特表 2023-540046 ２’－フコシルラクトースを含む脳心血管疾患改善用食品組成物及び脳心血管疾患予防又は治療用薬学組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-21

(54)【発明の名称】２’－フコシルラクトースを含む脳心血管疾患改善用食品組成物及び脳心血管疾患予防又は治療用薬学組成物

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/125 20160101AFI20230913BHJP

   A61K 31/702 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20230913BHJP

   A23L 29/30 20160101ALI20230913BHJP

【ＦＩ】

A23L33/125

A61K31/702

A61P7/02

A61P9/00

A61P9/10 101

A61P9/12

A61P9/10

A23L29/30

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023513554

(86)(22)【出願日】2021-05-25

(85)【翻訳文提出日】2023-02-27

(86)【国際出願番号】 KR2021006498

(87)【国際公開番号】W WO2022055073

(87)【国際公開日】2022-03-17

(31)【優先権主張番号】10-2020-0117862

(32)【優先日】2020-09-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2020-0117861

(32)【優先日】2020-09-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2021-0061963

(32)【優先日】2021-05-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517399125

【氏名又は名称】アドヴァンスド プロテイン テクノロジーズ コーポレーション

【氏名又は名称原語表記】Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．

【住所又は居所原語表記】１４７， Ｇｗａｎｇｇｙｏ－ｒｏ， Ｙｅｏｎｇｔｏｎｇ－ｇｕ， Ｓｕｗｏｎ－ｓｉ， Ｇｙｅｏｎｇｇｉ－ｄｏ １６２２９， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】100121382

【弁理士】

【氏名又は名称】山下 託嗣

(72)【発明者】

【氏名】キム，キョン ホ

(72)【発明者】

【氏名】シン，チョル ス

(72)【発明者】

【氏名】ユン，ジョン ウォン

(72)【発明者】

【氏名】ジョン，ソン ミン

(72)【発明者】

【氏名】ソン，ヨン ハ

(72)【発明者】

【氏名】ジョン，オク ソン

【テーマコード（参考）】

4B018

4B041

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B018LB01

4B018LB02

4B018LB06

4B018LB08

4B018LB10

4B018MD31

4B018ME14

4B041LC10

4B041LD10

4B041LK11

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA01

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA36

4C086ZA42

4C086ZA45

4C086ZA54

(57)【要約】

本発明は、血栓の生成に起因する様々な脳心血管疾患の改善、予防又は治療に効果がある２’－フコシルラクトース含有食品組成物及び薬学組成物に関し、本発明の２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ，２’－ＦＬ）は、血小板に対するアゴニストであるコラーゲン及びＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）に対して拮抗（阻害）作用を示し、血小板の異常作用による血栓の生成を抑制するために利用可能である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項2】

前記血栓は、
血小板による血液凝固に起因して発生したことを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項3】

前記血小板による血液凝固は、
血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したことを特徴とする、請求項２に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項4】

前記脳心血管疾患は、
血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項5】

２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項6】

前記血栓は、
血小板による血液凝固に起因して発生したことを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項7】

前記血小板による血液凝固は、
血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したことを特徴とする、請求項２に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項8】

前記脳心血管疾患は、
血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、２’－フコシルラクトースを含む、血栓生成に起因する脳心血管疾患の改善、予防又は治療用組成物に関し、より具体的には、血栓の生成に起因する様々な脳心血管疾患、例えば、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中などの改善に効果がある、２’－フコシルラクトース含有食品組成物及び２’－フコシルラクトース含有薬学組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

食生活及び生活様式の西欧化、そして老人人口の増加に伴い、血行障害が原因とされる脳心血管系疾患の発病が大きく増加しており、２０１８年の死亡原因統計資料によれば、１０大死亡原因のうち、心臓疾患、脳血管疾患、高血圧性疾患がそれぞれ、２位、４位、１０位を占めるほどに深刻な社会問題となっている。

【0003】

血行に関与する因子は、血球細胞と血液凝固因子とに大別でき、血管損傷による出血を防止するための血小板の癒着、プラーク形成による止血作用、及び病態生理的状態において異常に過度な血小板活性による血栓生成及び血管閉塞は、血管疾患を引き起こす主要病症要因である。

【0004】

このため、血栓を除去したり血栓の生成を抑制したりできる食品の持続摂取又は薬品の投与が必要であるが、既存の血行改善に関連する医薬品は、胃腸障害、血圧上昇などの副作用があり、服用に困難があった。そこで、副作用が少なく人体に安全な、血栓の生成を抑制して血行障害を根本的に改善できる製品の開発が必要である。

【0005】

一方、ヒトの母乳には２００余種以上の独特の構造を有するオリゴ糖（ｈｕｍａｎ ｍｉｌｋ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＨＭＯ）が、他の哺乳類の乳汁に比べて非常に高い濃度（５～１５ｇ／Ｌ）で存在する。ＨＭＯは、腸内乳酸菌の生育を助けるプレバイオティク（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）効果、病原菌感染予防、免疫システム調節及び頭脳発達のように、乳児の成長と頭脳発達及び健康に肯定的影響を及ぼすなど、様々な生物学的活性を提供することが報告されている。

【0006】

ＨＭＯは、Ｄ－グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ－ガラクトース（Ｇａｌ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ，ＧｌｃＮＡｃ）、Ｌ－フコース（Ｌ－ｆｕｃｏｓｅ，Ｆｕｃ）及びシアル酸（ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ）［Ｓｉａ；Ｎ－ａｃｅｔｙｌ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ ａｃｉｄ（Ｎｅｕ５Ａｃ）］で構成されている。ＨＭＯの構造は非常に多様で複雑なため、異なる残基とグルコシル結合を有する２００個程度の異性質体が互いに異なる重合度（ＤＰ ３～２０）で存在し得る。ただし、構造的複雑性にもかかわらず、ＨＭＯはいくつかの共通した構造を有する。大部分のＨＭＯは還元末端にラクトース（Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ）残基を有する。ラクトースのＧａｌは、α－（２，３）－とα－（２，６）－結合によってそれぞれ３－シアリルラクトース（３－ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）又は６－シアリルラクトース（６－ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏｓｅ）の形態でシアル化されるか、α－（１，２）－とα－（１，３）－結合によってそれぞれ２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ，２－ＦＬ）又は３－フコシルラクトース（３－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ，３－ＦＬ）の形態でフコシル化（ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）され得る。

【0007】

約２００個の異なる複合オリゴ糖が母乳から発見されたが、含有量の最も多いオリゴ糖を３つ含めて１３７個がフコシル化され、その比率は略７７％であり、残りのオリゴ糖は、シアル化されたもの（３９個）が殆どであり、約２８％に該当する。このうち、特に、２’－フコシルラクトース及び３－フコシルラクトースは、先に言及した様々な生物学的活性に関与する主要ＨＭＯとして報告されている。

【0008】

本発明では、ヒトの母乳に由来するものであって安全性が検証されたＨＭＯを用いて、血栓に起因する脳心血管疾患の改善、予防又は治療に利用可能な素材を開発しようとする。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明では、ＨＭＯを用いて、血栓の生成に起因する様々な脳心血管疾患、例えば、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中の改善に効果がある食品組成物及び予防又は治療に効果がある薬学組成物を開発して提供しようとする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患改善用食品組成物を提供する。

【0011】

本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物において、前記血栓は、好ましくは、血小板による血液凝固に起因して発生したものであってよい。

【0012】

本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物において、前記血小板による血液凝固は、好ましくは、血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したものであってよい。

【0013】

本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物において、前記脳心血管疾患は、好ましくは、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであってよい。

【0014】

また、本発明は、２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物を提供する。

【0015】

本発明の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、前記血栓は、好ましくは、血小板による血液凝固に起因して発生したものであってよい。

【0016】

本発明の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、前記血小板による血液凝固は、好ましくは、血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したものであってよい。

【0017】

本発明の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、前記脳心血管疾患は、好ましくは、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであってよい。

【発明の効果】

【0018】

本発明の２’－フコシルラクトースは、血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ、コラーゲンに対して拮抗（阻害）作用を示し、血小板の異常作用による血栓の生成を抑制するために利用可能であることが本発明から確認された。したがって、本発明の２’－フコシルラクトースを持続的に摂取又は投与すると、血栓の生成に起因する脳心血管疾患、例えば、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中などの改善が可能になるであろう。

【0019】

一方、本発明の２’－フコシルラクトースは、血小板に対するアゴニストであるＣＲＰ、コラーゲンに対してのみ拮抗（阻害）作用を示し、緊急な状況で止血のために用いられるトロンビンに対しては阻害作用がないことが確認された。トロンビンに対して阻害作用がないことは臨床的に非常に重要な意味を有する。事故などによって出血が発生した場合には止血のためにトロンビンを緊急に投入するからである。本発明の２’－フコシルラクトースがＣＲＰ、コラーゲンの他にトロンビンに対しても阻害効果があったとすれば、事故の発生時にトロンビンの投与によっても止血ができないはずであるが、もしそうだとすれば、２’－フコシルラクトースを持続して投与することは危険であり得る。しかしながら、驚くべきことに、本発明の２’－フコシルラクトースは、トロンビンの作用を阻害することがなく、よって、平常時に持続投与されても、事故の発生時のトロンビン投与による止血の誘導には何ら問題もない。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】本発明の実験で使用したフラクトオリゴ糖（ｆｒｕｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＦＯＳ）、２’－フコシルラクトース及び３－フコシルラクトースの構造を示す。

【図2】ＨＭＯの血小板凝集抑制効果を示す。

【図3】ＨＭＯの血小板活性化抑制機序を確認したものである。

【図4】ＨＭＯの細胞毒性をＣＣＫアッセイで測定した結果である。

【図5】動物モデルにおけるＨＭＯの血栓症抑制効能を確認した結果である。

【図6】動物モデルにおけるＨＭＯの止血作用効能を確認した結果である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明は、２’－フコシルラクトースを含む、血栓に起因する脳心血管疾患改善用食品組成物を提供する。また、本発明は、２’－フコシルラクトースを含む、血栓に起因する脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物を提供する。このとき、前記脳心血管疾患は、好ましくは、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであってよい。

【0022】

本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物及び脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、前記血栓は、好ましくは、血小板による血液凝固に起因して発生したものであってよい。このとき、前記血小板による血液凝固は、好ましくは、血小板に対するアゴニストであるＣＲＰ又はコラーゲンの作用によって発生したものであってよい。

【0023】

本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物及び脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、本発明の２’－フコシルラクトースは、好ましくは、血小板に対するアゴニストであるＣＲＰ又はコラーゲンの血小板に対するアゴニスト作用を阻害するものであってよい。すなわち、本発明の２’－フコシルラクトースは、「ＧＰＶＩ（Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＶＩ；ａ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｃｏｌｌａｇｅｎ）を媒介とした血小板凝集シグナル伝達経路」に作用して血小板の活性化を抑制するものと推論できる。

【0024】

上記の本発明の脳心血管疾患改善用食品組成物及び脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物において、前記２’－フコシルラクトースは、好ましくは、血小板に対するアゴニストであるトロンビンの血小板に対するアゴニスト作用に対しては阻害しないものであってよい。すなわち、本発明の２’－フコシルラクトースは、「ＧＰＣＲ（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）シグナル伝達経路を媒介とした血小板活性化」に対しては抑制効果を示さないものと推論できる。

【0025】

健康な人の血液は血管中で凝固することがないが、血管の損傷、血液の停滞、凝固性が高くなった場合などの原因により、その発生局所では血が固まった塊、すなわち「血栓」が生成されてしまう。

【0026】

血栓の生成には血球の一つである血小板が関与するが、血小板は、骨髄内に存在していた大きな細胞から細胞質が分かれて出た直径２～３μｍの細胞片であり、血液の凝固に重要な役割を担う。

【0027】

出血の抑制という正常な過程において上記のような血液凝固作用は生存に必須であるが、出血以外の別の原因による血栓生成、又は出血による正常の過程であっても過剰の血栓が生成されると、その箇所の血管を狭めたり又は塞いで血の流れを妨害したり止まらせたりしてしまう。このような異常な血栓の生成は、血の流れ、すなわち血行を妨害する要素として作用し、血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中などの様々な脳心血管疾患を誘発することがある。

【0028】

血小板による血液凝固はアゴニストによって誘導されるが、血小板に対するアゴニストとしては、ＣＲＰ、コラーゲン、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）、トロンボキサンＡ２類似体（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ａ２ａｎａｌｏｇｕｅ，Ｕ４６６１９）などがある。ＣＲＰ、コラーゲンは、ＧＰＶＩを媒介とした血小板凝集シグナル伝達経路において血小板凝集に重要な役割を担う。また、トロンビン、トロンボキサンＡ２類似体は、ＧＰＣＲシグナル伝達経路を媒介とした血小板凝集に重要な役割を担う。

【0029】

下記の本発明の実験では、前記４種のアゴニストを対象にして、ＨＭＯである２’－フコシルラクトース、３－フコシルラクトースと陽性対照物質としてのＦＯＳの拮抗（阻害）作用の有無を確認してみた。ところが意外にも、２’－フコシルラクトースのみが、４種のアゴニストのうちＣＲＰ、コラーゲンに対してのみ拮抗作用を示すことが確認できた。２’－フコシルラクトースと非常に類似する構造を有する３－フコシルラクトースは、拮抗効果を示さなかった。また、２’－フコシルラクトースは、アゴニストの中でもＣＲＰ、コラーゲンに対してのみ拮抗作用が確認され、トロンビンに対しては拮抗作用がないことが確認された。

【0030】

トロンビンに対して阻害作用がないことは臨床的に非常に重要な意味を有する。事故などによって出血が発生した場合には止血のためにトロンビンを緊急に投入するからである。本発明の２’－フコシルラクトースがＣＲＰ、コラーゲンの他にトロンビンに対しても阻害効果があったとすれば、事故発生時にロンビンの投与によっても止血ができないはずであるが、もしそうだとすれば、日常生活で２’－フコシルラクトースを持続して摂取することは非常に危険であり得る。しかしながら、驚くべきことに、本発明の２’－フコシルラクトースはトロンビンの作用を阻害することがなく、よって、平常時に持続摂取しても、事故の発生時のトロンビン投与による止血の誘導には何ら問題もない。

【0031】

また、動物モデルにおいて頚動脈血栓症抑制及び止血作用に関連した実験を行ったところ、本発明の２’－フコシルラクトースが濃度依存的に頚動脈血栓症抑制効果を示した。このことから、既存血栓治療剤であるアスピリンと肩を並べるほどの効能であることが確認された。また、既存合成医薬品の副作用である止血作用には影響を及ぼさないことが確認され、これにより、既存血栓治療剤であるアスピリンの副作用を克服できるような効能を有することが確認された。したがって、このような２’－フコシルラクトースは、血行改善健康機能食品や治療素材として生体内利用が可能であることも確認できた。

【0032】

一方、本発明の食品組成物は、その剤形に特に限定されるものではなく、例えば、肉類、穀類、カフェイン飲料、一般飲料、チョコレート、パン類、スナック食品類、菓子類、ピザ、ジェリー、麺類、ガム類、アイスクリーム類、アルコール性飲料、酒、ビタミン複合剤及びその他の丸、錠、顆粒などの健康補助食品類から選ばれるいずれか一つであってよい。

【0033】

２’－フコシルラクトースは、食品中に０．０１～９９重量％の割合で添加して配合されてよいが、例えば、健康補助食品組成物に含まれる２’－フコシルラクトースの濃度は、１，６００ｍｇで製造される錠を基準にして、好ましくは１００～１，０００ｍｇ含まれてよく、１日１回、長期摂取することが好ましい。

【0034】

一方、本発明の薬学組成物は、２’－フコシルラクトースの他に、薬剤学的に使用可能な担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含んでよい。使用可能な担体、賦形剤又は希釈剤には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、オキシ安息香酸メチル、オキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油があり、それらは１種以上用いられてよい。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤又は防腐剤などがさらに含まれてよい。

【0035】

一方、本発明薬学組成物の剤形は使用方法によって好ましい形態で製造されてよく、特に、哺乳動物に投与された後に活性成分の迅速、持続又は遅延した放出を提供できるように、当業界に公知の方法を採択して剤形化することが良い。具体的な剤形の例には、硬膏剤（ＰＬＡＳＴＥＲＳ）、顆粒剤（ＧＲＡＮＵＬＥＳ）、ローション剤（ＬＯＴＩＯＮＳ）、リニメント剤（ＬＩＮＩＭＥＮＴＳ）、レモネード剤（ＬＥＭＯＮＡＤＥＳ）、芳香水剤（ＡＲＯＭＡＴＩＣ ＷＡＴＥＲＳ）、散剤（ＰＯＷＤＥＲＳ）、シロップ剤（ＳＹＲＵＰＳ）、眼軟膏剤（ＯＰＨＴＡＬＭＩＣ ＯＩＮＴＭＥＮＴＳ）、液剤（ＬＩＱＵＩＤＳ ＡＮＤ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、エアロゾル剤（ＡＥＲＯＳＯＬＳ）、エキス剤（ＥＸＴＲＡＣＴＳ）、エリキシル剤（ＥＬＩＸＩＲＳ）、軟膏剤（ＯＩＮＴＭＥＮＴＳ）、流動エキス剤（ＦＬＵＩＤＥＸＴＲＡＣＴＳ）、乳剤（ＥＭＵＬＳＩＯＮＳ）、懸濁剤（ＳＵＳＰＥＮＳＩＯＮＳ）、煎剤（ＤＥＣＯＣＴＩＯＮＳ）、浸剤（ＩＮＦＵＳＩＯＮＳ）、点眼剤（ＯＰＨＴＨＡＬＭＩＣ ＳＯＬＵＴＩＯＮＳ）、錠剤（ＴＡＢＬＥＴＳ）、坐剤（ＳＵＰＰＯＳＩＴＯＲＩＥＳ）、注射剤（ＩＮＪＥＣＴＩＯＮＳ）、酒精剤（ＳＰＩＲＩＴＳ）、カタプラズマ剤（ＣＡＴＡＰＬＡＳＭＡ）、カプセル剤（ＣＡＰＳＵＬＥＳ）、クリーム剤（ＣＲＥＡＭＳ）、トローチ剤（ＴＲＯＣＨＥＳ）、チンキ剤（ＴＩＮＣＴＵＲＥＳ）、パスタ剤（ＰＡＳＴＥＳ）、丸剤（ＰＩＬＬＳ）、軟質又は硬質のゼラチンカプセルから選ばれるいずれか一つであってよい。

【0036】

一方、本発明薬学組成物の投与量は、投与方法、服用者の年齢、性別及び体重、及び疾患の重症度などを考慮して決定することが良い。例えば、本発明の薬学組成物は、２’－フコシルラクトースを基準にして、好ましくは、１日２４～４０ｍｇ／ｋｇ（体重）で１回投与可能である。ただし、この投与量は例示のための一例に過ぎず、服用者の状態に基づいて医師の処方によって変化可能である。

【0037】

以下、本発明の内容について、下記の実施例及び実験例を用いてより詳細に説明する。ただし、本発明の権利範囲が下記の実施例及び実験例に限定されるものではなく、それと等価の技術的思想の変形も含む。

【0038】

［実施例１：ＨＭＯによる選択的血小板凝集抑制効果確認］
（１）実験目的
ＨＭＯを活用して血行改善戦略素材としての可能性を調べた。そのために、本実験では、ＨＭＯのうち２’－フコシルラクトース及び３－フコシルラクトースと、陽性対照物質としてＦＯＳを用いて、血小板活性抑制機序及びさらには血小板作用に起因する血行障害の改善に対する効能を確認しようとした。

【0039】

（２）実験材料及び方法
＜１＞材料
ヒトトロンビン（Ｈｕｍａｎ ｔｈｒｏｍｂｉｎ）、トロンボキサンＡ２類似体（Ｕ４６６１９）、ＰＧＥ１、及び全ての試薬はシグマ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ＰＰＡＣＫ）は、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）から購入した。エクワインテンドンコラーゲン（Ｅｑｕｉｎｅ ｔｅｎｄｏｎ ｃｏｌｌａｇｅｎ）（ｔｙｐｅ Ｉ）はＣｈｒｏｎｏ－ｌｏｇ（Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ）から、ＣＲＰ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）はＤｒ．Ｒｉｃｈａｒｄ Ｆａｒｎｄａｌｅ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から購入して本実験に使用した。フィコエリトリン（ＰＥ）接合アイソタイプコントロールＩｇＧ（Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｉｓｏｔｙｐｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ＩｇＧｓ）、ＰＥ抗マウスＣＤ６２Ｐ（Ｐ－セレクチン）抗体、及びＰＥ抗マウスαＩＩｂβ３（ＪＯＮ／Ａ）抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。２’－フコシルラクトース及び３－フコシルラクトースは、（株）エーピーテクノロジーで生産した素材を使用した。

【0040】

＜２＞血小板分離方法
マウス（６～８週齢）の血小板は、クエン酸塩－デキストロース溶液（ＡＣＤ，ｓｉｇｍａ）が前処理された注射器を用いてマウスの腹部静脈から採血した。血小板が豊富な血漿（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈ ｐｌａｓｍａ，ＰＲＰ）を得るために、室温で２０分間３００×ｇで遠心分離した後、赤血球から分離された血漿に０．５μＭ ＰＧＥ１を添加して４分間７００×ｇで再遠心分離した。沈殿した血小板を、１０％ ＡＣＤを含有しているＨＥＰＥＳ－Ｔｙｒｏｄｅ緩衝液（５ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、ｐＨ７．３、５ｍＭブドウ糖、１３６ｍＭ ＮａＣｌ、１２ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、２．７ｍＭ ＫＣｌ）で洗浄した後、５分間７００×ｇで再遠心分離した。沈殿した血小板をＨＥＰＥＳ－Ｔｙｒｏｄｅバッファで３×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に調整し、本実験に使用した。

【0041】

＜３＞血小板凝集分析方法
３×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度でＨＥＰＥＳ－Ｔｙｒｏｄｅバッファに含まれたマウス血小板を、３７℃で１５分間ビークル（蒸留水）、１，０００μＭのＦＯＳ、３－フコシルラクトース、及び様々な濃度（３００～１，０００μＭ）の２’－フコシルラクトースで前処理した後、血小板凝集計でＣＲＰ、コラーゲン、トロンビン、トロンボキサンＡ２類似体で活性化させた。血小板凝集は、３７℃の血小板凝集計（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ Ｃｏｒｐ，Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ）で１，０００ｒｐｍの速度で血小板凝集を誘導して測定した。

【0042】

＜４＞フローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）分析
血小板活性のバイオマーカーとして知られた血小板Ｐ－セレクチン（ｓｅｌｅｃｔｉｎ）及びαＩＩｂβ３の活性度は、フローサイトメトリー（Ｇａｌｌｉｏｓ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて測定した。マウス血小板は３７℃で１５分間ビークル（蒸留水）、１，０００μＭのＦＯＳ、３－フコシルラクトース、及び様々な濃度（３００～１，０００μＭ）の２’－フコシルラクトースで前処理し、血小板活性のためにマウス血小板は３７℃で５分間０．１５μｇ／ｍｌ ＣＲＰで処理した後、Ｐ－セレクチン及びαＩＩｂβ３抗体を用いて活性度を測定した。

【0043】

＜５＞統計処理
統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を用いて資料分析を実施した。統計的有意性は、多重集団のＡＮＯＶＡ、多重集団の比較のためのダネット検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｒｏｕｐ）、２集団の比較のためのスチューデントｔ－検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ）で分析した。０．０５よりも低いＰ値は有意な結果と見なした。

【0044】

（３）実験結果
＜１＞ＨＭＯによる血小板凝集抑制効能確認
ＨＭＯが血小板機能に及ぼす影響を確認するために、まず、血小板凝集に対する効能を調べた。

【0045】

その結果は、図２の通りであった。図２のグラフにおいて、横軸の「光透過度（ｌｉｇｈｔ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）」は、光透過が増加して血小板凝集が多く起きたとのことを示す尺度である。これは、もともと血小板は浮遊細胞（ｆｌｏａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ）として浮遊しているが、血小板アゴニストによって活性化されると血小板形態の変化及び凝集が起きて光の透過度が増加するという原理を利用したものである。図２のグラフにおいて、横軸の「時間（秒）（ｔｉｍｅ（ｓｅｃ））」は、通常、血小板の完全な凝集に３００秒（ｓｅｃ）程度かかり、よって、その時間の間に血小板の凝集程度を測定している。

【0046】

本実験結果では、ＨＭＯのうち２’－フコシルラクトースによって前処理された血小板が、対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ）の蒸留水（ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ）によって前処理された血小板と比較して、血小板アゴニストのうちＣＲＰ（０．１５μｇ／ｍｌ）及びコラーゲン（０．５μｇ／ｍｌ）（図２のＡ）及び図２のＢ）)によって誘導された血小板凝集において濃度依存的に有意に血小板凝集を阻害することが確認された。ＦＯＳと３－フコシルラクトースによって前処理された血小板では、ＣＲＰとコラーゲンによる血小板凝集を有意に抑制できないことを確認した。また、２’－ＦＬによって前処理された血小板においてトロンビン（０．０２５Ｕ／ｍｌ）及びトロンボキサンＡ２類似体（３μＭ）（図２のＣ）及び図２のＤ））によって誘導された血小板凝集抑制効能は、対照群に比べて有意差が観察されなかった。すなわち、トロンビンとトロンボキサンＡ２類似体によって誘導された血小板凝集に対しては、２’－フコシルラクトースが抑制効能を示さないことが見られた。

【0047】

このような結果は、ＨＭＯのうち、２’－フコシルラクトースのみが、ＧＰＶＩを媒介とした血小板凝集シグナル伝達経路において選択的な血小板凝集に重要な役割を担うということを示唆する。これに対し、２’－フコシルラクトースは、ＧＰＣＲシグナル伝達経路を通じて血小板凝集反応を活性化させるトロンビンとトロンボキサンＡ２類似体に対する抑制効能はないことが推論できた。

【0048】

＜２＞ＨＭＯによる血小板活性化抑制機序確認
ＨＭＯによる血小板活性化抑制機序を確認した。血小板活性化において正のフィードバックのサイクル（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｅｅｄｂａｃｋ ｃｙｃｌｅ）を誘導する主要過程中に血小板活性バイオマーカーとして用いられる血小板のα－顆粒（ｇｒａｎｕｌｅ）のＰ－セレクチン及びαＩＩｂβ３インテグリン活性化調節機序に対するＨＭＯの効能を、フローサイトメトリー分析を用いて分析した。

【0049】

先の血小板凝集抑制実験において、ＨＭＯのうち２’－フコシルラクトースのみが、ＧＰＶＩを媒介とした血小板凝集シグナル伝達経路において選択的に血小板凝集に重要な役割を担うことが確認されたため、本血小板活性化実験ではＣＲＰのみを用いて活性化効能抑制実験を行った。

【0050】

血小板は、３７℃で１５分間ビークル（蒸留水）又はＦＯＳ、２’－フコシルラクトース及び３－フコシルラクトースで前処理し、０．１５μｇ／ｍｌ ＣＲＰで、３７℃で５分間活性化させた後、Ｐ－セレクチン及びαＩＩｂβ３抗体を用いて血小板活性度を測定した。

【0051】

その結果は図３の通りであった。血小板活性化が起きると、血小板活性シグナルによってα－顆粒中のＰ－セレクチンが血小板細胞外に放出されながら血小板活性をより高める。血小板－血小板凝集に重要なαＩＩｂβ３の活性増加は、αＩＩｂβ３とフィブリノゲン（ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）に対する結合を増加させ、血小板－血小板凝集を更に促進する。そこで、血小板活性の尺度としてＰ－セレクチン曝露レベル（ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｌｅｖｅｌ）とａＩＩｂβ３活性化レベル（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ）を、フローサイトメトリーを用いて測定した。グラフにおいてピークが左側に移動するほど血小板活性によるＰ－セレクチン曝露レベルとａＩＩｂβ３活性化レベルが減ったことを意味し、２’－フコシルラクトースが濃度依存的に血小板活性を抑制する効能があることを意味する。

【0052】

対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ）と比較して、ＨＭＯのうち２’－フコシルラクトースのみが前処理された血小板において濃度依存的にマウス血小板α－顆粒のＰ－セレクチン（図３のＡ））及び血小板αＩＩｂβ３インテグリン（図３のＢ））活性化を顕著に抑制することが確認された。このような結果は、２’－フコシルラクトースが、顆粒分泌とαＩＩｂβ３インテグリン活性化抑制によって血小板活性化を選択的に抑制することを示唆する。

【0053】

［実験例１：ＨＭＯの細胞毒性テスト］
本実験例では、ＨＭＯの細胞毒性をＣＣＫアッセイ（Ｏｈ，Ｙ．Ｃ．；Ｊｅｏｎｇ，Ｙ．Ｈ．；Ｐａｋ，Ｍ．Ｅ．；Ｇｏ，Ｙ．，Ｂａｎｈａｓａｓｉｍ－Ｔａｎｇ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｂｙ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ ２０２０，１２，（７））によって測定した。血小板に対する細胞毒性を測定できるプロトコルが確立されていないため、ＨｅｐＧ２細胞にＨＭＯ（２’－フコシルラクトース、３－フコシルラクトース）を濃度依存的に前処理した。２４時間後に細胞計数キット溶液（Ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を各ウェルに処理して１時間さらに培養した後、マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。

【0054】

ＨＭＯをＨｅｐＧ２細胞に前処理して細胞生存度（ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）を測定した結果、図４に示すように、ＨＭＯ（２’－フコシルラクトース、３－フコシルラクトース）の処理によるＨｅｐＧ２の細胞死滅は確認されておらず、このことから、ＨＭＯは細胞毒性がないものと結論付けることができた。

【0055】

［実施例２：ＨＭＯによる血行改善関連血小板活性（ｉｎ ｖｉｖｏ）効能確認］

【0056】

（１）実験目的
頚動脈結紮血栓動物モデルにおいてＨＭＯの血行改善効能を評価しようとした。また、これを経口投与した後に（ｅｘ ｖｉｖｏ）血小板の凝集及び活性効能を確認しようとした

【0057】

（２）実験動物準備及び実験方法
＜１＞実験動物準備
実験に用いられた雄Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）マウスは、（株）トゥヨルバイオテックから購買し、１週間の一般飼料給与下に２３±１℃及び５６％相対湿度条件で馴化させた後に実験に使用した。下記において、動物実験は、韓国漢医学研究院実験動物倫理委員会で承認された動物実験計画書プロトコルにしたがって行われた（承認番号：２０－０５８）。

【0058】

＜２＞ＦｅＣｌ_３を用いた血栓症動物モデル作製及び血流量測定
血栓症誘導マウスモデルを作るためにＦｅＣｌ_３（１０％）を用いた。マウスは、７日間、２’－フコシルラクトース（５００、１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）、３－フコシルラクトース（１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）又はＡＳＡ（１００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）を経口投与し、最後の投与２時間後に２％イソフルランでマウスを麻酔した後、マウスの左側頚動脈を分離し、ＦｅＣｌ_３（１０％）で濡らしたフィルター用紙（直径２ｍｍ）を用いて頚動脈上に２分間載せて血栓症を誘導した。血流量は、血液流量計（ＡＤ計測器、血流量計）を用いて測定した。

【0059】

＜３＞尾部采血時間（Ｔａｉｌ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ）動物モデル作製及び止血作用測定
血栓症による止血作用を測定するために尾部采血時間アッセイ（ｔａｉｌ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｓｓａｙ）を実施した。マウスは、１日１回、７日間２’－フコシルラクトース（５００、１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）、３－フコシルラクトース（１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）又はＡＳＡ（１００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）を経口投与し、最後の投与２時間後に２％イソフルランでマウスを麻酔した。その後、剃刀の刃を用いてマウス尾を５ｍｍ切断し、４５ｍＬのＰＢＳが入った５０ｍＬコニカルチューブに尾部を入れて固定させた後、出血時間及び出血量を測定した。具体的な過程及び写真は、図６の（Ａ）に示した。血中血流の損失量は、４５ｍＬのＰＢＳで収集された血中ヘモグロビン含有量を測定して定量化した。このとき、体温は暖房パッドを用いて３７℃を保たせた。

【0060】

＜４＞統計処理
統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を用いて資料分析を実施した。統計的有意性は、多重集団のＡＮＯＶＡ、多重集団の比較のためのダネット検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｒｏｕｐ）、２集団の比較のためのスチューデントｔ－検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ）で分析した。０．０５よりも低いＰ値は有意な結果と見なした。

【0061】

（３）実験結果
＜１＞頚動脈血栓症動物モデルにおけるＨＭＯによる血栓症生成抑制効能確認
血小板は、血管が損傷すると活性化されて損傷部位に凝集することによって血管損傷による部位の出血を止めるが、病的／病理生理的段階では血栓を起こし、この時、血小板活性が最も重要な役割を担う。

【0062】

血栓症誘導マウスモデルにおける血栓症生成抑制効能を確認した結果、図５に示すように、対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ）において頚動脈閉塞時間が平均７．４７分間、低濃度（５００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）２’－フコシルラクトース投与群では平均１１．７９分間、高濃度（１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）２’－フコシルラクトース投与群では平均１４．５２分間であり、頚動脈閉塞時間が有意に増加した。一方、高濃度（１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）の３－フコシルラクトースを経口投与したマウスでは頚動脈閉塞時間が８．１８分間であり、対照群と有意な差がなかった。また、高濃度（１，０００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）の２’－フコシルラクトース投与群における頚動脈閉塞時間は、陽性対照群（ＡＳＡと表記）であるアスピリン（Ａｓｐｉｒｉｎ）（１００ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）処理群の１８．０５分間と比較して、略同等なレベルに頚動脈閉塞時間を延長させることが確認された。

【0063】

＜２＞頚動脈血栓症動物モデルにおけるＨＭＯによる止血効能確認
血管が損傷すると血小板が活性化されて損傷部位に凝集及び付着することにより、血管損傷による出血を抑止する止血作用を果たす。上記において頚動脈血栓症において濃度依存的に抑制効能を示した２’－フコシルラクトースが止血作用にどのような影響を与えるかを確認した。

【0064】

血栓症誘導マウスモデルの尾部切断後に出血時間及び出血量を測定した結果、図６の（Ｂ）のように、高濃度３－フコシルラクトース及び低・高濃度２’－フコシルラクトース投与群のマウス尾部出血時間は、対照群と比較して統計的に有意な差が見られなかった。また、切断部位から採取した血液とヘモグロビン含有量を対照群と比較定量化した結果、図６の（Ｃ）のように、ＨＭＯを食べさせたマウスにおける血流の損失量は、対照群と有意な差がなかった。ただし、７日間１００ｍｇ／ｋｇ ＢＷのＡＳＡを経口投与した時、２’－フコシルラクトース及び対照群に比べて、出血時間及びヘモグロビン含有量が遥かに増加した。このような結果から、ＨＭＯが生体内止血作用に有意な影響を与えることがなく、よって、既存血栓治療剤であるアスピリンの副作用を克服できる治療素材として利用可能な効能があることが確認できた。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【手続補正書】

【提出日】2023-02-27

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項2】

前記血栓は、
血小板による血液凝固に起因して発生したことを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項3】

前記血小板による血液凝固は、
血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したことを特徴とする、請求項２に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項4】

前記脳心血管疾患は、
血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１に記載の脳心血管疾患改善用食品組成物。

【請求項5】

２’－フコシルラクトース（２’－ｆｕｃｏｓｙｌｌａｃｔｏｓｅ；２’－ＦＬ）を含む、血栓に起因する脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項6】

前記血栓は、
血小板による血液凝固に起因して発生したことを特徴とする、請求項５に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項7】

前記血小板による血液凝固は、
血小板に対するアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ；作用物質）であるＣＲＰ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）又はコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の作用によって発生したことを特徴とする、請求項６に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【請求項8】

前記脳心血管疾患は、
血行障害、動脈硬化、血栓症、高血圧、心筋梗塞、狭心症及び脳卒中から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項５に記載の脳心血管疾患予防用又は治療用薬学組成物。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0045】

その結果は、図２の通りであった。図２のグラフにおいて、縦軸の「光透過度（ｌｉｇｈｔ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）」は、光透過が増加して血小板凝集が多く起きたとのことを示す尺度である。これは、もともと血小板は浮遊細胞（ｆｌｏａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ）として浮遊しているが、血小板アゴニストによって活性化されると血小板形態の変化及び凝集が起きて光の透過度が増加するという原理を利用したものである。図２のグラフにおいて、横軸の「時間（秒）（ｔｉｍｅ（ｓｅｃ））」は、通常、血小板の完全な凝集に３００秒（ｓｅｃ）程度かかり、よって、その時間の間に血小板の凝集程度を測定している。

【国際調査報告】