▶ ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-09-04
(54)【発明の名称】ｓＢＣＭＡバリアントおよびそのＦＣ融合タンパク質
(51)【国際特許分類】
A61K 39/00 20060101AFI20230828BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20230828BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230828BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230828BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230828BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230828BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230828BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20230828BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20230828BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230828BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20230828BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230828BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20230828BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20230828BHJP
C07K 16/00 20060101ALN20230828BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20230828BHJP
【ＦＩ】
A61K39/00 H
C12N15/12
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/02 C
C12N15/62 Z
A61P35/00
A61P35/04
A61P43/00 111
A61K47/68
C07K14/47 ZNA
C07K16/00
C07K19/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023510373
(86)(22)【出願日】2021-08-11
(85)【翻訳文提出日】2023-04-10
(86)【国際出願番号】 US2021045615
(87)【国際公開番号】W WO2022036009
(87)【国際公開日】2022-02-17
(31)【優先権主張番号】63/064,880
(32)【優先日】2020-08-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】515158308
【氏名又は名称】ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ジャッチャ， アマート ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】ミアオ， ユー
(72)【発明者】
【氏名】タッカー， カウシク
(72)【発明者】
【氏名】水野 和恵
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064AG31
4B064CA02
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA08
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA25
4B065CA44
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF70
4C085AA02
4C085BB01
4C085DD22
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、新規なｓＢＣＭＡバリアントおよびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する方法、ならびにそのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を、例えば、例えば、腫瘍／がん、免疫調節性障害などの疾患を処置することにおいて、使用する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアント可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）を含む組成物であって、該アミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、該番号付けはＥＵインデックスに従う、組成物。
【請求項2】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記アミノ酸置換が、前記位置のうちの１個、前記位置のうちの２個、前記位置のうちの３個、前記位置のうちの４個、前記位置のうちの５個、前記位置のうちの６個、前記位置のうちの７個、前記位置のうちの８個、または前記位置のうちの９個で生じている、前述の請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項4】
前記アミノ酸置換が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される、前述の請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
前記アミノ酸置換が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群より選択される、前述の請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
前記アミノ酸置換が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群より選択される、前述の請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
前記アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群より選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項11】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号４９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号７４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項18】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６７のアミノ酸配列を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項19】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６８のアミノ酸配列を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項20】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６９のアミノ酸配列を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項21】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号４９のアミノ酸配列を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項22】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号７４のアミノ酸配列を有する、請求項１～４および７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項23】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、配列番号１と比較して増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）またはＴＮＦファミリーのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）に対する増強した結合親和性を示す、請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項24】
前記バリアントｓＢＣＭＡが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項25】
前述の請求項のいずれか一項に記載のバリアントｓＢＣＭＡをコードする核酸。
【請求項26】
請求項２５に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項27】
請求項２５に記載の核酸または請求項２６に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項28】
バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を生成する方法であって、ａ）前記Ｆｃ融合タンパク質が発現される条件下で請求項２７に記載の宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）該バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を回収する工程
を含む、方法。
【請求項29】
ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物であって、該融合タンパク質は、ａ）配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、該アミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、該番号付けはＥＵインデックスに従う、バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；ならびに
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む、組成物。
【請求項30】
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側からＣ末端側へ、ａ）前記バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）前記必要に応じたリンカー；および
ｃ）前記Ｆｃドメイン
を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項31】
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側からＣ末端側へ、ａ）前記Ｆｃドメイン；
ｂ）前記必要に応じたリンカー；および
ｃ）前記バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項32】
前記バリアントｓＢＣＭＡが配列番号１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項33】
前記アミノ酸置換が、前記位置のうちの１個、前記位置のうちの２個、前記位置のうちの３個、前記位置のうちの４個、前記位置のうちの５個、前記位置のうちの６個、前記位置のうちの７個、前記位置のうちの８個、または前記位置のうちの９個で生じている、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項34】
前記アミノ酸置換が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項35】
前記アミノ酸置換が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群より選択される、請求項２９～３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項36】
前記アミノ酸置換が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群より選択される、請求項２９～３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項37】
前記アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群より選択される、請求項２９～３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項38】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項39】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項40】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項41】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項42】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項43】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項44】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項45】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項46】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号４９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項47】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号７４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項48】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６７のアミノ酸配列を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項49】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６８のアミノ酸配列を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項50】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６９のアミノ酸配列を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項51】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号４９のアミノ酸配列を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項52】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号７４のアミノ酸配列を有する、請求項２９～３４および３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項53】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、請求項２９～５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項54】
前記バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、請求項２９～５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項55】
前記ＦｃドメインがヒトＩｇＧ ＦｃドメインまたはバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、請求項２９～５４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項56】
前記ヒトＩｇＧ ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、請求項５５に記載の組成物。
【請求項57】
前記ＦｃドメインがバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、請求項５５に記載の組成物。
【請求項58】
前記リンカーが配列番号８７である、請求項２９～５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項59】
前記リンカーが、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎからなる群より選択され、ｎは１、２、３、４および５からなる群より選択される、請求項２９～５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項60】
前記リンカーが配列番号８８である、請求項５９に記載の組成物。
【請求項61】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８０のアミノ酸配列を有する、請求項２９、３０、３２～３４、３７、５５、および６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項62】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８１のアミノ酸配列を有する、請求項２９、３０、３２～３４、３７、５５、および６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項63】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８２のアミノ酸配列を有する、請求項２９、３０、３２～３４、３７、５５、および６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項64】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８３のアミノ酸配列を有する、請求項２９、３０、３２～３４、３７、５５、および６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項65】
前記ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８４のアミノ酸配列を有する、請求項２９、３０、３２～３４、３７、５５、および６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項66】
請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項67】
請求項６６に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項68】
請求項６６に記載の核酸または請求項６７に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項69】
ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する方法であって、ａ）該融合タンパク質が発現される条件下で請求項６８に記載の宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）該融合タンパク質を回収する工程
を含む、方法。
【請求項70】
対象においてＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を処置するか、該ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項71】
ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項72】
対象においてＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、またはそれらの両方を阻害する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含み、前記バリアントｓＢＣＭＡドメインはＢＡＦＦに結合する、方法。
【請求項73】
ＢＣＭＡと、ＢＡＦＦＲと、ＴＡＣＩと、ＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターとからなる群より選択される少なくとも１つのレセプターを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項74】
ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項75】
ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを発現する線維症を対象において処置する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項76】
ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する線維症を対象において処置する方法であって、該対象に治療有効用量の１またはそれ以上の請求項２９～６５のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与する工程
を含む、方法。
【請求項77】
前記腫瘍が血液がんである、請求項７０または請求項７１に記載の方法。
【請求項78】
前記血液がんが多発性骨髄腫である、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出されており本明細書によりその全体が参照によって援用される、配列表を含む。２０２０年８月１１日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１２１０７６－５００４－ＰＲ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名前であり、サイズは６０．０バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出されており本明細書によりその全体が参照によって援用される、配列表を含む。２０２０年８月１１日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１２１０７６－５００４－ＰＲ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名前であり、サイズは６０．０バイトである。
【0002】
（Ｉ．発明の分野）
本発明は、可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアントおよびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する方法、ならびにそのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を、例えば、腫瘍／がん、免疫調節性障害、線維症などの疾患を処置することにおいて、使用する方法に関する。
本発明は、可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）バリアントおよびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する方法、ならびにそのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を、例えば、腫瘍／がん、免疫調節性障害、線維症などの疾患を処置することにおいて、使用する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
（ＩＩ．発明の背景）
腫瘍壊死因子（「ＴＮＦ」）ファミリーは、ＴＮＦファミリーリガンドおよびＴＮＦファミリーレセプターと呼ばれる、リガンドとそれらの特異的レセプターとの対からなる（Ｂａｚｚｏｎｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９６、３３４（２６）：１７１７）。そのファミリーは、免疫系およびおそらくは他の非免疫学的系の調節に関与する。ＴＮＦファミリーシグナル伝達の調節は、その後の多数の事象をもたらし得る。ＴＮＦは、細胞輸送、特定の細胞を特定の区画へ駆動するためのケモカイン産生、および種々のエフェクター細胞のプライミングに関与する接着分子の提示変化を含む、外敵の侵入に対する生物の全般的防御的炎症応答を開始し得る。従って、これらの経路の調節は、臨床的可能性を有する（ＵＳ９，６５０，４３０Ｂ２）。
腫瘍壊死因子（「ＴＮＦ」）ファミリーは、ＴＮＦファミリーリガンドおよびＴＮＦファミリーレセプターと呼ばれる、リガンドとそれらの特異的レセプターとの対からなる（Ｂａｚｚｏｎｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９６、３３４（２６）：１７１７）。そのファミリーは、免疫系およびおそらくは他の非免疫学的系の調節に関与する。ＴＮＦファミリーシグナル伝達の調節は、その後の多数の事象をもたらし得る。ＴＮＦは、細胞輸送、特定の細胞を特定の区画へ駆動するためのケモカイン産生、および種々のエフェクター細胞のプライミングに関与する接着分子の提示変化を含む、外敵の侵入に対する生物の全般的防御的炎症応答を開始し得る。従って、これらの経路の調節は、臨床的可能性を有する（ＵＳ９，６５０，４３０Ｂ２）。
【0004】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリーメンバーのメンバーである。ＢＣＭＡの細胞外ドメインのアミノ酸配列が、図７において示される。例えば、ＢＣＭＡは、増殖誘導リガンド（Ａ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ Ｌｉｇａｎｄ）（ＡＰＲＩＬ）およびＴＮＦファミリーのβ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）に対するレセプターである。抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が挙げられる抗ＢＣＭＡ抗体が、初期試験においてがんの処置において初期の成功を示しており、ＢＣＭＡ二重特異性Ｔ細胞誘導抗体、およびＢＣＭＡを使用するＣＡＲ－Ｔ構築物もまた、同様である。
【0005】
ＡＰＲＩＬは、ＷＯ９９ １２９６５およびＵＳ７，２７６，２４１Ｂ２（これらは本明細書において参照により援用される）において以前に記載されている。ＡＰＲＩＬの細胞外ドメインのアミノ酸配列が、図７において示される。ＡＰＲＩＬの発現研究および機能研究は、このタンパク質が、腫瘍細胞によって利用されて迅速な増殖を誘導することを示唆する。さらに、ＡＰＲＩＬは、他の疾患状況において、例えば、一部の自己免疫疾患（例えば、ループス）に関連して生じる細胞増殖性疾患などの細胞増殖性疾患において、または細胞集団が迅速に増殖する炎症性疾患（例えば、細菌性敗血症）において、作用し得る（ＵＳ７，２７６，２４１Ｂ２）。
【0006】
ＢＡＦＦは、ＷＯ／００１２９６４およびＵＳ９，６５０，４３０Ｂ２（これらは本明細書において参照により援用される）において以前に記載されている。ＢＡＦＦの細胞外ドメインのアミノ酸配列が、図７において示される。ＢＡＦＦは、Ｂ細胞に関する細胞の生存および成熟の因子であり、ＢＡＦＦの過剰産生は、全身性自己免疫疾患と関連する。ヒトにおいて、高レベルのＢＡＦＦが、自己免疫リウマチ性疾患（特に、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群）を有する患者のうちの一定の割合の血液において検出可能である（Ｇｒｏｏｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、２００２、１０９：５９；Ｚｈａｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１、１６６：６；Ｃｈｅｅｍａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、２００１、４４：１３１３（これらはすべて本明細書において参照により援用される））。ＢＡＦＦはまた、Ｔ細胞に対する有効な共刺激分子であり、この共刺激は、もっぱらＢＡＦＦ－Ｒを介して生じる（Ｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００４、１７３：８０７（本明細書において参照により援用される））。
【0007】
腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）としても公知である、膜貫通性活性化因子およびＣＡＭＬ相互作用子（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｄ ＣＡＭＬ ｉｎｔｅｒａｃｔｏｒ）（ＴＡＣＩ）は、ＩＩＩ型膜貫通タンパク質である。いくつかのタンパク質（ＢＡＦＦ／ＢＬｙｓ、ＡＰＲＩＬ、Ｓｙｎｄｅｃａｎ－２）が、ＴＡＣＩリガンドとして同定されている。ＴＡＣＩとそのリガンドとの相互作用は、転写因子ＮＦＡＴ、ＡＰ１、およびＮＦ－κＢの活性化を誘導し、それは、Ｂ細胞の増殖および生存の調節によって液性免疫において重要な役割を果たす。ＴＡＣＩによるＢ細胞の活性化は、それらの分化および成熟（抗体アイソタイプスイッチを含む）、ならびにＴ細胞非依存性抗体産生をもたらす（Ｃｈｉｎｅｎら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１１、１２７（６）：１５７９（本明細書において参照により援用される））。
ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦは、レセプター（例えば、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦレセプター（ＢＡＦＦＲ）およびＴＡＣＩ）に結合し得、従って、中和ＡＰＲＩＬおよび／または中和ＢＡＦＦが、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患（（例えば、がん、自己免疫疾患および線維症）を処置するために使用され得る。
がん、免疫調節性障害および線維性障害に対する現在の処置は、乏しい有効性、サバイバーシップに対する低い影響、重篤な副作用を引き起こす毒性、またはそれらの組合せが原因で、多くの疾患型にとっては不十分である。従って、重篤な副作用を誘導することなく有効性を提供し得る、がんおよび／または免疫調節性障害を処置するためのさらなる方法を同定および開発する必要性が、存在する。本発明は、この必要性および他の必要性を満たす。
ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦは、レセプター（例えば、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦレセプター（ＢＡＦＦＲ）およびＴＡＣＩ）に結合し得、従って、中和ＡＰＲＩＬおよび／または中和ＢＡＦＦが、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患（（例えば、がん、自己免疫疾患および線維症）を処置するために使用され得る。
がん、免疫調節性障害および線維性障害に対する現在の処置は、乏しい有効性、サバイバーシップに対する低い影響、重篤な副作用を引き起こす毒性、またはそれらの組合せが原因で、多くの疾患型にとっては不十分である。従って、重篤な副作用を誘導することなく有効性を提供し得る、がんおよび／または免疫調節性障害を処置するためのさらなる方法を同定および開発する必要性が、存在する。本発明は、この必要性および他の必要性を満たす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】米国特許第９，６５０，４３０号明細書
【特許文献2】国際公開第９９／０１２９６５号
【特許文献3】米国特許第７，２７６，２４１号明細書
【特許文献4】米国特許第９，６５０，４３０号明細書
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｂａｚｚｏｎｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９６、３３４（２６）：１７１７
【非特許文献2】Ｇｒｏｏｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、２００２、１０９：５９
【非特許文献3】Ｚｈａｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１、１６６：６
【非特許文献4】Ｃｈｅｅｍａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、２００１、４４：１３１３
【非特許文献5】Ｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００４、１７３：８０７
【非特許文献6】Ｃｈｉｎｅｎら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１１、１２７（６）：１５７９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0010】
改善した特性（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する増加した結合親和性など）を有するｓＢＣＭＡバリアントまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質ならびにそのようなｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を生成する方法ならびにがんおよび／または免疫調節性障害を有する患者を処置することにおいてそのようなｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を使用する方法を提供することが、本発明の目的である。
【0011】
（ＩＩＩ．発明の要旨）
本発明は、特に、ｓＢＣＭＡバリアントおよびそのＦｃ融合タンパク質、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を生成する方法、ならびにそのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を、特に疾患（例えば、がんまたは免疫調節性障害）を処置するために、使用する方法を提供する。一部の実施形態において、そのｓＢＣＭＡバリアントは、がんまたは免疫調節性適用を処置するために使用される。一部の実施形態において、そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、がんまたは免疫調節性適用を処置するために使用される。
本発明は、特に、ｓＢＣＭＡバリアントおよびそのＦｃ融合タンパク質、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、そのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を生成する方法、ならびにそのｓＢＣＭＡバリアントおよび／またはそのＦｃ融合タンパク質を、特に疾患（例えば、がんまたは免疫調節性障害）を処置するために、使用する方法を提供する。一部の実施形態において、そのｓＢＣＭＡバリアントは、がんまたは免疫調節性適用を処置するために使用される。一部の実施形態において、そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、がんまたは免疫調節性適用を処置するために使用される。
【0012】
一つの局面では、本発明は、配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアント可溶性Ｂ細胞成熟抗原（ｓＢＣＭＡ）を含む組成物であって、アミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、番号付けはＥＵインデックスに従う、組成物を提供する。
【0013】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0014】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、位置のうちの１個、位置のうちの２個、位置のうちの３個、位置のうちの４個、位置のうちの５個、位置のうちの６個、位置のうちの７個、位置のうちの８個、または位置のうちの９個で生じている、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0015】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0016】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0017】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0018】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0019】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0020】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0021】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0022】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0023】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0024】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0025】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0026】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0027】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号４９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0028】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号７４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0029】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６７のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0030】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６８のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0031】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号６９のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0032】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号４９のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0033】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号７４のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0034】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、配列番号１と比較して増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）またはＴＮＦファミリーのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）に対する増強した結合親和性を示す、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0035】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0036】
さらなる局面では、本発明は、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質をコードする核酸を提供する。
【0037】
さらなる局面では、本発明は、本明細書に記載される核酸を含む発現ベクターを提供する。
【0038】
さらなる局面では、本発明は、本明細書に記載される核酸または発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。
【0039】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を生成する方法であって、ａ）Ｆｃ融合タンパク質が発現される条件下で本明細書に記載される宿主細胞を培養する工程；およびｂ）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を回収する工程を含む、方法を提供する。
【0040】
さらなる局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物であって、融合タンパク質は、
ａ）配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、アミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、番号付けはＥＵインデックスに従う、バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；ならびに
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む、組成物を提供する。
ａ）配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、アミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、番号付けはＥＵインデックスに従う、バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；ならびに
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む、組成物を提供する。
【0041】
追加の局面では、本発明は、融合タンパク質が、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；および
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
ａ）バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；および
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0042】
さらなる局面では、本発明は、融合タンパク質が、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）Ｆｃドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；および
ｃ）バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
ａ）Ｆｃドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；および
ｃ）バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0043】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡが配列番号１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0044】
さらなる局面では、本発明は、アミノ酸置換が、位置のうちの１個、位置のうちの２個、位置のうちの３個、位置のうちの４個、位置のうちの５個、位置のうちの６個、位置のうちの７個、位置のうちの８個、または位置のうちの９個で生じている、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0045】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0046】
さらなる局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0047】
追加の局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0048】
さらなる局面では、本発明は、アミノ酸置換が、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0049】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0050】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0051】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0052】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0053】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａと、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換とを含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0054】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0055】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0056】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0057】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号４９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0058】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号７４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0059】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６７のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0060】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６８のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0061】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号６９のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0062】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号４９のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0063】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが配列番号７４のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0064】
さらなる局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0065】
追加の局面では、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡドメインが、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0066】
さらなる局面では、本発明は、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ ＦｃドメインまたはバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0067】
追加の局面では、本発明は、ヒトＩｇＧ ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0068】
さらなる局面では、本発明は、ＦｃドメインがバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0069】
さらなる局面では、本発明は、リンカーが配列番号８７である、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0070】
追加の局面では、本発明は、リンカーが、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎからなる群より選択され、ｎは１、２、３、４および５からなる群より選択される、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0071】
さらなる局面では、本発明は、リンカーがＧＧＧＧＳ（配列番号８８）である、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0072】
追加の局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８０のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0073】
さらなる局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８１のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0074】
追加の局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８２のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0075】
さらなる局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８３のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0076】
追加の局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号８４のアミノ酸配列を有する、本明細書に記載される組成物を提供する。
【0077】
追加の局面では、本発明は、本明細書に記載される融合タンパク質をコードする核酸を提供する。
【0078】
さらなる局面では、本発明は、本明細書に記載される核酸を含む発現ベクターを提供する。
【0079】
追加の局面では、本発明は、本明細書に記載される核酸または本明細書に記載される発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。
【0080】
さらなる局面では、本発明は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する方法であって、ａ）融合タンパク質が発現される条件下で本明細書に記載される宿主細胞を培養する工程；およびｂ）融合タンパク質を回収する工程を含む、方法を提供する。
【0081】
追加の局面では、本発明は、対象においてＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を処置するか、ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0082】
さらなる局面では、本発明は、ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0083】
追加の局面では、本発明は、対象においてＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、またはそれらの両方を阻害する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含み、バリアントｓＢＣＭＡドメインはＢＡＦＦに結合する、方法を提供する。
【0084】
さらなる局面では、本発明は、ＢＣＭＡと、ＢＡＦＦＲと、ＴＡＣＩと、ＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターとからなる群より選択される少なくとも１つのレセプターを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0085】
追加の局面では、本発明は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0086】
追加の局面では、本発明は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを発現する線維症を対象において処置する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0087】
さらなる局面では、本発明は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する線維症を対象において処置する方法であって、対象に治療有効用量の１またはそれ以上の本明細書に記載される融合タンパク質を投与する工程を含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0088】
【0089】
【0090】
【図3-1】図３Ａ～３Ｄは、配列番号１において示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較したｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。図３Ａは、Ｓ３クローン番号１～１２の配列を示す。図３Ｂは、Ｓ４クローン番号１３～４１の配列を示す。図３Ｃは、Ｓ５クローン番号４２～７４の配列を示す。図３Ｄは、Ｓ６クローン番号７５～１１８の配列を示す。
【図3-2】図３Ａ～３Ｄは、配列番号１において示される野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインの配列と比較したｓＢＣＭＡバリアントクローンの配列を示す。図３Ａは、Ｓ３クローン番号１～１２の配列を示す。図３Ｂは、Ｓ４クローン番号１３～４１の配列を示す。図３Ｃは、Ｓ５クローン番号４２～７４の配列を示す。図３Ｄは、Ｓ６クローン番号７５～１１８の配列を示す。
【0091】
【0092】
【0093】
【0094】
【0095】
【発明を実施するための形態】
【0096】
（Ｖ．発明の詳細な説明）
本願発明の主題をより明確で正確に指摘するために、以下の定義が、以下の記載および添付の特許請求の範囲において使用される特定の用語について提供される。
本願発明の主題をより明確で正確に指摘するために、以下の定義が、以下の記載および添付の特許請求の範囲において使用される特定の用語について提供される。
【0097】
（Ａ．序論）
本発明は、アミノ酸改変を含む可溶性形態のヒトＢＣＭＡ（例えば、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質）の使用に関する。これらのバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡリガンドであるヒトＢＡＦＦおよび／またはヒトＡＰＲＩＬのうちの１つまたは両方のいずれかに、野生型ヒトＢＣＭＡよりも強固な親和性で結合する。ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦは、レセプター（例えば、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよびＴＡＣＩ）に結合し得、従って、中和ＡＰＲＩＬおよび／または中和ＢＡＦＦが、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患を処置するために、使用され得る。これらの疾患としては、がん、自己免疫疾患および線維症が挙げられる。中和ＡＰＲＩＬ単独が、高レベルのＢＣＭＡおよびＴＡＣＩを発現するかまたはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される高レベルの他のレセプターを発現する、がん、自己免疫疾患および線維症を処置することにおいて有効であり得る。中和ＢＡＦＦ単独が、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよびＴＡＣＩを発現するか、またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する、Ｂ細胞悪性疾患および自己免疫疾患を処置することにおいて有効であり得る。従って、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、リガンド（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）により強固に（従って優先的に）結合すること、従って、細胞表面のＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩと、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦとの間で別な様式で生じる正常なレセプターシグナル伝達を変化させることによって、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩを発現するか、ならびに／またはＡＰＲＩＬおよび／もしくはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他の任意のレセプターを発現する、がん、免疫調節性障害および／または線維症性疾患を処置するために使用され得る。
本発明は、アミノ酸改変を含む可溶性形態のヒトＢＣＭＡ（例えば、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質）の使用に関する。これらのバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡリガンドであるヒトＢＡＦＦおよび／またはヒトＡＰＲＩＬのうちの１つまたは両方のいずれかに、野生型ヒトＢＣＭＡよりも強固な親和性で結合する。ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦは、レセプター（例えば、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよびＴＡＣＩ）に結合し得、従って、中和ＡＰＲＩＬおよび／または中和ＢＡＦＦが、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを介して変化したシグナル伝達経路から生じる疾患を処置するために、使用され得る。これらの疾患としては、がん、自己免疫疾患および線維症が挙げられる。中和ＡＰＲＩＬ単独が、高レベルのＢＣＭＡおよびＴＡＣＩを発現するかまたはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される高レベルの他のレセプターを発現する、がん、自己免疫疾患および線維症を処置することにおいて有効であり得る。中和ＢＡＦＦ単独が、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよびＴＡＣＩを発現するか、またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する、Ｂ細胞悪性疾患および自己免疫疾患を処置することにおいて有効であり得る。従って、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、リガンド（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）により強固に（従って優先的に）結合すること、従って、細胞表面のＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩと、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦとの間で別な様式で生じる正常なレセプターシグナル伝達を変化させることによって、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩを発現するか、ならびに／またはＡＰＲＩＬおよび／もしくはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他の任意のレセプターを発現する、がん、免疫調節性障害および／または線維症性疾患を処置するために使用され得る。
【0098】
さらに、一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアントは、概して血流から迅速に排出される小さいタンパク質であるので、本発明は、本明細書において議論されるように、ｓＢＣＭＡバリアントをヒトＦｃドメインまたはバリアントＦｃドメインに連結する、融合タンパク質を提供する。Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎレセプターへの結合を介して、延長した血清中半減期を与えるので、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃドメイン融合タンパク質の作製は、改善した治療法をもたらす。従って、本発明は、ｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン融合タンパク質（本明細書において時には「融合タンパク質」と呼ばれる）を提供する。一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアントまたは融合タンパク質のバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬに対する増強した結合親和性を示す。一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアントまたは融合タンパク質のバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアントまたは融合タンパク質のバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。
【0099】
（Ｂ．定義）
本明細書において使用される場合、以下の用語は、異なるように明示されない限りは、それらの用語に帰する意味を有する。
本明細書において使用される場合、以下の用語は、異なるように明示されない限りは、それらの用語に帰する意味を有する。
【0100】
本明細書において使用される用語「１つの（ある）（ａ）」、「１つの（ある）（ａｎ）」、または「その（この）（ｔｈｅ）」は、１つの要素を有する局面を含むだけではなく、１つよりも多い要素を有する局面もまた含む。例えば、単数形「１つの（ある）（ａ）」、「１つの（ある）（ａｎ）」、および「その（この）（ｔｈｅ）」は、異なるように文脈が明確に示さない限りは、複数の言及物を含む。従って、例えば、「１つの（ａ）細胞」に対する言及は、複数のそのような細胞を含み、「その（ｔｈｅ）作用因子」に対する言及は、当業者にとって公知である１つまたはそれ以上の作用因子に対する言及を含む、などである。
【0101】
本明細書において使用される場合、本明細書における「タンパク質」は、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸が意味され、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチドおよびペプチドを含む。
【0102】
用語「単離された」とは、その天然環境を実質的に含まず他のタンパク質を含まない、分子を指す。例えば、単離されたタンパク質は、それが由来する細胞源または組織源由来の細胞物質も他のタンパク質も、実質的に含まない。用語「単離された」はまた、その単離されたタンパク質が薬学的組成物として投与されるのに十分に純粋であるか、または少なくとも約７０～８０％、８０～９０％、または９０～９５％（重量／重量）純粋であるか、または少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％（重量／重量）純粋である、調製物を指す。特に、そのポリペプチドは「本質的に純粋な形態」であること、すなわち、そのポリペプチド調製物は、それが天然で関連する他のポリペプチド物質を実質的に含まないことが、好ましい。これは、例えば、周知の組換え方法によってそのポリペプチドを調製することによってか、または古典的精製方法によって、達成され得る。
【0103】
Ｂ細胞成熟抗原「ＢＣＭＡ」という用語は、Ｇｒａｓら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９５、７：１０９３；Ｙ．Ｌａａｂｉら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１９９２、１１：３８９７において記載されるような、Ｂ細胞成熟のためのタンパク質を指す。ＢＣＭＡは、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーのメンバーである。例えば、ＢＣＭＡは、ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対するレセプターである。野生型ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインのアミノ酸配列（配列番号１）が、図７および表３において示される。
【0104】
用語「リガンド」とは、第２の生体分子（例えば、標的細胞の表面に存在するレセプター）に結合して複合体を形成して生物学的目的に役立つことが可能である、生体分子を指す。リガンドは、一般的には、標的タンパク質の部位に、例えば、分子間力（例えば、イオン結合、水素結合、疎水性相互作用、双極子間結合、またはファンデルワールス力）によって結合する、エフェクター分子である。本発明において、ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦが、リガンドタンパク質である。
【0105】
用語「レセプター」とは、第２の生体分子（例えば、リガンド）に結合して複合体を形成することが可能である、標的細胞の表面に存在する生体分子を指す。レセプターは、一般的には、特定のシグナル伝達経路を活性化する。例えば、ＢＣＭＡは、ＴＮＦファミリーのメンバーであるＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対するレセプターである。
【0106】
本明細書において使用される「位置」によって、タンパク質の配列における場所が意味される。本発明の一部の実施形態において、位置は、成熟タンパク質の最初のアミノ酸で開始して連続的に番号付けされ、例えばヒトＢＣＭＡタンパク質について図３において示される。一部の場合において、例えば本明細書において記載される融合タンパク質のＦｃドメイン部分について、そのＦｃドメイン位置は、連続的に、または確立した形式（例えばＥＵインデックス）に従って、番号付けされ得る。ＥＵインデックスまたはＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスまたはＥＵ番号付けスキームとは、ＥＵ番号付け（ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ、第５版、ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、９１－３２４２号、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら（全体が参照により援用される）を参照のこと；およびＥｄｅｌｍａｎら、１９６９、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、６３：７８～８５（本明細書によって全体が参照により援用される）もまた参照のこと）を指す。
【0107】
本明細書における「アミノ酸改変」または「アミノ酸配列改変によって、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失が意味される。
【0108】
本明細書において使用される「親タンパク質」によって、後にバリアントを生成するように改変される出発タンパク質が意味される。その親タンパク質は、天然に存在するタンパク質、または天然に存在するタンパク質のバリアントもしくは操作されたバージョンであり得る。親タンパク質とは、そのタンパク質自体、その親タンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指し得る。この文脈において、「親Ｆｃドメイン」は、記載されたバリアントと関連する。従って、「バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン」は、ヒトＩｇＧの親Ｆｃドメインと比較され、例えば、「バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン」は、ヒトＩｇＧ１の親Ｆｃドメインと比較される、などである。
【0109】
本明細書における「野生型」または「ＷＴ」によって、天然で見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列（アレルバリエーションを含む）が意味される。ＷＴタンパク質は、天然に存在しない配列へと意図的に改変されてはいない、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
【0110】
本明細書において使用される「バリアントタンパク質」または「タンパク質バリアント」、または「バリアント」によって、少なくとも１アミノ酸配列改変によって親タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するタンパク質が意味される。例えば、本明細書において使用される「バリアントｓＢＣＭＡ」または「ｓＢＣＭＡバリアント」は、以下に概説されるとおり、少なくとも１アミノ酸配列改変によって親ｓＢＣＭタンパク質のアミノ酸配列とは異なるが依然として同族リガンドに結合する能力を保持する、アミノ酸配列を有するタンパク質が意味される。一部の実施形態において、その親タンパク質は、ヒト野生型配列である。一部の実施形態において、その親タンパク質は、バリアントを有するヒト配列である。タンパク質バリアントとは、そのタンパク質自体、そのタンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指し得る。一部の実施形態において、そのタンパク質バリアントは、１個の位置、２個の位置、３個の位置、４個の位置、５個の位置、６個の位置、７個の位置、８個の位置、９個の位置、または１０個の位置にアミノ酸置換を有する。本明細書におけるタンパク質バリアント配列は、親タンパク質配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％の配列同一性、好ましくは少なくとも約８５％、８６％、８８％、９０％、９３％または９５％の配列同一性を有する。２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド間の関係性は、パラメータ「配列同一性」または「同一性」。によって記述される。本発明のアミノ酸配列（「発明配列」）と特許請求の範囲において参照される親アミノ酸配列（例えば、配列番号１）との間の同一性の程度は、それらの２つの配列のアラインメントにおける正確なマッチの数を、「発明配列」の長さまたは親アミノ酸配列の長さ（どちらでも最短である方）で除算したものとして、算出される。その結果は、以下に算出されるように同一性パーセントで表現される。
【0111】
本発明の目的のために、配列番号１において示されるｓＢＣＭＡの細胞外ドメインが、本発明のｓＢＣＭＡバリアントにおける対応するアミノ酸配列改変を決定するために親タンパク質として使用される。ｓＢＣＭＡバリアントタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列とアラインメントされ、そのアラインメントに基づいて、配列番号１において開示される任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号が、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ、Ｒｉｃｅら、２０００、Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．、１６：２７６～２７７）（好ましくはバージョン５．０．０またはそれ以降）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実行されるとおり、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３～４５３）を使用して、決定される。使用されるパラメータは、ギャップオーブンペナルティ（ｇａｐ ｏｐｅｎ ｐｅｎａｌｔｙ）１０、ギャップ伸張ペナルティ（ｇａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｐｅｎａｌｔｙ）０．５、およびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性（ｌｏｎｇｅｓｔ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」と呼ばれるＮｅｅｄｌｅのアウトプット（ブリーフなし（－ｎｏｂｒｉｅｆ）オプションを使用して得られる）が、同一性パーセントとして使用され、以下のとおり算出される：
【0112】
（同一な残基×１００）／（アラインメントの長さ－アラインメント中のギャップの総数）
【0113】
別のｓＢＣＭＡバリアントにおける対応するアミノ酸残基の同定は、以下が挙げられるがこれらに限定はされないいくつかのコンピュータプログラムを、それらの各自のデフォルトパラメータを用いて使用して、複数のポリペプチド配列のアラインメントによって決定され得る：ＭＵＳＣＬＥ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｙ ｌｏｇ－ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ；バージョン３．５またはそれ以降；Ｅｄｇａｒ、２００４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３２：１７９２～１７９７）、ＭＡＦＦＴ（バージョン６．８５７またはそれ以降；ＫａｔｏｈおよびＫｕｍａ、２００２、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３０：３０５９～３０６６；Ｋａｔｏｈら、２００５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３３：５１１～５１８；ＫａｔｏｈおよびＴｏｈ、２００７、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２３：３７２～３７４；Ｋａｔｏｈら、２００９、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、５３７：３９～６４；ＫａｔｏｈおよびＴｏｈ、２０１０、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２６：１８９９～１９００）、ＣｌｕｓｔａｌＷを使用するＥＭＢＯＳＳ ＥＭＭＡ（１．８３またはそれ以降；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９９４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２２：４６７３～４６８０）、ならびにＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａを使用するＥＭＢＬ－ＥＢＩ（ＳｉｅｖｅｒｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ、２０１４、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、２０１４；１０７９：１０５～１６）。
【0114】
他のバリアントポリペプチドが、従来の配列ベースの比較がそれらの関係性を検出するのを失敗する程度（ＬｉｎｄａｈｌおよびＥｌｏｆｓｓｏｎ、２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２９５：６１３～６１５）に野生型ｓＢＣＭＡから離れていた場合、他のペアワイズ配列比較アルゴリズムが、使用され得る。配列ベースの検索におけるより高い感度が、ポリペプチドファミリーの確率的表示（プロファイル）を使用してデータベースを検索する検索プログラムを使用して、達成され得る。例えば、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴプログラムは、反復的データベース検索プロセスを通じてプロファイルを作成し、遠縁のホモログを検出することが可能である（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９～３４０２）。ポリペプチドのファミリーまたはスーパーファミリーがそのタンパク質構造データベースにおいて１つまたはそれ以上の代表物を有する場合に、さらに高い感度が達成され得る。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲ（Ｊｏｎｅｓ、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２８７：７９７～８１５；ＭｃＧｕｆｆｉｎおよびＪｏｎｅｓ、２００３、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１９：８７４～８８１）などのプログラムは、種々の供給源に由来する情報（ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造アラインメントプロファイル、および溶媒和ポテンシャル）を、問い合わせ配列について構造折畳みを予測するニューラルネットワークへのインプットとして使用する。同様に、Ｇｏｕｇｈら、２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３１３：９０３～９１９の方法が、未知の構造の配列を、ＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとアラインメントするために、使用され得る。これらのアラインメントは、次に、そのポリペプチドについての相同性モデルを作成するために使用され得、そのようなモデルは、その目的のために開発された種々のツールを使用して、精度について評価され得る。
【0115】
既知構造のタンパク質について、いくつかのツールおよび資源が、構造アラインメントを検索および作成するために利用可能である。例えば、タンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーが構造的にアラインメントされており、それらのアラインメントは、アクセス可能でありダウンロード可能である。２以上のタンパク質構造が、距離アラインメントマトリックス（ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｍａｔｒｉｘ）（ＨｏｌｍおよびＳａｎｄｅｒ、１９９８、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、３３：８８～９６）または組合せ拡張（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）（ＳｈｉｎｄｙａｌｏｖおよびＢｏｕｒｎｅ、１９９８、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１１：７３９～７４７）などの種々のアルゴリズムを使用して、アラインメントされ得、これらのアルゴリズムの実行が、可能性のある構造ホモログを発見するために、構造データベースに目的の構造で問い合わせるためにさらに利用され得る（例えば、ＨｏｌｍおよびＰａｒｋ、２０００、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１６：５６６～５６７）。
【0116】
本発明のバリアントを記述する際に、下記の命名法が、参照を容易にするために適合される。標準的に受容されているＩＵＰＡＣの１文字または３文字のアミノ酸略号が、使用される。
【0117】
アミノ酸置換について、以下の命名法が、本明細書において使用される：元のアミノ酸、位置、置換アミノ酸。従って、位置４３のアラニンのバリンによる置換は、「Ａｌａ４３Ｖａｌ」または「Ａ４３Ｖ」と示される。複数の変異は、スラッシュ記号（「／」）によって区切られ、例えば、「Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ」は、それぞれ、位置１１、位置１６および位置３１での置換を示す。２０個のアミノ酸の各々についての名前、３文字略号、および１文字略号が、表１において示される。
【0118】
（表１．２０個のアミノ酸の各々についての名前、３文字略号、および１文字略号）
【表1】
【0119】
用語「核酸構築物」とは、天然に存在する遺伝子から単離されているか、または天然では他に存在しない様式で核酸セグメントを含むように改変されているか、または合成である、一本鎖または二本鎖のいずれかである核酸分子を指し、その核酸分子は、１つまたはそれ以上の制御配列を含む。
【0120】
用語「作動可能に連結される」とは、制御配列がポリヌクレオチドのコード配列に対して、その制御配列がそのコード配列の発現を指示するように適切な位置に配置されている、構成を指す。
【0121】
本明細書において使用される「Ｆｃバリアント」または「バリアントＦｃ」は、親Ｆｃドメインと比較して少なくとも１アミノ酸配列改変を含むタンパク質が意味される。一部の実施形態において、その親Ｆｃドメインは、ヒト野生型Ｆｃ配列、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３に由来するＦｃ領域である。一部の実施形態において、その親Ｆｃドメインは、バリアントを含むヒトＦｃ配列である。ヒトＩｇＧのＦｃドメインに関する本発明において議論されるすべての位置について、異なるように記載されない限りは、アミノ酸位置番号付けは、ＥＵインデックスに従う。その改変は、本明細書において概説される付加、欠失、置換またはそれらの任意の組合せであり得る。あるいは、そのバリアントＦｃドメインは、その親Ｆｃドメインと比較して１個から、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個のアミノ酸改変を有し得る。さらに、本明細書において議論されるように、本明細書におけるバリアントＦｃドメインは、本明細書において記載される公知技術（例えば、非変性ゲル電気泳動）を使用して測定された場合に、別のＦｃドメインと二量体を形成する能力およびＦｃＲｎレセプターと結合する能力を、依然として保持する。
【0122】
本明細書における用語「可溶性ＢＣＭＡ」または「ｓＢＣＭＡ」は、ＢＣＭＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはそのフラグメントもしくは短縮バージョンを含むが、ＢＣＭＡの膜貫通ドメインの全体もＢＣＭＡの細胞質（細胞内）ドメインの全体も含まない、ＢＣＭＡの可溶性部分が意味される。ヒト野生型ｓＢＣＭＡのＥＣＤが、配列番号１として示される。一部の実施形態において、その親野生型ｓＢＣＭＡドメインは、Ｎ末端短縮および／またはＣ末端短縮を、下記に議論されるように、その短縮型野生型ｓＢＣＭＡが生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦへの結合）を保持する限りは、有し得る。
【0123】
用語「ｓＢＣＭＡバリアント」または「バリアントｓＢＣＭＡ」とは、少なくとも１アミノ酸配列改変による親ｓＢＣＭＡタンパク質のバリアントを指す。一部の実施形態において、その親タンパク質はヒト野生型ｓＢＣＭＡである。一部の実施形態において、そのｓＢＣＭＡバリアントは、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）への特異的結合を保持するが、アミノ酸配列改変（例えば、アミノ酸置換）を有し、そのｓＢＣＭＡバリアントは、野生型ｓＢＣＭＡと比較してＮ末端短縮またはＣ末端短縮を有し得る。この場合における特異的結合は、任意の適切な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｓａｐｉｄｙｎｅ ＫｉｎＥｘＡ、またはフローサイトメトリー結合分析）によって決定され、これらのアッセイはまた、下記に概説されるように、結合親和性を決定するためにも使用され得る。本明細書において議論されるように、ｓＢＣＭＡバリアントは、一部の場合において、野生型ｓＢＣＭＡと比較してＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）に対する増加した結合親和性を有し得る。
【0124】
用語「結合親和性」とは、リガンドまたはそのバリアントがタンパク質（例えば、レセプターまたはそのバリアント）と配位結合を形成する能力を指す。リガンドとタンパク質との間の結合親和性は、そのリガンドとそのタンパク質（例えば、レセプターまたはそのバリアント）との間のｋｏｆｆ／ｋｏｎ比である平衡解離定数（Ｋｄ）によって、表され得る。Ｋｄと結合親和性とは、逆の関連がある。例えば、Ｋｄ値は、ＴＧＦファミリーメンバーに結合するために必要とされるｓＢＣＭＡバリアントの濃度に関連し、より低いＫｄ値（より低いｓＢＣＭＡバリアント濃度）は、ＴＧＦファミリーメンバーに対するより高い結合親和性に対応する。高い結合親和性は、リガンドとタンパク質との間のより大きな分子間力に対応する。低い結合親和性は、リガンドとタンパク質との間のより低い分子間力に対応する。一部の場合において、リガンド結合親和性の増加は、例えば、少なくとも１．４分の１、少なくとも１．６分の１、少なくとも１．８分の１、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１、少なくとも２００分の１、少なくとも５００分の１、またはそれ以下への解離速度の減少として、表され得る。
【0125】
「特異的結合」または特定のリガンドもしくはそのバリアント「に特異的に結合する」または特定のリガンドもしくはそのバリアント「に特異的」とは、非特異的相互作用とは測定可能な程度異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照分子（これは一般的には、結合活性を有しない類似構造分子である）の結合と比較したある分子の結合を決定することによって、測定され得る。例えば、特異的結合は、標的と類似する対照分子との競合によって、決定され得る。一部の実施形態において、その結合親和性は、上記で議論されるような当業者によって理解される任意の適切なアッセイ（例えば、標準的Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）を使用して、測定される。
【0126】
特定のリガンド またはそのバリアントに対する特異的結合は、例えば、別のリガンドタンパク質に対する少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、あるいは少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ、少なくとも約１０－１５Ｍ、またはそれ以上のＫｄを有するタンパク質によって示され得、Ｋｄとは、特定のタンパク質－リガンド相互作用の解離速度を指す。一部の実施形態において、本発明のバリアントｓＢＣＭＡは、リガンドに、対照分子と比較して１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍またはそれ以上の結合親和性で結合する。
【0127】
本明細書において使用される「残基」によって、タンパク質中の位置およびその関連アミノ酸同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）が意味される。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも呼ばれる）は、ヒト抗体ＩｇＧ１の位置２９７の残基である。
【0128】
本明細書における「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「ヒンジドメイン」によって、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間にあるアミノ酸を含む可撓性ポリペプチドが意味される。構造的に、ＩｇＧ ＣＨ１ドメインは、ＥＵ位置２１５で終わり、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは、ＥＵ位置２３１の残基で開始する。従って、ＩｇＧについて、その抗体ヒンジは、位置２１６（ＩｇＧ１におけるＥ２１６）～２３０（ＩｇＧ１におけるｐ２３０）を含むと本明細書において定義され、その番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従う。一部の場合において、「ヒンジフラグメント」が使用され、それは、ヒンジドメインのＮ末端およびＣ末端のいずれか一方または両方の少数のアミノ酸を含む。本明細書において概説されるとおり、一部の場合では、ヒンジを含むＦｃドメインが使用され、そのヒンジは一般的には可撓性リンカーとして使用される。（さらに、本明細書においてさらに記載されるとおり、さらなる可撓性リンカー成分が、そのヒンジを含んでかまたはそのヒンジを含まずにかのいずれかで、使用され得る）。
【0129】
本明細書において使用される「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」によって、ＩｇＧ分子のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン（一部の場合において、そのヒンジを含む）を含むポリペプチドが意味される。ヒトＩｇＧ１についてのＥＵ番号付けにおいて、そのＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、アミノ酸２３１～４４７を含み、そのヒンジは２１６～２３０である。従って、「Ｆｃドメイン」の定義は、アミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２－ＣＨ３）または２１６－４４７（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）の両方、あるいはそれらのフラグメントを含む。従って、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、一部の場合において、これらのドメインのＮ末端側にある可撓性ヒンジを含む。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、そのＪ鎖を含み得る。ＩｇＧについて、そのＦｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３を含み、一部の場合において、Ｃγ１とＣγ２との間の下流側ヒンジ領域を含む。この文脈における「Ｆｃフラグメント」は、そのＮ末端およびＣ末端のいずれか一方または両方に由来する少数のアミノ酸を含み得るが、一般的には大きさに基づく標準的方法（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）を使用して検出され得るとおり、別のＦｃドメインまたはＦｃフラグメントと二量体を形成する能力を依然として保持する。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、本発明において特に有用であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３に由来するＦｃドメインであり得る。一般に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。一部の実施形態において、アミノ酸配列改変が、例えば、１もしくはそれ以上のＦｃγＲレセプターまたはＦｃＲｎレセプターへの結合を変化させるため、および／あるいはインビボでの半減期を増加させるために、Ｆｃ領域に対してなされる。
【0130】
本明細書において使用される「ＩｇＧサブクラス改変」または「アイソタイプ改変」によって、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸をアラインメントした別のＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸へと交換する、アミノ酸配列改変が意味される。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含みＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス改変と考えられる。同様に、ＩｇＧ１は位置２４１にプロリンを有しＩｇＧ４はセリンを有するので、Ｓ２４１Ｐを含むＩｇＧ４分子は、ＩｇＧサブクラス改変と考えられる。サブクラス改変は本明細書においてアミノ酸置換と考えられることに、留意すること。
【0131】
本明細書において使用される「アミノ酸」および「アミノ酸同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」によって、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされる２０個の天然に存在するアミノ酸のうちの１個が意味される。
【0132】
本明細書において使用される「エフェクター機能」によって、抗体Ｆｃ領域とＦｃレセプターまたはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象が意味される。エフェクター機能としては、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が挙げられるがこれらに限定はされない。多くの場合において、別のＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４）またはＦｃドメインにおけるアミノ酸置換のいずれかを使用して、ほとんどまたはすべてのエフェクター機能を除去することが、望ましい；しかし、ＦｃＲｎレセプターへの結合を維持することは、これがヒト血清におけるその融合タンパク質の半減期に寄与するので、望ましい。
【0133】
本明細書において使用される「ＦｃＲｎ」または「胎児性Ｆｃレセプター」によって、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合しＦｃＲｎ遺伝子によって少なくとも部分的にコードされる、タンパク質が意味される。
【0134】
本明細書において使用される「標的細胞」によって、標的ポリペプチドまたは標的タンパク質を発現する、細胞が意味される。
【0135】
本明細書における発明に従うバリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を生成する文脈における「宿主細胞」によって、そのバリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の成分をコードする外因性核酸を含み、適切な条件下でそのようなバリアントｓＢＣＭＡまたはＦｃ融合タンパク質を発現することが可能である、細胞が意味される。適切な宿主細胞が、以下に記載される。
【0136】
本明細書における「改善した活性」または「改善した機能」によって、少なくとも１つの生化学的特性の望ましい変化が意味される。この文脈における改善した機能は、望ましい特性の増加（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する増加した結合親和性および／もしくは特異性、増加したタンパク質安定性、増加したインビボ半減期など）を伴う、特定の活性の増加もしくは減少のパーセンテージとして、または「倍数」変化として、測定され得る。一般に、変化パーセンテージが、（その親タンパク質と比較して）１００％未満の生化学的活性変化を記述するために使用され、倍数変化が、（その親タンパク質と比較して）１００％よりも大きな生化学的活性変化を記述するために使用される。本発明において、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％および９９％の生化学的活性変化（通常は増加）パーセンテージが、達成され得る。本発明において、「倍数増加」（または減少）は、その親タンパク質と比較して測定される。多くの実施形態において、その改善は、少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍またはそれ以上である。
【0137】
（Ｃ．ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質）
本発明のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、Ｆｃドメインとを含む組成物を含み、その組成物は、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインをそのＦｃドメインと連結するリンカーを必要に応じて含む。
本発明のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメインと、Ｆｃドメインとを含む組成物を含み、その組成物は、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインをそのＦｃドメインと連結するリンカーを必要に応じて含む。
【0138】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書において記載される組成物を提供し、その融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記Ｆｃドメイン
を含む。
ａ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記Ｆｃドメイン
を含む。
【0139】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書において記載される組成物を提供し、その融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）上記Ｆｃドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む。
ａ）上記Ｆｃドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む。
【0140】
（Ｄ．バリアントｓＢＣＭＡタンパク質およびドメイン）
本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を独立的に提供し、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を、Ｆｃドメインと融合したｓＢＣＭＡドメインとして融合タンパク質構築物として提供する。本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ヒトＢＣＭＡの可溶性ＥＣＤの少なくとも一部（一般的には、図７において示される全体的ＥＣＤドメイン（配列番号１）を、アミノ酸バリアントとともに含む。一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質またはｓＢＣＭＡバリアントは、当該分野の下記で議論される結合親和性アッセイ（例えば、ＢｉａｃｏｒｅまたはＯｃｔｅｔアッセイ）によって測定した場合に、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する増加した結合親和性および／または特異性を示す。
本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を独立的に提供し、本発明は、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を、Ｆｃドメインと融合したｓＢＣＭＡドメインとして融合タンパク質構築物として提供する。本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ヒトＢＣＭＡの可溶性ＥＣＤの少なくとも一部（一般的には、図７において示される全体的ＥＣＤドメイン（配列番号１）を、アミノ酸バリアントとともに含む。一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質またはｓＢＣＭＡバリアントは、当該分野の下記で議論される結合親和性アッセイ（例えば、ＢｉａｃｏｒｅまたはＯｃｔｅｔアッセイ）によって測定した場合に、野生型ｓＢＣＭＡと比較して、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する増加した結合親和性および／または特異性を示す。
【0141】
一部の実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに結合して、内因性のＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、およびＴＡＣＩレセプターとのそれらの相互作用を軽減もしくは遮断する、アンタゴニストである。アンタゴニストとしてのバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩを介して、ならびに／あるいはＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを介して、変化したシグナル伝達経路に関連する状態を処置することにおいて、特に、腫瘍療法／化学療法、免疫調節性疾患および／または線維症性疾患において、使用され得る。
【0142】
一実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、対象においてＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を処置する方法、そのＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移または浸潤を減少または予防する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0143】
一実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、対象において、ＢＣＭＡおよび／もしくはＴＡＣＩを発現するかおよび／もしくはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を処置する方法、あるいはその腫瘍の転移または浸潤を減少または予防する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、Ｂ細胞悪性疾患である。一部の実施形態において、本明細書において開示されるＢ細胞悪性疾患は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫－粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、および原発性眼内リンパ腫（眼のリンパ腫）からなる群より選択される。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、血液がんである。一部の実施形態において、本明細書において開示される血液がんは、多発性骨髄腫である。
【0144】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、Ｂ細胞悪性疾患である。一部の実施形態において、本明細書において開示されるＢ細胞悪性疾患は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫－粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、および原発性眼内リンパ腫（眼のリンパ腫）からなる群より選択される。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、血液がんである。一部の実施形態において、本明細書において開示される血液がんは、多発性骨髄腫である。
【0145】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡおよび／もしくはＴＡＣＩを発現するかおよび／もしくはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、Ｂ細胞悪性疾患である。一部の実施形態において、本明細書において開示されるＢ細胞悪性疾患は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫－粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、および原発性眼内リンパ腫（眼のリンパ腫）からなる群より選択される。一部の実施形態において、本明細書において開示される腫瘍は、血液がんである。一部の実施形態において、本明細書において開示される血液がんは、多発性骨髄腫である。
【0146】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0147】
追加の実施形態では、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0148】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0149】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0150】
追加の実施形態では、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、対象においてＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、またはそれらの両方を阻害する方法において使用され得、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質はＢＡＦＦに結合し、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0151】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩおよび／またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現するＢ細胞過形成または自己免疫疾患を有する対象においてＢＡＦＦの活性を阻害する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0152】
追加の実施形態では、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡと、ＢＡＦＦＲと、ＴＡＣＩと、ＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターとからなる群より選択される少なくとも１つのレセプターを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0153】
さらなる実施形態において、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0154】
追加の実施形態では、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを発現する線維症を対象において処置する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0155】
追加の実施形態では、（単離されたタンパク質または本明細書における融合タンパク質のｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方としての）バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する線維症を対象において処置する方法において使用され得、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において開示されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0156】
一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、その野生型ｓＢＣＭＡと比較してアミノ酸の置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの組合せを含み、その野生型ｓＢＣＭＡと比較してＡＰＲＩＬもしくはＢＡＦＦのいずれか一方またはそれらの両方へのそれらの結合活性を増加する。
【0157】
本開示は、親ｓＢＣＭＡと比較して１個またはそれ以上（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個）の位置に少なくとも１アミノ酸置換を含む、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質を提供する。一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡは、その親ｓＢＣＭＡに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるが１００％未満である配列同一性を有する。一部の実施形態において、親ｓＢＣＭＡドメインはヒト野生型ｓＢＣＭＡである。一部の実施形態において、親ｓＢＣＭＡドメインは配列番号１のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるが１００％未満である配列同一性を有する。一部の実施形態において、本明細書において記載されるとおり、バリアントｓＢＣＭＡは、野生型ＳＢＣＭＡと比較してＮ末端短縮および／またはＣ末端短縮を、本明細書において概説される結合アッセイのうちの１つによって測定された場合にその短縮型バリアントｓＢＣＭＡが生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦへの結合）を保持する限りは、有し得る。明確にするために述べると、本発明のバリアントＢＣＭＡは、配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を有し、従って配列番号１ではない。
【0158】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、その野生型ｓＢＣＭＡポリペプチド／ドメインよりも強いＴＧＦファミリーメンバー（すなわち、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。一部の実施形態において、そのバリアントｓＢＣＭＡは、その野生型ｓＢＣＭＡのＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性の少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍またはそれ以上のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
【0159】
特定の実施形態において、そのバリアントｓＢＣＭＡのＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性は、その野生型ｓＢＣＭＡのＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性と比較して少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％またはそれ以上増加している。他の実施形態において、本発明のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質は、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦとの結合について約１×１０－８Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１２ Ｍ未満または１×１０－１５ Ｍ未満のＫｄ値を有する。なお他の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアントは、インビボもしくはインビトロのいずれか一方またはそれらの両方で、ＡＰＲＩＬおよび／もしくはＢＡＦＦへの結合において野生型ｓＢＣＭＡを阻害するかまたは野生型ｓＢＣＭＡと競合する。
【0160】
（１．特定のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質）
本発明は、配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡを含む組成物を提供し、そのアミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、その番号付けはＥＵインデックスに従う。
本発明は、配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡを含む組成物を提供し、そのアミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、その番号付けはＥＵインデックスに従う。
【0161】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0162】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１にあるメチオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、その置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、そのアミノ酸置換は、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、およびＭ１Ｖから選択される。
【0163】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２にあるロイシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２ＣまたはＬ２Ｓである。
【0164】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３にあるグルタミンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｑ３ＰまたはＱ３Ｒである。
【0165】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４にあるメチオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、およびＭ４Ｖから選択される。
【0166】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５にあるアラニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ａ５Ｔである。
【0167】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置６にあるグリシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｇ６Ｅである。
【0168】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置７にあるグルタミンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｑ７Ｒである。
【0169】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置９にあるセリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるスレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ９Ａ、Ｓ９ＦおよびＳ９Ｐから選択される。
【0170】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１０にあるグルタミンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０ＰおよびＱ１０Ｒから選択される。
【0171】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１１にあるアスパラギンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｎ１１ＤまたはＮ１１Ｓである。
【0172】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１２にあるグルタミン酸のアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｅ１２Ｋである。
【0173】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１４にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｆ１４Ｌである。
【0174】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１６にあるセリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるスレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、およびＳ１６Ｒから選択される。
【0175】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置１９にあるヒスチジンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｈ１９ＬまたはＨ１９Ｙである。
【0176】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２０にあるアラニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ａ２０ＶまたはＡ２０Ｔである。
【0177】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２２にあるイソロイシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｉ２２ＭまたはＩ２２Ｖである。
【0178】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２３にあるプロリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ２３Ｓである。
【0179】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２５にあるグルタミンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｑ２５Ｒである。
【0180】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２６にあるロイシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２６Ｆである。
【0181】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置２９にあるセリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるスレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ２９Ａである。
【0182】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３１にあるアスパラギンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｎ３１ＤまたはＮ３１Ｓである。
【0183】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３２にあるスレオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２ＩおよびＴ３２Ｐから選択される。
【0184】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３５にあるロイシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ３５ＳまたはＬ３５Ｐである。
【0185】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３６にあるスレオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、およびＴ３６Ｐから選択される。
【0186】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３８にあるグルタミンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｑ３８Ｒである。
【0187】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置３９にあるアルギニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｒ３９Ｈである。
【0188】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４２にあるアスパラギンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２ＲおよびＮ４２Ｓから選択される。
【0189】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４３にあるアラニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ａ４３ＴまたはＡ４３Ｖである。
【0190】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４４にあるセリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるスレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４ＮおよびＳ４４Ｒから選択される。
【0191】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４５にあるバリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｖ４５ＡまたはＶ４５Ｍである。
【0192】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４６にあるスレオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ４６ＡまたはＴ４６Ｉである。
【0193】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４７にあるアスパラギンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７ＲおよびＮ４７Ｓから選択される。
【0194】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４８にあるセリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるスレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８ＰおよびＳ４８Ｔから選択される。
【0195】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置４９にあるバリンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｖ４９ＡまたはＶ４９Ｍである。
【0196】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５０にあるリジンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０ＲおよびＫ５０Ｔから選択される。
【0197】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５１にあるグリシンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｇ５１Ｅである。
【0198】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５２にあるスレオニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｔ５２ＡまたはＴ５２Ｍである。
【0199】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５３にあるアスパラギンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３ＫおよびＮ５３Ｓから選択される。
【0200】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、位置５４にあるアラニンのアミノ酸置換を含み、その位置番号付けは成熟領域から開始する。一部の実施形態において、置換は、１９個の天然に存在するアミノ酸であるセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンおよびチロシンのうちのいずれか他の物により、一部の実施形態は（可能なジスルフィド形成が原因で）システインまたは（立体効果が原因で）プロリンを使用しない。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ａ５４ＶまたはＡ５４Ｔである。
【0201】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0202】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0203】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0204】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0205】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0206】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0207】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0208】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0209】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0210】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0211】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0212】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0213】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0214】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0215】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６７のアミノ酸配列を有する。
【0216】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６８のアミノ酸配列を有する。
【0217】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号６９のアミノ酸配列を有する。
【0218】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号４９のアミノ酸配列を有する。
【0219】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号７４のアミノ酸配列を有する。
【0220】
例示的バリアントｓＢＣＭＡタンパク質のクローン番号、配列番号１のアミノ酸配列と比較したアミノ酸置換、および割り当てられた配列番号が、表２において示される。
【0221】
（表２：例示的バリアントｓＢＣＭＡタンパク質／ドメインのクローン番号、配列番号１のアミノ酸配列と比較したアミノ酸置換、および割り当てられた配列番号）
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【表2-5】
【0222】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。
【0223】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。
【0224】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ 融合タンパク質は、配列番号８０のアミノ酸配列を有する。
【0225】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ 融合タンパク質は、配列番号８１のアミノ酸配列を有する。
【0226】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ 融合タンパク質は、配列番号８２のアミノ酸配列を有する。
【0227】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ 融合タンパク質は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する。
【0228】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ 融合タンパク質は、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。
【0229】
（２．結合親和性を測定するためのアッセイ）
本明細書において概説されるとおり、本発明は、ヒトＡＰＲＩＬおよび／またはヒトＢＡＦＦのいずれか一方または両方に対する増加した結合親和性を示す、ｓＢＣＭＡバリアントおよびこれらのバリアントを含む融合タンパク質を提供する。この文脈において、増加した結合親和性は、以下に概説されるインビトロ研究またはエクスビボ研究において、ヒト野生型ＢＣＭＡまたは配列番号と比較される。一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、その野生型ｓＢＣＭＡポリペプチドドメインおよび／または配列番号１よりも強いＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。一部の実施形態において、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、その野生型ｓＢＣＭＡおよび／または配列番号１のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性の少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍またはそれ以上のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
本明細書において概説されるとおり、本発明は、ヒトＡＰＲＩＬおよび／またはヒトＢＡＦＦのいずれか一方または両方に対する増加した結合親和性を示す、ｓＢＣＭＡバリアントおよびこれらのバリアントを含む融合タンパク質を提供する。この文脈において、増加した結合親和性は、以下に概説されるインビトロ研究またはエクスビボ研究において、ヒト野生型ＢＣＭＡまたは配列番号と比較される。一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、その野生型ｓＢＣＭＡポリペプチドドメインおよび／または配列番号１よりも強いＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦ）に対する結合親和性を有する。一部の実施形態において、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、その野生型ｓＢＣＭＡおよび／または配列番号１のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性の少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍またはそれ以上のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。
【0230】
ｓＢＣＭＡバリアントがＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに結合する能力は、例えば、アッセイプレートにコートされたＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに推定リガンドが結合する能力によって、決定され得る。あるいは、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対するｓＢＣＭＡ（バリアント）の結合親和性は、微生物細胞表面（例えば、酵母細胞表面）にそのｓＢＣＭＡ（バリアント）を提示させること、およびその結合した複合体を、例えば、フローサイトメトリーによって検出ことによって、決定され得る（実施例３を参照のこと）。ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対するｓＢＣＭＡ（バリアント）の結合親和性は、当業者によって理解される任意の適切な方法（放射性リガンド結合アッセイ、非放射性（蛍光）リガンド結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、Ｏｃｔｅｔ（商標）、プラズモン導波共鳴（ＰＷＲ）、熱力学的結合アッセイ、ホールセルリガンド結合アッセイ、および構造ベースリガンド結合アッセイが挙げられるがこれらに限定はされない）を使用して、測定され得る。
【0231】
（３．融合タンパク質の形式）
本明細書において記載されるとおり、融合タンパク質の形式は、いくつかの構成を採り得、その成分ドメインはそのタンパク質中で（Ｎ末端側からＣ末端側へ）順序を交換する。一実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインを含む。一部の実施形態において、リンカーが使用されず、その場合は、その融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン、またはＦｃドメイン－バリアントｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方を含む。一部の場合において、同じ融合タンパク質が多少異なるように標識され得ることに留意すること。例えば、そのＦｃドメインがヒンジドメインを含む場合には、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ヒンジドメインの形式のリンカーを依然として含む。あるいは、この同じタンパク質は、そのＦｃドメインに含まれるヒンジドメインを有しないこともあり得、その場合には、その融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
本明細書において記載されるとおり、融合タンパク質の形式は、いくつかの構成を採り得、その成分ドメインはそのタンパク質中で（Ｎ末端側からＣ末端側へ）順序を交換する。一実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインを含む。一部の実施形態において、リンカーが使用されず、その場合は、その融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメイン、またはＦｃドメイン－バリアントｓＢＣＭＡドメインのいずれか一方を含む。一部の場合において、同じ融合タンパク質が多少異なるように標識され得ることに留意すること。例えば、そのＦｃドメインがヒンジドメインを含む場合には、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ヒンジドメインの形式のリンカーを依然として含む。あるいは、この同じタンパク質は、そのＦｃドメインに含まれるヒンジドメインを有しないこともあり得、その場合には、その融合タンパク質は、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0232】
従って、一部の実施形態において、本開示は、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、そのＦｃドメインはヒンジドメインを含み、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、そのヒンジドメインによってそのＦｃドメインと連結されている：バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３。
【0233】
一部の実施形態において、本開示は、上記のバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、そのＦｃドメインはヒンジドメインを含み、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、本明細書において記載されるさらなるリンカーによってそのＦｃドメインに連結されている。すなわち、その融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端側へ、バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３；バリアントｓＢＣＭＡドメイン－ドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３；ヒンジドメイン－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメイン；またはＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－バリアントｓＢＣＭＡドメインであり得る。
【0234】
一部の実施形態において、本開示は、上記のバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質を提供し、そのＦｃドメインはヒンジドメインを含まず、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、本明細書において記載されるドメインリンカー（例えば、非ヒンジ）によってそのＦｃドメインに連結されている。
【0235】
一部の実施形態において、本開示は、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を提供し、その融合タンパク質は、
ａ）配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、そのアミノ酸置換は１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、その番号付けはＥＵインデックスに従う、バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；ならびに
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む。
ａ）配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含むバリアントｓＢＣＭＡドメインであって、そのアミノ酸置換は１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、その番号付けはＥＵインデックスに従う、バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）必要に応じたリンカー；ならびに
ｃ）Ｆｃドメイン
を含む。
【0236】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記Ｆｃドメイン
を含む。
ａ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記Ｆｃドメイン
を含む。
【0237】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端側からＣ末端側へ、
ａ）上記Ｆｃドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む。
ａ）上記Ｆｃドメイン；
ｂ）上記必要に応じたリンカー；および
ｃ）上記バリアントｓＢＣＭＡドメイン
を含む。
【0238】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のバリアントｓＢＣＭＡドメインは、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性を増加するのに役立つ。種々の実施形態において、本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の（バリアント）Ｆｃドメインは、その融合タンパク質の半減期を増加させる。多くの実施形態において、融合タンパク質は、腫瘍／がん、線維症および／または免疫調節性疾患を処置するために使用される。
【0239】
指定のタンパク質／タンパク質ドメインの名前および対応するアミノ酸配列が、それぞれ表３において列挙される。
（表３．配列番号、説明および対応するアミノ酸配列）
（表３．配列番号、説明および対応するアミノ酸配列）
【表3】
【0240】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡと比較してＡＰＲＩＬもしくはＢＡＦＦのいずれか一方またはそれらの両方に対するその結合活性を増加する、配列番号１のアミノ酸配列に対するアミノ酸の置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの任意の組合せを含む。
【0241】
本開示は、配列番号１のアミノ酸配列と比較して１個またはそれ以上（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個）の位置に少なくとも１アミノ酸置換を含む、バリアントｓＢＣＭＡドメインを提供する。一部の実施形態において、そのバリアントｓＢＣＭＡドメインは、その親ｓＢＣＭＡドメインに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるが１００％未満である配列同一性を有する。一部の実施形態において、親ｓＢＣＭＡドメインは配列番号１のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるが１００％未満である配列同一性を有する。一部の実施形態において、本明細書において記載されるとおり、バリアントｓＢＣＭＡドメインは、野生型ｓＢＣＭＡと比較してＮ末端短縮および／またはＣ末端短縮を、本明細書において概説される結合アッセイのうちの１つによって測定された場合にその短縮型バリアントｓＢＣＭＡが生物学的活性（例えば、ＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦへの結合）を保持する限りは、有し得る。明確にするために述べると、本発明のバリアントＢＣＭＡドメインは、少なくとも１アミノ酸置換を有し、従って配列番号１のアミノ酸配列ではない。
【0242】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、１個の位置、２個の位置、３個の位置、４個の位置、５個の位置、６個の位置、７個の位置、８個の位置、９個の位置、または１０個の位置にアミノ酸置換を有する。
【0243】
特定の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインのＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性は、その野生型ｓＢＣＭＡのＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性と比較して少なくとも約０．４％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％またはそれ以上増加される。他の実施形態において、本発明のバリアントＢＣＭＡドメインは、約１×１０－８Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１２ Ｍ未満または１×１０－１５ Ｍ未満のＡＰＲＩＬおよび／またはＢＡＦＦに対する結合親和性を有する。なお他の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントＢＣＭＡドメインは、インビボもしくはインビトロのいずれか一方またはそれらの両方で、ＡＰＲＩＬおよび／もしくはＢＡＦＦへの野生型ｓＢＣＭＡの結合を阻害するかもしくはそれと競合する。
【0244】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較して少なくとも１アミノ酸置換を含み、そのアミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１９、２０、２２、２３、２５、２６、２９、３１、３２、３５、３６、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、および５４からなる群より選択される位置番号にあり、その番号付けはＥＵインデックスに従う。
【0245】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0246】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｍ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ａ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0247】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｍ４Ｔ、Ｓ９Ｐ、Ｎ１１Ｄ、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９Ｙ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３６Ａ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４７Ｓ、Ｋ５０Ｅ、およびＮ５３Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0248】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｓ１６Ｇ、Ｈ１９ＹおよびＴ３６Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0249】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｅ１２Ｋ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３２Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ｉ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｖ、Ｑ３Ｒ／Ｓ１６Ｎ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ、Ｆ１４Ｌ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｔ／Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｆ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ａ／Ｓ９Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｇ６Ｅ／Ｑ２５Ｒ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｉ／Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｖ４９Ｍ／Ｔ５２Ｍ／Ａ５４Ｖ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｇ６Ｅ／Ｑ７Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ４２Ｄ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ａ５Ｔ／Ｈ１９Ｌ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｖ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｈ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｋ５０Ｇ、Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｌ２Ｓ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ４６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ａ５Ｔ／Ａ２０Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｖ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｃ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ／Ｍ４Ｅ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ｐ、Ｍ１Ｉ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｉ２２Ｍ／Ｓ２９Ａ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｎ／Ｎ４７Ｄ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｒ／Ｌ２Ｃ／Ｑ３Ｒ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４５Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｐ／Ｔ５２Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｖ４５Ｍ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ４７Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｋ５０Ｔ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４４Ｎ／Ｋ５０Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｓ４８Ｔ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３２Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ｉ／Ｔ５２Ａ／Ｎ５３Ｄ／Ａ５４Ｔ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｓ４４Ｒ、Ｈ１９Ｌ／Ｔ３２Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｇ５１Ｅ／Ｔ５２Ａ、Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｋ５０Ｒ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｔ４６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｓ４８Ｐ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ／Ｎ４７Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｈ１９Ｙ／Ｌ３５Ｐ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ｉ／Ｖ４９Ａ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｒ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｓ１６Ｎ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｍ１Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｌ２６Ｆ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｖ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｖ４９Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ａ４３Ｔ／Ｓ４４Ｇ／Ｖ４５Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｓ／Ｓ１６Ｇ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ、Ｎ１１Ｄ／Ｅ１２Ｋ／Ｓ１６Ｒ／Ｔ３６Ａ／Ｔ５２Ｍ、Ｍ４Ｖ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ａ４３Ｔ／Ｖ４５Ａ／Ｓ４８Ｐ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ、Ｍ１Ｔ／Ａ５Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｖ４９Ｍ、Ｌ２Ｓ／Ｓ９Ｐ／Ｓ１６Ｇ／Ａ２０Ｔ／Ｔ３２Ｉ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｄ／Ｔ４６Ａ／Ｓ４８Ｌ、Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｔ４６Ａ、Ｇ６Ｅ／Ｓ９Ａ／Ｓ１６Ｇ／Ｑ２５Ｒ／Ｎ３１Ｄ／Ｎ４７Ｓ／Ｔ５２Ｍ、Ｈ１９Ｙ／Ｑ３８Ｒ／Ｔ５２Ｍ、Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｉ２２Ｍ／Ｔ３２Ｐ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｓ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ｉ／Ｖ４５Ａ／Ｖ４９Ｍ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｑ１０Ｒ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｓ、Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、Ｍ１Ｖ／Ｍ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ５３Ｋ、Ｍ１Ｔ／Ｎ１１Ｄ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４２Ｓ／Ｖ４５Ａ／Ｎ５３Ｓ、Ｍ１Ｔ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ａ／Ｔ３６Ａ／Ａ３８Ｒ／Ｓ４４Ｄ／Ｖ４９Ａ／Ｋ５０Ｅ、Ｍ１Ｔ／Ｓ９Ｐ／Ｐ２３Ｓ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４８Ｐ／Ｖ４９Ａ／Ａ５４Ｖ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｓ４４Ｇ、Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ４Ｔ／Ｔ３６Ａ／Ｑ３８Ｒ／Ｎ４２Ｓ／Ｓ４４Ｇ／Ｔ４６Ａ／Ｎ４７Ｋ／Ｓ４８Ｐ／Ｔ５２Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0250】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0251】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ５３Ｄ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0252】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｓ９Ｐ／Ｎ１１Ｄ／Ｓ１６Ｇ／Ｈ１９Ｙ／Ｔ３６Ａ／Ｎ４７Ｓ／Ｎ５３Ｄ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0253】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｑ３Ｐ／Ｓ９Ｐ／Ｈ１９Ｙ／Ｎ３１Ｓ／Ｔ３６Ａ／Ｒ３９Ｈ／Ｎ４７Ｒ／Ｋ５０Ｅ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｍ１Ｖ、Ｌ２Ｃ、Ｌ２Ｓ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｔ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｇ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｄ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｉ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0254】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、アミノ酸置換Ｍ１Ｖ／Ｌ２Ｓ／Ｍ４Ｔ／Ｓ１６Ｇ／Ｎ３１Ｄ／Ｔ３２Ｉ／Ｔ３６Ａ、およびＭ１Ａ、Ｍ１Ｃ、Ｍ１Ｉ、Ｍ１Ｒ、Ｍ１Ｔ、Ｌ２Ｃ、Ｑ３Ｐ、Ｑ３Ｒ、Ｍ４Ｅ、Ｍ４Ｉ、Ｍ４Ｖ、Ａ５Ｔ、Ｇ６Ｅ、Ｑ７Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｐ、Ｑ１０Ｈ、Ｑ１０Ｐ、Ｑ１０Ｒ、Ｎ１１Ｄ、Ｎ１１Ｓ、Ｅ１２Ｋ、Ｆ１４Ｌ、Ｓ１６Ｎ、Ｓ１６Ｒ、Ｈ１９Ｌ、Ｈ１９Ｙ、Ａ２０Ｖ、Ａ２０Ｔ、Ｉ２２Ｍ、Ｉ２２Ｖ、Ｐ２３Ｓ、Ｑ２５Ｒ、Ｌ２６Ｆ、Ｓ２９Ａ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ３２Ａ、Ｔ３２Ｐ、Ｌ３５Ｓ、Ｌ３５Ｐ、Ｔ３６Ｉ、Ｔ３６Ｐ、Ｑ３８Ｒ、Ｒ３９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｎ４２Ｒ、Ｎ４２Ｓ、Ａ４３Ｔ、Ａ４３Ｖ、Ｓ４４Ｄ、Ｓ４４Ｇ、Ｓ４４Ｎ、Ｓ４４Ｒ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｍ、Ｔ４６Ａ、Ｔ４６Ｉ、Ｎ４７Ｄ、Ｎ４７Ｋ、Ｎ４７Ｒ、Ｎ４７Ｓ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｐ、Ｓ４８Ｔ、Ｖ４９Ａ、Ｖ４９Ｍ、Ｋ５０Ｅ、Ｋ５０Ｇ、Ｋ５０Ｒ、Ｋ５０Ｔ、Ｇ５１Ｅ、Ｔ５２Ａ、Ｔ５２Ｍ、Ｎ５３Ｄ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｓ、Ａ５４Ｖ、およびＡ５４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を含む。
【0255】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６７と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0256】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６８と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0257】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0258】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号４９と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0259】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0260】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６７を有する。
【0261】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６８を有する。
【0262】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号６９を有する。
【0263】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号４９を有する。
【0264】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号７４を有する。
【0265】
例示的バリアントｓＢＣＭＡドメインのクローン番号、配列番号１のアミノ酸配列と比較したアミノ酸置換、および割り当てられた配列番号が、表２において示される。
【0266】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬに対する増強した結合親和性を示す。
【0267】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。
【0268】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡドメインは、配列番号１と比較してＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに対する増強した結合親和性を示す。
【0269】
（４．Ｆｃドメイン）
本明細書において議論されるとおり、上記のｓＢＣＭＡバリアントドメインに加えて、本発明の融合タンパク質はまた、ＩｇＧクラスに一般的には基づく抗体のＦｃドメインも含み、そのＩｇＧクラスは、いくつかのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ３が挙げられるがこれらに限定はされない）を有する。本明細書において記載されるとおり、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ抗体のヒンジドメインを必要に応じて含む。
本明細書において議論されるとおり、上記のｓＢＣＭＡバリアントドメインに加えて、本発明の融合タンパク質はまた、ＩｇＧクラスに一般的には基づく抗体のＦｃドメインも含み、そのＩｇＧクラスは、いくつかのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ３が挙げられるがこれらに限定はされない）を有する。本明細書において記載されるとおり、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ抗体のヒンジドメインを必要に応じて含む。
【0270】
ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインが、本発明において特に有用であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３に由来のＦｃドメインに由来し得る。一般に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。
【0271】
本発明の融合タンパク質に含まれるヒトＩｇＧタンパク質のＦｃドメインは、その融合タンパク質の半減期の顕著な増加を付与し得、Ｉｇ分子とのさらなる結合または相互作用を提供し得る。一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、単量体バリアントｓＢＣＭＡポリペプチドと比較して精製、多量体化、結合および他の分子の中和を容易にし得る。
【0272】
Ｆｃドメインはまた、必要に応じて機能を変化させるためにＦｃバリアントを含み得る。しかし、多くの実施形態に従って、Ｆｃバリアントは、二量体を形成する能力およびＦｃＲｎに結合する能力の両方を保持することを一般的に必要とする。従って、本明細書における実施形態の多くはヒトＩｇＧ１ドメインの使用に依拠するが、Ｆｃバリアントは、他のＩｇＧドメインにおける機能を増強または抑制するようにされ得る。従って、当業者によって理解されるように、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２におけるエフェクター機能を減少または除去する除去バリアントが使用され得、かつ／またはＦｃＲｎレセプターへの強固な結合を付与するＦｃＲｎバリアントが使用され得る。
【0273】
一実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ ＦｃドメインまたはバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0274】
別の実施形態において、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0275】
さらなる実施形態において、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0276】
別の実施形態において、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0277】
一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ではない他のＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ３）に由来するＦｃドメインであり得る。一般に、ＩｇＧ２が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。
【0278】
さらなる実施形態において、Ｆｃドメインは、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。しかし、本明細書におけるバリアントＦｃドメインは、これが本明細書における融合タンパク質の血清半減期の増加に顕著に寄与するので、既知を使用して測定される別のＦｃドメインと二量体を形成する能力、およびＦｃＲｎと結合する能力を、依然として保持する。
【0279】
バリアントＩｇＧ Ｆｃドメインは、その親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して付加、欠失、置換またはそれらの任意の組合せを含み得る。
【0280】
一部の実施形態において、本発明のバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、対応する親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインに対する少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％または９９％の同一性を有し得る（上記で議論された同一性アルゴリズムを使用し、一実施形態は当該分野で公知であるＢＬＡＳＴアルゴリズムを、デフォルトパラメータを使用して使用する）。
【0281】
一部の実施形態において、本発明のバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、その親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと比較して１個から、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個のアミノ酸配列改変を有し得る。
【0282】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ ＦｃドメインまたはバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0283】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。
【0284】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるＦｃドメインはバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃドメインである。
【0285】
（５．リンカー）
本発明の融合タンパク質は、そのｓＢＣＭＡドメインをそのＦｃドメインに連結する、必要に応じたリンカーを含み得る。
本発明の融合タンパク質は、そのｓＢＣＭＡドメインをそのＦｃドメインに連結する、必要に応じたリンカーを含み得る。
【0286】
本明細書において使用される「リンカー」または「リンカーペプチド」は、２つの分子が互いに対して正確な立体構造を呈した結果それらの２つの分子が望ましい活性を保持する様式で、その２つの分子を連結するのに十分な長さを有する。一実施形態において、そのリンカーは、約１～２０アミノ酸長、好ましくは約１～１０アミノ酸長である。一実施形態において、４～１０アミノ酸長のリンカーが、使用され得る。有用なリンカーとしては、ＩＥＧＲＭＤまたはグリシン－セリンポリマー（例えば（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎが挙げられ、ｎは少なくとも１（一般的には３～４）である整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および他の可撓性リンカーが挙げられる。あるいは、種々の非タンパク質性ポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーが挙げられるがこれらに限定はされない）が、リンカーとして用途を見出し得る。
【0287】
一部の実施形態において、そのリンカーは、本明細書において概説される任意の２つのドメインを共に連結するため、例えばバリアントｓＢＣＭＡドメインをＦｃドメインに連結するために使用される、「ドメインリンカー」である。上記で議論されたとおり、多くの適切なリンカーが、それらの２つのドメインの組換え連結を、各ドメインがその生物学的活性を保持するのを可能にするのに十分な長さおよび可撓性で可能にするために、使用され得る。本明細書において議論されるとおり、特に有用なドメインリンカーは、ＩｇＧ１のヒンジドメインに連結されたＩＥＧＲＭＤリンカーである。
【0288】
種々の実施形態において、２つのドメイン（例えば、ｓＢＣＭＡバリアントドメインおよびＦｃドメイン）が、本明細書において記載されるドメインリンカーを使用して、一般的には連結される。多くの実施形態において、２つのドメインが、それらの２つのドメインが独立的に作動し得る様式で、可撓性リンカーを使用して連結される。可撓性連結が、種々の様式で、従来のリンカーおよび／またはヒンジリンカーを使用して、達成され得る。
【0289】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるリンカーはＩＥＧＲＭＤ（配列番号８７）である。
【0290】
一部の実施形態において、本明細書において記載されるリンカーはＧＧＧＧＳ（配列番号８８）である。
【0291】
一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ抗体のヒンジドメインが、使用される。一部の場合では、ヒンジドメインはアミノ酸置換も含み得る。
【0292】
一部の実施形態において、ドメインリンカーは、ヒンジドメインと可撓性リンカーとの組合せ、例えばＩｇＧ１ヒンジとＩＥＧＲＭＤリンカーとの組合せである。
【0293】
一実施形態において、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長、より好ましくは約４～１０アミノ酸である。
【0294】
（６．発明の特定の実施形態）
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
【0295】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８１に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
【0296】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８２に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
【0297】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８３に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
【0298】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８４に対する少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示す。
【0299】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８０において示されるアミノ酸配列を有する。
【0300】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８１において示されるアミノ酸配列を有する。
【0301】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８２において示されるアミノ酸配列を有する。
【0302】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８３において示されるアミノ酸配列を有する。
【0303】
一部の実施形態において、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８４において示されるアミノ酸配列を有する。
【0304】
（Ｅ．核酸）
本開示はまた、バリアントｓＢＣＭＡおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む、組成物も提供する。そのような核酸は、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかをコードする。
本開示はまた、バリアントｓＢＣＭＡおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む、組成物も提供する。そのような核酸は、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡおよび／またはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかをコードする。
【0305】
核酸は、単離および／または精製され得る。種々の実施形態において、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか一方としての核酸は、他の天然に存在する核酸配列を実質的には含まない。一部の実施形態において、核酸は、少なくとも約５０％、または少なくとも約９０％純粋である。多くの実施形態において、核酸は、「組換え体」であり、すなわち、天然に存在する染色体上でその核酸が通常は結合してない１個またはそれ以上のヌクレオチドが隣接している。
【0306】
一部の実施形態において、組成物は、本明細書において記載される任意のバリアントｓＢＣＭＡをコードする核酸を含む。
【0307】
一部の実施形態において、組成物は、本明細書において記載される任意のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0308】
一部の実施形態において、核酸は、シグナル配列を含むＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードする。当該分野において公知であるとおり、シグナル配列は、連結された場合に分泌経路を通るようにタンパク質（またはペプチド）に指示して、しばしばそのタンパク質が細胞から排出されることを生じる、短いペプチドをコードする。当業者によって理解されるとおり、その融合タンパク質の発現のために適切なシグナル配列は、宿主細胞にとって適切であるように選択され得る。すなわち、本発明の融合タンパク質が哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において発現される場合、例えば、ＣＨＯ細胞由来のシグナル配列が、使用され得る。
【0309】
一部の実施形態において、組成物は、本明細書において記載されるＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0310】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８０に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示すＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0311】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８１に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示すＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0312】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８２に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示すＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0313】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８３に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示すＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0314】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８４に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示すＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0315】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0316】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８１のアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0317】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0318】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８３のアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0319】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号８４のアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【0320】
一部の実施形態において、ＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸は、コドン最適化バージョンまたはバリアントを含む。
【0321】
この文脈における「コドン最適化」は、特定の宿主生物およびその一般的に好ましいアミノ酸コドンに関連して行われる；すなわち、その宿主産生生物（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓに好ましいコドンを使用して、酵母産生生物と比較して高い翻訳および／または分泌をもたらし得る。
【0322】
コドン最適化は、ｓＢＣＭＡ（バリアント）－Ｆｃ融合タンパク質のいずれを用いても使用され得、それは、使用される宿主細胞におけるより高い発現をもたらし得る。
【0323】
ｓＢＣＭＡ（バリアント）－Ｆｃ融合タンパク質は、周知技術（親遺伝子の部位特異的変異誘発および合成遺伝子組換え技術が挙げられる）を使用して、その融合タンパク質配列をコードする核酸配列によって一般的には調製され得る。
【0324】
発現核酸は、それら自体によって、または当該分野において公知である他の調節配列によって、調節され得る。種々の実施形態において、発現は、当該分野において理解されるとおり、望ましい発現効果をもたらすために特定の調節配列を組み込むことによって、調節される。
【0325】
（１．調節配列）
本発明はまた、バリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、制御配列と適合する条件下で適切な宿主細胞におけるそのコード配列の発現を指示する１つまたはそれ以上の調節配列に作動可能に連結された状態で含む、核酸構築物に関する。調節配列は、プロモーターを含み得る。プロモーターは、タンパク質（例えば、本明細書において記載されるバリアントタンパク質および融合タンパク質）の発現レベルを媒介する転写制御配列を含む。プロモーターは、宿主細胞において転写活性を示す任意のポリヌクレオチド（変異体プロモーター、短縮形プロモーター、およびハイブリッドプロモーターが挙げられる）であり得、宿主細胞に対して同種または異種のいずれかである細胞外ポリペプチドもしくは細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から取得され得る。
本発明はまた、バリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、制御配列と適合する条件下で適切な宿主細胞におけるそのコード配列の発現を指示する１つまたはそれ以上の調節配列に作動可能に連結された状態で含む、核酸構築物に関する。調節配列は、プロモーターを含み得る。プロモーターは、タンパク質（例えば、本明細書において記載されるバリアントタンパク質および融合タンパク質）の発現レベルを媒介する転写制御配列を含む。プロモーターは、宿主細胞において転写活性を示す任意のポリヌクレオチド（変異体プロモーター、短縮形プロモーター、およびハイブリッドプロモーターが挙げられる）であり得、宿主細胞に対して同種または異種のいずれかである細胞外ポリペプチドもしくは細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から取得され得る。
【0326】
（Ｆ．発現ベクター）
１つもしくはそれ以上のバリアントｓＢＣＭＡおよびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の、構成的または１つもしくはそれ以上の調節エレメント下のいずれかでの、インビトロまたはインビボでの発現のための発現ベクターもまた、本明細書において提供される。一部の実施形態において、発現ベクターは、バリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、プロモーター、ならびに転写終結シグナルおよび翻訳終止シグナルを含む。種々のヌクレオチドと制御配列とが、１つまたはそれ以上の従来の制限部位を含んでそのような部位でのＦｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能にし得る、組換え発現ベクターを作製するために共に連結され得る。あるいは、そのポリヌクレオチドは、発現のための適切なベクター中にそのポリヌクレオチドまたはそのポリヌクレオチドを含む核酸構築物を挿入することによって、発現され得る。発現ベクターを作製する際に、そのコード配列は、そのコード配列が発現のために適切な制御配列と作動可能に連結されるように、そのベクター中に配置される。
１つもしくはそれ以上のバリアントｓＢＣＭＡおよびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の、構成的または１つもしくはそれ以上の調節エレメント下のいずれかでの、インビトロまたはインビボでの発現のための発現ベクターもまた、本明細書において提供される。一部の実施形態において、発現ベクターは、バリアントｓＢＣＭＡまたはｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、プロモーター、ならびに転写終結シグナルおよび翻訳終止シグナルを含む。種々のヌクレオチドと制御配列とが、１つまたはそれ以上の従来の制限部位を含んでそのような部位でのＦｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能にし得る、組換え発現ベクターを作製するために共に連結され得る。あるいは、そのポリヌクレオチドは、発現のための適切なベクター中にそのポリヌクレオチドまたはそのポリヌクレオチドを含む核酸構築物を挿入することによって、発現され得る。発現ベクターを作製する際に、そのコード配列は、そのコード配列が発現のために適切な制御配列と作動可能に連結されるように、そのベクター中に配置される。
【0327】
組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ手順に都合よく従い得、ポリヌクレオチドの発現をもたらし得る、任意のベクター（例えば、プラスミドまたはウイルス）であり得る。そのベクターの選択は、そのベクターが導入される宿主細胞とのそのベクターの適合性に代表的には依拠する。そのベクターは、直鎖状または閉環状のプラスミドであり得る。
【0328】
ベクターは、自律複製ベクター、すなわち、染色体外実体として存在し、その複製が染色体複製から独立しているベクター（例えば、プラスミド、染色体外エレメント、ミニ染色体、または人工染色体）であり得る。ベクターは、自己複製を保証するための任意の手段を含み得る。あるいは、ベクターは、その宿主細胞中に導入された場合に、そのゲノム中に組み込まれ、そのベクターが組み込まれた染色体とともに複製される、ベクターであり得る。さらに、単一のベクターもしくはプラスミド、または宿主細胞のゲノム中に導入される全ＤＮＡを共に含む２つ以上のベクターもしくはプラスミド、またはトランスポゾン、使用され得る。意図されるベクターとしては、組込みベクターおよび非組込みベクターの両方が挙げられる。
【0329】
（Ｇ．宿主細胞および産生株）
当業者によって理解されるとおり、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質およびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の組換え産生のための広範な種類の産生宿主生物（細菌細胞、哺乳動物細胞および真菌細胞（酵母を含む）が挙げられるがこれらに限定はされない）が、存在する。
当業者によって理解されるとおり、本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質およびｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の組換え産生のための広範な種類の産生宿主生物（細菌細胞、哺乳動物細胞および真菌細胞（酵母を含む）が挙げられるがこれらに限定はされない）が、存在する。
【0330】
本発明の核酸は、当該分野において利用可能な種々の技術（例えば、トランスフェリンポリカチオン媒介性ＤＮＡ移入、裸の核酸またはカプセル化核酸によるトランスフェクション、リポソーム媒介性ＤＮＡ移入、ＤＮＡコートラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、遺伝子銃、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションなど）を使用して、適切な宿主細胞中に導入され得る。
【0331】
（Ｈ．融合タンパク質を作製する方法）
本発明はまた、バリアントｓＢＣＭＡを作製する方法にも関し、その方法は、
（ａ）そのバリアントｓＢＣＭＡの発現のために適切な条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）そのバリアントｓＢＣＭＡを必要に応じて回収する工程
を含む。
本発明はまた、バリアントｓＢＣＭＡを作製する方法にも関し、その方法は、
（ａ）そのバリアントｓＢＣＭＡの発現のために適切な条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）そのバリアントｓＢＣＭＡを必要に応じて回収する工程
を含む。
【0332】
本発明はまた、ｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法にも関し、その方法は、
（ａ）そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の発現のために適切な条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を必要に応じて回収する工程
を含む。
（ａ）そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質の発現のために適切な条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）そのｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を必要に応じて回収する工程
を含む。
【0333】
（Ｉ．処置の方法）
（１．処置に従う対象）
種々の実施形態が、治療方法に関し、その治療方法の多くは、処置を必要とする対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
（１．処置に従う対象）
種々の実施形態が、治療方法に関し、その治療方法の多くは、処置を必要とする対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0334】
種々の実施形態が、治療方法に関し、その治療方法の多くは、処置を必要とする対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0335】
一部の実施形態において、本発明は、対象において１またはそれ以上のＢ細胞悪性疾患を処置する方法を提供し、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において記載されるバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、１またはそれ以上のＢ細胞悪性疾患は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫－粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、および原発性眼内リンパ腫（眼のリンパ腫）からなる群より選択される。一部の実施形態において、本明細書において開示される対象はヒト対象である。
【0336】
一部の実施形態において、本発明は、対象において１またはそれ以上のＢ細胞悪性疾患を処置する方法を提供し、その方法は、その対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の本明細書において記載されるｓＢＣＭＡバリアントＦｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、１またはそれ以上のＢ細胞悪性疾患は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫－粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、および原発性眼内リンパ腫（眼のリンパ腫）からなる群より選択される。一部の実施形態において、本明細書において開示される対象はヒト対象である。
【0337】
いくつかの実施形態は、対象においてＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を処置するか、該ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0338】
いくつかの実施形態は、対象においてＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を処置するか、該ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0339】
いくつかの実施形態は、対象においてＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を処置するか、該ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0340】
いくつかの実施形態は、対象においてＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を処置するか、該ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍の転移もしくは浸潤を減少または予防する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0341】
一部の実施形態は、ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0342】
一部の実施形態は、ＡＰＲＩＬを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0343】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0344】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する腫瘍を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示される腫瘍は、上記で開示されるＢ細胞悪性疾患である。一部の実施形態では、本明細書に開示される腫瘍は血液がんである。一部の実施形態では、本明細書に開示される血液がんは多発性骨髄腫である。
【0345】
一部の実施形態は、ＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0346】
一部の実施形態は、ＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0347】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0348】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する自己免疫疾患を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0349】
一部の実施形態は、ＡＰＲＩＬを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0350】
一部の実施形態は、ＡＰＲＩＬを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0351】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0352】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩおよび／またはＡＰＲＩＬへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現する線維症を有する対象においてＡＰＲＩＬの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0353】
一部の実施形態は、対象においてＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、またはそれらの両方を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含み、バリアントｓＢＣＭＡタンパク質はＢＡＦＦに結合する。
【0354】
一部の実施形態は、対象においてＢ細胞増殖、免疫グロブリン産生、またはそれらの両方を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含み、ｓＢＣＭＡドメインはＢＡＦＦに結合する。
【0355】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩおよび／またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現するＢ細胞過形成または自己免疫疾患を有する対象においてＢＡＦＦの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0356】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩおよび／またはＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターを発現するＢ細胞過形成または自己免疫疾患を有する対象においてＢＡＦＦの活性を阻害する方法に関し、方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0357】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡと、ＢＡＦＦＲと、ＴＡＣＩと、ＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターとからなる群より選択される少なくとも１つのレセプターを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0358】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡと、ＢＡＦＦＲと、ＴＡＣＩと、ＢＡＦＦへの結合を介して活性化される他のレセプターとからなる群より選択される少なくとも１つのレセプターを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0359】
一部の実施形態は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0360】
一部の実施形態は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する自己免疫疾患を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0361】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを発現する線維症を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0362】
一部の実施形態は、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦＲおよび／またはＴＡＣＩを発現する線維症を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0363】
一部の実施形態は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する線維症を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を投与する工程を含む。
【0364】
一部の実施形態は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬを発現する線維症を対象において処置する方法に関し、この方法は、対象に治療有効用量の１種またはそれ以上の上記のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程を含む。
【0365】
（２．治療的投与）
特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を有する治療有効組成物または処方物は、個体に全身投与され得るか、または当該分野で公知の他の任意の投与経路を介して投与され得る。
特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のバリアントｓＢＣＭＡタンパク質を有する治療有効組成物または処方物は、個体に全身投与され得るか、または当該分野で公知の他の任意の投与経路を介して投与され得る。
【0366】
特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質を有する治療有効組成物または処方物は、個体に全身投与され得るか、または当該分野で公知の他の任意の投与経路を介して投与され得る。
【0367】
（３．投薬）
一部の実施形態において、例えばがんまたは免疫調節性障害の処置のための、本発明の治療実体の有効用量は、多くの種々の要因（投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるかまたは動物であるか、投与される他の薬物、および処置が予防的かまたは治療的かが、挙げられる）に依拠して変化する。処置投薬量は、安全性および有効性を最適にするように用量設定され得る。
一部の実施形態において、例えばがんまたは免疫調節性障害の処置のための、本発明の治療実体の有効用量は、多くの種々の要因（投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるかまたは動物であるか、投与される他の薬物、および処置が予防的かまたは治療的かが、挙げられる）に依拠して変化する。処置投薬量は、安全性および有効性を最適にするように用量設定され得る。
【実施例】
【0368】
（ＶＩ．実施例）
（Ａ．実施例１：酵母ディスプレイｓＢＣＭＡライブラリーの合成）
ヒトＢＣＭＡ細胞外ドメイン（アミノ酸Ｍｅｔ１～Ａｌａ５４）をコードするＤＮＡを、ＮｈｅＩ制限部位およびＢａｍＨＩ制限部位を使用して、ｐＣＴ酵母ディスプレイプラスミド中にクローニングした。配列番号付けを、Ｓａｓａｋｉらにおいて使用された配列番号付けと一致するように行って、その野生型タンパク質を用いた彼らの研究との比較を容易にした。エラープローンライブラリーを、そのＢＣＭＡ細胞外ドメインＤＮＡをテンプレートとして使用して作製し、低フィデリティＴａｑポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とヌクレオチドアナログである８－オキソ－ｄＧＴＰおよびｄＰＴＰ（ＴｒｉＬｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とを使用することによって、変異を導入した。６つの別個のＰＣＲ反応を実施し、それらの反応において、そのアナログの濃度およびサイクル数を以下のとおり変化させて、一定範囲の変異頻度を得た；５サイクル（２００μＭ）、１０サイクル（２μＭ、２０μＭ、または２００μＭ）、および２０サイクル（２μＭまたは２０μＭ）。これらの反応からの産物を、各々がそのｐＣＴプラスミドと５０ｂｐ相同性を有するフォワードプライマーおよびリバースプライマーをヌクレオチドアナログの非存在下で使用して増幅した。増幅したＤＮＡを、ゲル電気泳動を使用して精製し、ｐＣＴプラスミドを、ＮｈｅＩおよびＢａｍＨＩで消化した。精製した変異体ｃＤＮＡと、直鎖状にしたプラスミドとを、５：１の重量比でＥＢＹ１００酵母中に電気穿孔した。このＥＢＹ１００酵母において、これらの変異体ｃＤＮＡとプラスミドとが、相同組換えを介してインビボでアセンブルした。ライブラリーの大きさを、希釈プレーティングによって２×１０８であると見積もった。
（Ａ．実施例１：酵母ディスプレイｓＢＣＭＡライブラリーの合成）
ヒトＢＣＭＡ細胞外ドメイン（アミノ酸Ｍｅｔ１～Ａｌａ５４）をコードするＤＮＡを、ＮｈｅＩ制限部位およびＢａｍＨＩ制限部位を使用して、ｐＣＴ酵母ディスプレイプラスミド中にクローニングした。配列番号付けを、Ｓａｓａｋｉらにおいて使用された配列番号付けと一致するように行って、その野生型タンパク質を用いた彼らの研究との比較を容易にした。エラープローンライブラリーを、そのＢＣＭＡ細胞外ドメインＤＮＡをテンプレートとして使用して作製し、低フィデリティＴａｑポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とヌクレオチドアナログである８－オキソ－ｄＧＴＰおよびｄＰＴＰ（ＴｒｉＬｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とを使用することによって、変異を導入した。６つの別個のＰＣＲ反応を実施し、それらの反応において、そのアナログの濃度およびサイクル数を以下のとおり変化させて、一定範囲の変異頻度を得た；５サイクル（２００μＭ）、１０サイクル（２μＭ、２０μＭ、または２００μＭ）、および２０サイクル（２μＭまたは２０μＭ）。これらの反応からの産物を、各々がそのｐＣＴプラスミドと５０ｂｐ相同性を有するフォワードプライマーおよびリバースプライマーをヌクレオチドアナログの非存在下で使用して増幅した。増幅したＤＮＡを、ゲル電気泳動を使用して精製し、ｐＣＴプラスミドを、ＮｈｅＩおよびＢａｍＨＩで消化した。精製した変異体ｃＤＮＡと、直鎖状にしたプラスミドとを、５：１の重量比でＥＢＹ１００酵母中に電気穿孔した。このＥＢＹ１００酵母において、これらの変異体ｃＤＮＡとプラスミドとが、相同組換えを介してインビボでアセンブルした。ライブラリーの大きさを、希釈プレーティングによって２×１０８であると見積もった。
【0369】
（Ｂ．実施例２：ライブラリースクリーニング）
酵母が提示する高親和性ＢＣＭＡ変異体を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を使用して上記ライブラリーから単離した。ＦＡＣＳのラウンド１について、平衡結合ソートを実施し、このソートにおいて、酵母を、０．１％のＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＡ）および２ｎＭのＡＰＲＩＬ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）中で室温にて２４時間インキュベートした。ＡＰＲＩＬとのインキュベーションの後、酵母をペレットにし、洗浄し、抗ｃ－Ｍｙｃ ＦＩＴＣ抗体（Ａｂｃａｍ）と抗ＨＡ ＡＦ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）との１：１００混合物を含むＰＢＳＡ中で４℃にて１時間再懸濁した。その後、酵母を洗浄し、ペレットにし、ＰＢＳＡを使用して再懸濁し、その後ＦＡＣＳ分析を行った。
酵母が提示する高親和性ＢＣＭＡ変異体を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を使用して上記ライブラリーから単離した。ＦＡＣＳのラウンド１について、平衡結合ソートを実施し、このソートにおいて、酵母を、０．１％のＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＡ）および２ｎＭのＡＰＲＩＬ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）中で室温にて２４時間インキュベートした。ＡＰＲＩＬとのインキュベーションの後、酵母をペレットにし、洗浄し、抗ｃ－Ｍｙｃ ＦＩＴＣ抗体（Ａｂｃａｍ）と抗ＨＡ ＡＦ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）との１：１００混合物を含むＰＢＳＡ中で４℃にて１時間再懸濁した。その後、酵母を洗浄し、ペレットにし、ＰＢＳＡを使用して再懸濁し、その後ＦＡＣＳ分析を行った。
【0370】
ＦＡＣＳのラウンド２～６について、速度論的解離速度ソートを実施し、このソートにおいて、酵母を２ｎＭのＡＰＲＩＬとともに室温にて３時間インキュベートし、その後、細胞を２回洗浄して、過剰な非結合型ＡＰＲＩＬを除去し、約５０倍モル過剰のＢＣＭＡを含むＰＢＳＡ中に再懸濁して、解離事象を不可逆にした。この解離工程の長さは、以下のとおりであった：ソート２） ４８時間；ソート３、４および５） ７２時間；ソート６） ８４時間、すべての解離反応は室温にて実施した。この解離反応の最後の１時間の間に、細胞を、抗ｃ－Ｍｙｃ ＦＩＴＣ抗体（Ａｂｃａｍ）と抗ＨＡ ＡＦ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）との１：１００混合物とともに４℃にて１時間混合した。酵母をペレットにし、洗浄し、０．１％のＢＳＡ中に再懸濁した。標識された酵母を、Ｖａｎｔａｇｅ ＳＥフローサイトメーター（Ｓｔａｎｆｏｒｄ ＦＡＣＳ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ）およびＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してＦＡＣＳによってソートした。ソートは、クローンのうちの最高のＡＰＲＩＬ結合／ｃ－Ｍｙｃ発現比を有する１～３％が選択されるように行い、ＡＰＲＩＬに対する最高の結合親和性を有するクローンについてそのライブラリーを濃縮した。ソート１において、１０８個の細胞をスクリーニングし、その後のラウンドを、その前のソートラウンドにおいて収集したクローンの数の最低１０倍分析して、そのライブラリーの多様性の十分なサンプリングを保証した。選択したクローンを増殖させ、さらなるラウンドのＦＡＣＳに供した。ソート３、４、５および６の後、プラスミドＤＮＡを、Ｚｙｍｏｐｒｅｐキット（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ．）を使用して回収し、ＤＨ５ａスーパーコンピテント細胞中に形質転換し、プラスミドミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して単離した。配列決定を、ＭＣＬＡＢによって実施した。
【0371】
酵母により提示されたソート産物の分析を、同じ試薬およびプロトコルを使用して実施し、上記ライブラリーソートについて記載した。サンプルをＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にて分析し、データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。
【0372】
（Ｃ．実施例３：結合親和性アッセイ）
細胞を、標準的組織培養条件で培養した。細胞を収集し、その上清を捨て、その後、３×１０５細胞／ウェルにて染色プレート上に散布した。そのプレートを、４℃にて３００ｇで５分間遠心分離した。種々の濃度のｓＢＣＭＡ変異体および陰性対照を、２％のＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に希釈し、１００μＬ／ウェルを添加した。細胞を４℃にて１時間インキュベートし、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離した。その上清を、各洗浄の前および後に捨てた。細胞を、抗ヒトＩｇＧ－Ａｌｅｘａ ４８８（番号Ａ２８１７５、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を含む１：１０００希釈液で１００μＬ／ウェルにて再懸濁した。プレートを４℃にて１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、３００ｇにて５分間遠心分離した。上清を捨て、細胞を１００μＬの冷たいＰＢＳ中に再懸濁した。その細胞を暗所に維持し、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）にてＦＡＣＳ分析を実施した。（結合親和性の尺度である）二重陽性集団の幾何平均を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して決定した。この結合反応のＫｄ（平衡状態でレセプター部位の半分に結合するリガンド濃度）を決定するために、結合親和性をリガンド濃度に対してプロットし、そのグラフを、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍにおいて１部位特異的結合を使用して分析して、そのＫｄ値を得た。
細胞を、標準的組織培養条件で培養した。細胞を収集し、その上清を捨て、その後、３×１０５細胞／ウェルにて染色プレート上に散布した。そのプレートを、４℃にて３００ｇで５分間遠心分離した。種々の濃度のｓＢＣＭＡ変異体および陰性対照を、２％のＦＢＳを含有するＦＡＣＳ緩衝液中に希釈し、１００μＬ／ウェルを添加した。細胞を４℃にて１時間インキュベートし、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離した。その上清を、各洗浄の前および後に捨てた。細胞を、抗ヒトＩｇＧ－Ａｌｅｘａ ４８８（番号Ａ２８１７５、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を含む１：１０００希釈液で１００μＬ／ウェルにて再懸濁した。プレートを４℃にて１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、３００ｇにて５分間遠心分離した。上清を捨て、細胞を１００μＬの冷たいＰＢＳ中に再懸濁した。その細胞を暗所に維持し、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）にてＦＡＣＳ分析を実施した。（結合親和性の尺度である）二重陽性集団の幾何平均を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して決定した。この結合反応のＫｄ（平衡状態でレセプター部位の半分に結合するリガンド濃度）を決定するために、結合親和性をリガンド濃度に対してプロットし、そのグラフを、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍにおいて１部位特異的結合を使用して分析して、そのＫｄ値を得た。
【0373】
（Ｄ．実施例４：結果）
ＡＰＲＩＬに対するＷＴ－ＢＣＭＡの結合の結合速度論を、図１において示す。ＡＰＲＩＬに対するＷＴ－ＢＣＭＡの結合に付いての結合アッセイは、３２ｐＭというＫｄを示す。
ＡＰＲＩＬに対するＷＴ－ＢＣＭＡの結合の結合速度論を、図１において示す。ＡＰＲＩＬに対するＷＴ－ＢＣＭＡの結合に付いての結合アッセイは、３２ｐＭというＫｄを示す。
【0374】
ＢＣＭＡ酵母ディスプレイライブラリーについての種々のソート条件およびゲートを、図２において示す。
【0375】
図３は、野生型ｓＢＣＭＡと比較した変異を決定するためのバリアントｓＢＣＭＡクローンの配列決定を示す。
【0376】
ＡＰＲＩＬに対する種々のバリアントｓＢＣＭＡクローンについての結合曲線および結合の結果を、図４において示す。
【0377】
ＢＡＦＦに対する種々のバリアントｓＢＣＭＡクローンについての結合曲線および結合の結果を、図５において示す。
【0378】
（Ｅ．実施例５：インビボ腫瘍有効性研究）
１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで投与したｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（本明細書において以後は「バリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ」）の抗腫瘍活性を分析し、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで投与した野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質（本明細書において以後は「野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃ」）の抗腫瘍活性と比較した。ＭＭ１．Ｒ多発性骨髄腫細胞を、ＮＳＧ免疫不全マウスに皮下注射した。動物を、ビヒクル対照、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ、１０ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ、１ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃおよび１０ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した。腫瘍増殖を、対照群と処置群との間で実験全体と通じて比較した。収集したＭＭ１．Ｒ多発性骨髄腫腫瘍の最終的腫瘍重量を、対照群および処置群において比較した。図８は、腫瘍増殖曲線（図８Ａ）および末期腫瘍重量（図８Ｂ）の結果を示す。この研究は、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物、１０ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物および１０ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物において、薬物溶媒で処置した動物と比較して顕著に増強した抗腫瘍活性を示した。詳細には、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物は、１ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置したマウスと比較して顕著に改善した抗腫瘍活性を示した。
１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで投与したｓＢＣＭＡバリアント－Ｆｃ融合タンパク質（本明細書において以後は「バリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ」）の抗腫瘍活性を分析し、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで投与した野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質（本明細書において以後は「野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃ」）の抗腫瘍活性と比較した。ＭＭ１．Ｒ多発性骨髄腫細胞を、ＮＳＧ免疫不全マウスに皮下注射した。動物を、ビヒクル対照、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ、１０ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃ、１ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃおよび１０ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した。腫瘍増殖を、対照群と処置群との間で実験全体と通じて比較した。収集したＭＭ１．Ｒ多発性骨髄腫腫瘍の最終的腫瘍重量を、対照群および処置群において比較した。図８は、腫瘍増殖曲線（図８Ａ）および末期腫瘍重量（図８Ｂ）の結果を示す。この研究は、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物、１０ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物および１０ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物において、薬物溶媒で処置した動物と比較して顕著に増強した抗腫瘍活性を示した。詳細には、１ｍｇ／ｋｇのバリアントｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置した動物は、１ｍｇ／ｋｇの野生型ｓＢＣＭＡ－Ｆｃで処置したマウスと比較して顕著に改善した抗腫瘍活性を示した。
【0379】
上で示した実施例は、本発明の組成物、システムおよび方法の実施形態を製造し使用する方法に関する完全な開示および記載を当業者に与えるために提供され、本発明者らが自身の発明だとみなすものの範囲を限定することは意図されない。本発明を実施するための上記の様式の当業者にとって自明である改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本明細書において記載されたすべての特許および公開物は、本発明が属する分野の当業者のレベルを示す。本開示において引用されたすべての参考文献は、各々の参考文献がその全体が個別に参照によって援用された場合とおなじ程度に、参照によって援用される。
【0380】
すべての見出しおよび節の名称は、明確性および参照を目的とするためだけに使用され、限定することは何ら考慮されない。例えば、当業者は、本明細書において記載される発明の趣旨および範囲に従って適切に別々の見出しおよび節から種々の局面を組み合わせることの有用性を理解する。
【0381】
本明細書において引用されるすべての参考文献は、個別の公開物または特許または特許出願の各々がすべての目的のためにその全体が参照により援用されると具体的および個別に示された場合とおなじ程度に、本明細書における参照によってその全体がすべての目的のために本明細書によって援用される。
【0382】
本出願の多くの改変および変化が、当業者にとって明らかであるように、本出願の趣旨および範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書において記載した特定の実施形態および実施例は、単に例示のみのために提供される。
【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図3-4】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【手続補正書】
【提出日】2023-05-09
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】