａ３は塩素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１はメチルであり、Ｒａ３はフッ素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１はフッ素であり、Ｒａ３はＣＦ３である］。
【化6】
Ｒａ１、Ｒａ３、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ２及びＲａ４はフッ素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１及びＲａ３は塩素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１はメチルであり、Ｒａ３はフッ素であり、又は
Ｒａ２、Ｒａ４、及びＲａ５はそれぞれ水素であり；及びここで、Ｒａ１はフッ素であり、Ｒａ３はＣＦ３である］。
【0018】
米国特許第２０１９／０１９４２０１号は、米国特許第１０，２６６，５３３号の分割出願であり、その親出願と本質的に同じ置換イミプリドン誘導体を開示している。
【0019】
米国特許第２０１８／０１４１９４６号は、参照式５のイミダゾールピリミジンケトンを開示している
［ここで、ｎ＝０又は１であり；Ｒは、Ｈ、モノハロ又はマルチハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、窒素又は酸素などのヘテロ置換基、及び０個、１個、又は２個のヘテロ原子置換を有する６員複素環からなる群から選択され；Ａｒは、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、及びハロ置換Ｃ１～Ｃ４アルキル基からなる群から選択される少なくとも１つの置換基を有する一置換又は二置換アリール基からなる群から選択され；及びここで、ｎ＝１でＲがＨである場合、Ａｒはフェニル、２－クロロフェニル、２，４－ジフルオロフェニル、又はｏ－メチル－フェニルでもない］。Ｒの好ましい意味は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、メチル、イソブチル、メトキシ、トリフルオロメチル、モルホリニル、又はピペラジニル基である。引用文献は、５８個の特定の化合物の調製及び有効性データを開示している。
【化7】
【0020】
国際特許出願番号ＷＯ２０１８／０３１９８７は、式（参照式６）のさらなる置換４，７－ジベンジル－及び４－ベンジル－７－（チオフェニル－メチル）－イミプリドン
を開示しており、ここで、Ｖは置換ベンジル、（チオフェン－２－イル）－メチル、又は（チオフェン－３－イル）－メチル基を意味し、他の置換基は引用文献で定義されている通りである。この出願は、２７個の特定の化合物の調製及び有効性データを含む。
【化8】
【0021】
米国特許出願第２０１８／０１６２７７号は、ＯＮＣ２０１及び類似体などの新規の重水素化イミダゾ［１，２ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン化合物に関する。この文献はまた、引用文書の化合物を含む組成物を開示し、並びに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）スーパーファミリーメンバー１０をコードする遺伝子の誘導因子を投与することによって有益に治療される疾患及び状態の治療における、そのような組成物の単独の又は他の治療薬と組み合わせた使用を開示する。さらに、引用された特許文書は、癌治療におけるイミプリドン誘導体の使用を開示する。従って、泌尿生殖器癌の治療における化合物ＯＮＣ２０１の使用は、米国特許第１０，４５６，４０２号に開示されている。
【0022】
米国特許第９，６８８，６７９号は、白血病の治療におけるＯＮＣ２０１の使用を開示している。
【0023】
国際特許出願番号ＷＯ２０１７／１３２６６１は、クラスＡのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）又はクラスＡのＧＰＣＲシグナル伝達経路の活性の選択的調節を必要とする被験体における疾患、障害、又は状態を治療又は予防するための、特に中枢神経系腫瘍、脳腫瘍、末梢神経系腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、神経内分泌腫瘍、膵臓癌、前立腺癌、子宮内膜癌、血液悪性腫瘍、及びリンパ系腫瘍からなる群から選択される癌を治療するための、上記参照式１の化合物の使用を開示している。好適な化合物は、ＯＮＣ２０１、２０６、２１２、２０１３、及び２３６である。
【0024】
米国特許第１０，１７２，８６２号及び第１０，３６９，１５４号は、正中神経膠腫の治療のための化合物ＯＮＣ２０１の使用を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0025】
最先端のものと比較して増強された抗癌活性を有し、これらの化合物を医学での使用に適したものにする新規化合物が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0026】
本発明による発見
イミプリドンの残りのメンバーの構造的特徴の綿密な研究により、我々は、本発明に関連する、７位に結合した３，５－二置換ベンジル基を含む新規イミプリドン誘導体が増強された抗癌活性を有することを発見した。
イミプリドンの残りのメンバーの構造的特徴の綿密な研究により、我々は、本発明に関連する、７位に結合した３，５－二置換ベンジル基を含む新規イミプリドン誘導体が増強された抗癌活性を有することを発見した。
【図面の簡単な説明】
【0027】
【図1】ＰＣ３ヒト前立腺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図2】ＬＮＣａｐヒト前立腺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図3】ＢｘＰＣ３膵臓癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図4】ＭｉａＰａＣａ２膵臓癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図5】Ｐａｎｃ１膵臓癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図6】Ａ５４９肺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図7】ＨＣＣ８２７肺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図8】Ｈ１９９３肺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図9】Ｈ５２０肺癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図10】ＭＤＡ－ＭＢ－４５３乳癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図11】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌細胞株で実施されたインビトロ試験の結果に基づいて作成されたＩＣ５０曲線。
【図12】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図13】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）によって得られた用量応答曲線。
【図14】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／３（ＣＺＴ－０２１）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図15】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）によって得られた用量応答曲線。
【図16】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図17】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１１１（ＴＢＰ－２７２）によって得られた用量応答曲線。
【図18】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１４９（ＴＢＰ－３５３）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図19】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１３３（ＴＢＰ－４００）によって得られた用量応答曲線。
【図20】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）によって得られた用量応答曲線。
【図21】ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ、及びＰＣ－３細胞株について化合物Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）によって得られた用量応答曲線。
【図22】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図23】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）によって得られた用量応答曲線。
【図24】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／３（ＣＺＴ－０２１）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図25】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）によって得られた用量応答曲線。
【図26】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図27】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１１１（ＴＢＰ－２７２）によって得られた用量応答曲線。
【図28】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１４９（ＴＢＰ－３５３）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図29】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１３３（ＴＢＰ－４００）によって得られた用量応答曲線。
【図30】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）によって得られた用量応答曲線。
【図31】Ｐａｎｃ－１、Ｃａｐａｎ－１、及びＭＩＡＰａＣａ－２細胞株について化合物Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）によって得られた用量応答曲線。
【図32】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図33】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）によって得られた用量応答曲線。
【図34】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／３（ＣＺＴ－０２１）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図35】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）によって得られた用量応答曲線。
【図36】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図37】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１１１（ＴＢＰ－２７２）によって得られた用量応答曲線。
【図38】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１４９（ＴＢＰ－３５３）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図39】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１３３（ＴＢＰ－４００）によって得られた用量応答曲線。
【図40】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５及びＦａｄｕ細胞株で化合物Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）によって得られた用量応答曲線。
【図41】デトロイト５６２、ＳＣＣ－２５、及びＦａｄｕ細胞株について化合物Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）によって得られた用量応答曲線。
【図42】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図43】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）によって得られた用量応答曲線。
【図44】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／３（ＣＺＴ－０２１）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図45】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）によって得られた用量応答曲線。
【図46】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図47】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１１１（ＴＢＰ－２７２）によって得られた用量応答曲線。
【図48】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１４９（ＴＢＰ－３５３）（参照）によって得られた用量応答曲線。
【図49】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１３３（ＴＢＰ－４００）によって得られた用量応答曲線。
【図50】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）によって得られた用量応答曲線。
【図51】ＥＢＣ－１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞株について化合物Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）によって得られた用量応答曲線。
【図52】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）（参照）の細胞傷害性効果。
【図53】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／３（ＣＺＴ－０２１）（参照）の細胞傷害性効果。
【図54】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）（参照）の細胞傷害性効果。
【図55】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１４９（ＴＢＰ－３５３）（参照）の細胞傷害性効果。
【図56】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）の細胞傷害性効果。
【図57】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）の細胞傷害性効果。
【図58】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）の細胞傷害性効果。
【図59】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１１１（ＴＢＰ－２７２）の細胞傷害性効果。
【図60】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１３３（ＴＢＰ－４００）の細胞傷害性効果。
【図61】Ｐａｎｃ－１細胞株に対する化合物Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）の細胞傷害性効果。
【図62】実施例２３に開示された実験における動物の体重の変化。
【図63】実施例２３に開示された実験における腫瘍体積の変化［＊ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）］。
【図64】実施例２３に開示した実験における終了後の腫瘍サイズ（重量）［＊：ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）］。
【図65】実施例２３に開示された実験の終了後の腫瘍。
【発明を実施するための形態】
【0028】
（発明の簡単な説明）
１．式（Ｉ）の化合物
［ここで、
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロフェニル－メチル（化合物Ｉ／４４）、３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／５８）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６２）、３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９０）、４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９６）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０２）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０４）、（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニル（化合物Ｉ／１２１）、又は：
であり；又は
１．式（Ｉ）の化合物
【化9】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロフェニル－メチル（化合物Ｉ／４４）、３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／５８）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６２）、３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９０）、４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９６）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０２）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０４）、（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニル（化合物Ｉ／１２１）、又は：
【化10】
【0029】
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェロセニル（化合物Ｉ／５２）、３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６０）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６３）、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０５）、又は４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０６）であり；又は
【0030】
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６１）、４－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６４）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７））、３－アジドフェニル（化合物Ｉ／１２７）、（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニル（化合物Ｉ／１３２）であり；又は
【0031】
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６８）であり；又は
【0032】
Ｙが３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／７３）であり；又は
Ｙが３－フルオロフェニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／４５）であり；又は
Ｙが３－（アミノメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５９）、フェロセニル（化合物Ｉ／６７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／６９）、又はフェロセニルメチル（化合物Ｉ／７０）であり；又は
Ｙが３－フルオロフェニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／４５）であり；又は
Ｙが３－（アミノメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５９）、フェロセニル（化合物Ｉ／６７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／６９）、又はフェロセニルメチル（化合物Ｉ／７０）であり；又は
【0033】
Ｙがフェロセニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６５）であり；又は
Ｙがフェロセニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６６）であり；又は
Ｙがフェロセニルメチルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－（アミノメチル）フェニル（化合物Ｉ／６６）であり；又は
【0034】
Ｙが３－（メトキシカルボニルアミノメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘはフェロセニルメチル（化合物Ｉ／７１）又はフェロセニル（化合物Ｉ／７２）であり；又は
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９１）又は４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９３）であり；又は
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－アゼチジニル（化合物Ｉ／９１）又は４－ピペリジニル（化合物Ｉ／９３）であり；又は
【0035】
Ｙが３－アゼチジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９２）あり；又は
Ｙが４－ピペリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９４）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９５）であり；又は
Ｙが３－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９７）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９８）であり；又は
Ｙが２－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９９）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１００）であり；又は
Ｙが４－ピペリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９４）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９５）であり；又は
Ｙが３－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９７）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／９８）であり；又は
Ｙが２－ピロリジニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／９９）又は４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１００）であり；又は
【0036】
Ｙが４－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１０１）；３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１０８）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／１０９）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１０）、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１４）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１５）、３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／１１６）、４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１１７）、３－アゼチジニル（化合物Ｉ／１１８）、又は４－ピペリジニル（化合物Ｉ／１１９）であり；又は
【0037】
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１０３）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１２）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１３）、又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）であり；又は
Ｙが（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１２０）あり；又は
Ｙが（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１２０）あり；又は
【0038】
Ｙが
である場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／１２２）あり；又は
【化11】
【0039】
Ｙが３，５－ジアジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３８）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３９）であり；又は
Ｙが３－チオシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４２）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４３）であり；又は
Ｙが３－セレノシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４５）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４６）である］、
Ｙが３－チオシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４２）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４３）であり；又は
Ｙが３－セレノシアナトフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１４５）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１４６）である］、
【0040】
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0041】
２．ポイント１に記載の化合物［ここで、
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０６）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）であり；又は
Ｙが３，５－ジアジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３８）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３９）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０６）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）であり；又は
Ｙが３，５－ジアジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３８）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３９）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0042】
３．ポイント１に記載の化合物［ここで、
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－アジドフェニル（化合物Ｉ／１０７）であり；又は
Ｙが３－アジドフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１１１）又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３３）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0043】
４．医薬として使用するための、式（Ｉ）の化合物
［ここで、
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
【化12】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
【0044】
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３１）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／４６）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４９）、２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）、又は４－アミノフェニル（化合物Ｉ／８４）であり；又は
【0045】
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／３８）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／５０）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／１２６）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
【0046】
Ｙが２－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２６）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５４）であり；又は
【0047】
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２７）であり；又は
Ｙが４－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２８）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５５）であり；又は
Ｙが４－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２８）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５５）であり；又は
【0048】
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／８１）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８６）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／８７）、又は３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／８９）であり；又は
【0049】
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、Ｚがヒドロキシメチルである場合、Ｘは４－クロロフェニル（ラセミ体）（化合物Ｉ／１２８）、４－フルオロフェニル（Ｒ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ））、又は４－フルオロフェニル（Ｓ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｓ））であり；
【0050】
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
【0051】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
【0052】
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0053】
５．癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物
［ここで、
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
【化13】
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／５）、３－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８）、３，４，５－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／９）、２，３，４－トリフルオロフェニル（化合物Ｉ／２９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４８）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／７５）であり；又は
【0054】
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３１）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／４６）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／４９）、２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）、又は４－アミノフェニル（化合物Ｉ／８４）であり；又は
【0055】
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／３８）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、２－フルオロ－４－ニトロフェニル（化合物Ｉ／５０）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は３－アミノフェニル（化合物Ｉ／１２６）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
【0056】
Ｙが２－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２６）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５４）であり；又は
【0057】
Ｙが４－（トリフルオロメチル）フェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２７）であり；又は
【0058】
Ｙが４－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／２８）又は４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／５５）であり；又は
【0059】
Ｙが４－アミノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／８１）、４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／８６）、４－ヨードフェニル（化合物Ｉ／８７）、又は３，４，５－トリメトキシフェニル（化合物Ｉ／８９）であり；又は
【0060】
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、Ｚがヒドロキシメチルである場合、Ｘは４－クロロフェニル（ラセミ体）（化合物Ｉ／１２８）、４－フルオロフェニル（Ｒ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ））、又は４－フルオロフェニル（Ｓ－鏡像異性体）（化合物Ｉ／１２９（Ｓ））であり；
【0061】
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
【0062】
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0063】
６．癌が、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、神経膠腫、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌からなる群から選択される、ポイント５に記載の使用のための化合物。
【0064】
７．ポイント４～６に記載の使用のための化合物［ここで、
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）、又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物 若しくは医薬的に許容し得る塩。
Ｙが３－フルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－メチルフェニル（化合物Ｉ／５３）であり；又は
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、４－ブロモフェニル（化合物Ｉ／３９）、４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）、又は２－メチルフェニル（化合物Ｉ／３７）であり；又は
Ｙが３，５－ジシアノフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１３６）、又は４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／１３７）であり；又は
Ｙがフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは２－ヨードフェニル（化合物Ｉ／１１）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物 若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0065】
８．ポイント４～６に記載の使用のための化合物［ここで、
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
Ｙが３，５－ジフルオロフェニルであり、ＺがＨである場合、Ｘは４－フルオロフェニル（化合物Ｉ／７）、４－（トリフルオロメチル）フェニル（化合物Ｉ／３０）、又は４－クロロフェニル（化合物Ｉ／１２４）である］、
又はこれらの立体異性体、鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、ジアステレオ異性体の混合物、若しくは医薬的に許容し得る塩。
【0066】
９．医薬として使用するためのポイント１～３に記載の化合物。
【0067】
１０．癌の治療に使用するためのポイント１～３に記載の化合物。
【0068】
１１．癌が、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、神経膠腫、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌からなる群から選択される、ポイント１０に記載の使用のための化合物。
【0069】
発明の詳細な説明
本発明は、上記項目１に記載の式（Ｉ）の化合物（ここで、前記式中の識別子は項目１に定義されている通りである）、及びその医薬的に許容し得る塩、その立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）に関する。
本発明は、上記項目１に記載の式（Ｉ）の化合物（ここで、前記式中の識別子は項目１に定義されている通りである）、及びその医薬的に許容し得る塩、その立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）に関する。
【0070】
本発明の化合物の群は、上記の式（Ｉ）の化合物（ここで、前記式中の識別子は項目２に定義されている通りである）、及びその医薬的に許容し得る塩、立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）である。
【0071】
本発明の化合物の別の群は、項目３で上述した式（Ｉ）の化合物（ここで、前記式中の識別子は項目３に定義されている通りである）、及びその医薬的に許容し得る塩、立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）である。
【0072】
本発明の化合物のさらなる群は、上記項目４で上述した式（Ｉ）の化合物（ここで、前記式中の識別子は項目４に定義されている通りである）、及びその医薬的に許容し得る塩、立体異性体（単一の鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）である。
【0073】
本発明の化合物のさらなる群は、上記項目５で上述した式（Ｉ）の化合物、及びその医薬的に許容し得る塩、立体異性体（鏡像異性体、ラセミ混合物、鏡像異性体の混合物、又はこれらの組み合わせを含む）である。上述したように本発明の化合物は、ラセミ混合物及び鏡像異性体の形態の光学異性体として、純粋であるか又は主に存在する。純粋な形態で又は他の鏡像異性体と比較して主に混合物であるラセミ混合物と鏡像異性体の両方が、本発明の主題に属することが理解される。
【0074】
本発明はまた、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、神経膠腫、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌からなる群から選択される癌疾患の治療に使用するための本発明の化合物に関する。
【0075】
先行技術に記載されたイミプリドンの残りのメンバーの構造的特徴の綿密な研究により、ＯＮＣ２３４（参照化合物１）を除いて、Ｎ－４及びＮ－７に結合した置換基の制限された多用途性以外に、既知のイミプリドンは、７位に結合した二置換又は三置換ベンジル基を含まず、アクセス可能な化学空間が未開拓であることを示していると確証することができる。この認識により、化学療法用途においてより顕著な可能性のある新規リード化合物の特定につながり、これは、抗癌活性の増強に加えて、例えば、最先端のコレクションのものよりも優れた治療ウィンドウ及びバイオアベイラビリティの点で、追加の有益な特性を有する、
【0076】
従って、反応スキーム１に示した我々の収束的合成経路に従って、複素環骨格の両末端にさまざまな一置換、二置換、及び三置換ベンジル基とアミンベースの分子断片を有する新規イミプリドンの多様性志向の合成を実行した（表１を参照）。
【0077】
ぶら下がっている骨格置換基上の官能基の範囲を拡張するために、Ｂｏｃ保護芳香族アミン残基を含む市販の構造ブロックから調製された化合物を、同時の酸触媒によるＮ－脱保護とジアゾ化、それに続くジアゾニウム→アジド交換（反応スキーム２を参照）を含むワンポット操作により、アジド誘導体に変換した（表１を参照）。銅（Ｉ）触媒作用により、２つのアジドをエチニルフェロセン及びエルロチニブと結合させ、トリアゾール結合ハイブリッドを得た（表１を参照）。
【0078】
本発明の研究の過程で、特徴的な構造活性相関（ＳＡＲ）を開示する生物学的試験の結果は、強化された細胞傷害性効果を示した新規イミプリドンのさらなるメンバーの設計及び合成における構造改良のために継続的に考慮された。先行技術から知られているイミプリドンのバイオアッセイから得られた限定されたデータセットしかアクセスできないため（ＷＯ２０１８０３１９８７Ａ１）、ＯＮＣ２１２に加えて、３つの追加の既知のハロゲン化類似体［表１のＩ／２（ＯＮＣ２１７）、Ｉ／３（２１８５８２４－９９－９Ｐ）、及びＩ／４（２１８５８２４－９８－８Ｐ）］も、生物学的試験の参照として使用するために調製された。
【0079】
段階的な改良の結果、我々は、３つの新規ハロゲン化イミプリドン［Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）、Ｉ／３０（ＴＢＰ－３０１）、及びＩ／３９（ＴＢＰ－３０２）］を、代表的な細胞株に対して約３～８ｎＭの範囲のＩＣ５０値によって特徴付けられる非常に強い細胞傷害性を示す最も強力な薬剤候補として特定した。これは、先行技術の各参照化合物に対する優位性を明確に示している（表２及び３）。我々はまた、ヒドロキシメチル置換イミプリドンＩ／１２９（Ｒ）のＲ－鏡像異性体［ＴＢＰ－３３９（Ｒ）］が、Ｓ－鏡像異性体Ｉ／１２９（Ｓ）［（ＴＢＰ－３３９（Ｓ）］よりも、ＰＡＮＣ１細胞株に対してはるかに強力な抗増殖効果を示す（ＩＣ５０＝１５ｎＭ対２６５ｎＭ：表２）ことを開示した。
【0080】
ＯＮＣ２１２、２１８５８２４－９９－９Ｐ、及びＩ／３０（ＴＢＰ－３０１）によって生じる細胞傷害性の漸進的な増加で観察される傾向から、Ｎ－７－ベンジル基の「メタ」位置へのフッ素置換基の段階的導入に関連する明確な構造活性相関を確立することができる。まったく同じ傾向が、シリーズＩ／５（ＴＢＰ－１３４）、Ｉ／６（ＴＢＰ－２１８）、Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）、Ｉ／４１（ＴＢＰ－２８５）、２１８５８２４－９８－８Ｐ Ｉ／３９（ＴＢＰ－３０２）（最も活性が高い誘導体である３，５－ジフルオロベンジル置換誘導体）の抗増殖効果でも認められる。
【0081】
本発明の化合物の調製
一般式（Ｉ）の新規イミプリドン（４位及び７位ににぶら下がっている側鎖中にＮ３、ＣＮ、ＳＣＮ、及びＳｅＣＮ置換基を含む化合物を除く）（反応スキーム１）の収束的合成は、直接的なカップリング反応と、２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール（１）、アクリル酸メチル、一級アミンタイプ３及び５などの容易に入手可能な前駆体を使用する環化反応に基づいている。
一般式（Ｉ）の新規イミプリドン（４位及び７位ににぶら下がっている側鎖中にＮ３、ＣＮ、ＳＣＮ、及びＳｅＣＮ置換基を含む化合物を除く）（反応スキーム１）の収束的合成は、直接的なカップリング反応と、２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール（１）、アクリル酸メチル、一級アミンタイプ３及び５などの容易に入手可能な前駆体を使用する環化反応に基づいている。
【化14】
【0082】
材料と方法
すべての精密化学物質は、市販の供給元（Merck、Fluorochem、Molar Chemicals、VWR）から入手し、さらに精製することなく使用した。ジオキサンはベンゾフェノンナトリウムから蒸留した。Merck Kieselgel（２３０～４００メッシュ、６０Å）をフラッシュカラムクロマトグラフィーに使用した。Buchi M-560を用いて融点（未補正）を決定した。すべての化合物の１Ｈ ＮＭＲと１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、５００（１Ｈ）及び１２５（１３Ｃ）ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒＤＲＸ－５００分光計を使用して、５ｍｍチューブ内のＣＤＣｌ３溶液中、室温で、溶媒の重水素シグナルをロックとして、ＴＭＳを内部標準として、記録した。１Ｈ及び１３ＣＮＭＲシグナルの正確な割り当てを支持するＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ、及びＮＯＥＳＹスペクトルを、標準的なBrukerパルスプログラムを使用して得た。
すべての精密化学物質は、市販の供給元（Merck、Fluorochem、Molar Chemicals、VWR）から入手し、さらに精製することなく使用した。ジオキサンはベンゾフェノンナトリウムから蒸留した。Merck Kieselgel（２３０～４００メッシュ、６０Å）をフラッシュカラムクロマトグラフィーに使用した。Buchi M-560を用いて融点（未補正）を決定した。すべての化合物の１Ｈ ＮＭＲと１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、５００（１Ｈ）及び１２５（１３Ｃ）ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒＤＲＸ－５００分光計を使用して、５ｍｍチューブ内のＣＤＣｌ３溶液中、室温で、溶媒の重水素シグナルをロックとして、ＴＭＳを内部標準として、記録した。１Ｈ及び１３ＣＮＭＲシグナルの正確な割り当てを支持するＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ、及びＮＯＥＳＹスペクトルを、標準的なBrukerパルスプログラムを使用して得た。
【0083】
反応スキーム１に示される、最終的に式（Ｉ）の化合物に至る合成工程の一般的手順
１．２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸メチル（２）
市販のヨウ化２－メチルチオ－４，５－ジヒドロイミダゾリウム（１２．２１ｇ、５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、１６ｍＬ、１１．６２ｇ、１１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解した。クロロギ酸メチル（５ｍＬ、６．１２ｇ、６５ミリモル）を、予め０℃に冷却した溶液に滴加した。反応混合物を２５℃まで温め、一晩撹拌した。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を添加し、１５分間撹拌した後、沈殿したアンモニウム塩を濾別し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた溶液を蒸発乾固した。固体残留物を水で粉砕し、濾別し、真空下で乾燥して、５を白色固体として得た。収量：５．５５ｇ（６４％）。
１．２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸メチル（２）
【化15】
【0084】
２．Ｎ－置換－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－アミン（４）
ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ（４ｍＬ：１ｍＬ）の混合物に溶解した一級アミンタイプ３（２ｍｍｏｌ）の溶液に、２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸メチル２（０．４７ｇ，２．４ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を２０時間撹拌し還流した。冷却後、反応物を真空下で濃縮し、油状残留物をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解した。溶液を３Ｍ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）、食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させた。無色の油状物をエーテルから結晶化し、さらに精製することなく、イミプリドン骨格への環化に使用した。
【化16】
【0085】
３．イミプリドン形成環化
ＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解した一級アミン５（１ｍｍｏｌ）に、アクリル酸メチル（０．２３ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間撹拌し、真空下で濃縮し、得られた粗ジプロピオン酸タイプ６を無水ＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解した。アルゴン雰囲気下で、ＮａＨ（０．１２ｇ、５ミリモル）を、予め０℃に冷却した激しく撹拌した溶液に少量ずつ加えた。得られた懸濁液を還流温度でさらに２時間撹拌し、真空下で濃縮乾固した。Ｎ－置換オキソピペリジン－３－カルボン酸メチルの粗ナトリウム塩（７）を含む得られた固体残留物を無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解した。この溶液に、上記のように別々の工程で調製したＮ－置換－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－アミン（４）（１ミリモル）を加えた。塩基性溶液をアルゴン雰囲気下で還流しながら１２時間撹拌し、次に氷水で冷却した。冷却した反応混合物を１時間撹拌し、沈殿した固体を濾過して回収し、冷メタノールで洗浄し、乾燥して、式（Ｉ）の純粋なイミプリドン生成物を生成した。
ＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解した一級アミン５（１ｍｍｏｌ）に、アクリル酸メチル（０．２３ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間撹拌し、真空下で濃縮し、得られた粗ジプロピオン酸タイプ６を無水ＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解した。アルゴン雰囲気下で、ＮａＨ（０．１２ｇ、５ミリモル）を、予め０℃に冷却した激しく撹拌した溶液に少量ずつ加えた。得られた懸濁液を還流温度でさらに２時間撹拌し、真空下で濃縮乾固した。Ｎ－置換オキソピペリジン－３－カルボン酸メチルの粗ナトリウム塩（７）を含む得られた固体残留物を無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解した。この溶液に、上記のように別々の工程で調製したＮ－置換－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－アミン（４）（１ミリモル）を加えた。塩基性溶液をアルゴン雰囲気下で還流しながら１２時間撹拌し、次に氷水で冷却した。冷却した反応混合物を１時間撹拌し、沈殿した固体を濾過して回収し、冷メタノールで洗浄し、乾燥して、式（Ｉ）の純粋なイミプリドン生成物を生成した。
【0086】
４．アミン含有イミプリドンの合成
ぶら下がっている一級アミン又は環状二級アミン部分を有する標的化合物の合成のために、Ｘ又はＹ基のいずれかにおけるモノ－Ｂｏｃ保護された対応するジアミン（３又は５）を、上記の一般的手順のカップリング成分として使用した。単離したＢｏｃ保護イミプリドン（２ｍｍｏｌ）を濃塩酸（５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を５分間加熱還流し、室温まで冷却した。次に濃水酸化カリウム水溶液によって、この溶液のｐＨを約１３～１４に設定した。沈殿したアミン生成物を濾過して回収し、冷水で十分に洗浄し、デシケーター内で水素化カリウムペレット上で乾燥した。
ぶら下がっている一級アミン又は環状二級アミン部分を有する標的化合物の合成のために、Ｘ又はＹ基のいずれかにおけるモノ－Ｂｏｃ保護された対応するジアミン（３又は５）を、上記の一般的手順のカップリング成分として使用した。単離したＢｏｃ保護イミプリドン（２ｍｍｏｌ）を濃塩酸（５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を５分間加熱還流し、室温まで冷却した。次に濃水酸化カリウム水溶液によって、この溶液のｐＨを約１３～１４に設定した。沈殿したアミン生成物を濾過して回収し、冷水で十分に洗浄し、デシケーター内で水素化カリウムペレット上で乾燥した。
【0087】
５．アジドベンジルイミプリドンの合成
対応するアミノベンジルイミプリドン（１ｍｍｏｌ）を濃塩酸（５ｍＬ）に溶解した。０℃に冷却したこの溶液に、ＮａＮＯ２の水溶液（２．５ｍＬの水に溶解した１３７．８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を滴加した。ジアゾ化反応はＴＬＣでモニターした。完了後、ＮａＮ３（３２４ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を反応混合物に０℃で添加し、次にこれを室温で１時間撹拌した。固体Ｎａ２ＣＯ３を注意深く添加することにより、溶液のｐＨを１０～１１に調整した。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×４０ｍＬ）で抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次に蒸発乾固させた。油状残留物をｎ－ヘキサンで結晶化して、生成物を無色固体として得た。
対応するアミノベンジルイミプリドン（１ｍｍｏｌ）を濃塩酸（５ｍＬ）に溶解した。０℃に冷却したこの溶液に、ＮａＮＯ２の水溶液（２．５ｍＬの水に溶解した１３７．８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を滴加した。ジアゾ化反応はＴＬＣでモニターした。完了後、ＮａＮ３（３２４ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を反応混合物に０℃で添加し、次にこれを室温で１時間撹拌した。固体Ｎａ２ＣＯ３を注意深く添加することにより、溶液のｐＨを１０～１１に調整した。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×４０ｍＬ）で抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次に蒸発乾固させた。油状残留物をｎ－ヘキサンで結晶化して、生成物を無色固体として得た。
【0088】
６．アジドベンジルイミプリドンからのアリールトリアゾリルベンジルイミプリドンの合成
対応するアジドベンジルイミプリドン（１ｍｍｏｌ）、末端アルキン成分（１ｍｍｏｌ）、及びＣｕＩ（２９．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）に溶解した。密閉容器中で、反応混合物を室温で２４時間撹拌し、水（５０ｍＬ）に注いだ。沈殿した固体を濾取して回収し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、アンモニア水溶液（２０ｍＬ）に懸濁した。懸濁液を２０分間撹拌し、濾過した。残留物を水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、ＣＨ２Ｃｌ２とＭｅＯＨの９：１混合物（１０ｍＬ）に溶解した。溶液をシリカに通し、蒸発させた。固体残留物をエーテルで結晶化した。
対応するアジドベンジルイミプリドン（１ｍｍｏｌ）、末端アルキン成分（１ｍｍｏｌ）、及びＣｕＩ（２９．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）に溶解した。密閉容器中で、反応混合物を室温で２４時間撹拌し、水（５０ｍＬ）に注いだ。沈殿した固体を濾取して回収し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、アンモニア水溶液（２０ｍＬ）に懸濁した。懸濁液を２０分間撹拌し、濾過した。残留物を水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、ＣＨ２Ｃｌ２とＭｅＯＨの９：１混合物（１０ｍＬ）に溶解した。溶液をシリカに通し、蒸発させた。固体残留物をエーテルで結晶化した。
【0089】
以下では、本発明を例示的な実施態様によって説明するが、これらは本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【0090】
実施例１：
７－（３，５－ジフルオロベンジル）－４－（４－（トリフルオロメチル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３０１）（化合物Ｉ／３０）
収量: 387 mg (81%). 融点: 168.0 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.53 及び 7.50 (AA'BB'スピンシステムのA及びB部分, JＡＢ=8.9 Hz, 2x2H, H-3",5" 及び H-2",6", resp.); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.67 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 5.06 (s, 2H, H-11); 3.88 (s, 4H, H-1 及び H-2); 3.60 (s, 2H, H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.64 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.46 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=250.2 Hz 及び 15.6 Hz, C-3',5'); 161.3 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.8 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 140.8 (C-1"); 129.6 (qa, J=32.5 Hz, C-4"); 128.8 (C-2",6"); 125.3 (qa, J=3.8 Hz, C-3",5"); 124.4 (qa, J=272.5 Hz, CF３); 111.3 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.8 (t, J=25.8 Hz, C-4'); 101.6 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.3 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 45.0 (C-11); 26.8 (C-9)。
７－（３，５－ジフルオロベンジル）－４－（４－（トリフルオロメチル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３０１）（化合物Ｉ／３０）
【化17】
【0091】
実施例２：
４－（４－ブロモベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３０２）（化合物Ｉ／３９）
収量: 271 mg (56%). 融点: 173.5 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.36 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-3",5"); 7.32 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-2",6"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 4.95 (s, 2H, H-11); 3.87 (s, 4H, H-1 及び H-2); 3.60 (s, 2H, H-10); 3.23 (br s, 2H, H-6); 2.62 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=250.2 Hz 及び 15.6 Hz, C-3',5'); 161.3 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.8 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 135.9 (C-1"); 131.4 (C-3",5"); 130.6 (C-2",6"); 121.4 (C-4"); 111.3 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.8 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.6 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 44.8 (C-11); 26.8 (C-9)。
４－（４－ブロモベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３０２）（化合物Ｉ／３９）
【化18】
【0092】
実施例３：
４－（４－フルオロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＡＢＢ－０１１）（化合物Ｉ／７）
収量: 290 mg (68%). 融点: 190.5 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.44 (dd, J=8.7 Hz 及び 5.7 Hz, 2H, H-2",6"); 6.92 (t, J=8.7 Hz, 2H, H-3",5"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=8.9 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 4.97 (s, 2H, H-11); 3.92-3.83 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.23 (br s, 2H, H-6); 2.62 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 162.2 (d, J=162.2 Hz, C-4"); 163.1 (dd, J=250.0 Hz 及び 15.2 Hz, C-3',5'); 161.4 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.5 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 132.7 (C-1"); 130.7 (d, J=7.9 Hz, C-2",6"); 115.0 (d, J=21.3 Hz, C-3",5"); 111.4 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.6 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 44.7 (C-11); 26.7 (C-9)。
４－（４－フルオロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＡＢＢ－０１１）（化合物Ｉ／７）
【化19】
【0093】
実施例４：
４－（４－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３３３）（化合物Ｉ／１２４）
収量: 332 mg (75%). 融点: 162.4 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.38 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-2",6"); 7.20 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-3",5"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 4.97 (s, 2H, H-11); 3.90-3.83 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.22 (br s, 2H, H-6); 2.62 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.2 Hz 及び 14.6 Hz, C-3',5'); 161.3 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.6 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 135.4 (C-1"); 133.2 (C-4"); 130.6 (C-2",6"); 128.4 (C-3",5"); 111.7 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.6 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 44.7 (C-11); 26.7 (C-9)。
４－（４－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３３３）（化合物Ｉ／１２４）
【化20】
【0094】
実施例５：
４－（３－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４４）（化合物Ｉ／１２５）
収量: 302 mg (68%). 融点: 204.8 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.40 (br s, 1H, H-2"); 7.30 (m, 1H, H-5"); 7.18-7.15 (m, 2H, H-4",6"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=8.9 Hz 及び 2.2 Hz, 1H, H-4'); 4.98 (s, 2H, H-11); 3.87 (br ~s, 4H, H-1 及び H-2); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.63 (t, 2H, J=5.6 Hz, H-8); 2.45 (t, 2H, J=5.6 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.6 Hz 及び 14.0 Hz, C-3',5'); 161.3 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.7 (C-9a); 142.3 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 138.8 (C-1"); 134.1 (C-3"); 128.4 (２つの合体ライン, C-2" 及び C-4"); 127.6 (C-6"); 126.8 (C-5"); 111.3 (dd, J=19.6 Hz 及び 5.1 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.3 Hz, C-4'); 101.6 (C-5a); 61.3 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 44.9 (C-11); 26.8 (C-9)。
４－（３－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４４）（化合物Ｉ／１２５）
【化21】
【0095】
実施例６：
ｒａｃ－４－（４－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４２）（化合物Ｉ／１２８（ラセミ体））
収量: 38 mg (8%). 融点: 86 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.28 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-2",6"); 7.23 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-3",5"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.67 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 6.08 (dd, J=5.1 Hz 及び 1.6 Hz, 1H, H-11); 4.31 (dd, J=12.8 Hz 及び 5.1 Hz, 1H, H-12Ａ); 4.06 (dd, J=12.8 Hz 及び 1.6 Hz, 1H, H-12Ｂ); 3.93-3.85 (m, 3H, H-1 及び H-2Ａ); 3.78 (m, 1H, H-2Ｂ); 3.60 (s, 2H, H-10); 3.24 及び 3.21 (AA'BB'スピンシステムのA及びB部分, JＡＢ=14.9 Hz, 2x1H, H-6Ａ 及び H-6Ｂ); 2.66 (m, 2H, H-8); 2.50 (m, 2H, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.2 Hz 及び 13.9 Hz, C-3',5'); 161.6 (C-5); 153.5 (C-3a); 146.0 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 135.2 (C-1"); 133.1 (C-4"); 139.0 (C-2",6"); 128.4 (C-3",5"); 111.4 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.8 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 102.4 (C-5a); 62.9 (C-12); 61.3 (C-10); 57.6 (C-11); 49.5 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.5 (C-1); 26.8 (C-9)。
ｒａｃ－４－（４－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４２）（化合物Ｉ／１２８（ラセミ体））
【化22】
【0096】
実施例７：
Ｒ－４－（４－フルオロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３３９）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ－鏡像異性体））
収量: 51 mg (11%). 融点: 76 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.36 (dd, J=8.8 Hz 及び 5.8 Hz, 2H, H-2",6"); 6.96 (t, J=8.3 Hz, 2H, H-3",5"); 6.85 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.67 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 6.09 (dd, J=5.3 Hz 及び 1.6 Hz, 1H, H-11); 4.32 (dd, J=12.8 Hz 及び 5.3 Hz, 1H, H-12Ａ); 4.07 (dd, J=12.8 Hz 及び 1.6 Hz, 1H, H-12Ｂ); 3.94-3.85 (m, 3H, H-1 及び H-2Ａ); 3.81 (m, 1H, H-2Ｂ); 3.61 (s, 2H, H-10); 3.25 及び 3.21 (ABスピンシステムのA及びB部分, JＡＢ=14.9 Hz, 2x1H, H-6Ａ 及び H-6Ｂ); 2.66 (m, 2H, H-8); 2.50 (m, 2H, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.2 Hz 及び 13.9 Hz, C-3',5'); 162.0 (d, J=245.8 Hz, C-4"); 161.6 (C-5); 153.5 (C-3a); 145.8 (C-9a); 142.1 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 132.5 (br s, C-1"); 129.4 (d, J=7.8 Hz, C-2",6"); 115.1 (d, J=21.4 Hz, C-3",5"); 111.3 (dd, J=19.6 Hz 及び 5.2 Hz, C-2',6'); 102.8 (t, J=25.6 Hz, C-4'); 102.5 (C-5a); 63.1 (C-12); 61.3 (C-10); 57.6 (C-11); 49.5 (２つの合体ライン, C-2 及び C-6); 48.3 (C-8); 46.5 (C-1); 26.8 (C-9)。
Ｒ－４－（４－フルオロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３３９）（化合物Ｉ／１２９（Ｒ－鏡像異性体））
【化23】
【0097】
実施例８：
４－（３－（アミノメチル）ベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３２４）（化合物Ｉ／６１）
収量: 376 mg (86%). 融点: 129.5 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.33 (br s, 1H, H-2"); 7.30 (br d, J=7.6 Hz, 1H, H-6"); 7.22 (t, J=7.6 Hz 1H, H-5"); 7.15 (br d, J=7.6 Hz, 1H, H-4"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=8.9 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 5.00 (s, 2H, H-11); 3.92-3.83 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.79 (s, 2H, H-12); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.63 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.45 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9); 1.77 (br s, 2H, NH
２). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.4 Hz 及び 14.1 Hz, C-3',5'); 161.5 (C-5); 153.2 (C-3a); 145.6 (C-9a); 143.2 (C-3"); 142.3 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 137.2 (C-1"); 128.6 (C-5"); 127.3 (C-4"); 127.1 (C-2"); 126.2 (C-4"); 111.4 (dd, J=20.0 Hz 及び 5.0 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.7 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.7 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 46.4 (C-12); 45.4 (C-11); 26.7 (C-9)。
４－（３－（アミノメチル）ベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３２４）（化合物Ｉ／６１）
【化24】
【0098】
実施例９：
４－（３－アミノベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４６）（化合物Ｉ／１２６）
収量: 347 mg (82%). 融点: 114.5 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.03 (t, J=7.9 Hz, 1H, H-5"); 6.85 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.82 (br d, J=7.9 Hz, 1H, H-6"); 6.75 (br s, 1H, H-2"); 6.66 (tt, J=8.9 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 6.52 (dd, J=7.6 Hz 及び 2.2 Hz, 1H, H-4"); 4.93 (s, 2H, H-11); 3.92-3.79 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.62 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9); １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.4 Hz 及び 14.1 Hz, C-3',5'); 161.5 (C-5); 153.0 (C-3a); 146.4 (C-3"); 145.3 (C-9a); 142.3 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 138.0 (C-1"); 129.2 (C-5"); 119.0 (C-6"); 115.2 (C-2"); 114.3 (C-4"); 111.4 (dd, J=20.1 Hz 及び 5.4 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.7 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.8 (C-1); 45.3 (C-11); 26.7 (C-9)。
４－（３－アミノベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４６）（化合物Ｉ／１２６）
【化25】
【0099】
実施例１０：
４－（４－アジドベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＣＺＴ－１３６）
収量: 270 mg (60%). 融点: 155.5 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.44 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-2",6"); 6.90 (d, J=8.3 Hz, 2H, H-3",5"); 6.84 (br ~dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6'); 6.66 (tt, J=9.0 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 4.97 (s, 2H, H-11); 3.91-3.84 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.59 (s, 2H, H-10); 3.23 (br s, 2H, H-6); 2.63 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=250.2 Hz 及び 15.6 Hz, C-3',5'); 161.4 (C-5); 152.9 (C-3a); 145.5 (C-9a); 142.2 (t, J=8.4 Hz, C-1'); 139.1 (C-4"); 133.8 (C-1"); 130.4 (C-2",6"); 118.9 (C-3",5"); 111.3 (dd, J=19.3 Hz 及び 4.9 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.7 (C-5a); 61.4 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 44.8 (C-11); 26.8 (C-9)。
４－（４－アジドベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＣＺＴ－１３６）
【化26】
【0100】
実施例１１：
７－（３－アジドベンジル）－４－（４－（トリフルオロメチル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－２７２）
収量: 313 mg (65%). 融点: 128.8 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.52 及び 7.50 (AA'BB'スピンシステムのA及びB部分, JＡＢ=8.9 Hz, 2x2H, H-3",5" 及び H-2",6", resp.); 7.26 (t, J=7.7 Hz, 1H, H-5'); 7.06 (d, J=7.7 Hz, 1H, H-6'); 6.99 (t, J=1.5 Hz, 1H, H-2'); 6.90 (dd, J=7.7 Hz 及び 1.5 Hz, 1H, H-4'); 5.06 (s, 2H, H-11); 3.87 (s, 4H, H-1 及び H-2); 3.61 (s, 2H,H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.64 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.45 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 161.7 (C-5); 153.0 (C-3a); 145.9 (C-9a); 140.8 (C-1"); 140.2 (C-3'); 140.0 (C-1'); 129.8 (C-5'); 129.6 (qa, J=32.5 Hz, C-4"); 128.9 (C-2",6"); 125.5 (C-6'); 125.3 (qa, J=3.5 Hz, C-3",5"); 124.4 (qa, J=272.5 Hz, CF３); 119,4 (C-2'); 118.1 (C4'); 101.7 (C-5a); 61.9 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 45.0 (C-11); 26.8 (C-9)。
７－（３－アジドベンジル）－４－（４－（トリフルオロメチル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－２７２）
【化27】
【0101】
実施例１２：
４－（３－アジドベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４７）（化合物Ｉ／１２７）
収量: 355 mg (79%). 融点: 158 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.23 (t, J=7.9 Hz, 1H, H-5"); 7.18 (br ~d, J~8 Hz 1H, H-6"); 7.10 (br s, 1H, H-2"); 6.87 (br ~d, J~8 Hz 1H, H-4"); 6.84 (br dt, J~7 Hz 及び ~2 Hz, 2H, H-2',6');6.66 (tt, J=8.9 Hz 及び 2.3 Hz, 1H, H-4'); 5.00 (s, 2H, H-11); 3.90-3.81 (m, 4H, H-1 及び H-2); 3.60 (s, 2H, H-10); 3.24 (br s, 2H, H-6); 2.63 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.45 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9); １３C-NMR (CDCl３): 163.1 (dd, J=248.4 Hz 及び 13.7 Hz, C-3',5'); 161.3 (C-5); 153.0 (C-3a); 145.6 (C-9a); 142.3 (t, J=9.0 Hz, C-1'); 140.0 (C-3"); 138.9 (C-1"); 129.7 (C-5"); 125.1 (C-6"); 121.2 (C-2"); 118.0 (C-4"); 111.4 (dd, J=20.1 Hz 及び 5.4 Hz, C-2',6'); 102.7 (t, J=25.7 Hz, C-4'); 101.7 (C-5a); 61.3 (C-10); 50.6 (C-2); 49.4 (C-6); 48.4 (C-8); 46.9 (C-1); 45.0 (C-11); 26.8 (C-9)。
４－（３－アジドベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３４７）（化合物Ｉ／１２７）
【化28】
【0102】
実施例１３：
７－ベンジル－４－（４－（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＡＢＢ－０３０）
収量: 443 mg (71%). 融点: 165.4 ｏC. １H-NMR (CDCl３): 7.81 (s, 1H, H-12); 7.65 (d, J=7.9 Hz, 2H, H-3",5"); 7.59 (d, J=7.9 Hz, 2H, H-2",6"); 7.31-7.26 (m. 4H, H-2',3',5',6'); 7.22 (m, 1H, H-4'); 5.11 (s, 2H, H-11); 4.74 (t, J=1.8 Hz, 2H, H-15,18); 4.29 (t, J=1.8 Hz, 2H, H-16,17); 4.07 (s, η５-C５
H
５); 3.87 (br s, 4H, H-1 及び H-2); 3.63 (s, 2H,H-10); 3.27 (br s, 2H, H-6); 2.63 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-8); 2.44 (t, 2H, J=5.7 Hz, H-9). １３C-NMR (CDCl３): 161.3 (C-5); 153.0 (C-3a); 147.5 (C-4'); 145.9 (C-9a); 130.1 (C-2",6"); 128.4 (C-2',6'); 127.4 (C-4'); 126.1 (C-3',5'); 120.1 (C-3",5"); 116.6 (C-12); 102.2 (C-5a); 75.0 (C-14); 69.6 (η５-C
５H５); 68.8 (C-16,17); 66.8 (C-15,18); 62.3 (C-10); 50.6 (C-2); 49.5 (C-6); 48.3 (C-8); 46.8 (C-1); 44.9 (C-11); 26.8 (C-9)。
７－ベンジル－４－（４－（４－フェロセニル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）ベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＡＢＢ－０３０）
【化29】
【0103】
実施例１４：
４－アリールメチル置換７－（３，５－ジアジドベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１３８及びＩ／１３９）の合成
アジ化ナトリウム（０．２６０ｇ、４ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．１１９ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（０．０８０ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（０．０１２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、対応する７－（３，５－ジブロモベンジル）イミプリドンＩ／１３４又はＩ／１３５（１ｍｍｏｌ）、及びＣｕＩ（０．０５７ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、脱気（アルゴンで３０分間）したＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ溶媒混合物（７：３）２０ｍＬに溶解し、還流温度で３時間加熱した。反応混合物を減圧下で元の容量の約３分の１に濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×４ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を水（３×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾紙で濾過し、濃縮する。溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９９：１）を使用してカラムクロマトグラフィーにより最終精製を行う。
４－アリールメチル置換７－（３，５－ジアジドベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１３８及びＩ／１３９）の合成
アジ化ナトリウム（０．２６０ｇ、４ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．１１９ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（０．０８０ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（０．０１２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、対応する７－（３，５－ジブロモベンジル）イミプリドンＩ／１３４又はＩ／１３５（１ｍｍｏｌ）、及びＣｕＩ（０．０５７ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、脱気（アルゴンで３０分間）したＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ溶媒混合物（７：３）２０ｍＬに溶解し、還流温度で３時間加熱した。反応混合物を減圧下で元の容量の約３分の１に濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×４ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を水（３×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾紙で濾過し、濃縮する。溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９９：１）を使用してカラムクロマトグラフィーにより最終精製を行う。
【0104】
実施例１５：
４－アリールメチル置換７－（３，５－ジシアノベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１３６及びＩ／１３７）の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の対応する７－（３，５－ジブロモベンジル）イミプリドンＩ／１３４又はＩ／１３５（１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、シアン化亜鉛（０．１８１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、１，１'－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンリガンド（ＤＰＰＦ、０．０６５ｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、及び最後にＰｄ２ｄｂａ３（４５．８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を連続して加える。フラスコを窒素でフラッシュし、油浴中１１０～１２０℃で２０時間撹拌する。室温まで冷却した後、反応混合物を真空下で蒸発させる。得られた粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液、酢酸エチル：ヘキサン（１：４））に付し、ジシアノベンジル置換イミプリドンを純粋な生成物として得る。
４－アリールメチル置換７－（３，５－ジシアノベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１３６及びＩ／１３７）の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の対応する７－（３，５－ジブロモベンジル）イミプリドンＩ／１３４又はＩ／１３５（１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、シアン化亜鉛（０．１８１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、１，１'－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンリガンド（ＤＰＰＦ、０．０６５ｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、及び最後にＰｄ２ｄｂａ３（４５．８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を連続して加える。フラスコを窒素でフラッシュし、油浴中１１０～１２０℃で２０時間撹拌する。室温まで冷却した後、反応混合物を真空下で蒸発させる。得られた粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液、酢酸エチル：ヘキサン（１：４））に付し、ジシアノベンジル置換イミプリドンを純粋な生成物として得る。
【0105】
実施例１６：
４－アリールメチル置換７－（３－チオシアナトベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１４２及びＩ／１４３）の合成
アルゴン雰囲気下で、対応する７－（３－ヨードベンジル）イミプリドン（Ｉ／１４０又はＩ／１４１）（１．０ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＣＮ（０．１２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＫＳＣＮ（０．０９５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３ｍＬ）の混合物を油浴中で撹拌しながら加熱し、１４０℃で１２時間維持する。冷却後、混合物をトルエン（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で希釈し、次にセライト床を通して濾過する。水相をトルエン（２×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮する。残留物をシリカゲル（溶離液としてヘキサン）上でクロマトグラフィーにかけてチオシアネート生成物を得て、これをヘキサンからの再結晶によりさらに精製する。
４－アリールメチル置換７－（３－チオシアナトベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１４２及びＩ／１４３）の合成
アルゴン雰囲気下で、対応する７－（３－ヨードベンジル）イミプリドン（Ｉ／１４０又はＩ／１４１）（１．０ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＣＮ（０．１２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＫＳＣＮ（０．０９５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３ｍＬ）の混合物を油浴中で撹拌しながら加熱し、１４０℃で１２時間維持する。冷却後、混合物をトルエン（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で希釈し、次にセライト床を通して濾過する。水相をトルエン（２×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮する。残留物をシリカゲル（溶離液としてヘキサン）上でクロマトグラフィーにかけてチオシアネート生成物を得て、これをヘキサンからの再結晶によりさらに精製する。
【0106】
実施例１７：
４－アリールメチル置換７－（３－セレノシアナトベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１４５及びＩ／１４６）の合成
ジオキサン（４ｍＬ）中の対応する７－（３－ヨードベンジル）イミプリドン（Ｉ／７９及びＩ／１４４）の溶液に、６Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加える。得られた懸濁液を０℃に冷却し、次に水（２ｍＬ）中のＮａＮＯ２（０．４１５ｇ、６ミリモル）をゆっくり添加する。３０分間攪拌した後、飽和ＮａＯＡｃ溶液（約３０ｍＬ）を少しずつ加えて、反応混合物のｐＨを５～６に調整する。得られた懸濁液を水（２５ｍＬ）中のＫＳｅＣＮ（０．７９３ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で注ぐ。３０分間攪拌した後、反応混合物を室温まで温め、エーテルで抽出した。有機層を水及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残留物を、シリカ上のカラムクロマトグラフィーにより溶離液として酢酸エチル－ヘキサン（１：５）を使用して精製する。
４－アリールメチル置換７－（３－セレノシアナトベンジル）－２，４，６，７，８，９－ヘキサヒドロ－イミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（化合物Ｉ／１４５及びＩ／１４６）の合成
ジオキサン（４ｍＬ）中の対応する７－（３－ヨードベンジル）イミプリドン（Ｉ／７９及びＩ／１４４）の溶液に、６Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加える。得られた懸濁液を０℃に冷却し、次に水（２ｍＬ）中のＮａＮＯ２（０．４１５ｇ、６ミリモル）をゆっくり添加する。３０分間攪拌した後、飽和ＮａＯＡｃ溶液（約３０ｍＬ）を少しずつ加えて、反応混合物のｐＨを５～６に調整する。得られた懸濁液を水（２５ｍＬ）中のＫＳｅＣＮ（０．７９３ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で注ぐ。３０分間攪拌した後、反応混合物を室温まで温め、エーテルで抽出した。有機層を水及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残留物を、シリカ上のカラムクロマトグラフィーにより溶離液として酢酸エチル－ヘキサン（１：５）を使用して精製する。
【0107】
実施例１８：
本例では、本発明による式（Ｉ）の化合物を列挙し、先行技術から知られている関連する参考文献と共に、我々の系統的な実験作業中に試験した代表的な化合物について、それらのインビトロ抗増殖アッセイの結果を示す。
本例では、本発明による式（Ｉ）の化合物を列挙し、先行技術から知られている関連する参考文献と共に、我々の系統的な実験作業中に試験した代表的な化合物について、それらのインビトロ抗増殖アッセイの結果を示す。
【0108】
長期処理実験用の細胞培養物
認証された細胞培養物の欧州コレクション（European Collection of Authenticated Cell Cultures）(ECACC, Salisbury, UK) から得られるＰＡＮＣ－１（胆管起源のヒト膵臓癌）、ＣＯＬＯ２０５（ヒト結腸直腸腺癌）、Ａ２０５８（ヒト転移性メラノーマ）、及び日本研究資源バンク（Japanese Research Resources Bank）（東京、日本）から購入したＥＢＣ－１（ヒト肺扁平上皮癌）を使用して、イミプリドン誘導体の腫瘍増殖阻害効果を測定した。ＰＡＮＣ－１細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Lonza, Basel, Switzerland）で維持された。ＣＯＬＯ－２０５細胞株の培養には、４５００ｍｇ／Ｌのｄ－グルコースを配合したＤＭＥＭ培地を使用した。ＥＢＣ－１細胞は、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）を含むＤＭＥＭ培地で培養し、一方Ａ２０５８細胞株はＲＰＭＩ１６４０（Lonza, Basel, Switzerland）で増殖させた。すべての細胞株について、前述の基本培地に１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ, Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）、Ｌ－グルタミン（２ｍｍｏｌ／Ｌ）（Lonza, Basel, Switzerland）、及び １００μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）を補足した。すべての細胞株は、標準条件（３７℃、加湿５％ＣＯ２雰囲気）でプラスチック培養皿（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA or Eppendorf AG, Hamburg, Germany）で培養された。
認証された細胞培養物の欧州コレクション（European Collection of Authenticated Cell Cultures）(ECACC, Salisbury, UK) から得られるＰＡＮＣ－１（胆管起源のヒト膵臓癌）、ＣＯＬＯ２０５（ヒト結腸直腸腺癌）、Ａ２０５８（ヒト転移性メラノーマ）、及び日本研究資源バンク（Japanese Research Resources Bank）（東京、日本）から購入したＥＢＣ－１（ヒト肺扁平上皮癌）を使用して、イミプリドン誘導体の腫瘍増殖阻害効果を測定した。ＰＡＮＣ－１細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Lonza, Basel, Switzerland）で維持された。ＣＯＬＯ－２０５細胞株の培養には、４５００ｍｇ／Ｌのｄ－グルコースを配合したＤＭＥＭ培地を使用した。ＥＢＣ－１細胞は、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）を含むＤＭＥＭ培地で培養し、一方Ａ２０５８細胞株はＲＰＭＩ１６４０（Lonza, Basel, Switzerland）で増殖させた。すべての細胞株について、前述の基本培地に１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ, Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）、Ｌ－グルタミン（２ｍｍｏｌ／Ｌ）（Lonza, Basel, Switzerland）、及び １００μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco（登録商標）/Invitrogen Corporation, New York, NY, USA）を補足した。すべての細胞株は、標準条件（３７℃、加湿５％ＣＯ２雰囲気）でプラスチック培養皿（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA or Eppendorf AG, Hamburg, Germany）で培養された。
【0109】
生存率アッセイ（長期処理実験）
インピーダンスベースのアッセイ
ＰＡＮＣ－１細胞の細胞傷害性実験は、インピーダンスベースの xCELLigence SPシステム（ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA）を使用して実施された。インピーダンス測定の基礎に関するより詳細な説明は、我々の過去の論文［２２］に記載されている。電極表面に接着した細胞の数に比例するインピーダンスの変化をモニターすることは、細胞傷害性研究のための高感度な方法を提供する［２３］。インピーダンスの変化は、xCELLigenceシステムに組み込まれたソフトウェア（ＲＴＣＡ２．０、ACEABiosciences, SanDiego, CA, USA）によって計算される細胞指数（Cell Index：ＣＩ）の形式で表される。ＩＣ５０（細胞生存率を５０％低下させる濃度）値を決定するために、試験されるイミプリドンをＤＭＳＯに溶解し、補足ＤＭＥＭ培地でさらに希釈して、２．５×１０－４～５×１０－７Ｍの濃度範囲を調製した。私たちのインピーダンス実験の工程は、［２４］で示されたものと同じ方法で進行した。簡単に言えば、バックグラウンド測定中に一定のＣＩ値を得た後、ＰＡＮＣ－１細胞（１．５ｘ１０４細胞／ウェル）をいわゆるＥプレートに添加し、その接着／拡散を２４時間モニターして、細胞培養物をプラトー相に落ち着かせた。最後の工程で、この平衡状態の細胞を試験化合物（最終濃度：２．５×１０－５～５×１０－８Ｍ）で処理し、ＣＩの変化を１０ｋＨｚで少なくとも７２時間モニターした。対照ウェルの場合、適切な体積比のＤＭＳＯを加えた。各測定で３つの平行測定を行った。処理の７２時間後に得られた各濃度のＣＩ値は、ＤＭＳＯ対照のＣＩ値に正規化された。シグモイド用量応答曲線をOriginPro８（OriginLabCorporation, Northampton, MA, USA）の非線形回帰関数にフィッティングすることによって、これらの正規化されたＣＩ値についてＩＣ５０値を計算した。
インピーダンスベースのアッセイ
ＰＡＮＣ－１細胞の細胞傷害性実験は、インピーダンスベースの xCELLigence SPシステム（ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA）を使用して実施された。インピーダンス測定の基礎に関するより詳細な説明は、我々の過去の論文［２２］に記載されている。電極表面に接着した細胞の数に比例するインピーダンスの変化をモニターすることは、細胞傷害性研究のための高感度な方法を提供する［２３］。インピーダンスの変化は、xCELLigenceシステムに組み込まれたソフトウェア（ＲＴＣＡ２．０、ACEABiosciences, SanDiego, CA, USA）によって計算される細胞指数（Cell Index：ＣＩ）の形式で表される。ＩＣ５０（細胞生存率を５０％低下させる濃度）値を決定するために、試験されるイミプリドンをＤＭＳＯに溶解し、補足ＤＭＥＭ培地でさらに希釈して、２．５×１０－４～５×１０－７Ｍの濃度範囲を調製した。私たちのインピーダンス実験の工程は、［２４］で示されたものと同じ方法で進行した。簡単に言えば、バックグラウンド測定中に一定のＣＩ値を得た後、ＰＡＮＣ－１細胞（１．５ｘ１０４細胞／ウェル）をいわゆるＥプレートに添加し、その接着／拡散を２４時間モニターして、細胞培養物をプラトー相に落ち着かせた。最後の工程で、この平衡状態の細胞を試験化合物（最終濃度：２．５×１０－５～５×１０－８Ｍ）で処理し、ＣＩの変化を１０ｋＨｚで少なくとも７２時間モニターした。対照ウェルの場合、適切な体積比のＤＭＳＯを加えた。各測定で３つの平行測定を行った。処理の７２時間後に得られた各濃度のＣＩ値は、ＤＭＳＯ対照のＣＩ値に正規化された。シグモイド用量応答曲線をOriginPro８（OriginLabCorporation, Northampton, MA, USA）の非線形回帰関数にフィッティングすることによって、これらの正規化されたＣＩ値についてＩＣ５０値を計算した。
【0110】
比色アッセイ
ＣＯＬＯ－２０５及びＡ２０５８細胞株に対するイミプリドンの抗増殖／細胞傷害性効果は、アラマーブルーアッセイ（alamarBlue-assay）によって測定された。ＣＯＬＯ－２０５細胞は弱い／無視できる程度の接着を示し、Ａ２０５８細胞株はインピーダンス分析中に安定したプラトー相を確立できないため、この比色アッセイはこれらの細胞株の分析に、xCELLigenceシステムよりも適した方法であることが証明された。細胞の接種とアラマーブルーアッセイの手順は、我々の過去の論文［２４］で報告された説明と同様であった。主な工程は次のとおりである：（ｉ）細胞を９６ウェルプレート（Sarstedt AG, Nuumbrecht, Germany）に１０４細胞／ウェル濃度で接種、（ｉｉ）試験物質を２．５×１０－５～５×１０－８Ｍの最終濃度で７２時間処理、（ｉｉｉ）ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ＝７．２）に溶解したアラマーブルー試薬（０．１５ｍｇ／ｍＬ、Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）の添加、及び（ｉｖ）アラマーブルー試薬で６～８時間インキュベーション後の試料の蛍光強度の読み取り。ＬＳ－５０Ｂ発光分光計（Perkin Elmer Ltd., Buckinghamshire United Kingdom）を以下の設定で蛍光測定に適用した：励起波長＝５６０ｎｍ、発光波長＝５９０ｎｍ。各測定は３重測定で行われた。適切な体積比のＤＭＳＯを含むウェルを対照として使用した。各試料の蛍光強度は、ＤＭＳＯ対照の蛍光の比率として表された。正規化された蛍光強度にシグモイド用量応答曲線を当てはめるためにOriginPro8（OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA）の非線形回帰関数を使用して、ＩＣ５０値を計算した。
ＣＯＬＯ－２０５及びＡ２０５８細胞株に対するイミプリドンの抗増殖／細胞傷害性効果は、アラマーブルーアッセイ（alamarBlue-assay）によって測定された。ＣＯＬＯ－２０５細胞は弱い／無視できる程度の接着を示し、Ａ２０５８細胞株はインピーダンス分析中に安定したプラトー相を確立できないため、この比色アッセイはこれらの細胞株の分析に、xCELLigenceシステムよりも適した方法であることが証明された。細胞の接種とアラマーブルーアッセイの手順は、我々の過去の論文［２４］で報告された説明と同様であった。主な工程は次のとおりである：（ｉ）細胞を９６ウェルプレート（Sarstedt AG, Nuumbrecht, Germany）に１０４細胞／ウェル濃度で接種、（ｉｉ）試験物質を２．５×１０－５～５×１０－８Ｍの最終濃度で７２時間処理、（ｉｉｉ）ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ＝７．２）に溶解したアラマーブルー試薬（０．１５ｍｇ／ｍＬ、Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）の添加、及び（ｉｖ）アラマーブルー試薬で６～８時間インキュベーション後の試料の蛍光強度の読み取り。ＬＳ－５０Ｂ発光分光計（Perkin Elmer Ltd., Buckinghamshire United Kingdom）を以下の設定で蛍光測定に適用した：励起波長＝５６０ｎｍ、発光波長＝５９０ｎｍ。各測定は３重測定で行われた。適切な体積比のＤＭＳＯを含むウェルを対照として使用した。各試料の蛍光強度は、ＤＭＳＯ対照の蛍光の比率として表された。正規化された蛍光強度にシグモイド用量応答曲線を当てはめるためにOriginPro8（OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA）の非線形回帰関数を使用して、ＩＣ５０値を計算した。
【0111】
結果のデータの統計的評価は、RTCA2.0（ACEA Biosciences, San Diego, CA, USA）、ＭＳエクセル、OriginPro8（OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA）ソフトウェアを使用して実行された。各実験から得られたデータは、数学的な平均を表す。ＩＣ５０パラメータの標準偏差もシグモイド曲線フィッティングを用いて得られた。
【0112】
ＭＴＴアッセイを使用する短期細胞傷害性試験
短期間の細胞傷害性試験のために、Ａ－４３１（ヒト扁平上皮癌）細胞及びＵ－８７（ヒト原発性神経膠芽腫）細胞を、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清、Sigma Ltd.）、２ｍＭのＬ－グルタミン、及び１６０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。細胞培養物は、３７℃で５％ＣＯ２の加湿雰囲気で維持された。細胞をコンフルエントになるまで増殖させ、ウェルあたり５．０×１０３の初期細胞数で９６ウェルプレートに分配した。３７℃で２４時間インキュベーション後、細胞を、１．０ｖ／ｖ％のＤＭＳＯを含有する最終容量２００μＬの化合物で処理した。細胞を、１０－４～１０２μＭの濃度範囲の化合物と共に１時間インキュベートした。対照細胞は、無血清培地（ＲＰＭＩ－１６４０）のみ、又はＤＭＳＯ（ｃ＝１．０ｖ／ｖ％）を有する無血清培地で３７℃で１時間処理した。インキュベーション後、細胞を無血清（ＲＰＭＩ－１６４０）培地で２回洗浄した。インビトロ細胞増殖抑制効果を測定するために、細胞を１０％血清含有培地でさらに７２時間培養した。ＭＴＴ溶液（４５ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、最終濃度：０．３７ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加えた。呼吸鎖［２６，２７］及びその他の電子伝達系［２８］はＭＴＴを低下させ、それによって細胞内で非水溶性の紫色のホルマザン結晶を形成する［２９］。これらの結晶の量は、分光光学的に測定ですることができ、ウェル内のミトコンドリアの数、従って生細胞の数の推定値として役立つ［３０］。４時間のインキュベーション後、細胞を５分間遠心分離し（９００ｇ）、上清を除去した。得られたホルマザン結晶をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解し、試料の光学密度（ＯＤ）をＥＬＩＳＡリーダー（iEMS Reader, Labsystems, Finland）を使用してそれぞれλ＝５４０及び６２０ｎｍで測定した。ＯＤ６２０値をＯＤ５４０値から差し引いた。細胞増殖抑制の割合は、以下の式を使用して計算された：細胞増殖抑制効果（％）＝［１－（ＯＤ処理／ＯＤ）対照］×１００。ＯＤ処理値及びＯＤ対照値は、それぞれ処理された細胞及び対照細胞の光学密度に対応する。いずれの場合も、２つの独立した実験が４つの並行測定で実行された。用量応答曲線から５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値を決定した。曲線は、Microcal TM Origin1（バージョン７．５）ソフトウェアを使用して定義された：細胞増殖抑制を濃度の関数としてプロットし、シグモイド曲線にフィッティングし、この曲線に基づいて５０％阻害濃度（half maximal inhibitory concentration：ＩＣ５０）値を決定した。ＩＣ５０は、インビトロで５０％阻害するのに必要な化合物の濃度を表す。
短期間の細胞傷害性試験のために、Ａ－４３１（ヒト扁平上皮癌）細胞及びＵ－８７（ヒト原発性神経膠芽腫）細胞を、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清、Sigma Ltd.）、２ｍＭのＬ－グルタミン、及び１６０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。細胞培養物は、３７℃で５％ＣＯ２の加湿雰囲気で維持された。細胞をコンフルエントになるまで増殖させ、ウェルあたり５．０×１０３の初期細胞数で９６ウェルプレートに分配した。３７℃で２４時間インキュベーション後、細胞を、１．０ｖ／ｖ％のＤＭＳＯを含有する最終容量２００μＬの化合物で処理した。細胞を、１０－４～１０２μＭの濃度範囲の化合物と共に１時間インキュベートした。対照細胞は、無血清培地（ＲＰＭＩ－１６４０）のみ、又はＤＭＳＯ（ｃ＝１．０ｖ／ｖ％）を有する無血清培地で３７℃で１時間処理した。インキュベーション後、細胞を無血清（ＲＰＭＩ－１６４０）培地で２回洗浄した。インビトロ細胞増殖抑制効果を測定するために、細胞を１０％血清含有培地でさらに７２時間培養した。ＭＴＴ溶液（４５ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、最終濃度：０．３７ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加えた。呼吸鎖［２６，２７］及びその他の電子伝達系［２８］はＭＴＴを低下させ、それによって細胞内で非水溶性の紫色のホルマザン結晶を形成する［２９］。これらの結晶の量は、分光光学的に測定ですることができ、ウェル内のミトコンドリアの数、従って生細胞の数の推定値として役立つ［３０］。４時間のインキュベーション後、細胞を５分間遠心分離し（９００ｇ）、上清を除去した。得られたホルマザン結晶をＤＭＳＯ（１００ｍＬ）に溶解し、試料の光学密度（ＯＤ）をＥＬＩＳＡリーダー（iEMS Reader, Labsystems, Finland）を使用してそれぞれλ＝５４０及び６２０ｎｍで測定した。ＯＤ６２０値をＯＤ５４０値から差し引いた。細胞増殖抑制の割合は、以下の式を使用して計算された：細胞増殖抑制効果（％）＝［１－（ＯＤ処理／ＯＤ）対照］×１００。ＯＤ処理値及びＯＤ対照値は、それぞれ処理された細胞及び対照細胞の光学密度に対応する。いずれの場合も、２つの独立した実験が４つの並行測定で実行された。用量応答曲線から５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値を決定した。曲線は、Microcal TM Origin1（バージョン７．５）ソフトウェアを使用して定義された：細胞増殖抑制を濃度の関数としてプロットし、シグモイド曲線にフィッティングし、この曲線に基づいて５０％阻害濃度（half maximal inhibitory concentration：ＩＣ５０）値を決定した。ＩＣ５０は、インビトロで５０％阻害するのに必要な化合物の濃度を表す。
【0113】
CellTiter-Glo発光細胞生存率アッセイを使用するＥＢＣ－１及びＨ２２２８肺癌細胞株の高処理能力スクリーニング
ＥＢＣ－１（ＪＲＣＢから入手、https://cellbank.nibiohn.go.jp/english/）及びＨ２２２８（ＡＴＣＣから入手、https://www.lgcstandards-atcc.org/から入手）細胞株を、ＪＲＣＢ及びＡＴＣＣから提供された説明書に従って、５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃の温度に維持された。細胞生存率に対する化合物の影響は、CellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega, Madison, WI, USA）によって測定された。細胞を平底の白色９６ウェルプレート（BRANDplates、カタログ番号：７８１９６５）に１０００個／ウェルで播種した。２４時間後、細胞を１００ｎＭ濃度の化合物で７２時間処理した。処理後、培地を除去し、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を加えた。未処理の細胞を対照として使用した。発光シグナルは、マイクロプレートリーダー（BioTek Synergy 2 Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA）を使用して記録された。細胞生存率データ（未処理対照細胞の％）は、マイクロソフトエクセルを用いて評価された。
ＥＢＣ－１（ＪＲＣＢから入手、https://cellbank.nibiohn.go.jp/english/）及びＨ２２２８（ＡＴＣＣから入手、https://www.lgcstandards-atcc.org/から入手）細胞株を、ＪＲＣＢ及びＡＴＣＣから提供された説明書に従って、５％ＣＯ２加湿インキュベーター中３７℃の温度に維持された。細胞生存率に対する化合物の影響は、CellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega, Madison, WI, USA）によって測定された。細胞を平底の白色９６ウェルプレート（BRANDplates、カタログ番号：７８１９６５）に１０００個／ウェルで播種した。２４時間後、細胞を１００ｎＭ濃度の化合物で７２時間処理した。処理後、培地を除去し、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を加えた。未処理の細胞を対照として使用した。発光シグナルは、マイクロプレートリーダー（BioTek Synergy 2 Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA）を使用して記録された。細胞生存率データ（未処理対照細胞の％）は、マイクロソフトエクセルを用いて評価された。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【表1-10】
【表1-11】
【表1-12】
【表1-13】
【表1-14】
【0114】
ａ 肺癌細胞株ＥＢＣ－１及びＨ２２２８に関する高処理能力スクリーニング（ＨＴＳ）の結果が示されている。その後の実験で、ＨＴＳで強力であることが証明された化合物についてＩＣ５０値を決定した（表３）。
【0115】
実施例１９：
いくつかの代表的なイミプリドンと参照としてのＯＮＣ２１２は、以下のヒト悪性細胞株でさらに試験された：ＰＣ３とＬＮＣａｐ（前立腺癌）；ＢｘＰＣ３、ＭｉａＰａＣａ２、及びＰａｎｃ１（膵臓癌）；Ａ５４９、ＨＣＣ８２７、Ｈ１９９３、及びＨ５２０（肺癌）；ＭＤＡ－ＭＢ－４５３及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌）（表２及び図１～１１を参照）。
いくつかの代表的なイミプリドンと参照としてのＯＮＣ２１２は、以下のヒト悪性細胞株でさらに試験された：ＰＣ３とＬＮＣａｐ（前立腺癌）；ＢｘＰＣ３、ＭｉａＰａＣａ２、及びＰａｎｃ１（膵臓癌）；Ａ５４９、ＨＣＣ８２７、Ｈ１９９３、及びＨ５２０（肺癌）；ＭＤＡ－ＭＢ－４５３及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌）（表２及び図１～１１を参照）。
【0116】
細胞株は、ＡＴＣＣ（https://www.lgcstandards-atcc.org/）によって提供された説明書に従って、５％ＣＯ２加湿インキュベーターで３７℃の温度に維持された。細胞生存率に対する化合物の効果は、CellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega, Madison, WI, USA）によって測定された。細胞は１０００細胞／ウェルで平底白色９６ウェルプレート（BRANDプレート、カタログ番号：７８１９６５）に播種された。２４時間後、細胞を３倍連続希釈された化合物濃度（３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３．３ｎＭ、１１．１ｎＭ、３．７ｎＭ、１．２ｎＭ）で７２時間処理された。処理後、培地を除去し、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を加えた。発光シグナルは、マイクロプレートリーダー（BioTek Synergy 2 Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA）を使用して記録された。
【0117】
細胞生存率データ（未処理の対照細胞の％）は、マイクロソフトエクセルで評価された。用量応答曲線（非線形回帰モデル、対数（阻害剤）対応答、可変勾配を使用）を作成し、Graph Pad Prism 5.02ソフトウェア（GraphPad Software, San Diego, CA, USA）を使用してＩＣ５０値を決定した。
【0118】
これらの試験で、我々の化合物は、ＯＮＣ２１２よりはるかに優れた低ナノモル範囲のＩＣ５０値を特徴とする非常に効率的な抗増殖剤であることが証明された。特にＴＢＰ－３０１とＴＢＰ－３０２は、極めて強力な抗癌剤と見なすことができる。一方、強力なアジド誘導体であるＣＺＴ－１３６及びＴＢＰ－２７２は、細胞標的を特定する独自の可能性を提供し、医薬品の承認に不可欠な特定の作用機序を明らかにする。
【表2】
【0119】
実施例２０：
本発明の化合物の有効性を証明するための追加データ。
本発明の化合物の有効性を証明するための追加データ。
【表3】
【0120】
実施例２１：細胞生存率アッセイのプロトコール
癌細胞の生存率に対する選択された化合物の効果をCellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega, Madison, WI, USA）を用いて、製造元の説明書に従って測定した。細胞を平底白色の９６ウェルプレート（BRANDplates（登録商標）、カタログ番号：７８１９６５）に播種した。接種された細胞の密度は、以下のようにサイズと増殖速度に基づいて最適化された：Ｐａｎｃ－１：７５０細胞／ウェル；ＤＵ１４５、ＰＣ－３、Ｃａｐａｎ－１、ＭＩＡＰａＣａ－２、ＳＣＣ－２５、ＦａＤｕ、及びＥＢＣ－１：１０００細胞／ウェル；ＬＮＣａＰ、デトロイト５６２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３：１５００細胞／ウェル。４８時間のインキュベーション後、細胞を３倍連続希釈した化合物濃度（３００ｎＭ～１．２ｎＭの範囲）で７２時間処理した。未処理細胞（対応する細胞培養培地で７２時間処理の間インキュベートしたもの）を対照として使用した。処理後、マイクロプレートリーダー（BioTek Synergy 2 Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA）を使用して発光シグナルを記録した。用量応答曲線は、GraphPad Prism8.4.2ソフトウェアによって、非線形回帰モデル（可変勾配、４つのパラメーター）を使用して作成された（図１２～５１を参照）。
癌細胞の生存率に対する選択された化合物の効果をCellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega, Madison, WI, USA）を用いて、製造元の説明書に従って測定した。細胞を平底白色の９６ウェルプレート（BRANDplates（登録商標）、カタログ番号：７８１９６５）に播種した。接種された細胞の密度は、以下のようにサイズと増殖速度に基づいて最適化された：Ｐａｎｃ－１：７５０細胞／ウェル；ＤＵ１４５、ＰＣ－３、Ｃａｐａｎ－１、ＭＩＡＰａＣａ－２、ＳＣＣ－２５、ＦａＤｕ、及びＥＢＣ－１：１０００細胞／ウェル；ＬＮＣａＰ、デトロイト５６２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３：１５００細胞／ウェル。４８時間のインキュベーション後、細胞を３倍連続希釈した化合物濃度（３００ｎＭ～１．２ｎＭの範囲）で７２時間処理した。未処理細胞（対応する細胞培養培地で７２時間処理の間インキュベートしたもの）を対照として使用した。処理後、マイクロプレートリーダー（BioTek Synergy 2 Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA）を使用して発光シグナルを記録した。用量応答曲線は、GraphPad Prism8.4.2ソフトウェアによって、非線形回帰モデル（可変勾配、４つのパラメーター）を使用して作成された（図１２～５１を参照）。
【表4】
【表5】
【表6】
【表7】
【表8】
【表9】
【表10】
【表11】
【表12】
【表13】
【表14】
【表15】
【0121】
実施例２２：
本例は、Ｐａｎｃ－１ヒト細胞株に対する本発明によるいくつかの化合物の細胞傷害性効果を証明する。ＩＣ５０値は、xCELLigence SP機器で測定した（図５２～６１を参照）。以下の表は、２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間の処理後に得られたＩＣ５０値を示す。
本例は、Ｐａｎｃ－１ヒト細胞株に対する本発明によるいくつかの化合物の細胞傷害性効果を証明する。ＩＣ５０値は、xCELLigence SP機器で測定した（図５２～６１を参照）。以下の表は、２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間の処理後に得られたＩＣ５０値を示す。
【表16】
【0122】
実施例２３：
本例は、ＳＣＩＤマウス（immunsuprimizedマウス）の皮下増殖しているＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍異種移植片に対する化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）、Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）、Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）、及びＩ／１０７（ＣＺＴ－１３６）の抗腫瘍効果を示す。
本例は、ＳＣＩＤマウス（immunsuprimizedマウス）の皮下増殖しているＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍異種移植片に対する化合物Ｉ／１（ＯＮＣ２１２）、Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）、Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）、及びＩ／１０７（ＣＺＴ－１３６）の抗腫瘍効果を示す。
【0123】
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト三重陰性乳癌異種移植片は、免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスの背中に腫瘍細胞を皮下接種することによって形成された。試験された材料は、２～３日ごとに３週間、動物の腹腔内に注射された。
【0124】
実験結果は、試験したすべての化合物が腫瘍体積を減少させるが、この効果はＩ／１２４（ＴＢＰ－３３３）の場合にのみ有意であることを示した。
【0125】
実験計画：
試験された化合物：
参照としてＩ／１（ＯＮＣ２１２）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置；用量：０．８８ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）：
０．０２１３ｍｇ／動物／処置；用量：０．８５ｍｇ／ｋｇ
０．０３５５ｍｇ／動物／処置；用量：１．４１６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置；用量：０．８９ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置、用量：０．８９ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
及び、対照として１％ＤＭＳＯを含む生理食塩水。
試験された化合物：
参照としてＩ／１（ＯＮＣ２１２）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置；用量：０．８８ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／７（ＡＢＢ－０１１）：
０．０２１３ｍｇ／動物／処置；用量：０．８５ｍｇ／ｋｇ
０．０３５５ｍｇ／動物／処置；用量：１．４１６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／１２４（ＴＢＰ－３３３）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置；用量：０．８９ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
Ｉ／１０７（ＣＺＴ－１３６）：
０．０２２ｍｇ／動物／処置、用量：０．８９ｍｇ／ｋｇ
０．０３６ｍｇ／動物／処置；用量：１．４６６ｍｇ／ｋｇ
及び、対照として１％ＤＭＳＯを含む生理食塩水。
【0126】
４０匹のＳＣＩＤマウスが実験に含まれた。実験中、各動物群は別々のケージで維持された。各ケージには、動物の生年月日、腫瘍細胞注射の日付、動物の数と性別が記載された識別カードがあった。各物質の注射は識別カードに書かれた。物質ごとに８匹の動物が使用され、耳を傷つけることによって識別された。
【0127】
これらの試験で使用された動物は、ヘルシンキ宣言に基づく「動物の管理と使用に関する指導原則（Guiding Principles for the Care and Use of Animals）」に従って管理され、試験は地元の倫理委員会によって承認された。
【0128】
動物は、ＩＶＣ（個別換気ケージ）システムで滅菌ケージ内に収容され、１２時間の明期と１２時間の暗期の制御サイクルで、明期は０７：００時から１９：００時の間であった。温度と湿度は実験全体を通して毎日記録された。滅菌された齧歯動物特別品質管理食（ＶＲＦ１、Special Diets Services Ltd, Witham, UK）及び酸性化（ｐＨ＝３）した滅菌蒸留水は、試験期間を通じて自由に利用できた。
【0129】
各バッチの食事には、栄養成分を詳述した分析証明書が添付されていた。マウスの健康状態は、動物施設のスタッフによって評価された。
【0130】
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト三重陰性乳癌細胞は、１０％ウシ胎児血清（Sigma）と１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Sigma）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO）中で、３７℃で５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で培養した。単層培養からの細胞を０．０２％ＥＤＴＡ（Sigma）で剥がし、無血清培地で２回洗浄し、１細胞懸濁液をＳＣＩＤマウスの背部に１．３ｘ１０６細胞／動物の数で皮下接種した。腫瘍体積が検出可能なサイズに達したとき（約１００～２００ｍｍ３、腫瘍細胞接種の１２日後）、試験生成物を腹腔内に接種した。
【0131】
試験化合物はすべて、粉末として提供された。粉末はＤＭＳＯに溶解した。最終処理濃度として、化合物を生理食塩水で１：１００希釈した（１％ＤＭＳＯ）。
【0132】
試験化合物はすべて、１％ＤＭＳＯを含む０．３ｍｌ容量の生理食塩水溶液を週３回、腹腔内注射により投与することを計画した。しかしながら、実験中、このスケジュールは変更された：０７．１９から、毎日０．５ｍｌ容量の腹腔内注射が実行された（表１７）。
【表17】
【0133】
実験中、動物の体重と腫瘍の大きさを記録した。試験した化合物は体重減少を引き起こさなかった（図６２）。
【0134】
腫瘍体積は、実験中、週に３回測定された。試験した化合物のすべてが腫瘍増殖を低下させたが、その効果はＴＢＰ－３３３の場合にのみ有意であった（図６３）。
【0135】
化合物の抗腫瘍効果は、実験終了後に各群の腫瘍重量を測定することでも評価された（図６４及び６５）。腫瘍重量に基づいて、ＴＢＰ－３３３が最高の有意な阻害を示すことがわかったが、試験した化合物はすべて、対照と比較して腫瘍重量を減少させた．
【0136】
実験結果は、試験された薬物が抗腫瘍効果を有することを示し、これは、実験終了時の体積と腫瘍塊の両方で示されたが、この効果はＴＢＰ－３３３の場合にのみ有意であった。材料の溶解性を向上させたり、又は何らかの方法で送達量を増やすことができれば、さらに大きな効果が得られると考えられる。
【0137】
上記の結果に基づいて、次の点に注意する必要がある。
イミプリドン骨格の４位と７位に結合したベンジル基の置換パターンの影響に関して、我々は、４位に同一の置換基（Ｎ－４原子上のベンジル基）を有する［７－（３"，５"－ジフルオロベンジル）］－置換化合物が、これらの［７－（３"－フルオロベンジル）］－置換対応物（ＴＢＰ－３０１対ＣＺＴ－０２１、ＡＢＢ－０１１対ＴＢＰ－２１８、及びＴＢＰ－３３３対ＴＢＰ－３５３）よりも有意に強い抗増殖活性を示すことを明確に確立した。これは、ＩＣ５０値（表１６）と、異なる方法によってヒト悪性細胞株に対して実施されたインビトロアッセイによって得られた実施例２１で証明された細胞生存率データとに明確に反映されている。我々の元のアジドベンジル誘導体を含むすべての［７－（３"－フルオロベンジル）］－イミプリドンでさえ、本発明の各比較インビトロ試験において、ＯＮＣ－２１２よりもはるかに高活性であることを強調しなければならない。元のモノアジド誘導体もまた、試験した細胞株に対して極めて優れた活性プロファイルを示した。ＰＡＮＣ－１細胞株で測定されたＩＣ５０値によって示される（表１６）ように、［７－（３"－アジドベンジル）］イミプリドンＴＢＰ－２７２及びＴＢＰ－４００が、それぞれ対応する［７－（３"－フルオロベンジル）］イミプリドンＣＺＴ－０２１及びＴＢＰ－３５３より高い細胞傷害性を示すことは、効率プロフィールにおける顕著な優位性と新規性である。この傾向は、一連の細胞株に対するCellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイによって実施されたアッセイでも明らかになった（実施例２１を参照）。
イミプリドン骨格の４位と７位に結合したベンジル基の置換パターンの影響に関して、我々は、４位に同一の置換基（Ｎ－４原子上のベンジル基）を有する［７－（３"，５"－ジフルオロベンジル）］－置換化合物が、これらの［７－（３"－フルオロベンジル）］－置換対応物（ＴＢＰ－３０１対ＣＺＴ－０２１、ＡＢＢ－０１１対ＴＢＰ－２１８、及びＴＢＰ－３３３対ＴＢＰ－３５３）よりも有意に強い抗増殖活性を示すことを明確に確立した。これは、ＩＣ５０値（表１６）と、異なる方法によってヒト悪性細胞株に対して実施されたインビトロアッセイによって得られた実施例２１で証明された細胞生存率データとに明確に反映されている。我々の元のアジドベンジル誘導体を含むすべての［７－（３"－フルオロベンジル）］－イミプリドンでさえ、本発明の各比較インビトロ試験において、ＯＮＣ－２１２よりもはるかに高活性であることを強調しなければならない。元のモノアジド誘導体もまた、試験した細胞株に対して極めて優れた活性プロファイルを示した。ＰＡＮＣ－１細胞株で測定されたＩＣ５０値によって示される（表１６）ように、［７－（３"－アジドベンジル）］イミプリドンＴＢＰ－２７２及びＴＢＰ－４００が、それぞれ対応する［７－（３"－フルオロベンジル）］イミプリドンＣＺＴ－０２１及びＴＢＰ－３５３より高い細胞傷害性を示すことは、効率プロフィールにおける顕著な優位性と新規性である。この傾向は、一連の細胞株に対するCellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイによって実施されたアッセイでも明らかになった（実施例２１を参照）。
【0138】
最後に、測定されたすべてのＩＣ５０及び細胞生存率データを考慮に入れると、我々が初めて調製し試験したインビトロレベルのイミプリドン４－（４－クロロベンジル）－７－（３，５－ジフルオロベンジル）－２，４，６，７、８，９－ヘキサヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリド［３，４－ｅ］ピリミジン－５（１Ｈ）－オン（ＴＢＰ－３３３）は、これまで物理的に同定された低分子抗癌剤イミプリドンファミリーのメンバーの最も強力な代表であると言うことができる。
【0139】
産業上の利用可能性
本発明の化合物は抗癌活性を有するため、これらの化合物は医薬での使用に適している。
本発明の化合物は抗癌活性を有するため、これらの化合物は医薬での使用に適している。
【0140】
明細書で引用されている参考文献：
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
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【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
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【図20】
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【図28】
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【図30】
【図31】
【図32】
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【図39】
【図40】
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【図45】
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【図50】
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【図56】
【図57】
【図58】
【図59】
【図60】
【図61】
【図62】
【図63】
【図64】
【図65】
【国際調査報告】