特表 2023-536827 遺伝子療法用途のためのイヌ及びネコ誘導性発現構築物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-30

(54)【発明の名称】遺伝子療法用途のためのイヌ及びネコ誘導性発現構築物

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230823BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20230823BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230823BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20230823BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230823BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230823BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20230823BHJP

   A61K 38/17 20060101ALN20230823BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/63 Z ZNA

C12N7/01

A61K48/00

A61K35/76

A61K31/436

A61K38/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023505878

(86)(22)【出願日】2021-07-26

(85)【翻訳文提出日】2023-03-15

(86)【国際出願番号】 US2021043219

(87)【国際公開番号】W WO2022026411

(87)【国際公開日】2022-02-03

(31)【優先権主張番号】63/056,985

(32)【優先日】2020-07-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】502409813

【氏名又は名称】ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア

(74)【代理人】

【識別番号】110000741

【氏名又は名称】弁理士法人小田島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ウイルソン，ジェームス・エム

(72)【発明者】

【氏名】ヒンデラー，クリスチャン

(72)【発明者】

【氏名】堀内 真

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA02

4C084BA44

4C084MA02

4C084MA52

4C084MA58

4C084MA59

4C084MA63

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZA33

4C084ZA34

4C086AA01

4C086CB22

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA58

4C086MA59

4C086MA63

4C086MA65

4C086MA66

4C086NA05

4C086ZA33

4C086ZA34

4C087AA01

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA02

4C087MA52

4C087MA58

4C087MA59

4C087MA63

4C087MA65

4C087MA66

4C087NA05

4C087ZA33

4C087ZA34

(57)【要約】

本明細書では、誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子、ベクター、及び組換えＡＡＶが提供される。本系は、プロモーターを含む発現制御配列に作動可能に連結された遺伝子産物をコードする導入遺伝子と、イヌ又はネコトランス活性化ドメイン及びイヌ又はネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインを含む活性化ドメインと、ジンクフィンガーホメオドメイン（ＺＦＨＤ）及び１、２、又は３個のＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、少なくとも８コピーのＺＦＨＤに対する結合部位（８ＸＺＦＨＤ）、それに続く最小ＩＬ２プロモーターと、を含む。有効量のラパマイシン又はラパログの存在は、宿主細胞における導入遺伝子の発現を誘導する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子であって、前記系が、
（ａ）プロモーターを含む発現制御配列に作動可能に連結された遺伝子産物をコードする導入遺伝子と、
（ｂ）イヌ（ｃａｎｉｎｅ）又はネコ（ｆｅｌｉｎｅ）のトランス活性化ドメイン及びイヌ又はネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインを含む、活性化ドメインと、
（ｃ）ジンクフィンガーホメオドメイン（ＺＦＨＤ）及び１、２、又は３個のＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、
（ｄ）少なくとも１コピーのＺＦＨＤに対する結合部位、それに続く最小ＩＬ２プロモーターと、を含み、
有効量のラパマイシン又はラパログの存在が、宿主細胞における前記導入遺伝子の発現を誘導する、核酸分子。

【請求項2】

５’ＡＡＶ ＩＴＲ及び３’ＡＡＶ ＩＴＲを更に含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項3】

ＦＫＢＰサブユニット遺伝子配列が、互いに約８５％未満の同一性を共有する、請求項１又は２に記載の核酸分子。

【請求項4】

前記ＦＫＢＰサブユニット遺伝子配列のうちの１つが、天然のＦＫＢＰ遺伝子配列である、請求項１～３のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項5】

前記トランス活性化ドメインが、ＮＦ－κＢ ｐ６５の一部分を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項6】

前記トランス活性化ドメインが、イヌｐ６５配列である、請求項１～５のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項7】

前記トランス活性化ドメインが、ネコｐ６５配列である、請求項１～５のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項8】

前記プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項9】

前記プロモーターが、組織特異的プロモーターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項10】

前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項11】

ＩＲＥＳを更に含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項12】

少なくとも８コピーの前記ＺＦＨＤに対する結合部位を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項13】

プロモーターと、イヌ又はネコｐ６５トランス活性化ドメイン及びイヌ又はネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインを含む活性化ドメインと、ジンクフィンガーホメオドメイン（ＺＦＨＤ
）及び３つのＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、８コピーのＺＦＨＤに対する結合部位と、治療用産物のコード配列と、を含む、核酸分子。

【請求項14】

前記ＦＲＢドメインが、配列番号１若しくは配列番号２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を共有する配列を有し、かつ／又は
ｐ６５サブユニットが、配列番号４若しくは配列番号５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を共有する配列を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項15】

分子が、配列番号７、配列番号８、及び配列番号９を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項16】

ＡＡＶカプシドを有する組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）であって、前記カプシドが、その中に、請求項１～１５のいずれか一項に記載の核酸分子をパッケージングしている、組換えＡＡＶ。

【請求項17】

請求項１６に記載のｒＡＡＶと、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と、を含む、組成物。

【請求項18】

治療用産物の用量を調節するための治療レジメンであって、請求項１７に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することと、有効量のラパマイシン又はラパログを送達して、前記対象の宿主細胞において前記治療用産物の発現を誘導することと、を含む、治療レジメン。

【請求項19】

前記対象が、イヌ又はネコである、請求項１８に記載の治療レジメン。

【請求項20】

前記ラパマイシン又はラパログが、ラパマイシンである、請求項１８又は１９に記載の治療レジメン。

【請求項21】

前記ｒＡＡＶが、硝子体内投与され、前記ラパマイシンが、眼に送達される、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の治療レジメン。

【請求項22】

前記ｒＡＡＶが、鼻腔内投与され、前記ラパマイシンが、局所的に送達される、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の治療レジメン。

【請求項23】

前記ｒＡＡＶが、筋肉内投与され、前記ラパマイシンが、経口で、局所的に、経皮パッチを介して、又は皮下注射によって送達される、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の治療レジメン。

【請求項24】

前記ｒＡＡＶが、静脈内投与可能であり、前記ラパマイシンが、経口で、経皮パッチによって、又は皮下注射によって、送達可能である、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の治療レジメン。

【請求項25】

ＦＲＢ配列が、配列番号１又は配列番号２である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項26】

トランス活性化ドメイン配列が、配列番号４又は配列番号５である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項27】

ＺＦＨＤホメオドメイン配列が、配列番号３０である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項28】

前記ＦＫＢＰサブユニット遺伝子配列が、配列番号７、配列番号８、及び配列番号９である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項29】

８ＸＺＦＨＤ配列が、配列番号３１である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項30】

ＩＬ２最小プロモーター配列が、配列番号１１又は配列番号１２である、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子、組成物、又は治療レジメン。

【請求項31】

治療用遺伝子産物を、それを必要とする対象に送達するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項１６に記載のｒＡＡＶ又は請求項１７に記載の組成物の、使用。

【請求項32】

遺伝子産物を、それを必要とする対象に送達するための医薬品の調製に使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項１６に記載のｒＡＡＶ、又は請求項１７に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

遺伝子療法の中心的な課題は、インビボでの導入遺伝子の発現の調節の困難さである。実質的に全ての遺伝子療法の前臨床及び臨床応用は、構成的プロモーターから導入遺伝子を発現するベクターを使用しており、これは、ベクターゲノムが持続する限り、一定のレベルで活性であることを意味する。しかしながら、遺伝子療法に適している多くの疾患は、導入遺伝子の発現を調節する必要がある場合がある。遺伝子発現を積極的に誘導するために、目的の遺伝子を薬物誘導性の操作された転写因子の制御下に置く一般原理に基づくいくつかの系が記載されている（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｔ．，１９９７，Ｃｕｒｒ
Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｒｎ ＢｉｏＩ，１（２）：２１０－８、Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｔ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１９９８．９（５）：ｐ．４５１－６）。ラパマイシン、又はラパログなどの小分子薬物の投与によって導入遺伝子の発現を誘導することができる系が以前に開発されている。

【0002】

ラパログ調節遺伝子発現系は、例えば、米国特許第６，０１５，７０９号、同第６，１１７，６８０号、同第６，１３３，４５６号、同第６，１５０，５２７号、同第６，１８７，７５７号、同第６，３０６，６４９号、同第６，４７９，６５３号及び同第６，６４９，５９５号に記載されている。ＡＲＩＡＤ（登録商標）技術を採用する２つの主要な系は、ホモ二量体化に基づく系及びヘテロ二量体化に基づく系を含む（Ｒｉｖｅｒａ ｅｔ
ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ，２（９）：１０２８－１０３２、Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８３：８８－９１、Ｒｉｖｅｒａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．９６（１５）：８６５７－８６６２，１９９９）。

【0003】

Ｊ．Ｎａｉｄｏｏ ａｎｄ Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｖｏｌ ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ５９５４１０，１０ ｐａｇｅｓ，（２０１１）に要約されているように、ラパマイシン調節遺伝子調節系は、２つの転写因子間の相互作用に依存し、一方はＤＮＡ結合ドメインを組み込み、他方はＤＮＡ活性化ドメインを組み込む。転写因子の各々はまた、二量体化薬物ラパマイシンの存在下での相互作用を可能にして導入遺伝子の発現を駆動する異種リガンド結合ドメインを含有する。ＤＮＡ結合は、３コピーのＦＫ結合タンパク質（ＦＫＢＰ）に融合されたジンクフィンガーホメオドメイン－１（ＺＦＨＤ１）ＤＮＡ結合ドメインの、ヒトＣＭＶプロモーターに駆動される産生を介して促進される。ＮＦκＢ ｐ６５活性化ドメインに融合したＦＫＢＰ－ラパマイシン関連タンパク質１（ＦＲＡＰ）からなる融合タンパク質とともに、このＤＮＡ結合タンパク質の二量体化を誘導するラパマイシンの存在下で、導入遺伝子発現が達成される。

【0004】

これらの系は、非ヒト動物の療法に有益であるだろうが、報告されている系の全ては、ヒト配列に基づいている。したがって、必要とされるのは、非ヒト療法に好適な調節可能な系である。

【発明の概要】

【0005】

本明細書では、誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子、ベクター、及び組換えＡＡＶが提供される。

【0006】

第１の態様では、誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子が提供される。本系は、プロモーターを含む発現制御配列に作動可能に連結された遺伝子産物をコードする導入遺伝子と、イヌ（ｃａｎｉｎｅ）又はネコ（ｆｅｌｉｎｅ）トランス活性化ドメイン及びイヌ又はネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシ
ン結合（ＦＲＢ）ドメインを含む活性化ドメインと、ジンクフィンガーホメオドメイン（ＺＦＨＤ）及び１、２、又は３個のＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、少なくとも８コピーのＺＦＨＤに対する結合部位（８ＸＺＦＨＤ）、それに続く最小ＩＬ２プロモーターと、を含む。有効量のラパマイシン又はラパログの存在は、宿主細胞における導入遺伝子の発現を誘導する。

【0007】

別の態様では、核酸分子が提供される。本分子は、プロモーターと、イヌ又はネコｐ６５トランス活性化ドメイン及びイヌ又はネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインを含む活性化ドメインと、ジンクフィンガーホメオドメイン（ＺＦＨＤ）及び３つのＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、８コピーのＺＦＨＤに対する結合部位と、治療用産物のコード配列と、を含む。

【0008】

別の態様では、本明細書に記載される誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子を含む、ウイルスベクターが提供される。

【0009】

別の態様では、本明細書に記載される誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子を含む、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）が提供される。

【0010】

別の態様では、治療用産物の用量を調節するための治療レジメンが提供される。本レジメンは、本明細書に記載されるｒＡＡＶ組成物を、それを必要とする対象に投与することと、有効量のラパマイシン又はラパログを送達して、対象の宿主細胞において治療産物の発現を誘導することと、を含む。一実施形態では、対象は、イヌ又はネコである。

【0011】

本発明の他の態様及び利点は、以下の発明の詳細な説明から容易に明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】ｃＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（イヌ誘導性カセット）を示すプラスミドマップである。

【図2】ｆＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（ネコ誘導性カセット）を示すプラスミドマップである。

【図3】ｒｈＥＰＯのインビトロ発現を示すグラフである。ＨＥＫ２９３細胞を、アカゲザルＥｐｏ（ｒｈＥｐｏ）を発現するｈＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（ヒト誘導性カセット）、ｃＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（イヌ誘導性カセット）、又はｆＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（ネコ誘導性カセット）でトランスフェクトした。トランスフェクションの１日後、細胞を０ｎＭ、４ｎＭ、又は４０ｎＭのラパマイシンで処理した。培養上清を回収し、ラパマイシン処理の４８時間後にｒｈＥｐｏを測定した。

【図4】ネコ誘導性構築物、ｆｅＦＲＢ－ｐ６５（配列番号３６）及びｆｅＺＦＨＤ１－３ｘＦＫＢＰ（配列番号３７）、並びにイヌ誘導性構築物、ｃａＦＲＢ－ｐ６５（配列番号３８）及びｃａＺＦＨＤ１－３ｘＦＫＢＰ（配列番号３９）のアミノ酸配列を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本明細書に記載の核酸、ベクター、及びウイルスは、遺伝子療法が対象に一度投与され、その後、経口誘導剤を投与することによって導入遺伝子がオンになることを可能にするように設計されている。これにより、生物学的薬物の頻繁な注射を定期的な経口薬に置き換えることができる。一実施形態では、対象は、イヌである。別の実施形態では、対象は、ネコである。

【0014】

以前の入手可能な全ての系は、ヒト又は他の種由来のタンパク質に基づいているが、本明細書で提供されるのは、完全にイヌ及びネコのアミノ酸配列からなるＡＡＶパッケージングされた構築物であり、それは獣医用途において安全性プロファイルがより良好であり、免疫原性が減少している。

【0015】

「ａ」又は「ａｎ」という用語は、１つ以上を指すことに留意されたい。したがって、「ａ」（又は「ａｎ」）、「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、及び「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

【0016】

本明細書の様々な実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言葉を用いて示されているが、他の状況では、関連する実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」又は「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ
ｏｆ）」という言葉を用いて解釈及び記載されるべきことも意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、排他的ではなく包括的に解釈される必要がある。「なる（ｃｏｎｓｉｓｔ）」、「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という用語、及びその変形は、包括的ではなく排他的に解釈される必要がある。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、別途指定されない限り、与えられた参照から１０％の変動性を意味する。

【0017】

本明細書で使用される「調節」という用語又はその変形は、式（Ｉ）の化合物が生物学的経路の１つ以上の成分を阻害する能力を指す。

【0018】

「対象」は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、又はサル、チンパンジー、ヒヒ、若しくはゴリラなどの非ヒト霊長類である。一実施形態では、対象は、ネコである。別の実施形態では、対象は、イヌである。

【0019】

本明細書で使用される場合、「疾患」、「障害」、及び「状態」は、対象における異常な状態を示すために互換的に使用される。

【0020】

本明細書で別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者によって、及び本明細書で使用されている多数の用語に対して当業者に一般的な手引きを提供する公開された文書を参照することによって、一般的に理解されているものと同じ意味を有する。

【0021】

いくつかの例において、核酸分子に関して、以下の成分が記載される。核酸分子（又はベクター若しくはウイルス（例えば、ｒＡＡＶ））が言及される場合、別の実施形態では、ベクター又はウイルス（又は核酸分子）が本明細書に包含されることを理解されたい。

【0022】

成分
本明細書では、改良されたラパマイシン／ラパログで調節可能な発現系を含む核酸分子、ベクター、及びウイルスが提供される。本明細書で提供される場合、本明細書で提供されるベクターを介して送達される導入遺伝子産物の用量は、対象に送達される調節剤又は誘導剤（小分子）（時には「二量体化剤」とも称される）によって調節（制御）される。したがって、ラパマイシン又はラパログの送達は、導入遺伝子の発現を活性化するのに必要な２つの成分を一緒にする。

【0023】

本明細書で提供される誘導性遺伝子調節／発現系は、少なくとも以下の成分、目的の遺伝子産物をコードする導入遺伝子に作動可能に連結されたプロモーター、活性化ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、及びジンクフィンガーホメオドメイン結合部位を含有する。他の
実施形態では、本明細書に更に記載されるように、追加の成分が発現系に含まれ得る。

【0024】

核酸分子は、活性化ドメインを含み、それは、好ましくは、ＤＮＡ結合ドメインの上流に位置する。本明細書に記載の系は、活性化ドメインにおけるイヌ又はネコ配列を利用するように設計されている。一実施形態では、活性化ドメインは、ＮＦ－カッパＢのｐ６５サブユニットからのカルボキシ末端と、ＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインとの融合である。一実施形態では、ＦＲＢドメインは、イヌ配列である。別の実施形態では、ＦＲＢドメインは、ネコ配列である。

【0025】

一実施形態では、活性化ドメインは、ネコ由来のＮＦ－カッパＢのｐ６５サブユニットからのカルボキシ末端に融合されたネコＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインである。別の実施形態では、活性化ドメインは、イヌ由来のＮＦ－カッパＢのｐ６５サブユニットからのカルボキシ末端に融合されたイヌＦＫＢＰ１２－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＡＰ）のＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインである。

【0026】

一実施形態では、ＦＲＢドメインは、以下の配列番号１（イヌ）の配列を有する：ａｔｃｃｔｃｔｇｇｃａｔｇａｇａｔｇｔｇｇｃａｔｇａａｇｇｃｃｔｇｇａａｇａｇｇｃａｔｃｔｃｇｔｔｔｇｔａｃｔｔｔｇｇｇｇａａａｇｇａａｃｇｔｇａａａｇｇｃａｔｇｔｔｔｇａｇｇｔｇｃｔｇｇａｇｃｃｃｔｔｇｃａｔｇｃｔａｔｇａｔｇｇａａｃｇｇｇｇｃｃｃｃｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇｇａａａｃａｔｃｃｔｔｔａａｔｃａｇｇｃｃｔａｔｇｇｔｃｇａｇａｔｔｔａａｔｇｇａｇｇｃｃｃａａｇａｇｔｇｇｔｇｃａｇｇａａｇｔａｃａｔｇａａａｔｃａｇｇｇａａｃｇｔｃａａｇｇａｃｃｔｃａｃｃｃａａｇｃｃｔｇｇｇａｃｃｔｃｔａｔｔａｔｃａｃｇｔｇｔｔｃｃｇａｃｇａａｔｃｔｃａａａｇ。

【0027】

一実施形態では、ＦＲＢドメインは、以下の配列番号２（ネコ）の配列を有する：ａｔｇｇａｃｔａｔｃｃｔｇｃｔｇｃｃａａｇａｇｇｇｔｃａａｇｔｔｇｇａｃｔｃｔａｇａａｔｃｃｔｃｔｇｇｃａｔｇａｇａｔｇｔｇｇｃａｔｇａａｇｇｃｃｔｇｇａａｇａｇｇｃａｔｃｔｃｇｔｔｔｇｔａｃｔｔｔｇｇｇｇａａａｇｇａａｃｇｔｇａａａｇｇｃａｔｇｔｔｔｇａｇｇｔｇｃｔｇｇａｇｃｃｃｔｔｇｃａｔｇｃｔａｔｇａｔｇｇａａｃｇｇｇｇｃｃｃｃｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇｇａａａｃａｔｃｃｔｔｔａａｔｃａｇｇｃｃｔａｔｇｇｔｃｇａｇａｔｔｔａａｔｇｇａｇｇｃｃｃａａｇａｇｔｇｇｔｇｃａｇｇａａｇｔａｃａｔｇａａａｔｃａｇｇｇａａｃｇｔｃａａｇｇａｃｃｔｃａｃｃｃａａ。

【0028】

比較のため、ヒトＦＲＢドメイン配列は、以下の配列番号３（ヒト）に示される：ａｔｇｇａｃｔａｔｃｃｔｇｃｔｇｃｃａａｇａｇｇｇｔｃａａｇｔｔｇｇａｃｔｃｔａｇａａｔｃｃｔｃｔｇｇｃａｔｇａｇａｔｇｔｇｇｃａｔｇａａｇｇｃｃｔｇｇａａｇａｇｇｃａｔｃｔｃｇｔｔｔｇｔａｃｔｔｔｇｇｇｇａａａｇｇａａｃｇｔｇａａａｇｇｃａｔｇｔｔｔｇａｇｇｔｇｃｔｇｇａｇｃｃｃｔｔｇｃａｔｇｃｔａｔｇａｔｇｇａａｃｇｇｇｇｃｃｃｃｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇｇａａａｃａｔｃｃｔｔｔａａｔｃａｇｇｃｃｔａｔｇｇｔｃｇａｇａｔｔｔａａｔｇｇａｇｇｃｃｃａａｇａｇｔｇｇｔｇｃａｇｇａａｇｔａｃａｔｇａａａｔｃａｇｇｇａａｔｇｔｃａａｇｇａｃｃｔｃｃｔｃｃａａ。

【0029】

他の実施形態では、ＦＲＢドメインは、配列番号１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、又は９９％の同一性を共有する配列を有する。別の実施形態では、ＦＲＢドメインは、配列番号２と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、又は９９％の同一性を共有する配列を有する。

【0030】

一実施形態では、ＮＦ－カッパＢのｐ６５サブユニットは、イヌ配列である。別の実施
形態では、ＮＦ－カッパＢのｐ６５サブユニットは、ネコ配列である。

【0031】

一実施形態では、ｐ６５サブユニットは、以下の配列番号４（イヌ）の配列を有する：ｇａｇｇａａｔｔｃａｇｃｃｃｃａｔｇｇｔｇｔｔｃｔｃｔａｇｃｇｇｃｃａｇａｔｃａｇｃｔｃｔｃａｇａｃａａｇｃｇｃｃｃｔｔｇｃｔｔｃｔｇｃｃｃｃｔｇｃｔｃｃｔｇｃｔｃｃａａｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｃｔｃｃａｇｃａｃｃｔａｔｔｃｔｇｇｃａｃｃｔｇｇａｃｔｇｇｃｔｃａｇｇｃｔａｔｇｇｃｔｃｃａｃｃａｇｃａｃｃａａａｇａｃａａｃａｃａｇｇｃｃｇｇｃｇａｇｇｇａａｃａｃｔｇａｃａｇａａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃａｇｃｔｃｃａｇｔｔｃｇａｃｇｃｃｇａｃｇａｇｇａｔｃｔｇｇｇａｇｃｃｃｔｇｃｔｇｇｇｃａａｔｔｃｔｇｃｔｇａｔｃｃｔｇｃｃｇｔｇｔｔｃａｃｃｇａｔｃｔｇｇｃｃａｇｃｇｔｇｇａｃａａｔａｇｃｇａｇｔｔｃｃａｇｃａｇｃｔｃｃｔｇａａｃｃａｇｇｇｃｇｔｔａｇｔｇｔｇｇｃｃｃｃｔｃａｔａｃａｇｃｃｇａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇａｔｇｇａａｔａｃｃｃｃｇａｇｇｃｔａｔｃａｃｃａｇａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｇｃｔｃｔｃａａａｇａｃｃｔｃｃａｇａｔｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃｃａｇｔｇｇｇａｇｃａｔｃｔｇｇｇｃｔｃｃｃｃａａｔｇｇｃｃｔｃｃｔｔｔｃａｇｇａｇａｔｇａａｇａｃｔｔｃｔｃｃｔｃｃａｔｔｇｃｇｇａｃａｔｇｇａｃｔｔｃｔｃａｇｃｃｃｔｇｃｔｇａｇｔｃａｇａｔｃａｇｃｔｃｃ

【0032】

一実施形態では、ｐ６５サブユニットは、以下の配列番号５（ネコ）の配列を有する：ｇａｇｇａａｔｔｃａｇｃｃｃｃａｔｇｇｔｇｔｔｃｃｃｃａｇｃｇｇａｃａｇａｔｃｃｃａｔｃｔｃａｇａｃａｃｃａｇｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃｃｔｇｃｔｃｃｔａｔｔｃｔｔｇｃｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｃｃｔｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃｃａｇｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｇｃａｃｃａｇｃａｃｃａｇｃｔｃｃｇｇｃｔｃｃｇｇｃｔｃｃａｇｃａｃｃａａｔａｃｔｔｇｃｔｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｃａｇｇｃｔｇｔｇｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｃｔｃｃｔａａａａｃａａｃａｃａａｇｃｃｇｇｃｇａｇｇｇｃａｃａｃｔｇａｃａｇａａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃａｔｃｔｇｃａｇｔｔｃｇａｃｇｃｃｇａｃｇａｇｇａｔｃｔｇｇｇａｇｃｃｃｔｇｃｔｇｇｇｃａａｔｔｃｔｇｃｔｇａｔｃｃｔｇｃｃｇｔｇｔｔｃａｃｃｇａｔｃｔｇｇｃｃａｇｃｇｔｇｇａｃａａｔａｇｃｇａｇｔｔｃｃａｇｃａｇｃｔｃｃｔｇａａｃｃａｇｇｇｃｇｔｔａｇｔｇｔｇｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｃｔｇｃｃｇａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇａｔｇｇａａｔａｃｃｃｃｇａｇｇｃｔａｔｃａｃｃａｇａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｇｃｔｃｔｃａａａｇａｃｃｔｃｃａｇａｔｃｃａｇｃａｃｃｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｇａｇｃａｔｃｔ

【0033】

比較のために、ヒトｐ６５サブユニット配列は、以下の配列番号６（ヒト）に示される：ｇａｔｇａｇｔｔｔｃｃｃａｃｃａｔｇｇｔｇｔｔｔｃｃｔｔｃｔｇｇｇｃａｇａｔｃａｇｃｃａｇｇｃｃｔｃｇｇｃｃｔｔｇｇｃｃｃｃｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃａａｇｔｃｃｔｇｃｃｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｃｃｃｃｔｇｃｃｃｃｔｇｃｔｃｃａｇｃｃａｔｇｇｔａｔｃａｇｃｔｃｔｇｇｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｃｃｃｔｇｔｃｃｃａｇｔｃｃｔａｇｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃａｇｇｃｔｇｔｇｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｃｃｃｃａａｇｃｃｃａｃｃｃａｇｇｃｔｇｇｇｇａａｇｇａａｃｇｃｔｇｔｃａｇａｇｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｃｔｇｃａｇｔｔｔｇａｔｇａｔｇａａｇａｃｃｔｇｇｇｇｇｃｃｔｔｇｃｔｔｇｇｃａａｃａｇｃａｃａｇａｃｃｃａｇｃｔｇｔｇｔｔｃａｃａｇａｃｃｔｇｇｃａｔｃｃｇｔｃｇａｃａａｃｔｃｃｇａｇｔｔｔｃａｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｃｃａｇｇｇｃａｔａｃｃｔｇｔｇｇｃｃｃｃｃｃａｃａｃａａｃｔｇａｇｃｃｃａｔｇｃｔｇａｔｇｇａｇｔａｃｃｃｔｇａｇｇｃｔａｔａａｃｔｃｇｃｃｔａｇｔｇａｃａｇｇｇｇｃｃｃａｇａｇｇｃｃｃｃｃｃｇａｃｃｃａｇｃｔｃｃｔｇｃｔｃｃａｃｔｇｇｇｇｇｃｃｃｃｇｇｇｇｃｔｃｃｃｃａａｔｇｇｃｃｔｃｃｔｔｔｃａｇｇａｇａｔｇａａｇａｃｔｔｃｔｃｃｔｃｃａｔｔｇｃｇｇａｃａｔｇｇａｃｔｔｃｔｃａｇｃｃｃｔｇｃｔｇａｇｔｃａｇａｔｃａｇｃｔｃｃ

【0034】

他の実施形態では、ｐ６５サブユニットは、配列番号４と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、又は９９％の同一性を共有する配列を有する。別の実施形態では、ｐ６５サブユニットは、配列番号５と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、又は９９％の同一性を共有する配列を有する。

【0035】

ＤＮＡ結合ドメインは、最大３コピーのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）に接合されたジンクフィンガーホメオドメイン１のＤＮＡ結合融合からなる。誘導剤、例えばラパマイシンなどのラパログの存在下で、ＤＮＡ結合ドメイン及び活性化ドメインは、それらのＦＫＢＰ及びＦＲＢドメインの相互作用を介して二量体化され、導入遺伝子の転写活性化をもたらす。

【0036】

一実施形態では、誘導性発現系は、プロモーター及び治療用産物のコード配列と同じベクターに含有される。別の実施形態では、誘導性発現系は、２つ以上のベクターに含有される。

【0037】

本系は、目的の治療用産物のコード配列の上流に誘導性プロモーターを更に含む。

【0038】

一実施形態では、ジンクフィンガーホメオドメイン１は、配列番号１６の配列を有する。別の実施形態では、ジンクフィンガーホメオドメイン１は、配列番号３０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９６％、９８％、又は９９％の同一性を共有する配列を有する。

【0039】

核酸分子は、１、２、又は３コピーのＦＫＢＰ配列を有するように設計される。これらは、本明細書では、ＦＫＢＰサブユニットと称される。一実施形態では、サブユニットは、組換えを最小限にするために、同じタンパク質を発現するように設計されるが、互いに異なる核酸を有するように設計される。好適なＦＫＢＰ配列の例は、本明細書で提供される。一実施形態では、選択されたＦＫＢＰサブユニットは、互いに約８５％未満同一であり、すなわち、少なくとも約１５％異なる。別の実施形態では、ＦＫＢＰサブユニット核酸配列は、同一である。

【0040】

好適なＦＫＢＰサブユニット配列の例は、本明細書で提供される。特定の実施形態では、ＦＫＢＰサブユニットは、野生型ＦＫＢＰコード配列と約６０％～約８０％同一である。しかしながら、他の好適な配列が設計されてもよい。
一実施形態では、ＦＫＢＰサブユニットは、以下の配列番号７（ＦＫＢＰ）の配列を有する：
ｇｇａｇｔｇｃａｇｇｔｇｇａａａｃｃａｔｃｔｃｃｃｃａｇｇａｇａｃｇｇｇｃｇｃａｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｃｇｃｇｇｃｃａｇａｃｃｔｇｃｇｔｇｇｔｇｃａｃｔａｃａｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｔｇａａｇａｔｇｇａａａｇａａａｔｔｔｇａｔｔｃｃｔｃｃｃｇｇｇａｃａｇａａａｃａａｇｃｃｃｔｔｔａａｇｔｔｔａｔｇｃｔａｇｇｃａａｇｃａｇｇａｇｇｔｇａｔｃｃｇａｇｇｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇｇｔｔｇｃｃｃａｇａｔｇａｇｔｇｔｇｇｇｔｃａｇａｇａｇｃｃａａａｃｔｇａｃｔａｔａｔｃｔｃｃａｇａｔｔａｔｇｃｃｔａｔｇｇｔｇｃｃａｃｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇｇｃａｔｃａｔｃｃｃａｃｃａａａｃｇｃｃａｃｔｃｔｃｇｔｃｔｔｃｇａｔｇｔｇｇａｇｃｔｔｃｔａａａａｃｔｇｇａａ

【0041】

一実施形態では、ＦＫＢＰサブユニットは、以下の配列番号８（ＦＫＢＰｗ１）の配列を有する：ｇｇｃｇｔｔｃａｇｇｔｇｇａａａｃｃａｔｃａｇｔｃｃａｇｇｇｇａｔｇｇｃｃｇａａｃｔｔｔｔｃｃａａａｇａｇａｇｇｇｃａｇａｃｔｔｇｃｇｔｃｇｔｇｃａｔｔａｔａｃｔｇｇｔａｔｇｃｔｇｇａｇｇａｔｇｇｇａａａａａｇｔｔｃｇａｃｔｃｔｔｃｃａｇａｇａｔｃｇｇａａｃａａａｃｃａｔｔｃａａａｔｔｃａｔｇｃｔｃｇｇｇａａ
ａｃａｇｇａａｇｔｔａｔｃｃｇｃｇｇａｔｇｇｇａｇｇａｇｇｇｃｇｔｇｇｃｃｃａｇａｔｇｔｃｃｇｔｇｇｇｃｃａｇｃｇｃｇｃｃａａｇｃｔａａｃｃａｔｃｔｃｃｃｃａｇａｃｔａｃｇｃｃｔａｃｇｇａｇｃｃａｃｃｇｇａｃａｃｃｃｃｇｇｔａｔｃａｔａｃｃｃｃｃａａａｃｇｃｃａｃｃｃｔｔｇｔｇｔｔｔｇａｃｇｔｇｇａａｃｔｇｃｔｔａａｇｃｔａｇａｇ

【0042】

一実施形態では、ＦＫＢＰサブユニットは、以下の配列番号９（ＦＫＢＰｗ２）の配列を有する：
ｇｇｃｇｔｇｃａｇｇｔｃｇａｇａｃｃａｔｃａｇｃｃｃｃｇｇｃｇａｃｇｇｃｃｇｃａｃｃｔｔｔｃｃｃａａｇａｇａｇｇｃｃａｇａｃｔｔｇｃｇｔｇｇｔｃｃａｃｔａｃａｃｃｇｇｃａｔｇｃｔｇｇａｇｇａｃｇｇｃａａｇａａｇｔｔｃｇａｃａｇｃａｇｃｃｇｃｇａｃｃｇｃａａｃａａｇｃｃｃｔｔｃａａｇｔｔｃａｔｇｃｔｇｇｇｃａａａｃａｇｇａａｇｔｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｔｇｇｇａｇｇａａｇｇｃｇｔｇｇｃｔｃａｇａｔｇａｇｃｇｔｇｇｇｇｃａｇｃｇｇｇｃｃａａｇｃｔｇａｃｃａｔｃａｇｃｃｃｃｇａｃｔａｔｇｃｃｔａｃｇｇｃｇｃｃａｃｃｇｇｃｃａｃｃｃｃｇｇｃａｔｃａｔｃｃｃｃｃｃｃａａｃｇｃｃａｃｃｃｔｃｇｔｇｔｔｃｇａｃｇｔｇｇａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇａｇｔｇａ
（ＦＫＢＰ（完全な全サブユニット））：配列番号１０
ｇｇａｇｔｇｃａｇｇｔｇｇａａａｃｃａｔｃｔｃｃｃｃａｇｇａｇａｃｇｇｇｃｇｃａｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｃｇｃｇｇｃｃａｇａｃｃｔｇｃｇｔｇｇｔｇｃａｃｔａｃａｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｔｇａａｇａｔｇｇａａａｇａａａｔｔｔｇａｔｔｃｃｔｃｃｃｇｇｇａｃａｇａａａｃａａｇｃｃｃｔｔｔａａｇｔｔｔａｔｇｃｔａｇｇｃａａｇｃａｇｇａｇｇｔｇａｔｃｃｇａｇｇｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇｇｔｔｇｃｃｃａｇａｔｇａｇｔｇｔｇｇｇｔｃａｇａｇａｇｃｃａａａｃｔｇａｃｔａｔａｔｃｔｃｃａｇａｔｔａｔｇｃｃｔａｔｇｇｔｇｃｃａｃｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇｇｃａｔｃａｔｃｃｃａｃｃａａａｃｇｃｃａｃｔｃｔｃｇｔｃｔｔｃｇａｔｇｔｇｇａｇｃｔｔｃｔａａａａｃｔｇｇａａａｃｔａｇａｇｇｃｇｔｔｃａｇｇｔｇｇａａａｃｃａｔｃａｇｔｃｃａｇｇｇｇａｔｇｇｃｃｇａａｃｔｔｔｔｃｃａａａｇａｇａｇｇｇｃａｇａｃｔｔｇｃｇｔｃｇｔｇｃａｔｔａｔａｃｔｇｇｔａｔｇｃｔｇｇａｇｇａｔｇｇｇａａａａａｇｔｔｃｇａｃｔｃｔｔｃｃａｇａｇａｔｃｇｇａａｃａａａｃｃａｔｔｃａａａｔｔｃａｔｇｃｔｃｇｇｇａａａｃａｇｇａａｇｔｔａｔｃｃｇｃｇｇａｔｇｇｇａｇｇａｇｇｇｃｇｔｇｇｃｃｃａｇａｔｇｔｃｃｇｔｇｇｇｃｃａｇｃｇｃｇｃｃａａｇｃｔａａｃｃａｔｃｔｃｃｃｃａｇａｃｔａｃｇｃｃｔａｃｇｇａｇｃｃａｃｃｇｇａｃａｃｃｃｃｇｇｔａｔｃａｔａｃｃｃｃｃａａａｃｇｃｃａｃｃｃｔｔｇｔｇｔｔｔｇａｃｇｔｇｇａａｃｔｇｃｔｔａａｇｃｔａｇａｇａｃｔａｇａｇｇｃｇｔｇｃａｇｇｔｃｇａｇａｃｃａｔｃａｇｃｃｃｃｇｇｃｇａｃｇｇｃｃｇｃａｃｃｔｔｔｃｃｃａａｇａｇａｇｇｃｃａｇａｃｔｔｇｃｇｔｇｇｔｃｃａｃｔａｃａｃｃｇｇｃａｔｇｃｔｇｇａｇｇａｃｇｇｃａａｇａａｇｔｔｃｇａｃａｇｃａｇｃｃｇｃｇａｃｃｇｃａａｃａａｇｃｃｃｔｔｃａａｇｔｔｃａｔｇｃｔｇｇｇｃａａａｃａｇｇａａｇｔｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｔｇｇｇａｇｇａａｇｇｃｇｔｇｇｃｔｃａｇａｔｇａｇｃｇｔｇｇｇｇｃａｇｃｇｇｇｃｃａａｇｃｔｇａｃｃａｔｃａｇｃｃｃｃｇａｃｔａｔｇｃｃｔａｃｇｇｃｇｃｃａｃｃｇｇｃｃａｃｃｃｃｇｇｃａｔｃａｔｃｃｃｃｃｃｃａａｃｇｃｃａｃｃｃｔｃｇｔｇｔｔｃｇａｃｇｔｇｇａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇａｇｔｇａ

【0043】

任意選択で、サブユニット配列のうちの１つは、野生型ＦＫＢＰ配列であり得る。一実施形態では、野生型ＦＫＢＰ配列は、操作されたＦＫＢＰサブユニット配列の上流に位置する。別の実施形態では、野生型ＦＫＢＰ配列は、操作されたＦＫＢＰサブユニット配列の下流に位置する。更に別の実施形態では、野生型ＦＫＢＰ配列は、２つの異なる操作されたＦＫＢＰサブユニット配列の間に挟まれている。別の実施形態では、野生型ＦＫＢＰサブユニット配列は、本発明の組成物において使用されない。

【0044】

一実施形態では、核酸分子は、配列番号７、配列番号８、及び配列番号９を含む。

【0045】

核酸分子は、ジンクフィンガーホメオドメイン結合部位を更に含む。核酸分子は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２個のＺＦＨＤに対する結合部位を含有する。一実施形態では、核酸分子は、８つ（８）のジンクフィンガーホメオドメイン結合部位（結合パートナー）（８ＸＺＦＨＤ）を含有する。しかしながら、本発明は、２～約１２コピーのジンクフィンガー結合部位を有する核酸分子を包含する。一実施形態では、核酸は、８、９、１０、１１、又は１２コピーのジンクフィンガー結合部位を包含する。一実施形態では、ＺＦＨＤ結合部位は、配列番号３１を含む。別の実施形態では、ＺＦＨＤ結合部位は、配列番号３２、３３、３４、又は３５のうちの１つ以上を含む。ＺＦＨＤ結合部位は、配列番号３２、３３、３４、又は３５のうちのいずれかの１コピーより多くを含み得る。

【0046】

いくつかの実施形態では、ジンクフィンガーホメオドメイン結合部位の下流に最小ＩＬ２プロモーターがある。一実施形態では、ＩＬ２プロモーターは、以下の配列番号１１の配列を有する：ａａｃａｔｔｔｔｇａｃａｃｃｃｃｃａｔａａｔａｔｔｔｔｔｃｃａｇａａｔｔａａｃａｇｔａｔａａａｔｔｇｃａｔｃｔｃｔｔｇｔｔｃａａｇａｇｔｔｃｃｃｔａｔｃａｃｔｃｔｃｔｔｔａａｔｃａｃｔａｃｔｃａｃａｇｔａａｃｃｔｃａａｃｔｃｃｔｇｃｃａｃａａ。

【0047】

一実施形態では、ＩＬ２プロモーターは、以下の配列番号１２の配列を有する：ａａｃａｔｔｔｔｇａｃａｃｃｃｃｃａｔａａｔａｔｔｔｔｔｃｃａｇａａｔｔａａｃａｇｔａｔａａａｔｔｇｃａｔｃｔｃｔｔｇｔｔｃａａｇａｇｔｔｃｃｃｔａｔｃａｃｔｃｔｃｔｔｔａａｔｃａｃｔａｃｔｃａｃａｇｔａａｃｃｔｃ

【0048】

一実施形態では、トランス活性化ドメインとＤＮＡ結合ドメインとの間にリンカーがあり、リンカーは、Ｆ２Ａ又はＩＲＥＳであり得る。一実施形態では、リンカーは、ＩＲＥＳである。

【0049】

本明細書で提供される場合、ベクターを介して送達される導入遺伝子産物の用量は、対象に送達される調節剤又は誘導剤（小分子）（時には「二量体化剤」とも称される）によって調節（制御）される。一実施形態では、誘導剤は、ラパマイシン又はラパログである。

【0050】

「ラパマイシン」は、高い親和性でＦＫ５０６結合タンパク質、ＦＫＢＰに結合して、ラパマイシン：ＦＫＢＰ複合体を形成する、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓによって産生されるマクロライド抗生物質である。ラパマイシン：ＦＫＢＰ複合体は、高い親和性で大細胞タンパク質、ＦＲＡＰに結合し、ＦＲＡＰとともにＦＫＢＰ／ラパマイシン複合体を形成する。ラパマイシンは、ＦＫＢＰをＦＲＡＰに接合するための二量体化剤又はアダプターとして機能する。ラパマイシンは、シロリムスとしても既知である。

【0051】

本明細書で使用される場合、「ラパログ」という用語は、ラパマイシンに構造的に関連する類似体、ホモログ、誘導体、及び他の化合物を含むラパマイシンの構造変異体を含むことを意味する。ラパログは、ＦＲＡＰの変異体であるＦＲＡＰ_Ｌに結合するように設計されているが、野生型ＦＲＡＰには結合しない。かかる構造的変異体としては、Ｃ７、Ｃ４２及び／又はＣ２９でのメトキシの脱メチル化、除去又は置換、Ｃ１３、Ｃ４３及び／又はＣ２８でのヒドロキシの除去、誘導体化又は置換、Ｃ１４、Ｃ２４及び／又はＣ３０でのケトンの還元、除去又は誘導体化、６員ピペコレート環の５員のプロリル環での置換
、並びにシクロヘキシル環の代替置換、又はシクロヘキシル環の置換シクロペンチル環での置換などの修飾が含まれる。例えば、米国特許第６，１８７，７５７号、同第５，５２５，６１０号、同第５，３１０，９０３号及び同第５，３６２，７１８号を参照されたく、これらは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。例示的なラパログとしては、ＡＰ２２５９４（２８－エピラパマイシン）が挙げられ、これは、顕著に低い免疫抑制特性でラパマイシンの誘導活性を提供するため、特に好適である。この化合物は、Ｔｉ（ＯｉＰｒ）_４の存在下で、シロリムス（ラパマイシン）をメチレンクロルサイドと混合することによって合成され得る。６０分間の反応後、粗生成物をメタノールに溶解し、メタノール／水混合物から再結晶する。精製後の典型的な最終収率は、約５０％である。しかしながら、他の好適な方法が選択されてもよい。更に他の例示的なラパログとしては、例えば、テムシロリムス、エベロリムス、ＡＢＴ５７８、ＡＰ２３５７３、及びビオリムスが挙げられる。内因性ＦＫＢＰとの相互作用を最小限に抑えるように設計された「バンプ」を有する、ＡＰ２６１１３（Ａｒｉａｄ）、ＡＰ１５１０（Ａｍａｒａ，Ｊ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９４（２０）：１０６１８－２３）ＡＰ２２６６０、ＡＰ２２５９４、ＡＰ２１３７０、ＡＰ２２５９４、ＡＰ２３０５４、ＡＰ１８５５、ＡＰ１８５６、ＡＰ１７０１、ＡＰ１８６１、ＡＰ１６９２、及びＡＰ１８８９。

【0052】

「ラパマイシン調節プロモーター」は、その活性がラパマイシンの存在又は非存在によって調節されるプロモーターを指す。より具体的には、制御は、「オン」及び「オフ」よりも細かく調節され得、転写のレベルは、提供されるラパマイシンの濃度又は用量によって制御され得る。本明細書で提供される場合、導入遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターは、本明細書に記載される誘導性遺伝子発現系に含まれる場合、調節されたプロモーターである。ラパマイシン誘導性プロモーターは、当該技術分野で既知である。例えば、ＷＯ２００７１２６７９８、ＷＯ２００１０９８５０７を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

【0053】

一実施形態では、プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。一実施形態では、プロモーターは、以下の配列番号１３の配列を有するＣＭＶプロモーターである：ａｃｇｃｇｔｔｃｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｃｇｔｔａｃａｔａａｃｔｔａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇａｃｃｇｃｃｃａａｃｇａｃｃｃｃｃｇｃｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔａａｔｇａｃｇｔａｔｇｔｔｃｃｃａｔａｇｔａａｃｇｃｃａａｔａｇｇｇａｃｔｔｔｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇｇｇｔｇｇａｇｔａｔｔｔａｃｇｇｔａａａｃｔｇｃｃｃａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃａａｇｔｇｔａｔｃａｔａｔｇｃｃａａｇｔａｃｇｃｃｃｃｃｔａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃａｔｔａｔｇｃｃｃａｇｔａｃａｔｇａｃｃｔｔａｔｇｇｇａｃｔｔｔｃｃｔａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃｔａｃｇｔａｔｔａｇｔｃａｔｃｇｃｔａｔｔａｃｃａｔｇｇｔｇａｔｇｃｇｇｔｔｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃａａｔｇｇｇｃｇｔｇｇａｔａｇｃｇｇｔｔｔｇａｃｔｃａｃｇｇｇｇａｔｔｔｃｃａａｇｔｃｔｃｃａｃｃｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇｇｇａｇｔｔｔｇｔｔｔｔｇｇｃａｃｃａａａａｔｃａａｃｇｇｇａｃｔｔｔｃｃａａａａｔｇｔｃｇｔａａｃａａｃｔｃｃｇｃｃｃｃａｔｔｇａｃｇｃａａａｔｇｇｇｃｇｇｔａｇｇｃｇｔｇｔａｃｇｇｔｇｇｇａｇｇｔｃｔａｔａｔａａｇｃａｇａｇｃｔｃｇｔｔｔａｇｔｇａａｃｃｇｔｃａｇａｔｃｇｃｃｔｇｇａｇａｃｇｃｃａｔｃｃａｃｇｃｔｇｔｔｔｔｇａｃｃｔｃｃａｔａｇａａｇａｃａｃｃｇｇｇａｃｃｇａｔｃｃａｇｃｃｔｃｃｇｇｇｇｇａｔｃｔｔｇｇｔｇｇｃｇｔｇａａａｃｔｃｃｃｇ。

【0054】

好適なプロモーターの例としては、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター（任意選択でＲＳＶエンハンサーを有する）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（任意選択でＣＭＶエンハンサーを有する）［例えば、Ｂｏｓｈａｒ
ｔ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，４１：５２１－５３０（１９８５）を参照されたい］、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、β－アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１プロモーター［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］が挙げられるが、これらに限定されない。代替的に、組織特異的プロモーターが選択され得る。例えば、骨格筋での発現が所望される場合、筋肉で活性なプロモーターが使用される必要がある。これらには、骨格βアクチン、ミオシン軽鎖２Ａ、ジストロフィン、筋クレアチンキナーゼをコードする遺伝子由来のプロモーター、及び天然に存在するプロモーターよりも高い活性を有する合成筋肉プロモーターが含まれる（Ｌｉ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：２４１－２４５（１９９９）を参照されたい）。組織特異的であるプロモーターの例は、とりわけ、肝臓（アルブミン、Ｍｉｙａｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：５１２４－３２（１９９７）、Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター（Ｓａｎｄｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，３：１００２－９（１９９６））、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ，Ａｒｂｕｔｈｎｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７：１５０３－１４（１９９６））、骨オステオカルシン（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．，２４：１８５－９６（１９９７））、骨シアロタンパク質（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，１１：６５４－６４（１９９６））、リンパ球（ＣＤ２、Ｈａｎｓａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６１：１０６３－８（１９９８）、治療産物重鎖、Ｔ細胞受容体鎖、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーターなどのニューロンの（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，１３：５０３－１５（１９９３））、神経フィラメント軽鎖遺伝子（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：５６１１－５（１９９１））、及びニューロン特異的ｖｇｆ遺伝子（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，１５：３７３－８４（１９９５））についてである。プロモーターには、任意の種に由来し得る網膜色素上皮（ＲＰＥ）プロモーター又は光受容体プロモーターが含まれ得る。

【0055】

特定の実施形態では、プロモーターは、発現される遺伝子の天然プロモーターである。更に別の実施形態では、プロモーターは、ＲＰＧＲ近位プロモーターである（Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ，ＩＯＶＳ，Ｍａｙ ２０１２、これは参照により本明細書に組み込まれる）。他の有用なプロモーターには、ロッドオプシンプロモーター、赤緑色オプシンプロモーター、青色オプシンプロモーター、ｃＧＭＰ－β－ホスホジエステラーゼプロモーター、マウスオプシンプロモーター（上に引用されたＢｅｌｔｒａｎ ｅｔ ａｌ ２０１０）、ロドプシンプロモーター（Ｍｕｓｓｏｌｉｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，Ｊｕｌｙ ２０１１，１８（７）：６３７－４５）、錐体形トランスデューシンのアルファ－サブユニット（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ｅｔ ａｌ，ＢＭＣ Ｄｅｖ，Ｂｉｏｌ，Ｊａｎ ２０１１，１１：３）、ベータホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）プロモーター、網膜色素変性症（ＲＰ１）プロモーター（Ｎｉｃｏｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ，Ｄｅｃ ２００７，９（１２）：１０１５－２３）、ＮＸＮＬ２／ＮＸＮＬ１プロモーター（Ｌａｍｂａｒｄ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，Ｏｃｔ．２０１０，５（１０）：ｅ１３０２５）、ＲＰＥ６５プロモーター、網膜変性遅延／ペリフェリン２（Ｒｄｓ／ｐｅｒｐｈ２）プロモーター（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ．２０１０ Ａｕｇ；９１（２）：１８６－９４）、及びＶＭＤ２プロモーター（Ｋａｃｈｉ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，２００９（２０：３１－９））が挙げられるが、これらに限定されない。光受容体特異的プロモーターの例としては、ロッドオプシンプロモーター、赤緑色オプシンプロモーター、青色オプシンプロモーター、光受容体間結合タンパク質（ＩＲＢＰ）プロモーター、及びｃＧＭＰ－β－ホスホジエステラーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。

【0056】

核酸は、調節可能なプロモーターの制御下にある遺伝子産物のコード配列を更に含む。
導入遺伝子は、目的のポリペプチド、タンパク質、又は他の産物をコードする導入遺伝子に隣接するベクター配列に対して異種の核酸配列である。核酸コード配列は、標的細胞中で導入遺伝子の転写、翻訳、及び／又は発現を可能にする様式で、調節成分に作動可能に連結される。異種核酸配列（導入遺伝子）は、任意の生物に由来し得る。核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶは、１つ以上の導入遺伝子を含み得る。

【0057】

特定の実施形態では、本明細書で、エリスロポエチン（ＥＰＯ）をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコのＥＰＯ遺伝子をコードする。かかる組換えベクターは、例えば、循環赤血球の量の減少を特徴とする対象における慢性腎疾患及び他の状態を治療するためのレジメンでの使用に好適である。

【0058】

特定の実施形態では、本明細書で、抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコの抗ＮＧＦ抗体をコードする。かかる組換えベクターは、例えば、対象における変形性関節症疼痛を治療するためのレジメンで使用するのに好適である。例えば、Ｇｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｆｕｌｌｙ Ｆｅｌｉｎｉｚｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉ－Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ
Ｐａｉｎ ｉｎ Ｃａｔｓ，Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．２０１６ Ｊｕｌ；３０（４）：１１２９－３７．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊｖｉｍ．１３９８５．Ｅｐｕｂ ２０１６ Ｊｕｎ １５、及びＧｅａｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ，Ａ Ｆｕｌｌｙ Ｃａｎｉｎｉｓｅｄ ａｎｔｉ－ＮＧＦ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ
Ｐａｉｎ Ｒｅｌｉｅｆ ｉｎ Ｄｏｇｓ，ＢＭＣ Ｖｅｔ Ｒｅｓ．２０１３ Ｎｏｖ ９；９：２２６．ｄｏｉ：１０．１１８６／１７４６－６１４８－９－２２６を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み込まれる

【0059】

特定の実施形態では、本明細書で、抗ＣＤ２０抗体をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコの抗ＣＤ２０抗体をコードする。かかる組換えベクターは、例えば、対象におけるＢ細胞リンパ腫を治療するためのレジメンで使用するのに好適である。

【0060】

特定の実施形態では、本明細書で、抗ＧｎＲＨ抗体をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコの抗ＧｎＲＨ抗体をコードする。かかる組換えベクターは、例えば、イヌ又はネコの対象において滅菌するためのレジメンで使用するのに好適である。

【0061】

特定の実施形態では、本明細書で、抗ＩＬ－３１抗体をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコの抗ＩＬ－３１抗体をコードする。

【0062】

特定の実施形態では、本明細書で、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）及びその類似体をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコを標的とするＧＬＰ－１受容体アンタゴニストをコードする。かかる組換えベクターは、例えば、対象におけるＩＩ型糖尿病を治療するためのレジメンで使用するのに好適である。

【0063】

特定の実施形態では、本明細書で、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが
提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコを標的とするＧＭ－ＣＳＦをコードする。

【0064】

特定の実施形態では、本明細書で、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）をコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコを標的とするＧ－ＣＳＦをコードする。

【0065】

特定の実施形態では、本明細書で、インスリンをコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコのインスリンをコードする。かかる組換えベクターは、例えば、対象におけるＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病を含む代謝性疾患を治療するためのレジメンで使用するのに好適である。

【0066】

特定の実施形態では、本明細書では、例えば、抗体及び受容体－ＩｇＧ融合タンパク質を含む、ＩｇＥ、ＩＬ－３２、又はＩＬ－４／ＩＬ－１３受容体のインターロイキン－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）サブユニットのアンタゴニストをコードする配列を含む導入遺伝子を含む、核酸分子、ベクター、又はｒＡＡＶが提供される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、イヌ又はネコのＩｇＥ、ＩＬ－３２、又はＩＬ－４Ｒαサブユニットのアンタゴニストをコードする。かかる組換えベクターは、例えば、対象におけるアトピー性皮膚炎を治療するためのレジメンで使用するのに好適である。

【0067】

導入遺伝子配列の組成は、得られたベクターが用いられる使用に依存する。例えば、あるタイプの導入遺伝子配列は、発現時に検出可能なシグナルを生成するレポーター配列を含む。かかるレポーター配列には、限定されないが、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、増強ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、膜結合タンパク質（例えば、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８を含む）、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質、及び当該技術分野で周知の他のもの（それらを対象とする高親和性抗体が存在するか、又は従来の手段によって産生され得るもの）、並びに融合タンパク質（中でも、ヘマグルチニン又はＭｙｃ由来の抗原タグドメインに適切に融合された膜結合タンパク質を含む）をコードするＤＮＡ配列が含まれる。

【0068】

これらのコード配列は、それらの発現を駆動する調節エレメントに関連する場合、酵素、放射線、比色、蛍光又は他の分光学的アッセイ、蛍光活性化細胞選別アッセイ、並びに免疫学的アッセイ（酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学を含む）を含む従来の手段によって検出可能なシグナルを提供する。例えば、マーカー配列がＬａｃＺ遺伝子である場合、シグナルを有するベクターの存在は、β－ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイによって検出される。導入遺伝子が緑色蛍光タンパク質又はルシフェラーゼである場合、シグナルを有するベクターは、ルミノメーターで色又は光生成によって視覚的に測定することができる。

【0069】

しかしながら、導入遺伝子は、タンパク質、ペプチド、ＲＮＡ、酵素、ドミナントネガティブ変異体、又は触媒ＲＮＡなどの、生物学及び医学において有用な産物をコードする非マーカー配列であることが望ましい。望ましいＲＮＡ分子は、ｔＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、トランススプライシングＲＮＡ、及びアンチセンスＲＮＡを含む。有用なＲＮＡ配列の一例は、処置される動物において標的の核酸配列の発現を阻害又は失わせる配列である。典型的には、好適な標的配列には、腫瘍標的及びウイルス性疾患が含まれる。そのような標的の例については、免疫原に関連するセクションで後述する腫瘍標的及びウイルスを参照されたい。

【0070】

導入遺伝子は、遺伝子欠損を修正又は改善するために使用され得る。遺伝子欠損は、正常な遺伝子が正常レベルよりも低く発現する欠損、又は機能的な遺伝子産物が発現しない欠損を含み得る。代替的に、導入遺伝子は、細胞型又は宿主で天然に発現されない生成物を細胞に提供し得る。好ましいタイプの導入遺伝子配列は、宿主細胞で発現される治療用タンパク質又はポリペプチドをコードする。本発明は、複数の導入遺伝子を使用することを更に含む。ある状況では、異なる導入遺伝子は、タンパク質の各サブユニットをコードするために、又は異なるペプチド若しくはタンパク質をコードするために使用することができる。これは、タンパク質サブユニットをコードするＤＮＡのサイズが大きい場合（例えば、免疫グロブリン、血小板由来成長因子、又はジストロフィンタンパク質）に望ましい。細胞がマルチサブユニットタンパク質を生成するために、異なるサブユニットの各々を含む組換えウイルスを細胞に感染させる。あるいは、タンパク質の異なるサブユニットは、同じ導入遺伝子によってコードされていてもよい。この場合、単一の導入遺伝子は、各サブユニットのＤＮＡが内部リボザイム進入部位（ＩＲＥＳ）によって分離された、各サブユニットをコードするＤＮＡを含む。これは、サブユニットの各々をコードするＤＮＡのサイズが小さい場合（例えば、サブユニットをコードするＤＮＡ及びＩＲＥＳの総サイズが５キロベース未満）に望ましい。ＩＲＥＳの代替として、翻訳後事象において自己切断する２Ａペプチドをコードする配列によってＤＮＡが分離されていてもよい。例えば、Ｍ．Ｌ．Ｄｏｎｎｅｌｌｙ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７８（Ｐｔ １）：１３－２１（Ｊａｎ １９９７）、Ｆｕｒｌｅｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，８（１１）：８６４－８７３（Ｊｕｎｅ ２００１）、Ｋｌｕｍｐ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，８（１０）：８１１－８１７（Ｍａｙ ２００１）を参照されたい。この２Ａペプチドは、ＩＲＥＳよりも著しく小さく、スペースが制限因子である場合の使用に非常に好適である。より多くの場合、導入遺伝子が大きい場合、マルチサブユニットからなる場合、又は２つの導入遺伝子が同時送達される場合、所望の導入遺伝子又はサブユニットを有するｒＡＡＶを同時投与することで、インビボでそれらをコンカテマー化して、単一のベクターゲノムを形成することが可能になる。そのような実施形態では、宿主細胞での同時発現のために、第１のＡＡＶは、単一の導入遺伝子を発現する発現カセットを有し得、第２のＡＡＶは、異なる導入遺伝子を発現する発現カセットを有し得る。しかし、選択される導入遺伝子は、任意の生物学的に活性な産物又は他の産物（例えば、研究に望ましい産物）をコードすることができる。

【0071】

導入遺伝子によってコードされる有用な治療用産物には、ホルモン並びに増殖因子及び分化因子が含まれ、限定されないが、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン増殖因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、形質転換増殖因子βスーパーファミリーのうちのいずれか１つ（ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン）、又は骨形成タンパク質（ＢＭＰ）ＢＭＰ１－１５のうちのいずれか、成長因子のヘレグルイン／ニューレグリン／ＡＲＩＡ／ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）ファミリーのいずれか１つ、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン（ＮＴ－３及びＮＴ－４／５）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、セマフォリン／コラプシンのファミリーのうちのいずれか１つ、ネトリン－１及びネトリン－２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、チロシンヒドロキシラーゼが挙げられる。

【0072】

他の有用な導入遺伝子産物としては、免疫系を制御するタンパク質が含まれ、限定されないが、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ）、ＩＬ－１～ＩＬ－２５（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、及びＩＬ－１８）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２／ｆｌｔ３リガンドなどのサイトカイン及びリンホカインが挙げられる。免疫系によって産生される遺伝子産物も本発明において有用である。これらには、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、イヌ化抗体、ネコ化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩ ＭＨＣ分子、並びに操作された免疫グロブリン及びＭＨＣ分子が含まれるが、これらに限定されない。有用な遺伝子産物としては、補体調節タンパク質、膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＣＲ１、ＣＦ２、及びＣＤ５９などの補体調節タンパク質も含まれる。

【0073】

更に他の有用な遺伝子産物としては、ホルモン、成長因子、サイトカイン、リンホカイン、制御性タンパク質、及び免疫系タンパク質に対する受容体のうちのいずれか１つが挙げられる。本発明は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）受容体、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）受容体、及びスカベンジャー受容体を含む、コレステロール調節のための受容体を包含する。本発明はまた、糖質コルチコイド受容体及びエストロゲン受容体、ビタミンＤ受容体及び他の核受容体を含むステロイドホルモン受容体スーパーファミリーのメンバーなどの遺伝子産物を包含する。加えて、有用な遺伝子産物としては、ｊｕｎ、ｆｏｓ、ｍａｘ、ｍａｄ、血清応答因子（ＳＲＦ）、ＡＰ－１、ＡＰ２、ｍｙｂ、ＭｙｏＤ及びミオゲニンなどの転写因子、タンパク質を含むＥＴＳボックス、ＴＦＥ３、Ｅ２Ｆ、ＡＴＦ１、ＡＴＦ２、ＡＴＦ３、ＡＴＦ４、ＺＦ５、ＮＦＡＴ、ＣＲＥＢ、ＨＮＦ－４、Ｃ／ＥＢＰ、ＳＰ１、ＣＣＡＡＴボックス結合タンパク質、インターフェロン制御因子（ＩＲＦ－１）、ウィルムス腫瘍タンパク質、ＥＴＳ結合タンパク質、ＳＴＡＴ、ＧＡＴＡボックス結合タンパク質、例えば、ＧＡＴＡ－３、並びに翼状螺旋タンパク質のフォークヘッドファミリーが含まれる。

【0074】

他の有用な遺伝子産物としては、カルバモイルシンテターゼＩ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギノコハク酸シンテターゼ、アルギノコハク酸リアーゼ、アルギナーゼ、フマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、α－１アンチトリプシン、グルコース－６－ホスファターゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、シスタチオンβシンターゼ、分枝鎖ケト酸デカルボキシラーゼ、アルブミン、イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、グルタリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、インスリン、β－グルコシダーゼ、ピルビン酸カルボキシレート、肝ホスホリラーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グリシンデカルボキシラーゼ、Ｈ－タンパク質、Ｔ－タンパク質、嚢胞性線維症膜貫通制御因子（ＣＦＴＲ）配列、及びジストロフィン配列、又はそれらの機能的断片が挙げられる。更に他の有用な遺伝子産物としては、酵素補充療法に有用であり得るような酵素が挙げられ、これは酵素の不十分な活性に起因する様々な状態において有用である。例えば、マンノース－６－リン酸を含む酵素は、リソソーム蓄積症の療法に利用され得る（例えば、好適な遺伝子は、β－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）をコードする遺伝子を含む）。別の例では、遺伝子産物は、ユビキチンタンパク質リガーゼＥ３Ａ（ＵＢＥ３Ａ）である。更に有用な遺伝子産物としては、ＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼファミリー１メンバーＡ１（ＵＧＴ１Ａ１）が挙げられる。

【0075】

他の有用な遺伝子産物としては、挿入、欠失、又はアミノ酸置換を含む非天然アミノ酸配列を有するキメラ又はハイブリッドポリペプチドなどの非天然ポリペプチドが含まれる。例えば、一本鎖操作された免疫グロブリンは、特定の免疫不全患者において有用であり
得る。他の種類の非天然遺伝子配列としては、アンチセンス分子及びリボザイムなどの触媒核酸が含まれ、標的の過剰発現を低減するために使用され得る。

【0076】

遺伝子の発現の低減及び／又は調節は、癌及び乾癬と同様に、過増殖細胞を特徴とする過増殖状態の治療に特に望ましい。標的ポリペプチドとしては、正常細胞と比較して、過剰増殖細胞において排他的又はより高いレベルで産生されるポリペプチドが含まれる。標的抗原としては、ｍｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎなどの癌遺伝子、並びに転座遺伝子ｂｃｒ／ａｂｌ、ｒａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋ、及びＥＧＲＦによってコードされるポリペプチドが含まれる。標的抗原としての癌遺伝子産物に加えて、抗癌治療及び保護レジメンのための標的ポリペプチドは、Ｂ細胞リンパ腫によって作製された抗体の可変領域及びＴ細胞リンパ腫のＴ細胞受容体の可変領域を含み、いくつかの実施形態では、自己免疫疾患の標的抗原としても使用される。他の腫瘍関連ポリペプチドは、モノクローナル抗体１７－１Ａ及び葉酸結合ポリペプチドによって認識されるポリペプチドを含む腫瘍細胞中でより高いレベルで見出されるポリペプチドなどの標的ポリペプチドとして使用することができる。

【0077】

他の好適な治療用ポリペプチド及びタンパク質としては、細胞の受容体及び「自己」指向性の抗体を産生する細胞を含む自己免疫に関連する標的に対して広範な防御免疫応答を付与することにより、自己免疫性の疾患及び障害に罹患している個体を治療するために有用であり得るものが含まれる。Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患としては、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾癬、血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、クローン病、及び潰瘍性大腸炎が含まれる。これらの疾患の各々は、内因性抗原と結合し、自己免疫疾患に関連する炎症カスケードを開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を特徴とする。

【0078】

更に他の有用な遺伝子産物としては、血友病Ｂ（第ＩＸ因子を含む）及び血友病Ａ（第ＶＩＩＩ因子及びそのバリアント、例えばヘテロ二量体及びＢ－欠失ドメインの軽鎖並びに重鎖を含む；米国特許第６，２００，５６０号及び米国特許第６，２２１，３４９号）を含む血友病の治療に使用されるものが含まれる。いくつかの実施形態では、ミニ遺伝子は、１０個のアミノ酸シグナル配列をコードする第ＶＩＩＩ因子重鎖の最初の５７塩基対、並びにヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化配列を含む。代替的な実施形態では、ミニ遺伝子は、Ａ１及びＡ２ドメイン、並びにＢドメインのＮ末端からの５個のアミノ酸、かつ／又はＢドメインのＣ末端の８５個のアミノ酸、並びにＡ３、Ｃ１、及びＣ２ドメインを更に含む。更に他の実施形態では、第ＶＩＩＩ因子重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、Ｂドメインの１４個のアミノ酸をコードする４２個の核酸によって分離される単一ミニ遺伝子内に提供される［米国特許第６，２００，５６０号］。

【0079】

ｒＡＡＶを介して送達され得る更なる例示的な遺伝子にとしては、限定されないが、グリコーゲン蓄積症又は１Ａ型欠乏症（ＧＳＤ１）に関連するグルコース－６－ホスファターゼ、ＰＥＰＣＫ欠乏症に関連するホスホエノールピルビン酸－カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）、発作及び重度神経発達障害に関連するセリン／スレオニンキナーゼ９（ＳＴＫ９）としても知られるサイクリン依存性キナーゼ様５（ＣＤＫＬ５）、ガラクトース血症に関連するガラクトース－１リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）に関連するフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、ヒドロキシ酸オキシダーゼ１（ＧＯ／ＨＡＯ１）及びＡＧＸＴを含む原発性高シュウ酸尿症１型に関連する遺伝子産物、メープルシロップ尿症に関連する分枝鎖α－ケト酸デヒドロゲナーゼ（ＢＣＫＤＨ、ＢＣＫＤＨ－Ｅ２、ＢＡＫＤＨ－Ｅ１ａ、及びＢＡＫＤＨ－Ｅ１ｂを含む）、チロシン血症１型に関連するフマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、メチルマロン酸血症に関連するメチルマロニルＣｏＡムターゼ、中鎖アセチルＣｏＡ欠乏症に関連する中鎖アシルＣｏ
Ａデヒドロゲナーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症に関連するオルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）、シトルリン血症に関連するアルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ１）、レシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）欠損症、アメチルマロン酸血症（ＭＭＡ）、ニーマン・ピック病（Ｃ１型）に関連するＮＰＣ１、プロピオンアカデミア（ＰＡ）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）関連遺伝性アミロイドーシスに関連するＴＴＲ、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）に関連する低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）タンパク質、ＷＯ２０１５／１６４７７８に記載のＬＤＬＲバリアント、ＰＣＳＫ９、認知症に関連するＡｐｏＥ及びＡｐｏＣタンパク質、クリグラー・ナジャー病に関連するＵＤＰ－グルコウロシルトランスフェラーゼ、重症複合免疫不全症に関連するアデノシンデアミナーゼ、痛風及びレッシュ・ナイアン症候群に関連するヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ビオチミダーゼ欠損症に関連するビオチミダーゼ、ファブリー病に関連するα－ガラクトシダーゼＡ（ａ－ＧａｌＡ））、ＧＭ１ガングリオシドーシスに関連するβ－ガラクトシダーゼ（ＧＬＢ１）、ウィルソン病に関連するＡＴＰ７Ｂ、ゴーシェ病２型及び３型に関連するβ－グルコセレブロシダーゼ、ツェルウェーガー症候群に関連するペルオキシソーム膜タンパク質７０ｋＤａ、異染性白質ジストロフィーに関連するアリールスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ）、クラッベ病に関連するガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）酵素、ポンペ病に関連するα－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、ニーマン・ピック病Ａ型に関連するスフィンゴミエリナーゼ（ＳＭＰＤ１）遺伝子、成人発症ＩＩ型シトルリン血症（ＣＴＬＮ２）に関連するアルギニノコハク酸シンターゼ、尿素サイクル障害に関連するカルバモイルリン酸シンターゼ１（ＣＰＳ１）、脊髄性筋萎縮症に関連する生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質、ファーバー脂肪肉芽腫症に関連するセラミダーゼ、ＧＭ２ガングリオシドーシス及びテイサックス病及びサンドホフ病に関連するβ－ヘキソサミニダーゼ、アスパルチル－グルコサミン尿症に関連するアスパルチルグルコサミニダーゼ、フコシドーシスに関連するα－フコシダーゼ、α－マンノシドーシスに関連するα－マンノシダーゼ、急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）に関連するポルフォビリノーゲンデアミナーゼ、α－１アンチトリプシン欠損症（気腫）の治療のためのα－１アンチトリプシン、サラセミア又は腎不全による貧血の治療のためのエリスロポエチン、虚血性疾患の治療のための血管内皮増殖因子、アンジオポエチン－１、及び線維芽細胞増殖因子、例えば、アテローム性動脈硬化症、血栓症、又は塞栓症に見られる閉塞した血管の治療のためのトロンボモジュリン及び組織因子の経路の阻害剤、パーキンソン病の治療のための芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ（ＡＡＤＣ）及びチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）、うっ血性心不全の治療のためのβアドレナリン受容体、ホスホランバンに対するアンチセンス又はその変異体、筋小胞体（小胞体）アデノシントリホスファターゼ－２（ＳＥＲＣＡ２）、及び心臓アデニル酸シクラーゼ、様々な癌の治療のためのｐ５３などの腫瘍抑制遺伝子、炎症性障害及び免疫障害及び癌の治療のための様々なインターロイキンのうちの１つのようなサイトカイン、筋ジストロフィーの治療のためのジストロフィン又はミニジストロフィン及びユートロフィン又はミニユートロフィン、並びに糖尿病の治療のためのインスリン又はＧＬＰ－１が挙げられる。

【0080】

代替的に、又は更に、本発明のベクターは、選択された免疫原に対する免疫応答を誘導するペプチド、ポリペプチド又はタンパク質をコードする導入遺伝子を含有し得る。例えば、免疫原が、様々なウイルスファミリーから選択され得る。免疫応答が望まれる望ましいウイルスファミリーの例としては、ピコルナウイルスファミリーが挙げられ、感冒の症例の約５０％を担うライノウイルス属、ポリポリオウイルスオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、及びＡ型肝炎ウイルスなどのヒトエンテロウイルスを含むエンテロウイルス属、並びに主に非ヒト動物における口蹄疫を担うアプトウイルス属が含まれる。ウイルスのピコルナウイルスファミリー内で、標的抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、及びＶＰＧを含む。別のウイルスファミリーとしては、カルシウイルスファミリーが挙げられ、流行性胃腸炎の重要な原因病原体であるノーウォークウイルス群を包含
する。ヒト及び非ヒト動物における免疫応答を誘導するための標的化抗原で使用するための望ましい更に別のウイルスファミリーは、トガウイルスファミリーであり、シンドビスウイルス、ロスリバーウイルス、及びベネズエラ、東部、及び西部ウマ脳炎ウイルス、並びに風疹ウイルスを含むルビウイルスを含むアルファウイルス属を含む。フラビウイルス科には、デング熱、黄熱病、日本脳炎、セントルイス脳炎及びダニ媒介性脳炎のウイルスが含まれる。他の標的抗原は、Ｃ型肝炎又はコロナウイルスのファミリーから生成され得、それらは、伝染性気管支炎ウイルス（家禽）、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ブタ）、ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス（ブタ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ネコ）、ネコ腸内コロナウイルス（ネコ）、イヌコロナウイルス（イヌ）、及びその他のコロナウイルスなどの多くの非ヒトウイルスを含み、これらは、感冒及び／又は非Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎を引き起こし得る。一実施形態では、標的抗原は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２由来である。コロナウイルスファミリー内で、標的抗原としては、Ｅ１（Ｍ又はマトリックスタンパク質とも呼ばれる）、Ｅ２（Ｓ又はスパイクタンパク質とも呼ばれる）、Ｅ３（ＨＥ又はヘマグルチン－エルテロースとも呼ばれる）糖タンパク質（全てのコロナウイルスに存在しない）、又はＮ（ヌクレオカプシド）が挙げられる。更に他の抗原は、ラブドウイルスファミリーを標的にしてもよく、これには、ベシクロウイルス属（例えば、小胞性口内炎ウイルス）、及び一般的なリッサウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）が含まれる。ラブドウイルスファミリー内で、好適な抗原は、Ｇタンパク質又はＮタンパク質に由来し得る。フィロウイルス科には、マールブルグウイルス及びエボラウイルスなどの出血熱ウイルスが含まれ、抗原の好適な供給源であり得る。パラミキソウイルスファミリーには、パラインフルエンザウイルス１型、パラインフルエンザウイルス３型、ウシパラインフルエンザウイルス３型、ルブラウイルス（ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス２型、パラインフルエンザウイルス４型、ニューカッスル病ウイルス（ニワトリ）、牛疫ウイルス、麻疹ウイルス、及びイヌジステンパーを含むモルビリウイルス、並びに呼吸器合胞体ウイルスを含むニューモウイルスが含まれる。インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルスファミリー内に分類され、抗原（例えば、ＨＡタンパク質、Ｎ１タンパク質）の好適な供給源である。ブニヤウイルスファミリーには、ブニャウイルスブニヤウイルス属（カリフォルニア脳炎、ラクロス）、フレボウイルス属（リフトバレー熱）、ハンタウイルス属（ピュレマラはヘマハギン熱ウイルス）、ナイロウイルス属（ナイロビヒツジ病）、及び様々な未分類のブンガウイルスが含まれる。アレナウイルスファミリーは、ＬＣＭ及びラッサ熱ウイルスに対する抗原の供給源を提供する。レオウイルスファミリーには、レオウイルス属、ロタウイルス属（小児に急性胃腸炎を引き起こす）、オルビウイルス属、及びカルチウイルス属が含まれる。

【0081】

レトロウイルスファミリーには、ネコ白血病ウイルス、ＨＴＬＶＩ及びＨＴＬＶＩＩ、レンチウイラナエ（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｎａｅ）（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス、及びスプマウイルス亜科を含む）などの獣医学的疾患を包含するオルソレトロウイルス亜科が含まれる。ＨＩＶとＳＩＶとの間には、多くの好適な抗原が記載されており、容易に選択することができる。好適なＨＩＶ及びＳＩＶの抗原の例としては、限定されないが、ｇａｇ、ｐｏｌ、Ｖｉｆ、Ｖｐｘ、ＶＰＲ、Ｅｎｖ、Ｔａｔ、及びＲｅｖのタンパク質、並びにそれらの様々な断片が挙げられる。更に、これらの抗原に対する様々な修飾が記載されている。この目的のための好適な抗原は、当業者に既知である。例えば、他のタンパク質のうち、ｇａｇ、ｐｏｌ、Ｖｉｆ及びＶｐｒ、Ｅｎｖ、Ｔａｔ、並びにＲｅｖをコードする配列を選択してもよい。例えば、米国特許第５，９７２，５９６号に記載されている修飾ｇａｇタンパク質を参照されたい。また、Ｄ．Ｈ．Ｂａｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７５（５）：２４６２－２４６７（Ｍａｒｃｈ ２００１）、及びＲ．Ｒ．Ａｍａｒａ，ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９２：６９－７４（６ Ａｐｒｉｌ ２００１）に記載されているＨＩＶ及びＳＩＶタンパク質も参照されたい。これらのタンパク質又はそのサブユニットは、単独で、又は別個のベクターを介して若しくは
単一のベクターからの組み合わせで送達され得る。

【0082】

パポバウイルスファミリーには、ポリオーマウイルス亜科（ＢＫＵ及びＪＣＵウイルス）並びにパピローマウイルス亜科（癌又はパピローマの悪性進行に関連する）が含まれる。アデノウイルスファミリーには、呼吸器疾患及び／又は腸炎を引き起こすウイルス（例えば、ＥＸ、ＡＤ７、ＡＲＤ、Ｏ．Ｂ．）が含まれる。パルボウイルスファミリーには、ネコパルボウイルス（ネコ腸炎）、ネコパンロイコペニアウイルス、イヌパルボウイルス、及びブタパルボウイルスが含まれる。ヘルペスウイルスファミリーには、シンプレックスウイルス属（ＨＳＶＩ、ＨＳＶＩＩ）、バリセロウイルス属（仮性狂犬病、水痘帯状疱疹）を含むアルファヘルペスウイルス亜科、及びサイトメガロウイルス属（ＨＣＭＶ、ムロメガロウイルス）を含むベータヘルペスウイルス亜科、並びにリンホクリプトウイルス属、ＥＢＶ（バーキットリンパ腫）、感染性鼻気管炎、マレック病ウイルス、及びラジノウイルスを含むガンマヘルペスウイルス亜科が含まれる。ポックスウイルスファミリーには、オルソポックスウイルス属（痘瘡（天然痘）及びワクシニア（牛痘））、パラポックスウイルス、トリポックスウイルス、カプリポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルスを包含するコードポックスウイルス亜科、及びエントモポックスウイルス亜科が含まれる。ヘパドナウイルスファミリーには、Ｂ型肝炎ウイルスが含まれる。抗原の好適な供給源であり得る１つの非分類ウイルスは、デルタ型肝炎ウイルスである。更に他のウイルス源には、トリ伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス及びブタ生殖器呼吸器症候群ウイルスが含まれ得る。アルファウイルスファミリーには、ウマ動脈炎ウイルス及び様々な脳炎ウイルスが含まれる。

【0083】

本発明はまた、細菌、真菌、寄生微生物、又は非ヒト脊椎動物に感染するか、若しくは癌細胞若しくは腫瘍細胞由来の多細胞性寄生虫を含む他の病原体に対して、非ヒト動物を免疫化するのに有用な免疫原を包含し得る。細菌病原体の例には、病原性グラム陽性球菌、肺炎球菌、ブドウ球菌、及び連鎖球菌が含まれる。病原性グラム陰性球菌には、髄膜炎菌、淋菌が含まれる。病原性腸内グラム陰性桿菌には、腸内細菌科；シュードモナス、アシネトバクテリア、及びエイケネラ；類鼻疽；サルモネラ；シゲラ；ヘモフィルス；モラクセラ；Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳を引き起こす）；ブルセラ；Ｆｒａｎｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ（野兎病を引き起こす）；エルシニア（パスツレラ属）；ストレプトバチルスモニリフォルミス、及びスピリラムが含まれる；グラム陽性桿菌には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ；Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ（ジフテリア）；コレラ；炭疽菌（炭疽病）；ドノヴァン症（鼠径肉芽腫）；及びバルトネラ症が含まれる。病原性嫌気性細菌によって引き起こされる疾患としては、破傷風、ボツリヌス症、他のクロストリジウム、結核、ハンセン病、及び他のマイコバクテリアが挙げられる。病原性スピロヘータ疾患には、梅毒、トレポネーマ症（いちご腫、ピンタ、及び地方病性梅毒）、及びレプトスピラ症が含まれる。高病原性細菌及び病原性真菌によって引き起こされる他の感染症としては、放線菌症、ノーカルジオーシス、クリプトコッカス症、ブラストミセス症、ヒストプラズマ症、及びコクチジオイデス症、カンジダ症、アスペルギルス症、及びムコール症、スポロトリクム症、パラコクシジオイデス症、ペトリエリジア症、トルロプシス症、マイセトーマ、及びクロモミセス症、並びに皮膚糸状菌症が挙げられる。リケッチア感染症には、チフス熱、ロッキー山紅斑熱、Ｑ熱、及びリケッチア痘が含まれる。クラミジア属マイコプラズマ及びクラミジア感染症の例としては、マイコプラズマ肺炎、性病性リンパ肉芽腫、オウム病、及び周産期クラミジア感染症が挙げられる。病原性真核生物は、病原性原虫及び蠕虫、並びにそれによって生じる感染症を包含し、アメーバ症、マラリア、リーシュマニア症、トリパノソーマ症、トキソプラズマ症、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、トリチャン、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、バベシオーシス、バベシア症、ジアルジア症、旋毛虫症、フィラリア症、住血吸虫症、線虫、吸虫又はフルーク、及び条虫（サナダムシ）感染症が挙げられる。

【0084】

これらの生物及び／又はそれによって生成された毒素の多くは、疾患管理センター［（ＣＤＣ）、保健福祉省、米国］によって、生物攻撃で使用される可能性がある病原体として特定されている。例えば、これらの生物学的薬剤病原体の一部には、以下が含まれる：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽病）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ及びその毒素（ボツリヌス症）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ（ペスト菌）、大痘瘡（天然痘）、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ（野兎病）、及びウイルス性出血熱は、現在、これらの全てがカテゴリーＡ病原体に分類されており、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｔｉ（Ｑ熱）、Ｂｒｕｃｅｌｌａ種（ブルセラ症）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ（鼻疽）、Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ及びその毒素（リシン毒素）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ及びその毒素（イプシロン毒素）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌種及びその毒素（エンテロトキシンＢ）は、現在、これらの全てがカテゴリーＢ病原体に分類されており、並びに二パンウイルス及びハンタウイルスは、カテゴリーＣ病原体に分類されている。更に、このように分類されるか、又は分類が異なる他の生物は、将来的にかかる目的のために特定及び／又は使用され得る。本明細書に記載のウイルスベクター及び他の構築物が、これらの生物、ウイルス、それらの毒素、又は他の副産物由来の抗原を送達するのに有用であり、これらの生物学的病原体による感染又は他の有害反応を予防及び／又は治療することが容易に理解されるであろう。

【0085】

Ｔ細胞の可変領域に対して免疫原を送達するための本発明のベクターの投与は、それらのＴ細胞を排除するためのＣＴＬを含む免疫応答を誘発する。関節リウマチ（ＲＡ）では、疾患に関与するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のいくつかの特定の可変領域が特徴付けられている。これらのＴＣＲには、Ｖ－３、Ｖ－１４、Ｖ－１７及びＶα－１７が含まれる。したがって、これらのポリペプチドのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列の送達は、ＲＡに関与するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発するであろう。多発性硬化症（ＭＳ）では、疾患に関与するＴＣＲのいくつかの特定の可変領域が特徴付けられている。これらのＴＣＲには、Ｖ－７及びＶα－１０が含まれる。したがって、これらのポリペプチドのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列の送達は、ＭＳに関与するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発するであろう。強皮症では、疾患に関与するＴＣＲのいくつかの特定の可変領域が特徴付けられている。これらのＴＣＲには、Ｖ－６、Ｖ－８、Ｖ－１４、並びにＶα－１６、Ｖα－３Ｃ、Ｖα－７、Ｖα－１４、Ｖα－１５、Ｖα－１６、Ｖα－２８、及びＶα－１２が含まれる。したがって、これらのポリペプチドのうちの少なくとも１つをコードする核酸分子の送達は、強皮症に関与するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発するであろう。

【0086】

一実施形態では、導入遺伝子は、光遺伝学療法を提供するように選択される。光遺伝学療法では、人工光受容体は、残りの網膜回路における生存細胞型への光活性化チャネル又はポンプの遺伝子送達によって構築される。これは、かなりの量の光受容体機能を失ってはいるが、神経節細胞及び視神経への双極細胞の回路がそのまま残っている患者に特に有用である。一実施形態では、異種核酸配列（導入遺伝子）は、オプシンである。一実施形態では、オプシンは、ロドプシン、フォトプシン、Ｌ／Ｍ波長（赤／緑）－オプシン、又は短波長（Ｓ）オプシン（青）である。別の実施形態では、オプシンは、チャネルロドプシン又はハロロドプシンである。

【0087】

別の実施形態では、導入遺伝子は、遺伝子増強療法で使用するため、すなわち、欠損している又は欠陥のある遺伝子の置換コピーを提供するために選択される。この実施形態では、導入遺伝子は、必要な置換遺伝子を提供するために、当業者によって容易に選択され得る。一実施形態では、欠損／欠陥遺伝子は、眼障害に関連する。別の実施形態では、導入遺伝子は、ＮＹＸ、ＧＲＭ６、ＴＲＰＭ１Ｌ、又はＧＰＲ１７９であり、眼障害は、先
天性停止性夜盲症である。例えば、Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１３ Ｊａｎ １０；９２（１）：６７－７５を参照されたい。Ｅｐｕｂ ２０１２ Ｄｅｃ １３を参照されたい（参照により本明細書に援用される）。別の実施形態では、導入遺伝子は、ＲＰＧＲである。

【0088】

別の実施形態では、導入遺伝子は、遺伝子抑制療法における使用のために選択され、すなわち、１つ以上の天然遺伝子の発現が、転写又は翻訳のレベルで、中断又は抑制される。これは、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）又は当該技術分野で周知の他の技術を使用して達成することができる。例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２０１０ Ｆｅｂ １；１２６（３）：７６４－７４及びＯ’Ｒｅｉｌｌｙ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２００７ Ｊｕｌ；８１（１）：１２７－３５を参照されたい（参照により本明細書に援用される）。この実施形態では、導入遺伝子は、サイレンシングされることが望まれる遺伝子に基づいて、当業者によって容易に選択され得る。

【0089】

別の実施形態では、導入遺伝子は、２つ以上の導入遺伝子を含む。これは、２つ以上の異種配列を担持する単一のベクターを使用して、又は各々が１つ以上の異種配列を担持する２つ以上のベクターを使用して達成され得る。一実施形態では、ベクターは、遺伝子抑制（又はノックダウン）及び遺伝子増強の併用療法に使用される。ノックダウン／増強併用療法では、目的の遺伝子の欠陥コピーがサイレンシングされ、非変異コピーが供給される。一実施形態では、これは、２つ以上の同時投与ベクターを使用して達成される。Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎ－Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｐｒｉｌ ２０１１，１９（４）：６４２－６４９を参照されたい（参照により本明細書に援用される）。導入遺伝子は、所望の結果に基づいて、当業者によって容易に選択され得る。

【0090】

別の実施形態では、導入遺伝子は、遺伝子修正療法での使用のために選択される。これは、例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）誘導ＤＮＡ二本鎖切断を、外因性ＤＮＡドナー基質と併せて使用して達成され得る。例えば、Ｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（ｅｐｕｂ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２）２０：３５－４２を参照されたい（参照により本明細書に援用される）。導入遺伝子は、所望の結果に基づいて、当業者によって容易に選択され得る。

【0091】

特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、遺伝子編集システムで使用され得、システムは、１つのｒＡＡＶ又は複数のｒＡＡＶ系統の共投与を伴い得る。例えば、ｒＡＡＶは、ＳｐＣａｓ９、ＳａＣａｓ９、ＡＲＣＵＳ、Ｃｐｆ１（Ｃａｓ１２ａとしても既知）、ＣｊＣａｓ９、及び他の好適な遺伝子編集構築物を送達するように操作され得る。特定の実施形態では、ｒＡＡＶベース遺伝子編集ヌクレアーゼ系が、本明細書で提供される。遺伝子編集ヌクレアーゼは、疾患関連遺伝子、すなわち、目的の遺伝子における部位を標的とする。

【0092】

別の実施形態では、本明細書で有用な導入遺伝子は、発現時に検出可能なシグナルを生成するレポーター配列を含む。かかるレポーター配列には、限定されないが、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、膜結合タンパク質（例えば、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８を含む、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質、及び当該技術分野で周知の他のもの（それらを対象とする高親和性抗体が存在するか、又は従来の手段によって産生され得るもの）、並びに融合タンパク質（中でも、ヘマグルチニン又はＭｙｃ由来の抗原タグドメインに適切に融合された膜結合タンパク質を含む）をコードするＤＮＡ配列が含まれる。

【0093】

これらのコード配列は、それらの発現を駆動する調節エレメントに関連する場合、酵素、放射線、比色、蛍光又は他の分光学的アッセイ、蛍光活性化細胞選別アッセイ、並びに免疫学的アッセイ（酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学を含む）を含む従来の手段によって検出可能なシグナルを提供する。例えば、マーカー配列がＬａｃＺ遺伝子である場合、シグナルを有するベクターの存在は、β－ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイによって検出される。導入遺伝子が緑色蛍光タンパク質又はルシフェラーゼである場合、シグナルを有するベクターは、ルミノメーターで色又は光生成によって視覚的に測定することができる。

【0094】

導入遺伝子は、タンパク質、ペプチド、ＲＮＡ、酵素、又は触媒ＲＮＡなどの、生物学及び医学において有用な産物をコードすることが望ましい。望ましいＲＮＡ分子は、ｓｈＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びアンチセンスＲＮＡを含む。有用なＲＮＡ配列の一例は、処置される動物において標的の核酸配列の発現を失わせる配列である。

【0095】

タンパク質又は核酸を参照して使用される場合、「異種性」という用語は、タンパク質又は核酸が、天然では互いに同じ関係で見出されない、２つ以上の配列又は部分配列を含むことを示す。例えば、新規の機能的核酸を作製するために配置された関連のない遺伝子からの２つ以上の配列を有する核酸は、典型的に、組換えにより産生される。例えば、一実施形態では、核酸は、異なる遺伝子由来のコード配列の発現を指向するように配置された、ある遺伝子由来のプロモーターを有する。したがって、コード配列に関して、プロモーターは、異種性である。

【0096】

「外因性」という用語は、典型的には、同じ供給源ではない、すなわち、異なる細菌又はウイルス起源のものである、２つのエレメントを指すために使用される。

【0097】

本明細書では、本明細書に記載の核酸分子を含むベクター及び組換えＡＡＶを提供する。一実施形態では、核酸分子は、ベクターゲノム内に含まれる。ｒＡＡＶウイルス粒子の文脈で使用される場合、「ベクターゲノム」という用語は、ｒＡＡＶカプシドにパッケージングされる核酸配列を指す。典型的には、ｒＡＡＶのベクターゲノムは、約３．５ｋｂ～約５．２ｋｂ、より好ましくは約３．７ｋｂ～５ｋｂ、又は約４ｋｂ～約４．７ｋｂである。ベクターゲノムは、ベクターにパッケージングされる核酸配列（例えば、発現カセット）の５’末端及び３’末端にＡＡＶ ＩＴＲ配列を含む。

【0098】

かかる核酸配列は、ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む。本明細書の例では、ベクターゲノムは、少なくとも、５’から３’へ、ＡＡＶ ５’ＩＴＲ、コード配列、及びＡＡＶ ３’ＩＴＲを含有する。特定の実施形態では、ＩＴＲは、カプシドとは異なる供給源ＡＡＶであるＡＡＶ２由来であるか、又は別の完全長ＩＴＲが選択され得る。特定の実施形態では、ＩＴＲは、産生中にｒｅｐ機能を提供すＡＡＶ又はトランス相補性ＡＡＶと同じＡＡＶ供給源由来である。更に、他のＩＴＲが使用され得る。特定の実施形態では、ベクターゲノムは、外部Ａエレメントが欠失している、１３０塩基対の短縮ＡＡＶ２ ＩＴＲを含む。短縮ＩＴＲは、内部Ａエレメントを鋳型として使用して、ベクターＤＮＡ増幅中に１４５塩基対の野生型の長さに戻される。更に、ベクターゲノムは、遺伝子産物の発現を指向する誘導性遺伝子発現系を含む。ベクターゲノムの好適な成分が本明細書でより詳細に考察される。ベクターゲノムは、本明細書では「ミニ遺伝子」と称されることがある。

【0099】

本明細書で使用される場合の「組換えＡＡＶ」又は「ｒＡＡＶ」という用語は、天然に存在するアデノ随伴ウイルス、当業者に利用可能な、及び／又は本明細書に記載の組成物
及び方法の観点において利用可能なアデノ随伴ウイルス、並びに人工ＡＡＶを指す。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ウイルスベクターは、ＡＡＶタンパク質カプシドを有するＡＡＶ ＤＮａｓｅ耐性粒子であり、その中にパッケージングされる発現カセットは、標的細胞に送達するためのＡＡＶの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）に隣接している。ＡＡＶカプシドは、６０個のカプシド（ｃａｐ）タンパク質サブユニット、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３からなり、選択されるＡＡＶに応じて、およそ１：１：１０～１：１：２０の比で二十面体対称に配置される。上述のＡＡＶウイルスベクターのカプシドの供給源として、様々なＡＡＶが選択されてもよい。一実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ９カプシド又はそのバリアントである。特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、ｒＡＡＶベクターの名称で「ＡＡＶ」という用語の後の数値又は数値と文字との組み合わせによって指定される。特に明記しない限り、本明細書に記載のＡＡＶカプシド、ＩＴＲ、及び他の選択されるＡＡＶ成分は、限定されないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｈｕ３７、ＡＡＶｒｈ３２．３３、ＡＡＶ８ｂｐ、ＡＡＶ７Ｍ８、及びＡＡＶＡｎｃ８０、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９（ｈｕ１４）、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶｈｕ６８として特定されているＡＡＶを含むがこれに限定されない任意のＡＡＶの中から容易に選択され得る。例えば、米国特許出願公開第２００７－００３６７６０－Ａ１号、米国特許出願公開第２００９－０１９７３３８－Ａ１号、ＥＰ１３１０５７１を参照されたい。ＷＯ２００３／０４２３９７（ＡＡＶ７及び他のサルＡＡＶ）、米国特許第７７９０４４９号及び米国特許第７２８２１９９号（ＡＡＶ８）、ＷＯ２００５／０３３３２１及びＵＳ７，９０６，１１１（ＡＡＶ９）、並びにＷＯ２００６／１１０６８９、及びＷＯ２００３／０４２３９７（ｒｈ．１０）、ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２０１８／１６０５８２（ＡＡＶｈｕ６８）も参照されたく、これらは参照により本明細書に組み込まれる。他の好適なＡＡＶには、ＡＡＶｒｈ９０［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／３０２７３］、ＡＡＶｒｈ９１［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／３０２６６］ＡＡＶｒｈ９２、ＡＡＶｒｈ９３、ＡＡＶｒｈ９１．９３［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／３０２８１］が含まれ得るが、これらに限定されず、これらは参照により本明細書に組み込まれる。他の好適なＡＡＶには、２０１９年１０月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／９２４，１１２号、及び２０２０年５月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／０２５，７５３号に記載されるＡＡＶ３Ｂバリアントが含まれ、そこには、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０１、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０２、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０３、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０４、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０５、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０６、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０７、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０８、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１０、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１１、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１２、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１３、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１４、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１５、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１６、又はＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１７が記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。これらの文書はまた、ｒＡＡＶを生成するために選択され得る他のＡＡＶカプシドについても記載されており、参照により組み込まれる。ヒト又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）から単離又は操作され、十分に特徴付けられたＡＡＶのうち、ヒトＡＡＶ２は、遺伝子導入ベクターとして開発された最初のＡＡＶであり、種々の標的組織及び動物モデルにおける効率的な遺伝子導入実験に広く使用されている。

【0100】

本明細書で使用される場合、ＡＡＶに関して、「バリアント」という用語は、既知のＡＡＶ配列に由来する任意のＡＡＶ配列を意味し、保存的アミノ酸置換を有するＡＡＶ配列、及びアミノ酸配列又は核酸配列にわたって少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％以上の配列同一性を共有するＡＡＶ配列を含む。別の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、任意の記載の、又は既知のＡＡＶカプシド配列から最大約１０％
のバリエーションを含み得るバリアントを含む。すなわち、ＡＡＶカプシドは、本明細書に提供され、かつ／又は当該技術分野で既知のＡＡＶカプシドと、約９０％の同一性～約９９．９％の同一性、約９５％～約９９％の同一性、又は約９７％～約９８％の同一性を共有する。一実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶカプシドと少なくとも９５％の同一性を共有する。ＡＡＶカプシドの同一性パーセントを決定する場合、比較は、可変タンパク質（例えば、ｖｐ１、ｖｐ２、又はｖｐ３）のうちのいずれかにわたって行われ得る。

【0101】

「発現カセット」という用語は、導入遺伝子配列及びそのための調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリＡ）を含む核酸分子を指し、そのカセットは、ウイルスベクターのカプシド（例えば、ウイルス粒子）にパッケージングされ得る。典型的に、ウイルスベクターを産生するためのそのような発現カセットは、ウイルスゲノムのパッケージングシグナルに隣接する導入遺伝子配列、及び本明細書に記載のものなどの他の発現制御配列を含む。例えば、ＡＡＶウイルスベクターの場合、パッケージングシグナルは、５’逆位末端配列（ＩＴＲ）及び３’ＩＴＲである。特定の実施形態では、「導入遺伝子」という用語は、「発現カセット」と互換的に使用され得る。他の実施形態では、「導入遺伝子」という用語は、選択された遺伝子のコード配列のみを指す。

【0102】

上述のように、「約」という用語は、別段の指定がない限り、数値を修正するために使用される場合、±１０％の変動を意味する。

【0103】

本明細書及び特許請求の範囲全体を通して使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語、並びに他の変形の中で「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」を含むその変形は、他の成分、要素、整数、ステップなどを含む。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」」という用語は、他の成分、要素、整数、ステップなどを除外する。

【0104】

一実施形態では、少なくとも、活性化ドメインをコードする配列と、ジンクフィンガーホメオドメイン及び１、２又は３個以上のＦＫ５０６結合タンパク質ドメイン（ＦＫＢＰ）サブユニット遺伝子を含むＤＮＡ結合ドメインと、ＤＮＡ結合ドメインのジンクフィンガーホメオドメインに対する特異的結合パートナーであるジンクフィンガーホメオドメイン結合部位の少なくとも２～約１２コピーと、ラパマイシン調節発現制御配列に作動可能に連結されたミニプロモーターと、少なくとも１つの導入遺伝子と、を含むパッケージングされたベクターゲノムを有するｒＡＡＶ粒子を含むｒＡＡＶストックが提供される。有効量のラパマイシン又はラパログの存在下では、トランジェン（ｔｒａｎｇｅｎｅ）の転写は、調節可能な方法で誘導される。

【0105】

本明細書で使用される場合、ｒＡＡＶの「ストック」は、ｒＡＡＶの集団を指す。脱アミド化に起因するカプシドタンパク質の不均一性にもかかわらず、ストック内のｒＡＡＶは、同一のベクターゲノムを共有することが予想される。ストックは、例えば、選択されたＡＡＶカプシドタンパク質及び選択された産生系に特徴的な不均一な脱アミド化パターンを有するカプシドを有するｒＡＡＶを含み得る。ストックは、単一の産生系から産生されてもよく、又は産生系の複数の実行からプールされてもよい。本明細書に記載されるものを含むが、これらに限定されない様々な産生系が選択され得る。

【0106】

本明細書に記載の調節可能なプロモーター系に加えて、発現カセット及び／又はベクターは、他の適切な転写開始配列、終結配列、エンハンサー配列、スプライシング及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲ
ＮＡを安定化させる配列、翻訳効率を増強させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を増強させる配列、及び必要に応じて、コードされた産物の分泌を増強させる配列を含み得る。好適なポリＡ配列の例には、例えば、ＳＶ４０、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）、及びＴＫポリＡが含まれる。好適なエンハンサーの一例としては、例えば、ＣＭＶエンハンサーが挙げられる。

【0107】

これらの制御配列は、導入遺伝子配列に「作動可能に連結されている」。本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、目的の遺伝子に連続している発現制御配列、及びトランスで又は離れて作用して目的の遺伝子を制御する発現制御配列の両方を指す。

【0108】

一実施形態では、自己相補性ＡＡＶが使用される。このウイルスベクターは、Δ５’ＩＴＲ及びＡＡＶ３’ＩＴＲを含有し得る。別の実施形態では、一本鎖ＡＡＶウイルスベクターが提供される。対象に送達するのに好適なＡＡＶウイルスベクターを生成し、単離するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第７７９０４４９号、米国特許第７２８２１９９号、ＷＯ２００３／０４２３９７、ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２００６／１１０６８９、及びＵＳ７５８８７７２Ｂ２］を参照されたい。一系では、プロデューサー細胞株は、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子をコードする構築物、並びにｒｅｐ及びｃａｐをコードする構築物で一過性にトランスフェクトされる。第２の系では、ｒｅｐ及びｃａｐを安定的に供給するパッケージング細胞株は、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子をコードする構築物で一過性にトランスフェクトされる。これらの系の各々では、ＡＡＶビリオンは、ヘルパーアデノウイルス又はヘルペスウイルスへの感染に応答して産生され、ｒＡＡＶを汚染ウイルスから分離することを必要とする。より最近では、ＡＡＶを復元するためにヘルパーウイルスへの感染を必要としない系が開発されており、必要なヘルパー機能（すなわち、アデノウイルスＥ１、Ｅ２ａ、ＶＡ、及びＥ４、又はヘルペスウイルスＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２、及びＵＬ２９、並びにヘルペスウイルスポリメラーゼ）もまた、トランスで系によって供給される。これらのより新しい系では、ヘルパー機能は、必要とされるヘルパー機能をコードする構築物での細胞の一過性トランスフェクションによって供給され得るか、又は細胞は、ヘルパー機能をコードする遺伝子を安定的に含有するように操作され得、その発現は、転写レベル又は転写後レベルで制御され得る。更に別の系では、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子及びｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子は、バキュロウイルス由来のベクターによる感染によって、昆虫細胞に導入される。これらの産生システムに関するレビューについては、概して、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００９，“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｈｙｂｒｉｄ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９２２－９２９を参照されたい（その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される）。これら及び他のＡＡＶ産生系を作製及び使用する方法は、以下の米国特許にも記載されており、各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：５，１３９，９４１、５，７４１，６８３、６，０５７，１５２、６，２０４，０５９、６，２６８，２１３、６，４９１，９０７、６，６６０，５１４、６，９５１，７５３、７，０９４，６０４、７，１７２，８９３、７，２０１，８９８、７，２２９，８２３、及び７，４３９，０６５。

【0109】

いくつかの好適な精製方法が選択されてもよい。好適な精製方法の例は、例えば、国際特許公開第２０１７／１００６７４号（ＡＡＶ１）、同第２０１７／１００６７６号（ＡＡＶ８）、同第２０１７／１００７０４号（ＡＡＶｒｈ１０）、及び同第２０１７／１６０３６０号（ＡＡＶ９）に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

【0110】

本明細書に記載の誘導性遺伝子発現系を含む核酸分子は、活性化ドメインとＤＮＡ結合ドメインとの間に位置する少なくとも１つの内部リボソーム結合部位、すなわち、ＩＲＥＳを含有し得る。代替的に、活性化ドメイン及びＤＮＡ結合ドメインは、フリン－２ａ自己切断ペプチドリンカーによって分離され得る［例えば、Ｒａｄｃｌｉｆｆｅ ａｎｄ Ｍｉｔｒｏｐｈａｎｏｕｓ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００４），１１，１６７３－１６７４を参照されたい］。

【0111】

一実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号１４（又はｎｔ１８４～４０６５）のもの、又はそれと少なくとも９０％を共有する配列を含み、例示的なｒｈＥＰＯのコード配列（ｎｔ４１０６～４６８４）は、目的の所望の導入遺伝子のコード配列で置き換えられる。一実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号２２（又はｎｔ１８４～３９０７）のもの、又はそれと少なくとも９０％を共有する配列を含み、例示的なｒｈＥＰＯのコード配列（ｎｔ４０６７～４６４５）は、目的の所望の導入遺伝子のコード配列で置き換えられる。

【0112】

別の態様では、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、及び配列番号２１のうちの１つ以上を含む融合タンパク質が、提供される。配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、及び配列番号２１のうちの１つ以上を含む融合タンパク質をコードする核酸も提供される。当該核酸を包含する組換えＡＡＶもまた提供される。

【0113】

別の態様では、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、及び配列番号２９のうちの１つ以上を含む融合タンパク質が、提供される。配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、及び配列番号２９のうちの１つ以上を含む融合タンパク質をコードする核酸も提供される。当該核酸を包含する組換えＡＡＶもまた提供される。

【0114】

使用及びレジメン
好適には、一実施形態では、組成物は、導入遺伝子産物及び選択された細胞におけるその導入遺伝子産物の発現を指向する調節配列をコードする核酸発現カセットを担持するＡＡＶベクターを投与するように設計される。

【0115】

ベクターの投与後、誘導剤を使用して、インビボでの導入遺伝子産物構築物の発現を誘導する。一実施形態では、導入遺伝子発現レベルは、制御された投薬量の導入遺伝子産物を提供するように投与された誘導剤の用量によって用量依存的に制御され得る。

【0116】

組成物は、各ベクターストックが約１×１０^９ゲノムコピー（ＧＣ）～約５×１０^１３ＧＣの量で存在するように（体重約４ｋｇの平均的なネコ対象、又は約２０ｋｇの平均的なイヌ対象を治療するため）、２つ以上のｒＡＡＶを含有する投薬量単位で製剤化され得る。一例では、ベクター濃度は、約３ｘ１０^９ＧＣであるが、約１ｘ１０^９ＧＣ、約３ｘ１０^９ＧＣ、約１ｘ１０^１０ＧＣ、約３ｘ１０^１０ＧＣ、約１ｘ１０^１１ＧＣ、約３Ｘ１０^１１ＧＣ、約１ｘ１０^１２ＧＣ、約３Ｘ１０^１２ＧＣ、約１．０ｘ１０^１３ＧＣ又は約３．０ｘ１０^１３ＧＣなどの他の量である。これらのベクターの好適な濃度は、所望の体積の液体懸濁剤（例えば、送達経路に応じて、約２５０μＬ～１００ｍＬ、又はそれよりも多い若しくは少ない範囲に基づいて容易に決定され得る。例えば、範囲の終わり、又は更に少ない体積は、鼻腔内送達に適している可能性があるが、他の経路（例えば、全身送達）は、より多い体積を使用してもよい。

【0117】

ＡＡＶウイルスベクターの場合、ゲノムコピー（「ＧＣ」）の定量化を、製剤中に含有される用量の尺度として使用し得る。当該技術分野で既知の任意の方法を使用して、本発
明の複製欠損ウイルス組成物のゲノムコピー（ＧＣ）数を決定することができる。ＡＡＶのＧＣ数滴定を行うための１つの方法は、以下の通りである。精製されたＡＡＶベクター試料は、まずＤＮａｓｅで処理され、非カプシド化ＡＡＶゲノムＤＮＡ又は産生プロセスからの汚染プラスミドＤＮＡを排除する。次いで、ヌクレアーゼ耐性粒子を熱処理に供して、カプシドからゲノムを放出させる。次に、ウイルスゲノムの特定の領域（通常はポリＡシグナル）を標的とするプライマー／プローブセットを使用したリアルタイムＰＣＲによって、放出されたゲノムを定量化する。ゲノムコピーを決定するための別の好適な方法は、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）、特に最適化されたｑＰＣＲ又はデジタル液滴ＰＣＲである［Ｌｏｃｋ Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｐｒｉｌ ２０１４，２５（２）：１１５－１２５．ｄｏｉ：１０．１０８９／ｈｇｔｂ．２０１３．１３１、２０１３年１２月１３日の編集前にオンラインで公開］。

【0118】

好ましくは、生理学的に適合性のある担体に懸濁されたｒＡＡＶは、非ヒト哺乳動物患者、好ましくはイヌ又はネコに投与され得る。好適な担体は、導入ウイルスが指向される適応症の観点で、当業者によって容易に選択され得る。例えば、１つの好適な担体は、生理食塩水を含み、様々な緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）とともに製剤化され得る。他の例示的な担体としては、滅菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、マルトース、及び水が挙げられる。担体の選択は、本発明の制限ではない。任意選択で、本発明の組成物は、ｒＡＡＶ及び担体に加えて、防腐剤又は化学的安定剤などの他の従来の医薬成分を含み得る。

【0119】

例えば、全身、静脈内、腹腔内、皮下、髄腔内、眼内（例えば、硝子体内）、又は筋肉内投与を含む、ベクター組成物のための任意の好適な投与経路を選択し得る。一実施形態では、筋肉内投与が利用される。

【0120】

「二量体化剤」という用語は、ドメイン融合タンパク質の二量体化剤結合ドメインに結合し、融合タンパク質の二量体化を誘導し得る化合物（例えば、「薬理学的薬剤」とも称される小分子）を指す。本明細書に記載される構築物では、ラパマイシン又はラパログは、好ましい二量体化剤である。インビトロでアッセイされるように、転写因子のドメインを二量体化する任意の薬理学的薬剤を使用することができる。「ラパログ」と称される好適なラパマイシン及びその類似体の例は、本明細書の前半で特定されている。以下に記載される二量体化剤のうちのいずれかが使用され得る。米国公開第２００２／０１７３４７４号、米国公開第２００９／０１００５３５号、米国特許第５，８３４，２６６号、米国特許第７，１０９，３１７号、米国特許第７，４８５，４４１号、米国特許第５，８３０，４６２号、米国特許第５，８６９，３３７号、米国特許第５，８７１，７５３号、米国特許第６，０１１，０１８号、米国特許第６，０４３，０８２号、米国特許第６，０４６，０４７号、米国特許第６，０６３，６２５号、米国特許第６，１４０，１２０号、米国特許第６，１６５，７８７号、米国特許第６，９７２，１９３号、米国特許第６，３２６，１６６号、米国特許第７，００８，７８０号、米国特許第６，１３３，４５６号、米国特許第６，１５０，５２７号、米国特許第６，５０６，３７９号、米国特許第６，２５８，８２３号、米国特許第６，６９３，１８９号、米国特許第６，１２７，５２１号、米国特許第６，１５０，１３７号、米国特許第６，４６４，９７４号、米国特許第６，５０９，１５２号、米国特許第６，０１５，７０９号、米国特許第６，１１７，６８０号、米国特許第６，４７９，６５３号、米国特許第６，１８７，７５７号、米国特許第６，６４９，５９５号、米国特許第６，９８４，６３５号、米国特許第７，０６７，５２６号、米国特許第７，１９６，１９２号、米国特許第６，４７６，２００号、米国特許第６，４９２，１０６号、ＷＯ９４１１８３４７、ＷＯ９６／２０９５１、ＷＯ９６／０６０９７、ＷＯ９７／３１８９８、ＷＯ９６／４１８６５、ＷＯ９８／０２４４１、ＷＯ９５／３３０５２、ＷＯ９９／１０５０８、ＷＯ９９／１０５１０、ＷＯ９９／３６５５３、ＷＯ９９
／４１２５８、ＷＯ０１１１４３８７、ＡＲＧＥＮＴ（商標）Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ Ｋｉｔ、Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０（９１０９／０２）、及びＡＲＧＥＮＴ（商標）Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｋｉｔ、Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０（９／０９／０２）、これらの各々は、その全体が参照に本明細書に組み込まれる。

【0121】

一実施形態では、本発明の二量体化剤を含む医薬組成物の量は、約０．１～５マイクログラム（μｇ）／キログラム（ｋｇ）の範囲で投与される。この目的のために、本発明の二量体化剤を含む医薬組成物は、平均的な対象を治療するための治療をするために、約０．１ｍｇ～約３５０ｍｇの範囲の用量で製剤化される。投与される本発明の二量体化剤を含む医薬組成物の量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、又は１０ｍｇ／ｋｇである。製剤中の二量体化剤の用量は、７、８、９、１０、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５ ９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、又は７５０ｍｇである（体重約４ｋｇの平均的なネコ対象、又は体重約２０ｋｇの平均的なイヌを治療するために）。これらの用量は、好ましくは経口投与される。これらの用量は、１回又は毎日、隔日、毎週、隔週、若しくは毎月などの繰り返しで、投与され得る。好ましくは、医薬組成物は、約４～６週間の期間、週に１回投与される。いくつかの実施形態では、二量体化剤を含む医薬組成物は、１回の用量、又は２回の用量、又は３回の用量、又は４回の用量、又は５回の用量、又は６回以上の用量で対象に投与される。投薬量間の間隔は、例えば、導入遺伝子の発現によって引き起こされる症状、例えば、毒性を改善するために、導入遺伝子の発現の阻害の必要性があるという医師の決定に基づいて決定され得る。例えば、導入遺伝子アブレーションの必要性が急性であるいくつかの実施形態では、二量体化剤を含む医薬組成物の１日の投薬量が投与され得る。例えば、導入遺伝子アブレーションの必要性がそれほど急性でないか、又は急性ではない他の実施形態では、二量体化剤を含む医薬組成物の毎週の投薬量が投与され得る。

【0122】

本明細書に記載されるように使用するための医薬組成物は、懸濁剤及び希釈剤を含み得る１つ以上の生理学的に許容される担体又は賦形剤を使用して、従来の方法で製剤化され得る。二量体化剤並びにそれらの生理学的に許容される塩及び溶媒和物は、（口又は鼻のいずれかによる）吸入又は送気、経口、頬側、非経口、直腸、又は経皮投与によって投与のために製剤化され得る。非侵襲的な投与方法も企図される。

【0123】

経口投与の場合、医薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤とともに、従来の手段によって調製される錠剤又はカプセル剤の形態をとり得る。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングされてもよい。経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液、シロップ又は懸濁液の形態をとり得るか、又はそれらは、使用前に水又は他の好適なビヒクルでの構成のための乾燥産物として提供され得る。かかる液体調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂肪）、乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール又は分画された植物油）、及び防腐剤（例えば、メチル又はプロピル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸又はソ
ルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤とともに従来の手段によって調製され得る。調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、香味剤、着色剤及び甘味剤を含み得る。経口投与のための調製物は、二量体化剤の制御された放出をもたらすように好適に製剤化され得る。

【0124】

別の実施形態では、ラパマイシン（ラパログ）は、経皮パッチを介して送達される。かかる経皮パッチは、１日～数ヶ月間、及びその間の期間に適用され得る。

【0125】

頬側投与の場合、組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤又はロゼンジの形態をとり得る。

【0126】

吸入による投与の場合、本発明による使用のための二量体化剤は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の好適なガスを使用して、加圧パック又は噴霧器からエアゾールスプレー提示の形態で好都合に送達される。加圧エアロゾールの場合、投薬量単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。吸入器又は注入器で使用するための、例えば、ゼラチンのカプセル及びカートリッジは、二量体化剤と、ラクトース又はデンプンなどの好適な粉末基材との粉末混合物を含有するように製剤化され得る。

【0127】

二量体化剤は、注射、例えば、ボーラス注射又は連続注入による非経口投与のために製剤化され得る。注射のための製剤は、単位剤形で、例えば、添加された防腐剤とともに、アンプル中又は複数回用量容器中で提供され得る。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルションなどの形態をとり得、懸濁剤、安定剤、及び／又は分散剤などの製剤化剤を含有し得る。あるいは、有効成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、滅菌の発熱物質を含まない水で構成するための粉末形態であり得る。

【0128】

二量体化剤は、例えば、ココアバター又は他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を含有する坐薬又は保持浣腸剤などの直腸組成物中に製剤化され得る。

【0129】

前述の製剤に加えて、二量体化剤はまた、デポー調製物として製剤化され得る。かかる長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下又は筋肉内）によって、又は筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、二量体化剤は、好適な高分子若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルションとして）若しくはイオン交換樹脂とともに、又は例えば、難溶性の誘導体として、例えば、難溶性の塩として製剤化され得る。

【0130】

組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有し得るパック又はディスペンサー装置において提供され得る。パックは、例えば、金属箔又はプラスチック箔、例えば、ブリスターパックを含んでもよい。パック又はディスペンサー装置は、投与のための説明書を伴ってもよい。

【0131】

また、本発明の二量体化剤と組み合わせた、又はそれと混合したアジュバントの使用も包含される。企図されるアジュバントとしては、ミネラル塩アジュバント又はミネラル塩ゲルアジュバント、粒子アジュバント、微粒子アジュバント、粘膜アジュバント、及び免疫刺激アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。アジュバントは、本発明の二量体化剤との混合物として対象に投与され得るか、又は本発明の二量体化剤と組み合わせて使用され得る。

【0132】

別の実施形態では、組成物は、イヌ又はネコ患者に対して、約１．０×１０^９ゲノムコピー（ＧＣ）／キログラム（ｋｇ）～約３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇ、好ましくは１．０
×１０^１０ＧＣ／ｋｇ～３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇの量でｒＡＡＶを含有し得る。好ましくは、各ｒＡＡＶは、約１．０×１０^８ＧＣ／ｋｇ、５．０×１０^８ＧＣ／ｋｇ、１．０×１０^９ＧＣ／ｋｇ、５．０×１０^９ＧＣ／ｋｇ、１．０×１０^１０ＧＣ／ｋｇ、５．０×１０^１０ＧＣ／ｋｇ、１．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、５．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、又は１．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇ、５．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇ、１．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇ、３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇ、１．０×１０^１４ＧＣ／ｋｇの量で投与される。一実施形態では、ｒＡＡＶは、約３．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇの量で投与される。一実施形態では、ｒＡＡＶは、約３．０×１０^１０ＧＣ／ｋｇの量で投与される。一実施形態では、ｒＡＡＶは、約３．０×１０^９ＧＣ／ｋｇの量で投与される。一実施形態では、ｒＡＡＶは、約３．０×１０^８ＧＣ／ｋｇの量で投与される。

【0133】

これらの用量は、１回又は毎日、隔日、毎週、隔週、若しくは毎月などの繰り返しで、又は患者において適切な導入遺伝子発現が検出されるまで、投与され得る。一実施形態では、複製欠損ウイルス組成物は、約４～６週間の期間、週に１回投与され、投与方法又は投与部位は、好ましくは、各投与で変化する。繰り返しの注射は、導入遺伝子発現の完全なアブレーションに必要である可能性が最も高い。１回以上の注射のギャップ後に、同じ部位が繰り返されてもよい。また、分割注射も投与され得る。したがって、例えば、半分の用量は、ある部位で、残りの半分は、同じ日に別の部位で投与され得る。

【0134】

一実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、約３．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇの用量で、例えば、門脈の腸間膜支流の注射によって、肝臓を介して全身的に送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、約１．０×１０^１０ＧＣ／ｋｇ～約３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇの用量で、例えば、大腿四頭筋又は二頭筋のいずれかに、最大２０回の筋肉内注射によって、筋肉を介して全身に送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、頭蓋内に、例えば、マイネルト（ＮＢＭ）の基底核を含有する脳の基底前脳領域に、両側の定位注射によって、約５．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇの用量で送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、約１．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇ～約５．０×１０^１１ＧＣ／ｋｇの範囲の用量で、両側被殻内及び／又は黒質内注射によって、ＣＮＳに髄腔内送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶは、関節に、例えば、関節内注射によって、炎症性関節炎の治療のために約１．０×１０^１１ＧＣ／ｍＬの関節体積の用量で送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶは、心臓に、例えば、冠動脈内注射によって、約１．４×１０^１１ＧＣ／ｋｇ～約３．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇの範囲の用量で送達され得る。別の実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、例えば、約１．５×１０^１０ＧＣ／ｋｇの用量で網膜下腔に注射することによって、網膜に送達され得る。この情報を考慮して、これらの組織及び器官への他の送達手段及び他の用量は、当業者によって決定され得る。

【0135】

一態様では、本発明は、構成的又は組織特異的プロモーターの制御下にある転写因子を有するｒＡＡＶベクターを投与することによって、薬理学的に活性な治療用産物の用量を調節するための方法を提供する。

【0136】

以下の実施例は、例示的なものに過ぎず、本発明を限定することを意図するものではない。

【実施例】

【0137】

実施例１：インビトロ発現
ＨＥＫ２９３細胞を、アカゲザルＥｐｏ（ｒｈＥｐｏ）を発現するｈＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（ヒト誘導性カセット）、ｃＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（イヌ誘導性カセット）、又はｆＴＦ．ｒｈＥｐｏ．３ｗ．ｒＢＧ（ネコ誘導性カセット）でトランスフェクトした。トランスフェクションの１日後、細胞を０ｎＭ、４ｎＭ、及び４０ｎＭのラパマイシンで処理した。培養上清を回収し、ラパマイシン処理の４８時間後にｒｈＥ
ｐｏを測定した。図３は、ネコ及びイヌ誘導性構築物についてのｒｈＥＰＯの用量依存的発現を示す。

【0138】

（配列表フリーテキスト）
以下の情報は、数値識別子＜２２３＞の下でフリーテキストを含む配列を提供する。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【0139】

本明細書において引用される全ての刊行物は、「２０－９２９４ＰＣＴ＿Ｓｅｑ－Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」とラベル付けされた配列表と同様に、参照により本明細書に組み込まれる。また、２０２０年７月２７日に出願された米国仮特許出願第６３／０５６，９８５号も参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、特定の実施形態を参照して説明されているが、本発明の趣旨から逸脱することなく修正を行うことができることが理解されよう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

2023536827000001.app

【国際調査報告】