特表 2023-542044 ラクトバチルス・サケイＰＲＯＢＩＯ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-04

(54)【発明の名称】ラクトバチルス・サケイＰＲＯＢＩＯ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/747 20150101AFI20230927BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230927BHJP

   A61K 8/99 20170101ALI20230927BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20230927BHJP

   A23K 10/18 20160101ALI20230927BHJP

【ＦＩ】

A61K35/747

A61P25/28

A61K8/99

A23L33/135

A23K10/18

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023518380

(86)(22)【出願日】2020-10-22

(85)【翻訳文提出日】2023-03-22

(86)【国際出願番号】 KR2020014460

(87)【国際公開番号】W WO2022065568

(87)【国際公開日】2022-03-31

(31)【優先権主張番号】10-2020-0122716

(32)【優先日】2020-09-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520422371

【氏名又は名称】プロバイオニック インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】パーク ヨン－ハ

(72)【発明者】

【氏名】リオン ミン－ツェ

【テーマコード（参考）】

2B150

4B018

4C083

4C087

【Ｆターム（参考）】

2B150AB10

2B150AC06

2B150DD26

4B018MD86

4B018ME14

4B018MF13

4C083AA031

4C083CC01

4C083FF01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC56

4C087CA09

4C087CA10

4C087MA52

4C087MA63

4C087NA14

4C087ZA16

(57)【要約】

【課題】本発明は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を有効成分として含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物を提供する。
【解決手段】本発明に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物は、体内に副作用がなく、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてアルツハイマー病を緩和できるという効果を有し、医薬組成物、食品組成物、化粧品及び飼料組成物として使用され得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を有効成分として含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物。

【請求項2】

前記ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５菌株を液体培養したラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５培養液であることを特徴とする、請求項１に記載のアルツハイマー病の予防又は治療用組成物。

【請求項3】

ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む食品組成物。

【請求項4】

ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む化粧品。

【請求項5】

ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む飼料組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物に関し、より詳細には、副作用がなく、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてアルツハイマー病を緩和できるラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ Ｐｒｏｂｉｏ－６５）は、韓国人達が数百年間摂取し、伝統的に安全性が確保された発酵エサであるキムチから分離された菌株であって、耐酸性、耐胆汁性、抗生剤抵抗性を示し、動物体の体内及び腸内での有害な病原性微生物の生育を抑制し、免疫増進活性を示し、特に、アトピー性皮膚炎病変の疾病悪化因子として知られている黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）の生育を抑制することによってアトピー性皮膚炎の治療又は予防に効果的で、且つアレルギー関連疾患の治療又は予防にも効果的であり、腸内有害微生物の異常増殖を抑制することによって腸内微生物菌叢を安定化させるという効能を有する。本発明者は、大韓民国登録特許第１０－０４７９７１９号の発明者であって、前記ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５及びその組成物を提案したことがある。

【0003】

本発明者は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５のその他の効能と関連する研究の進行中に、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５がアルツハイマー病の予防又は治療用組成物として使用可能であることを発見した。

【0004】

アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）は、全世界的に最も広く拡散されている痴呆であって、全世界の４７００万人に影響を及ぼしており、２０１８年には合計６，０４０億ドルの費用を発生させた（アルツハイマー協会、２０１８）。アルツハイマー病は、神経繊維質の絡み合いや、大脳皮質と海馬における主にニューロンの損失などの他の神経退行性疾患と多くの病理学的側面を共有するが、この疾病の特徴は、アミロイドβ（Ａβ）として知られているアミロイド性ペプチドの堆積を通じてもたらされるアミロイドプラークの存在にある。形成された全てのＡβ種のうちＡβ４２は、神経退化を起こす毒性が最も強い形態であると同時に、攻撃的な種類である。炎症は、アルツハイマー病で炎症反応の恒常性が破壊されることによって慢性炎症を誘発し、初期Ａβ病理学を誘発する中心メカニズムである。

【0005】

具体的には、現在、アルツハイマー病の最も有力な原因として知られているＡβは、ベータ（β）とγ－セクレターゼ（γ－ｓｅｃｒｅｔａｓｅ）酵素がＡＰＰ（Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ）を非正常的に加水分解させることによって生成されるものである。Ａβは、毒性を含有するので、神経伝達物質であるアセチルコリンを作る大脳部分と大脳皮質の神経細胞を破壊し、アセチルコリンの活性状態を減少させ、活性酸素種（Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｐｅｃｉｅｓ；ＲＯＳ）を生成し、酸化的損傷を誘発することによって神経細胞死滅を起こすものとして知られている。

【0006】

現在使用されているアルツハイマー病治療剤は、ほとんどがＡｃｈ分解酵素抑制剤であるが、肝毒性の副作用が大きく、各種の副作用を起こすという問題を有していた。

【0007】

このような従来のアルツハイマー病治療剤の問題を解決するために、本発明者は、体内に副作用がなく、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてアルツハイマー病を緩和できるラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物を開発するに至った。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明が解決しようとする技術的課題は、体内に副作用がなく、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてアルツハイマー病を緩和させることができ、微生物又はその培養液をベースにして医薬組成物、食品組成物、化粧品及び飼料組成物として使用され得るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物を提供することにある。

【0009】

本発明の上記の目的及びその他の目的は、下記で説明する本発明によって全て達成され得る。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明の一実施例に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を有効成分として含むことを特徴とする。

【0011】

ここで、前記ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５菌株を液体培養したラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５培養液であることを特徴とする。

【0012】

また、本発明の一実施例に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む食品組成物として使用され得る。

【0013】

本発明の一実施例に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む化粧品として使用され得る。

【0014】

本発明の一実施例に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５又はその培養液を含む飼料組成物として使用され得る。

【発明の効果】

【0015】

本発明は、体内に副作用がなく、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてアルツハイマー病を緩和できるラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含むアルツハイマー病の予防又は治療用組成物を提供するという効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】正常エサが供給されたＧＭＲ－ＯｒｅＲの眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真である。

【図2】正常エサが供給された形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）の眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真である。

【図3】ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５培養液が含有された、正常エサが供給された形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）の眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真である。

【図4】Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ距離行列（ｄｉｓｔａｎｃｅ ｍａｔｒｉｘ）をベースにした微生物群集の主要座標分析（ＰｃｏＡ）を示したグラフである。

【図5】他の処理群で観察された属内の相対的存在量を示すショウジョウバエの腸内微生物学的特性を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明の上述した目的、特徴及び長所は、本発明の好適な実施例及び比較例を詳細に説明することによってさらに明らかになるだろう。後述する詳細な説明は、限定的な意味で記述されるものではなく、本発明の範囲は、各請求項が主張するのと均等な全ての範囲と共に、添付の請求項によってのみ限定される。

【0018】

以下、添付の図面及び実施例を参照して本発明をより詳細に説明する。

【0019】

実施例
実施例１：ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５の培養液製造
韓国の伝統発酵エサであるキムチから分離したラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５は、長期間保存された菌株の生理活性度を向上させ、健康な菌株を選抜するために、ＭＲＳブロス（ｂｒｏｔｈ）（Ｄｉｆｃｏ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）培地で１５時間にわたって３７℃の培養器に入れ、２回～３回継代培養した後で獲得した優良種を、ＭＲＳブロス培地を用いて３７℃の培養器で恒温に維持し、１５時間にわたって培養した菌体をスターターとして使用した。その後、グルコース１重量％、酵母抽出物１重量％、ソイペプトン０．２５重量％、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｅｌｅｎｅ ｓｏｒｂｉｔａｎ ｍｏｎｏ－ｏｌｅａｔｅ）０．１重量％、硫酸アンモニウム（（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４）０．１重量％、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）０．０１重量％、リン酸二水素カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４）０．１重量％、及び水９０重量％～９９重量％を含む液体培養培地を１２１℃で１５分間滅菌した後、この培地を用いて２Ｌのフラスコで前記ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ６５を３７℃で２４時間にわたって液体培養することによって、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５培養液を製造した。

【0020】

実施例２:形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）を用いたラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５のアルツハイマー病の予防又は治療効果実験
実施例２－１：実験ショウジョウバエ群の飼育
本実験のためのショウジョウバエ群（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）としては、Ｏｒｅｇｏｎ－Ｒ野生種；ＧＭＲ（Ｇｌａｓｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ）－ＧＡＬ４；及びＵＡＳ－Ａβ４２を使用した。Ｏｒｅｇｏｎ－ＲをＧＭＲ－ＧＡＬ４と交配させることによってＧＭＲ－ＯｒｅＲを生産し、ＵＡＳ－Ａβ４２をＧＭＲ－ＧＡＬ４と交配させることによって形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）を生産した。全てのショウジョウバエ群は２５℃の環境で生育し、交配条件は３０℃に維持した。

【0021】

実施例２－２：実験ショウジョウバエ群に対するエサ供給
形質転換処理前に、全ての実験のためのショウジョウバエ群は１８℃の環境で生育し、これらに一般エサを供給した。前記一般エサは、沸かしたトウモロコシ澱粉（Ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ）４％（ｗ／ｖ）、ポレンタ（Ｐｏｌｅｎｔａ）５％（ｗ／ｖ）、黄砂糖（Ｂｒｏｗｎ ｓｕｇａｒ）１０％（ｗ／ｖ）、寒天（Ａｇａｒ）０．７％（ｗ／ｖ）、熱処理された死んだ酵母（ｈｅａｔ－ｋｉｌｌｅｄ ｙｅａｓｔ）５％（ｗ／ｖ）、ニパギン（Ｎｉｐａｇｉｎ）３％（ｗ／ｖ）及びプロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）０．７％（ｖ／ｖ）を混合し、これを無菌プラスチックバイアルに移し替えた後、冷却及び固体化させることによって製造した。形質転換過程で、同一のエサは、ニパギン及びプロピオン酸なしで製造され、エサの冷却過程で固体化直前にラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５（１×１０^１１ＣＦＵ／ｍｌ）を添加した。それぞれのエサは、供給前に新鮮な状態で準備した。正常種及び形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）は一般エサで生育された。その一方で、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５が供給された形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）は、乳酸菌を含むエサで生育された。子孫ショウジョウバエは、分析のためにそれぞれのグループから１０日後に収集された。

【0022】

実施例２－３：実験結果
ショウジョウバエは、哺乳類と類似するが、単純な中枢神経系を共有することによって、神経研究におけるショウジョウバエのうちキイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）の使用は、この分野で重要な突破口となった。よって、本実験では、ショウジョウバエ群としてキイロショウジョウバエ（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）を使用した。また、本発明に係るラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含む培養液組成物は、汎網膜（ｐａｎ－ｒｅｔｉｎａｌ）ＧＭＲ－ＧＡＬ４ドライバーを用いて、複眼でヒトＡβ４２を異所性に発現するキイロショウジョウバエ（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）を対象にして実験した。

【0023】

図１は、正常エサが供給されたＧＭＲ－ＯｒｅＲの眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真で、図２は、正常エサが供給された形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）の眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真で、図３は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５培養液が含有された、正常エサが供給された形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）の眼の形態を８００倍の倍率で撮影した写真である。

【0024】

図１乃至図３で確認できるように、正常エサを供給したＧＭＲ－ＯｒｅＲ（対照群）の眼の形態では、小さい六角形の形状が規則的に配列され、前記六角形の形状の間に剛毛が形成されている。しかし、正常エサを供給した形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）（陰性対照群）では、粗眼表現型（ＲＥＰ）を特徴とする強い神経退行表現型が現れた。陰性対照群に比べると、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５（１×１０^１１ＣＦＵ／ｍｌ）を含む、正常エサを供給した形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）では、それぞれの単位が小さい六角形の形状を有しながら可視的な毛穴が少なく見える単眼（Ｏｍａｔｉｄｉａ）が観察され、剛毛の数が大きく増加し、剛毛の角度が調整されたことを示した。

【0025】

【表1】

【0026】

前記表１は、図１乃至図３と関連して、粗眼表現型に対する構造効果の程度を示した表である。表１で確認できるように、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５の供給でＡβ４２が減少することによって、神経毒効果が低減することを示した。前記低減効果の段階は、六角形の形状の複眼及び単眼（Ｏｍａｔｉｄｉａ）の穴で非常に著しく現れた。

【0027】

図４は、Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ距離行列をベースにした微生物群集の主要座標分析（ＰｃｏＡ）を示したグラフで、図５は、他の処理群で観察された属内の相対的存在量を示すショウジョウバエの腸内微生物学的特性を示すグラフである。図４及び図５において、Ｎｆは、正常エサを供給した形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）（陰性対照群）で、Ｐｒｏｂｉｏ６５は、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５（１×１０^１１ＣＦＵ／ｍｌ）を含む、正常エサを供給した形質転換ショウジョウバエ（ＧＭＲ－Ａβ４２）（Ｐｒｏｂｉｏ６５処理群）で、Ｃｏｎｔｒｏｌは、正常エサを供給したＧＭＲ－ＯｒｅＲ（対照群）を示す。

【0028】

図４で確認できるように、腸内微生物群の分析結果、Ｐｒｏｂｉｏ６５処理群は、陰性対照群よりも対照群とさらに類似することを示した。また、図５で確認できるように、形質転換ショウジョウバエにラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を処理した後、Ｐｒｏｂｉｏ６５処理群における寄生菌の一種であるボルバキア（Ｗｏｌｂａｃｈｉａ）の相対的豊富度は３７．９％減少した一方で、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ＿１）は、Ｐｒｏｂｉｏ６５処理群でのみ高い数値を示した。ボルバキアは、キイロショウジョウバエ（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）でアルツハイマー病の始まりとなったり、病因に支配的な菌であるので、アルツハイマー病に潜在的なバイオマーカーとして報告されている。さらに、ボルバキアは、神経退行性疾患、特に、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病とほとんどの関連性を有する。コリネバクテリウムは、グルタミン酸（Ｇｌｕｔａｍａｔｅ）の生成と関連している。アルツハイマー病を有する患者達に対する事前準備調査に基づくとき、アルツハイマー病患者達は、低いプラズマＤ－グルタミン酸（Ｐｌａｓｍａ Ｄ－ｇｌｕｔａｍａｔｅ）レベルを有することが報告された。また、脳での減少したＤ－グルタミン酸レベルは、アルツハイマー病での認知障害と関連している。このようなデータは、アルツハイマー病を有する患者達の精神健康におけるＤ－グルタミン酸の重要性を浮き彫りにする。そして、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５は、形質転換ショウジョウバエの内臓に存在するコリネバクテリウムの増殖を向上させ、潜在的にグルタミン酸の生成を促進させる。よって、前記形質転換ショウジョウバエは、重要なアルツハイマー病の緩和効果を示した。上記の実験結果から、ラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５は、腸内微生物のプロファイルと腸内代謝体組成物の変化を通じてショウジョウバエの眼の欠陥で発現される神経退行現象を改善する効果を有することを確認できた。

【0029】

以上で、本発明の好適な実施例に対して説明したが、本発明は、上述した特定の実施例に限定されない。すなわち、本発明の属する技術分野で通常の知識を有する者であれば、添付の特許請求の範囲の思想及び範疇を逸脱することなく、本発明に対する多数の変更及び修正が可能であり、そのような全ての適切な変更及び修正は、本発明の範囲に属するものと見なすべきであろう。

【産業上の利用可能性】

【0030】

本発明のラクトバチルス・サケイＰｒｏｂｉｏ－６５を含む組成物は、アルツハイマー病を緩和させるための用途を有し、微生物又はその培養液の形態で各種の医薬組成物、食品組成物、化粧品及び飼料組成物に使用され得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【国際調査報告】