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▶ メディジーン イミュノテラピーズ ゲーエムベーハーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-05
(54)【発明の名称】ＭＡＧＥ－Ａ３特異的Ｔ細胞受容体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/12 20060101AFI20230928BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20230928BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230928BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230928BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230928BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230928BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230928BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230928BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20230928BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20230928BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20230928BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20230928BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230928BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230928BHJP
【ＦＩ】
C12N15/12
C07K14/725 ZNA
C12N15/63 Z
C07K16/28
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K38/16
A61K48/00
A61K35/76
A61K35/12
A61P35/00
A61P35/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023518382
(86)(22)【出願日】2021-09-24
(85)【翻訳文提出日】2023-05-09
(86)【国際出願番号】 EP2021076323
(87)【国際公開番号】W WO2022063965
(87)【国際公開日】2022-03-31
(31)【優先権主張番号】20198049.7
(32)【優先日】2020-09-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517419917
【氏名又は名称】メディジーン イミュノテラピーズ ゲーエムベーハー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100110663
【弁理士】
【氏名又は名称】杉山 共永
(72)【発明者】
【氏名】ダヴァリ，カトリーン
(72)【発明者】
【氏名】ホランド，トリスタン
(72)【発明者】
【氏名】エリンガー，クリスティアン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA13
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA21
4C084BA22
4C084BA23
4C084DA45
4C084NA14
4C084ZB26
4C084ZB27
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BB65
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA14
4C087ZB26
4C087ZB27
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA22
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ３由来のペプチドに対して特異的な単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチドに関する。さらに、多価ＴＣＲ複合体、ＴＣＲをコードする核酸配列、ＴＣＲを発現する細胞およびＴＣＲを含む医薬組成物に関する。本発明はまた、医薬として使用するためのＴＣＲ、特に、がんの処置において使用するためのＴＣＲに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＭＡＧＥ－Ａ３に対して特異的な単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
【請求項2】
アミノ酸配列である配列番号１またはその断片を特異的に認識する、請求項１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項3】
アミノ酸配列である配列番号５４またはその断片を認識しない、請求項１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項4】
配列番号１のアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ１結合形態を特異的に認識する、好ましくは、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される配列番号１の前記アミノ酸配列を特異的に認識する、先行する請求項のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項5】
ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項6】
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；またはｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項7】
機能性部分が、ａ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｂ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｃ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２および２３
を含む、請求項１から６のいずれかに記載のＴＣＲの前記機能性部分を含む単離されたポリペプチド。
【請求項8】
請求項１から６のいずれか一項において請求される少なくとも１つのＴＣＲを含む多価ＴＣＲ複合体。
【請求項9】
ＩＦＮ－γ分泌が、前記ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列への結合によって誘導される、請求項１から６に記載の単離されたＴＣＲ、請求項７に記載の単離されたポリペプチド、請求項８に記載の多価ＴＣＲ複合体。
【請求項10】
請求項１から６のいずれか一項に記載のＴＣＲをコードするかまたは請求項７に記載の単離されたポリペプチドをコードする核酸。
【請求項11】
好ましくは発現ベクター、より好ましくはレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項１０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項12】
請求項１から６に記載のＴＣＲを発現する細胞。
【請求項13】
請求項１から６に記載のＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＴＣＲの前記一部が、ａ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項14】
医薬として使用するための、請求項１から６に記載のＴＣＲ、請求項７に記載のポリペプチド、請求項８に記載の多価ＴＣＲ複合体、請求項１０に記載の核酸、請求項１１に記載のベクター、請求項１２に記載の細胞、または請求項１３に記載の抗体。
【請求項15】
前立腺がん、子宮がん、甲状腺がん、精巣がん、腎がん、膵臓がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、扁平上皮癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、メラノーマ、肝細胞癌、頭頚部がん、胃がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、胃腺癌、胆管細胞癌、乳がん、膀胱がん、骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病、癌腫、肉腫または骨肉腫からなる群から選択されるがんの処置において使用するための、請求項１から６に記載のＴＣＲ、請求項７に記載のポリペプチド、請求項８に記載の多価ＴＣＲ複合体、請求項１０に記載の核酸、請求項１１に記載のベクター、請求項１２に記載の細胞、または請求項１３に記載の抗体。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ３由来のペプチドに対して特異的な単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチドに関する。さらに、多価ＴＣＲ複合体、ＴＣＲをコードする核酸、ＴＣＲを発現する細胞およびＴＣＲを含む医薬組成物に関する。本発明はまた、医薬として使用するためのＴＣＲ、特に、がんの処置において使用するためのＴＣＲに関する。
【背景技術】
【0002】
メラノーマ関連抗原３とも呼ばれるＭＡＧＥ－Ａ３は、互いに高い相同性を有するいくつかのタンパク質をコードするＭＡＧＥ－Ａ遺伝子ファミリーのメンバーである。ＭＡＧＥ－Ａ抗原は、がん／精巣抗原（ＣＴＡ）のファミリーに属し、分子レベルで同定された最初のヒト腫瘍関連抗原であった（Science 1991. 254: 1643-1647/ republished in J. Immunol. 2007; 178:2617-2621）。ＭＡＧＥ－Ａ遺伝子ファミリーは、第Ｘｐ２８染色体に位置する１２個の相同性の高い遺伝子を含む。これらの発現は、非小細胞肺がん、膀胱がん、食道、頭頚部がんおよび肉腫、ならびにメラノーマ、ある特定の種類の乳がんなどの様々な組織学的起源のがんにおいて、また生殖細胞において（Front Med (Lausanne). 2017; 4: 18.）、一貫して検出される。ＭＡＧＥ－Ａ３は、細胞質（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ）／細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ）タンパク質であり、ＭＡＧＥ－Ａ３タンパク質に由来するペプチドは、ＭＨＣクラスＩバックグラウンドで、すなわち、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子上に提示される。より詳細には、ＭＡＧＥ－Ａ３由来のエピトープは、ＨＬＡ－Ａ１分子上に提示され、Ｔ細胞に媒介されるがん免疫療法に関する有望な標的としてのそれらの適合性が示される。養子細胞移入（ＡＣＴ）を使用するがん免疫療法の原理は、患者自身の免疫系を利用する高度に腫瘍特異的ながん処置を可能にする。ＡＣＴは、ＭＡＧＥＡ－Ａ３のような細胞内タンパク質に由来する既定のエピトープに対する特異性を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子操作された、ｅｘ ｖｉｖｏで拡大された自己の（患者由来の）Ｔ細胞を使用する。
【0003】
ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１拘束性ＭＡＧＥ－Ａ３（ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ；配列番号１）に対して親和性が増強されたＴＣＲのオープンラベル試験では、重大な副作用が生じた。研究は、心臓組織のＴ細胞浸潤に起因する心筋損傷について明らかにした。分子レベルでの研究は、ＴＣＲが、横紋筋タンパク質であるタイチンの類似するエピトープと交差反応することも明らかにした（Cameron, et al. Science Tranlational Medcine 5 (197): 1-11;2013；Linette et al. Blood, 122(6), 863-871; 2013）。
【0004】
よって、腫瘍特異的／拘束性抗原であるＭＡＧＥ－Ａ３のみを標的とし、したがって、がん免疫療法に対する並外れた可能性を有する効率性の高いＴＣＲに対する需要が依然として存在する。よって、健康な組織に対して交差反応性を有さないかまたは非常に低い交差反応性しか有さないＭＡＧＥ－Ａ３を標的とするこのような特異的ＴＣＲに対する必要性が存在する。
【発明の概要】
【0005】
本発明の１つの目的は、ＭＡＧＥ－Ａ３に対して特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の提供である。特に、ＴＣＲは、アミノ酸配列である配列番号１またはその断片を有するＭＡＧＥ－Ａ３エピトープを特異的に認識し得る。好ましくは、ＴＣＲは、配列番号１のアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ１結合形態を特異的に認識し、より好ましくは、ＴＣＲは、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列を特異的に認識する。
【0006】
エピトープの断片は、この抗原に対して特異的な、すなわち、哺乳動物の、特にヒトの別のタンパク質またはペプチドでは生じないタンパク質配列であり得る。断片は、抗原の配列よりも短くてもよく、例えば抗原よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％短くてもよい。断片は、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５アミノ酸またはそれより多いアミノ酸の長さを有してもよい。
【0007】
具体的な実施形態では、ＴＣＲは、アミノ酸配列である配列番号５４またはその断片のタイチンエピトープを認識しない。望ましくない重大な副作用を回避するために、タイチン由来のエピトープとの交差反応性を有さないかまたは実質的に有さないことが望ましい。
【0008】
先行技術に記載されたＴＣＲは、重大な副作用をもたらす配列番号１のエピトープを対象とすることが示されている。先行技術のＴＣＲが、配列番号１のＭＡＧＥ－Ａ３エピトープに類似する配列番号５４のタイチンエピトープに結合することによって有害事象が生じることも見出された。したがって、ヒトの処置において使用される、ＭＡＧＥ－Ａ３、特に配列番号１のエピトープに対するＴＣＲが、タイチン由来のエピトープ、特に配列番号５４のタイチンエピトープに結合することによって活性化されないことが非常に重要である。
【0009】
好ましくは、ＴＣＲは、他のＭＡＧＥ－Ａファミリーのメンバー、特にＭＡＧＥ－Ａ６に対する交差反応性を示さない。
【0010】
具体的な実施形態では、単離されたＴＣＲは、
ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む。
ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む。
【0011】
ＴＣＲは、さらに、
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
によって定義され得る。
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
によって定義され得る。
【0012】
本発明によるＴＣＲは、単離および／または精製され、可溶性であるかまたは膜に結合してもよい。
【0013】
一部の実施形態では、ＴＣＲのアミノ酸配列は、１つまたは複数の表現型に影響しない（phenotypically silent）置換を含んでもよい。さらに、本発明のＴＣＲを検出可能な標識で標識することができる。さらに、またはあるいは、アミノ酸配列は、治療剤または薬物動態改変部分を含むように改変され得る。治療剤は、免疫エフェクター分子、細胞毒性剤および放射性核種からなる群から選択されてもよい。免疫エフェクター分子は、例えば、サイトカインであってもよい。薬物動態改変部分は、少なくとも１つのポリエチレングリコール繰り返し単位、少なくとも１つのグリコール基、少なくとも１つのシアリル基またはそれらの組合せであってもよい。
【0014】
ＴＣＲ、特に本発明によるＴＣＲの可溶性形態は、例えば、免疫原性を低下させる、流体力学的サイズ（溶液中のサイズ）溶解度および／もしくは安定性を増加させる（例えば、タンパク質分解に対する保護を増強させることによって）ならびに／または血清中半減期を延長するために、追加の機能性部分を付加することによって改変され得る。他の有用な機能性部分および改変には、患者の体内で本発明のＴＣＲを有するエフェクター宿主細胞を遮断するかもしくは活性化するために、またはトランスジェニックＴＣＲ自体を遮断するかもしくは活性化するために使用され得る「自殺」または「安全スイッチ」が含まれる。グリコシル化パターンが変更されたＴＣＲも本発明において予想される。
【0015】
薬物または治療実体、例えば、ＴＣＲ、特に本発明のＴＣＲの可溶性形態に対して小分子化合物を添加することも考えられる。
【0016】
ＴＣＲ、特に本発明のＴＣＲの可溶性形態は、それぞれの分子（タグ）の特定、追跡、精製および／または単離を補助する追加のドメインを導入するためにさらに改変され得る。
【0017】
一部の実施形態では、ＴＣＲは一本鎖タイプのものであり、ここで、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖は、リンカー配列によって連結されている。
【0018】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲの機能性部分を含む単離されたポリペプチドであって、
機能性部分が、
ａ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｂ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｃ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２、および２３
を含む、単離されたポリペプチドに関する。
機能性部分が、
ａ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｂ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｃ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２、および２３
を含む、単離されたポリペプチドに関する。
【0019】
具体的実施形態では、機能性部分は、ＴＣＲα可変鎖および／またはＴＣＲβ可変鎖を含む。
【0020】
本明細書に記載されている少なくとも１つのＴＣＲを含む多価ＴＣＲ複合体がさらに企図される。
【0021】
よって、本発明は、本明細書に記載のＴＣＲを発現する細胞、例えばＴ細胞のＩＦＮ－γ分泌が、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列への結合によって誘導される、本明細書に記載されている単離されたＴＣＲ、本明細書に記載されているポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体を指す。
【0022】
本明細書に記載されているＴＣＲをコードするかまたは本明細書に記載されている単離されたポリペプチドをコードする核酸も企図される。
【0023】
したがって、別の態様は、好ましくは発現ベクター、より好ましくはレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、本明細書に記載されている核酸を含むベクターを指す。
【0024】
さらに、さらなる態様は、本明細書に記載されているＴＣＲを発現する細胞を定義する。
【0025】
ＭＡＧＥ－Ａ３に対する特異性を媒介する本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片も想定され、好ましくはここで、ＭＡＧＥ－Ａ３特異性を媒介するＴＣＲの一部は、
ａ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
ａ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
【0026】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲ、本明細書に記載されているポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体、本明細書に記載されている核酸、本明細書に記載されているベクター、本明細書に記載されている細胞、または本明細書に記載されている抗体を含む医薬組成物を指す。
【0027】
典型的には、医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む。
【0028】
別の態様は、医薬として使用するための本明細書に記載されているＴＣＲ、多価ＴＣＲ複合体、核酸、ベクター、細胞、または抗体を指す。
【0029】
特に、これは、がんの処置において使用するための本明細書に記載されているＴＣＲ、多価ＴＣＲ複合体、核酸、ベクター、細胞、または抗体を指し、ここで、がんは、前立腺がん、子宮がん、甲状腺がん、精巣がん、腎がん、膵臓がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、扁平上皮癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、メラノーマ、肝細胞癌、頭頚部がん、胃がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、胃腺癌、胆管細胞癌、乳がん、膀胱がん、骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病、癌腫、肉腫または骨肉腫からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【0030】
【図1】３つの異なるＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲのペプチド選択性を示すグラフである。ｉｎ ｖｉｔｒｏプライミングアプローチを使用して、ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンを単離し、同じＴＣＲを発現する３つの個々の代表的なクローンを３つの異なるＴＣＲのそれぞれについて示す。Ｔ細胞クローンを、関連するペプチド（ＥＶＤ）もしくは無関係のペプチド（ＥＳＤ）のいずれかを負荷したＨＬＡ－Ａ１－ＧＦＰ（ＤＵ－１４５＿Ａ１）を以前に形質導入したかまたは全長ＭＡＧＥ－Ａ３をコードするｉｖｔ－ＲＮＡを電気穿孔したＤＵ－１４５細胞と共培養した。サイトカイン放出を分析するために、共培養上清を２４時間後に回収し、ＩＦＮ－γ濃度を標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（ＢＤヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡセット）によって分析した。
【図2】異なるＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲを形質導入したＴ細胞および形質導入されていないＴ細胞（ＵＴＤ）のＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体結合を示す図である。ＣＤ８ Ｔ細胞を健康なドナーのＰＢＭＣから単離し、３つの異なるＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲを形質導入した。形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞を、形質導入のためのマーカーとして定常ベータ１領域を使用するＦＡＣＳによって濃縮した。これらの細胞の拡大後に、これらを、ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体（右のパネル）またはＣＤ８およびＣβ１に対する抗体（左のパネル）のいずれかで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。集団を単一の生細胞に関してゲーティングした。
【図3】ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞が、内因的に処理され、ＨＬＡ－Ａ１に提示されるＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを選択的に認識することを示すグラフである。ＤＵ－１４５＿Ａ１細胞をさらに操作して、ｍＣｈｅｒｒｙ単独（陰性対照）、ＭＡＧＥ－Ａ３－ｍＣｈｅｒｒｙまたはＭＡＧＥ－Ａ６－ｍＣｈｅｒｒｙを発現させた。３名のドナーの形質導入されていない（ＵＴＤ）トランスジェニックＴ細胞を、関連するペプチド（ＥＶＤ）を負荷していないかまたは負荷した形質導入細胞と共培養した。標的細胞の認識は、標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによって分析した。
【図4】ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞が内因性のＭＡＧＥ－Ａ３陽性腫瘍細胞系を認識することを示す図である。３名のドナーの形質導入されていない（ＵＴＤ）トランスジェニックＴ細胞を内因的にＭＡＧＥ－Ａ３陽性のまたは陰性の腫瘍細胞系と共培養した。腫瘍細胞系は、内因的にＨＬＡ－Ａ１陽性であるかまたはＨＬＡ－Ａ１発現（ＴＤ）のために操作されていた。すべての腫瘍細胞系を関連するペプチド（ＥＶＤ）で負荷しないかまたは負荷して試験した。標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによってサイトカイン放出を分析した。
【発明を実施するための形態】
【0031】
本発明の詳細な記載
本発明が、その好ましい実施形態のうちのいくつかについて詳細に説明される前に、以下の一般的定義を提供する。
本発明が、その好ましい実施形態のうちのいくつかについて詳細に説明される前に、以下の一般的定義を提供する。
【0032】
以下に例示的に記載されるように、本発明は、本明細書において具体的に開示されていないいずれかの要素（単数または複数）、制限（単数または複数）の非存在下で、好適に実践され得る。
【0033】
本発明は、特定の実施形態に関しておよび特定の図を参照して記載されるが、本発明はそれらにではなく特許請求の範囲によってのみ限定される。
【0034】
本記載および特許請求の範囲において用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が使用される場合、それは他の要素を排除しない。本発明の目的のために用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、用語「を構成する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｏｆ）」の好ましい実施形態であると考えられる。以下で、群が少なくとも一定数の実施形態を含むと定義される場合、これは、好ましくはこれらの実施形態だけからなる群を開示するとも理解される。
【0035】
本発明の目的のために用語「得られた（ｏｂｔａｉｎｅｄ）」は、用語「得ることができる（ｏｂｔａｉｎａｂｌｅ）」の好ましい実施形態であると考えられる。以下で、例えば抗体が具体的な供給源から得ることができると定義される場合、これはこの供給源から得られる抗体を開示するとも理解される。
【0036】
不定冠詞または定冠詞が単数名詞、例えば「ａ」、「ａｎ」または「ｔｈｅ」を参照して使用される場合、これは、他に具体的に述べられている場合を除いてその名詞の複数を含む。本発明の文脈において、用語「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者が問題となる特質の技術的効果をまだ確保すると理解する正確さの区間を記す。用語は、±１０％、好ましくは±５％の示された数値からの偏差を典型的には示す。
【0037】
技術的用語は、それらの一般的な意味または当業者にとっての意味で使用される。具体的な意味が特定の用語によって伝えられる場合、用語の定義は以下にその用語が使用される文脈において与えられる。
【0038】
ＴＣＲバックグラウンド
ＴＣＲは、２つの異なる、別々のタンパク質鎖、すなわちＴＣＲアルファ（α）鎖およびＴＣＲベータ（β）鎖から構成される。ＴＣＲα鎖は、可変（Ｖ）、連結（Ｊ）および定常（Ｃ）領域を含む。ＴＣＲβ鎖は、可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、連結（Ｊ）および定常（Ｃ）領域を含む。ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖の両方の再配列Ｖ（Ｄ）Ｊ領域は、超可変領域（ＣＤＲ、相補性決定領域）を含有し、これらの中で、ＣＤＲ３領域は、特異的エピトープ認識を決定する。Ｃ末端領域において、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖の両方は、疎水性膜貫通ドメインを含有し、短い細胞質側末端で終わる。
ＴＣＲは、２つの異なる、別々のタンパク質鎖、すなわちＴＣＲアルファ（α）鎖およびＴＣＲベータ（β）鎖から構成される。ＴＣＲα鎖は、可変（Ｖ）、連結（Ｊ）および定常（Ｃ）領域を含む。ＴＣＲβ鎖は、可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、連結（Ｊ）および定常（Ｃ）領域を含む。ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖の両方の再配列Ｖ（Ｄ）Ｊ領域は、超可変領域（ＣＤＲ、相補性決定領域）を含有し、これらの中で、ＣＤＲ３領域は、特異的エピトープ認識を決定する。Ｃ末端領域において、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖の両方は、疎水性膜貫通ドメインを含有し、短い細胞質側末端で終わる。
【0039】
典型的には、ＴＣＲは、１つのα鎖と１つのβ鎖のヘテロ二量体である。このヘテロ二量体は、ペプチドを提示するＭＨＣ分子に結合し得る。
【0040】
本発明の文脈における用語「可変ＴＣＲα領域」または「ＴＣＲα可変鎖」または「可変ドメイン」は、ＴＣＲα鎖可変領域を指す。本発明の文脈における用語「可変ＴＣＲβ領域」または「ＴＣＲβ可変鎖」は、ＴＣＲβ鎖可変領域を指す。
【0041】
ＴＣＲ遺伝子座および遺伝子は、国際免疫遺伝学（ＩＭＧＴ）ＴＣＲ学名命名法（ＩＭＧＴデータベース、www. IMGT.org；Giudicelli, V., et al.,IMGT/LIGM-DB, the IMGT(登録商標) comprehensive database of immunoglobulin and T cell receptor nucleotide sequences, Nucl. Acids Res., 34, D781-D784 (2006). PMID: 16381979；T cell Receptor Factsbook, LeFranc and LeFranc, Academic Press ISBN 0-12- 441352-8）を使用して命名される。
【0042】
標的
本明細書に記載のＴＣＲに対する標的は、ＭＡＧＥ－Ａ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５３５３．１）由来のペプチドＥＶＤ（配列番号１）である。
本明細書に記載のＴＣＲに対する標的は、ＭＡＧＥ－Ａ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５３５３．１）由来のペプチドＥＶＤ（配列番号１）である。
【0043】
よって、ＴＣＲは、アミノ酸配列である配列番号１またはその断片を有するＭＡＧＥ－Ａ３エピトープを特異的に認識し得る。好ましくは、ＴＣＲは配列番号１のアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ１結合形態を特異的に認識し、より好ましくは、ＴＣＲは、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列を特異的に認識する。
【0044】
断片は、この抗原に対して特異的な、すなわち、哺乳動物の、特にヒトの別のタンパク質またはペプチドでは生じない抗原の配列であり得る。断片は、抗原の配列よりも短くてもよく、例えば抗原よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％短くてもよい。断片は、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５アミノ酸またはそれより多いアミノ酸の長さを有してもよい。
【0045】
ＴＣＲ特異的配列
一部の実施形態は、
ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む単離されたＴＣＲに関する。
一部の実施形態は、
ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む単離されたＴＣＲに関する。
【0046】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む。
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む。
【0047】
「少なくとも８０％同一」、特に「少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する」は、本明細書で使用される場合、アミノ酸配列が、記載されたアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であることを含む。
【0048】
複数の配列間のパーセント同一性の決定は、好ましくは、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ａｄｖａｎｃｅ（商標） １０プログラム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ、ＵＳＡ）のＡｌｉｇｎＸアプリケーションを使用して達成される。このプログラムは、改変Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムを使用する（Thompson et al., 1994. Nucl Acids Res. 22: pp. 4673-4680；Invitrogen Corporation；Vector NTI AdvanceTM10 DNA and protein sequence analysis software. User's Manual, 2004, pp.389-662）。パーセント同一性の決定は、ＡｌｉｇｎＸアプリケーションの標準パラメーターを用いて実施される。
【0049】
好ましい実施形態は、
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域を含むＴＣＲに関する。
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域を含むＴＣＲに関する。
【0050】
実施例を見ると分かるように、本発明によるＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ３に対して特異的であり、他のエピトープまたは抗原に対しては非常に低い交差反応性しか示さない。特に、実施例は、類似するタイチンエピトープである配列番号５４に対して実質的な交差反応性が存在しないことを示す。さらに、実施例を見るとわかるように、ＭＡＧＥ－Ａファミリーの他の抗原、例えばＭＡＧＥ－Ａ６に対する実質的な交差反応性は存在しない。
【0051】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されているＴＣＲは、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域を含む。
【0052】
故に、より詳細には、一部の実施形態では、ＴＣＲは、
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域を含んでもよい。
ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域を含んでもよい。
【0053】
さらにより具体的な実施形態では、ＴＣＲは、
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域を含んでもよい。
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域、配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域、配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域を含んでもよい。
【0054】
本発明によるＴＣＲは、単離または精製される。「単離される」は、本発明の文脈において、ＴＣＲが、元々天然に存在した状況下で存在しないことを意味する。「精製される」は、本発明の文脈において、例えば、ＴＣＲが、他のタンパク質およびＴＣＲが元々由来する細胞の非タンパク質部分を含まないかまたは実質的に含まないことを意味する。
【0055】
一部の実施形態では、ＴＣＲのアミノ酸配列は、１つまたは複数の表現型に影響しない置換を含んでもよい。
【0056】
「表現型に影響しない置換」は、「保存的アミノ酸置換」とも称される。「保存的アミノ酸置換」の概念は、当業者によって理解されており、好ましくは、正電荷残基（Ｈ、Ｋ、およびＲ）をコードするコドンは、正電荷残基をコードするコドンで置換され、負電荷残基（ＤおよびＥ）をコードするコドンは、負電荷残基をコードするコドンで置換され、中性極性残基（Ｃ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹ）をコードするコドンは、中性極性残基をコードするコドンで置換され、中性非極性残基（Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｖ、およびＷ）をコードするコドンは、中性非極性残基をコードするコドンで置換されることを意味する。これらのバリエーションは、自発的に生じてもよく、ランダム突然変異誘発によって導入されてもよく、または定方向突然変異誘発によって導入されてもよい。これらの変化は、これらのポリペプチドの本質的な特性を破壊することなくなされ得る。当業者は、バリアントアミノ酸および／またはそれらをコードする核酸を容易かつ日常的にスクリーニングし、これらのバリエーションがリガンド結合能を実質的に低下させるかまたは破壊するかどうかを当技術分野で公知の方法によって決定することができる。
【0057】
当業者は、ＴＣＲをコードする核酸も改変され得ることを理解する。核酸配列全体における有益な改変は、配列のコドン最適化を含む。発現したアミノ酸配列内に保存的置換をもたらす変更がなされ得る。これらのバリエーションは、機能に影響を及ぼさないＴＣＲ鎖のアミノ酸配列の相補性決定領域および非相補性決定領域においてなされ得る。通常、付加と欠失は、ＣＤＲ３領域において行うべきではない。
【0058】
本発明の一部の実施形態によれば、ＴＣＲのアミノ酸配列は、検出可能な標識、治療剤または薬物動態改変部分を含むように改変される。
【0059】
検出可能な標識に関する非限定的な例は、放射標識、蛍光標識、核酸プローブ、酵素および造影試薬である。ＴＣＲに付随し得る治療剤としては、放射性化合物、免疫調節薬、酵素または化学療法剤が挙げられる。治療剤は、化合物が標的部位でゆっくり放出され得るように、ＴＣＲに連結したリポソームによって封入され得る。このことによって、体内での輸送中の損傷が避けられ、ＴＣＲの関連する抗原提示細胞への結合後に、治療剤、例えば、毒素が最大の効果を有することが保障される。治療剤の他の例は、
【0060】
ペプチド細胞毒素、すなわちリシン、ジフテリア毒素、シュードモナス細菌外毒素Ａ、ＤＮａｓｅおよびＲＮａｓｅなどの、哺乳動物の細胞を殺滅する能力を有するタンパク質またはペプチドである。小分子細胞毒性剤、すなわち７００ダルトン未満の分子量を有する、哺乳動物の細胞を殺滅する能力を有する化合物。このような化合物は、細胞毒性作用を有することが可能な毒性金属を含有し得る。さらに、これらの小分子細胞毒製剤は、プロドラッグ、すなわち細胞毒性剤を放出するために、生理的条件下で、崩壊されるかまたは変換される化合物も含むことが理解されるべきである。このような薬剤としては、例えば、ドセタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、メイタンシン誘導体、ラシェルマイシン、カリチアマイシン、エトポシド、イフォスファミド、イリノテカン、ポルフィマーナトリウム フォトフリンＩＩ、テモゾロミド、トポテカン、グルクロン酸トリメトレキサート、ミトキサントロン、オーリスタチンＥ、ビンクリスチンおよびドキソルビシン；放射性核種、例えば、ヨウ素１３１、レニウム１８６、インジウム１１１、イットリウム９０、ビスマス２１０および２１３、アクチニウム２２５およびアスタチン２１３が挙げられる。例えば、キレート剤、免疫刺激薬としても知られる免疫賦活剤、すなわち、免疫応答を刺激する免疫エフェクター分子によって放射性核種をＴＣＲまたはその誘導体に付随させ得る。例示的な免疫賦活剤は、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γなどのサイトカイン、抗Ｔ細胞またはＮＫ細胞決定基抗体（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８または抗ＣＤ１６）を含む抗体またはその断片；抗体様結合特性を有する代替タンパク質足場；スーパー抗原、すなわちポリクローナルＴ細胞活性化および大量のサイトカイン放出をもたらすＴ細胞の非特異的活性化を引き起こす抗原、およびその変異体；ＩＬ－８、血小板因子４、メラノーマ成長刺激タンパク質などのケモカイン、補体活性化因子；異種タンパク質ドメイン、同種タンパク質ドメイン、ウイルス／細菌タンパク質ドメイン、ウイルス／細菌ペプチドである。
【0061】
ヒトＴリンパ球における抗原受容体分子（Ｔ細胞受容体分子）は、細胞表面でＣＤ３（Ｔ３）分子複合体と非共有結合により会合している。この複合体の抗ＣＤ３モノクローナル抗体による撹乱により、Ｔ細胞活性化が誘導される。よって、一部の実施形態は、抗ＣＤ３抗体、または前記抗ＣＤ３抗体の機能性断片またはバリアントと会合した（通常は、アルファまたはベータ鎖のＮまたはＣ末端への融合により）本明細書に記載されているＴＣＲを指す。本明細書に記載の組成物および方法において使用するのに好適な抗体断片およびバリアント／アナログとしては、ミニボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ＜’＞）２断片、ｄｓＦｖおよびｓｃＦｖ断片、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（商標）（Ａｂｌｙｎｘ（Ｂｅｌｇｉｕｍ）、ラクダ科動物（例えば、ラクダまたはラマ）抗体に由来する合成単一免疫グロブリン可変重鎖ドメインを含む分子）ならびにドメイン抗体（親和性成熟単一免疫グロブリン可変重鎖ドメインまたは免疫グロブリン可変軽鎖ドメイン（Ｄｏｍａｎｔｉｓ（Ｂｅｌｇｉｕｍ））を含む）またはアフィボディ（操作されたプロテインＡ足場アフィボディ（Ｓｗｅｄｅｎ）を含む）もしくはアンチカリン（操作されたアンチカリンＰｉｅｒｉｓ（Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む）などの抗体様結合特性を示す代替タンパク質足場が挙げられる。
【0062】
治療剤は、好ましくは、免疫エフェクター分子、細胞毒性剤および放射性核種からなる群から選択され得る。好ましくは、免疫エフェクター分子はサイトカインである。
【0063】
薬物動態改変部分は、例えば、少なくとも１つのポリエチレングリコール繰り返し単位、少なくとも１つのグリコール基、少なくとも１つのシアリル基またはそれらの組合せであってもよい。少なくとも１つのポリエチレングリコール繰り返し単位、少なくとも１つのグリコール基、少なくとも１つのシアリル基は、当業者に公知のいくつかの方法によって付随させ得る。好ましい実施形態では、ユニットはＴＣＲに共有結合により連結される。本発明によるＴＣＲは、１つまたはいくつかの薬物動態改変部分によって改変されてもよい。特に、ＴＣＲの可溶性形態は、１つまたはいくつかの薬物動態改変部分によって改変される。薬物動態改変部分は、治療薬の薬物動態プロファイルに対する有益な変化、例えば、血漿中半減期の改善、免疫原性の低減または増強、および溶解度の改善を達成し得る。
【0064】
本発明によるＴＣＲは、可溶性であっても、または膜に結合していてもよい。用語「可溶性」は、例えば、治療剤を抗原提示細胞に送達するための標的化剤として使用するための、可溶性形態である（すなわち、膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを有さない）ＴＣＲを指す。安定性のために、可溶性αβヘテロ二量体ＴＣＲは、好ましくは、例えば、国際公開第０３／０２０７６３号パンフレットに記載されているように、それぞれの定常ドメインの残基間に導入されたジスルフィド結合を有する。本発明のαβヘテロ二量体に存在する定常ドメインの一方または両方は、Ｃ末端（単数または複数）で、例えば、最大１５、または最大１０もしくは最大８もしくはそれより少ないアミノ酸で切断されてもよい。養子治療において使用するために、αβヘテロ二量体ＴＣＲは、例えば、細胞質ドメインと膜貫通ドメインの両方を有する全長鎖としてトランスフェクトされてもよい。ＴＣＲは、それぞれアルファ定常ドメインとベータ定常ドメインの間に天然に見られるものに対応するジスルフィド結合を含有してもよく、さらにまたはあるいは非天然ジスルフィド結合が存在してもよい。
【0065】
よって、ＴＣＲ、特に本発明によるＴＣＲの可溶性形態は、例えば、免疫原性を低下させる、流体力学的サイズ（溶液中のサイズ）溶解度および／もしくは安定性を増加させる（例えば、タンパク質分解に対する保護を増強させることによって）ならびに／または血清中半減期を延長するために、追加の機能性部分を付加することによって改変され得る。
【0066】
他の有用な機能性部分および改変には、患者の体内で本発明のＴＣＲを有するエフェクター宿主細胞を遮断するために使用され得る「自殺」または「安全スイッチ」が含まれる。１つの例は、Gargett and Brown Front Pharmacol. 2014; 5: 235に記載された誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）「安全スイッチ」である。簡潔には、その二量体化がＡＰ１９０３／ＣＩＰなどの小分子二量体化薬に依存し、改変されたエフェクター細胞においてアポトーシスの急速な誘導をもたらすカスパーゼ９ドメインを発現させるために、エフェクター宿主細胞は周知の方法によって改変される。この系は、例えば、欧州特許第２１７３８６９号明細書に記載されている。他の「自殺」「安全スイッチ」に関する例は、当技術分野において公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）、ＣＤ２０の発現とそれに続く抗ＣＤ２０抗体を使用する枯渇、またはｍｙｃタグ（Kieback et al, Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Jan 15;105(2):623-8）がある。
【0067】
グリコシル化パターンが変更されたＴＣＲも本明細書において予想される。当技術分野で公知であるように、グリコシル化パターンは、アミノ酸配列に依存し（例えば、以下で議論される特定のグリコシル化アミノ酸残基の存在または非存在）および／またはタンパク質が産生される宿主細胞もしくは生物に依存し得る。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ連結またはＯ連結されている。Ｎ連結は、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合を指す。結合分子へのＮ連結グリコシル化部位の付加は、アスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－トレオニン（ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）から選択される１つまたは複数のトリペプチド配列を含有するように、アミノ酸配列を変更することによって、従来より達成されている。Ｏ連結グリコシル化部位は、１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の出発配列への付加またはそれによる置換によって導入され得る。
【0068】
ＴＣＲのグリコシル化の別の手段は、グリコシドのタンパク質への化学的連結または酵素的連結によるものである。使用される連結方式によって、糖類は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基、例えば、システインのスルフヒドリル基、（ｄ）遊離ヒドロキシル基、例えば、セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンのヒドロキシル基、（ｅ）芳香族残基、例えば、フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンの芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合され得る。同様に、脱グリコシル化（すなわち、結合分子上に存在する炭水化物部分の除去）は、例えば、ＴＣＲをトリフルオロメタンスルホン酸に曝露することによって化学的に、またはエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼを用いることによって酵素的に達成され得る。
【0069】
小分子化合物などの薬物をＴＣＲ、特に本発明のＴＣＲの可溶性形態に付加することも考えられる。連結は、共有結合、または静電力によるなど非共有結合的相互作用によって達成され得る。当技術分野で公知の様々なリンカーは、薬物コンジュゲートを形成するために用いることができる。
【0070】
ＴＣＲ、特に本発明のＴＣＲの可溶性形態は、それぞれの分子（タグ）の特定、追跡、精製および／または単離を補助する追加のドメインを導入するためにさらに改変され得る。よって、一部の実施形態では、ＴＣＲα鎖またはＴＣＲβ鎖は、エピトープタグを含むように改変されてもよい。
【0071】
エピトープタグは、本発明のＴＣＲに組み込むことができるタグの有用な例である。エピトープタグは、特異的抗体の結合を可能にし、したがって、患者の体内の可溶性ＴＣＲもしくは宿主細胞または培養（宿主）細胞の結合および移動の特定および追跡を可能にするアミノ酸の短いストレッチである。エピトープタグと、故にタグ付けされたＴＣＲの検出は、いくつかの異なる技法を使用して達成され得る。
【0072】
タグは、前記タグに対して特異的な結合分子（抗体）の存在下で細胞を培養することによって、本発明のＴＣＲを有する宿主細胞の刺激および増殖のためにさらに用いることができる。
【0073】
一般的に、ＴＣＲは、一部の事例では、ＴＣＲの標的抗原との親和性およびオフレートを改変する様々な変異で改変され得る。特に、変異は、親和性を増加させるおよび／またはオフレートを低下させる場合がある。よって、ＴＣＲの少なくとも１つのＣＤＲおよびその可変ドメインフレームワーク領域が変異し得る。
【0074】
しかし、好ましい実施形態では、ＴＣＲのＣＤＲ領域は、改変されないかまたは実施例におけるＴＣＲ受容体に関するようにｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟を受けない。このことは、ＣＤＲ領域が天然に存在する配列を有することを意味する。これは有利であり得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟によって、ＴＣＲ分子に対する免疫原性がもたらされ得るからである。これより、治療効果および処置を低下または不活性化する抗薬物抗体の産生がもたらされ、ならびに／または有害作用が誘導される場合がある。
【0075】
変異は、１つまたは複数の置換、欠失または挿入であってもよい。これらの変異は、当技術分野で公知の任意の好適な方法、例えば、Example in Sambrook, Molecular Cloning - 4th Edition (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Pressに記載されている、ポリメラーゼ連鎖反応、制限酵素に基づくクローニング、ライゲーションに依存しないクローニング手順によって導入され得る。
【0076】
交差反応性のリスクを伴う理論的に予測できないＴＣＲ特異性は、内因性ＴＣＲ鎖と外因性ＴＣＲ鎖の間の誤対合に起因して生じ得る。ＴＣＲ配列の誤対合を避けるために、組換えＴＣＲ配列は、いくつかの異なる形質導入されたＴＣＲ鎖の正しい対合を効率的に増強することが示された技術である、最低限のマウス化Ｃα領域およびＣβ領域を含有するように改変されてもよい。ＴＣＲのマウス化（すなわち、アルファおよびベータ鎖ヒト定常領域をそれらのマウスのカウンターパートによって交換すること）は、宿主細胞におけるＴＣＲの細胞表面での発現を改善するために通常適用される技法である。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、マウス化ＴＣＲは、ＣＤ３共受容体とより効率的に会合する；および／または優先的に互いに対合し、所望の抗原特異性のＴＣＲを発現するようｅｘ ｖｉｖｏで遺伝子改変されているが、それらの「オリジナルの」ＴＣＲを依然として保持および発現するヒトＴ細胞上で混合ＴＣＲを形成しにくいと考えられる。
【0077】
マウス化ＴＣＲの発現の改善を代表する９つのアミノ酸が特定されており（Sommermeyer and Uckert, J Immunol. 2010 Jun 1; 184(11):6223-31）、ＴＣＲアルファおよび／またはベータ鎖定常領域におけるアミノ酸残基のうちの１つまたはすべてをそれらのマウスのカウンターパート残基で置換することが予測される。この技法は、「最低限のマウス化（minimal murinization）」とも称され、細胞表面の発現を増強するという利点をもたらすが、同時に、アミノ酸配列における「外来の」アミノ酸残基の数を低減し、それによって、免疫原性のリスクを低減する。
【0078】
一部の実施形態は、本明細書に記載されている単離されたＴＣＲを指し、ＴＣＲは、一本鎖タイプのものであり、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖は、リンカー配列によって連結している。
【0079】
好適な一本鎖ＴＣＲ形態は、可変ＴＣＲα領域に対応するアミノ酸配列によって構成された第１のセグメント、ＴＣＲβ鎖定常領域細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合した可変ＴＣＲβ領域に対応するアミノ酸配列によって構成された第２のセグメント、および第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列を含む。あるいは、第１のセグメントは、ＴＣＲβ鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によって構成されていてもよく、第２のセグメントは、ＴＣＲα鎖定常領域細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合したＴＣＲα鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構成されていてもよい。上記一本鎖ＴＣＲは、第１の鎖と第２の鎖の間にジスルフィド結合をさらに含んでもよく、リンカー配列の長さとジスルフィド結合の位置は、第１のセグメントと第２のセグメントの可変ドメイン配列が実質的にネイティブＴ細胞受容体におけるのと同様に変異によって配向されるようなものである。より具体的には、第１のセグメントは、ＴＣＲα鎖定常領域細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合したＴＣＲα鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構成されていてもよく、第２のセグメントは、ＴＣＲβ鎖定常領域細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合したＴＣＲβ鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によって構成されていてもよく、かつジスルフィド結合は、第１の鎖と第２の鎖の間にもたらされてもよい。リンカー配列は、ＴＣＲの機能を損なわない任意の配列であってもよい。
【0080】
本発明の文脈において、「機能性」ＴＣＲαおよび／またはβ鎖融合タンパク質は、例えば、少なくとも実質的な生物学的活性を維持する、アミノ酸の付加、欠失または置換によって改変されたＴＣＲまたはＴＣＲバリアントを意味することになる。ＴＣＲのαおよび／またはβ鎖の場合には、このことは、両方の鎖が、その生物学的機能、特に前記ＴＣＲの特異的ペプチド－ＭＨＣ複合体への結合、および／または特異的ペプチド：ＭＨＣ相互作用の際の機能的シグナル伝達を発揮するＴ細胞受容体（改変されていないαおよび／もしくはβ鎖を有するかまたは別の発明の融合タンパク質αおよび／またはβ鎖を有する）を形成することが可能なままであることを意味することになる。
【0081】
具体的実施形態では、ＴＣＲは、機能性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβ鎖融合タンパク質であるよう改変されてもよく、ここで、前記エピトープタグは、６から１５アミノ酸、好ましくは９から１１アミノ酸の長さを有する。別の実施形態では、ＴＣＲは、機能性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβ鎖融合タンパク質であるように改変されてもよく、ここで、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβ鎖融合タンパク質は、いずれも離れて配置されているかまたはタンデムに直接配置されている２つ以上のエピトープタグを含む。融合タンパク質の実施形態は、融合タンパク質がその生物学的活性（単数または複数）（「機能性」）を維持する限り、２、３、４、５またはさらに多くのエピトープタグを含有し得る。
【0082】
好ましいのは、本発明による機能性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβ鎖融合タンパク質であり、ここで、前記エピトープタグは、以下に限定されないが、ＣＤ２０もしくはＨｅｒ２／ｎｅｕタグ、または他の従来のタグ、例えば、ｍｙｃ－タグ、ＦＬＡＧ－タグ、Ｔ７－タグ、ＨＡ（ヘマグルチニン）－タグ、Ｈｉｓ－タグ、Ｓ－タグ、ＧＳＴ－タグ、もしくはＧＦＰ－タグから選択され、ｍｙｃ、Ｔ７、ＧＳＴ、ＧＦＰタグは、既存の分子に由来するエピトープである。対照的に、ＦＬＡＧは、高い抗原性のために設計された合成エピトープタグである（例えば、米国特許第４，７０３，００４号明細書および同第４，８５１，３４１号明細書を参照されたい）。高品質の試薬をその検出に使用することが可能であるため、ｍｙｃタグが好ましくは使用され得る。エピトープタグは、当然のことながら、抗体による認識の他に、１つまたは複数の追加の機能を有してもよい。これらのタグの配列は文献に記載されており、当業者に周知である。
【0083】
ＴＣＲバリアント
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチドであって、機能性部分が、
ａ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｂ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｃ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２、および２３
を含む、ポリペプチドを指す。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチドであって、機能性部分が、
ａ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｂ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｃ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２、および２３
を含む、ポリペプチドを指す。
【0084】
機能性部分は、ＴＣＲの抗原への、特に抗原－ＭＨＣ複合体への結合を媒介し得る。
【0085】
一実施形態では、機能性部分は、本明細書に記載されているＴＣＲα可変鎖および／またはＴＣＲβ可変鎖を含む。
【0086】
ＴＣＲバリアント分子、ＴＣＲ受容体の結合特性を有してもよいが、エフェクター細胞（Ｔ細胞以外）のシグナル伝達ドメイン、特にＮＫ細胞のシグナル伝達ドメインと組み合わされてもよい。したがって、一部の実施形態は、エフェクター細胞、例えば、ＮＫ細胞のシグナル伝達ドメインと組み合わせた、本明細書に記載されているＴＣＲの機能性部分を含むタンパク質を指す。
【0087】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されている少なくとも１つのＴＣＲ、好ましくは少なくとも２つのＴＣＲを含む多価ＴＣＲ複合体を指す。この態様の一実施形態では、少なくとも２つのＴＣＲ分子が、リンカー部分を介して連結し、多価複合体を形成する。好ましくは、複合体は水溶性であるため、リンカー部分はそれに従って選択されるべきである。リンカー部分は、形成された複合体の構造的多様性が最小限になるように、ＴＣＲ分子上の規定の位置に結合可能であることが好ましい。本態様の一実施形態は、本発明のＴＣＲ複合体によって提供され、ここで、ポリマー鎖またはペプチドリンカー配列は、ＴＣＲの可変領域配列内に位置していない各ＴＣＲのアミノ酸残基間に伸びている。本発明の複合体は、医学において使用するためのものであってもよく、リンカー部分は、それらの医薬適合性、例えば、それらの免疫原性に関して選択されるべきである。上記の望ましい基準を満たすリンカー部分の例は、当技術分野、例えば、抗体断片を連結する技術分野において公知である。
【0088】
リンカーの例は、親水性ポリマーおよびペプチドリンカーである。親水性ポリマーに関する１つの例は、ポリアルキレングリコールである。このクラスの最も一般的に使用されるものは、ポリエチレングリコールまたはＰＥＧに基づく。しかし、他のものは、他の好適な、必要に応じて置換された、ポリプロピレングリコールを含むポリアルキレングリコール、およびエチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体に基づく。ペプチドリンカーは、アミノ酸の鎖から構成され、単純なリンカー、またはその上にＴＣＲ分子が結合し得る多量体ドメインを生成するように機能する。
【0089】
一実施形態は、多価ＴＣＲ複合体を指し、ここで、前記ＴＣＲの少なくとも１つに、治療剤が付随している。
【0090】
サイトカインおよびケモカインの放出
一部の実施形態は、本明細書に記載されている単離されたＴＣＲ、本明細書に記載されているポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体を指し、ここで、ＩＦＮ－γの分泌は、エフェクター細胞上に発現された本発明のＴＣＲの配列番号１からなる群から選択されるアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ＊０１結合形態への結合によって誘導される。
一部の実施形態は、本明細書に記載されている単離されたＴＣＲ、本明細書に記載されているポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体を指し、ここで、ＩＦＮ－γの分泌は、エフェクター細胞上に発現された本発明のＴＣＲの配列番号１からなる群から選択されるアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ＊０１結合形態への結合によって誘導される。
【0091】
エフェクター細胞上に発現された本発明のＴＣＲの配列番号１のアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ＊０１結合形態への結合によって誘導されるＩＦＮ－γの分泌は、５００ｐｇ／ｍｌより多くてもよく、より好ましくは１０００ｐｇ／ｍｌより多くてもよく、最も好ましくは２０００ｐｇ／ｍｌより多くてもよい。ＩＦＮ－γの分泌は、無関係のペプチド（例えば、配列番号５４）のＨＬＡ－Ａ＊０１結合形態への結合と比較して、配列番号１のアミノ酸配列のＨＬＡ－Ａ＊０１結合形態への結合の場合には、少なくとも５倍、より高くてもよい。
【0092】
したがって、「ＴＣＲがアミノ酸配列を認識しない」は、非標的アミノ酸に接触させた場合に、本発明のＴＣＲのＩＦＮ－γ分泌が、３００ｐｇ／ｍｌ未満、２００ｐｇ／ｍｌ未満、１００ｐｇ／ｍｌ未満であることを意味する。特に、配列番号５４のタイチンエピトープと接触させた場合に、本発明のＴＣＲのＩＦＮ－γ分泌は、３００ｐｇ／ｍｌ未満、好ましくは２００ｐｇ／ｍｌ未満、より好ましくは１００ｐｇ／ｍｌ未満である。
【0093】
「エフェクター細胞」は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であってもよい。典型的には、エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞、特にＴ細胞である。他の好適な細胞型は、ガンマ－デルタＴ細胞およびＮＫ様Ｔ細胞を含む。
【0094】
本発明は、標的アミノ酸配列である配列番号１またはＨＬＡ－Ａ＊０１、好ましくはまたはそのＨＬＡ－Ａ＊０１：０１結合形態に結合するＴＣＲまたはその断片を同定するための方法であって、候補ＴＣＲまたはその抗原結合断片を配列番号１のアミノ酸配列またはＨＬＡ－Ａ＊０１、好ましくはまたはそのＨＬＡ－Ａ＊０１：０１結合形態と接触させることと、候補ＴＣＲまたはその抗原結合断片が標的に結合するおよび／または免疫応答を媒介するか否かを決定することとを含む方法にも関する。候補ＴＣＲまたはその抗原結合断片が免疫応答を媒介するかどうかは、例えば、サイトカイン分泌、例えば、ＩＦＮ－γ分泌の測定によって決定することができる。サイトカイン分泌は、アミノ酸配列である配列番号１をコードするｉｖｔＲＮＡをトランスフェクトされたＨＬＡ－Ａ１を形質導入したＤＵ－１４５細胞（またはＨＬＡ－Ａ１を形質導入した他のＡＰＣ）が、調査されるＴＣＲまたはＴＣＲの断片を含む分子を発現するＣＤ８＋濃縮ＰＢＭＣと共にインキュベートされるｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって測定することができる。
【0095】
本発明のＴＣＲは、高い腫瘍細胞認識能を示すため特に有用である。さらに、本明細書に記載されているＴＣＲは、高い腫瘍細胞殺滅能を示す。さらに、本発明のＴＣＲは、高い機能性アビディティを有する。
【0096】
さらに、ＴＣＲは、有効な腫瘍退縮に有利な、好ましいサイトカイン放出パターンを示す。
【0097】
核酸、ベクター
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲをコードする核酸または本明細書に記載されているＴＣＲをコードするポリヌクレオチドをコードする核酸に関する。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲをコードする核酸または本明細書に記載されているＴＣＲをコードするポリヌクレオチドをコードする核酸に関する。
【0098】
【表1】
【0099】
「核酸分子」は、一般的に、ＤＮＡまたはＲＮＡのポリマーを意味し、一本鎖または二本鎖であってもよく、天然源から合成または得られてもよく（例えば、単離および／または精製されてもよく）、天然、非天然または改変されたヌクレオチドを含有してもよく、および天然、非天然または改変されたヌクレオチド間の連結、例えば、未改変オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見られるホスホジエステルの代わりに、ホスホロアミデート連結またはホスホロチオエート連結などを含有してもよい。好ましくは、本明細書に記載の核酸は組換え体である。本明細書で使用される場合、用語「組換え体」は、（ｉ）天然もしくは合成核酸セグメントを、生細胞中で複製し得る核酸分子に連結することによって、生細胞の外側で構築される分子、または（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されたものの複製から得られる分子を指す。本発明の目的として、複製は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ複製であっても、またはｉｎ ｖｉｖｏ複製であってもよい。核酸は、当技術分野で公知の、または市販の（例えば、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒおよび同様の会社からの）手順を使用して、化学合成および／または酵素的ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Sambrook et al.を参照されたく、例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチドまたは分子の生物学的安定性を増加させるか、またはハイブリダイゼーションの際に形成される二本鎖の物理的安定性を高めるように設計された様々な改変ヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して化学的に合成され得る。核酸は、組換えＴＣＲ、ポリペプチド、もしくはタンパク質、またはその機能性部分もしくは機能性バリアントのいずれかをコードする任意のヌクレオチド配列を含み得る。
【0100】
本開示は、単離または精製された核酸のバリアントであって、バリアント核酸が、本明細書に記載のＴＣＲをコードするヌクレオチド配列と、少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一なヌクレオチド配列を含む、バリアントも提供する。このようなバリアントヌクレオチド配列は、ＭＡＧＥ－Ａ３を特異的に認識する機能性ＴＣＲをコードする。
【0101】
本開示は、本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列または本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む単離または精製された核酸も提供する。
【0102】
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシーな条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシーな条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能な程度に濃い量で、標的配列（本明細書に記載のいずれかの核酸のヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシーな条件には、ヌクレオチド配列に適合したほんの僅かな小さな領域（例えば、３～１０塩基）を偶然有するランダム配列から、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、または散在する僅かな不適合を含有するに過ぎないポリヌクレオチドを区別する条件が含まれる。このような相補性の小領域は、１４～１７塩基またはそれより多い塩基の完全長の相補体よりも容易に融解し、高ストリンジェンシーなハイブリダイゼーションにより、それらの区別が容易になる。比較的高ストリンジェンシーな条件としては、例えば、約５０～７０℃の温度で、約０．０２～０．１ＭのＮａＣｌまたはそれと同等なものによって提供されるような、低塩条件および／または高温条件が挙げられる。このような高ストリンジェンシーな条件は、存在するとしても、ヌクレオチド配列と鋳型または標的鎖との間の不適合をほとんど許容せず、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。ホルムアミド添加量を増加させることによって、条件をよりストリンジェントにし得ることは一般的に認識されている。
【0103】
本明細書の他の箇所で既に記載されているように、ＴＣＲをコードする核酸は改変されてもよい。核酸配列全体における有用な改変は、コドン最適化であり得る。発現したアミノ酸配列内に保存的置換をもたらす変更がなされ得る。これらのバリエーションは、機能に影響を及ぼさないＴＣＲ鎖のアミノ酸配列の相補性決定領域および非相補性決定領域においてなされ得る。通常、付加と欠失は、ＣＤＲ３領域において起こらない。
【0104】
別の実施形態は、本明細書に記載されているＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを指す。
【0105】
ベクターは、好ましくは、プラスミド、シャトルベクター、ファージミド、コスミド、発現ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターもしくは粒子および／または遺伝子治療において使用されるベクターである。
【0106】
「ベクター」は、核酸配列を、コードされたポリペプチドの合成が起こり得る好適な宿主細胞中に運ぶための能力を有する任意の分子または組成物である。典型的には、および好ましくは、ベクターは、所望の核酸配列（例えば、本発明の核酸）を組み込むために、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技法を使用して操作された核酸である。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、および／またはリポソームを含んでもよい。ベクターは、プラスミド、シャトルベクター、ファージミド、コスミド、発現ベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターもしくは粒子および／または遺伝子治療において使用されるベクターであってもよい。ベクターは、複製開始点として、宿主細胞における複製を可能とする核酸配列を含んでもよい。ベクターは、１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子および当業者にとって公知の他の遺伝要素も含んでもよい。ベクターは、好ましくは、前記核酸の発現を可能にする配列に作動可能に連結した本発明による核酸を含む発現ベクターである。
【0107】
好ましくは、ベクターは発現ベクターである。より好ましくは、ベクターは、レトロウイルス、より具体的には、ガンマ－レトロウイルスまたはレンチウイルスのベクターである。
【0108】
細胞、細胞株
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲを発現する細胞を指す。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲを発現する細胞を指す。
【0109】
一部の実施形態では、細胞は、単離されるかまたは天然に存在しない。
【0110】
具体的実施形態では、細胞は、本明細書に記載されているＴＣＲをコードする核酸または前記核酸を含むベクターを含んでもよい。
【0111】
細胞中では、上記ＴＣＲをコードする核酸配列を含む上記ベクターが導入されてもよく、または前記ＴＣＲをコードするｉｖｔＲＮＡが導入されてもよい。細胞は、Ｔ細胞などの末梢血リンパ球であってもよい。ＴＣＲのクローニングおよび外因性発現の方法は、例えば、Engels et al.（Relapse or eradication of cancer is predicted by peptide-major histocompatibility complex affinity. Cancer Cell, 23(4), 516-26. 2013）に記載されている。一次ヒトＴ細胞のレンチウイルスベクターによる形質導入は、例えば、Cribbs "simplified production and concentration of lentiviral vectors to achieve high transduction in primary human T cells" BMC Biotechnol. 2013; 13: 98に記載されている。
【0112】
用語「トランスフェクション」と「形質導入」は交換可能であり、外因性核酸配列が、宿主細胞、例えば、真核宿主細胞に導入されるプロセスを指す。核酸配列の導入または移入は、上述の方法に限定されないが、電気穿孔、微量注射、遺伝子銃送達、リポフェクション、スーパーフェクションおよびレトロウイルスまたは形質導入またはトランスフェクションに好適な他のウイルスによる上述の感染を含む任意の数の手段よって達成され得る。
【0113】
一部の実施形態は、
ａ）本明細書に記載されている少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター、または
ｂ）本明細書に記載されているＴＣＲのアルファ鎖をコードする核酸を含む第１の発現ベクター、および本明細書に記載されているＴＣＲのベータ鎖をコードする核酸を含む第２の発現ベクター
を含む細胞を指す。
ａ）本明細書に記載されている少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター、または
ｂ）本明細書に記載されているＴＣＲのアルファ鎖をコードする核酸を含む第１の発現ベクター、および本明細書に記載されているＴＣＲのベータ鎖をコードする核酸を含む第２の発現ベクター
を含む細胞を指す。
【0114】
一部の実施形態では、細胞は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。細胞は、ナチュラルキラー細胞またはＴ細胞であってもよい。好ましくは、細胞はＴ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。一部の実施形態では、細胞は、幹細胞様メモリーＴ細胞である。
【0115】
幹細胞様メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）は、自己再生能および長期間存続する能力によって特徴付けられる、分化の程度の低いＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の亜集団である。ｉｎ ｖｉｖｏでこれらの細胞がそれらの抗原に遭遇すると、これらは、一部の静止したままのＴＳＣＭと共に、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）および最終分化エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ）へとさらに分化する（Flynn et al., Clinical & Translational Immunology (2014)）。これらの残っているＴＳＣＭ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで耐性免疫記憶を構築する能力を示し、したがって、養子Ｔ細胞療法に関する重要なＴ細胞亜集団であると考えられる（Lugli et al., Nature Protocols 8, 33-42 (2013) Gattinoni et al., Nat. Med. 2011 Oct; 17(10): 1290-1297）。幹細胞メモリーＴ細胞亜集団にＴ細胞プールを限定するために、免疫磁気選択を使用することができる。（Riddell et al. 2014, Cancer Journal 20(2): 141-44）を参照されたい。
【0116】
ＴＣＲを標的とする抗体
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ＴＣＲの一部が、
ａ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合断片を指す。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ＴＣＲの一部が、
ａ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合断片を指す。
【0117】
特に、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ３に対する特異性を媒介する、本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を指す。一実施形態では、ＭＡＧＥ－Ａ３特異性を媒介するＴＣＲの一部は、
ａ）（ｉ）配列番号２のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号５のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；
または；
ｂ）（ｉ）配列番号１０のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号１３のベータ鎖のＣＤＲ１、
配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；
または；
ｃ）（ｉ）配列番号１８のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号２１のベータ鎖のＣＤＲ１、
配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
ａ）（ｉ）配列番号２のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号５のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；
または；
ｂ）（ｉ）配列番号１０のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号１３のベータ鎖のＣＤＲ１、
配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；
または；
ｃ）（ｉ）配列番号１８のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号２１のベータ鎖のＣＤＲ１、
配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
【0118】
一部の実施形態では、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ３に対する特異性を媒介する、本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を指す。一実施形態では、ＭＡＧＥ－Ａ３特異性を媒介するＴＣＲの一部は、
ａ）（ｉ）配列番号２のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号３のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号５のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号６のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３
または；
ｂ）（ｉ）配列番号１０のアルファ鎖のＣＤＲ１
配列番号１１のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは
（ｉｉ）配列番号１３のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号１４のベータ鎖のＣＤＲ２、
配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３
または；
ｃ）（ｉ）配列番号１８のアルファ鎖のＣＤＲ１
配列番号１９のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは
（ｉｉ）配列番号２１のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号２２のベータ鎖のＣＤＲ２
配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
ａ）（ｉ）配列番号２のアルファ鎖のＣＤＲ１、
配列番号３のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３；および／もしくは
（ｉｉ）配列番号５のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号６のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３
または；
ｂ）（ｉ）配列番号１０のアルファ鎖のＣＤＲ１
配列番号１１のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは
（ｉｉ）配列番号１３のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号１４のベータ鎖のＣＤＲ２、
配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３
または；
ｃ）（ｉ）配列番号１８のアルファ鎖のＣＤＲ１
配列番号１９のアルファ鎖のＣＤＲ２、
配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは
（ｉｉ）配列番号２１のベータ鎖のＣＤＲ１
配列番号２２のベータ鎖のＣＤＲ２
配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む。
【0119】
抗体抗原結合断片は、ＴＣＲの活性をモジュレートし得る。抗体またはその抗原結合断片は、ＴＣＲのＭＡＧＥ－Ａ３との結合をブロックする場合もあり、ブロックしない場合もある。抗体またはその抗原結合断片は、ＴＣＲの治療活性をモジュレートするため、または診断目的で使用され得る。
【0120】
医薬組成物、医学的処置およびキット
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲを含む医薬組成物、前記ＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体、ＴＣＲをコードする核酸、前記核酸を含むベクター、前記ＴＣＲを含む細胞、または本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体を指す。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲを含む医薬組成物、前記ＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体、ＴＣＲをコードする核酸、前記核酸を含むベクター、前記ＴＣＲを含む細胞、または本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体を指す。
【0121】
本発明のこれらの活性成分は、好ましくは、許容される担体または担体材料と混合した用量で、このような医薬組成物によって、疾患が処置されるかまたは少なくとも緩和され得るように使用される。このような組成物は、（活性成分および担体に加えて）、当技術分野の公知の状態である充填材料、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤および他の材料を含み得る。
【0122】
用語「薬学的に許容される」は、活性成分の生体活性の有効性を妨げない、非毒性材料を定義する。担体の選択は、適用に依存する。
【0123】
医薬組成物は、活性成分の活性を増強するかまたは処置を補う追加の成分を含有してもよい。このような追加の成分および／または因子は、相乗効果を達成するかまたは有害もしくは望ましくない作用を最小限にするための、医薬組成物の一部であり得る。
【0124】
本発明の活性成分の製剤化または調製および適用／薬物治療のための技法は、"Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, PA, latest editionに公開されている。適当な適用は、非経口適用、例えば、筋肉内、皮下、髄内注射および髄腔内、直接脳室内、静脈内、節内、腹腔内または腫瘍内注射である。静脈内注射は、患者にとって好ましい処置である。
【0125】
好ましい実施形態によれば、医薬組成物は、注入または注射である。
【0126】
注射用組成物は、少なくとも１つの有効成分、例えば、ＴＣＲを発現する増殖Ｔ細胞集団（例えば、処置される患者に対して自己であるかまたは同種間である）を含む薬学的に許容される流体組成物である。有効成分は、通常、生理的に許容される担体中に溶解されるかまたは懸濁され、さらに、組成物は、乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝剤などの少量の１つまたは複数の非毒性補助剤を含んでもよい。本開示の融合タンパク質と共に使用するのに有用な、このような注射用組成物は従来的なものであり、適当な製剤は、当業者に周知である。
【0127】
典型的には、医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む。
【0128】
したがって、本発明の別の態様は、本明細書に記載されているＴＣＲ、前記ＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体、前記ＴＣＲをコードする核酸、前記核酸を含むベクター、前記ＴＣＲを含む細胞、または医薬として使用するための本明細書に記載されているＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体を指す。
【0129】
一部の実施形態は、本明細書に記載されているＴＣＲ、前記ＴＣＲの機能性部分を含むポリペプチド、本明細書に記載されている多価ＴＣＲ複合体、前記ＴＣＲをコードする核酸、前記核酸を含むベクター、がんの処置において使用するための前記ＴＣＲを含む細胞を指す。
【0130】
一実施形態では、がんは、血液がんまたは固形腫瘍である。
【0131】
血液がんは、固形腫瘍を形成せず、したがって、体内に主に分散される血液のがんとも言われる。血液がんの例は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である。固形腫瘍には２つの主要なタイプ、すなわち肉腫および癌が存在する。肉腫は、例えば、血管、骨、脂肪組織、靭帯、リンパ管、筋肉または腱の腫瘍である。
【0132】
一実施形態では、がんは、前立腺がん、子宮がん、甲状腺がん、精巣がん、腎がん、膵臓がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、扁平上皮癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、メラノーマ、肝細胞癌、頭頚部がん、胃がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、胃腺癌、胆管細胞癌、乳がん、膀胱がん、骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病、癌腫、肉腫または骨肉腫からなる群から選択される。
【0133】
（ｉ）本明細書に記載されている単離されたＴＣＲ、（ｉｉ）組換えＴＣＲをコードする核酸を含むウイルス粒子、（ｉｉｉ）本明細書に記載されている組換えＴＣＲを発現するよう改変された、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞、（ｉｖ）本明細書に記載されている組換えＴＣＲをコードする核酸のうちの１つまたは複数を含有する医薬組成物およびキットも本明細書において企図されている。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の組換えＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクター粒子（または組換えＴＣＲを発現するよう、本明細書に記載のベクター粒子を使用して改変されたＴ細胞）を含む組成物を提供する。このような組成物は、本明細書にさらに記載されている本開示の方法において、対象に投与することができる。
【0134】
本明細書に記載されている改変Ｔ細胞を含む組成物は、公知の技法に従って、養子免疫療法のための方法および組成物において、または本開示に基づいて、当業者に明らかとなるそのバリエーションにおいて利用することができる。
【0135】
一部の実施形態では、細胞は、最初に、それらを培養培地から回収し、次いで、細胞を洗浄し、培地および投与に好適な容器系（「薬学的に許容される」担体）において、治療有効量で濃縮することによって製剤化される。好適な注入培地は、任意の等張培地製剤、典型的には、通常生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）またはＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）であってもよいが、水中５％のデキストロースまたは乳酸リンゲル液も利用することができる。注入培地にヒト血清アルブミンを補充してもよい。
【0136】
組成物中の有効治療のための細胞数は、典型的には、１０より多い細胞、かつ最大１０６、１０８または１０９以下の細胞であり、１０１０より多い細胞でもよい。細胞数は、組成物が、その中に含まれる細胞の種類に応じて意図される最終的用途に応じて変わることになる。本発明において提供される用途では、細胞は、一般的には１リットル以下の体積中にあり、５００ｍｌ以下、さらには２５０ｍｌまたは１００ｍｌ以下であってもよい。したがって、所望の細胞の密度は、典型的には１ｍｌ当たり１０６を超える細胞であり、一般的には１ｍｌ当たり１０７を超え、一般的には１ｍｌ当たり１０８を超える。臨床的に関連する数の免疫細胞は、１０９、１０１０または１０１１の細胞に累積的に等しいかまたはそれを超える複数の注入物中に配分され得る。本発明において提供される医薬組成物は、種々の形態、例えば、固体、液体、粉体、水性、または凍結乾燥形態であってもよい。好適な医薬担体の例は、当技術分野において公知である。このような担体および／または添加剤は、従来の方法によって製剤化することができ、好適な用量で対象に投与することができる。安定化剤、例えば、脂質、ヌクレアーゼ阻害剤、ポリマーおよびキレート剤は、組成物を体内での分解から保護することができる。注射による投与が意図される組成物中には、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定化剤および等張剤のうちの１つまたは複数が含まれてもよい。
【0137】
本明細書に記載されている組換えＴＣＲ、または本発明において提供される組換えＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むウイルスベクター粒子は、キットとしてパッケージングされてもよい。キットは、任意選択で、１つまたは複数の成分、例えば、使用説明書、デバイス、および追加の試薬、ならびに本方法を実践するためのコンポーネント、例えば、チューブ、容器およびシリンジを含んでもよい。例示的なキットは、組換えＴＣＲをコードする核酸、組換えＴＣＲポリペプチド、または本発明において提供されるウイルスを含んでもよく、任意選択で、使用説明書、対象においてウイルスを検出するためのデバイス、組成物を対象に投与するためのデバイス、および組成物を対象に投与するためのデバイスを含んでもよい。
【0138】
目的の遺伝子（例えば、組換えＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドを含むキットも本明細書において企図されている。目的の配列（例えば、組換えＴＣＲ）をコードするウイルスベクターおよび任意選択で免疫チェックポイント阻害剤をコードするポリヌクレオチド配列を含むキットも、本明細書において企図されている。
【0139】
本明細書において企図されるキットは、本明細書に開示されたＴＣＲのうちのいずれか１つまたは複数をコードするポリヌクレオチドの存在を検出するための方法を実行するためのキットも含む。特に、このような診断キットは、適当な増幅プライマーおよび検出プライマーならびに本明細書に開示されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを検出するために、ディープシーケンシングを実施するための他の関連試薬のセットを含んでもよい。さらなる実施形態では、本発明におけるキットは、抗体または他の結合分子などの、本明細書に開示されたＴＣＲを検出するための試薬を含んでもよい。診断キットは、本明細書に開示されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドの存在を決定するため、または本明細書に開示されたＴＣＲの存在を決定するための説明書も含有し得る。キットは、説明書を含有してもよい。説明書は、典型的には、キットに含まれる成分、対象の適切な状態を決定するための方法を含む投与のための方法、適切な投薬量、および適切な投与方法を説明する有形の表現を含む。説明書は、処置時間の持続期間にわたって対象をモニタリングするためのガイダンスも含み得る。
【0140】
本発明において提供されるキットは、本明細書に記載の組成物を対象に投与するためのデバイスも含み得る。医薬またはワクチンを投与するための、当技術分野で公知の種々のデバイスのいずれかが、本発明において提供されるキットに含まれてもよい。例示的なデバイスとしては、以下に限定されないが、皮下注射針、静脈注射針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器、および液体ディスペンサー、例えば、点眼器が挙げられる。典型的には、キットのウイルスを投与するためのデバイスは、キットのウイルスに対応するものであり、例えば、高圧注射用デバイスなどの無針注射用デバイスは、高圧注射によって損傷を受けなかったウイルスと共に、キット中に含まれてもよいが、典型的には、高圧注射によって損傷を受けたウイルスと共に、キット中に含まれることはない。
【0141】
本発明において提供されるキットは、化合物、例えば、Ｔ細胞活性化因子または刺激物質、またはＴＬＲアゴニスト、例えば、対象に対するＴＬＲ４アゴニストを投与するためのデバイスも含んでよい。医薬を対象に投与するための、当技術分野で公知の種々のデバイスのいずれかは、本発明において提供されるキット中に含まれてもよい。例示的なデバイスとしては、皮下注射針、静脈注射針、カテーテル、無針注射、以下に限定されないが、皮下注射針、静脈注射針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器、および液体ディスペンサー、例えば、点眼器が挙げられる。典型的には、キットの、化合物を投与するためのデバイスは、化合物投与の所望の方法に対応するものであろう。
【0142】
実験
[実施例１]
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンは、ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを選択的に認識する。
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンを単離するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏプライミングアプローチを使用した。プライミング系は、抗原提示細胞としてＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陰性ドナーだけでなくＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陽性ドナーの成熟樹状細胞（ｍＤＣ）を、応答細胞として自己のＣＤ８＋濃縮Ｔ細胞を使用する。ヒトＭＡＧＥＡ３遺伝子をコードするｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたＲＮＡ（ｉｖｔＲＮＡ）は、特異的抗原の供給源としての役割を果たす。ｍＤＣへの電気穿孔後に、ＭＡＧＥ－Ａ３をコードするｉｖｔＲＮＡはタンパク質へと翻訳され、次に、プロセシングされ、ｍＤＣ上にＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によってペプチドとして提示される。ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陰性ドナーでは、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１をコードするｉｖｔＲＮＡを、ＭＡＧＥ－Ａ３ ｉｖｔＲＮＡに加えて使用し、抗原提示細胞の各ＨＬＡ対立遺伝子を遺伝子導入により発現させた（同種間アプローチ）。同じドナーに由来するＴ細胞のｉｖｔＲＮＡがトランスフェクトされたｍＤＣとのｉｎ ｖｉｔｒｏ共培養によって、対応するＴＣＲの供給源としての役割を果たす抗原特異的Ｔ細胞のｄｅ ｎｏｖｏ誘導がもたらされる。抗原特異的Ｔ細胞は、種々の方法によって濃縮することができ、限界希釈またはＦＡＣＳベースの単一細胞選別によってクローニングされる。単離され、拡大されたＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンを、飽和量（１０－５Ｍ）のＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドまたはタイチン由来の対照ペプチド（ＥＳＤ）のいずれかを負荷した、ＨＬＡ－Ａ１－ＧＦＰで前もって形質導入したＤＵ－１４５細胞（ＤＵ－１４５＿Ａ１）と共培養した。タイチン由来のＥＳＤ対照ペプチドは、親和性成熟ＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲによって交差認識され、臨床試験中に主要な血管毒性をもたらした（Brian J. Cameron, 2013；Linette et al., 2013）。２０～２４時間後に、共培養上清のＩＦＮ－γ濃度を標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（ＢＤヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡセット）によって分析した。
[実施例１]
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンは、ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを選択的に認識する。
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンを単離するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏプライミングアプローチを使用した。プライミング系は、抗原提示細胞としてＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陰性ドナーだけでなくＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陽性ドナーの成熟樹状細胞（ｍＤＣ）を、応答細胞として自己のＣＤ８＋濃縮Ｔ細胞を使用する。ヒトＭＡＧＥＡ３遺伝子をコードするｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたＲＮＡ（ｉｖｔＲＮＡ）は、特異的抗原の供給源としての役割を果たす。ｍＤＣへの電気穿孔後に、ＭＡＧＥ－Ａ３をコードするｉｖｔＲＮＡはタンパク質へと翻訳され、次に、プロセシングされ、ｍＤＣ上にＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によってペプチドとして提示される。ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１陰性ドナーでは、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１をコードするｉｖｔＲＮＡを、ＭＡＧＥ－Ａ３ ｉｖｔＲＮＡに加えて使用し、抗原提示細胞の各ＨＬＡ対立遺伝子を遺伝子導入により発現させた（同種間アプローチ）。同じドナーに由来するＴ細胞のｉｖｔＲＮＡがトランスフェクトされたｍＤＣとのｉｎ ｖｉｔｒｏ共培養によって、対応するＴＣＲの供給源としての役割を果たす抗原特異的Ｔ細胞のｄｅ ｎｏｖｏ誘導がもたらされる。抗原特異的Ｔ細胞は、種々の方法によって濃縮することができ、限界希釈またはＦＡＣＳベースの単一細胞選別によってクローニングされる。単離され、拡大されたＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンを、飽和量（１０－５Ｍ）のＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドまたはタイチン由来の対照ペプチド（ＥＳＤ）のいずれかを負荷した、ＨＬＡ－Ａ１－ＧＦＰで前もって形質導入したＤＵ－１４５細胞（ＤＵ－１４５＿Ａ１）と共培養した。タイチン由来のＥＳＤ対照ペプチドは、親和性成熟ＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲによって交差認識され、臨床試験中に主要な血管毒性をもたらした（Brian J. Cameron, 2013；Linette et al., 2013）。２０～２４時間後に、共培養上清のＩＦＮ－γ濃度を標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（ＢＤヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡセット）によって分析した。
【0143】
結果：
すべてのＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンは、ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを選択的に認識したが、一方、タイチンＥＳＤペプチドは認識されなかった。さらに、試験したＴ細胞クローンは、ヒトＭＡＧＥＡ３遺伝子をコードするｉｖｔＲＮＡを電気穿孔したＤＵ－１４５＿Ａ１細胞において内因的にプロセシングされ、提示されたＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを認識した。（図１）。
すべてのＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンは、ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを選択的に認識したが、一方、タイチンＥＳＤペプチドは認識されなかった。さらに、試験したＴ細胞クローンは、ヒトＭＡＧＥＡ３遺伝子をコードするｉｖｔＲＮＡを電気穿孔したＤＵ－１４５＿Ａ１細胞において内因的にプロセシングされ、提示されたＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチドを認識した。（図１）。
【0144】
[実施例２]
単離されたＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲは遺伝子導入により発現され得る
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンのＴＣＲ－α鎖およびＴＣＲ－β鎖の配列を、次世代シーケンシングによって特定し、それらの最低限にマウス化されたカウンターパートによって定常ＴＣＲ領域を交換した後に、レトロウイルスベクターｐＥＳ．１２－６中にクローニングした。β鎖では、Ｃβ１配列を使用した。３名の健康なドナーのＰＢＭＣをフィコール勾配遠心分離によって単離した。ＣＤ８陽性Ｃβ１陰性Ｔ細胞を負の磁気選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によって濃縮し、非組織培養２４ウェルプレート中で、プレートに結合したＣＤ３およびＣＤ２８に対して特異的な抗体で刺激した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのレトロウイルスプラスミドと２種の発現プラスミドをコードする各ＴＣＲのトランスフェクションによって、アンホトロピックレトロウイルス粒子を生成した。刺激の３日後に、ＣＤ８陽性Ｃβ１陰性Ｔ細胞を形質導入し、１０日目に形質導入用マーカーとしてＣβ１定常ベータ領域を使用するＭＡＣＳ分離によって形質導入されたＣＤ８＋細胞を濃縮し、次いで、ＲＥＰによって拡大させた。トランスジェニックＴ細胞をＨＬＡ－Ａ１拘束性ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体（ＭＡＧＥ－Ａ３、ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ；ｉｍｍｕｎｅＡｗａｒｅ）またはＣＤ８および定常β１領域に対する抗体のいずれかで染色した。
単離されたＭＡＧＥ－Ａ３反応性ＴＣＲは遺伝子導入により発現され得る
ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンのＴＣＲ－α鎖およびＴＣＲ－β鎖の配列を、次世代シーケンシングによって特定し、それらの最低限にマウス化されたカウンターパートによって定常ＴＣＲ領域を交換した後に、レトロウイルスベクターｐＥＳ．１２－６中にクローニングした。β鎖では、Ｃβ１配列を使用した。３名の健康なドナーのＰＢＭＣをフィコール勾配遠心分離によって単離した。ＣＤ８陽性Ｃβ１陰性Ｔ細胞を負の磁気選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によって濃縮し、非組織培養２４ウェルプレート中で、プレートに結合したＣＤ３およびＣＤ２８に対して特異的な抗体で刺激した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのレトロウイルスプラスミドと２種の発現プラスミドをコードする各ＴＣＲのトランスフェクションによって、アンホトロピックレトロウイルス粒子を生成した。刺激の３日後に、ＣＤ８陽性Ｃβ１陰性Ｔ細胞を形質導入し、１０日目に形質導入用マーカーとしてＣβ１定常ベータ領域を使用するＭＡＣＳ分離によって形質導入されたＣＤ８＋細胞を濃縮し、次いで、ＲＥＰによって拡大させた。トランスジェニックＴ細胞をＨＬＡ－Ａ１拘束性ＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体（ＭＡＧＥ－Ａ３、ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ；ｉｍｍｕｎｅＡｗａｒｅ）またはＣＤ８および定常β１領域に対する抗体のいずれかで染色した。
【0145】
結果：
ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２を発現するトランスジェニックＴ細胞集団は、およそ７０％Ｃβ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞で効率的に形質導入された。両方のＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団はＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体に効率的に結合した（ＴＣＲ＿１では４０％を超え、ＴＣＲ＿２では２０％）。ＴＣＲ＿３を形質導入したＴ細胞集団の２５％だけがＣβ１に対して陽性であり、ＴＣＲ発現を示し、Ｔ細胞の５％がＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体に結合した。形質導入されていないＣＤ８陽性Ｔ細胞では、非常に低いＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体染色しか観察されず、Ｃβ１抗体染色は観察されなかった。これらの結果は、ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンから単離されたＴＣＲを、健康なドナーのＴ細胞において遺伝子導入により発現させることができることを示す。（図２）。
ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２を発現するトランスジェニックＴ細胞集団は、およそ７０％Ｃβ１陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞で効率的に形質導入された。両方のＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団はＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体に効率的に結合した（ＴＣＲ＿１では４０％を超え、ＴＣＲ＿２では２０％）。ＴＣＲ＿３を形質導入したＴ細胞集団の２５％だけがＣβ１に対して陽性であり、ＴＣＲ発現を示し、Ｔ細胞の５％がＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体に結合した。形質導入されていないＣＤ８陽性Ｔ細胞では、非常に低いＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤ－ＭＨＣ多量体染色しか観察されず、Ｃβ１抗体染色は観察されなかった。これらの結果は、ＭＡＧＥ－Ａ３反応性Ｔ細胞クローンから単離されたＴＣＲを、健康なドナーのＴ細胞において遺伝子導入により発現させることができることを示す。（図２）。
【0146】
[実施例３]
ＴＣＲを遺伝子導入により発現するＴ細胞は、内因的に処理され、提示されたペプチドを認識する
トランスジェニックＴ細胞の標的特異性を評価するために、ＤＵ－１４５細胞にＨＬＡ－Ａ１－ＧＦＰを前もって形質導入し、ｍＣｈｅｒｒｙ単独（陰性対照）、ＭＡＧＥ－Ａ３－ｍＣｈｅｒｒｙまたはＭＡＧＥ－Ａ６－ｍＣｈｅｒｒｙを発現するようにさらに操作した。ＭＡＧＥ－Ａ３およびＭＡＧＥ－Ａ６は、ヌクレオチドのアラインメントが９８％、タンパク質配列のアラインメントが９５％と相同性が高く、したがって、交差反応性があると考えられる（Newman et al., 2016）。３名のドナーの形質導入されていない（ＵＴＤ）トランスジェニックＴ細胞を、関連するペプチド（ＥＶＤ）を負荷していないかまたは負荷した形質導入細胞と共培養した。認識アッセイでは、１５，０００個のＴＣＲトランスジェニックＣβ１陽性Ｔ細胞および１５，０００個の腫瘍細胞と共にエフェクター対標的比１：１で共培養を設定する。標的細胞の認識は、標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによって分析した。
ＴＣＲを遺伝子導入により発現するＴ細胞は、内因的に処理され、提示されたペプチドを認識する
トランスジェニックＴ細胞の標的特異性を評価するために、ＤＵ－１４５細胞にＨＬＡ－Ａ１－ＧＦＰを前もって形質導入し、ｍＣｈｅｒｒｙ単独（陰性対照）、ＭＡＧＥ－Ａ３－ｍＣｈｅｒｒｙまたはＭＡＧＥ－Ａ６－ｍＣｈｅｒｒｙを発現するようにさらに操作した。ＭＡＧＥ－Ａ３およびＭＡＧＥ－Ａ６は、ヌクレオチドのアラインメントが９８％、タンパク質配列のアラインメントが９５％と相同性が高く、したがって、交差反応性があると考えられる（Newman et al., 2016）。３名のドナーの形質導入されていない（ＵＴＤ）トランスジェニックＴ細胞を、関連するペプチド（ＥＶＤ）を負荷していないかまたは負荷した形質導入細胞と共培養した。認識アッセイでは、１５，０００個のＴＣＲトランスジェニックＣβ１陽性Ｔ細胞および１５，０００個の腫瘍細胞と共にエフェクター対標的比１：１で共培養を設定する。標的細胞の認識は、標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによって分析した。
【0147】
結果：
すべてのＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、ドナー依存性のバリエーションを有するすべてのペプチドを負荷した標的細胞について強固な認識を示した。ＭＡＧＥ－Ａ３で操作されたＤＵ－１４５＿Ａ１だけが認識されたが、一方、ＭＡＧＥ－Ａ６を過剰発現するＤＵ－１４５＿Ａ１細胞は認識されなかった。すべてのドナーの形質導入されていないＴ細胞は、試験条件のいずれにおいてもＩＦＮ－γを分泌せず、活性化の兆候を示さなかった。これらの結果は、ＴＣＲ＿１、＿２および＿３がＭＡＧＥ－Ａ３を選択的に認識するが、ＭＡＧＥ－Ａ６のような相同性の高いファミリーメンバーを認識しないことを示す。（図３）。
すべてのＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、ドナー依存性のバリエーションを有するすべてのペプチドを負荷した標的細胞について強固な認識を示した。ＭＡＧＥ－Ａ３で操作されたＤＵ－１４５＿Ａ１だけが認識されたが、一方、ＭＡＧＥ－Ａ６を過剰発現するＤＵ－１４５＿Ａ１細胞は認識されなかった。すべてのドナーの形質導入されていないＴ細胞は、試験条件のいずれにおいてもＩＦＮ－γを分泌せず、活性化の兆候を示さなかった。これらの結果は、ＴＣＲ＿１、＿２および＿３がＭＡＧＥ－Ａ３を選択的に認識するが、ＭＡＧＥ－Ａ６のような相同性の高いファミリーメンバーを認識しないことを示す。（図３）。
【0148】
[実施例４]
ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞は内因的にＭＡＧＥ－Ａ３陽性の腫瘍細胞系を認識する。
設定量のＭＡＧＥ－Ａ３を発現する３つの腫瘍細胞系（ＳＫ－Ｍｅｌ２３、ＭｅｌＡ３７５、Ｋ５６２）および３つのＭＡＧＥ－Ａ３陰性腫瘍細胞系（ＯＶ－７、ＭＳ７５１、ＤＵ－１４５）を実験に使用する。腫瘍細胞系は、内因的にＨＬＡ－Ａ１陽性であるかまたはＨＬＡ－Ａ１発現のために操作されていた（Ｋ５６２、ＭＳ７５１、ＤＵ－１４５）。すべての腫瘍細胞系を飽和濃度のＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチド（１０－５Ｍ）を負荷しないかまたは負荷して試験した。認識アッセイでは、１５，０００個のＴＣＲトランスジェニックＣβ１陽性Ｔ細胞および１５，０００個の腫瘍細胞と共にエフェクター対標的比、約１：１で共培養を設定する。標的細胞の認識は、標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによって分析した。
ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞は内因的にＭＡＧＥ－Ａ３陽性の腫瘍細胞系を認識する。
設定量のＭＡＧＥ－Ａ３を発現する３つの腫瘍細胞系（ＳＫ－Ｍｅｌ２３、ＭｅｌＡ３７５、Ｋ５６２）および３つのＭＡＧＥ－Ａ３陰性腫瘍細胞系（ＯＶ－７、ＭＳ７５１、ＤＵ－１４５）を実験に使用する。腫瘍細胞系は、内因的にＨＬＡ－Ａ１陽性であるかまたはＨＬＡ－Ａ１発現のために操作されていた（Ｋ５６２、ＭＳ７５１、ＤＵ－１４５）。すべての腫瘍細胞系を飽和濃度のＭＡＧＥ－Ａ３ＥＶＤペプチド（１０－５Ｍ）を負荷しないかまたは負荷して試験した。認識アッセイでは、１５，０００個のＴＣＲトランスジェニックＣβ１陽性Ｔ細胞および１５，０００個の腫瘍細胞と共にエフェクター対標的比、約１：１で共培養を設定する。標的細胞の認識は、標準的なＥＬＩＳＡによって、共培養上清中のＩＦＮ－γ濃度を測定することによって分析した。
【0149】
結果：
すべてのＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、ドナー依存性のバリエーションを有するすべてのペプチドを負荷した標的細胞の認識を示し、標的細胞上でのＨＬＡ－Ａ１の十分な発現を示した。ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２を発現するＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、最大限の可能なＩＦＮ－γ放出を表すペプチドを負荷した標的細胞に匹敵するレベルのＩＦＮ－γを有するＭＡＧＥ－Ａ３内因性腫瘍細胞系の強固な認識を示した。ドナー１のＴＣＲ＿３トランスジェニックＴ細胞は、ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２トランスジェニックＴ細胞に匹敵する程度までＭＡＧＥ－Ａ３を発現する標的細胞を認識したが、一方、ドナー２およびドナー３におけるＩＦＮ－γの全体的な放出は、より低いものであった。ＭＡＧＥ－Ａ３陰性腫瘍細胞系は、ペプチドが負荷された場合にのみ認識された。すべてのドナーの形質導入されていないＴ細胞は、試験細胞系または試験条件のいずれも認識しなかった。これらの結果は、ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞が、高度に選択的に、内因的にＭＡＧＥ－Ａ３陽性の腫瘍細胞系を効率的に認識することができることを示す。（図４）。
すべてのＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、ドナー依存性のバリエーションを有するすべてのペプチドを負荷した標的細胞の認識を示し、標的細胞上でのＨＬＡ－Ａ１の十分な発現を示した。ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２を発現するＴＣＲトランスジェニックＴ細胞集団は、最大限の可能なＩＦＮ－γ放出を表すペプチドを負荷した標的細胞に匹敵するレベルのＩＦＮ－γを有するＭＡＧＥ－Ａ３内因性腫瘍細胞系の強固な認識を示した。ドナー１のＴＣＲ＿３トランスジェニックＴ細胞は、ＴＣＲ＿１およびＴＣＲ＿２トランスジェニックＴ細胞に匹敵する程度までＭＡＧＥ－Ａ３を発現する標的細胞を認識したが、一方、ドナー２およびドナー３におけるＩＦＮ－γの全体的な放出は、より低いものであった。ＭＡＧＥ－Ａ３陰性腫瘍細胞系は、ペプチドが負荷された場合にのみ認識された。すべてのドナーの形質導入されていないＴ細胞は、試験細胞系または試験条件のいずれも認識しなかった。これらの結果は、ＭＡＧＥ－Ａ３－ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞が、高度に選択的に、内因的にＭＡＧＥ－Ａ３陽性の腫瘍細胞系を効率的に認識することができることを示す。（図４）。
【0150】
本出願は、以下の項目をさらに含む：
【0151】
項目１：ＭＡＧＥ－Ａ３に対して特異的な単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
【0152】
項目２：アミノ酸配列である配列番号１またはその断片を特異的に認識する、項目１に記載の単離されたＴＣＲ。
【0153】
項目３：アミノ酸配列である配列番号５４またはその断片を認識しない、先行する実施形態のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0154】
項目４：ＨＬＡ－Ａ＊０１遺伝子にコードされた分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列を特異的に認識する、先行する項目のいずれかに記載の単離されたＴＣＲ。
【0155】
項目５：ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される配列番号１のアミノ酸配列を特異的に認識する、先行する項目のいずれかに記載の単離されたＴＣＲ。
【0156】
項目６：ａ）－ 配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
－ 配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｂ）－ 配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖；または
ｃ）－ 配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲα鎖、ならびに
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＴＣＲβ鎖
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0157】
項目７：ａ）配列番号８と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
ｂ）配列番号１６と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0158】
項目８：ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、先行する実施形態のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、先行する実施形態のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0159】
項目９：配列番号５０と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0160】
項目１０：配列番号５０のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲα領域および配列番号５１のアミノ酸配列を有する定常ＴＣＲβ領域
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0161】
項目１１：精製されている、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0162】
項目１２：そのアミノ酸配列が、１つまたは複数の表現型に影響しない置換を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0163】
項目１３：そのアミノ酸配列が、検出可能な標識、治療剤または薬物動態修飾部分を含むよう改変されている、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0164】
項目１４：治療剤が、免疫エフェクター分子、細胞毒性剤および放射性核種からなる群から選択される、項目１３に記載の単離されたＴＣＲ。
【0165】
項目１５：免疫エフェクター分子が、サイトカインである、項目１４に記載の単離されたＴＣＲ。
【0166】
項目１６：可溶性であるかまたは膜に結合している、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0167】
項目１７：薬物動態修飾部分が、少なくとも１つのポリエチレングリコール繰り返し単位、少なくとも１つのグリコール基、少なくとも１つのシアリル基またはそれらの組合せである、項目１３に記載の単離されたＴＣＲ。
【0168】
項目１８：一本鎖タイプのものであり、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖が、リンカー配列によって連結している、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0169】
項目１９：ＴＣＲα鎖またはＴＣＲβ鎖が、エピトープタグを含むように改変されている、先行する項目のいずれか１つに記載の単離されたＴＣＲ。
【0170】
項目２０：機能性部分が、
ｄ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｅ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｆ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２および２３
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載のＴＣＲの機能性部分を含む単離されたポリペプチド。
ｄ）アミノ酸配列である配列番号２、３、４、５、６、および７、または
ｅ）アミノ酸配列である配列番号１０、１１、１２、１３、１４、および１５、または
ｆ）アミノ酸配列である配列番号１８、１９、２０、２１、２２および２３
を含む、先行する項目のいずれか１つに記載のＴＣＲの機能性部分を含む単離されたポリペプチド。
【0171】
項目２１：機能性部分が、
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、項目２０に記載の単離されたポリペプチド。
ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号９のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域；または
ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲα領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有する可変ＴＣＲβ領域
を含む、項目２０に記載の単離されたポリペプチド。
【0172】
項目２２：項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲの少なくとも１つを含む多価ＴＣＲ複合体。
【0173】
項目２３：項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲの少なくとも２つを含む多価ＴＣＲ複合体。
【0174】
項目２４：ＩＦＮ－γ分泌が、ＨＬＡ－Ａ＊０１：０１にコードされた分子によって提示される、配列番号１のアミノ酸配列に結合することによって誘導される、項目１から１９に記載の単離されたＴＣＲ、項目２０から２１に記載のポリペプチド、項目２２から２３に記載の多価ＴＣＲ複合体。
【0175】
項目２５：項目１から１９のいずれか１つに記載のＴＣＲをコードするか、または項目２０から２１に記載のポリペプチドをコードする核酸。
【0176】
項目２６：項目２５の核酸を含むベクター。
【0177】
項目２７：発現ベクターである、項目２６に記載のベクター。
【0178】
項目２８：レトロウイルスベクターである、項目２６または２７に記載のベクター。
【0179】
項目２９：レンチウイルスベクターである、項目２６または２７に記載のベクター。
【0180】
項目３０：項目１から１９に記載のＴＣＲを発現する細胞または項目２０または２１に記載の単離されたポリペプチド。
項目３１：単離されるか、または天然に存在しない、項目３０に記載の細胞。
項目３１：単離されるか、または天然に存在しない、項目３０に記載の細胞。
【0181】
項目３２：項目２５に記載の核酸または項目２６から２９に記載のベクターを含む、項目３０または３１に記載の細胞。
【0182】
項目３３：
ａ）項目２５で実現されている少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター、または
ｂ）項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲのアルファ鎖をコードする核酸を含む第１の発現ベクター、および項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲのベータ鎖をコードする核酸を含む第２の発現ベクター
を含む、項目３０から３２に記載の細胞。
ａ）項目２５で実現されている少なくとも１つの核酸を含む発現ベクター、または
ｂ）項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲのアルファ鎖をコードする核酸を含む第１の発現ベクター、および項目１から１９のいずれか１つで実現されているＴＣＲのベータ鎖をコードする核酸を含む第２の発現ベクター
を含む、項目３０から３２に記載の細胞。
【0183】
項目３４：末梢血リンパ球（ＰＢＬ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、項目３０から３３のいずれか１つに記載の細胞。
【0184】
項目３５：Ｔ細胞である、項目３０から３４のいずれか１つに記載の細胞。
【0185】
項目３６：ＭＡＧＥ－Ａ３に対する特異性を媒介する、項目１から１９に記載のＴＣＲの一部に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片。
【0186】
項目３７：ＭＡＧＥ－Ａ３特異性を媒介するＴＣＲの一部が、
ｄ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｅ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｆ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む、項目３６に記載の抗体。
ｄ）配列番号４のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号７のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｅ）配列番号１２のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号１５のベータ鎖のＣＤＲ３；または
ｆ）配列番号２０のアルファ鎖のＣＤＲ３および／もしくは配列番号２３のベータ鎖のＣＤＲ３
を含む、項目３６に記載の抗体。
【0187】
項目３８：項目１から１９に記載のＴＣＲを含む医薬組成物、項目２０から２２に記載のポリペプチド、項目２２から２３に記載の多価ＴＣＲ複合体、項目２５に記載の核酸、項目２６から２９に記載のベクター、項目３０から３５のいずれか１つに記載の細胞、または項目３６から３７に記載の抗体。
【0188】
項目３９：少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む、項目３８に記載の医薬組成物。
【0189】
項目４０：医薬として使用するための、項目１から１９に記載のＴＣＲ、項目２０から２１に記載のポリペプチド、項目２２から２３に記載の多価ＴＣＲ複合体、項目２５に記載の核酸、項目２６から２９に記載のベクター、項目３０から３１のいずれか１つに記載の細胞、または項目３６から３７に記載の抗体。
【0190】
項目４１：がんの処置において使用するための、項目１から１９に記載のＴＣＲ、項目２０から２１に記載のポリペプチド、項目２２から２３に記載の多価ＴＣＲ複合体、項目２５に記載の核酸、請求項２６から２７に記載のベクター、または項目３０から３５のいずれか１つに記載の細胞。
【0191】
項目４２：がんが、血液がんまたは固形腫瘍である、項目４１に記載の使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、多価ＴＣＲ複合体、核酸、ベクターまたは細胞。
【0192】
項目４３：がんが、前立腺がん、子宮がん、甲状腺がん、精巣がん、腎がん、膵臓がん、卵巣がん、食道がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、扁平上皮癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、メラノーマ、肝細胞癌、頭頚部がん、胃がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、胃腺癌、胆管細胞癌、乳がん、膀胱がん、骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病、癌腫、肉腫または骨肉腫からなる群から選択される、項目４１および４２に記載の使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、多価ＴＣＲ複合体、核酸、ベクターまたは細胞。
【0193】
項目４４：がんが、好ましくは、肉腫または癌腫からなる群から選択される、項目４３に記載の使用するためのＴＣＲ、ポリペプチド、多価ＴＣＲ複合体、核酸、ベクターまたは細胞。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】