▶ イースト チャイナ ユニバーシティ オブ サイエンス アンド テクノロジーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-09-25
(54)【発明の名称】突然変異型ＥＧＦＲ阻害化合物およびその適用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20230915BHJP
C07D 475/00 20060101ALI20230915BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230915BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230915BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
C07D475/00
A61P35/00
A61P43/00 111
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023514146
(86)(22)【出願日】2021-09-01
(85)【翻訳文提出日】2023-04-24
(86)【国際出願番号】 CN2021116076
(87)【国際公開番号】W WO2022042755
(87)【国際公開日】2022-03-03
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】517204656
【氏名又は名称】イースト チャイナ ユニバーシティ オブ サイエンス アンド テクノロジー
(74)【代理人】
【識別番号】100102842
【弁理士】
【氏名又は名称】葛和 清司
(72)【発明者】
【氏名】リー，ホンリン
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ，ジェンジャン
(72)【発明者】
【氏名】ディアオ，イェンイェン
(72)【発明者】
【氏名】チェン，ズォ
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB09
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC41
(57)【要約】
ＥＧＦＲ非古典的突然変異阻害剤としてのプテリジノンシリーズおよび／またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグの適用。具体的には、ＥＧＦＲ ２０ｉｎｓＸ突然変異、ＥＧＦＲ Ｇ７１９Ｘ突然変異、ＥＲＢＢ２突然変異を含む疾患を治療するための薬物の調製における、式Ｉに示される一連の化合物、式Ｉの一連の化合物を含む医薬組成物の使用に関する。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
突然変異型ＥＧＦＲを阻害するための薬物または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患を治療もしくは予防するための薬物の調製における、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。【化1】
【請求項2】
前記突然変異型ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲエクソン１８－２１の点突然変異と挿入突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異のうちの少なくとも一つの突然変異を含むことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記突然変異型ＥＧＦＲは、エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉを含むエクソン２０の挿入突然変異と点突然変異、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含むことを特徴とする
請求項２に記載の使用。
【請求項4】
前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ｇ７１９Ｘ（Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｃ、Ｄを表す）、Ｄ７６１Ｙ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｌ８６１Ｑ、Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含むことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項5】
前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、ｄ７４７－７４９／Ａ７５０Ｐ Ｄ７６１Ｙ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ／Ｔ７９０Ｍ、Ｄ７７０ＧＹ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ｄ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１ＱおよびＥＲＢＢのＶ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含むことを特徴とする請求項４に記載の使用。
【請求項6】
前記疾患は、癌であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項7】
前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんであることを特徴とする請求項６に記載使用。
【請求項8】
突然変異型ＥＧＦＲの阻害、または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患の治療もしくは予防に使用される、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩。【化2】
【請求項9】
突然変異型ＥＧＦＲを阻害するための、または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患を治療もしくは予防するための方法であって、前記方法は、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与する段階を含むことを特徴とする、前記方法。
【化3】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬品化学の分野に関し、具体的には、本発明は、突然変異型上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ キナーゼ、ＥＧＦＲ）、特に非古典的突然変異ＥＧＦＲの阻害剤としてのプテリジノン（ｐｔｅｒｉｄｉｎｏｎｅ）誘導体の適用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＥＧＦＲの第１世代、第２世代および第３世代の阻害剤の発売により、ＥＧＦＲ古典的感受性突然変異およびＴ７９０Ｍ薬物耐性突然変異非小細胞肺がんの患者には朗報をもたらすが、ＥＧＦＲ突然変異を有するすべての患者が恩恵を受けるわけではない。その中でＥＧＦＲエクソン２０の挿入突然変異（ＥＧＦＲ ２０ｉｎｓ）のＮＳＣＬＣは、ほとんどのＥＧＦＲ阻害剤を標的とした治療に対する効果が悪いか、または無効であり、これらの突然変異は、しばしば非古典的突然変異として分類される。これらの非古典的突然変異は、主にエクソン１８－２１の挿入突然変異と点突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異を含む。
【0003】
従って、非古典的突然変異ＥＧＦＲ阻害剤を標的とする薬物の開発には、大きな臨床的意義および適用の見通しがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明の目的は、非古典的突然変異ＥＧＦＲ阻害剤および上記の阻害剤を含む医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0005】
第１の態様において、本発明は、突然変異型ＥＧＦＲを阻害するための薬物または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患を治療もしくは予防するための薬物の調製における、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【化1】
【0006】
具体的な実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲ エクソン１８－２１の点の突然変異と挿入突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異のうちの少なくとも一つの突然変異を含む。
【0007】
具体的な実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等を含むエクソン２０の挿入突然変異与点突然変異、およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉ、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等を含むエクソン２０の挿入突然変異与点突然変異、およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉ、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
【0008】
具体的な実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ｇ７１９Ｘ（Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｃ、Ｄを表す）、Ｄ７６１Ｙ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｌ８６１Ｑ、Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0009】
具体的な実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、ｄ７４７－７４９／Ａ７５０Ｐ Ｄ７６１Ｙ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ／Ｔ７９０Ｍ、Ｄ７７０ＧＹ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ｄ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１ＱおよびＥＲＢＢのＶ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0010】
具体的な実施形態において、前記疾患は、癌である。
具体的な実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
具体的な実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
【0011】
第２の態様において、本発明は、突然変異型ＥＧＦＲの阻害、または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患の治療もしくは予防に使用される、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化2】
【0012】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲ エクソン１８－２１の点の突然変異と挿入突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異のうちの少なくとも一つの突然変異を含む。
【0013】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉを含むエクソン２０の挿入突然変異と点突然変異、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉを含むエクソン２０の挿入突然変異と点突然変異、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
【0014】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ｇ７１９Ｘ（Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｃ、Ｄを表す）、Ｄ７６１Ｙ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｌ８６１Ｑ、Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0015】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、ｄ７４７－７４９／Ａ７５０Ｐ Ｄ７６１Ｙ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ／Ｔ７９０Ｍ、Ｄ７７０ＧＹ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ｄ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１ＱおよびＥＲＢＢのＶ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0016】
好ましい実施形態において、前記疾患は、癌である。
好ましい実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
好ましい実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
【0017】
第３の態様において、本発明は、突然変異型ＥＧＦＲを阻害するための、または突然変異型ＥＧＦＲが介在する疾患を治療もしくは予防するための方法を提供し、前記方法は、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与する段階を含む。
【化3】
【0018】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲ エクソン１８－２１の点突然変異と挿入突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異のうちの少なくとも一つの突然変異を含む。
【0019】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等を含むエクソン２０の挿入突然変異与点突然変異、およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉ、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
エクソン１８のＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異とコドン７０９での欠失突然変異、
エクソン１９の挿入突然変異Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫと点突然変異Ｄ７６１Ｙ、
Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等を含むエクソン２０の挿入突然変異与点突然変異、およびエクソン２０の点突然変異Ｓ７６８Ｉ、
エクソン２１の点突然変異Ｌ８６１Ｑ、
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等を含む。
【0020】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ｇ７１９Ｘ（Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｃ、Ｄを表す）、Ｄ７６１Ｙ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ、Ｌ８６１Ｑ、Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0021】
好ましい実施形態において、前記突然変異型ＥＧＦＲは、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＨＥＡ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、ｄ７４７－７４９／Ａ７５０Ｐ Ｄ７６１Ｙ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ／Ｔ７９０Ｍ、Ｄ７７０ＧＹ、Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ｄ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１ＱおよびＥＲＢＢのＶ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ等の少なくとも一つの突然変異を含む。
【0022】
好ましい実施形態において、前記疾患は、癌である。
好ましい実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
好ましい実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がんまたは多発性骨髄がんである。
【発明の効果】
【0023】
本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【図1a】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【図1b】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【図1c】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【図1d】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【図1e】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【図1f】異なるＥＧＦＲ突然変異を含む安定的細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として示され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として示される。
【発明を実施するための形態】
【0025】
具体実施形態
本発明者らは、広範囲かつ綿密な研究の後、プテリジノン誘導体を予想外に発見し、これらの誘導体は、非古典的突然変異ＥＧＦＲを標的にすることができるため、新世代のＥＧＦＲ阻害剤として機能することができる。これに基づいて、本発明を完成させた。
本発明者らは、広範囲かつ綿密な研究の後、プテリジノン誘導体を予想外に発見し、これらの誘導体は、非古典的突然変異ＥＧＦＲを標的にすることができるため、新世代のＥＧＦＲ阻害剤として機能することができる。これに基づいて、本発明を完成させた。
【0026】
ＥＧＦＲ非古典的突然変異
ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ古典的感受性突然変異およびＴ７９０Ｍ薬物耐性突然変異の非小細胞肺がんの患者に朗報をもたらす。しかしながら、すべてのＥＧＦＲ突然変異の患者は、既に市販されているＥＧＦＲ阻害剤から恩恵の受けるわけではない。研究により、ＥＧＦＲ エクソン２０の挿入突然変異（ＥＧＦＲ ２０ｉｎｓ）を有するＮＳＣＬＣは、ほとんどのＥＧＦＲ阻害剤を標的とした治療に対する効果が悪いか、または無効である。これらの突然変異は、しばしば非古典的突然変異として分類される。本発明において、前記非古典的突然変異は、主にエクソン１８－２１の的挿入突然変異と点突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異を含む。
ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ古典的感受性突然変異およびＴ７９０Ｍ薬物耐性突然変異の非小細胞肺がんの患者に朗報をもたらす。しかしながら、すべてのＥＧＦＲ突然変異の患者は、既に市販されているＥＧＦＲ阻害剤から恩恵の受けるわけではない。研究により、ＥＧＦＲ エクソン２０の挿入突然変異（ＥＧＦＲ ２０ｉｎｓ）を有するＮＳＣＬＣは、ほとんどのＥＧＦＲ阻害剤を標的とした治療に対する効果が悪いか、または無効である。これらの突然変異は、しばしば非古典的突然変異として分類される。本発明において、前記非古典的突然変異は、主にエクソン１８－２１の的挿入突然変異と点突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異を含む。
【0027】
エクソン１８の非古典的突然変異は、主にＧ７１９Ｘ、Ｅ７０９Ｘ、Ｋ７１６Ａ、Ｋ７２８Ａ点突然変異、コドン７０９での欠失突然変異として現れる。Ｇ７１９Ｘ突然変異は、ＥＧＦＲにおけるＧ７１９Ｘ（Ｘは、Ａアラニン（Ａｌａｎｉｎｅ）、Ｓセリン（Ｓｅｒｉｎｅ）、Ｃシステイン（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ）等を表す）突然変異であり、点突然変異を指し、Ｇ７１９Ｘ突然変異は、ＥＧＦＲ突然変異全体の約３．１０％を占める［Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．２０１６、１０７（９）、：１１７９－１１８６］。
【0028】
Ｇ７１９Ｓ突然変異は、感受性突然変異よりも発がん性が低く、インビトロ実験では、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂが用量増加的にＧ７１９Ｓの自己リン酸化を阻害できることを発現した。感受性突然変異Ｌ８５８Ｒと比較して、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂは、Ｇ７１９Ｓ突然変異を阻害するために、より高い濃度を必要とする。Ｅ７０９Ｘ点突然変異は、エクソン１８の別の非古典的突然変異であり、Ｅ７０９Ｘ突然変異は、ＥＧＦＲ突然変異全体の約０．３０％を占める。インビトロ実験において、第１世代または第３世代のＴＫＩｓと比較して、Ｅ７０９Ｘ点突然変異患者は、Ａｆａｔｉｎｉｂに対して高度の感受性を有する。
【0029】
ＤｅｌＥ７０９－Ｔ７１０ｉｎｓＤは、コドン７０９で最も一般的な欠失突然変異であり、ＥＧＦＲ突然変異全体の約０．３０％を占める。
【0030】
エクソン１９の非古典的突然変異は、挿入突然変異と点突然変異として現れる。エクソン１９の挿入突然変異は、ＥＧＦＲ突然変異全体の約０．６０％を占め、Ｉ７４４－Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＶＰＶＡＩＫ、Ｋ７４５－Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫを含む。インビトロ試験は、すべてエクソン１９の挿入突然変異がＡｆａｔｉｎｉｂ対して感受性を有することを示す。
【0031】
エクソン１９の点突然変異は、主にＤ７６１Ｙとして表され、研究によると、その出現は、ＥＧＦＲ－ＴＫｉ薬物耐性に関連する可能性があることを示唆するが、薬物耐性の程度は、エクソン２０の点突然変異Ｔ７９０Ｍよりも弱い。現在、臨床試験データが不足している。
【0032】
エクソン２０によって翻訳されるアミノ酸部位は、７６２－８２３である。Ｎ－末端から始まるグルタミン酸Ｇｌｕ７６２は、重要な触媒部位である。その中には、Ｅ７６２－Ｍ７６６アミノ酸からなるＣ－ヘリックスおよびＡ７６７－Ｖ７７４アミノ酸からなる環が含まれる。エクソン２０の非古典的突然変異は、主に挿入突然変異と点突然変異として表される。Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９－Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＰ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＨ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＡＳＶＤＮ、Ｄ７７０－Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＳＶＤＮＰ、Ｎ７７１－Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ｐ７７２－Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｎ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＨ、Ｈ７７１－Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ｈ７７３－Ｖ７７４ｉｎｓＡＨ、Ｄ７７０ｄｅｌｉｎｓＧＹ、Ｖ７７４－Ｃ７７５ｉｎｓＨＶ等を含む。上記の突然変異は、ＥＧＦＲ突然変異全体の約５．８０％を示す。Ａ７６３－Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡを除いて、ＥＧＦＲエクソン２０の挿入突然変異は、第１世代、第２世代のＴＫＩｓ標的に治療に対して感受性がない。多くの突然変異形態において、もっとも特殊なのは、７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡである。７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡは、現在ｅｘ２０ｉｎｓ突然変異中で発見された感受性突然変異である。
【0033】
これまでに６０以上のユニークなＥＧＦＲ ｅｘ２０ｉｎｓ形態が発見され、その研究で最も一般的なＥＧＦＲ ｅｘ２０ｉｎｓは、順次にＤ７７０＿Ｎ７７１＞ＡＳＶＤＮ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２＞ＳＶＤＮＰおよびＮ７７１＿Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨであり、ｅｘ２０ｉｎｓ突然変異の約５０％を占める。
【0034】
最新のインビトロ実験では、ＰｏｚｉｏｔｉｎｉｂがＥＧＦＲエクソン２０の挿入突然変異を有するＢａ／Ｆ３細胞株の成長を効果的に阻害することが分かる。Ｐｏｚｉｏｔｉｎｉｂは、Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ、Ａｆａｔｉｎｉｂよりも強力である。しかし、副作用が明らかで、疹や下痢として表され、臨床試験データが不足している。
【0035】
エクソン２０の点突然変異は、主にＳ７６８Ｉであり、ＥＧＦＲ突然変異全体の約１．０％を占める。インビトロ実験において、Ｓ７６８Ｉ突然変異は、ＯｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂよりもＡｆａｔｉｎｉｂに対して敏感である。
【0036】
ＥＧＦＲ ｅｘ２０ｉｎｓ突然変異は、古典的突然変異ほど第１世代および第２世代のＥＧＦＲ－ＴＫＩｓに対して感受性ではないが、ＥＧＦＲ突然変異の中でも最も一般的な非感受性突然変異である。従って、ｅｘ２０ｉｎｓ突然変異の集団に対する治療は、現在臨床管理において臨床医が直面する主要な問題である。
【0037】
エクソン２１の非古典的突然変異は、主に点突然変異Ｌ８６１Ｑとして表され、ＥＧＦＲ突然変異全体の約０．９０％を占める。Ｌ８６１Ｑ突然変異は、エクソン２１の第２８２８部位のＴがＡによって置換されたものであり、Ｌ８５８Ｒ突然変異と同様の発がん活性を有する。インビトロ研究では、Ｌ８６１Ｑ突然変異は、Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂに感受性があることを発現したが、現在臨床試験データは不足している。
【0038】
ＥＲＢＢ２の点突然変異Ｖ７７７Ｌ、Ｄ７６９Ｙ、Ｒ８９６Ｃ、Ｐ１１７０Ａと挿入突然変異Ｖ７７７－Ｇ７７８ｉｎｓＣＧ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ等。
【0039】
本発明の化合物および医薬組成物
本発明の化合物は、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩である。
本発明の化合物は、式Ｉに示される化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【化4】
【0040】
本発明に記載の化合物の調製方法は、ＣＮ１０８７２１２９８Ａに開示されている方法を参照することができる。
【0041】
本発明の化合物は、突然変異型ＥＧＦＲ、特にＥＧＦＲ エクソン１８－２１の点突然変異と挿入突然変異、ＥＲＢＢ２の点突然変異と挿入突然変異を阻害することができる。従って、本発明の化合物に基づいて、本発明は、医薬組成物をさらに提供し、当該組成物は、治療有效量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。
【0042】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩の例としては、無機および有機酸塩、例えば、塩酸塩（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、臭化水素酸塩（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ）、硫酸塩（ｓｕｌｆａｔｅ）、クエン酸塩（ｃｉｔｒａｔｅ）、乳酸塩（ｌａｃｔａｔｅ）、酒石酸塩（ｔａｒｔｒａｔｅ）、マレイン酸塩（ｍａｌｅａｔｅ）、フマル酸塩（ｆｕｍａｒａｔｅ）、マンデル酸塩（ｍａｎｄｅｌａｔｅ）およびシュウ酸塩（ｏｘａｌａｔｅ）、ならびにナトリウムヒドロキシ（ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ）（ＴＲＩＳ、トロメタミン）およびＮ－メチルグルカミン等の塩基とで形成される無機および有機塩基塩を含むが、これらに限定されない。
【0043】
本発明の医薬組成物は、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、経口、髄腔内、頭蓋内、経鼻または外部経路投与の形態含むがこれらに限定されない、様々な投与経路に適した製剤形態に調製されて、腫瘍および他の疾患を治療するために使用される。投与量は、一つまたは複数の病症を効果的に改善または排除する量である。特定の疾患の治療に関して、有効量は、疾患に関連する病症を改善するか、または何らかの方法で緩和するのに十分な量である。このような用量は、単回用量として投与されることができ、または効果的な治療方案に従って投与することができる。投与量は、疾患を治癒できるかもしれないが、投与は、一般に疾患の症状を改善するためである。一般に、症状の望ましい改善を達成するためには、反復投与が必要となる。薬物の投与量は、患者の年齢、健康状態、体重、同時治療の種類、治療の頻度、および希望する治療効果に応じて決定される。
【0044】
本発明の医薬製剤は、本発明の化合物の治療効果が得られる限り、任意の哺乳動物に投与されることができる。これらの哺乳動物の中で最も重要なのは、人間である。
【0045】
本発明の教示に基づいて、当業者は、本発明の化合物が癌の治療に使用されることができることを知っている。具体的な実施形態において、前記癌は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、神経膠腫、頭頸部扁平上皮がん、子宮頸がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、結腸がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、胃がん、多発性骨髄がんである。
【0046】
本発明の医薬製剤は、既知の方法で調製されることができる。例えば、従来の混合、造粒、打錠、溶解、または凍結乾燥プロセスによって調製される。経口製剤を調製する場合、固体補助剤と活性化合物とを組み合わせ、混合物を任意に粉砕することができる。所望または必要に応じて適量の助剤を加えた後、顆粒の混合物を加工して錠剤または糖衣錠の核を得る。
【0047】
適切な補助剤、特に、充填剤としては、ラクトースまたはスクロース、マンニトール（Ｍａｎｎｉｔｏｌ）またはソルビトール（Ｓｏｒｂｉｔｏｌ） のような糖類、セルロース（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）調製物または、リン酸三カルシウム（ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）またはリン酸水素カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）のようなリン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓａｌｔ）、ならびにコーンスターチ、小麦スターチ、米スターチ、ジャガイモスターチ、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース（ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、またはポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）を含むスターチペーストのような結合剤である。必要に応じて、上記で言及されるスターチ、カルボキシメチルスターチ（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｓｔａｒｃｈ）、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）または、アルギン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ）のようなその塩を崩壊剤として加えることができる。補助剤、特にフローレギュレーターおよび潤滑剤としては、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ Ｓｔｅａｒａｔｅ）、ステアリン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｓｔｅａｒａｔｅ）のようなステアリン酸塩、またはポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）である。必要に応じて、糖衣錠のコアには、胃液に耐性のある適切なコーティングを施すことができる。そのために、濃縮糖類溶液を使用することができる。この溶液は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／またはに酸化チタン（ｔｉｔａｎｉｕｍ ｄｉｏｘｉｄｅ）、希溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を含むことができる。胃液に耐性のあるコーティングを生成するために、適切なセルロース溶液、例えば、酢酸フタル酸セルロース（Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ａｃｅｔａｔｅ Ｐｈｔｈａｌａｔｅ）またはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）を使用することができる。錠剤または糖衣錠のコアのコーティングに染料または色素を加えることができる。例えば、有効成分の用量の組み合わせの同定または特徴付けに使用される。
【0048】
本発明の利点は、次のとおりである。
１．本発明によって提供される化合物は、新しい構造を有する、突然変異型ＥＧＦＲ、特に非古典的突然変異型ＥＧＦＲを阻害できる化合物である。
２．本発明によって提供される化合物は、非古典的突然変異型ＥＧＦＲに対して優れた阻害活性を有する。
３．本発明によって提供される化合物は、ＥＧＦＲ突然変異、特に非古典的突然変異型ＥＧＦＲを阻害できる薬物の開発の基礎を築き、非常に高い工業化および商業化、ならびに市場価値を有し、経済効果も著しい。
１．本発明によって提供される化合物は、新しい構造を有する、突然変異型ＥＧＦＲ、特に非古典的突然変異型ＥＧＦＲを阻害できる化合物である。
２．本発明によって提供される化合物は、非古典的突然変異型ＥＧＦＲに対して優れた阻害活性を有する。
３．本発明によって提供される化合物は、ＥＧＦＲ突然変異、特に非古典的突然変異型ＥＧＦＲを阻害できる薬物の開発の基礎を築き、非常に高い工業化および商業化、ならびに市場価値を有し、経済効果も著しい。
【0049】
以下、具体的な実施例と併せて本発明の技術的解決策をさらに説明するが、以下の実施例は、本発明の限定を構成するものではなく、本発明の原理および技術的手段に従って採用されるすべての様々な適用方法は、すべて本発明の範囲に属する。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常従来の条件または製造業者によって提案された条件に従う。特に明記されない限り、パーセンテージと部数とは、重量で計算される。
【0050】
実施例１．化合物１のキナーゼスペクトル評価（委託試験：Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｏｎｅ Ｇｒｅａｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｐａｒｋｗａｙ、Ｓｕｉｔｅ ２ Ｍａｌｖｅｒｎ、ＰＡ １９３５５、ＵＳＡ．）
実験方法：
キナーゼ反応の基質を新たに調製した反応緩衝液に入れ、入キナーゼ反応に必要な補因子を加え、ここで、緩衝液の日は、次のとおりである。２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、２ｍＭのＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ、その後被験するキナーゼを加え、軽く振とうさせる。被験する化合物をＤＭＳＯに溶解させ、必要とする濃度に調製し、オートサンプラーＥｃｈｏ５５０を使用して、被験する化合物を上記のキナーゼ／基質含有緩衝液に加える。反応系に３３Ｐ標識ＡＴＰ（３３Ｐ－ＡＴＰ、最終濃度は、０．０１μＣｉ／μＬである）を加え、キナーゼ反応を開始し、室温下で２時間反応させる。Ｐ８１イオン交換紙（Ｗｈａｔｍａｎ＃３６９８－９１５）に反応物を点滴し、０．７５％リン酸で十分に洗浄およびろ過し、最後にフィルター紙に残っている評者性リン酸化基質を測定する。キナーゼ活性データは、試験サンプル中の残存キナーゼ活性のパーセンテージとして表され、１０個の濃度勾配を測定し、Ｐｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して曲線フィッティングおよび計算し、ＩＣ５０値を得る。
実験方法：
キナーゼ反応の基質を新たに調製した反応緩衝液に入れ、入キナーゼ反応に必要な補因子を加え、ここで、緩衝液の日は、次のとおりである。２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、２ｍＭのＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ、その後被験するキナーゼを加え、軽く振とうさせる。被験する化合物をＤＭＳＯに溶解させ、必要とする濃度に調製し、オートサンプラーＥｃｈｏ５５０を使用して、被験する化合物を上記のキナーゼ／基質含有緩衝液に加える。反応系に３３Ｐ標識ＡＴＰ（３３Ｐ－ＡＴＰ、最終濃度は、０．０１μＣｉ／μＬである）を加え、キナーゼ反応を開始し、室温下で２時間反応させる。Ｐ８１イオン交換紙（Ｗｈａｔｍａｎ＃３６９８－９１５）に反応物を点滴し、０．７５％リン酸で十分に洗浄およびろ過し、最後にフィルター紙に残っている評者性リン酸化基質を測定する。キナーゼ活性データは、試験サンプル中の残存キナーゼ活性のパーセンテージとして表され、１０個の濃度勾配を測定し、Ｐｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して曲線フィッティングおよび計算し、ＩＣ５０値を得る。
【0051】
化合物１のＥＧＦＲ突然変異キナーゼスペクトルＩＣ５０値（ｎＭ）：
【表1】
【0052】
化合物１シリーズの誘導体（ＷＯ２０１８／１９２５３６Ａ１）のＥＧＦＲ突然変異キナーゼ阻害活性ＩＣ５０値（ｎＭ）、評価方法は、上記と同じである。
【化5】
【0053】
【表2】
【0054】
実施例２．細胞株増殖阻害検出実験
Ｍｏｂｏｃｅｒｔｉｎｉｂ（ＴＡＫ－７８８、武田薬品工業）は、最近、プラチナベースの化学療法後に疾患が進行したＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異を有する転移性非小細胞肺がん患者の治療に対して、米国ＦＤＡによるブレークスルーセラピー指定（ＢＴＤ）を取得した。化合物１の活性をより客観的に評価するために、本実験では、ＴＡＫ－７８８を陽性対照として使用する。
Ｍｏｂｏｃｅｒｔｉｎｉｂ（ＴＡＫ－７８８、武田薬品工業）は、最近、プラチナベースの化学療法後に疾患が進行したＥＧＦＲエクソン２０挿入突然変異を有する転移性非小細胞肺がん患者の治療に対して、米国ＦＤＡによるブレークスルーセラピー指定（ＢＴＤ）を取得した。化合物１の活性をより客観的に評価するために、本実験では、ＴＡＫ－７８８を陽性対照として使用する。
【0055】
１．様々なＥＧＦＲ突然変異を含む安定した細胞株の増殖阻害に対する化合物Ｉの検出実験。
２．プロジェクト内容
ＣＴＧ Ａｓｓａｙによって化合物１、ＴＡＫ７８８の様々な突然変異タイプＢａ／Ｆ３ ＥＧＦＲ細胞株増殖に対する阻害作用を検出する。
２．プロジェクト内容
ＣＴＧ Ａｓｓａｙによって化合物１、ＴＡＫ７８８の様々な突然変異タイプＢａ／Ｆ３ ＥＧＦＲ細胞株増殖に対する阻害作用を検出する。
【0056】
３．主な試薬および消耗品
３．１．化合物：化合物１およびＴＡＫ７８８は、粉末である。
３．２．細胞リスト：
３．１．化合物：化合物１およびＴＡＫ７８８は、粉末である。
３．２．細胞リスト：
【表3】
【0057】
３．３．ＲＰＭＩ－１６４０（Ｇｉｂｃｏ ＃Ｃ１１８７５５００ＣＰ、Ｌｏｔ ＃８１２００６９）
３．４．ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ ＃１００９９－１４１Ｃ、Ｌｏｔ ＃２１４５０６８ＣＰ ）
３．５．ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏR Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ｇ７５７３、Ｌｏｔ ＃００００３１９７８４）
３．７．細胞培養および検出プレート：９６ Ｗｅｌｌ Ａｓｓａｙ Ｐｌａｔｅ（Ｗｈｉｔｅ Ｐｌａｔｅ、Ｃｌｅａｒ Ｂｏｔｔｏｍ ｗｉｔｈ Ｌｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｒｅａｔｅｄ Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ １／Ｐａｃｋ、Ｃｏｓｔａｒ ３６１０）
３．８．Ｔ２５細胞培養フラスコ（ＢＩＯＦＩＬ ＃ＴＣＦ０１２０５０）
３．９．化合物の配置ボード（Ｃｏｓｔａｒ＃３３５７）
【0058】
４．主な実験機器
Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１多機能マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、ＲＥＦ：８０４０５３４、ＳＮ：５００４３１）
Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１多機能マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、ＲＥＦ：８０４０５３４、ＳＮ：５００４３１）
【0059】
５．実験原理
Ｂａ／Ｆ３は、インターロイキン－３依存性マウスｐｒｏ－Ｂ細胞株であり、キナーゼおよびそのキナーゼ阻害剤を研究する一般に使用されるシステムであり、いくつかのタンパク質キナーゼの組み合わせ発現は、Ｂａ／Ｆ３細胞をＩＬ－３依存せずに成長させることができるため、そのような特性によれば、化合物による異なる標的キナーゼを発現するＢ ａ／Ｆ３細胞増殖の阻害を検出し、細胞レベルから様々なキナーゼ標的に対する化合物の阻害効果を反映することができ、キナーゼ阻害剤のスクリーニングに使用される。
本実験は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏR Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用して細胞増殖を検出し、その具体的な原理は次のとおりである。
Ｂａ／Ｆ３は、インターロイキン－３依存性マウスｐｒｏ－Ｂ細胞株であり、キナーゼおよびそのキナーゼ阻害剤を研究する一般に使用されるシステムであり、いくつかのタンパク質キナーゼの組み合わせ発現は、Ｂａ／Ｆ３細胞をＩＬ－３依存せずに成長させることができるため、そのような特性によれば、化合物による異なる標的キナーゼを発現するＢ ａ／Ｆ３細胞増殖の阻害を検出し、細胞レベルから様々なキナーゼ標的に対する化合物の阻害効果を反映することができ、キナーゼ阻害剤のスクリーニングに使用される。
本実験は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏR Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用して細胞増殖を検出し、その具体的な原理は次のとおりである。
【0060】
アデノシン三リン酸（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｔｒｉ－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＡＴＰ）は、自然界の様々な生命活動における共通のエネルギー担体であり、エネルギーの貯蔵および伝達の最小単位である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）生細胞検出キットは、検出物としてルシフェラーゼを使用し、ルシフェラーゼは、光シグナルを生成するためにＡＴＰの関与を必要とする。細胞にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）試薬を加えた後、発光値を測定する。抗シグナルは、システム内のＡＴＰの量に正比例し、ＡＴＰは、生細胞の数に正の相関がある。従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットを使用してＡＴＰ含有量を検出することにより、細胞の生存率を反映し、細胞の増殖レベルを反映することができる。
【0061】
６．実験手順
６．１．細胞の回収および培養
液体窒素から細胞を取り出し、３７℃のウォーターバスで細胞素早く解凍し、凍結保存チューブを１０００ｒｐｍの速度で遠心分離し、凍結保存液の上清を捨て、細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁し、３７℃の細胞培養インキュベーターに入れ、細胞培養密度を２×１０ｅ５～２×１０ｅ６／ｍｌの間に保つ。
６．１．細胞の回収および培養
液体窒素から細胞を取り出し、３７℃のウォーターバスで細胞素早く解凍し、凍結保存チューブを１０００ｒｐｍの速度で遠心分離し、凍結保存液の上清を捨て、細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁し、３７℃の細胞培養インキュベーターに入れ、細胞培養密度を２×１０ｅ５～２×１０ｅ６／ｍｌの間に保つ。
【0062】
６．２．化合物の調製
１）化合物調製プレートでＤＭＳＯを使用して化合物に対して勾配希釈し、初期の希釈濃度は、１または１０ｍＭであり、勾配希釈倍数は、３である。
２）新しい化合物調製プレートを用意し、ウェルあたりに１９８ｕｌのＲＰＭＩ１６０＋１０％ＦＢＳ培地を加え、先の勾配希釈の化合物調製プレートから、対応する化合物を２ｕｌ／ウェルずつ当該プレートに移し、よく混合し、当該プレート内の最高の初期化合物濃度が１または１０ｕＭになるようにし、勾配に従って希釈する（当該プレートは、１０×化合物濃度希釈プレート）。
１）化合物調製プレートでＤＭＳＯを使用して化合物に対して勾配希釈し、初期の希釈濃度は、１または１０ｍＭであり、勾配希釈倍数は、３である。
２）新しい化合物調製プレートを用意し、ウェルあたりに１９８ｕｌのＲＰＭＩ１６０＋１０％ＦＢＳ培地を加え、先の勾配希釈の化合物調製プレートから、対応する化合物を２ｕｌ／ウェルずつ当該プレートに移し、よく混合し、当該プレート内の最高の初期化合物濃度が１または１０ｕＭになるようにし、勾配に従って希釈する（当該プレートは、１０×化合物濃度希釈プレート）。
【0063】
６．３．検出プロセス
１）対数増殖した細胞を取り、遠心分離して培養上清を捨て、遠心分離した細胞を新たなＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、細胞密度は、２×１０ｅ４／ｍｌである。
２）再懸濁した細胞を９６ウェルの白壁透明底の細胞培養プレートに接種し、細胞懸濁液を１００ｕｌ／ウェルで２枚の培養プレートに接種し、３７℃の細胞培養インキュベーターで一晩培養する。
３）翌日、その中から細胞を接種した９６孔プレートの一つを取り、１００ｕｌ／ウェルのｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ ｇｌｏ検出試薬を加えて６０分間放置し、値を読み取り、Ｇ０データとして定義する。
１）対数増殖した細胞を取り、遠心分離して培養上清を捨て、遠心分離した細胞を新たなＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、細胞密度は、２×１０ｅ４／ｍｌである。
２）再懸濁した細胞を９６ウェルの白壁透明底の細胞培養プレートに接種し、細胞懸濁液を１００ｕｌ／ウェルで２枚の培養プレートに接種し、３７℃の細胞培養インキュベーターで一晩培養する。
３）翌日、その中から細胞を接種した９６孔プレートの一つを取り、１００ｕｌ／ウェルのｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ ｇｌｏ検出試薬を加えて６０分間放置し、値を読み取り、Ｇ０データとして定義する。
【0064】
４）別の平衡プレートを取り、先に勾配希釈した１０×化合物濃度希釈プレートから１１．１ｕｌ／ウェルの化合物を当該プレートに取り、細胞検出プレートの化合物の最終濃度が０．５または１ｕＭから始まるようにして、９個の濃度勾配を３倍希釈し、ＤＭＳＯ対照ウェルを設定し、３７度の細胞インキュベーターで７２時間培養する。
５）化合物で７２時間処理した９６ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、１００ｕｌ／ウェルのｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ ｇｌｏ検出試薬を加えて６０分間放置し、値を読み取り、Ｇ３データとして定義する。
５）化合物で７２時間処理した９６ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、１００ｕｌ／ウェルのｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ ｇｌｏ検出試薬を加えて６０分間放置し、値を読み取り、Ｇ３データとして定義する。
【0065】
６）以下の式に従って、各ウェルに対応する細胞増殖率を計算する。
％Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ＝（被験する化合物ウェルＧ３－Ｇ０平均値）／（ＤＭＳＯ対照ウェルＧ３平均値－Ｇ０平均値）×１００
７）各勾配濃度ウェルに対応する増殖率およびその濃度に従って、Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄ５．０ソフトウェアを使用して、細胞増殖の勾配曲線をフィッティングし、化合物のＧＩ５０を計算する（ＧＩ５０は、細胞増殖率が５０％である場合の対応する化合物濃度として定義され、ソフトウェアのフィッティング式は、次のとおりである。
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））
％Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ＝（被験する化合物ウェルＧ３－Ｇ０平均値）／（ＤＭＳＯ対照ウェルＧ３平均値－Ｇ０平均値）×１００
７）各勾配濃度ウェルに対応する増殖率およびその濃度に従って、Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄ５．０ソフトウェアを使用して、細胞増殖の勾配曲線をフィッティングし、化合物のＧＩ５０を計算する（ＧＩ５０は、細胞増殖率が５０％である場合の対応する化合物濃度として定義され、ソフトウェアのフィッティング式は、次のとおりである。
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））
【0066】
７．実験結果：
様々なＥＧＦＲ突然変異を含む安定細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０は、次の表に示されたとおりである。
様々なＥＧＦＲ突然変異を含む安定細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０は、次の表に示されたとおりである。
【表4】
【0067】
図１ａ－図１ｆは、様々なＥＧＦＲ突然変異を含む安定細胞株の増殖阻害検出実験における化合物ＩのＧＩ５０データを示し、ここで、化合物１は、Ｒ２０１として表され、化合物ＴＡＫ７８８は、Ｒ－２０３として表される。
【0068】
結論：ＥＧＦＲ非古典的突然変異キナーゼ活性に対する化合物１およびそのシリーズ誘導体の結果から、化合物１は、優れた阻害活性を有することが分かり、さらなる典型的なＥＧＦＲ ２０ｉｎｓ突然変異安定細胞株の増殖阻害活性は、化合物１が、現在一般に考えられている最も有望なＥＧＦＲ ２０ｉｎｓキナーゼ阻害剤ＴＡＫ７８８と同等であるか、またはそれ以上であることを示す。
【0069】
本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。
【図1a】
【図1b】
【図1c】
【図1d】
【図1e】
【図1f】
【国際調査報告】