特表 2023-541372 神経保護方法及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-02

(54)【発明の名称】神経保護方法及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/197 20060101AFI20230925BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20230925BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230925BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230925BHJP

   A61K 9/113 20060101ALI20230925BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20230925BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20230925BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20230925BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230925BHJP

【ＦＩ】

A61K31/197

A61P27/06

A61P27/02

A61P25/00

A61K9/113

A61K47/14

A61K47/24

A61K47/02

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023512690

(86)(22)【出願日】2021-08-23

(85)【翻訳文提出日】2023-04-13

(86)【国際出願番号】 US2021047109

(87)【国際公開番号】W WO2022040622

(87)【国際公開日】2022-02-24

(31)【優先権主張番号】63/068,917

(32)【優先日】2020-08-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＬＡＢＲＡＳＯＬ

(71)【出願人】

【識別番号】523059718

【氏名又は名称】オクロセラピー リミテッド ライアビリティ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】ヤブロンスキー モニカ エム．

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA18

4C076AA94

4C076BB24

4C076CC10

4C076DD23A

4C076DD26A

4C076DD46A

4C076DD63A

4C076FF31

4C084AA17

4C084MA22

4C084MA58

4C084NA05

4C084NA12

4C084ZA33

4C084ZC41

4C206AA01

4C206AA02

4C206FA44

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA42

4C206MA78

4C206NA05

4C206NA12

4C206ZA33

(57)【要約】

本発明は、眼の神経変性の予防を必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象における緑内障を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項2】

緑内障誘発性神経変性を予防する方法であって、それを必要とする前記対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項3】

対象における視野欠損を減少させる方法であって、それを必要とする前記対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項4】

眼内圧を減少させ、眼の神経変性を予防する方法であって、それを必要とする前記対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項5】

それを必要とする対象の眼に対して神経保護効果を提供するための方法であって、前記対象に、神経保護効果を提供することができる、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項6】

対象における眼外傷を治療するための方法であって、それを必要とする前記対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項7】

遺伝性網膜変性を予防するための方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法。

【請求項8】

前記組成物が、眼の眼内圧（intraocular pressure；ＩＯＰ）を減少させる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記眼用組成物が、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記神経保護効果が、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす、請求項５に記載の方法。

【請求項11】

前記組成物が、局所投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記組成物が、前記対象の片眼又は両眼に投与される、請求項８に記載の方法。

【請求項13】

前記組成物が、点眼剤を介して投与される、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

前記組成物が、１日１回投与される、請求項９に記載の方法。

【請求項15】

前記組成物が、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記マイクロエマルジョン製剤が、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記マイクロエマルジョンが、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記多相マイクロエマルジョン（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）が、
内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、
外部乳化剤内に包含された、前記内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、
前記外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と
を含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記中間油相（Ｏ）が、内部乳化剤を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記内部乳化剤が、界面活性剤を含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記界面活性剤が、ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記水溶液が、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。

【請求項23】

前記外部水相（Ｗ_２）が、前記外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項24】

前記ＭＥが、局所製剤として製剤化される、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項26】

前記水溶液（Ｗ_２）が、水溶性薬物を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項27】

眼内の眼圧（intraocular eye pressure；ＩＯＰ）を低下させ、かつ直接的な神経保護を提供する方法であって、Ｃａｃｎａ２ｄ１遺伝子によってコードされるカルシウムチャネル電位依存性α２δ１サブユニット（ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）タンパク質を標的とする治療薬を投与することを含む、方法。

【請求項28】

前記眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤が、単回用量として投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤が、連続的に投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤が、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２０年０８月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／０６８，９１７号の優先権を主張し、その内容全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。

【0002】

本明細書に引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載され特許請求される本発明の日付の当業者に既知の最新技術をより完全に記載するために、これらの刊行物の開示は、参照により本出願に組み込まれる。

【0003】

本特許開示は、著作権保護の対象となる材料を含む。著作権所有者は、米国特許商標局の特許ファイル又は記録に掲載されている特許文書又は特許開示のいずれかによるファクシミリ複製に異議はないが、それ以外のあらゆる著作権を留保する。

【0004】

政府の権益
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金番号Ｒ４３ ＥＹ０２９９０９及びＲ２４ ＥＹ０２９９５０に基づく政府の支援を受けて行われた。政府は、本発明に一定の権利を有する。

【0005】

発明の分野
本発明は、眼の神経変性の予防を必要とする対象においてそれを行う方法を対象とする。

【背景技術】

【0006】

発明の背景
緑内障は、世界における不可逆的失明の主たる原因である。この疾患は、現在、米国において３００万人を超える人々が罹患しており、寿命の増加が予測されることに伴って、この数は、２０５０年までに約６３０万人に増加する可能性がある。成人発症型緑内障には４つの主要なタイプがあり、その全てが、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の機能不全及び／又は死の最終経路を介して視力喪失につながる。興味深いことに、緑内障の各形態は、複数の、かつ、時には異なる危険因子と関連付けられる可能性があり、ＲＧＣ死（demise）につながる複数の誘発機構が存在することを示している。４つの成人発症型緑内障サブタイプのうちの３つについて、眼内圧（ＩＯＰ）の上昇は、ＲＧＣ死の後の視野欠損についての最も有意な予測リスク因子である。第４のサブタイプである正常眼圧緑内障は、高ＩＯＰと関連付けられておらず、ＲＧＣ死を誘発する因子は、ほとんどが不明である。

【0007】

成人発症型緑内障のための現在の標準治療には、点眼剤として局所送達されるＩＯＰ低下薬による治療が含まれる。現在ＦＤＡ承認されている全ての緑内障薬物の主な制限は、限られた有効性である。具体的には、ＩＯＰ低減は、多くの緑内障患者においてＲＧＣ死及び結果として生じる視野欠損を完全には予防しない。

【発明の概要】

【0008】

本発明の一態様は、対象における緑内障を治療する方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法を対象とする。実施形態において、組成物は、眼の眼内圧（intraocular pressure；ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、眼用組成物は、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する。実施形態において、神経保護効果は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす。実施形態において、組成物は、局所投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、対象の片眼又は両眼に投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、点眼剤を介して投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、１日１回投与される。一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む。更なる実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。別の実施形態において、マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む。更なる実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、ａ．内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、ｂ．外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、ｃ．外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と、を含む。更なる実施形態において、中間油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。更なる実施形態において、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。一実施形態において、外部水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ＭＥは、局所製剤として製剤化される。別の実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む。一実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、水溶液（Ｗ_２）中に水溶性薬物を更に含む。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、単回用量で投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、連続的に投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される。

【0009】

本発明の一態様は、緑内障誘発性神経変性を予防する（例えば、それから保護する）方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法を対象とする。実施形態において、組成物は、眼の眼内圧（ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、眼用組成物は、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する。実施形態において、神経保護効果は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす。実施形態において、組成物は、局所投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、対象の片眼又は両眼に投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、点眼剤を介して投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、１日１回投与される。一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む。更なる実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。別の実施形態において、マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む。更なる実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、ａ．内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、ｂ．外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、ｃ．外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と、を含む。更なる実施形態において、中間油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。更なる実施形態において、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。一実施形態において、外部水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ＭＥは、局所製剤として製剤化される。別の実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む。一実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、水溶液（Ｗ_２）中に水溶性薬物を更に含む。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、単回用量で投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、連続的に投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される。

【0010】

本発明の一態様は、対象における視野欠損を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法を対象とする。実施形態において、組成物は、眼の眼内圧（ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、眼用組成物は、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する。実施形態において、神経保護効果は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす。実施形態において、組成物は、局所投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、対象の片眼又は両眼に投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、点眼剤を介して投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、１日１回投与される。一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む。更なる実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。別の実施形態において、マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む。更なる実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、ａ．内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、ｂ．外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、ｃ．外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と、を含む。更なる実施形態において、中間油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。更なる実施形態において、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。一実施形態において、外部水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ＭＥは、局所製剤として製剤化される。別の実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む。一実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、水溶液（Ｗ_２）中に水溶性薬物を更に含む。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、単回用量で投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、連続的に投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される。

【0011】

本発明の一態様は、眼内圧を減少させ、眼の神経変性を予防する方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法を対象とする。実施形態において、組成物は、眼の眼内圧（ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、眼用組成物は、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する。実施形態において、神経保護効果は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす。実施形態において、組成物は、局所投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、対象の片眼又は両眼に投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、点眼剤を介して投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、１日１回投与される。一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む。更なる実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。別の実施形態において、マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む。更なる実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、ａ．内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、ｂ．外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、ｃ．外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と、を含む。更なる実施形態において、中間油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。更なる実施形態において、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。一実施形態において、外部水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ＭＥは、局所製剤として製剤化される。別の実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む。一実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、水溶液（Ｗ_２）中に水溶性薬物を更に含む。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、単回用量で投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、連続的に投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される。

【0012】

本発明の一態様は、神経保護効果の提供を必要とする対象の眼に対してそれを行う方法であって、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を対象に投与することを含む、方法を対象とする。実施形態において、組成物は、眼の眼内圧（ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、眼用組成物は、約０．００１％～約１．２％のプレガバリン（ＰＲＧ）を含有する。実施形態において、神経保護効果は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経に影響を及ぼす。実施形態において、組成物は、局所投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、対象の片眼又は両眼に投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、点眼剤を介して投与される。更なる実施形態において、局所投与される組成物は、１日１回投与される。一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を含む。更なる実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。別の実施形態において、マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）多相マイクロエマルジョンを含む。更なる実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、ａ．内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む内部相（Ｗ_１）と、ｂ．外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する中間油相（Ｏ）と、ｃ．外部乳化剤を取り囲む外部水相（Ｗ_２）と、を含む。更なる実施形態において、中間油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。更なる実施形態において、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。一実施形態において、外部水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ＭＥは、局所製剤として製剤化される。別の実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、油相（Ｏ）中に不溶性又は難溶性薬物を更に含む。一実施形態において、多相マイクロエマルジョンは、水溶液（Ｗ_２）中に水溶性薬物を更に含む。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、単回用量で投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、連続的に投与される。実施形態において、眼用組成物又はマイクロエマルジョン製剤は、対象に１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回投与される。

【0013】

本発明の一態様は、眼内の眼圧（intraocular eye pressure；ＩＯＰ）を低下させ、かつ直接的な神経保護を提供する方法であって、Ｃａｃｎａ２ｄｑ遺伝子によってコードされるカルシウムチャネル電位依存性α２δ１サブユニット（ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）タンパク質を標的とする治療薬を投与することを含む、方法を対象とする。

【0014】

本発明の他の目的及び利点は、次の記載から容易に明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】近位Ｃｈｒ５上のＩＯＰ調節ＱＴＬを示す。Ｃａｃｎａ２ｄ１は、ＩＯＰ調節遺伝子として同定された（Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ ｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ８，１７５５（２０１７））。

【図2】ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が毛様体、シュレム管及び小柱網に局在することを示す（Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ ｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ８，１７５５（２０１７））。

【図3】ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が網膜神経節細胞（ＲＧＣ）（赤色矢印）及び神経線維層（ＮＦＬ）中のそれらの軸索（白色矢印）に局在することを示す（パネルＡ及びＢ）。ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は、視神経（ＯＮ）（黒色矢印）及び神経を取り囲むミエリン鞘（白色矢印）におけるＲＧＣ軸索束にも存在する（パネルＣ）。

【図4】ＢＸＤ２９マウスにおいて、ＩＯＰ（丸）はその生涯を通じて比較的一定であるが、ＯＮにおける軸索は早期（２～５ヶ月齢）に死滅することを示す。

【図5】Ｂ６マウスのベースラインＩＯＰ（１５．８３±０．７３ｍｍＨｇ）及びＢＸＤ２９マウスのベースラインＩＯＰ（１６．２５±０．２５ｍｍＨｇ）が５週齢で有意に異ならないことを示す。Ｂ６とは異なり、ＢＸＤ２９マウスのＩＯＰは、局所ＰＲＧ－ＭＥに応答しない（ｎ＝５マウス／条件）。

【図6】ＰＲＧ－ＭＥ（四角）が、（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｌ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））から改変された粘性媒体（上向きの三角形）でＰＲＧよりも大幅に薬効を改善することを示す。

【図7】２１日間にわたって１日１回ＰＲＧ－ＭＥ（黒四角）を投与することにより、ブランクＭＥと比較してより低い生理学的範囲内にＩＯＰが維持されることを示す。薬物耐性は、検出されない（（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図8】ＭＥの局所投与（２１日間、毎日投与）後にＰＲＧが網膜内（右端）に到達することを示す（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図9】毎日ＰＲＧ ＭＥを局所投薬することにより、ＯＮにおけるＲＧＣ軸索が変性から保護されることを示す。５週齢で（パネルＡ）、ＢＸＤ２９マウスのＯＮは、健康である。本発明者らのＰＲＧ ＭＥを６週間毎日局所投与した後（パネルＢ）、ＯＮの構造は良好に保存され、処置前対照と同様である。著しく対照的に、ブランクＭＥを６週間投与したマウスからのＯＮ軸索（パネルＣ）は変性している。

【図10】理論に束縛されることを望むものではないが、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１（赤色）へのＰＲＧ（プレガバリン）の結合により、カルシウムチャネルのαｌ孔がＲＧＣ及びそれらの軸索内へのＣａ^２＋流入を制限することを示す概略図である。

【図11】本発明者らのプレガバリンマイクロエマルジョンで６０日間処置したダッチベルテッド種（Dutch belted）ウサギにおける健康な視神経を示す。

【図12】透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）によって示されるように、ＰＲＧ ＭＥが明確な多層構造を有することを示す（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図13】ＰＲＧ ＭＥ（四角）が、（点眼剤（丸）又は水（アスタリスク）と比較して）２４時間より長くＰＲＧ放出を延長することを示す。

【図14】ＭＥ合成を示すフロー図を示す。

【図15】水相を青色で示し、油相を黄褐色で示したＭＥのカートゥーン図を示す。

【図16】ダッチベルテッド種ウサギにおいて、ＰＲＧ ＭＥの最初の投与後、ＩＯＰが２１日間の投与の間、低減されたレベルのままであったことを示す。ブランクＭＥを投与された眼は、上昇したベースラインＩＯＰのままであった（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図17】ダッチベルテッド種ウサギの眼が、２１日間の投与後に健康に見えることを示す（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図18】本発明者らのプレガバリンマイクロエマルジョンで６０日間処置したウサギの視神経乳頭の最小の陥凹を示す。

【図19】プレガバリンマイクロエマルジョンで６０日間処置したダッチベルテッド種ウサギの眼における陥凹／乳頭径比が０．４未満である眼底画像を示す。

【図20】損傷領域を丸で囲んだ、ナイーブダッチベルテッド種ウサギの眼神経断面の画像を示す。

【図21】ナイーブダッチベルテッド種ウサギの眼における０．７を超える陥凹／乳頭径比の画像を示す。

【図22】本発明者らのプレガバリンマイクロエマルジョンで処置したダッチベルテッド種ウサギからの眼区画におけるプレガバリン濃度を示す。

【図23】ダッチベルテッド種ウサギの処置眼とナイーブ眼との間の陥凹／乳頭径比のグラフを示す。

【図24】局所適用された水性プレガバリンが、眼内圧（ＩＯＰ）を２０％低下させるが、ＩＯＰは、投与後７時間までにベースラインに戻ることを示す。

【図25】ダッチベルテッド種ウサギにおいてＭＥを局所投与（２１日間、毎日投与）した後にＰＲＧが網膜内（緑色）に到達することを示す（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図26】最小限のＰＲＧが、ＭＥの局所投与（２１日間、毎日投与）後にダッチベルテッド種ウサギの他眼に到達することを示す（Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９））。

【図27】ダッチベルテッド種ウサギの眼へのＰＲＧ ＭＥの最初の投与後に、ＩＯＰが６０日間にわたって低減されたレベルのままであったことを示す。ブランクＭＥを投与された他眼は、上昇したベースラインＩＯＰのままであった。

【図28】ダッチベルテッド種ウサギの眼が投与６０日後に健康に見えることを示す。

【図29】６０日間ブランクＭＥのみを投与されたダッチベルテッド種ウサギの他眼における陥凹／乳頭径比が０．４未満である眼底画像を示す。

【図30】ダッチベルテッド種ウサギの処置眼とナイーブ眼との間の陥凹／乳頭径比のグラフを示す。

【図31】ブランクマイクロエマルジョンで６０日間処置したダッチベルテッド種ウサギの他眼における健康な視神経を示す。

【図32】ブランクマイクロエマルジョンで６０日間処置したダッチベルテッド種ウサギの他眼の視神経乳頭の最小の陥凹を示す。

【図33】ナイーブダッチベルテッド種ウサギの視神経乳頭の大きく深い陥凹を示す。

【図34】一方の眼においてはブランクマイクロエマルジョンで、他眼においてはブランクマイクロエマルジョンで６０日間処置したダッチベルテッド種ウサギ由来の末梢器官におけるプレガバリン濃度を示す。

【図35】ＢＸＤ２９マウスのＩＯＰが、毎日の投与の６週間まで局所プレガバリンマイクロエマルジョンに応答しないことを示す。投与された眼及び投与されていない眼のＩＯＰは、全ての時点で統計的に同一である。

【図36】図３５に記載の条件下での壊死軸索数のグラフを示す（ｎ＝６マウス／条件）。

【図37】共焦点顕微鏡画像を示す。カルシウムチャネルサブユニットＣＡＣＮＡ２Ｄ１及びＣＡＣＮＡ２Ｄ２は、毛様体（ＣＢ）、小柱網網膜及び視神経乳頭（ＯＮＨ）において発現される。１ヶ月齢の全Ｃ５７Ｂ１／６Ｊマウスの切片を、プレガバリンカルシウム電位依存性チャネル補助サブユニットアルファ２デルタ１（ＣＡＣＮＡ２Ｄ１、赤色）及びカルシウム電位依存性チャネル補助サブユニットアルファ２デルタ２（ＣＡＣＮＡ２Ｄ２、緑色）の２つの標的について免疫標識した。核をＤＡＰＩ（青色）で標識した。パネルＡ～Ｃ）毛様体の断面。パネルＤ～Ｆ）視神経乳頭を通る網膜切片。スケールバー＝２０ｍｍ。

【図38】免疫組織化学を使用して、網膜におけるＣＡＣＮＡ２Ｄ１の局在を示す画像を示す。ＣＡＣＮＡ２Ｄ１タンパク質は、内網状層（ＩＰＬ）及び光受容体内に見出される。

【図39】プレガバリン濃度のグラフを示す。本発明者らのＭＥを局所投与した後、プレガバリンは、網膜及びＯＮに到達する。

【図40】ＤＢウサギの眼に爆傷を生じさせるためのＯＢＩ装置を示す。

【図41】ＩＯＰ測定のグラフを示す。ＩＯＰは、外傷後７週間までベースラインから変化しなかった。データは、５０ｐｓｉの爆風圧からである。

【図42】パターン網膜電図検査（ＰＥＲＧ）のグラフを示す。ＰＥＲＧ振幅は一過的に増加し、続いて外傷から２週間後に急速に減少した。データは、５０ｐｓｉの爆風圧からである。

【図43】陥凹／乳頭径比のグラフを示す。外傷後２週間までに、陥凹／乳頭径比は着実に増加し、これはＲＧＣ軸索の喪失を示す可能性がある。データは、５０ｐｓｉの爆風圧からである。

【図44】組織像を示す。ＩＯＰが上昇した９ヶ月齢のナイーブＤＢウサギでは、ＯＮ損傷及びＯＮＨ陥凹が生じている。

【図45】組織像を示す。プレガバリンＭＥで２ヶ月間処置した９ヶ月齢のウサギでは、ＯＮＨ陥凹のＯＮ損傷が生じていない。

【図46】顕微鏡画像を示す。ＲＧＣに負荷されたＣａ^２＋指示薬（パネルＡ）。ＲＧＣ軸索（パネルＢ及びパネルＣの四角）及び細胞体（パネルＢ及びパネルＥの丸）の高倍率。軸索束（パネルＤ）及び個々のＲＧＣ（パネルＦ）におけるＫ^＋誘発。Ｃａ^２＋トランジェントを紫色で示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

発明の詳細な説明
本発明の態様は、眼の神経変性の予防を必要とする対象に対してそれを行う方法に関する。

【0017】

１つ以上の実施形態の詳細な説明が本明細書に提供される。しかしながら、本発明は、様々な形態で具現化され得る。したがって、本明細書に開示される特定の詳細は、限定として解釈されるべきではなく、特許請求の範囲の根拠として、及び当業者に本発明を任意の適切な方法で用いるように教示するための代表的な根拠として解釈されるべきである。

【0018】

単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、文脈が明確に他のことを指示しない限り、複数の参照を含む。特許請求の範囲及び／又は明細書において「含む」という用語とともに使用されるときの「１つの（a）」又は「１つの（an）」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又は２つ以上」の意味とも一致する。

【0019】

「例えば」、「など」、「含む」などの句のいずれかが本明細書で使用される場合は常に、他に明確に記載されない限り、「限定することなく」という句が付随し得る。同様に、「一例」、「例示的」などは、非限定的である。

【0020】

「実質的に」という用語は、意図した目的に悪影響を与えない記述語からの逸脱を可能にする。記述用語は、「実質的に」という語が明確に列挙されていなくても、「実質的に」という用語によって修飾され得る。

【0021】

「含む（comprising）」及び「含む（including）」及び「有する（having）」及び「含む（involving）」（並びに同様に「含む（comprises）」、「含む（includes）」、「有する（has）」、及び「含む（involves）」）などの用語は、交換可能に使用され、同じ意味を有する。具体的には、用語の各々は、「含む（comprising）」の一般的な米国特許法の定義と一致して定義され、したがって、「少なくとも以下（at least the following）」を意味する非限定用語（open term）であると解釈され、追加の特徴、限定、態様などを除外しないとも解釈される。よって、例えば、「ステップａ、ｂ、及びｃを含むプロセス」は、プロセスが少なくともステップａ、ｂ、及びｃを含むことを意味する。「ａ」又は「ａｎ」という用語が使用されている場合は常に、そのような解釈が文脈上無意味でない限り、「１つ以上」と理解される。

【0022】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、本明細書では、おおよそ、大まかに、およそ、又はその領域内を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、それは、記載された数値の上及び下の境界を拡張することによってその範囲を変更する。一般に、「約」という用語は、本明細書では、２０パーセント上又は下の（より高い又はより低い）分散によって記載された値を上回る、及び下回る数値を修飾するために使用される。

【0023】

本発明の態様は、眼の神経変性を予防する（例えば、眼の神経変性から保護する）方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む組成物を投与することを含む、方法に関する。本明細書で使用される場合、「神経変性」は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び／又は視神経の死／機能不全を指すことができる。例えば、神経変性は、当業者による視野検査を使用して測定することができる。例えば、神経変性は、当業者がパターン網膜電図（ｐＥＲＧ）を使用してＲＧＣの機能を測定することによって定量することができる。

【0024】

本発明の態様は、ニューロエンハンスメント及び／又は神経保護を提供する方法に関する。例えば、実施形態は、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含むことができる。本明細書で使用される場合、「ニューロエンハンスメント」は、神経学的成分の健康又は性能の増加を指すことができる。「神経学的成分」の非限定的な例は、網膜神経節細胞、又はそれらのそれぞれの軸索及び光受容体であり得る。本明細書で使用される場合、「神経保護」という用語は、神経細胞死の予防を指すことができる。例えば、本明細書に記載されるプレガバリン含有ＭＥの投与は、それを必要とする対象にニューロエンハンスメント及び／又は神経保護効果を提供することができる。

【0025】

本発明の態様は、対象において緑内障を治療するか、又は神経保護効果を提供する方法であって、プレガバリン（ＰＲＧ）を含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法に関する。本発明の態様は、対象における視野欠損を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリンＰＲＧを含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法に関する。本発明の態様は、眼内の眼圧を減少させ、神経変性を予防する方法であって、それを必要とする対象に、プレガバリンＰＲＧを含む有効量の眼用組成物を投与することを含む、方法に関する。本明細書中で使用される場合、用語「眼用組成物」は、眼投与のために製剤化された任意の組成物若しくは化合物、又は眼の疾患若しくは障害を処置するために使用され得る組成物若しくは化合物を指すことができる。

【0026】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、生物学的応答を生じる薬物の用量又は濃度を指すことができる。

【0027】

本発明の態様は、神経保護効果の提供を必要とする対象の眼に対してそれを行う方法に関する。例えば、実施形態は、（ＰＲＧ）を含む組成物を対象に投与することを含むことができる。本明細書で使用される場合、「神経保護効果」という句は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び／又は視神経の死／機能不全を予防及び／又は低減することを指すことができる。例えば、神経保護効果は、当業者による視野検査を用いて測定することができる。例えば、神経保護効果は、当業者がパターン網膜電図（ｐＥＲＧ）を使用してＲＧＣの機能を測定することによって定量することができる。実施形態において、組成物は、神経保護効果を提供しながら、眼内の眼圧（ＩＯＰ）を減少させる。実施形態において、組成物は、神経保護効果を提供するが、ＩＯＰの効果を有しない。実施形態において、神経保護効果は、ＩＯＰのいかなる変化とも無関係である。

【0028】

本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、物質を対象に導入することを指すことができる。例えば、鼻腔内、局所、経口、非経口、硝子体内、眼内、眼、網膜下、髄腔内、静脈内、皮下、経皮、皮内、頭蓋内などの投与を含む任意の投与経路を利用することができる。実施形態では、「投与すること」はまた、治療有効量の製剤又は医薬組成物を対象に提供することを指すことができる。本発明の製剤又は医薬化合物は、単独で投与することができるが、選択された投与経路及び標準的な医薬慣行に基づいて選択される他の化合物、賦形剤、充填剤、結合剤、担体又は他のビヒクルとともに投与することができる。投与は、滅菌水溶液若しくは非水溶液、又は生理食塩水、クリーム、ローション、カプセル、錠剤、顆粒、ペレット、粉末、懸濁液、エマルジョン若しくはマイクロエマルジョン、パッチ、ミセル、リポソーム、小胞、マイクロインプラントを含むインプラント、点眼剤、他のタンパク質及びペプチド、合成ポリマー、ミクロスフェア、ナノ粒子などを含む注射用溶液などの担体又はビヒクルを介して行うことができる。

【0029】

製剤の異なる形態は、異なる個体及び単一の個体の異なるニーズの両方に適応するために修正することができる。しかしながら、製剤が、全ての個体の全ての原因に対抗する必要はない。むしろ、必要な原因に対抗することにより、製剤が、体と脳を通常の機能に修復する。その後、体と脳自体が、残りの欠陥を直す。

【0030】

「治療有効量」という用語は、治療されている疾患又は状態の１つ以上の症状をある程度緩和することができる、及び／又は治療対象が発症する、又は発症するリスクのある状態又は疾患の１つ以上の症状をある程度予防することができる、投与される組成物又は医薬組成物の実施形態のその量を指すことができる。

【0031】

本明細書で交換可能に使用される場合、「対象」、「個体」、又は「患者」は、脊椎動物、例えば、ヒトなどの哺乳動物を指すことができる。哺乳動物には、ネズミ、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、及びペットが含まれるが、これらに限定されない。「ペット」という用語は、イヌ、ネコ、モルモット、マウス、ラット、ウサギ、フェレットなどを含むことができる。家畜という用語は、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ブタ、ウシ、ロバ、ラマ、アルパカ、シチメンチョウなどを含むことができる。

【0032】

「医薬的に許容され得る賦形剤」、「医薬的に許容され得る希釈剤」、「医薬的に許容され得る担体」、又は「医薬的に許容され得るアジュバント」は、安全であり、非毒性であり、生物学的にも望ましくないものでもない医薬組成物を調製するのに有用な賦形剤、希釈剤、担体、及び／又はアジュバントを指すことができ、獣医用及び／又はヒト用医薬品の使用に許容され得る賦形剤、希釈剤、担体、及びアジュバントを含むことができる。本明細書で使用される場合、「医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤、担体及び／又はアジュバント」は、１つ以上のそのような賦形剤、希釈剤、担体、及びアジュバントを含むことができる。

【0033】

「医薬組成物」又は「製剤」という句は、哺乳動物、特にヒトなどの対象への投与に好適な組成物又は医薬組成物を指すことができ、かつ活性剤、又は、医薬的に許容され得る担体又は賦形剤を含む成分の組み合わせを指すことができ、組成物を、インビトロ、インビボ、又はエクスビボでの診断的、治療的、又は予防的使用に好適なものにする。「医薬組成物」において、組成物が無菌であり、対象内で望ましくない応答を誘発する可能性のある汚染物質がないことを指すことができる（例えば、医薬組成物中の化合物は、医薬グレードである）。医薬組成物は、経口、鼻腔内、局所、静脈内、頬側、直腸、非経口、腹腔内、皮内、気管内、筋肉内、皮下を含む多くの異なる投与経路を介して、ステント溶出装置、カテーテル溶出装置、血管内バルーン、吸入などによって、それを必要とする対象又は患者に投与するように設計することができる。

【0034】

実施形態において、方法は、組成物を局所投与することを含む。例えば、組成物は、点眼剤を介して投与される。

【0035】

本発明の一態様は、組成物を１日３回超、１日約３回、１日約２回、１日約１回、２日に約１回、３日に約１回、４日に約１回、５日に約１回、６日に約１回、１週間に約１回、２週間に約１回、３週間に約１回、月に約１回、２ヶ月に約１回、３ヶ月に約１回、４ヶ月に約１回、５ヶ月に約１回、６ヶ月に約１回、７ヶ月に約１回、８ヶ月に約１回、９ヶ月に約１回、１０ヶ月に約１回、１１ヶ月に約１回、１年に約１回、又は１年約１回未満投与することを対象とする。

【0036】

一実施形態において、組成物は、マイクロエマルジョンを含む。例えば、米国特許出願公開第２０２０／０３８３９１５号を参照されたい。本明細書で使用される場合、「マイクロエマルジョン」は、界面活性剤の界面膜によって安定化された１つの液相の別の液相への熱力学的に安定な分散液を指すことができる。本明細書で使用される場合、「界面活性剤」は、疎水性部分及び親水性部分を有する合成及び／又は天然に存在する両親媒性分子を指すことができる。例えば、界面活性剤は、乳化剤を指すことができる。本明細書で使用する場合、「乳化剤」は、エマルジョン及び／又はマイクロエマルジョンを安定化させる物質を指す。例えば、乳化剤は、油中水型マイクロエマルジョン（Ｗ／Ｏ）若しくは水中油型（Ｏ／Ｗ）マイクロエマルジョンを乳化若しくは安定化するための１つ以上の分子、化合物、又は成分を含む化合物を指すことができる。

【0037】

一実施形態において、マイクロエマルジョンは、多層マイクロエマルジョンである。本明細書で使用される場合、「多相マイクロエマルジョン」という句は、不連続（又は中間相）として既知である１つの液体の、連続相（又は外部相）として既知である別の液体への熱力学的に安定な分散液であって、不連続相の液滴が、内部相として既知である連続相と同じ性質のより小さい液滴を含有する分散液を指すことができる。例えば、多相マイクロエマルジョンは、水中油中水型（Ｗ_１／Ｏ／Ｗ_２）マイクロエマルジョンであって、内部乳化剤内に包含された、水溶液を含む不連続相（Ｗ_１）と、外部乳化剤内に包含された、内部相を包含する連続相油相（Ｏ）と、外部乳化剤を取り囲む連続水相（Ｗ_２）と、を含む。本明細書で使用される場合、「不連続相」は、連続相内に分散され、連続相と不混和性である要素を指すことができ、「中間相又は油相」と互換的に使用することができる。本明細書で使用される場合、「連続相」は、不混和相とともに分散される相を指すことができ、「外部相」と互換的に使用することができる。本明細書で使用される場合、「内部相」は、外部相と同じ性質であり、不連続相内により小さい液滴として分散された相を指すことができる。本明細書で使用される場合、「内部乳化剤」は、内部相と中間相との間の界面に位置する、３～７のＨＬＢ値を有する疎水性界面活性剤を指すことができる。本明細書で使用される場合、「外部乳化剤」は、中間相と外部相との間の界面に位置する、１０より高いＨＬＢ値を有する親水性界面活性剤を指すことができる。親水性親油性バランス（ＨＬＢ）は、水又は油に対する界面活性剤の親和性の程度を指すことができる。

【0038】

一実施形態において、不連続油相（Ｏ）は、内部乳化剤を含む。例えば、内部乳化剤は、Ｃａｐｒｏｙｌ ９０、レシチン、又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、不連続油相（Ｏ）は、不溶性又は難溶性薬物を含む。

【0039】

一実施形態において、水溶液（Ｗ_２）は、水溶性薬物を含む。

【0040】

一実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。

【0041】

一実施形態において、連続水相（Ｗ_２）は、外部乳化剤及び生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、生体接着性ポリマーは、粘膜接着性ポリマーを指すことができる。

【0042】

一実施形態において、マイクロエマルジョン製剤は、作用持続時間の増加及び有効性の増加をもたらす。本明細書で使用される場合、「作用持続時間」という用語は、物質が有効である時間の長さを指すことができる。例えば、マイクロエマルジョン中にＰＲＧを入れると、ＰＲＧのＩＯＰ低下及び神経保護効果が延長される。例えば、マイクロエマルジョンを使用しないと、ＩＯＰは、約２０％低下し、約８～１０時間までにベースラインに戻り、マイクロエマルジョンを使用すると、ＩＯＰは、約４０％低下し、投与後約３０時間を超えるまでベースラインには戻らない。

【0043】

任意の好適な疎水性内部乳化剤を、マイクロエマルジョン中で使用することができる。様々な非限定的な実施形態において、内部乳化剤は、プロピレングリコールモノカプリレート又は３～７の親水性－親油性バランス（ＨＬＢ）値を有する任意の他の表面活性剤及び／又は任意の脂肪酸のプロピレングリコールエステル、例えば、プロピレングリコールモノカプロエート、プロピレングリコールモノカプリレート、プロピレングリコールモノカプレート、プロピレングリコールモノラウレート、プロピレングリコールモノステアレート、プロピレングリコールモノパルミテート、ポリエチレングリコールラウリルエーテル、ポリエチレングリコールオレイルエーテル、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ５０／１３（ステアリン酸のＰＥＧ（ＭＷ １５００）モノエステル、ジエステル、トリエステルの混合物）、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４（ラウリン酸のＰＥＧ（ＭＷ １５００）モノエステル、ジエステル、トリエステルの混合物）、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４３／０１（脂肪酸Ｃｓ－ＣｉｓのＰＥＧ（ＭＷ １５００）モノエステル、ジエステル、トリエステルの混合物）、任意の脂肪酸の任意のＰＥＧモノエステル、ジエステル及び／若しくはトリエステル、レシチン、卵レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、トコフェロール又は任意の他のリン脂質、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0044】

Ｃａｐｒｙｏｌ ９０は、ＨＬＢ＝５の界面活性剤である。その化学名は、プロピレングリコールモノカプリレート（カプリル酸のプロピレングリコールモノエステル）である。プロピレングリコールモノカプリレートの代替物は、ＨＬＢ値３～７を有する任意の他の界面活性剤及び／又は任意の脂肪酸のプロピレングリコールエステル、例えば、プロピレングリコールモノカプロエート、プロピレングリコールモノカプリレート、プロピレングリコールモノカプレート、プロピレングリコールモノラウレート、プロピレングリコールモノステアレート、プロピレングリコールモノパルミテート、ポリエチレングリコールラウリルエーテル、ポリエチレングリコールオレイルエーテル、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレートなどであり得る。

【0045】

Ｌａｂｒａｓｏｌは、ＨＬＢ値＝１２の親水性界面活性剤である。これは、少量のモノ－、ジ－及びトリグリセリドと、主にカプリル酸及びカプリン酸のポリエチレングリコール－８（ＭＷ ４００）モノエステル及びジエステルと、からなる。その化学名は、カプリロカプロイルポリオキシル－８グリセリド、カプリロカプロイルマクロゴール－８グリセリド又はＰＥＧ－８カプリル酸／カプリン酸グリセリドである。その代替物は、ＨＬＢ値（１０～１４）を有する任意の他の親水性界面活性剤、並びに／又は任意の脂肪酸のポリエチレングリコールモノエステル及び／若しくはジエステルであり得る。

【0046】

Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬは、ＨＬＢ値＝１４の親水性界面活性剤である。その化学名は、マクロゴールグリセロールリシノレエート、ＰＥＧ－３５ヒマシ油、ポリオキシル３５硬化ヒマシ油、又はポリオキシル－３５ヒマシ油である。代替物は、ＨＬＢ値（１２～１６）を有する任意の他の親水性界面活性剤、並びに／又は任意の脂肪酸若しくは脂肪酸混合物のポリエチレングリコールモノエステル及び／若しくはジエステルであり得る。

【0047】

レシチンは、ＨＬＢ値＝４～７を有する疎水性界面活性剤である。その化学名は、２－ノナノイルオキシ－３－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシプロポキシ）－［２－（トリメチルアザニウミル）エチル］ホスフィナートである。それは天然リン脂質の混合物であるので、その代替物は以下のうちの１つであり得る：卵レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、トコフェロール又は任意の他のリン脂質。

【0048】

一実施形態において、内部乳化剤は、プロピレングリコールモノカプリレート、レシチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0049】

任意の好適な水溶液を、マイクロエマルジョン中で使用することができる。様々な非限定的な実施形態において、水溶液は、脱イオン水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、人工涙液、及び平衡塩類溶液からなる群から選択される。

【0050】

任意の好適な油相を、マイクロエマルジョン中で使用することができる。様々な非限定的な実施形態において、油相は、カプリル酸（Ｃ_８）及びカプリン酸（Ｃ_１０）の中鎖トリグリセリドからなる油、エチル、プロピル、イソプロピル及びブチルを含むがこれらに限定されない任意の純粋な脂肪酸エステル、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸又はステアリン酸を含むがこれらに限定されない脂肪酸のエステル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、カプロン酸イソプロピル、カプリル酸イソプロピル、ステアリン酸エチル、ラウリン酸ブチル、並びにヤシ油、パーム核油、大豆油、ヒマシ油、綿実油、コム油及びオリーブ油を含むがこれらに限定されない任意の天然油、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。１つの特定の実施形態において、油相は、Ｌａｂｒａｆａｃ ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ＷＬ１３４９（すなわち、カプリル酸及びカプリン酸のトリグリセリドエステル）を含む。

【0051】

任意の好適な外部乳化剤を、ＭＥ中で使用することができる。様々な他の実施形態において、外部乳化剤は、カプリロカプロイルポリオキシル－８グリセリド、マクロゴールグリセロールリシノレエート、１０～１６の親水性－親油性バランス（ＨＬＢ）値を有する任意の他の親水性界面活性剤、任意の脂肪酸若しくは脂肪酸混合物のポリエチレングリコールモノエステル及び／若しくはジエステル、プロピレングリコール、又はグリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールを含むがこれらに限定されない任意の他のアルコール、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。様々な更なる実施形態において、外部乳化剤は、カプリロカプロイルポリオキシル－８グリセリド、マクロゴールグリセロールリシノレエート、プロピレングリコール、又はそれらの組み合わせを含む。

【0052】

本開示のＭＥの様々な成分の任意の好適な組み合わせが使用され得る。一実施形態において、ＭＥは、０．５～３５％ｗ／ｗの水溶液、０．５～９５％ｗ／ｗの油相、及び５～９９％ｗ／ｗの乳化剤（すなわち、内部乳化剤＋外部乳化剤）を含有する。別の実施形態において、ＭＥは、１０～３０％ｗ／ｗの水溶液、２０～４０％ｗ／ｗの油相、及び４０～６０％ｗ／ｗの乳化剤を含有する。更なる実施形態において、ＭＥは、約２０％ｗ／ｗの水溶液、約３０％ｗ／ｗの油相、及び約５０％ｗ／ｗの乳化剤を含有する。様々な更なる実施形態において、ＭＥは、少なくとも０．５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも２％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも３％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも４％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも６％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも７％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも８％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも９％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１１％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１２％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１３％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１４％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１６％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１７％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１８％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも１９％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも２０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも２５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも３０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも３５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも４０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも４５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも５０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも５５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも６０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも６５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも７０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも７５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも８０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも８５％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、少なくとも９０％ｗ／ｗの水溶液を含有するか、又は少なくとも９５％ｗ／ｗの水溶液を含有する。

【0053】

様々な実施形態において、外部乳化剤は、内部乳化剤に対して約１０：１～約２：１の比で存在する。様々な更なる実施形態において、外部乳化剤は、内部乳化剤に対して約９：１～約２：１、約８：１～約２：１、約７：１～約２：１、約６：１～約２：１、約５：１～約２：１、約４：１～約２：１、約３：１～約２：１、約１０：１～約２．５：１、約９：１～約２．５：１、約８：１～約２．５：１、約７：１～約２．５：１、約６：１～約２．５：１、約５：１～約２．５：１、約４：１～約２．５：１、約３：１～約２．５：１、約１０：１～約３：１、内部乳化剤に対して約９：１～約３：１、約８：１～約３：１、約７：１～約３：１、約６：１～約３：１、約５：１～約３：１、約４：１～約３：１、約１０：１～約４：１、内部乳化剤に対して約９：１～約４：１、約８：１～約４：１、約７：１～約４：１、約６：１～約４：１、約５：１～約４：１、約１０：１～約５：１、内部乳化剤に対して約９：１～約５：１、約８：１～約５：１、約７：１～約５：１、約６：１～約５：１の比で存在する。

【0054】

一実施形態において、水溶液は、水溶性治療薬／薬物を含む。ベータ遮断薬、例えば、ベタキソロール及びチモロール；プロスタグランジン類似体、例えば、ビマトプロスト、ラタノプロスト及びトラボプロスト；アルファ－アドレナリン作動薬、例えば、ブリモニジン酒石酸塩；炭酸脱水酵素阻害剤、例えば、ブリンゾラミド、ドルゾラミド及びアセタゾラミド；カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ニモジピン及びプレガバリン；アシアロ、ガラクトシル化三分岐（ＮＡ３）（アシアロ三分岐複合型Ｎ－グリカンとしても既知である）、ＯＴ－５５１塩酸塩（１－ヒドロキシ－２，２，６，６－テトラメチル－４－ピペリジニルシクロプロパンカルボン酸エステル塩酸塩）、ブリモニジン酒石酸塩、クリンダマイシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、オフロキサシン、トリアムシノロン、バラシクロビル、ピリメタミン、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、アシクロビル、ホスカルネット、酢酸プレドニゾロン、ジフルプレドナート、トリアムシノロン、デキサメタゾン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、シクロスポリン、タクロリムス、シクロホスファミド、リバビリン、ブロムフェナク、ケトロラク、ネパフェナク、リフィテグラスト、フルビプロフェン、ジクロンフェナク、ケトチフェン、ネドクロミル、フェニレフリン、アゼラスチン、エピナスチン、ナファゾリン／フェニラミン、オロプタジン、ベポタスチン、アラカフタジン、ペミロラスト、硫酸亜鉛を含むか、若しくは含まないテトラヒドロゾリン、ヨードキサミド、ナファゾリン、フェニレフリン、クロモリン、エメダスチン、オキシメタゾリン、キシロメタゾリン、ロラチジン、デスロラチジン、フェニルグリシン、ガバペンチン、又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない任意の好適な水溶性治療薬／薬物を水溶液に組み込み得る。特定の実施形態において、水溶性薬物は、フェニルグリシン、ガバペンチン、プレガバリン及びリバビリン、又はそれらの医薬的に許容され得る塩からなる群から選択される。

【0055】

医薬的に許容され得る塩としては、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエタノールアミン及び他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、プロカイン、Ｎ－ベンジルフェネチルアミン、１－パラ－クロロベンジル－２－ピロリジン－１’－イルメチルベンズイミダゾール、ジエチルアミン及び他のアルキルアミン、ピペラジン、並びにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどであるが、これらに限定されないアミン塩；リチウム、カリウム及びナトリウムなどであるが、これらに限定されないアルカリ金属塩；バリウム、カルシウム及びマグネシウムなどであるが、これらに限定されないアルカリ土類金属塩；亜鉛などであるが、これらに限定されない遷移金属塩；並びにリン酸水素ナトリウム及びリン酸二ナトリウムなどであるが、これらに限定されない他の金属塩を挙げることができるが、これらに限定されず、また、塩酸塩及び硫酸塩などであるが、これらに限定されない鉱酸の塩；並びに酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、酪酸塩、吉草酸塩及びフマル酸塩などであるが、これらに限定されない有機酸の塩も挙げられるが、これらに限定されない。

【0056】

別の実施形態において、水相は、ヒドロゲル（すなわち、液体成分が水若しくは水溶液、エマルジョン又は懸濁液であるゲル又は膨潤した網目構造ポリマーマトリックス）を含む。一実施形態において、ヒドロゲルは、生体接着性ポリマーを含む。一実施形態において、生体接着性ポリマーは、粘膜接着性ポリマーを含む。一実施形態において、ヒドロゲルは、粘膜接着性ポリマーを含む。ポリアクリル酸誘導体（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）９８１などのＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）を含むが、これに限定されない）、アルギン酸及びその塩若しくは誘導体（アルギン酸ナトリウムを含むが、これに限定されない）、キトサン及びその誘導体、デキストラン及びその誘導体、ペクチン及びその誘導体、ゼラチン及びその誘導体、ポリビニルピロリドン及びその誘導体、Ｎ－メチルピロリドン及びその誘導体、ヒアルロン酸塩及びその誘導体、ジェランガム及びその誘導体、キサンタンガム及びその誘導体、寒天及びその誘導体、グリココール酸及びその塩若しくは誘導体、又はそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、任意の好適な粘膜接着性ポリマーが使用され得る。特定の実施形態において、粘膜接着性ポリマーは、ポリアクリル酸誘導体（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）９８１などのＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）を含むが、これに限定されない）、アルギン酸及びその塩若しくは誘導体（アルギン酸ナトリウムを含むが、これに限定されない）、キトサン及びその誘導体、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0057】

マイクロエマルジョンは、任意の好適な投与経路（すなわち、経口、局所、鼻腔内、非経口など）用に、マイクロエマルジョン中に負荷された水溶性治療薬の投薬単位製剤に製剤化することができる。製剤は、従来の医薬的に許容され得る担体、アジュバント及びビヒクルを含むがこれらに限定されない、投与経路に好適な任意の他の成分を含むことができる。一実施形態において、マイクロエマルジョンは、眼への送達などのための局所製剤として製剤化される。例えば、局所製剤は、点眼剤を含む。一実施形態において、マイクロエマルジョンは、注射投与用に製剤化される。

【0058】

「製剤」は、製品仕様及び／又は使用条件を含む、特定の最終用途に最適な特性を提供するために選択された化合物、混合物、又は溶液の成分の任意のコレクションを指すことができる。製剤という用語は、液体、半液体、コロイド溶液、分散液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、並びに水中油型エマルジョン及び油中水型エマルジョンを含むナノエマルジョン、ペースト、粉末、並びに懸濁液を含むことができる。製剤はまた、化粧品担体、賦形剤、結合剤及び充填剤などの他の非毒性化合物とともに含まれ得るか、又は包装され得る。例えば、許容され得る化粧品担体、賦形剤、結合剤、及び充填剤としては、化合物を経口送達に適合させ、及び／又は本発明の製剤が商業的に許容され得る貯蔵寿命を示すように安定性を提供するものを挙げることができる。

【0059】

本明細書に開示されるマイクロエマルジョンは、マイクロエマルジョン小球（すなわち、滴剤）として提供され得、マイクロエマルジョン小球は、任意の好適なサイズであり得る。一実施形態において、マイクロエマルジョン小球は、直径が約１ｎｍ～約２００ｎｍである。様々な更なる実施形態において、ＭＥ小球は、直径が約１ｎｍ～約１５０ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約１８ｎｍ、約１ｎｍ～約１７ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、約５ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約１８ｎｍ、約５ｎｍ～約１７ｎｍである。様々な更なる実施形態において、ＭＥ小球は、直径が約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、約１０ｎｍ、約１５ｎｍ、約２０ｎｍ、約２５ｎｍ、約３０ｎｍ、約３５ｎｍ、約４０ｎｍ、約４５ｎｍ、約５０ｎｍ、約５５ｎｍ、約６０ｎｍ、約６５ｎｍ、約７０ｎｍ、約７５ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約９５ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、約１３０ｎｍ、約１４０ｎｍ、約１５０ｎｍ、約１６０ｎｍ、約１７０ｎｍ、約１８０ｎｍ、約１９０又は約２００ｎｍである。他の実施形態において、ＭＥ小球は、直径が少なくとも約１ｎｍ、少なくとも２ｎｍ、少なくとも３ｎｍ、少なくとも４ｎｍ、少なくとも５ｎｍ、少なくとも６ｎｍ、少なくとも７ｎｍ、少なくとも８ｎｍ、少なくとも９ｎｍ、少なくとも１０ｎｍ、少なくとも１５ｎｍ、少なくとも２０ｎｍ、少なくとも２５ｎｍ、少なくとも３０ｎｍ、少なくとも３５ｎｍ、少なくとも４０ｎｍ、少なくとも４５ｎｍ、少なくとも５０ｎｍ、少なくとも５５ｎｍ、少なくとも６０ｎｍ、少なくとも６５ｎｍ、少なくとも７０ｎｍ、少なくとも７５ｎｍ、少なくとも８０ｎｍ、少なくとも９０ｎｍ、少なくとも９５ｎｍ、少なくとも１００ｎｍ、少なくとも１１０ｎｍ、少なくとも１２０ｎｍ、少なくとも１３０ｎｍ、少なくとも１４０ｎｍ、少なくとも１５０ｎｍ、少なくとも１６０ｎｍ、少なくとも１７０ｎｍ、少なくとも１８０ｎｍ、少なくとも１９０又は少なくとも２００ｎｍである。

【0060】

別の態様では、眼疾患を治療するため、又は神経保護効果を提供するための方法が提供される。例えば、実施形態は、眼疾患を治療するか又は神経保護効果を提供するのに有効な量の、本明細書に記載される任意の実施形態又は実施形態の組み合わせのＭＥを、それを必要とする対象に投与することを含むことができ、水溶液は、眼疾患を治療するか又は神経保護効果を提供することができる水溶性治療薬を含む。様々な実施形態において、本方法は、眼内圧（ＩＯＰ）を低減させる、緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性を予防する、視野欠損を減少させる、神経変性を予防する、及び神経保護効果を提供するためのものであり、本明細書に記載の任意の実施形態若しくは実施形態の組み合わせのＭＥの眼内圧上昇、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損、及び／又は神経変性を有する対象に投与することを含み、水溶液は、ＩＯＰを低減させる、緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性を予防する、視野欠損を減少させる、神経変性を予防する、及び神経保護効果を提供することができる水溶性治療薬を含む。様々な実施形態において、ＩＯＰを低減させる、加齢性黄斑変性症を治療する、緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性を予防する、視野欠損を減少させる、神経変性を予防する、及び神経保護効果を提供することができる水溶性治療薬は、ベタキソロール及びチモロールなどのベータ遮断薬；プロスタグランジン類似体、例えばビマトプロスト、ラタノプロスト及びトラボプロスト；アルファ－アドレナリン作動薬、例えばブリモニジン酒石酸塩；炭酸脱水酵素阻害剤、例えばブリンゾラミド、ドルゾラミド及びアセタゾラミド；カルシウムチャネル遮断薬、例えばニモジピン及びプレガバリン；アシアロ、ガラクトシル化三分岐（ＮＡ３）（アシアロ三分岐複合型Ｎ－グリカンとしても既知である）、ＯＴ－５５１塩酸塩（１－ヒドロキシ－２，２，６，６－テトラメチル－４－ピペリジニルシクロプロパンカルボン酸エステル塩酸塩）、ブリモニジン酒石酸塩、クリンダマイシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、オフロキサシン、トリアムシノロン、バラシクロビル、ピリメタミン、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、アシクロビル、ホスカルネット、酢酸プレドニゾロン、ジフルプレドナート、トリアムシノロン、デキサメタゾン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、シクロスポリン、タクロリムス、シクロホスファミド、リバビリン、ブロムフェナク、ケトロラク、ネパフェナク、リフィテグラスト、フルビプロフェン、ジクロンフェナク、ケトチフェン、ネドクロミル、フェニレフリン、アゼラスチン、エピナスチン、ナファゾリン／フェニラミン、オロプタジン、ベポタスチン、アラカフタジン、ペミロラスト、硫酸亜鉛を含むか、若しくは含まないテトラヒドロゾリン、ヨードキサミド、ナファゾリン、フェニレフリン、クロモリン、エメダスチン、オキシメタゾリン、キシロメタゾリン、ロラチジン、デスロラチジン、フェニルグリシン、ガバペンチン、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態において、ＩＯＰを低減させる、緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性を予防する、視野欠損を減少させる、神経変性を予防する、及び神経保護効果を提供することができる水溶性薬物は、フェニルグリシン、ガバペンチン、プレガバリン及びリバビリン、又はそれらの医薬的に許容され得る塩からなる群から選択される。特定の一実施形態において、ＩＯＰを低減させる、緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性を予防する、視野欠損を減少させる、神経変性を予防する、及び神経保護効果を提供することができる水溶性薬物は、プレガバリンであり、プレガバリンは、マイクロエマルジョン中にＭＥ％ｗ／ｗの約０．２％～約２％で存在する。更なる実施形態において、プレガバリンは、ＭＥの％ｗ／ｗの約０．２％～約１．５％、約０．２％～約１％、約２％～約０．７５％、約０．３％～約２％、約０．３％～約１．５％、約０．３％～約１％、約０．３％～約０．７５％、約０．４％～約２％、約０．４％～約１．５％、約０．４％～約１％、約０．４％～約０．７５％、約０．５％～約２％、約０．５％～約１．５％、約０．５％～約１％、約０．５％～約０．７５％、約０．２％～約０．６％、約０．３％～約０．６％、約０．４％～約０．６％、約０．５％～約０．６％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、又は約０．６％でＭＥ中に存在する。本明細書に記載されるＭＥは、任意の水溶性治療候補のための優れた薬物送達系である。

【0061】

本明細書で使用される場合、「治療」及び「治療すること」は、状態、疾患又は障害と闘う目的で、疾患又は障害の症状のうちの１つ以上が改善されたか、又は他の方法で有益に変化する任意の方法で、対象者の管理及びケアを指すことができる。この用語は、症状若しくは合併症を軽減若しくは緩和する；状態、疾患、若しくは障害の進行を遅延させる；状態、疾患、若しくは障害を治癒若しくは排除する；及び／又は状態、疾患、若しくは障害を予防する目的のための活性化合物の投与など、患者が罹患している所与の状態のための全範囲の治療を含むことができ、ここで、「予防すること」又は「予防」は、状態、疾患、又は障害の発症を妨げる目的での患者の管理及びケアを指し得、症状又は合併症の発症のリスクを予防又は低減するための活性化合物の投与を含むことができる。当業者は、病理の発達を評価するために様々な方法論及びアッセイを使用できることを理解し、同様に、病態、ドライブウェイ、又は退行を低減するために様々な方法論及びアッセイを使用することができる。例えば、本明細書に記載の方法は、神経変性又は損傷に対する治療を提供することができる。

【0062】

本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、疾患のリスクがあり得るが、まだ疾患を有すると診断されていない対象において、疾患、障害、又は状態が発生するのを予防することを指すことができる。予防（及び予防するための有効用量）は、人口調査で実証することができる。例えば、所与の疾患又は状態を予防するのに有効な量は、未治療のコントロール集団と比較して、治療された集団における発生率を低減するのに有効な量である。

【0063】

この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される水溶性薬物は、これらの症候群のうちの１つ以上に罹患している患者において、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％、ＩＯＰを低減させる、及び／又は緑内障（ＰＯＡＧを含む）を治療する、緑内障誘発性神経変性から保護する、視野欠損を減少させる、神経変性から保護する、及び神経保護効果を提供するために使用される。この実施形態の更に他の態様では、本明細書に開示される水溶性薬物は、これらの症候群のうちの１つに罹患している患者において、例えば、約５％～約１００％、約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０％～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％、又は約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％、又は約５０％～約７０％から、ＩＯＰを低減させる、及び／又は緑内障を治療する、緑内障誘発性神経変性から保護する、緑内障誘発性神経変性から保護する、視野欠損を減少させる、神経変性から保護する、及び神経保護効果を提供する。

【0064】

本明細書に開示されるマイクロエマルジョンは、個体への慣習的な投与を可能にするのに十分な量で水溶性薬物を含むことができる。この実施形態の態様では、本明細書に開示されるＭＥは、例えば、少なくとも０．００１％ｗ／ｗ、少なくとも０．００２％ｗ／ｗ、少なくとも０．００３％ｗ／ｗ、少なくとも０．００４％ｗ／ｗ、少なくとも０．００５％ｗ／ｗ、少なくとも０．００６％ｗ／ｗ、少なくとも０．００７％ｗ／ｗ、少なくとも０．００８％ｗ／ｗ、少なくとも０．００９％ｗ／ｗ、少なくとも０．０１％ｗ／ｗ、少なくとも０．０２％ｗ／ｗ、少なくとも０．０３％ｗ／ｗ、少なくとも０．０４％ｗ／ｗ、少なくとも０．０５％ｗ／ｗ、少なくとも０．０６％ｗ／ｗ、少なくとも０．０７％ｗ／ｗ、少なくとも０．０８％ｗ／ｗ、少なくとも０．０９％ｗ／ｗ、少なくとも０．１％ｗ／ｗ、少なくとも０．２％ｗ／ｗ、少なくとも０．３％ｗ／ｗ、少なくとも０．４％ｗ／ｗ、０．５％ｗ／ｗ、少なくとも０．６％ｗ／ｗ、少なくとも０．７％ｗ／ｗ、少なくとも０．８％ｗ／ｗ、少なくとも０．９％ｗ／ｗ、少なくとも１．０％ｗ／ｗ、少なくとも１．１％ｗ／ｗ、少なくとも１．２％ｗ／ｗの水溶性薬物を含み得る。この実施形態の更に他の態様において、本明細書に開示されるＭＥは、例えば、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．２％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．１％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．２％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．１％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗ、約０．５５％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、又は約０．５５％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗの水溶性薬物を含み得る。

【0065】

本明細書に開示されるＭＥ中の本明細書に開示される水溶性薬物の最終濃度は、所望の任意の濃度であり得る。この実施形態の一態様において、マイクロエマルジョン中の水溶性薬物の最終濃度は、治療有効量であり得る。この実施形態の他の態様では、ＭＥ中の水溶性薬物の最終濃度は、例えば、少なくとも０．００１％ｗ／ｗ、少なくとも０．００２％ｗ／ｗ、少なくとも０．００３％ｗ／ｗ、少なくとも０．００４％ｗ／ｗ、少なくとも０．００５％ｗ／ｗ、少なくとも０．００６％ｗ／ｗ、少なくとも０．００７％ｗ／ｗ、少なくとも０．００８％ｗ／ｗ、少なくとも０．００９％ｗ／ｗ、少なくとも０．０１％ｗ／ｗ、少なくとも０．０２％ｗ／ｗ、少なくとも０．０３％ｗ／ｗ、少なくとも０．０４％ｗ／ｗ、少なくとも０．０５％ｗ／ｗ、少なくとも０．０６％ｗ／ｗ、少なくとも０．０７％ｗ／ｗ、少なくとも０．０８％ｗ／ｗ、少なくとも０．０９％ｗ／ｗ、少なくとも０．１％ｗ／ｗ、少なくとも０．２％ｗ／ｗ、少なくとも０．３％ｗ／ｗ、少なくとも０．４％ｗ／ｗ、０．５％ｗ／ｗ、少なくとも０．６％ｗ／ｗ、少なくとも０．７％ｗ／ｗ、少なくとも０．８％ｗ／ｗ、少なくとも０．９％ｗ／ｗ、少なくとも１．０％ｗ／ｗ、少なくとも１．１％ｗ／ｗ、少なくとも１．２％ｗ／ｗであり得る。この実施形態の他の態様において、ＭＥ中の本明細書に開示される水溶性薬物の濃度は、例えば、多くとも０．３％ｗ／ｗ、多くとも０．４％ｗ／ｗ、多くとも０．５％ｗ／ｗ、多くとも０．６％ｗ／ｗ、多くとも０．７％ｗ／ｗ、多くとも０．８％ｗ／ｗ、多くとも０．９％ｗ／ｗ、多くとも１．０％ｗ／ｗ、多くとも１．１％ｗ／ｗ、又は多くとも１．２％ｗ／ｗであり得る。この実施形態の他の態様では、ＭＥ中の水溶性薬物の最終濃度は、例えば、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．２％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．１％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．００１％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．２％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．１％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．３％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．４％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約１．０％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．９％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、約０．５％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗ、約０．５５％ｗ／ｗ～約０．８％ｗ／ｗ、又は約０．５５％ｗ／ｗ～約０．７％ｗ／ｗであり得る。

【0066】

本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療すること」は、以下のうちの１つ以上を達成することを指すことができる：（ａ）障害の重症度を低減すること；（ｂ）治療される障害に特徴的な症状の発症を制限又は予防すること；（ｃ）治療される障害に特徴的な症状の悪化を阻害すること；（ｄ）以前に障害を有していた患者における障害の再発を制限又は予防すること；（ｅ）以前に障害に対して症候性であった患者における症状の再発を制限又は予防すること。特定の実施形態は、部分的に、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性に罹患している個体を治療することを開示する。これらの実施形態において、治療することとは、個体において、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／若しくは神経変性の臨床症状を低減若しくは排除すること；又は個体において、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／若しくは神経変性の臨床症状の発症を遅延若しくは予防することを指し得る。例えば、「治療すること」という用語は、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性を特徴とする状態の症状を、例えば、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％低減することを指すことができる。ＩＯＰ、緑内障、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、ブドウ膜炎、及び／又は結膜炎に関連付けられた実際の症状は周知であり、これらの症候群のそれぞれに関連付けられた様々な因子を考慮することによって当業者によって判定することができる。当業者は、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性に関連する適切な症状又は指標を知っており、個体が本明細書に開示されるような治療の候補であるかどうかを判定する方法を知っているであろう。

【0067】

様々な実施形態において、治療有効量の本明細書に開示される水溶性薬物は、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性に関連付けられた症状を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％低減させる。他の実施形態において、治療有効量の本明細書に開示される水溶性薬物は、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、減少した視野欠損、及び／又は神経変性に関連付けられた症状を、例えば、多くとも１０％、多くとも１５％、多くとも２０％、多くとも２５％、多くとも３０％、多くとも３５％、多くとも４０％、多くとも４５％、多くとも５０％、多くとも５５％、多くとも６０％、多くとも６５％、多くとも７０％、多くとも７５％、多くとも８０％、多くとも８５％、多くとも９０％、多くとも９５％、又は多くとも１００％低減させる。更に他の実施形態において、治療有効量の本明細書に開示される水溶性薬物は、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性に関連付けられた症状を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、又は約３０％～約５０％低減させる。

【0068】

本明細書に開示される方法における使用のための治療薬（例えば、マイクロエマルジョン）は、担当医療従事者によって適切であるとみなされるように、例えば、本明細書に記載されるような投与経路によって投与され得る。一実施形態において、本明細書に開示される方法において使用するための治療薬（マイクロエマルジョンなど）は、対象の片眼又は両眼に投与される。別の実施形態において、投与は、１日１回行われる。投与は、単回投与又は累積（連続投与）であり得、当業者によって容易に決定され得る。例えば、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性の治療、並びに神経保護効果の提供は、本明細書に開示される水溶性薬物を含有するＭＥの有効用量の１回投与を含み得る。別の実施形態において、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性の治療、並びに神経保護効果の提供は、例えば、１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回、又は週１回など、ある範囲の期間にわたって実施される水溶性薬物を含有するマイクロエマルジョンの有効用量の複数回投与を含むことができる。投与のタイミングは、個体の症状の重症度のような因子に応じて、個体間で変化し得る。例えば、本明細書に開示される水溶性薬物を含有するＭＥの有効用量は、無期限に、又は個体がもはや治療を必要としなくなるまで、１日１回、個体に投与することができる。当業者は、個体の状態が治療の過程を通して監視され得ること、及び投与される本明細書中に開示される水溶性薬物を含有するＭＥの有効量がそれに応じて調節され得ることを認識するであろう。

【0069】

更なる実施形態において、本発明の水溶性薬物及びその誘導体は、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月又はそれ以上の半減期を有する。

【0070】

一実施形態において、ＩＯＰ、緑内障、緑内障誘発性神経変性、視野欠損の減少、及び／又は神経変性の治療並びに神経保護効果の提供のための治療薬の投与期間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、又はそれ以上である。更なる実施形態において、投与期間の間に投与が停止される期間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、又はそれ以上である。

【0071】

様々な実施形態において、本明細書に開示される水溶性薬物を含有する、治療有効量のＭＥは、個体の眼内の眼内圧（ＩＯＰ）を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％低減させる。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示される水溶性薬物を含有する、治療有効量のＭＥは、個体の眼内の内圧を、例えば、多くとも１０％、多くとも１５％、多くとも２０％、多くとも２５％、多くとも３０％、多くとも３５％、多くとも４０％、多くとも４５％、多くとも５０％、多くとも５５％、多くとも６０％、多くとも６５％、多くとも７０％、多くとも７５％、多くとも８０％、多くとも８５％、多くとも９０％、多くとも９５％、又は多くとも１００％低減させる。この実施形態の更に他の態様では、本明細書に開示される水溶性薬物を含有する、治療有効量のＭＥは、個体の眼内の内圧を、例えば、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％、又は約３０％～約５０％低減させる。

【0072】

実施形態において、本明細書に開示される水溶性薬物を含有する、治療有効量のマイクロエマルジョンは、低用量、中用量、又は高用量で投与される。本明細書で使用される場合、「用量」とは、生物学的応答を生じるのに有効な化合物又は組成物の量（例えば、生物学的応答を生じるのに有効なプレガバリン又はプレガバリンを含むマイクロエマルジョンの量）を指すことができる。例えば、用量は、約０．１％の化合物、約０．２％の化合物、約０．３％の化合物、約０．４％の化合物、約０．５％の化合物、約０．６％の化合物、約０．７％の化合物、約０．８％の化合物、約０．９％の化合物、約１％の化合物、約２％の化合物、約３％の化合物、約４％の化合物、約５％の化合物、約１０％の化合物、又は１０％を超える化合物を含む組成物を指すことができる。実施形態において、用量は、約０．６％のプレガバリンであり得る。例えば、用量は、約０．６％のプレガバリンを含むマイクロエマルジョンであり得る。「中用量」は、例えば、低用量の約３倍を指すことができる。高用量は、例えば、低用量の約１０倍、又は低用量の約１０倍超を指すことができる。

【0073】

本明細書で使用する場合、互換的に使用される「対象」、「個体」、又は「患者」という用語は、マウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、トリ、ブタ、ウマ、家畜（例えば、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ）、霊長類、又はヒトなどの哺乳動物を含む任意の動物を指すことができる。特定の実施形態において、対象、個体又は患者は、ヒトである。マイクロエマルジョン及び水溶性薬物を含む医薬組成物が、対象に投与される。例えば、治療の候補である任意の対象は、ある形態のＩＯＰ、緑内障、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、ブドウ膜炎、眼外傷、遺伝性網膜変性、及び／又は結膜炎を有する候補である。術前評価は、手順の全ての関連するリスク及び利益を開示する完全なインフォームドコンセントに加えて、日常的な病歴及び身体検査を含む。

【0074】

本明細書に開示される方法における使用のための治療薬含有マイクロエマルジョンは、経口、静脈内、眼内、膣内、肛門内、皮下、頭蓋内、局所、筋肉内、経腸又は非経口投与経路を含むが、これらに限定されない任意の好適な経路用に製剤化され、かつこれらを介して投与され得る。実施形態において、治療薬含有ＭＥは、眼又は目への（ocular or optic）適用（点眼剤として製剤化されることを含むがこれに限定されない）のための局所的投与、鼻腔内投与、様々な全身疾患のための経口、全身疾患のための経皮適用、及び様々な皮膚障害のための局所的投与のために製剤化され、かつこれらを介して投与され得る。本明細書に記載されるＭＥはまた、単一のＭＥ中に、小分子及びペプチドを含むがこれらに限定されない、任意のタイプの１つ以上の水溶性化合物を組み込むための薬物送達系として使用され得る。

【0075】

マイクロエマルジョンの調製は、意図される用途に適した任意の好適な条件下で実施することができる。非限定的な一実施形態において、水溶性薬物を医薬的に許容され得る溶媒中に完全に溶解させるために、マイクロエマルジョンの調製を室温で行うことができる。しかしながら、本方法の他の実施形態において、マイクロエマルジョンの調製は、室温より高い温度で実施することができる。この実施形態の態様では、ＭＥの調製は、例えば、２１℃超、２５℃超、３０℃超、３５℃超若しくは３７℃超、４０℃超、４２℃超、４５℃超、５０℃超、５５℃超、又は６０℃超の温度で実施され得る。この実施形態の態様では、ＭＥの調製は、例えば、約２０℃～約３０℃、約２５℃～約３５℃、約３０℃～約４０℃、約３５℃～約４５℃、約４０℃～約５０℃、約４５℃～約５５℃、又は約５０℃～約６０℃の温度で実施され得る。特定の場合において、ＭＥの調製は、治療薬が溶媒中に完全に溶解することを可能にするために、室温未満の温度で実施され得る。しかしながら、本方法の他の実施形態において、マイクロエマルジョンの調製は、室温未満、例えば、１０℃未満、５℃超、０℃超、－１０℃超、又は－２０℃超の温度で実施することができる。

【0076】

一実施形態において、マイクロエマルジョンとともに使用するための水溶性薬物は、プレガバリンである。本明細書で使用される場合、「プレガバリン」は、以下の化学構造を指すことができる。

【0077】

別の態様では、緑内障を治療する、ＩＯＰを低減させる、神経保護を提供する、眼外傷を治療する、及び遺伝性網膜変性を予防する方法であって、それを必要とする対象に、緑内障を治療する、ＩＯＰを低減させる、神経保護を提供する、眼外傷を治療する、及び／又は遺伝性網膜変性から保護するのに有効な量の、カルシウム電位依存性チャネル補助サブユニットアルファ２デルタ１（ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）タンパク質の阻害剤を投与することを含む、方法が提供される。一実施形態において、本方法は、緑内障を治療するためのものである。そのような一実施形態において、緑内障は、原発開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）である。一実施形態において、本方法は、神経保護を提供する。そのような実施形態において、神経保護は、眼外傷及び／又は網膜変性からである。例えば、眼外傷は、爆傷であり得る。例えば、網膜変性は、遺伝性網膜変性であり得る。一実施形態において、阻害剤は、ガバペンタノイド、フェニルグリシン、又はそれらの医薬的に許容され得る塩を含む。別の実施形態において、ガバペンタノイドは、プレガバリン又はその医薬的に許容され得る塩を含む。実施形態において、阻害剤は、プレガバリン又はその類似体であり得る。例えば、類似体は、ガバペンチン、ガバペンチンエナカルビル、フェニルアラニン、アムロジピン、４－メチルプレガバリン、アシビシン、ゾレドロン酸、５－エチルヘプト－２－エン酸エチルエステル、５－エチル－３－ニトロメチルヘプタン酸エチルエステル、４－（２－エチルブチル）ピロリジン－２－オン、３－アミノメチル－５－エチルヘプタン酸塩酸塩、３－エチルペンタンニトリル、３－シアノ－４－エチルヘキサン酸エチルエステル、３Ｒ－アミノメチル－４Ｒ，５－ジメチルヘキサン酸、４－（１－エチルプロピル）ピロリジン－２－オン、３－アミノメチル－４－エチルヘキサン酸塩酸塩、５Ｓ－メチル－３－（４Ａ－メチル－２－オキソ－５Ｓ－フェニルオキサゾリジン－３－カルボニル）ヘキサンニトリル、（Ｓ）－２－（２－アミノエチル）－４－メチルペンタン酸、（４Ｓ）－イソブチルジヒドロフラン－２－オン、（４Ｓ）－イソブチル－（３Ｓ）－メチルジヒドロフラン－２－オン、（３Ｓ）－アジドメチル－（２Ｓ，５）－ジメチルヘキサン酸エチルエステル、（４Ｓ）－イソブチル－（３Ｓ）－メチルピロリジン－２－オン、（３Ｓ）－アミノメチル－（２Ｓ，５）－ジメチルヘキサン酸塩酸塩、２，４－ジメチルバレロニトリル、２－エチル－４－メチルペンタンニトリル、３－シアノ－３，５－ジメチルヘキサン酸エチルエステル、３－シアノ－３－エチル－５－メチルヘキサン酸エチルエステル、４－メチル－４－イソブチルピロリジン－２－オン、４－エチル－４－イソブチルピロリジン－２－オン、３－アミノメチル－３，５－ジメチルヘキサン酸、３－アミノメチル－３－エチル－５－メチルヘキサン酸塩酸塩、３－イソブチル－２－メチル－５－オキソピロリジン－１－カルボン酸、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、２－メチル－５－オキソ－３－プロピルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル、３－ブチル－２－メチル－５－オキソピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル、３－（１－アミノ－エチル）－５－メチルヘキサン酸、３－（１－アミノ－エチル）ヘキサン酸、３－（１－アミノ－エチル）ヘプタン酸、５－メチルヘキサ－２－エン酸エチルエステル、５－メチル－３－（１－ニトロエチル）ヘキサン酸エチルエステル、４－イソブチル－５－メチルピロリジン－２－オン、３－イソブチル－２－メチル－５－オキソピロリジン－１－カルボン酸ベンジルエステル、３－（１－ベンジルオキシカルボニルアミノエチル）－５－メチルヘキサン酸、３－（１－アミノエチル）－５－メチルヘキサン酸４－メチルペント－２－エン酸、３－（４－メチルペント－２－エノイル）－４Ｒ－フェニルオキサゾリジン－２－オン、３－（３Ｒ，４－ジメチルペンタノイル）－４Ｒ－フェニルオキサゾリジン－２－オン、（３Ｒ）－（２－アセトキシ－１Ｒ－フェニルエチルカルバモイル）－４Ｓ，５－ジメチルヘキサン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル、２Ｒ（１Ｓ，２－ジメチルプロピル）コハク酸４－ｔｅｒｔ－ブチルエステル、４Ｒ－（１Ｓ，２－ジメチルプロピル）ジヒドロフラン－２－オン、３Ｒ－ブロモメチル－４Ｓ，５－ジメチルヘキサン酸エチルエステル、３Ｒ－アジドメチル－４Ｓ，５－ジメチルヘキサン酸エチルエステル、４Ｒ－（１Ｓ，２－ジメチルプロピル）ピロリジン－２－オン、３Ｒ，４Ｓ－３－アミノメチル－４，５－ジメチルヘキサン酸、３Ｒ－ベンジル－４Ｒ－イソプロピルジヒドロフラン－２－オン、２Ｒ－ベンジル－３Ｒ－ブロモメチル－４－メチルペンタン酸エチルエステル、２Ｒ－ベンジル－３Ｒ，４－ジメチルペンタン酸エチルエステル、酢酸２Ｒ－ベンジル－３Ｒ，４－ジメチルペンチルエステル、３Ｒ－ブロモメチル－４Ｒ，５－ジメチルヘキサン酸エチルエステル、３Ｒ－アミノメチル－４Ｒ，５－ジメチルヘキサン酸を含むことができる。

【0078】

本明細書で使用する場合、「医薬的に許容され得る塩」という句は、医薬的に許容され得る酸付加塩及び塩基付加塩並びに溶媒和物の両方を指すことができる。このような医薬的に許容され得る塩は、意図される用途に好適な任意の塩であり得、酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸、スルフィン酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、硝酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、ヨウ化水素酸、アルカン酸、例えば、酢酸、ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨ（式中、ｎは、０～４である）など）の塩が挙げられるが、これらに限定されない。非毒性の医薬的塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムなどの塩基の塩が挙げられる。当業者は、多種多様な非毒性の医薬的に許容され得る付加塩を認識するであろう。

【0079】

本明細書で使用される場合、「それを必要とする」対象は、治療されるべき障害若しくは疾患を有するか、又は疾患若しくは障害に罹りやすいか、又はそうでなければ疾患若しくは障害を発症するリスクがある対象を指すことができる。

【0080】

１つの非限定的な例において、マイクロエマルジョンは、以下の成分を含むか、又はそれらからなることができる：
（ａ）製剤の約０．１％～約４０％を構成する一次油中水型（ｗ／ｏ）相であって、
（ｉ）製剤の０％～約７％ｗ／ｗの濃度の水と、
（ｉｉ）製剤の約６％～約１３％ｗ／ｗの濃度の油と、
（ｉｉｉ）製剤の約１％～約１３％ｗ／ｗの濃度のＣａｐｒｙｏｌ ９０と、
（ｉｖ）製剤の約１％～約１３％ｗ／ｗの濃度のレシチンと、を含む、ｗ／ｏ相、及び
（ｂ）製剤の５０～９９．９％を構成する外部水相であって、
（ｉ）製剤の約０．１％～約２５％ｗ／ｗの濃度のＬａｂｒａｓｏｌと、
（ｉｉ）製剤の約０．１％～約２５％ｗ／ｗの濃度のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬと、
（ｉｉｉ）製剤の０％～約４５％ｗ／ｗの濃度のプロピレングリコールと、
（ｉｖ）製剤の約１０％～約９９．７％ｗ／ｗの濃度の水と、を含む、外部水相。

【0081】

別の非限定的な例において、マイクロエマルジョンは、以下の成分を含むか、又はそれらからなることができる：
（ａ）製剤の約０．１％～約４０％を構成する一次油中水型（ｗ／ｏ）相であって、
（ｉ）製剤の２％～約７％ｗ／ｗの濃度の水と、
（ｉｉ）製剤の約６％～約９％ｗ／ｗの濃度の油と、
（ｉｉｉ）製剤の約３％～約９％ｗ／ｗの濃度のＣａｐｒｙｏｌ ９０と、
（ｉｖ）製剤の約３％～約９％ｗ／ｗの濃度のレシチンと、を含む、ｗ／ｏ相、及び
（ｂ）製剤の５０～９９．９％を構成する外部水相であって、
（ｉ）製剤の約５％～約９．５％ｗ／ｗの濃度のＬａｂｒａｓｏｌと、
（ｉｉ）製剤の約５％～約９．５％ｗ／ｗの濃度のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬと、
（ｉｉｉ）製剤の５％～約２５％ｗ／ｗの濃度のプロピレングリコールと、
（ｉｖ）製剤の約３０％～約５６％ｗ／ｗの濃度の水と、を含む、外部水相。

【0082】

別の態様では、水不溶性及び水難溶性薬物分子のための薬物送達系として設計されたマイクロエマルジョンが提供される。これらの実施形態において、マイクロエマルジョンは、上記と同じであるが、内部水相及び内部乳化剤を欠く。したがって、この実施形態において、ＭＥは、
（ａ）不連続（分散）油相と、
（ｂ）当該油相を包含する乳化剤と、を含む。

【0083】

一実施形態において、マイクロエマルジョンは、（ｃ）乳化剤を取り囲む連続水相を更に含む。この実施形態において、油性薬物溶液は、親水性乳化剤（例えば、高いＨＬＢ値を有する乳化剤）を含有する生体接着性水相（例えば、本明細書に記載されるヒドロゲル）中で乳化される。

【0084】

更なる実施形態において、マイクロエマルジョンは、不連続油相中に不溶性又は難溶性薬物を含む。

【0085】

ＭＥに関して上で開示された全ての実施形態は、文脈が明確に他のことを指示しない限り、この態様においても同様に使用することができる。

【0086】

実施形態において、マイクロエマルジョンは、抗酸化剤を含有することができる。例えば、抗酸化剤は、グルタチオン、トコフェロールメトキシポリエチレングリコールスクシネート（ＴＰＧＳ）、メタ重亜硫酸ナトリウム、アルファトコフェロール、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、又はそれらの組み合わせを含むことができる。

【実施例】

【0087】

実施例は、本発明のより完全な理解を促進するために以下に提供される。以下の実施例は、本発明を作製及び実施する例示的な様式を例示する。しかしながら、本発明の範囲は、これらの実施例に開示されている特定の実施形態に限定されず、代わりの方法を使用して同様の結果を得ることができるため、例示のみを目的としている。

【0088】

実施例１
緑内障は、世界における不可逆的失明の主たる原因である。この疾患は、現在、米国において３００万人を超える人々が罹患しており、寿命の増加が予測されることに伴って、この数は、２０５０年までに約６３０万人に増加する可能性がある。成人発症型緑内障には４つの主要なタイプがあり、その全てが、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の機能不全及び／又は死の最終経路を介して視力喪失につながる。緑内障の各形態は、複数の、かつ、時には異なる危険因子と関連付けられる可能性があり、ＲＧＣ死につながる複数の誘発機構が存在することを示している。４つの成人発症型緑内障サブタイプのうちの３つについて、眼内圧（ＩＯＰ）の上昇は、ＲＧＣ死の後の視野欠損についての予測リスク因子である。第４のサブタイプである正常眼圧緑内障は、高ＩＯＰと関連付けられておらず、ＲＧＣ死を誘発する因子は、不明である。

【0089】

成人発症型緑内障のための現在の標準治療には、点眼剤として局所送達されるＩＯＰ低下薬による治療が含まれる。現在ＦＤＡ承認されている全ての緑内障薬物の制限は、限られた有効性である。具体的には、ＩＯＰ低減は、多くの緑内障患者においてＲＧＣ死及び結果として生じる視野欠損を予防しない。本発明者らの研究において、本発明者らは、新規なＩＯＰ低下薬標的であるカルシウムチャネル電位依存性α２δ１サブユニット（別名ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）を同定するために、システム遺伝学アプローチを使用した。更に、本発明者らは、ＩＯＰ低下活性を示す選択的ＣＡＣＮＡ２Ｄ１遮断薬であるプレガバリン（ＰＲＧ）を同定した。本発明者らは、眼への薬物侵入を増加させ、結果としてより高い有効性及び作用持続時間をもたらす局所徐放性ＰＲＧマイクロエマルジョン（ＭＥ）を開発した。本発明者らの研究は、緑内障に対するＰＲＧ処置に関連付けられた予期せぬ更なる利益を明らかにした。本発明者らは、ＩＯＰを調節する前眼部構造へのその局在に加えて、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１がＲＧＣ内に位置することを実証するデータを有する。本発明者らはまた、緑内障の２匹の動物モデルにおいて、それが視神経（ＯＮ）損傷から直接保護することを実証する証拠を有する。本発明者らの知見は、本発明者らのＰＲＧ ＭＥが、ＩＯＰを低下させ、かつＲＧＣに対する直接的な神経保護効果を有する緑内障療法であり得ることを示す。

【0090】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らのＰＲＧ ＭＥは、より高い有効性でＩＯＰを低下させるとともに、現在ＦＤＡ承認薬が存在しない使用分野であるＲＧＣの健康を維持する。これは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が、ＮＦＬ（神経線維層）及びＯＮを含むＲＧＣ及びそれらの軸索内に位置することを示す本発明者らのデータによって支持され、本発明者らの徐放性生体接着性ＭＥは、局所送達後の眼内へのＰＲＧの移動を増強する。

【0091】

以下の試験を以下に列挙する。
１．１日１回の投与を用いて、ＰＲＧがＲＧＣ及びＯＮに対する神経保護剤であるかどうかを試験する。
２：ＰＲＧが、細胞内カルシウム（Ｃａ^２＋）の濃度を調節することによって、ＲＧＣの健康において直接的な役割を果たすかどうかを試験する。

【0092】

結果：データセットに基づき、理論に束縛されることを望むものではないが、本研究は、緑内障患者の視野欠損を最小限に抑えることができる神経保護療法としてのＰＲＧ ＭＥを実証するであろう。

【0093】

実施例２
緑内障は、世界中の不可逆的失明の主たる原因である複雑な多因子性の多遺伝子疾患である^１。傾向は、２０４０年までに、世界中で１億１１８０万人もの人々が緑内障を有し^２、その多くが視神経（ＯＮ）損傷のために法的に失明している^３，４ことを示している。成人発症型緑内障の様々なサブタイプ－原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）、原発性閉塞隅角症（ＰＡＣＧ）、及び正常眼圧は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及びＯＮ軸索損傷、並びにその後の視野欠損の臨床病理を共有している^５。この疾患についていくつかの危険因子が既知であり^６－８、眼内圧（ＩＯＰ）の上昇は、緑内障の発症及び進行に関連する修正可能な危険因子である^{４，６，９－１１}。全ての形態の成人発症型緑内障の標準治療は、点眼剤として局所送達されるＩＯＰ低下薬による治療である。この治療戦略は、多くの緑内障患者においてＲＧＣ／ＯＮ損傷及び結果として生じる視野欠損を予防しない。そのため、ＲＧＣに直接的な神経保護又はニューロエンハンスメントを提供する分子を同定することに関心が持たれている。眼科医いわく、「神経保護は、大きな空白状態である」、「神経保護に対する治療選択肢はない」、かつ「ＩＯＰの低下は不十分である」。緑内障治療の有効性を増加させるために神経保護を加える必要がある。

【0094】

直接的な神経保護作用を有する新規なＩＯＰ低下薬の同定：ＩＯＰ低減は、全ての形態の成人発症型緑内障に対する治療選択肢であるが、残念ながら、現在のＩＯＰ低下薬は、根底にある病理又は遺伝的変異に対処していない。マウス前向き遺伝学アプローチを、ヒトＧＷＡＳデータの細胞生物学、薬理学及び分析と組み合わせることによって、本発明者らは、ＩＯＰ、例えば、カルシウムチャネル電位依存性α２δ１サブユニット（別名Ｃａｃｎａ２ｄ１）^１２を調節する新規な遺伝子を同定した（図１）。本発明者らのアプローチは、５つの齢コホートにわたる６５の組換え近交系ＢＸＤマウス系統のＩＯＰ測定を、遺伝的多型評価及び全眼マイクロアレイ分析と組み合わせた。本発明者らの研究の双方向性成分として、本発明者らは、ヒトＰＯＡＧ集団内のＣＡＣＮＡ２Ｄ１における帰属ＳＮＰを裏付けた。ヒト、ウサギ、及びマウスにおける免疫組織化学研究^{１２，１３}は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が毛様体（ＣＢ）及び流出構造内に位置し、これがＩＯＰに影響を及ぼし得ることを示す（図２）。薬理学研究は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１に対する特異性を有するアンタゴニストであるプレガバリン（ＰＲＧ）の局所投与が、用量依存的にＩＯＰを低下させることを実証した^１３。これらの知見は、現在のＩＯＰ低下薬とは異なる作用機序を有する新規なクラスの緑内障治療薬の代表としてのＰＲＧの開発を支持する。

【0095】

本発明者らの研究からの更なる予想外の知見は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１がＲＧＣにおいても発現されることを示す。これらのデータに基づき、理論に束縛されることを望むものではないが、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は、そのＩＯＰ低下効果に加えて、緑内障誘発性神経変性から保護するためのＲＧＣ及びＯＮ上のドラッガブルな標的を表す。

【0096】

本発明者らは、ＰＲＧを眼に送達するための徐放性マイクロエマルジョン（ＭＥ）ベースの製剤を調製し、最適化し、特徴付けた。本発明者らのＭＥは、迅速な排出、短い角膜接触時間及び最小の角膜浸透などといった水性点眼剤に関連する欠点（これらは全て、有効性の低減及び不十分な患者のアドヒアランスにつながる）を克服するように設計された。本発明者らは、生体接着性を改善し、角膜浸透を増強し、３０時間までの薬物の連続放出を提供するインサイチュゲル化特性を有する生体適合性成分を使用して多層ＭＥを設計することによって、これを達成した。本発明者らのＭＥは、小さい粒径（＜２０ｎｍ）を有するので、透明であり、視覚を不鮮明することはない。ＰＲＧ ＭＥの用量の増加に対してＩＯＰの用量応答が低減し、０．６％のＰＲＧは、投与後３４時間までベースラインに戻らないほぼ４０％のＩＯＰの低減を伴う最大効果を提供する最小用量である（試験１；^１３。本発明者らはまた、ＰＲＧ ＭＥを２１日間毎日投与しても、製剤の有効性の減少（タキフィラキシーともいう）はもたらさなかったと判定した（試験２；^１３。）研究を通して、ＩＯＰは、処置された眼において低減されたレベルのままであったが、対照眼は、上昇したベースラインＩＯＰのままであった。本発明者らは、タキフィラキシー研究の終了後に、眼及び身体におけるＰＲＧの分布を判定した（試験２；^１３。）本発明者らのＰＲＧ ＭＥを２１日間連続して局所投与した後、本発明者らは、薬物が、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１を阻害するのに十分な濃度で網膜を含む後眼の組織に到達したと判定した。ブランクＭＥを投与された対照眼は、血漿及び全ての末梢器官と同様に、ごくわずかなレベルのＰＲＧを含んでいた。細隙灯及び組織病理学的検査は、薬物負荷ＭＥが安全であり、眼によって忍容されると判定した^１３。これらは、本発明者らのＭＥが親水性分子を網膜に送達することができることを実証しているので、重要な知見である。これにより、この薬物送達系の使用は、後極の疾患を含むように拡大され、ＲＧＣへの神経保護分子の送達を含む。本発明者らは、有効なＩＯＰ低下治療薬であることに加えて、ＰＲＧが、本発明者らのＭＥによって送達された場合に、ＲＧＣに対する直接的な神経保護剤でもあるかどうかを直接試験する。

【0097】

概念及びアプローチ：
● 本発明者らは、ＩＯＰ調節遺伝子としてのＣａｃｎａ２ｄ１についての本発明者らの発見に基づいて選択された新規なＩＯＰ低下薬ＰＲＧを同定した^１２。ＰＲＧは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１に対して高い親和性及び特異性を有する。現在の療法は全て、持続作用の欠如、眼刺激、並びに他の副作用及び薬物相互作用を含む制限を有する。これらの副作用を経験する患者のために療法を変更することは、全ての現在の療法が、制限された一連の作用機序に関連しているため、困難である。したがって、利用可能な治療選択肢は限られている。ＰＲＧは、これまで知られていなかった新規な標的及び作用機序を介して作用する新規なクラスの緑内障薬であり、したがって多くの患者に選択肢を提供する。ＰＲＧは、ＦＤＡによって承認されており、かつ現在一般的なものであり、５０５（ｂ）（２）の調節経路を通じてそれをリパーパシング（repurpose）し、新規なクラスの緑内障療法を提供することを可能にする。
● 本発明者らは、親水性薬物を眼に送達するための、徐放性で多層生体接着性の局所用ＭＥベース製剤を調製し、特徴付けた。本発明者らのＭＥは、迅速な排出、短い角膜接触時間及び最小限の角膜浸透を含む従来の点眼剤の欠点を克服するように設計されたが、これらは全て、有効性の低減及び不十分な患者のアドヒアランスにつながる。改善された有効性は、粘膜付着特性の増加、角膜透過性の増加、非常に小さい粒子サイズ、浸透増強能力、及び徐放性によって支持される^＊＊。本発明者らのＭＥによって送達されると、眼内へのＰＲＧの移動が増強され、ＰＲＧを網膜内で検出することができ、したがって網膜標的療法のための局所送達が可能になる。
● 本発明者らは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１がＲＧＣ細胞体及びＯＮを含むそれらの軸索にも局在することを実証するデータを有する（図３）。追加のデータは、ＩＯＰ低減がない場合であっても、ＰＲＧがＯＮにおける軸索の変性を予防することを示す（図４～図６）。
まとめると、これらのデータは、ＰＲＧが、ＲＧＣに対する直接的な神経保護剤であり、単独でＩＯＰを低下させるだけでなく、視野欠損を制限することを示す。現在、緑内障のためのＦＤＡ承認神経保護療法はない。本発明者らのＰＲＧ ＭＥは、ＩＯＰを低下させ、かつＲＧＣ及び視神経を保護する最初の緑内障療法であろう。

【0098】

理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧは、１日１回の局所投与を使用するＲＧＣ及びＯＮのための神経保護剤である。

【0099】

目的：この研究における障害は、ＩＯＰ低下とは無関係であるＰＲＧの任意の直接的な神経保護効果のインビボ評価である。この課題に対処するために、本発明者らは、Ｃａｃｎａ２ｄ１のＤハプロタイプを有するマウスがＰＲＧのＩＯＰ低下特性に非応答性であることを実証する本発明者らのデータを利用した^１２。加えて、本発明者らは、５つの齢コホートにわたるＢＸＤマウスから収集されたＩＯＰ及びＯＮ損傷についての本発明者らのデータベースをマイニングし^{１２，１３}、ＢＸＤ２９を、Ｃａｃｎａ２ｄ１のＤハプロタイプを保有し、齢数とともに変化しないＩＯＰを有する（図４、オレンジ色の丸）が、若齢で顕著なＯＮ損傷を有する（図４、青色の棒）株として同定した。そのＩＯＰは、ＰＲＧ処置に対して非応答性である（図５、赤色の記号）。これらの特徴により、ＢＸＤ２９は、ＩＯＰ低減を介して媒介される間接的な影響を排除することによって、ＲＧＣに対するＰＲＧの直接的な神経保護特性を評価するのに理想的である。

【0100】

非限定的な例示的データ：本発明者らは、緑内障における視力喪失の治療においてＰＲＧを有効にすることができることを発見した。前眼部に存在すること（図２）に加えて、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１はまた、ＲＧＣ（図３Ａ及び図３Ｂ）並びにＯＮ（図３Ｃ）に局在する。ＰＲＧは、脳における複数のニューロン細胞型に対する外傷を改善することができ^{１６－２１}、本発明者らのデータは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が、ＩＯＰの低下及びＲＧＣ／ＯＮの直接的な神経保護の両方の標的であり得ることを示す。

【0101】

本発明者らは、ＩＯＰ低減のためのＰＲＧの１日１回投与を支持する、徐放性特性を有する多層マイクロエマルジョン（ＭＥ）を開発し、１滴で、３３時間でベースラインに戻るＩＯＰの顕著な低減（４２％）を誘導する（ＡＵＣ＝１７０ｍｍＨｇ・時間；赤色の四角ダッチベルテッド種ウサギ；図６）^１３。投与後２４時間で、ＩＯＰは、依然として＞２０％低減している。本発明者らのＭＥの非存在下では、ＰＲＧは、１０時間後にベースラインに戻る３０％のＩＯＰ低減しかもたらさず（ＡＵＣ＝３８ｍｍＨｇ・時間）、本発明者らの製剤がＰＲＧのＩＯＰ低下効力及び作用持続時間を増強したことを実証している。更に、それは安全であり、眼において忍容される^１３。２１日間にわたる１日１回の投与により、薬物耐性がなく、ＩＯＰがその上昇した投与前ベースラインには決して戻らないことが実証される（赤色；ダッチベルテッド種ウサギ；図７）^１３。ＲＧＣ及びＯＮに対する直接的な神経保護剤としてＰＲＧを評価する本発明者らの目的のために、本発明者らのＭＥを介したＰＲＧの局所送達はまた、眼への薬物浸透を増強し、薬物レベルが網膜、ＲＧＣの部位及びそれらの軸索に到達することを可能にする（ダッチベルテッド種ウサギ；図８）^１３。

【0102】

本発明者らは、理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らのＰＲＧ ＭＥによる局所投与が、ＯＮにおけるＲＧＣ軸索に対して神経保護的であることを示す証拠を有する。本発明者らは、ＯＮ変性が顕著になる前に、５週齢で開始して（図９Ａ）、ＰＲＧ ＭＥをＢＸＤ２９マウスに毎日投与した。６週間毎日投薬されたＢＸＤ２９マウスからのＯＮにおいて、ＯＮ軸索は、ほぼ正常レベルで保存された（図９Ｂ）。対照的に、非薬用（unmedicated）ＭＥを投与されたマウスからのＯＮは、軸索プロファイルが喪失し、壊死組織片面積が増加した（図９Ｃ）。本研究は、ＲＧＣ神経保護剤としてのＰＲＧの役割を評価し、その細胞作用機序を定義する。

【0103】

研究設計及び方法：本発明者らの試験対象は、上で概説した理由のためにＢＸＤ２９（ＪＡＸ＃０１０９８１）及びＣ５７Ｂ１／６Ｊ（Ｂ６；ＪＡＸ＃０００６６４；眼病変を有しない対照）であり得る。Ｄ２緑内障モデルにおいてニコチンアミドの神経保護効果を評価したＪｏｈｎらの検出力計算を使用して^２２、理論に束縛されることを望むものではないが、８０匹のマウスをこの研究に登録し、雄と雌との間で等しくバランスをとる。本研究の予防アームでは、ＢＸＤ２９マウスは、ＯＮ損傷の発症前に１ヶ月齢になる（図９）。マウスが４ヶ月齢になり、かつＰＲＧの非存在下でＯＮ変性が有意になるまで（ｎ＝２０）、各マウスの両眼に、５μｌのＰＲＧ ＭＥを３ヶ月間、毎日局所投与する^{２３－２５}。第２の組のマウスは、両眼にブランクＭＥを投与される（ｎ＝２０；同じ投与パターン）。第３の組は、介入を受けず、ナイーブ対照として使用される（各ＢＸＤ２９についてｎ＝２０；１０匹それぞれがベースラインデータを得るために使用され、１０匹それぞれが最終データを得るために使用される）。第４の組は、眼病変を有しない対照としてＢ６マウス（ｎ＝２０）を含む。それらは、ナイーブ対照として第３の組と並行して検査される。本発明者らは、本発明者らの製剤が５℃で最低３ヶ月間安定であると判定したので、ＰＲＧ ＭＥの単一バッチを調製し^１３、個々の４ｍｌの不透明ドロッパーボトルに等分し、各マウスについてコード化する。この調査の期間中、ボトルを５℃で保存する。実験者は、製剤ボトルの内容物を知らされない。ＰＲＧの神経保護効果を特徴付けるために、本発明者らは、以下の臨床検査及び実験室検査を使用する。
● 臨床検査（ベースライン及び毎月）：ＩＯＰ測定；ＲＧＣ機能の指標である、暗順応閾値応答を含む暗順応網膜電図（ＥＲＧ）及びパターンＥＲＧ（ＰＥＲＧ）；視力（ＶＡ）及びコントラスト感度（ＣＳ）；並びに、本発明者らが公開した方法^{１３，２３，２５－２７}を使用した視神経乳頭（ＯＮＨ）を通したＯＣＴイメージング。
● 臨床検査（ベースライン及び最終）：網膜の形態学的及び免疫／組織化学的評価（γ－シヌクレイン（ＳＮＣＧ）、脳特異的ホメオボックス／ＰＯＵドメインタンパク質３Ａ（ＢＲＮ３Ａ）、及びＴＵＮＥＬ染色を含む）；本発明者らが公開した方法^{１２，２８－３１}を使用したＯＮ損傷の組織学的評価。
● 統計分析：ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ－８統計ソフトウェアを使用して、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ多重比較検定（有意なＦ検定の場合）によって分析する。

【0104】

本明細書に記載される成果は、予防的に適用された場合のＰＲＧの神経保護的性質の判定である。ＰＲＧ ＭＥで処置されたＢＸＤ２９マウスでは、未処置マウスと比較して、以下が測定される：ベースラインに近いＥＲＧ及びＰＥＲＧ振幅；ベースラインに近いＶＡ及びＣＳレベル；より少ないＴＵＮＥＬ陽性ＲＧＣ；より多くのＳＮＣＧ－及びＢＲＮ３Ａ－免疫陽性ＲＧＣ；ＯＮにおける、より少ない壊死軸索及び瘢痕領域。緑内障患者における視野欠損を阻止又は軽減するためにＲＧＣに直接作用するＦＤＡ承認処置はない。理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧは、神経保護的であり、本発明者らのＰＲＧ ＭＥは、複数の作用機序（ＩＯＰ低下及び神経保護）を有する最初の緑内障治療であろう。

【0105】

この性能は、網膜及びＲＧＣの構造、機能及びタンパク質発現パターンが、ＩＯＰに対する効果の非存在下で、本発明者らのＰＲＧ ＭＥを３ヶ月間毎日投与した後にほぼベースラインレベルで維持されることの実証を含む。

【0106】

理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧは、細胞内（Ｃａ^２＋）レベルの濃度を調節することによって、ＲＧＣの健康において直接的な役割を果たす。

【0107】

非限定的な例示的目的：ＰＲＧがＲＧＣに対する神経保護剤として機能し得る作用機序は不明である。しかしながら、ＰＲＧが選択的ＣＡＣＮＡ２Ｄ１遮断薬であり^１２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１がＲＧＣ及びそれらの軸索に局在することを考慮すると（図３）、ＰＲＧが神経保護的である作用機序の第１段階は、細胞膜全体にわたるイオン性Ｃａ^２＋の流入を減弱させることによるものである（図１０）。

【0108】

非限定的な例示的研究設計：本発明者らは、確立された方法を使用して、Ｃａ^２＋指示色素を負荷した後に、ＢＸＤ２９及びＣ５７Ｂ１／６Ｊ（Ｂ６）マウス由来のＲＧＣ細胞体及び軸索における電位依存性Ｃａ^２＋チャネル（ＶＧＣＣ）によって媒介されるＣａ^２＋シグナルを測定する。早発性ＯＮ損傷を有するＢＸＤ２９（図４）は、本発明者らが試験１（同じ３つの実験条件とともに）で使用するマウスの同じ系統であり、一方、Ｂ６マウスは、ＯＮ損傷を有しない対照マウスとして役立つ。各実験条件からのマウス眼杯（ＯＮ断端：約１ｍｍ長）を得る。Ｃａ^２＋感受性色素（Ｆｌｕｏ－５Ｆ、ペンタカリウム塩；Ｈ_２Ｏ中４０ｍＭ）及びＣａ^２＋非感受性色素（Ａｌｅｘａ ５６８、Ｈ_２Ｏ中２０ｍＭ）の混合物を、ハミルトンシリンジを用いてＯＮ断端に注入する。この戦略は、ＲＧＣ及びそれらの軸索における遊離Ｃａ^２＋シグナルの振幅を計算するためにレシオメトリックアプローチを使用することを可能にする。Ｆｌｕｏ－５Ｆ及びＡｌｅｘａ ５６８の分子量は類似しているので、それらはほぼ同じ速度で細胞内に拡散する^３２。暗所で１時間９５％Ｏ_２／５％ＣＯ_２を吹き込んだ哺乳動物リンガー溶液中に眼杯を置き、色素をＲＧＣ及びそれらの軸索内に負荷する。網膜を単離し、四分円に分割し、安定化のためにハープスライスグリッドを使用してＲＧＣ側を下にしてガラススライド上に載せ、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－ＲＳ共焦点顕微鏡を使用してイメージングする。６チャネル重力灌流システム（Warner Instruments）を使用して、生理学的温度で９５％Ｏ_２／５％ＣＯ_２を吹き込んだ溶液を送達する。細胞外カリウム濃度（［Ｋ^＋］）を３ｍＭから６０ｍＭに３３秒間上昇させてＶＧＣＣを活性化することによって、ＲＧＣ及びＲＧＣ軸索を脱分極する^{３３，３４}。上昇した［Ｋ^＋］のスーパーフュージョン及びイメージングは、トランジスタ－トランジスタ論理（ＴＴＬ）デジタル信号を使用して自動化及び同期する^{３５，３６}。浸透圧は、ナトリウム（Ｎａ^＋）を低減させることによって高Ｋ^＋溶液中で一定に維持される。Ｎａ^＋チャネル遮断薬であるテトロドトキシン（ＴＴＸ；２００ｎＭ）を適用して、Ｎａ^＋チャネルが、高Ｋ^＋刺激中のＲＧＣ細胞体における［Ｃａ^２＋］トランジェントの生成に寄与する程度を判定する。ＲＯＩからの蛍光強度値は、実験条件内で平均化され、それぞれは、スチューデントの対応のないｔ検定を使用する統計的検定のための独立した観察であると考えられる。試験１における臨床成果及び検査成果と、試験２において得られたＣａ^２＋トランジェント振幅との間で相関をとる。

【0109】

非限定的な例示的結果：成果は、正常眼圧緑内障（ＢＸＤ２９）のモデルにおけるＰＲＧの存在／非存在におけるＣａ^２＋トランジェントの測定である。これらの成果により、ＲＧＣ及びそれらの軸索に対する神経保護治療薬としてのＰＲＧの作用機序を判定することが可能になる。ＰＲＧで予防的に処置されたＢＸＤ２９マウスからの正規化されたＣａ^２＋トランジェントの振幅は、ベースライン（１ヶ月齢）でのＢ６マウス又はナイーブＢＸＤ２９マウスと同様である。更に、未処置ＢＸＤ２９マウスのＲＧＣ及び軸索は若齢で損傷を受けるので（図５）、４ヶ月齢のナイーブＢＸＤ２９又は未処置マウスから得られた誘発Ｃａ^２＋トランジェントは、ＰＲＧで処置されたＢ６及びＢＸＤ２９マウスの両方よりも大きい。理論に束縛されることを望むものではないが、ＲＧＣ健康の陽性指標は、各条件において測定されるＣａ^２＋トランジェントの振幅と逆相関する。

【0110】

代替アプローチ：本プロジェクトのための方法論及びアプローチは、当業者によって確立及び理解される。ホールマウント調製物において未処置ＢＸＤ２９マウスのＲＧＣ及び軸索からのＣａ^２＋流入の変化が見出されない場合、ＲＧＣを単離して、ＶＧＣＣを介して誘発されたＣａ^２＋シグナルを比較する。これを行うために、パッチピペットを介してＣａ^２＋指示薬を負荷した後、カルシウムイメージングと組み合わせて、単離されたＲＧＣに対してホールセル電圧クランプを実行する^３４。更に、ＰＲＧで予防的に処置したＢＸＤ２９マウスにおいてＣＡＣＮＡ２Ｄ１発現が低減するかどうかを試験する。これを試験するために、本発明者らは、半定量的免疫組織化学を行い、より高い解像度のイメージングを実行して、ＶＧＣＣサブユニットの発現を比較する。

【0111】

ａ）ＰＲＧがＲＧＣ及び軸索においてＣＡＣＮＡ２Ｄ１に対する役割を有すること、並びにｂ）ＰＲＧがＢ６マウスと同様にＲＧＣ及び軸索においてＣａ^２＋シグナルを低減させたことを実証したことが、画期的であろう。

【0112】

本実施例で引用されている参考文献
１ Ｓｔａｎｄｅｆｅｒ，Ｊ．Ｅ．Ｉｎ ｆｏｃｕｓ：Ｇｌａｕｃｏｍａ ｉｓ ｓｅｃｏｎｄ ｌｅａｄｉｎｇ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ ｇｌｏｂａｌｌｙ．Ｂｕｌｌ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎ ８２，８８７－８８８（２００４）．
２ Ｔｈａｍ，Ｙ．－Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｇｌｏｂａｌ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ ａｎｄ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｂｕｒｄｅｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ２０４０．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １２１，２０８１－２０９０（２０１４）．
３ Ｂｏｕｒｎｅ，Ｒ．Ｒ．Ａ．Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｇｌａｕｃｏｍａ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｌｏｏｋｉｎｇ ｇｌａｓｓ．Ｂｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ９０，２５３－２５４（２００６）．
４ Ｑｕｉｇｌｅｙ，Ｈ．Ａ．＆ Ｂｒｏｍａｎ，Ａ．Ｔ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｅｏｐｌｅ ｗｉｔｈ ｇｌａｕｃｏｍａ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｉｎ ２０１０ ａｎｄ ２０２０．Ｂｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ９０，２６２－２６７（２００６）．
５ Ａｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｒ．Ｒ．，Ｌｉｕ，Ｙ．＆ Ｒｈｅｅ，Ｄ．Ｊ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ－ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ８８，８３７－８４４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｅｒ．２００８．１１．００３（２００９）．
６ Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｕｄｙ：ｂａｓｅｌｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｐｒｅｄｉｃｔ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ－ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １２０，７１４－７２０（２００２）．
７ Ｌｉｂｂｙ，Ｒ．，Ｇｏｕｌｄ，Ｄ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．＆ Ｊｏｈｎ，Ｓ．Ｗ．Ｃｏｍｐｌｅｘ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｇｌａｕｃｏｍａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ．Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ６，１５－４４（２００５）．
８ Ｑｕｉｇｌｅｙ，Ｈ．Ａ．Ｇｌａｕｃｏｍａ：ｍａｃｒｏｃｏｓｍ ｔｏ ｍｉｃｒｏｃｏｓｍ：Ｔｈｅ Ｆｒｉｅｄｅｎｗａｌｄ Ｌｅｃｔｕｒｅ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４６，２６６２－２６７０（２００５）．
９ Ａｒｍａｌｙ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ｇｌａｕｃｏｍａ ｓｔｕｄｙ．Ｉ．Ｓｕｍｍａｒｙ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ ｖｉｓｕａｌ－ｆｉｅｌｄ ｄｅｆｅｃｔｓ．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ９８，２１６３－２１７１（１９８０）．
１０ Ｌｅｓｋｅ，Ｍ．，Ｃｏｎｎｅｌｌ，Ａ．，Ｗｕ，Ｓ．，Ｈｙｍａｎ，Ｌ．＆ Ｓｃｈａｃｈａｔ，Ａ．Ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｏｐｅｎ－ａｎｇｌｅ
ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｔｈｅ Ｂａｒｂａｄｏｓ Ｅｙｅ Ｓｔｕｄｙ．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １１３，９１８－９２４（１９９５）．
１１ Ｓｏｍｍｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｔｅ ａｎｄ ｂｌａｃｋ Ａｍｅｒｉｃａｎｓ．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １０９，１０９０－１０９５（１９９１）．
１２ Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｓ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｃａｃｎａ２ｄｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ｇｌａｕｃｏｍａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ８，１７５５（２０１７）．
１３ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｅ Ｄａｉｌｙ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ Ｅｙｅ Ｄｒｏｐｓ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９）．
１４ Ｗｉｔｔｅｎｂｏｒｎ，Ｊ．＆Ｒｅｉｎ，Ｄ．ｉｎ Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１３）．
１５ Ｎａｔｉｏｎａｌ＿Ｅｙｅ＿Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｇｌａｕｃｏｍａ：ＮＥＩ Ｌｏｏｋｓ Ａｈｅａｄ，＜ｈｔｔｐ：／／ｎｅｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｈｅａｌｔｈ＞（
１６ Ａ§ｃｉ，Ｓ．，Ｄｅｍｉｒｃｉ，Ｓ．，Ａ§ｃｉ，Ｈ．，Ｄｏｇｕｇ，Ｄ．＆Ｏｎａｒａｎ，Ｉ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ｏｎ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｂａｌｋｉｎ Ｍｅｄ Ｊ ３３，２２１－２２７（２０１６）．
１７ Ｋａｚａｎｃｉ，Ｂ．ｅｔａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｉｓｃｈｅｍｉａ－Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｒａｔｓ．Ｔｕｒｋ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ ２７，９５２－９６１（２０１７）．
１８ Ｍｏｒｉｙａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｉ ｓｔｅｒｎａｌ ｆａｃｉａｌ ｎｅｒｖｅ ａｖｕｌｓｉｏｎ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｓｃｉ ６１，４９５－５０３（２０１７）．
１９ Ａｂｒａｈａｍ，Ｍ．，Ｆａｉｓａｌ，Ｋ．，Ｂｉｊｕ，Ｃ．＆Ｂａｂｕ，Ｇ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌａｃｏｓａｍｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ｏｎ ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｉｚｕｒｅ ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ ｒａｔ．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ Ｓｃｉ ３，１３２４－１３２９（２０１４）．
２０ Ｓｏｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｕｐｏｎ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １．ＰＬＯＳ Ｏｎｅ １２，ｅ０１７１１４７（２０１７）．
２１ Ｊｏｒｉｇｅ，Ａ．＆Ａｎｎａｐｕｒｎａ，Ａ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｌａｃｏｓａｍｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ｏｎ Ｐｅｎｔｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｚｏｌｅ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｉｚｕｒｅ Ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ Ｒａｔ．Ｂｒ Ｂｉｏｍｅｄ Ｂｕｌｌ（２０１４）．
２２ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ３ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｇｌａｕｃｏｍａ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５５，７５６－７６０（２０１７）．
２３ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｎｏｖｅｌ ｔｏｐｉｃａｌ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ３０，２８１８－２８３１（２０１３）．
２４ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－ｂａｓｅｄ ｔｏｐｉｃａｌ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ｒｅｌｅａｓｅ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ １０２，１０３６－１０５３（２０１３）．
２５ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｎａｔｕｒａｌ ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ－ｂａｓｅｄ ｔｏｐｉｃａｌ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ｒｅｌｅａｓｅ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｓｔｕｄｙ．Ｐｈａｒｍ Ｔｅｃｈｎｏｌ ＆Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ ２，７ ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７２４３／２０５０－７１２ＱＸ－７２４２－７２４７（２０１３）．
２６ Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｇｌｙｃａｎ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｆｏｒ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｓａｆｅｔｙ，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏ－ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ １６，３１１－３１２（２０１４）．
２７ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－Ｂａｓｅｄ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｔｒａｎｓｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ４，１２（２０１５）．
２８ Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．ｅｔａｌ．Ｔｈｅ Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｃｕｌａｒ ｍｕｔａｎｔｓ．Ｖｉｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２２，５９５－６０４（２００５）．
２９ Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｍｏｕｓｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｇａｎｇｌｉｏｎ Ｃｅｌｌｓ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｆｒｏｍ Ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ Ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ Ｒｅｔｉｎａｓ．Ｆｒｏｎｔ Ａｇｉｎｇ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ８，９３（２０１６）．
３０ Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．，Ｍｏｒａｌｅｓ－Ｔｉｒａｄｏ，Ｖ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｍｕｌｔｉｐｒｏｎｇｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｉｄｅｎｔｉｆｙ ａｎｄ Ｖａｌｉｄａｔｅ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｕｐｓｔｒｅａｍ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｓｎｃｇ ｉｎ Ｍｏｕｓｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｇａｎｇｌｉｏｎ Ｃｅｌｌｓ．ＦＥＢＳ Ｊ２８３，６７８－６９３（２０１５）．
３１ Ｓｔｉｅｍｋｅ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｏｐｔｉｃ Ｎｅｒｖｅ Ａｘｏｎ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｄｕｒｉｎｇ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｆｒｏｎｔ Ｇｅｎｅｔ １１，３１（２０２０）．
３２ Ｖａｎ Ｈｏｏｋ，Ｍ．Ｊ．＆Ｔｈｏｒｅｓｏｎ，Ｗ．Ｂ．Ｗｅａｋ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｃａ２＋ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｂｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｒｏｄ ａｎｄ ｃｏｎｅ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｓａｌａｍａｎｄｅｒ ｒｅｔｉｎａ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｐ ３，ｄｏｉ：１０．１４８１４／ｐｈｙ２．１２５６７（２０１５）．
３３ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．，Ａｋｍｅｎｔｉｎ，Ｗ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｄ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｔｈｅ ｒｉｂｂｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｉｓ ｎｏｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｒｉｂｂｏｎ ｓｙｎａｐｓｅｓ．Ｍｏｌ Ｖｉｓ １９，９１７－９２６（２０１３）．
３４ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ａｎｄ ｐｏｏｌ ｒｅｆｉｌｌｉｎｇ ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ｃａｌｃｉｕｍ ｎａｎｏｄｏｍａｉｎｓ ａｔ ｐｒｅｓｙｎａｐｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｚｏｎｅｓ ｏｆ ｒｉｂｂｏｎ ｓｙｎａｐｓｅｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １１１，８６５５－８６６０，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１３２３９６２１１１（２０１４）．
３５ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｄ．，Ａｋｍｅｎｔｉｎ，Ｗ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｎａｎｏｓｃａｌｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｐｒｅｓｙｎａｐｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｚｏｎｅ．Ｅｌｉｆｅ ５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１３２４５（２０１６）．
３６ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．，Ｗｏｌｌｍｕｔｈ，Ｌ．Ｐ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｄ．，Ｚｅｎｉｓｅｋ，Ｄ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｔｒａｃｋｉｎｇ
Ｎｅｗｌｙ Ｒｅｌｅａｓｅｄ Ｓｙｎａｐｔｉｃ Ｖｅｓｉｃｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ Ｒｉｂｂｏｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｚｏｎｅｓ．ｉＳｃｉｅｎｃｅ １７，１０－２３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｓｃｉ．２０１９．０６．０１５（２０１９）．

【0113】

実施例３
緑内障は、世界における不可逆的失明の主たる原因であり、米国だけでも３００万人を超える人々が罹患しており、年間４．１％の発生率の増加が予測されている。緑内障には４つの主要なタイプがあり、その全てが、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の機能不全及び／又は死の最終経路を介して視力喪失につながる。緑内障の一形態（原発開放隅角緑内障、ＰＯＡＧ）について、最も重大な危険要因は、眼内圧（ＩＯＰ）の上昇である。全ての成人発症型緑内障の標準治療は、現在、点眼剤として局所送達される４つのクラスのＩＯＰ低下薬（例えば、ベータ遮断薬、炭酸脱水酵素阻害剤、交感神経興奮薬、縮瞳薬又はプロスタグランジン誘導体）のうちの１つ以上による治療からなる。これらの薬物は、毛様体による房水の産生の阻害又は流出構造を通じた眼房水の排出の増強のいずれかを通じて房水の体積を低減することによってＩＯＰを低下させる。現在の療法は、産生及び排出の両方に影響を及ぼさない。利用可能な薬物の他の制限は、それらの短い半減期及び角膜上での限定された滞留時間であり、１日当たり最大３回までの投与の必要性を生じる。関連付けられた眼の刺激、眼窩副作用（球結膜充血など）、及び全身副作用とともに、点眼剤を毎日複数回適用する必要があることは、集合的に、多くの眼科医によって記録された低レベルの患者コンプライアンス／アドヒアランスの一因となっている。

【0114】

本発明者らは、システム遺伝学アプローチを使用して、新規なＩＯＰ低下薬物標的、カルシウムチャネル電位依存性α２δ１サブユニット（別名ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）を同定した。更に、本発明者らは、ＩＯＰ産生及び排出の両方に関連する二重ＩＯＰ低下活性を示す選択的ＣＡＣＮＡ２Ｄ１遮断薬であるプレガバリン（ＰＲＧ）を同定した。本発明者らは、眼への薬物侵入を増加させ、結果として眼刺激又は眼副作用を最小限に抑えながら、より高い有効性及びより長い作用持続時間をもたらす局所徐放性ＰＲＧ製剤を開発した。この研究に関する本発明者らの全体的な目的は、現在のＩＯＰ低下薬とは異なる作用機序を有する新規なクラスの緑内障治療薬の代表としてＰＲＧを更に開発することである。本発明者らは、ＩＯＰを約４０％低下させ、単回局所投与後３４時間にわたって低減されたレベルでそれを維持する有効なＩＯＰ低下処置を最適化する目的で、前眼部におけるドラッガブルな標的としてＣＡＣＮＡ２Ｄ１に焦点を当てる。ＰＲＧは、緑内障治療薬としてリパーパシングされているＦＤＡ承認薬であり、理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧは、徐放性、生体接着性、及び角膜浸透増強の特性を有する局所マイクロエマルジョン中に製剤化された場合、現在市販されている他の緑内障薬と同等以上の振幅及びより長い持続時間のＩＯＰ低下応答を誘発する。

【0115】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、本発明者らの製剤研究を完了し、薬物製品のＧＬＰ産生をスケールアップし、新規な作用機序及び持続的なＩＯＰ低下特性を有する新規な緑内障薬物についての毒物学研究を完了する。この治療戦略は、緑内障患者への負担を低減し、より良好な視覚的転帰につながる。本発明者らの目的に対処するために、以下を実行する。
１：新規な局所適用マイクロエマルジョン製剤の有効性を維持しながら安定性を増加させる。
２：毒物学研究のために優良試験所基準（ＧＬＰ）条件下で薬物製品を製造する。
３：食品医薬品局（ＦＤＡ）からのガイダンスを用いて毒物学研究を実行する。

【0116】

理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧは、ＲＧＣに対する神経保護も提供する。その研究において、本発明者らのマイクロエマルジョン点眼剤製剤を介して達成される神経保護についての作用機構及びその持続性を確立する。この研究の完了により、作用機序を有するＩＯＰ低下薬についての本発明者らの全体的な薬物開発プログラムを拡張して、更なる神経保護利益を含めることが可能になる。

【0117】

実施例４
緑内障は、利用可能な治療選択肢にも関わらず、世界における不可逆的失明の主たる原因であり続けている^１。傾向は、２０４０年までに、世界中で１億１１８０万人もの人々が緑内障を有し^１、その多くが視神経（ＯＮ）損傷のために法的に失明している^１ことを示している。成人発症型緑内障の様々なサブタイプ－原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）、原発性閉塞隅角症（ＰＡＣＧ）、及び正常眼圧は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及びＯＮ軸索損傷、並びにその後の視野欠損の一般的な臨床病理を共有している^２。この疾患についていくつかの危険因子が既知であり^３－５、眼内圧（ＩＯＰ）の上昇は、緑内障の発症及び進行に関連する唯一の修正可能な危険因子である^{３，６－９}。したがって、全ての形態の成人発症型緑内障に対する標準治療は、点眼剤として局所送達されるＩＯＰ低下薬による治療である。本発明者らが行った市場検証研究は、現在の緑内障薬に伴う複数の問題を特定しており、それらのいくつかは、１）持続作用の欠如；２）１日複数回投与の必要性；３）直接的な眼刺激；４）個々の患者に対する全身性及び眼の副作用；並びに５）異なる作用機序（ＭＯＡ）を有する薬物についての限定された選択肢。本発明者らは、緑内障の治療のための新規なドラッガブル標的、並びにこれらのペインポイントの多くに対処するための薬物及び製剤を同定した。

【0118】

リパーパシングされた治療薬を使用した新規なＭＯＡによるＩＯＰ低下：マウス遺伝学的アプローチを細胞生物学、薬理学、及びヒトゲノムワイド関連データベース（ＧＷＡＳ）データの分析と組み合わせることによって、本発明者らは、ＩＯＰを有意に調節する遺伝子座、すなわちカルシウムチャネル電位依存性、α２δ１サブユニット（別名Ｃａｃｎａ２ｄ１）を同定した^１０（図１）。本発明者らの研究の双方向性成分として、本発明者らは、ヒトＰＯＡＧ集団内のＣＡＣＮＡ２Ｄ１における帰属一塩基多型（ＳＮＰ）を裏付けた。ヒト、ウサギ、及びマウスにおける免疫組織化学研究は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が毛様体（ＣＢ）及び流出構造内に位置しており（図２）、その両方がＩＯＰに影響を及ぼし得ることを示す。同定された標的を検証するために、本発明者らは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１に対して高い特異性を有し、Ｌ型Ｃａ^２＋チャネルのＣａｖａｌ孔を通る電位依存性カルシウム（Ｃａ^２＋）フラックスを遮断するアンタゴニストであるプレガバリン（ＰＲＧ）の局所投与^１１が、ダッチベルテッド種ウサギにおいて用量依存的にＩＯＰを低下させることを実証した^１２。これらの知見は、ＣＢ及び流出構造の両方における作用を介するＩＯＰの調節因子としてＣａ^２＋フラックスを示唆した以前の知見と一致する^{１３，１４}。これは、流入及び流出機能の両方に作用する承認されたＩＯＰ低下薬がほとんどなく、流入及び流出制御に対するＣａ^２＋フラックスの、示唆されてはいるがまだ証明されていない役割を明らかにすることができるので、非常に重要である。治療側では、本発明者らの研究におけるＰＲＧ媒介性ＩＯＰ低減の振幅及び持続時間が制限されていたため（６時間でベースラインに戻る１７％のＩＯＰ低減）^１５、本発明者らは、次いで、ＰＲＧ有効性及び作用持続時間を増加させるために新規な局所徐放性マイクロエマルジョン（ＭＥ）製剤を設計した^１２。本発明者らのデータは、角膜に適用された本発明者らの最新のＰＲＧ ＭＥ製剤１滴でＣＡＣＮＡ２Ｄ１を標的とすることが、最初の製剤よりも有意に良好な有効性で、少なくとも２４時間までのＩＯＰの持続的低減をもたらすことを実証し、したがって、これは、ＩＯＰ低減のためのＰＲＧの１日１回投与（図３；最大４２％のＩＯＰ低減（３３時間でベースラインに戻る））が、本発明者らのＰＲＧ ＭＥをチモロール及びＸａｌａｔａｎと同等又はそれよりも優れたものにすることを支持している。これらの知見は、現在承認されているＩＯＰ低下薬とは異なるＭＯＡを有する新規なクラスの緑内障治療薬としてのＰＲＧの開発を示す。

【0119】

ＰＲＧのＩＯＰ低下効果及びＩＯＰを調節する構造（毛様体（ＣＢ）及び流出構造）へのその特異的局在という本発明者らの発見は、局所的に適用されるＰＲＧの延長された作用持続時間を提供するための新規な送達系とともに、緑内障におけるＩＯＰを減少させるための新規な処置及び新規な送達系の両方の開発のための戦略を表す。ＰＲＧは、ガバペンチノイド薬であるが、γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体に結合せず、ＧＡＢＡ放出又は取り込みにも影響を及ぼさない^１６。むしろ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１に高い親和性で結合し、抗炎症経路を含まない機構を介して鎮痛を提供する。ＰＲＧは、てんかん発作又は線維筋痛症などの神経障害性疼痛障害の治療に広く使用されており^１７、安全なプロファイルを有する^１８。いくつかの感受性集団における潜在的な相加的挙動及び血管性浮腫などのまれな過敏症が報告されている^{１８，１９}。本発明者らのＭＥの液滴（５０μＬ）中のＰＲＧの用量は、錠剤又は懸濁液中よりも＞２０００倍少なく、その局所用量からの全身曝露は更にはるかに少ない可能性があるので、経口投与の副作用は、本発明者らの局所投与では懸念されない。

【0120】

緑内障療法としてのカルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）：それらが不十分である理由及び将来の研究のための示唆：電位依存性カルシウムチャネルは、カルシウム（Ｃａ^２＋）流入を調節し、身体全体に分布する。ＣＡＣＮＡ２Ｄ１を含む複数のサブユニットがチャネルを構成し、Ｃａｖａｌ孔の活性を調節する働きをする（図１０）。以前の研究により、Ｃａ^２＋と緑内障との間の関連が実証されているため^{２０，２１}、Ｃａｖａｌ孔を標的とする全身性ＣＣＢ（例えば、ベラパミル）は、ＰＯＡＧの治療として評価されている。しかしながら、これらの調査の結果は矛盾しており、ＣＣＢがＩＯＰを低下させ、視覚機能を改善するのに有効であることを実証する研究もあれば、それらの結果を再現することができない研究もある^{２２－２８}。全身性ＣＣＢはまた、眩暈又は頭痛などの重大な副作用を有する^{２２－２８}。以前の研究では、本発明者らの系の遺伝的に同定された標的であるＣＡＣＮＡ２Ｄ１などのＣａ^２＋チャネルの緑内障関連補助モジュレータを評価したものはない（図１０）。ＩＯＰを低下させるために従来のＣＣＢよりもＰＲＧを使用するために、承認されかつ広く使用されている薬物を再目的化する遺伝的原理及び利点に加えて、ＰＲＧをＣＣＢよりも有用な局所治療選択肢にする、高い水溶性、低い分配係数、及び高い膜透過性などの複数の生理化学的特徴がある。これらの特徴は、ＰＲＧが角膜の上皮層を通過することを可能にするが、角膜実質及びＡＨの水性環境中では可溶性のままであり、したがって、局所投与を介して眼の標的組織に到達することができる。更に、その光感受性の欠如は、ＰＲＧ含有局所製剤の安定性を増加させることができる。

【0121】

以前の知見及び拡張の概要：本発明者らは、ＰＲＧを眼に送達するための持続作用マイクロエマルジョン（ＭＥ）ベースの製剤を調製し、特徴付けた^１２。本発明者らのＭＥは、迅速な排出、短い角膜接触時間及び最小の角膜浸透を含む従来の点眼剤の欠点を克服するように設計された。これらは全て、有効性の低減及び不十分な患者のアドヒアランスにつながる。本発明者らは、生体接着性を改善し、角膜浸透を増強し、３０時間を超えて連続的な薬理作用を提供するインサイチュゲル化特性を有する高度に生体適合性の成分を用いて、多層ＭＥを設計することによって、これを達成した。本発明者らのＭＥは小さい粒径（＜２０ｎｍ）を有するので、透明であり、視覚を不鮮明にしない。ＰＲＧ ＭＥの用量の増加に対してＩＯＰの用量応答が低減すると判定し、０．６％のＰＲＧは、ほぼ４０％のＩＯＰの低減（投与後３４時間までベースラインに戻らない）を伴う最大効果を提供する最小用量である（試験１^１２）。本発明者らはまた、ＰＲＧ ＭＥを２１日間毎日繰り返し投与しても、製剤の有効性が減少（タキフィラキシーともいう）しなかったと判定した（試験２^１２）。研究を通して、ＩＯＰは、処置された眼において低減されたレベルのままであったが、対照眼は、上昇したベースラインＩＯＰのままであった。本発明者らはまた、タキフィラキシー研究の終了後に、眼及び身体におけるＰＲＧの分布を判定した（試験２^１２）。本発明者らのＰＲＧ ＭＥを連続２１日間局所投与した後、薬物が眼の標的組織に到達したと判定した。ブランクＭＥを投与された対照眼は、血漿及び全ての末梢器官と同様に、ごくわずかなレベルのＰＲＧを含んでいた。細隙灯及び組織病理学的検査は、薬物負荷ＭＥが安全であり、眼によって十分に忍容されると判定した^１２。

【0122】

健康上の利益：緑内障の有病率の上昇及び予測されるヒトの寿命の増加を考慮すると、緑内障発生率はそれに応じて増加するであろう。２０１３年に、米国における緑内障の経済的負担は、約５８億ドルと推定された^２９。本発明者らの製品の開発は、緑内障治療薬の間で市場占有率を有する緑内障の管理のための治療アプローチを提供する。この状況は、市場リーダーと比較して優れた有効性（ＩＯＰが約４０％低下し、３０時間を超えてもベースラインに戻らない）及び高い生体適合性を有するＰＲＧの新規なＭＯＡ、１日１回の投与レジメンによって支持される。ＰＲＧは、独特のＭＯＡ、高い有効性及び持続期間を有するので、理論に束縛されることを望むものではないが、単剤療法であり得るだけでなく、他の緑内障治療薬と組み合わせて使用することもできる。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らの局所製剤は、３００万人のアメリカ人が罹患しているという有病率推定、２００ドル／５ｍｌボトルの費用、１０％の市場占有率、患者の両眼に１日１回液滴を投与することに基づいて、４億３８００万ドルのピーク年間米国市場を維持する。２０５０年までに予測された６３０万人のアメリカ人への有病率の増加に伴い^３０、本発明者らの局所製剤の米国市場占有率は、同じ仮定に従うと９億２０００万ドルに増加し得る。本発明者らは、ＰＲＧとともに使用される本発明者らの製剤を設計しているが、このＭＥは、水不溶性薬物の取り込みに好適であるように改変され得る。したがって、本発明者らのマイクロエマルジョンの有用性は、本発明者らの現在の薬物（ＰＲＧ）及び本発明者らの現在の標的疾患（緑内障）にとどまらない。マイクロエマルジョンと他のナノ薬物送達系（例えば、ナノ粒子）との比較は、マイクロエマルジョンが安定であり、調製が容易であり、調製中にエネルギーを必要とせず、その調製中にＡＰＩ損失がないので１００％のカプセル化効率を有し、組み込まれた薬物の角膜透過性を改善する透過性増強剤を含有することを示す。これらの特徴により、マイクロエマルジョンを商業的使用のために製造する医薬品製造会社のバッチサイズにスケールアップすることが容易になる。

【0123】

本発明者らは、いくつかの更なる予想外の知見を発見した。本発明者らのデータは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が網膜神経節細胞（ＲＧＣ）体、並びに視神経（ＯＮ）におけるＲＧＣ軸索においても発現されることを示す。本発明者らのＭＥを２１日間連続して局所投与した後、ＰＲＧは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１を阻害するのに十分な濃度で、網膜を含む後眼の組織に到達する。更に、本発明者らのＰＲＧ ＭＥの局所投与は、正常眼圧緑内障の前臨床モデルであるＢＸＤ２９マウスにおけるＯＮ損傷を軽減する。この証拠に基づいて、本発明者らは、この重要なリードを追求し、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が、ＣＢ及び流出構造を介したそのＩＯＰ低下効果に加えて、緑内障誘導性ＲＧＣ神経変性から保護するためのＲＧＣ上のドラッガブルな標的であり得るかどうかを判定している。理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＲＧ製剤は、治療用量を網膜に送達することができ、ＲＧＣに対して神経保護的である。理論に束縛されることを望むものではないが、ＩＯＰを低下させ、かつＲＧＣに直接的な神経保護を提供することができる唯一の緑内障治療であるため、本発明者ら製剤の市場占有率を増加させることができる。

【0124】

アプローチ：
本発明者らは、ＩＯＰ調節遺伝子であるＣａｃｎａ２ｄ１、並びにＣＡＣＮＡ２Ｄ１タンパク質に高い親和性及び特異性で結合して、ＩＯＰを低下させる薬物であるＰＲＧを同定した^{１５，１１}。現在の療法は全て、持続作用の欠如、眼刺激、並びに他の副作用及び薬物相互作用を含む制限を有する。全ての現在の療法は、制限された一連のＭＯＡに関連しているため、これらの副作用を経験する患者のために療法を変更することは困難である。多くの患者は、標的ＩＯＰレベルを達成するために２つ以上の薬物を必要とする。これらの課題は両方とも、異なるＭＯＡを有する治療選択肢の利用可能性が限られていることによって悪化する。ＰＲＧは、これまで知られていなかった新規な標的及びＭＯＡを介して作用する新規なクラスの緑内障薬であり、したがって多くの患者が切望していた選択肢を提供する。ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は、眼の流入及び流出構造の両方に局在するので（図２）^{１２，１５}、ＰＲＧは、ＩＯＰを低下させるための二重の協調作用を提供することができる。ＰＲＧは、ＦＤＡによって承認されており、かつ現在一般的なものであり、５０５（ｂ）（２）の調節経路を通じてそれをリパーパシングし、切望されていた新規なクラスの緑内障療法を提供することを可能にするであろう。

【0125】

本発明者らは、親水性薬物を眼に送達するための、徐放性、多層化、生体接着性、忍容性の良好な局所ＭＥベースの製剤を調製し、特徴付けた。本発明者らのＭＥは、迅速な排出、短い角膜接触時間及び最小限の角膜浸透を含む従来の点眼剤の欠点を克服するように設計され、これらの欠点は全て、１日に複数回投与する必要があるため、有効性の低減及び不十分な患者のコンプライアンスにつながる。改善された有効性は、粘膜付着特性の増加、角膜透過性の増加、非常に小さい粒子サイズ、浸透増強能力、及び徐放性によって支持される。本発明者らは、この製剤の現在の３ヶ月安定性を改善して、臨床適用を容易にするために貯蔵寿命を長くする。

【0126】

ＭＥの有利な物理的特性に加えて、ＭＥ製造を他の徐放性代替物よりも優れたものにする利点がある。ＭＥは無菌として容易に製造することができる。更に、ＭＥ製造中のカプセル化効率はほぼ１００％であり、したがって、プロセスをスケールアップして大きいバッチを作製することが可能になる。経済的観点から、ＭＥ製造は、単純な混合以外のエネルギー入力を必要としないので、効率的である。

【0127】

非限定的で例示的なアプローチ
これにより、本発明者らの製品は、緑内障及び／又は高眼圧症患者においてＩＯＰを低下させるための本発明者らの徐放性ＰＲＧ ＭＥについての規制当局の承認へと向かうであろう。本発明者らは、ウサギにおいて最大のＩＯＰ低下応答を提供する１日１回の最小用量を確立し、２１日間連続して１日１回の単回投与が、本発明者らのＰＲＧ ＭＥの有効性を減少させないが、その安全性及び眼との生体適合性並びに最小の全身曝露を維持することを実証した。本発明者らはまた、本発明者らのＰＲＧ ＭＥによる局所投与が、眼に入る薬物の量を増加させることを示した。加えて、本発明者らは、ＰＲＧが網膜に到達することができ、したがって、投与されていない他眼又は標的外器官に到達する薬物を制限しながら、後眼標的のためのこの投与様式を可能にすると判定した^１２。この研究は、製剤の現在の３ヶ月安定性を延長する一方で、完全な有効性を維持して、少なくとも１２ヶ月の貯蔵寿命を有する実行可能な医薬品にすることによって、本発明者らの薬物製品の価値提案を増強する研究に焦点を当てている。本発明者らは、毒物学研究のために、本発明者らの製造を大規模バッチ及びＧＬＰ製造にスケールアップする。本発明者らは、毒物学研究を実行する。ＰＲＧは、現在、他の目的に使用されるＦＤＡ承認薬である。ＰＲＧは、２００５年以来、疼痛管理について承認された製品であり、１６００万人を超える人々に処方され、服用されている（ＬｙｒｉｃａウェブサイトＦＡＱ）。加えて、本発明者らは、ＰＲＧの眼適用後に全身曝露の形跡がないことを示した^１２。

【0128】

研究設計及び方法
１：本発明者らの新規な局所適用マイクロエマルジョン製剤の有効性を維持しながら安定性を増加させる。

【0129】

目的：持続的なＩＯＰ低下特性を有する新規緑内障薬の製剤を検証し、それが最低１年間物理的及び化学的の両方で安定であり、長期保存後に本発明者らの緑内障のウサギモデルにおいて有効であり、それにより、改善された製剤による効力を保証することを実証する。

【0130】

本発明者らのＭＥ製剤の化学的安定性を増加させる。
結果：プレガバリン（ＰＲＧ；ＢＣＳクラスＩ）は、高い親和性及び特異性でＣＡＣＮＡ２Ｄ１を標的とする^１１。本発明者らは、１滴のＰＲＧ水溶液が、局所適用されると、用量依存的にＩＯＰを低下させると判定した。しかしながら、応答の大きさ及び持続時間は限られており、臨床用途には実用的ではなかった。ＩＯＰ低下薬としてのＰＲＧの有効性を増加させるために、本発明者らは、新規なマイクロエマルジョン局所製剤を設計した^１２。本発明者らの製剤を、最内水相及び最外水相中にそれぞれ４０％及び６０％のＰＲＧを有する水中油中水型マイクロエマルジョンとして設計した。２つの水相におけるＰＲＧの区画化は、ＩＯＰ低下作用の迅速な開始及び長い持続時間の両方を支持する。最も外側の水相からの薬物放出は速く、迅速なＩＯＰ低減を可能にする。しかしながら、最内水相から放出されるためには、ＰＲＧは、２つの界面（内側の水／油界面及び外側の油／水界面）を通過しなければならず、その後、本発明者らの多層ＭＥの最外水相を構成する粘性ポリマー溶液を通って拡散しなければならない（図１２）。集合的に、両方の界面を横切る移動は、本発明者らの製剤からのＰＲＧの移動を遅くし、長期のＩＯＰ低下効果を支持する。最も外側のポリマーから拡散した後、ＰＲＧは、角膜を通して吸収に利用可能である。製剤が薬物の徐放性を可能にするのに十分な時間、角膜表面上にとどまることを確実にするために、最外ヒドロゲル層は、優れた生体接着特性を有するＣａｒｂｏｐｏｌ ９８１から調製される。

【0131】

（表１）ＰＲＧ ＭＥ液滴は＜２０ｎｍであり、高いゼータ電位を有する^１２。

【0132】

本発明者らのＭＥは、薬物負荷によって影響されない小さい液滴サイズを有する（表１）。その低いＰＤＩは、サイズ変動が最小であることを示し、これは、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ；小球図１２）によって確認される。Ｘ線回折データは、ＰＲＧが本発明者らのＭＥに可溶性であり、ＰＲＧ結晶が存在しないことを実証する^１２。更なる特徴付けにより、本発明者らのＰＲＧ ＭＥは、ＰＲＧ点眼剤と比較して、ドロッパーからの分配を容易にするより低い粘度、及び投与後に眼内に局在したままにするより高い生体接着性を有することが明らかになった^１２。特徴は、本発明者らのＭＥへＰＲＧを組み込むことにより、水性点眼剤としての３時間と比較して、２４時間を超えてその放出時間が長くなることである（図１３）。その高いゼータ電位（表１）を考慮すると、ＭＥは安定であり得る。日米欧医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）によって提示されたガイドライン^３１に従って、本発明者らは、５℃、２５℃、３０℃、及び４０℃における本発明者らの製剤の化学的及び物理的安定性を評価した。化学的安定性は、ｐＨ、サイズ、ＰＤＩ、ゼータ電位、薬物放出及び薬物含有量を測定することによって評価した^３１。反復凍結－解凍サイクルを用いて、及び超遠心分離によって物理的安定性を測定した^{３２，３３}。本発明者らの結果は、本発明者らの製剤の化学的安定性の指標である本発明者らのＭＥの薬物含有量が、５℃及び２５℃で３ヶ月間、並びに３０℃及び４０℃で２ヶ月間、許容され得る薬局方の限界内にとどまったことを実証する（表２）。本発明者らの製剤の物理的特性は変化せず、化学的安定性の他の指標（ｐＨ、液滴サイズ及び電荷）は１年間の保存中に変化しなかったが、薬物含有量の保持は、臨床試験及びその後の使用のための合理的／実用的な貯蔵寿命を有する実行可能な市販の薬物製品の開発の成功を確実にするために最適化されなければならない。

【0133】

（表２）４ヶ月までの保存後のＰＲＧの薬物含有量（％）。本発明者らの現在のＰＲＧ ＭＥは、５℃及び２５℃で３ヶ月間、並びに３０℃及び４０℃で２ヶ月間、化学的に安定である。他のパラメータは、少なくとも１２ヶ月間安定であった。

【0134】

非限定的な研究設計及び方法：本発明者らのＭＥにおけるＰＲＧの化学的安定性を改善するために、本発明者らの製剤を最適化する。これは２つのステップで行われる：１）短期安定性及び抗酸化剤スクリーニング研究、続いて、２）ＩＣＨガイダンスに従った安定性試験。理論に束縛されることを望むものではないが、約１２ヶ月の最小貯蔵寿命を有する製剤が得られるであろう。

【0135】

マイクロエマルジョンの調製：本発明者らの多層水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ）ＭＥ生体接着性点眼剤の調製は、いくつかのステップで達成される。一次ｗ／ｏ ＭＥを調製し、生体接着性ポリマーが予め浸漬されている外部水溶液中に更に乳化させる。一次マイクロエマルジョン成分の適切な比率を判定するために、様々な疎水性界面活性剤を使用して水滴定法によっていくつかの三相図を作成した^１２。本発明者らが選択した一次ｗ／ｏ ＭＥは、２０％の水（４０％の薬物が溶解している；図１４、ステップ１）＋［３０％の油（Ｌａｂｒａｆａｃ ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ＷＬ１３４９）＋５０％の界面活性剤混合物（Ｃａｐｒｙｏｌ ９０ ＆ 大豆レシチン、１：１；図１４、ステップ２）］からなる。外部水相は、薬物の６０％が溶解している５０％の水（図１４、ステップ３）＋（１０％Ｌａｂｒａｓｏｌ＋１０％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ＋３０％プロピレングリコール）の混合物（図１４、ステップ４）からなる。生体接着性ポリマー（Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８１、０．１５％）を、予め調製した外部水相に浸漬し、一晩膨潤させて、粘性ポリマー／界面活性剤溶液を生成する。４０％のポリマー／界面活性剤溶液を含有する調製したｗ／ｏマイクロエマルジョンを、透明な多層ｗ／ｏ／ｗマイクロエマルジョン生体接着性点眼剤が形成されるまで十分に混合した。

【0136】

^＊＊抗酸化剤の添加：保存中、製剤中の医薬品有効成分（ＡＰＩ）の分解は、酸性及び／又は塩基性分解、酸化分解、水性加水分解、光分解及び熱分解を含むいくつかの経路を介して起こる。ＰＲＧは、水性加水分解、光分解及び熱分解に対して安定であり、酸性加水分解に対して比較的安定である^３４。対照的に、それは塩基性及び酸化条件下で不安定である^３４。これらのデータに基づくと、水性媒体中で保存すると、ＰＲＧは、アルカリ性ｐＨでの分解又は酸化的分解のいずれかによる分解を受けやすい可能性がある。本発明者らのＭＥは、弱酸性ｐＨ（５．４±０．０５）を有し、したがって、本発明者らのＭＥ中でのＰＲＧの化学的安定性に悪影響を及ぼす因子は、酸化分解である。

【0137】

（表３）ＭＥ安定度を改善するために水溶性及び脂溶性抗酸化剤を試験するための戦略。注：その乳化特性に起因して、ＴＰＧＳを含有する製剤において、製剤成分の比は、本発明者らの公開された方法を使用して判定される必要がある^１２。

【0138】

酸化分解に対抗し、それによって本発明者らのＰＲＧ ＭＥの化学的安定性を改善するために、本発明者らは、１つ以上の水溶性抗酸化剤を内部及び外部水相（図１５、青）に、及び／又は油溶性抗酸化剤を本発明者らのＭＥの中間油相（図１５、黄褐色）に組み込んで、保存中の酸化分解からＰＲＧを保護する。抗酸化剤は、酸化による化学分解を受けやすいＡＰＩの安定性を増強するために医薬製剤中に含まれる。本発明者らのＭＥで試験される水溶性抗酸化剤としては、グルタチオン（ＣＡＳ＃７０－１８－８）；トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート（ＴＰＧＳ；ＣＡＳ＃９００２－９６－４）；又はメタ重亜硫酸ナトリウム（ＣＡＳ＃７６８１－５７－４）が含まれる。試験される油溶性抗酸化剤としては、アルファトコフェロール（ビタミンＥ；ＣＡＳ＃１０１９１－４１－０）；ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ；ＣＡＳ＃１２８－３７－０）；又はブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ；ＣＡＳ＃２５０１３－１６－５）が含まれる。最も有効な抗酸化剤又は抗酸化剤の組み合わせを決定するために、予備安定性及び抗酸化剤スクリーニング試験を最初に行い、その後、ＩＣＨガイダンスに従って完全安定性試験を行う。これらの成分の多くは、多くのＡＰＩの安定性を延長するために使用されており、１２ヶ月の安定性に達することができる。

【0139】

抗酸化剤スクリーニング中の短期製剤安定性の評価：抗酸化剤のスクリーニングは、表３に示されるように、１つ以上の抗酸化剤を本発明者らのＭＥに個別に又は組み合わせて添加することによって達成される。抗酸化剤を含有する製剤を、２５℃、３０℃、４０℃の３つの異なる温度で３ヶ月間保存することによる加速安定性試験に供する。保存した製剤を、それらの物理的外観、薬物含有量及びｐＨに関して１５日毎に評価する。全ての製剤が３ヶ月間安定なままである場合、この短期試験は、６ヶ月間延長される。これらの加速された安定性の結果に応じて、最も有効な抗酸化剤が、最終的な最適化された製剤における使用のために選択される。

【0140】

ＩＣＨガイダンスに従った最適化製剤の完全安定性試験：短期安定性及び抗酸化剤スクリーニング試験の結果に応じて、最も有効な抗酸化剤を含有する最終最適化製剤、並びに抗酸化剤を含まない元の製剤を、以下のようにＩＣＨガイドラインに従って安定性試験に供する。製剤は、ＩＣＨガイドラインに従って、物理的安定性（凍結融解サイクル及び遠心分離試験）及び化学的安定性に関して評価する。本発明者らは、本発明者らの製剤をその貯蔵寿命の間保存することを意図する最良の保存条件を知らないので、室温、冷蔵庫又は冷凍庫条件を含む異なる条件を試験する。長期安定性試験のために、製剤を－２０℃、５℃及び２５℃で１年間保存する。中間安定性試験を、３０℃で６ヶ月間行う。加速安定性試験もまた、本発明者らの標準的な方法を用いて４０℃で６ヶ月間行う。保存中、製剤は、それらの薬物含有量、ｐＨ、液滴サイズ、ＰＤＩ及びゼータ電位に関して毎月評価される。また、放出パターンを最初に、次いで６ヶ月毎に試験して、ＭＥがその徐放性挙動を維持する能力を評価する。

【0141】

以下の方法を使用して、物理的及び化学的安定性を評価する（三連サンプル）。

【0142】

物理的安定性：物理的安定性は、反復凍結－融解サイクルを用いて、及び超遠心分離によって測定される^{３２，３３}。

【0143】

ＰＲＧ含有量：本発明者らのＨＰＬＣ－ＵＶ法を使用して、製剤及び放出サンプル中の薬物含有量を判定する^１２。

【0144】

ｐＨ測定：ｐＨは、ｐＨメータ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ｐＨメータ４４０）を使用して測定する^１２。

【0145】

平均液滴サイズ、多分散性指数（ＰＤＩ）及びゼータ電位測定：本発明者らのＭＥ製剤の平均液滴サイズ、ＰＤＩ及びゼータ電位は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｎａｎｏｓｅｒｉｅｓ、ｎａｎｏ－ＺＳ）^３５を使用して好適に希釈した後に判定する。全ての測定は、２５℃で実行する。

【0146】

試験１．２：上昇したＩＯＰのウサギモデルにおける、試験１．１からの最適化製剤の有効性の確認

【0147】

（表４）図６に示される製剤の薬力学的パラメータ

データは、平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝３ Ｔ_ｍａｘ：最大応答までの時間（単位：時間）。
Ｔ_ｅｎｄ（時間）：応答終了までの時間（単位：時間）。
ＡＵＣ（％、時間）：時間曲線に対する％ＩＯＰ低減下の総面積。

【0148】

データ：本発明者らは、ダッチベルテッド種ウサギにおいて本発明者らのＰＲＧ ＭＥの有効性を評価し^１２、本発明者らのＭＥ製剤１滴が、低減されたＩＯＰ（４２．３％の低減、表４）を維持し、単回適用後３４時間でベースラインに戻った（ＡＵＣ＝７８８．６％－時間）ことを実証した。本発明者らのＭＥの非存在下では、Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８１ゲル中の同じ薬物は、１０時間でベースラインに戻った２９．４％のＩＯＰ低減しかもたらさず（ＡＵＣ＝１７２．３％－時間）、本発明者らのＭＥへの薬物の組み込みがその有効性を増強したことを実証した。更に、本発明者らのＷ／Ｏ／Ｗ ＭＥの３つ全ての層の複合効果は、ＰＲＧの有効性を増強するために重要である。本発明者らはまた、ＭＥを特徴付け、それが角膜を横切るＰＲＧの浸透を増加させ、安全であり、眼において十分に忍容されると判定した^１２。この同じモデルを使用して、試験１．１から本発明者らの最適化された製剤を評価する。

【0149】

本発明者らのＰＲＧ ＭＥの長期使用を評価するために、２１日間連続して毎日の投与を使用して、タキフィラキシー、生物適合性及び生体分布研究を実行した^１２。本発明者らのデータは、ＰＲＧ ＭＥの最初の投与後、１９．３ｍｍＨｇのベースラインと比較して、ＩＯＰが１３～１４ｍｍＨｇの正常な生理学的範囲（ｐ＜０．００１）に維持されたことを実証する。重要なことに、２１日間の投与の後、ウサギの角膜及び結膜は、前眼房において細胞又は発赤がなく、健康に見え、これは、本発明者らのＭＥが眼において十分に忍容されるという証拠となる。この知見は、組織病理学でも確認される^１２。

【0150】

研究設計及び方法：ダッチベルテッド種ウサギ（Ｅｎｖｉｇｏ Ｒａｂｂｉｔｒｙ；旧Ｃｏｖａｎｃｅ）を、この単回投与設計研究において使用する。このウサギ飼育場からのウサギは、他のウサギ飼育業者から購入したものよりも高いベースラインＩＯＰ値を有し得る。ウサギ（雄と雌との間で等しくバランスがとられている）を、研究の開始前の少なくとも７日間、取り扱い及びＩＯＰ測定に順応させる。細隙灯生体顕微鏡検査及び眼底検査を、研究の前後に実行する。試験１．１からの本発明者らの上位３つの製剤を、本発明者らの方法を使用してこのモデルにおいて試験する^１２。両眼のＩＯＰを、リバウンド眼圧計（Ｔｏｎｏ－Ｐｅｎ ＡＶＩＡ Ｖｅｔ、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ）を使用して、製剤適用の直前（ベースライン、午前８時）及び適用後１時間間隔で、ＩＯＰがベースラインに戻るまで測定する。滅菌マイクロピペットチップを使用して、ＰＲＧ ＭＥを含有する３０マイクロリットルの製剤又はブランク対照を各ウサギの片眼に局所的に滴下し、他眼に製剤ビヒクルを与え、したがって対照として役立てる。ウサギに毎日午前８時に２１日間投与し、午前８時（投与直前）及び本発明者らの方法を用いて最大ＩＯＰ低減が測定される時点（Ｔ_ｍａｘ）でＩＯＰを収集する^１２。図１６と同様の曲線が生成される。抗酸化剤含有製剤の生物適合性は、図１７に示すように、細隙灯生体顕微鏡を用いて評価する。研究を実行する人は、各ウサギについて、どの眼が薬用製剤を投与され、どの眼がブランク対照を投与されるかについて盲検化される。８０％の検出力、及び３０％のＩＯＰ結果における限界差を仮定すると、この研究には１０匹のウサギが必要であると推定する。本発明者らはまた、Ｃ５７Ｂ１／６Ｊ（Ｂ６）マウス及びカニクイザルにおいてこれらの製剤を評価し、これにより種の確認及び比較が可能になる。

【0151】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らのＭＥの水相及び／又は油相への１つ以上の抗酸化剤の添加は、ＰＲＧの化学的安定性を改善し、保存中のその分解を予防する。ＭＥは安定な製剤であり、その水／油比が一定のままである限り、その物理的安定性を保持することができる。抗酸化剤はＭＥの油及び／又は水含量の一部として添加されるので、相体積比は一定のままであり、本発明者らのＭＥの物理的安定性及び完全性を維持することができる。添加された抗酸化剤を有する最適化されたＭＥは、ＩＯＰ低下能力又は作用の持続時間において最小限の変化～変化なしで、非常に有効であり続ける。経口溶液中のＰＲＧの化学的安定性は、１年を超える安定性を有する（ＮＤＡ ２２－４８８）。

【0152】

代替アプローチ：短期安定性及び抗酸化剤スクリーニング研究は、抗酸化剤が本発明者らのＭＥの化学的安定性を改善するかどうかを判定するが、抗酸化剤単独では、本発明者らの製品の貯蔵寿命を２年に延長するのに十分ではない可能性がある。より低温の保存温度（５℃及び－２０℃）の評価を含めることにより、製剤安定性を改善するために低温保存が必要であるかどうかが分かる。本発明者らのＭＥに抗酸化剤を組み込むか、又は保存温度を変更してもその安定性を増加させることができない場合、ボトル材料（ＨＤＰＥ）への抗酸化剤（例えば、ＢＨＴ、ＢＨＡ、又は１：１の比でのそれらの組み合わせ）の組み込み、並びに窒素雰囲気下での包装を調査する。酸化反応の大部分は、製剤のバルク内ではなく、ボトル壁と製剤との間の界面で起こるので、窒素ガス下でのボトル材料及び包装への抗酸化剤の組み込みは、酸化によるＰＲＧの分解を止めるのに役立つ。

【0153】

理論に束縛されることを望むものではないが、試験１は、有効性を維持するために抗酸化剤を添加してから１年後まで、本発明者らのＭＥ製剤の安定性が増加していることを実証することができる。加速安定性からの結果を使用して、各製剤について傾向分析プロットを計算する。これらのプロットを使用して、本発明者らのＧＭＰ製造者に本発明者らの製剤の移行を知らせる（試験２）。

【0154】

２：毒物学研究のための優良試験所基準（ＧＬＰ）条件下での薬物製品の製造。
目的：試験方法を最適化し、適切なものにして、本発明者らのＡＰＩ出発物質及び製造された薬物製品を分析的に評価する。ＧＬＰ薬物製品を製造し、ＩＣＨガイドラインの下で不純物の分析を開始する。これは、以下を提供することができる：１）薬物製品調製方法の製造現場への移行；２）毒物学研究に好適であろうエンジニアリングスケールアップＧＬＰバッチの生成；３）有意な不純物及び分解物（≧０．１０％）の同定及び特徴付け。本発明者らの目標は、最低１年間安定である、毒物学研究で使用するためのＧＬＰ薬物製品の製造の成功である。

【0155】

２．１：製造、品質リリース、及び安定性研究中の、薬物試験を支持するための分析試験方法の最適化、定量、及び移行。
ＨＰＬＣ－ＵＶ：ＰＲＧの効力及び純度を推定するために、逆相ＨＰＬＣ及び紫外線（ＵＶ）検出を使用するＬＣ－ＵＶ分析アッセイの開発に成功した^１２。この方法は、プレガバリンＡＰＩ及び最終薬物製品の両方を評価するために使用される。

【0156】

平均液滴サイズ、多分散性指数（ＰＤＩ）及びゼータ電位測定：本発明者らのＭＥ製剤の平均液滴サイズ、ＰＤＩ及びゼータ電位は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｎａｎｏｓｅｒｉｅｓ、ｎａｎｏ－ＺＳ）３５を使用して好適に希釈した後に判定する^３５。全ての測定は、２５℃で実行する。

【0157】

透過型電子顕微鏡法：本発明者らのＰＲＧ ＭＥの形態及び液滴サイズの確認を、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）（ＪＥＯＬ ＪＥＭ１２００ＥＸ ＩＩ電子顕微鏡）を使用して行う。簡単に述べると、ＭＥ製剤を、ＭｉｌｌｉＱ水で１：１００に希釈した。２マイクロリットルの希釈したＭＥを、Ｆｏｒｍｖａｒフィルム（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＥＭＳ）で覆った４００メッシュ銅グリッド上に置く。グリッドをデシケータ中で２時間乾燥させ、続いてＵｒａｎｙｌｅｓｓ ＥＭ ｓｔａｉｎ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＥＭＳ）で陰性染色した後、ＴＥＭで検査する。

【0158】

粘度の判定：コーン（１．５°）及びプレート回転粘度計（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＤＶ－ＩＩ＋プログラム可能な粘度計；Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、本発明者らのプロトコルに従って本発明者らの製剤の粘度を判定する^{３６，３７}。各製剤（５００μｌ）を粘度計の固定プレート上に５分間置き、その後、各測定を行って実行温度に到達させる。粘度は、３５±０．５℃で３回測定する。

【0159】

生体接着力の測定：本発明者らのＭＥ点眼剤の生体接着力は、生体接着ポリマーをムチン分散物と混合する際に生じるレオロジー的相乗作用の評価に依存する単純な方法によって判定する^{３８，３９}。胃ムチンＩＩ型（１５％、ｗ／ｖ）を模擬涙液（ｐＨ７．４）に分散させ、４℃で一晩溶解させる。測定前に、ムチン分散液を３５℃に加温し、次いで予め同じ温度に加温しておいた製剤と混合した。ムチン分散液、製剤、及びそれらの混合物の粘度は、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計を使用して３回測定する。生体接着並びに生体接着力による粘度変化は、本発明者らの方法を用いて計算される^１２。

【0160】

研究設計及び方法：
２．２：毒物学研究のためのＧＬＰ薬物製品の製造及び安定性。ＩＲＩＳＹＳによって実行する。
データ：図１６に示す方法を使用して、ＰＲＧ ＭＥの小規模バッチをそれぞれ５００ｇまで社内で作製した。本発明者らのＰＲＧ ＭＥは、５℃及び２５℃で３ヶ月間、並びに３０℃及び４０℃で２ヶ月間化学的に安定であり（表２）、試験１．１において化学安定性を１年に増加させるように、これを更に最適化する。最終的に最適化された製剤は、将来の毒物学研究のための調製におけるＧＬＰ製造及び評価のためにＩＲＩＳＹＳに移行する。

【0161】

バッチ記録は、試験１．１からの化学的安定性が最も長い上位３つの製剤についてそれぞれ５，０００ボトルのＧＬＰ実証バッチについて生成される。これらの実証バッチは、分析試験方法のプロセス及び感度を確立するために生成される。これらの実証バッチ及び将来のＧＭＰバッチにおける不純物プロファイルは、後に続くほぼ同一のプロセスに基づいて同様であり得る。実証バッチは、ＧＬＰ毒物学研究において使用する。加えて、これらのエンジニアリングバッチは、ＩＣＨガイドラインの下、－２０℃、２～８℃、２５℃及び４０℃で最低１２ヶ月間の安定性試験に入る。このバッチを本発明者らの全ての毒物学研究に使用する予定であるため、本発明者らの完全な毒物学プログラムを通して安定性を追跡できるに、２４、３０、及び３６ヶ月間の結果を生成するのに十分なサンプルを充填する。しかしながら、１２ヶ月経過したサンプルのみを分析する。

【0162】

２．３：ＰＲＧ ＭＥ製剤中に見出される不純物の探索的同定及び特徴付け。
不純物及び分解物（≧０．１０％）を同定し、特徴付けることができる。ＰＲＧ ＭＥ製剤内の不純物は、１）プレガバリン原薬中に存在する既知の不純物；及び２）本発明者らのＰＲＧ ＭＥ製剤内の不明な不純物であり得る。プレガバリン^３４及び潜在的供給源において見出される６つの既知の不純物及び分解生成物は、以下の通りである：
アルケン不純物、４－エン不純物、又は４，５デヒドロプレガバリン（ＣＡＳ＃２１６５７６－７４－８；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、
二酸不純物、３－カルボキシ－５－メチルヘキサン酸（ＣＡＳ＃５７０２－９９－８；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ又はＳｉｍｏｎ Ｐｈａｒｍａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）、
３－（２－アミノ－２－オキソエチル）－５－メチルヘキサン酸（ＣＡＳ＃１８１２８９－３３－８；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、
（Ｓ）－４－イソブチルピロリジン－２－オン、ラクタム不純物、又はＰＤ ０１４７８０４（ＣＡＳ＃６１３１２－８７－６；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、
ジオン不純物又は４－イソブチルピペリジン－２－６－ジオン（ＣＡＳ＃９１６９８２－１０－０；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ又はＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｄｇｅ）、
Ｒ－エナンチオマー不純物又はＰＤ ０１４４５５０（ＣＡＳ＃１４８５５３－５１－９；Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ又はＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｄｇｅ）。

【0163】

非限定的な例示的研究設計及び方法：本発明者らの最適化されたＰＲＧ ＭＥ含有抗酸化剤の最初のＧＬＰロットの探索的不純物プロファイリングを、薬物製品のＨＰＬＣ分析を使用して実行する。ピーク面積＞０．１０％を有する不純物の最初の構造的特徴付けを、ＭＳ／ＭＳ分析によって実行する。これらの構造を確認するために、同定された不純物を購入し、ＬＣ／ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ、及びＮＭＲスペクトルデータを使用して特徴付ける。不純物の多くは、薬物物質から持ち越されるので、現在市販されているＰＲＧ薬物製品（ＮＤＡ ２２－４８８）に見られるものと同じである。

【0164】

実施された研究を通して、以下を実行することができる：１）薬物製品の放出及び安定性のために必要な試験方法を移行し、適切なものにする；２）毒物学研究で使用するのに好適な高品質薬物製品の上位３つの製剤のそれぞれについてＧＬＰバッチを製造する；３）プラセボ／ＭＥビヒクルのＧＬＰバッチを製造する；４）この薬物製品が２～８℃及び室温で最低２年間安定であると判定する；５）ＩＣＨガイドラインによって規定されるように、分析によって同定されたＰＲＧ不純物を同定し、特徴付ける。

【0165】

試験２の測定基準は、以下を含み得る：１）毒物学研究で使用するためのＧＬＰ薬物製品の製造；２）６ヶ月加速安定性データ；及び３）ＩＣＨガイドライン下での１２ヶ月長期安定性データ。

【0166】

３：毒物学評価。
３は、ウサギにおける本発明者らのＰＲＧ ＭＥの無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を判定することができ（試験３．１）、これは、ウサギにおける将来のＧＬＰ長期反復用量研究の適切な用量の選択を導く。

【0167】

３．１：非ＧＬＰ ４週間、反復用量、用量範囲を設定する毒性試験。
４についてのデータ：ＰＲＧは、２００５年以来、疼痛管理について承認された製品であり、１６００万人を超える人々に処方され、服用されており、したがって、既存の臨床データベースは大きい（ＬｙｒｉｃａウェブサイトＦＡＱ）。検出可能なレベルの全身曝露の形跡は、ＰＲＧの眼科的適用後には見出されておらず^１２、これは、安全性プロファイルに有利に影響し得る。全身曝露のレベルに関する決定的なデータのために、高用量後の毒物動態学分析を本研究において実行する。本発明者らは、ガードカラムの使用を含む改変を伴って、Ｐａｕｌｙら^４０の方法に従って、超高速液体クロマトグラフィ－タンデム質量分析^１２を用いてＰＲＧの濃度を評価する生物分析法を検証した。このＨＰＬＣ法を使用した定量レベル（ＬＯＱ）は、約２．５ｐｇ／ｍＬである。

【0168】

反復用量安全性試験は社内で行われており、いかなる有害事象も観察されていない。無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を判定することは、非臨床的リスク評価の重要な部分であり、本発明者らの初期臨床試験における最大推奨開始用量を判定するのに役立つ。ＮＯＡＥＬを判定し、臨床試験において監視されるべき潜在的な有害事象を同定するために、（濃度を増加させ、１日当たりの適用数を増加させることによって）用量を増加させることが必要である。この研究は、長期ＧＬＰ反復用量毒性試験において使用される用量を予測して知らせる。

【0169】

（表５）毒性試験についての動物分布。

【0170】

非限定的な例示的研究設計及び方法雄及び雌のダッチベルテッド種ウサギにおいて、標準的な眼科毒性研究設計に従う。低用量（有効用量）、中用量（３倍有効用量）及び高用量（１０倍有効用量）を試験して、本発明者らのＰＲＧ ＭＥの治療域を評価する。データを収集する前に、動物をＩＯＰ測定に順応させる。

【0171】

順応は、２週間にわたる週５日の午前及び午後における両眼のＩＯＰ測定を含む。動物を、死亡率チェックのために１日２回、ケージサイド観察のために１日１回検査する。体重を含む詳細な臨床観察を毎週行う。動物を４つの群に分け、表５に従って４週間投与する。以下のエンドポイントを収集する。

【0172】

肉眼的眼観察：肉眼的眼観察は、修正ドレーズ採点システムを使用して得て、試験前及び最後の毎日の適用の約０．５時間後に週１回実施する。

【0173】

眼検査（Ocular Examination、ＯＥ）：ＯＥは、有資格の獣医眼科医によって、細隙灯生体顕微鏡検査及び倒像検眼鏡検査を使用して実行される。修正Ｈａｃｋｅｔｔ－ＭｃＤｏｎａｌｄ採点システムを使用して両眼を評価する。試験は、試験前に１回、１日目、８日目、１５日目、２２日目、及び最後の毎日適用の約０．５時間後の剖検の前に実行する。

【0174】

眼内圧（ＩＯＰ）：両眼における薬理学的効果を評価するために、リバウンド眼圧計を使用してＩＯＰを得る。ＩＯＰは、試験前、１週目に１回、２週目に１回、及び剖検前に測定する。

【0175】

パキメトリー：両眼において中央角膜からパキメトリーの読み取りを行い、試験前及び剖検前に行う。

【0176】

角膜スペキュラー顕微鏡検査：角膜スペキュラー顕微鏡検査は、麻酔した動物の両眼において評価され、角膜内皮細胞の標準的な数値評価を含む。評価は、試験前及び剖検前に行う。

【0177】

網膜電図検査（ＥＲＧ）：麻酔した動物の両眼において、全視野暗順応網膜電図検査を実行する。評価は、試験前及び剖検前に行う。

【0178】

臨床病理学：臨床病理学評価は、試験前に１回、及び剖検前に採取された血液に対して行う。背骨を剖検時に採取する。評価されるパラメータは、標準血液学、凝固、血清化学、及び尿分析パネルである。

【0179】

毒物動態学（ＴＫ）：血漿中の試験物質濃度は、１日目及び２９日目（２回目の毎日適用の１０、３０、及び９０分後）に採取した血液から評価する。

【0180】

肉眼的剖検：標準的な非眼組織リストを含む肉眼的剖検を実行する。臓器重量を収集する。収集される眼組織としては、眼球結膜を含む右眼、眼瞼、涙腺、下顎リンパ節、瞬膜、ハーダー腺、視神経、鼻甲介、鼻咽頭、眼房水採取を含む除核右眼が挙げられる。

【0181】

組織濃度：以下の眼組織における試験物質濃度を収集する：眼房水、角膜、虹彩／毛様体、硝子体液、網膜、脈絡膜／ＲＰＥ。

【0182】

組織病理学：全ての動物からの眼及び付属器組織を顕微鏡で評価し、各眼からの３枚のスライドを評価する（パラフィン包埋及びＨ＆Ｅ染色）。非眼組織は、将来の評価のために固定液中で保存する。

【0183】

本研究は、１）研究を完了するための本発明者らの計画に関する洞察及びＦＤＡとの一致を得ること、並びに２）ウサギにおける本発明者らのＰＲＧ ＭＥのＮＯＡＥＬを判定し、ウサギにおけるＧＬＰ長期反復用量研究のための本発明者らのその後の実験において使用される適切な用量を確信を持って選択することを目的とする。

【0184】

性能エンドポイント：試験３の主要エンドポイント／成功測定基準は、１）研究を完了するための計画に対する同意、２）判定されたＮＯＡＥＬを含む４週間研究のための最終研究報告、及び３）本発明者らの将来の長期ＧＬＰ反復用量毒性試験のための推奨用量レベルを含む。

【0185】

本実施例で引用されている参考文献
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２ Ａｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｒ．Ｒ．，Ｌｉｕ，Ｙ．＆Ｒｈｅｅ，Ｄ．Ｊ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ－ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ８８，８３７－８４４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｅｒ．２００８．１１．００３（２００９）．
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５ Ｑｕｉｇｌｅｙ，Ｈ．Ａ．Ｇｌａｕｃｏｍａ：ｍａｃｒｏｃｏｓｍ ｔｏ ｍｉｃｒｏｃｏｓｍ：Ｔｈｅ Ｆｒｉｅｄｅｎｗａｌｄ Ｌｅｃｔｕｒｅ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４６，２６６２－２６７０（２００５）．
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９ Ｓｏｍｍｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｔｅ ａｎｄ ｂｌａｃｋ Ａｍｅｒｉｃａｎｓ．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １０９，１０９０－１０９５（１９９１）．
１０ Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ Ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｃａｃｎａ２ｄｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｅｌｅｖａｔｅｄ Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ８，１７５５（２０１７）．
１１ Ｋｌｕｇｂａｕｅｒ，Ｎ．，Ｍａｒａｉｓ，Ｅ．＆Ｈｏｆｍａｎｎ，Ｆ．Ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ａｌｐｈａ２ｄｅｌｔａ ｓｕｂｕｎｉｔｓ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｄｒｕｇ ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ ３５，６３９－６４７（２００３）．
１２ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｅ Ｄａｉｌｙ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ Ｅｙｅ Ｄｒｏｐｓ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ １３，１３７２８－１３７４４（２０１９）．
１３ Ｂｒｕｂａｋｅｒ，Ｒ．ｉｎ Ｇｌａｕｃｏｍａ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ｅｄｓ ＳＭ Ｄｒａｎｃｅ ＆ＡＨＮｅｕｆｅｌｄ）３５－７０（Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｔ－ｔｏｎ，Ｉｎｃ．，１９８４）．
１４ Ｒｙｓｋａｍｐ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．ＴＲＰＶ４ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｃａｌｃｉｕｍ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｏｕｔｆｌｏｗ ａｎｄ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｅｙｅ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ ６，３０５８３（２０１６）．
１５ Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｓ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｃａｃｎａ２ｄｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ｇｌａｕｃｏｍａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ８，１７５５（２０１７）．
１６ Ｂｅｌｌｉｏｔｔｉ，Ｔ．ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｔｈａｔ Ｔａｒｇｅｔ ｔｈｅ ａ２－８ Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ ４８，２２９４－２３０７（２００５）．
１７ Ｆｉｅｌｄ，Ｍ．ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｐｈａ２－ｄｅｌｔａ－ｌ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｖｏｌｔａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０３，１７５３７－１７５４２（２００６）．
１８ Ｂｏｎｎｅｔ，Ｕ．＆Ｓｃｈｅｒｂａｕｍ，Ｎ．Ｈｏｗ ａｄｄｉｃｔｉｖｅ ａｒｅ ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ ａｎｄ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ？Ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｕｒ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ ２７，１１８５－１２１５（２０１７）．
１９ Ｐｆｉｚｅｒ．ｌａｂｅｈｎｇ．ｐｆｉｚｅｒ．ｃｏｍ／ＳｈｏｗＬａｂｅｌｉｎｇ．ａｓｐｘ？ｉｄ＝５６１＃Ｓ６．１．
２０ ＭｃＥｌｎｅａ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｌｃｉｕｍ ｏｖｅｒｌｏａｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌａｍｉｎａ ｃｒｉｂｒｏｓａ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｇｌａｕｃｏｍａ ｄｏｎｏｒｓ．Ｍｏｌ Ｖｉｓ １７，１１８２－１１９１（２０１１）．
２１ Ｃｒｉｓｈ，Ｓ．＆Ｃａｌｋｉｎｓ，Ｄ．Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｇｌａｕｃｏｍａ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃａｌｃｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １７６，１－１１（２０１１）．
２２ Ｐａｙｎｅ，Ｌ．，Ｓｌａｇｌｅ，Ｔ．，Ｃｈｅｅｋｓ，Ｌ．＆Ｇｒｅｅｎ，Ｋ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｎ Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ Ｒａｂｂｉｔｓ．ＯｐｈｔｈａｌＲｅｓ ２２，３３７－３４１（１９９０）．
２３ Ｗｉｅｄｅｒｈｏｌｔ，Ｍ．，Ｔｈｉｅｍｅ，Ｈ．＆Ｓｔｕｍｐｆｆ，Ｆ．Ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ｍｅｓｈｗｏｒｋ ａｎｄ ｃｉｌｉａｒｙ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ．Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ １９，２７１－２９５（２０００）．
２４ Ｓｉｅｇｎｅｒ，Ｓ．，Ｎｅｔｌａｎｄ，Ｐ．，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ａ．＆Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，Ｋ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ ａｌｏｎｅ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｇｌａｕｃｏｍａ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｔｅ ｅｙｅ．Ｊ Ｇｌａｕｃｏｍａ ９，３３４－３３９（２０００）．
２５ Ｌｕｋｓｃｈ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ ｏｎ ｏｃｕｌａｒ ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ ａｎｄ ｃｏｌｏｕｒ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｔｅｎｓｉｏｎ ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ８９，２１－２５，ｄｏｉ：１０．１１３６／ｂｊｏ．２００３．０３７６７１（２００５）．
２６ Ｊａｎｉ，Ａ．，Ｇｏｙａｌ，Ｒ．，Ｓｈａｈ，Ｇ．＆Ｍｅｈｔａ，Ａ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｎ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ．Ｉｒａｎｉａｎ ＪＰｈａｒｍ ＆Ｔｈｅｒａｐ ４，９５－９９（２００５）．
２７ Ａｒａｉｅ，Ｍ．＆Ｍａｙａｍａ，Ｃ．Ｕｓｅ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｆｏｒ ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ３０，５４－７１（２０１１）．
２８ Ｇａｎｅｋａｌ，Ｓ．，Ｄｏｒａｉｒａｊ，Ｓ．，Ｊｈａｎｊｉ，Ｖ．＆Ｋｕｄｌｕ，Ｋ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｎ Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｊ．Ｃｕｒｒ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｐｒａｃｔ ８，１５－１９（２０１４）．
２９ Ｗｉｔｔｅｎｂｏｒｎ，Ｊ．＆Ｒｅｉｎ，Ｖ）．ｉｎ Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１３）．
３０ ＮａｔｉｏｎａｌＥｙｅｌｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｇｌａｕｃｏｍａ：ＮＥＩ Ｌｏｏｋｓ Ａｈｅａｄ，ｎｅｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｈｅａｌｔｈ
３１ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ＨＨＳ），Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ），Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）＆Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＢＥＲ）．ｉｎ Ｔｈｅ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ Ｖｏｌ．６８（２００３）．
３２ Ｃｈｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｈｙｄｒｏｇｅｌ－ｔｈｉｃｋｅｎｅｄ ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ ｆｏｒ ｔｏｐｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｔ ａｎ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｔ ＪＰｈａｒｍ ３４１，７８－８４（２００７）．
３３ Ｄｅｈｇｈａｎｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ－ｖｉｖｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｃｉｔｒａｔｅ ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９６，４７９－４８９（２０１７）．
３４ Ｖｕｋｋｕｍ，Ｐ．，Ｂａｂｕ，Ｊ．＆Ｍｕｒａｌｉｋｒｉｓｈｎａ，Ｒ．Ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ＵＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｒｅｓ ６，２２４１－２２５７（２０１５）．
３５ Ｋａｌａｍ，Ｍ．Ａ．，Ａｌｓｈａｍｓａｎ，Ａ．，Ａｌｊｕｆｆａｌｉ，Ｉ．Ａ．，Ｍｉｓｈｒａ，Ａ．Ｋ．＆Ｓｕｌｔａｎａ，Ｙ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ ｕｓｉｎｇ ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ ａｓ ｖｅｈｉｃｌｅ：ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｃｏｒｎｅａｌ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｑｕｅｏｕｓ ｈｕｍｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ２３，８９６－９０７（２０１６）．
３６ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－Ｂａｓｅｄ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｔｒａｎｓｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ４，１２（２０１５）．
３７ Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ａｂｄ－Ｅｌｇａｗａｄ，Ａ．，Ｓｏｌｉｍａｎ，Ｏ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｃ ｅｌ ｅｃｏｘｉｂ－Ｌｏａｄｅｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ １０５，３６９１－３７０１（２０１６）．
３８ Ｍａｙｏｌ，Ｌ．，Ｑｕａｇｌｉａ，Ｆ．，Ｂｏｒｚａｃｃｈｉｅｌｌｏ，Ａ．，Ａｍｂｒｏｓｉｏ，Ｌ．＆Ｌａ Ｒｏｔｏｎｄａ，Ｍ．Ｉ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｏｘａｍｅｒｓ／ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｓｉｔｕ ｆｏｒｍｉｎｇ ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ，ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ ７０，１９９－２０６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｊｐｂ．２００８．０４．０２５（２００８）．
３９ Ｔａｙｅｌ，Ｓ．Ａ．，Ｅｌ－Ｎａｂａｒａｗｉ，Ｍ．Ａ．，Ｔａｄｒｏｓ，Ｍ．Ｉ．＆Ａｂｄ－Ｅｌｓａｌａｍ，Ｗ．Ｈ．Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｉｏｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｏｃｕｌａｒ ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ ｇｅｌｓ ｏｆ ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ：ｄｅｓｉｇｎ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｏｃｕｌａｒ ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｈｕｍｏｒ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ４４３，２９３－３０５，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｊｐｈａｒｍ．２０１２．１２．０４９（２０１３）．
４０ Ｐａｕｌｙ，Ｃ．，Ｙｅｇｌｅｓ，Ｍ．＆Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｓ．Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈａｉｒ ｂｙ Ｅｉｌｔｒａ－Ｈｉｇｈ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｊ Ａｎａｌ Ｔｏｘｉｃ ３７，６７６－６７９（２０１３）．

【0186】

実施例５
ダッチベルテッド種ウサギに、局所プレガバリンマイクロエマルジョンを６０日間投与した。他のウサギはナイーブであり、処置を受けなかった。プレガバリンマイクロエマルジョン処置を受けたウサギは、その視神経が保護された。

【0187】

実施例６
医薬プレガバリンの、その同族受容体ＣＡＣＮＡ２Ｄ１及びＣＡＣＮＡ２Ｄ２に対する作用の分子機構の検証
ＦＤＡ承認薬プレガバリンは、ＩＯＰを低下させることができる［１，２］。プレガバリンがＩＯＰを低下させる作用機序を判定するために、プレガバリンが結合する基質を同定し、その基質がＩＯＰ産生及び調節に関与する眼の領域に存在するかどうかを判定する必要があった。プレガバリンの標的は、カルシウムチャネル電位依存性サブユニット、α２δ１（別名ＣＡＣＮＡ２Ｄ１）であり得る。ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が眼に存在し、ＩＯＰに影響を及ぼす領域に局在し得ることを検証するために、本発明者らは蛍光免疫組織化学（ｆｌＨＣ）を行い、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１がＩＯＰを調節し得る領域、例えば、小柱網及び毛様体に局在することを実証した（図３７パネルＡ～Ｃ）。更に、プレガバリンは、水溶液及び徐放性マイクロエマルジョン中で局所送達される場合［１，２］、用量依存的にＩＯＰを低下させる。投与の２１日後の眼におけるプレガバリンの生体内分布の更なる研究［２］を通して、本発明者らは、視神経において高レベルのプレガバリンが測定されたことに驚いた。しかしながら、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は、視神経中に存在するとしても最小限であった。理論に束縛されることを望むものではないが、プレガバリンは、第２のデルタサブユニットであるＣＡＣＮＡ２Ｄ２と同様の親和性で結合するので、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２との相互作用を介して視神経において異なる機能を有し得る。免疫組織化学及び共焦点顕微鏡を使用して、本発明者らは、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２が視神経に局在することを示し（図３７パネルＤ～Ｆ）、これは、プレガバリンの局所投与後の視神経における上昇したレベルについての説明となる［２］。

【0188】

本実施例で引用されている参考文献
１．Ｃｈｉｎｔａｌａｐｕｄｉ，Ｓ．，Ｍａｒｉａ，Ｄ．，Ｗａｎｇ，Ｘ，Ｃｏｏｋｅ Ｂａｉｌｅｙ，Ｊ．，ＮＥＩＧＨＢＯＲＨＯＯＤ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，Ｈｙｓｉ，Ｐ．，Ｗｉｇｇｓ，Ｊ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．（２０１７）Ｓｙｓｔｅｍｓ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｃａｃｎａ２ｄｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ｇｌａｕｃｏｍａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．８，１７５５．
２．Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｍ．，Ｍａｒｉａ，Ｄ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｍｉｓｈｒａ，Ｓ．，Ｇｕｒａｇａｉｎ，Ｄ．＆Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ，Ｍ．（２０１９）Ｏｎｃｅ Ｄａｉｌｙ Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ Ｅｙｅ Ｄｒｏｐｓ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌａｕｃｏｍａ，ＡＣＳ Ｎａｎｏ．１３，１３７２８－１３７４４．

【0189】

実施例７
遺伝性網膜変性（ＩＲＤ）は、網膜内の光受容体に影響を及ぼす可能性があり、光受容体を死に至らしめる可能性があり、このため、対象は視力を失う可能性がある。緑内障（高齢者に影響を及ぼし得る）とは対照的に、ＩＲＤは、若年者（例えば、３０歳未満）に影響を及ぼし得る。いくつかの形態のＩＲＤは、１０代から若年成人に影響を及ぼし得る。これらは、「網膜色素変性症」と呼ばれ得る。他の形態は、幼児に影響を及ぼし得る。これらは、「レーバー先天性黒内障」と呼ばれ得る。これらの疾患を引き起こし得る多くの遺伝子が存在する。これらの疾患の他の形態は、「錐体杆体又は杆体錐体ジストロフィー」と呼ばれ得る。

【0190】

本発明者らは、免疫組織化学を使用して、プレガバリンの標的のうちの１つであるＣＡＣＮＡ２Ｄ１が網膜中の光受容体に局在し得ると判定した。図３８に示すように、
● ＲＰＥ＝網膜色素上皮；ＯＮＬ＝外顆粒層；ＯＰＬ＝外網状層；ＩＮＬ＝内顆粒層；ＩＰＬ＝内網状層；ＲＧＣ＝網膜神経節細胞層。
● 赤色は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１が局在する場所を示す。
○ ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は光受容体及び内網膜全体に局在する。
● 緑色は、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２が局在する場所を示す。
○ ＣＡＣＮＡ２Ｄ２は、内網膜全体に局在する。
● ＣＡＣＮＡ２Ｄ１及びＣＡＣＮＡ２Ｄ２の両方が、プレガバリンを結合する。
○ ＣＡＣＮＡ２Ｄ１は光受容体によって発現されることを考えると、そこで神経保護物質として作用することができる。

【0191】

実施例８
本明細書に記載される研究は、軍事関連の外傷事象に関連する眼外傷又は視覚機能障害；並びに厳しい環境及び長期のフィールドケア設定における眼外傷の安定化及び治療のための治療薬を提供することができる。

【0192】

理論に束縛されることを望むものではないが、ヒトの眼のサイズに近い眼を有し、それによって臨床への本発明者らの成果の適用可能性を容易にする眼爆傷（ＯＢＩ）のウサギモデルを検証し、緑内障網膜神経節細胞（ＲＧＣ）及び視神経（ＯＮ）損傷のマウス及びウサギモデル（本発明者らのウサギＯＢＩモデル）において神経保護剤として同定したプレガバリン分子の局所製剤の有効性及び作用機序を判定する。

【0193】

３０歳未満の兵士は、爆傷後に長年の視力障害を経験する可能性がある^１。視力を維持することができる療法は、関心事項である。理論に束縛されることを望むものではないが、プレガバリンマイクロエマルジョン（ＭＥ）は、爆傷ＯＢＩの治療薬として検証されている。理論に束縛されることを望むものではないが、眼外傷の新規なモデルが本明細書において検証される。

【0194】

背景
衝撃外傷後の視力喪失のための治療及び薬物送達系に対する必要性は満たされていない。身体防護具の改善は、戦闘員に対する致命的外傷の発生率を低減させた。しかしながら、眼外傷は、依然として罹患の原因である。合併症は、ＲＧＣ（網膜神経節細胞）及びＯＮ（眼神経）損傷並びに視野の喪失を含み得る。これらの外傷を治療する療法は、不足している。神経保護剤を後眼部に非侵襲的に送達する必要がある。これらの満たされていない必要性の両方に対処するための実施形態が、本明細書で説明される。本発明者らは、プレガバリンが緑内障においてＲＧＣ及びＯＮに神経保護を提供すると判定し、眼への薬物の侵入を容易にするために局所製剤を設計した。本発明者らは、プレガバリンを眼内圧（ＩＯＰ）のモジュレータとして同定した。驚くべきことに、本発明者らはまた、それが緑内障性ＲＧＣ及びＯＮ損傷のマウス及びウサギモデルにおける神経保護剤であることを発見した。本発明者らの製剤は、単回用量から＞２４時間にわたるプレガバリンの徐放性を提供する生体接着性多層マイクロエマルジョン（ＭＥ）ベースの局所点眼剤である^２。本発明者らのＭＥの利点としては、調製の容易さ、１００％のカプセル化効率、その生体接着性に起因する薬物角膜接触時間の増加、その多層構造に起因する制御された薬物放出、及び持続性の高い角膜透過性が挙げられる^２。これらの特徴の最終的な結果は、プレガバリンが眼に入り、網膜及びＯＮに拡散し得ることである（図３９）。本発明者らのＭＥはまた、安全であり、眼において十分に忍容される^２，３。

【0195】

ヒト研究への移行を容易にするために、大きい眼を有する前臨床ＯＢＩモデルに対する必要性は満たされていない。１０年近くの間、本発明者らは、ＯＢＩ及び外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の前臨床モデルとして大きな成功を収めたマウスを使用し、中心及び周辺の視覚系の外傷及び欠損を特徴付けた^４-９。マウスは、外傷の機構を判定し、妥当な神経保護分子を初期段階で評価するのに有用であるが、ヒトの眼のサイズに近い眼を用いた前臨床モデルは、治療薬をヒト臨床試験に移行するための要件である。この必要性を満たすために、本発明者らは、ＯＢＩのウサギモデルを検証し、それをＯＢＩの神経保護療法として本発明者らのプレガバリンＭＥを評価するためのプラットフォームとして使用する。

【0196】

目的及びアプローチ：
理論に束縛されることを望むものではないが、眼爆傷に罹患した負傷兵士における視力を保つための神経保護療法が、本明細書に記載される。本発明者らは、ＯＢＩの治療薬としての本発明者らの局所プレガバリンＭＥ製剤の有効性を評価することができる。理論に束縛されることを望むものではないが、プレガバリンは、細胞内遊離カルシウムレベル［Ｃａ^２＋］_ｉの増加を減弱させることによって、ＲＧＣ軸索の機能不全及び喪失を軽減する。

【0197】

目的１：ＯＢＩの前臨床ウサギモデルを検証する。

【0198】

目的２：製剤化したプレガバリンが、ＲＧＣ及びそれらの軸索における細胞内遊離カルシウム［Ｃａ^２＋］_ｉの濃度レベルを調節することによって、ウサギにおいてＯＢＩ後のＲＧＣ及びＯＮに神経保護を提供することを検証する。

【0199】

目的１：ＯＢＩの前臨床ウサギモデルを検証する。これにより、本発明者らは、プレガバリン及び他の薬物のヒトにおける臨床試験への進行を容易にするＯＢＩの検証された前臨床モデルとしてウサギを進歩させることができる。

【0200】

データ：本発明者らは、ダッチベルテッド種（ＤＢ）ウサギの眼への４０、４５、又は５０ｐｓｉの単回爆風後の外傷を評価した（図４０）。５０ｐｓｉは、ＲＧＣ及びＯＮへの一貫した実証可能な機能的外傷を生じ得る圧力である。ＩＯＰは、ＯＢＩ後の期間中一定であった（図４１）。ＲＧＣ機能を反映するパターンＥＲＧ（ＰＥＲＧ）振幅は、外傷後最初の２週間の間に一時的に増加し（図４２）、理論に束縛されることを望むものではないが、これは、軽度の外傷の例において実証されているように^{１０，１１}、保護サイトカインの放出に起因し得るか又は起因し得ないが、その後、７週間までに減少した。ＲＧＣ機能の一時的な増加にもかかわらず、本発明者らは、視神経乳頭（ＯＮＨ）において眼から出るときのＲＧＣ軸索の喪失を反映する、陥凹対円板比の着実な増加を記録した（図４３）。外傷マーカーの組織病理学及び評価は、外傷後１０週目の屠殺後に実行することができる。

【0201】

非限定的な例示的方法：モデル選択及び外傷パラダイム。検出力の計算に基づいて、本発明者らは、３６匹のウサギ（約３ヶ月齢；６Ｍ、６Ｆ／群；２つのＯＢＩ群及び１つの対照；３つの時点；Ｃｏｖａｎｃｅ）を登録することができる。ＯＢＩを作製するために、麻酔したウサギを定位固定フレームに固定し、本発明者らの爆風砲の先端を角膜から５ｍｍに配置する（図４０）。本発明者らは、２つのＯＢＩモデルを生成し、特徴付ける：１つの群における５０ｐｓｉの単回爆風による軽度外傷（図４１～図４３）；本発明者らのマウス研究で行ったように^４-７、５０ｐｓｉでの一連の５回の反復爆風圧と、別の爆風の間の６０秒の遅延による中程度外傷。各ウサギの両眼は、互いに数分以内に同じ外傷を受ける。対照群を爆風装置に入れるが、外傷を与えない。ナイーブウサギでのベースライン測定を、研究の開始前に行う。ＯＢＩの損傷効果は、以下の評価を使用して、爆風後に評価する。

【0202】

外傷前ベースライン並びにＯＢＩから２、６及び１０週間後の臨床検査：ＩＯＰ測定；それぞれ光受容体／生体極細胞及びＲＧＣ機能の指標であり得る、暗順応全視野網膜電図（ＥＲＧ）及びパターンＥＲＧ（ＰＥＲＧ）検査、陥凹／乳頭径比計算による眼底イメージング；並びに本発明者らが公開した方法^{２，１２-１５}を使用して網膜の厚さの変化を評価するためのＯＣＴイメージング。

【0203】

外傷前ベースライン並びにＯＢＩから２、６及び１０週間後の実験室検査。２匹のウサギ（１Ｍ、１Ｆ）を各時点で安楽死させ、以下の研究を行う：網膜、ＯＮ、及び視索の形態；ミクログリア状態の免疫組織化学的評価；本発明者らの方法を使用した、視索における外傷軸索球の存在の判定、及びＯＮ損傷の組織学的評価^４，５。

【0204】

統計分析：Ｐｒｉｓｍ統計ソフトウェアを使用して、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ多重比較検定（有意なＦ検定の場合）によって分析する。雄と雌の応答の差を判定する。差異が同定されない場合、データをプールする。

【0205】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、ウサギにおけるＯＢＩの２つのモデルの特徴付けを含むことができる。

【0206】

目的２：製剤化したプレガバリンが、ＲＧＣ及びそれらの軸索における細胞内カルシウム（Ｃａ^２＋）の濃度レベルを調節することによって、ウサギにおいてＯＢＩ後のＲＧＣ及びＯＮに神経保護を提供することを検証する。本発明者らは、ＯＢＩに罹患したウサギにおける神経保護剤としての本発明者らの製剤化したプレガバリンの有効性及び作用機序を検証することができる。理論に束縛されることを望むものではないが、局所投与による神経保護治療薬の送達は、治療の選択肢を改善することができる。投薬の性質により、１日１回の点眼剤である本発明者らの製剤は、野戦病院、厳しい環境、及び長時間のフィールドケア環境などで使用することができる。

【0207】

データ：ＤＢウサギは、ＯＮ損傷及びＯＮ頭部陥凹として現れる自然発生的な加齢性緑内障を発症し得る（図４４）。しかしながら、緑内障性損傷の初期段階の間の本発明者らのプレガバリンＭＥによる毎日の投薬は、これらの構造的欠陥を軽減した（図４５）。本発明者らのプレガバリンＭＥを、ＯＢＩに対する妥当な神経保護剤として評価することを検証することができる。例えば、若いウサギ（ＩＯＰ及びＯＮ損傷において齢数に関連した増加をまだ発症していない３ヶ月齢）を使用することができる。なぜなら、この齢数は、ＯＢＩに罹患した兵士の年齢をシミュレートすることができるからである。

【0208】

プレガバリンがＲＧＣに対して神経保護的である作用機序は、不明である。理論に束縛されることを望むものではないが、プレガバリンが、選択的ＣＡＣＮＡ２Ｄ１遮断薬であることを考えると^１６、ＲＧＣの細胞膜及びそれらの軸索全体にわたるイオン性Ｃａ^２＋の流入を減弱させることができる（図１０）。

【0209】

非限定的な例示的方法：神経保護剤としてのプレガバリンの評価。検出力の計算に基づいて、３６匹のウサギ（約３ヶ月齢；６Ｍ、６Ｆ／群；２つのＯＢＩ群及び１つの対照；３つの時点；Ｃｏｖａｎｃｅ）を登録する。本発明者らの軽度及び中等度のＯＢＩモデル（本明細書を参照されたい）における本発明者らのプレガバリンＭＥの神経保護効果を検証するために、ウサギに、外傷後２時間から投与を開始する（兵士が損傷と処置の開始との間に経験し得る時間の長さをシミュレートするため）。外傷眼に、３０μｌ用量のプレガバリンＭＥ（０．６％^２）を投与する。投与は、１０週間毎日継続する。プレガバリンＭＥの神経保護能は、本明細書に概説される同じ臨床検査及び実験室検査を使用して評価する。

【0210】

［Ｃａ^２＋］_ｉに対するプレガバリンの効果の評価。３６匹のウサギ（約３ヶ月齢；２Ｍ、２Ｆ／群；２つのＯＢＩ群及び１つの対照；３つの時点；Ｃｏｖａｎｃｅ）を登録する。プレガバリンが本発明者らの軽度及び中程度のＯＢＩモデルにおいて流入Ｃａ^２＋を軽減することを検証するために、ＲＧＣ細胞体及びそれらの軸索における電位依存性Ｃａ^２＋チャネル（ＶＧＣＣ）によって媒介されるＣａ^２＋シグナルを、外傷後の以下の時間：２時間、４時間及び２週間で測定し、これにより、急性及び慢性の変化の両方にアクセスすることができる。そうするために、各条件からの眼杯に、Ｃａ^２＋感受性及び非感受性色素の混合物を逆行的に負荷し、レシオメトリックアプローチを使用して［Ｃａ^２＋］_ｉの振幅及び持続時間を計算することを可能にする^１７。細胞は、細胞外カリウム濃度を上げて、イメージングコンピュータと同期した自動灌流を介してＶＧＣＣを活性化することによって^{１８，１９}、脱分極される^{２０，２１}。［Ｃａ^２＋］_ｉの変化は、特定のＲＧＣ軸索束及び細胞体上に関心領域（ＲＯＩ）を配置することによって得られる（図４６パネルＣ及びＥ）。Ｎａ^＋チャネル遮断薬であるテトロドトキシンを使用して、Ｎａ^＋チャネルがＣａ^２＋トランジェントの生成に寄与する程度を判定する。ＲＯＩからの蛍光強度値は、実験条件内で平均化され、各々は、統計的検定のための独立した観察であると考えられる。

【0211】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らの局所プレガバリンＭＥを投与された外傷眼は、未処置のものよりも機能的及び組織病理学的異常が少ない。理論に束縛されることを望むものではないが、ＯＢＩは、プレガバリンによって軽減され得るイオンＣａ^２＋の調節されていない上昇した流入につながる。理論に束縛されることを望むものではないが、安定で低い［Ｃａ^２＋］_ｉは、臨床的及び組織病理学的神経保護と相関する。

【0212】

本実施例で引用されている参考文献
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１１ Ｓｉｍｏｎ，Ｇ．，Ｈｏｖｄａ，Ｄ．，Ｈａｒｒｉｓ，Ｎ．，Ｇｏｍｅｒｚ－Ｐｉｎｉｌｌａ，Ｆ．＆Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ｒ．Ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｏｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｃｒｕｓｈ Ｊ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ ２３，１０７２－１０８２（２００６）．
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２０ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｄ．，Ａｋｍｅｎｔｉｎ，Ｗ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｎａｎｏｓｃａｌｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｐｒｅｓｙｎａｐｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｚｏｎｅ．Ｅｌｉｆｅ ５，ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．１３２４５（２０１６）．
２１ Ｖａｉｔｈｉａｎａｔｈａｎ，Ｔ．，Ｗｏｌｌｍｕｔｈ，Ｌ．Ｐ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｄ．，Ｚｅｎｉｓｅｋ，Ｄ．＆Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｇ．Ｔｒａｃｋｉｎｇ Ｎｅｗｌｙ Ｒｅｌｅａｓｅｄ Ｓｙｎａｐｔｉｃ Ｖｅｓｉｃｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ Ｒｉｂｂｏｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｚｏｎｅｓ．ｉＳｃｉｅｎｃｅ １７，１０－２３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｓｃｉ．２０１９．０６．０１５（２０１９）．

【0213】

同等物
当業者であれば、ルーチンの実験以上のものを使用せずに、本明細書に具体的に記載された特定の物質及び手順に対する多数の同等物を認識するであろう、又は確認できるであろう。そのような同等物は、本発明の範囲内であると考えられ、添付の請求の範囲によってカバーされる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【国際調査報告】