特表 2023-537115 抗ＣＤ７３抗体を使用する癌処置方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-30

(54)【発明の名称】抗ＣＤ７３抗体を使用する癌処置方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230823BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230823BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20230823BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230823BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20230823BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230823BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20230823BHJP

   C07K 16/30 20060101ALN20230823BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61P35/00

A61P1/00

A61P43/00 121

A61K31/337

A61K45/00

C07K16/28 ZNA

C07K16/30

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023509614

(86)(22)【出願日】2021-08-06

(85)【翻訳文提出日】2023-03-28

(86)【国際出願番号】 EP2021072020

(87)【国際公開番号】W WO2022033978

(87)【国際公開日】2022-02-17

(31)【優先権主張番号】63/065,085

(32)【優先日】2020-08-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】506000184

【氏名又は名称】イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＮＡＴＥ ＰＨＡＲＭＡ ＰＨＡＲＭＡ Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100157956

【弁理士】

【氏名又は名称】稲井 史生

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(72)【発明者】

【氏名】ゴーティエ，ローラン

(72)【発明者】

【氏名】パトゥレル，カリーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ペロ，イヴァン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA10

4C084NA14

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C085GG08

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA10

4C086NA14

4C086ZA66

4C086ZB26

4C086ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA21

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、癌の処置のための方法及び組成物に関する。具体的には、本開示は、抗ＣＤ７３抗体を投与する方法、及び個体の癌、好ましくは、ＨＥＲ２陽性の胃腺癌又は胃食道接合部腺癌の処置のために抗ＣＤ７３抗体を使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体のＨＥＲ２陽性の胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を処置する方法であって、前記個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合しその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を投与することを含む方法。

【請求項2】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体との組合わせ処置で使用する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

個体の胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を処置する方法であって、前記個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合しその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体と、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体とのそれぞれの治療的有効量を投与することを含む方法。

【請求項4】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、化学療法剤との組合わせ処置で使用する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記処置は、（ｉ）前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、２週間毎又は３週間毎に投与すること、（ｉｉ）前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、１週間毎又は３週間毎に投与することを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記処置は、（ｉ）前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、２週間毎又は３週間毎に投与すること、（ｉｉ）前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、３週間毎に投与すること、及び（ｉｉｉ）パクリタキセルを、３週間毎に投与することを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の最初の３週間毎の投与の１週間前に、ヒトＨＥＲ２タンパク質抗体に結合する抗体の負荷用量を投与する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記個体は、表面でＨＥＲ２を発現している腫瘍細胞を特徴とする癌を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

それを必要としている個体のＨＥＲ２陽性癌を処置する方法であって、前記個体に、（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合し且つその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体と、（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体とのぞれぞれの治療的有効量を投与することを含む方法。

【請求項10】

前記ＨＥＲ２陽性癌は、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記個体に、化学療法剤の治療的有効量を投与することをさらに含み、任意選択により、前記化学療法剤はタキサンであり、任意選択によりパクリタキセルである、請求項８又は９に記載の方法。

【請求項12】

前記個体は、ＩＨＣ又はＦＩＳＨで決定した場合にＨＥＲ２陽性である癌を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記処置は、（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、２週間毎又は３週間毎に投与すること、（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、１週間毎又は３週間毎に投与することを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記処置は、（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、２週間毎又は３週間毎に投与すること、（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、３週間毎に投与すること、及び（ｉｉｉ）化学療法剤を投与することを含み、任意選択により、前記化学療法剤はタキサンであり、任意選択によりパクリタキセルである、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の複数回の投与、及びヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の複数回の投与を含み、前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の複数回の投与のそれぞれを、抗ＣＤ７３抗体の投与後に行なう、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の複数回の投与、及び化学療法剤の複数回の投与を含み、前記化学療法剤の投与のそれぞれを、抗ＣＤ７３抗体の投与後に行なう、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の複数回の投与のそれぞれを、前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の投与後１時間～約１週間で行なう、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の複数回の投与、及びヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の複数回の投与を含み、前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の投与のそれぞれを、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の投与と同日又はヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の投与の７日後のいずれかで行なう、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記化学療法剤の複数回の投与のそれぞれを、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体後１時間～約１週間で行なう、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の複数回の投与、及び化学療法剤の複数回の投与を含み、前記化学療法剤の複数回の投与のそれぞれを、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の投与と同日又はヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の投与の７日後のいずれかで行なう、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

個体の癌を処置する方法であって、前記個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合し且つその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を投与することを含み、前記抗体は、配列番号４３、４４、４５、又は４６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する軽鎖改変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗体又は抗体断片であり、前記抗体を、前記個体に、（ａ）１５００～３０００ｍｇの固定用量（体重若しくは体表面積を問わない）で、任意選択により１５００ｍｇの用量で、任意選択により２４００ｍｇの用量で、２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの固定用量で、任意選択により２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、若しくは３０００ｍｇの用量で、３週間毎に投与する、
方法。

【請求項22】

前記処置は、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の複数回の投与、化学療法剤の複数回の投与、及びヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の複数回の投与を含み、抗ＨＥＲ２抗体のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を投与し、任意選択により、さらには、化学療法剤のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を投与する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記処置は、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、（ａ）１５００～３０００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、３～６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で静脈内投与により３週間毎に投与するか、又は６００ｍｇの用量で皮下投与により３週間毎に投与すること、
並びに任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記処置は、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、（ａ）１５００～３０００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、８ｍｇ／ｋｇの負荷用量で投与し、続いて１週間後に、６ｍｇ／ｋｇ体重の処置用量で３週間毎に投与すること、
並びに任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

個体のＨＥＲ２陽性癌を処置する方法であって、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、（ａ）１５００～３０００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、３～６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で静脈内投与により３週間毎に投与するか、又は６００ｍｇの用量で皮下投与により３週間毎に投与すること、
並びに任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む方法。

【請求項26】

抗ＨＥＲ２抗体の最初の３週間毎の投与の１週間前に、抗ＨＥＲ抗体の負荷用量を投与する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の最初の投与（例えば負荷用量）と、パクリタキセルの最初の投与とを、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の最初の用量の２週間後に行なう、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

個体のＨＥＲ２陽性癌を処置する方法であって、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合し且つその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を、（ａ）１５００～３０００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、８ｍｇ／ｋｇの負荷用量で投与し、続いて１週間後に、６ｍｇ／ｋｇ体重の処置用量で３週間毎に投与すること、
並びに、任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む方法。

【請求項29】

前記処置は、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、（ａ）１５００若しくは２４００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、３～６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で３週間毎に投与すること
並びに任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記処置は、前記個体に、
（ｉ）ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を、（ａ）１５００若しくは２４００ｍｇの用量で２週間毎に投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの用量で３週間毎に投与すること、
及び
（ｉｉ）ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を、８ｍｇ／ｋｇの負荷用量で投与し、続いて１週間後に、６ｍｇ／ｋｇ体重の処置用量で３週間毎に投与すること、
並びに任意選択により、
（ｉｉｉ）パクリタキセルを、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で３週間毎に投与すること
を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の最初の投与（例えば負荷用量）と、パクリタキセルの最初の投与とを、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の最初の用量の２週間後に行なう、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体、及び／又は化学療法剤を、静脈内投与する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体と、前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体とは、個別投与用に製剤化されている、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記ＨＥＲ２陽性癌は、乳癌、胃腺癌、又は胃食道接合部腺癌である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記個体は、化学療法剤による一連の治療を過去に受けている、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記個体は、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体による一連の治療を過去に受けている、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体は、変異Ａ９９Ｓ、Ｅ１２９Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｅ１３４Ｎ、Ａ１３５Ｓ、及びＫ１３６Ａ（配列番号１に関する）を含む変異体ＣＤ７３ポリペプチドに対する結合が、それぞれの場合において、前記抗体と、配列番号１のアミノ鎖配列を含む野生型ＣＤ７３ポリペプチドとの間の結合と比較して低下している、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗体若しくは抗体断片であるか、又はその機能保存変異体である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗体又は抗体断片である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

進行性の胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を処置する方法であって、必要な患者に、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の有効量を、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体の有効量と同時に投与するか、別々に投与するか、又は連続的に組み合わせて投与することを含む方法。

【請求項41】

前記ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖とを含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖と、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖とを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、任意の図面を含む、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる２０２０年８月１３日提出の米国仮特許出願第６３／０６５，０８５号明細書の利益を主張する。

【0002】

配列表の参照
本願は、電子方式の配列リストと共に提出されている。本配列リストは、２０２１年８月５日作成の「ＣＤ７３－９ ＰＣＴ ＳＥＱ ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５」という名称で提供されており、サイズは７９Ｋｏである。本配列リストの電子方式の情報は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

【0003】

本開示は、癌の処置のための方法及び組成物に関する。具体的には、本開示は、抗ＣＤ７３抗体を投与する方法、及び癌の処置のために抗ＣＤ７３抗体を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

ＣＤ７３（エクト－５’－ヌクレオチダーゼ）は、７０ｋＤａのグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型タンパク質であり、通常、内皮細胞及び造血細胞のサブセットに発現する。ＣＤ７３は、ＣＤ３９と共にアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の代謝を調節する。ＣＤ３９（ＮＴＰＤａｓｅ－１）は、ＡＴＰをＡＭＰに変換し、微量のＡＤＰのみが放出される一方、ＣＤ７３は、ＡＭＰからアデノシンへの変換を触媒する。

【0005】

アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）並びにその代謝物であるＡＭＰ及びアデノシンは、細胞代謝、シグナル伝達及び免疫恒常性において重要な役割を有する。細胞死又は細胞ストレスに応答した細胞外アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の放出は、免疫応答を活性化するように作用する。しかし、その代謝物であるアデノシンは、免疫抑制作用を有する。細胞外アデノシンは、癌性組織に蓄積し、腫瘍の免疫回避の重要なメカニズムを構成する。他の効果の中でも、腫瘍由来のアデノシンは、アデニル酸シクラーゼを活性化するＡ２Ａ受容体を介して浸潤性エフェクターＴ細胞を大幅に阻害する。

【0006】

ＣＤ７３発現は、白血病、膀胱癌、神経膠腫、神経膠芽腫、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、甲状腺癌、食道癌及び乳癌を含む様々な腫瘍細胞で報告されている。ＣＤ７３発現は、黒色腫及び乳癌の転移促進性の表現型とも関連付けられている。マウスＣＤ７３に結合する抗体による治療は、マウスの乳房腫瘍の成長及び転移を阻害できることが報告されている（非特許文献１）。Ａ２Ａ受容体の遺伝子欠失は、Ｔ細胞依存性腫瘍拒絶反応を誘発できることが示されている（非特許文献２）。ｓｉＲＮＡを使用したノックダウン又は腫瘍細胞でのＣＤ７３の過剰発現は、腫瘍の成長と転移を調節することができる（非特許文献３；非特許文献１；非特許文献４）。ＣＤ７３－／－マウスは、移植及び自然発生の腫瘍から保護されている（非特許文献５）。ヒトでは、ＣＤ７３の高発現がトリプルネガティブ乳癌の予後不良であることが示されていた（非特許文献６）。

【0007】

抗ＣＤ７３抗体の開発は、複雑である。ＣＤ７３は腫瘍細胞により発現されるが、免疫系の様々な細胞（特に、ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞、並びにＢ細胞）によっても発現される。さらに複雑する要因の１つは、文献で説明されている抗体の多くは、その活性及び作用様式が大きく異なるということである。ＣＤ７３に関する初期の報告の多くでは、特異性を欠いている場合がある及び／又はインビボ試験にとって過度に毒性の場合がある低分子阻害剤が使用されていた。抗７３抗体の多くの報告は、一般的に、Ｆｃγ受容体が結合可能なマウスアイソタイプのものであり、Ｆｃ媒介性の効果からあらゆる潜在的な遮断効果を分離することが困難となっている。より近年では、様々な治療用抗ＣＤ７３抗体が報告されている。これらの一部は、ＣＤ７３の細胞内内在化を引き起こすことにより機能しており、他は、様々な程度の有効性で、さらには可溶性ＣＤ７３タンパク質を阻害する能力の有するか又は有することなく、膜結合ＣＤ７３を阻害する。

【0008】

西欧での胃癌患者の約１２～２０％は、ＨＥＲ２癌遺伝子を過剰発現している（非特許文献７、非特許文献８）。さらには、化学療法と組み合わされたトラスツズマブは、進行性の転移性ＨＥＲ２陽性疾患の患者における選択肢と考えられている。しかしながら、乳癌とは異なり、胃癌では、トラスツズマブの導入により疾患の自然史が変化することはなく、生存期間の中央値は、ほとんど１年を超えなかった。したがって、胃癌の処置に最大限の有効性を付与する改善された処置レジメンが目的となっている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｓｔａｇｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０４：１５４７－１５５２

【非特許文献2】Ｏｈｔａ，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０３：１３１３２－１３１３７

【非特許文献3】Ｂｅａｖｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：１４７１１－７１６

【非特許文献4】Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０：２２４５－５５

【非特許文献5】Ｓｔａｇｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７１：２８９２－２９００

【非特許文献6】Ｌｏｉ ｅｔ ａｌ（２０１３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：１１０９１－１１０９６

【非特許文献7】Ｊａｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．．；Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ ２０１０

【非特許文献8】Ｔａｎｎｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．；Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２００５

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

ある実施形態において、本明細書で提供されるのは、表面でＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞を特徴とするＨＥＲ２陽性癌（任意選択により、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌）の処置のための、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体の使用である。

【0011】

ある実施形態において、本明細書で提供されるのは、必要な個体の胃癌（例えば、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌）の増殖を減少させるか又は阻害する方法であって、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体と、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体とのそれぞれの治療的有効量を投与することを含む方法である。任意選択により、この方法は、この個体に、化学療法剤の治療的有効量を投与することをさらに含む。ある実施形態において、この癌は、ＨＥＲ２陽性癌である。ある実施形態において、この腫瘍又は癌は、表面でＨＥＲ２タンパク質を発現する腫瘍細胞を特徴とする。ある実施形態において、この腫瘍又は癌は、表面でＣＤ７３タンパク質を発現する細胞を含む腫瘍間質を特徴とする。

【0012】

本明細書でさらに提供されるのは、必要な個体の癌（特に胃癌）を処置する方法であって、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体と、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体とのそれぞれの治療的有効量を投与することを含む方法である。任意選択により、この方法は、この個体に、化学療法剤の治療的有効量を投与することをさらに含む。ある実施形態において、この腫瘍又は癌は、表面でＨＥＲ２タンパク質を発現する腫瘍細胞を特徴とする。ある実施形態において、この腫瘍又は癌は、表面でＣＤ７３タンパク質を発現する細胞を含む腫瘍間質を特徴とする。

【0013】

本明細書でさらに提供されるのは、癌（特に胃癌）を有する個体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体による処置に対して感作させる方法であって、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体の治療的有効量を投与することを含む方法である。任意選択により、この方法は、この個体に、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の治療的有効量を投与することをさらに含む。ある実施形態において、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体と同日に投与し、及び／又はこの抗体の前に投与する。

【0014】

本明細書でさらに提供されるのは、癌（特に胃癌）を有する個体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体及び／又は化学療法剤による処置に対して感作させる方法であって、この個体は、化学療法剤及びヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体で処置されており（又は処置される予定であり）、この方法は、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を投与とすることを含む、方法である。ある実施形態において、この方法は、この個体に、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体及び化学療法剤を投与することをさらに含む。ある実施形態において、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体の投与と同日に投与し、及び／又はこの抗体の投与の前に投与し、任意選択により、さらには、化学療法剤の投与と同日に投与し、及び／又はこの化学療法剤の投与の前に投与する。

【0015】

任意の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体の最初の投与を、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与の前に行なう。

【0016】

ある実施形態において、処置は、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与を含み、ＣＤ７３抗体のそれぞれの投与を、抗ＨＥＲ２抗体の投与の１時間～７日前に行なう。ある実施形態において、処置は、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与を含み、抗ＨＥＲ２抗体のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、抗ＣＤ７３抗体を投与する。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体の投与と同日（例えば、抗ＨＥＲ２抗体の１～１２時間前）又は抗ＨＥＲ２抗体の投与に先行して１週間以内のいずれかで投与する。ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与のそれぞれを、抗ＨＥＲ２抗体の投与と同日（例えば、抗ＨＥＲ２抗体の１～１２時間前）又は抗ＨＥＲ２抗体の投与の約１週間（例えば７日）前のいずれかで行なう。ある実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与のそれぞれを、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日（例えば、抗ＣＤ７３抗体の投与の１～１２時間後）又は抗ＣＤ７３抗体の投与の約１週間（例えば７日）後のいずれかで行なう。

【0017】

化学療法剤を含む組合わせ処置の任意の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体の最初の投与を、化学療法剤の最初の投与の前（例えば、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与のさらに前）行なうように指定し得る。

【0018】

ある実施形態において、処置は、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与、化学療法剤の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与を含み、抗ＣＤ７３抗体のそれぞれの投与を、抗ＨＥＲ２抗体の投与の１時間～７日間前に行ない、さらには、抗ＣＤ７３抗体のそれぞれの投与を、化学療法剤の投与の１時間～７日間前に行なう。ある実施形態において、処置は、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与、化学療法剤の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与を含み、抗ＨＥＲ２抗体のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、抗ＣＤ７３抗体を投与し、化学療法剤のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、抗ＣＤ７３抗体を投与する。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、化学療法剤の投与と同日（例えば、化学療法剤の１～１２時間前）又は化学療法剤の投与に先行して１週間以内のいずれかで投与する。ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与のそれぞれを、化学療法剤の投与と同日（例えば、化学療法剤の１～１２時間前）又は化学療法剤の投与の約１週間（例えば７日）前のいずれかで行なう。ある実施形態において、化学療法剤の複数回の投与のそれぞれ及び抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与のそれぞれを、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日（例えば、抗ＣＤ７３抗体の投与の１～１２時間後）又は抗ＣＤ７３抗体の投与の約１週間（例えば７日）後のいずれかで行なう。

【0019】

任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の複数回の投与を、同日に行なう。ある実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に皮下投与し、抗ＣＤ７３抗体を、３週間毎に投与し、抗ＨＥＲ２抗体及び抗ＣＤ７３抗体を、同日に投与する。ある実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に静脈内投与し、抗ＣＤ７３抗体を、３週間毎に投与し、抗ＨＥＲ２抗体及び抗ＣＤ７３抗体を、同日に投与する。

【0020】

ある実施形態において、化学療法剤の複数回の投与、及び抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与を、それぞれ、抗ＨＥＲ２抗体及び化学療法剤を同日に投与しないように（例えば、抗ＨＥＲ２抗体及び化学療法の投与は、少なくとも１週間離れている）、並びに抗ＨＥＲ２抗体のそれぞれの投与、及び化学療法剤のそれぞれの投与に１時間～７日間先行して、抗ＣＤ７３抗体を投与するように、ずれたスケジュールで３週間毎に投与する。

【0021】

任意の実施形態において、腫瘍又は癌は、表面でＨＥＲ２タンパク質を発現する（例えば過剰発現する）腫瘍細胞を特徴とする。ある実施形態において、腫瘍又は癌は、表面でＣＤ７３タンパク質を発現する細胞を含む腫瘍間質を特徴とする。

【0022】

任意の実施形態において、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体は、ヒトＣＤ７３ポリペプチドに特異的に結合し得る。ある実施形態において、この抗体は、抗体断片である。ある実施形態において、この抗体は、完全長抗体である。ある実施形態において、この抗体は、可溶性ヒトＣＤ７３ポリペプチドの５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し得る。ある実施形態において、この抗体は、二価でＣＤ７３ポリペプチド二量体に結合し、例えば、この抗体は、ＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して１０倍高いモル過剰で提供される場合には、可溶性ヒト二量体ＣＤ７３ポリペプチドの５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し得る。

【0023】

ある実施形態において、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体は、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、２、及び３領域を含む。ある実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番に従って決定されている。ある実施形態において、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体は、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域を含む。

【0024】

ある実施形態において、化学療法剤は、腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する薬剤であり、例えば、化学療法剤は、免疫原性の癌細胞死を誘発し得る。ある実施形態において、化学療法剤は、タキサンであり、例えば、パクリタキセル又はその類似体である。ある実施形態において、化学療法剤は、カンプトテシン類似体又はその誘導体であり、例えば、ＳＮ－３８、エキサテカン、又はエキサテカン誘導体である（例えば、ＤＸ－８９５１誘導体、ＤＸｄ；Ｏｇｉｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １０７（２０１６）１０３９－１０４６を参照されたい）。ある実施形態において、化学療法剤（例えばパクリタキセル）を、（別の薬剤（例えば、抗体又は活性剤）にコンジュゲートしていないか又は共有結合していない）遊離化学療法剤として投与する。別の実施形態において、化学療法剤（例えば、カンプトテシン類似体又は誘導体）を、この化学療法剤が、ＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体にコンジュゲートしている（例えば共有結合している）、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）として投与する。

【0025】

ある態様において、提供されるのは、ＨＥＲ２陽性癌（例えば胃癌）を有する個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体、及びヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体を投与し、任意選択により、さらには化学療法剤（例えばタキサン）と組み合わせて投与することを含む処置である。ある実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、腫瘍細胞の表面でのＨＥＲ２発現を一般的に特徴とすることが既知の癌である。ある実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、腫瘍中又は腫瘍環境中（例えば、腫瘍細胞中又は腫瘍間質組織中における細胞中）での可溶性ＣＤ７３タンパク質及び／又はＣＤ７３発現細胞の存在を一般的に特徴とすることが既知の癌である。ある実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、例えば、抗ＨＥＲ２抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）で評価した場合での、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞の存在を特徴としており、任意選択により、この腫瘍は、基準（例えば健康な組織）と比較した数若しくはＨＥＲ２発現細胞の頻度が増加しており、及び／又は基準（例えば健康な組織）と比較してＨＥＲ２染色強度が強い。ある実施形態において、癌は、例えば抗ＣＤ７３抗体を使用する免疫組織化学で評価した場合での、ＣＤ７３発現腫瘍細胞及び／又は腫瘍間質組織中でのＣＤ７３発現細胞を特徴としており、任意選択により、この腫瘍は、基準（例えば健康な組織）と比較した数若しくはＣＤ７３発現細胞の頻度が増加しており、及び／又は基準（例えば健康な組織）と比較してＨＥＲ２染色強度が強い。

【0026】

ある実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌を有する個体を、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体、及び腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する化学療法剤（特に、免疫原性の癌細胞死を誘発する薬剤又は処置（例えば、タキサン剤、パクリタキセル））で処置する。

【0027】

別の態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＥＲ２陽性胃癌を有する個体を処置する方法であって、このＨＥＲ２陽性胃癌は、ＨＥＲ２発現細胞を含むと決定された腫瘍を特徴としており、この方法は、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してこのタンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害する手段（又はそのような手段を含む医薬品）を投与することを含む、方法である。任意選択により、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してこのタンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害し得る抗体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体と組み合わせて投与し、任意選択により、さらには、腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する化学療法剤（特に、免疫原性の癌細胞死を誘発する薬剤又は処置（例えば、タキサン剤、パクリタキセル））と組み合わせて投与する。

【0028】

別の態様において、本明細書で提供されるのは、ＣＤ７３に結合する抗体で、癌を有する個体を処置する方法における、ＨＥＲ２発現細胞を含むと決定された胃腫瘍を特徴とするＨＥＲ２陽性胃癌を有する個体を同定すること、及びこの個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してこのタンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害し得る抗体を投与することを含む改善である。任意選択により、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してこのタンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害し得る抗体を、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体と組み合わせて投与し、任意選択により、さらには、腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する化学療法剤（特に、免疫原性の癌細胞死を誘発する薬剤又は処置（例えば、タキサン剤、パクリタキセル））と組み合わせて投与する。

【0029】

別の態様において、本明細書で提供されるのは、ＣＤ７３に結合する抗体で、癌を有する個体を処置する方法における、ＨＥＲ２発現細胞を含むと決定された胃腫瘍を特徴とするＨＥＲ２陽性胃癌を有する個体を同定すること、及びこの個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してこのタンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害し得る抗体に加えて、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体、及び任意選択により、さらには、腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する化学療法剤（特に、免疫原性の癌細胞死を誘発する薬剤又は処置（例えば、タキサン剤、パクリタキセル））を投与することを含む改善である。

【0030】

本明細書の任意の実施形態において、ＨＥＲ２陽性胃癌を有する個体を同定することは、ＩＨＣ及び／又はＦＩＳＨで決定した場合に生物学的試料中の癌細胞がＨＥＲ２を発現するかどうかを評価することを含み得る。

【0031】

本明細書の任意の実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌を有する個体は、腫瘍細胞からのＡＴＰの細胞外放出を誘発する化学療法剤（特に、免疫原性の癌細胞死を誘発する薬剤又は処置（例えば、タキサン剤、パクリタキセル））による処置（少なくとも１回の処置の経過又はサイクル）を過去に受けている。任意選択により、この個体は、そのような過去の処置後に再発した腫瘍又は癌を有する。

【0032】

本明細書の任意の実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌を有する個体は、ヒトＨＥＲ２タンパク質に結合する抗体による処置（少なくとも１回の処置の経過又はサイクル）を過去に受けている。任意選択により、この個体は、そのような過去の処置後に再発した腫瘍又は癌を有する。

【0033】

さらなる態様において、本開示は、抗ＣＤ７３抗体を投与するための有利な２週間又は３週間処置レジメンを提供し、そのようなレジメンは、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを有する抗体、又はその機能保存変異体による処置に特に有用であり得る。そのような処置レジメンで投与される抗ＣＤ７３抗体を、他の治療薬（例えば、化学療法剤及び／若しくは抗ＨＥＲ２抗体）との組合わせ処置で投与し得るか、又は（単剤療法として）他の治療薬との組合わせ処置ではなく投与し得る。ある態様において、提供されるのは、個体の抗腫瘍免疫反応を強化するか、増強するか、若しくは誘発する方法、個体の免疫抑制（例えば腫瘍媒介性免疫抑制）を軽減する方法、腫瘍微小環境中におけるＣＤ７３の活性を中和する方法、腫瘍微小環境中におけるアデノシンの生成及び／若しくは濃度を減少させる方法、腫瘍細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、及び／若しくはＢ細胞による発現されるＣＤ７３の活性を中和する方法、個体のリンパ球（例えばＴ細胞）の活性を増強するか、若しくはリンパ球（例えばＴ細胞）の活性を回復させる方法、並びに／又は個体のリンパ球活性（例えばＴ細胞）のアデノシン媒介性阻害を軽減する方法であって、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する本開示の抗体（例えば、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗体若しくは抗体断片、又はその機能保存変異体）を投与することを含み、この抗体を、この個体に、（ａ）１５００～３６００ｍｇの固定用量（体重若しくは体表面積を問わない）で、任意選択により１５００ｍｇの用量で、任意選択により２４００ｍｇの用量で、２週間毎に１回投与するか、又は（ｂ）２０００～３０００ｍｇの固定用量で、任意選択により、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、若しくは３０００ｍｇの用量で、３週間毎に１回投与する、方法である。

【0034】

ある態様において、提供されるは、個体の癌を処置する方法であって、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合してその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体を投与することを含み、この抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗体若しくは抗体断片、又はその機能保存変異体であり、この抗体を、この個体に、１５００～３６００ｍｇの固定用量（体重若しくは体表面積を問わない）で、任意選択により１５００ｍｇの用量で、任意選択により２４００ｍｇの用量で、２週間毎に１回投与するか、又は２０００～３０００ｍｇの固定用量で、任意選択により、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、若しくは３０００ｍｇの用量で、３週間毎に１回投与する、方法である。

【0035】

これらの態様は、本明細書に記載されている説明においてより完全に説明されており、さらなる態様、特徴、及び利点は、本明細書に記載されている説明から明らかであるだろう。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【図1】左側のパネル：診断時の胃原発腫瘍におけるＣＤ７３染色強度（あらゆる処置前）。ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞（ＴＣ）及び間質細胞（ＳＣ）に対するＣＤ７３強度スコアの分布を示す積み上げバー。１～３の強度スコア。右側のパネル：Ｈｅｒ２状態に従う診断時の胃腫瘍細胞中におけるＣＤ７３発現。腫瘍細胞に対するＣＤ７３割合スコアの分布を示す積み上げバー。統計解析：ノンパラメトリックマン・ホイットニー検定（^＊ｐ＝０．０３４３）。スコア０＝陽性細胞なし；スコア１＝１～９％の陽性細胞；スコア２＝１０～５０％の陽性細胞；スコア３＝５１～８０％の陽性細胞、及びスコア４＝８０％超の陽性細胞。

【図2】ネオアジュバント化学療法前後でのＣＤ７３発現胃腫瘍細胞の比較。腫瘍細胞に対するＣＤ７３割合スコアの分布を示す積み上げバー（左側のパネル）、及びＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合を示すバイオリンプロット（右側のパネル）。スコア０＝陽性細胞なし；スコア１＝１～９％の陽性細胞；スコア２＝１０～５０％の陽性細胞；スコア３＝５１～８０％の陽性細胞、及びスコア４＝８０％超の陽性細胞。

【図3】ネオアジュバント化学療法前後でのＣＤ７３発現胃間質細胞の比較。間質細胞に対するＣＤ７３割合スコアの分布を示す積み上げバー（左側のパネル）、及びＣＤ７３＋間質細胞の割合を示すバイオリンプロット（右側のパネル）。スコア０＝陽性細胞なし；スコア１＝１～９％の陽性細胞；スコア２＝１０～５０％の陽性細胞；スコア３＝５１～８０％の陽性細胞、及びスコア４＝８０％超の陽性細胞。

【図4】ネオアジュバント化学療法前後でのＣＤ７３発現胃間質免疫細胞の比較。間質免疫細胞に対するＣＤ７３割合スコアの分布を示す積み上げバー（左側のパネル）、及びＣＤ７３＋間質免疫細胞の割合を示すバイオリンプロット（右側のパネル）。スコア０＝陽性細胞なし；スコア１＝１～９％の陽性細胞；スコア２＝１０～５０％の陽性細胞；スコア３＝５１～８０％の陽性細胞、及びスコア４＝８０％超の陽性細胞。

【図5A-5C】Ｔ細胞増殖が全ての抗ＣＤ７３抗体によって回復することを示す。図５Ａは、Ｔ細胞亜集団の増殖の制御及びＡＭＰによるその阻害を示す。図５Ｂは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を回復するためのＨ４＋Ｌｘ抗体及び親抗体ＨＰＬＰの有効性を示す。図５Ｃは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を回復するための２Ｈ４＋２Ｌｘ抗体（２Ｌ１、２Ｌ２、２Ｌ３又は２Ｌ４鎖と組み合わせた２Ｈ４＋鎖）及び親抗体２ＨＰ２ＬＰの有効性を示す。データは、重複の平均＋／－標準偏差として表される。

【図6A-6B】ヒト化変異体によって回復されたＴ細胞増殖が、それぞれ２人の代表的なヒトドナーで再現可能であることを示す。ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の増殖を回復するための２Ｈ４＋２Ｌｘ抗ＣＤ７３抗体変異体の有効性が示されている。データは、重複の平均＋／－標準偏差として表される。

【図7】ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖がＡＴＰによって阻害され、２Ｈ４＋２Ｌｘ抗体変異体で回復することを示す。２つの代表的なドナーであるＤ７９５（図７、上側パネル）及びＤ６６４（図７、下側パネル）について試験したものとして示される、１００μＭのＡＴＰによるＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖及び阻害の制御。データは、重複の平均＋／－標準偏差として表される。

【図8】抗ＣＤ７３抗体の薬物動態／薬力学モデルを示す。このモデルは、下記を含む：コンパートメント間クリアランス（Ｑ）と、中心コンパートメント及び末梢コンパートメントの分布量（それぞれＶｃ及びＶｐ）とを特徴とする２コンパートメント分布（血液から末梢へ）；単一クリアランスパラメータＣＬを特徴とする、中心コンパートメントからの１次除去；Ｖｍａｘ及びＫｍを特徴とする、中心コンパートメントからのミカエリス・メンテン飽和除去。ＰＤモデルのＣＤ７３飽和レベルは、５０％受容体占有率をもたらす抗ＣＤ７３抗体血清中濃度であるＥＣ５０を表すＫｍから予測される。

【図9】カニクイザルでの非ＧＬＰ毒性試験及びＧＬＰ毒性試験で予測された抗ＣＤ７３抗体血清中濃度と観察された抗ＣＤ７３抗体血清中濃度との重複を示す。左側のパネルは、非ＧＬＰ毒性試験で観察されたＰＫデータへのモデルフィッティングを表しており；右側のパネルは、ＧＬＰ毒性試験で観察されたＰＫデータへのモデルフィッティングを示しており；記号は、観察されたデータを表しており；実線は、モデル予測を表す。

【図10】図１０Ａは、２週間毎の投与－時間に関して予測される抗ＣＤ７３抗体血清中濃度と、ＣＤ７３占有率－時間プロファイルとを示す。図１０Ｂは、３週間毎の投与に関して予測される抗ＣＤ７３抗体血清中濃度を示す。左側のパネルは、ヒトでの予測された抗ＣＤ７３抗体ＰＫを示す。右側のパネルは、ヒトでの予測されたＣＤ７３受容体占有率を示す。ＥＣ５０は、ＰＫモデル化により推定されたミカエリス・メンテン定数Ｋｍであった。ＥＣ９０を、ＥＣ５０から算出した。下から上への線は、抗ＣＤ７３抗体の用量の増加に対応する。

【発明を実施するための形態】

【0037】

定義
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味し得る。請求項で使用される場合、「含む」という語と組み合わせて使用されるとき、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」という語は、１つ又は２つ以上を意味し得る。本明細書中で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２又はそれを超えるものを意味し得る。

【0038】

「含む」が使用される場合、これは、任意選択により、「から基本的になる」又は「からなる」により置き換えられ得る。

【0039】

エクト－５’－ヌクレオチダーゼ及び５－プライムリボヌクレオチドホスホヒドロラーゼとしても知られるヒトＣＤ７３、ＥＣ３．１．３．５は、ＮＴ５Ｅ遺伝子によってコードされ、５’－ヌクレオチダーゼ、とりわけＡＭＰ－、ＮＡＤ－及びＮＭＮ－ヌクレオチダーゼ活性を示す。ＣＤ７３は、プリン５－プライムモノヌクレオチドの中性ｐＨでのヌクレオシドへの変換を触媒し、好ましい基質は、ＡＭＰである。酵素は、原形質膜の外面にグリコシルホスファチジルイノシトール結合によって結合された２つの同一の７０ｋＤサブユニットの二量体からなる。アミノ酸１～２６にシグナル配列を含むヒトＣＤ７３プレタンパク質（モノマー）のアミノ酸配列は、以下のようにＧｅｎｂａｎｋにおいて受託番号ＮＰ＿００２５１７で示され、この開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【化1】

【0040】

本明細書に関連して、「ＣＤ７３の酵素活性を中和する」とは、ＣＤ７３の５’－ヌクレオチダーゼ（５’－エクトヌクレオチダーゼ）活性が阻害されるプロセスを指す。これは、とりわけ、ＣＤ７３を介したアデノシンの生成の阻害、すなわちＣＤ７３を介したＡＭＰのアデノシンへの異化の阻害を含む。これは、例えば、直接又は間接的に、ＡＭＰのアデノシンへの変換を阻害する試験化合物の能力を測定する無細胞アッセイで測定することができる。ある実施形態において、抗体調製物は、例えば、本明細書に記載のアッセイを参照して、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも５０％の減少、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも７０％の減少又はＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも８０％の減少を引き起こす。

【0041】

本明細書全体において、「癌の処置」などが抗ＣＤ７３抗体に関して言及される場合には常に、（ａ）癌の処置の方法であって、このような治療を必要とする個体、哺乳動物、特にヒトに、癌の処置を可能にする用量で（治療的有効量）、好ましくは本明細書中で指定されるような用量（量）で（好ましくは薬学的に許容可能な担体物質中で）抗ＣＤ７３抗体を投与する（少なくとも１回の処置）ステップを含む方法；（ｂ）（特にヒトにおける）癌の処置のための抗ＣＤ７３抗体の使用又はその処置における使用のための抗ＣＤ７３抗体；（ｃ）癌の処置用の医薬品の製造のための抗ＣＤ７３抗体の使用、抗ＣＤ７３抗体を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、癌の処置用の医薬品又は有効用量の癌の処置に適切な抗ＣＤ７３抗体を含む医薬品の製造のために抗ＣＤ７３抗体を使用する方法；又は（ｄ）本願が提出される国で特許を得ることを可能とする主題に従う、ａ）、ｂ）及びｃ）のいずれかの組み合わせを意味する。

【0042】

「抗体」という用語は、本明細書中で使用される場合、ポリクローナル及びモノクローナル抗体を指す。重鎖における定常ドメインのタイプに依存して、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの１つに割り当てられる。これらの一部は、サブクラス又はアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などにさらに分類される。代表的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００～１１０又はそれを超えるアミノ酸の可変領域を定める。可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）という用語は、これらの軽鎖及び重鎖をそれぞれ指す。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」及び「ミュー」とそれぞれ呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は、周知である。ＩｇＧは、生理学的状況において最も共通する抗体であるため及び実験室で最も容易に作製されるため、本明細書中で使用される抗体の代表的なクラスである。任意選択により、本抗体は、モノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化、キメラ、ヒト又はそうでなければヒトに適切な抗体である。「抗体」は、本明細書中に記載の抗体のいずれかの何らかの断片又は誘導体も含む。

【0043】

「特異的に結合する」という語は、単離標的細胞の表面上に存在するタンパク質、その中のエピトープ又はネイティブタンパク質のいずれかの組み換え形態を用いて評価した場合、抗体が好ましくは競合的結合アッセイにおいて結合パートナー、例えばＣＤ７３に結合し得ることを意味する。競合的結合アッセイ及び特異的な結合を決定するための他の方法を以下でさらに記載し、これらは、当技術分野で周知である。

【0044】

抗体が特定のモノクローナル抗体と「競合する」と言われる場合、これは、本抗体が、組み換えＣＤ７３分子又は表面発現ＣＤ７３分子のいずれかを用いた結合アッセイにおいて、モノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が結合アッセイにおいて参照抗体のＣＤ７３ポリペプチド又はＣＤ７３発現細胞への結合を減少させる場合、本抗体は、参照抗体とそれぞれ「競合する」と言われる。

【0045】

「親和性」という用語は、本明細書中で使用される場合、エピトープへの抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］（式中、［Ａｂ－Ａｇ］は、抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は、未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は、未結合抗原のモル濃度である）として定められる解離定数Ｋｄにより与えられる。親和性定数Ｋ_ａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を決定するための方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８），Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）に見出すことができ、この参考文献は、全体的に参照により本明細書中に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を決定するための当技術分野で周知のある標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析など）の使用である。

【0046】

本明細書に関連して、「決定基」は、ポリペプチド上の相互作用又は結合の部位を指す。

【0047】

「エピトープ」という用語は、抗原性決定基を指し、抗体が結合する抗原上のエリア又は領域である。タンパク質エピトープは、直接結合に関与するアミノ酸残基並びに特異的な抗原結合抗体又はペプチドにより効果的に阻止されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含み得る。これは、例えば、抗体又は受容体と組み合わせ得る複合抗原分子上の最も単純な形態又は最小構造領域である。エピトープは、直鎖状又は立体構造／構造であり得る。「直鎖状エピトープ」という用語は、アミノ酸の直鎖状配列（一次構造）上で隣接するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。「立体構造又は構造エピトープ」という用語は、全てが隣接しておらず、したがって分子の折り畳みにより互いに対して近接するようになるアミノ酸の直鎖状配列の分離部分を表す（二次、三次及び／又は四次構造）アミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造エピトープは、三次元構造に依存する。したがって、「立体構造」という用語は、「構造」と交換可能に使用されることが多い。

【0048】

「枯渇させる」又は「枯渇させること」という用語は、ＣＤ７３発現細胞に関して、結果として、試料又は対象中に存在するこのようなＣＤ７３発現細胞の数に負の影響を与えるように死滅させるか、排除するか、溶解するか、又はこのような死滅、排除若しくは溶解の誘導を引き起こす過程、方法又は化合物を意味する。

【0049】

「内在化」という用語は、「細胞内内在化」と互換的に使用され、細胞の細胞外表面から細胞の細胞内表面に分子を移動させるプロセスに関連する分子的、生化学的及び細胞的事象を指す。分子の細胞内内在化に関与するプロセスは、周知であり、とりわけ細胞外分子（ホルモン、抗体、有機小分子など）；膜関連分子（細胞表面受容体など）；細胞外分子に結合した膜結合分子の複合体（例えば、膜貫通受容体に結合したリガンド又は膜結合分子に結合した抗体）の内在化に関与し得る。したがって、「内在化の誘導及び／又は増加」は、細胞内内在化が開始され、且つ／又は細胞内内在化の速度及び／又は程度が増加する事象を含む。

【0050】

「薬剤」という用語は、本明細書中では、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生体高分子又は生体物質から作製される抽出物を指すために使用される。「治療剤」という用語は、生物学的活性を有する薬剤を指す。

【0051】

本明細書中での目的のために、「ヒト化」又は「ヒト」抗体は、１つ以上のヒト免疫グロブリンの定常及び可変フレームワーク領域が動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合される抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するために設計される。このような抗体は、抗原負荷に反応して特異的なヒト抗体を作製させるために「操作」されているトランスジェニックマウス又は他の動物から入手し得る（例えば、全体的な教示が参照により本明細書中に組み込まれるＧｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎ ６：５７９を参照されたい）。全て当技術分野で公知である、遺伝学的又は染色体導入法並びにファージディスプレイ技術によって完全ヒト抗体も構築し得る（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３を参照されたい）。ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞によっても作製し得る（例えば、参照によりそれらの全体において組み込まれる米国特許第５，５６７，６１０号明細書及び同第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）。

【0052】

「超可変領域」という用語は、本明細書中で使用される場合、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７（Ｌ３）及び重鎖可変ドメイン中の３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１）及び／又は「超可変ループ」からの残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）及び９１～９６（Ｌ３）及び重鎖可変ドメイン中の２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）及び９６～１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ１９８７；１９６：９０１－９１７）又は抗原結合に関与する必須アミノ酸を決定するための同様の系からのアミノ酸残基を含む。一般的には、この領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前出に記載の方法により行われる。「Ｋａｂａｔ位置」、「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基付番」及び「Ｋａｂａｔによる」などの句は、本明細書中では、重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対するこの付番系を指す。Ｋａｂａｔ付番系を用いて、ペプチドの実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＣＤＲの短縮又はそれへの挿入に対応する少数の又はさらなるアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ Ｈ２の残基５２の後に１つのアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後に残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ付番は、「標準的な」Ｋａｂａｔ付番配列での抗体の配列の相動性の領域でのアライメントにより、特定の抗体に対して決定され得る。

【0053】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書中で使用される場合、ＣＤＲとして定められる領域を除く抗体可変ドメインの領域を意味する。各抗体可変ドメインフレームワークは、ＣＤＲによって分離される近接領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）にさらに分けられ得る。

【0054】

「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」、及び「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、ヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０～約ａａ４５０からの、抗体重鎖のＣ末端断片、若しくは他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体の場合には、α、δ、ε、及びμ）におけるその対応配列、又はその天然に存在するアロタイプを指す。別途指定されない限り、本開示全体を通して、免疫グロブリンに関して一般的に受容されるＫａｂａｔアミノ酸付番が使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ．ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。

【0055】

「単離」、「精製」又は「生物学的に純粋」という用語は、実質的に又は基本的に、そのネイティブ状態で見られるような通常それに付随する成分を含まない物質を指す。純度及び均一性は、一般的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析学的化学技術を用いて決定される。標品中に存在する主要な種であるタンパク質は、実質的に精製されている。

【0056】

「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書中で交換可能に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマー並びに天然のアミノポリマー及び非天然のアミノポリマーに適用される。

【0057】

「組み換え」という用語は、例えば、細胞又は核酸、タンパク質又はベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質又はベクターが異種核酸若しくはタンパク質の導入又はネイティブ核酸若しくはタンパク質の改変により修飾されているか、又は細胞が、そのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組み換え細胞は、細胞のネイティブ（非組み換え）形態内で見出されない遺伝子を発現するか、又はそうでなければ異常に発現されるか、発現が少ないか又は全く発現されないネイティブ遺伝子を発現する。

【0058】

本明細書に関連して、ポリペプチド又はエピトープに「結合」する抗体という用語は、特異性及び／又は親和性をもって前記決定基に結合する抗体を指す。

【0059】

「同一性」又は「同一である」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上の一連のアミノ酸残基間の一致数により決定される場合のポリペプチド間の配列関連性の度合いを指す。「同一性」は、特定の数学的モデル又はコンピュータープログラム（すなわち「アルゴリズム」）により扱われるギャップアライメント（存在する場合）を用いた２つ以上の配列のより小さいものの間の完全な一致のパーセントを評価する。関連ポリペプチドの同一性は、公知の方法により容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ ＤｅｖｅｒｅｕＸ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられるが、限定されない。

【0060】

同一性を決定するための方法は、試験される配列間の一致が最大となるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータープログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータープログラム法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ ａｎｄ ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、前出）から公開されている。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用し得る。

【0061】

処置方法
説明されているのは、癌の診断、予後、モニタリング、及び処置で有用な方法である。ある実施形態において、この癌は、表面でＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞を特徴としており、処置は、個体に、本明細書で説明されている抗ＣＤ７３抗体を投与することを含む。ある実施形態において、本開示に従って処置される個体は、胃癌を有する。ある実施形態において、本開示に従って処置される個体は、乳癌を有する。本明細書の任意の実施形態において、胃癌は、胃腺癌、又は胃食道腺癌、又は胃食道接合部腺癌を特徴とし得る。任意の実施形態において、この癌は、ＨＥＲ２タンパク質に対して陽性の検査（又は陽性と検査されていること）を特徴とし得、任意選択により、この癌は、過剰なＨＥＲ２タンパク質を発現しており（ＨＥＲ２過剰発現）、任意選択により、この癌は、低レベルのＨＥＲ２タンパク質を発現している（過剰なＨＥＲ２発現又はＨＥＲ２過剰発現と比べて低い）。

【0062】

本明細書で示されるように、胃癌におけるＨＥＲ２状態に従う患者階層化により、ＨＥＲ２＋胃癌患者は全て、ＣＤ７３発現腫瘍を有していること、及びＨｅｒ２＋患者は、Ｈｅｒ２－患者と比べてＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合が高いことが示された。Ｈｅｒ２状態に関係なく、全ての患者は、ＣＤ７３＋間質細胞を有していた。さらに、本明細書で示されているように、ネオアジュバント化学療法（ＣＴ）により、ＣＤ７３を発現する患者の割合又はＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合のいずれにおいても、ＣＤ７３発現腫瘍細胞が有意に変更されなかった。しかしながら、ネオアジュバントＣＴにより、ＣＤ７３＋間質細胞を有する患者の割合は、ＣＴ前の６０％（ｎ＝１２／２０）からＣＴ後の９５％（ｎ＝１９／２０）へと上昇した。ＣＤ７３発現間質細胞の割合は、ＣＴ前とＣＴ後とで有意差がなかった（図１５、右側のパネル）。ＣＴにより、ＣＤ７３＋間質免疫細胞を有する患者の割合は、３０％（ｎ＝６／２０）から７０％（ｎ＝１４／２０）へと上昇した。したがって、抗ＣＤ７３抗体を、化学療法剤による処置を過去に受けている個体で有利に使用し得る。さらに、ＣＤ７３陽性試料中でのＣＤ７３発現細胞の割合に対する化学療法の効果の欠如から、抗ＣＤ７３抗体の処置レジメン及び投与量（例えば、ＣＤ７３受容体を飽和させるように設計された用量）は、例えば、化学療法剤による処置と組み合わせて投与された場合に有効であることが示され得る。

【0063】

「ＨＥＲ２」（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２、及びＥｒｂＢ－２としても既知である）という用語は、「ヒト上皮増殖因子受容体２」を表す。ＨＥＲ２、並びにその変異体及びアイソフォームは、ＨＥＲ受容体ファミリメンバーである、チロシンキナーゼ活性を有する膜貫通タンパク質をコードする、染色体１７ｑ２１上に位置する癌原遺伝子であり、シグナル伝達経路に関与しており、細胞の増殖及び分化を引き起こす。胃癌及び胃食道癌では、ＨＥＲ２過剰発現の頻度は、文献によって大きく異なる。しかしながら、胃癌でのＨＥＲ２検査は、腫瘍生物学での固有の差違、胃腫瘍で一般に観察されるＨＥＲ２発現の腫瘍内不均一及び不完全な膜染色により、乳癌での検査とは異なっている。

【0064】

ＨＥＲ２状態は、典型的には、免疫組織化学（ＩＨＣ）又はインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）アッセイにより評価される。両方の方法を、ホルマリン固定及びパラフィン包埋生検組織、又は外科的検体、時には細胞診試料を使用して実行し得る。蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）は、ゴールドスタンダードと見なされており、ＨＥＲ２遺伝子のコピー数の計数を可能にする。しかしながら、ＦＩＳＨは費用が高く、結果としてＩＨＣも広く使用されており、ＩＨＣによる３＋スコアは、ＨＥＲ２過剰発現と見なされており、ＩＣＨによる曖昧な（２＋スコア）症例が、ＦＩＳＨへとさらに供される。

【0065】

ＨＥＲ２の腫瘍細胞発現を評価するためのアッセイは、当該技術分野で公知である。ＦＩＳＨアッセイの例として、下記が挙げられる：ＨＥＲ２ ＩＱＦＩＳＨ ｐｈａｒｍＤｘ（Ａｇｉｌｅｎｔ）又はＨＥＲ２ ＦＩＳＨ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）（Ｄａｋｏ）、ホルマリン固定パラフィン包埋でのＨＥＲ－２／ｎｅｕ遺伝子の増幅を検出するよう設計されているＰａｔｈＶｙｓｉｏｎ（商標）ＨＥＲ－２ ＤＮＡ Ｐｒｏｂｅ Ｋｉｔ ＩＩ（Ａｂｂｏｔｔ）。例示的なアッセイとして、ＦＤＡにより承認されたＳＰｏＴ－Ｌｉｇｈｔ ＨＥＲ２ ＣＩＳＨアッセイも挙げられる。発色性インサイチュハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）により、ＨＥＲ２遺伝子増幅が検出される。減算プローブテクノロジー発色性インサイチュハイブリダイゼーション（Ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｂｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）とも称されるこの技術は、乳癌細胞が細胞表面でＨＥＲ２受容体タンパク質を過剰発現するかどうかを調べるために使用される検査である。ＨＥＲ２に関して別の広く使用されるアッセイは、ホルマリンで固定されてパラフィンに包埋された癌組織でのＨＥＲ２タンパク質過剰発現を決定するために使用される半定量免疫組織化学アッセイであるＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）（Ｄａｋｏ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．）である。例えば、低レベルのＨＥＲ２を発現する腫瘍は、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）により＋１～＋２のスコアで同定され得る。

【0066】

ある実施形態において、本開示に従って処置される個体は、ＨＥＲ２タンパク質に対して陽性という検査結果である胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、又は胃食道癌、又は胃食道接合部癌）を有しており、任意選択により、この癌は、（特に、ＨＥＲ２遺伝子増幅の結果として）ＨＥＲ２タンパク質を過剰発現しており、例えば、この腫瘍は、ＩＨＣでの３＋スコアを特徴としており、及び／又は遺伝子増幅に関してＦＩＳＨにより陽性である。ある特定の任意な実施形態において、腫瘍は、低レベルのＨＥＲ２タンパク質（過剰なＨＥＲ２発現と比べて低い）を特徴としており、例えば、この腫瘍は、ＩＨＣでの２＋スコアを特徴とし得、且つ遺伝子増幅に関してＦＩＳＨにより陰性である。ある実施形態において、この個体を、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗体（例えば、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ又は可変領域を含む抗体）と組み合わせて、任意選択により、さらには化学療法剤と組み合わせて、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体で処置する。

【0067】

いくつかの実施形態において、提供されるのは、胃癌を有する個体の腫瘍を処置する方法であって、（ａ）この個体の腫瘍（又は腫瘍細胞）によるＨＥＲ２発現を評価すること、及び（ｂ）この個体が、ＨＥＲ２発現（任意選択によりＨＥＲ２過剰発現）を特徴とする腫瘍（又は腫瘍細胞）を有する場合には、この個体に、ヒトＣＤ７３タンパク質の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和する抗体の有効量を、任意選択により、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗体（例えば、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ又は可変領域を含む抗体）の有効量と組み合わせて投与し、任意選択により、さらには化学療法剤と組み合わせて投与することを含む方法である。

【0068】

ある実施形態において、ＨＥＲ２発現又はＨＥＲ２過剰発現を特徴とする腫瘍は、ＦＩＳＨアッセイにおけるＨＥＲ２遺伝子増幅に関する陽性結果を特徴とする。ある実施形態において、腫瘍は、ＩＨＣによる２＋又は３＋スコアを特徴とする。ある実施形態において、腫瘍は、ＩＨＣによる３＋スコアを特徴とする。ある実施形態において、ＨＥＲ２過剰発現腫瘍は、ＩＨＣによる３＋スコアを特徴とする腫瘍である。ある実施形態において、ＨＥＲ２発現又はＨＥＲ２過剰発現は、胃癌及び胃食道接合部癌でのＨＥＲ２検査に関するＴｏＧＡ ＦＩＳＨ採点スキームに従って決定される（ｖａｎ Ｃｕｔｓｅｍ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｉｃ Ｃａｎｃｅｒ．２０１５；１８（３）：４７６－４８４を参照されたい）。一例において、ＨＥＲ２過剰発現は、少なくとも６つのシグナル／核のＨＥＲ２遺伝子コピー数を特徴とする。一例において、ＨＥＲ２過剰発現は、６つのシグナル／核よりも大きいＨＥＲ２遺伝子コピー数を特徴とする。別の例において、１７番染色体セントロメアシグナルに対するＨＥＲ２シグナルの比が決定されている。例えば、ＦＩＳＨ増幅の場合には、ＤＮＡプローブキットは、ＨＥＲ２のコピー数（オレンジ色）及び１７番染色体セントロメアのコピー数（緑色）を決定するために二色プローブを使用し得る。一例において、ＨＥＲ２過剰発現は、少なくとも２の、任意選択により少なくとも２．２の、又は任意選択により２．２超のＨＥＲ２シグナル対１７番染色体セントロメアの比を特徴とする。

【0069】

ある実施形態において、本開示の組合わせ処置で使用される、ＨＥＲ２に結合する抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートしていないヒトアイソタイプの抗体（例えばヒトＩｇＧ１）である（例えば、この抗体は、「裸の」抗体である」）。任意選択により、本方法は、化学療法剤の治療的有効量の個体への投与をさらに含む。

【0070】

別の実施形態において、本開示の組合わせ処置で使用される、ＨＥＲ２に結合する抗体は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、ＨＥＲ２に結合する抗体を細胞傷害剤にコンジュゲートさせ得、任意選択により、オーリスタチン、マイタンシノイド（例えばＤＭ１）、又はカンプトテシン（例えば、カンプトテシン誘導体若しくはエキサテカン誘導体、ＤＸｄ、又はＳＮ３８）にコンジュゲートさせ得、任意選択により、ＡＤＣは、トラスツズマブエムタンシン又はトラスツズマブデルクステカン（ＤＳ－８２０１ａ）である。

【0071】

組合わせ投与として、剤形が異なる化合物の同時投与、又は化合物の別個の投与（例えば連続投与）が挙げられ得る。そのため、ＣＤ７３結合抗体と、ＨＥＲ２結合抗体（及び任意選択によりさらなる化学療法剤）とを、組み合わせて使用し得る。抗ＣＤ７３抗体と、ＨＥＲ２結合抗体とを、別個の投与用に製剤化して、同時に又は連続して投与し得る。ＣＤ７３結合抗体とＨＥＲ２結合抗体とをまた、化学療法剤（例えば、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、パクリタキセル）と組み合わせても使用し得る。抗ＣＤ７３抗体、ＨＥＲ２結合抗体、及び／若しくは化学療法剤を、それぞれ、別個の投与用に製剤化して、同時に若しくは連続して投与し得るか、又はＨＥＲ２結合抗体が化学療法剤にコンジュゲートしている（例えば共有結合している）場合には、抗ＣＤ７３抗体及びＨＥＲ２結合ＡＤＣを、別個の投与用にそれぞれ製剤化して、同時に若しくは連続して投与し得る。

【0072】

いくつかの実施形態において、本開示の組合わせ処置は、少なくとも１回の処置の経過を含み、処置の各経過に関して、抗ＣＤ７３抗体の複数回（例えば、２回、３回、又は４回）の連続した用量を投与し、抗ＨＥＲ２抗体の複数回（例えば、２回、３回、又は４回）の連続した用量を投与する。任意選択により処置レジメンは、化学療法剤（例えばタキサン）の複数回（例えば２回、３回、又は４回）の連続した用量の投与をさらに含む。

【0073】

いくつかの実施形態において、本開示の組合わせ処置は、
（ａ）抗ＣＤ７３抗体の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与；
及び
（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＨＥＲ２抗体を、毎週１回投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与
を含む。一投与レジメンにおいて、抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎に１回投与し、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に１回投与する。別の投与レジメンにおいて、抗ＣＤ７３抗体を、３週間毎に１回投与し、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に１回投与し、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体を、同日に投与する。

【0074】

いくつかの実施形態において、本開示の組合わせ処置は、
（ａ）抗ＣＤ７３の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与；
及び
（ｂ）化学療法剤（例えば、白金剤、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、カンプトテシン）の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この化学療法剤を、毎週投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与
を含む。例示的な一投与レジメンにおいて、抗ＣＤ７３抗体を、３週間毎に１回投与し、化学療法剤を、３週間毎に１回投与し、抗ＣＤ７３抗体及び化学療法剤を、同日に投与する。

【0075】

いくつかの実施形態において、本開示の組合わせ処置は、
（ａ）抗ＣＤ７３の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎に１回投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与；
（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＨＥＲ２抗体を、毎週１回投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与；
及び
（ｃ）化学療法剤（例えば、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、カンプトテシン）の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この化学療法剤を、毎週投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与
を含む。

【0076】

いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体が化学療法剤にコンジュゲートしている場合には、本開示の組合わせ処置レジメンは、
（ａ）抗ＣＤ７３の用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎に１回投与するか、又は３週間毎に１回投与する、複数回の投与；
（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体化学療法剤コンジュゲートの用量の複数回の投与（例えば、少なくとも２回、３回、又は４回）であって、任意選択により、この抗ＨＥＲ２抗体化学療法剤コンジュゲートを、３週間毎に１回投与する、複数回の投与
を含み得る。

【0077】

実施形態のいずれかにおいて、本開示の処置は、抗ＣＤ７３抗体の少なくとも４回、５回、又は６回の投与を含む。実施形態のいずれかにおいて、本開示のレジメンに係る処置は、抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも４回、５回、又は６回の投与を含む。実施形態のいずれかにおいて、本開示に係る処置は、化学療法剤の少なくとも４回、５回、又は６回の投与を含む。実施形態のいずれかにおいて、本開示のレジメンに係る処置は、抗ＣＤ７３抗体の少なくとも６回の投与、抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも４回の投与、及び任意選択により、さらには化学療法剤の少なくとも４回の投与を含む。

【0078】

実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＤ７３抗体の最初の投与を、抗ＨＥＲ２抗体及び／又は化学療法剤の最初の投与の前に行なう。例えば、抗ＣＤ７３抗体の最初の投与を、抗ＨＥＲ２抗体及び／又は化学療法剤の最初の投与の１週間前又は２週間前に行ない得る。

【0079】

実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＤ７３抗体と抗ＨＥＲ２抗体とを同日に投与する場合には、任意選択により、抗ＣＤ７３抗体の投与を、抗ＨＥＲ２抗体の投与の前（例えば１～１２時間前）に行なう。実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＤ７３抗体と化学療法剤とを同日に投与する場合には、任意選択により、抗ＣＤ７３抗体の投与を、化学療法剤の投与の前（例えば１～１２時間前）に行なう。

【0080】

本処置方法において、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＣＤ７３抗体とを、別々に投与し得るか、一緒に若しくは連続して投与し得るか、又はカクテルで投与し得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体の前に投与する。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体の投与の約１時間～７又は８日前に投与し得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体の投与の約３０分～約１週間前、約１時間～約１週間前、約１時間～約２時間前、約１時間～約６時間前、約１時間～約１２時間前、約２時間～約４時間前、約４時間～約６時間前、約６時間～約８時間前、約８時間～１日前、又は約１～８日前に投与する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体の投与と同時に投与する。

【0081】

実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体及び／又は化学療法剤の投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与後約１週間以内に行なう。例えば、方法が、抗ＨＥＲ２抗体の用量の複数回の投与、及び抗ＣＤ７３抗体の用量の複数回の投与を含む場合には、抗ＨＥＲ２抗体の各投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日又はこの投与の約１週間（例えば、７日、８日）後のいずれかで行ない得る。

【0082】

実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与のそれぞれ、及び化学療法剤のそれぞれの投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与後１４日又は約２週間以内に行ない、任意選択により、この投与の７日又は約１週週間後に行なう。実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体の複数回の投与のそれぞれ、及び化学療法剤の複数回の投与のそれぞれを、抗ＣＤ７３抗体の投与後１４日又は約２週間以内に行ない、任意選択により、この投与の７日又は約１週間後に行なう。

【0083】

任意選択により、処置を、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与、及び／又は化学療法剤の最初の投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与後１４日又は約２週間以内に行ない、抗ＨＥＲ２抗体の各後続（即ち、２回目以降）の投与、及び／又は化学療法剤の各後続の投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に投与するか、又は抗ＣＤ７３抗体の投与後７日（例えば１週間）以内に投与する。

【0084】

したがって、実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体の各後続（即ち、２回目以降）の投与、及び／又は化学療法剤の各投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に投与するか、又は抗ＣＤ７３抗体の投与後８日以内又は８日（例えば約１週間）以内に行なう。

【0085】

実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体の各後続（即ち、２回目以降）の投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に行なうか、又はこの投与後７若しくは８日以内又は約１週間以内に行なう。実施形態のいずれかにおいて、抗ＨＥＲ２抗体の各投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に行なうか、又はこの投与後７若しくは８日以内又は約１週間以内に行なう。

【0086】

実施形態のいずれかにおいて、化学療法剤の各後続（即ち、２回目以降）の投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に行なうか、又はこの投与後７若しくは８日以内又は約１週間以内に行なう。実施形態のいずれかにおいて、化学療法剤の各投与を、抗ＣＤ７３抗体の投与と同日に行なうか、又はこの投与後７若しくは８日以内又は約１週間以内に行なう。

【0087】

そのため、抗ＣＤ７３抗体を、例えば２週間毎に投与し得、抗ＨＥＲ２抗体（及び使用される場合には化学療法剤）を、３週間毎に投与し得る。例示的な治療レジメンは、２週間毎の抗ＣＤ７３抗体の投与、３週間毎の抗ＨＥＲ２抗体（及び使用される場合には化学療法剤）の投与を含み、抗ＨＥＲ２抗体（及び使用される場合には化学療法剤）の最初の投与を、抗ＣＤ７３抗体の最初の投与の約２週間後に行なうか、又はこの投与後２週間以内（例えば１５日以内）に行なう。

【0088】

任意の実施形態において、個体は、過去の治療後に進行している若しくは再発している癌を有するか又は過去の治療に反応しなかった癌を有することを特徴とし得、任意選択により、さらには、この過去の治療は、化学療法剤の投与を含み、任意選択により、白金剤（例えばシスプラチン）又はタキサン剤（例えばパクリタキセル）の投与を含む。

【0089】

任意の実施形態において、個体は、進行しているか、再発しているか、又はＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗体（例えば、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ、可変領域、又はポリペプチド鎖を含む抗体）による過去の処置に反応しなかった癌を有することを特徴とし得る。

【0090】

別の例において、抗ＣＤ７３抗体を、（例えば、ＣＤ７３発現細胞（例えばＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）上の抗ＣＤ７３抗体を滴々することにより評価した場合に）ＣＤ７３発現細胞への結合に関するＥＣ_５０（任意選択によりＥＣ_７０、又は任意選択によりＥＣ_９０）と比べて高い循環中の濃度（任意選択により、目的の血管外組織（例えば、腫瘍又は腫瘍環境）中の濃度）を、指定された期間（例えば、少なくとも１週間、２週間、３週間）にわたり達成するか又は維持する量で投与し得る。任意選択により、達成される濃度は、ＣＤ７３発現細胞への結合に関するＥＣ_５０（任意選択によりＥＣ_７０、又は任意選択によりＥＣ_９０）と比べて少なくとも２０％、５０％、又は１００％高い。

【0091】

別の例において、抗ＣＤ７３抗体を、（例えば、アデノシンへのＡＭＰの加水分解を定量することによりＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞又はＡ３７５細胞における５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することによる）アデノシンへのＡＭＰのＣＤ７３媒介性異化の阻害に関する少なくともＥＣ_５０（任意選択によりＥＣ_７０、又は任意選択により実質的にＥＣ_９０）の血中濃度を、少なくとも１週間（任意選択により、少なくとも２週間若しくは３週間）にわたり及び／又は個体中の抗ＣＤ７３抗体の後続の投与まで達成するのに及び／又は維持するのに有効な量で投与し得る。ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体の量は、個体の血管外組織中でのアデノシンへのＡＭＰのＣＤ７３媒介性異化の阻害に関するＥＣ_５０（任意選択によりＥＣ_７０、又は任意選択により実質的にＥＣ_９０）を（任意選択により少なくとも１週間にわたり、任意選択により２週間にわたり）達成するのに（又は維持するのに）有効な量である。

【0092】

抗ＣＤ７３抗体は、本明細書でさらに説明されている。例えば、本開示の抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲを有する抗体（例えば、４７及び４８のそれぞれの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を有する抗体）又はその機能保存変異体を、９００～３０００ｍｇの用量で投与し得、任意選択により、この抗体を、少なくとも９００ｍｇの用量で投与するか、任意選択により１５００ｍｇ若しくは少なくとも１５００ｍｇの用量で投与するか、又は任意選択により２４００ｍｇ若しくは少なくとも２４００ｍｇの用量で投与する。この抗体を、静脈内投与し得る。

【0093】

別の例において、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ、配列番号４２及び４３の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する抗体を、少なくとも９００ｍｇの用量で投与し得るか、任意選択により１５００ｍｇ若しくは少なくとも１５００ｍｇの用量で投与し得るか、又は任意選択により２４００ｍｇ若しくは少なくとも２４００ｍｇの用量で投与し得る。この抗体を、静脈内投与し得る。

【0094】

化学療法剤を、抗ＨＥＲ２抗体とコンジュゲートしていない場合には、特定の溶剤に好適な用量で投与し得る。例えば、タキサン剤を投与し得る。タキサンは、細胞微小管を安定化させ、それにより細胞分裂を阻害することにより抗腫瘍活性を生じる化学療法剤（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）である。例えば、パクリタキセルを、３時間注入による１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量で、３週間毎に投与し得る。任意選択によるある実施形態において、本開示の組合わせ処置は、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）の非存在下での（この白金系薬剤による処置の非存在下での）、化学療法剤（例えば、タキサン、抗ＨＥＲ抗体にコンジュゲートしている化学療法剤）による処置を含む。任意選択によるある実施形態において、本開示の組合わせ処置は、アントラサイクリン誘導体（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン）の非存在下での（このアントラサイクリン誘導体による処置の非存在下での）、化学療法剤（例えば、タキサン、抗ＨＥＲ抗体にコンジュゲートしている化学療法剤）による処置を含む。

【0095】

本明細書の任意の実施形態において、本開示の処置は、ＰＤ－１を中和する抗体による組合わせ処置の非存在下であると指定され得る。「ＰＤ－１を中和する」という用語は、ＰＤ－１が、このＰＤ－１と、その結合パートナー（例えば、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２）の内の１つ又は複数との相互作用によるシグナル伝達能を阻害されるプロセスを指す。ＰＤ－１を中和する抗体は、例えば、ヒトのＰＤ－１タンパク質又はＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合し得る。例として、ペンブロリズマブ（商品名Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、アテゾリズマブ（商品名Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（商標））、デュルバルマブ（商品名Ｉｍｆｉｎｚｉ（商標））が挙げられる。

【0096】

ヒトＨＥＲ２に特異的に結合するいくつかの抗体（抗ＨＥＲ２抗体）が開発されており、特にトラスツズマブが挙げられる。ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、並びに抗体－薬物コンジュゲートであるトラスツズマブ－エムタンシン及びトラスツズマブ－デルクステカン等の他の分子ＨＥＲ２標的抗体が試験されているか、又は現在試験中である。

【0097】

特定の実施形態において、特に胃癌の処置に関して、抗ＨＥＲ２抗体を、例えば、（静脈内投与の場合には）後続の連続的な処置用量に先行する追加の負荷用量の投与と共に、又はこの投与なしで、３週間毎に静脈内投与し得るか又は皮下投与し得る。実施形態のいずれかにおいて、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与は、負荷用量であり得、続いて１週間後に、抗ＨＥＲ２抗体の後続の処置用量を投与し得、この後続の処置用量を、３週間毎に１回投与する。例えば、１日目（１週目の開始）に、個体を、抗ＣＤ７３抗体で処置し得；１５日目（３週目の開始）に、この個体を、抗ＣＤ７３抗体と、抗ＨＥＲ２抗体及び化学療法剤の負荷用量とで処置し得；２１日目に、この個体を、抗ＨＥＲ２抗体の処置用量で処置し得；抗ＣＤ７３抗体の後続の用量を、抗ＣＤ７３抗体の先行する投与後２週間毎又は３週間毎に投与し、抗ＨＥＲ２抗体の処置用量の後続の用量を、抗ＨＥＲ２抗体の処置用量の先行する投与後３週間毎に投与し、化学療法剤の後続の用量を、化学療法剤の先行する投与後３週間毎に投与する。

【0098】

抗ＨＥＲ２抗体は、本明細書でさらに説明されている。例えば、抗体は、トラスツズマブのそれぞれの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ、可変領域、又は完全ポリペプチド鎖を含み得、２～８ｍｇ／ｋｇ体重の用量（負荷用量を含む）で投与され、任意選択により２～６ｍｇ／ｋｇ体重（処置用量）で投与される。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）として承認された抗体組成物等のヒトＩｇＧ１アイソタイプの裸の抗体（細胞傷害剤とコンジュゲートしていない）として表された場合には、そのような抗体を、９０分間注入による８ｍｇ／ｋｇ体重の負荷用量（最初の投与）として投与し得、続いて１週間後に、６ｍｇ／ｋｇ体重の処置用量を３０分間注入により３週間毎に投与し得る。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）として承認されたトラスツズマブをまた、例えば、９０分間ＩＶ注入としての４ｍｇ／ｋｇの初期用量で、続いて３０分間ＩＶ注入による２ｍｇ／ｋｇの後続の毎週用量で、（特に乳癌の場合に）毎週の投与でも使用し得る。トラスツズマブはまた、皮下投与に好適な製剤であり且つ新規の賦形剤（薬物の有効成分の担体）であるｒＨｕＰＨ２０を含むＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）ＳＣとしても承認されている。ｒＨｕＰＨ２０（組換えヒトヒアルロニダーゼ）は、皮膚下での細胞間の組織中に障壁を形成するゲル状物質（ヒアルロン酸）を可逆的に分解する。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）ＳＣを、最大５分間の期間をかけて、負荷用量なしに、５ｍｌの総固定量で、６００ｍｇの固定用量として３週間毎に投与する。

【0099】

別の例において、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ、可変領域、又は完全ポリペプチド鎖を含む抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートしており、それにより、抗ＨＥＲ２と化学療法剤とが単一の分子又は組成物で組み合わされる。そのようなＡＤＣ、例えば、ＡＤＣトラスツズマブデルクステカン（ＤＳ－８２０１；ｆａｍ－トラスツズマブデルクステカン－ｎｘｋｉ；Ｅｎｈｅｒｔｕ（登録商標），Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）を、静脈内注入により、３週間毎に投与される５．４ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与し得る。ＡＤＣトラスツズマブエムタンシン（ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン；Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、静脈内注入により、３週間毎に投与される３．６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与し得る。

【0100】

本開示の処置レジメンを有利に使用して、腫瘍間質組織中におけるＣＤ７３発現細胞の存在を特徴とするＨＥＲ２陽性の胃食道接合部腺癌を処置し得る。そのため、ＣＤ７３陽性癌は、腫瘍中又は腫瘍環境中におけるＣＤ７３発現細胞の存在を特徴とし得る。本明細書で示されるように、ＨＥＲ２発現腫瘍は、腫瘍間質中におけるＣＤ７３発現を特徴とする。したがって、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を有する個体を、腫瘍微小環境中における細胞（例えば、内皮細胞及び／又は免疫細胞、例えば、Ｂ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８ Ｔ細胞）によるＣＤ７３の発現を評価するための事前検出工程と共に、又はこの工程なしに、本開示の処置レジメンにより処置し得る。

【0101】

任意選択により、処置方法は、個体からの腫瘍の生物学的試料（例えば、癌組織、癌の近位又は周辺の組織、癌隣接組織、隣接非腫瘍組織、又は正常な隣接組織）中におけるＣＤ７３の核酸又はポリペプチドを検出する工程を含み得る。この生物学的試料が、ＣＤ７３ポリペプチドを特徴とする（例えば、ＣＤ７３を発現する細胞を含む）という決定は、患者が、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択によりさらには化学療法剤）による処置から大きな利益を受け得る癌を有することを示し得る。本開示に係る処置に好適な癌を有する患者を、表面でＣＤ７３を発現する細胞、（例えば、参照値と比較して、健康な個体と比較して、抗ＣＤ７３剤による処置に対して低い応答者である個体に対応するレベルにて）高レベルでＣＤ７３を発現する細胞、又は（例えばＩＨＣで決定した場合に）抗ＣＤ７３抗体による高強度の染色を示す細胞を特徴とする腫瘍間質を有すると決定し得る。

【0102】

ある実施形態において、本方法は、生物学的試料（例えば、腫瘍及び／又は腫瘍間質組織を含む生物学的試料）中におけるＣＤ７３の核酸又はポリペプチドの発現のレベルを決定すること、並びにこのレベルと、健康な個体に対応する参照レベルとを比較することを含む。この生物学的試料が、参照レベルと比較して高いレベルでＣＤ７３の核酸又はポリペプチドを発現する細胞を含むという決定は、患者が、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択によりさらには化学療法剤）により有利に処置され得る（例えば、特定の利益を引き出し得る）癌を有することを示す。任意選択により、生物学的試料中におけるＣＤ７３ポリペプチドを検出することは、悪性細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞の表面上で発現されているＣＤ７３ポリペプチドを検出することを含む。ある実施形態において、ＣＤ７３ポリペプチドは、個体から採取した腫瘍組織試料又は腫瘍隣接組織試料（例えば生検）中における細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０、又はより多くに存在している。

【0103】

個体が、ＣＤ７３ポリペプチドを発現する細胞を特徴とする癌を有するかどうかを決定することは、例えば、癌環境（例えば、腫瘍又は腫瘍隣接組織）由来の細胞を含む個体由来の生物学的試料を（例えば生検を実施することにより）得ること、前記細胞を、ヒトＣＤ７３ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させること、及びこの細胞がその表面上でＣＤ７３を発現するかどうかを検出することを含み得る。任意選択により、個体が、ＣＤ７３を発現する細胞を有するかどうかを決定することは、免疫組織化学アッセイを実行することを含む。

【0104】

ある実施形態において、本開示は、必要な個体（例えば、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を有する対象）のＨＥＲ２陽性胃癌の処置又は予防の方法であって、
ａ）個体由来の腫瘍組織試料（任意選択により腫瘍及び／又は腫瘍隣接組織を含む）中におけるＣＤ７３ポリペプチド（例えばＣＤ７３発現細胞）を検出すること、
並びに
ｂ）腫瘍組織試料が、ＣＤ７３ポリペプチド（例えばＣＤ７３発現細胞）を含み、任意選択により、参照レベルと比較して高いレベルで含むとの決定時に、この個体に、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択によりさらに化学療法剤）を投与すること
を含む方法を提供する。任意選択により、腫瘍組織試料中におけるＣＤ７３ポリペプチド又はＣＤ７３発現細胞を検出することは、この個体から、腫瘍組織及び／又は腫瘍の近位若しくは周辺の組織（例えば、腫瘍隣接組織、隣接非腫瘍組織、若しくは正常な隣接組織）を含む生物学的試料を得ること、並びにＣＤ７３ポリペプチド又はＣＤ７３発現細胞のレベルを検出することを含む。ＣＤ７３発現細胞は、例えば、内皮細胞、腫瘍細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｂ細胞を含み得る。

【0105】

ある実施形態において、ＨＥＲ２発現及びＣＤ７３発現の両方を評価し得る。例えば、ある実施形態において、本開示は、必要な個体（例えば、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌を有する対象）の胃癌の処置又は予防の方法であって、
ａ）任意選択により腫瘍及び／又は腫瘍隣接組織内の、腫瘍環境中におけるＣＤ７３ポリペプチド（例えばＣＤ７３発現細胞）を検出すること、
ｂ）腫瘍細胞上でのＨＥＲ２発現（例えば発現レベル）を検出すること、
並びに
ｃ）腫瘍環境が、ＣＤ７３（例えばＣＤ７３発現細胞）を含み、任意選択により、参照レベルと比較して高いレベルで含むとの決定時、及び腫瘍細胞上でのＨＥＲ２発現（例えば過剰発現）の検出時に、この個体に、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択によりさらに化学療法剤）を投与すること
を含む方法を提供する。任意選択により、腫瘍環境内でのＣＤ７３ポリペプチド又はＣＤ７３発現細胞を検出することは、この個体から、腫瘍組織及び／又は癌の近位若しくは周辺の組織（例えば、腫瘍隣接組織、隣接非腫瘍組織、若しくは正常な隣接組織）を含む生物学的試料を得ること、並びにＣＤ７３ポリペプチド又はＣＤ７３発現細胞のレベルを検出することを含む。ＣＤ７３発現細胞は、例えば、内皮細胞、腫瘍細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｂ細胞を含み得る。任意選択により、腫瘍細胞上でのＨＥＲ２発現（例えば過剰発現）を検出すること（又はこの発現の検出）は、腫瘍細胞中におけるＨＥＲ２過剰発現を検出すること（又はこの過剰発現の検出）を含む。任意選択により、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞又はＨＥＲ２過剰発現腫瘍細胞を検出することは、この個体から、腫瘍組織を含む生物学的試料を得ること、並びに任意選択によりＦＩＳＨにより決定したように（例えば、高いＨＥＲ２遺伝子コピー数の存在）及び／又はＩＨＣにより決定したように（例えば、ＩＨＣアッセイにおける３＋スコア）、ＨＥＲ２ポリペプチドの発現レベルを検出することを含む。

【0106】

ある実施形態において、本開示の処置レジメンを有利に使用して、ＨＥＲ２陽性癌を有し且つ化学療法剤（例えば、白金系薬剤、カルボプラチン、タキサン剤、パクリタキセル）による一連の処置を過去に受けている個体（又は固体の集団）を処置し得る。任意選択により、化学療法剤による過去の一連の処置は、過去１、２、３、４、５、又は６ヶ月以内に完了している。ある実施形態において、ある態様では、本開示の処置レジメンを、細胞中での（例えば、生検での；腫瘍間質からの細胞中での；腫瘍細胞上での）ＣＤ７３発現を事前に試験する工程が存在しないと指定し得る。ある実施形態において、提供されるのは、化学療法剤（例えば、白金剤、カルボプラチン、タキサン剤、パクリタキセル）による一連の処置を過去に受けている個体（又は固体の集団）の胃癌の処置又は予防の方法であって、
ａ）任意選択により腫瘍及び／又は隣接組織内の、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞を検出すること、
並びに
ｂ）ＨＥＲ２発現（例えば過剰発現）腫瘍細胞の検出時に、この個体に、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択によりさらに化学療法剤）を投与すること
を含む方法である。任意選択により、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞又はＨＥＲ２過剰発現腫瘍細胞を検出することは、この個体から、癌組織を含む生物学的試料を得ること、並びに任意選択によりＦＩＳＨにより決定したように（例えば、高いＨＥＲ２遺伝子コピー数の存在）及び／又はＩＨＣにより決定したように（例えば、ＩＨＣアッセイにおける３＋スコア）、ＨＥＲ２ポリペプチドの発現レベルを検出することを含む。

【0107】

処置の有効性及び／又は治療的有効量を、癌処置の評価で一般的に使用される様々なエンドポイントにより測定し得る。例示的なエンドポイントとして、下記が挙げられる：生存（例えばＯＳ及びＰＦＳ）の延長；客観的奏効（例えばＣＲ若しくはＰＲ）という結果；腫瘍退縮、腫瘍の重量若しくはサイズの縮小、疾患進行までの時間の増加、生存期間の増加、より長いＰＦＳ、ＯＳ率の改善、奏効期間の増加、及び生活の質の改善、並びに／又は癌の徴候若しくは症状の改善。改善及び／又は有効性を、他の処置と比較し得、例えば、抗ＣＤ７３抗体の非存在下での抗ＨＥＲ２抗体及び化学療法剤の投与を含む処置と比較し得る。

【0108】

本明細書で使用される場合、「進行性疾患」（ＰＤ）という用語は、試験時の最小の合計（これには、試験で最小の場合にはベースライン合計が含まれる）を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも２０％の増加を指す。２０％の相対的増加に加えて、この合計は、少なくとも５ｍｍの絶対的増加も示さなければならない。１つ又は複数の新たな病変の出現も、進行と見なされる。

【0109】

本明細書で使用される場合、「部分奏効」（ＰＲ）という用語は、ベースラインの直径の合計を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％の減少を指す。

【0110】

本明細書で使用される場合、「完全奏効」（ＣＲ）という用語は、任意の標的リンパ節の短軸が１０ｍｍ未満まで減少している全ての標的病変の消失を指す。

【0111】

本明細書で使用される場合、「安定している疾患」（ＳＤ）という用語は、試験時の直径の最小の合計を基準として、ＰＲの資格を得るのに十分な収縮もＰＤの資格を得るのに十分な増加もないことを指す。

【0112】

本明細書で使用される場合、「客観的奏効率」（ＯＲＲ）という用語は、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従う部分奏効又は完全奏効（ＰＲ＋ＣＲ）の内の最良の全体奏効を達成した患者の割合と等しい。

【0113】

本明細書で使用される場合、「全生存」（ＯＳ）という用語は、診断時又は処置時から１年、５年等の規定の期間にわたり生存している患者の割合を指す。好ましい実施形態において、ＯＳは、試験中の無作為化日から任意の原因による死亡日までの時間を指す。患者が、フォローアップ期間の終了時に生存している場合には、又はフォローアップに失敗している場合には、ＯＳデータを、この患者が生存していることが分かっている最終日に打ち切る。全生存は、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法により評価され、各処置群のＯＳ中央値に関して９５％信頼区間（ＣＩ）が提供される。

【0114】

本明細書で使用される場合、「無増悪生存」（ＰＦＳ）という用語は、癌が進行するか又は悪化することなく生存している患者を指す。本発明の好ましい態様において、ＰＦＳは、試験での無作為化からＲＥＣＩＳＴ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）により定義される客観的進行の最初のＸ線撮影記録又は任意の原因による死亡までの時間と定義される。事前の進行が報告されることなく死亡した患者は、その死亡日に進行していたと見なされる。進行していなかったか又はフォローアップに失敗している患者を、最後のＸ線撮影腫瘍評価日に打ち切る。

【0115】

本明細書で使用される場合、「疾患制御率」（ＤＣＲ）という用語は、疾患進行の欠如及びその割合を指す。この用語は、ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤと分類された最良の全体奏効を有する患者の群（特に、ＰＤを有する患者を除く）を指しており、この最良の全体奏効は、処置開始からＰＤまで記録された最良奏効である。

【0116】

本明細書で使用される場合、「臨床的利益率」とう用語は、分析時のＳＤ以上を指す。ＳＤ以上（即ち、ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）の腫瘍奏効率は、ＲＥＣＩＳＴ １．１により定義されるように、ＳＤ以上の奏効率を有する患者の割合と定義される。

【0117】

本明細書で使用される場合、「生存の延長」という用語は、ｉ）未処置患者、ｉｉ）特定の組合わせ療法において抗腫瘍剤の一部で処置された患者、又はｉｉｉ）コントロール処置プロトコルと比較した、処置された患者でのＯＳ又はＰＦＳの増加を意味している。生存を、処置の開始後又は癌の最初の診断後にモニタリングする。

【0118】

本明細書で使用される場合、「最良の全体奏効」という用語は、試験処置の開始から最早期の客観的な進行又は新規の抗癌治療の開始まで記録された最良奏効であり、確認の必要性を考慮する。患者の最良の全体奏効の割り当ては、標的疾患と非標的疾患との両方の所見に依存しており、新規の病変の出現も考慮される。最良の全体奏効は、試験中に治験責任医師により提供された評価回答を使用して、アルゴリズにより算出される。

【0119】

癌（例えば、進行性の胃腺癌又は胃食道接合部腺癌）を処置する例示的な方法は、必要な患者に、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗ヒトＣＤ７３抗体の有効量と同時に、別々に、又は連続して組み合わせて、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域とを含む抗ヒトＨＥＲ２抗体の有効量を投与することを含み；任意選択により、この抗ヒトＨＥＲ２抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖とを含み；任意選択により、この抗ヒトＣＤ７３抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖と、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖とを含む。

【0120】

ＨＥＲ２に結合する抗体
ＨＥＲ２への結合、及びＨＥＲ２シグナル伝達の遮断、及びＨＥＲ２の利用可能な膜分子の数の制限は、いくつかの治療アプローチの焦点となっている。トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標），Ｒｏｃｈｅ）は、ＨＥＲ２の膜近傍領域に結合するネズミ４Ｄ５抗体のヒト化バージョンである。トラスツズマブは、結合する腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することにより、ＨＥＲ２の内在化及び分解を引き起こすことにより、並びにＨＥＲ２二量体化の阻害を介してＭＡＰＫ経路及びＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路を阻害することにより、抗増殖活性を発揮する。トラスツズマブは、下記に示す重鎖及び軽鎖の可変領域を含み、ヒトＩｇＧ１アイソタイプとして生成されている。トラスツズマブの完全な重鎖ポリペプチド鎖及び軽鎖ポリペプチド鎖を、下記に示す（配列番号２５及び２６）。抗ＨＥＲ２抗体の別の例は、トラスツズマブが結合するＨＥＲ２上の同一のエピトープに結合するマルゲツキシマブである。マルゲツキシマブは、配列番号２７及び２８に示される重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を有する（Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線が引かれている）。

【0121】

より近年では、様々な化学療法剤にコンジュゲートしているトラスツズマブが開発されている。このイムノコンジュゲート又はＡＤＣとして、特に下記が挙げられる：トラスツズマブエムタンシン（ＰＲＯ１３２３６５、ＲＧ３５０２、Ｔ－ＤＭ１、トラスツズマブ－ＭＣＣ－ＤＭ１、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）としても既知である）、トラスツズマブデルクステカン（ＤＳ－８２０１、ＤＳ－８２０１ａ、ｆａｍ－トラスツズマブデルクステカン－ｎｘｋｉ、Ｅｎｈｅｒｔｕ（登録商標）としても既知である）、及びトラスツズマブデュオカルマジン（ＳＹＤ９８５、トラスツズマブｖｃ－セコ－ＤＵＢＡ、トラスツズマブバリン－シトルリン－セコ－デュオカルマイシンヒドロキシベンズアミド－アザインドールとしても既知である）。トラスツズマブデルクステカン、トラスツズマブデュオカルマジン、及びトラスツズマブエムタンシンは、同一の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びにトラスツズマブの完全ポリペプチド鎖を共有しており、但し、トラスツズマブエムタンシンは、トラスツズマブの重鎖上の末端リシンを欠いている。トラスツズマブデルクステカン（ＤＳ８２０１ａ）は、平均して８個のシステイニル残基でリンカーを介して、ＤＸｄ（ＤＸ－８９５１誘導体、ＤＸｄ）と称されるカンプトテシン又はエキサテカン誘導体であるデルクステカンとコンジュゲートしている（Ｏｇｉｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １０７（２０１６）１０３９－１０４６（この開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）を参照されたい）。トラスツズマブデルクステカンを、米国特許第１０，１９５，２８８号明細書及び国際公開第２０１９／０４４９４６号パンフレット（これらの開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）で説明されているように調製し得る。トラスツズマブエムタンシンは、平均して３～４個のリシル残基で開裂不能のスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）リンカーを介して、マイタンシノイドＤＭ１にコンジュゲートしている。トラスツズマブデュオカルマジンは、平均して２又は４個のシステイニル残基で、開裂可能なリンカーＮ－［２－（２マレイミドエトキシ）エトキシカルボニル］－Ｌ－バリル－Ｌ－シトルリンイル－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル－Ｎ－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－Ｎ－［２－（メチルアミノ）エチル］カルボニルを介してセコ－ＤＵＢＡとコンジュゲートしている。
トラスツズマブ重鎖可変領域

【化2】

トラスツズマブ軽鎖可変領域

【化3】

トラスツズマブ重鎖

【化4】

トラスツズマブ軽鎖

【化5】

マルゲツキシマブ重鎖

【化6】

マルゲツキシマブ軽鎖

【化7】

【0122】

ＣＤ７３を阻害する抗体
本明細書で説明されている組合わせ処置方法に従って使用され得る例示的な抗ＣＤ７３抗体として、ヒト起源のＶＨフレームワーク及びＶＬフレームワーク（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）を含む、ヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合する抗体又は抗体断片が挙げられる。ある態様において、抗体又は抗体断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列ＳＹＮＭＹを含むＨＣＤＲ１（重鎖ＣＤＲ１）；配列番号１２に記載のアミノ酸配列ＹＩＤＰＹＮＧＧＳＳＹＮＱＫＦＫＧを含むＨＣＤＲ２（重鎖ＣＤＲ２）であって、任意選択によりさらに、配列番号１２の１３位のグルタミン残基（Ｑ）は、ロイシン残基（Ｌ）で置換され得、配列番号１２の１４位のリシン残基（Ｋ）は、任意選択により、スレオニン残基（Ｔ）で置換され得る、配列；配列番号１３に記載のアミノ酸配列ＧＹＮＮＹＫＡＷＦＡＹを含むＨＣＤＲ３（重鎖ＣＤＲ３）であって、任意選択によりさらに、配列番号１３の３位のアスパラギン残基（Ｎ）は、グリシン残基（Ｇ）で置換され得る、配列；配列番号１４に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＴＮＤＶＡを含むＬＣＤＲ１（軽鎖ＣＤＲ１）であって、任意選択によりさらに、配列番号１４の７位のスレオニン残基（Ｔ）は、セリン残基（Ｓ）で置換され得る、配列；配列番号１５に記載のアミノ酸配列ＹＡＳＮＲＹＴを含むＬＣＤＲ２（軽鎖ＣＤＲ２）であって、任意選択により、配列番号１５の４位のアスパラギン残基（Ｎ）は、スレオニン残基（Ｔ）で置換され得る、配列；配列番号７に記載のアミノ酸配列ＱＱＤＹＳＳＬＴを含むＬＣＤＲ３（軽鎖ＣＤＲ３）を含む。

【0123】

ある実施形態において、ＨＤＣＲ２は、式Ｉのアミノ酸配列：
Ｙ－Ｉ－Ｄ－Ｐ－Ｙ－Ｎ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｎ－Ｘａａ_１－Ｘａａ_２－Ｆ－Ｋ－Ｇ（配列番号３）又はその部分配列を含み、ここで、Ｘａａ_１はＱ（Ｇｌｎ）又はＬ（Ｌｅｕ）であり、Ｘａａ_２はＫ（Ｌｙｓ）又はＴ（Ｔｈｒ）である。

【0124】

ある実施形態において、ＨＤＣＲ３は、式ＩＩのアミノ酸配列：Ｇ－Ｙ－Ｘａａ_１－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ａ－Ｗ－Ｆ－Ａ－Ｙ（配列番号４）又はその部分配列を含み、ここで、Ｘａａ_１は、Ｎ（Ａｓｐ）又はＧ（Ｇｌｙ）である。

【0125】

ある実施形態において、ＬＤＣＲ１は、式ＩＩＩのアミノ酸配列：Ｋ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｘａａ_１－Ｎ－Ｄ－Ｖ－Ａ（配列番号５）又はその部分配列を含み、ここで、Ｘａａ_１は、Ｔ（Ｔｈｒ）又はＳ（Ｓｅｒ）である。

【0126】

ある実施形態において、ＬＤＣＲ２は、式ＩＶのアミノ酸配列：Ｙ－Ａ－Ｓ－Ｘａａ_１－Ｒ－Ｙ－Ｔ（配列番号６）又はその部分配列を含み、ここで、Ｘａａ_１は、Ｔ（Ｔｈｒ）又はＮ（Ａｓｎ）である。

【0127】

ある態様において、本発明に記載の処置方法において使用するための、ヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合する抗体は、配列番号２に記載のアミノ酸配列ＳＹＮＭＹを含むＨＣＤＲ１；配列番号８に記載のアミノ酸配列ＹＩＤＰＹＮＧＧＳＳＹＮＬＴＦＫＧを含むＨＣＤＲ２；配列番号９に記載のアミノ酸配列ＧＹＧＮＹＫＡＷＦＡＹを含むＨＣＤＲ３；配列番号１０に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡを含むＬＣＤＲ１；配列番号１１に記載のアミノ酸配列ＹＡＳＴＲＹＴを含むＬＣＤＲ２；及び配列番号７に記載のアミノ酸配列ＱＱＤＹＳＳＬＴを含むＬＣＤＲ３を含む。

【0128】

ある態様において、本発明に記載の処置方法において使用するための、ヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合する単離抗体は、配列番号２に記載のアミノ酸配列ＳＹＮＭＹを含むＨＣＤＲ１；配列番号１２に記載のアミノ酸配列ＹＩＤＰＹＮＧＧＳＳＹＮＱＫＦＫＧを含むＨＣＤＲ２；配列番号１３に記載のアミノ酸配列ＧＹＮＮＹＫＡＷＦＡＹを含むＨＣＤＲ３；配列番号１４に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＴＮＤＶＡを含むＬＣＤＲ１；配列番号１５に記載のアミノ酸配列ＹＡＳＮＲＹＴを含むＬＣＤＲ２；及び配列番号７に記載のアミノ酸配列ＱＱＤＹＳＳＬＴを含むＬＣＤＲ３を含む。

【0129】

ある実施形態において、抗体は、ヒトサブグループＩＧＨＶ１－３からの重鎖フレームワークを含み（任意選択によりＩＧＨＪ４と共に）、任意選択により、ＩＧＨＶ１－３は、ＩＧＨＶ１－３＊０１である。ある実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＩＧＫＶ１－３３（任意選択によりＩＧＫＪ２と共に）、任意選択によりＩＧＫＶ１－３３＊０１からの軽鎖フレームワークを含む。

【0130】

抗体は、例えば、抗体の親和性、安定性又は他の特性を強化するために、ヒト重鎖及び／又は軽鎖フレームワーク全体にわたる１、２、３、４、５つ又はそれを超える数のアミノ酸置換をさらに含み得る。

【0131】

抗ＣＤ７３抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列の例を実施例２（Ｈ４＋鎖を示し、２Ｈ４＋２Ｌｘ抗体について表３に示す）に示し、Ｌ１－Ｌ４鎖について表１に示す。

【0132】

ある態様において、本発明は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号３、８又は１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｃ）配列番号４、９又は１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号５、１０又は１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号６、１１又は１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；及び
（ｇ）ヒト重鎖及び軽鎖フレームワーク配列
を含む、本発明に記載の処置方法において使用される抗ＣＤ７３抗体又は抗体断片を提供する。

【0133】

ある実施形態において、抗体は、ＩＧＨＪ４と共に、ヒトサブグループＩＧＨＶ１－３からの重鎖フレームワークを含み、任意選択により、抗体は、ＩＧＨＪ４と共に、ＩＧＨＶ１－３＊０１を含む。ある実施形態において、ヒト化抗体は、ＩＧＫＪ２と共に、ヒトサブグループＩＧＫＶ１－３３、任意選択によりＩＧＫＶ１－３３＊０１からの軽鎖フレームワークを含む。

【0134】

任意選択により、ヒトフレームワークは、１つ以上の突然変異、例えば非ヒト哺乳動物（例えば、マウス）の特定の位置に存在する残基を導入するための逆突然変異を含む。

【0135】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置２のアミノ酸は、イソロイシンである。

【0136】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置３０のアミノ酸は、アラニンである。

【0137】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置４８のアミノ酸は、イソロイシンである。

【0138】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置６９のアミノ酸は、ロイシンである。

【0139】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置７３のアミノ酸は、リシンである。

【0140】

ある実施形態において、ＶＨは、Ｋａｂａｔ位置２にイソロイシン残基を、位置３０にアラニンを、位置４８にイソロイシンを、位置６９にロイシンを、且つ位置７３にリシンを含む。

【0141】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ軽鎖位置６７のアミノ酸は、チロシンである。

【0142】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ軽鎖位置６０のアミノ酸は、セリン又はアスパラギン酸である。

【0143】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ軽鎖位置２のアミノ酸は、バリン又はイソロイシンである。

【0144】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ軽鎖位置８７のアミノ酸は、チロシン又はフェニルアラニンである。

【0145】

ある実施形態において、ＶＬは、Ｋａｂａｔ位置６７にチロシン残基を、位置６０にセリンを、位置２にイソロイシンを、且つ位置８７にチロシンを含む。

【0146】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置２８のアミノ酸は、スレオニン（Ｔ）である。

【0147】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置６６のアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）である。

【0148】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置６７のアミノ酸は、バリン（Ｖ）である。

【0149】

本明細書の任意の実施形態のある態様において、Ｋａｂａｔ重鎖位置７１のアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）である。

【0150】

本明細書のＶＨ及びＶＬドメインにおける位置は、Ｋａｂａｔ付番系（Ｋａｂａｔ ｅｔ．ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）を使用して記載される。

【0151】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３７又は４２のＶＨドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有するＶＨドメインを含む。

【0152】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗体断片は、配列番号３３～３６又は４３～４６のいずれかのＶＬドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の同一性又は１００％の同一性）を有するＶＬドメインを含む。

【0153】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗体断片は、配列番号４２のＶＨドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有するＶＨドメイン及び配列番号４３～４６のいずれかのＶＬドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の同一性又は１００％の同一性）を有するＶＬドメインを含む。

【0154】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗体断片は、Ｈ４＋Ｌ１抗体の配列番号３８の重鎖に対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有する重鎖を含む。ある実施形態において、抗体又は抗体断片は、Ｈ４＋Ｌ１抗体の配列番号３９の軽鎖に対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有する軽鎖を含む。

【0155】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗体断片は、２Ｈ４＋２Ｌ１抗体の配列番号４７の重鎖に対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有する重鎖を含む。ある実施形態において、抗体又は抗体断片は、２Ｈ４＋２Ｌ１抗体の配列番号４８の軽鎖に対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性又は１００％の同一性）を有する軽鎖を含む。

【0156】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗ＣＤ７３抗体断片は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0157】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体又は抗ＣＤ７３抗体断片は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0158】

別の態様において、本発明の処置方法に従う使用のための抗ＣＤ７３抗体は、別の好適なＣＤ７３抗体由来の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、２、及び３（例えば、Ｋａｂａｔ付番に従って決定されている）又は重鎖及び軽鎖の可変領域を有し得る。

【0159】

ＣＤ７３二量体の各サブユニットは、２つの構造ドメイン：Ｎ末端ドメイン（残基２７～３１７、Ｋｎａｐｐ ｅｔ ａｌ．（２０１２）で言及されている付番）と、Ｃ末端ドメイン（残基３３７～５４９）からなり、ＣＤ７３のより大きなＮ末端ドメインは、金属イオン結合部位を含み、且つ２つの挟まれた混合ｂシートを含む４層のａ／ｂ－ｂ－ｂ－ａ構造を有している。Ｃ末端ドメインは、基質結合部位と、二量体化界面とを含み、且つ組成ａ／ｂ－ｂ－ａ－ｂの４層構造を有する。これら２つのドメインは、小さいヒンジ領域を含む単一のヘリックス（残基３１８～３３６）により連結されており、このヒンジ領域により、酵素は大きなドメイン移動を受けることが可能となり、それにより開構造と閉構造との間で切り替わる。閉構造で観察される活性部位は、Ｎ末端ドメインとＣ末端ドメインとの間の界面に位置しており、両方のドメインの残基で形成されている。例えば、Ｋｎａｐｐ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２０，２１６１－２１７３（この開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）を参照されたい。

【0160】

特に関心のある好適なＣＤ７３抗体のクラスは、過去の抗ＣＤ７３抗体で観察された「フック効果」を欠いている抗体（例えば、１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７）（国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレット、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ（この開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）を参照されたい）で表される。フック効果を欠くと報告されている他の例示的な抗ＣＤ７３抗体として、抗体３５０、３５６、３５８、３７３（例えば３７３．Ａ）、３７４、３７６、３７７、３７９、又はＨｕ１０１－２８が挙げられる（国際公開第２０１８／２３７１５７号パンフレット及び同第２０１８１３７５９８号パンフレット（これらの開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）を参照されたい）。フック効果は、可溶性二量体タンパク質としてのＣＤ７３の阻害に関して偽陽性として現れる抗ＣＤ７３抗体の傾向を指す。国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットで論じられているように、酵素活性の真の阻害ではなくＣＤ７３二量体の架橋を引き起こすと考えられるそのような抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３二量体に対して高過剰で試験した場合に、ＣＤ７３を阻害する能力を失う。１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７等の抗体は、（１つのＣＤ７３二量体に二価で結合することにより）可溶性ＣＤ７３の酵素活性を阻害し、（内在化に依存することなく）細胞膜に結合したＣＤ７３の特に強力な非競合的阻害剤として作用し得る（国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットを参照されたい）。（例えば腫瘍間質中の）ＣＤ７３を実質的に完全に中和する能力を考慮して、これらの抗体を、特に、腫瘍間質でのＣＤ７３の発現の誘発に関連する化学療法剤と組み合わされた及び／又は抗ＨＥＲ２抗体と組み合わされた処置レジメンで、有利に使用し得る。

【0161】

抗体は、好ましくは、腫瘍細胞等の細胞の表面で発現されたＣＤ７３上に存在するエピトープに結合し、ＣＤ７３酵素（例えば、細胞の表面で発現された膜結合ＣＤ７３タンパク質）の酵素（エクト－５’ヌクレオチダーゼ）活性を阻害する。ある実施形態において、この抗体を、純粋なＣＤ７３遮断抗体として使用し得、例えば、この抗体は、Ｆｃ受容体に実質的に結合することなく及び／又はＣＤ７３発現細胞にＡＤＣＣを実質的に導くことなく、細胞の表面で発現された膜結合ＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害する。任意選択により、この抗体は、Ｆｃドメインを保持しており、且つヒトＦｃＲｎへの結合を保持する。

【0162】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、基質に結合していない場合だけでなく基質（例えば、ＡＭＰ等の天然の基質、又は阻害剤、又はＡＭＰ類似体であるアデノシン５’－（α，β－メチレン）二リン酸（ＡＰＣＰ）等の活性部位に結合する他の化合物）に結合している場合にも、ＣＤ７３上に存在しているＣＤ上のエピトープに結合し得る。ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３ポリペプチドへの結合に関して、ＣＤ７３の基質と競合しない。ＣＤ７３の基質の例として、下記が挙げられる：例えば、ＡＭＰ等の天然の基質、又は阻害剤、又はＡＭＰ類似体であるアデノシン５’－（α，β－メチレン）二リン酸（ＡＰＣＰ）等の活性部位に結合する他の化合物。

【0163】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、アロステリック阻害剤として作用し、且つインタクトな完全長抗体とＣＤ７３二量体との間の１：１化学量論にて、二量体内結合モードでＣＤ７３に結合する。ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、ＡＭＰが加水分解され得ない中間状態（開（不活性）状態と、閉（活性、基質結合）状態との間）で、ＣＤ７３ポリペプチドに結合してこのＣＤ７３ポリペプチドを拘束し得る。

【0164】

ある実施形態において、抗体は、ＣＤ７３が可溶性組換えＣＤ７３タンパク質として存在する場合に、ＣＤ７３の酵素活性を阻害し、例えば、抗体は、この抗体がオリゴマーを形成し得ない設定／構成である場合に、例えば、ＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して実質的なモル過剰（例えば、少なくとも１０倍、２０倍、１００倍等）で提供される場合に、可溶性ヒト二量体ＣＤ７３ポリペプチドの酵素活性を阻害し得る。残留するＣＤ７３酵素活性が、免疫抑制効果を媒介するのに十分なアデノシン生成をもたらし得ることから、治療効果を媒介するためには、高レベルの抗体媒介性酵素遮断が有利である。

【0165】

そのような抗体の例は、本明細書及びＰＣＴ出願国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットで説明されている（例えば、抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７）。抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７は、残基Ｋ１３６（配列番号１のＣＤ７３ポリペプチドに関する）での置換を有するＣＤ７３変異体への結合を失っている。抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７はまた、残基Ａ９９、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４、及びＡ１３５（配列番号１のＣＤ７３ポリペプチドに関する）での置換を有する変異体、並びに残基Ｋ９７、Ｅ１２５、Ｑ１５３、及びＫ３３０（配列番号１のＣＤ７３ポリペプチドに関する）での置換を有する変異体への結合も失っている。抗体の他の例は、配列番号１の残基１３１～１６２のセグメントで結合し得、特に、アミノ酸残基Ｌ１３１、Ｋ１３６、Ｓ１５５ Ｌ１５７ Ｋ１６２ Ｋ３３０（配列番号１のＣＤ７３ポリペプチドに関する）で結合し得る。

【0166】

抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、及び８Ｃ７は、二量体内モードでＣＤ７３二量体に結合する抗体の例であり、二量体内モードで相互作用する他の抗体とは対照的に、ＡＭＰが加水分解され得ない不活性状態でＣＤ７３酵素を拘束する。そのようなＣＤ７３機能遮断抗体を同定するために使用され得る可溶性ＣＤ７３を使用するアッセイは、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレット及び同第２０１６／１３１９５０号パンフレットに記載されている。ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、本発明を開示する出願の出願日で入手可能であるか若しくは他の方法で既知である任意の抗体であるか、又はこの抗体の、ＣＤ７３に結合してＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力を保持する抗体断片（例えば、重鎖及び軽鎖のＣＤＲを含む断片）である。

【0167】

したがって、抗体は、ＣＤ７３ポリペプチドのアロステリック阻害剤であり得、例えば、この抗体は、ＣＤ７３ポリペプチドに結合するＣＤ７３ポリペプチドの基質の能力を妨げることなく、細胞（例えば限定されないが腫瘍細胞）の表面で発現されたヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合してＣＤ７３ポリペプチドの酵素（エクト－５’ヌクレオチダーゼ）活性を阻害する。

【0168】

本明細書では、同一面上に存在しているＣＤ７３上のエピトープに結合する例示的な抗体が説明されており、ＣＤ７３がＣＤ７３二量体として存在しており、例えば、抗体が１つのＣＤ７３二量体に二価で結合することが潜在的に可能となる場合には、この抗体は、インタクトな完全長抗体とＣＤ７３二量体との間の１：１化学量論にて、二量体内結合モードでＣＤ７３に結合する。リガンド結合ＣＤ７３への結合を考慮して、本明細書で説明されている抗体は、例えば、上流のＡＤＰ及び／又はＡＭＰが処置前の有意なレベルで存在している腫瘍環境中において、ＡＭＰに結合した場合でのＣＤ７３への結合に有用であり得る。腫瘍微小環境は、任意の適切なパラメータを特徴とし得、例えば、高レベルのＡＤＰ（例えば、瀕死の細胞により生成される）、ＡＭＰ、アデノシン、ＣＤ７３発現又はＣＤ７３発現細胞の存在又はレベル、アデノシン受容体発現又はアデノシン受容体発現細胞の存在又はレベルを特徴とし得る。そのため、腫瘍環境中のＣＤ７３分子は、基質結合構造で存在し得、非基質結合ＣＤ７３に加えて基質結合細胞性ＣＤ７３（例えば、ＡＭＰ等の基質と共に予めインキュベートされた、ＣＤ７３を発現する細胞）に結合して阻害する能力は、インビボでＣＤ７３を阻害する能力をより大きくし得る。任意選択により、ＡＤＰ又はＡＭＰ（及び／又はＡＴＰ又はアデノシン）のレベルを、処置前に腫瘍環境中で評価し得る。この抗体は、腫瘍試料中の有意なレベル（例えば、基準と比較して高レベル）のＡＤＰ、ＡＭＰ、ＡＴＰ、又はアデノシンを有する個体での処置に特に有利であり得る。

【0169】

例示的な抗体は、細胞の表面で発現されたヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合して、このＣＤ７３ポリペプチドの酵素（エクト－５’ヌクレオチダーゼ）活性を阻害し得、この抗体は、単一のＣＤ７３ポリペプチド二量体（細胞により発現された可溶性ＣＤ７３ポリペプチド二量体又はＣＤ７３ポリペプチド二量体）に二価で結合し得る。任意選択により、この抗体は、二量体内の第１のＣＤ７３ポリペプチドに第１の抗原結合ドメインで結合し、第２のＣＤ７３ポリペプチドに第２の抗原結合ドメインで結合する。

【0170】

例示的な抗体は、細胞の表面で発現されたヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合して、このＣＤ７３ポリペプチドの酵素（エクト－５’ヌクレオチダーゼ）活性を阻害し得、この抗体は、基質結合構造でＣＤ７３ポリペプチドに結合し得る。

【0171】

抗ＣＤ７３抗体を、ＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力に関して評価して選択し得、特に、ＣＤ７３の５’－ヌクレオチダーゼ活性を遮断し、ＣＤ７３発現細胞によるアデノシンの産生を減少させ、次に、リンパ球のアデノシン媒介性阻害の活性を回復させる及び／又は軽減する能力に関して評価し得る。

【0172】

ＣＤ７３の酵素活性を阻害する抗体の能力を、（二量体としての）組換え可溶性ヒトＣＤ７３及びＡＭＰを使用する無細胞アッセイで試験し得、アデノシンへのＡＭＰの変換（及び／又はその阻害）が、（例えば、基質及び生成物（即ち、ＡＭＰ、アデノシン、及び／又はリン酸塩）の測定により）直接的に検出されるか、又は間接的に検出される。一例において、ＡＭＰ及び／又はアデノシンは、試験化合物と組換えＣＤ７３とのインキュベーション前後に、ＨＰＬＣにより検出される。組換えＣＤ７３は、例えば国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレット及び同第２０１６／１３１９５０号パンフレットで説明されている。

【0173】

抗体の阻害活性をまた、多くの他の方法のいずれかでも評価し得る。例えば、間接アッセイでは、ルシフェラーゼ系試薬（例えば、Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能なＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）システム）を使用して、ＡＭＰの消失が検出される。このアッセイにおけるルシフェラーゼ反応は、ＡＭＰにより阻害される。反応物へのＣＤ７３酵素の添加により、ＡＭＰが分解されて阻害が軽減され、検出可能なシグナルが生じる。

【0174】

可溶性ＣＤ７３を使用するアッセイは、抗体が、ＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して実質的なモル過剰（例えば、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍等）で提供される条件下での試験を有利に含み得る。酵素に対してモル過剰で提供される場合には、抗ＣＤ７３抗体は、抗体とＣＤ７３二量体との多量体複合体をもはや形成し得ず；次いで、ＣＤ７３の酵素活性の阻害を保持する抗体が選択され得る。

【0175】

或いは、又は加えて、細胞アッセイ（ＣＤ７３を発現する細胞を使用する）では、ＣＤ７３の５’－エクトヌクレオチダーゼ酵素活性を阻害する抗体の能力も試験し得る。有利には、抗体を、ＣＤ７３の内在化を引き起こすことによりＣＤ７３を阻害する抗体を選択する可能性を低減するために、無細胞アッセイにおいて最初に試験するか又はスクリーニングして、酵素の活性を遮断する抗体を同定し、次いで、細胞アッセイにおいて精製抗体として試験し得る。細胞アッセイを、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットで示されるように実行し得る。例えば、ＣＤ７３発現細胞株（例えばＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株）を、抗ＣＤ７３抗体の存在下で平底９６ウェルプレートに蒔いてインキュベートする。この細胞にＡＭＰを添加し、４℃でインキュベートする（ＣＤ７３の下方調節を回避するため）。次いで、プレートを遠心分離し、上清を平底９６ウェル培養プレートに移す。次いで、アデノシンへのＡＭＰの加水分解により生成された遊離リン酸塩を定量する。抗体の存在下でのアデノシンへのＡＭＰの加水分解の減少は、抗体が細胞性ＣＤ７３を阻害することを示す。

【0176】

ある実施形態において、抗体調製物は、ＣＤ７３ポリペプチドの酵素活性の少なくとも５０％の減少を引き起こし、好ましくはＣＤ７３ポリペプチド（例えば、可溶性ホモ二量体ＣＤ７３ポリペプチド；細胞によって発現されるＣＤ７３）の酵素活性の少なくとも６０％、７０％、又は８０％の減少を引き起こす。

【0177】

抗体の活性をまた、リンパ球の活性を調節する能力に関しても、例えば、リンパ球活性のアデノシン媒介性阻害を軽減するか又はリンパ球活性の活性化を引き起こす能力に関しても、間接的アッセイで測定し得る。このことに、例えば、サイトカイン放出アッセイを使用して対処し得る。別の例において、抗体を、リンパ球の増殖を調節する能力に関して間接的アッセイで評価し得る。

【0178】

抗体を、ＣＤ７３を内在化する能力又はＣＤ７３の下方調節を誘発する能力に関して試験し得、例えば、内在化又は細胞表面からのＣＤ７３脱落の誘発のいずれかにより試験し得る。抗ＣＤ７３抗体が、哺乳動物細胞上のＣＤ７３への結合時に内在化するかどうか、又はＣＤ７３ポリペプチドが、（例えば抗体の結合時に）細胞内在化を受けるかどうかを、例えば国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレット（この開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）で説明されているもの等の様々なアッセイにより決定し得る。

【0179】

ある例において、抗体を、この抗体がオリゴマーを形成し得ない設定／構成である場合に、例えば、この抗体がＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して実質的なモル過剰（例えば、少なくとも１０倍、２０倍、１００倍等）で提供される場合に、可溶性ヒト二量体ＣＤ７３ポリペプチドの酵素活性を阻害する能力に関して選択し得る。オリゴマー化を引き起こすことにより機能する抗体は、この抗体がＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して実質的なモル過剰で提供される場合に、ＣＤ７３を阻害し得ない。さらに、この抗体は、ＣＤ７３が細胞表面上で発現されている場合に維持されているＣＤ７３上のエピトープに結合する。このアッセイの使用により、単一のＣＤ７３二量体に二価で結合する抗体も同定し得；そのような抗体は、ＣＤ７３発現細胞中においてインビトロ及びインビボで、改善されたＣＤ７３結合活性及びＣＤ７３遮断活性を有し得る。次いで、この方法により同定された抗体を、精製抗体を使用する細胞酵素活性アッセイで試験し、細胞性ＣＤ７３の酵素活性を中和することが分かった。主に内在化を誘発することによりＣＤ７３を阻害する抗体、又は細胞性ＣＤ７３への有意な結合を失う抗体は、効力が低く、酵素活性を中和し得ず、よくて細胞中でＣＤ７３の酵素活性を部分的に阻害するだけであった。

【0180】

これらの抗体が結合するＣＤ７３上のエピトープは、様々な細胞（例えば、癌細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｂ細胞、遺伝子導入細胞）により発現されるＣＤ７３ポリペプチド上に存在しており、フローサイトメトリーにより決定した場合に高親和性で結合する。例えば、抗体は、フローサイトメトリーにより決定した場合に、本明細書で説明されている抗ＣＤ７３抗体（例えば抗体６Ｅ１）のＥＣ_５０に相当するか、若しくはこのＥＣ_５０と比べて２ｌｏｇ以下で大きい、任意選択により１ｌｏｇ大きいＥＣ_５０を特徴とし得るか、又は表面でＣＤ７３ポリペプチドを発現する細胞への結合に関して、５μｇ／ｍｌ以下、任意選択により２μｇ／ｍｌ以下、１μｇ／ｍｌ以下、０．５μｇ／ｍｌ以下、０．１μｇ／ｍｌ以下、若しくは０．０５μｇ／ｍｌ以下のＥＣ_５０を特徴とし得る。ある実施形態において、細胞は、表面でＣＤ７３を発現するように作られた細胞である。ある実施形態において、細胞は、表面でＣＤ７３を内因的に発現する細胞（例えば癌細胞）である。

【0181】

ある実施形態において、ＣＤ７３中和抗体は、細胞のＣＤ７３の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性の少なくとも６０％、７５％、又は８０％の減少を引き起こし得ることを特徴とし得る。ある実施形態において、ＣＤ７３中和抗体は、本明細書で説明されている抗体のＥＣ_５０に相当するか若しくはこのＥＣ_５０以下の、本明細書で説明されている抗ＣＤ７３抗体（例えば抗体６Ｅ１）のＥＣ_５０と比べて２ｌｏ以下で大きい、任意選択により１ｌｏｇ大きい、又は１μｇ／ｍｌ以下、任意選択により０．５μｇ／ｍｌ以下、任意選択により０．２μｇ／ｍｌ以下の、細胞により発現されるＣＤ７３の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性の阻害に関するＥＣ_５０を特徴とし得る。

【0182】

任意選択により、細胞により発現されるＣＤ７３の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性の阻害は、アデノシンへのＡＭＰの加水分解を定量することによりＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞中での５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することにより決定される（例えば、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットの実施例５を参照されたい）。

【0183】

ある実施形態において、抗体は、細胞の表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、且つ細胞性ＣＤ７３（細胞により発現されるＣＤ７３）の５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し得る。ある実施形態において、抗体は、細胞の表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し且つその５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し、ＣＤ７３への結合時にＣＤ７３発現細胞中に内在化されず、例えば、この抗体は、そのＣＤ７３中和活性のために、ＣＤ７３の多量体化及びその後の内在化を必要としない。ある実施形態において、抗体は、非枯渇活性であり、例えばＦｃサイレント抗体である。抗体は、溶液中の二量体ヒトＣＤ７３ポリペプチドの５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し得、さらには、ＣＤ７３ポリペプチド抗ＣＤ７３抗体のオリゴマーの誘導に依存しない。

【0184】

ある態様において、抗体は、ＡＭＰと共に予めインキュベートされた細胞の表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、その５’－エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し得る。任意選択により、５’－エクトヌクレオチダーゼ活性の中和は、アデノシンへのＡＭＰの加水分解を定量することによりＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞での５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することにより決定される（例えば、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットの実施例５を参照されたい）。

【0185】

任意選択により、抗ＣＤ７３抗体は、可溶性ＣＤ７３と細胞表面で発現されたＣＤ７３との両方上に存在する共通の抗原決定基に結合し得る。

【0186】

任意選択により、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３活性部位が基質（例えばＡＭＰ、ＡＰＣＰ）により占有されていない／結合していない場合に、及びＣＤ７３活性部位が基質（例えばＡＭＰ、ＡＰＣＰ）により占有されている／結合している場合に、ＣＤ７３上に存在する共通の抗原決定基に結合する。

【0187】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３二量体内の各ＣＤ７３ポリペプチド鎖内の抗原決定基に結合し、例えば、この抗原決定基は、ＣＤ７３二量体の共通面上に存在している。

【0188】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、セグメント１５８～１７１の残基及び／又はセグメント２０６～２１１の残基でアミノ酸置換を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下しており、例えば、任意の１つ又は複数の残基Ｖ１７０、Ｋ２０６、及びＮ２１１（配列番号１に関する）でアミノ酸置換を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下している。

【0189】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、セグメント６５～８３での残基及び／又はセグメント１５７～１７２での残基（配列番号１に関する）でアミノ酸置換を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下している。

【0190】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、残基Ｋ１３６（配列番号１に関する）を含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0191】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｋ９７、Ｅ１２５、Ｑ１５３、及びＫ３３０（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の内の１、２、３、又は４個を含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0192】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ａ９９、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４、及びＡ１３５（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の内の１、２、３、４、又は５個を含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0193】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１、及びＲ４８０（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の内の１、２、３、４、又は５個を含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0194】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、アミノ酸残基Ｋ９７、Ａ９９、Ｅ１２５、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４、Ａ１３５、Ｋ１３６、Ｑ１５３、及びＫ３３０（配列番号１に関する）を含むヒトＣＤ７３タンパク質（例えばＣＤ７３ホモ二量体タンパク質）上のアミノ酸残基のドメイン又はセグメント内に少なくとも部分的に結合する。ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｋ９７、Ａ９９、Ｅ１２５、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４、Ａ１３５、Ｋ１３６、Ｑ１５３、及びＫ３３０（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の内の少なくとも１、２、３、４、又は５個、又はより多くを含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0195】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、残基Ｋ１３６（配列番号１に関する）で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下しており；任意選択により、この変異体ＣＤ７３ポリペプチドは、変異：Ｋ１３６Ａを有する。

【0196】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｋ９７、Ｅ１２５、Ｑ１５３、及びＫ３３０（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下しており；任意選択により、この変異体ＣＤ７３ポリペプチドは、変異：Ｋ９７Ａ、Ｅ１２５Ａ、Ｑ１５３Ａ、及び／又はＫ３３０Ａ（例えば、Ｋ９７Ａ、Ｅ１２５Ａ、及びＫ３３０Ａ；Ｋ９７Ａ、Ｅ１２５Ａ、及び／又はＱ１５３Ａ）を有する。

【0197】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ａ９９、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４、及びＡ１３５（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下しており；任意選択により、この変異体ＣＤ７３ポリペプチドは、変異：Ａ９９Ｓ、Ｅ１２９Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｅ１３４Ｎ、及びＡ１３５Ｓを有する。

【0198】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｌ１３１、Ｋ１３６、Ｓ１５５、Ｌ１５７、Ｋ１６２、及びＫ３３０（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の内の１、２、３、４、５、又は６個を含むＣＤ７３上のエピトープに結合する。

【0199】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｌ１３１、Ｋ１３６、Ｓ１５５、Ｌ１５７、及びＫ１６２（配列番号１に関する）からなる群から選択される１つ又は複数（又は全て）の残基で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下している。

【0200】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｌ１３１、Ｋ１３６、Ｓ１５５、Ｌ１５７、Ｋ１６２、及びＫ３３０（配列番号１に関する）からなる群から選択される１つ又は複数（又は全て）の残基で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下している。

【0201】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１、及びＲ４８０（配列番号１に関する）からなる群から選択される１つ又は複数（又は全て）の残基で変異を有するＣＤ７３ポリペプチドへの結合が減少している。

【0202】

ある態様において、抗ＣＤ７３抗体は、抗体１１Ｅ１、８Ｃ７、３Ｃ１２、６Ｅ１、３７３．Ａ、及び／又はＨｕ１０１－２８が結合するＣＤ７３上のエピトープへの結合に関して競合する（例えば、ＣＤ７３ポリペプチド上のエピトープへの結合に関して、前記抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ又は可変領域を有する抗体と競合する）。

【0203】

本明細書の実施形態のいずれかの一態様において、抗原結合化合物は、モノクローナル抗体１１Ｅ１、８Ｃ７、３Ｃ１２、及び／若しくは６Ｅ１と、同一のエピトープに結合し、並びに／又はＣＤ７３ポリペプチド上のエピトープへの結合に関して競合する（例えば、１１Ｅ１、８Ｃ７、３Ｃ１２、又は６Ｅ１のいずれかの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ又は可変領域を有する抗体と、ＣＤ７３ポリペプチドへの結合に関して競合する）。ある実施形態において、抗原結合化合物は、下記からなる群から選択される抗体と、同一のエピトープに結合し、及び／又はＣＤ７３ポリペプチド上のエピトープへの結合に関して競合する：
（ａ）配列番号４９及び５０のＶＨ領域及びＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（６Ｅ１）；
（ａ）配列番号５１及び５２のＶＨ領域及びＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１１Ｅ１）；
（ｃ）配列番号５３及び５４のＶＨ領域及びＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（８Ｃ７）；
並びに
（ｄ）配列番号５５及び５６のＶＨ領域及びＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（３Ｃ１２）。

【0204】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、又は８Ｃ７が結合するＣＤ７３上のアミノ酸残基からなる群から選択される１、２、又は３個のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。

【0205】

本明細書の実施形態のいずれかの一態様において、抗体は、１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３（例えば３７３．Ａ）、又はＨｕ１０１－２８からなる抗体の群から選択される抗体のそれぞれの重鎖及び／又は軽鎖の１、２、又は３個のＣＤＲを有する重鎖及び／又は軽鎖を有し得る。

【0206】

抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、及びＨｕ１０１－２８の重鎖及び軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を、表Ａに列挙する。具体的な実施形態において、本開示は、モノクローナル抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、又はＨｕ１０１－２８と同一又は実質的に同一のエピトープ又は決定基に結合する抗体を提供し；任意選択により、この抗体は、抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、又はＨｕ１０１－２８の超可変領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、又はＨｕ１０１－２８は、アミノ酸配列及び／又はこのアミノ酸配列をコードする核酸配列を特徴とし得る。ある実施形態によれば、抗体は、１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、又はＨｕ１０１－２８の重鎖可変領域の３個のＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ付番、Ｃｈｏｔｈｉａ付番、又はＩＧＭＴ付番に従う）を含み得る。同様に提供されるのは、１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、若しくはＨｕ１０１－２８の可変軽鎖可変領域をさらに含むか、又は各１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、若しくはＨｕ１０１－２８抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ付番、Ｃｈｏｔｈｉａ付番、又はＩＧＭＴ付番に従う）の１、２、若しくは３個をさらに含むモノクローナル抗体である。任意選択により、前記軽鎖又は重鎖のＣＤＲのいずれか１つ又は複数は、１、２、３、４、又は５個、又はより多くのアミノ酸改変（例えば、置換、挿入、又は欠失）を含み得る。任意選択により、提供されるのは、抗体であって、抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、８Ｃ７、３７３．Ａ、又はＨｕ１０１－２８の抗原結合領域の一部又は全てを含む軽鎖及び／又は重鎖の可変領域のいずれかが、ヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域に融合しており、任意選択によりヒト定常領域に融合しており、任意選択によりヒトＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、又はＩｇＧ４アイソタイプに融合している、抗体である。ある実施形態において、エフェクター機能（ヒトＦｃγ受容体への結合）を減少させるためのアミノ酸置換を任意選択によりさらに含むヒト定常領域。ある実施形態において、ＣＤ７３の細胞内内在化を増加させるか又は誘発するためのアミノ酸置換を任意選択によりさらに含むヒト定常領域（任意選択によりヒンジ領域）。

【0207】

本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、２、及び／又は３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９、若しくは１０個の連続したアミノ酸の配列を特徴とし得、及び／又は特定のＣＤＲ若しくはＣＤＲのセット（例えば、配列番号で列挙されている）と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とし得る。これらの抗体のいずれか（例えば、１１Ｅ１、８Ｃ７、３Ｃ１２、又は６Ｅ１）において、特定の可変領域配列及びＣＤＲ配列は、配列改変を含み得、例えば、置換（１、２、３、４、５、６、７、８個、又はより多くの配列改変）を含み得る。ある実施形態において、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、２、及び／又は３は、１、２、３個、又はより多くのアミノ酸置換を含み、置換された残基は、ヒト起源の配列で存在している残基である。ある実施形態において、置換は、保存的改変である。保存的配列改変は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意な影響を及ぼさないか又はこの結合特性を有意に変更しないアミノ酸改変を指す。そのような保存的改変として、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が挙げられる。改変は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発等の当技術分野で既知の標準的な技術により、抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、典型的には、アミノ酸残基が、物理化学的特性が類似している側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられているものである。特定の可変領域配列及びＣＤＲ配列は、１、２、３、４個、又はより多くのアミノ酸の挿入、欠失、又は置換を含み得る。置換が行なわれる場合には、好ましい置換は、保存的改変である。側鎖が類似しているアミノ酸残基のファミリは、当技術分野で定義されている。このファミリとして、下記が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。そのため、抗体のＣＤＲ領域内の１つ又は複数のアミノ酸残基を、同一の側鎖ファミリ由来の他のアミノ酸残基に置き換え得、変更された抗体を、本明細書で説明されているアッセイを使用して、保持された機能（即ち、本明細書に記載されている特性）に関して試験し得る。

【0208】

表Ａに示されているＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗体のＨＣＤＲ１、２、３、及びＬＣＤＲ１、２、３は、任意選択により、全て（又はそれぞれ独立して）Ｋａｂａｔ付番系のもの、Ｃｈｏｔｈｉａ付番系のもの、ＩＭＧＴ付番系のもの、又は任意の他の好適な付番系であると指定され得る。下線が引かれた太字の配列は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲを示す。

【0209】

【表1】

【0210】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、それらがヒトＦｃγ受容体、例えばＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ及び／又はＣＤ６４のいずれか１つ以上に実質的な結合を有しないように調製され得る。このような抗体は、Ｆｃγ受容体に対する結合を欠くこと又は低い結合性を有することが知られている様々な重鎖の定常領域を含み得る。代替的に、Ｆｃ受容体結合を回避するために、Ｆ（ａｂ’）２断片など、定常領域を含まない（又は部分的に含む）抗体断片を使用し得る。Ｆｃ受容体結合は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおけるＦｃ受容体タンパク質への抗体の結合を試験することを含め、当技術分野で公知の方法に従い評価し得る。また、Ｆｃ受容体への結合を最小化又は除外するためにＦｃ部分が修飾される（例えば、１、２、３、４、５つ又はそれを超えるアミノ酸置換を導入することによって）何らかの抗体ＩｇＧアイソタイプを一般に使用し得る（例えば、その開示が参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第０３／１０１４８５号パンフレットを参照されたい）。Ｆｃ受容体結合を評価するためのそのようなアッセイは、当技術分野で周知であり、例えば国際公開第０３／１０１４８５号パンフレットに記載されている。

【0211】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、エフェクター細胞との最小限の相互作用を有する「Ｆｃサイレント」抗体を生じるＦｃ領域における１つ以上の特異的突然変異を含み得る。サイレンシングされたエフェクター機能は、抗体のＦｃ領域における突然変異によって得ることができ、当技術分野において記載されてきた。Ｎ２９７Ａ突然変異、ＬＡＬＡ突然変異（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｖｏｌ．２０（６）：６８５－６９１）；Ｄ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４－６９）及びＨｅｕｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，国際公開第２０１２／０６５９５０号パンフレットを参照されたい。これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態において、抗体は、ヒンジ領域に１、２、３つ又はそれを超えるアミノ酸置換を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ２であり、残基２３３～２３６、任意選択により２３３～２３８（ＥＵ付番）において１つ、２つ又は３つの置換を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４であり、残基３２７、３３０及び／又は３３１（ＥＵ付番）に１つ、２つ又は３つの置換を含む。サイレントＦｃ ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列におけるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を含むＬＡＬＡ突然変異体である。Ｆｃサイレント突然変異の別の例は、例えば、ＤＡＰＡ（Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ）突然変異（米国特許第６，７３７，０５６号明細書）としてＩｇＧ１抗体において用いられる、残基Ｄ２６５又はＤ２６５及びＰ３２９における突然変異である。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、残基Ｎ２９７における突然変異（例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｓ突然変異）を含み、その結果、グリコシル化／非グリコシル化抗体を生じる。他のサイレント突然変異は、残基Ｌ２３４及びＧ２３７における置換（Ｌ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ）；残基Ｓ２２８、Ｌ２３５及びＲ４０９における置換（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｔ、Ｍ、Ｌ）；残基Ｈ２６８、Ｖ３０９、Ａ３３０及びＡ３３１における置換（Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ）；残基Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９及びＰ２３８における置換（Ｃ２２０Ｓ／Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｐ２３８Ｓ）；残基Ｃ２２６、Ｃ２２９、Ｅ２３３、Ｌ２３４及びＬ２３５における置換（Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ；残基Ｋ３２２、Ｌ２３５及びＬ２３５における置換（Ｋ３２２Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）；残基Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＰ３３１における置換（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）；残基２３４、２３５及び２９７における置換；残基Ｅ３１８、Ｋ３２０及びＫ３２２における置換（Ｌ２３５Ｅ／Ｅ３１８Ａ／Ｋ３２０Ａ／Ｋ３２２Ａ）；残基（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ）における置換；残基２４３及び２６４における置換；残基２９７及び２９９における置換；ＥＵ付番系によって定義される残基２３３、２３４、２３５、２３７及び２３８がＰＡＡＡＰ、ＰＡＡＡＳ及びＳＡＡＡＳから選択される配列を含む置換（国際公開第２０１１／０６６５０１号パンフレットを参照されたい）を含む。

【0212】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、Ｆｃ領域に１つ以上の特異的突然変異を含むことができる。例えば、そのような抗体は、ヒトＩｇＧ１起源のＦｃドメインを含み、Ｋａｂａｔ残基２３４、２３５、２３７、３３０及び／又は３３１における突然変異を含む。そのようなＦｃドメインの一例は、Ｋａｂａｔ残基Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＰ３３１における置換（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ又は（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ））を含む。このようなＦｃドメインの別の例は、Ｋａｂａｔ残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７及びＰ３３１における置換（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ３３１Ｓ）を含む。このようなＦｃドメインの別の例は、Ｋａｂａｔ残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ａ３３０及びＰ３３１における置換（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）を含む。ある実施形態において、抗体は、Ｆｃドメイン、任意選択によりヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む抗体であり、Ｌ２３４Ｘ_１置換、Ｌ２３５Ｘ_２置換及びＰ３３１Ｘ_３置換を含み、Ｘ_１は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_２は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残であり基、Ｘ_３は、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり、任意選択により、Ｘ_１は、アラニン若しくはフェニルアラニン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_２は、グルタミン酸又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_３は、セリン又はその保存的置換である。別の実施形態において、抗体は、Ｆｃドメイン、任意選択によりヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む抗体であり、Ｌ２３４Ｘ_１置換、Ｌ２３５Ｘ_２置換、Ｇ２３７Ｘ_４置換及びＰ３３１Ｘ_４置換を含み、Ｘ_１は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_２は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_３は、グリシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_４は、プロリン以外のアミノ酸残基であり、任意選択により、Ｘ_１は、アラニン若しくはフェニルアラニン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_２は、グルタミン酸又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_３は、アラニン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_４は、セリン又はその保存的置換である。別の実施形態において、抗体は、Ｆｃドメイン、任意選択によりヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む抗体であり、Ｌ２３４Ｘ_１置換、Ｌ２３５Ｘ_２置換、Ｇ２３７Ｘ_４置換、Ｇ３３０Ｘ_４置換及びＰ３３１Ｘ_５置換を含み、Ｘ_１は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_２は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_３は、グリシン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｘ_４は、アラニン以外のアミノ酸残基であり、Ｘ_５は、プロリン以外のアミノ酸残基であり、任意選択により、Ｘ_１は、アラニン若しくはフェニルアラニン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_２は、グルタミン酸又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_３は、アラニン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_４は、セリン又はその保存的置換であり；任意選択により、Ｘ_５は、セリン又はその保存的置換である。

【0213】

本明細書で使用されている略記法では、形式は、野生型残基：ポリペプチド中の位置：突然変異体残基であり、残基位置は、ＫａｂａｔによるＥＵ付番に従って示される。

【0214】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域又はそれらと少なくとも９０％、９５％若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含むが、Ｋａｂａｔ位置２３４、２３５及び３３１にアミノ酸残基を保持する（下線）。

【化8】

【0215】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域又はそれらと少なくとも９０％、９５％若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含むが、Ｋａｂａｔ位置２３４、２３５及び３３１にアミノ酸残基を保持する（下線）。

【化9】

【0216】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域又はそれらと少なくとも９０％、９５％若しくは９９％同一のアミノ酸配列を含むが、Ｋａｂａｔ位置２３４、２３５、２３７、３３０及び３３１にアミノ酸残基を保持する（下線）。

【化10】

【0217】

ある実施形態において、抗体は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域又はそれらと少なくとも９０％、９５％若しくは９９％同一の配列を含むが、Ｋａｂａｔ位置２３４、２３５、２３７及び３３１にアミノ酸残基を保持する（下線）。

【化11】

【0218】

Ｆｃサイレント抗体は、ＡＤＣＣ活性を生じないか又は低いＡＤＣＣ活性を生じ、すなわち、Ｆｃサイレント抗体は、５０％未満の特異的細胞溶解であるＡＤＣＣ活性を示す。好ましくは、抗体は、実質的にＡＤＣＣ活性を欠き、例えば、Ｆｃサイレント抗体は、５％未満又は１％未満のＡＤＣＣ活性（特異的細胞溶解）を示す。Ｆｃサイレント抗体は、ＣＤ７３発現細胞の表面でのＣＤ７３のＦｃγＲ媒介性架橋の欠如も生じ得る。

【0219】

ある実施形態において、抗体は、２２０、２２６、２２９、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２４３、２６４、２６８、２９７、２９８、２９９、３０９、３１０、３１８、３２０、３２２、３２７、３３０、３３１及び４０９（重鎖定常領域における残基の付番は、ＫａｂａｔによるＥＵ付番に従う）からなる群から選択される任意の１、２、３、４、５つ又はそれを超える残基において重鎖定常領域に置換を有する。ある実施形態において、抗体は、残基２３４、２３５及び３２２における置換を含む。ある実施形態において、抗体は、残基２３４、２３５及び３３１における置換を含む。ある実施形態において、抗体は、残基２３４、２３５、２３７及び３３１における置換を含む。ある実施形態において、抗体は、残基２３４、２３５、２３７、３３０及び３３１における置換を含む。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１サブタイプのものである。アミノ酸残基は、ＫａｂａｔによるＥＵ付番に従って示される。

【0220】

任意選択により、本明細書の任意の実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、本明細書で説明されている抗体、その重鎖及び／若しくは軽鎖、ＣＤＲ、又は可変領域のいずれかの機能保存変異体であることを特徴とし得る。「機能保存変異体」は、ポリペプチドの全体的な構造及び機能を変更することなくタンパク質又は抗体中の所与のアミノ酸残基が変更されているものであり、同様の特性（例えば、極性、水素結合能、酸性、塩基性、疎水性、芳香族、及び同類のもの）を有するものによるアミノ酸の置き換えが挙げられるが、これに限定されない。保存されていると示されているもの以外のアミノ酸はタンパク質が異なり得、そのため、機能が類似している任意の２つのタンパク質間のタンパク質配列又はアミノ酸配列の類似割合は変化し得、例えば、類似性がＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づくＣｌｕｓｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄ等のアラインメントスキームに従って決定した場合に７０％～９９％であり得る。「機能保存変異体」はまた、ＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡアルゴリズムにより決定した場合に、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有し、且つ比較される天然タンパク質又は親タンパク質（例えば、その重鎖若しくは軽鎖、又はＣＤＲ、又は可変領域）と同一の又は実質的に類似の特性又は機能を有するポリペプチドも含む。ある実施形態において、抗体は、抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、又は８Ｃ７の重鎖可変領域の機能保存変異体である重鎖可変領域と、各１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、又は８Ｃ７抗体の軽鎖可変領域の機能保存変異体である軽鎖可変領域とを含む。ある実施形態において、抗体は、本明細書で開示されているヒト重鎖定常領域（任意選択によりヒトＩｇＧ４定常領域、任意選択により改変ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１）定常領域、例えは本明細書で開示されている定常領域）に融合した抗体１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、又は８Ｃ７の重鎖可変領域の機能保存変異体である重鎖と、ヒトカッパ軽鎖定常領域に融合した各１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、又は８Ｃ７抗体の軽鎖可変領域の機能保存変異体である軽鎖とを含む。

【0221】

キット及び製剤
活性剤、例えば、抗ＣＤ７３抗体、抗ＨＥＲ２抗体、又は化学療法剤はいずれも、薬学的に許容される組成物及びキット等の組成物に具体化されると指定され得る。薬学的に許容される組成物は、典型的には、組成物の製剤化、送達、安定性、又は他の特性を促進する活性成分又は不活性成分であり得る１種又は複数種の追加成分（例えば、様々な担体）を含む。

【0222】

さらなる実施形態において、提供されるのは、胃癌（任意選択により、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌）を有する対象の処置での使用のための、抗ＣＤ７３抗体の治療的有効量を含む医薬製剤であって、この対象は、ＨＥＲ２陽性である癌を有しており、前記医薬製剤を、抗ＨＥＲ２抗体及び任意選択によりさらに化学療法剤（例えばパクリタキセル）と組み合わせて（例えば、これらとの組合わせ処置で）投与する、医薬製剤である。さらなる実施形態において、提供されるのは、胃癌（任意選択により、胃腺癌又は胃食道接合部腺癌）を有する対象の処置での使用のための、抗ＨＥＲ２抗体の治療的有効量を含む医薬製剤であって、この対象は、ＨＥＲ２陽性癌を有しており、前記医薬製剤を、抗ＣＤ７３抗体及び任意選択によりさらに化学療法剤（例えばパクリタキセル）と組み合わせて（例えば、これらとの組合わせ処置で）投与する、医薬製剤である。

【0223】

「医薬組成物」又は「治療組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、対象に適切に投与された場合に所望の治療効果を誘発し得る化合物又は組成物を指す。いくつかの実施形態において、本開示は、薬学的に許容される担体と、本開示の少なくとも１種の阻害剤の治療的有効量とを含む医薬組成物を提供する。「薬学的に許容される担体」又は「生理学的に許容される担体」という用語は、本明細書で使用される場合、本開示の１種又は複数種の薬剤の送達の達成又は増強に好適な１種又は複数種の製剤材料を指す。

【0224】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示されている薬剤を、医薬組成物として、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤と共に製剤化し得る。特定の実施形態において、そのような医薬組成物は、当技術分野で既知の方法を使用する任意の１種又は複数種の投与経路によるヒト又は非ヒト動物への投与に好適である。「薬学的に許容される担体」という用語は、活性成分の生物学的活性の有効性を阻害しない１種又は複数種の非毒性物質を意味する。そのような調製物は、塩、緩衝剤、保存料、適合性担体、及び任意の他の治療薬を日常的に含み得る。そのような薬学的に許容される調製物はまた、ヒトへの投与に好適な適合性の固体又は液体の充填剤、希釈剤、又はカプセル化物質も含み得る。本明細書で説明されている製剤に利用され得る他の企図される担体、賦形剤、及び／又は添加剤として、例えば下記が挙げられる：香味料、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、脂質、タンパク質賦形剤、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、カゼイン、塩形成対イオン、例えばナトリウム、及び同類のもの。本明細書で説明されている製剤での使用に好適なこれらの及び追加の既知の薬学的な担体、賦形剤、及び／又は添加剤は、例えば”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）、及び”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，”６０ｔｈ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（２００５）で列挙されているように、当技術分野で既知である。所望されるか又は必要とされる投与様式、溶解度、及び／又は安定性に好適な薬学的に許容される担体を選択し得る。

【0225】

ある実施形態において、本開示の製剤は、エンドトキシン及び／又は関連する発熱物質を実質的に含まないパイロジェンフリー製剤である。エンドトキシンとして、微生物内に閉じ込められており且つこの微生物が分解したか又は死滅した場合にのみ放出される毒素が挙げられる。発熱物質として、細菌及び他の微生物の外膜から熱を誘発する熱安定性物質（糖タンパク質）も挙げられる。これらの物質は両方とも、ヒトに投与され場合には、発熱、低血圧、及びショックを引き起こす可能性がある。潜在的な悪影響に起因して、少量のエンドトキシンであっても、静脈内投与される医薬品溶液から除去されなければならない。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用に関して、単一の１時間の期間で体重１キログラム当たり１回の用量当たり５エンドトキシン単位（ＥＵ）の条件を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。特定の実施形態において、組成物中のエンドトキシン及びパイロジェンのレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、又は５ＥＵ／ｍｇ未満、又は１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。

【0226】

インビボでの投与に使用される場合には、本開示の製剤は、無菌であるべきである。本開示の製剤を、例えば滅菌ろ過又は放射線照射等の様々な滅菌方法により、滅菌し得る。注射用の無菌組成物を、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）で説明されている従来の薬務に従って製剤化し得る。

【0227】

いくつかの実施形態において、治療組成物を、特定の投与経路（例えば、経口、経鼻、肺、局所（頬及び舌下を含む）、直腸、膣、及び／又は非経口投与）用に製剤化し得る。「非経口投与」及び「非経口で投与する」という用語は、本明細書で使用される場合、通常は注射による、腸及び局所投与以外の投与の様式を指しており、下記が挙げられるが、これらに限定されない：静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、 皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内の注射及び注入。阻害剤及び他の活性剤を、薬学的に許容される担体、及び必要とされ得る任意の保存料、緩衝剤、又は噴霧剤と、無菌条件下で混合し得る（例えば、米国特許第７，３７８，１１０号明細書；同第７，２５８，８７３号明細書；及び同第７，１３５，１８０号明細書；米国特許出願公開第２００４／００４２９７２号明細書、及び同第２００４／００４２９７１号明細書を参照されたい）。

【0228】

同様に提供されるのは、キットであって、例えば、
（ｉ）抗ＣＤ７３抗体を含む医薬組成物、
（ｉｉ）抗ＣＤ７３抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び任意選択によりさらに化学療法剤（例えば、タキサン、パクリタキセル）を含む医薬組成物、
又は
（ｉｉｉ）抗ＣＤ７３抗体を含む第１の医薬組成物、及び抗ＨＥＲ２抗体を含む第２の医薬組成物、及び任意選択により、さらに、化学療法剤（例えば、タキサン、パクリタキセル）を含む第３の医薬組成物、
又は
（ｉｖ）抗ＣＤ７３抗体を含む医薬組成物、及び前記抗ＣＤ７３抗体を、抗ＨＥＲ２抗体と共に投与し、任意選択によりさらには化学療法剤（例えば、タキサン、パクリタキセル）と共に投与するための説明書、
又は
（ｖ）抗ＨＥＲ２抗体を含む医薬組成物、及び前記ＰＤ－１中和剤を、抗ＣＤ７３抗体と共に、任意選択によりさらには化学療法剤（例えば、タキサン、パクリタキセル）と共に投与するための説明書
を含むキットである。

【0229】

医薬組成物は、任意選択により、薬学的に許容される担体を含むと指定され得る。抗ＣＤ７３抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び化学療法剤は、任意選択により、本明細書の方法のいずれかでの使用に適した治療的有効量で存在すると指定され得る。本キットはまた、任意選択により、実施者（例えば、医師、看護師、又は患者）が、このキットに含まれている組成物を、癌を有する患者（例えば、ＨＥＲ２陽性である胃腺癌若しくは胃食道接合部腺癌を有する患者、又は腫瘍細胞でのＨＥＲ２発現が低レベルであるか若しくは中程度のレベルである胃腺癌若しくは胃食道接合部腺癌を有する患者、又は腫瘍細胞がＨＥＲ２を過剰発現している胃腺癌若しくは胃食道接合部腺癌を有する患者）に投与することを可能にする説明書（例えば投与スケジュールを含む）も含み得る。任意の実施形態において、キットは、任意選択により、本開示の処置レジメンに従って前記ＣＤ７３抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び任意選択により化学療法剤を投与するための説明書を含み得る。このキットはまた、シリンジも含み得る。

【0230】

任意選択により、本キットは、上記の方法に従う単回投与のための、有効量の抗ＣＤ７３抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び任意選択により化学療法剤をそれぞれ含む単回用量医薬組成物の複数のパッケージを含む。このキットには、この医薬組成物を投与するのに必要な説明書又はデバイスも含まれ得る。例えば、キットは、抗ＣＤ７３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体のある量を含む１つ又は複数のプレ充填シリンジを提供し得る。

【0231】

ある実施形態において、本発明は、子宮頚部癌に罹患しているヒト患者の癌又は腫瘍を処置するためのキットであって、
（ａ）配列番号４２のいずれかに記載されている配列を有する重鎖可変領域のＨ－ＣＤＲ１ドメイン、Ｈ－ＣＤＲ２ドメイン、及びＨ－ＣＤＲ３ドメインと、配列番号４３に記載されている配列を有する軽鎖可変領域のＬ－ＣＤＲ１ドメイン、Ｌ－ＣＤＲ２ドメイン、及びＬ－ＣＤＲ３ドメインとを含む抗ＣＤ７３抗体の用量；
並びに／又は
（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体の用量、任意選択により、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン、及びＣＤＲ３ドメインを含む抗体の用量、任意選択により、配列番号２３に記載されている配列を有する重鎖可変領域のＨ－ＣＤＲ１ドメイン、Ｈ－ＣＤＲ２ドメイン、及びＨ－ＣＤＲ３ドメインと、配列番号２４に記載されている配列を有する軽鎖可変領域のＬ－ＣＤＲ１ドメイン、Ｌ－ＣＤＲ２ドメイン、及びＬ－ＣＤＲ３ドメインとを含む抗体の用量；
並びに／又は
（ｃ）任意選択により、化学療法剤の用量、任意選択によりタキサンの用量、任意選択によりパクリタキセルの用量；
並びに／又は
（ｄ）任意選択により、本明細書で説明されている方法のいずれかで前記抗ＣＤ７３抗体、前記抗ＨＥＲ抗体、及び／若しくは前記化学療法剤を使用するための説明書
を含むキットを提供する。

【0232】

いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブであるか、又は配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、化学療法剤は、パクリタキセルである。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体を、２週間毎に固定用量（体重を問わず、例えば、少なくとも９００ｍｇ、任意選択により１５００ｍｇ若しくは少なくとも１５００ｍｇ、又は任意選択により２４００ｍｇ若しくは少なくとも２４００ｍｇの固定用量）で投与する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ７３抗体を、３週間毎に固定用量（例えば、２０００～３０００ｍｇの固定用量、例えば、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、又は３０００ｍｇの固定用量）で投与する。いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に、３～６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で静脈内投与し、任意選択により６～８（例えば６又は８）ｍｇ／ｋｇ体重の用量で静脈内投与し（任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与は、６ｍｇ／ｋｇの３週間毎投与の開始１週間前に投与する８ｍｇ／ｋｇの負荷用量である）、化学療法剤は、１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積の固定用量で投与されるパクリタキセルを含む。いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体を、４ｍｇ／ｋｇの初期用量で静脈内投与し、続いて２ｍｇ／ｋｇの後続毎週用量で静脈内投与する。いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体を、３週間毎に６００ｍｇの固定用量で皮下投与する。

【0233】

ある実施形態において、抗ＣＤ７３抗体及び抗ＨＥＲ２抗体（及び任意選択により化学療法剤）を、下記の用量で投与する：
（ａ）（ｉ）９００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～２４００ｍｇ、任意選択により９００、１５００、若しくは２４００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、及び（ｉｉ）３～６ｍｇ／ｋｇ（例えば５～６若しくは６ｍｇ／ｋｇ）体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；
（ｂ）（ｉ）９００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～２４００ｍｇ、任意選択により９００、１５００、若しくは２４００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、及び（ｉｉ）６００ｍｇ 抗ＨＥＲ２抗体の固定用量の３週間毎の皮下投与（例えばＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）ＳＣ）；
（ｃ）（ｉ）２０００～３０００ｍｇ、任意選択により２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、若しくは３０００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体の固定用量を３週間毎、及び（ｉｉ）３～６ｍｇ／ｋｇ（例えば５～６若しくは６ｍｇ）体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；
（ｄ）（ｉ）２０００～３０００ｍｇ、任意選択により２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、若しくは３０００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体の固定用量を３週間毎、及び（ｉｉ）６００ｍｇ 抗ＨＥＲ２抗体の固定用量の３週間毎の皮下投与（例えばＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）ＳＣ）；
（ｅ）（ｉ）９００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～３６００ｍｇ、任意選択により１５００～２４００ｍｇ、任意選択により９００、１５００、若しくは２４００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、（ｉｉ）３～６ｍｇ／ｋｇ（例えば５～６若しくは６ｍｇ）体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；及び（ｉｉｉ）１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積のパクリタキセルの３週間毎の投与；
（ｆ）（ｉ）１５００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、及び（ｉｉ）６ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；
（ｇ）（ｉ）１５００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、（ｉｉ）６ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；及び（ｉｉｉ）１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積のパクリタキセルの３週間毎の投与；
（ｈ）（ｉ）２４００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、及び（ｉｉ）６ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；
又は
（ｉ）（ｉ）２４００ｍｇの抗ＣＤ７３抗体を２週間毎、（ｉｉ）６ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＨＥＲ２抗体を３週間毎、任意選択により、抗ＨＥＲ２抗体の最初の投与に先行して、抗ＨＥＲ２抗体の負荷用量（例えば８ｍｇ／ｋｇ体重）を１週間前に投与する；及び（ｉｉｉ）１７５ｍｇ／ｍ^２体表面積のパクリタキセルの３週間毎の投与。

【0234】

本開示を限定することなく、本開示の多くの実施形態が、例示のために本明細書で説明されている。

【実施例】

【0235】

方法
ヒト胃癌試料での免疫染色
ＣＤ７３免疫染色を、Ｖｅｎｔａｎａ Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ Ｕｌｔｒａで実施した。簡潔に説明すると、５μｍ厚のＦＦＰＥ切片を脱脂し、１００℃で６４分にわたり、ＣＣ１を使用して抗原回収を実施した。次いで、発見抗体希釈液（ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｉｌｕｅｎｔ）で１μｇ／ｍＬまで希釈した抗ＣＤ７３抗体を、３７℃で１時間にわたりアプライし、ＵＬＴＲＡＶＩＥＷ－ＲＴを使用して可視化した。各ＩＨＣランでは、ホルマリンで固定されたｈＣＤ７３細胞ペレットを、陰性対照及び陽性対照として使用した。腫瘍細胞、間質細胞、及び免疫細胞に対して免疫染色解析を実施し、ＣＤ７３を発現している細胞の割合を記録した。次いで、この割合を、下記のように割合スコアとして表した：０＝陽性細胞なし；１＝１０％未満の陽性細胞；２＝１０～５０％の陽性細胞；３＝５１～８０％の陽性細胞；４＝８０％超の陽性細胞。

【0236】

腫瘍細胞及び間質細胞に対するＣＤ７３染色の半定量的強度も、０、１＋、２＋、及び３＋として記録した。腫瘍細胞に対するＣＤ７３に関しては、Ｈスコアも算出した。各染色強度レベルでの細胞の割合を算出し、最終的には、下記式を使用してＨスコアを割り当てた：［１×（１＋細胞％）＋２×（２＋細胞％）＋３×（３＋細胞％）］。

【0237】

０～３００の範囲の最終スコアは、所与の腫瘍試料におけるより高強度の膜染色に、より相対的な重さを与える。染色陽性対照として、内皮細胞に対してもＣＤ７３発現を記録した。

【0238】

組換えｈｕＣＤ７３のクローニング、産生及び精製
分子生物学
ｈｕＣＤ７３タンパク質は、以下のプライマーＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＧＣＧＣＧ（配列番号２０）（フォワード）及びＣＣＧＣＣＣＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡｔｃａＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＧｃｔｔｇａｔｃｃｇａｃｃｔｔｃａａｃｔｇ配列番号２１）（リバース）を使用して、ＭＩＡＰＡＣＡ－２ｃＤＮＡからクローン化された。次に、精製されたＰＣＲ産物を、ＩｎＦｕｓｉｏｎクローニングシステムを使用して発現ベクターにクローニングした。精製ステップのために、タンパク質のＣ末端部分に６ｘＨｉｓタグを加えた。

【0239】

クローン化ｈｕＣＤ７３のアミノ酸配列：

【化12】

【0240】

ｈｕＣＤ７３タンパク質の発現及び精製
クローン化された配列の検証後、細胞をヌクレオフェクトし、次に産生プールをサブクローニングして、ｈｕＣＤ７３タンパク質を産生する細胞クローンを得た。ローラーで増殖させたｈｕＣＤ７３クローンからの上清を回収し、Ｎｉ－ＮＴＡカラムを使用して精製し、２５０ｍＭイミダゾールを使用して溶出した。次に、精製したタンパク質をＳ２００サイズ排除クロマトグラフィーカラムに充填した。二量体に対応する精製タンパク質は、酵素活性アッセイのためにＴｒｉｓ ２０ｍＭ ｐＨ７．５、ＮａＣｌ １２０ｍＭ及びＣａＣｌ２ ４ｍＭ緩衝液で製剤化される一方、製剤緩衝液には２０％グリセロールが補充される。

【0241】

組換えＣＤ７３タンパク質のＡｂ ＫＤを評価するためのＳＰＲ分析
ＳＰＲ測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００装置で２５℃において行った。プロテイン－Ａ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）は、Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に固定化された。チップ表面をＥＤＣ／ＮＨＳ（Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で活性化した。プロテイン－Ａを結合緩衝液（１０ｍＭ酢酸塩、ｐＨ５．６）中で１０μｇ／ｍＬに希釈し、適切な固定化レベルに達するまで（すなわち２０００ＲＵ）注入した。残りの活性化された基の失活は、１００ｍＭエタノールアミンｐＨ８（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。親和性研究は、製造業者（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｋｉｎｅｔｉｃ ｗｉｚａｒｄ）によって推奨される標準的なＣａｐｔｕｒｅ－Ｋｉｎｅｔｉｃプロトコルに従って実施した。１．２３～３００ｎＭの範囲のヒト組換え可溶性ＣＤ７３タンパク質の段階希釈液を、捕捉した抗ＣＤ７３抗体に順次注入し、再分化前に１０分間分離させた。センサーグラムセット全体を、１：１動態結合モデルを用いてフィッティングした。二価の親和性並びに動態結合速度定数及び解離速度定数が計算される。

【0242】

抗体による抗ＣＤ７３認識を評価するためのフローサイトメトリー分析
ＦＣＳＢに再懸濁した１０^５個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を丸底９６Ｗマイクロプレート（ウェルあたり５０μＬ）に分配した。抗ＣＤ７３ ｍＡｂの用量範囲をプレートに加え、細胞を＋５±３℃で１時間インキュベートした。プレートを４００ｇ、４℃で３分間回転させることにより、細胞をＦＣＳＢで３回洗浄した。ＦＣＳＢで希釈したＰＥ複合化ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次Ａｂを細胞に添加し、プレートを＋５±３℃でさらに３０分間インキュベートした。上記のように細胞を３回洗浄し、フローサイトメーターで分析した。

【0243】

蛍光強度の中央値対ｍＡｂ濃度をグラフにプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）プログラムを使用してＥＣ_５０を計算した。

【0244】

組換えヒト又はカニクイザルＣＤ７３を用いたインビトロ酵素アッセイ
簡潔には、組換えヒト又はカニクイザルＣＤ７３を、ある用量範囲の抗ＣＤ７３又はアイソタイプ対照ｍＡｂの存在下において白色の９６Ｗ平底マイクロプレートでインキュベートした。プレートを＋３７±１℃で１時間インキュベートした。ＡＴＰ（１２．５μＭ）及びＡＭＰ（１２５μＭ）を各ウェルに添加し、プレートを＋３７±１℃でさらに３０分間インキュベートした。ルシフェラーゼ／ルシフェリン含有ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）をウェルに加え、プレートを暗所で室温において５分間インキュベートし、Ｅｎｓｐｉｒｅ（商標）装置（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して放出光を測定した。
・条件：
・ＡＴＰ＋ＡＭＰ：最大ルシフェラーゼ阻害（１００％）
・ＣＤ７３＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ：ルシフェラーゼ阻害なし（０％）

【0245】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７（商標）ソフトウェアを使用して、残留酵素活性と抗ＣＤ７３ Ａｂ濃度をグラフにプロットした。

【0246】

Ｔ細胞増殖アッセイ
健常ドナーから末梢血を採取し、フィコール勾配で単核細胞を単離した。リンパ球は、５２％Ｐｅｒｃｏｌｌ（商標）勾配（細胞ペレット）でさらに濃縮され、２μＭ ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）で染色された。５×１０^４～１×１０^５の染色細胞を９６ｗ丸底プレートに分配し、抗ＣＤ７３ Ａｂと共に３７℃で１時間インキュベートし、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コーティングビーズを添加して３～５日間活性化した。Ｔ細胞増殖の阻害は、２００μＭのＡＭＰを添加することで達成された。Ｔ細胞増殖及びＡＭＰの免疫抑制効果を遮断するＡｂの能力は、増殖するＴ細胞の色素希釈を定量化することによりフローサイトメトリーによって評価された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して、抗ＣＤ７３Ａｂ濃度に対する増殖Ｔ細胞のパーセンテージをグラフにプロットした。一部の実験は、健常ドナー又は癌患者からのＰＢＭＣ全体で行われた。プロトコルは、Ｔ細胞抑制が０．５～１ｍＭのＡＴＰの添加によって達成されたことを除いて上記のとおりであった。

【0247】

ドナー又は患者を比較するために、Ｔ細胞増殖は、以下の式を使用して正規化された。

【数1】

【0248】

同種混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
健常ドナーからの単核細胞をフィコール勾配で単離し、単球をＣＤ１４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用した免疫磁気選択によって精製した。単球は、ＧＭ－ＣＳＦ（４００ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で５～７日間培養することにより、樹状細胞（ＭｏＤＣ）に分化した。ＤＣ回復の日、同種異系ドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞は、非ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）の免疫磁気枯渇によって精製され、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで染色された。ＤＣ（１０^４細胞／ウェル）及びＴ細胞（５×１０^４細胞／ウェル）を９６Ｗ丸底マイクロプレートである用量範囲の抗ｈｕＣＤ７３抗体及び固定用量のＡＴＰの存在下において混合した。Ｔ細胞増殖及びＡＴＰ媒介性抑制を逆転させるＡｂの能力は、Ｔ細胞増殖アッセイについて記載されているように評価された。

【0249】

実施例１：胃癌でのＣＤ７３及びＨＥＲ２の発現
胃癌コホートにおけるこの試験のために、下記の腫瘍試料を調べた：診断時の原発腫瘍からの合計６０例の外科的試料、これらの試料の内、１０例の外科的試料は、原発腫瘍由来であり、１０例の外科的試料は、最初の再発時の関連する転移由来であり、２０例は、診断時の生検であり、２０例は、ネオアジュバント化学療法（エピルビシン、シスプラチン、及び５－ＦＵ）後の対応する腫瘍の外科的試料であった。

【0250】

診断時（あらゆる処置前）に、患者の８３％（ｎ＝５０／６０）で腫瘍細胞（ＴＣ）にＣＤ７３が発現されていることが分かり、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞の割合は、患者間で５～８０％と変動した。腫瘍細胞に対する染色は、先端レベル（管腔部分）の細胞で主に極性化していた。患者の９５％は、ＣＤ７３発現間質細胞（ＳＣ）を有しており、ＣＤ７３発現間質細胞の割合は、１～５０％の範囲であった。患者の５％のみが、ＣＤ７３発現腫瘍内免疫細胞を有しており（ｎ＝３／６０）、患者の７８％が、間質中においてＣＤ７３発現免疫細胞を有しており、割合の範囲はＣＤ７３＋の１～２０％であった。

【0251】

腫瘍細胞に対するＣＤ７３のＨスコアは、０～２１０で変動しており、中央値のスコアは３７．５であった（図１、左側のパネル）。

【0252】

Ｈｅｒ２状態に従うＣＤ７３発現
腫瘍細胞及び間質細胞によるＣＤ７３発現を、Ｈｅｒ２状態に従って解析した。ＩＨＣ染色により評価したＨｅｒ２採点は、１＋、２＋、３＋と示されており、Ｈｅｒ２遺伝子の増幅をＦＩＳＨで評価した。データ解析のために、及び病理医に従って、「解析のためのＨｅｒ２状態（－／＋）」がＩＨＣにより３＋と記録された場合にのみ、患者をＨｅｒ２陽性と見なした。

【0253】

解析により、Ｈｅｒ２＋患者は全員、ＣＤ７３発現腫瘍細胞を有していることが分かった（図１、右側のパネル）。Ｈｅｒ２＋患者（ｎ＝７）は、Ｈｅｒ２－（ｎ＝３０）と比べて少数であったが、Ｈｅｒ２＋患者は、ＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合が有意に高かった（図１、右側のパネル）。ＣＤ７３発現間質細胞は、Ｈｅｒ２状態により変化しなかった。

【0254】

まとめると、Ｈｅｒ２状態に従う患者階層化により、Ｈｅｒ２＋患者は全員、ＣＤ７３発現腫瘍を有していること、及びＨｅｒ２＋患者は、Ｈｅｒ２－と比べてＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合が有意に高いことが強調された。患者は全員、Ｈｅｒ２状態に関係なくＣＤ７３＋間質細胞を有していた。

【0255】

ネオアジュバント化学療法前後の胃癌でのＣＤ７３発現の比較
ネオアジュバント化学療法（ＣＴ）前の原発腫瘍の生検と、ネオアジュバント化学療法（エピルビシン、シスプラチン、及び５－ＦＵ）後の腫瘍切除との間で、ＣＤ７３発現を比較した。

【0256】

ネオアジュバントＣＴにより、ＣＤ７３を発現する患者の割合（図２、左側のパネル）又はＣＤ７３＋腫瘍細胞の割合（図２、右側のパネル）のいずれにおいても、ＣＤ７３発現腫瘍細胞が有意に変更されなかった。しかしながら、ネオアジュバントＣＴにより、ＣＤ７３＋間質細胞を有する患者の割合は、ＣＴ前の６０％（ｎ＝１２／２０）からＣＴ後の９５％（ｎ＝１９／２０）へと上昇した（図３、左側のパネル）。ＣＤ７３発現間質細胞の割合は、ＣＴ前とＣＴ後とで有意差がなかった（図３、右側のパネル）。ＣＴにより、ＣＤ７３＋間質免疫細胞を有する患者の割合は、３０％（ｎ＝６／２０）から７０％（ｎ＝１４／２０）へと上昇した（図４、左側のパネル）。ＣＤ７３＋間質免疫細胞の割合のより厳密な解析により、ＣＴは、最初に高い場合にはこの割合を低下させる傾向があるが、最初に陰性の場合には免疫細胞にＣＤ７３を誘導することが示された（図４、右側のパネル）。

【0257】

実施例２：ヒト化抗ＣＤ７３抗体の設計
ヒト化抗ＣＤ７３抗体を、インタクトな完全長抗体とＣＤ７３二量体との間で１：１化学量論での二量体内結合モードでＣＤ７３に結合することが観察されたマウス抗体に基づいて、２０２０年４月２０に出願された、共同係属中のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６０９５５パンフレット（この開示は、参照により本明細書中に組み込まれる）で説明されているように調製した。

【0258】

簡潔に説明すると、ＩＧＨＪ４＊０１（ＦＲ４）と共に、ヒトサブグループＩＧＨＶ１－３＊０１からの重鎖フレームワーク（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３）をＶＨに導入し、且つＩＧＫＪ２＊０１（ＦＲ４）と共に、ヒトサブグループＩＧＫＶ１－３３＊０１からの軽鎖フレームワーク（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３）をＶＬに導入することにより、抗体を改変した。

【0259】

ヒト化抗体の第１のセットに関して、４種の異なるヒト化重鎖と、４種の異なるヒト化軽鎖とを設計した。配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有する第１の重鎖変異体（Ｈ１）は、Ｖ２Ｉ及びＴ７３Ｋ置換を有していた。配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有する第２の重鎖（Ｈ２）変異体は、置換Ｖ２Ｉ、Ｔ２８Ａ、Ｒ７１Ｖ及びＴ７３Ｋを有していた。配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有する第３の重鎖変異体（Ｈ３）は、置換Ｖ２Ｉ、Ｔ２８Ａ、Ｍ４８Ｉ、Ｒ６６Ｋ、Ｖ６７Ａ、Ｒ７１Ｖ及びＴ７３Ｋを有していた。配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有する第４の重鎖変異体（Ｈ４）は、置換Ｖ２Ｉ、Ｔ２８Ａ、Ｔ３０Ａ、Ｍ４８Ｉ、Ｒ６６Ｋ、Ｖ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ｖ及びＴ７３Ｋを有していた。置換の付番は、Ｋａｂａｔによる。

【0260】

配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有する第１の軽鎖変異体（Ｌ１）は、置換Ｓ６７Ｙを有していた。配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有する第２の軽鎖（Ｌ２）変異体は、置換Ｓ６０Ｄ及びＳ６７Ｙを有していた。配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有する第３の軽鎖変異体（Ｌ３）は、置換Ｉ２Ｖ、Ｓ６０Ｄ及びＳ６７Ｙを有していた。配列番号３６に示されるアミノ酸配列を有する第４の軽鎖変異体（Ｌ４）は、置換Ｉ２Ｖ、Ｓ６０Ｄ、Ｓ６７Ｙ及びＹ８７Ｆを有していた。置換の付番は、Ｋａｂａｔによる。

【0261】

それぞれの重鎖（表１の「Ｈ」鎖）及び軽鎖（表１の「Ｌ」鎖）可変領域のアミノ酸配列を以下の表１に示す。

【0262】

【表2】

【0263】

下記の表２に示す重鎖及び軽鎖の組合わせを有する抗体を製造した。

【0264】

【表3】

【0265】

驚くべきことに、実験は、フローサイトメトリー滴定とＣＤ７３の酵素活性の阻害における効力との間に直接的な相関関係がないことを示した。興味深いことに、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４変異体は、ＳＰＲアッセイ及びＣＤ７３発現細胞のフローサイトメトリーにおけるＣＤ７３組換えタンパク質への結合親和性に基づいて本質的に区別できなかったが、Ｈ２及びＨ３変異体は、Ｔ細胞増殖を回復する能力において、Ｈ４変異体よりも機能アッセイにおいて効力が低かった。１つの可能性は、ＣＤ７３を阻害する効力に有害であった（しかし、ＣＤ７３に対する結合親和性には有害でなかった）Ｈ２及びＨ３フレームワークに導入された突然変異が、Ｈ４変異体フレームワークに導入された突然変異によって代償されたことである。その結果、重鎖フレームワーク及び／又はＣＤＲ残基に置換を有する新しい変異体が設計された。これらの観察に基づいて、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４鎖で行われた置換は、機能に重要であると考えられる残基、機能に影響を与えない可能性が高い残基、機能に負の影響を与える残基及び機能を回復させる残基のいずれかに分類された。

【0266】

以下に示すアミノ酸配列（配列番号３７；アミノ酸置換は太字、Ｋａｂａｔ ＣＤＲは下線）を有する「Ｈ４＋」と呼ばれる新しい重鎖変異体が設計され、これは、（それぞれ配列番号３３、３４、３５及び３６の）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４軽鎖と組み合わされて、４つの新しい抗体、Ｈ４＋Ｌ１、Ｈ４＋Ｌ２、Ｈ４＋Ｌ３及びＨ４＋Ｌ４を生成した。

【0267】

Ｈ４＋ＶＨ：

【化13】

【0268】

Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む完全なＨ４＋重鎖のアミノ酸配列を以下に示す。

【化14】

【0269】

Ｈ４＋Ｌ１抗体には、ヒトＣｋａｐｐａドメインを含むＬ１軽鎖が含まれており、その完全な配列を以下に示す。

【化15】

【0270】

同じフレームワーク置換が、重鎖と軽鎖のＣＤＲが異なる抗体にどのように影響するかを調べるために、共通の重鎖及び４つの異なる軽鎖の１つを有する４つの抗体のシリーズをさらに産生した。「２Ｈ４＋」と呼ぶ共通の重鎖は、ＨＣＤＲ２のＫａｂａｔ位置５９（Ｑ５９）のグルタミン（すなわちＨ４＋鎖と比較したＬ５９Ｑ置換）、ＨＣＤＲ２のＫａｂａｔ残基６０（Ｋ６０）のリシン（すなわちＨ４＋鎖と比較したＴ６０Ｋ置換）及びＨＣＤＲ３のＫａｂａｔ位置９７（Ｎ９７）のアスパラギン（すなわちＨ４＋鎖と比較したＧ９７Ｎ置換）を有していた。２Ｌ１、２Ｌ２、２Ｌ３及び２Ｌ４と呼ぶ４つの軽鎖は、それぞれＬ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４鎖と同じフレームワーク残基を有し、ＬＣＤＲ１のＫａｂａｔ位置３０（Ｔ３０）のスレオニン（すなわちＬ１～Ｌ４鎖と比較したＳ３０Ｔ置換）及びＬＣＤＲ２のＫａｂａｔ残基５３（Ｎ５３）のアスパラギン（すなわちＬ１－Ｌ４鎖と比較したＴ５３Ｎ置換）の存在でＬ１～Ｌ４鎖からのそのＣＤＲと異なっていた。

【0271】

得られた４つの新しい抗体は、以下で２Ｈ４＋２Ｌ１、２Ｈ４＋２Ｌ２、２Ｈ４＋２Ｌ３及び２Ｈ４＋２Ｌ４と呼ばれた（重鎖及び軽鎖の組み合わせに関して以下の表４を、個々の鎖のアミノ酸配列に関しては以下の表３を参照されたい）。マウスフレームワークでＣＤＲを共有する親抗体は、２ＨＰ及び２ＬＰと呼ばれる重鎖及び軽鎖の可変領域（以下の表３を参照されたい）で産生された。

【0272】

【表4】

【0273】

【表5】

【0274】

全ての抗体を、Ｆｃ受容体結合を減少させるためにＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプとして製造した。

【0275】

Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む完全な２Ｈ４＋重鎖のアミノ酸配列を以下に示す。

【化16】

【0276】

ヒトＣｋａｐｐａドメインを含む抗体の完全な２Ｌ１軽鎖のアミノ酸配列を以下に示す。

【化17】

【0277】

実施例３：組換えＣＤ７３タンパク質を用いたインビトロ酵素アッセイの新しい変異体の研究
組換えＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害するヒト化変異体の有効性を、親抗体と比較した。簡潔に説明すると、ＡＴＰ基質及びＣＴＧ基質を混合した場合に、高レベルの発光を測定した。反応混合物にＡＭＰを添加した場合には、ＣＴＧ反応が阻害されて発光が減少した。ＡＭＰを加水分解する組換えヒトＣＤ７３タンパク質の存在下では、発光レベルが回復した。実施例２で産生された全ての新しいヒト化変異体は、ＣＤ７３タンパク質の活性を強力に阻害した。

【0278】

Ｈ４＋Ｌｘ抗体は、その親抗体と同程度に効率的でであった。さらに、全ての２Ｈ４＋２Ｌｘ（２Ｈ４＋Ｌ１、２Ｈ４＋Ｌ２、２Ｈ４＋Ｌ３及び２Ｈ４＋Ｌ４）変異体は、Ｈ４＋Ｌｘ変異体と比較してＣＤ７３阻害の効力の増加を示した。２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、親２ＨＰ２ＬＰ抗体と同様の効果でＣＤ７３の活性を阻害した。

【0279】

異なる濃度のＣＤ７３タンパク質（５０、１００、２００、４００ｎｇ／ｍＬ）を使用してさらなる実験を実施した。この実験の目的は、大量のＣＤ７３タンパク質の活性を遮断するヒト化抗体の能力を研究することであった。この場合にも、２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、親２ＨＰ２ＬＰ抗体と同程度に強力であった。

【0280】

実施例４：カニクイザルＣＤ７３タンパク質に対する有効性に関する新しい変異体の研究
組換えｒｅｃ ｃｙＣＤ７３タンパク質に対する実験は、２Ｈ１Ｌｘ及び２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体を使用して実施された。実験条件は、使用したｃｙＣＤ７３タンパク質の濃度（４００ｎｇ／ｍＬ）を除いて、ヒトタンパク質での実験と同じであった。

【0281】

ｃｙＣＤ７３タンパク質の酵素活性を遮断するヒト化変異体の有効性は、親（キメラ）抗体の有効性と同じであった。

【0282】

実施例５：Ｔ細胞増殖アッセイにおける新しい変異体の研究
異なる抗体のヒト化変異体は、ＡＭＰによって阻害されたＴ細胞増殖を回復する能力について試験された。簡潔に説明すると、健康なドナー（ＨＤ）の末梢血をＥＦＳから入手し（抗凝固剤：クエン酸塩）、単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ勾配で単離した。リンパ球を、ＰＢＳ溶液で調製した５２％Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配でさらに富化した。細胞を、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ色素で染色した。染色した細胞を、９６丸底プレートに分配し、抗ｈｕＣＤ７３ Ａｂと共に＋３７±１℃で１時間にわたりインキュベートし、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ（ビーズ対細胞比＝１：４）の添加により、３～５日にわたり活性化した。Ｔ細胞増殖の阻害を、ＡＭＰ（８００μＭ）の添加により達成した。Ｔ細胞増殖と、ＡＭＰの免疫抑制効果をブロックするＡｂの能力とを、増殖しているＴ細胞に対する色素希釈を定量することによるフローサイトメトリーにより評価した。

【0283】

図５Ａは、Ｔ細胞増殖に対するＡＭＰの阻害効果を示す。全てのヒト化変異体は、Ｔ細胞増殖に対するＡＭＰの阻害効果を強力に遮断した（図５Ｂ及びＣ）。大半のヒト化変異体は、一般に、ＡＭＰ媒介性Ｔ細胞抑制を逆転させるうえでキメラ親対応物と同程度に効率的であるようであるが、２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、全ての変異体の中で最も強力であり、驚くべきことに、ＡＭＰの抑制効果を遮断することにおいて親２ＨＰ２ＬＰ抗体よりもさらに強力であった。

【0284】

実施例６：２人のヒトドナーでのＴ細胞増殖アッセイにおける新しい変異体の比較研究
以前に得られた結果によると、２Ｈ４＋２Ｌｘヒト化変異体は、さらなる一連のＴ細胞増殖実験でさらに特徴付けられた。

【0285】

図６Ａ及び６Ｂは、それぞれ２人の健常ドナーからの細胞を使用したＴ細胞増殖アッセイで得られた結果を示す。以前に観察されたように、２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、それぞれ親２ＨＰ２ＬＰよりも強力にＴ細胞増殖を回復した（図６Ａ及びＢ、右パネル）。異なる２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体間で明確な違いは観察されなかった。したがって、この場合にも、２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、ＡＭＰの抑制効果を遮断することにおいて親の２ＨＰ２ＬＰ抗体よりもさらに強力であった。

【0286】

総合すると、Ｔ細胞増殖アッセイで得られた結果は、Ｈ４＋鎖のフレームワークを有するヒト化変異体が最も強力な抗体変異体であり、２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体が全体として全ての抗体の中で最大の効力を有することを示す。

【0287】

実施例７：同種混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおける新しい変異体の研究
２Ｈ４＋２Ｌｘ抗体変異体は、Ｔ細胞増殖アッセイで以前に得られた結果を確認するために同種ＭＬＲで試験された。簡潔に説明すると、健康なヒトドナー由来のＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配で富化し、単球を、陽性磁気選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）により精製した。単球を、ＧＭ－ＣＳＦ（４００ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下での５～７日間の培養により、樹状細胞（ＤＣ）へと分化させた。ＤＣ回収日に、同種ドナー由来のＣＤ４＋ Ｔ細胞を、非ＣＤ４＋ Ｔ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）の免疫磁気枯渇により精製し、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ色素で染色した。ＤＣ及びＴ細胞を、用量範囲の抗ｈｕＣＤ７３ ｍＡｂ及び固定用量の１００μＭ ＡＴＰの存在下において、９６丸底マイクロプレート中で混合した。次いで、Ｔ細胞増殖と、ＡＴＰ媒介性抑制を反転させるｍＡｂの能力とを、６日間の共培養後に評価した。Ｔ細胞増殖は、２つのヒトドナー試料について図７に示すように、１００μＭのＡＴＰ（ＣＤ３９によってＡＤＰ及びＡＭＰに分解される）を添加することによって阻害された。

【0288】

図７の左パネルに示すように、ＡＴＰの添加によりＴ細胞の増殖が阻害された。Ｔ細胞の増殖は、抗ＣＤ７３抗体の存在下で回復した（中央及び右側のパネル）。全ての２Ｈ４＋２Ｌｘヒト化変異体は、親２ＨＰ２ＬＰ抗体と同等の又はそれより優れた有効性でＴ細胞増殖を回復させることができた。全ての２Ｈ４＋２Ｌｘ変異体は、これらの設定でＴ細胞増殖を回復するために親２ＨＰ２ＬＰよりも強力であった。これらの結果は、ＡＭＰを阻害剤として使用したＴ細胞増殖アッセイで得られた結果と一致していた。

【0289】

要約すると、Ｈ４＋及び２Ｈ４＋可変領域に導入された置換は、Ｌ１及び２Ｌ１鎖（及びＬ２、Ｌ３、Ｌ４、２Ｌ２、２Ｌ３、２Ｌ４鎖）に導入された置換と共に、それらの親マウス抗体の重要な機能的特性を回復し（及びさらに改善し）、さらにヒトフレームワーク領域を有するようであるため、ヒトにおける免疫原性のリスクがより低い。２Ｈ４＋２Ｌｘ抗体は、全ての中で最も強力である。

【0290】

実施例８：抗ＣＤ７３抗体のヒト用量予測
２Ｈ４＋２Ｌ１抗ＣＤ７３抗体（配列番号４７の重鎖、及び配列番号４８の軽鎖）の血清中濃度と、血液中のＣＤ７３占有率との間の関係を特徴付けるために、ＰＫ／ＰＤモデルを構築した。最初に、カニクイザルでの非ＧＬＰ毒性試験及びＧＬＰ毒性試験のデータを使用して、抗ＣＤ７３抗体血清中濃度を説明するためにＰＫモデルを構築した。

【0291】

治療用ｍＡｂの薬物動態を、２コンパートメントモデルを使用してモデル化した（Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１ ＭＡｂｓ ３（１）：６１－６６）。カニクイザルでの前臨床ＰＫ結果に基づいて、抗ＣＤ７３抗体を、化合物特異的な標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）を除いて、ヒトにおける他の治療用ｍＡｂと同様のＰＫ特性を示すと予測した。このＴＭＤＤ効果を、このモデルに追加された追加の非線形除去によりモデル化し得た（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１６ Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｐｏｓ．３７：５１－６５）。図８に示すように、カニクイザルでの反復ＩＶ投与後に観察された抗ＣＤ７３抗体のＰＫを適切に説明するために、中央コンパートメントからの平行な一次（線形）及び飽和（非線形、ミカエリス・メンテン）除去を有する２コンパートメントモデルを開発した。

【0292】

非ＧＬＰ毒性試験及びＧＬＰ毒性試験で予測された抗ＣＤ７３抗体濃度と観察された抗ＣＤ７３抗体濃度との重複を、図９に示す。パネルＡは、非ＧＬＰ毒性試験で観察されたＰＫデータへのモデルフィッティングを表しており；パネルＢは、ＧＬＰ毒性試験で観察されたＰＫデータへのモデルフィッティングを表しており；記号は、観察されたデータを表しており；実線は、モデル予測を表す。

【0293】

カニクイザル用に開発されたＰＫモデルを、ヒトＰＫ予測に使用した。カニクイザルで実施された２種の抗ＣＤ７３抗体毒性試験において、抗ＣＤ７３抗体に関する線形ＰＫパラメータは、より高いクリアランス（ＣＬ）を除いて、文献（Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１）で説明されているＮＨＰ試験で見出されたものに近いことが分かった。したがって、ヒトでのＩｇＧ１ ＰＫパラメータを、クリアランス及び化合物特異的ＴＭＤＤの両方を除いて、ヒトＰＫの線形コンパートメントの予測に使用した。

【0294】

ＰＤモデルに関するＣＤ７３飽和レベルは、５０％受容体占有率をもたらす抗ＣＤ７３抗体血清中濃度であるＥＣ_５０を表すＫｍから予測される。

【0295】

２週間毎の投与に関して提案された臨床用量での予測されたヒトＰＫ及びＣＤ７３受容体占有率プロファイルを、図１０Ａに示す（線は、下から上へと、用量の増加に対応する）。３週間毎の投与に関する様々な用量での予測されたヒトＰＫ及びＣＤ７３受容体占有率プロファイルを、図１０Ｂに示す（線は、下から上へと、用量の増加に対応する）。

【0296】

１００ｍｇの開始用量は、Ｃｍａｘが３２．５μｇ／ｍＬであると予測され、このＣｍａｘは、ＰＫモデルからのミカエリス・メンテン定数Ｋｍにより推定された４２．３μｇ／ｍＬのＥＣ９０（９０％での標的飽和）未満である。１００ｍｇのこの開始用量にて、Ｃｍａｘで約９０％のＣＤ７３占有率が予測され、次の用量前に０に戻る。

【0297】

さらに、１００ｍｇのこの開始用量にて（２週間毎）、抗ＣＤ７３抗体濃度は、次の用量前に５０ｎｇ／ｍＬ未満まで戻ると予測される。この濃度は、ヒト血清（ＩＣ５０＝１２．３ｎｇ／ｍＬ）、Ａ３７５腫瘍細胞（ＩＣ５０＝３４ｎｇ／ｍＬ）、ＭＤＡ－ＭＢ２３１腫瘍細胞（ＩＣ５０＝１２６．８ｎｇ／ｍＬ）、並びにＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞によるＡＭＰ阻害Ｔ細胞増殖の反転（それぞれ、ＩＣ５０＝８．１ｎｇ／ｍＬ及び７．７ｎｇ／ｍＬ）によるインビトロアッセイにおいて、１００％未満の酵素的阻害を媒介する。この濃度はまた、ＣＤ７３＋腫瘍細胞への抗ＣＤ７３抗体の結合のＥＣ５０値と同様であるか又はこのＥＣ５０値未満であり、且つ組換え可溶性ヒトＣＤ７３に対する抗ＣＤ７３抗体親和性と同様である。このことは、開始用量が、次の用量前にＣＤ７３の完全飽和の喪失を引き起こすことをさらに示唆する。

【0298】

１００、３００、及び９００ｍｇの３つの最初の漸増用量は、２週間毎に投与した場合に、次の用量前に、８０％未満のＣＤ７３占有率をもたらし、抗ＣＤ７３抗体濃度は、次の用量前にＥＣ９０未満になると予測される。１５００ｍｇ及び２４００ｍｇの２つの最高用量レベルは、２週間毎に投与した場合に、処置期間全体を通して、９０％を超えるＣＤ７３占有率を維持すると予測される。

【0299】

実施例９：進行性固形腫瘍を有する患者での、トラスツズマブによる化学療法と組み合わされた抗ＣＤ７３の第１相ファースト・イン・ヒューマン試験
２Ｈ４＋２Ｌ１抗ＣＤ７３抗体（ＩＰＨ５３０１）は、機能的にサイレントなＦｃドメインを有するヒト化ＩｇＧ１アンタゴニストモノクローナル抗体である。この抗体は、ＣＤ７３に特異的に結合し、腫瘍微小環境中の細胞により発現されているＣＤ７３の酵素活性を阻害することにより、抗腫瘍免疫反応を増強するように設計されている。前臨床モデルは、現在臨床試験中である、ＣＤ７３を標的とする他の薬剤と比較して、区別されており且つ優れたインビトロでの活性を示している。これは、ＩＰＨ５３０１を調べるファースト・イン・ヒューマン臨床試験である。

【0300】

主要目的は、選択された進行性固形腫瘍を有する患者において、トラスツズマブによるか又はよらない化学療法と組み合わされたＩＰＨ５３０１の安全性プロファイル及び最大耐量（ＭＴＤ）／推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を評価することである。副次的目的として、トラスツズマブによるか又はよらない化学療法と組み合わされたＩＰＨ５３０１の予備的な臨床活性の評価が挙げられる。

【0301】

この試験は、パクリタキセル及びトラスツズマブによる処置の対象である（コホート２）、不治性の進行性及び／又は転移性癌を有する患者を含み、過去の全身療法の数は限定されない。ＨＥＲ２陽性の乳癌又は胃癌を有する患者が含まれる。適格性は、局所的に決定されるＨＥＲ２＋過剰発現（免疫組織化学による＋３、又はＦＩＳＨによる陽性）に基づく。患者が、過去の処置の最初の３ヶ月以内に疾患の進行を経験していなかった限り、高度な設定でのパクリタキセル、カルボプラチン、及び／又はトラスツズマブによる過去の処置が許容される。

【0302】

ＩＰＨ５３０１の５つの漸増用量レベルを、下記のように評価する：（１００ｍｇ、３００ｍｇ、９００ｍｇ、１５００ｍｇ、及び２４００ｍｇ）。全ての患者に、１日目（１週目）にＩＰＨ５３０１のみを投与する。１５日目（３週目の開始）に、下記のように、ＩＰＨ５３０１に化学療法及びトラスツズマブを追加する：
－ パクリタキセル（１７５ｍｇ／ｍ^２、３時間注入）３週間毎、
及び
－ トラスツズマブ（８ｍｇ／ｋｇ体重負荷用量、９０分注入、次いで６ｍｇ／ｋｇ ３週間毎、３０分）。

【0303】

ＩＰＨ５３０１を、試験用量に関係なく１時間かけて静脈内注入として投与し、続いてトラスツズマブを投与し、次いで化学療法を投与する。化学療法（トラスツズマブとの組合わせ）を、最大６サイクルにわたり施す。この期間の最中に、ＩＰＨ５３０１を、用量レベルに関係なく２週間毎に投与する。６サイクルの終了時に疾患進行の証拠がない患者には、この患者が臨床的利点を得ている限り、ＨＥＲ２陽性コホートの場合にＩＰＨ５３０１及びトラスツズマブ（両方とも３週間毎に投与する）を投与し続け得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【配列表】

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【国際調査報告】