特表 2023-541214 オルガノイドおよび抗炎症剤を含む炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-29

(54)【発明の名称】オルガノイドおよび抗炎症剤を含む炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/38 20150101AFI20230922BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230922BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230922BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20230922BHJP

【ＦＩ】

A61K35/38

A61P1/04

A61P29/00

A61K45/00

A61K38/02

A61K39/395 D

A61K39/395 U

A61K39/395 N

A61K31/7088

A61K31/7105

A61K47/68

A61K31/713

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022568869

(86)(22)【出願日】2022-09-16

(85)【翻訳文提出日】2022-11-11

(86)【国際出願番号】 KR2022013907

(87)【国際公開番号】W WO2023043272

(87)【国際公開日】2023-03-23

(31)【優先権主張番号】10-2021-0124721

(32)【優先日】2021-09-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519427985

【氏名又は名称】オルガノイドサイエンシーズ・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＯＲＧＡＮＯＩＤＳＣＩＥＮＣＥＳ， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】３０２， ＣＨＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＩＮＣＵＢＡＴＩＮＧ ＣＥＮＴＥＲ， ＹＡＴＡＰ‐ＲＯ ２６， ＢＵＮＧＤＡＮＧ‐ＧＵ， ＧＹＥＯＮＧＧＩ‐ＤＯ １３５２２， ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＫＯＲＥＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001818

【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ

(72)【発明者】

【氏名】パク，ジュン‐ヒョク

(72)【発明者】

【氏名】チョン，ヘミ

(72)【発明者】

【氏名】イム，テギュ

(72)【発明者】

【氏名】ソン，ハヨン

(72)【発明者】

【氏名】キム，ハン・ギョン

(72)【発明者】

【氏名】イ，ヒョギョン

(72)【発明者】

【氏名】タク，ジ・ヘ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB21

4C076BB29

4C076CC04

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4C087NA05

4C087NA06

4C087ZA66

4C087ZB11

4C087ZC75

(57)【要約】

本発明は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を含む炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物に関する。
本発明による腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、体重減少、下痢、血便などの炎症性腸疾患症状を緩和することができ、炎症による腸粘膜の線維化を抑制することができる。特に、腸オルガノイドおよび抗炎症剤であるＴＮＦα抑制剤を併用する場合、ＴＮＦα抑制剤を多回投与することより顕著に優れた治療効果を示すことができるので、炎症性腸疾患を予防または治療する物質として有用に活用されることができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を含む、炎症性腸疾患の予防または治療用の薬学組成物。

【請求項2】

前記ＴＮＦα抑制剤は、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合する化合物、ペプチド、ペプチドミメティクス、融合タンパク質、抗体、アプタマーまたは抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）である、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項3】

前記ＴＮＦα抑制剤は、ＴＮＦαのＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的に結合するアンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはリボザイムである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項4】

前記炎症性腸疾患は、放射線性大腸炎、放射線性直腸炎、虚血性大腸炎、ベーチェット大腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎および潰瘍性直腸炎からなる群より選ばれる一つ以上である、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項5】

前記組成物は、ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を減少させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項6】

前記組成物は、個体の体重減少、大便一貫性および糞便潜血からなる群より選ばれる一つ以上の症状を改善または緩和させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項7】

前記組成物は、炎症による線維化を抑制または緩和させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項8】

前記腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、同時に、順次にまたは個別的に対象体に投与されるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を含む炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

炎症性腸疾患は、大腸、直腸など、腸の多様な部位で炎症の発生および回復が繰り返される慢性疾患である。再発がありふれ、慢性的な下痢、腹痛、血便、体重減少などの症状を表し、炎症により腸粘膜に線維化が進行することが特徴である。腸線維化が発生すると、腸の長さが短くなり、かつ固くなるが、変化した腸組職により栄養分の吸収が遅延され、ひどい場合、腸狭窄が発生することもある。

【0003】

現在、炎症性腸疾患の治療は、炎症を減少させ、血便、下痢などの症状を改善することを主な目的とする。薬物としては、免疫調節剤、抗炎症剤、ステロイド剤などが使用されている。例えば、クローン病の治療には、抗炎症剤またはステロイドが多回投与される形態で使用されている。ただし、炎症性腸疾患は、原因が明らかではない慢性難治性疾患であるため、薬物治療により症状の改善効果がない場合が多く、根本的な治療ではなく炎症減少が主要治療機序である薬物であるので、持続的な薬物投与（寛解保持）および免疫力の減少により感染を引き起こす可能性がある。したがって、薬物治療で効果がないか、狭窄、穿孔、大腸癌などの余病が発生する場合には、手術が施行され、例えば、クローン病は、炎症が生じた一部分を切り出す手術、潰瘍性大腸炎は、大腸を除去する手術が行われている。手術の場合には、炎症部位を完全に除去するという点で治療効果は高いものの、日常生活に不便が従う問題点がある。

【0004】

これによって、炎症性腸疾患を根本的に治療するための薬物の開発が活発に研究されている。一例として、幹細胞などの生物学的製剤を活用して、繰り返した炎症により損傷した組職を再生する治療方法が研究されている。ただし、幹細胞治療剤の場合、幹細胞を投与した臨床試験の結果で損傷した組職の改善程度が微々たるか、またはその改善効果も長く持続できないという問題点が確認されており、長期追跡観察の結果、移植された成体幹細胞が移植後に生体内で長期間生存する割合が極めて低いという点等が限界として指摘されている。炎症性腸疾患の治療に使用される生物学的製剤の効能を増進させ、さらに再発率を低めた治療剤の開発が至急な実情である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明者らは、炎症性腸疾患の治療に使用された既存の薬物の短所を改善することで、これを再発なしに治療する方法に対する研究を進めた。その結果、腸オルガノイドおよび抗炎症剤であるＴＮＦα抑制剤を併用する場合、これらを単独で使用することに比べて体重減少、下痢、血便、腸線維化などの治療にシナジー効果を示し、特に、ＴＮＦα抑制剤を多回投与することより顕著に優れた治療効果を示すことができることを実験的に立証することから本発明を完成するに至った。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の一様態は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を含む炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。

【0007】

本明細書において使用する「オルガノイド」なる用語は、３次元立体構造を有する細胞の塊を意味し、器官または組職から分離した細胞を３次元培養を通じて製造した臓器類似体を意味する。オルガノイドは、器官または組職を構成する特異的細胞集団を含んでおり、実際組職または器官と類似した形態で構造的組織化がなされているので、各組職または器官が有する特殊な形態および機能を再現することができる。

【0008】

本明細書において使用する「腸オルガノイド」なる用語は、腸から分離した細胞から由来したオルガノイドを意味する。好ましくは、前記腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）は、小腸（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、大腸（ｌａｒｇｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、結腸（ｃｏｌｏｎ）、直腸（ｒｅｃｔｕｍ）および盲腸（ｃａｅｃｕｍ）をすべて含み、前記腸オルガノイドは、小腸オルガノイド、大腸オルガノイド、結腸オルガノイド、直腸オルガノイドおよび盲腸オルガノイドをすべて含む。

【0009】

本明細書において使用する「ＴＮＦα」なる用語は、腫瘍壊死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α）と呼ばれるサイトカインを意味する。

【0010】

好ましくは、前記ＴＮＦα抑制剤は、化合物、タンパク質、融合タンパク質、化合物－タンパク質複合体、薬物－タンパク質複合体、抗体、化合物－抗体複合体、薬物－抗体複合体、アミノ酸、ペプチド、ウイルス、炭水化物、脂質、核酸、抽出物、分画物などを制限なく含む。本明細書において、前記「抑制剤」は、「阻害剤」または「拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」と相互交換的に使用されることができ、「抑制」また「阻害」と相互交換的に使用されることができる。

【0011】

前記ＴＮＦα抑制剤は、例えば、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合する化合物、ペプチド、ペプチドミメティクス、融合タンパク質、抗体、アプタマー、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ；Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）などを含むことができ、これに制限されるものではない。

【0012】

本明細書において使用する「特異的」なる用語は、細胞内で他のタンパク質に影響を及ぼさず、目的タンパク質にのみ結合する能力を意味する。

【0013】

本明細書において使用する「抗体」なる用語は、単一クローン抗体、多クローン抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体を含み、新規抗体の他に既に当該技術の分野において公知になっているか、または市販の抗体も含まれる。前記抗体は、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合する限り、２本の重鎖と２本の軽鎖を含む全長の形態だけでなく、抗体分子の機能的な断片を含む。前記抗体分子の機能的な断片は、少なくとも抗原結合機能を保有している断片を意味し、ここには、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）、Ｆ（ａｂ´）_２、Ｆｖなどが含まれ得るが、これに制限されるものではない。「ペプチドミメティクス（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｍｉｎｅｔｉｃｓ）」なる用語は、ＴＮＦαの活性化役目を行う、タンパク質結合ドメインを抑制するペプチドまたは非ペプチドである。「アプタマー（Ａｐｔａｍｅｒ）」なる用語は、それ自体で安定した三次構造を有しながら、標的分子に高い親和性と特異性で結合できる特徴を有する一本鎖核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡまたは変形核酸）を意味する。

【0014】

前記ＴＮＦα抑制剤は、例えば、ＴＮＦα遺伝子のＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的に結合するアンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイムなどを含むことができ、これに制限されるものではない。

【0015】

本明細書において使用する「アンチセンス核酸」なる用語は、特定ｍＲＮＡの配列に対して相補的な核酸配列を含有しているＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの断片または誘導体を意味し、ｍＲＮＡの配列に相補的に結合またはハイブリダイズしてｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害する作用をする。「ｓｉＲＮＡ（低分子の干渉ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ））」なる用語は、特定ｍＲＮＡの切断（ｃｌｅａｖａｇｅ）を通してＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ））を誘導できる短い二重鎖ＲＮＡを意味する。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子のｍＲＮＡと相同な配列を有するセンスＲＮＡ鎖と、これと相補的な配列を有するアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子の発現を抑制できるので、遺伝子ノックダウン方法または遺伝子治療方法などに使用される。「ｓｈＲＮＡ（短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ））」なる用語は、一本鎖ＲＮＡであって、水素結合により二重鎖部分を形成するステム（ｓｔｅｍ）部分と、環状を帯びるループ（ｌｏｏｐ）部分とに区分されるＲＮＡを意味する。ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）などのタンパク質によりプロセッシングされてｓｉＲＮＡに変換され、ｓｉＲＮＡと同一の機能を遂行することができる。「ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏ ＲＮＡ））」なる用語は、標的ＲＮＡの分解を促進するか、またはこれらの翻訳を抑制させることで遺伝子発現を転写後に調節する２１～２３ｎｔの非コーディングＲＮＡを意味する。「リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）」なる用語は、特定塩基配列を認識して自体的にそれを切断する酵素のような機能を有したＲＮＡ分子を意味する。リボザイムは、ターゲットメッセンジャーＲＮＡ鎖の相補的な塩基配列で特異性を有して結合する領域と、ターゲットＲＮＡを切断する領域とで構成される。

【0016】

前記ＴＮＦαのＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的に結合するアンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイムなどは、ＴＮＦαの転写、細胞質内への転位（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、成熟（ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）、または翻訳など、他の任意のＴＮＦαの生物学的機能に対する必須な活性を阻害できる。

【0017】

本発明による薬学組成物は、ＴＮＦα抑制剤を有効量で含み、炎症性腸疾患の予防または治療を必要とする対象体に投与されてよい。

【0018】

本明細書において使用する「予防」なる用語は、本発明による薬学組成物の投与により炎症性腸疾患を抑制または遅延させるすべての行為を意味する。また、「治療」なる用語は、本発明による薬学組成物の投与により炎症性腸疾患が好転するか、または完治されるすべての行為を意味する。

【0019】

本発明の薬学組成物が予防または治療できる炎症性腸疾患には、例えば、放射線性大腸炎（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｃｏｌｉｔｉｓ）、放射線性直腸炎（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ）、虚血性大腸炎（ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｃｏｌｉｔｉｓ）、ベーチェット腸炎（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｂｅｈｃｅｔ´ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病（Ｃｒｏｈｎ´ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ）および潰瘍性直腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ）などが含まれ、これに制限されるものではない。

【0020】

また、前記薬学組成物は、ＤＡＩ（疾患活動性指標（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ））を減少させるものであってよい。

【0021】

本明細書において使用する「ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）」なる用語は、炎症性腸疾患に対する疾患活動性指標を意味し、具体的に、体重減少（ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ）、大便一貫性（ｓｔｏｏｌ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）および糞便潜血（ｆｅｃａｌ ｏｃｃｕｌｔ ｂｌｏｏｄ）などの炎症性腸疾患症状に対する重症度を示す。ＤＡＩが高いほど炎症性腸疾患症状は重症であり、ＤＡＩが低いほど炎症性腸疾患症状は軽症であり、具体的に０～１点のＤＡＩは正常、２～４点のＤＡＩは軽症、５～７点のＤＡＩは重症、８～１０点のＤＡＩは危重症の炎症性腸疾患を意味する。好ましくは、前記薬学組成物は、ＤＡＩを２～３点以上減少させることができ、これは、重症および／または危重症の炎症性腸疾患を軽症の炎症性腸疾患に緩和させるものである。

【0022】

また、前記薬学組成物は、体重減少、大便一貫性（ｓｔｏｏｌ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）および糞便潜血（ｆｅｃａｌ ｏｃｃｕｌｔ ｂｌｏｏｄ）からなる群より選ばれる一つ以上の症状を改善または緩和させるものであってよい。前記「体重減少」は、炎症性腸疾患により食餌攝取および栄養分の吸収が円滑でなく、個体の体重が減少する症状を意味し、前記「大便一貫性」は、下痢症状を意味し、前記「糞便潜血」は、血便症状を意味する。

【0023】

また、前記薬学組成物は、炎症による線維化を抑制または緩和させるものであってよい。腸粘膜は、炎症により線維化が発生して、結果的に腸の長さが短くなり、かつ固くなる現象が発生する。線維化は腸組職の非正常的な変化を引き起こして栄養分の攝取などを妨げ、腸狭窄のような副作用を発生させるなど、疾患の完治を妨げる要素となる。したがって、炎症による腸粘膜の線維化を抑制するか緩和させることが炎症性腸疾患の再発を防いで、完治する結果を導き出すことができる。

【0024】

一方、前記有効量は、「治療有効量」または「予防有効量」であってよい。「治療有効量」なる用語は、薬物または治療剤が単独でまたは他の治療剤と組み合わされて使用される場合に、疾患症状の重症度減少、疾患症状のない期間の頻度および持続期間の増加、または疾患苦痛による損傷または障害の防止を示すことができる任意の量を意味する。「予防有効量」なる用語は、個体で炎症性腸疾患の発生または再発を抑制する任意の量を意味する。前記有効量の水準は、対象体の重症度、年齢、性別、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出割合、治療期間、同時使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られている要素などによって決定できる。

【0025】

本明細書において使用する「投与」なる用語は、関連技術分野における通常の技術者にとって公知になっている多様な方法および伝達システムのうち任意のものを使用して組成物を対象体に物理的に導入することを意味する。本発明の薬学組成物のための投与経路は、例えば、経口投与経路、または静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髓または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入による投与経路を含むが、これに制限されるものではない。本発明の組成物のための投与回数は、例えば、単回、複数回、および一つ以上の延長された期間に亘って遂行されることができる。

【0026】

本発明の薬学組成物は、対象体の年齢、性別、体重によって変わり、具体的に対象体の症状によって本発明の組成物を０．１～１００ｍｇ／ｋｇを一日単回～数回投与するか、または数日～数ヶ月間隔で投与することができる。また、その投与量は、投与経路、疾病の重症度、性別、体重、年齢などによって増減されることができる。

【0027】

本発明の薬学組成物は、薬学組成物の製造に通常的に使用される適切な担体、賦形剤および希薄剤をさらに含んでよい。組成物に含まれ得る担体、賦形剤および希薄剤は、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アラビアガム、アルジネイト、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、未晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油であってよいが、これに制限されない。

【0028】

「対象体」なる用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物を含み、前記非ヒト動物は、脊椎動物、例えば、霊長類、犬、牛、馬、豚、齧歯類、例えば、マウス、ラット、モルモットなどであってよい。本明細書において、前記「対象体」は、「個体」および「患者」と相互交換的に使用される。

【0029】

本発明の薬学組成物に含まれる腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、同時に、順次にまたは個別的に投与されるように剤形化してよい。例えば、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、一つの製剤に同時に投与されてよく、または別個の製剤に同時に、順次にまたは個別的に投与されてよい。同時に、順次にまたは個別的に投与するために、本発明の薬学組成物に含まれる腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、それぞれ別途の容器に分離させて剤形化するか、または同じ容器で共に剤形化してよい。また、本発明の薬学組成物に含まれる腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、薬学的有効量、投与時間、投与間隔、投与経路、治療期間などが互いに同一であるか、または異なってもよい。

【0030】

また、本発明の薬学組成物は、他の治療剤と併用して投与されてよい。この場合、本発明の薬学組成物と他の治療剤は、同時に、順次に、または個別的に投与されてよい。前記他の治療剤は、炎症性腸疾患の予防、治療および改善効果を有する化合物、タンパク質などの薬物であってよいが、これに制限されるものではない。

【0031】

また、本発明の薬学組成物は、他の治療剤と同時に、順次にまたは個別的に投与されるように剤形化してよい。例えば、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤は、一つの製剤に同時に投与されてよく、または別個の製剤に同時に、順次にまたは個別的に投与されてよい。同時に、順次にまたは個別的に投与するために、本発明の薬学組成物に含まれる腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤は、それぞれ別途の容器に分離させて剤形化するか、または同じ容器で共に剤形化してよい。また、本発明の薬学組成物に含まれる腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤は、薬学的有効量、投与時間、投与間隔、投与経路、治療期間などが互いに同一であるか、または異なってもよい。

【0032】

本発明の他の一様態は、炎症性腸疾患の予防または治療を要する対象体に臓オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を投与するステップを含む、炎症性腸疾患の予防または治療方法を提供する。

【0033】

本発明による炎症性腸疾患の予防または治療方法において、各用語は、特別に言及しない限り、前記炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物で説明したところと同じ意味を有する。

【0034】

また、本発明による炎症性腸疾患の予防または治療方法において、前記腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、同時に、順次にまたは個別的に対象体に投与されてよい。

【0035】

また、前記腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、他の治療剤と同時に、順次にまたは個別的に対象体に投与されてよい。

【0036】

前記「同時」投与は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を一つの製剤に一度に投与することを意味するか、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤を一つの製剤に一度に投与することを意味する。また、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を別途の製剤に一度に投与することを意味するか、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤を別途の製剤に一度に投与することを意味し、この場合、腸オルガノイド、ＴＮＦα抑制剤および／または他の治療剤の投与経路は、互いに異なってもよい。

【0037】

前記「順次」投与は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を比較的連続的に投与することを意味するか、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤を比較的連続的に投与することを意味し、投与間隔に消耗する時間として可能な最小限の時間を許諾する。

【0038】

前記「個別的」投与は、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を一定時間間隔を置いて投与することを意味するか、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤と他の治療剤を一定時間間隔を置いて投与することを意味する。前記腸オルガノイド、ＴＮＦα抑制剤および／または他の治療剤の投与方法は、対象体の治療効能、副作用などを考慮して、当業界の医師または専門家が適切に選択することができる。

【発明の効果】

【0039】

本発明による腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、体重減少、下痢、血便などの炎症性腸疾患症状を緩和させることができ、炎症による腸粘膜の線維化を抑制することができる。特に、腸オルガノイドおよび抗炎症剤であるＴＮＦα抑制剤を併用する場合、ＴＮＦα抑制剤を多回投与することより顕著に優れた治療効果を示すことができるので、炎症性腸疾患を予防または治療する物質として有用に活用されることができる。

【図面の簡単な説明】

【0040】

【図1】ＤＳＳを使用した炎症性腸疾患の誘発、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与方法に対する概要図。

【図2】腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された腸組職に対するＨ＆Ｅ染色、ＧＦＰ／ＤＡＰＩ分析結果を示す像。

【図3】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独単回投与、ＴＮＦα抑制剤単独多回投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の生存率を示すグラフ。

【図4】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独単回投与、ＴＮＦα抑制剤単独多回投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の体重増減程度を示すグラフ。Ａは体重の増減割合を示し、Ｂは最終測定された体重（ｇ）を示す。

【図5】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独単回投与、ＴＮＦα抑制剤単独多回投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体のＤＡＩ（疾患活動性指標：ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）増減程度を示すグラフ。ＡはＤＡＩの増減割合を示し、Ｂは最終スコアリングされたＤＡＩを示す。

【図6】ＴＮＢＳを使用した炎症性腸疾患の誘発、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与方法に対する概要図。

【図7】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与（Ａｎｔｉ－ＴＮＦα）、腸オルガノイド単独移植（Ｏｒｇａｎｏｉｄ）、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）の腸組職写真。

【図8】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の生存率を示すグラフ。

【図9】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の体重増減程度を示すグラフ。

【図10】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の変形された潰瘍性大腸炎の内視鏡重症度指数（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ Ｉｎｄｅｘ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ；Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳ）を示すグラフ。

【図11】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体のＤＡＩ（疾患活動性指標：ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）増減程度を示すグラフ。

【図12】腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された腸組職に対するＨ＆Ｅ染色、ＧＦＰ／ＤＡＰＩ分析結果を示す像。

【図13】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の腸長さ増減程度を示すグラフ。

【図14】炎症性腸疾患が発病された個体で、ＴＮＦα抑制剤単独投与、腸オルガノイド単独移植、または腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤が併用された個体の腸長さ増減程度を示す像。

【発明を実施するための形態】

【0041】

以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明しようとする。これらの実施例は、本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されるものではない。

【0042】

実施例１．ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患に対する効果
実施例１－１．併用および移植
先ず、炎症性腸疾患マウスモデルに腸オルガノイドを移植し、抗炎症剤を投与して、腸オルガノイドおよび抗炎症剤の併用による炎症性腸疾患の予防または治療効能を確認した。

【0043】

具体的に、炎症性腸疾患マウスモデルは、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｍａｌｅ、１０株、平均体重２４ｇ）に４ｖ／ｖ％ＤＳＳ（Ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）飲水を５日間食べさせた以後、一般飲水に変更して製作した。ＤＳＳを飲用水に混合して経口投与すると、浮腫、発赤、潰瘍および血便を伴った急性大腸炎が腸全般に亘って誘発され、組職に好中球の浸透が観察される。時間が経ちながらリンパ球などが浸潤して慢性炎症を示す。

【0044】

その次、ＧＦＰを発現するマウス腸オルガノイドを５×１０^５細胞／匹の数で実験開始７日目（ｄａｙ７）と１０日目（ｄａｙ１０）に総２回の移植を進めた。移植は、内視鏡移植方法で進め、１次投与は、クラムプ（ｃｌｕｍｐ）形態の腸オルガノイドをフィブリノーゲン（ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）５０μＬに混合して投与し、２次投与は、トロンビン５０μＬを投与して移植を進めた。抗炎症剤としてはＴＮＦα抑制剤を使用し、抗－マウスＴＮＦα抗体（５ｍｇ／ｋｇ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）１００μＬを腹腔注射した。このとき、単回投与の場合、７日目、細胞移植後の一日後である８日目（ｄａｙ８）に遂行し、多回投与の場合、８日目を含んで二日間隔で総５回投与（ｄａｙ８、ｄａｙ１０、ｄａｙ１２、ｄａｙ１４、ｄａｙ１６）を遂行した。

【0045】

炎症性腸疾患の誘発、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与の概要は図１に示し、対照群および実験群は、下記の表１に整理した。

【0046】

【表1】

【0047】

以後、実験開始日から１～２株間隔で大腸内視鏡を通じて腸粘膜の病便および移植された腸オルガノイドを確認した。

【0048】

その結果、図２に示したように、移植された腸オルガノイドは、腸組職によく生着されていることを確認した。

【0049】

実施例１－２．生存率
前記実施例１－１による方法で、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤を投与し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の生存率を確認した。

【0050】

具体的に、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与による個体の生存率は、個体数が減少する度に各群ごとに下記のような式で計算しており、カプラン・マイヤー生存分析法を用いて評価した。
個体の生存率＝生存動物数／総動物数×１００（％）

【0051】

その結果、図３に示したように、炎症性腸疾患を病む陰性対照群は、実験開始１０日目に全て死亡した。

【0052】

また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で単回または多回投与した実験群１および２、および腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群３の場合、実験開始１０日目（初単独使用２日または３日後）から死亡し始め、１５日目（初単独使用７日または８日後）には半分以上の個体が死亡して約４０％の生存率を記録した。

【0053】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群４の場合、実験開始１０日目（初併用２日後）から死亡し始めたが、その後の期間には単独使用した個体に比べて生存した個体数が多く、１８日目（初併用１０日後）まで約５０％の生存率を記録して、単独使用した場合に比べて、生存率が約１０％程度顕著に増加することを確認した。

【0054】

すなわち、生存率と関連しては、ＴＮＦα抑制剤の単回投与と多回投与間に効果の差はなく、ＴＮＦα抑制剤を単回投与しながら腸オルガノイドを併用する場合の効果は、ＴＮＦα抑制剤多回投与効果よりも約１０％以上顕著に優れることを確認した。

【0055】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示すことが分かった。

【0056】

実施例１－３．体重
前記実施例１－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の体重増減程度を確認した。

【0057】

具体的に、ＤＳＳ投与および治療剤処置によるマウス体重の変化推移を毎日追跡観察し、試験開始前に個体の体重を１００％にしてＤＳＳ誘導腸疾患による体重の減少および治療剤処置による増加パターンをグラフで示した。試験終了時点、各群間のマウス体重差は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒ．３統計プログラムを使用して一元分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を行い、Ｔｕｋｅｙ事後検定を遂行することで、治療剤効果に対する有意性を確認した（＊ｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０５）。

【0058】

その結果、図４のＡおよびＢに示したように、炎症性腸疾患を病む陰性対照群は、実験開始１０日目に正常対照群に比べて約３０％の体重が減少し、その後にはすべての個体が死亡した。

【0059】

また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で単回または多回投与した実験群１および２、および腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群３の場合、実験開始１５日目（初単独使用７日または８日後）まで体重が減少して、正常対照群に比べて約３０～４０％の体重が減少したが、その後、体重が若干増加して実験２３日目（初単独使用１５日または１６日後）には正常対照群に比べて約２０～２５％の体重減少率を示した。

【0060】

具体的に、実験２３日目（初単独使用１５日または１６日後）には正常対照群に比べて、ＴＮＦα抑制剤を単独で単回投与した実験群１の場合、体重減少率が約２０％であり、ＴＮＦα抑制剤を単独で多回投与した実験群２の場合、体重減少率が約２５％であり、腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群３の場合、体重減少率が約２２％であることを確認した。

【0061】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群４の場合、実験開始１０日目（初併用２日後）まで体重が減少して正常対照群に比べて約２５％の体重が減少したが、その後、体重が顕著に増加して実験２３日目（初併用１５日後）には正常対照群に比べて約１５％の体重減少率を示した。また、単独使用した場合に比べて、生存率が約１０％程度顕著に増加することを確認した。

【0062】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示し、これは、ＴＮＦα抑制剤を多回投与することより顕著に優れた治療効果であることが分かった。

【0063】

実施例１－４．ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）
前記実施例１－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の疾患活動性指標（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ；ＤＡＩ）に対する減少効果を確認した。

【0064】

具体的に、ＤＡＩは、体重減少、大便一貫性および分別潜血から構成されたパラメーターに対して分析した。各パラメーターに対する症状を観察した後、変化程度によってスコアリングし、これを合算して０～１点のＤＡＩは正常、２～４点のＤＡＩは軽症、５～７点のＤＡＩは重症、８～１０点のＤＡＩは危重症の炎症性腸疾患に分類した。

【0065】

【表2】

【0066】

その結果、図５のＡおよびＢに示したように、腸オルガノイドまたはＴＮＦα抑制剤を投与していない陰性対照群は、実験開始１０日目に正常対照群に比べてＤＡＩが約６まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示し、その後には、すべての個体が死亡した。また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で単回または多回投与した実験群１および２、および腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群３の場合、実験開始１５日目（初単独使用７日または８日後）までＤＡＩが約６～７まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示した。実験２３日目（初単独使用１５日または１６日後）には、ＤＡＩが約５～６程度に減少したが、依然として重症の炎症性腸疾患症状を示した。具体的に、実験２３日目（初単独使用１５日または１６日後）には正常対照群に比べて、ＴＮＦα抑制剤を単独で単回投与した実験群１の場合、ＤＡＩが約５．５であり、ＴＮＦα抑制剤を単独で多回投与した実験群２のＤＡＩが６であり、腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群３の場合、ＤＡＩが５であることを確認した。

【0067】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群４の場合、実験開始１３日目（初併用５日後）までＤＡＩが約６まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示したが、その後、実験２３日目（初併用１５日後）には、ＤＡＩが約３程度に減少して炎症性腸疾患症状が軽症に緩和された。これは、腸オルガノイドまたはＴＮＦα抑制剤を単独使用した場合に比べて、ＤＡＩが２～３程度に顕著に減少したものであって、重症から軽症に症状が顕著に緩和されたことを確認した。

【0068】

すなわち、ＤＡＩと関連しては、ＴＮＦα抑制剤の単回投与よりも多回投与の効果がさらに優れているが、ＴＮＦα抑制剤を単回投与しながら腸オルガノイドを併用する場合の効果は、ＴＮＦα抑制剤多回投与効果よりもＤＡＩを２～３程度に減少させる顕著に優れた効果を示すことを確認した。

【0069】

特に、前記併用の実験群４の場合、実験開始１３日目（初併用５日後）以後からＤＡＩが急激に減少するが、単独使用の実験群１～３の場合には、実験開始１５日目（初単独使用７日または８日後）からＤＡＩが減少することを考慮すると、炎症性腸疾患の治療効果をより短期間に示すことができることを確認した。

【0070】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、体重減少、大便一貫性（ｓｔｏｏｌ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）および糞便潜血（ｆｅｃａｌ ｏｃｃｕｌｔ ｂｌｏｏｄ）などの症状を示す炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示し、これは、ＴＮＦα抑制剤を多回投与することよりも顕著に優れた治療効果であることが分かった。

【0071】

実施例２．ＴＮＢＳ誘導炎症性腸疾患に対する効果
実施例２－１．併用および移植
炎症性腸疾患マウスモデルに腸オルガノイドを移植し、抗炎症剤を投与して、腸オルガノイドおよび抗炎症剤の併用による炎症性腸疾患の予防または治療効能を確認した。

【0072】

具体的に、炎症性腸疾患マウスモデルは、次のような方法で製作した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雄（Ｍａｌｅ）、１０株、平均体重２４ｇ）に１ｗ／ｖ％ＴＮＢＳ（Ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）前感作溶液（ｐｒｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を背側肌に処理し、以後、８日間体重が減少するか、他の特異症状が発見されていないマウスのみを選別して使用した。以後、エタノール溶液に混合した２．５ｗ／ｖ％ＴＮＢＳをマウスの直腸内に投与した。ＴＮＢＳをエタノール溶液に混合して直腸内に投与すると、人体の炎症性腸疾患と類似した疾患が誘発されると知られている。エタノールは、腸粘膜障壁（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｂａｒｒｉｅｒ）を破り、ＴＮＢＳが障壁に入ることに主な役目をし、ＴＮＢＳは、酸化的な損傷を通じて急性全階性壊死を起こす。

【0073】

ＴＮＢＳ直腸内投与の翌日、ＴＮＦα抑制剤として、抗－マウスＴＮＦα抗体 （ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）１００μｇを腹腔注射した。また、ＴＮＦα抑制剤投与の翌日、ＧＦＰを発現するマウス腸オルガノイドを１×１０^６細胞／匹の数でマウス腸内に移植した。移植は、内視鏡移植方法で進め、腸オルガノイドのスキャフォルドとしてはフィブリングルー（Ｆｉｂｒｉｎ ｇｌｕｅ）を使用した。一方、ＴＮＦα抑制剤および腸オルガノイド併用投与の場合、抗－マウスＴＮＦα抗体１００μｇおよび１×１０^６細胞／匹の腸オルガノイドをＴＮＢＳ直腸内に投与した、翌日同時に投与および移植した。

【0074】

炎症性腸疾患の誘発、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与の概要は、図６に示し、対照群および実験群は、下記の表３に整理した。

【0075】

【表3】

【0076】

以後、実験開始日から１～２株間隔で大腸内視鏡を通じて腸粘膜の病便および移植された腸オルガノイドを確認した。

【0077】

その結果、図７に示したように、陰性対照群の場合、ＴＮＢＳによる炎症性腸疾患の誘発直後から深刻な程度の炎症および潰瘍病便（白色部分）が示され、発病４週次には大部分の個体が死亡して、製作されたモデルが激しい重症度のモデルであることを確認した。

【0078】

また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５の場合、発病４週次には陰性対照群に比べて生存率が上がっているが、依然として多数の死亡個体が確認され、生存した個体でも炎症および潰瘍病便が一部残存していることが確認された。腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群６の場合にも、発病４週次まで生存した個体で炎症および潰瘍病便が一部残存していることが確認された。

【0079】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、実験開始直後には陰性対照群と類似した程度の炎症および潰瘍病便を示したが、発病４週次まで生存した個体で炎症および潰瘍病便がほとんど消え、一部写真から見られる凸凹の腸表面は、炎症または潰瘍が治療されながら示される過程のうち一部であることと観察された。

【0080】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示すことが分かった。

【0081】

実施例２－２．生存率
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤を投与し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の生存率を確認した。

【0082】

具体的に、腸オルガノイド移植およびＴＮＦα抑制剤投与による個体の生存率は、個体数が減少する度に各群ごとに下記のような式で計算しており、カプラン・マイヤー生存分析法を用いて評価した。
個体の生存率＝生存動物数／総動物数×１００（％）

【0083】

その結果、図８に示したように、炎症性腸疾患を病む陰性対照群は、実験開始２週次に大部分の個体が死亡して、生存率は約２０％に過ぎなかった。

【0084】

また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５の場合、実験開始１週次から死亡し始め、２週次には半分以上の個体が死亡して約４０％の生存率を記録した。腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群６の場合にも、実験開始１週次から死亡し始めて実験終了時に約６０％の生存率を記録した。

【0085】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、実験開始１週次には約９０％に達する高い生存率を示し、実験終了時に約７０％の生存率を記録して、単独使用した場合に比べて、生存率が約１０％程度顕著に増加することを確認した。

【0086】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示すことが分かった。

【0087】

実施例２－３．体重
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の体重増減程度を確認した。

【0088】

具体的に、ＤＳＳ投与および治療剤処置によるマウス体重の変化推移を毎日追跡観察し、試験開始前に個体の体重を１００％にしてＤＳＳ誘導腸疾患による体重の減少および治療剤処置による増加パターンをグラフで示した。試験終了時点、各群間のマウス体重差は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒ．３統計プログラムを用いて一元分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を行い、Ｔｕｋｅｙ事後検定を遂行することで、治療剤効果に対する有意性を確認した（＊ｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０５）。

【0089】

その結果、図９に示したように、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５または腸オルガノイドのみを単独で移植した実験群６と類似した体重を示した。

【0090】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用しても、体重が顕著に減少するなどの生体毒性を示さないので、これらは、炎症性腸疾患の予防または治療に安全に使用され得ることが分かる。

【0091】

実施例２－４．ＵＣＥＩＳ（潰瘍性大腸炎内視鏡的重症度指標：Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ Ｉｎｄｅｘ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ）
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる潰瘍性大腸炎の予防または治療効果として個体の変形された潰瘍性大腸炎内視鏡的重症度指標（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ Ｉｎｄｅｘ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ；Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳ）に対する減少程度を確認した。

【0092】

具体的に、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳは、血管パターン（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｔｔｅｒｎ）、出血（Ｂｌｅｅｄｉｎｇ）、潰瘍（Ｕｌｃｅｒｓ）および生存（Ｓｕｒｖｉｖａｌ）から構成されたパラメーターに対して分析した。各パラメーターに対する症状を観察した後、変化程度によってスコアリングし、これを合算して０～１点のＵＣＥＩＳは正常、２～４点のＵＣＥＩＳは軽症、５～６点のＵＣＥＩＳは重症、７～８点のＵＣＥＩＳは危重症の潰瘍性大腸炎に分類した。

【0093】

【表4】

【0094】

その結果、図１０に示したように、腸オルガノイドまたはＴＮＦα抑制剤を投与していない陰性対照群は、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳが約８まで増加する重症の潰瘍性大腸炎症状を示した。また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５の場合、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳが約５～６まで増加する重症の潰瘍性大腸炎症状を示し、腸オルガノイドのみを単独で投与した実験群６の場合、ＤＡＩが約５まで増加する重症の潰瘍性大腸炎症状を示した。

【0095】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＵＣＥＩＳが約３程度に軽症の潰瘍性大腸炎症状のみを示した。

【0096】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示し、炎症性腸疾患の症状を重症から軽症に顕著に緩和させ得ることが分かった。

【0097】

実施例２－５．ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の疾患活動性指標（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ；ＤＡＩ）に対する減少効果を確認した。具体的に、ＤＡＩは、前記実施例１－４による方法と同一に分析した。

【0098】

その結果、図１１に示したように、腸オルガノイドまたはＴＮＦα抑制剤を投与していない陰性対照群は、実験開始１０日目に正常対照群に比べてＤＡＩが約８まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示した。

【0099】

また、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５の場合、ＤＡＩが約６～７まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示し、腸オルガノイドのみを単独で投与した実験群６の場合、ＤＡＩが約５まで増加する重症の炎症性腸疾患症状を示した。

【0100】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、実験開始時からＤＡＩが約３程度に軽症の炎症性腸疾患症状のみを示し、実験終了時までさらに悪化することなく症状が保持された。

【0101】

前記結果を通じて、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症性腸疾患の予防または治療に対して優れたシナジー効果を示し、炎症性腸疾患の症状を重症から軽症に顕著に緩和させ得ることが分かった。

【0102】

実施例２－６．腸粘膜再生
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の腸粘膜再生促進効果を確認した。具体的に、腸組職に生着された腸オルガノイドおよび腸組職の構造を分析して、腸粘膜の再生程度を確認した。

【0103】

その結果、図１２に示したように、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、腸オルガノイドが腸粘膜に生着されており、損傷した組職に代替して正常組職を形成することを確認した。

【0104】

前記結果を通じて、炎症性腸疾患の治療に対する腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症が発生して損傷した組職に代替することで、体重減少、下痢、血便などの症状を示す炎症性腸疾患に対する予防または治療効果を示すことを確認した。

【0105】

実施例２－７．腸粘膜線維化
前記実施例２－１による方法で、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用し、これによる炎症性腸疾患の予防または治療効果として個体の腸粘膜線維化の抑制効果を確認した。

【0106】

具体的に、腸長さを測定することで、炎症による腸粘膜の線維化進行程度、および腸オルガノイドおよび／またはＴＮＦα抑制剤による腸粘膜の線維化抑制程度を確認した。炎症性腸疾患を病む個体の場合、腸粘膜は炎症により線維化が発生して、結果的に腸の長さが短くなり、かつ固くなる現象が発生する。線維化は、腸組職の非正常的な変化を引き起こして、栄養分の攝取などを妨げるので、疾患の完治を妨げる要素となる。

【0107】

具体的に、ＴＮＢＳ投与および治療剤処置による腸線維化差を確認するための腸長さの変化は、試験終了時点でマウスを剖検して、盲腸から肛門までの長さを測定して観察した。各群間の腸長さの差は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒ．３統計プログラムを用いて一元分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）を行い、Ｔｕｋｅｙ事後検定を遂行することで、腸線維化抑制に対する治療剤効果の有意性を確認した（＊ｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０５）。

【0108】

その結果、図１３および１４に示したように、ＴＮＦα抑制剤のみを単独で投与した実験群５および腸オルガノイドのみを単独で投与した実験群６の場合、炎症による線維化が進行して大腸の長さが短くなり、陰性対照群と類似した程度の長さを示した。

【0109】

これに対し、腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を併用した実験群７の場合、炎症による腸粘膜の線維化が抑制され、これにより大腸の長さが短くならないため、正常対照群と類似した程度の長さを示した。

【0110】

前記結果を通じて、炎症性腸疾患の治療に対する腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤の併用は、炎症が発生した部位で線維化の進行を抑制するか、または緩和させることで、体重減少、下痢、血便などの症状を示す炎症性腸疾患に対する予防または治療効果を示すことを確認した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【手続補正書】

【提出日】2023-02-27

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤を含む、炎症性腸疾患の予防または治療用の薬学組成物であって、
前記炎症性腸疾患は、虚血性大腸炎、ベーチェット大腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎および潰瘍性直腸炎からなる群より選ばれる一つ以上である、薬学組成物。

【請求項2】

前記ＴＮＦα抑制剤は、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合する化合物、ペプチド、ペプチドミメティクス、融合タンパク質、抗体、アプタマーまたは抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）である、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項3】

前記ＴＮＦα抑制剤は、ＴＮＦαのＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的に結合するアンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはリボザイムである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項4】

前記組成物は、ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を減少させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項5】

前記組成物は、個体の体重減少、大便一貫性および糞便潜血からなる群より選ばれる一つ以上の症状を改善または緩和させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項6】

前記組成物は、炎症による線維化を抑制または緩和させるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【請求項7】

前記腸オルガノイドおよびＴＮＦα抑制剤は、同時に、順次にまたは個別的に対象体に投与されるものである、請求項１に記載の薬学組成物。

【国際調査報告】