▶ シュアファイア・メディカル・インコーポレイテッド・ドゥーイング・ビジネス・アズ・トリサルース・ライフ・サイエンシズの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-12
(54)【発明の名称】トール様受容体アゴニストを使用したがん治療
(51)【国際特許分類】
A61K 31/711 20060101AFI20231004BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231004BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20231004BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20231004BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20231004BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20231004BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231004BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231004BHJP
A61K 31/713 20060101ALN20231004BHJP
C12N 15/11 20060101ALN20231004BHJP
【ＦＩ】
A61K31/711
A61P43/00 121
A61P37/04 ZNA
A61K48/00
A61P35/04
A61K31/7125
A61K45/00
A61K39/395 U
A61K39/395 T
A61K31/713
C12N15/11 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023518828
(86)(22)【出願日】2021-09-21
(85)【翻訳文提出日】2023-05-22
(86)【国際出願番号】 US2021051378
(87)【国際公開番号】W WO2022066670
(87)【国際公開日】2022-03-31
(31)【優先権主張番号】63/225,026
(32)【優先日】2021-07-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/081,613
(32)【優先日】2020-09-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/159,867
(32)【優先日】2021-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/115,435
(32)【優先日】2020-11-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/159,857
(32)【優先日】2021-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/139,622
(32)【優先日】2021-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＭＡＴＬＡＢ
(71)【出願人】
【識別番号】521104137
【氏名又は名称】トリサルース・ライフ・サイエンシズ・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】スティーブン・シー・カッツ
(72)【発明者】
【氏名】ブライアン・エフ・コックス
(72)【発明者】
【氏名】デイビッド・ベンジャミン・ジャロク
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084AA19
4C084MA02
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB021
4C084ZB022
4C084ZB091
4C084ZB092
4C084ZB261
4C084ZC751
4C085AA14
4C085BB01
4C085BB12
4C085EE03
4C085GG02
4C086AA01
4C086AA02
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB02
4C086ZB09
4C086ZB26
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明の実施形態は、血管系を通る局所領域療法を使用して、がんを治療する方法、及び肝臓の固形腫瘍にトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを送達する方法を提供する。一態様では、本発明は、ＴＬＲ９アゴニストを肝臓に投与することを含む、肝臓のブドウ膜メラノーマの転移を治療する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、構造：【数1】
【請求項2】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、肝動脈注入（ＨＡＩ）によってデバイスを通じて投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、門脈注入（ＰＶＩ）によってデバイスを通じて投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記ＴＬＲ９アゴニストの前記治療有効量が、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、又は８ｍｇからなる群から選択され、投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、カテーテルデバイスを通じて投与され得る、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記カテーテルデバイスが、局所的な圧力変化に動的に応答する一方向バルブを備える、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、圧力有効化薬物送達を介して前記カテーテルデバイスを通じて投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、約１ｃｃ／分～約５ｃｃ／分の注入速度で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、約２５分間の期間投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項10】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、１つ以上のチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与され、前記チェックポイント阻害剤が、前記ＴＬＲ９アゴニストの投与と同時に、その前、又はその後のいずれかで全身投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
前記１つ以上のチェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、及びセミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブ、及びイピリムマブのうちの少なくとも１つを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記ＴＬＲ９アゴニストの前記投与が、サイクルを含む投与レジメンを含み、前記サイクルのうちの１つ以上が、肝動脈注入によるカテーテルデバイスを介した前記ＴＬＲ９アゴニストの投与、続いてチェックポイント阻害剤の全身投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
前記１つ以上のチェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、及びセミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブ、及びイピリムマブのうちの少なくとも１つを含む、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年９月２２日に出願された米国仮特許出願第６３／０８１，６１３号、２０２０年１１月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／１１５，４３５号、２０２１年１月２０日に出願された米国仮特許出願第６３／１３９，６２２号、２０２１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，８５７号、２０２１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，８６７号、及び２０２１年７月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／２２５，０２６号の利益を主張し、これらのうちのいずれも参照によりそれらの全体が組み込まれる。
本出願は、２０２０年９月２２日に出願された米国仮特許出願第６３／０８１，６１３号、２０２０年１１月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／１１５，４３５号、２０２１年１月２０日に出願された米国仮特許出願第６３／１３９，６２２号、２０２１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，８５７号、２０２１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，８６７号、及び２０２１年７月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／２２５，０２６号の利益を主張し、これらのうちのいずれも参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年９月１６日に作成され、Ａ３７２－５０２＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは、４８４バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年９月１６日に作成され、Ａ３７２－５０２＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは、４８４バイトである。
【0003】
本開示は、概して、血管系を通る局所領域療法を使用して、がんを治療する方法、及び肝臓の固形腫瘍にトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを送達する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
がんは、皮膚及び肝臓などの様々な臓器における固形腫瘍の増殖をもたらし得る、細胞の抑制のない増殖を伴う壊滅的な疾患である。腫瘍は、最初に任意の数の臓器に存在し得るか、又は転移の結果であり得るか、又は他の位置からの拡散であり得る。
【0005】
メラノーマは、広範囲の亜型及び提示の特徴を含む多様な疾患である。メラノーマは、メラノサイトから発症するがんであり、皮膚及び眼などのメラノサイトが見出される任意の臓器又は組織内を含み、また肝臓などの他の臓器への転移も含む、多数の亜型及び提示を伴い得る。
【0006】
ブドウ膜メラノーマ（ＵＭ）は、最も一般的な原発性眼内悪性腫瘍であり、原発性眼内悪性腫瘍の８５～９５％及び全てのメラノーマ症例の３～５％を占める。これらの悪性腫瘍は、虹彩、毛様体、及び脈絡膜からなる眼球血管膜内のメラノサイトから生じる。原発性腫瘍を放射線療法又は摘出術により確定的に治療すると、局所再発率が低くなる。しかしながら、効果的な局所制御にもかかわらず、転移性疾患は、５０％超の患者に起こる。転移性ブドウ膜メラノーマは、典型的には、９０％超の症例に肝臓に影響を与え、血液学的広がりから生じる。肝転移（ＬＭ）に対するこの疾患の傾向は、マウス及びヒト腫瘍研究で評価されている。転移性ブドウ膜メラノーマの他の病変部位には、肺、骨、脳、リンパ節、及び皮膚が含まれる。転移性ブドウ膜メラノーマ（例えば、多巣性内臓腫瘍）から肝臓に存在する固形腫瘍は、特に治療が困難である。
【0007】
転移性疾患の場合、治療は、肝臓を標的とした療法、細胞毒性化学療法、免疫療法、分子標的療法、及びエピジェネティック修飾剤を含むいくつかのカテゴリに分類され得る。転移性疾患は、非常に予後不良であり、最初の診断から１年間の全生存率は４３％である。
【0008】
更に、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、及びアテゾリズマブなどの特定の抗体療法は、静脈内全身注入を介した皮膚メラノーマの治療のために承認されているが、これらの治療薬は、転移性ブドウ膜メラノーマの治療のために安全又は有効であるとして承認されていない。
【0009】
したがって、転移性ブドウ膜メラノーマの治療のための安全かつ効果的な治療薬が依然として必要である。
【発明の概要】
【0010】
本発明は、血管系を通る局所領域療法を使用して、がんを治療する方法、及び肝臓の固形腫瘍にＴＬＲアゴニストを送達する方法に関する。
【0011】
一態様では、本発明は、肝臓のブドウ膜メラノーマの転移を治療する方法であって、肝動脈注入（ＨＡＩ）によって血管内デバイスを通じてＴＬＲアゴニストを投与することを含む、方法に関する。別の実施形態によれば、肝臓のブドウ膜メラノーマの転移の治療は、門脈注入（ＰＶＩ）によってＴＬＲアゴニストを、血管内デバイスを通じて投与することを含む。
【0012】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、血管及び／又は標的組織又は腫瘍内の流体圧力の正味の増加を生成する、引き起こす、及び／又は寄与するカテーテルデバイスなどのデバイスを通じた治療薬の投与を含む、圧力有効化薬物送達（ＰＥＤＤ）を通じて投与される。
【0013】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、血管圧力を上昇させるデバイスなどの圧力有効化デバイスを通じて投与される。
【0014】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、クラスＣタイプＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮ）である。
【0015】
いくつかの実施形態において、肝臓への血管内デバイスを介したＴＬＲアゴニストの投与は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の減少、又は免疫抑制を制限するためのＭＤＳＣの機能的変化をもたらす。
【0016】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストである。
【0017】
本開示の例示的な実施形態のこれら及び他の目的、特徴、及び利点は、本明細書全体と併せて考慮される場合、本開示の例示的な実施形態の以下の詳細な説明を読むと明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【0018】
本開示の更なる目的、特徴、及び利点は、本開示の例示的な実施形態を示す添付の図面と併せて考慮される以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
【図1】ＳＤ－１０１の構造を示す。
【図6】マウスにおいて肝転移を発症するためのスキーマ、並びに門脈及び尾静脈投与のための対応する治療プロトコルを示す。
【図12】１ｃｍ厚の薄片に切断される、肝臓の４つの一次葉のサンプル処理方法を示す。
【図18】標識されたオリゴヌクレオチドを用いた肝動脈注入後の肝酵素反応を示す。
【図19】エンドホールカテーテル又はＰＥＤＤによる送達後にブタ肝組織に保持される標識されたＯＤＮのシグナル強度を示す。
【図22】エンドホール平均処理組織量、ＰＥＤＤ平均処理組織量、及び重複した同時処理組織量のベン図を示す。
【図23】本発明の一実施形態による、ブドウ膜メラノーマ肝転移を治療するための全体的な臨床研究設計を示す。
【発明を実施するための形態】
【0019】
図面全体を通して、特に明記しない限り、同じ参照番号及び文字は、図示された実施形態の同様の特徴、要素、構成要素、又は部分を示すために使用される。
【0020】
更に、本開示は、図面を参照して詳細に説明されるが、それは例示的な実施形態に関連して行われ、図面及び添付の段落に示される特定の実施形態によって限定されるものではない。
【0021】
以下の実施形態の説明は、本発明の異なる態様の特徴及び教示を特に説明するために数字を参照する非限定的な代表的な例を提供する。説明される実施形態は、実施形態の説明とは別に、又は他の実施形態と組み合わせて実施することが可能であると認識されるべきである。実施形態の説明を検討する当業者は、本発明の異なる説明された態様を理解することができるはずである。実施形態の説明は、具体的にはカバーされていないが、実施形態の説明を読んだ当業者の知識の範囲内である他の実施形態が、本発明の出願と一致すると理解される程度に、本発明の理解を容易にするべきである。
【0022】
トール様受容体アゴニスト
トール様受容体は、微生物病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を検出することができるパターン認識受容体である。ＴＬＲ９刺激などのＴＬＲ刺激は、広範な先天性免疫刺激を提供することができるだけでなく、肝臓における免疫抑制の優勢な推進要因に特異的に対処することもできる。ＴＬＲ１－１０は、ヒトにおいて発現され、多様な微生物ＰＡＭＰを認識する。この点で、ＴＬＲ９は、微生物ＤＮＡを含む非メチル化ＣｐＧ－ＤＮＡに応答することができる。ＣｐＧは、シトシン及びグアニンジヌクレオチド１のモチーフを指す。ＴＬＲ９は、Ｂ細胞、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、活性化好中球、単球／マクロファージ、Ｔ細胞、及びＭＤＳＣで構成的に発現される。ＴＬＲ９は、ケラチノサイト及び腸、頸部、及び呼吸器上皮細胞を含む非免疫細胞においても発現される。ＴＬＲ９は、エンドソーム内のそのアゴニストに結合することができる。シグナル伝達は、炎症誘発性サイトカイン遺伝子発現を誘導するために、ＭＹＤ８８／ＩｋＢ／ＮｆκＢを介して行われ得る。ＩＲＦ７を通る平行シグナル伝達経路は、適応免疫反応を刺激する１型及び２型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γなど）を誘導する。更に、ＴＬＲ９アゴニストは、抗原提示樹状細胞のサイトカイン及びＩＦＮ産生及び機能的成熟を誘導することができる。
トール様受容体は、微生物病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を検出することができるパターン認識受容体である。ＴＬＲ９刺激などのＴＬＲ刺激は、広範な先天性免疫刺激を提供することができるだけでなく、肝臓における免疫抑制の優勢な推進要因に特異的に対処することもできる。ＴＬＲ１－１０は、ヒトにおいて発現され、多様な微生物ＰＡＭＰを認識する。この点で、ＴＬＲ９は、微生物ＤＮＡを含む非メチル化ＣｐＧ－ＤＮＡに応答することができる。ＣｐＧは、シトシン及びグアニンジヌクレオチド１のモチーフを指す。ＴＬＲ９は、Ｂ細胞、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、活性化好中球、単球／マクロファージ、Ｔ細胞、及びＭＤＳＣで構成的に発現される。ＴＬＲ９は、ケラチノサイト及び腸、頸部、及び呼吸器上皮細胞を含む非免疫細胞においても発現される。ＴＬＲ９は、エンドソーム内のそのアゴニストに結合することができる。シグナル伝達は、炎症誘発性サイトカイン遺伝子発現を誘導するために、ＭＹＤ８８／ＩｋＢ／ＮｆκＢを介して行われ得る。ＩＲＦ７を通る平行シグナル伝達経路は、適応免疫反応を刺激する１型及び２型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γなど）を誘導する。更に、ＴＬＲ９アゴニストは、抗原提示樹状細胞のサイトカイン及びＩＦＮ産生及び機能的成熟を誘導することができる。
【0023】
一実施形態によれば、ＴＬＲ９アゴニストは、ＭＤＳＣを低減し、再プログラムすることができる。ＭＤＳＣは、肝臓における免疫抑制の主要な原動力である。ＭＤＳＣはまた、Ｔ制御細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、及びがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）などの他の抑制細胞型の増殖を駆動する。ＭＤＳＣは、免疫細胞を下方制御し、免疫療法薬の有効性を妨げ得る。更に、高いＭＤＳＣレベルは、一般的に、がん患者の不良な転帰を予測する。この点で、ＭＤＳＣを減少、改変、又は排除することは、がんを攻撃する宿主の免疫系の能力、及びより有益な治療反応を誘発する免疫療法の能力を改善すると考えられている。一実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＭＤＳＣを免疫刺激性Ｍ１マクロファージに変換し、未成熟樹状細胞を成熟樹状細胞に変換し、エフェクターＴ細胞を拡大して、抗腫瘍活性を促進する応答性腫瘍微小環境を作成し得る。
【0024】
一実施形態によれば、微生物ＣｐＧ－ＤＮＡの免疫刺激性質を模倣する合成ＣｐＧ－オリゴヌクレオチド（ＣＰＧ－ＯＮ）を、治療用に開発することができる。一実施形態によれば、オリゴヌクレオチドは、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。いくつかの異なるＣｐＧ－ＯＤＮクラスタイプ、例えば、クラスＡ、クラスＢ、クラスＣ、クラスＰ、及びクラスＳがあり、それらは、特定の構造的及び機能的特徴を共有する。この点で、クラスＡタイプＣＰＧ－ＯＤＮ（又はＣＰＧ－Ａ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞及び最高度のＩＦＮα誘導にほとんど影響を及ぼさないｐＤＣ成熟に関連しており、クラスＢタイプＣＰＧ－ＯＤＮ（又はＣＰＧ－Ｂ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞増殖を強く誘導し、ｐＤＣ及び単球成熟、ＮＫ細胞活性化、並びに炎症性サイトカイン産生を活性化し、クラスＣタイプＣＰＧ－ＯＤＮ（又はＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞増殖及びＩＦＮ－α産生を誘導することができる。更に、一実施形態によれば、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮは、以下の属性：（ｉ）非メチル化ジヌクレオチドＣｐＧモチーフ、（ｉｉ）隣接ヌクレオチド（例えば、ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＡ）と並置されたＣｐＧモチーフ、（ｉｉｉ）（細菌ＤＮＡに見出される天然ホスホジエステル（ＰＯ）骨格とは対照的に）ヌクレオチドを結合させる完全なホスホロチオエート（ＰＳ）骨格、及び（ｉｖ）自己相補性回文配列（例えば、ＡＡＣＧＴＴ）と関連し得る。この点で、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮは、その回文性の性質のために自らを結合し、それによって二本鎖（ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ）二重鎖（ｄｕｐｌｅｘ）又はヘアピン構造を生成し得る。
【0025】
更に、一実施形態によれば、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮは、５’－Ｔがオリゴヌクレオチドの５’末端から０、１、２、又は３塩基に位置する１つ以上の５’－ＴＣＧトリヌクレオチドと、１つ以上の非メチル化ＣＧジヌクレオチドを含む少なくとも８塩基長の少なくとも１つの回文配列とを含むことができる。１つ以上の５’－ＴＣＧトリヌクレオチド配列は、回文配列の５’末端から０、１、又は２塩基を分離し得るか、又は回文配列は、１つ以上の５’－ＴＣＧトリヌクレオチド配列の全て又は一部を含有し得る。一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、１２～１００塩基長、好ましくは１２～５０塩基長、好ましくは１２～４０塩基長、又は好ましくは１２～３０塩基長である。一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、３０塩基長である。一実施形態において、ＯＤＮは、少なくとも（下限）１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３４、３６、３８、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０塩基長である。一実施形態において、ＯＤＮは、最大で（上限）１００、９０、８０、７０、６０、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、又は３０塩基長である。
【0026】
一実施形態において、少なくとも１つの回文配列は、８～９７塩基長、好ましくは８～５０塩基長、又は好ましくは８～３２塩基長である。一実施形態において、少なくとも１つの回文配列は、少なくとも（下限）８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、又は３０塩基長である。一実施形態において、少なくとも１つの回文配列は、最大で（上限）５０、４８、４６、４４、４２、４０、３８、３６、３４、３２、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１８、１６、１４、１２、又は１０塩基長である。
【0027】
一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、配列番号１の配列を含むことができる。
【0028】
一実施形態によれば、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、ＳＤ－１０１を含むことができる。ＳＤ－１０１は、３０ｍｅｒのホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドであり、以下の配列を有する：
【数1】
【0029】
ＳＤ－１０１原薬は、ナトリウム塩として単離される。ＳＤ－１０１の構造を、図１に示す。
【0030】
ＳＤ－１０１遊離酸の分子式は、Ｃ２９３ Ｈ３６９ Ｎ１１２ Ｏ１４９ Ｐ２９ Ｓ２９であり、ＳＤ－１０１遊離酸の分子量は、９．６７２ダルトンである。ＳＤ－１０１ナトリウム塩の分子式は、Ｃ２９３ Ｈ３４０ Ｎ１１２ Ｏ１４９ Ｐ２９ Ｓ２９ Ｎａ２９であり、ＳＤ－１０１ナトリウム塩の分子量は、１０，３０９ダルトンである。
【0031】
更に、一実施形態によれば、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮ配列は、米国特許第９，４２２，５６４号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される配列番号１７２に対応することができる。
【0032】
一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、配列番号１などの前述のうちのいずれかと少なくとも７５％の相同性を有する配列を含むことができる。
【0033】
別の実施形態によれば、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮ配列は、米国特許第９，４２２，５６４号に記載される他の配列のうちのいずれか１つに対応することができる。更に、ＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮ配列はまた、米国特許第８，３７２，４１３号（その全体が参照により本明細書にも組み込まれる）に記載される配列のうちのいずれかに対応することができる。
【0034】
一実施形態によれば、本明細書で論じられるＣＰＧ－Ｃ ＯＤＮのうちのいずれかは、それらの薬学的に許容される塩形態において存在してもよい。例示的な塩基性塩には、アンモニウム塩、ナトリウム、リチウム、及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、亜鉛塩、Ｎ－Ｍｅ－Ｄ－グルカミンなどの有機塩基（例えば、有機アミン）を有する塩、Ｎ－［１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド、コリン、トロメタミン、ジシクロヘキシルアミン、ｔ－ブチルアミン、及びアルギニン、リジンなどのアミノ酸を有する塩が含まれる。一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、アンモニウム、ナトリウム、リチウム、又はカリウム塩形態である。１つの好ましい実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、ナトリウム塩形態である。ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的溶液中で提供され得る。代替的に、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、凍結乾燥固体として提供され得、凍結乾燥固体は、その後、投与前に、滅菌水、生理食塩水、又は薬学的に許容される緩衝液中で再構成される。本開示の薬学的に許容される賦形剤としては、例えば、溶媒、増量剤、緩衝剤、等張調整剤、及び防腐剤が挙げられる。一実施形態において、薬学的組成物は、溶媒、増量剤、緩衝剤、及び等張調整剤のうちの１つ以上として機能する賦形剤を含み得る（例えば、生理食塩水中の塩化ナトリウムは、水性ビヒクル及び等張調整剤の両方として機能し得る）。本開示の薬学的組成物は、非経口及び／又は経皮投与に好適である。
【0035】
一実施形態において、薬学的組成物は、溶媒としての水性ビヒクルを含む。好適なビヒクルとしては、例えば、滅菌水、食塩水溶液、リン酸緩衝食塩水、及びリンゲル溶液が挙げられる。ある実施形態において、本組成物は、等張である。
【0036】
薬学的組成物は、増量剤を含み得る。増量剤は、薬学的組成物が投与前に凍結乾燥される場合に特に有用である。一実施形態において、増量剤は、凍結又は噴霧乾燥中及び／又は保管中の活性剤の分解の安定化及び防止を助ける保護剤である。好適な増量剤は、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビタール、グルコース、及びラフィノースなどの糖（単糖、二糖、及び多糖）である。
【0037】
薬学的組成物は、緩衝剤を含み得る。緩衝剤は、ｐＨを制御して、処理、貯蔵、及び任意選択で再構成中の活性剤の分解を阻害する。好適な緩衝液としては、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、又は硫酸塩を含む塩が挙げられる。他の好適な緩衝剤としては、例えば、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、及びリジンなどのアミノ酸が挙げられる。緩衝剤は、塩酸又は水酸化ナトリウムを更に含み得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、組成物のｐＨを４～９の範囲内に維持する。一実施形態において、ｐＨは、（下限）４、５、６、７、又は８よりも大きい。いくつかの実施形態において、ｐＨは、（上限）９、８、７、６、又は５未満である。すなわち、ｐＨは、下限が上限未満である約４～９の範囲内である。
【0038】
薬学的組成物は、等張調整剤を含み得る。好適な等張調整剤としては、例えば、デキストロース、グリセロール、塩化ナトリウム、グリセリン、及びマンニトールが挙げられる。
【0039】
薬学的組成物は、防腐剤を含み得る。好適な防腐剤としては、例えば、酸化防止剤及び抗菌剤が挙げられる。しかしながら、一実施形態において、薬学的組成物は、滅菌条件下で調製され、単回使用容器内にあり、したがって、防腐剤の含有を必要としない。
【0040】
表１は、ＳＤ－１０１医薬品１６ｇ／Ｌのバッチ式を説明する：
【表1】
【0041】
いくつかの実施形態において、単位用量強度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬを含み得る。一実施形態において、ＳＤ－１０１の単位用量強度は、１３．４ｍｇ／ｍＬである。
【0042】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、修飾を含有し得る。好適な修飾は、３’ＯＨ又は５’ＯＨ基の修飾、ヌクレオチド塩基の修飾、糖成分の修飾、及びリン酸基の修飾を含むことができるが、これらに限定されない。修飾塩基は、修飾塩基が、ワトソン－クリック塩基対合を介してその天然相補体に対して同じ特異性を維持する限り、回文配列に含まれ得る（例えば、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮの回文部分は、自己相補的なままである）。
【0043】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、直線的であってもよく、円形であってもよく、又は円形部分及び／若しくはヘアピンループを含むことができる。ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、一本鎖又は二本鎖であってもよい。ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドであってもよい。
【0044】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、天然に存在する塩基又は修飾された非天然に存在する塩基を含有してもよく、修飾された糖、リン酸塩、及び／又は末端を含有してもよい。例えば、ホスホジエステル結合に加えて、ホスフェート修飾には、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホラミデート（架橋又は非架橋）、ホスホトリエステル及びホスホロジチオエートが含まれるが、これらに限定されず、任意の組み合わせで使用され得る。一実施形態において、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、ホスホロチオエート結合のみ、ホスホジエステル結合のみ、又はホスホジエステルとホスホロチオエート結合の組み合わせを有する。
【0045】
２’－アルコキシ－ＲＮＡアナログ、２’－アミノ－ＲＮＡアナログ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、及び２’－アルコキシ－又はアミノ－ＲＮＡ／ＤＮＡキメラなどの、本分野で知られている糖修飾も、作製して、任意のリン酸修飾と組み合わせてもよい。塩基修飾の例としては、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮのシトシン（例えば、５－ブロモシトシン、５－クロロシトシン、５－フルオロシトシン、５－ヨードシトシン）のＣ－５及び／又はＣ－６、並びにＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮのウラシル（例えば、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－フルオロウラシル、５－ヨードウラシル）のＣ－５及び／又はＣ－６への電子求引性部分の添加が挙げられるが、これらに限定されない。上記のように、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮの回文配列における塩基修飾の使用は、ワトソン－クリック塩基対合に関与する塩基の自己相補性を妨げるべきではない。しかしながら、回文配列の外では、修飾塩基は、この制限なしに使用することができる。例えば、２’－Ｏ－メチル－ウリジン及び２’－Ｏ－メチル－シチジンは、回文配列の外側で使用されてもよく、一方、５－ブロモ－２’－デオキシシチジンは、回文配列の内側及び外側の両方で使用されてもよい。回文配列の内側及び外側の両方で用いられ得る他の修飾ヌクレオチドとしては、７－デアザ－８－アザ－ｄＧ、２－アミノ－ｄＡ、及び２－チオ－ｄＴが挙げられる。
【0046】
ほとんどのＯＤＮの二重鎖（すなわち、二本鎖）及びヘアピン形態は、多くの場合、動的平衡状態にあり、ヘアピン形態は、低オリゴヌクレオチド濃度及び高温で一般的に好まれる。共有結合鎖間又は鎖内架橋は、それぞれ、熱、イオン、ｐＨ、及び濃度誘導構造変化に向かって、二重鎖又はヘアピンの安定性を増加させる。化学的架橋は、ポリヌクレオチドを二重鎖又はヘアピン形態のいずれかにロックして、物理化学的及び生物学的特性評価を行うために使用することができる。構造的に均質であり、最も活性な形態（二重鎖又はヘアピン形態のいずれか）で「ロック」されている架橋ＯＤＮは、架橋されていない対応物よりも潜在的により活性であり得る。したがって、本開示のいくつかのＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、共有結合鎖間及び／又は鎖間架橋を含有することができる。
【0047】
ポリヌクレオチド及び修飾ポリヌクレオチドを作製するための技術は、当該技術分野において既知である。ホスホジエステル結合を含有する天然に存在するＤＮＡ又はＲＮＡは、一般に、適切なヌクレオシドホスホラミダイトを３’末端で固体支持体に結合した成長ＯＤＮの５’ヒドロキシ基に順次結合させ、続いて中間ホスファイトトリエステルをリン酸トリエステルに酸化することによって合成され得る。この方法を使用して、所望のポリヌクレオチド配列が合成されると、ポリヌクレオチドが支持体から除去され、リン酸トリエステル基がリン酸ジエステルに脱保護され、ヌクレオシド塩基が水性アンモニア又は他の塩基を使用して脱保護される。
【0048】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、リン酸修飾オリゴヌクレオチドを含有してもよく、そのうちのいくつかは、ＯＤＮを安定化することが知られている。したがって、いくつかの実施形態は、安定化ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮを含む。ＯＤＮ中の糖又は糖アナログ部分に結合され得るリン誘導体（又は修飾リン酸基）は、一リン酸塩、二リン酸塩、三リン酸塩、アルキルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミデートなどであり得る。
【0049】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、１つ以上のリボヌクレオチド（唯一又は主糖成分としてリボースを含む）、デオキシリボヌクレオチド（主糖成分としてデオキシリボースを含む）、修飾糖又は糖アナログを含むことができる。したがって、リボース及びデオキシリボースに加えて、糖部分は、ペントース、デオキシペントース、ヘキソース、デオキシヘキソース、グルコース、アラビノース、キシロース、リキソース、及び糖アナログシクロペンチル基であり得る。糖は、ピラノシル又はフラノシル形態であり得る。ＣｐＧ－Ｃオリゴヌクレオチドにおいて、糖部分は、好ましくは、リボース、デオキシリボース、アラビノース、又は２′－０－アルキルリボースのフラノシドであり、糖は、いずれかのアノマー配置でそれぞれの複素環式塩基に結合することができる。これらの糖又は糖アナログ、及びそのような糖又はアナログが複素環式塩基（核酸塩基）自体に結合しているそれぞれのヌクレオシドの調製は既知であるため、本明細書に記載する必要はない。糖修飾はまた、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮの調製において、作製して、任意のリン酸修飾と組み合わせてもよい。
【0050】
ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮに組み込まれる複素環式塩基又は核酸塩基は、天然に存在する主プリン及びピリミジン塩基（すなわち、上記のようなウラシル、チミン、シトシン、アデニン、及びグアニン）、並びに当該主塩基の天然に存在する修飾及び合成修飾であり得る。したがって、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは、イノシン、２’－デオキシウリジン、及び２－アミノ－２’－デオキシアデノシンのうちの１つ以上を含み得る。
【0051】
別の実施形態によれば、ＣＰＧ－ＯＤＮは、クラスＡタイプのＣＰＧ－ＯＤＮ（ＣＰＧＰ－Ａ ＯＤＮ）、クラスＢタイプのＣＰＧ－ＯＤＮ（ＣＰＧ－Ｂ ＯＤＮ）、クラスＰタイプのＣＰＧ－ＯＤＮ（ＣＰＧ－Ｐ ＯＤＮ）、及びクラスＳタイプのＣＰＧ－ＯＤＮ（ＣＰＧ－Ｓ ＯＤＮ）のうちの１つである。この点で、ＣＰＧ－Ａ ＯＤＮは、ＣＭＰ－００１であり得る。
【0052】
別の実施形態において、ＣＰＧ－ＯＤＮは、チルソトリモド（ＩＭＯ－２１２５）であり得る。
【0053】
チェックポイント阻害剤
一実施形態によれば、本発明のＴＬＲアゴニストは、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）と併用してもよい。チェックポイント阻害剤は、プログラム死１受容体（ＰＤ－１）アンタゴニストを含むことができる。ＰＤ－１アンタゴニストは、がん細胞上で発現したプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫＴ細胞）上で発現したＰＤ－１への結合を遮断し、好ましくは、がん細胞上で発現したＰＤ－Ｌ２プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の、免疫細胞発現ＰＤ－１への結合を遮断する任意の化学化合物又は生体分子であり得る。ＰＤ－１及びそのリガンドの代替名又は同義語には、ＰＤ－１についてはＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９、及びＳＬＥＢ２、ＰＤ－Ｌ１についてはＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４、及びＢ７－Ｈ、並びにＰＤ－Ｌ２についてはＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂｔｄｃ、及びＣＤ２７３が含まれる。ヒト個体が治療されている本発明の治療方法、医薬、及び使用のうちのいずれかにおいて、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１のヒトＰＤ－１への結合を遮断し、好ましくは、ヒトＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方のヒトＰＤ－１への結合を遮断する。
一実施形態によれば、本発明のＴＬＲアゴニストは、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）と併用してもよい。チェックポイント阻害剤は、プログラム死１受容体（ＰＤ－１）アンタゴニストを含むことができる。ＰＤ－１アンタゴニストは、がん細胞上で発現したプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫＴ細胞）上で発現したＰＤ－１への結合を遮断し、好ましくは、がん細胞上で発現したＰＤ－Ｌ２プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の、免疫細胞発現ＰＤ－１への結合を遮断する任意の化学化合物又は生体分子であり得る。ＰＤ－１及びそのリガンドの代替名又は同義語には、ＰＤ－１についてはＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９、及びＳＬＥＢ２、ＰＤ－Ｌ１についてはＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４、及びＢ７－Ｈ、並びにＰＤ－Ｌ２についてはＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂｔｄｃ、及びＣＤ２７３が含まれる。ヒト個体が治療されている本発明の治療方法、医薬、及び使用のうちのいずれかにおいて、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１のヒトＰＤ－１への結合を遮断し、好ましくは、ヒトＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方のヒトＰＤ－１への結合を遮断する。
【0054】
一実施形態によれば、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、好ましくは、ヒトＰＤ－１又はヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、又はその抗原結合断片を含むことができる。ｍＡｂは、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体であり得、ヒト定常領域を含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、好ましい実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ及びＦｖ断片からなる群から選択される。
【0055】
一実施形態によれば、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、好ましくは、ヒトＰＤ－１又はヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する免疫アドヘシン、例えば、免疫グロブリン分子のＦｃ領域などの定常領域に融合されたＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分を含む融合タンパク質を含むことができる。
【0056】
一実施形態によれば、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害することができ、好ましくは、ＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合も阻害する。上記の治療方法、薬剤、及び使用のいくつかの実施形態において、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を遮断するモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片である。一実施形態において、ＰＤ－１アンタゴニストは、重鎖及び軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗体である。
【0057】
一実施形態によれば、ＰＤ－１アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、及びセミプリマブのうちの１つであり得る。別の実施形態によれば、ニボルマブは、４週間毎（「Ｑ４Ｗ」）に４８０ｍｇの用量で末梢静脈を介して静脈内（ＩＶ）に投与される。別の実施形態によれば、ニボルマブは、３週間毎（「Ｑ３Ｗ」）に１ｍｇ／ｋｇのニボルマブの用量で末梢静脈を介して静脈内（ＩＶ）に投与される。更に別の実施形態において、ニボルマブは、ＳＤ－１０１と同時に、同じ時間に、ほぼ同じ時間に、又は同日に投与される。別の実施形態において、ニボルマブは、ＳＤ－１０１の１つ以上のサイクルの投与後、週に１回、隔週に１回、３週間に１回、４週間に１回、又は毎月投与される。
【0058】
別の実施形態によれば、ＣＰＩは、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含むことができる。この点で、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブのうちの１つであり得る。
【0059】
別の実施形態によれば、ＣＰＩは、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストを含むことができる。この点で、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストは、イピリムマブであり得る。別の実施形態によれば、イピリムマブは、３週間毎に３ｍｇ／ｋｇの用量で末梢静脈を介して静脈内（ＩＶ）に投与される。更に別の実施形態において、イピリムマブは、ＳＤ－１０１と同時に、同じ時間に、ほぼ同じ時間に、又は同日に投与される。別の実施形態において、ニボルマブは、ＳＤ－１０１の１つ以上のサイクルの投与後、週に１回、隔週に１回、３週間に１回、４週間に１回、又は毎月投与される。
【0060】
局所領域送達を達成するためのデバイス
一実施形態によれば、上記のデバイスのうちのいずれかは、カテーテル自体を含む、腫瘍への局所領域送達を達成するのに有用な任意のデバイスを含み得るか、又はカテーテルと組み合わせて使用され得る他の構成要素（例えば、フィルタバルブ、バルーン、圧力センサシステム、ポンプシステム、注射器、外側送達カテーテルなど）とともにカテーテルを含み得る。ある特定の実施形態において、カテーテルは、マイクロカテーテルである。
一実施形態によれば、上記のデバイスのうちのいずれかは、カテーテル自体を含む、腫瘍への局所領域送達を達成するのに有用な任意のデバイスを含み得るか、又はカテーテルと組み合わせて使用され得る他の構成要素（例えば、フィルタバルブ、バルーン、圧力センサシステム、ポンプシステム、注射器、外側送達カテーテルなど）とともにカテーテルを含み得る。ある特定の実施形態において、カテーテルは、マイクロカテーテルである。
【0061】
いくつかの実施形態において、デバイスは、血管の下流分岐ネットワークにおける治療法の均一な分布を提供することができるセルフセンタリング能力、ＴＬＲアゴニストの逆行流を遮断又は阻害することができる逆流防止能力（例えば、バルブ及びフィルタ、及び／又はバルーンの使用による）、血管内の圧力を測定するシステム、並びに配置時及び２ｃｃ／分注入中に圧力の低下、及び生理食塩水ボーラス中の圧力の増加を引き起こすことによって、血管内の圧力を調節する手段、例えば、を含むが、これらに限定されない、１つ以上の属性を有し得る。いくつかの実施形態において、システムは、手順全体を通してリアルタイム圧力を継続的にモニタリングするように設計される。
【0062】
いくつかの実施形態において、本発明の方法を実行するために使用され得るデバイスは、米国特許第８，５００，７７５号、米国特許第８，６９６，６９８号、米国特許第８，６９６，６９９号、米国特許第９，５３９，０８１号、米国特許第９，８０８，３３２号、米国特許第９，７７０，３１９号、米国特許第９，９６８，７４０号、米国特許第１０，８１３，７３９号、米国特許第１０，５８８，６３６号、米国特許第１１，０９０，４６０号、米国特許公開第２０１８／０１９３５９１号、米国特許公開第２０１８／０２５０４６９号、米国特許公開第２０１９／０２９８９８３号、米国特許公開第２０２０／００３８５８６号、及び米国特許公開第２０２０－０３８３６８８号に開示されるデバイスであり、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【0063】
いくつかの実施形態において、デバイスは、米国特許第９，７７０，３１９号に開示されるデバイスである。ある特定の実施形態において、デバイスは、Ｓｕｒｅｆｉｒｅ注入システムとして知られているデバイスであってもよい。
【0064】
いくつかの実施形態において、デバイスは、使用中の血管内圧の測定を支援する。いくつかの実施形態において、デバイスは、米国特許第２０２０－０３８３６８８号に開示されるデバイスである。ある特定の実施形態において、デバイスは、ＴｒｉＳａｌｕｓ注入システムとして知られているデバイスであってもよい。ある特定の実施形態において、デバイスは、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムとして知られているデバイスであってもよい。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）は、心臓サイクルから生じる、又は注入によって生成されるような局所的な圧力変化に応答する一方向バルブを備える単腔カテーテルである。バルブ構造は、遠位血管圧及び血流を調節する。同様に、これは、血管系内の接触時間の増加に起因して、治療分布及び初回通過吸収を変化させ得る。
【0065】
いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、ＰＥＤＤによってデバイスを通じて投与され得る。いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、血管内の圧力をモニタリングしながら投与され得、これは、注入部位におけるデバイスの位置を調整及び修正するために、並びに／又は注入速度を調整するために使用され得る。圧力は、例えば、１つ以上の圧力センサを含む圧力センサシステムによってモニタリングされ得る。
【0066】
注入速度は、血管圧力を変化させるように調整され得、これは、標的組織又は腫瘍へのＴＬＲアゴニストの浸透を促進し得る。いくつかの実施形態において、注入速度は、送達システムの一部としてシリンジポンプを使用して調整及び／又は制御され得る。いくつかの実施形態において、注入速度は、ポンプシステムを使用して調整及び／又は制御され得る。いくつかの実施形態において、注入速度は、約０．１ｃｃ／分～約４０ｃｃ／分、又は約０．１ｃｃ／分～約３０ｃｃ／分、又は約０．５ｃｃ／分～約２５ｃｃ／分、又は約０．５ｃｃ／分～約２０ｃｃ／分、又は約１ｃｃ／分～約１５ｃｃ／分、又は約１ｃｃ／分～約１０ｃｃ／分、又は約１ｃｃ／分～約８ｃｃ／分、又は約１ｃｃ／分～約５ｃｃ／分であり得る。更に、ボーラス注入を使用する注入速度は、約３０ｃｃ／分～約３６０ｃｃ／分、又は約１２０ｃｃ／分～約２４０ｃｃ／分であり得る。一実施形態において、ＳＤ－１０１注入手順は、約３０～６０分続く。追加の実施形態において、ＳＤ－１０１は、約２５分間の期間投与される。
【0067】
肝臓への投与を含む方法
一実施形態において、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマなどのメラノーマの転移である腫瘍などの肝臓の固形腫瘍を治療する方法を含み、当該方法は、それを必要とする患者に、トール様受容体アゴニストを投与することを含み、トール様受容体アゴニストは、ＨＡＩによってデバイスを通じて肝臓のそのような固形腫瘍に投与される。ＨＡＩは、肝臓の肝動脈への治療薬の注入を指す。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、カテーテル及び／又は圧力有効化送達を容易にするデバイスなどの肝動脈の分岐へのデバイスの経皮的導入を通じて導入される。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストであり、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＳＤ－１０１である。一実施形態において、患者は、ヒト患者である。
一実施形態において、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマなどのメラノーマの転移である腫瘍などの肝臓の固形腫瘍を治療する方法を含み、当該方法は、それを必要とする患者に、トール様受容体アゴニストを投与することを含み、トール様受容体アゴニストは、ＨＡＩによってデバイスを通じて肝臓のそのような固形腫瘍に投与される。ＨＡＩは、肝臓の肝動脈への治療薬の注入を指す。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、カテーテル及び／又は圧力有効化送達を容易にするデバイスなどの肝動脈の分岐へのデバイスの経皮的導入を通じて導入される。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストであり、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＳＤ－１０１である。一実施形態において、患者は、ヒト患者である。
【0068】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマなどのメラノーマの転移である腫瘍などの肝臓の固形腫瘍を治療する方法を含み、当該方法は、それを必要とする患者に、トール様受容体アゴニストを投与することを含み、トール様受容体アゴニストは、ＰＶＩによってデバイスを通じて肝臓のそのような固形腫瘍に投与される。ＰＶＩは、肝門脈静脈系への治療薬の注入を指す。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、カテーテル及び／又は圧力有効化送達を容易にするデバイスなどの肝門脈静脈系の分岐へのデバイスの経皮的導入を通じて導入される。一実施形態によれば、トール様受容体アゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストであり、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＳＤ－１０１である。一実施形態において、患者は、ヒト患者である。
【0069】
一実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、対象は、肝臓のみの疾患又は肝臓優性疾患を有する組織学的又は細胞学的に確認された転移性ＵＭを有する。肝臓優性疾患は、他の臓器と比較して疾患の最大部分を表す肝内転移を伴って存在し得、許容される肝外部位は、肺、皮膚、又は皮下組織、及び骨である。肝臓優性疾患はまた、他の臓器と比較して疾患の最大部分を表す、又はＬＭの進行が患者の生命に対する多大なる脅威を表す場合、肝内転移を伴って存在し得る。別の実施形態によれば、本方法は、男性又は女性であり、１８歳以上である対象への投与を含む。
【0070】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、対象は、登録前１４日以内に、事前に細胞傷害性化学療法、標的療法、又は外部放射線療法を受けていない。別の実施形態によれば、本発明の方法は、研究介入の最初の投与の３０日前までに、事前の免疫チェックポイント阻害による治療を受けたことがなく、進行中の免疫媒介性ＡＥグレード２以上を有しない対象への投与を含む。更に別の実施形態によれば、本発明の方法は、事前の免疫学的チェックポイント阻害による治療を受けたことがない対象に投与される。本発明の一実施形態によれば、方法はまた、永久的な塞栓材料を用いて以前に塞栓性ＨＡＩ療法を受けたことがない対象への投与を含む。別の実施形態において、本発明の方法は、オリゴ転移性肝疾患の手術切除又は高周波アブレーションをこれまでに受けたことがある対象を含む。
【0071】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、対象は、悪性腫瘍が臨床的に有意でない限り、悪性腫瘍の病歴又は他の同時の悪性腫瘍を有しない。別の実施形態において、本発明の方法に従って治療される対象は、進行中の治療を有し得ない。更に別の実施形態において、対象は、臨床的に安定している。
【0072】
別の実施形態において、本発明の方法は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１基準に従って肝臓に測定可能な疾患を有する対象への投与を含み得る。追加の実施形態において、本発明の方法は、スクリーニング時に、０～１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（「ＥＣＯＧ」）パフォーマンススコア（「ＰＳ」）を示す対象への投与を含み得る。別の実施形態において、本発明の方法に従って治療を投与される対象は、治験責任医師によって推定されるように、スクリーニング時に、３カ月を超える平均余命を有する。更に別の実施形態において、対象は、４８０ｍｓｅｃ以下のＱＴｃ間隔を有する。
【0073】
別の実施形態において、以前のがん治療からの全ての関連する臨床的に有意な薬物関連毒性は、治療の前に分解される。この実施形態において、分解能は、１以下のグレード又は患者の前処置レベルである。追加の実施形態において、対象は、置換療法で制御されたグレード２の脱毛症及び内分泌異常を有し得る。
【0074】
別の実施形態において、本発明の方法は、スクリーニング時に適切な臓器機能を有する対象への投与を含み得る。一実施形態において、適切な臓器機能を有する対象は、以下のもののうちの１つ以上を示し得る：（ｉ）血小板数＞１００，０００／μＬ、（２）ヘモグロビン≧８．０ｇ／ｄＬ、（３）白血球数（ＷＢＣ）＞２，０００／μＬ（４）測定されたクレアチニンクリアランスが＞４０ｍＬ／分／１．７３ｍ２でない限り、血清クレアチニン≦２．０ｍｇ／ｄＬ、（５）合計及び直接ビリルビン≦２．０×正常上限（ＵＬＮ）及びアルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ、（６）文書化されたギルバート病を有する患者においては、合計ビリルビン最大３．０ｍｇ／ｄＬ、（７）ＡＬＴ及びＡＳＴ≦５×ＵＬＮ、並びに（８）スクリーニング時のプロトロンビン時間／国際標準化比（ＩＮＲ）又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験結果≦１．５×ＵＬＮ（これは、治療的抗凝固療法を受けていない患者のみに適用される。治療的抗凝固療法を受けている患者は、研究介入の最初の投与前に少なくとも４週間安定した用量を投与しなければならない）。
【0075】
別の実施形態によれば、本発明の方法を使用して、他のがん、例えば、結腸直腸がん（すなわち、結腸直腸がん肝転移）、膵管腺がんなどの膵臓がん（すなわち、膵管腺がん肝転移）の結果として肝転移を治療することもできる。
【0076】
別の実施形態によれば、腫瘍は、切除不能である。
【0077】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、免疫調節剤、腫瘍殺傷剤、及び／又は他の標的化治療薬などの他のがん治療薬とともに投与され得る。
【0078】
一実施形態によれば、ＴＬＲ９療法は、細胞療法と組み合わせて投与してもよく、それによって免疫系の調節による細胞療法を可能にする。
【0079】
一実施形態において、肝臓への投与の上記の方法は、固形腫瘍全体、臓器全体、又は実質的に腫瘍全体にわたって、トール様受容体アゴニストの浸透をもたらすことを意図している。一実施形態において、そのような方法は、腫瘍の間質液圧及び固体応力を克服することを含む、トール様受容体アゴニストの灌流の強化を必要とする患者へのトール様受容体アゴニストの灌流を強化する。別の実施形態において、臓器全体又はその一部全体にわたる灌流は、腫瘍を治療剤に完全に曝露することによって、疾患の治療のための利益をもたらし得る。一実施形態において、そのような方法は、全身循環へのアクセスが不十分な腫瘍の領域へのトール様受容体の送達をより良く得ることができる。別の実施形態において、そのような方法は、末梢静脈を介して、又は腫瘍間直接注射を介して従来の全身送達と比較して、非標的組織に送達されるより少ないトール様受容体アゴニストを有する、より高い濃度のトール様受容体アゴニストをそのような腫瘍に送達する。一実施形態において、そのような方法は、サイズの縮小、成長速度の縮小、又は固形腫瘍の収縮若しくは除去をもたらす。
【0080】
本発明の方法はまた、ＨＡＩ又は特定のセクタ若しくはセグメントへの選択的注入を実施する前に肝臓の右葉及び左葉につながる血管をマッピングすること、及び必要に応じて、肝臓につながらない、又はそうでなければ標的ではない血管を閉塞することを含み得る。いくつかの実施形態において、注入の前に、患者は、例えば、一般的な大腿動脈アプローチを介して、マッピング血管造影を受けることができる。
【0081】
体内の血管をマッピングし、治療薬の送達のための方法は、当業者に周知である。閉塞は、例えば、治験責任医師がオフターゲット動脈又は血管を遮断することを可能にし、それによって修飾細胞の肝臓への送達を最適化する、マイクロコイル塞栓術の使用によって達成され得る。マイクロコイル塞栓術は、必要に応じて、例えば、ＴＬＲ９アゴニストを含む薬学的組成物の最適な注入を促進するために、第１の用量のＴＬＲ９アゴニストを投与する前に行うことができる。別の実施形態において、滅菌スポンジ（例えば、ＧＥＬＦＯＡＭ）を使用することができる。この点で、滅菌スポンジを切断して、カテーテルに押し込むことができる。別の実施形態において、滅菌スポンジは、顆粒として提供され得る。
【0082】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１などのＴＬＲ９アゴニストの用量は、約０．０１ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．５ｍｇ、約５ｍｇ、約５．５ｍｇ、約６ｍｇ、約６．５ｍｇ、約７ｍｇ、約７．５ｍｇ、又は約８ｍｇであり得る。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、１２ｍｇ、１６ｍｇ、及び２０ｍｇの用量で投与される。ミリグラム量のＳＤ－１０１（例えば、約２ｍｇ）の投与は、図１に例示される組成物の約２ｍｇの投与を記載する。例えば、そのような量のＳＤ－１０１（例えば、約２ｍｇの量）は、そのような量のＳＤ－１０１に加えて、他の関連化合物及び非関連化合物などの材料を含有する組成物内にも存在し得る。等価モル量の他の薬学的に許容される塩もまた、企図される。
【0083】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１などのＴＬＲ９アゴニストの用量は、約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約８ｍｇ、及び約０．０１ｍｇ～約４ｍｇであり得る。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１などのＴＬＲ９アゴニストの用量は、約２ｍｇ～約１０ｍｇ、約２ｍｇ～約８ｍｇ、及び約２ｍｇ～約４ｍｇであり得る。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１などのＴＬＲ９アゴニストの用量は、約１０ｍｇ未満、約８ｍｇ未満、約４ｍｇ未満、又は約２ｍｇ未満であり得る。そのような用量は、毎日、毎週、又は隔週投与され得る。一実施形態において、ＳＤ－１０１の用量は、例えば、約２ｍｇ、続いて約４ｍｇ、続いて約８ｍｇの投与によって徐々に増加する。
【0084】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、サイクルを含む投与レジメンを投与することを含み得、サイクルのうちの１つ以上は、ＨＡＩ及びＰＥＤＤによってＳＤ－１０１を投与することを含む。本明細書で使用される場合、「サイクル」は、投与配列の繰り返しである。一実施形態において、１つのサイクルは、１サイクル当たり３回の週１回投与（すなわち、３週連続で週１回ＳＤ－１０１を投与すること）を含む。一実施形態において、本発明による治療のサイクルは、ＳＤ－１０１投与の期間、続いて「オフ」期間又は休止期間を含み得る。別の実施形態において、１サイクル当たり３回の週１回投与に加えて、サイクルは、ＳＤ－１０１の週１回の投与後の休止期間として１週間、２週間、３週間、又は４週間を更に含む。更に別の実施形態において、１サイクル当たり３回の週１回投与に加えて、サイクルは、ＳＤ－１０１の毎週の投与後の休止期間として約３８日を更に含む。別の実施形態において、サイクル全体は、約５２日を含む。別の実施形態において、投与レジメンは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つ、又はそれ以上のサイクルを含む。
【0085】
いくつかの実施形態において、本発明は、肝臓における固形腫瘍（例えば、ブドウ膜メラノーマなどのメラノーマの転移である腫瘍）を治療するための薬剤の製造におけるＴＬＲ９アゴニストの使用に関し、当該方法は、ＴＬＲ９アゴニストを、それを必要とする患者に投与することを含み、ＴＬＲ９アゴニストは、肝臓のそのような固形腫瘍にＨＡＩによってデバイスを通じて投与される。
【0086】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて０．５ｍｇの用量で転移性ブドウ膜メラノーマの治療のために投与され、いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、圧力を調節するデバイス（すなわちＰＥＤＤ）を通じて更に投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、チェックポイント阻害剤と組み合わせて血管圧力を調節するデバイスを通じて、０．５ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。他の実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、０．５ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブ及びニボルマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、０．５ｍｇの用量で投与される。
【0087】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて２ｍｇの用量で転移性ブドウ膜メラノーマの治療のために投与され、いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、圧力を調節するデバイス（すなわちＰＥＤＤ）を通じて更に投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、チェックポイント阻害剤と組み合わせて血管圧力を調節するデバイスを通じて、２ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。他の実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、２ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブ及びニボルマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、２ｍｇの用量で投与される。
【0088】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて４ｍｇの用量で転移性ブドウ膜メラノーマの治療のために投与され、いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、圧力を調節するデバイス（すなわちＰＥＤＤ）を通じて更に投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、チェックポイント阻害剤と組み合わせて血管圧力を調節するデバイスを通じて、４ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。他の実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、４ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブ及びニボルマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、４ｍｇの用量で投与される。
【0089】
いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて８ｍｇの用量で転移性ブドウ膜メラノーマの治療のために投与され、いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、圧力を調節するデバイス（すなわちＰＥＤＤ）を通じて更に投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、チェックポイント阻害剤と組み合わせて血管圧力を調節するデバイスを通じて、８ｍｇの用量で投与され、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブである。他の実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、８ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、ＳＤ－１０１は、ＨＡＩを通じて、かつイピリムマブ及びニボルマブと組み合わせて圧力を調節するデバイスを通じて、８ｍｇの用量で投与される。
【0090】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、標的病変の治療をもたらす。この実施形態において、本発明の方法は、全ての標的病変の消失を含む完全奏効をもたらし得る。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ベースラインの合計最長径を基準として、標的病変の最長径の合計の少なくとも３０％の減少を含む部分奏効をもたらし得る。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、治療開始以降の最小の合計最長径を基準として、部分奏効を認めるのに十分な縮小も、進行性疾患を認めるのに十分な増加もない、標的病変の安定疾患をもたらし得る。そのような実施形態において、進行性疾患は、治療開始以降の記録された最小の合計最長径又は１つ以上の新たな病変の出現を基準として、標的病変の合計最長径の少なくとも２０％の増加を特徴とする。この合計は、５ｍｍの絶対的な増加を示す必要がある。
【0091】
別の実施形態において、本発明の方法は、非標的病変の治療をもたらす。この実施形態において、本発明の方法は、全ての非標的病変の消失を含む完全奏効をもたらし得る。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、１つ以上の非標的病変の持続性をもたらすが、完全奏効又は進行性疾患をもたらさない。そのような実施形態において、進行性疾患は、既存の非標的病変の明確な進行、及び／又は１つ以上の新たな病変の出現を特徴とする。
【0092】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１による全奏効率などの有益な全奏効率をもたらす。これらの実施形態において、本発明の方法は、完全奏効である全奏効をもたらし、対象は、標的病変の完全奏効、非標的病変の完全奏効を示し、新たな病変を示さない。他の実施形態において、本発明の方法は、部分奏効である全奏効をもたらし、対象は、標的病変に対する完全奏効、非標的病変に対する非完全奏効及び非進行性疾患を示し、新たな病変を示さない。他の実施形態において、本発明の方法は、部分奏効である全奏効をもたらし、対象は、標的病変に対する部分奏効、非標的病変に対する非進行性疾患を示し、新たな病変を示さない。別の実施形態において、本発明の方法は、安定した疾患である全奏効をもたらし、対象は、標的病変の安定した疾患、非標的病変の非進行性病変を示し、新たな病変を示さない。
【0093】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、全奏効期間の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、全奏効期間は、完全奏効又は部分奏効について測定基準が満たされる時間（いずれか最初に記録される）から、再発又は進行性疾患が客観的に文書化された最初の日まで（治療開始以降記録された最小の測定値を進行性疾患の基準として）測定される。全体的な完全奏効期間は、完全奏効の測定基準が最初に満たされた時点から、進行性疾患が客観的に文書化された最初の日まで測定することができる。いくつかの実施形態において、安定疾患期間は、ベースライン測定値を含む治療開始以降記録された最小の測定値を基準として、治療の開始から進行の基準が満たされるまで測定される。
【0094】
更に他の実施形態において、本発明の方法は、改善された全生存率をもたらす。例えば、全生存期間は、登録日から死亡時まで計算することができる。最終有効性分析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、最後に生存が確認された日で打ち切られる。
【0095】
他の実施形態において、本発明の方法は、無増悪生存をもたらす。例えば、無増悪生存期間は、再発（又は疾患発症の他の明確な指標）を文書化した日、又は死亡日のいずれか先に発生した日から算出することができる。再発が文書化されておらず、最終有効性解析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、再発がないことを文書化する最後の放射線学的証拠の日で打ち切られる。
【0096】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ｍＲＥＣＩＳＴによる全奏効率などの有益な全奏効率をもたらす。これらの実施形態において、本発明の方法は、完全奏効である全奏効をもたらし、対象は、標的病変の完全奏効、非標的病変の完全奏効を示し、新たな病変を示さない。他の実施形態において、本発明の方法は、部分奏効である全奏効をもたらし、対象は、標的病変に対する完全奏効、非標的病変に対する非完全奏効及び不完全奏効を示し、新たな病変を示さない。他の実施形態において、本発明の方法は、部分奏効である全体奏効をもたらし、対象は、標的病変に対する部分奏効、非標的病変に対する非進行性疾患を示し、新たな病変を示さない。別の実施形態において、本発明の方法は、安定した疾患である全奏効をもたらし、対象は、標的病変の安定した疾患、非標的病変の非進行性病変を示し、新たな病変を示さない。
【0097】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ｉＲＥＣＩＳＴによる全奏効率などの有益な全奏効率をもたらす。
【0098】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、ＳＤ－１０１の投与は、腫瘍負荷の低減をもたらす。いくつかの実施形態において、腫瘍負荷は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％減少する。
【0099】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、ＳＤ－１０１の投与は、腫瘍進行の低減をもたらす。いくつかの実施形態において、腫瘍進行は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％減少する。
【0100】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、ＳＤ－１０１の投与は、肝臓ＭＤＳＣコンパートメントを再プログラムして、肝転移の免疫制御を可能にし、及び／又はＭＤＳＣの排除によって全身抗ＰＤ－１療法への応答性を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＭＤＳＣの制御において優れている。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ブドウ膜メラノーマの肝転移を治療するための方法を含み、ＳＤ－１０１の投与は、ＭＤＳＣ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋）、単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ；ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃ＋）細胞、又は顆粒球性ＭＤＳＣ（Ｇ－ＭＤＳＣ；ＣＤ１１ｂ＋ＬＹ６Ｇ＋）細胞の頻度を低減させる。別の実施形態によれば、本発明の方法は、Ｍ１マクロファージを増強する。更に別の実施形態によれば、本発明の方法は、Ｍ２マクロファージを減少させる。
【0101】
別の実施形態において、本発明の方法は、ＮＦκＢリン酸化を増加させる。更に追加の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ－６を増加させる。別の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ１０を増加させる。更に追加の実施形態において、本発明の方法は、ＩＬ－２９を増加させる。別の実施形態において、本発明の方法は、ＩＦＮαを増加させる。更なる実施形態として、本発明の方法は、ＳＴＡＴ３リン酸化を減少させる。
【実施例】
【0102】
本発明は、以下の実施例で更に例示及び／又は実証され、これは、例示／実証のみを目的として示され、いずれにせよ本発明を限定することを意図するものではない。
【0103】
実施例１
本実施例では、例示的なＴＲＬ９アゴニストの局所的な血管内注入は、全身的に注入されたＣＰＩに対する応答性を高め得ると仮定した。
本実施例では、例示的なＴＲＬ９アゴニストの局所的な血管内注入は、全身的に注入されたＣＰＩに対する応答性を高め得ると仮定した。
【0104】
この点で、確立されたＭＣ３８－ＣＥＡ－Ｌｕｃ ＬＭを有するマウスを、ＣＰＩ、例えば、抗ＰＤ－１抗体（２５０μｇ／マウス）の腹腔内送達を伴って又は伴わずに、ＴＬＲ９アゴニスト、すなわち、ＯＤＮ－２３９５（３０μｇ／マウス）の局所送達で処置した。８～１２週の雄Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、０．５ｅ６のＭＣ３８－ＣＥＡ－Ｌｕｃ細胞で脾臓内に１週間チャレンジした。生物発光をＩＶＩＳによって測定し、Ｄ０、Ｄ＋３、及びＤ＋６のＩＰを介した２５０μｇ／マウスの抗ＰＤ１抗体を伴って又は伴わずに、ＰＶを介して３０μｇ／マウスＯＤＮ２３９５で処置する前に、Ｄ０にマウスを無作為化した。ＰＶを介してＰＢＳ処置したマウスを、対照として使用した。腫瘍進行は、Ｄ＋２、Ｄ＋４、Ｄ＋７、Ｄ＋１０、及びＤ＋１２にモニタリングした。
【0105】
図２Ａ～２Ｂは、腫瘍進行に対する例示的なＴＬＲ９アゴニストとＣＰＩとの組み合わせの効果を示す。図に示されるように、ＬＭ増殖の対照は、抗ＰＤ－１（ｐ＜０．０１）又は対照（例えば、ＰＢＳ）処置と比較して、組み合わせ処置で有意に高かった（ｐ＜０．０５）。図２Ａにおいて、ＰＢＳ（ＰＶ）、ＯＤＮ ３０μｇ（ＰＶ）、抗ＰＤ－１ ２５０μｇ（ＩＰ）＋ＰＢＳ（ＰＶ）、及び抗ＰＤ－１ ２５０μｇ（ＩＰ）＋ＯＤＮ ３０μｇ（ＰＶ）を、グラフ（左から右、Ｙ軸に最も近いＰＢＳ）に示す。図２Ｂにおいて、腫瘍増殖を、Ｄ＋２、Ｄ＋４、Ｄ＋７、Ｄ＋１０、及びＤ＋１２にＩＶＩＳ画像によってモニタリングした。腫瘍進行を、二元配置ＡＮＯＶＡによって分析し、続いてＴｕｋｅｙ事後検定によって分析した。グラフでは、経時的に、Ｃｔｒｌ、抗ＰＤ－１、ＯＤＮ、及び抗ＰＤ－１＋ＯＤＮのＤ０に対する倍率変化が示され、Ｃｔｒｌは、Ｄ０に対する最大の倍率変化を示し、抗ＰＤ－１＋ＯＤＮは、最小を示す。
【0106】
ヒトＭＤＳＣ（ｈｕ－ＭＤＳＣ）に対するＴＬＲ９活性化の影響を研究するために、健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＯＤＮ－２３９５又はＳＤ－１０１で処理した。図３Ａ～３Ｄに示されるように、両方が、フローサイトメトリー（ＦＣ）分析によって決定されるように、ＰＤ－Ｌ１発現の増加とともに、非線形用量依存的な様式でｈｕ－ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ３３＋ＨＬＡＤＲ－）集団を減少させることが見出された。この研究では、ヒトＰＢＭＣを、Ｌｅｕｋｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＲＳ）チャンバから単離した。１ｅ６／ｍｌのＰＢＭＣを、増加する濃度（０．０４～１０μＭ）のＳＤ－１０１、ＯＤＮ２３９５、及びｃｔｒｌ ＯＤＮ５３２８（１μＭ）で４８時間処理した。図３Ａにおいて、ＭＤＳＣ及びＰＤ－Ｌ１発現の表現型分析のためのゲーティング戦略を示す。図３Ｂ～３Ｃにおいて、ＭＤＳＣ集団及びそれらの対応するＰＤ－Ｌ１発現を評価した。３回の複製を有する４人のドナーを使用し、データを、平均値±ＳＥＭで表した。図３Ｄにおいて、（ａ）ＣＤ４、（ｂ）、ＣＤ８（ｃ）、及びＣＤ６９を、ＦＣによって評価した。３回の複製を有する３人のドナーを使用した。これらの図は、ＯＤＮ２３９５又はＳＤ－１０１によるＴＬＲ９刺激が、ＰＢＭＣからのＭＤＳＣ生成を阻害することを示す。
【0107】
更に、Ｌｕｍｉｎｅｘを使用することにより、ＯＤＮ－２３９５及びＳＤ－１０１が、下流サイトカインＩＬ－６及びＩＬ－１０とともに、ＩＬ－２９、ＩＦＮα、及びＮＦκＢの発現を増強したことを示された。図４Ａ～４Ｄにおいて、ヒトＰＢＭＣを、増加する用量（０．０４～１０μＭ）のＳＤ－１０１（左ボックス）、（０．０４～３μＭ）のＯＤＮ２３９５（右ボックス）、及びｃｔｒｌ ＯＤＮ５３２８（１μＭ）で４８時間処理した。Ｌｕｍｉｎｅｘ分析を用いて、ＩＬ－２９（図４Ａ）、ＩＦＮα（図４Ｂ）、ＩＬ－６（図４Ｃ）、及びＩＬ－１０（図４Ｄ）について細胞上清を分析した。２人のドナー及び２つの複製物を、使用した。ＮＴ、Ｃｔｒｌ ＯＤＮ、及び増加する用量（０．０４～３μＭ）を、各群のＸ軸上に、左から右に開始して示す。図３Ａ～３Ｄは、ＯＤＮ２３９５又はＳＤ－１０１によるＴＬＲ９刺激が、ＮＦκＢ及びＩＦＮα制御サイトカイン産生を増強することを示す。
【0108】
更に、ヒトＰＢＭＣからのｈｕ－ＭＤＳＣの分化を調節する際のＳＤ－１０１の効果を調査するために、ヒトＰＢＭＣを、図５Ａ～５Ｄに示すように、ＳＤ－１０１の存在下又は不在下で、ＩＬ６＋ＧＭ－ＣＳＦで処理した。この研究では、ヒトＰＢＭＣを、断続的に又は１回、４８時間、０．３μＭのＳＤ－１０１を伴う／伴わない、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ６及びＧＭ－ＣＳＦで７日間処理した。図５Ａにおいて、ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ３３＋ＨＬＡＤＲ－）の表現型分析のためのゲーティング戦略を示す。図５Ｂにおいて、治療プロトコルを示す。図５Ｃにおいて、ＭＤＳＣ及びそのサブ集団におけるＴＬＲ９Ａの効果を示す。図５Ｄにおいて、ＰＢＭＣをＩＬ６及びＧＭ－ＣＳＦの存在下でＭＤＳＣに分化させ、０．３μＭのＳＤ－１０１を用いて／用いずに４８時間１回処理し、７日後、ＦＣを実施して、ＭＤＳＣ集団（８人のドナー）をモニタリングした。データを、平均値±ＳＥＭで表した。この点で、ＦＣ分析を用いることによって、ＳＤ－１０１は、ＩＬ６＋ＧＭ－ＣＳＦによって誘導されるｈｕ－ＭＤＳＣの発達を遮断し、より免疫抑制性の高い単球性ＭＤＳＣサブタイプを優先的に制限し、また、Ｍ１マクロファージ分極を駆動することが見出された。更に、ＳＤ－１０１を４８時間１回のみ処置するだけで、ｈｕ－ＭＤＳＣ分化を２週間阻害するのに十分であった。したがって、ＳＤ－１０１によるＴＬＲ９刺激が、ヒトＭＤＳＣプログラミングを阻害することが示された。
【0109】
要約すると、ＴＬＲ９刺激は、マウスモデルにおける肝転移を制御するチェックポイント療法の能力を増強する。ＴＬＲ９アゴニストは、Ｔ細胞集団に影響を与えることなく、ＰＢＭＣ由来のＭＤＳＣを阻害し、ＭＤＳＣ ＰＤ－Ｌ１発現を増強する。ＯＤＮ２３９５及びＳＤ－１０１は、二相性様式で、ＩＦＮα、ＩＬ２９（ＩＦＮα依存性サイトカイン）、ＩＬ６及びＩＬ１０（ＮＦκＢ依存性サイトカイン）の産生を調節する。ＳＤ－１０１は、ＭＤＳＣプログラミングを阻害し、単一処理は、この抑制効果を誘発するのに十分である。
【0110】
したがって、インビトロ及びインビボの所見は両方とも、ＬＭモデルにおける局所ＴＬＲ９刺激がＭＤＳＣの排除によって全身抗ＰＤ－１療法への応答性を改善し、血液ｈｕ－ＭＤＳＣへの効果がインビトロで確認されることを示唆している。更に、ＭＤＳＣ間のＴＬＲ９刺激に応答して増加したＰＤ－Ｌ１発現は、抗ＰＤ－１効果を更に増強した。したがって、ＴＬＲ９アゴニストの局所注入を全身性抗ＰＤ－１薬剤と組み合わせることは、ＭＤＳＣプログラミングを抑制することによって抗ＰＤ－１療法への応答性を改善することを使用して、肝臓腫瘍を治療し、肝内免疫抑制を提供し得る。
【0111】
実施例２
本実施例では、ＴＲＬ９アゴニストの局所的な血管内注入は、肝転移（ＬＭ）の免疫制御を可能にするために肝臓ＭＤＳＣ区画を再プログラムし得ると仮定した。クラスＣのＴＬＲ９アゴニスト、例えば、ＯＤＮ－２３９５の効果は、ＬＭ進行及び肝臓ＭＤＳＣ集団に対するその影響を阻害することにおいて評価された。特に、ＬＭ進行の制御及び肝臓ＭＤＳＣ集団サイズへの影響に関して、ＯＤＮ－２３９５の局所的な血管内注入をＯＤＮ－２３９５の全身送達と比較した。
本実施例では、ＴＲＬ９アゴニストの局所的な血管内注入は、肝転移（ＬＭ）の免疫制御を可能にするために肝臓ＭＤＳＣ区画を再プログラムし得ると仮定した。クラスＣのＴＬＲ９アゴニスト、例えば、ＯＤＮ－２３９５の効果は、ＬＭ進行及び肝臓ＭＤＳＣ集団に対するその影響を阻害することにおいて評価された。特に、ＬＭ進行の制御及び肝臓ＭＤＳＣ集団サイズへの影響に関して、ＯＤＮ－２３９５の局所的な血管内注入をＯＤＮ－２３９５の全身送達と比較した。
【0112】
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、脾臓内経路を介して、２．５ｅ６ ＭＣ３８－ＣＥＡ－Ｌｕｃ細胞でチャレンジした。１週間後、マウスを、門脈（ＰＶ：局所）を介して１、３、１０、若しくは３０μｇのＯＤＮ－２３９５、又は尾静脈（ＴＶ）を通じて３０μｇの静脈内（全身）で処置した。マウス門脈を通じた薬剤の投与は、動物肝臓への局所投与をもたらす。腫瘍負荷を、生物発光を評価することによって、ＯＤＮ投与から２４時間及び４８時間後に測定した。ＣＤ４５＋細胞を単離し、ＦＡＣＳ分析を行って、ＴＬＲ９の下流のシグナル伝達事象とともに、ＭＤＳＣ、単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ）、及びＭ１マクロファージサブセットを定量化した。
【0113】
図６は、ＬＭを開発するためのスキーマ／方法及び治療プロトコルを示す。８～１２週齢の雄Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、２．５ｅ６ ＭＣ３８－ＣＥＡ－Ｌｕｃ細胞を用いた脾臓内経路を介してチャレンジし、１週間増殖させた。生物発光値を、ＩＶＩＳによって決定し、マウスを、それに応じて無作為化し、ＰＶを介して１、３、１０、３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５、及びＴＶを介して３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５で処置した。Ｄ＋２処置後に関するその後の研究では、マウスを殺処分し、肝臓を採取して、ＣＤ４５＋細胞を単離した。次いで、単離したＣＤ４５＋ ＮＰＣを、ＭＤＳＣ及びマクロファージについて評価した。
【0114】
図７Ａ～７Ｂは、腫瘍進行へのＯＤＮ－２３９５の効果を示す。特に、図７Ａは、ＰＶを介した１、３、１０、３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５、及びＴＶを介した３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５の、処置当日（Ｄ０）、Ｄ１、及びＤ２の腫瘍成長／負荷を示す。腫瘍進行を、二元配置ＡＮＯＶＡによって分析し、続いてＴｕｋｅｙ事後検定によって分析した（＊ｐ＜０．０５）。更に、図７Ｂは、ＰＶ及びＴＶを介して３０μｇのＯＤＮ２３９５によって処置された腫瘍負荷の生物発光及びＰ値を示す。図７Ａ～７Ｂに示されるように、（ＴＶと比較して）ＰＶを介して投与された３０μｇのＯＤＮ－２３９５は、腫瘍負荷を著しく低減させた（ｐ＜０．０１）。
【0115】
図８Ａ～８Ｄは、ＬＭにおけるＭＤＳＣ集団へのＯＤＮ－２３９５の効果を示す。この点で、図８Ａは、ＦＡＣＳによってＬＭから単離されたＣＤ４５＋細胞を分析するためのゲーティング戦略を示す。更に、図８Ｂ、８Ｃ、及び８Ｄは、それぞれ、ＰＶを介した１、３、１０、３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５、及びＴＶを介した３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５について、測定されたＭＤＳＣ細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１＋）、単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ；ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃ＋）細胞、及び顆粒球性ＭＤＳＣ（Ｇ－ＭＤＳＣ；ＣＤ１１ｂ＋ＬＹ６Ｇ＋）細胞を示す。図８Ｂ及び８Ｃに示されるように、ＰＶを介した３０μｇのＯＤＮ－２３９５は、ＴＶを介して３０μｇのＯＤＮ－２３９５を受けたマウスと比較して、ＭＤＳＣ及びＭ－ＭＤＳＣの制御において優れており、特に、ＰＶを介して３０μｇのＯＤＮ－２３９５で送達された場合に、ＯＤＮ－２３９５によって好ましく再プログラムされ得る増加した腫瘍抑制性ＴＭＥを示唆している。
【0116】
図９Ａ～９Ｃは、ＬＭにおけるＭ１及びＭ２マクロファージ集団へのＯＤＮ－２３９５の効果を示す。この点で、図９Ａは、Ｍ１及びＭ２マクロファージについて、ＬＭから単離されたＣＤ４５＋細胞を分析するためのゲーティング戦略を示す。特に、表現型分析が、示される。図９Ｂ及び９Ｃは、ＰＶを介して１、３、１０、３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５、及びＴＶを介して３０μｇ／マウスのＯＤＮ－２３９５について、測定されたＭ１マクロファージ細胞集団（Ｆ４／８０＋ＣＤ３８＋ＥＧＲ２－）及びＭ２マクロファージ細胞集団（Ｆ４／８０＋ＣＤ３８－ＥＧＲ２＋）を示す。この点で、ＰＶを介してＯＤＮ－２３９５を受けたマウスは、ＴＶを介して３０μｇと比較して、Ｍ１マクロファージ集団を有意に増加させ、Ｍ２集団を減少させた。このデータは、特に、ＰＶを介した３０μｇのＯＤＮ－２３９５が、ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋単球細胞を炎症誘発性／抗腫瘍性のＭ１マクロファージに偏向させ、ＭＤＳＣに加えて、血管新生促進のＭ２集団も減少させることを示唆している。
【0117】
図１０Ａ～１０Ｂは、ＮＦκＢシグナル伝達へのＯＤＮ－２３９５の効果を示す。特に、図１０Ａは、ＰＶ及びＴＶによる３０μｇＯＤＮ２３９５のｐＮＦκＢ（ｐ６５Ｓ５３６）、総ＮＦκＢ、ｐＳＴＡＴ３Ｙ７０５、ＳＴＡＴ３、及びＩＬ－６のウェスタンブロッティングを示し、ＧＡＰＤＨをタンパク質対照として使用する。更に、図１０Ｂは、ＰＶ及びＴＶによる３０μｇのＯＤＮ－２３９５の密度測定分析を示す。この点で、ＰＶを介して注入した場合、３０μｇのＯＤＮ－２３９５は、ＮＦκＢリン酸化を増加させ、ＩＬ－６の同時増加を伴い、ＴＶ注入と比較して、ＬＭにおけるＳＴＡＴ３リン酸化を低減させた。
【0118】
図１１Ａ～１１Ｂは、ＮＦκＢシグナル活性へのＯＤＮ－２３９５濃度の効果を示し、レポーターベースのアッセイにおいて、ＨＥＫ２９３－ブルー細胞を、ＯＤＮ－２３９５及びＳＤ－１０１で増加する用量（０．００４～１０μＭ）で２１時間処理した。ＴＬＲ９を介したＮＦκＢシグナル伝達の活性化におけるＯＤＮ－２３９５の用量依存的効果を評価するために、これを行った。この点で、図１１Ａの放出分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）は、６５０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。更に、図１１Ｂは、ＮＦκＢシグナル活性へのクロロキン（Ｃｈｑ）の効果を示す。この点で、細胞をクロロキン（１μｇ／ｍｌ）で４５分間前処理した後、ＯＤＮ－２３９５を増加する濃度（０．０１２～３μＭ）で２１時間添加し、６５０ｎｍでの吸光度を測定した。Ｃｈｑ前処理を伴って又は伴わずにＴＮＦαで処理した細胞の６５０ｎｍにおける吸光度を、図１１Ｂに示す。図１１Ｂに示されるように、クロロキンは、ＴＬＲ９アゴニストが媒介するＮＦκＢの活性化を阻害し、ＯＤＮ－２３９５が、ＴＬＲ９と相互作用することによってＮＦκＢ経路を活性化することを示した。
【0119】
上記を考慮して、３０μｇのＯＤＮ－２３９５のインビボＰＶ送達が腫瘍負荷を減少させ、ＭＤＳＣ（主に免疫抑制性の高いＭ－ＭＤＳＣ亜集団）の頻度を低減させ、炎症誘発性／抗腫瘍性Ｍ１マクロファージを増強し、免疫抑制性Ｍ２マクロファージを同時に減少させることが判定された。更に、分子レベルでは、ＯＤＮ－２３９５は、ＩＬ６発現とともにＮＦκＢのリン酸化を増加させ、ＳＴＡＴ３のリン酸化を減少させた。加えて、インビトロＳＥＡＰアッセイは、ＯＤＮ－２３９５媒介性ＮＦκＢ活性化がＴＬＲ９依存性であることを確認した。
【0120】
要言すれば、ＰＶを介して投与された３０μｇのＯＤＮ－２３９５は、２４時間での腫瘍負荷の低減において（ＴＶと比較して）より効率的であり、４８時間まで持続した。ＯＤＮ－２３９５の局所送達はまた、ＭＤＳＣの頻度を低減させ、主にＬＭにおけるより免疫抑制性の高いＭ－ＭＤＳＣ亜集団を低減させた。更に、ＯＤＮ－２３９５の局所送達はまた、炎症誘発性／抗腫瘍性Ｍ１マクロファージを増強した。加えて、ＮＦκＢ依存性可溶性アルカリホスファターゼアッセイ（例えば、ＳＥＡＰ）を使用して、ＯＤＮ－２３９５が、ＮＦκＢ転写因子活性を用量依存的に増強したことが判定された（ｐ＜０．００１）。更に、腫瘍溶解物のウエスタンブロットデータは、ＰＶによるＯＤＮ送達が、ＩＶと比較して、ＮＦκＢ（ｐＰ６５）活性及びＩＬ－６の産生を有意に増加させ、ＳＴＡＴ３活性を低減させることを示した。
【0121】
実施例３
この実施例では、ＳＤ－１０１ ＨＡＩ／ＰＥＤＤ一般毒性研究を、家畜ブタに対して実施した。この研究は、１０ｍＬ／ｋｇ／日の体積を使用して０（ビヒクル）の投薬量で肝動脈内に直接投与するためのＴｒｉＮａｖ（登録商標）カテーテルを使用して実施した。評価されるべき投薬量は、０（ビヒクル）、２、４、及び８ｍｇのＳＤ－１０１であった。０日目、７日目、及び１４日目に２匹のブタ／群に、３回のＳＤ－１０１投与を行い、１５日目に剖検を行った。臨床観察、体重、及び食物摂取を含む、標準的な評価が、研究全体を通して行われた。完全な獣医学的身体検査は、薬物投与期間の前並びにＳＤ－１０１の２回目及び３回目の投与後に行われた。
この実施例では、ＳＤ－１０１ ＨＡＩ／ＰＥＤＤ一般毒性研究を、家畜ブタに対して実施した。この研究は、１０ｍＬ／ｋｇ／日の体積を使用して０（ビヒクル）の投薬量で肝動脈内に直接投与するためのＴｒｉＮａｖ（登録商標）カテーテルを使用して実施した。評価されるべき投薬量は、０（ビヒクル）、２、４、及び８ｍｇのＳＤ－１０１であった。０日目、７日目、及び１４日目に２匹のブタ／群に、３回のＳＤ－１０１投与を行い、１５日目に剖検を行った。臨床観察、体重、及び食物摂取を含む、標準的な評価が、研究全体を通して行われた。完全な獣医学的身体検査は、薬物投与期間の前並びにＳＤ－１０１の２回目及び３回目の投与後に行われた。
【0122】
毒物動態（ＴＫ）分析のための連続血液サンプル（及び最大２つの代謝産物）を、０日目及び１４日目に、ＳＤ－１０１の曝露及び処分の計算のために収集した。抗薬物抗体（ＡＤＡ）分析の可能性についても、サンプルを、これらの同日に採取した。血清サンプルを、サイトカイン分析のために、処置前、並びに０日目（投与前）及び１４日目に収集した。徹底した血液学、臨床化学、及び凝固パネルは、処置前及び剖検直前に行われた。以下の臓器重量が、測定され、顕微鏡的組織病理学検査が、肝臓（４つの葉）、肺、脾臓、胸腺、腎臓、心臓、リンパ節（ドレイン及び非ドレイン）、腸関連リンパ組織、骨髄、脳、並びに肉眼的病変において行われた。ＳＤ－１０１及び最大２つの代謝産物の組織レベルが、肝臓（４つの葉）、肺、脾臓、胸腺、腎臓、心臓、リンパ節（ドレイン及び非ドレイン）、腸関連リンパ組織、骨髄、脳、並びに肉眼的病変において行われた。研究の全てのブタにおいて、ＳＤ－１０１を肝動脈に注入した後の肝毒性の証拠はなかった。
【0123】
上記に加えて、動物が０、０．５、４、又は８ｍｇの用量でＳＤ－１０１の単回投与を受けた反復研究が行われた。以前の研究と同様に、治療関連の副作用は、観察されなかった。重要なことに、血清薬物動態分析は、ブタにおけるＨＡＩ後のＳＤ－１０１の全身レベルが、皮下注射後の霊長類研究で観察されたものより１００倍低いことを示した。
【0124】
実施例４
この実施例では、例えば、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを用いた、ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介したＴＬＲ９アゴニストの投与と、針注射を介したＴＬＲ９アゴニストの投与との比較を、研究した。特に、この研究は、蛍光タグ付きトール様受容体９（ＴＬＲ９）クラスＣアゴニストＳＤ－１０１（Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１）及びツール分子オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）２３９５ Ｏｌｉｇｏ（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５）の肝内局在化に対する投与経路（局所領域ＰＥＤＤ注入に対して針注射を介した肝組織への直接注射）に焦点を当てた。
この実施例では、例えば、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを用いた、ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介したＴＬＲ９アゴニストの投与と、針注射を介したＴＬＲ９アゴニストの投与との比較を、研究した。特に、この研究は、蛍光タグ付きトール様受容体９（ＴＬＲ９）クラスＣアゴニストＳＤ－１０１（Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１）及びツール分子オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）２３９５ Ｏｌｉｇｏ（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５）の肝内局在化に対する投与経路（局所領域ＰＥＤＤ注入に対して針注射を介した肝組織への直接注射）に焦点を当てた。
【0125】
治療分布に対するＰＥＤＤデバイスの影響を評価するために、ブタモデルは、ヒト肝臓と比較して、肝血管系、細胞構造、及び内臓構造の類似性に基づいて選択された。ブタモデルは、治療薬の局所投与の調査で広く使用されている。肝血管の解剖学的構造は、ＰＥＤＤ ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスのサイズ範囲表示（直径１．５～３．５ｍｍ）に適合する。
【0126】
この研究は、４５～６５ｋｇの体重である８～１１週齢の雌Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ Ｃｒｏｓｓブタで実施された。
【0127】
ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１配列オリゴを合成し、Ｃｙ５．５（ｅｘ．６８５ｎｍ、ｅｍ．７０６ｎｍ）のフルオロフォアにコンジュゲートした。
【0128】
ＴＬＲ９アゴニストＯＤＮ２３９５配列オリゴを合成し、ＩＲＤｙｅ８００（ｅｘ．７９１ｎｍ、ｅｍ．８０９ｎｍ）のフルオロフォアにコンジュゲートした。
【0129】
研究設計
合計８頭の健康な雌ブタが、本研究のために選択された。最初のコホート動物（ｎ＝４）は、ＰＥＤＤデバイス（ＴｒｉＮａｖ（登録商標）、カタログ番号ＴＮＶ－２１１２０－３５）を用いたＨＡＩを介してＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５を受容し、続いてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１の針注射を用いて受容した。第２のコホート動物（ｎ＝４）は、ＰＥＤＤデバイスを用いたＨＡＩを介してＣｙ５．５－ＳＤ－１０１を受容し、続いてＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の針注射を用いて受容した。
合計８頭の健康な雌ブタが、本研究のために選択された。最初のコホート動物（ｎ＝４）は、ＰＥＤＤデバイス（ＴｒｉＮａｖ（登録商標）、カタログ番号ＴＮＶ－２１１２０－３５）を用いたＨＡＩを介してＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５を受容し、続いてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１の針注射を用いて受容した。第２のコホート動物（ｎ＝４）は、ＰＥＤＤデバイスを用いたＨＡＩを介してＣｙ５．５－ＳＤ－１０１を受容し、続いてＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の針注射を用いて受容した。
【0130】
針注射
２１ゲージ、１５ｃｍの長さの経皮アクセス針を、超音波ガイダンスの下、肝臓の右側葉又は右中葉に挿入した。次いで、３ｍＬの量のオリゴ溶液を、０．３～０．６ｍＬ／秒の速度で、手動で注射した。この速度及び量は、腫瘍への治療薬の針注射を使用する臨床実践と一致する。
２１ゲージ、１５ｃｍの長さの経皮アクセス針を、超音波ガイダンスの下、肝臓の右側葉又は右中葉に挿入した。次いで、３ｍＬの量のオリゴ溶液を、０．３～０．６ｍＬ／秒の速度で、手動で注射した。この速度及び量は、腫瘍への治療薬の針注射を使用する臨床実践と一致する。
【0131】
ＨＡＩ
ＨＡＩは、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを使用して実施した。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）は、心臓サイクルから生じる、又は注入によって生成されるような局所的な圧力変化に応答する一方向バルブを備える単腔カテーテルである。バルブ構造は、遠位血管圧及び血流を調節する。同様に、これは、血管系内の接触時間の増加に起因して、治療分布及び初回通過吸収を変化させ得る。
ＨＡＩは、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを使用して実施した。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）は、心臓サイクルから生じる、又は注入によって生成されるような局所的な圧力変化に応答する一方向バルブを備える単腔カテーテルである。バルブ構造は、遠位血管圧及び血流を調節する。同様に、これは、血管系内の接触時間の増加に起因して、治療分布及び初回通過吸収を変化させ得る。
【0132】
Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ技術を使用して、大腿動脈からアクセスした。５Ｆイントロデューサシースを、部位に固定した。５Ｆ血管造影カテーテルを使用して、血管造影を行い、肝動脈解剖学的構造を特定した。次いで、左中葉及び／又は左側葉に供給する直径１．５～３．５ｍｍの血管（平均２．５９ｍｍ±０．２１ｍｍ ＳＥ）が、選択された。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを、標的血管の位置に追跡した。Ｑｕａｎｔｉｅｎ圧力モニタに接続された侵襲性血圧（ＩＢＰ）トランスデューサを使用して、注入システムの管腔（マイクロバルブの遠位）を通る及び血管造影カテーテルの管腔（マイクロバルブの近位）を通る圧力を測定した。次いで、１０ｍＬの治療用シリンジをシリンジポンプに入れ、溶液をＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスを通じて２ｍｌ／分の速度で合計５分間注入した。
【0133】
血液サンプル収集
肝酵素（アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］）に対する手順及び治療効果を評価した。介入前、標的血管内のデバイス配置後、ＨＡＩの直後（ｔ＝０）、及びその後の合計９０分間、１０分毎に血液を採血した。
肝酵素（アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］）に対する手順及び治療効果を評価した。介入前、標的血管内のデバイス配置後、ＨＡＩの直後（ｔ＝０）、及びその後の合計９０分間、１０分毎に血液を採血した。
【0134】
組織調製
注入後に動物を殺処分し、血液サンプルを収集し、肝臓を除去した。肝臓の各葉を分離し、薬物取り込みのパターンを特定するために、Ｐｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いた近赤外線画像を行った。次いで、各葉を１ｃｍの厚さの切片（図１２）に切断し、Ｐｅａｒｌシステムを使用して両組織面上で別々に画像化した（８５μｍ分解能、７００ｎｍ、８００ｎｍ、及び白色光チャネル）。組織内のＯＤＮツール化合物の存在について、肝臓の全体積を分析した。
注入後に動物を殺処分し、血液サンプルを収集し、肝臓を除去した。肝臓の各葉を分離し、薬物取り込みのパターンを特定するために、Ｐｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いた近赤外線画像を行った。次いで、各葉を１ｃｍの厚さの切片（図１２）に切断し、Ｐｅａｒｌシステムを使用して両組織面上で別々に画像化した（８５μｍ分解能、７００ｎｍ、８００ｎｍ、及び白色光チャネル）。組織内のＯＤＮツール化合物の存在について、肝臓の全体積を分析した。
【0135】
治療的シグナル定量化
Ｐｅａｒｌ画像システムによって生成された組織の画像は、別々の７００ｎｍ及び８００ｎｍの蛍光チャネルで構成された。画像内で、バックグラウンドサンプル調製プレート、正常な未処理肝組織、及び治療された肝組織について、異なる発光強度レベルが観察された。特注設計されたＭＡＴＬＡＢグラフィカルユーザインタフェース（ＧＵＩ）は、シグナルのこれらの別個の領域を特定するために開発された（図１３Ａ及び１３Ｂ）。各動物の肝臓の未処理領域から採取した切片（ｎ＝３）を画像化して、ピクセル光度値のヒストグラムを生成した。「低」強度（Ｉ）値限界を、サンプル調製プレートに関連するピクセル強度について特定した。「高」強度値限界を、未処理の非標的組織で測定された最大ピクセル強度で決定した。低（ｎ＝３）及び高（ｎ＝３）測定値の各々について平均を得て、組織閾値を決定した。次いで、組織切片は、閾値に基づいて処理した。
Ｐｅａｒｌ画像システムによって生成された組織の画像は、別々の７００ｎｍ及び８００ｎｍの蛍光チャネルで構成された。画像内で、バックグラウンドサンプル調製プレート、正常な未処理肝組織、及び治療された肝組織について、異なる発光強度レベルが観察された。特注設計されたＭＡＴＬＡＢグラフィカルユーザインタフェース（ＧＵＩ）は、シグナルのこれらの別個の領域を特定するために開発された（図１３Ａ及び１３Ｂ）。各動物の肝臓の未処理領域から採取した切片（ｎ＝３）を画像化して、ピクセル光度値のヒストグラムを生成した。「低」強度（Ｉ）値限界を、サンプル調製プレートに関連するピクセル強度について特定した。「高」強度値限界を、未処理の非標的組織で測定された最大ピクセル強度で決定した。低（ｎ＝３）及び高（ｎ＝３）測定値の各々について平均を得て、組織閾値を決定した。次いで、組織切片は、閾値に基づいて処理した。
【0136】
７００ｎｍ（Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１）及び８００ｎｍ（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５）ツール化合物について、「高」閾値のピクセル強度よりも大きいピクセル強度によって特定される、処理された標的組織から生じるシグナルを確立した。発光単位（ｌｕ）の総シグナル強度は、これらの基準を満たすピクセルのｌｕの合計によって計算された。これにより、針注射（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の場合はｎ＝４、Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１の場合はｎ＝４、ｎ＝８の総測定値）及びＨＡ注入（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の場合はｎ＝４、Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１の場合はｎ＝４、ｎ＝８の総測定値）について観察されたシグナルに相関するデータが得られた。各切片の両側の平均ｌｕを決定した。次いで、全ての切片についてのこれらの測定値の合計を、各対象について計算し、次いで、２つの注入方法のｌｕの合計を、９５％信頼区間での２サンプル等価検定を使用して比較した。
【0137】
カバレッジ体積は、各切片の両側の「高」閾値よりも大きい強度を表示するピクセル数の平均を取ることによって計算された。次いで、この値を、全ての組織切片（針注射（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の場合はｎ＝４、Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１の場合はｎ＝４、ｎ＝８の総測定値）及びＨＡＩ（ＩＲＤ８００－ＯＤＮ２３９５の場合はｎ＝４、Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１の場合はｎ＝４、ｎ＝８の総測定値）について組織量（８５μｍ×８５μｍ ピクセル×１ｃｍ 切片深さ）に変換した。次いで、２つの注入方法の組織量を、９５％信頼区間での２サンプル等価検定を使用して比較した。
【0138】
結果
組織画像
針注射（図１４Ａ及び図１５Ａ）と比較して、ＰＥＤＤデバイス（図１４Ｂ及び図１５Ｂ）を使用して局所動脈ネットワーク内で治療が送達された場合、肝組織の近赤外線画像は、標識されたＯＤＮ分布のパターンにおいて明確な差を示した。
組織画像
針注射（図１４Ａ及び図１５Ａ）と比較して、ＰＥＤＤデバイス（図１４Ｂ及び図１５Ｂ）を使用して局所動脈ネットワーク内で治療が送達された場合、肝組織の近赤外線画像は、標識されたＯＤＮ分布のパターンにおいて明確な差を示した。
【0139】
治療的送達
ＯＤＮの各々について、肝組織に記録された総シグナルの分析が、行われた。標識されたＯＤＮ２３９５について測定されたシグナル強度は、ＰＥＤＤデバイス（ｎ＝４、４６４８３±４２８５ｌｕ ＳＥ）を使用して注入した場合、針による注射（ｎ＝４、１６４３８±４７９３ｌｕ ＳＥ）よりも有意に大きかった（ｐ＝０．００３）（図１６Ａ）。標識されたＳＤ－１０１のシグナル強度（ｎ＝４、５１５１１±２１２６７ｌｕ ＳＥ）は、動物間の変動性がより高いため、針注射（ｎ＝４、２２１１２±１２６４８ｌｕ ＳＥ）と有意差はなかった（ｐ＝０．１５）（図１６Ａ）。ＰＥＤＤ（ｎ＝８、４８９９７±１００８８ ｌｕ ＳＥ）によって送達された両方のＯＤＮの複合シグナル強度は、針注射（ｎ＝８、１９２７５±６３５２ ｌｕ ＳＥ）（ｐ＝０．０１５）によって送達された場合よりも有意に大きかった（図１６Ｂ）。
ＯＤＮの各々について、肝組織に記録された総シグナルの分析が、行われた。標識されたＯＤＮ２３９５について測定されたシグナル強度は、ＰＥＤＤデバイス（ｎ＝４、４６４８３±４２８５ｌｕ ＳＥ）を使用して注入した場合、針による注射（ｎ＝４、１６４３８±４７９３ｌｕ ＳＥ）よりも有意に大きかった（ｐ＝０．００３）（図１６Ａ）。標識されたＳＤ－１０１のシグナル強度（ｎ＝４、５１５１１±２１２６７ｌｕ ＳＥ）は、動物間の変動性がより高いため、針注射（ｎ＝４、２２１１２±１２６４８ｌｕ ＳＥ）と有意差はなかった（ｐ＝０．１５）（図１６Ａ）。ＰＥＤＤ（ｎ＝８、４８９９７±１００８８ ｌｕ ＳＥ）によって送達された両方のＯＤＮの複合シグナル強度は、針注射（ｎ＝８、１９２７５±６３５２ ｌｕ ＳＥ）（ｐ＝０．０１５）によって送達された場合よりも有意に大きかった（図１６Ｂ）。
【0140】
治療的カバレッジ
ＯＤＮの各々について、肝組織に記録された総シグナルの分析が、行われた。標識されたＯＤＮ２３９５について測定された組織カバレッジは、針による注射（ｎ＝４、１５．７±３．３ｃｍ３ ＳＥ）よりも、ＰＥＤＤデバイス（ｎ＝４、１５９．２±３６．６ｃｍ３ ＳＥ）を使用して注入した場合に有意に大きかった（ｐ＝０．０１５）（図１７Ａ）。標識されたＳＤ－１０１（ｎ＝４、３８．８±１０．９ｃｍ３ ＳＥ）の組織カバレッジもまた、針注射（ｎ＝４、１１．３±４．７ｃｍ３ ＳＥ）よりも有意に大きかった（ｐ＝０．０４）（図１７Ａ）。ＰＥＤＤ（ｎ＝８、９９．０±２８．８ｃｍ３ ＳＥ）によって送達された両方の化合物の複合シグナル強度は、針注射（ｎ＝８、１３．５±２．９ｃｍ３ ＳＥ）によって送達された場合よりも有意に大きかった（ｐ＝０．０１１）（図１７Ｂ）。
ＯＤＮの各々について、肝組織に記録された総シグナルの分析が、行われた。標識されたＯＤＮ２３９５について測定された組織カバレッジは、針による注射（ｎ＝４、１５．７±３．３ｃｍ３ ＳＥ）よりも、ＰＥＤＤデバイス（ｎ＝４、１５９．２±３６．６ｃｍ３ ＳＥ）を使用して注入した場合に有意に大きかった（ｐ＝０．０１５）（図１７Ａ）。標識されたＳＤ－１０１（ｎ＝４、３８．８±１０．９ｃｍ３ ＳＥ）の組織カバレッジもまた、針注射（ｎ＝４、１１．３±４．７ｃｍ３ ＳＥ）よりも有意に大きかった（ｐ＝０．０４）（図１７Ａ）。ＰＥＤＤ（ｎ＝８、９９．０±２８．８ｃｍ３ ＳＥ）によって送達された両方の化合物の複合シグナル強度は、針注射（ｎ＝８、１３．５±２．９ｃｍ３ ＳＥ）によって送達された場合よりも有意に大きかった（ｐ＝０．０１１）（図１７Ｂ）。
【0141】
肝臓酵素レベル
Ｍｉｎｉｔａｂソフトウェア（Ｍｉｎｉｔａｂ ＬＬＣ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して、ＡＳＴ又はＡＬＴレベルが手順前ベースラインレベルと比較して有意な変化を経験したかどうかを判断するために、一対ｔ検定を実施した。採血の経過中、ＡＳＴ又はＡＬＴのいずれにおいても有意な変化は、観察されなかった（表２及び図１８）。
Ｍｉｎｉｔａｂソフトウェア（Ｍｉｎｉｔａｂ ＬＬＣ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して、ＡＳＴ又はＡＬＴレベルが手順前ベースラインレベルと比較して有意な変化を経験したかどうかを判断するために、一対ｔ検定を実施した。採血の経過中、ＡＳＴ又はＡＬＴのいずれにおいても有意な変化は、観察されなかった（表２及び図１８）。
【表2】
【0142】
この研究の結果は、直接注射の限界を更に強化する。肝臓内に注射された治療薬は、組織内で比較的限られた拡散を示し、しばしば肝臓の１～２の１ｃｍの厚さの部分に限定された。この分布パターンは、多発性びまん性疾患を治療するには不十分であろう。
【0143】
ＰＥＤＤは、治療的送達の代替モードを提供する。ＰＥＤＤは、一方向のマイクロバルブ構造を備えたカテーテルシステムを使用して実施される。血流の中に配置される場合、この管は、血流及び血圧を物理的に調節する。前方血流は、デバイスの配置後に保持され、標的血管ネットワークへの治療薬の下流への移行を可能にする。注入中、圧力は、非標的組織への逆流のリスクなしに、動脈ネットワーク内で局所的に生成され得る。
【0144】
この研究では、正常なブタ肝組織を、標識ＯＤＮ配列の分布及び組織取り込みを定量化する目的で、ＰＥＤＤデバイスを使用して処置した。肝組織の１ｃｍ切片の定量的近赤外線画像を使用して、標識化合物に曝露して保持する組織の全体積を定量化した。ＰＥＤＤ注入後にＯＤＮに曝露した組織の体積は、針注射によって曝露した組織の７倍以上であった（それぞれ、９９．０±２８．８ｃｍ３ ＳＥ対１３．５±２．９ｃｍ３）。予想外に、治療取り込みの尺度である総光度は、同様にＰＥＤＤ処置組織において有意に高かった（４８９９７±１００８８ ｌｕ ＳＥ ＰＥＤＤ対１９２７５±６３５２ ｌｕ ＳＥ針注射、２．５倍増加）。
【0145】
直接針注射は、標的組織に全体積の治療薬を送達することが期待され、高い送達効率をもたらした。しかしながら、ＰＥＤＤと比較して有意に低い光度が観察された。これは、逆流として知られる現象と関連してもよく、逆流は、注入物が針の周りに移動し、針路から流出する場合に生じる。針の挿入速度、挿入角度、注入速度、針の直径、及び組織圧力など、いくつかの要因がこの現象の大きさに影響を及ぼす。逆流は、腫瘍に注射された治療薬の有効性の低下に関与している。注入されたＯＤＮ体積のかなりの部分が針路を通って腹部に逆流し、より低い組織保持をもたらしたと仮定する。
【0146】
ＰＥＤＤデバイスは、血流及び局所血管圧を物理的に調節し、研究で観察された高レベルのＯＤＮ保持に寄与し得る。初期配置時、デバイスは、バルブの近位にある９６．８ｍｍＨｇ±６．２ｍｍＨｇ ＳＥからバルブの遠位にある５７．６ｍｍＨｇ±８．３ｍｍＨｇ ＳＥまでの圧力勾配を誘導した（ｎ＝８測定値）。圧力の低減はまた、より低い血流速度をもたらす。注入中、治療薬は、組織との接触時間が長くなり、堅牢な吸収をもたらす可能性が高い。
【0147】
ＰＥＤＤデバイスの使用は、従来のカテーテルシステムと比較して正常な組織への送達を有意に減少させながら、腫瘍組織内のＭＡＡ沈着を有意に更に増加させた。この研究で処置した正常なブタ肝臓は、ＰＥＤＤデバイスによって誘発された圧力勾配に応答し、ある程度の流量再配分をもたらす可能性が高い。
【0148】
しかしながら、現在のモデルには腫瘍組織が存在しなかったため、病変組織状態への差動は、観察されなかった。
【0149】
ＡＳＴ及びＡＬＴ測定は、標識されたＯＤＮの注入後９０分間にわたって実施した。この持続期間は、四塩化炭素などの既知の肝毒素の投与後に酵素レベルの有意な上昇を識別するのに十分であると文書化されている。本研究で投与される標識されたオリゴヌクレオチドの用量は、前臨床モデルにおいて治療量以下であると予測されるが、これらの結果は、ＰＥＤＤによる投与経路が肝酵素の有意な上昇をもたらさなかったことを更に示す。肝毒性の徴候は、研究期間中に観察されなかった。
【0150】
要言すれば、本研究は、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）カテーテルシステムを使用したＰＥＤＤ技術による注入と比較して、従来の直接針注射を介した近赤外線で標識されたＯＤＮの送達を比較するように設計された。この目的は、シグナルの強度及びシグナルの体積を、薬物保持及び組織分布の指標として定量化することであった。この点で、ＰＥＤＤ／ＴｒｉＮａｖ（登録商標）を用いた薬物送達は、シグナル強度（薬物保持の指標）及び薬物に曝露された組織量（薬物分布の指標）の両方を有意に改善した。治療範囲のこの有意な増加は、びまん性疾患の治療における重要な因子となり得る。そのような方法論は、治療薬が、従来の針注射を使用して治療することが実用的でないか、又は不可能であろうマクロ転移及び微小転移の両方に達することを可能にし得る。
【0151】
実施例５
この研究の目的は、蛍光タグ付きトール様受容体９（ＴＬＲ９）クラスＣアゴニストＳＤ－１０１（Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１及びＩＲＤｙｅ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１）の肝内局在化に対する投与経路（エンドホールカテーテル対局所的なＰＥＤＤ注入を介した）を評価することであった。
この研究の目的は、蛍光タグ付きトール様受容体９（ＴＬＲ９）クラスＣアゴニストＳＤ－１０１（Ｃｙ５．５－ＳＤ－１０１及びＩＲＤｙｅ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１）の肝内局在化に対する投与経路（エンドホールカテーテル対局所的なＰＥＤＤ注入を介した）を評価することであった。
【0152】
調査化合物の送達後、２つの送達様式を比較するために、ｎｅａｒ ＩｎｆｒａＲｅｄ（近赤外線）画像を使用して、肝組織を分析した。近赤外線画像は、相対的な組織透明性のスペクトルウィンドウを利用し、がん組織の解剖学的マッピング及び同定のために広範囲に臨床的に使用されている。治療分布及び濃度の定量的全臓器分析が、達成された。
【0153】
材料及び方法
試験動物
この研究は、４５～６０ｋｇの体重である８～１１週齢の雌Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ Ｃｒｏｓｓブタ（Ｏａｋ Ｈｉｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｅｗｉｎｇ、ＩＬ）に行われた。
試験動物
この研究は、４５～６０ｋｇの体重である８～１１週齢の雌Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ Ｃｒｏｓｓブタ（Ｏａｋ Ｈｉｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｅｗｉｎｇ、ＩＬ）に行われた。
【0154】
オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）被験物質
ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１配列オリゴを合成し、Ｃｙ５．５（ｅｘ．６８５ｎｍ、ｅｍ．７０６ｎｍ）のフルオロフォアにコンジュゲートした。
ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１配列オリゴを合成し、Ｃｙ５．５（ｅｘ．６８５ｎｍ、ｅｍ．７０６ｎｍ）のフルオロフォアにコンジュゲートした。
【0155】
ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１配列オリゴを合成し、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ（ｅｘ．７６７ｎｍ、ｅｍ．７９１）にコンジュゲートした。
【0156】
研究設計
合計８頭の健康な雌ブタが、本研究のために選択された。全ての動物に２回の治療用注入を受け、最初の注入は、最初の注入の完了の１５分後に、エンドホールカテーテルを使用し、続いてＰＥＤＤデバイス（ＴｒｉＮａｖ（登録商標）、カタログ番号ＴＮＶ－２１１２０－３５、ＴｒｉＳａｌｕｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｅｓｔｍｉｎｓｔｅｒ ＣＯ）による２回目の注入を実施した。被験物質の注入順序を交互にし、４匹の動物はそれぞれ、最初の注入のためにエンドホールカテーテルを通じてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１又はＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１による注入を受け、４匹の動物はそれぞれ、第２の注入のためにＰＥＤＤカテーテルを通じてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１又はＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１による注入を受けた。
合計８頭の健康な雌ブタが、本研究のために選択された。全ての動物に２回の治療用注入を受け、最初の注入は、最初の注入の完了の１５分後に、エンドホールカテーテルを使用し、続いてＰＥＤＤデバイス（ＴｒｉＮａｖ（登録商標）、カタログ番号ＴＮＶ－２１１２０－３５、ＴｒｉＳａｌｕｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｅｓｔｍｉｎｓｔｅｒ ＣＯ）による２回目の注入を実施した。被験物質の注入順序を交互にし、４匹の動物はそれぞれ、最初の注入のためにエンドホールカテーテルを通じてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１又はＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１による注入を受け、４匹の動物はそれぞれ、第２の注入のためにＰＥＤＤカテーテルを通じてＣｙ５．５－ＳＤ－１０１又はＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１による注入を受けた。
【0157】
この研究設計の一部として、デバイスの順序は切り替えられなかった。これは、ＰＥＤＤ注入がエンドホールカテーテルに関連する血行動態パターンを混乱させる可能性があるためであり、血管生理学の短期的（１５～３０分）変化の可能性があり、第２の注入が適時に行われるのを妨げる血管けいれんの可能性を最小限に抑えるためである。
【0158】
試験物質の調製
凍結乾燥した被験物質ペレットを、純粋なＤＮａｓｅ遊離水中に２．５ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で再懸濁した。次いで、ＯＤＮ濃縮物を１ｃｃチューブに等分し、使用前に－６０～－８０℃で保管した。
凍結乾燥した被験物質ペレットを、純粋なＤＮａｓｅ遊離水中に２．５ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で再懸濁した。次いで、ＯＤＮ濃縮物を１ｃｃチューブに等分し、使用前に－６０～－８０℃で保管した。
【0159】
投与時に、それぞれの凍結ＯＤＮ濃縮物を解凍した。ＯＤＮ濃縮物を、９ｍＬの滅菌生理食塩水で希釈して、２．５ｎｍｏｌの化合物を含有する１０ｍＬの総体積を生成し、注入前に１０ｍＬのポリプロピレンシリンジ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）に保存した。投与量は、最適な画像シグナルを提供するために選択され、治療量以下であることが予測される。ＯＤＮを含有するシリンジを、Ｐｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉ－Ｃｏｒ，Ｌｉｎｃｏｌｎ ＮＥ）を使用して画像化し、投与前に注入物の初期光度を定量化し、サンプル群間の投与量の一貫性を確保した。
【0160】
局所肝動脈注入
Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ技術を使用して、大腿動脈からアクセスした。５Ｆイントロデューサシース（Ｐｉｎｎａｃｌｅ， Ｔｅｒｕｍｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ）を、部位に固定した。５Ｆ血管造影カテーテル（Ｇｌｉｄｅｃａｔｈ，Ｔｅｒｕｍｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ）を使用して、血管造影を行い、肝動脈解剖学的構造を特定した。次いで、左中葉及び／又は左側葉に供給する直径１．５～３．５ｍｍの血管（平均２．９８ｍｍ±０．１３ｍｍ ＳＥ）が、選択された。次いで、エンドホールカテーテルを、標的位置まで追跡した（種々、０．０１８”～０．０２１” ＩＤ、（Ｄｉｒｅｘｉｏｎ，Ｒｅｂａｒ－１８，Ｒｅｎｅｇａｄｅ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）、（Ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ １０１８，Ｓｔｒｙｋｅｒ Ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ，Ｆｒｅｍｏｎｔ ＣＡ）、及び（Ｔｒａｎｓｉｔ，Ｃｏｒｄｉｓ，Ｍｉａｍｉ Ｌａｋｅｓ，ＦＬ））。
Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ技術を使用して、大腿動脈からアクセスした。５Ｆイントロデューサシース（Ｐｉｎｎａｃｌｅ， Ｔｅｒｕｍｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ）を、部位に固定した。５Ｆ血管造影カテーテル（Ｇｌｉｄｅｃａｔｈ，Ｔｅｒｕｍｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ）を使用して、血管造影を行い、肝動脈解剖学的構造を特定した。次いで、左中葉及び／又は左側葉に供給する直径１．５～３．５ｍｍの血管（平均２．９８ｍｍ±０．１３ｍｍ ＳＥ）が、選択された。次いで、エンドホールカテーテルを、標的位置まで追跡した（種々、０．０１８”～０．０２１” ＩＤ、（Ｄｉｒｅｘｉｏｎ，Ｒｅｂａｒ－１８，Ｒｅｎｅｇａｄｅ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）、（Ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ １０１８，Ｓｔｒｙｋｅｒ Ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ，Ｆｒｅｍｏｎｔ ＣＡ）、及び（Ｔｒａｎｓｉｔ，Ｃｏｒｄｉｓ，Ｍｉａｍｉ Ｌａｋｅｓ，ＦＬ））。
【0161】
Ｑｕａｎｔｉｅｎ圧力モニタ（Ａｂｂｏｔｔ．Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）に接続された侵襲性血圧（ＩＢＰ）トランスデューサ（ＴｒｕＷａｖｅ ＰＸ６００，Ｅｄｗａｒｄｓ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｉｒｖｉｎｅ ＣＡ）を使用して、注入システムの管腔（遠位端）を通る及び血管造影カテーテルの管腔（注入管腔の近位）を通る圧力を測定した。次いで、１０ｍＬの治療用シリンジをシリンジポンプ（ＮＥ－１０００，Ｎｅｗ Ｅｒａ Ｐｕｍｐ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）に入れ、第１の被験物質溶液を、エンドホールカテーテルを通じて２ｍＬ／分の速度で合計５分間注入した。この速度及び体積は、ＨＡ注入の臨床実践と一致する。注入後、デバイスを、５分間適切な位置に保ち、次いで抜去した。
【0162】
次いで、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを、血管造影によって確認された標的血管内の全く同じ位置に追跡した。第２の注入は、代替カラーチャネルＯＤＮと同一の方法で実施した。ＰＥＤＤを、注入完了後５分間、適切な位置に保った。
【0163】
組織調製
次いで、デバイス除去後に動物を殺処分し、肝臓を除去した。肝臓の各葉を分離し、薬物取り込みのパターンを特定するために、Ｐｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いた近赤外線画像を行った。次いで、実施例４（図１２）に記載されるように、各葉を１ｃｍの厚さの切片に切断し、Ｐｅａｒｌシステムを使用して両組織面上で別々に画像化した（８５μｍ分解能、７００ｎｍ、８００ｎｍ、及び白色光チャネル）。組織内のＯＤＮツール化合物の存在について、肝臓の全体積を分析した。
次いで、デバイス除去後に動物を殺処分し、肝臓を除去した。肝臓の各葉を分離し、薬物取り込みのパターンを特定するために、Ｐｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いた近赤外線画像を行った。次いで、実施例４（図１２）に記載されるように、各葉を１ｃｍの厚さの切片に切断し、Ｐｅａｒｌシステムを使用して両組織面上で別々に画像化した（８５μｍ分解能、７００ｎｍ、８００ｎｍ、及び白色光チャネル）。組織内のＯＤＮツール化合物の存在について、肝臓の全体積を分析した。
【0164】
治療的シグナル定量化
治療的シグナル定量化を、実施例４（図１３Ａ～１３Ｂ）に記載されるプロセスに従って実施した。注入ゾーン内で処理された組織の重複を、画像内の各ピクセルに座標を割り当てることによって評価した。赤色チャネル及び緑色チャネルの両方で「高」閾値を超えるシグナルを表示するピクセルを、両方の処置が重複する領域とみなした。ピクセルを、緑色チャネルシグナル存在、赤色チャネルシグナル存在、並びに緑色及び赤色シグナル存在を重複する領域について定量化した。
治療的シグナル定量化を、実施例４（図１３Ａ～１３Ｂ）に記載されるプロセスに従って実施した。注入ゾーン内で処理された組織の重複を、画像内の各ピクセルに座標を割り当てることによって評価した。赤色チャネル及び緑色チャネルの両方で「高」閾値を超えるシグナルを表示するピクセルを、両方の処置が重複する領域とみなした。ピクセルを、緑色チャネルシグナル存在、赤色チャネルシグナル存在、並びに緑色及び赤色シグナル存在を重複する領域について定量化した。
【0165】
結果
被験物質の組織取り込み
肝臓の近赤外線画像を使用して、エンドホール及びＰＥＤＤデバイスによって送達された吸収されたＯＤＮ被験物質のシグナル強度及び分布を定量化した（デバイス／標的されたＯＤＮ当たりｎ＝４）。データを、ＭｉｎｉＴａｂソフトウェア（Ｍｉｎｉｔａｂ ＬＬＣ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）の２サンプルのスチューデントｔ検定を使用して分析した。両方のＯＤＮ物質は、ＰＥＤＤによって送達された場合に増加するシグナルの同じ傾向を示した（表３）。両方のＯＤＮ物品（デバイス当たりｎ＝８）のシグナル強度測定値をプールすることは、ＰＥＤＤによって送達された場合のシグナル強度の有意な増加を示した（図１．ｐ＝０．０３３）。
被験物質の組織取り込み
肝臓の近赤外線画像を使用して、エンドホール及びＰＥＤＤデバイスによって送達された吸収されたＯＤＮ被験物質のシグナル強度及び分布を定量化した（デバイス／標的されたＯＤＮ当たりｎ＝４）。データを、ＭｉｎｉＴａｂソフトウェア（Ｍｉｎｉｔａｂ ＬＬＣ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）の２サンプルのスチューデントｔ検定を使用して分析した。両方のＯＤＮ物質は、ＰＥＤＤによって送達された場合に増加するシグナルの同じ傾向を示した（表３）。両方のＯＤＮ物品（デバイス当たりｎ＝８）のシグナル強度測定値をプールすることは、ＰＥＤＤによって送達された場合のシグナル強度の有意な増加を示した（図１．ｐ＝０．０３３）。
【表3】
【0166】
図１９は、エンドホールカテーテル又はＰＥＤＤによる送達後に肝組織に保持される標識されたＯＤＮのシグナル強度を示す。
【0167】
加えて、エンドホールデバイス対ＰＥＤＤデバイスを用いて正常なブタ肝臓を処置する場合、組織カバレッジに有意差は、観察されなかった（表４）。
【表4】
【0168】
送達デバイスは、処置された組織の全量に有意な影響を与えなかったが、標識されたＯＤＮの分布は、注入間で完全に一致しなかった（表５）。いくつかの動物は、２つの注入間の分布パターンにおいて高度な相同性を示したが（図２０Ａ～２０Ｃ）、他のサンプルは、不均一分布を示した（図２１Ａ～２１Ｃ）。例えば、図２０Ａ～２０Ｃは、エンドホール及びＰＥＤＤデバイスを用いた注入からの高度なシグナル重複を示す組織を示す。（ａ）図２０Ａは、エンドホールカテーテルを使用して送達されるＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１の８００ｎｍの緑色チャネル分布を示す。（ｂ）図２０Ｂは、ＰＥＤＤによって送達されるＣｙ５．５－ＳＤ－１０１の７００ｎｍの赤色チャネル分布を示す。（ｃ）図２０Ｃは、注入デバイスとの分布の重複を示す複合画像を示す。図２１Ａ～２０Ｃは、エンドホール及びＰＥＤＤデバイスを用いた注入からの低度なシグナル重複を示す組織を示す。（ａ）図２１Ａは、エンドホールカテーテルを使用して送達されたＣｙ５．５－ＳＤ－１０１の７００ｎｍの赤色チャネル分布を示す。（ｂ）図２１Ｂは、ＰＥＤＤによって送達されるＩＲＤ８００ＣＷ－ＳＤ－１０１の８００ｎｍの緑色チャネル分布を示す。（ｃ）図２１Ｃは、注入デバイスとの分布の重複を示す複合画像を示す。図２２は、エンドホール平均処理組織量、ＰＥＤＤ平均処理組織量、及び重複した同時処理組織量を比較するベン図を示す。
【表5】
【0169】
圧力調節
ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスに装備された拡大可能なマイクロバルブは、局所的な血管圧力を調節するように作用する。一方向のバルブは、バルブの遠位に対してバルブの近位に存在するより高い圧力を有する局所的な圧力勾配を生成する。バルブの近位の平均圧力（ベースカテーテルを通じて測定）は、８７±４ｍｍＨｇであったが、遠位血管圧力は、５０±７ｍｍＨｇで有意に低く（ｐ＝０．０００１）、血管圧力が４３％低下したことを表した。エンドホールは、９３±６ｍｍＨｇとして測定された近位圧力及び８８±９ｍｍＨｇの遠位圧力では血管圧力に有意には影響しなかった。
ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスに装備された拡大可能なマイクロバルブは、局所的な血管圧力を調節するように作用する。一方向のバルブは、バルブの遠位に対してバルブの近位に存在するより高い圧力を有する局所的な圧力勾配を生成する。バルブの近位の平均圧力（ベースカテーテルを通じて測定）は、８７±４ｍｍＨｇであったが、遠位血管圧力は、５０±７ｍｍＨｇで有意に低く（ｐ＝０．０００１）、血管圧力が４３％低下したことを表した。エンドホールは、９３±６ｍｍＨｇとして測定された近位圧力及び８８±９ｍｍＨｇの遠位圧力では血管圧力に有意には影響しなかった。
【0170】
この研究では、エンドホール注入が最初に起こり、ＰＥＤＤ注入が２番目に起こるため、デバイスの順序は変更されなかったことに留意すべきである。血液中に存在する任意の標識されたＯＤＮが臓器中を循環することを可能にするために５分間を指定し、その後、ＰＥＤＤデバイスを第２の注入のために血管内に配置した。この手順は、通常、両方の注入が互いに１５分以内に実施されることになった。より長い循環期間が組織からいくつかの標識されたＳＤ－１０１を洗浄し得、その結果、エンドホール注入と比較してＰＥＤＤ注入のシグナル強度がより高くなり得る。しかしながら、この効果は、実験設計のウォッシュアウト期間に考慮された血管内からの材料の急速なウォッシュアウトよりも長い期間にわたって起こると予想され得る。以前の研究では、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスを使用して、同一の方法（ｎ＝４）でＣｙ５．５－ＳＤ－１０１を注入したが、臓器分析の前に血液を最低９０分間循環させた。９０分間の長い循環期間を経験した対象のシグナル強度は、この研究の対象が経験した５分間と比較して有意差はなかった（それぞれ、５１，５１１±２１２６７ ｌｕ ＳＥ対８５，２７２±１６，５２３（ｐ＝０．２６５））。
【0171】
結論
本研究は、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）カテーテルシステムを使用したＰＥＤＤ技術による注入と比較して、従来のエンドホールカテーテル注入を介した近赤外線で標識されたＯＤＮの送達を比較するように設計された。この目的は、シグナルの強度及びシグナルの量を、薬物保持及び組織分布の指標として定量化することであった。
本研究は、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）カテーテルシステムを使用したＰＥＤＤ技術による注入と比較して、従来のエンドホールカテーテル注入を介した近赤外線で標識されたＯＤＮの送達を比較するように設計された。この目的は、シグナルの強度及びシグナルの量を、薬物保持及び組織分布の指標として定量化することであった。
【0172】
ＰＥＤＤ／ＴｒｉＮａｖ（登録商標）を用いた薬物送達は、エンドホールデバイスと比較した場合、シグナル強度（薬物保持の指標）を有意に増加させた。これは、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）の配置によって誘発される血管系内の圧力及び流れの調節に関連し、結果として被験物質のより高い組織吸収をもたらし得る。エンドホールカテーテルとＴｒｉＮａｖ（登録商標）との間の組織カバレッジパターンも、同じ位置に注入されたにもかかわらず分岐した。血流は、局所圧の変化及び血管内の注入管腔の位置に対して感受性がある。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスに取り付けられたマイクロバルブは、血圧及び流量の局所的な低下を引き起こしながら、血管内のデバイスの注入管腔を自立させる傾向がある。ＴｒｉＮａｖ（登録商標）デバイスのこれらの物理的特性は、この研究で観察された血流の再分配及び関連する治療的堆積をもたらした可能性が高い。
【0173】
実施例６
この実施例では、ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１の肝臓を標的とした注入を、ステージ４ ＵＭを用いたＣＰＩ療法への奏効率を向上させ、ＵＭ転移性腫瘍、例えば肝転移（ＬＭ）を改善することを目的として投与した。この点で、ＳＤ－１０１は、全てのＵＭ ＬＭ病変の治療に使用することができる。更に、ＣＰＩ系注入と組み合わせたＳＤ－１０１の遠位効果を通じて、肝外病変も同様に免疫応答性の向上から利益を得ることができる。
この実施例では、ＴＬＲ９アゴニストＳＤ－１０１の肝臓を標的とした注入を、ステージ４ ＵＭを用いたＣＰＩ療法への奏効率を向上させ、ＵＭ転移性腫瘍、例えば肝転移（ＬＭ）を改善することを目的として投与した。この点で、ＳＤ－１０１は、全てのＵＭ ＬＭ病変の治療に使用することができる。更に、ＣＰＩ系注入と組み合わせたＳＤ－１０１の遠位効果を通じて、肝外病変も同様に免疫応答性の向上から利益を得ることができる。
【0174】
研究は、２つのフェーズ、すなわち、フェーズ１及び１ｂを有する。この点で、フェーズ１の主な目的は、ＳＤ－１０１単独のＰＥＤＤ／ＨＡＩの最大耐量（ＭＴＤ）又は最適用量、ニボルマブと組み合わせたＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量、並びにイピリムマブ及びニボルマブの両方と組み合わせたＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量の安全性を決定し、それを特定することである。更に、副次的な目的は、単剤又は二重剤のＣＰＩを研究のフェーズ１ｂの部分で利用すべきかどうかを判定することである。フェーズ１ｂに関して、主な目的は、全身性、すなわち、静脈内（ＩＶ）、免疫学的チェックポイント遮断と組み合わせた、ＰＥＤＤ／ＨＡＩ ＳＤ－１０１への固形腫瘍における奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１全奏効率（ＯＲＲ）及び１２カ月全成功率（ＯＳ）（共同主要評価項目）を評価することである。更に、副次的な目的は、（ｉ）免疫療法（ｉＲＥＣＩＳＴ）ＯＲＲ、ｍＲＥＣＩＳＴ ＯＲＲ、ＲＥＣＩＳＴ １．１肝特異的奏効率（ＨＲＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、全般的無増悪生存期間ＰＦＳ、及び臨床的利益率（完全奏効［ＣＲ］＋部分奏効［ＰＲ］＋ＳＤ）に対するＲＥＣＩＳＴの観点からの有効性を評価すること、並びに（ｉｉ）ＣＰＩと組み合わせたＳＤ－１０１の選択されたＭＴＤ又は最適用量の安全性／毒性を評価することである。更に、以下の予備的な目的もある：（ｉ）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１肝特異的無増悪生存期間（ＨＰＦＳ）を評価すること、（ｉｉ）全身ＩＶ ＣＰＩ注入を伴う又は伴わない、ＳＤ １０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩ後のＬＭにおける病理学的反応、及び画像反応スコアとの相関を評価すること、（ｉｉｉ）ＰＥＤＤ／ＨＡＩ後のＳＤ １０１の肝臓腫瘍及び血漿中濃度を評価すること、（ｉｖ）対を成したベースラインと治療中の肝腫瘍及び正常肝の生検を使用して、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、リンパ球、及びサイトカインプロファイルに対する治療の腫瘍内免疫学的影響を評価すること、（ｖ）ＣＴＣ、循環サイトカイン、及び他の免疫学的相関について連続採血を用いて、治療の末梢免疫薬力学的効果を評価すること、（ｖｉ）ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介した単剤ＳＤ １０１の未照射部位への効果を評価すること、（ｖｉｉ）経時的にＥＣＯＧ ＰＳにおけるベースラインからの変化を評価すること、（ｖｉｉｉ）ＥＯＲＴＣ－ＱＬＱ－Ｃ３０装置を用いて生活の質におけるベースラインからの変化を評価すること。
【0175】
本研究の全体的な設計は、図２３に見られ得る。本研究は、非盲検、多施設、及び非無作為化である。
【0176】
以下に更に詳述されるように、フェーズ１において、センチネルコホートを登録して、２用量の患者内用量漸増を伴うＰＥＤＤ／ＨＡＩを介して送達されるＳＤ－１０１の安全性を判定する。センチネルコホート患者は、試験のコホートのうちの１つに進行する前に、最初の注入は、第１の用量レベル（０．５ｍｇ）を含み、２回目の注入は、第２の用量レベル（２ｍｇ）を含み、毒性の評価を伴う２回の注入（２週間間隔）を受ける。センチネルコホートへの患者登録は、７日間ずれている。用量制限毒性（ＤＬＴ）が存在しない場合、各患者は、用量レベル１（すなわち、コホートＡ、８日目の用量）の第２の注入時点でコホートＡに移行することができる。センチネルコホートの完了後、ＳＤ－１０１の増量投与は、単独で（コホートＡ）、ニボルマブと一緒に（コホートＢ）、イピリムマブ及びニボルマブを組み合わせて（コホートＣ）投与される。コホートＢ及びＣは、ＳＤ－１０１にＣＰＩを添加するときの安全性を最適化するために、コホートＡからＭＴＤ又は最適用量を下回る１つの用量レベルを開始する。コホートＣは、コホートＢの完了後に開始する。標準的な３＋３用量漸増設計を採用して、ＭＴＤを判定する。
【0177】
ＰＥＤＤ／ＨＡＩに対するＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量、及びどのＣＰＩレジメンが許容されるかを決定した後、アプローチは、フェーズ１ｂに進ませる。フェーズ１ｂの患者は、単剤又は二重薬剤のチェックポイント遮断と組み合わせて、フェーズ１から選択されるＳＤ－１０１用量を受ける。フェーズ１ｂでは、ＳＤ－１０１と組み合わせた単一又は二重ＣＰＩ療法の選択は、フェーズ１のコホートＢ及びＣからの奏効率に加えて、安全性データを考慮することができる。ＳＤ－１０１は、２サイクルにわたって投与され、フェーズ１のコホートＡ、Ｂ、及びＣ、並びにフェーズ１ｂについて、サイクル毎に週１回で３回投与される。センチネルコホートでは、ＳＤ－１０１は、１ミニサイクルにわたって投与され、２週間間隔で送達された２回の注入で構成される。各患者に対する第１のＳＤ－１０１注入の後、一晩の入院中の観察又は入院が必要とされる。第１のＳＤ－１０１用量が良好に許容される場合、更なる一晩の観察又は入院は、その後のＳＤ－１０１注入のための治療医師の裁量に任される。その後の注入が外来ベースで行われる場合、臨床的に安定している場合は、患者は、注入後最低６時間、退院前に観察される。ＳＤ－１０１ ＰＥＤＤ／ＨＡＩに関連して、最初の注入後に入院治療を必要とする任意のグレード２の事象がある場合、患者は、その後の各ＳＤ－１０１注入後に一晩の観察又は入院のために隔離され得る。
【0178】
試験対象患者基準
一実施形態によれば、本研究に含めるためには、患者は以下の基準の全てを満たさなければならない：
１．スクリーニング時に１８歳以上の男女
２．研究を理解し、任意の研究の手順前に書面によるインフォームドコンセントを提供できる
３．肝臓のみ又は肝臓優性疾患を伴う組織学的又は細胞学的に確認された転移性ＵＭを有する。肝臓優性疾患は、以下のように定義される：
ａ．フェーズ１、コホートＡ－他の臓器と比較して疾患の最大部分を表す肝内転移であり、許容される肝外部位は、肺、皮膚、又は皮下組織、及び骨である。
ｂ．フェーズ１、コホートＢ及びＣ、並びにフェーズ１ｂ－他の臓器と比較して疾患の最大割合を表す肝内転移、又はＬＭの進行が患者の生命に対する多大なる脅威を表す場合。
４．登録前１４日以内に、事前に細胞傷害性化学療法、標的療法、又は外部放射線療法を受けていない
５．フェーズ１のみ：研究介入の最初の投与の３０日前までに、事前の免疫チェックポイント阻害による治療を受けたことがなく、進行中の免疫媒介性ＡＥグレード２以上を有しない
フェーズ１ｂのみ：事前の免疫学的チェックポイント阻害による治療を受けたことがない
６．永久的な塞栓材料を用いて以前に塞栓性ＨＡＩ療法を受けたことがない。注意：この研究のフェーズ１及びフェーズ１ｂの両方の一部で、オリゴ転移性肝疾患の手術切除又は高周波アブレーションをこれまでに許容されている。切除療法を受けた肝臓病変は、治療後に明らかに進行していない限り、標的病変とみなすべきではない。
７．悪性腫瘍が臨床的に有意ではなく、進行中の治療が必要ではなく、患者が臨床的に安定している場合を除き、以前の病歴又は他の同時の悪性腫瘍を有しない
８．ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１基準に従って肝臓に測定可能な疾患を有する
９．スクリーニング時のＥＣＯＧ ＰＳが０～１を有する
１０．治験責任医師によって推定されるように、スクリーニング時の平均余命が＞３カ月である
１１．≦４８０ｍｓｅｃのＱＴｃ間隔を有する
１２．以前のがん治療からの全ての関連する臨床的に有意な（治験責任医師の判断では）薬物関連毒性は、研究治療投与前に（グレード≦１又は患者の治療前レベルまで）解決されなければならない（グレード２の脱毛症及び置換療法で制御される内分泌障害は許可される）。
１３．以下によって証明されるような、スクリーニング時に適切な臓器機能を有している：
・血小板数＞１００，０００／μＬ
・ヘモグロビン≧８．０ｇ／ｄＬ
・白血球数（ＷＢＣ）＞２，０００／μＬ
・測定されたクレアチニンクリアランスが＞４０ｍＬ／分／１．７３ｍ２でない限り、血清クレアチニン≦２．０ｍｇ／ｄＬ
・総直接ビリルビン≦２．０×正常上限（ＵＬＮ）及びアルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ。文書化されたギルバート病の患者では、最大３．０ｍｇ／ｄＬの総ビリルビンが、許容される。
・ＡＬＴ及びＡＳＴ≦５×ＵＬＮ
・スクリーニング時のプロトロンビン時間／国際標準化比（ＩＮＲ）又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験結果≦１．５×ＵＬＮ（これは、治療的抗凝固療法を受けていない患者のみに適用される。治療的抗凝固療法を受けている患者は、研究介入の最初の投与前に少なくとも４週間安定した用量を投与しなければならない）
注意：治験責任医師が患者の臨床状態と互換性がないと判断した除外結果を有する実験室試験は、適格性のために１回繰り返すことができる。
１４．妊娠可能性のある女性は、スクリーニング時及び治験介入の最初の投与前に、非妊娠及び非授乳、又は閉経後でなければならず、血清ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）妊娠検査結果が陰性でなければならない。
・妊娠可能性のある女性は、避妊治療を受けていない男性パートナーとの性行為を控えることに同意しなければならないか、又は避妊治療を受けていない男性パートナーと性的に活発な場合は、スクリーニングから研究期間中、非常に効果的な避妊方法を使用することに同意しなければならず、研究介入の最終投与後１００日間そのような予防措置を継続することに同意しなければならない。
・妊娠可能性のある女性と性的に活発な避妊治療を受けていない男性は、効果的な避妊方法を使用し、研究期間中の１日目から研究介入の最終投与後３０日間、精子の提供を避けることに同意しなければならない。
一実施形態によれば、本研究に含めるためには、患者は以下の基準の全てを満たさなければならない：
１．スクリーニング時に１８歳以上の男女
２．研究を理解し、任意の研究の手順前に書面によるインフォームドコンセントを提供できる
３．肝臓のみ又は肝臓優性疾患を伴う組織学的又は細胞学的に確認された転移性ＵＭを有する。肝臓優性疾患は、以下のように定義される：
ａ．フェーズ１、コホートＡ－他の臓器と比較して疾患の最大部分を表す肝内転移であり、許容される肝外部位は、肺、皮膚、又は皮下組織、及び骨である。
ｂ．フェーズ１、コホートＢ及びＣ、並びにフェーズ１ｂ－他の臓器と比較して疾患の最大割合を表す肝内転移、又はＬＭの進行が患者の生命に対する多大なる脅威を表す場合。
４．登録前１４日以内に、事前に細胞傷害性化学療法、標的療法、又は外部放射線療法を受けていない
５．フェーズ１のみ：研究介入の最初の投与の３０日前までに、事前の免疫チェックポイント阻害による治療を受けたことがなく、進行中の免疫媒介性ＡＥグレード２以上を有しない
フェーズ１ｂのみ：事前の免疫学的チェックポイント阻害による治療を受けたことがない
６．永久的な塞栓材料を用いて以前に塞栓性ＨＡＩ療法を受けたことがない。注意：この研究のフェーズ１及びフェーズ１ｂの両方の一部で、オリゴ転移性肝疾患の手術切除又は高周波アブレーションをこれまでに許容されている。切除療法を受けた肝臓病変は、治療後に明らかに進行していない限り、標的病変とみなすべきではない。
７．悪性腫瘍が臨床的に有意ではなく、進行中の治療が必要ではなく、患者が臨床的に安定している場合を除き、以前の病歴又は他の同時の悪性腫瘍を有しない
８．ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１基準に従って肝臓に測定可能な疾患を有する
９．スクリーニング時のＥＣＯＧ ＰＳが０～１を有する
１０．治験責任医師によって推定されるように、スクリーニング時の平均余命が＞３カ月である
１１．≦４８０ｍｓｅｃのＱＴｃ間隔を有する
１２．以前のがん治療からの全ての関連する臨床的に有意な（治験責任医師の判断では）薬物関連毒性は、研究治療投与前に（グレード≦１又は患者の治療前レベルまで）解決されなければならない（グレード２の脱毛症及び置換療法で制御される内分泌障害は許可される）。
１３．以下によって証明されるような、スクリーニング時に適切な臓器機能を有している：
・血小板数＞１００，０００／μＬ
・ヘモグロビン≧８．０ｇ／ｄＬ
・白血球数（ＷＢＣ）＞２，０００／μＬ
・測定されたクレアチニンクリアランスが＞４０ｍＬ／分／１．７３ｍ２でない限り、血清クレアチニン≦２．０ｍｇ／ｄＬ
・総直接ビリルビン≦２．０×正常上限（ＵＬＮ）及びアルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ。文書化されたギルバート病の患者では、最大３．０ｍｇ／ｄＬの総ビリルビンが、許容される。
・ＡＬＴ及びＡＳＴ≦５×ＵＬＮ
・スクリーニング時のプロトロンビン時間／国際標準化比（ＩＮＲ）又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験結果≦１．５×ＵＬＮ（これは、治療的抗凝固療法を受けていない患者のみに適用される。治療的抗凝固療法を受けている患者は、研究介入の最初の投与前に少なくとも４週間安定した用量を投与しなければならない）
注意：治験責任医師が患者の臨床状態と互換性がないと判断した除外結果を有する実験室試験は、適格性のために１回繰り返すことができる。
１４．妊娠可能性のある女性は、スクリーニング時及び治験介入の最初の投与前に、非妊娠及び非授乳、又は閉経後でなければならず、血清ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）妊娠検査結果が陰性でなければならない。
・妊娠可能性のある女性は、避妊治療を受けていない男性パートナーとの性行為を控えることに同意しなければならないか、又は避妊治療を受けていない男性パートナーと性的に活発な場合は、スクリーニングから研究期間中、非常に効果的な避妊方法を使用することに同意しなければならず、研究介入の最終投与後１００日間そのような予防措置を継続することに同意しなければならない。
・妊娠可能性のある女性と性的に活発な避妊治療を受けていない男性は、効果的な避妊方法を使用し、研究期間中の１日目から研究介入の最終投与後３０日間、精子の提供を避けることに同意しなければならない。
【0179】
フェーズ１
別個のフェーズ１患者コホートは、以下の通りである。
別個のフェーズ１患者コホートは、以下の通りである。
【0180】
センチネルコホート－標準３＋３設計を使用したＳＤ－１０１単独療法のＰＥＤＤ／ＨＡＩの患者内用量漸増コホート、続いてＤＬＴの不在下でコホートＡへの移行（下記参照）：
・１回目の注入（センチネル１日目）：０．５ｍｇ（ｎ＝３～６）
・２回目の注入（センチネル１５日目）：２ｍｇ（ｎ＝３～６）
・１回目の注入（センチネル１日目）：０．５ｍｇ（ｎ＝３～６）
・２回目の注入（センチネル１５日目）：２ｍｇ（ｎ＝３～６）
【0181】
センチネルコホートへの患者登録は、７日間ずれている。新規患者は、前の患者におけるＳＤ－１０１の最初の注入が完了してから７日以内に登録されることはない。
【0182】
各患者の１回目の注入後、安全性評価委員会（ＳＲＣ）は、１１日目まで臨床データをレビューし、２回目の注入への用量漸増が起こり得るかどうかを判定するために会合することができる。各患者の２回目の注入の後、ＳＲＣは、１８日目まで臨床データをレビューするために会合することができ、ＤＬＴがない場合、ＳＲＣによる確認後、患者は、２ｍｇの用量レベルでコホートＡに移行する資格がある。安全性の解釈に関して意見の相違がある場合、独立したレビュアの決定が結果を決定することができる。
【0183】
コホートＡ－ＳＤ－１０１単剤療法のＰＥＤＤ／ＨＡＩの用量漸増コホート（２サイクル、１週間に１用量×３週間、１サイクル当たり）。標準３＋３設計に続いて任意の拡大群を使用して、ＳＤ－１０１単独の最大耐量（ＭＴＤ）又は最適用量を特定し、単剤療法の奏効率を推定する：
・用量レベル１：２ｍｇ（ｎ＝３～６）
・用量レベル２：４ｍｇ（ｎ＝３～６）
・用量レベル３：８ｍｇ（ｎ＝３～６）
・用量レベル１：２ｍｇ（ｎ＝３～６）
・用量レベル２：４ｍｇ（ｎ＝３～６）
・用量レベル３：８ｍｇ（ｎ＝３～６）
【0184】
各用量レベルでの最初の２人の患者の登録は、少なくとも４８時間ずらすことができる。更に、ＳＤ－１０１（２、４、及び８ｍｇ）の最大３用量レベルの調査を仮定すると、コホートＡでは、最低１９人及び最大２８人の患者を使用することができる。安全性及び反応データに基づいて、追加の増分用量レベル（４ｍｇの増分）を追加し得る。ＳＤ－１０１単剤療法ＭＴＤ又は最適用量の１０人の患者の拡大群は、コホートＢと同時に進行し得る。
【0185】
コホートＢ－ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩの標準３＋３設計用量再漸増コホート（２サイクル、１週間に１用量×３週間、１サイクル当たり）と静脈内（ＩＶ）ニボルマブ４８０ｍｇを４週間毎（Ｑ４Ｗ）に併用して、単剤ニボルマブとともにＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量を特定する：
・用量レベル１：この組み合わせで肝毒性が高まる可能性があるため、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたニボルマブの用量漸増は、コホートＡ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量を下回る１用量レベル（すなわち、ＭＴＤ－１又は最適用量－１）で開始する
・用量レベル２：コホートＡ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量で、又はＭＴＤ－１又は最適用量－１が許容されない場合、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたニボルマブは、ＭＴＤ－２又は最適用量－２に段階的に縮小することができる
・用量レベル１：この組み合わせで肝毒性が高まる可能性があるため、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたニボルマブの用量漸増は、コホートＡ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量を下回る１用量レベル（すなわち、ＭＴＤ－１又は最適用量－１）で開始する
・用量レベル２：コホートＡ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量で、又はＭＴＤ－１又は最適用量－１が許容されない場合、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたニボルマブは、ＭＴＤ－２又は最適用量－２に段階的に縮小することができる
【0186】
各用量レベルでの最初の２人の患者の登録は、少なくとも４８時間ずらすことができる。コホートＢでニボルマブと組み合わせたＳＤ－１０１の最大２用量レベルの調査を仮定すると、コホートＢでは、最低６人、最大１２人の患者が必要となり得る。ニボルマブと組み合わせたＳＤ－１０１を受けた最大１０人の患者の任意の拡大群は、コホートＣと同時に進行し得る。コホートＡ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量で、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせた単剤イピリムマブを試験するための１０人の患者の任意のコホートＢ１、又は、コホートＢでＭＴＤ－１又は最適用量－１が許容されない場合、コホートＢ１は、ＭＴＤ－２又は最適用量－２に段階的に縮小する。ニボルマブ及びイピリムマブは異なる作用機序（ＰＤ－１対ＣＴＬＡ－４を標的とする）を有することを考えると、ニボルマブの生物学的活性が低い場合、コホートＣに進む前に、単剤イピリムマブの研究が所望であり得る。
【0187】
コホートＣ－全身ＩＶイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇ及び全身ＩＶニボルマブ１ｍｇ／ｋｇを組み合わせたＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩの標準３＋３設計用量再漸増研究（２サイクル、１週間に１用量×３週間、１サイクル当たり）を３週間毎（Ｑ３Ｗ）にそれぞれ４回投与し、その後、ニボルマブ４８０ｍｇの全身ＩＶをＱ４Ｗ、二重薬剤ＣＰＩとともにＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量を特定する：
・用量レベル１：コホートＢ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量を下回る１用量レベルで、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたイピリムマブ及びニボルマブ
・用量レベル２：コホートＢ（ｎ＝３～６）からのＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量で、又はＭＴＤ－１又は最適用量－１が許容されない場合、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたイピリムマブ及びニボルマブは、ＭＴＤ－２又は最適用量－２に段階的に縮小することができる。
・用量レベル１：コホートＢ（ｎ＝３～６）からのＭＴＤ又は最適用量を下回る１用量レベルで、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたイピリムマブ及びニボルマブ
・用量レベル２：コホートＢ（ｎ＝３～６）からのＳＤ－１０１のＭＴＤ又は最適用量で、又はＭＴＤ－１又は最適用量－１が許容されない場合、ＳＤ－１０１のＰＥＤＤ／ＨＡＩと組み合わせたイピリムマブ及びニボルマブは、ＭＴＤ－２又は最適用量－２に段階的に縮小することができる。
【0188】
ＳＤ－１０１の最大２用量レベル（最初にＭＴＤ－１又は最適用量－１、次いでコホートＢからのＭＴＤ又は最適用量、又はＭＴＤ－１／最適用量－１が許容されなかった場合のＭＴＤ－２／最適用量－２）の調査を仮定すると、コホートＣでは最低６人、最大１２人の患者を必要とすることができる。各用量レベルでの最初の２人の患者の登録は、少なくとも４８時間ずらすことができる。フェーズ１ｂでＰＥＤＤ／ＨＡＩを介してＳＤ－１０１と組み合わせた単剤及び二重薬剤ＣＰＩの間で決定するために追加のデータが必要な場合、１０人の患者の任意の拡大コホートを登録してもよい。
【0189】
フェーズ１ｂ
フェーズ１ｂは、コホートＢ又はコホートＣの完了し、ＳＲＣによるデータのレビューが行われた後に、進めることができる。このフェーズは、ＳＤ－１０１用量及びＣＰＩレジメンに関する決定に従って実施される。フェーズ１ｂでは、ＳＤ－１０１ ＭＴＤ又は最適用量＋単剤又は二重薬剤ＣＰＩでの奏効割合が、更なる試験を正当化するのに十分高いかどうかを確認するために、２段階設計が使用される。
フェーズ１ｂは、コホートＢ又はコホートＣの完了し、ＳＲＣによるデータのレビューが行われた後に、進めることができる。このフェーズは、ＳＤ－１０１用量及びＣＰＩレジメンに関する決定に従って実施される。フェーズ１ｂでは、ＳＤ－１０１ ＭＴＤ又は最適用量＋単剤又は二重薬剤ＣＰＩでの奏効割合が、更なる試験を正当化するのに十分高いかどうかを確認するために、２段階設計が使用される。
【0190】
研究のフェーズ１ｂの部分は、最大４０人の参加者を企図する。総サンプル数が最も少ない２段階設計（Ｍｉｎｉｍａｘ設計と呼ばれる、Ｓｉｍｏｎ １９８９）が、使用される。第１段階では、２２人の患者が登録され、３人以上の奏効が観察された場合、フェーズ１ｂコホートは、有効性を更に評価するために合計４０人の患者に拡大される。このコホートへの登録は、第１段階で２人以下の奏効が観察された場合に停止される。奏効の総数が＞７である場合、治療は、更なる検査を必要とする。全奏効率（ＯＲＲ）を評価するために、５０人の患者を治療した後に中間分析を行うことができる。
【0191】
投与期間
ＳＤ－１０１投与期間（フェーズ１及びフェーズ１ｂの全ての参加者）：
センチネルコホート－最大７用量のＳＤ－１０１（コホートＡへの移行後に投与される用量を含む）
ＳＤ－１０１投与期間（フェーズ１及びフェーズ１ｂの全ての参加者）：
センチネルコホート－最大７用量のＳＤ－１０１（コホートＡへの移行後に投与される用量を含む）
【0192】
コホートＡ、Ｂ、Ｃ、及びフェーズ１ｂ－最大６用量（ＳＤ－１０１の最大２サイクル、１サイクル当たり３回の週１回の投与）。ＳＤ－１０１のより少ない用量又はサイクルは、毒性又は忍容性に基づいて投与され得る。ＳＤ－１０１の少なくとも１回のＰＥＤＤ／ＨＡＩ用量を受容している全ての患者は、評価可能であるとみなされる。
【0193】
ＣＰＩ投与期間
フェーズ１、センチネルコホート及びコホートＡ：該当なし
フェーズ１、センチネルコホート及びコホートＡ：該当なし
【0194】
フェーズ１、コホートＢ、及び任意の拡大コホート：ニボルマブ４８０ｍｇ Ｑ４Ｗで最大１２カ月
【0195】
フェーズ１、任意のコホートＢ１：全身ＩＶイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗで、４回投与
【0196】
フェーズ１、コホートＣ及び任意の拡大コホート：（ｉ）全身ＩＶニボルマブ１ｍｇ／ｋｇをＱ３Ｗで４回投与、次いで４８０ｍｇ／ｋｇをＱ４Ｗで最大１２カ月投与、及び（ｉｉ）全身ＩＶイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇをＱ３Ｗで４回投与。
【0197】
フェーズ１ｂ：フェーズ１のデータによって決定された最大１２カ月間のＣＰＩレジメン
【0198】
投与された介入
介入及び計画された用量レベルを、以下の表６に要約する。
介入及び計画された用量レベルを、以下の表６に要約する。
【表6】
【0199】
ＳＤ－１０１の注入
ＳＤ－１０１溶液は、肝動脈系を介して、任意にＴｒｉＮａｖ（登録商標）Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを使用して注入される。大腿骨又は上腕／橈骨神経アクセスが、使用され得る。治療的送達を妨げ得る肝臓の血管腫、シャント血管、又は他の血管病変は、治療する介入放射線専門医の裁量で塞栓される。ＳＤ－１０１注入手順のために、薬物を、５０ｍＬのシリンジ（治療用量）及び治療用フラッシュ（１０ｍＬ）に必要な量を含有する１００ｍＬのバイアルで、両方とも治療的濃度で調製及び送達し、以下の表７に記載されるように提供され得る。
ＳＤ－１０１溶液は、肝動脈系を介して、任意にＴｒｉＮａｖ（登録商標）Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを使用して注入される。大腿骨又は上腕／橈骨神経アクセスが、使用され得る。治療的送達を妨げ得る肝臓の血管腫、シャント血管、又は他の血管病変は、治療する介入放射線専門医の裁量で塞栓される。ＳＤ－１０１注入手順のために、薬物を、５０ｍＬのシリンジ（治療用量）及び治療用フラッシュ（１０ｍＬ）に必要な量を含有する１００ｍＬのバイアルで、両方とも治療的濃度で調製及び送達し、以下の表７に記載されるように提供され得る。
【表7】
【0200】
一実施形態によれば、ＳＤ－１０１治療セッションの手順ワークフローは、以下を含むことができる：（ｉ）大腿動脈に通じるＳｅｌｄｉｎｇｅｒ技術を介して患者の血管系にアクセスすること、（ｉｉ）圧力バッグを使用してヘパリン化生理食塩水フラッシュを準備すること（患者にとって禁忌でなければ）、（ｉｉｉ）ヘパリン化生理食塩水ラインをベースカテーテルに取り付け、処置中、継続的にフラッシュすること、（ｉｖ）侵襲性血圧トランスデューサ（ＩＢＰ）を患者モニタに接続すること、（ｖ）デバイスを標的治療位置に追跡すること、（ｖｉ）高圧チューブラインを取り付け、トランスデューサ及びラインをフラッシングし、気泡がないことを確認すること、（ｖｉｉ）ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムのハブに高圧チューブラインを取り付けること、（ｖｉｉｉ）圧力測定値を安定させ、平均遠位血管圧を記録すること、（ｉｘ）ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムから高圧チューブラインを外し、その後の圧力測定用にラインを滅菌領域内に維持すること、（ｘ）１０ｍＬのプライミングシリンジをストップコックに接続し、高圧チューブが治療薬で完全に満たされ、溶液がチューブの端から出るまでフラッシングすること、（ｘｉ）５０ｍＬのシリンジを高圧チューブに接続する、（ｘｉｉ）５０ｍＬのシリンジをシリンジポンプに入れること、（ｘｉｉｉ）注入前に、１０ｍＬのプライミングシリンジでストップコックの遠位端を流体がストップコックから出るまでフラッシングすること、（ｘｉｖ）ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムのハブをストップコックに接続し、ストップコックを５０ｍＬの治療用シリンジから注入する位置に回転させること、（ｘｖ）１０ｍＬのプライミングシリンジを１ｍＬの生理食塩水ボーラスシリンジに交換すること、（ｘｖｉ）５０ｍＬのシリンジから計算上の治療量（５０ｍＬ／部位数）を２ｍＬ／分の速さで２分間（例えば、４ｍＬの量）、シリンジポンプを用いて注入すること、（ｘｖｉｉ）１ｍＬのシリンジのストップコックを回転させ、１ｍＬの生理食塩水アリコートを２ｍＬ／秒（例えば、０．５秒の持続時間）の速度で、手動で注入し、これにより、肝動脈注入に陽圧を発生させ、腫瘍への治療薬の取り込みを促進すること、（ｘｖｉｉｉ）ボーラス注入後、ストップコックを回転させて、５０ｍＬのシリンジからの注入を継続すること、（ｘｉｘ）残りの計算された量の治療薬を２ｍＬ／分の速度で注入すること、（ｘｘ）所望の量の注入を完了した後（ポンプに表示）、更なる注入を停止し、高圧チューブをＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムから外すこと、（ｘｘｉ）次の注入に備え、登録した量をクリアすること、並びに（ｘｘｉｉ）残りの選択的注入についてステップ（ｉｖ）～（ｘｘｉ）を繰り返し実施すること。
【0201】
一実施形態において、投与される５０．０ｍＬの量は、肝臓のセグメント又はセクタ毎に割り当てられる。一実施形態において、セグメント又はセクタ毎の注入量の計算は、ＳＤ－１０１注入手順の前（前処置ＭＲＩ若しくはＣＴスキャンに基づいて）、又はＳＤ－１０１注入と同じセッション中（前述の血管造影に基づいて）に行われ得る。一実施形態において、５０ｍＬの治療用量は、以下のように割り当てることができる：右肝葉の標的血管への３×１０ｍＬ注入、左肝葉の標的血管への２×１０ｍＬ注入。更に、１０ｍＬのアリコートの分布は、測定可能な疾患及び標的血管直径の位置に基づいて調整され得る。別の実施形態において、セグメント又はセクタ毎の注入量は、以下のように計算される：（灌流肝体積／総肝体積）×４０＋（灌流セグメントの推定腫瘍体積／肝臓の推定総腫瘍体積）×１０）。一実施形態において、最初のＳＤ－１０１注入手順のために決定されたセグメント又はセクタ毎の計画されたＳＤ－１０１の量は、その後の各ＳＤ－１０１注入手順の計画された量として使用されるべきである。
【0202】
腫瘍反応評価
全ての患者は、肝臓及び他の部位における疾患の程度、並びに肝生検及び循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）、及び循環サイトカイン、及び他の免疫学的相関物のアッセイを評価するために、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）及び陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）による画像診断を受けることができる。腫瘍反応は、固形腫瘍における標準的な応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１基準を使用して放射線写真的に測定することができる。公式の奏効スコア（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）は、８４日目までに評価可能である。ＬＭ奏効は、腹部ＣＴ又はＭＲＩで評価され、一方、肝外病変は、全身ＰＥＴ／ＣＴスキャンで評価される。最終奏効スコアは、１６８日目に判定され、擬似進行が除外され、初期奏効が確認されることを保証することができる。その後、９０日毎に画像診断を行うことができる。Ｅｏｖｉｓｔ（登録商標）造影剤を用いたＭＲＩを使用した肝臓画像は、可能な限り評価に使用する必要がある
全ての患者は、肝臓及び他の部位における疾患の程度、並びに肝生検及び循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）、及び循環サイトカイン、及び他の免疫学的相関物のアッセイを評価するために、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）及び陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）による画像診断を受けることができる。腫瘍反応は、固形腫瘍における標準的な応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１基準を使用して放射線写真的に測定することができる。公式の奏効スコア（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）は、８４日目までに評価可能である。ＬＭ奏効は、腹部ＣＴ又はＭＲＩで評価され、一方、肝外病変は、全身ＰＥＴ／ＣＴスキャンで評価される。最終奏効スコアは、１６８日目に判定され、擬似進行が除外され、初期奏効が確認されることを保証することができる。その後、９０日毎に画像診断を行うことができる。Ｅｏｖｉｓｔ（登録商標）造影剤を用いたＭＲＩを使用した肝臓画像は、可能な限り評価に使用する必要がある
【0203】
４つの肝生検を行うことができる：
・フェーズ１のセンチネルコホート－ＳＤ－１０１の２ｍｇ注入前の１５日目に最初の生検を行い、１５日目に注入後に行う（腫瘍組織のＳＤ－１０１レベルについて）
・フェーズ１のコホートＡ、Ｂ、及びＣ、並びにフェーズ１ｂ：ベースライン生検は、ＳＤ－１０１の最初の注入前の１日目及び注入後の１日目（腫瘍組織におけるＳＤ－１０１レベルについて）、ＳＤ－１０１の２回目のサイクルの開始時（ＳＤ－１０１の４回目の注入前）、及び１００日目に得られる。・病理学的奏効は、腫瘍サンプル内の壊死及び線維化のスコアリングを伴う局所部位の病理学者によるレビューに基づいて評価される。
・フェーズ１のセンチネルコホート－ＳＤ－１０１の２ｍｇ注入前の１５日目に最初の生検を行い、１５日目に注入後に行う（腫瘍組織のＳＤ－１０１レベルについて）
・フェーズ１のコホートＡ、Ｂ、及びＣ、並びにフェーズ１ｂ：ベースライン生検は、ＳＤ－１０１の最初の注入前の１日目及び注入後の１日目（腫瘍組織におけるＳＤ－１０１レベルについて）、ＳＤ－１０１の２回目のサイクルの開始時（ＳＤ－１０１の４回目の注入前）、及び１００日目に得られる。・病理学的奏効は、腫瘍サンプル内の壊死及び線維化のスコアリングを伴う局所部位の病理学者によるレビューに基づいて評価される。
【0204】
薬物動態
血液サンプルを採取して、ＰＥＤＤ／ＨＡＩ後のＳＤ－１０１全身曝露を特徴付けることができる。ニボルマブ又はイピリムマブ濃度については、サンプリング又は試験を行うことはできない。
血液サンプルを採取して、ＰＥＤＤ／ＨＡＩ後のＳＤ－１０１全身曝露を特徴付けることができる。ニボルマブ又はイピリムマブ濃度については、サンプリング又は試験を行うことはできない。
【0205】
ＳＤ－１０１の腫瘍レベルは、腫瘍反応評価のために得られたＬＭの注入後の生検標本、及びセンチネルコホートについて１５日目及びコホートＡ、Ｂ、及びＣについて１日目の追加の注入後の生検から測定することができる。
【0206】
薬物力学
血液サンプルは、ＣＴＣ、循環サイトカイン、並びにＩＦＮ－α及びＩＦＮ－γ関連遺伝子シグネチャを含む他の免疫学的相関物の測定のために収集することができ、これらは、このクラスの治療薬についての薬物動態評価よりも有益であり得る。
血液サンプルは、ＣＴＣ、循環サイトカイン、並びにＩＦＮ－α及びＩＦＮ－γ関連遺伝子シグネチャを含む他の免疫学的相関物の測定のために収集することができ、これらは、このクラスの治療薬についての薬物動態評価よりも有益であり得る。
【0207】
安全性
安全性評価には、有害事象（ＡＥ）、臨床検査室検査、バイタルサイン、身体検査、心電図（ＥＣＧ）が含まれる。
安全性評価には、有害事象（ＡＥ）、臨床検査室検査、バイタルサイン、身体検査、心電図（ＥＣＧ）が含まれる。
【0208】
以下は、ＳＤ－１０１サイクル中、又はサイクル１の最後のＳＤ－１０１投与後４週間以内に観察された場合にＤＬＴとみなされ、研究介入（ＳＤ－１０１若しくはＣＰＩ療法）及び／又はＰＥＤＤデバイスに起因するとみなされる：
・グレード４以上のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
・７日以内にグレード２以下に回復しない
・国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）に基づく
・７日以内にグレード２以下に回復しないＮＣＩ ＣＴＣＡＥ当たりのグレード３ ＣＲＳ
・ＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づく自己免疫ＡＥ≧グレード３
・ＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づくアレルギー反応ＡＥ≧グレード３
・７日以内に≦グレード２に回復しないグレード４の血液学的ＡＥ
・あらゆる臓器系におけるＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づく任意のグレード４のＡＥ
・グレード４以上のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
・７日以内にグレード２以下に回復しない
・国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）に基づく
・７日以内にグレード２以下に回復しないＮＣＩ ＣＴＣＡＥ当たりのグレード３ ＣＲＳ
・ＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づく自己免疫ＡＥ≧グレード３
・ＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づくアレルギー反応ＡＥ≧グレード３
・７日以内に≦グレード２に回復しないグレード４の血液学的ＡＥ
・あらゆる臓器系におけるＮＣＩ ＣＴＣＡＥに基づく任意のグレード４のＡＥ
【0209】
ＳＤ－１０１のいずれかのサイクル中にＤＬＴを発症した患者は、特定のＤＬＴを考慮した代替アプローチ（例えば、用量修正を伴い臨床的に示されるように）が合理的に安全であると予想されるという十分な正当性が提供されない限り、研究介入を永久的に中止することができる。患者は、臨床診療に従って治療され、毒性の解消を監視され得る。
【0210】
ＳＤ－１０１及び／又はＣＰＩ療法は、重度又は生命を脅かす注入関連の反応に対して永久に中止することができる。患者がグレード３以上の免疫媒介反応を有する場合、ＳＤ－１０１及び／又はＣＰＩ療法の投与中断、遅延、又は中止が必要である。異常な肝臓検査のためのＳＤ－１０１及び／又はＣＰＩ療法の中止は、患者が以下に概説される状態のうちの１つを満たす場合、又は治験責任医師が患者の最善の利益であると考えている場合、プロトコルに規定された停止規則を満たさない異常な肝臓化学物質の存在下で必要とされる。
・患者は、臨床的に黄疸がある
・患者は、凝固障害の証拠を有する
・患者は、腹水又は静脈瘤出血を含むがこれらに限定されない門脈圧高進症の臨床的証拠を有する
・患者は、臨床的に黄疸がある
・患者は、凝固障害の証拠を有する
・患者は、腹水又は静脈瘤出血を含むがこれらに限定されない門脈圧高進症の臨床的証拠を有する
【0211】
全ての患者は、治療開始後少なくとも１年間、安全性のためにこの研究にフォローアップすることができる。本試験に登録された全ての患者は、別の長期フォローアッププロトコルで１年を超える全生存期間（ＯＳ）を評価することができる。
【0212】
疾患の進行（例えば、毒性、同意の撤回）以外の理由で研究治療を中止した患者は、患者が死亡するまで、疾患の進行（肝内又は肝外）を経験するまで、又は更なる全身がん治療を開始するまでのいずれか最初に発生した方で、９０日毎に予定されている腫瘍評価を継続して受けることができる。
【0213】
レスキュー薬及び治療
研究施設は、局所的に入手される免疫調節レスキュー薬を提供する。以下のレスキュー薬を使用することができる：
医薬
１．ＣＲＳのために６０分間にわたって、ＩＬ６受容体抗体トシリズマブ４～８ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶは、臨床的に示されるように繰り返すことができる。
２．ＣＲＳグレードが２超、又は神経機能障害においては、メチルプレドニゾロン２ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶボーラス、続いて６～１２時間毎に０．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ。最初の用量は、治験責任医師又は治験実施者と相談することなく投与することができるが、その後の用量は、治験責任医師又は治験実施者と相談した後に投与する必要がある。
３．１～２用量の抗ＴＮＦα剤（インフリキシマブ又はエタネルセプト）を検討する。効用は不明であるが、ＴＮＦαは急激に上昇する可能性があるため、疾患プロセスの初期に検討する価値はある。
４．２用量においては、エタネルセプト２５ｍｇのＳＣを週に２回、３～４日間隔で投与する（０．４ｍｇ／ｋｇを週に２回、１用量当たり最大２５ｍｇ
５．インフリキシマブ用量１０ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶを週１回×２用量
介入
１．内視鏡的胆管造影及びステント留置
２．経皮的胆管造影及びステント留置
研究施設は、局所的に入手される免疫調節レスキュー薬を提供する。以下のレスキュー薬を使用することができる：
医薬
１．ＣＲＳのために６０分間にわたって、ＩＬ６受容体抗体トシリズマブ４～８ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶは、臨床的に示されるように繰り返すことができる。
２．ＣＲＳグレードが２超、又は神経機能障害においては、メチルプレドニゾロン２ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶボーラス、続いて６～１２時間毎に０．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ。最初の用量は、治験責任医師又は治験実施者と相談することなく投与することができるが、その後の用量は、治験責任医師又は治験実施者と相談した後に投与する必要がある。
３．１～２用量の抗ＴＮＦα剤（インフリキシマブ又はエタネルセプト）を検討する。効用は不明であるが、ＴＮＦαは急激に上昇する可能性があるため、疾患プロセスの初期に検討する価値はある。
４．２用量においては、エタネルセプト２５ｍｇのＳＣを週に２回、３～４日間隔で投与する（０．４ｍｇ／ｋｇを週に２回、１用量当たり最大２５ｍｇ
５．インフリキシマブ用量１０ｍｇ／ｋｇの全身ＩＶを週１回×２用量
介入
１．内視鏡的胆管造影及びステント留置
２．経皮的胆管造影及びステント留置
【0214】
研究中はいつでもレスキュー薬の使用が許容可能であるが、可能であれば、臨床的に適切な場合は、研究介入の投与後少なくとも６時間はレスキュー医薬の使用を延期する必要がある。レスキュー医薬の投与の日時、並びにレスキュー医薬の名称及び投薬レジメンを記録しなければならない。
【0215】
明らかに疾患の進行に起因する有害事象、治験薬とは無関係の有害事象、又は治験の適格患者集団に予想される有害事象は、ＤＬＴとはみなされない。
【0216】
サイトカイン放出症候群の評価
治験責任医師又は治験実施者は、重度のＣＲＳの存在について各患者を評価する。ＣＲＳグレーディングは、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ５．０に基づいて決定する。
治験責任医師又は治験実施者は、重度のＣＲＳの存在について各患者を評価する。ＣＲＳグレーディングは、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ５．０に基づいて決定する。
【0217】
画像
疾患の程度は、センチネルコホート、コホートＡ、コホートＢ、及びコホートＣの時点で放射線学的に測定する。スクリーニング評価には、腹部及び骨盤のＭＲＩ（禁忌でない限り、経口／全身ＩＶ Ｅｏｖｉｓｔ造影剤を用いる）及び脳スキャン（全身ＩＶ造影剤又はＭＲＩを用いるＣＴ）を含める必要がある。腹部及び骨盤のＭＲＩに加えて、胸部のスパイラルＣＴスキャンを取得する必要がある。ＭＲＩが医学的に禁忌である場合、又は医師の裁量である場合、胸部、腹部、及び骨盤のＣＴスキャンは、三相全身ＩＶ造影剤を使用して実施され得る。ＰＥＴ／ＣＴスキャンを実施する場合、研究のＣＴ部分は、全造影ＣＴスキャンの標準と一致していなければならない。Ｅｏｖｉｓｔ造影剤を用いたＭＲＩを用いた肝臓画像は、肝臓外の疾患の評価のためのＰＥＴ／ＣＴとともに、可能な限りＬＭの評価に使用する必要がある。スクリーニング時に使用されたのと同じ画像方法が、研究全体を通して使用する必要がある。
疾患の程度は、センチネルコホート、コホートＡ、コホートＢ、及びコホートＣの時点で放射線学的に測定する。スクリーニング評価には、腹部及び骨盤のＭＲＩ（禁忌でない限り、経口／全身ＩＶ Ｅｏｖｉｓｔ造影剤を用いる）及び脳スキャン（全身ＩＶ造影剤又はＭＲＩを用いるＣＴ）を含める必要がある。腹部及び骨盤のＭＲＩに加えて、胸部のスパイラルＣＴスキャンを取得する必要がある。ＭＲＩが医学的に禁忌である場合、又は医師の裁量である場合、胸部、腹部、及び骨盤のＣＴスキャンは、三相全身ＩＶ造影剤を使用して実施され得る。ＰＥＴ／ＣＴスキャンを実施する場合、研究のＣＴ部分は、全造影ＣＴスキャンの標準と一致していなければならない。Ｅｏｖｉｓｔ造影剤を用いたＭＲＩを用いた肝臓画像は、肝臓外の疾患の評価のためのＰＥＴ／ＣＴとともに、可能な限りＬＭの評価に使用する必要がある。スクリーニング時に使用されたのと同じ画像方法が、研究全体を通して使用する必要がある。
【0218】
任意の評価可能又は測定可能な疾患は、スクリーニング時に文書化し、その後の各腫瘍評価時に再評価する必要がある。測定可能な疾患を有する患者については、奏効は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って評価される。局所画像の読み出しは、フェーズ１中の奏効評価に利用される。奏効評価のための独立した中央レビュー（ＩＣＲ）は、フェーズ１ｂの間に実施することができる。
【0219】
治験責任医師の裁量により、ＰＤが疑われる場合はいつでも画像化が実施され得る。加えて、ｍＲＥＣＩＳＴ及びｉＲＥＣＩＳＴ評価は、副次的エンドポイントデータ収集のために実施されるが、公式の奏効スコアには組み込まれない。
【0220】
ＥＣＯＧパフォーマンスステータス
ＥＣＯＧ ＰＳスケールを使用して、疾患が患者の日常生活活動及び自分自身の世話をする能力にどのように影響しているかを評価する。各指定された時点で、資格を有する施設職員が以下の尺度に従って患者を評価する：
０．十分に活動的、制限なしで全ての病気にかかる前の動作を行うことができる
１．身体的に激しい運動が制限されているが、歩行が可能で、軽い又は座って行う性質の作業（例えば、軽い家事、事務作業）を行うことができる
２．歩行が可能であり、全てのセルフケアが可能であるが、いかなる作業活動も行うことができない。起床時間の約５０％以上
３．限られたセルフケアのみ可能、起床時間の５０％以上がベッド又は椅子に限られている
４．完全に身体が不自由で、いかなるセルフケアも行うことができず、ベッド又は椅子に完全に限られている
５．死
ＥＣＯＧ ＰＳスケールを使用して、疾患が患者の日常生活活動及び自分自身の世話をする能力にどのように影響しているかを評価する。各指定された時点で、資格を有する施設職員が以下の尺度に従って患者を評価する：
０．十分に活動的、制限なしで全ての病気にかかる前の動作を行うことができる
１．身体的に激しい運動が制限されているが、歩行が可能で、軽い又は座って行う性質の作業（例えば、軽い家事、事務作業）を行うことができる
２．歩行が可能であり、全てのセルフケアが可能であるが、いかなる作業活動も行うことができない。起床時間の約５０％以上
３．限られたセルフケアのみ可能、起床時間の５０％以上がベッド又は椅子に限られている
４．完全に身体が不自由で、いかなるセルフケアも行うことができず、ベッド又は椅子に完全に限られている
５．死
【0221】
変更、すなわち悪化は、ＡＥに対する非指示的な質問中に報告されない限り、ＡＥとして記録されない。
【0222】
ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１の定義
測定可能な疾患－少なくとも１つの測定可能な病変の存在。測定可能な疾患が孤立性病変に限定されている場合、その腫瘍性の性質は、細胞学／組織学によって確認されるべきである。
測定可能な疾患－少なくとも１つの測定可能な病変の存在。測定可能な疾患が孤立性病変に限定されている場合、その腫瘍性の性質は、細胞学／組織学によって確認されるべきである。
【0223】
測定可能な病変－最長直径≧１０ｍｍ（ＣＴスキャン切片厚≦５ｍｍ）で少なくとも１次元で正確に測定することができる病変。
【0224】
測定不可能な病変－小さな病変（最長直径＜１０ｍｍ）を含む全ての他の病変、並びに真に測定不可能な病変（軟膜疾患、腹水、胸膜／心外膜液、炎症性乳房疾患、皮膚又は肺のリンパ管関与、再現性画像技術によって測定できない腹部腫瘤など）。
【0225】
ベースライン文書化
１臓器当たり最大２病変、合計５病変までの全ての測定可能な病変を標的病変として特定し、ベースラインで記録及び測定する必要がある。
１臓器当たり最大２病変、合計５病変までの全ての測定可能な病変を標的病変として特定し、ベースラインで記録及び測定する必要がある。
【0226】
標的病変は、そのサイズ（最長直径の病変）と、一貫した画像技術による正確な繰り返し測定への適合性に基づいて選択する必要がある。
【0227】
全ての標的病変（非結節性）の最長直径（ＬＤ）の合計を計算し、ベースライン合計ＬＤとして報告する。ベースライン合計ＬＤは、疾患の測定可能な寸法における客観的腫瘍応答を特徴付けるための参照として使用される。
【0228】
全ての他の病変（又は疾患部位）は、非標的病変として特定されるべきであり、ベースラインでも記録されるべきである。これらの病変の測定は、必要とされないが、それぞれの有無は、フォローアップ中に留意する必要がある。
【0229】
標的病変の評価
完全奏効（ＣＲ）：全ての標的病変の消失
完全奏効（ＣＲ）：全ての標的病変の消失
【0230】
部分奏効（ＰＲ）：ベースライン合計ＬＤを基準として、標的病変のＬＤの合計が少なくとも３０％減少する。
【0231】
進行性疾患（ＰＤ）：治療開始以降の記録された最小の合計ＬＤ又は１つ以上の新たな病変の出現を基準として、標的病変のＬＤの合計の少なくとも２０％増加。この合計は、５ｍｍで絶対的な増加を示す必要がある。
【0232】
安定疾患（ＳＤ）：治療開始以降の最小の合計ＬＤを基準として、ＰＲを認めるのに十分な縮小も、ＰＤを認めるのに十分な増加もない。
【0233】
非標的病変の評価
完全奏効（ＣＲ）：全ての非標的病変の消失
完全奏効（ＣＲ）：全ての非標的病変の消失
【0234】
非ＣＲ／非ＰＤ：１つ以上の非標的病変の持続性
【0235】
進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明確な進行、及び／又は１つ以上の新たな病変の出現。
【0236】
ＲＥＣＩＳＴ １．１における完全奏効、部分奏効、及び安定疾患の観点からの全生存率は、以下に従って評価される：
【表8】
【0237】
全奏効期間
全奏効期間は、ＣＲ又はＰＲについて測定基準が満たされる時間（いずれか最初に記録される）から、再発又はＰＤが客観的に文書化された最初の日まで（治療開始以降記録された最小の測定値をＰＤの基準として）測定される。全体的なＣＲ期間は、ＣＲの測定基準が最初に満たされた時点から、ＰＤが客観的に文書化された最初の日まで測定することができる。ＳＤ期間：安定疾患は、ベースライン測定値を含む治療開始以降記録された最小の測定値の合計を基準として、治療の開始から進行の基準が満たされるまで測定される。
全奏効期間は、ＣＲ又はＰＲについて測定基準が満たされる時間（いずれか最初に記録される）から、再発又はＰＤが客観的に文書化された最初の日まで（治療開始以降記録された最小の測定値をＰＤの基準として）測定される。全体的なＣＲ期間は、ＣＲの測定基準が最初に満たされた時点から、ＰＤが客観的に文書化された最初の日まで測定することができる。ＳＤ期間：安定疾患は、ベースライン測定値を含む治療開始以降記録された最小の測定値の合計を基準として、治療の開始から進行の基準が満たされるまで測定される。
【0238】
全生存率
全ての患者について、ＯＳは、登録日から死亡時まで計算することができる。最終有効性分析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、最後に生存が確認された日で打ち切られる。
全ての患者について、ＯＳは、登録日から死亡時まで計算することができる。最終有効性分析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、最後に生存が確認された日で打ち切られる。
【0239】
無増悪生存率
全ての患者について、ＰＦＳは、登録日から再発（又は疾患発症の他の明確な指標）を文書化したＣＴスキャンの時点、又は死亡日（いずれか早い方）まで計算される。再発が文書化されておらず、最終有効性解析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、再発がないことを文書化する最後の放射線学的証拠の日で打ち切られる。
全ての患者について、ＰＦＳは、登録日から再発（又は疾患発症の他の明確な指標）を文書化したＣＴスキャンの時点、又は死亡日（いずれか早い方）まで計算される。再発が文書化されておらず、最終有効性解析のためのデータカットオフ前に生存している患者、又は研究終了前に脱落した患者は、再発がないことを文書化する最後の放射線学的証拠の日で打ち切られる。
【0240】
修飾ＲＥＣＩＳＴ（ｍＲＥＣＩＳＴ）
肝細胞がんのｍＲＥＣＩＳＴの定義は、以下の通りである：
肝細胞がんのｍＲＥＣＩＳＴの定義は、以下の通りである：
【0241】
完全奏効（ＣＲ）＝全ての標的病変における任意の腫瘍内動脈増強の消失
【0242】
部分奏効（ＰＲ）＝標的病変の直径のベースライン合計を基準として、生存可能な（動脈相における増強）標的病変の直径の合計が少なくとも３０％減少する
【0243】
安定疾患（ＳＤ）＝ＰＲ又は進行性疾患のいずれにも該当しない症例
【0244】
進行性疾患（ＰＤ）＝治療開始以降記録された生存可能な（増強する）標的病変の直径の最小合計を基準として、生存可能な（増強する）標的病変の直径の合計が少なくとも２０％増加する
【0245】
ｍＲＥＣＩＳＴにおける完全奏効、部分奏効、及び安定疾患の観点からの全生存率を、以下に従って評価する：
【表9】
【0246】
免疫ベースの療法のためのＲＥＣＩＳＴ １．１（ｉＲＥＣＩＳＴ）
奏効はまた、ｉＲＥＣＩＳＴによっても評価される。要言すれば、ＲＥＣＩＳＴとｉＲＥＣＩＳＴの主な違いは、Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ ２０１７で以下のように説明されている：「客観的な腫瘍反応を決定するために使用される原則は、ＲＥＣＩＳＴ １．１とほぼ変わらないが、ｉＲＥＣＩＳＴの大きな変更は、腫瘍縮小による次の評価でＲＥＣＩＳＴ １．１の進行が続く場合に「バーをリセットする」という概念である。ｉＲＥＣＩＳＴは、ＲＥＣＩＳＴ １．１の原則に基づいてｉＵＰＤを定義するが、ｉＵＰＤには確認が必要である。確認は、進行が最初に特定された病変カテゴリ（すなわち、標的、非標的疾患）のサイズ（又は新たな病変の数）の更なる増加、又はＲＥＣＩＳＴ １．１進行基準をこれまでに満たさなかった病変カテゴリ（ＲＥＣＩＳＴ １．１によって定義される）の進行のいずれかを観察することに基づいている。しかしながら、上記のように進行が確認されないが、その代わりにｉＣＲ、ｉＰＲ、又はｉＳＤの基準を満たす腫瘍縮小（ベースラインと比較して）が確認された場合、バーはリセットされ、ｉＵＰＤは再び発生しなければならず（最低値と比較して）、次いでｉＣＰＤが割り当てられるための次の評価で（更なる成長によって）確認されなければならない。ｉＵＰＤからの腫瘍サイズ／範囲の変化がない場合、時点の応答は、再びｉＵＰＤとなり得る。このアプローチにより、擬似進行後に生じる遅延応答などの非定型応答を特定し、更に理解し、より良く特徴付けることができる。」
奏効はまた、ｉＲＥＣＩＳＴによっても評価される。要言すれば、ＲＥＣＩＳＴとｉＲＥＣＩＳＴの主な違いは、Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ ２０１７で以下のように説明されている：「客観的な腫瘍反応を決定するために使用される原則は、ＲＥＣＩＳＴ １．１とほぼ変わらないが、ｉＲＥＣＩＳＴの大きな変更は、腫瘍縮小による次の評価でＲＥＣＩＳＴ １．１の進行が続く場合に「バーをリセットする」という概念である。ｉＲＥＣＩＳＴは、ＲＥＣＩＳＴ １．１の原則に基づいてｉＵＰＤを定義するが、ｉＵＰＤには確認が必要である。確認は、進行が最初に特定された病変カテゴリ（すなわち、標的、非標的疾患）のサイズ（又は新たな病変の数）の更なる増加、又はＲＥＣＩＳＴ １．１進行基準をこれまでに満たさなかった病変カテゴリ（ＲＥＣＩＳＴ １．１によって定義される）の進行のいずれかを観察することに基づいている。しかしながら、上記のように進行が確認されないが、その代わりにｉＣＲ、ｉＰＲ、又はｉＳＤの基準を満たす腫瘍縮小（ベースラインと比較して）が確認された場合、バーはリセットされ、ｉＵＰＤは再び発生しなければならず（最低値と比較して）、次いでｉＣＰＤが割り当てられるための次の評価で（更なる成長によって）確認されなければならない。ｉＵＰＤからの腫瘍サイズ／範囲の変化がない場合、時点の応答は、再びｉＵＰＤとなり得る。このアプローチにより、擬似進行後に生じる遅延応答などの非定型応答を特定し、更に理解し、より良く特徴付けることができる。」
【表10A】
【表10B】
【0247】
この実施例では、ＳＤ－１０１を、ＨＡＩ／ＰＥＤＤを介して２人のヒト患者に投与した。ＳＤ－１０１を、ＴｒｉＮａｖ（登録商標）注入システムを用いてヒト患者に投与した。この点に関して、第１の患者に、０．５ｍｇのＳＤ－１０１の用量を投与し、第２の患者に、２．０ｍｇのＳＤ－１０１の用量を投与した。患者からの生物検体を、以下のように得た：
・１日目－注入前のサイトカイン、ＰＫ、ＡＤＡ、免疫学的相関物
・１日目－注入後のＰＫ（１５、３０分、１、２、４、６時間）
・８日目－サイトカイン、免疫学的相関物
・１５日目－注入前のサイトカイン、ＰＫ、免疫学的相関物
・１５日目－注入後のＰＫ（１５、３０分、１、２、４、６時間）
・１５日目－注入前の肝生検
・１５日目－注入後の肝生検
・１日目－注入前のサイトカイン、ＰＫ、ＡＤＡ、免疫学的相関物
・１日目－注入後のＰＫ（１５、３０分、１、２、４、６時間）
・８日目－サイトカイン、免疫学的相関物
・１５日目－注入前のサイトカイン、ＰＫ、免疫学的相関物
・１５日目－注入後のＰＫ（１５、３０分、１、２、４、６時間）
・１５日目－注入前の肝生検
・１５日目－注入後の肝生検
【0248】
ＴＳ－ＰＥＲＩＯ－０１治療の概要
患者１０１－００１は、センチネルコホート（０．５ｍｇ及び２ｍｇのＳＤ－１０１用量）を完了し、ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介してＳＤ－１０１を投与された最初の患者となった。加えて、ＳＤ－１０１の注入前後の肝生検を、センチネル１５日目に実施した。サイトカインを含む相関の血液検体、ＭＤＳＣレベルを含む免疫学的相関物、ＰＫ、及びＡＤＡ検体は、複数の時点で収集されている。この患者は、安全性審査委員会により、２ｍｇの用量でコホートＡに移行するための許可を得ている。患者は、ＳＤ－１０１ ＰＥＤＤ ＨＡＩに関連するいかなるＳＡＥも経験していない。
患者１０１－００１は、センチネルコホート（０．５ｍｇ及び２ｍｇのＳＤ－１０１用量）を完了し、ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介してＳＤ－１０１を投与された最初の患者となった。加えて、ＳＤ－１０１の注入前後の肝生検を、センチネル１５日目に実施した。サイトカインを含む相関の血液検体、ＭＤＳＣレベルを含む免疫学的相関物、ＰＫ、及びＡＤＡ検体は、複数の時点で収集されている。この患者は、安全性審査委員会により、２ｍｇの用量でコホートＡに移行するための許可を得ている。患者は、ＳＤ－１０１ ＰＥＤＤ ＨＡＩに関連するいかなるＳＡＥも経験していない。
【0249】
患者１０１－００２は、センチネルコホート（ＰＥＤＤ／ＨＡＩを介した０．５ｍｇ及び２ｍｇのＳＤ－１０１用量）を完了している。加えて、ＳＤ－１０１の注入前後の肝生検を、センチネル１５日目に実施した。サイトカインを含む相関の血液検体、ＭＤＳＣレベルを含む免疫学的相関物、ＰＫ、及びＡＤＡ検体は、複数の時点で収集されている。安全性審査委員会会議は、患者が２ｍｇの用量でコホートＡに移行できるかどうかを決定するために予定されている。患者は、ＳＤ－１０１に関連するいかなるＳＡＥも経験していない。
【0250】
上記は、本開示の原理を単に例示するに過ぎない。本明細書の教示を考慮して、説明される実施形態に対する様々な修正及び変更は、当業者には明白であろう。したがって、当業者は、本明細書に明示的には示され又は説明されていないが、本開示の原理を具現化し、したがって本開示の精神及び範囲内であり得る多数のシステム、配置、及び手順を考案することができることが理解されるであろう。様々な異なる例示的な実施形態は、当業者によって理解されるべきであるように、互いに一緒に、並びにそれと互換的に使用され得る。加えて、本明細書を含む本開示で使用される特定の用語は、例えば、データ及び情報を含むがこれらに限定されない、特定の例において同義的に使用され得る。本明細書では、これらの単語、及び／又は互いに同義であり得る他の単語は、本明細書で同義的に使用され得るが、そのような単語が同義的に使用されないように意図され得る場合があり得ることを理解されたい。更に、先行技術の知識が上記の本明細書において参照により明示的に組み込まれていない範囲において、その全体が本明細書に明示的に組み込まれる。参照した全ての刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図10A】
【図10B】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図14A】
【図14B】
【図15A】
【図15B】
【図16A】
【図16B】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19】
【図20A】
【図20B】
【図20C】
【図21A】
【図21B】
【図21C】
【図22】
【図23】
【配列表】
【国際調査報告】