(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-09-06
(54)【発明の名称】感染症を診断、予防及び処置するための融合タンパク質
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20230830BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20230830BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20230830BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20230830BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20230830BHJP
C07K 16/12 20060101ALI20230830BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20230830BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230830BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230830BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230830BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230830BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230830BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20230830BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20230830BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20230830BHJP
A61P 33/00 20060101ALI20230830BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20230830BHJP
A61P 31/10 20060101ALI20230830BHJP
A61P 33/10 20060101ALI20230830BHJP
A61P 31/16 20060101ALI20230830BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230830BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20230830BHJP
A61K 47/62 20170101ALI20230830BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20230830BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230830BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20230830BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20230830BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20230830BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z ZNA
C12N15/13
C12N15/12
C07K16/46
C07K16/18
C07K16/12
C07K14/705
C12N15/63 Z
C12N5/10
C12N1/21
C12N1/19
C12N1/15
C12P21/02 A
A61P31/00
A61P31/14
A61P33/00
A61P31/04
A61P31/10
A61P33/10
A61P31/16
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K39/00 G
A61K47/62
A61K47/36
A61K47/26
A61K47/24
G01N33/53 S
G01N33/531 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023512390
(86)(22)【出願日】2021-08-19
(85)【翻訳文提出日】2023-04-13
(86)【国際出願番号】 US2021046713
(87)【国際公開番号】W WO2022040436
(87)【国際公開日】2022-02-24
(31)【優先権主張番号】16/997,639
(32)【優先日】2020-08-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523057585
【氏名又は名称】バイトルビアエ・エル・エル・シー
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アハメド，マヒウディン
(72)【発明者】
【氏名】セケイラ，ソニア
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG01
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B064DA15
4B065AA90X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4B065CA45
4C076AA94
4C076BB01
4C076BB11
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC31
4C076CC32
4C076CC34
4C076CC35
4C076DD63
4C076DD67
4C076EE30
4C085AA03
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB36
4C085BB37
4C085BB44
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG05
4C085GG06
4C085GG08
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA31
4H045EA50
4H045EA52
4H045EA53
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、特に、ジカ、デング、西ナイル、エボラ、Ｈ１Ｎ１、エンテロウイルス、リーシュマニア、マラリア及びコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶを含む微生物感染症を管理及び処置するための、ホスホチジルセリン又は病原性糖標的治療薬の使用に関する。一態様において、本発明は、Ｉｇ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、例えばアルブミン、並びにホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質、又は抗体断片、及び／又は微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質を含む融合構築物に関する。他の態様も記載されている。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｉｇ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、例えばアルブミン若しくはアルブミンに結合する抗体断片、並びにａ．ホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質若しくは抗体断片、及び／又は
ｂ．微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質
を含む、融合構築物。
【請求項2】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む、好ましくは請求項１に記載の融合構築物。
【請求項3】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．ヒトＴＩＭ１の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む、請求項１又は２に記載の融合構築物。
【請求項4】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．１つ以上のヒトＴＩＭ１由来の２つ以上の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．１つ以上のヒトＣＤ２０９断片由来の２つ以上の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む、請求項３に記載の融合構築物。
【請求項5】
ａ．ヒトＴＩＭ１の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及びｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む、融合構築物。
【請求項6】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む、融合構築物であって、
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣの増強を提供する、
好ましくは請求項１～５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項7】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む、融合構築物であって、
配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域をさらに含む、
好ましくは請求項１～６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項8】
ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びにａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む、融合構築物であって、
フーリン阻害剤をさらに含む、
好ましくは請求項１～７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項9】
ペプチド、タンパク質又は抗体断片が、免疫細胞に結合及び／又は免疫細胞を刺激することができる、請求項１～８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項10】
ＴＩＭ１断片が、４０～２００アミノ酸残基、５０～１８０アミノ酸残基、６０～１６０アミノ酸残基、７０～１４０アミノ酸残基、８０～１３０アミノ酸残基、９０～１２０アミノ酸残基、１００～１２０アミノ酸残基及び１００～１１０アミノ酸残基からなる群から選択される配列長を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項11】
ＣＤ２０９断片が、４０～２００アミノ酸残基、４０～１９０アミノ酸残基、５０～１８０アミノ酸残基、６０～１７０アミノ酸残基酸残基、７０～１６０アミノ酸残基、８０～１５０アミノ酸残基、９０～１５０アミノ酸残基、１００～１５０アミノ酸残基、１１０～１５０アミノ酸残基、１２０～１５０アミノ酸残基及び１３０～１４０アミノ酸残基からなる群から選択される配列長を有する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項12】
ＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９断片が、野生型ＴＩＭ１又はＣＤ２０９と少なくとも７０％、又は７５％、又は８０％、又は８５％、又は９０％、又は９５％の配列相同性を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項13】
ＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９断片がインタクトなＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９機能を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項14】
ＩｇＧ－ＦｃドメインがＩｇＧ３－Ｆｃドメインである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項15】
以下のａ）ヒンジ配列が好ましくはＩｇＧ４ヒンジ配列又はＩｇＧ１ヒンジ配列で置き換えられている、ＩｇＧ３；
ｂ）配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域；及び／又は
ｃ）フーリン阻害剤
のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項16】
配列番号１及び／若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項17】
配列番号３及び／若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項18】
少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、又は好ましくは少なくとも８個のジスルフィド結合を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項19】
融合構築物が標的に結合することができ、標的がマンナン、高マンノース含有構造物、フカン、リン脂質ホスファチジルセリン及び／又はＣＤ３である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項20】
ａ．配列番号１に記載の配列、又は配列番号１に記載の配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含むか、又はそれからなる、タンパク質断片、及びｂ．配列番号３に記載の配列、又は配列番号３に記載の配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含むか、又はそれからなる、タンパク質断片
を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項21】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号９に記載の配列若しくは配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９に記載の配列若しくは配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項22】
ａ．ｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号９に記載の配列若しくは配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９に記載の配列若しくは配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項23】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号１１に記載の配列若しくは配列番号４５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１３に記載の配列若しくは配列番号４７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項24】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号１４若しくは１５、若しくは配列番号６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６若しくは１７、若しくは配列番号６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれか一項に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項25】
ａ．ｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号１４若しくは１５、若しくは配列番号６６に記載の配列、又はこれらの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３及び／又は配列番号４による配列、又はこれらの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６若しくは１７、若しくは配列番号６７に記載の配列、又はこれらの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれか一項に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項26】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号１４若しくは１５、若しくは配列番号６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６若しくは１７、若しくは配列番号６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれか一項に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項27】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号１６若しくは１７、若しくは配列番号６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、及び
ｉｉｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれか一項に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｖ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉｉ．配列番号１４若しくは１５、若しくは配列番号６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項28】
リンカーを含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項29】
リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号４１）、（ＧＧＧＧＳ）４リンカー（配列番号７０）、（ＧＧＧＧＳ）５リンカー（配列番号７１）及び（ＧＧＧＧＳ）６リンカー（配列番号７２）から選択される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項30】
少なくとも１個の遊離システイン残基、少なくとも２個の遊離システイン残基、少なくとも３個の遊離システイン残基、少なくとも４個の遊離システイン残基、少なくとも５個の遊離システイン残基、好ましくは少なくとも６個の遊離システイン残基を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項31】
遊離システインが、薬物及び／又はペイロードとの相互作用を可能にする、請求項１～３０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項32】
ペイロードが、フーリン阻害剤である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項33】
融合構築物が、Ａ３３９Ｃ変異、Ｓ３３７Ｃ変異、及び／又はＫ３４０Ｃ変異を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項34】
融合構築物が、配列番号３６、３７、配列番号３８、３９、４０、４２、４４、又は４６の配列のいずれかから選択される配列を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項35】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項36】
ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、又はＩｇＥである、請求項１～３５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項37】
ｎｕｌｌ ｆｃを含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項38】
ｎｕｌｌ ｆｃが、２３４位でのＡｌａ置換、及び／又は２３５位でのＡｌａ置換、及び／又はＮ２９７Ａ変異、及び／又はＫ３２２Ａ変異を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項39】
ヘテロ二量体化ドメインを含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項40】
ヘテロ二量体化ドメインが、配列番号４８、４９、又は５０に記載の配列を含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項41】
ヘテロ二量体化変異を含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項42】
ヘテロ二量体化変異が、Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９Ｋ及び／又はＫ４０９Ｒ変異である、請求項１～４１のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項43】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項44】
ａ．ｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項45】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号４０に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項46】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｉｖ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項47】
ａ．ｉ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｉｖ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項48】
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及びｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｉｖ．配列番号３若しくは配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第２の鎖
を含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項49】
融合構築物の薬物及び／又はペイロードに対する比が、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０から選択される、請求項１～４８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項50】
配列番号５１に記載のカッパ軽鎖、又は配列番号５２若しくは５３に記載のラムダ軽鎖を含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項51】
融合構築物がＩｇＧ３構築物であり、ＩｇＧ３構築物がヒンジ領域を含み、ヒンジ領域が改変されている、好ましくは請求項１～５０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項52】
ヒンジ領域が、配列番号６又は配列番号８に記載の配列と、合計で少なくとも１０％の同一性、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、請求項５１に記載の融合構築物。
【請求項53】
配列番号５、７、９、１０、１１、１２及び／又は１３に記載の配列を含む、請求項１～５２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項54】
ヒンジ領域が、少なくとも１個の遊離システイン残基、少なくとも２個の遊離システイン残基、好ましくは少なくとも３個の遊離システイン残基を含む、請求項１～５３のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項55】
ヒンジ領域が、Ｓ２２８Ｐ変異を含む、請求項１～５４のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項56】
ヒンジ領域が、配列番号６及び／又は配列番号８及び／又は配列番号６８に記載の配列を含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項57】
ホスファチジルセリンを検出するために使用される、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項58】
対象の血液中のホスファチジルセリンを検出するために使用される、請求項１～５７のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項59】
配列番号１に記載の配列及び／又は配列番号２に記載の配列を含む、請求項５７に記載の融合構築物。
【請求項60】
マンナン部分又はフカン部分に結合するＣ型レクチンを検出するために使用される、請求項１～５９のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項61】
対象の血液中のマンナン部分又はフカン部分に結合するＣ型レクチンを検出するために使用される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項62】
配列番号３に記載の配列及び／又は配列番号４に記載の配列を含む、請求項６０に記載の融合構築物。
【請求項63】
ＩｇＧ３の定常領域及びヒンジを含む融合構築物、融合タンパク質又は抗体であって、ヒンジが、好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ４ヒンジから選択される、融合構築物、融合タンパク質又は抗体。
【請求項64】
１つ以上のヘテロ二量体化変異を含む、請求項６３に記載の融合構築物、融合タンパク質又は抗体。
【請求項65】
４０５位及び／又は４０９位（ＥＵナンバリング）が関与する又はそれらを含むヘテロ二量体化変異を含む、請求項６４に記載の融合構築物、融合タンパク質又は抗体。
【請求項66】
ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ホモ二量体であって、ヒンジ領域が、配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ホモ二量体。
【請求項67】
ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ヘテロ二量体であって、ヒンジ領域が、配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ヘテロ二量体。
【請求項68】
４０５位及び／又は４０９位に変異を含む、請求項６６～６７のいずれか一項に記載のＩｇＧ３。
【請求項69】
ＣＨ２及び／又はＣＨ４ドメインの電荷対を変化させることによって得ることができるＩｇＭヘテロ二量体。
【請求項70】
表８の変異のうちの１つ以上を含む、請求項６９に記載のＩｇＭヘテロ二量体。
【請求項71】
配列番号６４及び／又は６５に記載の配列を含む、請求項６９～７０のいずれか一項に記載のＩｇＭ。
【請求項72】
請求項６６～７１のいずれか一項に記載のＩｇＧ３ホモ二量体、ＩｇＧ３ヘテロ二量体及び／又はＩｇＭヘテロ二量体を含む、請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項73】
感染症の処置において使用するためのものである、請求項１～７２のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項74】
感染症が、コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶなどのウイルス、寄生虫、細菌、真菌又は原虫によって引き起こされる感染症である、請求項７３に記載の融合構築物。
【請求項75】
ウイルスが、アルボウイルス、ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１、チクングニアウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２及びコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶから選択される、請求項７４に記載の融合構築物。
【請求項76】
細菌が、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びマイコプラズマ・レプレ（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）から選択される、請求項７４に記載の融合構築物。
【請求項77】
寄生虫が、リーシュマニア及びマラリアから選択される、請求項７４に記載の融合構築物。
【請求項78】
感染症の処置のための、請求項１～７１のいずれか一項に記載の融合構築物の使用。
【請求項79】
感染症が、ウイルス感染症、細菌感染症及び原虫感染症から選択される、請求項７８に記載の使用。
【請求項80】
処置が、皮下、皮内、筋肉内、経口及び経鼻から選択される投与形態での融合構築物の投与を含む、請求項７８～７９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項81】
ペイロード送達のためのＩｇＧ４又はＩｇＧ４の一部の使用であって、ＩｇＧ４がＦｃを含まないように改変されているか、又はＩｇＧ４のＦｃの活性が１つ以上の変異により無効化若しくは低減されている、使用。
【請求項82】
ＩｇＧ４が、１つ以上のヘテロ二量体化変異を含む、請求項７８～８１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項83】
ＩｇＧ４が、１つ以上のＣｙｓ変異を含み、好ましくはそれにより部位特異的コンジュゲーションが可能になる、請求項８１～８２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項84】
ＩｇＧ４が、３３９位（ＥＵナンバリング）にＣｙｓを含む、請求項８１～８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項85】
請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物を含む、ワクチン。
【請求項86】
マンナン、高マンノース含有構造物、フカン及び／又はリン脂質ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む、ワクチン。
【請求項87】
β－グルカンをさらに含む、請求項８５又は８６に記載のワクチン。
【請求項88】
感染症の予防及び／又は処置のための、請求項８５～８７のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項89】
感染症が、ウイルス、好ましくは請求項７５に記載のウイルス、及び／若しくはコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶ、寄生虫、好ましくは請求項７７に記載の寄生虫、細菌、好ましくは請求項７６に記載の細菌、真菌又は原虫によって引き起こされる、請求項８８に記載のワクチン。
【請求項90】
皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、経口投与及び／又は経鼻投与から選択される経路を介した投与が可能である、請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物及び／又は請求項８５～８９のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項91】
希釈剤、結合剤又は担体などの１つ以上の賦形剤を任意選択的に含む、請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物を含む組成物。
【請求項92】
請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物、及び／又は請求項８５～８９のいずれか一項に記載のワクチン、及び／又は請求項９０～９１のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、対象における感染症を処置及び／又は予防する方法。
【請求項93】
対象における疾患の進行をスクリーニング及び／又はモニタリングする方法であって、下記のｉ．対象由来の血液試料を提供するステップ、
ｉｉ．血液試料を、請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物と接触させるステップ
を含む、方法。
【請求項94】
請求項１～６５のいずれか一項に記載の融合構築物をコードする、単離された核酸分子。
【請求項95】
請求項９４に記載の核酸分子を含む、組換えベクター。
【請求項96】
請求項９５に記載の組換えベクターを含む、宿主細胞。
【請求項97】
請求項１～９６のいずれか一項に記載の融合構築物の生成方法であって、融合構築物の発現を可能にする条件下において培養培地中で請求項９６に記載の宿主細胞を培養するステップ、及び融合構築物を培養培地から単離するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本明細書は、本出願と一緒に提出したコンピュータ可読形式の配列表を含む。配列表は本開示の一部を形成し、本明細書にその全体が組み込まれる。
【0002】
本発明は、ジカ、デング、呼吸器合胞体ウイルス、西ナイル、エボラ、Ｈ１Ｎ１、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、エンテロウイルス、リーシュマニア、マラリア及びコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶを含む、微生物感染症を管理及び処置するための、ホスホチジルセリン又は病原性糖標的治療薬の使用に関する。
【0003】
フーリンプロテアーゼ阻害剤、Ｔ細胞エンゲージャー、細胞毒性機能を有するプラットフォーム、一価及び多価分子、薬物コンジュゲート及びアジュバント、担体にコンジュゲートされ得る病原体中和タンパク質を含む、新規の治療用タンパク質に関する組成物、並びに投与方法、特に皮下、経口又は経鼻投与方法が提供される。本発明はさらに、このような治療から恩恵を受ける可能性のある対象の選択方法としてのコンパニオン診断、及び処置の応答を迅速かつ容易にモニタリングするための血液バイオマーカーに関する。
【背景技術】
【0004】
ＷＨＯによれば、アルボウイルスであるジカウイルス（ＺＩＫＶ）、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、並びにエボラウイルス（ＥＢＬＶ）及びＳＡＲＳは、世界的な公衆衛生上の高リスクをもたらすパンデミック拡大しやすい、比較的最近の、生命を脅かす希少疾患である（ＷＨＯ ｒｅｐｏｒｔ ２０２０）。
【0005】
これらの疾患に対してＦＤＡが承認した治療法はない。エボラ株の１つであるザイールエボラウイルス（Ｅｒｖｅｂｏ、２０１９年）のエンベロープ糖タンパク質からなる組換え生ワクチンは、最近ＦＤＡによって成人における使用のみが承認されたが、防御の期間はまだ完全には判明されていない。デングの４株すべてのプレＭ及びＥタンパク質からなる別の組換えワクチン（Ｄｅｎｇｖａｘｉａ、２０１９年）もまた承認されているが、Ｌｉｍら、２０１９年は、異なる抗原特性を持つＤＥＮＶの新しい変異を報告している。
【0006】
ＺＩＫＶ、ＷＮＶ、及びＤＥＮＶは、主に媒介蚊によって感染されるフラビウイルス（フラビウイルス科（ｆａｍｉｌｙ Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ））である（すなわち、アルボウイルス）。ジカは、主にアエデス属（Ａｅｄｅｓ）蚊によって感染されるプラス一本鎖ＲＮＡフラビウイルス科ウイルスであり、１９４７年にウガンダで初めて単離されて以来、２つの系統発生系列（アジア及びアフリカ）の多数の株が同定されている（Ｒａｍｏｓ ｄａ Ｓｉｌｖａ、２０１６年）。ＷＨＯによれば、２０１５年～２０１７年のアウトブレイクは、世界で３０，０００件を超える症例を引き起こした（世界保健機関ジカ疫学 アップデート２０１９年７月、ウェブサイト：ｗｗｗ＿ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｚｉｋａ／ｚｉｋａ－ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ－ｕｐｄａｔｅ－ｊｕｌｙ－２Ｏ１９．ｐｄｆ？ ｕａ＝１、２０２０年８月５日アクセス）。
【0007】
Ｍｕｓｓｏ、２０１５年によれば、ジカは性的接触によっても拡大し（Ｍｕｓｓｏ、２０１５年）、Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ、２０１６年によれば、ジカは母体血液から胎児血液にも広がる（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ、２０１６年）。
【0008】
神経学的後遺症のスペクトルの拡大が報告されている。Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ、２０１６年によれば、妊婦におけるジカ感染症の特に深刻な共存症は、その子孫への重度の先天性小頭症である（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ、２０１６年）。Ｂａｒｂｉ、２０１８年によれば、成人では、ミエリン鞘を破壊して進行性の上行性麻痺を引き起こす自己免疫疾患のギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）は、患者の１．２３％で発症すると推定されている（Ｂａｒｂｉ、２０１８年）。他に報告されたＺＩＫＶの神経学的合併症には、脳炎／髄膜脳炎、急性散在性脳脊髄炎、脊髄炎、脳血管合併症、発作及び脳症、感覚性多発性ニューロパシー及び感覚性ニューロパシーが含まれる。
【0009】
ＺＩＫＶの主な宿主には、ヒト、サル、蚊が含まれる。Ｈｏｕ、２０１７年によれば、神経幹細胞、線維芽細胞、上皮細胞、血液細胞は、ＺＩＫＶ感染を許容する（Ｈｏｕ、２０１７年）。
【0010】
デングウイルス（ＤＥＧＶ）は、世界で最も流行している節足動物由来のウイルス性疾患（１００万症例／年）を引き起こす、マイナスＲＮＡ鎖フラビウイルスである。ＤＥＮＶ感染は、無症候性感染症又はデング熱（ＤＦ）と呼ばれる自己限定的発熱性疾患から、デング出血熱（ＤＨＦ）及びデングショック症候群（ＤＳＳ）を含めた生命を脅かす疾患まで、幅広い臨床症状を伴うヒト疾患を引き起こす。現在、デングに対する治療法はなく、デングに以前感染したことがない人又は非流行地域から旅行する人に対するワクチンもない。Ｄｅｎｇｖａｘｉａは、以前にデングに感染したことが検査室で確認され流行地域に住んでいる、９歳～１６歳の人に対して承認されたワクチンである。
【0011】
特許出願ＵＳ２００９１７５８６５Ａ１には、親抗体の１つ以上のアミノ酸を非架橋の高反応性のシステインアミノ酸で置き換えることにより操作される抗体が記載されている。変異の中でもとりわけ、本特許出願はＡ３３９Ｃ及びＳ３３７Ｃに言及している。
【0012】
特許出願ＷＯ２０１５１５７５９５には、１つ以上の反応性システイン残基で操作された抗体及びその断片を含むコンジュゲート化合物が記載されている。変異の中でもとりわけ、本特許出願はＫ３４０Ｃに言及している。
【0013】
Ｗｅｎｗｅｎ Ｂｉら（ＩｇＧ Ｆｃ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｒｔｉｆ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＨＩＶ－１ ｆｕｓｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｏｔｅｎｃｙ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｒｏａｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ、２０１９年１２月５日）によれば、短いＨＩＶ－１融合阻害ペプチドＣＰ２４のインビボ半減期を、ヒトＩｇＧ Ｆｃ結合ペプチド（ＩＢＰ）とＣＰ２４を融合させることによって延長する戦略が開発されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0014】
【特許文献1】米国特許出願公開第２００９／１７５８６５号明細書
【特許文献2】国際公開第２０１５／１５７５９５号
【非特許文献】
【0015】
【非特許文献1】世界保健機関，ｒｅｐｏｒｔ，２０２０年
【非特許文献2】Ｅｒｖｅｂｏ，２０１９年
【非特許文献3】Ｄｅｎｇｖａｘｉａ，２０１９年
【非特許文献4】Ｌｉｍら，２０１９年
【非特許文献5】Ｒａｍｏｓ ｄａ Ｓｉｌｖａ，２０１６年
【非特許文献6】世界保健機関，ジカ疫学 アップデート２０１９年７月，［２０２０年８月５日検索］，ウェブサイト＜URL：ｗｗｗ＿ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｚｉｋａ／ｚｉｋａ－ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ－ｕｐｄａｔｅ－ｊｕｌｙ－２Ｏ１９．ｐｄｆ？ ｕａ＝１＞
【非特許文献7】Ｍｕｓｓｏ，２０１５年
【非特許文献8】Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，２０１６年
【非特許文献9】Ｂａｒｂｉ，２０１８年
【非特許文献10】Ｈｏｕ，２０１７年
【非特許文献11】Ｗｅｎｗｅｎ Ｂｉら，ＩｇＧ Ｆｃ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｒｔｉｆ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＨＩＶ－１ ｆｕｓｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｏｔｅｎｃｙ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ： Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｒｏａｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，２０１９年１２月５日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0016】
（発明の要旨）
遺伝的変異が生じやすい新興及び再興感染症を管理するための新しい技術に関するまだ対処されていないニーズがある。
遺伝的変異が生じやすい新興及び再興感染症を管理するための新しい技術に関するまだ対処されていないニーズがある。
【0017】
ウイルスが許容ヒト細胞に結合し、エンドソーム－リソソーム区画で活性化され、感染性になるという点における類似性は、それらの処置に対する汎治療的なアプローチに対して可能性に対する洞察を提供する。
【0018】
ＣＤ２０９治療標的としての病原性糖
グリカンは、微生物の必須構造的及び機能性成分である。これらの中でも、Ｄ－グルコースに由来する多糖部分であるグルカンは、真菌、植物、及びマイコバクテリアの細胞壁の主要構成物である。高マンノース含有構造（マンナン）は、多くのウイルス、真菌、及び細菌によって発現され、フコース構造（フカン）は、蠕虫及び一部の細菌の表面において確認されている（Ｇｅｉｊｔｅｎｂｅｅｋ及びＧｒｉｎｇｈｕｉｓ、２００９年；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、２００６年）。
グリカンは、微生物の必須構造的及び機能性成分である。これらの中でも、Ｄ－グルコースに由来する多糖部分であるグルカンは、真菌、植物、及びマイコバクテリアの細胞壁の主要構成物である。高マンノース含有構造（マンナン）は、多くのウイルス、真菌、及び細菌によって発現され、フコース構造（フカン）は、蠕虫及び一部の細菌の表面において確認されている（Ｇｅｉｊｔｅｎｂｅｅｋ及びＧｒｉｎｇｈｕｉｓ、２００９年；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、２００６年）。
【0019】
ヒト免疫系は、自己グリカンを非自己グリカンから識別する先天性パターン認識受容体を進化させてきた。Ｃ型レクチンが病原性糖に結合することにより、病原体の排除をもたらす先天免疫及び適応免疫の両事象が誘発されるが、しかし、この相互作用はまた、病原性の増強に利用される可能性もある。
【0020】
骨髄細胞、樹状細胞及びマクロファージ細胞特異的Ｃ型レクチン受容体ＣＤ２０９（ＤＣ－ＳＩＧＮとしても公知である）（Ｚｅｌｅｎｓｋｙ及びＧｒｅａｄｙ、２００５年）は、ＺＩＫＶ（Ｐｅｒｅｒａ Ｌｅｃｏｉｎ、２０１３年、Ｏｓｏｒｉｏ及びＳｏｕｓａ ２０１１年）、インフルエンザ（Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ ２０１６年）、ＤＥＮＶ（Ｃｒｕｚ－Ｏｌｉｖｅｉｒａ、２０１５年）、ＷＮＶ（Ｄａｖｉｓ ２００６年）、エボラ（Ａｌｖａｒｅｚ ２００２年）、エンテロウイルス（ＲＥＮ ２０１４年）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｔａｉｌｌｅｕｘ ２００３年）及びマイコバクテリウム・レプレ（Ｂａｒｒｅｉｒｏ ２００６年）、並びにＳＡＲＳ－ＣＯＶ２／ＣＯＶＩＤ１９（Ａｍｒａｅｉ ２０２０年、Ｃａｉ ２０２０年、Ｊｅｆｆｅｒｓ ２００４年）の侵入に対する重要な宿主細胞受容体である。原虫媒介性の疾患であるレシュマニア症及びマラリアは、宿主侵入にＣＤ２０９を利用する非ウイルス性病原体である（Ｃｏｌｍｅｎａｒｅｓ ２００２年、Ｍｏｒｅｎｉｋｅｊｉ ２０２０年）。ＣＤ２０９は、ウイルスシグネチャー又は「病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）」を含む、マンナン（高マンノースＮ結合型オリゴ糖）部分及びフカン部分の両方に結合する。この結合は、「Ｃ型炭水化物認識ドメイン」又は「Ｃ型レクチンドメイン（ＣＴＬＤ）」として公知になった独自の構造フォールドを持つコンパクトなタンパク質領域内で起こる（Ｗｅｉｓ及びＤｒｉｃｋ－Ａｍｅｒ、１９９６年）。
【0021】
現在、世界的流行のＣＯＶＩＤ－１９についての治療法はなく、ＦＤＡは、抗ウイルス薬レムデシビルの緊急使用許可を与えてはいるが、Ｃｏｖｉｄ－１９に対する有効性は大規模な無作為臨床試験においてはまだ実証されていない。初期前臨床開発におけるアプローチのうち、宿主細胞へのウイルス付着を遮断するＡＣＥ２デコイタンパク質、及び人工呼吸器を使用している患者であるが初期段階の症状のない患者の炎症を軽減するデキサメタゾンの適応外使用がある。したがって、ＣＯＶＩＤ－１９及び関連症状を処置及び緩和するための有効かつ安全な手段のための緊急のニーズがある。そのため、特定の処置から効果を得ることができる患者を正確に選択できる診断薬のための緊急のニーズがある。
【0022】
ＴＩＭ１治療標的としてのホスファチジルセリン（ＰＳ）脂質
いくつかのウイルスの外側のウイルス膜層は、リン脂質のホスファチジルセリン（ＰＳ）が豊富であるが、宿主細胞膜においては、ＰＳは、通常、内膜層に限定されている。
いくつかのウイルスの外側のウイルス膜層は、リン脂質のホスファチジルセリン（ＰＳ）が豊富であるが、宿主細胞膜においては、ＰＳは、通常、内膜層に限定されている。
【0023】
Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン１（ＴＩＭ－１）ヒト膜受容体は、Ｔ細胞活性化のための強力な共刺激分子として機能する。
【0024】
ＴＩＭ１（ＨＡＶＣＲ１としても公知である）はＩ型膜貫通糖タンパク質であり、Ｎ末端免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）様ドメインとそれに続くグリコシル化ムチンドメインで構成される細胞外ドメイン、単一膜貫通ドメイン、及びチロシンリン酸化モチーフを持つ短い細胞質尾部を含有する。ＴＩＭ１のＩｇＶドメインは、保存されたＰＳ結合部位を含有することが予測されている（Ｓａｎｔｉａｇｏら、２００７年）。
【0025】
ＴＩＭ－１は、脳、消化管、肝臓及び胆嚢、腎臓、精巣、並びにリンパ組織における２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）細胞で優先的に発現される。Ｆｒｅｅｍａｎ ２０１０年によれば、ＴＩＭ－１は、死にかけているアポトーシス細胞において高い特異性で露出したＰＳを認識して付着し、免疫系による食作用を誘発する（Ｆｒｅｅｍａｎ ２０１０年）。ＴＩＭ－１は、ＩｇＶドメイン内の金属イオン依存性リガンド結合部位（ＭＩＬＩＢＳ）を介してＰＳに結合することにより、アポトーシスクリアランスを促進する。
【0026】
また、ＴＩＭ１は、ジカ（Ｌｅｅ ２０１８年）、エボラ（Ｂｒｕｎｔｏｎ ２０１９年）、デング（Ｃｈｕ ２０１９年、Ａｍａｒａ ２０１５年）、西ナイル（Ｒｉｃｈａｒｄ ２０１５年）、Ａ型肝炎、及びおそらくはマラリア（Ｎｕｃｈｎｏｉ ２０２０年）を含む、非常に多様なウイルスの侵入因子であることも明らかにされている（Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ、２０１３年）。
【0027】
これらの研究は、ＴＩＭ－１が、糖タンパク質とは無関係に、ウイルスエンベロープのＰＳと直接相互作用することによって様々なエンベロープウイルスに共通の付着因子として機能することを示唆している。
【0028】
ＴＩＭ１は最も周知のＰＳ受容体であるが、ＴＡＭファミリーのタンパク質のＴｙｒｏ３、Ａｘｌ及びＭｅｒなどの他のＰＳ受容体も、少ないが記載されている。
【0029】
ウイルスタンパク質のための受容体としてのＴＩＭ－１
Ａｎｇｉａｒｉら ２０１４年によれば、ＴＩＭ－１は、ＴＩＭ－１ムチン及びＩｇＶドメインを介したＰ－セレクチンタンパク質への結合によりＴ細胞接着を制御することによって、自己免疫疾患及び炎症性疾患の発症において役割を果たしている（Ａｎｇｉａｒｉ ２０１４年）。
Ａｎｇｉａｒｉら ２０１４年によれば、ＴＩＭ－１は、ＴＩＭ－１ムチン及びＩｇＶドメインを介したＰ－セレクチンタンパク質への結合によりＴ細胞接着を制御することによって、自己免疫疾患及び炎症性疾患の発症において役割を果たしている（Ａｎｇｉａｒｉ ２０１４年）。
【0030】
Ｋｕｒｏｄａら ２０１５年は、ＴＩＭ－１とニーマン・ピック病Ｃ１タンパク質（ＮＰＣ１）の間の相互作用を阻害するＴＩＭ－１特異的モノクローナル抗体を用いて処置すると、フィロウイルス感染及びＧＰ媒介性膜融合が顕著に抑制されることを報告した。この研究は、ＴＩＭ－１がウイルス膜融合にも関係し得ることを示唆している。
【0031】
Ｙｕａｎら ２０１５年によれば、ヒトＴＩＭ－１はＥＢＯＶ糖タンパク質（ＧＰ）に直接結合し、著者らは、ｈＴＩＭ－１とｈＴＩＭ－４のＩｇＶドメインの結晶構造及び結合領域を決定した。
【0032】
Ｋｏｎｄｒａｔｏｗｉｃｚａら ２０１０年によれば、気管、角膜、及び結膜の宿主上皮細胞上のＴＩＭ－１は、ザイールエボラウイルス（ＥＢＯＶ）糖タンパク質の受容体結合ドメインに直接結合し、空気感染及び手から目への感染を増強する。この相互作用を抗体で遮断すると、結合及びエボラ感染が抑制された。
【0033】
したがって、ＴＩＭ－１は、ウイルス感染において、タンパク質依存性機能とタンパク質非依存性機能の両方を有し得る。
【0034】
治療戦略としてのフーリンプロテアーゼ阻害
フーリン切断部位は、中でもジカ、デング、ＣＯＶＩＤ－１９（Ｃｏｕｔａｒｄ ２０２０年）、エボラ、ＨＩＶ、及びＢ型肝炎ウイルスの侵入タンパク質に存在する（Ｂｒａｕｎ ２０１９年）。
フーリン切断部位は、中でもジカ、デング、ＣＯＶＩＤ－１９（Ｃｏｕｔａｒｄ ２０２０年）、エボラ、ＨＩＶ、及びＢ型肝炎ウイルスの侵入タンパク質に存在する（Ｂｒａｕｎ ２０１９年）。
【0035】
配列番号８１を含むデカノイル－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋ）及びヘキサ－Ｄ－アルギニン（Ｄ６Ｒ）は、インビトロでのウイルス感染性の低下を示すために使用されてきた小型の合成フーリン阻害剤である（Ｏｗｃｚａｒｅｋ、２０１９年、Ｉｍｒａｎ ２０１９年、Ｒｅｍａｃｌｅ ２０１０年、Ｃｏｕｔｕｒｅ ２０１５年）。ＣＭＫは、Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）前駆体の成熟ＨＢｅＡｇへのフーリン媒介性プロセシングを阻害することにより、肝炎複製の減少においてＤ６Ｒよりも効果的である。Ｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋは、すべてのプロタンパク質転換酵素（ＰＣ１、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＡＣＥ４、ＰＣ５、ＰＣ７、及びフーリン）の小型で合成の不可逆的及び細胞透過性競合阻害剤である。ＣＭＫは、ウイルス糖タンパク質のフーリン媒介性切断及び融合活性を阻害すると報告されており、ヒト免疫不全ウイルス、チクングニアウイルス、慢性Ｂ型肝炎ウイルス、インフルエンザＡ型、エボラウイルス感染、及びパピローマウイルスを含む様々なウイルスに対する抗ウイルス剤として作用する。Ｓｍｉｔｈら及びＳｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒらはまた、ｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋのＣ末端を脱炭酸アルギニン模倣物で修飾することによってペプチド模倣型フーリン阻害剤の特許を取得し、非常に強力なフーリン阻害剤をもたらした（Ｃｏｕｔｕｒｅ ２０１５年）。
【0036】
広範囲のフーリン／プロタンパク質阻害剤は、フーリンノックアウトマウスによって明らかなように、プロタンパク質転換酵素が非常に冗長であることから、宿主における最小限のオフ・病原体、オン・ターゲット効果を有すると考えられる。
【0037】
ＣＭＫは非細胞毒性濃度で抗フラビウイルス活性を有することが明らかとなっている（Ｉｍｒａｎ ２０１９年）。
【0038】
ジカウイルスは、３つの構造タンパク質（キャプシド－ｐＣ、エンベロープ－ｐＥ、及び膜－ｐｒＭ）、並びに７つの非構造（ＮＳ）タンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、及びＮＳ５）を含む。ジカウイルス複製は、クラスリン媒介性ｐＨ依存性エンドサイトーシスを介した内在化とリソソームコンパートメントでのウイルスタンパク質の成熟後に、寛容な宿主細胞において起こる（Ｏｗｃｚａｒｅｋ、２０１９年）。リソソームにおいて、フーリン又はフーリン様プロテアーゼは、ウイルス表面糖タンパク質ｐｒＭを活性型に切断し、ウイルス膜を不安定化し、ミトコンドリア及び小胞体で複製するためのウイルスＲＮＡの放出を促進する。
【0039】
臨床開発中の治験薬はあるが、ＺＩＫＶに対するワクチンはない。
【0040】
フーリン阻害により、未成熟ビリオンが後期コンパートメントに輸送され、そこでタンパク質分解を受けることが明らかになっている。分解生成物は、ゆっくりと再循環する小胞を介して細胞から排出される（Ｏｗｃｚａｒｅｋ、２０１９年）。
【0041】
ＺＩＫＶと同様に、ウイルスＥタンパク質と細胞受容体とのＤＥＮＶ結合により、ウイルス粒子は、クラトリン媒介性エンドサイトーシス経路を介して許容細胞内に内在化される。ウイルスＲＮＡゲノムを放出するために、ＤＥＮＶビリオンは、酸誘導型の構造変化と膜融合を受ける。小胞体（ＥＲ）近くで生成された、新たに合成されたウイルスタンパク質は、ウイルスＲＮＡゲノムの複製、膜再編成の誘導、及び新しいウイルス粒子のアセンブリを促進する。ＤＥＮＶ複製のプロセスを促進するために、ＤＥＮＶは、様々な細胞成分と相互作用するだけでなく、オートファジーなどの様々な宿主応答も誘発する。
【0042】
Ｔ細胞媒介療法
ＣＤ３はタンパク質複合体であり、Ｔ細胞の活性化に関与するＴ細胞共受容体である。ＣＤ３は血液、骨髄、リンパ系組織のＴ細胞で選択的に発現されるが、他の正常組織では発現されず、チンパンジーを除く他の動物との交差反応はない。近年、ヒトＣＤ３トランスジェニックマウスが作製され、抗ＣＤ３免疫療法の研究が容易になった。
ＣＤ３はタンパク質複合体であり、Ｔ細胞の活性化に関与するＴ細胞共受容体である。ＣＤ３は血液、骨髄、リンパ系組織のＴ細胞で選択的に発現されるが、他の正常組織では発現されず、チンパンジーを除く他の動物との交差反応はない。近年、ヒトＣＤ３トランスジェニックマウスが作製され、抗ＣＤ３免疫療法の研究が容易になった。
【0043】
ムロモマブ－ＣＤ３（Ｊａｎｓｓｅｎ、オルソクローン、ＯＫＴ３）などの抗ＣＤ３ベースの治療は、反応性Ｔ細胞を遮断し、潰瘍性大腸炎及びメタボリックシンドロームを回復させることについて、ヒトにおいて全身的及び経口的な両面で広く研究されている（ｄａ Ｃｕｎｈａ ２０１１年、Ｉｌａｎ ２０１０－ＮＣＴ０１２８７１９５、ＮＣＴ０１２０５０８７）。ブリナツモマブ及びカツマキソマブなどの、腫瘍を橋渡ししてＴ細胞に関与する抗ＣＤ３二重特異性抗体プラットフォームは、がんの処置に対して承認されており、いくつかの他のＣＤ３二重特異性が臨床開発中である（Ｓｕｕｒｓ、２０１９年）。
【課題を解決するための手段】
【0044】
一態様によれば、本発明は、Ｉｇ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、例えばアルブミン、並びに
ａ．ホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質若しくは抗体断片、及び／又は
ｂ．微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質
を含む融合構築物に関する。
ａ．ホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質若しくは抗体断片、及び／又は
ｂ．微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質
を含む融合構築物に関する。
【0045】
ＰＡＭＰは、宿主自然免疫系により認識される、微生物病原体によって生成されるが宿主生物によって生成されない病原体関連分子パターン：保存された分子構造を指す。
【0046】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物に関する。
【0047】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣの増強を提供する、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣの増強を提供する、
融合構築物に関する。
【0048】
ＡＤＣＣは、抗体依存性細胞傷害として定義することができる。ＡＤＣＰは、抗体依存性細胞食作用として定義することができる。ＣＤＣは、補体依存性細胞毒性として定義することができる。
【0049】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域を追加的に含む、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域を追加的に含む、
融合構築物に関する。
【0050】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
フーリン阻害剤をさらに含む、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
フーリン阻害剤をさらに含む、
融合構築物に関する。
【0051】
好ましくは、フーリン阻害剤は、クロロメチルケトン及びＤ－アルギニン誘導体、例えば、ヘキサ－Ｄ－アルギニン及びｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋ（配列番号８１を含む）から選択される。
【0052】
リンカー及びスペーサーはフーリンにコンジュゲートすることができ、表７を参照されたい。
【0053】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ３構築物である融合構築物であって、ＩｇＧ３構築物がヒンジ領域を含み、ヒンジ領域が改変されている、融合構築物に関する。
【0054】
別の態様によれば、本発明は、ＩｇＧ３の定常領域及びヒンジを含む融合構築物、融合タンパク質又は抗体であって、ヒンジが、好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ４ヒンジから選択される、融合構築物、融合タンパク質又は抗体に関する。
【0055】
別の態様によれば、本発明は、ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ホモ二量体であって、ヒンジ領域が配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ホモ二量体に関する。
【0056】
別の態様によれば、本発明は、ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ヘテロ二量体であって、ヒンジ領域が配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ヘテロ二量体に関する。
【0057】
別の態様によれば、本発明は、４０５位及び／又は４０９位に変異を含む、ＩｇＧ３に関する。別の態様によれば、本発明は、ＣＨ２及び／又はＣＨ４ドメインの電荷対を変化させることによって得ることができるＩｇＭヘテロ二量体に関する。
【0058】
別の態様によれば、本発明は、表８の変異のうちの１つ以上を含む、ＩｇＭヘテロ二量体に関する。
【0059】
別の態様によれば、本発明は、本発明に記載のＩｇＧ３ホモ二量体、ＩｇＧ３ヘテロ二量体及び／又はＩｇＭヘテロ二量体を含む、融合構築物に関する。
【0060】
別の態様によれば、本発明は、感染症を処置するための本発明に記載の融合構築物の使用に関する。
【0061】
別の態様によれば、本発明は、感染症がウイルス感染症、細菌感染症、原虫感染症から選択される、使用に関する。
【0062】
別の態様によれば、本発明は、処置が皮下、皮内、筋肉内、経口及び経鼻から選択される投与形態での融合構築物の投与を含む、使用に関する。
【0063】
別の態様によれば、本発明は、ペイロード送達のためのＩｇＧ４又はＩｇＧ４の一部の使用であって、ＩｇＧ４がＦｃを含まないように改変されている、又はＩｇＧ４のＦｃの活性が１つ以上の変異により無効化若しくは低減されている、使用に関する。
【0064】
別の態様によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物を含むワクチンに関する。
【0065】
別の態様によれば、本発明は、マンナン、高マンノース含有構造、フカン及び／又はリン脂質ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含むワクチンに関する。
【0066】
別の態様によれば、本発明は、希釈剤、結合剤又は担体などの１つ以上の賦形剤を任意選択的に含む、本発明に記載の融合構築物を含む組成物に関する。
【0067】
別の態様によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物及び／又はワクチン及び／又は組成物を投与するステップを含む、対象における感染症を処置及び／又は予防する方法に関する。
【0068】
別の態様によれば、本発明は、対象における疾患の進行をスクリーニング及び／又はモニタリングする方法であって、下記の
ｉ．対象由来の血液試料を提供するステップ、
ｉｉ．血液試料を、本発明に記載の融合構築物と接触させるステップ
を含む、方法に関する。
ｉ．対象由来の血液試料を提供するステップ、
ｉｉ．血液試料を、本発明に記載の融合構築物と接触させるステップ
を含む、方法に関する。
【0069】
別の態様によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物をコードする単離された核酸分子に関する。
【0070】
別の態様によれば、本発明は、本発明の核酸分子を含む組換えベクターに関する。
【0071】
別の態様によれば、本発明は、本発明の組換えベクターを含む宿主細胞に関する。
【0072】
別の態様によれば、本発明は、
融合構築物の発現を可能にする条件下の培養培地中で本発明に記載の宿主細胞を培養するステップ、及び
融合構築物を培養培地から単離するステップ
を含む、本発明に記載の融合構築物を生成する方法に関する。
融合構築物の発現を可能にする条件下の培養培地中で本発明に記載の宿主細胞を培養するステップ、及び
融合構築物を培養培地から単離するステップ
を含む、本発明に記載の融合構築物を生成する方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【0073】
詳細な開示
一実施形態によれば、本発明は、Ｉｇ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、例えばアルブミン、並びに
ａ．ホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質若しくは抗体断片、及び／又は
ｂ．微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質
を含む融合構築物に関する。
一実施形態によれば、本発明は、Ｉｇ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、例えばアルブミン、並びに
ａ．ホスファチジルセリンに結合するペプチド、タンパク質若しくは抗体断片、及び／又は
ｂ．微生物によって発現されるＰＡＭＰに結合及び／又はＰＡＭＰを認識するペプチド又はタンパク質
を含む融合構築物に関する。
【0074】
ＰＡＭＰは、宿主自然免疫系により認識される、微生物病原体によって生成されるが宿主生物によって生成されない病原体関連分子パターン：保存された分子構造を指す。
【0075】
「タンパク質足場」という用語は、上記ａ．及びｂ．で定義された活性エレメントが結合され得るタンパク質構造を意味する。タンパク質足場は、好ましくは血漿中に可溶性であるべきであり、好ましくは血漿中に長い滞留時間を有するべきであり、これは典型的には、完全融合タンパク質が腎クリアランス限界を超えるサイズ、例えば６０ｋＤａを超えるサイズを有する場合に、又は活性保持システムの影響下にあるタンパク質足場、例えば、ＦｃＲｎ受容体を介して血漿に結合しリサイクルされるタンパク質を選択することによって提供され得る。適切なタンパク質足場の例としては、血漿タンパク質又はその断片、例えば、免疫グロブリンの定常領域、アルブミン、アルブミンドメインＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ、トランスフェリン及びラクトフェリンなどが挙げられる。
【0076】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物に関する。
【0077】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．ヒトＴＩＭ１断片の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
ａ．ヒトＴＩＭ１断片の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
【0078】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．１つ以上のヒトＴＩＭ１断片由来の２つ以上の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．１つ以上のヒトＣＤ２０９断片由来の２つ以上の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
ａ．１つ以上のヒトＴＩＭ１断片由来の２つ以上の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び／又は
ｂ．１つ以上のヒトＣＤ２０９断片由来の２つ以上の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
【0079】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ヒトＴＩＭ１断片の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び
ｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
ａ．ヒトＴＩＭ１断片の組換えＩｇ様Ｖ型ドメイン、及び
ｂ．ヒトＣＤ２０９断片の組換えＣ型レクチンドメイン
を含む融合構築物に関する。
【0080】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣの増強を提供する、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣの増強を提供する、
融合構築物に関する。
【0081】
ＡＤＣＣは、抗体依存性細胞傷害として定義することができる。ＡＤＣＰは、抗体依存性細胞食作用として定義することができる。ＣＤＣは、補体依存性細胞毒性として定義することができる。
【0082】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域を追加的に含む、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域を追加的に含む、
融合構築物に関する。
【0083】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－Ｆｃドメイン又は他のタンパク質足場、並びに
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
フーリン阻害剤をさらに含む、
融合構築物に関する。
ａ．組換えヒトＴＩＭ１断片、及び／又は
ｂ．組換えヒトＣＤ２０９断片
を含む融合構築物であって、
フーリン阻害剤をさらに含む、
融合構築物に関する。
【0084】
好ましくは、フーリン阻害剤は、クロロメチルケトン及びＤ－アルギニン誘導体、例えば、ヘキサ－Ｄ－アルギニン及びｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋ（配列番号８１を含む）から選択される。
【0085】
リンカー及びスペーサーはフーリンにコンジュゲートすることができ、表７を参照されたい。
【0086】
一実施形態によれば、本発明は、ペプチド、タンパク質又は抗体断片が免疫細胞に結合及び／又は免疫細胞を刺激することができる、融合構築物に関する。
【0087】
一実施形態によれば、本発明は、ＴＩＭ１断片が、４０～２００アミノ酸残基、５０～１８０アミノ酸残基、６０～１６０アミノ酸残基、７０～１４０アミノ酸残基、８０～１３０アミノ酸残基、９０～１２０アミノ酸残基、１００～１２０アミノ酸残基及び１００～１１０アミノ酸残基からなる群から選択される配列長を有する、融合構築物に関する。
【0088】
一実施形態によれば、本発明は、ＣＤ２０９断片が、４０～２００アミノ酸残基、４０～１９０アミノ酸残基、５０～１８０アミノ酸残基、６０～１７０アミノ酸残基酸残基、７０～１６０アミノ酸残基、８０～１５０アミノ酸残基、９０～１５０アミノ酸残基、１００～１５０アミノ酸残基、１１０～１５０アミノ酸残基、１２０～１５０アミノ酸残基及び１３０～１４０アミノ酸残基からなる群から選択される配列長を有する、融合構築物に関する。
【0089】
一実施形態によれば、本発明は、ＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９断片が、野生型ＴＩＭ１又はＣＤ２０９と少なくとも７０％、又は７５％、又は８０％、又は８５％、又は９０％、又は９５％の配列相同性を有する、融合構築物に関する。
【0090】
一実施形態によれば、本発明は、ＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９断片がインタクトなＴＩＭ１及び／又はＣＤ２０９機能を有する、融合構築物に関する。
【0091】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ－ＦｃドメインがＩｇＧ３－Ｆｃドメインである、融合構築物に関する。
【0092】
一実施形態によれば、本発明は、以下の
ａ）ヒンジ配列が好ましくはＩｇＧ４ヒンジ配列で置き換えられている、ＩｇＧ３；
ｂ）配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域；及び／又は
ｃ）フーリン阻害剤
のうちの少なくとも１つを追加的に含む、融合構築物に関する。
ａ）ヒンジ配列が好ましくはＩｇＧ４ヒンジ配列で置き換えられている、ＩｇＧ３；
ｂ）配列番号５４～５９に記載のＣＤＲ領域；及び／又は
ｃ）フーリン阻害剤
のうちの少なくとも１つを追加的に含む、融合構築物に関する。
【0093】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号１及び／又は配列番号２に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0094】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号３及び／又は配列番号４に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0095】
一実施形態によれば、本発明は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のジスルフィド結合を含む、融合構築物に関する。
【0096】
一実施形態によれば、本発明は、融合構築物が標的に結合することができ、標的がマンナン、高マンノース含有構造、フカン、リン脂質ホスファチジルセリン及び／又はＣＤ３である、融合構築物に関する。
【0097】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．配列番号１に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらからなるタンパク質断片、及び
ｂ．配列番号３に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらからなるタンパク質断片
を含む、融合構築物に関する。
ａ．配列番号１に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらからなるタンパク質断片、及び
ｂ．配列番号３に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらからなるタンパク質断片
を含む、融合構築物に関する。
【0098】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに、
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１若しくは配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに、
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0099】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号９、配列番号４３に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0100】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１１、配列番号４５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１３、配列番号４７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１１、配列番号４５に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１３、配列番号４７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0101】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0102】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３及び／又は配列番号４による配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３及び／又は配列番号４による配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0103】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0104】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｖ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号１６、１７、６７に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｖ．配列番号１８～３５から選択される配列のいずれかに記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖｉ．好ましくは配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉｉ．配列番号１４、１５、６６に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0105】
一実施形態によれば、本発明は、リンカーを含む融合構築物に関する。
【0106】
一実施形態によれば、本発明は、リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号４１）、（ＧＧＧＧＳ）４リンカー（配列番号７０）、（ＧＧＧＧＳ）５リンカー（配列番号７１）及び（ＧＧＧＧＳ）６リンカー（配列番号７２）から選択される、融合構築物に関する。
【0107】
（ＧＧＧＧＳ）リンカーは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー（配列番号６９）として定義することができる。
【0108】
一実施形態によれば、本発明は、少なくとも１個の遊離システイン残基、少なくとも２個の遊離システイン残基、少なくとも３個の遊離システイン残基、少なくとも４個の遊離システイン残基、少なくとも５個の遊離システイン残基、好ましくは少なくとも６個の遊離システイン残基を含む、融合構築物に関する。
【0109】
一実施形態によれば、本発明は、遊離システインが、薬物及び／又はペイロードとの相互作用を可能にする、融合構築物に関する。
【0110】
一実施形態によれば、本発明は、ペイロードがフーリン阻害剤である、融合構築物に関する。
【0111】
一実施形態によれば、本発明は、Ａ３３９Ｃ変異、Ｓ３３７Ｃ変異、及び／又はＫ３４０Ｃ変異を含む、融合構築物に関する。
【0112】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号３６、３７、配列番号３８、３９、４０、４２、４４、又は４６の配列のいずれかから選択される配列を含む、融合構築物に関する。
【0113】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である、融合構築物に関する。
【0114】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、又はＩｇＥである、融合構築物に関する。
【0115】
一実施形態によれば、本発明は、ｎｕｌｌ ｆｃを含む、融合構築物に関する。
【0116】
一実施形態によれば、本発明は、ｎｕｌｌ ｆｃが、２３４位でのＡｌａ置換及び／又は２３５でのＡｌａ置換、及び／又はＮ２９７Ａ変異、及び／又はＫ３２２Ａ変異を含む、融合構築物に関する。
【0117】
一実施形態によれば、本発明は、ヘテロ二量体化ドメインを含む、融合構築物に関する。
【0118】
一実施形態によれば、本発明は、ヘテロ二量体化ドメインが配列番号４８、４９、又は５０に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0119】
一実施形態によれば、本発明は、ヘテロ二量体化変異を含む、融合構築物に関する。
【0120】
一実施形態によれば、本発明は、ヘテロ二量体化変異がＦ４０５Ｌ及び／又はＫ４０９Ｒ変異である、融合構築物に関する。
【0121】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0122】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0123】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号４０に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号３８に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、並びに
ｂ．ｉｉｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｖ．配列番号４０に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0124】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｖ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｖ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0125】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖；
ｂ．ｉｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第１の鎖；
ｂ．ｉｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列、又はこの配列と少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0126】
一実施形態によれば、本発明は、
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｉｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
ａ．ｉ．配列番号１、配列番号２に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｉｉ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｉｉｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第１の鎖、
ｂ．ｉｖ．配列番号３、配列番号４に記載の配列、又はこれらの配列の１つと少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する配列、及び
ｖ．配列番号４１に記載のリンカー配列、及び
ｖｉ．配列番号６５に記載の配列であって、配列番号６５が表８の変異のうちの１つ以上を含む配列
を含む第２の鎖
を含む、融合構築物に関する。
【0127】
一実施形態によれば、本発明は、融合構築物の薬物及び／又はペイロードに対する比が１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０から選択される、融合構築物に関する。
【0128】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号５１に記載のカッパ軽鎖、又は配列番号５２若しくは５３に記載のラムダ軽鎖を含む、融合構築物に関する。
【0129】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ３構築物である融合構築物であって、ＩｇＧ３構築物がヒンジ領域を含み、ヒンジ領域が改変されている、融合構築物に関する。
【0130】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域が、配列番号６又は配列番号８に記載の配列と合計で少なくとも１０％の同一性、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、融合構築物に関する。
【0131】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号５、７、９、１０、１１、１２及び／又は１３に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0132】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域が、少なくとも１個の遊離システイン残基、少なくとも２個の遊離システイン残基、好ましくは少なくとも３個の遊離システイン残基を含む、融合構築物に関する。
【0133】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域がＳ２２８Ｐ変異を含む、融合構築物に関する。
【0134】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域が、配列番号６及び／又は配列番号８及び／又は配列番号６８に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0135】
一実施形態によれば、本発明は、ホスファチジルセリンを検出するために使用される、融合構築物に関する。
【0136】
一実施形態によれば、本発明は、対象の血液中のホスファチジルセリンを検出するために使用される、融合構築物に関する。
【0137】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号１に記載の配列、及び／又は配列番号２に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0138】
一実施形態によれば、本発明は、マンナン又はフカン部分に結合するＣ型レクチンを検出するために使用される、融合構築物に関する。
【0139】
一実施形態によれば、本発明は、対象の血液中のマンナン又はフカン部分に結合するＣ型レクチンを検出するために使用される、融合構築物に関する。
【0140】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号３に記載の配列及び／又は配列番号４に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0141】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ３の定常領域及びヒンジを含む融合構築物、融合タンパク質又は抗体であって、ヒンジが、好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ４ヒンジから選択される、融合構築物、融合タンパク質又は抗体に関する。
【0142】
一実施形態によれば、本発明は、１つ以上のヘテロ二量体化変異を含む、融合構築物、融合タンパク質又は抗体に関する。
【0143】
一実施形態によれば、本発明は、４０５位及び／又は４０９位（ＥＵナンバリング）が関与するヘテロ二量体化変異を含む、融合構築物、融合タンパク質又は抗体に関する。
【0144】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ホモ二量体であって、ヒンジ領域が配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ホモ二量体に関する。
【0145】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域を含むＩｇＧ３ヘテロ二量体であって、ヒンジ領域が配列番号６、８及び６８から選択される配列を含む、ＩｇＧ３ヘテロ二量体に関する。
【0146】
一実施形態によれば、本発明は、４０５位及び／又は４０９位に変異を含む、ＩｇＧ３に関する。
【0147】
一実施形態によれば、本発明は、ＣＨ２及び／又はＣＨ４ドメインの電荷対を変化させることによって得ることができるＩｇＭヘテロ二量体に関する。
【0148】
一実施形態によれば、本発明は、表８の変異のうちの１つ以上を含む、ＩｇＭヘテロ二量体に関する。
【0149】
一実施形態によれば、本発明は、配列番号６４及び／又は６５に記載の配列を含む、ＩｇＭに関する。
【0150】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載のＩｇＧ３ホモ二量体、ＩｇＧ３ヘテロ二量体及び／又はＩｇＭヘテロ二量体を含む、融合構築物に関する。
【0151】
一実施形態によれば、本発明は、感染症の処置において使用するためのものである、融合構築物に関する。
【0152】
一実施形態によれば、本発明は、感染症がウイルス、寄生虫、細菌、真菌又は原虫によって引き起こされる感染症である、融合構築物に関する。
【0153】
一実施形態によれば、本発明は、ウイルスが、アルボウイルス、ジカウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１、チクングニアウイルス、エンテロウイルス、及びコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣＯＶから選択される、融合構築物に関する。
【0154】
一実施形態によれば、本発明は、細菌がマイコバクテリウム・ツベルクローシス及びマイコプラズマ・レプレから選択される、融合構築物に関する。
【0155】
一実施形態によれば、本発明は、寄生虫がリーシュマニア及びマラリアから選択される、融合構築物に関する。
【0156】
一実施形態によれば、本発明は、感染症の処置のための本発明に記載の融合構築物の使用に関する。
【0157】
一実施形態によれば、本発明は、感染症がウイルス、細菌及び原虫感染症から選択される、使用に関する。
【0158】
一実施形態によれば、本発明は、処置が皮下、皮内、筋肉内、経口及び経鼻から選択される投与形態での融合構築物の投与を含む、使用に関する。
【0159】
一実施形態によれば、本発明は、ペイロード送達のためのＩｇＧ４又はＩｇＧ４の一部の使用であって、ＩｇＧ４がＦｃを含まないように改変されている、又はＩｇＧ４のＦｃの活性が１つ以上の変異により無効化若しくは低減されている、使用に関する。
【0160】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ４が１つ以上のヘテロ二量体化変異を含む、使用に関する。
【0161】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ４が１つ以上のＣｙｓ変異を含み、好ましくはそれにより部位特異的コンジュゲーションが可能になる、使用に関する。
【0162】
一実施形態によれば、本発明は、ＩｇＧ４が３３９位（ＥＵナンバリング）にＣｙｓを含む、使用に関する。
【0163】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物を含むワクチンに関する。
【0164】
一実施形態によれば、本発明は、マンナン、高マンノース含有構造、フカン及び／又はリン脂質ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含むワクチンに関する。
【0165】
一実施形態によれば、本発明は、免疫応答を増強するためのβ－グルカンアジュバントをさらに含むワクチンに関する。
【0166】
一実施形態によれば、本発明は、感染症の予防及び／又は処置のためのワクチンに関する。
【0167】
一実施形態によれば、本発明は、感染症がウイルス、寄生虫、細菌、真菌又は原虫によって引き起こされる、ワクチンに関する。
【0168】
一実施形態によれば、本発明は、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、経口投与及び／又は経鼻投与から選択される経路を介した投与を可能にする、融合構築物及び／又はワクチンに関する。
【0169】
一実施形態によれば、本発明は、希釈剤、結合剤又は担体などの１つ以上の賦形剤を任意選択的に含む、本発明に記載の融合構築物を含む組成物に関する。
【0170】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物及び／又はワクチン及び／又は組成物を投与するステップを含む、対象における感染症を処置及び／又は予防する方法に関する。
【0171】
一実施形態によれば、本発明は、対象における疾患の進行をスクリーニング及び／又はモニタリングする方法であって、下記の
ｉ．対象由来の血液試料を提供するステップ、
ｉｉ．血液試料を、本発明に記載の融合構築物と接触させるステップ
を含む、方法に関する。
ｉ．対象由来の血液試料を提供するステップ、
ｉｉ．血液試料を、本発明に記載の融合構築物と接触させるステップ
を含む、方法に関する。
【0172】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載の融合構築物をコードする単離された核酸分子に関する。
【0173】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載の核酸分子を含む組換えベクターに関する。
【0174】
一実施形態によれば、本発明は、本発明に記載の組換えベクターを含む宿主細胞に関する。
【0175】
一実施形態によれば、本発明は、融合構築物の発現を可能にする条件下の培養培地中で本発明に記載の宿主細胞を培養するステップ、及び融合構築物を培養培地から単離するステップを含む、本発明に記載の融合構築物を生成する方法に関する。
【0176】
本発明の追加の実施形態を以下に説明する。
【0177】
一実施形態によれば、本発明は、ヒンジ領域を含む融合構築物であって、ヒンジ領域が以下に記載の配列のいずれかを含む、融合構築物に関する：
【0178】
【表1】
【0179】
一実施形態によれば、本発明は、残基４０５～４０９にＦｃヘテロ二量体化配列を含み、Ｆｃヘテロ二量体化配列が配列番号４８、４９又は５０に記載の配列を含む、融合構築物に関する。
【0180】
ＩｇＧ Ｆｃヘテロ二量体化配列（残基４０５～４０９）
【0181】
【表2】
【0182】
免疫グロブリンは、１つ以上のユニットから構成される糖タンパク質であり、それぞれが４つのポリペプチド鎖：２つの同一の重鎖（ＨＣ）及び２つの同一の軽鎖（ＬＣ）を含む。ポリペプチド鎖のアミノ末端は、アミノ酸組成にかなりの多様性を示し、相対的定常（Ｃ）領域と区別するために可変（Ｖ）領域と呼ばれる。各軽鎖は、１つの可変ドメインＶＬ、及び１つの定常ドメインＣＬから構成されている。重鎖は、可変ドメインＶＨ、並びに３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３から構成されている。重鎖及び軽鎖は、非共有結合の相互作用と共有結合の鎖間ジスルフィド結合の組合せによって一緒になって結合されており、左右対称の構造を形成している。Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の抗原結合部位を含む。各Ｉｇ単量体は、２つの抗原結合部位が含んでおり、二価であると言われている。
【0183】
Ｆａｂは、１つの完全なＬ鎖全体、並びに１つのＨ鎖のＶ及びＣＨ１部分を含む。Ｆａｂはさらに、ＶＨドメイン及びＶＬドメインから構成される可変断片（Ｆｖ）、並びにＣＬドメイン及びＣＨ１ドメインから構成される定常断片（Ｆｂ）に分けることができる。
【0184】
Ｈ鎖定常ドメインは、一般に、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ）として定義され、ＩｇＭ及びＩｇＥについては追加のドメイン（ＣＨ４）を含んで定義される。上述のように、ＣＨ１ドメインはＦ（ａｂ）領域内に位置しているが、残りのＣＨドメイン（ＣＨ２－ＣＨ３又はＣＨ２－ＣＨ４）はＦｃ断片を含む。このＦｃ断片は、免疫グロブリンのアイソタイプ及びサブクラスを定義する。
【0185】
ＣＨ３ドメイン：ＣＨ３ドメイン及びＣＨ３領域という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【0186】
ＣＨ１ドメイン：ＣＨ１ドメイン及びＣＨ１領域という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【0187】
ヒンジ領域：ヒンジ領域は、第１と第２のＣ領域ドメインの間の重鎖の領域であり、ジスルフィド結合によって結合されている。ヒンジ領域は、典型的には、１０～３０個のアミノ酸残基を含む。
【0188】
リンカー：リンカーは、ペプチドリンカー又は非ペプチドリンカーであり得る。ペプチドリンカーの例は、適切な回数を繰り返すことができる、５アミノ酸残基単位ＧＧＧＧＳ（配列番号７１）を含むＧｌｙ／Ｓｅｒペプチドリンカーである。リンカーは、天然に存在するリンカーあっても、合成的に生成されたリンカーであってもよい。リンカーは、分子内で自然に生じる場合もあれば、合成的に分子に付加されることもある。
【0189】
抗体断片：本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、例えば、抗体の抗原結合性又は可変領域などのインタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；トリアボディ；テトラボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。例えば、抗体断片には、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる単離された断片、「Ｆｖ」断片、軽鎖及び重鎖の可変領域がペプチドリンカーにより連結されている組換え単鎖ポリペプチド分子（「ＳｃＦｖタンパク質」、並びに超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニットが含まれる。多くの実施形態において、抗体断片は、親抗体と同じ抗原に結合する断片である親抗体の十分な配列を含む。一部の実施形態において、断片は、親抗体の親和性に匹敵する親和性で抗原に結合する、及び／又は抗原への結合に対して親抗体と競合する。抗体の抗原結合断片の例としては、限定するものではないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ｄｓＦｖダイアボディ、ｄＡｂ断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）領域が挙げられる。抗体の抗原結合性断片は、任意の手段によって生成され得る。例えば、抗体の抗原結合性断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的若しくは化学的に生成され、及び／又は部分的抗体配列をコードする遺伝子から組換え的に生成され得る。或いは、又は追加として、抗体の抗原性結合断片は、完全に又は部分的に、合成的に生成することができる。
【0190】
抗体の抗原結合性断片は、単鎖抗体断片を任意選択的に含み得る。或いは、又は追加として、抗体の抗原結合断片は、例えば、ジスルフィド結合によって一緒に連結された複数の鎖を含んでいてもよい。抗体の抗原結合性断片は、多分子複合体を任意選択的に含み得る。機能性抗体断片は、典型的には少なくとも約５０アミノ酸を含み、より典型的には少なくとも約２００アミノ酸を含む。
【0191】
抗体又はその断片：本明細書で使用される場合、「抗体又はその断片」とは、上記で定義された抗体又は抗体断片を指す。
【0192】
ヒト化抗体：ヒト化抗体は、ヒトにおいて自然に生成される抗体バリアントとの類似性を高めるようにタンパク質配列が改変された非ヒト種由来の抗体である。
【0193】
ＩＭＧＴ：ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍは、免疫遺伝学及び免疫情報学における国際的なリファレンスである。
【0194】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）：単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、当技術分野において広く知られており、使用されている。単鎖Ｆｖは、多くの場合、短いリンカーペプチドによって連結されている、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である（例えば、Ｂｅｎｎｙ Ｋ． Ｃ． Ｌｏ（編）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ－Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００４年、及びその中で引用されている参考文献を参照されたい）。
【図面の簡単な説明】
【0195】
【図1】ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣが増強されたＴＩＭ１及びＣＴＬＤ構築物を示す図である。
【図2】Ｔ細胞エンゲージャー活性を持つＴＩＭ１及びＣＴＬＤ構築物を示す図である。
【図3】フーリン阻害剤ペイロードを持つＴＩＭ１及びＣＴＬＤ構築物を示す図である。
【図4】ＩｇＭエフェクター機能を持つＴＩＭ１及びＣＴＬＤ構築物を示す図である。
【図5a】ＶＰ０１９のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を示す図である。
【図5b】ＶＰ０２０のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析を示す図である。
【図6a】ＶＰ０２５が４つの異なるピークから構成されることを示す図である。
【図6b】インタクト質量分析ピーク３からのフラクション３（ＶＰ０２５－Ｆ３）を示す図である。
【図6c】インタクト質量分析：ピーク４からのフラクション４（ＶＰ０２５－Ｆ４）を示す図である。
【図7a】ＳＥＣ－ＨＰＬＣによるＶＰ３００の概略図及び純度を示す図である。
【図7b】ＳＥＣ－ＨＰＬＣによるＶＰ３０１の概略図及び純度を示す図である。
【図8】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質（Ｄ６１４Ｇ）の結合を示す図である。
【図9】ＶＰ０２５－ＣＴのウイルスタンパク質への結合を示す図である。
【図10a】ＶＰ０１９、ＶＰ０２０（ヘテロ二量体混合物）のビオチン－ホスファチジルセリン及びウイルス抗原の選択群への結合曲線を示す図である。
【図10b】ＶＰ０２５－ＣＴ（ヘテロ二量体混合物）及びＶＰ０２５－Ｆ４（純度７８％のヘテロ二量体）のビオチン－ホスファチジルセリン及びウイルス抗原の選択群への結合曲線を示す図である。
【図11】ヘキサ－Ｄ－アルギニンリンカー化合物及びデカノイル－ＲＶＫＲ－ＣＭＫリンカー化合物の構造を示す図である。
【図12】デカノイル－ＲＶＫＲ－ＣＭＫリンカー化合物の反応スキームを示す図である。
【図13a】フーリン阻害剤ペイロードのＶＰ０２０へのコンジュゲーションが達成されたことを実証するマススペクトログラムを示す図である。
【図13b】フーリン阻害剤ペイロードのＶＰ０２０へのコンジュゲーションが達成されたことを実証するマススペクトログラムを示す図である。
【図14a】本発明の選択された融合タンパク質の中和アッセイを示す図である。詳細については、実施例１６を参照されたい。
【図14b】本発明の選択された融合タンパク質の中和アッセイを示す図である。詳細については、実施例１７を参照されたい。
【0196】
すべての引用された参考文献は、参照により組み込まれる。
【0197】
添付の図面及び実施例は、本発明を限定するものではなく、説明のために提供されている。本発明の態様、実施形態、特許請求の範囲、及び任意の項目が組み合わされ得ることは、当業者には明白である。
【0198】
特に記載のない限り、すべてのパーセンテージは重量／重量である。特に記載のない限り、すべての測定は、標準条件（室温及び気圧）下で実施される。特に記載のない限り、試験条件は、欧州薬局方８．０に従っている。
【実施例】
【0199】
［実施例１］ 組換えヒトＴＩＭ１断片の選択
構築物Ｖ－ＴＩＭ１－１を完全長ＴＩＭ－１配列（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９６Ｄ４２）の残基２１～１２５として選択し、Ｖ－ＴＩＭ１－２を残基２１～１２７として選択した。Ｖ－ＴＩＭ１－２は、Ｃ末端ドメイン境界に余分な２個のＰｒｏ残基を含む。
構築物Ｖ－ＴＩＭ１－１を完全長ＴＩＭ－１配列（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９６Ｄ４２）の残基２１～１２５として選択し、Ｖ－ＴＩＭ１－２を残基２１～１２７として選択した。Ｖ－ＴＩＭ１－２は、Ｃ末端ドメイン境界に余分な２個のＰｒｏ残基を含む。
【0200】
【表3】
【0201】
［実施例２］ ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＤ２０９）の組換えヒトＣ型レクチンドメイン（ＣＴＬＤ）断片の選択
構築物Ｖ－ＣＴＬＤ－１を完全長ＤＣ－ＳＩＧＮ配列（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＮＮＸ６）の残基２５０～３８５として選択し、Ｖ－ＣＴＬＤ－２を残基２５４～３８３として選択した。Ｖ－ＣＴＬＤ－１は４つの内部ジスルフィド結合を含むが、Ｖ－ＣＴＬＤ－２は３つの内部ジスルフィド結合を含む。
構築物Ｖ－ＣＴＬＤ－１を完全長ＤＣ－ＳＩＧＮ配列（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＮＮＸ６）の残基２５０～３８５として選択し、Ｖ－ＣＴＬＤ－２を残基２５４～３８３として選択した。Ｖ－ＣＴＬＤ－１は４つの内部ジスルフィド結合を含むが、Ｖ－ＣＴＬＤ－２は３つの内部ジスルフィド結合を含む。
【0202】
【表4】
【0203】
［実施例３］ ＩｇＧ３エフェクター機能を持つＴＩＭ－１及びＣＴＬＤ構築物の設計
すべてのヒトＩｇＧサブクラスの中で、ＩｇＧ３は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣの点で最も高いエフェクター機能を有する（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎ．ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１４．００５２０／ｆｕｌｌ）。ＩｇＧ３は、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の長いヒンジ領域がタンパク質分解切断により血清半減期が短くなるので、典型的には治療に使用されていない。ＩｇＧ３サブクラスの強力なエフェクター機能を利用するため、ＩｇＧ３ヒンジ（ＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰ）（配列番号６）を、Ｆａｂアーム交換を防止するＩｇＧ４ヒンジＳ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４ヒンジ配列（ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰ）（配列番号８）又はＩｇＧ１様ヒンジ（ＫＴＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＡＰ）（配列番号６８）と置き換えたＶ－ＩＧＧ３構築物を設計した。
すべてのヒトＩｇＧサブクラスの中で、ＩｇＧ３は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣの点で最も高いエフェクター機能を有する（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎ．ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１４．００５２０／ｆｕｌｌ）。ＩｇＧ３は、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の長いヒンジ領域がタンパク質分解切断により血清半減期が短くなるので、典型的には治療に使用されていない。ＩｇＧ３サブクラスの強力なエフェクター機能を利用するため、ＩｇＧ３ヒンジ（ＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰ）（配列番号６）を、Ｆａｂアーム交換を防止するＩｇＧ４ヒンジＳ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４ヒンジ配列（ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰ）（配列番号８）又はＩｇＧ１様ヒンジ（ＫＴＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＡＰ）（配列番号６８）と置き換えたＶ－ＩＧＧ３構築物を設計した。
【0204】
ヘテロ二量体Ｖ－ＩＧＧ３構築物は、ＣＨ３ドメイン（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｎｐｒｏｔ．２０１４．１６９）にＫ４０９Ｒ（１つの半抗体上）変異及びＦ４０５Ｌ（２つ目の抗体上）変異を含めることにより設計した。それぞれの半抗体は、まず単一ホモ二量体として生成され、次に一緒に混合され、還元条件及び酸化条件下でヘテロ二量体として再結合される。得られた配列は、Ｖ－ＩＧＧ３－Ａ及びＶ－ＩＧＧ３－Ｂとして注記され、一緒に対になっているか、一緒に対になるＶ－ＩＧＧ３－Ｄ及びＶ－ＩＧＧ３－Ｅとして注記されている。配列は、ＣＨ１ドメインを置き換えるための（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号４１）を含む切断型バージョンを含め、表３で確認される。
【0205】
【表5】
【0206】
ＴＩＭ１及びＣＴＬＤ融合タンパク質は、改変されたＩｇＧ３－Ｆｃドメインを用いて設計されており、図１及び表４に示す。
【0207】
【表6】
【0208】
［実施例４］ Ｔ細胞エンゲージング活性を持つＴＩＭ－１及びＣＴＬＤ構築物の設計
ＴＩＭ－１及びＣＴＬＤを単一抗ＣＤ３ ｓｃＦｖと融合させることによってＴ細胞エフェクター機能をエンゲージする追加の構築物を設計した。設計を図２及び表５に示す。
ＴＩＭ－１及びＣＴＬＤを単一抗ＣＤ３ ｓｃＦｖと融合させることによってＴ細胞エフェクター機能をエンゲージする追加の構築物を設計した。設計を図２及び表５に示す。
【0209】
【表7】
【0210】
【表8】
【0211】
［実施例５］ フーリン阻害剤ペイロード送達を用いるＴＩＭ－１及びＣＴＬＤ構築物の設計
抗体Ｆｃ領域への薬物ペイロードの部位特異的付加は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃと細菌タンパク質Ａの３ヘリックスバンドルとの共結晶構造の解析によって考案された（ＰＤＢ構造５Ｕ４Ｙ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／シーケンス／５Ｕ４Ｙ）。計算モデリングにより、Ａ３３９Ｃが構造に対して安定化効果を有し、Ｓ３３７Ｃ又はＫ３４０ＣがＦｃドメインの安定性に対して中立的な効果を有することが明らかになった。Ａ３３９Ｃが部位特異的コンジュゲーションの部位として選択された。
抗体Ｆｃ領域への薬物ペイロードの部位特異的付加は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃと細菌タンパク質Ａの３ヘリックスバンドルとの共結晶構造の解析によって考案された（ＰＤＢ構造５Ｕ４Ｙ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／シーケンス／５Ｕ４Ｙ）。計算モデリングにより、Ａ３３９Ｃが構造に対して安定化効果を有し、Ｓ３３７Ｃ又はＫ３４０ＣがＦｃドメインの安定性に対して中立的な効果を有することが明らかになった。Ａ３３９Ｃが部位特異的コンジュゲーションの部位として選択された。
【0212】
【表9】
【0213】
ペイロードコンジュゲーション部位を含むＦｃドメインを有するＴＩＭ１及びＣＴＬＤ融合タンパク質が設計され、図３及び表８に示す。
【0214】
【表10】
【0215】
［実施例６］ フーリンリンカー
デカノイル－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋ）（配列番号８１）又はヘキサ－Ｄ－アルギニン（Ｄ６Ｒ）を、酸感受性Ｎ－アシル－ヒドラゾンなどの切断可能なリンカー、又は酵素感受性マレイミドコンジュゲート型ジペプチド、バリン－アラニン、バリン－シトルリン若しくはフェニルアラニン－リジンを使用し、ＴＩＭ－１及びＣＴＬＤ構築物に連結させた。
デカノイル－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ｄｅｃ－ＲＶＫＲ－ｃｍｋ）（配列番号８１）又はヘキサ－Ｄ－アルギニン（Ｄ６Ｒ）を、酸感受性Ｎ－アシル－ヒドラゾンなどの切断可能なリンカー、又は酵素感受性マレイミドコンジュゲート型ジペプチド、バリン－アラニン、バリン－シトルリン若しくはフェニルアラニン－リジンを使用し、ＴＩＭ－１及びＣＴＬＤ構築物に連結させた。
【0216】
酸感受性リンカーは、構築物の内部移行後にリソソーム酸性環境において切断される。この戦略は、２種類の承認済みＡＤＣ、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）及びイノツズマブオゾガマイシン（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）で使用されている。リソソームプロテアーゼ感受性ジペプチドは、カテプシンＢ－リソソームプロテアーゼなどのプロテアーゼによって切断された後、薬物を放出する。このタイプのリンカー化学は、ＦＤＡ承認のブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）に使用されている。
【0217】
抗体のポリペプチドへの結合は、コンジュゲートの不均一な混合物を生成するランダムコンジュゲーションによって、又は生成物の不均一性を抗体薬物比（ＡＤＲ）１若しくは２に低減する、操作されたシステインへの部位特異的コンジュゲーションによって、リジン又はシステインの求核基を介して行われる。
【0218】
Ｃｙｓ残基のチオール官能基のマレイミド基に対する求核反応性は、リジン残基のアミノ基又はＮ末端アミノ基などのタンパク質の他のいずれかのアミノ酸官能基と比較して約１０００倍高い。マレイミド試薬中のチオール特異的官能基はアミン基と反応し得るが、より高いｐＨ（＞９．０）及びより長い反応時間が必要とされる（Ｇａｒｍａｎ、１９９７年、Ｎｏｎ－Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）。
【0219】
最初にＦＤＡ承認された、設計されたシステインによる部位特異的ＡＤＣは、バダスツキシマブタリリン（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）であった。
【0220】
【表11】
【0221】
［実施例７］ ＩｇＭ定常領域との融合タンパク質
ＩｇＭ分子は、特に、ＣＤＣとの強力なＦｃエフェクター機能を有する。ＩｇＭ分子は自然にホモ二量体化し、その後共有結合により五量体又は六量体になる。ＩｇＭは、ＩｇＧ分子のようなヒンジ領域を含まず、代わりに余分のＣＨドメイン（ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４）を含む。ホモ二量体重鎖は、ＣＨ２ドメインとＣＨ４ドメインで一体となる。マウスＩｇＭ ＣＨ２ドメイン（ｐｄｂ ４ＪＶＵ）の結晶構造、マウスＩｇＭ ＣＨ４ドメイン（ｐｄｂ ４ＪＶＷ）の結晶構造、及びヒトＩｇＭ ＣＨ２及びＣＨ４配列と相同なマウス配列との配列アラインメントの視覚的分析に基づき、ホモ二量体化界面で電荷差を誘導することによりＩｇＭ重鎖ヘテロ二量体化を誘導するように変異を設計した。
ＩｇＭ分子は、特に、ＣＤＣとの強力なＦｃエフェクター機能を有する。ＩｇＭ分子は自然にホモ二量体化し、その後共有結合により五量体又は六量体になる。ＩｇＭは、ＩｇＧ分子のようなヒンジ領域を含まず、代わりに余分のＣＨドメイン（ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４）を含む。ホモ二量体重鎖は、ＣＨ２ドメインとＣＨ４ドメインで一体となる。マウスＩｇＭ ＣＨ２ドメイン（ｐｄｂ ４ＪＶＵ）の結晶構造、マウスＩｇＭ ＣＨ４ドメイン（ｐｄｂ ４ＪＶＷ）の結晶構造、及びヒトＩｇＭ ＣＨ２及びＣＨ４配列と相同なマウス配列との配列アラインメントの視覚的分析に基づき、ホモ二量体化界面で電荷差を誘導することによりＩｇＭ重鎖ヘテロ二量体化を誘導するように変異を設計した。
【0222】
ｕｎｉｐｒｏｔ（ｗｗｗ＿ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ０１８７１）による残基番号１～４５３のヒトＩｇＭ定常領域の配列：
【0223】
【化1】
【0224】
ＩｇＭのエフェクター機能（残基１０５～４５３）を付加するための、抗体断片（Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ＶＨＨなど）又はターゲティングタンパク質（ＴＩＭ－１、ＣＴＬＤ／ＤＣ－ＳＩＧＮ）への融合に使用することができるＩｇＭ ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４の配列：
【0225】
【化2】
【0226】
構造解析によれば、下線部の残基Ｋ１３１及びＱ１３５はＣＨ２：ＣＨ２界面で近接していることが確認され、残基Ｔ３５４及びＥ３８５はＣＨ４：ＣＨ４界面で近接していることが確認された。Ｖ－ＩＧＭ－Ａ及びＶ－ＩＧＭ－Ｂの電荷パターンを変更し、Ａ：Ｂのヘテロ二量体形成を誘導し、Ａ：Ａ又はＢ：Ｂの形成を回避するために、以下の変異を行った。
【0227】
【表12】
【0228】
ＩｇＭエフェクター機能を持つＴＩＭ１及びＣＴＬＤ融合タンパク質を設計し、図４及び表１１に示す。
【0229】
【表13】
【0230】
実施例８：ＶＰ０１１－ＶＰ０２０の発現及び精製
［表１及び図１～３］の１０種類のタンパク質を発現させ、プロテインＡ／Ｇ磁気アガロースビーズを使用して、２．５ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ培養物からバッチ精製した。発現収量及び単量体純度％を表１２に示す。
［表１及び図１～３］の１０種類のタンパク質を発現させ、プロテインＡ／Ｇ磁気アガロースビーズを使用して、２．５ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ培養物からバッチ精製した。発現収量及び単量体純度％を表１２に示す。
【0231】
【表14】
【0232】
ＶＰ０１１（１００ｍＬ）、ＶＰ０１２（１００ｍＬ）、ＶＰ０１３（１００ｍＬ）、ＶＰ０１４（１００ｍＬ）、ＶＰ０１９（１Ｌ）及びＶＰ０２０（２５０ｍＬ）について、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞でより大きなスケールでの調製を行った。ＶＰ０１１、ＶＰ０１９、及びＶＰ０２０は、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡ樹脂カラムクロマトグラフィーにより精製した。ＶＰ０１２、ＶＰ０１３及びＶＰ０１４は、ＨｉＴｒａｐプロテインＧ樹脂カラムクロマトグラフィーにより精製した。発現収量及び単量体純度％を表１３に示す。
【0233】
【表15】
【0234】
発現された組換えタンパク質の配列を表１４に示す。
【0235】
【表16】
【0236】
実施例９：ＶＰ０１９画分及びＶＰ０２５ヘテロ二量体の調製
ＶＰ０１９のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析（図５ａ）は、ＶＰ０１９が予想されるホモ二量体（フラクションＦ６）と多量体約６００ｋＤａ（フラクションＦ２）を形成することを示す。この画分を精製し、機能活性について別々に評価した（それぞれＶＰ０１９－Ｆ６及びＶＰ０１９－Ｆ２と命名した）。
ＶＰ０１９のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析（図５ａ）は、ＶＰ０１９が予想されるホモ二量体（フラクションＦ６）と多量体約６００ｋＤａ（フラクションＦ２）を形成することを示す。この画分を精製し、機能活性について別々に評価した（それぞれＶＰ０１９－Ｆ６及びＶＰ０１９－Ｆ２と命名した）。
【0237】
図５ｂ：ＶＰ０２０のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析。
【0238】
ＶＰ０１９とＶＰ０２０のヘテロ二量体であるタンパク質産物ＶＰ０２５は、遺伝子ＴＭ－Ｇ４－Ａ－ＤＣとＣＴ－Ｇ４－Ｂ－ＤＣをＥｘｐｉＣＨＯ細胞で共発現させることにより生成し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡ樹脂カラムクロマトグラフィーにより精製した。得られた同時トランスフェクトされた試料生成物をＶＰ０２５－ＣＴと命名した。図６ａは、ＶＰ０２５－ＣＴが４つの異なるピークを含み、これを精製してインタクト質量分析で別々に評価したことを示す。ピーク１及びピーク２からの画分は、多くの種を示した。ピーク３からのフラクション３（ＶＰ０２５－Ｆ３）は、ＶＰ０２０ホモ二量体に対応する、８６，７２１Ｄａの質量を示した（図６ｂ）。ピーク４からのフラクション４（ＶＰ０２５－Ｆ４）は、約７８％の純度で、適切に形成されたＶＰ０１９／ＶＰ０２０ヘテロ二量体に対応する、８３，８８１Ｄａの質量を示した（図６ｃ）。
【0239】
実施例１０：ＶＰ３００及びＶＰ３０１の発現及び精製
単一ポリペプチド鎖上にＴＩＭ－１及びＣＴＬＤドメインを含む２つの追加の二重特異性分子（表１５）を１００ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ細胞で生成し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡ樹脂カラムクロマトグラフィーで精製した。概略図及びＳＥＣ－ＨＰＬＣによる純度を図７ａ及び図７ｂに示す。
単一ポリペプチド鎖上にＴＩＭ－１及びＣＴＬＤドメインを含む２つの追加の二重特異性分子（表１５）を１００ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ細胞で生成し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡ樹脂カラムクロマトグラフィーで精製した。概略図及びＳＥＣ－ＨＰＬＣによる純度を図７ａ及び図７ｂに示す。
【0240】
発現された組換えタンパク質の配列を表１４に示す。
【0241】
【表17】
【0242】
実施例１１：ＶＰ０１９、ＶＰ０２０及びＶＰ０２５のＳＡＲＳ－ＣＯＶ２ Ｓタンパク質への結合
ＶＰ０１９－Ｆ２、ＶＰ０２０、及びＶＰ０２５－ＣＴのＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓ Ｄ６１４Ｇへの結合をＥＬＩＳＡにより調べた。このタンパク質は、２０２０年初頭において優勢なＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株を代表するものである。ＤＣ－ＳＩＧＮは結合部位でカルシウムを使用することが知られているため、本実施例及び後続の実施例におけるすべてのＥＬＩＳＡアッセイは、２．５ｍＭのＣａＣｌ２の存在下で実施した。結合曲線を図８に示し、ＥＣ５０値を表１６に示す。ＶＰ０１９－Ｆ２は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ２ Ｓタンパク質に対して予想外に高い結合を示したが、ＶＰ０２０はわずかな結合であった。
ＶＰ０１９－Ｆ２、ＶＰ０２０、及びＶＰ０２５－ＣＴのＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓ Ｄ６１４Ｇへの結合をＥＬＩＳＡにより調べた。このタンパク質は、２０２０年初頭において優勢なＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株を代表するものである。ＤＣ－ＳＩＧＮは結合部位でカルシウムを使用することが知られているため、本実施例及び後続の実施例におけるすべてのＥＬＩＳＡアッセイは、２．５ｍＭのＣａＣｌ２の存在下で実施した。結合曲線を図８に示し、ＥＣ５０値を表１６に示す。ＶＰ０１９－Ｆ２は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ２ Ｓタンパク質に対して予想外に高い結合を示したが、ＶＰ０２０はわずかな結合であった。
【0243】
【表18】
【0244】
実施例１２：ＶＰ０２５－ＣＴの広範囲のウイルス抗原への結合
多くの多様なウイルス表面タンパク質抗原へのＶＰ０２５－ＣＴの結合をＥＬＩＳＡにより調べた。結合曲線を図９に示し、ＥＣ５０値を表１７に示す。
多くの多様なウイルス表面タンパク質抗原へのＶＰ０２５－ＣＴの結合をＥＬＩＳＡにより調べた。結合曲線を図９に示し、ＥＣ５０値を表１７に示す。
【0245】
【表19】
【0246】
実施例１３：ＶＰ０１９、ＶＰ０２０、ＶＰ０２５－ＣＴ及びＶＰ０２５－Ｆ４のホスファチジルセリン及びウイルス抗原への結合
ＶＰ０１９、ＶＰ０２０、ＶＰ０２５－ＣＴ（ヘテロ二量体混合物）及びＶＰ０２５－Ｆ４（７８％純度のヘテロ二量体）のビオチン－ホスファチジルセリン並びにウイルス抗原（インフルエンザＡ型Ｈ１Ｎ１ ＨＡ、ヒトＲＳＶ糖タンパク質Ｇ、ジカウイルスエンベロープタンパク質及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓ Ｄ６１４Ｇ）の選択群への結合について、ＥＬＩＳＡにより調べた。結合曲線を図１０ａ及び図１０ｂに示し、ＥＣ５０値を表１８及び表１９に示す。ＶＰ０２５－Ｆ４は、ＶＰ０２５－ＣＴよりもすべての抗原に強い結合を有していた。
ＶＰ０１９、ＶＰ０２０、ＶＰ０２５－ＣＴ（ヘテロ二量体混合物）及びＶＰ０２５－Ｆ４（７８％純度のヘテロ二量体）のビオチン－ホスファチジルセリン並びにウイルス抗原（インフルエンザＡ型Ｈ１Ｎ１ ＨＡ、ヒトＲＳＶ糖タンパク質Ｇ、ジカウイルスエンベロープタンパク質及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓ Ｄ６１４Ｇ）の選択群への結合について、ＥＬＩＳＡにより調べた。結合曲線を図１０ａ及び図１０ｂに示し、ＥＣ５０値を表１８及び表１９に示す。ＶＰ０２５－Ｆ４は、ＶＰ０２５－ＣＴよりもすべての抗原に強い結合を有していた。
【0247】
【表20】
【0248】
【表21】
【0249】
実施例１４：フーリン阻害剤リンカーペイロードの合成
溶媒及び試薬は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＶＷＲ、又はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、さらなる精製を行うことなく使用した。反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって、又はＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＬＣシステム及びＳｙｎａｐｔ高解像度質量分析計を用いる分析液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によってモニターした。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ ＩＮＯＶＡ分光計（５００ＭＨｚ）で記録した。すべての化学シフトをｐｐｍで報告し、カップリング定数Ｊはヘルツ（Ｈｚ）で報告している。ＮＭＲ溶媒ピークは次のように参照された：（１Ｈ ＮＭＲ）ＣＤＣｌ３：７．２７ｐｐｍ、ＤＭＳＯ－ｄ６：２．５０ｐｐｍ。化合物は、順相シリカゲル（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ Ｉｎｃ．）又は逆相（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｇｏｌｄ－Ｃ１８又はＣ１８－Ａｑ）プレパックカラムを使用するＴｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉ－Ｆｌａｓｈシステムのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。化合物の純度は、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＣＳＨ Ｃ１８ １．７μｍ（５０ｍｍ×２．１ｍｍ）カラム及び０．３ｍＬ／分の流速を使用する分析用ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）により決定した。勾配条件：溶媒Ａ（水中０．０５％ギ酸）及び溶媒Ｂ（アセトニトリル中０．０５％ギ酸）：０～０．１分 ９５％Ａ、０．１～４．０分 ５～９５％Ｂ（線形勾配）、４．０～５．０分 ９５％Ｂ、２５４ｎｍ及び２２０ｎｍでのＵＶ検出。
溶媒及び試薬は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＶＷＲ、又はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、さらなる精製を行うことなく使用した。反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって、又はＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＬＣシステム及びＳｙｎａｐｔ高解像度質量分析計を用いる分析液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によってモニターした。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ ＩＮＯＶＡ分光計（５００ＭＨｚ）で記録した。すべての化学シフトをｐｐｍで報告し、カップリング定数Ｊはヘルツ（Ｈｚ）で報告している。ＮＭＲ溶媒ピークは次のように参照された：（１Ｈ ＮＭＲ）ＣＤＣｌ３：７．２７ｐｐｍ、ＤＭＳＯ－ｄ６：２．５０ｐｐｍ。化合物は、順相シリカゲル（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ Ｉｎｃ．）又は逆相（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｇｏｌｄ－Ｃ１８又はＣ１８－Ａｑ）プレパックカラムを使用するＴｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉ－Ｆｌａｓｈシステムのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。化合物の純度は、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＣＳＨ Ｃ１８ １．７μｍ（５０ｍｍ×２．１ｍｍ）カラム及び０．３ｍＬ／分の流速を使用する分析用ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｕｌｔｒａ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）により決定した。勾配条件：溶媒Ａ（水中０．０５％ギ酸）及び溶媒Ｂ（アセトニトリル中０．０５％ギ酸）：０～０．１分 ９５％Ａ、０．１～４．０分 ５～９５％Ｂ（線形勾配）、４．０～５．０分 ９５％Ｂ、２５４ｎｍ及び２２０ｎｍでのＵＶ検出。
【0250】
反応スキームを図１２に示す。
【0251】
Ｎ－メチルモルホリン（１３．８μＬ、０．１２６ｍｍоｌ）を、ヘキサ－Ｄ－Ａｒｇ（Ｄ－アルギニンアミドＤ－アルギニル－Ｄ－アルギニル－Ｄ－アルギニル－Ｄ－アルギニル－Ｄ－アルギニル－Ｄ－アラニン；Ａｍｂｅｅｄ、ｃａｔ＃ Ａ３３３４５８）（３０ｍｇ、０．０３１４ｍｍｏｌ）、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍ Ｃａｔ＃：ＢＰ－２３２９２、ＣＡＳ：１５９８５７－８１－５）（４６．４ｍｇ、０．０６２９ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物；５．３ｍｇ、０．０３４５）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、アルゴン雰囲気下で加えた。溶液を室温で１８時間撹拌した。反応物を１：１のＡＣＮ／水（０．０５％ ＨＣＯ２Ｈ）（１０ｍＬ）で希釈し、逆相Ｃ１８－Ａｑフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出；１００％水－移動相添加剤として０．０５％のＨＣＯ２Ｈを含む１００％ＡＣＮ）で精製し、凍結乾燥後にＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢ－（Ｄ－Ａｒｇ）ｅ－ＮＨ２（１２ｍｇ、０．００７７３ｍｍｏｌ、２５％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） ｄ １０．０９ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｂｒ． ｓ， ６Ｈ）， ８．４７ （ｓ， ６Ｈ）， ８．３２ － ８．４５ （ｍ， ４Ｈ）， ８．１２ － ８．２０ （ｍ， １Ｈ）， ７．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ － ７．８０ （ｍ， １８Ｈ）， ７．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ７．０１ （ｓ， ２Ｈ）， ６．０８ － ６．１０ （ｍ， １Ｈ）， ５．４３ － ５．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８９ － ５．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３６ － ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ － ４．３０ （ｍ， ６Ｈ）， ４．０１ － ４．０９ （ｍ， １Ｈ）， ３．３５ － ３．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９１ － ３．１２ （ｍ， １２Ｈ）， ２．０９ － ２．２１ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ － ２．００ （ｍ， １Ｈ）， １．６５ － １．７５ （ｍ， ６Ｈ）， １．４０ － １．６２ （ｍ， ２８Ｈ）， １．３０ － １．４０ （ｍ， １Ｈ）， １．１５ － １．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８０ － ０．８９ （ｍ， ６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１５５２．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0252】
構造を図１１に示す。
【0253】
実施例１５：フーリン阻害剤ペイロードのＶＰ０２０へのコンジュゲーション
ヘキサ－Ｄ－アルギニンリンカー化合物のＶＰ０２０へのコンジュゲーション試験は、ＶＰ０２５を４当量のＴＣＥＰと反応させ、３７℃で１時間インキュベートして遊離システインを還元することにより実施した。試料をＺｅｂａカラムに通してＴＣＥＰを除去し、１ｍＭ ＤＴＰＡ ｐＨ６．５を含む１×ＰＢＳに緩衝液を交換した。次いで、この試料を２．５当量のペイロード（Ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－（Ｄ－Ａｒｇ６）－ＣＯＮＨ２と室温で１時間反応させた。最終生成物を質量分析法で分析し（図１３を参照）、予想される質量の８８，１３８Ｄａに近い、８８，１３６Ｄａの質量を有することが示された。
ヘキサ－Ｄ－アルギニンリンカー化合物のＶＰ０２０へのコンジュゲーション試験は、ＶＰ０２５を４当量のＴＣＥＰと反応させ、３７℃で１時間インキュベートして遊離システインを還元することにより実施した。試料をＺｅｂａカラムに通してＴＣＥＰを除去し、１ｍＭ ＤＴＰＡ ｐＨ６．５を含む１×ＰＢＳに緩衝液を交換した。次いで、この試料を２．５当量のペイロード（Ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－（Ｄ－Ａｒｇ６）－ＣＯＮＨ２と室温で１時間反応させた。最終生成物を質量分析法で分析し（図１３を参照）、予想される質量の８８，１３８Ｄａに近い、８８，１３６Ｄａの質量を有することが示された。
【0254】
実施例１６：ＶＰ０１９、ＶＰ０２０及びＶＰ０２５のＲＳＶ中和アッセイ
マイクロ中和アッセイを実施して、ＲＳＶに対する３つの化合物（ＶＰ０１９－Ｆ２、ＶＰ０２０及びＶＰ０２５－Ｆ４）の抗ウイルス特性を決定した。各ウイルスを各抗体と１時間インキュベートした後、その混合物をＡ５４９細胞（ヒト肺がん細胞株）に添加した。抗ウイルス活性を、免疫蛍光ベースのアッセイを使用して２４時間後に決定した。２４時間後、感染プレートをＰＢＳで洗浄し、４％ホルムアルデヒドで３０分間固定し、再度ＰＢＳで洗浄し、染色までＰＢＳ中に４℃で保存した。残留ホルムアルデヒドすべてを５０ｍＭの塩化アンモニウムでクエンチし、その後、細胞を透過処理し（０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００）、ＲＳＶ融合タンパク質を認識する抗体（ＧｅｎｅＴｅｘ ＧＴＸ４０６９７）で染色した。一次抗体をＡｌｅｘａ－４８８コンジュゲート二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ２１２４４及びＡ１１００１）で検出し、核をＨｏｅｃｈｓｔで染色した。画像は、ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ５ハイコンテント・プラットフォーム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で取得し、感染率をＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ５ソフトウェアを使用して算出した（感染細胞／全細胞×１００）。
マイクロ中和アッセイを実施して、ＲＳＶに対する３つの化合物（ＶＰ０１９－Ｆ２、ＶＰ０２０及びＶＰ０２５－Ｆ４）の抗ウイルス特性を決定した。各ウイルスを各抗体と１時間インキュベートした後、その混合物をＡ５４９細胞（ヒト肺がん細胞株）に添加した。抗ウイルス活性を、免疫蛍光ベースのアッセイを使用して２４時間後に決定した。２４時間後、感染プレートをＰＢＳで洗浄し、４％ホルムアルデヒドで３０分間固定し、再度ＰＢＳで洗浄し、染色までＰＢＳ中に４℃で保存した。残留ホルムアルデヒドすべてを５０ｍＭの塩化アンモニウムでクエンチし、その後、細胞を透過処理し（０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００）、ＲＳＶ融合タンパク質を認識する抗体（ＧｅｎｅＴｅｘ ＧＴＸ４０６９７）で染色した。一次抗体をＡｌｅｘａ－４８８コンジュゲート二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ２１２４４及びＡ１１００１）で検出し、核をＨｏｅｃｈｓｔで染色した。画像は、ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ５ハイコンテント・プラットフォーム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で取得し、感染率をＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ５ソフトウェアを使用して算出した（感染細胞／全細胞×１００）。
【0255】
試験物質は０．５μＭの濃度で使用し、試料は３連で試験した。結果のデータを図１４に示す。ＲＳＶについては、ＶＰ０１９－Ｆ２は９７％のウイルス阻害であったのに対し、ＶＰ０２５－Ｆ５については５５％の阻害、ＶＰ０２０については２８％の阻害であった。
【0256】
実施例１７：ＶＰ０２５のＺＩＫＶ中和アッセイ
第２の中和アッセイは、以下の手順を使用し、ＶＰ０２５－Ｆ４を使用してジカウイルスについて実施した。
第２の中和アッセイは、以下の手順を使用し、ＶＰ０２５－Ｆ４を使用してジカウイルスについて実施した。
【0257】
細胞培養の調製
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を２％ＦＢＳ（及び１％ ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ －Ａｌｌｅｎで確認することが必要）を補充したＤＭＥＭで維持し、５％ＣＯ２で３７℃にて保存した。細胞を４８ウェルプレートに１ウェルあたり８．０×１０４個の細胞の濃度で播種し、一晩接着させた。感染当日の朝に、細胞単層を検査して９０～９５％の密集度であることを確認した。
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を２％ＦＢＳ（及び１％ ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ －Ａｌｌｅｎで確認することが必要）を補充したＤＭＥＭで維持し、５％ＣＯ２で３７℃にて保存した。細胞を４８ウェルプレートに１ウェルあたり８．０×１０４個の細胞の濃度で播種し、一晩接着させた。感染当日の朝に、細胞単層を検査して９０～９５％の密集度であることを確認した。
【0258】
ジカウイルス中和の試験
ＶＰ０２５－Ｆ４を、合計８つの希釈（２２０～０．１μｇ／ｍＬ）について、１：３の比で感染培地を使用して３連で連続希釈した。ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＭＥＸ－１－４４株を、１．０のＭＯＩ（８．０×１０４ＦＦＵ）で各希釈液に加え、混合し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。
ＶＰ０２５－Ｆ４を、合計８つの希釈（２２０～０．１μｇ／ｍＬ）について、１：３の比で感染培地を使用して３連で連続希釈した。ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＭＥＸ－１－４４株を、１．０のＭＯＩ（８．０×１０４ＦＦＵ）で各希釈液に加え、混合し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。
【0259】
陽性対照の中和
ＶＰ０２５：ＺＩＫＶのインキュベーションと同時に、陽性対照試料もインキュベートした。マウスα－ＺＩＫＶ ＭＩＡＦ（マウス免疫腹水抗体）を１：５００、１：１０００、及び１：１５００に希釈し、３連で試験ウェルと同じ濃度のウイルスを使用してＺＩＫＶと組み合わせた。
ＶＰ０２５：ＺＩＫＶのインキュベーションと同時に、陽性対照試料もインキュベートした。マウスα－ＺＩＫＶ ＭＩＡＦ（マウス免疫腹水抗体）を１：５００、１：１０００、及び１：１５００に希釈し、３連で試験ウェルと同じ濃度のウイルスを使用してＺＩＫＶと組み合わせた。
【0260】
プレート感染
ＶＰ０２５－Ｆ４：ＺＩＫＶ及びα－ＺＩＫＶ ＭＩＡＦ：ＺＩＫＶをインキュベーションした後、Ｖｅｒｏ Ｅ６ウェルプレートをインキュベーターから取り出した。培地を細胞から吸引し、試験試料及び陽性対照試料をＶｅｒｏ Ｅ６プレートに移し、インキュベーターに戻し、非中和ウイルスを細胞に１時間感染させた。
ＶＰ０２５－Ｆ４：ＺＩＫＶ及びα－ＺＩＫＶ ＭＩＡＦ：ＺＩＫＶをインキュベーションした後、Ｖｅｒｏ Ｅ６ウェルプレートをインキュベーターから取り出した。培地を細胞から吸引し、試験試料及び陽性対照試料をＶｅｒｏ Ｅ６プレートに移し、インキュベーターに戻し、非中和ウイルスを細胞に１時間感染させた。
【0261】
陰性対照フォーカス形成アッセイ
プレート感染のインキュベーションと同時に、ＺＩＫＶを段階希釈し（１０－２～１０－５）、試料をＶｅｒｏ Ｅ６細胞に３連で感染させた。
プレート感染のインキュベーションと同時に、ＺＩＫＶを段階希釈し（１０－２～１０－５）、試料をＶｅｒｏ Ｅ６細胞に３連で感染させた。
【0262】
フォーカス減少法中和アッセイ
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞で１時間インキュベーションした後、０．８％メチルセルロースのオーバーレイをすべてのウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で約６０時間維持した。プレートをインキュベーターから取り出し、オーバーレイを吸引し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で２回穏やかに洗浄した。ウイルスをメタノールとアセトンの１：１固定液混合物で不活性化し、プレートを３０分間固定させた。不活性化した後、固定液を除去し、固定液がなくなるまでプレートを風乾した。
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞で１時間インキュベーションした後、０．８％メチルセルロースのオーバーレイをすべてのウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で約６０時間維持した。プレートをインキュベーターから取り出し、オーバーレイを吸引し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で２回穏やかに洗浄した。ウイルスをメタノールとアセトンの１：１固定液混合物で不活性化し、プレートを３０分間固定させた。不活性化した後、固定液を除去し、固定液がなくなるまでプレートを風乾した。
【0263】
すべてのインキュベーション及び洗浄は室温で実施し、プレートをプレートロッカーに置いた。細胞をＰＢＳ中０．５％Ｔｒｉｔｏｎで透過処理し、ＰＢＳ中０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で洗浄した。ＢＳＡ及び正常ヤギ血清を含むＰＢＳＴのブロッキング溶液を調製し、すべてのウェルで１時間インキュベートした。一次抗体、マウスα－ＺＩＫＶ ＭＩＡＦは、ＢＳＡを含むＰＢＳＴで希釈し、使用するまで氷上で保存した。ブロッキング溶液を除去し、一次抗体を１時間インキュベートした。抗体を除去し、プレートをＰＢＳＴで洗浄した。二次抗体、ヤギα－マウスＩｇＧ（高鎖及び低鎖）ＨＲＰコンジュゲート型を、ＢＳＡを含むＰＢＳＴで希釈した。抗体をウェル上で１時間インキュベートし、次いで、ＢＳＡを含むＰＢＳＴでウェルを洗浄した。Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｓ ＩｍｍＰＡＣＴ ＡＭＥＣ展開溶液をキットの説明書に従って調製し、各ウェルに添加した。プレートを暗所でインキュベートしたが、染色について定期的にチェックした。病巣が明確に発生した後（約１５分）、ウェルを脱イオン水ですすぎ、プレートを乾燥させた。
【0264】
結果
病巣は、ＶＰ０２５－Ｆ４試験ウェル又は陽性対照ウェルにおいて観察されなかった（図１４ｂを参照）。病巣は、陰性対照フォーカス形成アッセイウェルで予想どおりに発生し、連続ウイルス希釈ごとに病巣が減少することが示されている。これは、ＶＰ０２５試験物質が（２２０～０．１μｇ／ｍＬ）の希釈でＺＩＫＶを中和できたことを示唆している。
病巣は、ＶＰ０２５－Ｆ４試験ウェル又は陽性対照ウェルにおいて観察されなかった（図１４ｂを参照）。病巣は、陰性対照フォーカス形成アッセイウェルで予想どおりに発生し、連続ウイルス希釈ごとに病巣が減少することが示されている。これは、ＶＰ０２５試験物質が（２２０～０．１μｇ／ｍＬ）の希釈でＺＩＫＶを中和できたことを示唆している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5a】
【図5b】
【図6a】
【図6b】
【図6c】
【図7a】
【図7b】
【図8】
【図9】
【図10a】
【図10b】
【図11】
【図12】
【図13a】
【図13b】
【図14a】
【図14b】
【配列表】
【国際調査報告】