特表 2023-540123 Ｐ５３におけるＲ２７３Ｃ又はＹ２２０Ｃの変異を認識するＴ細胞受容体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-21

(54)【発明の名称】Ｐ５３におけるＲ２７３Ｃ又はＹ２２０Ｃの変異を認識するＴ細胞受容体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20230913BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20230913BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230913BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALI20230913BHJP

   C12Q 1/6886 20180101ALI20230913BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230913BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 11/04 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230913BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C07K14/725 ZNA

C12N15/867 Z

C12N15/86 Z

C12N5/10

C12N5/0783

C12P21/02 C

C12Q1/04

C12Q1/6886 Z

C12N15/62 Z

C07K19/00

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P1/16

A61P17/00

A61P1/04

A61P15/00

A61P11/00

A61P25/00

A61P43/00 105

A61P1/02

A61P11/02

A61P11/04

A61P1/18

A61P13/10

A61K48/00

A61P37/04

A61K35/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023515071

(86)(22)【出願日】2021-09-02

(85)【翻訳文提出日】2023-04-25

(86)【国際出願番号】 US2021048786

(87)【国際公開番号】W WO2022051449

(87)【国際公開日】2022-03-10

(31)【優先権主張番号】63/074,747

(32)【優先日】2020-09-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510002280

【氏名又は名称】アメリカ合衆国

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】キム、サンヒョン

(72)【発明者】

【氏名】ザカラキス、ニコラオス

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンバーグ、スティーヴン エー．

【テーマコード（参考）】

4B063

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA19

4B063QQ08

4B063QR77

4B063QS34

4B063QX01

4B064AG20

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA05

4B064DA14

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA341

4C084ZA591

4C084ZA661

4C084ZA671

4C084ZA751

4C084ZA811

4C084ZA891

4C084ZB091

4C084ZB211

4C084ZB261

4C085AA14

4C085AA16

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA34

4C087ZA59

4C087ZA66

4C087ZA67

4C087ZA75

4C087ZA81

4C087ZA89

4C087ZB09

4C087ZB21

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA42

4H045DA50

4H045EA28

4H045EA51

4H045FA74

(57)【要約】

ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}又はヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}に対する抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が開示される。関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、及び医薬組成物も提供される。また、哺乳類におけるがんの存在を検出する方法及び哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法も開示される。
【選択図】図３Ｄ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}又はヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}のアミノ酸配列に対する抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、
（１）配列番号２～７の全て；
（２）配列番号２１～２６の全て；
（３）配列番号４０～４５の全て；
（４）配列番号５９～６４の全て；又は
（５）配列番号７８～８３の全て
のアミノ酸配列を含むＴＣＲ。

【請求項2】

（１）配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（５）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（６）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（７）配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（８）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（９）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１０）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１１）配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１２）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１３）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１４）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１５）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１６）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１７）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１８）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１９）配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２０）配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２１）配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２２）配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２３）配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２４）配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２５）配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２６）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２７）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２８）配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２９）配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３０）配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３１）配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３２）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３３）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３４）配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３５）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３６）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３７）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３８）配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３９）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４０）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４１）配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４２）配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４３）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４４）配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；又は
（４５）配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方
を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。

【請求項3】

（１）配列番号８及び９の両方；
（２）配列番号１０及び１１の両方；
（３）配列番号１２及び１３の両方；
（４）配列番号１２及び１１の両方；
（５）配列番号１２１及び１３の両方；
（６）配列番号１２１及び１２２の両方；
（７）配列番号８及び１２０の両方；
（８）配列番号１１９及び９の両方；
（９）配列番号１１９及び１２０の両方；
（１０）配列番号２７及び２８の両方；
（１１）配列番号２９及び３０の両方；
（１２）配列番号３１及び３２の両方；
（１３）配列番号３１及び３０の両方；
（１４）配列番号１２５及び３２の両方；
（１５）配列番号１２５及び１２６の両方；
（１６）配列番号２７及び１２４の両方；
（１７）配列番号１２３及び２８の両方；
（１８）配列番号１２３及び１２４の両方；
（１９）配列番号４６及び４７の両方；
（２０）配列番号４８及び４９の両方；
（２１）配列番号５０及び５１の両方；
（２２）配列番号５０及び４９の両方；
（２３）配列番号１２９及び５１の両方；
（２４）配列番号１２９及び１３０の両方；
（２５）配列番号４６及び１２８の両方；
（２６）配列番号１２７及び４７の両方；
（２７）配列番号１２７及び１２８の両方；
（２８）配列番号６５及び６６の両方；
（２９）配列番号６７及び６８の両方；
（３０）配列番号６９及び７０の両方；
（３１）配列番号６９及び６８の両方；
（３２）配列番号１３３及び７０の両方；
（３３）配列番号１３３及び１３４の両方；
（３４）配列番号６５及び１３２の両方；
（３５）配列番号１３１及び６６の両方；
（３６）配列番号１３１及び１３２の両方；
（３７）配列番号８４及び８５の両方；
（３８）配列番号８６及び８７の両方；
（３９）配列番号８８及び８９の両方；
（４０）配列番号８８及び８７の両方；
（４１）配列番号１３７及び８９の両方；
（４２）配列番号１３７及び１３８の両方；
（４３）配列番号８４及び１３６の両方；
（４４）配列番号１３５及び８５の両方；又は
（４５）配列番号１３５及び１３６の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。

【請求項4】

（ａ）
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである
配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域；
（ｂ）配列番号１４２の５７位におけるＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項5】

（ａ）
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである
配列番号１４１のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域；
（ｂ）配列番号１４２の５７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項6】

（１）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（５）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（６）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（７）配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（８）配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（９）配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１０）配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１１）配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１２）配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１３）配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１４）配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；又は
（１５）配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項7】

（１）配列番号１４及び１５の両方；
（２）配列番号１６及び１７の両方；
（３）配列番号１８及び１９の両方；
（４）配列番号３３及び３４の両方；
（５）配列番号３５及び３６の両方；
（６）配列番号３７及び３８の両方；
（７）配列番号５２及び５３の両方；
（８）配列番号５４及び５５の両方；
（９）配列番号５６及び５７の両方；
（１０）配列番号７１及び７２の両方；
（１１）配列番号７３及び７４の両方；
（１２）配列番号７５及び７６の両方；
（１３）配列番号９０及び９１の両方；
（１４）配列番号９２及び９３の両方；又は
（１５）配列番号９４及び９５の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項8】

前記ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}アミノ酸配列が、ＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項9】

前記ヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}アミノ酸配列が、ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項10】

ＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＲＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１６）の野生型ヒトＰ５３アミノ酸配列に対する抗原特異性を有しない、請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項11】

ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＹＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１４）の野生型ヒトＰ５３アミノ酸配列に対する抗原特異性を有しない、請求項１～７及び９のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか一項に記載のＴＣＲの機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、
（１）配列番号２～７の全て；
（２）配列番号２１～２６の全て；
（３）配列番号４０～４５の全て；
（４）配列番号５９～６４の全て；又は
（５）配列番号７８～８３の全て
のアミノ酸配列を含むポリペプチド。

【請求項13】

（１）配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（５）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（６）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（７）配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（８）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（９）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１０）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１１）配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１２）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１３）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１４）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１５）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１６）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１７）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１８）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１９）配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２０）配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２１）配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２２）配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２３）配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２４）配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２５）配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２６）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２７）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２８）配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２９）配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３０）配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３１）配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３２）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３３）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３４）配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３５）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３６）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３７）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３８）配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３９）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４０）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４１）配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４２）配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４３）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４４）配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；又は
（４５）配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方
を含む、請求項１２に記載のポリペプチド。

【請求項14】

（１）配列番号８及び９の両方；
（２）配列番号１０及び１１の両方；
（３）配列番号１２及び１３の両方；
（４）配列番号１２及び１１の両方；
（５）配列番号１２１及び１３の両方；
（６）配列番号１２１及び１２２の両方；
（７）配列番号８及び１２０の両方；
（８）配列番号１１９及び９の両方；
（９）配列番号１１９及び１２０の両方；
（１０）配列番号２７及び２８の両方；
（１１）配列番号２９及び３０の両方；
（１２）配列番号３１及び３２の両方；
（１３）配列番号３１及び３０の両方；
（１４）配列番号１２５及び３２の両方；
（１５）配列番号１２５及び１２６の両方；
（１６）配列番号２７及び１２４の両方；
（１７）配列番号１２３及び２８の両方；
（１８）配列番号１２３及び１２４の両方；
（１９）配列番号４６及び４７の両方；
（２０）配列番号４８及び４９の両方；
（２１）配列番号５０及び５１の両方；
（２２）配列番号５０及び４９の両方；
（２３）配列番号１２９及び５１の両方；
（２４）配列番号１２９及び１３０の両方；
（２５）配列番号４６及び１２８の両方；
（２６）配列番号１２７及び４７の両方；
（２７）配列番号１２７及び１２８の両方；
（２８）配列番号６５及び６６の両方；
（２９）配列番号６７及び６８の両方；
（３０）配列番号６９及び７０の両方；
（３１）配列番号６９及び６８の両方；
（３２）配列番号１３３及び７０の両方；
（３３）配列番号１３３及び１３４の両方；
（３４）配列番号６５及び１３２の両方；
（３５）配列番号１３１及び６６の両方；
（３６）配列番号１３１及び１３２の両方；
（３７）配列番号８４及び８５の両方；
（３８）配列番号８６及び８７の両方；
（３９）配列番号８８及び８９の両方；
（４０）配列番号８８及び８７の両方；
（４１）配列番号１３７及び８９の両方；
（４２）配列番号１３７及び１３８の両方；
（４３）配列番号８４及び１３６の両方；
（４４）配列番号１３５及び８５の両方；又は
（４５）配列番号１３５及び１３６の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のポリペプチド。

【請求項15】

（ａ）
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである
配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域；
（ｂ）配列番号１４２の５７位におけるＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項16】

（ａ）
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである、
配列番号１４１のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域；
（ｂ）配列番号１４２の５７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、
任意で、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域；又は
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
を更に含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項17】

（１）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（２）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（３）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（４）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（５）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（６）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（７）配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（８）配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（９）配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１０）配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１１）配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１２）配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１３）配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；
（１４）配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方；又は
（１５）配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列及び配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列の両方
を含む、請求項１２～１６のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項18】

（１）配列番号１４及び１５の両方；
（２）配列番号１６及び１７の両方；
（３）配列番号１８及び１９の両方；
（４）配列番号３３及び３４の両方；
（５）配列番号３５及び３６の両方；
（６）配列番号３７及び３８の両方；
（７）配列番号５２及び５３の両方；
（８）配列番号５４及び５５の両方；
（９）配列番号５６及び５７の両方；
（１０）配列番号７１及び７２の両方；
（１１）配列番号７３及び７４の両方；
（１２）配列番号７５及び７６の両方；
（１３）配列番号９０及び９１の両方；
（１４）配列番号９２及び９３の両方；又は
（１５）配列番号９４及び９５の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１２～１６のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項19】

（１）配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
（２）配列番号２１～２３の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２４～２６の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
（３）配列番号４０～４２の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４３～４５の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
（４）配列番号５９～６１の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は
（５）配列番号７８～８０の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８１～８３の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖
を含む、単離又は精製されたタンパク質。

【請求項20】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；又は
（４５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む
請求項１９に記載のタンパク質。

【請求項21】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む；
（２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む；
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む；
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む；
（５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む；
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む；
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む；
（８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む；
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む；
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む；
（１１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む；
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む；
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む；
（１４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む；
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む；
（１６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む；
（１７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む；
（１８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む；
（１９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４７のアミノ酸配列を含む；
（２０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４９のアミノ酸配列を含む；
（２１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列を含む；
（２２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４９のアミノ酸配列を含む；
（２３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列を含む；
（２４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む；
（２５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４６のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む；
（２６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４７のアミノ酸配列を含む；
（２７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む；
（２８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む；
（２９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含む；
（３０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む；
（３１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含む；
（３２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む；
（３３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む；
（３４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む；
（３５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む；
（３６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む；
（３７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む；
（３８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８６のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む；
（３９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８９のアミノ酸配列を含む；
（４０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む；
（４１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８９のアミノ酸配列を含む；
（４２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む；
（４３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む；
（４４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列を含む；又は
（４５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む
請求項１９に記載のタンパク質。

【請求項22】

（ａ）第１のポリペプチド鎖が、
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである
配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含み、
任意で、第１のポリペプチド鎖が、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含み；
（ｂ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号１４２の５７位におけるＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含み、
任意で、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含む
請求項１９～２１のいずれか一項に記載のタンパク質。

【請求項23】

（ａ）
（ｉ）配列番号１４１の１位のＸが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、若しくはＴｙｒであり；
（ｉｉ）配列番号１４１の４８位のＸが、Ｔｈｒ若しくはＣｙｓであり；
（ｉｉｉ）配列番号１４１の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐであり；
（ｉｖ）配列番号１４１の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、若しくはＴｒｐであり；
（ｖ）配列番号１４１の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、若しくはＴｒｐである
配列番号１４１のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含む、第１のポリペプチド鎖であって；
任意で、配列番号９７若しくは１４５のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含む、第１のポリペプチド鎖；及び
（ｂ）配列番号１４２の５７位のＸが、Ｓｅｒ若しくはＣｙｓである、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含む、第２のポリペプチド鎖であって、
任意で、配列番号９９若しくは１４０のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含む第２のポリペプチド鎖
を更に含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載のタンパク質。

【請求項24】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；
（１４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む；又は
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む
請求項１９～２３のいずれか一項に記載のタンパク質。

【請求項25】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む；
（２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む；
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む；
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む；
（５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３６のアミノ酸配列を含む；
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む；
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含む；
（８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む；
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む；
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７２のアミノ酸配列を含む；
（１１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７４のアミノ酸配列を含む；
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７６のアミノ酸配列を含む；
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む；
（１４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９３のアミノ酸配列を含む；又は
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号９４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む
請求項１９～２３のいずれか一項に記載のタンパク質。

【請求項26】

請求項１～１１のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項１９～２５のいずれか一項に記載のタンパク質をコードしているヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。

【請求項27】

５’から３’に向かって、第１の核酸配列及び第２のヌクレオチド配列を含む単離又は精製された核酸であって、前記第１及び第２のヌクレオチド配列が、それぞれ、配列番号８及び９；９及び８；１０及び１１；１１及び１０；１２及び１３；１３及び１２；１２及び１１；１１及び１２；１２１及び１３；１３及び１２１；１２１及び１２２；１２２及び１２１；８及び１２０；１２０及び８；１１９及び９；９及び１１９；１１９及び１２０；１２０及び１１９；１４及び１５；１５及び１４；１６及び１７；１７及び１６；１８及び１９；１９及び１８；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３１及び３２；３２及び３１；３１及び３０；３０及び３１；１２５及び３２；３２及び１２５；１２５及び１２６；１２６及び１２５；２７及び１２４；１２４及び２７；１２３及び２８；２８及び１２３；１２３及び１２４；１２４及び１２３；３３及び３４；３４及び３３；３５及び３６；３６及び３５；３７及び３８；３８及び３７；４６及び４７；４７及び４６；４８及び４９；４９及び４８；５０及び５１；５１及び５０；５０及び４９；４９及び５０；１２９及び５１；５１及び１２９；１２９及び１３０；１３０及び１２９；４６及び１２８；１２８及び４６；１２７及び４７；４７及び１２７；１２７及び１２８；１２８及び１２７；５２及び５３；５３及び５２；５４及び５５；５５及び５４；５６及び５７；５７及び５６；６５及び６６；６６及び６５；６７及び６８；６８及び６７；６９及び７０；７０及び６９；６９及び６８；６８及び６９；１３３及び７０；７０及び１３３；１３３及び１３４；１３４及び１３３；６５及び１３２；１３２及び６５；１３１及び６６；６６及び１３１；１３１及び１３２；１３２及び１３１；７１及び７２；７２及び７１；７３及び７４；７４及び７３；７５及び７６；７６及び７５；８４及び８５；８５及び８４；８６及び８７；８７及び８６；８８及び８９；８９及び８８；８８及び８７；８７及び８８；１３７及び８９；８９及び１３７；１３７及び１３８；１３８及び１３７；８４及び１３６；１３６及び８４；１３５及び８５；８５及び１３５；１３５及び１３６；１３６及び１３５；９０及び９１；９１及び９０；９２及び９３；９３及び９２；９４及び９５；又は９５及び９４のアミノ酸配列をコードしている単離又は精製された核酸。

【請求項28】

第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間に挿入される第３のヌクレオチド配列を更に含み、前記第３のヌクレオチド配列が、切断可能なリンカーペプチドをコードしている、請求項２７に記載の単離又は精製された核酸。

【請求項29】

前記切断可能なリンカーペプチドが、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の単離又は精製された核酸。

【請求項30】

配列番号２０、３９、５８、７７、及び９６からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードしている、請求項２９に記載の単離又は精製された核酸。

【請求項31】

請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸を含む、組み換え発現ベクター。

【請求項32】

トランスポゾン又はレンチウイルスベクターである、請求項３１に記載の組換え発現ベクター。

【請求項33】

請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸又は請求項３１若しくは３２に記載のベクターによってコードされている、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項34】

請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸又は請求項３１若しくは３２に記載のベクターが細胞内で発現した結果得られる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項35】

ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）又はＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）のペプチドに対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法であって、請求項３１又は３２に記載のベクターの前記細胞への導入を可能にする条件下で、前記細胞を該ベクターと接触させることを含む方法。

【請求項36】

請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸又は請求項３１若しくは３２に記載の組換え発現ベクターを含む、単離又は精製された宿主細胞。

【請求項37】

ヒトリンパ球である、請求項３６に記載の宿主細胞。

【請求項38】

Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される、請求項３６に記載の宿主細胞。

【請求項39】

請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む、単離又は精製された細胞の集団。

【請求項40】

請求項１～１１、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項１９～２５、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のタンパク質を生成する方法であって、前記ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が生成されるように、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞又は請求項３９に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む方法。

【請求項41】

（ａ）請求項１～１１、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１９～２５、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸、請求項３１若しくは３２に記載の組み換え発現ベクター、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞、又は請求項３９に記載の細胞の集団と、（ｂ）薬学的に許容し得る担体と、を含む医薬組成物。

【請求項42】

哺乳類におけるがんの存在を検出する方法であって、
（ａ）前記がんの細胞を含むサンプルを、請求項１～１１、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１９～２５、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸、請求項３１若しくは３２に記載の組み換え発現ベクター、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３９に記載の細胞の集団、又は請求項４１に記載の医薬組成物と接触させ、それによって、複合体を形成させることと；
（ｂ）前記複合体を検出することと、
を含み、
前記複合体の検出が、前記哺乳類におけるがんの存在を示す方法。

【請求項43】

哺乳類におけるがんに対する免疫応答の誘導において使用するための、請求項１～１１、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１９～２５、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸、請求項３１若しくは３２に記載の組み換え発現ベクター、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３９に記載の細胞の集団、又は請求項４１に記載の医薬組成物。

【請求項44】

哺乳類におけるがんの治療又は予防において使用するための、請求項１～１１、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１２～１８、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１９～２５、３３、若しくは３４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸、請求項３１若しくは３２に記載の組み換え発現ベクター、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項３９に記載の細胞の集団、又は請求項４１に記載の医薬組成物。

【請求項45】

前記細胞の集団が、前記哺乳類に対して自己である、請求項４３若しくは４４に記載の通り使用するための細胞の集団を含む、前記細胞の集団又は医薬組成物。

【請求項46】

前記細胞の集団が、前記哺乳類に対して同種である、請求項４３若しくは４４に記載の通り使用するための細胞の集団を含む、前記細胞の集団又は医薬組成物。

【請求項47】

前記がんが、上皮がんである、請求項４２に記載の方法、又は請求項４３～４６のいずれか一項に記載の通り使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項48】

前記がんが、胆管がん、メラノーマ、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんである、請求項４２に記載の方法、又は請求項４３～４６のいずれか一項に記載の通り使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【請求項49】

前記がんが、ヒトＰ５３においてＲ２７３Ｃ又はＹ２２０Ｃの変異を含むことが知られている、請求項４２に記載の方法、又は請求項４３～４８のいずれか一項に記載の通り使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、その全体が参照によって本明細書に援用される、２０２０年９月４日出願の米国仮特許出願第６３／０７４，７４７号の優先権を主張する。

【0002】

連邦支援の研究又は開発に関する記述
本発明は、米国国立衛生研究所、国立がん研究所によって与えられたプロジェクト番号ＢＣ０１０９８５の下、政府の支援を受けて成された。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0003】

電子的に提出された文献の参照による援用
本明細書と同時に提出され、以下の通り特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により本明細書に援用される：２０２１年８月１８日付の「７５７０４２＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称の２２２，０１６バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。

【背景技術】

【0004】

一部のがんは、特に該がんが転移性かつ切除不能になったとき、非常に限られた治療法の選択肢しか有しない場合がある。例えば、外科手術、化学療法、及び放射線療法等の治療法の進歩にもかかわらず、多くのがん、例えば、膵臓、結腸直腸、肺、子宮内膜、卵巣、及び前立腺のがんの予後は不良である場合がある。従って、がんの更なる治療法に対するアンメットニーズが存在する。

【発明の概要】

【0005】

本発明の実施形態は、ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}又はヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}のアミノ酸配列に対する抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、（１）配列番号２～７の全て；（２）配列番号２１～２６の全て；（３）配列番号４０～４５の全て；（４）配列番号５９～６４の全て；又は（５）配列７８～８３の全てのアミノ酸配列を含むＴＣＲを提供する。

【0006】

本発明の更なる実施形態は、本発明のＴＣＲに関連するポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、及び医薬組成物を提供する。

【0007】

本発明の更なる実施形態は、哺乳類におけるがんの存在を検出する方法、哺乳類におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法、及び哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法を提供する。

【0008】

本発明の追加の実施形態は、ＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法及びＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を生成する方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1A】図１Ａは、患者４３４３の腫瘍断片番号Ｆ１～Ｆ７及びＦ９～Ｆ２４をＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃでパルスした自己ＤＣと共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポット数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである（図１Ａ）。変異体Ｐ５３に対する反応性を有する断片を枠で囲む。

【図1B】図１Ｂは、患者４３８６の腫瘍断片番号Ｆ１～Ｆ２４をＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃでパルスした自己ＤＣと共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポット数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである（図１Ｂ）。変異体Ｐ５３に対する反応性を有する断片を枠で囲む。

【図1C】図１Ｃは、患者４３８６の（腫瘍１Ａ又は腫瘍１Ｂの）新鮮腫瘍消化物からの選別されたＴ細胞をＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃでパルスした自己ＤＣと共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポット数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである。Ｔ細胞は、指定の細胞表面マーカーの発現に基づいて選別した。変異体Ｐ５３に対する反応性を有する選別されたＴ細胞集団を枠で囲む。

【図1D】図１Ｄは、フローサイトメトリーによって測定した、患者４３８６からのＴＩＬをＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃペプチドでパルスした自己ＤＣと共培養した後のＯＸ４０及び４－ＢＢを発現しているＴ細胞の百分率を示す。

【図2A】図２Ａは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した際の、４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域陽性細胞の百分率を示すグラフである。エフェクター細胞には４３４３－Ｄ ＴＣＲを形質導入していた。標的細胞は、図示されるＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１つをトランスフェクトし、Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチドでパルスしたＣＯＳ７細胞であった。

【図2B】図２Ｂは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した際の、４－１ＢＢを発現しているＣＤ３陽性細胞の百分率を示すグラフである。エフェクター細胞は、Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃを認識するＴ細胞を含有するＴＩＬであった。標的細胞は、図示されるＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１つをトランスフェクトし、Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチドでパルスしたＣＯＳ７細胞であった。

【図3A】図３Ａは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ分泌（スポット数／２ｅ４細胞）示すグラフである。エフェクター細胞は、４３４３－Ｄ ＴＣＲを形質導入したＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（μｇ／ｍＬ）のＰ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）でパルスした自己ＤＣであった。

【図3B】図３Ｂは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後の４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域陽性細胞の百分率を示すグラフである。エフェクター細胞は、４３４３－Ｄ ＴＣＲを形質導入したドナーＣ（３Ｂ）からのＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（μｇ／ｍＬ）のα－アミノ酪酸（ＡＡＢＡ）置換を有する対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）の上方の、ＡＡＢＡ置換を有する変異型Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）でパルスした自己Ｂ細胞であった。

【図3C】図３Ｃは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後の４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域陽性細胞の百分率を示すグラフである。エフェクター細胞は、４３４３－Ｄ ＴＣＲを形質導入したドナーＨ（３Ｃ）からのＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（μｇ／ｍＬ）のα－アミノ酪酸（ＡＡＢＡ）置換を有する対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）の上方の、ＡＡＢＡ置換を有する変異型Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）でパルスした自己Ｂ細胞であった。

【図3D】図３Ｄは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ分泌（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４３８６－Ｆ ＴＣＲ（図３Ｄ）を形質導入したＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（ｎｇ／ｍＬ）のＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）でパルスした自己ＤＣであった。

【図3E】図３Ｅは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ分泌（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４３８６－Ｇ ＴＣＲ（図３Ｅ）を形質導入したＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（ｎｇ／ｍＬ）のＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）でパルスした自己ＤＣであった。

【図3F】図３Ｆは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ分泌（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４３８６－Ｈ ＴＣＲ（図３Ｆ）を形質導入したＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（ｎｇ／ｍＬ）のＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）でパルスした自己ＤＣであった。

【図3G】図３Ｇは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γ分泌（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。エフェクター細胞は、独立して４３８６－Ｏ ＴＣＲ（図３Ｇ）を形質導入したＴ細胞であった。標的細胞は、図示されている濃度（ｎｇ／ｍＬ）のＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（四角）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（丸）でパルスした自己ＤＣであった。

【図4】図４は、９つのＰ５３スプライスバリアントのアミノ酸配列のアラインメントを示す。ＳＰ｜Ｐ０４６３７｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－２｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０１）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－３｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０２）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－４｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０３）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－５｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０４）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－６｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０５）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－７｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０６）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－８｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０７）；及びＳＰ｜Ｐ０４６３７－９｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１０８）。

【発明を実施するための形態】

【0010】

腫瘍タンパク質Ｐ５３（「ＴＰ５３」又は「Ｐ５３」とも称される）は、例えば、細胞分裂を制御することによって腫瘍抑制因子として作用する。Ｐ５３タンパク質は、細胞の核内に局在し、そこでＤＮＡに直接結合する。ＤＮＡが損傷を受けると、Ｐ５３タンパク質は、ＤＮＡを修復するか、又は損傷を受けた細胞をアポトーシスさせるかの決定に関与する。ＤＮＡを修復することができる場合、Ｐ５３は他の遺伝子を活性化させて損傷を修復する。ＤＮＡを修復することができない場合、Ｐ５３タンパク質は、細胞が分裂するのを阻止し、該細胞にシグナルを伝達してアポトーシスさせる。変異型の又は損傷を受けたＤＮＡを有する細胞の分裂を停止させることによって、Ｐ５３は腫瘍の発達を阻止するのを支援する。ＷＴ（正常）完全長Ｐ５３は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0011】

Ｐ５３タンパク質における変異によって、Ｐ５３タンパク質の腫瘍抑制因子機能が低下するか又は失われることがある。あるいは又は更に、Ｐ５３の変異は、ドミナントネガティブ的にＷＴ Ｐ５３に干渉することによる機能獲得型変異であり得る。変異型Ｐ５３タンパク質は、様々なヒトがん、例えば、胆管がん、メラノーマ、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんのいずれかで発現し得る。

【0012】

本発明の実施形態は、変異型のヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}又はヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}のアミノ酸配列（以後、「変異型Ｐ５３」）に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。以後、「ＴＣＲ」に対する言及は、特に規定のない限り、ＴＣＲの機能的部分及び機能的バリアントも指す。Ｐ５３の変異は、本明細書では、完全長ＷＴＰ５３（配列番号１）のアミノ酸配列を参照することによって定義される。Ｐ５３の変異は、本明細書では、特定の位置に存在するアミノ酸残基、続いて位置番号、続いて検討中の特定の変異において該残基に置き換わったアミノ酸を参照することによって記載される。Ｐ５３アミノ酸配列（例えば、Ｐ５３ペプチド）は、完全長のＷＴ Ｐ５３タンパク質の全アミノ酸残基よりも少ないアミノ酸残基を含む場合がある。従って、Ｐ５３アミノ酸配列の特定の例では対応する残基の実際の位置が異なる場合もあるという理解の下、本明細書では、ＷＴ完全長Ｐ５３タンパク質（すなわち、配列番号１）を参照することにより位置番号を定義する。位置は配列番号１によって定義されるので、用語「Ｒ２７３Ｃ」は、配列番号１の２７３位に存在するアルギニンがシステインに置き換わっていることを示し、一方、「Ｙ２２０Ｃ」は、配列番号１の２２０位に存在するチロシンがシステインに置き換わっていることを示す。例えば、Ｐ５３アミノ酸配列の具体例が、例えばＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＲＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１６）（配列番号１の連続アミノ酸残基２６１～２８５に対応する例示的なＷＴ Ｐ５３ペプチド）である場合、「Ｒ２７３Ｃ」とは、たとえ配列番号１１６における下線付きアルギニンの実際の位置が１３であろうと、配列番号１１６における下線付きアルギニンのシステインによる置換を指す。以後、Ｒ２７３Ｃ変異を有するヒトＰ５３アミノ酸配列を「Ｒ２７３Ｃ」又は「Ｐ５３^{Ｒ２７３Ｃ}」と称する。以後、Ｙ２２０Ｃ変異を有するヒトＰ５３アミノ酸配列を「Ｙ２２０Ｃ」又は「Ｐ５３^{Ｙ２２０Ｃ}」と称する。本明細書で使用するとき、「変異型Ｐ５３」とは、ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}又はヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}を指す。

【0013】

Ｐ５３は、９種の公知のスプライスバリアントを有する。本明細書に記載のＰ５３変異は、９種のＰ５３スプライスバリアントの全てにわたって保存されている。９種のＰ５３スプライスバリアントのアラインメントを図４に示す。従って、本発明のＴＣＲは、９種のＰ５３スプライスバリアントのいずれかによってコードされている本明細書に記載の任意の変異型Ｐ５３アミノ酸配列に対する抗原特異性を有し得る。位置は配列番号１によって定義されるので、Ｐ５３の特定のスプライスバリアントのアミノ酸配列の実際の位置は配列番号１の対応する位置に対して定義され、配列番号１によって定義される位置が特定のスプライスバリアントにおける実際の位置とは異なる場合がある。従って、例えば、スプライスバリアントにおける実際の位置は異なる場合もあるという理解の下、変異とは、配列番号１の３９３アミノ酸配列の指定の位置に対応するＰ５３の特定のスプライスバリアントのアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の置換を指す。

【0014】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１によって定義したとき２７３位に変異を有するヒトＰ５３に対する抗原特異性を有する。２７３位におけるＰ５３変異は、任意のミスセンス変異であってよい。従って、２７３位における変異は、２７３位に存在するネイティブ（ＷＴ）アルギニン残基の、アルギニン以外の任意のアミノ酸残基による置換であってよい。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}アミノ酸配列に対する抗原特異性を有する。例えば、ＴＣＲは、ＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）のヒトＰ５３^{Ｒ２７３Ｃ}アミノ酸配列に対する抗原特異性を有し得る。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＲＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１６）の野生型ヒトＰ５３アミノ酸配列に対する抗原特異性を有しない。

【0015】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１によって定義したとき２２０位に変異を有するヒトＰ５３に対する抗原特異性を有する。２２０位におけるＰ５３変異は、任意のミスセンス変異であってよい。従って、２２０位における変異は、２２０位に存在するネイティブ（ＷＴ）チロシン残基の、チロシン以外の任意のアミノ酸残基による置換であってよい。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}アミノ酸配列に対する抗原特異性を有する。例えば、ＴＣＲは、ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）のヒトＰ５３^{Ｙ２２０Ｃ}アミノ酸配列に対する抗原特異性を有し得る。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＹＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１４）の野生型ヒトＰ５３アミノ酸配列に対する抗原特異性を有しない。

【0016】

本発明の実施形態では、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ（ヒト白血球抗原）分子依存的に変異型Ｐ５３を認識することができ得る。「ＨＬＡ分子依存的に」とは、本明細書で使用するとき、ＴＣＲが単離された患者によって発現されるＨＬＡ分子の枠内で変異型Ｐ５３に結合した際にＴＣＲが免疫応答を惹起することを意味する。本発明のＴＣＲは、適用可能なＨＬＡ分子によって提示された変異型Ｐ５３を認識することができ得、変異型Ｐ５３に加えてＨＬＡ分子にも結合し得る。

【0017】

本発明の実施形態では、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＲ２７３Ｃを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の枠内でＲ２７３Ｃに結合した際に免疫応答を惹起し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＲ２７３Ｃを認識することができ、Ｒ２７３Ｃに加えてＨＬＡクラスＩＩ分子にも結合することができる。

【0018】

本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰ分子である。ＨＬＡ－ＤＰ分子は、α鎖（ＤＰＡ）とβ鎖（ＤＰＢ）とのヘテロ二量体である。ＨＬＡ－ＤＰＡ鎖は、任意のＨＬＡ－ＤＰＡ鎖であってよい。ＨＬＡ－ＤＰＢ鎖は、任意のＨＬＡ－ＤＰＢ鎖であってよい。本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰＡ１鎖とＨＬＡ－ＤＰＢ１鎖とのヘテロ二量体である。ＨＬＡ－ＤＰＡ１分子の例としては、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０３、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０４、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０５、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０６、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０７、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０８、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０９、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：１０、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０２：０１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０２：０２、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０２：０３、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０２：０４、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０３：０１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０３：０２、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０３：０３、及びＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０４：０１の対立遺伝子によってコードされているものを挙げることができるが、これらに限定されない。ＨＬＡ－ＤＰＢ１分子の例としては、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０１：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０２：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０２：０２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０３：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０５：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０６：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０７：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０８：０１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０９：０１、及びＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊１０：０１の対立遺伝子によってコードされているものを挙げることができるが、これらに限定されない。好ましくは、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０３鎖とＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０２鎖とのヘテロ二量体である。

【0019】

本発明の実施形態では、本発明のＴＣＲのうちの１つは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＹ２２０Ｃを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の枠内でＹ２２０Ｃに結合した際に免疫応答を惹起し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＹ２２０Ｃを認識することができ、Ｙ２２０Ｃに加えてＨＬＡクラスＩＩ分子にも結合することができる。

【0020】

本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体である。ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体は、α鎖及びβ鎖を含む細胞表面受容体である。ＨＬＡ－ＤＲのα鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＡ遺伝子によってコードされている。実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子のアルファ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：０１対立遺伝子によって発現される。ＨＬＡ－ＤＲのβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子、又はＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子によってコードされている。ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子によってコードされている分子の例としては、ＨＬＡ－ＤＲ１、ＨＬＡ－ＤＲ２、ＨＬＡ－ＤＲ３、ＨＬＡ－ＤＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ６、ＨＬＡ－ＤＲ７、ＨＬＡ－ＤＲ８、ＨＬＡ－ＤＲ９、ＨＬＡ－ＤＲ１０、ＨＬＡ－ＤＲ１１、ＨＬＡ－ＤＲ１２、ＨＬＡ－ＤＲ１３、ＨＬＡ－ＤＲ１４、ＨＬＡ－ＤＲ１５、ＨＬＡ－ＤＲ１６、及びＨＬＡ－ＤＲ１７を挙げることができるが、これらに限定されない。ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５２をコードしている。ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５３をコードしている。ＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲ５１をコードしている。本発明の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ３：ＨＬＡ－ＤＲＡヘテロ二量体である。ＨＬＡクラスＩＩ分子のベータ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２、又はＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０３：０１の対立遺伝子によって発現され得る。好ましくは、ＨＬＡクラスＩＩ分子のベータ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２：０１対立遺伝子によって発現される。好ましい実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：０１鎖とＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２：０１鎖とのヘテロ二量体である。

【0021】

養子細胞移入に使用される細胞によって発現された場合を含む、本発明のＴＣＲは、多くの利点のうちのいずれか１つ以上を提供し得る。変異型Ｐ５３は、がん細胞で発現し、正常非がん性細胞では発現しない。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは、有利なことに、がん細胞の破壊を標的とするが、一方、例えば毒性を最小化又は排除することによって、正常非がん性細胞の破壊を最小化又は排除し、それによって、低減すると考えられる。更に、本発明のＴＣＲは、有利なことに、例えば化学療法、外科手術、又は放射線照射等の他の種類の治療には応答しない変異型Ｐ５３陽性がんを成功裏に治療又は予防することができる。更に、本発明のＴＣＲは、操作されていない腫瘍細胞（例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）－γで処理していない、変異型Ｐ５３及び適用可能なＨＬＡ分子の一方又は両方をコードしているベクターをトランスフェクトしていない、Ｐ５３変異を有するＰ５３ペプチドでパルスしていない、又はこれらの組み合わせの腫瘍細胞）を認識する能力を提供し得る、変異型Ｐ５３の高い結合活性での（ｈｉｇｈｌｙ ａｖｉｄ）認識を提供することができる。全腫瘍の約半数はＰ５３に変異を有しており、そのうちの約半数はミスセンス変異である。全がんの約２．８％がＲ２７３Ｃ変異を発現し、米国の白人集団の約２４％及び米国のヒスパニック集団の約６０％～約８０％がＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０２対立遺伝子を発現する。Ｙ２２０Ｃ変異は、全がんの約１．５％にみられ、米国の白人集団の約３３％がＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２対立遺伝子を発現する。Ｒ２７３Ｃ及びＹ２２０Ｃの変異は、多くのがん組織診断でみられることから、多様な患者群が本発明ＴＣＲの恩恵を受けられる可能性があることが示唆される。従って、本発明のＴＣＲは、免疫療法による治療の適格性を有する可能性のある患者の数を増加させることができる。

【0022】

語句「抗原特異性」とは、本明細書で使用するとき、ＴＣＲが、高い結合活性で変異型Ｐ５３に特異的に結合し、免疫学的に認識できることを意味する。例えば、ＴＣＲは、（ａ）低濃度の変異型Ｐ５３ペプチド（例えば、約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、０．０５ｎｇ／ｍＬ、０．１ｎｇ／ｍＬ、０．５ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）でパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際に、該ＴＣＲを発現している約１×１０^４～約１×１０^５個のＴ細胞が少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍＬ以上、３００ｐｇ／ｍＬ以上、４００ｐｇ／ｍＬ以上、５００ｐｇ／ｍＬ以上、６００ｐｇ／ｍＬ以上、７００ｐｇ／ｍＬ以上、１０００ｐｇ／ｍＬ以上、５，０００ｐｇ／ｍＬ以上、７，０００ｐｇ／ｍＬ以上、１０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、２０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）のＩＦＮ－γを分泌した場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。本発明のＴＣＲを発現している細胞は、より高濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際にもＩＦＮ－γを分泌することができる。

【0023】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、（ａ）低濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際に、ネガティブコントロールが発現するＩＦＮ－γの量と比較して、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞が少なくとも２倍多いＩＦＮ－γを分泌した場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ネガティブコントロールは、例えば、（ｉ）（ａ）同濃度の無関係のペプチド（例えば、変異型Ｐ５３ペプチドとは異なる配列を有する幾つかの他のペプチド）でパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞若しくは（ｂ）標的細胞が無関係のペプチドを発現するように該無関係のペプチドをコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞、又は（ｉｉ）（ａ）同濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞若しくは（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した、形質導入されていないＴＣＲ細胞（例えば、該ＴＣＲを発現しないＰＢＭＣ由来）であってよい。ＩＦＮ－γ分泌は、当技術分野において公知の方法、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定することができる。

【0024】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、（ａ）低濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際に、ＩＦＮ－γを分泌するネガティブコントロールＴ細胞の数と比較して、少なくとも２倍多い数の該ＴＣＲを発現しているＴ細胞がＩＦＮ－γを分泌した場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ペプチドの濃度及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。ＩＦＮ－γを分泌する細胞の数は、当技術分野において公知の方法、例えば、酵素免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイによって測定することができる。

【0025】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、（ａ）低濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際に、同じ標的細胞と共培養したネガティブコントロールＴ細胞についてＥＬＩＳｐｏｔによって検出されたスポット数と比較して、ＴＣＲを発現しているＴ細胞についてＥＬＩＳｐｏｔによって検出されたスポットが少なくとも２倍多い場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ペプチドの濃度及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。

【0026】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、（ａ）低濃度の変異型Ｐ５３ペプチドでパルスした抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異型Ｐ５３を発現するように該変異型Ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列が導入された抗原陰性の適用可能なＨＬＡ分子陽性標的細胞と共培養した際に、ＴＣＲを発現しているＴ細胞についてＥＬＩＳｐｏｔによって約５０個を超えるスポットが検出された場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ペプチドの濃度は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。

【0027】

あるいは又は更に、ＴＣＲは、変異型Ｐ５３を発現している標的細胞で刺激した後に例えばフローサイトメトリーによって測定したとき、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞が４－１ＢＢ及びＯＸ４０の一方又は両方の発現をアップレギュレートした場合、変異型Ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。

【0028】

本発明の実施形態は、例えば、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖、又はこれらの組み合わせ等の２つのポリペプチド（すなわち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、ＴＣＲが変異型Ｐ５３に対する抗原特異性を有する限り、任意のアミノ酸配列を含んでいてよい。

【0029】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域をそれぞれ含む、２本のポリペプチド鎖を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、α鎖のＣＤＲ１（ＣＤＲ１α）、α鎖のＣＤＲ２（ＣＤＲ２α）、及びα鎖のＣＤＲ３（ＣＤＲ３α）を含む第１のポリペプチド鎖と、β鎖のＣＤＲ１（ＣＤＲ１β）、β鎖のＣＤＲ２（ＣＤＲ２β）、及びβ鎖のＣＤＲ３（ＣＤＲ３β）を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、（１）配列番号２～７の全て；（２）配列番号２１～２６の全て；（３）配列番号４０～４５の全て；（４）配列番号５９～６４の全て；又は（５）配列番号７８～８３の全てのアミノ酸配列を含む。この段落における上述の５つのアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異型ヒトＰ５３について抗原特異性を有する５つの異なるＴＣＲのそれぞれの６つのＣＤＲ領域を示す。各コレクションにおける６つのアミノ酸配列は、それぞれ、ＴＣＲのＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、及びＣＤＲ３βに対応する。

【0030】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、共に上記ＣＤＲのコレクションのうちの１つを含む、α鎖可変領域アミノ酸配列及びβ鎖可変領域アミノ酸配列を含む。これに関して、ＴＣＲは、例えば、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４６、４７、４８、４９、５０、５１、６５、６６、６７、６８、６９、７０、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。例えば、ＴＣＲは、（１）配列番号８及び９の両方；（２）配列番号１０及び１１の両方；（３）配列番号１２及び１３の両方；（４）配列番号１２及び１１の両方；（５）配列番号１２１及び１３の両方；（６）配列番号１２１及び１２２の両方；（７）配列番号８及び１２０の両方；（８）配列番号１１９及び９の両方；（９）配列番号１１９及び１２０の両方；（１０）配列番号２７及び２８の両方；（１１）配列番号２９及び３０の両方；（１２）配列番号３１及び３２の両方；（１３）配列番号３１及び３０の両方；（１４）配列番号１２５及び３２の両方；（１５）配列番号１２５及び１２６の両方；（１６）配列番号２７及び１２４の両方；（１７）配列番号１２３及び２８の両方；（１８）配列番号１２３及び１２４の両方；（１９）配列番号４６及び４７の両方；（２０）配列番号４８及び４９の両方；（２１）配列番号５０及び５１の両方；（２２）配列番号５０及び４９の両方；（２３）配列番号１２９及び５１の両方；（２４）配列番号１２９及び１３０の両方；（２５）配列番号４６及び１２８の両方；（２６）配列番号１２７及び４７の両方；（２７）配列番号１２７及び１２８の両方；（２８）配列番号６５及び６６の両方；（２９）配列番号６７及び６８の両方；（３０）配列番号６９及び７０の両方；（３１）配列番号６９及び６８の両方；（３２）配列番号１３３及び７０の両方；（３３）配列番号１３３及び１３４の両方；（３４）配列番号６５及び１３２の両方；（３５）配列番号１３１及び６６の両方；（３６）配列番号１３１及び１３２の両方；（３７）配列番号８４及び８５の両方；（３８）配列番号８６及び８７の両方；（３９）配列番号８８及び８９の両方；（４０）配列番号８８及び８７の両方；（４１）配列番号１３７及び８９の両方；（４２）配列番号１３７及び１３８の両方；（４３）配列番号８４及び１３６の両方；（４４）配列番号１３５及び８５の両方；又は（４５）配列番号１３５及び１３６の両方のアミノ酸配列を含み得る。この段落における上述のアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異型ヒトＰ５３について抗原特異性を有する異なるＴＣＲのそれぞれの２つの可変領域を示す。各コレクションにおける２つのアミノ酸配列は、それぞれ、ＴＣＲのα鎖の可変領域及びβ鎖の可変領域に対応する。

【0031】

本発明のＴＣＲは、定常領域を更に含み得る。定常領域は、例えばヒト又はマウス等の任意の好適な種に由来していてよい。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、マウス定常領域を更に含む。本明細書で使用するとき、用語「マウス」又は「ヒト」は、本明細書に記載のＴＣＲ又はＴＣＲの任意の構成要素（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域、定常領域、アルファ鎖、及び／又はベータ鎖）に言及するとき、それぞれマウス又はヒトに由来するＴＣＲ（又はその構成要素）、すなわち、それぞれマウスＴ細胞又はヒトＴ細胞を起源とするか又は該細胞によってかつて発現されたＴＣＲ（又はその構成要素）を意味する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、マウスα鎖定常領域及びマウスβ鎖定常領域を含み得る。マウスα鎖定常領域は、修飾されていてもよく、修飾されていなくてもよい。修飾マウスα鎖定常領域は、例えば米国特許第１０，１７４，０９８号に記載の通り、例えば、システイン置換されていてもよく、ＬＶＬ修飾されていてもよく、又はシステイン置換及びＬＶＬ修飾の両方が行われていてもよい。マウスβ鎖定常領域は、修飾されていてもよく、修飾されていなくてもよい。修飾マウスβ鎖定常領域は、例えば米国特許第１０，１７４，０９８号に記載の通り、例えばシステイン置換されていてもよい。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むシステイン置換ＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号９８のアミノ酸配列を含むシステイン置換ＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むシステイン置換ＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＬＶＬ修飾マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むシステイン置換マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むシステイン置換マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むシステイン置換マウスα鎖定常領域を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＤ１マウスα鎖定常領域を含む。本発明の幾つかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む縮重アミノ酸配列に記載のマウスα鎖定常領域を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むシステイン置換マウスβ鎖定常領域を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む野生型マウスβ鎖定常領域を含む。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む縮重アミノ酸配列に記載のマウスβ鎖定常領域を含む。

【0032】

例示的なＣα領域配列及びＣβ領域配列を表１及び表２に示す。

【0033】

【表1】

【0034】

【表2】

【0035】

本発明の実施形態では、本発明のＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。ＴＣＲのα鎖は、α鎖の可変領域及びα鎖の定常領域を含み得る。この種のα鎖は、ＴＣＲの任意のβ鎖と対合し得る。β鎖は、β鎖の可変領域及びβ鎖の定常領域を含み得る。

【0036】

幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖のいずれかのアミノ酸配列は、Ｃ末端にアミノ酸配列ＲＡＫＲ（配列番号１１８）を更に含む。

【0037】

本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、３３、３４、３５、３６、３７、３８、５２、５３、５４、５５、５６、５７、７１、７２、７３、７４、７５、７６、９０、９１、９２、９３、９４、及び９５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例えば、ＴＣＲは、（１）配列番号１４及び１５の両方；（２）配列番号１６及び１７の両方；（３）配列番号１８及び１９の両方；（４）配列番号３３及び３４の両方；（５）配列番号３５及び３６の両方；（６）配列番号３７及び３８の両方；（７）配列番号５２及び５３の両方；（８）配列番号５４及び５５の両方；（９）配列番号５６及び５７の両方；（１０）配列番号７１及び７２の両方；（１１）配列番号７３及び７４の両方；（１２）配列番号７５及び７６の両方；（１３）配列番号９０及び９１の両方；（１４）配列番号９２及び９３の両方；又は（１５）配列番号９４及び９５の両方のアミノ酸配列を含み得る。この段落における上述のアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異型ヒトＰ５３について抗原特異性を有する異なるＴＣＲのそれぞれのα鎖及びβ鎖を示す。各コレクションにおける２つのアミノ酸配列は、それぞれ、ＴＣＲのα鎖及びβ鎖に対応する。

【0038】

本明細書に記載の本発明のＴＣＲの機能的バリアントは、本発明の範囲に含まれる。用語「機能的バリアント」とは、本明細書で使用するとき、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対して実質的な又は著しい配列の同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、該機能的バリアントは、該機能的バリアントがそのバリアントであるＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持している。機能的バリアントは、例えば、親のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質と同様の程度、同一程度、又はより高程度、親ＴＣＲが抗原特異性を有するか又は親のポリペプチド若しくはタンパク質が特異的に結合する変異型Ｐ５３に特異的に結合する能力を保持している本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントを包含する。親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に関連して、機能的バリアントは、例えば、それぞれ親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対してアミノ酸配列が少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又はそれ以上同一であってよい。

【0039】

機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当技術分野において公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有するあるアミノ酸が同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸に交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）による置換、非極性側鎖を有するアミノ酸の、非極性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）による置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）による置換、極性側鎖を有するアミノ酸の、極性側鎖を有する別のアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）による置換等であってよい。

【0040】

あるいは又は更に、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的バリアントの生物活性に干渉もせず、阻害もしないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は機能的バリアントの生物活性を増強し、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と比べて増大する。

【0041】

ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、本明細書に記載の指定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になっていてよく、その結果、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の他の構成要素、例えば、他のアミノ酸が、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を実質的に変化させることはない。

【0042】

また、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかの機能的部分を含むポリペプチドが本発明によって提供される。用語「ポリペプチド」は、本明細書で使用するとき、オリゴペプチドを含み、そして、１つ以上のペプチド結合によって連結された一本鎖のアミノ酸を指す。

【0043】

本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、変異型Ｐ５３に特異的に結合する限り、該機能的部分がその一部であるＴＣＲの連続アミノ酸を含む任意の部分であってよい。用語「機能的部分」は、ＴＣＲに関して使用されるとき、本発明のＴＣＲの任意の部分又は断片であって、該部分又は断片がその一部であるＴＣＲ（親ＴＣＲ）の生物活性を保持している部分又は断片を指す。機能的部分は、例えば、親ＴＣＲと同様の程度、同一程度、又はより高程度、（例えば、適用可能なＨＬＡ分子依存的に）変異型Ｐ５３に特異的に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力を保持しているＴＣＲの部分を包含する。親ＴＣＲに関して、機能的部分は、例えば、親ＴＣＲの約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又はそれ以上を構成し得る。

【0044】

機能的部分は、該部分のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両末端に、親ＴＣＲのアミノ酸配列にはみられない追加のアミノ酸を含んでいてもよい。望ましくは、追加のアミノ酸は、例えば、変異型Ｐ５３に特異的に結合する及び／又はがんを検出する、がんを治療若しくは予防する能力を有する等の機能的部分の生物学的機能に干渉しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲの生物活性と比較して、生物活性を増強する。

【0045】

ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分、例えば、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域（複数可）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む機能的部分を含み得る。本発明の実施形態では、ポリペプチドは、（１）配列番号２～７の全て；（２）配列番号２１～２６の全て；（３）配列番号４０～４５の全て；（４）配列番号５９～６４の全て；又は（５）配列番号７８～８３の全てのアミノ酸配列を含み得る。

【0046】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、例えば、上記ＣＤＲ領域の組み合わせを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、例えば、（１）配列番号８及び９の両方；（２）配列番号１０及び１１の両方；（３）配列番号１２及び１３の両方；（４）配列番号１２及び１１の両方；（５）配列番号１２１及び１３の両方；（６）配列番号１２１及び１２２の両方；（７）配列番号８及び１２０の両方；（８）配列番号１１９及び９の両方；（９）配列番号１１９及び１２０の両方；（１０）配列番号２７及び２８の両方；（１１）配列番号２９及び３０の両方；（１２）配列番号３１及び３２の両方；（１３）配列番号３１及び３０の両方；（１４）配列番号１２５及び３２の両方；（１５）配列番号１２５及び１２６の両方；（１６）配列番号２７及び１２４の両方；（１７）配列番号１２３及び２８の両方；（１８）配列番号１２３及び１２４の両方；（１９）配列番号４６及び４７の両方；（２０）配列番号４８及び４９の両方；（２１）配列番号５０及び５１の両方；（２２）配列番号５０及び４９の両方；（２３）配列番号１２９及び５１の両方；（２４）配列番号１２９及び１３０の両方；（２５）配列番号４６及び１２８の両方；（２６）配列番号１２７及び４７の両方；（２７）配列番号１２７及び１２８の両方；（２８）配列番号６５及び６６の両方；（２９）配列番号６７及び６８の両方；（３０）配列番号６９及び７０の両方；（３１）配列番号６９及び６８の両方；（３２）配列番号１３３及び７０の両方；（３３）配列番号１３３及び１３４の両方；（３４）配列番号６５及び１３２の両方；（３５）配列番号１３１及び６６の両方；（３６）配列番号１３１及び１３２の両方；（３７）配列番号８４及び８５の両方；（３８）配列番号８６及び８７の両方；（３９）配列番号８８及び８９の両方；（４０）配列番号８８及び８７の両方；（４１）配列番号１３７及び８９の両方；（４２）配列番号１３７及び１３８の両方；（４３）配列番号８４及び１３６の両方；（４４）配列番号１３５及び８５の両方；又は（４５）配列番号１３５及び１３６の両方のアミノ酸配列を含み得る。

【0047】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、上記本発明のＴＣＲの可変領域を更に含み得る。これに関して、ポリペプチドは、例えば、（ｉ）配列番号９７～９９及び１３９～１４９のうちの１つ又は（ｉｉ）配列番号９９、１４０、及び１４２のうちの１つ並びに配列９７、９８、１３９、１４１、及び１４３～１４９のうちの１つのアミノ酸配列を含み得る。

【0048】

本発明の実施形態では、本発明のポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、例えば、（１）配列番号１４及び１５の両方；（２）配列番号１６及び１７の両方；（３）配列番号１８及び１９の両方；（４）配列番号３３及び３４の両方；（５）配列番号３５及び３６の両方；（６）配列番号３７及び３８の両方；（７）配列番号５２及び５３の両方；（８）配列番号５４及び５５の両方；（９）配列番号５６及び５７の両方；（１０）配列番号７１及び７２の両方；（１１）配列番号７３及び７４の両方；（１２）配列番号７５及び７６の両方；（１３）配列番号９０及び９１の両方；（１４）配列番号９２及び９３の両方；又は（１５）配列番号９４及び９５の両方のアミノ酸配列を含み得る。

【0049】

本発明の実施形態は、更に、本明細書に記載のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含むタンパク質を提供する。「タンパク質」とは、１本以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。実施形態では、本発明のタンパク質は、（１）配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２）配列番号２１～２３の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２４～２６の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３）配列番号４０～４２の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４３～４５の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４）配列番号５９～６１の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は（５）配列番号７８～８０の全てのアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８１～８３の全てのアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含み得る。

【0050】

本発明の実施形態では、タンパク質は、（１）配列番号８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２）配列番号１０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３）配列番号１２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４）配列番号１２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（５）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（６）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（７）配列番号８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（８）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（９）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１０）配列番号２７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１１）配列番号２９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１２）配列番号３１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１３）配列番号３１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１４）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１５）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１６）配列番号２７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２４のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１７）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１８）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２４のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１９）配列番号４６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２０）配列番号４８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２１）配列番号５０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２２）配列番号５０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２３）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２４）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２５）配列番号４６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２６）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２７）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２８）配列番号６５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２９）配列番号６７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３０）配列番号６９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３１）配列番号６９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３２）配列番号１３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３３）配列番号１３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３４）配列番号６５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３５）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３６）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３７）配列番号８４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３８）配列番号８６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３９）配列番号８８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４０）配列番号８８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４１）配列番号１３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４２）配列番号１３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４３）配列番号８４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４４）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号８５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は（４５）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む。

【0051】

本発明の実施形態では、タンパク質は、例えば、上記本発明のＴＣＲの定常領域を更に含み得る。これに関して、第１のポリペプチド鎖は、配列番号９９、１４０、及び１４２のうちの１つを含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号９７、９８、１３９、１４１、及び１４３～１４９のうちの１つを含み得る。

【0052】

本発明の実施形態では、タンパク質は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（２）配列番号１６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（４）配列番号３３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（５）配列番号３５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（６）配列番号３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（７）配列番号５２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（８）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（９）配列番号５６のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１０）配列番号７１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１１）配列番号７３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号７４のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１２）配列番号７５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１３）配列番号９０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号９１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；（１４）配列番号９２のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号９３のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は（１５）配列番号９４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号９５のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む。

【0053】

本発明のタンパク質は、ＴＣＲであってよい。あるいは、該タンパク質の第１の及び／又は第２のポリペプチド鎖（複数可）が、他のアミノ酸配列、例えば、免疫グロブリン若しくはその一部をコードしているアミノ酸配列を更に含む場合、本発明のタンパク質は、融合タンパク質であってもよい。これに関して、本発明の実施形態はまた、少なくとも１つの他のポリペプチドと共に、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別々のタンパク質として存在してもよく、又は本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの１つとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子、例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ等が挙げられるがこれらに限定されない任意のペプチド性若しくはタンパク質性の分子又はこれらの一部をコードしていてよい。

【0054】

融合タンパク質は、１コピー以上の本発明のポリペプチド及び／又は１コピー以上の他のポリペプチドを含み得る。例えば、融合タンパク質は、１、２、３、４、５、又はそれ以上のコピーの本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドを含み得る。融合タンパク質を作製する好適な方法は、当技術分野において公知であり、例えば、組み換え法が挙げられる。

【0055】

本発明の幾つかの実施形態では、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現し得る。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、リンカーペプチドを更に含み得る。リンカーペプチドは、有利なことに、宿主細胞における組み換えのＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質の発現を促進し得る。リンカーペプチドは、任意の好適なアミノ酸配列を含み得る。例えば、リンカーペプチドは、配列ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含み得る。リンカーペプチドを含むコンストラクトが宿主細胞によって発現されたら、該リンカーペプチドを切断してもよく、その結果、分離されたα鎖及びβ鎖が得られる。本発明の実施形態では、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、完全長α鎖、完全長β鎖、及びα鎖とβ鎖との間に位置するリンカーペプチドを含むアミノ酸配列を含み得る。

【0056】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、シグナルペプチドを含む、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖のいずれかのシグナルペプチドの配列は、２位において野生型残基に置き換わったアラニン又はヒスチジンの残基を含む。

【0057】

幾つかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、シグナルペプチドを欠く、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖の成熟バージョンを含む。

【0058】

本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む、組み換え抗体又はその抗原結合部分であってよい。本明細書で使用するとき「組み換え抗体」とは、本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分を含む組み換え（例えば、遺伝的に操作された）タンパク質を指す。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、抗体の重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ）２’の断片等であってよい。抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、組み換え抗体の別々のポリペプチドとして存在してよい。あるいは、抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、本発明のポリペプチドとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体及び抗体断片のいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体断片のポリペプチドであってよい。

【0059】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、任意の長さであってよい、すなわち、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質がその生物活性、例えば、変異型Ｐ５３に特異的に結合する、哺乳類におけるがんを検出する、又は哺乳類におけるがんを治療若しくは予防する能力等を保持している限り、任意の数のアミノ酸を含み得る。例えば、ポリペプチドは、約５０～約５０００アミノ酸長の範囲、例えば、約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、又はそれ以上のアミノ酸長であってよい。これに関して、本発明のポリペプチドは、オリゴペプチドも含む。

【0060】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含んでいてもよい。このような合成アミノ酸は、当技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

【0061】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を、例えば、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、例えばジスルフィド架橋を介して環化、又は酸付加塩に変換、及び／又は任意で二量体化若しくは多量体化、又はコンジュゲートしてもよい。

【0062】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質は、当技術分野において公知の方法、例えば、デノボ合成によって得ることができる。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え法を使用し、本明細書に記載の核酸を使用して組み換え的に生成することができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４^ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照。あるいは、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質は、様々な商業実体のいずれかによって合成されてもよい。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成であってもよく、組み換え体であってもよく、単離されていてもよく、及び／又は精製されていてもよい。

【0063】

本発明の実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。「核酸」は、本明細書で使用するとき、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、及び「核酸分子」を含み、一般的に、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマーを意味し、これらは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよく、そして、改変されていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間にみられるホスホジエステルの代わりに天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチド間結合、例えば、ホスホロアミデート結合又はホスホロチオエート結合を含有していてもよい。実施形態では、核酸は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含む。核酸は、任意の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含まないことが一般に好ましい。しかし、幾つかの例では、本明細書で論じた通り、核酸が１つ以上の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含むことが好適である場合もある。

【0064】

本発明の実施形態は、５’から３’に向かって、第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列を含む単離又は精製された核酸であって、該第１及び第２のヌクレオチド配列が、それぞれ、配列番号８及び９；９及び８；１０及び１１；１１及び１０；１２及び１３；１３及び１２；１２及び１１；１１及び１２；１２１及び１３；１３及び１２１；１２１及び１２２；１２２及び１２１；８及び１２０；１２０及び８；１１９及び９；９及び１１９；１１９及び１２０；１２０及び１１９；１４及び１５；１５及び１４；１６及び１７；１７及び１６；１８及び１９；１９及び１８；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３１及び３２；３２及び３１；３１及び３０；３０及び３１；１２５及び３２；３２及び１２５；１２５及び１２６；１２６及び１２５；２７及び１２４；１２４及び２７；１２３及び２８；２８及び１２３；１２３及び１２４；１２４及び１２３；３３及び３４；３４及び３３；３５及び３６；３６及び３５；３７及び３８；３８及び３７；４６及び４７；４７及び４６；４８及び４９；４９及び４８；５０及び５１；５１及び５０；５０及び４９；４９及び５０；１２９及び５１；５１及び１２９；１２９及び１３０；１３０及び１２９；４６及び１２８；１２８及び４６；１２７及び４７；４７及び１２７；１２７及び１２８；１２８及び１２７；５２及び５３；５３及び５２；５４及び５５；５５及び５４；５６及び５７；５７及び５６；６５及び６６；６６及び６５；６７及び６８；６８及び６７；６９及び７０；７０及び６９；６９及び６８；６８及び６９；１３３及び７０；７０及び１３３；１３３及び１３４；１３４及び１３３；６５及び１３２；１３２及び６５；１３１及び６６；６６及び１３１；１３１及び１３２；１３２及び１３１；７１及び７２；７２及び７１；７３及び７４；７４及び７３；７５及び７６；７６及び７５；８４及び８５；８５及び８４；８６及び８７；８７及び８６；８８及び８９；８９及び８８；８８及び８７；８７及び８８；１３７及び８９；８９及び１３７；１３７及び１３８；１３８及び１３７；８４及び１３６；１３６及び８４；１３５及び８５；８５及び１３５；１３５及び１３６；１３６及び１３５；９０及び９１；９１及び９０；９２及び９３；９３及び９２；９４及び９５；又は９５及び９４のアミノ配列をコードしている核酸を提供する。

【0065】

本発明の実施形態では、核酸は、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間に介在する第３のヌクレオチド配列を更に含み、該第３のヌクレオチド配列は、切断可能なリンカーペプチドをコードしている。例えば、切断可能なリンカーペプチドは、配列ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含み得る。本発明の実施形態では、核酸は、配列番号２０、３９、５８、７７、及び９６からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードしている。例えば、核酸は、配列番号１０９～１１３からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。

【0066】

好ましくは、本発明の核酸は、組み換え体である。本明細書で使用するとき、用語「組み換え体」とは、（ｉ）天然若しくは合成の核酸セグメントを生細胞で複製可能な核酸分子に連結させることによって生細胞の外部で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されているものの複製から得られる分子を指す。本明細書における目的のために、複製は、インビトロ複製であってもインビボ複製であってもよい。

【0067】

核酸は、当技術分野において公知の手順を使用して、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、上掲を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増大させるか若しくはハイブリダイゼーションの際に形成される二本鎖の物理的安定性を増大させるために設計された様々に改変されたヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して、化学的に合成することができる。核酸を作製するために使用することができる改変ヌクレオチドの例としては、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ－Ｄ－ガラクトシルクエオシン、イノシン、Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、Ｎ^６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルクエオシン、５－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、クエオシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、本発明の核酸のうちの１つ以上は、様々な商業実体のいずれかから購入することもできる。

【0068】

本発明の実施形態では、核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしている、コドン最適化されたヌクレオチド配列を含む。任意の特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヌクレオチド配列のコドン最適化によって、ｍＲＮＡ転写物の翻訳効率が増大すると考えられる。ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ネイティブなコドンを、同じアミノ酸をコードしているが細胞内でより容易に利用可能なｔＲＮＡによって翻訳され得る別のコドンで置換し、それによって、翻訳効率を増大させることを伴い得る。また、ヌクレオチド配列の最適化は、翻訳に干渉するｍＲＮＡの二次構造を低減し、それによって、翻訳効率を増大させることもできる。

【0069】

本発明の実施形態はまた、本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。

【0070】

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェントな条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に多い量で標的配列（本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェントな条件は、正確な相補的配列を有するポリヌクレオチド又は幾つかの散在している不一致しか含有していないものを、該ヌクレオチド配列に一致している幾つかの小さな領域（例えば、３～１０塩基）を偶然有するランダム配列と識別する条件を含む。このような相補的な小さな領域は、１４～１７又はそれ以上の塩基の完全長相補体よりも容易に融解するので、高ストリンジェントなハイブリダイゼーションによって容易に識別可能になる。比較的高ストリンジェントな条件は、例えば、約０．０２～０．１Ｍ ＮａＣｌ又は等価物、約５０～７０℃の温度によって提供されるもの等の低塩及び／又は高温条件を含む。このような高ストリンジェントな条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート又は標的鎖との間に（もし存在するとしても）わずかな不一致しか許容せず、本発明のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。一般的に、漸増量のホルムアミドを添加することによって、条件をよりストリンジェントにすることができると理解される。

【0071】

本発明の実施形態はまた、本明細書に記載の核酸のいずれかと少なくとも約７０％以上、例えば、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。これに関して、核酸は、本明細書に記載のヌクレオチド配列のいずれかから本質的になっていてよい。

【0072】

本発明の核酸は、組み換え発現ベクターに組み込むことができる。これに関して、本発明の実施形態は、本発明の核酸のいずれかを含む組み換え発現ベクターを提供する。本発明の実施形態では、組み換え発現ベクターは、α鎖、β鎖、及びリンカーペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む。

【0073】

本明細書における目的のために、用語「組み換え発現ベクター」は、コンストラクトがｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含み、宿主細胞内で該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下でベクターを該細胞と接触させたとき、該細胞に該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させる遺伝的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドのコンストラクトを意味する。本発明のベクターは、全体としては天然に存在しない。しかし、ベクターの一部は天然に存在している場合がある。本発明の組み換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡが挙げられるがこれらに限定されない任意の種類のヌクレオチドを含んでいてよく、該ＤＮＡ及びＲＮＡは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、合成されても天然源から部分的に入手されてもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよい。組み換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合、天然には存在しないヌクレオチド間結合、又は両方の種類の結合を含んでいてよい。好ましくは、天然には存在しないか又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写も複製も妨げない。

【0074】

本発明の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであってよく任意の好適な宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトするために使用することができる。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルス等、伝播及び増殖用、若しくは発現用、又は両方のために設計されたものが挙げられる。ベクターは、トランスポゾン／トランスポゼースシリーズ、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）からなる群から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターを使用してもよい。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。好ましくは、組み換え発現ベクターは、トランスポゾン又はウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクターである。

【0075】

本発明の組み換え発現ベクターは、例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、上掲に記載されている標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して調製することができる。環状又は線状である発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製することができる。複製系は、例えば、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス等に由来していてよい。

【0076】

望ましくは、組み換え発現ベクターは、調節配列、例えば、必要に応じて、そして、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞の種類（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物）に特異的な転写及び翻訳の開始及び終止のコドンを含む。

【0077】

組み換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞の選別を可能にする１つ以上のマーカー遺伝子を含んでいてよい。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属等に対する耐性、原栄養性を与えるための栄養要求性宿主における補完等を含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子は、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子を含む。

【0078】

組み換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に、又はＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に相補的であるか若しくはハイブリダイズするヌクレオチド配列に動作可能に連結しているネイティブ又は非ネイティブのプロモータを含んでいてよい。例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的、及び発生段階特異的なプロモータの選択は、当業者の技能の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列とプロモータとの組み合わせも当業者の技能の範囲内である。プロモータは、非ウイルスプロモータ、例えば、ヒト伸長因子－１αプロモータであってもよく、ウイルスプロモータ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＲＳＶプロモータ、及びマウス幹細胞ウイルスの末端反復配列にみられるプロモータであってもよい。

【0079】

本発明の組み換え発現ベクターは、一過的発現用、安定的発現用、又は両方のために設計してよい。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現用又は誘導性発現用に作製してよい。

【0080】

更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製してもよい。本明細書で使用するとき、用語「自殺遺伝子」とは、自殺遺伝子を発現している細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、該遺伝子が発現する細胞に剤、例えば薬物に対する感受性を付与し、そして、該細胞が該剤と接触したとき又は該剤に曝露されたときに該細胞を死に至らしめる遺伝子であってよい。自殺遺伝子は、当技術分野において公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼを含む。

【0081】

本発明の別の実施形態は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかによってコードされている単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。

【0082】

本発明の更に別の実施形態は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかが発現した結果得られる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。

【0083】

本発明の別の実施形態は、更に、本明細書に記載の核酸のいずれか又は組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」とは、本発明の組み換え発現ベクターを含有し得る任意の種類の細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、真菌、又は藻類であってもよく、原核細胞、例えば、細菌又は原生動物であってもよい。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞、すなわち、生物、例えばヒトから直接単離された細胞であってよい。宿主細胞は、接着細胞又は懸濁細胞、すなわち、懸濁液中で成長する細胞であってよい。好適な宿主細胞は、当技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のために、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞、例えばＤＨ５α細胞である。組み換えのＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を生成する目的のために、宿主細胞は、好ましくは、哺乳類細胞である。最も好ましくは、宿主細胞は、ヒト細胞である。例えば、宿主細胞は、ヒトリンパ球であってよい。本発明の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。宿主細胞は、任意の細胞型であってよく、任意の種類の組織を起源としていてよく、任意の発生段階であってよいが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。

【0084】

本明細書における目的のために、Ｔ細胞は、任意のＴ細胞、例えば、培養Ｔ細胞、例えば初代Ｔ細胞、又は培養Ｔ細胞株由来のＴ細胞、例えばＪｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１等、又は哺乳類から得られたＴ細胞であってよい。哺乳類から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは流体を含むがこれらに限定されない多数の供給源から得ることができる。また、Ｔ細胞は、濃縮又は精製されてもよい。好ましくは、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であってよく、任意の発生段階であってよく、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、例えば、Ｔｈ_１及びＴｈ_２細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリＴ細胞（例えば、セントラルメモリＴ細胞及びエフェクタメモリＴ細胞）、ナイーブＴ細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

また、本明細書に記載される少なくとも１つの宿主細胞を含む細胞の集団が本発明の実施形態によって提供される。細胞の集団は、組み換え発現ベクターのいずれも含まない少なくとも１つの他の細胞、例えば宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞等に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均一な集団であってよい。あるいは、細胞の集団は、組み換え発現ベクターを含む（例えば、から本質的になる）宿主細胞を主に含む、実質的に均一な集団であってもよい。また、集団は、該集団の全ての細胞が、組み換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、その結果、該集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む、細胞のクローン集団であってもよい。本発明の一実施形態では、細胞の集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。

【0086】

本発明の実施形態では、集団内の細胞数を、急速に拡大させることができる。Ｔ細胞数の拡大は、例えば、米国特許第８，０３４，３３４号、同第８，３８３，０９９号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３号、Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２－４２（２００３）、及びＲｉｄｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２８：１８９－２０１（１９９０）に記載されている通り、当技術分野において公知の多数の方法のいずれかによって実現することができる。実施形態では、Ｔ細胞数の拡大は、該Ｔ細胞をＯＫＴ３抗体、ＩＬ－２、及びフィーダーＰＢＭＣ（例えば、放射線照射された同種ＰＢＭＣ）と共に培養することによって実行される。

【0087】

本発明の実施形態は、ＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）又はＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）のペプチドに対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法であって、本明細書に記載のベクターのいずれかの該細胞への導入を可能にする条件下で、該細胞を該ベクターと接触させることを含む方法を提供する。

【0088】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）は、単離及び／又は精製されてもよい。用語「単離された」は、本明細書で使用するとき、その天然環境から取り出されたことを意味する。用語「精製された」は、本明細書で使用するとき、純度が増大したことを意味し、「純度」は相対的な用語であり、必ずしも絶対純度と解釈される訳ではない。例えば、純度は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％であってもよく、約１００％であってもよい。

【0089】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）（以後、これらの全てをまとめて「本発明のＴＣＲ材料」と称する）は、医薬組成物等の組成物に製剤化してもよい。これに関して、本発明の実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）のいずれかと、薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、１つを超える本発明のＴＣＲ材料、例えば、ポリペプチド及び核酸又は２つ以上の異なるＴＣＲを含んでいてもよい。あるいは、医薬組成物は、別の薬学的活性剤（複数可）又は薬物（複数可）、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン等と組み合わせて本発明のＴＣＲ材料を含んでいてもよい。

【0090】

好ましくは、担体は、薬学的に許容し得る担体である。医薬組成物に関して、担体は、検討中の具体的な本発明のＴＣＲ材料に従来使用されているもののいずれかであってよい。投与可能な組成物を調製する方法は、当業者に公知であるか又は明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）により詳細に記載されている。薬学的に許容し得る担体は、使用条件下で有害な副作用も毒性も有しないものであることが好ましい。

【0091】

担体の選択は、具体的な本発明のＴＣＲ材料によって、並びに本発明のＴＣＲ材料を投与するために使用される具体的な方法によって部分的に決定される。従って、本発明の医薬組成物の様々な好適な製剤が存在する。好適な製剤は、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、腫瘍内、又は腹腔内に投与するもののいずれかを含み得る。１つを超える経路を使用して本発明のＴＣＲ材料を投与してもよく、特定の例では、特定の経路が別の経路よりも即時かつより有効な応答を提供し得る。

【0092】

好ましくは、本発明のＴＣＲ材料は、例えば静脈内に注射することによって投与される。本発明のＴＣＲ材料が、本発明のＴＣＲを発現している宿主細胞であるとき、注射するための細胞用の薬学的に許容し得る担体は、任意の等張担体、例えば、通常生理食塩水（水中約０．９０％ｗ／ｖ ＮａＣｌ、水中約３００ｍＯｓｍ／Ｌ ＮａＣｌ、又は水１リットルあたり約９．０ｇ ＮａＣｌ）、ＮＯＲＭＯＳＯＬ Ｒ電解質溶液（Ａｂｂｏｔｔ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、ＰＬＡＳＭＡ－ＬＹＴＥ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、水中約５％デキストロース、又は乳酸リンゲル液を含んでいてよい。実施形態では、薬学的に許容し得る担体にヒト血清アルブメン（ａｌｂｕｍｅｎ）を補給する。

【0093】

投与される本発明のＴＣＲ材料の量又は用量（例えば、本発明のＴＣＲ材料が１つ以上の細胞である場合は細胞数）は、適切な時間枠にわたって対象又は動物において例えば治療的又は予防的応答をもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、投与時点から約２時間以上、例えば、１２～２４時間又はそれ以上の期間、がん抗原（例えば、変異型Ｐ５３）に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防するのに十分でなければならない。特定の実施形態では、期間は更に長くてもよい。用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の有効性及び動物（例えば、ヒト）の状態、並びに治療される動物（例えば、ヒト）の体重によって決定される。

【0094】

投与される用量を決定するための多くのアッセイが、当技術分野において公知である。例えば、それぞれ異なる用量のＴ細胞を与えた哺乳類のセット間で、所与の用量の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を発現しているＴ細胞を哺乳類に投与した際にこのようなＴ細胞によって標的細胞が溶解する又はＩＦＮ－γが分泌される程度を比較することを含むアッセイを使用して、哺乳類に投与する開始用量を決定することができる。特定の用量の投与した際に標的細胞が溶解する又はＩＦＮ－γが分泌される程度は、当技術分野において公知の方法によってアッセイすることができる。

【0095】

本発明のＴＣＲ材料の用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の投与に付随し得る任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によっても決定される。典型的には、主治医は、様々な要因、例えば、年齢、体重、全体的な健康状態、食生活、性別、投与される本発明のＴＣＲ材料、投与経路、及び治療されるがんの重症度を考慮して、各個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の投与量を決定する。本発明のＴＣＲ材料が細胞の集団である実施形態では、注入１回あたりに投与される細胞数は、例えば、約１×１０^６～約１×１０^１２細胞又はそれ以上で変動し得る。特定の実施形態では、１×１０^６細胞未満を投与してもよい。

【0096】

当業者は、本発明のＴＣＲ材料を任意の数の方法で修飾してもよく、その結果、該修飾を通して本発明のＴＣＲ材料の治療又は予防の有効性が増大することを容易に理解するであろう。例えば、本発明のＴＣＲ材料を、直接又は架橋を介して間接的に化学療法剤にコンジュゲートしてもよい。化合物の化学療法剤へのコンジュゲートの実施は、当技術分野において公知である。当業者は、架橋及び／又は化学療法剤が本発明のＴＣＲ材料に結合しても本発明のＴＣＲ材料の機能、すなわち、変異型Ｐ５３に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力には干渉しない限り、本発明のＴＣＲ材料の機能に必須ではない本発明のＴＣＲ材料の部位が、架橋及び／又は化学療法剤を結合させるのに理想的な部位であることを認識する。

【0097】

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団は、がんを治療又は予防する方法において使用できることが企図される。特定の理論に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは変異型Ｐ５３に特異的に結合し、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質）は、細胞によって発現されたとき、変異型Ｐ５３を発現している標的細胞に対する免疫応答を媒介することができると考えられる。これに関して、本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんを治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を、哺乳類におけるがんを治療又は予防するのに有効な量、該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

【0098】

本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんの治療又は予防において使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を提供する。

【0099】

用語「治療する」及び「予防する」、並びにそれから派生する語は、本明細書で使用するとき、必ずしも１００％、すなわち、完全な治療又は予防を意味するものではない。どちらかといえば、当業者が潜在的な利点又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、哺乳類における任意の量の任意のレベルのがんの治療又は予防を提供することができる。更に、本発明の方法によって提供される治療又は予防は、治療又は予防されるがんの１つ以上の病態又は症状の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退縮を促進することを含み得る。また、本明細書における目的のために、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の発症を遅らせることを包含し得る。あるいは又は更に、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の再発を防ぐか又は遅らせることを包含し得る。

【0100】

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団は、哺乳類におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法において使用できることも企図される。これに関して、本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を、哺乳類におけるがんに対する免疫応答を誘導するのに有効な量、該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

【0101】

本発明の実施形態は、哺乳類におけるがんに対する免疫応答の誘導において使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を提供する。

【0102】

また、哺乳類におけるがんの存在を検出する方法も本発明の実施形態によって提供される。方法は、（ｉ）本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、又は医薬組成物のいずれかを、哺乳類由来の１つ以上の細胞を含むサンプルと接触させ、それによって、複合体を形成させることと、（ｉｉ）該複合体を検出することとを含み、該複合体の検出が、哺乳類におけるがんの存在を示す。

【0103】

哺乳類におけるがんを検出する本発明の方法に関して、細胞のサンプルは、全細胞、その溶解物、又は全細胞溶解物の画分、例えば、核若しくは細胞質の画分、全タンパク質画分、又は核酸画分を含むサンプルであってよい。

【0104】

本発明の検出方法の目的のために、接触は、哺乳類に対してインビトロ又はインビボで行ってよい。好ましくは、インビトロで接触させる。

【0105】

また、複合体の検出は、当技術分野において公知の任意の数の方法を通して行うことができる。例えば、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）等で標識してよい。

【0106】

宿主細胞又は細胞の集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、哺乳類に対して同種又は自己である細胞であってよい。好ましくは、細胞は、哺乳類に対して自己である。

【0107】

本発明の方法に関して、がんは、例えば、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管、又は肛門直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢、又は胸膜のがん、鼻、鼻腔、又は中耳のがん、口腔のがん、膣のがん、外陰部のがん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、子宮頸がん、消化管カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、上咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、中咽頭のがん、卵巣がん、陰茎のがん、膵臓がん、腹膜、網、及び腸間膜のがん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎がん、皮膚がん、小腸がん、軟組織がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮のがん、尿管がん、並びに膀胱がんのいずれかを含む任意のがんであってよい。好ましい実施形態では、がんは、変異型Ｐ５３を発現するがんである。がんは、配列番号１によって定義したとき２７３位及び２２０位の一方又は両方に変異を有するＰ５３を発現し得る。がんは、以下のヒトＰ５３変異のうちの一方又は両方を有するＰ５３を発現し得る：Ｒ２７３Ｃ及びＹ２２０Ｃ。本発明の実施形態では、がんは、上皮がんである。本発明の実施形態では、がんは、胆管がん、メラノーマ、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんである。がんは、ヒトＰ５３におけるＲ２７３Ｃ又はＹ２２０Ｃの変異を含むことが知られている場合がある。

【0108】

本発明の方法において言及される哺乳類は、任意の哺乳類であってよい。本明細書で使用するとき、用語「哺乳類」とは、げっ歯目の哺乳類、例えばマウス及びハムスター、並びにウサギ目の哺乳類、例えばウサギを含むがこれらに限定されない任意の哺乳類を指す。哺乳類は、ネコ及びイヌを含む食肉目の哺乳類であることが好ましい。哺乳類は、ウシ及びブタを含む偶蹄目、又はウマを含む奇蹄目の哺乳類であることがより好ましい。哺乳類は、霊長目、サル目（Ｃｅｂｏｉｄｓ又はＳｉｍｏｉｄｓ）（サル）、又は真猿亜目（ヒト及び類人猿）の哺乳類であることが最も好ましい。特に好ましい哺乳類は、ヒトである。

【実施例】

【0109】

以下の実施例は、本発明について更に説明するが、無論、いかなる方法でもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【0110】

実施例１
この実施例は、患者４３４３のＴＩＬにおける抗Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ Ｔ細胞反応性の同定について示す。

【0111】

ホルモン陽性ＨＥＲ２陽性の転移性乳がんを有する患者４３４３から切除した腫瘍を２３個の断片に切断し、サイトカインＩＬ－２の存在下で培養して、エクスビボでＴＩＬを成長させた。断片（Ｆ１～Ｆ７及びＦ９～Ｆ２４と付番）を、ＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｙ２２０ＣペプチドＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）でパルスした自己樹状細胞と共培養することにより、変異体Ｐ５３を含む腫瘍特異的ネオアンチゲン反応性について試験した。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。結果を図１Ａに示す。断片番号Ｆ２、Ｆ３、Ｆ１１、Ｆ２１、及びＦ２３は、Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃを認識するＴＩＬを含有すると同定された。

【0112】

実施例２
この実施例は、患者４３８６のＴＩＬにおける抗Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ Ｔ細胞反応性の同定について示す。

【0113】

患者４３８６の左乳房腋窩リンパ節から切除した腫瘍を２４個の断片に切断し、サイトカインＩＬ－２の存在下で培養して、エクスビボでＴＩＬを成長させた。断片（Ｆ１～Ｆ２４と付番）を、ＤＭＳＯ（ビヒクル）又は変異体Ｐ５３－Ｒ２７３ＣペプチドＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）でパルスした自己樹状細胞と共培養することにより、変異体Ｐ５３を含む腫瘍特異的ネオアンチゲン反応性について試験した。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。結果を図１Ｂに示す。断片番号Ｆ７は、Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃを認識するＴＩＬを含有すると同定された。

【0114】

患者４３８６の新鮮腫瘍消化物（腫瘍１Ａ又は腫瘍１Ｂ）からのＴ細胞を、ＣＤ３並びに細胞表面マーカーＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３９、ＰＤ－１、及びＴＩＧＩＴのうちの１つ以上の発現に基づいて選別した。選別された細胞集団を増幅させ、変異体Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃペプチド又はＤＭＳＯに対する反応性について試験した。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。結果を図１Ｃに示す。腫瘍１Ａからの２つの細胞集団が、Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃを認識するＴ細胞を含有すると同定された：ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ３９^＋ＰＤ－１^＋ＴＩＧＩＴ^＋及びＣＤ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ３９^＋ＰＤ－１^＋ＴＩＧＩＴ^－。

【0115】

ネオアンチゲン反応性Ｔ細胞を濃縮するために、患者４３８６からのＴＩＬをインビトロ感作に供し、続いて、ＤＭＳＯ又は変異体Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃペプチドに対する試験を行った。Ｔ細胞活性化マーカーである４－１ＢＢ及びＯＸ４０をフローサイトメトリーによって測定した。結果を図１Ｄに示す。

【0116】

実施例３
この実施例は、実施例１の反応性ＴＩＬからの抗Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ＴＣＲの単離について示す。

【0117】

反応性ＴＩＬを再刺激し、単一細胞Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シーケンシングのために４－１ＢＢのアップレギュレーションによって選別して９６ウェルプレートに入れた。ＴＣＲ、すなわち、４３４３－Ｄ ＴＣＲ（ＴＲＡＶ１２－３／ＴＲＢＶ２７）が見出された。

【0118】

単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって、ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表３に示す。ＣＤＲには下線付きである。Ｎ末端シグナルペプチドは太字フォントである。

【0119】

【表3】

【0120】

実施例４
この実施例は、実施例２の反応性ＴＩＬからの抗Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ ＴＣＲの単離について示す。

【0121】

反応性ＴＩＬを再刺激し、単一細胞Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シーケンシングのために４－１ＢＢのアップレギュレーションによって選別して９６ウェルプレートに入れた。４つのＴＣＲ、すなわち、４３８６－Ｆ ＴＣＲ（ＴＲＡＶ１３－２／ＴＲＢＶ４－３）、４３８６－Ｇ ＴＣＲ（ＴＲＡＶ３／ＴＲＢＶ２０－１）、４３８６－Ｈ ＴＣＲ（ＴＲＡＶ２３／ＴＲＢＶ７－２）、及び４３８６－Ｏ ＴＣＲ（ＴＲＡＶ１３－２／ＴＲＢＶ７－３）が見出された。

【0122】

単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって、ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表４に示す。ＣＤＲは下線付きである。Ｎ末端シグナルペプチドは太字フォントである。

【0123】

【表4-1】

【0124】

【表4-2】

【0125】

【表4-3】

【0126】

【表4-4】

【0127】

実施例５
この実施例は、実施例３～４のそれぞれのＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターの構築について示す。

【0128】

表３～４のＴＣＲのα鎖及びβ鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を得、コドン最適化を行った。ＴＣＲβのＶＤＪ領域をマウスＴＣＲβの定常鎖に融合させた。ＴＣＲαのＶＪ領域をマウスＴＣＲαの定常鎖に融合させた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヒトのＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖の定常領域を対応するマウス定常領域で置換すると、ＴＣＲの発現及び機能性が改善すると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６６（１７）：８８７８－８６（２００６））。

【0129】

更に、マウスのＴＣＲα及びＴＣＲβの定常鎖をシステインで修飾した。マウスＴＣＲαの定常鎖に膜貫通型疎水性変異を導入した。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、これら修飾により、導入されたＴＣＲ鎖が優先的に対合し、ＴＣＲの表面発現及び機能性が高まると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６７（８）：３８９８－９０３（２００７）；Ｈａｇａ－Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕ．，１８８：５５３８-５５４６（２０１２））。

【0130】

ＴＣＲ発現カセットのＭＳＧＶ１ベクター５’ＮｃｏＩ部位へのクローニングを促進し、コザック配列を導入するために、ＴＣＲＶα鎖のＮ末端シグナルペプチドにおける２番目のアミノ酸をヒスチジン（Ｈ）に変更し、ＴＣＲＶβ鎖のＮ末端シグナルペプチドにおける２番目のアミノ酸をアラニン（Ａ）に変更した。

【0131】

定常領域へのこれら修飾を含む、５つのＴＣＲのそれぞれの完全長のα鎖及びβ鎖を表５に示す。表５中、ＣＤＲは下線付きであり、定常領域はイタリック体であり、定常領域の修飾アミノ酸残基は下線付きかつ太字である。

【0132】

【表5-1】

【0133】

【表5-2】

【0134】

【表5-3】

【0135】

【表5-4】

【0136】

表５のＴＣＲのα鎖及びβ鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を、以下の発現カセット構成を有するＭＳＧＶ１ベースのレトロウイルスベクターにクローニングした：５’ＮｃｏＩ－ＶＤＪβ－ｍＣβ－フリン／ＳｅｒＧｌｙ／Ｐ２Ａ－ＶＪα－ｍＣα－ＥｃｏＲＩ３’。

【0137】

ＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖は、フリンＳｅｒ／Ｇｌｙ Ｐ２ＡリンカーＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１００）によって分離されていた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、リンカーによって、２本の鎖の発現効率が同等になると考えられる（Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２２（５）：５８９－９４（２００４））。

【0138】

レトロウイルスベクターのＴＣＲ発現カセットは、５’から３’に向かって、リンカーによって分離されているＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖をコードしていた。ＴＣＲ発現カセットのヌクレオチド配列を表６に示す。

【0139】

【表6】

【0140】

それぞれの各ＴＣＲ発現カセットがコードしているアミノ酸配列を表７に示す。表７中、ＣＤＲは下線付きであり、定常領域はイタリック体であり、リンカーは太字で示す。

【0141】

【表7】

【0142】

実施例６
この実施例は、実施例５のレトロウイルスベクターによって発現される抗Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ＴＣＲの結合活性について示す。

【0143】

同種ＰＢＬに、独立して、実施例５の４３４３－Ｄ ＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターを形質導入した。自己ＤＣを、図３Ａに示す様々な濃度のうちの１つの変異型Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチドＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチドＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＹＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１４）で２時間パルスした。細胞を２回洗浄し、１：１の比で形質導入したＴ細胞と１６時間共培養した。ＩＦＮ－γの分泌をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。図３Ａに示すように、ＴＣＲを形質導入した細胞は、Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチドでパルスしたＤＣを特異的かつ強力に（ａｖｉｄ）認識することが示された。

【0144】

特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（配列番号１１４）及び変異型Ｐ５３ Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（配列番号１１５）中に存在するシステイン残基は、酸化及びホモ二量化を受けやすい可能性があり、これが最終的にＴ細胞の効力の低下につながる可能性があると考えられる（Ｓａｃｈｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０５（２）：５３９－５４９（２０２０））。Ｙ２２０Ｃ変異自体が、追加のシステイン残基を導入する。追加のシステイン残基が、ＴＣＲの変異体ペプチドの認識に影響を与える可能性があるという仮説を立てた。

【0145】

野生型及び変異体の両ペプチドの元の配列中のシステイン残基を全て、それ以上酸化も二量化も受けないＡＡＢＡに改変することによって、この仮説を検証した。改変されたペプチドを表８に示す。

【0146】

【表8】

【0147】

同種ＰＢＬに、独立して、実施例５の４３４３－Ｄ ＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターで形質導入した。自己Ｂ細胞を、図３Ｂ～３Ｃに示す様々な濃度のうちの１つのＡＡＢＡ置換を有する変異型Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチド（配列番号１５１）又はＡＡＢＡ置換を有する対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチド（配列番号１５０）で２時間パルスした。細胞を２回洗浄し、１：１の比で形質導入したＴ細胞と１６時間共培養した。フローサイトメトリーによりマウスＴＣＲ定常領域陽性細胞におけるＴ細胞活性化マーカー４－１ＢＢのアップレギュレーションを測定することによって、反応性を試験した。

【0148】

図３Ｂ～３Ｃに示すように、結果からこの実施例で上述した仮説が検証された。ＡＡＢＡ置換を有する変異型Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチドでは、ＡＡＢＡ置換を有する対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチドよりも１対数分又はそれよりも大きなＴＣＲ効力が観察された。

【0149】

実施例７
この実施例は、実施例５のレトロウイルスベクターによって発現される抗Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ ＴＣＲの結合活性について示す。

【0150】

同種ＰＢＬに、独立して、実施例５の４３８６－Ｆ ＴＣＲ、４３８６－Ｇ ＴＣＲ、４３８６－Ｈ ＴＣＲ、又は４３８６－Ｏ ＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターで形質導入した。自己ＤＣを、図３Ｄ～３Ｇに示す様々な濃度のうちの１つのＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチドＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）又は対応するＷＴ ２５ｍｅｒペプチドＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＲＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１６）で２時間パルスした。細胞を２回洗浄し、１：１の比で形質導入したＴ細胞と１６時間共培養した。ＩＦＮ－γ分泌をＥＬＩＳＡによって測定した（図３Ｄ～３Ｇ）。図３Ｄ～３Ｇに示すように、ＴＣＲを形質導入した細胞は、変異型Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチドでパルスしたＤＣを特異的かつ強力に認識することが示された。

【0151】

実施例８
この実施例は、実施例５のレトロウイルスベクターによって発現される抗Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ＴＣＲが、ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２／ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１ヘテロ二量体によって提示される変異型Ｐ５３を認識することを示す。

【0152】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４３４３が発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を図２Ａに示す。

【0153】

エフェクター細胞は、４３４３－Ｄ ＴＣＲをコードしている実施例５のレトロウイルスベクターを形質導入した同種ＰＢＬであった。標的細胞は、独立して図２Ａに示すＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１つをトランスフェクトし、Ｐ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒペプチドＤＲＮＴＦＲＨＳＶＶＶＰＣＥＰＰＥＶＧＳＤＣＴＴＩ（配列番号１１５）でパルスしたＣＯＳ７細胞であった。

【0154】

フローサイトメトリーによりマウスＴＣＲ定常領域陽性細胞におけるＴ細胞活性化マーカー４－１ＢＢのアップレギュレーションを測定することによって、反応性を試験した。結果を図２Ａに示す。図２Ａに示すように、４３４３－Ｄ ＴＣＲ形質導入細胞を、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：０１／ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２：０１ヘテロ二量体をコードしているヌクレオチド配列を形質導入したＰ５３－Ｙ２２０Ｃ ２５ｍｅｒ負荷標的細胞と共培養したときにのみ反応性が観察された。

【0155】

実施例９
この実施例は、実施例２のＴＩＬが、ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０２／ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１ヘテロ二量体によって提示される変異型Ｐ５３を認識したことを示す。

【0156】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４３８６が発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を図２Ｂに示す。

【0157】

エフェクター細胞は、実施例２で同定したＰ５３－Ｒ２７３Ｃを認識するＴ細胞を含有するＴＩＬであった。標的細胞は、独立して図２Ｂに示すＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１つをトランスフェクトし、Ｐ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒペプチドＳＧＮＬＬＧＲＮＳＦＥＶＣＶＣＡＣＰＧＲＤＲＲＴＥ（配列番号１１７）でパルスしたＣＯＳ７細胞であった。

【0158】

フローサイトメトリーによりＣＤ３陽性細胞におけるＴ細胞活性化マーカー４－１ＢＢのアップレギュレーションを測定することによって、反応性を試験した。結果を図２Ｂに示す。図２Ｂに示すように、ＴＩＬを、ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０３／ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０２ヘテロ二量体をコードしているヌクレオチド配列を形質導入したＰ５３－Ｒ２７３Ｃ ２５ｍｅｒ負荷標的細胞と共培養したときにのみ反応性が観察された。

【0159】

本明細書に引用した刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参照文献は、各参照文献が個々にかつ具体的に参照によって援用されると示されており、その全体が本明細書に記載されているかのように、参照によって本明細書に援用される。

【0160】

本発明の説明に関連して（特に以下の特許請求の範囲に関連して）用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つ」、並びに類似の参照対象の使用は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、単数形及び複数形の両方を網羅すると解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストの後の用語「少なくとも１つ」の使用（例えば、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」）は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、列挙される項目から選択される１つの項目（Ａ又はＢ）又は列挙される項目のうちの２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特に断らない限り、オープンエンドな用語である（すなわち、「含むがこれらに限定されない」を意味する）と解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において他の指定がない限り、単に、範囲内の各別個の値を個々に参照する省略法として機能することを意図し、各別個の値が、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意の及び全ての例又は例示的な表現（例えば、「等」）の使用は、特に主張しない限り、単に本発明をより深く解明することを意図し、本発明の範囲の限定を提起するものではない。明細書中の表現はいずれも、任意の請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。

【0161】

本発明を実施するための本発明者らに公知の最良の形態を含む本発明の好ましい実施形態が、本明細書に記載される。好ましい実施形態の変形は、前述の記載を読んだときに当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者がこのような変形を適宜使用すると予想し、そして、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されているのとは別の方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、準拠法によって認められている通り、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙される発明主題の全ての変形及び等価物を含む。更に、その全ての可能な変形における上記要素の任意の組み合わせは、本明細書において他の指定がない限り又は文脈から明らかに矛盾していない限り、本発明によって包含される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図4】

【配列表】

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【国際調査報告】