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▶ アリゾナ ボード オブ リージェンツ オン ビハーフ オブ ザ ユニバーシティー オブ アリゾナの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-30
(54)【発明の名称】一塩基多型及び炎症状態の治療
(51)【国際特許分類】
C12Q 1/6827 20180101AFI20230823BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230823BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230823BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230823BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230823BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20230823BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20230823BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230823BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20230823BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230823BHJP
C12Q 1/686 20180101ALI20230823BHJP
C12Q 1/6869 20180101ALI20230823BHJP
C12Q 1/6876 20180101ALI20230823BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20230823BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20230823BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20230823BHJP
G01N 33/542 20060101ALI20230823BHJP
G01N 33/536 20060101ALI20230823BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230823BHJP
【ＦＩ】
C12Q1/6827
A61K45/00 ZNA
A61P9/10
A61P25/00
A61P35/00
A61P15/00
A61P3/06
A61P1/16
A61P13/12
A61K39/395 D
A61K39/395 N
C12Q1/686 Z
C12Q1/6869 Z
C12Q1/6876 Z
C07K16/40
G01N33/50 P
G01N33/53 M
G01N33/542 A
G01N33/536 B
G01N33/536 D
G01N33/536 E
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023508577
(86)(22)【出願日】2021-08-06
(85)【翻訳文提出日】2023-04-06
(86)【国際出願番号】 US2021045005
(87)【国際公開番号】W WO2022032135
(87)【国際公開日】2022-02-10
(31)【優先権主張番号】63/062,750
(32)【優先日】2020-08-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/062,908
(32)【優先日】2020-08-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/063,022
(32)【優先日】2020-08-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518073309
【氏名又は名称】アリゾナ ボード オブ リージェンツ オン ビハーフ オブ ザ ユニバーシティー オブ アリゾナ
(74)【代理人】
【識別番号】100169904
【弁理士】
【氏名又は名称】村井 康司
(74)【代理人】
【識別番号】100130443
【弁理士】
【氏名又は名称】遠藤 真治
(72)【発明者】
【氏名】ジョー ジー．エヌ．ガルシア
(72)【発明者】
【氏名】モハンマド エヌ．アーメッド
【テーマコード（参考）】
2G045
4B063
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA26
2G045DA13
4B063QA13
4B063QA19
4B063QQ03
4B063QQ42
4B063QR08
4B063QR56
4B063QR62
4B063QS25
4B063QS28
4B063QS34
4B063QX02
4C084AA17
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA02
4C084ZA36
4C084ZA75
4C084ZA81
4C084ZB26
4C084ZC21
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC22
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA20
(57)【要約】
心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症等の炎症状態に関連付けられるＮＡＭＰＴプロモーター内の一塩基多型（ＳＮＰ）を同定する方法。対象におけるそのような炎症状態を診断及び治療する方法も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症を有するまたは発症するリスクがある対象を同定する方法であって、ａ）心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有するまたは発症するリスクがある対象から試料を取得することと、
ｂ）前記試料中のヒトニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）に関連付けられる少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）の存在を検出することと、を含み、前記ＳＮＰが、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、前記方法。
【請求項2】
前記対象が、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記対象が、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも２つのＳＮＰ、少なくとも３つのＳＮＰ、少なくとも４つのＳＮＰ、少なくとも５つのＳＮＰ、少なくとも６つのＳＮＰ、少なくとも７つのＳＮＰ、または少なくとも８つのＳＮＰを有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも２つのＳＮＰを検出することを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、及びｒｓ５９７４４５６０からなる群から選択される、少なくとも１つのＳＮＰを検出することを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも１つのＳＮＰを検出することを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
前記対象がアフリカ系である、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記検出することが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＳＮＰマイクロアレイ、ＳＮＰ制限断片長多型（ＳＮＰ－ＲＦＬＰ）、動的対立遺伝子特異的ハイブリタイゼーション（ＤＡＳＨ）、プライマー伸長（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法、一本鎖高次構造多型、及び／または新世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用することを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記検出することが、前記試料を、前記ＳＮＰを含むヌクレオチド配列またはそれに相補的なヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブと接触させ、前記オリゴヌクレオチドプローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
前記オリゴヌクレオチドプローブが検出可能な標識を含み、前記プローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することが、前記検出可能な標識を検出することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記検出可能な標識が、蛍光標識、発光標識、放射性核種、または化学発光標識を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記オリゴヌクレオチドプローブが、蛍光部分及び蛍光消光剤を含む２標識オリゴヌクレオチドプローブを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項13】
前記ＳＮＰが、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルよりも高いＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルに関連付けられ、任意選択で、前記ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルが、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有しない対象に関連付けられるレベルである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記試料が血漿試料である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有するまたは有するリスクがある対象を治療する方法であって、ａ）心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有するまたは有するリスクがある対象から試料を取得することと、
ｂ）前記試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することであって、前記ＳＮＰが、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択され、前記少なくとも１つのＳＮＰの前記存在は、前記対象が心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有することまたは発症するリスクがあることを示す、前記検出することと、
ｃ）心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有するまたは発症するリスクがある前記対象に有効量のＮＡＭＰＴ阻害剤を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項16】
前記試料が血漿試料である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも２つのＳＮＰ、少なくとも３つのＳＮＰ、少なくとも４つのＳＮＰ、少なくとも５つのＳＮＰ、少なくとも６つのＳＮＰ、少なくとも７つのＳＮＰ、または少なくとも８つのＳＮＰを検出することを含む、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項18】
前記少なくとも１つのＳＮＰの前記存在または不存在を前記検出することが、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、及びｒｓ５９７４４５６０からなる群から選択される少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することを含む、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
前記少なくとも１つのＳＮＰの前記存在または不存在を前記検出することが、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１３１９５０１、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することを含む、請求項１５～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
前記対象がアフリカ系である、請求項１５～１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項21】
前記検出することが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＳＮＰマイクロアレイ、ＳＮＰ制限断片長多型（ＳＮＰ－ＲＦＬＰ）、動的対立遺伝子特異的ハイブリタイゼーション（ＤＡＳＨ）、プライマー伸長（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法、一本鎖高次構造多型、または新世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用することを含む、請求項１５～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項22】
前記検出することが、前記試料を、前記ＳＮＰを含むヌクレオチド配列またはそれに相補的なヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブと接触させ、前記オリゴヌクレオチドプローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することを含む、請求項１５～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記オリゴヌクレオチドプローブが検出可能な標識を含み、前記プローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することが、前記検出可能な標識を検出することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記検出可能な標識が、蛍光標識、発光標識、放射性核種、または化学発光標識を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記オリゴヌクレオチドプローブが、蛍光部分及び蛍光消光剤を含む２標識オリゴヌクレオチドプローブを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項26】
前記ＳＮＰが、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルよりも高いＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルに関連付けられる、請求項１５～２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項27】
前記ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルが、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有しない対象に関連付けられるレベルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記ＮＡＭＰＴ阻害剤が抗ＮＡＭＰＴ抗体である、請求項１５～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
前記抗ＮＡＭＰＴ抗体が、配列番号２として示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、
配列番号３として示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号４、５、及び６として示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号７、８、及び９として示されるアミノ酸配列を有する、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記重鎖可変領域が、配列番号２に示される前記アミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３に示される前記アミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記抗ＮＡＭＰＴ抗体が、配列番号１０として示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、
配列番号１１として示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項33】
前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４として示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号１５、１６、及び１７として示されるアミノ酸配列を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記重鎖可変領域が、配列番号１０に示される前記アミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に示される前記アミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記抗ＮＡＭＰＴ抗体が、配列番号２３として示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、
配列番号３として示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインと、を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項36】
前記重鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号４、２４、及び６として示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが、それぞれ配列番号７、８、及び９として示されるアミノ酸配列を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記重鎖可変領域が、配列番号２３に示される前記アミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３に示される前記アミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記対象が、心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項39】
前記対象が、外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項40】
前記対象が、がんを有する、またはがんを発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
前記対象が、絨毛膜羊膜炎を有する、または絨毛膜羊膜炎を発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記対象が、ＮＡＳＨを有する、またはＮＡＳＨを発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記対象が、腎線維症を有する、または腎線維症を発症するリスクがある、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
連邦政府の支援による研究または開発
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）による助成番号Ｒ４１－ＨＤ１０１２０２－０１ ＳＴＴＲの下で、米国政府の支援を受けてなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）による助成番号Ｒ４１－ＨＤ１０１２０２－０１ ＳＴＴＲの下で、米国政府の支援を受けてなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【0002】
関連出願
本出願は、２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６２，９０８号、２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６３，０２２号、及び２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６２，７５０号に対する優先権を主張する。前述の優先権出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６２，９０８号、２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６３，０２２号、及び２０２０年８月７日に出願された米国仮出願第６３／０６２，７５０号に対する優先権を主張する。前述の優先権出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年８月３日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、Ａ１１０８０８＿１０１０ＷＯ＿ＳＬ＿ＳＴ２５という名称でサイズが１６，３６３バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年８月３日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、Ａ１１０８０８＿１０１０ＷＯ＿ＳＬ＿ＳＴ２５という名称でサイズが１６，３６３バイトである。
【0004】
本発明は、概して、炎症及び分子生物学の分野に関する。本発明は、一塩基多型（ＳＮＰ）を検出する方法、ＳＮＰを使用して、炎症状態を発症するリスクの増加を予測する方法、炎症状態を診断する方法、炎症状態を治療する方法、及び治療に対する患者の応答性を決定する方法を提供する。
【背景技術】
【0005】
炎症は、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、及び腎線維症等の様々な状態に関連付けられる。心臓虚血、外傷性脳損傷、及びがんは、世界中の罹患率及び死亡率の主な原因である。そのような状態のリスクを判定し、診断し、治療するための新規かつより効果的な方法が当該技術分野で必要である。
【0006】
羊膜内感染症（ＩＡＩ）としても知られる絨毛性羊膜炎は、母体に起こり得る周産期の長期的な有害転帰に関連付けられる妊娠の合併症である。絨毛性羊膜炎は、早産症例の約４０％を占める（未熟児は世界中の妊娠の１０％近くに影響を及ぼし、周産期死亡及び罹患の最も重要な原因である）。絨毛性羊膜炎のリスクを判定し、診断し、治療するための新規かつより効果的な方法が当該技術分野で必要がある。
【0007】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、世界の成人人口の最大２５％に影響を及ぼし、肝臓関連の罹患率及び死亡率の増加、心血管疾患、肝外癌、Ｔ２ＤＭ（肝線維症／肝細胞癌で死亡する８人に１人）及び慢性腎臓病のリスクの増加に関連付けられる。有病率が増加しているにもかかわらず、ＮＡＦＬＤの発症及びその後の単純脂肪肝（脂肪症）からＮＡＳＨ、肝線維症／肝硬変及び肝細胞癌（ＨＣＣ）への進行に影響を及ぼす因子（Ａｎｓｔｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ（２０１９），１６：４１１－４２８）への理解は不足しており、ＮＡＦＬＤ治療のための新しい治療戦略が依然として必要とされている。増加する証拠は、ＮＡＦＬＤの進行の機序が、遺伝的変異、脂質過酸化、酸化ストレス、腸内微生物叢における不均衡を含む複雑かつ多因子なものであり、先天性免疫応答の調節不全に対する非常に深い関係を有することを示している（Ｄｉｅｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ（２０１７），３７７：２０６３－２０７２、Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ（２０１８），２４：９０８－９２２）。ＮＡＳＨは米国人口の推定３～６％に影響を及ぼし、有病率は増加している。ＮＡＳＨ患者の推定２０％が肝硬変を発症し、ＮＡＳＨは米国での肝移植の主要な適応症になると予測されている。ＮＡＳＨ患者における死亡率は、一般集団またはこの炎症性サブタイプでないＮＡＦＬＤの患者よりも著しく高く、年間全死因死亡率は１０００人年当たり２５．５６、肝臓特異的死亡率は１０００人年当たり１１．７７である。米国食品医薬品局によって承認されているＮＡＳＨ特異的療法はない。したがって、ＮＡＳＨのリスクを決定し、診断し、治療するための新規のより効果的な方法の必要性が当技術分野に存在する。
【0008】
腎線維症は、正常な腎組織構造が細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に徐々に置き換えられたときに起こる（Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ，１０：４９３－５０３（２０１４））。糸球体及び尿細管間質区画の両方の線維症は、糖尿病性及び非糖尿病性糸球体疾患の全ての進行性形態における腎機能の低下と相関し、末期腎疾患につながる共通の機序と広く考えられている（Ｂｏｈｌｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｒｕｍ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｖｏｌｕｍｅ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｅｎｄｏｃａｐｉｌｌａｒｙ（ａｃｕｔｅ）ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ ｓｅｖｅｒｅ ｍｅｓａｎｇｉｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ，”Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ Ａ Ｐａｔｈｏｌ Ａｎａｔ Ｈｉｓｔｏｌ，３７５：８７－９６（１９７７）、Ｍａｃｋｅｎｓｅｎ－Ｈａｅｎ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｎａｌ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｔｒｏｐｈｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，”Ｃｌｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ １５：１６７－１７１（１９８１）、Ｓｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｄ．，“Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｒｏｓｓ－ｓｅｃｔｉｏｎ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｄａｍａｇｅ，”Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，５：８８９－８９３（１９９０））。腎臓炎症は、原因を排除し修復を促進するための広範な損傷に対する保護反応として誘発されるが、根底にある病因にかかわらず、進行中の炎症は進行性腎線維症を促進する。しかしながら、進行性腎線維症の根底にある機序は完全には理解されておらず、したがって、有効な治療法を欠いている。したがって、腎線維症のリスクを決定し、診断し、治療するための新規かつより効果的な方法の必要性が当技術分野で存在する。
【発明の概要】
【0009】
炎症疾患に関連付けられる罹患率及び死亡率を低減することは、疾患進行に関連付けられる危険因子の同定、疾患を示すマーカーの同定、並びに／または疾患の重症度及び進行を低減させる新規アプローチの開発を含む。
【0010】
先天性免疫の調節、及び炎症状態に関連付けられる炎症性損傷の低減、特に、ＮＦｋＢ依存性炎症性カスケードの調節は、疾患の治療及び予防に重要であり得る。
【0011】
治療及び転帰を改善するためには、炎症状態を示す及び／または炎症状態を発症するリスクを示すバイオマーカーが必要である。そのようなマーカーの非限定的な例としては、ＰＢＥＦ及びビスファチンとも呼ばれるニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ酵素（ＮＡＭＰＴ）等のサイトカインを調節する遺伝子における一塩基多型（ＳＮＰ）が挙げられる。
【0012】
炎症状態に関連付けられるＮＡＭＰＴプロモーター内の一塩基多型（ＳＮＰ）を同定する方法が提供される。少なくとも一部の実施形態において、炎症状態のリスクにあり得る患者を同定する手段を提供する。また、炎症状態を診断及び治療する方法も提供される。
【0013】
いくつかの実施形態は、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症を有する、または発症するリスクがある対象を同定する方法であって、ａ）心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または発症するリスクがある対象から試料を取得することと、ｂ）試料中のヒトニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）遺伝子に関連付けられる少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）の存在を検出することとを含み、ＳＮＰが、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、方法を含む。いくつかの実施形態において、対象は、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する。
【0014】
いくつかの実施形態において、対象は、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも１つのＳＮＰ、少なくとも２つのＳＮＰ、少なくとも３つのＳＮＰ、少なくとも４つのＳＮＰ、少なくとも５つのＳＮＰ、少なくとも６つのＳＮＰ、少なくとも７つのＳＮＰ、または少なくとも８つのＳＮＰを有する。いくつかの実施形態は、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも２つのＳＮＰを検出することを含む。いくつかの実施形態は、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、及びｒｓ５９７４４５６０からなる群から選択される、少なくとも１つのＳＮＰを検出することを含む。いくつかの実施形態は、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも１つのＳＮＰを検出することを含む。
【0015】
いくつかの実施形態において、対象はアフリカ系である。
【0016】
いくつかの実施形態において、検出することは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＳＮＰマイクロアレイ、ＳＮＰ制限断片長多型（ＳＮＰ－ＲＦＬＰ）、動的対立遺伝子特異的ハイブリタイゼーション（ＤＡＳＨ）、プライマー伸長（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法、一本鎖高次構造多型、及び／または新世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用することを含む。
【0017】
いくつかの実施形態において、検出することは、試料を、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列またはそれに相補的なヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブと接触させることと、オリゴヌクレオチドプローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することと、を含む。ある特定の実施形態において、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ＳＮＰを取り囲む各側に２００塩基対を含む。特定の実施形態において、配列番号１８に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ７７８９０６６を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号１９に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ６１３３００８２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２０に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ９７７０２４２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ５９７４４５６０を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、及び／または配列番号２２に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ１３１９５０１を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズする。
【0018】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドプローブは、検出可能な標識を含み、プローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することは、検出可能な標識を検出することを含む。いくつかの実施形態において、検出可能な標識は、蛍光標識、発光標識、放射性核種、または化学発光標識を含む。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドプローブは、蛍光部分及び蛍光消光剤を含む２標識オリゴヌクレオチドプローブを含む。
【0019】
いくつかの実施形態において、ＳＮＰは、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルよりも高いＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルに関連付けられる。特定の実施形態において、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルは、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有しない対象に関連付けられるレベルである。
【0020】
いくつかの実施形態において、試料は、血漿試料である。
【0021】
有効量のＮＡＭＰＴ阻害剤を、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または発症するリスクがある対象に投与することによって、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、またはそのリスクを有する対象を治療する方法も提供される。いくつかの実施形態において、対象は、臨床診断（例えば、炎症状態の１つ以上の症状及び／または危険因子を同定すること）、ＮＡＭＰＴのレベルの上昇（例えば、血漿ＮＡＭＰＴレベル）、及び／またはＮＡＭＰＴプロモーターの活性レベル（例えば、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３）に関連付けられる１つ以上のＳＮＰの同定のうちの１つ以上に基づいて、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または有するリスクがあると判定され得る。
【0022】
心虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または有するリスクがある対象を治療する方法であって、ａ）心虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または有するリスクがある対象からサンプルを取得することと、ｂ）試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することであって、ＳＮＰが、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択され、少なくとも１つのＳＮＰの存在が、対象が心臓虚血症、脳損傷、脳損傷、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有することまたは発症するリスクがあることを示す、検出することと、ｃ）心虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有する、または発症するリスクがある対象に、有効量のＮＡＭＰＴ阻害剤を投与することと、を含む方法もまた提供される。いくつかの実施形態において、試料は、血漿試料である。
【0023】
いくつかの実施形態は、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される、少なくとも２つのＳＮＰ、少なくとも３つのＳＮＰ、少なくとも４つのＳＮＰ、少なくとも５つのＳＮＰ、少なくとも６つのＳＮＰ、少なくとも７つのＳＮＰ、または少なくとも８つのＳＮＰを検出することを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することは、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、及びｒｓ５９７４４５６０からなる群から選択される少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することは、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、及びｒｓ１９０８９３１８３からなる群から選択される少なくとも１つのＳＮＰの存在または不存在を検出することを含む。
【0024】
いくつかの実施形態において、対象はアフリカ系である。
【0025】
いくつかの実施形態において、検出することは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＳＮＰマイクロアレイ、ＳＮＰ制限断片長多型（ＳＮＰ－ＲＦＬＰ）、動的対立遺伝子特異的ハイブリタイゼーション（ＤＡＳＨ）、プライマー伸長（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法、一本鎖高次構造多型、または新世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用することを含む。いくつかの実施形態において、検出することは、試料を、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列またはそれに相補的なヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブと接触させ、オリゴヌクレオチドプローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することを含む。ある特定の実施形態において、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ＳＮＰを取り囲む各側に２００塩基対を含む。特定の実施形態において、配列番号１８に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ７７８９０６６を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号１９に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ６１３３００８２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２０に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ９７７０２４２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ５９７４４５６０を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、及び／または配列番号２２に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ１３１９５０１を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズする。
【0026】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドプローブは、検出可能な標識を含み、プローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することは、検出可能な標識を検出することを含む。いくつかの実施形態において、検出可能な標識は、蛍光標識、発光標識、放射性核種、または化学発光標識を含む。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドプローブは、蛍光部分及び蛍光消光剤を含む２標識オリゴヌクレオチドプローブを含む。
【0027】
いくつかの実施形態において、ＳＮＰは、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルよりも高いＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルに関連付けられる。いくつかの実施形態において、ベースラインＮＡＭＰＴプロモーター活性レベルは、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症を有しない対象に関連付けられるレベルである。
【0028】
いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴ阻害剤は抗ＮＡＭＰＴ抗体である。
【0029】
いくつかの実施形態において、抗ＮＡＭＰＴ抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、を含む。特定の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号４、５、及び６として示されるアミノ酸配列を有し、及び／または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号７、８、及び９として示されるアミノ酸配列を有する。
【0030】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、及び／または軽鎖可変領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。
【0031】
いくつかの実施形態において、抗ＮＡＭＰＴ抗体は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、を含む。特定の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４として示されるアミノ酸配列を有し、及び／または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号１５、１６、及び１７として示されるアミノ酸配列を有する。
【0032】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、及び／または軽鎖可変領域は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。
【0033】
いくつかの実施形態において、抗ＮＡＭＰＴ抗体は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、を含む。特定の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号４、２４、及び６として示されるアミノ酸配列を有し、及び／または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ配列番号７、８、及び９として示されるアミノ酸配列を有する。
【0034】
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み、及び／または軽鎖可変領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。
【0035】
いくつかの実施形態において、対象は、心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、がんを有する、またはがんを発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、絨毛膜羊膜炎を有する、または絨毛膜羊膜炎を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、ＮＡＳＨを有する、またはＮＡＳＨを発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、腎線維症を有する、または腎線維症を発症するリスクがある。
【図面の簡単な説明】
【0036】
【図1】様々な障害性シグナルに対応したＮＡＭＰＴの分泌、先天性免疫及び炎症の活性化のための細胞外ＮＡＭＰＴのＴＬＲ４への結合、ならびに抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂであるＡＬＴ－１００によってＮＡＭＰＴを中和することによる炎症の遮断を示す概略図である。
【図2】健康な対照女性（２つの左パネル）または絨毛性羊膜炎を有する女性（２つの右パネル）から得られる胎盤組織におけるＮＡＭＰＴの免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。
【図3】健康な妊婦（「妊娠中」）、絨毛性羊膜炎を有する妊婦（「ＣｈｏｒＰ」）、または非妊婦対照（「対照」）から得られた血漿試料中のＮＡＭＰＴレベルのグラフ表示である。
【図4】ＬＰＳ誘導性絨毛羊膜炎のマウスモデルにおける絨毛羊膜炎関連子宮組織学を示す。Ａは、子宮膿瘍（Ａ、上パネル）、ならびにＬＰＳチャレンジされた絨毛性羊膜炎マウスから得られた子宮組織における炎症及びアポトーシスの領域（Ａ、下パネル）を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｂは、ＬＰＳチャレンジされた絨毛性羊膜炎マウスに由来する血清（Ｂ、上パネル）または子宮組織ホモジネート（Ｂ、下パネル）中の炎症促進性サイトカインＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－６、ＫＣ（ＩＬ－８）及びＭＣＰ１のレベルを示すグラフを提供する。
【図5A】ヒト化抗ＮＡＭＰＴモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるＡＬＴ－１００の、絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子のＮＡＭＰＴ及び他の炎症性サイトカインの発現、ならびに絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子の生存率に対する効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００）処置絨毛膜羊膜炎マウス、ＰＢＳ処置絨毛膜羊膜炎マウス、または健康なマウス対照に生まれた子の肺組織におけるＮＡＭＰＴ発現を示すウエスタンブロット分析からの代表的な画像を提供する。
【図5B】ヒト化抗ＮＡＭＰＴモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるＡＬＴ－１００の、絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子のＮＡＭＰＴ及び他の炎症性サイトカインの発現、ならびに絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子の生存率に対する効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置絨毛性羊膜炎マウス（「ＬＰＳ＋ＡＬＴ－１００」）またはＰＢＳ注射絨毛性羊膜炎マウス（「ＬＰＳ」）から産まれた子の肺組織ホモジネートにおける炎症促進性サイトカインＩＬ－６、ＫＣ（ＩＬ－８）及びＭＣＰ１のレベルのグラフ表示である。
【図5C】ヒト化抗ＮＡＭＰＴモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるＡＬＴ－１００の、絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子のＮＡＭＰＴ及び他の炎症性サイトカインの発現、ならびに絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子の生存率に対する効果を示す。ＰＢＳチャレンジされた対照マウス（「対照」）、ＬＰＳチャレンジされた絨毛膜羊膜炎マウス（「ＬＰＳ」）、または抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＬＰＳ＋ＡＬＴ－１００」）で処置したＬＰＳチャレンジされた絨毛膜羊膜炎マウス、に生まれる子の生存率のグラフ表現である。＊はｐ＜０．０５を示す。
【図6】ＢＰＤのマウスモデルから得られた肺組織における、Ｈ＆Ｅ染色によって評価される、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ ＡＬＴ－１００の炎症及び気管支肺異形成（ＢＰＤ）に対する効果を示す。Ａは、対照室内気に曝露された子から得られる肺組織におけるＨ＆Ｅ染色を示す代表的な顕微鏡写真である。Ｂは、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされたＢＰＤ子から得られる肺組織におけるＨ＆Ｅ染色を示す代表的な顕微鏡写真である。Ｃは、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされたＢＰＤ子から得られる肺組織におけるＨ＆Ｅ染色を示す代表的な顕微鏡写真である。
【図7】ＢＰＤのマウスモデルにおいて、ＬＰＳ及び高酸素に曝露したマウスから得られた新生児肺組織における、ウエスタンブロット解析によって評価したＮＡＭＰＴ発現を示す。Ａは、対照室内気に曝露された（「対照」）、ＬＰＳ／高酸素に曝露された（「ＬＰＳ／高酸素」）、またはＬＰＳ／高酸素に曝露されたが抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ（「ＬＰＳ／高酸素＋抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ」）で処置された子の肺組織におけるＮＡＭＰＴ発現のウエスタンブロット分析を示す代表的な画像を提供する。Ｂは、対照室内気に曝露された子（「対照」）、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ／高酸素」）、または抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置したＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ／高酸素＋ＡＬＴ－１００」）の肺組織においてＧＡＰＤＨに対して正規化されたＮＡＭＰＴバンド強度の濃度測定値のグラフ表示である。
【図8】絨毛膜羊膜炎誘導性ＰＡＨの２ヒットマウスモデルから得られた肺組織ホモジネートにおける、ＲＴ－ＰＣＲ分析によって評価される、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００）の絨毛膜羊膜炎誘導性肺高血圧症（ＰＡＨ）に対する効果を示す。Ａは、対照室内気に曝露された子（「ＲＡ」）、室内気でＬＰＳチャレンジされた子（「ＲＡ ＬＰＳ」）、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳチャレンジされた子（「ＲＡ ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ」）、ＬＰＳ及び高酸素チャレンジされた子（「ＨＯ ＬＰＳ」）、または抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＨＯ ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ」）の肺組織におけるｐ－ＳＭＡＤ１／５／８／９発現のグラフ表現である。Ｂは、対照室内気に曝露された子（「ＲＡ」）、室内気でＬＰＳチャレンジされた子（「ＬＰＳ ＲＡ」）、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置したＬＰＳチャレンジされた子（「ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ ＲＡ」）、ＬＰＳ及び高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ高酸素」）、または抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置したＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ高酸素」）からの肺組織におけるＳＴＡＴ３／ＧＡＰＤＨの倍率変化のグラフ表現である。
【図9】絨毛性羊膜炎誘導性ＰＡＨの２ヒットマウスモデルからの子のＦｕｌｔｏｎ指数のグラフ表現であり、対照室空気に曝露された子、ＬＰＳ及び高酸素チャレンジされた子、または抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子のＲＶ／ＬＶ隔壁比を示す。
【図10】ヒト非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、マウス非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）組織、及びマウス脂肪肝組織からの肝臓組織におけるＮＡＭＰＴ発現を示す代表的な画像を提供する。Ａは、正常な肝臓組織（挿入図）と比較した、ＮＡＦＬＤ対象（ｎ＝４～５）の肝臓切片におけるＮＡＭＰＴのＩＨＣ染色を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｂは、正常な肝臓組織（挿入図）と比較した、６週（ｎ＝８）に撮影されたＮＡＳＨ（ＳＴＺ／ＨＦ）マウスＳＴＡＭモデルの肝臓切片におけるＮＡＭＰＴのＩＨＣ染色を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｃは、正常な肝臓組織（挿入図）と比較した、高脂質高スクロース（ＨＦＨＳ）を給飼された（８週、１６週に屠殺）西洋食誘導性ＮＡＳＨモデルのマウスの肝臓切片におけるＮＡＭＰＴのＩＨＣ染色を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｄは、正常食及びＨＦＨＳ給餌マウス（１６週、ｎ＝４マウス）からの肝臓組織溶解物中のＮＡＭＰＴ発現のウエスタンブロット分析を示す代表的な画像を提供する。Ｅは、正常な肝臓切片及び脂肪肝疾患を有するマウスの肝臓切片におけるＮＡＭＰＴのＩＨＣ染色を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。
【図11】高脂肪食で維持されたストレプトゾトシンチャレンジされたＮＡＳＨマウス（ＳＴＺ／ＨＦ（ＳＴＡＭ）マウス）から得られた肝臓組織における、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色によって評価される、ＮＡＳＨ媒介性肝損傷に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの効果を示す。Ａは、１２週における対照マウス（左パネル、挿入図）と比較した、ビヒクル（ＩｇＧ１ Ａｂ）処置したＳＴＺ／ＨＦ（ＳＴＡＭ）マウス（左パネル）における脂肪症の証拠、ならびに抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置したＳＴＺ／ＨＦマウスにおける脂肪症、肝内脂肪球、肝細胞傷害及びバルーニングの低減（右パネル）を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｂは、図１０Ａからの画像の拡大版（２００倍）を提供する。
【図12A】ＳＴＺ／ＨＦ誘導性マウスＮＡＳＨ（ＳＴＡＭ）の複数の指標に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」、ｎ＝８）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」、ｎ＝８）、またはテルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」、ｎ＝８）からの、肝臓組織中で評価される脂肪症スコアのグラフ表示である。
【図12B】ＳＴＺ／ＨＦ誘導性マウスＮＡＳＨ（ＳＴＡＭ）の複数の指標に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」、ｎ＝８）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」、ｎ＝８）、またはテルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」、ｎ＝８）からの、肝臓組織で評価される肝臓トリグリセリドレベルのグラフ表示である。
【図12C】ＳＴＺ／ＨＦ誘導性マウスＮＡＳＨ（ＳＴＡＭ）の複数の指標に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」、ｎ＝８）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」、ｎ＝８）、またはテルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」、ｎ＝８）からの、肝臓組織で評価される肝線維症のマーカーであるコラーゲンのシリウス染色のグラフ表示である。
【図12D】ＳＴＺ／ＨＦ誘導性マウスＮＡＳＨ（ＳＴＡＭ）の複数の指標に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの効果を示す。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」）、テルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」）、またはＳＴＺ／ＨＦに曝露しなかった対照マウス（「Ｃｔｒｌ」）において評価したＮＡＭＰＴ血漿レベルのグラフ表示である。＊ｐ＜０．０１、＃ｐ＜０．０００１。
【図13】新規のＮＡＳＨ治療標的としてのＮＡＭＰＴを示す概略図である。左パネルは、ＮＡＳＨにおける炎症及び線維症の調節におけるＮＡＭＰＴの役割を示している。右側のパネルは、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂであるＡＬＴ－１００を中和する保護効果を示している。
【図14】片側尿管閉塞（ＵＵＯ）のマウスモデルにおける腎線維症の重症度に対するヒト化抗ＮＡＭＰＴであるｍＡｂ ＡＬＴ－１００の効果を示す。Ａは、対照組織と比較した、ＵＵＯ後１４日目のＵＵＯマウスの腎組織におけるシリウスレッド染色／コラーゲン沈着を示す代表的な顕微鏡写真を提供する（挿入図）。Ｂは、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂであるＡＬＴ－１００で処置したＵＵＯマウス由来の腎組織におけるシリウスレッド染色／コラーゲン沈着を示す代表的な顕微鏡写真を提供する。Ｃは、正常腎組織、ＵＵＯマウス由来の腎組織、及び抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂであるＡＬＴ－１００で処置したＵＵＯマウス由来の腎組織におけるシリウスレッド染色／コラーゲン沈着のグラフ表現である。＊ｐ＜０．０００１。
【発明を実施するための形態】
【0037】
定義
本発明をより容易に理解できるようにするために、特定の用語を最初に定義する。更に、パラメータの値または値の範囲が列挙されるときはいつでも、列挙された値及び列挙された値の間の範囲も本発明の一部であることが意図されることに留意されたい。本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「及び」及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと規定されない限り、複数の参照を含むことにも留意されたい。
本発明をより容易に理解できるようにするために、特定の用語を最初に定義する。更に、パラメータの値または値の範囲が列挙されるときはいつでも、列挙された値及び列挙された値の間の範囲も本発明の一部であることが意図されることに留意されたい。本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「及び」及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと規定されない限り、複数の参照を含むことにも留意されたい。
【0038】
「一塩基多型」または「ＳＮＰ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、ゲノム（または他の共有配列）内の一塩基が種のメンバー間（または個体内の対染色体間）で異なる場合に生じるＤＮＡ配列変異を指す。ＳＮＰは、生物のゲノムのコード領域または非コード領域のいずれかで発生し得る。
【0039】
「ＮＡＭＰＴ」または「ｅＮＡＭＰＴ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、非分泌型（例えば、細胞内ＮＡＭＰＴまたはＮＡＭＰＴ核酸）に関連すると具体的に言及されない限り、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）の分泌型を指す。分泌されたヒトＮＡＭＰＴ（ヒトｅＮＡＭＰＴとも称される）のアミノ酸配列は、配列番号１として以下に提供される（ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ参照番号ＮＣ＿０００００７．１４及びタンパク質参照番号ＮＰ＿００５７３７．１も参照されたい）。
ＭＮＰＡＡＥＡＥＦＮ ＩＬＬＡＴＤＳＹＫＶ ＴＨＹＫＱＹＰＰＮＴ ＳＫＶＹＳＹＦＥＣＲ ＥＫＫＴＥＮＳＫＬＲ ＫＶＫＹＥＥＴＶＦＹ ＧＬＱＹＩＬＮＫＹＬ ＫＧＫＶＶＴＫＥＫＩ ＱＥＡＫＤＶＹＫＥＨ ＦＱＤＤＶＦＮＥＫＧ ＷＮＹＩＬＥＫＹＤＧ ＨＬＰＩＥＩＫＡＶＰ ＥＧＦＶＩＰＲＧＮＶ ＬＦＴＶＥＮＴＤＰＥ ＣＹＷＬＴＮＷＩＥＴ ＩＬＶＱＳＷＹＰＩＴ ＶＡＴＮＳＲＥＱＫＫ ＩＬＡＫＹＬＬＥＴＳ ＧＮＬＤＧＬＥＹＫＬ ＨＤＦＧＹＲＧＶＳＳ ＱＥＴＡＧＩＧＡＳＡ ＨＬＶＮＦＫＧＴＤＴ ＶＡＧＬＡＬＩＫＫＹ ＹＧＴＫＤＰＶＰＧＹ ＳＶＰＡＡＥＨＳＴＩ ＴＡＷＧＫＤＨＥＫＤ ＡＦＥＨＩＶＴＱＦＳ ＳＶＰＶＳＶＶＳＤＳ ＹＤＩＹＮＡＣＥＫＩ ＷＧＥＤＬＲＨＬＩＶ ＳＲＳＴＱＡＰＬＩＩ ＲＰＤＳＧＮＰＬＤＴ ＶＬＫＶＬＥＩＬＧＫ ＫＦＰＶＴＥＮＳＫＧ ＹＫＬＬＰＰＹＬＲＶ ＩＱＧＤＧＶＤＩＮＴ ＬＱＥＩＶＥＧＭＫＱ ＫＭＷＳＩＥＮＩＡＦ ＧＳＧＧＧＬＬＱＫＬ ＴＲＤＬＬＮＣＳＦＫ ＣＳＹＶＶＴＮＧＬＧ ＩＮＶＦＫＤＰＶＡＤ ＰＮＫＲＳＫＫＧＲＬ ＳＬＨＲＴＰＡＧＮＦ ＶＴＬＥＥＧＫＧＤＬ ＥＥＹＧＱＤＬＬＨＴ ＶＦＫＮＧＫＶＴＫＳ ＹＳＦＤＥＩＲＫＮＡ ＱＬＮＩＥＬＥＡＡＨＨ（配列番号１）
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【0040】
ＮＡＭＰＴは、プレＢ細胞コロニー増強因子（ＰＢＥＦ）またはビスファチンとも称される。
【0041】
「ベースライン」という用語は、本明細書で使用される場合、参照または対照測定値、例えば、健康な対象（すなわち、炎症状態を有しない対象）または健康な対象の群からのＮＡＭＰＴ発現の対照レベルを指す。
【0042】
本明細書で使用される場合、「ＮＡＭＰＴ阻害剤」または「ＮＡＭＰＴの阻害」は、ＮＡＭＰＴ活性を低減または予防する薬剤を指す。いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴ阻害剤は、ＮＡＭＰＴに結合し、ＮＡＭＰＴの生物学的活性の阻害をもたらす。
【0043】
本明細書にて使用されるように、本明細書で互換的に使用される「ＮＡＭＰＴ抗体」または「抗ＮＡＭＰＴ抗体」または「抗ｅＮＡＭＰＴ抗体」という用語は、ＮＡＭＰＴの分泌形態（本明細書ではｅＮＡＭＰＴとも称される）に特異的に結合する抗体を指す。好ましい実施形態において、抗体は、ヒトＮＡＭＰＴ（ｈＮＡＭＰＴ）に特異的に結合する。好ましくは、ＮＡＭＰＴ抗体は、ＮＡＭＰＴの生物活性を阻害する。改変されたＮＡＭＰＴ活性は、当技術分野で認識される技術を使用して直接測定されてもよく、または改変された活性が下流に及ぼす影響によって測定されてもよいことを理解が理解されよう。
【0044】
本明細書で使用される「レベル」または「量」という用語は、測定可能な量のバイオマーカー、例えば、ＮＡＭＰＴ発現のレベルを指す。この量は、（ａ）単位体積または細胞当たりの分子、モル、または重量で測定した絶対量、または（ｂ）例えば、濃度測定分析によって測定した相対量のいずれかであり得る。
【0045】
本明細書で使用される「試料」という用語は、対象から得られた材料（例えば、同様の細胞または組織の集合体）を指す。試料は、新鮮な、凍結された及び／または保存された臓器もしくは組織試料もしくは生検材料もしくは吸引物からの固体組織（例えば、胎盤組織）、血液もしくは任意の血液成分、または血液、血清、血漿、尿、唾液、汗もしくは滑液等の体液であり得る。いくつかの実施形態において、滑膜炎バイオマーカーは血清試料から得られる。いくつかの実施形態において、軟骨分解バイオマーカーは尿試料から得られる。
【0046】
「患者」、「個体」、または「対象」という用語は、本明細書において互換的に使用され、哺乳動物、特に、ヒト（例えば、妊娠中のヒト女性）を指す。患者は、疾患を有しないか、軽度、中等度または重度の疾患を有し得る。患者は、治療未経験であってもよく、任意の形態の治療に応答してもよく、または難治性であってもよい。患者は、治療を必要とする、または特定の症状または家族歴に基づいて診断を必要とする個体であり得る。いくつかの実施形態において、対象は、炎症状態と診断されている、または炎症状態の症状を有するヒト対象である。他の実施形態において、対象は、炎症状態と診断されていない、または炎症状態の症状を有しない健康なヒト対象である。
【0047】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療」または「治療すること（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」または「緩和すること（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」または「緩和すること（ｔｏ ａｌｌｅｖｉａｔｅ）」等の用語は、状態または障害の進行を治癒する、遅延させる（ｓｌｏｗ ｄｏｗｎ）、症状を軽減する、及び／または停止させるもしくは遅延させる（ｓｌｏｗ）治療手段を指す。
【0048】
「予防する」等の用語は、標的とする状態の発症を予防する予防的または防止的措置を指す。
【0049】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、本明細書において互換的に使用され、特定の生物学的結果を達成するのに有効な薬剤の量を指す。そのような結果には、当該技術分野において好適な任意の手段によって決定される、ＮＡＭＰＴ発現もしくは活性の阻害、またはＮＡＭＰＴの下流にあるシグナル伝達分子の発現もしくは活性が含まれ得るが、これらに限定されない。
【0050】
疾病／状態
ＮＡＭＰＴ発現に関連付けられる状態を発症するリスクを決定する方法が提供される。また、そのような状態を診断及び／または治療する方法も提供される。いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴ関連状態は、心臓虚血、心筋梗塞、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症等の炎症状態である。いくつかの実施形態において、この状態は、２０２１年２月１１日に公開されたＧａｒｃｉａによるＷＯ／２０２１／０２６４８７に記載される状態であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（例えば、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、放射線誘発性肺損傷（ＲＩＬＩ）、肺高血圧、肺線維症、ＣＯＶＩＤ－１９、または前立腺癌）。
ＮＡＭＰＴ発現に関連付けられる状態を発症するリスクを決定する方法が提供される。また、そのような状態を診断及び／または治療する方法も提供される。いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴ関連状態は、心臓虚血、心筋梗塞、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症等の炎症状態である。いくつかの実施形態において、この状態は、２０２１年２月１１日に公開されたＧａｒｃｉａによるＷＯ／２０２１／０２６４８７に記載される状態であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（例えば、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、放射線誘発性肺損傷（ＲＩＬＩ）、肺高血圧、肺線維症、ＣＯＶＩＤ－１９、または前立腺癌）。
【0051】
カロリー過剰及び座りがちなライフスタイルは、肥満、メタボリックシンドローム及び非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の世界的な流行につながり、これは慢性肝疾患の主要な原因として浮上している（Ａｌｉ ａｎｄ Ｃｕｓｉ，“Ｎｅｗ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ），”Ａｎｎ Ｍｅｄ，４１：２６５－２７８（２００９）、Ｙｏｕｎｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．“Ｇｌｏｂａｌ ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ ＮＡＦＬＤ ａｎｄ ＮＡＳＨ：ｔｒｅｎｄｓ，ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ，ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，１５：１１－２０（２０１８））。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪肝（脂肪症）からＮＡＳＨ、肝線維症／肝硬変までの範囲に進行するスペクトルを表し、肝細胞癌（ＨＣＣ）のリスク増加させる（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．“Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ，”Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１２９：１１３－１２１（２００５）、Ａｎｓｔｅｅ ｅｔ ａｌ．“Ｆｒｏｍ ＮＡＳＨ ｔｏ ＨＣＣ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，１６：４１１－４２８（２０１９）、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．“Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ，ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ，”Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，１０：１３４２－１３５９ ｅ１３４２（２０１２））。有病率が増加しているにもかかわらず、ＮＡＦＬＤの発症及びその後の進行に影響を及ぼす要因は十分に理解されていない。進行性ＮＡＦＬＤの複雑な病因における治療の進歩は、現在、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行において先天性免疫駆動型炎症応答及び酸化／タンパク質毒性ストレスの役割を強調している（Ｆｅｂｂｒａｉｏ ｅｔ ａｌ．“Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ Ｓｔｕｄｙｉｎｇ ＮＡＳＨ－Ｄｒｉｖｅｎ ＨＣＣ：Ｈｏｗ Ｕｓｅｆｕｌ Ａｒｅ Ｔｈｅｙ？”Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ，２９：１８－２６（２０１９））。本発明者らは、システム生物学及びゲノム戦略を利用して、ＴＬＲ ４媒介性炎症経路の活性化を介して先天性免疫媒介性炎症及び線維症を強力に調節する新規の損傷関連分子パターンタンパク質（ＤＡＭＰ）としてＮＡＭＰＴを同定した（Ｙｅ ｅｔ ａｌ．“Ｐｒｅ－Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ－ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１７１：３６１－３７０（２００５）、Ｃａｍｐ ｅｔ ａｌ．“Ｕｎｉｑｕｅ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＮＡＭＰＴ／ＰＢＥＦ Ｉｎｄｕｃｅｓ ＮＦｋａｐｐａＢ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ，”Ｓｃｉ Ｒｅｐ，５：１３１３５（２０１５）、Ｏｉｔａ ｅｔ ａｌ．“Ｎｏｖｅｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，５９：３６－４４（２０１８））。循環ＮＡＭＰＴは、多臓器炎症、損傷及び線維症（肺、肝臓、腎臓、心臓）ならびに特異的ながんの発症及び重症度への非常に重要な関与体である（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））。ＮＡＭＰＴ中和ヒト化ＡＬＴ－１００ｍＡｂを用いた予備的前臨床試験は、循環ＮＡＭＰＴの中和が、ＴＬＲ４炎症性カスケード活性ならびに急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、人工呼吸器誘発性肺損傷（ＶＩＬＩ）、外傷誘発性肺損傷、肺高血圧、放射線肺炎、肺線維症、腎線維症、心臓線維症、及び前立腺癌の重症度を低下させることを示す（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０）、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｒｅ－Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１７８：６０５－６１７（２００８）、Ｑｕｉｊａｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅＮＡＭＰＴ Ａｍｐｌｉｆｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｕｔｅ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ：Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎ ｅＮＡＭＰＴ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｓｉｎｇ ｍＡｂ，”Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，２００２５３６（２０２０）、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｓ ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｉａｌ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，”Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１３５：１５３２－１５４６（２０１７）、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｒｅｃｔ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ＮＡＭＰＴ Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＳＯＸ ａｎｄ ＨＩＦ－２ａｌｐｈａ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，６３：９２－１０３（２０２０））。これを図１に示す。図１に記載されるように、ＮＡＭＰＴは、様々な有害なシグナル（例えば、感染（細菌、ウイルス等）、低酸素症、脂肪毒性、ＲＯＳ等）に応答して分泌され、ＡＲＤＳ等の急性炎症性肺疾患におけるような「サイトカインストーム」の結果として、臓器に閉じ込められた炎症（例えば、胎盤、肺、肝臓、前立腺、腎臓、心臓）または多臓器の炎症及び損傷を生じさせる可能性がある。ＮＡＭＰＴは、ＴＬＲ４に結合し、ＴＬＲ４炎症カスケードを誘発することによってＤＡＭＰとして機能し、これはＮＡＦＬＤからＮＡＳＨへの移行に寄与する。したがって、ヒト化ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂであるＡＬＴ－１００は、炎症性カスケードを抑制し、急性適応症（例えば、ＡＲＤＳ、外傷誘発性脳損傷及び／または肺損傷、子宮内感染及び／または早産（例えば、絨毛膜羊膜炎に関連付けられるもの）、心臓虚血等）、急性及び慢性（例えば、ＲＩＬＩ）、ならびに慢性適応症（例えば、肺高血圧、肺線維症、ＮＡＳＨ、肝線維症、腎線維症、前立腺癌等）等の様々な炎症適応症を改善、遅延及び／または阻害し得る。例えば、ヒト化ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂであるＡＬＴ－１００は、ＮＡＦＬＤから関連する致死性を有する侵襲性ＮＡＳＨ表現型への移行を遅延、または阻害し得る。
【0052】
心臓虚血（心筋虚血とも呼ばれる）は、心臓への血流の減少を特徴とする状態である。心臓虚血は、心筋の血液ポンプ能力を低下させ、心臓の動脈の部分的または完全な閉塞から生じると考えられている。
【0053】
心臓虚血の症状には、典型的には体の左側にある胸部圧迫または痛み（狭心症）、首及び／または顎の痛み、肩及び／または腕の痛み、頻脈、息切れ、特に身体活動に伴う息切れ、吐き気、嘔吐、発汗、及び疲労のうちの１つ以上が含まれる。理論に縛られることなく、心臓虚血は、冠動脈疾患（アテローム性動脈硬化症）、血栓、または冠動脈痙攣によって引き起こされ得、そしてそれは、労作、感情的ストレス、低温、コカイン使用、重たい食事または大量の食事、及び／または性交によって引き起こされ得ると考えられる。心臓虚血の危険因子には、タバコ使用、糖尿病、高血圧、高血中コレステロールレベル、高血中トリグリセリドレベル、肥満、大胴囲、及び／または身体活動の欠如が含まれる。心臓虚血に関連付けられる有害転帰には、心臓発作、不規則な心拍（不整脈）、及び／または心不全が含まれる。心臓虚血については、Ｓｈｉｍｏｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ：Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，”Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，５２（２）：６７－７８（２００８）により詳細に考察されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0054】
心臓発作としても知られる心筋梗塞は、心臓への血流が遮断されたときに起こる。理論に拘束されることなく、閉塞はほとんどの場合、冠動脈にプラークを形成する、脂肪、コレステロール、及び他の物質の蓄積であると考えられている。心筋梗塞の症状には、首、顎、または背中に広がり得る胸または腕の圧迫感、緊張感、疼痛、または圧迫感もしくは痛みの感覚；吐き気；消化不良；胸やけ；腹痛；息切れ；冷や汗；疲労；意識朦朧；及び突然のめまいのうちの１つ以上が含まれる。心筋梗塞の危険因子には、年齢（例えば、４５歳以上の男性、５５歳以上の女性）、タバコ使用、高血圧、高血中コレステロールまたはトリグリセリドレベル、肥満、糖尿病、メタボリックシンドローム、心臓発作の家族歴、身体活動の欠如、ストレス、違法薬物使用、子癇前症の病歴、及び自己免疫状態が含まれる。心筋梗塞に関連付けられる有害転帰には、不整脈、心不全、及び心停止が含まれる。心筋梗塞については、Ｓａｌｅｈ ｅｔ ａｌ，“Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，”Ｆ１０００ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７（Ｆ１０００ Ｆａｃｕｌｔｙ Ｒｅｖ）：１３７８（８ ｐａｇｅｓ）（２０１８）により詳細に考察されている。
【0055】
外傷性脳損傷は、頭もしくは体への打撃もしくは衝撃、または脳組織を貫通する物体によって引き起こされる脳への損傷である。外傷性脳損傷は、打撲傷、組織の引き裂き、出血、及び脳への他の物理的損傷を引き起こす可能性がある。理論に拘束されることなく、外傷性脳損傷の原因は、転倒、車両関連の衝突、暴力、スポーツ傷害、爆発性爆風及び他の戦闘傷害が含まれると考えられている。外傷性脳損傷のリスクが最も高い被験者には、小児（特に新生児から４歳まで）、若年成人（特に１５～２４歳）、６０歳以上の成人、及び男性が含まれる。外傷性脳損傷の症状には、数分から数時間の意識喪失、持続的な頭痛または悪化する頭痛、嘔吐または吐き気の繰り返し、痙攣または発作、目の片方または両方の瞳孔の拡張、鼻または耳から排出される透明な液体、眠りから目覚めることの不能、指及びつま先の脱力感またはしびれ、調整の喪失、深刻な混乱、興奮、戦闘性または他の異常な行動、不明瞭発語、昏睡及び他の意識障害、食事または授乳習慣の変化、異常または容易な怒りっぽさ、持続的な泣きと慰められない状態、注意を払う能力の変化、睡眠習慣の変化、悲しいまたは抑うつ気分、眠気、及び好きな玩具への興味の喪失、のうちの１つ以上が含まれる。外傷性脳損傷は、Ｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒａｕｍａｔｉｃ Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｉｅｓ：Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１３（Ａｒｔｉｃｌｅ５２８）：１－２３（２０１９）により詳細に考察されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0056】
炎症は多くの場合、がんの発症及び進行と関連付けられる。理論に拘束されることなく、がん関連炎症は、細菌及びウイルス感染、自己免疫疾患、肥満、タバコ喫煙、アスベスト曝露、及び／または過剰なアルコール摂取等の腫瘍外因性因子、またはがん性変異（ｃａｎｃｅｒ－ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）等の腫瘍内因性因子によって引き起こされ得ると考えられる。がん関連炎症は、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，”Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ａｆｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８（３）：１２１－１２６（２０１９）、及びＧｒｅｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ：Ｔｒｉｇｇｅｒｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ Ｒｅｖｉｅｗ，５１：２７－４１（２０１９）においてより詳細に考察されており、これらの双方は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0057】
絨毛性羊膜炎は、分娩前または分娩中または出産後に発生する状態であり、好中球浸潤及び／または母体胎児界面での炎症を特徴とし得る。それは急性、亜急性、または慢性であり得る。絨毛膜羊膜炎は、伝統的に、例えば、膜破裂の状態において、細菌感染と関連付けられ、膜の急性炎症及び／または胎盤の絨毛膜に関連付けることができる。絨毛性羊膜炎の症状には、発熱、発汗、膣分泌物、変色及び悪臭を放つ羊水、羊水中の低グルコースレベル、羊水中の高濃度の白血球及び／または細菌、子宮圧痛、母体白血球増加、化膿性子宮頸部廃液、及び／または胎児頻拍が含まれる。
【0058】
絨毛性羊膜炎は、妊娠中の対象（例えば、新生児を出産する対象）または新生児の対象のいずれか、または両方に様々な有害な結果をもたらす可能性がある。例えば、絨毛膜羊膜炎は、出生母親が絨毛膜羊膜炎を有した胎児または幼児における慢性肺疾患、脳損傷、脳性麻痺、未熟児網膜症、呼吸窮迫症候群、気管支肺異形成、超低出生体重（すなわち、１，５００グラム未満）、新生児敗血症、髄膜炎、肺炎、脳発達障害、死産、及び／または死亡をもたらし得る。有害な母体転帰には、産後感染、敗血症、菌血症、子宮内膜炎、帝王切開の必要、分娩による大量の失血、肺及び／または骨盤の血栓及び／または死亡が含まれる。
【0059】
絨毛性羊膜炎は、Ｃａｐｐｅｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｃｕｔｅ Ｃｈｏｒｉｏａｍｎｉｏｎｉｔｉｓ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１（６４９）：１－２１（２０２０）、Ｔｉｔａ ｅｔ ａｌ．“Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｏｒｉｏａｍｎｉｏｎｉｔｉｓ，”Ｃｌｉｎ．Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ．，３７（２）：３３９－５４（２０１０）、及びＣｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，“Ｉｎｔｒａｐａｒｔｕｍ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｔｒａａｍｎｉｏｔｉｃ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ：ＡＣＯＧ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｎｏ．７１２：７ ｐａｇｅ（２０１７）にてより詳細に考察されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0060】
ＮＡＳＨは、肝臓における脂肪の蓄積によって引き起こされる肝臓の炎症及び損傷を特徴とする状態である。それは、過度のアルコール消費の不在下で、小葉炎症、肝細胞損傷、及び線維症の有無にかかわらず、Ｍａｌｌｏｒｙヒアリンを伴う脂肪変化を特徴とする。ＮＡＳＨの症状としては、肝臓の肥大、皮膚の斑点の黒ずみ（例えば、手首、肘、及び／または膝の上）、疲労、かゆみ、右上腹部の痛み、打撲傷及び出血しやすい、皮膚表面のすぐ下にあるクモのような血管、腹部の腫れ、皮膚の下にある血管の肥大、男性の乳房の肥大、赤い手のひら、肝性脳症、及び／または黄疸（すなわち、黄色がかった皮膚及び目）が挙げられる。
【0061】
理論に拘束されないが、ＮＡＳＨは、過体重または肥満であること、インスリン抵抗性を有すること、血中の脂肪レベルが異常に高いこと（例えば、高レベルのトリグリセリド、高レベルの総コレステロール、高レベルのＬＤＬコレステロール、低レベルのＨＤＬコレステロール）、脂質異常を有すること、高トリグリセリド血症を有すること、メタボリックシンドロームを有すること、またはメタボリックシンドロームのうちの１つ以上の形質を有すること、２型糖尿病を有すること、高血圧を有すること、身体が脂肪を不適切に使用または貯蔵する障害を有すること、急速な体重減少、特定の感染症（Ｃ型肝炎等）、特定の薬（アミオダロン、ジルチアゼム、グルコルチコルコイド、高活性抗レトロウイルス治療剤、メトレキセート、合成エストロゲン、タモキシフェン、またはバルプロ酸）及び毒素への曝露のうちの１つ以上によって引き起こされると考えられる。上記のいずれも、ＮＡＳＨのリスク要因とみなすことができる。
【0062】
ＮＡＳＨは、肝線維症、肝硬変、肝細胞癌、末期肝疾患、及び肝移植の必要性等、様々な有害な結果をもたらす可能性がある。ＮＡＳＨは、Ｓｈｅｋａ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，”ＪＡＭＡ Ｒｅｖｉｅｗ，３２３（１２）：１１７５－８３（２０２０）においてより詳細に考察されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0063】
ＮＡＦＬＤの進行及び管理における治療的進歩は、ＮＡＳＨの発症、肝繊維化、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）への進行において炎症性経路活性化の役割を強調している（Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ＮＡＳＨ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，１５：３４９－３６４（２０１８））。本発明者らは、システム生物学及びゲノム戦略を利用して、ＴＬＲ４のライゲーションを介して先天性免疫媒介性炎症及び線維症を強力に調節する新規の損傷関連分子パターンタンパク質（ＤＡＭＰ）（Ｃａｍｐ ｅｔ ａｌ．，“Ｕｎｉｑｕｅ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＮＡＭＰＴ／ＰＢＥＦ Ｉｎｄｕｃｅｓ ＮＦｋａｐｐａＢ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ，”Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，５：１３１３５（２０１５）、Ｏｉｔａ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｖｅｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，５９：３６－４４（２０１８））として、細胞外ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｅＮＡＭＰＴ）（Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅ－Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ－ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１７１：３６１－３７０（２００５））を同定した。ＮＡＭＰＴは、多臓器炎症、損傷及び線維症（肺、肝臓、腎臓、心臓）ならびにがん（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ） ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））への非常に重要な役割を果たす（図１）。同じＮＡＭＰＴタンパク質は、ｉＮＡＭＰＴとして細胞内の場合、ＮＡＤ代謝を酵素的に調節し、臨床がん治験において小分子阻害剤（ＳＭＩ）で標的化されているが、利益の欠如及び毒性のために失敗した（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））。本開示は、ＮＡＭＰＴ（例えば、ｅＮＡＭＰＴ）を、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行の重要な調節因子として、及びＮＡＦＬＤの後のステージへの進行を低減するための魅力的な治療標的として示す。「実施例」セクションに記載されているように、肝臓ＮＡＭＰＴ発現の増加は、マウスＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデル及びＮＡＦＬＤを有するヒトに見られる。更に、ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００ｍＡｂ）は、ＮＡＳＨの重症度の複数の指標を低減し、ＡＬＴ－１００ｍＡｂが、ＮＡＳＨの進行／致死性を防止するための緊急の満たされていない必要性に対処するための実行可能で新規なアプローチであることを示唆した。
【0064】
尿細管間質性線維症及び糸球体硬化症を特徴とする腎線維症は、慢性腎疾患の最終的な症状発現である。腎線維症は、細胞外マトリックス成分の過度の蓄積及び沈着を特徴とする。この病理学的結果は、通常、上皮から間葉への移行、線維芽細胞活性化、単球／マクロファージ浸潤、細胞アポトーシス等の基礎となる複雑な細胞活動と、形質変換成長因子ベータ及びアンジオテンシンＩＩ等のシグナル伝達分子の活性化の両方に由来する。しかしながら、腎線維症の病因は極めて複雑であり、この状態に関する知識は依然として限られているため、更なる研究が必要である。腎線維症については、Ｎｏｇｕｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，“Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｒｅｎａｌ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，”Ｉｎ Ｖｉｖｏ，３１（１）：１－２２（２０１７）、Ｌｉｕ，“Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｒｅｎａｌ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ，７（１２）：６８４－６９６（２０１１）、Ａｒａｉ ａｎｄ Ｙａｎａｇｉｔａ，“Ｊａｎｕｓ－Ｆａｃｅｄ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ Ｎａｔｕｒｅ ｏｆ Ｒｅｎａｌ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ，”Ｋｉｄｎｅｙ３６０，１（７）：６９７－７０４（２０２０）、Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ，１０：４９３－５０３（２０１４）、及びＢｏｏｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，”Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２２：３３９１－３４０７（２００７）においてより詳細に考察されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0065】
バイオマーカー、一塩基多型、及びそれらの使用
心虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症等の炎症状態を有する、または発症するリスクがある対象を特定するための方法が提供される。いくつかの実施形態は、炎症状態を診断する方法を含む。いくつかの実施形態は、炎症状態の進行を決定することを含む。いくつかの実施形態は、炎症状態治療の有効性を決定することを含む。
心虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症等の炎症状態を有する、または発症するリスクがある対象を特定するための方法が提供される。いくつかの実施形態は、炎症状態を診断する方法を含む。いくつかの実施形態は、炎症状態の進行を決定することを含む。いくつかの実施形態は、炎症状態治療の有効性を決定することを含む。
【0066】
いくつかの実施形態は、試料中のＮＡＭＰＴの存在または不存在を検出することを含む。いくつかの実施形態は、試料中のＮＡＭＰＴのレベルを検出することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、試料中のＮＡＭＰＴの存在またはレベル（例えば、レベルの増加）に基づいて、炎症状態を有する、または炎症状態を発症するリスクがあると判定される。いくつかの実施形態において、対象は、試料中のＮＡＭＰＴの不存在、または低レベルもしくはＮＡＭＰＴのレベルの低下に基づいて、もしくは少なくとも部分的に基づいて、炎症状態を有しない、または発症するリスクがないと決定される。
【0067】
いくつかの実施形態は、サイトカインケモカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１ｂ、及び／またはＩＬ－ＲＡ）、マクロファージ遊走阻害因子等の二重機能酵素）、血管損傷マーカー（例えば、ＶＥＧＲＡ、Ｓ１ＰＲ３、及び／またはアンジオポエチン２）、及び／または進行グリコシル化最終生成物経路マーカー（例えば、ＨＭＧＢ１及び／または可溶性ＲＡＧＥ）等の１つ以上の追加のバイオマーカーの存在、不存在、またはレベルを検出することを含む。いくつかの実施形態は、前述のマーカーのうちの１つ以上のレベルに基づいて、または少なくとも部分的に基づいて（例えば、ＮＡＭＰＴの存在、不存在、またはレベルと組み合わせて）、対象が炎症状態を有するかまたは発症することになるリスクの増加または減少を決定することを含む。
【0068】
一塩基多型（ＳＮＰ）は、遺伝子プロモーター、エクソン、イントロン、及び５‘及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に位置し、異なる機序によって遺伝子発現に影響を及ぼす。ヒトＮＡＭＰＴ遺伝子のプロモーター領域に位置するＳＮＰが提供される。
【0069】
いくつかの実施形態において、以下のＳＮＰのうちの１つ以上は、炎症状態に関連付けられる：ｒｓ７７８９０６６（位置：ｃｈｒ７：１０６２８７３０６（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１１６６４７５０６（位置：ｃｈｒ７：１０６２８７１８０（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ６１３３００８２（位置：ｃｈｒ７：１０６２８６４１９（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１１４３８２４７１（位置：ｃｈｒ７：１０６２８６２８８（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ９７７０２４２（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５８８５（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ５９７４４５６０（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５８３２（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１９０８９３１８３（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５６６３（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、及びｒｓ１３１９５０１（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５３０７（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２）。
【0070】
いくつかの実施形態は、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰを検出することを含む。
【0071】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法で使用されるＳＮＰは、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ９７７０２４２、及び／またはｒｓ５９７４４５６０である。代替の実施形態において、本明細書に記載の方法で使用されるＳＮＰは、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ１９０８９３１８３、及び／またはｒｓ１３１９５０１である。
【0072】
理論に拘束されることなく、本明細書に記載のＳＮＰは、炎症性シグナル伝達経路（例えば、ＮＦｋＢ依存性炎症性カスケード）の調節不全を含む細胞プロセスの調節不全に寄与し、炎症状態の進行をもたらす可能性があると考えられる。ヒトＮＡＭＰＴのプロモーター領域内で生じる，本明細書に開示されるＳＮＰは、ＮＡＭＰＴプロモーター活性の増加を引き起こすことが企図される。活性の増加は、ＮＡＭＰＴの発現の増加をもたらし、それに続いてＮＡＭＰＴの血漿レベルの増加をもたらす。ＮＡＭＰＴレベルの増加の可能性は、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）を介した、進化的に保存されたＮＦｋＢ依存性炎症カスケードを活性化する可能性がある。サイトカインの産生の増強は、次いで炎症状態表現型を増強し、したがって、対象が状態を発症するリスクを増加させる。ＮＡＭＰＴはまた、炎症状態によって影響を受ける細胞を取り巻く微小環境に影響を及ぼし、したがって疾患の発症及び／または進行に影響を及ぼす。
【0073】
いくつかの実施形態は、炎症状態を有する、または炎症状態を発症するリスクがある対象から試料を得ることと、その状態に関連付けられる１つ以上のＳＮＰの存在または不存在を検出することとを含む。いくつかの実施形態において、炎症状態を有する、または炎症状態を発症するリスクがある対象は、炎症状態のうちの１つ以上の症状を呈する。心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、及び腎線維症等のうちの１つ以上の炎症状態に特異的であり得る症状を含む、炎症状態のかかる症状は、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態において、対象は無症状であるが、炎症状態を発症するための１つ以上のリスク因子を有する。心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、及び腎線維症等のうちの１つ以上の炎症状態に特異的であり得るリスク因子を含む、炎症状態のかかるリスク因子は、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態において、試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在は、対象が炎症状態を有することまたは炎症状態を発症するリスクがあることを示す。いくつかの実施形態において、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰの存在は、対象が炎症状態を有することまたは炎症状態を発症するリスクがあることを示す。いくつかの実施形態は、１つ以上のＳＮＰの存在に基づいて、炎症状態を有する対象を診断することを含む。いくつかの実施形態において、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰの存在は、対象が、本明細書の他の場所に記載されるＮＡＭＰＴ阻害剤での治療に応答する可能性が高い、またはＮＡＭＰＴ阻害剤での治療から利益を得る可能性が高いことを示す。当業者であれば、当該技術分野で既知である日常的な臨床情報の収集及び評価に基づいて、どの１つ以上の炎症状態を対象が有するかまたは発症するリスクがあるかを決定することができるであろう。１つ以上のＳＮＰの存在を使用して、診断を強化または確証し得る。
【0074】
いくつかの実施形態において、試料からのＮＡＭＰＴのプロモーター要素内の少なくとも１つのＳＮＰの検出は、ＳＮＰ遺伝子型決定によって達成され得る。概して、ＳＮＰ遺伝子型決定は、例えば、被検対象から生体試料（例えば、生検組織、細胞、流体、分泌物等の試料）を採取するステップ、核酸（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはその両方）を試料の細胞から単離するステップ、標的核酸領域のハイブリタイゼーション及び増幅が起こるような条件下で、標的ＳＮＰを含有する単離された核酸の領域に特異的にハイブリタイズする１つ以上のプライマーと核酸を接触させるステップ、及び目的のＳＮＰ位置に存在するヌクレオチドを決定するステップ、または、いくつかのアッセイにおいて、増幅生成物の存在または不存在を検出するステップ（アッセイは、特定のＳＮＰ対立遺伝子が存在するか存在しない場合にのみ、ハイブリタイゼーション及び／または増幅が起こるように設計することができる）を含む。ＳＮＰ遺伝子型決定は、ホモ接合型またはヘテロ接合型のいずれかであるＳＮＰを同定することができる。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、少なくとも１つのＳＮＰは、ホモ接合型である。他の実施形態において、少なくとも１つのＳＮＰは、ヘテロ接合型である。
【0075】
ＳＮＰを検出する他の方法は当技術分野で既知であり、本方法に適用され得る。例えば、市販されており、１つ以上のＳＮＰのヌクレオチド出現を識別するために使用することができるアッセイシステムは、ＳＮＰ－ＩＴ（商標）アッセイシステム（Ｏｒｃｈｉｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｎ．Ｊ．）である。概して、ＳＮＰ－ＩＴ（商標）法は、３段階のプライマー伸長反応である。第１のステップでは、標的核酸分子は、捕捉プライマーへのハイブリタイゼーションによって試料から単離され、これは、第１のレベルの特異性を提供する。第２のステップでは、捕捉プライマーは、標的ＳＮＰ部位から終端ヌクレオチドトリホスフェートにおいて伸長され、これは、第２のレベルの特異性を提供する。第３のステップにおいて、伸長ヌクレオチドトリホスフェートは、例えば、直接蛍光、間接蛍光、間接比色アッセイ、質量分析、または蛍光偏光によって含む、様々な既知の方式を用いて検出され得る。反応は、ＳＮＰｓｔｒｅａｍ（商標）機器（Ｏｒｃｈｉｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、自動化された形式によって３８４ウェル形式で便利に処置することができる。
【0076】
当業者に既知の方法によって、対象から採取された試料からの核酸試料を遺伝子型決定して、目的のＳＮＰの存在及び同一性を判定することができる。隣接する配列を使用してオリゴヌクレオチドプローブ等のＳＮＰ検出試薬を設計することができ、これは、任意選択で、キット形式で実装され得る。例示的なＳＮＰ遺伝子型決定方法は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ：ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｒｏｔｏｃｏｌ，ｃｏｓｔ ａｎｄ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ”，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｊ．２００３；３（２）：７７－９６、Ｋｗｏｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ”，Ｃｕｒｒ Ｉｓｓｕｅｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００３ Ａｐｒｉｌ；５（２）：４３－６０；Ｓｈｉ，“Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｇｅｎｅｓ”，Ａｍ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ．２００２；２（３）：１９７－２０５、及びＫｗｏｋ，“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ”，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ２００１；２：２３５－５８に記載されている。高スループットのＳＮＰ遺伝子型決定のための例示的な技術は、Ｍａｒｎｅｌｌｏｓ，“Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ＳＮＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ”，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．２００３ Ｍａｙ；６（３）：３１７－２１に記載されている。一般的なＳＮＰ遺伝子型決定法としては、ＴａｑＭａｎアッセイ、分子ビーコンアッセイ、核酸アレイ、対立遺伝子特異的プライマー伸長、対立遺伝子特異的ＰＣＲ、配列プライマー伸長、均一プライマー伸長アッセイ、質量分析による検出によるプライマー伸長、ピロシーケンシング、遺伝子アレイ上で選別された多重プライマー伸長、ローリングサークル増幅によるライゲーション、均一ライゲーション、ＯＬＡ（米国特許第４，９８８，１６７号）、遺伝子アレイ上で選別された多重ライゲーション反応、制限断片長多型、単一塩基伸長タグアッセイ、及びインベーダーアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。そのような方法は、例えば、発光または化学発光検出、蛍光検出、時間分解蛍光検出、蛍光共鳴エネルギー伝達、蛍光偏光、質量分析、及び電気検出等の検出メカニズムと組み合わせて使用され得る。多型を検出するための様々な方法には、限定されないが、切断剤からの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ二本鎖中のミスマッチ塩基を検出する方法（Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２（１９８５）、Ｃｏｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ８５：４３９７（１９８８）、及びＳａｌｅｅｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６－２９５（１９９２））、変異体及び野生型核酸分子の電気泳動移動度の比較（Ｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．、ＰＮＡＳ ８６：２７６６（１９８９）、Ｃｏｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５－１４４（１９９３）、及びＨａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３－７９（１９９２）を参照されたい）、及び変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用した変性剤の勾配を含有するポリアクリルアミドゲル中の多形または野生型断片の移動をアッセイすること（Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９５（１９８５））が含まれる。特定の位置における配列変異は、ＲＮａｓｅ及びＳＩ保護または化学的切断法等のヌクレアーゼ保護アッセイによって評価することもできる。
【0077】
いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴプロモーター配列中のＳＮＰを検出することは、対象からの試料を、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列またはそれに相補的なヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブと接触させることと、オリゴヌクレオチドプローブの選択的なハイブリタイゼーションを検出することと、を含む。特定の実施形態において、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ＳＮＰを取り囲む各側に１００～５００（例えば、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、または５００）塩基対を含む。特定の実施形態において、ＳＮＰを含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ＳＮＰを取り囲む各側に２００塩基対を含むことができる。特定の実施形態において、配列番号１８に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ７７８９０６６を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号１９に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ６１３３００８２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２０に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ９７７０２４２を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ５９７４４５６０を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズし、及び／または配列番号２２に示されるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドプローブはｒｓ１３１９５０１を含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズする。ＳＮＰを含むヌクレオチド配列に選択的にハイブリタイズすることができる例示的なオリゴヌクレオチドプローブが、以下の表１に提供される。
【表1-1】
【表1-2】
【0078】
いくつかの実施形態において、ＳＮＰ遺伝子型決定は、５’ヌクレアーゼアッセイ（米国特許第５，２１０，０１５号及び同第５，５３８，８４８号）としても知られるＴａｑＭａｎアッセイを使用して実施される。ＴａｑＭａｎアッセイは、ＰＣＲ中の特定の増幅産物の蓄積を検出する。ＴａｑＭａｎアッセイは、蛍光レポーター色素及び消光剤色素で標識されたオリゴヌクレオチドプローブを利用する。レポーター色素は、適切な波長の照射によって励起され、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）と呼ばれるプロセスを介して、同じプローブ内の消光剤色素にエネルギーを伝達する。プローブに取り付けた時、励起されたレポーター色素は信号を発しない。無傷のプローブ内で消光剤色素がレポーター色素に近接することで、レポーターの蛍光の低減が維持される。レポーター色素及び消光剤色素は、それぞれ５’端及び３’端にあってもよく、またはその逆であってもよい。代替的に、レポーター色素は、消光剤色素が内部ヌクレオチドに結合されているにもかかわらず、５’もしくは３’末端にあってもよく、またはその逆であってもよい。更に別の実施形態において、レポーターと消光剤との両方が、互いに距離を置いて内部ヌクレオチドに結合され、その結果、レポーターの蛍光が低減されるようにしてもよい。ＰＣＲ中、ＤＮＡポリメラーゼの５’ヌクレアーゼ活性がプローブを切断し、それによってレポーター色素と消光剤色素とを分離し、レポーターの蛍光の増加をもたらす。ＰＣＲ生成物の蓄積は、レポーター色素の蛍光の増加を監視することによって直接検出される。ＤＮＡポリメラーゼは、プローブがＰＣＲ中に増幅される標的ＳＮＰ含有鋳型にハイブリタイズする場合にのみ、レポーター色素と消光剤色素との間のプローブを切断し、プローブは、特定のＳＮＰ対立遺伝子が存在する場合にのみ、標的ＳＮＰ部位にハイブリタイズするように設計される。方法のいくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、蛍光部分及び蛍光消光剤を含む、２標識オリゴヌクレオチドプローブを含む。
【0079】
好ましいＴａｑＭａｎプライマー及びプローブ配列は、本明細書に提供されるＳＮＰ及び関連する核酸配列情報を使用して容易に決定することができる。Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）等の多数のコンピュータプログラムを使用して、最適なプライマー／プローブセットを迅速に取得することができる。本発明のＳＮＰを検出するためのそのようなプライマー及びプローブが、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、ＮＡＳＨ及び腎線維症を含む様々な炎症状態の予後アッセイに有用であり、容易にキット形式に組み込むことができることは、当業者には明らかであろう。本発明はまた、分子ビーコンプローブ（米国特許第５，１１８，８０１号及び同第５，３１２，７２８号）ならびに他の変形形態（米国特許第５，８６６，３３６号及び同第６，１１７，６３５号）の使用等の、当該技術分野で周知のＴａｑｍａｎアッセイの改変も含む。
【0080】
ＳＮＰはまた、リボプローブを使用するＲＮａｓｅ保護方法（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：７５７５，１９８５、Ｍｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２，１９８５）、及びＥ．ｃｏｌｉ ｍｕｔＳタンパク質等のヌクレオチドミスマッチを認識するタンパク質（Ｍｏｄｒｉｃｈ，Ｐ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２５：２２９－２５３，１９９１）を含むが、それらに限定されないミスマッチ検出技法を使用しても検出され得る。代替的に、ＳＮＰは、一本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）分析（Ｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ５：８７４－８７９，１９８９、Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｒ．Ｅｌｌｅｓ，ｅｄ．，ｐｐ．３２１－３４０，１９９６）、または変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）（Ｗａｒｔｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｉ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：２６９９－２７０６、１９９０、Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２３２－２３６，１９８９）によって同定され得る。
【0081】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＳＮＰは、質量分析に基づく方法を使用して検出され得る。質量分析は、ＤＮＡの４つのヌクレオチドの各々に固有の質量を利用する。ＳＮＰは、質量分析によって、ＳＮＰを欠く対照対象からの試料と比較したＳＮＰを有する核酸の質量の差を測定することによって明確に検出することができる。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｌａｓｅｒ Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－Ｔｉｍｅ ｏｆ Ｆｌｉｇｈｔ）質量分析技術は、ＳＮＰ等の分子量の非常に正確な測定に好ましい。ＳＮＰ分析に対する多数の手法は、質量分析に基づいて開発された。ＳＮＰ遺伝子型決定の好ましい質量分析ベースの方法は、プライマー伸長アッセイを含み、これは、従来のゲルベースのフォーマット及びマイクロアレイ等の他のアプローチと組み合わせて利用することもできる。
【0082】
ＳＮＰ遺伝子型決定は、ＳＮＰ－疾患関連分析、疾患素因スクリーニング、疾患診断、疾患予後、疾患進行モニタリング、個体の遺伝子型に基づいた治療戦略の決定、疾患または薬物に応答する可能性に関連付けられるＳＮＰ遺伝子型に基づいた有効な治療薬（例えば、抗ＮＡＭＰＴ抗体）の開発、ならびに治療レジメンの臨床試験のための患者集団の層別化を含むがこれらに限定されない多数の用途に有用である。
【0083】
治療方法
また、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症等の炎症状態を有する、または発症するリスクがある対象を治療する方法も提供される。いくつかの実施形態は、炎症状態を有する、または炎症状態を発症するリスクがある対象を特定することと、状態の発症または進行を防止または低減するように対象を治療することと、を含む。いくつかの実施形態は、状態を有するか、または状態を発症するリスクがある対象を治療することによって、炎症状態の有害な結果を予防することを含む。
また、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛膜羊膜炎、ＮＡＳＨ、または腎線維症等の炎症状態を有する、または発症するリスクがある対象を治療する方法も提供される。いくつかの実施形態は、炎症状態を有する、または炎症状態を発症するリスクがある対象を特定することと、状態の発症または進行を防止または低減するように対象を治療することと、を含む。いくつかの実施形態は、状態を有するか、または状態を発症するリスクがある対象を治療することによって、炎症状態の有害な結果を予防することを含む。
【0084】
いくつかの実施形態において、対象は、対象にＮＡＭＰＴ阻害剤を投与することによって治療される（例えば、ＮＡＭＰＴのレベルを低下させる、及び／またはＮＡＭＰＴ活性を低下させるために）。いくつかの実施形態において、ＮＡＭＰＴ阻害剤は、抗ＮＡＭＰＴ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＮＡＭＰＴ抗体は、２０２１年３月１１日に発行されたＧａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．に対する米国出願公開第２０２１／００７０８８３号に記述され抗体であり、本出願公開は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＮＡＭＰＴ抗体は、以下の表２に記載のように、Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ３、またはその抗原結合部分を含む。
【表2-1】
【表2-2】
【0085】
いくつかの実施形態は、心臓虚血を有するか、または心臓虚血のリスクがある対象に、アスピリン、硝酸塩、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、コレステロール低下薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及びラノラジンのうちの１つ以上を投与することを含む。いくつかの実施形態において、上記治療剤のうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0086】
いくつかの実施形態は、心筋梗塞を有する、または心筋梗塞のリスクがある対象に、アスピリン、血栓溶解剤、血栓溶解剤、抗血小板剤、血液希釈剤、鎮痛剤、ニトログリセリン、ベータ遮断薬、ＡＣＲ阻害剤、及びスタチンのうちの１つ以上を投与することを含む。いくつかの実施形態は、上記治療剤のうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0087】
いくつかの実施形態は、外傷性脳損傷を有する、またはそのリスクがある対象に、手術（例えば、血腫を除去する、頭蓋骨骨折を修復する、脳出血を停止する、または頭蓋骨内の圧力を低減するために頭蓋骨内の窓を開く）を行うこと及び／または酸素、血液、利尿剤、抗発作薬、及び昏睡誘発薬のうちの１つ以上を投与することを含む。いくつかの実施形態は、上記治療剤のうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0088】
いくつかの実施形態は、がんを有する、またはがんのリスクがある対象に、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗有糸分裂剤、細胞傷害性抗生物質、ポリアミン阻害剤、鉄調節薬、化学療法剤、キナーゼ阻害剤、モノクローナル抗体、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、放射線療法、及びキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）のうちの１つ以上を投与することを含む。例示的な治療法は、Ｆａｌｚｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ａｔ ｔｈｅ Ｔｕｒｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，９（Ａｒｔｉｃｌｅ１３００）：１－２６（２０１８）に記述されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態は、上記治療剤のうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0089】
いくつかの実施形態は、絨毛性羊膜炎を有する、または絨毛性羊膜炎を発症するリスクがある対象に１つ以上の抗生物質を投与することを含む。例示的な抗生物質としては、アンピシリン、ペニシリン、ゲンタマイシン、クリンダマイシン、セファゾリン、バンコマイシン、及びメトロニダゾールが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗生物質（複数可）は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、抗生物質は経口投与される。いくつかの実施形態は、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて１つ以上の抗生物質を投与することを含む。
【0090】
いくつかの実施形態は、ＮＡＳＨを有する、またはＮＡＳＨを発症するリスクがある対象に、酸化防止剤（例えば、ビタミンＥ）、ＰＰＡＲ－γアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン等のチアゾリジンジオン）、及びグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）アゴニストのうちの１つ以上を投与することを含む。いくつかの実施形態は、酸化防止剤、ＰＰＡＲ－γアゴニスト、及びＧＬＰ－１アゴニストのうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0091】
いくつかの実施形態は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンジオテンシンＩＩ受容体１型遮断薬（ＡＲＢ）、カリクレイン遺伝子治療剤（例えば、ヒト組織カリクレイン遺伝子のアデノウイルス送達）、ヒト組換えリラクシン、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト、ＢＭＰ－７、抗ＴＮＦ抗体、ＣＣＲ１アンタゴニスト、抗ＰＤＧＦ－Ｄ抗体、及びＶＥＧＦ１２１のうちの１つ以上を、腎線維症を有する、または腎線維症を発症するリスクがある対象に投与することを含む。そのような治療薬は、静脈内に、経口的に、またはアデノウイルスベクターを介して投与され得る。いくつかの実施形態は、ＡＣＥＩ、ＡＲＢ、カリクレイン遺伝子治療剤、ヒト組換えリラクシン、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト、ＢＭＰ－７、抗ＴＮＦ抗体、ＣＣＲ１アンタゴニスト、抗ＰＤＧＦ－Ｄ抗体、及びＶＥＧＦ１２１のうちの１つ以上を、１つ以上のＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、抗体）と組み合わせて投与することを含む。
【0092】
文脈から明らかに実行可能でないまたは実用的でない限り、本明細書に開示される態様または実施形態のいずれも、互いに組み合わせることができる。例えば、一実施形態の任意の特徴は、別の実施形態の特徴に追加されてもよく、または別の実施形態の対応する特徴を置き換えてもよい。以下の実施例は、本開示の組成物及び方法を更に記載及び例証する。実施例は、決して開示を限定することを意図するものではない。他の態様は、当業者には明白であろう。例えば、本明細書の各例では、「含む」、「本質的にからなる」、及び「からなる」という用語のいずれも、他の２つの用語のいずれかで置き換えられてもよく、更に、用語のいずれかも、本明細書に開示される特徴に関連して使用されてもよい。
【実施例】
【0093】
実施例１：炎症状態に関連付けられるＳＮＰの同定
ＮＡＭＰＴプロモーターＳＮＰは、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症等の炎症状態を有する、またはそのリスクが高い患者を特定するために使用され得る指標として同定されている。
ＮＡＭＰＴプロモーターＳＮＰは、心臓虚血、外傷性脳損傷、がん、絨毛性羊膜炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または腎線維症等の炎症状態を有する、またはそのリスクが高い患者を特定するために使用され得る指標として同定されている。
【0094】
ＮＡＭＰＴ ＳＮＰは、炎症状態のリスクを評価するためにレビューされ、改良され、いくつかはアフリカ系の個体では大きな比率を占めた。ＳＮＰは、ｒｓ７７８９０６６（位置：ｃｈｒ７：１０６２８７３０６（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１１６６４７５０６（位置：ｃｈｒ７：１０６２８７１８０（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ６１３３００８２（位置：ｃｈｒ７：１０６２８６４１９（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１１４３８２４７１（位置：ｃｈｒ７：１０６２８６２８８（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ９７７０２４２（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５８８５（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ５９７４４５６０（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５８３２（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、ｒｓ１９０８９３１８３（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５６６３（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））、及びｒｓ１３１９５０１（位置：ｃｈｒ７：１０６２８５３０７（ＧＲＣｈ３８．ｐ１２））である。
【0095】
これらのＮＡＭＰＴ ＳＮＰは、ＮＡＭＰＴプロモーターＳＮＰ－９４８Ｔ、－１００１Ｇ、及び－２４２２Ｇに有意に影響を受けるが、一部の状況では保護性ＳＮＰであることが知られている－１５３５Ｇに影響を受ない低酸素誘導転写因子ＨＩＦ２αによる重要な関与を有する機械的ストレス及び低酸素に応答して、炎症状態の感受性に寄与し及びＮＡＭＰＴプロモーター活性を変化させる。
【0096】
実施例２：心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある対象を特定するためのＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現
本実施例は、心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象における心臓虚血の存在または心臓虚血を発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生物学的試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
本実施例は、心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象における心臓虚血の存在または心臓虚血を発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生物学的試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
【0097】
例えば、そのような対象から得られた生体試料は、本明細書に記載の少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在（例えば、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰの存在）について評価することができる。生体試料からのＮＡＭＰＴのプロモーター要素内の少なくとも１つのＳＮＰの検出は、ＳＮＰ遺伝子型決定等本明細書で上述された方法によって達成され得る。ＳＮＰ遺伝子型決定は、ホモ接合型またはヘテロ接合型のいずれかであるＳＮＰを同定することができる。対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在は、対象が心臓虚血を有することまたは心臓虚血を発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在はまた、対象を、中和抗ＮＡＭＰＴ抗体（Ａｂ）等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用した心臓虚血の治療により応答性が高いものとして同定し得る。いくつかの場合において、対象からの生体試料中に前述のＳＮＰが存在しないことは、対象が心臓虚血を有しない、または心臓虚血を発症するリスクが低いことを示し得る。
【0098】
加えて、または代替的に、かかる対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴタンパク質発現レベルについて評価することができる。対象（例えば、被験者）からの生体試料中のＮＡＭＰＴの発現レベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、オートラジオグラフィー、抗体アレイ、及びリアルタイム定量的逆転写ＰＣＲ（リアルタイムｑＲＴ－ＰＣＲまたはＲＴ－ｑＰＣＲ）を含むがこれらに限定されない様々な方法によって評価され得る。被験者由来の生体試料で評価されるようなＮＡＭＰＴの発現レベルは、健康な対照（例えば、心臓病を有しない対象及び／または炎症性疾患を有しない対象）におけるＮＡＭＰＴ発現レベル等の標準対照と比較することができる。標準対照と比較して、被験者におけるＮＡＭＰＴ発現レベルの増加は、対象が心臓虚血を有することまたは心臓虚血を発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中のＮＡＭＰＴ発現レベルの増加はまた、対象を、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用した心臓虚血の治療により応答性が高いものとして同定し得る。いくつかの場合において、標準対照と比較して被験者のＮＡＭＰＴ発現レベルが同様または低いことは、被験者が心臓虚血を有しない、または心臓虚血を発症するリスクが低いことを示し得る。
【0099】
実施例３：心臓虚血の治療及び／または予防のための抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある対象を治療するために使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が心臓虚血を有する、または心臓虚血を発症するリスクがある対象を治療するために使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
【0100】
心臓虚血を有する対象、または心臓虚血を発症するリスクがある対象は、例えば、本明細書に記載のヒト化抗ＮＡＭＰＴモノクローナルＡｂ（ｍＡｂ）等の治療有効量の抗ＮＡＭＰＴ Ａｂを対象に投与することによって治療することができる。対象は、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを単独で用いて、またはアスピリン、硝酸塩、ベータ遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、コレステロール低下薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及びラノラジンを含むがこれらに限定されない１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて治療することができる。単独でのまたは１つ以上の追加の治療剤と組み合わせた、抗ＮＡＭＰＴ Ａｂによる対象の治療は、心臓虚血の発症を予防または低減することができ、心臓虚血の進行を予防または低減することができ、及び／または心臓虚血に関連付けられる１つ以上の症状を軽減することができる。ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを使用した心臓虚血の治療は、前述の実施例に記載されるように、より高いＮＡＭＰＴ発現及び／または少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在を有する対象において、より効果的であり得る。
【0101】
実施例４：外傷性脳損傷を有する、または発症するリスクを有する対象を同定するためのＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現
本実施例は、外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象における外傷性脳損傷の存在または外傷性脳損傷を発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
本実施例は、外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象における外傷性脳損傷の存在または外傷性脳損傷を発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
【0102】
例えば、そのような対象から得られた生体試料は、本明細書に記載の少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在（例えば、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰの存在）について評価することができる。生体試料からのＮＡＭＰＴのプロモーター要素内の少なくとも１つのＳＮＰの検出は、ＳＮＰ遺伝子型決定等、本明細書で上述される方法によって達成され得る。ＳＮＰ遺伝子型決定は、ホモ接合型またはヘテロ接合型のいずれかであるＳＮＰを同定することができる。対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在は、対象が外傷性脳損傷を有することまたは発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在はまた、対象を、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用した外傷性脳損傷の治療により応答性が高いものとして同定し得る。いくつかの場合において、対象からの生体試料中に前述のＳＮＰが存在しないことは、対象が外傷性脳損傷を有しない、または外傷性脳損傷を発症するリスクが低いことを示し得る。
【0103】
加えて、または代替的に、かかる対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。対象（例えば、被験者）からの生体試料中のＮＡＭＰＴの発現レベルは、ＩＨＣ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、オートラジオグラフィー、抗体アレイ、及びＲＴ－ｑＰＣＲを含むがこれらに限定されない様々な方法によって評価され得る。被験者由来の生体試料で評価されるようなＮＡＭＰＴの発現レベルは、健康な対照（例えば、外傷、脳疾患、及び／または炎症性疾患を有しない対象）におけるＮＡＭＰＴ発現レベル等の標準対照と比較することができる。標準対照と比較した、被験者におけるＮＡＭＰＴ発現レベルの増加は、対象が外傷性脳損傷を有することまたは発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中のＮＡＭＰＴ発現レベルの増加はまた、対象を、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用した外傷性脳損傷の治療により応答性が高いものとして同定し得る。いくつかの場合において、標準対照と比較して被験者のＮＡＭＰＴ発現レベルが同様または低いことは、被験者が外傷性脳損傷を有しない、または外傷性脳損傷を発症するリスクが低いことを示し得る。
【0104】
実施例５：外傷性脳損傷の治療及び／または予防のための抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある対象を治療するために使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある対象を治療するために使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
【0105】
外傷性脳損傷を有する、または外傷性脳損傷を発症するリスクがある対象は、例えば、本明細書で上述のヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ等の治療有効量の抗ＮＡＭＰＴ Ａｂを対象に投与することによって治療することができる。対象は、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを単独で用いて、あるいは手術（例えば、血腫を除去する、頭蓋骨骨折を修復する、脳出血を止める、または頭蓋骨内の圧力を減少させるために頭蓋骨内の窓を開く）を行うこと、及び／または酸素、血液、利尿剤、抗発作薬、及び昏睡誘発薬のうちの１つ以上を投与することを含むがこれらに限定されない、１つ以上の追加の療法と組み合わせて治療することができる。単独でのまたは１つ以上の追加の治療と組み合わせた、抗ＮＡＭＰＴ Ａｂによる対象の治療は、外傷性脳損傷の発症を予防または低減することができ、外傷性脳損傷の進行を予防または低減することができ、及び／または外傷性脳損傷に関連付けられる１つ以上の症状を軽減することができる。ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを使用した外傷性脳損傷の治療は、前述の実施例に記載されるように、より高いＮＡＭＰＴ発現及び／または少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在を有する対象においてより効果的であり得る。
【0106】
実施例６：がんを発症している、またはがんを発症するリスクがある対象を特定するためのＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現
本実施例は、がんを有する、またはがんを発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象におけるがんの存在またはがんを発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
本実施例は、がんを有する、またはがんを発症するリスクがある対象の同定に、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰ及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルをどのように使用できるかを記述する。これらの方法は、疾患の１つ以上の症状を示す対象、または疾患を発症するための１つ以上のリスク因子を有する無症状対象におけるがんの存在またはがんを発症するリスクを診断するために有用であり得る。そのような対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在について評価し、及び／またはＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。
【0107】
例えば、そのような対象から得られた生体試料は、本明細書に記載の少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在（例えば、ｒｓ７７８９０６６、ｒｓ１１６６４７５０６、ｒｓ６１３３００８２、ｒｓ１１４３８２４７１、ｒｓ９７７０２４２、ｒｓ５９７４４５６０、ｒｓ１９０８９３１８３、及びｒｓ１３１９５０１からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７、または８個のＳＮＰの存在）について評価することができる。生体試料からのＮＡＭＰＴのプロモーター要素内の少なくとも１つのＳＮＰの検出は、ＳＮＰ遺伝子型決定等本明細書において上述の方法によって達成され得る。ＳＮＰ遺伝子型決定は、ホモ接合型またはヘテロ接合型のいずれかであるＳＮＰを同定することができる。対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在は、対象ががんを有することまたはがんを発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中の少なくとも１つのＳＮＰの存在はまた、対象が、中和抗ＮＡＭＰＴ抗体（Ａｂ）等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用したがんの治療により応答性が高いであろうと同定し得る。いくつかの場合において、対象からの生体試料中に前述のＳＮＰが存在しないことは、対象ががんを有しない、またはがんを発症するリスクが低いことを示し得る。
【0108】
加えて、または代替的に、かかる対象から得られた生体試料を、ＮＡＭＰＴ発現レベルについて評価することができる。対象（例えば、被験者）からの生体試料中のＮＡＭＰＴの発現レベルは、ＩＨＣ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、オートラジオグラフィー、抗体アレイ、及びＲＴ－ｑＰＣＲを含むがこれらに限定されない様々な方法によって評価され得る。被験者由来の生体試料で評価されるようなＮＡＭＰＴの発現レベルは、健康な対照（例えば、がんを有しない対象及び／または炎症性疾患を有しない対象）におけるＮＡＭＰＴ発現レベル等の標準対照と比較することができる。標準対照と比較した、被験者におけるＮＡＭＰＴ発現レベルの増加は、対象ががんを有することまたはがんを発症するリスクがあることを示し得る。更に、対象からの生体試料中のＮＡＭＰＴ発現レベルの増加はまた、対象が、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤を使用したがんの治療により応答性が高いものとして同定し得る。いくつかの場合において、標準対照と比較して被験者のＮＡＭＰＴ発現レベルが同様または低いことは、対象ががんを有しない、またはがんを発症するリスクが低いことを示し得る。
【0109】
実施例７：がんの治療及び／または予防のための抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が、がんを有する対象、またはがんを発症するリスクがある対象を治療するためにどのように使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
本実施例は、中和抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ等のＮＡＭＰＴ阻害剤が、がんを有する対象、またはがんを発症するリスクがある対象を治療するためにどのように使用できるかを記述する。そのような対象は、前述の実施例に記載の方法によって同定することができる。
【0110】
がんを有する、またはがんを発症するリスクがある対象は、本明細書に記載のヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ等の治療有効量の抗ＮＡＭＰＴ Ａｂを対象に投与することによって治療することができる。対象は、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを単独で用いて、またはアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗有糸分裂薬、細胞傷害性抗生物質、ポリアミン阻害剤、鉄調節薬、化学療法剤、キナーゼ阻害剤、モノクローナル抗体、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、放射線療法、及びキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含むが、それらに限定されない１つ以上の追加の治療剤と組わせて治療することができる。単独でのまたは１つ以上の追加の治療剤と組み合わせた抗ＮＡＭＰＴ Ａｂによる対象の治療は、がんの発症を予防または低減することができ、がんの進行を予防または低減することができ、及び／またはがんに関連付けられる１つ以上の症状を軽減することができる。ヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを使用するがんの治療は、前述の実施例に記載されるように、より高いＮＡＭＰＴ発現及び／または少なくとも１つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰの存在を有する対象においてより効果的であり得る。
【0111】
実施例８．絨毛性羊膜炎におけるＮＡＭＰＴ発現の評価
絨毛性羊膜炎におけるＮＡＭＰＴの役割を評価するために、ＮＡＭＰＴの発現を、健常な対照女性または絨毛性羊膜炎を有する女性から得られた胎盤組織における免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって評価した。図２に示すように、絨毛性羊膜炎を有する女性からの胎盤組織（図２、右パネル、「ＣｈｏｒＰ胎盤」）は、健常対照からの胎盤組織と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の著しい増加を示した（図２、左パネル、「対照胎盤」）。
絨毛性羊膜炎におけるＮＡＭＰＴの役割を評価するために、ＮＡＭＰＴの発現を、健常な対照女性または絨毛性羊膜炎を有する女性から得られた胎盤組織における免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって評価した。図２に示すように、絨毛性羊膜炎を有する女性からの胎盤組織（図２、右パネル、「ＣｈｏｒＰ胎盤」）は、健常対照からの胎盤組織と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の著しい増加を示した（図２、左パネル、「対照胎盤」）。
【0112】
絨毛性羊膜炎におけるＮＡＭＰＴの役割を更に評価するために、血漿サンプルを、健康な妊婦（「妊娠」）、絨毛性羊膜炎を有する妊婦（「ＣｈｏｒＰ」）、または非妊婦対照（「対照」）から得て、ＮＡＭＰＴ血漿レベルをＥＬＩＳＡによって評価した。これらの結果を図３に記述する。図３に記述されるように、ＮＡＭＰＴ血漿レベルの増加は、非妊婦対照と比較して妊婦において観察され、一方、絨毛性羊膜炎を有する妊婦においてＮＡＭＰＴ血漿レベルの著しい増加が観察された。
【0113】
したがって、結果は、絨毛性羊膜炎におけるＮＡＭＰＴ発現及び分泌の調節不全を例証し、絨毛性羊膜炎の病因におけるＮＡＭＰＴの役割を示す。
【0114】
実施例９．ＬＰＳ誘発性絨毛性羊膜炎の前臨床モデルを使用した絨毛性羊膜炎の治療標的としてのＮＡＭＰＴの検証
前述の実施例に概説された結果は、絨毛性羊膜炎の病因におけるＮＡＭＰＴの役割を例証し、したがって、絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を示す。次に、絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を探るために、絨毛性羊膜炎及び早産の前臨床マウスモデルを使用し、妊娠１４日目に２０μｇ／ＫｇのＬＰＳで妊娠マウスにチャレンジすることによって絨毛性羊膜炎を誘導した。ＰＢＳチャレンジされた妊娠マウスを対照として使用した。
前述の実施例に概説された結果は、絨毛性羊膜炎の病因におけるＮＡＭＰＴの役割を例証し、したがって、絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を示す。次に、絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を探るために、絨毛性羊膜炎及び早産の前臨床マウスモデルを使用し、妊娠１４日目に２０μｇ／ＫｇのＬＰＳで妊娠マウスにチャレンジすることによって絨毛性羊膜炎を誘導した。ＰＢＳチャレンジされた妊娠マウスを対照として使用した。
【0115】
前臨床モデルは、絨毛性羊膜炎関連の病因についてマウスを評価することによって確認された。このために、まず、マウスの子宮組織をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色に供して、子宮膿瘍、炎症及びアポトーシスを評価した。図４Ａにも示すように、ＬＰＳチャレンジマウスからの子宮組織は、子宮膿瘍（図４Ａ、上パネル）及び炎症及びアポトーシスの領域（図４Ａ、下パネル）も示し、したがって、前臨床モデルにおける絨毛膜羊膜炎の誘導を示す。前臨床モデルにおける絨毛性羊膜炎関連の病因を更に確認するために、ＬＰＳチャレンジされたマウスの産後母体血清（図４Ｂ、上部パネル）及び子宮組織ホモジネート（図４Ｂ、下部パネル）中の炎症促進性サイトカインＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－６、ＫＣ（ＩＬ－８）及びＭＣＰ１のレベルをＥＬＩＳＡによって評価した。図４Ｂに示されるように、ＩＬ－６、ＩＬ－８、及びＭＣＰ１の血清レベルは、対照（図４Ｂ、下部パネル）と比較して、ＬＰＳチャレンジマウスにおいて有意に上昇した（ｐ＜０．０５）、一方、ＬＰＳチャレンジマウス由来の子宮組織ホモジネートは、それらのビヒクルチャレンジ対応物（図４Ｂ、下部パネル）と比較して、ＩＬ－６及びＭＣＰ１のレベルにおいて有意な増加を示した（ｐ＜０．０５）。したがって、結果は、ＬＰＳチャレンジされた妊娠マウスにおける絨毛性羊膜炎関連の病因を実証し、絨毛性羊膜炎の前臨床モデルを検証している。
【0116】
次に、絨毛性羊膜炎における治療標的としてＮＡＭＰＴを検証するために、絨毛性羊膜炎のマウスモデルからの妊娠マウスを、０．４ｍｇ／Ｋｇの中和抗ＮＡＭＰＴモノクローナル抗体（ｍＡｂ、「ＡＬＴ－１００」もしくはＡｂ３（例えば、本明細書中の上記表２を参照））またはビヒクル対照（ＰＢＳ）で処置した。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置またはＰＢＳ処置された絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子を、肺組織における生存率及びＮＡＭＰＴ及び他の炎症促進性サイトカインの発現について評価した。健康なマウスに生まれた子が対照として用いられた。これらの結果を図５Ａ～５Ｃに示す。
【0117】
図５Ａのウエスタンブロット分析に示すように、ＰＢＳ処置絨毛性羊膜炎マウスに生まれた子（図５Ａ、中央パネル）の肺組織は、健常対照に生まれた子（図５Ａ、左パネル）と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の強い増加を示した。対照的に、ＰＢＳ処置絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子と比較して、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子（図５Ａ、右パネル）は、肺におけるＮＡＭＰＴ発現の著しい減少を示した。したがって、図５Ａに示す結果は、子におけるＮＡＭＰＴ発現の絨毛膜羊膜炎誘発性上昇の低減における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を例証する。更に、図５Ｂに示すように、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置絨毛膜羊膜炎マウス（「ＬＰＳ＋ＡＬＴ－１００」）に生まれた子からの肺組織ホモジネートは、ＰＢＳ処置絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子と比較して、炎症促進性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－８及びＭＣＰ１）の発現の有意な減少を示した（ｐ＜０．０５、「ＬＰＳ」）。したがって、図５Ａ及び５Ｂに示される結果は、ＮＡＭＰＴ及び他の炎症性サイトカインの絨毛性羊膜炎関連発現の低減における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を例証する。更に、図５Ｃに示すように、ＰＢＳ処置絨毛膜羊膜炎マウス（「ＬＰＳ」）に生まれた子は、健常対照（「対照」）に生まれた子と比較して、生存率の著しい低下を示した（ｐ＜０．０５）。対照的に、ＰＢＳ処置絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子と比較して、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置絨毛膜羊膜炎マウスに生まれた子（「ＬＰＳ＋ＡＬＴ－１００」）は、生存率の著しい増加を示した（ｐ＜０．０５）。したがって、図５Ａ～５Ｃに示される結果は、子の炎症を減少させ、絨毛性羊膜炎の雌に生まれた子の生存を増加させることにおける抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を例証し、絨毛性羊膜炎の治療標的としてＮＡＭＰＴを検証する。
【0118】
実施例１０．気管支肺異形成の前臨床モデルにおける絨毛性羊膜炎に曝露された子を使用した絨毛性羊膜炎の治療標的としてのＮＡＭＰＴの検証
絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証するために、気管支肺異形成（ＢＰＤ）のマウスモデルにおいて、絨毛性羊膜炎に曝露された子を用いて抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＡＬＴ－１００」）の有効性を試験した。このために、絨毛性羊膜炎の雌から生まれた子を、出生後１４日間、ＬＰＳ及び高酸素（ＦｉＯ２ ８５％）に曝露させ、その後１０～１４日間、室内気（ＲＡ）に収容した。次いで、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子を中和抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置した、または未処置のまま放置した。マウスからの肺組織をＨ＆Ｅ染色に供して、ＬＰＳ／高酸素チャレンジの２８日後に炎症及び気管支肺異形成を評価した。絨毛性羊膜炎の雌に生まれ、対照室内気に曝露された子の肺組織が対照として使用された。これらの結果を図６Ａ～６Ｃに示す。
絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証するために、気管支肺異形成（ＢＰＤ）のマウスモデルにおいて、絨毛性羊膜炎に曝露された子を用いて抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＡＬＴ－１００」）の有効性を試験した。このために、絨毛性羊膜炎の雌から生まれた子を、出生後１４日間、ＬＰＳ及び高酸素（ＦｉＯ２ ８５％）に曝露させ、その後１０～１４日間、室内気（ＲＡ）に収容した。次いで、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子を中和抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置した、または未処置のまま放置した。マウスからの肺組織をＨ＆Ｅ染色に供して、ＬＰＳ／高酸素チャレンジの２８日後に炎症及び気管支肺異形成を評価した。絨毛性羊膜炎の雌に生まれ、対照室内気に曝露された子の肺組織が対照として使用された。これらの結果を図６Ａ～６Ｃに示す。
【0119】
図６Ａ～６Ｃに示されるように、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子由来の肺組織（図６Ｂ）は、対照室内気に曝露した子由来の肺組織と比較して、炎症及び気管支肺異形成の強い増加を示した（図６Ａ）。対照的に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置マウスから得られた肺組織は、炎症及び気管支肺異形成の顕しい減少を示した（図６Ｃ）。したがって、結果は、新生児の子を気管支肺異形成から保護する上での抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を実証し、絨毛性羊膜炎の治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証する。
【0120】
次に、マウス由来の肺組織ホモジネートをウエスタンブロット分析に供し、ＬＰＳ／高酸素チャレンジの２８日後にＮＡＭＰＴ発現を評価した。絨毛性羊膜炎の雌に生まれ、対照室内気に曝露された子の肺組織が対照として使用された。これらの結果を図７Ａ～７Ｂに示す。図７Ａ～７Ｂに示されるように、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子由来の肺組織（「ＬＰＳ／高酸素」）は、対照室内気に曝露した子（「対照」）由来の肺組織と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の強い増加を示した。対照的に、抗ＮＡＭＰＴ ｐＡｂ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（「ＬＰＳ／高酸素＋抗ＮＡＭＰＴ Ａｂ」）で処置したマウスから得られた肺組織は、ＮＡＭＰＴ発現の著しい低下を示した。したがって、結果は、気管支肺異形成モデルからＮＡＭＰＴ発現を低減する際の抗ＮＡＭＰＴ Ａｂの有効性を実証し、絨毛性羊膜炎の治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証する。
【0121】
実施例１１．絨毛膜羊膜炎誘発性絨肺高血圧の前臨床マウスモデルを使用した絨毛性羊膜炎の治療標的としてのＮＡＭＰＴの検証
絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証するために、絨毛膜羊膜炎誘導性肺高血圧（ＰＡＨ）の２ヒットマウスモデルにおいて、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＡＬＴ－１００」）の有効性を試験した。このために、絨毛性羊膜炎の雌に生まれた子は、出生後１４日間ＬＰＳ及び高酸素に曝され、その後１０～１４日間室内気（ＲＡ）に収容された。次いで、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子を中和抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置した、または未処置のまま放置した。室内空（ＲＡ）に保持されたマウスが対照として用いられた。マウス由来の肺組織ホモジネートをＲＴ－ＰＣＲ分析に供し、ｐ－ＳＭＡＤ１／５／８／９及びＳＴＡＴ３発現を評価した。その結果を図８Ａ及び８Ｂにそれぞれ示す。
絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証するために、絨毛膜羊膜炎誘導性肺高血圧（ＰＡＨ）の２ヒットマウスモデルにおいて、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＡＬＴ－１００」）の有効性を試験した。このために、絨毛性羊膜炎の雌に生まれた子は、出生後１４日間ＬＰＳ及び高酸素に曝され、その後１０～１４日間室内気（ＲＡ）に収容された。次いで、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子を中和抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置した、または未処置のまま放置した。室内空（ＲＡ）に保持されたマウスが対照として用いられた。マウス由来の肺組織ホモジネートをＲＴ－ＰＣＲ分析に供し、ｐ－ＳＭＡＤ１／５／８／９及びＳＴＡＴ３発現を評価した。その結果を図８Ａ及び８Ｂにそれぞれ示す。
【0122】
図８Ａに示されるように、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子由来の肺組織（「ＨＯ ＬＰＳ」）は、対照室内気に曝露した子（「ＲＡ」）または室内気でＬＰＳチャレンジされた子（「ＲＡ ＬＰＳ」）由来の肺組織と比較して、ｐ－ＳＭＡＤ１／５／８／９発現の著しい低下を示した。対照的に、ｐ－ＳＭＡＤ１／５／８／９発現の有意な増加は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（「ＨＯ ＬＰＳ ＮＡＡＭＰＴ」）で処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子から得られた肺組織において見られた。したがって、結果は、絨毛性羊膜炎誘発性ＰＡＨモデルにおけるｐ－ＳＭＡＤ発現の回復における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を例証する。
【0123】
図８Ｂに示されるように、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子由来の肺組織（「ＬＰＳ高酸素」）は、対照室内気に曝露した子（「ＲＡ」）または対照室内気でＬＰＳチャレンジされた子（「ＬＰＳ ＲＡ」）由来の肺組織と比較して、ＳＴＡＴ３発現の顕著な増加（ヒトＰＡＨにも見られる）を示した。対照的に、ＳＴＡＴ３発現の有意な減少は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳチャレンジされた子（「ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ ＲＡ」）及び抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ ＮＡＭＰＴ 高酸素」）から得られた肺組織において見られた。したがって、結果は、絨毛性羊膜炎誘発性ＰＡＨモデルにおけるベースラインへのＳＴＡＴ３発現の回復における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を実証する。したがって、図８Ａ～８Ｂに記載される結果は、絨毛性羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証する。
【0124】
絨毛性羊膜炎の治療標的としてＮＡＭＰＴを更に検証するために、心エコー図データ、血行動態データ、及びｆｕｌｔｏｎ指数を、絨毛性羊膜炎誘発性ＰＡＨの２ヒットマウスモデルからの子で評価した。エコーデータ及び血行動態データを示す結果を表３～４及び図９に記載する。
【表3】
【表4】
【0125】
表３～４及び図９に示すように、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ高酸素」）は、対照室空気に曝露した子（「対照ＲＡ」）と比較して、ＲＶ分画壁肥厚、ＲＶ／ＬＶ比、及びＲＶＰの著しい増加を示した。対照的に、これらのパラメータの有意な減少は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置されたＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ／高酸素＋ＡＬＴ－１００」）において見られた。他方では、ＰＡＴ／ＰＥＴ及びＴＡＰＳＥは、対照室内気に曝露された子（「対照ＲＡ」）と比較して、ＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ高酸素」）で減少し、これらのパラメータの回復は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂで処置したＬＰＳ／高酸素チャレンジされた子（「ＬＰＳ／高酸素＋ＡＬＴ－１００」）で見られた。
【0126】
したがって、表３～４及び図９に記載される結果は、絨毛膜羊膜炎誘発性ＰＡＨモデルにおけるＰＡＨの様々なパラメータの調節における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を実証し、絨毛膜羊膜炎における治療標的としてのＮＡＭＰＴを更に検証する。
【0127】
実施例１２．ヒトＮＡＦＬＤ肝組織及びマウスＮＡＳＨ組織におけるＮＡＭＰＴ発現の評価
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）におけるＮＡＭＰＴの役割とその脂肪症からＮＡＳＨへの最終的な進行を評価するために、肝臓ＮＡＭＰＴ発現を、ＮＡＦＬＤを有するヒト及びＮＡＳＨの２つのマウスモデルで評価した。１つのマウスＮＡＳＨモデルは、高脂肪／高スクロース（ＨＦＨＳ）の「西洋食」を与えられたマウスが含まれていた。ＳＴＡＭ ＮＡＳＨマウスモデルとも呼ばれる、第２のマウスモデルは、出生後に低用量ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与され、第４週に高脂肪食（ＳＴＺ／ＨＦ）で開始されたマウスを含み、これはヒトＮＡＳＨと同様の組織学的特徴（類洞周囲線維症を含む）を有するＮＡＳＨを７週までに誘導した。更に、脂肪肝疾患を有するマウスにおいて肝臓ＮＡＭＰＴの発現を評価した。これらの結果を図１０Ａ～１０Ｅに示す。
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）におけるＮＡＭＰＴの役割とその脂肪症からＮＡＳＨへの最終的な進行を評価するために、肝臓ＮＡＭＰＴ発現を、ＮＡＦＬＤを有するヒト及びＮＡＳＨの２つのマウスモデルで評価した。１つのマウスＮＡＳＨモデルは、高脂肪／高スクロース（ＨＦＨＳ）の「西洋食」を与えられたマウスが含まれていた。ＳＴＡＭ ＮＡＳＨマウスモデルとも呼ばれる、第２のマウスモデルは、出生後に低用量ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与され、第４週に高脂肪食（ＳＴＺ／ＨＦ）で開始されたマウスを含み、これはヒトＮＡＳＨと同様の組織学的特徴（類洞周囲線維症を含む）を有するＮＡＳＨを７週までに誘導した。更に、脂肪肝疾患を有するマウスにおいて肝臓ＮＡＭＰＴの発現を評価した。これらの結果を図１０Ａ～１０Ｅに示す。
【0128】
図１０Ａに記載されるように、ＮＡＦＬＤを有する５人のヒト対象からの肝組織のＩＨＣ分析は、正常な肝臓組織と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の有意な増加を示した（挿入図に示す）。図１０Ｂ～１０Ｄは、２つの前臨床マウスＮＡＳＨ／線維症モデルにおけるＩＨＣによるＮＡＭＰＴ発現及びウエスタンブロット分析を記述する。図１０Ｂに記載されるように、ＮＡＳＨ肝組織におけるＮＡＭＰＴ発現は、ＳＴＺ／ＨＦ曝露マウスにおいて著しく増加する。同様に、強化されたＮＡＭＰＴ発現を、西洋式食事を給餌されたマウスの肝臓においてＩＨＣによって検出し（ＨＦＨＳ、１６週間）（図１０Ｃ）、これを、肝組織溶解物中のＮＡＭＰＴレベルの免疫ブロット分析によって更に検証した（図１０Ｄ）。図１０Ｅは、更に、脂肪肝疾患を有するマウスにおけるＩＨＣ分析によるＮＡＭＰＴの発現を記述する。図１０Ｅに記述されるように、マウス脂肪肝は、正常なマウス肝臓と比較して、ＮＡＭＰＴ発現の顕著な増加を示した。これらの結果は、ヒトＮＡＳＨ進行に影響を与える潜在的なＮＡＭＰＴ関与と一致する。したがって、図１０Ａ～１０Ｅに記述される結果は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨのＮＡＭＰＴ発現の調節不全を例証し、ＮＡＳＨの病因におけるＮＡＭＰＴの役割を示す。
【0129】
実施例１３．ＮＡＭＰＴの抗体媒介性中和は、ＮＡＳＨのマウスモデルにおける肝臓の炎症、損傷及び線維症を減少させる
前述の実施例に概説された結果は、ＮＡＳＨの病因におけるＮＡＭＰＴの役割を実証し、したがって、ＮＡＳＨにおける治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を示す。次に、ＮＡＳＨにおける治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を探るために、循環抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの中和の有効性をＳＴＺ／ＨＦ（ＳＴＡＭ）マウスにおいて評価した。ＳＴＺ／ＨＦマウスは、出生２日後にストレプトゾトシン（ＳＴＺ）チャレンジされ、高脂肪食（ＨＦ）で維持したＣ５７／Ｂ６マウスであった。第９～１２週の間に、ＳＴＺ／ＨＦマウスに、０．４ｍｇ／ｋｇのヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００）またはビヒクル対照（対照ＩｇＧ１ Ａｂ）を毎週腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射した。この戦略は、ＮＡＳＨ／肝線維症の発症を標的とし、次いで陽性対照として働く前臨床ＮＡＳＨを減少させることが知られているアンジオテンシン受容体遮断薬である毎日経口投与されたテルミサルタンと所見を比較するように設計された。
前述の実施例に概説された結果は、ＮＡＳＨの病因におけるＮＡＭＰＴの役割を実証し、したがって、ＮＡＳＨにおける治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を示す。次に、ＮＡＳＨにおける治療標的としてのＮＡＭＰＴの可能性を探るために、循環抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの中和の有効性をＳＴＺ／ＨＦ（ＳＴＡＭ）マウスにおいて評価した。ＳＴＺ／ＨＦマウスは、出生２日後にストレプトゾトシン（ＳＴＺ）チャレンジされ、高脂肪食（ＨＦ）で維持したＣ５７／Ｂ６マウスであった。第９～１２週の間に、ＳＴＺ／ＨＦマウスに、０．４ｍｇ／ｋｇのヒト化抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００）またはビヒクル対照（対照ＩｇＧ１ Ａｂ）を毎週腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射した。この戦略は、ＮＡＳＨ／肝線維症の発症を標的とし、次いで陽性対照として働く前臨床ＮＡＳＨを減少させることが知られているアンジオテンシン受容体遮断薬である毎日経口投与されたテルミサルタンと所見を比較するように設計された。
【0130】
まず、ＳＴＺ／ＨＦ曝露マウス（「ＳＴＺ／ＨＦ」）及び抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ＳＴＺ／ＨＦ＋ｅＮＡＭＰＴ ｍＡｂ」）から得られた肝臓組織をＨ＆Ｅ染色に供して、ＮＡＳＨ媒介性肝損傷を評価した。分析からの結果は、図１１Ａ～１１Ｂに記載されている。図１１Ａ～１１Ｂに記載されるように、対照マウス由来の肝組織（図１１Ａ、左パネル、挿入図）と比較して、ＳＴＺ／ＨＦマウス由来の肝組織（図１１Ａ～１１Ｂ、左パネル）は、有意な肝脂肪症、肝内脂肪球及び肝細胞損傷／バルーニングを示した。しかしながら、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス由来の肝組織（図１１Ａ～１１Ｂ、右パネル）は、肝脂肪症、肝内脂肪球及び肝細胞傷害／バルーニングの著しい減少を示した（テルミサルタン保護に匹敵する、データ示さず）。したがって、図１１Ａ～１１Ｂに記載される結果は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂによるＮＡＭＰＴの中和が、ＳＴＺ／ＨＦマウスにおける脂肪症及びＮＡＳＨの組織学的進行を減衰させるのに有効であることを示す。
【0131】
次に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」）またはテルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」）から得られた肝臓組織を、脂肪症スコア及び肝臓トリグリセリドレベルについて分析した。分析からの結果は、図１２Ａ～１２Ｂに記載されている。図１２Ａに記載されるように、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置マウスは、ビヒクル対照を注射されたマウスと比較して、脂肪症スコアの有意な減少を示した（ｐ＜０．０１）。また、図１２Ｂに記載されるように、ビヒクル対照を注入したマウスと比較して、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置マウスにおいて肝臓トリグリセリドレベルの強い減少が観察された（ｐ＜０．０１）。したがって、図１２Ａ～１２Ｂに記載される結果は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂによるＮＡＭＰＴの中和がＮＡＳＨの炎症指標を効果的に低減させることを示す。
【0132】
次に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」）またはテルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」）から得られた肝臓組織を、コラーゲン、繊維症マーカーに対してシリウスレッド染色に供し、ＮＡＳＨ媒介性肝線維症を評価した。分析からの結果は、図１２Ｃに記載されている。図１２Ｃに示すように、ビヒクル対照を注射したマウスと比較して、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置マウスからの肝臓組織において、線維症マーカーであるコラーゲンの発現の有意な減少を示すシリウスレッド陽性領域の割合の有意な減少が観察された（ｐ＜０．０５）。したがって、図１２Ｃに記載される結果は、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂによるＮＡＭＰＴの中和が、ＮＡＳＨ媒介性肝線維症を減衰させるのに有効であることを示す。
【0133】
次に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「ｍＡｂ」）、ビヒクル注射ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｖｅｈ」）、テルミサルタン処置ＳＴＺ／ＨＦマウス（「Ｔｅｌｍ」）、またはＳＴＺ／ＨＦに曝露されなかった対照マウス（「Ｃｔｒｌ」）においてＮＡＭＰＴの血漿レベルを評価した。これらの結果を図１２Ｄに示す。図１２Ｄに記載されるように、未処置の対照マウスと比較して、ビヒクル注入ＳＴＺ／ＨＦマウスは、ＮＡＭＰＴ血漿レベルの著しい増加を示し、これは、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂによる処置によって有意に減少した。したがって、結果は、ＮＡＳＨにおける血漿ＮＡＭＰＴレベルの調節不全を例証し、ＮＡＳＨの病因におけるＮＡＭＰＴの役割を検証する。
【0134】
全体として、図１０Ａ～１０Ｅ、１１Ａ～１１Ｂ及び１２Ａ～１２Ｄに概説されるように、前述の研究の結果は、炎症及び線維症を調節する新規のＮＡＳＨ治療標的としてのＮＡＭＰＴを例証し、また、ＮＡＳＨ媒介性肝炎、損傷及び線維症を減衰させることにおける抗ＮＡＭＰＴ抗体の有効性を示し、したがって、ＮＡＳＨにおける治療標的としてのＮＡＭＰＴを検証する。これは、図１３に提供される概略図において更に要約される。図１３に記載されるように、ＮＡＳＨをもたらす炎症の３つのサイクルは、肥満及びインスリン抵抗性によって引き起こされる末梢炎症サイクル、腸間膜脂肪細胞の腸炎症及び活性化によって引き起こされる局部的炎症サイクル、ならびに肝臓内の肝臓脂肪毒性及び先天性免疫細胞活性化によって引き起こされる局所炎症サイクルを含む。腸炎症は、「漏出腸症候群」及び門脈を介して肝臓に流入する管腔内容物によって引き起こされる。ＮＡＭＰＴは、各炎症サイクルに関与し、脂肪細胞、腸上皮、及び活性化肝細胞によって強く産生され得る。ＤＡＭＰとして、ＮＡＭＰＴは、ＴＬＲ４／ＮＦｋＢ炎症性シグナル伝達を誘発して、局所的に、肝細胞傷害、線維症及び新生物への移行を促進するケモカイン／サイトカイン及び成長因子を産生し、これらのプロセスは、ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂによって著しく減衰される。
【0135】
本開示で提示される注目すべき前臨床及び臨床データは、（ｉ）ＮＡＭＰＴ血漿レベル及び肝臓ＮＡＭＰＴ発現がマウスＮＡＳＨモデルにおいて有意に上昇している；、（ｉｉ）ＮＡＳＨ及びＮＡＳＨ肝硬変を有するヒトは、肝臓ＮＡＭＰＴ発現の増加を示す、（ｉｉｉ）現在ＧＭＰ製造プロセス中のＮＡＭＰＴ中和性ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００）、肺及び腎線維症（下記の実施例１４を参照）、ならびにＮＡＦＬＤ進行からＮＡＳＨ線維症への複数の指標を低減させたので、ＮＡＭＰＴをＮＡＦＬＤからＮＡＳＨへの進行のリスクを減少させるための魅力的な標的として強く示唆する。したがって、ヒト化された、配列最適化された、ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ（例えば、ＡＬＴ－１００またはＡｂ３）は、生命を脅かすＮＡＳＨ及びＨＣＣへの進行を遅らせるまたは停止させるための安全かつ効果的なアプローチを表し得る。
【0136】
本開示は、ヒト化抗ＮＡＭＰＴ中和抗体（例えば、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ）等のＮＡＭＰＴ阻害剤に加えて、ＮＡＭＰＴ血漿バイオマーカーアッセイ及びＮＡＭＰＴ遺伝子型決定アッセイを含むプラットフォーム（ＥＮＡＭＰＴＯＲ（商標）プラットフォーム）を提供する。血漿ＮＡＭＰＴレベル（Ｂｉｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ（２０１８），１９７：１４２１－１４３２）及び５つのＮＡＭＰＴプロモーターＳＮＰの双方は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を予測する（Ｂａｊｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ（２００７），３５：１２９０－１２９５）及び肺動脈高血圧死亡率及びは、重度の炎症性損傷の危険因子であることが示されている。各ＮＡＭＰＴ ＳＮＰは、機械的ストレス及び低酸素に応答して（ＨＩＦ－２αを介して）ＮＡＭＰＴプロモーター活性を変化させる（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０１４），５１：６６０－６６７、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０２０），６３：９２－１０３）。各ＳＮＰは、黒人では重要でない対立遺伝子頻度＞１％を有し、黒人では３つのＮＡＭＰＴ ＳＮＰが著しく過剰に表されている。本明細書に開示される精密医療プラットフォームは、ＮＡＭＰＴ療法（例えば、ＡＬＴ－１００ｍＡｂによる治療）に応答する可能性が最も高い患者の同定を可能にする。ＮＡＭＰＴ血漿レベル及びＮＡＭＰＴリスク遺伝子型の両方は、ＮＡＦＬＤからＮＡＳＨへの進行等の炎症状態の進行／死亡における新規の危険因子を表し得る。本明細書に開示される精密医療プラットフォームは、例えば、ＮＡＭＰＴ阻害剤（例えば、ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂ）による治療の臨床試験に登録するための対象（例えば、ＮＡＳＨ対象）を層別化する上で重要な価値であり得る。
【0137】
実施例１４．ＮＡＭＰＴの抗体媒介性中和は、尿管閉塞誘発性マウス腎線維症を減少させる
次に、尿管閉塞誘発性マウス腎線維症モデルにおいて、臓器線維症の重症度の低減または予防における循環抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの中和の有効性を評価した。片側尿管閉塞（ＵＵＯ）は、比較的短期間での慢性腎疾患、尿細管壊死及び炎症性細胞浸潤の主要な病態生理学的特徴を有する腎線維症の十分に特徴付けられた疾患モデルである。腎臓の炎症及び線維症の低減に対するＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂのＮＡＭＰＴ発現及び有効性を、前臨床マウスＵＵＯモデルにおいて評価した。
次に、尿管閉塞誘発性マウス腎線維症モデルにおいて、臓器線維症の重症度の低減または予防における循環抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの中和の有効性を評価した。片側尿管閉塞（ＵＵＯ）は、比較的短期間での慢性腎疾患、尿細管壊死及び炎症性細胞浸潤の主要な病態生理学的特徴を有する腎線維症の十分に特徴付けられた疾患モデルである。腎臓の炎症及び線維症の低減に対するＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂのＮＡＭＰＴ発現及び有効性を、前臨床マウスＵＵＯモデルにおいて評価した。
【0138】
このために、８匹の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（７週齢）の３つのグループを、尿管閉塞の実施によって外科的にチャレンジして、腎線維症を開始させた。野生型（ＷＴ）マウスには、術後１日目及び８日目に０．４ｍｇ／ｋｇのＡＬＴ－１００ｍＡｂ（ｉ．ｐ．）を受け、１４日目に全てのマウスを屠殺した。シリウスレッド陽性腎組織染色のＵＵＯ媒介性増加を腎線維症の指標として評価した。これらの結果を図１４Ａ～１４Ｃに示す。図１４Ａ～１４Ｃに記載されるように、ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ ＡＬＴ－１００は、ＵＵＯモデルにおけるシリウスレッド陽性染色を有意に減少させ、腎臓ヒドロキシプロリン含量の減少を伴ったが、これは統計学的有意性に達しなかった（データ示さず）。
【0139】
したがって、前述の研究の結果は、臓器線維症（例えば、腎線維症）の重症度を低減させることにおける中和循環抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの有効性を強調する。
【0140】
実施例１５．更なる研究設計及び方法
ＮＡＦＬＤにおけるＮＡＭＰＴの関与の最初の探索（前述の実施例に概説されているように）は、ＮＡＦＬＤを有するヒト及び２つのＮＡＳＨのマウスモデルの両方において、肝臓ＮＡＭＰＴ発現の著しい増加を明らかにした。１つのマウスＮＡＳＨモデルは、高脂肪／高スクロース（ＨＦＨＳ）の「西洋食」を与えられたマウスが含まれていた。第２のマウスモデルは、出生後に低用量ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を与えられ、４週目（ＳＴＺ／ＨＦ）に高脂肪食で開始されたマウス（ＳＴＡＭ ＮＡＳＨマウスモデルとも称される）を含んでいた。重要なことに、ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、マウスＳＴＡＭモデルにおけるＮＡＳＨ重症度の複数の指標を減少させた。ＮＡＭＰＴは、多発性炎症性障害における新規の上流治療標的であるため、ＮＡＭＰＴ中和ヒト化ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨ及び線維症／肝硬変への進行を遅らせるはずである。この第Ｉ相試験は、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨ及び肝線維症／肝硬変への進行を遅らせる治療戦略として、ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂを確認するように設計されている。前臨床ＮＡＳＨモデルにおけるＡＬＴ－１００ｍＡｂの治療的送達も最適化される。
ＮＡＦＬＤにおけるＮＡＭＰＴの関与の最初の探索（前述の実施例に概説されているように）は、ＮＡＦＬＤを有するヒト及び２つのＮＡＳＨのマウスモデルの両方において、肝臓ＮＡＭＰＴ発現の著しい増加を明らかにした。１つのマウスＮＡＳＨモデルは、高脂肪／高スクロース（ＨＦＨＳ）の「西洋食」を与えられたマウスが含まれていた。第２のマウスモデルは、出生後に低用量ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を与えられ、４週目（ＳＴＺ／ＨＦ）に高脂肪食で開始されたマウス（ＳＴＡＭ ＮＡＳＨマウスモデルとも称される）を含んでいた。重要なことに、ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、マウスＳＴＡＭモデルにおけるＮＡＳＨ重症度の複数の指標を減少させた。ＮＡＭＰＴは、多発性炎症性障害における新規の上流治療標的であるため、ＮＡＭＰＴ中和ヒト化ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨ及び線維症／肝硬変への進行を遅らせるはずである。この第Ｉ相試験は、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨ及び肝線維症／肝硬変への進行を遅らせる治療戦略として、ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂを確認するように設計されている。前臨床ＮＡＳＨモデルにおけるＡＬＴ－１００ｍＡｂの治療的送達も最適化される。
【0141】
研究（１）：ＮＡＳＨの前臨床マウスＳＴＡＭモデル（ＳＴＺ／ＨＦＤ）におけるＮＡＭＰＴ ｍＡｂ送達（ＡＬＴ－１００）の最適化。ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂは、ＮＡＳＨの前臨床マウスＳＴＡＭモデルにおいて、３用量及び２時点（第５週または第９週）で評価される。ｍＡｂの有効性の読み出しは、肝臓炎、脂肪症及び線維症の既知の指標を含む肝細胞損傷、ならびに死亡率の有意な減衰である。
【0142】
研究（２）：ＮＡＳＨの前臨床マウスＡＭＬＮモデル（ＨＦＨＣＤ）における抗－ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ送達（ＡＬＴ－１００）の最適化。抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの投与／タイミングは、前臨床ラット西洋食ＮＡＦＬＤモデル（高脂肪、高フルクトース、高コレステロール食、つまりＨＦＨＣＤ）において最適化される。ｍＡｂの有効性のリードアウトは、脂肪症及び線維症の既知の指標を含む肝臓炎、肝細胞損傷の有意な減少であろう。
【0143】
第ＩＩ相の計画。第Ｉ相試験の成功裏の完了に続く第ＩＩ相試験では、ＡＬＴ－１００ｍＡｂの薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び安全性（毒性）プロファイルが評価され、臨床開発をサポートするＣＭＣインフラストラクチャが確立される。第ＩＩ相試験の成功裏の完了に続いて、健康なボランティア（第Ｉ相試験）及びＮＡＳＨを有する対象（第ＩＩ相試験）における治療的アプローチとしてのＡＬＴ－１００ｍＡｂの検証が行われる。
【0144】
生物学的理論的根拠。ＮＡＦＬＤの進行及び管理における治療的進歩は、ＮＡＳＨの発症、肝繊維化、及びＨＣＣへの進行について炎症性経路活性化の役割を強調している（Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ＮＡＳＨ，”Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，１５：３４９－３６４（２０１８））。システム生物学及びゲノム戦略を利用して、本発明者らは、ＴＬＲ４のライゲーションを介して先天性免疫媒介性炎症及び線維化を強力に調節する新規の損傷関連分子パターンタンパク質（ＤＡＭＰ）として細胞外ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｅＮＡＭＰＴ）を同定した（Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅ－Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ－ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１７１：３６１－３７０（２００５）、Ｃａｍｐ ｅｔ ａｌ．，“Ｕｎｉｑｕｅ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＮＡＭＰＴ／ＰＢＥＦ Ｉｎｄｕｃｅｓ ＮＦｋａｐｐａＢ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ，”Ｓｃｉ Ｒｅｐ，５：１３１３５（２０１５）、Ｏｉｔａ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｖｅｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，５９：３６－４４（２０１８））。ＮＡＭＰＴは、多臓器炎症、損傷及び線維症（肺、肝臓、腎臓、心臓）ならびにがんへの非常に重要な役割を果たす（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ） ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））（図１）。同じＮＡＭＰＴタンパク質は、ｉＮＡＭＰＴとして細胞内の場合、ＮＡＤ代謝を酵素的に調節し、臨床がん治験においてＳＭＩで標的化されているが、有益性の欠如及び毒性のために失敗した（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））．本開示に記載の研究は、ＮＡＭＰＴ（例えば、ｅＮＡＭＰＴ）を、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行の重要な調節因子として、及びＮＡＦＬＤの後のステージへの進行を低減するための魅力的な治療標的として注目する。前臨床試験では、マウスＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデル及びＮＡＦＬＤを有するヒトにおける肝臓ＮＡＭＰＴ発現の増加が示されている。更に、ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ（ＡＬＴ－１００ｍＡｂ）は、ＮＡＳＨ重症度の複数の指標を低減させ、ＡＬＴ－１００ｍＡｂが、ＮＡＳＨの進行／致死性を防止するための緊急の未充足のニーズに対処するための実行可能なかつ新規のアプローチであり得ることを示唆する。
【0145】
提案された製品。ＮＡＳＨの治療パイプラインは拡大しているが、進行性ＮＡＦＬＤの標的化に成功することへの需要は、依然として満たされていない。腸間膜脂肪組織及び「漏出性腸」によって生成されるＮＡＭＰＴは、ＴＬＲ４／ＮＦｋＢ依存性炎症カスケードを直接活性化するはずであり（Ｃａｍｐ ｅｔ ａｌ．，“Ｕｎｉｑｕｅ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＮＡＭＰＴ／ＰＢＥＦ Ｉｎｄｕｃｅｓ ＮＦｋａｐｐａＢ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ，”Ｓｃｉ Ｒｅｐ，５：１３１３５（２０１５）、Ｏｉｔａ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｖｅｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，５９：３６－４４（２０１８））、したがって、脂肪症からＮＡＳＨ及び肝線維症への肝移行に寄与する（図１３）。ＮＡＭＰＴは、非常にｄｒｕｇｇａｂｌｅな治療標的であり、本発明者らは、ＮＡＳＨ治療のための新規治療剤として、ヒト化ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂであるＡＬＴ－１００ｍＡｂを開発した。ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、前臨床ＡＲＤＳ／ＶＩＬＩにおけるＴＬＲ４／ＮＦｋＢ炎症性カスケード活性化（Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｒｅ－Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１７８：６０５－６１７（２００８）、Ｑｕｉｊａｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅＮＡＭＰＴ Ａｍｐｌｉｆｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｕｔｅ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ：Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎ ｅＮＡＭＰＴ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｓｉｎｇ ｍＡｂ，”Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，２００２５３６（２０２０）、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｓ ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｉａｌ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，”Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１３５：１５３２－１５４６（２０１７）、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｒｅｃｔ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ＮＡＭＰＴ Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＳＯＸ ａｎｄ ＨＩＦ－２ａｌｐｈａ，”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，６３：９２－１０３（２０２０））、放射線誘発性肺損傷及び前立腺癌（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））を効果的に低下させる．抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、２つの親マウスｍＡｂ（Ｆｕｓｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｉｎｃ、Ｂｅｌｆａｓｔ，ＵＫ）に由来する５０個のＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂの総合的なインビトロ及びインビボスクリーニングの後に選択した。抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、免疫原性配列を除去するために配列最適化されており、ＳＰＲにより得られた４．５ｎＭのＫｄという強いＮＡＭＰＴ結合力を示す。強力な前臨床／臨床データに支持され、２つの前臨床ＮＡＳＨモデルを利用して、本明細書で提案される研究は、ＮＡＦＬＤの、脂肪症からＮＡＳＨ、肝線維症／肝硬変への進行を低減するための治療戦略として、抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂの概念の更なる証明を提供するように設計されている。
【0146】
革新。第一に、ＮＡＦＬＤ及び脂肪症からＮＡＳＨ及び肝線維症への進行を予防する有望なアプローチとして細胞外ＮＡＭＰＴ（例えば、ｅＮＡＭＰＴ）を標的とすることは非常に革新的であり、私たちの知る限り、この生物学的アプローチを利用するＮＡＳＨ治療の競合者は存在しない。第二に、図１３に示される私たちの仮説は非常に革新的であり、増加した漏出性腸症候群、活性化された腸間膜脂肪組織、脂肪症関連脂肪毒性、ＲＯＳ、及び低酸素に応答するＤＡＭＰとしてのｅＮＡＭＰＴの役割を強調する。ＴＬＲ４ライゲーション及びＮＦｋＢ炎症性シグナル伝達を介して、ＮＡＭＰＴはＮＡＳＨ進行微小環境の誘導に寄与し、ＮＡＦＬＤの進行に機能的に影響を与える。ＮＡＭＰＴ中和は、末梢、腸（漏出性腸由来エンドトキシン）、及び肝臓局在性炎症機構によって産生される炎症負荷を抑制する非常に有利な特性を有する。第三に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ自体は革新的であり、免疫原性を低減するために配列最適化されており、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける我々の薬力学的／薬物動態研究は、最大５０ｍｇ／ｋｇの用量であっても、観察される毒性なしに１４～１８日のｍＡｂ半減期を示している。最後に、精密医療アプローチの要件は、ＮＡＦＬＤを首尾よく標的にするための重要な要素として認識されている。本発明者らは、ｉ）ＮＡＭＰＴ（例えば、ｅＮＡＭＰＴ）血漿バイオマーカーアッセイ、及びｉｉ）５ＳＮＰ ＮＡＭＰＴ遺伝子型決定アッセイからなるＥＮＡＭＰＴＯＲ（商標）精密医学プラットフォームを開発した。これらの両方は、重度の炎症性損傷のリスク因子として示されている。我々は、ｅＮＡＭＰＴ血漿バイオマーカー／遺伝子決定アッセイ及びヒト化抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂからなるＥＮＡＭＰＴＯＲ（商標）精密医学プラットフォームが、革新の追加のソースである抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂに応答する可能性が最も高いＮＡＦＬＤ患者の同定を可能にするであろうと推測する。
【0147】
研究設計：前述の実施例に提示された結果は、非常にｄｒｕｇｇａｂｌｅな標的としてのＮＡＭＰＴを例証し、脂肪症からＮＡＳＨ及びＮＡＳＨ肝硬変への致死的移行を制限する際のヒト化ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂの有効性を強調する。ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、ＡＲＤＳ、放射線誘発性肺損傷、肺高血圧症、及び前立腺癌等の疾患の前臨床炎症モデルにおいて劇的な有効性を有する（Ｑｕｉｊａｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅＮＡＭＰＴ Ａｍｐｌｉｆｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｕｔｅ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ：Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎ ｅＮＡＭＰＴ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｓｉｎｇ ｍＡｂ，”Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，２００２５３６（２０２０）、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｅＮＡＭＰＴ）ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ，”ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，６１：１０３０５９（２０２０））。次に、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂを、ＮＡＳＨの前臨床マウスモデルにおいて、以下により試験する。（１）ＮＡＳＨ（ＳＴＺ／ＨＦＤ）のマウスＳＴＡＭモデルにおけるＡＬＴ－１００の有効性及び最適な投与／タイミングを評価すること（図１０Ａ～１０Ｅ、１１Ａ～１１Ｂ、及び１２Ａ～１２Ｄを参照されたい）、ならびに（２）西洋食を模倣し、ＮＡＦＬＤ（脂肪症、ＮＡＳＨ、肝線維症）の全スペクトルを誘導するラットＡＭＬＮモデル（ＨＦＨＣＤ）におけるＡＬＴ－１００の有効性及び最適な投与／タイミングを評価すること。一般的なエンドポイントには、肝機能障害／損傷、炎症、及び線維症の有意な減少が含まれる。ラットにおける薬物動態研究として、ＡＬＴ－１００ｍＡｂの半減期が１６～１８日であることが例証されたため、ＡＬＴ－１００ｍＡｂを毎週投与する。
【0148】
研究（１）－ＮＡＳＨのマウスＳＴＡＭモデル（ＳＴＺ／ＨＦ）におけるＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ投与の最適化
研究（１）の理論的根拠：ＮＡＭＰＴは、ＮＡＳＨの前臨床マウスモデル（ＳＴＡＭ）を利用して、ＮＡＳＨにおいて非常にｄｒｕｇｇａｂｌｅな標的として試験される。具体的には、生後２日後のマウスに低用量のＳＴＺを注射してｂ細胞損傷を誘導し、その後４週齢で高食事給餌を行う。このモデルは、ＮＡＦＬＤ進行の全スペクトルを発達させ、単純な脂肪症はＳＴＺ後５週目、ＮＡＳＨは７週目、線維症は９週目に観察される。本開示には示されていないが、ＨＣＣは、ＳＴＺ後１６週までに発症する。予備データ（図１０Ａ～１０Ｅ、及び１１Ａ～１１Ｂ）は、このマウスＳＴＡＭモデルにおけるＮＡＳＨの発症及びＮＡＳＨの低減における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの予備的成功を示す。研究（１）（すなわち、ＮＡＳＨのマウスＳＴＡＭモデルにおけるＡＬＴ－１００の有効性及び最適な投与／タイミングを評価するため）について、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの毎週の腹腔内注射は、肝臓損傷及びＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行の有意な減少をもたらす有効性について評価される。これらの研究のための３つの抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ用量は、肺高血圧症及び放射線線維症の適応症のためのいくつかの前臨床試験に基づいて選択され、ＮＡＳＨ患者におけるＳＴＴＲ第ＩＩ相試験及び第１Ｂ相臨床試験を可能にする、効果的にＮＡＳＨ進行を減少させるＡＬＴ－１００ｍＡｂの最適な投与量を決定することに導いた。加えて、本研究は、このＳＴＡＭモデルにおける２つの時間的ＮＡＳＨ段階に対処し、ＮＡＳＨ標的化戦略として第５週に抗ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ送達を開始し、線維症標的化戦略として第８週に別個の群に分ける。
研究（１）の理論的根拠：ＮＡＭＰＴは、ＮＡＳＨの前臨床マウスモデル（ＳＴＡＭ）を利用して、ＮＡＳＨにおいて非常にｄｒｕｇｇａｂｌｅな標的として試験される。具体的には、生後２日後のマウスに低用量のＳＴＺを注射してｂ細胞損傷を誘導し、その後４週齢で高食事給餌を行う。このモデルは、ＮＡＦＬＤ進行の全スペクトルを発達させ、単純な脂肪症はＳＴＺ後５週目、ＮＡＳＨは７週目、線維症は９週目に観察される。本開示には示されていないが、ＨＣＣは、ＳＴＺ後１６週までに発症する。予備データ（図１０Ａ～１０Ｅ、及び１１Ａ～１１Ｂ）は、このマウスＳＴＡＭモデルにおけるＮＡＳＨの発症及びＮＡＳＨの低減における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの予備的成功を示す。研究（１）（すなわち、ＮＡＳＨのマウスＳＴＡＭモデルにおけるＡＬＴ－１００の有効性及び最適な投与／タイミングを評価するため）について、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂの毎週の腹腔内注射は、肝臓損傷及びＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行の有意な減少をもたらす有効性について評価される。これらの研究のための３つの抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ用量は、肺高血圧症及び放射線線維症の適応症のためのいくつかの前臨床試験に基づいて選択され、ＮＡＳＨ患者におけるＳＴＴＲ第ＩＩ相試験及び第１Ｂ相臨床試験を可能にする、効果的にＮＡＳＨ進行を減少させるＡＬＴ－１００ｍＡｂの最適な投与量を決定することに導いた。加えて、本研究は、このＳＴＡＭモデルにおける２つの時間的ＮＡＳＨ段階に対処し、ＮＡＳＨ標的化戦略として第５週に抗ＮＡＭＰＴ中和ｍＡｂ送達を開始し、線維症標的化戦略として第８週に別個の群に分ける。
【0149】
試験（１）実験設計及び方法：８群のＣ５７ＢＬ／６マウス（各群２０匹）を、出生２日後に単回の皮下注射を介して２００μｇのＳＴＺに曝露し、続いて４週齢でＨＦ給餌する。Ｉ群は、５週目から毎週、ＩＰ送達対照ＩｇＧ１ Ａｂ １．０ｍｇ／ｋｇを受ける。ＶＩＩＩ群は、８週目から毎週、ＩＰ送達対照ＩｇＧ１ Ａｂ １．０ｍｇ／ｋｇを受ける。ＩＩ及びＶ群は、第５週（ＩＩ群）または第８週（Ｖ群）から０．４ｍｇ／ｋｇのＡＬＴ－１００ｍＡｂを受ける。ＩＩＩ及びＶＩ群は、第５週（ＩＩＩ群）または第８週（ＶＩ群）に１．０ｍｇ／ｋｇのＡＬＴ－１００ｍＡｂを受ける。最後に、ＩＶ及びＶＩＩ群は、第５週（ＩＶ群）または第８週（ＶＩＩ群）に４．０ｍｇ／ｋｇのＡＬＴ－１００ｍＡｂを受ける。全ての動物は２０週目に屠殺される。臨床的に同等なエンドポイント及びｍＡｂ有効性の読み取り値は、ｉ）ＮＡＦＬＤ活動スコア（ＮＡＳ）の肝臓Ｈ＆Ｅ組織学的分析、ｉｉ）肝臓対体重比、ｉｉｉ）血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ及びコレステロール、ｉｖ）肝臓トリグリセリド及びコレステロール、ｖ）コラーゲン染色の面積％に対するシリウス染色（線維症スコア）、及びｖｉ）死亡率（ＳＴＺ／ＨＦ、ＩｇＧ１群では、１６週目で３０％、２０週目で４５％と予想される）の減少となる。予備的研究に基づくと、これらの実験は、本研究者らは介入ごとに２０匹のラットを利用していることを考えると、０．１のアルファにおいて９０％の信頼性で線維症指数の４０％の低下が検出されるはずである。
【0150】
研究（１）予想される結果、予想し得ない欠陥及び代替案：ＨＦ摂食を伴うＳＴＺチャレンジされたマウスはＮＡＳＨを発症し、未治療のマウスは２０週間以内にＮＡＳＨの進行と死亡率を示し始めるはずである。ＩｇＧ１対照と比較して、ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ開始のタイミングに依存する潜在的な逆転を伴うＮＡＳＨ進行を有意かつ用量依存的に減少させるはずである。マイルストーン：Ｍ１）ＳＴＺ／ＨＦマウスモデルでは、抗ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、ＮＡＦＬＤの重症度／進行の用量依存的な減少を例証する。Ｍ２）最適な抗ＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂ用量が確立される。Ｍ３）早期のｅＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂ介入の重要性が確立される。
【0151】
研究（２）－ＮＡＳＨのラットＡＭＬＮモデル（ＨＦＨＣＤ）における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ用量の最適化
研究（２）の理論的根拠：糖尿病と肥満（ＮＡＦＬＤの２つの主要なリスク因子）の両方を組み込んだ研究（１）に記載されているマウスＳＴＡＭモデル（ＳＴＺ／ＨＦ）における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ研究を補完するために、研究（２）は、前臨床研究のための最良な食事誘発性ＮＡＳＨモデルの１つである、食事誘導性ラットモデルであるＡＭＬＮ食（４０％ｋｃａｌ脂肪（主にＰｒｉｍｅｘ水添植物油ショートニング、すなわちトランス脂肪）、２０％ｋｃａｌフルクトース、及び２％ｗ／ｗコレステロール（ＨＦＨＣＤ）からなる）を利用する。ＨＦＨＣＤ動物は、１６～２０週間にわたってＮＡＦＬＤの全スペクトル（脂肪症、ＮＡＳＨ、及び肝線維症）をカバーするヒトＮＡＦＬＤに見られる代謝特徴を示す（Ｃｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，”Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３０５：Ｇ４８３－４９５（２０１３）、Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｂｅｓｅ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ－ｔｒａｃｋｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ｌｉｖｅｒ ｂｉｏｐｓｙ，”Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，８：６７３－６８４（２０１６）、Ｔｒｅｖａｓｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｍ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ，ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ，”Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３０２：Ｇ７６２－７７２（２０１２）、Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｙｉｎｚｈｉｈｕａｎｇ ｏｎ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｈｉｇｈ－ｆａｔ，ｈｉｇｈ－ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｄｉｅｔ．Ｊ Ｄｉｇ Ｄｉｓ，２１：１７９－１８８（２０２０））。ＡＭＬＮ／ＨＦＨＣＤモデル（研究（２））ではＮＡＦＬＤの様々な段階が遥かに遅く発症するが、研究（１）のＳＴＡＭ（ＳＴＺ／ＨＦ）モデルと比較して、有毒な化学物質の注射なしでヒトの疾病を忠実に模倣する最新のモデルの１つである。このＡＭＬＮモデル（ＨＦＨＣＤ）は、ＨＦＨＳモデル（図１０Ｃ～１０Ｄ）よりも優れており、より大きな小葉炎症及びより重度のＮＡＳＨを示す。研究（１）と同様に、研究（２）は、肝臓損傷の有意な減少を提供する、毎週の抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ腹腔内注射の有効性を評価するこれらの研究は、ＮＡＳＨの進行を効果的に減少させるためのＡＬＴ－１００ｍＡｂの最適用量の決定を可能にし、ＮＡＳＨ患者におけるＳＴＴＲ第ＩＩ相試験及び第１Ｂ相臨床試験を可能にする。
研究（２）の理論的根拠：糖尿病と肥満（ＮＡＦＬＤの２つの主要なリスク因子）の両方を組み込んだ研究（１）に記載されているマウスＳＴＡＭモデル（ＳＴＺ／ＨＦ）における抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ研究を補完するために、研究（２）は、前臨床研究のための最良な食事誘発性ＮＡＳＨモデルの１つである、食事誘導性ラットモデルであるＡＭＬＮ食（４０％ｋｃａｌ脂肪（主にＰｒｉｍｅｘ水添植物油ショートニング、すなわちトランス脂肪）、２０％ｋｃａｌフルクトース、及び２％ｗ／ｗコレステロール（ＨＦＨＣＤ）からなる）を利用する。ＨＦＨＣＤ動物は、１６～２０週間にわたってＮＡＦＬＤの全スペクトル（脂肪症、ＮＡＳＨ、及び肝線維症）をカバーするヒトＮＡＦＬＤに見られる代謝特徴を示す（Ｃｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，”Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３０５：Ｇ４８３－４９５（２０１３）、Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｂｅｓｅ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ－ｔｒａｃｋｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ｌｉｖｅｒ ｂｉｏｐｓｙ，”Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，８：６７３－６８４（２０１６）、Ｔｒｅｖａｓｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｍ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ，ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ，”Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３０２：Ｇ７６２－７７２（２０１２）、Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｙｉｎｚｈｉｈｕａｎｇ ｏｎ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｈｉｇｈ－ｆａｔ，ｈｉｇｈ－ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｄｉｅｔ．Ｊ Ｄｉｇ Ｄｉｓ，２１：１７９－１８８（２０２０））。ＡＭＬＮ／ＨＦＨＣＤモデル（研究（２））ではＮＡＦＬＤの様々な段階が遥かに遅く発症するが、研究（１）のＳＴＡＭ（ＳＴＺ／ＨＦ）モデルと比較して、有毒な化学物質の注射なしでヒトの疾病を忠実に模倣する最新のモデルの１つである。このＡＭＬＮモデル（ＨＦＨＣＤ）は、ＨＦＨＳモデル（図１０Ｃ～１０Ｄ）よりも優れており、より大きな小葉炎症及びより重度のＮＡＳＨを示す。研究（１）と同様に、研究（２）は、肝臓損傷の有意な減少を提供する、毎週の抗ＮＡＭＰＴ ｍＡｂ腹腔内注射の有効性を評価するこれらの研究は、ＮＡＳＨの進行を効果的に減少させるためのＡＬＴ－１００ｍＡｂの最適用量の決定を可能にし、ＮＡＳＨ患者におけるＳＴＴＲ第ＩＩ相試験及び第１Ｂ相臨床試験を可能にする。
【0152】
研究（２）実験設計及び方法：合計８群（Ｉ～ＶＩＩＩ群）のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（各群２０匹のラット）に、４０％の脂肪（約１８％のトランス脂肪）、２２％のフルクトース、及び２％のコレステロールを含む食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ、カタログ番号Ｄ０９１００３０１）を給餌する。対照ラットの２つの群（ＩＸ～Ｘ群）は、同じ会社からの正常な脂肪の対照食餌（カタログ番号Ｄ０９１００３０４）で維持される。１２週目から開始して、Ｉ～ＩＶ群は、対照ＩｇＧ１ Ａｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（Ｉ群）、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ（０．４ｍｇ／ｋｇ）（ＩＩ群）、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（ＩＩＩ群）、またはＡＬＴ－１００ｍＡｂ（４．０ｍｇ／ｋｇ）（ＩＶ群）のいずれかのＩＰ送達を毎週受ける。１６週目から開始して、Ｖ～ＶＩＩＩ群は、対照ＩｇＧ１ Ａｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（Ｖ群）、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ（０．４ｍｇ／ｋｇ）（ＶＩ群）、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（ＶＩＩ群）、またはＡＬＴ－１００ｍＡｂ（４．０ｍｇ／ｋｇ）（ＶＩＩＩ群）のいずれかのＩＰ送達を毎週受ける。正常な食物を受けた対照群（ＩＸ～Ｘ群）は、１２週目から、対照ＩｇＧ１ Ａｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（ＩＸ群）、またはＡＬＴ－１００ｍＡｂ（１．０ｍｇ／ｋｇ）（Ｘ群）のいずれかのＩＰ送達を毎週受ける。全ての動物は３０週目に屠殺される。臨床的に同等なエンドポイント及びｍＡｂの効力の読み取り値は、ｉ）ＮＡＦＬＤ活動スコア（ＮＡＳ）の肝臓Ｈ＆Ｅ組織学的分析、ｉｉ）肝臓対体重比、ｉｉｉ）血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ及びコレステロール、ｉｖ）肝臓トリグリセリド及びコレステロール、ｖ）コラーゲン染色の％面積に対するシリウス染色（線維症スコア）の減少である。本研究者らの予備的研究に基づくと、これらの実験は、介入ごとに２０匹のラットを利用していることを考えると、０．１のアルファで９０％の信頼性で線維症指数の４０％の低下が検出されるはずである。
【0153】
研究（２）予想される結果、潜在的な予想し得ない欠陥及び代替案：ＮＡＳＨの発症は、ＩｇＧ１対照と比較して、ＡＬＴ－１００ｍＡｂ処置で用量依存的に低減されるはずである。マイルストーン：Ｍ４）ＡＭＬＮ（ＨＦＨＣＤ）マウスモデルでは、抗ＮＡＭＰＴ中和ＡＬＴ－１００ｍＡｂは、ＮＡＳＨの重症度／進行の用量依存的な減少を例証する。Ｍ５）ＡＭＬＮ（ＨＦＨＣＤ）ラットモデルにおける最適なＮＡＳＨ低減ＡＬＴ－１００ｍＡｂ用量を決定する。Ｍ６）ラットＡＭＬＮ（ＨＦＨＣＤ）モデルにおいて早期のｅＮＡＭＰＴ ＡＬＴ－１００ｍＡｂ介入の重要性が確立される。
【0154】
統計上の考慮事項
２０匹のマウス／群の試料サイズの妥当性は、以下に基づく：
（ｉ）少なくとも８０％の予想される生着率（ｎ＝１６ ＮＡＳＨ／群）。ＮＡＳＨの存在は、各マウスについて線維症容積対時間の混合線形モデルを適合させることによって分析される。結果として生じる傾き（線維化率）は、階乗モデルを使用して比較される。
（ｉｉ）「非治療」応答と「治療」応答との比較。８０％の検出力により、両側アルファが０．０５であると仮定して、２つの群間の平均（差をＳＤで割ったもの）間で１．３２５の標準化された減少を検出することができる。統計学的検定は、ボンフェローニ多重比較検定を使用して実施する。Ｐ値０．０５は統計的に有意とみなされる。
２０匹のマウス／群の試料サイズの妥当性は、以下に基づく：
（ｉ）少なくとも８０％の予想される生着率（ｎ＝１６ ＮＡＳＨ／群）。ＮＡＳＨの存在は、各マウスについて線維症容積対時間の混合線形モデルを適合させることによって分析される。結果として生じる傾き（線維化率）は、階乗モデルを使用して比較される。
（ｉｉ）「非治療」応答と「治療」応答との比較。８０％の検出力により、両側アルファが０．０５であると仮定して、２つの群間の平均（差をＳＤで割ったもの）間で１．３２５の標準化された減少を検出することができる。統計学的検定は、ボンフェローニ多重比較検定を使用して実施する。Ｐ値０．０５は統計的に有意とみなされる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図12D】
【図13】
【図14】
【配列表】
【国際調査報告】