特表 2023-539524 エンゲージャを含む薬物治療剤の開発及び応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-14

(54)【発明の名称】エンゲージャを含む薬物治療剤の開発及び応用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230907BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230907BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230907BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230907BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230907BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230907BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230907BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230907BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/475 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/473 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20230907BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230907BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/46 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K16/28

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 111

A61K48/00

A61K35/12

A61K47/68

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61K31/337

A61K31/475

A61K38/10

A61K31/407

A61K31/473

A61K31/4745

A61K31/7048

C12P21/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023514106

(86)(22)【出願日】2021-08-26

(85)【翻訳文提出日】2023-02-27

(86)【国際出願番号】 CN2021114847

(87)【国際公開番号】W WO2022042661

(87)【国際公開日】2022-03-03

(31)【優先権主張番号】202010873215.X

(32)【優先日】2020-08-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523069832

【氏名又は名称】北京天諾健成医葯科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＢＥＩＪＩＮＧ ＴＩＡＮＮＵＯＪＩＡＮＣＨＥＮＧ ＰＨＡＲＭＡ ＴＥＣＨ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】王 瑩

(72)【発明者】

【氏名】徐 剛

(72)【発明者】

【氏名】陳 博

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B065AA91X

4B065AA91Y

4B065AA93X

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD14

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA13

4C084BA44

4C084CA04

4C084DA42

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC411

4C084ZC412

4C085AA14

4C085AA25

4C085AA26

4C085AA27

4C085BB36

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG08

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086BC30

4C086CB03

4C086CB09

4C086CB14

4C086CB22

4C086EA11

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC41

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB64

4C087BB65

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC41

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045BA71

4H045BA72

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異的抗体及びその使用に関する。当該二重特異的抗体は、標的細胞表面に結合するＣＤ２０の第１の結合ドメイン、及び、Ｔ細胞表面に結合するＣＤ３の第２の結合ドメインを含む。当該二重特異的抗体は、耐性が良く、低用量の条件でＢ細胞を効果的に除去することができ。治療効果及び安全性が同類の抗体に優れている。
【選択図】図２７

【特許請求の範囲】

【請求項1】

標的細胞表面に結合するＣＤ２０の第１の結合ドメイン及びＴ細胞表面に結合するＣＤ３的第２の結合ドメインを含む二重特異的抗体又はその抗原結合部分であって、前記第１の結合ドメインは、第１の軽鎖及び第１の重鎖を含み、前記第１の結合ドメインは、下記の軽鎖及び重鎖から選ばれるＣＤＲの組み合わせを含む、二重特異的抗体又はその抗原結合部分。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、６８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、７１的第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、６２、６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、７７、７８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ及びＣＤＲ３配列、
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、６２、６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、７７、８５を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【請求項2】

前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４、５９又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、６９、７２、７４、７９、８１、８３又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む、
請求項１に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項3】

前記第２の結合ドメインは、第２の軽鎖及び第２の重鎖を含み，前記第２の結合ドメインは、下記の軽鎖及び重鎖から選ばれるＣＤＲの組み合わせを含む、請求項１または又は２に記載の二重特異的抗体または又はその抗原結合部分。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【請求項4】

前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１０、１２、１６、１８、２２又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４８、５０、５２又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含む、
請求項１～３のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項5】

前記第１の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８、９６、１００、１０２、１１０、１１８又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第１の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、９４、９８、１０４、１１２、１２０又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項6】

前記第２の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２、１０６、１１４又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第２の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０、１０８、１１６又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む、
請求項１～５のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項7】

請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸であって、
好ましくは、前記第１の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５、６０又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、７０、７３、７５、８０、８２、８４又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１１、１３、１７、１９、２３又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４９、５１、５３又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９、９７、１０１、１０３、１１１、１１９又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７、９５、９９、１０５、１１３、１２１又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３、１０７、１１５又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１、１０９、１１７又はそれらの任意の変異体から選ばれる、核酸。

【請求項8】

請求項７に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項9】

請求項７に記載の核酸又は請求項８に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項10】

請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター及び／又は請求項９に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項11】

治療部分に共有結合する請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分を含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、
好ましくは、前記治療部分は、細胞毒性部分、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、免疫刺激剤、分解ペプチド又は放射性同位体から選ばれるものであり、
好ましくは、前記細胞毒性部分は、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン（Ｃｅｐｈａｅｌｉｎｅ）、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、マイタンシン又はその類似体若しくは誘導体などのチューブリン阻害剤、モノメチルアウリスタチンＥ若しくはＦ又はその類似体若しくは誘導体などの有糸分裂阻害剤、ドラスタチン１０若しくは１５又はその類似体、イリノテカン又はその類似体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、カリケアミシン又はその類似体若しくは誘導体、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン又はクラドリビンなどの代謝拮抗剤、メクロレタミン、チオプリン（ｔｈｉｏｐｕｒｉｎｅ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣなどのアルキル化剤、シスプラチン又はカルボプラチン等の白金系誘導体、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）又はその類似体若しくは誘導体、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミスラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリマイシン（ｐｒｉｍｙｃｉｎ）、アントラマイシン（ＡＭＣ）などの抗生物質、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］－ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、ジフテリア毒素及びジフテリアＡ鎖及びその活性フラグメント及びハイブリッド分子などの関連分子、リシンＡ又は脱グリコシル化リシンＡ鎖毒素、コレラ毒素などのリシン、ＳＬＴ Ｉ、ＳＬＴ ＩＩ、ＳＬＴ ＩＩＶなどのシガ様毒素、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、シガ毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ボウマン・バーク大豆プロテアーゼ阻害剤、シュードモナス外毒素、アロリン、サポリン（Ｓａｐｏｒｉｎ）、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓなどのアメリカヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サポナリアコン（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン及びエノマイシン毒素、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンドトキシンＡ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリア毒素、シュードモナスエンドトキシンから選ばれるものであり、
好ましくは、前記サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８ａ、ＩＬ－２８ｂ、ＩＬ－２９、ＫＧＦ、ＩＦＮα、ＩＦＮ３、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ４０Ｌ、Ｆｌｔ３リガンド、幹細胞因子、アンセスチム及びＴＮＦαから選ばれるものであり、
好ましくは、前記放射性同位体は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ及び^２２７Ｔｈから選ばれるものである、抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項12】

請求項１～６のいずれか１項に記載の特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１０に記載の組成物及び／又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む、キット。

【請求項13】

請求項１～６のいずれか１項に記載の特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１０に記載の組成物及び／又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲートの、ＣＤ２０関連疾患を診断、治療又は予防する薬物又はキットの製造における使用であって、
好ましくは、ＣＤ２０関連疾患は、Ｂ細胞疾患、例えば、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患を含み、
好ましくは、前記疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）から選ばれる、使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、二重特異的抗体及びその使用、特にＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異的抗体及びその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＤ２０は、Ｂリンパ球の表面に発現するグリコシル化膜タンパク質であり、前駆Ｂ細胞及び末期の形質細胞を除いて、ヒトＢ細胞は、ほぼ全分化周期中にＣＤ２０抗原を発現する（Ｔｅｄｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３５（２）：９７３－９７９，１９８５）。ＣＤ２０も、Ｂ細胞腫瘍関連抗原であり、９５％以上のＢ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）やその他のＢ細胞悪性腫瘍に発現する（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ６３（６）：１４２４－１４３３，１９８４）。１９９７年では、ＣＤ２０に対するキメラ抗体であるリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）は、承認され、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）と他の薬物との併用治療を受けた患者は、５年生存率が平均６０～７０％に達した。第２世代ＣＤ２０抗体オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（Ｔｅｅｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０４（６）：１７９３－８００，２００４）及び第３世代ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）等は、慢性リンパ性白血病又は多発性硬化症を治療するために開発されている。ＣＤ２０モノクローナル抗体は、多くのＢ－ＮＨＬ患者に治療効果を示すが、１０％以上の患者が依然として原発性・難治性の症例である。また、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）によって治癒された患者のうち、約３０～４０％の患者は、２～３年以内に再発し、既存の治療に耐性を持ち、平均生存期間が６．３ヶ月に過ぎない。そのため、このような患者のニーズに合わせて、新しいメカニズムを持つ治療薬物の開発は、急務となっている。

【0003】

Ｔ細胞二重特異的抗体（又はＴ細胞エンゲージャとも呼ばれる。）は、その一端を介して標的細胞表面抗原（抗原アーム）を認識し、他端を介してＴ細胞ＣＤ３受容体（ＣＤ３アーム）に結合することができる人工的に構築された特殊な抗体分子である。ＣＤ３ε鎖を標的する抗体を利用して、ＴＣＲ／ペプチド／ＨＬＡと類似する方式でＴ細胞上のＣＤ３を凝集させることにより、Ｔ細胞を活性化させ、かつ腫瘍を殺す。２０世紀８０年代、二重特異的抗体を利用して腫瘍細胞を殺傷することが報告され（Ｎａｔｕｒｅ．１９８５ Ａｐｒ １８－２４； ３１４（６０１２）：６２８－３１；Ｎａｔｕｒｅ．１９８５ Ｊｕｌ ２５－３１；３１６（６０２６）：３５４－６）、２００５年、ＣＤ２０×ＣＤ３二重特異的抗体を利用してリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）耐性腫瘍細胞を殺傷することは、Ｇａｌｌなどに報告された（２００５ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ３３：４５２）。類似な報告として、Ｓｔａｎｇｌｍａｉｅｒなどのマウス及びラットのＩｇＧから構築された二重特異的抗体Ｂｉ２０／ＦＢＴＡ０５（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ：１２３，１１８１，２００８）、Ｗｕらが開発した新規なＤＶＤ－Ｉｇ抗体（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：１２９０－１２９７，２００７）、Ｓｕｎらが開発したＣＤ３抗体であるＵＣＨＴ１に基づくＣＤ２０－ＴＤＢ二重特異的抗体（Ｓｃｉｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５；７：２８７ｒａ２７０－２８７ｒａ２７０）、及び、Ｓｍｉｔｈらが開発したＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅマウスに基づくＲＥＧＮ１９７９（Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５；４：ｅ３１）などがある。

【0004】

ＣＤ２０×ＣＤ３二重特異的分子は、Ｂ細胞に発現されたＣＤ２０及びＴ細胞に存在しているＣＤ３ε鎖（ＣＤ３ｅ）を標的するＴ細胞二重特異的（ＴＣＢ）抗体である。ＣＤ２０×ＣＤ３二重特異的分子の作用機序は、同時的にＣＤ２０^＋Ｂ細胞及びＣＤ３^＋Ｔ細胞に結合して、Ｔ細胞の活性化及びＴ細胞に媒介されたＢ細胞の殺傷を引き起こすことを含む。

【0005】

正常な免疫応答過程において、ＴＣＲは、低アフィニティー（約１～１００μＭ）で感染又は突然変異した細胞の外因性ペプチド－ヒト白血球抗原複合体（ＨＬＡ）に結合し、ＣＤ３を介して活性化シグナルを核内に伝達し、転写因子及びその下流タンパク質（サイトカイン、グランザイム、パーフォリン等）の発現を活性化させ、そのうち、ＴＣＲ複合体に産生されたシグナル強度は、Ｔ細胞の運命を決定するものである。シグナル伝達複合体は、ε、γ、δ及びζサブユニットが互いに会合してＣＤ３ε－γヘテロ二量体、ＣＤ３ε－δヘテロ二量体及びＣＤ３ζ－ζ相同二量体を形成する。初期に開発されたＣＤ３二重特異的抗体は、主にＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１及びＴＲ６６などの少数のマウス由来抗体に基づくものであり、アフィニティーが高い。臨床研究では、ＣＤ３抗体のアフィニティーが強すぎると、Ｔ細胞の過剰活性化につながり、多数のサイトカインを放出してサイトカインストーム症候群を形成すると共に、高いアフィニティーが二次リンパ器官における二重特異的抗体の募集し、腫瘍組織への曝露が減少することが見出された。抗体Ｆｃ部分とＦｃγ受容体との結合能力は、薬物の安全に影響を与えるもう１つの要因であり、Ｆｃγ受容体は、多種の正常な組織で発現しているため、二重特異的抗体は、Ｆｃを介して細胞膜のＦｃγ受容体に結合した後、他端に結合したＣＤ３受容体がＦｃγ受容体の凝集によって架橋されて活性化され、重篤なオフターゲット毒性を生じ、例えば、初期に承認されたカツマキソマブ（ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）は、Ｆｃセグメントが肝臓のＫｕｐｆｆｅｒ細胞に発現されるＦｃγ受容体に結合するため、急速なサイトカイン放出を引き起こす。Ｆｃγ受容体への結合能力が弱いヒトＩｇＧ２サブタイプ又はＩｇＧ４サブタイプを使用することにより、或は、さらにＣＨ２の対応サイトにアミノ酸置換を行うことにより、例えば、Ａｒｍｏｕｒらは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４の第２３３～２３６サイト（ＥＵ配列番号）をＩｇＧ２の対応配列に置換することにより、Ｆｃγ受容体への結合（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９）を減少し、Ｎｅｗｍａｎらは、ＩｇＧ４に突然変異Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕを導入することにより、ＩｇＧ４構造を安定させながら、Ｆｃγ受容体への結合を減少し（Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１）、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらは、Ａｓｐ２７０、Ｌｙｓ３２２、Ｐｒｏ３２９又はＰｒｏ３３１をそれぞれＡｌａに置換することにより、ＩｇＧ１と補体Ｃ１ｑとの結合を減少する（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００）。

【発明の概要】

【0006】

従来技術に存在する問題を解決するために、本開示は、全長ＩｇＧ構造を採用し、電荷を導入し、並びにアフィニティーを最適化することにより、κλ二重特異的抗体がＣＤ２０^＋腫瘍組織に優先的に定位され、低濃度で活性化Ｔ細胞を募集し、標的細胞に対して効果的な殺傷を生じ、標的細胞が存在しない場合、Ｔ細胞が活性化されず、また、κλ二重特異的抗体がＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡなどの受容体に結合せず、サイトカインストームのリスクを減らすことができる新規なＣＤ２０－ＣＤ３κλ二重特異的抗体を提供する。薬効試験により、この新規なＣＤ２０－ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、極めて低用量で腫瘍の成長を阻害し、免疫最構成マウス移植腫瘍の成長を効果的に阻害できることが確認された。また、カニクイザル体内での毒性研究では、動物が新規なＣＤ２０－ＣＤ３κλ二重特異的抗体に対して良好な耐性を持ち、低用量条件では、Ｂ細胞が効果的に除去され、新規なＣＤ２０－ＣＤ３κλ二重特異的抗体の有効性及び安全性が同種類の抗体に優れていることを示した。

【0007】

従って、一態様において、本開示は、二重特異的抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0008】

一態様において、本開示は、前記の態様の二重特異的抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸を提供する。

【0009】

一態様において、本開示は、前記の態様の核酸を含むベクターを提供する。

【0010】

一態様において、本開示は、前記の態様の核酸又はベクターを含む細胞を提供する。
前記のいずれかの態様の抗体又はその抗原結合部分によれば、前記抗体又はその抗原結合部分は、ヒト化されたものである。

【0011】

一態様において、本開示は、前記のいずれかの態様の抗体又はその抗原結合部分、或いは、それをコードする核酸、及び薬学的に許容される担体を含む、薬物組成物又はキットを提供する。

【0012】

一態様において、本開示は、治療部分に共有結合する前記のいずれかの態様に記載の抗体又はその抗原結合部分、二重特異的又は多重特異的分子を含む、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。

【0013】

一態様において、本開示は、治療有効量の前記のいずれかの態様の抗体又はその抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、細胞及び／又は薬物組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、ＣＤ２０関連疾患を治療する方法を提供する。

【0014】

一態様において、本開示は、哺乳動物のＣＤ２０関連疾患を治療するための薬物又はキットの製造における、前記のいずれかの態様の抗体又はその抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、細胞及び／又は薬物組成物の使用を提供する。

【発明の効果】

【0015】

本開示に係る抗体は、ＣＤ２０タンパク質の検出、ＣＤ２０関連疾患の診断、治療又は予防を含む、多種の応用に用いられる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】フローサイトメトリーによりヒト及びサルのＣＤ２０安定トランスフェクト細胞を検出しましたところ、ヒトＣＤ２０安定トランスフェクト細胞（ＣＨＯ－ｈＣＤ２０－３Ｇ６）及びサルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞（ＣＨＯ－ｃｙＣＤ２０－１Ｇ９）がいずれも高いレベルのＣＤ２０を発現したことを示す。

【図2】ＣＤ３εγ－Ｆｃ組換えタンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果を示す。

【図3】ヒト化ＣＤ３抗体のＣＤ３εγ－Ｆｃ組換えタンパク質への結合を示す。

【図4】ヒト化ＣＤ３抗体のＪｕｒｋａｔ細胞への結合を示す。

【図5】ヒト化ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞への結合を示す。

【図6】ヒト化ＣＤ２０抗体のＤａｕｄｉ細胞への結合を示す。

【図7】ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組合せのＲａｊｉ細胞への結合を示す。

【図8】ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組合せのＪｕｒｋａｔ細胞への結合を示す。

【図9】異なるＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせによるＲａｊｉ細胞の殺傷活性及びＴ細胞の活性化を示し、そのうち、図９Ａは、異なるＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせに媒介されたＴＤＣＣ殺傷作用を示し、図９Ｂは、ＴＤＣＣ殺傷過程中、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせがＴ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９及びＣＤ２５の向上を刺激できることを示す。

【図10】異なるＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせによるＮＦＡＴ経路の特異的活性化を示す。

【図11】本開示に係るＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体を示す。

【図12】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のキャピラリー電気泳動結果を示す。

【図13】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の精製を示す。

【図14】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の質量分析結果を示す。

【図15】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のＣＤ２０安定トランスフェクト細胞への結合を示す。

【図16】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の高アフィニティーでＣＤ２０^＋腫瘍細胞への結合を示す。

【図17】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のヒト及びカニクイザルＣＤ３εγ組換え抗原への結合を示す。

【図18】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のＪｕｒｋａｔ細胞への結合を示す。

【図19】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のヒト末梢血Ｔ細胞への結合を示す。

【図20】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＮａｌｍ－６細胞への殺傷及びＴ細胞の活性化を示し、そのうち、図２０Ａは、Ｎａｌｍ－６細胞に対する殺傷を示し、図２０Ｂは、Ｔ細胞に対する活性化を示す。

【図21】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴＭＤ－８細胞への殺傷及びＴ細胞の活性化を示し、そのうち、図２１Ａは、ＴＭＤ－８細胞に対する殺傷を示し、図２１Ｂは、Ｔ細胞に対する活性化を示す。

【図22】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴｏｌｅｄｏ細胞への殺傷及びＴ細胞の活性化を示し、そのうち、図２２Ａは、Ｔｏｌｅｄｏ細胞に対する殺傷を示し、図２２Ｂは、Ｔ細胞に対する活性化を示す。

【図23】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴ細胞シグナル経路の活性化を示す。

【図24-26】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるサイトカイン放出の活性化を示し、そのうち、図２４は、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＲａｊｉ細胞のＴＤＣＣ活性化及びその過程中のＴ細胞の活性化を示し、図２５は、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体による自己Ｂ細胞の除去及びその過程中のＴ細胞の活性化を示し、図２６は、Ｒａｊｉ細胞に対する殺傷及び自己Ｂ細胞の除去過程中の関連サイトカインの放出を示す。

【図27】免疫不全マウスにＲａｊｉを皮下移植した腫瘍モデルに対する、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の抑制効果を示す。

【図28-29】免疫不全マウスにヒトＰＢＭＣ及びＲａｊｉを混合し、皮下接種した腫瘍モデルに対する、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の抑制効果を示し、そのうち、図２９は、低用量群の治療效果の比較を示す。

【図30】ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体を投与した後、カニクイザルＢ細胞が急速に除去されることを示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

Ｉ．定義
本発明では、特に断らない限り、本明細書で使用される科学的及び技術的用語は、当業者に一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用されるタンパク質及び核酸化学、分子生物学、細胞及び組織培養、微生物学、免疫学に関連する用語及び試験室の操作手順は、対応する分野で広く使用される用語及び日常手順である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義及び説明を以下に示す。

【0018】

ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及び、ＬＦ５とも称され、ヒトタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６から得られる）は、前Ｂリンパ球及び成熟Ｂリンパ球に発現される約３５ｋＤ分子量の疎水性膜貫通タンパク質である（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９８９） １１２８２－１１２８７；Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５（１９８８）２０８－２１２；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７（１９８８）１９７５－１９８０；Ｅｉｎｆｅｌｄ，Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．７（１９８８）７１１－７１７；Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２（１９８９）２５６０－２５６８）。対応するヒト遺伝子は、膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１であり、ＭＳ４Ａ１とも呼ばれている。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーの１つをコードする。この一次タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似イントロン／エクソンスプライシング境界を特徴とし、かつ造血細胞及び非リンパ組織で独特の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の形質細胞への発生と分化に機能するＢリンパ球表面分子をコードする。ファミリーメンバーのクラスターでは、このファミリーメンバーは、１１ｑ１２に位置している。この遺伝子の可変スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写産物変異体を生成する。

【0019】

本明細書で使用されている「ＣＤ２０」という用語は、特に明記されていない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物に由来する天然ＣＤ２０を指す。この用語は、「全長」で未加工のＣＤ２０及び細胞内で処理された任意の形態のＣＤ２０に由来するものをカバーする。この用語は、さらに、スプライシング変異体又は対立変異体などのＣＤ２０の自然発生変異体をカバーする。一実施形態では、ＣＤ２０は、ヒトＣＤ２０である。例示的なヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１で示される。

【0020】

「抗ＣＤ２０抗体」及び「ＣＤ２０に結合する抗体」という用語は、十分なアフィニティーでＣＤ２０に結合して当該抗体が診断剤及び／又は治療剤としてＣＤ２０を標的することに有用な抗体を指す。一実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された無関係な非ＣＤ２０タンパク質に対する抗ＣＤ２０抗体の結合度が、ＣＤ２０に対する当該抗体の結合度の約１０％未満である。いくつの実施形態では、ＣＤ２０に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は、≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ又は１０^－８Ｍ未満、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、異なる種由来ＣＤ２０の間における保存的なＣＤ２０エピトープに結合する。

【0021】

「ＣＤ３」とは、特に明記されていない限り、霊長動物（例えば、ヒト）、非ヒト霊長動物（例えば、カニクイザル）及びげっ歯動物（例えば、マウス及びラット）のような哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の天然ＣＤ３を指す。この用語は、「全長」で未加工のＣＤ３、及び細胞内で処理された任意の形態のＣＤ３に由来するものをカバーする。この用語は、さらにスプライシング変異体又は対立変異体などのＣＤ３の自然発生変異体をカバーする。一実施形態では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３であり、特にヒトＣＤ３のεサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）登録番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、又はＮＣＢＩ （ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／） ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示される。カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ．ＢＡＢ７１８４９．１に示される。

【0022】

「細胞表面」という用語は、当分野におけるその通常の意味に従い、使用されるから、タンパク質や他の分子への結合によってアクセス可能な細胞外部を含む。
本明細書で使用されている「約」又は「およそ」という用語は、特に明記されていない限り、特定の値又は範囲±１０％以内である。整数であると要求されている場合、当該用語は、特定の値又は範囲±１０％以内で最も近い整数に繰り上げ又は繰り下げてなるものである。

【0023】

抗体鎖ポリペプチド配列に関して、「実質的に同一」という用語は、リファレンスポリペプチド配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はそれ以上の配列同一性を示す抗体鎖であると理解される。核酸配列に関して、前記用語は、リファレンス核酸配列に対して少なくとも６０％を超え、少なくとも６５％を超え、少なくとも７０％を超え、少なくとも７５％を超え、少なくとも８０％を超え、少なくとも８５％を超え、少なくとも９０％を超え、少なくとも９５％を超え、少なくとも９６％を超え、少なくとも９７％を超え、少なくとも９８％を超え、少なくとも９９％を超え、又はそれ以上の配列同一性を示すヌクレオチド配列であると理解される。

【0024】

配列の「相同性」又は「同一性」は、本分野で周知されている意味を有し、従来技術を使用して２つの核酸又はポリペプチド分子又は領域間の配列同一性の百分率を計算することができる。ポリヌクレオチド又はポリペプチドの全長に沿って、又は当該分子の領域に沿って配列同一性を測定することができる。２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド間の同一性を測定する方法は、多く存在するが、「同一性」という用語は、当業者に周知られているものである（Ｃａｒｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３ （１９８８））。

【0025】

「置換型」変異体は、ネイティブ配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、かつ異なるアミノ酸が同位置に挿入された変異体である。前記置換は、分子内で１つのアミノ酸のみが置換されている単一の置換、又は同じ分子に２つ以上のアミノ酸が置換されている複数の置換であり得る。複数の置換は、連続するサイトでの置換であり得る。同様に、１つのアミノ酸は、複数の残基に置換され得、そのような変異体は、置換及び挿入の両方を含む。「挿入型」変異体は、１つ又は複数のアミノ酸がネイティブ配列の特定の位置にあるアミノ酸に直接隣接するように挿入されているアミノ酸の変異体である。アミノ酸に直接隣接することは、当該アミノ酸のα－カルボキシル又はα－アミノ官能基に結合していることを意味する。「欠失型」変異体は、天然アミノ酸配列中の１つ又は複数のアミノ酸が除去された変異体である。通常、欠失型変異体は、分子の特定の領域に１つ又は２つのアミノ酸が欠失しているものである。

【0026】

抗体の可変ドメインに関して、「可変」という用語は、抗体の間に配列が大きく異なり、特定の標的に対する特定の抗体の特異的認識及び結合に使用される、関連する分子の特定の部分を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一的に分布していない。可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲｓ、即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中しており、すべて軽鎖及び重鎖の可変ドメイン内にある。可変ドメイン内でより高い程度に保存される部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域又はフレームワークシーケンスと呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の各可変ドメインには、いずれも主にβシート構造を採用する４つのＦＲ領域が含まれ、これらは、３つのＣＤＲｓを介して連結され、ＣＤＲｓらは、ループを形成し、前記ループは、βシート構造を連結し、ある場合、βシート構造の一部を形成する。各鎖のＣＤＲｓは、通常、ＦＲ領域によって隣接して連結されており、他の鎖からのＣＤＲにより、抗体の標的結合部位（エピトープ又は決定基）の形成に寄与する。本明細書で使用されるように、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に明記しない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基番号付けシステムに従う。１つのＣＤＲは、関連するエピトープに特異的に結合する能力を有し得る。

【0027】

本明細書で使用される抗体の「抗体フラグメント」又は「抗原結合フラグメント」とは、全長未満であるが、抗原に結合する前記抗体の可変領域（例えば、１つ又は複数のＣＤＲ及び／又は１つ又は複数の抗体結合サイト）の少なくとも一部を含むことによって結合特異性及び前記全長抗体の特異的結合能力の少なくとも一部が保持されている全長抗体の任意の部分を指す。従って、抗原結合フラグメントとは、抗体フラグメントを誘導する抗体と同じ抗原に結合する抗原結合部分を含む抗体フラグメントを指す。抗体フラグメントは、全長抗体の酵素触媒処理によって産生された抗体誘導体、並びに合成によって産生された誘導体、例えば、組換えて産生された誘導体を含む。抗体は、抗体フラグメントを含む。抗体フラグメントの実例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、ＦｄとＦｄ’フラグメント、及び、修飾フラグメントを含む他のフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。前記フラグメントは、例えば、ジスルフィド結合及び／又はペプチドリンカーによって連結された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントは、通常、少なくとも５０個のアミノ酸又は約５０個のアミノ酸を含み、典型的には少なくとも２００個のアミノ酸又は約２００個のアミノ酸を含む。抗原結合フラグメントは、抗体フレームワークに（例えば、対応する領域を置換することによって）挿入されるときに免疫特異的に（即ち、少なくとも１０^７～１０^８Ｍ^－１のＫａ又は少なくとも約１０^７～１０^８Ｍ^－１のＫａを示す）抗原に結合する抗体をもたらす、任意の抗体フラグメントを含む。「機能的フラグメント」又は「抗ＣＤ２０抗体の類似体」は、受容体がリガンドに結合する能力又はシグナル伝達を開始する能力を防止又は実質的に低下させるフラグメント又は類似体である。本明細書で使用される場合、機能的フラグメントは、通常、「抗体フラグメント」と同じ意味を有し、抗体である場合、受容体のリガンドに結合する能力又はシグナル伝達を開始する能力を防止又は実質的に低下させるフラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２などを指し得る。「Ｆｖ」フラグメントは、１つの重鎖の可変ドメインと１つの軽鎖の可変ドメインとの非共有結合によって形成された二量体（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体）からなる。この構造では、インタクトな抗体の場合と同様に、各可変ドメインの３つのＣＤＲｓが相互作用してＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体の表面における標的結合部位を決定する。前記の６つのＣＤＲｓは、相乗的にインタクトな抗体の標的結合特異性を付与する。ただし、単一の可変ドメイン（又は３つの標的特異的なＣＤＲｓのみを含むＦｖの半分）でも、標的を認識・結合する機能を持つことができる。

【0028】

本明細書で使用される「二重特異性」（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＢｓＡｂ）という用語は、抗体及び／又は抗原結合分子が２つの異なる抗原決定基に特異的に結合することができることを指し、通常、二重特異性の抗体及び／又は抗原結合分子は、それぞれが異なる抗原決定基に特異的に結合できる２つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態において、前記二重特異性抗体及び／又は抗原結合分子は、２つの抗原決定基、特に２つの異なる細胞に発現される２つの抗原決定基に同時に結合することができる。

【0029】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」とは、同一の抗体の集団を指し、モノクローナル抗体集団における個々の抗体分子が他の抗体分子と同一であることを意味する。この特性は、さまざまな異なる配列を持つ抗体を含む抗体のポリクローナル群の特性とは逆である。モノクローナル抗体は、多くのよく知られた方法で調製することができる（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．５７，９１２－９１７、及び、Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ（２０００），５３，１１１－１１７）。例えば、モノクローナル抗体は、Ｂ細胞を不死化することによって調製でき、例えば、骨髄腫細胞に融合してハイブリドーマ細胞株を産生することによって、又はＢ細胞をＥＢＶなどのウイルスに感染させることによって調製することができる。組換え技術は、また、抗体をコードするヌクレオチドの人工配列を保有するプラスミドで宿主細胞を形質転換することにより、インビトロで宿主細胞のクローン集団から抗体を調製することに用いられる。

【0030】

本明細書で使用される「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」という用語は、抗体産生リンパ球と非抗体産生がん細胞との融合によって産生される細胞又は細胞株（通常、骨髄腫又はリンパ腫細胞）を指す。当業者に知られているように、ハイブリドーマは増殖し、かつ継続的に供給して特定のモノクローナル抗体を産生することができる。ハイブリドーマを生成する方法は、当分野で知られている。「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」という用語が言及される場合、ハイブリドーマのサブクローン及び後代細胞も含む。

【0031】

本明細書で使用される場合、全長抗体は、２つの全長重鎖（例えば、ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３又はＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４）及び２つの全長軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）及びヒンジ領域を有する抗体であり、例えば、抗体を分泌するＢ細胞によって天然に産生される抗体、合成的に産生される同じドメインを有する抗体などがある。

【0032】

「キメラ抗体」という用語は、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体のような、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体を指す。

【0033】

「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２又は抗体の他の抗原に結合するサブシーケンス）である非ヒト（例えば、マウス）の抗体を指す。好ましくは、ヒト化抗体が、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、前記レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、マウス、ラット又はウサギなどの所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）に由来するＣＤＲ残基で置換されたヒト免疫グロブリンである。

【0034】

さらに、ヒト化において、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を突然変異させることも可能であり、これにより、抗体の１つ又は複数の結合特性（例えば、親和性）を改善する。例えば、ＰＣＲを介した突然変異により突然変異を導入することができ、抗体結合又は他の機能的特性に対する影響は、本明細書に記載のインビトロ又はインビボアッセイで評価することができる。通常、保存的突然変異を導入する。このような突然変異は、アミノ酸の置換、追加、又は欠失であってもよい。また、ＣＤＲ内の突然変異は、通常、１つ又は２つ以下である。従って、本発明に記載のヒト化抗体は、ＣＤＲ内に１つ又は２つのアミノ酸の突然変異を含む、抗体をさらに含む。

【0035】

本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）を指し、抗体分子の各重鎖及び軽鎖は、３つのＣＤＲを有することが知られている。ＣＤＲは、超可変領域とも呼ばれ、抗体の各重鎖及び軽鎖の可変領域に存在し、ＣＤＲの一次構造に変動性の極めて高い部位がある。本明細書では、重鎖のＣＤＲは、重鎖に由来するアミノ末端配列のアミノ末端のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３で表され、軽鎖のＣＤＲは、軽鎖に由来するアミノ末端配列のアミノ末端のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３で表される。これらの部位は三次構造で互いに隣接しており、抗体が結合する抗原の特異性を決定する。

【0036】

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体のパラトープが結合する抗原の任意の抗原決定基を指す。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸や糖側鎖などの化学的に活性な分子の表面タイピングを含み、通常、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

【0037】

本明細書で使用される抗体又はその抗原結合フラグメントに関する「特異的に結合する」又は「免疫特異的に結合する」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、抗体と抗原の抗体結合サイトとの間の非共有相互作用を介して同種抗原と１つ又は複数の非共有結合を形成する抗体又は抗原結合フラグメントの能力を指す。前記抗原は、分離された抗原であってもよく、腫瘍細胞に存在してもよい。一般的に、抗原に免疫特異的結合（又は特異的結合）する抗体は、約１×１０^７Ｍ^－１又は約１×１０^８Ｍ^－１又はそれより大きな親和定数Ｋａ（１×１０^－７又は１×１０^－８Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ））で前記抗原に結合する。親和定数は、抗体反応の標準的な動力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍｙｓｚｋａ（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：５４、Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ（１９９８）Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９）、等温滴定熱測定（ＩＴＣ）又は本分野で知られている他の動的相互作用により測定することができる。また、抗体の結合アフィニティーを計算することに用いる示例的なＳＰＲ及びＩＴＣ方法が記載されている米国特許第７，２２９，６１９号が参照されたい。結合速度をリアルタイムに検出し、モニタリングするための装置及び方法は、既知であり、かつ市販から購入可能である（ＢｉａＣｏｒｅ ２０００、Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２７：３３５が参照されたい）。

【0038】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」及び「核酸分子」という用語は、少なくとも２つの連結されているヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体を含むオリゴマー又はポリマーを指し、通常、ホスホジエステル結合で結合しているデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含む。本明細書で使用される「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であってもよく、そしてｃＤＮＡであってもよい。
本明細書で使用される単離された核酸分子は、核酸分子の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離された核酸分子である。例えば、ｃＤＮＡ分子の「単離された」核酸分子は、組換え技術によって調製される場合、他の細胞材又は培地を実質的に含まず、又は、化学的に合成される場合、化学前駆体又は他の化学成分を実質的に含まない。本明細書で提供される例示的な単離された核酸分子は、提供される抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸分子を含む。

【0039】

本明細書で使用される、核酸配列、領域、エレメント又はドメインの「作動可能に連結されている」について、核酸領域が互いに機能的に関連していることを意味する。例えば、プロモーターは、核酸の転写を調整又は媒介できるように、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結され得る。

【0040】

本明細書に記載の配列表に記載されている配列の「保存的配列修飾」、即ち、ヌクレオチド配列にコードされ、又は、アミノ酸配列を含む、抗体の抗原に結合するヌクレオチド及びアミノ酸配列を影響しない修飾を提供する。これら保存的配列修飾は、保存的ヌクレオチド及びアミノ酸の置換、並びに、ヌクレオチド及びアミノ酸の付加及び欠失を含む。例えば、修飾は、当技術分野で知られている標準的な技術（例えば、部位特異的変異誘発及びＰＣＲによる変異誘発などの）で、本明細書に記載の配列リストに導入することができる。保存的配列修飾は、アミノ酸残基が類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、保存的アミノ酸置換を含む。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野で定義されているものである。これらファミリーとして、塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を持つアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を持つアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を持つアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β－分岐側鎖を持つアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を持つアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。従って、抗ＣＤ２０抗体の予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。抗原に結合するヌクレオチド及びアミノ酸を影響しない保存的置換を同定するための方法は、当技術分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１１８７（１９９３）； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）； Ｂｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４： ４１２－４１７（１９９７）が参照されたい）。

【0041】

別の実施形態において、別の選択肢として、例えば、飽和変異誘発により、抗ＣＤ２０抗体をコードする配列の全部又は一部に沿ってランダムに突然変異を導入することができ、得られた修飾抗ＣＤ２０抗体を、改善された結合活性についてスクリーニングすることができる。

【0042】

本明細書で使用される「発現」は、ポリヌクレオチドの転写及び翻訳により、ポリペプチドを生成するプロセスを指す。ポリペプチドの発現レベルは、例えば、宿主細胞から産生されるポリペプチドの量を決定する方法を含む、当技術分野で知られている任意の方法を使用して評価することができる。このような方法として、ＥＬＩＳＡによる細胞溶解物中のポリペプチドの定量、ゲル電気泳動後のクーマシーブルー染色、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ、及び、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを含むが、これらに限定されない。

【0043】

本明細書で使用される「宿主細胞」は、ベクターを受け取り、維持し、複製し、そして増幅するために使用される細胞である。宿主細胞は、さらに、ベクターにコードされるポリペプチドを発現させることもできる。宿主細胞が分裂すると、ベクターに含まれる核酸が複製され、これにより、核酸が増幅する。宿主細胞は、真核細胞又は原核細胞であっても良い。適切な宿主細胞として、ＣＨＯ細胞、様々なＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞などのＨＥＫ細胞を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ベクター」は、適切な宿主細胞に形質転換されると１つ又は複数の異種タンパク質を発現させることができる、複製可能な核酸である。ベクターについて、通常、制限酵素消化及びライゲーションによりポリペプチド又はそのフラグメントをコードする核酸を導入することができるものを含む。ベクターについて、ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターも含む。ベクターは、ポリペプチドをコードする核酸を宿主細胞に導入し、核酸を増幅し、又は、核酸にコードされるポリペプチドを発現／表示するために用いられる。ベクターは、通常、遊離のままであるが、遺伝子又はその一部がゲノムに組み込まれている染色体に設計してもよい。また、酵母人工ベクター及び哺乳動物人工染色体などの人工染色体のベクターも考えられる。このようのビヒクルの選択及び使用は、当業者に周知されている。

【0044】

本明細書で使用されるベクターは、また、「ウイルスであるベクター」又は「ウイルスのベクター」を含む。ウイルスのベクターは、外来遺伝子を（ビヒクル又はシャトル（ｓｈｕｔｔｌｅ）としての）細胞に移すために、外来遺伝子に作動可能に連結されている、遺伝子操作されたウイルスである。

【0045】

本明細書で使用される「発現ベクター」は、例えば、プロモーター領域の、ＤＮＡフラグメントの発現に影響を与えることができる調節配列に作動可能に連結されているＤＮＡを発現することができるベクターを含む。このような追加のフラグメントとして、プロモーター配列及びターミネーター配列、かつ、任意に１つ又は複数の複製起点、１つ又は複数の選択マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルなどを含んでもよい。発現ベクターは、通常、プラスミド若しくはウイルスＤＮＡに由来するか、又は、その両方のエレメントを含んでもよい。従って、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入されると、ＤＮＡをクローニングする発現をもたらす、プラスミド、ファージ、組換えウイルス、又は他のベクターなどの組換えＤＮＡ又はＲＮＡ構築物を指す。適切な発現ベクターは、当業者によく知られており、真核細胞及び／又は原核細胞において複製できる発現ベクター、並びに、遊離のままであるか、又は、宿主細胞ゲノムに組み込まれる発現ベクターを含む。
本明細書で使用される疾患又は疾患の症状を有する個体を「治療する」とは、前記個体の症状が部分的又は完全に寛解されるか、又は治療後変わりのないままであることを意味する。従って、治療は、予防、治療、及び／又は治癒を含む。予防とは、潜在的な疾患を防止すること、及び／又は、症状の悪化又は疾患の発症を防止することを指す。治療は、提供される抗体又はその抗原結合フラグメント及び本明細書で提供される組成物のいずれかの医薬的使用を含む。

【0046】

本明細書で使用される「治療効果」は、個人に対する治療により、疾患又は疾患の症状を変化させ、一般に改良又は改善し、又は疾患又は疾患の症状を治癒するという効果を指す。

【0047】

本明細書で使用される「治療に有効な量」又は「治療に有効な用量」は、被験者に投与した後に少なくとも治療効果を生じるのに十分な物質、化合物、材料、又は化合物を含む組成物の量を指す。従って、それは、疾患又は疾患の症状を予防、治癒、改善、遅延、又は部分的に遅延させるために必要な量である。

【0048】

本明細書で使用される「予防に有効な量」又は「予防に有効な用量」とは、対象に投与されたと、例えば、疾患や症状の発生や再発を予防又は遅延させ、疾患や症状の発生や再発の可能性を減らすという所望の予防効果を有する物質、化合物、材料、又は化合物を含む組成物の量を指す。完全に予防に有効な用量は、単一の使用量を投与することで発生する必要はなく、一連の使用量を投与した後にのみ発生する可能性がある。従って、予防に有効な量は、１回又は複数回の投与により投与することができる。

【0049】

本明細書で使用される「患者」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を指す。

【0050】

ＩＩ．発明を実施するための形態

【0051】

一態様において、本開示は、標的細胞表面のＣＤ２０に結合する第１の結合ドメイン、及び、Ｔ細胞表面のＣＤ３に結合する第２の結合ドメインを含む二重特異的抗体又はその抗原結合部分であって，前記第１の結合ドメインが第１の軽鎖及び第１の重鎖を含み、前記第１の軽鎖がアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、６１、６２、６３又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖ＣＤＲを含み、及び／又は、前記第１の重鎖がアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、６８、７１、７６、７７、７８、８５又は任意の変異体から選ばれる重鎖ＣＤＲを含む、二重特異的抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0052】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第１の結合ドメインの第１の軽鎖は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、６１又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、６２又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、６３又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖ＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記第１の結合ドメインの第１の重鎖は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、７６又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、７７又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、７１、７８、８５又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖ＣＤＲ３を含む。

【0053】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第１の結合ドメインは、下記から選ばれる軽鎖及び重鎖のＣＤＲ組み合わせを含む。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６－５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６－６８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６－５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、７１を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１－６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６－７８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１－６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、７７、８５を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【0054】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４、５９又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、６９、７２、７４、７９、８１、８３又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含む。

【0055】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0056】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域とを含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0058】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0059】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0060】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0061】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む。

【0062】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１４又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１５、２０又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、２１又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の軽鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、３１、４６又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、４７又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８、３４、３７、４０、４３又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖ＣＤＲ３を含む。

【0063】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、第２の軽鎖及び第２の重鎖を含み、前記第２の結合ドメインは、下記から選ばれる軽鎖及び重鎖のＣＤＲ組み合わせを含む。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【0064】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１０、１２、１６、１８、２２又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４８、５０、５２又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含む。

【0065】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含む。

【0066】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖可変領域を含む。

【0067】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖可変領域を含む。

【0068】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖可変領域を含む。

【0069】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４又はそれらの任意の変異体から選ばれる第２の重鎖可変領域を含む。

【0070】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含む。

【0071】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含む。

【0072】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第１の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８、９６、１００、１０２、１１０、１１８又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第１の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、９４、９８、１０４、１１２、１２０又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含む。

【0073】

前述態様に係る抗体又はその抗原結合部分によれば、前記第２の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２、１０６、１１４又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第２の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０、１０８、１１６又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含む。

【0074】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0075】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0076】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0077】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0078】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0079】

いくつかの実施形態において、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖を含む。

【0080】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0081】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0082】

いくつかの実施形態において、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0083】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0084】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0085】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0086】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0087】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0088】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0089】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0090】

いくつかの実施形態において、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む。

【0091】

ＣＤ２０に結合する抗体又はその抗原結合部分は、前述したいずれかの態様の抗体又はその抗原結合部分と少なくとも６０％超え、６５％超え、７０％超え、７５％超え、８０％超え、８５％超え、９０％超え、９５％超え、９６％超え、９７％超え、９８％超え、９９％超え、又は、それより高い配列同一性を有する。

【0092】

前述したいずれかの態様の抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸、又はそれと少なくとも６０％超え、６５％超え、７０％超え、７５％超え、８０％超え、８５％超え、９０％超え、９５％超え、９６％超え、９７％超え、９８％超え、９９％超え、又は、それより高い配列同一性を有する核酸分子である。

【0093】

いくつかの実施形態において、前記第１の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５、６０又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0094】

いくつかの実施形態において、前記第１の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、７０、７３、７５、８０、８２、８４又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0095】

いくつかの実施形態において、前記第２の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１１、１３、１７、１９、２３又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0096】

いくつかの実施形態において、前記第２の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４９、５１、５３又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0097】

いくつかの実施形態において、前記第１の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９、９７、１０１、１０３、１１１、１１９又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0098】

いくつかの実施形態において、前記第１の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７、９５、９９、１０５、１１３、１２１又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0099】

いくつかの実施形態において、前記第２の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３、１０７、１１５又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0100】

いくつかの実施形態において、前記第２の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１、１０９、１１７又はそれらの任意の変異体から選ばれる核酸配列である。

【0101】

前記核酸を含むベクターを提供する。

【0102】

前記核酸又はベクターを含む細胞を提供する。

【0103】

前記二重特異的抗体又はその抗原結合部分、核酸、ベクター及び／又は細胞を含む組成物を提供する。

【0104】

治療部分に共有結合する前記二重特異的抗体又はその抗原結合部分を含む抗体－薬物コンジュゲートを提供する。

【0105】

好ましくは、前記治療部分は、細胞毒性部分、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、免疫刺激剤、分解ペプチド又は放射性同位体から選ばれるものである。

【0106】

本開示に係る抗体は、ＣＤ２０が不利に発現又は表現された様々な疾患の治療又は診断ツールとして有用である。

【0107】

ＣＤ２０関連疾患の一実施形態において、ＣＤ２０は、疾患組織や臓器の細胞における発現が、健康な組織や臓器中の状態に比べて増加する。増加とは、少なくとも１０％、特に少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１００００％又はそれより多く増加する。一実施形態において、発現は、疾患組織のみに見つかれ、対応する健康な組織中の発現は、抑制される。本開示によれば、ＣＤ２０関連疾患は、例えば、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患などのＢ細胞疾患を含む。

【0108】

「Ｂ細胞増殖性疾患」とは、患者のＢ細胞の数が健康被験者のＢ細胞の数に比べて増加している疾患、特にＢ細胞数の増加が疾患の原因又は徴候である疾患を意味する。「ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性疾患」は、Ｂ細胞、特に悪性Ｂ細胞（正常Ｂ細胞以外）がＣＤ２０を発現するＢ細胞増殖性疾患を意味する。
示例的なＢ細胞増殖性疾患として、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、及び、いくつかのタイプの多発性骨髄腫（ＭＭ）とホジキンリンパ腫（ＨＬ）を含む。

【0109】

本開示に係る方法は、複数種の疾患の治療に応用・使用される治療剤に決まれる。しかしながら、当該方法は、Ｂ細胞増殖性疾患の治療、特に（ＣＤ２０陽性）Ｂ細胞が大量（即ち、罹患疾患の被験者は、健康被験者に比べて，Ｂ細胞の存在数が増加する）に存在するＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患の治療に特に有効である。このように、一実施形態において、疾患は、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患である。

【0110】

いくつかの実施形態において、当該治療剤は、がんの治療に用いると明示される抗体を含む。一実施形態において、当該治療剤は、がんの治療に用いると明示される。一実施形態において、当該がんは、Ｂ細胞増殖性疾患である。一実施形態において、当該がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性疾患である。一実施形態において、当該がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及び、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選ばれる。一実施形態において、当該治療剤は、免疫治療剤である。

【0111】

いくつかの実施形態において、当該治療剤は、活性化されたＴ細胞抗原に特異的に結合する抗体を含む。

【0112】

一実施形態において、当該治療剤は、ＣＤ３、特にＣＤ３εに特異的に結合する抗体を含む。

【0113】

一つの特定の実施形態において、疾患は、ＮＨＬ、特に再発性／難治性（ｒ／ｒ）ＮＨＬである。一実施形態において、疾患は、ＤＬＢＣＬである。一実施形態において、疾患は、ＦＬである。一実施形態において、疾患は、ＭＣＬである。一実施形態において、疾患は、ＭＺＬである。

【0114】

本開示に係るＣＤ２０抗体で疾患や症状を治療する方法は、前記哺乳動物に治療に有効な量の前記のいずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合フラグメント、又は核酸分子、又はベクター、又は細胞、又は薬物組成物を投与するステップを含む
いくつかの実施形態において、本開示は、患者に少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供できるようにＣＤ２０に結合できる抗体を投与することを含む、がん疾患の治療又は予防方法を提供する。異なる実施形態において、前記抗体の投与により、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも４００μｇ／ｍｌ、或は、少なくとも５００μｇ／ｍｌの血清レベルを提供する。異なる実施形態において、前記抗体の投与により、８００μｇ／ｍｌ以下、７００μｇ／ｍｌ以下、６００μｇ／ｍｌ以下、５５０μｇ／ｍｌ以下、或は、５００μｇ／ｍｌ以下の血清レベルを提供する。一実施形態において、提供される血清レベルは、４０μｇ／ｍｌ～７００μｇ／ｍｌであり、好ましくは４０μｇ／ｍｌ～６００μｇ／ｍｌであり、好ましくは５０μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌであり、例えば、１５０μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌ又は３００μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌである。本明細書に用いられる「血清レベル」という用語は、血清における検討されている物質の濃度を意味する。一実施形態において、少なくとも７日又は少なくとも１４日の前記血清レベルを提供する。一実施形態において、前記方法は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ^２、例えば、少なくとも６００ｍｇ／ｍ^２、かつ好ましくは１５００ｍｇ／ｍ^２以下、１２００ｍｇ／ｍ^２以下、又は１０００ｍｇ／ｍ^２以下の用量の抗体を投与することを含む。

【0115】

いくつかの実施形態において、本開示は、患者にＣＤ２０に結合できる抗体を、少なくとも３００ｍｇ／ｍ^２、例えば、少なくとも６００ｍｇ／ｍ^２、かつ好ましくは１５００ｍｇ／ｍ^２以下、１２００ｍｇ／ｍ^２以下、又は１０００ｍｇ／ｍ^２以下の用量で投与することを含む、がん疾患を治療又は予防する方法を提供する。

【0116】

いくつかの実施形態において、本開示は、患者にＣＤ２０に結合できる抗体を投与することを含む、がん疾患を治療又は予防する方法を提供し、そのうち、前記患者は、少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％又は９０％のがん細胞がＣＤ２０陽性であり、及び／又は、前記患者は、少なくとも４０％、好ましくは５０％又は６０％のがん細胞がＣＤ２０の表面発現陽性である。これについて、本開示は、さらに、ａ．少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％又は９０％のＣＤ２０陽性がん細胞、及び／又は、少なくとも４０％、好ましくは５０％又は６０％のがん細胞を示す患者を鑑定するステップであって、前記がん細胞がＣＤ２０の表面発現陽性であるステップ、及び、ｂ．前記患者にＣＤ２０に結合できる抗体を投与するステップ、を含むがん疾患を治療又は予防する方法を提供する。一実施形態において、前記患者は、少なくとも９５％又は少なくとも９８％のがん細胞がＣＤ２０陽性である。一実施形態において、前記患者は、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％のがん細胞がＣＤ２０の表面発現陽性である。

【0117】

本明細書に記載のいずれかの態様に係る方法の一実施形態において、がん疾患の治療結果は、病状の安定化を実現することである。一実施形態において、病状の安定化として、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、或は、少なくとも６ヶ月を実現する。

【0118】

いくつかの実施形態において、本開示は、患者にＣＤ２０に結合できる抗体を投与することを含む、がん患者の病状の安定化を実現する方法を提供する。一実施形態において、病状の安定化として、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、或は、少なくとも６ヶ月を実現する。

【0119】

本明細書に記載のいずれかの態様の方法の一実施形態において、単一な用量又は複数の用量で抗体を投与する。

【0120】

いくつかの実施形態において、本開示は、患者にＣＤ２０に結合できる抗体を複数の用量で投与することを含む、がん疾患を治療又は予防する方法を提供する。

【0121】

本開示によれば、複数の用量で前記抗体を投与する場合、好ましくは、少なくとも３回の用量、少なくとも４回の用量、少なくとも５回の用量、少なくとも６回の用量、少なくとも７回の用量、少なくとも８回の用量、少なくとも９回の用量、又は、少なくとも１０回の用量、かつ好ましくは３０回以下の用量、２５回以下の用量、２０回以下の用量、１５回以下の用量、又は、１０回以下の用量で前記抗体を投与する。好ましくは、少なくとも７日、少なくとも１０日、少なくとも１４日、又は、少なくとも２０日の時間間隔で前記抗体の用量を投与する。好ましくは、７～３０日、１０～２０日、且つ好ましくは約１４日の時間間隔で前記抗体の用量を投与する。
一実施形態において、少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように前記抗体を投与する。異なる実施形態において、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも４００μｇ／ｍｌ、又は、少なくとも５００μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように前記抗体を投与する。異なる実施形態において、８００μｇ／ｍｌ以下、７００μｇ／ｍｌ以下、６００μｇ／ｍｌ以下、５５０μｇ／ｍｌ以下、又は、５００μｇ／ｍｌ以下の血清レベルを提供するように前記抗体を投与する。一実施形態において、提供される血清レベルは、４０μｇ／ｍｌ～７００μｇ／ｍｌであり、好ましくは４０μｇ／ｍｌ～６００μｇ／ｍｌであり、好ましくは５０μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌ、例えば、１５０μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌ、又は、３００μｇ／ｍｌ～５００μｇ／ｍｌである。一実施形態において、前記血清レベルを少なくとも７日、又は、少なくとも１４日提供する。一実施形態において、前記方法は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ^２、例えば、少なくとも６００ｍｇ／ｍ^２、かつ好ましくは１５００ｍｇ／ｍ^２以下、１２００ｍｇ／ｍ^２以下、又は、１０００ｍｇ／ｍ^２以下の抗体の用量を投与することを含む。

【0122】

哺乳動物のＣＤ２０関連疾患を治療するための薬物の製造における、前述のいずれかの態様の抗体又はその抗原結合フラグメント、又は核酸分子、又はベクター、又は細胞、又は薬物組成物の使用。

【0123】

前記のいずれかの態様によれば、任意に、前記抗体は、他の薬物にカップリングし、例えば、標識を付けるか、又は、細胞毒性を有するコンジュゲートである。

【0124】

一態様において、本開示は、さらに、キットを含み、例えば、前記キットは、本開示に係る抗体、そのフラグメント、ホモログ、その誘導体など、例えば、標識を付けるか、又は、細胞毒性を有するコンジュゲート、及び、抗体の取扱説明書、特定の種類の細胞を殺すコンジュゲートなどを含む。当該取扱説明書は、抗体、コンジュゲートなどのインビトロ、インビボ又はエクスビボでの使用ガイドを含んでもよい。抗体は、液体又は固体であり、通常、凍結乾燥されている。当該キットは、さらに緩衝液、再構成溶液などの他の適当な試薬及び予定使用に応じて必要な他の成分を含んでもよい。所定の量でパッケージ化された試薬の組み合わせとそれらの治療使用又は診断アッセイ使用などの使用に用いる取扱説明書とも考えられる。抗体が標識されている場合、例えば、酵素で標識されている場合、当該キットは、基質及び酵素に必要な補因子（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含んでもよい。さらに、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング緩衝液又は溶解緩衝液）などの他の添加剤も含んでもよい。様々な試薬の相対量を変化させて、試薬溶液の濃縮物を提供することができ、これにより、ユーザーの柔軟性、スペースの節約、試薬の節約などを提供する。これら試薬は、乾燥粉末の形で提供することもでき、通常、凍結乾燥されたものとして提供され、賦形剤を含むため、溶解すると適切な濃度の試薬の溶液を提供することができる。

【0125】

前記のいずれかの態様に係る抗体又はその機能的フラグメント、又は核酸分子、又はベクター、又は細胞、又は薬物組成物、又はキットの、ＣＤ２０への結合を阻害するための試薬の調製における使用を提供する。

【0126】

また、本発明に係る抗体は、免疫測定、精製方法及び他の免疫グロブリン又はそのフラグメントを用いる方法に用いられてもよい。このような使用は、当業者が周知されているものである。

【0127】

対応的に、本開示は、また、本開示に係る抗ＣＤ２０抗体又はそのフラグメントを含む組成物を提供し、前記抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を便宜に組み合わせることができ、これは、本分野の通常手段である。

【0128】

本開示に使用される「薬物組成物」という用語は、さまざまな調製物の製剤を指す。治療に有効な量の多価抗体を含む製剤は、無菌液体溶液、液体懸濁液又は凍結乾燥形態であり、任意に安定剤又は賦形剤を含んでもよい。

【0129】

本開示に係る抗体は、単独で投与される組成物として使用することができ、又は他の活性剤と組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態において、本開示に係るヒト化抗体は、治療部分（即ち、薬物）にカップリングしている。治療部分は、例えば、細胞毒素、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、免疫刺激剤、分解ペプチド又は放射性同位体であってもよい。このようなコンジュゲートは、本明細書に「抗体－薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」と称される。

【0130】

いくつかの実施形態において、抗体は、細胞毒性部分にコンジュゲートしている。細胞毒性部分は、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン（Ｃｅｐｈａｅｌｉｎｅ）、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、マイタンシン又はその類似体若しくは誘導体などのチューブリン阻害剤、モノメチルアウリスタチンＥ若しくはＦ又はその類似体若しくは誘導体などの有糸分裂阻害剤、ドラスタチン１０若しくは１５又はその類似体、イリノテカン又はその類似体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、カリケアミシン又はその類似体若しくは誘導体、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン又はクラドリビンなどの代謝拮抗剤、例えば、メクロレタミン、チオプリン（ｔｈｉｏｐｕｒｉｎｅ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣなどのアルキル化剤、シスプラチン又はカルボプラチン等の白金系誘導体、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）又はその類似体若しくは誘導体、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミスラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリマイシン（ｐｒｉｍｙｃｉｎ）、アントラマイシン（ＡＭＣ）などの抗生物質、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］－ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、ジフテリア毒素及びジフテリアＡ鎖及びその活性フラグメント及びハイブリッド分子などの関連分子、リシンＡ又は脱グリコシル化リシンＡ鎖毒素、コレラ毒素などのリシン、ＳＬＴ Ｉ、ＳＬＴ ＩＩ、ＳＬＴ ＩＩＶなどのシガ様毒素、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、シガ毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ボウマン・バーク大豆プロテアーゼ阻害剤、シュードモナス外毒素、アロリン、サポリン（Ｓａｐｏｒｉｎ）、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓなどのアメリカヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サポナリアコン（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン及びエノマイシン毒素、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンドトキシンＡ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリア毒素、シュードモナスエンドトキシンから選ばれるものであってもよい。

【0131】

いくつかの実施形態において、抗体は、アウリスタチン又はそのペプチド類似体、誘導体又はプロドラッグにコンジュゲートする。アウリスタチンは、微小管のダイナミクス、ＧＴＰ加水分解並びに核分裂及び細胞分裂に影響し、抗がん活性及び抗真菌活性を有することが示された。例えば，アウリスタチンＥは、ｐ－アセチル安息香酸又はベンゾイル吉草酸と反応し、それぞれＡＥＢ、ＡＥＶＢを生成することができる。他の典型的なアウリスタチン誘導体として、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）及びＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）を含む。好適なアウリスタチン、アウリスタチンの類似体、誘導体及びプロドラッグ、並びにアウリスタチンとＡｂとのコンジュゲートに好適なリンカーは、例えば、米国特許第５，６３５，４８３号、第５，７８０，５８８号、第６，２１４，３４５号及び国際特許出願公開ＷＯ０２０８８１７２、ＷＯ２００４０１０９５７、ＷＯ２００５０８１７１１、ＷＯ２００５０８４３９０、ＷＯ２００６１３２６７０、ＷＯ０３０２６５７７、ＷＯ２００７００８６０、ＷＯ２０７０１１９６８及びＷＯ２０５０８２０２３に記載されている。

【0132】

いくつかの実施形態において、抗体は、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］－ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、そのペプチド類似体、誘導体又はプロドラッグにコンジュゲートする。適切なＰＤＢ、ＰＤＢ誘導体及び関連技術は、例えば、Ｈａｒｔｌｅｙ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１０、７０（１７）：６８４９－６８５８、Ａｎｔｏｎｏｗ Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ ２００８、１４（３）：１５４－１６９、Ｈｏｗａｒｄ Ｐ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２００９；１９：６４６３－６４６６、及び、Ｓａｇｎｏｕｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ ＭｅｄＣｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２０００；１０（１８）：２０８３－２０８６に記載されている。

【0133】

いくつかの実施形態において、抗体は、アントラサイクリン系抗生素、メルタンシン、カリケアミシン、デュオカルマイシン、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）、ドラスタチン１０、ドラスタチン１５、イリノテカン、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、ＰＤＢ、又は、これらのいずれの類似体、誘導体又はプロドラッグから選ばれる細胞毒性部分にコンジュゲートする。

【0134】

いくつかの実施形態において、抗体は、アントラサイクリン系抗生素又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、メルタンシン又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、カリケアミシン又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、デュオカルマイシン又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、ドラスタチン１０又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、ドラスタチン１５又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、モノメチルアウリスタチンＥ又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、モノメチルアウリスタチンＦ又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］－ベンゾジアゼピン又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。いくつかの実施形態において、抗体は、イリノテカン又はその類似体、誘導体或はプロドラッグにコンジュゲートする。

【0135】

いくつかの実施形態において、抗体は、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８ａ、ＩＬ－２８ｂ、ＩＬ－２９、ＫＧＦ、ＩＦＮａ、ＩＦＮ３、ＩＦＮｙ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ４０Ｌ、Ｆｌｔ３リガンド、幹細胞因子、アンセスチム（ａｎｃｅｓｔｉｍ）及びＴＮＦａ）にコンジュゲートする。

【0136】

いくつかの実施態様では、抗体を、放射性同位体又は放射性同位体を含有するキレートにコンジュゲートする。例えば、抗体を、キレートリンカー、例えばＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、又はチウキセタンにコンジュゲートさせることができる。該抗体は、さらに、又は、代替的に、１つ以上の放射標識されたアミノ酸又は他の放射標識された分子を含むか又はこれにコンジュゲートさせ得る。放射性同位体の非限定的な例としては、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ及び^２２７Ｔｈを含む。治療の目的のために、β又はα粒子放射線を放出する放射性同位体、例えば、^１３１Ｉ、^９０Ｙ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^６７Ｃｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ及び^２１２Ｐｂを使用してもよい。

【0137】

分子を抗体にコンジュゲートする技術は、本分野でよく知られているものである。通常、核酸分子は、それぞれＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル又はマレイミド官能基を介して、抗体におけるリシン又はシステインに共有的に連結している。操作システインを用いるか、又は、非天然アミノ酸を組み込んだコンジュゲーション方法は、コンジュゲートの同一性を改善され得ることが報告されている。当業者は、特に、アシル供与体グルタミン含有タグ（例えば、Ｇｉｎ含有ペプチドタグまたはＱタグ）またはポリペプチド操作（例えば、アミノ酸の欠失、挿入、置換またはポリペプチドの変異によるもの）によって反応性にした内在性グルタミンで操作したＦｃ含有ポリペプチドが考えられよう。次いで、トランスグルタミナーゼがアミン供与剤（例えば、反応性アミンを含むか、これと結合した小分子）と共有結合により架橋し、アミン供与剤がアシル供与体グルタミン含有タグまたは接触可能な／露出した／反応性の内在性グルタミンを介してＦｃ含有ポリペプチドと部位特異的にコンジュゲートした操作Ｆｃ含有ポリペプチドコンジュゲートの安定で均一な集団を形成し得る（ＷＯ２０１２０５９８８２）。

【0138】

前記実施形態に係る治療薬は、改善された移転、送達、耐性などを提供するために製剤に組み込まれる適切な薬学的に許容される担体、賦形剤及び他の試薬とともに投与されることが理解される。医薬品化学者らに知られている薬局方には、多数の適切な製剤が記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５））、特にそのうちのＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章が挙げられる。これらの製剤として、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゲル、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン又はアニオン）含有担体（例如、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^ＴＭ）、ＤＮＡコンジュゲート、無水スラリー、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンポリエチレングリコール（さまざまな分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びポリエチレングリコールを含む半固体混合物が挙げられる。前記混合物は、いずれも製剤における有効成分が製剤に不活化されず、生理学的適合性があり、投与経路に耐えるという条件で、本発明に係る治療又は治療方法に適用される。

【0139】

一実施形態において、前記の抗体は、治療薬として使用することができる。このような薬剤は、通常、被験者の異常なＣＤ２０の発現、活性、及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病状を治療、寛解、及び／又は予防するために使用される。治療レジメンは、標準的な方法で、被験者、例えば、異常なＣＤ２０発現、活性、及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は障害、例えば、ＣＤ２０関連障害（又は、リスクがあるが、若しくは発症している）に罹るヒト患者を特定することで実施することができる。抗体製剤、好ましくは標的抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有する抗体製剤を被験者に投与し、かつ、一般に、標的への結合によって効果を生じる。投与された抗体は、標的（例えば、ＣＤ２０）の発現、活性、及び／又はシグナル伝達機能を解消するか、阻害するか、又は妨害する可能性がある。投与された抗体は、標的（例えば、ＣＤ２０）と自然的にそれに結合する内因性リガンドとの結合を解消するか、阻害するか、又は妨害する可能性がある。例えば、抗体は、標的に結合し、ＣＤ２０の発現、活性、及び／又はシグナル伝達を調節、阻害、抑制、低下、拮抗、中和、及び／又はその他の方式で妨害する。いくつかの実施形態において、異常なＣＤ２０発現に関連する疾患又は障害を治療するために、重鎖及び軽鎖ＣＤＲを有する抗体を被験者に投与することができる。

【0140】

別の実施形態において、ＣＤ２０に対する抗体は、当分野で知られているＣＤ２０のローカリゼーション及び／又は定量化に関連する方法に用いられる（例えば、適切な生体試料におけるＣＤ２０及び／又はＣＤ２０のレベルの決定、診断方法、タンパク質イメージングなどに用いられる）。特定の実施形態において、ＣＤ２０又はその誘導体、フラグメント、類似体又は同族体に特異的な、抗体に由来する抗原結合ドメインを含む抗体は、薬学的に活性な化合物（以下、「治療薬」と呼ばれる）として使用される。

【0141】

別の実施形態において、免疫アフィニティー、クロマトグラフィー又は免疫沈降などの標準的な技術により、ＣＤ２０に特異的な抗体を使用し、ＣＤ２０ポリペプチドを単離し得る。ＣＤ２０タンパク質に対する抗体（又はそのフラグメント）は、生体試料におけるタンパク質を検出することに用いられる。いくつかの実施形態において、例えば、特定の治療レジメンの有効性を決定するために、臨床試験手順の一部として生体試料におけるＣＤ２０を検出する。抗体を検出可能な物質にコンジュゲートする（即ち、物理的に結合する）ことは、検出に有利である。検出可能な物質として、さまざまな酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料が挙げられる。適切な酵素の例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミノフルオレセイン、塩化ダンシルアミド、又は、フィコエリトリンを含み、発光材料の例として、ルミノールを含み、生物発光材料の例として、ルシフェラーゼ、フルオレセイン及びイクオリンを含み、適切な放射性材料の例として、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、又は^３Ｈを含む。

【0142】

別の実施形態において、本開示に係る抗体は、試料におけるＣＤ２０又はそのタンパク質フラグメントの存在を検出するための試薬として使用することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル抗体、又は、より好ましくはモノクローナル抗体である。インタクトな抗体又はそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ又はＦ（ａｂ’）_２）を使用する。抗体に関する「標識」という用語は、検出可能な物質を抗体にコンジュゲートする（即ち、物理的に結合する）ことで当該抗体を直接に標識し、及び、直接に標識された別の試薬との反応によって当該抗体を間接に標識することを含む。間接に標識する例として、蛍光で標識された二次抗体による一次抗体の検出、及び、蛍光で標識されたストレプトアビジンによる検出を可能にするためのビオチンによる抗体の末端標識が挙げられる。「生体試料」という用語は、被験者から単離された組織、細胞、及び生体流体、並びに被験者の体内に存在する組織、細胞、及び流体を含むことを意図している。従って、「生体試料」という用語は、血清、血漿、又はリンパ液を含む、血液及び血液中の画分又は成分を含む。言い換えれば、前記実施形態に係る検出方法は、インビトロ及びインビボで、生体試料における分析物であるｍＲＮＡ、タンパク質、又はゲノムＤＮＡの検出に用いられる。例えば、分析物であるｍＲＮＡのインビトロ検出技術は、ノーザンハイブリダイゼーション及びインサイチュハイブリダイゼーションを含む。分析物であるタンパク質のインビトロ検出技術として、酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロッティング、免疫沈降、及び免疫蛍光を含む。分析物であるゲノムＤＮＡのインビトロ検出技術は、サザンハイブリダイゼーションを含む。イムノアッセイの実施手順は、例えば、「ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，第４２卷，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編集）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．，１９９５；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ＆Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９６；及び、「Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。また、分析物であるタンパク質のインビボ検出技術は、標識された抗分析物タンパク質抗体を被験者に導入することを含む。例えば、抗体を放射性標識で標識し、そして、被験者体内の当該放射性標識の存在及び位置を、標準的な画像技術により検出する。

【0143】

本明細書に係る抗体及びその誘導体、フラグメント、類似体及び同族体は、投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。このような組成物の調製に関する原理、考慮事項、及び、組成成分を選択するためのガイドラインは、当分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ １９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏら編集）Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ， Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４；及びＰｅｐｔｉｄｅ Ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第４卷），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに参照されたい。
このような組成物は、通常、抗体及び薬学的に許容される担体を含む。抗体のフラグメントを用いる場合、好ましくは、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小限の抑制フラグメントである。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学合成及び／又は組換えＤＮＡ技術により産生することができる（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）に参照されたい）。

【0144】

本明細書に使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、医薬品投与に許容される任意及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図している。適切な薬学的に許容される担体は、最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されており、これは、当分野の標準の参考書誌であり、参照により本明細書に組み込まれる。このような担体又は希釈剤の好ましい例として、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソーム及び固定化油などの非水性ベクターも使用することができる。このような媒体及び試薬を薬学的に活性な物質に使用することは、当分野で周知されているものである。抗体と相容しない通常の培地又は試薬以外、組成物におけるその使用が想定されている。

【0145】

前記実施形態の薬物組成物を、それらの意図された投与経路に適合するように調製される。投与経路の例として、例えば、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（即ち、局所）、経粘膜、及び直腸投与を含む。非経口、皮内又は皮下投与用溶液又は懸濁液として、注射用無菌希釈剤、例えば、水、塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール系、グリセロール、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム、キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩、及び浸透圧調節剤、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロースを含む。ｐＨは、酸又は塩基、例えば、塩酸や水酸化ナトリウムで調整できる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、ガラス又はプラスチック製の複数回投与用バイアルに包装することができる。

【0146】

注射使用に適する薬物組成物として、無菌水性溶液（ここで、水溶性である）又は分散体、及び無菌の注射液又は分散体を即時調製するための無菌粉末を含む。静脈内投与に適する薬学的に許容される担体として、生理食塩水、無菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ^ＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）又は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、組成物は、無菌でなければならず、注射しやすい流動性を有しなければならない。また、製造及び保管の条件で安定している必要があり、細菌や真菌などの微生物の汚染作用を防止できる必要がある。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）を含む溶媒又は分散媒体、及び、それらの適切な混合物であってもよい。コーティング、例えば、レシチンを利用し、分散体の場合に所望の粒子サイズを維持し、また、界面活性剤を利用し、適切な流動性を維持することができる。微生物作用の防止は、パラオキシ安息香酸エステル、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌剤及び抗真菌剤により達成することができる。多くの場合、糖、ポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の延長は、例えば、モノステアリン酸アルミニウム、ゼラチンなどの吸収を遅らせる試薬を組成物に含むことで達成できる。

【0147】

必要に応じて、抗体を必要な量で上記に挙げられた成分の１種又は組み合わせ（必要に応じて）の適切な溶媒に組み込むことで無菌注射液を調製し、そしてフィルターして消毒する。通常、抗体を、塩基性分散媒体及び上記に挙げられたものからの他の必要成分を含む無菌担体に組み込むことで分散体を調製する。無菌注射溶液を調製するための無菌粉末について、調製方法として、前記成分の無菌濾過溶液からの、活性成分及び任意の追加の所望の成分を含む、粉末の真空乾燥及び凍結乾燥を得る。

【0148】

吸入投与について、推進薬、例えば、二酸化炭素等のガスを適切に供給する加圧容器又は分配器又は噴霧器より、エアロゾル噴霧形式で化合物を送達する。
また、経粘膜的又は経皮的手段により全身投与をすることであってもよい。経粘膜又は経皮投与について、製剤にバリアを透過することに適する浸透剤を使用する。このような浸透剤は、当分野で周知されており、例えば、経粘膜投与用洗剤、胆汁酸塩、フシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、点鼻薬又は坐剤を使用することで達成できる。経皮投与について、１つ又は複数の抗体を、当技術分野で周知されているペースト、軟膏、ゲル、又はクリームに調製することができる。

【0149】

化合物は、さらに、（例えば、カカオバター又は他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを有する）坐剤又は保持型浣腸剤の形態で調製し直腸送達することができる。

【0150】

一実施形態において、前記抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む徐放性／制御放出製剤など、身体に急速に排泄されないことを防ぐ担体を用いて調製することができる。生分解する可能な、生体適合性を有するポリマーとして、例えば、エチレン‐酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸を使用することができる。このような製剤を調製するための方法は、当業者にとって自明である。

【0151】

投与の容易性及び用量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を調製ことは特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、治療される被験者の単回用量に適する物理的に分離されている単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と組み合わせて所望の治療効果を生じるように計算された特定量の１種又は複数種の前記抗体を含む。前記実施形態の単位剤形の仕様は、抗体の固有の特性及び達成しようとする具体的な治療効果、並びに個体を治療するためのこのような抗体の調製技術に固有の制限に決定され、かつそれに直接的に依存される。

【0152】

前記薬物組成物は、投与取扱説明書とともに容器、パック、又はディスペンサーに入れてもよい。

【0153】

本明細書に係る製剤は、治療しようとする具体的な状態に応じて１種を超える前記抗体、好ましくは相補的活性を有するが互いに悪影響を及ぼさない抗体をさらに含でもよい。また、又は、これ以外、組成物は、組成物の機能を増強する試薬、例えば、細胞毒素、サイトカイン、化学療法剤、又は成長抑制剤を含んでもよい。このような分子は、意図された目的に有効量で適切に組み合わせて存在し得る。例えば、キットに組み合わせて存在してもよく、使用時に組み合わせて存在してもよい。

【0154】

一実施形態において、１種又は複数種の前記抗体は、併用療法で、即ち、他の試薬、例えば、治療薬（病理的状態又は障害を治療するための、例えば、様々な形態のがん、自己免疫障害及び炎症性疾患）と併用する。本明細書で使用される「併用」という用語は、実質的に同時に、同時に、又は順に試薬を投与することを指す。順に投与すると、好ましくは、第２化合物の投与を開始する時、２つの化合物における第１化合物が依然として治療部位で有効濃度で検出することができる。ある場合、「併用」は、キットに本開示に係る抗体及び他の治療薬を同時に含んでもよい。
例えば、併用治療は、本開示に係る１種又は複数種の抗体と１種又は複数種の追加の治療剤（例えば、１種又は複数種のサイトカイン及び成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤及び／又は細胞毒素又は細胞増殖阻害剤、以下でより詳しく説明する。）との同時調製及び／又は同時投与を含む。このような併用療法は、投与された治療剤を低い投与用量で利用することができるため、様々な単一療法に関連する可能な毒性又は合併症を回避することができる。

【0155】

一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の投与及び治療剤の投与により、当該被験者のＢ細胞の数を低下させることができる。

【0156】

一実施形態において、当該治療レジメンは、対応する抗ＣＤ２０抗体を投与しない治療レジメンに比べて、当該被験者の当該Ｔ細胞活性化治療剤の投与に関するサイトカイン放出を効果的に低下させることができる。

【0157】

明確かつ簡潔に説明するために、技術特徴を同じ又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されているが、本発明の範囲は、説明されるすべて又はいくつかの特徴の組み合わせてなる実施形態を含んでもよいと理解される。

【0158】

実施例
実施例１：ＣＤ２０安定トランスフェクト細胞及びＣＤ３組換え抗原
１．ヒト又はサルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞株の構築
ヒトＣＤ２０又はカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）ＣＤ２０の全長配列（ｃＤＮＡは、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入、ＨＧ１１００７－ＵＴ、ＣＧ９００５２－Ｇ）を含むレンチウイルスベクタープラスミドを構築し、レンチウイルスパッケージキット（Ｌｅｎｔｉ－Ｐａｃ ＨＩＶ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｋｉｔ、Ｇｅｎｅ Ｃｏｐｏｅｉａ、＃ＨＰＫ－ＬｖＴＲ－２０）で構築されたレンチウイルスプラスミド及びパッケージプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトし、４８時間後、上清を取った。レンチウイルス粒子を含む培養上清を１０μＬ取り、対数増殖期にあるＣＨＯ細胞を添加し、２日後、ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ １０μｇ／ｍＬを添加し、スクリーニングした。耐性クローンから限界希釈法でさらに高発現ヒト又はサルＣＤ２０の安定トランスフェクト細胞株ＣＨＯ－ヒトＣＤ２０（クローン３Ｇ６）及びＣＨＯ－カニクイザルＣＤ２０（クローン１Ｇ９）を得た。

【0159】

図１に示されるように、ＡＰＣ標識ＣＤ２０抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＃３０２３０９）を利用し、フローサイトメトリー検出を行い、ヒトＣＤ２０安定トランスフェクト細胞（ＣＨＯ－ｈＣＤ２０－３Ｇ６）及びサルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞（ＣＨＯ－ｃｙＣＤ２０－１Ｇ９）は、トランスフェクトされないＣＨＯ細胞に比べて、いずれも高いレベルのＣＤ２０を発現した。

【0160】

２．ヒト又はサルＣＤ３εγヘテロ二量体の構築
ヒトＣＤ３γ（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０９６９３、Ｇｌｎ_２３－Ａｓｎ_１１６）及びＣＤ３ε（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０７７６６、Ｇｌｎ_２３－Ａｓｐ_１２６）細胞外領域ヌクレオチド配列を合成し、Ｃ末端は、それぞれヒトＩｇＧ Ｆｃホール又はＦｃノブに融合し、ヒトＣＤ３εγ－Ｆｃヘテロ二量体（ヒトＣＤ３γ ＩｇＧ Ｆｃ（ｈｏｌｅ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１に示し、ヒトＣＤ３ε ＩｇＧ Ｆｃ（ｋｎｏｂ）のアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示す）を発現して形成された。同様に、カニクイザルＣＤ３γ（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ９５ＬＩ７，Ｇｌｎ_２３－Ａｓｎ_１１０）及びＣＤ３ε（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ９５ＬＩ５，Ｇｌｎ_２２－Ａｓｐ_１１７）を合成し、Ｃ末端は、カニクイザルＩｇＧ Ｆｃホール又はＦｃノブに融合し、カニクイザルＣＤ３εγ－Ｆｃヘテロ二量体（カニクイザルＣＤ３γ ＩｇＧ Ｆｃ（ｈｏｌｅ）のアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３に示し、カニクイザルＣＤ３γ ＩｇＧ Ｆｃ（ｋｎｏｂ）のアミノ酸配列を、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４に示す）を発現して形成された。ＣＤ３γ－Ｆｃ及びＣＤ３ε－Ｆｃを発現する組換えプラスミドを、ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，＃２４７６５－２）３ｍｇ／ｍＬと混合し、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞（培地ＯＰＭ－２９３ ＣＤ０３ ＤＰＭ）にコトランスフェクトし、３７℃、１２０ｒｐｍ、５％ＣＯ_２で７日培養した後、培地上清を回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティクロマトグラフィーで精製してヒト又はカニクイザルＣＤ３εγ－Ｆｃ組換えタンパク質を得、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる純度は、９５％を超える（図２）。

【0161】

実施例２：ＣＤ３ヒト化抗体
マウス由来ハイブリドーマのＣＤ３抗体（ＥＭＢＯ Ｊ．１９８５．４（２）：３３７－３４４；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８６，１３７（４）：１０９７－１００； Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９１，１７４：３１９－３２６；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４７（９）：３０４７－５２）は、ヒト及びサルＣＤ３受容体を認識し、その配列は、以下の通りであった。

【0162】

抗ＣＤ３マウスモノクローナル抗体軽鎖アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２２）：

【化1】

【0163】

抗ＣＤ３マウスモノクローナル抗体重鎖アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １２３）：

【化2】

【0164】

抗ＣＤ３マウスモノクローナル抗体をヒト化し、同一性の最も高いヒト生殖系列遺伝子ＩＭＧＴ＿ｈＶＬ７－４３を選択し、軽鎖ＣＤＲ移植を行い、ＦＭ４としてヒトＩＧＬＪ３＊０２を用い、ヒトＩＭＧＴ＿ｈＶＨ３－７３を選択し、重鎖ＣＤＲ移植を行い、ＦＭ４としてヒトＩＧＨＪ４＊０１を用いた。設計して異なる重鎖変異体と軽鎖変異体を得た（表１、２）。

【表1】

【化3】

【表2】

【化4】

【0165】

軽鎖、重鎖のヒト化変異体の全配列をそれぞれ合成した後、抗体ｌａｍｂｄａ軽鎖定常領域又はヒトＩｇＧ４重鎖定常領域ＣＨ１－ＣＨ３を含む真核発現ベクターにクローニングし、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞にコトランスフェクトし、３７℃、１２０ｒｐｍ、５％ＣＯ_２で５～６日培養した後、培地上清液を回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラムにより精製した。

【0166】

ＥＬＩＳＡによるアフィニティー測定
ヒトＣＤ３εγタンパク質を４℃で一晩コーティングした。２％スキムミルクでブロックした後、各ウェルに異なる希釈倍数のＣＤ３抗体を加え、１時間インキュベートし、二次抗体としてＨＰＲ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃを添加し、ＴＭＢ溶液で発色させた後、濃硫酸で反応を終了させ、かつ４５０ｎｍの吸光度を読み取った（結果を図３に示す）。

【0167】

図３は、ヒトＣＤ３εγタンパク質に結合する抗ＣＤ３ヒト化抗体の組み合わせ（ａＣＤ３－ｈＶＨ８／ＶＬ１、ａＣＤ３－ｈＶＨ９／ＶＬ１、ａＣＤ３－ｈＶＨ９／ＶＬ２、ａＣＤ３－ｈＶＨ９／ＶＬ３、ａＣＤ３－ｈＶＨ１／ＶＬ５、ａＣＤ３－ｈＶＨ８／ＶＬ５、ａＣＤ３－ｈＶＨ９／ＶＬ５を含む）を示し、ＣＤ３ヒト化抗体は、高いアフィニティーでＣＤ３εγ組換えタンパク質に結合した。

【0168】

Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞のアフィニティー測定
対数増殖期にあるＪｕｒｋａｔ細胞を取り、３％ＢＳＡで３０分間ブロックし、Ｕ型９６ウェルプレートに５×１０^４細胞／ウェルを添加し、遠心分離し、上清を捨て、各ウェルに勾配希釈抗体（抗体濃度は、３０μｇ／ｍｌから３倍希釈で５つの勾配である）５０μＬを入れ、４℃で１時間インキュベートした。洗浄して一次抗体を除去した後、二次抗体として１：３００で希釈されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９－６０６－１７０）を添加し、４℃で４５分間インキュベートし、洗浄した後、各ウェルに対してＰＢＳ ５０μｌに再懸濁してＦＡＣＳ（ｉＱｕｅ，Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）検出を行った（結果を図４に示す）。
図４は、Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合した抗ＣＤ３ヒト化抗体の組み合わせを示し、ＣＤ３ヒト化抗体ｈＶＨ９／ＶＬ５（ａＣＤ３－ｈＶＨ９／ＶＬ５）は、中度アフィニティーでＪｕｒｋａｔ細胞に結合した。

【0169】

実施例３：ＣＤ２０ヒト化抗体
マウスＣＤ２０抗体又は対照抗体は、文献ＵＳ５７３６１３７、ＵＳ８５２９９０２を参照して合成し、その可変領域アミノ酸配列は、以下の通りであった。

【化5】

【0170】

ＣＤＲ移植及び点突然変異により、ＣＤ２０抗体に対して最適化設計し、等電点を低下させ、マウス又は対照ＣＤ２０抗体の軽鎖ＣＤＲをヒト抗体の生殖系列遺伝子Ｖｋ３－２０フレームに移植し、Ｊｏｉｎｔ領域としてヒトＫＪ２＊０１を採用し、重鎖ＣＤＲをヒトＶＨ１－６９又はＶＨ３－２３フレームに移植し、Ｌｙｓ_７７Ａｓｎなどの突然変異を導入し、Ｆｖ領域の電荷密度を低下させ、Ｊｏｉｎｔ領域としてヒトＨＪ４＊０１を採用し、それぞれヒト化Ｍａｂ００１抗体、Ｍａｂ００２抗体、Ｍａｂ００３抗体、Ｍａｂ００４抗体、Ｍａｂ００５抗体、Ｍａｂ００６抗体、Ｍａｂ００７抗体（表３、４）を得た。

【0171】

軽鎖可変領域を、ｋａｐｐａ軽鎖定常領域を含む真核発現ベクターにクローニングし、重鎖可変領域を、ＩｇＧ４ ＣＨ１－３定常領域を含む真核発現ベクターにクローニングした。ＨＥＫ２９３Ｅ細胞にトランスフェクトし、５～６日発現した後、培養上清を回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティクロマトグラフィーにより精製し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計及び理論吸光値により抗体濃度を決定した。

【表3】

【表4】

【0172】

Ｍａｂ００１抗体軽鎖の可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ５４に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５５にし、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５６－５８に示す。

【化6】

【0173】

Ｍａｂ００１抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６４に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６５に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６６－６８に示す。

【化7】

【0174】

Ｍａｂ００２抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５４に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５５に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５６－５８に示す。

【化8】

【0175】

Ｍａｂ００２抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６６、６７、７１に示す。

【化9】

【0176】

Ｍａｂ００３抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５４に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５５に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５６－５８に示す。

【化10】

【0177】

Ｍａｂ００３抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７２に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７３に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６６－６８に示す。

【化11】

【0178】

Ｍａｂ００４抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６１－６３に示す。

【化12】

【0179】

Ｍａｂ００４抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７４に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７５に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７６－７８に示す。

【化13】

【0180】

Ｍａｂ００５抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６１－６３に示す。

【化14】

【0181】

Ｍａｂ００５抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７６－７８に示す。

【化15】

【0182】

Ｍａｂ００６抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６１－６３に示す。

【化16】

【0183】

Ｍａｂ００６抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８１に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８２に示され、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７６－７８に示す。

【化17】

【0184】

Ｍａｂ００７抗体軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５９に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６０に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６１－６３に示す。

【化18】

【0185】

Ｍａｂ００７抗体重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８３に示し、そのコード核酸をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８４に示し、そのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７６、７７、８５に示す。

【化19】

【0186】

ヒト化ＣＤ２０抗体の腫瘍細胞への結合
対数増殖期にあるリンバ腫細胞系Ｒａｊｉ細胞及びＤａｕｄｉ細胞を取り、マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）２００μｇ／ｍＬを加え、３０分間ブロックした。Ｕ型９６ウェルプレートの各ウェルに５×１０^４細胞及び勾配希釈抗体（初期濃度２００ｎＭから５倍希釈で合計８つの勾配である）５０μＬを添加し、氷上で４５分間インキュベーターした。洗浄した後、各ウェルにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬを添加し、氷上で４５分間インキュベーターした。ＰＩ（Ｓｉｇｍａ，Ｐ４１７０）６０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリー（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）で検出した。図５は、ヒト化ＣＤ２０抗体とＲａｊｉ細胞との結合を示し、図６は、ヒト化ＣＤ２０抗体とＤａｕｄｉ細胞との結合を示す。

【0187】

実施例４：ヒト化ＣＤ２０抗体とＣＤ３抗体との組み合わせのスクリーニング
１．抗体の組み合わせから二機能性抗体のスクリーニング
等電点最適化により得られたヒト化ＣＤ２０抗体Ｍａｂ００２、Ｍａｂ００５及びＭａｂ００７を選択し、ヒト化ＣＤ３抗体と二重特異的抗体を構築した。Ｓｃｈａｅｆｅｒ Ｗら（ＰＮＡＳ， ２０１１）を参照し、ヒト化ＣＤ２０抗体とＣＤ３抗体との組み合わせをスクリーニングし、ヒト化ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域をｋａｐｐａ軽鎖定常領域を含む真核発現ベクターにクローニングし、重鎖可変領域を突然変異したヒトＩｇＧ４定常領域を含む真核発現ベクターにクローニングし、ヒト化ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域を、ｌａｍｂｄａ軽鎖定常領域、重鎖ヒンジ領域及び定常領域ＣＨ２、ＣＨ３を含む真核発現ベクターにクローニングし、ＣＤ３抗体の重鎖可変領域をヒトＣＨ１定常領域を含む真核発現ベクターにクローニングし、軽鎖、重鎖の遺伝子をコードする４種類のプラスミドを１：１：１：１の比率で混合し、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞にトランスフェクトし、５～６日発現した後、培地上清を回収し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティクロマトグラフィーにより精製した。ＳＥＣ－ＨＰＬＣにおいて、当該方法で調製された二機能性抗体Ｍａｂ００２×ＣＤ３、Ｍａｂ００５×ＣＤ３及びＭａｂ００７×ＣＤ３のモノマー含有量が５５％を超えることを示し、下記の標的細胞結合及び殺傷作用の相対的活性評価に用いられた。

【0188】

抗体組み合わせから二機能性抗体をスクリーニングすることに用いられる配列を表５に示す。

【表5】

【表6】

【0189】

２．ＣＤ２０＋細胞及びＪｕｒｋａｔ細胞への認識
対数増殖期にあるＲａｊｉ細胞及びヒト末梢血白血病Ｔ細胞系Ｊｕｒｋａｔ細胞を取り、マウスＩｇＧ２００μｇ／ｍＬを加え、３０分間ブロックした。Ｕ型９６ウェルプレートの各ウェルに５×１０^４細胞及び勾配希釈抗体（初期濃度１８００ｎＭから５倍希釈で合計８つの勾配である）を添加し、氷上で４５分間インキュベーターした。洗浄して一次抗体を除去した後、各ウェルにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬを添加し、氷上で４５分間インキュベーターし、ＰＩ６０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリーで検出した。

【0190】

図７ｈは、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせとＲａｊｉ細胞との結合を示し、図８は、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせとＪｕｒｋａｔ細胞との結合を示す。

【0191】

３．Ｔ細胞依存細胞毒試験（ＴＤＣＣ）
分離して得られた新鮮なＰＢＭＣ及び対数増殖期にあるＲａｊｉ細胞（エフェクター細胞／標的細胞＝１０：１）を混合し、各ウェルに勾配希釈抗体（初期濃度６６．７ｎＭから１０倍希釈で８つの勾配である）を添加し、５％ＣＯ_２、３７℃で２４時間培養した。培養終了後、１０００ｒｍｐで３分間遠心分離し、上清を取ってＬＤＨ放出を検出し、上清５０μＬを黒色ＥＬＩＳＡプレートに移し、ＬＤＨ検出基質５０μＬ／ウェルを添加し、１０分間後、反応を終了させ、検出し（Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ）、下記の式で殺傷率を計算し、上清を捨てた後、ウェル内の残留細胞を４％ウシ血清で２回洗浄した後、ヒトＩｇＧ １００μｇ／ｍＬを添加し、１０分間ブロックし、Ｔ細胞活性化の早期標識ＣＤ６９及び後期標識ＣＤ２５を添加し、抗体（ＣＤ２５－ＰＥ，ＣＤ４－ＡＰＣ，ＣＤ６９－ＦＩＴＣ及びＣＤ８－ＡＰＣ）を検出し、氷上で２０分間インキュベーターした。インキュベーター終了後，各ウェルに４％ウシ血清２００μＬを添加して３回洗浄し、上清を捨て、ＰＩ（１：２００希釈）６０μＬ／ウェルを添加し、氷上で５分間インキュベーターし、フローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳ ｃｅｌｅｓｔａ）で検出した。

【0192】

殺傷率の計算式は、以下の通りである。

【数1】

【0193】

図９Ａは、異なるＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせに媒介されたＴＤＣＣ殺傷作用を示し、図９Ｂは、ＴＤＣＣ殺傷過程中、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の組み合わせがＴ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９及びＣＤ２５の向上を刺激できることを示す。

【0194】

４．Ｔ細胞シグナル経路の活性化
ルシフェラーゼレポータープラスミドｐＧＬ４．３０［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦＡＴ－ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｅ８４８１）をＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトし、ハイグロマイシンＢ２００μｇ／ｍｌを添加し、スクリーニングし、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ ｌｕｃ安定トランスフェクトレポーター細胞を得た。ＣＤ２０＋標的細胞、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体及びＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞をコインキュベーターし、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体が標的細胞に結合した後、他端は、Ｊｕｒｋａｔ細胞表面ＣＤ３受容体に結合し、ＣＤ３胞内シグナルモチーフの凝集を引き起こし、活性化シグナルがＮＦＡＴ経路を通じて核内に伝達され、最終にレポーター遺伝子ルシフェラーゼの発現アップレギュレートを招致する。それぞれ対数増殖期にあるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞及びＲａｊｉ細胞を取り、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を捨て、細胞を２×１０^６細胞／ｍｌに再懸濁した。５０μＬ／ウェルでＲａｊｉ細胞懸濁液を９６ウェルプレートに添加し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨て、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ｌｕｃ細胞懸濁液５０μＬ／ウェル及び勾配希釈抗体（初期濃度２０μｇ／ｍｌから１０倍希釈で１０勾配である）５０μＬを添加し、５％ＣＯ_２、３７℃で６時間培養した。培養終了後、ＯＮＥ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）取扱説明書に従い、操作し、検出用試薬を１００μＬ／ウェル添加し、室温で３分間放置し、蛍光シグナル（Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ）を検出した。
図１０は、Ｒａｊｉ細胞とコインキュベーターした時、各群のＣＤ２０×ＣＤ３抗体がＪｕｒｋａｔ細胞のＮＦＡＴシグナル経路を活性化することができるが、標的細胞を存在しない場合、ＣＤ２０×ＣＤ３抗体がＪｕｒｋａｔ細胞のＮＦＡＴシグナル経路を活性化しないことを示した。

【0195】

実施例５：異なるタイプの軽鎖が形成されたＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の構築
ヒト化ＣＤ３アーム（λ軽鎖及び対重鎖）及びヒト化ＣＤ２０抗原アーム（κ軽鎖及び対重鎖）から天然ＩｇＧ構造を有する新規なＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体を構築した。自由に組み合わせた場合、κ軽鎖やλ軽鎖は、通常、相同重鎖とペアリングする傾向があるから、ＣＤ３アーム及びＣＤ２０抗原アームのネイティブ配列を保持するＣＤ２０×ＣＤ３κλ００１を構築し、同時に、生じる可能性があるミスマッチをさらに低減するために、κ及びλ軽鎖が相同重鎖とペアリングする上、安定したＦｖの電荷変異体（Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８）、或いは、Ｃ_Ｈ１／Ｃκの間に相補的な電荷対Ｇｌｕ_１２３Ｌｙｓ／Ｇｌｎ_１２４Ｌｙｓ及びＬｙｓ_１５２Ｇｌｕ／Ｌｙｓ_２１８Ｇｌｕを導入し、合計５種類の下記のＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体を設計・構築した。

【0196】

（１）ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００１：ＣＤ３アーム及びＣＤ２０抗原アームのネイティブ配列を保持した；
（２）ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００２：ＣＤ２０抗原アーム及びＣＤ３アームに同時に電荷変異体を導入した（Ｖκ_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３８Ｌｙｓ；ＶＨ_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３９Ｇｌｕ；Ｖλ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_４０Ｇｌｕ；ＶＨ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_３９Ｌｙｓ）；
（３）ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００３：ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００２に基づき、ＣＨ１／Ｃκの間に相補的な電荷対（Ｖκ－Ｃｋ_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３８Ｌｙｓ＼Ｇｌｕ_１２３Ｌｙｓ＼Ｇｌｎ_１２４Ｌｙｓ；Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３９Ｇｌｕ＼Ｌｙｓ_１５２Ｇｌｕ＼Ｌｙｓ_２１８Ｇｌｕ；Ｖλ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_４０Ｇｌｕ；ＶＨ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_３９Ｌｙｓ）を追加した；
（４）ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００４：ＣＤ２０抗原アームにＦｖを安定させるための電荷変異体（Ｖκ_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３８Ｌｙｓ；ＶＨ_ＣＤ２０：Ｇｌｎ_３９Ｇｌｕ）を導入した；
（５）ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００５：ＣＤ３アームに電荷変異体（Ｖλ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_４０Ｇｌｕ；ＶＨ_ＣＤ３：Ｇｌｎ_３９Ｌｙｓ）を導入した。

【0197】

異種二量体ペアリング（Ａｔｗｅｌｌら、１９９７）を実現するために、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のＦｃ部分として、ヒトＩｇＧ４ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ構造を採用し、突然変異Ｓｅｒ_２２８Ｐｒｏ、Ｌｅｕ_２３５Ｇｌｕ及びＰｒｏ_３２９Ａｌａにより、ヒンジ領域の安定を維持し、Ｆｃγ受容体とＣ１ｑとの相互作用を低下した。図１１は、新規なＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体を示す。

【0198】

ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の配列を表６に示す。

【表7】

【表8】

【表9】

【0199】

ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の発現及び精製
対応する抗体フラグメントをコードするプラスミドを、κ軽鎖：λ軽鎖：重鎖１：重鎖２＝２：２：１：１の比率で混合し、ＰＥＩ３ｍｇ／ｍＬと混合した後、ＣＨＯ－Ｓ細胞にコトランスフェクトし、ＣＤ ＣＨＯ ＡＧＴ培地（Ｇｉｂｃｏ＃１２４９０－００１）５００ｍＬに３７℃、５％ＣＯ_２、１５０ｒｐｍで培養し、それぞれ一過的にトランスフェクトしてから、第２日目、第４日目及び第６日目に４％ＣＨＯ Ｆｅｅｄ Ｃ＋フィード（Ｇｉｂｃｏ ＃Ａ２５０３１－０５）を添加した。細胞活率が８５％程度に低下した時、発酵液を収穫し、ろ過した後、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティクロマトグラフィーで精製した。濃縮しＰＢＳに移行し、吸光度（Ｎａｎｏｄｒｏｐ）を測定し、理論的な消光係数を利用してタンパク質濃度を計算した。

【0200】

ＳＥＣ－ＨＰＬＣ及びキャピラリー電気泳動検出において、ＣＤ２０×ＣＤ３ κλ二重特異的抗体は、モノマー純度が９０％に近く、若しくは９０％超え（表７）、κλ軽鎖の比率が１：１に近い（図１２）ことを示す。

【表10】

【0201】

Ｃａｐｔｏ Ｓ ＩｍｐＡｃｔイオン交換クロマトグラフィーで、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体をさらに精製し、勾配溶出し、溶出ピークを合併し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣモノマー含有量が９９％を超えると示す（図１３）。ＣＤ２０×ＣＤ３ κλ００２及びＣＤ２０×ＣＤ３κλ００３の精製試料において、軽鎖ミスマッチの比率は、極めて低く（＜１％）、ＣＤ３相同二量体又はＣＤ２０相同二量体を検出しなかった（図１４）。

【0202】

実施例６：ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の結合活性
各々ＣＤ２０過剰発現の安定トランスフェクト細胞又はＣＤ２０＋腫瘍細胞との結合を検出することで、二重特異的抗体ＣＤ２０抗原アームのアフィニティーを決定し、ＣＤ３組換え抗原、Ｊｕｒｋａｔ細胞又は分離された新鮮な末梢血Ｔ細胞との結合を検出することで、二重特異的抗体ＣＤ３アームのアフィニティーを決定した。検出結果に示されているように、新規なＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体と腫瘍細胞とのアフィニティーが、Ｔ細胞とのアフィニティーより約３～５倍高いと示す。陽性対照抗体ｂｓＡＢ１は、文献ＵＳ２０１７０１７４７８１に従い合成し、発現して調製した。

【0203】

１．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とヒト及びサルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞との結合
対数増殖期にある実施例１で調製されたＣＨＯ－ヒトＣＤ２０及びＣＨＯ－サルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞を取り、４％ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３０６２６．０６）で細胞を５×１０^５個細胞／ｍｌに調節し、細胞懸濁液１００μｌ／ウェルをＵ型９６ウェルプレートに添加し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨て、各ウェルに勾配希釈抗体（初期濃度１８００ｎＭから３倍希釈で１２個の勾配である）１００μＬを添加し、４℃で６０分間インキュベーターした。二次抗体としてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬ／ウェルを添加し、氷上で２０分間インキュベーターし、１回洗浄した後、ＰＩ溶液（１：３００）５０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリーにより検出した。

【0204】

図１５及び表８に示されているように、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、高アフィニティーで細胞ＣＤ２０受容体に結合し、ヒト及びサルＣＤ２０安定トランスフェクト細胞とのアフィニティーが同程度であった。

【表11】

【0205】

２．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とヒトＣＤ２０^＋腫瘍細胞との結合
対数増殖期にあるＳＵ－ＤＨＬ－４、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６細胞を取り、マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，１１５－００５－０３）２００μｇ／ｍＬを添加し、氷浴で３０分間ブロックし、４％ウシ血清で細胞を５×１０^５細胞／ｍＬに調節し、Ｕ型９６ウェルプレートの各ウェルに１００μＬを添加し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨て、各ウェルに勾配希釈抗体（初期濃度１８００ｎＭから３倍希釈で１２個の勾配である）を添加し、４℃で６０分間インキュベーターした。洗浄して一次抗体を除去し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬ／ウェルを添加し、氷上で２０分間インキュベーターし、１回洗浄した後ＰＩ ５０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリーで検出した。

【0206】

検出結果を図１６及び表９に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、高アフィニティーでＣＤ２０＋腫瘍細胞ＳＵ－ＤＨＬ－４、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６に結合した。

【表12】

【0207】

３．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とヒト及びサルＣＤ３組換え抗原との結合
ヒト又はサルＣＤ３γ／ε組換え抗原１μｇ／ｍＬを４℃で一晩コーティングした。スキムミルクでブロックした後、各ウェルに抗体（初期濃度６０μｇ／ｍＬから３倍希釈で合計１２個の勾配である）を１００μＬ／ウェル添加し、室温で１時間インキュベーターした。二次抗体としてヤギ抗ヒトＦ′（ａｂ）２（１：４０００希釈）を１００μＬ／ウェル添加し、室温で１時間インキュベーターした。ＴＭＢで１０分間発色させ、濃硫酸を５０μＬ添加して反応を終了させ、マイクロプレートリーダーでＯＤ４５０ｎｍを読み取り、Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアで３パラメータフィッティング曲線を作成した。

【0208】

検出結果を図１７に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３εγ組換え抗原を認識し、アフィニティーが同程度であった。

【0209】

４．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とＣＤ３組換え抗原とのアフィニティー測定
アミノカップリングによりヒト又はサルＣＤ３εγ組換え抗原１０μｇ／ｍＬをＣＭ５チップ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に結合させ、抗原結合量を約２００ＲＵに制御した。ベースラインが安定した後、勾配希釈抗体（１０μｇ／ｍＬから２倍希釈で７つの勾配である）を、結合時間３５０秒間、解離時間６００秒間で３０μＬ／ｍｉｎの流速でチップに流した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアで、１：１の結合モデルにより、フィッティングして動的定数を得た。アフィニティーの測定結果を表１０に示す。

【表13】

【0210】

５．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とＪｕｒｋａｔ細胞との結合
対数増殖期にあるＪｕｒｋａｔ細胞を取り、マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，１１５－００５－０３）を２００μｇ／ｍＬ加え、３０分間氷浴した。４％ウシ血清で細胞を５×１０^５細胞／ｍＬに調節し、Ｕ型９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで添加し、３００ｇで遠心分離し、上清を捨て、勾配希釈抗体（初期濃度１８００ｎＭから３倍希釈で１２個の勾配である）を１００μＬウェル添加し、４℃で６０分間インキュベーターした。二次抗体としてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識さえｒたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬ／ウェルを添加し、氷上で２０分間インキュベーターし、１回洗浄した後ＰＩ５０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリー（ＢＤ Ｃ６）により検出した。

【0211】

検出結果を図１８及び表１１に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、中等アフィニティーでヒト白血病Ｔ細胞系Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合し、ＥＣ_５０が約７１～１２０ｎＭであり、ＣＤ２０抗原アームとＣＤ２０受容体との結合力より約１０倍低かった。

【表14】

【0212】

６．ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とヒト又はカニクイザル末梢血Ｔ細胞との結合
新鮮なヒト又はカニクイザルの末梢血を取り、Ｆｉｃｏｌｌ．Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕ（ＧＥ，１７－１４４０－０３）で分離してＰＢＭＣを得た。ＰＢＭＣについて、４％ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３０６２６．０６）で細胞を５×１０^５个細胞／ｍＬに調節し、Ｕ型９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで添加し、遠心分離し、上清を捨て、勾配希釈抗体（初期濃度１８００ｎＭから３倍希釈で１１個の勾配である）を１００μＬ／ウェル添加し、４℃で６０分間インキュベーターした。二次抗体としてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｒｏ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（１：３００希釈）５０μＬ／ウェルを添加し、２０分間氷浴し、１回洗浄した後、ＰＩ ５０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリー（ＢＤ Ｃ６）により検出した。

【0213】

検出結果を図１９及び表１２に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、ヒト又はカニクイザル末梢血におけるＣＤ４^＋Ｔ及びＣＤ８^＋Ｔ細胞を認識し、ヒトＴ細胞とのアフィニティーが約６５～９８ｎＭであり、カニクイザルＴ細胞とのアフィニティーが約８９～１２４ｎＭであり、アフィニティーが同程度であり、いずれもＣＤ２０抗原アームのＣＤ２０受容体との結合力より約１０倍低く、二重特異的抗体の腫瘍細胞への優先的募集に有利である。

【表15】

【0214】

実施例７： ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴＤＣＣ
分離して得られた新鮮なＰＢＭＣを取り、各々対数増殖期にある標的細胞ＮＡＬＭ－６、ＴＭＤ－８及びＴｏｌｅｄｏ細胞と混合し、エフェクター細胞／標的細胞＝８：１、勾配希釈抗体（抗体濃度６６．７ｎＭから１０倍希釈で８つの勾配である）を５０μＬ／ウェル添加し、５％ＣＯ_２、３７℃で２４時間培養した。培養終了後、上清５０μＬを新しい黒色ＥＬＩＳＡプレートに移し、ＬＤＨ検出基質５０μＬ／ウェルを添加し、１０分間後反応を終了させ、ＬＤＨ放出を検出した。ウェル内の残留細胞を４％ウシ血清で２回洗浄した後、ヒトＩｇＧを１００μｇ／ｍＬ添加し、１０分間インキュベーターし、そして、Ｔ細胞活性化検出用抗体（ＣＤ２５－ＰＥ、ＣＤ４－ＡＰＣ、ＣＤ６９－ＦＩＴＣ及びＣＤ８－ＡＰＣ）を添加し、氷上で２０分間インキュベーターした。洗浄し、上清を捨て、ＰＩ６０μＬ／ウェルを添加し、氷の上に置いて５分間インキュベーターし、フローサイトメトリーにより検出した。

【0215】

図２０Ａ、２０Ｂは、各々ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるヒトＢリンバ白血病細胞Ｎａｌｍ－６の殺傷及びＴ細胞の活性化を示す。図２１Ａ、２１Ｂは、各々ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴＭＤ－８細胞の殺傷及びＴ細胞の活性化を示す。図２２Ａ、２２Ｂは、各々ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＴｏｌｅｄｏ細胞の殺傷及びＴ細胞の活性化を示す。異なるＣＤ２０発現レベルの腫瘍細胞Ｎａｌｍ－６、ＴＭＤ－８及びＴｏｌｅｄｏに対して、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００２及びＣＤ２０×ＣＤ３κλ００３は、いずれも、Ｔ細胞による効果的な殺傷を媒介させ、殺傷活性は、対照抗体ｂｓＡＢ１に同程度又はわずかに強く、かつＴ細胞の活性化が後者よりも穏やかでした。

【0216】

実施例８：ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体のＴ細胞活性化経路への活性化
対数増殖期にあるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞及びＣＤ２０陽性標的細胞（ＳＵ－ＤＨＬ－４、Ｒａｊｉ及びＮＡＬＭ－６細胞）を取り、遠心分離し、上清を捨て、２×１０^６个細胞／ｍｌになるように再懸濁した。標的細胞５０μｌ／ウェルを９６ウェルプレートに接種し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨て、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞５０μｌ／ウェルを９６ウェルプレートに接種し、勾配希釈されたＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体又は対照抗体ＫＬＨ×ＣＤ３（初期濃度２０μｇ／ｍｌから１０倍希釈で１０個の勾配である）５０μｌ／ウェルを添加し、５％ＣＯ_２、３７℃で６時間培養した。培養終了後、ＯＮＥ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍの取扱説明書に従い、検出用試薬１００μＬ／ウェルを添加し、室温で３分間放置し、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ）で検出した。

【0217】

検出結果を図２３及び表１３に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、異なるＣＤ２０発現レベルの腫瘍細胞を標的細胞とする場合、いずれもＴ細胞のＮＦＡＴシグナル経路を活性化させることができる。

【表16】

【0218】

実施例９：ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるサイトカインの放出の活性化
Ｂ－ＮＨＬ腫瘍細胞Ｒａｊｉ又は自己Ｂ細胞の殺傷を媒介する過程において、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、Ｔ細胞を活性化させ、ＰＢＭＣにおける関連サイトカインの放出を刺激することができる。各ウェルに新鮮なＰＢＭＣ２×１０^５個を添加し、Ｒａｊｉ細胞１×１０^５個及び勾配希釈抗体（初期濃度６６．７ｎＭから１０倍希釈で８つの勾配である）５０μＬと混合し、５％ＣＯ_２、３７℃で２４時間培養した。微量試料の複数指標サイトメトリックビーズアレイ（ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｂｅａｄ ａｒｒａｙ，ＣＢＡ）により、培養上清におけるＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α等の含有量を測定した。ウェル内の上清を捨て、ウェル内の残留細胞を４％ウシ血清で２回洗浄した後、ヒトＩｇＧ１００μｇ／ｍＬを添加して１０分間ブロックし、そして、Ｔ細胞を添加して検出用抗体（ＣＤ２５－ＰＥ、ＣＤ４－ＡＰＣ、ＣＤ６９－ＦＩＴＣ及びＣＤ８－ＡＰＣ）を活性化させ、氷上で２０分間インキュベーターした。洗浄し、上清を捨て、ＰＩ６０μＬ／ウェルを添加し、５分間インキュベーターし、フローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳ ｃｅｌｅｓｔａ）によりＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化マーカーを検出した。自己Ｂ細胞の殺傷試験手順は、上記と同様であるが、インキュベートする時、Ｒａｊｉ細胞を添加しなかった。

【0219】

図２４は、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体によるＲａｊｉ細胞のＴＤＣＣ活性及びこの過程におけるＴ細胞の活性化を示した。図２５は、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体による自己Ｂ細胞の除去及びこの過程におけるＴ細胞の活性化を示す。図２６は、Ｒａｊｉ細胞に対する殺傷又は自己Ｂ細胞の除去過程における関連サイトカインの放出を示す。ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体がＣＤ２０高発現のＲａｊｉ細胞及びＰＢＭＣとコインキュベートする時、或は、ＰＢＭＣのみとインキュベートする時、それによるＲａｊｉ細胞又は自己Ｂ細胞への殺傷活性は、対照抗体ｂｓＡＢ１と同程度又はわずか強いが、ＴＤＣＣ過程におけるＴ細胞に対する活性化作用が比較的に穏やかであり、マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の発現アップレギュレートは、対照抗体に比べて、著しく低く、或いは、高くなく、同様に、刺激されたサイトカインＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの分泌量は、後者に比べて、著しく低く、或いは、高くないが、ＩＬ－６及びＩＮＦ－γ等の大量放出は、重度のサイトカインストーム症候群を引き起こす可能性がある。

【0220】

実施例１０：ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体とＦｃγ受容体との結合
アミノカップリングにより、Ｈｉｓ－Ｔａｇ抗体５０μｇ／ｍｌをＣＭ５チップに結合させ、各々Ｈｉｓタグ付きＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ_Ｈ１３１及びＦｃγＲＩＩＩＡ_Ｖ１５８組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、＃１０２５６－Ｈ０８Ｈ／１０３７４－Ｈ０８Ｈ１／１０３８９－Ｈ０８Ｈ１）を捕捉し、捕捉時間は、４０秒間であり、流速は、１０μＬ／ｍｉｎであり、ベースラインが安定化した後、勾配希釈抗体（初期濃度３７．５μｇ／ｍＬから２倍希釈）を３０μＬ／ｍｉｎの流速でチップを流し、結合時間は、１２０秒間であり、解離時間は、２００秒間であり、Ｂｉａｃｏｒｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアでフィッティングしてアフィニティー定数を得た。

【0221】

表１４に示されるように、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ_Ｈ１３１及びＦｃγＲＩＩＩＡ_Ｖ１５８に結合せず、野生型ＩｇＧ４対照抗体は、比較的に強いアフィニティーでＦｃγＲＩに結合し、ＦｃγＲＩＩＡ_Ｈ１３１にわずか弱く結合した。

【表17】

【0222】

実施例１１：マウス皮下Ｒａｊｉ移植腫瘍モデルの免疫再構築
６～８周齢Ｂ－ＮＧＤメスマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）を選択し、Ｒａｊｉ細胞３×１０^６を皮下接種し、腫瘍が６０ｍｍ^３に達すると、ランダムに群分けし、各々投与群３．０ｍｇ／ｋｇ、投与群０．６ｍｇ／ｋｇ、投与群０．１２ｍｇ／ｋｇ及び陰性対照群ＫＬＨ×ＣＤ３ ３ｍｇ／ｋｇとした。マウス１匹あたりＰＢＭＣ細胞１×１０^７個を尾静脈に注射し、３日後１回目のマウス投与を始め、投与間隔は、５日１回であり、合計３回投与した。マウスの腫瘍体積及びマウスの体重をモニターし、実験終了後、首を切断してマウスを処刑し、腫瘍を取り出して秤量し、その結果を記録した。
結果を図２７に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異性抗体は、インビボでの薬効が用量依存性を示し、中用量及び高用量での腫瘍抑制率が各々８２％、８９％である。腫瘍担持マウスは、上記用量に対して良好の耐性を示し、体重減少などの副作用を示しない。図２８は、低用量群（０．１２ｍｇ／ｋｇ）においてＣＤ２０×ＣＤ３κλ００２が４匹のマウスでの腫瘍抑制を達成したことを示す（ｎ＝５）。

【0223】

実施例１２：免疫不全マウス皮下ＲａｊｉとヒトＰＢＭＣとの混合腫瘍接種モデル
６～８週齢のＢ－ＮＧＤメスマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）を選択し、Ｒａｊｉ（３×１０^６個）及びヒトＰＢＭＣ（５×１０^６個）を混合してマウスの皮下に接種し、腫瘍体積が６０～１００ｍｍ^３に達すると、ランダムに群分けした。各々投与群３．０ｍｇ／ｍＬ、投与群０．６ｍｇ／ｍＬ、投与群０．１２ｍｇ／ｍＬ及び陰性対照群ＫＬＨ×ＣＤ３ ３ ｍｇ／ｋｇとした。投与間隔は、５日ごとに１回、合計２回で投与した。マウスの腫瘍体積及びマウスの体重をモニターし、実験終了後、首を切断してマウスを処刑し、腫瘍を取り出して秤量し、その結果を記録した。

【0224】

結果を図２９に示し、ＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体は、インビボでの薬効が用量依存性を示し、低用量、中用量及び高用量での腫瘍抑制率が各々６５％、９８％、１６２％であり、高用量群、中用量群では腫瘍が完全に抑制又は消失する。

【0225】

実施例１３：カニクイザルでのＣＤ２０×ＣＤ３κλ二重特異的抗体の薬効
８匹のカニクイザルを４用量群に分配し、各用量群は、２匹のサルからなる（１匹：メス、１匹：オス）。各投与群に受けた投与量は、各々ＣＤ２０×ＣＤ３κλ００２二重特異性抗体０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ（週に１回、３週間、合計４回投与する）及び１ｍｇ／ｋｇ（単回投与）であり、投与レジメンを表１５に示す。投与期間及び回復期間に、各群におけるすべてのサルは、一般的状況が良好であり、毒性反応が見られず、死亡又は瀕死が見られなかった。各投与量群では、体温に明らかな異常変化が見られず、ＩＩ誘導心電図波形が正常で、その心拍数、Ｒ－Ｒ間期、Ｐ－Ｒ間期、ＱＴ間期、ＱＲＳ時限、収縮期圧、拡張期圧等の指標に明らかな異常が見られなかった。投与後の異なる時点で、フローサイトメトリーにより末梢血におけるＢ細胞及びＴ細胞の集団の数の変化を分析し、Ｂ細胞は、細胞表面標識物ＣＤ２０で（ＣＤ２０＋細胞）鑑定され、Ｔ細胞はＣＤ３で（ＣＤ３＋細胞）鑑定される。投与してから８時間、末梢血におけるＢは、急速に除去され、２４時間後、検出下限を下回った（図３０）。

【表18】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【配列表】

2023539524000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-02-27

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

標的細胞表面に結合するＣＤ２０の第１の結合ドメイン及びＴ細胞表面に結合するＣＤ３的第２の結合ドメインを含む二重特異的抗体又はその抗原結合部分であって、前記第１の結合ドメインは、第１の軽鎖及び第１の重鎖を含み、前記第１の結合ドメインは、下記の軽鎖及び重鎖から選ばれるＣＤＲの組み合わせを含む、二重特異的抗体又はその抗原結合部分。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、６８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、６７、７１的第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、６２、６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、７７、７８を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ及びＣＤＲ３配列、
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、６２、６３を含む第１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、７７、８５を含む第１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【請求項2】

前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４、５９又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、６９、７２、７４、７９、８１、８３又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９又はその任意の変異体である第１の軽鎖可変領域と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３又はその任意の変異体である第１の重鎖可変領域を含む、
請求項１に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項3】

前記第２の結合ドメインは、第２の軽鎖及び第２の重鎖を含み，前記第２の結合ドメインは、下記の軽鎖及び重鎖から選ばれるＣＤＲの組み合わせを含む、請求項１または又は２に記載の二重特異的抗体または又はその抗原結合部分。
（１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、１５、９を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（１９）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２０）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２１）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２３）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２４）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３４を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２５）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、３７を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２６）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４０を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２７）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、２７、４３を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、
（２８）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、２０、２１を含む第２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、４７、２８を含む第２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列。

【請求項4】

前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１０、１２、１６、１８、２２又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４８、５０、５２又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はその任意の変異体である第２の軽鎖可変領域、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０又はその任意の変異体である第２の重鎖可変領域を含む、
請求項１～３のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項5】

前記第１の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８、９６、１００、１０２、１１０、１１８又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第１の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、９４、９８、１０４、１１２、１２０又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項6】

前記第２の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２、１０６、１１４又はそれらの任意の変異体から選ばれる軽鎖を含み、前記第２の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０、１０８、１１６又はそれらの任意の変異体から選ばれる重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第１の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
好ましくは、前記第２の結合ドメインは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８又はその任意の変異体である第２の重鎖を含み、
より好ましくは、前記二重特異的抗体は、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２又はその任意の変異体である第１の軽鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４又はその任意の変異体である第１の重鎖、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４又はその任意の変異体である第２の軽鎖、及び、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６又はその任意の変異体である第２の重鎖を含む、
請求項１～５のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分。

【請求項7】

請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸であって、
好ましくは、前記第１の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５、６０又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、７０、７３、７５、８０、８２、８４又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の軽鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１１、１３、１７、１９、２３又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の重鎖可変領域のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４９、５１、５３又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９、９７、１０１、１０３、１１１、１１９又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第１の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７、９５、９９、１０５、１１３、１２１又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の軽鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３、１０７、１１５又はそれらの任意の変異体から選ばれ、
好ましくは、前記第２の重鎖のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１、１０９、１１７又はそれらの任意の変異体から選ばれる、核酸。

【請求項8】

請求項７に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項9】

請求項７に記載の核酸又は請求項８に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項10】

請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター及び／又は請求項９に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項11】

治療部分に共有結合する請求項１～６のいずれか１項に記載の二重特異的抗体又はその抗原結合部分を含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、
好ましくは、前記治療部分は、細胞毒性部分、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、免疫刺激剤、分解ペプチド又は放射性同位体から選ばれるものであり、
好ましくは、前記細胞毒性部分は、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン（Ｃｅｐｈａｅｌｉｎｅ）、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、マイタンシン又はその類似体若しくは誘導体などのチューブリン阻害剤、モノメチルアウリスタチンＥ若しくはＦ又はその類似体若しくは誘導体などの有糸分裂阻害剤、ドラスタチン１０若しくは１５又はその類似体、イリノテカン又はその類似体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、カリケアミシン又はその類似体若しくは誘導体、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン又はクラドリビンなどの代謝拮抗剤、メクロレタミン、チオプリン（ｔｈｉｏｐｕｒｉｎｅ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣなどのアルキル化剤、シスプラチン又はカルボプラチン等の白金系誘導体、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ－１０６５）又はその類似体若しくは誘導体、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミスラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリマイシン（ｐｒｉｍｙｃｉｎ）、アントラマイシン（ＡＭＣ）などの抗生物質、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］－ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、ジフテリア毒素及びジフテリアＡ鎖及びその活性フラグメント及びハイブリッド分子などの関連分子、リシンＡ又は脱グリコシル化リシンＡ鎖毒素、コレラ毒素などのリシン、ＳＬＴ Ｉ、ＳＬＴ ＩＩ、ＳＬＴ ＩＩＶなどのシガ様毒素、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、シガ毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ボウマン・バーク大豆プロテアーゼ阻害剤、シュードモナス外毒素、アロリン、サポリン（Ｓａｐｏｒｉｎ）、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓなどのアメリカヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サポナリアコン（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン及びエノマイシン毒素、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンドトキシンＡ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリア毒素、シュードモナスエンドトキシンから選ばれるものであり、
好ましくは、前記サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８ａ、ＩＬ－２８ｂ、ＩＬ－２９、ＫＧＦ、ＩＦＮα、ＩＦＮ３、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ４０Ｌ、Ｆｌｔ３リガンド、幹細胞因子、アンセスチム及びＴＮＦαから選ばれるものであり、
好ましくは、前記放射性同位体は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ及び^２２７Ｔｈから選ばれるものである、抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項12】

請求項１～６のいずれか１項に記載の特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１０に記載の組成物及び／又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む、キット。

【請求項13】

ＣＤ２０関連疾患の診断、治療又は予防において使用されるための、請求項１～６のいずれか１項に記載の特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１０に記載の組成物及び／又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲートであって、
好ましくは、ＣＤ２０関連疾患は、Ｂ細胞疾患、例えば、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患を含み、
好ましくは、前記疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）から選ばれる、請求項１～６のいずれか１項に記載の特異的抗体又はその抗原結合部分、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１０に記載の組成物及び／又は請求項１１に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【国際調査報告】