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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-05
(54)【発明の名称】サイズ制御放射標識粒子
(51)【国際特許分類】
A61K 51/00 20060101AFI20230928BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20230928BHJP
A61K 47/04 20060101ALI20230928BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20230928BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20230928BHJP
A61K 33/241 20190101ALI20230928BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20230928BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230928BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230928BHJP
【ＦＩ】
A61K51/00
A61K9/14
A61K47/04
A61K47/24
A61K33/24
A61K33/241
A61K9/10
A61P35/00
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023516758
(86)(22)【出願日】2021-09-15
(85)【翻訳文提出日】2023-05-12
(86)【国際出願番号】 EP2021075300
(87)【国際公開番号】W WO2022058337
(87)【国際公開日】2022-03-24
(31)【優先権主張番号】20196202.4
(32)【優先日】2020-09-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】21165246.6
(32)【優先日】2021-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517455465
【氏名又は名称】オンコインベント アクスィエ セルスカプ
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】ロイ ホー．ラルセン
(72)【発明者】
【氏名】ティナ ベー．ベーンスドルフ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA22
4C076AA31
4C076BB11
4C076CC27
4C076DD25B
4C076DD63
4C076GG12
4C076GG16
4C084AA19
4C084MA23
4C084MA41
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C085KB02
4C085KB05
4C086AA01
4C086AA02
4C086HA04
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA23
4C086MA41
4C086NA05
4C086ZB26
(57)【要約】
本開示は、崩壊性化合物と、放射性核種と、およびリン含有添加剤とを含んでいる粒子に関する。リン含有添加剤、例えば、ホスホネートは、医療用途に対する粒子のサイズを制御する特有の能力をもっている。特に、がん分野において、当該用途は、医薬品としての粒子の使用、およびイメージングを可能にする。
図１は、前記要約と合わせて読むべきである。
図１は、前記要約と合わせて読むべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでいる粒子であって、前記崩壊性化合物が、ＣａＣＯ３を含んでおり、そして、
前記リン含有添加剤が、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、環状ポリホスフェート、ホスホネート、ビスホスホネート、およびポリホスホネートからなる群より選ばれる、前記粒子。
【請求項2】
前記リン含有添加剤が、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）および／またはパミドロネートである、請求項１に記載の粒子。
【請求項3】
前記リン含有添加剤が、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）である、請求項１又は２に記載の粒子。
【請求項4】
前記放射性核種が、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２２７Ｔｈ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｏ、２０８Ｔｌ、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなる群より選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項5】
前記放射性核種が、プロジェニー放射性核種である２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌを伴う２１２Ｐｂである、αプロジェニーを伴う治療に適したβ放射体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項6】
前記放射性核種が、プロジェニー放射性核種である２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌを伴う、α放射体２２４Ｒａからなる群より選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項7】
前記放射性核種が、２２４Ｒａであり、前記リン含有添加剤が、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）である、請求項１～６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項8】
前記放射性核種が、２１２Ｐｂであり、そして、前記リン含有添加剤が、パミドロネートである、請求項１～６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項9】
前記粒子のサイズが、１ｎｍから５００μｍである、請求項１～８のいずれか１に記載の粒子。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか１項に記載の粒子を１または複数含んでいる組成物。
【請求項11】
さらに、希釈剤、担体、界面活性剤、および／または賦形剤を含んでいる医薬品組成物である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項12】
前記リン含有添加剤が、組成物または懸濁液中に存在することで、粒子の部分として存在することで、粒子の表面上に存在することで、粒子の分散中に存在することで、組成物または懸濁液および／または粒子の分散の部分として存在することで、または粒子の部分および組成物または粒子懸濁液の部分として存在することで、例えば、粒子中または上に０．０１-８０％存在することで、粒子と会合している、請求項１０又は１１に記載の組成物。
【請求項13】
投与量当たり１ｋＢｑから１０ＧＢｑである放射性核種の量で、または複数回投与の工業規模生産に適した５０ＭＢｑから１００ＧＢｑである放射性核種の量で調製された、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項14】
前記組成物が、請求項１～９のいずれか一項に記載の単分散または多分散の粒子を含んでいる粒子懸濁液である、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項15】
非経口使用、例えば、静脈内注射、腔内注射、および／または腫瘍内注射に適している、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
医薬品としての使用のための、請求項１～９のいずれか１項に記載の粒子、または請求項１０～１５のいずれか１項に記載の組成物または医薬品組成物。
【請求項17】
がん治療における使用のための、請求項１～９のいずれか１に関する粒子、または請求項１０～１５のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、前記がんが、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん、および非空洞性の標的、例えば、メラノーマ、非小細胞肺がんからなる群より選択される、粒子、組成物、または医薬品組成物。
【請求項18】
他のがん治療、例えば、化学療法（タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、プラチン（例えば、カルボプラチン、シスプラチン）、ドキソルビシン、マイトマイシン））、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミド）、および放射線免疫療法との組み合わせにおいて使用される、請求項１５～１７に記載の使用のための、請求項１～９のいずれか１に記載の粒子、または請求項１０～１５のいずれか１項に記載の組成物または医薬品組成物。
【請求項19】
ホスホネートおよび／またはホスフェート化合物の前記濃度が、１ｍｌ当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラム、例えば、最終溶液１ｍｌ当たり、０．１ｍｇから１０ｍｇ、または、最終溶液中の粒子１グラム当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラムである、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の組成物または医薬品組成物。
【請求項20】
前記方法が、放射性核種の担体を使用するかまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる、請求項１～７のいずれか１に関する粒子の調製方法。
【請求項21】
崩壊性化合物および放射性核種は、初めのステップにおいて、粒子を形成し、その後、当該粒子は、リン含有添加剤によってコーティングされるか、または少なくとも部分的に当該粒子と会合されているリン含有添加剤を伴っており、例えば当該粒子内に取り込まれたリン含有添加剤を伴っている、請求項２０に記載の粒子を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、崩壊性化合物と、放射性核種と、およびリン含有添加剤とを含んでいる粒子に関する。リン含有添加剤、例えば、ホスホネートおよびホスフェートは、医療適用に対する粒子のサイズを制御する特有の能力をもっている。特に、がん分野において、当該適用は、医薬品としての粒子の使用、およびイメージングを可能にする。
【背景技術】
【0002】
放射標識されたマイクロ粒子は、がんの放射線治療および放射線滑膜切除術（すなわち、滑膜炎の治療のために、関節内に微小放射活性粒子を注入）を伴う関節炎の治療における痛みの治療での使用に対して、有望性を示している。
【0003】
ゆっくり崩壊するナノサイズ粒子およびマイクロサイズ粒子を使用することが望ましい。そして、この目的のために、非毒性塩の結晶粒子が有望である。これらの結晶粒子は、経時的に形態及びサイズ、特に懸濁液中の時に、不安定となりうる。粒子が、好収率で放射標識されうること、および粒度分布および結晶粒子の形態が、患者の体内に注射するために経時的に安定であることが重要である。
【0004】
いくつかの適用において、放射線治療の粒子懸濁液を投与する前に、粒子の体内分布を知っておくことは、有用となりうる。in vivoで、粒子分布のイメージングを可能にするため、イメージングに適切な放射性核種で放射標識された安定化した粒子でできている粒子は、この目的のため、有用となりうる。決定された粒度分布の粒子は、異なる体内区画における液体分布を評価するイメージング目的に対して有用となりうる。そして、決定された粒度分布の粒子は、ある種のがんの特異的治療のために、適用され、かつ設計されうる。
【0005】
医療用途のためのその様な粒子に必要なものは、粒子サイズをコントロールすること、および意図した使用のために最適化するように設計されることに関する。粒子は、非崩壊性でも崩壊性でもありうる。非崩壊性粒子を使用することで、利点は、全身毒性の低いリスクでありうる。不利点は、潜在的により不均一な放射線量分布、およびホットスポットからのいくつかの局所的な毒性リスクを含んでいる。原発腫瘍および肝臓への転移の治療のため、非崩壊性のガラススフィアー（ＴｈｅｒａＳｐｈｅｒｅ）（登録商標）またはレジンベーススフィアー（ＳＩＲ－Ｓｐｈｅｒｅ）（登録商標）で安定的にラベルされた高エネルギーβ放出物質９０Yを使用した放射線塞栓術のために、安定した放射線治療粒子は使用されている。この場合には、肝臓組織は、腸などに対する有毒な放射に対して、保護されるであろう。
【0006】
いくつかの放射性核種をゆっくりと放出する崩壊性粒子を使用することで、ありうる利点としては、親核種および／または短命の娘核種の改善された拡散による、より均一な放射線量分布と、局所毒性を引き起こす「ホットスポット」の傾向がより低いこととが挙げられる。ありうる不利点としては、放出された放射性核種の血液への起こりうる運搬、およびさらなる再分配のため生じる全身毒性の潜在的な可能性が挙げられる。崩壊性粒子は、化学療法薬のような他の細胞毒性化合物に主に使用され、そして、現在、放射性核種には使用されていない。
【0007】
放射標識された崩壊性結晶粒子の主な問題点は、懸濁液において、経時的に／保存中に、再結晶および粒子サイズの不安定性であり、その割合は、エネルギー入力、例えば、オートクレーブによって、増加されうる。粒子は、様々な懸濁液中において、経時的に、そしてまた生理食塩水、PBS、TRISを含んでいる試験されるすべての一般的な溶液中においてオートクレーブしたときにも、粒度分布および形態を変化しうる。
【0008】
従って、非毒性塩でできている粒子を基盤とした放射性核種の改善されたデリバリーシステムは、医療適用に対して興味深く、そして、崩壊性粒子のサイズを安定化する方法は請け負われている。
【発明の概要】
【0009】
その幅広い態様において、本発明は、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでいる粒子に関する。
【0010】
崩壊性化合物は、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、ＳｒＣＯ３、ＢａＣＯ３、ハイドロキシアパタイトＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）およびフルオロアパタイトを含んでいるカルシウムホスフェート、および主要成分としてこれらのいずれかを伴う複合物からなる群から選択されうる。崩壊性化合物は、ＣａＣＯ３である。
【0011】
リン含有添加剤は、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、および環状ポリホスフェートからなる群から選択されるホスフェートでありうる。
【0012】
ポリホスフェートは、ピロホスフェート、トリポリホスフェートおよびトリホスホノホスフェートからなる群から選択されうる。リン含有添加剤は、環状ポリホスフェート、例えば、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）でありうる。リン含有添加剤は、ホスホネートでありうる。ホスホネートは、ビスホスホネートでありうる。ビスホスホネートは、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、およびゾレドロネートからなる群から選択されうる。ホスホネートは、ポリホスホネートでありうる。ポリホスホネートは、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）及びＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）からなる群から選択されうる。
【0013】
放射性核種は、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２２７Ｔｈ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏ、２０８Ｔｌ、１８Ｆ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、６４Ｃｕ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなる群から選択されうる。放射性核種は、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａ及び２２７Ｔｈからなる治療に適しているα放射線核種からなる群から選択されうる。放射性核種は、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙからなる治療に適しているβ放射線核種からなる群から選択されうる。放射性核種は、治療に適したαプロジェニーである２１２Ｐｂを伴うβ放射体でありうる。放射性核種は、α放射体２２４Ｒａとそのプロジェニー放射性核種である２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌからなる群から選択されうる。放射性核種は、１８Ｆ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、６４Ｃｕ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなるイメージングに適している放射性核種からなる群から選択されうる。
【0014】
粒子サイズは１ｎｍから５００μｍでありうる。
【0015】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾ＣａＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＣａＣＯ３、炭水化物修飾ＣａＣＯ３、脂質修飾ＣａＣＯ３、ビタミン修飾ＣａＣＯ３、有機化合物修飾ＣａＣＯ３、ポリマー修飾ＣａＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＣａＣＯ３からなる群から選択されうる。
【0016】
本発明の１つの態様は、本発明の１または複数の粒子を含んでいる組成物に関する。
【0017】
組成物は、本発明の１または複数の粒子、および希釈剤、担体、界面活性剤、および／または賦形剤を含んでいる医薬品組成物となりうる。
【0018】
本発明の組成物は投与量当たり１ｋＢｑから１０ＧＢｑである放射性核種の量で、または複数投与商業規模生産に適した５０ＭＢｑから１００ＧＢｑである放射性核種の量で調製されうる。
【0019】
組成物は、本発明の単分散の粒子または多分散の粒子を含んでいる粒子懸濁液でありうる。
【0020】
本発明の組成物は、非経口での使用、例えば、静脈注射、腔内注射、および／または腫瘍内注射に適しうる。
【0021】
本発明の１つの態様は、医薬品としての使用するための本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。
【0022】
本発明の１つの態様は、腔内治療、放射線塞栓術、または放射線滑膜切除術における使用のための本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。
【0023】
本発明の１つの態様は、がんの治療における使用に対する本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。
【0024】
本発明の１つの態様は、がんの治療における使用に対する本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物であって、前記がんは、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん、非空洞性の標的、例えば、メラノーマ、非小細胞肺がんからなる群から選択される、前記粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。
【0025】
本発明の１つの態様は、イメージングにおける使用に対する本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。
【0026】
本発明の１つの態様は、本発明に関する使用のための、本発明の粒子、組成物、または医薬組成物に関しており、当該粒子、組成物又は医薬組成物は、他のがん治療、例えば、化学療法（タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、プラチン（例えば、カルボプラチン、シスプラチン）、ドキソルビシン、マイトマイシン））、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミド）、および放射線免疫療法とを組み合わせて使用される。
【0027】
ホスホネートおよび／またはホスフェート化合物の濃度は、ｍｌ当たり１マイクログラムから１０００ミリグラム、例えば、最終溶液ｍｌ当たり、０．１ｍｇから１０ｍｇ、または最終溶液中の1グラム粒子あたり、１マイクログラムから１０００ミリグラムである。
【0028】
本発明の１つの態様は、本発明に関する粒子の調製に対する方法に関しており、当該方法は、放射性核種の担体を使用するまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる。崩壊性化合物および放射性核種は、初めのステップにおいて粒子を形成しうる。そして、粒子は、リン含有添加剤によって、サイズが制御されている。
【0029】
［発明の詳細な説明］
本発明者は、リン含有添加剤の適用によって、崩壊性化合物によりできており、かつ放射性核種を含んでいる粒子の調製および維持において、いくつかの有益な効果を加えられることを、驚くべきことに発見している。そのような化合物は、しばしば非毒性塩であり、例えば、非毒性塩の結晶粒子である。本粒子は、がん治療およびイメージングを含んでいる多くの医療適用に対して有益である。
本発明者は、リン含有添加剤の適用によって、崩壊性化合物によりできており、かつ放射性核種を含んでいる粒子の調製および維持において、いくつかの有益な効果を加えられることを、驚くべきことに発見している。そのような化合物は、しばしば非毒性塩であり、例えば、非毒性塩の結晶粒子である。本粒子は、がん治療およびイメージングを含んでいる多くの医療適用に対して有益である。
【0030】
有益な効果のいくつかは、経時的に、および高温（例えば、オートクレーブの間）でも安定であることを含んでいる。安定性は、粒度分布、形態を維持するために、粒子に会合した放射性核種の放出を引き起こさないために高められる。そのようなパラメータは、臨床用途を意図されている製品の製造、輸送、および保管においてかなり重要である。粒子が、それらの意図した使用を基盤として設計されうることを理解することはまた重要である。そのうえ、例えば、放射線塞栓術における使用のために大きい粒子を設計することは可能である。そして、大きい粒子は、そのサイズにより、腫瘍を取り囲んでいる血管中に捕捉される。一方で、マイクロ粒子は、空洞の治療に対して適用されうる。そして、マイクロ粒子が膜（例えば、腹膜）を素早く通過することを妨げることが望まれており、そしてナノ粒子は、静脈内の使用に必要とされる。リン含有添加剤、例えば、ビスホスホネート、ポリホスホネート、およびポリホスフェートは、粒子安定剤として使用することができ、、それによって、粒度分布を維持でき、そして、放射性核種が会合されている粒子の放出をすることがないということは、予測できない発見であった。１２０ｏＣでオートクレーブし、室温で数日間保存した後、本マイクロ粒子は、そのサイズおよび放射標識を維持していた。これにより、無菌生産が可能になり、並びに輸送のためや、臨床用途（実施例６、７および１１参照）のための放射標識された粒子懸濁液の操作のための時間も許容される。
【0031】
従って、本粒子および本発明の組成物は、懸濁液中に、経時的に、および／または保管しているときに、増加した安定性と、粒子再結晶予防という有益な技術の利点を持っている。例えば、エネルギー入力であるオートクレーブにより、再結晶の割合、およびサイズ変化の割合は、増加されうる。本粒子は、様々な懸濁液中において、経時的に、及び生理食塩水、PBS、TRISを含んでいるすべての一般的な溶液試験において、オートクレーブされた時にも、粒度分布および形態を変化するであろう。それゆえに、リン含有添加剤は、組成物または懸濁液中において、粒子の安定性を増加するために使用されうる。それゆえに、リン含有添加剤は、経時的に、および／またはオートクレーブのような増加されたエネルギー入力を伴う、粒子の再結晶の予防に使用されうる。
【0032】
従って、本発明は、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでいる粒子に関する。リン含有添加剤は、粒子中に取り込まれうる、粒子表面と会合されうる、もしくは、粒子の周辺に存在しうる。すなわち、本粒子は、組成物または懸濁液の一部である。従って、本発明の１つの態様は、粒子を含んでいる組成物または懸濁液であって、本粒子は、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでおり、前記リン含有添加剤は、組成物または懸濁液中に存在することで、粒子と結合している、前記組成物又は懸濁液に関する。その存在は、粒子の一部としてありうる。その存在は、粒子の表面に存在しうる。その存在は、粒子の分散中にありうる。その存在は、組成物または懸濁液、および／または粒子の分散の一部としてありうる。その存在は、粒子の一部としても、および組成物または粒子の懸濁液の一部としてもありうる。これらの個々の成分は、粒子の意図された使用に応じた異なる性質を持っている粒子の異なるタイプ中に混合されうる。これは、リン含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰおよび／またはパミドロネートが、少なくとも微小量で発見されるであろうこと、または個別の粒子と結合しているであろうことを意味している。それゆえに、もし、組成物中、たとえば、溶液中の粒子が、リン含有添加剤の内容を試験された場合、通常、リン含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰおよび／またはパミドロネートは、少なくとも粒子表面に、または粒子内において発見されうる。リン含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰおよび／またはパミドロネートの組成物中（例えば溶液）の合計量は、粒子設計に応じて様々であるが、組成物中のリン含有添加剤の合計量の少なくとも０.０１-８０％が、粒子内または粒子表面に存在し、残りの部分は、組成物中に存在することを意味する。組成物中の、粒子内または粒子表面上に存在するリン含有添加剤の合計量の少なくとも０.０１-８０％は、０.１-５０％、例えば、１０-５０％、例えば、２０-８０％、例えば、１０-８０％でありうる。
【0033】
崩壊性化合物
本発明の崩壊性化合物は、崩壊されうる任意の化合物でありうる。前記崩壊は、高ｐＨ、低ｐＨ、温度、プロテアーゼ、酵素、ヌクレアーゼ、および／またはファゴサイトーシスをも含んでいる、エンドサイトーシスのような細胞プロセスに起因するものからなる群から選択される任意の経路によって、起こりうる。それゆえに、崩壊性化合物は、非毒性塩、または非毒性塩の結晶でありうる。本発明の１または複数の実施形態において、崩壊性化合物は、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、ＳｒＣＯ３、ＢａＣＯ３、ハイドロキシアパタイトＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）およびフルオロアパタイトを含んでいるカルシウムホスフェート、および主要成分としてこれらのいずれかを伴う複合物からなる群から選択されうる。主要成分は、本粒子の合計分子量の少なくとも２０％と定義されており、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも３０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも４０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも５０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも６０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも７０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも８０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９５％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９８％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９９％である。
本発明の崩壊性化合物は、崩壊されうる任意の化合物でありうる。前記崩壊は、高ｐＨ、低ｐＨ、温度、プロテアーゼ、酵素、ヌクレアーゼ、および／またはファゴサイトーシスをも含んでいる、エンドサイトーシスのような細胞プロセスに起因するものからなる群から選択される任意の経路によって、起こりうる。それゆえに、崩壊性化合物は、非毒性塩、または非毒性塩の結晶でありうる。本発明の１または複数の実施形態において、崩壊性化合物は、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、ＳｒＣＯ３、ＢａＣＯ３、ハイドロキシアパタイトＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）およびフルオロアパタイトを含んでいるカルシウムホスフェート、および主要成分としてこれらのいずれかを伴う複合物からなる群から選択されうる。主要成分は、本粒子の合計分子量の少なくとも２０％と定義されており、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも３０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも４０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも５０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも６０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも７０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも８０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９０％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９５％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９８％、例えば、本粒子の合計分子量の少なくとも９９％である。
【0034】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾ＣａＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＣａＣＯ３、炭水化物修飾ＣａＣＯ３、脂質修飾ＣａＣＯ３、ビタミン修飾ＣａＣＯ３、有機化合物修飾ＣａＣＯ３、ポリマー修飾ＣａＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＣａＣＯ３からなる群から選択されるＣａＣＯ３でありうる。
【0035】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾ＭｇＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＭｇＣＯ３、炭水化物修飾ＭｇＣＯ３、脂質修飾ＭｇＣＯ３、ビタミン修飾ＭｇＣＯ３、有機化合物修飾ＭｇＣＯ３、ポリマー修飾ＭｇＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＭｇＣＯ３からなる群から選択されるＭｇＣＯ３でありうる。
【0036】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾ＳｒＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＳｒＣＯ３、炭水化物修飾ＳｒＣＯ３、脂質修飾ＳｒＣＯ３、ビタミン修飾ＳｒＣＯ３、有機化合物修飾ＳｒＣＯ３、ポリマー修飾ＳｒＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＳｒＣＯ３からなる群から選択されるＳｒＣＯ３でありうる。
【0037】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾ＢａＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＢａＣＯ３、炭水化物修飾ＢａＣＯ３、脂質修飾ＢａＣＯ３、ビタミン修飾ＢａＣＯ３、有機化合物修飾ＢａＣＯ３、ポリマー修飾ＢａＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＢａＣＯ３からなる群から選択されるＢａＣＯ３でありうる。
【0038】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、炭水化物修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、脂質修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、ビタミン修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、有機化合物修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、ポリマー修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）、および／または無機結晶修飾Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）からなる群から選択されるＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）でありうる。
【0039】
崩壊性化合物は、ＰＥＧ修飾フルオロアパタイト、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾フルオロアパタイト、炭水化物修飾フルオロアパタイト、脂質修飾フルオロアパタイト、ビタミン修飾フルオロアパタイト、有機化合物修飾フルオロアパタイト、ポリマー修飾フルオロアパタイト、および／または無機結晶修飾フルオロアパタイトからなる群から選択されるフルオロアパタイトでありうる。
【0040】
本複合物粒子は、上記の定義の通り、結合されている主要な成分である２または複数のこれらの崩壊性化合物を含んでいてもよい。
【0041】
本崩壊性化合物は、他の塩またはタンパク質またはペプチドと共に複合物として使用されてもよく、そして、オレエートおよび類似物のような界面活性剤によって表面修飾を受けていてもよい。
【0042】
特別の実施形態において、本崩壊性化合物は、本崩壊性化合物のポリエチレングリコール（PEG）修飾粒子または無機結晶修飾崩壊性化合物からなる群から選択される化合物と共に使用される。
【0043】
特別の実施形態において、本崩壊性化合物は、機能性レセプターおよび／またはモノクローナル抗体および誘導体を含んでいる抗原基や、ビタミン及び誘導体で修飾されておりレセプターや抗原が、粒子を、個別の標的細胞及び疾患組織へ結合させる。これは、本粒子の修飾が、他の化合物の崩壊性化合物への付加に関することを意味する。これは、様々な方法において、そして、相互作用、例えば、双極子ー双極子相互作用、イオン双極子およびイオン誘導双極子力、水素結合、ファンデルワールス力、および力の相対的強弱度（relative strength of forces）によって起こりうる。
【0044】
キレート剤は、標的親和分子、例えば、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体または抗体誘導体、ビタミンまたはビタミン誘導体と優先的に結合されて、使用されうる。
【0045】
モノクローナル抗体(mAbs)、ポリクローナル抗体(pAbs)、抗原結合断片(Fabs)および他のタイプのポリペプチドおよびタンパク質は、特定の標的化を本粒子内に含めるために使用することができ、すなわち、特定標的分子を添加することによって、本粒子は、体内のある標的細胞に対する親和性を高めることができるであろう。
【0046】
リン含有添加剤
リン含有添加剤は、ホスフェートでもよく、従って、ホスフェート含有添加剤にもなりうる。リン含有添加剤は、ホスホネートでもよく、従って、ホスホネート含有添加剤にもなりうる。
リン含有添加剤は、ホスフェートでもよく、従って、ホスフェート含有添加剤にもなりうる。リン含有添加剤は、ホスホネートでもよく、従って、ホスホネート含有添加剤にもなりうる。
【0047】
ホスホネートおよびホスホン酸は、Ｃ―ＰＯ（ＯＨ）２またはＣ―ＰＯ（ＯＲ）２基（Ｒ＝アルキル、アリル）を含んでいる有機リン化合物である。ホスホン酸は、一般に塩として取り扱われ、有機溶媒への溶解性は悪いが、水および一般のアルコールへの溶解性はある、一般的な不揮発性の固体である。従って、ホスホネートの様々な塩および酸は、ホスホネートの定義の一部と理解される。
【0048】
一般的に、リン酸は、それぞれのリン原子の酸化度が＋５で、４つの酸素原子と結合しており、そのうちの１つが２重結合であり、正四面体の頂点に配置されている、リンオキソ酸である。プロトンＨ＋として水素原子を取り除くと、リン酸はホスフェートアニオンになる。一部の除去は、様々な水素ホスフェートアニオンをもたらす。
【0049】
リン含有添加剤は、ホスホネートであり得る。ホスホネートはビスホスホネートであり得る。ビスホスホネートは、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、およびゾレドロネートからなる群から選択されうる。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、エチドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、クロドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、チルドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、パミドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、ネリドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、オルパドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、アレンドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、イバンドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、リセドロネートである。本発明の１または複数の実施形態において、ビスホスホネートは、ゾレドロネートである。
【0050】
ホスホネートはポリホスホネートであり得る。ポリホスホネートは、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）及びＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）からなる群から選択されうる。本発明の１または複数の実施形態において、ホスホネートは、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）である。本発明の１または複数の実施形態において、ホスホネートは、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）である。本発明の１または複数の実施形態において、ホスホネートは、ＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）である。
【0051】
１つの実施形態において、本発明の粒子は、崩壊性化合物としてＣａＣＯ３を、リン含有添加剤としてＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）を、放射性核種として２２４Ｒａを含んでいる。
【0052】
１つの実施形態において、本発明の粒子は、崩壊性化合物としてＣａＣＯ３を、リン含有添加剤としてパミドロネートを、放射性核種として２１２Ｐｂを含んでいる。
【0053】
ホスフェート含有添加剤は、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、および環状ポリホスフェートからなる群から選択されうる。ポリホスフェートは、ピロホスフェート、トリポリホスフェートおよびトリホスホノホスフェートからなる群から選択されうる。リン含有添加剤は、環状ポリホスフェート、例えば、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）でありうる。
【0054】
ホスホネート化合物および／またはホスフェート化合物の濃度は、ｍｌ当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラム、例えば、最終溶液ｍｌ当たり、０．１ｍｇから１０ｍｇ、または最終溶液中の１グラム粒子あたり１マイクログラムから１０００ミリグラムである。実施例６において使用された粒子および方法を用いると、１グラムＣａＣＯ３当たり０．００１－０．０４６グラムのＥＤＴＭＰの範囲で試験を実施し、サイズ制御を得るためには、１グラムＣａＣＯ３粒子あたり、少なくとも、０．０１３グラムのＥＤＴＭＰが必要であった。ＳＨＭＰおよびパミドロネートに対して、濃度を試験して、１グラムＣａＣＯ３当たり０．０１５－０．２００グラムのＳＨＭＰ、および１グラムＣａＣＯ３当たり０．００８－０．０１６グラムのパミドロネートが、多分散懸濁液中のサイズの安定化に寄与していた。実施例１２（図５）は、少なくとも１％のＥＤＴＭＰの添加が、マイクロ粒子のサイズ制御に寄与することを示す。
【0055】
従って、ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰに対して、患者服用量の範囲は、ｍＬ当たり、１ｕｇから１ｇ、またはｇ粒子当たり、１ｕｇから１ｇであり得る。例えば、患者服用量は、２．５ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／グラムＣａＣＯ３のような崩壊性化合物でありうる。ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰの添加は、０．１－１０％でありうる。前記添加は、０．５－５％または０．５－２％でもありうる。前記添加は、少なくとも１％でありうる。
【0056】
ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰは、１０ｍｌ製品当たり、２４．４ｍｇ ＥＤＴＭＰのようなホスフェート含有添加剤の濃度において使用されうる。例えば、１０ｍＬ製品当たり、２０から３０ｍｇの範囲である。
【0057】
ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰは、賦形剤としても使用されうり、最終濃度５．６ｍＭ（２．４４ｍｇ／ｍＬ）で、４．６－６．６ｍＭの範囲である。
【0058】
ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰは、２４．４ｍｇ／ｇ炭酸カルシウム、または１グラム炭酸カルシウム当たり、１０ｍｇ-５０ｍｇの範囲で使用される。
【0059】
ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰは、２．４％ｗ／ｗで使用されてもよく、その範囲は、１－２０％ｗ／ｗである。
【0060】
ＥＤＴＭＰのようなホスフェート含有添加剤の量は、１０ｍｌ製品当たり、２４．４ｍｇでもよい。
【0061】
ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰまたはＥＤＴＭＰＡ（酸）は、５．６ｍＭ （２．４４ｍｇ／ｍＬ）の濃度で賦形剤として使用されうる。
【0062】
ＥＤＴＭＰまたはＥＤＴＭＰＡ（酸）のようなホスフェート含有添加剤の濃度は、５．６ ｍＭ±１５％であってもよい。
【0063】
ホスホネート含有添加剤、例えば、パミドロネートに対して、患者服用量の範囲は、ｍＬ当たり１ｕｇから１ｇ、またはｇ粒子当たり１ｕｇから１ｇであってもよい。例えば、患者服用量は、２．５ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／１グラムＣａＣＯ３のような崩壊性化合物であってもよい。ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートの添加は、０．１－１０％であってもよい。前記添加は、０．５－５％または０．５－２％であってもよい。前記添加は、少なくとも１％であってもよい。
【0064】
ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートは、１０ｍｌ製品当たり、１０ｍｇホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートの濃度において使用されてもよい。例えば、その範囲は、１０ｍｌ製品当たり、５から５０ｍｇの範囲である。
【0065】
ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートは、最終濃度４ｍＭ （１ｍｇ／ｍＬ）で賦形剤として使用されてもよい。その範囲は、０．１－１０ｍＭである。
【0066】
ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートは、０．０１ｇ／ｇ炭酸カルシウム、または１ｍｇ-５０ｍｇ／１グラム炭酸カルシウムの範囲で使用されてもよい。
【0067】
ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートは、１％ｗ／ｗで使用されてもよい。その範囲は、０．１－５％ｗ／ｗである。
【0068】
パミドロネートのようなホスフェート含有添加剤の量は、１０ｍｌ製品当たり１０ｍｇであってもよい。
【0069】
ホスフェート含有添加剤、例えば、パミドロネートまたはパミドロン酸は、４ｍＭ（１ｍｇ／ｍＬ）の濃度で賦形剤として使用されてもよい。
【0070】
パミドロネートまたはパミドロン酸のようなホスフェート含有添加剤の濃度は、４ｍＭ±２５％であってもよい。
【0071】
実施例１３は、沈降速度が、粒子サイズの縮小により、減少されることを示している。製品の臨床投与における利点を有する、懸濁液の取り扱いに対する改善された特徴がある。それゆえに、ホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰの添加は、粒子サイズの縮小による、沈降速度に対して重要な影響を与えうる。実施例１４は、層被包の有無によるＣａＣＯ３マイクロ粒子上の２１２Ｐｂおよび ２２４Ｒａの保持比較を示し、特に２１２Ｐｂの保持が、製品におけるホスフェート含有添加剤、例えば、ＥＤＴＭＰに層を添加することで、どのように改善されるかを示している。実施例１５の例は、異なる量の層被包マイクロ粒子およびフリーラジウム２２４の間のラジウム２２４および鉛２１２（ｌｅａｄ－２１２）両方の体内分布の比較を示す。骨の減少されたレベルは、マイクロ粒子の増加している量を取り込む。
実施例１６は、MPｓ上に吸着された化学的に同等な安定娘核種２０８Pbの蓄積量が、時間と共に増加することを示している。実施例１７は、２１２Ｐｂ及びカルシウムの両方とＥＤＴＭＰのよく知られた錯体形成性質は、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ複合体が、ＭＰｓと結合できることを指し示すことを示している。
実施例１６は、MPｓ上に吸着された化学的に同等な安定娘核種２０８Pbの蓄積量が、時間と共に増加することを示している。実施例１７は、２１２Ｐｂ及びカルシウムの両方とＥＤＴＭＰのよく知られた錯体形成性質は、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ複合体が、ＭＰｓと結合できることを指し示すことを示している。
【0072】
放射性核種
治療目的のために、α線、β線およびオージェ電子を放出する放射性核種が知られている。放出された粒子の質量およびエネルギーにおける多様性により、組織におけるそれらの範囲およびそれによる線エネルギー付与（LET）は、有意に異なる。LETは、単位長さ当たりの物質へのエネルギー移動であると定義されている。一般的に、低LETβ放射体は、高LETα放射体およびオージェ放射体よりも、大きな腫瘍の治療により適していると考えられている。そして、それは、微小転移病および単細胞病の治療に好まれている。それゆえに、本発明の粒子における放射性核種は、意図した使用に関して、適合しうる。
治療目的のために、α線、β線およびオージェ電子を放出する放射性核種が知られている。放出された粒子の質量およびエネルギーにおける多様性により、組織におけるそれらの範囲およびそれによる線エネルギー付与（LET）は、有意に異なる。LETは、単位長さ当たりの物質へのエネルギー移動であると定義されている。一般的に、低LETβ放射体は、高LETα放射体およびオージェ放射体よりも、大きな腫瘍の治療により適していると考えられている。そして、それは、微小転移病および単細胞病の治療に好まれている。それゆえに、本発明の粒子における放射性核種は、意図した使用に関して、適合しうる。
【0073】
局所治療、例えば、腹腔内空洞におけるα粒子放出化合物の主要な医療上の利点は、より短い範囲であり、一般に、医療用β放射体からのβ粒子に対するｍｍからｃｍの範囲と比較して、αは０．１ｍｍ未満である。
【0074】
腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ：ＩＰ）使用の場合は、放射線感受性腸クリプト細胞のような内部器官のより深い範囲に照射するため、α放射体の使用は、腔内の環境において、毒性リスクを減少させる。細胞を殺すのに、極めて少ないαの衝突が必要とされており、修復できない2本鎖結合の損傷を生じさせる高い確率のため、ＤＮＡ鎖損傷の高い修復能力のような細胞耐性機構は、問題が少ないので、放出されたα粒子の高い線エネルギー付与は、また利点である。
【0075】
崩壊あたりの高い効果は、低い放射能が必要とされていることを意味するものであり、大半のα放射体およびβ放射体が保護される必要のあるX線及びγ線を放出することから、病院スタッフおよび関係者を遮蔽する必要性を低減する。
【0076】
がんが巨大腫瘤病変として特徴づけられた状況において、α粒子と比較してより長い範囲のβ粒子は、利点となりうる。より長いβ粒子の経路長は、いわゆるクロスファイア効果（ｃｒｏｓｓ－ｆｉｒｅ ｅｆｆｅｃｔ）を生じさせ、有意に多くの近傍及び離れた細胞への照射により、放射標識された粒子が生じたところからさらに離れている細胞に損傷が引き起される。
【0077】
本文脈において、プロジェニーは、親放射線核種の崩壊の結果物である放射線核種であると理解されている。従って、例えば、２２４Ｒａが親放射性核種であるとき、２２０Ｒｎは、娘放射性核種であり、２１６Ｐｏは孫娘放射性核種であり、そして、２１２Ｐｂは、ひ孫娘放射性核種である。それゆえに、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏおよび２１２Ｐｂはすべて２２４Ｒａのプロジェニー放射性核種であると理解される。
【0078】
従って、α線放出放射性核種２２４Ｒａと娘放射性核種２２０Ｒｎ、孫娘放射性核種２１６Ｐｏ、およびひ孫娘放射性核種２１２Ｐｂは、１つの実施形態内である。２２４Ｒａが放射性核種であるとき、本発明粒子に対して、これらすべては、前記粒子によって、含まれているであろう。
【0079】
本発明粒子における放射性核種は、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２２７Ｔｈ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、 １８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｏ、 ２０８Ｔｌ、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび １５５Ｔｂからなる群から選択されうる。前記放射性核種は、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａおよび２２７Ｔｈからなる治療に適したα放射線核種からなる群から選択されうる。前記放射性核種は、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙからなる治療に適したβ放射線核種からなる群から選択されうる。放射性核種は、治療に適したαプロジェニーである２１２Ｐｂを伴う、β放射体でありうる。放射性核種は、プロジェニー放射性核種である２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌを伴う、α放射体２２４Ｒａからなる群から選択されうる。放射性核種は、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、６４Ｃｕ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなるイメージングに適した放射性核種からなる群から選択されうる。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２５Ｒａである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２４Ｒａである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２３Ｒａである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２５Ａｃである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１２Ｂｉである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２７Ｔｈである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１１Ａｔである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１３Ｂｉである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１２Ｐｂである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、６４Ｃｕである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、６７Ｃｕである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１６６Ｈｏである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１７７Ｌｕである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、３２Ｐである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１８６Ｒｅである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１５３Ｓｍである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、８９Ｓｒである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１６１Ｔｂである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、９０Ｙである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２２０Ｒｎである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１６Ｐｏである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１２Ｂｉである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２１２Ｐｏである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２０８Ｔｌである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１８Ｆである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、６７Ｇａである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、９９ｍＴｃである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１１１Ｉｎである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、２０３Ｐｂである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１５２Ｔｂである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、１５５Ｔｂである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、８３Ｓｒである。本発明の１または複数の実施形態において、放射性核種は、８６Ｙである。
【0080】
これらの放射性核種は、本発明の粒子内において結合されていてもよい。それゆえ、前記粒子は、上述した放射性核種の１、２、またはそれ以上を含んでいる。これは、放射性核種が崩壊し、そしてその天然のプロジェニーになる自然要因により生じ得る。例えば、２２４Ｒａが親放射性核種であり、２２０Ｒｎが娘放射性核種で、２１６Ｐｏが孫娘放射性核種で、そして、２１２Ｐｂがひ孫娘放射性核種の時、そのような状況が生じ得る。それゆえに、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏおよび２１２Ｐｂは、すべて２２４Ｒａのプロジェニー放射性核種であると見なされており、自動的な２２４Ｒａの自然崩壊により、粒子中に、一定量存在するであろう。
【0081】
自然崩壊からの量よりも多くの量を含んでいることは、粒子の意図した使用のために有益となりうるため、２または複数の放射性核種は、本粒子中に含まれていてもよい。例えば、もし、２２４Ｒａおよび２１２Ｐｂが、本粒子の形成のために、混合されるなら、これは生じ得る。この状況において、もし、本粒子が、精製された２２４Ｒａと調製されたら、存在するであろう量よりも、粒子中の２１２Ｐｂのレベルはより高く存在するであろう。
【0082】
患者適用量あたりに使用される放射性核種の量は、１ｋＢｑから１０ＧＢｑの範囲において、より好ましくは、１００ｋＢｑから１００ＭＢｑ、よりいっそう好ましい範囲は、０．５ＭＢｑから２５ＭＢｑであってもよい。適用量範囲は、患者服用量あたり、１０ＭＢｑから１０ＧＢｑであってもよい。適用量範囲は、患者服用量あたり、１０ＭＢｑから５ＧＢｑであってもよい。前記範囲は、β放射体、α放射体、またはこれの組み合わせに対してでありうる。前記範囲は、治療またはイメージングに対してでありうる。適用量は、がんのタイプ、および、例えば、その病気がどれぐらい侵攻性であるかによる。１つの実施形態において、適用量は、１０－１００ｋＢｑ／ｋｇ、例えば、２０－５０ｋＢｑ／ｋｇである。他の実施形態において、適用量は、１０－１０００ｋＢｑ／ｋｇ、例えば、２５－３００ｋＢｑ／ｋｇである。さらなる実施形態において、適用量は、１００－５００ｋＢｑ／ｋｇ、例えば、１５０－３００ｋＢｑ／ｋｇである。１つの実施形態において、服用量は、１－１００ ＭＢｑ／ｋｇ、例えば、５－２０ＭＢｑ／ｋｇである。他の実施形態において、服用量は、１－１０００ＭＢｑ／ｋｇ、例えば、１０－５０ＭＢｑ／ｋｇである。さらなる実施形態において、服用量は、１００－５００ＭＢｑ／ｋｇ、例えば、１５０－３００ＭＢｑ／ｋｇである。
【0083】
本発明の１つの実施形態において、医薬組成物は、投与量あたり、１ｋＢｑから１０ ＧＢｑである放射性核種の量で調製される。例えば、１００患者投与量が、１日あたり１バッチで生産される場合、医薬組成物は１００の１回投与バイアル、または即時使用シリンジに分配される合計１～１０ＧＢｑから成り立ちうる。
【0084】
本発明の他の実施形態において、医薬組成物は、複数投与商業規模生産、例えば、５０ＭＢｑから１００ＧＢｑに対して適している放射性核種の量で調製される。
【0085】
従って、本発明の組成物は、投与量あたり、１ｋＢｑから１０ＧＢｑである放射性核種の量で、または、複数投与商業規模生産に適している５０ＭＢｑから１００ＧＢｑである放射性核種の量で調整されてもよい。
【0086】
形態および組成物
本粒子は、様々な特徴を持つことができ、そして、粒子のサイズは、意図した使用および用途により、変更してもよい。
本粒子は、様々な特徴を持つことができ、そして、粒子のサイズは、意図した使用および用途により、変更してもよい。
【0087】
結晶のタイプは、任意の知られた崩壊性化合物の形態であってもよく、そして、１ｎｍから５００μｍに変化するサイズが使用されてもよい。前記サイズは、１００ｎｍから５０μｍの範囲で存在していてもよく、さらに好ましくは、サイズは、１－１０μｍの範囲である。１つのより好ましい実施形態において、前記サイズは、１－１０μｍである。他のより好ましい実施形態において、前記サイズは、１００ｎｍから５μｍ、および他には１０－１００ｎｍである。他のより好ましい実施形態において、前記サイズは、１－２０μｍ、および他には２－１０μｍである。
【0088】
ある態様は、本発明に関する１または複数の粒子を含有している組成物に関する。組成物は、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含有する単分散の粒子または多分散の粒子を含有する粒子懸濁液であってもよい。
【0089】
本発明の１または複数の実施形態は、本発明の粒子の使用であって、放射性核種は、放射性核種によって標識された表面、粒子体積の一部として標識された封入体、または、放射標識された後、放射標識された表面を保護し、放射性核種の放出を抑制する材料の層でカバーされた表面標識粒子である、前記使用に関する。本発明粒子は、放射性核種標識された粒子となっていてもよく、それにより、もともとの表面をカバーするために、材料の層が加えられ、放射性核種を被包する。実施例５は、粒子を調製するこれらの様々なタイプについて記述している。
【0090】
表面標識は、要素の親和性によって引き起こされる、放射性核種の結晶粒子への吸着として実行されてもよく、または、追加の無機化合物が沈殿過程を促進する共沈殿として実行されてもよい。キレート剤は、この過程において使用されてもよい。そして、前記キレート剤は、粒子内に、または粒子表面に取り込まれ得る。
【0091】
本発明のある態様は、崩壊性化合物および放射性核種を含有する粒子を含んでいる組成物に関しており、ここでリン含有添加剤は、前記組成物中に含まれている。前記組成物は、粒子懸濁液であってもよい。前記リン含有添加剤は、粒子内に取り込まれてもよい。リン含有添加剤は、粒子表面と会合されていてもよく、または、粒子周辺、すなわち、粒子の一部である組成物または懸濁液において存在していてもよい。従って、本発明の１つの態様は、粒子を含有する組成物または懸濁液であって、前記粒子は、崩壊性化合物、放射性核種およびリン含有添加剤を含んでおり、そして、リン含有添加剤は、組成物または懸濁液において存在することで、粒子と会合している、前記組成物または懸濁液に関する。リン含有添加剤は、粒子の一部として存在してもよい。その存在は、粒子の表面上にあってもよい。その存在は、組成物または粒子の懸濁液の一部として存在してもよい。その存在は、粒子の一部として、および組成物または粒子の懸濁液として存在しうる。
【0092】
本発明の一または複数の実施形態は、固相および液相の混合物である粒子懸濁液に関する。リン含有添加剤は、液相において存在していてもよい。リン含有添加剤は、固相に存在してもよい。リン含有添加剤は、液相および固相に存在してもよい。固相において、リン含有添加剤は、表面上に、または粒子内に埋め込まれて、または表面または固相内に埋め込まれるの両方で、存在してもよい。固相は、ナノ粒子、マイクロ粒子、またはこれら２つの組み合わせでできていてもよい。放射性核種は、粒子の表面と会合されていてもよく、または、体積中に、または、粒子の容積中に、またはその両方に埋め込まれていてもよい。それゆえに、固相は、崩壊性化合物および放射性核種を含有しており、リン含有添加剤を伴うか又は伴わない、粒子を含んでいる。しかし、リン含有添加剤が固相の一部でないときは、リン含有添加剤は、常に、液相に存在しうる。崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤は、本明細書で開示された任意のものであってもよい。
【0093】
リン含有化合物は、放射性核種と組み合わせても、または、組み合わせなくてもよい。
【0094】
本発明の組成物は、好ましくは、水性組成物である。従って、この実施形態において、液相は、水層である。組成物は塩類組成物であってもよい。組成物は、アルコール組成物であってもよい。組成物は、ゲルマトリックス組成物であってもよい。本発明の組成物は、本発明粒子の懸濁液であってもよい。
【0095】
従って、本発明のさらなる態様は、組成物、または本発明に関する１または複数の粒子および希釈剤、担体、界面活性剤、分散剤および／または賦形剤を含んでいる医薬品組成物に関する。
【0096】
許容できる担体および薬学的担体は、非毒性緩衝液、賦形剤、等張液、溶媒および共溶媒、抗菌性の保存剤、酸化防止剤、湿潤剤、消泡剤、および増ちょう剤等を含んでいるが、これには限定されない。より具体的には、薬学的担体は、生理食塩水（０．９％）、半生理食塩水、乳酸リンゲル液、溶解ラクトース、ブドウ糖、例えば、３．３％ブドウ糖／０．３％生理食塩水であってもよいが、これには限定されない。生理学的に許容される担体は、放射線分解安定剤、例えば、アスコルビン酸、ヒト血清アルブミンを含んでいてもよく、それらは、保存および輸送の間、放射性医薬品の完全性を保護する。
【0097】
本粒子は、医療注射液と同等な様々な緩衝液、例えば、溶解塩および／またはタンパク質および／または脂質および／または糖類中に分散されていてもよい。
【0098】
医薬組成物は、多数の粒子を含んでいてもよい。これらは同じものでも異なるものでもよい。
【0099】
医療用途
本粒子および組成物または本発明は、放射線治療の化合物および／または放射線治療の混合物（組成物および溶液）として使用されてもよい。
本粒子および組成物または本発明は、放射線治療の化合物および／または放射線治療の混合物（組成物および溶液）として使用されてもよい。
【0100】
本発明の１つの態様は、医薬としての使用するための、粒子、組成物または本発明の医薬組成物に関する。本発明の１つの態様は、がん治療における使用のための、粒子、組成物または本発明の医薬組成物に関する。
【0101】
非経口注射は、少なくとも、静脈内の（ＩＶ）、筋肉内の（ＩＭ）、皮下の（ＳＣ）、および皮内の（ＩＤ）投与を包含している用語である。従って、本発明の１または複数の実施形態は、非経口注射を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、静脈内の（ＩＶ）投与を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、筋肉内の（ＩＭ）投与を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、皮下の（ＳＣ）投与を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、皮内の（ＩＤ）投与を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、腫瘍内の投与を含んでいる投与における、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物の使用に関する。
【0102】
本発明の粒子の医学的使用は、（１）腔内治療（２）放射線塞栓術（３）放射線滑膜切除術（４）イメージング（５）医療機器においてでありうるヒトまたは獣医学の使用を含んでいる。
【0103】
腔内治療は、例えば、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん治療を含んでいてよい。粒子が使用されうる空洞の例は、頭蓋腔、胸腔、肺腔、脊髄空洞、骨盤空洞、心膜、肋膜空洞、膀胱腔またはこれらの空洞のどれの範囲内ででも、腹膜または髄膜と器官の上で蔓延しているがんを含むこれらの組合せで使用されうる。本発明の一つの実施形態において、前記がんは、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん治療からなる群から選択されうる。本発明の１つの実施形態において、前記がんは、転移がん、肺がん、卵巣がん、大腸がん、胃がん、すい臓がん、乳がん、腫瘍性髄膜炎、腹膜がん、胸水、悪性中皮腫、乳がん、肉腫、膠芽腫および星細胞腫のような脳がん、前立腺がん、および肝臓がんからなる群より選択される。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが転移がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが肺がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが卵巣がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが大腸がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが胃がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが胃がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんがすい臓がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが乳がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが腫瘍性髄膜炎である、本発明の使用に関する。本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが腹膜がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが胸水である、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが胸水である、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが胸水である、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが悪性中皮腫である、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが乳がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが前立腺がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが心臓がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが肉腫である、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが膠芽腫および星細胞腫のような脳がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが膀胱がんである、本発明の使用に関する。本発明の１または複数の実施形態は、前記がんが肝臓がんである、本発明の使用に関する。
【0104】
本発明の１つの態様は、がん治療における使用に対する本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。そして前記がんは、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん、非空洞性の標的、例えば、メラノーマ、非小細胞肺がんからなる群から選択される。
【0105】
がんとの組み合わせというよりもむしろ、感染、または炎症である病気を治療、または改善することが、本発明粒子の使用に対する特別の実施形態である。例えば、前記炎症は、関節炎であってもよい。
【0106】
本発明の１つの実施形態では、感染は、細菌感染およびウィルス感染からなる群より選択される。
【0107】
放射線塞栓術は、本発明粒子を、血管に投与し、腫瘍組織によって浸潤されている肝臓または他の固形器官における腫瘍へもたらすことにより、器官、例えば、肝臓における原発腫瘍または転移がんの治療を含んでいてもよい。
【0108】
慢性炎症を含んでいる関節障害に対する放射線滑膜切除術は、放射性物質を使用する有痛関節症に対する標的放射線療法である。その使用は、血友病関節炎の治療を含んでいる。
【0109】
今日、放射線滑膜切除術は、炎症性の病気、または、リウマチ様疾患、様々な関節滑膜の関節症、特に、膝、手および足首に対して使用されているβ粒子放出化合物を基盤としている。崩壊性である本明細書で述べられている粒子は、放射線滑膜切除術においてかなり有益となり得る。
【0110】
本粒子は、局所注射、例えば、腔内により、好ましくは投与される。特別の態様において、本粒子は、腫瘍に直接注射される。
【0111】
本発明の他の態様は、本発明の粒子または医薬品組成物を、それを必要とする個人に投与することを含んでいる治療法または改善法に関する。
【0112】
本発明の組成物は、非経口での使用、例えば、静脈注射、腔内注射、および／または腫瘍内注射に適しうる。
【0113】
本発明の１つの態様において、本発明に関する粒子は、医療機器である、または、医療機器中に、含まれている。
【0114】
医療機器は、任意の器具、装置、機器、ソフトウェア、道具、または他の物であり、単体または、組み合わせで使用される。そして、そのメーカーによって、特有の診断目的および／または治療目的で使用されることおよびその適切な適用が必要不可欠であると意図されており、そのメーカーによって、ヒトのために、下記の目的：診断、予防、モニタリング、病気の治療、病気の緩和；診断、モニタリング、治療、緩和、損傷またはハンディキャップに対する補償；検査、解剖または生理学的プロセスの置き換えまたは修正；受胎のコントロール；で使用されると意図されているソフトウェアを含んでいる。そして、それは、薬理学的な手段、免疫学的な手段、代謝的な手段によって、人体内また人体上で、その主要な意図した作用を達成しない。しかし、それは、そのような手段によって、その機能内で、促進されてもよい。
【0115】
医療機器は、意図された使用および適用に関して、様々である。例は、シンプルデバイス、例えば、舌圧子、体温計、およびディスポーサブル手袋からアドバンスドデバイス、例えば、医療検査、移植、および装具の管理において、補助するコンピューターに及ぶ。
【0116】
ＦＤＡによれば、医療機器は、器具、器械、道具、機械、移植片、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試薬、もしくは、他の類似の物または関連した物である。そして、構成部品または付属品は：公式の国民医薬品集、または米国薬局方、またはそれらの任意の付録に承認されている、ヒトまたは他の動物において、病気または他の状態の診断、もしくは病気の治療（ｃｕｒｅ）、軽減、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、予防における使用に意図されている、または人または他の動物の体の構造または任意の機能に影響することを意図されている。そして、それは、ヒトまたは他の動物の体の中または表面で、化学作用を通じて、いずれかのそれの主要な意図した目的を達成しない。そして、それは、いずれかのその主要な意図した目的の達成のために代謝されることに左右されない。
【0117】
本粒子は、代謝されず、そしてまた体内で重要な化学作用を示すことはない。粒子は、代謝されないように設計され、または体内でいかなる化学作用を示さない放射能の担体である。そして、これは、毒性などのきわめて限定的な望まない副作用を伴う放射線療法を可能にする。
【0118】
従って、１つの実施形態では、用語“医療機器”は、上記ＦＤＡの定義として理解される。
【0119】
イメージング
がんのイメージングは、がんの研究および診断で使用されている多くの手段を包含する総称である。病気の診断および病気の分類のためにもともと使用されており、現在、がんのイメージングは、外科手術および放射線治療を補助するため、がん治療の初期応答を探すため、治療に応答していない患者を特定するためにも使用されている。一要素は、病気の診断およびモニタリングにおける本願の放射性物質が関与する核イメージングである。核医学イメージングは、Ｘ線のような外部源によって生じた放射線よりもむしろ、体内から放出している放射線を記録するため、ある意味では、核医学イメージングは、インサイドアウトに行われた放射線医学、または内放射線医学（ｅｎｄｏｒａｄｉｏｌｏｇｙ）である。加えて、強調が、解剖学的構造のイメージングよりも、機能においているため、核医学スキャンは、放射線医学とは異なる。この理由から、生理学イメージングモダリティと呼ばれている。単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）および陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は、核医学における２つの最も一般的なイメージングモダリティである。
がんのイメージングは、がんの研究および診断で使用されている多くの手段を包含する総称である。病気の診断および病気の分類のためにもともと使用されており、現在、がんのイメージングは、外科手術および放射線治療を補助するため、がん治療の初期応答を探すため、治療に応答していない患者を特定するためにも使用されている。一要素は、病気の診断およびモニタリングにおける本願の放射性物質が関与する核イメージングである。核医学イメージングは、Ｘ線のような外部源によって生じた放射線よりもむしろ、体内から放出している放射線を記録するため、ある意味では、核医学イメージングは、インサイドアウトに行われた放射線医学、または内放射線医学（ｅｎｄｏｒａｄｉｏｌｏｇｙ）である。加えて、強調が、解剖学的構造のイメージングよりも、機能においているため、核医学スキャンは、放射線医学とは異なる。この理由から、生理学イメージングモダリティと呼ばれている。単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）および陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は、核医学における２つの最も一般的なイメージングモダリティである。
【0120】
核医学において、診断的イメージングと治療が組み合わされた手法は、セラノスティクスと名付けられている。放射標識された粒子の体内分布の視覚化は、患者が治療からの恩恵をもっているおよび／または投与されるべき最適用量を決定する恩恵をもっているかどうかの予測を助けうる。放射標識された粒子の体内分布の視覚化は、患者が治療からの恩恵を受けるかを予測すること、及び／又は投与されるべき最適用量を決定することを手助けすることができる。幾つかの治療用の放射性核種は、それらをイメージングされることを可能にする性質が衰退したとしても、ほんのわずかのものだけが、放射能の体内分布の明確で正確な決定を可能にする性質を衰退する。それゆえに、薬剤を治療上の放射性核種の代用物で放射標識する考えが確立された。ｉｎ ｖｉｖｏの診断的イメージングに対して、９９ｍＴｃ、 １８Ｆおよび６７Ｇａのような短命ガンマ線放射体、または陽電子放射体が一般に使用される。最適なイメージング性質にもかかわらず、治療用の放射性核種とは異なる化学的性質により、これらの放射性核種を使用することは、すべての場合において、実行可能ではない。加えて、診断用の放射性核種と治療用の放射性核種との間のかなり異なる放射性核種は、体内分布の解釈を複雑にしうる。それゆえに、例えば、それらは、両方とも、類似の半減期（２．８日対２．７日）をもった三価金属であるため、１１１Ｉｎは、９０Ｙの代用物として使用されている。同じ元素の放射性核種のペア、治療に適した性質を衰退するものと、イメージングに適した性質を衰退するものを使用する、いわゆる、セラノスティクな放射性核種のペアを使用するという考えも現れてきている。その例は、８６Ｙ／９０Ｙ、６４Ｃｕ／６７Ｃｕ、８３Ｓｒ／８９Ｓｒ、５２Ｔｂ／１６１Ｔｂおよび２０３Ｐｂ／２１２Ｐｂである。
【0121】
したがって、本発明の１つの態様は、イメージングにおいて使用するための本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。本発明の１または複数の実施形態において、前記イメージングは、核医学イメージングである。
【0122】
併用療法
崩壊性粒子は、多くの異なる追加の化合物を含んでいてもよい。これらは、標的指向性、安定性、溶解性、および崩壊速度を含んでいる様々な目的に役立ちうる。
崩壊性粒子は、多くの異なる追加の化合物を含んでいてもよい。これらは、標的指向性、安定性、溶解性、および崩壊速度を含んでいる様々な目的に役立ちうる。
【0123】
本発明の１つの実施形態において、前記粒子は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、放射性免疫複合体、免疫複合体、キレート抗体複合体、葉酸および葉酸誘導体を含んでいるビタミン、ペプチド、小分子抗体、およびアフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ）からなる群より選択される１または複数の化合物を含んでいる。
【0124】
１つの実施形態において、本粒子は、腫瘍細胞上の抗原を含んでいる受容体に対して親和性を持っている、抗体、フラグメント抗体、またはタンパク質またはペプチドまたはビタミン誘導体（標的指向性複合体（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ））を含んでいる。
【0125】
他の実施形態において、本粒子は、腫瘍細胞上の抗原を含んでいる受容体に対して親和性を持っている、放射標識された、抗体、フラグメント抗体、またはタンパク質またはペプチドまたはビタミン誘導体（標的指向性複合体（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ））を含んでいる。それにより、前記標識された粒子は、表面上の一般的な粒子放射線を与えるであろうし、そして、標識された抗体または類似体は、受容体または抗原に結合することで、腫瘍細胞に対して、特有のα粒子線量を与える。
【0126】
本発明における放射性核種は、2官能性キレート剤を使用して、標的指向性分子と結合されていてもよい。
【0127】
これらは、環状の、直線状の、または分岐状のキレート剤であってもよい。骨格窒素に結合された酸性基（例えば、カルボキシアルキル）を伴った直鎖状の、環状の、または分岐状のポリアザアルカン骨格を含んでいる、ポリアミノポリ酸キレート剤が特に言及されてもよい。
【0128】
適したキレート剤の例は、ＤＯＴＡ誘導体、例えば、ｐ－イソチオシアナトベンジル－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｚ－ＤＯＴＡ）およびＴＣＭＳと名付けられた、このＤＯＴＡ化合物のテトラ第一アミドバリアント、およびＤＴＰＡ誘導体、例えば、ｐ－イソチオシアナトベンジル－ジエチレントリアミン五酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｚ－ＤＴＰＡ）を含んでおり、前者は環状キレート剤、後者は直線状のキレート剤である。
【0129】
錯体生成部分のメタル化は、錯体生成部分とターゲティング部分との結合の前後で、行われてもよい。
【0130】
放射標識を行う前に、キレート剤が抗体に結合されている場合、費やす時間という観点から、放射標識手順は、一般に、より便利となる。
【0131】
本発明の１つの態様は、本発明に関する使用のための、本発明の粒子、組成物、または医薬品組成物に関する。そして、それは、他のがん治療と併用して使用される。
【0132】
療法の例は、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、プラチン（例えば、カルボプラチン、シスプラチン）、ドキソルビシン、マイトマイシンのような化学療法である。他の例は、DNA修復阻害剤、例えば、PARP阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミド）である。さらなる例は、放射免疫療法である。
【0133】
ＤＮＡ修復阻害剤は、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ阻害剤（ＰＡＲＰｉ）、ＭＧＭＴ阻害剤、ＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ阻害剤（ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤）、毛細血管拡張性運動失調症及びＲａｄ３関連（ＡＴＲ）キナーゼ阻害剤、毛細血管拡張性運動失調症変異（ＡＴＭ）キナーゼ阻害剤、Ｗｅｅ１キナーゼ阻害剤、または、チェックポイントキナーゼ１および２（ＣＨＫ１／２）阻害剤からなる群より選択されうる。
【0134】
本発明の１または複数の実施形態において、ＰＡＲＰｉは、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミドからなる群より選択される。
【0135】
前記ＰＡＲＰｉは、オラパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、ルカパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、ニラパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、タラゾパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、ベリパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、パミパリブであってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、ＣＥＰ９７２２であってもよい。
前記ＰＡＲＰｉは、Ｅ７０１６であってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、３－アミノベンズアミドであってもよい。
前記ＰＡＲＰｉは、Ｅ７０１６であってもよい。前記ＰＡＲＰｉは、３－アミノベンズアミドであってもよい。
【0136】
粒子調製の方法
本発明の１つの態様は、本発明に関する粒子の調製方法に関し、そして、前記方法は、放射性核種の担体を使用するかまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる。崩壊性化合物および放射性核種は、初めの段階において、第一粒子を形成しうる。そして、それは、すでに放射標識された粒子へ崩壊性化合物を添加する追加のステップをともなっていてもよく、これにより、積層粒子を与える。その後、リン含有添加剤が添加され、前記粒子を安定化する。このプロセスにおいて、リン含有添加剤は、粒子の一部となりうる、および前記粒子が存在する組成物中に残り得る。リン含有添加剤は、粒子の一部としても、粒子を含有する組成物中に残っているの両方でもありうる。異なる粒子調製の例は、実施例１および実施例５においてみることができる。粒子調製の他の例は、実施例１８においてみることができる。
本発明の１つの態様は、本発明に関する粒子の調製方法に関し、そして、前記方法は、放射性核種の担体を使用するかまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる。崩壊性化合物および放射性核種は、初めの段階において、第一粒子を形成しうる。そして、それは、すでに放射標識された粒子へ崩壊性化合物を添加する追加のステップをともなっていてもよく、これにより、積層粒子を与える。その後、リン含有添加剤が添加され、前記粒子を安定化する。このプロセスにおいて、リン含有添加剤は、粒子の一部となりうる、および前記粒子が存在する組成物中に残り得る。リン含有添加剤は、粒子の一部としても、粒子を含有する組成物中に残っているの両方でもありうる。異なる粒子調製の例は、実施例１および実施例５においてみることができる。粒子調製の他の例は、実施例１８においてみることができる。
【0137】
リン含有化合物、例えば、ホスホネートおよびホスフェートは、結晶粒子を安定化する添加剤として適用されうる。すなわち、それらは、本明細書で述べられているリン含有添加剤である。サイズ制御を達成するために、これらの形成の間、粒子の形成完了後、標識の後、または最終形成にむけて、それらは結晶粒子のような粒子に適用されうる。製品は、オートクレーブにより殺菌されてもよく、そして添加剤は、このプロセスの前後で、含まれていてもよい。サイズ制御添加剤は、最終製品を調製するために使用されるキットの構成要素として使用されてもよい。
【0138】
実施例１８は、より小さなマイクロ粒子（ＣａＣＯ３ＳＭＰｓ）を生産するために、自然に起こる沈降反応中に、グリセロールの添加によって生産された炭酸カルシウムマイクロ粒子について述べている。
【0139】
従って、実施形態において、追加のサイズ制御添加剤は、粒子の調製中に、添加される。実施形態において、追加のサイズ制御添加剤は、これには限定されないが、ジオールまたはトリオールのようなアルコールである。実施形態において、追加のサイズ制御添加剤は、エチレングリコール（ＥＧ）、ＰＥＧ、グリセロールおよびデキストラン、エタノールからなる群より選択される。実施形態において、追加のサイズ制御添加剤は、グリセロールである。
【0140】
リン含有化合物は、単分散の粒子および多分散の粒子の結晶粒子を安定化できる。粒子は溶液中に形成されるので、前記粒子は一般に単分散である。しかし、それらは、与えられた類似範囲内のサイズをもつなどの特徴を共有しうる。
【0141】
従って、本発明の１つの態様は、崩壊性化合物を含んでいる粒子のサイズを制御するためのリン含有添加剤の使用に関する。本発明の他の態様は、崩壊性化合物を含んでいる粒子を安定化するためのリン含有添加剤の使用に関する。放射性核種が添加される前後で、これらの粒子は、本発明の粒子でありうる。それゆえに、前記粒子は、崩壊性化合物自体であってもよい。本発明の１つの実施形態において、崩壊性化合物は、結晶粒子である。
【0142】
混合物中にプロジェニー２１２Ｐｂを伴う２２４Ｒａ溶液又は組成物は、粒子標識前に、２１２Ｐｂと錯体形成するためにキレート剤―抗体コンジュゲートで前処理をして、２１２Ｐｂ抗原特異的治療のための放射性免疫複合体と、一般的な腔内治療のためのα放射体、例えば、２２４Ｒａ標識粒子とを含んでいる、前記２成分療法システムを製造する。生物学的化合物、例えば、抗体は、これらの粒子の一部となりうる。その後、これらはリン含有添加剤と混合されてもよく、これにより、サイズ制御粒子を与える。組成物の粒子は、２１２Ｐｂ抗原―特有治療に対する組成物中の、２１２Ｐｂ標識された粒子であってもよい。
【0143】
１つの実施形態は、放射性核種、例えば、抗原―特有治療のための放射性免疫複合体、崩壊性化合物、およびリン含有添加剤を含んでいる３成分システムまたキットに関する。
【0144】
これを使用するより好ましい方法は、抗体が結合されたキレート剤を含んでいるバイアルＡと、放射性核種、例えば、娘核種と平衡状態の２２４Ｒａを含んでいるバイアルＢと、マイクロ粒子を含んでいるバイアルＣとを含んでいるキットによるものであろう。これによりＡの内容物は、バイアルＢに添加され、またはその逆で、そして、混合物がバイアルＣに移される前に、数分間から数時間インキュベートされ、リン含有添加剤と混合される前に、数分から数時間さらにインキュベートされ、続いて、シリンジに移され、患者に注射される。
【0145】
２２４Ｒａ粒子は、そのようなシステムにおいて、抗腫瘍活性に対して強く貢献すると予測されているため、この原理は、例えば、治療に必要とされる２１２Ｐｂ－放射性免疫複合体のレベルを有意に減少させ得る。
【0146】
本発明の他の態様は、本発明に関するナノ粒子またはマイクロ粒子、および任意に当該キットの使用に関する説明書を含んでいるキットに関する。
【0147】
本発明の１つの実施形態において、本キットは、モノクローナル抗体を含んでいる、分子結合キレート剤を含んでいる。
【0148】
放射性核種は、数日間の半減期を持っているので、現在の方法および製品は、集中生産およびエンドユーザーへの集中した発送を可能にしている。本発明の他の態様は、カルシウムおよびカーボネイト中でゆっくりと溶解する生分解性粒子の使用である。それにより、生体内ですでに十分存在する少量の製品を生産する。以下の特徴は注目すべきである。：放射線核種、例えば、２２４Ｒａが、炭酸カルシウムのような崩壊性化合物に吸着された時、より長く存在するβ放射体２１２Ｐｂ（ｔ１／２＝１０．６時間）の崩壊前に、超短命の２１６Ｐｏ（ｔ１／２＝０．１６秒）と共に、２つのα粒子を放出する短命２２０Ｒｎ（ｔ１／２ ＝５６秒）の重要な放出がある。鉛は、例えば、炭酸カルシウムとかなり高い沈殿性を示す。そのため、i.p.流体中の２１２Pbは、体循環中に漏出した２１２Ｐｂを減らす粒子と再結合する傾向である。
【0149】
したがって、２２４Ｒａが崩壊してガスとなり、粒子から拡散し、その後さらに崩壊して２１２Pbとなり、炭酸カルシウムと沈殿することは、非常に特殊な技術的特徴である。
【0150】
あらかじめ製造された粒子と、その後の表面沈降または放射性核種をより深く含めるための放射性核種共沈は、治療用製品の生産に有益な2つの方法である。いったん放射性核種と崩壊性化合物が第一粒子を形成した後は、リン含有添加剤が第一粒子のサイズを制御し、本発明の粒子となり得る。
【0151】
粒子はナノメートルから数十マイクロメートルのサイズで製造され、高い標識収率で放射標識され、そして数日間貯蔵することができ、これにより、即時使用の粒子懸濁液の集中生産および病院への発送が可能になるので、重要である。粒子の完全性にリスクを与えることなく、これは行い得るし、それゆえに、粒子が完全性を維持し、そして意図した使用に必要とされるサイズを有することを保証する。
【0152】
本発明の1つの態様としては、本明細書で述べられている任意の方法によって生産された粒子に関する。
【0153】
一般
本発明による化合物に関連して上述した任意の特徴および／または態様は、本明細書に記載の方法に類推して適用されることを理解されるべきである。
本発明による化合物に関連して上述した任意の特徴および／または態様は、本明細書に記載の方法に類推して適用されることを理解されるべきである。
【0154】
本発明を説明するために、以下の図および実施例は提供される。これらは例示であることを意図しており、いかなる意味でも限定するものとして解釈されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【0155】
【図1】
２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子の異なるバリアントの腹腔内投与後１日目の２２４ＲａのＥｘ ｖｉｖｏ組織分布：（Ａ）１ｍｇおよび５ｍｇの添加剤なしの表面が標識されたもの、（Ｂ）ＥＤＴＭＰ中の、表面が標識され、層で保護された１．２ｍｇ、６ｍｇ、および１２ｍｇの２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子、（Ｃ）異なる量のＳＨＭＰで洗浄された表面が標識された２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子、（Ｄ）ＥＤＴＭＰ中の、封入体が標識された２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子。データは、それぞれのマウスの個別のデータポイントを表す記号に加え、棒線は、集められた器官および組織の１グラム組織当たりの注射された服用量のメディアン％を表していることを示されている。
【図2】カチオン性の２２４Ｒａの腹腔内投与後１日目の放射能のＥｘ ｖｉｖｏ組織分布：データは、それぞれのマウスの個別のデータポイントを表す記号に加え、棒線は、集められた器官および組織の1グラム組織当たりの注射された服用量のメディアン％を表していることを示されている。
【図3】１×１０６ＥＳ－２細胞を腹腔内に接種され、そして、一日後に、０．９％ＮａＣｌ、または２２４Ｒａ－標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の５つの異なるバリアントの腹腔内注射で処理された胸腺欠損ヌードフォックスヌーマウス（ａｔｈｙｍｉｃ ｎｕｄｅ Ｆｏｘｎｕ ｍｉｃｅ）のカプランマイヤー生存プロット。N＝５－６マウス／群
【図4】５×１０４ＣＴ２６を腹腔内に接種されたＢＡＬＢ／ｃマウスのカプランマイヤー生存プロット。WT細胞および０．９％ＮａＣｌ、または２２４Ｒａ－標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の４つの異なるバリアントの腹腔内注射で処理され一日経過後のもの。N＝７－８マウス／群
【図5】ＣａＣＯ３マイクロ粒子の粒度分布。（ａ）原料として使用されたオートクレーブされていないＣａＣＯ３－ＭＰｓと比較された、生理食塩水中に懸濁され、初日にオートクレーブされた、異なるＥＤＴＭＰ％（ｗ／ｗ）を伴った、非標識、非放射性のＣａＣＯ３－ＭＰｓ（ＭＰｓ：マイクロ粒子）。（ｂ）原料として使用されたオートクレーブされていないＣａＣＯ３－ＭＰｓと比較された、異なるＥＤＴＭＰ％（ｗ／ｗ）を伴った、表面２２４Ｒａ標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓ。（ｃ）原料として使用されたオートクレーブされていないＣａＣＯ３－ＭＰｓと比較された、異なるＥＤＴＭＰ％（ｗ／ｗ）を伴った、オートクレーブされた層被包２２４Ｒａ表面標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓ。（ｄ）表面標識ＭＰｓおよび層被包表面標識ＭＰｓの比較、（ｂ）および（ｃ）の抜粋、Ｄｖ：体積平均直径（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ｄｉａｍｅｔｅｒ）、Ｄｖ１０は１０パーセンタイルである。
【図6】非放射性のオートクレーブされたＣａＣＯ３の異なるサイズのマイクロ粒子の沈降速度。（ａ）それぞれ、懸濁液を３０秒および４分静置した後の、ＥＤＴＭＰを伴った、０．９％ＮａＣｌ中に懸濁された疑義表面標識ＭＰｓとＥＤＴＭＰを伴わないものとの比較。（ｂ）異なるサイズの懸濁されたＣａＣＯ３－ＭＰｓの濁度評価、すべての疑似表面は標識され；層被包ＭＰｓはＸを伴うマーカーラインで示されている。Ｄｖ：体積平均直径（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ｄｉａｍｅｔｅｒ）、Ｄｖ５０は５０パーセンタイルである。
【図7】様々なＥＤＴＭＰ濃度を伴った、ＣａＣＯ３マイクロ粒子（ＭＰｓ）上の吸着された２１２Ｐｂおよび２２４Ｒａの放射化学分析。記号は、独立したサンプルを表し、ＥＤＴＭＰ濃度は、ＣａＣＯ３に関係する。（ａ）標識後、異なる日における、ＭＰｓ上の吸着された２１２Ｐｂの割合（％ＲＣＰ）で、表面標識ＭＰｓ対層被包表面標識ＭＰｓ。（ｂ）標識後、異なる日における、ＭＰｓ上の吸着された２２４Ｒａの割合（％ＲＣＰ）で、表面標識ＭＰｓ対層被包表面標識ＭＰｓ。（ｃ）標識後、異なる日における、ＩＴＬＣセットアップにおける０．９％ＮａＣｌ中の２１２Ｐｂ２＋の非特異的な移動を差し引いた後の液相中の２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの割合で、表面標識ＭＰｓ対層被包表面標識ＭＰｓ。
【図8】ｉ．ｐ．注射後、一日目の層被包２２４Ｒａ表面標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の体内分布。 棒線はメディアンを表し、記号は、個別の動物を表す。等しいまたはほぼ等しい質量で処理された動物は、１つの群においてプールされている。（ａ）２２４Ｒａの１グラム組織当たりの注射された服用量割合。（ｂ）（ａ）における同じサンプルからの、２１２Ｐｂの１グラム組織当たりの注射された服用量割合。２２４ＲａＣｌ２群中の１つの頭蓋骨に対する２２４Ｒａおよび２１２Ｐｂの欠損データおよび１２ｍｇ群における１つの血液サンプルに対する２１２Ｐｂの欠損データがある。
【図9】表面を２２４Ｒａで標識した後の日数を関数として、２．５％（ｗ／ｗ）ＥＤＴＭＰを伴った、層被包マイクロ粒子上の２０８Ｐｂおよび２１２Ｐｂの分布。２２４Ｒａが娘核種と平衡状態にあり、０日目に、２２４Ｒａ、２１２Ｐｂ、および２０８Ｐｂのそれぞれに対して総量２００原子（またはａ．ｕ．）を伴っていると想定されている。ＭＰｓ上の吸着された２０８Ｐｂおよび２１２Ｐｂ（ＲＣＰ）対溶液中の２０８Ｐｂおよび２１２Ｐｂの等しい割合は、０－３日では９４％ＲＣＰ、４―６日では８１％ＲＣＰ、および７日目では７９％ＲＣＰであると想定されている。２２４Ｒａの崩壊ごとに１個の２０８Ｐｂ原子が生成され、２１２Ｐｂ原子の総数は２２４Ｒａと２１２Ｐｂの崩壊を考慮したベイトマン方程式で求められる。
【図10】
２１２Ｐｂ２＋および２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの非放射性疑似標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓ、表面標識ＭＰｓ、および層被包表面標識ＭＰｓに対する吸着割合。ＥＤＴＭＰ濃度は、ＣａＣＯ３１グラム当たりのグラムについての、ＭＰ懸濁液中の相対濃度を表す。
【図11】オートクレーブおよび２１２Ｐｂで標識後の懸濁液中の様々なＣａＣＯ３粒子の放射化学性質。メディアン直径は、レーザー回折計測に基づいている。（ａ）２１２Ｐｂが添加された後の時間の関数として、放射標識収率の割合（ＲＣＰと同じ量）（ｂ、ｃ）（ｂ）の標識と同じ日または（ｃ）の少なくとも２１時間経過後の粒子サイズおよび／またはホスホネートのタイプの関数としてのＲＣＰ割合。等張液中で、ヒト血清アルブミンとインキュベートされた後の（ｂ、ｃ）における粒子タイプ状の保持された２１２Ｐｂ。
【図12】ｉ．ｐ．注射後の指定時間における組織１グラム当たりの注射された服用量の割合として評価された２１２Ｐｂの体内分布。棒線は、メディアンを表し、そして、記号は個々の動物を表す。（ａ、ｂ、ｃ）（ａ）２時間、（ｂ）６時間、および（ｃ）２４時間の後の組織１グラム当たりの注射された服用量の割合を伴って、２１２ＰｂＣｌ２として投与されたフリー２１２Ｐｂ２＋と比較した、パミドロネート中の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３マイクロ粒子。（ｄ）パミドロネート中の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３マイクロ粒子の体内分布とグリセロール存在下で生産された、パミドロネート中のより小さなマイクロ粒子（ＳＭＰｓ）の体内分布との比較。尿および／または膀胱のデータは、（ａ、ｃ、ｄ）では１つの群の２／３のマウスのデータが欠落しており、（ｂ、ｄ）では１つの尿サンプルが欠落しているため、報告されていない。
【図13】ＥＳ－２細胞を腹腔内に接種され、そして、一日後に、０．９％ＮａＣｌ、またはパミドロネート中の異なる活性濃度の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓで処理された胸腺欠損ヌードフォックスヌーマウスの生存プロット。
【0156】
実施例
実施例１―マイクロ粒子の調製
Ｖｏｌｏｄｋｉｎ ｅｔ ａｌ．２００４に記述されているプロトコールに基づいた任意の沈殿方法により、２２４Ｒａ表面標識に続いて使用された結晶ＣａＣＯ３マイクロ粒子を調製した。調製されたマイクロ粒子が、遠心分離により集められる前に、０．３３Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（Ｍｅｒｃｋ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）と０．３３Ｍ ＣａＣｌ２（Ｍｅｒｃｋ）の等しい量を一般の撹拌器（Ｅｕｒｏｓｔａｒ ２０， ＩＫＡ（登録商標）－Ｗｅｒｋｅ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ，１２０ Ｓｔａｕｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）により勢いよく混合した。沈殿物を欧州薬局方水（ｐｈ．Ｅｕｒ ｗａｔｅｒ）により洗浄し、そして、加熱真空オーブン内で乾燥させた。レーザー回折式粒度分布計（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）により計測したとき、マイクロ粒子は、主に球形構造を持ち、メディアン直径は、４から７μｍであった。
実施例１―マイクロ粒子の調製
Ｖｏｌｏｄｋｉｎ ｅｔ ａｌ．２００４に記述されているプロトコールに基づいた任意の沈殿方法により、２２４Ｒａ表面標識に続いて使用された結晶ＣａＣＯ３マイクロ粒子を調製した。調製されたマイクロ粒子が、遠心分離により集められる前に、０．３３Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（Ｍｅｒｃｋ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）と０．３３Ｍ ＣａＣｌ２（Ｍｅｒｃｋ）の等しい量を一般の撹拌器（Ｅｕｒｏｓｔａｒ ２０， ＩＫＡ（登録商標）－Ｗｅｒｋｅ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ，１２０ Ｓｔａｕｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）により勢いよく混合した。沈殿物を欧州薬局方水（ｐｈ．Ｅｕｒ ｗａｔｅｒ）により洗浄し、そして、加熱真空オーブン内で乾燥させた。レーザー回折式粒度分布計（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）により計測したとき、マイクロ粒子は、主に球形構造を持ち、メディアン直径は、４から７μｍであった。
【0157】
マイクロ粒子は、１ＭまでのＮａ２ＣＯ３のストック溶液と２２４Ｒａを含んでいるＣａＣｌ２と混合し、実施例５においてさらに記述されるように、封入体標識マイクロ粒子を作成することでまた調製した。実施例５は、また、いくつかの適用においての方法について記述している。表面保護のための薄い被包を作成するために、すでに標識されているマイクロ粒子の表面上にＣａＣＯ３の層を調製した。
【0158】
実施例２―サイズ制御のためのリン含有添加剤の使用
リン含有化合物、例えば、ホスホネートおよびホスフェートは、添加剤として添加されて、結晶粒子を安定化しうる。サイズ制御を達成するため、これらの形成の間、結晶粒子の形成後、標識後、または、最終形成に対して、それらは結晶粒子に添加してもよい。製品は、オートクレーブにより、殺菌されてもよく、そして、添加剤は、この過程の前後で添加してもよい。サイズ制御添加剤は、最終製品を調製するために使用されるキットの構成要素として使用してもよい。
リン含有化合物、例えば、ホスホネートおよびホスフェートは、添加剤として添加されて、結晶粒子を安定化しうる。サイズ制御を達成するため、これらの形成の間、結晶粒子の形成後、標識後、または、最終形成に対して、それらは結晶粒子に添加してもよい。製品は、オートクレーブにより、殺菌されてもよく、そして、添加剤は、この過程の前後で添加してもよい。サイズ制御添加剤は、最終製品を調製するために使用されるキットの構成要素として使用してもよい。
【0159】
ホスホネートおよびホスホン酸は、Ｃ―ＰＯ（ＯＨ）２またはＣ―ＰＯ（ＯＲ）２基（Ｒ＝アルキル、アリル）を含んでいる有機リン化合物である。ホスホン酸は、一般に塩として取り扱われ、有機溶媒への溶解性は悪いが、水および一般のアルコールへの溶解性はある、一般的な不揮発性の固体である。ビスホスホネートは、エチドロネート(ＨＥＤＰ)、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、ゾレドロネートを含んでいる。ポリホスホネートは、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）及びＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）を含んでいる。
【0160】
一般的に、リン酸は、それぞれのリン原子の酸化度が＋５で、４つの酸素原子と結合しており、そのうちの１つが２重結合であり、正四面体の頂点に配置されている、リンオキソ酸である。プロトンＨ＋として水素原子を取り除くと、リン酸はホスフェートアニオンになる。一部の除去は、様々な水素ホスフェートアニオンをもたらす。ホスフェートは、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、例えば、ピロホスフェート、トリポリホスフェートおよびトリホスホノホスフェート、および環状ポリホスフェート、例えば、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）を含んでいる。
【0161】
実施例３―２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂの生産
２２４Ｒａジェネレーターは、２２８Ｔｈ源と、アクチニドレジンとを混合し、それをカラムにローディングすることで、調製した。１Ｍ ＨＮＯ３中の２２８Ｔｈ源は、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ， Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＯａｋ Ｒｉｄｇｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＴＮ， ＵＳＡ）から購入し、そして、ＤＩＰＥＸ（登録商標）Ｅｘｔｒａｃｔａｎｔをベースとしたアクチニドレジンは、Ｅｉｃｈｒｏｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＬＬＣ（Ｌｉｓｌｅ， ＩＬ）社の２ｍＬプレパックカートリッジから得た。アクチニドレジンカートリッジ中の材料を取り出し、レジンを１Ｍ ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で調製した。約０．２５ ｍＬアクチニドレジンのスラリー、０．２５ ｍＬ １ Ｍ ＨＣｌ、及び１ Ｍ ＨＮＯ３中の０．１ ｍＬ２２８Ｔｈを、ガラス瓶（４ ｍＬ ｖｉａｌ， Ｅ－Ｃ ｓａｍｐｌｅ， Ｗｈｅａｔｏｎ， Ｍｉｌｌｖｉｌｌｅ， ＮＪ）の中で調製し、そして、２２８Ｔｈの固定化のために、一般的な攪拌と共に、４時間室温で、インキュベートした。そして、数日間放置した。２２８Ｔｈを含有している部分をトップにローディングする前に、０．２ ｍＬの不活性のアクチニドレジンをはじめに添加することで、ジェネレーターカラムを、１ｍＬフィルトレーションカラム（Ｉｓｏｌｕｔｅ ＳＰＥ， Ｂｉｏｔａｇｅ ＡＢ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）中に調製した。不活性レジンは、もし、ジェネレーター操作の間に、２２８Ｔｈが放出された場合に、キャッチャー層として役立てるため、カラムの底に導入した。その後、ジェネレーターの用量を増やした。ジェネレーターカラムにローディングする前に、０．４ ｍＬのアクチニドレジンを含有するスラリーと、１ Ｍ ＨＮＯ３中の０．５ ｍＬ ２２８Ｔｈと、０．５ ｍＬ １ ＭＨＣｌとを、上述した通り、調製した。
２２４Ｒａジェネレーターは、２２８Ｔｈ源と、アクチニドレジンとを混合し、それをカラムにローディングすることで、調製した。１Ｍ ＨＮＯ３中の２２８Ｔｈ源は、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ， Ｇｅｒｍａｎｙ）またはＯａｋ Ｒｉｄｇｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＴＮ， ＵＳＡ）から購入し、そして、ＤＩＰＥＸ（登録商標）Ｅｘｔｒａｃｔａｎｔをベースとしたアクチニドレジンは、Ｅｉｃｈｒｏｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＬＬＣ（Ｌｉｓｌｅ， ＩＬ）社の２ｍＬプレパックカートリッジから得た。アクチニドレジンカートリッジ中の材料を取り出し、レジンを１Ｍ ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で調製した。約０．２５ ｍＬアクチニドレジンのスラリー、０．２５ ｍＬ １ Ｍ ＨＣｌ、及び１ Ｍ ＨＮＯ３中の０．１ ｍＬ２２８Ｔｈを、ガラス瓶（４ ｍＬ ｖｉａｌ， Ｅ－Ｃ ｓａｍｐｌｅ， Ｗｈｅａｔｏｎ， Ｍｉｌｌｖｉｌｌｅ， ＮＪ）の中で調製し、そして、２２８Ｔｈの固定化のために、一般的な攪拌と共に、４時間室温で、インキュベートした。そして、数日間放置した。２２８Ｔｈを含有している部分をトップにローディングする前に、０．２ ｍＬの不活性のアクチニドレジンをはじめに添加することで、ジェネレーターカラムを、１ｍＬフィルトレーションカラム（Ｉｓｏｌｕｔｅ ＳＰＥ， Ｂｉｏｔａｇｅ ＡＢ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）中に調製した。不活性レジンは、もし、ジェネレーター操作の間に、２２８Ｔｈが放出された場合に、キャッチャー層として役立てるため、カラムの底に導入した。その後、ジェネレーターの用量を増やした。ジェネレーターカラムにローディングする前に、０．４ ｍＬのアクチニドレジンを含有するスラリーと、１ Ｍ ＨＮＯ３中の０．５ ｍＬ ２２８Ｔｈと、０．５ ｍＬ １ ＭＨＣｌとを、上述した通り、調製した。
【0162】
ラジウムー２２４は、１－２ｍLの１Ｍ ＨＣlにより、ジェネレーターカラムから定期的に溶出できる。さらなる精製のために、ジェネレーターカラムからの未精製の溶出物を、２番目のアクチニドレジンカラムに直接ローディングした。２番目のカラムを１Ｍ ＨＣｌで洗浄した。この溶出物を、蒸発させて、閉鎖系で乾燥物を得た。ガラス瓶をヒータブロックに置き、そして、テフロン（登録商標）チューブ注入口およびガラス瓶のラバー／テフロン（登録商標）隔膜中の出口を通じて、Ｎ２ガスを流した。酸の蒸気を、Ｎ２ガスの流れによって、飽和ＮａＯＨのビーカーに通した。蒸留後に残っている放射性残留物を、０．２ｍＬまたはそれ以上の０．１Ｍ ＨＣｌで溶出した。放射性同位体キャリブレーター（ＣＲＣ－２５Ｒ， Ｃａｐｉｎｔｅｃ Ｉｎｃ．， Ｒａｍｓｅｙ， ＮＪ）を使用して、前記方法中の合計抽出活性を計測した。
【0163】
鉛２１２（Ｌｅａｄ－２１２）は、Ｈａｓｓｆｊｅｌｌ Ｓ．， ２００１の方法から変更を加えた、新規で単純化されたシングルチャンバー拡散システムを使用して、２２０Ｒｎの放射を介した２２４Ｒａから生産した。上述のように調製した、約２－２０μＬの２２４ＲａＣｌ２溶液（～２５０ｋＢｑ）を３ｍＬマイクロ反応容器ガラスｖ－ｖｉａｌ（Ｓｕｐｅｌｃｏ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）のスクリューキャップのシリコン隔壁を通じてあらかじめ挿入したシリンジチップに取り付けた小さな紙片（１５×５ｍｍ）の表面上に分配した。スクリューキャップは、紙片とｖ－ｖｉａｌの内面が接触しないように慎重にｖ－ｖｉａｌに取り付けた。密封されたｖ－ｖｉａｌは、ヒュームフード内で一晩放置した。次に、２２４Ｒａ源からガラス瓶内の空気を介して放出された２２０Ｒｎは、その短命娘核種２１６Ｐｏを介して２１２Ｐｂに拡散・崩壊し、容器内に沈殿した。２０～２８時間後、２２４Ｒａがバイアルに混入しないように、紙片のついたキャップを慎重に外した。その後、２１２Ｐｂは１Ｍ ＨＣｌでガラス壁から洗い流され、新しい容器に移された。
【0164】
実施例４―放射能の計測方法
約３０ｋＢｑまでの放射性サンプルは、２１２Ｐｂの定量化のために６０－１１０ｋｅＶのエネルギー範囲において、及び２２４Ｒａの定量化のために６５－３４５ｋｅＶのエネルギー範囲において、ＮａＩガンマカウンタによって、計測した。表１においてみられるように、これらのエネルギー範囲において、最も豊富なｘ線及びγ線は２１２Ｐｂからである。これらのウィンドウのカウントは、主に２１２Ｐｂに由来し、シリーズの他の核種からの寄与は最小限であると仮定されている。ラジウムー２２４活性は、６５－３４５ ｋｅＶウィンドウのカウントに基づいて間接的に決定した。サンプル中に存在する初めの２１２Ｐｂが崩壊し、そして、過渡平衡に達したとき、初めの計測後、２から４日間のサンプルを再計測することで、これを実行した。純粋な２２４Ｒａ源は、２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂの半減期に基づく約２日間後に、平衡状態に到達する。
約３０ｋＢｑまでの放射性サンプルは、２１２Ｐｂの定量化のために６０－１１０ｋｅＶのエネルギー範囲において、及び２２４Ｒａの定量化のために６５－３４５ｋｅＶのエネルギー範囲において、ＮａＩガンマカウンタによって、計測した。表１においてみられるように、これらのエネルギー範囲において、最も豊富なｘ線及びγ線は２１２Ｐｂからである。これらのウィンドウのカウントは、主に２１２Ｐｂに由来し、シリーズの他の核種からの寄与は最小限であると仮定されている。ラジウムー２２４活性は、６５－３４５ ｋｅＶウィンドウのカウントに基づいて間接的に決定した。サンプル中に存在する初めの２１２Ｐｂが崩壊し、そして、過渡平衡に達したとき、初めの計測後、２から４日間のサンプルを再計測することで、これを実行した。純粋な２２４Ｒａ源は、２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂの半減期に基づく約２日間後に、平衡状態に到達する。
【表1】
【0165】
放射性同位体キャリブレーター（ＣＲＣ－２５Ｒ ｏｒ ＣＲＣ－５５ｔＲ Ｃａｐｉｎｔｅｃ Ｉｎｃ．， Ｒａｍｓｅｙ， ＮＪ， ＵＳＡ）を使用して、５０ｋＢｑ超のサンプルを計測した。
【0166】
サンプル中の２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂのリアルタイムの分布を決定するため、高純度ゲルマニウム検知器（ａ Ｂｒｏａｄ Ｅｎｅｒｇｙ Ｇｅｒｍａｎｉｕｍ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ＢＥ３８３ＯＰ ｏｒ ａ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ Ｃｏａｘｉａｌ Ｇｅｒｍａｎｉｕｍ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ＧＣ３５１８， Ｍｉｒｉｏｎ－Ｃａｎｂｅｒｒａ， ＵＳＡ）を使用した。機器とともに使用される分光分析ソフトウェアパッケージは、Ｇｅｎｉｅアルゴリズムをベースにしていた。
【0167】
実施例５―２２４Ｒａの標識：表面標識、封入体標識、及び層保護ＣａＣＯ３マイクロ粒子
ラジウム標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子は、３つの異なる手順により調製した。
１．あらかじめ調製されたＣａＣＯ３マイクロ粒子の表面上に２２４Ｒａを吸着させることによる表面標識。
２．ＣａＣＯ３マイクロ粒子の形成の間に、ＣａＣＯ３マイクロ粒子中に２２４Ｒａを取り込むことによる封入体標識。
３．放射標識の後、ＣａＣＯ３の層をもともとの層の上に析出させ、放射性核種を包みこんだ表面標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子。
ラジウム標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子は、３つの異なる手順により調製した。
１．あらかじめ調製されたＣａＣＯ３マイクロ粒子の表面上に２２４Ｒａを吸着させることによる表面標識。
２．ＣａＣＯ３マイクロ粒子の形成の間に、ＣａＣＯ３マイクロ粒子中に２２４Ｒａを取り込むことによる封入体標識。
３．放射標識の後、ＣａＣＯ３の層をもともとの層の上に析出させ、放射性核種を包みこんだ表面標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子。
【0168】
表面標識のため、ＣａＣＯ３マイクロ粒子は放射標識の直前に水で３回、０．１Ｍ Ｎａ２ＳＯ４ （Ｍｅｒｃｋ）で２回洗浄した。ラジウム－２２４溶液（０．０３５－０．５Ｍ ＮＨ４ＯＡｃを含む０．１Ｍ ＨＣｌ中）を、微粒子表面への２２４Ｒａ２＋の共沈のためにＣａＣＯ３に対して０．００４ｗ／ｗ％Ｂａ２＋と０．６ｗ／ｗ％ＳＯ４
２－（Ｍｅｒｃｋ）の存在下で微粒子に添加した。放射標識は、０．９％生理食塩水（Ｍｅｒｃｋ）の溶液中で公転（ＨｕｌａＭｉｘｅｒ， Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， ＭＡ， ＵＳ）させながら１．５時間かけて行われた。
【0169】
マグネチックスターラ（ＢｉｏＳａｎ ＭＳ３０００、Ｒｉｇａ， Ｌａｔｖｉａ）で混合しながら、または手で振り、かつボルテックスしながら、０．００４から０．３ｗ／ｗ％ Ｂａ２＋（ＣａＣＯ３に対して）を含有している所望量の０．３３ Ｍまたは１Ｍ ＣａＣｌ２溶液と、所望量の２２４Ｒａとを、０．６から０．７ｗ／ｗ％ＳＯ４
２－（ＣａＣＯ３に対して）を含有している同量の０．３３Ｍまたは１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３溶液に素早く注入し、封入体標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子を調製した。いくつかの目的では、結晶化を遅らせるために１ｍｇ／ｍｌのゼラチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をＣａＣＯ３結晶化段階で添加し、冷蔵庫で一晩保存した。
【0170】
層保護ＣａＣＯ３マイクロ粒子を２２４Ｒａで表面標識し、過剰な標識液を除去した。その後、ＣＯ３
２－イオンとＣａ２＋イオンを０．３３－０．６６Ｍの濃度で含む溶液にマイクロ粒子を分散し、激しく攪拌しながら、元の表面を覆うようにＣａＣＯ３の薄い層を析出させた。
【0171】
すべての場合において、過剰な積層または標識溶液は、ＣａＣＯ３マイクロ粒子をＮａＣｌまたはリン化合物を添加したＮａＣｌに分散させる前に、それぞれ０．９％ＮａＣｌで１回または２回洗浄する前に、除去した。２回の洗浄工程が行われた場合、リン化合物は最初の洗浄工程の後に添加され、それによってマイクロ粒子は追加の洗浄に供された。最後に、放射標識されたマイクロ粒子懸濁液をオートクレーブした。
【0172】
実施例６―ＥＤＴＭＰ、パミドロネート、及びＳＨＭＰを伴ったＣａＣＯ３マイクロ粒子のサイズ制御
０．９％ＮａＣｌ中の、濃度を変えた添加剤（ＥＤＴＭＰ、パミドロネート、ＳＨＭＰ）の溶液に懸濁する前に、炭酸カルシウムマイクロ粒子は、注射用水（ＷＦＩ）で３回、場合によっては追加で０．１Ｍ硫酸ナトリウムで２回洗浄した。比較のため、添加剤ゼロのサンプルは、０．９％ＮａＣｌのみに懸濁させた。マイクロ粒子濃度は３０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌまで変化させた。懸濁液は１２１°Ｃで２１分間オートクレーブ処理した。場合によっては、実施例５に記載したように２２４Ｒａで表面標識したＣａＣＯ３マイクロ粒子上で計測を行った。
０．９％ＮａＣｌ中の、濃度を変えた添加剤（ＥＤＴＭＰ、パミドロネート、ＳＨＭＰ）の溶液に懸濁する前に、炭酸カルシウムマイクロ粒子は、注射用水（ＷＦＩ）で３回、場合によっては追加で０．１Ｍ硫酸ナトリウムで２回洗浄した。比較のため、添加剤ゼロのサンプルは、０．９％ＮａＣｌのみに懸濁させた。マイクロ粒子濃度は３０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌまで変化させた。懸濁液は１２１°Ｃで２１分間オートクレーブ処理した。場合によっては、実施例５に記載したように２２４Ｒａで表面標識したＣａＣＯ３マイクロ粒子上で計測を行った。
【0173】
懸濁液を調製し、そして室温で保管してから８日までに、レーザー回折式粒度分布計（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）を使用して、オートクレーブされた懸濁液の粒子サイズを計測した。添加剤および添加剤濃度、マイクロ粒子粒度分布および計測日は、表２に要約している。比較のために、水中に懸濁しているときは、未処理のＣａＣＯ３原料の体積基準のメディアン直径は、与えられる。添加剤非存在下では、サンプル調製後すぐにメディアン粒子径が３倍の増加を引き起こし、５日後には水性媒体中で成長が続くため、さらに大きなマイクロ粒子となった。添加剤であるＥＤＴＭＰ、ＳＨＭＰ、またはパミドロネートを加えることで、未加工の原料に関してマイクロ粒子サイズを安定させた。添加剤濃度の影響はＥＤＴＭＰで最も顕著で、ＣａＣＯ３に対して０．００１ｇ／ｇの濃度では試料調製から５日後にマイクロ粒子サイズを安定させることができなかったのに対し、ＥＤＴＭＰ濃度が０．０１３ｇ／ｇ以上では少なくとも８日までサイズが安定したままだった。
【表2】
【0174】
実施例７―ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＣａＣＯ３マイクロ粒子上の放射能の保持：添加剤としてのリン化合物の影響
表面標識、封入体標識、または層保護を含んでいるＣａＣＯ３マイクロ粒子の放射標識は、実施例５において述べた通り行った。ＣａＣＯ３に対して、０－０．１００ｇ／ｇの範囲の添加剤（ＥＤＴＭＰ、パミドロネート、またはＳＨＭＰ）濃度である０．９％ＮａＣｌ中に、マイクロ粒子を、１２．５－２５０ｍｇ／ｍｌ濃度で懸濁した。懸濁液をオートクレーブし、そして室温で放置した。マイクロ粒子上の２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂの保持を決定するため、オートクレーブの後、サンプルの一定分量を異なる時間点で分取した。その後、マイクロ粒子を遠心分離により液相から分離し、得られたペレット画分および上清画分中の放射能を、ＨＰＧｅ検知器またはＨｉｄｅｘ自動ガンマカウンタを使用して（詳細は実施例４を参照）計測した。マイクロ粒子上の保持された放射能割合を、ペレット画分における活性と分離前の全体サンプルにおける活性との比で定義した。表面標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子および層保護ＣａＣＯ３マイクロ粒子上の２１２Ｐｂ及び２２４Ｒａの両方からの保持された放射能の概要は、それぞれ表３および表４に与えられる。おそらく、より高いＥＤＴＭＰ量を伴う２１２Ｐｂ保持のより低い程度に対する傾向を除いて、サンプル調製から１週目において、リン化合物の添加は、マイクロ粒子上の保持された放射能の割合に影響を与えない。すべての試験された添加剤の量は、マイクロ粒子のサイズを制御できた（実施例６を参照）。
表面標識、封入体標識、または層保護を含んでいるＣａＣＯ３マイクロ粒子の放射標識は、実施例５において述べた通り行った。ＣａＣＯ３に対して、０－０．１００ｇ／ｇの範囲の添加剤（ＥＤＴＭＰ、パミドロネート、またはＳＨＭＰ）濃度である０．９％ＮａＣｌ中に、マイクロ粒子を、１２．５－２５０ｍｇ／ｍｌ濃度で懸濁した。懸濁液をオートクレーブし、そして室温で放置した。マイクロ粒子上の２２４Ｒａ及び２１２Ｐｂの保持を決定するため、オートクレーブの後、サンプルの一定分量を異なる時間点で分取した。その後、マイクロ粒子を遠心分離により液相から分離し、得られたペレット画分および上清画分中の放射能を、ＨＰＧｅ検知器またはＨｉｄｅｘ自動ガンマカウンタを使用して（詳細は実施例４を参照）計測した。マイクロ粒子上の保持された放射能割合を、ペレット画分における活性と分離前の全体サンプルにおける活性との比で定義した。表面標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子および層保護ＣａＣＯ３マイクロ粒子上の２１２Ｐｂ及び２２４Ｒａの両方からの保持された放射能の概要は、それぞれ表３および表４に与えられる。おそらく、より高いＥＤＴＭＰ量を伴う２１２Ｐｂ保持のより低い程度に対する傾向を除いて、サンプル調製から１週目において、リン化合物の添加は、マイクロ粒子上の保持された放射能の割合に影響を与えない。すべての試験された添加剤の量は、マイクロ粒子のサイズを制御できた（実施例６を参照）。
【表3】
【表4】
【0175】
実施例８―マウスにおける腹腔内に投与された２２４Ｒａ標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の体内分布
施設内で飼育し、健康的な胸腺欠損ヌードフォックスヌーマウス（ａｔｈｙｍｉｃ ｎｕｄｅ Ｆｏｘｎｎｕ ｍｉｃｅ）を使用した。マウスに異なるバリアントの
２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子またはカチオン性の２２４Ｒａを腹腔内に投与し（詳細は表５を参照）、注射から約１日後に、前記動物が麻酔下にある間に、心臓穿刺により、血液を収集した。直後に、選択された器官および組織を収集し、計量し、そしてＨｉｄｅｘガンマカウンタにより放射能を計測する前に、前記動物を安楽死させた。２２４Ｒａと最も長い半減期である２１２Ｐｂ（１０．６時間）を伴う娘核種の１グラム組織当たりの注射された服用量当たりの割合を推定した。犠牲にした後できるだけ早く行ったサンプルの計測は、２１２Ｐｂの量を推定するために使用し、一方で、犠牲にした後最低２日目の再計測は、２２４Ｒａの量を決定するために使用した。計測された放射能を、サンプルと一緒に計測された注射物の標準サンプル中の放射能と直接比較した。
施設内で飼育し、健康的な胸腺欠損ヌードフォックスヌーマウス（ａｔｈｙｍｉｃ ｎｕｄｅ Ｆｏｘｎｎｕ ｍｉｃｅ）を使用した。マウスに異なるバリアントの
２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子またはカチオン性の２２４Ｒａを腹腔内に投与し（詳細は表５を参照）、注射から約１日後に、前記動物が麻酔下にある間に、心臓穿刺により、血液を収集した。直後に、選択された器官および組織を収集し、計量し、そしてＨｉｄｅｘガンマカウンタにより放射能を計測する前に、前記動物を安楽死させた。２２４Ｒａと最も長い半減期である２１２Ｐｂ（１０．６時間）を伴う娘核種の１グラム組織当たりの注射された服用量当たりの割合を推定した。犠牲にした後できるだけ早く行ったサンプルの計測は、２１２Ｐｂの量を推定するために使用し、一方で、犠牲にした後最低２日目の再計測は、２２４Ｒａの量を決定するために使用した。計測された放射能を、サンプルと一緒に計測された注射物の標準サンプル中の放射能と直接比較した。
【表5】
【0176】
ｅｘ ｖｉｖｏの生体内分布データは、組織分布は、サイズ制御添加剤を使用している
２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子（図１Ｂ、Ｃ及びＤ）とサイズ制御添加剤を使用していない２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子（図１Ａ）との間で、おおむね類似していたことを示す。ＩＰ投与されたカチオン性の２２４Ｒａと比較して（図２）、大腿骨および頭蓋骨における減少された取り込みを反映しているように、リン含有添加剤が使用されている２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子のすべてのバリアントは、放射能の増加されたＩＰ保持率を示す。添加物なしのバリアントに対して（図１Ａ）、１ｍｇを投与した後の骨中の２２４Ｒａの保持率は、ＩＰ注射後のカチオン性の２２４Ｒａの保持率と同等である。他方で、１ｍｇの層保護における２２４ＲａのＩＰ保持率は、有意に改善されている（図１Ｂ）。
２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子（図１Ｂ、Ｃ及びＤ）とサイズ制御添加剤を使用していない２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子（図１Ａ）との間で、おおむね類似していたことを示す。ＩＰ投与されたカチオン性の２２４Ｒａと比較して（図２）、大腿骨および頭蓋骨における減少された取り込みを反映しているように、リン含有添加剤が使用されている２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子のすべてのバリアントは、放射能の増加されたＩＰ保持率を示す。添加物なしのバリアントに対して（図１Ａ）、１ｍｇを投与した後の骨中の２２４Ｒａの保持率は、ＩＰ注射後のカチオン性の２２４Ｒａの保持率と同等である。他方で、１ｍｇの層保護における２２４ＲａのＩＰ保持率は、有意に改善されている（図１Ｂ）。
【0177】
実施例９―マウス卵巣がん異種移植モデルにおけるリン化合物中に分散された放射標識されたマイクロ粒子の治療効果。
ヒト卵巣がんは、しばしば腹水をもたらし、そして、それゆえに、リン化合物中に分散された放射標識されたマイクロ粒子の治療効果は、免疫不全マウスにおける腹水として樹立された侵攻性の腫瘍細胞成長を生み出す卵巣がん異種移植モデルにおいて研究されていた。
ヒト卵巣がんは、しばしば腹水をもたらし、そして、それゆえに、リン化合物中に分散された放射標識されたマイクロ粒子の治療効果は、免疫不全マウスにおける腹水として樹立された侵攻性の腫瘍細胞成長を生み出す卵巣がん異種移植モデルにおいて研究されていた。
【0178】
異種移植は、施設内で飼育された４－５週齢のメスの胸腺欠損ヌードFoxnｎｕマウス中に、ＥＳ－２細胞懸濁液（０．２ｍｌＲＰＭＩ中に１×１０６細胞）の１回のＩＰ注射により、作成した。約１日後に、マウスを異なるバリアントの２２４Ｒａ標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子を腹腔内投与処理した（表５）。コントロール群のマウスには、０．９％ＮａＣｌ ＩＰを投与した。治療効果は、生存時間により、評価した。体重、行動、姿勢及び外観における変化を週に2回、マウスが病気の進行を示している兆候を示したときは、それよりも頻繁に、観察した。マウスがあらかじめ設定されたエンドポイントに到達したとき、エンドポイントには、急激な体重減少（一週間以内に１０％を超える）、腹水の蓄積および／または悪液質に起因する可動性の深刻な障害を含んでおり、マウスは、頚椎脱臼により、安楽死させた。
【0179】
生存時間は、腫瘍細胞接種後の日数として記録した。そして、カプラン・マイヤー生存曲線は、図３に存在し、そして、メディアン生存時間は、表６に存在する。生存曲線の比較は、すべての実験群は、コントロール群と有意に異なっていたことを明らかにした（ペアワイズログランク検定、ｐ≦０．００１４、０．０５のファミリーワイズ有意水準）。腫瘍細胞接種後１９日目に、生理食塩水コントロール群におけるすべてのマウスを安楽死させた。一方で、２２４Ｒａ－標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子治療群におけるすべてのマウスは、本研究のエンドポイントに到達しなかった。リン添加物を使用していたかどうかまたはどちらであるか（ＥＤＴＭＰ対ＳＨＭＰ）またはマイクロ粒子が表面標識であるかまたは封入体標識であるかにかかわりなく、生理食塩水コントロールと比較して、すべての２２４Ｒａ－治療は生存において類似の延長を示した。
【表6】
【0180】
実施例１０―同系の大腸がんモデルマウスにおけるリン化合物中に分散された放射標識マイクロ粒子の抗腫瘍活性。
大腸がんは、頻繁に、腹膜腔における転移を引き起こし、そして、それゆえに、リン化合物中に分散された放射標識されたマイクロ粒子の治療効果は、免疫応答性マウスにおけるIP大腸がんの同系モデルにおいて、調査されていた。
大腸がんは、頻繁に、腹膜腔における転移を引き起こし、そして、それゆえに、リン化合物中に分散された放射標識されたマイクロ粒子の治療効果は、免疫応答性マウスにおけるIP大腸がんの同系モデルにおいて、調査されていた。
【0181】
腫瘍は、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６の一回のＩＰ注射により、樹立した。約６週齢のメスＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＲｊマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ，フランス）におけるＷＴ（０．２ ｍｌ ＰＢＳ中の５ × １０４細胞）。一日後、マウスを異なるバリアントの２２４Ｒａ－標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の腹腔内注射処置をした（表８）。コントロール群のマウスを、０．９ ％ＮａＣｌ ＩＰで投与した。生存時間によって計測されるように、効能は、急激な体重変化、腹水の発達、身体的外見のスコアリングおよび腹部における触知可能な腫瘍の発達に基づいていた。マウスがこれらのあらかじめ設定されたエンドポイントに到達したとき、マウスを頚椎脱臼により安楽死させた。
【0182】
生存時間は、腫瘍細胞接種後の日数として記録した。そして、カプラン・マイヤー生存曲線は図４に存在し、そして、メディアン生存時間は、表７に存在する。メディアン生存は、異なる２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－マイクロ粒子に対して、２７から３３日目のコントロール群において、１８日目から増加した。リン化合物を使用していたかどうかまたはどちらであるか（ＥＤＴＭＰ対ＳＨＭＰ）またはマイクロ粒子が表面標識であるかまたは封入体標識であるかにかかわりなく、生理食塩水コントロールと比較して、すべての２２４Ｒａ－治療は生存において類似の延長を示した。
【表7】
【0183】
実施例１１―パミドロネート中の鉛２１２標識炭酸カルシウムマイクロ粒子。
炭酸カルシウムマイクロ粒子および２１２Ｐｂ溶液を、実施例１および実施例３において前述した通り、作成した。乾燥ＣａＣＯ３マイクロ粒子をＷＦＩ中に懸濁し、超音波処理をし、そして、ＷＦＩで合計３回洗浄した。マイクロ粒子を２５－５０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．９％ＮａＣｌ中に最終的に懸濁し、そして、パミドロネート二ナトリウムを、０．０１ｇ／ｇの相対的なパミドロネート／ＣａＣＯ３濃度を目的に、懸濁液に添加した。室温まで冷却される前に、密閉されたヘッドスペースガラス瓶において、懸濁液を、１２１°Ｃで２０分間オートクレーブした。鉛２１２溶液は、それぞれ１０ｖ／ｖ％の５Ｍ酢酸アンモニウムおよび１Ｍ水酸化ナトリウムを添加することで、ｐＨ中和を行った。放射標識過程において、約５０％のマイクロ粒子懸濁液に応じた２１２Ｐｂ溶液の用量を、シリンジの使用により、マイクロ粒子懸濁液とともに、密閉された容器に添加した。その後、前記懸濁液をボルテックスし、３０分から６０分の間水平な撹拌機に置いた。マイクロ粒子質量当たりの活性は、３-９９ｋＢｑ／ｍｇで異なる。いくつかの場合において、マイクロ粒子懸濁液は、標識手順の後、０．９％ＮａＣｌでさらに希釈した。
炭酸カルシウムマイクロ粒子および２１２Ｐｂ溶液を、実施例１および実施例３において前述した通り、作成した。乾燥ＣａＣＯ３マイクロ粒子をＷＦＩ中に懸濁し、超音波処理をし、そして、ＷＦＩで合計３回洗浄した。マイクロ粒子を２５－５０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．９％ＮａＣｌ中に最終的に懸濁し、そして、パミドロネート二ナトリウムを、０．０１ｇ／ｇの相対的なパミドロネート／ＣａＣＯ３濃度を目的に、懸濁液に添加した。室温まで冷却される前に、密閉されたヘッドスペースガラス瓶において、懸濁液を、１２１°Ｃで２０分間オートクレーブした。鉛２１２溶液は、それぞれ１０ｖ／ｖ％の５Ｍ酢酸アンモニウムおよび１Ｍ水酸化ナトリウムを添加することで、ｐＨ中和を行った。放射標識過程において、約５０％のマイクロ粒子懸濁液に応じた２１２Ｐｂ溶液の用量を、シリンジの使用により、マイクロ粒子懸濁液とともに、密閉された容器に添加した。その後、前記懸濁液をボルテックスし、３０分から６０分の間水平な撹拌機に置いた。マイクロ粒子質量当たりの活性は、３-９９ｋＢｑ／ｍｇで異なる。いくつかの場合において、マイクロ粒子懸濁液は、標識手順の後、０．９％ＮａＣｌでさらに希釈した。
【0184】
放射標識の収率は、懸濁液（上清Ｓ及び粒子ペレットＰ）の小さなサンプル一定分量におけるマイクロ粒子からの液相を分離することで、評価した。放射能は、ＨＰＧｅ検知器またはＨｉｄｅｘ自動ガンマカウンタのいずれかを使用することにより、両方の分画において計測した。放射標識の収率は、ＣＰＭ（Ｐ）／ＣＰＭ（Ｓ）＋ＣＰＭ（Ｐ）として評価した。そして、ＣＰＭは分当たりのカウントを意味する。
【0185】
表８において、放射標識の収率の概要が与えられている。水平な攪拌の間のインキュベーション時間は、放射標識の収率には影響しないが、より高い活性濃度を伴う改善された収率の傾向がある。
【表8】
【0186】
実施例１２―ＥＤＴＭＰ添加による炭酸カルシム層の追加をした場合とそうでない場合の放射標識された炭酸カルシウムのサイズ制御。
様々な濃度を伴うＥＤＴＭＰの懸濁液中の、非標識、疑似標識、および放射標識されたＣａＣＯ３－ＭＰｓ（ＭＰｓ：マイクロ粒子）のサイズは、レザー回析（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ．， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）により計測した。少量の乾燥ＣａＣＯ３－ＭＰｓを水中に分散させ、そして、超音波処理をして分散させることにより、放射標識および疑似標識のための原料として使用された非オートクレーブＣａＣＯ３－ＭＰｓを基準として使用した。経時的なサイズ安定性は、室温での保管後７日後の計測による放射標識されたＣａＣＯ３－ＭＰｓにおいて、計測した。表面標識ＭＰｓは、層被包ＭＰｓと比較した。
様々な濃度を伴うＥＤＴＭＰの懸濁液中の、非標識、疑似標識、および放射標識されたＣａＣＯ３－ＭＰｓ（ＭＰｓ：マイクロ粒子）のサイズは、レザー回析（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ．， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）により計測した。少量の乾燥ＣａＣＯ３－ＭＰｓを水中に分散させ、そして、超音波処理をして分散させることにより、放射標識および疑似標識のための原料として使用された非オートクレーブＣａＣＯ３－ＭＰｓを基準として使用した。経時的なサイズ安定性は、室温での保管後７日後の計測による放射標識されたＣａＣＯ３－ＭＰｓにおいて、計測した。表面標識ＭＰｓは、層被包ＭＰｓと比較した。
【0187】
ラジウムー２２４によって放射標識され、そしてオートクレーブにより懸濁液を殺菌する前に、炭酸カルシウムの層を追加することで、さらに被包された炭酸カルシウムマイクロ粒子のサイズを制御するＥＤＴＭＰの能力を調査した。図５は、少なくとも１％のＥＤＴＭＰの添加は、マイクロ粒子のサイズ制御をもたらしたことを示す。
【0188】
この実施例は、ＥＤＴＭＰによるサイズ制御は、放射標識および層被包製品に対して達成されることも示す。
【0189】
実施例１３―ＥＤＴＭＰ添加による炭酸カルシウムマイクロ粒子のサイズ制御による懸濁液中のマイクロ粒子の沈降速度の減速。
溶液中に懸濁し続けるＭＰｓの能力は、沈降速度によって評価した。そして、それは、サンプルの目視検査およびＥＤＴＭＰを添加した場合と添加しなかった場合の非放射性の疑似標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓの異なる懸濁液の濁度の評価により、調査した。濁度は、ＣａＣＯ３－ＭＰ懸濁液を水（注射用の水）で希釈し、そして、分光光度計（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｕ－１９００， Ｈｉｔａｃｈｉ Ｈｉｇｈ－Ｔｅｃｈ， Ｔｏｋｙｏ， Ｊａｐａｎ）を使用して、８００ｎｍの波長で、３０分以上、吸光度の変化を計測することで、評価した。ＣａＣＯ３による潜在的な吸光を減少させ、そして、粒子による光散乱を改善するために、８００ｎｍの波長を選んだ。それゆえに、時間とともに、吸光度が減少することは、ＭＰｓによる減少された光散乱、および沈降に起因するそれらによるサンプルの減少された濁度と直接的に関連する。図６を参照。
溶液中に懸濁し続けるＭＰｓの能力は、沈降速度によって評価した。そして、それは、サンプルの目視検査およびＥＤＴＭＰを添加した場合と添加しなかった場合の非放射性の疑似標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓの異なる懸濁液の濁度の評価により、調査した。濁度は、ＣａＣＯ３－ＭＰ懸濁液を水（注射用の水）で希釈し、そして、分光光度計（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｕ－１９００， Ｈｉｔａｃｈｉ Ｈｉｇｈ－Ｔｅｃｈ， Ｔｏｋｙｏ， Ｊａｐａｎ）を使用して、８００ｎｍの波長で、３０分以上、吸光度の変化を計測することで、評価した。ＣａＣＯ３による潜在的な吸光を減少させ、そして、粒子による光散乱を改善するために、８００ｎｍの波長を選んだ。それゆえに、時間とともに、吸光度が減少することは、ＭＰｓによる減少された光散乱、および沈降に起因するそれらによるサンプルの減少された濁度と直接的に関連する。図６を参照。
【0190】
この実施例は、沈降速度は、粒子サイズの減少により、減少されることを示している。製品の臨床投与の観点から利点のある懸濁液の処理に対する改善された特徴がある。
【0191】
実施例１４―ＥＤＴＭＰおよび層被包による放射化学性質
放射化学的純度は、ある期間後の、ＭＰｓ上の保持された放射性核種の割合として定義した。懸濁液の小さな一定分量は、遠心分離により、ＭＰ分画Ｐおよび上清分画Ｓに分離した。放射化学的純度の割合である％ＲＣＰは、Ｐ分画における放射能の割合として定義した。：
放射化学的純度は、ある期間後の、ＭＰｓ上の保持された放射性核種の割合として定義した。懸濁液の小さな一定分量は、遠心分離により、ＭＰ分画Ｐおよび上清分画Ｓに分離した。放射化学的純度の割合である％ＲＣＰは、Ｐ分画における放射能の割合として定義した。：
【0192】
ＣＰＭ（Ｐ）／ＣＰＭ（Ｐ＋Ｓ）ＣＰＭは、分当たりのカウントを意味する（ｃｏｕｎｔｓ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ）。２つの分画中の放射能を、Ｈｉｄｅｘ自動ガンマカウンタ（Ｈｉｄｅｘ Ｏｙ， Ｔｕｒｋｕ， Ｆｉｎｌａｎｄ）を使用することで、別々に計測した。２１２Ｐｂの放射能は、６０－１１０ｋｅＶウィンドウにおいて、カウントすることで、定量化した。２２４Ｒａに対して、放射能は、２つの分画を少なくとも２日間の間崩壊させた後、２２４Ｒａとプロジェニー２１２Ｐｂの間の過渡平衡を仮定し、そして、６５－３４５ｋｅＶウィンドウにおいて２１２Ｐｂ活性を計測することで、間接的に決定した。ガンマエネルギーとＸ線は、主にこの娘核種から発生した。２１２Ｐｂ及び２２４Ｒａ％ＲＣＰの経時的な安定性を評価するために、室温で最長７日間の保管の後、サンプリングと計測を繰り返した。
【0193】
ＭＰｓからの放出された２１２Ｐｂと溶液中のＥＤＴＭＰの間の錯体形成は、異なるバリアントの２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓの液相において、評価した（図７）。遠心分離により、液体分画を、ＭＰｓから初めに分離した。得られた上清中の２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ錯体の程度は、インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）ストリップ（Ｔｅｃ－Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃１５０－７７２， Ｂｉｏｄｅｘ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．， ＮＹ， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）を使用して、計測した。このシステムにおいて、キレートされた２１２Ｐｂは移動相と共に移動し、一方で、大半（＞９０％）の結合しなかった２１２Ｐｂ２＋は、元々の線上に残る。従って、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ錯体の評価が可能となる。水（医薬品グレード）または０．９％ＮａＣｌを移動相として使用し、そして、溶媒先端がトップラインに到達した後、ストリップを半分にカットした。２つの部分にある２１２Ｐｂの放射能は、上述した通り、ガンマカウンタにより、計測した。キレート化の程度は、２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓの液体分画における移動した２１２Ｐｂの割合によって定義し、そして、ＥＤＴＭＰ非添加の０．９％ ＮａＣｌ溶液中のフリー２１２Ｐｂ２＋の不特定な移動を引き算することで定量化した。数式１は、キレート化の割合を述べている；Ａ２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰは、２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓの上清における計測された活性を意味し、Ａ２１２Ｐｂは、０．９％ＮａＣｌ溶液中のフリー２１２Ｐｂ２＋の計測された活性を意味し、そして、ｍおよびｏは、ＩＴＬＣストリップの２つの部分を意味する；ｍは、移動相とともに移動されたこと（ｍｉｇｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ）を意味し、ｏは、元々の線（ｏｒｉｇｉｎ ｌｉｎｅ）を意味する。
【数1】
【0194】
この実施例は、層被包のある場合とない場合のＣａＣＯ３マイクロ粒子上の２１２Ｐｂ及び２２４Ｒａの保持の比較を示し、そして、ＥＤＴＭＰ中の製品の層追加により、特に、２１２Ｐｂの保持がどのように改善されるかを示している。
【0195】
実施例１５―ＥＤＴＭＰ中の層被包２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓのｉ．ｐ．注射後のラジウムー２２４および鉛２１２の体内分布。
添加されたＥＤＴＭＰを含んだ層被包２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓの体内分布は、施設内で生育されたメスの胸腺欠損ヌードマウス（Ｈｓｄ： Ａｔｈｙｍｉｃ Ｎｕｄｅ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ）において評価した。上述した通り、炭酸カルシウムマイクロ粒子を標識し、そしてオートクレーブした。質量服用量（ｍｇ服用量）の影響は、等張注入溶液（Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ， Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．， ＩＬ， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）を用いて希釈液を作成し、１－１２ｍｇＣａＣＯ３および６－１８ ｋＢｑの範囲の服用量をテストすることで、検討した。１回のｉ．ｐ．注射後の１日目、マウスを頚椎脱臼で安楽死させ、そして、組織サンプルを得て放射能を計測した。それぞれの治療に関して投与された服用量の２５－５０％に応じた３つの標準試料を使用して、注入された放射能服用量を決定した。組織の２１２Ｐｂおよび２２４Ｒａの放射能並びに標準試料の放射能は、上述した通り、ガンマカウンタを使用することで、計測した。そして、１グラム組織当たりの注入された服用量割合（％ＩＤ／ｇ）を計算した。崩壊および／または２２４Ｒａおよび２１２Ｐｂのイングロース（ｉｎｇｒｏｗｔｈ）の校正は、２つの理由より、％ＩＤ／ｇの計算において、実行しなかった。第一に、標準試料および組織試料を、２－３時間未満の時間間隔でカウントした（すなわち、２２４Ｒａの半減期の３％）ことによる。そして、第二に、誤差伝搬を、計測された活性が、機器の定量の限界に近いまたは下のとき、２２４Ｒａの計測における不確実性の結果として、回避できえたことによる。ｉ．ｐ．注射後１日目のフリー２２４Ｒａの骨格蓄積に対する参考として、１つのグループのマウスは、Ｗｅｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌによって以前に述べられている通りに調製された～３０ｋＢｑ２２４ＲａＣｌ２を受け取った。図８を参照。
添加されたＥＤＴＭＰを含んだ層被包２２４Ｒａ－ＣａＣＯ３－ＭＰｓの体内分布は、施設内で生育されたメスの胸腺欠損ヌードマウス（Ｈｓｄ： Ａｔｈｙｍｉｃ Ｎｕｄｅ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ）において評価した。上述した通り、炭酸カルシウムマイクロ粒子を標識し、そしてオートクレーブした。質量服用量（ｍｇ服用量）の影響は、等張注入溶液（Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ， Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．， ＩＬ， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）を用いて希釈液を作成し、１－１２ｍｇＣａＣＯ３および６－１８ ｋＢｑの範囲の服用量をテストすることで、検討した。１回のｉ．ｐ．注射後の１日目、マウスを頚椎脱臼で安楽死させ、そして、組織サンプルを得て放射能を計測した。それぞれの治療に関して投与された服用量の２５－５０％に応じた３つの標準試料を使用して、注入された放射能服用量を決定した。組織の２１２Ｐｂおよび２２４Ｒａの放射能並びに標準試料の放射能は、上述した通り、ガンマカウンタを使用することで、計測した。そして、１グラム組織当たりの注入された服用量割合（％ＩＤ／ｇ）を計算した。崩壊および／または２２４Ｒａおよび２１２Ｐｂのイングロース（ｉｎｇｒｏｗｔｈ）の校正は、２つの理由より、％ＩＤ／ｇの計算において、実行しなかった。第一に、標準試料および組織試料を、２－３時間未満の時間間隔でカウントした（すなわち、２２４Ｒａの半減期の３％）ことによる。そして、第二に、誤差伝搬を、計測された活性が、機器の定量の限界に近いまたは下のとき、２２４Ｒａの計測における不確実性の結果として、回避できえたことによる。ｉ．ｐ．注射後１日目のフリー２２４Ｒａの骨格蓄積に対する参考として、１つのグループのマウスは、Ｗｅｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌによって以前に述べられている通りに調製された～３０ｋＢｑ２２４ＲａＣｌ２を受け取った。図８を参照。
【0196】
この実施例は、異なる量の層被包マイクロ粒子およびフリーラジウムー２２４間のラジウムー２２４および鉛２１２の両方の生体内分布の比較を示す。マイクロ粒子の量が増加するにつれ、骨の吸収レベルは低下した。
【0197】
実施例１６―２．５％（ｗ／ｗ）ＥＤＴＭＰを含んでいる層被包マイクロ粒子上の２０８Ｐｂおよび ２１２Ｐｂの分布。
ＭＰｓ上に吸着された化学的に等価な安定娘核種２０８Ｐｂの蓄積量は、時間と共に増加するが、これは２１２Ｐｂの吸着に対して少しの影響しか与えないように思える。このＥＤＴＭＰ濃度における表面標識バリアントに対して、２１２Ｐｂの％ＲＣＰは、０日目にたった５６％であり、４日目に７０％まで増加する。
ＭＰｓ上に吸着された化学的に等価な安定娘核種２０８Ｐｂの蓄積量は、時間と共に増加するが、これは２１２Ｐｂの吸着に対して少しの影響しか与えないように思える。このＥＤＴＭＰ濃度における表面標識バリアントに対して、２１２Ｐｂの％ＲＣＰは、０日目にたった５６％であり、４日目に７０％まで増加する。
【0198】
実施例１７―２１２Ｐｂ２＋ および２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの炭酸カルシウムマイクロ粒子への吸着
２１２Ｐｂとカルシウムの両方とＥＤＴＭＰの知られている錯体生成特性は、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ複合体が、ＭＰｓと結合することが可能なことをも示している。この仮説を検証するために、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの溶液を添加した後で、層被包のある場合とない場合の両方について、非放射性疑似標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓ上の２１２Ｐｂの吸着を評価した。１７－２０％の２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰがＭＰｓ上に吸着したことを発見した；代わりに結合していない２１２Ｐｂ２＋ （２１２ＰｂＣｌ２）を添加したときは、吸着は９６％まで増加した。２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの減少された吸着は、表面標識ＭＰｓおよび層被包ＭＰｓの両方の２１２Ｐｂの％ＲＣＰが、ＭＰ懸濁液中でより高いＥＤＴＭＰ濃度において減少されたという一般的な観察に則している。
２１２Ｐｂとカルシウムの両方とＥＤＴＭＰの知られている錯体生成特性は、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰ複合体が、ＭＰｓと結合することが可能なことをも示している。この仮説を検証するために、２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの溶液を添加した後で、層被包のある場合とない場合の両方について、非放射性疑似標識ＣａＣＯ３－ＭＰｓ上の２１２Ｐｂの吸着を評価した。１７－２０％の２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰがＭＰｓ上に吸着したことを発見した；代わりに結合していない２１２Ｐｂ２＋ （２１２ＰｂＣｌ２）を添加したときは、吸着は９６％まで増加した。２１２Ｐｂ－ＥＤＴＭＰの減少された吸着は、表面標識ＭＰｓおよび層被包ＭＰｓの両方の２１２Ｐｂの％ＲＣＰが、ＭＰ懸濁液中でより高いＥＤＴＭＰ濃度において減少されたという一般的な観察に則している。
【0199】
実施例１８―より小さなマイクロ粒子（ＣａＣＯ３ＳＭＰｓ）の調製
炭酸カルシウムマイクロ粒子を２つの異なる手順により作成し、２つの異なるサイズ集団をもった粒子を作成した。ＣａＣＯ３マイクロ粒子生産の１つの手順は、実施例１において詳述した通りであった。もう一方の手順は、初めの手順と類似であったが、より小さいマイクロ粒子（ＣａＣＯ３ＳＭＰｓ）の生産をするために、自然に起こる沈降反応の間に、グリセロールを添加した。１ＭのＣａＣｌ２およびＮａ２ＣＯ３（Ｍｅｒｃｋ）溶液を混合する前に、グリセロール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれの溶液に５０％（ｖ／ｖ）の濃度で添加し、前記溶液を０．５Ｍまで希釈した。２つの溶液を、６０００ＲＰＭ、３０分間でオーバーヘッドスターラーを用いて、激しい攪拌下で組み合わせた。１８０°Ｃで乾燥させる前に、ＣａＣＯ３ＳＭＰｓの沈殿物を注射用の水（ＷＦＩ）で３回洗浄した。マイクロ粒子の粒度分布は、レーザー回折式粒度分布計（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）を用いて、計測した。実施例１９、２０および２１において使用されているＣａＣＯ３ＭＰおよびＣａＣＯ３ＳＭＰｓは、それぞれ、およそ５μｍおよび２μｍの体積基準メディアン直径を有していた。２１２Ｐｂによる標識は、実施例１１において述べられている通り実行した。
炭酸カルシウムマイクロ粒子を２つの異なる手順により作成し、２つの異なるサイズ集団をもった粒子を作成した。ＣａＣＯ３マイクロ粒子生産の１つの手順は、実施例１において詳述した通りであった。もう一方の手順は、初めの手順と類似であったが、より小さいマイクロ粒子（ＣａＣＯ３ＳＭＰｓ）の生産をするために、自然に起こる沈降反応の間に、グリセロールを添加した。１ＭのＣａＣｌ２およびＮａ２ＣＯ３（Ｍｅｒｃｋ）溶液を混合する前に、グリセロール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれの溶液に５０％（ｖ／ｖ）の濃度で添加し、前記溶液を０．５Ｍまで希釈した。２つの溶液を、６０００ＲＰＭ、３０分間でオーバーヘッドスターラーを用いて、激しい攪拌下で組み合わせた。１８０°Ｃで乾燥させる前に、ＣａＣＯ３ＳＭＰｓの沈殿物を注射用の水（ＷＦＩ）で３回洗浄した。マイクロ粒子の粒度分布は、レーザー回折式粒度分布計（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ３０００， Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）を用いて、計測した。実施例１９、２０および２１において使用されているＣａＣＯ３ＭＰおよびＣａＣＯ３ＳＭＰｓは、それぞれ、およそ５μｍおよび２μｍの体積基準メディアン直径を有していた。２１２Ｐｂによる標識は、実施例１１において述べられている通り実行した。
【0200】
実施例１９―オートクレーブし、そして２１２Ｐｂで標識した後の懸濁液中の様々なＣａＣＯ３粒子の放射化学的性質。
２１２Ｐｂ放射標識粒子（実施例１または実施例１８において生産され、そして実施例１１において述べられている通り標識された）の計測には、放射能濃度、放射化学収率／放射化学純度、経時的安定性、および親核種２２４Ｒａの起こりうるブレイクスルーを決定することを含んでいる。２１２Ｐｂ溶液の放射能レベルおよび懸濁液中の標識されたＣａＣＯ３粒子のガラス瓶を、電離箱ドーズキャリブレータ（Ｃａｐｉｎｔｅｃ Ｉｎｃ．， ＮＪ， ＵＳＡ）を用いて、計測した。放射標識収率割合である％ＲＣＹは、懸濁液の少量の一定分量を、粒子分画Ｐおよび上清分画Ｓに分離し、粒子上の吸着された２１２Ｐｂの割合を計測することで、決定した。２つの分画は、自動ガンマカウンタ（Ｈｉｄｅｘ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｇａｍｍａ Ｃｏｕｎｔｅｒ， Ｈｉｄｅｘ Ｏｙ， Ｔｕｒｋｕ， Ｆｉｎｌａｎｄ）により、別々に計測した。％ＲＣＰは、ＣＰＭ（Ｐ）／ＣＰＭ （Ｐ＋Ｓ）の比率として計算した。そして、ＣＰＭは、それぞれの分画における分あたりのカウント（ｃｏｕｎｔｓ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ）を意味し、粒子上の吸着された２１２Ｐｂの分画を意味する。
２１２Ｐｂ放射標識粒子（実施例１または実施例１８において生産され、そして実施例１１において述べられている通り標識された）の計測には、放射能濃度、放射化学収率／放射化学純度、経時的安定性、および親核種２２４Ｒａの起こりうるブレイクスルーを決定することを含んでいる。２１２Ｐｂ溶液の放射能レベルおよび懸濁液中の標識されたＣａＣＯ３粒子のガラス瓶を、電離箱ドーズキャリブレータ（Ｃａｐｉｎｔｅｃ Ｉｎｃ．， ＮＪ， ＵＳＡ）を用いて、計測した。放射標識収率割合である％ＲＣＹは、懸濁液の少量の一定分量を、粒子分画Ｐおよび上清分画Ｓに分離し、粒子上の吸着された２１２Ｐｂの割合を計測することで、決定した。２つの分画は、自動ガンマカウンタ（Ｈｉｄｅｘ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｇａｍｍａ Ｃｏｕｎｔｅｒ， Ｈｉｄｅｘ Ｏｙ， Ｔｕｒｋｕ， Ｆｉｎｌａｎｄ）により、別々に計測した。％ＲＣＰは、ＣＰＭ（Ｐ）／ＣＰＭ （Ｐ＋Ｓ）の比率として計算した。そして、ＣＰＭは、それぞれの分画における分あたりのカウント（ｃｏｕｎｔｓ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ）を意味し、粒子上の吸着された２１２Ｐｂの分画を意味する。
【0201】
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性は、３７°Ｃで１．５－２１時間、１０ｇ／Ｌヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ， ＭＯ， ＵＳＡ）を添加し、約ｐＨ７の等張注入溶液（Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ， Ｂａｘｔｅｒ， ＩＬ， ＵＳＡ）における２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓ／ＳＭＰｓのインキュベーションからなるｉｎ ｖｉｔｒｏのセットアップにおけるマイクロ粒子上の保持された２１２Ｐｂの割合として定義した。希釈を、初期の２５ ｍｇ／ｍｌのＣａＣＯ３濃度から２ｍｇ／ｍｌまたは６ｍｇ／ｍｌまで実行した。希釈された粒子をインキュベーション溶液から分離し、そして２つの部分における放射能を、上述したＲＣＰの決定に対して計測した。
【0202】
すべてのバリアントは、これらの実験において、９０％超の２１２Ｐｂ％ＲＣＰを示し、希釈および２－６ｍｇ／ｍｌのインキュベーションは、粒子タイプ依存および濃度依存と考えられる２１２Ｐｂのインキュベーション溶液への放出をもたらした。粒子上の２１２Ｐｂの保持は、最も大きな再結晶粒子および最も低い濃度に対して、最も低かった。９０分から２１時間までの延長したインキュベーション期間の寄与は軽微であった。バテライトマイクロ粒子上の２１２Ｐｂの保持は、ＭＰｓと比較したＳＭＰｓのより高い安定性の傾向とともに、高かった。
【0203】
結果は図１１に示している。
【0204】
実施例２０―マウスにおける腹腔内に投与された２１２Ｐｂ－標識ＣａＣＯ３マイクロ粒子の体内分布。
２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓおよび２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＳＭＰｓを実施例１１のように標識した。鉛２１２の体内分布を、腫瘍―フリーマウスに、２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓをｉ．ｐ．投与した後に評価し、そして、０．９％ＮａＣｌ中のフリー２１２Ｐｂ２＋（２１２ＰｂＣｌ２）のｉ．ｐ．投与と比較した。体積基準メディアン粒子直径が５μｍの５ｍｇ ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの服用量を調査した。治療後２、６、および２４時間後にマウスを頚椎脱臼により犠牲にし、そして、放射能計測および１グラム組織当たりの注射された服用量の割合（％ＩＤ／ｇ）の計算のために、組織サンプルを収集した。２番目の実験において、５ｍｇ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓおよび体積基準メディアン直径が３μｍ未満の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＳＭＰｓの体内分布を比較した。放射能計測を、適切な校正係数を用いて、Ｈｉｄｅｘ自動ガンマカウンタにより実行し、Ｂｑデータを得た。計測は、１０．６時間の半減期の２１２Ｐｂを用いて校正された崩壊であった。腎臓および肝臓のサンプルの再計測は、崩壊の２４時間超後に実行し、２１２Ｐｂと娘核種の間の過渡平衡を保証した。高いレベルの２１２Ｐｂは、２１２ＰｂＣｌ２が注射された後２時間後に腎臓で検知され得た。血液、肝臓および骨格においてもかなりの量であった。ＭＰ－結合２１２Ｐｂに対して、％ＩＤ／ｇは、脾臓における場合と同じくこれらの組織においても有意に減少した。６時間後には、腎臓における２１２Ｐｂのレベルは、両方のバリアントに対して減少しており、クリアランスを示していた。しかし、骨格においては安定を維持していた。そして、これらの組織においては、２１２ＰｂＣｌ２と比較してＭＰ－結合２１２Ｐｂの％ＩＤ／ｇは有意に高かった。２４時間後、すなわち、２つの物理的２１２Ｐｂの半減期超後に、軟組織の大半における％ＩＤ／ｇは減少し、ＭＰ－結合とフリーバリアントの間の統計的有意差は、頭蓋骨を除いて検知されなかった（ｐ＜０．０２０）。そして、骨格に蓄積された２１２Ｐｂは、ＭＰｓに対するより早いタイムポイントに関して増加していた。
２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓおよび２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＳＭＰｓを実施例１１のように標識した。鉛２１２の体内分布を、腫瘍―フリーマウスに、２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓをｉ．ｐ．投与した後に評価し、そして、０．９％ＮａＣｌ中のフリー２１２Ｐｂ２＋（２１２ＰｂＣｌ２）のｉ．ｐ．投与と比較した。体積基準メディアン粒子直径が５μｍの５ｍｇ ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの服用量を調査した。治療後２、６、および２４時間後にマウスを頚椎脱臼により犠牲にし、そして、放射能計測および１グラム組織当たりの注射された服用量の割合（％ＩＤ／ｇ）の計算のために、組織サンプルを収集した。２番目の実験において、５ｍｇ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓおよび体積基準メディアン直径が３μｍ未満の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＳＭＰｓの体内分布を比較した。放射能計測を、適切な校正係数を用いて、Ｈｉｄｅｘ自動ガンマカウンタにより実行し、Ｂｑデータを得た。計測は、１０．６時間の半減期の２１２Ｐｂを用いて校正された崩壊であった。腎臓および肝臓のサンプルの再計測は、崩壊の２４時間超後に実行し、２１２Ｐｂと娘核種の間の過渡平衡を保証した。高いレベルの２１２Ｐｂは、２１２ＰｂＣｌ２が注射された後２時間後に腎臓で検知され得た。血液、肝臓および骨格においてもかなりの量であった。ＭＰ－結合２１２Ｐｂに対して、％ＩＤ／ｇは、脾臓における場合と同じくこれらの組織においても有意に減少した。６時間後には、腎臓における２１２Ｐｂのレベルは、両方のバリアントに対して減少しており、クリアランスを示していた。しかし、骨格においては安定を維持していた。そして、これらの組織においては、２１２ＰｂＣｌ２と比較してＭＰ－結合２１２Ｐｂの％ＩＤ／ｇは有意に高かった。２４時間後、すなわち、２つの物理的２１２Ｐｂの半減期超後に、軟組織の大半における％ＩＤ／ｇは減少し、ＭＰ－結合とフリーバリアントの間の統計的有意差は、頭蓋骨を除いて検知されなかった（ｐ＜０．０２０）。そして、骨格に蓄積された２１２Ｐｂは、ＭＰｓに対するより早いタイムポイントに関して増加していた。
【0205】
結果は図１２に示している。
【0206】
実施例２１―マウスにおける腹腔内投与された２１２Ｐｂ－標識ＣａＣＯ３の治療効果。
空洞性がんの治療に対する２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓ１％パミドロネートの治療効果の研究は、卵巣がんのｉ．ｐ．異種移植マウスモデルにおいて実行した。ヌードマウスに３０００００のＥＳ－２細胞（ＡＴＣＣ， Ｗｅｓｅｌ， Ｇｅｒｍａｎｙ）をｉ．ｐ．接種し、次の日に２－５ｍｇおよび６３－４３０ｋＢｑ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの服用量で処置した。上述したように、すべての放射能服用量は、標準試料から遡及的に測定および計算した。コントロール動物には、生理食塩水、または生理食塩水および１％（ｗ／ｗ）パミドロネート中に懸濁された非標識ＣａＣＯ３ＭＰｓを与えた。有意な治療効果を、生理食塩水コントロールおよびパミドロネートを含む非標識ＣａＣＯ３ＭＰｓと比較して、パミドロネート中の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの試験された服用量のすべてに対して観察した。前記効果は、標識ＭＰｓの服用量依存に現れていた。
空洞性がんの治療に対する２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓ１％パミドロネートの治療効果の研究は、卵巣がんのｉ．ｐ．異種移植マウスモデルにおいて実行した。ヌードマウスに３０００００のＥＳ－２細胞（ＡＴＣＣ， Ｗｅｓｅｌ， Ｇｅｒｍａｎｙ）をｉ．ｐ．接種し、次の日に２－５ｍｇおよび６３－４３０ｋＢｑ２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの服用量で処置した。上述したように、すべての放射能服用量は、標準試料から遡及的に測定および計算した。コントロール動物には、生理食塩水、または生理食塩水および１％（ｗ／ｗ）パミドロネート中に懸濁された非標識ＣａＣＯ３ＭＰｓを与えた。有意な治療効果を、生理食塩水コントロールおよびパミドロネートを含む非標識ＣａＣＯ３ＭＰｓと比較して、パミドロネート中の２１２Ｐｂ－ＣａＣＯ３ＭＰｓの試験された服用量のすべてに対して観察した。前記効果は、標識ＭＰｓの服用量依存に現れていた。
【0207】
結果は図１３に示している。
【0208】
発明事項
【0209】
事項１
崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでいる粒子。
崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を含んでいる粒子。
【0210】
事項２
前記崩壊性化合物が、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、ＳｒＣＯ３、ＢａＣＯ３、ハイドロキシアパタイトＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）およびフルオロアパタイトを含んでいるカルシウムホスフェート、および主要成分としてこれらのいずれかを伴う複合物からなる群から選択される、事項１に関する粒子。
前記崩壊性化合物が、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、ＳｒＣＯ３、ＢａＣＯ３、ハイドロキシアパタイトＣａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）およびフルオロアパタイトを含んでいるカルシウムホスフェート、および主要成分としてこれらのいずれかを伴う複合物からなる群から選択される、事項１に関する粒子。
【0211】
事項３
前記崩壊性化合物が、ＣａＣＯ３である、事項１～２に関する粒子。
前記崩壊性化合物が、ＣａＣＯ３である、事項１～２に関する粒子。
【0212】
事項４
前記リン含有添加剤が、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、および環状ポリホスフェートからなる群から選択されるホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
前記リン含有添加剤が、オルトホスフェート、直鎖のオリゴホスフェート、およびポリホスフェート、および環状ポリホスフェートからなる群から選択されるホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
【0213】
事項５
前記リン含有添加剤が、ピロホスフェート、トリポリホスフェートおよびトリホスホノホスフェートからなる群から選択されるポリホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
前記リン含有添加剤が、ピロホスフェート、トリポリホスフェートおよびトリホスホノホスフェートからなる群から選択されるポリホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
【0214】
事項６
前記リン含有添加剤が、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）である環状ポリホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
前記リン含有添加剤が、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）である環状ポリホスフェートである、事項１～３に関する粒子。
【0215】
事項７
前記リン含有添加剤が、ホスホネートである、事項１～３に関する粒子。
前記リン含有添加剤が、ホスホネートである、事項１～３に関する粒子。
【0216】
事項８
前記ホスホネートが、ビスホスホネートである、事項７に関する粒子。
前記ホスホネートが、ビスホスホネートである、事項７に関する粒子。
【0217】
事項９
前記ビスホスホネートが、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、およびゾレドロネートからなる群から選択される、事項８に関する粒子。
前記ビスホスホネートが、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、およびゾレドロネートからなる群から選択される、事項８に関する粒子。
【0218】
事項１０
前記ホスホネートが、ポリホスホネートである、事項７に関する粒子。
前記ホスホネートが、ポリホスホネートである、事項７に関する粒子。
【0219】
事項１１
前記ポリホスホネートが、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）及びＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）からなる群より選択される、事項１０に関する粒子。
前記ポリホスホネートが、ＥＤＴＭＰーエチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ＤＯＴＭＰ－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライルーテトラキス（メチルホスホン酸）及びＤＴＰＭＰ－ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）からなる群より選択される、事項１０に関する粒子。
【0220】
事項１２
前記放射性核種が、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２２７Ｔｈ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｏ、２０８Ｔｌ、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなる群より選択される、事項１～１１に関する粒子。
前記放射性核種が、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２２７Ｔｈ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｏ、２０８Ｔｌ、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなる群より選択される、事項１～１１に関する粒子。
【0221】
事項１３
前記放射性核種が、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａおよび２２７Ｔｈからなる治療に適したα放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
前記放射性核種が、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２２５Ｒａ、２２４Ｒａ、２２３Ｒａおよび２２７Ｔｈからなる治療に適したα放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
【0222】
事項１４
前記放射性核種が、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙからなる治療に適したβ放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
前記放射性核種が、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、１６１Ｔｂ、９０Ｙからなる治療に適したβ放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
【0223】
事項１５
前記放射性核種が、治療に適したαプロジェニーである２１２Ｐｂを伴う、β放射体である、事項１～１２に関する粒子。
前記放射性核種が、治療に適したαプロジェニーである２１２Ｐｂを伴う、β放射体である、事項１～１２に関する粒子。
【0224】
事項１６
前記放射性核種が、プロジェニー放射性核種である２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌを伴う、α放射体である２２４Ｒａからなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
前記放射性核種が、プロジェニー放射性核種である２２０Ｒｎ、２１６Ｐｏ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｏおよび２０８Ｔｌを伴う、α放射体である２２４Ｒａからなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
【0225】
事項１７
前記放射性核種が、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなるイメージングに適した放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
前記放射性核種が、１８Ｆ、６７Ｇａ、８６Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、８３Ｓｒ、１５２Ｔｂおよび１５５Ｔｂからなるイメージングに適した放射性核種からなる群より選択される、事項１～１２に関する粒子。
【0226】
事項１８
前記粒子のサイズが、１ｎｍから５００μｍである、事項１～１７のいずれか１に関する粒子。
前記粒子のサイズが、１ｎｍから５００μｍである、事項１～１７のいずれか１に関する粒子。
【0227】
事項１９
前記崩壊性化合物が、ＰＥＧ修飾ＣａＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＣａＣＯ３、炭水化物修飾ＣａＣＯ３、脂質修飾ＣａＣＯ３、ビタミン修飾ＣａＣＯ３、有機化合物修飾ＣａＣＯ３、ポリマー修飾ＣａＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＣａＣＯ３からなる群から選択される、事項１～１８のいずれか１に関する粒子。
前記崩壊性化合物が、ＰＥＧ修飾ＣａＣＯ３、ｍＡｂｓ及びＦａｂｓを含んでいるタンパク質修飾ＣａＣＯ３、炭水化物修飾ＣａＣＯ３、脂質修飾ＣａＣＯ３、ビタミン修飾ＣａＣＯ３、有機化合物修飾ＣａＣＯ３、ポリマー修飾ＣａＣＯ３、および／または無機結晶修飾ＣａＣＯ３からなる群から選択される、事項１～１８のいずれか１に関する粒子。
【0228】
事項２０
事項１～１９のいずれか１に関する１または複数の粒子を含んでいる組成物。
事項１～１９のいずれか１に関する１または複数の粒子を含んでいる組成物。
【0229】
事項２１
事項１～１９のいずれか１に関する１または複数の粒子および希釈剤、担体、界面活性剤および／または賦形剤を含んでいる医薬品組成物である組成物。
事項１～１９のいずれか１に関する１または複数の粒子および希釈剤、担体、界面活性剤および／または賦形剤を含んでいる医薬品組成物である組成物。
【0230】
事項２２
服用量当たり１ｋＢｑから１０ＧＢｑである放射性核種の量で、または多回投与型商業規模生産に適した５０ＭＢｑから１００ＧＢｑである放射性核種の量で調製された、事項２１に関する医薬品組成物または事項１５に関する組成物。
服用量当たり１ｋＢｑから１０ＧＢｑである放射性核種の量で、または多回投与型商業規模生産に適した５０ＭＢｑから１００ＧＢｑである放射性核種の量で調製された、事項２１に関する医薬品組成物または事項１５に関する組成物。
【0231】
事項２３
前記組成物が、事項１～１９において定義されている単分散または多分散の粒子を含んでいる粒子懸濁液である、事項２０に関する組成物または事項２１～２２のいずれかに関する医薬品組成物。
前記組成物が、事項１～１９において定義されている単分散または多分散の粒子を含んでいる粒子懸濁液である、事項２０に関する組成物または事項２１～２２のいずれかに関する医薬品組成物。
【0232】
事項２４
事項２０～２３のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、非経口使用、例えば、静脈内注射、腔内注射、および／または腫瘍内注射に適している、医薬品組成物。
事項２０～２３のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、非経口使用、例えば、静脈内注射、腔内注射、および／または腫瘍内注射に適している、医薬品組成物。
【0233】
事項２５
医薬品として使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
医薬品として使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
【0234】
事項２６
腔内治療、放射線塞栓術、または放射線滑膜切除術における使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
腔内治療、放射線塞栓術、または放射線滑膜切除術における使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
【0235】
事項２７
がん治療における使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
がん治療における使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
【0236】
事項２８
事項２６～２７に関する使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、前記がんが、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん、および非空洞性の標的、例えば、メラノーマ、非小細胞肺がんからなる群より選択される、組成物または医薬品組成物。
事項２６～２７に関する使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、前記がんが、腹腔内がん、頭蓋内がん、胸膜がん、膀胱がん、噴門がん、くも膜下腔がん、および非空洞性の標的、例えば、メラノーマ、非小細胞肺がんからなる群より選択される、組成物または医薬品組成物。
【0237】
事項２９
イメージングにおける使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
イメージングにおける使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物。
【0238】
事項３０
事項２６～２７に関する使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、他のがん治療、例えば、化学療法（タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、プラチン（例えば、カルボプラチン、シスプラチン）、ドキソルビシン、マイトマイシン））、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミド）、および放射線免疫療法との組み合わせにおいて使用される、組成物または医薬品組成物。
事項２６～２７に関する使用のための、事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、他のがん治療、例えば、化学療法（タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、プラチン（例えば、カルボプラチン、シスプラチン）、ドキソルビシン、マイトマイシン））、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、パミパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６および３－アミノベンズアミド）、および放射線免疫療法との組み合わせにおいて使用される、組成物または医薬品組成物。
【0239】
事項３１
事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、医療機器である、または医療機器中に含まれている、組成物または医薬品組成物。
事項１～１９のいずれか１に関する粒子、または事項２０～２４のいずれか１に関する組成物または医薬品組成物であって、それが、医療機器である、または医療機器中に含まれている、組成物または医薬品組成物。
【0240】
事項３２
ホスホネートおよび／またはホスフェート化合物の前記濃度が、ｍｌ当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラム、例えば、最終溶液ｍｌ当たり、０．１ｍｇから１０ｍｇ、または、最終溶液中のグラム粒子当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラムである、事項２０～２４に関する組成物または医薬品組成物。
ホスホネートおよび／またはホスフェート化合物の前記濃度が、ｍｌ当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラム、例えば、最終溶液ｍｌ当たり、０．１ｍｇから１０ｍｇ、または、最終溶液中のグラム粒子当たり、１マイクログラムから１０００ミリグラムである、事項２０～２４に関する組成物または医薬品組成物。
【0241】
事項３３
事項１～１９のいずれか１に関する粒子の調製方法であって、そして、前記方法は、放射性核種の担体を使用するまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる、調製方法。
事項１～１９のいずれか１に関する粒子の調製方法であって、そして、前記方法は、放射性核種の担体を使用するまたは使用しないで、崩壊性化合物、放射性核種、およびリン含有添加剤を互いに接触させることを含んでいる、調製方法。
【0242】
事項３４
崩壊性化合物および放射性核種は、初めのステップにおいて、粒子を形成し、その後、それは、リン含有添加剤によってコーティングされる、事項３３に関する粒子の調製方法。
崩壊性化合物および放射性核種は、初めのステップにおいて、粒子を形成し、その後、それは、リン含有添加剤によってコーティングされる、事項３３に関する粒子の調製方法。
【0243】
事項３５
粒子を含んでいる組成物または懸濁液であって、前記粒子が、崩壊性化合物、放射性核種、リン含有添加剤を含んでおり、そして、前記リン含有添加剤が、組成物または懸濁液において存在することで、粒子と結合している、組成物または懸濁液。
粒子を含んでいる組成物または懸濁液であって、前記粒子が、崩壊性化合物、放射性核種、リン含有添加剤を含んでおり、そして、前記リン含有添加剤が、組成物または懸濁液において存在することで、粒子と結合している、組成物または懸濁液。
【0244】
事項３６
前記リン含有添加剤が、粒子の一部である、事項３５に関する組成物または懸濁液。
前記リン含有添加剤が、粒子の一部である、事項３５に関する組成物または懸濁液。
【0245】
事項３７
リン含有添加剤が、組成物または粒子懸濁液の一部である、事項３５～３６に関する組成物または懸濁液。
リン含有添加剤が、組成物または粒子懸濁液の一部である、事項３５～３６に関する組成物または懸濁液。
【0246】
事項３８
リン含有添加剤が、前記粒子の一部であり、そして、組成物または粒子懸濁液の一部でもある、事項３５～３７に関する組成物または懸濁液。
リン含有添加剤が、前記粒子の一部であり、そして、組成物または粒子懸濁液の一部でもある、事項３５～３７に関する組成物または懸濁液。
【0247】
事項３９
前記粒子懸濁液が、固相と液相の混合物である、事項３５～３８に関する組成物または懸濁液。
前記粒子懸濁液が、固相と液相の混合物である、事項３５～３８に関する組成物または懸濁液。
【0248】
事項４０
前記リン含有添加剤が、液相に存在する、事項３５～３９に関する組成物または懸濁液。
前記リン含有添加剤が、液相に存在する、事項３５～３９に関する組成物または懸濁液。
【0249】
事項４１
前記リン含有添加剤が、固相に存在する、事項３５～４０に関する組成物または懸濁液。
前記リン含有添加剤が、固相に存在する、事項３５～４０に関する組成物または懸濁液。
【0250】
事項４２
前記リン含有添加剤が、固相および液相に存在する、事項３５～４１に関する組成物または懸濁液。
前記リン含有添加剤が、固相および液相に存在する、事項３５～４１に関する組成物または懸濁液。
【0251】
事項４３
前記リン含有添加剤が、表面上または粒子中に埋め込まれている、または表面上または固相に埋め込まれているの両方である、事項３５～４２に関する組成物または懸濁液。
前記リン含有添加剤が、表面上または粒子中に埋め込まれている、または表面上または固相に埋め込まれているの両方である、事項３５～４２に関する組成物または懸濁液。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【国際調査報告】