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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-09-13
(54)【発明の名称】四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途
(51)【国際特許分類】
C07D 471/22 20060101AFI20230906BHJP
A61K 31/4985 20060101ALI20230906BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230906BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230906BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230906BHJP
【ＦＩ】
C07D471/22 CSP
A61K31/4985
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P35/02
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023512802
(86)(22)【出願日】2021-08-19
(85)【翻訳文提出日】2023-02-21
(86)【国際出願番号】 CN2021113452
(87)【国際公開番号】W WO2022037630
(87)【国際公開日】2022-02-24
(31)【優先権主張番号】202010847583.7
(32)【優先日】2020-08-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202011277650.2
(32)【優先日】2020-11-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110323813.4
(32)【優先日】2021-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110543513.7
(32)【優先日】2021-05-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202110816014.0
(32)【優先日】2021-07-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】510116819
【氏名又は名称】浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．４６ Ｗａｉｓｈａ Ｒｏａｄ，Ｊｉａｏｊｉａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１８０００，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
(71)【出願人】
【識別番号】521508896
【氏名又は名称】上海昂睿医薬技術有限公司
【氏名又は名称原語表記】Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｒｙｌ Ｐｈａｒｍｔｅｃｈ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ３， ３０１ Ｍｉｎｑｉａｎｇ Ｒｏａｄ， Ｓｏｎｇｊｉａｎｇ， Ｓｈａｎｇｈａｉ， ２０１６１２， Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】陳友喜
(72)【発明者】
【氏名】程超英
(72)【発明者】
【氏名】▲こん▼亮
(72)【発明者】
【氏名】毛文涛
(72)【発明者】
【氏名】向清
(72)【発明者】
【氏名】趙偉峰
(72)【発明者】
【氏名】趙▲うぇん▼▲うぇん▼
(72)【発明者】
【氏名】和燕玲
(72)【発明者】
【氏名】朱明江
(72)【発明者】
【氏名】叶成
(72)【発明者】
【氏名】胡泰山
(72)【発明者】
【氏名】銭文建
(72)【発明者】
【氏名】陳磊
【テーマコード（参考）】
4C065
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C065AA04
4C065BB12
4C065CC06
4C065DD05
4C065EE04
4C065HH02
4C065JJ02
4C065KK02
4C065KK04
4C065KK09
4C065LL04
4C065PP03
4C065PP05
4C065PP12
4C065PP17
4C065QQ05
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB01
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC20
(57)【要約】
本発明は、四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途に関する。具体的には、本発明は、一般式（Ｉ）で表される四環系誘導体、その製造方法及びその薬学的に許容される塩、ならびに治療剤として、特にＫ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤としてのそれらの使用に関する。ただし、一般式（Ｉ）における各置換基の定義は、明細書における定義と同じである。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。【化1】
（式中、
Ｅは
【化2】
からなる群より選択され、
Ｌは、化学結合又はＣ１～Ｃ６のアルキレン基からなる群より選択され；ただし、前記アルキレン基は、アルキル基、ハロゲン及びヒドロキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；好ましくは、Ｌは、化学結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－又は－ＣＨ（ＣＨ３）－からなる群より選択され；より好ましくは、Ｌは化学結合であり、
Ｘ及びＹは、それぞれ独立してＮ及びＣＲｃからなる群より選択され、
Ｚは、Ｏ及びＮＲ６からなる群より選択され、
環Ａは、５～８員の単環式ヘテロシクリル基及び５～１０員の橋かけヘテロシクリル基からなる群より選択され；ただし、前記単環式ヘテロシクリル基又は橋かけヘテロシクリル基は、１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｒを含み、
環Ｂは、２つの窒素原子を含む４～１２員の複素環であり、
環Ｃは、アリール基、ヘテロアリール基及び縮合環からなる群より選択され、
Ｒａは、水素原子及びフッ素からなる群より選択され、
Ｒｂは、水素原子、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、
【化3】
からなる群より選択され、
Ｒｃは、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基又はアルコキシ基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；Ｒｃは、ハロゲンであることが好ましく、フッ素又は塩素であることがより好ましく、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基又はアルコキシ基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；好ましくは、Ｒ１は水素原子であり、
Ｒ２は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ３は、アルキル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基は、１つ又は複数のＲＡで任意選択的にさらに置換され；好ましくは、Ｒ３はヘテロアリール基であり；
ＲＡは、同一または異なって、それぞれ独立して、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；ただし、少なくとも１つのＲＡは－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７であり；好ましくは、Ｒ３は２つのＲＡで置換されたヘテロアリール基であり（ただし、１つのＲＡはアルキル基であり、もう１つのＲＡは－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７である）、
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９及び－ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９からなる群より選択され；好ましくは、Ｒ４は、水素原子、メチル基、重水素化メチル基又は＝Ｏであり、
Ｒ５は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され、水素原子又はアルキル基であることが好ましく、
Ｒ６は、水素原子、アルキル基、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３及び－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３からなる群より選択され、
Ｒ７は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；
或いは、Ｒ８及びＲ９は、それらが連結している原子とともに４～８員のヘテロシクリル基を形成し；ただし、前記４～８員のヘテロシクリル基は１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｒを含有し、かつ、前記４～８員のヘテロシクリル基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アミノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、カルボキシ基及びカルボン酸エステル基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ１３は、アルキル基であり、メチル基であることが好ましく、
ｎは、０、１、２又は３であり、
ｐは、０、１又は２であり、
ｑは、０、１又は２であり、
ｒは、０、１又は２である。）
【請求項2】
下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。【化4】
（式中、
Ｇは、Ｏ、Ｃ＝Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
Ｗは、ＮＲｆ、Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
条件として、ＧがＯである場合、ＷはＣＲｄＲｅであり；ＷがＮＲｆである場合、ＧはＣ＝Ｏであり、
ＲｄとＲｅは、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され、好ましくは水素原子であり、
Ｒｆは、水素原子、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはアルキル基又は重水素化アルキル基であり、より好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ５は、水素原子又はアルキル基であり；ただし、前記アルキル基は好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｃ、Ｅ、Ｌ及びｎの定義は、請求項１で記載されている通りである。）
【請求項3】
下記の一般式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。【化5】
（式中、環Ｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒｃ、Ｅ、Ｌ、Ｇ、Ｗ及びｎの定義は、請求項２で記載されている通りである。）
【請求項4】
下記の一般式（Ｖ）又は（ＶＩ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。【化6】
（式中、
Ｒｇは、水素原子、アルキル基及び－ＳＲ７からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は－Ｓ－ＣＨ３であり、
Ｒｈは水素原子又は、アルキル基であり好ましくはメチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ４はアルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ５、Ｒｃ、Ｅ及びｎの定義は、請求項２で記載されている通りである。）
【請求項5】
Ｅが、【化7】
からなる群より選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
環Ｃは、フェニル基、ナフチル基、ピリジル基、ベンゾチアゾリル基及びベンゾピラゾリル基からなる群より選択され、好ましくはフェニルである、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
【化8】
が、
【化9】
からなる群より選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
Ｒｃは、ハロゲンであり、好ましくはフッ素又は塩素である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項9】
Ｒ２が、水素原子、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アルコキシ基又はシクロアルキル基が、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、Ｒ８及びＲ９の定義が、請求項１で記載されている通りである、
請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項10】
Ｒ２は、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、アミノ基、メチル基、エチル基、トリフルオロメチル基、シクロプロピル基及び【化10】
からなる群より選択され、好ましくはヒドロキシ基又はフッ素である、請求項９に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項11】
Ｒ３が、【化11】
からなる群より選択される、
（式中、Ｒｊは、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基、－ＳＲ７、ハロアルキル基及びハロアルコキシ基からなる群より選択され、かつ、少なくとも１つのＲｊは－ＳＲ７であり；Ｒｊは、好ましくはアルキル基または－ＳＲ７であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
ｋは、０、１、２、３、４又は５である。）
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
１つのＲｊは、－ＳＲ７であり、もう１つのＲｊは、アルキル基であり；ただし、前記アルキル基は、好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、より好ましくはイソプロピル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり；好ましくは、Ｒ７はメチル基であり、
ｋは２である、請求項１１に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
Ｒ３が、【化12】
からなる群より選択される、
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
Ｒ４は、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は重水素化メチル基である、請求項１に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
ＧがＯであり、ＷがＣＨ２である、請求項２～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
ＧがＣＨ２であり、ＷがＯである、請求項２～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
ＧがＣ＝Ｏであり、ＷがＮＣＨ３である、請求項２～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項18】
Ｒ５が水素原子又はメチル基である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項19】
Ｌが、化学結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－及び－ＣＨ（ＣＨ３）－からなる群より選択され、より好ましくは、Ｌが化学結合である、
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項20】
前記化合物が、【化13】
である、請求項１に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項21】
【化14】
上記の一般式（ＩＡ）の化合物を上記の一般式（ＩＢ）の化合物と塩基性条件下で反応させ、さらに任意選択的に保護基を除去することにより上記の一般式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む（式中、Ｘ１は脱離基であり、好ましくは塩素であり、環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｅ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、請求項１で記載されている通りである。）、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩を製造する方法。
【請求項22】
下記の一般式（ＩＡ）で示される化合物又はその立体異性体、互変異性体その薬学的に許容される塩。【化15】
（式中、環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、請求項１で記載されている通りである。）
【請求項23】
前記化合物が、【化16】
である、請求項２２に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩。
【請求項24】
有効量の請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、賦形剤又はそれらの組み合わせとを含有する、医薬組成物。
【請求項25】
Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤（Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤は、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ阻害剤である）の製造における、請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いは請求項２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項26】
ＫＲＡＳ変異によって媒介される疾患を治療するための医薬品の製造における請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いは請求項２４に記載の医薬組成物の使用であって、前記ＫＲＡＳ変異によって媒介される疾患は、好ましくはがんであり、
ただし、前記がんは、好ましくは膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、子宮癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、横紋筋肉腫、皮膚有棘細胞癌、子宮頸癌、および精巣胚細胞癌からなる群より選択され、より好ましくは膵臓がん、結腸直腸癌及び肺癌であり、
ただし、前記ＫＲＡＳ変異は、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異である、使用。
【請求項27】
がんを治療するための医薬品の製造における、請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いは請求項２４に記載の医薬組成物の使用であって、前記がんは、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、子宮癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、横紋筋肉腫、皮膚有棘細胞癌、子宮頸癌、精巣胚細胞癌からなる群より選択され、好ましくは膵臓がん、結腸直腸癌、又は肺癌である、使用。
【請求項28】
前記肺癌が非小細胞肺癌である、請求項２６又は２７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［相互参照］
本出願は、以下の中国特許出願の優先権を主張する。
１）発明の名称「四環系誘導体及びその製造方法と医薬用途」である２０２０年８月２１日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２０１０８４７５８３．７
２）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２０年１１月１６日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２０１１２７７６５０．２
３）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年３月２６日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０３２３８１３．４
４）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年５月１９日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０５４３５１３．７
５）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年７月２０日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０８１６０１４．０
上記優先権出願のそれぞれの内容は、援用により全体として本明細書に組み込まれる。
本発明は、四環系誘導体、その製造方法及びその誘導体を含む医薬組成物、ならびに治療剤として、特にＫ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤としてのそれらの用途に関する。
本出願は、以下の中国特許出願の優先権を主張する。
１）発明の名称「四環系誘導体及びその製造方法と医薬用途」である２０２０年８月２１日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２０１０８４７５８３．７
２）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２０年１１月１６日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２０１１２７７６５０．２
３）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年３月２６日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０３２３８１３．４
４）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年５月１９日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０５４３５１３．７
５）発明の名称「四環系誘導体、その製造方法及びその医薬用途」である２０２１年７月２０日に中国特許庁に出願された中国特許出願２０２１１０８１６０１４．０
上記優先権出願のそれぞれの内容は、援用により全体として本明細書に組み込まれる。
本発明は、四環系誘導体、その製造方法及びその誘導体を含む医薬組成物、ならびに治療剤として、特にＫ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤としてのそれらの用途に関する。
【背景技術】
【0002】
ＲＡＳは、１８９個アミノ酸を有し、原形質膜と結合し、ＧＤＰ又はＧＴＰに結合する一連の関連する単量体球状タンバク質（２１ｋＤａ分子量）を表す。正常な発達や生理学的条件下では、ＲＡＳは成長因子やその他の様々な細胞外シグナルを受け取ることにより活性化され、細胞の成長、生存、移動及び分化などの機能の調節を担っている。ＲＡＳは分子スイッチとして機能し、アクティブなシグナル伝達立体配座がＧＴＰに結合し、非アクティブな立体配座がＧＤＰに結合するように、ＲＡＳタンパク質のオン／オフ状態がヌクレオチドへの結合により決定される。ＲＡＳは結合されたＧＤＰを含む場合、休眠又は静止又はオフ状態にあり、「非アクティブ」である。細胞が特定の成長促進刺激物に曝露されて応答する際、ＲＡＳは誘導され、それに結合されたＧＤＰをＧＴＰに変換する。ＧＴＰが結合されると、ＲＡＳは「オン」になり、他のタンパク質（その「下流のターゲット」）と相互作用して他のタンパク質を活性化させることができる。ＲＡＳタンパク質自体は、ＧＴＰを加水分解してＧＤＰに戻すことにより自身をオフ状態にする極めて低い固有の能力を持っている。ＲＡＳをオフに変換するには、ＲＡＳと相互作用し、ＧＴＰからＧＤＰへの変換を大幅に促進するＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰｓ）と呼ばれる外因性タンパク質が必要である。ＧＡＰと相互作用し、またＧＴＰをＧＤＰに変換する能力に影響を与えるいずれかのＲＡＳの変異は、延長された前記タンパク質の活性化を引き起こし、そして成長と分裂を続けるように細胞に伝える延長されたシグナルが生じた。このように、これらのシグナルにより細胞が成長および分裂するので、過度に活性化されたＲＡＳシグナル伝達は最終的にがんにつながる恐れがある。
【0003】
構造的に、ＲＡＳタンパク質には、グアニンヌクレオチドの結合と加水分解（ＧＴＰアーゼ反応）であるＲＡＳの酵素活性を担うＧドメインが含まれ、またＣＡＡＸボックスと呼ばれるＣ端延長領域も含まれる。Ｃ端延長領域が翻訳されて修飾されたタンパク質が膜に標的化される可能性がある。Ｇドメインは約２１～２５ｋＤａのサイズであり、リン酸結合ループ（Ｐ－ループ）を含む。Ｐ－ループは、ヌクレオチドに結合するタンパク質のポケットを表し、ヌクレオチドの結合と加水分解に必要な保存性アミノ酸残基（グリシン１２、スレオニン２６及びリジン１６）を持つドメインの剛性部分である。Ｇドメインは、いわゆるスイッチＩ領域（残基３０～４０）とスイッチＩＩ領域（残基６０～７６）をさらに含む。Ｉ領域とＩＩ領域ともタンパク質の動的部分であり、この動的部分は、静止状態と負荷状態の間で変換する能力を持つため、「ばね仕掛け」メカニズムと呼ばれることがよくある。主な相互作用としては、スレオニン－３５とグリシン－６０およびＧＴＰのγ－リン酸により形成される水素結合であり、スイッチＩ領域及びスイッチＩＩ領域をそれぞれアクティブな立体配座を維持する。ＧＴＰが加水分解されてリン酸塩が放出された後、この二つの領域は非アクティブなＧＤＰ立体配座に緩和された。
【0004】
ＲＡＳファミリーのメンバーの中で、ＫＲＡＳ（８５％）は最も発癌性変異に見られ、ＮＲＡＳ（１２％）およびＨＲＡＳ（３％）はあまり見られない。ＫＲＡＳ変異は、米国で最も死亡率の高い３種類のがんである膵臓がん（９５％）、結腸直腸癌（４５％）及び肺癌（２５％）でよく見られ、多発性骨髄腫、子宮癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、横紋筋肉腫、皮膚有棘細胞癌、子宮頸癌、精巣胚細胞癌などを含む他の種類のがんでもＫＲＡＳ変異が見られるが、乳がん、卵巣がん及び脳腫瘍ではめったに見られない（＜２％）。非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）で、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃは最も一般的な変異であり、ＫＲＡＳ変異のほぼ半分を占め、続いてよく見られる変異はＧ１２Ｖ及びＧ１２Ｄである。非小細胞肺癌では、特定の対立遺伝子の変異頻度の増加は、喫煙により誘発された代表的な変異（Ｇ：ＣからＴ：Ａへの置換）に起因することが多く、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ（ＧＧＴからＴＧＴへ）及びＧ１２Ｖ（ＧＧＴからＧＴＴへ）変異をもたらす。
【0005】
大規模なゲノム研究により、Ｇ１２Ｃを含む肺癌ＫＲＡＳ変異は、ＮＳＣＬＣにおける他の既知のドライバー発癌性変異（ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＲＥＴ及びＢＲＡＦを含む）と相互的に排他的であり、肺癌におけるＫＲＡＳ変異の独自性が示されている。一方、ＫＲＡＳ変異は、ＳＴＫ１１、ＫＥＡＰ１及びＴＰ５３などの特定の共変異と同時に発生することが多く、それらは変異したＲＡＳと協力して細胞を非常に悪性かつ攻撃的な腫瘍細胞に変換する。
【0006】
この３つのＲＡＳ癌遺伝子は、ヒトのがんで最も頻繁に変異する遺伝子ファミリーを構成している。残念なことに、３０年以上の研究努力にもかかわらず、臨床的に有効な抗ＲＡＳ療法はまだなく、小分子を使用してこの遺伝子を標的とすることは挑戦である。従って、当技術分野では、ＲＡＳ（例えば、Ｋ－ＲＡＳ、Ｈ－ＲＡＳ及び／又はＮ－ＲＡＳ）を標的とし、それを用いてがんなどの様々な疾患を治療するための小分子が緊急に必要とされている。
【0007】
現在、ＫＲＡＳ阻害剤の臨床開発競争は国内外で激しく、その中で、Ｍｉｒａｔｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ社が開発したＫＲＡＳアーゼ阻害剤であるＭＲＴＸ－８４９は、進行性固形腫瘍、転移性結腸・直腸癌及び転移性非小細胞肺癌などの疾患の予防と治療のための第ＩＩ相臨床試験に入った。ＡＭＧ－５１０（アムジェン社、ｐｈａｓｅ３）を含む他のＫＲＡＳ阻害剤も開発中である。初期の臨床研究により、ＫＲＡＳ阻害剤が非小細胞肺癌患者の疾患進行を制御して緩和し、進行性肺癌及び大腸癌患者の腫瘍サイズを低下させることができることが示されている。現在、ＷＯ２０２００４７１９２、ＷＯ２０１９０９９５２４及びＷＯ２０１８２１７６５１などを含む一連のＫＲＡＳ阻害剤に関する特許出願が公表されている。ＫＲＡＳ阻害剤の研究と応用がある程度進んでいるが、既存のＫＲＡＳ阻害剤は、有効性と安全性の面でまだ満足のいくものではなく、改善の余地がまだ大きく、新たなＫＲＡＳ阻害剤の研究と開発を続ける必要がある。
【発明の概要】
【0008】
本発明者らは、下記一般式（Ｉ）で表される四環系誘導体、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩が、有効なＫＲＡＳ阻害剤として使用でき、良好な有効性及び安全性を有することを研究の中で意外に見出した。
【0009】
そこで、第１の態様においては、本発明は、下記の一般式（Ｉ）で表される四環系誘導体、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩を提供し、
【0010】
【化1】
【0011】
式中、
【0012】
【化2】
【0013】
Ｌは、化学結合及びＣ１～Ｃ６のアルキレン基からなる群より選択され；ただし、前記アルキレン基は、アルキル基、ハロゲン及びヒドロキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；好ましくは、Ｌは、化学結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－又は－ＣＨ（ＣＨ３）－からなる群より選択され；より好ましくは、Ｌは化学結合であり、
Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、Ｎ又はＣＲｃからなる群より選択され、
Ｚは、Ｏ及びＮＲ６からなる群より選択され、
Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、Ｎ又はＣＲｃからなる群より選択され、
Ｚは、Ｏ及びＮＲ６からなる群より選択され、
【0014】
環Ａは、５～８員の単環式ヘテロシクリル基及び５～１０員の橋かけヘテロシクリル基からなる群より選択され；ただし、前記単環式ヘテロシクリル基又は橋かけヘテロシクリル基は、１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｒを含み、
環Ｂは、２つの窒素原子を含む４～１２員の複素環であり、
環Ｃは、アリール基、ヘテロアリール基及び縮合環からなる群より選択され、
環Ｂは、２つの窒素原子を含む４～１２員の複素環であり、
環Ｃは、アリール基、ヘテロアリール基及び縮合環からなる群より選択され、
【0015】
Ｒａは、水素原子及びフッ素からなる群より選択され、
【0016】
【化3】
【0017】
Ｒｃは、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基又はアルコキシ基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；Ｒｃは、好ましくはハロゲンであり、より好ましくはフッ素又は塩素であり、
【0018】
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基又はアルコキシ基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；Ｒ１は、好ましくは水素原子であり、
【0019】
Ｒ２は同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、オキソ基（＝Ｏ）、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
【0020】
Ｒ３は、アルキル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基は、１つ又は複数のＲＡで任意選択的にさらに置換され；Ｒ３は、好ましくはヘテロアリール基であり、
【0021】
ＲＡは、同一または異なって、それぞれ独立して、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択され、ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、アルキル基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－ＯＲ７、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；ただし、少なくとも１つのＲＡは－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７であり；好ましくは、Ｒ３は２つのＲＡでさらに置換されたヘテロアリール基であり、ただし、１つのＲＡは、アルキル基であり、もう１つのＲＡは－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択され、
【0022】
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９又は－ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９からなる群より選択され；好ましくは、Ｒ４は、水素原子、メチル基、重水素化メチル基又は＝Ｏであり、
【0023】
Ｒ５は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され、好ましくは、水素原子又はアルキル基であり、
Ｒ６は、水素原子、アルキル基、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３及び－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３からなる群より選択され、
Ｒ７は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ６は、水素原子、アルキル基、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３及び－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３からなる群より選択され、
Ｒ７は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
【0024】
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；
【0025】
或いは、Ｒ８及びＲ９は、それらが連結している原子とともに４～８員のヘテロシクリル基を形成し；ただし、前記４～８員のヘテロシクリル基は１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｒを含有し、かつ前記４～８員のヘテロシクリル基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
【0026】
Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アミノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、カルボキシ基及びカルボン酸エステル基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ１３はアルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
Ｒ１３はアルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
【0027】
ｎは、０、１、２又は３であり、
ｐは、０、１又は２であり、
ｑは、０、１又は２であり、
ｒは、０、１又は２でありる。
ｐは、０、１又は２であり、
ｑは、０、１又は２であり、
ｒは、０、１又は２でありる。
【0028】
本発明の好適な実施形態においては、一般式（Ｉ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩は、下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩であり、
【0029】
【化4】
【0030】
式中、
Ｇは、Ｏ、Ｃ＝Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
Ｗは、ＮＲｆ、Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
条件としては、ＧがＯである場合、ＷはＣＲｄＲｅであり；ＷがＮＲｆである場合、ＧはＣ＝Ｏであり、
Ｒｄ及びＲｅは、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され、好ましくは水素原子であり、
Ｒｆは、水素原子、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはアルキル基又は重水素化アルキル基であり、より好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ５は、水素原子又は、アルキル基であり；ただし、前記アルキル基は好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｃ、Ｅ、Ｌ及びｎの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
Ｇは、Ｏ、Ｃ＝Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
Ｗは、ＮＲｆ、Ｏ及びＣＲｄＲｅからなる群より選択され、
条件としては、ＧがＯである場合、ＷはＣＲｄＲｅであり；ＷがＮＲｆである場合、ＧはＣ＝Ｏであり、
Ｒｄ及びＲｅは、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル基及びアルコキシ基からなる群より選択され、好ましくは水素原子であり、
Ｒｆは、水素原子、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはアルキル基又は重水素化アルキル基であり、より好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ５は、水素原子又は、アルキル基であり；ただし、前記アルキル基は好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｃ、Ｅ、Ｌ及びｎの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
【0031】
本発明の好適な実施形態においては、一般式（ＩＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩は、下記の一般式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩であり、
【0032】
【化5】
【0033】
式中、環Ｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒｃ、Ｅ、Ｌ、Ｇ、Ｗ及びｎの定義は、一般式（ＩＩ）で記載されている通りである。
【0034】
本発明の好適な実施形態においては、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩は、下記の一般式（Ｖ）又は（ＶＩ）で表される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩であり、
【0035】
【化6】
【0036】
式中、
Ｒｇは、水素原子、アルキル基及び－ＳＲ７からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は－Ｓ－ＣＨ３であり、
Ｒｈは、水素原子又はアルキル基であり、好ましくはメチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ４は、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ５、Ｒｃ、Ｅ及びｎの定義は、一般式（ＩＩ）で記載されている通りである。
Ｒｇは、水素原子、アルキル基及び－ＳＲ７からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は－Ｓ－ＣＨ３であり、
Ｒｈは、水素原子又はアルキル基であり、好ましくはメチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ４は、アルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は重水素化メチル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
環Ｃ、Ｒ２、Ｒ５、Ｒｃ、Ｅ及びｎの定義は、一般式（ＩＩ）で記載されている通りである。
【0037】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
【0038】
【化7】
【0039】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
【0040】
【化8】
【0041】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、Ｒｃはハロゲンであり、好ましくはフッ素又は塩素である。
【0042】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アルコキシ基又はシクロアルキル基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；より好ましくは、Ｒ２は、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、アミノ基、メチル基、エチル基、トリフルオロメチル基、シクロプロピル基及び
Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択され；ただし、前記アルキル基、アルコキシ基又はシクロアルキル基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基及び－ＮＲ８Ｒ９からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され；より好ましくは、Ｒ２は、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、アミノ基、メチル基、エチル基、トリフルオロメチル基、シクロプロピル基及び
【0043】
【化9】
【0044】
からなる群より選択され；さらにより好ましくは、Ｒ２はヒドロキシ基又はフッ素であり、
Ｒ８及びＲ９の定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
Ｒ８及びＲ９の定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
【0045】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
Ｒ３は、
Ｒ３は、
【0046】
【化10】
【0047】
式中、
Ｒｊは、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基、－ＳＲ７ハロアルキル基及びハロアルコキシ基からなる群より選択され、少なくとも１つのＲｊは－ＳＲ７からなる群より選択され；Ｒｊは、好ましくはアルキル基及び－ＳＲ７であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
ｋは、０、１、２、３、４又は５であり。
Ｒｊは、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基、－ＳＲ７ハロアルキル基及びハロアルコキシ基からなる群より選択され、少なくとも１つのＲｊは－ＳＲ７からなる群より選択され；Ｒｊは、好ましくはアルキル基及び－ＳＲ７であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、
Ｒ７は、アルキル基であり、好ましくはメチル基であり、
ｋは、０、１、２、３、４又は５であり。
【0048】
本発明の好適な実施形態においては、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
Ｒ３は、
Ｒ３は、
【0049】
【化11】
【0050】
式中、
Ｒｊは、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基、－ＳＲ７ハロアルキル基及びハロアルコキシ基からなる群より選択され、少なくとも１つのＲｊは－ＳＲ７であり；Ｒｊは、好ましくはアルキル基又は－ＳＲ７であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、
条件としては、
１つのＲｊは－ＳＲ７であり、
もう１つのＲｊは、アルキル基であり；ただし、前記アルキル基は、好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、より好ましくはイソプロピル基であることであり、
Ｒ７は、アルキル基であり；好ましくは、Ｒ７はメチル基であり、
ｋは２である。
Ｒｊは、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基、－ＳＲ７ハロアルキル基及びハロアルコキシ基からなる群より選択され、少なくとも１つのＲｊは－ＳＲ７であり；Ｒｊは、好ましくはアルキル基又は－ＳＲ７であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、
条件としては、
１つのＲｊは－ＳＲ７であり、
もう１つのＲｊは、アルキル基であり；ただし、前記アルキル基は、好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、より好ましくはイソプロピル基であることであり、
Ｒ７は、アルキル基であり；好ましくは、Ｒ７はメチル基であり、
ｋは２である。
【0051】
本発明の好適な実施形態においては、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩は、
【0052】
【化12】
【0053】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、Ｒ４はアルキル基及び重水素化アルキル基からなる群より選択され、好ましくはメチル基又は重水素化メチル基である。
【0054】
本発明の好適な実施形態において、一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、ＧがＯであり、ＷがＣＨ２である。
【0055】
本発明の好適な実施形態において、一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、ＧがＣＨ２であり、ＷがＯである。
【0056】
本発明の好適な実施形態において、一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、ＧがＣ＝Ｏであり、ＷがＮＣＨ３である。
【0057】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、Ｒ５が水素原子又はメチル基である。
【0058】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
Ｌが化学結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－および－ＣＨ（ＣＨ３）－からなる群より選択され；より好ましくは、Ｌが化学結合である。
Ｌが化学結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－および－ＣＨ（ＣＨ３）－からなる群より選択され；より好ましくは、Ｌが化学結合である。
【0059】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
Ｌは化学結合であり、かつＲ３はヘテロアリール基であり、
より好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３はメチルチオ基（－Ｓ－ＣＨ３）で置換されたヘテロアリール基であり、
特に好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３はメチルチオ基で置換されたピリジル基であり、
特に好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３は
Ｌは化学結合であり、かつＲ３はヘテロアリール基であり、
より好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３はメチルチオ基（－Ｓ－ＣＨ３）で置換されたヘテロアリール基であり、
特に好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３はメチルチオ基で置換されたピリジル基であり、
特に好ましくは、Ｌは化学結合であり、かつＲ３は
【0060】
【化13】
【0061】
である。
或いは、本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｖ）和（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、Ｒｇが－Ｓ－ＣＨ３である。
或いは、本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｖ）和（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、Ｒｇが－Ｓ－ＣＨ３である。
【0062】
本発明の好適な実施形態において、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩としては、
環Ｃは二環式ヘテロアリール基又はナフチル基であり、前記二環式ヘテロアリール基又はナフチル基は、ヒドロキシ基又はアミノ基で任意選択的に置換され、
より好ましくは、前記
環Ｃは二環式ヘテロアリール基又はナフチル基であり、前記二環式ヘテロアリール基又はナフチル基は、ヒドロキシ基又はアミノ基で任意選択的に置換され、
より好ましくは、前記
【0063】
【化14】
【0064】
本発明の代表的な化合物としては、以下の表に記載されている化合物及びその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない：
【0065】
【化15】
【0066】
【化16】
【0067】
注：構造式とその構造式に付けられた名前が一致ではない場合は、構造式が優先する。
【0068】
また、本発明は、
【0069】
【化17】
【0070】
一般式（ＩＡ）の化合物を一般式（ＩＢ）の化合物と塩基性条件下で反応させ、任意選択的に保護基をさらに除去し、一般式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む（式中、Ｘ１は脱離基であり、好ましくは塩素であり、環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｅ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである）、一般式（Ｉ）の化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩を製造する方法を提供する。
【0071】
さらに、本発明は、一般式（ＩＡ）：
【0072】
【化18】
【0073】
（式中、環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。）で示される化合物又はその立体異性体、互変異性体その薬学的に許容される塩を提供する。
【0074】
一般式（ＩＡ）の代表的な化合物としては、以下の表に記載されている化合物、及びその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【0075】
【化19】
【0076】
別の態様においては、本発明は、有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩と、任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤又はそれらの組み合わせとを含む医薬組成物を提供する。
【0077】
別の態様においては、本発明は、Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼを阻害する方法を提供し、前記方法は、有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩と、任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤又はそれらの組み合わせとを含む医薬組成物を対象（患者及び健常被検者を含む）に投与することを含み、Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼは、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃアーゼである。
【0078】
また、本発明は、ＫＲＡＳ変異によって媒介される疾患を治療するための医薬品の製造における、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いはその医薬組成物の使用を提供する。ここで、前記ＫＲＡＳ変異によって媒介される疾患はがんであり、前記がんは、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、子宮癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、横紋筋肉腫、皮膚有棘細胞癌、子宮頸癌、及び精巣胚細胞癌からなる群より選択され、好ましくは膵臓がん、結腸直腸癌及び肺癌である。前記肺癌は、好ましくは非小細胞肺癌である。前記ＫＲＡＳ変異は、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異である。
【0079】
別の態様においては、本発明は、Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤の製造における、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いはその医薬組成物の使用を提供する。Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ阻害剤は、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ阻害剤である。
【0080】
本発明の別の態様は、ＫＲＡＳ変異によって媒介される疾患を予防及び／又は治療する方法に関する。該方法は、治療有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオ異性体、ジアステレオ異性体若しくはそれらの混合物の形態若しくはその薬学的に許容される塩、或いはそれらを含む医薬組成物を患者に投与することを含む。ここで、前記ＫＲＡＳ変異は、好ましくはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異である。
【0081】
また、本発明は、がんを治療するための医薬品の製造における、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）若しくは（ＶＩ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩、或いはその医薬組成物の使用を提供する。前記がんは、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、子宮癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、横紋筋肉腫、皮膚有棘細胞癌、子宮頸癌、及び精巣胚細胞癌からなる群より選択され、好ましくは膵臓がん、結腸直腸癌及び肺癌である。ここで、前記肺癌は、好ましくは非小細胞肺癌である。
【0082】
本発明の医薬製剤は、局所、経口、経皮、経直腸、経膣、非経口、鼻腔内、肺内、眼内、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、膀胱内、皮内、腹腔内、皮下、角質下、又は吸入により投与することができる。有効成分を含む医薬組成物としては、錠剤、糖錠剤、トローチ、水若しくは油性懸濁液、分散性粉末、分散性顆粒、エマルジョン、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、又はシロップ剤若しくは錬金薬などの経口投与に適した形態であってもよい。錠剤は、有効成分と、錠剤の製造に適した混合のための非毒性の薬学的に許容される賦形剤とを含んでもよい。
【0083】
本発明の製剤としては、単位用量の形態で存在するのが好適である。前記製剤は、製薬技術において周知の任意の方法により製造することができる。担体物質と組み合わせることにより単一剤形を生成できる有効成分の量は、治療される宿主及び特定の投与様式に応じて変化することができる。担体物質と組み合わせることにより単一剤形を生成できる有効成分の量とは、通常、治療効果を生じることが可能な化合物の量を指す。
【0084】
本発明に係る化合物の局所又は経皮投与のための剤形には、粉末、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液、パッチ及び吸入剤が含まれる。活性化合物は、無菌条件下で薬学的に許容される担体と混合することができ、必要とされる任意の防腐剤、緩衝剤又は推進薬と混合することができる。
【0085】
本発明に係る化合物が医薬品の形態でヒト及び動物に投与される場合、前記化合物は、単独で又は医薬組成物の形態で提供されてもよい。前記医薬組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせる有効成分を例えば０．１％～９９．５％（より好ましくは、０．５％～９０％）含有することができる。
【0086】
薬学的に許容される担体の例としては、以下に限定されないが、例えば、（１）ラクトースや、グルコース、スクロースなどの糖、（２）コーンスターチやポテトスターチなどのデンプン、（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体、（４）粉末トラントガム、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバターや座薬ワックスなどの賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのジオール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）発熱性物質を含まない水（ｐｙｒｏｇｅｎ－ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ）、（１７）等張食塩水、（１８）リンゲル液（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、（１９）エタノール、（２０）リン酸緩衝液、（２１）シクロデキストリンのようなナノ粒子に連結されている標的化リガンド、例えば、ＡｃｃｕｒｉｎｓＴＭ、及び（２２）ポリマーベースの組成物などの医薬製剤に使用される他の非毒性の適合性物質が挙げられる。
【0087】
薬学的に許容される酸化防止剤の例としては、以下に限定されないが、例えば、（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム及びその類似体などの水溶性酸化防止剤、（２）アスコルビン酸パルミチン酸エステル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロール及びその類似体などの油溶性酸化防止剤、及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸及びその類似体などの金属キレート剤がが挙げられる。固体剤形（例えば、カプセル剤、トローチ丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤及びその類似体）としては、クエン酸ナトリウムやリン酸二カルシウムなどの１つ又は複数の薬学的に許容される担体、及び／又は（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及／又はケイ酸などの充填剤又は増量剤、（２）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアラビアゴムなどの結合剤、（３）グリセリンなどの保湿剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（５）パラフィンなどの溶解遅延剤、（６）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（７）セチルアルコール及ステアリン酸モノグリセリドなどの湿潤剤、（８）カオリン及びベントナイトなどの吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物などの潤滑剤、及び（１０）着色剤のうちの任意の１つを含有することができる。液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及び錬金薬を含有することができる。液体剤形は、有効成分に加えて、当技術分野で一般的に使用される、水又は他の溶媒などの不活性希釈剤；エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブタンジオール、油（特に綿実油、ピーナッツ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセリン、テトラヒドロフランメタノール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などの可溶化剤や乳化剤を含有することができる。
【0088】
懸濁液としては、活性化合物に加えて、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、水酸化アルミニウム酸化物、ベントナイト、寒天及びトラントガム、ならびにそれらの混合物などの懸濁助剤を含有することができる。
【0089】
軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤及びゲル剤としては、活性化合物に加えて、動物性脂肪及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラントガム、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリシロキサン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛、又はそれらの混合物などの賦形剤を含有することができる。
【0090】
粉末及びスプレー剤としては、活性化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、カルシウムシリケート及びポリアミド粉末又はこれらの混合物などの賦形剤を含有することができる。前記スプレー剤としては、クロロフルオロ炭化水素などの他の通常の推進薬、及びブタンやプロパンなどの揮発性の非置換炭化水素を含有することができる。
【図面の簡単な説明】
【0091】
【発明を実施するための形態】
【0092】
反対の記載がない限り、明細書及び特許請求の範囲において本発明で使用されるいくつかの用語は、以下のように定義される。
【0093】
「化学結合」とは、示された置換基が存在せず、この置換基の両端が直接連結して化学結合を形成していることを意味する。
【0094】
「アルキル基」とは、基又は基の一部とした場合、Ｃ１～Ｃ２０の直鎖又は分岐鎖を含む脂肪炭化水素基を指す。アルキル基としては、好ましくはＣ１～Ｃ１０のアルキル基であり、より好ましくはＣ１～Ｃ６のアルキル基であり、又はＣ１～Ｃ４のアルキル基である。アルキル基の実例としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、１－エチルプロピル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ｎ－ヘキシル基、１－エチル－２－メチルプロピル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0095】
「アルケニル基」とは、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素－炭素二重結合からなる上記で定義されるアルキル基を指し、代表的な実例としては、エテニル基、１－プロペニル基、２－プロペニル基、１－、２－又は３－ブテニル基などが挙げられるが、これらに限定されないが。好ましくはＣ２～Ｃ１０のアルケニル基であり、より好ましくはＣ２～Ｃ６のアルケニル基であり、最も好ましくはＣ２～Ｃ４のアルケニル基である。アルケニル基は、任意の置換又は非置換のものであってもよい。
【0096】
「アルキニル基」とは、１つの炭素-炭素三重結合を含む脂肪炭化水素基を指し、直鎖であってもよく、分岐鎖であってもよい。アルキニル基としては、好ましくはＣ２～Ｃ１０のアルキニル基であり、より好ましくはＣ２～Ｃ６のアルキニル基であり、最も好ましくはＣ２～Ｃ４のアルキニル基である。アルキニル基の実例としては、エチニル基、１－プロピニル基、２－プロピニル基、１－、２－又は３－ブチニル基などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0097】
「アルキレン基」とは、二価のアルキル基である。アルキレン基としては、好ましくはＣ１～Ｃ１０のアルキレン基であり、より好ましくはＣ１～Ｃ６のアルキレン基であり、特に好ましくはＣ１～Ｃ４のアルキレン基である。アルキレン基の実例としては、メチレン基、エチレン基、－ＣＨ（ＣＨ３）２、プロピリデン基などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキレン基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0098】
「シクロアルキル基」とは、飽和又は部分的に飽和した単環式、縮合多環、橋かけ環及びスピロ環の炭素環を指す。シクロアルキル基としては、好ましくはＣ３～Ｃ１２のシクロアルキル基であり、より好ましくはＣ３～Ｃ８のシクロアルキル基であり、最も好ましくはＣ３～Ｃ６のシクロアルキル基である。単環式シクロアルキル基の実例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロペンテニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサジエニル基、シクロヘプチル基、シクロヘプタトリエニル基、シクロオクチル基などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくはシクロプロピル基、シクロヘキセニル基である。シクロアルキル基は、任意の置換又は非置換のものであってもよい。
【0099】
「ヘテロシクリル基」、「複素環」又は「複素環の」は、本願において互換的に使用でき、環構成原子の１つ又は複数が酸素、窒素、硫黄原子などのヘテロ原子である非芳香族ヘテロシクリル基を指し、単環式、縮合多環、橋かけ環及びスピロ環を含む。５～７員の単環式環又は７～１０員の二環式環又は三環式環を有することが好ましく、窒素、酸素及び／又は硫黄からなる群より選択される１、２又は３個の原子を含有することができる。「ヘテロシクリル基」の実例としては、モルホリニル基、オキセタニル基、チオモルホリニル基、テトラヒドロピラニル基、１，１－ジオキソチオモルホリニル基、ピペリジニル基、２－オキソピペリジニル基、ピロリジニル基、２－オキソピロリジニル基、ピペラジン－２－オン、８－オキサ－３－アザ－ビスシクロ［３．２．１］オクチル基及びピペラジニル基などが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリル基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0100】
「アリール基」とは、１つ又は２つの環を含む炭素環式芳香族系を指し、前記環が縮合の方式で連結されることができる。「アリール基」という用語は、フェニル基、ナフチル基、テトラヒドロナフチル基の芳香基などの単環式又は二環式のアリール基を含む。好ましくはアリール基はＣ６～Ｃ１０のアリール基であり、より好ましくはアリール基はフェニル及びナフチル基である。アリール基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0101】
「ヘテロアリール基」とは、芳香族である５～６員の単環式環又は８～１０員の二環式環を指し、窒素、酸素及び／又は硫黄からなる群より選択される１～４個の原子を含有することができる。「ヘテロアリール基」は、好ましくは二環式ヘテロアリール基であり、実例としては、以下に限定されないが、例えば、フラニル基、ピリジル基、２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、チエニル基、イソキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イミダゾリル基、ピロリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、１，２，３－チアジアゾリル基、ベンゾジオキソリル基、ベンゾチエニル基、ベンズイミダゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、１，３－ジオキソ－イソインドリル基、キノリニル基、インダゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンズイソキサゾリル基、
【0102】
【化20】
【0103】
が挙げられる。ヘテロアリール基は、置換又は非置換のものであってもよい。
【0104】
「縮合環」とは、２つ以上の環状構造が互いに一対の原子を共有する多環式基であって、そのうちの１つ又は複数の環が１つ又は複数の二重結合を含有することができるが、少なくとも１つの環が完全に共役したπ電子を有しないという芳香族系を指す。ここでは、環原子としては、窒素、酸素又はＳ（Ｏ）ｒ（ｒは、０、１又は２である。）から選択された０個、１個又はそれ以上のヘテロ原子であり、他の環原子としては炭素である。縮合環としては、好ましくは二環式又は三環式縮合環であり、該二環式縮合環は、好ましくはアリール基又はヘテロアリール基と単環式ヘテロシクリル基又は単環式シクロアルキル基との縮合環である。「縮合環」としては、好ましくは７～１４員であり、より好ましくは８～１０員であり、実例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：
【0105】
【化21】
【0106】
【化22】
【0107】
【化23】
【0108】
「アルコキシ基」とは、（アルキル基－Ｏ－）の基を指す。アルキル基は本明細書で定義されている通りである。好ましくは、Ｃ１～Ｃ６及びＣ１～Ｃ４のアルコキシ基である。その実例としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ－ブトキシ基などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0109】
「ハロアルキル基」とは、アルキル基が１つ又は複数のハロゲンで任意選択的にさらに置換された基を指し、ただし、アルキル基は本明細書で定義されている通りである。
【0110】
「重水素化アルキル基」とは、アルキル基が１つ又は複数の重水素原子で任意選択的にさらに置換された基を指し、アルキル基は本明細書で定義されている通りである。「重水素化アルキル基」としては、好ましくは、モノ重水素化メチル基、ジ重水素化メチル基、及びトリ重水素化メチル基を含む重水素化メチル基であり、より好ましくはトリ重水素化メチル基である。
【0111】
「ヒドロキシアルキル基」とは、アルキル基が１つ又は複数のヒドロキシ基で任意選択的にさらに置換された基を指し、ただし、アルキル基は本明細書で定義されている通りである。
【0112】
「ハロアルコキシ基」とは、（アルキル基－Ｏ－）のアルキル基が１つ又は複数のハロゲンで任意選択的にさらに置換された基を指し、ただし、アルコキシ基は本明細書で定義されている通りである。
【0113】
「ヒドロキシ基」とは、－ＯＨ基を指す。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
「アミノ基」とは、－ＮＨ２を指す。
「シアノ基」とは、－ＣＮを指す。
「ニトロ基」とは、－ＮＯ２を指す。
「ベンジル基」とは、－ＣＨ２－フェニル基を指す。
「カルボキシ基」とは、－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
「アミノ基」とは、－ＮＨ２を指す。
「シアノ基」とは、－ＣＮを指す。
「ニトロ基」とは、－ＮＯ２を指す。
「ベンジル基」とは、－ＣＨ２－フェニル基を指す。
「カルボキシ基」とは、－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
【0114】
「カルボン酸エステル基」とは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル基又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－シクロアルキル基を指し、ただし、アルキル基、シクロアルキル基の定義は、上記通りである。
【0115】
「ＤＭＳＯ」とは、ジメチルスルホキシドを指す。
「ＢＯＣ」とは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基を指す。
「Ｔｓ」とは、ｐ－トルエンスルホニルを指す。
「Ｔ３Ｐ」とは、プロピルリン酸無水物を指す。
「ＤＰＰＡ」とは、ジフェニルホスホリルアジドを指す。
「ＤＥＡ」とは、ジエチルアミンを指す。
「ＴＦＡ」とは、トリフルオロ酢酸を指す。
「ＣａＣｌ２」とは、塩化カルシウムを指す。
「ＭｇＣｌ２」とは、塩化マグネシウムを指す。
「ＫＣｌ」とは、塩化カリウムを指す。
「ＮａＣｌ」とは、塩化ナトリウムを指す。
「Ｇｌｕｃｏｓｅ」とは、グルコースを指す。
「ＨＥＰＥＳ」とは、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸を指す。
「ＥＧＴＡ」とは、エチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）四酢酸を指す。
「ＢＯＣ」とは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基を指す。
「Ｔｓ」とは、ｐ－トルエンスルホニルを指す。
「Ｔ３Ｐ」とは、プロピルリン酸無水物を指す。
「ＤＰＰＡ」とは、ジフェニルホスホリルアジドを指す。
「ＤＥＡ」とは、ジエチルアミンを指す。
「ＴＦＡ」とは、トリフルオロ酢酸を指す。
「ＣａＣｌ２」とは、塩化カルシウムを指す。
「ＭｇＣｌ２」とは、塩化マグネシウムを指す。
「ＫＣｌ」とは、塩化カリウムを指す。
「ＮａＣｌ」とは、塩化ナトリウムを指す。
「Ｇｌｕｃｏｓｅ」とは、グルコースを指す。
「ＨＥＰＥＳ」とは、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸を指す。
「ＥＧＴＡ」とは、エチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）四酢酸を指す。
【0116】
「置換の」とは、原子団内の１つ又は複数の水素原子、好ましくは最大５、より好ましく１～３個の水素原子が、それぞれに独立して、対応する数の置換基で置換されることを意味する。いうまでもなく、置換基はそれらの可能な化学的位置のみにあり、また、その置換が可能なのか又は不可能なのかは、当業者が過度の努力なしに決定（実験又は理論により）できるものである。例えば、遊離水素を有するアミノ基又はヒドロキシ基は不飽和（例えば、オレフィン性）結合を有する炭素原子と結合した場合、不安定となる可能性がある。
【0117】
本明細書に記載されている「置換」又は「置換の」とは、特に断りのない限り、基がアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基、アミノ基、ハロアルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシ基、カルボン酸エステル基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ７、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＮＲ８Ｒ９、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７、－ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９及び－Ｓ（Ｏ）ｒＲ７からなる群より選択される１つ又は複数の基で置換され得ることを意味する。
【0118】
ここでは、Ｒ７は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択される。ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換されている。
【0119】
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択される。ただし、前記アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換されている。
【0120】
或いは、Ｒ８及びＲ９は、それらが連結している原子とともに４～８員のヘテロシクリル基を形成する。ただし、４～８員のヘテロシクリル基は、１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｒを含み、前記４～８員のヘテロシクリル基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、＝Ｏ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、－ＮＲ１１Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、－ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２及び－ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）Ｒ１２からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換されている。
【0121】
Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アミノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基からなる群より選択される。ただし、前記アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基又はヘテロアリール基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、カルボキシ基及びカルボン酸エステル基からなる群より選択された１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換されている。
【0122】
ｒは、０、１又は２である。
【0123】
本発明に係る化合物は、不斉中心又はキラル中心を含み、従って異なる立体異性体形態で存在し得る。予想されるのは、本発明に係る化合物のすべての立体異性体形態としては、ジアステレオ異性体、エナンチオ異性体、アトロプ異性体（ａｔｒｏｐｉｓｏｍｅｒ）及び幾何（立体配座）異性体、ならびにラセミ体混合物のようなそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。これらのすべての形態は本発明の範囲内である。
【0124】
特に断りのない限り、本発明に記載されている構造は、この構造のすべての異性体（例えば、ジアステレオ異性体、エナンチオ異性体、アトロプ異性体及び幾何（立体配座）異性体）形態、例えば、各不斉中心のＲ及びＳ立体配置、（Ｚ）及び（Ｅ）二重結合異性体、ならびに（Ｚ）及び（Ｅ）配座異性体をさらに含む。従って、本発明に係る化合物の個々の立体異性体及びエナンチオ異性体混合物、ジアステレオ異性体混合物及び幾何（立体配座）異性体混合物は、本発明の範囲内である。
【0125】
「薬学的に許容される塩」とは、上記の化合物の元の生物活性を保持した上で医薬用途に適した特定の塩類を指す。式（Ｉ）で示される化合物の薬学的に許容される塩としては、金属塩、適切な酸と形成されたアミン塩であってもよい。
【0126】
「医薬組成物」とは、本明細書に記載されている一つまたは複数の化合物又はその生理学的に薬学的に許容される塩又はプロドラッグと他の化学成分との混合物と、生理学的に薬学的に許容される担体や賦形剤などの他の任意の成分とを含有することを意味する。医薬組成物は、生体への投与を促進し、有効成分の吸収、ひいては生物活性の発揮を促進することを目的とする。
【0127】
本発明に係る化合物の合成方法
本発明の目的を達成するために、本発明は以下の技術案を採用する。
本発明の目的を達成するために、本発明は以下の技術案を採用する。
【0128】
本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物、又はその立体異性体、互変異性体若しくはその薬学的に許容される塩の製造方法は、一般式（ＩＡ）の化合物を一般式（ＩＢ）の化合物と塩基性条件下で反応させ、任意選択的に保護基をさらに除去し、一般式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む。
【0129】
【化24】
【0130】
式中、
Ｘ１は脱離基であり、好ましくは塩素であり、
環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｅ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
Ｘ１は脱離基であり、好ましくは塩素であり、
環Ａ、環Ｂ、環Ｃ、Ｒ１～Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｅ、Ｌ、ｎ、ｐ及びｑの定義は、一般式（Ｉ）で記載されている通りである。
【0131】
以下、実施例を併せて本発明をさらに説明するために使用されるが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【0132】
実施例においては、式（Ｉ）で表される代表的な化合物の製造及び関連する構造同定データが記載されている。なお、以下の実施例は、本発明を限定するのではなく、本発明を説明するために用いられている。１ＨＮＭＲスペクトルはブルカー装置（４００ＭＨｚ）で測定したものであり、化学シフトがｐｐｍで表される。テトラメチルシランを内部標準（０．００ｐｐｍ）として使用した。１ＨＮＭＲの表示方法：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多重線、ｂｒ＝ブロード、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線。結合定数が提供される場合、その単位はＨｚである。
【0133】
マススペクトルはＬＣ／ＭＳ機器で測定したものであり、イオン化モードがＥＳＩ又はＡＰＣＩであった。
【0134】
薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートとしては、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４又は青島ＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されるシリカゲルプレートの規格は０．１５ｍｍ～０．２ｍｍ、薄層クロマトグラフィー分離精製物の規格は０．４ｍｍ～０．５ｍｍであった。
【0135】
カラムクロマトグラフィーには、一般的に、煙台黄海シリカゲル２００～３００メッシュのシリカゲルを担体として使用した。
【0136】
別段の指定がない限り、以下の実例では、すべての温度は摂氏温度であり、出発原料及び試薬としては、市販されているか又は既知の方法に従って合成したものを使用した。ただし、市販の原料及び試薬をさらに精製せずにそのまま使用した。別段の指定がない限り、市販のメーカーには、ＳＡＨＮＧＨＡＩ ＨＡＯＨＯＮＧ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｈａｏｙｕａｎ Ｃｏ． Ｌｔｄ．、Ｂｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ Ｌｔｄ．、Ｓｕｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｃｏ．， Ｌｔｄ．、及びＬｉｎｋＣｈｅｍ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．などが含まれるが、これらに限定されない。
【0137】
ＣＤ３ＯＤ：重水素化メタノール。
ＣＤＣｌ３：重水素化クロロホルム。
ＤＭＳＯ－ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド。
特に断りのない限り、実施例において反応の溶液は水溶液を指す。
ＣＤＣｌ３：重水素化クロロホルム。
ＤＭＳＯ－ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド。
特に断りのない限り、実施例において反応の溶液は水溶液を指す。
【0138】
化合物をカラムクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーの溶離剤系で精製した。ただし、溶媒系は、Ａ：石油エーテルと酢酸エチルとの溶媒系、Ｂ：ジクロロメタンとメタノールとの溶媒系、Ｃ：ジクロロメタンと酢酸エチルとの溶媒系、Ｄ：ジクロロメタンとエタノールとの溶媒系、Ｅ：テトラヒドロフラン／石油エーテルの溶媒系、または、Ｆ：テトラヒドロフランとメタノールである。溶媒系における溶媒の体積比は化合物の極性によって異なるが、醋酸などの酸性試薬又はトリエチルアミンなどの塩基性試薬を少量加えて調整してもよい。
実施例１－化合物７
実施例１－化合物７
【0139】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0140】
【化25】
【0141】
【化26】
【0142】
ステップ１
６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ニコチン酸
６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ニコチン酸
【0143】
２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－アミン１ｄ（２１．４６ｇ、１４２．８６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン２００ｍＬに溶解し、－７８℃まで冷却し、窒素雰囲気下、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０Ｍ、２３８．１１ｍＬ）を滴下し、－７８℃で１５分間攪拌を続けた後、２，６－ジクロロ－５－フルオロニコチン酸１ａ（２０ｇ、９５．２４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液を滴下した。－７８℃で１時間反応した後、２５℃で３時間反応を続けた。反応終了後、反応液を氷水１００ｍＬに注ぎ、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１００ｍＬ）を加えた。水相の酸塩基度を２Ｍ希塩酸でｐＨ＝４に調整し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ニコチン酸７ａ（１５ｇ、４６．３３ｍｍｏｌ）を収率４８．６５％で得た。
【0144】
MS m/z(ESI):323.8[M+1]+
【0145】
ステップ２
３－（６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソプロピオン酸エチル
３－（６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソプロピオン酸エチル
【0146】
６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ニコチン酸７ａ（５ｇ、１５．４４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（６．４０ｇ、４６．３３ｍｍｏｌ）と２－ニトロ酢酸エチル（６．１７ｇ、４６．３３ｍｍｏｌ）を加え、２－クロロ－１－メチルピリジニウムヨージド（７．８９ｇ、３０．８９ｍｍｏｌ）をさらに加え、２５℃で３時間反応させた。酢酸エチル１０ｍＬと飽和食塩水１０ｍＬを加え、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、３－（６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソプロピオン酸エチル７ｂ（２．３ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）を収率３３．９４％で得た。
【0147】
MS m/z(ESI):438.9[M+1]+
【0148】
ステップ３
７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
【0149】
３－（６－クロロ－５－フルオロ－２－（（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）アミノ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソプロピオン酸エチル７ｂ（２．３ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（２．５６ｇ、７．８６ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応終了後、２５℃に冷却し、酢酸エチル１０ｍＬと飽和食塩水１０ｍＬを加え、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系－Ｆ系）で単離し、７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン７ｃ（１．７ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を収率８２．５８％得た。
【0150】
MS m/z(ESI):393.0[M+1]+
【0151】
ステップ４
４，７－ジクロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
４，７－ジクロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
【0152】
７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン７ｃ（４００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を塩化ホスホリル（３ｍＬ）に溶解し、９０℃で１時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。反応終了後、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、４，７－ジクロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン７ｄ（３５０ｍｇ、８５１．１４μｍｏｌ）を収率８３．５８％で得た。
【0153】
MS m/z(ESI):410.8[M+1]+
【0154】
ステップ５
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル
【0155】
４，７－ジクロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン７ｄ（１．３ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１ｊ（１．６３ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１６時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。反応終了後、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル７ｅ（１ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を収率４９．９７％で得た。
【0156】
MS m/z(ESI):633.0[M+1]+
【0157】
ステップ６
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（３－アミノ－７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（３－アミノ－７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル
【0158】
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル７ｅ（１ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）とラネーニッケル（１０ｍｇ、１５７．９６μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、水素置換を３回行い、水素ガス雰囲気下、２５℃で２時間反応させた。ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮させ、粗生成物（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（３－アミノ－７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル７ｆ（０．８３ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を得、次の反応にそのまま使用した。収率が８７．１３％であった。
【0159】
MS m/z(ESI):603.3[M+1]+
【0160】
ステップ７
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0161】
（３Ｒ，６Ｒ）－１－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（３－アミノ－７－クロロ－６－フルオロ－１－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－３－カルボン酸メチル７ｆ（０．８３ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（５７０．６４ｍｇ、４．１３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、５０℃で１時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル１０ｍＬと飽和食塩水１０ｍＬを加え、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、粗生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｇ（０．７ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を得、次の反応にそのまま使用した。
【0162】
MS m/z(ESI):571.0[M+1]+
【0163】
ステップ８
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0164】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｇ（０．７ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（５２１．９８ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（５０８．２７ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、２５℃で１６時間反応させた。酢酸エチル１０ｍＬと水１０ｍＬを加え、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｈ（０．４５ｇ、７６９．１４μｍｏｌ）を収率６２．７４％で得た。
【0165】
MS m/z(ESI):585.0[M+1]+
【0166】
ステップ９
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0167】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｈ（０．１２ｇ、２０５．１０μｍｏｌ）、（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）ボロン酸７ｉ（１９２．０５ｍｇ、６１５．３１μｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２３．７０ｍｇ、２０．５１μｍｏｌ）及びリン酸カリウム（２１７．６８ｍｇ、１．０３ｍｍｏ）を水０．２ｍＬと１，４－ジオキサン１ｍＬの混合溶媒に溶解し、窒素置換を３回行い、窒素雰囲気下、１００℃で１６時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。反応終了後、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｊ（０．１ｇ、１２２．４１μｍｏｌ）を収率５９．６８％で得た。
【0168】
MS m/z(ESI):817.4[M+1]+
【0169】
ステップ１０
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0170】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｊ（０．１ｇ、１２２．４１μｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（３００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で１６時間反応させた。減圧下で濃縮させ、粗生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン７ｋ（１００ｍｇ、１３６．８５μｍｏｌ）を得、次の反応にそのまま使用した。
【0171】
MS m/z(ESI):617.5[M+1]+
【0172】
ステップ１１
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0173】
アクリル酸（１８．３３ｍｇ、２５４．４１μｍｏｌ）、（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン７ｋ（１１０ｍｇ、１５０．５４μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１９４．５６ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解し、プロピルリン酸無水物（１９１．５９ｍｇ、３０１．０８μｍｏｌ、純度５０％）を加え、２５℃で１６時間反応させた。反応終了後、水２０ｍＬを加え、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物を分取液体クロマトグラフで単離し（分離カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ）、（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン７（３０ｍｇ）を得た。
【0174】
MS m/z(ESI):671.1[M+1]+
実施例２－化合物８及び化合物９
実施例２－化合物８及び化合物９
【0175】
（２Ｒ，４ａＲ，８Ｒ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン８
（２Ｒ，４ａＲ，８Ｓ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン９
（２Ｒ，４ａＲ，８Ｓ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン９
【0176】
【化27】
【0177】
【化28】
【0178】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（２－アミノ－７－フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール－４－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン７（３０ｍｇ）を分取ＳＦＣキラル分離（カラムタイプ：（ｓ，ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１、２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相：Ａ ｆｏｒ ＣＯ２ ａｎｄ Ｂ ｆｏｒ ＥｔＯＨ（０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）；カラム圧力：１００ｂａｒ；流速：７０ｍＬ／ｍｉｎ；検出波長：２２０ｎｍ；カラム温度：４０℃）で精製した後、単一配座の化合物８（短い保持時間のほう）及び単一配座の化合物９（長い保持時間のほう）を得た。
【0179】
単一配座の化合物８（短い保持時間のほう）：
MS m/z(ESI):671.1[M+1]+
２．０５ｍｇ；保持時間３．４４６分；キラル純度１００％ｅｅ。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.46(d, J =4.9 Hz,1H),8.02-7.83(m,3H),7.25(d, J =4.9 Hz,1H),7.10-6.80(m,3H),6.24-6.08(m,1H),5.82-5.69(m,1H),5.17-4.37(m,2H),4.08-3.92(m,1H),3.75(br dd, J =3.9、13.8 Hz,1H),3.34(s,3H),3.02-2.71(m,3H),1.83(s,3H)、1.62-1.45(m,3H),1.11(br d, J =6.6 Hz,3H), 0.99(br d, J =6.5 Hz,3H).
MS m/z(ESI):671.1[M+1]+
２．０５ｍｇ；保持時間３．４４６分；キラル純度１００％ｅｅ。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.46(d, J =4.9 Hz,1H),8.02-7.83(m,3H),7.25(d, J =4.9 Hz,1H),7.10-6.80(m,3H),6.24-6.08(m,1H),5.82-5.69(m,1H),5.17-4.37(m,2H),4.08-3.92(m,1H),3.75(br dd, J =3.9、13.8 Hz,1H),3.34(s,3H),3.02-2.71(m,3H),1.83(s,3H)、1.62-1.45(m,3H),1.11(br d, J =6.6 Hz,3H), 0.99(br d, J =6.5 Hz,3H).
【0180】
単一配座の化合物９（長い保持時間のほう）：
MS m/z(ESI):671.1[M+1]+
９．３５ｍｇ；保持時間４．２３５分；キラル純度１００％ｅｅ。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.47(d, J =4.8 Hz,1H),8.00-7.87(m,3H),7.25(d, J =4.9 Hz,1H),7.09-6.83(m,3H),6.23-6.09(m,1H),5.76-5.69(m,1H),5.10-4.42(m,2H),4.13-3.96(m,1H),3.75( dd, J =4.0、14.0 Hz,1H),3.37(s,3H),3.32-3.22(m,2H)、2.99-2.77(m,1H)、2.00(s,3H)、1.60-1.51(m,3H),1.05(br d, J =6.6 Hz,3H), 0.92(br d, J =6.6 Hz,3H).
実施例３－化合物１０
MS m/z(ESI):671.1[M+1]+
９．３５ｍｇ；保持時間４．２３５分；キラル純度１００％ｅｅ。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.47(d, J =4.8 Hz,1H),8.00-7.87(m,3H),7.25(d, J =4.9 Hz,1H),7.09-6.83(m,3H),6.23-6.09(m,1H),5.76-5.69(m,1H),5.10-4.42(m,2H),4.13-3.96(m,1H),3.75( dd, J =4.0、14.0 Hz,1H),3.37(s,3H),3.32-3.22(m,2H)、2.99-2.77(m,1H)、2.00(s,3H)、1.60-1.51(m,3H),1.05(br d, J =6.6 Hz,3H), 0.92(br d, J =6.6 Hz,3H).
実施例３－化合物１０
【0181】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0182】
【化29】
【0183】
【化30】
【0184】
ステップ１
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１０－（トリメチルスタニル）－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１０－（トリメチルスタニル）－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0185】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｈ（０．１ｇ、１７０．９２μｍｏｌ）、ヘキサメチルジチン（１３９．９９ｍｇ、４２７．３０μｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１９．７５ｍｇ、１７．０９μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１ｍＬ）に溶解し、窒素置換を３回行い、窒素雰囲気下、１１０℃で１６時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１０－（トリメチルスタニル）－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１０ａ（９５ｍｇ、１３３．１６μｍｏｌ）を収率７７．９１％で得た。
【0186】
MS m/z(ESI):714.8[M+1]+
【0187】
ステップ２
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0188】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１０－（トリメチルスタニル）－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１０ａ（４０ｍｇ、５６．０７μｍｏｌ）、６－ブロモ－５－クロロピリジン－２－アミン１０ｂ（１３．９６ｍｇ、６７．２８μｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（１．０７ｍｇ、５．６１μｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３．２４ｍｇ、２．８０μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（０．５ｍＬ）に溶解し、窒素置換を３回行い、窒素雰囲気下、１００℃で１６時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１０ｃ（１５ｍｇ、２２．１５μｍｏｌ）を収率３９．５１％で得た。
【0189】
MS m/z(ESI):677.3[M+1]+
【0190】
ステップ３
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0191】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１０ｃ（３０ｍｇ、４４．３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で１６時間反応させた。減圧下で濃縮させ、粗生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１０ｄ（３０ｍｇ、５１．９９μｍｏｌ）を得、次の反応にそのまま使用した。
【0192】
MS m/z(ESI):577.0[M+1]+
【0193】
ステップ４
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0194】
アクリル酸（４．４１ｍｇ、６１．１４μｍｏｌ）、（２Ｒ，４ａＲ）－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１０ｄ（２５ｍｇ、３６．１８μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４６．７５ｍｇ、３６１．７６μｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解し、プロピルリン酸無水物（４６．０４ｍｇ、７２．３５μｍｏｌ、純度５０％）を加え、２５℃で１６時間反応させた。反応終了後、水２０ｍＬを加え、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物を分取液体クロマトグラフで単離し（分離カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ）、（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１０－（６－アミノ－３－クロロピリジン－２－イル）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１０（１３ｍｇ、２０．６０μｍｏｌ）を収率５６．９４％で得た。
【0195】
MS m/z(ESI):631.4[M+1]+
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.46(dd, J = 2.3,4.8 Hz,1H),8.09-7.99(m,1H),7.49(d, J=8.8 Hz,1H),7.26(dd, J =4.9、12.3 Hz,1H),7.10-6.80(m,1H),6.52(d, J =8.9 Hz,1H),6.33(br s、2H),6.22-6.11(m,1H),5.83-5.70(m,1H),5.10-4.29(m,2H),4.09-3.92(m,1H),3.74(dd, J =4.0、14.1 Hz,1H),3.3-3.33(m,3H),2.97-2.72(m,2H)、2.46-2.36(m,1H)、2.04-1.75(m,3H),1.61-1.49(m,3H),1.14-0.83(m,6H).
実施例４－化合物１１
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ8.46(dd, J = 2.3,4.8 Hz,1H),8.09-7.99(m,1H),7.49(d, J=8.8 Hz,1H),7.26(dd, J =4.9、12.3 Hz,1H),7.10-6.80(m,1H),6.52(d, J =8.9 Hz,1H),6.33(br s、2H),6.22-6.11(m,1H),5.83-5.70(m,1H),5.10-4.29(m,2H),4.09-3.92(m,1H),3.74(dd, J =4.0、14.1 Hz,1H),3.3-3.33(m,3H),2.97-2.72(m,2H)、2.46-2.36(m,1H)、2.04-1.75(m,3H),1.61-1.49(m,3H),1.14-0.83(m,6H).
実施例４－化合物１１
【0196】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0197】
【化31】
【0198】
【化32】
【0199】
ステップ１
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－１０－（３－メトキシナフタレン－１－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－１０－（３－メトキシナフタレン－１－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0200】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０－クロロ－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７ｈ（１００ｍｇ、１７０．９２μｍｏｌ）、（３－メトキシナフタレン－１－イル）ボロン酸１１ａ（１０３．５８ｍｇ、５１２．７６μｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１９．７５ｍｇ、１７．０９μｍｏｌ）及びリン酸カリウム（１８１．４０ｍｇ、８５４．６０μｍｏｌ）を水０．３ｍＬと１，４－ジオキサン１．５ｍＬの混合溶媒に溶解し、窒素置換を３回行い、窒素雰囲気下、１００℃で１６時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｅ系）で単離し、（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－１０－（３－メトキシナフタレン－１－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１１ｂ（０．１ｇ、１４１．４８μｍｏｌ）を収率８２．７８％で得た。
【0201】
MS m/z(ESI):707.7[M+1]+
【0202】
ステップ２
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0203】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－１０－（３－メトキシナフタレン－１－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１１ｂ（７０ｍｇ、９９．０４μｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍＬに溶解し、三臭化ホウ素（１．４０ｇ、５．５９ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で１６時間反応させた。メタノール１０ｍＬを加えて反応をクエンチし、減圧下で濃縮させ、水２０ｍＬを加えて反応を希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で洗浄し、水相を収集し、水相を凍結乾燥し、粗生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１１ｃ（１００ｍｇ、１６８．７３μｍｏｌ）を得た。
【0204】
MS m/z(ESI):593.4[M+1]+
【0205】
ステップ３
４－（（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－２，３，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－１０－イル）ナフタレン－２－イル アクリル酸ブチル
４－（（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－２，３，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－１０－イル）ナフタレン－２－イル アクリル酸ブチル
【0206】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１１ｃ（１００ｍｇ、１６８．７３μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８５．３７ｍｇ、８４３．６５μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、１０℃で塩化アクリロイル（１５．２７ｍｇ、１６８．７３μｍｏｌ）を滴下し、１０～２０℃で１６時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。反応終了後、水１０ｍＬを加え、ジクロロメタン（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、粗生成物４－（（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－２，３，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－１０－イル）ナフタレン－２－基 アクリル酸ブチル１１ｄ（１５０ｍｇ、２１４．０５μｍｏｌ）を得、次の反応にそのまま使用した。
【0207】
MS m/z(ESI):701.2[M+1]+
【0208】
ステップ４
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0209】
４－（（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－２，３，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－１０－イル）ナフタレン－２－イル アクリル酸ブチル１１ｄ（１５０ｍｇ、２１４．０５μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１ｍＬに溶解し、水酸化リチウム一水和物（２６．９５ｍｇ、６４２．１６μｍｏｌ）水溶液（１ｍＬ）を滴下し、１５℃で１６時間反応させた。ＬＣ－ＭＳにより、反応の進行を監視した。反応終了後、１Ｍ希塩酸を滴下してｐＨを７に調整し、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物を分取液体クロマトグラフで単離し（分離カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ）、（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－フルオロ－１０－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－８－（２－イソプロピル－４－メチルピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１１（２６ｍｇ、４０．２０μｍｏｌ）を収率１８．７８％で得た。
【0210】
MS m/z(ESI):647.2[M+1]+
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.02(s,1H),8.42-8.37(m,1H),8.14-8.04(m,1H),7.75(d, J =8.3 Hz,1H),7.45-7.33(m,2H),7.27-7.12(m,3H),7.11-6.83(m,2H),6.22-6.12(m,1H),5.83-5.71(m,1H),5.05(br d, J = 13.8 Hz,1H),4.81(br s、1H),4.63(br d, J = 13.3 Hz,1H),4.46(s,1H),4.07-3.95(m,1H),3.77(dd, J =4.1、14.2 Hz,1H),3.54-3.41(m,2H),3.29-3.22(m,1H),2.95-2.79(m,1H)、2.07-1.81(m,3H),1.64-1.52(m,3H),1.14-0.84(m,6H).
実施例５－化合物１６
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.02(s,1H),8.42-8.37(m,1H),8.14-8.04(m,1H),7.75(d, J =8.3 Hz,1H),7.45-7.33(m,2H),7.27-7.12(m,3H),7.11-6.83(m,2H),6.22-6.12(m,1H),5.83-5.71(m,1H),5.05(br d, J = 13.8 Hz,1H),4.81(br s、1H),4.63(br d, J = 13.3 Hz,1H),4.46(s,1H),4.07-3.95(m,1H),3.77(dd, J =4.1、14.2 Hz,1H),3.54-3.41(m,2H),3.29-3.22(m,1H),2.95-2.79(m,1H)、2.07-1.81(m,3H),1.64-1.52(m,3H),1.14-0.84(m,6H).
実施例５－化合物１６
【0211】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0212】
【化33】
【0213】
【化34】
【0214】
【化35】
【0215】
ステップ１
３－イソシアネート－２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン
３－イソシアネート－２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン
【0216】
２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－アミン１６ａ（３．３８ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ、特許ＷＯ２０２０２３９０７７に従って発明者らが自分で製造したもの）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に加え、摂氏ゼロ度まで冷却し、トリエチルアミン（１．８６ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）を加え、トリホスゲン（５．４８ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）をバッチでゆっくりと加え、摂氏ゼロ度で０．５時間反応させ、ろ過し、３－イソシアネート－２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン１６ｂ（３．８３ｇ）を収率１００％で得、精製せずに、そのまま次の直接反応に行った。
【0217】
ステップ２
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロアセトアミド
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロアセトアミド
【0218】
ニトロメタン（１．１２ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に加え、摂氏ゼロ度まで冷却し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４．４１ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）を加え、摂氏ゼロ度で０．５時間反応させ、３－イソシアネート－２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン１６ｂ（３．８３ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、反応終了後、酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（３０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロアセトアミド１６ｃ（２．２ｇ）を収率４４．９５％で得た。
【0219】
MS m/z(ESI):270.1[M+1]+
【0220】
ステップ３
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソ－３－（２，５，６－トリクロロピリジン－３－イル）プロピオンアミド
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソ－３－（２，５，６－トリクロロピリジン－３－イル）プロピオンアミド
【0221】
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロアセトアミド１６ｃ（８２０ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）、２，５，６－トリクロロニコチン酸４ａ（６８６．２５ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）、テトラメチルフルオロウレアヘキサフルオロホスフェート（１．２ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９２３ｍｇ、７．１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に加え、室温で３時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（３０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソ－３－（２，５，６－トリクロロピリジン－３－イル）プロピオンアミド１６ｅ（１．２ｇ）を収率８２．５６％で得た。
【0222】
MS m/z(ESI):477.1[M+1]+
【0223】
ステップ４
６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
【0224】
Ｎ－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－ニトロ－３－オキソ－３－（２，５，６－トリクロロピリジン－３－イル）プロピオンアミド１６ｅ（１．２ｇ、２．５２ｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に加え、炭酸セシウム（１．６ｇ、５．０４ｍｍｏｌ）を加え、８５℃に加熱し、一晩反応させた。反応終了後、酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（３０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン１６ｆ（９８０ｍｇ）を収率８７．６４％で得た。
【0225】
MS m/z(ESI):441.1[M+1]+
【0226】
ステップ５
４，６，７－トリクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
４，６，７－トリクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
【0227】
６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン１６ｆ（６１０ｍｇ、１．３８ｍｏｌ）を塩化ホスホリル（１０ｍＬ）に加え、１１０℃に加熱し、３時間反応させ、反応終了後、反応液を氷水に注ぎ、ＰＨを塩基性に調整し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えて抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、４，６，７－トリクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン１６ｇ（４６０ｍｇ）を収率７２．２４％で得た。
【0228】
MS m/z(ESI):459.1[M+1]+
【0229】
ステップ６
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
【0230】
４，６，７－トリクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン１６ｇ（４６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１ｊ（３０９．４２ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に加え、アルゴン雰囲気下、一晩還流させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｉ（５４４ｍｇ）を収率８０％で得た。
【0231】
MS m/z(ESI):681.1[M+1]+
【0232】
ステップ７
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－アミノ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－アミノ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
【0233】
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸１６ｉ（５４４ｍｇ、８００μｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に加え、摂氏ゼロ度まで冷却し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５２０．０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）とトリクロロシラン（３７９．２６ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させ、反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－アミノ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｊ（４２０ｍｇ）を収率８１．３７％で得た。
【0234】
MS m/z(ESI):651.1[M+1]+
【0235】
ステップ８
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0236】
１－（ｔ－ブチル）－３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－アミノ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｊ（４２０ｍｇ、６５１．２２μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に加え、炭酸カリウム（１７９．７３ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｋ（３３０ｍｇ）を収率８２．０４％で得た。
【0237】
MS m/z(ESI):619.1[M+1]+
【0238】
ステップ９
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0239】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｋ（３３０ｍｇ、５３３．９８μｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１４７．７２ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）をアセトン（１０ｍＬ）に加え、ヨードメタン（１４９．４６ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を滴下し、２時間加熱して還流させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｌ（３００ｍｇ）を収率８７．３４％で得た。
【0240】
MS m/z(ESI):633.1[M+1]+
【0241】
ステップ１０
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0242】
（２Ｒ，４ａＲ）－１０，１１－ジクロロ－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｌ（３００ｍｇ、４７４．６８μｍｏｌ）、カリウム（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）トリフルオロボレート（１５５．２２ｍｇ、７１２．０２μｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（５２．８４ｍｇ、７１．２１μｍｏｌ）及び酢酸カリウム（１３９．１６ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を混合溶媒（１，４－ジオキサン：水＝１０：３）１３ｍＬに加え、１００℃に加熱し、５時間反応させた。反応終了後、反応液を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を収集し、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（１０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｍ（１５０ｍｇ）を収率４３．６７％で得た。
【0243】
MS m/z(ESI):709.1[M+1]+
【0244】
ステップ１１
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0245】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｍ（１５０ｍｇ、２０７．７５μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に加え、摂氏ゼロ度まで冷却し、塩酸ジオキサン溶液（４Ｍ、２ｍＬ）を滴下し、室温で２時間反応させた。反応終了後、氷水をに注ぎ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えて抽出し、水相を飽和炭酸ナトリウム水溶液で弱塩基性に調整し、酢酸エチル１０ｍＬと水（１０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（１０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６ｎ（８０ｍｇ）を収率６４．１９％で得た。
【0246】
MS m/z(ESI):609.1[M+1]+
【0247】
ステップ１２
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0248】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６ｎ（８０ｍｇ、１３１．３４μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に加え、摂氏ゼロ度まで冷却し、トリエチルアミン（２６．５３ｍｇ、２６２．６８μｍｏｌ）を滴下し、塩化アクリロイル（１２．９２ｍｇ、１４２．７１μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液をゆっくりと滴下し続け、摂氏ゼロ度で反応を続けた。反応終了後、室温でジクロロメタン（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（１０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物を分取分離し、精製して生成物（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６（２５ｍｇ）を収率２７．０８％で得た。
【0249】
MS m/z(ESI):663.1[M+1]+
1H NMR(400mHz, CDCl3) δ8.61(d, J =5.3 Hz,1H),8.29(s,1H),7.74(s,1H),7.24(d, J = 2.0 Hz,1H),7.11(d, J =5.4 Hz,1H),7.08 -6.99(m,1H),6.73 -6.70(m,1H),6.69(t, J = 1.3 Hz,1H),6.36(dd, J = 16.9、2.0 Hz,1H),5.81(dd, J = 10.6、1.9 Hz,1H),5.07(s,1H),4.77(d, J = 14.0 Hz,1H),3.82(dd, J = 14.1,4.4 Hz,1H),3.64(d, J =4.0 Hz,1H),3.49(s,3H),3.22(d, J = 12.2 Hz,1H),3.00(dd, J = 12.0,3.6 Hz,1H)、2.53 - 2.46(m,1H)、2.45(s,3H)、1.68(s,3H)、1.20(d, J =6.7 Hz,3H), 0.95(d, J =6.7 Hz,3H).
1H NMR(400mHz, CDCl3) δ8.61(d, J =5.3 Hz,1H),8.29(s,1H),7.74(s,1H),7.24(d, J = 2.0 Hz,1H),7.11(d, J =5.4 Hz,1H),7.08 -6.99(m,1H),6.73 -6.70(m,1H),6.69(t, J = 1.3 Hz,1H),6.36(dd, J = 16.9、2.0 Hz,1H),5.81(dd, J = 10.6、1.9 Hz,1H),5.07(s,1H),4.77(d, J = 14.0 Hz,1H),3.82(dd, J = 14.1,4.4 Hz,1H),3.64(d, J =4.0 Hz,1H),3.49(s,3H),3.22(d, J = 12.2 Hz,1H),3.00(dd, J = 12.0,3.6 Hz,1H)、2.53 - 2.46(m,1H)、2.45(s,3H)、1.68(s,3H)、1.20(d, J =6.7 Hz,3H), 0.95(d, J =6.7 Hz,3H).
【0250】
【化36】
【0251】
ステップ１
６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン
【0252】
６，７－ジクロロ－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン１６ｆ（５００ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）と水（５ｍＬ）の混合溶媒に加え、（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）ボロン酸１６ｏ（３８６ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（２２０ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１２．７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下、１００℃に一晩加熱した。反応終了後、ろ過し、ろ液を収集し、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、生成物６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン１６ｐ（５３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を収率７２．２４％で得た。
【0253】
MS m/z(ESI):531.1[M+1]+
【0254】
ステップ２
４，６－ジクロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
４，６－ジクロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン
【0255】
６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン１６ｐ（５３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化ホスホリル（１０ｍＬ）に加え、１１０°Ｃに加熱して３時間反応させた。反応液を氷水に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液で系を塩基性に調整し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えて抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、生成物４，６－ジクロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン１６ｑ（４３９．２ｍｇ、８００μｍｏｌ）を収率８０％で得た。
【0256】
MS m/z(ESI):549.1[M+1]+
【0257】
ステップ３
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
【0258】
４，６－ジクロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－１，８－ナフチリジン－２（１Ｈ）－オン１６ｑ（２６７ｍｇ、４８７．８μｍｏｌ）及び１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１ｊ（１９６．８ｍｇ、７３１．７μｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に加え、アルゴン雰囲気下、一晩還流させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、生成物１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｒ（３００ｍｇ、３９０．２４μｍｏｌ）を収率８０％で得た。
【0259】
MS m/z(ESI):771.1[M+1]+
【0260】
ステップ４
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（３－アミノ－６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（３－アミノ－６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル
【0261】
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－３－ニトロ－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｒ（３００ｍｇ、３９０．２４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）とアセトニトリル（１０ｍＬ）の混合溶媒に加え、０℃まで冷却し、ジイソプロピルエチルアミン（１７６ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）とトリクロロシラン（１８８．９２ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、生成物１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（３－アミノ－６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｓ（２３０ｍｇ、３２０μｍｏｌ）を収率８２．０４％で得た。
【0262】
MS m/z(ESI):741.1[M+1]+
【0263】
ステップ５
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0264】
１－（ｔ－ブチル）３－メチル（３Ｒ，６Ｒ）－４－（３－アミノ－６－クロロ－７－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－１－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－１，８－ナフチリジン－４－イル）－６－メチルピペラジン－１，３－ジカルボン酸エステル１６ｓ（２３０ｍｇ、３２０μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に加え、炭酸カリウム（８８．３２ｍｇ、６４０μｍｏｌ）を加え、室温で３時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ａ系）で精製し、生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｔ（１８２ｍｇ、２５６．４８μｍｏｌ）を収率８０．０４％で得た。
【0265】
MS m/z(ESI):709.1[M+1]+
【0266】
ステップ６
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
【0267】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｔ（１８２ｍｇ、２５６．４８μｍｏｌ）及び炭酸カリウム（７０．８９ｍｇ、５１２．９μｍｏｌ）をアセトン（５ｍＬ）に加え、ヨードメタン（７２．４６ｍｇ、５１２．９６μｍｏｌ）を滴下し、２時間加熱して還流させた。反応終了後、酢酸エチル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（２０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：Ｂ系）で精製し、生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｕ（１５０ｍｇ、２０７．７５μｍｏｌ）を収率８１％で得た。
【0268】
MS m/z(ESI):723.1[M+1]+
【0269】
ステップ７
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0270】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－メトキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－５，７－ジオキソ－１，２，４，４ａ，５，６，７，８－オクタヒドロ－３Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－３－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１６ｕ（１５０ｍｇ、２０７．７５μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に加え、０°Ｃまで冷却し、三臭化ホウ素（１Ｍ、１３．３４ｍＬ）を滴下し、室温に戻して一晩反応させた。反応終了後、氷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えて抽出し、水相を飽和炭酸ナトリウム水溶液で弱塩基性に調整し、酢酸エチル（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し（１０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、粗生成物（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６ｎ（８０ｍｇ、１３１．３４μｍｏｌ）を収率６４．１９％で得た。
【0271】
MS m/z(ESI):609.1[M+1]+
【0272】
ステップ８
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン
【0273】
（２Ｒ，４ａＲ）－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６ｎ（８０ｍｇ、１３１．３４μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に加え、０°Ｃまで冷却し、トリエチルアミン（２６．５３ｍｇ、２６２．６８μｍｏｌ）を滴下し、塩化アクリロイル（１２．９２ｍｇ、１４２．７１μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液をゆっくりと滴下し続け、０°Ｃで反応を続けた。反応終了後、室温でジクロロメタン（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えて抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し（１０ｍＬ×３）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物を分取液体クロマトグラフで単離し（分離カラム：ＡＫＺＯＮＯＢＥＬ Ｋｒｏｍａｓｉｌ；２５０×２１．２ｍｍ Ｉ．Ｄ．；５μｍ；移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ＋Ｈ２Ｏ、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：２０ｍＬ／ｍｉｎ）、生成物（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６（２５ｍｇ、３７．７６μｍｏｌ）を収率２７．０８％で得た。
【0274】
MS m/z(ESI):663.1[M+1]+
1H NMR(400mHz, CDCl3) δ8.61(d, J =5.3 Hz,1H),8.29(s,1H),7.74(s,1H),7.24(d, J = 2.0 Hz,1H),7.11(d, J =5.4 Hz,1H),7.08 -6.99(m,1H),6.73 -6.70(m,1H),6.69(t, J = 1.3 Hz,1H),6.36(dd, J = 16.9、2.0 Hz,1H),5.81(dd, J = 10.6、1.9 Hz,1H),5.07(s,1H),4.77(d, J = 14.0 Hz,1H),3.82(dd, J = 14.1,4.4 Hz,1H),3.64(d, J =4.0 Hz,1H),3.49(s,3H),3.22(d, J = 12.2 Hz,1H),3.00(dd, J = 12.0,3.6 Hz,1H)、2.53 - 2.46(m,1H)、2.45(s,3H)、1.68(s,3H)、1.20(d, J =6.7 Hz,3H),0.95(d, J =6.7 Hz,3H).
実施例６－化合物１７及び化合物１８
1H NMR(400mHz, CDCl3) δ8.61(d, J =5.3 Hz,1H),8.29(s,1H),7.74(s,1H),7.24(d, J = 2.0 Hz,1H),7.11(d, J =5.4 Hz,1H),7.08 -6.99(m,1H),6.73 -6.70(m,1H),6.69(t, J = 1.3 Hz,1H),6.36(dd, J = 16.9、2.0 Hz,1H),5.81(dd, J = 10.6、1.9 Hz,1H),5.07(s,1H),4.77(d, J = 14.0 Hz,1H),3.82(dd, J = 14.1,4.4 Hz,1H),3.64(d, J =4.0 Hz,1H),3.49(s,3H),3.22(d, J = 12.2 Hz,1H),3.00(dd, J = 12.0,3.6 Hz,1H)、2.53 - 2.46(m,1H)、2.45(s,3H)、1.68(s,3H)、1.20(d, J =6.7 Hz,3H),0.95(d, J =6.7 Hz,3H).
実施例６－化合物１７及び化合物１８
【0275】
【化37】
【0276】
（２Ｒ，４ａＲ）－３－アクリロイル－１１－クロロ－１０－（２－フルオロ－６－ヒドロキシフェニル）－８－（２－イソプロピル－４－（メチルチオ）ピリジン－３－イル）－２，６－ジメチル－２，３，４，４ａ，６，８－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［１’，２’：４，５］ピラジノ［２，３－ｃ］［１，８］ナフチリジン－５，７－ジオン１６（４５ｍｇ）を分取ＳＦＣキラル分離（カラムタイプ：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、１０μｍ、２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ａ ｆｏｒ ＣＯ２ ａｎｄ Ｂ ｆｏｒ Ｅｔｈａｎｏｌ；カラム圧力：１００ｂａｒ；流速：８０ｍＬ／ｍｉｎ；検出波長：２２０ｎｍ；カラム温度：３８℃）で精製した後、単一配座の化合物１７（短い保持時間のほう）及び単一配座の化合物１８（長い保持時間のほう）を得た。
【0277】
単一配座の化合物１７（短い保持時間のほう）：
MS m/z(ESI):663.2[M+1]+
２０ｍｇ；保持時間１．１０９分；キラル純度１００％ｅｅ。
MS m/z(ESI):663.2[M+1]+
２０ｍｇ；保持時間１．１０９分；キラル純度１００％ｅｅ。
【0278】
単一配座の化合物１８（長い保持時間のほう）：
MS m/z(ESI):663.3[M+1]+
１０ｍｇ；保持時間２．５２５分；キラル純度９９．２８％ｅｅ。
MS m/z(ESI):663.3[M+1]+
１０ｍｇ；保持時間２．５２５分；キラル純度９９．２８％ｅｅ。
【0279】
生物学的評価
試験例１. 本発明に係る化合物とＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質との共有結合能力の測定
試験例１. 本発明に係る化合物とＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質との共有結合能力の測定
【0280】
以下の方法は、本発明に係る化合物のインビトロ条件下での組換えヒトＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質への共有結合能力を測定するために使用された。
【0281】
実験手順は次のように簡単に説明された。反応緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ）を使用して組換えヒトＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質（ａａ１－１６９）を調製し、４μＭの濃度で予備とした。被験化合物をＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭストック溶液として調製し、その後反応緩衝液を使用して希釈して予備とした。まず、ウェルに、反応緩衝液で希釈した被験化合物（反応系の最終濃度を３μＭとした）１．５μＬを加え、その後反応緩衝液２３．５μＬを加えてよく混合し、その後４μＭの組換えヒトＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質２５μＬを加え、室温条件下で５分間インキュベートした後、酢酸５μＬを加えて反応を停止させ、サンプルをバイアルに移した。Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０／６５３０装置を使用して被験化合物のＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質への共有結合の比率を検出した。ただし、サンプルは液相クロマトカラム（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ Ｃ４、３００Å、３．５μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）で分析され、検出過程中、移動相Ａを０．１％ギ酸水溶液、移動相Ｂをアセトニトリルとした。移動相溶出プログラムとしては、０～０．５分、移動相Ａが９５％、２．５分である際、移動相Ａを３０％に変えて０．５分維持し、３．１分で移動相Ａを９５％に変えて１．９分維持し、流速が０．５ｍＬ／ｍｉｎであった。最後に、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｂｉｏｃｏｎｆｉｒｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ Ｂ．０８．００ソフトウェアを用いてデータを分析し、被験化合物の３μＭの濃度で５ｍｉｎインキュベートした条件でのＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質への共有結合率（Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒａｔｅ）を得、表１に示す。
【0282】
【表1】
【0283】
結論：本発明に係る化合物は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃタンパク質と良好な共有結合率を有する。
【0284】
試験例２．本発明に係る化合物のＮＣＩ－Ｈ３５８細胞増殖への阻害活性
以下の方法は、本発明に係る化合物によるＮＣＩ－Ｈ３５８細胞増殖の影響を測定するために使用された。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異を含む）は、中国科学院上海生命科学研究院細胞資源センターから購入し、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ １６４０培地で培養した。細胞の生存能力は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｒ）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）によって測定された。
以下の方法は、本発明に係る化合物によるＮＣＩ－Ｈ３５８細胞増殖の影響を測定するために使用された。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異を含む）は、中国科学院上海生命科学研究院細胞資源センターから購入し、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ １６４０培地で培養した。細胞の生存能力は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｒ）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）によって測定された。
【0285】
実験方法は、キットの説明書の手順に従って操作され、次のように簡単に説明された。被験化合物は、まずＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭストック溶液として調製し、その後培地で希釈し、化合物の最終濃度が１０００ｎＭ～０．０１５ｎＭの範囲になるように試験サンプルとして調製した。対数増殖期の細胞を９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり８００細胞の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した後、被験化合物を加えてから１２０時間培養し続けた。培養終了後、５０μＬ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ検出液を各ウェルに加え、５分間振とうし、１０分間静置した後、マイクロプレートリーダーのＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅモードでサンプルの各ウェルの発光値を読み取った。対照群（０．３％ＤＭＳＯ）の数値と比較することにより各濃度点での化合物のパーセント阻害率を算出し、その後ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアで化合物濃度対数－阻害率について非線形回帰分析を行い、化合物による細胞増殖阻害のＩＣ５０値を得、表２に示す。
【0286】
【表2】
【0287】
結論：本発明に係る化合物は、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ヒト非小細胞肺癌）細胞に対して良好な増殖阻害効果を有する。
【0288】
試験例３．本発明に係る化合物によるＮＣＩ－Ｈ３５８細胞中のｐ－ＥＲＫ１／２の阻害活性
以下の方法は、本発明に係る化合物がＮＣＩ－Ｈ３５８細胞中のｐ－ＥＲＫ１／２に対して阻害する活性を測定するために使用された。この方法では、Ｃｉｓｂｉｏ社のＡｄｖａｎｃｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／ｔｙｒ２０４）キット（カタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨ）を使用し、詳細な実験操作は、キットの説明書を参照することができる。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異を含む）は、中国科学院上海生命科学研究院細胞資源センターから購入した。
以下の方法は、本発明に係る化合物がＮＣＩ－Ｈ３５８細胞中のｐ－ＥＲＫ１／２に対して阻害する活性を測定するために使用された。この方法では、Ｃｉｓｂｉｏ社のＡｄｖａｎｃｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／ｔｙｒ２０４）キット（カタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨ）を使用し、詳細な実験操作は、キットの説明書を参照することができる。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異を含む）は、中国科学院上海生命科学研究院細胞資源センターから購入した。
【0289】
実験手順は次のように簡単に説明された。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ １６４０完全培地に培養した。ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を９６ウェルプレートに１ウェルあたり３００００個で播種し、培地として完全培地を使用し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。被験化合物をＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭストック溶液として調製し、その後ＲＰＭＩ １６４０基礎培地で希釈し、対応する濃度の被験化合物を含むＲＰＭＩ １６４０基礎培地９０μＬを各ウェルに加え、反応系における被験化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．０１５ｎＭの範囲にし、細胞培養器に入れて３時間４０分間培養した。その後、最終濃度が５ｎＭになるように、ＲＰＭＩ １６４０基礎培地で調製したｈＥＧＦ（ロシュより購入、カタログ番号１１３７６４５４００１）１０μＬを加え、インキュベーターを入れて２０分間培養した。細胞上清を捨て、氷浴したＰＢＳで細胞を洗浄した後、各ウェルに４５μＬの１×ｃｅｌｌ ｐｈｏｓｐｈｏ／ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（Ａｄｖａｎｃｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２キット成分）を加えて分解し、９６ウェルプレートを氷上で３０分間分解した後、Ａｄｖａｎｃｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／ｔｙｒ２０４）キットの説明書に従って分解液を検出した。最後に、マイクロプレートリーダーのＴＦ－ＦＲＥＴモードで３０４ｎＭの励起波長で発光波長６２０ｎＭ及び６６５ｎＭの各ウェルの蛍光強度を測定し、各ウェルの６６５／６２０の蛍光強度比を算出した。対照群（０．１％ＤＭＳＯ）の蛍光強度比と比較することにより、各濃度での被験化合物のパーセント阻害率を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアで被験化合物濃度対数値－阻害率について非線形回帰分析を行い、化合物のＩＣ５０値を得、表３に示す。
【0290】
【表3】
【0291】
結論：本発明に係る化合物は、ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞中のｐ－ＥＲＫ１／２に対して良好な増殖阻害効果を有する。
【0292】
試験例４．本発明に係る化合物のｈＥＲＧカリウムイオンチャネルへの阻害活性
１、細胞培養
１．１ この試験で使用した細胞として、ｈＥＲＧ ｃＤＮＡをトランスフェクトしてｈＥＲＧチャネルを安定して発現するＣＨＯ細胞株（デンマークＳｏｐｈｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社より提供）を使用し、細胞世代がＰ１７であった。細胞をＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地、１０％（ｖ／ｖ）不活化ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、１００μｇ／ｍＬのジェネティシン（すべてインビトロジェンから購入）を含む培地に培養した。
１、細胞培養
１．１ この試験で使用した細胞として、ｈＥＲＧ ｃＤＮＡをトランスフェクトしてｈＥＲＧチャネルを安定して発現するＣＨＯ細胞株（デンマークＳｏｐｈｉｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社より提供）を使用し、細胞世代がＰ１７であった。細胞をＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地、１０％（ｖ／ｖ）不活化ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、１００μｇ／ｍＬのジェネティシン（すべてインビトロジェンから購入）を含む培地に培養した。
【0293】
１．２ ＣＨＯ ｈＥＲＧ細胞を上記の培養液を含むペトリ皿で増殖させ、３７℃、５％ＣＯ２含むインキュベーターで培養した。電気生理学的実験の２４～４８時間前に、ＣＨＯ ｈＥＲＧ細胞をペトリ皿に置いた円形ガラススライドに移し、上記と同じ培養液及び培養条件下で増殖させた。各円形ガラススライド上のＣＨＯ ｈＥＲＧ細胞の密度は、ほとんどの細胞が独立した単一のものであるように要求された。
【0294】
２．実験溶液
次の溶液（Ｓｏｐｈｉｏｎが推奨したもの）を電気生理学的記録に使用した。
次の溶液（Ｓｏｐｈｉｏｎが推奨したもの）を電気生理学的記録に使用した。
【0295】
【表4-1】
【0296】
３．電気生理学的記録過程
３．１ 電気生理学的記録システム
完全に自動化されたＱＰａｔｃｈシステム（Ｓｏｐｈｉｏｎ、デンマーク）を、全細胞電流の記録に使用した。細胞を－８０ｍＶの電圧でクランプされた。細胞クランプ電圧を＋２０ｍＶに脱分極してｈＥＲＧカリウムチャネルを活性化し、２．５秒後に－５０ｍＶにクランプして不活性化を無効にし、外向きテール電流を生成した。テール電流ピークは、ｈＥＲＧ電流の大きさの尺度として使用された。
３．１ 電気生理学的記録システム
完全に自動化されたＱＰａｔｃｈシステム（Ｓｏｐｈｉｏｎ、デンマーク）を、全細胞電流の記録に使用した。細胞を－８０ｍＶの電圧でクランプされた。細胞クランプ電圧を＋２０ｍＶに脱分極してｈＥＲＧカリウムチャネルを活性化し、２．５秒後に－５０ｍＶにクランプして不活性化を無効にし、外向きテール電流を生成した。テール電流ピークは、ｈＥＲＧ電流の大きさの尺度として使用された。
【0297】
３．２ ＱＰａｔｃｈ実験手順
初期段階で膜透過性の全細胞配置状態に達した後、安定化に達するまで細胞を少なくとも１２０秒記録した。そして全過程で、上記の電圧パターンを、１５秒ごとに細胞に適用した。上記のパラメータ閾値の記録では、安定した細胞のみが、薬物治療の過程に入ることを許された。０．１％ジメチルスルホキシド（溶媒）を含む外液を細胞に適用し、ベースラインを確立し、電流を３分間安定させた。化合物溶液の添加後、細胞を化合物の効果が安定状態又は限界の４分間に達するまで試験環境にとどまった。化合物の異なる濃度勾配の試験実験では、クランプされた細胞に化合物を低濃度から高濃度まで添加した。化合物試験完了後、電流が安定状態に戻るまで外液で細胞を洗浄した。
初期段階で膜透過性の全細胞配置状態に達した後、安定化に達するまで細胞を少なくとも１２０秒記録した。そして全過程で、上記の電圧パターンを、１５秒ごとに細胞に適用した。上記のパラメータ閾値の記録では、安定した細胞のみが、薬物治療の過程に入ることを許された。０．１％ジメチルスルホキシド（溶媒）を含む外液を細胞に適用し、ベースラインを確立し、電流を３分間安定させた。化合物溶液の添加後、細胞を化合物の効果が安定状態又は限界の４分間に達するまで試験環境にとどまった。化合物の異なる濃度勾配の試験実験では、クランプされた細胞に化合物を低濃度から高濃度まで添加した。化合物試験完了後、電流が安定状態に戻るまで外液で細胞を洗浄した。
【0298】
４、化合物の準備
４．１ １０ｍＭの化合物ストック溶液を細胞外液で段階希釈により最終にμＭ濃度に希釈した。
４．２ 最高の試験濃度を３０μＭとして、３０、１０，３、１，０．３及び０．１μＭの６つの濃度にした。
４．３ ３０μＭの化合物のＤＭＳＯの最終濃度が０．３％であることを除いて、他の濃度の化合物溶液中のＤＭＳＯの最終濃度が０．１％であった。すべての化合物溶液に対しては、化合物を完全に溶解させるために、５～１０分間超音波処理に付し振とうした。
４．１ １０ｍＭの化合物ストック溶液を細胞外液で段階希釈により最終にμＭ濃度に希釈した。
４．２ 最高の試験濃度を３０μＭとして、３０、１０，３、１，０．３及び０．１μＭの６つの濃度にした。
４．３ ３０μＭの化合物のＤＭＳＯの最終濃度が０．３％であることを除いて、他の濃度の化合物溶液中のＤＭＳＯの最終濃度が０．１％であった。すべての化合物溶液に対しては、化合物を完全に溶解させるために、５～１０分間超音波処理に付し振とうした。
【0299】
５．データ分析
試験データを、Ｓｏｐｈｉｏｎが提供されるＱｐａｔｃｈ分析ソフトウェア、Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍなどで分析した。
試験データを、Ｓｏｐｈｉｏｎが提供されるＱｐａｔｃｈ分析ソフトウェア、Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍなどで分析した。
【0300】
６．実験結果
本発明に係る化合物のｈＥＲＧ電流への阻害結果を表４に示す。
本発明に係る化合物のｈＥＲＧ電流への阻害結果を表４に示す。
【0301】
【表4-2】
【0302】
結論：心臓ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する薬物の阻害は、薬物がＱＴ延長症候群を引き起こす主な理由である。実験結果から、本発明に係る化合物１７は、心臓ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対して有意な阻害効果を有さず、高用量で心毒性の副作用を回避できることが分かった。
【0303】
試験例５．本発明に係る化合物のＩＣＲマウスにおける薬物動態研究
１．実験の目的
ＩＣＲマウスを被試動物とし、比較例１及び本発明の実施例１７の化合物をマウスに胃内投与し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法で異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定し、マウス体内における本発明に係る化合物の薬物動態特性を考察した。
１．実験の目的
ＩＣＲマウスを被試動物とし、比較例１及び本発明の実施例１７の化合物をマウスに胃内投与し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法で異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定し、マウス体内における本発明に係る化合物の薬物動態特性を考察した。
【0304】
２．実験方案
２．１ 実験薬品と動物
比較例１：実施例１７の化合物
北京維通利華実験動物技術有限公司から購入したＩＣＲマウス、雄、体重２９．２～３４．９ｇ。
２．１ 実験薬品と動物
比較例１：実施例１７の化合物
北京維通利華実験動物技術有限公司から購入したＩＣＲマウス、雄、体重２９．２～３４．９ｇ。
【0305】
２．２ 薬剤の調製
胃内投与製剤の調製：適量の被験化合物を秤量し、適量のＤＭＳＯ：ＰＥＧ２００＝５％：９５％（ｖ／ｖ）を加え、ボルテックスして振とうし、最終調製濃度を０．５ｍｇ／ｍＬとして溶液を調製した。
胃内投与製剤の調製：適量の被験化合物を秤量し、適量のＤＭＳＯ：ＰＥＧ２００＝５％：９５％（ｖ／ｖ）を加え、ボルテックスして振とうし、最終調製濃度を０．５ｍｇ／ｍＬとして溶液を調製した。
【0306】
２．３ 投与
ＩＣＲマウス、被験化合物胃内群（各群９匹）。
胃内群：一晩絶食後に胃内投与し（投与量５ｍｇ／ｋｇ、投与体積１０ｍＬ／ｋｇ）、投与４時間後に摂食した。
ＩＣＲマウス、被験化合物胃内群（各群９匹）。
胃内群：一晩絶食後に胃内投与し（投与量５ｍｇ／ｋｇ、投与体積１０ｍＬ／ｋｇ）、投与４時間後に摂食した。
【0307】
３．操作
胃内群：投与前と投与後０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間及び２４時間に眼窩静脈から約１００μＬの血液を採取した。
全血サンプルをＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固剤管に入れた。（遠心条件：１５００ｇ、１０分間）遠心分離で血漿を収集した。この上層血漿を分析まで－４０～－２０℃で保存した。
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより、化合物を胃内投与した後にマウス血漿中の被験化合物の含有量を測定した。
胃内群：投与前と投与後０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間及び２４時間に眼窩静脈から約１００μＬの血液を採取した。
全血サンプルをＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固剤管に入れた。（遠心条件：１５００ｇ、１０分間）遠心分離で血漿を収集した。この上層血漿を分析まで－４０～－２０℃で保存した。
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより、化合物を胃内投与した後にマウス血漿中の被験化合物の含有量を測定した。
【0308】
４．薬物動態パラメータの結果
本発明に係る化合物の薬物動態パラメータを表５に示す。
本発明に係る化合物の薬物動態パラメータを表５に示す。
【0309】
【表5】
【0310】
結論：比較例１と比較して、本発明に係る化合物１７は、薬物動態吸収が良好であり、血中薬物濃度、曲線下面積及び半減期が比較例１よりも有意に優れており、良好な薬物動態特性を有する。
【0311】
注：比較例１は、ＷＯ２０２１０８３１６７Ａ１の化合物Ｚ２７－２であり、ＷＯ２０２１０８３１６７Ａ１の実施例２７に従って製造され、具体的な構造は以下の通りである：
【0312】
【化38】
【0313】
試験例６．ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植モデルにおける本発明に係る化合物の薬力学試験
１．実験の目的
この試験は、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ヒト非小細胞肺癌）細胞株ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植動物モデルにおける、経口胃内投与により１日１回で１４日間投与された本発明に係る化合物１７の抗腫瘍効果及び安全性を評価するために行われた。
１．実験の目的
この試験は、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ヒト非小細胞肺癌）細胞株ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植動物モデルにおける、経口胃内投与により１日１回で１４日間投与された本発明に係る化合物１７の抗腫瘍効果及び安全性を評価するために行われた。
【0314】
２．被験物質の調製
２．１ ブランク投与製剤の調製：
ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）：３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５：Ｓａｌｉｎｅ（生理食塩水）＝１０：１０：８０（ｖ／ｖ／ｖ）を含む適量の体積の製剤をブランク群投与試験液として調製した。
２．１ ブランク投与製剤の調製：
ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）：３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５：Ｓａｌｉｎｅ（生理食塩水）＝１０：１０：８０（ｖ／ｖ／ｖ）を含む適量の体積の製剤をブランク群投与試験液として調製した。
【0315】
２．２ 化合物１７の経口投与製剤の調製
適量の化合物１７を１０ｍＬの遠心管に秤量，適量のＤＭＡを加え、ボルテックスして振とうし、固形物を完全に溶解させ、さらに適量の体積の３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５を加え、ボルテックスして振とうし、よく混合し、さらに生理食塩水を加え、ＤＭＡ：３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５：Ｓａｌｉｎｅの比率を１０：１０：８０（ｖ／ｖ／ｖ）にし、濃度が１ｍｇ／ｍＬの投与製剤を調製した。
適量の化合物１７を１０ｍＬの遠心管に秤量，適量のＤＭＡを加え、ボルテックスして振とうし、固形物を完全に溶解させ、さらに適量の体積の３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５を加え、ボルテックスして振とうし、よく混合し、さらに生理食塩水を加え、ＤＭＡ：３０％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５：Ｓａｌｉｎｅの比率を１０：１０：８０（ｖ／ｖ／ｖ）にし、濃度が１ｍｇ／ｍＬの投与製剤を調製した。
【0316】
３．実験動物
江蘇集萃薬康生物科技有限公司から購入した１２匹のＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雌、６～７週齢（腫瘍細胞接種時のマウスの週齢）、ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１９－０００９、動物認証番号：２０２１１３１４９。
江蘇集萃薬康生物科技有限公司から購入した１２匹のＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雌、６～７週齢（腫瘍細胞接種時のマウスの週齢）、ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１９－０００９、動物認証番号：２０２１１３１４９。
【0317】
４．細胞培養
ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を、１０％ウシ胎児血清、１％ピルビン酸ナトリウム及び１％グルタミンを含むＲＰＭＩ １６４０培養液に培養した。指数増殖期のＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を収集し、ヌードマウスへの皮下腫瘍接種に適した濃度まで細胞をＰＢＳに再懸濁した。
ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を、１０％ウシ胎児血清、１％ピルビン酸ナトリウム及び１％グルタミンを含むＲＰＭＩ １６４０培養液に培養した。指数増殖期のＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を収集し、ヌードマウスへの皮下腫瘍接種に適した濃度まで細胞をＰＢＳに再懸濁した。
【0318】
５．動物接種とグループ分け
雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの背中の右側に約３．７×１０６ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１００～１５０ｍｍ３に達したとき、腫瘍の大きさに応じてランダムにグループ分けし、各群６匹ずつに２群に分けた。
雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの背中の右側に約３．７×１０６ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１００～１５０ｍｍ３に達したとき、腫瘍の大きさに応じてランダムにグループ分けし、各群６匹ずつに２群に分けた。
【0319】
６．動物への投与と観察
腫瘍接種後、皮下移植腫瘍モデルを構築した。各治療群及び溶媒対照群に１４日間経口胃内投与した。動物の体重を毎日測定し、腫瘍体積を週に２回測定した。
腫瘍接種後、皮下移植腫瘍モデルを構築した。各治療群及び溶媒対照群に１４日間経口胃内投与した。動物の体重を毎日測定し、腫瘍体積を週に２回測定した。
【0320】
腫瘍体積（ＴＶ）、相対的腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）、相対的腫瘍阻害率（ＴＧＩ）及び腫瘍阻害率（ＩＲ）を次の計算式により算出した。
（１）ＴＶ（腫瘍体積、ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）＝１／２×ａ×ｂ２、ただし、ａ、ｂはそれぞれ腫瘍の長さと幅を表す。
（２）Ｔ／Ｃ（相対的腫瘍増殖率、％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％、ただし、ＴＲＴＶは治療群のＲＴＶ、ＣＲＴＶは対照群のＲＴＶである。
（３）ＴＧＩ％（腫瘍増殖阻害率）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％、ただし、ＴとＣはそれぞれ治療群と対照群のある特定の時点での相対的腫瘍体積である。
（４）ＩＲ（％）（腫瘍重量腫瘍阻害率）＝（１－ＴＷｔ／ＴＷｃ）×１００％、ただし、ＴＷｔは治療群の腫瘍重量、ＴＷｃは対照群の腫瘍重量である。
（１）ＴＶ（腫瘍体積、ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）＝１／２×ａ×ｂ２、ただし、ａ、ｂはそれぞれ腫瘍の長さと幅を表す。
（２）Ｔ／Ｃ（相対的腫瘍増殖率、％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％、ただし、ＴＲＴＶは治療群のＲＴＶ、ＣＲＴＶは対照群のＲＴＶである。
（３）ＴＧＩ％（腫瘍増殖阻害率）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％、ただし、ＴとＣはそれぞれ治療群と対照群のある特定の時点での相対的腫瘍体積である。
（４）ＩＲ（％）（腫瘍重量腫瘍阻害率）＝（１－ＴＷｔ／ＴＷｃ）×１００％、ただし、ＴＷｔは治療群の腫瘍重量、ＴＷｃは対照群の腫瘍重量である。
【0321】
７．結果
本発明に係る化合物１７により処理したＮＣＩ－Ｈ３５８細胞ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヌードマウス異種移植腫瘍の腫瘍体積変化図を図１に示す。
本発明に係る化合物１７により処理したＮＣＩ－Ｈ３５８細胞ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヌードマウス異種移植腫瘍の腫瘍体重変化図を図２に示す。
本発明に係る化合物１７により処理したＮＣＩ－Ｈ３５８細胞ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヌードマウス異種移植腫瘍の腫瘍体積変化図を図１に示す。
本発明に係る化合物１７により処理したＮＣＩ－Ｈ３５８細胞ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヌードマウス異種移植腫瘍の腫瘍体重変化図を図２に示す。
【0322】
【表6】
【0323】
【表7】
【0324】
表６～７、図１～２から分かるように、１０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ、ｑｄ）の用量で、本発明に係る化合物（化合物１７を例とした）は、１４日以内にＮＣＩ－Ｈ３５８細胞に基づくマウスインビボ腫瘍モデルの確立に対して有意な増殖阻害効果を有し、有意な体重変化が見られなく、良好な安全性と耐性を有する。
【図1】
【図2】
【国際調査報告】