特表 2023-540134 蠕動式ポンプおよび減衰装置を使用して薬学的組成物を生産するためのシステムおよび方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-21

(54)【発明の名称】蠕動式ポンプおよび減衰装置を使用して薬学的組成物を生産するためのシステムおよび方法

(51)【国際特許分類】

   B01F 35/71 20220101AFI20230913BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20230913BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 31/7115 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 31/7125 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20230913BHJP

   C07K 14/74 20060101ALI20230913BHJP

   B01F 25/10 20220101ALI20230913BHJP

   B01F 25/30 20220101ALI20230913BHJP

   B01F 25/40 20220101ALI20230913BHJP

   B01F 33/84 20220101ALI20230913BHJP

   B01F 101/22 20220101ALN20230913BHJP

【ＦＩ】

B01F35/71

A61P43/00 111

A61K9/127 ZNA

A61K9/51

A61K47/18

A61K47/24

A61K31/7088

A61K31/7115

A61K31/7125

A61P35/00

C12N15/11 Z

C07K14/74

B01F25/10

B01F25/30

B01F25/40

B01F33/84

B01F101:22

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023515379

(86)(22)【出願日】2021-09-07

(85)【翻訳文提出日】2023-05-02

(86)【国際出願番号】 US2021049261

(87)【国際公開番号】W WO2022055867

(87)【国際公開日】2022-03-17

(31)【優先権主張番号】63/075,723

(32)【優先日】2020-09-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ベルクロ

(71)【出願人】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】519258736

【氏名又は名称】バイオエヌテック エスエー

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】オヴァディア， ロバート ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】ペトリー， クリストファー アンドリュー

(72)【発明者】

【氏名】リム， フレデリック ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ハース， ハインリヒ

(72)【発明者】

【氏名】ヘレナー， ゼバスティアン

(72)【発明者】

【氏名】ベイツ， フェルディア

(72)【発明者】

【氏名】キント， トビアス

(72)【発明者】

【氏名】ベルガー， ペール アンドレ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

4G035

4G036

4G037

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA19

4C076AA65

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC29

4C076DD49

4C076DD63

4C076FF31

4C076FF68

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086EA18

4C086MA02

4C086MA05

4C086MA24

4C086MA41

4C086NA10

4C086NA13

4C086ZB26

4C086ZC02

4G035AC01

4G035AC22

4G035AC44

4G035AE13

4G035AE17

4G036AC70

4G037AA02

4G037EA01

4H045AA30

4H045BA10

4H045EA34

4H045FA74

(57)【要約】

蠕動式ポンプとともに使用するための方法およびシステムがここに提供される。より具体的には、脂質およびＲＮＡを含む薬学的組成物および製剤を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、かつ／または製造するために、蠕動式ポンプシステムからの流量の脈動を低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプシステムがここに提供される。
【選択図】図１５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

混合物を形成するためのチュービングキットであって、
第１の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、
第２の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、
前記チュービングの第１の部分に流体的に接続され、かつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置と、
前記チュービングの第１の部分からの前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の組成物を混合するための混合装置と、
前記混合装置から、混合された前記第１の組成物および第２の組成物を収集するための混合物容器と、
を備え、
前記チュービングの第１の部分は、前記第１の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第１の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第２の部分は、前記第２の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第２の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、チュービングキット。

【請求項2】

前記減衰装置が、封入されたある体積の流体を含む、請求項１に記載のチュービングキット。

【請求項3】

前記流体が空気である、請求項２に記載のチュービングキット。

【請求項4】

前記減衰装置がチュービング減衰装置である、請求項１～３のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項5】

前記減衰装置が柔軟な膜を備える、請求項１に記載のチュービングキット。

【請求項6】

前記減衰装置と、前記チュービングの第１の部分と、チュービングの第１の混合装置入力部分とを流体的に接続する第１のＴ字型コネクタをさらに備え、前記チュービングの第１の混合装置入力部分が前記混合装置に流体的に接続する、請求項１～５のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項7】

前記減衰装置と、前記チュービングの第２の部分と、チュービングの第２の混合装置入力部分とを流体的に接続する第２のＴ字型コネクタをさらに備え、前記チュービングの第２の混合装置入力部分が前記混合装置に流体的に接続する、請求項６に記載のチュービングキット。

【請求項8】

前記チュービングの第１の部分が、チュービングの第１のセグメントとチュービングの第２のセグメントとを備え、前記チュービングの第１のセグメントおよび前記チュービングの第２のセグメントは、並列して流体的に接続される、請求項１～７のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項9】

前記チュービングの第１のセグメントが、第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第２のセグメントが、第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、請求項８に記載のチュービングキット。

【請求項10】

前記チュービングの第２の部分が、チュービングの第３のセグメントとチュービングの第４のセグメントとを備え、前記チュービングの第３の部分および前記チュービングの第４の部分は、並列して流体的に接続される、請求項１～８のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項11】

前記チュービングの第３のセグメントが、第３の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第４のセグメントが、第４の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、請求項１０に記載のチュービングキット。

【請求項12】

前記混合装置が、前記チュービングの第１の部分に流体的に接続された入力部と、前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された入力部と、前記混合物容器に流体的に接続された出力部とを備える、請求項１～１１のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項13】

前記混合装置が、Ｙ字型コネクタ、らせん型混合装置または静的混合装置を備える、請求項１～１２のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項14】

前記チュービングの第１の部分を前記減衰装置および前記混合装置に流体的に接続する第１の減衰装置コネクタと、前記チュービングの第２の部分を前記減衰装置および前記混合装置に流体的に接続する第２の減衰装置コネクタとをさらに備える、請求項１～１３のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項15】

前記混合物容器が、袋、器または瓶である、請求項１～１４のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項16】

薬学的組成物または薬学的組成物の混合物を形成するためのシステムであって、
第１の薬学的組成物を収容する第１の容器と、
第２の薬学的組成物を収容する第２の容器と、
前記第１の容器に流体的に接続されたチュービングの第１の部分と、
前記第２の容器に流体的に接続されたチュービングの第２の部分と、
前記チュービングの第１の部分に流体的に接続され、かつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置と、
前記チュービングの第１の部分からの前記第１の薬学的組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の薬学的組成物を混合するための混合装置と、
前記混合装置から、混合された前記第１の薬学的組成物および第２の薬学的組成物を収集するための混合物容器と、
を備える、システム。

【請求項17】

前記第１の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第１の組成物を圧送するために前記チュービングの第１の部分に接続された少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドと、前記第１の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第２の組成物を圧送するために前記チュービングの第２の部分に接続された少なくとも１つの蠕動式ポンプとをさらに備える、請求項１６に記載のシステム。

【請求項18】

前記第１の組成物または前記第２の組成物が、核酸、１つ以上の脂質、１つ以上のタンパク質、または緩衝剤を含む、請求項１６または１７に記載のシステム。

【請求項19】

前記第１の組成物が核酸を含み、前記第２の組成物が１つ以上の脂質を含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項20】

前記第１の組成物がＲＮＡを含み、前記第２の組成物が１つ以上の脂質を含む、請求項１８に記載のシステム。

【請求項21】

前記ＲＮＡが、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１０～２０のネオエピトープをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、請求項２０に記載のシステム。

【請求項22】

前記ＲＮＡが、リポプレックスナノ粒子またはリポソーム中に製剤化される、請求項２１に記載のシステム。

【請求項23】

前記リポプレックスナノ粒子またはリポソームが、前記ＲＮＡを封入する多層構造を形成する１つ以上の脂質を含む、請求項２２に記載のシステム。

【請求項24】

前記１つ以上の脂質が、少なくとも１つのカチオン性脂質および少なくとも１つのヘルパー脂質を含む、請求項２０に記載のシステム。

【請求項25】

前記１つ以上の脂質が、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む、請求項２０に記載のシステム。

【請求項26】

生理的ｐＨにおいて、前記リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比が１．３：２（０．６５）である、請求項２５に記載のシステム。

【請求項27】

前記ＲＮＡが、５’→３’方向に、
（１）５’キャップと、
（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、
（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、
（４）腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、
（５）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列と、
（６）３’ＵＴＲであって、
（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片と、
（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片と、
を含む、３’ＵＴＲと、
（７）ポリ（Ａ）配列と、
を含むＲＮＡ分子を含む、請求項２０～２６のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項28】

前記ＲＮＡ分子が、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記アミノ酸リンカーをコードする前記ポリヌクレオチド配列および前記１つ以上のネオエピトープの第１をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成し、前記第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成する前記ポリヌクレオチド配列が、５’→３’方向に、前記分泌シグナルペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にある、請求項２７に記載のシステム。

【請求項29】

前記アミノ酸リンカーが、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む、請求項２８に記載のシステム。

【請求項30】

前記アミノ酸リンカーをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む、請求項２８に記載のシステム。

【請求項31】

前記ＲＮＡ分子が、５’→３’方向に、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールをさらに含み、前記少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールが、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列と、ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列とを含み、前記第２のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成する前記ポリヌクレオチド配列が、５’→３’方向に、前記第１のリンカー－ネオエピトープモジュールの前記ネオエピトープをコードする前記ポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にあり、前記第１のリンカー－エピトープモジュールの前記ネオエピトープが、前記第２のリンカー－エピトープモジュールの前記ネオエピトープとは異なる、請求項２８～３０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項32】

前記ＲＮＡ分子が５のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記５のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項３１に記載のシステム。

【請求項33】

前記ＲＮＡ分子が１０のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記１０のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項３１に記載のシステム。

【請求項34】

前記ＲＮＡ分子が２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記２０のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項３１に記載のシステム。

【請求項35】

前記ＲＮＡ分子が、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記アミノ酸リンカーをコードする前記第２のポリヌクレオチド配列が、３’方向に最も遠位にあるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にある、請求項２８～３４のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項36】

前記５’キャップが、構造：

のＤ１ジアステレオ異性体を含む、請求項２８～３５のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項37】

前記５’ＵＴＲが、配列ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）を含む、請求項２８～３６のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項38】

前記５’ＵＴＲが、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む、請求項２８～３７のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項39】

前記分泌シグナルペプチドが、アミノ酸配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む、請求項２８～３８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項40】

前記分泌シグナルペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む、請求項２８～３８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項41】

前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部が、アミノ酸配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む、請求項２８～４０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項42】

前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通ドメインおよび前記細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む、請求項２８～４０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項43】

前記ＡＥＳ ｍＲＮＡの前記３’非翻訳領域が、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む、請求項２８～４２のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項44】

前記ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの前記非コードＲＮＡが、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む、請求項２８～４３のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項45】

前記３’ＵＴＲが、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む、請求項２８～４４のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項46】

前記ポリ（Ａ）配列が、１２０のアデニンヌクレオチドを含む、請求項２８～４５のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項47】

前記ＲＮＡが、５’→３’方向に、
ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）と、
前記腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、
ポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）と、
を含むＲＮＡ分子を含む、請求項２０に記載のシステム。

【請求項48】

蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法であって、
少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、
少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、
前記チュービングの第１の部分に流体接続され、かつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、前記チュービングの第１の部分における前記第１の組成物の流体流中の脈流を減衰させることおよび前記チュービングの第２の部分における前記第２の組成物の流体流中の脈流を減衰させることと、
を含む、方法。

【請求項49】

前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、前記チュービングの第１の部分からの前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の組成物とを混合することをさらに含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記第１の組成物と前記第２の組成物とを含有する混合物を、前記混合物に流体的に接続された混合物容器中に堆積させることをさらに含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記第１の組成物または前記第２の組成物が、核酸、１つ以上の脂質、１つ以上のタンパク質、または緩衝剤を含む、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記第１の組成物が核酸を含み、前記第２の組成物が１つ以上の脂質を含む、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記第１の組成物がＲＮＡを含み、前記第２の組成物が１つ以上の脂質を含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記ＲＮＡが、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１０～２０のネオエピトープをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記ＲＮＡが、リポプレックスナノ粒子またはリポソームに配合される、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記リポプレックスナノ粒子またはリポソームが、前記ＲＮＡを封入する多層構造を形成する１つ以上の脂質を含む、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記１つ以上の脂質が、少なくとも１つのカチオン性脂質および少なくとも１つのヘルパー脂質を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項58】

前記１つ以上の脂質が、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項59】

生理的ｐＨにおいて、前記リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比が１．３：２（０．６５）である、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記ＲＮＡが、５’→３’方向に、
（１）５’キャップと、
（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、
（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、
（４）腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する前記１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、
（５）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列と、
（６）３’ＵＴＲであって、
（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片と、
（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片と、
を含む、３’ＵＴＲと、
（７）ポリ（Ａ）配列と、
を含むＲＮＡ分子を含む、請求項５３～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記ＲＮＡ分子が、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記アミノ酸リンカーをコードする前記ポリヌクレオチド配列および前記１つ以上のネオエピトープの第１をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成し、前記第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成する前記ポリヌクレオチド配列が、５’→３’方向に、前記分泌シグナルペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にある、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記アミノ酸リンカーが、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記アミノ酸リンカーをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記ＲＮＡ分子が、５’→３’方向に、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールをさらに含み、前記少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールが、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列と、ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列とを含み、前記第２のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成する前記ポリヌクレオチド配列が、５’→３’方向に、前記第１のリンカー－ネオエピトープモジュールの前記ネオエピトープをコードする前記ポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にあり、前記第１のリンカー－エピトープモジュールの前記ネオエピトープが、前記第２のリンカー－エピトープモジュールの前記ネオエピトープとは異なる、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記ＲＮＡ分子が５のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記５のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記ＲＮＡ分子が１０のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記１０のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項６４に記載の方法。

【請求項67】

前記ＲＮＡ分子が２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、前記２０のリンカー－エピトープモジュールがそれぞれ異なるネオエピトープをコードする、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記ＲＮＡ分子が、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記アミノ酸リンカーをコードする前記第２のポリヌクレオチド配列が、３’方向に最も遠位にあるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列との間にある、請求項６１～６７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

前記５’キャップが、構造：

のＤ１ジアステレオ異性体を含む、請求項６１～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

前記５’ＵＴＲが、配列ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）を含む、請求項６１～６９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記５’ＵＴＲが、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む、請求項６１～７０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

前記分泌シグナルペプチドが、アミノ酸配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む、請求項６１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

前記分泌シグナルペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む、請求項６１～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部が、アミノ酸配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む、請求項６１～７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記ＭＨＣ分子の前記膜貫通および細胞質ドメインの前記少なくとも一部をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む、請求項６１～７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記ＡＥＳ ｍＲＮＡの前記３’非翻訳領域が、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む、請求項６１～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

前記ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの前記非コードＲＮＡが、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む、請求項６１～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

前記３’ＵＴＲが、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む、請求項６１～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記ポリ（Ａ）配列が、１２０のアデニンヌクレオチドを含む、請求項６１～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記ＲＮＡが、５’→３’方向に、
ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）と、
前記腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する前記１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、
ポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）と、
を含むＲＮＡ分子を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項81】

蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法であって、
第１の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、
第２の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、
前記チュービングの第１の部分に流体的に接続され、かつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、前記チュービングの第１の部分における前記第１の組成物の流体流中の脈流を減衰させることおよび前記チュービングの第２の部分における前記第２の組成物の流体流中の脈流を減衰させることであって、前記減衰装置の後ろの前記チュービングの第１の部分における前記第１の流量の流量脈動のレベル（ＬｏＰ）が１０未満であり、前記減衰装置の後ろの前記チュービングの第２の部分における第２の流量の流量脈動のレベル（ＬｏＰ）が１０未満である、減衰させることと、
を含む、方法。

【請求項82】

核酸および１つ以上の脂質を含む薬学的組成物を製造するための方法であって、
第１の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から核酸を含む第１の組成物を圧送することと、
第２の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から１つ以上の脂質を含む第２の組成物を圧送することと、
前記チュービングの第１の部分に流体的に接続され、かつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、前記チュービングの第１の部分における前記第１の組成物の流体流中の脈流を減衰させることおよび前記チュービングの第２の部分における前記第２の組成物の流体流中の脈流を減衰させることと、
前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、前記チュービングの第１の部分からの前記核酸を含む前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記１つ以上の脂質を含む前記第２の組成物とを混合することと、
前記核酸および前記１つ以上の脂質を含む組成物を、前記混合物に流体的に接続された容器中に堆積させることと、
を含む、方法。

【請求項83】

前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分が、同じ蠕動式ポンプのポンプヘッドに接続されるように構成される、請求項１～８２のいずれか一項に記載のチュービングキット、システムまたは方法。

【請求項84】

前記チュービングの第１の部分、前記チュービングの第２の部分、前記減衰装置、前記混合装置および／または前記混合物容器が使い捨て材料で構成される、請求項１～８３のいずれか一項に記載のチュービングキット、システムまたは方法。

【請求項85】

前記チュービングキットもしくはシステムが無菌の（ａｅｓｐｅｔｉｃ）クローズドチュービングキットもしくはシステムであるか、または前記方法が無菌のクローズドシステム内で行われることをさらに含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のチュービングキット、システムまたは方法。

【請求項86】

混合物を形成するためのチュービングキットであって、
第１の組成物を収容する第１の容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、
第２の組成物を収容する第２の容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、
前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置と、
前記流体減衰装置から下流で前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置であって、前記チュービングの第１の部分からの前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の組成物とを混合するように構成された混合装置と、
前記混合装置に流体的に接続された混合物容器であって、前記混合装置からの混合された前記第１の組成物および第２の組成物を収集するように構成された混合物容器と、
を備え、
前記チュービングの第１の部分は、前記第１の容器から前記混合物容器に前記第１の組成物を圧送するための、前記チュービング減衰装置の上流の第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第２の部分は、前記第２の容器から前記混合物容器に前記第２の組成物を圧送するための、前記チュービング減衰装置の上流の第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、
チュービングキット。

【請求項87】

薬学的組成物または薬学的組成物の混合物を形成するためのシステムであって、
第１の薬学的組成物を収容する第１の容器と、
第２の薬学的組成物を収容する第２の容器と、
前記第１の容器に流体的に接続されたチュービングの第１の部分と、
前記第２の容器に流体的に接続されたチュービングの第２の部分と、
前記第１の容器から前記第１の薬学的組成物を圧送するための、前記チュービングの第１の部分に接続された第１の蠕動式ポンプヘッドと、前記第２の容器から前記第２の薬学的組成物を圧送するための、前記チュービングの第２の部分に接続された第２の蠕動式ポンプヘッドとを備える蠕動式ポンプと、
前記蠕動式ポンプから下流で前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置と、
前記流体減衰装置から下流で前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置であって、前記チュービングの第１の部分からの前記第１の薬学的組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の薬学的組成物とを混合するように構成された混合装置と、
前記混合装置に流体的に接続された混合物容器であって、前記混合装置からの混合された前記第１の薬学的組成物および第２の薬学的組成物を収集するように構成された混合物容器と、
を備える、システム。

【請求項88】

蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法であって、
第１の蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、
第２の蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、
前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置を使用して、前記第１の蠕動式ポンプヘッドの下流の前記チュービングの第１の部分における前記第１の組成物の流体流中の脈動を減衰させることおよび前記第２の蠕動式ポンプヘッドの下流の前記チュービングの第２の部分における前記第２の組成物の流体流中の脈動を減衰させることと、
前記流体減衰装置から下流で前記チュービングの第１の部分および前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、前記チュービングの第１の部分からの前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の組成物とを混合することと、
混合された第１の組成物および第２の組成物を含む組成物を、前記混合装置に流体的に接続された容器中に堆積させることと、
を含む、方法。

【請求項89】

混合物を形成するためのチュービングキットであって、
第１の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、
第２の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、
前記チュービングの第１の部分に流体的に接続された第１の減衰装置と、
前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された第２の減衰装置と、
前記チュービングの第１の部分からの前記第１の組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の組成物を混合するための混合装置と、
前記混合装置から混合された前記第１の組成物および第２の組成物を収集するための混合物容器と、
を備え、
前記チュービングの第１の部分は、前記第１の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第１の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第２の部分は、前記第２の組成物を収容する前記容器から前記混合物容器に前記第２の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、チュービングキット。

【請求項90】

前記第１の減衰装置および／または前記第２の減衰装置が、封入されたある体積の流体を含む、請求項８９に記載のチュービングキット。

【請求項91】

前記流体が空気である、請求項９０に記載のチュービングキット。

【請求項92】

前記第１の減衰装置および／または前記第２の減衰装置が、チュービング減衰装置である、請求項８９～９１のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項93】

前記減衰装置が、柔軟な膜を備える、請求項８９に記載のチュービングキット。

【請求項94】

前記第１の減衰装置と、前記チュービングの第１の部分と、チュービングの第１の混合装置入力部分とを流体的に接続する第１のＴ字型コネクタをさらに備え、前記チュービングの第１の混合装置入力部分が前記混合装置に流体的に接続する、請求項８９～９３のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項95】

前記第２の減衰装置と、前記チュービングの第２の部分と、チュービングの第２の混合装置入力部分とを流体的に接続する第２のＴ字型コネクタをさらに備え、前記チュービングの第２の混合装置入力部分が前記混合装置に流体的に接続する、請求項９４に記載のチュービングキット。

【請求項96】

前記チュービングの第１の部分が、チュービングの第１のセグメントとチュービングの第２のセグメントとを備え、前記チュービングの第１のセグメントおよび前記チュービングの第２のセグメントは、並列して流体的に接続される、請求項８９～９５のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項97】

前記チュービングの第１のセグメントが、第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第２のセグメントが、第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、請求項９６に記載のチュービングキット。

【請求項98】

前記チュービングの第２の部分が、チュービングの第３のセグメントとチュービングの第４のセグメントとを備え、前記チュービングの第３の部分および前記チュービングの第４の部分は、並列して流体的に接続されている、請求項８９～９７のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項99】

前記チュービングの第３のセグメントが、第３の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、前記チュービングの第４のセグメントが、第４の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている、請求項９８に記載のチュービングキット。

【請求項100】

前記混合装置が、前記チュービングの第１の部分に流体的に接続された入力部と、前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された入力部と、前記混合物容器に流体的に接続された出力部とを備える、請求項８９～９９のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項101】

前記混合装置が、Ｙ字型コネクタ、らせん型混合装置または静的混合装置を備える、請求項８９～１００のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項102】

前記チュービングの第１の部分を前記第１の減衰装置および前記混合装置に流体的に接続する第１の減衰装置コネクタと、前記チュービングの第２の部分を前記第２の減衰装置および前記混合装置に流体的に接続する第２の減衰装置コネクタとをさらに備える、請求項８９～１０１のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項103】

前記混合物容器が、袋、器または瓶である、請求項８９～１０２のいずれか一項に記載のチュービングキット。

【請求項104】

流体ポンプ用の脈動減衰装置であって、
流体入口および流体出口を備えるバイオプロセシングバッグであって、前記流体入口は流体ポンプの下流に流体的に接続されるように構成されたバイオプロセシングバッグと、
前記バイオプロセシングバッグを受容するように構成された筐体であって、前記筐体は、基部と、前記バイオプロセシングバッグのための空洞を形成する複数の側壁とを備え、少なくとも１つの側壁が、前記バイオプロセシングバッグの前記流体入口および流体出口へのアクセスを提供するように構成された１つ以上の切り込みを備える、筐体と、
前記複数の側壁に取り付けられ、前記筐体を閉鎖するように構成された筐体蓋と、
を備える、
脈動減衰装置。

【請求項105】

前記バイオプロセシングバッグが気体入口を備え、前記気体入口は気体源に流体的に接続されるように構成されている、請求項１０４に記載の脈動減衰装置。

【請求項106】

前記１つ以上の切り込みが、前記バイオプロセシングバッグの前記気体入口へのアクセスを提供するように構成されている、請求項１０５に記載の脈動減衰装置。

【請求項107】

筐体の前記基部が窓を備える、請求項１０４～１０６のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【請求項108】

前記窓が、前記筐体の前記基部中の開口部または前記筐体の前記基部中の透明な材料を備える、請求項１０７に記載の脈動減衰装置。

【請求項109】

前記筐体蓋が窓を備える、請求項１０４～１０９のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【請求項110】

前記窓が、前記筐体蓋中の開口部または前記筐体蓋中の透明な材料を備える、請求項１０９に記載の脈動減衰装置。

【請求項111】

筐体の側壁および／または前記筐体蓋の少なくとも１つに接続されるように構成された前板をさらに備え、前記前板は、前記流体入口および流体出口を受容するように構成された少なくとも１つの開口部を備える、請求項１０４～１１０のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【請求項112】

前記流体ポンプが循環ポンプである、請求項１０４～１１１のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【請求項113】

前記循環ポンプが蠕動式ポンプである、請求項１１２に記載の脈動減衰装置。

【請求項114】

前記流体出口が、流体貯蔵容器に流体的に接続されるように構成されている、請求項１０４～１１３のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【請求項115】

前記流体出口が、逆止め弁を備える、請求項１０４～１１４のいずれか一項に記載の脈動減衰装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる２０２０年９月８日に出願された米国仮特許出願第６３／０７５，７２３号に対する優先権を主張する。

【0002】

配列表
本出願は配列表を含み、ＡＳＣＩＩテキストファイル上の以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる：配列表（ファイル名：１４６３９２０４８１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年９月３日、サイズ：９，５４９バイト）のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）。

【0003】

分野
本開示は、薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するための方法およびシステムに関する。いくつかの態様において、薬学的混合物を形成するための蠕動式ポンプとともに使用するためのチュービングキットが提供される。より具体的には、本開示は、脂質（例えば、リポソームまたはリポプレックス）およびＲＮＡを含む薬学的組成物および製剤を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するために、蠕動式ポンプシステムからの流量の脈動を低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプシステムに関する。

【背景技術】

【0004】

背景
蠕動式ポンプは、様々な流体を圧送するために使用することができる容積移送式ポンプである。典型的には、蠕動式ポンプは、ケーシングの内部に装着または接続されたチューブと、チューブを圧縮するロータとを備えた循環ポンプケーシングを含む。ロータは、ロータの外周に取り付けられた複数のローラを含む。ロータが回転すると、チューブの圧縮された部分が塞がれ、それによってチューブを通して強制的に流体を移動させる。回転ごとに一定量の流体が送り出されるので、送り出される流体の量を大まかに測定するために蠕動式ポンプを使用することができる。

【0005】

蠕動式ポンプの１つの主な欠点は、蠕動式ポンプが不均一な流れを提供し得ることである。ポンプケーシング内のチュービングを圧縮するためにローラを使用するため、蠕動式ポンプからの流量は脈動または振動する。したがって、滑らかで一貫した流れが必要とされる場合、蠕動式ポンプはあまり適していない。

【0006】

ＤＮＡおよびＲＮＡのような核酸は、様々な治療的処置のために関心が高まっている。様々な報告は、核酸の投与のためのアプローチを記載している。例えば、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられる米国特許第１０４８５８８４号を参照されたい。１つのアプローチは、特定の細胞内へのＤＮＡまたはＲＮＡの細胞取り込みを促進するために、（ＤＮＡ／ＲＮＡ濃縮を誘導する）カチオン性リポソームの能力を活用することである。カチオン性リポソームは、通常、ＤＯＴＭＡおよび／またはＤＯＴＡＰなどのカチオン性脂質と、ＤＯＰＥなどの１つ以上のヘルパー脂質とからなる。いわゆる「リポプレックス」は、カチオン性（正に帯電した）リポソームおよびアニオン性（負に帯電した）核酸から形成されることができる。リポプレックスは、正に帯電したリポソームと負に帯電した核酸との間での静電的相互作用によって駆動されて、核酸をリポソームと混合することによって自発的に形成し得る。したがって、ＲＮＡおよび脂質（例えば、リポソーム）を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するための方法およびシステムが必要とされる。

【発明の概要】

【0007】

概要
本明細書では、システム内の蠕動式ポンプからの流量の脈動または振動を低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプシステムが提供される。いくつかの態様において、これらのシステムは、例えば、ＲＮＡとリポプレックスまたはリポソームを含む脂質とを含む組成物および製剤を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するのに有用である。上で説明したように、蠕動式ポンプからの流量は、蠕動式ポンプの性質のために経時的に脈動または振動し得る。したがって、蠕動式ポンプは、滑らかなまたは一貫した流量が必要とされるある種の用途には適していないことがあり得る。そのような使用の例は、薬学的組成物を転位させるために蠕動式ポンプを使用する場合であり得る。これらの薬学的組成物は、繊細で高価な成分を含み得る。さらに、薬学的組成物中の所定の成分の量は、その薬学的組成物がその意図された用途に関して有効かつ安全であるかどうかにとって極めて重要であり得る。例えば、ＲＮＡおよび脂質（リポプレックスまたはリポソームなど）を含む薬学的組成物および製剤は、（１）混合に際して薬学的組成物が形成されるときの核酸および脂質／リポソームの動的比率ならびに；（２）混合中に使用される平均流量に影響を受ける。核酸の動的流量が操作中に動的に変化すると、混合操作全体を通じて脂質／リポソームに対する核酸の比が変化し、その結果、得られるリポプレックスの品質属性（サイズ、分子量分散度、表面電荷など）の不均一性がより大きくなる。核酸およびリポソーム／脂質（例えば、ＲＮＡおよび脂質を含む）を混合して、ＲＮＡワクチンの製造において有用なリポプレックスを形成するために、シリンジポンプを使用することができる（例えば、Ｏｂｅｒｌｉ Ｍ．Ａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０１７，１７，１３２６－１３３５、またはＫａｕｆｆｍａｎ，Ｋ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０１５，１５，７３００－７３０６；国際公開第２０１９０７７０５３号も参照）。シリンジポンプは、比較的低い脈動を有する流れを生成し、２つ以上の溶液の混合比を良好に制御することができる。しかしながら、シリンジバレル内に流体を充填するためにシリンジプランジャが引っ張られる前にシリンジバレルの内側が周囲環境に曝されているので、通常のシリンジは、グレードＡのクリーンルーム環境の外側では、閉鎖された無菌の境界を提供しない。これは、無菌グレードのフィルタを通過するにはリポソームおよび／またはリポプレックスが大きすぎ、有意な分解なしに最終的に滅菌することができない系にとって特に重大である。対照的に、蠕動式ポンプは、無菌処理および滅菌保証を維持するためにグレードＡのクリーンルーム環境での操作を必要としない完全に閉じた流体経路で使用することができる。グレードＡのクリーンルーム環境は維持に費用がかかり、時間のかかる環境監視制御を必要とするため、これは大きな利点である。したがって、本出願人らは、例えば、ＲＮＡとリポプレックスまたはリポソームを含む脂質とを含む組成物および製剤、例えばＲＮＡワクチンなどの薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するのに有用な、蠕動式ポンプからの脈動または振動を劇的に低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプを使用する方法およびシステムを発見した。本明細書に開示される減衰装置は蠕動式ポンプと組み合わせて論述されるが、減衰装置は、その作用機構（例えば、膜、ピストンなどを含む）の一部として脈動を生成する任意のポンプシステムと組み合わせることができるので、ポンプシステムは必ずしも蠕動式ポンプシステムである必要はない。例えば、シリンジポンプシステムは、本明細書に開示される減衰装置を使用することができる。いくつかの態様において、減衰装置を含む蠕動式ポンプを使用するこれらの方法およびシステムは、例えばＲＮＡワクチンを含む、ＲＮＡおよび脂質（リポプレックスまたはリポソームを含む）を含む薬学的組成物を生産し、混合し、移送し、および／または製造するために円滑なまたは一貫した流量を確保するのに適している。

【0008】

いくつかの態様において、混合物を形成するためのチュービングキットは、第１の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、第２の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、チュービングの第１の部分に流体的に接続されかつチュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置と、チュービングの第１の部分からの第１の組成物とチュービングの第２の部分からの第２の組成物を混合するための混合装置と、混合装置から混合された第１の組成物および第２の組成物を収集するための混合物容器と、を含み、チュービングの第１の部分は、第１の組成物を収容する容器から混合物容器に第１の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第２の部分は、第２の組成物を収容する容器から混合物容器に第２の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、減衰装置は、封入されたある体積の流体を含む。いくつかの態様において、流体は空気である。いくつかの態様において、減衰装置はチュービング減衰装置である。いくつかの態様において、減衰装置は柔軟な膜を備える。いくつかの態様において、チュービングキットは、減衰装置と、チュービングの第１の部分と、チュービングの第１の混合装置入力部分とを流体的に接続する第１のＴ字型コネクタを含み、チュービングの第１の混合装置入力部分は混合装置に流体的に接続する。いくつかの態様において、チュービングキットは、減衰装置と、チュービングの第２の部分と、チュービングの第２の混合装置入力部分とを流体的に接続する第２のＴ字型コネクタを含み、チュービングの第２の混合装置入力部分は混合装置に流体的に接続する。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分は、チュービングの第１のセグメントとチュービングの第２のセグメントとを備え、チュービングの第１のセグメントおよびチュービングの第２のセグメントは、並列して流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービングの第１のセグメントは、第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第２のセグメントは、第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分は、チュービングの第３のセグメントとチュービングの第４のセグメントとを備え、チュービングの第３の部分およびチュービングの第４の部分は、並列して流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービングの第３のセグメントは、第３の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第４のセグメントは、第４の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、混合装置は、チュービングの第１の部分に流体的に接続された入力部と、チュービングの第２の部分に流体的に接続された入力部と、混合物容器に流体的に接続された出力部とを備える。いくつかの態様において、混合装置は、Ｙ字型コネクタ、らせん型混合装置または静的混合装置を備える。いくつかの態様において、チュービングキットは、チュービングの第１の部分を減衰装置および混合装置に流体的に接続する第１の減衰装置コネクタと、チュービングの第２の部分を減衰装置および混合装置に流体的に接続する第２の減衰装置コネクタとを含む。いくつかの態様において、混合物容器は袋、器または瓶である。

【0009】

いくつかの態様において、薬学的組成物または薬学的組成物の混合物を形成するためのシステムは、第１の薬学的組成物を収容する第１の容器と、第２の薬学的組成物を収容する第２の容器と、前記第１の容器に流体的に接続されたチュービングの第１の部分と、前記第２の容器に流体的に接続されたチュービングの第２の部分と、前記チュービングの第１の部分に流体的に接続されかつ前記チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置と、前記チュービングの第１の部分からの前記第１の薬学的組成物と前記チュービングの第２の部分からの前記第２の薬学的組成物を混合するための混合装置と、前記混合装置から前記混合された第１の薬学的組成物および第２の薬学的組成物を収集するための混合物容器と、を含む。いくつかの態様において、システムは、第１の組成物を収容する容器から混合物容器に第１の組成物を圧送するためにチュービングの第１の部分に接続された少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドと、第１の組成物を収容する容器から混合物容器に第２の組成物を圧送するためにチュービングの第２の部分に接続された少なくとも１つの蠕動式ポンプとを含む。いくつかの態様において、第１の組成物または第２の組成物は、核酸、１種以上の脂質、１種以上のタンパク質、または緩衝剤を含む。いくつかの態様において、第１の組成物は核酸を含み、第２の組成物は１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、第１の組成物はＲＮＡを含み、第２の組成物は１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡは、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１０～２０のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡはリポプレックスナノ粒子またはリポソームに配合される。いくつかの態様において、リポプレックスナノ粒子またはリポソームは、ＲＮＡを封入する多層構造を形成する１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、１種以上の脂質は、少なくとも１種のカチオン性脂質および少なくとも１種のヘルパー脂質を含む。いくつかの態様において、１種以上の脂質は、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は１．３：２（０．６５）である。いくつかの態様において、ＲＮＡは、５’→３’方向に、（１）５’キャップと、（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、（４）腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、（５）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列と、（６）３’ＵＴＲであって、（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片と、（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片と、を含む３’ＵＴＲと、（７）ポリ（Ａ）配列とを含むＲＮＡ分子を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーおよび１つ以上のネオエピトープの第１をコードするポリヌクレオチド配列は、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成し、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーは、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、５’→３’方向に、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールをさらに含み、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールは、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列と、ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列とを含み、第２のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールのネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にあり、第１のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープは、第２のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープとは異なる。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は５つのリンカー－エピトープモジュールを含み、５つのリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は１０のリンカー－エピトープモジュールを含み、１０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、２０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列は、３’方向に最も遠位にあるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。いくつかの態様において、５’キャップは、以下の構造のＤ１ジアステレオ異性体を含む：

いくつかの態様において、５’ＵＴＲは、配列ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）を含む。いくつかの態様において、５’ＵＴＲは、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む。いくつかの態様において、分泌シグナルペプチドは、アミノ酸配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む。いくつかの態様において、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部は、アミノ酸配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む。いくつかの態様において、ＡＥＳ ｍＲＮＡの３’非翻訳領域は、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む。いくつかの態様において、ミトコンドリアによりコードされる１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡは、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む。いくつかの態様において、３’ＵＴＲは、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む。いくつかの態様において、ポリ（Ａ）配列は１２０のアデニンヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡは、５’→３’方向に、ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）；腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列；およびポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）を含むＲＮＡ分子を含む。
いくつかの態様において、蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法は、少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、チュービングの第１の部分に流体接続されかつチュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、チュービングの第１の部分における第１の組成物の流体流中の脈動を減衰させることおよびチュービングの第２の部分における第２の組成物の流体流中の脈動を減衰させることと、を含む。いくつかの態様において、前記方法は、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、チュービングの第１の部分からの第１の組成物とチュービングの第２の部分からの第２の組成物とを混合することを含む。いくつかの態様において、前記方法は、第１の組成物と第２の組成物とを収容する混合物を、該混合物に流体的に接続された混合物容器中に堆積させることを含む。いくつかの態様において、第１の組成物または第２の組成物は、核酸、１種以上の脂質、１種以上のタンパク質、または緩衝液を含む。いくつかの態様において、第１の組成物は核酸を含み、第２の組成物は１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、第１の組成物はＲＮＡを含み、第２の組成物は１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡは、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１０～２０のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡはリポプレックスナノ粒子またはリポソームに配合される。いくつかの態様において、リポプレックスナノ粒子またはリポソームは、ＲＮＡを封入する多層構造を形成する１種以上の脂質を含む。いくつかの態様において、１種以上の脂質は、少なくとも１種のカチオン性脂質および少なくとも１種のヘルパー脂質を含む。いくつかの態様において、１種以上の脂質は、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は１．３：２（０．６５）である。いくつかの態様において、ＲＮＡは、５’→３’方向に、（１）５’キャップと、（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、
（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、（４）腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、（５）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列と、（６）３’ＵＴＲであって、（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片と、（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片と、を含む３’ＵＴＲと、（７）ポリ（Ａ）配列とを含むＲＮＡ分子を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーおよび１つ以上のネオエピトープの第１をコードするポリヌクレオチド配列は、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成し、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーは、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、５’→３’方向に、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールをさらに含み、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールは、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列と、ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列とを含み、第２のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールのネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にあり、第１のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープは、第２のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープとは異なる。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は５つのリンカー－エピトープモジュールを含み、５つのリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は１０のリンカー－エピトープモジュールを含み、１０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、２０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列は、３’方向に最も遠位にあるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。いくつかの態様において、５’キャップは、以下の構造のＤ１ジアステレオ異性体を含む：

いくつかの態様において、５’ＵＴＲは、配列ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）を含む。いくつかの態様において、５’ＵＴＲは、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む。いくつかの態様において、分泌シグナルペプチドは、アミノ酸配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む。いくつかの態様において、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部は、アミノ酸配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む。いくつかの態様において、ＡＥＳ ｍＲＮＡの３’非翻訳領域は、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む。いくつかの態様において、ミトコンドリアによりコードされる１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡは、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む。いくつかの態様において、３’ＵＴＲは、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む。いくつかの態様において、ポリ（Ａ）配列は１２０のアデニンヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡは、５’→３’方向に、ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）；腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列；およびポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）を含むＲＮＡ分子を含む。

【0010】

いくつかの態様において、蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法は、第１の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、第２の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、チュービングの第１の部分に流体的に接続されかつチュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、チュービングの第１の部分における第１の組成物の流体流中の脈動を減衰させることおよびチュービングの第２の部分における第２の組成物の流体流中の脈動を減衰させることであって、減衰装置の後ろのチュービングの第１の部分における第１の流量の流量脈動のレベル（ＬｏＰ）が１０未満であり、減衰装置の後ろのチュービングの第２の部分における第２の流量の流量脈動のレベル（ＬｏＰ）が１０未満である、減衰させることと、を含む。

【0011】

いくつかの態様において、核酸および１種以上の脂質を含む薬学的組成物を製造するための方法は、第１の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から核酸を含む第１の組成物を圧送することと、第２の流量で、少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から１種以上の脂質を含む第２の組成物を圧送することと、チュービングの第１の部分に流体的に接続されかつチュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を使用して、チュービングの第１の部分における第１の組成物の流体流中の脈動を減衰させることおよびチュービングの第２の部分における第２の組成物の流体流中の脈動を減衰させることと、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、チュービングの第１の部分からの核酸を含む第１の組成物とチュービングの第２の部分からの１種以上の脂質を含む第２の組成物とを混合することと、核酸および１種以上の脂質を含む組成物を、混合物に流体的に接続された容器中に堆積させることと、を含む。

【0012】

いくつかの態様において、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分は、同じ蠕動式ポンプのポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分、チュービングの第２の部分、減衰装置、混合装置および／または混合物容器は使い捨て材料で構成されている。チュービングキットまたはシステムは、無菌の（ａｅｓｐｅｔｉｃ）クローズドチュービングキットもしくはシステムであるか、または前記方法は無菌のクローズドシステム内で行われる。

【0013】

いくつかの態様において、混合物を形成するためのチュービングキットは、第１の組成物を収容する第１の容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、第２の組成物を収容する第２の容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置と、流体減衰装置から下流でチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置であって、チュービングの第１の部分からの第１の組成物とチュービングの第２の部分からの第２の組成物とを混合するように構成された混合装置と、混合装置に流体的に接続された混合物容器であって、混合装置からの混合された第１の組成物および第２の組成物を収集するように構成された混合物容器と、を含み、チュービングの第１の部分は、第１の容器から混合物容器に第１の組成物を圧送するための、チュービング減衰装置の上流の第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第２の部分は、第２の容器から混合物容器に第２の組成物を圧送するための、チュービング減衰装置の上流の第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。

【0014】

いくつかの態様において、薬学的組成物または薬学的組成物の混合物を形成するためのシステムは、第１の薬学的組成物を収容する第１の容器と、第２の薬学的組成物を収容する第２の容器と、第１の容器に流体的に接続されたチュービングの第１の部分と、第２の容器に流体的に接続されたチュービングの第２の部分と、第１の容器から第１の薬学的組成物を圧送するための、チュービングの第１の部分に接続された第１の蠕動式ポンプヘッドと、第２の容器から第２の薬学的組成物を圧送するための、チュービングの第２の部分に接続された第２の蠕動式ポンプヘッドとを備える蠕動式ポンプと、蠕動式ポンプから下流でチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置と、流体減衰装置から下流でチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置であって、チュービングの第１の部分からの第１の薬学的組成物とチュービングの第２の部分からの第２の薬学的組成物とを混合するように構成された混合装置と、混合装置に流体的に接続された混合物容器であって、混合装置からの混合された第１の薬学的組成物および第２の薬学的組成物を収集するように構成された混合物容器と、を含む。

【0015】

いくつかの態様において、蠕動式ポンプを使用して薬学的組成物を移送するための方法は、第１の蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第１の部分を通して第１の容器から第１の組成物を圧送することと、第２の蠕動式ポンプヘッドを使用して、チュービングの第２の部分を通して第２の容器から第２の組成物を圧送することと、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された、封入されたある体積の流体を含むチュービング減衰装置を使用して、第１の蠕動式ポンプヘッドの下流のチュービングの第１の部分における第１の組成物の流体流中の脈動を減衰させることおよび第２の蠕動式ポンプヘッドの下流のチュービングの第２の部分における第２の組成物の流体流中の脈動を減衰させることと、流体減衰装置から下流でチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に流体的に接続された混合装置内で、チュービングの第１の部分からの第１の組成物とチュービングの第２の部分からの第２の組成物とを混合することと、混合された第１および第２の組成物を含む組成物を、混合装置に流体的に接続された容器中に堆積させることと、を含む。

【0016】

いくつかの態様において、混合物を形成するためのチュービングキットは、第１の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分と、第２の組成物を収容する容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分と、チュービングの第１の部分に流体的に接続された第１の減衰装置と、チュービングの第２の部分に流体的に接続された第２の減衰装置と、チュービングの第１の部分からの第１の組成物とチュービングの第２の部分からの第２の組成物を混合するための混合装置と、混合装置から混合された第１の組成物および第２の組成物を収集するための混合物容器と、を含み、チュービングの第１の部分は、第１の組成物を収容する容器から混合物容器に第１の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第２の部分は、第２の組成物を収容する容器から混合物容器に第２の組成物を圧送するための少なくとも１つの蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、第１および／または第２の減衰装置は、封入されたある体積の流体を含む。いくつかの態様において、流体は空気である。いくつかの態様において、第１および／または第２の減衰装置はチュービング減衰装置である。いくつかの態様において、減衰装置は柔軟な膜を備える。いくつかの態様において、チュービングキットは、第１の減衰装置と、チュービングの第１の部分と、チュービングの第１の混合装置入力部分とを流体的に接続する第１のＴ字型コネクタを含み、チュービングの第１の混合装置入力部分は混合装置に流体的に接続する。いくつかの態様において、チュービングキットは、第２の減衰装置と、チュービングの第２の部分と、チュービングの第２の混合装置入力部分とを流体的に接続する第２のＴ字型コネクタを含み、チュービングの第２の混合装置入力部分は混合装置に流体的に接続する。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分は、チュービングの第１のセグメントとチュービングの第２のセグメントとを備え、チュービングの第１のセグメントおよびチュービングの第２のセグメントは、並列して流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービングの第１のセグメントは、第１の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第２のセグメントは、第２の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分は、チュービングの第３のセグメントとチュービングの第４のセグメントとを備え、チュービングの第３の部分およびチュービングの第４の部分は、並列して流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービングの第３のセグメントは、第３の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されており、チュービングの第４のセグメントは、第４の蠕動式ポンプヘッドに接続されるように構成されている。いくつかの態様において、混合装置は、チュービングの第１の部分に流体的に接続された入力部と、チュービングの第２の部分に流体的に接続された入力部と、混合物容器に流体的に接続された出力部とを備える。いくつかの態様において、混合装置は、Ｙ字型コネクタ、らせん型混合装置または静的混合装置を備える。いくつかの態様において、チュービングキットは、チュービングの第１の部分を第１の減衰装置および混合装置に流体的に接続する第１の減衰装置コネクタと、チュービングの第２の部分を第２の減衰装置および混合装置に流体的に接続する第２の減衰装置コネクタとを含む。いくつかの態様において、混合物容器は袋、器または瓶である。

【0017】

いくつかの態様において、流体ポンプ用の脈動減衰装置は、流体入口および流体出口を備えるバイオプロセシングバッグであって、流体入口は流体ポンプの下流に流体的に接続されるように構成された、バイオプロセシングバッグと、バイオプロセシングバッグを受容するように構成された筐体であって、筐体は、基部と、バイオプロセシングバッグのための空洞を形成する複数の側壁とを備え、少なくとも１つの側壁が、バイオプロセシングバッグの流体入口および流体出口へのアクセスを提供するように構成された１つ以上の切り込みを備える、筐体と、複数の側壁に取り付けられ、筐体を閉鎖するように構成された筐体蓋と、を含む。いくつかの態様において、バイオプロセシングバッグは気体入口を備え、気体入口は気体源に流体的に接続されるように構成されている。いくつかの態様において、１つ以上の切り込みは、バイオプロセシングバッグの気体入口へのアクセスを提供するように構成されている。いくつかの態様において、筐体の基部は窓を備える。いくつかの態様において、窓は、筐体の基部中の開口部または筐体の底部中の透明な材料を備える。いくつかの態様において、筐体蓋は窓を備える。いくつかの態様において、窓は、筐体蓋中の開口部または筐体蓋中の透明な材料を備える。いくつかの態様において、減衰装置は、筐体の側壁および／または筐体蓋の少なくとも１つに接続されるように構成された前板を含み、前板は、流体入口および流体出口を受容するように構成された少なくとも１つの開口部を備える。いくつかの態様において、流体ポンプは循環ポンプである。いくつかの態様において、循環ポンプは蠕動式ポンプである。いくつかの態様において、流体出口は、流体貯蔵容器に流体的に接続されるように構成されている。いくつかの態様において、流体出口は逆止め弁を備える。

【0018】

さらなる利点は、以下の詳細な説明から当業者には容易に明らかになるであろう。本明細書の実施例および説明は、本質的に例示的であり、限定的ではないと見なされるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0019】

例示的な態様は、添付の図面を参照して説明される。

【0020】

【図1】図１は、本明細書に開示されるいくつかの態様による、蠕動式ポンプの流量を測定するための実験装置の一例を示す。

【0021】

【図2】図２は、実験１において達成された蠕動式ポンプを通る水の流量を示す。

【0022】

【図3】図３は、本明細書に開示されるいくつかの態様による、減衰装置を有する蠕動式ポンプの流量を測定するための実験装置の一例を示す。

【0023】

【図4】図４は、本明細書に開示される様々なＴ字型コネクタを有するシリンジ減衰装置の画像である。

【0024】

【図5】図５は、実験２において達成された蠕動式ポンプを通る流量を示す。

【0025】

【図6】図６は、実験４において達成された蠕動式ポンプを通る流量を示す。

【0026】

【図7】図７は、実験６において達成された蠕動式ポンプを通る流量を示す。

【0027】

【図8】図８は、本明細書に開示されるＴ字型コネクタを有する膜減衰装置の画像である。

【0028】

【図9】図９は、本明細書に開示されるいくつかの態様によるＴ字型コネクタチュービングコネクタの一例を示す。

【0029】

【図10】図１０は、本明細書に開示されるいくつかの態様による十字型チュービングコネクタの一例を示す。

【0030】

【図11】図１１は、本明細書に開示されるいくつかの態様による、減衰装置を有する２源の蠕動式ポンプシステムの流量を測定するための実験装置の一例を示す。

【0031】

【図12】図１２は、２つの別個の流体ラインを接続する減衰装置ループの一例を示す。

【0032】

【図13】図１３は、実験１９において達成された蠕動式ポンプシステムを通る水の流量を示す。

【0033】

【図14】図１４は、実験２０において達成された蠕動式ポンプを通る水の流量を示す。

【0034】

【図15】図１５は、本明細書に開示されるいくつかの態様によるチュービングキットの一例を示す。

【0035】

【図16】図１６は、例示的ＲＮＡ分子（すなわち、ポリネオエピトープＲＮＡ）の一般構造を示す。この図は、定常５’キャップ（β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１））、５’および３’非翻訳領域（それぞれｈＡｇ－コザックおよびＦＩ）、Ｎ末端およびＣ末端融合タグ（それぞれｓｅｃ_２．０およびＭＩＴＤ）、ならびにポリ（Ａ）尾部（Ａ１２０）ならびに、ＧＳリッチリンカーによって融合されたネオエピトープ（ｎｅｏ１～１０）をコードする腫瘍特異的配列を有するＲＮＡ薬物物質の一般構造の概略図である。

【0036】

【図17】図１７は、例示的ＲＮＡ分子（配列番号２４）の定常領域のリボヌクレオチド配列（５’→３’）である。最初の２つのＧ残基間の結合は、５’－キャッピング構造について図１８に示されるような異常な結合（５’→５’）－ｐｐ_ｓｐ－である。患者のがん特異的配列の挿入部位は、Ｃ１３１残基とＡ１３２残基との間である（太字でマークされている）。「Ｎ」は、（任意のリンカーによって分離された）１つ以上の（例えば、１～２０の）ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列の位置を指す。

【0037】

【図18】図１８は、ＲＮＡ定常領域の５’末端で使用される５’－キャッピング構造β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）（ｍ_２ ^{７・２’・Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐＧ）である。ステレオジェニックＰ中心は、「Ｄ１」異性体においてＲｐ配置である。注：β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）と基本キャップ構造ｍ^７ＧｐｐｐＧとの相違；構成要素ｍ^７ＧのＣ２’位における－ＯＣＨ３基およびβ－ホスフェートにおける非架橋酸素の硫黄による置換が赤色で示されている。ステレオジェニックＰ中心（＊で標識されている）の存在により、ホスホロチオエートキャップ類縁体β－Ｓ－ＡＲＣＡは２つのジアステレオマーとして存在する。逆相高速液体クロマトグラフィーにおける溶出順序に基づいて、これらを０１および０２と命名した。

【0038】

【図19】図１９は、本明細書で説明される実験において使用されるＨＰＰＤ装置の概略図である。

【0039】

【図20】図２０は、ガラス瓶をＨＰＰＤとして利用する実験装置を示す。

【0040】

【図21】図２１は、図２０のガラス瓶減衰装置が一定した圧力を達成するのに要する時間、およびポンプが停止した後に同じＨＰＰＤがこの取得された圧力を消失させるのに要する時間を示すグラフである。

【0041】

【図22】図２２は、一定期間にわたる様々な流量での図２０のガラス瓶減衰装置の変位を示すグラフである。

【0042】

【図23】図２３は、増大した空気ポケットサイズの関数としてのガラス瓶ＨＰＰＤ装置にわたる圧力差（ＨＰＰＤ前の圧力対ＨＰＰＤ後の圧力）を表示するグラフである。

【0043】

【図24】図２４は、実験室用フラスコをベースとしたＨＰＰＤ（左）および取り外し可能なライナーを備え、ＨＰＰＤを理論的に単回使用装置として扱うことを可能にする同じ装置（右）を示す。

【0044】

【図25】図２５は、ライナー（すなわち、ブラダー減衰装置）ありおよびなしでの、図２４のＨＰＰＤ減衰装置の効率を示すグラフである。

【0045】

【図26】図２６は、背圧が高い場合に送り出された流体の逆流洗浄が起こらないようにするために位置を高くした入口チューブと、バッグに気体クッションを事前充填して装置の呼び水効率を改善するためにガスの挿入を可能にする追加の第３の点とを含む改変されたバイオプロセシングバッグをベースとした柔軟な単回使用ＨＰＰＤデザインを示す。

【0046】

【図27】図２７は、紙箱の覆いを有するバイオプロセシングバッグ減衰装置を示す。

【0047】

【図28A】図２８Ａは、本明細書に開示されるいくつかの態様によるＨＰＰＤの分解立体図である。

【0048】

【図28B】図２８Ｂは、本明細書に開示されるいくつかの態様によるＨＰＰＤの筐体である。

【0049】

【図28C】図２８Ｃは、本明細書に開示されるいくつかの態様による使用時のＨＰＰＤである。

【0050】

【図29A】図２９Ａは、蠕動式ポンプ実験装置および流れプロファイル結果を示す。

【0051】

【図29B】図２９Ｂは、シリンジポンプ実験装置および流れプロファイル結果を示す。

【0052】

【図29C】図２９Ｃは、本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置を有する蠕動式ポンプ実験装置および流れプロファイル結果を示す。

【0053】

【図30】図３０は、市販のＣｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤを示す。

【0054】

【図31A】図３１Ａは、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤ装置の流れプロファイルを示す。

【0055】

【図31B】図３１Ｂは、本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置の流れプロファイルを示す。

【0056】

【図32】図３２は、本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置のデッドボリュームおよび増加する流量に伴う減衰装置入口での圧力を示す。

【0057】

【図33A】図３３Ａは、本明細書に開示されるように、脈動に対する１．６ｍｍの内径の影響を示す。

【0058】

【図33B】図３３Ｂは、本明細書に開示されるように、脈動に対する３．２ｍｍの内径の影響を示す。

【0059】

【図33C】図３３Ｃは、本明細書に開示されるように、脈動に対する６ｍｍの内径の影響を示す。

【0060】

【図34A】図３４Ａは、本明細書に開示されるように、脈動に対する１メートルのチュービング長の影響を示す。

【0061】

【図34B】図３４Ｂは、本明細書に開示されるように、脈動に対する２メートルのチュービング長の影響を示す。

【0062】

【図34C】図３４Ｃは、本明細書に開示されるように、脈動に対する２０メートルのチュービング長の影響を示す。

【発明を実施するための形態】

【0063】

詳細な説明
本出願人らは、蠕動式ポンプからの脈動または振動を劇的に低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプを使用する方法およびシステムを発見した。本明細書に開示される方法およびシステムは、減衰を達成するために必要な部品の数を最小限に抑えることができる。さらに、本明細書に開示されているキットおよびシステムは、単回使用の使い捨てキットおよびシステムであり得、例えば、ＲＮＡとリポプレックスまたはリポソームを含む脂質とを含む組成物および製剤を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するために多大な利点を提供することができる。本明細書に開示されるいくつかの態様において、ＲＮＡとリポプレックスまたはリポソームを含む脂質とを含む組成物および製剤はＲＮＡワクチンである。

【0064】

本開示はまた、例えば、本明細書に記載される薬学的組成物、特に、ＲＮＡ－リポプレックス、ＲＮＡリポソームまたはＲＮＡワクチンを含む最終薬学的組成物を作製し、移送し、または製造するために混合することができる、ＲＮＡ、ＲＮＡ分子またはＲＮＡワクチンを含む第１の薬学的組成物、および１種以上の脂質を含む第２の薬学的組成物を含む、２つの流体源との使用に適した蠕動式ポンプ、減衰装置およびチュービングキットシステムを提供する。いくつかの態様において、本明細書に記載される方法およびシステムは、蠕動式ポンプを使用するときに通常観察される流量の脈動または振動の実質的な低減を必要とするＧＭＰ製造過程において有用である。

【0065】

Ｉ．定義
本発明を詳細に説明する前に、本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明するためのものに過ぎず、限定することを意図するものではないことを理解するべきである。

【0066】

別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記ならびに他の技術的および科学的用語または語法は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。いくつかの場合において、一般的に理解される意味を有する用語は、明確性および／または容易な参照のために本明細書に定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、必ずしも、当技術分野において一般的に理解されるものに対する実質的な相違を表すと解釈されるべきではない。

【0067】

本明細書で使用される、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないと示さない限りは、複数形を同様に含むことが意図されている。本明細書で使用される「および／または」という用語は、関連する列挙された項目のうちの１つ以上のあらゆる可能な組み合わせを指し、それらを包含することも理解されたい。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および／または「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、記載された特徴、整数、工程、動作、要素、構成要素および／または単位の存在を指定するが、１つ以上の他の特徴、整数、工程、動作、要素、構成要素、単位および／またはそれらの群の存在または追加を排除するものではないことがさらに理解されるべきである。

【0068】

本開示を通して、様々な局面が範囲形式で提示される。範囲形式での記載は、単に便宜および簡潔さのためのものであり、本開示に対する変更できない限定として解釈されるべきではないことを理解すべきである。したがって、範囲の記載は、すべての可能な部分範囲の他、その範囲内の個々の数値をも具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限の間の各介在する値、およびその記載された範囲内の任意の他の記載された値または介在する値が本開示では包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、そのより小さい範囲に独立して含まれることができ、また、記載された範囲内のいずれかの特に除外された限界に従うことを条件として、本開示に包含される。記載された範囲が限界の一方または両方を含む場合、それら包含される限界のいずれかまたは両方を除いた範囲もまた、本開示に含まれる。これは、範囲の幅に関わらず適用される。

【0069】

本明細書で使用される「約」という用語は、容易に理解されるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」に続く値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする態様を含む（かつ記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。いくつかの態様において、「約」は、当業者によって理解されるように、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％、±５％、または±１％を指し得る。

【0070】

本明細書で使用される場合、組成物は、細胞を含む１つ以上の生成物、物質または化合物の任意の混合物を指す。組成物は、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性またはこれらの任意の組み合わせであり得る。

【0071】

本明細書で使用される場合、「蠕動式ポンプ」は、様々な流体を圧送するために使用することができる容積移送式ポンプの一種を指す。蠕動式ポンプとしては、Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｐｕｍｐ（ＨＶ－７７９２１－７５）およびＷａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ Ｆｌｅｘｉｃｏｎ（ＰＤ１２Ｉ）が挙げられるが、これらに限定されない。典型的には、蠕動式ポンプは、以下の２つの理由のためにバイオ医薬品において使用される。（１）システムは、クローズドシステムを介して流体を圧送することができる（すなわち、露出したポンプ部分が流体と接触しない）、および（２）せん断応力が緩やかである。

【0072】

「減衰装置」という用語は、例えば蠕動式ポンプを含むポンプからの流量の脈動および／または振動を低減することができる任意の構成要素、装置または機構を指す。

【0073】

「チュービングキット」という用語は、チューブ／チュービングとチューブ／チュービングと相互作用することができる他の構成要素との組立品を指す。

【0074】

「薬学的組成物」または「薬学的製剤」または「薬学的組成物および製剤」という用語は、調製物に含まれる有効成分の生物活性が有効になるような形態をしており、また薬学的組成物が投与されるであろう対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない、調製物を指す。そのような製剤は無菌である。「薬学的に許容され得る」賦形剤（ビヒクル、添加物）は、対象哺乳動物に適度に投与されて、用いられる有効用量の活性成分を提供することができるものである。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載されるいくつかの態様において、薬学的組成物は、核酸（例えば、ＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはＲＮＡワクチンを含む）および／または１種以上の脂質（例えば、カチオン性脂質および／または中性「ヘルパー」脂質を含む）を含む。

【0075】

「個体」、「対象」または「患者」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギおよびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の局面において、個体または対象はヒトである。

【0076】

「核酸」または「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」との用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物および／または物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基、具体的にはプリン塩基またはピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボースまたはリボース）、およびリン酸基で構成されている。多くの場合、核酸分子は塩基の配列によって記述され、前記塩基は核酸分子の一次構造（線状構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’に向かって表される。本明細書では、核酸分子という用語は、例えば相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）およびゲノムＤＮＡを含むデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、特にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡまたはＲＮＡの合成形態、およびこれらの分子の２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は線状または環状であり得る。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖およびアンチセンス鎖、ならびに一本鎖形態および二本鎖形態の両方を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチドまたは天然に存在しないヌクレオチドを含むことができる。天然に存在しないヌクレオチドの例には、誘導体化された糖またはリン酸骨格結合または化学的に修飾された残基を有する修飾ヌクレオチド塩基が含まれる。「単離された」核酸は、その天然環境の構成要素から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0077】

「ＲＮＡ」または「ＲＮＡ分子」という用語は、リボヌクレオチド残基を含み、好ましくは完全にまたは実質的にリボヌクレオチド残基から構成される分子に関する。「リボヌクレオチド」は、β－Ｄ－リボフラノシル基の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドに関する。この用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え生産されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または変化によって天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾されたＲＮＡを含む。そのような変化は、ＲＮＡの末端または内部などに、例えばＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドに非ヌクレオチド材料の付加を含むことができる。ＲＮＡ分子中のヌクレオチドはまた、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準的なヌクレオチドを含むことができる。これらの変化したＲＮＡは、類縁体または天然に存在するＲＮＡの類縁体と呼ばれ得る。

【0078】

「ＲＮＡ」という用語はまた、「メッセンジャーＲＮＡ」を意味し、ＤＮＡを鋳型として使用して生成され得、ペプチドまたはタンパク質をコードする「転写産物」に関する「ｍＲＮＡ」を含み、好ましくは「ｍＲＮＡ」に関する。ｍＲＮＡは、典型的には、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、タンパク質またはペプチドコード領域および３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）を含む。ｍＲＮＡは、細胞およびインビトロにおいて限られた半減期を有する。ｍＲＮＡは、ＤＮＡ鋳型を用いたインビトロ転写または化学合成によって生産され得る。インビトロ転写方法は当業者に公知である。例えば、市販されている様々なインビトロ転写キットが存在する。

【0079】

本明細書で使用される「ＲＮＡワクチン」は、１つ以上の抗原をコードし、対象または個体に投与されたときに免疫応答（例えば、抗原に対する防御免疫）を誘導するＲＮＡ、ＲＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡ分子を指す。いくつかのＲＮＡワクチンが記載されている。例えば、Ｐａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．”ｍＲＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ－ａ ｎｅｗ ｅｒａ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ”を参照されたい。Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ１７，２６１－２７９（２０１８）．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｒｄ．２０１７．２４３。

【0080】

「リポプレックス」または「ＲＮＡリポプレックス」という用語は、脂質とＲＮＡなどの核酸の複合体を指す。リポプレックスは、しばしば中性「ヘルパー」脂質も含むカチオン性脂質および／またはリポソームが核酸と混合されると、自然に形成される。

【0081】

本開示が正電荷、負電荷もしくは中性電荷またはカチオン性化合物、負の化合物もしくは中性化合物などの電荷を指す場合、これは一般に、言及された電荷が、生理的ｐＨなどの選択されたｐＨにおいて存在することを指す。例えば、「カチオン性脂質」という用語は、生理的ｐＨなどの選択されたｐＨにおいて正味の正電荷を有する脂質を意味する。「中性脂質」という用語は、正味の正または負の電荷を有さず、生理的ｐＨなどの選択されたｐＨにおいて無電荷または中性の両性イオンの形態で存在することができる脂質を意味する。本明細書において「生理的ｐＨ」とは、約７．５のｐＨを意味する。

【0082】

本発明で使用するための本明細書に記載される脂質担体は、例えばＲＮＡと複合体を形成することによって、またはＲＮＡがその中に封入もしくはカプセル化された小胞を形成することによって、ＲＮＡと会合することができる任意の物質またはビヒクルを含む。これは、裸のＲＮＡと比較してＲＮＡの安定性の増加をもたらし得る。特に、血中でのＲＮＡの安定性が増加し得る。

【0083】

カチオン性脂質、カチオン性ポリマーおよび正電荷を有する他の物質は、負に帯電した核酸と複合体を形成し得る。これらのカチオン性分子は、核酸を複合体化し、それによって、例えば、いわゆるリポプレックスまたはポリプレックスをそれぞれ形成するために使用することができる。

【0084】

リポソームは、しばしばリン脂質などの小胞形成脂質の１つ以上の二重層を有する微視的脂質小胞であり、ＲＮＡなどの薬物または核酸分子を封入することができる。多重層小胞（ＭＬＶ）、小型単層小胞（ＳＵＶ）、大型単層小胞（ＬＵＶ）、立体的に安定化されたリポソーム（ＳＳＬ）、多胞性小胞（ＭＶ）、および大型多胞性小胞（ＬＭＶ）、ならびに当技術分野で公知の他の二重層形態を含むがこれらに限定されない様々な種類のリポソームが本発明の文脈で使用され得る。リポソームのサイズおよび層状性は調製方法に依存し、使用されるべき小胞の種類の選択は好ましい投与様式に依存する。ラメラ相、六方相および逆六方相、立方相、ミセル、単層から構成される逆ミセルを含む、脂質が水性媒体中に存在し得るいくつかの他の形態の超分子構造が存在する。これらの相は、ＤＮＡまたはＲＮＡと組み合わせて得られることもでき、ＲＮＡおよびＤＮＡとの相互作用が相状態に実質的に影響を及ぼし得る。

【0085】

想定されるＲＮＡリポプレックスを製造するのに適したリポソームを提供する限り、リポソームの形成のためには、リポソームを形成する任意の適切な方法を使用することができる。リポソームは、逆蒸発法（ＲＥＶ）、エタノール注入法、脱水－再水和法（ＤＲＶ）、超音波処理または他の適切な方法などの標準的な方法を使用して形成され得る。リポソーム形成後に、リポソームは、実質的に均一なサイズ範囲を有するリポソームの集団を得るために、サイズによって分けることができる。

【0086】

二重層形成脂質は、典型的には、２つの炭化水素鎖、特にアシル鎖と、極性または非極性のいずれかの頭部基を有する。二重層形成脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチド酸、ホスファチジルイノシトールおよびスフィンゴミエリンなどのリン脂質を含む天然に存在する脂質または合成起源の脂質から構成され、２つの炭化水素鎖は典型的には約１４～２２個の炭素原子の長さであり、様々な不飽和度を有する。本発明の組成物において使用するための他の適切な脂質には、糖脂質およびコレステロールおよびリポソームにも使用することができるその様々な類縁体などのステロールが含まれる。

【0087】

カチオン性脂質は、典型的には、ステロール、アシルまたはジアシル鎖などの親油性部分を有し、全体の正味の正電荷を有する。脂質の頭部基は、典型的には正電荷を有する。カチオン性脂質は、好ましくは、１価～１０価の正電荷、より好ましくは１価～３価の正電荷、より好ましくは１価の正電荷を有する。カチオン性脂質の例としては、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）；ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）；１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；１，２－ジアシルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；１，２－ジアルキルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２－ジミリストイルオキシプロピル－１，３－ジメチルヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、および２，３－ジオレオイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミウム（ｐｒｏｐａｎａｍｉｕｍ）トリフルオロアセタート（ＤＯＳＰＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいのは、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＤＡＣおよびＤＯＳＰＡである。最も好ましいのは、ＤＯＴＭＡである。

【0088】

ＩＩ．概要
システム内の蠕動式ポンプからの流量の脈動または振動を低減するための減衰装置を含む蠕動式ポンプシステム、ならびに例えば、ＲＮＡとリポプレックスまたはリポソームを含む脂質とを含む組成物および製剤を含む薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するためのこれらのシステムの使用方法が本明細書で提供される。いくつかの態様において、薬学的組成物および製剤は、ＲＮＡ、ＲＮＡ分子またはＲＮＡワクチンを含む。

【0089】

本開示はまた、例えば、本明細書に記載される薬学的組成物、特に、ＲＮＡ－リポプレックス、ＲＮＡリポソームまたはＲＮＡワクチンを含む最終薬学的組成物を作製または製造するために混合または移送することができる、ＲＮＡ、ＲＮＡ分子またはＲＮＡワクチンを含む第１の薬学的組成物、および本明細書に記載される１種以上の脂質を含む第２の薬学的組成物を含む、２つの流体源との使用に適した蠕動式ポンプ、減衰装置およびチュービングキットシステムを提供する。

【0090】

ＩＩＩ．蠕動式ポンプ、減衰装置およびチュービングキットシステム
蠕動式ポンプシステムとともに使用するためのチュービングキットが本明細書で提供される。いくつかの態様において、蠕動式ポンプは、４つのローラを有し、複数のポンプヘッドを有するように適合させることができるＭａｓｔｅｒｆｌｅｘポンプ（ＨＶ－７７９２１－７５）であり得る。いくつかの態様において、蠕動式ポンプは、Ｗａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗであり得る。いくつかの態様において、チュービングキットは、薬学的組成物、製剤および／または混合物を形成するために使用することができる。いくつかの態様において、直列で混合して薬学的組成物、製剤および／または混合物を形成するために、チュービングキットを使用することができる。いくつかの態様において、薬学的組成物、製剤および／または混合物は、第１の薬学的組成物を第２の薬学的組成物と混合することによって形成することができる。図１５は、チュービングキット１の一例を示す。チュービングキットは、容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第１の部分を含むことができる。チュービングの第１の部分の例が、チュービング２の一部として図１５に示されている。

【0091】

チュービング２の一部は、入口チュービング２ａ、ポンプチュービング２ｂおよび２ｃ、ポンプ出口チュービング２ｄ、ならびに減衰装置の後ろチュービング２ｅを含むことができる。入口チュービング２ａは、流体源または容器に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分は、チュービングの第１の部分を流体源または容器に流体的に接続するためのコネクタ４を含むことができる。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分を流体源または容器に流体的に接続するコネクタは、無菌コネクタであり得る。いくつかの態様において、容器からチュービングへの任意のコネクタが機能することができる。いくつかの態様において、容器は、第１の流体または組成物を含むことができる。いくつかの態様において、第１の組成物は、例えば脂質またはＲＮＡを収容する組成物を含む第１の薬学的組成物であり得る。いくつかの態様において、容器は、袋、瓶および／または器などの流体容器であり得る。

【0092】

チュービングの第１の部分は、チュービングの第１のセグメントおよびチュービングの第２のセグメントを含むことができる。いくつかの態様において、チュービングの第１のセグメントおよびチュービングの第２のセグメントは、並列して流体的に接続されている。例えば、図１５に示すように、チュービングの第１の部分は、ポンプチュービング２ｂおよびポンプチュービング２ｃを含む。いくつかの態様において、チュービングの第１のセグメントは、蠕動式ポンプの第１のヘッドに接続または装着されるように構成されており、チュービングの第２のセグメントは、蠕動式ポンプの第２のヘッドに接続または装着されるように構成されている。

【0093】

いくつかの態様において、入口チュービング２ａは、コネクタ５を介してポンプチュービング２ｂおよび２ｃに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、入口チュービングをポンプチュービングに流体的に接続するコネクタは、Ｙ字型コネクタまたは混合装置（例えば、静的、らせん状など）である。いくつかの態様において、ポンプチュービングは、図１５に示されるように並列ポンプチューブに分割される必要はない。したがって、コネクタは必要でないことがあり得、入口チュービングおよびポンプチュービングは同じ１つのものであり得る。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分は、蠕動式ポンプに接続または装着されるように構成することができる。いくつかの態様において、蠕動式ポンプは、デュアルヘッド蠕動式ポンプなどのマルチヘッド蠕動式ポンプであり得る。いくつかの態様において、ポンプチュービング２ｂおよび２ｃは、第１の蠕動式ポンプに接続または装着される。例えば、蠕動式ポンプがデュアルヘッド蠕動式ポンプである場合、ポンプチュービング２ｂは１つのポンプヘッドに接続または装着することができ、ポンプチュービング２ｃは別のポンプヘッドに接続または装着することができる。２つより多くのヘッドを有するポンプにも同じロジックを使用することができる。複数の態様において、第１の蠕動式ポンプは、シングルヘッドの蠕動式ポンプである。したがって、ポンプチュービング２ｂまたは２ｃの一方のみが第１の蠕動式ポンプに接続もしくは装着されるか、または単一の入口チュービング／ポンプチュービングが第１の蠕動式ポンプに接続もしくは装着され得る。

【0094】

いくつかの態様において、ポンプチュービングまたは入口／ポンプチュービングは、ポンプ出口チュービングに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、ポンプチュービング２ｂおよび２ｃは、コネクタ５（例えば、Ｙ字型コネクタ）を介してポンプ出口チュービング２ｄに流体的に接続される。いくつかの態様において、ポンプチュービングは、並列ポンプチューブに分割される必要はない。したがって、ポンプの後のコネクタは必要でないことがあり得、ポンプチュービングとポンプ出口チュービングは同じ１つのものであり得る。例えば、チュービングは、入口、ポンプおよびポンプ出口チュービングであり得る。

【0095】

いくつかの態様において、チュービングキットは、チュービングの第１の部分に流体的に接続された減衰装置を含むことができる。チュービングの第１の部分は、コネクタを介して減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、このようなコネクタは、Ｔ字型コネクタ、４方向コネクタまたは様々な他のタイプのコネクタであり得る。図１５は、コネクタ６を介して減衰装置７に流体的に接続されたチュービング２の第１の部分を示す。具体的には、ポンプ出口チュービング２ｄは、コネクタ６を介して減衰装置７に流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービング２の第１の部分は、独自の第１の減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、減衰装置はまた、減衰装置の後ろチュービングに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、ポンプ出口チュービングは、コネクタ（例えば、図１５に示されるようなコネクタ５）を介して減衰装置の後ろチュービングに流体的に接続される。いくつかの態様において、減衰装置、ポンプ出口チュービング、コネクタおよび減衰装置の後ろチュービングは、流体的に接続されている。

【0096】

チュービングキットはまた、容器に流体的に接続されるように構成されたチュービングの第２の部分を含むことができる。チュービングの第２の部分の一例が、チュービング３の一部として図１５に示されている。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分は、並列して流体的に接続されている。

【0097】

チュービング３の一部は、入口チュービング３ａ、ポンプチュービング３ｂおよび３ｃ、ポンプ出口チュービング３ｄ、ならびに減衰装置の後ろチュービング３ｅを含むことができる。入口チュービング３ａは、流体源または容器に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分は、チュービングの第２の部分を流体源または容器に流体的に接続するためのコネクタ４を含むことができる。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分を流体源または容器に流体的に接続するコネクタは、無菌コネクタであり得る。いくつかの態様において、容器からチュービングへの任意のコネクタが機能することができる。いくつかの態様において、容器は、第１の流体または組成物とは異なる第２の流体または組成物を含むことができる。いくつかの態様において、容器は、第１の流体または組成物と同じ流体または組成物を含むことができる。いくつかの態様において、第２の組成物は、例えば脂質またはＲＮＡを収容する組成物を含む第２の薬学的組成物であり得る。いくつかの態様において、容器は、袋、瓶および／または器などの流体容器であり得る。

【0098】

チュービングの第２の部分は、チュービングの第３のセグメントおよびチュービングの第４のセグメントを含むことができる。いくつかの態様において、チュービングの第３のセグメントおよびチュービングの第４のセグメントは、並列して流体的に接続されている。例えば、図１５に示すように、チュービングの第２の部分は、ポンプチュービング３ｂおよびポンプチュービング３ｃを含む。いくつかの態様において、チュービングの第３のセグメントは、蠕動式ポンプの第１のヘッドに接続または装着されるように構成されており、チュービングの第４のセグメントは、蠕動式ポンプの第２のヘッドに接続または装着されるように構成されている。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分に接続または装着された蠕動式ポンプは、チュービングの第１の部分に接続または装着された蠕動式ポンプとは異なる。いくつかの態様においては、同じ蠕動式ポンプがチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分に接続または装着される。したがって、チュービングの第１の部分は、蠕動式ポンプの１つまたは複数の第１のヘッドに接続または装着することができ、チュービングの第２の部分は、蠕動式ポンプの１つまたは複数の第２のヘッドに接続または装着することができる。

【0099】

いくつかの態様において、入口チュービング３ａは、コネクタ５を介してポンプチュービング３ｂおよび３ｃに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、入口チュービングをポンプチュービングに流体的に接続するコネクタは、Ｙ字型コネクタまたは混合装置（例えば、静的、らせん状など）である。いくつかの態様において、ポンプチュービングは、図１５に示されるように並列ポンプチューブに分割される必要はない。したがって、コネクタは必要でないことがあり得、入口チュービングおよびポンプチュービングは同じ１つのものであり得る。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分は、第２の蠕動式ポンプに接続または装着されるように構成することができる。いくつかの態様において、蠕動式ポンプは、デュアルヘッド蠕動式ポンプなどのマルチヘッド蠕動式ポンプであり得る。いくつかの態様において、ポンプチュービング３ｂおよび３ｃは、第２の蠕動式ポンプに接続または装着される。例えば、蠕動式ポンプがデュアルヘッド蠕動式ポンプである場合、ポンプチュービング３ｂは１つのポンプヘッドに接続または装着することができ、ポンプチュービング３ｃは別のポンプヘッドに接続または装着することができる。２つより多くのヘッドを有するポンプにも同じロジックを使用することができる。いくつかの態様において、第２の蠕動式ポンプは、シングルヘッドの蠕動式ポンプである。したがって、ポンプチュービング３ｂまたは３ｃの一方のみが第２の蠕動式ポンプに接続もしくは装着されるか、または単一の入口チュービング／ポンプチュービングが第２の蠕動式ポンプに接続もしくは装着され得る。

【0100】

いくつかの態様において、第１の蠕動式ポンプは、第２の蠕動式ポンプと同じポンプであり、チュービングの様々な部分は、ポンプの別個のヘッドに接続または装着されるように構成されている。したがって、ポンプチュービング２ｂは第１のポンプヘッドに接続または装着することができ、ポンプチュービング２ｃは第２のポンプヘッドに接続または装着することができ、ポンプチュービング３ｃは第３のポンプヘッドに接続または装着することができ、ポンプチュービング３ｂは第４のポンプヘッドに接続または装着することができる。または、ポンプチュービング２ｂもしくは２ｃの一方のみを第１のポンプヘッドに接続もしくは装着することができ、または第１の単一の入口チュービング／ポンプチュービングを第１のポンプヘッドに接続もしくは装着することができ、およびポンプチュービング３ｂもしくは３ｃの一方のみを第２のポンプヘッドに接続もしくは装着することができ、または第２の単一の入口チュービング／ポンプチュービングを第２のポンプヘッドに接続もしくは装着することができる。

【0101】

いくつかの態様において、ポンプチュービングまたは入口／ポンプチュービングは、ポンプ出口チュービングに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、ポンプチュービング３ｂおよび３ｃは、コネクタ５（例えば、Ｙ字型コネクタ）を介してポンプ出口チュービング３ｄに流体的に接続される。いくつかの態様において、ポンプチュービングは、並列ポンプチューブに分割される必要はない。したがって、ポンプの後のコネクタは必要でないことがあり得、ポンプチュービングとポンプ出口チュービングは同じ１つのものであり得る。例えば、チュービングは、入口、ポンプおよびポンプ出口チュービングであり得る。

【0102】

いくつかの態様において、チュービングキットは、チュービングの第２の部分に流体的に接続された減衰装置を含むことができる。いくつかの態様において、減衰装置は、チュービングの第１の部分に流体的に接続されており、かつチュービングの第２の部分に流体的に接続されている。いくつかの態様において、減衰装置は、Ｔ字型コネクタ、４方向コネクタなどのコネクタを介して、チュービングの第１の部分および／またはチュービングの第２の部分に流体的に接続されている。

【0103】

減衰装置は、封入されたある体積の流体によって減衰が実行される任意の装置であり得る。いくつかの態様において、減衰装置内の流体の体積は、流量および／または露出した表面積に依存し得る。いくつかの態様において、減衰装置は、封入されたある体積の空気によって脈動を減衰させる。いくつかの態様において、減衰装置は、シリンジ減衰装置、膜減衰装置（例えば、柔軟膜減衰装置）またはチュービング減衰装置であり得る。いくつかの態様において、チュービング減衰装置は、減衰装置の一端がチュービングの第１の部分またはチュービングの第２の部分に流体的に接続され、減衰装置の他端が閉鎖されるような、デッドエンドチュービング減衰装置であり得る。いくつかの態様において、減衰装置の他端は、クランプ、エンドキャップによって閉鎖することができ、別の減衰ライン、または環境から気体を封入することができる別の部分に接続することができる。いくつかの態様において、チュービング減衰装置はシリコーンチューブから作製される。

【0104】

いくつかの態様において、チュービング減衰装置の一端は、チュービングの第１の部分に流体的に接続され、チュービング減衰装置の他端は、チュービングの第２の部分に流体的に接続され、それによってループチュービング減衰装置を形成する。いくつかの態様においては、チュービングの第１の部分および／または第２の部分からの最小限の流体が減衰装置に入らず、空気が減衰装置内に残存するように、ループチュービング減衰装置は、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分の上方にある。例えば、溶液が表面上で水平に流れている場合、ポンピング中に空気ポケットが液面より上に留まるように、減衰装置は意図された流体経路を超える高さで垂直に堆積させることができる。いくつかの態様において、ループチュービング減衰装置は、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分より上に配置し、または取り付けることができる。いくつかの態様において、ループチュービング減衰装置は、水平バー上に取り付けることができ、またはチュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分より上に貼り付ける（すなわち、テープで貼る）ことができる。

【0105】

チュービングの第２の部分は、コネクタを介して減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、このようなコネクタは、Ｔ字型コネクタ、４方向コネクタまたは様々な他のタイプのコネクタであり得る。図１５は、コネクタ６を介して減衰装置７に流体的に接続されたチュービング３の第２の部分を示す。具体的には、ポンプ出口チュービング３ｄは、コネクタ６を介して減衰装置７に流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービング３の第２の部分は、独自の第２の減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、ポンプ出口チュービング２ｄは独自の減衰装置に流体的に接続されており、ポンプ出口チュービング３ｄはそれ独自の異なる減衰装置に接続されている。いくつかの態様において、減衰装置はまた、減衰装置の後ろチュービングに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、ポンプ出口チュービングは、コネクタ（例えば、図１５に示されるようなコネクタ５）を介して減衰装置の後ろチュービングに流体的に接続される。いくつかの態様において、減衰装置、ポンプ出口チュービング、コネクタおよび減衰装置の後ろチュービングは、流体的に接続されている。

【0106】

いくつかの態様において、本明細書に開示されるチュービングキットは、チュービングの第１の部分からの第１の流体または組成物と、チュービングの第２の部分からの第２の流体または組成物とを混合するための混合装置を含むことができる。したがって、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分は、混合装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分およびチュービングの第２の部分は、減衰装置から下流で混合装置に流体的に接続されている。いくつかの態様において、チュービングの第１の部分の減衰装置の後ろチュービング（すなわち、チュービングの第１の混合装置入力部分）およびチュービングの第２の部分の減衰装置の後ろチュービング（すなわち、チュービングの第２の混合装置入力部分）は、混合装置に流体的に接続されている。いくつかの態様において、コネクタ（例えば、コネクタ６）は、減衰装置、チュービングの第１の部分およびチュービングの第１の混合装置入力部分を流体的に接続する。いくつかの態様において、コネクタ（例えば、コネクタ６）は、減衰装置、チュービングの第２の部分およびチュービングの第２の混合装置入力部分を流体的に接続する。いくつかの態様において、第１の減衰装置コネクタは、チュービングの第１の部分を減衰装置および混合装置に流体的に接続し、第２の減衰装置コネクタはチュービングの第２の部分を減衰装置および混合装置に流体的に接続する。

【0107】

いくつかの態様において、混合装置は、チュービングの第１の部分に流体的に接続された入力部と、チュービングの第２の部分に流体的に接続された入力部と、出力部とを含む。いくつかの態様において、混合装置は、Ｙ字型コネクタ、らせん型混合装置または静的混合装置であり得る。いくつかの態様において、出力部はチュービング（例えば、出力チュービング８）に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、混合装置は、混合物容器（例えば、第１および第２の供給源混合物容器９）に流体的に接続された出力部を含む。混合物容器は、混合された第１の流体または組成物および第２の流体または組成物を混合装置から収集することができる。いくつかの態様において、混合物容器は、袋、瓶および／または器などの流体容器であり得る。

【0108】

いくつかの態様において、チュービングの第１の部分は、容器から混合物容器に第１の流体または組成物を圧送するための第１の蠕動式ポンプまたはポンプヘッドに接続または装着されるように構成される。いくつかの態様において、チュービングの第２の部分は、容器から混合物容器に第２の流体または組成物を圧送するための第２の蠕動式ポンプまたはポンプヘッドに接続または装着されるように構成される。いくつかの態様において、チュービングキットを通して圧送される流体または組成物は、例えば脂質またはＲＮＡを収容する組成物を含む薬学的組成物である。本明細書に開示される薬学的組成物は、核酸（例えば、ＲＮＡまたはｍＲＮＡを含む）、１種以上の脂質、タンパク質、緩衝剤、小分子、アミノ酸および／またはポリペプチドを含むことができる。いくつかの態様において、核酸は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡを含む）および／またはＤＮＡであり得る。いくつかの態様において、１種以上の脂質は、リポソームまたはリポプレックスの形態であり得る。いくつかの態様において、薬学的組成物は、リポプレックスをともに形成する核酸および脂質を含む、個別化がんワクチンまたはＲＮＡワクチンの成分であり得る。

【0109】

本明細書に開示されるチュービングキット、方法および／またはシステムは、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプからの流量の脈動または振動を低減するための減衰装置を含む。いくつかの態様において、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプとともに使用される本明細書に開示されるチュービングキット、方法および／またはシステムの脈動のレベル（「ＬｏＰ」）は、約４０未満、約３５未満、約３０未満、約２５未満、約２０未満、約１５未満、約１２未満、約１０未満、約９未満、約８未満、約７未満、約６未満、約５未満、約４未満、約３未満、約２未満または約１未満である。いくつかの態様において、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプとともに使用される本明細書に開示されるチュービングキット方法および／またはシステムの脈動のレベル（「ＬｏＰ」）は、約７～約４０または約１０～約２０である。いくつかの態様において、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプとともに使用される本明細書に開示されるチュービングキット方法および／またはシステムの脈動のレベル（「ＬｏＰ」）は、約７、約８、約１０、約１５，約２０または約２５であり得る。

【0110】

いくつかの態様において、本明細書に開示されるチュービングキット、方法および／またはシステムを使用する、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプの脈動の減少のレベル（「ＬｏＰ」）は、本明細書に記載される減衰装置を欠く、流体が１つまたは２つの源から来る蠕動式ポンプのＬｏＰと比較して、約９８％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％または約２０％である。

【0111】

実施例および説明の大部分は、薬学的組成物および製剤に対して減衰装置を使用することを論じているが、本明細書に開示される減衰装置およびポンプシステムは、薬学的組成物および製剤における使用に限定されない。例えば、本明細書に開示されるポンプシステムは、一貫した流量を有することが有利であり得る場合に、蠕動式ポンプを使用して作業を満たすか、または単に容器間で溶液を移動させるために使用することができる。本明細書に開示されるシステムは、ピストン、隔膜、ねじなどを含むがこれらに限定されない蠕動式ポンプ以外の任意のポンプとともに、任意の流量で、任意の種類の減衰装置ならびに任意のチュービング寸法およびチュービング材料（例えば、パイプ、プラスチック、ステンレス）とともに使用することができる。いくつかの態様においては、チュービングシステムは製品に接触するので、チュービングシステムは、使用（ｓｕｅ）前に滅菌することができる。このような滅菌は、オートクレーブ、ガンマ線などを用いて行うことができる。

【0112】

ＩＶ．流体圧式脈動減衰装置
上で説明したように、蠕動式ポンプなどの循環ポンプシステムを使用すると、圧力および流量の変動がポンプの下流の流体経路で発生し得る。このいわゆる脈動は、閉じ込められた流体（例えば、気体）クッションの圧縮によって脈動を吸収して、低減された脈動および安定した滑らかな流体の流れをもたらすことができる流体圧式脈動減衰装置（ＨＰＰＤ）を含む様々な技術的解決策を使用することによって低減することができる。

【0113】

初期の実験では、この概念は、脈動を吸収するための圧縮可能な気体（例えば、空気）を捕捉するために、圧送される流体（例えば、水）中に浸漬された入口および出口を有するガラス瓶を使用して有効であることが示された。この概念を図１９に示す。無菌製造シナリオをシミュレートするために、５００ｍＬの実験用ボトルから作製されたＨＰＰＤを様々な流量で試験し、一定の圧力まで上昇し、ポンプの停止後にその圧力から下降するのに必要とされる時間（すなわち、流体経路圧力を正常化するために必要とされる時間）にわたって評価した。図２０は、流体（水）リザーバ、蠕動式ポンプ、２つのポート（そのうちの１つは圧送可能な流体中に浸漬されている）からなるキャップで閉じられた５００ｍＬの実験用フラスコ、および流体経路の出口に位置する収集容器からなる初期のＨＤＤＰ装置を示す。図２１に示されるように、より低い流量では、より高い流量において上昇時間および下降時間が同等に留まった約１５０ｍＬ／分の流量まで、圧力を増大させる時間は急速に増加した。これは、それぞれ、一定の圧力まで増大させるのに約７５秒、圧力を消失させてゼロに戻すのに約４０秒であった。

【0114】

このガラス瓶減衰装置については、変位速度に対する残留背圧の影響も測定された。図２２は、ＨＰＰＤシステムを加圧および減圧するためにかなりの時間が必要とされるが、ＨＰＰＤ一体型システムの実際の変位は一定であり、ポンプから出口に至る単純な設定と同等であることを確認する。

【0115】

圧力差に対するボトルサイズの影響も調査した。具体的には、２５０～２０００ｍＬのサイズの実験用ボトルを使用して作製されたＨＰＰＤを通して一定の速度で圧送することによって、空気ポケットサイズの影響を調査した。図２３は、空気体積が小さいほど、入口での背圧がより高くなるが、ポンプを出口に直接接続することと比較してＨＰＰＤ装置全体で圧力損失がより低くなることを実証している。この圧力損失は、出口での流れの滑らかさに影響を及ぼさないことが観察された。

【0116】

ＨＰＰＤの単回使用設計の概念を試験するために、実験用フラスコ中にライナーを挿入し、それによって各使用後に接触面および流体経路を交換することを可能にした。これを図２４に示す。図２５に示されるように、このライナーの追加は、柔軟なライナーの増加した柔軟性のために、ＨＰＰＤのスループットを大幅に低下させることが分かった。ライナー減衰装置（すなわち、ブラダー減衰装置）は、流体流の正常化に関しても良好に機能し、ライナー減衰装置はポンピング過程中に流体流が空気と接触しないようにするので有利であった。しかしながら、ポンプが停止された後の残留圧力および流体流出の形態でのポンピング効率の著しい低下は、システムに効率の著しい低下を引き起こした。

【0117】

したがって、ガラス瓶減衰装置は、脈動を首尾よく低減することが実証された。さらに、ガラス瓶減衰装置は、比較的大きな一般的に入手可能な実験用ボトルが、システムの圧縮可能性を増大させることができ、それ故、エネルギー損失を通じて出口圧力を低下させることができる大きなデッドボリュームおよび大きな空気ポケットをもたらすことができるという利点を有していた。欠点は、ライナーがないと、ガラス瓶が単回使用に適合せず、事前の組み立てが必要になることであった。さらに、システムを平衡化し、停止させるために長い呼び水時間と流出時間が必要とされ、その結果、大きなデッドボリュームをもたらした。

【0118】

デッドボリュームをさらに減少させ、堅牢な単回使用の優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）設計を達成するために、ガラス瓶を図２６に示される５０ｍＬのＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バイオプロセシングバッグなどのバイオプロセシングバッグに交換した。ＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バッグは、位置を高くした入口チューブを含むように改変することができる。この入口チューブの入口は、図２６に示されるように、バッグの周囲から離れてバッグの中央に向かうように堆積させることができる。対照的に、気体入口（例えば、無菌空気、窒素気体）および出口は、バッグの周囲に堆積させることができる。バイオプロセシングバッグへの入口チューブをバッグの中央に向かって堆積させることは、背圧が高い場合に、圧送された流体の逆流洗浄が起こらないようにするのに役立ち得る。さらに、気体入口は、バッグに気体クッションを予め充填してＨＰＰＤの呼び水効率を改善するために、ガスの挿入を可能にすることができる。

【0119】

バッグに剛性を加え、ポンプ流量および圧力の増加に伴うバッグの膨張を最小限に抑え、それによって圧送される流体の通過流を改善するために、図２７に示されるように紙箱から試作のケーシングも作製した。具体的には、図２７に示されるように、ＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バッグを紙箱ケーシング内に固定した。これは、バッグがそれ以上膨張することができないようにし、気体クッションを作製できるようにするのに役立った。これは、デッドボリュームの減少およびより短いプライマー時間をもたらすのに役立ち得ることが見出された。しかしながら、紙箱の材料が弱いため、ＨＰＰＤはある一定の圧力までしか安定的でなかった。したがって、出願人は、紙箱をより剛性の高い筐体と交換することを発見した。

【0120】

具体的には、図２８Ａは、流体ポンプ用の脈動減衰装置１００の分解立体図を示す。いくつかの態様において、脈動減衰装置は、バイオプロセシングバッグ１０２を含むことができる。バイオプロセシングバッグは、ＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バッグとすることができる。例えば、バイオプロセシングバッグは、５０ｍＬのＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バッグであり得るが、他のサイズのバイオプロセシングバッグ（例えば、５ｍＬ～５０Ｌのいずれも）も使用することができる。バイオプロセシングバッグは、流体入口１０５および流体出口１０６を含むことができる。いくつかの態様において、流体入口および／または流体出口はチュービングに流体的に接続することができる。いくつかの態様において、流体入口および／または流体出口は、チュービング自体を含むことができる。いくつかの態様において、流体入口および／もしくは流体出口または流体入口／出口に接続された流体チュービングは、図２６に示されるように、バッグの周囲から離れてバッグの中央に向かうように堆積させることができる。いくつかの態様において、流体入口は、循環ポンプ（例えば、蠕動式ポンプ）などの流体ポンプの下流に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、流体出口は、流体貯蔵容器に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、流体出口は逆止め弁を含むことができる。いくつかの態様において、逆止め弁は、約０．０５～０．５バール、約０．０５～０．４バール、約０．０５～０．３バール、約０．１～０．２バールまたは約０．１４バールのブレークスルー抵抗を有することができる。

【0121】

いくつかの態様において、バイオプロセシングバッグは気体入口１０７を含むことができる。気体入口は、気体源に流体的に接続されるように構成することができる。いくつかの態様において、気体源は空気（例えば、無菌空気）および／または窒素である。気体入口は、バッグが脈動減衰用の気体クッションを含むように、バイオプロセシングバッグに気体を供給することができる。

【0122】

いくつかの態様において、脈動減衰装置１００は、筐体１０１を含むことができる。図２８Ｂは、脈動減衰装置の他の構成要素なしで筐体１０１を示す。筐体は、バイオプロセシングバッグを受容するように構成することができる。いくつかの態様において、筐体は基部１１１を含むことができる。基部は基板とすることができる。いくつかの態様において、筐体は、複数の側壁１０４を含むことができる。いくつかの態様において、複数の側壁は、基部の周囲に沿って基部から離れるように延びることができる。いくつかの態様において、複数の側壁は、基部の周囲に接続することができる。いくつかの態様において、複数の側壁および基部は、単一の一体化した構成要素とすることができる。いくつかの態様において、基部および複数の側壁は、バイオプロセシングバッグを受容／保持するように構成された空洞を形成することができる。

【0123】

いくつかの態様において、筐体の側壁の少なくとも１つは、１つ以上の切り込み１０８を有することができる。図２８Ｂに示されるように、筐体１０１は、側壁１０４に３つの切り込み１０８を含む。１つまたは複数の切り込みは、筐体の少なくとも１つの側壁中への窪みまたは凹部とすることができる。いくつかの態様において、１つ以上の切り込みは、バイオプロセシングバッグの流体入口、流体出口および／または気体入口へのアクセスを提供するように構成することができる。いくつかの態様において、１つ以上の切り込みは、バイオプロセシングバッグの流体入口、流体出口および／または気体入口を受容するように構成することができる。以下でより詳細に説明されているように、筐体は、筐体蓋を介して閉じることができる。したがって、バイオプロセシングバッグにアクセスする任意の流体または流体チュービングは、筐体の側壁の少なくとも１つの１つ以上の切り込みを通って入る／出ることができる。

【0124】

いくつかの態様において、筐体は窓１１０を含むことができる。いくつかの態様において、筐体の基部は窓を含むことができる。いくつかの態様において、窓は、筐体の基部中の開口部とすることができる。いくつかの態様において、窓は、筐体の基部中の透明材料（例えば、ガラスまたは透明プラスチック）とすることができる。窓は、使用中にバイオプロセシングバッグの目視検査を可能にすることができる。

【0125】

いくつかの態様において、減衰装置１００は、筐体蓋１０３を含むことができる。バイオプロセシングバッグが筐体および筐体蓋によって包まれるように、筐体は、筐体を閉じるように構成することができる。いくつかの態様において、筐体蓋は、筐体の複数の側壁に取り付けられるように構成される。いくつかの態様において、筐体蓋は、任意の取り付け機構（例えば、とりわけ、接着剤、ねじ、釘、ボルト、ベルクロ、クリップ（図２８Ｃに示されているような）、ロック機構）を介して筐体に取り付けることができる。いくつかの態様において、筐体蓋が筐体用のドア（すなわち、ヒンジ機構）として作用するように、筐体蓋は少なくとも１つの側壁に取り付けることができる。いくつかの態様において、筐体蓋は窓を含むことができる。いくつかの態様において、窓は、筐体蓋中の開口部とすることができる。筐体の基部中の任意の窓と同様に、窓は、筐体の基部中の透明材料（例えば、ガラスまたは透明プラスチック）とすることができる。

【0126】

いくつかの態様において、減衰装置１００は前板１０９を含むことができる。いくつかの態様において、前板は、筐体１０１および／または筐体蓋１０３の少なくとも１つの側壁１０４に接続することができる。前板は、バイオプロセシングバッグの流体入口、流体出口および／または気体入口を受容するように構成された少なくとも１つの開口部を含むことができる。前板は、バイオプロセシングバッグの入口／出口または対応するチュービングの任意が確実に減衰装置１００の筐体内の所定の位置に保持されるようにするために含めることができる。いくつかの態様においては、前板は、バイオプロセシングバッグの入口／出口または対応するチュービングがその使用全体を通じて確実に一定の均一な圧力下にあるようにするために含めることができる。

【0127】

いくつかの態様において、筐体および／または筐体蓋は、剛性材料（例えば、プラスチック／ポリマー、金属、セラミック）で作ることができる。いくつかの態様において、筐体および／または筐体蓋は、３Ｄ印刷することができる。いくつかの態様において、減衰装置１００の内部寸法は、９０×８０×１０ｍｍとすることができ、５０ｍＬのＦＬＥＸＢＯＹ（登録商標）バイオプロセシングバッグに適合するように設計することができる。この減衰装置は、流量の変動を最小限に抑制するために気体状クッションを用いて、発生する脈動を吸収することができる流体流システム用の単回使用組立品とすることができる。いくつかの態様において、デッドボリュームは、筐体内のバイオプロセシングバッグの高さでの相対的位置に依存し得る。したがって、減衰装置の高さは、流体経路の必要条件（例えば、流量および流速、ポンプヘッドによって生成される脈動の大きさ、システムの背圧など）に対して一定のデッドボリュームおよび／または最適な減衰効果を確保するように定めることができる。

【0128】

脈動減衰装置は、以下の２つの流体を含むことができる。（１）変位される脈動する流体（例えば、水）；および（２）圧縮可能な流体（例えば、空気）。変位される流体がバイオプロセシングバッグを通って圧送されると、捕捉された圧縮可能な流体は、変位される流体内の脈動を吸収することができ、安定した脈動のない流れでのみ圧送することができる。

【0129】

本セクションに開示されている減衰装置の脈動減衰能力は、減衰装置ありおよびなしの蠕動式ポンプ、ならびにシリンジポンプを使用した基準設定を使用して、異なる流量で体系的に試験された。以下でより詳細に説明されるように、減衰装置は、脈動がないと仮定されるシリンジポンプシステムで達成されるレベルよりさらに低いレベルまで脈動を著しく減少させることが示された。

【0130】

図２９Ａは、３．６ｍｍの内径を有するチュービングを使用する蠕動式ポンプの装置を示す。脈動は、０．１秒の時間分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能を有する超音波流量センサ（Ｌｅｖｉｔｒｏｎｉｘ）を用いて測定した。水をシステムに圧送した。図２９Ａは、１００秒の合計期間にわたる試験されたシステムの流れプロファイルも示す。システムは、蠕動式ポンプおよび流量センサからなった。試験した流量は、５０、６０、７０および１００ｍＬ／分であった。蠕動式ポンプの回転に起因して高い脈動が観察された。

【0131】

図２９Ｂは、３．６ｍｍの内径を有するチュービングを使用するシリンジポンプからなる装置を示す。脈動は、０．１秒の時間分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能を有する超音波流量センサを用いて測定した。水をシステムに圧送した。図２９Ｂは、１００秒の合計期間にわたる試験されたシステムの流れプロファイルも示す。試験した流量は、５０、６０、７０および１００ｍＬ／分であり、低い脈動が測定された。

【0132】

図２９Ｃは、３．６ｍｍの内径を有するチュービングを使用する蠕動式ポンプと、これに接続された本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置とからなる装置を示す。ＨＰＰＤ減衰装置の出口を、０．１４バールのブレークスルー抵抗を有する逆止め弁に接続した。脈動は、０．１秒の時間分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能で超音波流量センサを用いて測定した。水をシステムに圧送した。図２９Ｃは、ＨＰＰＤ減衰装置を用いた流れプロファイルも示す。図示されるように、著しい減少した脈動（より低い振幅）が存在した。ＨＰＰＤ効果が、首尾よく（数値的に）観察された。さらに、ＨＰＰＤ装置は、シリンジポンプよりさらに低い流量の変動をもたらした。

【0133】

この強固な減衰装置を試験するために、図３０に示されるように、本セクションに開示されているＨＰＰＤ減衰装置とＣｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤとの間で比較可能性研究を行った。Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤの減衰原理は、閉じ込められた空気ポケットの圧縮に基づいている。具体的には、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤの内部体積は約１９０ｍＬである。圧送している間のデッドボリュームは約４０～５０ｍＬである。これは、５０ｍＬバイオプロセシングバッグを使用しながら、本セクションに開示されているＨＰＰＤ減衰装置と比較すると、より高いデッドボリュームである。さらに、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤは、呼び水を行うのにより時間がかかり、脈動減衰効果を生み出すために固定された水平位置に配置されなければならない。対照的に、本セクションに開示されたＨＰＰＤ装置は、水平である必要はなく、使用中に任意の方向に向けることができる。以下でより詳細に説明されているように、本セクションに記載されているＨＰＰＤ減衰装置は、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤと比較すると、様々な流量でさらに高い減衰効率を示しながら、はるかに小さく、より予測可能なデッドボリュームおよび低下した呼び水時間を有する。

【0134】

図３１Ａは、１００秒の合計期間にわたるＣｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤを用いた流れプロファイルを示す。システムは、蠕動式ポンプ、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ ＨＰＰＤおよび流量センサからなる。５０、６０、７０および１００ｍＬ／分の試験流量で水を圧送した。水は、蠕動式ポンプを用いて、３．６ｍｍの内径を有するチュービングを通して圧送した。脈動は、０．１秒の時間分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能を有する超音波流量センサを用いて測定した。

【0135】

図３１Ｂは、１００秒の合計期間にわたる試験されたシステム（図２９Ｃ）の流れプロファイルを示す。水は、５０、６０、７０および１００ｍＬ／分の流量で試験した。水は、蠕動式ポンプを用いて、３．６ｍｍの内径を有するチュービングを通して圧送した。ＨＰＰＤの出口に、０．１４バールのブレークスルー抵抗を有する逆止め弁を接続した。再び、脈動は、０．１秒の分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能を有する超音波流量センサを用いて測定した。Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒと本セクションに開示されているＨＰＰＤとの間で脈動減衰の有意な差は見られなかった。

【0136】

次に、システムがその動作平衡に達したときに、呼び水後の圧送流量の関数として、充填体積および圧力を記録した。本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置のデッドボリュームは、約７０ｍＬ／分以上の流量に達した後も一定を保ち得ることが示された。試験するために、本セクションに開示されているＨＰＰＤ減衰装置に接続された蠕動式ポンプで水を圧送した。ＨＰＰＤ減衰装置の入口上および０．１４バールの抵抗を有する逆止め弁を有する出口上に、圧力センサを設置した。流量は、０．１秒の時間分解能および０．８ｍＬ／分の値分解能を有する超音波流量センサを用いて測定した。

【0137】

図３２は、増加する流量に伴う、本セクションに開示されるＨＰＰＤ減衰装置のデッドボリュームおよび減衰装置入口での圧力を示す。具体的には、減衰装置の入口における圧力は、流量に比例して増加する。デッドボリュームは７０ｍＬ／分の流量で安定する。デッドボリュームは、バイオプロセシングバッグの総容積を低下させることによって減少させることができる。しかしながら、強固な筐体は、安定した減衰効果を達成するという大きな役割を果たした。デッドボリュームおよび圧力に影響を及ぼし得る追加のパラメータは、ポンプ、減衰装置および流体容器の相対位置によって調整することができる動圧の変化であり得る。動圧の変化は、減衰装置内の圧力平衡に影響を及ぼすことができ、したがって減衰装置内のデッドボリュームに影響を及ぼすことができる。この効果は、より高い流量（例えば、２００ｍＬ／分）では無視できるものであり得る。別のパラメータは、起点の流体容器、ポンプおよび減衰装置の間の空のチュービングの容積であり得る。減衰装置内部の空気の量は、システムの最初の充填工程が行われている間に減衰装置内に圧送される空のチュービング内の空気の体積によって決定することができる。図３２では、菱形の記号はデッドボリュームの値を表し、正方形は測定された圧力を表す。

【0138】

次に、脈動に対するチュービング直径および長さの影響を調べた。減衰効果は、シリコーンチュービングの弾性による脈動の吸収によって得られる。蠕動式ポンプを使用して、一定流量で３つの異なるチュービング直径を調査した。チュービング直径が減少するにつれて、測定された脈動が有意に低下することが示された。測定するために、１メートルの一定の長さを有する異なる内径のチュービングに接続された蠕動式ポンプ（モデルＷａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ ３２３）で水を圧送した。チュービングの内径が増加するにつれて、一定の流束を達成するためにポンピングＲＰＭが減少した。脈動は、ＭＡＳＴＥＲＦＬＥＸ（登録商標）超音波流量センサを用いて２０ｍｓの測定間隔で測定した。分析のために、設定ごとに３００個の測定点を分析し、算術平均および標準偏差を計算した。流量標準偏差の低下は、改善された脈動減衰を示す。

【0139】

図３３Ａは、１．６ｍｍの内径、１メートルの固定長を有するチュービングに対する、２８５ｒｐｍのポンプ速度での脈動の調査を示す。算術平均は７５．６ｍＬ／分であり、標準偏差は３．４ｍＬ／分である。図３３Ｂは、３．２ｍｍの内径、１メートルの固定長を有するチュービングに対する、７０ｒｐｍのポンプ速度での脈動の調査を示す。算術平均は７７．３ｍＬ／分であり、標準偏差は６．７ｍＬ／分である。図３３Ｃは、６ｍｍの内径、１メートルの固定長を有するチュービングに対する、２０ｒｐｍのポンプ速度での脈動の調査を示す。算術平均は７７．３ｍＬ／分であり、標準偏差は６．７ｍＬ／分である。より小さいチュービング内径およびそれぞれのより高い圧送速度を使用すると、流量の標準偏差が有意に減少し、同時に脈動が低下した。

【0140】

次に、チュービングの長さを増加させることの脈動減衰効果を調査した。これは、チュービング直径の低下に加えて、チュービングの長さを増加させることが、脈動をさらに低下させることができることを実証することができる。しかしながら、これは増加した圧力損失をもたらす。試験のために、異なるチュービング長さおよび１．６ｍｍの一定の内径に接続された蠕動式ポンプを用いて水を圧送した。高い背圧のため、他の設定と同等の流量に達するために、２０メートルのチュービング長ではポンピングＲＰＭを増加させた。脈動は、超音波流量センサを用いて２０ｍｓの測定間隔で測定した。分析のために、設定ごとに３００個の測定点を分析し、算術平均および標準偏差を計算した。流量標準偏差の低下は、改善された脈動減衰を示す。

【0141】

図３４Ａは、１メートルの固定長、１．６ｍｍの内径および２８５ｒｐｍのポンプ速度を有するチュービングに対する脈動の調査を示す。算術平均は７５．６ｍＬ／分であり、標準偏差は３．４ｍＬ／分である。図３４Ｂは、２メートルの固定長、１．６ｍｍの内径、２８５ｒｐｍのポンプ速度を有するチュービングに対する脈動の調査を示す。算術平均は７７．７ｍＬ／分であり、標準偏差は２．０ｍＬ／分である。図３４Ｃは、２０メートルの固定長、１．６ｍｍの内径および４００ｒｐｍのポンプ速度を有するチュービングに対する脈動の調査を示す。算術平均は８５．８ｍＬ／分であり、標準偏差は１．６ｍＬ／分である。より長いチュービングおよびそれぞれのより高い圧送速度を使用すると、流量の標準偏差を有意に減少させ、脈動を低減することができる。本明細書に開示されるＨＰＰＤ減衰装置を利用することと比較して、デッドボリュームをさらに減少させることができ、脈動減衰のためのチュービングのみを使用する場合、別個の呼び水工程をスキップすることができる。しかしながら、チュービングの延長された長さにわたる圧力損失は、ＨＰＰＤ減衰装置を利用するときよりもはるかに大きかった。

【0142】

上記の実験に使用した器具を以下の表に示す：

【0143】

Ｖ．ＲＮＡワクチン
本開示の特定の局面は、個別化がんワクチン（ＰＣＶ）を含む薬学的組成物の生産、混合または製造に関する。いくつかの態様において、ＰＣＶは、例えばｍＲＮＡワクチンを含むＲＮＡワクチンである。例示的なＲＮＡワクチンの特徴を以下に記載する。いくつかの態様において、本開示は、以下に記載されるＲＮＡワクチンの特徴／配列の１つ以上を含むＲＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡ分子を提供する。いくつかの態様において、ＲＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡ分子は一本鎖ｍＲＮＡポリヌクレオチドである。他の態様において、本開示は、以下に記載されるＲＮＡワクチンの特徴／配列の１つ以上を含むＲＮＡ分子をコードするＤＮＡポリヌクレオチドを提供する。

【0144】

個別化がんワクチンは、潜在的な免疫刺激活性を有すると同定された個別化ネオ抗原（すなわち、患者のがんにおいて特異的に発現される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ））を含む。本明細書に記載の態様において、ＰＣＶは核酸、例えばメッセンジャーＲＮＡである。したがって、理論に拘束されることを望むものではないが、投与されると、個別化がんワクチンは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって取り込まれ、翻訳され、発現されたタンパク質は、ＡＰＣの表面上の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子を介して提示されると考えられる。これは、ＴＡＡを発現するがん細胞に対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびメモリーＴ細胞依存性免疫応答の両方の誘導をもたらす。

【0145】

ＰＣＶは、典型的には、複数のネオ抗原エピトープ（「ネオエピトープ」）、例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２８個、２９個もしくは３０個のネオエピトープ、または少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２８個、２９個もしくは３０個のネオエピトープを含み、任意に個々のネオエピトープ間にリンカー配列を有する。いくつかの態様において、本明細書で使用されるネオエピトープは、患者のがんに特異的であるが、患者の正常細胞には見られない新規エピトープを指す。いくつかの態様において、ネオエピトープは、ＭＨＣに結合した場合にＴ細胞に提示される。いくつかの態様において、ＰＣＶは、５’ｍＲＮＡキャップ類縁体、５’ＵＴＲ、シグナル配列、抗原発現を促進するドメイン、３’ＵＴＲ、および／またはポリＡ尾部も含む。いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異から生じる１０～２０個のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する少なくとも５のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する５～２０のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する５～１０のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。

【0146】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードする１種以上のポリヌクレオチド配列を含む。例えば、アミノ酸リンカーは、２つの患者特異的ネオエピトープ配列の間、患者特異的ネオエピトープ配列と融合タンパク質タグ（例えば、ＭＨＣ複合体ポリペプチドに由来する配列を含む）の間、または分泌シグナルペプチドと患者特異的ネオエピトープ配列の間で使用することができる。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は複数のリンカーをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する５～２０個のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含み、各エピトープをコードするポリヌクレオチドは、リンカー配列をコードするポリヌクレオチドによって分離されている。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する５～１０個のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含み、各エピトープをコードするポリヌクレオチドは、リンカー配列をコードするポリヌクレオチドによって分離されている。いくつかの態様において、リンカー配列をコードするポリヌクレオチドはまた、Ｎ末端融合タグ（例えば、分泌シグナルペプチド）をコードするポリヌクレオチドとネオエピトープのうちの１つをコードするポリヌクレオチドとの間、および／またはネオエピトープのうちの１つをコードするポリヌクレオチドとＣ末端融合タグ（例えば、ＭＨＣポリペプチドの一部を含む）をコードするポリヌクレオチドとの間に存在する。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子によってコードされる２つ以上のリンカーは、異なる配列を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、複数のリンカーをコードし、そのすべてが同じアミノ酸配列を共有する。

【0147】

様々なリンカー配列が当技術分野で公知である。いくつかの態様において、リンカーは柔軟なリンカーである。いくつかの態様において、リンカーは、Ｇ、Ｓ、Ａおよび／またはＴ残基を含む。いくつかの態様において、リンカーはグリシン残基およびセリン残基からなる。いくつかの態様において、リンカーは、約５～約２０アミノ酸長または約５～約１２アミノ酸長、例えば、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０アミノ酸長である。いくつかの態様において、リンカーは、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子のリンカーは、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子のリンカーは、配列ＧＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号２０）を含むＤＮＡによってコードされる。

【0148】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、５’キャップを含む。基本的なｍＲＮＡキャップ構造は、２つのヌクレオシド（例えば、２つのグアニン）と遠位グアニン上の７－メチル基、すなわち、ｍ^７ＧｐｐｐＧとの間に５’－５’三リン酸結合を含むことが知られている。例示的なキャップ構造は、例えば、米国特許第８，１５３，７７３号および同第９，２９５，７１７号、ならびにＫｕｈｎ，Ａ．Ｎ．ら（２０１０）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７：９６１－９７１に見ることができる。いくつかの態様において、５’キャップは、構造ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐＧを有する。いくつかの態様において、５’キャップはβ－Ｓ－ＡＲＣＡキャップである。Ｓ－ＡＲＣＡキャップ構造は、（例えば、ｍ^７ＧのＣ２’位に）２’－Ｏメチル置換およびリン酸基の１つ以上にＳ置換を含む。いくつかの態様において、５’キャップは、以下の構造を含む：

【0149】

いくつかの態様において、５’キャップは、β－Ｓ－ＡＲＣＡのＤ１ジアステレオ異性体（例えば、米国特許第９，２９５，７１７号を参照）である。上記構造中の＊は、２つのジアステレオ異性体（Ｄ１およびＤ２と命名）中に存在することができるステレオジェニックＰ中心を示す。β－Ｓ－ＡＲＣＡまたはβ－Ｓ－ＡＲＣＡのＤ１ジアステレオマー（Ｄ１）は、β－Ｓ－ＡＲＣＡのＤ２ジアステレオマー（β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ２））と比較してＨＰＬＣカラムで最初に溶出し、したがってより短い保持時間を示すβ－Ｓ－ＡＲＣＡのジアステレオマーである。ＨＰＬＣは、好ましくは分析ＨＰＬＣである。一態様において、好ましくは以下のフォーマット：５μｍ、４．６×２５０ｍｍのＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ－１８－Ｔ ＲＰカラムが分離のために使用され、１．３ｍｌ／分の流量を適用することができる。一態様において、１５分以内の酢酸アンモニウム中のメタノールの勾配、例えば０．０５Ｍ酢酸アンモニウム中のメタノール、ｐＨ＝５．９の０～２５％の直線勾配が使用される。ＵＶ検出（ＶＷＤ）は２６０ｎｍで行うことができ、蛍光検出（ＦＬＤ）は２８０ｎｍでの励起および３３７ｎｍの検出で行うことができる。

【0150】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、５’ＵＴＲを含む。ｍＲＮＡ中のタンパク質コード配列に対して５’に見出される特定の非翻訳配列は、翻訳効率を高めることが示されている。例えばＫｏｚａｋ，Ｍ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７－９５０を参照されたい。いくつかの態様において、５’ＵＴＲは、ヒトアルファグロビンｍＲＮＡからの配列を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）の５’ＵＴＲ配列を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の５’ＵＴＲ配列は、配列ＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号６）を含むＤＮＡによってコードされる。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の５’ＵＴＲ配列は、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の５’ＵＴＲ配列は、配列ＧＧＣＧＡＡＣＴＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号４）を含むＤＮＡによってコードされる。

【0151】

本明細書において提供される方法のいくつかの態様において、例示的ＲＮＡワクチンの定常領域は、配列番号２４のリボヌクレオチド配列（５’→３’）を含む。最初の２つのＧ残基間の結合は、例えば、５’キャッピング構造について表６および図１８に示されるような異常な結合（５’→５’）－ｐｐ_ｓｐ－である。「Ｎ」は、（任意のリンカーによって分離された）１つ以上の（例えば、１～２０の）ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列の位置を指す。腫瘍特異的配列の挿入部位（Ｃ１３１～Ａ１３２；太字でマークする）を太字で示す。例示的なＲＮＡ配列中の修飾塩基および一般的でない連結については表６を参照されたい。

【0152】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む。当技術分野で公知のように、分泌シグナルペプチドは、翻訳時にポリペプチドを小胞体から分泌経路に輸送するように指示するアミノ酸配列である。いくつかの態様において、シグナルペプチドは、ＭＨＣポリペプチド等のヒトポリペプチドに由来する。例えば、ヒト樹状細胞におけるＭＨＣクラスＩおよびＩＩエピトープのプロセシングおよび提示を改善する例示的な分泌シグナルペプチドを記載するＫｒｅｉｔｅｒ，Ｓ．ら（２００８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０：３０９－３１８を参照されたい。いくつかの態様において、翻訳時に、シグナルペプチドは、ＲＮＡワクチンによってコードされる１種以上のネオエピトープ配列に対してＮ末端にある。いくつかの態様において、分泌シグナルペプチドは、配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の分泌シグナルペプチドは、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の分泌シグナルペプチドは、配列ＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号８）を含むＤＮＡによってコードされる。

【0153】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、少なくとも膜貫通および細胞質ドメインの一部をコードするポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、膜貫通および／または細胞質ドメインは、ＭＨＣ分子の膜貫通／細胞質ドメインに由来する。「主要組織適合複合体」という用語および略語「ＭＨＣ」は、すべての脊椎動物で生じる遺伝子の複合体に関する。正常な免疫応答におけるリンパ球と抗原提示細胞との間のシグナル伝達におけるＭＨＣタンパク質または分子の機能は、それらがペプチドに結合し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）による可能な認識のためにそれらを提示することを含む。ＭＨＣ分子は、細胞内プロセシング区画内のペプチドに結合し、抗原提示細胞の表面上のこれらのペプチドをＴ細胞に提示する。ＨＬＡとも呼ばれるヒトＭＨＣ領域は、６番染色体上に位置し、クラスＩ領域およびクラスＩＩ領域を含む。クラスＩアルファ鎖は、約４４ｋＤａの分子量を有する糖タンパク質である。このポリペプチド鎖は、３５０アミノ酸残基を幾分超える長さを有する。これは、３つの機能的領域、すなわち外部、膜貫通および細胞質領域に分けることができる。外部領域は、２８３アミノ酸残基の長さを有し、アルファ１、アルファ２およびアルファ３の３つのドメインに分けられる。これらのドメインおよび領域は、通常、クラスＩ遺伝子の別個のエクソンによってコードされる。膜貫通領域は、原形質膜の脂質二重層に及ぶ。これは、通常、アルファヘリックスに配置された２３個の疎水性アミノ酸残基からなる。細胞質領域、すなわち細胞質に面し、膜貫通領域に接続している部分は、典型的には３２アミノ酸残基の長さを有し、細胞骨格の要素と相互作用することができる。アルファ鎖は、ベータ２－ミクログロブリンと相互作用し、したがって、細胞表面上にアルファ－ベータ２二量体を形成する。「ＭＨＣクラスＩＩ」または「クラスＩＩ」という用語は、主要組織適合複合体クラスＩＩタンパク質または遺伝子に関する。ヒトＭＨＣクラスＩＩ領域内には、クラスＩＩα鎖遺伝子およびβ鎖遺伝子のＤＰ、ＤＱおよびＤＲサブ領域が存在する（すなわち、ＤＰα、ＤＰβ、ＤＱα、ＤＱβ、ＤＲαおよびＤＲβ）。クラスＩＩ分子は、それぞれアルファ鎖およびベータ鎖からなるヘテロ二量体である。両方の鎖は、３１～３４ｋＤａ（ａ）または２６～２９ｋＤＡ（ベータ）の分子量を有する糖タンパク質である。アルファ鎖の全長は２２９～２３３アミノ酸残基まで変動し、ベータ鎖の全長は２２５～２３８残基まで変動する。アルファ鎖およびベータ鎖はいずれも、外部領域、接続ペプチド、膜貫通領域および細胞質尾部からなる。外部領域は、２つのドメイン、アルファ１およびアルファ２、またはベータ１およびベータ２からなる。接続ペプチドは、それぞれアルファ鎖およびベータ鎖中のベータおよび９残基長である。接続ペプチドは、アルファ鎖およびベータ鎖の両方において２３アミノ酸残基からなる膜貫通領域に２つのドメインを接続する。細胞質領域、すなわち細胞質に面し、膜貫通領域に接続している部分の長さは、アルファ鎖では３～１６残基、ベータ鎖では８～２０残基で変化する。例示的な膜貫通／細胞質ドメイン配列は、米国特許第８，１７８，６５３号および同第８，６３７，００６号に記載されている。いくつかの態様において、翻訳時に、膜貫通および／または細胞質ドメインは、ＲＮＡワクチンによってコードされる１種以上のネオエピトープ配列のＣ末端にある。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインは、配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および／または細胞質ドメインは、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む。いくつかの態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および／または細胞質ドメインは、配列ＡＴＣＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＡＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＣＴＡＣＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＡＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１１）を含むＤＮＡによってコードされる。

【0154】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、１種以上のネオエピトープ配列に対してＮ末端である分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、１種以上のネオエピトープ配列に対してＣ末端である膜貫通および／または細胞質ドメインをコードするポリヌクレオチド配列の両方を含む。そのような配列を組み合わせることにより、ヒト樹状細胞におけるＭＨＣクラスＩおよびＩＩエピトープのプロセシングおよび提示が改善されることが示されている。例えば、Ｋｒｅｉｔｅｒ，Ｓ．ら（２００８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０：３０９－３１８を参照されたい。

【0155】

骨髄ＤＣでは、ＲＮＡはサイトゾル中に放出され、ポリ－ネオエピトープペプチドに翻訳される。ポリペプチドは、抗原提示を増強するための追加の配列を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドのＮ－末端のＭＨＣＩ重鎖からのシグナル配列（ｓｅｃ）を使用して、新生分子を小胞体に標的化し、これはＭＨＣＩ提示効率を高めることが示されている。理論に拘束されることを望むものではないが、ＭＨＣＩ重鎖の膜貫通および細胞質ドメインは、ＭＨＣＩＩ提示を改善することが示されたエンドソーム／リソソーム区画にポリペプチドを誘導すると考えられる。

【0156】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、３’ＵＴＲを含む。ｍＲＮＡ中のタンパク質コード配列に対して３’に見出される特定の非翻訳配列は、ＲＮＡ安定性、翻訳およびタンパク質発現を改善することが示されている。３’ＵＴＲとしての使用に適したポリヌクレオチド配列は、例えば、ＰＧ公開番号、米国特許出願公開第２０１９００７１６８２号に記載されている。いくつかの態様において、３’ＵＴＲは、ＡＥＳの３’非翻訳領域もしくはその断片および／またはミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡを含む。「ＡＥＳ」というは、スプリットのアミノ末端エンハンサー（Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ Ｏｆ Ｓｐｌｉｔ）に関し、ＡＥＳ遺伝子を含む（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１６６を参照）。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、タンパク質のｇｒｏｕｃｈｏ／ＴＬＥファミリーに属し、ホモオリゴマーとして、または他のファミリーメンバーとのヘテロオリゴマー（ｏｌｏｇｉｍｅｒ）として機能して、他のファミリーメンバー遺伝子の発現を優位に抑制することができる。例示的なＡＥＳ ｍＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩ参照配列アクセッション番号ＮＭ＿１９８９６９で提供される。「ＭＴ＿ＲＮＲ１」という用語は、ミトコンドリアにコードされる１２Ｓ ＲＮＡに関し、ＭＴ＿ＲＮＲ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５４９を参照）を含む。このＲＮＡ遺伝子はＭｔ＿ｒＲＮＡクラスに属する。ＭＴ－ＲＮＲ１に関連する疾患には、拘束型心筋症および聴覚神経障害が含まれる。その関連経路の中には、真核生物におけるリボソーム生合成およびＣＦＴＲ翻訳忠実度（クラスＩ変異）がある。例示的なＭＴ＿ＲＮＲ１ＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩ参照配列アクセッション番号ＮＣ＿０１２９２０の配列内に存在する。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）および配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣ（配列番号１６）を含むＤＮＡによってコードされる。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１８）を含むＤＮＡによってコードされる。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣ（配列番号１６）および配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１８）を含むＤＮＡによってコードされる。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子の３’ＵＴＲは、配列ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＴ（配列番号１４）を含むＤＮＡによってコードされる。

【0157】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、その３’末端にポリ（Ａ）尾部を含む。いくつかの態様において、ポリ（Ａ）尾部は、５０個超または１００個超のアデニンヌクレオチドを含む。例えば、いくつかの態様において、ポリ（Ａ）尾部は１２０個のアデニンヌクレオチドを含む。このポリ（Ａ）尾部は、ＲＮＡ安定性および翻訳効率を高めることが実証されている（Ｈｏｌｔｋａｍｐ，Ｓら（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０８：４００９－４０１７）。いくつかの態様において、ポリ（Ａ）尾部を含むＲＮＡは、少なくとも５０、１００または１２０個のアデニン連続ヌクレオチドをコードするポリヌクレオチド配列およびＩＩＳ型制限エンドヌクレアーゼに対する認識配列を転写の５’→３’方向に含むＤＮＡ分子を転写することによって生成される。翻訳を改善する例示的なポリ（Ａ）尾部および３’ＵＴＲ配列は、例えば、米国特許第９，４７６，０５５号に見られる。

【0158】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、以下の一般構造を（５’→３’方向に）含む。（１）５’キャップ；（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列；（４）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列；（５）３’ＵＴＲであって、（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片と、（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片と、を含む３’ＵＴＲと、（６）ポリ（Ａ）配列。いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、５’→３’方向に、ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）；およびポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）を含む。有利には、構造または配列のこの組合せおよび配向を含むＲＮＡワクチンは、ＲＮＡ安定性の改善、翻訳効率の向上、抗原提示および／またはプロセシングの改善（例えば、ＤＣによる）、ならびにタンパク質発現の増加のうちの１つ以上を特徴とする。

【0159】

いくつかの態様において、本開示のＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、配列番号２４の配列を（５’→３’方向に）含む。例えば、図１７を参照されたい。いくつかの態様において、Ｎは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または３０の異なるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列を指す。いくつかの態様において、Ｎは、１つ以上のリンカー－エピトープモジュール（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または３０の異なるリンカー－エピトープモジュール）をコードするポリヌクレオチド配列を指す。いくつかの態様において、Ｎは、１つ以上のリンカー－エピトープモジュール（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、または３０の異なるリンカー－エピトープモジュール）および３’末端の追加のアミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列を指す。

【0160】

いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、少なくとも１種のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列をさら含み、少なくとも１種のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。いくつかの態様において、ＲＮＡ分子は、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個の異なるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列を含む。

【0161】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、５’→３’方向に、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列、およびネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーおよびネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、リンカー－ネオエピトープモジュール（例えば、同じオープンリーディングフレーム内の５’→３’方向の連続配列）を形成する。いくつかの態様において、リンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間、または配列番号１の配列と配列番号２の配列との間にある。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２８個、２９個または３０個のリンカー－エピトープモジュールを含む。いくつかの態様において、リンカー－エピトープモジュールのそれぞれは、異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個のリンカー－エピトープモジュールを含み、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個の異なるネオエピトープをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、５個、１０個または２０個のリンカー－エピトープモジュールを含む。いくつかの態様において、リンカー－エピトープモジュールのそれぞれは、異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、リンカー－エピトープモジュールは、同じオープンリーディングフレーム内で５’→３’方向に連続配列を形成する。いくつかの態様において、第１のリンカー－エピトープモジュールのリンカーをコードするポリヌクレオチド配列は、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の３’である。いくつかの態様において、最後のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列の５’である。

【0162】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、少なくとも８００ヌクレオチド、少なくとも１０００ヌクレオチド、または少なくとも１２００ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンは２０００ヌクレオチド未満の長さである。いくつかの態様において、ＲＮＡワクチンは、少なくとも８００ヌクレオチドであるが２０００ヌクレオチド未満の長さ、少なくとも１０００ヌクレオチドであるが２０００ヌクレオチド未満の長さ、少なくとも１２００ヌクレオチドであるが２０００ヌクレオチド未満の長さ、少なくとも１４００ヌクレオチドであるが２０００ヌクレオチド未満の長さ、少なくとも８００ヌクレオチドであるが１４００ヌクレオチド未満の長さ、または少なくとも８００ヌクレオチドであるが２０００ヌクレオチド未満の長さである。例えば、上記の要素を含むＲＮＡワクチンの定常領域は、およそ８００ヌクレオチド長である。いくつかの態様において、５個の患者特異的ネオエピトープ（例えば、それぞれが２７個のアミノ酸をコードする）を含むＲＮＡワクチンは、１３００ヌクレオチド長を超える。いくつかの態様において、１０個の患者特異的ネオエピトープ（例えば、それぞれが２７個のアミノ酸をコードする）を含むＲＮＡワクチンは、１８００ヌクレオチド長を超える。

【0163】

リポプレックス／リポソーム
いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、リポプレックスナノ粒子またはリポソームに配合される。いくつかの態様において、ＲＮＡのためのリポプレックスナノ粒子製剤（ＲＮＡ－リポプレックス）を使用して、本開示のＲＮＡワクチンのＩＶ送達を可能にする。いくつかの態様において、合成カチオン性脂質（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびリン脂質１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含むＲＮＡがんワクチン用のリポプレックスナノ粒子製剤を、例えばＩＶ送達を可能にするために使用する。ＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥリポソーム成分は、脾臓および他のリンパ器官における抗原－提示細胞のＩＶ送達および標的化のために最適化されている。

【0164】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡ分子は、例えば、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびリン脂質１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む１種以上のカチオン性脂質を含む薬学的組成物と混合される。一態様において、薬学的組成物は少なくとも１種の脂質を含む。一態様において、薬学的組成物は少なくとも１種のカチオン性脂質を含む。カチオン性脂質は、モノカチオン性またはポリカチオン性であり得る。任意のカチオン性両親媒性分子、例えば、少なくとも１つの親水性および親油性部分を含む分子は、本発明の意味の範囲内のカチオン性脂質である。一態様において、正電荷は少なくとも１種のカチオン性脂質によって占められ、負電荷はＲＮＡによって占められる。一態様において、薬学的組成物は、少なくとも１種のヘルパー脂質を含む。ヘルパー脂質は、中性またはアニオン性脂質であり得る。ヘルパー脂質は、天然脂質、例えばリン脂質もしくは天然脂質の類縁体、または完全合成脂質、または天然脂質と類似性のない脂質様分子であり得る。一態様において、カチオン性脂質および／またはヘルパー脂質は、二重層形成脂質である。

【0165】

一態様において、少なくとも１種のカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）またはその類縁体もしくは誘導体、および／または１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）またはその類縁体もしくは誘導体を含む。

【0166】

一態様において、少なくとも１種のヘルパー脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）またはその類縁体もしくは誘導体、コレステロール（Ｃｈｏｌ）またはその類縁体もしくは誘導体、および／または１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）またはその類縁体もしくは誘導体を含む。

【0167】

一態様において、少なくとも１種のカチオン性脂質対少なくとも１種のヘルパー脂質のモル比は、１０：０～３：７、好ましくは９：１～３：７、４：１～１：２、４：１～２：３、７：３～１：１、または２：１～１：１、好ましくは約１：１である。一態様において、この比において、カチオン性脂質のモル量は、カチオン性脂質のモル量にカチオン性脂質中の正電荷の数を乗じたものから生じる。

【0168】

一態様において、脂質は、当該ＲＮＡをカプセル化する小胞に含まれる。小胞は、多層小胞、単層小胞、またはそれらの混合物であり得る。小胞は、リポソームであり得る。

【0169】

本明細書に記載のリポプレックスまたはリポソームは、ＲＮＡに対するカチオン性脂質の（＋／－）電荷比に応じて正電荷対負電荷を調整し、ＲＮＡとカチオン性脂質を混合することによって形成することができる。本明細書に記載の薬学的組成物中のＲＮＡに対するカチオン性脂質の＋／－電荷比を、以下の式によって計算することができる。（＋／－電荷比）＝［（カチオン性脂質量（ｍｏｌ））＊（カチオン性脂質中の正電荷の総数）］：［（ＲＮＡ量（ｍｏｌ））＊（ＲＮＡ中の負電荷の総数）］。ＲＮＡ量およびカチオン性脂質量は、ナノ粒子の調製時の負荷量を考慮して当業者が容易に決定することができる。例示的な薬学的組成物のさらなる説明については、例えば、ＰＧ公開番号、米国特許出願公開第２０１５００８６６１２号を参照されたい。

【0170】

一態様において、薬学的組成物中の正電荷対負電荷の全電荷比（例えば、生理的ｐＨで）は、１．４：１～１：８、好ましくは１．２：１～１：４、例えば１：１～１：３、例えば１：１．２～１：２、１：１．２～１：１．８、１：１．３～１：１．７、特に１：１．４～１：１．６、例えば約１：１．５である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、ナノ粒子の正電荷対負電荷の全電荷比は、

である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、薬学的組成物の正電荷対負電荷の全電荷比は、１．６：２（０．８）～１：２（０．５）または１．６：２（０．８）～１．１：２（０．５５）である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、薬学的（ｐｈａｒｍａｃｅｔｉｃａｌ）組成物の正電荷対負電荷の全電荷比は１．３：２（０．６５）である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は１．０：２．０以上である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は１．９：２．０以下である。いくつかの態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は、１．０：２．０以上１．９：２．０以下である。当業者には明らかなように、本開示の薬学的組成物は、ＲＮＡを含む第１の薬学的組成物と、脂質を含む第２の薬学的組成物とを含み得、本開示の方法およびシステムを使用して混合した場合、上述の正電荷対負電荷が達成される。

【0171】

一態様において、薬学的組成物は、１０：０～１：９、好ましくは８：２～３：７、より好ましくは７：３～５：５のモル比でＤＯＴＭＡおよびＤＯＰＥを含み、ＤＯＴＭＡ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は、１．８：２～０．８：２、より好ましくは１．６：２～１：２、さらにより好ましくは１．４：２～１．１：２、さらにより好ましくは約１．２：２である。一態様において、薬学的組成物は、１０：０～１：９、好ましくは８：２～３：７、より好ましくは７：３～５：５のモル比でＤＯＴＭＡおよびコレステロールを含み、ＤＯＴＭＡ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は、１．８：２～０．８：２、より好ましくは１．６：２～１：２、さらにより好ましくは１．４：２～１．１：２、さらにより好ましくは約１．２：２である。一態様において、薬学的組成物は、１０：０～１：９、好ましくは８：２～３：７、より好ましくは７：３～５：５のモル比でＤＯＴＡＰおよびＤＯＰＥを含み、ＤＯＴＭＡ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は、１．８：２～０．８：２、より好ましくは１．６：２～１：２、さらにより好ましくは１．４：２～１．１：２、さらにより好ましくは約１．２：２である。一態様において、薬学的組成物は、２：１～１：２、好ましくは２：１～１：１のモル比でＤＯＴＭＡとＤＯＰＥを含み、ＤＯＴＭＡ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は１．４：１以下である。一態様において、薬学的組成物は、２：１～１：２、好ましくは２：１～１：１のモル比でＤＯＴＭＡとコレステロールを含み、ＤＯＴＭＡ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は１．４：１以下である。一態様において、薬学的組成物は、２：１～１：２、好ましくは２：１～１：１のモル比でＤＯＴＡＰとＤＯＰＥを含み、ＤＯＴＡＰ中の正電荷対ＲＮＡ中の負電荷の電荷比は１．４：１以下である。当業者には明らかなように、本開示の薬学的組成物は、ＲＮＡを含む第１の薬学的組成物と、脂質（例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、ＤＯＴＡＰおよび／またはコレステロールを含む）を含む第２の薬学的組成物とを含み得、本開示の方法およびシステムを使用して混合した場合、上述の正電荷対負電荷比および／またはモル比が達成される。

【0172】

一態様において、本開示の方法およびシステムに従って本明細書に記載の２つ以上の薬学的組成物を組み合わせた後に生産または製造されるリポプレックスまたはリポソームのゼータ電位は、－５以下、－１０以下、－１５以下、－２０以下または－２５以下である。様々な態様において、リポプレックスまたはリポソームのゼータ電位は、－３５以上、－３０以上または－２５以上である。一態様において、ナノ粒子またはリポソームは、０ｍＶ～－５０ｍＶ、好ましくは０ｍＶ～－４０ｍＶまたは－１０ｍＶ～－３０ｍＶのゼータ電位を有する。

【0173】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムに従って本明細書に記載される２つ以上の薬学的組成物を組み合わせた後に生産または製造されるリポプレックスまたはリポソームの分子量分散度は、動的光散乱によって測定される場合、０．５以下、０．４以下または０．３以下である。

【0174】

いくつかの態様において、本開示の方法およびシステムに従って本明細書に記載される２つ以上の薬学的組成物を組み合わせた後に生産または製造されるナノ粒子またはリポソームは、動的光散乱によって測定される場合、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２００ｎｍ～約６００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約７００ｎｍまたは約２５０ｎｍ～約５５０ｎｍの範囲の平均直径を有する。

【0175】

本開示の方法およびシステムとともに使用することができるＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子のいずれかをコードするＤＮＡ分子を、本明細書中にさらに提供する。例えば、いくつかの態様においては、本開示のＤＮＡ分子は、以下の一般構造（５’→３’方向）を含む：（１）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）をコードするポリヌクレオチド配列；（２）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列；（３）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列；（４）３’ＵＴＲをコードするポリヌクレオチド配列であって、（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡまたはその断片の３’非翻訳領域；および（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片を含む３’ＵＴＲ；ならびに（５）ポリ（Ａ）配列をコードするポリヌクレオチド配列。いくつかの態様において、本開示のＤＮＡ分子は、５’→３’方向に、ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＴＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号２２）およびポリヌクレオチド配列ＡＴＣＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＡＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＣＴＡＣＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＡＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＧＣＣＴＡＧＴＡＡＣＴＣＧＡＧＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＴ（配列番号２３）を含む。

【0176】

いくつかの態様において、ＤＮＡ分子は、５’→３’方向に、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列およびネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーおよびネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、リンカー－ネオエピトープモジュール（例えば、同じオープンリーディングフレーム内の５’→３’方向の連続配列）を形成する。いくつかの態様において、リンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間、または配列番号２２の配列と配列番号２３の配列との間にある。いくつかの態様において、ＤＮＡ分子は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２８、２９、または３０のリンカー－エピトープモジュールを含み、各リンカー－エピトープモジュールは異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、ＤＮＡ分子は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、ＤＮＡ分子は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０の異なるネオエピトープをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、ＤＮＡ分子は、５、１０、または２０のリンカー－エピトープモジュールを含む。いくつかの態様において、リンカー－エピトープモジュールのそれぞれは、異なるネオエピトープをコードする。いくつかの態様において、リンカー－エピトープモジュールは、同じオープンリーディングフレーム内で５’→３’方向に連続配列を形成する。いくつかの態様において、第１のリンカー－エピトープモジュールのリンカーをコードするポリヌクレオチド配列は、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の３’である。いくつかの態様において、最後のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列の５’である。

【0177】

いくつかの態様において、本開示のＲＮＡまたはＤＮＡ分子は、５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの制御下でＲＮＡが転写されることを可能にし、ポリアデニルカセット（ポリ（Ａ）配列）を含むＩＩＳ型制限切断部位を含み、認識配列はポリ（Ａ）配列の３’側に位置するが、切断部位は上流側に位置し、したがってポリ（Ａ）配列内に位置する。ＩＩＳ型制限切断部位での制限切断は、米国特許第９，４７６，０５５号および同第１０，１０６，８００号に記載されるように、プラスミドをポリ（Ａ）配列内で線状化することを可能にする。次いで、線状化プラスミドをインビトロ転写のための鋳型として使用することができ、得られた転写物はマスクされていないポリ（Ａ）配列で終わる。米国特許第９，４７６，０５５号および同第１０，１０６，８００号に記載されているＩＩＳ型制限切断部位のいずれかを用いてもよい。

【0178】

本明細書で提供する方法のいくつかの態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子は、腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１０～２０（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０のいずれか）のネオエピトープをコードする１種以上のポリヌクレオチドを含む。特定の態様において、ＲＮＡワクチンまたはＲＮＡ分子はリポプレックスナノ粒子またはリポソームに配合される。特定の態様において、リポプレックスナノ粒子またはリポソームは、ＲＮＡワクチンのＲＮＡをカプセル化する多層構造を形成する１種以上の脂質を含む。特定の態様において、１種以上の脂質は、少なくとも１種のカチオン性脂質および少なくとも１種のヘルパー脂質を含む。特定の態様において、１種以上の脂質は、（Ｒ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２，３－ジオレイルオキシ－１－プロパンアミニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。特定の態様において、生理的ｐＨでは、リポソームの正電荷対負電荷の全電荷比は１．３：２（０．６５）である。

【0179】

特定の態様において、ＲＮＡワクチンは、５’→３’方向に、（１）５’キャップ；（２）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（３）分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列；（４）腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列；（５）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列；（６）３’ＵＴＲであって、（ａ）Ａｍｉｎｏ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ（ＡＥＳ）ｍＲＮＡの３’非翻訳領域またはその断片；および（ｂ）ミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡまたはその断片を含む３’ＵＴＲ；ならびに（７）ポリ（Ａ）配列を含むＲＮＡ分子を含む。

【0180】

特定の態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーおよび１つ以上のネオエピトープの第１をコードするポリヌクレオチド配列は、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成し、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。特定の態様において、アミノ酸リンカーは、配列ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号２１）を含む。特定の態様において、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ（配列番号１９）を含む。

【0181】

特定の態様において、ＲＮＡ分子は、５’→３’方向に、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールをさら含み、少なくとも第２のリンカー－エピトープモジュールは、アミノ酸リンカーをコードするポリヌクレオチド配列と、ネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列とを含み、第２のリンカー－ネオエピトープモジュールを形成するポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に、第１のリンカー－ネオエピトープモジュールのネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にあり、第１のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープは、第２のリンカー－エピトープモジュールのネオエピトープとは異なる。特定の態様において、ＲＮＡ分子は５のリンカー－エピトープモジュールを含み、５のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。特定の態様において、ＲＮＡ分子は１０のリンカー－エピトープモジュールを含み、１０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。特定の態様において、ＲＮＡ分子は２０のリンカー－エピトープモジュールを含み、２０のリンカー－エピトープモジュールはそれぞれ異なるネオエピトープをコードする。

【0182】

ある態様において、ＲＮＡ分子は、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列をさらに含み、アミノ酸リンカーをコードする第２のポリヌクレオチド配列は、３’方向において最も遠位にあるネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列と、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列との間にある。

【0183】

特定の態様において、５’キャップは、以下の構造のＤ１ジアステレオ異性体を含む：

【0184】

特定の態様において、５’ＵＴＲは、配列ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号５）を含む。特定の態様において、５’ＵＴＲは、配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）を含む。

【0185】

特定の態様において、分泌シグナルペプチドは、アミノ酸配列ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ（配列番号９）を含む。特定の態様において、分泌シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号７）を含む。

【0186】

特定の態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部は、アミノ酸配列ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ（配列番号１２）を含む。特定の態様において、ＭＨＣ分子の膜貫通および細胞質ドメインの少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列は、配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ（配列番号１０）を含む。

【0187】

特定の態様において、ＡＥＳ ｍＲＮＡの３’非翻訳領域は、配列ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ（配列番号１５）を含む。特定の態様において、ミトコンドリアによりコードされる１２Ｓ ＲＮＡの非コードＲＮＡは、配列ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ（配列番号１７）を含む。特定の態様において、３’ＵＴＲは、配列ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号１３）を含む。

【0188】

特定の態様において、ポリ（Ａ）配列は１２０のアデニンヌクレオチドを含む。

【0189】

特定の態様において、ＲＮＡワクチンは、５’→３’方向に、ポリヌクレオチド配列ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ（配列番号１）；腫瘍標本中に存在するがん特異的体細胞変異に起因する１つ以上のネオエピトープをコードするポリヌクレオチド配列；およびポリヌクレオチド配列ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ（配列番号２）を含むＲＮＡ分子を含む。

【実施例】

【0190】

本開示は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解されることになる。しかしながら、本実施例は、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例および態様は、例示のみを目的としており、それに照らして様々な修正または変更が当業者に提案され、本出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。

【0191】

本明細書に開示される方法およびシステムを開発する前に、これらの方法およびシステムを理解し、開発し、最適化するために様々な実験を行った。具体的には、以下の３つの段階で実験を行った。（１）蠕動式ポンプ流量の脈動を理解すること（実施例１）；（２）脈動のレベル（「ＬｏＰ」）によって測定される一貫した安定した流量を維持するために減衰装置および蠕動式ポンプ構成を開発および最適化すること（実施例２）；ならびに（３）２つの供給源からの流体を有する流れプロセスに対して、減衰装置および蠕動式ポンプの構成を最適化すること（実施例３）。これらの実験は、ＬｏＰに影響を及ぼす多数のパラメータの有効性を評価および定量化する機会を提供した。

【0192】

これらの実験の最終目標は、例えばシリンジポンプなどの他の代替物との類似性および／または他の代替物の改善を含む、許容され得るＬｏＰを有し、単回使用材料を使用して無菌のクローズド優良医薬品製造基準（「ＧＭＰ」）環境で実施することが簡単である（すなわち、本明細書に記載される薬学的製剤とともに使用するための構造材料および滅菌の検討）方法およびシステムを開発することであった。製品接触面が製品中に浸出してはならない（かつ製品は材料からいずれの種も抽出してはならない）ので、構造材料は重要であり得る。したがって、そのような材料は、例えば白金硬化シリコーンチュービングなどの本明細書に記載の薬学的組成物および製剤を含む薬学的組成物を製造または移送させる上での使用に適しているべきである。

【0193】

実施例で使用した測定および計算
非製品接触式流量計（例えば、Ｋｅｙｅｎｃｅの入力モデルＦＤ－ＸＡ１）を使用して、実施例に記載される実験における流量およびＬｏＰを監視した。標的チュービングの外径に基づいて、センサヘッドＦＤ－Ｘｓ８をクランプセットＦＤ－ＸＣＲ２またはＦＤ－ＸＣＲ１と対にした。各ＫｅｙｅｎｃｅメータをＫｅｙｓｉｇｈｔ高速データロガー（例えば、Ｕ２５４１Ａ）に接続し、付随するＫｅｙｓｉｇｈｔソフトウェアを使用して１０ｍｓごとにデータを記録した。流量計を使用してシステム内の動的流量を測定し、定常状態動作中のシステム内の動的流量を使用してＬｏＰを決定した。

【0194】

流量測定からの入口効果を排除するために、流量計は、減衰装置、コネクタ、急なカーブなどの流路のいずれの変化からも最低１０内径離れて配置した。各実験の前に、各メータを初期化し、０ｍＬ／分の流量を設定する。最低７秒が１００Ｈｚのサンプルレートで記録された。１秒間中に複数の期間（すなわち、流量ピーク間の距離）が存在したので、代表的な秒、典型的には第４または第５の秒を脈動計算とデータプロットの両方に対して使用した。いくつかの態様においては、定常状態の流れが確立された時点で、データを１０秒の期間から得た。

【0195】

脈動のレベル：脈動のレベル（「ＬｏＰ」）の計算は、データプロットに使用した代表的な秒に対して行った。この計算は以下の通りである。

【0196】

（最大流量－最小流量）／平均流量×１００。

【0197】

最大および最小流量パーセント：最大および最小流量パーセンテージは以下のように計算した：

【0198】

最大流量パーセント＝（（最大流量－平均流量）／平均流量×１００

【0199】

最小流量パーセント＝（（平均流量－最小流量）／平均流量×１００

【0200】

すべての実験について、単一の蠕動式ポンプを使用した。２つのポンプヘッドを用いた実験では、単一のポンプに２つのポンプヘッドを取り付けた。ローラと接触する４つの製品ライン（２つの別々の流れを有するデュアルヘッドポンプ）が存在する実験では、２つのポンプヘッドを有する２つの別々のポンプを使用するのとは対照的に、２つのヘッドを有する単一のポンプを使用し、２つのラインを単一のポンプヘッドに供給した。特に明記しない限り、実施例に記載のポンプの平均流量は約５０ｍＬ／分であった。

【0201】

［実施例１］蠕動式ポンプ流量脈動を理解する
本明細書に記載されるように、蠕動式ポンプからの流量は、蠕動式ポンプの性質のために時間とともに脈動または振動し得る。例えば、蠕動式ポンプを通って移動する水の流量が所与の期間にわたって測定された実験１（表１Ａ（実験の設定詳細）および表１Ｂ（実験１の結果）に記載されている）を参照されたい。簡単に説明すると、実験１は、減衰装置なしで単一のポンプヘッドを使用し、減衰装置から下流に３０ｃｍの長さのチュービングを使用して実施した。この装置は、流量変動を低減する試みなしの蠕動式ポンプシステムについて予想されるＬｏＰの実験的ベースラインに相当した。図１は、実験１のための実験装置を示す。この装置は、水の容器、蠕動式ポンプおよび蠕動式ポンプから出る水の流れを測定するための流量計を含んでいた。ポンプの平均流量は約５０ｍＬ／分であった。

【0202】

図２は、経時的に測定された蠕動式ポンプを通る水の流量を示す。図２に示されるように、流量は時間とともに著しく振動する。表１Ａおよび表１Ｂは、実験１の結果のさらなる詳細および要約を提供する。

【0203】

実験１で観察された最小流量は０未満の値に達した。しかしながら、これは以下の組み合わせに起因するものであった：（１）固有の溶液サックバック；および（２）わずかなセンサ測定誤差。

【0204】

［実施例２］一貫した定常流量を誘導するために蠕動式ポンプシステムにおける減衰装置構成を最適化する
蠕動式ポンプからの脈動を低減する１つの可能な方法は、減衰装置を使用することである。したがって、蠕動式ポンプ後の様々な設計および構成の減衰装置を調べた。高度に圧縮可能であるので、空気および／または気体は減衰装置として使用することができる。したがって、減衰装置の設計は、空気に直接開放することができるか、または流体および空気と接触する膜を有することができる。図３は、１つまたは２つの蠕動式ポンプヘッドおよび１つまたは複数の蠕動式ポンプ後の減衰装置を使用して流量を測定するための実験装置を示す。減衰装置は、蠕動式ポンプによって生成される圧力および流れの変動を低減または排除することができる。具体的には、減衰装置は、ピーク流量の間に余分な流体を吸収し、下落時に放出して流量を平滑化することができる。実験１～３では、１つのポンプヘッドを使用した。本明細書に記載される他のすべての実験は、２つのポンプヘッドを使用した。

【0205】

図３の実験装置は、蠕動式ポンプの後に減衰装置を含む。図３に示されるように、減衰装置は、Ｔ字型コネクタを有するシリンジ減衰装置である。Ｔ字型コネクタは、主ラインへの接続部に対して９０度に２つの出口を有するＴ字型の接続具であり得る。Ｔ字型コネクタは、横方向出口を有する短いパイプ片であり得る。Ｔ字型の相対的なサイズ／開口部は、減衰効率に影響を与え得る。減衰装置およびＴ字型コネクタは、図３に示されるように、蠕動式ポンプからの出口チュービングに流体的に接続される。減衰装置の一例は、シリンジ減衰装置である。蠕動式ポンプ後のチュービングは、シリンジ減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、蠕動式ポンプ後のチュービングは、シリンジに流体的に接続されたＴ字型コネクタに流体的に接続することができる。様々なＴ字型コネクタを有するシリンジ減衰装置の画像の例を図４に示す。シリンジ内の空気の体積を所与の用途に合わせて調整することができるように、シリンジのプランジャは引き戻すことができる。シリンジ内の空気は、蠕動式ポンプが作動しているときに余分な流体を一時的に貯蔵することができる空間バッファとして作用することができる。この一時的な貯蔵は空気圧を増加させることができ、蠕動式ポンプからの流量が減少すると流体を押し出す。

【0206】

以下の変数を調整することによって、図３に示される実験装置に従って水を使用するいくつかの実験（すなわち、実験２～１６）を行った：（１）使用されるポンプヘッドの数（Ｎ個のポンプヘッドを使用すると、ポンプの設定が同じであれば、おおよそ流量にＮを乗じることができる。ほとんどのポンプは、そのポンプのローラの最小および最大ＲＰＭに応じて多くの流量に調整することができる。）；（２）シリンジ減衰装置またはシリンジ減衰装置なし；（３）使用されるＴ字型コネクタのサイズ（Ｔ字が小さな開口部を有し、現在流量を制限しているまれなシナリオでない限り、ほとんどの場合、Ｔ字は流量に影響を与えない可能性がある）；（４）チュービング出口長さ（出口チュービングの長さは脈動に影響を及ぼし得る。チュービングの柔軟性が自然にシステムを減衰させるので、出口が長いほど、ＬｏＰは低くなり得る）；（５）シリンジ内の空気の体積。これらの実験（実験２～９および１２～１６）のさらなる詳細および結果を表２Ａ（実験の設定詳細）および表２Ｂ（実験の結果）に要約する。

【0207】

実験２、４、および６で達成された経時的な流量を、それぞれ図５、６および７に示す。これらの図に示されるように、２つのポンプヘッド、最大空気体積（すなわち、６０ｍＬ）での６０ｍＬシリンジ減衰装置、および６０ｃｍのチュービング出口長を使用した実験６の流量（図７）は、実験全体を通じて脈動を有意に低下させた。

【0208】

実験４は、第２のポンプヘッド（例えば、同じモータによって駆動される２つのポンプヘッドが取り付けられた単一のポンプ）の影響を評価した。これは、第２のポンプヘッドに隣接する弁を開くことによって行われた。図３を参照されたい。ＬｏＰは１３４に減少したが、図６に示されるように流量変動が依然として存在した。後続のポンプヘッドを追加すると、ＬｏＰがさらに減少する可能性がある。しかしながら、これは、システムのための製品流路およびチュービングキットの複雑さを増大させ、多くの蠕動式ポンプは２つの固定ヘッドしか有さない。

【0209】

実験２および５は、シリンジ減衰装置を追加した。これは、Ｔ字および６０ｍＬシリンジに取り付けられた弁を開くことによって達成された。図３を参照されたい。弁を開く前に、シリンジを最大位置（６０ｍＬの印）に調整し、ルアーロックＴ字に接続し、Ｔ字を出口チュービングに直列に接続し、そこでは溶液は急に曲がることなく流れる。実験２および５では、ＬｏＰ値はそれぞれ３５および２３の値まで大きく減少した。このように、シリンジ減衰装置は効果的であることが判明したが、わずかな脈動が依然として観察された。

【0210】

流量変動を低減するための別の可能な方法は、出口チュービングの長さを増加させることである。実験３および６では、実験２および５のものと比較した場合、出口チュービングの長さを３０ｃｍから６０ｃｍに変更した。ＬｏＰ値は、３５および２３（それぞれ、表２Ｂ実験２および５を参照）から２５および２１（それぞれ、表２Ｂ、実験３および６を参照されたい。）に減少した。

【0211】

実験１２～１６では、流れを効果的に減衰させることができる最小体積をよりよく理解するために、６０ｍＬシリンジ減衰装置内の空気の体積を調査した。これらの実験では、表２Ｂに報告されているように、プランジャの位置を６０、４０、２０、１０および５ｃｃの体積測定目盛りに調整し、ＬｏＰはそれぞれ２２、２１、２２、３０および４７であった。このように、減衰装置の効果がより低下した１０ｃｃと５ｃｃにプランジャ位置が調整されるまでは、ＬｏＰ間に有意差はなかった。

【0212】

実験中、減衰装置の有効性は、減衰装置／Ｔ字型システムにおける空気－液体界面の位置によって影響を受けた。したがって、実験７は、実験６と同じ装置を使用して行われたが、試験中に溶液がＴ字内に残った実験６とは異なり、実験７中には、溶液がＴ字を越えて弁内に上昇し、実験の期間中、溶液は弁内に留まることが観察された。ＬｏＰは、実験６と実験７の間で２１から２８に増加し（表２Ｂを参照）、空気－液体界面表面積が減衰装置の有効性に影響を及ぼし得ることを示唆している。ルアーティーの内径は３．１ｍｍであり、ルアー弁の内径は４．１ｍｍである。このルアーティーは強固ではないと判明したため、９．５ｍｍの内径を有するより大きなティーを実験９で試験した。ＬｏＰは１８に減少し、減衰装置／ティーシステム中気液界面表面が制御すべきパラメータであることを確認した。

【0213】

蠕動式ポンプ減衰装置を実装する能力は、構造材料、滅菌を行う能力および形状（すなわち、流体パルスに応答して空気圧がどれだけ速く加圧するか）を含む多くの変数に依存し得る。上記の実験１～１６は、減衰装置を使用して流量脈動を低下させることができるが、シリンジ減衰装置は、例えばＲＮＡワクチンなどのＲＮＡまたは脂質を含む薬学的組成物を含む本明細書に記載される薬学的組成物とともに使用するための基準（例えば、以下に説明するようなＧＭＰ用途のためのＬｏＰおよび／または無菌頑強性）を満たさないことがあり得ることを実証した。実験１～１６は、ＬｏＰは低下させることが可能であり、ＬｏＰの観察された低下を増加させるために追加のパラメータがさらに最適化されたという概念実証を提供した。このようなパラメータの１つは、ＲＮＡワクチンなどのＲＮＡまたは脂質を含む薬学的製剤とともに使用するために容易に実施することができる減衰装置を開発することであった。

【0214】

シリンジ減衰装置の他に、使用することができる別のタイプの脈動減衰装置は膜減衰装置である。したがって、蠕動式ポンプ後のチュービングは、膜減衰装置に流体的に接続することができる。いくつかの態様において、蠕動式ポンプ後のチュービングは、膜に流体的に接続されたＴ字型コネクタに流体的に接続することができる。例示的な膜減衰装置を図８に示す。膜減衰装置は、圧縮性気体がバリアとして膜を有する減衰装置を実行しているという点で、本明細書に開示される他の減衰装置と類似している。いくつかの事例では、気体と溶液の間のバリアとして作用する膜を有する圧縮可能な気体減衰装置を有するクローズドシステムを使用することができる。本明細書に記載される実験では、気体は大気であったため、このシナリオでは十分ではなかったが、クローズドシステムは、圧縮可能な気体および柔軟な膜を用いて設計することができる。膜（柔軟性、表面積、硬度計など）および圧縮可能な気体の微調整は、ＬｏＰを低減させることを補助することができる。

【0215】

膜減衰装置の潜在的な影響を調べるために、図３に示される実験装置に従って水を使用する実験を行ったが、シリンジ減衰装置を膜減衰装置で置き換えた。この実験（実験１０）のさらなる詳細および結果を表３Ａ（実験の設定詳細）および表３Ｂ（実験の結果）に要約する。

【0216】

実験１０は、柔軟な膜を備えたＴ字の減衰装置を評価した。理論的には、大気圧と組み合わせた膜は、減衰装置として作用するはずである。しかしながら、このシステムのＬｏＰは６５であり、膜は流量脈動を低減するのにわずかに有効であるに過ぎず、例えば、ＲＮＡワクチンなどのＲＮＡまたは脂質を含む薬学的組成物を含む本明細書に記載される薬学的組成物とともに使用するには依然として高すぎることが示唆された。

【0217】

膜またはシリンジの他に、気体が充填されたチュービング自体を脈動減衰装置として使用することができる可能性がある。したがって、蠕動式ポンプ後のチュービングは、チュービング減衰装置に流体的に接続することができる。チュービング減衰装置の例示的な構成が図９および１０に示されている。図９に示されるように、チュービング減衰装置は、Ｔ字型コネクタチュービング減衰装置とすることができる。このようなＴ字型コネクタチュービング減衰装置が使用される場合、蠕動式ポンプ後のチュービングは、チュービング減衰装置に流体的に接続されたＴ字型コネクタに流体的に接続することができる。チュービング減衰装置のチュービングは、蠕動式ポンプ後のチュービングと同じまたは異なる材料から作製することができる。いくつかの態様において、チュービング減衰装置のチュービングは、シリコーンとすることができる。いくつかの態様において、チュービング減衰装置は、Ｔ字型コネクタに流体的に接続された端部の反対側のチュービング減衰装置の端部が閉じられるように、クランプまたは他の物体を含むことができる。チュービング減衰装置は、封入された気体が減衰を行うことができるという点で、他の減衰装置と同様に機能する。

【0218】

図１０は、十字型または４方向コネクタを有するチュービング減衰装置の一例を示す。Ｔ字型コネクタの代わりに、図１０の４方向コネクタ（減衰効果は弁開口寸法に依存し得る）は、チュービング減衰装置の一端を閉じるためにクランプまたは他の装置を使用する代わりに、チュービング減衰装置の両端を４方向コネクタに接続することを可能にする。４方向チュービング減衰装置が使用される場合、蠕動式ポンプ後のチュービングは、チュービング減衰装置に流体的に接続された４方向コネクタに流体的に接続することができる。このため、蠕動式ポンプからの流体は、４方向コネクタの開口部のうちの１つに入り、別の開口部から出ることができるのに対して、チュービング減衰装置の両端が４方向コネクタに流体的に接続されるように、チュービング減衰装置を他の２つの使用されていない開口部に接続することができる。４方向チュービング減衰装置は、封入された気体が減衰を行うことができるという点で、他の減衰装置と同様に機能することができる。

【0219】

Ｔ字型コネクタチュービング減衰装置（図９に示される）または４方向チュービング減衰装置（図１０に示される）の潜在的な影響を調べるために、図３に示される実験装置に従って水を使用する実験を行ったが、シリンジ減衰装置をＴ字型コネクタチュービング減衰装置または４方向コネクタチュービング減衰装置で置き換えた。これらの実験（実験１１、１７および１８）のさらなる詳細および結果を表４Ａ（実験の設定詳細）および表４Ｂ（実験の結果）に要約する。

【0220】

事前準備として、実験１１は、Ｔ字／減衰装置を３０ｃｍの薄壁の柔軟なチュービング（外径７．９ｍｍ、壁の厚さ０．８ｍｍ）に置き換えた。減衰装置として薄壁の柔軟なチュービングを使用するという考え方は、チュービングの出口長さがより長いほどＬｏＰを低下させた実験３および実験６（表２Ｂを参照）に基づいている。理論に束縛されるものではないが、流体は、チュービングによって減衰され、チュービングの柔軟性が増加するにつれて（すなわち、硬いチュービングから柔軟なチュービングへの移行）、減衰効果も増加する。このことから、実験３および６で使用したチュービングと比較して、より短い長さの薄壁の柔軟なチュービングが同じＬｏＰを達成し得る。この仮説を試験するために、実験１１を行い、３０ｃｍの薄壁チュービングを用いると、ＬｏＰが１３４（表２Ｂ、実験４を参照、減衰装置なし）から１５２（表３Ｂ参照）に増加した。ＬｏＰの増加は、薄壁の柔軟なチュービングを使用することによって最初に観察されたが、実験１７および１８にさらに記載されているように、減衰装置としてチュービングを使用することの背後にある概念をさらに検討した。１片のチュービング内の封入されたある体積の空気がシリンジの空気を置き換え、ＬｏＰを効果的に低減することができれば、滅菌および溶液ホールドアップなどの多くのプロセス要件を満たすことができる。

【0221】

したがって、実験１７では、チュービングの長さが４２ｃｍ（チュービング内の空気が約３０ｃｃ）であるシリンジの代わりに、末端を塞いだ（すなわち、クランプなどで締められた）シリコーンチュービング（すなわち、図９に示されるようなＴ字型コネクタチュービング減衰装置）を利用した。さらに、取り付けをより容易にするためにＴ字の位置を変更したが、これは減衰装置に影響を及ぼさないと仮定した。表３Ｂに報告されているように、観察されたＬｏＰは１９であり、これはシリンジ減衰装置を用いた値に匹敵した（例えば、表２Ｂを参照）。これらの結果は、末端を塞いだチュービングの減衰のレベルがシリンジ減衰装置の減衰のレベルに匹敵することを示した。前述のように、シリンジの代わりに末端を塞いだチュービングを使用することの的確性は、そのようなシステムが薬学的組成物および製剤に対するＧＭＰプロセス要件を満たすことができることである。いくつかの態様において、減衰装置は、末端が開放された（すなわち、大気に開放されている）チュービング減衰装置であり得る。

【0222】

実験１８では、Ｔ字を（図１０に示されるような）「Ｘ」または「十字」のように配置された４方向コネクタと交換し、２つのポートを、ループを形成する単一のシリコーンチュービングと接続し、他の２つのポートを流体の流れのために使用した。実験１８の最終目的は、実験１７と比較して、この減衰装置の間に何らかの利点が存在するかどうかを評価することであった。実験１８のＬｏＰは、実験１７のＬｏＰと同一であった。表３Ｂを参照されたい。

【0223】

本発明者らは、いくつかの減衰装置およびチュービングキットの構成を使用してＬｏＰの有意な低下を観察し、１８～２２という低いＬｏＰ値さえ達成したが、脈動および振動のレベルは、例えばＲＮＡワクチンなどのＲＮＡまたはリポプレックスもしくはリポソームを含む脂質を含む薬学的組成物などの本明細書に記載の薬学的組成物を混合および／または製造するのになお最適ではなく、一般に、代替シリンジポンプ構成を使用した場合に観察されるＬｏＰ値よりも高い（表５Ａおよび５Ｂ、実施例２４～２６を参照）。したがって、ＬｏＰ値をさらに低下させるために追加のパラメータを評価した。ＬｏＰ値を低下させるという本発明者らの目標にかかわらず、当業者は、実施例２で観察されたＬｏＰの低下が、例えば、袋またはバイアルなどの容器中への薬学的組成物の移送および／または充填を含む、他の用途および薬学的組成物に適し得ることを理解するであろう。

【0224】

［実施例３］２つの流体源を有する流れプロセスへの減衰装置構成の適用
実験１～１８は、主に１つの流体源を有するシステムを対象とした。しかしながら、蠕動式ポンプは、２つ以上の流体源を有するシステムにおいて使用することもできる。そのような一例は、例えば、ＲＮＡまたはＲＮＡワクチンを含む第１の薬学的組成物を１種以上の脂質を含む第２の薬学的組成物と組み合わせて、ＲＮＡ－リポプレックスまたはＲＮＡリポソームを含む最終薬学的組成物を形成する場合を含む、２つの薬学的組成物を混合または組み合わせて最終薬学的組成物を形成する場合である。薬学的組成物は繊細な成分を含み、高価な成分を含有することがあり得るので、最終薬学的組成物または製剤に使用されるこれらの成分の量は、最終薬学的組成物が有効であり、安全であり、費用効果が高いかどうかにとって極めて重要であり得る。最終薬学的組成物の成分は異なる供給源または容器に由来するので、蠕動式ポンプシステムにおけるこれらの成分または中間薬学的組成物の流量は、中間薬学的組成物の混合物を含む最終薬学的組成物が有効であるための適切な割合でこれらの成分または中間薬学的組成物を効果的に混合することができないような脈動を生じないことが重要であり得る。

【0225】

例えばＲＮＡワクチンなどのＲＮＡまたは脂質を含む薬学的組成物を含む本明細書に記載の薬学的組成物は、ＲＮＡ－リポプレックスまたはＲＮＡリポソームを含む最終薬学的組成物を作製するためにしばしば混合されるので、２つの蠕動式ポンプを有する２つの異なる流体源を評価する実験を行った。特に、両方の蠕動式ポンプにわたって一貫した流量を達成することができる減衰装置のタイプを評価するために実験を行った。図１１は、１つの蠕動式ポンプおよび１つまたは複数の蠕動式ポンプ後の１つまたは複数の減衰装置を使用して２つの流体源システムの流量を測定するための実験装置を示す。図１１には１つの蠕動式ポンプのみが示されているが、いくつかの態様においては、蠕動式ポンプは、デュアルヘッド蠕動式ポンプまたは２以上のヘッドを有する蠕動式ポンプであり得る。したがって、各流体源からのチュービングは、ただ１つの蠕動式ポンプが必要とされるように、デュアルヘッド蠕動式ポンプのヘッドに取り付けることができる。いくつかの態様において、流体源の各々は、独自の蠕動式ポンプを有することができる。しかしながら、実験１９～２０で行われた実験では、各蠕動式ポンプのためのデュアルポンプヘッドの各ポンプヘッドが使用されるように、各供給源からの入口を２つの流れに分割した。実験１９および２０は単一の蠕動式ポンプを使用したが、ポンプはモータによって駆動される２つのヘッドを有していた。実験２１～２２では、各デュアルヘッド蠕動式ポンプのポンプヘッドの１つのみを使用した。

【0226】

図３と比較した場合の異なる構成に加えて、図１１の実験装置にはさらなる変更が加えられた。まず、使用した蠕動式ポンプはＷａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ Ｆｌｅｘｉｃｏｎ ＰＤ１２ｌであり、チュービング出口寸法は３．２ｍｍの内径ではなく２．４ｍｍの内径であった。実験２０は、２つの入口ラインに対して減衰装置を使用せずに、この設定で観察されたＬｏＰのベースラインを確立した。最小流量は各入口について約８０ｍＬ／分であり、これは以前に使用された約５０ｍＬ／分とは異なる。図１１に示されるように、流量計は、両方の入口ポンプの下流のみならず、Ｙ字型コネクタの下流にも配置された。

【0227】

実験１９は、減衰装置を実装した。いくつかの態様において、減衰装置は、２つの個別の、末端を塞いだチュービング減衰装置であり得る。しかしながら、出願人らは、減衰チュービングループを形成する際に、単一のチュービング減衰装置を両入口に同時に使用できることを発見した。図１２は、減衰装置ループの一例を示す。減衰ループは、ポンプ後入口ライン上の両Ｔ字型コネクタに接続することができる。さらに、溶液がループに入るのを防ぐために、減衰ループを流路の上方に取り付けた。

【0228】

実験２１および２２は、デュアルポンプヘッドを有するのとは対照的に、各入口に対して単一のポンプヘッドを利用することによってチュービングキットをさらに単純化する可能性を評価した。これにより、ポンプヘッドのすぐ上流および下流のＹ字型コネクタを不要にすることができる。しかしながら、２つの別個の入口の混合に関与するＹ字型コネクタは依然として必要とされる。

【0229】

図１１の設定を用いた実験１９～２２のさらなる詳細および結果を表５Ａ（実験の設定の詳細）および表５Ｂ（実験の結果）に要約する。

【0230】

実験２４、２５および２６は、ＬｏＰ値を実験１９（ループ減衰装置を備えた蠕動式ポンプ）で観察されたものと直接比較することを目標として、２種類のシリンジポンプを使用して行われた。実験２４～２６のさらなる詳細および結果を表５Ａ（実験の設定の詳細）および表５Ｂ（実験の結果）に要約する。

【0231】

実験１９．１、２０．１、２１．１および２２．１の結果はすべて、第１の供給源入口に取り付けられた流量計からのものである。実験１９．２、２０．２、２１．２および２２．２の結果はすべて、第２の供給源入口に取り付けられた流量計からのものである。実験１９．３、２０．３、２１．３および２２．３の結果はすべて、組み合わされた第１および第２の供給源のＹ字型コネクタまたは混合装置の後の流量計からのものである。表５Ｂに報告されているように、両方の入口を混合した後に測定された流量は、約９１ｍＬ／分および１６１ｍＬ／分であり、実験２１および２２では、それらの対応するＬｏＰは、それぞれ約１５（１４～１６）および約９（８～１０）であった。より高い流量（実験２２）でのＬｏＰは１０以下であったが、実験２１のＬｏＰは増加したので、単一のポンプヘッドでの設定は多様な流量にわたって堅牢ではないことがあり得る。

【0232】

表５Ｂに報告されているように、実験２０（減衰なし）での各入口のＬｏＰは８０および８７であり、出口のＬｏＰは８０であった。対照的に、ループ減衰装置を使用した実験１９（減衰）のＬｏＰは両方とも７であり、出口でのＬｏＰは８であった。これらの結果は、（例えば、薬学的組成物の適切な混合を確保するために複数のポンプおよび／または流体源の流量を適切に制御するために、およびシリンジポンプで一般的に達成されるものと同等またはより良好なＬｏＰ値を達成するために）１０未満のＬｏＰを達成するという、例えばＲＮＡワクチンなどの、ＲＮＡまたは脂質を含む薬学的組成物などの、本明細書に記載される薬学的組成物および製剤を生産し、混合し、移送し、および／または製造するための許容され得る目標を満たし、減衰ループは、実施するのが簡単で費用対効果が高く、単回使用提供に適合的でありながら、先に要約したＧＭＰプロセス目標のすべてを満たす。図１３は、実験１９による蠕動式ポンプシステムを通る水の流量を示し、図１４は、実験２０の実験による蠕動式ポンプを通る水の流量を示す。

【0233】

実験２４．１、２５．１および２６．１の結果はすべて、第１の供給源入口に取り付けられた流量計からのものである。実験１４．２、２５．２および２６．２の結果はすべて、第２の供給源入口に取り付けられた流量計からのものである。実験２４．３、２５．３、２６．３の結果はすべて、組み合わされた第１および第２の供給源のＹ字型コネクタまたは混合装置の後の流量計からのものである。

【0234】

表５Ｂに報告されているように、両方の入口を混合した後に測定された流量は、約１１１ｍＬ／分および５７ｍＬ／分であり、実験２４および２５では、それらの対応するＬｏＰは、それぞれ約２５．５（２５～２６）および約２４．５（２１～２８）の平均であった。これらの実験は、ポンプ脈動を低減するように特別に設計されていない既成のシリンジポンプを使用したが、標準的なユニットは１０未満のＬｏＰ値を達成することに関して許容され得る目標を満たさないことを実証している。実験２６では、既製のシリンジポンプも使用した。市販のシリンジポンプの脈動は様々であり得るが、このタイプのシステムは無脈動ではない。表５Ｂに報告されているように、両方の入口を混合した後に測定された流量は約１４１ｍＬ／分であり、対応するＬｏＰは平均で約１４（１０～１８）であった。これらの結果は、実験１９（ループ減衰装置）が両方のシリンジポンプシステムよりも良好なＬｏＰ値を達成したことを確認した。

【0235】

図１５は、例えば、本明細書に記載の薬学的組成物、特に、ＲＮＡ－リポプレックスまたはＲＮＡリポソームを含む最終薬学的組成物を作製、移送または製造するために混合することができる、ＲＮＡ、ＲＮＡ分子またはＲＮＡワクチンを含む薬学的組成物を含む薬学的組成物および１種以上の脂質を含む別の薬学的組成物などの２つの流体源から１０未満のＬｏＰを達成することができる蠕動式ポンプ、減衰装置およびチュービングキットシステムを記載する。

【0236】

本出願で参照される特許文献、科学論文およびデータベースを含むすべての刊行物は、あたかも各個々の刊行物が参照により個別に組み入れられたのと同じ程度に、すべての目的のためにその全体が参照により組み入れられる。本明細書に記載される定義が、参照により本明細書に組み入れられる特許、出願、公開された出願およびその他の刊行物に記載された定義に反するか、あるいは矛盾する場合、本明細書に記載された定義は、参照により本明細書に組み入れられる定義よりも優先する。

【0237】

本発明は、例えば本発明の様々な局面を例示するために提供される特定の開示された態様に範囲が限定されることを意図しない。記載された装置および方法に対する様々な変更は、本明細書の記載および教示から明らかになるであろう。そのような変形は、本開示の真の範囲および精神から逸脱することなく実施することができ、本開示の範囲内に属することが意図される。
略式の配列表
すべてのポリヌクレオチド配列は、５’→３方向に表記されている。すべてのポリペプチド配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に表記されている。
完全ＰＣＶ ＲＮＡ５’定常配列（配列番号１）
ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ
完全ＰＣＶ ＲＮＡ３’定常配列（配列番号２）
ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ
完全ＰＣＶコザックＲＮＡ（配列番号３）
ＧＧＣＧＡＡＣＵＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ
完全ＰＣＶコザックＤＮＡ（配列番号４）
ＧＧＣＧＡＡＣＴＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ
短コザックＲＮＡ（配列番号５）
ＵＵＣＵＵＣＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ
短コザックＤＮＡ（配列番号６）
ＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣ
ｓｅｃ ＲＮＡ（配列番号７）
ＡＵＧＡＧＡＧＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ
ｓｅｃ ＤＮＡ（配列番号８）
ＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ
ｓｅｃタンパク質（配列番号９）
ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳ
ＭＩＴＤ ＲＮＡ（配列番号１０）
ＡＵＣＧＵＧＧＧＡＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧＡＣＡＧＣＣ
ＭＩＴＤ ＤＮＡ（配列番号１１）
ＡＴＣＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＡＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＣＴＡＣＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＡＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＧＣＣ
ＭＩＴＤタンパク質（配列番号１２）
ＩＶＧＩＶＡＧＬＡＶＬＡＶＶＶＩＧＡＶＶＡＴＶＭＣＲＲＫＳＳＧＧＫＧＧＳＹＳＱＡＡＳＳＤＳＡＱＧＳＤＶＳＬＴＡ
完全ＰＣＶ ＦＩ ＲＮＡ（配列番号１３）
ＣＵＣＧＡＧＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣＣＧＣＧＵＣＧＣＵ
完全ＰＣＶ ＦＩ ＤＮＡ（配列番号１４）
ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＴ
ＦエレメントＲＮＡ（配列番号１５）
ＣＵＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣＣＵＣＣ
ＦエレメントＤＮＡ（配列番号１６）
ＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣ
ＩエレメントＲＮＡ（配列番号１７）
ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ
ＩエレメントＤＮＡ（配列番号１８）
ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧ
リンカーＲＮＡ（配列番号１９）
ＧＧＣＧＧＣＵＣＵＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣ
リンカーＤＮＡ（配列番号２０）
ＧＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＣ
リンカータンパク質（配列番号２１）
ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ
完全ＰＣＶ ＤＮＡ ５’定常配列（配列番号２２）
ＧＧＣＧＡＡＣＴＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣ
完全ＰＣＶ ＤＮＡ ３’定常配列（配列番号２３）
ＡＴＣＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＴＣＧＧＡＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＣＴＡＣＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＡＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＧＣＣＴＡＧＴＡＡＣＴＣＧＡＧＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣＡＡＴＧＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＧＡＡＡＧＴＴＴＡＡＣＴＡＡＧＣＴＡＴＡＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＴ
キャップ由来の５’ＧＧを有する完全ＰＣＶ ＲＮＡ（配列番号２４）
ＧＧＧＧＣＧＡＡＣＵ ＡＧＵＡＵＵＣＵＵＣ ＵＧＧＵＣＣＣＣＡＣ ＡＧＡＣＵＣＡＧＡＧ ＡＧＡＡＣＣＣＧＣＣ
ＡＣＣＡＵＧＡＧＡＧ ＵＧＡＵＧＧＣＣＣＣ ＣＡＧＡＡＣＣＣＵＧ ＡＵＣＣＵＧＣＵＧＣ ＵＧＵＣＵＧＧＣＧＣ
ＣＣＵＧＧＣＣＣＵＧ ＡＣＡＧＡＧＡＣＡＵ ＧＧＧＣＣＧＧＡＡＧ ＣＮＡＵＣＧＵＧＧＧＡ ＡＵＵＧＵＧＧＣＡＧ
ＧＡＣＵＧＧＣＡＧＵ ＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧ ＧＵＧＧＵＧＡＵＣＧ ＧＡＧＣＣＧＵＧＧＵ ＧＧＣＵＡＣＣＧＵＧ
ＡＵＧＵＧＣＡＧＡＣ ＧＧＡＡＧＵＣＣＡＧ ＣＧＧＡＧＧＣＡＡＧ ＧＧＣＧＧＣＡＧＣＵ ＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣ
ＣＧＣＣＡＧＣＵＣＵ ＧＡＵＡＧＣＧＣＣＣ ＡＧＧＧＣＡＧＣＧＡ ＣＧＵＧＵＣＡＣＵＧ ＡＣＡＧＣＣＵＡＧＵ
ＡＡＣＵＣＧＡＧＣＵ ＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵ ＧＣＡＣＧＣＡＡＵＧ ＣＵＡＧＣＵＧＣＣＣ ＣＵＵＵＣＣＣＧＵＣ
ＣＵＧＧＧＵＡＣＣＣ ＣＧＡＧＵＣＵＣＣＣ ＣＣＧＡＣＣＵＣＧＧ ＧＵＣＣＣＡＧＧＵＡ ＵＧＣＵＣＣＣＡＣＣ
ＵＣＣＡＣＣＵＧＣＣ ＣＣＡＣＵＣＡＣＣＡ ＣＣＵＣＵＧＣＵＡＧ ＵＵＣＣＡＧＡＣＡＣ ＣＵＣＣＣＡＡＧＣＡ
ＣＧＣＡＧＣＡＡＵＧ ＣＡＧＣＵＣＡＡＡＡ ＣＧＣＵＵＡＧＣＣＵ ＡＧＣＣＡＣＡＣＣＣ ＣＣＡＣＧＧＧＡＡＡ
ＣＡＧＣＡＧＵＧＡＵ ＵＡＡＣＣＵＵＵＡＧ ＣＡＡＵＡＡＡＣＧＡ ＡＡＧＵＵＵＡＡＣＵ ＡＡＧＣＵＡＵＡＣＵ
ＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧ ＵＵＧＧＵＣＡＡＵＵ ＵＣＧＵＧＣＣＡＧＣ ＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡ ＣＣＵＧＧＵＣＣＡＧ
ＡＧＵＣＧＣＵＡＧＣ ＣＧＣＧＵＣＧＣＵＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28A】

【図28B】

【図28C】

【図29A】

【図29B】

【図29C】

【図30】

【図31A】

【図31B】

【図32】

【図33A】

【図33B】

【図33C】

【図34A】

【図34B】

【図34C】

【配列表】

2023540134000001.app

【国際調査報告】