特表 2023-542257 癌の治療のために二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-05

(54)【発明の名称】癌の治療のために二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230928BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230928BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20230928BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20230928BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230928BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20230928BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 Y

A61P35/00 ZNA

A61P13/08

A61P43/00 105

A61K45/00

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61K39/395 N

A61K39/395 D

C07K16/28

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/62 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023541485

(86)(22)【出願日】2021-09-15

(85)【翻訳文提出日】2023-05-08

(86)【国際出願番号】 US2021050546

(87)【国際公開番号】W WO2022060901

(87)【国際公開日】2022-03-24

(31)【優先権主張番号】63/079,418

(32)【優先日】2020-09-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＰＬＵＲＯＮＩＣ

(71)【出願人】

【識別番号】500203709

【氏名又は名称】アムジェン インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】523093217

【氏名又は名称】アムジェン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムべーハー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】マカロー， アダム ビー．

(72)【発明者】

【氏名】クロース－メヘル， ホセイン

(72)【発明者】

【氏名】クーファー， ペーター

(72)【発明者】

【氏名】サルバーティ， マーク

(72)【発明者】

【氏名】ミネラ， アレクサンダー シー．

(72)【発明者】

【氏名】ナゴルセン， ディルク

(72)【発明者】

【氏名】ウプレティ， ヴィジャイ

(72)【発明者】

【氏名】ミノチャ， ムクル

(72)【発明者】

【氏名】ハウク， ブレット

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084MA16

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C085AA13

4C085AA33

4C085BB11

4C085BB31

4C085BB42

4C085CC21

4C085CC22

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、患者における癌の治療のために二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法に関する。この投与方法は、サイトカイン放出症候群などの有害事象の発生率及び／又は重症度を低減し、且つ数日の期間にわたる持続静脈内注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を患者に投与し、その後、少なくとも１週間の投与間隔でボーラス静脈内注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを伴う。本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内（ＩＶ）注入（延長ＩＶ注入（ｅＩＶ）とも称する）によって少なくとも１日、例えば１日～７日の期間わたって投与することを含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

癌と診断された患者に二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法であって、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを前記患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、
前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を１日～７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、
前記プライミング用量後、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することと
を含み、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及びＦｃドメインを含む、方法。

【請求項2】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約２日の期間にわたって投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約３日の期間にわたって投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約４日の期間にわたって投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約５日の期間にわたって投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約７日の期間にわたって投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記治療用量は、前記プライミング用量の前記持続静脈内注入が終了するのと同じ日に投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約１日～約７日後に投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約１日後に投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約３日後に投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約４日後に投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項14】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約５日後に投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項15】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約６日後に投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項16】

前記プライミング用量後且つ前記治療用量前にボーラス静脈内注入によって前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を投与することをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ブースト用量は、前記プライミング用量の約３０％～約４０％である、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記開始サイクルの前記持続期間は、約２８日である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～３日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目及び２２日目に投与される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～２日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を前記開始サイクルの３日目にボーラス静脈内注入によって投与することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～７日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項１８に記載の方法。

【請求項23】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～４日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項１８に記載の方法。

【請求項24】

前記プライミング用量は、前記治療用量の約１０％～約８０％である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記プライミング用量は、前記治療用量の約１５％～約５０％である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって７日に１回又は１４日に１回投与することを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記維持サイクルの持続期間は、約２８日である、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記維持サイクルは、前記開始サイクルを完了した翌日に投与される、請求項２６又は２７に記載の方法。

【請求項29】

前記維持サイクルは、前記開始サイクルの完了の約７日後に投与される、請求項２６又は２７に記載の方法。

【請求項30】

２回以上の維持サイクルは、前記患者に投与される、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＭＵＣ１７、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＦＬＴ３、ＤＬＬ３、ＢＣＭＡ及びＰＳＭＡから選択される標的癌細胞抗原に特異的に結合する、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）第１の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ１）を含む、前記標的癌細胞抗原に特異的に結合する前記第１のドメイン、
（ｉｉ）第２の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ２）及び第２の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ２）を含む、ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第２のドメイン、及び
（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含む前記Ｆｃドメインであって、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、前記２つのモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている、前記Ｆｃドメイン
を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＰＳＭＡに特異的に結合し、及び前記患者は、前立腺癌と診断されている、請求項３１又は３２に記載の方法。

【請求項34】

前記第１のドメインは、配列番号５１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号５２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号５３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ１と、配列番号５５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号５７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ１とを含み、
前記第２のドメインは、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ２と、配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ２とを含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

ＶＨ１は、配列番号５４の配列を含み、ＶＬ１は、配列番号５８の配列を含み、ＶＨ２は、配列番号９０の配列を含み、及びＶＬ２は、配列番号１００の配列を含む、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号６０の配列を含む単鎖ポリペプチドである、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記開始サイクルは、
約３０μｇ～約１５０μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたって投与することと、
約３００μｇ～約６００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約５日後に投与される、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記開始サイクルは、
約９０μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたって投与することと、
約３００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約５日後に投与される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって１４日に１回投与することを含む、請求項３７又は３８に記載の方法。

【請求項40】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＢＣＭＡに特異的に結合し、及び前記患者は、多発性骨髄腫と診断されている、請求項３１又は３２に記載の方法。

【請求項41】

前記第１のドメインは、配列番号４１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号４２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号４３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ１と、配列番号４５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号４６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号４７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ１とを含み、
前記第２のドメインは、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ２と、配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ２とを含む、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

ＶＨ１は、配列番号４４の配列を含み、ＶＬ１は、配列番号４８の配列を含み、ＶＨ２は、配列番号９０の配列を含み、及びＶＬ２は、配列番号１００の配列を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号５０の配列を含む単鎖ポリペプチドである、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記開始サイクルは、
約８，４００μｇ～約１６，１００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約７日の期間にわたって投与することと、
約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約１日後に投与される、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記開始サイクルは、
約４，６００μｇ～約９，２００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日の期間にわたって投与することと、
約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約６日後に投与される、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

約８００μｇ～約１，６００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を前記プライミング用量の約１日後且つ前記治療用量の約５日前にボーラス静脈内注入によって投与することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって７日に１回投与することを含む、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記Ｆｃドメインの前記Ｆｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３２の配列を含む、請求項３２～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記Ｆｃドメインは、配列番号１４０の配列を含む、請求項３２～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記持続静脈内注入は、一定の速度で前記プライミング用量を送達する、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記ボーラス静脈内注入は、約３０分～約９０分の注入である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記ボーラス静脈内注入は、約６０分の注入である、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

癌の治療を、それを必要とする患者において行う方法で使用するための、標的癌細胞抗原及びヒトＣＤ３に特異的に結合する二重特異性Ｔ細胞誘導分子であって、前記方法は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを前記患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、
前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を１日～７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、
前記プライミング用量後、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することと
を含み、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及びＦｃドメインを含む、二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項54】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回投与される、請求項５３に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項55】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回投与される、請求項５３に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項56】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約２日の期間にわたって投与される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項57】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約３日の期間にわたって投与される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項58】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約４日の期間にわたって投与される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項59】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約５日の期間にわたって投与される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項60】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、約７日の期間にわたって投与される、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項61】

前記治療用量は、前記プライミング用量の前記持続静脈内注入が終了するのと同じ日に投与される、請求項５３～６０のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項62】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約１日～約７日後に投与される、請求項５３～６０のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項63】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約１日後に投与される、請求項６２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項64】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約３日後に投与される、請求項６２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項65】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約４日後に投与される、請求項６２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項66】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約５日後に投与される、請求項６２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項67】

前記治療用量は、前記プライミング用量の約６日後に投与される、請求項６２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項68】

前記方法は、前記プライミング用量後且つ前記治療用量前にボーラス静脈内注入によって前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を投与することをさらに含む、請求項５３～６７のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項69】

前記ブースト用量は、前記プライミング用量の約３０％～約４０％である、請求項６８に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項70】

前記開始サイクルの前記持続期間は、約２８日である、請求項５３～６９のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項71】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～３日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目及び２２日目に投与される、請求項７０に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項72】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～２日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項７０に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項73】

前記方法は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を前記開始サイクルの３日目にボーラス静脈内注入によって投与することをさらに含む、請求項７２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項74】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～７日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項７０に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項75】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記プライミング用量は、前記開始サイクルの１～４日目にわたって投与され、及び前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量は、前記開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に投与される、請求項７０に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項76】

前記プライミング用量は、前記治療用量の約１０％～約８０％である、請求項５３～７５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項77】

前記プライミング用量は、前記治療用量の約１５％～約５０％である、請求項５３～７５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項78】

前記方法は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって７日に１回又は１４日に１回投与することを含む、請求項５３～７７のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項79】

前記維持サイクルの持続期間は、約２８日である、請求項７８に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項80】

前記維持サイクルは、前記開始サイクルを完了した翌日に投与される、請求項７８又は７９に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項81】

前記維持サイクルは、前記開始サイクルの完了の約７日後に投与される、請求項７８又は７９に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項82】

２回以上の維持サイクルは、前記患者に投与される、請求項７８～８１のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項83】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＭＵＣ１７、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＦＬＴ３、ＤＬＬ３、ＢＣＭＡ及びＰＳＭＡから選択される標的癌細胞抗原に特異的に結合する、請求項５３～８２のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項84】

アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）第１の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ１）を含む、前記標的癌細胞抗原に特異的に結合する前記第１のドメイン、
（ｉｉ）第２の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ２）及び第２の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ２）を含む、ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第２のドメイン、及び
（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含む前記Ｆｃドメインであって、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、前記２つのモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている、前記Ｆｃドメイン
を含む、請求項５３～８３のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項85】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＰＳＭＡに特異的に結合し、及び前記患者は、前立腺癌と診断されている、請求項８３又は８４に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項86】

前記第１のドメインは、配列番号５１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号５２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号５３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ１と、配列番号５５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号５７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ１とを含み、前記第２のドメインは、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ２と、配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ２とを含む、請求項８５に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項87】

ＶＨ１は、配列番号５４の配列を含み、ＶＬ１は、配列番号５８の配列を含み、ＶＨ２は、配列番号９０の配列を含み、及びＶＬ２は、配列番号１００の配列を含む、請求項８６に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項88】

配列番号６０の配列を含む単鎖ポリペプチドである、請求項８４～８７のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項89】

前記開始サイクルは、
約３０μｇ～約１５０μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたって投与することと、
約３００μｇ～約６００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約５日後に投与される、請求項８５～８８のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項90】

前記開始サイクルは、
約９０μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたって投与することと、
約３００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約５日後に投与される、請求項８９に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項91】

前記方法は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって１４日に１回投与することを含む、請求項８９又は９０に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項92】

前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記第１のドメインは、ＢＣＭＡに特異的に結合し、及び前記患者は、多発性骨髄腫と診断されている、請求項８３又は８４に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項93】

前記第１のドメインは、配列番号４１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号４２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号４３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ１と、配列番号４５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号４６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号４７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ１とを含み、前記第２のドメインは、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ２と、配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ２とを含む、請求項９２に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項94】

ＶＨ１は、配列番号４４の配列を含み、ＶＬ１は、配列番号４８の配列を含み、ＶＨ２は、配列番号９０の配列を含み、及びＶＬ２は、配列番号１００の配列を含む、請求項９３に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項95】

配列番号５０の配列を含む単鎖ポリペプチドである、請求項９２～９４のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項96】

前記開始サイクルは、
約８，４００μｇ～約１６，１００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約７日の期間にわたって投与することと、
約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約１日後に投与される、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項97】

前記開始サイクルは、
約４，６００μｇ～約９，２００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日の期間にわたって投与することと、
約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することと
を含み、前記治療用量は、前記プライミング用量の投与の約６日後に投与される、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項98】

前記方法は、約８００μｇ～約１，６００μｇの前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を前記プライミング用量の約１日後且つ前記治療用量の約５日前にボーラス静脈内注入によって投与することをさらに含む、請求項９７に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項99】

前記方法は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを前記患者に投与することをさらに含み、前記維持サイクルは、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の前記治療用量をボーラス静脈内注入によって７日に１回投与することを含む、請求項９６～９８のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項100】

前記Ｆｃドメインの前記Ｆｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３２の配列を含む、請求項８４～９９のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項101】

前記Ｆｃドメインは、配列番号１４０の配列を含む、請求項８４～１００のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項102】

前記持続静脈内注入は、一定の速度で前記プライミング用量を送達する、請求項５３～１０１のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項103】

前記ボーラス静脈内注入は、約３０分～約９０分の注入である、請求項５３～１０２のいずれか一項に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項104】

前記ボーラス静脈内注入は、約６０分の注入である、請求項１０３に記載の使用のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子。

【請求項105】

癌の治療を、それを必要とする患者において行うための医薬を製造するための、標的癌細胞抗原及びヒトＣＤ３に特異的に結合する二重特異性Ｔ細胞誘導分子の使用であって、前記治療は、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを前記患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、
前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を１日～７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、
前記プライミング用量後、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することと
を含み、前記二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及びＦｃドメインを含む、使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０２０年９月１６日出願の米国仮特許出願第６３／０７９，４１８号明細書の利益を主張するものである。

【0002】

電子提出されたテキストファイルの説明
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年９月１３日に作成された、コンピュータで読み取り可能なフォーマットの配列表のコピーは、名称がＡ－２６８４－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＴ２５であり、サイズが２２２キロバイトである。

【0003】

本発明は、癌免疫及びバイオ医薬品の分野に関する。特に、本発明は、癌の治療を、それを必要とする患者において行うために、標的癌細胞抗原及び分化クラスター３（ＣＤ３）に特異的に結合する二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法に関する。本方法は、癌の治療を受けている患者において、サイトカイン放出症候群などの有害事象の発生率及び／又は重症度を低減する特定の投与レジメンを用いる。

【背景技術】

【0004】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、様々な癌の治療のために開発されている新しい免疫療法である。これらの分子は、典型的には、癌細胞上に発現する細胞表面抗原に特異的な少なくとも１つの結合ドメインと、Ｔ細胞上に発現するＴ細胞受容体複合体のサブユニットであるＣＤ３に特異的な少なくとも別の結合ドメインとを有する。二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、Ｔ細胞を標的癌細胞と連結し、標的癌細胞に対するＴ細胞の固有の細胞溶解能を強力に活性化するように設計される。第１世代の二重特異性Ｔ細胞誘導分子（例えば、国際公開第９９／５４４４０号パンフレット、国際公開第２００５／０４０２２０号パンフレット及び国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレットを参照されたい）は、１日に満たない半減期のために、通常、持続静脈内注入によって投与される。第２世代の二重特異性Ｔ細胞誘導分子（例えば、国際公開第２０１３／１２８０２７号パンフレット、国際公開第２０１４１４０３５８号パンフレット、国際公開第２０１４／１４４７２２号パンフレット、国際公開第２０１４／１５１９１０号パンフレット及び国際公開第２０１７／１３４１４０を参照されたい）は、少なくとも部分的には、分子の血清半減期を増加させて、間欠的な間隔での投与が可能な投薬パラダイムを可能にするように設計されている。

【0005】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子の作用機序は、Ｔ細胞活性化を伴うため、これらの分子の潜在的な副作用は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。ＣＲＳは、多数のＴ細胞が活性化され、炎症性サイトカインを放出する場合に起こり得る。ＣＲＳの症状は、発熱、倦怠感、頭痛及び発疹などの軽度のインフルエンザ様症状から、過剰な炎症反応の重度の生命を脅かす結果まで及び得る（Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ－Ｖｏｒｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．６：５６，２０１８）。ＣＲＳのより重度の症例は、低血圧及び急性呼吸促迫の症状を特徴とし、これらは、昇圧剤を必要とする循環性ショック、血管漏出及び多臓器系不全に進行し得る（Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ－Ｖｏｒｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８、上記）。これらの副作用は、特に治療開始時に短時間注入（例えば、１時間にわたって）として投与された場合、これらの二重特異性Ｔ細胞誘導分子の薬物動態プロファイル（高いピーク血清レベル）に部分的に起因し得る。サイトカインの上昇及びＣＲＳの発生の影響を最小限に抑えるために、二重特異性Ｔ細胞誘導分子を、より低い用量において又は抗ヒスタミン剤若しくはコルチコステロイドによる前処置を使用して投与することができる（Ｔｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ．，Ｖｏｌ．１６：５７－６６、２０１５）。さらに、免疫療法を受けている患者のＣＲＳの症状を予防又は治療するために、ＩＬ－６受容体抗体であるトシリズマブが予防的又は治療的に使用されている（例えば、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，Ｖｏｌ．２０：１１９－１２２，２０１４を参照されたい）。しかしながら、ＣＲＳを管理するためのこれらの様々な方法は、用いられる免疫療法の種類及び治療される患者の特性に応じて有効性レベルが異なる。さらに、これらの緩和方法のいくつかは、免疫療法の有効性に影響を及ぼし得る。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

したがって、当技術分野では、二重特異性Ｔ細胞誘導免疫療法に関連するＣＲＳ及び他の有害事象の発生率又は重症度を効果的に管理する一方、癌患者におけるそのような免疫療法の治療的利益を最大限にする戦略が依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、部分的に、癌と診断された患者の有害事象、特にＣＲＳ事象の数及び重症度を低減しながら、治療の第１サイクルにおいて可能な限り早期に治療用量を送達する、二重特異性Ｔ細胞誘導分子、特に半減期が延長された二重特異性Ｔ細胞誘導分子のための投与レジメンの設計に基づく。したがって、特定の実施形態では、本発明は、癌と診断された患者に二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法であって、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内注入によってある期間にわたって投与することと、プライミング用量後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入又は皮下注射によって投与することとを含む、方法を提供する。

【0008】

本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内（ＩＶ）注入（延長ＩＶ注入（ｅＩＶ）とも称する）によって少なくとも１日、例えば１日～７日の期間わたって投与することを含む。そのような長時間にわたって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量（すなわちプライミング用量）を持続ＩＶ注入によって投与することにより、患者においてＣＲＳの発生率及びグレードに関連して観察されている分子のピーク血清濃度の急速な上昇が回避される。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、持続ＩＶ注入によって長時間にわたってプライミング用量を投与することにより、分子のピーク血清濃度を低下及び遅延させ、それによりＣＲＳ及び他の有害事象の頻度及び重症度を低減させると考えられる。いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続ＩＶ注入によって約２日の期間にわたって投与する。他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続ＩＶ注入によって約３日の期間にわたって投与する。一実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続ＩＶ注入によって約４日の期間にわたって投与する。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続ＩＶ注入によって約５日の期間にわたって投与する。さらに別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続ＩＶ注入によって約７日の期間にわたって投与する。持続ＩＶ注入は、持続ＩＶ注入が一定の速度（例えば、１日当たりの用量を固定）でプライミング用量を送達するように一定の流量により、又は持続ＩＶ注入が注入期間にわたって可変の速度（例えば、毎日用量を増加させる）でプライミング用量を送達するように可変の流量で与えられ得る。

【0009】

本発明の方法のいくつかの実施形態では、開始サイクルは、プライミング用量の投与後（例えば、持続注入期間の完了後）、ボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを含む。治療用量は、プライミング用量の持続ＩＶ注入の完了後の同じ日（例えば、３０分～１８時間以内）又はプライミング用量の持続ＩＶ注入完了の１日後（例えば、翌日）に投与され得る。代わりに、治療用量の投与は、プライミング用量の持続ＩＶ注入完了後に２日以上遅らせ得る。特定の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与（例えば、持続注入期間の完了）の約３日、約４日、約５日、約６日又は約７日後に投与される。本発明の方法のいくつかの実施形態では、開始サイクルは、プライミング用量の投与後且つ治療用量の投与前に、ボーラス静脈内注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を投与することをさらに含む。このような実施形態では、ブースト日は、プライミング用量の持続ＩＶ注入完了の１日後（例えば、翌日）及び治療用量投与の少なくとも２日前、３日前、４日前、５日前又は６日前に投与され得る。前述の実施形態のいずれかにおいて、治療用量及び／又はブースト用量のボーラスＩＶ注入は、３時間未満の注入であり、通常、約３０分～約９０分の注入である。特定の実施形態では、ボーラスＩＶ注入は、約６０分の注入である。本発明の方法の他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量及び／又はブースト用量は、皮下注射として投与され得る。

【0010】

本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量の最初の投与後、開始サイクルの持続期間にわたり、少なくとも７日の投与間隔でボーラスＩＶ注入又は皮下注射によって治療用量を投与することができる。例えば、一実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回（例えば、毎週）、ボーラスＩＶ注入によって投与される。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回（例えば、２週に１回）、ボーラスＩＶ注入によって投与される。任意のそのような実施形態では、開始サイクルの持続期間は、約２８日であり得る。

【0011】

本発明の方法のいくつかの実施形態では、開始サイクルは、約２８日であり、サイクルの１～３日にわたって持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することと、サイクルの８日目及び２２日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することとを含む。本発明の方法の他の実施形態では、開始サイクルは、約２８日であり、サイクルの１～４日にわたって持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することと、サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することとを含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、開始サイクルは、約２８日であり、サイクルの１～５日にわたって持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することと、サイクルの８日目及び２２日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することとを含む。本発明の方法のさらに他の実施形態では、開始サイクルは、約２８日であり、サイクルの１～７日にわたって持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することと、サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することとを含む。本発明の方法のさらに他の実施形態では、開始サイクルは、約２８日であり、サイクルの１～２日にわたって持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することと、サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することとを含む。１つのそのような実施形態では、開始サイクルは、サイクルの３日目にボーラスＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を投与することをさらに含み得る。

【0012】

本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、使用される特定の二重特異性Ｔ細胞誘導分子及び患者の治療すべき癌のタイプ、グレード又は病期に応じて約５０μｇ～約２００ｍｇ又は約２００μｇ～約８０ｍｇの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、前立腺癌などのＰＳＭＡ発現癌の治療のためのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の好適な治療用量は、約９０μｇ～約１８００μｇであり得る。他の実施形態では、多発性骨髄腫などのＢＣＭＡ陽性癌の治療のためのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の好適な治療用量は、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇであり得る。特定の実施形態では、プライミング用量は、治療用量よりも低く、例えば治療用量の一部、例えば治療用量の約１０％～約８０％又は約１５％～約５０％であり得る。代替の実施形態では、プライミング用量は、治療用量と同じであり得る。ブースト用量が投与される実施形態では、ブースト用量は、プライミング用量の一部、例えばプライミング用量の約１０％～約６０％又は約３０％～約４０％であり得る。

【0013】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、開始サイクルの投与後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを患者に投与することをさらに含む。維持サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラスＩＶ注入又は皮下注射によって少なくとも７日の投与間隔で投与することを含み得る。例えば、特定の実施形態では、維持サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラスＩＶ注入によって７日に１回（例えば、毎週）投与することを含む。特定の他の実施形態では、維持サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラスＩＶ注入によって１４日に１回（例えば、２週に１回）投与することを含む。いくつかの実施形態では、維持サイクル中に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、各投与間隔で同じである（例えば、全維持サイクルで固定用量）。これらの実施形態及び他の実施形態では、維持サイクル中に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量及び投与頻度（例えば、週１回又は２週に１回）は、１つの維持サイクルから次の維持サイクルまで同じである。上記実施形態のいずれかでは、維持サイクルの持続期間は、約２８日であり得る。

【0014】

方法が維持サイクルを投与することをさらに含む一実施形態では、維持サイクルは、開始サイクルを完了した翌日に、例えば開始サイクルと維持サイクルとの間に無治療期間なしで投与される。別の実施形態では、維持サイクルは、開始サイクルの完了の約７日後に投与される。すなわち、開始サイクルと維持サイクルとの間に７日間の無治療期間が存在する。患者は、複数の維持サイクル、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２回以上の維持サイクルを受け得る。いくつかの実施形態では、維持サイクルは、患者が治療に応答するまで、例えば完全な応答に達成するまで患者に投与される。

【0015】

本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、一般に、標的癌細胞抗原（例えば、ＣＥＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ７０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＬＴ３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＤＬＬ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１７又はＣＬＤＮ１８．２）に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及び２４時間を超える分子半減期を提供する半減期延長ドメインを含む。半減期延長ドメインは、免疫グロブリンＦｃドメイン、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）に由来するドメイン、アルブミン結合ドメイン（例えば、ヒトアルブミン結合ペプチド又は血清アルブミンに特異的に結合する抗体断片を含む）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合するペプチド及びポリエチレングリコールポリマーであり得る。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、免疫グロブリンＦｃドメインを含む。いくつかのそのような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、二重特異性抗体であり得、完全長免疫グロブリンの一般構造を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する抗体由来の軽鎖及び重鎖並びにヒトＣＤ３に特異的に結合する抗体由来の軽鎖及び重鎖を含むヘテロ二量体抗体であり得る。他の実施形態では、本発明の方法に用いられる二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、（ｉ）標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン、及び（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含むＦｃドメインであって、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、前記２つのモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている、Ｆｃドメインを含む。このような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、３つのドメインの全てが任意選択的にペプチドリンカーを介して連結されて、単一のポリペプチド鎖を形成する、単鎖ポリペプチドであり得る。

【0016】

本発明の方法に従って治療される患者は、癌を有するか又は癌と診断されている。いくつかの実施形態では、癌は、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）及びリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）などの血液癌である。他の実施形態では、癌は、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、精巣癌、結腸直腸癌、食道癌、グリア芽腫、頭頸部癌、膵臓癌、乳癌、胃癌、胃食道接合部癌、骨癌、卵巣癌、子宮内膜癌及び黒色腫から選択される癌であり得る。特定の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、前立腺癌（例えば、転移性去勢抵抗性前立腺癌）を有するか又はそれと診断されており、患者に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子である。１つのそのような実施形態では、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号６０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。特定の他の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、多発性骨髄腫（例えば、難治性及び／又は再発性多発性骨髄腫）を有するか又はそれと診断されており、患者に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子である。１つのそのような実施形態では、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号５０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0017】

本発明は、本明細書に記載の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の医薬組成物も提供する。医薬組成物は、１種以上の薬学的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤、例えば緩衝液、界面活性剤及び安定剤を含むことができる。特定の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子、緩衝液、界面活性剤及び安定剤を含む。一実施形態では、医薬組成物は、約４．０～約４．４のｐＨで二重特異性Ｔ細胞誘導分子、グルタミン酸緩衝液、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０及びスクロースを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥され、患者に投与する前に再構成され得る。

【0018】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される医薬組成物と、その医薬組成物を使用して、プライミング用量、ブースト用量及び治療用量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を調製し、静脈内注入によって送達するために医薬組成物を使用するための説明書とを含む、癌の治療を、それを必要とする患者において行うためのキットも提供する。医薬組成物が凍結乾燥又は乾燥粉末形態で提供される実施形態では、キットは、投与前に医薬組成物を再構成するための希釈剤及び説明書を含み得る。特定の実施形態では、キットは、静脈内溶液安定剤（ＩＶＳＳ）の１つ又は複数のバイアルと、患者に送達するために医薬組成物を希釈する前に、ＩＶＳＳを使用してＩＶバッグを前処理するための説明書とをさらに含み得る。

【0019】

本明細書に記載される方法のいずれかにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の使用又は本明細書に開示される方法のいずれかによって投与する医薬の調製における二重特異性Ｔ細胞誘導分子の使用について具体的に検討する。例えば、本発明は、癌の治療を、それを必要とする患者において行う方法で使用するための、標的癌細胞抗原及びヒトＣＤ３に特異的に結合する二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含み、その方法は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内注入によって長時間（例えば、１日～７日）にわたって投与することと、プライミング用量後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含む。特定の実施形態では、本方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及びＦｃドメインを含む。

【0020】

本発明は、癌の治療を、それを必要とする患者において行うための医薬を製造するための、標的癌細胞抗原及びヒトＣＤ３に特異的に結合する二重特異性Ｔ細胞誘導分子の使用も含み、その治療は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の開始サイクルを患者に投与することを含み、前記開始サイクルは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内注入によって長時間（例えば、１日～７日）にわたって投与することと、プライミング用量後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含む。いくつかのそのような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン及びＦｃドメインを含む。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】［図１Ａ］サイクル１中に１時間のＩＶ注入（逆三角形）として投与されるか、又は７２時間にわたる持続ＩＶ注入（丸）によって投与された０．０３ｍｇの初回用量の投与後の予備的に観察されたＡＭＧ １６０の平均血清濃度－時間プロファイルを示す。両方の群において、０．０９ｍｇの用量が１時間のＩＶ注入として初回用量の７日後に投与された。データは、平均±標準偏差として示す。 ［図１Ｂ］図１Ａの拡大図であり、１時間のＩＶ注入（逆三角形）として投与されるか、又は７２時間にわたる持続ＩＶ注入（丸）によって投与された０．０３ｍｇの初回用量の投与後の最初の７日間のＡＭＧ １６０の予備的濃度－時間プロファイルを示す。初回用量が持続ＩＶ注入によって投与された場合、１時間のＩＶ注入として同じ用量が投与された場合と比較して、ＡＭＧ １６０のピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）は、約４０％低下し、且つ遅れて生じる。データは、平均±標準偏差として示す。

【図2】サイクル１中に１時間のＩＶ注入（菱形）として投与されるか、又は７２時間にわたる持続ＩＶ注入（丸）によって投与された０．０９ｍｇ用量の投与後の予備的に観察されたＡＭＧ １６０の平均血清濃度－時間プロファイルを示す。両方の群において、０．０９ｍｇ用量の７日後に０．３０ｍｇの目標用量を最初に１時間のＩＶ注入として投与し、その後、２週間隔で投与した。データは、平均±標準偏差として示す。

【図3】［図３Ａ］ｃＩＶコホート１（コホート１＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるインターロイキン－６（ＩＬ－６）の血清レベルを示す。ｃＩＶコホート１の患者は、サイクル１の最初の３日間にわたって一定の速度（例えば、０．０１ｍｇ／日で３日間）で０．０３ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．０９ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＬ－６の定量上限（ＵＬＯＱ）及び定量下限（ＬＬＯＱ）を示す。 ［図３Ｂ］ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂ（コホート２＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＬ－６の血清レベルを示す。ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂの患者は、サイクル１の最初の２日間（コホート２ｂ）又は最初の３日間（コホート２ａ）にわたって一定の速度で０．０９ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＬ－６のＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。 ［図３Ｃ］コホート６ｂ中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＬ－６の血清レベルを示す。コホート６ｂの患者は、１日目（Ｄ１）に０．０３ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．９０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＬ－６のＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。 ［図３Ｄ］コホート５中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＬ－６の血清レベルを示す。コホート５の患者は、１日目（Ｄ１）に０．０１ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＬ－６のＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。

【図4】［図４Ａ］ｃＩＶコホート１（コホート１＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点における腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－アルファ）の血清レベルを示す。ｃＩＶコホート１の患者は、サイクル１の最初の３日間にわたって一定の速度（例えば、０．０１ｍｇ／日で３日間）で０．０３ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．０９ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。 ［図４Ｂ］ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂ（コホート２＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＴＮＦ－アルファの血清レベルを示す。ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂの患者は、サイクル１の最初の２日間（コホート２ｂ）又は最初の３日間（コホート２ａ）にわたって一定の速度で０．０９ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。 ［図４Ｃ］コホート６ｂ中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＴＮＦ－アルファの血清レベルを示す。コホート６ｂの患者は、１日目（Ｄ１）に０．０３ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．９０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。 ［図４Ｄ］コホート５中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＴＮＦ－アルファの血清レベルを示す。コホート５の患者は、１日目（Ｄ１）に０．０１ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。

【図5】［図５Ａ］ｃＩＶコホート１（コホート１＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－ガンマ）の血清レベルを示す。ｃＩＶコホート１の患者は、サイクル１の最初の３日間にわたって一定の速度（例えば、０．０１ｍｇ／日で３日間）で０．０３ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．０９ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＦＮ－ガンマのＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。 ［図５Ｂ］ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂ（コホート２＿ｅＩＶ）中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＦＮ－ガンマの血清レベルを示す。ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂの患者は、サイクル１の最初の２日間（コホート２ｂ）又は最初の３日間（コホート２ａ）にわたって一定の速度で０．０９ｍｇのプライミング用量のＡＭＧ １６０を投与され、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）に１時間のＩＶ注入によって０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＦＮ－ガンマのＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。 ［図５Ｃ］コホート６ｂ中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＦＮ－ガンマの血清レベルを示す。コホート６ｂの患者は、１日目（Ｄ１）に０．０３ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．９０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＦＮ－ガンマのＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。 ［図５Ｄ］コホート５中のＡＭＧ １６０を投与された患者の、サイクル１（Ｃ１）の最初の２１日間の異なる時点におけるＩＦＮ－ガンマの血清レベルを示す。コホート５の患者は、１日目（Ｄ１）に０．０１ｍｇの第１のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、８日目（Ｄ８）に０．０９ｍｇの第２のプライミング用量のＡＭＧ １６０を、且つ１５日目（Ｄ１５）に０．３０ｍｇの目標用量のＡＭＧ １６０を投与された（ここで、全てのＡＭＧ１６０用量は、１時間のＩＶ注入として投与された）。各線及び記号タイプは、個々の患者のデータを示す。図の上部の矢印は、ＡＭＧ １６０用量投与のタイミングを示す。図の上部及び下部の点線は、それぞれＩＦＮ－ガンマのＵＬＯＱ及びＬＬＯＱを示す。

【図6】［図６Ａ］１０００μｇ／ｋｇ（動物２８０５及び２８０７）又は５０００μｇ／ｋｇ（動物２８０８）の用量のＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞結合分子を試験１、２、３、４、５、６、７、８及び１５日目のそれぞれに静脈内注射したカニクイザルにおけるＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）のレベルを示す。 ［図６Ｂ］ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞誘導分子を、（ｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、１０００μｇ／ｋｇ／日）による７０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に１０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１０及び２８１１）、又は（ｉｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、５０００μｇ／ｋｇ／日）による３５０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に５０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１２）の投与レジメンに従って投与されたカニクイザルにおけるＣＲＰレベルを示す。

【図7】［図７Ａ］１０００μｇ／ｋｇ（動物２８０５及び２８０７）又は５０００μｇ／ｋｇ（動物２８０８）の用量のＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞結合分子を試験１、２、３、４、５、６、７、８及び１５日目のそれぞれに静脈内注射したカニクイザルにおけるＣＤ２５＋Ｔ細胞活性化を示す。 ［図７Ｂ］ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞誘導分子を、（ｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、１０００μｇ／ｋｇ／日）による７０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に１０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１０及び２８１１）、又は（ｉｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、５０００μｇ／ｋｇ／日）による３５０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に５０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１２）の投与レジメンに従って投与されたカニクイザルにおけるＣＤ２５＋Ｔ細胞活性化を示す。

【図8】［図８Ａ］１０００μｇ／ｋｇ（動物２８０５及び２８０７）又は５０００μｇ／ｋｇ（動物２８０８）の用量のＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞結合分子を試験１、２、３、４、５、６、７、８及び１５日目のそれぞれに静脈内注射したカニクイザルにおけるＣＤ６９＋Ｔ細胞活性化を示す。 ［図８Ｂ］ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞誘導分子を、（ｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、１０００μｇ／ｋｇ／日）による７０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に１０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１０及び２８１１）、又は（ｉｉ）７日間にわたる持続ＩＶ注入（例えば、５０００μｇ／ｋｇ／日）による３５０００μｇ／ｋｇの用量後、試験８日目及び１５日目に５０００μｇ／ｋｇの静脈内注入（動物２８１２）の投与レジメンに従って投与されたカニクイザルにおけるＣＤ６９＋Ｔ細胞活性化を示す。

【発明を実施するための形態】

【0022】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、様々な癌の治療のために開発されている新しいクラスの免疫療法である。これらの分子は、患者のＴ細胞を癌細胞に誘導し、Ｔ細胞に癌細胞を攻撃し死滅させるように設計されている。新しい二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、１日未満の短い半減期のために、必然的に数週間にわたる持続注入によって投与される第１世代の二重特異性Ｔ細胞誘導分子よりも便利で少ない頻度での投与を提供するために、半減期延長部分を含むように設計されている。二重特異性Ｔ細胞誘導分子の作用機序の結果として、ＣＲＳは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子を最初に投与したときに患者において起こり得る有害事象である可能性がある。ＣＲＳ事象は、所望の治療効果を達成するために必要な用量の患者への投与を妨害、制限又は遅延させる可能性がある。半減期延長（ＨＬＥ）二重特異性Ｔ細胞誘導分子（これは、通常、１週間の投与間隔又はより長い投与間隔でボーラス注射又は注入として投与される）の場合、投与レジメンを患者におけるＣＲＳ事象を低減又は回避するように適応させる能力は特に困難である。サイクル１におけるＨＬＥ二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量のボーラス注入後のピーク血清薬物レベル（Ｃ_ｍａｘ）は、患者におけるＣＲＳ事象の程度と相関することが観察されている（実施例１を参照されたい）。初期用量の投与後の薬物曝露の急速な増加を最小限にするための１つの可能な方法は、より低い用量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を最初に投与し、その後、治療用量まで１段階以上の用量を投与する、段階的投与戦略を採用することである。しかしながら、このような方法は、治療用量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子が治療開始の数週後まで投与されず、複数段階を行っても治療用量の達成できない可能性があることを必要とし得る。

【0023】

本発明は、ＣＲＳ及び他の有害事象の発生及び／又は重症度を最小限にしながら、有効性を最大化するために、治療の第１サイクルにおいて可能な限り早期に治療用量を送達する、二重特異性Ｔ細胞誘導分子、特にＨＬＥ二重特異性Ｔ細胞誘導分子のための投与レジメンを提供することにより、これらの課題に対処する。したがって、一態様において、本発明は、癌と診断された患者に二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法であって、（ｉ）二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を持続静脈内注入によりある期間（例えば、１日～７日）にわたって投与することと、プライミング用量後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入又は皮下注射によって投与することを含む開始サイクルを患者に投与することとを含む方法を提供する。理論に束縛されるものではないが、長時間にわたる持続ＩＶ注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量（すなわちプライミング用量）を投与することにより、分子のピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）への急激な上昇が回避され、Ｃ_ｍａｘが減少及び遅延し、それによりＣＲＳ及び他の有害事象の頻度及び重症度が低減され、且つ投与間隔中の高レベルの累積薬物曝露が維持され、開始サイクルにおいて可能な限り早期に有効な用量を達成することを可能になり、それにより癌細胞を排除する効果が増強されることになると考えられる。したがって、本発明の方法による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与は、有害事象、特にＣＲＳ事象を低減することによって分子の安全性プロファイルを改善し、治療の第１週中に有効な曝露レベルを達成することによって分子の有効性を増強する。早期のＴ細胞活性化は、Ｔ細胞によるサイトカインの実質的な放出をもたらし、これは、マクロファージ及び単球などの腫瘍微小環境における他の常在細胞によるサイトカイン放出のカスケード増幅を引き起こす。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子により活性化が延長されたＴ細胞は、おそらくフィードバックループ機構によってサイトカインの産生を下方制御するが、継続して癌細胞を認識し死滅させることができる。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子への長期曝露によって誘導されるＴ細胞におけるサイトカイン産生の下方制御を本明細書ではＴ細胞の「プライミング」と称する。また、本発明の方法に従って持続ＩＶ注入によって長時間にわたって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することにより、患者のＴ細胞の漸進的なプライミングが可能になり、その結果、より高い治療用量の投与により、サイトカイン放出及び関連するＣＲＳ事象の発生が減少又は最小化されると考えられる。

【0024】

一般に、本発明の方法は、１回以上の治療サイクルで患者に二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与することを含む。「治療サイクル」又は「サイクル」は、特定の投与量及び投与間隔で二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与する期間を指す。本発明の方法によれば、患者は複数の治療サイクル（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又はそれを超えるサイクル）を受けることができる。治療サイクルは、サイクル間に中断、すなわち二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与しない期間なしで連続的に患者に投与することができる。代わりに、二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与しない期間（例えば、「無治療期間」又は「中断」）を治療サイクル間に用いることができる。無治療期間の長さは、患者の特性及び／又は治療に対する応答に基づいて調整することができる。

【0025】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、少なくとも１つの開始サイクルで患者に二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与することを含む。本明細書で使用される場合、「開始サイクル」は、有害事象、例えばＣＲＳに関連する有害事象を最小限に抑える一方、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量に患者を可能な限り最短の時間で暴露させることが可能になるように設計された投与頻度及び投与様式で２つ以上の異なる用量で二重特異性Ｔ細胞誘導分子が投与される治療サイクルである。開始サイクルは、好ましくは、患者が二重特異性Ｔ細胞誘導分子による一連の治療を開始するとき、最初の治療サイクルとして患者に投与される。開始サイクルは、患者が二重特異性Ｔ細胞誘導分子による治療コースを再開するとき、例えば無治療期間、投与の中断（例えば、患者が以前の治療サイクルを完了しなかった場合）又は患者における癌の再発若しくは進行後にも患者に投与され得る。通常、１つの開始サイクルの投与で十分であるが、本発明の方法のいくつかの実施形態では、２つ以上の開始サイクルを投与することが企図される。特定の一実施形態では、１つの開始サイクルのみが患者に投与される。

【0026】

特定の実施形態では、開始サイクルは、長時間の持続静脈内注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与することを含む。本明細書で使用される場合、用語「プライミング用量」は、治療用量の投与によって患者に生じる有害事象がより少ないか又は重症度がより低い、例えばＣＲＳ事象より少ないか又は重症度がより低くなるように、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量のその後の投与のために患者をプライミングする、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量又は量を指す。いくつかの実施形態では、プライミング用量は、治療用量よりも低くてもよいが、患者のＴ細胞をプライミングする、例えば、その後のより多い用量又は治療用量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与により、サイトカイン分泌の増加が抑えられるようにサイトカインを放出させるのに十分な用量である。特定の実施形態では、プライミング用量は、患者における活性化末梢Ｔ細胞の割合を、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量を受ける前の患者における活性化Ｔ細胞の割合と比較して増加させる（例えば、ＣＤ６９＋ＣＤ８＋末梢Ｔ細胞の割合を増加させる）のに十分である。いくつかの実施形態では、プライミング用量は、治療用量の一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、プライミング用量は、治療用量の約１０％～約８０％、例えば治療用量の約２０％～約７５％、約１５％～約５０％、約２５％～約６０％又は約３０％～約５０％であり得る。一実施形態では、プライミング用量は治療用量の約２５％である。別の実施形態では、プライミング用量は治療用量の約３０％である。さらに別の実施形態では、プライミング用量は治療用量の約５０％である。

【0027】

他の実施形態では、プライミング用量は、例えば、治療用量の１．５倍又は２倍など、治療用量と同じであるか又はさらにそれを上回り得る。いくつかのそのような実施形態では、プライミング用量の持続静脈内注入を使用して、ボーラス静脈内注入によって投与される同じ用量の投与と同じ数又は重症度の有害事象を引き起こすことなく、プライミング用量の持続注入の開始後２４時間～９６時間以内に治療的曝露レベルを達成することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の効力を評価するのに適したＴ細胞の細胞毒性アッセイ又は動物腫瘍モデル（例えば、異種移植マウスモデル）で決定されたＥＣ５０（すなわち半数効果濃度）を超える二重特異性Ｔ細胞誘導分子の血液中の定常状態濃度（Ｃ_ｓｓ）を提供する用量である。他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の効力を評価するのに適したＴ細胞の細胞毒性アッセイ又は動物腫瘍モデル（例えば、異種移植マウスモデル）で決定されたＥＣ９０（すなわち９０％効果濃度）を超える二重特異性Ｔ細胞誘導分子の血液中のＣ_ｓｓを提供する用量である。プライミング用量の具体的な量は、方法において使用される具体的な二重特異性Ｔ細胞誘導分子、患者の治療すべき癌のタイプ、グレード又は病期並びに年齢、併存疾患及び他の併用薬などの１つ又は複数の患者特性に応じて変わり得る。任意の特定の二重特異性Ｔ細胞誘導分子のための好適なプライミング用量は、特定のタイプの癌の治療のために患者に投与される、以下にさらに詳細に記載するものなどの、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の所与の治療用量から、本明細書中に提供されるガイダンスに従って決定することができる。

【0028】

「治療用量」という用語は、癌又はその１つ以上の症状、特に癌に関連する状態若しくは症状を治療若しくは改善するのに十分であるか、又はさもなければ癌又は癌に関連する任意の他の望ましくない症状の進行を何らかの方法で予防、妨害、遅延若しくは逆転させるのに十分な二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量若しくは量を指す。治療用量の量は、治療される患者の特性、患者において診断された癌のタイプ、グレード又は病期及び患者に投与される特定の二重特異性Ｔ細胞誘導分子に応じて変わり得る。二重特異性Ｔ細胞誘導分子のための具体的な治療用量は実施例に記載されているものなどの用量探索ヒト臨床試験から決定することができ、また場合によっては、治療対象の特定の癌の関連する動物モデルから推定することができる。癌の治療のための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量の例示的な範囲としては、以下に限定はされないが、約５０μｇ～約２００ｍｇ、約２００μｇ～約８０ｍｇ、約９０μｇ～約３０ｍｇ、約３００μｇ～約１５ｍｇ、約１５０μｇ～約２ｍｇ、約６ｍｇ～約２５ｍｇ、約１ｍｇ～約２０ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ又は約５０ｍｇ～約１５０ｍｇの用量を挙げることができる。

【0029】

本発明の方法の好ましい実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、長時間にわたる持続静脈内注入によって患者に投与される。本明細書で使用される場合、持続静脈内注入は、中断することなく又は実質的に中断することなく、約３時間を超える、より典型的には約６時間を超える時間にわたって与えられる二重特異性Ｔ細胞誘導分子の静脈内投与の制御された方法を指す。持続静脈内注入は、流体をリザーバーから送り出すための流体送出機構及び送出機構を駆動するための駆動機構を含む、流体送達デバイス又は小型ポンプシステムによって投与され得る。このような投与のためのポンプシステムは、患者の皮膚に穿通し、注入溶液を患者体内に送達するための針又はカニューレを含み得る。このポンプシステムは、患者に２４時間～数日間接続することができる。静脈内注入を送達するためのポンプシステムは、当技術分野で知られている。持続注入の持続期間に応じて、ポンプシステム内に注入溶液を収容するバッグ又はリザーバーを交換又は置き換える必要があり得る。ポンプシステムのバッグ又はリザーバーの交換中、そうでなければ中断されない注入液の流れの一時的な中断が起こり得る。バッグ又はリザーバーの交換から生じるそのような一時的な中断は、静脈内投与の中断又は実質的な中断を構成せず、バッグ又はリザーバーが交換される時間は依然として、この用語が本明細書で使用されているように、持続静脈内注入の時間内であると見なされる。

【0030】

本発明の方法のいくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続静脈内注入により少なくとも２４時間の期間、例えば１～１４日間、１～７日間又は１～５日の期間にわたって患者に投与される。一実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続ＩＶ注入によって約７日の期間にわたって患者に投与される。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続ＩＶ注入によって約５日の期間にわたって患者に投与される。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続ＩＶ注入によって約４日の期間にわたって患者に投与される。さらに別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続ＩＶ注入によって約３日の期間にわたって患者に投与される。さらに別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、持続ＩＶ注入によって約２日の期間にわたって患者に投与される。これらの実施形態及び他の実施形態では、持続静脈内注入は一定の流量で与えられる。すなわち、持続静脈内注入は、注入期間にわたって一定の割合でプライミング用量を送達する。例えば、８．４ｍｇのプライミング用量の場合、７日間にわたって一定の流量で与えられる持続静脈内注入は、８．４ｍｇの総プライミング用量が７日間の注入期間の完了時に送達されるように、１日当たり１．２ｍｇの割合でプライミング用量を送達する。代わりに、いくつかの実施形態では、持続静脈内注入は、プライミング用量が注入期間にわたって１日当たり異なる用量で送達されるように可変流量で与えられ得る。例えば、１つのそのような実施形態では、持続注入の流量は、注入期間の完了時に総プライミング用量を送達するために、注入期間にわたって毎日増加する用量が与えられるように調整することができる。

【0031】

持続静脈内注入期間の持続期間は、血液中の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の所与の用量から生じるピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）を、ボーラス静脈内注入によって投与される同じ用量で達成されるＣ_ｍａｘと比較して、少なくとも約２０％減少させるように選択することができる。例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｍａｘを、プライミング用量がボーラス静脈内注入によって投与された場合に達成されるＣ_ｍａｘと比較して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％又は少なくとも約７０％減少させるのに十分な時間にわたって持続静脈内注入によって投与される。このような実施形態では、Ｃ_ｍａｘまでの時間が注入期間の終わりまで遅延される。例えば、本発明の方法のいくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｍａｘが注入開始の２４時間後よりも遅く、例えば持続静脈内注入開始の２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後又はそれより遅く達成されるように持続静脈内注入によって投与される。

【0032】

本発明の方法の特定の実施形態では、持続静脈内注入のプライミング用量及び持続期間は、持続静脈内注入の開始後１～７日以内、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日以内に二重特異性Ｔ細胞誘導分子の血液中の定常状態濃度（Ｃ_ｓｓ）を提供するように選択される。一実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｓｓが持続静脈内注入の開始後２～４日以内に達成されるように、持続静脈内注入によって投与される。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｓｓが持続静脈内注入の開始後１～２日以内に達成されるように、持続静脈内注入によって投与される。さらに別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｓｓが持続静脈内注入の開始後３～５日以内に達成されるように、持続静脈内注入によって投与される。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＣ_ｓｓは、例えば、適切なＴ細胞毒性アッセイ、動物腫瘍モデル又は他の前臨床モデルにおける分子のＥＣ５０又はＥＣ９０を超える治療的曝露レベルである。

【0033】

本発明の方法のいくつかの実施形態では、開始サイクルは、プライミング用量の投与後、ボーラス静脈内注入によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを含む。本明細書で使用される場合、本明細書で短時間静脈内注入と互換的に使用されるボーラス静脈内注入とは、長くとも３時間の期間、より典型的には約３０分～約９０分間の期間にわたって投与される少量（例えば、２０ｍＬ～１００ｍＬ）の静脈内注入を指す。本発明の方法のいくつかの実施形態では、ボーラス静脈内注入は、約３０分～約６０分にわたって投与される静脈内注入である。本発明の方法の特定の実施形態では、ボーラス静脈内注入が約６０分（例えば、５５分～６５分）にわたって投与される静脈内注入である。本発明の方法の他の実施形態では、開始サイクルは、プライミング用量の投与後、皮下注射によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを含む。

【0034】

持続静脈内注入によるプライミング用量の投与に続いて、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を開始サイクルの持続期間にわたって少なくとも７日の投与間隔でボーラス静脈内注入又は皮下注射によって投与することができる。例えば、いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回（例えば、ＱＷ、すなわち週１回投与）投与される。他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回（例えば、Ｑ２Ｗ、すなわち２週に１回投与）投与される。二重特異性Ｔ細胞誘導分子の半減期及び開始サイクルの持続期間に応じて、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの残りの期間、３週に１回又は４週に１回など、より長い投与間隔で投与され得る。

【0035】

開始サイクル中、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、プライミング用量の持続静脈内注入期間の完了の直後（例えば、同日又は翌日）に投与することができる。代わりに、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、プライミング用量の持続静脈内注入期間の完了後、１日以上遅れて投与され得る。特定の実施形態では、プライミング用量の持続静脈内注入の完了と、治療用量の（例えば、ボーラス静脈内注入又は皮下注射による）投与との間の期間は、持続静脈内注入期間の終了時に達成される曝露レベル又は実質的にそのような曝露レベルに二重特異性Ｔ細胞誘導分子の血清曝露を維持するように調整される。本発明の方法の特定の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の持続静脈内注入が終了するのと同じ日にボーラス静脈内注入によって投与される。例えば、そのような実施形態では、治療用量は、プライミング用量の持続静脈内注入完了の１８時間、１６時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間又は３０分以内に投与され得る。本発明の方法のいくつかの実施形態では、治療用量は、開始サイクル中のプライミング用量の持続静脈内注入完了の約１日～約７日後にボーラス静脈内注入によって投与される。例えば、一実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与の約１日後（例えば、翌日）に投与される。別の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与の約３日後に投与される。別の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与の約４日後に投与される。さらに別の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与の約５日後に投与される。さらに別の実施形態では、治療用量は、プライミング用量の投与の約６日後に投与される。

【0036】

本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルは、プライミング用量後且つ治療用量前にボーラス静脈内注入又は皮下注射によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量を投与することをさらに含む。二重特異性Ｔ細胞誘導分子の「ブースト用量」は、持続注入期間の完了後の期間と治療用量の投与前との間のプライミング用量の持続静脈内注入によって達成される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の曝露レベル（例えば、Ｃ_ｓｓ）を維持するために使用され得る。ブースト用量は、一般に、プライミング用量の約１０％～約６０％、例えばプライミング用量の約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％又は約６０％などのプライミング用量の一部である。いくつかの実施形態では、ブースト用量は、プライミング用量の約３０％～約４０％である。他の実施形態では、ブースト用量は、プライミング用量の約２５％～約５０％である。ブースト用量の実施は、プライミング用量の持続注入の完了と治療用量の投与との間に２日以上の遅延がある実施形態において特に有用である。本発明の方法のいくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量は、プライミング用量の持続静脈内注入が終了するのと同じ日に投与される。例えば、そのような実施形態では、ブースト用量は、プライミング用量の持続静脈内注入完了の１８時間、１６時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間又は３０分以内に投与され得る。特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量は、プライミング用量の持続静脈内注入完了の１日後（例えば、翌日）、治療用量投与の少なくとも２日前、３日前、４日前、５日前又は６日前に投与される。他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量は、プライミング用量の持続静脈内注入完了の２日後（例えば、翌日）、治療用量投与の少なくとも２日前、３日前、４日前又は５日前に投与される。

【0037】

本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルの持続期間は、約１４日～約５６日、例えば約１４日～約２８日、約２１日～約４２日、約２８日～約４９日又は約２１日～約２８日である。特定の実施形態では、開始サイクルの持続期間は、約２８日である。そのような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～３日目にわたる持続静脈内注入によって投与され得、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与され得る。他のそのような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～２日目にわたる持続静脈内注入によって投与され得、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与され得る。開始サイクルの持続期間が約２８日である特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～２日目にわたる持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与される。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～２日目にわたる持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量は、開始サイクルの３日目にボーラス静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与される。開始サイクルの持続期間が約２８日である特定の他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～７日目にわたる持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与される。開始サイクルの持続期間が約２８日であるさらに他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は、開始サイクルの１～４日目にわたる持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与される。

【0038】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つ以上の開始サイクルの投与後、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の少なくとも１つの維持サイクルを患者に投与することをさらに含む。本明細書で使用される場合、「維持サイクル」は、患者における治療レベルで二重特異性Ｔ細胞誘導分子の曝露の閾値レベルを維持するように設計された投与頻度で、二重特異性Ｔ細胞誘導分子が投与される治療サイクルである。いくつかの実施形態では、維持サイクルで使用される投与頻度は、開始サイクルで使用される投与頻度よりも少ない（すなわち、維持サイクルの投与間隔は、開始サイクルの投与間隔よりも長い）。特定の実施形態では、維持サイクルは、１つ以上の開始サイクルの完了直後に投与される。したがって、そのような実施形態では、開始サイクルの終了と維持サイクルの開始との間に無治療期間又は中断が存在しない。１つのそのような実施形態では、維持サイクルは、開始サイクルを完了した後の翌日に投与される。他の実施形態では、開始サイクルの完了と維持サイクルの投与との間に無治療期間又は中断が存在する。好ましくは、開始サイクルと維持サイクルとの間の無治療期間は、維持サイクルで使用される投与間隔以下である。一実施形態では、維持サイクルは、開始サイクルの完了の約７日後に投与される。別の実施形態では、維持サイクルは、開始サイクルの完了の約１４日後に投与される。

【0039】

複数の維持サイクル（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又はそれを超えるサイクル）を、その患者の治療の所望の持続期間に応じて患者に投与することができる。例えば、患者は、患者が完全奏効又は部分奏効などの所望の奏効レベルを達成するまで、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを受け得る。いくつかの実施形態では、２回以上の維持サイクルが患者に投与される。他の実施形態では、４回以上の維持サイクルが患者に投与される。さらに他の実施形態では、６～１２の維持サイクルが患者に投与される。特定の実施形態では、維持サイクルは、維持サイクル間に無治療期間を伴わずに連続して投与される。治療の中断が必要な場合、無治療期間の持続期間は、理想的には、維持サイクルで使用される投与間隔の２倍以下である。例えば、維持サイクルで使用される投与間隔が１４日に１回（例えば、２週に１回）である場合、維持サイクル間の無治療期間は、好ましくは約２８日以下である。

【0040】

本発明の方法の特定の実施形態では、維持サイクルは、本明細書に記載の治療用量のいずれかで二重特異性Ｔ細胞誘導分子を、少なくとも７日の投与間隔でボーラス静脈内注入又は皮下注射によって投与することを含む。例えば、本発明の方法のいくつかの実施形態では、維持サイクルは、７日に１回（例えば、週１回、ＱＷ投与）のボーラス静脈内注入又は皮下注射によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを含む。本発明の方法の他の実施形態では、維持サイクルは、１４日に１回（例えば、２週に１回、Ｑ２Ｗ投与）のボーラス静脈内注入又は皮下注射によって二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与することを含む。さらに他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量が、３週に１回又は４週に１回など、維持サイクル中のより長い投与間隔で、ボーラス静脈内注入又は皮下注射によって投与され得る。好ましくは、維持サイクル中に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、各投与間隔、例えば、週１回又は２週に１回の投与間隔で同じである（例えば、維持サイクル全体で固定用量）。これら実施形態及び他の実施形態では、維持サイクル中に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量及び投与頻度は、１つの維持サイクルから次の維持サイクルまで同じである。

【0041】

本発明の方法の特定の実施形態によれば、維持サイクルの持続期間は、約１４日～約６０日、例えば約１４日～約２８日、約２１日～約４２日、約２８日～約４９日、約２８日～約５６日又は約２１日～約２８日である。特定の実施形態では、維持サイクルの持続期間は、約２８日である。いくつかのそのような実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、各維持サイクルの１日目及び１５日目にボーラス静脈内注入によって投与される。維持サイクルの持続期間が約２８日である他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量は、各維持サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与される。

【0042】

本明細書に記載の方法は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子を患者に投与することを含む。「Ｔ細胞誘導分子」という用語は、構造が、ＣＤ３などのＴ細胞の表面の抗原への特異的結合を可能にする抗体、例えば完全長免疫グロブリン分子の最小の構造的特徴に由来するか又はそれを含む少なくとも１つのドメインを含む分子を指す。したがって、本発明によるＴ細胞誘導分子は、一般に、１つ以上の結合ドメインを含み、その各々は、典型的には、特異的標的結合を可能にする抗体の最小構造要件を含む。この最小要件は、例えば、少なくとも３つの軽鎖「相補性決定領域」又はＣＤＲ（すなわちＶＬ領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３）及び／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＶＨ領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３）、好ましくは軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の両方の６つ全てのＣＤＲの存在によって定義され得る。本発明によるＴ細胞誘導分子は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体由来のドメイン又は領域（例えば、ＣＤＲ又は可変領域）を含み得る。

【0043】

好ましくは、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子はタンパク質であり、１つ以上のポリペプチド鎖を含む。本明細書で使用されるポリペプチドは、少なくとも５０個のアミノ酸、好ましくは少なくとも１００個のアミノ酸を含むアミノ酸のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、本発明の方法に従って投与されるＴ細胞誘導分子は単鎖ポリペプチドである。他の実施形態では、本発明の方法によって投与されるＴ細胞誘導分子は、２本以上のポリペプチド鎖を含む－例えば、ポリペプチド二量体又は多量体である。特定の実施形態では、本発明の方法に従って投与されるＴ細胞誘導分子は、４本のポリペプチド鎖を含み、例えば、抗体又は免疫グロブリンタンパク質のフォーマットを有し得る。

【0044】

本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、一般に、２つの軽鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤａ）及び２つの重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０～７０ｋＤａ）を含む四量体免疫グロブリンタンパク質を指す。用語「軽鎖」又は「免疫グロブリン軽鎖」は、アミノ末端からカルボキシル末端に、単一の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）及び単一の免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含むポリペプチドを指す。免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）は、ヒトカッパ（κ）又はヒトラムダ（λ）定常ドメインであり得る。用語「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」は、アミノ末端からカルボキシル末端に、単一の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）及び任意選択的に免疫グロブリン重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）を含むポリペプチドを指す。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）及びイプシロン（ε）として分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧクラス及びＩｇＡクラス抗体は、それぞれサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分けられる。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体の重鎖は、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有し、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体の重鎖は、４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）を有する。免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、サブタイプを含む任意の免疫グロブリンアイソタイプ由来であり得る。抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間（すなわち軽鎖と重鎖との間）及び２つの抗体重鎖のヒンジ領域間のポリペプチド間ジスルフィド結合を介して連結されている。

【0045】

免疫グロブリン鎖の可変領域は、一般に、３つの超可変領域（「相補性決定領域」又はＣＤＲと呼ばれることの方が多い）によって連結された相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）を含む同一の全体構造を示す。それぞれの重鎖／軽鎖対の２本の鎖に由来するＣＤＲは、典型的には、フレームワーク領域によって整列されることで、標的タンパク質（例えば、標的癌細胞抗原又はＣＤ３）の特定のエピトープに特異的に結合する構造を形成する。Ｎ末端からＣ末端まで、天然に存在する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は両方とも、通常、以下のこれらの要素の順序と一致する：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。これらのドメインのそれぞれにおいて位置を占めるアミノ酸に番号を割り当てるための付番方式が考案されている。この付番方式は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７及び１９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）又はＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３に定義されている。所与の抗体のＣＤＲ及びＦＲを、この方式を使用して同定し得る。免疫グロブリン鎖におけるアミノ酸のための他の付番方式としては、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１８５－２０３；２００５）及びＡＨｏ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－６７０；２００１）が挙げられる。

【0046】

本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子は、好ましくは、少なくとも二重特異性Ｔ細胞誘導分子である。「二重特異性Ｔ細胞誘導分子」という用語は、２つの異なる抗原に特異的に結合することができる分子を指す。本発明に関連して、そのような二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的細胞の細胞表面の癌細胞抗原（例えば、ヒト癌細胞抗原）及びＴ細胞の細胞表面のＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞誘導分子は、標的細胞の細胞表面の２つ以上の癌細胞抗原（例えば、ヒト癌細胞抗原）及びＴ細胞の細胞表面のＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に結合し得る。したがって、そのような実施形態では、Ｔ細胞誘導分子は２つ以上の異なる癌細胞抗原に特異的に結合し、Ｔ細胞を２つ以上のタイプの癌細胞又は２つ以上の抗原を発現する癌細胞に向け直すことができるという点で、「マルチターゲティング」である。Ｔ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、標的抗原に対し、類似の結合アッセイ条件下において、他の無関係なタンパク質に対するその親和性と比較して有意に高い結合親和性を有し、その結果、その抗原を区別することができる場合、標的抗原に「特異的に結合する」。抗原に特異的に結合するＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、その抗原に対し、１×１０^－６Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合し得る。Ｔ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、Ｋ_Ｄが１×１０^－８Ｍ以下である場合、「高親和性」で抗原に特異的に結合する。一実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、５×１０^－７Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。別の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。さらに別の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。別の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、２×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。特定の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、１×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。他の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子又はその結合ドメインは、１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄでヒト癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に結合する。

【0047】

親和性は、様々な手法を使用して決定され、その一例は、親和性ＥＬＩＳＡアッセイである。様々な実施形態では、親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）に基づくアッセイ）によって決定される。この方法論を用いて、結合速度定数（ｋ_ａ単位：Ｍ^－１ｓ^－１）及び解離速度定数（ｋ_ｄ単位：ｓ^－１）を測定することができる。次に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ単位：Ｍ）は、運動速度定数の比（ｋ_ｄ／ｋ_ａ）から算出することができる。いくつかの実施形態では、親和性は、Ｒａｔｈａｎａｓｗａｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３７３：５２－６０，２００８に記載されているような結合平衡除外法（ＫｉｎＥｘＡ）などの速度論的方法によって決定される。ＫｉｎＥｘＡアッセイを用いて、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ単位：Ｍ）及び会合速度定数（ｋ_ａ単位：Ｍ^－１ｓ^－１）を測定することができる。解離速度定数（ｋ_ｄ単位：ｓ^－１）は、これらの値（Ｋ_Ｄ×ｋ_ａ）から算出することができる。他の実施形態では、親和性は、Ｋｕｍａｒａｓｗａｍｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１２７８：１６５－８２，２０１５に記載され、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で用いられているようなバイオレイヤー干渉法により決定される。速度定数（ｋ_ａ及びｋ_ｄ）並びに親和性定数（Ｋ_Ｄ）は、バイオレイヤー干渉法を使用して実時間で算出することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその結合ドメインは、約１０^－２、１０^－３、１０^－４、１０^－５、１０^－６、１０^－７、１０^－８、１０^－９、１０^－１０ｓ^－１若しくはそれ未満のヒト癌細胞抗原及び／若しくはヒトＣＤ３に対するｋ_ｄ（解離速度定数）によって測定される結合親和力（値が小さいほどより大きい結合親和力を示す）並びに／又は約１０^－７、１０^－８、１０^－９、１０^－１０、１０^－１１Ｍ若しくはそれ未満のヒト癌細胞抗原及び／若しくはヒトＣＤ３に対するＫ_Ｄ（平衡解離定数）によって測定される結合親和性（値が小さいほどより高い結合親和性を示す）などの望ましい特性を示す。

【0048】

いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、抗体であって、完全長免疫グロブリンの一般構造を有し得る。例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、２つの完全長抗体重鎖及び２つの完全長抗体軽鎖を含み得る。特定の実施形態では、本発明の二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ヘテロ二量体の抗体（本明細書では「ヘテロ免疫グロブリン」又は「ヘテロＩｇ」と互換的に使用される）であり、これは２つの異なる軽鎖及び２つの異なる重鎖を含む抗体を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、本明細書においてさらに記載する癌細胞抗原などの癌細胞抗原に特異的に結合する抗体由来の軽鎖及び重鎖と、ＣＤ３に特異的に結合する抗体由来の軽鎖及び重鎖とを含む。

【0049】

本発明の方法に使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ、（ｓ）ｄＡｂ、Ｆｖ、軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）、Ｆｄ（ＶＨ－ＣＨ１）、重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２又は「ｒ ＩｇＧ」（重鎖と軽鎖とからなる「半抗体」）などの完全長抗体の断片も含み得る。本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、抗体の改変断片も含み得る。そのような改変断片の例としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｄｉ－ｓｃＦｖ又はｂｉ（ｓ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、Ｆａｂ_２、Ｆａｂ_３、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）、タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、下記：（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）_２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）_２、（（ｓｃＦｖ）_２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）_２－ＣＨ３）又は（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）_２の通りの構造により例示される「ミニボディ」、マルチボディ（例えば、トリアボディ又はテトラボディ）及び単一ドメイン抗体（例えば、他の可変領域又はドメインと無関係に抗原又は標的に特異的に結合する、ＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬであり得る１つの可変領域のみを含むナノボディ又は単一可変ドメイン抗体）。

【0050】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は多価である。Ｔ細胞誘導分子の価数は、Ｔ細胞誘導分子内の個々の抗原結合ドメインの数を示す。本発明に関連して、例えば、Ｔ細胞誘導分子に関する用語「一価」、「二価」及び「四価」は、それぞれ１つ、２つ及び４つの抗原結合ドメインを有するＴ細胞誘導分子を指す。したがって、多価Ｔ細胞誘導分子は２つ以上の抗原結合ドメインを含む。Ｔ細胞誘導分子は、特異性よりも多い抗原結合ドメイン（例えば、より高い価数）を有することができる。例えば、第１の標的（例えば、癌細胞抗原）のための２つの抗原結合ドメインと、第２の標的（ＣＤ３）のための１つの抗原結合ドメイン－又はその逆－を有するＴ細胞誘導分子は、三価（３つの抗原結合ドメイン）であり、且つ二重特異性（２つの抗原に結合する）であると考えられる。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は二価である。したがって、そのような二重特異性で二価のＴ細胞誘導分子は、次の２つの抗原結合ドメインを含有する：癌細胞抗原（例えば、ヒト癌細胞抗原）のための１つの抗原結合ドメイン及びＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）のための１つの抗原結合ドメイン。他の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子は、三価の三重特異性Ｔ細胞誘導分子であり、次の３つの抗原結合ドメインを含む：第１の癌細胞抗原のための１つの抗原結合ドメイン、第２の癌細胞抗原のための別の抗原結合ドメイン及びＣＤ３のための第３の結合ドメイン。さらに他の実施形態では、本発明の方法で使用されるＴ細胞誘導分子は、四価の三重特異性Ｔ細胞誘導分子であり、次の４つの抗原結合ドメインを含む：第１の癌細胞抗原のための１つの抗原結合ドメイン、第２の癌細胞抗原のための別の抗原結合ドメイン及びＣＤ３のための２つの抗原結合ドメイン。

【0051】

いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、標的癌細胞抗原（例えば、ヒト標的癌細胞抗原）に特異的に結合する第１の結合ドメインと、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。本明細書で使用する場合、「結合ドメイン」と互換的に使用される「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原と相互作用し、その抗原に対する特異性及び親和性をＴ細胞誘導分子に付与するアミノ酸残基を含有するＴ細胞誘導分子の領域を指す。特定の実施形態では、Ｔ細胞誘導分子の１つ以上の結合ドメインは、抗体又はその抗原結合断片に由来し得る。例えば、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の結合ドメインは、ヒト標的癌細胞抗原及び／又はヒトＣＤ３に特異的に結合する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域に由来する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインは、そのヒト標的癌細胞抗原に特異的に結合する抗体の重鎖及び軽鎖可変領域の６つ全てのＣＤＲを含み、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、抗ＣＤ３抗体の重鎖及び軽鎖可変領域の６つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の結合ドメイン（抗癌細胞抗原結合ドメイン、抗ＣＤ３結合ドメイン又は両方）は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）又はナノボディを含む。一実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の両方の結合ドメインはＦａｂ断片である。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の一方の結合ドメインはＦａｂ断片であり、他方の結合ドメインはｓｃＦｖである。さらに別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の両方の結合ドメインはｓｃＦｖである。

【0052】

本発明に関連して使用される場合、本明細書において「結合断片」又は「断片」と互換的に使用される「抗原結合断片」は、完全長の重鎖及び／又は軽鎖に存在するアミノ酸の少なくともいくつかを欠くが、それでもなお抗原に特異的に結合することができる抗体の一部である。抗原結合断片としては、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ（例えば、ラクダ重鎖抗体のＶＨドメイン；ＶＨＨ断片、Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ．６４：２８５３－５７，２００４を参照されたい）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片及びＣＤＲ断片が挙げられるが、これらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ウサギ又はラクダなどの任意の哺乳動物供給源に由来し得る。抗原結合断片は、標的抗原との結合についてインタクトな抗体と競合する場合があり、断片は、インタクトな抗体の改変（例えば、酵素的又は化学的切断）によって作製されるか、又は組換えＤＮＡ技術若しくはペプチド合成を使用して新たに合成され得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の少なくとも１つのＣＤＲ、例えば抗原に結合する抗体由来の重鎖ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体の重鎖由来の３つのＣＤＲの全て又は抗原に結合する抗体の軽鎖由来の３つのＣＤＲの全てを含む。さらに他の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の６つのＣＤＲの全て（重鎖由来の３つ及び軽鎖由来の３つ）を含む。

【0053】

抗体をパパインで消化すると、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同じ抗原結合断片（その各々が単一の抗原結合部位を有する）と、残部の「Ｆｃ」断片（免疫グロブリン定常領域の第１のドメイン以外の全てを含有する）が産生される。Ｆａｂ断片は、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン並びに軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。このように、「Ｆａｂ断片」は、１つの免疫グロブリン軽鎖（軽鎖可変領域（ＶＬ）及び定常領域（ＣＬ））と１つの免疫グロブリン重鎖のＣＨ１領域及び可変領域（ＶＨ）とから構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆｄ断片」は、免疫グロブリン重鎖に由来するＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む。Ｆｄ断片は、Ｆａｂ断片の重鎖成分を表す。

【0054】

免疫グロブリンの「Ｆｃ断片」又は「Ｆｃドメイン」は、一般に、２つの定常ドメイン、すなわちＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意選択により、ＣＨ４ドメインを含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、免疫グロブリンのＦｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４免疫グロブリン由来のＦｃドメインであり得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ２免疫グロブリン由来のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。Ｆｃドメインは、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び貪食などのエフェクター機能を保持し得る。他の実施形態では、Ｆｃドメインは、エフェクター機能を低減又は排除するように修飾され得る。

【0055】

「Ｆａｂ’断片」は、ＣＨ１ドメインのＣ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ又は複数のシステイン残基を有するＦａｂ断片である。

【0056】

「Ｆ（ａｂ’）_２断片」は、ヒンジ領域で、重鎖間のジスルフィド架橋によって連結されている２つのＦａｂ’断片を含む二価の断片である。

【0057】

「Ｆｖ」断片は、抗体由来の完全抗原認識及び結合部位を含有する最小の断片である。この断片は、緊密な非共有会合での、１つの免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）の二量体からなる。この構成において、各可変領域の３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を規定する。単一の軽鎖又は重鎖の可変領域（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖ断片の半分）は、抗原を認識し、結合する能力を有するが、ＶＨ及びＶＬの両方を含む結合部位全体よりも親和性は低い。

【0058】

「単鎖可変抗体断片」又は「ｓｃＦｖ断片」は、抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、これらの領域は、単一のポリペプチド鎖に存在し、任意選択により、Ｆｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするペプチドリンカーをＶＨ領域とＶＬ領域との間に含む（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２４２：４２３－４２６，１９８８；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８５：５８７９－５８８３，１９８８を参照されたい）。

【0059】

「ナノボディ」は、重鎖抗体の重鎖可変領域である。そのような可変ドメインは、そのような重鎖抗体の完全に機能的な最小の抗原結合性断片であり、分子質量は、わずか１５ｋＤａである。Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３－５７，２００４を参照されたい。軽鎖を欠く機能的重鎖抗体は、特定の種の動物、例えばコモリザメ、テンジクザメ並びにラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）、例えばラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びラマでは天然に生じる。これらの動物において、抗原結合部位は、単一ドメインであるＶＨＨドメインになる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを使用して抗原結合領域を形成する。すなわち、これらの機能的抗体は、構造Ｈ_２Ｌ_２を有するのみの重鎖のホモ二量体（「重鎖抗体」又は「ＨＣＡｂｓ」と称する）である。ラクダ化ＶＨＨは、報告によれば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含有し、ＣＨ１ドメインを欠くＩｇＧ２定常領域及びＩｇＧ３定常領域と再結合する。ラクダ化ＶＨＨドメインは、抗原に高親和性で結合し（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６：２６２８５－９０，２００１）、溶液で高い安定性を有する（Ｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４１：３６２８－３６，２００２）ことが判明している。ラクダ化重鎖を有する抗体を生成する方法は、例えば、米国特許公報第２００５／０１３６０４９号明細書及び同第２００５／００３７４２１号明細書に記載されている。別の足場は、サメＶ－ＮＡＲ足場とより密接に適合するヒト可変様ドメインから作製することができ、長い貫通性のループ構造のフレームワークを提供し得る。

【0060】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の結合ドメインは、所望の抗原に特異的に結合する抗体又は抗体断片の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。例えば、本発明の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインは、標的癌細胞抗原に特異的に結合する抗体、例えば、本明細書に記載の抗癌細胞抗原抗体又はその断片のいずれかに由来するＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、抗ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３に特異的に結合する抗体、例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体又はその断片のいずれかに由来するＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。ヒト癌細胞抗原又はヒトＣＤ３に特異的に結合する結合ドメインは、これらの抗原に対する既知の抗体或いは抗原タンパク質若しくはその断片を使用する新規な免疫化法、ファージディスプレイ又は当秘術分野で知られた他の方法により得られる新規な抗体又は抗体断片に由来するものであり得る。二重特異性Ｔ細胞誘導分子の結合ドメインの起源である抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体であり得る。特定の実施形態では、結合ドメインの起源である抗体は、モノクローナル抗体である。これらの実施形態又は他の実施形態では、抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であり、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型又はＩｇＧ４型のものであり得る。

【0061】

本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインは、標的癌細胞抗原、好ましくはヒト標的癌細胞抗原に特異的に結合する。この結合ドメインは、本明細書では抗癌細胞抗原結合ドメインと称される。「標的癌細胞抗原」という用語は、悪性細胞、腫瘍細胞又は他のタイプの癌性細胞の表面に発現する抗原を指す。標的癌細胞抗原は、癌細胞においてのみ発現するか、又は正常細胞と比較して癌細胞において過剰発現し得る。標的癌細胞抗原には、癌細胞で発現するが、正常細胞で発現しないタンパク質の変異型又は異常型も含まれ得る。標的癌細胞抗原の例としては、以下に限定されないが、５Ｔ４、ＡＦＰ、ＢＣＭＡ、ベータ－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤＨ３、ＣＤＨ１９、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ１、ｇｐＡ３３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＨＥＲ２、ＩＧＦＲ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－６、ＭＡＧＥ－１２、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１７、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥタンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＲＰ１及びＴＲＰ２が挙げられる。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＭＵＣ１７、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＦＬＴ３、ＤＬＬ３、ＢＣＭＡ及びＰＳＭＡから選択される標的癌細胞抗原に特異的に結合する。

【0062】

いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＣＤ１９（分化抗原１９）、好ましくはヒトＣＤ１９に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＣＤ１９抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１０／０５２０１４号パンフレット、国際公開第２０１５／１０９１３１号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１４０号パンフレット及び国際公開第２０２０／０１８９２２号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗体由来の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。本明細書において「可変ドメイン」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））と互換的に使用される「可変領域」は、抗体の抗原への結合に直接関与する、免疫グロブリン軽鎖及び免疫グロブリン重鎖のそれぞれにおける領域を指す。上記のように、可変軽鎖及び可変重鎖の領域は、同じ一般構造を有し、各領域は４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含み、それらの配列は、広く保存され、３つのＣＤＲによって連結されている。フレームワーク領域は、ベータ－シート構造を採用し、ＣＤＲは、ベータ－シート構造を接続するループを形成し得る。各鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域によってそれらの三次元構造中に保持され、他方の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。したがって、特定の実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、（ｉ）配列番号４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、（ｉ）配列番号８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号８の配列を含むＶＬ領域を含む。１つの特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号８の配列を含むＶＬ領域とを含む。別の特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号９の配列を含む。

【0063】

他の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＣＤ３３（分化抗原３３；シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３（ＳＩＧＬＥＣ３）としても知られる）、好ましくはヒトＣＤ３３に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＣＤ３３抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレット、国際公開第２０１２／０４５７５２号パンフレット、国際公開第２０１６／００４１０８号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１４０号パンフレット及び国際公開第２０１９／２２４７１１号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３３結合ドメインは、配列番号１１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号１３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号１５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号１７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３３結合ドメインは、（ｉ）配列番号１４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３３結合ドメインは、（ｉ）配列番号１８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１８の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３３結合ドメインは、配列番号１４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号１８の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３３結合ドメインは、配列番号１９の配列を含む。

【0064】

さらに他の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＦＬＴ３（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３；分化抗原クラスター１３５（ＣＤ１３５）としても知られる）、好ましくはヒトＦＬＴ３に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＦＬＴ３抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１７／０２１３６２号パンフレット及び国際公開第２０１７／１３４１４０号パンフレットに記載されており、これらの両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号２１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号２３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号２５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号２６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号２７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＦＬＴ３結合ドメインは、（ｉ）配列番号２４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号２４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号２４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＦＬＴ３結合ドメインは、（ｉ）配列番号２８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号２８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号２８の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号２４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号２８の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＦＬＴ３結合ドメインは、配列番号２９の配列を含む。

【0065】

いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＤＬＬ３（デルタ様リガンド３）、好ましくはヒトＤＬＬ３に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＤＬＬ３抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７４６号パンフレット、国際公開第２０１７／０２１３４９号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１４０号パンフレット、国際公開第２０１９／２３４２２０号パンフレット及び国際公開第２０２０／０６９０２８号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＤＬＬ３結合ドメインは、配列番号３１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号３２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号３３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号３５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号３６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号３７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＤＬＬ３結合ドメインは、（ｉ）配列番号３４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号３４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号３４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＤＬＬ３結合ドメインは、（ｉ）配列番号３８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号３８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号３８の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＤＬＬ３結合ドメインは、配列番号３４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号３８の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＤＬＬ３結合ドメインは、配列番号３９の配列を含む。

【0066】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、好ましくはヒトＢＣＭＡに特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＢＣＭＡ抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１３／０７２４１５号パンフレット、国際公開第２０１７／０３１１０４号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１３４号パンフレット、国際公開第２０１８／１１９２１５号パンフレット、国際公開第２０１９／０７５３７８号パンフレット、国際公開第２０１９／１６４８９１号パンフレット及び国際公開第２０２０／０１８８２０号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号４１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号４２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号４３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号４５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号４６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号４７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（ｉ）配列番号４４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号４４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号４４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（ｉ）配列番号４８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号４８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号４８の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号４４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号４８の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号４９の配列を含む。

【0067】

特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、好ましくはヒトＰＳＭＡに特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＰＳＭＡ抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１０／０３７８３６号パンフレット、国際公開第２０１７／０２３７６１号パンフレット、国際公開第２０１７／１２１９０５号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１５８号パンフレット、国際公開第２０１８／０９８３５６号パンフレット、国際公開第２０１９／０９２４５２号パンフレット、国際公開第２０１９／２２４７１８号パンフレット及び国際公開第２０１９／２４６５１４号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＰＳＭＡ結合ドメインは、配列番号５１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号５２の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号５３の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号５５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号５６の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号５７の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＰＳＭＡ結合ドメインは、（ｉ）配列番号５４の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号５４の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号５４の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＰＳＭＡ結合ドメインは、（ｉ）配列番号５８の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号５８の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号５８の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＰＳＭＡ結合ドメインは、配列番号５４の配列を含むＶＨ領域と、配列番号５８の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＰＳＭＡ結合ドメインは、配列番号５９の配列を含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＣＬＤＮ１８．２（タイトジャンクション分子クローディン－１８アイソフォーム２）、好ましくはヒトＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＣＬＤＮ１８．２抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２００７／０５９９９７号パンフレット、国際公開第２０１３／１７４５０９号パンフレット、国際公開第２０１４／１２７９０６号パンフレット、国際公開第２０１４／１４６７７８号パンフレット、国際公開第２０１４／０７５７８８号パンフレット及び国際公開第２０２０／０２５７９２に記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、配列番号１４９の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１５０の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号１５１の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号１５４の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１５５の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号１５６の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する態様において、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、（ｉ）配列番号１５２若しくは配列番号１５３の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１５２若しくは配列番号１５３の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１５２若しくはハイ１５３の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、（ｉ）配列番号１５７の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１５７の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１５７の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、配列番号１５２の配列を含むＶＨ領域と、配列番号１５７の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、配列番号１５３の配列を含むＶＨ領域と、配列番号１５７の配列を含むＶＬ領域とを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、配列番号１５８の配列を含む。他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインは、配列番号１５９の配列を含む。

【0069】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１のドメインは、ＭＵＣ１７（ムチン１７）、好ましくはヒトＭＵＣ１７に特異的に結合する。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＭＵＣ１７抗体又は結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１９／１３３９６１号パンフレット及び米国特許第８，５４６，５４６号明細書に記載されており、これらの両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＭＵＣ１７結合ドメインは、配列番号１６２の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１６３の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号１６４の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ領域と、配列番号１６６の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１６７の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号１６８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ領域とを含む。関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＭＵＣ１７結合ドメインは、（ｉ）配列番号１６５の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１６５の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１６５の配列を含むＶＨ領域を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＭＵＣ１７結合ドメインは、（ｉ）配列番号１６９の配列と少なくとも９０％同一である配列、（ｉｉ）配列番号１６９の配列と少なくとも９５％同一である配列、又は（ｉｉｉ）配列番号１６９の配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＭＵＣ１７結合ドメインは、配列番号１６５の配列を含むＶＨ領域と、配列番号１６９の配列を含むＶＬ領域とを含む。特定の他の実施形態では、本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＭＵＣ１７結合ドメインは、配列番号１７０の配列を含む。

【0070】

用語「同一性」は、本明細書で使用される場合、配列を整列させ、比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」は、本明細書中で使用される場合、比較する分子中のアミノ酸又はヌクレオチド間の同一残基のパーセントを意味し、比較する分子の最小の大きさに基づいて計算される。これらの計算のために、アラインメントにおけるギャップ（存在する場合）に特定の数学的モデル又はコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって対処しなければならない。整列させた核酸又はポリペプチドの同一性を計算するために使用され得る方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．），１９８８，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．），１９９３，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．），１９９４，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．），１９９１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８：１０７３に記載のものが挙げられる。例えば、配列同一性は、２つのポリペプチドのアミノ酸の位置の類似性を比較するために一般に使用されている標準的な方法によって決定することができる。ＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡなどのコンピュータプログラムを用いて、２つのポリペプチド又は２つのポリヌクレオチド配列を、それらのそれぞれの残基が最適に一致するように整列させる（一方若しくは両方の配列の全長に沿って又は一方若しくは両方の配列の所定の部分に沿って）。プログラムは、デフォルトの開始ペナルティ及びデフォルトのギャップペナルティを提供し、ＰＡＭ ２５０（Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐ．３，１９７８）又はＢＬＯＳＵＭ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５－１０９１９）などのスコアリングマトリックスをコンピュータプログラムと共に使用し得る。次いで、例えば、同一性パーセントを次のように計算することができる：完全一致の総数に１００を掛け、次いで、２つの配列を整列させるために、一致したスパン内のより長い配列の長さと、より長い配列に導入されたギャップの数との合計で割る。同一性パーセントの算出では、比較される配列は、これらの配列間のマッチを最大化するように整列させる。

【0071】

ＧＣＧプログラムパッケージは、同一性パーセントを決定するために使用し得るコンピュータプログラムであり、このパッケージには、ＧＡＰが含まれる（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。コンピュータアルゴリズムＧＡＰは、配列同一性パーセントを決定しようとする２つのポリペプチド又は２つのポリヌクレオチドを整列させるために使用される。配列は、それらのそれぞれのアミノ酸又はヌクレオチドが最適に一致するように並べられる（アルゴリズムによって決定される「一致スパン」）。このアルゴリズムと共に、ギャップ開始ペナルティ（３×平均対角として算出される。ここで、「平均対角」は、使用される比較マトリックスの対角の平均であり；「対角」は、特定の比較マトリックスによりそれぞれの完全アミノ酸マッチに割り当てられるスコア又は数である）及びギャップ伸長ペナルティ（通常、ギャップ開始ペナルティの１／１０倍である）並びにＰＡＭ ２５０又はＢＬＯＳＵＭ ６２などの比較マトリックスが使用される。特定の実施形態では、このアルゴリズムにより、標準比較マトリックス（ＰＡＭ ２５０比較マトリックスに関しては、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：３４５－３５２を参照されたい；ＢＬＯＳＵＭ ６２比較マトリックスに関しては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５－１０９１９を参照されたい）も使用される。

【0072】

ＧＡＰプログラムを用いてポリペプチド又はヌクレオチド配列の同一性パーセントを決定するために推奨されるパラメータには、以下が含まれる：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３；
比較マトリックス：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９９２（上記）のＢＬＯＳＵＭ ６２；
ギャップペナルティ：１２（ただし、エンドギャップに対するペナルティなし）
ギャップ長ペナルティ：４
類似性の閾値：０。

【0073】

２つのアミノ酸配列を整列させるための特定のアラインメントスキームは、これら２つの配列の短い領域のみのマッチングをもたらし得、この整列させた小さい領域は、２つの完全長配列間に有意な関係がないにもかかわらず、非常に高い配列同一性を有し得る。したがって、選択されたアラインメント方法（ＧＡＰプログラム）を、必要に応じて調節して、標的ポリペプチドの少なくとも５０個の連続するアミノ酸にわたるアラインメントをもたらすことができる。

【0074】

本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメインは、ＣＤ３、好ましくはヒトＣＤ３に特異的に結合する。この結合ドメインは、本明細書では抗ＣＤ３結合ドメインと称される。「ＣＤ３」（分化抗原３）は、４つの鎖で構成されるＴ細胞共受容体である。哺乳類では、ＣＤ３タンパク質複合体は、ＣＤ３γ（ガンマ）鎖、ＣＤ３δ（デルタ）鎖及び２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖を含有する。これらの４つの鎖がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及びいわゆるζ（ゼータ）鎖と結び付いて「Ｔ細胞受容体複合体」を形成し、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。ＣＤ３γ（ガンマ）、ＣＤ３δ（デルタ）及びＣＤ３ε（イプシロン）鎖は、免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連性のある細胞表面タンパク質であり、それぞれが単一の細胞外免疫グロブリンドメインを含有する。ＣＤ３分子の細胞内テールは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として知られる単一の保存モチーフを含有し、これは、ＴＣＲのシグナル伝達能に必須である。ＣＤ３イプシロン分子は、ヒトの第１１染色体に存在するＣＤ３Ｅ遺伝子によってコードされるポリペプチドである。

【0075】

Ｔ細胞上のＣＤ３及び標的細胞（例えば、腫瘍細胞）上の標的タンパク質（例えば、癌細胞抗原）に結合するＴ細胞誘導分子によるＴ細胞の動員によってリダイレクトされた標的細胞の溶解には、通常、細胞溶解性シナプス形成並びにパーフォリン及びグランザイムの送達が関与する。誘導されたＴ細胞は、連続的な標的細胞の溶解が可能であり、ペプチド抗原のプロセシング及び提示又はクローナルなＴ細胞分化を妨げる免疫回避機構による影響を受けない（例えば、国際公開第２００７／０４２２６１号パンフレットを参照されたい）。

【0076】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメインは、Ｔ細胞表面のＣＤ３、より好ましくはＴ細胞の表面のヒトＣＤ３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメインは、ＣＤ３のイプシロン、好ましくはヒトＣＤ３のイプシロン、例えば、Ｔ細胞表面のヒトＣＤ３イプシロンに特異的に結合する。ヒトＣＤ３イプシロンの細胞外ドメインの例示的なアミノ酸配列は、配列番号６１に示される。

【0077】

本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメインが構築又は誘導され得る抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３結合ドメインの例は、国際公開第２００７／０４２２６１号パンフレット、国際公開第２００８／１１９５６７号パンフレット、国際公開第２０１７／０５３８５６号パンフレット、国際公開第２０１７／２０１４９３号パンフレット、国際公開第２０１７／２２３１１１号パンフレット、国際公開第２０１８／０５２５０３号パンフレット及び国際公開第２０１９／２２４７１７号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２のドメインは、ヒトＣＤ３イプシロンの細胞外ドメイン中のエピトープ（例えば、配列番号６１の配列を含むポリペプチド内のエピトープ）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法における使用に好適な二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域と、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域とを含み、
（ａ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６２、６３及び６４の配列を有するか、
（ｂ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６５、６６及び６７の配列を有するか、
（ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６８、６９及び７０の配列を有するか、
（ｄ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号７１、６９及び７２の配列を有するか、
（ｅ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８５、８６及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号７４、７５及び７７の配列を有するか、
（ｆ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６５、６３及び７３の配列を有するか、
（ｇ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８５、８６及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号７８、７９及び８０の配列を有するか、
（ｈ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８２、８３及び８４の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号７４、７５及び７６の配列を有するか、
（ｉ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８７、８３及び８８の配列を有し、且つＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６８、６９及び８１の配列を有するか、又は
（ｊ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号８７、８３及び８８の配列を有し、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号６５、６６及び６７の配列を有する。
好ましい実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、（ｉ）配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域とを含む。

【0078】

本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８～１００から選択される配列を含む軽鎖可変領域及び／又は配列番号８９～９７から選択される配列を含む重鎖可変領域並びにこれらの軽鎖及び重鎖可変領域の結合断片、誘導体及びバリアントを含み得る。配列番号９８～１００に記載の軽鎖可変領域のそれぞれは、配列番号８９～９７に記載の重鎖可変領域のいずれかと組み合わされて、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインを形成し得る。特定の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号８９の配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９０の配列を含む重鎖可変領域とを含む。他の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９１の配列を含む重鎖可変領域とを含む。さらに他の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９２の配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９９の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９５の配列を含む重鎖可変領域とを含む。

【0079】

特定の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９３の配列を含む重鎖可変領域とを含む。一実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９９の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９６の配列を含む重鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９４の配列を含む重鎖可変領域とを含む。好ましい実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号１００の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９０の配列を含む重鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号１００の配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９７の配列を含む重鎖可変領域とを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８～１００に記載の軽鎖可変領域と１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸残基のみで異なる連続するアミノ酸の配列を含む軽鎖可変領域を含み、そのような配列の相違は、それぞれ独立して、１つのアミノ酸の欠失、挿入又は置換であり、欠失、挿入及び／又は置換は、前述の可変ドメイン配列に対して１５以下のアミノ酸の変化をもたらす。いくつかの抗ＣＤ３結合ドメイン中の軽鎖可変領域は、配列番号９８～１００のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。

【0081】

一実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８～１００から選択される配列と少なくとも９０％同一である配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８～１００から選択される配列と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号９８～１００から選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0082】

これらの実施形態及び他の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８９～９７に記載の重鎖可変領域と１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸残基のみで異なる連続するアミノ酸の配列を含む重鎖可変領域を含み、そのような配列の相違は、それぞれ独立して、１つのアミノ酸の欠失、挿入又は置換であり、欠失、挿入及び／又は置換は、前述の可変ドメイン配列に対して１５以下のアミノ酸の変化をもたらす。いくつかの抗ＣＤ３結合ドメイン中の重鎖可変領域は、配列番号８９～９７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。

【0083】

一実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８９～９７から選択される配列と少なくとも９０％同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８９～９７から選択される配列と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８９～９７から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0084】

特定の実施形態によれば、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１つ又は複数の結合ドメインは、ｓｃＦｖの形式である。ｓｃＦｖにおいて、ＶＨ領域及びＶＬ領域は、ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨの順に（Ｎ末端からＣ末端に）配置される。第１及び／又は第２の結合ドメインのＶＨ領域及びＶＬ領域は、リンカー、好ましくはペプチドリンカーを介して連結されていることが想定される。第１及び／又は第２のドメインの一実施形態では、ＶＨ領域はリンカーのＮ末端に位置し、ＶＬ領域はリンカーのＣ末端に位置する。リンカーは、好ましくはペプチドリンカーであり、より好ましくは短鎖ペプチドリンカーである。好適なリンカーの例としては、配列番号１１１～１２４に記載の配列を含むリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

これに関連して、「短い」リンカーは、２～５０個のアミノ酸、好ましくは３～３５個のアミノ酸、４～３０個のアミノ酸、５～２５個のアミノ酸、６～２０個のアミノ酸又は６～１７個のアミノ酸を有する。１つの結合ドメインの２つの可変領域間のリンカーは、２つの結合ドメイン間のリンカーと異なる長さを有し得る（例えば、より長い場合がある）。例えば、一方又は両方の結合ドメインの２個の可変領域間のリンカーは、８～１６アミノ酸、好ましくは１０～１５の長さを有し得、２個の結合ドメイン間のリンカーは、３～１０アミノ酸、好ましくは５～８の長さを有し得る。さらに、ペプチドリンカーは、配列番号１１２～１１６及び１１８～１２４に示されるものなど、グリシン／セリンリンカーであることが想定される。一実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメイン及び／又は抗ＣＤ３結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ領域－ペプチドリンカー－ＶＬ領域を含むｓｃＦｖであり、ペプチドリンカーは配列番号１１９に記載のリンカーなどのグリシン－セリンリンカーを含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメイン及び／又は抗ＣＤ３結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ領域－ペプチドリンカー－ＶＨ領域を含むｓｃＦｖであり、ペプチドリンカーは配列番号１１９に記載のリンカーなどのグリシン－セリンリンカーを含む。関連する実施形態では、抗癌細胞抗原結合ドメインと抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖドメイン）との間のペプチドリンカーは、配列番号１１２又は配列番号１１５に記載のリンカーである。特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはｓｃＦｖドメインであり、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１７０から選択される配列を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗ＣＤ３結合ドメインはｓｃＦｖドメインであり、配列番号１０１～１１０から選択される配列を含む。

【0086】

特定の実施形態では、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ヒト標的癌細胞抗原に特異的に結合し、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する第１の結合ドメインと、ヒトＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１０１～１１０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する第２の結合ドメインとを含む。好ましい実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメイン（例えば、抗癌細胞抗原結合ドメイン）は配列番号４９のアミノ酸配列を含み、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ３結合ドメイン）は配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第１の結合ドメイン（例えば、抗癌細胞抗原結合ドメイン）は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の第２の結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ３結合ドメイン）は配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。

【0087】

本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１７０に示される抗癌細胞抗原ｓｃＦｖ結合ドメインのいずれかを、配列番号１０１～１１０に示される抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ結合ドメインのいずれかと組み合わされて含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９又は配列番号１７０に示される抗癌細胞抗原ｓｃＦｖ結合ドメインと、配列番号１０１～１１０に示される抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ結合ドメインとを含み、抗癌細胞抗原ｓｃＦｖ結合ドメインは、本明細書に記載されるペプチドリンカーなどのペプチドリンカーを介して抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ結合ドメインに連結される。特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、抗癌細胞抗原ｓｃＦｖ結合ドメイン、ペプチドリンカー及び抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ結合ドメインを含む。いくつかのそのような実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１１２又は配列番号１１５の配列を含む。

【0088】

本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、好ましくは、例えば分子の薬物動態プロファイルを調節することができる追加のドメインを含む。例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、分子の排出半減期を増加させるドメイン又は部分をさらに含み得る。排出半減期は、血漿中の薬物濃度又は体内の総量が５０％減少するのにかかる時間を指す。したがって、１回の半減期後、体内の薬物の濃度は、開始用量の半分となる。好ましくは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、２４時間を超える、４８時間を超える、７２時間を超える、５日を超える、７日を超える、１０日を超える、１４日を超える又は２１日を超える分子の半減期を提供する半減期延長部分を含む。したがって、本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、約２日～約２１日、約３日～約１４日、約５日～約１５日、約３日～約７日又は約２日～約５日の半減期を有し得る。本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子に組み込まれ得る半減期延長部分の例としては、免疫グロブリンＦｃドメイン、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）に由来するドメイン又はアルブミン結合ドメイン（例えば、ヒトアルブミン結合ペプチドを含む）、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合するペプチド及びポリエチレングリコールポリマーを挙げ得るが、これらに限定されない。二重特異性Ｔ細胞誘導分子に組み込むことができるヒト血清アルブミン又はそのバリアントに由来するドメインの例は、例えば、国際公開第２０１１／０５１４８９号パンフレット、国際公開第２０１２／０５９４８６号パンフレット、国際公開第２０１３／０７５０６６号パンフレット、国際公開第２０１３／１３５８９６号パンフレット及び国際公開第２０１４／０７２４８１に記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子に組み込まれる半減期延長部分は、アルブミン結合ドメイン、例えば、血清アルブミンに特異的に結合するアルブミン結合ペプチド又は抗体断片（例えば、単一ドメイン抗体又はｓｃＦｖドメイン）を含むドメインである。本発明の方法における使用に適した二重特異性Ｔ細胞誘導分子に組み込まれ得るアルブミン結合ドメインの例は、例えば、国際公開第２０１３／１２８０２７号パンフレット、国際公開第２０１４／１４０３５８号パンフレット及び国際公開第２０１７／２０１４８８号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0089】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、免疫グロブリンＦｃドメインを含む。免疫グロブリンＦｃドメインは、１つ以上のＦｃモノマーを含み得る。各「Ｆｃモノマー」は、典型的には、免疫グロブリン分子由来の少なくともＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。Ｆｃ単量体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４免疫グロブリン由来のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み得る。一例として、ＣＨ２ドメインは、ＩｇＧ１免疫グロブリンの２３１～３４０位のアミノ酸を含み、ＣＨ３ドメインはＩｇＧ１免疫グロブリンの３４１～４４６位のアミノ酸を含む。ここで、アミノ酸の番号付けは、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．６３：７８－８５（１９６９）及びＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載のＥＵ番号付けシステムによる。ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの境界は、ＩｇＧアイソフォーム毎にわずかに異なり得るが、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４におけるＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ１におけるＣＨ２及びＣＨ３ドメインとのアラインメントによって確認することができる。

【0090】

いくつかの実施形態では、Ｆｃモノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域又はその一部を含み得る。免疫グロブリンヒンジ領域は、典型的には、ＩｇＧ免疫グロブリンの２１６～２３１位のアミノ酸（ＥＵ番号付けシステムによる）によって定義される領域である。特定の実施形態では、Ｆｃモノマーは、ＩｇＧ１免疫グロブリン又はその一部由来のヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１領域は、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２５）又はＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２６）を含む。他の実施形態では、Ｆｃモノマーは、配列ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）を有するＩｇＧ２ヒンジ領域、配列ＥＬＫＴＰＬＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（配列番号１２８）、ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ（配列番号１２９）若しくはＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（配列番号１３０）を有するＩｇＧ３ヒンジ領域又は配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１３１）を有するＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。特定の実施形態では、Ｆｃモノマーは、アミノからカルボキシルの順に、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリンＣＨ２ドメイン及び免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含む。

【0091】

特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、１つのＦｃモノマーを有するＦｃドメインを含む。代替の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、２つ以上のＦｃモノマーを有するＦｃドメインを含む。例えば、一実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、２つのＦｃモノマーを有するＦｃドメインを含む。２つのＦｃモノマーは別々のポリペプチド鎖上に存在し、会合して、例えば、非共有相互作用及び／又はジスルフィド結合を介して（例えば、Ｆｃモノマーのヒンジ領域中のシステイン残基間で）、二量体を形成し得る。別の実施形態では、２つのＦｃモノマーは、ペプチドリンカー、好ましくはＦｃモノマーが会合して鎖内二量体を形成することを可能にするのに十分な長さのリンカーを介して互いに融合される。単一のポリペプチド鎖を形成するための２つのＦｃモノマーの融合は、本明細書では単鎖Ｆｃドメイン（ｓｃＦｃドメイン）と称し、以下でより詳細に説明する。

【0092】

Ｆｃモノマーが互いに融合して単鎖Ｆｃドメインを形成するペプチドリンカーは、好ましくは、少なくとも２５個のアミノ酸残基（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０個又はそれを超える）を含む。より好ましくは、このペプチドリンカーは、少なくとも３０アミノ酸残基（３０、３１、３２、３３、３４、３５個又はそれを超える）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大４０個のアミノ酸残基、より好ましくは最大３５個のアミノ酸残基、より一層好ましくは３０個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、グリシン－セリン残基、例えば、アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１１２）の反復を含む。そのような実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｘを含み、ここで、ｘは、５以上の整数（例えば、６、７又は８）である。好ましくは、整数は、６又は７であり、より好ましくは、整数は、６である。１つの特定の実施形態では、２つのＦｃモノマーを連結して単鎖Ｆｃドメインを形成するために使用されるペプチドリンカーは、配列番号１２２の配列を含む。

【0093】

Ｆｃモノマーは、例えば、エフェクター機能を調節するか、グリコシル化を変更するか又は安定性を増強するために、天然のＣＨ２又はＣＨ３の免疫グロブリンアミノ酸配列と比較して１つ又は複数のアミノ酸置換を含有し得る。例えば、一実施形態では、ＥＵ番号付けによるアミノ酸２９７位のＣＨ２ドメインのグリコシル化部位が、この位置のアスパラギン残基を異なるアミノ酸に置換することによって除かれる。いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ置換が好ましい。安定性増強変異は、ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン中の１つ又は複数のアミノ酸をシステイン残基で置換して、ジスルフィド結合形成を促進することを含む。好ましくは、残基の特定の対は、互いにジスルフィド結合を優先的に形成するようにシステインで置換され、このため、ジスルフィド結合のスクランブルが制限又は防止される。好ましい対としては、以下に限定されないが、Ａ２８７Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｖ２５９Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ並びにＶ３２３Ｃ及びＩ３３２Ｃが挙げられる（これらのアミノ酸位置は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされている）。１つの特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＦｃドメインに組み込まれるＦｃモノマーは、Ｎ２９７Ｇ、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ置換を含む（これらのアミノ酸位置は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされている）。

【0094】

特定の実施形態では、本発明の方法に使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、単鎖ＦｃドメインであるＦｃドメインを含む。したがって、特定のそのような実施形態では、Ｆｃドメインは、２つのＦｃモノマーを含み、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリンＣＨ２ドメイン及び免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含み、２つのＦｃモノマーは、本明細書に記載されるペプチドリンカーを介して互いに融合されている。Ｆｃモノマーの例示的なアミノ酸配列を配列番号１３２～１３９に示し、単鎖Ｆｃ（ｓｃＦｃ）ドメインの例示的なアミノ酸配列を配列番号１４０～１４８に示す。いくつか実施形態では、ＦｃドメインのＦｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３２～１３９から選択される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ＦｃドメインのＦｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３２～１３９から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態では、ＦｃドメインのＦｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。別の好ましい実施形態では、ＦｃドメインのＦｃモノマーのそれぞれは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。

【0095】

本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子のＦｃドメインは、配列番号１４０～１４８に示されるｓｃＦｃドメインのいずれかの配列又はこれらのｓｃＦｃドメインのバリアントを含み得る。一実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１４０～１４８から選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＦｃドメインを含む。別の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１４０～１４８から選択されるアミノ酸配列を含むＦｃドメインを含む。好ましい実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＦｃドメインを含む。別の好ましい実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＦｃドメインを含む。さらに別の好ましい実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＦｃドメインを含む。

【0096】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）第１の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ１）及び第１の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ１）を含む、標的癌細胞抗原（例えば、ヒト癌細胞抗原）に特異的に結合する第１のドメイン、
（ｉｉ）第２の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ２）及び第２の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ２）を含む、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する第２のドメイン、及び
（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含むＦｃドメイン
を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含むＶＨ１並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含むＶＬ１を含む標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン（ここで、
（ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号１、２及び３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号５、６及び７の配列を有するか、
（ｂ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号１１、１２及び１３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号１５、１６及び１７の配列を有するか、
（ｃ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号２１、２２及び２３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号２５、２６及び２７の配列を有するか、
（ｄ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号３１、３２及び３３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号３５、３６及び３７の配列を有するか、
（ｅ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号４１、４２及び４３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号４５、４６及び４７の配列を有するか、
（ｆ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号５１、５２及び５３の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号５５、５６及び５７の配列を有するか、
（ｇ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号１４９、１５０及び１５１の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６の配列を有するか、又は
（ｈ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、それぞれ配列番号１６２、１６３及び１６４の配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号１６６、１６７及び１６８の配列を有する）、
（ｉｉ）配列番号６５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＨ２及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＨ３を含むＶＨ２と、配列番号８７の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ２及び配列番号８８の配列を有するＣＤＲＬ３を含むＶＬ２とを含む、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン、及び
（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含むＦｃドメインであって、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、前記２つのモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている、Ｆｃドメイン
を含む。

【0098】

関連する実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）ＶＨ１及びＶＬ１を含む標的癌細胞抗原に特異的に結合する第１のドメイン（ここで、
（ａ）ＶＨ１は、配列番号４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号８の配列を含むか、
（ｂ）ＶＨ１は、配列番号１４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号１８の配列を含むか、
（ｃ）ＶＨ１は、配列番号２４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号２８の配列を含むか、
（ｄ）ＶＨ１は、配列番号３４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号３８の配列を含むか、
（ｅ）ＶＨ１は、配列番号４４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号４８の配列を含むか、
（ｆ）ＶＨ１は、配列番号５４の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号５８の配列を含むか、
（ｇ）ＶＨ１は、配列番号１５２の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号１５７の配列を含むか、
（ｈ）ＶＨ１は、配列番号１５３の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号１５７の配列を含むか、又は
（ｉ）ＶＨ１は、配列番号１６５の配列を含み、及びＶＬ１は、配列番号１６９の配列を含む）、
（ｉｉ）配列番号９０の配列を含むＶＨ２及び配列番号１００の配列を含むＶＬ２を含む、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２のドメイン、及び
（ｉｉｉ）２つのＦｃモノマーを含むＦｃドメインであって、各モノマーは、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、前記２つのモノマーは、ペプチドリンカーを介して互いに融合されている、Ｆｃドメイン
を含む。

【0099】

特定の実施形態では、本明細書に記載されるものなどのペプチドリンカーは、第１のドメインを第２のドメインに、且つ／又は第２のドメインをＦｃドメインに接続する。したがって、いくつかの実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）標的癌細胞抗原（例えば、ヒト癌細胞抗原）に特異的に結合する第１のドメイン、
（ｉｉ）配列番号１１２、１１５、１１８及び１１９から選択されるアミノ酸配列を有する第１のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する第２のドメイン、
（ｉｖ）配列番号１１１、１１５、１１８及び１１９から選択されるアミノ酸配列を有する第２のペプチドリンカー、
（ｖ）第１のＦｃモノマー、
（ｖｉ）配列番号１２１～１２４から選択されるアミノ酸配列を有する第３のペプチドリンカー、及び
（ｖｉｉ）第２のＦｃモノマー
を含む。

【0100】

他の実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１７０から選択されるアミノ酸配列を有する第１のドメイン（例えば、抗癌細胞抗原結合ドメイン）、
（ｉｉ）配列番号１１２、１１５、１１８及び１１９から選択されるアミノ酸配列を有する第１のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号１０１～１１０から選択されるアミノ酸配列を有する第２のドメイン（例えば、抗ＣＤ３結合ドメイン）、
（ｉｖ）配列番号１１１、１１５、１１８及び１１９から選択されるアミノ酸配列を有する第２のペプチドリンカー、
（ｖ）配列番号１３２～１３９から選択されるアミノ酸配列を有する第１のＦｃモノマー、
（ｖｉ）配列番号１２１～１２４から選択されるアミノ酸配列を有する第３のペプチドリンカー、及び
（ｖｉｉ）配列番号１３２～１３９から選択されるアミノ酸配列を有する第２のＦｃモノマー
を含む。

【0101】

いくつかの実施形態では、本発明による二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、アミノからカルボキシルの順に、
（ｉ）配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３９、配列番号４９、配列番号５９、配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１７０から選択されるアミノ酸配列を有する第１のドメイン（例えば、抗癌細胞抗原結合ドメイン）、
（ｉｉ）配列番号１１２又は配列番号１１５のアミノ酸配列を有する第１のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を有する第２のドメイン（例えば、抗ＣＤ３結合ドメイン）、
（ｉｖ）配列番号１１１又は配列番号１１２のアミノ酸配列を有する第２のペプチドリンカー、
（ｖ）配列番号１３２のアミノ酸配列を有する第１のＦｃモノマー、
（ｖｉ）配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列を有する第３のペプチドリンカー、及び
（ｖｉｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を有する第２のＦｃモノマー
を含む。

【0102】

特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、単鎖ポリペプチド又は単鎖融合タンパク質である。本明細書で使用される場合、「単鎖ポリペプチド」又は「単鎖融合タンパク質」は、ただ１つのポリペプチド鎖からなる分子を指す。すなわち、二重特異性Ｔ細胞誘導分子中のドメインの全てが任意選択によりペプチドリンカーを介して連結されて、単一のポリペプチド鎖を形成している。本発明に関連して、そのような単鎖ポリペプチド又は単鎖融合タンパク質の一例は、アミノからカルボキシルの順に、抗癌細胞抗原ｓｃＦｖドメイン、第１のペプチドリンカー、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖドメイン、第２のペプチドリンカー及びｓｃＦｃドメインを含む単鎖ポリペプチドである。本発明の方法で使用され得る例示的な二重特異性単鎖ポリペプチド又は単鎖融合タンパク質は、配列番号１０、配列番号２０、配列番号３０、配列番号４０、配列番号５０、配列番号６０、配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１７１に記載される。本発明の方法における使用に適した他の二重特異性単鎖ポリペプチド又は単鎖融合タンパク質は、国際公開第２０１７／０２１３６２号パンフレット、国際公開第２０１７／０２１３４９号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１３４号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１４０号パンフレット、国際公開第２０１７／１３４１５８号パンフレット、国際公開第２０１９／１３３９６１号パンフレット及び国際公開第２０２０／０２５７９２号パンフレットに記載されており、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0103】

いくつかの態様では、本発明の方法により患者に投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１０、配列番号２０、配列番号３０、配列番号４０、配列番号５０、配列番号６０、配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１７１から選択されるアミノ酸配列又はこれらの配列の１つのバリアントを含む。例えば、本発明の方法において用いられる二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１０、配列番号２０、配列番号３０、配列番号４０、配列番号５０、配列番号６０、配列番号１６０、配列番号１６１又は配列番号１７１のいずれかと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る。いくつかのそのような実施形態では、配列変化は、ペプチドリンカー領域及び／又は単鎖Ｆｃドメインにおいて生じる。

【0104】

一実施形態では、本発明の方法により治療される患者は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は急性リンパ芽球性白血病などの白血病又はリンパ腫と診断されるか又はそれらを有し、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはＣＤ１９に特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ１９結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、白血病又はリンパ腫と診断されるか又はそれらを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0105】

別の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、骨髄性白血病、特に急性骨髄性白血病と診断されており、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはＣＤ３３又はＦＬＴ３に特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ３３結合ドメイン又は抗ＦＬＴ３結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、骨髄性白血病と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号２０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。他の実施形態では、骨髄性白血病と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号３０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0106】

さらに別の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、小細胞肺癌、神経内分泌前立腺癌、黒色腫又は神経膠芽腫などのＤＬＬ３発現癌と診断されるか又はそれらを有し、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインは、ＤＬＬ３に特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＤＬＬ３結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、ＤＬＬ３発現癌（例えば、小細胞肺癌）と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号４０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0107】

特定の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、多発性骨髄腫と診断されるか又はそれを有し、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、多発性骨髄腫と診断されるか又はそれらを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号５０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0108】

特定の他の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、精巣癌、結腸癌、グリア芽腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌又は黒色腫などのＰＳＭＡ発現癌と診断されるか又はそれを有し、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはＰＳＭＡに特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、ＰＳＭＡ発現癌（例えば、前立腺癌）と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号６０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0109】

いくつかの実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌及び消化器癌、特に胃癌、食道癌及び胃食道接合部癌などのＣＬＤＮ１８．２発現癌と診断され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２発現癌（例えば、消化器癌）と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１６０の配列を含む単鎖ポリペプチドである。他の実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２発現癌（例えば、消化器癌）と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１６１の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0110】

他の実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、結腸直腸癌、膵臓癌及び消化器癌、特に胃癌及び胃食道接合部癌などのＭＵＣ１７発現癌と診断され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の抗癌細胞抗原結合ドメインはＭＵＣ１７に特異的に結合する。本明細書に記載の抗ＭＵＣ１７結合ドメインを含む二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを本発明の方法に従ってそのような患者に投与することができる。特定の実施形態では、ＭＵＣ１７発現癌（例えば、消化器癌）と診断されるか又はそれを有する患者に本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号１７１の配列を含む単鎖ポリペプチドである。

【0111】

本発明の方法で使用するための二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、多くの従来の手法のいずれかによって調製することができる。例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、当技術分野で知られる任意の手法を用いて組換え発現系によって生成し得る。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｋｅｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）；及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）を参照されたい。

【0112】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子又はその構成要素（例えば、Ｆｖ断片、Ｆｃモノマー）は、ハイブリドーマ細胞株又はハイブリドーマ以外の細胞株において発現させることができる。抗体をコードする発現ベクター又は発現コンストラクトは、哺乳類宿主細胞、昆虫宿主細胞又は微生物宿主細胞の形質転換に使用することができる。「ベクター」という用語は、タンパク質コード情報を宿主細胞に移入するために使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ又はウイルス）を指す。ベクターの例としては、以下に限定されないが、プラスミド、ウイルスベクター、非エピソーム哺乳動物ベクター及び発現ベクター、例えば、組換え発現ベクターが挙げられる。「発現ベクター」又は「発現コンストラクト」という用語は、本明細書で使用される場合、所望のコード配列と、特定の宿主細胞中において、作動可能に連結されたこのコード配列の発現に必要となる適切な核酸制御配列とを含む組換え核酸分子を指す。発現ベクターは、転写、翻訳に影響を及ぼすか又はこれらを制御する配列及びイントロンが存在する場合、それに作動可能に連結されたコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列を含み得るが、これらに限定されない。原核生物での発現に必要な核酸配列には、プロモーター、任意選択によりオペレーター配列、リボソーム結合部位及び場合により他の配列が含まれる。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー並びに終結シグナル及びポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。分泌シグナルペプチド配列も任意選択により発現ベクターによってコードされ、目的のコード配列に作動可能に連結されることが可能であり、これにより、必要に応じて、細胞から目的のポリペプチドがより容易に単離されるように、組換え宿主細胞に発現ポリペプチドを分泌させることができる。

【0113】

組換え発現ベクター又はコンストラクトは、一般に、以下の１つ以上を含むポリペプチドをコードする核酸分子を含む：本明細書に提供される１つ以上のＣＤＲ、軽鎖定常領域、軽鎖可変領域、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３）、重鎖可変領域、ヒンジ領域、Ｆｃドメイン及び／又は癌細胞抗原若しくは抗ＣＤ３抗体に特異的に結合する抗体の別の足場部分。これらの核酸配列は、標準的なライゲーション手法を使用して適切な発現ベクターに挿入される。二重特異性Ｔ細胞誘導分子が単鎖ポリペプチド又は単鎖融合タンパク質である実施形態では、組換え発現ベクターに含まれる核酸が完全長単鎖ポリペプチド（例えば、完全長単鎖融合タンパク質）を通常コードする。ベクターは、通常、用いられる特定の宿主細胞において機能的であるように選択される（すなわち、ベクターは、宿主の細胞機構と適合し、遺伝子の増幅及び／又は発現を可能にし得る）。いくつかの実施形態では、ジヒドロ葉酸還元酵素などのタンパク質レポーターを使用するタンパク質間相互作用検出法を使用するベクターが使用される（例えば、米国特許第６，２７０，９６４号明細書（これは、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。好適な発現ベクターは、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ又はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（以前は「Ｃｌｏｎｔｅｃｈ」）から購入することができる。抗体及び断片のクローニング及び発現のための他の有用なベクターとしては、Ｂｉａｎｃｈｉ ａｎｄ ＭｃＧｒｅｗ，２００３，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８４：４３９－４４（これは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。追加の好適な発現ベクターは、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，ｖｏｌ．１８５（Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ．），１９９０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓにおいて論じられている。

【0114】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子を産生するために宿主細胞のいずれかにおいて使用される発現ベクターは、通常、二重特異性Ｔ細胞誘導分子又はその構成要素をコードする外因性ヌクレオチド配列のクローニング及び発現のための配列を含有する。集合的に「隣接配列」と呼ばれるこのような配列は、特定の実施形態において、典型的には、以下のヌクレオチド配列の１つ又は複数を含む：プロモーター、１つ又は複数のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及びアクセプタースプライス部位を含有する完全イントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるべきポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域並びに選択マーカーエレメント。

【0115】

任意選択により、ベクターは、「タグ」をコードする配列、すなわち二重特異性Ｔ細胞誘導分子をコードする配列の５’末端又は３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含み得、こうしたオリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（ヘキサＨｉｓなど）をコードするか、又は市販の抗体が存在する、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡ（インフルエンザウイルスのヘマグルチニン）若しくはｍｙｃなどの別の「タグ」をコードする。このタグは、通常、ポリペプチドが発現すると、ポリペプチドに融合し、宿主細胞からの二重特異性Ｔ細胞誘導分子の親和性精製又は検出のための手段として機能することができる。親和性精製は、例えば、タグに対する抗体を親和性マトリックスとして使用するカラムクロマトグラフィーによって実現することができる。その後、任意選択で、切断のために特定のペプチダーゼを使用するなど、様々な手段によって精製Ｔ細胞誘導分子からタグを除去することができる。

【0116】

発現ベクター及びクローニングベクターは、典型的には、宿主細胞により認識され且つ二重特異性Ｔ細胞誘導分子をコードする核酸分子に作動可能に連結されているプロモーターを含有する。「作動可能に連結された」という用語は、本明細書で使用される場合、所与の遺伝子の転写及び／又は所望のタンパク質分子の合成を指令することができる核酸分子が産生されるように、２つ以上の核酸配列が連結されていることを指す。例えば、タンパク質コード配列に「作動可能に連結された」ベクター中の制御配列は、タンパク質コード配列の発現が制御配列の転写活性と適合する条件下で行われるように、タンパク質コード配列にライゲートされる。より具体的には、プロモーター及び／又はエンハンサー配列（シス作用性転写制御エレメントの任意の組み合わせを含む）は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系においてコード配列の転写を刺激又は調節する場合、そのコード配列に作動可能に連結されている。種々の潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが当業者によく知られている。哺乳動物宿主細胞と共に使用するのに好適なプロモーターとしては、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２型など）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから得られるものが挙げられる。好適なプロモーターは、制限酵素消化によって供給源の核酸からプロモーターを取り出し、ベクターに所望のプロモーター配列を挿入することにより、例えば二重特異性Ｔ細胞誘導分子又はその構成要素をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結される。

【0117】

本明細書に記載される二重特異性Ｔ細胞誘導分子の組換え産生のための発現ベクターは、市販のベクターなどの出発ベクターから構築し得る。そのようなベクターは、所望の隣接配列の全てを含有しても又はしなくてもよい。所望の隣接配列の１つ又は複数がベクター内に最初から存在していない場合、それらを個々に得てベクター中にライゲートし得る。隣接配列のそれぞれを得るために使用される方法は、当業者に知られている。発現ベクターを宿主細胞に導入し、それによりこのベクター内に存在する核酸によってコードされる二重特異性Ｔ細胞誘導分子を産生させることができる。

【0118】

ベクターが構築され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子又はその構成要素をコードする１つ以上の核酸分子がベクターの適当な部位に挿入された後、完成したベクターは、増幅及び／又はポリペプチド発現に好適な宿主細胞に挿入され得る。「宿主細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸で形質転換されているか又は形質転換され得、それにより目的の遺伝子を発現する細胞を指す。この用語には、目的の遺伝子が存在する限り、親細胞の子孫の形態又は遺伝的構造が元の親細胞と同一であるか否かにかかわらず、親細胞の子孫が含まれる。好ましくは少なくとも１つの発現制御配列（例えば、プロモーター又はエンハンサー）に作動可能に連結された二重特異性Ｔ細胞誘導分子をコードする単離ポリヌクレオチド又は単離核酸を含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」である。

【0119】

選択された宿主細胞へのポリペプチドのための発現ベクターの形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈、エレクトロポレーション、微量注入、リポフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション又は他の既知の手法を含む、よく知られた方法によって行われ得る。選択される方法は、ある程度、使用される宿主細胞の型に応じる。

【0120】

宿主細胞は、適切な条件下で培養されると二重特異性Ｔ細胞誘導分子を合成し、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、その後、（宿主細胞がそれを培地に分泌する場合には）培養培地又は（それが分泌されない場合には）それを産生する宿主細胞から直接採取することができる。適切な宿主細胞の選択は、所望の発現レベル、活性（グリコシル化又はリン酸化など）に望ましいか又は必要であるポリペプチドの修飾及び生物学的に活性な分子へのフォールディングの容易さなどの様々な要因に依存する。好適な宿主細胞としては、以下に限定はされないが、原核細胞（例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））、酵母細胞（サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｍｏｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ））及び哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ））が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、二重特異性抗原結合タンパク質を発現するのに好ましい宿主細胞である。

【0121】

宿主細胞は二重特異性Ｔ細胞誘導分子の産生のために上記の発現ベクターで形質転換又はトランスフェクトされ、プロモーターの誘導、形質転換体の選択又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地中で培養される。抗体コンストラクトを産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４，１９７９；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５，１９８０；米国特許第４，７６７，７０４号明細書；同第４，６５７，８６６号明細書；同第４，９２７，７６２号明細書；同第４，５６０，６５５号明細書；若しくは同第５，１２２，４６９号明細書；国際公開第９０／０３４３０号パンフレット；又は国際公開第８７／００１９５号パンフレットに記載される培地のいずれかは、宿主細胞のための培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれかは、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の増殖因子（インスリン、トランスフェリン又は上皮増殖因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ^ＴＭ薬剤など）、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）並びにグルコース又は同等のエネルギー源を補充することができる。他に必要な任意の栄養補助物質も、当業者に知られた適切な濃度で含まれ得る。温度及びｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者に明らかであろう。

【0122】

宿主細胞を培養すると、Ｔ細胞誘導分子は、細胞内、細胞膜周辺腔内で産生されるか又は培地中に直接分泌され得る。Ｔ細胞誘導分子が細胞内で産生される場合、第１の工程として、宿主細胞が溶解され（例えば、機械的剪断、浸透圧ショック又は酵素的方法により）、粒状の細片（例えば、宿主細胞及び溶解断片）が、例えば、遠心分離、精密濾過又は限外濾過によって除去される。Ｔ細胞誘導分子が培養培地に分泌される場合、Ｔ細胞誘導分子は遠心分離又は精密濾過により宿主細胞から分離され得、任意選択により、その後、限外濾過により濃縮され得る。二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、例えば、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ、プロテインＬ又はプロテインＧ親和性クロマトグラフィー）、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー又は混合形式のクロマトグラフィーなどの１種以上のクロマトグラフィー工程を使用してさらに精製又は部分的に精製され得る。

【0123】

本発明の方法による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与は、それを必要とする患者における癌の治療のためである。本明細書で使用される「治療」又は「治療する」という用語は、癌を有するか若しくは癌と診断されているか、癌の症状を有するか、癌を発症するリスクがあるか又は癌の素因がある患者に対して、癌、癌の１つ又は複数の症状、癌を発症するリスク又は癌に対する素因を軽快、治癒、軽減、緩和、変更、寛解又は改善する目的で二重特異性Ｔ細胞誘導分子を適用又は投与することを指す。「治療」という用語は、患者における癌の進行の遅延若しくは停止、癌の症状の数若しくは重症度の低減又は患者が癌の症状を有さない期間の頻度若しくは長さの増加を含む、患者における疾患の任意の改善を包含する。「患者」という用語には、ヒト患者が含まれる。

【0124】

「癌」という用語は、細胞の異常な制御されない増殖によって引き起こされる様々な病態を指し、新生物、原発性腫瘍、続発性腫瘍及び他の転移性病変を含む。癌は、以下に限定されないが、臨床的又は放射線学的手段によって検出される組織内の腫瘍の存在、生物学的試料（例えば、組織生検）中の癌性若しくは異常な細胞の検出、癌又は前癌状態を示すバイオマーカーの検出又は癌若しくは癌を発症するリスクを示す遺伝子型の検出を含む多くの方法で検出することができる。「癌」という用語には、病期、グレード、侵襲性、攻撃性又は組織型にかかわらず、様々な癌状態が包含される。本発明の方法により治療され得る癌としては、以下に限定されないが、白血病（例えば、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病）、リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型リンパ腫、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫）、多発性骨髄腫、肺癌（例えば、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、神経膠腫、グリア芽腫、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性前立腺癌、神経内分泌前立腺癌）、膵臓癌、乳癌、骨癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、卵巣癌、胃癌、胃食道接合部癌、精巣癌、甲状腺癌、副腎癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮癌、食道癌、尿路上皮癌、上皮性悪性腫瘍及び非上皮性悪性腫瘍並びにこれらのいずれかに由来する転移癌が挙げられる。

【0125】

特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ＰＳＭＡ及びＣＤ３に特異的に結合し、本発明の方法に従い、前立腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、精巣癌、結腸癌、グリア芽腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌及び黒色腫などのＰＳＭＡ発現癌を有するか又はそれと診断された患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＳＭＡ発現癌は、前立腺癌である。前立腺癌は、去勢抵抗性前立腺癌（アンドロゲン遮断療法に抵抗性がある前立腺癌）であり得る。これらの実施形態及び他の実施形態では、前立腺癌は、転移性前立腺癌、特に転移性去勢抵抗性前立腺癌である。

【0126】

ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子（例えば、配列番号６０の配列を含む単鎖ポリペプチド）が、前立腺癌又は他のＰＳＭＡ発現癌の治療を必要とする患者に投与される実施形態において、本方法は、約３０μｇ～約３００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日間又は約３日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、約９０μｇ～約１８００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約５日又は約６日後に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約３０μｇ～約１５０μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、約３００μｇ～約６００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約５日後に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。他の実施形態では、方法は、約５０μｇ～約２５０μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を投与すること、約３００μｇ～約９００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約３日後に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。前述の実施形態のいずれかにおいて、方法は、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを患者に投与することをさらに含み得、維持サイクルは、治療用量のＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子をボーラス静脈内注入によって１４日に１回投与することを含む。

【0127】

１つの特定の実施形態では、方法は、前立腺癌又は他のＰＳＭＡ発現癌の治療を必要とする患者に、約９０μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたる持続静脈内注入によって（例えば、１日当たり３０μｇを３日間）投与することと、約３００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約５日後に投与される、開始サイクルを投与することとを含む。いくつかの実施形態では、治療用量（例えば、３００μｇ）は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回投与される。したがって、この投与レジメンによれば、２８日の持続期間を有する開始サイクルにおいて、患者は、サイクルの１～３日目にわたる持続静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の９０μｇのプライミング用量を投与され（例えば、１日当たり３０μｇの一定速度で３日間）、サイクルの８日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の３００μｇの治療用量を投与される。

【0128】

別の特定の実施形態では、方法は、前立腺癌又は他のＰＳＭＡ発現癌の治療を必要とする患者に、約１５０μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約３日の期間にわたる持続静脈内注入によって（例えば、１日当たり５０μｇを３日間）投与することと、約３００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量はプライミング用量の投与の約５日後に投与される、開始サイクルを投与することを含む。このような実施形態では、治療用量（例えば、３００μｇ）は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回投与される。したがって、この投与レジメンによれば、２８日の持続期間を有する開始サイクルにおいて、患者はサイクルの１～３日目にわたる持続静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１５０μｇのプライミング用量を投与され（例えば、１日当たり５０μｇの一定速度で３日間）、サイクルの８日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の３００μｇの治療用量を投与される。

【0129】

別の実施形態では、方法は、前立腺癌又は他のＰＳＭＡ発現癌の治療を必要とする患者に、約１５０μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約５日の期間にわたる持続静脈内注入によって（例えば、１日当たり３０μｇを５日間）投与することと、約３００μｇのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約３日後に投与される、開始サイクルを投与することを含む。このような実施形態では、治療用量（例えば、３００μｇ）は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって１４日に１回投与される。したがって、この投与レジメンによれば、２８日の持続期間を有する開始サイクルにおいて、患者はサイクルの１～５日目にわたる持続静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１５０μｇのプライミング用量を投与され（例えば、１日当たり３０μｇの一定速度で５日間）、サイクルの８日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によってＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の３００μｇの治療用量を投与される。

【0130】

ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子が患者に投与される前述の実施形態のいずれかにおいて、方法は維持サイクルを投与することをさらに含み得、この維持サイクルは治療用量（例えば、３００μｇ）のＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子を１４日に１回、例えば、維持サイクルの１日目及び１５日目にボーラス静脈内注入によって投与することを含む。開始サイクルの持続期間に応じて、開始サイクルで治療用量に達した後、治療用量の２週に１回の投与頻度を維持するため、開始サイクルの完了と維持サイクルの開始との間に無治療期間を存在させることができる。１つのそのような例示的な投与スケジュールは、１～３日目にわたる持続静脈内注入によるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量（例えば、９０μｇ又は１５０μｇ）の投与並びに２８日間の開始サイクルの８日目及び２２日目のボーラス静脈内注入による治療用量（例えば、３００μｇ）の投与、それに続く７日間の無治療期間、それに続く２８日間の維持サイクルの１日目及び１５日目のボーラス静脈内注入によるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量（例えば、３００μｇ）の投与を含み得る。したがって、この投与レジメンによれば、２８日間の開始サイクル及び２８日間の維持サイクルの両方を包含し、開始サイクルの初回用量から始まる５６日間、患者は、１～３日目、８日目、２２日目、３６日目及び５０日目のそれぞれにＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与される。別の例示的な投与スケジュールは、１～５日目にわたる持続静脈内注入によるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量（例えば、１５０μｇ）の投与並びに２８日間の開始サイクルの８日目及び２２日目のボーラス静脈内注入による治療用量（例えば、３００μｇ）の投与、それに続く７日間の無治療期間、それに続く２８日間の維持サイクルの１日目及び１５日目のボーラス静脈内注入によるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量（例えば、３００μｇ）の投与を含み得る。したがって、この投与レジメンによれば、２８日間の開始サイクル及び２８日間の維持サイクルの両方を包含し、開始サイクルの初回用量から始まる５６日間、患者は、１～５日目、８日目、２２日目、３６日目及び５０日目のそれぞれにＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与される。

【0131】

特定の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、ＢＣＭＡ及びＣＤ３に特異的に結合し、本発明の方法に従い、多発性骨髄腫、重鎖多発性骨髄腫、軽鎖多発性骨髄腫、髄外骨髄腫（髄外形質細胞腫、髄外多発性骨髄腫）、形質細胞腫、形質細胞白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）及びくすぶり型骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫）などのＢＣＭＡ陽性癌を有するか又はそれと診断された患者に投与される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ陽性癌は、多発性骨髄腫である。多発性骨髄腫は、難治性及び／又は再発性多発性骨髄腫であり得る。

【0132】

ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子（例えば、配列番号５０の配列を含む単鎖ポリペプチド）が、多発性骨髄腫又は他のＢＣＭＡ陽性癌の治療を必要とする患者に投与されるいくつかの実施形態において、本方法は、約８，４００μｇ～約１６，１００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約１日後（例えば、翌日）に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。約８，４００μｇ～約１６，１００μｇのプライミング用量は、注入期間の完了までに投与される総用量であり、開始サイクルの１～７日目のそれぞれに投与される、例えば約１，２００μｇ／日～約２，３００μｇ／日の７つの個々の用量に言い換えることができる。他の実施形態では、方法は、約４，６００μｇ～約９，２００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約６日後に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。約４，６００μｇ～約９，２００μｇのプライミング用量は、注入期間の完了までに投与される総用量であり、開始サイクルの１日目及び２日目のそれぞれに投与される、例えば約２，３００μｇ／日～約４，６００μｇ／日の２つの個々の用量に言い換えることができる。いくつかのそのような実施形態において、開始サイクルは、約８００μｇ～約１，６００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量をプライミング用量の約１日後（例えば、翌日）且つ治療用量の約５日前にボーラス静脈内注入によって投与することをさらに含み得る。前述の実施形態のいずれかにおいて、方法は、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の維持サイクルを患者に投与することをさらに含み得、維持サイクルは治療用量のＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子をボーラス静脈内注入によって７日に１回投与することを含む。

【0133】

１つの特定の実施形態では、方法は、多発性骨髄腫又は他のＢＣＭＡ陽性癌の治療を必要とする患者に、約８，４００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと（例えば、１日当たり１，２００μｇを７日間）、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約１日後（例えば、翌日）に投与される、開始サイクルを患者に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、約１６，１００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約７日の期間にわたる持続静脈内注入によって投与することと（例えば、１日当たり２，３００μｇを７日間）、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約１日後（例えば、翌日）に投与される、開始サイクルを投与することを含む。前述の実施形態のいずれかにおいて、治療用量は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回投与され得る。したがって、そのような投与レジメンによれば、２８日の持続期間を有する開始サイクルにおいて、患者はサイクルの１～７日目にわたる持続静脈内注入によってＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量（例えば、８，４００μｇ又は１６，１００μｇ）を投与され（例えば、８，４００μｇのプライミング用量では１日当たり１，２００μｇの一定速度で７日間又は１６，１００μｇのプライミング用量では１日当たり２，３００μｇの一定速度で７日間）、サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によってＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与される。

【0134】

別の特定の実施形態では、方法は、多発性骨髄腫又は他のＢＣＭＡ陽性癌の治療を必要とする患者に、約４，６００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日の期間にわたる持続静脈内注入によって（例えば、１日当たり２，３００μｇを２日間）投与することと、約８００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量をボーラス静脈内注入によって投与することと、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約６日後に投与され、ブースト用量は、プライミング用量の約１日後（例えば、翌日）で治療用量の約５日前に投与される、開始サイクルを投与することを含む。別の実施形態では、方法は、約９，２００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量を約２日の期間にわたる持続静脈内注入によって（例えば、１日当たり４，６００μｇを２日間）投与することと、約１，６００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量をボーラス静脈内注入によって投与することと、約１２，０００μｇ～約１９，５００μｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量をボーラス静脈内注入によって投与することとを含み、治療用量は、プライミング用量の投与の約６日後に投与され、ブースト用量は、プライミング用量の約１日後（例えば、翌日）で治療用量の約５日前に投与される、開始サイクルを投与することを含む。前述の実施形態のいずれかにおいて、治療用量は、その後、開始サイクルの持続期間にわたって７日に１回投与され得る。したがって、これらの実施形態における投与レジメンによれば、２８日の持続期間を有する開始サイクルにおいて、患者はサイクルの１～２日間にわたる持続静脈内注入によってＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量（例えば、４，６００μｇ又は９，２００μｇ）を投与され（例えば、４，６００μｇのプライミング用量では１日当たり２，３００μｇの一定速度で２日間又は９，２００μｇのプライミング用量では１日当たり４，６００μｇの一定速度で２日間）、サイクルの３日目にボーラス静脈内注入によってＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量（例えば、８００μｇ又は１，６００μｇ）を投与され、サイクルの８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によってＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与される。

【0135】

ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子が患者に投与される前述の実施形態のいずれかにおいて、方法は維持サイクルを投与することをさらに含み得、この維持サイクルは治療用量のＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子を７日に１回、例えば、維持サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目にボーラス静脈内注入によって投与することを含む。開始サイクルの持続期間に応じて、開始サイクルで治療用量に達した後、治療用量の週１回の投与頻度を維持するため、開始サイクルの完了と維持サイクルの開始との間の無治療期間をなくすことができる。したがって、特定の実施形態では、維持サイクルは開始サイクルを完了した翌日に投与される。１つのそのような例示的な投与スケジュールは、１～７日目にわたる持続静脈内注入によるＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量の投与並びに２８日間の開始サイクルの８日目、１５日目及び２２日目のボーラス静脈内注入による治療用量の投与、それに続く２８日間の維持サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目のボーラス静脈内注入によるＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子の治療用量の投与を含み得る。したがって、この投与レジメンによれば、２８日間の開始サイクル及び２８日間の維持サイクルの両方を包含し、開始サイクルの初回用量から始まる５６日間、患者は、１～７日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目及び５０日目のそれぞれにＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子を投与される。

【0136】

本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量の投与前に１つ又は複数の前投与を患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、前投与は、開始サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の投与前に患者に投与される。前投与は、１つ以上の維持サイクルにおいて、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１つ以上の用量の投与前にも患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、前投与は、開始サイクル中の１つ以上の用量の投与前にのみ患者に投与され、その後の治療サイクル（例えば、維持サイクル）では二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量の投与前に患者に投与されない。代替の実施形態では、前投与は、開始サイクル中の１つ以上の用量の投与前に患者に投与されるが、その後の治療サイクル（例えば、維持サイクル）において二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量の投与前に患者に投与される用量は、より低い用量（例えば、開始サイクルで使用される前投与用量の５０％）である。この特定の文脈において、「～の前」とは、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与開始前の７２時間、４８時間、３６時間、２４時間、１８時間、１６時間、１２時間、６時間、５時間、４時間又は３時間以内、好ましくは１２０分、９０分、６０分又は３０分以内を意味することが想定される。使用する前投与のタイプ及びそれが投与される経路に応じて、前投与は、例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与開始の３０～１２０分又は３０～６０分前に投与され得る。前投与は、例えば、注入に関連する反応の重症度を予防若しくは軽減し、且つ／又はサイトカイン放出症候群若しくはその症状の重症度を予防若しくは軽減するために投与され得る。特定の実施形態では、前投与は、開始サイクルの二重特異性Ｔ細胞誘導分子の用量前に投与されないか、又は注入反応若しくはＣＲＳ症状を軽減するために一般に必要とされる用量よりも低い用量で投与される。理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載される投与レジメンによる持続注入に従う開始サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量の投与は、前投与がもはや必要でなくなり得るほどにＣＲＳ事象を低減すると考えられる。

【0137】

前投与が投与されるいくつかの実施形態では、前投与は抗ヒスタミン剤である。抗ヒスタミン剤は、経口又は静脈内投与され、ジフェンヒドラミン５０ｍｇをｉ．ｖ．投与するのと同等の用量で投与される。前投与として投与することができる好適な抗ヒスタミン剤にとしては、アザタジン（最大用量、例えば４ｍｇ／日）、ブロムフェニラミン（最大用量、例えば３０ｍｇ／日）、セチリジン（最大用量、例えば１５ｍｇ／日）、クロルフェニラミン（最大用量、例えば３０ｍｇ／日）、クレマスチン（最大用量、例えば１０ｍｇ／日）、シプロヘプタジン（最大用量、例えば１５ｍｇ／日）、デスロラタジン（最大用量、例えば７ｍｇ／日）、デキスクロルフェニラミン（最大用量、例えば１５ｍｇ／日）、ジフェンヒドラミン（最大用量、例えば３５０／日）、ドキシルアミン（最大用量、例えば１８０ｍｇ／日）、フェキソフェナジン（最大用量、例えば２００ｍｇ／日）、ロラタジン（最大用量、例えば１５ｍｇ／日）及びフェニンダミン（最大用量、例えば１８０ｍｇ／日）などの経口、非経口又は直腸経路の抗ヒスタミン剤が挙げられるが限定されない。

【0138】

前投与が投与される他の実施形態では、前投与はグルココルチコイドである。グルココルチコイドはコルチコステロイドのクラスであり、これはステロイドホルモンのクラスである。グルココルチコイドは、グルココルチコイド受容体に結合するコルチコステロイドである。あまり一般的でない同義語は、グルココルチコステロイドである。コルチゾール（薬剤として使用される場合、ヒドロコルチゾンとして知られている）は、最も重量なヒトグルココルチコイドである。様々な合成グルココルチコイドは、コルチゾールよりもはるかに強力であり、治療上の使用のために作製されている。コルチゾールは、グルココルチコイドの効力の比較基準である。一般的に処方されている代替ステロイド均等物の一例は、プレドニゾン（５ｍｇ）＝コルチゾン（２５ｍｇ）＝デキサメタゾン（０．７５ｍｇ）＝ヒドロコルチゾン（２０ｍｇ）＝メチルプレドニゾロン（４ｍｇ）であり得る。これらの用量は、グルココルチコイドの全身投与と均等な薬理学的用量を示す。グルココルチコイドは経口投与又は静脈内投与することができ、４～２０ｍｇのデキサメタゾンｉ．ｖ．に相当する用量で投与することができる（グルココルチコイドの効力を参照する同等性）。グルココルチコイドの用量は、各投与において（すなわちグルココルチコイド前投与が投与される毎に）同じであり得る。代わりに、グルココルチコイドの用量は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の以前の投与後に注入反応及び／又はＣＲＳ症状の徴候がないか又は最小限である場合、その後の投与において例えば以前の用量の５０％減少させることができる。特定の実施形態では、グルココルチコイドが開始サイクルの前投与としてのみ投与され、その後の治療サイクル（例えば、維持サイクル）では投与されない。

【0139】

前投与として使用されるグルココルチコイドの例としては、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、トリアムシノロン、クロプレドノール、デフラザコート、フルオコルトロン、コルチバゾール、パラメタゾン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド並びにこれらの組み合わせ及び／又は薬学的に許容可能な誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。種々のグルココルチコイドを、単独で又は組み合わせて使用することができる。デキサメタゾン、プレドニゾン及びプレドニゾロンは、本発明の方法による前投与として使用するための好ましいグルココルチコイドである。本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクル及び／又は維持サイクル中の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１つ又は複数（又は全て）の用量の投与前に患者に投与されるグルココルチコイドは、デキサメタゾンである。デキサメタゾンは、各投与で約４～２０ｍｇ、６～１８ｍｇ、８～１６ｍｇ、約１６ｍｇ又は約８ｍｇの用量で投与することができる。

【0140】

前投与が投与される特定の実施形態では、前投与は、トシリズマブなどのＩＬ－６受容体アンタゴニストであり得る。トシリズマブは、Ｔ細胞誘導療法によって誘導されるＣＲＳの症状を効果的に低減又は逆転させることが報告されている。例えば、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，Ｖｏｌ．２０：１１９－１２２，２０１４を参照されたい。トシリズマブは、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約８ｍｇ／ｋｇ～約１２ｍｇ／ｋｇ体重又は約４ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与することができる。トシリズマブは、開始サイクル及び／又は１つ若しくは複数の維持サイクルにおいて、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の約１時間～約２時間前に投与することができる。追加的又は代替的に、トシリズマブは、開始サイクル及び／又は１つ若しくは複数の維持サイクルにおいて、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の直後に投与することができる。ＩＬ－６／ＩＬ－６受容体シグナル伝達の他のアンタゴニスト、例えば、シルツキシマブ、オロキズマブ、クラザキズマブ、サリルマブ及びシルクマブを、ＣＲＳの発生率又は重症度を低減するために、本発明の方法による前投与として使用することができる。

【0141】

前投与が投与される特定の他の実施形態では、前投与は腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－アルファ）アンタゴニストである。ＣＲＳ症状は、ＴＮＦ－アルファの放出によって部分的に媒介されることが以前に報告されている（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．１２４：１８８－１９５，２０１４；Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３６８：１５０９－１５１８，２０１３）。最近の研究は、免疫療法剤の投与前のＴＮＦ－アルファアンタゴニストによる治療がＣＲＳ症状を軽減し得ることを示唆している（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．１１（５０８），２０１９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４、上記；Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ，２０１３、上記）。したがって、特定の実施形態では、本発明の方法は、開始サイクル及び／又は１つ若しくは複数の維持サイクル中、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の投与前に患者にＴＮＦ－アルファアンタゴニストを投与することをさらに含む。前投与として使用することができるＴＮＦ－アルファアンタゴニストの例としては、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール及びゴリムマブが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法の特定の実施形態では、開始サイクル及び／又は維持サイクル中の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の１つ又は複数（又は全て）の用量の投与前に患者に投与されるＴＮＦ－アルファアンタゴニストは、エタネルセプトである。エタネルセプトは各投与で約１０ｍｇ～１００ｍｇ、約２５ｍｇ～約７５ｍｇ、約４０ｍｇ～約６０ｍｇ又は約５０ｍｇの用量で投与することができ、皮下又は静脈内投与することができる。本発明の方法のいくつかの実施形態では、エタネルセプトは、開始サイクル中、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の投与前に患者に投与される。いくつかのそのような実施形態では、エタネルセプトは、開始サイクル中、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の投与の約２日前に約５０ｍｇの用量で患者に皮下投与される。他のそのような実施形態では、エタネルセプトは、開始サイクル中、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の各用量の投与の約１日前に約５０ｍｇの用量で患者に皮下投与される。

【0142】

患者は、設定された治療期間にわたり、本発明の方法に従って治療され得る。「治療期間」は、開始サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の初回用量の投与時に開始し、維持サイクルにおける二重特異性Ｔ細胞誘導分子の最終用量の投与時に終了する。治療期間は、約３か月～約３６か月、約１２か月～約２４か月又は約６か月～約１２か月であり得る。例えば、治療期間は、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１３か月、約１４か月、約１５か月、約１８か月、約２１か月、約２４か月、約２７か月、約３０か月、約３３か月又は約３６か月であり得る。いくつかの実施形態では、治療期間は、約６か月である。いくつかの実施形態では、治療期間は、約９か月である。さらに他の実施形態では、治療期間は約１２か月である。治療期間は、治療に対する患者の応答に応じて、各患者について調整することができる。１つの特定の実施形態では、患者は、患者が完全奏効を達成するまで又はさもなければ特定の癌の証拠が患者において検出できなくなるまで、本発明の方法に従って治療される。

【0143】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、一般に、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含み得る医薬組成物で患者に投与される。「薬学的に許容される」とは、使用される用量及び濃度でヒトレシピエントに対して非毒性であり、且つ／又はヒトに投与された場合にアレルギー若しくは副作用を生じない分子、化合物及び組成物を指す。特定の実施形態では、医薬組成物は、組成物の、例えば、ｐＨ、モル浸透圧濃度、粘性、透明性、色調、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解速度若しくは放出速度、吸収性又は振盪性の改変、維持又は保存のための製剤材料を含み得る。このような実施形態では、好適な製剤材料としては、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジンなど）；抗微生物剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸など）；増量剤（マンニトール又はグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；及び他の炭水化物（グルコース、マンノース又はデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなど）；着色剤、香味剤及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール又はソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（例えば、ｐｌｕｒｏｎｉｃ、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパールなど）；安定性増強剤（スクロース又はソルビトール）；等張性増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤並びに／或いは医薬アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。治療使用のための分子を製剤化する方法及び好適な材料は医薬分野において知られており、例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。本発明の方法に従って投与される二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物には、液体組成物、凍結組成物及び凍結乾燥組成物が含まれるが、これらに限定されない。

【0144】

医薬組成物が凍結乾燥されている場合、凍結乾燥された材料は、投与前に適切な液体で再構成される。凍結乾燥材料は、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は凍結乾燥前にタンパク質が存在した同じ製剤中で再構成され得る。

【0145】

いくつかの実施形態では、医薬組成物への組み込みのための担体及び賦形剤の選択は、二重特異性Ｔ細胞誘導分子の物理的状態、安定性、インビボ放出速度及びインビボクリアランス速度に影響を及ぼす。特定の実施形態では、医薬組成物中の主なビヒクル又は担体は、水性又は非水性の性質を有し得る。例えば、好適なビヒクル又は担体は、場合により非経口投与用組成物によく見られる他の材料又は賦形剤が補足された注射用水、生理食塩水溶液であり得る。

【0146】

本明細書に記載の方法において、二重特異性Ｔ細胞誘導分子（例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物）は、非経口で患者に投与される。非経口投与は、胃腸管以外の経路による分子の投与を指し、腹腔内、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、皮下、脳内、脳室内及び髄腔内投与を挙げることができる。好ましい実施形態では、本発明の方法による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与は、静脈内である。他の好ましい実施形態では、本発明の方法による二重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与は、皮下である。本発明の方法の特定の実施形態では二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量及び／又は治療用量の投与はボーラス静脈内注入によって投与される。本発明の方法の特定の他の実施形態では、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のプライミング用量は持続静脈内注入によって投与され、二重特異性Ｔ細胞誘導分子のブースト用量及び／又は治療用量の投与は皮下注射によって投与される。

【0147】

非経口、皮下又は静脈内投与は、注射（例えば、針及びシリンジを使用）又は注入（例えば、カテーテル及びポンプシステムを介して）によって実施され得る。いくつかの実施形態では、本発明による投与は、静脈内注射又は静脈内注入によるものであることが想定される。通常、静脈内（ＩＶ）注入は、ライン、ポート若しくはカテーテル（小さく柔軟なチューブ）、例えば中心静脈アクセス又は大静脈に留置されるカテーテルである中心静脈カテーテル（ＣＶＣ）など、又は末梢静脈に留置されるカテーテルである末梢静脈カテーテル（ＰＶＣ）を介して投与される。一般に、カテーテル又はラインは、頸部の静脈（内頸静脈）、胸部の静脈（鎖骨下静脈又は腋窩静脈）、鼠径部の静脈（大腿静脈）に又は腕の静脈（ＰＩＣＣライン又は末梢静脈挿入式中心カテーテルとしても知られる）を通して配置され得る。中心ＩＶラインは、静脈を通して進められ、大中心静脈、通常、上大静脈、下大静脈又は心臓の右心房に流入するカテーテルを有する。末梢静脈（ＰＩＶ）ラインは、末梢静脈（腕、手、脚及び足の静脈）において使用される。ポートは、外部コネクタがない中心静脈ラインであり、代わりに、これは、シリコーンゴムで被覆され、皮膚の下に埋め込まれる小型リザーバーを有する。薬剤は、皮膚に小さい針を刺し、シリコーンを突き刺してリザーバーに入れることにより、断続的に投与される。針が引き抜かれると、リザーバーカバーは、それ自体を再封止する。カバーは、その寿命中に何百もの針刺しを許容できる。

【0148】

特定の実施形態では、医薬組成物は、有効量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子及び１種以上の賦形剤を含む。有効量は、治療用量であり得るか、又はプライミング用量若しくはブースト用量などのより少量であり得る。賦形剤は、製剤の物理的、化学的又は生物学的特性の調整（粘度の調製など）など、多様な目的のために且つ／又は例えば製造、出荷、貯蔵、使用前準備及び投与中に起こるストレスに起因する分解及び変質に対してこのような製剤を安定化させために使用することができる。

【0149】

いくつかの実施形態では、本発明の方法に従って患者に投与される有効量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤は、組成物を生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ、典型的には約４．０～約６．５のｐＨ範囲内に維持するために使用される。好適な緩衝剤としては、グルタミン酸塩、酢酸塩、トリス、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩及びリン酸塩緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って投与される医薬組成物は、グルタミン酸塩緩衝剤、特にＬ－グルタミン酸塩緩衝剤を含む。グルタミン酸塩緩衝剤を含む医薬組成物は、約４．０～約５．５のｐＨ、約４．０～約４．４のｐＨ又は約４．２～約４．８のｐＨを有することができる。

【0150】

有効量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物は、界面活性剤をさらに含み得る。「界面活性剤」という用語は、本明細書で使用される場合、溶解した液体の表面張力を低下させる働きをする物質である。界面活性剤は、例えば、液体製剤中の凝集、粒子形成及び／若しくは表面吸着を防止若しくは制御するか、又は凍結乾燥中及び／若しくは凍結乾燥製剤における再構成プロセス中のこれらの現象を防止若しくは制御することを含む、様々な目的のために医薬組成物中に含まれ得る。界面活性剤としては、例えば、有機溶媒及び水溶液の両方に部分的溶解性を示す両親媒性有機化合物が挙げられる。界面活性剤の一般的な特徴としては、水の表面張力を低下させ、油と水との間の界面張力を低下させ、且つミセルも形成するそれらの能力が挙げられる。本発明の方法に使用される医薬組成物に組み込まれ得る界面活性剤には、非イオン性及びイオン性界面活性剤の両方が含まれる。好適な非イオン性界面活性剤としては、アルキルポリ（エチレンオキシド）、オクチルグルコシド及びデシルマルトシドなどのアルキルポリグルコシド、セチルアルコール及びオレイルアルコールなどの脂肪アルコール、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ及びコカミドＴＥＡが挙げられるが、これらに限定されない。非イオン性界面活性剤の特定の例としては、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート２８、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５などを含むポリソルベート；例えば、ポロキサルコール又はポリ（エチレンオキシド）－ポリ（プロピレンオキシド）としても知られるポロクサマー１８８、ポロクサマー４０７又はポリエチレン－ポリプロピレングリコ－ルなどを含むポロクサマー及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。好適なイオン性界面活性剤としては、例えば、アニオン性、カチオン性及び双性イオン界面活性剤が挙げられる。アニオン性界面活性剤としては、石鹸、脂肪酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸アンモニウム及び他のアルキル硫酸塩などのスルホン酸塩系又はカルボン酸塩系界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。カチオン性界面活性剤としては、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、他のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム、ポリエトキシル・タロウ・アミン（ＰＯＥＡ）及び塩化ベンザルコニウムなどの第四級アンモニウム系界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。双性イオン又は両性界面活性剤としては、例えば、ドデシルベタイン、ドデシルジメチルアミンオキシド、コカミドプロピルベタイン及びココアンホグリシン酸塩が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って投与される医薬組成物が非イオン性界面活性剤を含む。一実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０である。別の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。

【0151】

特定の実施形態では、有効量の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物は、安定剤をさらに含む。本明細書で使用される場合、「安定剤」という用語は、ポリペプチド若しくはＴ細胞誘導分子の天然の立体構造を安定化し、且つ／又はポリペプチド若しくはＴ細胞誘導分子の物理的若しくは化学的分解を防止若しくは低減する賦形剤を指す。好適な安定剤としては、ポリオール（例えば、ソルビトール、グリセロール、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、エリスリトール及びトレイトール）、糖（例えば、フルクトース、グルコース、グリセルアルデヒド、ラクトース、アラビノース、マンノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、マルトース、スクロース、トレハロース、ソルボース、スクラロース、メレチトース及びラフィノース）並びにアミノ酸（例えば、グリシン、メチオニン、プロリン、リジン、アルギニン、ヒスチジン又はグルタミン酸）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、安定剤として糖を含む。これらの実施形態及び他の実施形態では、糖は、スクロースである。

【0152】

二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む例示的な医薬組成物は、国際公開第２０１８／１４１９１０号パンフレットに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法による癌の治療に有用な医薬組成物は、約０．５ｍｇ／ｍｌ～約２ｍｇ／ｍｌの二重特異性Ｔ細胞誘導分子、約５ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－グルタミン酸、約０．００５重量／体積（ｗ／ｖ）％～約０．０１５重量／体積（ｗ／ｖ）％のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０）及び約７％（ｗ／ｖ）～約１２％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。他の実施形態では、医薬組成物は、約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１．５ｍｇ／ｍｌの二重特異性Ｔ細胞誘導分子、約８ｍＭ～約１２ｍＭのＬ－グルタミン酸、約０．００８％（ｗ／ｖ）～約０．０１２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０）及び約８％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。これらの製剤のｐＨは、約４．０～約４．４の範囲（例えば、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３又は約４．４のｐＨ）である。

【0153】

本明細書に記載の二重特異性Ｔ細胞誘導分子を含む医薬組成物のいずれも凍結乾燥させ、患者への投与前に例えば注射用の滅菌水で再構成することができる。再構成容量は、凍結乾燥後のタンパク質含量及び再構成溶液中の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の所望の濃度に依存して約０．５ｍｌ～約５ｍｌであり得る。再構成後の溶液は、本発明の方法に従って本明細書に記載の用量を投与するために、必要に応じて患者に投与する前に希釈剤（例えば、生理食塩水及び／又は静脈内溶液安定剤（ＩＶＳＳ））でさらに希釈することができる。

【0154】

本明細書に記載の二重特異性Ｔ細胞誘導分子のいずれかを、上記の医薬組成物のいずれかに組み込み、本明細書に記載の方法に従って患者に投与することができる。好ましい実施形態では、前立腺癌又は他のＰＳＭＡ発現癌の治療のために本発明の方法に従って投与されるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。別の好ましい実施形態では、多発性骨髄腫又は他のＢＣＭＡ陽性癌の治療のために本発明の方法に従って投与されるＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む。

【0155】

本発明は、癌の治療を、それを必要とする患者において行うためのキットも含む。一実施形態では、キットは、本明細書に記載の二重特異性Ｔ細胞誘導分子の医薬組成物と、医薬組成物の使用に関する説明書を提供するパッケージング材料とを含む。キットの医薬組成物は、バイアルなどの容器中に含まれ得る。医薬組成物は、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、結晶又は脱水粉末若しくは凍結乾燥粉末として提供され得る。医薬組成物が凍結乾燥粉末として提供される実施形態では、キットは、医薬組成物を再構成するために必要な希釈剤（例えば、注射用滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、製剤緩衝液）及び投与のための組成物を調製するための説明書も含み得る。特定の実施形態では、キットは、静脈内溶液安定剤（ＩＶＳＳ）の１つ又は複数のバイアルと、患者に送達するために医薬組成物を希釈する前に、ＩＶＳＳを使用してＩＶバッグを前処理するための説明書とをさらに含み得る。ＩＶＳＳは活性医薬成分を含有せず、典型的には、防腐剤を含まない緩衝溶液である。一実施形態では、ＩＶＳＳは、ｐＨ７．０で、クエン酸（例えば、２０～３０ｍＭ）、塩酸リシン（例えば、１～３Ｍ）及びポリソルベート８０（０．０５％（ｗ／ｖ）～０．１５％（ｗ／ｖ））を含む。特定の実施形態では、ＩＶＳＳは、ｐＨ７．０で、２５ｍＭのクエン酸、１．２５Ｍの塩酸リシン及び０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む。

【0156】

以下の実施例は、実施された実験及び得られた結果を含むが、それらは、例示の目的のためにのみ提供されるものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0157】

実施例１．ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞結合分子のためのサイクル１プライミング用量レジメンの安全性及び有効性の比較
二重特異性Ｔ細胞誘導分子は、Ｔリンパ球エフェクター細胞を標的癌細胞に誘導するように設計される。二重特異性Ｔ細胞誘導分子によって誘導される標的癌細胞へのＴ細胞の近接は、Ｔ細胞活性化を誘発し、標的癌細胞のＴ細胞媒介性細胞傷害をもたらす。二重特異性Ｔ細胞結合分子によって媒介されるＴ細胞活性化は、標的癌細胞への細胞傷害性タンパク質の指向性放出を誘導するだけでなく、Ｔ細胞によるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びインターロイキン－６（ＩＬ－６）などの炎症性サイトカインの産生ももたらす。これらの炎症性サイトカインの産生は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、二重特異性Ｔ細胞誘導分子による治療に関連する有害な副作用をもたらし得る。

【0158】

ＡＭＧ１６０は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）及びＣＤ３の両方に結合し、単鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含む半減期延長（ＨＬＥ）ＢｉＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）分子である。ＡＭＧ１６０のアミノ酸配列は、配列番号６０に記載される。転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の成人患者におけるＡＭＧ１６０の第１相試験の用量探索部分における最初のコホートからのデータは、ＡＭＧ１６０が２８日サイクルで２週間に１回（Ｑ２Ｗ）、短時間（例えば、約６０分）の静脈内（ＩＶ）注入として投与された場合、患者によって示されたＣＲＳの程度は、初回用量投与の約６時間後に測定されたＡＭＧ１６０のピーク血清レベル（例えば、Ｃ_ｍａｘ）並びにＩＬ－６血清レベルと相関するようであることを示した。サイクル１中にＣＲＳを低減するための緩和戦略として、第１相試験におけるサイクル１投与スケジュールを、以下のいずれかに修正した：（ｉ）目標用量に達するまで週１回の間隔でＡＭＧ１６０の１、２又は３段階用量を投与することを含む投与スケジュール、又は（ｉｉ）２～３日間にわたる持続ＩＶ注入により初回用量を投与し、続いて２週間毎に目標用量を短時間ＩＶ注入することを含む投与スケジュール。理論に束縛されるものではないが、２～３日間にわたる持続ＩＶ注入によるＡＭＧ１６０の初回用量（すなわちプライミング用量）の投与により、最初の投与間隔における累積曝露を維持しながら、ＡＭＧ１６０のＣ_ｍａｘが減少し、Ｔ_ｍａｘが遅延し、その結果、以下の１つ以上が起こると考えられる：ＣＲＳ事象の頻度及び重症度が減少し、Ｔ細胞の細胞傷害能を維持しながらＴ細胞媒介性サイトカイン放出が下方制御され、且つ／又はＡＭＧ１６０の有効用量がサイクル１において可能な限り早く送達される。

【0159】

インフォームド・コンセントに署名した後、患者はスクリーニング期間（２８日まで）に入り、その間に患者の適格性が評価された。適格患者は以前の新規ホルモン療法及び１～２のタキサンレジメンに抵抗性のｍＣＲＰＣを有し、進行性疾患の証拠があった。具体的には、以下の主要な選択基準の全てを満たす患者を本試験に登録した：
・組織学的又は細胞学的に確認されたｍＣＲＰＣであり、新規抗アンドロゲン療法（例えば、アビラテロン、エンザルタミド、ダロルタミド及び／又はアパルタミド）に抵抗性であり、少なくとも１つ（しかし、３つ以上ではない）のタキサンレジメンに失敗した（又はタキサンレジメンで治療するのに医学的に適していないと考えられるか、又はタキサンレジメンでの治療を積極的に拒否した）；
・両側精巣摘除を受けたか、又はゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニスト若しくはアンタゴニストによる持続的アンドロゲン遮断療法（ＡＤＴ）を受けていた；
・総血清テストステロン濃度が５０ｎｇ／ｄＬ以下又は１．７ｎｍｏｌ／Ｌ以下であった；及び
・以下の前立腺癌ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３；Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｏｎｃｏｌ，Ｖｏｌ．３４：１４０２－１４１８、２０１６）の基準の１つ以上で定義される進行性疾患の証拠を有した：
・前立腺特異抗原（ＰＳＡ）濃度が１ｎｇ／ｍＬ以上で、少なくとも１週間隔で少なくとも２回連続して増加
・ＰＣＧＷ３改変を含むＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）１．１によって定義されるリンパ節又は内臓の進行
・骨スキャンにおける２つ以上の新たな病変の出現。

【0160】

患者が以下の場合、試験から除外した：（ｉ）免疫抑制療法を必要とする活動性自己免疫疾患を有したか；（ｉｉ）ＰＳＭＡ放射性リガンド療法を除いて、以前にＰＳＭＡ標的療法を受けたか、又は（ｉｉｉ）ＣＮＳ転移、軟髄膜疾患若しくは脊髄圧迫を有した。

【0161】

ＡＭＧ１６０を、０．００３～０．９ｍｇの範囲の目標用量の２８日サイクルにおいて目標用量に達した後、２週間毎に（Ｑ２Ｗ）（例えば、１日目及び１５日目に）短時間ＩＶ注入（約６０分）として投与した。ＡＭＧ１６０の初回投与日を、サイクルの１日目と定義した。ＣＲＳの発生率及び／又は重症度を低減するために、２つの異なるサイクル１プライミング用量戦略を実施した。第１のサイクル１プライミング用量戦略は段階的投与戦略であり、サイクル１において１段階、２段階及び３段階の投与スケジュールを含んだ。１段階投与は、２８日サイクル（＋サイクル２の開始前の７日間の無注入間隔）のサイクル１の１日目に投与されるＡＭＧ１６０の導入用量（例えば、プライミング用量）と、続く８日目及び２２日目のＡＭＧ１６０の目標用量の投与とを含んだ。２段階投与スケジュールは、２８日サイクルのサイクル１の１日目のＡＭＧ１６０の導入用量（例えば、第１のプライミング用量）の投与と、続くサイクル１の８日目のＡＭＧ１６０のより高い導入用量（例えば、第２のプライミング用量）の投与と、その後のサイクル１の１５日目のＡＭＧ１６０の目標用量の投与とを伴った。３段階投与スケジュールは、２８日サイクル（＋サイクル２の開始前の７日間の無注入間隔）のサイクル１の１日目のＡＭＧ１６０の導入用量（例えば、第１のプライミング用量）の投与と、続くサイクル１の８日目のＡＭＧ１６０のより高い導入用量（例えば、第２のプライミング用量）の投与と、続くサイクル１の１５日目のＡＭＧ１６０の別のより高い導入用量（例えば、第３のプライミング用量）の投与と、その後のサイクル１の２２日目のＡＭＧ１６０の目標用量の投与とを含んだ。

【0162】

第２のサイクル１プライミング用量戦略（ｃＩＶプライミング；本明細書では長時間ＩＶプライミング又はｅＩＶプライミングとも称する）は、２８日サイクル（＋サイクル２の開始前の７日間の無注入間隔）のサイクル１の１～２日目又はサイクル１の１～３日目にＡＭＧ１６０の２日又は３日持続ＩＶ注入によって投与される導入用量（例えば、プライミング用量）と、続くサイクル１の８日目及び２２日目のＡＭＧ１６０の目標用量の短時間ＩＶ注入（約６０分注入）による投与とを含んだ。特定のプライミング用量の短時間ＩＶ注入（例えば、６０分注入）と比較して、同じプライミング用量の３日持続ＩＶ注入は、ＡＭＧ１６０のピーク血清曝露（Ｃ_ｍａｘ）を約４０％低下させ、且つＴ_ｍａｘ（すなわちＣ_ｍａｘまでの時間）を遅延させて、ＣＲＳの発生率又は重症度を低減させ、Ｔ細胞によるサイトカイン放出を下方制御すると予測された。プライミング用量は、示された日数の期間にわたって（例えば、２又は３日間にわたって）一定の速度で投与された。例えば、３日間にわたって投与される０．０３ｍｇのプライミング用量では、０．０１ｍｇ／日を３日間送達するようにプライミング用量を一定の速度で連続的に注入した。同様に、３日間にわたって投与される０．３０ｍｇのプライミング用量では、０．１０ｍｇ／日を３日間送達するようにプライミング用量を一定の速度で連続的に注入した。

【0163】

サイクル１後、サイクル２及びその後の全てのサイクルは、２８日サイクルの１日目及び１５日目にＡＭＧ１６０の短時間ＩＶ注入（例えば、約６０分）としての目標用量の投与を伴った。以下の表１に、様々な投薬コホートの概要を示す。無段階投与レジメン又は２段階投与レジメンに従って投与されたコホートでは、サイクル２は、２８日サイクル１の直後に開始され、すなわち、試験２９日目は、サイクル２の１日目であった。１段階若しくは３段階投与レジメンに従って投与されたコホート又はｃＩＶプライミング投与レジメンに従って投与されたコホートでは、サイクル２は、２８日サイクル１の７日後に開始され、すなわち、試験３６日目は、サイクル２の１日目であった。全ての患者がサイクル１におけるＡＭＧ１６０の全ての投与の６～１６時間前に８ｍｇのＰＯデキサメタゾンで前治療された。さらに、サイクル１におけるＡＭＧ１６０の全ての用量前の１時間以内にデキサメタゾン８ｍｇＩＶが投与された。患者は、疾患進行又は許容できない毒性までＡＭＧ１６０の治療サイクルを受けた。

【0164】

ＡＭＧ１６０の抗腫瘍活性を、ＰＣＷＧ３改変を含むＲＥＣＩＳＴ １．１基準による客観的応答、ＰＳＡ応答、循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）応答、^６８ガリウム（^６８Ｇａ）－ＰＳＭＡ－１１陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及び^１８Ｆ－フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）ＰＥＴ／ＣＴスキャンによって測定される放射線学的応答、無増悪生存（放射線撮影及びＰＳＡ）並びに全生存を含む、いくつかの測定によって評価した。ＣＴ／磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンは、治療の最初の６か月間はベースライン時及び８週間毎、その後、１２週間毎に実施した。腫瘍量評価は、ＰＣＷＧ３改変を含むＲＥＣＩＳＴ １．１に基づいて実施した（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．４５：２２８－２４７，２００９；Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｏｎｃｏｌ，Ｖｏｌ．３４：１４０２－１４１８，２０１６を参照されたい）。疾患進行（ＰＤ）を確認するために、放射線学的進行の最初の検出の４～６週間後に２回目のＭＲＩ／ＣＴスキャンを実施した。応答（部分奏効（ＰＲ）及び完全奏効（ＣＲ））を、放射線学的応答の最初の検出の少なくとも４週間後に反復連続評価によって確認した。

【0165】

ＰＳＡ３０／５０／７０／９０応答は、それぞれベースラインからの血清ＰＳＡレベルにおける３０％、５０％、７０％及び９０％の減少として定義した。ＣＴＣ応答は、全血中で測定されたＣＴＣ０（ＣＴＣの減少＞０から０）又はＣＴＣ変換（≧５ＣＴＣ／７．５ｍＬ血液から≦４ＣＴＣ／７．５ｍＬ血液）として定義した。^６８Ｇａ－ＰＳＭＡ－１１ ＰＥＴ／ＣＴスキャンは、ＰＳＭＡ陽性腫瘍量を評価するためにベースライン時に実施し、応答評価のために治療期間中は１２週間毎に実施した。ＰＳＭＡ陰性疾患負荷を確認するために、ベースライン時に^１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴスキャンを実施し、用量拡大期中の応答評価のために治療中に１２週間毎に実施した。

【0166】

【表1】

【0167】

データ分析の時点で、４３人の患者は、最大０．９ｍｇまでの６つの目標用量レベルで１つ以上の用量のＡＭＧ１６０単独療法を受けており、１９人の患者（４４．２％）は、治療を継続した。６人の患者が６か月以上治療を受けた。試験に登録された４３人の男性のうち、ほとんど（７９．１％）が白人であった。患者の平均年齢は、６６．０歳（範囲：４９～７８歳）であり、ベースラインのＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）ステータススコアは０又は１であった。患者は、中央値４の以前の治療ライン（範囲：１～９）を受けており、２６人の対象（６０．５％）は、４以上の以前の治療ラインを受けていた。

【0168】

サイクル１の最初の１４日間のＡＭＧ１６０の予備的血清薬物動態（ＰＫ）プロファイルを、コホート６ｂ（２段階投与コホート）及びｃＩＶコホート１のｍＣＲＰＣ患者間で比較した。コホート６ｂでは、患者は、ＡＭＧ１６０の短時間ＩＶ注入をサイクル１の１日目に０．０３ｍｇの用量で受け、続いて８日目に０．０９ｍｇの用量を受けた。ｃＩＶコホート１では、患者は、コホート６ｂにおける患者と同じ０．０３ｍｇの初回用量を受けたが、一定の速度で３日間にわたって（例えば、０．０１ｍｇ／日を３日間）投与され、サイクル１の８日目に短時間ＩＶ注入によって同じ０．０９ｍｇ用量が投与された。したがって、これらの２つのコホートの血清ＰＫプロファイルの比較は、第１週中の２つの異なる注入法によって投与された同じプライミング用量に対するＡＭＧ１６０の血清曝露の差の直接比較を可能にする。図１Ａ及び１Ｂに示されるように、０．０３ｍｇ用量が６０分の注入としてではなく３日間にわたる持続ＩＶ注入として与えられる場合、同じ用量のＡＭＧ１６０のピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）は、約４０％低く（４．４８ｎｇ／ｍＬ対７．４９ｎｇ／ｍＬ）、注入開始の約１時間後ではなく、注入開始の約７２時間後に生じる。

【0169】

コホート５の患者及びｃＩＶコホート２ａの患者は両方とも、０．３ｍｇのＡＭＧ１６０の目標用量を受けた。コホート５の患者は、１５日目に０．３ｍｇの目標用量を受けるまで、１日目及び８日目にそれぞれ０．０１ｍｇ及び０．０９ｍｇの２つの用量段階を投与することにより、この目標用量に漸増された。表１を参照されたい。対照的に、ｃＩＶコホート２ａの患者は、０．０９ｍｇの初回用量（例えば、プライミング用量）を１～３日目にわたる持続ＩＶ注入として投与された後、８日目に０．３ｍｇの目標用量を受けた（表１）。その後、両コホートの患者は、０．３ｍｇの目標用量を１４日に１回投与された。これら２つの投与コホートの予備的血清ＰＫプロファイルを図２に示す。比較のために、コホート５のＡＭＧ１６０の血清濃度を、０．０９ｍｇの第２段階用量の投与から開始し、グラフの０日目に開始するように調整して示す。投与コホート６ｂとｃＩＶコホート１との間の比較と同様に、３日間にわたるｃＩＶ注入による同じ用量、この場合０．０９ｍｇの投与は、１時間の注入によって投与された同じ用量と比較して、Ｃ_ｍａｘを減少させる（図２）。加えて、０．３ｍｇの目標用量の投与時に同様の血清曝露が達成されるが、目標用量は初回用量が連続ＩＶによって投与される場合、１週間早く投与することができる。

【0170】

サイクル１の最初の２１日間の様々な時点でのＩＬ－６（図３）、ＴＮＦ－アルファ（図４）及びＩＦＮ－ガンマ（図５）の血清レベルを、ｃＩＶコホート１及び２の患者と、段階的投与コホート５及び６ｂの患者との間で比較した。患者がｃＩＶコホート１のようにＡＭＧ１６０の０．０３ｍｇプライミング用量を３日間にわたり持続静脈内注入として受けた場合、患者がコホート６ｂのように６０分間の注入として０．０３ｍｇプライミング用量を受けた場合と比較して、初期ピークＩＬ－６レベルは低下した（図３Ａと図３Ｃを比較されたい）。また、ＩＬ－６放出は、６０分のＩＶ注入によってプライミング用量を受けた患者と比較して、持続ＩＶ注入によってプライミング用量を受けた患者では６時間から２４時間まで遅延した。同様の結果は、ＴＮＦ－アルファ及びＩＦＮ－ガンマレベルで観察され、これらの２つのサイトカインの初期ピークレベルは６０分間のＩＶ注入として０．０３ｍｇプライミング用量を受けた患者におけるこれらのサイトカインのレベルと比較して、３日間にわたる持続ＩＶ注入によって０．０３ｍｇプライミング用量を受けた患者において減少し、且つ遅延した（ＴＮＦ－アルファについては図４Ａと図４Ｃを、ＩＦＮ－ガンマについては図５Ａと図５Ｃを比較されたい）。

【0171】

初回ＡＭＧ１６０用量として２～３日間にわたる持続注入によって０．０９ｍｇの用量を受けたｃＩＶコホート２ａ及び２ｂの患者（図３Ｂ、４Ｂ及び５Ｂではコホート２ ｅＩＶとして統合）と、６０分の注入として１日目に０．０１ｍｇのＡＭＧ１６０の初回プライミング用量を受けたコホート５の患者との比較は、０．０９ｍｇの初期用量の持続注入が、９倍低い用量の０．０１ｍｇを短時間ＩＶ注入として受けた患者と同様のＩＬ－６、ＴＮＦ－アルファ及びＩＦＮ－ガンマの放出を誘導したことを示す（ＩＬ－６については図３Ｂと図３Ｄを、ＴＮＦ－アルファについては図４Ｂと図４Ｄを、ＩＦＮ－ガンマについては図５Ｂと図５Ｄを比較されたい）。ｃＩＶコホート１の患者で観察されたように、サイトカインの放出は、ＡＭＧ１６０の初回用量が２～３日間にわたる連続注入によって投与された場合、一部の患者で６時間から２４時間まで遅延した。図３Ｂ、４Ｂ及び５Ｂを参照されたい。

【0172】

治療中に発生した有害事象は、データ分析時において、４１例（９５．３％）が報告された。グレード５の事象はなく、治療中止に至った事象もなかった。次の３つの可逆的用量制限毒性が生じた：グレード３の発疹（ｎ＝２）及びグレード３のＧＩ出血（ｎ＝１）。最も多かった有害事象はＣＲＳであり、発熱、一過性の高トランスアミナーゼ血症、低血圧、悪心／嘔吐及び／又は下痢を呈し、３９人の患者（任意のグレード）で発現した。ＣＲＳ事象は、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．１２４：１８８－１９５，２０１４に記載のＬｅｅ基準に従って評価した。ＣＲＳは可逆的であり、主にサイクル１及び２で生じた。２６人の患者（６０．５％）が最悪グレードとしてグレード２のＣＲＳを有し、１１人の患者（２５．６％）が最悪グレードとしてグレード３のＣＲＳを有した。グレード４又は５のＣＲＳ事象はなかった。データ分析時に評価した患者３０人中６人（２０．０％）が、サイクル１～１０においてＡＭＧ１６０の曝露に影響を及ぼす抗薬物抗体を発現した。抗薬物抗体と明らかに関連する有害事象は観察されなかった。

【0173】

以下の表２に、２段階、３段階及びｃＩＶプライミングコホートの安全性及び有効性プロファイルの概要を示す。一般に、ｃＩＶプライミングコホートは、段階的投与レジメンを受けたコホートと比較して、安全性プロファイルの改善を示した。例えば、２段階投与コホート６ｂとｃＩＶコホート１との比較により、６０分間の注入としてではなく、３日間にわたる持続ＩＶ注入によるＡＭＧ１６０の同じ初回用量（例えば、プライミング用量）の投与が、用量制限毒性、重篤な有害事象及び用量減少の発生を回避すると共に、グレード２及びグレード３のＣＲＳ事象の数を減少させたことがわかる。いずれも患者が０．３ｍｇの目標用量を受けるコホート５（２段階用量コホート）とｃＩＶコホート２ａとの比較では、ＡＭＧ１６０のプライミング用量を３日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与することにより、重篤な有害事象及びグレード３のＣＲＳ事象の発生が排除されたことが示されている。同様に、患者が２日間又は３日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与されるＡＭＧ１６０のプライミング用量を受け、次いで０．９ｍｇの目標用量を受けたｃＩＶコホート３ａ及び３ｂと、患者が２回又は３回の投与段階を用いて０．９ｍｇの目標用量に漸増されるコホート６ａ～６ｃのいずれかとの比較は、数日間にわたる連続注入によるプライミング用量の投与が、重篤な有害事象の数並びにＣＲＳ事象の数及び重症度を低減することを示している。コホート２ａとコホート２ｂとの安全性測定の比較によって示されるように、同じプライミング用量（例えば、０．０９ｍｇ）を２日間ではなく３日間にわたって持続注入した場合、観察される用量減少、重篤な有害事象及びグレード３のＣＲＳ事象がより減少した。

【0174】

【表2】

【0175】

データ分析時、ＡＭＧ１６０の有効性及び臨床的有益性の予備的証拠が一部の患者で観察された。測定可能な疾患を有する患者におけるＲＥＣＩＳＴ １．１応答は、３例の部分奏効（ＰＲ；コホート３、４及びｃＩＶコホート２ａのそれぞれ０．０３ｍｇ、０．０９ｍｇ及び０．３ｍｇの目標用量で）、８例の安定（ＳＤ）及び５例の進行（ＰＤ）を含んだ。ＰＳＡの低下は評価可能な患者３５例中２４例（６８．６％）で生じた。評価可能な患者は、１つ以上の用量のＡＭＧ１６０を受け、且つ測定可能なベースラインＰＳＡレベルを有した患者を含んだ。最良の応答としての５０％を超えるＰＳＡの低下は、評価可能な患者３５例中１２例（３４．３％）で生じた。全体として、２例のベースライン後ＰＳＡ結果を含む２９例の患者のうちの８例（２７．６％）で確認されたＰＳＡ応答を有した：ＰＳＡ９０（目標用量０．０９ｍｇ）１例、ＰＳＡ７０（目標用量０．０９ｍｇ及び０．９ｍｇ）２例、ＰＳＡ５０（目標用量０．０３ｍｇ及び０．３ｍｇ）２例及びＰＳＡ３０（目標用量０．０３ｍｇ、０．３ｍｇ及び０．９ｍｇ）３例。ベースライン時に測定可能なＰＳＡ値を示した患者３５例中、さらに４例（１１．４％）でデータ分析時に未確認のＰＳＡ応答を有した：ＰＳＡ７０（０．３ｍｇの目標用量）１例、ＰＳＡ５０（０．９ｍｇの目標用量）２例及びＰＳＡ３０（０．９ｍｇの目標用量）１例。ベースラインＣＴＣ＞０及びベースライン後ＣＴＣ評価を有する患者１３例中３例（２３．１％）が、ＣＴＣ０応答を有した。この最初のデータカット後、ｃＩＶプライミングコホートで、ＲＥＣＩＳＴ １．１測定可能な患者において、４例のＰＳＡ７０超応答及び１例のＰＳＡ９０応答（全て未確認）及び２例のＳＤ応答が報告された。これらの応答並びにｃＩＶプライミングコホート及び２段階及び３段階投与コホートの他の有効性の測定を、上記の表２に要約する。これまでに段階的投与コホートから報告された有効性結果と同じ目標用量が投与されたｃＩＶプライミングコホートから報告された有効性結果の比較は、ｃＩＶプライミングコホートにおける患者がＡＭＧ１６０で良好な応答を有することを示す。具体的には、２～３日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与されたプライミング用量から０．３ｍｇの目標用量に漸増された患者（ｃＩＶコホート２ａ及び２ｂ）は、ＰＳＡ測定値を有する５人の患者のうちの４人がＰＳＡ７０応答を有し、ＲＥＣＩＳＴ １．１による測定の可能な疾患を有する患者中１人のＰＲ及び２人のＳＤを有した一方、０．０１ｍｇ及び０．０９ｍｇの２段階用量を介して０．３ｍｇの目標用量に漸増された患者（コホート５）は、１人の患者において１人のＰＳＡ３０／ＣＴＣ０応答を有し、コホートの４人の患者のうちの第２の患者において１人のＰＳＡ５０応答／ＳＤ応答を有した。ｃＩＶプライミングで観察される改善された有効性は、一つには、ｃＩＶプライミングで達成される忍容性プロファイルの改善（例えば、ＣＲＳ及び有害事象の低減）のために、サイクル１において段階的投薬よりも早期に目標用量を患者に投与することができることに起因し得る。

【0176】

プライミング用量をより長い注入期間とすることの効果を評価するために、別のコホートの患者（ｎ＝４）に、サイクル１において、５日間（すなわちサイクル１の１～５日目；０．０３ｍｇ／日を５日間）にわたる持続ＩＶ注入によって０．１５ｍｇのＡＭＧ１６０のプライミング用量を投与し、その後、８日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（約６０分）によって０．３ｍｇの目標用量を投与した。患者は、サイクル２及び他の全てのその後のサイクルの１日目及び１５日目に短時間ＩＶ注入によって０．３ｍｇの目標用量が投与された。現在までにこのコホートに登録された４人の患者のうち、１人の患者は、グレード３のＣＲＳ事象を有し、２人の患者は、グレード２のＣＲＳ事象を有し、１人の患者は、グレード１のＣＲＳ事象を最悪のグレードとして有した。データ分析時に評価可能な３人の患者のうち、ＰＳＡ９０応答を有し、ＲＥＣＩＳＴ １．１による判定が安定である患者１人が認められた。

【0177】

用量拡大
ＡＭＧ１６０を上記のｃＩＶコホート２ａと同じｃＩＶ投与レジメンに従って用量拡大コホートに投与した（表１を参照されたい）。具体的には、用量拡大コホートに登録された患者に、サイクル１において、１～３日間にわたる持続ＩＶ注入によって０．０９ｍｇの初回用量（例えば、プライミング用量）を投与し（例えば、０．０３ｍｇ／日を３日間）、その後、８日目及びその後、２週間毎に短時間ＩＶ注入（約６０分）によって０．３ｍｇの目標用量を投与した。患者は、サイクル２及び他の全てのその後のサイクルの１日目及び１５日目に短時間ＩＶ注入によって０．３ｍｇの目標用量が投与された。

【0178】

データカットオフ日の時点で４３人の患者が用量拡大コホートに登録され、４０人の患者に少なくとも１つの用量のＡＭＧ１６０が投与された。登録された患者は、中央値４の以前の治療ラインを受けており、２４人の対象（６０．０％）は４以上の以前の治療ラインを受けていた。患者は、ベースライン時（すなわちＡＭＧ１６０を投与される前）、０又は１のＥＣＯＧステータススコアも有した。登録された患者４３人のうち、１８人（４１．９％）は、疾患の進行（１３人の患者）、対象の要求（２人の患者）、有害事象（２人の患者）又は他の理由（１人の患者）のために治療を中止した。

【0179】

データカットオフ日の時点の用量拡大コホートにおいて、治験実施施設の治験責任医師が治験薬と関係があると判断した有害事象は、治療に関連したグレード５の事象のない３８人の患者（９５％）で報告された。２０％以上の患者で報告された治療関連有害事象は、ＣＲＳ（３７例、９２．５％）；悪心（１９例、４７．５％）；下痢（１６例、４０％）；口渇（１５例、３７．５％）；嘔吐及び疲労（それぞれ１３例、３２．５％）；発熱（１２例、３０％）；食欲減退（１０例、２５％）；発疹（１１例、２７．５％）；味覚異常（９例、２２．５％）；及び斑状丘疹発疹（８例、２０％）であった。最も多く報告されたグレード３の治療関連有害事象はＣＲＳ（６例、１５％）であった。重篤な有害事象は２２例（５５％）に認められた。臓器別で最も多く報告された重篤な有害事象は免疫系障害（１２例、３０％）であった。２人以上の患者について報告された優先用語別の重篤な有害事象は、ＣＲＳ（１２例、３０％）及び全身の健康状態の悪化（２例、５％）、痛み（２例、５％）であった。２０人の患者（５０％）が、治験実施施設の治験責任医師によってＡＭＧ１６０と関連があると判断された重篤な有害事象を有した。このうち、１例（２．５％）にグレード４の重篤な有害事象（ＣＲＳ及び急性腎損傷）が認められ、１２例（３０％）にＣＴＣＡＥグレード３の重篤な有害事象（ＣＲＳ、ＡＳＴ増加、血小板数減少、嘔吐、貧血、播種性血管内凝固症候群、全身の健康状態の悪化、難聴及び感染）が認められた。データカット時の用量拡大コホートの２人の患者（６．５％）は用量制限毒性を有し、これには、３日間で消失したグレード３の重篤な事象であるＡＳＴ増加を有した１人の対象と、中止に至ったグレード４の重篤な事象である急性腎損傷（７日間を超える持続期間）を有した別の対象が含まれた。

【0180】

３７人の患者（９２．５％）が最悪のグレードとしてグレード１～４のＣＲＳを有した（グレード５のＣＲＳ事象はなかった）。最悪グレードとして、１人の患者（２．５％）はグレード４のＣＲＳ事象を有し、６人の患者（１５％）はグレード３のＣＲＳ事象を有し、２７人の患者（６７．５％）はグレード２のＣＲＳ事象を有し、２９人の患者（７２．５％）はグレード１のＣＲＳ事象を最悪グレードとして有した。２０％以上の患者において最も一般的に報告されたＣＲＳ症状は、発熱、悪心、低血圧、肝酵素の上昇（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ））、嘔吐、下痢、疲労、頻脈、硬直、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の上昇、低酸素症及び食欲不振を含んだ。ＣＲＳは１回目及び２回目の用量で最も重症度が高く、且つ可逆的であり、標準的な治療アプローチ（例えば、トシリズマブ、コルチコステロイド及び昇圧剤）で管理可能であった。段階的投与コホート５、６ａ、６ｂ及び６ｃ（上記の表１を参照されたい）と比較して、ｃＩＶプライミングレジメンを使用する用量拡大コホートでは、用量減少及びグレード３のＣＲＳ事象が少なく（データは示さず）、ｃＩＶプライミングアプローチがＡＭＧ１６０の忍容性プロファイルを改善することを示した。

【0181】

データカットオフ日の時点で、用量拡大コホートにおけるＡＭＧ１６０の有効性及び臨床的有益性の予備的証拠が一部の患者で観察された。ＰＳＡ低下に関しては、患者の８８％が少なくともある程度のＰＳＡ低下を経験した。評価可能な３４人の患者のうち、１２人（３５．３％）が３０％以上のＰＳＡ低下を確認し、９人（２６．５％）が５０％以上のＰＳＡ低下を確認し、７人（２０．６％）が７０％以上のＰＳＡ低下を確認し、３人（８．８％）が９０％以上のＰＳＡ低下を確認した。ＡＭＧ１６０の少なくとも１回の投与を受けた４０人の患者のうちの１６人の患者は、データ分析時、ＲＥＣＩＳＴ測定可能な疾患を有していた。ベースライン後の応答評価を行った１２例（７５％）のＲＥＣＩＳＴ１．１の応答には、安定を有する６例（３７．５％）、未確認の部分奏効を有する３例（１８．８％）及び未確認の進行を有する３例（１８．８％）が含まれた。ガリウムＰＳＭＡ－１１応答（５０％ＳＵＶ_ｍａｘ減少）は、４人の患者（１２．９％）で報告された。ＡＭＧ１６０で治療された患者の大部分は、腫瘍量のマーカーであるＬＤＨレベルが低下し（９７．５％の患者）、骨疾患の指標であるＡＬＰレベルが低下し（９５％の患者）、ＬＤＨ及びＡＬＰレベルの５０％以上の低下は、それぞれ２７．５％及び１７．５％の患者において報告された。

【0182】

この実施例に記載される結果は、サイクル１におけるＡＭＧ１６０の初回用量（すなわちプライミング用量）の２～３日間にわたる持続ＩＶ注入による投与が、短時間のＩＶ注入（例えば、６０分の注入）によるプライミング用量の投与と比較して、ＡＭＧ１６０のピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）を低下させ、Ｃ_ｍａｘまでの時間を２～３日遅らせることを実証する。このＰＫプロファイルは、一部の患者において初期のＩＬ－６、ＴＮＦ－アルファ及びＩＦＮ－ガンマの放出の減少と関連していた。２～３日間の持続注入によってＡＭＧ１６０プライミング用量を投与された患者は、各段階用量を６０分のＩＶ注入によって投与されたＡＭＧ１６０の段階的投与レジメンを受けた患者と比較して、減少した数の重篤な有害事象、用量減少及びグレード２、３のＣＲＳ事象の数の減少を示した。ｃＩＶプライミングコホートの患者は、段階的投与レジメンによって投与された同じ目標用量を投与された患者よりも、ＰＳＡ減少及びＲＥＣＩＳＴ測定可能な応答に関してより良好な有効性応答も示した。

【0183】

実施例２．多発性骨髄腫患者におけるＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のサイクル１プライミング投与レジメン
ＡＭＧ７０１は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）及びＣＤ３の両方に結合し、単鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むＨＬＥ ＢｉＴＥ（登録商標）分子である。ＡＭＧ７０１のアミノ酸配列は、配列番号５０に記載される。本試験は、再発／難治性多発性骨髄腫患者を対象としたＡＭＧ７０１の安全性、忍容性及び有効性を評価する第１相非盲検用量探索試験である。

【0184】

インフォームド・コンセントに署名した後、患者はスクリーニング期間（２１日まで）に入り、その間に患者の適格性が評価される。適格な患者は、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬剤及びＣＤ３８に対する抗体を含む既知の臨床的利益を有する確立された利用可能な療法後に再発し、且つ／又はそうした療法に対し難治性の多発性骨髄腫を有する１８歳以上の患者である。主要な患者選択基準には以下が含まれる：
・以下の基準を満たす多発性骨髄腫：
○以下で定義されるような再発又は難治性の多発性骨髄腫の病理学的に記録された診断：
・３ライン以上の以前の療法後の再発で、療法にはプロテアソーム阻害剤（ＰＩ）、免疫調節薬剤（ＩＭｉＤ）及びＣＤ３８に対する抗体を、同じ治療ライン又は別々の治療ラインで組み合わせて含まれなければならない；又は
・ＰＩ、ＩＭｉＤ及びＣＤ３８に対する抗体に不応性
・難治性多発性骨髄腫は、一次療法又はサルベージ療法を受けている間又は最後の治療から６０日以内の進行中、非応答性（すなわち最小の応答を達成することができない）疾患と定義される。
・再発多発性骨髄腫は、以前に治療された多発性骨髄腫であって、進行し、サルベージ療法の開始を必要とするが、難治性多発性骨髄腫の基準を満たさない多発性骨髄腫として定義される。
○スクリーニング時に以下の１以上により定義される、測定可能な疾患：
・血清タンパク電気泳動で測定された血清Ｍタンパク≧０．５ｇ／ｄＬ
・尿中Ｍタンパク排泄≧２００ｍｇ／２４時間
・関与する血清遊離軽鎖（ｓＦＬＣ）測定値＞１０ｍｇ／ｄＬ（国際骨髄腫ワーキンググループ（ＩＭＷＧ）の効果判定基準によりｓＦＬＣ比が異常である場合）
・Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスが２以下
・スクリーニング時の治験責任医師の判断による平均余命が少なくとも３か月
・以下の輸血支援なしの血液機能：
○絶対好中球絶対数（ＡＮＣ）≧１．０×１０^９／Ｌ（増殖因子の支援なし）
○血小板数≧５０×１０^９／Ｌ（スクリーニング評価から７日以内の輸血なし）
○ヘモグロビン≧８．０ｇ／ｄＬ（輸血はスクリーニングの４８時間前まで許可）
・Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を用いて又は血漿及び尿クレアチニン濃度を用いた２４時間の尿採取を介して、計算又は測定されたクレアチニンクリアランス≧３０ｍＬ／分によって定義される腎機能；及び
・以下の肝機能：
○アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＜３×正常上限（ＵＬＮ）
○総ビリルビン（ＴＢＩＬ）＜１．５×ＵＬＮ（ギルバート症候群によると考えられない限り）

【0185】

ＡＭＧ７０１の初回用量（例えば、プライミング用量）がサイクル１の第１週の２日間又は７日間にわたる持続ＩＶ注入として投与され、その後、サイクルの８日目に始まるＡＭＧ７０１の目標用量の週１回の短時間ＩＶ注入（例えば、６０分間のＩＶ注入）が続く。ＡＭＧ７０１は２８日サイクルで投与され、ＡＭＧ７０１の初回用量の日をサイクルの１日目として定義する。サイクル１の第１週の持続ＩＶ注入によるＡＭＧ７０１の投与は、サイクル１において可能な限り早く、且つＡＭＧ７０１が週１回の投与間隔で投与されたときに以前に観察されたものの範囲内で、ＡＭＧ７０１の有効な曝露レベルを達成するように設計される。理論に束縛されるものではないが、これらの持続ＩＶプライミング投与レジメンは、ＰＫシミュレーションに基づき、２～４日以内に血清遊離ＡＭＧ７０１予測有効曝露を達成すると考えられるが、より重要なことには、それらは、遊離ＡＭＧ７０１血清曝露の急峻な増加、例えば注入開始の１時間以内のピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）と共に、短時間の６０分ＩＶ注入で見られるような遊離ＡＭＧ７０１血清曝露の急激な増加を回避するとも予測される。遊離ＡＭＧ７０１濃度の緩慢な上昇及びＣ_ｍａｘまでの時間の遅延は、ＣＲＳのリスクを低減すると考えられる。これらのｃＩＶプライミング投与レジメンは、６０分のＩＶ注入によって投与されたＡＭＧ７０１の初期サイクル１用量後のグレード２以上のＣＲＳの誘導と関連している、遊離ＡＭＧ７０１の血清濃度の急速な増加を伴わずに、１週間中の標的細胞の最適なＴ細胞誘導を可能にすると考えられる。

【0186】

２つのコホートにおいて、患者は２日の期間（サイクル１の１～２日目）にわたる持続注入によってＡＭＧ７０１の初回用量（例えば、プライミング用量）を投与され、その後、サイクル１の３日目にブースト用量の短時間ＩＶ注入（例えば、６０分注入）が続き、その後、サイクル１の２８日サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入として目標用量が投与される。２つの他方のコホートでは、患者は７日の期間（サイクル１の１～７日目）の期間にわたる連続注入によってＡＭＧ７０１の初回用量（例えば、プライミング用量）を投与され、その後、サイクル１の２８日サイクルの８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入として目標用量が投与される。サイクル１後、サイクル２及びその後の全てのサイクルは、２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目にＡＭＧ７０１の短時間ＩＶ注入（例えば、約６０分）としての目標用量の投与を伴う。ＡＭＧ７０１のプライミング用量は、示された日数の期間にわたって（例えば、２又は７日間にわたって）一定の速度で投与される。例えば、７日間にわたって投与される８．４ｍｇのプライミング用量では、１．２ｍｇ／日を７日間送達するようにプライミング用量を一定の速度で連続的に注入する。同様に、２日間にわたって投与される４．６ｍｇのプライミング用量では、２．３ｍｇ／日を２日間送達するようにプライミング用量を一定の速度で連続的に注入する。

【0187】

患者は、以下のように４つのコホートのそれぞれにおいて投与される：
・コホート１：サイクル１の１～７日目に７日間にわたる持続ＩＶ注入によって８．４ｍｇのプライミング用量が投与され（例えば、１．２ｍｇ／日を７日間）、続いてサイクル１の８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１２ｍｇの目標用量が投与される
・コホート２Ａ：サイクル１の１～７日目に７日間にわたる持続ＩＶ注入によって１６．１ｍｇのプライミング用量が投与され（例えば、２．３ｍｇ／日を７日間）、続いてサイクル１の８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１２ｍｇ～１８ｍｇの目標用量が投与される
・コホート２Ｂ：サイクル１の１日目～２日目に２日間にわたる持続ＩＶ注入によって４．６ｍｇのプライミング用量が投与され（例えば、２．３ｍｇ／日を２日間）、続いてサイクル１の３日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として０．８ｍｇのブースト用量が投与され、続いてサイクル１の８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１２ｍｇ～１８ｍｇの目標用量が投与される
・コホート３：サイクル１の１日目～２日目に２日間にわたる持続ＩＶ注入によって９．２ｍｇのプライミング用量が投与され（例えば、４．６ｍｇ／日を２日間）、続いてサイクル１の３日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１．６ｍｇのブースト用量が投与され、続いてサイクル１の８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１２ｍｇ～１８ｍｇの目標用量が投与される。

【0188】

コホート２Ａ及び／又はコホート２Ｂは、コホート１からの全ての利用可能な安全性、ＰＫ及び薬力学（ＰＤ）データのレビュー後にのみ選択的に開かれる。コホート３は、コホート２Ａ及び／又は２Ｂからの全ての利用可能な安全性、ＰＫ及びＰＤデータのレビュー後にのみ開かれる。各コホートには、４～７人の適格な患者を登録される。サイクル１のＡＭＧ７０１注入の開始前に、患者に禁忌でない限り、５０ｍｇのプレドニゾン、４０ｍｇのメチルプレドニゾン又は８ｍｇのデキサメタゾンに相当する用量のグルココルチコイドを、サイクル１におけるＡＭＧ７０１の各用量の投与から１時間以内に患者に静脈内投与する。サイクル２のＡＭＧ７０１の初回用量前に、グレード１を超えるＣＲＳが先行する用量の投与と共に生じる場合、８ｍｇのデキサメタゾン又は均等な用量のグルココルチコイドをサイクル２におけるＡＭＧ７０１の初回用量の１時間以内に患者に静脈内投与する。さもなければ、４ｍｇのデキサメタゾン（２５ｍｇのプレドニゾン又は２０ｍｇのメチルプレドニゾンに相当）を、サイクル２におけるＡＭＧ７０１の初回用量の１時間以内に患者に静脈内投与する。

【0189】

ＡＭＧ７０１の有効性は、ＩＭＷＧ効果判定基準（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ．，Ｖｏｌ．１７：ｅ３２８－３４６，２０１６を参照されたい）に従った全体的応答及び以下の各応答カテゴリーにおける最良の全体的応答によって評価される：厳密完全奏効（ｓＣＲ）、完全奏効（ＣＲ）、非常に良好な部分奏効（ＶＧＰＲ）及び部分奏効（ＰＲ）。各応答カテゴリーのＩＭＷＧ効果判定基準は以下の通りである：
・完全奏効（ＣＲ）：
〇血清及び尿に対する陰性Ｍタンパク免疫固定、
〇軟部組織形質細胞腫の消失、及び
〇骨髄（ＢＭ）穿刺液の５％未満の形質細胞
〇ｓＦＬＣによってのみ測定可能なベースラインの疾患を有する患者では、正常なＦＬＣ比が要求される
・厳密完全奏効（ｓＣＲ）：
〇上記に定義されるＣＲ、
〇正常なＦＬＣ比、
〇免疫組織化学によるＢＭ生検におけるクローン細胞の欠如（κ／λ比≦４：１又はκ及びλ患者ではそれぞれ１００個以上の形質細胞を計数した後１：２以上）
・非常に良好な部分奏効（ＶＧＰＲ）：
〇血清及び尿Ｍタンパクが免疫固定で検出できるが、電気泳動で検出できないか、又は血清Ｍタンパクで９０％以上の減少＋尿Ｍタンパクレベルが１００ｍｇ／２４時間未満
〇ｓＦＬＣによってのみベースラインの測定可能な疾患を有する患者では、Ｍタンパク基準の代わりに、関与するＦＬＣレベル及び関与しないＦＬＣレベルの差を９０％以上減少させる必要がある
〇他の基準によってＶＧＰＲを達成した患者では、軟部組織形質細胞腫がベースラインと比較して、測定された病変（ＳＰＤ）の最大垂直直径の積の合計において９０％を超えて減少しなければならない
・部分奏効（ＰＲ）：
〇血清Ｍタンパクが５０％以上減少し、２４時間で尿中Ｍタンパクが９０％以上又は２００ｍｇ／２４時間未満まで減少する
〇ｓＦＬＣによってのみベースラインの測定可能な疾患を有する患者では、Ｍタンパク基準の代わりに、関与するＦＬＣレベル及び関与しないＦＬＣレベルの差を５０％以上減少させる必要がある
○血清及び尿中Ｍ－タンパク質が測定不可能であり、血清フリーライトアッセイも測定不可能である場合、ベースラインＢＭ形質細胞比率が３０％以上であれば、Ｍ－タンパクの代わりに形質細胞の５０％以上の減少が必要である
○軟組織形質細胞腫がベースライン時に存在する場合、そのサイズ（ＳＰＤ）の５０％以上の減少も必要とされる。

【0190】

有害事象及び重篤な有害事象並びに疾患関連事象の評価は、試験全体を通して行い、評価し、原資料に記録する。全ての事象の重症度を、ＣＴＣＡＥ、バージョン４．０に従って評価する。しかし、ＣＲＳは、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．１２４：１８８－１９５，２０１４に記載のＬｅｅ基準に従って評価する。簡潔に述べると、この研究で使用されるＣＲＳグレーディングは、以下の表３に記載されている。

【0191】

【表3】

【0192】

４人の患者がコホート１に登録され、サイクル１の１～７日目に７日間にわたる持続ＩＶ注入によってＡＭＧ７０１の８．４ｍｇのプライミング用量が投与され（例えば、１．２ｍｇ／日を７日間）、続いてサイクル１の８日目、１５日目及び２２日目に短時間ＩＶ注入（例えば、６０分ＩＶ注入）として１２ｍｇの目標用量が投与された。サイクル２及びその後のサイクルでは、ＡＭＧ７０１を、１２ｍｇの目標用量で、週１回の短時間ＩＶ注入によって投与した。コホートに登録された４人の患者のうち、１人の患者は、サイクル１１において確認されたＣＲを有し、治療を続け、１人の患者は、サイクル３において確認されたＶＧＰＲを有したが、サイクル６において進行した。残りの２人の患者は、有害事象のためにサイクル１を完了しなかった。コホートの４人の患者のうちの２人は、グレード１のＣＲＳ事象を有した一方、他の２人の患者は、グレード２のＣＲＳ事象を有した。

【0193】

実施例３．ＣＬＤＮ１８．２×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のサイクル１プライミング用量レジメンの比較
ＡＭＧ９１０は、細胞タイトジャンクションタンパク質ＣＬＤＮ １８のアイソフォームのクローディン（ＣＬＤＮ）１８．２とＣＤ３の両方に結合し、単鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むＨＬＥ ＢｉＴＥ（登録商標）分子である。ＡＭＧ９１０のアミノ酸配列は、配列番号１６０に記載される。ＡＭＧ９１０はＴ細胞をＣＬＤＮ１８．２発現細胞に向けてリダイレクトし、Ｔ細胞媒介性細胞傷害によってそれらを死滅させるように設計されている。ＡＭＧ９１０は、ＣＬＤＮ１８．２陽性の転移性又は局所進行切除不能胃腺癌又は胃食道接合部（ＧＥＪ）腺癌を有する成人対象における治療のために現在臨床試験が行われている。本試験は、ＣＬＤＮ１８．２＋胃腺癌患者におけるＡＭＧ９１０の安全性、忍容性、薬物動態及び薬力学的作用を評価するための第１相非盲検用量探索試験である。

【0194】

組織学的又は細胞学的に確認された、ＣＬＤＮ１８．２陽性の転移性又は局所進行切除不能胃腺癌又はＧＥＪ腺癌の患者で、白金、フルオロピリミジン、タキサン又はイリノテカン及び承認された血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）抗体／チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む２つ以上の以前の標準的な全身療法ライン後に再発した患者を本試験に登録した。線量探索は、２つの段階：単一患者コホートに続いて複数の患者コホート（１コホート当たり３～４人の患者）で行った。ＡＭＧ９１０を２８日サイクルで患者に投与し、ＡＭＧ９１０の初回投与日をサイクルの１日目と定義した。

【0195】

コホート１に登録された単一の患者について、ＣＲＳグレード２及び腹痛グレード２の観察は、単一の患者コホートから複数の患者コホートへの切り替えを誘発した。第１の複数の患者コホートにおいて、サイクル１の１、３、８、１５及び２２日目のそれぞれに、ＡＭＧ９１０の目標用量を短時間ＩＶ注入（例えば、約６０分の注入）によって投与した。サイクル２及びその後の全てのサイクルにおいて、目標用量を短時間ＩＶ注入として週１回、すなわち各２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目に投与した。この第１の複数の患者コホート１に登録された６人の患者のうち、５人が用量制限毒性（ＤＬＴ）について評価可能であった。２つのＤＬＴ（グレード３の高トランスアミナーゼ血症及びグレード３の心房細動）が５人の患者のうちの２人に観察された。グレード３のＣＲＳの設定において、グレード３の心房細動のＤＬＴが報告された。さらに、別の患者はグレード２のＣＲＳ事象を経験した。

【0196】

コホート１と同じ目標用量を有するｃＩＶプライミングレジメンのコホート１ｂには４人の患者が登録された。コホート１ｂでは、初回用量（例えば、プライミング用量）のＡＭＧ９１０を、サイクル１の１日目に開始する４日間（９６時間）にわたる持続ＩＶ注入として投与し、その後、サイクル１の８日目、１５日目及び２２日目のそれぞれにおいて、短時間ＩＶ注入（約６０分の注入）によってＡＭＧ９１０の目標用量を投与した。コホート１における投与レジメンにおいて１日目及び３日目に与えられた用量の合計であるプライミング用量（すなわち目標用量の２倍）を４日間にわたって一定の速度で投与した。サイクル２及びその後の全てのサイクルにおいて、目標用量を短時間ＩＶ注入として週１回、すなわち各２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目に投与した。コホート１ｂに登録された４人の患者は、全て８日目まで投与を完了し、その時点で、１人の患者は、治療を中止し、残りの３人の患者は、治療を続け、サイクル１の投与を完了した。４人の患者のうちの２人は、グレード１のＣＲＳのみを発症した。サイクル１の投与期間中、コホート１ｂの患者では、投与に関連するグレード３の毒性は報告されなかった。これらの結果は、サイクル１の１週目におけるｃＩＶプライミング投与方法の使用がグレード２以上のＣＲＳ事象又は用量制限毒性を誘発することなく、ＡＭＧ９１０の目標用量の投与を可能にし、患者はサイクル１の１週目における短時間ＩＶ注入による同じ目標用量の投与と比較して、より良好にＡＭＧ９１０を忍容することができたことを示す。

【0197】

実施例４．多重特異性Ｔ細胞誘導分子のための連続ＩＶプライミングレジメン
ｃＩＶプライミングレジメンが他のタイプのＴ細胞誘導分子の有害事象も低減するかどうかを評価するために、２つの癌細胞抗原（カドヘリン３（ＣＤＨ３）及びメソテリン（ＭＳＬＮ））とＴ細胞上のＣＤ３とに結合する多重特異性Ｔ細胞誘導分子を、２つの異なる投与レジメンに従って雄カニクイザルに投与した。ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ Ｔ細胞誘導分子（ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥ）は、ヒトＣＤＨ３に結合するｓｃＦｖドメイン、ヒトＭＳＬＮに結合するｓｃＦｖドメイン、ヒトＣＤ３に結合する２つのｓｃＦｖドメイン及び一本鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含む。ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥ分子を、以下の４つの異なる処置群においてサルに投与した：
・第１群（ｎ＝２）：試験の１、２、３、４、５、６、７、８及び１５日目（１日１回の投与；用量レベル１）のそれぞれにおいて、緩徐静脈内注射（約２分間）により１０００μｇ／ｋｇを投与
・第２群（ｎ＝１）：試験の１、２、３、４、５、６、７、８及び１５日目（１日１回の投与；用量レベル２）のそれぞれにおいて、緩徐静脈内注射（約２分間）により５０００μｇ／ｋｇを投与
・第３群（ｎ＝２）：７日間にわたる持続ＩＶ注入として７０００μｇ／ｋｇを投与（すなわち試験１～７日目；１０００μｇ／ｋｇ／日から）及び試験の８日目及び１５日目（ｃＩＶプライミング；用量レベル１）のそれぞれにおいて緩徐静脈内注射（約２分間）により１０００μｇ／ｋｇを投与
・第４群（ｎ＝１）：７日間にわたる持続ＩＶ注入として３５０００μｇ／ｋｇを投与（すなわち試験１～７日目；５０００μｇ／ｋｇ／日から）及び試験の８日目及び１５日目（ｃＩＶプライミング；用量レベル２）のそれぞれにおいて緩徐静脈内注射（約２分間）により５０００μｇ／ｋｇを投与。

【0198】

ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥの同等の血清曝露が第１群と第３群との間（１０００μｇ／ｋｇ用量レベル）及び第２群と第４群との間（５０００μｇ／ｋｇ用量レベル）の動物で観察され、これは、分子の薬物動態プロファイルが２つの異なる投与アプローチ間で類似していたことを示している（データは示さず）。興味深いことに、ｃＩＶプライミング投与レジメンを用いてＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥを投与された動物では、１日１回の投与レジメンと比較して、副作用の臨床的徴候がより少なかった（表４）。

【0199】

【表4】

【0200】

ＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥを１日１回投与した後、１日目の投与２時間後に第１群（１０００μｇ／ｋｇ／用量）の１匹の動物及び第２群（５０００μｇ／ｋｇ／用量）の１匹の動物の後肢にわずかな立ち毛が観察された。２日目に、第１群の動物は、投与の２時間後に一過性の異常な歩行を示し、投与の４時間後に軽度の全身性振戦に関連するわずかな活動の減少を示した。同様の臨床徴候が第２群の動物でも観察された。３日目に、赤色の皮膚及び赤い斑点が投与前及び投与後４時間まで第１群及び第２群のこれらの両方の動物で認められた。４日目に第１群の動物の口、前肢、後肢及び陰嚢にわずかな落屑及び／又は乾燥皮膚が観察され（８日目まで）、第２群の動物は、鼠径部の毛がわずかに赤色に変色した（７日目まで）。さらに、第１群の罹患動物が収容されたケージで、一過性の摂餌量の減少が認められ、これは、この動物でのみみられた一過性の体重減少と関連していた。

【0201】

対照的に、同じ用量のＣＤＨ３×ＭＳＬＮ ＴＣＥのｃＩＶプライミングレジメンを受けた第３群及び第４群の動物では、臨床徴候は観察されなかった。第３群の２匹の動物中の１匹は、１日目の注入開始から２時間後、投与に関連した中等度の体温低下を示した。この減少は一過性であり、値は４時間以内にベースラインに近い値に戻った。

【0202】

以下を含む自然免疫応答の急性期の指標が４つの全ての群で観察された：２日目のＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）の最小から中程度の増加（図６Ａ及び６Ｂ）、並びに２日目及び９日目のアルブミン及びコレステロールの最小から軽度の減少、並びに１６日目の個々の動物における持続（データは示さず）（これらに限定されない）。ＣＲＰの値は、均等な用量レベルでのｃＩＶプライミング群（第３群及び第４群；図６Ｂ）と比較して、１日１回の投与群（第１群及び第２群；図６Ａ）においてかなり高く、炎症のレベルの低下を示唆した。この分子のＴ細胞誘導活性を示すＣＤ２５＋及びＣＤ６９＋Ｔ細胞集団の両方の活性化Ｔ細胞の数の増加が、４つの群全てにおいて観察された（図７Ａ、７Ｂ、８Ａ及び８Ｂ）。

【0203】

この試験の結果は、分子の初回用量が数日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与されるｃＩＶプライミングレジメンを使用する多重特異性Ｔ細胞誘導分子の投与が、１日１回の緩徐なＩＶ注射による分子の投与と比較して、副作用の誘発を減少させるが、同等レベルのＴ細胞活性化を生じさせることを示している。

【0204】

実施例５．消化器癌患者におけるＭＵＣ１７×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞結合分子のサイクル１プライミング投与レジメン
ＡＭＧ１９９は、ムチン１７（ＭＵＣ１７）及びＣＤ３の両方に結合し、単鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むＨＬＥ ＢｉＴＥ（登録商標）分子である。ＡＭＧ１９９のアミノ酸配列は、配列番号１７１に記載される。本試験は、ＭＵＣ１７陽性胃癌又は胃食道接合部癌を有する患者におけるＡＭＧ１９９の安全性、忍容性及び抗腫瘍活性を評価するための第１相非盲検用量探索試験である。組織学的又は細胞学的に確認された、ＭＵＣ１７陽性の転移性又は局所進行切除不能胃腺癌又は胃食道接合部（ＧＥＪ）腺癌の患者で、白金、フルオロピリミジン、タキサン又はイリノテカン及び承認された血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）抗体／チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む２つ以上の以前の標準的な全身療法ライン後に再発した患者を本試験に登録する。ＡＭＧ１９９は２８日サイクルで患者に投与され、ＡＭＧ１９９の初回用量の日をサイクルの１日目として定義する。以下の２つの投与レジメンを、患者の別々のコホートにおいて評価する：
・投与レジメン＃１：サイクル１の１日目、３日目、８日目、１５日目及び２２日目のそれぞれにおいて、ＡＭＧ１９９の目標用量を短時間ＩＶ注入（例えば、約６０分の注入）によって投与する。サイクル２及びその後の全てのサイクルにおいて、目標用量を短時間ＩＶ注入として週１回、すなわち各２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目に投与する。
・投与レジメン＃２（ｃＩＶプライミング）：初回用量（例えば、プライミング用量）のＡＭＧ１９９を、サイクル１の１日目に開始する４日間（９６時間）にわたる持続ＩＶ注入として投与し、その後、サイクル１の８日目、１５日目及び２２日目のそれぞれにおいて、短時間ＩＶ注入（約６０分の注入）によってＡＭＧ１９９の目標用量を投与する。投与レジメン＃１において１日目及び３日目に与えられた用量の合計であるプライミング用量（すなわち目標用量の２倍）を４日間にわたって一定の速度で投与する。サイクル２及びその後の全てのサイクルにおいて、目標用量を短時間ＩＶ注入として週１回、すなわち各２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目及び２２日目に投与する。

【0205】

ＡＭＧ１９９の抗腫瘍活性を、固形癌の治療効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１及びｉＲＥＣＩＳＴによる客観的応答によって評価する。有害事象及び重篤な有害事象並びに疾患関連事象の評価は本試験を通して行い、ＣＴＣＡＥバージョン５．０に従って評価する。しかし、ＣＲＳは、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．１２４：１８８－１９５，２０１４に記載されるＬｅｅ基準に従って評価し（例えば、上記の表３を参照されたい）、腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）は、Ｃｏｉｆｆｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２６：２７６７－２７７８，２００８で参照されているＣａｉｒｏ Ｂｉｓｈｏｐ基準に従って評価する。

【0206】

ｃＩＶプライミングレジメンによるＡＭＧ１９９の投与は、投与レジメン＃１による投与と比較して、患者におけるＣＲＳ事象の発生率の減少及び／又は重症度の低下を誘導すると予想される。ｃＩＶプライミングレジメンの使用は、投与レジメン＃１よりも高い目標用量の投与を可能にすることも期待され、これは、ＡＭＧ１９９の抗腫瘍効果を増強し得る。

【0207】

実施例６．小細胞肺癌患者におけるＤＬＬ３×ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞誘導分子のためのサイクル１プライミング投与レジメン
ＡＭＧ７５７は、デルタ様リガンド３（ＤＬＬ３）及びＣＤ３の両方に結合し、単鎖ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むＨＬＥ ＢｉＴＥ（登録商標）分子である。ＡＭＧ７５７のアミノ酸配列は、配列番号４０に記載される。本試験は、再発／難治性小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を有する患者におけるＡＭＧ７５７の安全性、忍容性及び抗腫瘍活性を評価するための第１相非盲検用量探索研究である。

【0208】

少なくとも１つのプラチナ製剤ベースのレジメン後に進行又は再発した、組織学的又は細胞学的に確認されたＳＣＬＣを有する１８歳以上の患者を本試験に登録する。ＡＭＧ７５７は２８日サイクルで患者に投与され、ＡＭＧ７５７の初回用量の日をサイクルの１日目として定義する。初回用量（例えば、プライミング用量）のＡＭＧ７５７を、サイクル１の１日目に開始する３日間（７２時間）にわたる持続ＩＶ注入として投与し、その後、サイクル１の８日目及び１５日目のそれぞれにおいて、短時間ＩＶ注入（約６０分の注入）によってＡＭＧ７５７の目標用量を投与する。プライミング用量は目標用量の約３０％～約３５％であり、３日間にわたって一定の速度で投与される。サイクル２及びその後の全てのサイクルにおいて、目標用量を短時間ＩＶ注入として２週に１回、すなわち各２８日サイクルの１日目及び１５日目に投与する。全ての患者が、サイクル１におけるＡＭＧ７５７の全ての投与の６～１６時間前に８ｍｇのＰＯデキサメタゾンで前治療される。さらに、サイクル１におけるＡＭＧ７５７の全ての用量前の１時間以内にデキサメタゾン８ｍｇＩＶが投与された。

【0209】

ＡＭＧ７５７の抗腫瘍活性を、造影ＭＲＩ／ＣＴによって評価し、固形癌の治療効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１による客観的応答によって決定する。有害事象及び重篤な有害事象並びに疾患関連事象の評価は本試験を通して行い、ＣＲＳをＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．１２４：１８８－１９５，２０１４（例えば、上記の表３を参照されたい）に記載されるＬｅｅ基準に従って評価することを除き、ＣＴＣＡＥバージョン４．０に従って評価する。

【0210】

７２時間にわたる持続静脈内注入によるＡＭＧ７５７の初回用量（例えば、プライミング用量）の投与は、６０分間の持続期間にわたって注入される場合のＡＭＧ７５７の同じ総用量と比較して、ＣＲＳに関連する症状の強さ及び／又は頻度を低減し得ると仮定される。さらに、このようなｃＩＶプライミングアプローチは、段階的ステップ投与パラダイムと比較して、治療の第１週中のＡＭＧ７５７のより高い累積平均血清曝露を達成するのに役立ち得、これは薬力学的活性の増強をもたらし得ると仮定される。

【0211】

本明細書において論じ、引用してきた全ての刊行物、特許及び特許出願は、参照によりその全体が本明細書により組み込まれる。開示した本発明は、記載された特定の方法論、プロトコル及び材料に限定されず、これらは、変化し得ることが理解される。また、本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではないことも理解される。

【0212】

当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を、単なるルーチン実験を使用して認識又は確認することができるであろう。このような均等物は、続く特許請求の範囲に包含されるものとする。

【0213】

【表5】

【0214】

【表6】

【0215】

【表7】

【0216】

【表8】

【0217】

【表9】

【0218】

【表10】

【0219】

【表11】

【0220】

【表12】

【0221】

【表13】

【0222】

【表14】

【0223】

【表15】

【0224】

【表16】

【0225】

【表17】

【0226】

【表18】

【0227】

【表19】

【0228】

【表20】

【0229】

【表21】

【0230】

【表22】

【0231】

【表23】

【0232】

【表24】

【0233】

【表25】

【0234】

【表26】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

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【国際調査報告】