特表 2023-539525 抗体療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-14

(54)【発明の名称】抗体療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230907BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230907BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230907BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 39/02 20060101ALI20230907BHJP

   A61K 39/12 20060101ALI20230907BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20230907BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P43/00 121

A61P35/02

A61K39/02

A61K39/12

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023514116

(86)(22)【出願日】2021-09-02

(85)【翻訳文提出日】2023-04-14

(86)【国際出願番号】 EP2021074314

(87)【国際公開番号】W WO2022049220

(87)【国際公開日】2022-03-10

(31)【優先権主張番号】20194018.6

(32)【優先日】2020-09-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】507316398

【氏名又は名称】ジェンマブ エー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100172683

【弁理士】

【氏名又は名称】綾 聡平

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100203208

【弁理士】

【氏名又は名称】小笠原 洋平

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】ベノニソン，フライン

(72)【発明者】

【氏名】ミデルバーグ，ジム

(72)【発明者】

【氏名】ヴァン・ホール，ソーボールド

(72)【発明者】

【氏名】アルティンタス，イシル

(72)【発明者】

【氏名】ケンパー，クリステル

(72)【発明者】

【氏名】シューマン，ジャニーン

(72)【発明者】

【氏名】ロイド，ケイティ・アン

(72)【発明者】

【氏名】オフチンニコフ，ヴィタリス

(72)【発明者】

【氏名】ゾム，ギスベルトゥス

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085AA14

4C085BA07

4C085BA51

4C085BB11

4C085BB36

4C085CC07

4C085CC08

4C085CC23

4C085EE06

4C085FF01

4C085FF11

4C085GG02

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA20

(57)【要約】

本発明は、腫瘍学の分野における併用療法、特に、ワクチンとＣＤ３および腫瘍細胞上の標的抗原に結合する結合剤との併用療法に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍の成長を予防もしくは低減するための、またはそれを必要とする対象における癌の治療のための方法であって、
ｉ）ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域、および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、
を前記対象に提供することを含む、方法。

【請求項2】

前記ワクチン抗原が、非腫瘍特異的ワクチン抗原である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記免疫原性組成物が、予防ワクチンまたは治療ワクチンなどのワクチンである、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記免疫原性組成物が、感染症、例えば、ウイルスまたは細菌感染に対するワクチンである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記感染症または感染が、コレラ（Ｖ．コレラ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ）、例えば、ＷＣ／ｒＢＳ、ジフテリア（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、コロナウイルス、脳炎、麻疹、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）（リンパ球性脈絡髄膜炎マンマレナウイルス（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ ｍａｍｍａｒｅｎａｖｉｒｕｓ、ＬＣＭＶ））、髄膜炎疾患（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、流行性耳下腺炎、百日咳／咳嗽（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、肺炎球菌疾患／感染症（肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））、灰白髄炎（ポリオ）、狂犬病、ロタウイルス感染症、風疹／ドイツ麻疹、破傷風（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ））、天然痘、腸チフス（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ））、水痘／水疱瘡、黄熱病、結核、プラーク（ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ））、バットリセウイルス、日本脳炎、Ｑ熱（コクシエラ菌（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉｄ））、水痘帯状疱疹（水疱瘡）、炭疽（炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ））からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記感染が、コロナウイルス感染、例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染である、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

前記感染症が、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）である、請求項４または５に記載の方法。

【請求項8】

前記感染が、インフルエンザ感染である、請求項４に記載の方法。

【請求項9】

前記感染症が、インフルエンザである、請求項４または８に記載の方法。

【請求項10】

前記感染が、リンパ球性脈絡髄膜炎マンマレナウイルス（ＬＣＭＶ）感染である、請求項４に記載の方法。

【請求項11】

前記感染症が、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）である、請求項４または１０に記載の方法。

【請求項12】

前記免疫原性組成物が、
弱毒化生ワクチンなどの生ワクチン、
不活化ワクチン、
スプリットウイルスワクチンなどのスプリットワクチン、
ウイルス様粒子に基づくワクチン、
サブユニットワクチン、タンパク質ベースのワクチン、ペプチドベースのワクチン、多糖ベースのワクチン、またはコンジュゲートワクチンなどの部分ワクチン、
組換えワクチン；および
ウイルスベクターベースのワクチンなどの核酸ベースのワクチン、
からなる群から選択される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記免疫原性組成物が、生ワクチン、例えば弱毒化生ワクチン、例えば、
弱毒化生ウイルスワクチン；例えば、弱毒化生麻疹ワクチン、弱毒化生ムンプスワクチン、弱毒化生風疹ワクチン、弱毒化生インフルエンザワクチン、弱毒化生水痘／水痘帯状疱疹ワクチン、弱毒化生ワクシニア（天然痘）ワクチン、弱毒化生経口ポリオワクチン（ＯＰＶ）（Ｓａｂｉｎ）、弱毒化生ロタウイルスワクチンまたは弱毒化生黄熱病ワクチン；
または、例えば、
弱毒化生細菌ワクチン；例えば、ＢＣＧワクチン、チフス菌（Ｔｙ２１）に対する弱毒化生ワクチン（経口腸チフスワクチンもしくは流行性チフスワクチン）、弱毒化生コレラワクチン、
である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記免疫原性組成物が、不活化ワクチン；例えば、
不活化ウイルスワクチン；例えば、不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）（ソークワクチン）、不活化インフルエンザワクチン、不活化狂犬病ワクチン、不活化日本脳炎ワクチンまたは不活化Ａ型肝炎ワクチン；
または、例えば、
不活化細菌ワクチン、例えば不活化腸チフスワクチン、不活化コレラワクチン、不活化ペストワクチン、不活化Ｑ熱ワクチン、不活化炭疽ワクチンもしくは不活化百日咳ワクチン、
である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記部分ワクチンが、
トキシドワクチン、例えば破傷風トキソイドまたはジフテリアトキソイドを含むワクチン；
サブユニットワクチン；および
サブビリオンワクチン、
からなる群から選択されるタンパク質ベースのワクチンである、請求項１２に記載の方法。

【請求項16】

前記部分ワクチンが、多糖ベースのワクチン；例えば、多糖ベースの髄膜炎菌性疾患（髄膜炎菌（Ａ，Ｃ，Ｙ．Ｗ１３５））ワクチン、多糖ベースのチフスワクチンまたは多糖ベースの肺炎球菌性疾患（肺炎連鎖球菌ワクチンである、請求項１２または１５に記載の方法。

【請求項17】

前記部分ワクチンが、ポリペプチドに連結された多糖を含むコンジュゲートワクチン、例えばコンジュゲート型血友病インフルエンザｂ型（Ｈｉｂ）ワクチン、コンジュゲート型肺炎連鎖球菌ワクチン、コンジュゲート型髄膜炎ワクチンである、請求項１２、１５および１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記免疫原性組成物が、組換えワクチンである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記免疫原性組成物が、ＢＣＧ；コレラ：不活化経口；４価デング熱（生、弱毒化）；ジフテリア－破傷風；ジフテリア破傷風（抗原含有量の減少）；ジフテリア－破傷風－百日咳（無細胞）（ＤＴａＰ／Ｔｄａｐ）；ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳菌およびインフルエンザ菌ｂ型（ＤＴａＰ－Ｈｉｂ）；ジフテリア－破傷風－百日咳（無細胞）－Ｂ型肝炎－インフルエンザ菌ｂ型－ポリオ（不活化）；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）（ＤＴＰ）；ジフテリア－破傷風－百日咳菌（全細胞）－インフルエンザ菌ｂ型（ＤＴＰ－Ｈｉｂ）；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）－Ｂ型肝炎；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）－Ｂ型肝炎インフルエンザ菌ｂ型；エボラザイール（ｒＶＳＶΔＧ－ＺＥＢＯＶ－ＧＰ、弱毒化生）；インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）；Ａ型肝炎（ヒト二倍体細胞）、不活化（成人）；Ａ型肝炎（ヒト二倍体細胞）、不活化（小児）；Ｂ型肝炎、Ｂ型肝炎（小児）；ヒトパピローマウイルス（二価）；ヒトパピローマウイルス（九価）；ヒトパピローマウイルス（四価）；インフルエンザ、パンデミックＨ１Ｎ１；インフルエンザ、季節性（四価）；インフルエンザ、季節性（三価）；日本脳炎ワクチン（不活化）；日本脳炎ワクチン（生、弱毒化）；はしか；麻疹および風疹；麻疹、流行性耳下腺炎および風疹（ＭＭＲ）；麻疹、流行性耳下腺炎、風疹および水痘（ＭＭＲＶ）麻疹、流行性耳下腺炎および風疹（ＭＭＲ）；髄膜炎菌Ａコンジュゲート１０μｇ；髄膜炎菌Ａコンジュゲート５μｇ；髄膜炎菌ＡＣＹＷ－１３５（コンジュゲートワクチン）；肺炎球菌（コンジュゲート）；ポリオワクチン－不活化（ＩＰＶ）；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）二価１および３型；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）一価１型；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）三価；狂犬病；ロタウイルス；ロタウイルス（生、弱毒化）；風疹；破傷風トキソイド；腸チフス（コンジュゲート）；腸チフス（多糖）；水痘；黄熱病、カルメット・ゲリン桿菌（ＢＣＧ）からなる群から選択されるワクチンである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記免疫原性組成物が、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンである、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンが、ＢＮＴ１６２ｂ２／ＣＯＭＩＲＮＡＴＹ（Ｔｏｚｉｎａｍｅｒａｎ）（Ｐｆｉｚｅｒ ＢｉｏＮＴｅｃｈ）、ＣＶｎＣｏＶ／ＣＶ０７０５０１０１（Ｚｏｒｅｃｉｍｅｒａｎ）（ＣｕｒｅＶａｃ）、ＡＺＤ１２２２バキスゼブリア（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ｍＲＮＡ－１２７３（Ｍｏｄｅｒｎａ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（Ｖｅｒｏ Ｃｅｌｌ）、Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ（ｌｎＣｏＶ）（Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ／ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（ＢＩＢＰ）、ＣｏＶ２ ｐｒｅＳ ｄ（商標）－ＡＳ０３ワクチン（Ｓａｎｏｆｉ）およびＣｏｖｉｓｈｉｅｌｄ（ＣｈＡｄＯｘ１＿ｎＣｏＶ－１９）（Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｄｉａ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ）、Ｓｐｕｔｎｉｋ Ｖ（ｒＡｄ２６およびｒＡｄ５）（Ａｃｅｌｌｅｎａ）、Ｓｐｕｔｎｉｋ Ｌｉｇｈｔ（ｒＡｄ２６）（Ａｃｅｌｌｅｎａ）、Ａｄ２６．ＣＯＶ２．Ｓ（ＪＮＪ７８４３６７３５）（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＣｏｒｏｎａＶａｖ（Ｓｉｎｏｖａｃ）、ＢＢＩＢＰ－ＣｏｒＶ（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｃｈｉｎａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ（Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ））、ＥｐｉＶａｃＣｏｒｏｎａ（Ｆｅｄｅｒａｌ Ｂｕｄｇｅｔａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｓｔａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｃｏｎｖｉｄｉｃｅａ（ＣａｎＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）およびＭＶＣ－ＣＯＶ１９０１（Ｍｅｄｉｇｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｃｏｒｐ．；Ｄｙｎａｖａｘ）からなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の方法。

【請求項22】

前記免疫原性組成物が、インフルエンザワクチンである、請求項１９に記載の方法。

【請求項23】

前記免疫原性組成物が、インフルエンザパンデミック（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザ季節性（三価）、およびインフルエンザ季節性（四価）からなる群から選択されるタイプのインフルエンザワクチンである、請求項１９または２２に記載の方法。

【請求項24】

前記感染症が、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）ワクチンである、請求項１９に記載の方法。

【請求項25】

前記免疫原性組成物が、小児ワクチンまたは子どもワクチンである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記免疫原性組成物が、子どもブースターワクチンである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記免疫原性組成物が、予防的または治療的癌ワクチンなどの癌ワクチンである、請求項１または３に記載の方法。

【請求項28】

前記ワクチン抗原が、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原である、請求項１、３、および２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記免疫原性組成物が、前記腫瘍または癌によって発現されるワクチン抗原を含む、請求項１、３、２７および２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記標的抗原およびワクチン抗原の両方が、前記腫瘍または癌によって発現される、請求項１、３および２７～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記結合角（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｇｅｎｔ）および前記免疫原性組成物が、同じ腫瘍または癌を指向するかまたは標的とする、請求項１、３および２７～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ワクチン抗原および前記標的抗原が、同じであるか、または前記ワクチン抗原が、前記標的抗原の一部、部分配列もしくは変異体である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記免疫原性組成物が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、サバイビンまたはＭｕｃ－１などの前記腫瘍によって過剰発現される抗原；癌ネオ抗原、例えばｐ５３ネオ抗原；ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＰＲＡＭＥ、ＣＴ８３、ＳＳＸ２またはＮＹ－ＥＳＯ－１などの癌精巣抗原；Ｍａｒｔ１、ＰＳＡまたはＰＡＰなどの分化抗原およびＨＰＶ抗原などのウイルス関連抗原からなる群から選択されるワクチン抗原を含む、請求項１、３および２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記免疫原性組成物が、個別化癌ワクチンであり、前記ワクチン抗原が、前記対象の腫瘍に特異的なネオ抗原である、請求項１、３および２７～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ワクチン抗原が、Ｔ細胞エピトープを含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記免疫原性組成物が、インビボおよび／またはインビトロで細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発することができる、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記ワクチンが、前記腫瘍または癌のＴ細胞活性化および／またはＴ細胞浸潤を含むＴ細胞応答を誘発することができる、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記免疫原性組成物が、ｉ）前記腫瘍もしくは癌のＴ細胞浸潤および腫瘍浸潤Ｔ細胞の活性化を含むＴ細胞応答を誘発すること、かつ／またはｉｉ）腫瘍における免疫細胞の浸潤および／もしくは拡大、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／もしくは樹状細胞（ＤＣ）の浸潤および／もしくは拡大を誘発すること、を行うことができる、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

Ｔ細胞浸潤および／または活性化が、前記結合剤の前記第２の結合領域が結合する抗原を発現する腫瘍を有するマウスにおいて、前記マウスを腫瘍特異的Ｔ細胞の移入に供し、次いで前記免疫原性組成物を皮下注射し、続いて前記結合剤を注射する手順を使用して決定される、請求項３７または３８に記載の方法。

【請求項40】

浸潤および／または活性化が、
ｉ）前記結合剤が結合することができる抗原を発現し、第１の生物発光を生じさせることができる第１の酸化酵素および第２の生物発光を生じさせることができる第２の酸化酵素を構成的に発現するＴ細胞を提供するステップであって、前記第２の酸化酵素の発現が、Ｔ細胞活性化によって、例えば活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）によって誘導される、ステップと、
ｉｉ）ＡｌｂｉｎｏＣ５７ＢＬ／６マウスなどの、前記結合剤の前記腫瘍標的化結合領域が結合する抗原を発現する腫瘍を有するマウスに、ｉ）で定義される前記Ｔ細胞を尾静脈内注射によって注射するステップと、
ｉｉｉ）ｉｉ）における前記Ｔ細胞の注射の１日後および８日後に、尾部基部での皮下注射によって２用量の前記免疫原性組成物をマウスに投与するステップと、
ｉｖ）ｉｉ）における前記Ｔ細胞の注射の１０日後および１４日後に、静脈内注射または注入によって２用量の前記結合剤を前記マウスに投与するステップと、
ｖ）前記酸化酵素のそれぞれの基質を前記マウスに注射し、前記第１および第２の生物発光を測定するステップと、
を含む手順において決定される、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

Ｔ細胞浸潤および／または活性化が、本明細書の実施例５に本質的に記載の手順を使用して、または実施例５に記載の手順を使用して決定される、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記方法が、前記対象における既存のＴ細胞免疫、例えば、以前のワクチン接種または感染からの既存のＴ細胞免疫を決定することを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

既存のＴ細胞免疫が、末梢Ｔ細胞活性化の測定によって決定される、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記方法が、子どもワクチン接種プログラムなどのワクチン接種プログラムへの前記対象の以前の参加を決定することを含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記免疫原性組成物が、前記対象が以前に有したことがある、および／またはＴ細胞免疫応答を発生させたことがある、感染または感染症、例えば、請求項のいずれか一項に定義される感染または感染症または感染に対するワクチンである、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記方法が、アジュバントの投与をさらに含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記アジュバントが、Ｔｈ１／Ｔｈ２アジュバント、Ｔｈ１アジュバントまたはＴｈ２アジュバント、好ましくはＴｈ１アジュバントである、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記アジュバントと共に投与された場合の前記免疫原性組成物が、Ｔｈ１／Ｔｈ２型免疫応答、Ｔｈ１型免疫応答またはＴｈ２型免疫応答、好ましくはＴｈ１型免疫応答を誘発することができる、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記免疫原性組成物が、アジュバントを含む、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

アジュバントを含む免疫原性組成物が、ＮＫ細胞応答および／またはＴｈ１／Ｔｈ２型免疫応答、Ｔｈ１型免疫応答、もしくはＴｈ２型免疫応答、好ましくはＴｈ１型免疫応答を誘発することができる、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記アジュバントが、アルミニウム塩、例えばミョウバン（ＸＡｌ（ＳＯ_４）_２・１２Ｈ_２Ｏ（式中、Ｘは、Ｋ^＋またはＮＨ_４ ^＋などの一価カチオンである））を含む、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記アジュバントが、水中油型エマルジョンなどのエマルジョン系アジュバントである、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記アジュバントが、
ａ）スクアレン、ポリソルベート８０およびソルビタントリオレエートを含むアジュバント；例えばＭＦ５９、
ｂ）スクアレン、ポリソルベート８０およびα－トコフェロールを含むアジュバント；例えばＡＳ０３、
ｃ）スクアレン、ポリオキシエチレン、セトステアリルエーテル、マンニトールおよびソルビタンオレエートを含むアジュバント；例えば、ＡＦ０３、
ｄ）３－Ｏ－デサシル－４’－モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、キラヤサポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）、フラクション２１（ＱＳ－２１）およびリポソームを含むアジュバント；例えばＡＳ０１；ならびに
ｅ）３－Ｏ－デサシル－４’－モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および水酸化アルミニウムを含むアジュバント；例えば、ＡＳ０４、
からなる群から選択される、請求項４６～５０および５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記アジュバントが、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、例えば、イミキモド（Ａｌｄａｒａ）、レシキモドおよびガルディキモドからなる群から選択されるＴＬＲ７アゴニストを含む、請求項４６または４９に記載の方法。

【請求項55】

前記アジュバントが、
ｉ）Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、髄膜炎菌ポリンＢ（ｐｏｒＢ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）およびチルソトリモドからなる群から選択されるＴＬＲ９アゴニスト、
ｉｉ）Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、グルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）およびネオセプチン－３からなる群から選択されるＴＬＲ４アゴニスト、
ｉｉｉ）Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）アゴニスト、例えばモビラン、エントリモドもしくは組換えフラジェリンＦｌｉｃＣからなる群から選択されるＴＬＲ５アゴニスト；ならびに／または
ｉｖ）Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、例えばＰｏｌｙ－ＩＣおよびその誘導体からなる群から選択されるＴＬＲ３アゴニスト、
を含む、請求項４６または４９に記載の方法。

【請求項56】

前記アジュバントが、脂質ナノ粒子（ＬＰＮ）などのナノ粒子、例えばアジュバントが組み込まれた脂質ナノ粒子を含む、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記免疫原性組成物または前記アジュバントが、サイトカインを含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記方法が、サイトカインと組み合わせて前記免疫原性組成物を投与することを含む、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記サイトカインが、ＩＬ２／アルデスロイキンなどのインターロイキン－２（ＩＬ２）受容体アゴニストまたはインターロイキン－１５である、請求項５７または５８に記載の方法。

【請求項60】

前記結合剤が、注射または注入などの非経口投与または全身投与によって、例えば静脈内注射または注入によって、前記対象に投与される、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記結合剤が、１つ以上の治療サイクルで前記対象に提供される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

前記結合剤が、１週間に１回（１Ｑ１Ｗ）、２週間に１回（１Ｑ２Ｗ）、３週間に１回（１Ｑ３Ｗ）または４週間に１回（１Ｑ４Ｗ）投与される、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記免疫原性組成物が、局所効果を達成するために／皮膚へのクリームの塗布などによる局所投与によって前記対象に投与される、請求項１～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記免疫原性組成物が、全身効果を達成するために／全身投与によって、例えば経口投与、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射または経粘膜経路によって投与される、請求項１～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記アジュバントが、局所効果を達成するために／皮膚へのクリームの塗布などによる局所投与によって前記対象に投与される、請求項１～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記アジュバントが、全身効果を達成するために／全身投与によって、例えば経口投与、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射または経粘膜経路によって投与される、請求項４６～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

インターロイキン２受容体アゴニストなどの前記サイトカインが、注射または注入などの非経口投与または全身投与によって、例えば、静脈内注射または注入によって前記対象に投与される、請求項５８～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記免疫原性組成物、ならびに、場合により、前記アジュバント、および／または前記サイトカイン、例えば前記インターロイキン２受容体アゴニストが、前記腫瘍の成長を減少させるために、および／または前記癌を治療するために提供される治療レジメンの一部として投与される、請求項１～６７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

前記免疫原性組成物および前記結合剤の投与が、養子Ｔ細胞療法と組み合わされる、請求項１～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

複数のＴ細胞を前記対象に投与することを含む、請求項１～６９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記免疫原性組成物が、前記結合剤の投与と同時にもしくはそれと同日に、前記結合剤の第１の用量の投与と同時にもしくはそれと同日に、および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの一部として前記対象に投与される、請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

前記免疫原性組成物の投与および前記結合剤の投与、例えば前記免疫原性組成物の投与、ならびに前記結合剤の第１の用量の投与および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの開始が、最大で２ヶ月、例えば最大で１ヶ月、最大で４週間、最大で３週間、最大で２週間、最大で１週間、最大で６日間、最大で５日間、最大で４日間、最大で３日間または最大で２日間の期間で区切られる、請求項１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

前記免疫原性組成物の投与および前記結合剤の投与、例えば前記免疫原性組成物の投与および前記結合剤の第１の用量の投与および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの開始が、２日～２ヶ月、例えば、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、例えば６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月または３～４週間の期間で区切られる、請求項１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記免疫原性組成物が、前記結合剤の投与前、前記結合剤の第１の投与量の投与前および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの前に前記対象に投与される、請求項１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記免疫原性組成物が、前記結合剤の投与の、前記結合剤の第１の投与量の投与の、および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの、２日前～２ヶ月前、例えば、前記結合剤の投与の、前記結合剤の第１の投与量の投与の、および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月、または例えば３～４週間前に前記対象に投与される、請求項１～７１および７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記複数のＴ細胞が、前記対象に投与されるか、または前記養子Ｔ細胞療法が、前記結合剤の投与と同時もしくは同日に、前記結合剤の第１の用量の投与と同時もしくはそれと同日に、および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの一部として、前記対象に提供される、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

前記複数のＴ細胞が、前記対象に投与されるか、または前記養子Ｔ細胞療法が、前記結合剤の投与前に、前記結合剤の第１の投与量の投与前に、および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの前に、前記対象に提供される、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

ｉ）前記免疫原性組成物の投与および前記複数のＴ細胞の投与、または前記養子Ｔ細胞療法、ならびに
ｉｉ）前記結合剤の投与、例えば、前記結合剤の第１の用量の投与および／または前記結合剤による第１の治療サイクルの開始、
が、２日間～２ヶ月、例えば、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、例えば６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月または３～４週間の期間で区切られる、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記免疫原性組成物および前記複数のＴ細胞の投与、または前記養子Ｔ細胞療法が、前記結合剤の投与の、前記結合剤の第１の投与量の投与の、および／または前記結合剤による前記第１の治療サイクルの、２日前～２ヶ月前、例えば、前記結合剤の投与の、前記結合剤の第１の投与量の投与の、および／または前記結合剤による前記第１の治療サイクルの、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月、または例えば３～４週間前に、前記対象に投与される、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記結合剤、前記免疫原性組成物、ならびに、場合により、前記アジュバント、前記複数のＴ細胞およびインターロイキン２のそれぞれが、有効量で前記対象に提供される、請求項６５～７９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記結合剤の第１の投与量が、前記免疫原性組成物の投与前に前記対象に投与され、および／または前記免疫原性組成物が、前記結合剤を用いた第２または後続の処置スケジュールの一部として投与される、請求項１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記方法が、前記対象の前記免疫原性組成物に対するＴ細胞特異的応答があるかどうかを決定すること、および／または、前記免疫原性組成物に特異的なＴ細胞の前記対象における増殖を監視することを含んでもよい、前記免疫原性組成物に対する任意のＴ細胞特異的応答を監視すること、を含む、請求項１～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記標的抗原が、前記腫瘍に特異的な抗原である、請求項１～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記標的抗原が、前記腫瘍または癌の細胞によって過剰発現される、例えば、健常組織の細胞と比較した場合に過剰発現される抗原である、請求項１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

前記標的抗原が、前記腫瘍または癌の細胞によって排他的に発現される抗原であるか、または前記腫瘍微小環境（例えば、ＴＡＭ、ＭＤＳＣ、Ｔｒｅｇ）内の免疫抑制細胞上で過剰発現される抗原である、請求項１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項86】

前記標的抗原が、Ｈｅｒ２、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ３３、ＥｐｈＡ２およびＭＣＳＰ（ＨＭＷ－ＭＡＡ）からなる群から選択される、請求項１～８５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

前記標的抗原に結合する抗原結合領域が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するハーセプチンの抗原結合領域、ＣＤ１９に結合するブリナツモマブの抗原結合領域、ＥｐＣＡＭに結合するカツマキソマブの抗原結合領域、ＥＧＦＲに結合するセツキシマブまたはパニツムマブの抗原結合領域、およびＣＤ３３に結合するリンツズマブの抗原結合領域からなる群から選択される、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項89】

前記腫瘍または癌が、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌および頭頸部の扁平上皮癌、子宮頸癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、軟部組織癌、例えば滑膜肉腫からなる群から選択される、請求項１～８８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項90】

前記腫瘍が、黒色腫および腺癌（例えば、乳管腺癌）からなる群から選択される、請求項１～８９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項91】

前記腫瘍が、血液腫瘍である、請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項92】

前記血液腫瘍が、Ｂ細胞リンパ腫、および慢性リンパ性白血病または急性リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

前記腫瘍が、免疫浸潤物を欠いている、例えば、機能的免疫濾液を欠いている、請求項１～９２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項94】

前記腫瘍が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）およびＭ２型マクロファージからなる群から選択される免疫細胞などの抑制性免疫細胞の存在を特徴とする、請求項１～９３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項95】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域が、ヒトＣＤ３ε（イプシロン）、例えば配列番号１に指定されるヒトＣＤ３ε（イプシロン）に結合する、請求項１～９４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項96】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域が、
それぞれ配列番号２、配列番号３および配列番号４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；［野生型抗ＣＤ３（ＳＰ３４／ヒト化ＳＰ３４、国際公開第２０１５００１０８５号（Ｇｅｎｍａｂ））－ＶＨ ＣＤＲ配列］を含み、
ならびに、それぞれ配列番号６、ＧＴＮおよび７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型抗ＣＤ３、ＶＬ ＣＤＲ配列］を含んでもよい、請求項１～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項97】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域が、
配列番号５７の配列、または配列番号５の配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型抗ＣＤ３－ＶＨ全長配列］を含み、
および、配列番号６０の配列、または配列番号８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型抗ＣＤ３－ＶＬ全長配列］を含んでもよい、請求項１～９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

前記結合剤が、配列番号５に示されるＶＨ配列および配列番号８に示されるＶＬ配列［野生型抗ＣＤ３（ヒト化ＳＰ３４、国際公開第２０１５００１０８５号（Ｇｅｎｍａｂ））ＶＨおよびＶＬ配列］を含む抗原結合領域を有する結合剤よりも低いヒトＣＤ３ε結合親和性を有し、好ましくは、前記親和性が、少なくとも５倍低い、例えば少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも２０倍低い、少なくとも３０倍低い、少なくとも４０倍低い、少なくとも４５倍低いまたは例えば少なくとも５０倍低い、請求項１～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

前記抗原結合領域が、２００ｎＭ～１０００ｎＭの範囲内、例えば３００～１０００ｎＭの範囲内、４００～１０００ｎＭの範囲内、５００～１０００ｎＭの範囲内、３００～９００ｎＭの範囲内、４００～９００ｎＭの範囲内、４００～７００ｎＭの範囲内、５００～９００ｎＭの範囲内、５００～８００ｎＭの範囲内、５００～７００ｎＭの範囲内、６００～１０００ｎＭの範囲内、６００～９００ｎＭの範囲内、６００～８００ｎＭの範囲内、または例えば６００～７００ｎＭの範囲内の平衡解離定数Ｋ_ＤでＣＤ３に結合する、請求項１～９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項100】

前記抗原結合領域が、１～１００ｎＭの範囲内、例えば５～１００ｎＭの範囲内、１０～１００ｎＭの範囲内、１～８０ｎＭの範囲内、１～６０ｎＭの範囲内、１～４０ｎＭの範囲内、１～２０ｎＭの範囲内、５～８０ｎＭの範囲内、５～６０ｎＭの範囲内、５～４０ｎＭの範囲内、５～２０ｎＭの範囲内、１０～８０ｎＭの範囲内、１０～６０ｎＭの範囲内、１０～４０ｎＭの範囲内、または例えば１０～２０ｎＭの範囲内の平衡解離定数Ｋ_ＤでＣＤ３に結合する、請求項１～９７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項101】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域が、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含み、
前記重鎖可変（ＶＨ）領域が、配列番号５に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と比較した場合、前記ＣＤＲ配列のうちの１つにおいてアミノ酸置換を有し、前記置換が、Ｔ３１、Ｎ５７、Ｈ１０１、Ｇ１０５、Ｓ１１０およびＹ１１４からなる群から選択される位置であり、前記位置が、配列番号５の配列に従ってナンバリングされ［ＶＨ＿ｈｕＣＤ３－Ｈ１Ｌ１］、
前記野生型軽鎖可変（ＶＬ）領域が、それぞれ配列番号６、ＧＴＮおよび配列番号７に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む、請求項１～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項102】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域の重鎖可変（ＶＨ）領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、配列番号５に示される配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と比較した場合、合計で最大で１、２、３、４または５個のアミノ酸置換を含む、請求項１０１に記載の方法。

【請求項103】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域の前記重鎖可変（ＶＨ）領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の前記アミノ酸配列が、前記野生型重鎖可変（ＶＨ）領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の前記アミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性または少なくとも９９％の配列同一性を有し、配列同一性が、ＣＤに結合する前記抗原結合領域の前記重鎖可変（ＶＨ）領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列からなるアミノ酸配列を、前記野生型重鎖可変（ＶＨ）領域の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を含むアミノ酸配列と整列することに基づいて計算される、請求項１０１または１０２に記載の方法。

【請求項104】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域が、Ｔ３１Ｍ、Ｔ３１Ｐ、Ｎ５７Ｅ、Ｈ１０１Ｇ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０５Ｐ、Ｓ１１０Ａ、Ｓ１１０Ｇ、Ｙ１１４Ｍ、Ｙ１１４Ｒ、Ｙ１１４Ｖからなる群から選択される変異を含む、請求項１～９５および９８～１０３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項105】

ＣＤ３に結合することができる前記抗原結合領域が、
ａ）配列番号９、配列番号３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ１－Ｔ３１Ｐ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ２、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｂ）配列番号１１、配列番号３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ１－Ｔ３１Ｍ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ２、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｃ）配列番号２、配列番号１３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ－Ｎ５７Ｅ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ１、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｄ）配列番号２、配列番号３および配列番号１５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｇ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、
ｅ）配列番号２、配列番号３および配列番号１７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｎ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］；
ｆ）配列番号２、配列番号３および配列番号１９に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｇ１０５Ｐ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］；
ｇ）配列番号２、配列番号３および配列番号２１に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｓ１１０Ａ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｈ）配列番号２、配列番号３および配列番号２３に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｓ１１０Ｇ］、ならびに配列番号６５８に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、
ｉ）配列番号２、配列番号３および配列番号２５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｖ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｊ）配列番号２、配列番号３および配列番号２７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｍ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｋ）配列番号２、配列番号３および配列番号２９に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｒ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、
を含む、請求項１～９５および９８～１０４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項106】

ＣＤ３に結合することができる前記抗原結合領域が、配列番号２、配列番号３および配列番号１５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｇ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］を含む、請求項１～８３および８６～９３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項107】

ヒトＣＤ３に結合することができる前記抗原結合領域が、
ａ）配列番号１０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｔ３１Ｐ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列［野生型全長配列］、
ｂ）配列番号１２に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｔ３１Ｍ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｃ）配列番号１４に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｎ５７Ｅ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｄ）配列番号１６に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｅ）配列番号１８に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｎ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｆ）配列番号２０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｇ１０５Ｐ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｇ）配列番号２２に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｓ１１０Ａ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｈ）配列番号２４に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｓ１１０Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｉ）配列番号２６に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｖ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｊ）配列番号２８に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｍ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列；ならびに
ｋ）配列番号３０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｒ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列
からなる群から選択されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、請求項１～１０６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項108】

ヒトＣＤ３に結合することができる前記抗原結合領域が、配列番号１０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列を含む、請求項１～９５および９８～１０７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項109】

前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるアイソタイプのものである、請求項１～１０８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項110】

前記結合剤が、全長抗体、例えば全長ＩｇＧ１抗体である、請求項１～１０９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項111】

前記結合剤が、ＩｇＧ１ｍ（ｆ）アロタイプの抗体である、請求項１～１１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項112】

前記結合剤が、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である、請求項１～１１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項113】

各抗原結合領域が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記可変領域がそれぞれ、３つのＣＤＲ配列、それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、４つのフレームワーク配列、それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４とを含む、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項114】

前記結合剤が、２つの重鎖定常領域（ＣＨ）および２つの軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、請求項１１３に記載の方法。

【請求項115】

前記結合剤が、第１および第２の重鎖を含み、前記第１および第２の重鎖のそれぞれが、少なくともヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含み、前記第１の重鎖において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＴ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｄ３９９、Ｆ４０５、Ｙ４０７およびＫ４０９からなる群から選択される位置に対応する前記位置のアミノ酸のうちの少なくとも１つが置換されており、前記第２の重鎖において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＴ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｄ３９９、Ｆ４０５、Ｙ４０７およびＫ４０９からなる群から選択される位置に対応する前記位置のアミノ酸のうちの少なくとも１つが置換されており、前記第１および第２の重鎖の前記置換が、同じ位置にはなく、前記アミノ酸位置が、ＥＵナンバリングに従ってナンバリングされている、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項116】

前記結合剤が、第１および第２の重鎖を含み、ヒトＩｇＧ１重鎖のＫ４０９に対応する位置のアミノ酸が、前記第１の重鎖のＲであり、ヒトＩｇＧ１重鎖のＦ４０５に対応する位置のアミノ酸が、前記第２重鎖のＬであるか、またはその逆である、請求項１～１１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項117】

前記結合剤が、第１および第２の重鎖を含み、前記第１および第２の重鎖の両方において、ＥＵナンバリングによるヒトＩｇＧ１重鎖の位置Ｌ２３４およびＬ２３５に対応する位置のアミノ酸残基が、それぞれＦおよびＥである、請求項１～１１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項118】

前記結合剤が、第１および第２の重鎖を含み、前記第１および第２の重鎖の両方において、ＥＵナンバリングでヒトＩｇＧ１重鎖の位置Ｄ２６５に対応する位置のアミノ酸残基がＡである、請求項１～１１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項119】

前記結合剤が、第１の重鎖を含み、および第２の重鎖を含んでもよく、前記第１の重鎖および存在する場合には前記第２の重鎖が、前記抗体が同一の非改変抗体に対してより少ない程度でＦｃ媒介エフェクター機能を誘導するように改変されている、請求項１～１１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項120】

前記結合剤が、カッパ（κ）軽鎖を含む、請求項１～１１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項121】

前記結合剤が、ラムダ（λ）軽鎖を含む、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項122】

前記結合剤が、ＣＤ３に結合する結合領域を含む重鎖およびラムダ（λ）軽鎖を含む、請求項１～１２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項123】

前記結合剤が、ＣＤ３に結合する前記結合領域を含む重鎖およびカッパ（κ）軽鎖を含む、請求項１～１２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項124】

前記カッパ（κ）軽鎖が、
ａ）配列番号３１に示される配列、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続する（ｃｏｎｓｅｑｕｔｉｖｅ）アミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列、および
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

前記ラムダ（λ）軽鎖が、
ａ）配列番号３２に示される配列、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続するアミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列、および
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２２に記載の方法。

【請求項126】

前記抗体が、第１の重鎖および／または第２の重鎖を含み、前記第１の重鎖および／または第２の重鎖の定常領域が、
ａ）配列番号３３に示される配列、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続するアミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列、および
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または本質的にそれらからなる、またはそれらからなる、請求項１～１２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項127】

前記最大で５個の置換が、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５ＬおよびＫ４０９Ｒからなる群から選択される１個以上の置換、例えば１、２、３または４個の置換を含む、請求項１２４～１２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項128】

腫瘍の成長の予防または低減を必要とする対象における腫瘍の成長を予防または低減するための方法であって、
少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物を前記対象に提供し、それによって前記腫瘍中の生細胞集団内の免疫細胞の相対量を増加させ、場合により、前記免疫細胞の活性化を増加させることと、
ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤を前記対象に提供することと、
を含む、方法。

【請求項129】

前記免疫細胞が、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞などのＴ細胞からなる群から選択される、請求項１２８に記載の方法。

【請求項130】

腫瘍の成長を予防もしくは低減するための、またはそれを必要とする対象における癌の治療のための方法であって、
ｉ）ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域、および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤をコードする核酸構築物と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、
を前記対象に提供することを含む、方法。

【請求項131】

前記結合剤が、請求項１、８３～１１５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１３０に記載の方法。

【請求項132】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１３０または１３１に記載の方法。

【請求項133】

前記結合剤が、インターロイキン２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５またはその類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与される、請求項１３２～１３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項134】

前記結合剤が、アジュバント、例えば、請求項３５～４４のいずれか一項で定義されるアジュバントとさらに組み合わせて投与される、請求項１３１～１３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項135】

対象における癌の腫瘍増殖または治療を予防または低減するのに使用するための結合剤であって、当該結合剤が、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、前記使用が、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて前記抗体を前記対象に提供することを含む、結合剤。

【請求項136】

前記結合剤が、請求項１、９５～１２７のいずれか一項に定義される通りである、請求項１３５に記載の使用のための結合剤。

【請求項137】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１３５または１３６に記載の使用のための結合剤。

【請求項138】

前記結合剤が、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与される、請求項１３５または１３６に記載の使用のための結合剤。

【請求項139】

前記結合剤が、アジュバント、例えば、請求項４６～５５４４のいずれか一項に記載のアジュバントとさらに組み合わせて投与される、請求項１３５または１３６に記載の使用のための結合剤。

【請求項140】

対象における腫瘍増殖または癌の治療を予防または低減するのに使用するための少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物であって、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて前記対象に提供される、免疫原性組成物。

【請求項141】

前記結合剤が、請求項１、９５～１２７のいずれか一項に定義される通りである、請求項１４０に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項142】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１４０または１４１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項143】

前記免疫原性組成物剤が、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与される、請求項１４０～１４２のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項144】

前記免疫原性組成物が、アジュバント、例えば請求項４５～５５のいずれか一項で定義されるアジュバントまたは例えば、免疫原性核酸配列または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む、遺伝子ベースの療法のための免疫原性組成物とさらに組み合わせて投与される、請求項１４０～１４３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項145】

対象における癌を治療するための医薬品の製造における結合剤の使用であって、前記結合剤が、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、前記治療が、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて前記結合剤を前記対象に提供することを含む、使用。

【請求項146】

前記結合剤が、請求項１、９５～１２７のいずれか一項に定義される通りである、請求項１４５に記載の結合剤の使用。

【請求項147】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１４５または１４６に記載の結合剤の使用。

【請求項148】

前記結合剤が、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与される、請求項１４５または１４６に記載の結合剤の使用。

【請求項149】

前記結合剤が、アジュバント、例えば、請求項４５～５５のいずれか一項に記載のアジュバントとさらに組み合わせて投与される、請求項１４５～１４８のいずれか一項に記載の結合剤の使用。

【請求項150】

対象における癌を治療するための医薬品の製造における少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物の使用であって、前記免疫原性組成物が、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて前記対象に提供される、使用。

【請求項151】

前記結合剤が、請求項１、９５～１２７のいずれか一項に定義される通りである、請求項１５０に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項152】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１５０または１５１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項153】

ＣＤ３に結合する結合領域および腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と、
少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と
を含む、キットオブパーツ。

【請求項154】

前記結合剤が、請求項１、９５～１２７のいずれか一項に定義される通りである、請求項１５３に記載のキットオブパーツ。

【請求項155】

前記免疫原性組成物が、請求項１～４５のいずれか一項に定義される通りである、請求項１５３または１５４に記載のキットオブパーツ。

【請求項156】

アジュバント、例えば、請求項４５～５５のいずれか一項に定義されるアジュバントをさらに含む、請求項１５３～１５５のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。

【請求項157】

ある量のインターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５またはその類似体をさらに含む、請求項１５３～１５６のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。

【請求項158】

前記免疫原性組成物と組み合わせた前記結合剤の投与などの使用説明書をさらに含む、請求項１５３～１５７のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、ＣＤ３に結合する抗原結合領域および腫瘍細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤と、を用いた治療を組み合わせた癌療法に関する。

【背景技術】

【0002】

免疫療法の進歩は、癌療法の分野を変えた。古典的な化学療法および放射線照射とは別に、多種多様な癌タイプの患者が、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）治療および養子細胞移入（ＡＣＴ）などの治療選択肢を利用するようになってきた。単一特異性モノクローナル抗体は、細胞上に発現された抗原、例えば腫瘍関連抗原またはＴ細胞特異的標的に特異的かつ二価に結合することができる。しかしながら、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、２つの異なる標的に一価で結合することができ、１つの細胞上の２つのエピトープまたは異なる細胞上の２つの抗原の標的化を可能にする。後者の状況では、ｂｓＡｂは、本質的に２つの細胞、例えばＴ細胞を腫瘍細胞に近接させる。Ｔ細胞係合ｂｓＡｂまたはＣＤ３ｂｓＡｂとしても知られる、Ｔ細胞特異的アームおよび腫瘍関連抗原特異的アームを含有するＢｓＡｂは、Ｔ細胞を腫瘍細胞と架橋し、それにより、Ｔ細胞のＴＣＲ特異性にかかわらず、腫瘍細胞のＴ細胞媒介死滅を誘導することができる。ＡＣＴは、免疫細胞、主に一般的にはＴ細胞の癌患者への養子移入を含む。特に、人工の高親和性Ｔ細胞受容体を発現するように遺伝子操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を使用する２つの療法が、血液癌の治療のためにＦＤＡによって承認されている（Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１９；３８０：４５－５６，Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１７；３７７：２５３１－２５４４）。予防ワクチンは、疾患を予防するために感染因子に対する抗体応答を誘導することを目的とすることが多い。一方、治療用癌ワクチンは、例えば腫瘍特異的配列を有するペプチドを注射することによって、既存の腫瘍特異的Ｔ細胞をブーストするために適用され得る（Ｚｗａｖｅｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；１６９（１）：３５０－８）。

【0003】

これらの療法の実装形態は、多くの癌タイプにおいてより良好な全生存率をもたらしたが、すべての癌患者が免疫療法から恩恵を受けるわけではない。注目すべきことに、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂは、血液腫瘍において有望な臨床結果を示しているが、臨床的有効性はこれまで実証されていないので、ＣＤ３ｂｓＡｂは、固形腫瘍の治療についてまだ承認されていない（Ｙｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１７；１０：１５５）。免疫療法は、（機能的な）免疫浸潤物を欠く腫瘍であるいわゆる「冷たい」腫瘍では顕著に有効性が低い。また、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）および／またはＭ２型マクロファージ（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｂｉｏｌ ２０２１；５（３）：ｅ１９００３１１）などの抑制性免疫細胞の存在を特徴とする免疫抑制性腫瘍微小環境は、Ｔ細胞浸潤を予防するか、またはＴ細胞機能を局所的に抑制し得る。この抑制環境を変換するために、（アジュバント非添加）季節性インフルエンザワクチン（Ｎｅｗｍａｎ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ２０２０）、遺伝子操作マウスサイトメガロウイルス（Ｅｒｋｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１６）または不活化改変ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（Ｄａｉ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１７）の腫瘍内注射が研究されており、これらはすべてマウス腫瘍モデルにおいて抗腫瘍効果の増強をもたらした。機構的には、そのような療法は、腫瘍常在抗原提示細胞によって発現されるパターン認識受容体の誘発を介して作用し、免疫抑制性腫瘍微小環境の免疫浸潤およびＴ細胞活性化を支援する環境への変換をもたらすと仮定される。非筋肉浸潤性膀胱癌を治療するためのバチルス・カルメット・ゲリン（ＢＣＧ）免疫療法の臨床使用もまた、腫瘍における局所炎症および免疫細胞浸潤の誘発に寄与する（Ｒｅｄｅｌｍａｎ－Ｓｉｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｕｒｏｌ ２０１４；１１（３）：１５３－６２）。

【0004】

腫瘍浸潤Ｔ細胞の数を増加させることは、多くの治療ワクチン接種研究の目的であった。しかしながら、治療ワクチン接種は、前悪性病変において有望な結果を示したが、そのようなワクチン接種は、癌患者において効率的な臨床的有効性を示さなかった。したがって、併用療法は、より有効であり得る（Ｍｅｌｉｅｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１５；１２５（９）：３４０１－３４１２）。これはまた、Ｂｅｎｏｎｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．によって結論付けられ、この研究では、マウスＴ細胞係合ｂｓＡｂによるマウス黒色腫（Ｂ１６Ｆ１０）を有するマウスの処置が、腫瘍Ｔ細胞浸潤および活性化の増強をもたらしたことが実証されたが、Ｔ細胞免疫は、組み込まれなかった（Ｂｅｎｏｎｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１９ Ｆｅｂ；１８（２）：３１２－３２２）。米国特許出願公開第２０１５０９５８１１号および同第２０１９０３８２４９０号の両方は、癌特異的ワクチンおよびモノクローナル抗体による免疫チェックポイント阻害からなる併用療法を記載している。さらに、Ｌｙ ｅｔ ａｌ．は、ＡＣＴ、腫瘍特異的ペプチドワクチン接種、アジュバントＴｏｌｌ様受容体リガンド（ＴＬＲ－Ｌ）７およびＩＬ－２からなる併用療法を調査し、腫瘍根絶を媒介し得るＴ細胞数の大幅な増加を見出した（Ｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０；７０（２１）：８３３９－４６）。
固形腫瘍中の腫瘍浸潤Ｔ細胞の数を増加させる方法が依然として必要とされており、これはその後、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂ抗体治療との併用療法に活用することができる。特に、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂおよび腫瘍非特異的ワクチンを含む療法が依然として必要とされており、これは、患者の特定の癌タイプに関係なく、患者への一般的なワクチンの投与を可能にする。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】米国特許出願公開第２０１５０９５８１１号明細書

【特許文献2】米国特許出願公開第２０１９０３８２４９０号明細書

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１９；３８０：４５－５６

【非特許文献2】Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１７；３７７：２５３１－２５４４

【非特許文献3】Ｚｗａｖｅｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；１６９（１）：３５０－８

【非特許文献4】Ｙｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１７；１０：１５５

【非特許文献5】Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｂｉｏｌ ２０２１；５（３）：ｅ１９００３１１

【非特許文献6】Ｎｅｗｍａｎ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ２０２０

【非特許文献7】Ｅｒｋｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１６

【非特許文献8】Ｄａｉ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１７

【非特許文献9】Ｒｅｄｅｌｍａｎ－Ｓｉｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｕｒｏｌ ２０１４；１１（３）：１５３－６２

【非特許文献10】Ｍｅｌｉｅｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１５；１２５（９）：３４０１－３４１２

【非特許文献11】Ｂｅｎｏｎｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１９ Ｆｅｂ；１８（２）：３１２－３２２

【非特許文献12】Ｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０；７０（２１）：８３３９－４６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明の目的は、腫瘍の成長を予防もしくは低減するための方法、またはそれを必要とする対象における癌の治療のための方法であって、
ｉ）ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域、および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を対象に提供することを含む、方法を提供することである。

【0008】

第２の態様では、本発明は、腫瘍の成長を予防もしくは低減する方法、またはそれを必要とする対象の癌を治療する方法であって、
ｉ）ＣＤ３に結合する第１の結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する第２の結合領域を含む結合剤をコードする核酸構築物と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を対象に提供することを含む、方法に関する。

【0009】

第３の態様では、本発明は、対象における癌の腫瘍増殖または治療を予防または低減するのに使用するための結合剤であって、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、その使用が、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて対象に抗体を提供することを含む、結合剤に関する。

【0010】

第４の態様では、本発明は、対象における癌の腫瘍増殖または治療を予防または低減するのに使用するための少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物であって、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて対象に提供される、免疫原性組成物に関する。

【0011】

第５の態様では、本発明は、対象における癌を治療するための医薬品の製造における結合剤の使用であって、結合剤が、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、その治療が、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて前記結合剤を対象に提供することを含む、結合剤の使用に関する。

【0012】

第６の態様では、本発明は、対象における癌を治療するための医薬品の製造における少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物の使用であって、免疫原性組成物が、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて対象に提供される、免疫原性組成物の使用に関する。

【0013】

最後に、本発明はまた、ＣＤ３に結合する結合領域および腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を含むキットオブパーツを提供する。

【0014】

これらおよび他の態様および実施形態は、以下の節でより詳細に説明される。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。（図１Ａ）処置タイムラインを示す図である。０日目に、ＷＴまたはＣＸＣＲ３ノックアウト（ＫＯ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。６日目および９日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。腫瘍の増殖を、腫瘍を週に２回測定し、腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えたときに屠殺することによって監視した。（図１Ｂ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。個々のマウスの腫瘍成長曲線（ｎ＝６～１０）を示す図である。（図１Ｃ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。処置群内のマウスの生存を示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロットを示す図である。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。（図１Ｄ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。別個の実験において（Ａ）に示されたものと同じ処置タイムラインに従って、マウス（ｎ＝４～５）を２０日目に屠殺し、腫瘍および脾臓を免疫浸潤物の分析のために処理した。フローサイトメトリーによって測定したＴ細胞およびＮＫ細胞の総ＣＤ４５陽性細胞浸潤および割合を示す。（Ｅ～Ｇ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性処置と組み合わせたＯＴ１ＡＣＴ＋ＯＶＡワクチン接種に対するＣＸＣＲ３媒介内因性細胞浸潤の効果。（図１Ｅ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。処置タイムラインを示す図である。０日目に、ＣＸＣＲ３ノックアウトＣ５７ＢＬ／６マウスに、５０，０００個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を皮下注射した。マウスは、３日目に１×１０^６個のＯＴ１濃縮脾細胞を受けた。３日目および１０日目に、マウスをＯＶＡペプチドで免疫した。免疫化に対するアジュバントとして、３日目および１０日目に注射部位にＡｌｄａｒａを局所適用し、１０日目および１１日目に組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。腫瘍成長を週に３回監視し、腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えたらマウスを屠殺した。（図１Ｆ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。個々のマウスの腫瘍成長曲線を示す図である。（図１Ｇ）ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置に対するＣＸＣＲ３媒介性免疫細胞浸潤の効果を示す図である。処置群内の生存マウスのパーセンテージを示す図である。（Ｆ）および（Ｇ）では、（Ａ）からの未処置対照マウスを参照のために示す。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。ｎｓ＝有意でない、＊Ｐ＜０．０５

【図2】Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目に１００，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。５日目に、３×１０^６個のＰｍｅｌ－１Ｔ細胞を静脈内投与した。６日目および９日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。６日目および１３日目に、マウスをＫＶＰペプチドで皮下免疫した。免疫化に対するアジュバントとして、Ａｌｄａｒａを注射部位に局所適用した。加えて、１３および１４日目に、組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。腫瘍成長を週に２回監視し、腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えたらマウスを屠殺した。（図２Ａ）実験の概略図。（図２Ｂ）個々のマウスの腫瘍成長曲線。（図２Ｃ）処置群内の生存マウスのパーセンテージをプロットし、未処置マウスの生存と比較した（＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。

【図3】－１日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１×１０^６個の濃縮ＯＴ１ Ｔ細胞を静脈内投与した。０日目に、それらに１００，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。３日目および１０日目に、マウスをＫＶＰまたはＯＶＡペプチドで免疫した。アジュバントとして、３日目および１０日目にＡｌｄａｒａを注射部位に局所適用し、１０日目および１１日目に組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。腫瘍成長を週に２回監視し、腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えたらマウスを屠殺した。（図３Ａ）実験の概略図。（図３Ｂ）個々のマウスの腫瘍成長曲線。（図３Ｃ）処置群内の生存マウスのパーセンテージをプロットし、未処置マウスの生存と比較した（＊Ｐ＜０．０５）。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。

【図4】ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍特異的ワクチン接種との組み合わせ、または適合する腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせが同様に抗腫瘍有効性を増強することを示す図である。（図４Ａ）－１日目に、１×１０^６個の濃縮ＯＴ－ＩＴ細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに静脈内投与した。０日目に、それらに１００，０００個のマウスＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。３日目および１０日目に、マウスをＫＶＰまたはＯＶＡペプチドで免疫した。アジュバントとして、３日目および１０日目にＡｌｄａｒａを注射部位に局所適用し、加えて、１０日目および１１日目に組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。腫瘍成長を週に２回監視した。（図４Ｂ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍特異的ワクチン接種との組み合わせ、または適合する腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせが同様に抗腫瘍有効性を増強することを示す図である。すべての処置群についての腫瘍成長曲線を示す。（図４Ｃ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍特異的ワクチン接種との組み合わせ、または適合する腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせが同様に抗腫瘍有効性を増強することを示す図である。異なる処置群のマウスの生存を示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロットを示す。腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えた場合、マウスを屠殺し、処置群内の生存マウスのパーセントをプロットし、未処置マウスの生存と比較した（＊＊Ｐ＜０．０１）。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。

【図5】ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。（図５Ａ）処置タイムラインを示す図である。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、背中の左側（ＴＲＰ１陰性ＫＰＣ３細胞）および右側（ＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３細胞）の両方に８０，０００個のＫＰＣ３腫瘍細胞を皮下注射した。５日目に、１×１０^６個の濃縮ＴｂｉＬｕｃ×ＯＴ１脾細胞をすべてのマウスに静脈内投与し、ＯＶＡワクチン接種を受けたマウスに、６日目および１３日目にＣｐＧ ＯＤＮ１８２６と混合した卵白アルブミン由来合成長ペプチドを皮下注射した。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを１５日目および１９日目に腹腔内注射した（矢印で示す）。（図５Ｂ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｃｙｃｌｕｃ１生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞活性化が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置を受けたマウスの群において示される図である。（図５Ｃ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｃｙｃｌｕｃ１生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞活性化が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスの群において示される図である。（図５Ｄ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｃｙｃｌｕｃ１生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞活性化が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置およびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスの群において示される図である。（図５Ｅ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｄ－ルシフェリン生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞浸潤が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置を受けたマウスの群において示される図である。（図５Ｆ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｄ－ルシフェリン生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞浸潤が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスの群において示される図である。（図５Ｇ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。Ｄ－ルシフェリン生物発光束／秒として測定されるＯＴ１ Ｔ細胞のＴ細胞浸潤が、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置およびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスの群において示される図である。同じデータセットが（Ｈ～Ｋ）に提示されている。（図５Ｈ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。ＫＰＣ３腫瘍におけるＴ細胞活性化を示す図である。（図５Ｉ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。ＫＰＣ３－ＴＲＰ１腫瘍におけるＴ細胞活性化を示す図である。（図５Ｊ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。ＫＰＣ３腫瘍におけるＴ細胞浸潤を示す図である。（図５Ｋ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。ＫＰＣ３－ＴＲＰ１腫瘍におけるＴ細胞浸潤を示す図である。１５日目および１９日目のＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ注射を矢印で示す。（図５Ｌ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。処置タイムラインを示す図である。０日目～１３日目のスケジュールは、（Ａ）について記載したスケジュールと同一であった。１６日目に、マウスを安楽死させ、血液、脾臓および腫瘍の単一細胞懸濁液を調製して、フローサイトメトリーによって免疫サブセット浸潤を分析した。（図５Ｍ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。血液におけるＣＤ４５^＋集団およびＯＴ１ナイーブ（ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋）対エフェクター（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）表現型内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。（図５Ｎ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。脾臓におけるＣＤ４５^＋集団およびＯＴ１ナイーブ（ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋）対エフェクター（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）表現型内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。（図５Ｏ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。ＴＲＰ１陰性およびＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団およびＯＴ１ナイーブ（ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋）対エフェクター（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）表現型内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。（図５Ｐ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。処置タイムラインを示す図である。０日目～１３日目のスケジュールは、（Ｌ）について記載したスケジュールと同一であった。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを１６および１９日目に腹腔内注射し、２０日目にマウスを安楽死させた。（図５Ｑ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。血液におけるエフェクター（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）表現型に対するＣＤ４５^＋集団およびＯＴ１ナイーブ（ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋）表現型内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。（図５Ｒ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。脾臓におけるエフェクター（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）表現型に対するＣＤ４５^＋集団およびＯＴ１ナイーブ（ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋）表現型内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。（図５Ｓ）ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの組み合わせで処置したアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスのＫＰＣ３－ＴＲＰ１陽性およびＫＰＣ３－ＴＲＰ１陰性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞浸潤および活性化を示す図である。左：示された処置を受けたマウスのＴＲＰ１陰性およびＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内のＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。中央：ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴとＯＶＡワクチン接種との組み合わせへのｂｓＡｂの添加後のＯＴ１ Ｔ細胞上のＣＤ６９の表面レベル発現を示す図である。右：ＣＤ４５^＋集団内のエフェクター表現型（ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－）を有するＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。統計学的有意性は、Ｗｅｌｃｈｔ検定を使用して決定した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図6】フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（図６Ａ）処置タイムラインを示す図である。（図６Ｂ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。未処置のまま、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせで処置されたマウスに由来する腫瘍の生細胞ゲート内のＣＤ４５^＋細胞（免疫細胞）のパーセンテージを示す図である。（図６Ｃ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内の従来のＤＣ（ｃＤＣ１）のパーセンテージを示す図である。（図６Ｄ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内の単球由来ＤＣ（ＭｏＤＣ）のパーセンテージを示す図である。（図６Ｅ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内のＮＫ１．１^＋／ＣＤ３^－（ＮＫ）細胞のパーセンテージを示す図である。（図６Ｆ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内のＭ１型マクロファージのパーセンテージを示す図である。（図６Ｇ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内の静止マクロファージ（Ｍ０マクロファージ）のパーセンテージを示す図である。（図６Ｈ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内の未成熟マクロファージのパーセンテージを示す図である。（図６Ｉ）フローサイトメトリーによって決定された、ＩＬ－２、ＡｌｄａｒａクリームまたはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせのいずれかで処置されたマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍におけるＣＤ４５^＋集団内のＴ細胞のパーセンテージを示す図である。Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ検定による統計解析、＊ｐ＜０．０５。

【図7】ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腫瘍特異的ワクチン接種または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせると、同様に抗腫瘍有効性が増強されることを示す図である。（図７Ａ）実験の概略図である。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに８０，０００個のマウスＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。３日目および１０日目に、マウスをＫＶＰまたはＲｐｌ１８ペプチドで免疫した。アジュバントとして、３日目および１０日目にＡｌｄａｒａを注射部位に局所適用し、加えて、１０日目および１１日目に組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。腫瘍成長を週に２回監視した。（図７Ｂ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腫瘍特異的ワクチン接種または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせると、同様に抗腫瘍有効性が増強されることを示す図である。個々のマウスの腫瘍成長曲線を示す図である。（図７Ｃ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腫瘍特異的ワクチン接種または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせると、同様に抗腫瘍有効性が増強されることを示す図である。異なる処置群のマウスの生存を示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロットを示す図である。腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えた場合、マウスを屠殺し、処置群内の生存マウスのパーセントをプロットし、ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性のみで処置したマウスの生存と比較した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。

【図8】フローサイトメトリーによって決定した、腫瘍非特異的ペプチド（Ｒｐｌ１８）をワクチン接種したマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。（図８Ａ）処置タイムラインを示す図である。（図８Ｂ）フローサイトメトリーによって決定した、腫瘍非特異的ペプチド（Ｒｐｌ１８）をワクチン接種したマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。未処置のままのマウスまたはＲｐｌ１８ペプチド、ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２をワクチン接種したマウスに由来する腫瘍の生細胞ゲート内のＣＤ４５^＋細胞（免疫細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４Ｔ細胞の比、ＣＤ８／Ｔｒｅｇの比、ＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞の記憶表現型（ナイーブＴ細胞［ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋］、エフェクターＴ細胞［Ｔｅｆｆ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－およびセントラルメモリーＴ細胞［Ｔｃｍ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^＋］）、単球由来ＤＣ（ＭｏＤＣ）、未成熟マクロファージ、好酸球、好中球および従来のＤＣ（ｃＤＣ１）のパーセンテージを示す図である。（図８Ｃ）フローサイトメトリーによって決定した、腫瘍非特異的ペプチド（Ｒｐｌ１８）をワクチン接種したマウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍内の異なる免疫細胞サブセットのパーセンテージを示す図である。ＣＤ１０３、グランザイムＢ（ＧｚｍＢ）について陽性のＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびＣＤ１９^＋Ｂ細胞のパーセンテージ、（Ｂ）で示されるように処置されたマウス由来の腫瘍集団内のＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＰＤ－１およびＮＫＧ２Ａについて陽性のＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞のパーセンテージを示す図である。Ｗｅｌｃｈｔ検定により実行した統計分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図9】ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。（図９Ａ）処置タイムラインを示す図である。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに８０，０００個のＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３腫瘍細胞を皮下注射した。８日目および１５日目に、ワクチン接種群のマウスを１５０μｇのＯＶＡペプチドで免疫した。アジュバントとして、８日目および１５日目にＡｌｄａｒａを注射部位に局所適用し、加えて、１５日目および１６日目に６００．０００ ＵＩ ｈＩＬ－２を腹腔内注射した。１７日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。１９日目に、マウスを屠殺し、腫瘍および脾臓を分析のために処理した。（図９Ｂ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。腫瘍内のＣＤ４５^＋、Ｔ細胞、Ｔ細胞サブセット組成物（ＣＤ８、ＣＤ４^＋ＦｏｘＰ３^－、ＣＤ４^＋ＦｏｘＰ３^＋、ナイーブＴ細胞［ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋］、エフェクターＴ細胞［Ｔｅｆｆ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－］およびセントラルメモリーＴ細胞［Ｔｃｍ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^＋］）、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の分析を示す図である。（図９Ｃ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。脾臓内のＣＤ４５^＋、Ｔ細胞、Ｔ細胞サブセット組成物（ＣＤ８、ＣＤ４^＋ＦｏｘＰ３^－、ＣＤ４^＋ＦｏｘＰ３^＋、ナイーブＴ細胞［ＣＤ４４^－ＣＤ６２Ｌ^＋］、エフェクターＴ細胞［Ｔｅｆｆ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^－］およびセントラルメモリーＴ細胞［Ｔｃｍ、ＣＤ４４^＋ＣＤ６２Ｌ^＋］）、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の分析を示す図である。（図９Ｄ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。腫瘍内のＣＤ８^＋Ｔ細胞における活性化および阻害性表面マーカー、エフェクター分子および転写因子（４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＧｚｍＢ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ６９、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、Ｔｉｍ３、ＣＤ３９、ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＧ１、Ｋｉ６７、ＴＣＦ－１、Ｅｏｍｅｓ、Ｔｂｅｔ、ＧＡＴＡ－３およびＲｏｒγＴ）の発現を示す図である。（図９Ｅ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。脾臓内のＣＤ８^＋Ｔ細胞における活性化および阻害性表面マーカー、エフェクター分子および転写因子（４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＧｚｍＢ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ６９、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、Ｔｉｍ３、ＣＤ３９、ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＧ１、Ｋｉ６７、ＴＣＦ－１、Ｅｏｍｅｓ、Ｔｂｅｔ、ＧＡＴＡ－３およびＲｏｒγＴ）の発現を示す図である。（図９Ｆ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。腫瘍内のＮＫ細胞上の活性化および阻害性表面マーカーおよびエフェクター分子（ＧｚｍＢ、ＣＤ６９、ＣＤ４９ａ、ＣＤ３９、ＫＬＲＧ１、ＮＫＧ２Ａ）の発現を示す図である。（図９Ｇ）ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独または腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせて処置したＫＰＣ３－ＴＲＰ１保有マウスの腫瘍および脾臓における免疫細胞の表現型検査を示す図である。上：腫瘍中のＣＤ４５^＋細胞内のマクロファージの頻度を示す図である。下：ｉＮＯＳ－Ｅｇｒ２－（Ｍ０）、ｉＮＯＳ＋Ｅｇｒ２－（Ｍ１）およびｉＮＯＳ－Ｅｇｒ２＋（Ｍ２）マクロファージ表現型の分布を示す図である。統計分析を、Ｂｒｏｗｎ－ＦｏｒｓｙｔｈｅおよびＷｅｌｃｈのＡＮＯＶＡを使用して実行し、ｐ値をＤｕｎｎｅｔｔのＴ３多重比較検定で決定した。ｎｓ＝有意でない、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図10】（図１０Ａ）実験のタイムラインの概略図である。－３０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１００×ＴＣＩＤ５０のＨＫｘ３１インフルエンザウイルスを投与した。０日目に、それらに８０，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。１０日目に、マウスを２×１０^６個のＴＣＩＤ５０熱不活化インフルエンザウイルスで免疫した。アジュバントとして、１０日目にＡｌｄａｒａを注射部位に局所適用し、１０日目および１１日目に組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。（図１０Ｂ）腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えた場合、マウスを屠殺した、異なる処置群における個々のマウスの腫瘍成長曲線を示す図である。腫瘍体積をｍｍ^３として示した。（図１０Ｃ）未処置マウスの生存と比較した処置群内のマウスの生存を示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒプロット（＊＊Ｐ＜０．０１）を示す図である。生存における統計学的に有意な差を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ分析によって計算した。

【発明を実施するための形態】

【0016】

定義
本発明の文脈における「結合剤」という用語は、所望の抗原に結合することができる任意の剤を指す。本発明の特定の実施形態では、結合剤は、抗体、抗体断片、またはその構築物である。結合剤はまた、合成、修飾または天然に存在しない部分、特に非ペプチド部分を含み得る。そのような部分は、例えば、抗体または抗体断片などの所望の抗原結合官能基または領域を連結し得る。一実施形態では、結合剤は、抗原結合相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域を含む合成構築物である。

【0017】

「免疫グロブリン」という用語は、２対のポリペプチド鎖、１対の軽（Ｌ）低分子量鎖および１対の重（Ｈ）鎖からなる構造的に関連する糖タンパク質のクラスを指し、４つすべてがジスルフィド結合によって相互接続されている。免疫グロブリンの構造は、十分に特徴付けられている。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。簡潔には、各重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）および重鎖定常領域（本明細書ではＣＨと略す）で構成されている。重鎖定常領域は、典型的には、３つのドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３で構成されている。ヒンジ領域は、重鎖のＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域であり、非常に柔軟である。ヒンジ領域中のジスルフィド結合は、ＩｇＧ分子中の２つの重鎖間の相互作用の一部である。各軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）および軽鎖定常領域（本明細書ではＣＬと略す）で構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる超可変領域（または配列および／もしくは構造的に定義されたループの形態で超可変であり得る超可変領域）にさらに細分されてもよい。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１－９１７（１９８７）も参照されたい）。特に明記しない限り、または文脈と矛盾しない限り、本明細書のＣＤＲ配列は、ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎを使用してＩＭＧＴ規則に従って識別される（Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９；２７：２０９－２１２ ａｎｄ Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．，Ｋａａｓ Ｑ．ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８，Ｄ３０１－３０７（２０１０）、インターネットｈｔｔｐアドレスｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／も参照されたい）。特に明記しない限り、または文脈と矛盾しない限り、本発明における定常領域のアミノ酸位置への言及は、Ｅｕナンバリングによるものとする（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９６９ Ｍａｙ；６３（１）：７８－８５；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．１９９１ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）。例えば、本明細書の配列番号３３は、ＩｇＧ１ｍ（ｆ）重鎖定常領域のＥｕナンバリングによるアミノ酸位置１１８～４４６を示す。

【0018】

「アミノ酸」および「アミノ酸残基」という用語は、本明細書では互換的に使用され得、限定的であると理解されるべきではない。アミノ酸は、各アミノ酸に特異的な側鎖（Ｒ基）と共にアミン（－ＮＨ_２）およびカルボキシル（－ＣＯＯＨ）官能基を含有する有機化合物である。本発明の文脈において、アミノ酸は、構造および化学的特性に基づいて分類され得る。したがって、アミノ酸のクラスは、以下の表の一方または両方に反映され得る。

【0019】

【表1】

【0020】

【表2】

【0021】

あるアミノ酸の別のアミノ酸への置換は、保存的置換または非保存的置換として分類され得る。本発明の文脈において、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、同様の構造的および／または化学的特徴を有する別のアミノ酸による置換、例えば、上記の２つの表のいずれかで定義されるのと同じクラスの別のアミノ酸残基に対する１つのアミノ酸残基の置換である：例えば、ロイシンは、両方とも脂肪族分岐疎水性であるので、イソロイシンで置換されていてもよい。同様に、アスパラギン酸は、両方とも小さい負荷電残基であるため、グルタミン酸で置換されていてもよい。

【0022】

本明細書で使用される「位置．．．に対応するアミノ酸」という用語は、ヒトＩｇＧ１重鎖のアミノ酸位置番号を指す。他の免疫グロブリン中の対応するアミノ酸位置は、ヒトＩｇＧ１とのアラインメントによって見出され得る。したがって、別の配列中のアミノ酸またはセグメント「に対応する」１つの配列中のアミノ酸またはセグメントは、他の配列がヒトＩｇＧ１重鎖に対して少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有するという条件で、典型的にはデフォルト設定で、ＡＬＩＧＮ、ＣｌｕｓｔａｌＷまたは同様のものなどの標準的な配列アラインメントプログラムを使用して他のアミノ酸またはセグメントと整列するものである。配列または配列中のセグメントを整列させ、それによって本発明によるアミノ酸位置に対する配列中の対応する位置を決定する方法は、当技術分野で周知であると考えられる。

【0023】

本発明の文脈における「抗体」（Ａｂ）という用語は、典型的な生理学的条件下で、有意な期間の半減期、例えば、少なくとも約３０分、少なくとも約４５分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、約２４時間以上、約４８時間以上、約３、４、５、６、７日間以上など、または任意の他の関連する機能的に定義された期間（例えば、抗原への抗体結合に関連する生理学的応答を誘導、促進、増強および／または調節するのに十分な時間および／または抗体がエフェクター活性を動員するのに十分な時間）で抗原に特異的に結合する能力を有する、免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の断片、またはそれらのいずれかの誘導体を指す。免疫グロブリン分子の重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体という用語は、本明細書で使用される場合、単一特異性抗体だけでなく、２つ以上などの複数、例えば３つ以上の異なる抗原結合領域を含む多重特異性抗体も含む。抗体の定常領域（Ａｂ）は、免疫系の様々な細胞（エフェクター細胞など）および補体活性化の古典的経路における第１の成分であるＣ１ｑなどの補体系の成分を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。上記のように、本明細書における抗体という用語は、特に明記しない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、抗原結合断片である、すなわち抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の断片を含む。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行され得る得ることが示されている。「抗体」という用語に包含される抗原結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ’もしくはＦａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片、または国際公開第２００７０５９７８２号（Ｇｅｎｍａｂ）に記載されている一価抗体、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよび本質的にＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよび本質的にＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）本質的にＶＨドメインからなり、ドメイン抗体（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ；２１（１１）：４８４－９０）とも呼ばれるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４－５４６（１９８９））、（ｖｉ）ラクダ科動物またはナノボディ分子（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ；５（１）：１１１－２４）、ならびに（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされているが、それらは、組換え法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって連結され得る（一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知、例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）ａｎｄ Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８）を参照されたい）。そのような一本鎖抗体は、特に明記されない限り、または文脈によって明確に示されない限り、抗体という用語に包含される。そのような断片は、一般に抗体の意味の範囲内に含まれるが、それらは、集合的におよびそれぞれ独立して本発明の固有の特徴であり、異なる生物学的特性および有用性を示す。抗体という用語は、特に明記しない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体およびヒト化抗体などの抗体様ポリペプチド、ならびに酵素的切断、ペプチド合成、および組換え技術などの任意の公知の技術によって提供される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体断片（抗原結合断片）も含むことも理解されるべきである。生成される抗体は、任意のアイソタイプのものであり得る。本明細書で使用される「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリン（サブ）クラス（例えば、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥもしくはＩｇＭ）またはその任意のアロタイプ、例えばＩｇＧ１ｍ（ｚａ）およびＩｇＧ１ｍ（ｆ）［配列番号３３］を指す。したがって、一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１クラスの免疫グロブリンまたはその任意のアロタイプの重鎖を含む。さらに、各重鎖アイソタイプは、カッパ（κ）軽鎖またはラムダ（λ）軽鎖のいずれかと組み合わせることができる。

【0024】

したがって、特定のアイソタイプ、例えばＩｇＧ１が本明細書で言及される場合、この用語は、特定のアイソタイプ配列、例えば特定のＩｇＧ１配列に限定されず、抗体が他のアイソタイプよりもそのアイソタイプ、例えばＩｇＧ１に配列が近いことを示すために使用される。したがって、例えば、本発明のＩｇＧ１抗体は、定常領域の変異を含む、天然に存在するＩｇＧ１抗体の配列変異体であり得る。

【0025】

本発明の文脈における「多重特異性抗体」という用語は、異なる抗体配列によって定義される２つ以上の異なる抗原結合領域を有する抗体を指す。抗体が異なる抗体配列によって定義される２つの異なる抗原結合領域を有する場合、それは「二重特異性抗体」と称される。多重特異性抗体は、任意の二重特異性抗体フォーマットを含む任意のフォーマットであり得る。

【0026】

本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列およびヒト免疫グロブリン定常ドメインに由来する可変領域およびフレームワーク領域を有する抗体を含むことを意図している。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発またはインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異、挿入もしくは欠失）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の非ヒト種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。

【0027】

本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体定常ドメインおよびヒト可変ドメインに対して高レベルの配列相同性を含有するように改変された非ヒト可変ドメインを含む、遺伝子操作された非ヒト抗体を指す。これは、一緒に抗原結合部位を形成する６つの非ヒト抗体ＣＤＲを相同ヒトアクセプターＦＲにグラフトすることによって達成することができる（国際公開第９２／２２６５３号および欧州特許第０６２９２４０号明細書を参照されたい）。親抗体の結合親和性および結合特異性を完全に再構成するために、親抗体（すなわち、非ヒト抗体）からヒトフレームワーク領域へのフレームワーク残基の置換（復帰突然変異）が必要とされ得る。構造相同性モデリングは、抗体の結合特性に重要なフレームワーク領域中のアミノ酸残基を同定するのに役立ち得る。したがって、ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列、主に、非ヒトアミノ酸配列に対する１つ以上のアミノ酸復帰変異を含んでいてもよいヒトフレームワーク領域、および完全ヒト定常領域を含み得る。必ずしも復帰突然変異ではないさらなるアミノ酸修飾を適用して、親和性および生化学的特性などの好ましい特徴を有するヒト化抗体を得てもよい。

【0028】

本明細書で使用される場合、文脈に矛盾しない限り、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリンの重鎖の２つのＦｃ配列からなる抗体領域を指し、前記Ｆｃ配列は、抗体のＮ末端からＣ末端に向かう方向に、少なくともヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。抗体のＦｃ領域は、免疫系の様々な細胞（エフェクター細胞など）および補体系の成分を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0029】

本明細書で使用される「ヒンジ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のヒンジ領域を指す。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のヒンジ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥｕナンバリングによるアミノ酸２１６～２３０に対応する（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．第５版－米国保健福祉省、ＮＩＨ公開番号９１－３２４２、ｐｐ６６２，６８０，６８９（１９９１））。しかしながら、ヒンジ領域は、本明細書に記載される他のサブタイプのいずれかであってもよい。

【0030】

本明細書で使用される「ＣＨ１領域」または「ＣＨ１ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ１領域を指す。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１領域は、Ｋａｂａｔ（同上）に示されるようなＥｕナンバリングによるアミノ酸１１８～２１５に対応する。しかしながら、ＣＨ１領域はまた、本明細書に記載される他のサブタイプのいずれかであり得る。

【0031】

本明細書で使用される「ＣＨ２領域」または「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ２領域を指す。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ２領域は、Ｋａｂａｔ（同上）に示されるようなＥｕナンバリングによるアミノ酸２３１～３４０に対応する。しかしながら、ＣＨ２領域はまた、本明細書に記載される他のサブタイプのいずれかであり得る。

【0032】

本明細書で使用される「ＣＨ３領域」または「ＣＨ３ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ３領域を指す。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ３領域は、Ｋａｂａｔ（同上）に示されるようなＥｕナンバリングによるアミノ酸３４１～４４７に対応する。しかしながら、ＣＨ３領域はまた、本明細書に記載される他のサブタイプのいずれかであり得る。

【0033】

「全長」という用語は、抗体の文脈で使用される場合、抗体が断片ではないが、そのアイソタイプについて自然界で通常見られる特定のアイソタイプのドメイン、例えばＩｇＧ１抗体のＶＨ、ＣＨ１領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ヒンジ、ＶＬおよびＣＬドメインのすべてを含有することを示す。

【0034】

本明細書で使用される場合、所定の抗原またはエピトープへの抗体の結合の文脈における「結合する」または「結合することができる」という用語は、典型的には、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して決定される場合、または例えば、リガンドとして抗原および検体として抗体を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を使用して決定される場合、約１０^－７Ｍ以下、例えば約１０^－７Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－９Ｍ以下、例えば１０^－９Ｍ以下、例えば約１０^－１０Ｍ以下、例えば約１０^－１０Ｍ以下、例えば１０^－１１、もしくは例えば１０^－１１Ｍ以下、またはそれ以下のＫ_Ｄに対応する親和性での結合である。抗体は、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ウシ血清アルブミン、カゼイン）への結合について、そのＫ_Ｄよりも少なくとも十倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１，０００倍低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫ_Ｄに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性がより高い量は、抗体のＫ_Ｄに依存するので、抗体のＫ_Ｄが非常に低い場合（すなわち、抗体は高度に特異的である）、抗原に対する親和性が非特異的抗原に対する親和性よりも低い程度は、少なくとも１０，０００倍であり得る。

【0035】

本明細書で使用される「ｋ_ｄ」（ｓｅｃ^－１）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指す。前記値は、ｋ_ｏｆｆ値とも称される。

【0036】

本明細書で使用される「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指す。

【0037】

本明細書で使用される「結合領域」という用語は、例えば細胞、細菌、またはビリオン上に存在するポリペプチドなどの分子に結合することができる、抗体などの結合剤の領域を指す。本明細書で使用される場合、「結合領域」は、特に、抗原と相互作用し、かつ重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域の両方を含む抗体などの結合剤の領域を指し得る。

【0038】

本明細書で使用される「抗原」という用語は、免疫応答を誘発することができる任意の物質を広く指す。いくつかの実施形態では、「抗原」は、タンパク質性であってもよく、または多糖であってもよい。

【0039】

本明細書で使用される「標的抗原」という用語は、（治療用）抗体によって結合することができる分子である。

【0040】

本明細書で使用される「免疫原性組成物」という用語は、アジュバントまたは抗原に対する免疫応答を増加させるために使用される分子などの免疫刺激剤の有無にかかわらず、抗原および／または抗原をコードする少なくとも１つの核酸分子を含有する組成物を指す。免疫原性組成物は、ヒトまたは動物対象への投与時に、前記動物またはヒト対象内で体液性応答（例えば、抗体応答）、細胞性応答（例えば、Ｔ細胞応答）、または先天性応答（例えば、顆粒球、抗原提示細胞、ＮＫ細胞の活性化）および／または局所炎症を誘発する組成物であると当業者によって理解されるであろう。

【0041】

本明細書で使用される「ワクチン」は、少なくとも１つのワクチン抗原および／またはワクチン抗原をコードする少なくとも１つの核酸分子、ならびに薬学的に許容される希釈剤または担体を含み、賦形剤、アジュバントおよび／もしくは添加剤または保護剤を組み合わせて含んでもよい調製物であると理解される。ワクチン抗原は、ワクチン接種に適した任意の材料に由来してもよく、例えば、抗原または免疫原は、病原体、例えば細菌もしくはウイルス粒子など、または腫瘍もしくは癌性組織に由来してもよい。抗原または免疫原は、アジュバントの存在下または非存在下のいずれかで、体液性応答（例えば、抗体応答）および／または細胞性応答（例えば、Ｔ細胞応答）などの適応免疫応答を提供するように身体の適応免疫系を刺激する。本発明の文脈において、ワクチンは、感染後または対象が腫瘍もしくは癌と診断された後に対象に与えられる治療ワクチンであり得、疾患の進行を軽減または停止することを意図している。ワクチンはまた、感染因子への曝露前または対象が腫瘍もしくは癌と診断される前に対象に提供される防止的または予防的ワクチンであってもよく、初期感染もしくは腫瘍形成を予防すること、または感染もしくは腫瘍成長の速度もしくは負荷を低減することを意図している。

【0042】

本明細書で使用される場合、「ワクチン抗原」という用語は、前記抗原に特異的なＢリンパ球および／またはＴリンパ球の産生をもたらす体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導することができる分子である。

【0043】

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体および／または対象の免疫系によって、具体的には抗体、Ｂ細胞、またはＴ細胞によって認識される抗原の一部を指す。エピトープとしては、Ｂ細胞エピトープおよびＴ細胞エピトープが挙げられる。Ｂ細胞エピトープは、特異的抗体産生Ｂ細胞による認識に必要なペプチド配列または炭水化物である。Ｂ細胞エピトープは、抗体によって認識される抗原の特定の領域を指す。エピトープに結合する抗体の部分は、パラトープと呼ばれる。エピトープは、構造およびパラトープとの相互作用に基づいて、立体構造エピトープまたは線状エピトープであり得る。線状または連続的なエピトープは、タンパク質の特定の領域の一次アミノ酸配列によって定義されるか、または単糖組成によって定義することができる。抗体と相互作用する配列は、タンパク質または炭水化物上で連続的に互いに隣接して位置し、エピトープは、通常、単一のペプチドによって模倣され得る。立体配座エピトープは、天然タンパク質、炭水化物または糖タンパク質の立体配座構造によって定義されるエピトープである。これらのエピトープは、連続的であっても不連続的であってもよく、すなわち、エピトープの成分は、折り畳まれた天然のタンパク質構造において互いに近接したタンパク質の異なる部分に位置することができる。Ｔ細胞エピトープは、細胞表面上のタンパク質に関連して特異的Ｔ細胞による認識に必要とされるペプチド配列、脂質、炭水化物または代謝産物から構成される。Ｔ細胞エピトープは、ＡＰＣによって細胞内でプロセシングされ、かつ抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含むすべての有核細胞の表面上に提示されるポリペプチド、脂質、炭水化物または代謝産物に由来し、それらは、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩを含む古典的主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、またはＭＲ１、ＣＤ１もしくはブトロフィリン（ＢＴＮ３Ａ１）などの非古典的ＭＨＣ様分子に結合する。ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子の文脈で提示されるＴ細胞エピトープは、特定のＴ細胞のＴ細胞受容体によって認識され得る。

【0044】

本明細書で使用される場合、「生ワクチン」は、生きている微生物またはウイルスを含むワクチンを指す。ほとんどの生ワクチンは、生きている微生物またはウイルスから調製された 「弱毒化生ワクチン」 であり、これらは、病原性ではないか、または関連する対象において病原性が低下しているか、または防御免疫などの免疫応答を誘導する能力を保持しながら、病原性を低下または消失させるための治療を受けているかのいずれかである。治療は、例えば、それらの病原性の喪失をもたらす有害条件下での培養を含み得る。

【0045】

本明細書で使用される「不活化ワクチン」という用語は、制御された条件下で成長させ、次いで、典型的には化学処理、例えばホルムアルデヒドによる処理、または熱処理によって、死滅または不活化させた微生物またはウイルス粒子を含むワクチンを指す。

【0046】

本明細書で使用される「ウイルス様粒子」および「ＶＬＰ」という用語は、いかなるウイルス遺伝物質も含有しないウイルスに似た非感染性粒子を指す。ＶＬＰは、カプシドタンパク質などのウイルス構造タンパク質の発現およびそれらの自己集合の結果である。

【0047】

本発明の文脈において、「部分ワクチン」という用語は、細菌、ウイルスまたは他の微生物の一部のみを含むワクチンを指す。「部分ワクチン」は、タンパク質ベースまたは多糖ベースのいずれであってもよく、サブユニット、トキソイド（不活化細菌毒素）、非コンジュゲート／純粋多糖および／またはコンジュゲート多糖、例えば非コンジュゲート／純粋もしくはコンジュゲート細菌細胞壁多糖を含み得る。

【0048】

本明細書で使用される「サブユニットワクチン」は、免疫応答を誘発することができる細菌もしくはウイルスもしくは他の微生物の単離されたもしくは精製されたワクチン抗原、またはウイルスもしくは細菌ポリペプチドもしくはそのようなポリペプチドをコードする核酸などのいくつかの単離されたおよび／もしくは精製された抗原の組み合わせを含むワクチンを指す。

【0049】

本文脈において、「タンパク質ベースのワクチン」という用語は、細菌、ウイルスまたは他の微生物由来のタンパク質性抗原などの単離、精製または組換えタンパク質性ワクチン抗原を含むワクチンを指す。

【0050】

本発明の文脈において、「多糖ベースのワクチン」という用語は、単離または精製多糖ワクチン抗原、例えば細菌／細菌莢膜多糖のカプセルに由来する多糖を含むワクチンを指す。

【0051】

「コンジュゲートワクチン」という用語は、互いにコンジュゲートされた２つの抗原を含むワクチンを広く指し、典型的には、「弱い」ワクチン抗原は、より強い抗原にコンジュゲートされる。コンジュゲートワクチンの例としては、免疫原性を増強するためにタンパク質にコンジュゲートされた細菌莢膜多糖などの多糖を含むワクチンが挙げられる。

【0052】

「組換えワクチン」という用語は、組換えＤＮＡ技術によって産生されたワクチン抗原を含むワクチンを指す。一般に、これは、ワクチン抗原をコードするヌクレオチド配列を細菌、真菌または哺乳動物細胞に挿入し、これらの細胞で抗原を発現させ、次いで細菌、真菌または哺乳動物細胞の培養物から抗原を精製することを伴う。

【0053】

本文脈において、「核酸ベースのワクチン」という用語は、ワクチン抗原をコードする核酸分子を含む組成物を広く指す。核酸分子は、例えば、プラスミドの形態でデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）であり得、または例えば、ｍＲＮＡの形態でリボ核酸（ＲＮＡ）であり得る。ナノ粒子ベースのヌクレオチドワクチン、例えば脂質ベース、ペプチドベース、多糖ベースおよび／または無機ナノ粒子製剤であり得る。

【0054】

「ウイルスベクターベースのワクチン」という用語は、ワクチン抗原をコードする核酸配列を保有するように遺伝子操作を受けた生きている複製ウイルスを含む組成物を指す。ウイルスは、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、サイトメガロウイルス、またはセンダイウイルスであり得る。

【0055】

本発明の文脈において、「小児ワクチン」および「子どもワクチン」という用語は、感染および／または感染症の発症のリスクを予防または低減するために子ども用に意図され、推奨され、および／または子どもに与えられるワクチンを指すために互換的に使用される。

【0056】

定期的なワクチン接種／免疫化の推奨は、世界保健機関（ＷＨＯ）によって提供されている：一部の定期的なワクチン接種／免疫化は、すべての子どもに推奨されているが、例えば特定の地理的地域に居住する子どもおよび特に高リスク集団の子どもにも別個の推奨がある。定期的なワクチン接種に関する推奨は、以下の感染症／病原体およびワクチンに関する、ＷＨＯによって公開されたポジションペーパーに見出すことができる：
Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／ＢＣＧ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１８，９３：７３－９６）
Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：３６９－３９２）
Ｐｏｌｉｏ／ＯＰＶ ａｎｄ ＩＰＶ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１６，９：１４５－１６８）
Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：４１７－４３６）
Ｔｅｔａｎｕｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：５３－７６）
Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１５，９０：４３３－４６０）
Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１３，８８：４９－６４）
Ｍｅａｓｌｅｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：２０５－２２８）
Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１９，９４：８５－１０４）
Ｒｕｂｅｌｌａ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１１，８６：３０１－３１６）
Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１５，９０：６９－８８）
Ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：２４１－２６８）
Ｙｅｌｌｏｗ Ｆｅｖｅｒ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１３，８８：２６９－２８４）
Ｔｉｃｋ－Ｂｏｒｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ（ＴＢＥ）：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１１，８６：２４１－２５６）
Ｔｙｐｈｏｉｄ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１８，９３：１５３－１７２）
Ｃｈｏｌｅｒａ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１７，９２：４７７－５００）
Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１２，８７：２６１－２７６）
Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１１，８６：５２１－５４０）；ｕｐｄａｔｅ ｆｏｒ ＭｅｎＡ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ Ｒｅｃｏｒｄ（２０１５，９０：５７－６８）
Ｒａｂｉｅｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１８，９３：２０１－２２０）
Ｍｕｍｐｓ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２００７，８２：４９－６０）
Ｓｅａｓｏｎａｌ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１２，８７：４６１－４７６）
Ｄｅｎｇｕｅ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１８，９３，４５７－７６）
Ｖａｒｉｃｅｌｌａ：Ｗｅｅｋｌｙ Ｅｐｉｄ．Ｒｅｃｏｒｄ（２０１４，８９：２６５－２８８）

【0057】

本明細書で使用される「ワクチン接種プログラム」は、居住国に応じて推奨または強制のいずれかであり得るすべての用量のタイミングを含む一連のワクチン接種を指す。

【0058】

本明細書で使用される「ブースターワクチン」は、（１又は複数の）一次ワクチン用量の（１又は複数の）ワクチン抗原に対する免疫応答を増加させるために、（１又は複数の）一次用量の後に与えられる、２回目以降のワクチン用量として投与されるワクチンを指す。ブースターワクチンとして与えられるワクチンは、一次ワクチンと同じであっても、同じでなくてもよい。

【0059】

本明細書で使用される「癌ワクチン」は、腫瘍、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原に対する特異的免疫応答を誘導する組成物を指す。「腫瘍関連抗原」という用語は、対象の健康な組織の非腫瘍細胞または細胞の中または上に存在する量と比較して、対象の腫瘍細胞の中または上に大量に存在する抗原を指す。構造に関して、腫瘍関連抗原は、一般に、正常細胞の中または上に見られる抗原と質的に異ならないが、それらは、有意により多量に存在する。

【0060】

「腫瘍特異的抗原」という用語は、腫瘍内の細胞で特異的に発現または産生され、同じ起源の非癌性細胞と比較して、それぞれの腫瘍の細胞で特異的に発現またはアップレギュレートされる抗原を指す。腫瘍抗原またはそれに由来するエピトープは、免疫応答を誘導するために免疫系によって認識され得る。腫瘍特異的抗原は、すべてのタンパク質クラス、例えば酵素、受容体、転写因子などに由来し得る。

【0061】

「ネオ抗原」は、ネオエピトープ、すなわち、腫瘍細胞に生じるランダムな体細胞変異を介して生成された抗原性エピトープを含む抗原を指す。ネオエピトープは、通常、個々の細胞または細胞の系統に特異的な特異的腫瘍抗原またはユニーク抗原に由来し、したがってネオエピトープは、それが由来する細胞または腫瘍細胞の系統に特異的である。

【0062】

本明細書で使用される目的のペプチドまたはポリペプチドの「変異体」は、１つ以上のアミノ酸によって変化し、したがって参照アミノ酸配列から逸脱するアミノ酸配列を指す。変異体は、置換アミノ酸が同様の構造的または化学的特性（例えば、イソロイシンによるロイシンの置換）を有する「保存剤」変化を有し得る。よりまれに、変異体は、「非保存性」変化を有し得る（例えば、トリプトファンによるグリシンの置換）。同様の小さな変形はまた、アミノ酸の欠失もしくは挿入、またはその両方を含み得る。変異体ペプチドまたはポリペプチドは、参照ペプチドもしくはポリペプチドと同じ活性もしくは機能を有し得るか、または参照ペプチドもしくはポリペプチドよりも大きいもしくは小さい活性もしくは機能を有し得るが、少なくとも参照ペプチドまたはポリペプチドの部分的な活性または機能を保持しなければならない。

【0063】

本明細書で使用される「アジュバント」という用語は、免疫系の抗原非依存性刺激を引き起こすか、または抗原の免疫原性を増強することができる物質もしくは物質の混合物を指す。本発明の文脈において、アジュバントは、ワクチン抗原に対する免疫応答を増強するために使用され得る。

【0064】

本発明の文脈において、「Ｔｈ１型免疫応答」という用語は、活性化時に炎症性サイトカイン、典型的にはインターフェロンγ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびインターロイキン－２（ＩＬ－２）を主に分泌する能力を特徴とするヘルパーＴ細胞のサブセットの活性化を指す。Ｔｈ１型免疫応答は、主に、病原体または癌性細胞に対する細胞性免疫応答の増幅をもたらす。

【0065】

本明細書で使用される「Ｔｈ２型免疫応答」という用語は、好酸球の活性化およびアレルギー性疾患の促進に関連するＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３などのサイトカイン、ならびに抗炎症性サイトカインＩＬ－１０を主に分泌する能力を特徴とするヘルパーＴ細胞のサブセットの活性化を指す。Ｔｈ２型免疫応答は、主に、抗体応答などの体液性免疫応答の発生を促進する。

【0066】

本明細書で使用される場合、「養子Ｔ細胞療法」は、腫瘍特異的または腫瘍非特異的Ｔ細胞の単離、および対象においてより多数のそのようなＴ細胞を達成するための複数のそのような腫瘍特異的または腫瘍非特異的Ｔ細胞のエクスビボ増殖を伴う。

【0067】

Ｔ細胞は、公知の技術に従って、本発明による治療を受ける対象の腫瘍（腫瘍浸潤リンパ球、ＴＩＬ）などの腫瘍、または本発明による治療を受ける対象から採取された末梢血などの末梢血（末梢血リンパ球）のいずれかから収集され得る。

【0068】

Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、表面上にＣＤ８を発現するＴリンパ球（すなわちＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ細胞）およびＴ細胞受容体遺伝子導入（ＴＣＲｔｇ）リンパ球を含むが、これらに限定されない任意の適切なタイプのＴ細胞であり得る。

【0069】

Ｔ細胞は、ヒト対象から単離され得るが、原則として、任意の哺乳動物、好ましくは霊長類の種から単離され得る。Ｔ細胞は、レシピエント対象として同種異系（すなわち、同じ種からであるが異なるドナーから単離される）であり得、あるいは、Ｔ細胞は、自家（すなわち、ドナーとレシピエントは同じである）であり得る。

【0070】

複数のＴ細胞は、単一のタイプのＴ細胞を含み得るか、または細胞タイプの混合物であり得る。必要とされる細胞の数は、その中に含まれる細胞のタイプと同様に、Ｔ細胞集団が意図される最終用途に依存する。例えば、特定の抗原に特異的な細胞が望まれる場合、集団は、そのような細胞の７０％超、例えば８０％超、８５％超、９０％超または例えば９５％超を含有し得る。

【0071】

複数のＴ細胞は、抗体への親和性結合などの公知の技術によって所望のタイプのＴ細胞について濃縮され得る。濃縮ステップの後、所望のＴ細胞のインビトロ増殖を、公知の技術（米国特許第６，０４０，１７７号明細書に記載されているものを含むが、これらに限定されない）または当業者には明らかであろうその変形に従って実施することができる。例えば、所望のＴ細胞集団または亜集団は、初期Ｔリンパ球集団をインビトロで培養培地に添加し、次いで、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（例えば、得られた細胞集団が、増殖させるべき初期集団中の各Ｔリンパ球について少なくとも約５、１０、２０または４０以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように）などのフィーダー細胞を培養培地に添加することと、培養物をインキュベートすること（例えば、Ｔ細胞の数を増殖させるのに十分な時間）と、によって増殖させ得る。Ｔ細胞およびフィーダー細胞を培地に添加する順序は、必要に応じて逆にしてもよい。培養物は、典型的には、Ｔリンパ球の成長に好適な温度などの条件下でインキュベートすることができる。例えば、ヒトＴリンパ球の成長のために、温度は、一般に、少なくとも約２５℃、好ましくは少なくとも約３０℃、より好ましくは約３７℃である。
ＣＡＲＴ細胞は、当技術分野で公知の技術によって産生され得る：簡潔に言えば、Ｔ細胞は、対象から収集される。次に、Ｔ細胞は、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターのいずれかを使用して、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように形質導入される。増殖後、遺伝子操作されたＴ細胞は、注入によって治療される対象に投与される。

【0072】

「治療サイクル」は、本明細書では、定期的なスケジュールで繰り返される治療期間とそれに続く休止期間（治療なし）として定義される。例えば、治療サイクルは、１週間の治療とそれに続く３週間の休薬とを含み得る。また、治療サイクルは、単回用量の医薬品の投与と、それに続く休止期間、例えば別の用量を投与する前の１、２または３週間の休止期間とを含み得る。小さな時間窓での複数の小用量、例えば、２～１２時間または同日などの２～２４時間以内は、特に用量間に生成物のクリアランスがないか実質的なクリアランスがない場合、より大きな単回用量に等しいとみなされ得る。

【0073】

「治療」という用語は、有効量の１つ以上の治療活性生成物、例えば、症状または疾患状態を緩和、改善、停止または根絶する目的を有する免疫原性組成物および結合剤（本出願で定義される）の投与を指す。

【0074】

本明細書で互換的に使用される「治療有効量」または「有効量、」という用語は、単独でまたは他の活性成分などの他の化合物と組み合わせて投与された場合、治療されている障害、疾患、または状態の症状の１つ以上の発症を予防するか、またはある程度緩和するのに十分であり得る医薬組成物中の活性成分などの化合物の量を指すことができる。「治療有効量」という用語はまた、研究者、獣医、医師または臨床医によって求められている細胞、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発するのに十分な化合物の量を指すことができる。

【0075】

本明細書で使用される「ヒトＣＤ３」という用語は、Ｔ細胞共受容体タンパク質複合体の一部であり、４つの異なる鎖で構成される分化ヒトクラスター３タンパク質を指す。ＣＤ３は、他の種にも見られ、したがって「ＣＤ３」という用語は、本明細書で使用され得、文脈によって矛盾しない限り、ヒトＣＤ３に限定されない。哺乳動物では、複合体は、ＣＤ３γ（ガンマ）鎖（例えば、ヒトＣＤ３γ鎖Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｐ０９６９３またはカニクイザルＣＤ３γ Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｑ９５ＬＩ７）、ＣＤ３δ（デルタ）鎖（例えば、ヒトＣＤ３δＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｐ０４２３４またはカニクイザルＣＤ３δＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｑ９５ＬＩ８）、２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖（例えば、ヒトＣＤ３εＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｐ０７７６６；カニクイザルＣＤ３εＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｑ９５ＬＩ５またはアカゲザルＣＤ３ε（ＳｗｉｓｓｐｒｏｔＧ７ＮＣＢ９））、およびＣＤ３ζ鎖（ゼータ）鎖（例えば、ヒトＣＤ３ζＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｐ２０９６３、カニクイザルＣＤ３ζＳｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｑ０９ＴＫ０）を含有する。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）として公知の分子と会合し、Ｔ細胞において活性化シグナルを生成する。ＴＣＲおよびＣＤ３分子は、共にＴＣＲ複合体を含む。

【0076】

配列番号１は、成熟ヒトＣＤ３ε（イプシロン）のアミノ酸配列を示し、本明細書で使用される「成熟」という用語は、いかなるシグナルまたはリーダー配列も含まないタンパク質を指す。

【0077】

シグナルペプチド配列の相同性、長さ、および切断部位の位置が、異なるタンパク質間で有意に変動することは周知である。シグナルペプチドは、例えば、ＳｉｇｎａｌＰアプリケーション（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／で入手可能）に従って、異なる方法によって決定され得る。

【0078】

特定の実施形態では、本発明の結合剤は、ＣＤ３のイプシロン鎖、例えばヒトＣＤ３のイプシロン鎖（配列番号１）に結合する。さらに別の特定の実施形態では、ヒト化抗体またはキメラ抗体は、ヒトＣＤ３ε（イプシロン）のＮ末端部分のアミノ酸１～２７内のエピトープに結合する（配列番号１）。そのような特定の実施形態では、抗体は、カニクイザル（カニクイザルＣＤ３イプシロン）および／またはアカゲザル（アカゲザルＣＤ３イプシロン）などの他の非ヒト霊長類種とさらに交差反応し得る。

【0079】

本発明は、ＣＤ３に結合する結合剤および腫瘍標的による腫瘍または癌の治療が腫瘍特異的Ｔ細胞の存在を必要としないことを確認する実験データに基づく。したがって、腫瘍部位におけるＴ細胞の単なる存在は、結合剤が腫瘍成長に対する効果を提供するのに十分であるように見え、ワクチン活性化Ｔ細胞は腫瘍内に移動するように見える。

【0080】

データは、対象において既存のＴ細胞応答をブーストすることができるワクチン、例えば子どもワクチンブースターを、ＣＤ３および腫瘍細胞上の標的抗原に結合し、それによって結合の抗腫瘍活性を増加させる結合剤と組み合わせて使用され得ることをさらに示す。

【0081】

したがって、第１の態様では、本発明は、腫瘍の成長を予防もしくは低減するための方法、またはそれを必要とする対象の癌を治療するための方法であって、
ｉ）ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤、および薬剤と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を対象に提供することを含む、方法を提供する。

【0082】

ワクチン抗原は、特に、非腫瘍特異的ワクチン抗原であり得る。
免疫原性組成物は、予防ワクチンまたは治療ワクチンなどのワクチンであり得る。
免疫原性組成物が感染症に対するワクチンであることが現在好ましく、例えば、そのようなワクチンとしてのウイルスまたは細菌感染は、一般に容易に入手可能であり、低コストである。

【0083】

ワクチンは、コレラ（Ｖ．コレラ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ）、例えば、ＷＣ／ｒＢＳ、ジフテリア（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、コロナウイルス、脳炎、麻疹、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）（リンパ球性脈絡髄膜炎マレナウイルス（マンマレナウイルス（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ ｍａｍｍａｒｅｎａｖｉｒｕｓ、ＬＣＭＶ））、コロナウイルス、脳炎、麻疹、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）（リンパ球性脈絡髄膜炎マレナウイルス（ＬＣＭＶ））、髄膜炎疾患（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、流行性耳下腺炎、百日咳／咳嗽（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、肺炎球菌疾患／感染症（肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））、灰白髄炎（ポリオ）、狂犬病、ロタウイルス感染症、風疹／ドイツ麻疹、破傷風（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ））、天然痘、腸チフス（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ））、水痘／水疱瘡、黄熱病、結核、プラーク（ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ））、バットリセウイルス、日本脳炎、Ｑ熱（コクシエラ菌（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉｄ））、水痘帯状疱疹（水疱瘡）、炭疽（炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ））からなる群から選択される感染症または感染に対するものであり得る。

【0084】

感染は、特に、コロナウイルス感染、例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染であり得る。

【0085】

感染症は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）であり得る。

【0086】

感染は、インフルエンザ感染であり得る。

【0087】

感染症は、インフルエンザであり得る。

【0088】

感染は、リンパ球性脈絡髄膜炎マンマレナウイルス（ＬＣＭＶ）感染であり得る。

【0089】

感染症は、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）であり得る。

【0090】

免疫原性組成物は、
弱毒化生ワクチンなどの生ワクチン、
不活化ワクチン、
スプリットウイルスワクチンなどのスプリットワクチン、
ウイルス様粒子に基づくワクチン、
サブユニットワクチン、タンパク質ベースのワクチン、ペプチドベースのワクチン、多糖ベースのワクチン、またはコンジュゲートワクチンなどの部分ワクチン、
組換えワクチン、および
ウイルスベクターベースまたはｍＲＮＡベースのワクチンなどの核酸ベースのワクチン、からなる群から選択され得る。

【0091】

特に、免疫原性組成物は、生ワクチン、例えば弱毒化生ワクチン；例えば、
弱毒化生ウイルスワクチン；例えば、弱毒化生麻疹ワクチン、弱毒化生ムンプスワクチン、弱毒化生風疹ワクチン、弱毒化生インフルエンザワクチン、弱毒化生水痘／水痘帯状疱疹ワクチン、弱毒化生ワクシニア（天然痘）ワクチン、弱毒化生経口ポリオワクチン（ＯＰＶ）（Ｓａｂｉｎ）、弱毒化生ロタウイルスワクチンまたは弱毒化生黄熱病ワクチン；
または、例えば、
弱毒化生細菌ワクチン；例えば、ＢＣＧワクチン、チフス菌（Ｔｙ２１）に対する弱毒化生ワクチン（経口腸チフスワクチンもしくは流行性チフスワクチン）、弱毒化生コレラワクチン、であり得る。

【0092】

あるいは、免疫原性組成物は、不活化ワクチン；例えば、
不活化ウイルスワクチン；例えば、不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）（ソークワクチン）、不活化インフルエンザワクチン、不活化狂犬病ワクチン、不活化日本脳炎ワクチンまたは不活化Ａ型肝炎ワクチン；
または、例えば、
不活化細菌ワクチン、例えば不活化腸チフスワクチン、不活化コレラワクチン、不活化ペストワクチン、不活化Ｑ熱ワクチン、不活化炭疽ワクチンもしくは不活化百日咳ワクチン、であり得る。

【0093】

部分ワクチンは、
トキソイドワクチン、例えば破傷風トキソイドまたはジフテリアトキソイドを含むワクチン；
サブユニットワクチン；および
サブビリオンワクチン、からなる群から選択されるタンパク質ベースのワクチンであり得る。

【0094】

部分ワクチンは、多糖ベースのワクチン、例えば多糖ベースの髄膜炎菌性疾患（髄膜炎菌（Ａ，Ｃ，Ｙ．Ｗ１３５））ワクチン、多糖ベースのチフス菌ワクチンまたは多糖ベースの肺炎球菌性疾患（肺炎連鎖球菌）ワクチンであり得る。

【0095】

部分ワクチンは、ポリペプチドに連結された多糖を含むコンジュゲートワクチン、例えば、コンジュゲート型血友病インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）ワクチン、コンジュゲート型肺炎連鎖球菌ワクチン、コンジュゲート型髄膜炎菌ワクチンであり得る。

【0096】

免疫原性組成物は、組換えワクチンであり得る。

【0097】

世界保健機関（ＷＨＯ）は、事前資格のあるワクチンのリストを提供しており、これはｈｔｔｐｓ：／／ｅｘｔｒａｎｅｔ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｇａｖｉ／ＰＱ＿Ｗｅｂ／で入手可能である。ワクチンのＷＨＯの事前資格付与は、製品が免疫化プログラムにおける安全性および有効性の要件を満たすかどうかを決定することを目的とした標準化された手順を通して行われる包括的な評価である。したがって、ＷＨＯの事前資格のあるワクチンは、安全で有効であり、本明細書で定義される結合剤と組み合わせて本発明に従って使用するために利用可能である。

【0098】

【表3】

【0099】

したがって、本発明に従って使用される免疫原性組成物は、ＢＣＧ；コレラ：不活化経口；４価デング熱（生、弱毒化）；ジフテリア－破傷風；ジフテリア破傷風（抗原含有量の減少）；ジフテリア－破傷風－百日咳（無細胞）（ＤＴａＰ／Ｔｄａｐ）；ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳菌およびインフルエンザ菌ｂ型（ＤＴａＰ－Ｈｉｂ）；ジフテリア－破傷風－百日咳（無細胞）－Ｂ型肝炎－インフルエンザ菌タイプｂ－ポリオ（不活化）；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）（ＤＴＰ）；ジフテリア－破傷風－百日咳菌（全細胞）－インフルエンザ菌ｂ型（ＤＴＰ－Ｈｉｂ）；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）－Ｂ型肝炎；ジフテリア－破傷風－百日咳（全細胞）－Ｂ型肝炎インフルエンザ菌ｂ型；エボラザイール（ｒＶＳＶΔＧ－ＺＥＢＯＶ－ＧＰ、弱毒化生）；インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）；Ａ型肝炎（ヒト二倍体細胞）、不活化（成人）；Ａ型肝炎（ヒト二倍体細胞）、不活化（小児）；Ｂ型肝炎、Ｂ型肝炎（小児）；ヒトパピローマウイルス（二価）；ヒトパピローマウイルス（九価）；ヒトパピローマウイルス（四価）；インフルエンザ、パンデミックＨ１Ｎ１；インフルエンザ、季節性（四価）；インフルエンザ、季節性（三価）；日本脳炎ワクチン（不活化）；日本脳炎ワクチン（生、弱毒化）；はしか；麻疹および風疹；麻疹、流行性耳下腺炎および風疹（ＭＭＲ）；麻疹、流行性耳下腺炎、風疹および水痘（ＭＭＲＶ）麻疹、流行性耳下腺炎および風疹（ＭＭＲ）；髄膜炎菌Ａコンジュゲート１０μｇ；髄膜炎菌Ａコンジュゲート５μｇ；髄膜炎菌ＡＣＹＷ－１３５（コンジュゲートワクチン）；肺炎球菌（コンジュゲート）；ポリオワクチン－不活化（ＩＰＶ）；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）二価１および３型；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）一価１型；ポリオワクチン－経口（ＯＰＶ）三価；狂犬病；ロタウイルス；ロタウイルス（生、弱毒化）；風疹；破傷風トキソイド；腸チフス（コンジュゲート）；腸チフス（多糖）；水痘；黄熱病、カルメット・ゲリン桿菌（ＢＣＧ）からなる群から選択され得る。

【0100】

免疫原性組成物は、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンであり得る。

【0101】

ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンは、ＢＮＴ１６２ｂ２／ＣＯＭＩＲＮＡＴＹ（Ｔｏｚｉｎａｍｅｒａｎ）（Ｐｆｉｚｅｒ ＢｉｏＮＴｅｃｈ）、ＣＶｎＣｏＶ／ＣＶ０７０５０１０１（Ｚｏｒｅｃｉｍｅｒａｎ）（ＣｕｒｅＶａｃ）、ＡＺＤ１２２２バキスゼブリア（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ｍＲＮＡ－１２７３（Ｍｏｄｅｒｎａ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（Ｖｅｒｏ Ｃｅｌｌ）、Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ（ｌｎＣｏＶ）（Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ／ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（ＢＩＢＰ）、ＣｏＶ２ ｐｒｅＳ ｄ（商標）－ＡＳ０３ワクチン（Ｓａｎｏｆｉ）およびＣｏｖｉｓｈｉｅｌｄ（ＣｈＡｄＯｘ１＿ｎＣｏＶ－１９）（Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｄｉａ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ）、Ｓｐｕｔｎｉｋ Ｖ（ｒＡｄ２６およびｒＡｄ５）（Ａｃｅｌｌｅｎａ）、Ｓｐｕｔｎｉｋ Ｌｉｇｈｔ（ｒＡｄ２６）（Ａｃｅｌｌｅｎａ）、Ａｄ２６．ＣＯＶ２．Ｓ（ＪＮＪ７８４３６７３５）（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＣｏｒｏｎａＶａｖ（Ｓｉｎｏｖａｃ）、ＢＢＩＢＰ－ＣｏｒＶ（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｃｈｉｎａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ（Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ））、ＥｐｉＶａｃＣｏｒｏｎａ（Ｆｅｄｅｒａｌ Ｂｕｄｇｅｔａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｓｔａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｃｏｎｖｉｄｉｃｅａ（ＣａｎＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）およびＭＶＣ－ＣＯＶ１９０１（Ｍｅｄｉｇｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｃｏｒｐ．；Ｄｙｎａｖａｘ）からなる群から選択され得る。

【0102】

免疫原性組成物は、インフルエンザワクチンであり得る。

【0103】

免疫原性組成物は、インフルエンザパンデミック（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザ季節性（三価）、およびインフルエンザ季節性（四価）からなる群から選択されるタイプのインフルエンザワクチンであり得る。

【0104】

感染症は、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭ）ワクチンであり得る。

【0105】

免疫原性組成物は、小児ワクチンまたは子どもワクチンであり得る。

【0106】

免疫原性組成物は、特に子どもブースターワクチンであり得る。

【0107】

あるいは、免疫原性組成物は、予防的または治療的癌ワクチンなどの癌ワクチンであり得る。

【0108】

ワクチン抗原は、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原であり得る。

【0109】

免疫原性組成物は、前記腫瘍または癌によって発現されるワクチン抗原を含み得る。

【0110】

標的抗原およびワクチン抗原は両方とも、前記腫瘍または癌によって発現され得る。そのような実施形態によれば、結合剤および免疫原性組成物は、同じ腫瘍または癌を指向するかまたは標的とする。

【0111】

本発明の方法において、ワクチン抗原と標的抗原は同じであってもよく、またはワクチン抗原は標的抗原の一部、部分配列もしくは変異体であってもよい。

【0112】

免疫原性組成物は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、サバイビンまたはＭｕｃ－１などの前記腫瘍によって過剰発現される抗原；癌ネオ抗原、例えばｐ５３ネオ抗原；ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＰＲＡＭＥ、ＣＴ８３、ＳＳＸ２またはＮＹ－ＥＳＯ－１などの癌精巣抗原；Ｍａｒｔ１、ＰＳＡまたはＰＡＰなどの分化抗原およびＨＰＶ抗原などのウイルス関連抗原からなる群から選択されるワクチン抗原を含み得る。

【0113】

免疫原性組成物は、個別化癌ワクチンであってもよく、ワクチン抗原は、対象の腫瘍に特異的なネオ抗原であり得る。

【0114】

好ましくは、ワクチン抗原は、１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

【0115】

また、免疫原性組成物は、好ましくは、インビボおよび／またはインビトロで細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発することができる。

【0116】

ワクチンは、前記腫瘍または癌のＴ細胞活性化および／またはＴ細胞浸潤を含むＴ細胞応答を誘発することができることがさらに好ましい。

【0117】

また、本発明による方法で使用される免疫原性組成物は、前記腫瘍または癌のＴ細胞浸潤および腫瘍浸潤Ｔ細胞の活性化を含むＴ細胞応答を誘発することができ得る。

【0118】

本発明による方法で使用される免疫原性組成物は、腫瘍における免疫細胞の浸潤および／または増殖、例えば浸潤および／または増殖ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／または樹状細胞（ＤＣ）を誘発することができ得る。

【0119】

当業者は、Ｔ細胞浸潤またはＴ細胞活性化を誘発する免疫原性組成物の能力を容易に決定することができるであろう。一例として、Ｔ細胞浸潤および／またはＴ細胞活性化は、前記結合剤の第２の結合領域が結合する抗原を発現する腫瘍を有するマウスにおいて、マウスを腫瘍特異的Ｔ細胞の移入に供し、次いで免疫原性組成物を皮下注射し、続いて結合剤を皮下注射する手順を使用して決定され得る。

【0120】

例として、Ｔ細胞浸潤および／または活性化は、
ｉ）結合剤が結合することができる抗原を発現し、第１の生物発光を生じさせることができる第１の酸化酵素および第２の生物発光を生じさせることができる第２の酸化酵素を構成的に発現するＴ細胞を提供するステップであって、第２の酸化酵素の発現が、Ｔ細胞活性化によって、例えば活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）などによって誘導される、ステップと、
ｉｉ）ＡｌｂｉｎｏＣ５７ＢＬ／６マウスなどの、前記結合剤の腫瘍標的化結合領域が結合する抗原を発現する腫瘍を有するマウスに、ｉ）で定義されるＴ細胞を尾静脈内注射によって注射するステップと、
ｉｉｉ）ｉｉ）におけるＴ細胞の注射の１日後および８日後に、尾部基部での皮下注射によって２用量の免疫原性組成物をマウスに投与するステップと、
ｉｖ）ｉｉ）におけるＴ細胞の注射の１０日後および１４日後に、静脈内注射または注入によって２用量の前記結合剤をマウスに投与するステップと、
ｖ）前記酸化酵素のそれぞれの基質をマウスに注射し、前記第１および第２の生物発光を測定するステップと、を含む手順で決定され得る。

【0121】

さらに、例として、Ｔ細胞浸潤および／または活性化は、本質的に本明細書の例４に記載の手順を使用して、または例４に記載の手順を使用して決定される。

【0122】

さらなる実施形態では、本発明による方法は、前記対象における既存のＴ細胞免疫を決定することを含む。既存のＴ細胞免疫は、例えば上で定義したワクチンによる以前のワクチン接種からのものであり得る。あるいは、既存のＴ細胞免疫は、上で定義された病原体のいずれか１つによる感染を含む以前の感染の結果であり得るか、または前記腫瘍に対する免疫応答の結果であり得る。

【0123】

既存のＴ細胞免疫は、末梢Ｔ細胞活性化の測定によって決定される。

【0124】

本発明による方法は、子どもワクチン接種プログラムなどのワクチン接種プログラムへの対象の以前の参加を決定することを含み得る。これは、特に子どもワクチン接種プログラムが長年にわたって確立され、十分に文書化されている国または地域において、本発明による方法の一部としてブーストされ得る既存のＴ細胞免疫を決定する簡便な方法であり得る。

【0125】

本発明による方法は、対象が以前に有していた、および／またはＴ細胞免疫応答を発生させた感染または感染症、例えば、上で定義した感染または感染症のいずれかに対するワクチンである免疫原性組成物を使用し得る。

【0126】

免疫原性組成物は、従来の技術に従って、薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに任意の他の公知のアジュバントおよび賦形剤と共に製剤化され得る。薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに任意の他の公知の賦形剤は、ワクチン抗原および選択された投与様式と共に使用するのに好適であるべきである。本発明に従って使用される免疫原性組成物はまた、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０もしくはＴｗｅｅｎ－８０などの非イオン性界面活性剤）、安定剤（例えば、糖もしくはタンパク質を含まないアミノ酸）、保存剤、組織固定剤、可溶化剤、および／または医薬組成物に含めるのに好適な他の材料を含み得る。

【0127】

本発明による方法は、アジュバントの投与をさらに含み得る。

【0128】

免疫応答をＴｈ１応答またはＴｈ２応答に向かわせる能力を有するアジュバントと同様に、Ｔｈ１応答およびＴｈ２応答の両方を誘発することができるアジュバントが利用可能である。したがって、本発明による方法で使用されるアジュバントは、Ｔｈ１／Ｔｈ２アジュバント、Ｔｈ１アジュバントまたはＴｈ２アジュバント、好ましくはＴｈ１アジュバントであり得る。

【0129】

同様に、免疫原性組成物は、アジュバントと一緒に投与された場合、ＮＫ細胞応答および／またはＴｈ１／Ｔｈ２型免疫応答、Ｔｈ１型免疫応答またはＴｈ２型免疫応答、好ましくはＴｈ１型免疫応答を誘発することができ得る。

【0130】

本発明による方法で使用される免疫原性組成物は、アジュバントを含むものであり得る。そのような実施形態では、特に、アジュバントの別個の投与は、いかなる追加の利益も提供し得ないことが企図される。

【0131】

これらの実施形態によれば、アジュバントを含む免疫原性組成物は、Ｔｈ１／Ｔｈ２型免疫応答、Ｔｈ１型免疫応答、またはＴｈ２型免疫応答、好ましくはＴｈ１型免疫応答を誘発することができ得る。本発明の文脈において、Ｔｈ１型免疫応答は、抗原発現腫瘍細胞を標的とし溶解する能力を有する細胞傷害性Ｔ細胞を生成するため、好ましい場合がある。

【0132】

本発明の目的のために、アルミニウム塩、例えばミョウバン（ＸＡｌ（ＳＯ_４）_２・１２Ｈ_２Ｏ（式中、Ｘは、Ｋ^＋またはＮＨ_４ ^＋などの一価カチオンである））を含むアジュバントを使用してもよい。伝統的に、アルミニウム塩を含むアジュバントは、感染性細菌およびウイルスに対するワクチンに一般的に使用されてきた。

【0133】

あるいは、アジュバントは、水中油型エマルジョンなどのエマルジョン系アジュバントであり得る。

【0134】

特定の実施形態では、アジュバントは、認可ワクチン（Ｄｅｌ Ｇｉｕｄｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３９，１４－２１，２０１８）に一般的に使用されるアジュバントの群から選択される。したがって、アジュバントは、
ａ）スクアレン、ポリソルベート８０およびソルビタントリオレエートを含むアジュバント；例えばＭＦ５９、
ｂ）スクアレン、ポリソルベート８０およびα－トコフェロールを含むアジュバント；例えばＡＳ０３、
ｃ）スクアレン、ポリオキシエチレン、セトステアリルエーテル、マンニトールおよびソルビタンオレエートを含むアジュバント；例えば、ＡＦ０３、
ｄ）３－Ｏ－デサシル－４’－モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、キラヤサポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）、フラクション２１（ＱＳ－２１）およびリポソームを含むアジュバント；例えばＡＳ０１；ならびに
ｅ）３－Ｏ－デサシル－４’－モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および水酸化アルミニウムを含むアジュバント；例えば、ＡＳ０４、からなる群から選択され得る。
あるいは、アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、例えば、イミキモド（Ａｌｄａｒａ）、レシキモドおよびガルディキモドからなる群から選択されるＴＬＲ７アゴニストであり得る。

【0135】

アジュバントは、
ｉ）Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、髄膜炎菌ポリンＢ（ｐｏｒＢ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）およびチルソトリモドからなる群から選択されるＴＬＲ９アゴニスト、
ｉｉ）Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、グルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）およびネオセプチン－３からなる群から選択されるＴＬＲ４アゴニスト、
ｉｉｉ）Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）アゴニスト、例えばモビラン、エントリモドもしくは組換えフラジェリンＦｌｉｃＣからなる群から選択されるＴＬＲ５アゴニスト；ならびに／または
ｉｖ）Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、例えばＰｏｌｙ－ＩＣおよびその誘導体からなる群から選択されるＴＬＲ３アゴニスト、を含み得る。

【0136】

アジュバントは、脂質ナノ粒子（ＬＰＮ）などのナノ粒子、例えば、アジュバントが組み込まれた脂質ナノ粒子を含み得る。

【0137】

本発明による方法で使用される免疫原性組成物は、サイトカインを含み得る。あるいは、サイトカインを免疫原性組成物と組み合わせて投与してもよく、またはサイトカインをアジュバントに含めてもよく、またはアジュバントと組み合わせてもよく、これは、免疫原性組成物と組み合わせて対象に投与されてもよく、例えば上に開示されるアジュバントのいずれかである。

【0138】

したがって、本発明による方法は、サイトカインと組み合わせて免疫原性組成物を投与するステップを含み得る。サイトカインは、好ましくは、インターロイキン－２（ＩＬ２）受容体アゴニスト、例えば、ヒトＩＬ２／アルデスロイキン、もしくはヒトインターロイキン－１５、またはこれら２つのいずれかの類似体である。ヒトインターロイキン－２（予測シグナルペプチドを除く成熟配列）のアミノ酸配列を配列番号５５に示す。ヒトインターロイキン－１５（予測シグナルペプチドおよびプロペプチド配列を除く成熟配列）のアミノ酸配列を配列番号５６に示す。

【0139】

さらに、改変されたサイトカインまたは遺伝子操作されたサイトカイン、例えば、半減期延長免疫サイトカイン、条件付き活性ＣＤ２５ヌル結合サイトカインが本発明に従って使用され得る。特定の例としては、ＮＫＴＲ－２１４（ベンペガルデロイキン、ＰＥＧ化ＩＬ２）Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｎｅｏ－２／１５（デノボ設計ＩＬ－２／ＩＬ－１５模倣物）Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ、ＩＬ－２ｖ（ＣＤ２５ヌル結合）Ｒｏｃｈｅが挙げられる。

【0140】

本発明による方法では、結合剤は、非経口投与または全身投与、例えば注射または注入によって、例えば、静脈内注射または注入によって対象に投与され得る。

【0141】

好ましくは、結合剤は、１つ以上の治療サイクルで対象に提供される。

【0142】

結合剤は、１週間に１回（１Ｑ１Ｗ）、２週間に１回（１Ｑ２Ｗ）、３週間に１回（１Ｑ３Ｗ）または４週間に１回（１Ｑ４Ｗ）投薬され得る。

【0143】

免疫原性組成物は、局所効果を達成するために対象に投与されてもよく、および／または治療される腫瘍への注射などによる局所投与によって投与されてもよい。

【0144】

あるいは、免疫原性組成物は、全身効果を達成するために投与されてもよく、および／または全身投与、例えば経口投与、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射もしくは経粘膜経路によって投与されてもよい。

【0145】

アジュバントは、局所効果を達成するために／局所投与によって対象に投与され得る。例えば、アジュバントは、前記腫瘍への注射によって投与され得る。

【0146】

アジュバントは、全身効果を達成するために／全身投与によって、例えば経口投与、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射または経粘膜経路によって投与され得る。

【0147】

サイトカインは、注射または注入などによる非経口投与または全身投与によって、例えば、静脈内注射または注入によって、対象に投与され得る。それはまた、前記サイトカインのインサイチュ産生のために、核酸製剤（例えばｍＲＮＡ）の形態で対象に投与され得る。

【0148】

本発明による治療を受ける前に、対象は、免疫原性組成物、例えばワクチン、および異なる目的のための、例えば感染症または感染症を治療するためのアジュバントでの治療を受けていてもよい。また、対象は、本発明による治療の前に、サイトカイン、例えばＩＬ－２による治療を受けていてもよい。ＩＬ－２は、転移性腎細胞癌および転移性黒色腫の治療のために承認されており、したがって、癌免疫療法として対象に提供されていてもよい。しかしながら、本発明による方法では、免疫原性組成物、ならびに、場合により、アジュバントおよび／またはサイトカイン（インターロイキン２受容体アゴニストなど）は、好ましくは、前記腫瘍の成長を減少させるために、および／または前記癌を治療するために提供される治療レジメン／同じ治療レジメンの一部として投与されてもよいことを理解されたい。

【0149】

本発明のさらなる実施形態では、免疫原性組成物の投与および結合剤の投与は、養子Ｔ細胞療法と組み合わされる。したがって、本発明による方法は、複数のＴ細胞を対象に投与することを含み得る。

【0150】

免疫原性組成物は、結合剤の投与と同時にまたはそれと同日に、結合剤の第１の用量の投与と同時にまたはそれと同日に、および／または結合剤による第１の治療サイクルの一部として、前記対象に投与され得る。

【0151】

免疫原性組成物の投与および結合剤の投与、例えば免疫原性組成物の投与および結合剤の最初の用量の投与および／または結合剤による第１の治療サイクルの開始は、最大で２ヶ月、例えば最大で１ヶ月、最大で４週間、最大で３週間、最大で２週間、最大で１週間、最大で６日間、最大で５日間、最大で４日間、最大で３日間、または最大で２日間の期間で区切られ得る。

【0152】

免疫原性組成物の投与および結合剤の投与、例えば免疫原性組成物の投与および結合剤の最初の用量の投与および／または結合剤による第１の治療サイクルの開始は、２日～２ヶ月間、例えば２日～１ヶ月間、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月間、３日～１ヶ月間、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月間、４日～１ヶ月間、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月間、５日～１ヶ月間、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月間、例えば６日～１ヶ月間、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月間、１週間～１ヶ月間、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月間、３週間～１ヶ月間または３～４週間の期間で区切られ得る。

【0153】

免疫原性組成物は、結合剤の投与前、結合剤の第１の投与量の投与前および／または結合剤による第１の治療サイクルの前に前記対象に投与され得る。

【0154】

免疫原性組成物は、結合剤の投与の、結合剤の第１の投与量の投与の、および／または結合剤による第１の治療サイクルの、２日前～２ヶ月前、例えば、結合剤の投与の、結合剤の第１の投与量の投与の、および／または結合剤による第１の治療サイクルの、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月、または例えば３～４週間前に対象に投与され得る。

【0155】

複数のＴ細胞を前記対象に投与してもよく、または養子Ｔ細胞療法を、結合剤の投与と同時もしくは同日に、結合剤の第１の用量の投与と同時もしくは同日に、および／または結合剤による第１の治療サイクルの一部として、前記対象に提供してもよい。

【0156】

複数のＴ細胞を前記対象に投与してもよく、または養子Ｔ細胞療法を、結合剤の投与前に、結合剤の第１の投与量の投与前に、および／または結合剤による第１の治療サイクルの前に、前記対象に提供してもよい。

【0157】

本発明による方法では、
ｉ）免疫原性組成物の投与および複数のＴ細胞の投与、または養子Ｔ細胞療法、ならびに
ｉｉ）結合剤の投与、例えば、結合剤の第１の用量の投与および／または結合剤による第１の治療サイクルの開始、
は、２日～２ヶ月、例えば２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、例えば６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月または３～４週間の期間で区切られ得る。

【0158】

免疫原性組成物および複数のＴ細胞、または養子Ｔ細胞療法は、結合剤の投与の、結合剤の第１の投与量の投与の、および／または結合剤による第１の治療サイクルの、２日前～２ヶ月前、例えば、結合剤の投与の、結合剤の第１の投与量の投与の、および／または結合剤による第１の治療サイクルの、２日～１ヶ月、２日～４週間、２日～３週間、２日～２週間、２日～１週間、３日～２ヶ月、３日～１ヶ月、３日～４週間、３日～３週間、３日～２週間、３日～１週間、４日～２ヶ月、４日～１ヶ月、４日～４週間、４日～３週間、４日～２週間、４日～１週間、５日～２ヶ月、５日～１ヶ月、５日～４週間、５日～３週間、５日～２週間、５日～１週間、６日～２ヶ月、６日～１ヶ月、６日～４週間、６日～３週間、６日～２週間、１週間～２ヶ月、１週間～１ヶ月、１～４週間、１～３週間、１～２週間、３週間～２ヶ月、３週間～１ヶ月、または例えば３～４週間前に対象に投与され得る。

【0159】

結合剤、免疫原性組成物、ならびに、場合により、アジュバント、複数のＴ細胞およびサイトカイン、例えばインターロイキン－２受容体アゴニストのそれぞれは、有効量で対象に提供されてもよいことが理解されるべきである。当業者が理解するように、本発明による免疫原性組成物と組み合わせて使用される場合の結合剤の効率的な投与量および投与レジメンは、例えば、選択される特定の結合剤および投与経路、ならびに治療される特定の腫瘍または癌に依存し得る。それは、対象の症状の重症度、対象の大きさおよび全体的な健康ならびに治療に対する対象または癌もしくは腫瘍の応答を含むいくつかのさらなる因子にさらに依存し得る。

【0160】

有効量および投与レジメンは、当業者によって決定され得る。例えば、治療的使用のための結合剤の「有効量」は、腫瘍成長を阻害もしくは停止する能力、疾患の進行を遅らせる能力、または疾患を安定化する能力によって測定され得る。

【0161】

特に、本発明による治療の有効性は、固形腫瘍における応答評価基準、バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ基準ｖ１．１）に従って評価され得る。ＲＥＣＩＳＴ基準を以下の表４に示す。

【0162】

【表4】

【0163】

本発明の特定の実施形態では、結合剤の第１の投与量は、免疫原性組成物の投与前に前記対象に投与され、および／または免疫原性組成物は、前記結合剤を用いた第２または後続の処置スケジュールの一部として投与される。

【0164】

本発明による方法は、対象において免疫原性組成物に対するＴ細胞特異的応答があるかどうかを決定すること、および／または、免疫原性組成物に特異的なＴ細胞の前記対象における拡大を監視することを含んでもよい、免疫原性組成物に対する任意のＴ細胞特異的応答を監視すること、をさらに含んでもよい。

【0165】

標的抗原は、前記腫瘍に特異的な抗原であり得る。

【0166】

標的抗原は、前記腫瘍または癌の細胞によって過剰発現される、例えば、健常組織の細胞と比較した場合に過剰発現される抗原であり得る。

【0167】

特に、標的抗原は、前記腫瘍または癌の細胞によって排他的に発現される抗原であってもよく、または腫瘍微小環境（例えば、ＴＡＭ、ＭＤＳＣ、Ｔｒｅｇ）内の免疫抑制細胞上で過剰発現される抗原であってもよい。

【0168】

標的抗原は、例えば、受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂＢ－２（Ｈｅｒ２）、例えばヒトＨｅｒ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０４６２６）；Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、例えばヒトＢリンパ球抗原ＣＤ１９（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１５３９１）；上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、例えばヒトＥｐＣＡＭ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１６４２２）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、例えばヒトＥＧＦＲ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ００５３３）；癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＤ６６ｅ）、例えばヒトＣＥＡ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０６７３１）；骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３（ＣＤ３３）、例えばヒトＣＤ３３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２０１３８）；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、例えばヒトＥｐｈＡ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２９３１７）；コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＭＣＳＰまたはＨＭＷ－ＭＡＡ）、例えばヒトＭＳＣＰ）からなる群から選択され得る。

【0169】

前記標的抗原に結合する抗原結合領域は、Ｈｅｒ２に結合するハーセプチンの抗原結合領域、ＣＤ１９に結合するブリナツモマブの抗原結合領域、ＥｐＣＡＭに結合するカツマキソマブの抗原結合領域、ＥＧＦＲに結合するセツキシマブまたはパニツムマブの抗原結合領域、およびＣＤ３３に結合するリンツズマブの抗原結合領域からなる群から選択され得る。

【0170】

本発明による方法で治療される腫瘍は、特に固形腫瘍であり得る。

【0171】

腫瘍または癌は、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌および頭頸部の扁平上皮癌、子宮頸癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、軟部組織癌、例えば滑膜肉腫からなる群から選択され得る。

【0172】

本発明に従って治療される腫瘍は、黒色腫および腺癌（例えば、乳管腺癌）からなる群からさらに選択され得る。

【0173】

あるいは、本発明に従って治療される腫瘍は、血液腫瘍であり得る。

【0174】

血液腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫、および慢性リンパ性白血病または急性リンパ性白血病からなる群から選択され得る。

【0175】

本発明に従って治療される腫瘍は、特に、いわゆる「冷たい」腫瘍、すなわち、いかなる（機能的な）免疫浸潤物もない腫瘍であり得る。冷たい腫瘍は、特に、腫瘍Ｔ細胞浸潤の欠如または不足を特徴とし得る。Ｔ細胞浸潤の欠如または不足の原因となる機構には、腫瘍抗原の欠如、抗原提示の欠如、ならびにＴ細胞活性化の欠如および腫瘍床へのホーミングの欠如が含まれ得る。

【0176】

また、本発明による方法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）および／またはＭ２型マクロファージなどの抑制性免疫細胞の存在を再び特徴とする免疫抑制性腫瘍微小環境を特徴とする腫瘍を治療するのに特に有効であり得る。抑制性免疫細胞は、腫瘍のＴ細胞浸潤を予防もしくは低減し得る、かつ／またはＴ細胞機能を局所的に抑制し得る。

【0177】

本発明による方法で使用される結合剤では、ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、特に、配列番号１で指定されるヒトＣＤ３ε（イプシロン）などのヒトＣＤ３ε（イプシロン）に結合するものであり得る。

【0178】

本発明の特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、
それぞれ配列番号２、配列番号３および配列番号４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；［野生型抗ＣＤ３（ＳＰ３４／ヒト化ＳＰ３４、国際公開第２０１５００１０８５号（Ｇｅｎｍａｂ））－ＶＨ ＣＤＲ配列］を含み、
ならびに、それぞれ配列番号６、ＧＴＮおよび７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型抗ＣＤ３、ＶＬ ＣＤＲ配列］を含んでもよい。

【0179】

ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、
配列番号５７の配列、または配列番号５の配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型抗ＣＤ３－ＶＨ全長配列］を含み、
および、配列番号６０の配列、または配列番号８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型抗ＣＤ３－ＶＬ全長配列］を含んでもよい。

【0180】

本発明による方法で使用される結合剤は、配列番号５に示されるＶＨ配列および配列番号８に示されるＶＬ配列を含む抗原結合領域［野生型抗ＣＤ３（ヒト化ＳＰ３４、国際公開第２０１５００１０８５号（Ｇｅｎｍａｂ））ＶＨおよびＶＬ配列］を有する結合剤よりも低いヒトＣＤ３ε結合親和性を有するものであり得、好ましくは、前記親和性は、少なくとも５倍低い、例えば少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも２０倍低い、少なくとも３０倍低い、少なくとも４０倍低い、少なくとも４５倍低いまたは例えば少なくとも５０倍低い。

【0181】

ＣＤ３に結合する前記抗原結合領域は、２００～１０００ｎＭの範囲内、例えば３００～１０００ｎＭの範囲内、４００～１０００ｎＭの範囲内、５００～１０００ｎＭの範囲内、３００～９００ｎＭの範囲内、４００～９００ｎＭの範囲内、４００～７００ｎＭの範囲内、５００～９００ｎＭの範囲内、５００～８００ｎＭの範囲内、５００～７００ｎＭの範囲内、６００～１０００ｎＭの範囲内、６００～９００ｎＭの範囲内、６００～８００ｎＭの範囲内、または例えば６００～７００ｎＭの範囲内の平衡解離定数Ｋ_Ｄで結合するものであり得る。

【0182】

ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、１～１００ｎＭの範囲内、例えば５～１００ｎＭの範囲内、１０～１００ｎＭの範囲内、１～８０ｎＭの範囲内、１～６０ｎＭの範囲内、１～４０ｎＭの範囲内、１～２０ｎＭの範囲内、５～８０ｎＭの範囲内、５～６０ｎＭの範囲内、５～４０ｎＭの範囲内、５～２０ｎＭの範囲内、１０～８０ｎＭの範囲内、１０～６０ｎＭの範囲内、１０～４０ｎＭの範囲内、または例えば１０～２０ｎＭの範囲内の平衡解離定数Ｋ_Ｄで結合するものであり得る。

【0183】

本発明のいくつかの実施形態では、ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含み、
重鎖可変（ＶＨ）領域は、配列番号５に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と比較した場合、ＣＤＲ配列のうちの１つにおいてアミノ酸置換を有し、置換は、Ｔ３１、Ｎ５７、Ｈ１０１、Ｇ１０５、Ｓ１１０およびＹ１１４からなる群から選択される位置であり、位置は、配列番号５の配列に従ってナンバリングされ［ＶＨ＿ｈｕＣＤ３－Ｈ１Ｌ１］、
野生型軽鎖可変（ＶＬ）領域は、それぞれ配列番号６、ＧＴＮおよび配列番号７に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

【0184】

ＣＤ３に結合する抗原結合領域の重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、配列番号５に示される配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と比較した場合、合計で最大１、２、３、４または５個のアミノ酸置換を含み得る。

【0185】

ＣＤ３に結合する抗原結合領域の重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は、野生型重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９６％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性または少なくとも９９％の配列同一性を有し得、配列同一性は、ＣＤに結合する抗原結合領域の重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列からなるアミノ酸配列を、野生型重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を含むアミノ酸配列と整列させることに基づいて計算される。

【0186】

ＣＤ３に結合する抗原結合領域は、特に、Ｔ３１Ｍ、Ｔ３１Ｐ、Ｎ５７Ｅ、Ｈ１０１Ｇ、Ｈ１０１Ｎ、Ｇ１０５Ｐ、Ｓ１１０Ａ、Ｓ１１０Ｇ、Ｙ１１４Ｍ、Ｙ１１４Ｒ、Ｙ１１４Ｖからなる群から選択される変異を含み得る。

【0187】

ＣＤ３に結合することができる抗原結合領域は、
ａ）配列番号９、配列番号３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ１－Ｔ３１Ｐ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ２、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｂ）配列番号１１、配列番号３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ１－Ｔ３１Ｍ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ２、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｃ）配列番号２、配列番号１３および配列番号４に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［ＶＨ ＣＤＲ－Ｎ５７Ｅ＋野生型ＶＨ ＣＤＲ１、３］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｄ）配列番号２、配列番号３および配列番号１５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｇ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、
ｅ）配列番号２、配列番号３および配列番号１７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｎ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］；
ｆ）配列番号２、配列番号３および配列番号１９に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｇ１０５Ｐ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］；
ｇ）配列番号２、配列番号３および配列番号２１に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｓ１１０Ａ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｈ）配列番号２、配列番号３および配列番号２３に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｓ１１０Ｇ］、ならびに配列番号６５８に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、
ｉ）配列番号２、配列番号３および配列番号２５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｖ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｊ）配列番号２、配列番号３および配列番号２７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｍ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、または
ｋ）配列番号２、配列番号３および配列番号２９に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｙ１１４Ｒ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］、を含み得る。

【0188】

ＣＤ３に結合することができる抗原結合領域は、配列番号２、配列番号３および配列番号１５に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）［野生型ＶＨ ＣＤＲ１、２＋ＶＨ ＣＤＲ３－Ｈ１０１Ｇ］、ならびに配列番号６に示される配列、配列ＧＴＮおよび配列番号７に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）［野生型ＶＬ ＣＤＲ１、２、３］を含み得る。

【0189】

ヒトＣＤ３に結合することができる抗原結合領域は、
ａ）配列番号１０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｔ３１Ｐ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列［野生型全長配列］、
ｂ）配列番号１２に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｔ３１Ｍ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｃ）配列番号１４に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｎ５７Ｅ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｄ）配列番号１６に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｅ）配列番号１８に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｎ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｆ）配列番号２０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｇ１０５Ｐ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｇ）配列番号２２に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｓ１１０Ａ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｈ）配列番号２４に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｓ１１０Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｉ）配列番号２６に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｖ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列、
ｊ）配列番号２８に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｍ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列；ならびに
ｋ）配列番号３０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｙ１１４Ｒ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列
からなる群から選択されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含み得る。

【0190】

ヒトＣＤ３に結合することができる抗原結合領域は、配列番号１０に示されるＶＨ配列［ＶＨ Ｈ１０１Ｇ全長配列］および配列番号８に示されるＶＬ配列を含むことが現在好ましい。

【0191】

結合剤は、抗体、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるイソタイプサブクラスの抗体であることがさらに好ましい。

【0192】

結合剤は、全長ＩｇＧ１抗体などの全長抗体であり得る。

【0193】

一実施形態では、抗体は、ヒト抗体であるか、またはすべての可変領域および定常領域がヒト抗体のものである抗体である。あるいは、抗体は、ヒト化抗体またはすべての可変領域がヒト化抗体に由来する抗体であり得る。

【0194】

抗体はまた、ＣＤ３に結合する結合領域を含む第１のアームおよび標的抗原に結合する結合領域を含む第２のアームを有し得、第１の結合アームは、ヒト抗体のものであり、第２の結合アームは、ヒト化抗体のものであり、またはその逆である。

【0195】

結合剤は、ＩｇＧ１ｍ（ｆ）アロタイプの抗体であり得る。

【0196】

結合剤は、特に二重特異性抗体などの多重特異性抗体であり得る。

【0197】

本発明において使用され得る二重特異性抗体分子の例は、（ｉ）異なる抗原結合領域を含む２つのアームを有する単一抗体、（ｉｉ）例えば、余分なペプチドリンカーによってタンデムに連結された２つのｓｃＦｖを介して、２つの異なるエピトープに対する特異性を有する一本鎖抗体、（ｉｉｉ）二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））であって、各軽鎖および重鎖が、短いペプチド結合によってタンデムに２つの可変ドメインを含有する、二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２０１０））；（ｉｖ）化学結合二重特異性（Ｆａｂ’）２断片；（ｖ）標的抗原のそれぞれに対して２つの結合部位を有する四価二重特異性抗体をもたらす２つの一本鎖ダイアボディの融合物であるＴａｎｄａｂ（登録商標）；（ｖｉ）多価分子をもたらすｓｃＦｖとダイアボディとの組み合わせである屈曲体；（ｖｉｉ）Ｆａｂに適用すると、異なるＦａｂ断片に連結された２つの同一のＦａｂ断片からなる三価二重特異性結合タンパク質を生じ得る、プロテインキナーゼＡの「二量体化およびドッキングドメイン」に基づく、いわゆる「ドックおよびロック」分子（Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（登録商標））；（ｖｉｉｉ）例えば、ヒトＦａｂアームの両末端に融合した２つのｓｃＦｖを含む、いわゆるＳｃｏｒｐｉｏｎ分子；ならびに（ｉｘ）ダイアボディを含む。

【0198】

一実施形態では、本発明に従って使用される二重特異性抗体は、ダイアボディ、ＣｒｏｓｓＭａｂなどのクロスボディ、または（国際公開第２０１１／１３１７４６号；ＧｅｎｍａｂＡ／Ｓ）に記載されるような制御されたＦａｂアーム交換を介して得られる二重特異性抗体である。

【0199】

異なるクラスの二重特異性抗体の例としては、（ｉ）ヘテロ二量体化を強制するための相補的なＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、（ｉｉ）分子の両面がそれぞれ、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片またはＦａｂ断片の一部を含有する、組換えＩｇＧ様二重標的化分子；（ｉｉｉ）全長ＩｇＧ抗体が余分なＦａｂ断片またはＦａｂ断片の一部に融合されている、ＩｇＧ融合分子；（ｉｖ）一本鎖Ｆｖ分子または安定化ダイアボディが重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域またはその一部に融合されている、Ｆｃ融合分子；（ｖ）異なるＦａｂ断片が一緒に融合され、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域またはその一部に融合された、Ｆａｂ融合分子；ならびに（ｖｉ）異なる一本鎖Ｆｖ分子または異なるダイアボディまたは異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ（登録商標））が、互いに、または重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域もしくはその一部に融合した別のタンパク質もしくは担体分子に融合した、ＳｃＦｖおよびダイアボディ系ならびに重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0200】

相補的ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子の例としては、Ｔｒｉｏｍａｂ（登録商標）（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ、国際公開第２００２／０２００３９号；Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、国際公開第２０１１１１７３２９号；Ｒｏｃｈｅ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂ（Ｒｏｃｈｅ、［３３］）およびｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ－ｍａｔｃｈｅｄ（Ａｍｇｅｎ、欧州特許第１８７０４５９号明細書；Ａｍｇｅｎおよび国際公開第２００９０８９００４号；Ａｍｇｅｎ；Ｃｈｕｇａｉ［米国特許出願公開第２０１０００１５５１３３号；Ｃｈｕｇａｉ；Ｏｎｃｏｍｅｄ、国際公開第２０１０１２９３０４号；Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＤＩＧ－ｂｏｄｙおよびＰＩＧ－ｂｏｄｙ（Ｐｈａｒｍａｂｃｉｎｅ）、ｔｈｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ、国際公開第２００７１１０２０５号；ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、ｔｈｅ Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ（Ｍｅｒｕｓ）、ＦｃΔＡｄｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、国際公開第２０１０／０１５７９２号；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、二重特異性ＩｇＧ１およびＩｇＧ２（Ｐｆｉｚｅｒ／Ｒｉｎａｔ、国際公開第１１１４３５４５号；Ｐｆｉｚｅｒ／Ｒｉｎａｔ）、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ ｓｃａｆｆｏｌｄ（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ／Ｍｅｒｃｋ、国際公開第２０１２０５８７６８号：Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ／Ｍｅｒｃｋ）、ｍＡｂ－Ｆｖ（Ｘｅｎｃｏｒ、国際公開第２０１１０２８９５２号；Ｘｅｎｃｏｒ）、二価二重特異性抗体（Ｒｏｃｈｅ国際公開第２００９／０８０２５４号；Ｒｏｃｈｅ）およびＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）分子（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ、国際公開第２０１１／１３１７４６号；Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0201】

組換えＩｇＧ様二重標的化分子の例としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ、［４４］）、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（商標）（Ｚｙｎｇｅｎｉａ）、共通軽鎖を用いたアプローチ（Ｃｒｕｃｅｌｌ／Ｍｅｒｕｓ、［４５］）、κλＢｏｄｉｅｓ（ＮｏｖＩｍｍｕｎｅ）およびＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0202】

ＩｇＧ融合分子の例としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（商標）（Ａｂｂｏｔｔ、米国特許第７，６１２，１８１号；Ａｂｂｏｔｔ、Ｄｕａｌ ｄｏｍａｉｎ ｄｏｕｂｌｅ ｈｅａｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ；Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ、国際公開第２０１００２２６９２３号；Ｕｎｉｌｅｖｅｒ、Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）およびＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（ＢｉｏｇｅｎＩｄｅｃ，米国特許第００７９５１９１８号；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ｓｃＦｖ ｆｕｓｉｏｎ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ｓｃＦｖ ｆｕｓｉｏｎ（Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ Ａｄａｍ ＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．、中国特許第１０２２５０２４６号；Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ Ａｄａｍ ＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．）およびＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ、国際公開第２０１２０２５５２５号；Ｒｏｃｈｅ、国際公開第２０１２０２５５３０号；Ｒｏｃｈｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0203】

Ｆｃ融合分子の例としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ、Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ（商標））（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，国際公開第２００８１５７３７９号；Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ、国際公開第２０１０／０８０５３８号；ＭａｃｒｏｇｅｎｉｃｓおよびＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－中国）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0204】

Ｆａｂ融合二重特異性抗体の例としては、Ｆ（ａｂ）_２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（登録商標）（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）およびＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0205】

ＳｃＦｖ系、ダイアボディ系およびドメイン抗体の例としては、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ（商標））（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性リターゲティング技術（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）およびＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的化重鎖のみのドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0206】

本発明に従って使用される結合剤において、各抗原結合領域は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得、前記可変領域はそれぞれ、３つのＣＤＲ配列、それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに４つのフレームワーク配列、それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。

【0207】

結合剤は、２つの重鎖定常領域（ＣＨ）および２つの軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み得る。

【0208】

本発明による方法で使用される結合剤は、第１および第２の重鎖を含み得、前記第１および第２の重鎖のそれぞれは、少なくともヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含み、前記第１の重鎖において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＴ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｄ３９９、Ｆ４０５、Ｙ４０７およびＫ４０９からなる群から選択される位置に対応する位置のアミノ酸のうちの少なくとも１つが置換されており、前記第２の重鎖において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＴ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｄ３９９、Ｆ４０５、Ｙ４０７およびＫ４０９からなる群から選択される位置に対応する位置のアミノ酸のうちの少なくとも１つが置換されており、前記第１および前記第２の重鎖の前記置換は、同じ位置にはなく、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに従ってナンバリングされている。

【0209】

ヒトＩｇＧ１重鎖のＫ４０９に対応する位置のアミノ酸は、特に前記第１の重鎖のＲであり得、ヒトＩｇＧ１重鎖のＦ４０５に対応する位置のアミノ酸は、特に前記第２の重鎖のＬであり得、またはその逆であり得る。

【0210】

本発明に従って使用される結合剤は、第１および第２の重鎖を含む結合剤であり得、第１および第２の重鎖の両方において、ＥＵナンバリングによるヒトＩｇＧ１重鎖の位置Ｌ２３４およびＬ２３５に対応する位置のアミノ酸残基は、それぞれＦおよびＥである。

【0211】

本発明に従って使用される結合剤は、第１および第２の重鎖を含む結合剤であり得、第１および第２の重鎖の両方において、ＥｕナンバリングによるヒトＩｇＧ１重鎖の位置Ｄ２６５に対応する位置のアミノ酸残基はＡである。

【0212】

本発明に従って使用される結合剤はまた、第１および第２の重鎖を含む結合剤であり得、第１および第２の重鎖の両方において、ＥｕナンバリングによるヒトＩｇＧ１重鎖の位置Ｇ２３６に対応する位置のアミノ酸残基はＲである。

【0213】

本発明に従って使用される結合剤は、第１の重鎖を含み、および第２の重鎖を含んでもよい結合剤であり得、第１の重鎖、および存在する場合には第２の重鎖は、同一の非改変抗体と比較して、抗体がより少ない程度でＦｃ媒介エフェクター機能を誘導するように改変されている。

【0214】

結合剤は、カッパ（κ）軽鎖を含み得る。

【0215】

あるいは、結合剤は、ラムダ（λ）軽鎖を含み得る。

【0216】

特に、結合剤は、ＣＤ３に結合する結合領域を含む重鎖およびラムダ（λ）軽鎖を含み得る。

【0217】

あるいは、結合剤は、ＣＤ３に結合する結合領域を含む重鎖およびカッパ（κ）軽鎖を含み得る。

【0218】

本発明に従って使用される結合剤に含まれる場合、カッパ（κ）軽鎖は、
ａ）配列番号３１に示される配列と、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続するアミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列と、
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0219】

本発明に従って使用される結合剤に含まれる場合、ラムダ（λ）軽鎖は、
ａ）配列番号３２に示される配列と、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続するアミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列と、
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。

【0220】

前記第１および／または第２の重鎖の定常領域は、
ａ）配列番号３３に示される配列と、
ｂ）ａ）で定義された配列のＮ末端またはＣ末端から出発して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の連続するアミノ酸が欠失している部分配列などの、ａ）の配列の部分配列と、
ｃ）ａ）またはｂ）で定義されたアミノ酸配列と比較して、最大で５個の置換、例えば最大で４個の置換、最大で３個、最大で２個または最大で１個の置換を有する配列と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、または本質的にそれからなる、またはそれからなり得る。

【0221】

最大で５個の置換は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５ＬおよびＫ４０９Ｒからなる群から選択される１個以上の置換、例えば１、２、３または４個の置換を含み得る。

【0222】

あるいは、最大５個の置換は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３６Ｒ、Ｆ４０５ＬおよびＫ４０９Ｒからなる群から選択される１個以上の置換、例えば１、２、３または４個の置換を含み得る。

【0223】

本発明は、腫瘍の成長の予防または低減を必要とする対象における腫瘍の成長を予防または低減するための方法であって、

【0224】

少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物を対象に提供し、それによって腫瘍中の生細胞集団内の免疫細胞の相対量を増加させ、場合により、前記免疫細胞の活性化を増加させることと、

【0225】

ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤を対象に提供することと、を含む、方法をさらに提供する。

【0226】

免疫細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞などのＴ細胞からなる群から選択される。

【0227】

代替アプローチでは、本発明による方法で使用される結合剤は、遺伝子送達によって対象に投与され得る。したがって、本発明の第２の態様は、腫瘍の成長を予防もしくは低減するための方法、またはそれを必要とする対象の癌を治療するための方法であって、
ｉ）ヒトＣＤ３などのＣＤ３に結合する抗原結合領域、および前記腫瘍または癌の細胞上の標的抗原に結合する抗原結合領域を含む結合剤をコードする核酸構築物と、
ｉｉ）少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を対象に提供することを含む、方法を提供する。

【0228】

結合剤をコードする（１又は複数の）ポリヌクレオチドを送達するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターなどのベクターの使用を含む、結合剤の効率的な遺伝子送達のために異なる戦略を利用し得る。代替的なアプローチでは、ナノ粒子製剤、例えば脂質ベース、ペプチドベース、多糖ベース、または無機ナノ粒子を介して、結合剤をコードするｍＲＮＡを送達し得る。ｍＲＮＡは、結合剤の発現が望まれる（１又は複数の）臓器に直接送達されてもよく、または注射もしくは注入によって全身的に送達されてもよく、これは経時的に発現を生じさせる（数時間以内に開始し、数日まで続く）。後者のアプローチでは、ｍＲＮＡは、免疫活性化を予防し、安定性を増加させ、経時的に凝集する傾向を減少させ、および／または不純物を回避するために１つ以上の手段によって最適化され得るそのような最適化は、ｍＲＮＡ中の修飾ヌクレオシド（例えば、ｌ－メチルプソイドウリジンを用いて）の使用を含み得、かつ／または細胞内安定性および翻訳効率を改善するための特定の５’ＴＲ、３’ＵＴＲ、および／もしくはポリ（Ａ）尾部を含み得る（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１７；２３（７）：８１５－８１７を参照されたい）。

【0229】

遺伝子療法によって送達される結合剤は、タンパク質ベースの送達アプローチの文脈で上記に記載された特徴のいずれかを有し得ることが理解されるべきである。また、免疫原性組成物は、上に開示されるような組成物であり得る。

【0230】

さらに、本発明の第１の態様による方法に関連して開示された特徴は、本発明の第２の態様の方法にも等しく良好に適用されることが理解されよう。特に、結合剤をコードする核酸構築物は、上に開示されるように、ＴＬＲアゴニストなどのアジュバントと組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、またはヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0231】

第３の態様では、本発明は、対象における癌の腫瘍増殖または治療を予防または低減するのに使用するための結合剤であって、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、使用が、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて対象に抗体を提供することを含む、結合剤を提供する。

【0232】

本発明による使用のための結合剤は、本発明による方法に関して上で定義した通りであり得る。

【0233】

また、本発明のこの態様に関連して、免疫原性組成物は、本発明による方法に関連して上で定義した通りであり得る。

【0234】

ここでも、本発明の第１の態様による方法に関連して開示された特徴は、本発明の第３の態様による使用にも等しく良好に適用されることが理解されよう。特に、結合剤は、上に開示されるようなアジュバントと組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0235】

特に、結合剤は、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与される。

【0236】

また、本明細書中上記で開示されるように、結合剤は、アジュバント（例えば、上記で定義されるようなアジュバント）とさらに組み合わせて投与され得る。

【0237】

あるいは、結合剤は、例えば、免疫原性核酸配列または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む、遺伝子ベースの治療のための免疫原性組成物と組み合わせて投与されてもよい。

【0238】

本発明の第４の態様は、対象における癌の腫瘍増殖または治療を予防または減少させるのに使用するための少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物に関し、免疫原性組成物は、ＣＤ３に結合する結合領域、および前記腫瘍もしくは癌の細胞上の標的または腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞上に発現される標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて対象に提供される。

【0239】

免疫原性組成物は、上記で定義された特徴および特性のうちのいずれか１つ以上を有し得る。

【0240】

本発明に従って使用するための免疫原性組成物に関して、結合剤は、本発明の第１の態様に関して定義される結合剤であり得る。

【0241】

加えて、本発明の第１の態様による方法に関連して開示された特徴のうちのいずれか１つ以上は、本発明の第４の態様による使用にも等しく良好に適用される。特に、免疫原性組成物および結合剤は、上に開示されるアジュバントとさらに組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0242】

本発明の第５の態様は、対象の癌を治療するための医薬品の製造における結合剤の使用に関し、結合剤は、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含み、治療は、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせて前記結合剤を対象に提供することを含む。

【0243】

結合剤および免疫原性組成物は、本発明の第１の態様に関して定義される通りであり得る。

【0244】

ここでも、本発明の第１の態様による方法に関連して開示された特徴のうちのいずれか１つ以上は、本発明の第５の態様による使用に等しく良好に適用される。特に、免疫原性組成物および結合剤は、上に開示されるアジュバントとさらに組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン２またはその類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0245】

本発明は、第６の態様では、対象の癌を治療するための医薬品の製造における少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物の使用であって、ＣＤ３に結合する結合領域および前記腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と組み合わせて対象に提供される、使用をさらに提供する。

【0246】

免疫原性組成物および結合剤は、本発明の第１の態様に関連して定義された特徴および特性のいずれかを有し得る。

【0247】

加えて、本発明の第１の態様による方法に関連して開示された特徴のうちのいずれか１つ以上は、本発明の第４の態様による使用にも等しく良好に適用される。特に、免疫原性組成物および結合剤は、上に開示されるアジュバントとさらに組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、ヒトインターロイキン－１５、またはそれらの類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0248】

本発明の最終態様では、ＣＤ３に結合する結合領域および腫瘍または癌の細胞上の標的に結合する結合領域を含む結合剤と、少なくとも１つのワクチン抗原を含む免疫原性組成物と、を含むキットオブパーツが提供される。

【0249】

キットオブパーツは、アジュバント、例えば上で定義したアジュバントをさらに含み得る。

【0250】

キットオブパーツは、インターロイキン－２またはインターロイキン－２受容体アゴニストなどの、本発明の第１の態様に関連して開示されるサイトカインの量をさらに含み得る。

【0251】

加えて、本発明の第１の態様による方法に関連して開示される特徴のうちのいずれか１つ以上は、本発明に従って提供されるキットオブパーツの構成要素およびそれらが治療目的のために使用される方法に等しく良好に適用される。特に、免疫原性組成物および結合剤は、上に開示されるアジュバントとさらに組み合わせて投与され得る。それはまた、インターロイキン－２受容体アゴニスト、例えばヒトインターロイキン－２、またはその類似体などのサイトカインとさらに組み合わせて投与されてもよく、これらはすべて上記で提供される通りである。

【0252】

キットオブパーツは、免疫原性組成物と組み合わせた結合剤の投与などの使用説明書をさらに備え得る。説明書はまた、結合剤および免疫原性組成物を、上で定義したアジュバントおよび／もしくは上で定義したサイトカインと組み合わせてさらに組み合わせるか、または結合剤および免疫原性組成物を投与するための指示を提供し得る。

【0253】

【表5】

【0254】

本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、これは特許請求の範囲をさらに限定するものと解釈されるべきではない。

【0255】

［実施例］
［実施例１］
ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置の抗腫瘍有効性は、腫瘍への免疫細胞のＣＸＣＲ３媒介性浸潤に依存する

【0256】

ＣＤ３を１つのアームで標的化する二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、Ｔ細胞上のＣＤ３を腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）で架橋することによって、Ｔ細胞を再誘導して腫瘍細胞を死滅させることができる。腫瘍微小環境からのＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０およびＣＸＣＬ１１などのケモカインの分泌により、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ３を発現するＴ細胞およびＮＫ細胞を腫瘍に引き付けることができる。実施例では、ｂｓＡｂ処置が免疫浸潤物のレベルおよびＴ細胞を含む免疫細胞の腫瘍に到達する能力によってどのように影響されるかを調べた。この問題に対処するために、腫瘍へのＴ細胞浸潤において非冗長な役割を果たすＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０およびＣＸＣＬ１１媒介性細胞輸送の破壊を示すＣＸＣＲ３ノックアウト（ＣＸＣＲ３－ＫＯ）マウスを使用した（Ｍｉｋｕｃｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ＣＸＣＲ３ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｕｒｉｎｇ ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｃｒｏｓｓ ｔｕｍｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５ Ｊｕｎ ２５；６：７４５８）。

【0257】

すべてのマウス系統は、Ｌｅｉｄｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ（ＬＵＭＣ）動物施設で飼育され、すべてのマウス実験は、ＬＵＭＣ、Ｌｅｉｄｅｎ、オランダの動物施設で実行した。動物の健康状態を経時的に監視し、試験したすべての動物は、特定病原体を含まないマウスコロニーについてＦＥＬＡＳＡ（欧州実験動物科学協会連盟）ガイドラインに記載されている薬剤について陰性であった。すべてのマウス研究は、オランダ動物倫理委員会（ＣＣＤ）およびＬＵＭＣの現地動物福祉委員会によって、許可番号ＡＶＤ１１６００２０２０１０００４（実施例１、１０および１１）、ＡＶＤ１１６００２０１８８６０４（実施例１２）ならびにＡＶＤ１１６００２０１５２７１（すべての他の実施例）で承認された。実験は、動物実験に関するオランダ法およびＥＵ指令２０１０／６３／ＥＵ（「科学目的で使用される動物の保護に関する」）に従って実行した。Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ［ＡＴＣＣ］、カタログ番号ＣＲＬ－６４７５）を、５％のＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で８％ウシ胎児血清（ＦＣＳ，Ｂｏｄｉｎｃｏ、カタログ番号５０１０（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１０３７８－０１６）を補充したＩｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２４４０－０５３）で成長させた。

【0258】

不活性Ｆｃ尾部を有するＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ（ｂｓＩＧｇ２ａｍｍ－２Ｃ１１ｘＴＡ９９－ＬＡＬＡ）は、マウスＣＤ３εおよびＴＡＡｇｐ７５をそれぞれ認識する親抗ＣＤ３１４５－２Ｃ１１および抗糖タンパク質（ｇｐ）７５ＴＡ９９抗体に基づく。ＣＤ３結合アームの重鎖（ＶＨ）可変領域および軽鎖（ＶＬ）可変領域のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号４２および配列番号４５に示す。ｇｐ７５結合アームの重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号４９および配列番号５２に示す。ＣＤ３結合アームについては、ＶＨＣＤＲ１、－２および－３配列をそれぞれ配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１に提供する。ＶＬ ＣＤＲ１、－２および－３配列は、それぞれ配列番号４３、ＹＴＮおよび配列番号４４である。ｇｐ７５結合アームについては、ＶＨＣＤＲ１、－２および－３配列をそれぞれ配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８に提供する。ＶＬ ＣＤＲ１、－２および－３配列は、それぞれ配列番号５０、ＤＡＫおよび配列番号５１である。Ｆｃ尾部をＬｅｕ２３４ＡｌａおよびＬｅｕ２３５Ａｌａ（ＬＡＬＡ）変異で不活性にした（Ｓｃｈｌｏｔｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２０１６；２９（１０）：４５７－６６）。ｂｓＡｂは、制御されたＦａｂアーム交換を可能にした親抗体（２Ｃ１１－１４５中のＶａｌ３７０ＬｙｓおよびＬｙｓ４０９Ａｒｇ、ＴＡ９９中のＰｈｅ４０５ＬｅｕおよびＡｓｎ４１１Ｔｈｒ）のＣＨ３ドメインに適合する点変異を導入することによって生成した。ｂｓＡｂは、以前に記載されたように社内で産生および精製した（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｕｒｉｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｅ－Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ Ｒｏｄｅｎｔ Ｍｏｄｅｌｓ，Ｓｃｉ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１７）。

【0259】

野生型（ＷＴ）雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、オランダ）およびＣ５７ＢＬ／６ＣＸＣＲ３－ＫＯマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；ストック番号００５７９６）の右側腹部に、０日目に５０，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞（０．１％ウシ血清アルブミン［ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ３９１２］を含有する２００μＬリン酸緩衝生理食塩水［ＰＢＳ；Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、カタログ番号Ｍ０９０００１］中）を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。６日目および９日目に、マウスに１２．５μｇ（およそ０．５ｍｇ／ｋｇ）のＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。処置スケジュールのタイムラインを図１Ａに示す。腫瘍サイズをノギスによって週に３回測定し、長さ×幅×高さを乗算することによって計算した。腫瘍が１０００ｍｍ^３の体積に達したとき、マウスを安楽死させた。Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定を使用して、処置マウスの生存が未処置対照群の生存と比較して有意に改善されたかどうかを決定した。

【0260】

未処置ＷＴマウスおよびＣＸＣＲ３－ＫＯマウスの両方において、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍は、急速な増殖を示し、それぞれ生存期間中央値２４日および２０日、ＷＴ群では１匹のマウスが無腫瘍のままであった（図１Ｂ、図１Ｃ）。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置群では、ＣＸＣＲ３－ＫＯマウスの生存は、ＷＴ群と比較して有意に短く、６０日後に腫瘍が残っていないマウスは少なかった（ＣＸＣＲ３－ＫＯ群で２／１０対ＷＴ群で６／１０）。ＣＸＣＲ３－ＫＯマウスは、有意ではないが、全体的なＣＤ４５陽性浸潤物が少なく、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の頻度が低いという一貫した傾向を示した（図１Ｄ）。この傾向は、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂで処置したマウスで維持され、浸潤物内のＴ細胞の存在は、有意に低かった。

【0261】

まとめると、これらのデータは、ＣＤ３係合ｂｓＡｂ療法の有効性におけるＣＸＣＲ３媒介免疫細胞輸送の役割を確認している。これは、免疫細胞浸潤の調節が、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂ処置の転帰の改善に寄与し得ることをさらに示唆する。

【0262】

［実施例２］
腫瘍特異的Ｔ細胞の移入と組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種は、Ｔ細胞係合二重特異性抗体ＣＤ３ｘＴＡ９９の有効性を増強する

【0263】

実施例１では、腫瘍微小環境へのＴ細胞の動員が、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂ処置の抗腫瘍有効性に影響を及ぼすことが示された。ここでは、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効果が、腫瘍特異的Ｔ細胞と組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種の投与によって増強され得るかどうかを試験した。

【0264】

ここで１００，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を注射したことを除いて、腫瘍接種およびｂｓＡｂ処理を本質的に実施例１に記載したように実行した。処置スケジュールのタイムラインを図２Ａに示す。養子細胞移入（ＡＣＴ）のために、ｇｐ１００_{２５－３３}／Ｈ－２Ｄ^ｂ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する脾細胞を、コンジェニックマーカーＣＤ４５．１またはＣＤ９０．１を発現するように交配されたＰｍｅｌ－１ＴＣＲトランスジェニックマウス（ＯｖｅｒｗｉｊｋＷＷ ｅｔ ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｓｅｌｆ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ＣＤ８^＋Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ２００３；１９８：５６９－８０；Ｄｒ．Ｎ．Ｐ．Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤのご厚意により贈られた）から濃縮した。Ｐｍｅｌ－１ＴＣＲトランスジェニックマウスの脾臓およびリンパ節からのリンパ球を単離し、ナイロンウールカラム（Ｋｉｓｋｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧＭＢＨ、カタログ番号ＭＫＮ－５０）上のＰｍｅｌ－１Ｔリンパ球について濃縮した。これらのＴリンパ球は、Ｐｍｅｌ－１Ｔ細胞とさらに称される。

【0265】

６日目および１３日目に、各マウスを２０μＬの２０ｍｇ／ｍＬのキシラジン（Ｄｅｃｈｒａ、カタログ番号６１５３１９）、２０μＬの１０％ケタミン（Ａｌｆａｓａｎ、カタログ番号１９０７１８４－０６）および６０μＬのＰＢＳの混合物を腹腔内注射し、続いてｇｐ１００由来の合成ペプチドで免疫化することによって麻酔した。手短に言えば、マウスの剃毛した左側腹部に、１００μｌのＰＢＳに溶解したＨ－２Ｄ^ｂ拘束性ＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープ（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ；配列番号３５）を有する１００μｇのｇｐ１００_{２０－３９}ペプチド（「ＫＶＰ」）（ＡＶＧＡＬＫＶＰＲＮＱＤＷＬＧＶＰＲＱＬ；配列番号３４相同ヒト配列；Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成により、オランダのライデン大学医療センターで合成）を皮下注射した。アジュバントとして、６０ｍｇの５％イミキモド含有クリームＡｌｄａｒａ（３Ｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、カタログＧＴＩ１０２Ｃ番号）を注射部位に同時に局所適用した。組換えヒトインターロイキン（ＩＬ）－２（１００μＬＰＢＳ中６００，０００ＩＵ、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ、カタログ番号６０１３８１Ｚ）を、２回目の免疫化の日（１３日目）および１日後（１４日目）に腹腔内注射した。ＫＶＰワクチン接種などの実施例で使用されるワクチン接種という用語は、ＡｌｄａｒａアジュバントおよびＩＬ－２処置を含む、または示される場合はアジュバントＣｐＧを含むＫＶＰペプチドなどのペプチドワクチンによるワクチン接種を指す。

【0266】

未処置対照マウスでは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、攻撃的な腫瘍成長を示し、生存期間の中央値は１８日であった（図２Ｂ）。ｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９での処置は、生存を有意に延長し（図２Ｃ；Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ試験；Ｐ＝０．００１３）、４／７のマウスにおいて腫瘍の増殖を予防した。ＫＶＰワクチン接種およびＰｍｅｌ－１Ｔ細胞のＡＣＴによるＣＤ３ｘＴＡ９９処置の組み合わせは、抗腫瘍有効性をさらに増加させ、６／８のマウスにおいて腫瘍増殖を予防した。対照的に、ＫＶＰワクチン接種単独と組み合わせたＰｍｅｌ－１細胞のＡＣＴは、腫瘍増殖を予防するのに十分ではなく、マウスの生存期間中央値（２９日間）は、未処置対照の生存期間よりもわずかに増加したが、処置は、生存期間を有意に改善しなかった（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ試験；Ｐ＝０．０７５５）。

【0267】

まとめると、これらのデータは、腫瘍特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種がＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍有効性を増強することを示す。

【0268】

［実施例３］
ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果は、非適合の腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種によって、および適合する腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍非特異的ワクチン接種によって増強され得る。

【0269】

実施例２に示されるように、適合する腫瘍特異的Ｐｍｅｌ－１Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍特異的ＫＶＰワクチン接種の投与は、同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＣＤ３ｘＴＡ９９処置の抗腫瘍効果を増強した。

【0270】

ここでは、ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果が、非適合の腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種によって、または適合する腫瘍非特異的Ｔ細胞のＡＣＴと組み合わせた腫瘍非特異的ワクチン接種によっても増強され得るかどうかを試験した。

【0271】

実験は、実施例１および２に記載されているように実行し、以下に記載されているようにいくつかの小さな順応を行った。ニワトリ卵白アルブミンＯＶＡ_{２５７－２６４}／Ｈ－２Ｋ^ｂに特異的なＴＣＲを有する脾細胞を、コンジェニックマーカーＣＤ４５．１またはＣＤ９０．１を発現するように飼育されたＯＴ１ ＴＣＲトランスジェニックマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ストック番号００３８３１）から濃縮した。Ｐｍｅｌ－１Ｔ細胞について実施例２に記載したように脾細胞濃縮を実行した。これらのＯＶＡ特異的脾細胞は、ＯＴ１ Ｔ細胞とさらに称される。
－１日目に、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、尾静脈注射によって１×１０^６個の濃縮ＯＴ１ Ｔ細胞（２００μＬのＰＢＳ中）を投与した。０日目に、マウスの右側腹部に１００，０００個の同系Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞（０．１％ＢＳＡを含む２００μＬのＰＢＳ中）を皮下注射した。３日目および１０日目に、各マウスを、実施例２に記載されるように麻酔した後、１５０μｇの実施例２に記載されるようなｇｐ１００_{２０－３９}ペプチド（「ＫＶＰペプチド」）、または１００μＬのＰＢＳに溶解した、Ｈ－２Ｋ^ｂ拘束性ＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープ（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）を有する１５０μｇのニワトリ卵白アルブミンＯＶＡ_{２４１－２７０}ペプチド（「ＯＶＡペプチド」）（ＳＭＬＶＬＬＰＤＥＶＳＧＬＥＱＬＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴＳ；Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成によってオランダのライデン大学医療センターで合成）で免疫化した。アジュバントとして、Ａｌｄａｒａを３日目および１０日目に注射部位に局所適用し、ＩＬ－２を１０および１１日目に腹腔内注射した。１２および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。実施例１に記載されるように腫瘍成長を監視した。処置スケジュールのタイムラインを図３Ａに示す。

【0272】

未処置対照マウスでは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、攻撃的な腫瘍成長を示し、生存期間の中央値は２１日であった（図３Ｂ）。８匹中１匹のマウスにおいて、腫瘍の増殖は、観察されなかった。ｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９による処置は、生存を有意に延長しなかった（図３Ｃ；Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ試験；Ｐ＝０．０９７２）が、生存期間の中央値を３１日に延長した。この有効性の欠如は、実施例２と比較してｂｓＡｂの投与が遅延したためである可能性が高い（実施例２の６日目および９日目に対して、実施例３の１２日目および１５日目）。腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種によるＣＤ３ｘＴＡ９９処置と適合する腫瘍非特異的ＯＴ１ Ｔ細胞のＡＣＴとの組み合わせは、抗腫瘍有効性を有意に増加させ（＊Ｐ＝０．０１４７）、生存期間中央値は、６８日であった。加えて、８匹のマウスのうち４匹において、腫瘍の増殖を予防した。同様に、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍特異的ＫＶＰワクチン接種との組み合わせ、および非適合の腫瘍非特異的ＯＴ１ Ｔ細胞のＡＣＴは、腫瘍増殖を有意に遅延させ（＊Ｐ＝０．０１４７；７５日間の生存期間中央値）、８匹中２匹のマウスにおいて腫瘍増殖を予防した。対照的に、適合する腫瘍非特異的ＯＴ１ Ｔ細胞と組み合わせた腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種のみによる処置は、生存を有意に延長せず（Ｐ＝０．４；２８日間の生存期間中央値）、または腫瘍増殖を予防しなかった。

【0273】

まとめると、これらのデータは、非適合のＡＣＴと組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種、腫瘍非特異的Ｔ細胞、または適合するＡＣＴと組み合わせた腫瘍非特異的ワクチン接種、腫瘍非特異的Ｔ細胞は両方とも、適合するＡＣＴである腫瘍特異的Ｔ細胞と組み合わせた腫瘍特異的ワクチン接種と同程度にＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍有効性を増強することができることを示す。

【0274】

［実施例４］
ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍特異的ワクチン接種との組み合わせ、または適合するＡＣＴと組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせ、腫瘍非特異的Ｔ細胞は同様に抗腫瘍有効性を増強する

【0275】

実施例２および３に示されるように、ｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果は、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置を腫瘍特異的ＡＣＴおよび腫瘍特異的ワクチン接種と組み合わせることによって、ＣＤ３ｘＴＡ９９を腫瘍非特異的ＡＣＴおよび適合する腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせることによって、またはＣＤ３ｘＴＡ９９処置を腫瘍非特異的ＡＣＴおよび腫瘍特異的ワクチン接種と組み合わせることによって、増強することができる。ここで、本発明者らは、マウスＢ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置を腫瘍特異的ワクチン接種と組み合わせることによっても、ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果を増強することができるかどうかを試験した。

【0276】

実験は、本質的に実施例３に記載されるように実施した。腫瘍成長は、実施例１に記載されるように監視した。図４Ａは、処置タイムラインを示す。

【0277】

未処置対照マウスでは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、攻撃的な腫瘍成長を示し、生存期間の中央値は２２日であった（図４Ｂ）。ｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９のみでの処置またはＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２のみでの処置のいずれによっても有意に延長された生存期間は得られなかったが（図４Ｃ）、生存期間中央値は、それぞれ２９．５日および２６日に延長された。ＣＤ３ｘＴＡ９９、ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２での処置後に腫瘍増殖の有意な遅延が観察され、有意に長い生存期間が得られた（Ｐ＝０．００７７）が、腫瘍負荷のためにすべてのマウスを５９日目までに屠殺する必要があった。ＣＤ３ｘＴＡ９９、ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２で処置したマウス群の生存は、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂのみまたはＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２のみで処置したマウス群と比較して有意に延長されなかった。ＣＤ３ｘＴＡ９９処置を腫瘍非特異的（ＯＶＡ）ワクチン接種、腫瘍非特異的ＡＣＴ（ＯＴ１）と組み合わせた場合、８匹のマウスのうち２匹が生存し、無処置群と比較して有意に延長された生存が観察された（Ｐ＝０．００８４）。同様に、腫瘍特異的（ＫＶＰ）ワクチン接種、ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２と組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９で処置した場合、８匹のマウスのうち３匹が腫瘍チャレンジを生存した。この併用処置は、未処置群と比較した場合、生存を有意に延長した（Ｐ＝０．００９２）。

【0278】

まとめると、これらのデータは、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍非特異的ＡＣＴおよび適合するする腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせと同程度に、ＡＣＴの非存在下でＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍特異的ワクチン接種とを組み合わせることによって、ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍有効性を増強できることを示している。対照的に、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置へのＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２の添加は、生存を有意に増加させなかった。

【0279】

［実施例５］
Ｔ細胞浸潤および活性化は、腫瘍非特異的ＡＣＴと腫瘍非特異的ワクチン接種とを組み合わせてＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂで処置したＴＲＰ１発現腫瘍において増強される

【0280】

実施例２、３および４に示されるように、Ｂ１６Ｆ１０マウス腫瘍モデルにおけるｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果は、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍特異的または腫瘍非特異的ＡＣＴおよびワクチン接種とを組み合わせることによって、ならびにＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍特異的ワクチン接種とを組み合わせることによって増強ことができる。ここで、本発明者らは、腫瘍非特異的ＡＣＴとワクチン接種とを組み合わせたＣＤ３ｘＴＡ９９での処置後に、ＴＡ９９抗体によって認識されるＴＲＰ１抗原（ｇｐ７５としても公知）を発現する腫瘍においてＴ細胞浸潤および活性化が特異的に増強されるかどうかを研究した。

【0281】

インビボでのＴ細胞浸潤および活性化を研究するために、ＴｂｉＬｕｃｘＯＴ１マウス由来のＯＴ１ＣＤ８^＋Ｔ細胞を使用した（Ｋｌｅｉｎｏｖｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１８；９：３０９７）。二重ルシフェラーゼＴｂｉＬｕｃマウス由来のＴ細胞は、緑色発光クリックビートルルシフェラーゼ（ＣＢＧ９９）およびＴ細胞活性化時に赤色発光ホタルルシフェラーゼ（ＰｐｙＲＥ９）を構成的に発現する。後者は、Ｔ細胞活性化時に活性化される活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）の活性化によって誘導される。これにより、Ｔ細胞の位置および活性化の多色生物発光イメージングが可能になる。ＫＰＣ３腫瘍細胞株を、Ｋ－ｒａｓ^{Ｇ１２Ｄ／＋}、ｐ５３^{Ｒ１７２Ｈ／＋}ならびに膵臓および十二指腸ホメオボックス１（Ｐｄｘ－１）－Ｃｒｅ導入遺伝子を有する遺伝的膵管腺癌「ＫＰＣ」マウスモデルから単離した（Ｈｉｎｇｏｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２００５；７（５）：４６９－８３）。ＫＰＣ３－ＴＲＰ１細胞は、以前に記載されたように、リポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用したＴＲＰ１／ｇｐ７５コードプラスミドのトランスフェクションによって生成した（Ｂｅｎｏｎｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ Ｃａｎｃ Ｔｈｅｒ ２０１９；１８（２）：３１２－２２）。このプラスミドは、Ｇｅｓｔｕｒ Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ（アカデミックメディカルセンター、アムステルダム、オランダ）によるご厚意で提供され、ゼオシン選択遺伝子をネオマイシン選択遺伝子と交換し、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターをＣＭＶエンハンサー、ニワトリβ－アクチンプロモーターおよびウサギβ－グロビンスプライスアクセプター部位（ＣＡＧ）プロモーターで置き換えることによって最適化された。トランスフェクト細胞を４００μｇのネオマイシンで７日間選択し、その後、ＴＡ９９抗体および二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ標識抗マウスＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して、ＴＲＰ１／ｇｐ７５発現について蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって濃縮した。

【0282】

処置スケジュールのタイムラインを図５Ａに示す。アルビノＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ストック番号００００５８）を背中の２箇所で剃毛し、０日目に８０，０００個のＫＰＣ３腫瘍細胞（背中の左側）および８０，０００個の腫瘍ＫＰＣ３－ＴＲＰ１細胞（背中の右側）を皮下注射した。５日目に、マウスは、尾静脈への静脈注射によって１×１０^６個のＴｂｉＬｕｃ×ＯＴ１濃縮脾細胞（２００μＬのＰＢＳ中）を受けた。次に、無作為化マウス（群当たりｎ＝４）を、以下に記載されるように、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９抗体処置の種々の組み合わせで処置した。５０μＬのＰＢＳ中の２０μｇのＴＬＲ９－リガンドＣｐＧ（ＯＤＮ－１８２６、カタログ番号ｔｌｒｌ－１８２６、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と混合した１００μｇのＯＶＡ_{２４１－２７０}合成長ペプチドでの免疫化を、６日目および１３日目に尾部基部に皮下注射によって与えた。マウスは、１５日目および１９日目に２００μＬのＰＢＳ中の１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９（およそ０．５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内で受けた。生物発光の可視化のために、イソフルラン吸入（４％誘導、１．５％維持、Ｆｅｎｄｉｇｏ、カタログ番号１２２１８９４）によってマウスを麻酔し、続いて１００μＬのＰＢＳ中の４．８８ｍｇ／ｋｇのＣｙｃｌｕｃ１（Ａｏｂｉｏｕｓ、カタログ番号ＡＯＢ１１１７）を首の皮膚に皮下注射した。マウスを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍイメージャ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号１２４２６２）を使用して、１３日目（２回目の免疫化の直前）、１４日目、１６日目、１９日目（ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ注射の直前）、２３日目および２６日目にイメージングした。Ｃｙｃｌｕｃ１注射の１５分後に、自動曝露時間のオープンフィルタを使用して生物発光を測定した。次に、イソフルラン誘発麻酔下で維持しながら、マウスの首の皮膚に１００μＬのＰＢＳ中の１５０ｍｇ／ｋｇＤ－ルシフェリン（Ｓｙｎｃｈｅｍ、カタログ番号ｂｃ２１９）を皮下注射した。生物発光を、５４０ｎｍフィルターおよび自動曝露時間設定を使用して１５分後に測定した。特定の関心領域（ＲＯＩ）におけるシグナル定量化を、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅ４．２ソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して実験全体を通して固定サイズＲＯＩを使用することによって実行した。

【0283】

ＴＲＰ１陽性およびＴＲＰ１陰性ＫＰＣ３腫瘍の両方において、ＣＤ３ｘＴＡ９９およびＯＴ１ Ｔ細胞による併用処置は、Ｔ細胞活性化または浸潤を誘導しなかった（図５Ｂ、図５Ｅ）。ＯＴ１ Ｔ細胞と腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種との併用ＡＣＴは、ＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３腫瘍を有するマウスの一部でＴ細胞活性化および浸潤をもたらしたが、ＴＲＰ１発現のないＫＰＣ３腫瘍を有するマウスでは、Ｔ細胞浸潤および活性化のわずかな増加が観察された（図５Ｃ、図５Ｆ）。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処理をＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよび腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種に加えると、強いＴ細胞浸潤およびＯＴ１ Ｔ細胞の活性化がＴＲＰ１陽性腫瘍において観察された（図５Ｄ、Ｇ）。Ｔ細胞浸潤および活性化はまた、ＴＲＰ１陰性腫瘍においてある程度観察された（図５Ｈ、Ｊ）。加えて、ＫＰＣ３－ＴＲＰ１腫瘍におけるＴ細胞活性化は、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを受けたマウスでは、ＯＴ１ Ｔ細胞およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを受けたマウスと比較して、またＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスと比較して増強された（図５Ｉ）。同様に、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを受けたマウスでは、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを受けたマウスと比較して、またＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＯＶＡワクチン接種を受けたマウスと比較して、Ｔ細胞浸潤が増強された（図５Ｋ）。

【0284】

生物発光イメージングに加えて、フローサイトメトリーを使用して、ＯＴ１ Ｔ細胞活性化および腫瘍浸潤に対するワクチン接種の効果を確認した。処置スケジュールのタイムラインが図５Ｌおよび図５Ｐに示されており、これらは、上記の処置スケジュールと一致している。無作為化マウス（群当たりｎ＝４）を、上記のように、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９抗体処置の異なる組み合わせで処置した。マウスを、それぞれベースラインおよびｂｓＡｂ投与後の時点について、１６日目または２０日目に安楽死させた。腫瘍の単一細胞懸濁液を物理的断片化によって調製し、続いて３００μＬの３８５μｇ／ｍＬのＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号０５４０１０２０００１）と共に、５％のＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で１０分間インキュベートした。最後に、７０μｍセルストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）で細胞をすり潰した。脾臓の単一細胞懸濁液を、７０μｍセルストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）によるすり潰しによって物理的に断片化し、続いて溶解緩衝液（ＬＵＭＣ Ｐｈａｒｍａｃｙ、ＮＨ４Ｃｌ８．４ｇ／ＬおよびＫＨＣＯ３１ｇ／Ｌ、ｐＨ＝７．４＋／－０．２）で処理して赤血球を溶解することによって調製した。１６日目および２０日目に採取した血液試料を溶解緩衝液で処理した。単一細胞懸濁液を、フローサイトメトリー染色のために９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号６５０１０１）に蒔いた。

【0285】

細胞をＰＢＳ中の４０μＬのＦｃＢｌｏｃｋ（１：４００、ＢＤ、カタログ番号５５３１４１）に再懸濁し、氷上で１５分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中の４０μＬのＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ生存色素（１：８００、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２３１０２）に再懸濁し、室温で１０分間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、表面マーカー（ＣＤ４５．１、ＣＤ４５、ＣＤ８、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、表６の詳細を４０μＬのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ、カタログ番号５６６３４９）で氷上で２０分間染色した。サンプルをＦｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で分析した。

【0286】

【表6】

【0287】

実験の１６日目に、ｂｓＡｂ投与前に、ＯＴ１ Ｔ細胞単独のＡＣＴは、血液（図５Ｍ）、脾臓（図５Ｎ）、またはＴＲＰ１陽性およびＴＲＰ１陰性ＫＰＣ３腫瘍の両方でＴ細胞活性化または拡大を誘導しなかった（図５Ｏ）。ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴと腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種との組み合わせは、血液および脾臓でＯＴ１ Ｔ細胞増殖を誘導し（図５Ｍ、５Ｎ）、ＡＣＴ単独と比較して、ＴＲＰ１陽性ＫＰＣ３腫瘍を有するマウスでＯＴ１ Ｔ細胞を有意に増加させた（図５Ｏ；＊ｐ＜０．０５）。あまり顕著ではなく有意ではないが、ＴＲＰ１発現のないＫＰＣ３腫瘍を有するマウスにおいて、併用処置後に増加も観察された。ＯＴ１ Ｔ細胞は、ワクチン接種後にナイーブＴ（Ｔｅｆｆ）細胞からエフェクターＴ（Ｔ_ｅｆｆ）細胞に切り替わり、表面ＣＤ４４のレベルは有意に高く、ＣＤ６２Ｌのレベルは低下した（図５Ｍ～５Ｏ）。

【0288】

その後の時点（２０日目；図５Ｐ）で、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴと、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの添加の有無にかかわらない腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種との組み合わせは、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ単独と比較して、血液（図５Ｑ；＊＊、ｐ＜０．０１）および脾臓（図５Ｒ；＊＊、ｐ＜０．０１）における末梢ＯＴ１ Ｔ細胞数の有意な増加をもたらした。ワクチン接種後、血液（図５Ｑ）および脾臓（図５Ｒ）中のＯＴ１ Ｔ細胞の大部分がエフェクターＴ（Ｔ_ｅｆｆ）細胞に切り替わった。ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴとＯＶＡワクチン接種との組み合わせへのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置の追加は、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴおよびＯＶＡワクチン接種のみで処置した群と比較して、脾臓で検出されたＯＴ１ Ｔ細胞のパーセンテージを有意に減少させたが、同様の傾向が血液であった（図５Ｑ、５Ｒ）。

【0289】

ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴと腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種との組み合わせは、ＴＲＰ１陽性腫瘍およびＴＲＰ１陰性腫瘍の両方においてＯＴ１ Ｔ細胞の有意な増加をもたらした（図４Ｓ）。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置をＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴと腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種との組み合わせに加えた場合、ＴＲＰ１陽性腫瘍におけるＯＴ１ Ｔ細胞の有意に増強されたＴ細胞浸潤および活性化があった（図５Ｓ）。これらのデータは、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂとワクチン接種との組み合わせについて末梢ＣＤ８^＋ＯＴ１ Ｔ細胞の観察された減少によって裏付けられる（図５Ｑ、５Ｒ）。加えて、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、ＯＶＡワクチン接種およびｂｓＡｂを含む併用処置後のＴＲＰ１陽性腫瘍中のＯＴ１ Ｔ細胞は、有意に増加したＣＤ６９発現によって反映されるように、より活性化された。腫瘍内のＯＴ１ Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞表現型を示した。

【0290】

まとめると、これらのデータは、ＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴ、腫瘍非特異的ＯＶＡペプチドワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置の組み合わせによる処置時に、ＯＴ１ Ｔ細胞がＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂによって標的化されるＴＲＰ１抗原を発現するＫＰＣ３腫瘍に特異的に浸潤することを示す。加えて、これらの浸潤Ｔ細胞のほとんどは、ＣＤ３ｘＴＡ９９処理後に活性化されるようになる。これらのデータはまた、併用処置を伴う代替アジュバント（ＣｐＧ）の使用が腫瘍浸潤およびＴ細胞の活性化ももたらすことを示す。

【0291】

［実施例６］
Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６のＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２処理後のＮＫ細胞、マクロファージおよび樹状細胞の腫瘍浸潤の増強

【0292】

実施例２～５では、Ａｌｄａｒａ（イミキモド）およびＩＬ－２またはＣｐＧのいずれかと組み合わせた、ＣＤ３ｘＴＡ９９抗体処置、ＡＣＴおよびペプチドワクチン接種を含む併用処置の抗腫瘍効果が示された。後者の処置の組み合わせは、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍モデルにおける抗腫瘍有効性の増強、およびＣＤ３ｘＴＡ９９抗体によって標的化されるＴＲＰ１抗原を発現するＫＰＣ３腫瘍におけるＴ細胞浸潤および活性化の増加をもたらした。ここで、本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＢ１６Ｆ１０腫瘍の腫瘍微小環境への異なる免疫細胞集団の浸潤に対するアジュバントＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２の効果を研究した。

【0293】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に０．１％ＢＳＡを補充した２００μＬのＰＢＳ中の１００，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。マウスを無作為化し、異なる処置群に分配した（群当たりｎ＝４～６匹のマウス）。７日目および１４日目に、６０ｍｇの５％イミキモド含有クリームＡｌｄａｒａを局所適用し、１４日目および１５日目に１００μＬのＰＢＳ中の組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１６日目に、すべてのマウスを安楽死させた。腫瘍の単一細胞懸濁液を物理的断片化によって調製し、続いて３００μＬの３８５μｇ／ｍＬのＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号０５４０１０２０００１）と共に、５％のＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で１０分間インキュベートした。最後に、細胞を７０μｍセルストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）ですり潰し、フローサイトメトリー染色のために９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ＃６５０１０１）に蒔いた。

【0294】

細胞をＰＢＳ中の４０μＬのＦｃＢｌｏｃｋ（１：４００、ＢＤ、カタログ番号５５３１４１）に再懸濁し、氷上で１０分間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中の４０μＬのＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ生存色素（１：８００、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２３１０２）に再懸濁し、室温で１０分間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、表面マーカー（ＭＨＣ－ＩＩ、Ｌｙ６Ｃ、ＣＣＲ２、Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ、Ｓｉｇｌｅｃ－Ｆ、Ｌｙ６Ｇ、ＣＤ１０３、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、すべて表６）を４０μＬのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ、カタログ番号５６６３４９）で氷上で２０分間染色した。細胞内Ｅｇｒ２およびｉＮＯＳ染色（表７）を、ＦｏｘＰ３染色キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号００－５５２３－００）と共に提供される緩衝液を製造者の説明書に従って使用して実行した。サンプルをＦｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で分析した。実験のタイムラインを図６Ａに示す。

【0295】

【表7】

【0296】

マウスを未処置のままにした（ｎ＝４）か、ＩＬ－２（ｎ＝５）、Ａｌｄａｒａ（ｎ＝５）、またはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせ（ｎ＝６）で処置した。腫瘍中の生細胞集団内の免疫細胞（ＣＤ４５^＋細胞）の平均パーセンテージにおいて処置群間に有意差は、観察されなかった（図６Ｂ）。次に、ＣＤ４５^＋集団内で、腫瘍浸潤樹状細胞（ＤＣ）サブセット、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびマクロファージサブセットのパーセンテージを分析した（表８）。

【0297】

【表8】

【0298】

ＩＬ－２またはＡｌｄａｒａの処置時に、従来の樹状細胞（ｃＤＣ１）および単球由来ＤＣ（ｍｏＤＣ）の両方による腫瘍浸潤の有意な増加が観察された（＊ｐ＜０．０５；図６Ｃ、図６Ｄ）。ＩＬ－２、Ａｌｄａｒａ、またはこれらの組み合わせによる処置は、未処置マウスと比較して、ＮＫ細胞による腫瘍浸潤の有意な増加をもたらした（図６Ｅ）。Ｍ１マクロファージによる腫瘍浸潤の強い有意な増加が、Ａｌｄａｒａによる処理後に観察された（図６Ｆ）が、ＩＬ－２またはＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせでは観察されなかった。休止マクロファージとしても公知のＭ０マクロファージによる腫瘍浸潤は、ＡｌｄａｒａまたはＡｌｄａｒａとＩＬ－２との組み合わせによる処理後に減少した（図６Ｇ）。各群内でかなり大きな広がりがあったにもかかわらず、腫瘍浸潤未成熟マクロファージのパーセンテージは、ＩＬ－２またはＡｌｄａｒａで処置した場合に有意に増加しなかったが、ＩＬ－２とＡｌｄａｒａとの組み合わせは、浸潤未成熟マクロファージのパーセンテージを有意に増加させた（図６Ｈ；＊ｐ＜０．０５）。Ｔ細胞の浸潤に対して、Ａｌｄａｒａ、ＩＬ－２またはＡｌｄａｒａとＩＬ－２との組み合わせの有意な効果は、検出されなかった（図６Ｉ）。

【0299】

まとめると、これらのデータは、アジュバントであるアルダラ（Ａｌｄａｒａ）およびＩＬ－２による処置が、単独でまたは組み合わせて、ＤＣサブセット、ＮＫ細胞およびマクロファージによる増強されたＢ１６Ｆ１０腫瘍浸潤を誘導することを示す。しかしながら、マクロファージによる腫瘍浸潤は、サブセットごとに異なる。ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２による処置後にマウスの腫瘍内で低下したパーセンテージを示した唯一のサブセットは、静止マクロファージのサブセットであった。

【0300】

［実施例７］
内因性細胞のインタクトな輸送は、抗原特異的ＡＣＴ、同族抗原ワクチン接種および二重特異性抗体処置からなる併用処置の抗腫瘍効果に寄与する

【0301】

実施例３および４では、腫瘍非特異的ＡＣＴ、適合する抗原ワクチン接種および腫瘍標的化ｂｓＡｂ処置からなる併用処置が、インビボ腫瘍モデルにおいて抗腫瘍有効性を実証したことが示された。ここでは、実施例３および４で観察された養子移入されたＯＴ１細胞による腫瘍制御が内因性区画の寄与を必要とするかどうかを調べた。この問題に対処するために、内因性Ｔ細胞輸送が破壊されたＣＸＣＲ３－ＫＯマウスに、実施例１で概説したようにＢ１６Ｆ１０腫瘍を移植した。マウスは、ＣＸＣＲ３－十分なＯＴ１ Ｔ細胞を、３日目にＯＶＡワクチン接種（ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２を使用）と組み合わせ、続いて１０日目にのみＯＶＡワクチン接種（ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２を使用）を受けた。１２日目および１５日目に、マウスに本質的には実施例１に記載されているように、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置を腹腔内注射した。処置スケジュールのタイムラインを図１Ｅに示す。

【0302】

実施例１で強調したように、未処置のままにしたＷＴマウスとＣＸＣＲ３－ＫＯマウスとの間で腫瘍増殖の差は、観察されなかった（図１Ｆ、Ｇ）。ＯＶＡワクチン接種とＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置とが一体となったＯＴ１ Ｔ細胞のＡＣＴで処置した腫瘍担持ＣＸＣＲ３－ＫＯマウスの生存期間中央値は、３３日に延長された（図１Ｆ、Ｇ）。同じ処置を受けたＷＴマウスの生存は、有意に延長され（ｐ＝０．０１７１）、８匹のマウスのうち５匹が６０日後に無腫瘍のままであった。

【0303】

これらの結果は、内因性免疫浸潤物が、外因的に移入されたワクチン特異的ＯＴ１ Ｔ細胞によって駆動される場合、腫瘍非特異的ＯＶＡワクチン接種およびＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置からなる併用処置の抗腫瘍効果に寄与することを示している。

【0304】

［実施例８］
ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置と腫瘍特異的ワクチン接種または腫瘍非特異的ワクチン接種との併用は、ＡＣＴを必要とせずに抗腫瘍有効性を同様に増強する

【0305】

実施例４に示すように、ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果は、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍非特異的ＡＣＴおよび適合する腫瘍非特異的ワクチン接種との組み合わせと同程度に、ＡＣＴの非存在下でＣＤ３ｘＴＡ９９処置と腫瘍特異的ワクチン接種とを組み合わせることによって増強することができた。ここで、本発明者らは、マウスＢ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置を、ＡＣＴの非存在下での腫瘍非特異的ワクチン接種と組み合わせることによっても、ＣＤ３ｘＴＡ９９の抗腫瘍効果を増強することができるかどうかを試験した。

【0306】

実験は、以下を除いて、本質的に実施例２に記載のように実行した：ワクチン接種を受けたマウスに、１００μＬのＰＢＳ中の１５０μｇの腫瘍特異的ＫＶＰ合成長ペプチドまたはリボソームタンパク質Ｌ１８由来の腫瘍非特異的合成長ペプチド（Ｒｐｌ１８；配列番号５７）のいずれかを尾部基部に皮下注射し、ＡＣＴは与えなかった。実施例１に記載されるように腫瘍成長を監視した。図７Ａは、処置タイムラインを示す。

【0307】

未処置対照マウスでは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、攻撃的な腫瘍成長を示し、生存期間の中央値は２１日であった（図７Ｂ）。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂのみまたはＲｐｌ１８もしくはＫＶＰワクチン接種のいずれかによる処置によって有意に延長された生存は得られなかったが、生存期間中央値はそれぞれ２５．５、２４および２９日に延長された。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂをＲｐｌ１８またはＫＶＰワクチン接種のいずれかと組み合わせると、腫瘍増殖の有意な遅延が観察され、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置単独と比較した場合、有意に長い生存期間が得られた（それぞれＰ＝０．０１７３およびＰ＝０．００２７；図７Ｃ）。生存期間中央値は、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂおよび腫瘍非特異的Ｒｐｌ１８ワクチン接種で処置されたマウスの群では３１日間に延長され、６匹のマウスのうち１匹が腫瘍チャレンジを生存した。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置を腫瘍特異的ＫＶＰワクチン接種と組み合わせた場合、生存期間中央値は、６５日に延長され、８匹のマウスのうち４匹が生存した。

【0308】

まとめると、これらのデータは、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置をＡＣＴの非存在下での腫瘍特異的ワクチン接種または腫瘍非特異的ワクチン接種のいずれかと組み合わせることによって、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂの抗腫瘍有効性を増強することができることを示している。加えて、Ｒｐｌ１８ペプチドの非外来性にもかかわらず、抗腫瘍効果は、適切なアジュバントと組み合わせて投与された場合に達成され得、これは、非外来起源のワクチン抗原へのアジュバントの添加が自己寛容を克服し得ることを示す公開された報告からのデータによって裏付けられる（Ｂａｕｍｇａｅｒｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０１１；１３０（１１）：２６０７－２６１７，Ｌｉｅｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９；３２（８）：８７５－８３）。特に、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置とアジュバントまたはアジュバントのみとの組み合わせは、実施例４にのみ示されるように、ＣＤ３ｘＴＡ９９処置と比較して生存を増強せず、本実施例で観察された抗腫瘍効果がワクチン抗原の添加に依存するという仮説を裏付けた。

【0309】

［実施例９］
腫瘍非特異的ワクチン接種は、ｂｓＡｂ投与の時点で免疫細胞の割合および腫瘍内の活性化を増加させ、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂと組み合わせた場合に生存率の向上をもたらす

【0310】

実施例８では、ＡＣＴを必要としないＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂおよび腫瘍非特異的ワクチン接種併用処置の抗腫瘍有効性を提示した。実施例６では、アジュバントＡｌｄａｒａおよび／またはＩＬ－２は、腫瘍内のｃＤＣ１、ＭｏＤＣ、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージおよび未成熟マクロファージ集団の頻度の増加、ならびに静止マクロファージの頻度の減少を誘導することができるが、Ｔ細胞頻度の有意な変化は観察されなかったことが示された。ここで、本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＢ１６Ｆ１０腫瘍の腫瘍微小環境への異なる免疫細胞集団の浸潤に対する腫瘍非特異的ワクチン接種の効果を研究した。

【0311】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に０．１％ＢＳＡを補充した２００μＬのＰＢＳ中の８０，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。マウスを無作為化し、異なる処置群に分配した（群当たりｎ＝６匹のマウス）。７日目および１４日目に、６０ｍｇの５％イミキモド含有クリームＡｌｄａｒａを局所適用し、１００μＬのＰＢＳ中の１５０μｇのＲｐｌ１８長ペプチドを右脇腹に皮下注射した。１４日目および１５日目に１００μＬのＰＢＳ中の組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。１６日目に、すべてのマウスを安楽死させた。腫瘍の単一細胞懸濁液を実施例５に記載されるように調製した。

【0312】

実施例６に記載するように、異なるフローサイトメトリー染色パネル（表９および１０の詳細）を使用して、様々な表面および細胞内マーカーを指向する蛍光標識抗体で細胞を染色した。実験のタイムラインを図８Ａに示す。

【0313】

【表9】

【0314】

【表10】

【0315】

マウスを未処置のままにしたか（ｎ＝６）、またはアジュバントであるＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２によるＲｐｌ１８ワクチン接種の組み合わせで処置した（ｎ＝６）。

【0316】

免疫細胞サブセットを、表１１に示すマーカーの発現によって特徴付けた。腫瘍非特異的ワクチン接種後の腫瘍における生細胞集団内の免疫細胞（ＣＤ４５^＋細胞）のパーセンテージの有意な増加があった（図８Ｂ）。全免疫細胞集団内で、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞の割合も、腫瘍非特異的ワクチン接種時に有意に増加した（図８Ｂ；＊、ｐ＜０．０５）。同様に、ワクチン接種は、ＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋／Ｔｒｅｇ細胞の比の増加をもたらした。ＣＤ８^＋ＴエフェクターおよびＣＤ４^＋Ｔセントラルメモリー細胞もまた、ワクチン接種後に有意に増加した（図８Ｂ；＊＊、ｐ＜０．０１）。

【0317】

割合の増加に加えて、リンパ系集団もより活性化された（図８Ｃ）。グランザイムＢは、ワクチン接種後にＣＤ８^＋Ｔ細胞（＊＊、ｐ＜０．０１）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１）、ＮＫ細胞（＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１）、ＮＫＴ細胞（＊、ｐ＜０．０１）およびＣＤ１９^＋Ｂ細胞（＊、ｐ＜０．０５）において有意にアップレギュレートされた。腫瘍非特異的ワクチン接種で処置したマウスでは、有意により多くのＣＤ１０３発現ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞もあり、これは腫瘍微小環境におけるこれらの細胞の組織滞留の指標である（それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．０１）。加えて、ＰＤ－１およびＮＫＧ２Ａの発現は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ｐ＜０．０５）およびＮＫＴ細胞（ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１）で有意に増加した。

【0318】

【表11】

【0319】

次に、腫瘍中のＣＤ４５^＋集団内の骨髄細胞サブセットのパーセンテージをフローサイトメトリーによって分析した。腫瘍非特異的ワクチン接種で処置すると、単球由来ＤＣの増殖増加（ｍｏＤＣ；＊、ｐ＜０．０５）が腫瘍で観察されたが、未成熟マクロファージ、好酸球および従来の樹状細胞では増殖増加の傾向が観察された（ｃＤＣ１；図８Ｂ）。

【0320】

まとめると、これらのデータは、腫瘍非特異的ワクチン接種による処置が、二重特異性投与に先立ってＢ１６Ｆ１０腫瘍内のＴ細胞、ＮＫ細胞およびＤＣサブセットの割合を高めたことを示す。加えて、腫瘍内の免疫細胞サブセットは、腫瘍非特異的ワクチン接種後により活性化され、グランザイムＢおよび活性化マーカーのレベルが上昇した。実施例６および実施例９に示された結果を比較すると、Ｒｐｌ１８ペプチドワクチン接種およびアジュバントであるＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２を含む併用療法でマウスを処置した場合、ＡｌｄａｒａおよびＩＬ－２のみで処置したマウス（実施例６）と比較して、実施例９でのみＴ細胞浸潤の増加が観察される。これは、アジュバントが、骨髄サブセットおよびＮＫ細胞による腫瘍浸潤の増加または減少を誘導することによって（実施例６に示すように）、非抗原特異的様式で腫瘍微小環境を調節し得るが、Ｔ細胞の活性化を誘発するワクチン抗原が腫瘍へのＴ細胞浸潤に必要であり得ることを示唆する。

【0321】

［実施例１０］
腫瘍非特異的外来抗原によるワクチン接種は、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂ処置後のＣＤ８^＋Ｔ細胞の浸潤、活性化およびエフェクター分子発現の増加をもたらす

【0322】

以前の実施例は、腫瘍特異的ワクチン接種（ＫＶＰ）、腫瘍非特異的ワクチン接種（Ｒｐｌ１８）またはＯＴ１ Ｔ細胞ＡＣＴと腫瘍非特異的外来抗原ワクチン接種（ＯＶＡ）との組み合わせと一緒のＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂによる処置後の改善された腫瘍制御を実証した。さらに、実施例９では、Ｒｐｌ１８ペプチドワクチン接種で処置した腫瘍内で免疫細胞の存在および活性化の増強が観察された。ここでは、腫瘍内の免疫細胞の存在および活性化状態に対するＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置への寄与を、腫瘍非特異的外来抗原（ＯＶＡ）によるワクチン接種について研究した。

【0323】

これに対処するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に０日目に、０．１％ＢＳＡを補充した１００μＬＰＢＳ中の８０，０００個のＴＲＰ１発現ＫＰＣ３細胞を移植した（図９Ａ）。マウスを無作為化し、異なる処置群に分配した（群当たりｎ＝７匹のマウス）。８日目および１５日目に、ワクチン群のマウスを、実施例２に記載のように麻酔した後、１００μＬのＰＢＳに溶解した１５０μｇのＯＶＡ_{２４１－２７０}ペプチドで免疫した。アジュバントとして、Ａｌｄａｒａを８日目および１５日目に注射部位に局所適用し、１５日目および１６日目に、ＩＬ－２を腹腔内注射した。１７日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射した。ｂｓＡｂ処置の２日後、すべてのマウスを屠殺した。腫瘍および脾臓の単一細胞懸濁液を実施例５に記載されるように調製した。染色を、表１２、１３および１４に示される抗体パネルを使用して、実施例６に概説される手順に従って実行した。

【0324】

【表12】

【0325】

【表13】

【0326】

【表14】

【0327】

異なる免疫細胞集団によって発現されるマーカーを実施例６の表８に提供する。

【0328】

マウスをＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂで処置すると、ワクチン接種群と非ワクチン接種群の両方で腫瘍内のＣＤ４５^＋細胞の割合が増加した（図９Ｂ）。しかしながら、ワクチン接種群では、これは、ＣＤ３ｘＴＡ９９のみで処置したマウスまたは未処置のままにしたマウスと比較して、Ｔ細胞頻度の有意な増加と並行していた。さらに、併用処置は、従来の（ＦｏｘＰ３^－）ＣＤ４^＋Ｔ細胞および制御性（Ｆｏｘｐ３^＋）ＣＤ４^＋Ｔ細胞の両方の減少によって反映される、主にＣＤ８^＋Ｔ細胞に対するＴ細胞レパートリーのスキューイングをもたらした。加えて、腫瘍内のＣＤ８^＋Ｔ細胞は、未処理群またはＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独と比較した場合、エフェクターＴ（Ｔ_ｅｆｆ）細胞にほぼ排他的に切り替わり、実施例５および９に記載された結果と一致した。併用処置は、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置のみの群と比較して、腫瘍中のＢ細胞の相対頻度を有意に減少させたが、ＮＫ細胞の割合は有意に増加した。脾臓では、変化はあまり顕著ではなかった（図９Ｃ）。それでも、ＣＤ８^＋Ｔ細胞へのＴ細胞組成物のわずかなシフト、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞の減少、およびこの群内の全身活性化を示唆するＣＤ８^＋Ｔ_ｅｆｆ細胞の対応する増加が観察された。さらに、脾臓におけるＢ細胞頻度は、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置のみの群と比較して、併用処置群で有意に減少したが、ＮＫ細胞頻度に影響は観察されなかった。

【0329】

ワクチン接種がＴ細胞浸潤物にどのように影響するかを理解するために、腫瘍および脾臓内のＣＤ８^＋Ｔ細胞の詳細な表現型決定を実施した（図９Ｄ、図９Ｅ）。腫瘍において、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ単独での処置は、４－１ＢＢ発現および陰性チェックポイントＴＩＧＩＴの中程度の増加をもたらした（図９Ｄ）。他方、ワクチン接種の追加は、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ４９ａおよびＯＸ４０について陽性の細胞のさらなる増加をもたらした。併用群の細胞の３分の１がエフェクター分子グランザイムＢについて陽性であった。同時に、陰性チェックポイント発現、具体的にはＰＤ－１、Ｔｉｍ３およびＮＫＧ２Ａならびに免疫抑制性エクトヌクレアーゼＣＤ３９の増加があった。さらに、ワクチン接種マウス由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞は、Ｋｉ－６７の発現によって測定されるように、より増殖性であった。転写因子分析により、両方の処置群が、通常はナイーブ状態に関連するＴＣＦ－１をダウンレギュレートしたが、組み合わせ群は、Ｔ_ｂｅｔ陽性ＣＴＬ表現型に対するより大きなスキューイングの傾向を示したことが明らかになった。これらの結果を脾臓に存在するＣＤ８^＋Ｔ細胞の表現型検査と比較すると、ｂｓＡｂ単独によって引き起こされる変化が腫瘍に局在していることが明らかになった（図９Ｅ）。逆に、併用処置の効果はより全身的であった。

【0330】

Ｔ細胞区画の変化に加えて、併用療法後に腫瘍におけるＮＫ細胞頻度の増加が観察された（図９Ｂ）。さらに検査すると、より高い割合のＮＫ細胞が活性化され、併用処置群においてより多くのグランザイムＢを発現した（図９Ｆ）。さらに、腫瘍マクロファージの表現型のシフトが観察され、Ｍ２マクロファージのほぼ完全な喪失、Ｍ０マクロファージの減少およびＭ１マクロファージの対応する増加が観察された（図９Ｇ）。まとめると、これらの所見は、併用処置効果がＴ細胞に限定されず、腫瘍微小環境のより好ましい骨髄組成ももたらすことを示唆している。

【0331】

全体として、これらのデータは、ｂｓＡｂ処置と外来腫瘍非特異的抗原によるワクチン接種との組み合わせが、ｂｓＡｂ処置単独と比較してより活性化されたより大きなＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞浸潤物をもたらすことを示している。

【0332】

［実施例１１］
ＣＤ３ｘＴＡ９９二重特異性抗体処置の抗腫瘍有効性に対する腫瘍非特異的外来抗原（ＯＶＡ）ワクチン接種の効果
実施例１０では、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置への腫瘍非特異的外来抗原ワクチン接種の追加が、内因性Ｔ細胞およびＮＫ細胞の浸潤および活性化の著しい増加をもたらしたことが示された。したがって、実施例８に示すように、この処置レジメンが腫瘍特異的抗原（ＫＶＰ）または腫瘍非特異的抗原（Ｒｐｌ１８）による免疫化と同様に、腫瘍増殖の制御の増強ももたらすかどうかをここで研究する。さらに、実施例１０では、ワクチン接種およびＣＤ３ｂｓＡｂ処理後のＮＫ細胞浸潤物の増加およびグランザイムＢの発現増強が観察された。したがって、併用処置レジメンに対するＮＫ細胞の寄与は、ワクチン接種前にそれらを枯渇させることによって研究される。

【0333】

これに対処するために、０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に０．１％ＢＳＡを補充した１００μＬのＰＢＳ中の５０，０００個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植する。マウスを無作為化し、異なる処置群に分配する（群当たりｎ＝８～１２匹のマウス）。ＮＫ細胞の役割を調べるために、１００μｇの枯渇抗ＮＫ１．１抗体（Ｉｎｖｉｖｏｐｌｕｓ抗ＮＫ１．１、ＢｉｏＸｃｅｌｌ ＢＰ００３６）を腫瘍注射の２日前に腹腔内注射し、次いで、２日目、９日目および１６日目に腹腔内注射する。３日目および１０日目に、ワクチン群のマウスを、実施例２に記載のように麻酔した後、１００μＬのＰＢＳに溶解した１５０μｇのＯＶＡ_{２４１－２７０}ペプチドで免疫する。アジュバントとして、Ａｌｄａｒａを３日目および１０日目に注射部位に局所適用し、１０および１１日目に、組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射する。１２日目および１５日目に、マウスに１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを腹腔内注射する。腫瘍の増殖を腫瘍を週２回測定することによって監視し、腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えたらマウスを屠殺する。

【0334】

［実施例１２］
マウス腫瘍モデルにおけるＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂおよびプライム－ブーストインフルエンザワクチン接種レジメンから構成される併用処置による抗腫瘍効果の増強。

【0335】

実施例８では、マウス腫瘍モデルにおける抗腫瘍効果が、ＡＣＴを必要としない腫瘍特異的ｂｓＡｂおよび腫瘍非特異的ワクチン接種を含む併用処置によって増強され得ることが示された。ここでは、マウス腫瘍モデルにおいて既存のウイルス特異的Ｔ細胞をブーストするためにワクチンレジメンと一緒にｂｓＡｂ処置を組み合わせることによって抗腫瘍効果も増強できるかどうかを研究した。

【0336】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、低用量インフルエンザウイルス１００×ＴＣＩＤ５０（ＨＫｘ３１；Ｓａｎｑｕｉｎ、オランダ）を研究の－３０日目に鼻腔内投与した。活動性感染の完全な消散後、０日目に、マウスの右側腹部に０．１％ＢＳＡを補充した２００μＬのＰＢＳ中の８０，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射した。マウスを無作為化し、異なる処置群に分配した（群当たりｎ＝１０匹のマウス）。１０日目に、６０ｍｇの５％イミキモド含有クリームＡｌｄａｒａを局所適用し、２×１０^６個のＴＣＩＤ５０熱不活化インフルエンザウイルス（７０℃で１時間）を対側腹部に皮下注射した。１０日目および１１日目に１００μＬのＰＢＳ中の組換えヒトＩＬ－２を腹腔内注射した。マウスは、１２日目および１５日目に２００μＬのＰＢＳ中の１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９（およそ０．５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内で受けた。実施例１に記載されるように腫瘍成長を監視した。処置スケジュールのタイムラインを図１０Ａに示す。

【0337】

未処置対照マウスでは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、攻撃的な腫瘍成長を示し、生存期間の中央値は２０日であった（図１０Ｂ）。ｂｓＡｂ ＣＤ３ｘＴＡ９９のみによる処置によって有意に延長された生存は得られなかったが、生存期間中央値は２４日に延長された（図１０Ｂ）。活性インフルエンザ感染後または活性感染とワクチン接種との組み合わせ後にＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂを投与すると、腫瘍増殖の有意な遅延が観察され、未処置マウスと比較した場合、有意に長い生存期間が得られた（それぞれＰ＝０．００９６およびＰ＝０．００１１；図１０Ｃ）。生存期間中央値は、活動性インフルエンザ感染後にＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂで処置されたマウス群では２５．５日間に延長され、１０匹のマウスのうち１匹が腫瘍チャレンジを生存した。ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置を活動性感染およびワクチン接種と組み合わせた場合、生存期間中央値は、３７．５日に延長され、１０匹のマウスのうち３匹が生存した。

【0338】

まとめると、これらのデータは、ＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置の抗腫瘍有効性が、マウス腫瘍モデルにおいてＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置とブーストされた既存のウイルス特異的Ｔ細胞とを組み合わせることによって増強され得ることを示す。

【0339】

［実施例１３］
マウス腫瘍モデルにおけるブーストされた既存の腫瘍非特異的ＬＣＭＶ特異的Ｔ細胞とＣＤ３ｘＴＡ９９ ｂｓＡｂ処置との組み合わせによる抗腫瘍効果の増強

【0340】

先の実施例では、ＣＤ３係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効果は、それを腫瘍非特異的ワクチンと組み合わせることによって増強され得ることが実証された。実施例１２では、活性インフルエンザ感染が先行する、ＣＤ３係合ｂｓＡｂおよびインフルエンザワクチンを含む併用処置が、抗腫瘍効果を増強することが示された。ここでは、ＣＤ３係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効果が、ＬＣＭＶに以前に感染したマウスにおいて、ＣＤ３係合ｂｓＡｂ処置をリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）特異的ワクチン接種と組み合わせることによっても増強され得るかどうかが研究される。

【0341】

これを研究するために、試験の－３０日目にＣ５７ＢＬ／６マウスに１００μｌのＰＢＳ中の２×１０^５ＰＦＵのＬＣＭＶ－Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ（ＬＵＭＣ、オランダ）を腹腔内投与する。ＬＣＭＶは、非自己抗原ｇｐ３３およびｇｐ３４を発現する。活動性感染の完全な消散後、０日目に、マウスの右側腹部に０．１％ＢＳＡを補充した１００μＬのＰＢＳ中の５０，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を皮下注射する。マウスを無作為化し、異なる処置群（対照群のｎ＝８匹のマウス；処置群のｎ＝１２匹のマウス）に分配する。８日目に、ＰＢＳに溶解した２０μｇのＣｐＧ－ＯＤＮ１８２６と共に、ｇｐ３３およびｇｐ３４エピトープ（社内で合成、ＬＵＭＣ、オランダ；配列番号５８）を含有する１００μｇのＳＳＰ_{２７－４８}合成長ペプチドをマウスの尾部基部に皮下注射する。マウスは、１２日目および１５日目に２００μＬのＰＢＳ中の１２．５μｇのＣＤ３ｘＴＡ９９（およそ０．５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内で受けた。腫瘍成長を、実施例１に記載されるように監視する。

【0342】

実施例のまとめ
上記の実施例に提示されたデータは、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効果を増強するための様々な提案されたレジメンを実証している。第１に、同種ワクチンと組み合わせて投与した場合、養子移入された腫瘍特異的または腫瘍非特異的Ｔ細胞が、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂがそれらの抗腫瘍効果を発揮することを可能にするためのＴ細胞のさらなる供給源を構成し得ることが示された。第２に、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効果は、腫瘍特異的または腫瘍非特異的ワクチンと養子移入されたＴ細胞の非存在下でのｂｓＡｂ処置との組み合わせによっても増強され得ることが示された。さらに、そのようなワクチン組成物に共製剤化されたアジュバントの効果は、抗原提示細胞およびＮＫ細胞などの非抑制性白血球集団の頻度を増加させることによって、抑制性腫瘍微小環境を調節するのに役立ち得ることが示された。ワクチン抗原およびアジュバントを含む併用処置は、提案されたｂｓＡｂ処置のタイミングの前に、腫瘍において、より活性化された表現型を示すＴ細胞およびＮＫ細胞の頻度の増加を誘導することが示された。最後に、腫瘍特異的抗原を標的とするＴ細胞係合ｂｓＡｂと、既存のＴ細胞をブーストすることができる腫瘍非特異的免疫原性組成物とを含む併用処置は、主に活性化されたＴｅｆｆ表現型を有する腫瘍浸潤Ｔ細胞の有意に増加した頻度を誘導することが示された。

【0343】

そのようなｂｓＡｂを、既存の腫瘍非特異的または腫瘍特異的Ｔ細胞をブーストするように設計されたワクチン接種レジメンと組み合わせることによって、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂの抗腫瘍効力を増強するための一般化された概念が示される。そのようなＴ細胞は、その後、ワクチン成分によって予め調節され得る腫瘍微小環境に浸潤し得る。そのような浸潤は、ＣＸＣＲ３依存性機構を介して（部分的に）起こると考えられている。そのような既存のＴ細胞をブーストすることによって、腫瘍標的にも一価で結合することができるＴ細胞係合ｂｓＡｂによる係合のために、より大きくより活性化されたＴ細胞のプールが利用可能になり得る。そのようなＴ細胞は、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂに結合すると腫瘍細胞の死滅を誘導し得るが、活性化Ｔ細胞の流入および腫瘍微小環境における抑制性細胞集団の頻度の減少は、腫瘍浸潤ＮＫ細胞の活性化と並行している。合わせて、これらの因子は、Ｔ細胞係合ｂｓＡｂ処置の抗腫瘍有効性の改善に寄与する。
ＯＴ１

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図5-4】

【図6】

【図7-1】

【図7-2】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図9-4】

【図9-5】

【図9-6】

【図9-7】

【図10】

【配列表】

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【国際調査報告】