特表 2023-538855 カルボキシル官能基およびフェノール性官能基含有分析物のためのフェナシルブロミドベースの質量タグ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-12

(54)【発明の名称】カルボキシル官能基およびフェノール性官能基含有分析物のためのフェナシルブロミドベースの質量タグ

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/50 20060101AFI20230905BHJP

   G01N 27/62 20210101ALI20230905BHJP

【ＦＩ】

G01N33/50 D

G01N33/50 Z

G01N27/62 V

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023509689

(86)(22)【出願日】2021-08-11

(85)【翻訳文提出日】2023-02-28

(86)【国際出願番号】 IB2021057423

(87)【国際公開番号】W WO2022034528

(87)【国際公開日】2022-02-17

(31)【優先権主張番号】63/064,710

(32)【優先日】2020-08-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510075457

【氏名又は名称】ディーエイチ テクノロジーズ デベロップメント プライベート リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ダニエルズ， スコット

(72)【発明者】

【氏名】デイ， スブハカール

(72)【発明者】

【氏名】プルカヤスタ， サブハシシュ

【テーマコード（参考）】

2G041

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G041CA01

2G041EA04

2G041EA12

2G041FA10

2G041GA09

2G041JA04

2G041JA05

2G041LA08

2G041LA09

2G045CA25

2G045CA26

2G045CB01

2G045CB03

2G045CB07

2G045CB16

2G045CB30

2G045DA02

2G045DA07

2G045DA35

2G045DA59

2G045DA80

2G045FA36

2G045FB07

(57)【要約】

誘導体化試薬、誘導体化試薬のセット、および誘導体化技術が、旧来のイオン化技術を使用する質量分析法を介して分析することが困難であり得る分析物を含むカルボキシル官能基および／またはフェノール性官能基を含む分析物の相対的定量化、絶対的定量化、または両方に関して本明細書で提供される。非限定的な例によれば、このような分析物としては、脂肪酸、カルニチン、エイコサノイド、およびエストロゲンが挙げられ得る。上記誘導体化試薬を生成する方法がまた、開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

サンプルを分析する方法であって、前記方法は、
カルボキシル官能基およびフェノール性官能基のうちの少なくとも一方を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われるサンプルと、誘導体化薬剤とを反応させて、１もしくはこれより多くの誘導体化された分析物を生成する工程であって、ここで前記誘導体化薬剤は、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミド（ＰＡＢ）およびその誘導体を含む工程；
前記１もしくはこれより多くの誘導体化された分析物を分析する工程、
を包含する方法。

【請求項2】

前記サンプルは、少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われる、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する前記１もしくはこれより多くの分析物は、脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、およびカルニチンのうちの１もしくはこれより多くのものを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する前記１もしくはこれより多くの分析物は、少なくとも１個のエイコサノイドを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記少なくとも１個のエイコサノイドは、プロスタグランジン、トロンボキサン、ＥｐＥＴＥ、ＨＥＴＥ、ＨＯＤＥ、およびＨｐＥＴＥのうちの１またはこれより多くのものを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記サンプルは、少なくとも１個のフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われる、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

少なくとも１個のフェノール性官能基を有する前記１もしくはこれより多くの分析物は、少なくとも１種のホルモンを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記少なくとも１種のホルモンは、１種もしくはこれより多くのエストロゲンを含み、必要に応じてここで前記１種もしくはこれより多くのエストロゲンは、エストロン、エストラジオール、およびエストリオールからなる群より選択される、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記サンプルは、生物学的サンプルであり、必要に応じてここで前記生物学的サンプルは、血液、血漿、血清、尿、唾液、脳液、組織、毛、または体液から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化17】

またはその重原子誘導体のものであり、ここでＸは、水素またはピロリジン基である、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記誘導体化薬剤は、以下の式の置換されていないＰＡＢ：

【化18】

またはその重原子誘導体である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記誘導体化薬剤は、以下の式の置換されたＰＡＢ：

【化19】

またはその重原子誘導体を含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化20】

のものであり、ここで
Ｘは、水素またはピロリジン基であり、そして
Ｙは、酸素またはＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋もしくはその重原子誘導体であり、ｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである、
請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化21】

またはその重原子誘導体のものである、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化22】

またはその重原子誘導体のものである、請求項１３に記載の方法。

【請求項16】

前記誘導体化された分析物を分析する工程は、質量分析計によって行われ、必要に応じてここで前記誘導体化された分析物は、前記質量分析計を使用する前に、陽イオンモードでイオン化される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

方法であって、前記方法は、
置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミドと、四級アミンまたはその重原子誘導体を有するアミノオキシ化合物と反応させて、誘導体化試薬を形成する工程であって、必要に応じてここで前記アミノオキシ化合物は、式Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋またはその重原子誘導体のものであり、ｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状のもしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである工程、
を包含する方法。

【請求項18】

組成物であって、
置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミドと、四級アミンを有するアミノオキシ化合物との反応生成物、
を含む組成物。

【請求項19】

前記アミノオキシ化合物は、式Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋またはその重原子誘導体であり、ここでｎは、１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記組成物は、以下の式：

【化23】

のものであり、ここで
Ｘは、水素またはピロリジン基であり、
Ｙは、ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋またはその重原子誘導体である、請求項１８に記載の組成物。

【請求項21】

カルボキシル官能基およびフェノール性官能基のうちの少なくとも一方を有する１もしくはこれより多くの分析物の質量分析計による分析のためのキットであって、前記キットは、
請求項１８～２０のいずれかに記載の組成物、
を含むキット。

【請求項22】

カルボキシル官能基およびフェノール性官能基のうちの少なくとも一方を有する１もしくはこれより多くの分析物の質量分析計による分析のためのキットであって、前記キットは、以下の式の組成物：

【化24】

を含み、ここで
Ｘは、水素またはピロリジン基であり、
Ｙは、酸素またはＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋もしくはその重原子誘導体であり、ｎは、１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである、
キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連米国出願
本出願は、２０２０年８月１２日出願の発明の名称「Ｐｈｅｎａｃｙｌｂｒｏｍｉｄｅ－Ｂａｓｅｄ Ｍａｓｓ Ｔａｇｓ ｆｏｒ Ｃａｒｂｏｘｙｌ ａｎｄ Ｐｈｅｎｏｌｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ａｎａｌｙｔｅｓ」という米国仮特許出願第６３／０６４，７１０号（その全内容は、参考として援用される）の優先権の利益を主張する。

【0002】

分野
本教示は、一般に、質量分析法に、およびより詳細には、質量分析法に有用なタグ化試薬に関する。

【背景技術】

【0003】

緒言
質量分析法（ＭＳ）は、定性的適用および定量的適用の両方を有する、試験物質の元素組成を決定するための分析技術である。ＭＳは、未知の化合物を特定する、分子中の元素の同位体組成を決定する、特定の化合物の構造を、その断片化を観察することによって決定する、およびサンプル中の特定の化合物の量を定量するために有用であり得る。その感度および選択性を考慮すれば、ＭＳは、生命科学応用において特に重要である。

【0004】

末端カルボキシル基を含む酸含有化合物の正確な分析および定量化は、ますます重要になりつつある。例えば、生理学的サンプル中の酸含有化合物（例えば、脂肪酸およびエイコサノイド）の量は、種々の疾患状態に関する診断情報を提供し得る。同様に、フェノール性ＯＨ基を含む化合物（例えば、ホルモン）の分析は、臨床上重要である。例えば、エストロゲンおよびエストロゲン様化合物の定量化は、エストロゲン関連疾患（例えば、乳がん）の管理の一助になる。

【0005】

質量分析計は、イオンのような化学的実体を検出することから、分析されるべき化合物を、荷電したイオンへと変換することは、サンプル処理の間に起こらなければならない。しかし、これらのカルボキシル官能基およびフェノール性官能基を含む化合物の質量分析法による分析は、上記化合物のイオン化効率が低いことに起因して、例えば、これらの化合物のうちの多くがイオン化可能な基を含まないことから、難題を呈してきた。結果として、サンプル内の、および特に生物学的マトリクスを含むサンプル内で低濃度にある場合のこのような分析物の定量化は、困難であり得る。

【0006】

従って、これらの欠点を克服する、カルボキシル官能基またはフェノール性官能基を含むこのような分析物を定量するための改善された技術のニーズが存在する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

要旨
本教示の種々の局面は、カルボキシル官能基またはフェノール性官能基を含む分析物の分析（例えば、相対的定量化、絶対的定量化、または両方）のための標識試薬、標識試薬のセット、および標識技術を提供する。このような分析物は、旧来のイオン化技術を使用する質量分析法を介して分析することが困難である場合があり、種々の疾患に関する診断において有用である例えば、脂肪酸、胆汁酸、カルニチン、エイコサノイド、およびエストロゲン（例えば、エストロン、エストラジオール、エストリオール）を含み得る。上記標識試薬を生成する方法がまた開示され、質量分析法におけるそれらの使用のための方法も開示される。

【0008】

本教示の種々の局面によれば、サンプルを分析する方法であって、上記方法は、カルボキシル官能基およびフェノール性官能基のうちの少なくとも一方を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われるサンプルと、誘導体化薬剤とを反応させて、１もしくはこれより多くの誘導体化された分析物を生成する工程であって、ここで上記誘導体化薬剤は、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミド（ＰＡＢ）およびその誘導体を含む工程を包含する方法が提供される。上記方法は、上記１もしくはこれより多くの誘導体化された分析物を分析する工程をさらに包含する。

【0009】

いくつかの局面において、上記サンプルは、少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われる。例えば、いくつかの局面において、少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する上記１もしくはこれより多くの分析物は、脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、およびカルニチンのうちの１種もしくはこれより多くのものを含み得る。別の例によれば、少なくとも１個のカルボキシル官能基を有する上記１もしくはこれより多くの分析物は、少なくとも１個のエイコサノイドを含み得る。幾つかの関連する局面において、上記少なくとも１個のエイコサノイドは、プロスタグランジン、トロンボキサン、ＥｐＥＴＥ（エポキシエイコサテトラエン酸）、ＨＥＴＥ（ヒドロキシエイコサテトラエン酸）、ＨＯＤＥ（ヒドロキシオクタデカジエン酸）、およびＨｐＥＴＥ（ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸）のうちの１種もしくはこれより多くのものを含み得る。

【0010】

いくつかの局面において、上記サンプルは、少なくとも１個のフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むかまたは含むと疑われる。例えば、いくつかの局面において、少なくとも１個のフェノール性官能基を有する上記１もしくはこれより多くの分析物は、少なくとも１種のホルモンを含み得る。種々の局面において、上記ホルモンは、１種もしくはこれより多くのエストロゲンであり得る。例によれば、上記１種もしくはこれより多くのエストロゲンは、エストロン、エストラジオール、およびエストリオールからなる群より選択され得る。

【0011】

種々の局面において、上記サンプルは、生物学的サンプルであり得る。例によれば、上記生物学的サンプルは、血液、血漿、血清、尿、唾液、脳液、組織、毛、または体液のうちの１つであり得る。

【0012】

種々の実施形態によれば、上記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化1】

またはその重原子誘導体のものであり得、ここでＸは、水素またはピロリジン基である。例えば、ある特定の局面において、上記誘導体化薬剤は、以下の式の置換されていないＰＡＢ：

【化2】

またはその重原子誘導体であり得る。いくつかの代替の局面において、上記誘導体化薬剤は、以下の式の置換されたＰＡＢ：

【化3】

またはその重原子誘導体を含み得る。

【0013】

種々の実施形態によれば、上記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化4】

であって、ここでＸは、水素もしくはピロリジン基であり、Ｙは、酸素またはＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋もしくはその重原子誘導体であり、ｎは、１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状、もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンであるものであり得る。例えば、ある特定の局面において、上記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化5】

またはその重原子誘導体であるものであり得る。いくつかの代替の局面において、上記誘導体化薬剤は、以下の式：

【化6】

またはその重原子誘導体であるものである。

【0014】

上記誘導体化された分析物は、種々の様式で分析され得る。例えば、種々の局面において、上記誘導体化された分析物の分析は、質量分析計によって行われ得る。いくつかの局面において、例えば、上記誘導体化された分析物は、質量分析計を使用する前に、陽イオンモードにおいてイオン化され得る。

【0015】

上で注記されるように、上記標識試薬を生成する方法がまた、開示され、質量分析法におけるそれらの使用のための方法も同様に開示される。

【0016】

本明細書で開示される種々の誘導体化薬剤を生成する方法がまた、本明細書で記載される。例えば、本教示に従う方法の種々の実施形態が、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミドと、四級アミンを有するアミノオキシ化合物と反応させて、誘導体化薬剤を形成する工程を包含する。いくつかの局面において、例えば、上記アミノオキシ化合物は、式Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋またはその重原子誘導体であって、ここでｎは、１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンであるものであり得る。

【0017】

本教示の種々の局面によれば、組成物であって、上記組成物は、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミドと四級アミンを有するアミノオキシ化合物との反応生成物を含む組成物が提供される。例えば、上記アミノオキシ化合物は、式Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋またはその重原子誘導体であって、ここでｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状のもしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンであるものであり得る。例によれば、種々の局面において、上記組成物は、以下の式：

【化7】

であって、ここでＸは、水素またはピロリジン基であり、Ｙは、ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋またはその重原子誘導体であるものであり得る。

【0018】

本教示はまた、カルボキシル官能基およびフェノール性官能基のうちの少なくとも一方を有する１もしくはこれより多くの分析物の質量分析計による分析のためのキットを提供する。いくつかの例示的な実施形態において、上記キットは、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミドと、四級アミンを有するアミノオキシ化合物との反応生成物を含み得る。非限定的な例によれば、上記キットは、以下の式：

【化8】

であって、ここで、
Ｘは、水素またはピロリジン基であり、
Ｙは、酸素またはＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋もしくはその重原子誘導体であり、ｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンであるものの組成物を含み得る。

【0019】

出願人の教示のこれらおよび他の特徴は、本明細書で示される。

【0020】

当業者は、以下に記載される図面が例証目的に過ぎないことを理解する。図面は、いずれにせよ、出願人の教示の範囲を限定するとは意図されない。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】図１は、カルボキシル基を含む酸と、出願人の教示の種々の局面に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤との例示的反応を示す。

【0022】

【図2A】図２Ａは、アラキドン酸と、出願人の教示の種々の局面に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤の例示的実施形態との反応を示す。

【0023】

【図2B】図２Ｂは、標識されていないアラキドン酸を含むサンプルの質量スペクトルを示す。

【0024】

【図2C】図２Ｃは、図２Ａに示されるＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化されたアラキドン酸の質量スペクトルを示す。

【0025】

【図3】図３は、フェノール基を含む分析物と、出願人の教示の種々の局面に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤との例示的反応を示す。

【0026】

【図4】図４は、エストラジオールと、出願人の教示の種々の局面に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤の例示的実施形態との反応を示す。

【0027】

【図5】図５は、図２Ａに示されるＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化されたステロイドのパネルの例示的なクロマトグラムを示す。

【0028】

【図6A】図６Ａは、図２Ａに示されるＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化された血漿サンプル調製物の例示的なクロマトグラムを示す。カルニチンおよびアセチルカルニチンのＸＩＣが示される。

【0029】

【図6B】図６Ｂは、図２Ａに示されるＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化されたカルニチンおよびアセチルカルニチンの標準的混合物の例示的なクロマトグラムを示す。

【0030】

【図7】図７Ａ～Ｃは、出願人の教示の種々の局面に従う例示的なＰＡＢベースの誘導体化薬剤の合成を示す。

【0031】

【図8】図８Ａ～Ｃは、出願人の教示の種々の局面に従う他の例示的なＰＡＢベースの誘導体化薬剤の合成を示す。

【0032】

【図9】図９は、出願人の教示の種々の局面に従う４種のＰＡＢベースの誘導体化薬剤の例示的なセットを示す。

【発明を実施するための形態】

【0033】

詳細な説明
明瞭性のために、以下の考察が、出願人の教示の実施形態の種々の局面を詳細に説明すると同時に、そうすることが好都合または適切である場合には常に、ある特定の具体的詳細を省略することは、理解される。例えば、代替の実施形態における同様のまたは類似の特徴の考察は、いくぶん省略され得る。周知の着想または概念はまた、簡潔さのためにそれほど詳細に考察しない場合もある。当業者は、出願人の教示のいくつかの実施形態が、あらゆる実行において、実施形態の完全な理解を提供するためにのみ示される、具体的に記載される詳細のある特定のものを必要としなくてもよいことを認識する。同様に、その記載される実施形態が、本開示の範囲から逸脱することなく、一般的常識に従って変化またはバリエーションが可能であり得ることは、明らかである。実施形態の以下の詳細な説明は、出願人の教示の範囲を限定するとはいかなる方法であっても見做されるべきではない。

【0034】

いくつかの実施形態によれば、サンプル中で少なくとも１個のカルボキシル官能基またはフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物の存在を検出するおよび／またはその分析物を定量する方法が、提供される。

【0035】

カルボキシル含有分析物は、カルボキシル基：

【化9】

を含む。

【0036】

いくつかの実施形態において、カルボキシル含有分析物は、中性であり得る。いくつかの実施形態において、上記カルボキシル含有分析物は、イオンである。ある特定の実施形態において、カルボキシル含有分析物は、約５０～１０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、上記カルボキシル含有分析物は、約１００～４００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、上記カルボキシル含有分析物は、２個、３個、またはより多くのカルボキシル－（Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）部分を有する。

【0037】

カルボキシル官能基を含む分析物の例としては、脂肪酸、胆汁酸、アミノ酸、カルニチン、およびエイコサノイドが挙げられるが、これらに限定されない。本教示に従って分析され得るカルボキシル含有化合物のこれらのクラスの各々の非限定的な例は、以下の表１に示される。

【表1-1】

【表1-2】

【0038】

一般には、脂肪酸は、脂肪族の鎖を有するカルボン酸であり、細胞にとって重要な構造的構成要素である。さらなる非限定的な例によれば、カルボキシル官能基を含む脂肪酸分析物は、短鎖脂肪酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸）、中鎖脂肪酸（例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸）、長鎖脂肪酸（例えば、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸）、超長鎖脂肪酸（例えば、ドコサン酸、テトラコサン酸、およびヘキサコサン酸）、分枝鎖脂肪酸（例えば、フィタン酸、プリスタン酸）、飽和脂肪酸（プロパン酸、酪酸、吉草酸）、一価不飽和脂肪酸（例えば、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸（ｖａｓｓｅｎｉｃ ａｃｉｄ））、および多価不飽和脂肪酸（例えば、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸）を含み得る。

【0039】

一般には、胆汁酸は、肝臓で一般に合成されるステロイド酸（一級胆汁酸）か、または結腸における細菌の活動から生じ得るステロイド酸（二級胆汁酸）である。さらなる例によれば、種々の実施形態によれば、カルボキシル官能基を含む上記胆汁酸は、一級胆汁酸（例えば、コール酸、ケノデオキシコール酸）および二級胆汁酸（例えば、デオキシコール酸、リトコール酸）を含み得る。

【0040】

一般に、アミノ酸は、アミンおよびカルボキシル官能基の両方を含み、タンパク質の構築ブロックとして、神経伝達物質として、および生合成において広範な生物学的機能を有する。さらなる例によれば、種々の実施形態によれば、カルボキシル官能基を含むアミノ酸は、標準的アミノ酸（例えば、リジン、アスパラギン、スレオニンなど）およびこれらの立体異性体、ならびにこのようなアミノ酸の誘導体（例えば、ホスホセリン（ＰＳＥＲ）、アルギノコハク酸（ＡＳＡ）、ヒドロキシプロリンおよびカルニチン（例えば、リジンから得られ得るＤ－およびＬ－カルニチン））を含み得る。

【0041】

一般に、エイコサノイドは、多価不飽和脂肪酸前駆体（例えば、アラキドン酸、アドレン酸、エイコサペンタエン酸、ジホモ－γ－リノレン酸、およびミード酸）の代謝生成物である。上で示されるそれらの例に対するエイコサノイドのさらなる非限定的な例としては、ＥｐＥＴＥ、ＨＥＴＥ、ＨＯＤＥ、およびＨｐＥＴＥが挙げられる。

【0042】

フェノール性含有分析物は、フェノール基：

【化10】

を含む。

【0043】

いくつかの実施形態において、フェノール性含有分析物は、中性であり得る。いくつかの実施形態において、上記フェノール性含有分析物は、イオンである。ある特定の実施形態において、フェノール性含有分析物は、約５０～１０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、上記フェノール性含有分析物は、約１００～４００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有し得る。いくつかの実施形態において、上記フェノール性含有分析物は、２個、３個、またはより多くのフェノール性ＯＨ部分を有する。

【0044】

本教示に従って分析され得るフェノール性官能基を含む分析物の例としては、ホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。ホルモンの例は、以下の表２に示される。

【表2】

【0045】

さらなる例によれば、種々の実施形態によれば、フェノール性官能基を含む上記分析物は、１種もしくはこれより多くのステロイド、ステロイド様化合物、エストロゲン、エストロゲン様化合物、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール（１７１３－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストリオール（Ｅ３）、１６－エピエストリオール、１７－エピエストリオール、および１６，１７－エピエストリオール、ならびに／またはこれらの代謝産物を含み得る。種々の実施形態において、上記代謝産物は、例えば、エストリオール、１６－エピエストリオール（１６－エピＥ３）、１７－エピエストリオール（１７－エピＥ３）、１６，１７－エピエストリオール（１６，１７－エピＥ３）、１６－ケトエストラジオール（１６－ケトＥ２）、１６α－ヒドロキシエストロン（１６α－ＯＨＥ１）、２－メトキシエストロン（２－ＭｅＯＥ１）、４－メトキシエストロン（４－ＭｅＯＥ１）、２－ヒドロキシエストロン－３－メチルエーテル（３－ＭｅＯＥ１）、２－メトキシエストラジオール（２－ＭｅＯＥ２）、４－メトキシエストラジオール（４－ＭｅＯＥ２）、２－ヒドロキシエストロン（２０ＨＥ１）、４－ヒドロキシエストロン（４－ＯＨＥ１）、２－ヒドロキシエストラジオール（２－ＯＨＥ２）、エストロン（Ｅ１）、硫酸エストロン（Ｅ１ｓ）、１７α－エストラジオール（Ｅ２ａ）、１７β－エストラジオール（Ｅ２ｂ）、硫酸エストラジオール（Ｅ２ｓ）、エクイリン（ＥＱ）、１７α－ジヒドロエクイリン（ＥＱａ）、１７β－ジヒドロエクイリン（ＥＱｂ）、エクイレニン（Ｅｑｉｌｅｎｉｎ）（ＥＮ）、１７α－ジヒドロエクイレニン（ＥＮａ）、１７β－ジヒドロエクイレニン（ＥＮｂ）、Δ８，９－デヒドロエストロン（ｄＥ１）、Δ８，９－デヒドロエストロンスルフェート（ｄＥ１ｓ）であり得る。いくつかの実施形態において、上記フェノール含有分析物は、ステロイド、またはｓｐ^２混成であるＡ環およびＡ環の３位においてＯＨ基を有するステロイド様化合物であり得る。

【0046】

種々の実施形態において、本教示に従う方法は、カルボキシル官能基またはフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの目的の分析物と、フェナシルブロミドベースの（ＰＡＢベースの）誘導体化薬剤とを、サンプル中に存在する上記目的の分析物（あるとすれば）を誘導体化するために十分な条件下で反応させる工程を包含する。従って、上記誘導体化された分析物は、本明細書で別段考察されるように、分析され得る（例えば、検出され得る、定量され得る）。

【0047】

本教示に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、一般に、置換されたかもしくは置換されていないフェナシルブロミド（ＰＡＢ）およびその誘導体（例えば、置換されていないＰＡＢまたは置換されたＰＡＢの重原子誘導体）を含む。置換されていないＰＡＢ（ＣＡＳ番号７０－１１－１）は、以下の式Ｉを有する化合物である。

【化11】

【0048】

種々の実施形態において、式Ｉの置換されていないＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、ＰＡＢの重原子誘導体であり得る。本明細書で使用される場合、用語「重原子（ｈｅａｖｙ ａｔｏｍ）」とは、天然の存在量が最も多い同位体と同一のプロトンおよび電子の数を有するが、少なくとも１個のさらなる中性子を有し、それによって、元素の分子量を１種もしくはこれより多くの質量ユニット程度増大させる元素の同位体をいう。従って、本明細書で使用される場合、用語「その重原子誘導体」が化合物に言及する場合、その用語は、化合物の原子のうちの１種もしくはこれより多くのものが、上記元素の重原子同位体で置き換えられていることを意味する。例えば、式ＩのＰＡＢの重原子誘導体において、その水素原子のうちの１種もしくはこれより多くのものが、重水素であり得る。^１２Ｃ炭素原子のうちの１種もしくはこれより多くのが、^１３Ｃであり得る、および／または^１６Ｏ酸素原子は、^１７Ｏもしくは^１８Ｏであり得る。同様に、窒素含有化合物の重原子誘導体は、１種もしくはこれより多くの^１４Ｎ窒素原子を、より重い^１５Ｎで置き換え得る。

【0049】

ＰＡＢおよびその重原子誘導体に加えて、本教示に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、ＰＡＢのうちの１個もしくはこれより多くの位置においてさらに置換され得る。例によれば、本教示に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、一般に、式ＩＩの構造（その重原子誘導体を含む）：

【化12】

を有し得、ここでＸは、水素またはピロリジン基であり、Ｙは、酸素またはＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋であり、ｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである。

【0050】

Ｘが水素であり、Ｙが酸素である場合、上記の式ＩＩは、置換されていないＰＡＢを表すことが理解される。従って、種々の実施形態において、上記ＰＡＢ誘導体化薬剤は、置換を有しないＰＡＢ（すなわち、上の式ＩＩにおいてＸ＝水素、Ｙ＝酸素である）、Ｘにおいてのみ置換を有するＰＡＢ（例えば、以下の式ＩＩＩにあるように、Ｘ＝ピロリジン基、Ｙ＝酸素）、Ｙにおいて置換を有するＰＡＢ（例えば、以下の式ＩＶにあるように、Ｘ＝水素、Ｙ＝ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋）、またはＸおよびＹの両方において置換を有するＰＡＢ（例えば、以下の式Ｖにあるように、Ｘ＝ピロリジン基、Ｙ＝ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋）、ならびにこれらの重原子誘導体であり得る。

【化13】

【0051】

上で注記されるように、式ＩＩのＹにおける置換は、ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋またはその重原子誘導体であり得、ここでｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである。いくつかの特定の例示的な実施形態において、ｎは３であり、各Ｒは水素であり、その結果、式ＩＶおよびＶのＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、それぞれ、式ＶＩおよびＶＩＩの構造（およびその重原子誘導体）を有する：

【化14】

【0052】

本教示に従う方法は、カルボキシル官能基またはフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの目的の分析物と、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤とを、上記サンプル中に存在する目的の分析物を誘導体化するために十分な条件下で反応させる工程を包含し得る。図１は、カルボキシル基を含む酸と、上の式ＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤との、塩基の存在下での例示的な反応を示す。例示的反応において示されるように、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤の臭素は、脱離基として機能し、それによって、誘導体化された酸を生じる。

【0053】

図１の反応の特定の例として、図２Ａは、式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤とアラキドン酸（これは、細胞シグナル伝達に関与する多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）である）との反応を示す。当業者によって理解されるように、アラキドン酸はまた、広い範囲のエイコサノイドへの前駆体であり、生物学的におよび臨床上関連するその代謝産物である。図２Ｂは、１０ミルモル濃度（ｍＭ）の非標識アラキドン酸を含むサンプルのＭＳ^２スペクトルを示す。図２Ｃは、他方で、本教示の種々の局面に従う、図２Ａに示されるとおりのＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化された５０マイクロモル濃度（μＭ）のアラキドン酸を含むサンプルのＭＳ^２スペクトルを示す。特に、アラキドン酸は、アセトニトリル中の０．７５Ｍ トリエタノールアミンの中で式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤と反応させ、６０℃において１時間加熱した。上記溶液を、Ｔｕｒｂｏ Ｓｐｒａｙ源を有するＳＣＩＥＸ ３２００ ＱＴＲＡＰへと注入した。その生成物イオンピークのフラグメント化を示す。図２Ｃのイオン化およびＭＳ条件は、図２ＢのＭＳ^２スペクトルを生成するために使用したものと同一であった。顕著なことには、図２Ｃのサンプル中の誘導体化されたアラキドン酸の濃度に対して、図２Ｂのサンプル中の非標識アラキドン酸の濃度が２００倍大きかったにもかかわらず、誘導体化されたサンプルのＭＳ^２分析は、検出された最大強度において２０×超の増大を示した（１．３×１０^６ ｃｐｓ 対 ５．８×１０^４ ｃｐｓ）。それによって、実質的に増大した感度は、本教示の種々の局面に従うカルボキシル含有ＰＵＦＡのＰＡＢベースの誘導体化から生じることが示された。いかなる特定の理論によっても拘束されることなく、ＭＳ^２シグナルにおけるこの実質的な増大は、負に荷電した非標識アラキドン酸のものに対して、上記誘導体化された分析物の改善されたイオン化効率から生じたと考えられる。非誘導体化アラキドン酸のフラグメント化は、図２Ｂの質量スペクトルにおいて多くのピークを生じ、シグナルの全体的な希釈を生じるのに対して、図２Ｃに示されるとおりの誘導体化されたアラキドン酸ではわずか数個の高い強度ピークが生じる。

【0054】

ここで図３を参照すると、フェノール含有化合物と、式ＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤との例示的な反応が示される。示されるように、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤の臭素は、また、塩基の存在下でフェノール含有化合物と反応される場合には脱離基として機能し、それによって、誘導体化されたフェノールを形成する。図３の反応の特定の例として、図４は、式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤とエストラジオールとの反応を示す。

【0055】

少なくとも１個のカルボキシル官能基またはフェノール性官能基を有する分析物は、天然または合成であり得、上記サンプルは、分析に適したサンプルの任意のタイプであり得る（例えば、生物学的サンプルが挙げられるが、これに限定されない）。分析物を含むサンプルの非限定的な例としては、細胞または組織およびその培養物（または継代培養物）、粗製または処理された細胞溶解物（全細胞溶解物を含む）、体液、組織抽出物または細胞抽出物が挙げられるが、これらに限定されない。サンプルのなお他の非限定的な例としては、クロマトグラフィーによる分離または電気泳動による分離のような分離プロセスからの画分が挙げられるが、これらに限定されない。体液としては、血液、尿、糞便、脊髄液、脳液、羊水、リンパ液または腺分泌物からの液が挙げられるが、これらに限定されない。処理された細胞溶解物によって、本発明者らは、上記細胞を溶解するために必要とされる処理に加えて、それによって、集められた物質のさらなる処理を行うために、細胞溶解物が処理されていることを意味する。例えば、上記サンプルは、タンパク質分解酵素での、それによって前駆タンパク質またはタンパク質を消化するために、粗製細胞溶解物の全タンパク質構成要素の処理によって形成されるペプチドである１もしくはこれより多くの分析物を含む細胞溶解物であり得る。

【0056】

種々の実施形態によれば、少なくとも１個のカルボキシル官能基またはフェノール性官能基を有する１もしくはこれより多くの分析物を含むサンプルは、分析の前に種々の方法によって富化され得る。例示的な富化方法は、タンパク質沈殿、液液抽出、固液抽出、アフィニティー捕捉／放出、抗体媒介性富化および精製を含み得るが、これらに限定されない。他の富化方法、または２もしくはこれより多くの富化方法の組み合わせが使用され得る。

【0057】

上で注記されるように、種々の実施形態において、本明細書で提供される方法は、上記誘導体化された分析物を分析する（例えば、検出する、定量する）工程を包含し得る。本教示に照らして当業者によって理解されるように、非限定的な例によれば、質量分析法またはＵＶ／ＶＩＳ分光光度法を含む誘導体化された分析物を分析するための種々の分析方法が使用され得る。

【0058】

いくつかの例示的な実施形態において、上記分析する工程は、上記誘導体化された分析物およびその１種もしくはこれより多くのフラグメントのうちのいずれかと関連する多くの質量シグナルのうちの１個を検出する工程を包含する。質量シグナルの検出は、任意の標準的な質量分析計（例えば、ＱＴＲＡＰ（登録商標）５５００質量分析計が挙げられるが、これに限定されない）とともに使用され得る。一般に、具体的質量分析計および作動モードは、重要ではないが、本明細書中の教示は、陽イオンモードにおいて作動するイオン源を使用して、誘導体化された分析物のイオン化を可能にするにあたって特に有益であり得る。多くのカルボキシル官能基およびフェノール性官能基含有化合物は、陽モード質量分析技術を使用して分析することが以前は困難であったが、本教示に従う誘導体化方法は、陽イオンモードにおけるイオン化効率を実質的に改善し得る。

【0059】

いくつかの実施形態において、上記方法は、サンプル中のカルボキシルまたはフェノール性含有分析物の量を定量する工程を包含する。定量する工程は、例えば、質量スペクトルと標準とを比較することによって行われ得る。上記標準は、内部標準または分析物標準であり得る。例えば、重原子標識分析物が使用され得る。上記重原子標識分析物は、重原子誘導体化されたカルボキシルまたはフェノール性含有分析物（例えば、本明細書で記載されるもの）であり得る。

【0060】

図５は、式ＩＩＩの置換されたＰＡＢ化合物で誘導体化された脂肪酸のパネルのＬＣ／ＭＳ／ＭＳクロマトグラムを示す。上記パネルは、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミトレイン酸、ｃｉｓ－１０－ヘプタデセン酸、パルミチン酸（ｐａｌｍｉｃ ａｃｉｄ）、オレイン酸、およびステアリン酸からなった。これらの脂肪酸の各々の１０μＭの溶液を、アセトニトリル中の０．７５Ｍ トリエタノールアミンの中で式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤と反応させ、６０℃で１時間加熱した。その反応混合物を、ＬＣ／ＭＳ－ＭＳ（Ｔｕｒｂｏ Ｓｐｒａｙ源およびＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣを備えたＳＣＩＥＸ ３２００ ＱＴＲＡＰ）に注入し、Ｃ１３カラムを使用して分離した。図は、誘導体化した脂肪酸（ラウリン酸 ３８８．３／２０６．２、ミリスチン酸 ４１６．３／２０６．２、パルミトレイン酸 ４４２．３／２０６．２、ｃｉｓ－１０－ヘプタデセン酸 ４５６．３／２０６．２、パルミチン酸（ｐａｌｍｉｃ ａｃｉｄ） ４４４．３／２０６．２、オレイン酸 ４７０．４／２０６．２、およびステアリン酸 ４７２．４／２０６．２）のＭＲＭトランジションを使用する抽出されたイオンクロマトグラムを示す。

【0061】

図６Ａは、本教示に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化されたＬ－カルニチンおよびアセチル－Ｌ－カルニチンの標準のＬＣ／ＭＳ^２クロマトグラムを示す。カルニチンおよびアセチルカルニチンの溶液を、アセトニトリル中の０．７５Ｍ トリエタノールアミンの中で式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤と反応させ、６０℃で１時間加熱した。その反応混合物を、ＬＣ／ＭＳ－ＭＳ（Ｔｕｒｂｏ Ｓｐｒａｙ源およびＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣを備えたＳＣＩＥＸ ３２００ ＱＴＲＡＰ）に注入し、Ｃ１３カラムを使用して分離した。図は、誘導体化したカルニチン（３４９．２／１６０．３）およびアセチルカルニチン（３９１．２／１６０．３）のＭＲＭトランジションを使用する抽出されたイオンクロマトグラムを示す。

【0062】

図６Ｂは、カルボキシル含有分析物が式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤で誘導体化された血漿サンプルのＬＣ／ＭＳ^２ クロマトグラムを示す。特に、２００μＬの、アセトニトリルを、５０μＬの血漿サンプルに添加して、そのサンプル中のタンパク質を沈殿させ、そのサンプルを遠心分離して、タンパク質をペレット化した。５０μＬの上清を取り出し、乾燥させた。その乾燥させた上清を、２０μＬの、アセトニトリル中の０．７５Ｍ トリエタノールアミンで再構成し、次いで、これを、２０μＬの、アセトニトリル中の式ＩＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤（２０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、６０℃で１時間加熱した。次いで、６０μＬの、水中の２％ ギ酸を添加し、２μＬを、ＬＣ／ＭＳ－ＭＳ（Ｔｕｒｂｏ Ｓｐｒａｙ源およびＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣを備えたＳＣＩＥＸ ３２００ ＱＴＲＡＰ）に注入し、Ｃ１３カラムを使用して分離した。図は、誘導体化したカルニチン（３４９．２／１６０．３）およびアセチルカルニチン（３９１．２／１６０．３）のＭＲＭトランジションを使用する抽出されたイオンクロマトグラムを示す。

【0063】

本教示の種々の局面によれば、種々のＰＡＢベースの誘導体化薬剤を合成する方法が、本明細書で提供され、上記方法は、置換されたかもしくは置換されていないＰＡＢと１種もしくはこれより多くのさらなる化合物（例えば、アミノオキシ試薬）とを反応させて、上記ＰＡＢベースの誘導体化薬剤を形成する工程を包含し得る。例えば、いくつかの局面において、本教示の種々の局面に従うＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、置換されたかもしくは置換されていないＰＡＢと、四級アミンまたはその置換基を有するアミノオキシ化合物（アミノオキシ化合物の重原子誘導体を含む）とを反応させることによって精製され得る。このようなアミノオキシ化合物の例は、以下の構造を有得：

【化15】

ここでｎは１～２０、１～１５、１～１０、１～５、または２～４であり、Ｒ_１は、四級アミンまたは以下の構造を有する置換基：

【化16】

であり、ここで各Ｒ_４は、独立して、Ｈまたは環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、もしくはＣ_１－Ｃ_１８アルキンであり、ここでｍは、１～２０の間の整数であり、Ｘは、アニオンである。

【0064】

このようなアミノオキシ化合物の特定の例としては、Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_ｎ－（ＮＲ_３）^＋（またはその重原子誘導体）（ここでｎは１～２０であり、各Ｒは、独立して、水素または環式、分枝状もしくは直鎖状のＣ_１－Ｃ_１８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_１８アルケン、またはＣ_１－Ｃ_１８アルキンである）が挙げられる。化合物 Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋は、このようなアミノオキシ試薬の一例である。

【0065】

図７Ａを参照すると、式Ｉの置換されていないＰＡＢ化合物（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから得た。ＣＡＳ ７０－１１－１）を、５当量のアミノオキシ化合物 Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋（Ａｍｐｌｉｆｅｘ Ｋｅｔｏ Ｒｅａｇｅｎｔ）と、５％ 酢酸／メタノール中で反応させ、周囲温度において１２時間撹拌して、式ＶＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤を形成した。その生成物を、Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。さらに、上で注記されるように、本明細書で記載される種々の化合物の重原子誘導体を、例えば、非限定的な例によれば、重水素原子（^２ＨまたはＤ）、^１３Ｃ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、および^１５Ｎのうちの１種もしくはこれより多くのものを組み込むことによって、さらに使用した。例えば、図７Ｂは、式ＩのＰＡＢと重原子誘導体Ｈ_２ＮＯ－（ＣＤ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋との反応を示す一方で、図７Ｃは、重原子誘導体 Ｈ_２ＮＯ－（^１３ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋との反応を示す。

【0066】

図８Ａを参照すると、式ＩＩＩの置換されたＰＡＢ化合物（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒから得た２－ブロモ－４’－（１－ピロリジニル）アセトフェノン、ＣＡＳ番号２１６１４４－１８－２）を、５当量のアミノオキシ化合物Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋（Ａｍｐｌｉｆｅｘ Ｋｅｔｏ Ｒｅａｇｅｎｔ）と５％酢酸／メタノール中で反応させ、周囲温度で１２時間撹拌して、式ＶＩＩのＰＡＢベースの誘導体化薬剤を形成した。その生成物を、Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。図８Ｂは、式ＩＩＩのＰＡＢと、重原子誘導体Ｈ_２ＮＯ－（ＣＤ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋との反応を示す一方で、図８Ｃは、重原子誘導体 Ｈ_２ＮＯ－（^１３ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋との反応を示す。

【0067】

いくつかの実施形態によれば、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤の１種もしくはこれより多くの重原子誘導体は、１もしくはこれより多くのサンプル実行において内部標準として使用され得る。さらにまたは代わりに、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤およびその重原子誘導体のうちの１種もしくはこれより多くのものは、多重アッセイにおいて、例えば、相対的または絶対的定量化においてセットとして使用され得る。例えば、ＰＡＢベースの誘導体化薬剤の種々の重原子誘導体のセットは、二重、三重、四重、および他の多重アッセイのために使用され得る。非限定的な例によれば、図９は、本教示の種々の実施形態に従う四重アッセイにおいて使用される式ＶＩの４種のＰＡＢベースの誘導体化薬剤の例示的セットを示す。示されるように、その示されるＰＡＢベースの誘導体化薬剤の各々は、アミノオキシ化合物 Ｈ_２ＮＯ－（ＣＨ_２）_３－（ＮＨ_３）^＋の異なる重同位体バージョンと反応させた式Ｉの置換されていないＰＡＢ化合物を含む。

【0068】

いくつかの実施形態によれば、キットがまた、提供される。いくつかの実施形態において、上記キットは、ＰＡＢベースの誘導体化試薬（例えば、本明細書で記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない）を含む。いくつかの実施形態において、上記ＰＡＢベースの誘導体化薬剤は、式ＩＩの化合物またはその重原子誘導体である。種々の実施形態によれば、上記キットは、緩衝液、１種もしくはこれより多くのクロマトグラフィーカラム、および必要に応じて上記方法またはアッセイを行うに当たって有用な他の試薬および／または構成要素を含み得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、例えば、ユーザーがサンプルを添加することのみを必要とするような均質アッセイを含み得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、較正または正規化試薬または標準を含み得る。アッセイを行い得るまたは行うために使用されるべき機器設定に関する情報はまた、キットの中に含まれ得る。いくつかの実施形態において、サンプル調製、操作条件、容積、温度設定などに関する情報は、キットとともに含まれ得る。上記キットは、１個もしくはこれより多くの試薬容器および適切な説明書を含む密閉容器の中にパッケージされ得る。１種もしくはこれより多くのアッセイ、測定値、トランジション対、操作説明書、操作を行うためのソフトウェア、これらの組み合わせなどに関する電子情報が格納されている電子媒体は、キットの中に含められ得る。種々の実施形態によれば、上記ＰＡＢベースの誘導体化試薬およびその中間体の合成のための方法が提供され得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、既知のフェノールまたはカルボキシル含有分析物（例えば、目的の分析物）の既知の濃度を含む少なくとも１種の標準を含み得る。いくつかの実施形態によれば、キットは、フェノールまたはカルボキシル含有分析物を誘導体化、定量、および検出するための説明書を含み得る。

【0069】

本明細書で使用される節の見出しは、体系化する目的に過ぎず、限定として解釈されるべきではない。出願人の教示は、種々の実施形態とともに記載されるが、出願人の教示がこのような実施形態に限定されることは意図されない。反対に、出願人の教示は、当業者によって理解されるように、種々の代替、改変、および均等物を包含する。

【0070】

以下が特許請求される。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】