特表 2023-543248 ヒト造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-13

(54)【発明の名称】ヒト造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0789 20100101AFI20231005BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/44 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/192 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/381 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/475 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/165 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/4184 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/166 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 31/4709 20060101ALI20231005BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0789

A61K45/00

A61K31/519

A61K31/4985

A61K31/506

A61K31/44

A61K31/192

A61K31/381

A61K31/475

A61K31/165

A61K31/4184

A61K31/166

A61P35/00

A61P37/00

A61P3/00

A61P35/02

A61P7/06

A61P43/00 105

A61P7/04

A61P37/02

A61P19/02

A61P25/00

A61P1/04

A61P21/00

A61K31/4709

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023519146

(86)(22)【出願日】2021-09-24

(85)【翻訳文提出日】2023-05-24

(86)【国際出願番号】 CN2021120300

(87)【国際公開番号】W WO2022063226

(87)【国際公開日】2022-03-31

(31)【優先権主張番号】202011015709.0

(32)【優先日】2020-09-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522242362

【氏名又は名称】▲広▼州▲輯▼因医▲療▼科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＥＤＩＧＥＮＥ （ＧＵＡＮＧＺＨＯＵ） ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １０， Ｎｏ．６， Ｎａｎｊｉａｎｇ Ｓｅｃｏｎｄ Ｒｏａｄ， Ｚｈｕｊｉａｎｇ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｎａｎｓｈａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｃｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１００００， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002000

【氏名又は名称】弁理士法人栄光事務所

(72)【発明者】

【氏名】方 日国

(72)【発明者】

【氏名】▲馬▼ 奎▲瑩▼

(72)【発明者】

【氏名】李 超

(72)【発明者】

【氏名】袁 ▲鵬▼▲飛▼

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AC20

4B065BA30

4B065BD21

4B065CA44

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4C206MA01

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4C206NA14

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4C206ZB07

4C206ZB15

4C206ZB21

4C206ZB26

4C206ZB27

4C206ZC21

(57)【要約】

本発明はヒト造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用を開示し、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上である。本発明による化合物は、インビトロでの短時間の処理により、細胞の表現型、生存率及び種々の特性に影響を与えることなく、造血幹細胞表面タンパク質ＣＤ１８４の発現を向上させることができる。ＨＳＣが発現したケモカイン受容体ＣＤ１８４と骨髄微小環境中のケモカインリガンドＳＤＦ１との結合を通じて、ＨＳＣの遊走能及び骨髓でのホーミング能を向上させ、ＨＳＣの移植効率及び治療効果を向上させる。
【選択図】 なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上である使用。

【請求項2】

前記化合物はチューブリン重合阻害剤であり、好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上である請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである請求項２に記載の使用。

【請求項4】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項１～３のいずれか１項に記載の使用。

【請求項5】

造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である使用。

【請求項6】

前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくは、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである請求項５に記載の使用。

【請求項7】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項５又は６に記載の使用。

【請求項8】

被験者の造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法。

【請求項9】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項８に記載の方法。

【請求項10】

被験者の造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法。

【請求項11】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項13】

前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである請求項１２に記載の使用。

【請求項14】

血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療するための薬物であって、
チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである薬物。

【請求項15】

前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである請求項１４に記載の薬物。

【請求項16】

ＣＤ１８４表面タンパク質の発現レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項17】

造血幹細胞移植効率レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項18】

造血幹細胞ホーミング能を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項19】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項１８に記載の使用。

【請求項20】

被験者の造血幹細胞ホーミング能を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法。

【請求項21】

前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

造血幹細胞ホーミング能レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項23】

チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、又は４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含む細胞培地であって、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである細胞培地。

【請求項24】

造血幹細胞培地である請求項２３に記載の細胞培地。

【請求項25】

前記培地中の前記化合物の濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である請求項２３又は２４に記載の培地。

【請求項26】

被験者の血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する方法であって、
前記被験者に造血幹細胞を投与することを含み、
前記造血幹細胞は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を添加した培地にて培養した造血幹細胞であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法。

【請求項27】

前記化合物を添加した培地にて培養された前記造血幹細胞には、ＣＤ１８４タンパク質の発現が増加する請求項２６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、生物技術の技術分野に関し、特にヒト造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

造血幹細胞（ＨＳＣ：Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）は骨髄と血液中に存在し、自己更新能力を有し、すべてタイプの血液細胞に多方向に分化する幹細胞である。そのような特徴のため、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ：Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）は臨床で多種の血液疾患と免疫疾患を治療するのに最も有効であり、さらには唯一の治療手段であると考えられている。

【0003】

ＨＳＣＴは、ＨＳＣの由来によっては、自己幹細胞移植と同種幹細胞移植に分けられる。ＨＳＣの種類によっては、臍帯血（ＣＢ：Ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ）、動員末梢血（ｍＰＢ：Ｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ）、及び骨髄（ＢＭ：Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ）ＨＳＣに分けられる。現在、ＣＢ－ＨＳＣはますます多くの注目を受けているが、限られた細胞数は患者への移植及び遺伝子編集の臨床応用を制限し、ＨＳＣ数が十分かどうかは移植成功率、移植効率及び患者回復に直接影響する。この問題を解決するために、現在、以下の３つの方面からＨＳＣのインビトロ培養システムを最適化することができる。（１）細胞増幅数を大量に増加することができる。（２）細胞移植効率を高める。（３）単位体積の中・長期造血幹細胞（ＬＴ－ＨＳＣ）の比率を高め、患者が移植を受けた後、その体内に定着したＬＴ－ＨＳＣは長期的にレシピエントの血液と免疫系を再建することを可能にする。

【0004】

ＨＳＣは、静脈注射後、骨髄にホーミングし、骨髄微小環境との相互作用により、自己更新又は更なる分化を実現する。ＨＳＣの遊走及びホーミングには、ＨＳＣ細胞表面のケモカイン受容体ＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）と間質細胞由来タンパク質（ＳＤＦ－１）との結合が最も重要な役割を果たす。研究により、ヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣ及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＨＳＣにおいてＣＤ１８４を過剰発現させることにより、免疫不全マウスモデルにおけるこれらの骨髄ホーミング能を顕著に高めることができることが指摘された。従って、ＣＤ１８４の発現を調節することは、ＨＳＰＣが骨髄にホーミングする可能性を高める潜在的な突破口となる。

【0005】

近年、いくつかの研究により、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２：Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２）、ヒストン脱アセチル酵素阻害剤（ＨＤＡＣｉ：Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）例えばバルプロ酸（ＶＰＡ：Ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ）、グルココルチコイド（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ）例えばデキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）などはＨＳＰＣ中のＣＤ１８４受容体の発現を制御することによって、そのリガンドＳＤＦ１との結合強度を高め、それによってＨＳＰＣの遊走及び骨髄ホーミングに対して積極的な促進作用を果たすことが明らかになった。もう１つの研究により、ＨＳＰＣ移植前に３９．５℃で４時間処理すると、ＣＤ１８４表面タンパク質の発現及び脂質ラフトドメインでのその凝集を高め、ＳＤＦ１との相互作用を容易にし、ＨＳＣＴ効率を高めることができる。

【0006】

そのほか、いくつかの研究により、ミトコンドリア膜透過性遷移孔開口阻害剤（ＭＰＴＰｉ）、例えば、ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａの処理により、細胞が余分な生理的酸素ショック／ストレス（ｅｘｔｒａ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｏｘｙｇｅｎ ｓｈｏｃｋ／ｓｔｒｅｓｓ、ＥＰＨＯＳＳ）を受けることを避けることはＨＳＰＣの低酸素環境を模擬し、ＨＳＰＣの移植効率を高めることができることを発見した。骨髄内皮でのＨＳＣの転動と滞留は部分的にＥ－ｓｅｌｅｃｔｉｎとＰ－ｓｅｌｅｃｔｉｎにより媒介される。グアノシン二リン酸フコース（ｇｕａｎｏｓｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｆｕｃｏｓｅ）とフコシルトランスフェラーゼ６（ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ－ＶＩ）の処理によってＥ－ｓｅｌｅｃｔｉｎとＰ－ｓｅｌｅｃｔｉｎのフコシル化（ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）を高めることもＨＳＣの移植潜在力を高めることができる。
しかし、現在開発されている方法では、ＨＳＣの他の機能への影響を完全に明確にしているわけではないものや、実際の操作の難しさに限定されているものもある。そのため、ＨＳＰＣでのＣＤ１８４発現を制御でき、ＨＳＣの移植効率を高めることができる重要な分子を探すことは、造血幹細胞移植において解決すべき課題となっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

上記の問題に対して、本発明は、造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させるための化合物の使用であって、前記化合物はチューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上である使用を提供し、前記化合物はＨＳＰＣの遊走能を向上させ、移植効率を向上させることができる。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の具体的な技術的態様は以下のとおりである。

【0009】

１． 造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、本願は、インビトロで造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させるための化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上である使用に関する。

【0010】

２． 前記化合物はチューブリン重合阻害剤であり、好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種である項１に記載の使用。

【0011】

３． 前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである項２に記載の使用。

【0012】

４． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項１～３のいずれか１項に記載の使用。

【0013】

５． 造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である。いくつかの実施形態では、本願はまた、造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えるステップを含む方法に関する。

【0014】

６． 前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくは、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである項５に記載の使用又は方法。

【0015】

７． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項５又は６に記載の使用。

【0016】

８． 被験者の造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる方法であって、これを必要とする被験者に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を投与するステップを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
いくつかの実施形態では、本願はまた、被験者の造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる方法であって、前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えるステップを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法に関する。

【0017】

９． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項８に記載の方法。

【0018】

１０． 被験者の造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、これを必要とする被験者に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を投与するステップを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
いくつかの実施形態では、本願はまた、造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えるステップを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法に関する。

【0019】

１１． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項１０に記載の方法。

【0020】

１２． 血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
被験者の血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する方法であって、前記被験者に造血幹細胞を投与するステップを含み、前記造血幹細胞は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を添加した培地にて培養された造血幹細胞であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
いくつかの実施形態では、前記化合物を添加した培地にて培養された前記造血幹細胞には、ＣＤ１８４タンパク質の発現が増加する。

【0021】

１３． 項１２に記載の使用及び方法であって、前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー（クラッベ病）、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである。

【0022】

１４． 血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療するための薬物であって、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0023】

１５． 前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである請求項１４に記載の薬物。

【0024】

１６． ＣＤ１８４表面タンパク質の発現レベルの低下に関する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0025】

１７． 造血幹細胞移植効率レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
上記のいくつかの態様では、本願はまた、造血幹細胞移植効率レベルの低下に関する疾患を治療する方法であって、前記被験者に造血幹細胞を投与するステップを含み、前記造血幹細胞は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を添加した培地にて培養された造血幹細胞であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。
いくつかの実施形態では、前記化合物を添加した培地にて培養された前記造血幹細胞には、ＣＤ１８４タンパク質の発現が増加する。

【0026】

１８． 造血幹細胞ホーミング能を向上させるための化合物の使用であって、前記化合物はチューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0027】

１９． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項１８に記載の使用。

【0028】

２０． 被験者の造血幹細胞ホーミング能を向上させる方法であって、前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えるステップを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0029】

２１． 前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項２０に記載の方法。

【0030】

２２． 造血幹細胞ホーミング能レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0031】

２３． チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含む細胞培地であって、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである細胞培地。

【0032】

２４． 造血幹細胞培地である項２３に記載の細胞培地。

【0033】

２５． 前記培地中の前記化合物の濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である項２３又は２４に記載の培地。

【発明の効果】

【0034】

本発明による化合物は、インビトロでの短時間の処理により、細胞の表現型、生存率及び種々の特性に影響を与えることなく、造血幹細胞表面タンパク質ＣＤ１８４の発現を向上させることができる。ＨＳＣが発現したケモカイン受容体ＣＤ１８４と骨髄微小環境中のケモカインリガンドＳＤＦ１との結合を通じて、ＨＳＣの遊走能及び骨髓でのホーミング能を向上させ、ＨＳＣの移植効率及び治療効果を向上させる。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1】実施例３における各化合物による一次スクリーニングの概略図である。

【図2】実施例３における１３種類の化合物による二次スクリーニングの概略図である。

【図3】実施例３におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理のＣＤ１８４発現に対する影響である。

【図4】実施例４におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理の細胞生存率に対する影響の概略図である。

【図5A】実施例５におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理によるＨＳＰＣの、ＮＰＧマウス骨髓における移植効率の概略図であり、黒丸、黒四角、黒三角及び黒逆三角はそれぞれ、各群のそれぞれのマウスの検出を表す。

【図5B】実施例５におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理によるＨＳＰＣの骨髓での分化の概略図である。

【図5C】実施例５におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理によるＨＳＰＣの脾臓での分化の概略図である。

【図5D】実施例５におけるＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅであるチューブリン重合阻害剤を用いた処理によるＨＳＰＣの末梢血での分化の概略図である。

【発明を実施するための形態】

【0036】

本発明は、図面に記載された実施形態を参照して以下で詳細に説明され、ここで、すべての図面中の同じ数字は同じ特徴を表す。本発明の具体的な実施例が図面に示されているが、本発明は、本明細書に記載された実施例に限定されるべきではなく、様々な形態で実施され得ることが理解されるべきである。むしろ、これらの実施例は、本発明をより完全に理解することを可能にし、かつ、本発明の範囲を当業者に完全に伝えることを可能にするために提供される。

【0037】

なお、明細書及び特許請求の範囲では、特定の構成要素を称するためにいくつかの用語が使用されている。当業者は、同じ構成要素を異なる名詞で呼ぶことがあることを理解するべきである。本明細書及び特許請求の範囲は、名詞の差異を、構成要素を区分する手段とするのではなく、構成要素の機能上の差異を区分の基準とする。明細書及び特許請求の範囲を通じて言及されている「含む」又は「包含」は開放的な用語であるため、「含むが、限定されない」と解釈すべきである。本明細書では、以下に本発明のより良い実施形態が記載されるが、当該記載は本発明の範囲を限定するためのものではなく、本明細書の一般的な原則を目的とするものである。本発明の保護範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されるものに準ずるものとする。

【0038】

本発明は、造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上である使用を提供する。

【0039】

前記ＣＤ１８４はＨＳＣ細胞表面のケモカイン受容体ＣＸＣＲ４であり、ヒトＨＳＰＣ及びＬＴ－ＨＳＣにＣＤ１８４を過剰発現させることにより、免疫不全マウスモデルにおける骨髄ホーミング能を著しく向上させることができる。

【0040】

前記チューブリン重合阻害剤は、微小管の重合を阻害することができる小分子化合物である。微小管（ＭＴ：ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ）は２種類の微小管グロブリンα－ｔｕｂｕｌｉｎとβ－ｔｕｂｕｌｉｎが重合してプロトフィラメントを形成し、その後高度に規則的に配列して形成した中空管構造である。微小管は細胞質に存在し、細胞骨格の構成要素であり、細胞構造の維持、細胞内物質の輸送、細胞分裂、細胞遊走など、さまざまな生理学的過程に関与している。

【0041】

ＬＮＤ－２１２８５４はＢＭＰ受容体ＡＬＫの阻害剤であり、活性化受容体様キナーゼ（ＡＬＫ：Ａｃｔｉｖｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ ｋｉｎａｓｅｓ）はトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ）ファミリーに属し、ＴＧＦβはＳＭＡＤ４転写因子を制御することによって、ＨＳＣ遊走の重要因子ＣＤ１８４の制御を含む、ＨＳＣの異なるサブグループの多種機能に関与する。

【0042】

ＡＺＤ０３６４とＳＣＨ７７２９８４は細胞外調節プロテインキナーゼ（ＥＲＫ：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ）阻害剤であり、ＥＲＫ／ＭＥＫ／ｍＴＯＲ経路の制御を通じてＨＳＣの成長に作用する。

【0043】

Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ（ＡＳ－７０３０２６）とＴｒａｍｅｔｉｎｉｂ（ＧＳＫ１１２０２１２）はマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ：ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ）／ＥＲＫキナーゼ（ＭＥＫ１／２）阻害剤であり、ＥＲＫ／ＭＥＫ／ｍＴＯＲ経路の制御を通じてＨＳＣの成長に作用する。

【0044】

ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏはＷｎｔ経路阻害剤であり、Ａｘｉｎ２タンパク質を制御することにより、β－ｃａｔｅｎｉｎと形成した「破壊複合体」構造を安定化し、β－ｃａｔｅｎｉｎのリン酸化を促進するため、ＨＳＣの自己更新及び分化の可能性を向上させる。

【0045】

ＴＴＮＰＢはレチノイン酸受容体（ＲＡＲ：Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）アゴニストであり、ヒトＲＡＲα、β、γに作用し、［３Ｈ］ｔＲＡへの結合を阻害する。レチノイドは、ＲＡＲとレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ：Ｒｅｔｉｎｏｉｄ Ｘ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を介してリガンドと結合し、核上の転写因子を制御することで機能する。すべてのトランスレチノイン酸は細胞分化を誘導するが、レチノイン酸受容体とリガンドとの結合を阻害することで幹細胞分化を阻害し、ＨＳＣ幹細胞性を維持する。

【0046】

ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸはｃＪｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ：ｃ－Ｊｕｎ Ｎ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ）阻害剤であり、神経機能、免疫活性化及び胚胎発育などを含む多くの重要な生理的プロセスに関与している。報告によると、ＪＮＫ阻害剤はインビトロ培養システムにおいて明らかにＨＳＣの数を増加させることができ、ＬＴ－ＨＳＣに対して最適化の偏向性があり、ＨＳＣの長期的な再建能力を増強できる。

【0047】

ＣＨＩＲ９９０２１はＧＳＫ－３αとＧＳＫ－３β特異的阻害剤であり、ＧＳＫ－３αとＧＳＫ－３βはグリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ－３：Ｇｌｙｃｏｇｅｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｋｉｎａｓｅ ３）の２つのサブタイプである。ＧＳＫはＷｎｔ、ＨｅｄｇｅｈｏｇやＮｏｔｃｈなどの複数のシグナル経路の調節に関与し、糖代謝、遺伝子転写、アポトーシスなどを含む異なる細胞成長過程を制御する。また、ＧＳＫはＨＳＣの定常状態の制御にも重要な作用がある。ＣＨＩＲ９９０２１はヒトとマウスのＥＳ細胞の自己更新を促進し、体細胞のリプログラミングを促進することが報告されている。文献報告によると、ＣＨＩＲ９９０２１とｍＴＯＲ阻害剤Ｒａｐａｍｙｃｉｎとを組み合わせてマウスとヒトのＨＳＣを培養した結果、ＣＨＩＲ９９０２１はＨＳＣの長期的な再建能力を比較的に良よく維持できることが実証された。

【0048】

本発明の好ましい具体的な実施形態では、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくは、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0049】

チューブリン阻害剤は、そのメカニズムにより、チューブリン重合阻害剤とチューブリン形成阻害剤に分類され、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｆｏｓｂｒｅｔａｂｕｌｉｎ（Ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ４ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＣＡ４Ｐ））Ｄｉｓｏｄｉｕｍ（コンブレタスタチンＡ４リン酸二ナトリウム）、ＳＳＥ１５２０６、Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ（ノコダゾール）、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ（ＣＹＴ９９７）、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ（コルヒチン）、Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ（メイタンシノール）、ＥＧＦＲ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ Ｂ（ククルビタシンＢ）、Ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ（カバジタキセル）、ＡＢＴ－７５１（Ｅ７０１０）、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（ビンブラスチン硫酸塩）、Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（ビンクリスチン硫酸塩）、Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（ビンデシン硫酸塩、ビンデシン）、Ｐａｒｂｅｎｄａｚｏｌｅ（パルベンダゾール）、２－Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ（２－ＭｅＯＥ２）（２－メトキシエストラジオール）、Ｖｉｎｄｏｌｉｎｅ（ビンドリン）、４－Ｄｅｍｅｔｈｙｌｅｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ（ＮＳＣ－１２２８１９、ＶＭ－２６）、Ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ Ｏｘｉｄｅ（アルベンダゾールオキシド）、Ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ ｐ－３（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ、ＮＳＣ２９２２２２）（アンサマイトシンＰ－３）、Ｐｌｉｎａｂｕｌｉｎ（ＮＰＩ－２３５８）（プリナブリン）、ＭＭＡＦ（Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ）、Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ Ｔａｒｔｒａｔｅ（ビノレルビン酒石酸塩）、Ｉｎｄｉｂｕｌｉｎ（インジブリン）などである。

【0050】

チューブリン形成阻害剤としては、Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ（ＭＭＡＥ）（モノメチルアウリスタチンＥ）、ＣＷ０６９、Ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ４（コンブレタスタチンＡ４）、ＳＫＬＢ－２３ｂｂ、Ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ（メベンダゾール）、Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ（カルベンダジム）、Ｇｒｉｓｅｏｆｕｌｖｉｎ（グリセオフルビン）、Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、ＥＬＲ－５１０４４４、Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌｉｎｅ（トリゴネリン、Ｎ－メチルニコチン酸内塩）、ＭＭＡＤなどが含まれる。

【0051】

Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、別名ＣＹＴ９９７は有効な微小管重合阻害剤であり、微小管の迅速な再構成を誘導することができる。それは紡錘体の形成を阻害し、細胞周期をＧ２／Ｍ期に停滞させ、チューブリンを阻害し、血管形成を阻害し、潜在的な抗腫瘍活性を有する。

【0052】

Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ（別名ＮＳＣ４９８４２）はビンカアルカロイドの１種である。それが紡錘体上のチューブリンに結合して微小管を結晶化させることにより、微小管形成を阻害することができる。

【0053】

Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅは微小管重合阻害剤であり、アルカロイド薬類であり、最初は１９６１年にＦＤＡに薬物として承認され、ユリ類植物であるイヌサフラン（コルチカム）から抽出したものであり、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅは微小管タンパク質に結合して複合体を形成し、低濃度でも微小管の成長を阻止でき、高濃度では微小管の解重合を引き起こす。

【0054】

Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅは微小管重合の高速可逆阻害剤であり、Ａｂｌ、Ｅ２５５ＫやＴ３１５ｌも阻害する。それはβ－ｔｕｂｕｌｉｎに特異的に結合して、チューブリンの組み立てや解重合に影響する。

【0055】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭであり、例えば、前記化合物の使用濃度が、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲であってもよい。

【0056】

本発明は、造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用を提供し、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である。

【0057】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0058】

前記造血幹細胞移植効率とは、ヒトドナー造血幹細胞が静脈注射によりレシピエントに移植された後、効果的にレシピエント骨髄に移動し、骨髄微小環境下で成長を続け、造血系再構築作用を発揮する能力をいう。造血幹細胞移植効率の実験検証は、ヒト造血幹細胞を免疫不全マウスモデルに移植し、フローサイトメーターによりレシピエントマウスの血液及び免疫器官を検出し、ヒトドナー細胞の含有量（ｈＣＤ４５陽性細胞比率）を分析することである。

【0059】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭである。

【0060】

本発明は、被験者の造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる方法であって、これを必要とする被験者に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を投与することを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法を提供する。

【0061】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭである。

【0062】

本発明は、被験者の造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、これを必要とする被験者に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を投与することを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法を提供する。

【0063】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭである。

【0064】

本発明では、前記化合物を使用することによって、ＣＤ１８４表面タンパク質の発現レベルを向上させ、ＨＳＰＣの遊走能を向上させ、移植効率を向上させることができる。

【0065】

本発明は、血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する薬物の製造における前記化合物の製造における使用であって、
好ましくは、例えば前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、又は他の血液系の悪性腫瘍であってもよい使用を提供する。

【0066】

血液系の非悪性腫瘍は、例えば、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、無巨核球性血小板減少症、又は他の血液系の非悪性腫瘍であってもよい。

【0067】

固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、悪性脳腫瘍、又は他の固形腫瘍であってもよい。

【0068】

免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ（免疫調節異常、多腺性内分泌障害、腸疾患、Ｘ連鎖）症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、皮膚筋炎、又は他の自己免疫、免疫調節異常及び免疫不全疾患であってもよい。

【0069】

遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、Ｘ 連鎖性の副腎白質ジストロフィー、又は他の遺伝性疾患若しくは代謝性疾患であってもよい。

【0070】

本発明は、血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する薬物を提供し、前記薬物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである。

【0071】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、
前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、又は他の血液系の悪性腫瘍であってもよい。

【0072】

血液系の非悪性腫瘍は、例えば、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、無巨核球性血小板減少症、又は他の血液系の非悪性腫瘍であってもよい。

【0073】

固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、悪性脳腫瘍、又は他の固形腫瘍であってもよい。

【0074】

免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ（免疫調節異常、多腺性内分泌障害、腸疾患、Ｘ連鎖）症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、皮膚筋炎、又は他の自己免疫、免疫調節異常及び免疫不全疾患であってもよい。

【0075】

遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、Ｘ 連鎖性の副腎白質ジストロフィー、又は他の遺伝性疾患若しくは代謝性疾患であってもよい。

【0076】

本発明は、ＣＤ１８４表面タンパク質の発現レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用を提供する。

【0077】

本発明は、造血幹細胞移植効率レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用を提供する。

【0078】

本発明は、造血幹細胞ホーミング能を向上させるための化合物の使用であって、前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用を提供する。

【0079】

前記造血幹細胞ホーミング能とは、ヒトドナー造血幹細胞が静脈注射によりレシピエントに移植された後、レシピエントの骨髄に効果的に定着し、造血系の再構築作用を発揮する能力をいう。造血幹細胞ホーミング能力の実験検証は、ヒト造血幹細胞を免疫不全マウスモデルに移植し、フローサイトメーターによりレシピエントマウスの骨髄細胞を検出し、ヒトドナー細胞の含有量（ｈＣＤ４５陽性細胞比率）を分析することである。

【0080】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭである。

【0081】

本発明は、被験者の造血幹細胞ホーミング能を向上させる方法であって、これを必要とする被験者に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を投与することを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである方法を提供する。

【0082】

本発明の１つの好ましい特定実施形態では、前記化合物の使用濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、好ましくは０．１～１０μＭである。

【0083】

ここで、被験者とは、上記の状況により影響を受ける可能性のあるいかなる生物、好ましくは哺乳動物、例えばヒト、マウスなどをいう。

【0084】

前記造血幹細胞は、臍帯血由来の造血幹細胞、動員末梢血由来の造血幹細胞、骨髄由来の造血幹細胞など、任意の由来の造血幹細胞であってもよい。

【0085】

前記造血幹細胞は、例えば、凍結状態の造血幹細胞であってもよいし、新鮮な造血幹細胞であってもよい。

【0086】

本発明による化合物は、インビトロでの短時間の処理により、細胞の表現型、生存率、及び種々の特性に影響を与えることなく、造血幹細胞表面タンパク質ＣＤ１８４の発現を向上させることができる。ＨＳＣが発現したケモカイン受容体ＣＤ１８４と骨髄微小環境でのケモカインリガンドＳＤＦ１との結合を通じて、ＨＳＣの遊走能及び骨髄でのホーミング能を向上させ、ＨＳＣの移植効率及び治療効果を向上させ、また、上記の化合物を用いることにより、前記造血幹細胞は、安全性に優れ、生存率が良好で、細胞数が十分であり、これによって、造血幹細胞移植後の長期的な造血系再構築の有効性を維持することができる。

【実施例】

【0087】

本発明は、試験に使用される材料及び試験方法の一般的及び／又は具体的な説明をしており、以下の実施例では、特に断らない限り、％はｗｔ％、すなわち重量パーセントを表す。使用する試薬又は器具は製造元を明記していないが、いずれも市販で入手できる通常の試薬製品であり、表１は実施例で使用する原料の由来を示す表である。

【0088】

【表1】

【0089】

実施例１ 造血幹細胞の単離
使用するヒト造血幹細胞は主に臍帯血由来であり、臍帯血サンプルは病院から回収した後、室温で０．５～１時間放置して温度を回復させ、血液サンプルを採血袋から５０ｍｌ遠心管に移し、軽く均一に混合した。ピペットガンを用いてそれぞれ１００μｌのサンプルを取り、白血球計数及びフローサイトメトリーによるＣＤ３４陽性比率の検出に用いた。残りの血液サンプルを１％ＨＡＳを含む生理食塩水により１：１で希釈し、ピペットで軽く均一に混合した。混合液を新しい５０ｍｌ遠心管に入れて、適量のリンパ球分離液を管底に添加し、スピードアップ３、スピードダウン０で４００ｇを３０分間遠心分離した。遠心分離後に遠心管をゆっくりと取り出し、液面を水平に維持した。ピペッターでバフィーコート細胞を慎重に吸引し、新しい遠心管に移し、１％ＨＡＳの生理食塩水で細胞を洗浄し、スピードアップ９、スピードダウン５で５００ｇを１０分間遠心分離した。
遠心分離後に細胞を再懸濁させ、ＣＤ３４陽性細胞の選別を行った（ＣＤ３４＋細胞磁気ビーズ選別キット、ミルテニーバイオテク社、１３０－０４６－７０３）。
まず、１×１０^６全細胞に、ＦｃＲ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ １００μｌとＣＤ３４－Ｂｅａｄｓ １００ μｌを加えて４℃で放置し、３０分間インキュベートした。インキュベート後に１％ＨＡＳの生理食塩水４０ｍｌで洗浄し、４００ｇを８分間遠心分離し、３ｍｌあたり１ｘ１０^９細胞で再懸濁させた。
ＣＤ３４＋細胞選別カラムをＭＡＣＳ磁気分離ラックに置き、選別カラムの上に４０μｍ細胞篩を置き、選別カラムの下に１５ｍｌ遠心管を置いた。ろ過篩を３ｍｌ１％ＨＡＳの生理食塩水で濡らして洗浄した後、細胞懸濁液を加え、滴下完了後、１％ＨＡＳの生理食塩水３ｍｌで３回洗浄した。吸着カラムについて磁場を解消し、１％ＨＡＳの生理食塩水を加えて細胞を遠心管に集め、１回繰り返して、細胞を混合して計数し、培養又は凍結保存を行った。細胞の一部を採取してフローサイトアッセイを行い、ＣＤ３４の発現を検出し、その純度を確認した。

【0090】

実施例２ 造血幹細胞の培養
まず、造血幹細胞の完全培地を調製し、その成分と使用量を以下に示す。

【0091】

【表2】

【0092】

実施例１の計数結果によれば、５×１０^４ＣＤ３４＋細胞を２４ウェルプレートの各ウェルにそれぞれ加え、１ウェルあたり完全培地１ｍｌで細胞を２４時間培養した。
翌日、化合物をＤＭＳＯで溶解混合した後、ＰＢＳで特定濃度に希釈した（表３参照）。希釈した化合物を１ウェルあたり１０μｌの体積で細胞培養液に加えて、均一に混合し、インキュベータに入れて１６時間培養した。

【0093】

【表3】

【0094】

実施例３ ＣＤ１８４タンパク質発現の検出
３日目、ＰＢＳ＋０．０５％ＢＳＡの溶液を蛍光抗体ＢＶ５１０ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ３４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ｃｌｏｎｅ ５８１）、ＦＩＴＣ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ９０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃｌｏｎｅ ５Ｅ１０）及びＡＰＣＣｙ７ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ４５ＲＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃｌｏｎｅ ＨＩ１００）をプレミックスして、各抗体を５０μｌ／ｍｌずつ加え、抗体プレミックス液を調製し、光を避けて保存した。
細胞を遠心管に集め、４００ｇを５分間遠心分離し、上清を除去し、各サンプルに抗体プレミックス液（抗体は２．５μｌずつ含む）５０μｌを加え、再懸濁させて均一に混合し、４℃で２０分間避光下インキュベートした。１管あたりＰＢＳ １ｍｌを加えて洗浄し、４００ｇを５分間遠心した後、ＰＢＳ＋０．０５％ＢＳＡ溶液５０μｌで再懸濁させた。各サンプルにＰＥ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｎｔｉ－ＣＤ１８４抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃｌｏｎｅ １２Ｇ５）２．５μｌを加え、３７℃で３０分間インキュベートした後、洗浄し、７ＡＡＤ染色で細胞生存率を鑑定した。フローサイトメータ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ）を用いて細胞表面の蛍光を検出し、ＣＤ１８４がＨＳＰＣとＬＴ－ＨＳＣに発現したときの平均蛍光強度（ＭＦＩ）と陽性比をそれぞれ分析した。ＨＳＰＣはＣＤ３４＋細胞、ＬＴ－ＨＳＣはＣＤ３４＋ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－細胞である。

【0095】

（１）化合物の一次スクリーニング：１３９種類の化合物を用いて一次スクリーニングを行い、第１～第５ラウンドで８９種類の化合物をスクリーニングし、第６～第９ラウンドで５０種類の化合物をスクリーニングした。ＣＤ３４＋ＨＳＰＣのインビトロ培養において、完全培地に３種類の濃度の化合物を添加して１６時間処理した後、フローサイトメトリー染色を用いてＣＤ１８４表面タンパク質発現の平均蛍光強度を検出し、その結果を図１に示す。
その結果、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１は、ＣＤ３４＋ＨＳＰＣのＣＤ１８４発現を上昇させることが示され、ここで、チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ、Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅであった。

【0096】

（２）化合物の二次スクリーニング：一次スクリーニングにより得られた１３種類の化合物を高濃度、中等濃度、低濃度の３つの濃度で選択し、濃度ごとに３回繰り返してさらに検証を行った。上記化合物を用いて１６時間処理した後、フローサイトメトリーでＣＤ１８４表面タンパク質発現の平均蛍光強度を検出し、その結果を図２に示す。ここで、図中のデータは対照群（Ｍｏｃｋ）に対する各群のＣＤ１８４蛍光強度の平均値の比である（Ｍ３４４は陽性対照群であり、Ｍｏｃｋは培養中に処理されていない陰性対照群である。）。
図２より、化合物が高濃度である場合に、ＬｅｘｉｂｕｌｉｎとＶｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅは、ＣＤ１８４の発現量を有意に向上させることができ、発現量は陽性対照のＭ３４４の約２倍であり、陰性対照の４倍以上であり、一方、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅは、Ｍ３４４と同等の効果を示し、高濃度では、陰性対照の２倍であり、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及びＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅはＣＤ１８４の発現能を有意に向上させることが示唆された。

【0097】

（３）ＣＤ１８４発現に対するＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅチューブリン重合阻害剤の影響
上記チューブリン重合阻害剤をそれぞれ３つの濃度（１０μＭ、１μＭ、０．１μＭ）で１６時間処理した後、ＣＤ３４＋ＨＳＰＣで（ａ）、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－ＬＴ－ＨＳＣで（ｂ）のＣＤ１８４の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメータで検出し、その結果を図３に示す。

【0098】

実施例４ 細胞生存率の検出
３日目、実施例２の培養プレートにＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ、Ｍ３４４及びＭｏｃｋで処理した細胞を収集し、４００ｇを５分間遠心分離し、上清を取り、ＰＢＳで再懸濁させ、２０μｌの希釈細胞サンプルを取り、等比率でＡＯＰＩ染色液（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＣＳ２－０１０６）２０μｌを加えて均一に混合し、２０μｌの混合液を計数プレートのサンプルウェルに加え、蛍光細胞計数器（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２）にて細胞計数及び細胞活性検出を行い、実験結果を図４に示した。

【0099】

実施例５
Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ又はＬｅｘｉｂｕｌｉｎで短時間処理した、又は対照群のヒトＣＤ３４＋ＨＳＰＣをそれぞれ１．０Ｇｙ放射によるＮＰＧ（ＮＯＤ－ｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇ－／－）免疫不全マウスに移植し、１群あたり８匹のマウスとした。移植後１７週目に、マウス骨髄への細胞移植効率を検出した。また、骨髄、末梢血及び脾臓において、ヒト由来ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８抗体で標識されたヒトＴ細胞、ヒト由来ＣＤ３３抗体で標識された骨髄細胞、ヒト由来ＣＤ１９抗体で標識されたＢ細胞、ヒト由来ＣＤ５６抗体で標識されたＮＫ細胞、及びヒト由来ＣＤ３４抗体で標識された造血幹前駆細胞の分布割合を検出し、これらの結果をそれぞれ図５Ａから図５Ｄに示す。ここで、移植効率＝ｈＣＤ４５^＋割合／（ｈＣＤ４５）^＋割合＋ｍＣＤ４５^＋割合）×１００％
図５Ａの結果より、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ又はＬｅｘｉｂｕｌｉｎの小分子で処理したＨＳＰＣは、移植後１７週目に、対照群の細胞よりＮＰＧマウス骨髄への移植効率が向上し、その中でも、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ群は６５．８４％、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ群は８０．７３％、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ群は８２．４６％、Ｍｏｃｋ群は６４．７％があった。
図５Ｂから図５Ｄの結果より、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ又はＬｅｘｉｂｕｌｉｎの小分子で処理したＨＳＰＣは、骨髄、脾臓及び末梢血のいずれでも、Ｔ細胞、骨髄系細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞に分化することができ、小分子で処理したＨＳＰＣは造血幹細胞の造血系再建能を保持していることが示唆された。

【0100】

上記は、本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明の他の形態について限定するものではなく、当業者であれば、上記で開示された技術的内容を利用して同等の変化の等価実施例に変更又は変形することができる。しかし、本発明の技術手段の内容から逸脱しない限り、本発明の技術的本質に基づいて上記の実施例に対して行われたいかなる簡単な修正、均等な変化及び変形も本発明の技術手段の保護範囲に属する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【手続補正書】

【提出日】2023-05-24

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上であり、好ましくは、前記化合物はチューブリン重合阻害剤であり、更に好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上であり、
更に好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである使用。

【請求項2】

造血幹細胞移植効率を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、
更に好ましくは、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである使用。

【請求項3】

被験者の造血幹細胞表面ＣＤ１８４タンパク質の発現を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤はＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである方法。

【請求項4】

被験者の造血幹細胞移植効率を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである方法。

【請求項5】

血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、
前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
前記血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
前記固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
前記免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
前記遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである使用。

【請求項6】

血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療するための薬物であって、
チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記血液系の悪性腫瘍は、慢性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症及び骨髄異形成症候群、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、原発性マクログロブリン血症、形質細胞白血病、形質芽細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、全身性肥満細胞症、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍であり、
前記血液系の非悪性腫瘍は、再生不良性貧血、ファンコニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、骨髄線維症、重度の発作性夜間ヘモグロビン尿症、又は無巨核球性血小板減少症であり、
前記固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、胚細胞腫瘍、ユーイング肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、髄芽腫、又は悪性脳腫瘍であり、
前記免疫系疾患は、重度複合免疫不全症、重度自己免疫疾患、原発性中枢神経系リンパ腫、免疫不全症候群を伴う湿疹性血小板減少症、慢性肉芽腫、ＩＰＥＸ症候群、ＡＬアミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群、血球貪食症候群、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、多発性筋炎、又は皮膚筋炎であり、
前記遺伝性又は代謝性疾患は、ムコ多糖症、先天性角化異常症、リソソーム代謝症、グロボイド細胞白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、又はＸ 連鎖性の副腎白質ジストロフィーである薬物。

【請求項7】

ＣＤ１８４表面タンパク質の発現レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項8】

造血幹細胞移植効率レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項9】

造血幹細胞ホーミング能を向上させるための化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
更に好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである使用。

【請求項10】

被験者の造血幹細胞ホーミング能を向上させる方法であって、
前記造血幹細胞を培養する培地に、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を加えることを含み、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
好ましくは、前記化合物の使用濃度が１ｎＭ～１００μＭである方法。

【請求項11】

造血幹細胞ホーミング能レベルの低下に関連する疾患を治療する薬物の製造における化合物の使用であって、
前記化合物は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種又は２種以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種又は２種以上、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである使用。

【請求項12】

チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、又は４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を含む細胞培地であって、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅである細胞培地。

【請求項13】

造血幹細胞培地である請求項１２に記載の細胞培地。

【請求項14】

前記培地中の前記化合物の濃度が、１ｎＭ～１００μＭ、例えば１０ｎＭ～５０μＭ、０．１μＭ～２０μＭ、１μＭ～１０μＭ、例えば、０．１μＭ、０．２μＭ、０．３μＭ、０．４μＭ、０．５μＭ、０．６μＭ、０．７μＭ、０．８μＭ、０．９μＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ又はこれらの間の任意の範囲である請求項１２又は１３に記載の培地。

【請求項15】

被験者の血液系の悪性腫瘍、血液系の非悪性腫瘍、固形腫瘍、免疫系疾患、遺伝性又は代謝性疾患を治療する方法であって、
前記被験者に造血幹細胞を投与することを含み、
前記造血幹細胞は、チューブリン重合阻害剤、ＬＮＤ－２１２８５４、ＡＺＤ０３６４、ＳＣＨ７７２９８４、Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、ＩＷＲ－１－ｅｎｄｏ、ＴＴＮＰＢ、ＪＮＫ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＸ及びＣＨＩＲ９９０２１から選択される１種、２種、３種、４種またはそれ以上、好ましくはチューブリン重合阻害剤である化合物を添加した培地にて培養した造血幹細胞であり、
好ましくは、前記チューブリン重合阻害剤は、Ｌｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ及びＮｏｃｏｄａｚｏｌｅから選択される１種、２種、３種、４種、好ましくはＬｅｘｉｂｕｌｉｎ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ及び／又はＣｏｌｃｈｉｃｉｎｅであり、
前記化合物を添加した培地にて培養された前記造血幹細胞には、ＣＤ１８４タンパク質の発現が増加する方法。

【国際調査報告】