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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-06
(54)【発明の名称】眼疾患の処置のための組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 48/00 20060101AFI20230929BHJP
C12N 15/35 20060101ALI20230929BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20230929BHJP
C07K 14/015 20060101ALI20230929BHJP
C07K 14/47 20060101ALI20230929BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20230929BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20230929BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20230929BHJP
A61K 31/711 20060101ALI20230929BHJP
【ＦＩ】
A61K48/00
C12N15/35 ZNA
C12N15/12
C07K14/015
C07K14/47
C12N7/01
A61K38/17
A61P27/02
A61K31/711
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023512665
(86)(22)【出願日】2021-07-20
(85)【翻訳文提出日】2023-02-17
(86)【国際出願番号】 IB2021000509
(87)【国際公開番号】W WO2022018518
(87)【国際公開日】2022-01-27
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523058788
【氏名又は名称】インスピラール リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110003797
【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】シー，ジョンドン
(72)【発明者】
【氏名】チャオ，ウェイ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4B065CA46
4C084AA13
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA22
4C084BA23
4C084CA18
4C084CA53
4C084DC50
4C084MA58
4C084NA14
4C084ZA331
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA17
4C086EA18
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA33
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA01
4H045CA40
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
網膜色素変性症を処置または予防するための組成物が、本明細書に提供される。組成物は、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドを含む。組成物は、更に第３の配列および第４の配列をさらに含んでもよい。組換えアデノ随伴ウイルス粒子、システム、方法、およびこれらを実施または使用するためのキットも本明細書に提供される。
【選択図】図２Ａ
【選択図】図２Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
医薬組成物であって、前記医薬組成物は、（ｉ）第１のポリヌクレオチド、そこで、第１のポリヌクレオチドは言った、第１のシーケンスを操作しやすく含む、第１のプロモーターと別のシーケンスにリンクされた、操作しやすく、別のプロモーターにリンクされた、第１のシーケンスは言った、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド・タンパク質のエンコード、第２のシーケンスは言った、ＡＡＶレプ・タンパク質のエンコード、第１のプロモーターは言った、および第２のプロモーター言った、昆虫細胞の発現のために適している、および
（ｉｉ）別のポリヌクレオチド、そこで、第２のポリヌクレオチドは言った、３番めのシーケンスを操作しやすく含む、ＣＭＶプロモーターにリンクされた、ＣＡＧプロモーター、ＭＮＤＵ３プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーター、およびそこで、３番目のシーケンスが色素性網膜炎ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）ポリペプチドをエンコードする。
【請求項2】
請求項１の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードする）。
【請求項3】
請求項１または２の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは最適化されたコドンである）。
【請求項4】
請求項１の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）：２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：２．
【請求項5】
請求項１の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）：３－６または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３－６．
【請求項6】
請求項５の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）：３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３．
【請求項7】
請求項５の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）：４または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：４．
【請求項8】
請求項５の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）：５または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：５．
【請求項9】
請求項５の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）：６または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：６．
【請求項10】
請求項１の組成物（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）。
【請求項11】
請求項１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターがｐ１０プロモーターまたはｐｏｌｈプロモーターであると言った。
【請求項12】
請求項１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐ１０プロモーターであると言った。
【請求項13】
請求項１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐｏｌｈプロモーターであると言った。
【請求項14】
請求項１の組成物（そこではＲＰＥ ６５遺伝子プロモーター、細胞のレチナールデヒド結合蛋白質（ＣＲＡＬＢＰ）、ネズミ科の１１－ｃｉｓ－レチノール脱水素酵素（ＲＤＨ）プロモーター、ロドプシン・プロモーター、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーター、コラーゲン分解酵素阻害－３（ＴＩＭＰ３）プロモーター、光受容体レチノール結合蛋白質プロモーター、卵黄様黄斑ジストロフィ２プロモーターとＩｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ類網膜の結合蛋白質（ＩＲＢＰ）プロモーターから構成される群から上述の眼に特有のプロモーターは選択される）。
【請求項15】
請求項１４の組成物（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号のうちのいずれか１つを含む）：７－８または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７－８．
【請求項16】
請求項１５の組成物（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）：７または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７．
【請求項17】
請求項１５の組成物（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）：８または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：８．
【請求項18】
請求項１の組成物、そこで、３’終了、第１のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
【請求項19】
請求項１の組成物、そこで、３’終了、第２のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
【請求項20】
請求項１の組成物、そこで、第１のシーケンスは言い、第２のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
【請求項21】
請求項２０の組成物（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）。
【請求項22】
請求項２０の組成物（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）。
【請求項23】
請求項２０の組成物（そこでは上述のシーケンス・コード化はリンカーがさらにプロモーターを含むと言った）。
【請求項24】
請求項２３の組成物（そこでは上述のプロモーターはＦＭＤＶプロモーターである）。
【請求項25】
請求項１の組成物、そこで、３’終了は言った、３番目のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
【請求項26】
請求項１８、１９、または２５の組成物（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）：９－１２または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９－１２．
【請求項27】
請求項２６の組成物（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）：９または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９．
【請求項28】
請求項２６の組成物（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）：１０または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１０．
【請求項29】
請求項２６の組成物（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）：１１または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１１．
【請求項30】
請求項２６の組成物（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）：１２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１２．
【請求項31】
請求項１の組成物（そこでは上述の第２のポリヌクレオチドはさらに詰め物をする人シーケンスを含む）。
【請求項32】
請求項１の組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスをさらに含むと言いました。
【請求項33】
請求項３２の組成物、そこで、逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）であると言った、２つのＩＴＲシーケンスをセロタイプで分けます。
【請求項34】
請求項１の組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含むと言いました。
【請求項35】
請求項３４の組成物、前記治療用タンパク質は以下の群から選択される：ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＳＭＣｌ、ＳＭＣ３、Ｗｈｉｒｌｉｎ、ＰＤＥδとＲＡＢ８。
【請求項36】
請求項３４の組成物、そこで、３番目のシーケンスは言い、４番目のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
【請求項37】
請求項３６の組成物（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）。
【請求項38】
請求項３６の組成物（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）。
【請求項39】
イントロンをさらに含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項40】
請求項３９の組成物（そこでは上述のイントロン・シーケンスは配列番号を含む）：１３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１３．
【請求項41】
請求項１の組成物、そこで、第１のポリヌクレオチドがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むと言った、５つのシーケンスをセロタイプで分けます。
【請求項42】
昆虫細胞へ請求項１－４１のうちのいずれか１つの組成物を導入することにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子。
【請求項43】
請求項４２の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）。
【請求項44】
Ｘを処置するためのシステムは、請求項４２または４３と薬学的に許容可能な担体の上述の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む色素性網膜炎をリンクしました。
【請求項45】
Ｘを処置する方法は色素性網膜炎をリンクしました、その必要性のある上述の対象に投与することを含むこと、請求項４４のシステム。
【請求項46】
請求項４４と指示の上述のシステムを含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本出願は、２０２０年７月２１日に出願された中国特許出願公開第２０２０１０７０５０６９．Ｘ号の利益を主張するものであり、その内容はすべて参照によって本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年７月２１日に出願された中国特許出願公開第２０２０１０７０５０６９．Ｘ号の利益を主張するものであり、その内容はすべて参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【0002】
色素性網膜炎（ＲＰ）は、夜間視力の障害を含み、周辺視力（側面図）の損失を含む症状を備えた、ビジョン損失に至ることができる遺伝的な眼疾患です。幼年期の通常現われますが、症状は徐々に悪化します。Ｘをリンクした色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）は、Ｘ染色体に置かれた色素性網膜炎ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）における変異による引き起こされた一種のＲＰです。疾患患者は、夜盲症、次に視覚の徐々の低減と結局完成した盲目から始めます。
【0003】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０２１年７月１９日に作成されたＡＳＣＩＩのコピーは、５７８３７－７０８＿６０１＿ＳＬという名称であり、３６，５１２バイトのサイズである。
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０２１年７月１９日に作成されたＡＳＣＩＩのコピーは、５７８３７－７０８＿６０１＿ＳＬという名称であり、３６，５１２バイトのサイズである。
【発明の概要】
【0004】
現在、ＸＬＲＰの処置において、有効な薬物の開発においてニーズと方法があります。本の開示の組成物、組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子、システム、方法とキットは、それについてニーズを解決する。
【0005】
組成物が本明細書に開示される。態様における、組成物は（ｉ）第１のポリヌクレオチドを含む、そこでは最初のポリヌクレオチドは、第１のプロモーターに操作しやすくリンクされた第１のシーケンス、別のプロモーターに操作しやすくリンクされた別のシーケンス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド・タンパク質をエンコードする最初のシーケンス、ＡＡＶレプ・タンパク質をエンコードする第２のシーケンス、第１のプロモーターと第２のプロモーターを含みます、昆虫細胞の発現のために適している、および（ｉｉ）別のポリヌクレオチド、そこでは、第２のポリヌクレオチドは、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＭＮＤＵ３プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーターに操作しやすくリンクされた３番めのシーケンス、と３番目のシーケンスが色素性網膜炎ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）ポリペプチドをどこでエンコードするかを含みます。
【0006】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードします。幾つかの実施形態において、第２のペプチドはへプタペプチドである。幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。２または配列番号への少なくとも９０％の同一性を含むシーケンス：２．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。３または配列番号への少なくとも９０％の同一性を含むシーケンス：３．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。４または配列番号への少なくとも９０％の同一性を含むシーケンス：４．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。５または配列番号への少なくとも９０％の同一性を含むシーケンス：５．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。６または配列番号への少なくとも９０％の同一性を含むシーケンス：６．
【0007】
いくつかの実施形態では、上皮細胞はヒト上皮細胞である。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターまたは第２のプロモーターはｐ１０プロモーターまたはｐｏｌｈプロモーターです。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターまたは第２のプロモーターはｐ１０プロモーターです。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターまたは第２のプロモーターはｐｏｌｈプロモーターです。いくつかの実施形態では、眼に特有のプロモーターは、ＲＰＥ ６５遺伝子プロモーター、細胞のレチナールデヒド結合蛋白質（ＣＲＡＬＢＰ）、ネズミ科の１１－ｃｉｓ－レチノール脱水素酵素（ＲＤＨ）プロモーター、ロドプシン・プロモーター、Ｒｈｏｄｏｐｏｓｉｎキナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーター、コラーゲン分解酵素阻害－３（ＴＩＭＰ３）プロモーター、光受容体レチノール結合蛋白質プロモーター、卵黄様黄斑ジストロフィ２プロモーターとＩｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ類網膜の結合蛋白質（ＩＲＢＰ）プロモーターから構成される群から選択されます。
【0008】
いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを含みます：７－８または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７－８いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含みます：７または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含みます：８または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：８．
【0009】
いくつかの実施形態では、最初のシーケンスの３’終了はさらにポリＡシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、第２のシーケンスの３’終了はさらにポリＡシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、最初のシーケンスと第２のシーケンスはリンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。幾つかの実施形態において、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、リンカーをエンコードするシーケンスはさらにプロモーターを含みます。幾つかの実施形態において、プロモータは構成型プロモータである。いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスの３’終了はさらにポリＡシーケンスを含みます。
【0010】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを含みます：９－１２または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９－１２幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。９または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。１０または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１０．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。１１または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１１．幾つかの実施形態では、ＣＨ１配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６を含む。１２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１２．
【0011】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドはさらに詰め物をする人シーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドはさらに逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型２ ＩＴＲシーケンスです。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含みます。いくつかの実施形態では、環境パラメータは、以下からなる群から選択される：ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＳＭＣ１、ＳＭＣ３、Ｗｈｉｒｌｉｎ、ＰＤＥδとＲＡＢ８。
【0012】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスと４番目のシーケンスはリンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。幾つかの実施形態において、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。
【0013】
ある場合には、組成物がさらにイントロン・シーケンスを含みます。場合によっては、結合ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１３．ある場合には、最初のポリヌクレオチドがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型５シーケンスを含みます。
【0014】
本明細書に開示された、組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子です。態様では、組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子はそれについて昆虫細胞へ記載されたいかなる組成物の導入により調製されています。幾つかの実施形態において、細胞は分裂細胞である。
【0015】
本明細書に開示された、Ｘを処置するためのシステムである、色素性網膜炎をリンクしました。態様では、Ｘをリンクした色素性網膜炎を処置するためのシステムは、それについて記載されたいかなる組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子、と薬学的に許容可能な担体も含みます。
【0016】
本明細書に開示された、Ｘを処置する方法である、色素性網膜炎をリンクしました。態様では、Ｘを処置する方法は色素性網膜炎をリンクしました、その必要性のある対象に投与することを含む、それについて記載されたあらゆるシステム。
【0017】
本明細書に開示された、キットです。態様では、キットは、それについて記載されたいかなるシステムと指示も含みます。
【図面の簡単な説明】
【0018】
開示の特徴は、特に、添付の特許請求の範囲内に明記される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的実施形態を示す以下の詳細な説明、および添付の図面（本明細書では「図面」および「図」ともいう）を参照することによって得られるだろう。
【0019】
【図1A】コドンに最適化されたＲＰＧＲポリヌクレオチド・シーケンスが示すことができる図１Ａ－Ｂショー、ハイ・レベルへの組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質、生体外で。図１Ａは、様々なコドンに最適化されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ ｃＤＮＡから発現された組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の西の汚れの代表的なイメージがＨＥＫ２９３Ｔ細胞を中へ構築することを示します。細胞は、表２のリストされた１セットの発現構成物を運ぶプラスミドを有するトランスフェクトされました。トランスフェクトされた細胞の溶解産物は西の汚れによる分析されました。ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５（ＯＲＦ１５）タンパク質は抗ＲＰＧＲ抗体を用いて確認されました。ｇｌｕｔａｍｙｌａｔｅｄされたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質（ＯＲＦ１５）ｇｌｕｔａｍｙｌａｔｉｏｎは抗ＧＴ３３５抗体を用いて確認されました。すべては構築します、それに関するＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の高位レベルを示した、プラスミド対照群はない。組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質は発現しました、また彼らが野生型のタンパク質の通常の翻訳後修飾を持っていたことを示唆してｇｌｕｔａｍｙｌａｔｅｄされました。
【図1B】図１Ｂは、様々なコドンに最適化されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ ｃＤＮＡから発現された組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の西の汚れの代表的なイメージがＨＥＫ２９３Ｔ細胞を中へ構築することを示します。細胞は、表２のリストされた構成物の別のセットを運ぶ組み換えのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子を有するトランスフェクトされました。トランスフェクトされた細胞の溶解産物は西の汚れによる分析されました。ＲＰＧＲタンパク質ＯＲＦ１５（ＯＲＦ１５）タンパク質は抗ＲＰＧＲ抗体を用いて確認されました。構成物はすべて、抑制細胞のそれに相関するＲＰＧＲ ＯＲＦ１５の高位レベルを示しました。図１Ａ－Ｂでは、アクチンは抑制（抗－ｂ－アクチン）タンパク質として用いられました。発現分析のために、ｕｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ細胞（プラスミドはない）は負の調節として用いられました。
【図2A】図２Ａ～Ｃコドンを最適化されたことから発現された組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質が構築するショー、機能的である、眼において生体内。図２Ａは、組み換えのＲＰＧＲ組み換えタンパクを示す様々な組み換えのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子を注入された時、ＲＰＧＲノックアウトマウスの暗順応のＡ波欠損を統計的に著しく救うことができるかもしれないことを示します。
【図2B】図２Ｂは、組み換えのＲＰＧＲ組み換えタンパクを示す様々な組み換えのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子を注入された時、ＲＰＧＲノックアウトマウスの暗順応のＢ波欠損を統計的に著しく救うことができるかもしれないことを示します。
【図2C】図２Ｃは、組み換えのＲＰＧＲ組み換えタンパクを示すいくつかの組み換えのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子を注入された時、ＲＰＧＲノックアウトマウスの明所視のＢ波欠損を救うことができるかもしれないことを示します。ＦＩＧ ２Ａ－Ｃの中で、マウスはコドンに最適化されたＲＰＧＲ構成物を含んでいる同数のウィルス粒子を注入されました。製剤緩衝剤（ビヒクル）を注入された野性型マウス（Ｃ５７）とＲＰＧＲノックアウトマウスは、陽性と負の調節としてそれぞれ用いられました。その注入は両側性の網膜下の注入を用いて実行されました。注入された眼の数、表３の要約されます。暗順応のＡ波、暗順応のＢ波と明所視のＢ波は、網膜電図記録法（ＥＲＧ）注射後のあるか月までに測定されました。統計分析は、ボンフェローニの多重比較検定が後続するビヒクルに対する一元配置分散分析を用いて行なわれました。＊ｐ＜０．０５， ＊＊ ｐ＜０．００１， ＊＊＊ｐ＜０．０００１， ＊＊＊＊ｐ＜０．００００１。
【発明を実施するための形態】
【0020】
本開示のさらなる態様と利点は、本開示の例示的な実施形態だけが示され記載される以下の詳細な説明から当業者には容易に明白になるだろう。以下の記載から分かるように、本開示は他の実施形態および異なる実施形態であってもよく、そのいくつかの詳細は、本開示から逸脱することなく、様々な明白な点においてすべて修正が可能である。したがって、図面と記述は、本質的に例示的とみなされ、限定的とは見なされない。
【0021】
他に指示がない限り、本明細書に開示されたいくつかの実施形態の実行は、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクスとＤＮＡ再結合技術の従来の技術を含みます。見る、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ、緑、分子クローニング：実験手引き書（４番目の版（２０１２））；分子生物学シリーズ（Ｆ。Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、編集者）への現在のプロトコル；酵素学シリーズ（アカデミックプレス社）への方法；ＰＣＲ ２：実際的なアプローチ（Ｍ。Ｊ．マックファーソン、Ｂ．Ｄ．くびきとＧ．Ｒ．テーラーｅｄｓ（１９９５））、ハーローとレーン、編集者（１９８８） 抗体、実験手引き書；および動物細胞の培養：基本技術と専門の適用（６番目の版（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、ｅｄ（２０１０）。））のマニュアル。
【0022】
定義
本明細書及び特許請求の範囲で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容が他に明確に示していない限り、複数の参照を含む。例えば、用語「ｒＡＡＶ粒子」は１つ以上のｒＡＡＶ粒子を含みます。
本明細書及び特許請求の範囲で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容が他に明確に示していない限り、複数の参照を含む。例えば、用語「ｒＡＡＶ粒子」は１つ以上のｒＡＡＶ粒子を含みます。
【0023】
用語「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者によって決定されるような特定の値の許容可能な誤差範囲内であることを意味し、これは、その値がどのように測定または決定されるか、例えば測定システムの限界に部分的に左右される。芸術の実行に応じて、例えば、「に関して」１つの標準偏差よりある以上の内に意味することができます。代替的に、「約」とは所定の値の最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％の範囲内を意味し得る。代替的に、とりわけ生体系または生物学的プロセスに関して、この用語は１桁以内、好ましくはある値の５倍、より好ましくは２倍以内を意味することがある。特定の値が本出願と請求項に記載されている場合、特段の定めのない限り、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味する「約」との用語が仮定されなければならない。
【0024】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、あらゆる長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書で交換可能に使用される。環状で、ポリマーは線状かもしれないしまたは分岐したかもしれません。ポリマーは修正済のアミノ酸を含むことができ、非アミノ酸による中断することができます。用語は、また硫酸化によるのような、修飾されたアミノ酸ポリマーを含みます、グリコシレーション、ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ、アセチル化、リン酸化、ヨウ素化、メチル化、酸化、タンパク質分解の治療、リン酸化、ｉｓｏｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ、ラセミ化、セレン化、転移ＲＮＡ －は、ラベルを付ける構成要素を有する接合などのタンパク質（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎのような）、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎまたは他の動作へのアミノ酸の付加を調停しました。所与のタンパク質から「誘導した」ポリペプチドまたはアミノ酸配列順序は、ポリペプチドの起源を表します。むしろ、ポリペプチドは、実質的にシーケンスの中でエンコードされたポリペプチドのアミノ酸配列順序と同じであるアミノ酸配列順序をしています。または、その一部分（そこでその部分は少なくとも１０－２０のアミノ酸から構成される）、少なくとも２０－３０のアミノ酸、少なくとも３０－５０のアミノ酸またはそれは、シーケンスの中でエンコードされたポリペプチドに免疫学的に同一視することができます。用語は、また指定の核酸配列から発現されたポリペプチドを含みます。本明細書に用いられるように、用語「領域」はタンパク質またはペプチドの他の部分と物理的にまたは機能的に識別されるタンパク質の一部を表します。物理的に定義された領域は、非常に疎水性か親水性の膜－境界または細胞質の境界であるものなどのアミノ酸配列順序を含みます。例えば、領域も遺伝子複製による引き起こされた内部相同による定義することができます。機能的に定義された領域には異なる生物学的機能があります。例えば、タンパク結合の領域は、タンパク質に結合するタンパク結合の単位の部分を表します。連続的なアミノ酸配列順序による機能的に定義された領域をエンコードする必要はありません。そして、機能的に定義された領域は１つ以上の物理的に定義された領域を含んでいるかもしれません。
【0025】
本明細書に用いられるように、用語「アミノ酸」は、アミノ酸類似体およびｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓを含み、これらに限定されずにもＤまたはＬの光学異性体を含み、これらに限定されずにも、生まれつきの名人および／または不自然か合成アミノ酸を表します。標準の１つのレターまたは３－レター・コードはアミノ酸を指定するために用いられます。このコンテキストでは、アミノ酸は、当技術においてよく知られているあるレターと３レターの略語による通常表わされます。例えば、アラニンはＡまたはアラバマによる表わすことができます。
【0026】
ポリペプチドの場合には、本明細書に用いられるように、「シーケンス」はアミノ末端基からカルボキシ・ターミナルへ方角のポリペプチドへのアミノ酸のシーケンスです。そこでは互いに隣接している残基はシーケンスの中でポリペプチドのあります。それは一次構造において連続的です。シーケンスは、また１つまたは２つの方角の追加の残基を含むと知られていたポリペプチドの一部の線状のシーケンスになりえます。
【0027】
ポリヌクレオチドの場合には、本明細書に用いられるように、「シーケンス」は５’終了から３’終了へ方角のポリヌクレオチドへのヌクレオチドのシーケンスです。そこでは互いに隣接しているヌクレオチドはシーケンスの中でポリヌクレオチドのあります。それは一次構造において連続的です。シーケンスは、また１つまたは２つの方角の追加のヌクレオチドを含むと知られていたポリヌクレオチドの一部の線状のシーケンスになりえます。
【0028】
本明細書に用いられるように、「同一性」、「相同」または「シーケンス同一性」は、２つ以上のポリヌクレオチド・シーケンス、または２つ以上のポリペプチド配列間の類似点または互換性を表します。プログラムを用いる時、のような、シーケンス同一性、相同または２つの異なるアミノ酸配列順序間の類似点を測定するために針またはＢｅｓｔＦｉｔを浮き彫りにする、デフォルト設定は用いられてもよい。または、適切な得点するマトリックスは、同一性、類似点または相同性のスコアを最適化するためにｂｌｏｓｕｍ４５またはＢＬＯＳＵＭ８０のような選択されてもよい。むしろ、同族のポリヌクレオチドは、より好ましくは少なくとも９０％より好ましくはむしろ、本明細書に定義されるような厳格な条件の下で交雑し、少なくとも７０％が少なくとも８０％あるものです（少なくとも９５％、より好ましくは）少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、およびより好ましくは少なくとも９９％のシーケンス同一性さえ。比較可能な長さのシーケンスが最適に整列する時、同族のポリペプチドには少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％のシーケンス同一性または少なくとも９９％のシーケンス同一性がむしろあります。
【0029】
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに関して、本明細書に、「パーセント・シーケンス同一性（％）」は、シーケンスを整列させて、最大のシーケンス同一性パーセンテージを得るのに必要な場合ギャップを導入し、シーケンスの一部と見なされるいかなる保存的置換も除去していなかった後に計算されて、第２、参照ポリペプチド／ポリヌクレオチド・シーケンスのアミノ酸残基またはヌクレオチドに同一か、それについて分かれる、質問シーケンスのアミノ酸残基またはヌクレオチドのパーセンテージとして定義されます。アミノ酸配列順序同一性のパーセンテージの測定を目指した配列は、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公に有効なコンピューター・ソフトウェアを用いるような芸術の技術内の様々な面の中で達成することができます。当業者は、比較されているシーケンスの短縮していないものを含む配列の測定のための適切なパラメータを測定することができます、最大の配列を得るために必要とされるあらゆるアルゴリズムのために資格を有します。パーセント同一性は、定義されたポリペプチド／ポリヌクレオチド・シーケンス全体の長さの間測定することができるか、またはより短い長さ（例えば少なくとも５つ、１０（少なくとも）の、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、または少なくとも２００連続する残基／ヌクレオチドのＡ破片などのより大きく、定義されたポリペプチド／ポリヌクレオチド・シーケンスから得られた破片の長さ）の間測定することができます。これらの長さは典型的です、だけ、および、その上のいかなる破片長さも長さの割合を有する測定されるかもしれないことを説明するために図面で本明細書に示される形、またはシーケンス・リストの中で支持されたシーケンスを用いることができることが、理解されるに違いありません。
【0030】
本明細書に記載されたタンパク質は、参照シーケンスに関する１つ以上の変異をしているかもしれません。その変異は、欠失、挿入または、付加、またはアミノ酸残基の置換または、置換かもしれません。「欠失」は、１つ以上のアミノ酸残基の不足によりアミノ酸配列順序の変化を表します。「挿入」または「付加」は、基準シーケンスに比較して、１つ以上のアミノ酸残基の付加の帰着するアミノ酸配列順序変化を表します。「置換」または「置換」は、異なるアミノ酸を有する１つ以上のアミノ酸の置換を表します。本の開示では、参照シーケンスに関するポリペプチドの変異はポリペプチドを参照シーケンスに比較することにより測定することができます。比較のシーケンスの最適な配列は、芸術のあらゆる既知の方法に応じて果たすことができます。
【0031】
本明細書に用いられたように、用語「抽出された」通常の状況の下の自然界、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体またはその破片において、関連される細胞か他の構成要素の絶縁および／または分離を参照します。当業者は、それらの自然発生の相当物と識別されるためには、非自然発生のポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体またはその破片が「分離される必要はない」と理解するべきです。加えて、「濃縮」ポリヌクレオチド、「分離された」ポリヌクレオチドまたは「希釈された」ポリヌクレオチド、またはペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体またはその破片は、それらの濃縮のためにそれらの自然発生の相当物から識別可能です。または、１つの単位体積当たりの分子の数は、その自然発生の相当物（「分離する」）より、またはその相当物未満で（「集中する」）大きい。豊富化は１つの単位体積当たりの解決の重量などの絶対量に基づいて、測定することができるか、またはそれを第２に関連があって測定することができます、潜在的に出所混合物においてある種類を参考文献として載せます。
【0032】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」と「オリゴヌクレオチド」は、交換可能に用いられます。彼らは、あらゆる長さ（かどうか、彼ら、ａｅデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド）またはアナログのヌクレオチドの重合体の形を表します。ポリヌクレオチドはいかなる三次元構造も持つことができ、いかなる既知か未知の作用も果たすことができます。以下はポリヌクレオチドの制限しない例です：遺伝子または遺伝子破片のコーディングまたは非コードの領域、座、連鎖解析から測定された、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組み換えのポリヌクレオチド、枝分かれさせられたポリヌクレオチド、分離されたプラスミド、ベクター、あらゆるＤＮＡはシーケンスを分離した、あらゆるＲＮＡシーケンス、核酸プローブ、入門書、または合成オリゴヌクレオチドＤＮＡ。ポリヌクレオチドは、メチル化されたヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログなど修飾されたヌクレオチドを含むかもしれない。存在するとき、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリーの前または後で与えられ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって阻止され得る。ポリヌクレオチドは、標識化構成要素との抱合によってなど、重合の後にさらに修飾され得る。ＤＮＡ／ＲＮＡを参照する時、Ａはアデニンを意味する場合があります、Ｃはシトシンを意味する場合があります、Ｇはグアニンを意味する場合があります、Ｔはチミンを意味する場合があります、Ｕはウラシルを意味する場合があります。ＤＮＡまたはＲＮＡを参照する時ＵおよびＴは交換可能に用いることができます。
【0033】
ポリヌクレオチドに適用された時、「組み換えである」ことはポリヌクレオチドがクローニングの生成物であることを意味します、制限消化、連結反応、他の手順、それは生産する、構築する、自然界の中で発見されたものと異なる、またはあらゆる組み合わせ、それの。ポリペプチドに適用された時、「組み換えである」ことはポリペプチドが組み換えのポリヌクレオチドの示されたかまたは翻訳された生成物であることを意味します。
【0034】
「遺伝子」、「遺伝子破片」という用語は交換可能に本明細書に用いられます。彼らは、少なくとも１つの読取枠、転写の後に特定のタンパク質をエンコードすることができる読取枠、と翻訳を含んでいるポリヌクレオチドを表します。遺伝子または遺伝子破片は遺伝子群かもしれません、ｃＤＮＡ、または多核性のヌクレオチドが少なくとも１つの読取枠を含む限り、合成、読取枠は全コード領域またはその切開を覆うかもしれません。
【0035】
「操作しやすく接続しているか」、「有効に接続している」用語は、それらがそれらの意図した方法の中で機能することを可能にするために構成要素の並置を表します。例えば、プロモーター・シーケンスが暗号配列の転写を促進する場合、プロモーター・シーケンスは暗号配列に操作しやすくリンクされます。
【0036】
本明細書に用いられるように、「発現」はポリヌクレオチドがｍＲＮＡへ転写される手順および／または手順をそばに表します、どれがｍＲＮＡ（また「転写」と呼ばれた）を転写したかは、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質へ次に変換されます。転写とエンコードされたポリペプチドは総体として遺伝子産物と呼ばれます。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡから誘導した場合、発現は真核細胞のｍＲＮＡのスプライシングを含むかもしれません。
【0037】
本明細書に用いられるように、用語「ベクター」はポリヌクレオチドが挿入することができる核酸伝達手段を表します。ベクターが挿入されたポリヌクレオチドによるエンコードされたタンパク質を示すことができる時、ベクターは発現ベクトルと呼ばれます。ベクターは変態、形質導入またはトランスフェクションを介して宿主細胞へ導入することができます。その結果、それが運ぶ遺伝物質は宿主細胞で示すことができます。ベクターは以下を含み、これらに限定されずに当業者によく知られています：プラスミド；ファージミド；Ｐ１から誘導した酵母人工染色体（ＹＡＣ）、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）または人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体；λファージまたはＭ１３ファージ身体と、動物ウイルスなどのバクテリオファージ。ベクターとして用いることができる動物ウイルス、含む、しかし制限されない、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウィルス（単純疱疹ウイルスのような）、ポックスウイルス、バキュロウィルス、乳頭腫ウィルス、および乳頭突起ポリオーマウイルス液胞ウィルス（シミアンウイルス４０のような）。ベクターは、プロモーター・シーケンス、転写開始シーケンス、エンハンサー配列、選択要素とレポーター遺伝子を含み、これらに限定されずに、発現をコントロールする様々な要素を含むことができます。加えて、ベクターは、また複製部位の起源を含んでいるかもしれません。
【0038】
本明細書に用いられるような用語「コドン最適化」は、それがエンコードするのと同じタンパク質シーケンスを維持する一方でヌクレオチド配列を変更するために遺伝子コードへの余剰の使用を表します。ある場合には、コドン最適化がエンコードされたタンパク質の発現を促進するために増加されるか減少するかもしれません。これは、細胞型への転移リボ核酸の相対存在量などの特有の細胞型のためにコドン利用に対する好みを選択することにより行われます。ある場合には、まれな転移リボ核酸コドンが特定の細胞型への発現を低減するために選択されるかもしれません。ある場合には、コドン最適化が、またシーケンス複製の適合度を増加する場合があります。すなわち、より少ない変異がクローニング中のようなポリヌクレオチド複製サイクル中に生じます。
【0039】
本明細書に用いられるように、用語「宿主細胞」はベクター（それは含む）を有する導入されるために用いることができるが、制限されない細胞、大腸菌または枯草菌などの原核細胞またはアスペルギルス属などのイスートまたは、菌による細胞を表します、またはショウジョウバエＳ２細胞またはＳｆ９細胞などの昆虫細胞、または繊維芽細胞などの動物細胞、ＣＨＯ細胞、コス細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはヒト細胞。
【0040】
本明細書に用いられるような「有効な量」は、少なくとも特定の条件の測定可能な改善または予防を達成するのに必要な最低額を表します。ここの有効な量は、患者の疾患状態、年齢、性、重量と他の要素によって変化することができます。有効な量は、また治療の利益が治療のいかなる有毒または悪影響にもまさる量です。癌または腫瘍の処置では、薬物の有効量は次の効果がありえます：癌細胞の数を減らす、腫瘍サイズを低減する、周辺の器官へ癌細胞の浸潤を阻害する、腫瘍転移を阻害する、ある程度まで腫瘍の増殖を阻害する、その疾患に関連する１つ以上の症状、またはそのいかなる組み合わせも緩和します。有効な量は１つ以上の適用または用量の中で投与することができます。
【0041】
本明細書に用いられたとき、用語「受容者」、「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」は交換可能に本明細書に用いられる、および分析されるか、薬で治療されるか、処置されることが従属するあらゆる哺乳類を参照する、特にヒト。
【0042】
本明細書に用いられるように、「治療」、「薬物」という用語は希望の薬学でおよび／または生理的な効果を得ることを表します。効力は、完全にまたは部分的に疾患またはその症状を予防する点では予防的かもしれないし、および／またはその疾患に起因する疾患と／ｏｒａｄｖｅｒｓｅ反応を部分的にまたは完全に安定させるか直す点では治療かもしれません。本明細書に用いられるような「処置」は、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、霊長類、人間を含むこと他の類人猿などの哺乳動物への疾患のいかなる処置（特に人間）も包含します。そして、用語は次のものを含みます：（ａ） 対象の生じることから、疾患または症状の予防、疾患または症状に弱いかもしれないが、まだではなく分析されるかもしれない；（ｂ）病徴を阻害すること；（ｃ） その疾患の発現を防ぐこと；（ｄ） その疾患の症状を和らげること；（ｅ）疾患または症状をおさまらせること；または、これらの組み合わせである。本明細書に用いられるような用語「キット」は、共通の使用のための、または営利上パッケージにされた組み合わせを表します、有効。例えば、本の開示のキットは、本の開示の組成物と組成物またはキットを用いるための指示を含むかもしれません。用語「指示」は、治療薬のコマーシャル・パッケージの通常含まれている説明の挿入物を表します。それは、適応症、使用、量、投与、併用、禁忌、そのような治療薬の使用に関する警告またはそのあらゆる組み合わせに関する情報を含んでいます。
【0043】
本開示の好ましい実施形態が、本明細書に示され且つ記載されている一方で、このような実施形態が、ほんの一例として提供されることは当業者に明白であろう。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく当業者に想到されることもある。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、利用されることもあることを理解されたい。
【0044】
Ｘ連鎖性色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）
Ｘをリンクした色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）は網膜の変性の最も重大な形です。その疾患は生命の最初の１０年の現われて、初期の発症を持っており、迅速に後で進行します。その疾患がＸリンクされるので、その疾患は主として雄に影響し、雌の生じてそうでありません。しかしながら、ある場合には、網膜の変性の酵素がヘテロ接合の変異遺伝子を運ぶ雌の明示されるかもしれません。
Ｘをリンクした色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）は網膜の変性の最も重大な形です。その疾患は生命の最初の１０年の現われて、初期の発症を持っており、迅速に後で進行します。その疾患がＸリンクされるので、その疾患は主として雄に影響し、雌の生じてそうでありません。しかしながら、ある場合には、網膜の変性の酵素がヘテロ接合の変異遺伝子を運ぶ雌の明示されるかもしれません。
【0045】
色素性網膜炎ＧＴＰ酵素制御因子（ＲＰＧＲ）は人間におけるＲＰＧＲ遺伝子によるエンコードされたＧＴＰアーゼ結合蛋白質です。このタンパク質の作用はよく理解されませんが、研究は細胞の繊毛の構造のそれが重要な役割を果たすことを示しました。繊毛は、多くの細胞型の表面から出て、細胞運動と様々なシグナル経路の参加する、小さく指のような突出です。繊毛は聴力、匂いと視覚のために必要です。ＲＰＧＲ遺伝子はいくつかのＲＰＧＲアイソフォームを生成することができます。そのうちの１つはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５（１１５２のアミノ酸）と呼ばれます。ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５は、特に光受容細胞における、網膜における主として示され、繊毛の作用の規制により光受容の手順の参加してもよい。ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５は持っています、１つの、高度に反復、Ｃ末端におけるグリシン／グルタミン酸豊富な領域をエンコードするプリン豊かな領域。コドン最適化は、遺伝子治療の安定したＤＮＡ塩基配列コード化ＯＲＦ１５を生成するのにふさわしいかもしれません。ＲＰＧＲの機能不良はＸＬＲＰ患者の７０％以上の中で観測されます。
【0046】
組換えＡＡＶベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）パルボウィルス、単一の鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）ウィルスに属します。ＡＡＶの短縮していないゲノムは、レプおよびキャップと呼ばれる２つの読取枠（ＯＲＦ）を包含するウィルスの両端で逆方向末端反復（ＩＴＲ）ＤＮＡ塩基配列を含んで、およそ４．７キロベース（ｋｂ）を含んでいます。
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）パルボウィルス、単一の鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）ウィルスに属します。ＡＡＶの短縮していないゲノムは、レプおよびキャップと呼ばれる２つの読取枠（ＯＲＦ）を包含するウィルスの両端で逆方向末端反復（ＩＴＲ）ＤＮＡ塩基配列を含んで、およそ４．７キロベース（ｋｂ）を含んでいます。
【0047】
「ＡＡＶ逆方向末端反復」（ＩＴＲ）シーケンスは、自然な単鎖のＡＡＶゲノムの両端で存在する、約１４５のヌクレオチドのシーケンスです。ＩＴＲは、対称的なＡＡＶ粒子のゲノム核酸配列の効率的な複製のために必要です。それは複製のウィルスＤＮＡ合成起源として用いることができ、組み換えのＡＡＶベクターの必要な構造の構成要素です。
【0048】
「レプ」遺伝子はポリヌクレオチドを含んでいます、順番に並べる、４のレプ・タンパク質ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２と、ＡＡＶの生活環のために必要なｒｅｐ４０のエンコード。「キャップ」遺伝子は、ＡＡＶカプシド・タンパク質ＶＰ１、ＶＰ２とＶＰ３タンパク質をエンコードするポリヌクレオチド・シーケンスを含んでいます。ＡＡＶカプシド・タンパク質ＶＰ１、ＶＰ２とＶＰ３はそれらの間の相互作用を介して２４のサブユニットの対称的なＡＡＶカプシドを形成するのに有能です。
【0049】
ＡＡＶは分割し無分裂のヒト細胞を有効に感染させる場合があります。そして、そのゲノムは、宿主ゲノムへの１回の染色体のサイトへ統合することができます。最も重要なことには、ＡＡＶは人間の既に存在しますが、現在の調査はＡＡＶがいかなる疾患にも関連しないと信じます。その高い安全性に基づいた、低い免疫原性、広い宿主領域、外因性の遺伝子の安定した長期的な発現を生体内で調停する能力、ＡＡＶは遺伝子治療の中で最も有望なベクターシステムになりました。
【0050】
現在まで、１３のＡＡＶ血清型、彼らが感染させる組織または異なる細胞型に応じて確認されました。さらに、下記のＴＡＢＬＥあるによれば、異なるＡＡＶは特有の細胞型のトランスフェクションの有利なベクターシステムとして開発されています。多くのＡＡＶ血清型中で、血清型２（ＡＡＶ２）は最も広く研究されて用いられているＡＡＶです。それは、網膜の上皮を含み、これらに限定されずに、光受容細胞、骨格筋、中枢神経系と肝細胞を感染させる場合があります；および、進行における担体として多くの臨床の尾のために用いられました。
【0051】
【表1】
【0052】
本明細書に用いられるような用語「組み換えのＡＡＶベクター（ｒＡＡＶベクター）」は、１つ含んでいるポリヌクレオチド・ベクターを表します。または、より異種のシーケンス（すなわちＡＡＶから誘導していない核酸配列）は２つのＡＡＶ ＩＴＲシーケンスによる側面に位置しました。ＡＡＶレプとキャップ・タンパク質を示すホスト細胞においてある時、ｒＡＡＶベクターは折れ重なり、ＡＡＶウイルス粒子へパッケージにすることができます。
【0053】
用語「組み換えのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウィルス」または本明細書に用いられるような「ｒＡＡＶウィルス粒子」は、ＡＡＶウィルス粒子へ少なくとも１つのＡＡＶカプシド・タンパク質によるカプセルに入れられたｒＡＡＶベクターを表します。ｒＡＡＶウィルス粒子産生の現在用いられているホスト細胞、２９３個の細胞、コス細胞、ＨｅＬａ細胞、ＫＢ細胞と他の哺乳動物細胞株などの哺乳動物細胞型から誘導しています。ｒＡＡＶウイルス粒子は哺乳動物細胞にｒＡＡＶプラスミドを提供することにより哺乳動物細胞培養系の中で生むことができます。しかしながら、ほとんどの上記の哺乳動物細胞培養系のウィルスの生産性は、治験と工業規模産生の必要条件を満たすことにおいて不十分です。この目的のために、Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞を用いるｒＡＡＶウイルス粒子プロダクション・システムは、最近開発されています。しかしながら、昆虫細胞のＡＡＶを生成するために、ＡＡＶカプシド・タンパク質の正しい理論混合比を得るためにいくつかの変異をなさなければなりません。
【0054】
バキュロウィルスはバキュロウイルス科ウィルス・ファミリーが所有して、二重らせん構造のサーキュラーＤＮＡウィルスで、９０ｋｂ－２３０ｋｂのゲノム・サイズを持っています。バキュロウィルスは、節足動物以外には排他的で、昆虫の６００を超える種類を感染させると知られていた寄生虫です。Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ多重カプシド核多角体ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）、スミスらを成功裡に用いることは、第一のバキュロウィルス発現システム（ｍｏｌ。細胞生物学者、１９８３年、３： ２１５６－２１６５）を開発して、１９８３年のＳｆ９細胞系統へのヒト・ベータ・インターフェロンを示しました。その時以来、バキュロウィルス発現システムは継続的に改善され開発されています。そして、それは広く非常に用いられている真核生物の発現システムになりました。２００２年には、Ｕｒａｂｅらが、Ｓｆ９細胞と成功裡に準備したｒＡＡＶウイルス粒子を共同感染させるためにＡＡＶのレプ遺伝子、キャップ遺伝子とＩＴＲコア発現要素を運ぶ３つの組み換えのバキュロウィルスを用いて、バキュロウィルスに感染したＳｆ９昆虫細胞がＡＡＶ複製を支持することができることを示しました。この根拠の上で、研究者は、ｒＡＡＶウイルス粒子の大規模調製のために、より適しているシステムを連続的に開発しました。
【0055】
現在、バキュロウィルス発現システムを用いるｒＡＡＶウイルス粒子の大規模調製の２つの方法が主としてあります：２つのＢａｃシステムと１つのＢａｃシステム。ｒＡＡＶウィルス粒子を調製された２つのバキュロウィルス・システムの主な手順は、レプ遺伝子とＡＡＶのキャップ遺伝子が１つのバキュロウィルス・ゲノムへ統合されるということです。そして、興味のある遺伝子を発現するＩＴＲコアエレメントは、別のバキュロウィルス・ゲノムへ統合されます。その後、上記の２つの組み換えのバキュロウィルスは標的遺伝子を運ぶｒＡＡＶウイルス粒子を生むホスト細胞を共同感染させるために用いられます。１つのＢａｃシステムを用いる主な過程は、ｒＡＡＶウイルス粒子を調製するために細胞系統をパッケージにすることに依存します。レプ遺伝子とキャップ遺伝子の発現を引き起こすことができるパッケージング細胞系統は、最初に確立されます。このパッケージング細胞系統はレプ遺伝子とキャップ遺伝子発現要素に統合されます。レプ遺伝子とキャップ遺伝子は両方とも、強いバキュロウィルス後期遺伝子発現プロモーターｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ（ｐｏｌｈ）の管理下に配置されます。ｈｒ２エンハンサー配列とＡＡＶレプ・タンパク結合シーケンスは、ｐｏｌｈプロモーターの上流にさらに挿入されます。ＡＡＶ ＩＴＲと標的遺伝子を含んでいる組み換えのバキュロウィルスに感染した後に、パッケージング細胞系統へのレプ遺伝子とキャップ遺伝子は引き起こされます。そして、標的遺伝子挿入物を含んでいるｒＡＡＶウイルス粒子が生まれます。
【0056】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターはかつてはｒＡＡＶウイルス粒子の興味のある遺伝子を運びました、また本明細書に用いられるような用語「発現調節要素」が、異種のポリヌクレオチドの転写と翻訳を促進するポリヌクレオチド・シーケンスを含む操作しやすくリンクしたポリヌクレオチドの発現に影響する核酸配列を表す１つ以上の「発現調節要素」を含んでもよい。本の開示における用いることができる発現調節要素は含みます、しかし制限されない、プロモーター、エンハンサー、信号、ポリＡシーケンスまたは逆方向末端反復（ＩＴＲ）を結合するイントロン。
【0057】
「プロモーター」は、標的生成物をエンコードする異種のポリヌクレオチド・シーケンスに隣接した位置にあったＤＮＡ塩基配列です。それは、通常異種のポリヌクレオチドなどの隣接したシーケンスに操作しやすくリンクされます。プロモーターの不在中に示された量に比較して、プロモーターは、一般に異種のポリヌクレオチド発現の量を増加します。
【0058】
「エンハンサー」はプロモーターの活動を増強するシーケンスです。プロモーターと異なるので、エンハンサーはプロモーター作用をしておらず、プロモーター（すなわち上流にまたは下流にプロモーターの）に関するその位置に一般に左右されてもよい。本の開示における用いることができるエンハンサーエレメント（またはその部分）の制限しない例は、バキュロウィルス・エンハンサーと、昆虫細胞の中で見つけられたエンハンサーエレメントを含みます。
【0059】
「詰め物をする人シーケンス」は、より大きな核酸分子（のような、しかしベクターに限定的でなかった）のヌクレオチド配列を表し、通常２つの核酸形質（のような、しかしプロモーターおよび暗号配列の間で限定的でなかった）間の希望のギャップまたは分離を作出するか、核酸分子を拡張することです、希望の長さ。詰め物をする人シーケンスはタンパク質暗号情報を含んでおらず、未知か合成起源（より大きな核酸分子内の他の核酸配列に関連していなかった）またはそのいかなる組み合わせがあってもよい。
【0060】
組成物
１つの態様では、本の開示は、その第１のポリヌクレオチドと別のポリヌクレオチドを含む組み合わせを提供します、そこで、第１のポリヌクレオチドが第１のシーケンスに操作しやすくリンクされた第１のプロモーター、と別のシーケンスに操作しやすくリンクされた別のプロモーターを含むと言いました。
１つの態様では、本の開示は、その第１のポリヌクレオチドと別のポリヌクレオチドを含む組み合わせを提供します、そこで、第１のポリヌクレオチドが第１のシーケンスに操作しやすくリンクされた第１のプロモーター、と別のシーケンスに操作しやすくリンクされた別のプロモーターを含むと言いました。
【0061】
いくつかの実施形態では、最初のシーケンスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャップ・タンパク質をエンコードします。キャップ・タンパク質は、機能的なＡＡＶカプシド（すなわちパッケージングＤＮＡと感染させる標的細胞）を形成することができる技術における既知のあらゆる構造タンパク質になりえます。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＶＰ１、ＶＰ２とＶＰ３を含みます。いくつかの実施形態では、それが機能的なＡＡＶカプシドを生成することができる限り、キャップ・タンパク質はＶＰ１、ＶＰ２とＶＰ３をすべて含む必要はありません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＶＰ１およびＶＰ２を含みます。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＶＰ１およびＶＰ３を含みます。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＶＰ２およびＶＰ３を含みます。いくつかの実施形態における、その場合、キャップ・タンパク質はＶＰ１を含みます。幾つかの実施形態では、ＲＮＡは、された核酸塩基を含まない。幾つかの実施形態では、ＲＮＡは、された核酸塩基を含まない。
【0062】
ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３はあらゆるＡＡＶ血清型から誘導しているかもしれません。いくつかの実施形態では、ＶＰ１はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２（ＡＡＶ３）（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８から誘導したＶＰ１と野性型ＶＰ１には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ＶＰ１に比較して、ＶＰ１には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0063】
いくつかの実施形態では、ＶＰ２はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２（ＡＡＶ３）（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８から誘導したＶＰ２と野性型ＶＰ２には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ＶＰ２に比較して、ＶＰ２には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0064】
ＶＰ３はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態、ＶＰ３と、ＡＡＶ１から誘導した野性型ＶＰ３における、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ＶＰ３に比較して、ＶＰ３には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0065】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３またはその同じ血清型のＡＡＶから誘導したあらゆる組み合わせを含みます；例えば、キャップ・タンパク質はＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３またはそのＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ５またはＡＡＶ８から誘導したあらゆる組み合わせを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップはＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３またはそのＡＡＶの異なる血清型から誘導したあらゆる組み合わせを含みます；例えば、キャップ・タンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３またはそのＡＡＶ１のあらゆる組み合わせのうちのいずれか１つ以上を含むかもしれません、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８。
【0066】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はｐＵＣ５７（ｐＦａｓｔＢａｃ１）へクローンを作られるかもしれないか、またはｐＵＣ５７を修飾したか、ｐＦａｓｔＢａｃ１を修飾しました。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質は修正済のｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質は修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。
【0067】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質をエンコードする最初のシーケンスは、第１のプロモーターに操作しやすくリンクされます。第１のプロモーターは、キャップ・タンパク質の発現を駆り立てることができる技術における既知のあらゆる適切なプロモーターかもしれません。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、組織特異的プロモーター、構成するプロモーターまたは取り締まれるプロモーターかもしれません。例えばいくつかの実施形態では、第１のプロモーターは異なる出所から選択することができます、第１のプロモーターは、ウイルスのプロモーター、プラント・プロモーターまたは哺乳類のプロモーターになりえます。
【0068】
第１のプロモーターは含めることができます、しかし制限されない、ヒト－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の即時の初期のエンハンサー、シミアンウイルス４０の初期のエンハンサー、ＪＣポリオーマウイルス・プロモーターまたはプロモーターまたはプロモーター、ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）または神経膠線維酸性蛋白質（ＧＦＡＰ）プロモーター、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ－ある）の潜伏期関連のプロモーター（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ニューロンの特有のプロモーター（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモーター、ＣＢＡ、マトリックス金属タンパク質プロモーター（ＭＰＰ）、鶏β－アクチン・プロモーター、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫとＥＦ１ａプロモーター。
【0069】
いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは昆虫細胞の発現のために適しているプロモーターです。いくつかの実施形態における、昆虫細胞の発現のために適しているプロモーター、含む、しかしｐｏｌｈプロモーター、ｐ１０プロモーター、基礎的なプロモーター、誘導可能なプロモーター、Ｅ１プロモーターまたはΔＥ１プロモーターに限定的でありません。幾つかの実施形態において、プロモータは構成型プロモータである。幾つかの実施形態において、プロモータは構成型プロモータである。
【0070】
いくつかの実施形態では、第１のシーケンスの３’終了はさらにポリアデニル化シーケンスまたは「ポリＡシーケンス」を含みます。いくつかの実施形態では、別のシーケンスの３’終了はさらにポリアデニル化シーケンスまたは「ポリＡシーケンス」を含みます。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化シーケンスまたは「ポリＡシーケンス」は及ぶかもしれません、から、ｌ－ ５００塩基対（ｂｐ）に関して。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化シーケンスまたは「ポリＡシーケンス」はそうかもしれません、しかし制限されない、ある、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０の、３０、５０、１００、２００、または５００ヌクレオチド．
【0071】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：９－１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：９－１２．
【0072】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：９．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：９．
【0073】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：１０．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：１０．
【0074】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：１１．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：１１．
【0075】
いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：１２．いくつかの実施形態では、ポリＡシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：１２．
【0076】
いくつかの実施形態では、第２のシーケンスはＡＡＶレプ・タンパク質をエンコードします。そこでは、レプ・タンパク質は、折れ重なり、かつｒＡＡＶウィルス粒子へパッケージにされるあらゆるｒＡＡＶベクターのために必要な複製タンパク質になりえます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２またはｒｅｐ４０を含みます。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターが折れ重なるかｒＡＡＶウイルス粒子へパッケージにされることをそれが可能にすることができる限り、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２またはｒｅｐ４０のすべてを含むとは限らないかもしれません。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質は、ｒｅｐ７８、レプ６８、ｒｅｐ５２またはレプ４０のうちのいかなる３も含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質は、ｒｅｐ７８、レプ６８、ｒｅｐ５２またはレプ４０のうちのいかなる２も含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質は、ｒｅｐ７８、レプ６８、ｒｅｐ５２またはレプ４０のうちのいずれか１つを含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８またはｒｅｐ５２を含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８またはレプの４０を含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ６８またはｒｅｐ５２を含みます。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ６８またはｒｅｐ４０を含みます。
【0077】
ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２またはｒｅｐ４０はあらゆるＡＡＶ血清型から誘導しているかもしれません。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態、ｒｅｐ７８と、ＡＡＶ１から誘導した野性型ｒｅｐ７８における、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ｒｅｐ７８に比較して、ｒｅｐ７８には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0078】
いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態、ｒｅｐ６８と、ＡＡＶ１から誘導した野性型ｒｅｐ６８における、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ｒｅｐ６８に比較して、ｒｅｐ６８には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0079】
いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２はＡＡＶ血清型ある（ＡＡＶ１）から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ血清型３（血清型３Ａと３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶは４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ血清型をセロタイプで分けます。５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ血清型．６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ血清型．７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ血清型．８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ血清型．９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ血清型１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶ血清型１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶ血清型１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶ血清型１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶ．いくつかの実施形態、ｒｅｐ５２と、ＡＡＶ１から誘導した野性型ｒｅｐ５２における、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ２ｉ８には少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはより多くのシーケンス同一性があるかもしれません。いくつかの実施形態事例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４またはＡＡＶ－２ｉ８から誘導した野性型ｒｅｐ５２に比較して、ｒｅｐ５２には１つ以上のアミノ酸置換、欠失、付加またはそのあらゆる組み合わせがあります。
【0080】
いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２またはｒｅｐ４０を含みます。または、そのいかなる組み合わせも同じ血清型のＡＡＶから誘導していました；例えば、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８を含むかもしれません、ｒｅｐ６８する、ｒｅｐ５２する、ｒｅｐ４０、またはそのＡＡＶ２から誘導したあらゆる組み合わせ。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はまたｒｅｐ７８を含むかもしれません、ｒｅｐ６８する、ｒｅｐ５２する、ｒｅｐ４０、またはそのＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）から誘導したあらゆる組み合わせ。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｒｅｐ７８を含みます、ｒｅｐ６８する、ｒｅｐ５２する、ｒｅｐ４０、またはそのＡＡＶの異なる血清型から誘導したあらゆる組み合わせ；例えば、レプ・タンパク質は、ｒｅｐ７８のうちのいずれか１つ以上を含むかもしれません、ｒｅｐ６８する、ｒｅｐ５２する、ｒｅｐ４０、またはそのＡＡＶ１のあらゆる組み合わせ、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８。
【0081】
いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質をエンコードする第２のシーケンスは、別のプロモーターに操作しやすくリンクされます。第２のプロモーターは、レプ・タンパク質の発現を駆り立てることができる技術における既知のあらゆる適切なプロモーターかもしれません。いくつかの実施形態では、第２のプロモーターは、組織特異的プロモーター、構成するプロモーターまたは取り締まれるプロモーターかもしれません。例えばいくつかの実施形態では、第２のプロモーターは異なる出所から選択することができます、第２のプロモーターは、ウイルスのプロモーター、プラント・プロモーターまたは哺乳類のプロモーターになりえます。
【0082】
いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｐＵＣ５７（ｐＦａｓｔＢａｃ１）へクローンを作られるかもしれないか、またはｐＵＣ５７を修飾したか、ｐＦａｓｔＢａｃ１を修飾しました。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質はｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質は修正済のｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、レプ・タンパク質は修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。
【0083】
第２のプロモーターは含めることができます、しかし制限されない、ヒト－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の即時の初期のエンハンサー、シミアンウイルス４０の初期のエンハンサー、ＪＣポリオーマウイルス・プロモーターまたはプロモーターまたはプロモーター、ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）または神経膠線維酸性蛋白質（ＧＦＡＰ）プロモーター、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ－ある）の潜伏期関連のプロモーター（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ニューロンの特有のプロモーター（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモーター、ＣＢＡ、マトリックス金属タンパク質プロモーター（ＭＰＰ）、鶏β－アクチン・プロモーター、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫとＥＦ１ａプロモーター。
【0084】
いくつかの実施形態では、第２のプロモーターは昆虫細胞の発現のために適しているプロモーターです。いくつかの実施形態における、昆虫細胞の発現のために適しているプロモーター、含む、しかしｐｏｌｈプロモーター、ｐ１０プロモーター、基礎的なプロモーター、誘導可能なプロモーター、Ｅ１プロモーターまたはΔＥ１プロモーターに限定的でありません。幾つかの実施形態において、プロモータは構成型プロモータである。幾つかの実施形態において、プロモータは構成型プロモータである。
【0085】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質とレプ・タンパク質は同じ血清型のＡＡＶから誘導しています；例えば、キャップ・タンパク質とレプ・タンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９のＡＡＶ８、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８または他の既知のＡＡＶから誘導しているかもしれません。
【0086】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質とレプ・タンパク質はＡＡＶの異なる血清型から誘導しています；例えば、キャップ・タンパク質とレプ・タンパク質はＡＡＶ１から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、または他の既知のＡＡＶ。例えば、いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質はＡＡＶ２から誘導しているかもしれません。そして、レプ・タンパク質はＡＡＶ５から誘導しています。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質は、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）から誘導しているかもしれません。そして、レプ・タンパク質はＡＡＶ５から誘導しています。
【0087】
いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは同じプロモーターかもしれません。例えば、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、ｐｏｌｈプロモーター（ｐ１０プロモーター）から構成される群から選択されるかもしれません、基礎的なプロモーター、誘導可能なプロモーター、Ｅ１、プロモーター、およびΔＥ１プロモーター。例えば、いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは両方ともｐｏｌｈプロモーターです。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは両方ともｐ１０プロモーターです。
【0088】
いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターは異なるプロモーターを含んでもよい。例えば、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、ｐｏｌｈプロモーター（ｐ１０プロモーター）から構成される群からかもしれません、基礎的なプロモーター、誘導可能なプロモーター、Ｅ１、プロモーター、およびΔＥ１プロモーター。例えば、いくつかの実施形態では、第１のプロモーターはｐｏｌｈプロモーターです。そして、第２のプロモーターはｐ１０プロモーターです。いくつかの実施形態では、第１のノズルは内側ノズルであり、および第２のノズルは外側ノズルである。
【0089】
いくつかの実施形態では、第１または第２プロモーターはｐＵＣ５７（ｐＦａｓｔＢａｃ１）へクローンを作られるかもしれないか、またはｐＵＣ５７を修飾したか、ｐＦａｓｔＢａｃ１を修飾しました。いくつかの実施形態では、第１または第２プロモーターはｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、第１または第２プロモーターはｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、第１または第２プロモーターは修正済のｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、第１または第２プロモーターは修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。
【0090】
いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質、レプ・タンパク質、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、ｐＵＣ５７（ｐＦａｓｔＢａｃ１）へクローンを作られるかもしれないか、またはｐＵＣ５７を修飾したか、ｐＦａｓｔＢａｃ１を修飾しました。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質、レプ・タンパク質、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、ｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質、レプ・タンパク質、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、ｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質、レプ・タンパク質、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、修正済のｐＵＣ５７へクローンを作られるかもしれません。いくつかの実施形態では、キャップ・タンパク質、レプ・タンパク質、第１のプロモーターと第２のプロモーターは、修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られるかもしれません。
【0091】
いくつかの実施形態では、最初のシーケンスと第２のシーケンスはリンカーをエンコードするシーケンスによるリンクされます。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは２Ａペプチドを含むシーケンスです。いくつかの実施形態では、２Ａペプチドは、口蹄疫ウィルス（ＦＭＤＶ）、ウマの鼻炎Ａウィルス（ＥＲＡＶ）、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウィルス（ＴａＶ）またはブタのｔｅｓｃｈｏｖｉｒｕｓ（ＰＴＶ－ある）などのＡｐｈｔｈｏｒｖｉｒｕｓまたはカルジオウイルスから誘導した２Ａペプチドから選択されるかもしれません。いくつかの実施形態では、リンカーをエンコードするシーケンスはさらにプロモーター・シーケンスを含みます。幾つかの実施形態において、プロモータは誘導プロモータである。
【0092】
いくつかの実施形態では、本の開示の組成物への第２のポリヌクレオチドは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーターに操作しやすくリンクされた３番めのポリヌクレオチドを含みます。そこでは３番目のシーケンスはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードします。いくつかの実施形態における、３番めのシーケンスの３’終了、さらにポリＡシーケンスを含みます。シーケンスは、この開示の別記されていたいかなるポリＡシーケンスも含むかもしれません。
【0093】
本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドはあらゆる哺乳動物から誘導したＲＰＧＲとその変異体かもしれません。いくつかの実施形態では、哺乳動物は含みます、しかし制限されない、霊長類（例えば人間）、脅す、犬、猫またはげっ歯動物（例えばモルモット、ラットまたはマウス）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドはヒト派生したＲＰＧＲまたはその変異体です。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５またはその変異体です。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドはヒト派生したＲＰＧＲ ＯＲＦ１５またはその変異体です。
【0094】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも７５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも８０％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも８５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９０％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９６％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９７％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９８％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲに少なくとも９９％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲのシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ＲＰＧＲに比較して、１つ以上のアミノ酸変異、置換、欠失または付加があるシーケンスを含みます。
【0095】
いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも７５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも８０％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも８５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９０％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９５％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９６％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９７％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９８％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態における、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチド、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に少なくとも９９％同一のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５のシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５に比較して、１つ以上のアミノ酸変異、置換、欠失または付加があるシーケンスを含みます。
【0096】
いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも７５％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも８０％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも８５％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９０％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９５％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９６％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９７％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９８％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に少なくとも９９％同一のシーケンスを含みます：１．いくつかの実施形態では、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドは、配列番号に比較された１つ以上のアミノ酸変異、置換、欠失または付加を有するシーケンスを含みます：１．
【0097】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：２．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：２．
【0098】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、ヒトＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするシーケンスを含み、最適化されたコドンです。いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：３－６．いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３のうちいずれか１つの配列を含む。３－６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：３－６．
【0099】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：３．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：３．
【0100】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：４．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：４．
【0101】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：５．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：５．
【0102】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号のシーケンスを含みます：６．いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：６．
【0103】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むあらゆるシーケンスを有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むシーケンスにシーケンスを含みます：２月１２日いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号の表２およびあらゆるシーケンスのいかなる構成物設計も含むシーケンスに比較するシーケンスを含みます：２月１２日
【0104】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーターに操作しやすくリンクされます。いくつかの実施形態では、眼に特有のプロモーターは網膜色素です、上皮組織の（ＲＰＥ）細胞特異的なプロモーター。ＲＰＥの細胞特異的なプロモーターは含めます、しかし制限されない、ＲＰＥ６５遺伝子プロモーター、ヒト網膜の結合蛋白質（ＣＲＡＬＢＰ）プロモーター、ネズミ科の１１－ｃｉｓレチノールデヒドロゲナーゼ（ＲＤＨ）プロモーター、ロドプシン・プロモーター、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーター、コラーゲン分解酵素阻害３（Ｔｉｍｐ３）プロモーター、光受容体レチノール結合蛋白質プロモーターと卵黄様黄斑ジストロフィ２プロモーター、または光受容体間類網膜の結合蛋白質（ＩＲＢＰ）プロモーター。
【0105】
いくつかの実施形態では、３番目のシーケンスは、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターに操作しやすくリンクされます。いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のうちのいずれか１つを有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のシーケンスを含みます：７月８日いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：７月８日
【0106】
いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のシーケンスを含みます：７．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：７．
【0107】
いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、配列番号のシーケンスを含みます：８．いくつかの実施形態では、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：８．
【0108】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、さらに逆方向末端反復（ＩＴＲ）、エンハンサー、結合する信号、ポリアデニル化信号、詰め物をする人シーケンス、終端装置、タンパク質低下信号、内部リボソーム・エントリー要素（ＩＲＥＳ）または２Ａシーケンスを含み、これらに限定されずに、他の調節配列を含みます。
【0109】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドはさらにエンハンサー領域を含みます。いくつかの実施形態では、エンハンサー領域はシミアンウイルス４０エンハンサー、即時の初期のサイトメガロウィルス・エンハンサー、ＩＲＢＰエンハンサーと、免疫グロブリン遺伝子から誘導したエンハンサーを含みます。いくつかの実施形態では、エンハンサー領域はＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーターの上流に位置します。いくつかの実施形態では、エンハンサーは眼に特有のプロモーターの上流に位置します。いくつかの実施形態では、エンハンサー領域は、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーターに下流に位置します。いくつかの実施形態では、エンハンサーは、眼に特有のプロモーターに下流に位置します。
【0110】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドはさらに逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含みます。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは少なくとも１つの逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含みます。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは２つの逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含みます。いくつかの実施形態では、第１および第２の経路は同じである。いくつかの実施形態では、第１および第２の経路は異なる。いくつかの実施形態では、逆方向末端反復（ＩＴＲ）はＡＡＶから誘導したＩＴＲです。いくつかの実施形態では、ＩＴＲはＡＡＶ１から誘導しているかもしれません、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ（Ｒｈ７４（－）、ＡＡＶ－２ｉ８とＡＡＶの他の既知のＩＴＲ）。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４から誘導したものに比較して、ＩＴＲには１つ以上の塩基変異、挿入または欠失があるかもしれません、ＡＡＶ－２ｉ８と、ＡＡＶ（そこではＩＴＲは標的遺伝子複製、ウィルス・パッケージング、ウイルス－ゲノム統合またはそのあらゆる組み合わせなどの希望のターミナル・リピート機能を保持する）の他の既知の野生型のＩＴＲ。ある場合には、ＩＴＲシーケンスがＡＡＶ２シーケンスです。ある場合には、ＩＴＲシーケンスが、ＡＡＶ２変異体（例えばＡＡＶ２．７ｍ８、ＡＡＶ２（コッドＹ－Ｆ）またはＡＡＶ２ｔＹＦ）シーケンスです。ある場合には、最初のポリペプチドがＡＡＶ５シーケンスを含みます。
【0111】
幾つかの実施形態において、第２モノマー単位は更に、１以上のポリエチレングリコール・セクションを含む。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスはＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーター・シーケンスの上流に位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモーター・シーケンスに下流に位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは眼に特有のプロモーターの上流に位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、眼に特有のプロモーターに下流に位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、５’ＩＴＲシーケンスの５’終わりに位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、５’ＩＴＲシーケンスの３’終わりに位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、３’ＩＴＲシーケンスの５’終わりに位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは、３’ＩＴＲシーケンスの５’終わりに位置します。いくつかの実施形態では、詰め物をする人シーケンスは３’ＩＴＲシーケンスの３’ｅｎｄに位置します。
【0112】
いくつかの実施形態では、詰めるシーケンスの長さは－５ｋｂ約０．１ｋｂかもしれません、のような、しかし、０．１ｋｂに限定的でなかった、０．２ｋｂ、０．３ｋｂ、０．４ｋｂ、０．５ｋｂ、０．６ｋｂ、０．７ｋｂ、０．８ｋｂ、０．９ｋｂ、あるｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂ、１．６ｋｂ、１．７ｋｂ、１．８ｋｂ、１．９ｋｂ、２ｋｂ、２．１ｋｂ、２．２ｋｂ、２．３ｋｂ、２．４ｋｂ、２．５ｋｂ、２．６ｋｂ、２．７ｋｂ、２．８ｋｂ、２．９ｋｂ、３ｋｂ、３．１ｋｂ、３．２ｋｂ、３．３ｋｂ、３．４ｋｂ、３．５ｋｂ、３．６ｋｂ、３．７ｋｂ、３．８ｋｂ、３．９ｋｂ、４．０ｋｂ、４．１ｋｂ、４．２ｋｂ、４．３ｋｂ、４．４ ｋｂ、４．５ｋｂ、４．６ｋｂ、４．７ｋｂ、ｋｂ（４．８）、または、または。（４．９）（５．０ｋｂ）
【0113】
いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、別の治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含みます。いくつかの実施形態では、治療のタンパク質は、脳８（ＲＡＢ８）における、ＲＰＧＲの対話するタンパク質ある（ＲＰＧＲＩＰ１）、ＲＰＧＲの対話するタンパク質のある－類似のタンパク質（ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ）、構造維持タンパク質ある（ＳＭＣ１）、構造維持タンパク質３（ＳＭＣ３）、Ｗｈｉｒｌｉｎ、ホスホジエステラーゼδ（ＰＤＥδ）とラー関連のタンパク質から構成される群から選択されます。
【0114】
いくつかの実施形態では、４番目のシーケンスと３番目のシーケンスはリンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。幾つかの実施形態において、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、２Ａペプチドのシーケンスを含みます。いくつかの実施形態では、２Ａペプチドは、口蹄疫ウィルス（ＦＭＤＶ）、ウマの鼻炎Ａウィルス（ＥＲＡＶ）、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウィルス（ＴａＶ）またはブタのｔｅｓｃｈｏｖｉｒｕｓ（ＰＴＶ－ある）などのＡｐｈｔｈｏｒｖｉｒｕｓまたはカルジオウイルスから誘導した２Ａペプチドから選択されるかもしれません。いくつかの実施形態では、リンカーをエンコードするシーケンスはさらにプロモーター・シーケンスを含みます。幾つかの実施形態において、プロモータは誘導プロモータである。
【0115】
いくつかの実施形態では、組成物は開口部を含む。いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも７５％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも８０％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも８５％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９０％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９５％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９６％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９７％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９８％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、配列番号を有する少なくとも９９％の同一性があるシーケンスを含みます：１３．いくつかの実施形態では、ＨＳＡはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を有する。１３．いくつかの実施形態では、イントロンは、１つ以上のヌクレオチド変異、置換、欠失または付加を配列番号に比較するシーケンスを含みます：１３．
【0116】
組換えＡＡＶウイルス粒子
別の態様では、本の開示は、哺乳動物細胞へ本の開示の組成物を導入することにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を提供します。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞または２９３Ｔ細胞などのその誘導体です。
別の態様では、本の開示は、哺乳動物細胞へ本の開示の組成物を導入することにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を提供します。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞または２９３Ｔ細胞などのその誘導体です。
【0117】
いくつかの実施形態では、方法は含みます、しかし制限されない、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈澱反応、リポソームを媒介としたトランスフェクション。いくつかの実施形態では、組成物は助手プラスミドを有する２９３Ｔ細胞へトランスフェクトされます。いくつかの実施形態では、２９３Ｔ細胞はｒＡＡＶウイルス粒子を生むために用いられます。
【0118】
別の態様では、本の開示は、昆虫細胞へ本の開示の組成物を導入することにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子、と昆虫細胞へ本の開示の組成物を導入することにより、組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を調製する方法を提供します。いくつかの実施形態では、細胞は癌細胞である。
【0119】
いくつかの実施形態では、本の開示の組成物は当技術における既知のあらゆる方法による昆虫細胞へ送達されるかもしれません。いくつかの実施形態では、方法は含みます、しかし制限されない、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈澱反応、リポソームを媒介としたトランスフェクション、および／または感染症。いくつかの実施形態では、組成物は昆虫細胞へ感染します。いくつかの実施形態では、組成物は、昆虫細胞へ安定してトランスフェクトされます。
【0120】
いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はｂａｃｍｉｄ ＤＮＡおよび／またはバキュロウィルスを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はＲＰＧＲ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにＲＰＧＲ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は促進するかもしれません、パッケージにされたｒＡＡＶ／ＲＰＧＲ －を得るために宿主細胞（Ｓｆ９細胞のような）を感染させるために２つのバキュロウィルスを混合することを含む、本の開示のウイルス粒子を最適化しました。
【0121】
いくつかの実施形態における、準備をする組み換えのＡＡＶウイルス粒子の方法は（１）生成するＲＰＧＲ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを含むかもしれない、（２）生成するｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡ、（３）、バキュロウィルスを生成するｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、（４）、バキュロウィルスを生成するＲＰＧＲ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、（５）、バキュロウィルスを生成するｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、そして（６）、宿主細胞（Ｓｆ９細胞のような）を感染させる２つバキュロウィルスの混合、にパッケージにされたｒＡＡＶ／ＲＰＧＲ －を得てください。本の開示のウイルス粒子を最適化しました。
【0122】
いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はｂａｃｍｉｄ ＤＮＡおよび／またはバキュロウィルスを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はＲＰＧＲ ＯＲＦ１５発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法はｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを生成することを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにＲＰＧＲ ＯＲＦ１５発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は、バキュロウィルスを生成するためにｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすることを含むかもしれません。いくつかの実施形態では、組み換えのＡＡＶウイルス粒子を調製する方法は促進するかもしれません、パッケージにされたｒＡＡＶ／ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ －を得るために宿主細胞（Ｓｆ９細胞のような）を感染させるために２つのバキュロウィルスを混合することを含む、本の開示のウイルス粒子を最適化しました。
【0123】
いくつかの実施形態における、準備をする組み換えのＡＡＶウイルス粒子の方法は（１）生成するＲＰＧＲ ＯＲＦ１５発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを含むかもしれない、（２）生成するｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡ、（３）、バキュロウィルスを生成するｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、（４）、バキュロウィルスを生成するＲＰＧＲ ＯＲＦ１５発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、（５）、バキュロウィルスを生成するｒＡＡＶキャップ発現シーケンスｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを有する宿主細胞をトランスフェクトすること、そして（６）、宿主細胞（Ｓｆ９ ｃｅｌｌ）のような）を感染させる２つのバキュロウィルスの混合。パッケージにされたｒＡＡＶ／ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ －を得ることは、本の開示のウイルス粒子を最適化しました。
【0124】
必要ならば、ある場合には、ｒＡＡＶウイルス粒子は、当業者に知られていた従来方式による昆虫細胞から分離し精製することができます。例えば、ｒＡＡＶは、それについて遠心分離、ＨＰＬＣ、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、限外濾過、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、他の浄化技術またはあらゆる組み合わせを用いて精製することができます。
【0125】
システム
別の態様では、本の開示はその必要性のある対象のＸＬＲＰを処置するためにシステムを提供します。それは、本の開示、薬学的に許容可能な担体または賦形剤のｒＡＡＶ粒子を含みます。
別の態様では、本の開示はその必要性のある対象のＸＬＲＰを処置するためにシステムを提供します。それは、本の開示、薬学的に許容可能な担体または賦形剤のｒＡＡＶ粒子を含みます。
【0126】
本明細書で使用されるように、「薬学的にまたは治療的に許容可能な担体」とは、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉せず、宿主または患者に毒性ではない担体媒体を指す。医薬製剤における用いられる担体の型は、治療の化合物の投与の方法に左右されるでしょう。様々な投与経路のために医薬組成物を調製する多くの方法が当該技術分野で周知である。「薬学的に許容可能な眼の担体」は、眼の上で、またはその眼の近くで、直接にまたは間接的に眼に本の開示のｒＡＡＶウイルス粒子を送達するために用いることができる、薬学的に許容可能な担体または賦形剤を表します。
【0127】
本の開示のいくつかの実施形態では、システムは、適切な溶媒への本の開示のｒＡＡＶウイルス粒子を溶かすことにより調製されています。適切な溶媒としては、限定されないが、水、食塩水（例えば、ＮａＣｌ）、緩衝液、軟膏剤、ゲル、または他の溶媒が挙げられる。特定の実施形態において、溶媒はＴＨＦである。
【0128】
目薬の調製における用いられる懸濁の水溶液と希釈剤は、蒸留水または生理的塩類を含むかもしれません。様々な添加物は、目薬、眼のゲル剤および／または眼軟膏剤の含まれているかもしれません。これらの添加物は過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激またはアレルギーを伴わない眼で、またはその眼のまわりの接触のために適している追加の成分、添加物または担体を含むかもしれません。溶媒、塩基、共同溶媒、懸濁化剤、シックナー、乳化剤、スタビライザー、緩衝剤、等張性制御因子、ｐＨ制御因子、キレート剤、無痛化剤、保存剤、香料、香料、着色料、賦形剤、結合剤、潤滑剤、界面活性剤、吸収プロモーター、分散剤または可溶化剤などの添加物。
【0129】
例えば、目薬は溶かされた界面活性剤と、保存剤、スタビライザー、緩衝剤、抗酸化剤と粘性変更遺伝子などの任意に加える適切な医薬品添加物を有する滅菌水へのｒＡＡＶウイルス粒子を溶かすことにより処方することができます。
【0130】
例えば、緩衝剤は緩衝剤の一定のｐＨを維持するために付け加えられます。そして、緩衝剤は、ホウ酸塩緩衝剤、シトラート緩衝剤、酒石酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝液、緩衝酢酸溶液またはトリス＝ＨＣｌ緩衝剤（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよびＨＣｌを含んで）などの薬学的に許容可能な緩衝剤を含むかもしれません。
【0131】
緩衝剤に加えて、涙液に等張の等張の作用薬は眼に付加かもしれません。等張化剤としては、限定されないが、デキストロース、グルコース、スクロース、およびフルクトースなどの糖；マンニトールとソルビトールなどの糖アルコール；グリセロール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールなどの多価アルコール；ならびに、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化エフェドリン（ｐｈｅｄｒｉｎｅ）、塩化カリウム、塩化プロカイン、クロラムフェニコール、およびコハク酸ナトリウムなどの塩が挙げられる。等張の作用薬は、目薬の浸透圧が涙液の浸透圧に等しい量における付加です。
【0132】
保存剤は点眼薬および／または眼軟膏剤の完全性を維持するために加えられ得る。保存剤の例としては、限定されないが、ソルビン酸、塩化ベンザルコニウム、臭化ベンゾドデシニウム、パラベン、クロロブタノール、ベンジル型アルコール、フェニルエチルアルコール、貧歯類の二ナトリウム、ソルビン酸、ポリクオタニウム－１、または当業者に知られている他の薬剤が挙げられる。
【0133】
いくつかの実施形態では、増粘剤は、目薬、点眼用ゲル剤、および／または眼軟膏剤などの点眼用調製物の粘性を増加させるために使用される。使用可能な増粘剤としては、限定されないが、グリセロール、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、およびカルボキシビニルポリマーが挙げられ得る。
【0134】
上記のものに加えて、いくつかの実施形態では、限定されないが以下を含む追加薬剤を使用することが望ましい：亜硫酸ナトリウム、安定化剤、炭酸ナトリウム、およびプロピレングリコールなどの安定化剤；アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、チオ硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；および／または、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス－（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、およびクエン酸ナトリウムなどのキレート剤。
【0135】
目薬、眼のゲル剤、眼軟膏剤またはそのあらゆる組み合わせは、無菌の動作による調製されているか、またはあるいは、調製の適切な病期で殺菌されるかもしれません。例えば、滅菌医薬組成物は、滅菌材料を無菌で混合することにより調製され得る。代替的に、滅菌医薬組成物は、最初に材料を混合し、次いで最終的な調製物を滅菌することにより調製され得る。滅菌方法は、限定されないが、加熱滅菌、照射、及び濾過を含む。
【0136】
眼軟膏剤（眼軟膏剤）は、眼軟膏剤を調製し、次に、当技術における既知のあらゆる方法による医薬品製剤へそれを処方することのための塩基へ有効成分を混合することにより無菌的に調製することができます。眼軟膏剤のために用いられた典型的な塩基の例はワセリン、ｊｅｌｅｎｅ ５０、プラスチベースとポリエチレングリコールです。加えて、界面活性物質を加えて吸水性を増加させてもよい。
【0137】
活動的な作用薬の制御放出の様々な有効な方法は用いることができます。例えば、眼の剤形及び薬物送達システムに使用される、Ｗａｇｈ Ｖ． Ｄ．， Ｉｎａｍｄａｒ Ｂ．， Ｓａｍａｎｔａ Ｍ． Ｋ．， Ｐｏｌｙｍｅｒｓを参照。Ａｓｉａｎ Ｊ Ｐｈａｒｍ ２， ２００８， １２－１７、及びその中で引用される参考文献については、その内容が参照により本明細書に組み込まれている。ポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）及びヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）などのセルロース誘導体、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）、ポリアクリル酸塩、シクロデキストリン、及び天然のゴム、ポリオルソエステル（ＰＯＥ）、及び粘膜付着性ポリマー）；ゲル剤、膜と他の挿入物などの半固体；イオン交換樹脂などの樹脂；イオントフォレーシス送達；およびミクロスフェアおよびナノ粒子などのコロイド粒子。
【0138】
本の開示のｒＡＡＶウイルス粒子も他の治療剤と結合して提供することができます。いくつかの実施形態では、本の開示の薬物または組成物は、抗感染症薬、抗生物質、抗ウイルス物質、抗真菌物質、抗原生動物薬、抗炎症薬、アレルギー治療薬（抗ヒスタミン薬を含む）、人工涙血管収縮剤、血管拡張剤、局所麻酔薬、鎮痛剤、作用薬、免疫調節薬、抗酸化剤、ビタミンと無機質、酵素抑制因子または代替プロテアーゼとペプチダーゼを低下させる眼内圧またはサイトカイン阻害剤を含み、これらに限定されずに、他の活動的な作用薬に共同処方されるかもしれません。
【0139】
様々な実施形態では、本の開示の薬物または組成物も目の療法と結合して提供されるかもしれません。そこでは目の療法はＡｃｕｌａｒ（ｋｅｔｏｒｏｌａｃトロメタミン点眼剤）０．５％、Ａｃｕｖａｉｌ（ｋｅｔｏｒｏｌａｃトロメタミン）、ＡＫコンカナバリンＡ（ナファゾリン目薬）、Ａｋｔｅｎ（塩酸リドカイン）、Ａｌａｍａｓｔ、Ａｌｐｈａｇａｎ（ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ）、Ａｌｒｅｘ、Ａｓｔｅｐｒｏ（塩酸アゼラスチン鼻内噴霧）、ＡｚａＳｉｔｅ（アジスロマイシン）を含むことができますＢｅｐｒｅｖｅ（ｂｅｐｏｔａｓｔｉｎｅ ｂｅｓｉｌａｔｅ点眼剤）、Ｂｅｓｉｖａｎｃｅ（ｂｅｓｉｆｌｏｘａｃｉｎ眼使用懸濁）、Ｂｅｔａｘｏｎ、ＢＳＳの無菌の洗浄解決、Ｃｏｓｏｐｔ、Ｄｕｒｅｚｏｌ（ジフルプレドナート）、Ｅｙｌｅａ（ａｆｉｂｅｒｃｅｐｔ）、Ｌｏｔｅｍａｘ、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、Ｌｕｍｉｇａｎ（Ｂｉｍａｔｏｐｒｏｓｔ眼科用液剤）、Ｍａｃｕｇｅｎ（ｐｅｇａｎｔａｎｉｂ）、Ｏｃｕｆｌｏｘ（オフロキサシン点眼剤）０．３％、ＯｃｕＨｉｓｔ、Ｏｚｕｒｄｅｘ（デキサメタゾン）、Ｑｕｉｘｉｎ（レボフロキサシン）、レスキュラ（ｕｎｏｐｒｏｓｔｏｎｅイソプロピル点眼剤）０．１５％、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（シクロスポリンの眼のエマルジョン）、Ｓａｌａｇｅｎタブレット、Ｔｒａｖａｔａｎ（ｔｒａｖｏｐｒｏｓｔ点眼剤）、Ｖａｌｃｙｔｅ（ｖａｌｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ塩酸塩）、トリフルオロサイミジン（Ｖｉｒｏｐｔｉｃ）、Ｖｉｓｔｉｄｅ（Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）、ビスダイン（注入のＶｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）、Ｖｉｔｒａｓｅｒｔ移植組織、Ｆｏｍｉｖｉｒｓｏｎ注入、ＺＡＤＩＴＯＲ、Ｚｉｏｐｔａｎ（ｔａｆｌｕｐｒｏｓｔ点眼剤）、Ｚｉｒｇａｎ（ガンシクロビルの眼のゲル）、Ｚｙｍａｘｉｄ（Ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ点眼剤）、アトロピン、フルルビプロフェン、Ｐｈｙｓｏｓｔｉｍｉｎｅ、Ａｚｏｐｔ、ゲンタミシン、ピロカルピン（プロパラカイン）、バシトラシン、ｈｙｐｒｏｍｅｌｌｏｓｅ目薬（Ｇｏｎｉｏｓｏｌ）、ポリミキシンＢ、ポビドンヨード（ベータダイン）、グラミシジン、プレドニゾロン、ｂｅｔａｏｌｏｌ、Ｈｕｍｏｒｓｏｌ、プロパラカイン、ｂｅｔａｌｏｌ目薬（ベトプティック）、Ｈｙｌａｒｔｉｎ、贈り物、Ｂｒｉｎｚｏｌａｍｉｄｅ、高張性のＮａＣｌ、Ｐｕｒａｌｕｂｅ、ＢＳＳ、Ｉｎｄｏｃｙｃａｎｉｎｅグリーン、ローズベンガル、カルバコール、イトラコナゾール、ヒアルロン酸ナトリウム、セファゾリン、ラタノプロスト、スプロフェン、Ｃｅｌｌｕｖｉｓｃ、マンニットール、オキシテトラサイクリン、クロラムフェニコール、Ｍｅｔａｚｏｌａｍｉｄｅ、眼球内血圧液圧減退剤、Ｃｉｌｏｘａｎ、ミコナゾール、トブラマイシン、Ｃｙｐｒｏ Ｆｌｏｘａｃｉｎ、Ｍｉｏｓｔａｔ、トリアムシノロン、Ｃｏｓｏｐｔ、Ｍｕｒｏ １２８、Ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ、デメカリウム、ネオマイシン、Ｔｏｐｐｉｃａｍｉｄｅ、デキサメサゾン、Ｍｅｔａｚｏｌａｍｉｄｅ（ネプタザン）、トルソプト、Ｄｉｐｉｆｏｒｉｎ、Ｏｃｕｆｌｏｘ、または、Ｄｏｒｚｏｌａｍｉｄｅ、オフロキサシン、ビラ－Ａ、エピネフリン、Ｏｘｏｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ、トリフルオロサイミジン、フルオレセイン、フェニレフリンまたはキサラタン）
【0140】
薬物の例は、血液造成阻害剤、ａｎｅｃｏｒｔ酢酸塩、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦレセプタ・チロシンキナーゼ阻害剤と、ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂとベバシズマブ、ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ、ｓｕｎｉｔｉｎｉｂとｓｏｒａｆｅｎｉｂなどの抗血管内皮細胞増殖因子（抗ＶＥＧＦ）薬物などの抗血管原性の作用薬と既知の抗菌薬のいかなる数も含むかもしれません。血管形成の小さな分子と転写阻害剤；次のものを含む様々な既知の眼科用薬：例えば、ａｃｅｔｂｕｔｏｌｏｌ、ａｔｔｅｎｏｌｏｌ、ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ、カルベジロール、ａｓｍｏｌｏｌ、ラベタロール、ナドロール、ｐｅｍｂｒｏｌｏｌ、ピンドロール、プロプラノロール、ｍｅｔｅｎｏｌｏｌ、ｂｅｔａｘｏｌｏｌ、カルテオロール、ｌｅｖｏｂｅｔａｘｏｌｏｌ、ｌｅｖｏｂｕｎｏｌｏｌと眼球内血圧液圧減退剤などのβ－遮断剤を含むアドレナリン作動性拮抗薬などの緑内障作用薬；アドレナリン作用のアゴニストまたは交感神経興奮性の神経は、エピネフリン、ｄｉｐｉｖｅｆｒｉｎ、クロニジン、ａｒａｃｌｏｎｉｄｉｎｅとｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅのような麻薬を常用します；副交感神経薬またはピロカルピン、カルバコール、ホスホリン・ヨウ素、フィゾスチグミン、サリチル酸、塩化アセチルコリン、エゼリン、ジイソ・プロピル基フルオロホスファート、臭化デメカリウムなどのコリン作用性リセプタ・アゴニスト；ムスカリン；ａｃｅｔｏｚｏｌａｍｉｄｅ、ｂｒｉｎｚｏｌａｍｉｄｅ、ｄｏｒｚｏｌａｍｉｄｅとメタゾルアミドなどの局所でおよび／または全身の作用薬、ｅｔｈｏｘｚｏｌａｍｉｄｅ、ダイアモックスとジクロルフェナミドを含む炭酸脱水酵素阻害薬作用薬；アトロピン、シクロペントレート、サクシニルコリン、ホマトロピン、フェニレフリン、スコポラミンとトロピカミドなどの瞳孔拡大の毛様体筋麻痺の作用薬；プロスタグランジンＦ２αなどのプロスタグランジン、抗プロスタグランジン、プロスタグランジン前駆体またはｂｉｍａｔｏｐｒｏｓｔ、ラタノプロスト、ｔｒａｖｏｐｒｏｓｔとｕｎｏｐｒｏｓｔｏｎｅなどのプロスタグランジン・アナログ作用薬
【0141】
追加の薬物実施例は、また例えば、ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメサゾン、デキサメサゾン２１のリン酸塩、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン２１のリン酸塩、酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロン、フルオロメトロン、ｌｏｔｅｐｒｅｄｎｏｌ、ｍｅｔｏｘｙｓｏｎｅ、フルオシノロン酢酸塩、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロン、トリアムシノロン酢酸塩、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルオロメトロン、ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾンなどのグルココルチコイドとコルチコステロイドを含む抗炎症薬を含むかもしれません。例えば、炎症性の薬物が含むｌｏｔｅｐｒｅｄｎｏｌ、ｒｉｍｅｘｏｌｏｎｅと非ステロイド性の抗生物質、アスピリン、ジクロフェナク（ジクロフェナク）、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ｂｒｏｍｆｅｎａｃ（ｂｒｏｍｆｅｎａｃ）、ｎｅｐａｆｅｎａｃ、およびｋｅｔｏｒｏｌａｃ、サリチラート、インドメタシン、ｎａｘｏｐｒｅｎ、ピロキシカムとナブメトン・ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ｃｌｏｆｅｎａｍｉｃな酸、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ｏｘａｐｒａｚｉｎｅ（オキサプロジン）、ピロキシカム、サリチラート、スリンダクとトルメチン；ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ、ロフェコキシブとｖａｌｄｅｃｏｘｉｂなどのＣＯＸ－２インヒビター；抗生物質などの抗感染性または抗微生物薬は例えば、テトラサイクリン、クロールテトラサイクリン、バシトラシン、ネオマイシン、ポリミキシン、グラミシジン、セファレキシン、オキシテトラサイクリン、クロラムフェニコール、リファンピシン、シプロフロキサシン、トブラマイシン、ゲンタミシン、エリスロマイシン、ペニシリン、サルファ剤、スルファダイアジン、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルフイソキサゾール、ニトロフラゾン、プロピオン酸ナトリウム、ゲンタミシンなどのアミノグリコシド、トブラマイシン、アミカシンとストレプトマイシンを含みます；シプロフロキサシン、ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ、レボフロキサシン、ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ、ノルフロキサシン、オフロキサシンなどのフルオロキノロン；バシトラシン、赤芽細胞要素、フシジン酸、ネオマイシン、ポリミキシンｂ、グラミシジン、トリメトプリムとスルファセタミド；アムホテリシンｂ、ｃａｓｐｏｆｕｎｇｉｎ、クロトリマゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅ、テルビナフィン、ナイスタチンとミコナゾールなどの抗真菌物質；クロロキン、ａｔｏｖａｑｕｉｎｏｎｅ、メフロキン、プリマキン、キニジンとキニーネなどの抗マラリア熱の作用薬；エタンブトール、イソニアジド、ピラジン・アミド、リファンピシンとｒｉｆａｂｕｔｉｎなどの抗ミコバクテリウムの作用薬；アルベンダゾール、メベンダゾール、ｔｈｉｏｂｅｎｄａｚｏｌｅ、ｄｉａｚｏｔｉｄｅ坐薬、ピランテル、ａｔｏｖａｑｕｏｎｅ、ｉｏｄｏｑｕｉｎａｏｌ、イベルメクチン、パロモマイシン、プラジカンテルとｔｒｉｍａｔｒｅｘａｔｅなどの駆虫剤。
【0142】
方法
別の態様では、本の適用は、Ｘをリンクした色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）を処置する方法を提供します。それはその必要性のある対象への本の開示の治療上有効な量のシステムを投与することを含みます。
別の態様では、本の適用は、Ｘをリンクした色素性網膜炎（ＸＬＲＰ）を処置する方法を提供します。それはその必要性のある対象への本の開示の治療上有効な量のシステムを投与することを含みます。
【0143】
いくつかの実施形態では、システムは当技術で既知のあらゆる適切な方法による対象に投与することができます。いくつかの実施形態では、システムは、眼（例えば結膜下か、眼球後か、ｐｅｒｉｏｃｕｌａｒ、網膜下か、ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄａｌか、眼内の投与）にローカルに投与されるかもしれません。
【0144】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶウイルス粒子を含むシステムは、医学的に毒性の合格水準で希望の生物学的作用を達成する、治療上有効な量における提供されます。組成物の量は、投与経路とその病気の重症度に依存して変動することもある。量も体重、年齢、性、処置される各患者の症状の程度またはそのあらゆる組み合わせに応じて調節することができます。正確な量と投与経路は、処置する医者または獣医による結局測定されるでしょう。当然、量は、患者の年齢と重量と、処置される条件の厳しさに応じて慣例的に変更される必要があるかもしれません。
【0145】
いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１３ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾５に一般に関係しています。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１２ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾６に一般に関係しています。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１２ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾７に一般に関係しています。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１２ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾８に一般に関係しています。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１２ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾９に一般に関係しています。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が、１×１０＾１２ ｒＡＡＶウイルス粒子への１×１０＾１０に一般に関係しています。
【0146】
いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５ミリメートル（ｍＬ）の－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．０５のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．１のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．２のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．０１のｍＬ－あるｍＬからです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．１５のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．２５のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．３のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．３５のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．４のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．４５のｍＬ－０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．０５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．１ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．１５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．２ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．２５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．３ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．３５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．４ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．４５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．０５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．１ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．１５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．２ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．２５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．３ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．３５ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．４ｍＬです。いくつかの実施形態では、送達された体積は１つの眼当たり約０．００５のｍＬ－０．４５ｍＬです。
【0147】
いくつかの実施形態では、投与の度数は、少なくとも１日当たり２、３、４、または５倍を含む１日に一度適用されるかもしれません。代替的に、処置レジメンは、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日、１５０日、２００日、２５０日、３００日、４００日、５００日、７５０日、１０００日、または１０００日以上にわたって続くことがある。
【0148】
キット
別の態様では、本の開示はＸＬＲＰを処置するためにキットを提供します。それは、本の開示のシステムと指示を含みます。いくつかの実施形態では、指示はＸＬＲＰを処置するシステムを投与する方法を教えるために用いられます。
別の態様では、本の開示はＸＬＲＰを処置するためにキットを提供します。それは、本の開示のシステムと指示を含みます。いくつかの実施形態では、指示はＸＬＲＰを処置するシステムを投与する方法を教えるために用いられます。
【0149】
いくつかの実施形態では、装置はさらに制御装置を含む。いくつかの実施形態では、包装容器は本明細書に記載されたシステムを送達するように構成されます。いくつかの実施形態では、包装容器はバイアル、滴瓶、ボトル、チューブと注射器を含みます。いくつかの実施形態では、包装容器はシステムを適用するために用いられる滴瓶です。いくつかの実施形態では、包装容器はシステムを投与するために用いられる注射器です。
【0150】
実施形態
組成物であって、該組成物は：
（ｉ）第１のポリヌクレオチド、そこで、第１のポリヌクレオチドは言った、第１のシーケンスを操作しやすく含む、第１のプロモーターと別のシーケンスにリンクされた、操作しやすく、別のプロモーターにリンクされた、第１のシーケンスは言った、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド・タンパク質のエンコード、第２のシーケンスは言った、ＡＡＶレプ・タンパク質のエンコード、第１のプロモーターは言った、および第２のプロモーター言った、昆虫細胞の発現のために適している、および
（ｉｉ）別のポリヌクレオチド、そこで、第２のポリヌクレオチドは言った、３番めのシーケンスを操作しやすく含む、ＣＭＶプロモーターにリンクされた、ＣＡＧプロモーター、ＭＮＤＵ３プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーター、およびそこで、３番目のシーケンスが色素性網膜炎ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）ポリペプチドをエンコードすると言いました。
２．実施形態ある（そこでは上述の３番目のシーケンスはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードする）の組成物。
３．実施形態あるまたは２の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは最適化されたコドンである）。
４．実施形態１－３（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）のうちのいずれか１つの組成物：２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：２．
５．実施形態１－３（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）のうちのいずれか１つの組成物：３－６または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３月６日
６．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３．
７．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：４または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：４．
８．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：５または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：５．
９．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：６または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：６．
１０．実施形態１－９（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）のうちのいずれか１つの組成物。
１１．実施形態１－１０のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターがｐ１０プロモーターまたはｐｏｌｈプロモーターであると言った。
１２．実施形態１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐ１０プロモーターであると言った。
１３．実施形態１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐｏｌｈプロモーターであると言った。
１４．実施形態１－１３（そこではＲＰＥ ６５遺伝子プロモーター、細胞のレチナールデヒド結合蛋白質（ＣＲＡＬＢＰ）、ネズミ科の１１－ｃｉｓ－レチノール脱水素酵素（ＲＤＨ）プロモーター、ロドプシン・プロモーター、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーター、コラーゲン分解酵素阻害－３（ＴＩＭＰ３）プロモーター、光受容体レチノール結合蛋白質プロモーター、卵黄様黄斑ジストロフィ２プロモーターとＩｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ類網膜の結合蛋白質（ＩＲＢＰ）プロモーターから構成される群から上述の眼に特有のプロモーターは選択される）のうちのいずれか１つの組成物。
１５．実施形態１４（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号のうちのいずれか１つを含む）の組成物：７－８または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７月８日
１６．実施形態１５（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）の組成物：７または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７．
１７．実施形態１５（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）の組成物：８または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：８．
１８．実施形態１－１７のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了、第１のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
１９．実施形態１－１８のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了、第２のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
２０．実施形態１－１９のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のシーケンスは言い、第２のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
２１．実施形態２０（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）の組成物。
２２．実施形態２０（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）の組成物。
２３．実施形態２０（そこでは上述のシーケンス・コード化はリンカーがさらにプロモーターを含むと言った）の組成物。
２４．実施形態２３（そこでは上述のプロモーターはＦＭＤＶプロモーターである）の組成物。
２５．実施形態１－２４のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了は言った、３番目のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
２６．実施形態１８－２５（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）のうちのいずれか１つの組成物：９－１２または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９月１２日
２７．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：９または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９．
２８．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１０または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１０．
２９．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１１または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１１．
３０．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１２．
３１．実施形態１－４７のいずれか１つに係る方法は、製剤が風味材料（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）をさらに含むことを特徴とする。
３２．実施形態１－３１のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスをさらに含むと言いました。
３３．実施形態３２（そこでは上述の逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型２ ＩＴＲシーケンスである）の組成物。
３４．実施形態１－３３のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含むと言いました。
３５．実施形態３４の組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含むと言いました。ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＳＭＣｌ、ＳＭＣ３、Ｗｈｉｒｌｉｎ、ＰＤＥδとＲＡＢ８。
３６．実施形態３４の組成物、そこで、３番目のシーケンスは言い、４番目のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
３７．実施形態３６（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）の組成物。
３８．実施形態３６（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）の組成物。
３９．トロメタミンを更に含む、実施形態１－３８の何れか１つに記載の組成物。
４０．実施形態３９（そこでは上述のイントロン・シーケンスは配列番号を含む）の組成物：１３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１３．
４１．実施形態１－４０のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のポリヌクレオチドがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むと言った、５つのシーケンスをセロタイプで分けます。
４２．昆虫細胞へ実施形態１－４１のうちのいずれか１つの組成物をトランスフェクトすることにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子。
４３．実施形態４２（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子。
４４．Ｘを処置するためのシステムは、実施形態４２または４３、ならびに薬学的に許容可能な担体の上述の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む色素性網膜炎をリンクしました。
４５．Ｘを処置する方法は色素性網膜炎をリンクしました、その必要性のある上述の対象に投与することを含むこと、実施形態４４のシステム。
４６．実施形態４４と指示の上述のシステムを含むキット。
組成物であって、該組成物は：
（ｉ）第１のポリヌクレオチド、そこで、第１のポリヌクレオチドは言った、第１のシーケンスを操作しやすく含む、第１のプロモーターと別のシーケンスにリンクされた、操作しやすく、別のプロモーターにリンクされた、第１のシーケンスは言った、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド・タンパク質のエンコード、第２のシーケンスは言った、ＡＡＶレプ・タンパク質のエンコード、第１のプロモーターは言った、および第２のプロモーター言った、昆虫細胞の発現のために適している、および
（ｉｉ）別のポリヌクレオチド、そこで、第２のポリヌクレオチドは言った、３番めのシーケンスを操作しやすく含む、ＣＭＶプロモーターにリンクされた、ＣＡＧプロモーター、ＭＮＤＵ３プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＥＦ１ａプロモーターまたは眼に特有のプロモーター、およびそこで、３番目のシーケンスが色素性網膜炎ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）ポリペプチドをエンコードすると言いました。
２．実施形態ある（そこでは上述の３番目のシーケンスはＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードする）の組成物。
３．実施形態あるまたは２の組成物（そこでは上述の３番目のシーケンスは最適化されたコドンである）。
４．実施形態１－３（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）のうちのいずれか１つの組成物：２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：２．
５．実施形態１－３（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）のうちのいずれか１つの組成物：３－６または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３月６日
６．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：３．
７．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：４または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：４．
８．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：５または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：５．
９．実施形態５（そこでは上述の３番目のシーケンスは配列番号を含む）の組成物：６または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：６．
１０．実施形態１－９（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）のうちのいずれか１つの組成物。
１１．実施形態１－１０のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターがｐ１０プロモーターまたはｐｏｌｈプロモーターであると言った。
１２．実施形態１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐ１０プロモーターであると言った。
１３．実施形態１１の組成物、そこで、第１のプロモーターは言ったか、第２のプロモーターが上述のｐｏｌｈプロモーターであると言った。
１４．実施形態１－１３（そこではＲＰＥ ６５遺伝子プロモーター、細胞のレチナールデヒド結合蛋白質（ＣＲＡＬＢＰ）、ネズミ科の１１－ｃｉｓ－レチノール脱水素酵素（ＲＤＨ）プロモーター、ロドプシン・プロモーター、ロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーター、コラーゲン分解酵素阻害－３（ＴＩＭＰ３）プロモーター、光受容体レチノール結合蛋白質プロモーター、卵黄様黄斑ジストロフィ２プロモーターとＩｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ類網膜の結合蛋白質（ＩＲＢＰ）プロモーターから構成される群から上述の眼に特有のプロモーターは選択される）のうちのいずれか１つの組成物。
１５．実施形態１４（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号のうちのいずれか１つを含む）の組成物：７－８または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７月８日
１６．実施形態１５（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）の組成物：７または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：７．
１７．実施形態１５（そこでは上述のロドプシン・キナーゼ（ＧＲＫ１）プロモーターは配列番号を含む）の組成物：８または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：８．
１８．実施形態１－１７のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了、第１のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
１９．実施形態１－１８のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了、第２のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
２０．実施形態１－１９のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のシーケンスは言い、第２のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
２１．実施形態２０（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）の組成物。
２２．実施形態２０（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）の組成物。
２３．実施形態２０（そこでは上述のシーケンス・コード化はリンカーがさらにプロモーターを含むと言った）の組成物。
２４．実施形態２３（そこでは上述のプロモーターはＦＭＤＶプロモーターである）の組成物。
２５．実施形態１－２４のうちのいずれか１つの組成物、そこで、３’終了は言った、３番目のシーケンスがさらにポリＡシーケンスを含むと言いました。
２６．実施形態１８－２５（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号のうちのいずれか１つを含む）のうちのいずれか１つの組成物：９－１２または配列番号のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９月１２日
２７．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：９または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：９．
２８．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１０または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１０．
２９．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１１または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１１．
３０．実施形態２６（そこでは上述のポリＡシーケンスは配列番号を含む）の組成物：１２または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１２．
３１．実施形態１－４７のいずれか１つに係る方法は、製剤が風味材料（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）をさらに含むことを特徴とする。
３２．実施形態１－３１のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスをさらに含むと言いました。
３３．実施形態３２（そこでは上述の逆方向末端反復（ＩＴＲ）シーケンスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型２ ＩＴＲシーケンスである）の組成物。
３４．実施形態１－３３のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含むと言いました。
３５．実施形態３４の組成物、そこで、第２のポリヌクレオチドが治療のタンパク質をエンコードする４番めのシーケンスをさらに含むと言いました。ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＧＲＩＰ１Ｌ、ＳＭＣｌ、ＳＭＣ３、Ｗｈｉｒｌｉｎ、ＰＤＥδとＲＡＢ８。
３６．実施形態３４の組成物、そこで、３番目のシーケンスは言い、４番目のシーケンスを言った、リンカーをエンコードするシーケンスによる接続されます。
３７．実施形態３６（そこでは上述のリンカーは切断可能なリンカーである）の組成物。
３８．実施形態３６（そこでは上述のリンカーは２Ａペプチドをエンコードするシーケンスを含む）の組成物。
３９．トロメタミンを更に含む、実施形態１－３８の何れか１つに記載の組成物。
４０．実施形態３９（そこでは上述のイントロン・シーケンスは配列番号を含む）の組成物：１３または配列番号に対して少なくとも９０％の同一性を持っているシーケンス：１３．
４１．実施形態１－４０のうちのいずれか１つの組成物、そこで、第１のポリヌクレオチドがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むと言った、５つのシーケンスをセロタイプで分けます。
４２．昆虫細胞へ実施形態１－４１のうちのいずれか１つの組成物をトランスフェクトすることにより調製された組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子。
４３．実施形態４２（そこでは上述の昆虫細胞はＳｆ９細胞である）の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子。
４４．Ｘを処置するためのシステムは、実施形態４２または４３、ならびに薬学的に許容可能な担体の上述の組み換えのアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む色素性網膜炎をリンクしました。
４５．Ｘを処置する方法は色素性網膜炎をリンクしました、その必要性のある上述の対象に投与することを含むこと、実施形態４４のシステム。
４６．実施形態４４と指示の上述のシステムを含むキット。
【0151】
本開示のいくつかの実施形態は、次の実施例によるさらに説明されます。それは制限として解釈されるべきではありません。当業者は、本の開示の実施形態のインプリメンテーションの中でうまくいくために、発明者が見つけた技術が本明細書に記述し従って、これらの実施形態をインプリメントするための有益な手法を構成すると考えることができる、と次の実施例において開示された技術が相当すると理解するでしょう。好ましい面。しかしながら、本の開示に基づいて、当業者は、本の開示の蒸留酒と範囲から外れないと、本明細書に開示された特有の実施形態における多くの変化を行なうことができると理解するでしょう。そして、同じか同様の結果は今までどおり得ることができます。
【実施例】
【0152】
これらの実施例は説明目的のために提供されるにすぎず、請求項の範囲を制限するものではない。
【0153】
実施例１－組換えＡＡＶ構成物の設計
【0154】
キャップおよびレプのタンパク質の暗号配列を含む最初のポリヌクレオチドを得るために、ＡＡＶ５およびＡＡＶ２から誘導したキャップおよびレプの暗号配列は、それぞれ、それらの対応するプロモーターと共に修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へ合成されクローンを作られました。
【0155】
配列番号における示されるＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列：ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５の暗号配列を含む第２のポリヌクレオチドを得るの、あるとそれらの対応するプロモーターは修正済のｐＦａｓｔＢａｃ１へクローンを作られました。
【0156】
コドン最適化はＲＰＧＲ ＯＲＦ１５の発現を最適化するために用いられました。
【0157】
コドンに、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５シーケンスを最適化する、様々な発現は構築します、表２のリストされた、作出されました。
【0158】
【表2】
【0159】
４つのコドンに最適化されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ ｃＤＮＡシーケンスが作出されました（ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ ｃｏ１－ｃｏ４； 配列番号： ３－６）。構成物は長時間番組ロドプシン・キナーゼある（ＧＲＫ１Ｌ； 配列番号： ７）プロモーターまたは簡易型ＧＲＫ１プロモーター（ＧＲＫ１Ｓ； 配列番号： ８）のいずれかを牽制しました。様々な構成物はまた異なるポリＡシーケンス－ｂＧＨｐＡ（配列番号： ９）、ＳＶ４０ｐＡ（配列番号： １０）、ｒｂＧｌｏｂｐＡ（配列番号： １１）とｈＧＨｐＡ（配列番号： １２）－を含んでいました－およびシミアンウイルス４０イントロン・シーケンス（配列番号：１３）。
【0160】
実施例２－コドン最適化されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５生体外の構築の堅調な発現
【0161】
発現激しさを測定するために、設計された、構築する、２個の×１０５ ＨＥＫ２９３Ｔ細胞が接種されました、１つの、２４－よく、プレート、および培養した、夜通し。０．５マイクログラムの各発現（μｇ）プラスミドを構築する、１．５マイクロリットル（μＬ）のＭｉｒｕｓ ＴｒａｎｓＴ－ＶｉｒｕｓＧＥＮ（ｒ）トランスフェクション試薬に混合された、につき、５０のμＬ Ｏｐｔｉ－Ｍｅｍ媒体（ＤＮＡ： Ｍｉｒｕｓ試薬（μｌ）＝ １：３（μｇ））におけるよく。４８時間の後、ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の発現はウェスタンブロッティングによる検出されました。図１Ａ－Ｂの示されるように、構成物はすべてハイ・レベルへの組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質を示しました。これらのタンパク質も、彼らが内因性の翻訳後修飾（野性型ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質のそれに似ている）を受けたことを示唆してｇｌｕｔａｍｙｌａｔｅｄされました。
【0162】
コドンに最適化されたｃＤＮＡ構成物から組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の発現は分析されました。
【0163】
これらのデータは、コドンに最適化されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ ｃＤＮＡが構築することを示唆します、ハイ・レベルの機能的な組み換えタンパクを生体外で示すことができます。
【0164】
実施例３－組換えＡＡＶウイルス粒子の調製
【0165】
ＡＡＶ粒子はＡＡＶ技術へのｂａｃによる生成されました。Ｓｐｅｃｉｆｃａｌｌｙ、２つのｂａｃｍｉｄｓの含んでいるレプ・キャップとトランスジーン発現カセットがそれぞれ、ｇｅｎｒａｔｅｄされました。そして、これらの２ ｂａｃｍｉｄｓのバキュロウィルスは次に生成されました。ｒＡＡＶは、Ｓｆ９細胞のレプ・キャップとトランスジーン・バキュロウィルスの両方を感染させることにより生成されました。組み換えのＡＡＶ２／５／ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ウイルス粒子は勾配超遠心分離またはアフィニティカムを用いて、分離され精製されました。
【0166】
実施例４－眼における機能的なＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質
【0167】
眼における表２における構成物から発現されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の機能特性はＲＰＧＲノックアウトマウス・モデルを用いて評価されました。
【0168】
マウスは、両側性の網膜下の注入を用いて、表３のリストされたスケジュールによる実施例３の選択されたｒＡＡＶ５ウィルス粒子を注入されました。
【0169】
【表3】
【0170】
負の調節（ビヒクル）以外の各注入のために、￣１ｘ１０＾９ウィルス粒子は各眼へ注入されました。
【0171】
マウスが繁殖から有効になったように、注射剤の回転は実行されました。組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質の機能特性は網膜電図記録法（ＥＲＧ）を用いて、外観検査の中でテストされました。野性型マウス（Ｃ５７マウス）陽性対照として用いられました。最初の分析は注入のあるか月後に行なわれました。図２Ａ－２Ｂにおける示されるように、ＰＡ０１４を除いて構成物はすべてＲＰＧＲノックアウトマウスの暗順応のＡ波およびＢ波欠損を著しく救うことができました。マウスの表現型はＰＡ００２（ＰＡ００４）を注入しました。そして、ＰＡ０１２は陽性対照マウスのそれに似ていました。さらに、図における２Ｃ示されるように、ＰＡ００２およびＰＡ０１２を注入されたマウスはまたＲＰＧＲノックアウトマウスの明所視のＢ波表現型を救いました。
【0172】
これらのデータは、ＡＡＶベクターから発現されたＲＰＧＲ ＯＲＦ１５タンパク質が生体内で機能的なことを示します。
【0173】
実施例５－組み換えＡＡＶベクターの設計とクローニング
【0174】
キャップおよびレプのタンパク質の暗号配列を含む本の開示の最初のポリヌクレオチドを得るの、ＡＡＶ２から誘導したキャップおよびレプの暗号配列とそれらの対応するプロモーターは、バキュロウィルス・プラスミドベクトルへクローンを作られます。
【0175】
緑の蛍光性のタンパク質（ＧＦＰ）をエンコードするヌクレオチド配列、と配列番号における示されるＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列：ＧＦＰとＲＰＧＲ ＯＲＦ１５の暗号配列を含む第２のポリヌクレオチドを得るの、あるとそれらの対応するプロモーターはバキュロウィルス・プラスミドベクトルへクローンを作られます。
【0176】
実施例６－マウスの眼におけるレポーター遺伝子の送達と発現
【0177】
この実施形態では、マウスは目標実験群および対照群へ分割されます。方法による得られた、精製されたｒＡＡＶ２／ＧＦＰウイルス粒子は実施例３を記載しました。そして、ＰＢＳは、目標実験群および対照群の眼へそれぞれ注入されます。期間の後、マウス網膜色素上皮細胞への蛍光発現は評価されます。
【0178】
対照群に比較して、緑の蛍光は、目標実験群へのマウスの網膜色素における観測されます。この結果は、送達のｒＡＡＶ２／ＧＦＰウィルス粒子へこの開示のＧＦＰ暗号配列を含んでいる最初のポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶベクターを成功裡にパッケージにすることができることを示します。そして、送達されたＧＦＰ暗号配列は、マウス網膜色素上皮における成功裡に示すことができます。
【0179】
実施例７－マウスへのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５の送達と発現
【0180】
マウスは２つの群（抑制および実験）へ分割されます。そこでは対照群および目標実験群は、実施例３の記載された方法による精製されたｒＡＡＶ２／ＧＦＰとｒＡＡＶ２／ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ウイルス粒子を眼内で注入されます。マウスの眼は注入の後に評価されます。結果は、網膜の上で組み換えのＲＰＧＲ ＯＲＦ１５暗号配列を示すことができることを示して、マウス網膜色素上皮における成功裡にＧＦＰを示すことができることを示します。
【0181】
実施例８－生体内の適用の組成物の有効性
【0182】
２つの腕治験、この適用の記載されたシステムの有効性をテストするためにこの開示の記載されたｒＡＡＶ２／ＲＰＧＲ ＯＲＦ１５ウイルス粒子を含んでいる抑制とシステムを用いて実行されます。
【0183】
他のウイルス粒子の有効性もこの実施例を用いてテストすることができます。
【0184】
本開示の好ましい実施形態が、本明細書に示され且つ記載されている一方で、このような実施形態が、ほんの一例として提供されることは当業者に明白であろう。本教示が明細書内で提供される特定の例によって制限されることを意図しない。本発明は前述の明細書を参照して記載されている一方、本明細書における実施形態の記載および例示は限定的な意味で解釈されることは意図されていない。多数の変形、変化、及び置換は、本開示から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。さらに、本発明の全ての態様は、様々な条件および変数に依存する、本明細書で述べられた特定の描写、構成、または相対的比率に限定されないことが理解されるだろう。本明細書に記載される開示の実施形態の様々な代案が、本開示の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。したがって、本発明は、任意のそのような代替案、修正、変形、または同等物にも及ぶことが考えられる。以下の特許請求の範囲は本開示の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲及びそれらの同等物の範囲内の方法及び構成は、それによって包含されることが、意図される。
【0185】
【表4-1】
【0186】
【表4-2】
【0187】
【表4-3】
【0188】
【表4-4】
【0189】
【表4-5】
【0190】
【表4-6】
【0191】
【表4-7】
【0192】
【表4-8】
【0193】
【表4-9】
【0194】
【表4-10】
【0195】
【表4-11】
【0196】
【表4-12】
【0197】
【表4-13】
【0198】
【表4-14】
【0199】
【表4-15】
【0200】
【表4-16】
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【配列表】
【国際調査報告】