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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-09-14
(54)【発明の名称】アネキシンＡ１のＮ末端ペプチド製剤及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/16 20060101AFI20230907BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230907BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230907BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230907BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230907BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20230907BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20230907BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20230907BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20230907BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20230907BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20230907BHJP
【ＦＩ】
A61K38/16 ZNA
A61P9/10
A61P29/00
A61K9/08
A61K47/26
A61K47/10
A61K47/12
A61K47/18
A61K47/22
A61K9/19
C07K14/47
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2023512755
(86)(22)【出願日】2021-08-20
(85)【翻訳文提出日】2023-02-20
(86)【国際出願番号】 EP2021073186
(87)【国際公開番号】W WO2022038281
(87)【国際公開日】2022-02-24
(31)【優先権主張番号】20192142.6
(32)【優先日】2020-08-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523060507
【氏名又は名称】リゾサー ファーマ エー／エス
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ブクリンスキー，イェンス トルプ
(72)【発明者】
【氏名】トゥエルング，ペルニレ ソンダービー
(72)【発明者】
【氏名】イェンセン，メッテ ハンブルグ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA29
4C076CC04
4C076CC11
4C076DD22Z
4C076DD25Z
4C076DD38D
4C076DD41Z
4C076DD49Z
4C076DD50Z
4C076DD51Z
4C076DD57Z
4C076DD60Z
4C076DD66D
4C076DD67D
4C076EE23D
4C076EE23Z
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA19
4C084BA23
4C084DC50
4C084MA17
4C084MA44
4C084NA10
4C084ZA361
4C084ZB111
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA19
4H045CA42
4H045EA28
(57)【要約】
本発明は、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３．５を含むホルミルペプチド受容体のうちの１以上においてアゴニスト活性を保持しながら、溶解性及び／又は安定性が改善したアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドの治療有効量を含む医薬製剤に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ｐＨ＞６．０；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、ａ．アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、例えば、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～９のいずれか１つの変異体からなる群から選択される治療有効量のペプチドなどのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液、及び
ｉｉｉ．水である溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液、及び
ｉｖ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む、液体医薬製剤。
【請求項2】
ｐＨ≧７．４；又は２＜ｐＨ＜２．６である、請求項１に記載の液体医薬製剤。
【請求項3】
ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０である、請求項１～２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項4】
ｐＨ≧８；又は２＜ｐＨ＜２．６である、請求項１～３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項5】
ｐＨが８～８．５である、請求項１～４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項6】
ｐＨが≧８．３である、請求項１～５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項7】
本質的にフィブリルを含まず、かつ／又は本質的に≧１μｍ、例えば≧１０μｍ、例えば≧１００μｍのタンパク質性粒子を含まない、請求項１～６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項8】
ｐＨ３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４の液体医薬製剤と比較して；及び／又は生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．物理的安定性の改善を有する
ｂ．化学的安定性の改善を有する
ｃ．溶解性の改善及び／又は不溶性の低下を有する、かつ／又は
ｄ．フィブリルを形成する傾向の低下を有する、
請求項１～７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項9】
前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する、請求項１～８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項10】
前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する、請求項１～９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項11】
０．１～１０ｍｇ／ｍｌ、例えば０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１ｍｇ／ｍｌ、例えば１～２ｍｇ／ｍｌ、例えば２～３ｍｇ／ｍｌ、例えば３～４ｍｇ／ｍｌ、例えば４～５ｍｇ／ｍｌ、例えば５～６ｍｇ／ｍｌ、例えば６～７ｍｇ／ｍｌ、例えば７～８ｍｇ／ｍｌ、例えば８～９ｍｇ／ｍｌ、例えば９～１０ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する、請求項１～１０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項12】
少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する、請求項１～１１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項13】
ｐＨ＞６であり、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し；かつ／又は前記製剤が、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する、請求項１～１２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項14】
前記溶液が、１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項15】
前記溶液が、１００％（等張）±２０％の張度、例えば８０％～１２０％；例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％の張度、例えば１１５～１２０％の張度を有する、請求項１～１４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項16】
ａ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつｂ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有する、
請求項１～１５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項17】
ａ．前記溶液が、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有する、
請求項１～１６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項18】
ａ．前記溶液が、ｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有する、
請求項１～１７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項19】
ａ．前記溶液が、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有する、
請求項１～１８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項20】
ａ．前記溶液がｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有する、
請求項１～１９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項21】
ａ．前記溶液がｐＨ≧８．３のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有する、
請求項１～２０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項22】
ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧８．０、例えばｐＨ≧８．３であり、かつ前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも６．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも８．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも９．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１５．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し；かつ／又は前記製剤が、少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも６．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも８．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも９．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１５．０ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する、請求項１～２１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項23】
前記溶媒が、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの１以上の等張性調整剤を含む、請求項１～２２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項24】
前記等張性調整剤が、ペントース単糖、ヘキソース単糖、二糖及び三糖からなる群から選択される、請求項１～２３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項25】
前記等張性調整剤が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される、請求項１～２４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項26】
前記溶液がスクロース及び／又はマンニトールを含む、請求項１～２５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項27】
前記溶液がスクロースを含む、請求項１～２６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項28】
前記溶液が、約４％（ｗ／ｖ）マンニトール及び／又は約１％スクロースを含み、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール及び／又は０．５～２％（ｗ／ｖ）スクロースを含み、例えば０～８％（ｗ／ｖ）マンニトール及び／又は０～５％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、請求項１～２７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項29】
ａ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつb．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される等張性調整剤を含む、
請求項１～２８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項30】
ａ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつb．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｃ．前記溶液がスクロース及び／又はマンニトールを含む、
請求項１～２９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項31】
ａ．前記溶液が、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｄ．前記溶液が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される等張性調整剤を含む、
請求項１～３０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項32】
ａ．前記溶液が、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｄ．前記溶液が、スクロース及び／又はマンニトールを含む、
請求項１～３１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項33】
ａ．前記溶液がｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｄ．前記溶液が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される等張性調整剤を含む、
請求項１～３２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項34】
ａ．前記溶液がｐＨ≧８．０のｐＨを有し、かつｂ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ
ｃ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ
ｄ．前記溶液が、スクロース及び／又はマンニトールを含む、
請求項１～３３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項35】
１以上の緩衝液をさらに含む、請求項１～３４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項36】
酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ、アミン含有緩衝液、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン及びグリシル－グリシンなどのアミノ酸ベースの緩衝液、非リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ポリソルベート８０（例えばＴｗｅｅｎ８０）、ＨＥＰＥＳ及びホウ酸塩からなる群から選択される１以上の緩衝液をさらに含む、請求項１～３５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項37】
グリシル－グリシン及び／又はＴｗｅｅｎ２０をさらに含む、請求項１～３６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項38】
グリシル－グリシン及びＴｗｅｅｎ２０をさらに含む、例えば１～２０ｍＭグリシル－グリシン及び０．００１～０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む、例えば１０ｍＭグリシル－グリシン及び０．０１％のＴｗｅｅｎ２０を含む、請求項１～３７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項39】
約８．３のｐＨで、約４％マンニトール、約１％スクロース、約１０ｍＭグリシルグリシン、約０．０１％ポリソルベート８０を含む、請求項１～３８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項40】
ヒスチジンをさらに含む、請求項１～３９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項41】
１～１００ｍＭのヒスチジンをさらに含む、請求項１～４０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項42】
配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む、請求項１～４１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項43】
前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ－ＮＨ２（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、又は１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含むその変異体である、請求項１～４２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項44】
配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、３個の個々のアミノ酸置換を含む、請求項１～４３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項45】
配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、２個の個々のアミノ酸置換を含む、請求項１～４４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項46】
配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、１個のアミノ酸置換を含む、請求項１～４５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項47】
前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドがＣ末端アミド化されている、請求項１～４６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項48】
前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、任意選択でＣ末端アミド化されているＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ－ＮＨ２（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）である、請求項１～４７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
【請求項49】
請求項１～４８のいずれかに記載の液体医薬製剤を調製するプロセスであって、ａ．請求項１～４８のいずれかに記載の溶媒とアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを混合する工程；
ｂ．任意選択で、工程ａの混合物を濾過する工程、及び
ｃ．前記液体医薬製剤のｐＨを調整する工程
を含むプロセス。
【請求項50】
凍結乾燥医薬製剤を調製するプロセスであって、ａ．請求項１～４９のいずれかに記載の液体医薬製剤を提供する工程、及び
ｂ．工程ａの前記液体を凍結乾燥する工程
を含むプロセス。
【請求項51】
請求項５０に記載のプロセスによって得られる凍結乾燥医薬製剤。
【請求項52】
アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法であって、ａ．請求項５０～５１のいずれか一項に記載の凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
を含む方法。
【請求項53】
請求項５２に記載の方法によって得られる再構成溶液。
【請求項54】
医薬として使用するための、請求項１～５３のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤又は再構成溶液。
【請求項55】
虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するための、請求項１～５４のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤又は再構成溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
技術分野
本発明は、溶解性及び／又は安定性が改善されたアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドを含む医薬製剤であって、液体製剤；それに由来する凍結乾燥製剤、及び再構成された製剤又は溶液を含む医薬製剤に関する。該液体製剤は、ｐＨ＞６、又は２＜ｐＨ＜３を有し、治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、並びに超純水などの水；並びに本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液からなる群から選択される溶媒を含む。開示される製剤は、虚血性及び炎症性状態の治療で使用するのに特に有効である。
本発明は、溶解性及び／又は安定性が改善されたアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドを含む医薬製剤であって、液体製剤；それに由来する凍結乾燥製剤、及び再構成された製剤又は溶液を含む医薬製剤に関する。該液体製剤は、ｐＨ＞６、又は２＜ｐＨ＜３を有し、治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、並びに超純水などの水；並びに本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液からなる群から選択される溶媒を含む。開示される製剤は、虚血性及び炎症性状態の治療で使用するのに特に有効である。
【背景技術】
【0002】
背景
アネキシンスーパーファミリーは、有意な生物学的及び構造的相同性を有する１３種のカルシウム・リン脂質結合タンパク質からなる。アネキシンは、構造的に高度に保存されたコアドメインと可変Ｎ末端ドメインに分けられる。アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１、３７ｋＤａ－配列番号１）は、血液由来の多形核白血球（ＰＭＮ）の周辺組織への血管外漏出を阻害する抗炎症性タンパク質である。このタンパク質は、Ｎ－ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）２又はＦＰＲ－Ｌ１受容体に結合し、そこで一連のシグナル伝達イベントを開始する。炎症刺激に続いて、血液由来の多形核白血球（ＰＭＮ）の周囲組織への移行が起こる。ＰＭＮの移行又は血管外漏出は、炎症促進性及び抗炎症性プロセスを制御する接着分子、サイトカイン及びプロテアーゼなどのメディエーターによって調節される。ＰＭＮの破壊的な能力は高く、潜在的に自己損傷を与える。そのため、ＰＭＮの血管外漏出及び炎症反応を制御することが重要である。
アネキシンスーパーファミリーは、有意な生物学的及び構造的相同性を有する１３種のカルシウム・リン脂質結合タンパク質からなる。アネキシンは、構造的に高度に保存されたコアドメインと可変Ｎ末端ドメインに分けられる。アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１、３７ｋＤａ－配列番号１）は、血液由来の多形核白血球（ＰＭＮ）の周辺組織への血管外漏出を阻害する抗炎症性タンパク質である。このタンパク質は、Ｎ－ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）２又はＦＰＲ－Ｌ１受容体に結合し、そこで一連のシグナル伝達イベントを開始する。炎症刺激に続いて、血液由来の多形核白血球（ＰＭＮ）の周囲組織への移行が起こる。ＰＭＮの移行又は血管外漏出は、炎症促進性及び抗炎症性プロセスを制御する接着分子、サイトカイン及びプロテアーゼなどのメディエーターによって調節される。ＰＭＮの破壊的な能力は高く、潜在的に自己損傷を与える。そのため、ＰＭＮの血管外漏出及び炎症反応を制御することが重要である。
【0003】
抗炎症剤としての治療目的のために、完全なアネキシンＡ１タンパク質は、機能性断片又はその改変バージョンに関して多数の欠点を有する。タンパク質のサイズが大きいと、より小さなポリペプチドを用いて可能になる技術（例えば、経皮又は経粘膜）による送達がより困難になる。眼の炎症を治療するために使用する場合、より小さな分子は角膜上皮をより良好に貫通することができると予想される。また、タンパク質分解に対する感受性は、全てのペプチド医薬品、特に大きなものについて、かつ特に経口送達（多くの患者に好まれる）が企図される場合に、特に懸念される。
【0004】
ポリペプチドのＮ末端側に顕著な領域を欠くいくつかのアネキシンＡ１誘導体は、炎症及びメディエーター放出のいくつかのアッセイにおいて顕著な活性を欠くことが示されているが、全長Ｎ末端ＮアセチルアネキシンＡ１はいくつかの系において生物学的に活性があるとみなされた。主にアネキシンＡ１タンパク質の特有なＮ末端部分に由来する多くのペプチドが抗炎症特性を有することが示されている。最も広く研究されているアネキシンＡ１ペプチドの１つはペプチドＡｃ２－２６であり、これは５４アミノ酸Ｎ末端領域の２番目から２６番目のアミノ酸を模倣している。Ａｃ１－１８８断片（及び天然タンパク質）と同様に、Ｎ末端アセチル化を有するため、安定性が高まり、場合によっては半減期が増加する。アネキシンＡ１及びそのＮ末端ペプチド（Ａｃ２－２６）は、ＦＰＲ２／リポキシンＡ４（ＦＰＲ２／Ａｌｘ）受容体を介して抗炎症作用の大部分を発揮することが示されている。インビボでは、Ａｃ２－２６ペプチドは、心筋虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）、腸間膜Ｉ／Ｒ、グリコーゲン腹膜炎及びＩＬ１エアポーチのモデルで抗炎症作用を発揮することが示されており、損傷／炎症部位への好中球の動員を大幅に低下させることが報告されている。
【0005】
ペプチドＡｃ２－１２及びＡｃ２－６などのＡｃ２－２６ペプチドのより短いバージョンも、炎症の急性モデルにおいてある程度の抗炎症作用を誘発することが示されている。プロテアーゼ耐性Ｖ２４Ｌ変異体を含む、アミノ酸残基２～４８、２～５０及び１１～４８に対応するポリペプチドなどの抗炎症作用を有するより長いポリペプチドが開示されている（ＷＯ ２０１２／１７４３９７）。
【0006】
ペプチド治療薬は自己会合し、凝集及び／又はフィブリル化を引き起こす可能性がある。安定なペプチド製剤を調製するには、天然ペプチドの立体構造を維持する必要がある。安定な製剤及び長期安定性は、生物学的利用能を保持し、ペプチドを機械的ストレスにさらす送達装置（例えば、連続注入システム）において使用することができる効果的な治療組成物の開発において重要である。
【0007】
水溶液中のペプチドの溶解度は、緩衝系の選択、張度プロバイダー並びにペプチドの濃度及び形態（例えば、塩及び他の修飾）を含む多くの要因に大きく依存する。
【0008】
アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドの治療の可能性を考慮すると、様々な投与経路で投与できる安全で効果的かつ安定な製剤を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ（配列番号８）などのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドは、約７．３の中性ｐＨの生理食塩水に溶けにくく、非常に高いフィブリル化傾向を有することが本明細書に示されており、そのため、医薬投与には適していない。溶解性及び安定性に関する問題を克服するために、本発明者らは、フィブリル及び粒子を形成する傾向を低減し、保存中に安定にさせるための任意選択の凍結乾燥中にペプチドを保護するアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの安定溶液を開発した。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本開示は、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが明確なｐＨ依存性フィブリル化プロファイルを示し、試験された任意の溶媒（生理食塩水、超純水及び本質的に非イオン性及び等張の溶液）においてｐＨ６以下では完全に不溶であるという知見に関する。したがって、ｐＨを６以上又は３未満；例えば６．５以上又は２．５未満に維持すること；いくつかの実施形態において、塩の存在を回避することなどによって、生理食塩水を含む本質的に非イオン性又は低イオン強度（例えば１μＭ～５０ｍＭ）の溶液を維持すること;かつ任意選択で、本質的に等張な溶液を維持することは、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの溶解性及び安定性を著しく、予想外に増加させる。
【0011】
溶解性及び／又は安定性が改善された本明細書に開示される医薬製剤は、治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド、並びに超純水などの水；並びに本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液からなる群から選択される溶媒を含み、前記製剤は、ｐＨ＞６、又は２＜ｐＨ＜３を維持する。
【0012】
該医薬製剤は、虚血性及び炎症性状態の治療に特に有用である。
【発明の効果】
【0013】
ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤を提供することが本開示の態様である。
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤を提供することが本開示の態様である。
【0014】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）
並びに
Ｖ２４Ｌ置換及びＣ末端アミド化を有する変異体を含む、配列番号４～６のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）
並びに
Ｖ２４Ｌ置換及びＣ末端アミド化を有する変異体を含む、配列番号４～６のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される。
【0015】
本明細書に開示される液体医薬製剤を凍結乾燥することによって得られる凍結乾燥医薬製剤を提供することも本開示の態様である。前記凍結乾燥医薬製剤の再構成溶液も開示される。虚血状態及び／又は炎症状態の治療における使用などの医薬として使用するための、本明細書に開示される液体医薬製剤、及び前記凍結乾燥医薬製剤の再構成溶液も開示される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】図１：濃度がより低い場合のラグタイムの増加から濃度と安定性の逆の関係を示すＴｈＴアッセイの結果。６.４ｍｇ／ｍＬ、おそらく５.０ｍｇ／ｍｌ以上では、試料は時間ゼロでフィブリルの形成によってすでに分解されていることが分かる。
【図2】図２：ｐＨ＝８、ｐＨ＝６、ｐＨ＝４及びｐＨ＝２でのＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水、０.９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）中５ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１の写真。ＡＩ溶液は不透明で、ＡｎｘＡ１の溶解度が限られていることを示す。
【図3】図３：３つのペプチド濃度に対するｐＨの関数としての濃度（Ａ２８０）。ＡｎｘＡ１の３つの試料を、濃度３.３、１.６及び０.８ｍｇ／ｍＬに、ｐＨ９で、Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水、０.９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）で調製した。ｐＨは０.１ＭのＮａＯＨの添加により調整し、濃度をＵＶ－ＶＩＳ分光法を用いて決定した。ｐＨ６.０未満では溶解度が非常に低いことがはっきりと分かる。
【図6】図６：マンニトールを含む場合と含まない場合の、ｐＨ２～１０のＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水の溶液の視覚的外観の写真。マンニトールを含む場合と含まない場合の両方で、透明な溶液がｐＨ８及び１０で観察される。
【図9】図９：表９に示す製剤についてＴｈＴアッセイを用いて決定したラグタイム（時間）のグラフ表示。張度プロバイダーとは無関係に、分析方法（６０時間）でｐＨ８.３ではフィブリル化は観察されなかったが、ｐＨ７.５では、３５時間後に溶液がフィブリル化する。ＰＢＳ中の基準溶液及び生理食塩水中の製剤（両方ともｐＨ７.４）と比較すると、張度プロバイダーとして炭水化物を使用することが有利であることも明らかである。
【発明を実施するための形態】
【0017】
定義
単数形の「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、及び「その」には、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象が含まれる。
単数形の「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、及び「その」には、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象が含まれる。
【0018】
治療の目的のための用語「対象」又は「個体」は、任意の対象を含み、好ましくは虚血性及び炎症性状態の治療を必要としている対象である。対象は典型的には動物であり、より典型的には哺乳動物である。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【0019】
「治療有効量」は、無毒であるが、虚血性及び炎症性状態の重症度を治療、予防又は改善するのに十分なアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの量を指す。
【0020】
本明細書で使用する場合、「パーセント」、「パーセンテージ」又は記号「％」は、組成物中に存在する担体の量、任意の特定の成分に関して示され、全てが組成物中に存在する担体の量に基づく重量／重量（ｗ／ｗ）、重量／体積（ｗ／ｖ）又は体積／体積（ｖ／ｖ）濃度に基づく、組成物中に示される成分のパーセントを意味する。そのため、異なる種類の担体は、示されるように最大１００％の量で存在することができ、これはＡＰＩの存在を排除するものではなく、その量は、％として、又は組成物中に存在する特定のｍｇの数若しくは存在する特定のｍｇ／ｍＬの数として示すことができ、その％又はｍｇ／ｍＬは、組成物中に存在する全担体の量に基づく。１００％の担体を構成するために、特定の種類の担体を組み合わせて存在させることができる。
【0021】
本明細書で使用する「医薬として許容される担体」は、非毒性であるか、又は必要とされる投与量及び濃度でレシピエントに対して治療上の利点を達成することを制限する用量ではない特定の毒性属性を有し、製剤の他の成分と適合性がある。
【0022】
用語「医薬として許容される賦形剤」は、ビヒクル、アジュバント、又は希釈剤又は当技術分野で慣用されているものなどの他の補助物質を含み、これらは、公に容易に利用でき、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であるか又は許容される毒性を有し、製剤の他の成分と適合性がある。例えば、医薬として許容される補助物質には、ｐＨ調整剤や緩衝剤、張度調整剤、安定化剤、抗酸化剤、防腐剤、可溶化剤、湿潤剤などが含まれる。
【0023】
用語「医薬組成物」又は「医薬製剤」は、有効成分（複数可）を含む薬物製品、担体を構成する医薬として許容される賦形剤、及び成分のうちの任意の２以上の組み合わせ、錯化又は凝集から直接的又は間接的に生じる任意の生成物を包含することを意図する。したがって、本開示の医薬組成物は、有効成分、有効成分分散液又は複合物、追加の有効成分（複数可）、及び医薬として許容される賦形剤を混合することによって作製される任意の組成物を包含する。
【0024】
詳細な説明
アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ（配列番号８）などのアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、約７．３の中性ｐＨの生理食塩水に溶けにくいため、医薬品投与には適していない。
アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ（配列番号８）などのアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、約７．３の中性ｐＨの生理食塩水に溶けにくいため、医薬品投与には適していない。
【0025】
それに基づいて、様々な投与経路で投与することができる安全で、有効かつ安定な製剤の開発が必要とされている。本開示による製剤は、安定であり、凍結乾燥にも適する液体医薬製剤、及び使用前に十分に長期間保存することができる可能性のある水溶性凍結乾燥医薬製剤の形態で提供される。この水溶性凍結乾燥医薬製剤は、使用前に再構成溶液を取得するための再構成を意図したものである。
【0026】
液体製剤
ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤などの液体製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドなどのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体製剤を提供することが態様である。
ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤などの液体製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドなどのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体製剤を提供することが態様である。
【0027】
一実施形態において、前記本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液は、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む。
【0028】
「等張性調整剤」は、溶液の張度を調整するために添加される薬剤である。
【0029】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、改善された物理的安定性を有する。
【0030】
一実施形態において、本開示によるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む液体医薬製剤は、溶解性が改善され、かつ／又は不溶性が低下している。
【0031】
一実施形態において、本開示によるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む前記液体医薬製剤は、フィブリルを形成しないなどの、フィブリルを形成する傾向が低下している。
【0032】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的にフィブリルを含まない。
【0033】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、フィブリル化傾向が低い。一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、フィブリルを形成する可能性が低い。一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、保存の際にフィブリルを形成する可能性が低い。
【0034】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的に目に見える粒子を含まない。
【0035】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的に目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えない粒子を含まない。
【0036】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的に目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えないタンパク質性粒子を含まない。
【0037】
顕微鏡でないと見えない粒子は、通常、０.１μｍ～１００μｍのサイズ範囲にあると定義され、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定の上限サイズを超えることがよくあるが、目で容易に検出できるほど十分に大きくはない。そのような粒子は、タンパク質性（凝集体又は他の混入物に吸着したタンパク質）であり得る。
【0038】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的に０．１μｍ以上のタンパク質性粒子を含まない。一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、１μｍ以上のタンパク質性粒子を本質的に含まない。一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、１０μｍ以上のタンパク質性粒子を本質的に含まない。一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、本質的に１００μｍ以上のタンパク質性粒子を含まない。
【0039】
一実施形態において、本開示による凍結乾燥医薬製剤は、化学的安定性が改善されている。一実施形態において、本開示による凍結乾燥医薬製剤は、不純物の低下、含有量の改善など、純度が改善されている。
【0040】
一実施形態において、本開示によるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む液体医薬製剤は、３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４のｐＨの液体医薬製剤と比較して；及び／又は
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．物理的安定性の改善、
ｂ．溶解性の改善及び／又は不溶性の低下、
ｃ．フィブリルを形成する傾向の低下、
ｄ．化学的安定性の改善、及び／又は
ｅ．純度の改善、及び／又は不純物の低減、及び／又は含有量の改善
を有する。
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．物理的安定性の改善、
ｂ．溶解性の改善及び／又は不溶性の低下、
ｃ．フィブリルを形成する傾向の低下、
ｄ．化学的安定性の改善、及び／又は
ｅ．純度の改善、及び／又は不純物の低減、及び／又は含有量の改善
を有する。
【0041】
溶液は、２以上の物質で構成される均質な混合物である。そのような混合物において、溶質は、溶媒として知られている別の物質に溶解した物質（ペプチドなど）である。
【0042】
ｐＨは、溶液中の水素イオン活性Ｈ＋の逆数の１０進対数として定義される。典型的には、溶液のｐＨは温度が変化するにつれて変化する。したがって、一実施形態において、本明細書での特定のｐＨ値への言及は、室温及び／又は周囲温度におけるｐＨ値を示すことを意味する。周囲温度は、温度計によって測定された場合、任意の特定の場所の空気（又は他の媒体及び環境）の実際の温度、又は物体を囲む温度を指す用語である。特定の実施形態において、ｐＨはおおよそ摂氏２５度で測定される。
【0043】
ｐＨを規定レベルに維持することは、溶液中のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの安定性に重要な役割を果たす。具体的には、ｐＨを６以上；又は２＜ｐＨ＜３で維持することは、フィブリル化（物理的安定性の低下）を回避するのに不可欠であり、いくつかの実施形態において、本発明者らは、医薬製剤のｐＨを８～８．５などの約７～９、例えば、約８．３に維持することが有利であることを見出した。典型的なペプチド製剤は、約７～７．８のより中性のｐＨ、又はさらに酸性ｐＨを有する。
【0044】
ｐＨ
一実施形態において、本開示の液体医薬製剤は、室温でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記液体医薬製剤は、周囲温度でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記液体医薬製剤は、約２５℃でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。
一実施形態において、本開示の液体医薬製剤は、室温でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記液体医薬製剤は、周囲温度でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記液体医薬製剤は、約２５℃でｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。
【0045】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨはｐＨ≧６．５である。
【0046】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、ｐＨ≧６．５、例えばｐＨ≧７．０、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧８．０である。一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨはｐＨ≧７．４である。
【0047】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０である。
【0048】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、ｐＨ≦１２、例えばｐＨ≦１１．５、例えばｐＨ≦１１、ｐＨ≦１０．５、例えばｐＨ≦１０、例えばｐＨ≦９．５、例えばｐＨ≦９、例えばｐＨ≦８．５である。
【0049】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２である。
【0050】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５である。
【0051】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５である。
【0052】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である。
【0053】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である。一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは８≧ｐＨ≦８．５である。
【0054】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、（約）７．４、例えば７．５、例えば７．６、例えば７．７、例えば７．８、例えば７．９、例えば８．０、例えば８．１、例えば８．２、例えば８．３、例えば８．３、例えば８．４、例えば８．５、例えば８．６、例えば８．７、例えば８．８、例えば８．９、例えば９．０である。
【0055】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは８≧ｐＨ≦８．５である。
【0056】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、約８．３である。
【0057】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、２＜ｐＨ＜３である。
【0058】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、２＜ｐＨ＜２．６である。
【0059】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨは、ｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨである。
【0060】
一実施形態において、該液体医薬製剤のｐＨはｐＨ≧８；又は２＜ｐＨ＜２．６である。
【0061】
溶解度／濃度
一実施形態において、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、ｐＨ＞６、例えばｐＨ≧６．５、例えば６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０で、少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌなど、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する。
一実施形態において、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、ｐＨ＞６、例えばｐＨ≧６．５、例えば６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０で、少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌなど、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する。
【0062】
一実施形態において、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する。
【0063】
一実施形態において、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する。
【0064】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度、例えば０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～３１、例えば３１～３２、例えば３２～３３、例えば３３～３４、例えば３４～３５、例えば３５～３６、例えば３６～３７、例えば３７～３８、例えば３８～３９、例えば３９～４０ｍｇ／ｍｌ、例えば４０～４１、例えば４１～４２、例えば４２～４３、例えば４３～４４、例えば４４～４５、例えば４５～４６、例えば４６～４７、例えば４７～４８、例えば４８～４９、例えば４９～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む。
【0065】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．２ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む。
【0066】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む。
【0067】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、ｐＨ＞６を有し、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は前記製剤は、少なくとも０．８ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．６、例えば少なくとも２、例えば少なくとも２．５、例えば少なくとも３、例えば少なくとも３．３、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する。
【0068】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧８．０、例えば≧８．３を有し、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも６．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも８．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも９．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１５．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は前記製剤は、少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも６．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも８．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも９．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１５．０ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する。
【0069】
溶媒
該液体医薬製剤は溶媒を含む。一実施形態において、前記溶媒は、超純水などの水である。
該液体医薬製剤は溶媒を含む。一実施形態において、前記溶媒は、超純水などの水である。
【0070】
超純水（ＵＰＷ）、高純度水又は高純度水（ＨＰＷ）は、厳しい仕様まで精製された水であり、有機及び無機化合物；溶解した粒状物質；揮発性及び不揮発性、反応性及び不活性；親水性及び疎水性；並びに溶解した気体を含む全ての混入物の種類について最高レベルの純度を有する。
【0071】
液体医薬製剤は溶媒を含み、その溶媒は生理食塩水ではないことが好ましい。一実施形態において、該液体医薬製剤は、非生理食塩水溶媒を含む。
【0072】
好ましい実施形態において、溶媒は塩をほとんど又は基本的に含まない。
【0073】
一実施形態において、前記溶媒は、本質的に非イオン性、又は低イオン性である。一実施形態において、前記溶媒は低いイオン強度を有する。一実施形態において、本明細書での「本質的に非イオン性」及び「低イオン性」への言及は、低いイオン強度を有する溶媒を指すことを意味する。
【0074】
溶液のイオン強度は、その溶液中のイオン濃度の尺度である。イオン性化合物は、水に溶解するとイオンに解離する。溶存イオンを有する溶液の主な特徴の１つは、イオン強度である。イオン強度は、モル濃度（ｍｏｌ／Ｌ溶液）又は重量モル濃度（ｍｏｌ／ｋｇ溶媒）であり得る。溶液のモルイオン強度Ｉは、その溶液中に存在する全てのイオンの濃度の関数である。
【0075】
一実施形態において、溶媒は、１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有する。
【0076】
一実施形態において、溶媒は、１μＭ～５０ｍＭ、例えば１μＭ～５μＭ、例えば５～１０μＭ、例えば１０～２５μＭ、例えば２５～５０μＭ、例えば５０～７５μＭ、例えば７５～１００μＭ、例えば１００～２００μＭ、例えば２００～３００μＭ、例えば３００～４００μＭ、例えば４００～５００μＭ、例えば５００～７５０μＭ、例えば７５０～１０００μＭ（１ｍＭ）、例えば１ｍＭ～２ｍＭ、例えば２～３ｍＭ、例えば３～４ｍＭ、例えば４～５ｍＭ、例えば５～１０ｍＭ、例えば１０～２０ｍＭ、例えば２０～３０ｍＭ、例えば３０～４０ｍＭ、例えば４０～５０ｍＭのイオン強度を有する。
【0077】
一実施形態において、前記溶媒は本質的に等張液である。一実施形態において、前記溶液は、１００％±１００％の張度を有する。一実施形態において、前記溶媒は、１００％±１００％の張度を有する溶液である。
【0078】
等張性とは、等しい張力を有すること；同じ浸透圧又は張度を保有する溶液を示すこと；より具体的には、真核細胞が膨張も収縮もしない（半透性細胞膜を横切る正味の水の流れがない）溶液に限定されることを意味する。そのため、細胞内液と等張性である溶液は、細胞膜を自由に透過する尿素などの溶質を含む場合には、等張性ではない。
【0079】
等張液は、１００％、又は約３００ｍＯｓｍの張度を有するものとして定義することができる。
【0080】
一実施形態において、前記溶液は、約１００％の張度、例えば１００％±１００％の張度、例えば０．１％～２００％の張度；例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％の張度を有する。
【0081】
一実施形態において、前記溶液は、１００％±２０％の張度、例えば８０％～１２０％の張度；例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％の張度を有する。
【0082】
１００％±２０％の張度は規制目的に許容されるが、１００％±１００％の張度は正当化されて許容される。
【0083】
一実施形態において、前記溶液は、０～２０％高張性、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％高張性である。
【0084】
一実施形態において、前記溶液は、０～２０％低張性、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％低張性である。
【0085】
一実施形態において、前記溶媒は等張性調整剤を含む。一実施形態において、前記溶媒は、等張性調整剤を含む本質的に等張の溶液である。
【0086】
一実施形態において、前記等張性調整剤は、炭水化物及び糖アルコールからなる群から選択される。
【0087】
糖アルコールと炭水化物は、その骨格において同じ特徴、すなわち、－ＣＨＯＨ－ＣＨＯＨ－を共有している。糖アルコールには、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの化合物が含まれる。これらの化合物は直鎖分子である。一方で、スクロース、マンノース、リボース、トレハロース、マルトース、グリセロール、イノシトール、グルコース及びラクトースなどの炭水化物は、ケト又はアルデヒド基を含み得る環状分子である。これらの２つのクラスの化合物は、高温及び凍結融解又は凍結乾燥プロセスによって引き起こされる変性に対してタンパク質を安定化させるのに効果的である。
【0088】
一実施形態において、前記等張性調整剤は、炭水化物、糖アルコール、及び炭水化物と糖アルコールの組み合わせからなる群から選択される。
【0089】
一実施形態において、前記溶媒は炭水化物等張性調整剤を含む。
【0090】
一実施形態において、前記溶媒は、糖アルコール等張性調整剤を含む。
【0091】
一実施形態において、前記溶媒は、炭水化物及び糖アルコールの等張性調整剤を含む。
【0092】
一実施形態において、前記糖アルコールは、凍結乾燥にそれほど有用ではないため、液体糖アルコールではない。一実施形態において、前記糖アルコールは、凍結乾燥に必要な条件で固体である糖アルコールなどの固体糖アルコールである。
【0093】
一実施形態において、前記等張性調整剤は、ペントース単糖、ヘキソース単糖、二糖及び三糖からなる群から選択される。
【0094】
一実施形態において、前記溶液は、１以上のペントース単糖（ＭＷ１５０，１３）を含む。
【0095】
一実施形態において、前記溶液は、約４．５％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のペントース単糖を含む。
【0096】
一実施形態において、前記溶液は、０．１～９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のペントース単糖を含む。
【0097】
一実施形態において、前記溶液は、３．６～５．４％；例えば３．６～３．８、例えば３．８～４．０、例えば４．０～４．２、例えば４．２～４．４、例えば４．４～４．６、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のペントース単糖を含む。
【0098】
一実施形態において、前記溶液は、１以上のヘキソース単糖（ＭＷ１８２，１７）を含む。
【0099】
一実施形態において、前記溶液は、約５．５％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のヘキソース単糖を含む。
【0100】
一実施形態において、前記溶液は、０．１～１０．９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％、例えば９．０～９．５、例えば９．５～１０．０％、例えば１０．０～１０．５、例えば１０．５～１０．９％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のヘキソース単糖を含む。
【0101】
一実施形態において、前記溶液は、４．４～６．６％、例えば４．４～４．６％、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２、例えば５．２～５．４、例えば５．４～５．６、例えば５．６～５．８、例えば５．８～６．０、例えば６．０～６．２％、例えば６．２～６．４％、例えば６．４～６．６％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のヘキソース単糖を含む。
【0102】
一実施形態において、前記溶液は、１以上の二糖類（３４２，３）を含む。
【0103】
一実施形態において、前記溶液は、約１０．３％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の二糖を含む。
【0104】
一実施形態において、前記溶液は、０．１～２０．５％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２０．５％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の二糖を含む。
【0105】
一実施形態において、前記溶液は、８．２～１２．３％、例えば８．２～８．５、例えば８．５～９、例えば９～９．５、例えば９．５～１０、例えば１０～１０．５、例えば１０．５～１１、例えば１１～１１．５、例えば１１．５～１２、例えば１２～１２．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の二糖を含む。
【0106】
一実施形態において、前記溶液は、１以上の三糖（ＭＷ５０４，４２）を含む。
【0107】
一実施形態において、前記溶液は、約１５．１％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の三糖を含む。
【0108】
一実施形態において、前記溶液は、０．１～３０．３％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０、例えば３０～３０．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の三糖を含む。
【0109】
一実施形態において、前記溶液は、１２．１～１８．２％、例えば１２．１～１２．５、例えば１２．５～１３、例えば１３～１３．５、例えば１３．５～１４、例えば１４～１４．５、例えば１４．５～１５、例えば１５～１５．５、例えば１５．５～１６、例えば１６～１６．５、例えば１６．５～１７、例えば１７．５～１８、例えば１８～１８．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の三糖を含む。
【0110】
一実施形態において、前記炭水化物等張性調整剤は、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース及びアラビノースからなる群から選択される。
【0111】
一実施形態において、前記糖アルコール等張性調整剤は、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される。
【0112】
特定の実施形態において、前記溶液はスクロース又はトレハロースを含む。
【0113】
特定の実施形態において、前記溶液はスクロースを含む。スクロースは、化学的安定性を提供するのに効率的であることが本明細書に示される。一実施形態において、該溶液は約１０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。一実施形態において、該溶液は、８～１２％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。一実施形態において、該溶液は約１％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。一実施形態において、該溶液は、１～５％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５（ｗ／ｖ）スクロースを含む。
【0114】
一実施形態において、該溶液は、０～２０％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１６～１７、１７～１８、１８～１９、１９～２０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。
【0115】
特定の実施形態において、前記溶液はマンニトールを含む。一実施形態において、該溶媒は約５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む。一実施形態において、該溶液は、４～６％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば４～６％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば４～４．５、例えば４．５～５、例えば５～５．５、例えば５．５～６％のマンニトールを含む。一実施形態において、該溶媒は約４％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む。一実施形態において、該溶液は、３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～３．５、例えば３．５～４、例えば４～４．５、例えば４．５～４％のマンニトールを含む。
【0116】
一実施形態において、該溶液は、０～１０％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む。
【0117】
一実施形態において、前記溶液は、マンニトール、及びスクロース又はトレハロースを含む。
【0118】
一実施形態において、前記溶液は、マンニトール及びスクロースを含む。
【0119】
一実施形態において、該溶液は、０～２０％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１６～１７、１７～１８、１８～１９、１９～２０％（ｗ／ｖ）スクロースを含み、０～１０％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む。
【0120】
一実施形態において、前記溶液は約４％（ｗ／ｖ）マンニトール及び約２．５％スクロースを含む。
【0121】
一実施形態において、前記溶液は、３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール及び２～３％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。
【0122】
一実施形態において、前記溶液は約４％（ｗ／ｖ）マンニトール及び約１％スクロースを含む。
【0123】
一実施形態において、前記溶液は、３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール及び０．５～２％スクロースを含む。
【0124】
一実施形態において、前記溶液は、０～８％（ｗ／ｖ）マンニトール及び０～５％（ｗ／ｖ）スクロースを含む。一実施形態において、前記溶液は、０～８％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば０～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８％（ｗ／ｖ）マンニトール；及び０～５％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば０～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５（ｗ／ｖ）スクロースを含む。
【0125】
特定の実施形態において、前記等張性調整剤は、凍結乾燥中の化学的分解に対してペプチドを保護する。炭水化物はこの目的に非常に適していることが観察される。一実施形態において、該液体医薬製剤は、例えば、凍結乾燥中にペプチドを保護する１以上の炭水化物、例えば化学的安定性を改善する１以上の炭水化物を含む。
【0126】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、スクロース及びトレハロースからなる群から選択される１以上の炭水化物を含む。一実施形態において、該液体医薬製剤はスクロースを含む。
【0127】
ｐＨ＞６、又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液；
及び緩衝液
からなる群から選択される溶媒
を含む製剤も開示される。
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液；
及び緩衝液
からなる群から選択される溶媒
を含む製剤も開示される。
【0128】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、緩衝液などの１以上の緩衝液を含む。
【0129】
緩衝液の選択は、ｐＨに影響を与えるため、ペプチド製剤の安定性にも部分的に影響を与え得る。本開示で使用される緩衝液は、好ましくは、６を超える、例えば７を超える、例えば８を超える緩衝能を提供する。アルカリ範囲の医薬として許容される緩衝液はほとんどなく、ペプチド製剤に通常使用されるリン酸緩衝液はｐＨを８以上に維持できない。
【0130】
一実施形態において、前記緩衝液は、液体製剤のｐＨを安定化させるのに役立つ。ｐＨは、ＡｎｘＡ１のＮ末端ペプチドの物理的安定性にとって重要である。
【0131】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ、アミン含有緩衝液、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン及びグリシル－グリシンなどのアミノ酸ベースの緩衝液、非リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ポリソルベート８０（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）、ＨＥＰＥＳ及びホウ酸塩からなる群から選択される１以上の緩衝液を含む。
【0132】
一実施形態において、該液体医薬製剤には、グリシル－グリシンを含む。一実施形態において、該液体医薬製剤はＴｗｅｅｎ２０を含む。一実施形態において、該液体医薬製剤はグリシル－グリシン及びＴｗｅｅｎ２０を含む。一実施形態において、該液体医薬製剤は、１～２０ｍＭグリシル－グリシン及び０．００１～０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む。一実施形態において、該液体医薬製剤は、１０ｍＭグリシル－グリシン及び０．０１％のＴｗｅｅｎ２０を含む。一実施形態において、該液体医薬製剤はヒスチジンを含む。
【0133】
一実施形態において、該液体医薬製剤は、保存剤をさらに含む。一実施形態において、前記保存剤は、ｍクレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルパラベン、ブチルパラベン、メチルパラベン、及びフェノールからなる群から選択される。
【0134】
液体製剤の調製
本明細書上記で定義した液体医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒と、本明細書上記で定義したアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドとを混合する工程；
ｂ．任意選択で、工程ａの混合物を濾過する工程、並びに
ｃ．前記液体医薬製剤のｐＨをｐＨ＜６；又は２＜ｐＨ＜３に調整する工程
を含むプロセスを提供することも本開示の態様である。
本明細書上記で定義した液体医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒と、本明細書上記で定義したアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドとを混合する工程；
ｂ．任意選択で、工程ａの混合物を濾過する工程、並びに
ｃ．前記液体医薬製剤のｐＨをｐＨ＜６；又は２＜ｐＨ＜３に調整する工程
を含むプロセスを提供することも本開示の態様である。
【0135】
一実施形態において、前記液体医薬製剤のｐＨは、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２に調整される。
【0136】
一実施形態において、前記液体医薬製剤のｐＨは、≧７．４に調整される。一実施形態において、前記液体医薬製剤のｐＨは、≧７．５、例えば≧８、例えば≧８．５、例えば≧９に調整される。
【0137】
一実施形態において、前記液体医薬製剤のｐＨは、２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨに調整される。
【0138】
一実施形態において、該プロセスは、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で混合することを含む。
【0139】
一実施形態において、該プロセスは、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度；例えば０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１ｍｇ／ｍｌ、例えば１～２ｍｇ／ｍｌ、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～３１、例えば３１～３２、例えば３２～３３、例えば３３～３４、例えば３４～３５、例えば３５～３６、例えば３６～３７、例えば３７～３８、例えば３８～３９、例えば３９～４０ｍｇ／ｍｌ、例えば４０～４１、例えば４１～４２、例えば４２～４３、例えば４３～４４、例えば４４～４５、例えば４５～４６、例えば４６～４７、例えば４７～４８、例えば４８～４９、例えば４９～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で混合することを含む。
【0140】
凍結乾燥製剤
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅ）、又は凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙ）される。凍結乾燥は、材料を保護し、貯蔵寿命を延長し、かつ／又は材料の輸送をより便利にするために通常使用される水分除去プロセスである。凍結乾燥は、高真空（低圧）下での凍結製品の急速凍結及び脱水によって機能する。
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅ）、又は凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙ）される。凍結乾燥は、材料を保護し、貯蔵寿命を延長し、かつ／又は材料の輸送をより便利にするために通常使用される水分除去プロセスである。凍結乾燥は、高真空（低圧）下での凍結製品の急速凍結及び脱水によって機能する。
【0141】
一実施形態において、本開示による液体医薬製剤は凍結乾燥される。
【0142】
一実施形態において、本明細書に開示されるような、安定、例えば貯蔵安定である凍結乾燥医薬製剤が提供される。
【0143】
一実施形態において、該ペプチドは、安定、例えば貯蔵安定である凍結乾燥医薬製剤を取得するために凍結乾燥中の化学的分解から保護される。
【0144】
凍結乾燥医薬製剤を調製するプロセスを提供することが本開示の一態様であり、前記方法は、
ａ．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド；並びに
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液；
からなる群から選択される溶媒；
並びに任意選択で緩衝液
を含む液体医薬製剤を提供する工程；並びに
ｂ．工程ａの前記液体医薬製剤を凍結乾燥する工程
を含む。
ａ．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド；並びに
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液；
からなる群から選択される溶媒；
並びに任意選択で緩衝液
を含む液体医薬製剤を提供する工程；並びに
ｂ．工程ａの前記液体医薬製剤を凍結乾燥する工程
を含む。
【0145】
一実施形態において、凍結乾燥医薬製剤を調製するプロセスが提供され、前記方法は、
ａ．本明細書上記で定義した液体医薬製剤の凍結の工程、
ｂ．減圧及び加熱を含む一次乾燥（昇華段階）の工程、並びに
ｃ．二次乾燥（脱離段階）の工程
を含む。
ａ．本明細書上記で定義した液体医薬製剤の凍結の工程、
ｂ．減圧及び加熱を含む一次乾燥（昇華段階）の工程、並びに
ｃ．二次乾燥（脱離段階）の工程
を含む。
【0146】
本開示による液体医薬製剤を提供し、前記液体医薬製剤を凍結乾燥するプロセスによって得られる凍結乾燥医薬製剤を提供することも本開示の一態様である。
【0147】
一実施形態において、凍結乾燥医薬製剤であって、
ａ．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド；並びに
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤からなる群から選択される溶媒；並びに任意選択で緩衝液を含む溶液
を含む液体医薬製剤を提供するプロセス；並びに
ｂ．工程ａの前記液体医薬製剤を凍結乾燥するプロセス
によって得られる凍結乾燥医薬製剤が提供される。
ａ．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド；並びに
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤からなる群から選択される溶媒；並びに任意選択で緩衝液を含む溶液
を含む液体医薬製剤を提供するプロセス；並びに
ｂ．工程ａの前記液体医薬製剤を凍結乾燥するプロセス
によって得られる凍結乾燥医薬製剤が提供される。
【0148】
一実施形態において、前記凍結乾燥医薬製剤は、保存中に安定、例えば貯蔵安定である。
【0149】
再構成液体製剤／溶液
アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法であって、
ａ．本開示による凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
を含む方法を提供することが本開示のさらなる態様である。
アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法であって、
ａ．本開示による凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
を含む方法を提供することが本開示のさらなる態様である。
【0150】
一実施態様において、得られる溶液は、ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記溶液は、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２のｐＨを有する。一実施形態において、前記溶液は、２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨを有する。
【0151】
一実施形態において、前記溶媒は、
ａ．超純水などの水；及び
ｂ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される。
ａ．超純水などの水；及び
ｂ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される。
【0152】
特定の実施形態において、前記溶媒は、超純水などの水である。
【0153】
一実施形態において、該溶媒は、ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３を有する。一実施形態において、前記溶媒は、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２のｐＨを有する。一実施形態において、前記溶液は、２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨを有する。
【0154】
本明細書に開示されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法によって得られる再構成溶液も開示する。
【0155】
アネキシンＡ１のＮ末端ペプチド
細胞表面では、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）タンパク質が細胞外液にさらされ、カルシウムの存在下で構造再編成が行われ、その結果、タンパク質のコア領域（約２８０アミノ酸長）を介してリン脂質と相互作用し、Ｎ末端領域（約５０アミノ酸長）が露出する。この立体構造の変化は、ＡｎｘＡ１のＮ末端と特異的受容体との相互作用をもたらすと考えられている。ＡｎｘＡ１のＮ末端は、アミノ酸１～５４（配列番号２）を含む。
細胞表面では、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）タンパク質が細胞外液にさらされ、カルシウムの存在下で構造再編成が行われ、その結果、タンパク質のコア領域（約２８０アミノ酸長）を介してリン脂質と相互作用し、Ｎ末端領域（約５０アミノ酸長）が露出する。この立体構造の変化は、ＡｎｘＡ１のＮ末端と特異的受容体との相互作用をもたらすと考えられている。ＡｎｘＡ１のＮ末端は、アミノ酸１～５４（配列番号２）を含む。
【0156】
カウンターリガンドとの相互作用をもたらすタンパク質のファルマコフォアを表すことに加えて、Ｎ末端は高度に調節された領域でもある。特定の細胞型での分泌の前提条件である特異的チロシン又はセリン部位でリン酸化を受けるか、又はセリンプロテアーゼによって切断することができる。多くのプロテアーゼがＡｎｘＡ１のＮ末端領域内の特異的部位で切断することが示されており、このプロセスはインビトロのアーティファクトではないが、生物学的に重要であると考えられる。
【0157】
ヒト組換えＡｎｘＡ１とＮ末端ペプチドＡｃ２－２６はいずれも、様々な実験モデルにおいて抗炎症作用及び分解促進作用を発揮する。
【0158】
主にアネキシンＡ１タンパク質の特有のＮ末端部分に由来する多くのペプチドが、抗炎症特性を保有することが示されている。
【0159】
本明細書で定義されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、その任意の短い断片、その任意の変異体、並びに前記短い断片の任意の変異体を含むアミノ酸配列ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）を含むか又はそれからなるペプチドである。
【0160】
本開示は、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド；並びに溶媒を含む液体医薬製剤を提供する。
【0161】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、及び配列番号３の５～５２個の連続するアミノ酸、例えば配列番号３の５～１０、例えば１０～１５、例えば１５～２０、例えば２０～２５、例えば２５～３０、例えば３０～３５、例えば３５～４０、例えば４０～４５、例えば４５～５０、例えば５０～５３個の連続するアミノ酸を含む配列番号３の断片、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号３の変異体
からなる群から選択される。
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号３の変異体
からなる群から選択される。
【0162】
一実施形態において、配列番号３の前記断片は、配列番号３の５個以上の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなり、例えば配列番号３の６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、又は５２の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなる。
【0163】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫ（配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１０の変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫ（配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１０の変異体
からなる群から選択される。
【0164】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
及び配列番号４～６のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
及び配列番号４～６のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体
からなる群から選択される。
【0165】
一実施形態において、前記変異体は、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１～２個のアミノ酸置換、例えば２～３個のアミノ酸置換、例えば３～４個のアミノ酸置換、例えば４～５個のアミノ酸置換、例えば５～６個の個々のアミノ酸置換を含む。
【0166】
一実施形態において、前記１以上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一実施形態において、前記１以上のアミノ酸置換は、非保存的アミノ酸置換である。
【0167】
本明細書で定義されるペプチドの変異体は、原則として、１以上の位置で１以上の置換を有することができる。開示される配列中の個々のアミノ酸残基は、任意の所与のタンパク質原性又は非タンパク質原性アミノ酸と置換され得る。
【0168】
遺伝暗号は、ポリペプチド（タンパク質原性）に自然に組み込まれる２０個の標準アミノ酸を指定する：Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ、及び特有の合成メカニズムによってタンパク質に組み込まれる２つ：Ｓｅｃ（セレノシステイン、又はＵ）及びＰｙｌ（ピロリジン、Ｏ）。これらは全てＬ－立体異性体である。
【0169】
２２個の標準アミノ酸又は天然アミノ酸の他に、他の多くの非天然アミノ酸（非タンパク質原性又は非標準）がある。それらは、タンパク質中に見出されないか、又は標準的な細胞機構によって直接及び単離されて産生されない。非標準アミノ酸は通常、翻訳後修飾などの標準アミノ酸への修飾によって形成される。非天然アミノ酸残基の例は、Ａｂｕ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、ＤＯｒｎ（Ｄ－オルニチン、デグアニル化（ｄｅｇｕａｎｙｌａｔｅｄ）アルギニン）、Ｎａｌ（β－２－ナフチルアラニン）、Ｄ－Ｎａｌ（β－２－ナフチル－Ｄ－アラニン）、ＤＡｒｇ、ＤＴｒｐ、ＤＰｈｅ及びＤＶａｌである。
【0170】
本開示による任意のアミノ酸は、Ｌ－又はＤ－立体配置であり得る。特に指定されない場合、好ましくはＬ異性体形態への言及が意図される。
【0171】
ポリペプチドという用語はまた、当技術分野で知られているように、化学反応又は酵素触媒反応によって導入される翻訳後修飾も包含する。そのような翻訳後修飾は、必要に応じてパーティショニングの前に導入することができる。また、機能的等価物は、ユビキチン化、標識（例えば、放射性核種、様々な酵素などによる）、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、又はヒトタンパク質（例えば、オルニチン）では通常起こらないアミノ酸の挿入（又は化学合成による置換）などによる化学修飾を含み得る。
【0172】
Ｎ末端アルキル化及びＣ末端エステル化を有する本明細書で定義されるポリペプチドも、本開示に包含される。機能的等価物はまた、二量体又は無関係の化学的部分を含む、同じ分子で形成されたグリコシル化及び共有結合又は凝集によるコンジュゲートを含む。そのような機能的等価物は、当技術分野で公知の手段によってＮ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方を含む断片中に見出される基に機能を結びつけることによって調製される。
【0173】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸置換を含み、配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている。
【0174】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸置換を含み、配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）が、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、システイン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている。
【0175】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸置換を含み、配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）がロイシン（Ｌ）（Ｖａｌ２４Ｌｅｕ又はＶ２４Ｌ）で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｖａｌ２４Ｌｅｕ変異はプロテアーゼ安定性を増加させる。
【0176】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫ（配列番号１１；アネキシン Ａ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１１の変異体であって、例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫ（配列番号１１；アネキシン Ａ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１１の変異体であって、例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
【0177】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び配列番号７～９のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体；
例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び配列番号７～９のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体；
例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
【0178】
一実施形態において、前記１以上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【0179】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアラニン残基は、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている。
【0180】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアラニン残基は、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている。
【0181】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアミノ酸残基はアラニンではなく；すなわち、アラニンを除く任意のアミノ酸である。
【0182】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの２１位のバリン残基は、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている。
【0183】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの２１位のバリン残基は、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びリジンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている。
【0184】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの２１位の残基は、バリンではなく；すなわち、バリンを除く任意のアミノ酸である。
【0185】
一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアラニン残基と２１位のバリン残基はいずれも、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン、アルギニン及びリジンからなる群；例えば、ロイシン、アスパラギン酸及びメチオニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基；例えばロイシンで置換されている。一実施形態において、配列番号３～１１のいずれか１つの残基１０と残基２１は同一である。
【0186】
一実施形態において、配列番号３～９のいずれか１つの３５位のバリン残基は、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている。
【0187】
一実施形態において、配列番号３～９のいずれか１つの３５位のバリン残基は、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、システイン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている。
【0188】
一実施形態において、配列番号３～９のいずれか１つの３５位の残基はリジンである。
【0189】
一実施形態において、配列番号３～９のいずれか１つの３５位の残基は、バリンではなく；すなわち、バリンを除く任意のアミノ酸である。
【0190】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、
及び配列番号７～９のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体；
例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、
及び配列番号７～９のいずれか１つの変異体であって、１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む変異体；
例えば、Ｖ２４Ｌを含む変異体
からなる群から選択される。
【0191】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
からなる群から選択される。
【0192】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
からなる群から選択される。
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
からなる群から選択される。
【0193】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）である。
【0194】
本明細書に開示されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの断片及び変異体は、一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの機能性断片及び／又は機能性変異体と同等である。
【0195】
機能性変異体又は機能性断片は、変異体又は断片が、それが由来するペプチドの機能を本質的に保持していることを意味する。
【0196】
本開示によるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチド、又はその機能性変異体を含む本明細書で定義されるその変異体若しくは断片は、一実施形態において、ホルミルペプチド受容体１（ＦＰＲ１）、ホルミルペプチド受容体２（ＦＰＲ２）及びホルミルペプチド受容体３（ＦＰＲ３）のうちの１以上を活性化及び／又は刺激する。
【0197】
アネキシンＡ１のＮ末端ペプチド、又は本明細書で定義されるその変異体若しくは断片は、一実施形態において、ホルミルペプチド受容体１（ＦＰＲ１）、ホルミルペプチド受容体２（ＦＰＲ２）及びホルミルペプチド受容体３（ＦＰＲ３）のうちの１以上のリガンド及び／又はアゴニストである。
【0198】
本文脈における用語「アゴニスト」は、受容体に結合することができるか、又はいくつかの実施形態において、受容体と少なくともある程度結合及び／若しくは活性化することができるか、又はいくつかの実施形態において、受容体を少なくともある程度活性化することができる本明細書で定義されるペプチドを指す。例えば、ＦＰＲ２アゴニストは、そのため、ＦＰＲ２に結合及び／又は活性化することができる。
【0199】
アゴニストは、いくつかの異なる種類の受容体のアゴニストであり、そのため、いくつかの異なる種類の受容体に結合及び／又は活性化することが可能であり得る。前記アゴニストはまた、１つの種類の受容体にのみ結合して活性化する選択的アゴニストであり得る。本文脈における用語「アンタゴニスト」は、受容体アゴニストの効果を阻害することができる物質を指す。
【0200】
完全アゴニストは受容体に結合し（親和性を有し）、受容体を活性化し、その受容体で完全な効力を示す。本文脈における「部分アゴニスト」は、所与の受容体に結合して活性化することができるが、完全アゴニストと比較して受容体において部分的な効力しか有していないペプチドである。部分アゴニストは、受容体占有率について完全アゴニストと競合し、完全アゴニスト単独で観察される効果又は活性化と比較して受容体活性化に正味の減少を生じさせる場合にアンタゴニストとして作用することができる。
【0201】
本文脈における「選択的アゴニスト」は、選択的であり、したがって主に１つの種類の受容体に結合して活性化する化合物である。そのため、選択的ＦＰＲ２アゴニストはＦＰＲ２に対して選択的である。
【0202】
本開示によるポリペプチドは、１つの実施形態において、１つ又はいくつかのホルミルペプチド受容体にある程度結合及び活性化することができ、異なる受容体に対して異なる結合親和性及び／又は異なる受容体活性化効力を有することができる。親和性は、ペプチドリガンドとその受容体との間の分子間力の数と大きさ、及びその受容体結合部位でのリガンドの滞留時間を指し、受容体活性化効力は、標的受容体に結合した際に生物学的応答を生じるペプチドリガンドの能力及びこの応答の量的大きさを指す。いくつかの実施形態において、親和性及び受容体活性化効力におけるそのような差異は、当技術分野で慣用されている受容体結合／活性化研究によって、例えば、本明細書で言及されるような１つの又はいくつかの種類の受容体を発現する細胞において、又は異なる種類の受容体を発現する組織上でのリガンド結合の刺激についてのＥＣ５０及びＥｍａｘ値を生成することによる決定される。高い親和性は、より低い親和性を有するリガンドペプチドと比較して、受容体の５０％の結合を得るためにより低い濃度のリガンドが必要であることを意味し、高い受容体活性化効力は、親和性及び／又は受容体活性効力が低いペプチド（より高いＥＣ５０値）と比較して、５０％の受容体活性化応答を得るためにより低い濃度のペプチド（低いＥＣ５０値）が必要であることを意味する。
【0203】
一実施形態において、該ペプチドは、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３から選択される２以上の受容体に対して異なる親和性及び／又は受容体活性化効力を有することができる。
【0204】
ペプチドアゴニストの受容体活性化能力は、アゴニストの受容体活性化効力を決定するための従来の方法であるｐ（Ａ５０）値で測定することもできる。
【0205】
特定の実施形態において、本開示によるペプチドは、ホルミルペプチド受容体２（ＦＰＲ２）に対する結合親和性及び／又は受容体効力を有する。
【0206】
１つの特定の実施形態において、本開示によるペプチドは、ＦＰＲ２に結合して活性化することができる。さらなる実施形態において、前記ペプチドはＦＰＲ２の完全なアゴニストである。
【0207】
一実施形態において、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及び本開示によるその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ａ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体に結合する、
ｂ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体を活性化及び／又は刺激する、
ｃ．ＦＰＲ２に結合及び／又は活性化する、
ｄ．免疫細胞を活性化する、
ｅ．食作用白血球などの白血球を活性化する、
ｆ．好中球及び／又は単球を活性化する、
ｇ．好中球走化性の誘導、好中球補体受容体３（ＣＲ３）の動員、及び好中球ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化などの食細胞白血球のエフェクター機能を活性化する、かつ／又は
ｈ．食細胞白血球の走化性を誘導する。
及び本開示によるその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、
ａ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体に結合する、
ｂ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体を活性化及び／又は刺激する、
ｃ．ＦＰＲ２に結合及び／又は活性化する、
ｄ．免疫細胞を活性化する、
ｅ．食作用白血球などの白血球を活性化する、
ｆ．好中球及び／又は単球を活性化する、
ｇ．好中球走化性の誘導、好中球補体受容体３（ＣＲ３）の動員、及び好中球ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化などの食細胞白血球のエフェクター機能を活性化する、かつ／又は
ｈ．食細胞白血球の走化性を誘導する。
【0208】
一実施形態において、本開示のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、Ｎ末端アセチル化される（ＣＯＣＨ３又はＡｃ－）。
【0209】
一実施形態において、本開示のアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、Ｃ末端アミド化される（－ＮＨ２）。
【0210】
ｐＨ＞６．０；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、例えば、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～９のいずれか１つの変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤を提供することが本開示の一態様である。
ａ．アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、例えば、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～９のいずれか１つの変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤を提供することが本開示の一態様である。
【0211】
ｐＨ＞６．０；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、例えば、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～９のいずれか１つの変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液、及び
ｉｉｉ．水である溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液、及び
ｉｖ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤も開示される。
ａ．アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド、例えば、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～９のいずれか１つの変異体からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液、及び
ｉｉｉ．水である溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液、及び
ｉｖ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤も開示される。
【0212】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、ｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０のｐＨを有する。
【0213】
一実施形態において、前記液体医薬製剤はｐＨ≧８のｐＨを有する。
【0214】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、ｐＨ≧８のｐＨ；又は２＜ｐＨ＜２．６を有する。
【0215】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、８～８．５のｐＨを有する。
【0216】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、約８．３のｐＨを有する。
【0217】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、本質的にフィブリルを含まず、かつ／又は≧１μｍ、例えば≧１０μｍ、例えば≧１００μｍのタンパク質性粒子を本質的に含まない。
【0218】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドは、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの液体医薬製剤の水性溶解度を有する。
【0219】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、１００％±２０％の張度、例えば８０％～１２０％；例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％の張度、例えば１１５～１２０％の張度を有する。
【0220】
一実施形態において、液体医薬製剤であって、
ａ．該溶液がｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０、例えばｐＨ≧８．３のｐＨを有し、かつ／又は
ｂ．該溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ／又は
ｃ．該溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ／又は
ｄ．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は
ｅ．該製剤が、０．１～１０ｍｇ／ｍｌ、例えば０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１ｍｇ／ｍｌ、例えば１～２ｍｇ／ｍｌ、例えば２～３ｍｇ／ｍｌ、例えば３～４ｍｇ／ｍｌ、例えば４～５ｍｇ／ｍｌ、例えば５～６ｍｇ／ｍｌ、例えば６～７ｍｇ／ｍｌ、例えば７～８ｍｇ／ｍｌ、例えば８～９ｍｇ／ｍｌ、例えば９～１０ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する
液体医薬製剤が提供される。
ａ．該溶液がｐＨ≧７．４、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０、例えばｐＨ≧８．３のｐＨを有し、かつ／又は
ｂ．該溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ／又は
ｃ．該溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ／又は
ｄ．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は
ｅ．該製剤が、０．１～１０ｍｇ／ｍｌ、例えば０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１ｍｇ／ｍｌ、例えば１～２ｍｇ／ｍｌ、例えば２～３ｍｇ／ｍｌ、例えば３～４ｍｇ／ｍｌ、例えば４～５ｍｇ／ｍｌ、例えば５～６ｍｇ／ｍｌ、例えば６～７ｍｇ／ｍｌ、例えば７～８ｍｇ／ｍｌ、例えば８～９ｍｇ／ｍｌ、例えば９～１０ｍｇ／ｍｌの前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの濃度を有する
液体医薬製剤が提供される。
【0221】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、１以上の等張性調整剤を含む。
【0222】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される１以上の等張性調整剤を含み；例えば、スクロース及び／又はマンニトールを含む。
【0223】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、スクロース及びマンニトールからなる群から選択される１以上の等張性調整剤を含む。
【0224】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、１以上の緩衝液を含む。
【0225】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ、アミン含有緩衝液、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン及びグリシル－グリシンなどのアミノ酸ベースの緩衝液、非リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ポリソルベート８０（例えばＴｗｅｅｎ８０）、ＨＥＰＥＳ及びホウ酸塩からなる群から選択される１以上の緩衝液を含む。
【0226】
一実施形態において、前記液体医薬製剤は、約８．３のｐＨで約４％マンニトール、約１％スクロース、約１０ｍＭグリシル－グリシン、約０．０１％ポリソルベート８０を含む。
【0227】
一実施形態において、配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体は、３個の個々のアミノ酸置換を含む。
【0228】
一実施形態において、配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体は、２つの個々のアミノ酸置換を含む。
【0229】
一実施形態において、配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体は、１個のアミノ酸置換を含む。
【0230】
一実施形態において、前記アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドはＣ末端アミド化されている。
【0231】
治療の方法
本明細書に開示される医薬製剤は、虚血性及び炎症性状態の治療における使用に特に有効である。
本明細書に開示される医薬製剤は、虚血性及び炎症性状態の治療における使用に特に有効である。
【0232】
一実施形態において、医薬として使用するための、本明細書に開示される液体医薬製剤、凍結乾燥医薬製剤、又は再構成された液体医薬製剤（又は溶液）が提供される。
【0233】
一実施形態において、虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するための、本明細書に開示される液体医薬製剤、凍結乾燥医薬製剤、又は再構成溶液が提供される。
【0234】
一実施形態において、虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するための医薬の製造のための、本明細書に開示される液体医薬製剤、凍結乾燥医薬製剤、又は再構成溶液の使用が提供される。
【0235】
一実施形態において、虚血状態及び／又は炎症状態の治療方法であって、本明細書に開示される液体医薬製剤、凍結乾燥医薬製剤、又は再構成溶液を投与する１以上の工程を含む方法が提供される。
【0236】
一実施形態において、虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するためのｐＨ＞６の液体医薬製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体
からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液、
からなる群から選択される溶媒、
及び任意選択で緩衝液
を含む液体医薬製剤が提供される。
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体
からなる群から選択される治療有効量のアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド；並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液、
からなる群から選択される溶媒、
及び任意選択で緩衝液
を含む液体医薬製剤が提供される。
【0237】
一実施形態において、虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するためのアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液であって、
ａ．本開示による凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
によって取得される再構成溶液が提供される。
ａ．本開示による凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
によって取得される再構成溶液が提供される。
【0238】
本開示のいくつかの実施形態において、前記治療は、予防的、改善的又は治癒的である。
【0239】
本開示のいくつかの実施形態において、前記虚血状態及び／又は炎症状態は、急性、亜急性又は慢性である。
【0240】
投与経路
好ましい投与経路は、治療される対象の全身状態及び年齢、治療される状態の性質、体内の治療される組織の位置及び選択された有効成分に依存することが理解されよう。
好ましい投与経路は、治療される対象の全身状態及び年齢、治療される状態の性質、体内の治療される組織の位置及び選択された有効成分に依存することが理解されよう。
【0241】
本開示の一実施形態において、投与経路は、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチドを含む医薬製剤を血流中に導入して、最終的に所望の作用部位を標的化することができる。
【0242】
本開示の一実施形態において、投与経路は、任意の適切な経路、例えば経腸経路（経口、直腸、鼻、肺、頬側、舌下、経皮、槽内及び腹腔内投与を含む）、及び／又は非経口経路（皮下、筋肉内、髄腔内、静脈内及び皮内投与を含む）である。適切な剤形は、通常の技術によって調製され得る。
【0243】
非経口投与は、薬剤が肝臓での初回通過分解を回避する経口／経腸経路ではない任意の投与経路である。したがって、非経口投与は、任意の注射及び注入、例えば、静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与などのボーラス注射又は連続注入を含む。さらに、非経口投与には、吸入及び局所投与が含まれる。
【0244】
したがって、本開示による医薬製剤は、一実施形態において、製剤が与えられる動物の、例えば鼻、膣、眼、口、生殖管、肺、胃腸管、又は直腸内の任意の粘膜、例えば鼻又は口の粘膜を通過するように局所的に投与され、したがって、非経口投与はまた、頬側、舌下、鼻、直腸、膣及び腹腔内投与並びに吸入又は装置による肺及び気管支投与を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される製剤は、皮膚を通過するように局所投与される。
【0245】
本開示の一実施形態において、非経口投与の静脈内、皮下及び筋肉内形態が採用される。
【0246】
本開示の一実施形態において、本明細書に開示される医薬製剤は、局所治療として使用され、すなわち作用部位（複数可）に直接導入される。したがって、該医薬製剤は、皮膚又は粘膜に直接適用され得るか、又は作用部位、例えば疾患組織に、又は疾患組織に直接つながる末端動脈に注入され得る。
【0247】
好ましい実施形態において、本明細書に開示される医薬製剤は、非経口経路を介して投与される。本開示の医薬製剤の投与のための好ましい非経口経路には、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内、経鼻、肺及び頬側経路が含まれる。最も好ましい経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下の投与経路が含まれる。
【0248】
投与及び投与量
本開示によれば、本明細書中で提供されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む医薬製剤は、一実施形態において、医薬として有効な用量又は治療有効量でそれを必要とする個体に投与される。
本開示によれば、本明細書中で提供されるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む医薬製剤は、一実施形態において、医薬として有効な用量又は治療有効量でそれを必要とする個体に投与される。
【0249】
本開示によるアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの治療有効量は、一実施形態において、所与の疾患又は障害及びその合併症の臨床症状を治癒する、予防する、そのリスクを低減する、緩和する又は部分的に停止するのに十分な量である。特定の治療目的に有効な量は、障害の重症度及び種類並びに対象の体重及び全身状態に依存する。これを達成するのに十分な量は、「治療有効量」として定義される。
【0250】
一実施形態において、本開示の医薬製剤は、１μｇ／日～１００ｍｇ／日；例えば１μｇ／日～１０μｇ／日、例えば１０μｇ／日～１００μｇ／日、例えば１００μｇ／日～２５０μｇ／日、例えば２５０μｇ／日～５００μｇ／日、例えば５００μｇ／日～７５０μｇ／日、例えば７５０μｇ／日～１ｍｇ／日、例えば１ｍｇ／日～２ｍｇ／日、例えば２ｍｇ／日～５ｍｇ／日、又は例えば５ｍｇ／日～１０ｍｇ／日、例えば１０ｍｇ／日～２０ｍｇ／日、例えば２０ｍｇ／日～３０ｍｇ／日、例えば３０ｍｇ／日～４０ｍｇ／日、例えば４０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日、例えば５０ｍｇ／日～７５ｍｇ／日、又は例えば７５ｍｇ／日～１００ｍｇ／日の用量で投与される。
【0251】
本開示の一実施形態において、本開示の医薬製剤の１回の単回用量が投与され、１μｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重；例えば１～１０μｇ／ｋｇ体重、例えば１０～１００μｇ／ｋｇ、例えば１００～２５０μｇ／ｋｇ体重、例えば２５０～５００μｇ／ｋｇ体重、例えば５００～７５０μｇ／ｋｇ体重、例えば７５０μｇ／ｋｇ体重～１ｍｇ／ｋｇ体重、例えば１ｍｇ／ｋｇ体重～２ｍｇ／ｋｇ体重、例えば２～５ｍｇ／ｋｇ体重、例えば５～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば１０～２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば２０～３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば３０～４０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば４０～５０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば５０～７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は例えば７５～１００ｍｇ／ｋｇ体重を含み得る。
【0252】
一実施形態において、本開示による用量は、１日当たり１回又は数回、例えば１日当たり１～６回、例えば１日当たり１～５回、例えば１日当たり１～４回、例えば１日当たり１～３回、例えば１日当たり１～２回、例えば１日当たり２～４回、例えば１日当たり２～３回投与される。
【0253】
配列
全長アネキシンＡ１（ホモサピエンス）は以下の配列を有する：
>sp|P04083|ANXA1_ヒトアネキシンＡ１ OS=ホモサピエンスGN=ANXA1 PE=1 SV=2
MAMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAALHKAIMVKGVDEATIIDILTKRNNAQRQQIKAAYLQETGKPLDETLKKALTGHLEEVVLALLKTPAQFDADELRAAMKGLGTDEDTLIEILASRTNKEIRDINRVYREELKRDLAKDITSDTSGDFRNALLSLAKGDRSEDFGVNEDLADSDARALYEAGERRKGTDVNVFNTILTTRSYPQLRRVFQKYTKYSKHDMNKVLDLELKGDIEKCLTAIVKCATSKPAFFAEKLHQAMKGVGTRHKALIRIMVSRSEIDMNDIKAFYQKMYGISLCQAILDETKGDYEKILVALCGGN (配列番号１)。
MAMVSEFLKQ AWFIENEEQE YVQTVKSSKG GPGSAVSPYP TFNPSSDVAA LHKA （ＡｎｘＡ１ １－５４；配列番号２）
AMVSEFLKQ AWFIENEEQE YVQTVKSSKG GPGSAVSPYP TFNPSSDVAA LHKA （ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAA （配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDV （配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSS （配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAA （配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDV （配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSS （配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVK （配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLK （配列番号１１；アネキシンＡ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）
全てのペプチドは、好ましい実施形態においてＣ末端アミド化される（－ＮＨ２）。
全長アネキシンＡ１（ホモサピエンス）は以下の配列を有する：
>sp|P04083|ANXA1_ヒトアネキシンＡ１ OS=ホモサピエンスGN=ANXA1 PE=1 SV=2
MAMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAALHKAIMVKGVDEATIIDILTKRNNAQRQQIKAAYLQETGKPLDETLKKALTGHLEEVVLALLKTPAQFDADELRAAMKGLGTDEDTLIEILASRTNKEIRDINRVYREELKRDLAKDITSDTSGDFRNALLSLAKGDRSEDFGVNEDLADSDARALYEAGERRKGTDVNVFNTILTTRSYPQLRRVFQKYTKYSKHDMNKVLDLELKGDIEKCLTAIVKCATSKPAFFAEKLHQAMKGVGTRHKALIRIMVSRSEIDMNDIKAFYQKMYGISLCQAILDETKGDYEKILVALCGGN (配列番号１)。
MAMVSEFLKQ AWFIENEEQE YVQTVKSSKG GPGSAVSPYP TFNPSSDVAA LHKA （ＡｎｘＡ１ １－５４；配列番号２）
AMVSEFLKQ AWFIENEEQE YVQTVKSSKG GPGSAVSPYP TFNPSSDVAA LHKA （ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAA （配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDV （配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSS （配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDVAA （配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSSDV （配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLKSSKGGPGSAVSPYPTFNPSS （配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTVK （配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
AMVSEFLKQAWFIENEEQEYVQTLK （配列番号１１；アネキシンＡ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）
全てのペプチドは、好ましい実施形態においてＣ末端アミド化される（－ＮＨ２）。
【0254】
実施例
一般的な材料と方法
以下の実施例において、「ＡｎｘＡ１」及び「試験ペプチド」への言及は、本明細書において、Ｃ末端アミド化された配列番号８（アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶとして同定される。
一般的な材料と方法
以下の実施例において、「ＡｎｘＡ１」及び「試験ペプチド」への言及は、本明細書において、Ｃ末端アミド化された配列番号８（アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶとして同定される。
【0255】
チオフラビンＴ、「ＴｈＴ」
本明細書以下でＴｈＴ（分子）及びＴｈＴアッセイ（アッセイ）として知られるチオフラビンＴ（ＩＵＰＡＣ：４－（３，６－ジメチル－１，３－ベンゾチアゾール－３－イウム－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリンクロリド；ＣＡＳ番号:２３９０－５４－７）。
本明細書以下でＴｈＴ（分子）及びＴｈＴアッセイ（アッセイ）として知られるチオフラビンＴ（ＩＵＰＡＣ：４－（３，６－ジメチル－１，３－ベンゾチアゾール－３－イウム－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリンクロリド；ＣＡＳ番号:２３９０－５４－７）。
【0256】
ＴｈＴは、アミロイド又はフィブリルと呼ばれる誤って折り畳まれたペプチド及びタンパク質凝集体の存在を視覚化及び定量するために広く使用されている。ＴｈＴは、ペプチド及びタンパク質中の分子間ベータシートに結合する蛍光分子である（本明細書ではＡｎｘＡ１）。４５０ｎｍ付近で励起されると、ＴｈＴはアミロイド及びフィブリルに結合したときにより強い蛍光強度を示す。蛍光の増加は、より多くのＴｈＴ分子がペプチドに結合していることを示し、これもまた、より多くのペプチドがアミロイド又はフィブリルとして誤って折り畳まれることを示す。弱い蛍光強度は、ＴｈＴが結合できる分子間ベータシートが少ないアミロイド又はフィブリルが少ないことを示している。
【0257】
チオフラビンＴアッセイ、「ＴｈＴアッセイ」
一部のペプチドはフィブリル及びアミロイドを形成する傾向があり、その傾向は予測不可能に製剤条件に依存する。フィブリル化は確率過程であり、長い分析時間及び偽陰性と陽性結果の両方を回避するために、約４８６ｎｍの蛍光発光を継続的に監視しながら、マイクロタイタープレート内の厳密な回転によって試料にせん断応力を導入する。蛍光の増加は、アミロイド又はフィブリルの形成の指標であり、蛍光が増加し始めるのにかかる時間はラグタイムとして知られている。より速い（短い）ラグタイムは、フィブリル又はアミロイドの形成によってペプチドが分解する傾向が高いことを示している。
一部のペプチドはフィブリル及びアミロイドを形成する傾向があり、その傾向は予測不可能に製剤条件に依存する。フィブリル化は確率過程であり、長い分析時間及び偽陰性と陽性結果の両方を回避するために、約４８６ｎｍの蛍光発光を継続的に監視しながら、マイクロタイタープレート内の厳密な回転によって試料にせん断応力を導入する。蛍光の増加は、アミロイド又はフィブリルの形成の指標であり、蛍光が増加し始めるのにかかる時間はラグタイムとして知られている。より速い（短い）ラグタイムは、フィブリル又はアミロイドの形成によってペプチドが分解する傾向が高いことを示している。
【0258】
ｔ＝０で５０ＡＵのＴｈＴ蛍光をノイズ又はバックグラウンドと見なす。ラグタイムを、信号強度が５０ＡＵを超えるのにかかる時間として報告する。
【0259】
ＴｈＴアッセイのための全ての試料をセルロースアセテートフィルター（２２μｍカットオフ、直径１３ｍｍ、濾過前にＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水ですすいだ）で濾過した。各試料について、１ｍＭ溶液のＴｈＴ２０μＬをペプチド溶液１ｍＬに添加した。この試料混合物から、２００μＬを９６ウェルマイクロタイタープレート中のｎ（n＝３～６）ウェルに移した。９６ウェルＮＵＮＣプレートボトムオプティクス及びシーリングテープのＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）Ｎｕｎｃ（商標）シーリングテープを使用した。ラグタイムをｎ試料の平均として報告する。
【0260】
蛍光プレートリーダー（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓ，ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を以下の設定で実験に使用した：励起波長４５０ｎｍ；ダイクロイックフィルター４６５ｎｍ；発光波長４８６ｎｍ；焦点高さ３．５ｍｍ；ゲイン１０００；サイクル数９６０；サイクルタイム３６０秒；ウェルあたりの点滅回数２０；温度２５℃；振盪モードオービタル、回転速度３００ｒｍｐ、２００秒、及び各サイクル後に振盪する。
【0261】
ＴｈＴアッセイ－ラグタイム
可能であれば、全ＴｈＴデータの反復の平均をＴｈＴラグタイムの決定に使用する。非常に確率的なデータの場合、ワーストケースのデータをラグタイム評価に使用する。ＴｈＴラグタイムは、１ステップ又は２ステップのシグモイド曲線のいずれかを用いて決定した。フィブリル化がシグモイド曲線をたどらない場合及び実験時間内にプラトーに達しなかった場合には、シグナルが５０ＡＵを超えるのにかかる時間としてラグタイムを評価した。
可能であれば、全ＴｈＴデータの反復の平均をＴｈＴラグタイムの決定に使用する。非常に確率的なデータの場合、ワーストケースのデータをラグタイム評価に使用する。ＴｈＴラグタイムは、１ステップ又は２ステップのシグモイド曲線のいずれかを用いて決定した。フィブリル化がシグモイド曲線をたどらない場合及び実験時間内にプラトーに達しなかった場合には、シグナルが５０ＡＵを超えるのにかかる時間としてラグタイムを評価した。
【0262】
ＵＶ－ＶＩＳを用いた濃度の決定
ＡｎｘＡ１の濃度を、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社のＮａｎｏｄｒｏｐ ２０００ｃを用いるＵＶ－ＶＩＳ分光法及び
の吸光係数を用いて決定した。
ＡｎｘＡ１の濃度を、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社のＮａｎｏｄｒｏｐ ２０００ｃを用いるＵＶ－ＶＩＳ分光法及び
【数1】
【0263】
溶解時間
ペプチドを最初に少量の溶媒で湿潤させ、５分間放置し、続いて溶媒を全量加えた。溶液を手で旋回させ、最終溶解時間の観察を記録した。
ペプチドを最初に少量の溶媒で湿潤させ、５分間放置し、続いて溶媒を全量加えた。溶液を手で旋回させ、最終溶解時間の観察を記録した。
【0264】
凍結乾燥を意図した溶液を湿潤させて溶解し、続いて残りの溶液を添加した。容量が大きいため、溶解のために５つの製剤を低速振盪器上に置いた。
【0265】
凍結乾燥
試料を凍結乾燥前に調製し、８０℃で一晩保存した。試料を、ストッパー（２０ｍｍ Ｌｙｏ ＮｏｖａＰｕｒｅ，Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａ）付きの６Ｒバイアル（ｃｌｅａｒ Ｆｉｏｌａｘ，Ｂｕｃｈ＆Ｈｏｌｍ）中の２ｍＬのＡｎｘＡ１溶液で調製した。試料を、－５５℃に予冷した凍結乾燥機（Ｔｅｌｓｔａｒ ＬｙｏＱｕｅｓｔ，Ａｚｂｉｌ Ｔｅｌｓｔａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．Ｕ.）に入れた。コンデンサーの温度を－５５℃に、圧力を０．２ｍｂａｒに４８時間維持した。製剤１～５のバイアル１～５をタワー内の中央棚に置き、製剤１～５のバイアル６～１０を下棚に置いた。タワーチューブ（直径２２、高さ２５ｃｍ）を周囲温度でコンデンサーの外側に配置し、下部の棚がコンデンサーに最も近い状態である。
試料を凍結乾燥前に調製し、８０℃で一晩保存した。試料を、ストッパー（２０ｍｍ Ｌｙｏ ＮｏｖａＰｕｒｅ，Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａ）付きの６Ｒバイアル（ｃｌｅａｒ Ｆｉｏｌａｘ，Ｂｕｃｈ＆Ｈｏｌｍ）中の２ｍＬのＡｎｘＡ１溶液で調製した。試料を、－５５℃に予冷した凍結乾燥機（Ｔｅｌｓｔａｒ ＬｙｏＱｕｅｓｔ，Ａｚｂｉｌ Ｔｅｌｓｔａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｓ．Ｌ．Ｕ.）に入れた。コンデンサーの温度を－５５℃に、圧力を０．２ｍｂａｒに４８時間維持した。製剤１～５のバイアル１～５をタワー内の中央棚に置き、製剤１～５のバイアル６～１０を下棚に置いた。タワーチューブ（直径２２、高さ２５ｃｍ）を周囲温度でコンデンサーの外側に配置し、下部の棚がコンデンサーに最も近い状態である。
【0266】
実施例１
全ての試料は、７．１～７．４のｐＨ範囲で二重脱イオン（Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標））水中に０．９％のＮａＣｌ（１５４ｍＭ）を含んでいた。ＡｎｘＡ１の濃度は、表１によると１．６ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬであった。
全ての試料は、７．１～７．４のｐＨ範囲で二重脱イオン（Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標））水中に０．９％のＮａＣｌ（１５４ｍＭ）を含んでいた。ＡｎｘＡ１の濃度は、表１によると１．６ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬであった。
【0267】
図１及び表１のデータは、Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中０．９％のＮａＣｌを用いた異なる濃度のＡｎｘＡ１についてのＴｈＴアッセイの結果を示す。データは、中性ｐＨ付近で、濃度依存的にアミロイド又はフィブリルの形成によってペプチドが分解することを明確に示している。５ｍｇ／ｍＬ以上の濃度では、分析を開始する前にＡｎｘＡ１はすでに分解（フィブリル化）を開始しており、非常に高いフィブリル化傾向を示している。
【0268】
表１：濃度が低い場合のラグタイムの増加から濃度と安定性の逆の関係を示すＴｈＴアッセイ用の試料組成とラグタイム。
【表1】
【0269】
実施例２
中性ｐＨでＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）中の０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）１ｍＬあたり２０ｍｇの凍結乾燥ＡｎｘＡ１を添加したところ、ペプチドは容易に溶解しなかった。ペプチド懸濁液を室温で、回転しながら一晩放置し、翌朝、エマルジョンは不透明なゲル状物質に変わった。アリコートをエッペンドルフチューブに移し、スピンダウンし、ＵＶ－ＶＩＳによって上清の濃度を約０．１７ｍｇ／ｍＬと決定した。
中性ｐＨでＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）中の０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）１ｍＬあたり２０ｍｇの凍結乾燥ＡｎｘＡ１を添加したところ、ペプチドは容易に溶解しなかった。ペプチド懸濁液を室温で、回転しながら一晩放置し、翌朝、エマルジョンは不透明なゲル状物質に変わった。アリコートをエッペンドルフチューブに移し、スピンダウンし、ＵＶ－ＶＩＳによって上清の濃度を約０．１７ｍｇ／ｍＬと決定した。
【0270】
残りのペプチド懸濁液を想定濃度５ｍｇ／ｍＬまで希釈し、４つの１ｍＬ試料をｐＨ２、４、６、及び８に調整した（図２参照）。４つのバイアルは全て不透明であり続け、溶解度が限られていることを示す。
【0271】
実施例３
ＡｎｘＡ１の３つの試料を、ｐＨ９のＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水、０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）中で、それぞれ濃度３．３、１．６及び０．８ｍｇ／ｍＬで調製した。ｐＨを、各試料に０．１ＭのＮａＯＨを添加して調整し、遠心分離後にＵＶ－ＶＩＳ分光法を用いて濃度を決定した。ｐＨ６．０で試料は不透明になり、ｐＨ６．０未満ですぐに沈殿した（図３参照）。
ＡｎｘＡ１の３つの試料を、ｐＨ９のＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水、０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭ）中で、それぞれ濃度３．３、１．６及び０．８ｍｇ／ｍＬで調製した。ｐＨを、各試料に０．１ＭのＮａＯＨを添加して調整し、遠心分離後にＵＶ－ＶＩＳ分光法を用いて濃度を決定した。ｐＨ６．０で試料は不透明になり、ｐＨ６．０未満ですぐに沈殿した（図３参照）。
【0272】
実施例４
表２によると、異なる塩（ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２又はＨＣｌ）を含有する中性付近のｐＨで１．６又は３．２ｍｇのＡｎｘＡ１をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水に添加した。溶解時間を観察し、得られた溶液を、ＴｈＴアッセイを用いて分析した。
表２によると、異なる塩（ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２又はＨＣｌ）を含有する中性付近のｐＨで１．６又は３．２ｍｇのＡｎｘＡ１をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水に添加した。溶解時間を観察し、得られた溶液を、ＴｈＴアッセイを用いて分析した。
【0273】
溶解時間は低塩濃度ではるかに速く、同時に、ＴｈＴアッセイのラグタイムが長く、アミロイド又はフィブリル形成を介した分解の傾向が低いことを示すことがはっきりと分かる。溶解が５分未満で、ラグタイムが５０時間超の場合に、塩を添加しないと最高の安定性が観察される。ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２のいずれも、ＡｎｘＡ１がアミロイド又はフィブリル形成を介して分解する傾向を減少させなかった（図４参照）。
【0274】
表２：異なる塩（ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２又はＨＣｌ）を含有する中性付近のｐＨのＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中のＡｎｘＡ１の７つの試料。低塩濃度では溶解時間がはるかに速く、同時にＴｈＴアッセイのラグタイムが長くなることがはっきりと分かる。溶解が５分未満、ラグタイムが５０時間超の場合に、塩を添加しないと最高の安定性が観察される（最大アッセイ時間内にフィブリル化は観察されない）。
【表2】
【0275】
実施例５
約１６ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水に添加した。その結果得られたｐＨは７．５であった。表３によると、１つの試料で０．１ＭのＮａＯＨを用いてｐＨ１０に、別の試料で０．１ＭのＨＣｌを用いてｐＨ２にｐＨを調整した。溶液の外観に注目した。ｐＨ≧７．４では、溶液は透明であった。ｐＨ≦７．１、ｐＨ＞２．６では、溶液は不明瞭である。ｐＨ≦２．６では、溶液は再び透明であった。データを表３にまとめる。図５も参照されたい。
約１６ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水に添加した。その結果得られたｐＨは７．５であった。表３によると、１つの試料で０．１ＭのＮａＯＨを用いてｐＨ１０に、別の試料で０．１ＭのＨＣｌを用いてｐＨ２にｐＨを調整した。溶液の外観に注目した。ｐＨ≧７．４では、溶液は透明であった。ｐＨ≦７．１、ｐＨ＞２．６では、溶液は不明瞭である。ｐＨ≦２．６では、溶液は再び透明であった。データを表３にまとめる。図５も参照されたい。
【0276】
表３：異なるｐＨ値でＡｎｘＡ１を含有する試料の視覚的外観。透明な溶液が、ｐＨ７．４以上と２．６から２．０で観察された。
【表3】
【0277】
実施例６
ＡｎｘＡ１試料をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水又はＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中の５％マンニトールに約１８ｍｇ／ｍＬまで溶解し、１．０ＭのＨＣｌ及びＮａＯＨを用いてｐＨを調整した。溶解後、視覚的外観を記録し、写真撮影した。図６及び表４を参照されたい。遠心分離により試料を透明化し、ＵＶ－ＶＩＳ分光法を用いて上清中の濃度を決定した。透明な溶液は、Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中に５％マンニトールを含む場合と含まない場合で、ｐＨ８と１０の両方で観察された。表４及び図６によると、ｐＨ２、４及び６では、不明瞭な及び又は粘性のある溶液が観察された。
ＡｎｘＡ１試料をＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水又はＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中の５％マンニトールに約１８ｍｇ／ｍＬまで溶解し、１．０ＭのＨＣｌ及びＮａＯＨを用いてｐＨを調整した。溶解後、視覚的外観を記録し、写真撮影した。図６及び表４を参照されたい。遠心分離により試料を透明化し、ＵＶ－ＶＩＳ分光法を用いて上清中の濃度を決定した。透明な溶液は、Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中に５％マンニトールを含む場合と含まない場合で、ｐＨ８と１０の両方で観察された。表４及び図６によると、ｐＨ２、４及び６では、不明瞭な及び又は粘性のある溶液が観察された。
【0278】
表４：ＡｎｘＡ１の濃度と、ｐＨ２～１０までの、マンニトールを含む場合と含まない場合のＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中の溶液の視覚的外観。透明な溶液がｐＨ８及び１０で観察される。
【表4】
【0279】
実施例７
１．５～１．６ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１及び張度プロバイダー（等張性調整剤）を含む等張試料を、表５の仕様に従って中性付近のｐＨで調製した。全ての試料は透明な溶液として観察された。試料を前述のＴｈＴアッセイに供し、張度プロバイダーとしてスクロースとマンニトールを使用すると、トレハロースとグルコースを使用した場合と比較して、より長いラグタイムが観察された。表５に示すデータを図７にグラフで示す。
１．５～１．６ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１及び張度プロバイダー（等張性調整剤）を含む等張試料を、表５の仕様に従って中性付近のｐＨで調製した。全ての試料は透明な溶液として観察された。試料を前述のＴｈＴアッセイに供し、張度プロバイダーとしてスクロースとマンニトールを使用すると、トレハロースとグルコースを使用した場合と比較して、より長いラグタイムが観察された。表５に示すデータを図７にグラフで示す。
【0280】
表５：１．５～１．６ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１を含む等張試料を、本明細書に提示した仕様に従って中性付近のｐＨで調製した。
【表5】
【0281】
実施例８
異なる濃度のＡｎｘＡ１を含有する試料を、表６に従ってＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中で調製した。参照試料を生理食塩水、０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭのＮａＣｌ）で調製した。ラグタイムを前述のＴｈＴアッセイを用いて決定した。Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水では、ＡｎｘＡ１の濃度が高いほど、アミロイド又はフィブリル形成を介したより高い分解傾向が観察されることが明らかである。さらに、Ｍｉｌｌｉ Ｑ水中のＡｎｘＡ１の全ての溶液は、生理食塩水（１５４ｍＭのＮａＣｌ）中の基準試料よりも安定であることが観察される。
異なる濃度のＡｎｘＡ１を含有する試料を、表６に従ってＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中で調製した。参照試料を生理食塩水、０．９％ＮａＣｌ（１５４ｍＭのＮａＣｌ）で調製した。ラグタイムを前述のＴｈＴアッセイを用いて決定した。Ｍｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水では、ＡｎｘＡ１の濃度が高いほど、アミロイド又はフィブリル形成を介したより高い分解傾向が観察されることが明らかである。さらに、Ｍｉｌｌｉ Ｑ水中のＡｎｘＡ１の全ての溶液は、生理食塩水（１５４ｍＭのＮａＣｌ）中の基準試料よりも安定であることが観察される。
【0282】
表６．０．９％（１５４ｍＭ）のＮａＣｌ中のＡｘｎ０１試料と比較した、異なる濃度のＭｉｌｌｉ Ｑ（登録商標）水中のＡｎｘＡ１試料のＴｈＴアッセイを用いて決定したラグタイムデータ。全ての試料のｐＨは７．４であった。
【表6】
【0283】
実施例９
ＴｈＴアッセイを、ＡｎｘＡ１の物理的安定性（フィブリル化傾向）を評価するために使用した。等張性溶液を提供するために、等張性調整剤としてスクロース、マンニトール又はソルビトールのいずれかを有するグリシル－グリシン緩衝液ｐＨ８．０及びトリス緩衝液ｐＨ７．４で物理的安定性を試験し、ＡｎｘＡ１の濃度は１．５ｍｇ／ｍＬ～４．８ｍｇ／ｍＬであった。ラグタイムは、ＡｎｘＡ１及び等張性調整剤の濃度とは無関係に、ｐＨ８の１０ｍＭグリシル－グリシンを含有する全ての試料で６５時間を超える（ＴｈＴアッセイは実行されている）。
ＴｈＴアッセイを、ＡｎｘＡ１の物理的安定性（フィブリル化傾向）を評価するために使用した。等張性溶液を提供するために、等張性調整剤としてスクロース、マンニトール又はソルビトールのいずれかを有するグリシル－グリシン緩衝液ｐＨ８．０及びトリス緩衝液ｐＨ７．４で物理的安定性を試験し、ＡｎｘＡ１の濃度は１．５ｍｇ／ｍＬ～４．８ｍｇ／ｍＬであった。ラグタイムは、ＡｎｘＡ１及び等張性調整剤の濃度とは無関係に、ｐＨ８の１０ｍＭグリシル－グリシンを含有する全ての試料で６５時間を超える（ＴｈＴアッセイは実行されている）。
【0284】
１０ｍＭトリス、ｐＨ７．５では、より高い濃度（４．７ｍｇ／ｍＬ）の全ての試料で１０．７～１１．１時間後にフィブリル化が観察される。１０％スクロース中のより低い濃度の１．５ｍｇ／ｍＬでは、ラグタイムは４２．８時間であり、５％マンニトール又はソルビトールを含有する１．７ｍｇ／ｍＬではラグタイムは６５時間を超える。
【0285】
表７
【表7】
【0286】
実施例１０
ＴｈＴアッセイを用いて、ＡｎｘＡ１の物理的安定性及びフィブリル化傾向を評価した。実験計画を、１．５～８．４ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１濃度で、スクロース、マンニトール又はマンニトール／スクロースを有するｐＨ７．４～８．５の１０～５０ｍＭグリシル－グリシン緩衝液中で表８に従って実行した。
ＴｈＴアッセイを用いて、ＡｎｘＡ１の物理的安定性及びフィブリル化傾向を評価した。実験計画を、１．５～８．４ｍｇ／ｍＬのＡｎｘＡ１濃度で、スクロース、マンニトール又はマンニトール／スクロースを有するｐＨ７．４～８．５の１０～５０ｍＭグリシル－グリシン緩衝液中で表８に従って実行した。
【0287】
ｐＨが７．４から８．５に上昇するにつれて、ＡｎｘＡ１の物理的安定性が増加する（ラグタイムは長くなる）。グリシル－グリシン緩衝液の濃度が１０ｍＭから５０ｍＭに増加すると、物理的安定性が低下する（ラグタイムは短くなる）。使用した等張性調整剤（マンニトール、スクロース及びマンニトール／スクロース）の影響は、物理的安定性（ラグタイム）に対して無視できるほどの影響しかなかった。
【0288】
【0289】
表８：
【表8】
【0290】
実施例１１
加速安定性試験
ＡｎｘＡ１の５つの製剤（形態１～５）を表９に提示するように調製した。試料を、前述の手順に従って凍結乾燥した。試料の化学的安定性を表１０に従って５℃及び４０℃での６か月の安定性試験で、ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）によるＡｎｘＡ１の純度として決定した。
加速安定性試験
ＡｎｘＡ１の５つの製剤（形態１～５）を表９に提示するように調製した。試料を、前述の手順に従って凍結乾燥した。試料の化学的安定性を表１０に従って５℃及び４０℃での６か月の安定性試験で、ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）によるＡｎｘＡ１の純度として決定した。
【0291】
ＡｎｘＡ１は、ｐＨ８．３で全ての組成物の試料（製剤１、２、３及び５）において物理的に安定であることが観察される（ラグタイム＞６０時間）。ｐＨ７．５では、３４．７時間のより短いラグタイムによって観察されるように、物理的安定性は低い。生理食塩水（０．９ｗｔ％のＮａＣｌ）及びＰｂｓ緩衝液では、それぞれ８．８時間及び５．６時間の短いラグタイムから観察されるように、物理的安定性はより低い。
【0292】
ＡｎｘＡ１は、等張性調整剤としてマンニトールのみを有する試料（形態１）と比較して、等張性調整剤としてマンニトールとスクロースを組み合わせた試料（形態２、形態３、形態４及び形態５）において、より化学的に安定（より高い純度）であることが観察される。そのため、スクロースは凍結乾燥ケーキ中のＡｎｘＡ１の化学的安定性を高める。
【0293】
表９：
【表9】
【表10】
【0294】
表１０
【表11】
【0295】
実施例１２
高張及び低張溶液での安定性
ＡｎｘＡ１の９つの製剤を、ＴｈＴアッセイ用の陽性対照を含む、以下の表１１に提示するように調製した。試料を、ＮａＨＣＯ３を含有する試料についてはｎ＝３及びグリシル－グリシンを含有する試料についてはｎ＝４で、前述の手順を用いて、ＴｈＴアッセイを用いて分析した。
高張及び低張溶液での安定性
ＡｎｘＡ１の９つの製剤を、ＴｈＴアッセイ用の陽性対照を含む、以下の表１１に提示するように調製した。試料を、ＮａＨＣＯ３を含有する試料についてはｎ＝３及びグリシル－グリシンを含有する試料についてはｎ＝４で、前述の手順を用いて、ＴｈＴアッセイを用いて分析した。
【0296】
フィブリル化は、０．９％生理食塩水中の陽性対照試料においてのみ観察される。ＮａＨＣＯ３でもグリシル－グリシン緩衝液でも、２０％低張、及び２０％と１００％高張では、フィブリル化は観察されなかった。
【0297】
表１１：
【表12】
【0298】
項目
１．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のＡｎｘＡ１ペプチドなどのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤。
２．ｐＨ≧６．５である、項目１に記載の液体医薬製剤。
３．ｐＨ≧６．５、例えばｐＨ≧７．０、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧８．０である、項目１～２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４．ｐＨ＞７である、項目１～３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５．ｐＨ＞７．４である、項目１～４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６．ｐＨ＞７．５である、項目１～５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７．ｐＨ＞８である、項目１～６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８．ｐＨ≦１２、例えばｐＨ≦１１．５、例えばｐＨ≦１１、ｐＨ≦１０．５、例えばｐＨ≦１０、例えばｐＨ≦９．５、例えばｐＨ≦９、例えばｐＨ≦８．５である、項目１～７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
９．６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２である、項目１～８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１０．７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５；例えば、７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である；
例えば、ｐＨ≧７．４である、
例えば、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である；
例えば、例えば８≧ｐＨ≦８．５である、
項目１～９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１１．ｐＨが、７．５、例えば７．６、例えば７．７、例えば７．８、例えば７．９、例えば８．０、例えば８．１、例えば８．２、例えば８．３、例えば８．３、例えば８．４、例えば８．５、例えば８．６、例えば８．７、例えば８．８、例えば８．９、例えば９．０である、項目１～１０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１２．ｐＨ≧７．４、例えば、ｐＨ≧７．５、例えば、ｐＨ≧７．６、例えば、ｐＨ≧７．７、例えば、ｐＨ≧７．８、例えば、ｐＨ≧７．９、例えば、ｐＨ≧８．０である、項目１～１１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１３．ｐＨが約８．３である、項目１～１２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１４．ｐＨが、２＜ｐＨ＜３、ｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨである、項目１～１３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１５．２＜ｐＨ＜２．６である、項目１～１４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１６．ｐＨ≧８；又は２＜ｐＨ＜２．６である、項目１～１５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１７．前記製剤が本質的にフィブリルを含まない、項目１～１６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１８．前記製剤が、本質的にタンパク質性粒子などの目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えない粒子を含まない、項目１～１７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１９．前記製剤が、本質的に、≧０．１μｍ、例えば≧１μｍ、例えば≧１μｍ、例えば≧１０μｍ、例えば≧１μｍのタンパク質性粒子などの目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えない粒子を含まない、項目１～１８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２０．前記製剤が、３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４の液体医薬製剤と比較して；及び／又は
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．物理的安定性の改善を有する、
ｂ．溶解性の改善及び／又は不溶性の低下を有する、かつ／又は
ｃ．フィブリルを形成する傾向の低下を有する、
項目１～１９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２１．前記製剤が、ｐＨ３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４の液体医薬製剤と比較して；及び／又は
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．化学的安定性の改善を有する、
ｂ．凍結乾燥中にペプチドを保存する、かつ／又は
ｃ．凍結乾燥中のペプチド分解を低減する、
項目１～２０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２２．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する、項目１～２１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２３．０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２４．０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～３１、例えば３１～３２、例えば３２～３３、例えば３３～３４、例えば３４～３５、例えば３５～３６、例えば３６～３７、例えば３７～３８、例えば３８～３９、例えば３９～４０ｍｇ／ｍｌ、例えば４０～４１、例えば４１～４２、例えば４２～４３、例えば４３～４４、例えば４４～４５、例えば４５～４６、例えば４６～４７、例えば４７～４８、例えば４８～４９、例えば４９～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２５．少なくとも２．２ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２６．前記溶媒が水である、項目１～２５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２７．前記溶媒が超純水である、項目１～２６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２８．前記溶媒が、本質的に非イオン性溶液又は低イオン強度を有する低イオン性溶液である、項目１～２７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２９．前記溶媒が、１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する、項目１～２８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３０．前記溶媒が、１μＭ～５０ｍＭ、例えば１μＭ～５μＭ、例えば５～１０μＭ、例えば１０～２５μＭ、例えば２５～５０μＭ、例えば５０～７５μＭ、例えば７５～１００μＭ、例えば１００～２００μＭ、例えば２００～３００μＭ、例えば３００～４００μＭ、例えば４００～５００μＭ、例えば５００～７５０μＭ、例えば７５０～１０００μＭ（１ｍＭ）、例えば１ｍＭ～２ｍＭ、例えば２～３ｍＭ、例えば３～４ｍＭ、例えば４～５ｍＭ、例えば５～１０ｍＭ、例えば１０～２０ｍＭ、例えば２０～３０ｍＭ、例えば３０～４０ｍＭ、例えば４０～５０ｍＭのイオン強度を有する、項目１～２９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３１．前記溶媒が非生理食塩水である、項目１～３０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３２．前記溶媒が本質的に等張液である、項目１～３１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３３．前記溶媒が約１００％の張度を有する、項目１～３２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３４．前記溶媒が、１００％±１００％の張度、例えば０．１％～２００％の張度を有する、項目１～３３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３５．前記溶媒が、１００％±１００％の張度、例えば０．１％～１％の張度、例えば１～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％、例えば２０～２５％、例えば２５～３０％、例えば３０～３５％、例えば３５～４０％、例えば４０～４５％、例えば４５～５０％、例えば５０～５５％、例えば５５～６０％、例えば６０～６５％、例えば６５～７０％、例えば７０～７５％、例えば７５～８０％、例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％、例えば１２０～１２５％、例えば１２５～１３０％、例えば１３０～１３５％、例えば１３５～１４０％、例えば１４０～１４５％、例えば１４５～１５０％、例えば１５０～１５５％、例えば１５５～１６０％、例えば１６０～１６５％、例えば１６５～１７０％、例えば１７０～１７５％、例えば１７５～１８０％、例えば１８０～１８５％、例えば１８５～１９０％、例えば１９０～１９５％、例えば１９５～２００％の張度を有する、項目１～３４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３６．前記溶媒が、１００％±２０％の張度、例えば８０％～１２０％の張度を有する、項目１～３５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３７．前記溶媒が、８０～８５％の張度、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％の張度を有する、項目１～３６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３８．前記溶媒が０～２０％高張、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％高張である、項目１～３７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３９．前記溶媒が、０～２０％低張、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％低張である、項目１～３８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４０．前記溶媒が、
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液、及び
ｉｉｉ．水である溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液、及び
ｉｖ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液
からなる群から選択される、項目１～３９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４１．等張性調整剤を含む、項目１～４０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４２．炭水化物及び／又は糖アルコールである等張性調整剤を含む、項目１～４１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４３．炭水化物等張性調整剤を含む、項目１～４２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４４．糖アルコール等張性調整剤を含む、項目１～４３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４５．炭水化物等張性調整剤及び糖アルコール等張性調整剤を含む、項目１～４４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４６．前記等張性調整剤が、ペントース単糖、ヘキソース単糖、二糖及び三糖からなる群から選択される、項目１～４５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４７．炭水化物等張性調整剤が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース及びアラビノースからなる群から選択される、項目１～４６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４８．前記糖アルコール等張性調整剤が、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される、項目１～４７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４９．前記溶液が、約４．５％（１００％等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）、例えば、０．１～９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば３．６～５．４％；例えば３．６～３．８、例えば３．８～４．０、例えば４．０～４．２、例えば４．２～４．４、例えば４．４～４．６、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のペントース単糖を含む、項目１～４８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５０．前記溶液が、約５．５％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～１０．９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％、例えば９．０～９．５、例えば９．５～１０．０％、例えば１０．０～１０．５、例えば１０．５～１０．９％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば、４．４～６．６％、例えば４．４～４．６％、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２、例えば５．２～５．４、例えば５．４～５．６、例えば５．６～５．８、例えば５．８～６．０、例えば６．０～６．２％、例えば６．２～６．４％、例えば６．４～６．６％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のヘキソース単糖を含む、項目１～４９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５１．前記溶液が、約１０．３％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～２０．５％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２０．５％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば８．２～１２．３％、例えば８．２～８．５、例えば８．５～９、例えば９～９．５、例えば９．５～１０、例えば１０～１０．５、例えば１０．５～１１、例えば１１～１１．５、例えば１１．５～１２、例えば１２～１２．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の二糖を含む、項目１～５０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５２．前記溶液が、約１５．１％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～３０．３％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０、例えば３０～３０．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば１２．１～１８．２％、例えば１２．１～１２．５、例えば１２．５～１３、例えば１３～１３．５、例えば１３．５～１４、例えば１４～１４．５、例えば１４．５～１５、例えば１５～１５．５、例えば１５．５～１６、例えば１６～１６．５、例えば１６．５～１７、例えば１７．５～１８、例えば１８～１８．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の三糖を含む、項目１～５１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５３．前記溶液がトレハロース及び／スクロースを含む、項目１～５２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５４．前記溶液がスクロースを含む、項目１～５３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５５．前記溶液が約１０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む；例えば、８～１２％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば約１％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば１～５％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば０～２０％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１６～１７、１７～１８、１８～１９、１９～２０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
項目１～５４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５６．前記溶液がマンニトールを含む、項目１～５５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５７．前記溶液が約５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、例えば４～６％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば４～４．５、例えば４．５～５、例えば５～５．５、例えば、５．５～６％マンニトールを含む、
例えば約４％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～３．５、例えば３．５～４、例えば４～４．５、例えば４．５～４％マンニトールを含む、
例えば０～１０％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、
項目１～５６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５８．前記溶液がマンニトール及びスクロースを含む、項目１～５７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５９．前記溶液が、４％（ｗ／ｖ）マンニトール及び約２．５％スクロースを含む、
例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール及び２～３％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば０～８％（ｗ／ｖ）マンニトール及び０～５％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
項目１～５８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６０．ａ．前記溶液がｐＨ≧７．４のｐＨを有し、かつ／又は
ｂ．前記溶液が、ｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０、例えばｐＨ≧８．１、例えばｐＨ≧８．２、例えばｐＨ≧８．３、例えばｐＨ≧８．５、例えばｐＨ≧８．６、例えばｐＨ≧８．７、例えばｐＨ≧８．８、例えばｐＨ≧８．９、例えばｐＨ≧９．０のｐＨを有し、かつ／又は
ｃ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ／又は
ｄ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ／又は
ｅ．前記溶液が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される等張性調整剤を含み、かつ／又は
ｆ．前記溶液がスクロース及び／又はマンニトールを含み、かつ／又は
ｇ．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は
ｈ．前記溶液が、０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、
項目１～５９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６１．１以上の緩衝液などの緩衝液をさらに含む、項目１～６０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６２．前記緩衝液が、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ、アミン含有緩衝液、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン及びグリシル－グリシンなどのアミノ酸ベースの緩衝液、非リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ポリソルベート８０（例えばＴｗｅｅｎ８０）、ＨＥＰＥＳ及びホウ酸塩からなる群から選択される、項目１～６１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６３．グリシル－グリシン及び／又はポリソルベート８０をさらに含む、項目１～６２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６４．保存剤をさらに含む、項目１～６３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６５．ｍクレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルパラベン、ブチルパラベン、メチルパラベン、及びフェノールからなる群から選択される保存剤をさらに含む、項目１～６４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６６．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及び配列番号３の５～５２個の連続するアミノ酸、例えば配列番号３の５～１０、例えば１０～１５、例えば１５～２０、例えば２０～２５、例えば２５～３０、例えば３０～３５、例えば３５～４０、例えば４０～４５、例えば４５～５０、例えば５０～５２個の連続するアミノ酸を含む配列番号３の断片、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号３の変異体
からなる群から選択される、項目１～６５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６７．配列番号３の前記断片が、配列番号３の５個以上の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなり、例えば配列番号３の６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、又は５２の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなる、項目１～６６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６８．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫ（配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１０の変異体
からなる群から選択される、項目１～６７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６９．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～６のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される、項目１～６８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７０．配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている、項目１～６９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７１．配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）がロイシン（Ｌ）で置換されている、項目１～７０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７２．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫ（配列番号１１；アネキシン Ａ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１１の変異体
からなる群から選択される、項目１～７１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７３．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号７～９のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される、項目１～７２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７４．配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアラニン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている、項目１～７３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７５．配列番号３～１１のいずれか１つの２１位のバリン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びリジンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている、項目１～７４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７６．配列番号３～９のいずれか１つの３５位のバリン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、システイン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基；好ましくはリジンで置換されている、項目１～７５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７７．前記アミノ酸置換が保存的アミノ酸置換である、項目１～７６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７８．配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、１、２又は３個のアミノ酸置換、例えば１又は２個のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換を含む、項目１～７７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７９．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
からなる群から選択される、項目１～７８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８０．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
からなる群から選択される、項目１～７９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８１．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｃ末端アミド化されたＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）である、項目１～８０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８２．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの前記断片及び前記変異体が、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの機能性断片及び／又は機能性変異体である、項目１～８１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８３．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチド、又はその変異体若しくは断片が、
ａ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体に結合する、
ｂ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体を活性化及び／又は刺激する、
ｃ．ＦＰＲ２と結合及び／又は活性化する、
ｄ．免疫細胞を活性化する、
ｅ．食作用白血球などの白血球を活性化する、
ｆ．好中球及び／又は単球を活性化する、
ｇ．好中球走化性の誘導、好中球補体受容体３（ＣＲ３）の動員、及び好中球ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化などの食細胞白血球のエフェクター機能を活性化する、かつ／又は
ｈ．食細胞白血球の走化性を誘導する、
項目１～８２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８４．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｎ末端アセチル化される（ＣＯＣＨ３又はＡｃ－）、項目１～８３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８５．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｃ末端アミド化される（－ＮＨ２）、項目１～８４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８６．項目１～８５のいずれかに記載の液体医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．項目１～８５のいずれかに記載の溶媒とアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを混合する工程；
ｂ．任意選択で、工程ａの混合物を濾過する工程、及び
ｃ．前記液体医薬製剤のｐＨをｐＨ＜６；又は２＜ｐＨ＜３に調整する工程
を含むプロセス。
８７．前記ｐＨが、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２に調整される、項目８４に記載のプロセス。
８８．前記ｐＨが、２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨに調整される、項目８４に記載のプロセス。
８９．凍結乾燥医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．項目１～８８のいずれかに記載の液体医薬製剤を提供する工程、
ｂ．工程ａの前記液体を凍結乾燥する工程
を含むプロセス。
９０．前記凍結乾燥が、
ａ．本明細書上記で定義した液体医薬製剤の凍結、
ｂ．減圧及び加熱を含む一次乾燥（昇華段階）、及び
ｃ．二次乾燥（脱離段階）
の１以上の工程を含む、項目８７に記載のプロセス。
９１．項目８７～８８のいずれか一項に記載のプロセスによって得られる凍結乾燥医薬製剤。
９２．安定、例えば貯蔵安定である、項目１～９１のいずれかに記載の凍結乾燥医薬製剤。
９３．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法であって、
ａ．項目８７～９０のいずれか一項に記載の凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
を含む方法。
９４．前記溶媒がｐＨ＞６を有し、かつ／又は前記溶液がｐＨ＞６；若しくは２＜ｐＨ＜３を有する、項目９１に記載の方法。
９５．前記溶媒及び／又は前記溶液が、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２；又は２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨを有する、項目９２に記載の方法。
９６．前記溶媒が、
ａ．超純水などの水；及び
ｂ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される、項目９１～９３のいずれか一項に記載の方法。
９７．前記溶媒が超純水などの水である、項目９１～９４のいずれか一項に記載の方法。
９８．医薬として使用するための、項目１～９７のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤。
９９．虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するための、項目１～９８のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤。
１．ｐＨ＞６；又は２＜ｐＨ＜３の液体医薬製剤であって、
ａ．ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及びその断片、及びその変異体、及びその断片の変異体からなる群から選択される治療有効量のＡｎｘＡ１ペプチドなどのアネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）Ｎ末端ペプチド;並びに
ｂ．ｉ．超純水などの水;及び
ｉｉ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、
任意選択で、炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される溶媒
を含む液体医薬製剤。
２．ｐＨ≧６．５である、項目１に記載の液体医薬製剤。
３．ｐＨ≧６．５、例えばｐＨ≧７．０、例えばｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧８．０である、項目１～２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４．ｐＨ＞７である、項目１～３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５．ｐＨ＞７．４である、項目１～４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６．ｐＨ＞７．５である、項目１～５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７．ｐＨ＞８である、項目１～６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８．ｐＨ≦１２、例えばｐＨ≦１１．５、例えばｐＨ≦１１、ｐＨ≦１０．５、例えばｐＨ≦１０、例えばｐＨ≦９．５、例えばｐＨ≦９、例えばｐＨ≦８．５である、項目１～７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
９．６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２である、項目１～８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１０．７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５；例えば、７．０≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である；
例えば、ｐＨ≧７．４である、
例えば、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９である；
例えば、例えば８≧ｐＨ≦８．５である、
項目１～９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１１．ｐＨが、７．５、例えば７．６、例えば７．７、例えば７．８、例えば７．９、例えば８．０、例えば８．１、例えば８．２、例えば８．３、例えば８．３、例えば８．４、例えば８．５、例えば８．６、例えば８．７、例えば８．８、例えば８．９、例えば９．０である、項目１～１０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１２．ｐＨ≧７．４、例えば、ｐＨ≧７．５、例えば、ｐＨ≧７．６、例えば、ｐＨ≧７．７、例えば、ｐＨ≧７．８、例えば、ｐＨ≧７．９、例えば、ｐＨ≧８．０である、項目１～１１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１３．ｐＨが約８．３である、項目１～１２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１４．ｐＨが、２＜ｐＨ＜３、ｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨである、項目１～１３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１５．２＜ｐＨ＜２．６である、項目１～１４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１６．ｐＨ≧８；又は２＜ｐＨ＜２．６である、項目１～１５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１７．前記製剤が本質的にフィブリルを含まない、項目１～１６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１８．前記製剤が、本質的にタンパク質性粒子などの目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えない粒子を含まない、項目１～１７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
１９．前記製剤が、本質的に、≧０．１μｍ、例えば≧１μｍ、例えば≧１μｍ、例えば≧１０μｍ、例えば≧１μｍのタンパク質性粒子などの目に見える及び／又は顕微鏡でないと見えない粒子を含まない、項目１～１８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２０．前記製剤が、３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４の液体医薬製剤と比較して；及び／又は
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．物理的安定性の改善を有する、
ｂ．溶解性の改善及び／又は不溶性の低下を有する、かつ／又は
ｃ．フィブリルを形成する傾向の低下を有する、
項目１～１９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２１．前記製剤が、ｐＨ３＜ｐＨ＜６、例えば３＜ｐＨ＜６．５、例えば３＜ｐＨ＜７、例えば３＜ｐＨ＜７．４の液体医薬製剤と比較して；及び／又は
生理食塩水液体医薬製剤と比較して；及び／又は
＞５０ｍＭのイオン強度を有する溶液と比較して；及び／又は
等張性調整剤を含まない溶液と比較して
ａ．化学的安定性の改善を有する、
ｂ．凍結乾燥中にペプチドを保存する、かつ／又は
ｃ．凍結乾燥中のペプチド分解を低減する、
項目１～２０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２２．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有する、項目１～２１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２３．０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２４．０．１～０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０ｍｇ／ｍｌ、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０ｍｇ／ｍｌ、例えば３０～３１、例えば３１～３２、例えば３２～３３、例えば３３～３４、例えば３４～３５、例えば３５～３６、例えば３６～３７、例えば３７～３８、例えば３８～３９、例えば３９～４０ｍｇ／ｍｌ、例えば４０～４１、例えば４１～４２、例えば４２～４３、例えば４３～４４、例えば４４～４５、例えば４５～４６、例えば４６～４７、例えば４７～４８、例えば４８～４９、例えば４９～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２５．少なくとも２．２ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、項目１～２４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２６．前記溶媒が水である、項目１～２５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２７．前記溶媒が超純水である、項目１～２６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２８．前記溶媒が、本質的に非イオン性溶液又は低イオン強度を有する低イオン性溶液である、項目１～２７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
２９．前記溶媒が、１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する、項目１～２８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３０．前記溶媒が、１μＭ～５０ｍＭ、例えば１μＭ～５μＭ、例えば５～１０μＭ、例えば１０～２５μＭ、例えば２５～５０μＭ、例えば５０～７５μＭ、例えば７５～１００μＭ、例えば１００～２００μＭ、例えば２００～３００μＭ、例えば３００～４００μＭ、例えば４００～５００μＭ、例えば５００～７５０μＭ、例えば７５０～１０００μＭ（１ｍＭ）、例えば１ｍＭ～２ｍＭ、例えば２～３ｍＭ、例えば３～４ｍＭ、例えば４～５ｍＭ、例えば５～１０ｍＭ、例えば１０～２０ｍＭ、例えば２０～３０ｍＭ、例えば３０～４０ｍＭ、例えば４０～５０ｍＭのイオン強度を有する、項目１～２９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３１．前記溶媒が非生理食塩水である、項目１～３０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３２．前記溶媒が本質的に等張液である、項目１～３１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３３．前記溶媒が約１００％の張度を有する、項目１～３２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３４．前記溶媒が、１００％±１００％の張度、例えば０．１％～２００％の張度を有する、項目１～３３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３５．前記溶媒が、１００％±１００％の張度、例えば０．１％～１％の張度、例えば１～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％、例えば２０～２５％、例えば２５～３０％、例えば３０～３５％、例えば３５～４０％、例えば４０～４５％、例えば４５～５０％、例えば５０～５５％、例えば５５～６０％、例えば６０～６５％、例えば６５～７０％、例えば７０～７５％、例えば７５～８０％、例えば８０～８５％、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％、例えば１２０～１２５％、例えば１２５～１３０％、例えば１３０～１３５％、例えば１３５～１４０％、例えば１４０～１４５％、例えば１４５～１５０％、例えば１５０～１５５％、例えば１５５～１６０％、例えば１６０～１６５％、例えば１６５～１７０％、例えば１７０～１７５％、例えば１７５～１８０％、例えば１８０～１８５％、例えば１８５～１９０％、例えば１９０～１９５％、例えば１９５～２００％の張度を有する、項目１～３４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３６．前記溶媒が、１００％±２０％の張度、例えば８０％～１２０％の張度を有する、項目１～３５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３７．前記溶媒が、８０～８５％の張度、例えば８５～９０％、例えば９０～９５％、例えば９５～１００％、例えば１００～１０５％、例えば１０５～１１０％、例えば１１０～１１５％、例えば１１５～１２０％の張度を有する、項目１～３６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３８．前記溶媒が０～２０％高張、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％高張である、項目１～３７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
３９．前記溶媒が、０～２０％低張、例えば０～５％、例えば５～１０％、例えば１０～１５％、例えば１５～２０％低張である、項目１～３８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４０．前記溶媒が、
ｉ．超純水などの水；及び
ｉｉ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液、及び
ｉｉｉ．水である溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液、及び
ｉｖ．１μＭ～５０ｍＭのイオン強度などの低イオン強度を有する溶液であって、１００％（等張）±１００％の張度を有する溶液
からなる群から選択される、項目１～３９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４１．等張性調整剤を含む、項目１～４０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４２．炭水化物及び／又は糖アルコールである等張性調整剤を含む、項目１～４１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４３．炭水化物等張性調整剤を含む、項目１～４２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４４．糖アルコール等張性調整剤を含む、項目１～４３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４５．炭水化物等張性調整剤及び糖アルコール等張性調整剤を含む、項目１～４４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４６．前記等張性調整剤が、ペントース単糖、ヘキソース単糖、二糖及び三糖からなる群から選択される、項目１～４５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４７．炭水化物等張性調整剤が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース及びアラビノースからなる群から選択される、項目１～４６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４８．前記糖アルコール等張性調整剤が、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される、項目１～４７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
４９．前記溶液が、約４．５％（１００％等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）、例えば、０．１～９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば３．６～５．４％；例えば３．６～３．８、例えば３．８～４．０、例えば４．０～４．２、例えば４．２～４．４、例えば４．４～４．６、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のペントース単糖を含む、項目１～４８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５０．前記溶液が、約５．５％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～１０．９％、例えば０．１～０．５、例えば０．５～１．０、例えば１．５～２．０、例えば１．５～２．０、例えば２．０～２．５、例えば２．５～３．０、例えば３．０～３．５、例えば３．５～４．０、例えば４．０～４．５、例えば４．５～５．０、例えば５．０～５．５、例えば５．５～６．０、例えば６．０～６．５、例えば７．０～７．５、例えば７．５～８．０、例えば８．０～８．５、例えば８．５～９．０％、例えば９．０～９．５、例えば９．５～１０．０％、例えば１０．０～１０．５、例えば１０．５～１０．９％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば、４．４～６．６％、例えば４．４～４．６％、例えば４．６～４．８、例えば４．８～５．０、例えば５．０～５．２、例えば５．２～５．４、例えば５．４～５．６、例えば５．６～５．８、例えば５．８～６．０、例えば６．０～６．２％、例えば６．２～６．４％、例えば６．４～６．６％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上のヘキソース単糖を含む、項目１～４９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５１．前記溶液が、約１０．３％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～２０．５％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２０．５％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば８．２～１２．３％、例えば８．２～８．５、例えば８．５～９、例えば９～９．５、例えば９．５～１０、例えば１０～１０．５、例えば１０．５～１１、例えば１１～１１．５、例えば１１．５～１２、例えば１２～１２．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の二糖を含む、項目１～５０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５２．前記溶液が、約１５．１％（等張）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば０．１～３０．３％、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２、例えば１２～１３、例えば１３～１４、例えば１４～１５、例えば１５～１６、例えば１６～１７、例えば１７～１８、例えば１８～１９、例えば１９～２０、例えば２０～２１、例えば２１～２２、例えば２２～２３、例えば２３～２４、例えば２４～２５、例えば２５～２６、例えば２６～２７、例えば２７～２８、例えば２８～２９、例えば２９～３０、例えば３０～３０．３％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する、例えば１２．１～１８．２％、例えば１２．１～１２．５、例えば１２．５～１３、例えば１３～１３．５、例えば１３．５～１４、例えば１４～１４．５、例えば１４．５～１５、例えば１５～１５．５、例えば１５．５～１６、例えば１６～１６．５、例えば１６．５～１７、例えば１７．５～１８、例えば１８～１８．２％（ｗ／ｖ）の総重量百分率（ｗ／ｖ）を有する１以上の三糖を含む、項目１～５１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５３．前記溶液がトレハロース及び／スクロースを含む、項目１～５２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５４．前記溶液がスクロースを含む、項目１～５３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５５．前記溶液が約１０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む；例えば、８～１２％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば８～９、例えば９～１０、例えば１０～１１、例えば１１～１２％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば約１％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば１～５％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば０～２０％（ｗ／ｖ）スクロース、例えば０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１６～１７、１７～１８、１８～１９、１９～２０％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
項目１～５４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５６．前記溶液がマンニトールを含む、項目１～５５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５７．前記溶液が約５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、例えば４～６％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば４～４．５、例えば４．５～５、例えば５～５．５、例えば、５．５～６％マンニトールを含む、
例えば約４％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば３～３．５、例えば３．５～４、例えば４～４．５、例えば４．５～４％マンニトールを含む、
例えば０～１０％（ｗ／ｖ）マンニトール、例えば０．１～１、例えば１～２、例えば２～３、例えば３～４、例えば４～５、例えば５～６、例えば６～７、例えば７～８、例えば８～９、例えば９～１０％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、
項目１～５６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５８．前記溶液がマンニトール及びスクロースを含む、項目１～５７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
５９．前記溶液が、４％（ｗ／ｖ）マンニトール及び約２．５％スクロースを含む、
例えば３～５％（ｗ／ｖ）マンニトール及び２～３％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
例えば０～８％（ｗ／ｖ）マンニトール及び０～５％（ｗ／ｖ）スクロースを含む、
項目１～５８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６０．ａ．前記溶液がｐＨ≧７．４のｐＨを有し、かつ／又は
ｂ．前記溶液が、ｐＨ≧７．５、例えばｐＨ≧７．６、例えばｐＨ≧７．７、例えばｐＨ≧７．８、例えばｐＨ≧７．９、例えばｐＨ≧８．０、例えばｐＨ≧８．１、例えばｐＨ≧８．２、例えばｐＨ≧８．３、例えばｐＨ≧８．５、例えばｐＨ≧８．６、例えばｐＨ≧８．７、例えばｐＨ≧８．８、例えばｐＨ≧８．９、例えばｐＨ≧９．０のｐＨを有し、かつ／又は
ｃ．前記溶液が１μＭ～５０ｍＭのイオン強度を有し、かつ／又は
ｄ．前記溶液が１００％（等張）±２０％の張度を有し、かつ／又は
ｅ．前記溶液が、スクロース、トレハロース、マンノース、リボース、マルトース、グルコース、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロピレン／エチレングリコール共重合体からなる群から選択される等張性調整剤を含み、かつ／又は
ｆ．前記溶液がスクロース及び／又はマンニトールを含み、かつ／又は
ｇ．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも３．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも７．５ｍｇ／ｍｌ、例えば少なくとも１０．０ｍｇ／ｍｌの水性溶解度を有し、かつ／又は
ｈ．前記溶液が、０．１～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む、
項目１～５９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６１．１以上の緩衝液などの緩衝液をさらに含む、項目１～６０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６２．前記緩衝液が、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ、アミン含有緩衝液、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン及びグリシル－グリシンなどのアミノ酸ベースの緩衝液、非リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ポリソルベート８０（例えばＴｗｅｅｎ８０）、ＨＥＰＥＳ及びホウ酸塩からなる群から選択される、項目１～６１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６３．グリシル－グリシン及び／又はポリソルベート８０をさらに含む、項目１～６２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６４．保存剤をさらに含む、項目１～６３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６５．ｍクレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルパラベン、ブチルパラベン、メチルパラベン、及びフェノールからなる群から選択される保存剤をさらに含む、項目１～６４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６６．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱ ＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥ ＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧ ＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰ ＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ ＬＨＫＡ（ＡｎｘＡ１ ２－５４；配列番号３）、
及び配列番号３の５～５２個の連続するアミノ酸、例えば配列番号３の５～１０、例えば１０～１５、例えば１５～２０、例えば２０～２５、例えば２５～３０、例えば３０～３５、例えば３５～４０、例えば４０～４５、例えば４５～５０、例えば５０～５２個の連続するアミノ酸を含む配列番号３の断片、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号３の変異体
からなる群から選択される、項目１～６５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６７．配列番号３の前記断片が、配列番号３の５個以上の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなり、例えば配列番号３の６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、又は５２の連続するアミノ酸を含むか又はそれからなる、項目１～６６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６８．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫ（配列番号１０；アネキシンＡ１ ２－２６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１０の変異体
からなる群から選択される、項目１～６７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
６９．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号６；アネキシンＡ１ ２－４６）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号４～６のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される、項目１～６８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７０．配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸で置換されている、項目１～６９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７１．配列番号３～６及び１０のいずれか１つの２４位のバリン（Ｖ）がロイシン（Ｌ）で置換されている、項目１～７０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７２．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫ（配列番号１１；アネキシン Ａ１ ２－２６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個の個々のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号１１の変異体
からなる群から選択される、項目１～７１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７３．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳ（配列番号９；アネキシンＡ１ ２－４６ Ｖ２４Ｌ）、
及び１～６個のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換、例えば２個のアミノ酸置換、例えば３個のアミノ酸置換、例えば４個のアミノ酸置換、例えば５個のアミノ酸置換、例えば６個の個々のアミノ酸置換を含む配列番号７～９のいずれか１つの変異体
からなる群から選択される、項目１～７２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７４．配列番号３～１１のいずれか１つの１０位のアラニン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている、項目１～７３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７５．配列番号３～１１のいずれか１つの２１位のバリン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、ロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、グルタミン酸、イソロイシン及びリジンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基で置換されている、項目１～７４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７６．配列番号３～９のいずれか１つの３５位のバリン残基が、任意の他の標準又は非標準アミノ酸；例えば、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、システイン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン及びアルギニンからなる群から独立して選択されるアミノ酸残基；好ましくはリジンで置換されている、項目１～７５のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７７．前記アミノ酸置換が保存的アミノ酸置換である、項目１～７６のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７８．配列番号４～９のいずれか１つの前記変異体が、１、２又は３個のアミノ酸置換、例えば１又は２個のアミノ酸置換、例えば１個のアミノ酸置換を含む、項目１～７７のいずれかに記載の液体医薬製剤。
７９．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号４；アネキシンＡ１ ２－５０）及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号５；アネキシンＡ１ ２－４８）
からなる群から選択される、項目１～７８のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８０．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶＡＡ（配列番号７；アネキシンＡ１ ２－５０ Ｖ２４Ｌ）、及び
ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）
からなる群から選択される、項目１～７９のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８１．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｃ末端アミド化されたＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＬＫＳＳＫＧＧＰＧＳＡＶＳＰＹＰＴＦＮＰＳＳＤＶ（配列番号８；アネキシンＡ１ ２－４８ Ｖ２４Ｌ）である、項目１～８０のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８２．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの前記断片及び前記変異体が、アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドの機能性断片及び／又は機能性変異体である、項目１～８１のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８３．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチド、又はその変異体若しくは断片が、
ａ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体に結合する、
ｂ．ＦＰＲ１、ＦＰＲ２及びＦＰＲ３を含む１以上のホルミルペプチド受容体を活性化及び／又は刺激する、
ｃ．ＦＰＲ２と結合及び／又は活性化する、
ｄ．免疫細胞を活性化する、
ｅ．食作用白血球などの白血球を活性化する、
ｆ．好中球及び／又は単球を活性化する、
ｇ．好中球走化性の誘導、好中球補体受容体３（ＣＲ３）の動員、及び好中球ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化などの食細胞白血球のエフェクター機能を活性化する、かつ／又は
ｈ．食細胞白血球の走化性を誘導する、
項目１～８２のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８４．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｎ末端アセチル化される（ＣＯＣＨ３又はＡｃ－）、項目１～８３のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８５．前記アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドが、Ｃ末端アミド化される（－ＮＨ２）、項目１～８４のいずれかに記載の液体医薬製剤。
８６．項目１～８５のいずれかに記載の液体医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．項目１～８５のいずれかに記載の溶媒とアネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを混合する工程；
ｂ．任意選択で、工程ａの混合物を濾過する工程、及び
ｃ．前記液体医薬製剤のｐＨをｐＨ＜６；又は２＜ｐＨ＜３に調整する工程
を含むプロセス。
８７．前記ｐＨが、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２に調整される、項目８４に記載のプロセス。
８８．前記ｐＨが、２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨに調整される、項目８４に記載のプロセス。
８９．凍結乾燥医薬製剤を調製するプロセスであって、
ａ．項目１～８８のいずれかに記載の液体医薬製剤を提供する工程、
ｂ．工程ａの前記液体を凍結乾燥する工程
を含むプロセス。
９０．前記凍結乾燥が、
ａ．本明細書上記で定義した液体医薬製剤の凍結、
ｂ．減圧及び加熱を含む一次乾燥（昇華段階）、及び
ｃ．二次乾燥（脱離段階）
の１以上の工程を含む、項目８７に記載のプロセス。
９１．項目８７～８８のいずれか一項に記載のプロセスによって得られる凍結乾燥医薬製剤。
９２．安定、例えば貯蔵安定である、項目１～９１のいずれかに記載の凍結乾燥医薬製剤。
９３．アネキシンＡ１のＮ末端ペプチドを含む再構成溶液を作製する方法であって、
ａ．項目８７～９０のいずれか一項に記載の凍結乾燥医薬製剤を提供すること、及び
ｂ．前記凍結乾燥医薬製剤を溶媒に溶解すること
を含む方法。
９４．前記溶媒がｐＨ＞６を有し、かつ／又は前記溶液がｐＨ＞６；若しくは２＜ｐＨ＜３を有する、項目９１に記載の方法。
９５．前記溶媒及び／又は前記溶液が、６＞ｐＨ≦６．５、例えば６．５≧ｐＨ≦７、例えば７≧ｐＨ≦７．５、例えば７．５≧ｐＨ≦８、例えば８≧ｐＨ≦８．５、例えば８．５≧ｐＨ≦９、例えば９≧ｐＨ≦９．５、例えば９．５≧ｐＨ≦１０、例えば１０≧ｐＨ≦１０．５、例えば１０．５≧ｐＨ≦１１、例えば１１≧ｐＨ≦１１．５、例えば１１．５≧ｐＨ≦１２；又は２＜ｐＨ＜３、例えばｐＨ≦３．０、例えばｐＨ≦２．５、例えば約２．５のｐＨを有する、項目９２に記載の方法。
９６．前記溶媒が、
ａ．超純水などの水；及び
ｂ．本質的に非イオン性又は低イオン性、及び／又は本質的に等張性の溶液であって、任意選択で炭水化物及び／又は糖アルコールなどの等張性調整剤を含む溶液
からなる群から選択される、項目９１～９３のいずれか一項に記載の方法。
９７．前記溶媒が超純水などの水である、項目９１～９４のいずれか一項に記載の方法。
９８．医薬として使用するための、項目１～９７のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤。
９９．虚血状態及び／又は炎症状態の治療に使用するための、項目１～９８のいずれかに記載の液体医薬製剤又は凍結乾燥医薬製剤。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【手続補正書】
【提出日】2023-02-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】