特表 2023-543361 ＮＥＵＲＯＤ１及びＤＬＸ２ベクター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-13

(54)【発明の名称】ＮＥＵＲＯＤ１及びＤＬＸ２ベクター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/864 20060101AFI20231005BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20231005BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20231005BHJP

【ＦＩ】

C12N15/864 100Z

C12N15/12 ZNA

A61P29/00

A61P13/12

A61P9/10

A61P7/02

A61P19/00

A61P31/00

A61P35/00

A61P17/02

A61P25/08

A61P25/14

A61P21/04

A61P25/16

A61P25/28

A61P25/00

A61P43/00 105

A61K48/00

A61K35/76

A61K38/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023544179

(86)(22)【出願日】2021-09-28

(85)【翻訳文提出日】2023-05-24

(86)【国際出願番号】 US2021052348

(87)【国際公開番号】W WO2022072322

(87)【国際公開日】2022-04-07

(31)【優先権主張番号】63/084,945

(32)【優先日】2020-09-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/247,442

(32)【優先日】2021-09-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ

(71)【出願人】

【識別番号】523113881

【氏名又は名称】ニューエクセル・セラピューティクス・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＮｅｕＥｘｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(74)【代理人】

【識別番号】100218268

【弁理士】

【氏名又は名称】及川 健太郎

(72)【発明者】

【氏名】シュー，ジエ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA44

4C084DC50

4C084MA52

4C084MA56

4C084MA58

4C084MA59

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA061

4C084ZA062

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA221

4C084ZA222

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA401

4C084ZA402

4C084ZA541

4C084ZA542

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB311

4C084ZB312

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA56

4C087MA58

4C087MA59

4C087MA65

4C087MA66

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA02

4C087ZA06

4C087ZA16

4C087ZA22

4C087ZA36

4C087ZA40

4C087ZA54

4C087ZA81

4C087ZA94

4C087ZA96

4C087ZB11

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB31

(57)【要約】

本開示は、ＡＡＶベクターにおけるＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列の使用によるグリア細胞のニューロンへの変換に関連するＡＡＶベクター、組成物、及び方法に関する。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項2】

配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項3】

神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）タンパク質をコードするＤｌｘ２核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記Ｄｌｘ２コード配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記Ｄｌｘ２コード配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項4】

ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を有するヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項5】

ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項6】

治療を必要とする対象における治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記Ｄｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項7】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項9】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項10】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項11】

前記グリア細胞が、反応性アストロサイトである、請求項４又は５に記載の組成物。

【請求項12】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性（ｓｅｒａｔｏｎｅｒｇｉｃ）ニューロン、エピネフリン作動性（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅｒｇｉｃ）ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項４又は５に記載の組成物。

【請求項13】

前記ヒトが、神経学的状態を有する、請求項４又は５に記載の組成物。

【請求項14】

前記ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項15】

前記Ｄｌｘ２が、ヒトＤｌｘ２（ｈＤｌｘ２）である、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項17】

前記Ｄｌｘ２が、チンパンジーＤｌｘ２、ボノボＤｌｘ２、オランウータンＤｌｘ２、ゴリラＤｌｘ２、マカクＤｌｘ２、マーモセットＤｌｘ２、オマキザルＤｌｘ２、ヒヒＤｌｘ２、テナガザルＤｌｘ２、及びキツネザルＤｌｘ２からなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項18】

前記ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、請求項１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項19】

前記ｈＤｌｘ２が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、請求項１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項20】

前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項21】

前記ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項22】

前記リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項23】

前記リンカーが、前記Ｐ２Ａである、請求項２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項24】

前記リンカーが、前記Ｔ２Ａである、請求項２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項25】

前記Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１５及び１８からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項26】

前記Ｔ２Ａリンカーが、配列番号１６及び１９からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項27】

前記ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項28】

前記ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項29】

前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項30】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項31】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項32】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項33】

前記エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項34】

前記ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３３に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項35】

前記ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３３に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項36】

前記キメライントロンが、配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項37】

前記ＷＰＲＥが、配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項38】

前記ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ｈＧＨポリアデニル化シグナル、及びｂＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項39】

前記ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項40】

前記ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項41】

前記ｂＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。

【請求項42】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。

【請求項43】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項44】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項45】

前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項46】

前記ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項47】

前記ＡＡＶベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項48】

組成物を必要とする前記対象が、哺乳動物である、請求項６に記載の組成物。

【請求項49】

前記哺乳動物が、ヒトである、請求項４８に記載の組成物。

【請求項50】

前記哺乳動物が、非ヒト霊長類である、請求項４８に記載の組成物。

【請求項51】

組成物を必要とする前記対象が、神経学的状態を有する、請求項６に記載の組成物。

【請求項52】

前記神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項53】

前記神経学的状態が、ＣＮＳへの傷害を含む、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項54】

前記神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項55】

前記神経学的状態が、アルツハイマー病である、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項56】

前記神経学的状態が、パーキンソン病である、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項57】

前記神経学的状態が、ＡＬＳである、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項58】

前記神経学的状態が、ハンチントン病である、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項59】

前記神経学的状態が、脳卒中である、請求項１３又は５１に記載の組成物。

【請求項60】

前記脳卒中が、虚血性脳卒中である、請求項５９に記載の組成物。

【請求項61】

前記脳卒中が、出血性脳卒中である、請求項５９に記載の組成物。

【請求項62】

前記組成物が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、請求項５１に記載の組成物。

【請求項63】

前記グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項６２に記載の組成物。

【請求項64】

前記グリア細胞が、アストロサイトである、請求項６２に記載の組成物。

【請求項65】

前記アストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項６２に記載の組成物。

【請求項66】

前記グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、請求項６２に記載の組成物。

【請求項67】

前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項６２に記載の組成物。

【請求項68】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項６２に記載の組成物。

【請求項69】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロンである、請求項６８に記載の組成物。

【請求項70】

前記組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、請求項６に記載の組成物。

【請求項71】

前記組成物が、局所送達用に製剤化される、請求項７０に記載の組成物。

【請求項72】

前記組成物が、全身送達用に製剤化される、請求項７０に記載の組成物。

【請求項73】

前記組成物が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を介した送達用に製剤化される、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項74】

請求項６に記載の組成物を、それを必要とする前記対象に送達することを含む、方法。

【請求項75】

前記組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記送達が、局所投与を含む、請求項７４に記載の方法。

【請求項77】

前記送達が、全身投与を含む、請求項７４に記載の方法。

【請求項78】

前記送達が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を含む、請求項７４～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、前記ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、方法。

【請求項80】

生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、前記ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。

【請求項81】

グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする前記対象に送達することを含み、前記ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、
前記ＡＡＶベクターが、それを必要とする前記対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、方法。

【請求項82】

神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、前記対象に送達することを含み、前記ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記Ｄｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）それを必要とする前記対象へのポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。

【請求項83】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２である、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型５である、請求項８３に記載の方法。

【請求項86】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型９である、請求項８３に記載の方法。

【請求項87】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンである、請求項７９又は８０に記載の方法。

【請求項88】

前記ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項89】

前記Ｄｌｘ２が、ヒトＤｌｘ２（ｈＤｌｘ２）である、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項90】

前記ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項91】

前記Ｄｌｘ２が、チンパンジーＤｌｘ２、ボノボＤｌｘ２、オランウータンＤｌｘ２、ゴリラＤｌｘ２、マカクＤｌｘ２、マーモセットＤｌｘ２、オマキザルＤｌｘ２、ヒヒＤｌｘ２、テナガザルＤｌｘ２、及びキツネザルＤｌｘ２からなる群から選択される、請求項７５又は７６に記載の方法。

【請求項92】

前記ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸コード配列をコードするアミノ酸配列を含む、請求項８８に記載の方法。

【請求項93】

前記ｈＤｌｘ２が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を含む、請求項８９に記載の方法。

【請求項94】

前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項８８に記載の方法。

【請求項95】

前記ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項８９に記載の方法。

【請求項96】

前記ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項97】

前記ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項98】

前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項７９～９７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９６に記載の方法。

【請求項100】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９６に記載の方法。

【請求項101】

前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９６に記載の方法。

【請求項102】

前記リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項103】

前記Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１５及び１８からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記Ｔ２Ａリンカーが、配列番号１６及び１９からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０２に記載の方法。

【請求項105】

前記エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項106】

前記ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

前記ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０５に記載の方法。

【請求項108】

前記キメライントロンが、配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項109】

前記ＷＰＲＥが、配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項110】

前記ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル及びｈＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、請求項８１又は８２に記載の方法

【請求項111】

前記ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１１０に記載の方法。

【請求項112】

前記ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１１０に記載の方法。

【請求項113】

前記ベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項114】

前記ベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項115】

前記ベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項116】

前記ベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項117】

前記ベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項118】

前記ベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項７９～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項119】

前記変換が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系において生じる、請求項８１に記載の方法。

【請求項120】

前記変換が、前記ＣＮＳにおいて生じる、請求項８１に記載の方法。

【請求項121】

方法を必要とする前記対象が、哺乳動物である、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項122】

前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１２１に記載の方法。

【請求項123】

前記哺乳動物が、非ヒト霊長類である、請求項１２１に記載の方法。

【請求項124】

前記送達が、局所投与を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項125】

前記送達が、全身投与を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項126】

前記送達が、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、髄腔内投与、脳内投与、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内投与、鼻腔内投与、及び経口投与からなる群から選択される投与を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項127】

前記注入が、腹腔内注入、筋肉内注入、静脈内注入、髄腔内注入、脳内注入、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内注入、鼻腔内注入、及び経口注入からなる群から選択される注入を含む、請求項７９又は８０に記載の方法。

【請求項128】

前記送達が、注入を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項129】

前記注入が、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍＬの濃度で行われる、請求項７９、８０、又は１２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項130】

前記注入が、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分の流量を更に含む、請求項１２９に記載の方法。

【請求項131】

前記少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイト及び少なくとも１つのＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。

【請求項132】

前記少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイトである、請求項１３１に記載の方法。

【請求項133】

前記少なくとも１つのアストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項１３１又は１３２に記載の方法。

【請求項134】

前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項８１に記載の方法。

【請求項135】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項７９、８０、及び１３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項136】

前記対象が、前記送達前の前記対象と比較して、少なくとも１つの神経学的状態の症状の改善を示す、請求項８１に記載の方法。

【請求項137】

前記改善が、前記送達の１年以内に測定される、請求項１３６に記載の方法。

【請求項138】

前記方法が、前記ＡＡＶを前記対象の前記脳に直接注入することを含む、請求項７９、８０、又は１２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項139】

前記変換が、前記脳の線条体におけるものである、請求項７９又は８０に記載の方法。

【請求項140】

前記方法が、前記ＡＡＶを前記対象の脊髄に直接注入することを含む、請求項７９、８０、又は１２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項141】

前記神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、請求項８２に記載の方法。

【請求項142】

前記神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、請求項８２に記載の方法。

【請求項143】

前記神経学的状態が、アルツハイマー病である、請求項８２に記載の方法。

【請求項144】

前記神経学的状態が、パーキンソン病である、請求項８２に記載の方法。

【請求項145】

前記神経学的状態が、ＡＬＳである、請求項８２に記載の方法。

【請求項146】

前記神経学的状態が、ハンチントン病である、請求項８２に記載の方法。

【請求項147】

前記神経学的状態が、脳卒中である、請求項８２に記載の方法。

【請求項148】

前記脳卒中が、虚血性脳卒中である、請求項１４７に記載の方法。

【請求項149】

前記脳卒中が、出血性脳卒中である、請求項１４７に記載の方法。

【請求項150】

前記方法が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、請求項８２に記載の方法。

【請求項151】

前記グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項１５０に記載の方法。

【請求項152】

前記グリア細胞が、アストロサイトである、請求項１５０に記載の方法。

【請求項153】

前記アストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項１５２に記載の方法。

【請求項154】

前記グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、請求項１５０に記載の方法。

【請求項155】

前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項１５０に記載の方法。

【請求項156】

前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項１４５に記載の方法。

【請求項157】

治療有効用量の前記ＡＡＶベクターが、前記対象に注入される、請求項７９又は８０に記載の方法。

【請求項158】

治療有効用量の前記ＡＡＶベクターが、前記対象に送達される、請求項８１又は８２に記載の方法。

【請求項159】

前記治療有効用量が、薬学的に許容される担体と共に投与される、請求項１４７又は１４８に記載の方法。

【請求項160】

（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項161】

（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項162】

（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３の核酸配列を含むｈＤｌｘ２配列を含むＡＡＶベクターを含む、請求項１６０又は１６１に記載の組成物。

【請求項163】

（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項164】

（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。

【請求項165】

（ｉｉ）が、前記ｈＤｌｘ２タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含み、前記核酸が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、請求項１６３又は１６４に記載の組成物。

【請求項166】

配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項167】

配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項168】

配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項169】

配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項170】

配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項171】

配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年９月２９日に出願された米国仮出願第６３／０８４，９４５号及び２０２１年９月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／２４７，４４２号の優先権を主張し、それらのいずれも、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。

【0002】

配列表の援用
２８，３１１バイト（ＭＳ－Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定）であり、２０２１年９月２７日に作成された、Ｐ３４８３８ＷＯ００＿ＳＬ．ＴＸＴという名前のファイルに含まれる配列表は、本明細書と共に電子的に提出され、その全体が参照により援用される。

【0003】

本開示は、グリア細胞をニューロンに変換させるヒトＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２をコードする核酸配列を含むＡＡＶベクターを使用する方法及び組成物を含む。

【背景技術】

【0004】

ニューロンは、神経学的状態を有する対象において、又は中枢神経系（ＣＮＳ）若しくは末梢神経系（ＰＮＳ）への傷害後、しばしば死滅するか又は損傷され、再生することができない。

【0005】

グリア細胞は、脳傷害又は神経学的状態などのＣＮＳ又はＰＮＳへの傷害の後に反応する。

【0006】

現在、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、神経学的状態を有するヒト対象において機能的な新しいニューロンを再生するための利用可能な方法はない。

【発明の概要】

【0007】

一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0008】

一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0009】

一態様では、本開示は、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）タンパク質をコードするＤｌｘ２核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びＤｌｘ２コード配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びＤｌｘ２コード配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0010】

一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を有するヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0011】

一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0012】

一態様では、本開示は、治療を必要とする対象の治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0013】

一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、それを必要とする対象にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0014】

一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、それを必要とする対象にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0015】

一態様では、本開示は、グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、当該ベクターが、それを必要とする当該対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。

【0016】

一態様では、本開示は、神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該Ｄｌｘ２配列が、それを必要とする当該対象への、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0017】

一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0018】

一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0019】

一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0020】

一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0021】

一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0022】

一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0023】

一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0024】

一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0025】

一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0026】

一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1A】ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図1B】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図1C】ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図1D】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図2A】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図2B】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図2C】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図2D】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図3A】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図3B】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図3C】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図3D】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図4A】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図4B】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０のマップを示す。

【図4C】ＣＥ：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図4D】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１ ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨのマップを示す。

【図5A】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図5B】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図5C】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図5D】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図6A】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図6B】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図6C】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図6D】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図7A】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図7B】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図7C】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図7D】ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＳＶ４０のマップを示す。

【図8A】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図8B】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図8C】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図8D】Ｕ６：ｓｈＲＮＡ：ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ｈＧｈのマップを示す。

【図9】Ｐ３１プラスミドのＡＡＶウイルス産生を測定する。力価分析は、目的の遺伝子（ＧＯＩ）プライマー、ＩＴＲ領域プライマー、及びリバースパッケージングプライマーを使用して実施される。ウイルス力価は、ｖｇ／細胞として計算される。

【図10】生後３日のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの脳からのラットアストロサイト初代培養物の樹立を示す。左上のパネルは、ＧＦＡＰ染色細胞の画像を提示する。右上のパネルは、ＳＯＸ９染色細胞の画像を提示する。左下のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞の画像を提示する。右下のパネルは、ＧＦＡＰ、ＳＯＸ９、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。

【図11】プラスミドのＮｅｕｒｏＤ１発現レベルの比較を示す。原発性ラットアストロサイトは、Ｐ１４（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ３１（ＥＦ－１αＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、及びＰ６３（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１－ＧＳＧＰ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）のいずれかでトランスフェクトされる。上部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色を示し、中央パネルは、細胞のＤｌｘ２染色を示し、下部パネルは、細胞の重ね合わせたＮｅｕｒｏＤ１、Ｄｌｘ２、及びＤＡＰＩ染色を示す。

【図12】ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）を使用して、異なる用量でのＡＡＶウイルス粒子の形質導入の比較を示す。左上のパネルは、３×１０^１０ｖｇ／ウェルの用量を示す。右上のパネルは、１×１０^１０ｖｇ／ウェルの用量を示す。下のパネルは、２．５×１０^９ｖｇ／ウェルの用量を示す。

【図13A-13B】一次速度アストロサイトへのＡＡＶ粒子の形質導入の定量分析を示す。図１３Ａは、５×１０^５ｖｇ／細胞、２×１０^５ｖｇ／細胞、及び５×１０^４ｖｇ／細胞のＭＯＩにおけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を提示する。図１３Ｂは、２×１０^４細胞／ウェル、１．５×１０^４細胞／ウェル、１×１０^４細胞／ウェル、及び５×１０^３細胞／ウェルの一連の密度で播種され、１００μｌの培地中で２μｌ、１μｌ、０．５μｌ、０．２５μｌ、０．１２５μｌの１×１０^１３ｖｇ／ｍｌウイルスの一連の量のウイルスで感染した細胞におけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を示す。

【図14】対照プラスミドＡＡＶ９－Ｐ２１（ＣＥ－ｐＧＦＡ６８１－ＣＩ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）を２×１０^１０ｖｇ／ｍｌによる形質導入の３週間後のＲＣＡを示す。細胞は、ニューロンマーカーＮｅｕＮ及びＭＡＰ２に対する抗体、並びにＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色される。ＧＦＰ蛍光は、対照プラスミドで形質導入された細胞の存在を示す。

【図15】ＮＸＬ－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮｅｕｒｏＤ１（ＮＤ１）抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図16】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図17】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ及び抗ＭＡＰ２抗体並びにＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。ＮＤ１含有ベクターによる形質導入は、アストロサイト培養物からニューロン（ＮｅｕＮ／／ＭＡＰ２＋）を生成する。

【図18】ＮＸＬ－Ｐ１３８（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図19】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１３８（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す）。

【図20】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１３８（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ及び抗ＭＡＰ２抗体並びにＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す）。ＮＤ１含有ベクターによる形質導入は、アストロサイト培養物からニューロン（ＮｅｕＮ／／ＭＡＰ２＋）を生成する。

【図21】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。ＧＦＰ蛍光は、形質導入された細胞の存在を示す。

【図22】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ及び抗ＭＡＰ２抗体並びにＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。ＮＤ１含有ベクターによる形質導入は、アストロサイト培養物からニューロン（ＮｅｕＮ／／ＭＡＰ２＋）を生成する。

【図23】ＮＸＬ－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図24】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図25】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ及び抗ＭＡＰ２抗体並びにＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。ＮＤ１含有ベクターによる形質導入は、アストロサイト培養物からニューロン（ＮｅｕＮ／／ＭＡＰ２＋）を生成する。

【図26】ＮＸＬ－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図27】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図28】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。ＮＤ１含有ベクターによる形質導入は、アストロサイト培養物からニューロン（ＮｅｕＮ＋）を生成する。

【図29】ＮＸＬ－Ｐ１０７（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図30】ＮＸＬ－Ｐ１０８（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図31】ＮＸＬ－Ｐ１０９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図32】感染１０日後のＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）、ＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）、及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８（Ｐ１３８群）に感染したマウスの脳皮質組織を示す。

【図33】感染（ｄｐｉ）３０日後のＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８（Ｐ１３８群）に感染したマウスの脳皮質組織を示す。

【図34】１０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）に感染したマウスの脳皮質組織（両側傷害モデル）を示す。

【図35】Ｐ１３４、Ｐ１３０、Ｐ１３８、及びＰ２１プラスミドのＡＡＶウイルス産生の測定値のプロットである。力価分析は、目的の遺伝子（ＧＯＩ）を増幅するプライマー及びプラスミドに特異的なプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって行われる。ウイルス収率は、ｖｇ／細胞として計算される。

【図36】感染１０日後のＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）、ＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）、及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８（Ｐ１３８群）に感染したマウスの脳皮質組織を示す。細胞は、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮに対する抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色される。ＧＦＰ蛍光は、対照ウイルスに感染した細胞の存在を示す。

【図37】感染３０日後のＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）、ＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）、及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８（Ｐ１３８群）に感染したマウスの脳皮質組織を示す。細胞は、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮに対する抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色される。ＧＦＰ蛍光は、対照ウイルスに感染した細胞の存在を示す。

【図38】１０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）に感染したマウスの脳皮質組織（両側傷害モデル）を示す。細胞は、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮに対する抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色される。ＧＦＰ蛍光は、対照ウイルスに感染した細胞の存在を示す。

【図39A-B】３０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２（Ｐ１２対照群）及びＡＡＶ９－Ｐ１２＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４（Ｐ１３４群）に感染したマウスの脳皮質組織（両側傷害モデル）を示す。図３９Ａは、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮに対する抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色された細胞を示す。ＧＦＰ蛍光は、対照ウイルスに感染した細胞の存在を示す。図３９Ｂは、３０ｄｐｉでのグリア細胞からニューロンへの変換率の定量化である。

【図40】ＮＤ１及びＤｌｘ２構築物の２つの一般的なマップを示す。エンハンサーは、ｅｆ１ａエンハンサー又はＣＭＶエンハンサーを指す。ｐＧｆａは、２．２ｋｂ又は１．６ｋｂのＧｆａプロモーターを指す。ポリ（Ａ）シグナルは、ＳＶ４０、ｂＧＨ、又はｈＧＨポリ（Ａ）シグナルを指す。

【図41】ＮＸＬ－Ｐ１１２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図42】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１１２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図43】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１１２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ抗体、抗ＭＡＰ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図44】ＮＸＬ－Ｐ１２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図45】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図46】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ抗体、抗ＭＡＰ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図47】ＮＸＬ－Ｐ１２４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図48】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１２４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図49】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ１２４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ｂＧＨｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ抗体、抗ＭＡＰ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図50】ＮＸＬ－Ｐ２０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図51】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ２０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の６日後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図52】２×１０^１０ｖｇ／ｍｌのＡＡＶ９－Ｐ２０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ｂＳＶ４０ｐＡ）による形質導入の３週間後、抗ＮｅｕＮ抗体、抗ＭＡＰ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図53】ＮＸＬ－Ｐ３１（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図54】ＮＸＬ－Ｐ１２３（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図55】ＮＸＬ－Ｐ１１３（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図56】ＮＸＬ－Ｐ１１１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ＳＶ４０ｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗ＮＤ１抗体、抗Ｄｌｘ２抗体、及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【図57A-B】１０ｄｐｉ及び３０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２（ウイルス）に感染したマウスの脳の線条体組織を示す。図５７Ａは、ＧＦＰ蛍光によって実証されるように、１０ｄｐｉでのＡＡＶ－Ｐ１２によるマウス線条体の広範な感染を示す。図５７Ｂは、３０ｄｐｉでのＡＡＶ９－Ｐ１２によるマウスの感染を示す。細胞は、ＧＦＡＰ及びＮｅｕＮに対する抗体で免疫染色されている。

【図58】１０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１１２（Ｐ１１２群）に同時感染したマウスの脳の線条体組織を示す。ＧＦＰ蛍光は、ＡＡＶ９－Ｐ１１２に感染した細胞を識別する。細胞は、ＧＦＡＰ及びＮｅｕＮに対する抗体で免疫染色されている。

【図59】３０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１１２（Ｐ１１２群）に同時感染したマウスの脳の線条体組織を示す。ＧＦＰ蛍光は、ＡＡＶ９－Ｐ１１２に感染した細胞を識別する。細胞は、ＧＦＡＰ及びＮｅｕＮに対する抗体で免疫染色されている。白色の矢印は、ＮｅｕＮ陽性ニューロンとなったＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１１２に同時感染した細胞を示す。

【図60】１０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１２２（Ｐ１２２群）に同時感染したマウスの脳の線条体組織を示す。ＧＦＰ蛍光は、ＡＡＶ９－Ｐ１１２に感染した細胞を識別する。細胞は、ＧＦＡＰ及びＮｅｕＮに対する抗体で免疫染色されている。

【図61】３０ｄｐｉでＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１２２（Ｐ１２２群）に同時感染したマウスの脳の線条体組織を示す。ＧＦＰ蛍光は、ＡＡＶ９－Ｐ１１２に感染した細胞を識別する。細胞は、ＧＦＡＰ及びＮｅｕＮに対する抗体で免疫染色されている。

【図62】ＮＸＬ－Ｐ１０４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｂＧＨｐＡ）又はＮＸＬ－Ｐ１０５（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）を示す。

【図63】ＮＸＬ－Ｐ１３３（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）、ＮＸＬ－Ｐ１３７（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）、又はＮＸＬ－Ｐ１３１（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクションの２４時間後、抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）を示す。

【図64】ＡＡＶ９－Ｐ１３３（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）によるトランスフェクション後、抗Ｄｌｘ２抗体及びＤＡＰＩ（核染色）で免疫染色されたＲＣＡを示す。

【発明を実施するための形態】

【0028】

配列の簡単な説明
表１に、核酸配列及びアミノ酸配列のリストを提供する。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

【表1-13】

【表1-14】

【0029】

別途定義されない限り、使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。用語が単数形で記載される場合、本発明者らはまた、その用語の複数形によって説明される本開示の態様も企図する。参照によって組み込まれる参考文献で使用される用語及び定義に矛盾がある場合、本出願で使用される用語は、本明細書で与えられる定義を有するものとする。使用される他の専門用語は、当該技術分野専門の様々な辞書、例えば、“Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅｒｉｔａｇｅ（登録商標）Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ”（Ｅｄｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅｒｉｔａｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ，２０１１，Ｈｏｕｇｈｔｏｎ Ｍｉｆｆｌｉｎ Ｈａｒｃｏｕｒｔ，Ｂｏｓｔｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、“ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ”（６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００２，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、又は“Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００８，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）によって例示されているような、それらが使用される技術分野における通常の意味を有する。

【0030】

例えば、全ての特許、公開された特許出願、及び非特許文献を含む、本明細書で引用される任意の参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。

【0031】

選択肢の群化が提示される場合、その選択肢の群化を構成するメンバーの任意の組み合わせ及び全ての組み合わせが具体的に想定される。例えば、項目が、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤからなる群から選択される場合、発明者らは、各代替例を個別に（例えば、Ａ単独、Ｂ単独など）、並びにＡ、Ｂ、及びＤ、Ａ及びＣ、Ｂ及びＣなどの組み合わせを具体的に想定する。「及び／又は」という用語は、２つ以上の項目のリストにおいて使用される場合、それ自体で、又は他の列挙された項目のうちのいずれか１つ以上と組み合わせて、列挙された項目のうちのいずれか１つを意味する。例えば、「Ａ及び／又はＢ」という表現は、Ａ及びＢのいずれか又は両方、すなわち、Ａ単独、Ｂ単独、又はＡ及びＢの組み合わせを意味することを意図している。「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」という表現は、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、Ａ及びＢの組み合わせ、Ａ及びＣの組み合わせ、Ｂ及びＣの組み合わせ、又はＡ、Ｂ、及びＣの組み合わせを意味することを意図している。

【0032】

数値の範囲が本明細書で提供される場合、範囲は、範囲の縁及び定義された範囲の縁の間の任意の数字を含むと理解される。例えば、「１～１０」は、１～１０の任意の数字、並びに数字１及び数字１０を含む。

【0033】

数値に関して「約（ａｂｏｕｔ）」という用語が使用される場合、プラス又はマイナス１０％を意味すると理解される。例えば、「約１００」には、９０～１１０が含まれる。

【0034】

本明細書で使用される場合、「ｈＮＤ１」は、ヒト神経分化（ＮｅｕｒｏＤ１）遺伝子又はタンパク質を指す。

【0035】

本明細書で使用される場合、「ＣＥ」は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターエンハンサー配列を指す。

【0036】

本明細書で使用される場合、「ＥＥ」は、Ｅｆ１αプロモーターエンハンサー配列を指す。

【0037】

本明細書で使用される場合、「ｐＧｆａ６８１」は、６８１ｂｐサイズのヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター切断型配列を指す。本明細書で使用される場合、「ｐＧｆａ６８１」、「Ｇｆａ６８１」、「ＧｆａＡＢＣ１Ｄ」、及び「ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ」は、同義的に使用される。

【0038】

本明細書で使用される場合、「ＣＩ」は、ヒトβグロビン遺伝子の第１イントロンからの５’ドナー部位と免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロンからの分岐及び３’アクセプター部位とからなるキメライントロンを指す。

【0039】

本明細書で使用される場合、「ＣＲＧＩ」は、ＣＡＧプロモーターにおけるものと同様のウサギβグロビン（ｇｌｏｂｉｎｇ）及びニワトリβアクチンのキメライントロンを指す。

【0040】

本明細書で使用される場合、「ＧＩ」は、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）第１イントロンを指す。

【0041】

本明細書で使用される場合、「ＷＰＲＥ」は、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）転写後調節因子を指す。

【0042】

本明細書で使用される場合、「ｏＰＲＥ」は、ＷＰＲＥの最適化バージョンを指す。

【0043】

本明細書で使用される場合、「ＳＶ４０ｐＡ」は、ＳＶ４０ウイルスのポリＡシグナルを指す。

【0044】

本明細書で使用される場合、「ｂＧＨｐＡ」は、ウシ成長ホルモンのポリＡシグナルを指す。

【0045】

本明細書で使用される場合、「ｖｇ」は、ウイルスゲノムを指す。

【0046】

本明細書で使用される場合、「ｈＤｌｘ２」は、ヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２遺伝子又はタンパク質を指す。

【0047】

本明細書に提供される任意の組成物又はベクターは、本明細書に提供される任意の方法で使用するために具体的に想定される。

【0048】

一態様では、本明細書に提供される方法及び組成物は、ベクターを含む。本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、染色体ＤＮＡから物理的に分離された環状の二本鎖ＤＮＡ分子を指す。「ベクター」という用語は、「プラスミド」という用語と互換的に使用され得ることに留意されたい。

【0049】

一態様では、本明細書に提供されるベクターは、組換えベクターである。本明細書で使用される場合、「組換えベクター」という用語は、組換え核酸を含むベクターを指す。本明細書で使用される場合、「組換え核酸」は、限定されないが、分子クローニングなどの遺伝子組換えの実験室法によって形成される核酸分子を指す。組換えベクターは、限定されないが、分子クローニングなどの遺伝子組換えの実験室法によって形成され得る。また、限定されないが、当業者は、個々のヌクレオチドによってプラスミドを合成することによって、又は異なる既存のベクターからの核酸分子を一緒にスプライシングすることによって、組換えベクターを新規に作製することができる。

【0050】

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ヒト及び追加の霊長類種に感染する複製欠陥非エンベロープ型ディペンドパルボウイルスである。ＡＡＶは、いかなる種においても疾患を引き起こすことは知られていないが、軽度の免疫応答を引き起こす可能性がある。ＡＡＶは、分裂細胞及び静止細胞に感染することができる。ＡＡＶは、ＡＡＶＳ１遺伝子座（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＣ０１０３２７．８のヌクレオチド７７７４～１１４２９）と呼ばれる染色体１９の特定の部位でヒトゲノムに安定して組み込まれるが、ヒトゲノムの他の遺伝子座でのランダムな組み込みも可能である。

【0051】

ＡＡＶは、約４７００ヌクレオチド長の一本鎖ＤＮＡを有する直鎖ゲノムを含む。ＡＡＶのゲノムはまた、ゲノムの各末端に１４５ヌクレオチド長の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。ＩＴＲは、２つのウイルス遺伝子であるｒｅｐ（複製のために非構造タンパク質をコードする）及びｃａｐ（カプシドのために構造タンパク質をコードする）に隣接する。ＩＴＲには、ＡＡＶのゲノムレスキュー、複製、及びパッケージングに必要な全てのシス作用エレメントが含まれている。

【0052】

遺伝子療法アプローチで使用される場合、ＡＡＶゲノム配列のｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子は除去され、２つのＡＡＶ ＩＴＲの間に配置される目的のＤＮＡで置き換えられる。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター構築物」は、２つのＡＡＶ ＩＴＲ配列間に挿入される所望の配列を含むＤＮＡ分子を指す。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター」は、ＤＮＡベクター構築物と共にパッケージングされたＡＡＶを指す。

【0053】

本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター血清型」という用語は、主に、ＡＡＶベクターのカプシドタンパク質内のバリエーションを指す。

【0054】

一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクター血清型１、ＡＡＶベクター血清型２、ＡＡＶベクター血清型３、ＡＡＶベクター血清型４、ＡＡＶベクター血清型５、ＡＡＶベクター血清型６、ＡＡＶベクター血清型７、ＡＡＶベクター血清型８、ＡＡＶベクター血清型９、ＡＡＶベクター血清型１０、ＡＡＶベクター血清型１１、及びＡＡＶベクター血清型１２からなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型３である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型４である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型５である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型６である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型７である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型８である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型９である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１０である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１１である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１２である。

【0055】

一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型２のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型３のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型４のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型５のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型６のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型７のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型８のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型９のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型１０のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型１１のＩＴＲ、及びＡＡＶ血清型１２のＩＴＲからなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型２のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型３のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型４のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型５のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型６のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型７のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型８のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型９のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１０のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１１のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１２のＩＴＲである。

【0056】

一態様では、少なくとも１つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１及び９からなる群から選択される。一態様では、少なくとも１つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１である。一態様では、少なくとも９つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１である。

【0057】

一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0058】

一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0059】

２つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸配列に関して本明細書で使用される「パーセント同一性」又は「パーセント同一」という用語は、（ｉ）比較のウィンドウ（「整列可能な」領域）にわたって２つの最適に整列された配列（ヌクレオチド又はアミノ酸）を比較し、（ｉｉ）両方の配列で同一の核酸塩基（ヌクレオチド配列の場合）又はアミノ酸残基（タンパク質及びポリペプチドの場合）が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を得、（ｉｉｉ）一致した位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で割り、次いで、（ｉｖ）この商に１００％を掛けて、パーセント同一性を得ることによって計算される。「パーセント同一性」が特定の比較ウィンドウを指定せずに参照配列に関連して計算されている場合、パーセント同一性は、整列領域にわたる一致した位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、２つの配列（クエリ及び対象）が最適に整列されている場合（それらの整列のギャップを考慮して）、クエリ配列の「パーセント同一性」は、２つの配列間の同一の位置の数をその長さ（又は比較ウィンドウ）にわたってクエリ配列の位置の総数で割って、それに１００％を掛けたものと等しい。

【0060】

配列同一性のパーセンテージがアミノ酸に関して使用される場合、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換（アミノ酸残基が、同様の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有し、したがって、分子の機能的特性を変化させない他のアミノ酸残基で置換されている）によってしばしば異なることが認識される。配列が保存的置換で異なる場合、パーセント配列同一性を、置換の保存的性質について補正するために上向きに調整することができる。そのような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」又は「類似性」を有すると言われる。

【0061】

パーセント同一性を計算するための配列の最適な整列のために、２つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸配列間の配列同一性又は類似性を比較するために使用することができるＣｌｕｓｔａｌＷ又はＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（登録商標）（ＢＬＡＳＴ（商標））などの様々なペアワイズ又は多重配列整列アルゴリズム及びプログラムが当該技術分野で既知である。他の整列及び比較方法が、当該技術分野で既知であるが、２つの配列間の整列及びパーセント同一性（上記のパーセント同一性の範囲を含む）は、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムによって決定され得る。例えば、Ｃｈｅｎｎａ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｃｌｕｓｔａｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１：３４９７－３５００（２００３）、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ，ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｍａｔｒｉｘ ｃｈｏｉｃｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２：４６７３－４６８０（１９９４）、Ｌａｒｋｉｎ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０，”Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３：２９４７－４８（２００７）、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．“Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）を参照されたい（それらの内容及び開示全体は、参照により本明細書に援用される）。

【0062】

２つのヌクレオチド配列に関して本明細書で使用される「パーセント相補性」又は「パーセント相補」という用語は、パーセント同一性の概念に類似しているが、クエリ及び対象配列が直線的に配置され、ループ、ステム、又はヘアピンなどの二次フォールディング構造なしで最適に塩基対形成された場合、対象配列をヌクレオチドに最適に塩基対形成又はハイブリダイズするクエリ配列のヌクレオチドのパーセントを指す。かかるパーセント相補性は、２つのＤＮＡ鎖、２つのＲＮＡ鎖、又はＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖との間であり得る。「パーセント相補性」は、（ｉ）比較のウィンドウにわたって直線的にかつ完全に伸長した配置で２つのヌクレオチド配列を最適に塩基対形成又はハイブリダイズさせ（すなわち、フォールディング又は二次構造なしで）、（ｉｉ）比較のウィンドウにわたって２つの配列間の塩基対の位置の数を決定して、相補的な位置の数を得、（ｉｉｉ）相補的な位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で割り、（ｉｖ）この商に１００％を掛けて、２つの配列のパーセント相補性を得ることによって計算することができる。２つの配列の最適な塩基対形成は、水素結合を介して、Ｇ－Ｃ、Ａ－Ｔ、及びＡ－Ｕなどのヌクレオチド塩基の既知の対形成に基づいて決定することができる。「パーセント相補性」が、特定の比較ウィンドウを指定せずに参照配列に関連して計算される場合、パーセント同一性は、２つの直線的な配列間の相補的な位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、２つの配列（クエリ及び対象）が最適に塩基形成された場合（ミスマッチ又は非塩基対形成ヌクレオチドを許容する場合）、クエリ配列の「パーセント相補性」は、２つの配列間の塩基対形成の位置の数をその長さにわたるクエリ配列の位置の総数で割って、これに１００％を掛けたものと等しくなる。

【0063】

「ポリヌクレオチド」、「核酸配列」、又は「核酸分子」という用語の使用は、本開示を、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含むポリヌクレオチドに限定することを意図するものではない。例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）分子も想定される。当業者であれば、ポリヌクレオチド及び核酸分子が、リボヌクレオチド並びにリボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドの組み合わせを含むことができることを認識するであろう。かかるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドは、天然に存在する分子及び合成類似体の両方を含む。本開示のポリヌクレオチドはまた、一本鎖形態、二本鎖形態、ヘアピン、ステム及びループ構造などを含むが、これらに限定されない配列の全ての形態を包含する。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、一本鎖である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、二本鎖である。核酸分子は、ポリペプチド又は低分子ＲＮＡをコードすることができる。

【0064】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドは、本明細書に提供されるポリヌクレオチドによってコードされ得る。本明細書に提供されるタンパク質は、本明細書に提供される核酸分子によってコードされ得る。タンパク質は、本明細書に提供されるポリペプチドを含むことができる。本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、細胞に構造又は酵素活性を提供することができるアミノ酸残基の鎖を指す。本明細書で使用される場合、「コード配列」は、タンパク質をコードする核酸配列を指す。

【0065】

本明細書で使用される場合、「ＣｐＧ部位」又は「ＣＧ部位」という用語は、シトシン及びグアニンが１つのリン酸基によってのみ分離されているＤＮＡ配列の領域を指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、「ＣＧ島」の「ＣｐＧ島」という用語は、高頻度で発生するＣｐＧ部位を指す。

【0067】

本明細書で使用される場合、「コドン」という用語は、３つのヌクレオチドの配列を指す。

【0068】

本明細書で使用される場合、「コドン最適化」という用語は、元のアミノ酸配列を維持しながら、配列の少なくとも１つのコドンを、宿主細胞の遺伝子においてより頻繁に又は最も頻繁に使用されるコドンで置き換えることによって、目的の宿主細胞における発現の増強のために改変されるコードを指す。

【0069】

本明細書で使用される場合、「エンハンサー」という用語は、少なくとも特定の組織、発生段階、及び／又は状態において、関連する転写可能なＤＮＡ配列又はコード配列の転写及び発現を開始、支援、影響、起因、及び／又は促進するように作動するＤＮＡ配列の領域を指す。一態様では、エンハンサーは、シスエンハンサーである。一態様では、エンハンサーは、トランスエンハンサーである。

【0070】

エンハンサー配列は、当該技術分野で既知のゲノム技術を利用することによって同定することができる。非限定的な例としては、レポーター遺伝子及び次世代配列決定方法、例えば、クロマチン免疫沈降配列決定（ＣｈＩＰ－ｓｅｑ）、ＤＮａｓｅＩ過感受性配列決定（ＤＮａｓｅ－ｓｅｑ）、小球菌ヌクレアーゼ配列決定（ＭＮａｓｅ－ｓｅｑ）、調節エレメントのホルムアルデヒド支援単離配列決定（ＦＡＩＲＥ－ｓｅｑ）、及びトランスポザーゼアクセス可能クロマチン配列決定のためのアッセイ（ＡＴＡＣ－ｓｅｑ）の使用が挙げられる。

【0071】

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、プロモーター又は他の調節エレメントと、関連する転写可能なＤＮＡ配列又は遺伝子（又は導入遺伝子）のコード配列との間の機能的連結を指し、そのため、プロモーターなどが、少なくとも特定の組織、発生段階、及び／又は状態において、関連する転写可能なＤＮＡ配列又はコード配列の転写及び発現を開始、支援、影響、起因、及び／又は促進するように作動する。本明細書で使用される場合、「調節エレメント」は、作動可能に連結された配列の発現を正又は負に調節する任意の配列エレメントを指す。「調節エレメント」には、細胞において遺伝子又は転写可能なＤＮＡ配列の発現を調節又は可能にするのに好適、必要、又は好ましい、プロモーター、エンハンサー、リーダー、転写開始部位（ＴＳＳ）、リンカー、５’及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）、イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び終止領域又は配列などが含まれるが、これらに限定されない。このような追加の調節エレメントは任意選択的であり、遺伝子又は転写可能なＤＮＡ配列の発現を増強又は最適化するために使用することができる。

【0072】

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位、転写開始部位、及び／又はＴＡＴＡボックスを含み、かつ会合した転写可能なポリヌクレオチド配列及び／又は遺伝子（又は導入遺伝子）の転写及び発現を支援又は促進するＤＮＡ配列を指す。プロモーターは、既知の又は天然に存在するプロモーター配列若しくは他のプロモーター配列から、合成的に産生、変化、又は誘導され得る。プロモーターは、２つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメラプロモーターも含むことができる。したがって、本出願のプロモーターは、プロモーター配列のバリアントを含むことができ、それらは、既知の又は本明細書に提供される他のプロモーター配列と組成が類似しているが、同一ではない。

【0073】

本明細書で使用される場合、「イントロン」は、ｍＲＮＡ前駆体からメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が成熟するとＲＮＡスプライシングによって除去される、ヌクレオチド配列を指す。

【0074】

本明細書で使用される場合、「ｍＲＮＡ」又は「メッセンジャーＲＮＡ」は、遺伝子の遺伝子配列に対応する一本鎖ＲＮＡを指す。

【0075】

ｍＲＮＡの発現は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して測定され得る。ｍＲＮＡ発現を測定する非限定的な例としては、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ－ＰＣＲ）、ＲＮＡブロット（例えば、ノーザンブロット）、及びＲＮＡ配列決定が挙げられる。発現の違いは、絶対定量化又は相対定量化として説明され得る。例えば、Ｌｉｖａｋ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５：４０２－４０８（２００１）を参照されたい。

【0076】

本明細書で使用される場合、「ゲノム編集」又は「遺伝子編集」は、標的化編集技術を使用して、ゲノム内の目的のヌクレオチド配列の標的化された変異誘発、挿入、欠失、逆位、置換、又は転座を指す。目的のヌクレオチド配列は、任意の長さ、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも２５００、少なくとも５０００、少なくとも１０，０００、又は少なくとも２５，０００ヌクレオチドであり得る。遺伝子編集技術の非限定的な例は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）技術、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）技術、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）技術、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）技術、又はＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ技術である。

【0077】

本明細書で使用される場合、「ＡＳＯ」又は「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、細胞内の標的ＲＮＡ配列に結合し、遺伝子をサイレンシングさせる低分子の一本鎖核酸である。

【0078】

本明細書で使用される場合、「コード領域」、「遺伝子領域」、又は「遺伝子」は、機能ユニットを生成することができるポリヌクレオチドを指す。非限定的な例としては、タンパク質又は非コードＲＮＡ分子が挙げられる。「コード領域」、「遺伝子」、又は「遺伝子領域」は、プロモーター、エンハンサー配列、リーダー配列、転写開始部位、転写終止部位、ポリアデニル化部位、１つ以上のエキソン、１つ以上のイントロン、５’－ＵＴＲ、３’－ＵＴＲ、又はそれらの任意の組み合わせを含むことができる。

【0079】

一態様では、遺伝子編集は、変異体ハンチンチン（Ｈｔｔ）凝集体を標的とする。一態様では、遺伝子編集は、非コードＲＮＡ分子によるものである。非コードＲＮＡ分子の非限定的な例としては、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ＲＮＡ（１８～２６ヌクレオチド長）及びそれをコードする前駆体、ヘテロクロマチンｓｉＲＮＡ（ｈｃ－ｓｉＲＮＡ）、Ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、ヘアピン二本鎖ＲＮＡ（ヘアピンｄｓＲＮＡ）、トランス作用性ｓｉＲＮＡ（ｔａ－ｓｉＲＮＡ）、天然に存在するアンチセンスｓｉＲＮＡ（ｎａｔ－ｓｉＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トレーサーＲＮＡ（ｔｒａｃＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）が挙げられる。一態様では、ｓｈＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｓｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ＡＳＯは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｍｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｇＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、低分子ＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｈｃ－ｓｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｐｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ヘアピンｄｓＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｔａ－ｓｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｎａｔ－ｓｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｃｒＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｔｒａｃｒＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｓｇＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的とする。一態様では、ｓｈＲＮＡは、配列番号２３～２５からなる群から選択される核酸配列を含む。一態様では、ｓｈＲＮＡは、配列番号２３の核酸配列を含む。一態様では、ｓｈＲＮＡは、配列番号２４の核酸配列を含む。一態様では、ｓｈＲＮＡは、配列番号２５の核酸配列を含む。

【0080】

本明細書で使用される場合、「ドナー分子」又は「ドナー配列」は、ゲノムへの部位特異的標的化挿入のために選択されている核酸配列として定義される。一態様では、ドナー分子は、「ドナー配列」を含む。一態様では、本明細書に提供される標的編集技術は、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上のドナー分子又はドナー配列の使用を含む。本明細書に提供されるドナー分子又はドナー配列は、任意の長さであり得る。例えば、本明細書に提供されるドナー分子又はドナー配列は、２～５０，０００、２～１０，０００、２～５０００、２～１０００、２～５００、２～２５０、２～１００、２～５０、２～３０、１５～５０、１５～１００、１５～５００、１５～１０００、１５～５０００、１８～３０、１８～２６、２０～２６、２０～５０、２０～１００、２０～２５０、２０～５００、２０～１０００、２０～５０００、又は２０～１０，０００ヌクレオチド長である。

【0081】

本明細書で使用される場合、「ＨＴＴ」は、Ｈｔｔ特異的ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）及び／又はドナー配列を指す。

【0082】

一態様では、本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ遺伝子、Ｈｔｔ特異的ｇＲＮＡ、及びドナー配列を含む。一態様では、本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ遺伝子、Ｈｔｔ特異的ｇＲＮＡ、ドナー配列、及びＤｌｘ２遺伝子配列を含む。一態様では、本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ遺伝子、Ｈｔｔ特異的ｓｈＲＮＡ、及びドナー配列を含む。一態様では、本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ遺伝子、Ｈｔｔ特異的ｓｈＲＮＡ、ドナー配列、及びＤｌｘ２遺伝子配列を含む。

【0083】

本明細書に提供される部位特異的ヌクレアーゼは、標的化編集技術の一部として使用され得る。部位特異的ヌクレアーゼの非限定的な例としては、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＲＮＡガイドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９及びＣｐｆ１）、リコンビナーゼ（限定されないが、例えば、ＤＮＡ認識モチーフに結合したセリンリコンビナーゼ、ＤＮＡ認識モチーフに結合したチロシンリコンビナーゼ）、トランスポザーゼ（限定されないが、例えば、ＤＮＡ結合ドメインに結合したＤＮＡトランスポザーゼ）、又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0084】

部位特異的ヌクレアーゼ、例えば、メガヌクレアーゼ、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、アルゴノートタンパク質（アルゴノートタンパク質の非限定的な例としては、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓアルゴノート（ＴｔＡｇｏ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓアルゴノート（ＰｆＡｇｏ）、Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｅｇｏｒｙｉアルゴノート（ＮｇＡｇｏ）、それらのホモログ、又はそれらの改変バージョンが挙げられる）、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ（ＲＮＡガイドヌクレアーゼの非限定的な例としては、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１及びＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、Ｃｐｆ１、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、それらのホモログ、又はそれらの改変バージョンが挙げられる）は、ゲノム配列の標的部位で二本鎖ＤＮＡ切断を誘導し、その後、自然なプロセスによって修復される。次いで、配列の改変は、切断部位で起こり、これは、遺伝子破壊又は核酸配列の組み込みをもたらす逆位、欠失、又は挿入を含み得る。一態様では、本明細書に提供されるＲＮＡガイドヌクレアーゼは、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１及びＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、Ｃｐｆ１、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、それらのホモログ、又はそれらの改変バージョンからなる群から選択される。

【0085】

一態様では、本明細書に記載の標的化編集技術は、ＲＮＡガイドヌクレアーゼの使用を含む。

【0086】

特定の科学理論によって限定されるものではないが、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳヌクレアーゼは、細菌及び古細菌の適応免疫系の一部であり、配列依存的な様式で標的ＤＮＡを切断することによってウイルスなどの侵入核酸からそれらを保護する。免疫は、侵入ＤＮＡの短い断片（スペーサーとして知られる）を、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座（ＣＲＩＳＰＲアレイ）の近位端の約２０ヌクレオチド長のＣＲＩＳＰＲ反復の間に組み込むことによって獲得される。よく記載されているＣａｓタンパク質は、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ（Ｃｓｎ１としても知られている）であり、これは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓのクラス２、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの一部である。Ｍａｋａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｍｉｃｒｏ３５６９を参照されたい。Ｃａｓ９は、そのアミノ末端にＲｕｖＣ様ヌクレアーゼドメインと、タンパク質の中央に位置するＨＮＨ様ヌクレアーゼドメインと、を含む。Ｃａｓ９タンパク質はまた、ＰＡＭ相互作用（ＰＩ）ドメイン、認識ローブ（ＲＥＣ）、及びＢＨドメインも含む。別のＩＩ型系であるＣｐｆ１ヌクレアーゼは、Ｃａｓ９と同様の様式で作用するが、Ｃｐｆ１は、ｔｒａｃｒＲＮＡを必要としない。Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１３）３３９：８１９－８２３、Ｚｅｔｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１５）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１５．０９．０３８、米国特許公開第２０１４／００６８７９７号、米国特許公開第２０１４／０２７３２３５号、米国特許公開第２０１５／００６７９２２号、米国特許第８，６９７，３５９号、米国特許第８，７７１，９４５号、米国特許第８，７９５，９６５号、米国特許第８，８６５，４０６号、米国特許第８，８７１，４４５号、米国特許第８，８８９，３５６号、米国特許第８，８８９，４１８号、米国特許第８，８９５，３０８号、及び米国特許第８，９０６，６１６号を参照されたい（それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に援用される）。

【0087】

本明細書で使用される場合、「グリア」又は「グリア細胞」という用語は、ＣＮＳ又はＰＮＳ内の非神経細胞を指す。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのオリゴデンドロサイト、少なくとも１つのアストロサイト、少なくとも１つのＮＧ２細胞、少なくとも１つの上衣細胞、及び少なくとも１つのミクログリアからなる群から選択される。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのオリゴデンドロサイトである。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのＮＧ２細胞である。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つの上衣細胞である。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのミクログリアである。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つの反応性アストロサイトである。一態様では、少なくとも１つのアストロサイトは、少なくとも１つの反応性アストロサイトである。

【0088】

本明細書で使用される場合、「アストロサイト」という用語は、脳の重要な構成要素であるグリア細胞を指す。アストロサイトは、シナプス形成及び可塑性、カリウム緩衝、栄養供給、神経又はグリア伝達物質の分泌及び吸収、並びに血液脳関門の維持などの神経機能のサポートに関与する。本明細書で使用される場合、「反応性アストロサイト」という用語は、傷害又は疾患後のアストロサイトの異常な状態を指す。

【0089】

本明細書で使用される場合、「ＮＧ２細胞」又は「ポリデンドロサイト」という用語は、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＣＳＰＧ４）及び血小板由来増殖因子のα受容体（ＰＤＧＦＲＡ）を発現するグリア細胞を指す。

【0090】

本明細書で使用される場合、「ニューロン」又は「神経細胞」という用語は、シナプスを介して他のニューロンと通信する電気的に励起の細胞を指す。一態様では、ニューロンは、単極ニューロン、双極ニューロン、擬単極ニューロン、及び多極ニューロンからなる群から選択される。一態様では、ニューロンは、単極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、双極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、擬単極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、双極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、感覚ニューロン、運動ニューロン、及び介在ニューロンからなる群から選択される。一態様では、ニューロンは、感覚ニューロンである。一態様では、ニューロンは、運動ニューロンである。一態様では、ニューロンは、介在ニューロンである。

【0091】

本明細書で使用される場合、「機能的なニューロン」という用語は、生物学的プロセスを実行することができるニューロンを指す。限定されないが、生物学的プロセスの例としては、化学シナプス及び電気シナプスを介した情報及び通信の処理及び伝達が挙げられる。

【0092】

本明細書で使用される場合、「グルタミン酸作動性ニューロン」という用語は、グルタミン酸を産生し、興奮性シナプスを確立するニューロンのサブクラスを指す。本明細書で使用される場合、「興奮性シナプス」という用語は、シナプス前ニューロンにおける活動電位が、シナプス後細胞で発生する活動電位の確率を増加させるシナプスを指す。本明細書で使用される場合、「活動電位」又は「神経インパルス」という用語は、軸索の膜を横切る電気インパルスを指す。本明細書で使用される場合、「軸索」又は「神経線維」という用語は、活動電位を伝導するニューロンを指す。本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡ作動性ニューロン」という用語は、ＧＡＢＡを生成し、抑制性シナプスを確立するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡ」又は「γアミノ酪酸」という用語は、イオンチャネルを開いて、負に帯電した塩化物イオンを細胞に流入させるか、又は正に帯電したカリウムイオンを細胞から流出させることを可能にする化合物を指す。本明細書で使用される場合、「抑制性シナプス」という用語は、シナプス後ニューロンの膜電位を、活動電位を生成するための閾値から遠ざけるシナプスを指す。本明細書で使用される場合、「ドーパミン作動性ニューロン」という用語は、ドーパミンを産生するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「ドーパミン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「神経伝達物質」という用語は、神経伝達を活性化する内因性化学物質を指す。本明細書で使用される場合、「神経伝達」という用語は、ニューロンの軸索末端によって神経伝達物質が放出されるプロセスを指す。本明細書で使用される場合、「アセチルコリン作動性ニューロン」又は「コリン作動性ニューロン」という用語は、アセチルコリンを分泌するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「アセチルコリン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「セロトニン作動性（ｓｅｒａｔｏｎｅｒｇｉｃ）ニューロン」という用語は、セロトニンを合成するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「セロトニン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「エピネフリン作動性（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅｒｇｉｃ）ニューロン」は、神経伝達物質としてエピネフリンを放出するニューロンを指す。本明細書で使用される場合、「運動ニューロン」という用語は、細胞体が運動皮質、脳幹、又は脊髄に位置し、軸索が脊髄又は脊髄の外側に投射し、筋肉及び腺を直接的又は間接的に制御する、ニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、ペプチド作動性ニューロンという用語は、小さなペプチド分子を神経伝達物質として利用するニューロンのサブセットを指す。

【0093】

一態様では、ニューロンは、機能的なニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される。一態様では、機能的なニューロンは、グルタミン酸作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ドーパミン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、コリン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、セロトニン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、エピネフリン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、運動ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ペプチド作動性ニューロンである。

【0094】

本明細書で使用される場合、「変換」又は「変換された」という用語は、その物理的形態及び／又は生物学的機能を異なる物理的形態及び／又は異なる生物学的機能に変化させる細胞型を指す。一態様では、本開示は、少なくとも１つのグリア細胞を少なくとも１つのニューロンに変換することを提供する。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＣＮＳ又はＰＮＳにおいて生じる。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＣＮＳにおいて生じる。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＰＮＳにおいて生じる。

【0095】

一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0096】

一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２８からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0097】

一態様では、本開示は、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）タンパク質をコードするＤｌｘ２核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びＤｌｘ２コード配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びＤｌｘ２コード配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0098】

一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を有するヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及びｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0099】

一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0100】

一態様では、本開示は、治療を必要とする対象の治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0101】

一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶタンパク質をコードする核酸配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ウイルスタンパク質をコードする核酸配列を含む。ＡＡＶタンパク質及びウイルスタンパク質の非限定的な例としては、ｒｅｐ及びｃａｐタンパク質が挙げられる。

【0102】

神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１；β２とも称される）は、他のｂＨＬＨタンパク質とヘテロ二量体を形成して、Ｅボックスとして知られているＤＮＡ配列を含む遺伝子の転写を活性化する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（ｂＨＬＨ）転写因子である。

【0103】

一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１配列、ボノボＮｅｕｒｏＤ１配列、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１配列、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１配列、マカクＮｅｕｒｏＤ１配列、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１配列、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１配列、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１配列、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１配列、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１配列からなる群から選択される。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ボノボＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、マカクＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、キツネザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。

【0104】

一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0105】

一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１０と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。

【0106】

Ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２、ＴＥＳ１とも称される）は、Ｄｌｘ遺伝子ファミリーのメンバーであり、前脳及び頭蓋顔面の発生に役割を果たすホメオボックス含有遺伝子である。

【0107】

一態様では、Ｄｌｘ２配列は、ヒトＤｌｘ２（ｈＤｌｘ２）配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、チンパンジーＤｌｘ２配列、ボノボＤｌｘ２配列、オランウータンＤｌｘ２配列、ゴリラＤｌｘ２配列、マカクＤｌｘ２配列、マーモセットＤｌｘ２配列、オマキザルＤｌｘ２配列、ヒヒＤｌｘ２配列、テナガザルＤｌｘ２配列、及びキツネザルＤｌｘ２配列からなる群から選択される。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、チンパンジーＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、ボノボＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、オランウータンＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、ゴリラＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、マカクＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、マーモセットＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、オマキザルＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、ヒヒＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、テナガザルＤｌｘ２配列である。一態様では、Ｄｌｘ２配列は、キツネザルＤｌｘ２配列である。

【0108】

一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９１３％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｄｌｘ２核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0109】

一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＤｌｘ２タンパク質をコードする。

【0110】

一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１配列を含む。一態様では、ＡＡＶは、Ｄｌｘ２配列を含む。

【0111】

本明細書で使用される場合、「リンカー」又は「スペーサー」は、複数のタンパク質ドメイン及びコードドメインを分離する短い配列である。リンカーは、切断可能又は切断不可能であり、単一ベクターにおける多重遺伝子の共発現を促進することができる。

【0112】

本明細書で使用される場合、「２Ａ自己切断ペプチド」又は「２Ａペプチド」は、細胞において組換えタンパク質の切断を誘導することができるリンカーのクラスである。

【0113】

本明細書で使用される場合、「Ｐ２Ａリンカー」、「ｐ２Ａ」、又は「Ｐ２Ａ」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーであるブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）リンカーを指す。

【0114】

一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１５の核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１８の核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａは、配列番号１５である。一態様では、ＧＳＧ－Ｐ２Ａは、配列番号１８である。一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１８の核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａリンカータンパク質は、配列番号２０の核酸コード配列を有する。

【0115】

本明細書で使用される場合、「Ｔ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーである、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）リンカーを指す。

【0116】

一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号１６の核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号１９の核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号２１の核酸コード配列を有する。

【0117】

本明細書で使用される場合、「Ｅ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーであるウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）リンカーを指す。

【0118】

本明細書で使用される場合、「Ｆ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーである口蹄疫(foot and mouse)ウイルス（Ｆ２Ａ）リンカーを指す。

【0119】

一態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、及びＦ２Ａリンカーからなる群から選択される。一態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｔ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｅ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｆ２Ａリンカーである。

【0120】

一態様では、リンカー配列は、Ｐ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0121】

一態様では、リンカー配列は、Ｐ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１８又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0122】

一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２０と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。

【0123】

一態様では、リンカー配列は、Ｔ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１６又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0124】

一態様では、リンカー配列は、Ｔ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0125】

一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２１と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。

【0126】

本明細書で使用される場合、「ＩＲＥＳ」は、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）の内部リボソーム進入部位を指す。

【0127】

一態様では、本開示のＡＡＶ又はベクターは、脳心筋炎ウイルス（ＩＲＥＳ）配列の内部リボソーム進入部位を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0128】

グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）（グリア線維性酸性タンパク質とも称される）は、タンパク質のＩＩＩ型中間径フィラメントファミリーのメンバーであり、中枢神経系で発現され、細胞コミュニケーション及び血液脳関門の機能において役割を果たす。

【0129】

一態様では、プロモーターは、ＧＦＡＰプロモーター、Ｓｏｘ９プロモーター、Ｓ１００ｂプロモーター、Ａｌｄｈ１ｌ１プロモーター、リポカリン２（Ｌｃｎ２）プロモーター、グルタミンシンテターゼプロモーター、アクアポリン－４（ＡＱＰ４）プロモーター、オリゴデンドロサイト転写因子（Ｏｌｉｇ２）プロモーター、及びシナプシンプロモーター、ＮＧ２プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ１）プロモーター、表面抗原分類８６（ＣＤ８６）プロモーター、血小板由来増殖因子受容体α（ＰＤＧＦＲＡ）プロモーター、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲＢ）プロモーター、伸長因子１－α（ＥＦ１ａ）プロモーター、ＣＡＧプロモーター、サイゴメウイル（ＣＭＶ）プロモーター、ユビキチンプロモーターからなる群から選択される。一態様では、プロモーターは、ＧＦＡＰプロモーターである。一態様では、プロモーターは、切断型ＧＦＡＰプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｓｏｘ９プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｓ１００ｂプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ａｌｄｈ１ｌ１プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｌｃｎ２プロモーターである。一態様では、プロモーターは、グルタミンシンテターゼプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＡＱＰ４プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｏｌｉｇ２プロモーターである。一態様では、プロモーターは、シナプシンプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｉｂａ１プロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＤ８６プロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＰＤＧＦＲＡプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＰＤＧＦＲＢプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＥＦ１ａプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＭＶプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ユビキチンプロモーターである。

【0130】

一態様では、ユビキチンプロモーターは、Ｕ６、Ｈ１、７ＳＫ、及びＵ１からなる群から選択される。一態様では、ユビキチンプロモーターは、Ｕ６である。一態様では、ユビキチンプロモーターは、Ｈ１である。一態様では、ユビキチンプロモーターは、Ｈ１である。一態様では、ユビキチンプロモーターは、７ＳＫである。一態様では、ユビキチンプロモーターは、Ｕ１である。一態様では、Ｕ６は、配列番号２２の核酸配列を含む。

【0131】

一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、細胞におけるグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）と呼ばれるタンパク質のアストロサイト特異的発現を指示するプロモーターである。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ＧｆａＡＢＣ１Ｄ（「ｐＧｆａ６８１」とも呼ばれる）、Ｇｆａ１．６、及びｈＧＦＡ２．２からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ＧｆａＡＢＣ１Ｄ（「ｐＧｆａ６８１」とも呼ばれる）である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、Ｇｆａ１．６である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ｈＧＦＡ２．２である。一態様では、ｐＧｆａ６８１は、配列番号２６である。一態様では、ＧＦＡＰ Ｇｆａ１．６は、配列番号４である。一態様では、ｈＧＦａ２．２は、配列番号１２である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号４である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号１２である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号２６である。

【0132】

一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター配列、ボノボＧＦＡＰプロモーター配列、オランウータンＧＦＡＰプロモーター配列、ゴリラＧＦＡＰプロモーター配列、マカクＧＦＡＰプロモーター配列、マーモセットＧＦＡＰプロモーター配列、オマキザルＧＦＡＰプロモーター配列、ヒヒＧＦＡＰプロモーター配列、テナガザルＧＦＡＰプロモーター配列、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーター配列からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ボノボＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、オランウータンＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ゴリラＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、マカクＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、マーモセットＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、オマキザルＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ヒヒＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、テナガザルＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、キツネザルＧＦＡＰプロモーター配列である。

【0133】

一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。更なる態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも１０００ヌクレオチドを含む。更に別の態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも１４００ヌクレオチドを含む。

【0134】

当該技術分野では、プロモーター配列の断片は、作動可能に連結された核酸分子の転写を駆動するように機能し得ることが理解される。例えば、限定されないが、１０００ヌクレオチドのプロモーターが５００ヌクレオチドに切断され、５００ヌクレオチド断片が転写を駆動することができる場合、５００ヌクレオチド断片は、「機能性断片」と称される。

【0135】

一態様では、プロモーターは少なくとも１０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１４０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも２００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも２５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも３００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも３５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも４００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも４５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。

【0136】

一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター核酸配列は、配列番号４、１２、２６、及びその機能的断片からなる群から選択される配列と１００％同一の配列を含む。

【0137】

一態様では、本明細書に提供される核酸配列は、コドン最適化される。

【0138】

一態様では、本明細書に提供される核酸配列は、ＣｐＧ部位が枯渇している。

【0139】

本明細書で使用される場合、「脳」という用語は、神経系の中枢として機能する臓器を指す。一態様では、脳は、大脳、大脳皮質、小脳、及び／又は脳幹を含む。

【0140】

本明細書で使用される場合、「大脳皮質」という用語は、大脳の神経組織の外層を指す。

【0141】

本明細書で使用される場合、「線条体（ｓｔｒｉａｔｕｍ）」又は「線条体（ｃｏｒｐｕｓ ｓｔｒｉａｔｕｍ）」という用語は、前脳の皮質下基底核のニューロンのクラスターを指し、腹側線条体及び背側線条体を含む。

【0142】

本明細書で使用される場合、「黒質」という用語は、中脳の皮質下基底核のニューロンのクラスターを指し、緻密部及び網様部を含む。

【0143】

本明細書で使用される場合、「前脳」という用語は、脳の最も前方の部分を指す。

【0144】

本明細書で使用される場合、「被殻」という用語は、前脳の基底の丸い構造を指し、背部線条体の構成要素である。

【0145】

本明細書で使用される場合、「尾状核」という用語は、前脳の基底の構造を指し、背部線条体の構成要素である。

【0146】

本明細書で使用される場合、「皮質下基底核」という用語は、脳の深部大脳半球におけるニューロンのクラスターを指す。

【0147】

本明細書で使用される場合、「脊髄」という用語は、運動皮質から身体への神経シグナルの伝達において機能する構造を指す。

【0148】

本明細書で使用される場合、「運動皮質」という用語は、随意運動の計画、制御、及び実行に関与する大脳皮質の前頭葉の領域を指す。

【0149】

一態様では、本明細書に提供される方法は、脳において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の大脳皮質において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の線条体において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の背側線条体において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の脊髄において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の被殻において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の尾状核において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の黒質において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。

【0150】

伸長因子１α（ＥＦ－１α；ｅＥＦ１ａ１とも称される）は、伸長因子１複合体のαサブユニットのアイソフォームである。複合体は、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素的送達に関与する。ＥＦ－１αのアイソフォームは、脳、胎盤、肺、肝臓、腎臓、及び膵臓で発現する。

【0151】

一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのヒトエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのチンパンジーエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのボノボエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのオランウータンエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのゴリラエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのマカクエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのマーモセットエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのオマキザルハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのヒヒエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのテナガザルエンハンサー配列、及びＥＦ－１αプロモーターからのキツネザルエンハンサー配列からなる群から選択される。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列はＥＦ－１αプロモーターからの、チンパンジーエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのボノボエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのオランウータンエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのゴリラエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのマカクエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのマーモセットエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのオマキザルエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのヒヒエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのテナガザルエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのキツネザルエンハンサー配列である。

【0152】

一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0153】

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は、ヘルペスウイルス目のウイルスの属である。

【0154】

一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのヒトエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのチンパンジーエンハンサー配列、ＣＭＶからのボノボエンハンサー配列、ＣＭＶからのオランウータンエンハンサー配列、ＣＭＶからのゴリラエンハンサー配列、ＣＭＶからのマカクエンハンサー配列、ＣＭＶからのマーモセットエンハンサー配列、ＣＭＶからのオマキザルエンハンサー配列、ＣＭＶからのヒヒエンハンサー配列、ＣＭＶからのテナガザルエンハンサー配列、及びＣＭＶからのキツネザルエンハンサー配列からなる群から選択される。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのチンパンジーエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのボノボエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのオランウータンエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのゴリラエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのマカクエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのマーモセットエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのオマキザルエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのヒヒエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのテナガザルエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのキツネザルエンハンサー配列である。

【0155】

一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９１１％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１１又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0156】

一態様では、エンハンサーは、ＥＦ１－αプロモーター及びＣＭＶエンハンサーからなるエンハンサーからなる群から選択される。一態様では、エンハンサーは、ＥＦ１－αプロモーターからのものである。一態様では、エンハンサーは、ＣＭＶエンハンサーである。

【0157】

一態様では、本開示のベクターは、キメライントロンを含む。一態様では、キメライントロンは、ヒトβグロビン遺伝子の第１イントロンからの５’ドナー部位、並びに免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロンからの分岐及び３’アクセプター部位からなる。一態様では、キメライントロンは、ＣＡＧプロモーターにおけるものと同様のウサギβグロビン及びニワトリβアクチンのキメライントロンである。一態様では、本開示のベクターは、グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）のイントロンを含む。一態様では、本開示のベクターは、グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）の第１イントロンを含む。

【0158】

イントロンは、スプライソソームイントロン、トランスファーＲＮＡイントロン、グループＩイントロン、グループＩＩイントロン、及びグループＩＩＩイントロンを含む、少なくとも５つのクラスに分類することができる。イントロンは、既知の若しくは天然に存在するイントロン配列又は他のイントロン配列から、合成的に産生、変化、又は誘導することができる。イントロンは、２つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメライントロンも含むことができる。したがって、本出願のイントロンは、イントロン配列のバリアントを含むことができ、既知の又は本明細書に提供される他のイントロン配列と組成が類似しているが、同一ではない。一態様では、イントロンは、少なくとも１０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１４０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも２００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも２５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも３００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも３５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも４００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも４５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。

【0159】

一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５及び２７からなる群から選択される。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５である。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７である。

【0160】

一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0161】

一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0162】

ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）は、ウイルスベクターで送達される遺伝子の発現を増強する三次構造を作成するＤＮＡ配列である。

【0163】

一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、ＷＰＲＥの最適化バージョンである。

【0164】

一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７及び２９からなる群から選択される。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７である。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９である。

【0165】

一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0166】

一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0167】

ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列（ＳＶ４０ポリＡ、サルウイルス４０ポリＡ、及びポリＡとも称する）は、転写を終結させ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の３’末端にポリＡテールを付加することができるＤＮＡ配列である。

【0168】

ｈＧＨポリアデニル化シグナル配列（ｈＧＨポリＡとも称する）は、ＤＮＡ配列であり、転写を終結させ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の３’末端にポリＡテールを付加することができる。

【0169】

ｂＧＨポリアデニル化シグナル配列（ｂＧＨポリＡ又はｂＧＨｐＡとも称する）は、ウシ成長ホルモンのポリＡシグナル又はポリＡテールを指す。

【0170】

本明細書で使用される場合、「ポリＡテール」は、核酸塩基アデニンのみを含む一続きのＲＮＡを指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター構築物から転写されるＲＮＡ分子は、ポリＡテールを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２つのアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも５０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１００個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１４０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２００個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２５０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、５０個のアデニン～３００個のアデニンを含む。

【0171】

一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0172】

一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．１７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0173】

一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９１７％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．１７％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と１００％同一の配列を含む。

【0174】

本明細書で使用される場合、「中枢神経系」又は「ＣＮＳ」という用語は、左右対称の動物の脳及び脊髄を指す。ＣＮＳはまた、網膜、視神経、嗅神経、及び嗅上皮を含む。

【0175】

本明細書で使用される場合、「末梢神経系」又は「ＰＮＳ」という用語は、網膜、視神経、嗅神経、及び嗅上皮を除く、脳及び脊髄以外の神経及び神経節を指す。一態様では、末梢神経系は、体性神経系と自律神経系とに分けられる。

【0176】

本明細書で使用される場合、「体性神経系」という用語は、身体運動の随意制御と関連するＰＮＳの部分を指す。

【0177】

本明細書で使用される場合、「自律神経系」という用語は、内臓の機能を調節するＰＮＳの部分を指す。

【0178】

本明細書で使用される場合、「ＧＦＡＰ陽性」という用語は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）の検出可能なタンパク質蓄積又はＧＦＡＰ ｍＲＮＡ発現の検出可能な蓄積を有する細胞を指す。一態様では、グリア細胞は、ＧＦＡＰ陽性である。

【0179】

本明細書で使用される場合、「検出可能な」という用語は、同定可能なタンパク質又はｍＲＮＡの蓄積を指す。

【0180】

タンパク質の蓄積は、抗体を使用して同定することができる。タンパク質蓄積を測定する非限定的な例としては、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び免疫蛍光が挙げられる。本明細書に提供される抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり得る。本明細書に提供されるタンパク質に対する特異的結合親和性を有する抗体は、当該技術分野で既知の方法を使用して作製され得る。当該技術分野で既知の方法を使用して、本明細書に提供される抗体をマイクロタイタープレートなどの固体支持体に付着させることができる。

【0181】

本明細書で使用される場合、「感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）」及び「ＭＯＩ」という用語は、感染中に添加される細胞当たりのビリオンの数を指す。

【0182】

本明細書で使用される場合、「ビリオン」という用語は、宿主細胞の外側のウイルスの感染形態を指す。

【0183】

本明細書で使用される場合、「神経学的状態」という用語は、中枢神経系又は末梢神経系における障害、疾病、病気、傷害、又は疾患を指す。神経学的状態の非限定的な例は、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：ｃｏｕｒｓｅ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２）（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．）ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｇｏｅｔｚ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００７）（Ｓａｕｎｄｅｒｓ）に見出され得る。

【0184】

本明細書で使用される場合、「損傷」という用語は、中枢神経系又は末梢神経系への損傷を指す。

【0185】

一態様では、神経学的状態は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される。一態様では、神経学的状態は、アルツハイマー病である。一態様では、神経学的状態は、パーキンソン病である。一態様では、神経学的状態は、ＡＬＳである。一態様では、神経学的状態は、ハンチントン病である。一態様では、神経学的状態は、てんかんである。一態様では、神経学的状態は、身体的傷害である。一態様では、神経学的状態は、脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、虚血性脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、出血性脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、脳動脈瘤である。一態様では、神経学的状態は、外傷性脳傷害である。一態様では、神経学的状態は、脳振盪である。一態様では、神経学的状態は、腫瘍である。一態様では、神経学的状態は、炎症である。一態様では、神経学的状態は、感染である。一態様では、神経学的状態は、運動失調症である。一態様では、神経学的状態は、脳萎縮である。一態様では、神経学的状態は、脊髄萎縮である。一態様では、神経学的状態は、多発性硬化症である。一態様では、神経学的状態は、外傷性脊髄傷害である。一態様では、神経学的状態は、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）である。一態様では、神経学的状態は、全虚血である。一態様では、神経学的状態は、低酸素性虚血性脳症である。一態様では、神経学的状態は、塞栓症である。一態様では、神経学的状態は、線維軟骨塞栓症脊髄症である。一態様では、神経学的状態は、血栓症である。一態様では、神経学的状態は、腎症である。一態様では、神経学的状態は、慢性炎症性疾患である。一態様では、神経学的状態は、髄膜炎である。一態様では、神経学的状態は、脳静脈洞血栓症である。

【0186】

一態様では、神経学的状態は、ＣＮＳ又はＰＮＳへの傷害を含む。一態様では、神経学的状態は、ＣＮＳに対する傷害を含む。一態様では、神経学的状態は、ＰＮＳへの傷害を含む。

【0187】

一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、それを必要とする対象にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。

【0188】

一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、それを必要とする対象にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0189】

一態様では、本開示は、グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、当該ＡＡＶベクターが、それを必要とする当該対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。

【0190】

一態様では、本開示は、神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクターを含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該Ｄｌｘ２配列が、それを必要とする当該対象への、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。

【0191】

一態様では、本明細書に提供される方法は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。一態様では、本明細書に提供される方法は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換する。

【0192】

Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１、ＡＳＨ１、ＨＡＳＨ１、ＭＡＳＨ－１、及びｂＨＬＨａ４６とも称される）は、転写因子の塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックスファミリーのメンバーをコードし、神経コミットメント及び分化に役割を果たす遺伝子である。

【0193】

インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１；ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス－１及びＩＳＬＥＴ１としても知られている）は、２つのＮ末端ＬＩＭドメイン及び１つのＣ末端ホメオドメインを含む転写因子をコードする遺伝子である。コードされたタンパク質は、膵臓ランゲルハンス島の胚発生に役割を果たす。

【0194】

ＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ３；ＬＩＭ３及びＣＰＨＤ３としても知られている）遺伝子は、独自のシステインリッチ亜鉛結合ドメイン（ＬＩＭドメイン）を有するタンパク質のファミリーからのタンパク質をコードする。

【0195】

ハンチンチン（Ｈｔｔ；ハンチントン病遺伝子としても知られている）遺伝子はハンチンチンタンパク質をコードする。野生型は、６～３５個のグルタミン残基を含み、変異型Ｈｔｔは、３６個超のグルタミン残基を含む。

【0196】

一態様では、本明細書に提供される方法は、本開示によるＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｄｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、第３の転写因子コード配列を含む第２のＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列又はＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、第３の転写因子は、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、及びＬＨＸ３からなる群から選択される。一態様では、第３の転写因子は、Ａｓｃｌ１である。一態様では、第３の転写因子は、ＩＳＬ１である。一態様では、第３の転写因子は、ＬＨＸ３である。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列、Ｄｌｘ２コード配列、第２のＮｅｕｒｏＤ１コード配列、及び第２のＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含む第２のＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。

【0197】

一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列及びＨｔｔを標的とする第２のｓｈＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のｓｈＲＮＡ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のｓｈＲＮＡを含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列及びＨｔｔを標的とする第２のｓｈＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｓｈＲＮＡ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のｓｈＲＮＡ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のｓｈＲＮＡを含むＡＡＶベクターを使用する。

【0198】

一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするＡＳＯ配列と組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするＡＳＯ配列及びＨｔｔを標的とする第２のＡＳＯ配列と組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするＡＳＯ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のＡＳＯ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のＡＳＯと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。

【0199】

一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｉＲＮＡと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｉＲＮＡ及びＨｔｔを標的とする第２のｓｉＲＮＡと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｓｉＲＮＡ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のｓｉＲＮＡ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のｓｉＲＮＡと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。

【0200】

一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列及びＨｔｔを標的とする第２のｍｉＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のｍｉＲＮＡ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のｍｉＲＮＡを含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列及びＨｔｔを標的とする第２のｍｉＲＮＡ配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｍｉＲＮＡ配列、Ｈｔｔを標的とする第２のｍｉＲＮＡ配列、及びＨｔｔを標的とする第３のＭＩＲＮＡを含むＡＡＶベクターを使用する。

【0201】

一態様では、本明細書で提供される方法は、Ｈｔｔを標的とするｇＲＮＡ配列及びＣＡＳヌクレアーゼを含むＡＡＶベクターと組み合わせて、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列を含むＡＡＶベクターを使用する。一態様では、本明細書に提供される方法は、ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２コード配列、並びにＨｔｔを標的とするｇＲＮＡ配列及びＣＡＳヌクレアーゼを含むＡＡＶベクターを使用する。

【0202】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターは、機能性について、ＮｅｕＮ、ダブルコルチン（ＤＣＸ）、β３チューブリン、（ニューロフィラメント２００）ＮＦ－２００、（微小管関連タンパク質２）ＭＡＰ２、イオン化カルシウム結合アダプター分子（Ｉｂａ１）の転写レベル及びタンパク質レベルを評価することによって測定される。

【0203】

本明細書で使用される場合、「ＮｅｕＮ」又は「Ｆｏｘ－３」又は「Ｒｂｆｏｘ２」又は「ヘキサリボヌクレオチド結合タンパク質－３」という用語は、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓにおける性決定遺伝子のタンパク質産物のホモログであり、ニューロン核抗原であるタンパク質を指す。

【0204】

本明細書で使用される場合、「ＤＣＸ」又は「ダブリング」又は「リッセンセファリン－Ｘ」という用語は、胚及び成体の皮質構造の神経前駆細胞及び未熟ニューロンによって発現される微小管関連タンパク質を指す。

【0205】

本明細書で使用される場合、「β３－チューブリン」又は「クラスＩＩＩβ－チューブリン」又は「β－チューブリンＩＩＩ」という用語は、ニューロンに見られるチューブリンファミリーの微小管要素を指す。

【0206】

本明細書で使用される場合、「ＮＦ－２００」という用語は、ニューロンの細胞質に見出されるＩＶ型中間径フィラメントであるタンパク質のクラスを指す。

【0207】

本明細書で使用される場合、「ＭＡＰ２」という用語は、微小管関連タンパク質ファミリーに属し、ニューロン発生中にニューロン形態を決定及び安定化する役割を果たすタンパク質を指す。

【0208】

本明細書で使用される場合、「Ｉｂａ１」という用語は、ミクログリアマクロファージ特異的カルシウム結合タンパク質を指す。

【0209】

一態様では、本明細書に提供される方法は、遺伝子編集技術と組み合わせて、グリア細胞をニューロンに変換する。一態様では、遺伝子編集技術は、変異型Ｈｔｔを標的とする。一態様では、遺伝子編集技術は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＡＳＯ、及びＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳからなる群から選択される。一態様では、遺伝子編集技術は、ｓｉＲＮＡである。一態様では、遺伝子編集技術は、ｍｉＲＮＡである。一態様では、遺伝子編集技術は、ＡＳＯである。一態様では、遺伝子編集技術は、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳである。

【0210】

一態様では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。一態様では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換する。

【0211】

本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、哺乳綱に分類される任意の種を指す。

【0212】

本明細書で使用される場合、「ヒト」という用語は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓを指す。一態様では、ヒトは、神経学的障害を有する。

【0213】

本明細書で使用される場合、「生きているヒト」という用語は、心臓、呼吸、及び脳活動を有するヒトを指す。

【0214】

本明細書で使用される場合、「非ヒト霊長類」という用語は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓではない霊長目に分類される任意の種又は亜種を指す。非ヒト霊長類の非限定的な例としては、チンパンジー、ボノボ、オランウータン、ゴリラ、マカク、マーモセット、オマキザル、ヒヒ、テナガザル、及びキツネザルが挙げられる。

【0215】

本明細書で使用される場合、「送達すること」又は「送達」という用語は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物で哺乳動物を処置することを指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、それを必要とする対象に送達される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される。一態様では、送達は、局所送達を含む。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、局所送達用に製剤化される。一態様では、送達は、全身送達を含む。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、全身送達用に製剤化される。一態様では、送達は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物を、それを必要とする対象に注入することを含む。一態様では、送達は、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内（ｉｎｔｒａ ｌａｔｅｒａｌ ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ）、大槽内、硝子体内、網膜下内（ｉｎｔｒａ－ｓｕｂｒｅｔｉｎａ）、実質内、鼻腔内、又は経口投与からなる群から選択される。一態様では、送達は、腹腔内送達を含む。一態様では、送達は、筋肉内送達を含む。一態様では、送達は、静脈内送達を含む。一態様では、送達は、髄腔内送達を含む。一態様では、送達は、脳内送達を含む。一態様では、送達は、頭蓋内送達を含む。一態様では、送達は、側脳室内送達を含む。一態様では、送達は、大槽内送達を含む。一態様では、送達は、硝子体内送達を含む。一態様では、送達は、網膜下内送達を含む。一態様では、送達は、実質内送達を含む。一態様では、送達は、鼻腔内送達を含む。一態様では、送達は、経口投与を含む。

【0216】

本明細書で使用される場合、「注入する」という用語は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物を、圧力下及び力を用いて送達することを指す。非限定的な例として、注入は、シリンジ及び針の使用を含むことができる。

【0217】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、対象の脳に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の大脳皮質に注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、対象の線条体に注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脊髄又は対象に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の線条体に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の背側線条体に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の被殻に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の尾状核に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の黒質に注入される。

【0218】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脳の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脳の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0219】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、大脳皮質の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、大脳皮質の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0220】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脊髄の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脊髄の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0221】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、線条体の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、線条体の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0222】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、背側線条体の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、背側線条体の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0223】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0224】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、尾状核の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、尾状核の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0225】

及び態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、注入部位から約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、注入部位から約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0226】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、黒質の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。

【0227】

本明細書で使用される場合、「ＡＡＶ粒子」という用語は、その核酸ゲノムを細胞に伝達するＡＡＶウイルスのパッケージングされたカプシド形態を指す。

【0228】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０^１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１４ＡＡＶ粒子／ｍＬの濃度で注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０^１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１４ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０^１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１４ＡＡＶ粒子／ｍＬ、又は１０^１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０^１４ＡＡＶ粒子／ｍＬの濃度で注入される。

【0229】

一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０μＬ～１０００μＬの体積で注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０μＬ～１００μＬ、１０μＬ～２００μＬ、１０μＬ～３００μＬ、１００μＬ～２００μＬ、１００μＬ～３００μＬ、１００μＬ～４００μＬ、２００μＬ～３００μＬ、２００μＬ～４００μＬ、２００μＬ～５００μＬ、３００μＬ～４００μＬ、３００μＬ～５００μＬ、３００μＬ～６００μＬ、４００μＬ～５００μＬ、４００μＬ～６００μＬ、４００μＬ～７００μＬ、５００μＬ～６００μＬ、５００μＬ～７００μＬ、５００μＬ～８００μＬ、６００μＬ～７００μＬ、６００μＬ～８００μＬ、６００μＬ～９００μＬ、７００μＬ～８００μＬ、７００μＬ～９００μＬ、７００μＬ～１０００μＬ、８００μＬ～９００μＬ、８００μＬ～１０００μＬ、又は９００μＬ～１０００μＬの体積で注入される。

【0230】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意の動物対象を指す。動物対象の非限定的な例としては、ヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチョウ、ニワトリ）、及び家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類など）が挙げられる。

【0231】

本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」は、神経学的状態を有する対象を指す。一態様では、それを必要とする対象は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される神経疾患を有する。一態様では、それを必要とする対象は、アルツハイマー病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、パーキンソン病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、ＡＬＳを有する。一態様では、それを必要とする対象は、ハンチントン病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、てんかんを有する。一態様では、それを必要とする対象は、身体的傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、虚血性脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、出血性脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳動脈瘤を有する。一態様では、それを必要とする対象は、外傷性脳傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳震盪を有する。一態様では、それを必要とする対象は、腫瘍を有する。一態様では、それを必要とする対象は、炎症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、感染を有する。一態様では、それを必要とする対象は、運動失調症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳萎縮を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脊髄萎縮を有する。一態様では、それを必要とする対象は、多発性硬化症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、外傷性脊髄傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）を有する。一態様では、それを必要とする対象は、全虚血を有する。一態様では、それを必要とする対象は、低酸素性虚血性脳症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、塞栓症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、線維軟骨塞栓症脊髄症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、血栓症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、腎症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、慢性炎症性疾患を有する。一態様では、それを必要とする対象は、髄膜炎を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳静脈洞血栓症を有する。

【0232】

一態様では、それを必要とする対象は、哺乳動物である。一態様では、それを必要とする対象は、ヒトである。一態様では、それを必要とする対象は、非ヒト霊長類である。一態様では、それを必要とする対象は、チンパンジー、ボノボ、オランウータン、ゴリラ、マカク、マーモセット、オマキザル、ヒヒ、テナガザル、及びキツネザルからなる群から選択される。一態様では、それを必要とする対象は、チンパンジーである。一態様では、それを必要とする対象は、ボノボである。一態様では、それを必要とする対象は、オランウータンである。一態様では、それを必要とする対象は、ゴリラである。一態様では、それを必要とする対象は、マカクである。一態様では、それを必要とする対象は、マーモセットである。一態様では、それを必要とする対象は、オマキザルである。一態様では、それを必要とする対象は、ヒヒである。一態様では、それを必要とする対象は、テナガザルである。一態様では、それを必要とする対象は、キツネザルである。

【0233】

一態様では、それを必要とする対象は、雄である。一態様では、それを必要とする対象は、雌である。一態様では、それを必要とする対象は、ジェンダーニュートラルである。一態様では、それを必要とする対象は、未熟児（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｎｅｗｂｏｒｎ）である。一態様では、未熟児は、妊娠３６週以前に生まれる。一態様では、それを必要とする対象は、新生児である。一態様では、新生児（ｎｅｗｂｏｒｎ）という用語は、約２ヶ月齢未満である。一態様では、それを必要とする対象は、新生児（ｎｅｏｎａｔｅ）である。一態様では、新生児は、約１ヶ月齢未満である。一態様では、それを必要とする対象は、乳児である。一態様では、乳児は、２ヶ月～２４ヶ月齢である。一態様では、乳児は、２ヶ月～３ヶ月、２ヶ月～４ヶ月、２ヶ月～５ヶ月、３ヶ月～４ヶ月、３ヶ月～５ヶ月、３ヶ月～６ヶ月、４ヶ月～５ヶ月、４ヶ月～６ヶ月、４ヶ月～７ヶ月、５ヶ月～６ヶ月、５ヶ月～７ヶ月、５ヶ月～８ヶ月、６ヶ月～７ヶ月、６ヶ月～８ヶ月、６ヶ月～９ヶ月、７ヶ月～８ヶ月、７ヶ月～９ヶ月、７ヶ月～１０ヶ月、８ヶ月～９ヶ月、８ヶ月～１０ヶ月、８ヶ月～１１ヶ月、９ヶ月～１０ヶ月、９ヶ月～１１ヶ月、９ヶ月～１２ヶ月、１０ヶ月～１１ヶ月、１０ヶ月～１２ヶ月、１０ヶ月～１３ヶ月、１１ヶ月～１２ヶ月、１１ヶ月～１３ヶ月、１１ヶ月～１４ヶ月、１２ヶ月～１３ヶ月、１２ヶ月～１４ヶ月、１２ヶ月～１４ヶ月、１３ヶ月～１４ヶ月、１３ヶ月～１４ヶ月、１３ヶ月～１６ヶ月、１４ヶ月～１４ヶ月、１４ヶ月～１６ヶ月、１４ヶ月～１７ヶ月、１４ヶ月～１６ヶ月、１４ヶ月～１７ヶ月、１４ヶ月～１８ヶ月、１６ヶ月～１７ヶ月、１６ヶ月～１８ヶ月、１６ヶ月～１９ヶ月、１７ヶ月～１８ヶ月、１７ヶ月～１９ヶ月、１７ヶ月～２０ヶ月、１８ヶ月～１９ヶ月、１８ヶ月～２０ヶ月、１８ヶ月～２１ヶ月、１９ヶ月～２０ヶ月、１９ヶ月～２１ヶ月、１９ヶ月～２２ヶ月、２０ヶ月～２１ヶ月、２０ヶ月～２２ヶ月、２０ヶ月～２３ヶ月、２１ヶ月～２２ヶ月、２１ヶ月～２３ヶ月、２１ヶ月～２４ヶ月、２２ヶ月～２３ヶ月、２２ヶ月～２４ヶ月、及び２３ヶ月～２４ヶ月齢である。一態様では、それを必要とする対象は、幼児である。一態様では、幼児は、１歳～４歳齢である。一態様では、幼児は、１歳～２歳、１歳～３歳、１歳～４歳、２歳～３歳、２歳～４歳、及び３歳～４歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、小児である。一態様では、小児は２歳～５歳齢である。一態様では、小児は、２歳～３歳、２歳～４歳、２歳～５歳、３歳～４歳、３歳～５歳、４歳～５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、子供である。一態様では、子供は、６歳～１２歳齢である。一態様では、子供は、６歳～７歳、６歳～８歳、６歳～９歳、７歳～８歳、７歳～９歳、７歳～１０歳、８歳～９歳、８歳～１０歳、８歳～１１歳、９歳～１０歳、９歳～１１歳、９歳～１２歳、１０歳～１１歳、１０歳～１２歳、及び１１歳～１２歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、青年である。一態様では、青年は、１３歳～１９歳齢である。一態様では、青年は、１３歳～１４歳、１３歳～１４歳、１３歳～１６歳、１４歳～１４歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１４歳～１８歳、１６歳～１７歳、１６歳～１８歳、１６歳～１９歳、１７歳～１８歳、１７歳～１９歳、及び１８歳～１９歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、小児対象である。一態様では、１日～１８歳齢の小児対象である。一態様では、小児対象は、１日～１歳、１日～２歳、１日～３歳、１歳～２歳、１歳～３歳、１歳～４歳、２歳～３歳、２歳～４歳、２歳～５歳、３歳～４歳、３歳～５歳、３歳～６歳、４歳～５歳、４歳～６歳、４歳～７歳、５歳～６歳、５歳～７歳、５歳～８歳、６歳～７歳、６歳～８歳、６歳～９歳、７歳～８歳、７歳～９歳、７歳～１０歳、８歳～９歳、８歳～１０歳、８歳～１１歳、９歳～１０歳、９歳～１１歳、９歳～１２歳、１０歳～１１歳、１０歳～１２歳、１０歳～１３歳、１１歳～１２歳、１１歳～１３歳、１１歳～１４歳、１２歳～１３歳、１２歳～１４歳、１２歳～１４歳、１３歳～１４歳、１３歳～１４歳、１３歳～１６歳、１４歳～１４歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１４歳～１８歳、１６歳～１７歳、１６歳～１８歳、及び１７歳～１８歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、高齢者対象である。一態様では、高齢者対象は、６５歳～９５歳以上齢である。一態様では、高齢者対象は、６５歳～７０歳、６５歳～７５歳、６５歳～８０歳、７０歳～７５歳、７０歳～８０歳、７０歳～８５歳、７５歳～８０歳、７５歳～８５歳、７５歳～９０歳、８０歳～８５歳、８０歳～９０歳、８０歳～９５歳、８５歳～９０歳、及び８５歳～９５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、成人である。一態様では、成人対象は、２０歳～９５歳以上齢である。一態様では、成人対象は、２０歳～２５歳、２０歳～３０歳、２０歳～３５歳、２５歳～３０歳、２５歳～３５歳、２５歳～４０歳、３０歳～３５歳、３０歳～４０歳、３０歳～４５歳、３５歳～４０歳、３５歳～４５歳、３５歳～５０歳、４０歳～４５歳、４０歳～５０歳、４０歳～５５歳、４５歳～５０歳、４５歳～５５歳、４５歳～６０歳、５０歳～５５歳、５０歳～６０歳、５０歳～６５歳、５５歳～６０歳、５５歳～６５歳、５５歳～７０歳、６０歳～６５歳、６０歳～７０歳、６０歳～７５歳、６５歳～７０歳、６５歳～７５歳、６５歳～８０歳、７０歳～７５歳、７０歳～８０歳、７０歳～８５歳、７５歳～８０歳、７５歳～８５歳、７５歳～９０歳、８０歳～８５歳、８０歳～９０歳、８０歳～９５歳、８５歳～９０歳、及び８５歳～９５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、１歳～５歳、２歳～１０歳、３歳～１８歳、２１歳～５０歳、２１歳～４０歳、２１歳～３０歳、５０歳～９０歳、６０歳～９０歳、７０歳～９０歳、６０歳～８０歳、又は６５歳～７５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、前期高齢者（ｙｏｕｎｇ ｏｌｄ）対象（６５～７４歳齢）である。一態様では、それを必要とする対象は、中期高齢者（ｍｉｄｄｌｅ ｏｌｄ）対象（７５～８４歳齢）である。一態様では、それを必要とする対象は、後期高齢者（ｏｌｄ）対象（＞８５歳齢）である。

【0234】

本明細書で使用される場合、「流量」という用語は、ＡＡＶベクター又は組成物の送達速度を指す。一態様では、流量は、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分である。一態様では、流量は、０．１μＬ／分～０．２μＬ／分、０．１μＬ／分～０．３μＬ／分、０．１μＬ／分～０．４μＬ／分、０．２μＬ／分～０．３μＬ／分、０．２μＬ／分～０．４μＬ／分、０．２μＬ／分～０．５μＬ／分、０．３μＬ／分～０．４μＬ／分、０．３μＬ／分～０．５μＬ／分、０．３μＬ／分～０．６μＬ／分、０．４μＬ／分～０．５μＬ／分、０．４μＬ／分～０．６μＬ／分、０．４μＬ／分～０．７μＬ／分、０．５μＬ／分～０．６μＬ／分、０．５μＬ／分～０．７μＬ／分、０．５μＬ／分～０．８μＬ／分、０．６μＬ／分～０．７μＬ／分、０．６μＬ／分～０．８μＬ／分、０．６μＬ／分～０．９μＬ／分、０．７μＬ／分～０．８μＬ／分、０．７μＬ／分～０．９μＬ／分、０．７μＬ／分～１．０μＬ／分、０．８μＬ／分～０．９μＬ／分、０．８μＬ／分～１．０μＬ／分、０．８μＬ／分～１．１μＬ／分、０．９μＬ／分～１．０μＬ／分、０．９μＬ／分～１．１μＬ／分、０．９μＬ／分～１．２μＬ／分、１．０μＬ／分～１．１μＬ／分、１．０μＬ／分～１．２μＬ／分、１．０μＬ／分～１．３μＬ／分、１．１μＬ／分～１．２μＬ／分、１．１μＬ／分～１．３μＬ／分、１．１μＬ／分～１．４μＬ／分、１．２μＬ／分～１．３μＬ／分、１．２μＬ／分～１．４μＬ／分、１．２μＬ／分～１．５μＬ／分、１．３μＬ／分～１．４μＬ／分、１．３μＬ／分～１．５μＬ／分、１．３μＬ／分～１．６μＬ／分、１．４μＬ／分～１．５μＬ／分、１．４μＬ／分～１．６μＬ／分、１．４μＬ／分～１．７μＬ／分、１．５μＬ／分～１．６μＬ／分、１．５μＬ／分～１．７μＬ／分、１．５μＬ／分～１．８μＬ／分、１．６μＬ／分～１．７μＬ／分、１．６μＬ／分～１．８μＬ／分、１．６μＬ／分～１．９μＬ／分、１．７μＬ／分～１．８μＬ／分、１．７μＬ／分～１．９μＬ／分、１．７μＬ／分～２．０μＬ／分、１．８μＬ／分～１．９μＬ／分、１．８μＬ／分～２．０μＬ／分、１．８μＬ／分～２．１μＬ／分、１．９μＬ／分～２．０μＬ／分、１．９μＬ／分～２．１μＬ／分、１．９μＬ／分～２．２μＬ／分、２．０μＬ／分～２．１μＬ／分、２．０μＬ／分～２．２μＬ／分、２．０μＬ／分～２．３μＬ／分、２．１μＬ／分～２．２μＬ／分、２．１μＬ／分～２．３μＬ／分、２．１μＬ／分～２．４μＬ／分、２．２μＬ／分～２．３μＬ／分、２．２μＬ／分～２．４μＬ／分、２．２μＬ／分～２．５μＬ／分、２．３μＬ／分～２．４μＬ／分、２．３μＬ／分～２．５μＬ／分、２．３μＬ／分～２．６μＬ／分、２．４μＬ／分～２．５μＬ／分、２．４μＬ／分～２．６μＬ／分、２．４μＬ／分～２．７μＬ／分、２．５μＬ／分～２．６μＬ／分、２．５μＬ／分～２．７μＬ／分、２．５μＬ／分～２．８μＬ／分、２．６μＬ／分～２．７μＬ／分、２．６μＬ／分～２．８μＬ／分、２．６μＬ／分～２．９μＬ／分、２．７μＬ／分～２．８μＬ／分、２．７μＬ／分～２．９μＬ／分、２．７μＬ／分～３．０μＬ／分、２．８μＬ／分～２．９μＬ／分、２．８μＬ／分～３．０μＬ／分、２．８μＬ／分～３．１μＬ／分、２．９μＬ／分～３．０μＬ／分、２．９μＬ／分～３．１μＬ／分、２．９μＬ／分～３．２μＬ／分、３．０μＬ／分～３．１μＬ／分、３．０μＬ／分～３．２μＬ／分、３．０μＬ／分～３．３μＬ／分、３．１μＬ／分～３．２μＬ／分、３．１μＬ／分～３．３μＬ／分、３．１μＬ／分～３．４μＬ／分、３．２μＬ／分～３．３μＬ／分、３．２μＬ／分～３．４μＬ／分、３．２μＬ／分～３．５μＬ／分、３．３μＬ／分～３．４μＬ／分、３．３μＬ／分～３．５μＬ／分、３．３μＬ／分～３．６μＬ／分、３．４μＬ／分～３．５μＬ／分、３．４μＬ／分～３．６μＬ／分、３．４μＬ／分～３．７μＬ／分、３．５μＬ／分～３．６μＬ／分、３．５μＬ／分～３．７μＬ／分、３．５μＬ／分～３．８μＬ／分、３．６μＬ／分～３．７μＬ／分、３．６μＬ／分～３．８μＬ／分、３．６μＬ／分～３．９μＬ／分、３．７μＬ／分～３．８μＬ／分、３．７μＬ／分～３．９μＬ／分、３．７μＬ／分～４．０μＬ／分、３．８μＬ／分～３．９μＬ／分、３．８μＬ／分～４．０μＬ／分、３．８μＬ／分～４．１μＬ／分、３．９μＬ／分～４．０μＬ／分、３．９μＬ／分～４．１μＬ／分、３．９μＬ／分～４．２μＬ／分、４．０μＬ／分～４．１μＬ／分、４．０μＬ／分～４．２μＬ／分、４．０μＬ／分～４．３μＬ／分、４．１μＬ／分～４．２μＬ／分、４．１μＬ／分～４．３μＬ／分、４．１μＬ／分～４．４μＬ／分、４．２μＬ／分～４．３μＬ／分、４．２μＬ／分～４．４μＬ／分、４．２μＬ／分～４．５μＬ／分、４．３μＬ／分～４．４μＬ／分、４．３μＬ／分～４．５μＬ／分、４．３μＬ／分～４．６μＬ／分、４．４μＬ／分～４．５μＬ／分、４．４μＬ／分～４．６μＬ／分、４．４μＬ／分～４．７μＬ／分、４．５μＬ／分～４．６μＬ／分、４．５μＬ／分～４．７μＬ／分、４．５μＬ／分～４．８μＬ／分、４．６μＬ／分～４．７μＬ／分、４．６μＬ／分～４．８μＬ／分、４．６μＬ／分～４．９μＬ／分、４．７μＬ／分～４．８μＬ／分、４．７μＬ／分～４．９μＬ／分、４．７μＬ／分～５．０μＬ／分，４．８μＬ／分～４．９μＬ／分、４．８μＬ／分～５．０μＬ／分、又は４．９μＬ／分～５．０μＬ／分である。

【0235】

本明細書で使用される場合、「治療有効用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」又は「薬学的活性用量（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」という用語は、神経学的状態の治療に有効である本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物の量を指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物は、薬学的に許容される担体と一緒に提供され得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物と混合される非毒性の溶媒、分散剤、賦形剤、アジュバント、又は他の材料を指す。

【0236】

薬学的に許容される担体の非限定的な例としては、液体（例えば、生理食塩水）、ゲル、ナノ粒子、エクソソーム、脂質小胞、又は希釈剤、アジュバント、賦形剤、又は耐酸性カプセル化成分の固体形態が挙げられる。好適な希釈剤及び賦形剤の非限定的な例としては、医薬品グレードの生理食塩水、デキストロース、グリセロール、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられる。一態様では、治療有効用量は、補助物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤、安定剤又はｐＨ緩衝剤を含む。一態様では、治療有効用量の本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物が、対象に注入される。一態様では、治療有効用量の本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物が、対象に送達される。一態様では、治療有効用量は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に投与される。一態様では、治療有効用量は、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物の約１％～約５％、約５％～約１０％、約１０％～約１４％、約１４％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約３０％～約３５％、約４０～約４５％、約５０％～約５５％、約１％～約９５％、約２％～約９５％、約５％～約９５％、約１０％～約９５％、約１４％～約９５％、約２０％～約９５％、約２５％～約９５％、約３０％～約９５％、約３５％～約９５％、約４０％～約９５％、約４５％～約９５％、約５０％～約９５％、約５５％～約９５％、約６０％～約９５％、約６５％～約９５％、約７０％～約９５％、約４５％～約９５％、約８０％～約９５％、又は約８５％～約９５％を含む。

【0237】

一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも２日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回投与される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、若しくは１４日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、最大で４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１４、１６、１７、１８、１９、若しくは２０日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２週間又は数ヶ月間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２ヶ月間又は数年間連続して、慢性的に、対象の全生涯、又は無期限に、少なくとも１回投与される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、２年間連続して、３年間連続して、又は５年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、２年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、３年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、５年間連続して、年に１回送達される。

【0238】

本明細書で使用される場合、「寛解」、「治癒」、又は「解消」という用語は、それを必要とする対象の、治療有効用量に応答して治癒される割合又は神経学的状態の寛解若しくは完全な解消が得られる割合を指す。

【0239】

本明細書で使用される場合、「奏効率」という用語は、それを必要とする対象の、治療有効用量に肯定的に応答する（例えば、１つ以上の症状の重症度又は頻度が低下した）割合を指す。

【0240】

一態様では、治療有効用量は、少なくとも約５０％の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。一態様では、治療有効用量は、１つ以上の神経学的状態の症状を排除、低減、減速、又は遅延させる。神経学的状態の症状の非限定的な例としては、振戦、動きの鈍化（運動緩慢）、筋肉の硬直、姿勢及び平衡の障害、自動運動の喪失、非協調運動、非制御運動、自発痙攣運動、発話の変化、しびれ、書字の変化、不随意運動（例えば、舞踏運動、制御不能な姿勢、気分の変化、及び睡眠障害）が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、運動症状である。運動症状の非限定的な例としては、不随意運動の障害又は随意運動の障害が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、認知症状である。認知症状の非限定的な例としては、微細運動能力、振戦、発作、舞踏病、ジストニア、ジスキネジア、遅い又は異常な眼球運動、歩行障害、姿勢障害、平衡障害、発話困難、嚥下困難、整理困難、優先順位付け困難、課題に集中することの困難、柔軟性の欠如、衝動制御の欠如、爆発、自分自身の行動及び／又は能力の認識の欠如、思考の処理の遅さ、新しい情報の学習の困難、物事を記憶することの困難、コミュニケーションの困難、命令に従うことの困難、課題を実行することの困難が挙げられる。

【0241】

一態様では、神経学的状態の症状は、精神医学的症状である。精神医学的症状の非限定的な例としては、うつ病、過敏性、悲しみ又は無感情、ひきこもり、不眠症、疲労、エネルギーの欠如、強迫性障害、躁病、双極性障害、及び体重減少が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、少なくとも１つの損傷した血管である。一態様では、神経学的状態の症状は、損傷した血液脳関門である。一態様では、神経学的状態の症状は、損傷した血流である。神経学的状態の症状の除去、低減、減速、又は遅延を評価するための試験の非限定的な例としては、ハンチントン病統一評価尺度（ＵＨＤＲＳ）スコア、ＵＨＤＲＳ総機能容量（ＴＦＣ）、ＵＨＤＲＳ機能評価、ＵＨＤＲＳ歩行スコア、ＵＨＤＲＳ総運動スコア（ＴＭＳ）、ハミルトンうつ病尺度（ＨＡＭ－Ｄ）、コロンビア自殺重症度評価尺度（Ｃ－ＳＳＲＳ）、モントリオール認知評価（ＭｏＣＡ）、改訂ランキン尺度（ｍＲＳ）、国立衛生研究所脳卒中尺度（ＮＩＨＳＳ）、及びバーセル指数（ＢＩ）、タイムアップ・アンド・ゴー検査（Ｔｉｍｅｄ Ｕｐ ａｎｄ Ｇｏ Ｔｅｓｔ）（ＴＵＧ）、チェドック上肢機能調査（Ｃｈｅｄｏｋｅ Ａｒｍ ａｎｄ Ｈａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（ＣＡＨＡＩ）、記号数字モダリティー検査、制御口頭語連想課題（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｏｒａｌ Ｗｏｒｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｔａｓｋｓ）、磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）、機能的磁気共鳴画像診断（ｆＭＲＩ）、並びに陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）が挙げられる。

【0242】

一態様では、治療有効用量は、約１０％～約９９％又はそれ以上の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。一態様では、治療有効用量は、１０％～１００％、例えば、１０％～１４％、１０％～２０％、１０％～２５％、１４％～２０％、１４％～２５％、１４％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。

【0243】

一態様では、治療有効用量は、１つ以上の神経学的状態の症状を１０％～１００％、例えば、１０％～約１４％、１０％～２０％、１０％～２５％、１４％～２０％、１４％～２５％、１４％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％除去、低減、減速、又は遅延させる。

【0244】

一態様では、神経学的状態の症状は、処置当日、処置後１日、処置後３ヶ月、処置後６ヶ月、処置後１年、及びその後は毎年評価される。

【0245】

一態様では、神経学的状態の症状は、処置後１日～処置後７日に評価される。一態様では、症状は、処置後１日～処置後２日、処置後１日～処置後３日、処置後１日～処置後４日、処置後２日～処置後３日、処置後２日～処置後４日、処置後２日～処置後５日、処置後３日～処置後４日、処置後３日～処置後５日、処置後３日～処置後６日、処置後４日～処置後５日、処置後４日～処置後６日、処置後４日～処置後７日、処置後５日～処置後６日、処置後５日～処置後７日、又は処置後６日～処置後７日に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後２週、処置後１週～処置後３週、処置後１週～処置後４週、処置後２週～処置後３週、処置後２週～処置後４週、又は処置後３週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後２ヶ月、処置後１ヶ月～処置後３ヶ月、処置後１ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後３ヶ月、処置後２ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後４ヶ月、処置後３ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後５ヶ月、処置後４ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後６ヶ月、処置後５ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後７ヶ月、処置後６ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後８ヶ月、処置後７ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後９ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１２ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１２ヶ月、又は処置後１１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後約２０年に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後５年、処置後１年～処置後１０年、処置後１年～処置後１４年、処置後５年～処置後１０年、処置後５年～処置後１４年、処置後５年～処置後２０年、処置後１０年～処置後１４年、処置後１０年～処置後２０年、又は処置後１４年～処置後２０年に評価され得る。

【0246】

本明細書で使用される場合、「生存率」という用語は、神経学的状態の診断後の所与の期間後にまだ生きている処置群の対象のコホートを指す。

【0247】

一態様では、治療有効用量は、約１０％～９９％又はそれ以上の生存率の増加を達成する。一態様では、治療有効用量は、１０％～１００％、例えば、１０％～１４％、１０％～２０％、１０％～２５％、１４％～２０％、１４％～２５％、１４％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の生存率の増加を達成する。

【0248】

本明細書で使用される場合、「平均余命」という用語は、対象が生存すると予想される期間を指す。

【0249】

一態様では、治療有効用量は、平均余命を約１０％～９９％以上増加させる。一態様では、治療有効用量は、平均余命を１０％～１００％、例えば、１０％～１４％、１０％～２０％、１０％～２５％、１４％～２０％、１４％～２５％、１４％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％増加させる。

【0250】

一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を約１０％～９９％以上減少させる。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を１０％～１００％、例えば、１０％～１４％、１０％～２０％、１０％～２５％、１４％～２０％、１４％～２５％、１４％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％減少させる。

【0251】

一態様では、治療を必要とする対象の脳内の萎縮の量は、処置当日、処置後１日、処置後３ヶ月、処置後６ヶ月、処置後１年、及びその後は毎年評価される。

【0252】

一態様では、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量は、処置後１日～処置後７日に評価される。一態様では、症状は、処置後１日～処置後２日、処置後１日～処置後３日、処置後１日～処置後４日、処置後２日～処置後３日、処置後２日～処置後４日、処置後２日～処置後５日、処置後３日～処置後４日、処置後３日～処置後５日、処置後３日～処置後６日、処置後４日～処置後５日、処置後４日～処置後６日、処置後４日～処置後７日、処置後５日～処置後６日、処置後５日～処置後７日、又は処置後６日～処置後７日に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後２週、処置後１週～処置後３週、処置後１週～処置後４週、処置後２週～処置後３週、処置後２週～処置後４週、又は処置後３週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後２ヶ月、処置後１ヶ月～処置後３ヶ月、処置後１ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後３ヶ月、処置後２ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後４ヶ月、処置後３ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後５ヶ月、処置後４ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後６ヶ月、処置後５ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後７ヶ月、処置後６ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後８ヶ月、処置後７ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後９ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１２ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１２ヶ月、又は処置後１１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後約２０年に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後５年、処置後１年～処置後１０年、処置後１年～処置後１４年、処置後５年～処置後１０年、処置後５年～処置後１４年、処置後５年～処置後２０年、処置後１０年～処置後１４年、処置後１０年～処置後２０年、又は処置後１４年～処置後２０年に評価され得る。

【0253】

それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を評価するための検査の非限定的な例としては、Ｎｉｓｓｌｅ染色、ＭＲＩ、機能的磁気共鳴ｆＭＲＩ、及びＰＥＴスキャンが挙げられる。

【0254】

本開示は、好ましい実施形態を参照して説明されているが、本開示の範囲から逸脱することなく特定の状況に適応するように、様々な変更が行われ得、均等物がその要素に置き換えられ得ることが当業者によって理解されるであろう。したがって、本開示は、本開示を実施するために企図される最良の形態として開示される特定の実施形態に限定されるものではなく、本開示は、添付の特許請求の範囲の範囲及び趣旨内にある全ての実施形態を含むであろうことが意図される。

【0255】

本明細書に示される実施例は、本開示のいくつかの実施形態を例示するが、いかなる様式でも本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0256】

実施例１．ＡＡＶベクター構築物
４８種類のＡＡＶベクター構築物：
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（Ｐ３１）（図１Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図３Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図３Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図２Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図２Ａ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図４Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図４Ａ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、及びＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ｈＧＨが構築される。

【0257】

４８種類のベクター構築物は全て、ｐＨＳＧ－２９９（Ｔａｋａｒａ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を利用し、これは、骨格として、複製起点、カナマイシン耐性遺伝子、及びｌａｃＺ遺伝子と共に多重クローニング部位（ＭＳＣ）を含むｐＵＣベースのベクター構築物である。

【0258】

発現カセットの５’末端は、ヒト伸長因子－１αプロモーターからのエンハンサー（ＥＦ－１αエンハンサー、配列番号２）又はサイトメガロウイルスエンハンサー（ＣＭＶエンハンサー、配列番号１１）であり、７５８ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（ＧｆａＡＢＣ１Ｄ；配列番号２６）、１６６７ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（Ｇｆａ１．６；配列番号４）、又は２２１４ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（ＧＦＡ２．２配列番号１２）のいずれかの５’に配置される。

【0259】

エンハンサー／ＧＦＡＰプロモーターに続いて（例えば、３’に）、５’から３’方向へ、いくつかの追加の配列が発現カセットに導入され、これには、キメライントロン（配列番号５又は配列番号６）、ヒトＮｅｕｒｏＤ１コード配列（ｈＮｅｕｒｏＤ１；配列番号６）、ヒトＤｌｘ２コード配列（ｈＤｌｘ２；配列番号１３）、リンカー配列（Ｐ２Ａ；配列番号１５）、（ＧＳＧ－Ｐ２Ａ；配列番号１８）、（Ｔ２Ａ；配列番号１６）、又は（ＧＳＧ－Ｔ２Ａ；配列番号１９）、及びウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ；配列番号７）が含まれる。これらの配列は全て、ＳＶ４０ポリ（Ａ）シグナル（配列番号８）、又はｈＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号１７）、又はｂＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号３０）に作動可能に連結される。エンハンサー、ＧＦＡＰプロモーター、キメライントロン、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、ｈＤｌｘ２コード配列、リンカー、ＷＰＲＥ、及びポリ（Ａ）シグナルは、２つのＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接している。

【0260】

実施例２．ＡＡＶウイルス産生
２４種類のプラスミドの各々を、ポリエチレンイミンを使用して、Ｒｅｐ－Ｃａｐプラスミド（ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子の発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）及びヘルパープラスミド（アデノウイルスのＥ２Ａ、Ｅ４、及びＶＡ ＲＮＡの発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）と共に、２９３ＡＡＶ細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子を産生する。

【0261】

トランスフェクションの７２時間後、トランスフェクトされた細胞を掻き取り、遠心分離する。細胞ペレットを、凍結し、解凍し、ドライアイス／エタノール混合物に入れ、続いて、３７℃の水浴に入れる。凍結／融解サイクルを更に３回繰り返す。ＡＡＶ溶解物を、不連続イオジキサノール勾配で、３５０，０００ｇで１時間超遠心分離することによって精製する（例えば、細胞破片を除去する）。ウイルス含有層を回収し、次いで、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎウルトラ遠心式フィルターを使用して濃縮する。次いで、ＩＴＲ領域又は遺伝子／発現カセット特異的配列を増幅するプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって、ウイルス力価を決定する。

【0262】

実施例３．アストロサイト細胞培養物
ヒト皮質アストロサイト（ＨＡ１８００；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）は、それらが９０％超コンフルエントである場合、継代培養する。継代培養の場合、細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｓｅｌｅｃｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用してトリプシン処理し、２００×ｇで５分間遠心分離し、次いで、再懸濁し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、３．５ｍＭのグルコース（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｎｇ／ｍＬの上皮増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１０ｎｇ／ｍＬの線維芽細胞増殖因子２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む培地にプレーティングする。アストロサイトを、２４ウェルプレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、ポリ－Ｄ－リジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングされたカバースリップ（１２ｍｍ）上で、カバースリップ当たり約２０，０００細胞の密度で培養する。

【0263】

（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの皮質又は線条体から単離された）ラット初代アストロサイトは、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、３．５ｍＭのグルコース（Ｇｉｂｃｏ）を含む培地中で培養される。

【0264】

全ての細胞は、５％の二酸化炭素を含む加湿空気中、３７℃で維持される。

【0265】

実施例４．アストロサイト細胞培養物中でのＡＡＶベクターの（インビトロ）試験
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍｌの濃度範囲で、実施例３からのヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイトを感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。

【0266】

細胞培養物中の空きスペースは、追加のヒトアストロサイトで満たされ、アストロサイト又はラット初代アストロサイトがニューロンに変換された場合、変換されたニューロンの機能的発生をサポートする。

【0267】

実施例５．ＡＡＶベクター効力の試験
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、継代数４～７の実施例３のヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイト（又は他の脳領域又は脊髄からのアストロサイト）を、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍＬの濃度範囲で感染させる。ｑＰＣＲ、酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）、及びウエスタンブロットを実施して、ＮｅｕｒｏＤ１転写物の発現及びタンパク質レベルを決定する。

【0268】

ＮｅｕＮ、ダブルコルチン（ＤＣＸ）、β３－チューブリン、ＮＦ－２００、及びＭＡＰ２の発現を、ｑＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、及び免疫染色によって評価して、組換えＡＡＶの機能的出力を決定する。

【0269】

実施例６．ＡＡＶベクターの滴定及び感染率の試験
精製したＡＡＶベクターをＤＮａｓｅＩで処理して、残留プラスミドの混入を排除する。一連のＡＡＶベクターの希釈を、１００倍、５００倍、２５００倍、及び１２５００倍で実施する。ＡＡＶプラスミド骨格を希釈して、段階希釈によって標準曲線を生成する。プラスミドを１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、及び１０^８分子／μｌに希釈する。ｑＰＣＲを、希釈したＡＡＶベクター及び希釈したＡＡＶプラスミドに対して実施する。使用するプライマーは、ＩＴＲ領域（フォワードＩＴＲプライマー、５’－ＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴ、リバースＩＴＲプライマー、５’－ＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡ）に対するものである。ｑＰＣＲミックスは、１０μＬのユニバーサルＳＹＢＲマスターミックス２Ｘ、２μＬの５μＭフォワードＩＴＲプライマー、２μＬの５μＭリバースＩＴＲプライマー、５μＬの試験試料又は希釈した標準物質、及び１μＬのＨ_２Ｏを含む。ｑＰＣＲのプログラムは、９５℃で１０分間、続いて、９５℃で１５秒間、６０℃で３０秒間を４０サイクル、続いて、溶融曲線である。ｑＰＣＲサイクラーのソフトウェアを使用して、データを分析する。ＡＡＶ試料（ウイルスゲノム（ｖｇ）／ｍｌ）の物理的力価は、標準曲線に基づいて計算される。

【0270】

ＡＡＶベクターの感染率は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）からの標準的なプロトコルを使用して実施される５０％組織培養感染用量（ＴＣＩＤ５０）アッセイを使用して試験する。

【0271】

実施例７．ＡＡＶ用量範囲の試験（インビボ）
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、運動皮質への両側頭蓋内注入により、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに注入する。各ＡＡＶは、１μＬの体積で、１×１０^１１、３×１０^１１、１×１０^１２、３×１０^１２、１×１０^１２、３×１０^１２、１×１０^１３ウイルスゲノム／ｍＬの投与量で注入される。各投与量を、注入後４日、２０日、及び６０日で評価して、細胞及び組織レベルでの最適有効用量（ＯＥＤ）、最大耐容用量（ＭＴＤ）、及び最小有効用量（ＭＥＤ）を決定する。時点ごとに３匹のマウスが存在する。ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトからニューロンへの変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。第１の用量範囲がＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤを決定するのに十分でない場合、第２の用量範囲は、１μＬの体積で、１×１０^１０ウイルスゲノム／ｍＬ～１×１０^１４ＧＣ／ｍＬで行われる。

【0272】

実施例８．ヒト細胞培養物中の様々なＡＡＶベクター構築物から得られた組換えＡＡＶのニューロン変換率の比較（インビトロ）
ＡＡＶベクター構築物は、ＮｅｕｒｏＤ１単独又はＤｌｘ２単独のいずれかを発現するように、実施例１に記載されるように設計される。組換えＡＡＶは、（１）ＮｅｕｒｏＤ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（２）Ｄｌｘ２単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（３）ＡＡＶベクター構築物（１）及び（２）の組み合わせ、並びに（４）ＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２を有するリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物について、実施例２に記載されるように得られる。得られた組換えＡＡＶを使用して、実施例３のヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイトに感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。細胞培養物中の空きスペースは、追加のヒトアストロサイトで満たされ、アストロサイト又はミクログリア細胞がニューロンに変換された場合、変換されたニューロンの機能的発生をサポートする。各処理のニューロン変換レベルが測定され、比較される。

【0273】

実施例９．ヒト対象におけるＡＡＶベクターの試験（インビボ）
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、インビボでヒトの脳又は脊髄のアストロサイトに感染させる。組換えＡＡＶは、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１ｍＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の脳又は脊髄に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脳の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。

【0274】

実施例１０．非ヒト霊長類における用量スケールアッセイ
実施例７からのＮｅｕｒｏＤ１を発現する脳組織の体積を、ベクターゲノムの数で割ったもの（ｍｍ^３／ベクターゲノム）を使用して、脳組織のウイルス感染率を決定する。非ヒト霊長類において処置される特定の脳領域の体積（ｍｍ^３）を計算し、ベクターゲノムの用量範囲を、実施例７で得られた感染率に従ってスケーリングする。用量範囲試験は、実施例７のように実施され、ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトから神経細胞への変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。

【0275】

実施例１１．ハンチントン病を有するそれを必要とする対象の治療（インビボ）
ハンチントン病を有する対象を、実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、舞踏運動などの不随意運動、制御不能な姿勢、気分の変化、睡眠障害、発話の変化、嚥下困難、並びに学習及び記憶の欠陥などの認知機能の障害が含まれる。組換えＡＡＶは、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の線条体（被殻及び尾状核）に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脳の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。

【0276】

実施例１２．Ｈｔｔ遺伝子発現のノックダウンのためのｓｈＲＮＡと共役して、グリア細胞をニューロンに直接変換するための組み合わせアプローチ
Ｈｔｔ遺伝子に相補的である標的配列が同定される。ｓｈＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子を標的化するように設計される。ＮｅｕｒｏＤ１、Ｄｌｘ２、及び標的ｓｈＲＮＡは、ＡＡＶベクター（ｈＵ６：：Ｈｔｔ ｓｈＲＮＡ－ｈＧＦＡＰ：：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２）（図５Ａ～８Ｄ）にパッケージングされ、実施例２に記載されるように、組換えＡＡＶが産生される。組換えＡＡＶは、変異型Ｈｔｔ遺伝子を有するマウスの線条体に注入される。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）組換えＡＡＶ（ｈＵ６：：Ｈｔｔ ｓｈＲＮＡ－ｈＧＦＡＰ：：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２）を受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する（図５Ａ～８Ｄ）。

【0277】

代替的に、標的ｓｈＲＮＡは、ＡＡＶベクター（ｈＵ６：：ｈＨｔｔ ｓｈＲＮＡ）にパッケージングされ、実施例２に記載されるように、別の組換えＡＡＶが産生される。２つの組換えＡＡＶは、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入される。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２から単独での組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶと組み合わせて組換えＡＡＶ（ｈＵ６：：ｈＨｔｔ ｓｈＲＮＡ）を受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する。

【0278】

実施例１３．Ｈｔｔ遺伝子のＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ遺伝子編集と共役して、グリア細胞をニューロンに直接変換するための組み合わせアプローチ
Ｈｔｔ遺伝子に相補的である標的配列が同定される。ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）配列は、Ｈｔｔ遺伝子を標的化するように設計される。ドナー配列は、Ｈｔｔ遺伝子のＣＡＧリピートの数を３６未満に改変するように設計される。Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、Ｈｔｔ特異的ｇＲＮＡ、及びドナー配列は、ＡＡＶベクター（ＡＡＶ－Ｃａｓ９－ＨＴＴ）にパッケージングされる。組換えＡＡＶは、実施例２に記載されるように産生される。

【0279】

組換えＡＡＶ（ＡＡＶ－Ｃａｓ９－ＨＴＴ）を、実施例２からの組換えＡＡＶと同時に、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入する。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶと共に組換えＡＡＶ－Ｃａｓ９－ＨＴＴを受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較して、変異型Ｈｔｔの遺伝子編集とグリアからニューロンへの変換との間の相乗効果を特定する。組換えＡＡＶ－Ｃａｓ９－ＨＴＴ及び実施例２からの組換えＡＡＶは、同時に又は異なる時間に注入することができる。

【0280】

代替的に、ＮｅｕｒｏＤ１、リンカー（Ｐ２Ａ）、Ｄｌｘ２、第２のリンカー（Ｐ２Ａ）、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、Ｈｔｔ特異的ｇＲＮＡ、及びドナー配列が、ＡＡＶベクター（ＡＡＶ－ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－Ｃａｓ９－ＨＴＴ）にパッケージングされる。組換えＡＡＶは、実施例２に記載されるように産生される。組換えＡＡＶ（ＡＡＶ－ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－Ｃａｓ９－ＨＴＴ）は、実施例２からの組換えＡＡＶと同時に、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入される。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶと共に組換えＡＡＶ－ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－Ｃａｓ９－ＨＴＴを受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較して、変異型Ｈｔｔの遺伝子編集とグリアからニューロンへの変換との間の相乗効果を特定する。

【0281】

実施例１４．Ｈｔｔ遺伝子発現をノックダウンするアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）と共役して、グリア細胞をニューロンに直接変換するための組み合わせアプローチ
Ｈｔｔ遺伝子に相補的である標的配列が同定される。ＡＳＯは、Ｈｔｔ遺伝子発現をノックダウンするように設計及び合成される。実施例２からの組換えＡＡＶを、Ｈｔｔ ＡＳＯと一緒に、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入する。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）Ｈｔｔ ＡＳＯと一緒に、実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する。

【0282】

実施例１５．Ｈｔｔ遺伝子発現をノックダウンするｓｉＲＮＡと共役して、グリア細胞をニューロンに直接変換するための組み合わせアプローチ
Ｈｔｔ遺伝子に相補的である標的配列が同定される。ｓｉＲＮＡは、Ｈｔｔ遺伝子の発現をノックダウンするように設計及び合成される。実施例２からの組換えＡＡＶを、Ｈｔｔ ｓｉＲＮＡと一緒に、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入する。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）Ｈｔｔ ｓｉＲＮＡと一緒に、実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する。

【0283】

実施例１６．Ｈｔｔ遺伝子発現をノックダウンするｍｉＲＮＡと共役して、グリア細胞をニューロンに直接変換するための組み合わせアプローチ
Ｈｔｔ遺伝子の発現を調節しているｍｉＲＮＡが同定される。ＮｅｕｒｏＤ１、Ｄｌｘ２、及びｍｉＲＮＡは、ＡＡＶベクター（ＣＡＧ：：Ｈｔｔ ｍｉＲＮＡ－ｈＧＦＡＰ：：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２）にパッケージングされ、実施例２に記載されるように、組換えＡＡＶが産生される。組換えＡＡＶは、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入される。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）組換えＡＡＶ（ＣＡＧ：：Ｈｔｔ ｍｉＲＮＡ－ｈＧＦＡＰ：：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２）を受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する。

【0284】

代替的に、標的ｍｉＲＮＡは、ＡＡＶベクター（ＣＡＧ：：ｈＨｔｔ ｍｉＲＮＡ）にパッケージングされ、実施例２に記載されるように、組換えＡＡＶが産生される。組換えＡＡＶは、変異型Ｈｔｔを有するマウスの線条体に注入される。処置を受けるマウスを、キャットウォーク、オープンフィールド試験、クラスピング、マウス体重、及び握力、並びに脳画像診断（ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む）などの行動メトリックについて試験する。（ｉ）処置を受けない群、（ｉｉ）実施例２から単独での組換えＡＡＶを受ける群、及び（ｉｉｉ）実施例２からの組換えＡＡＶと組み合わせて組換えＡＡＶ（ＣＡＧ：：ｈＨｔｔ ｍｉＲＮＡ）を受ける群間で、行動試験結果及び脳イメージングを比較する。

【0285】

実施例１７．Ｐ３１のＡＡＶウイルス産生
組換えＡＡＶは、実施例２に記載されるように得られる。Ｐ３１プラスミドを、血清型５カプシドタンパク質を発現するＲｅｐ－Ｃａｐプラスミド及びヘルパープラスミドＰ４０Ｈｅｌｐｅｒ（Ｐ４０Ｈ）又はｐＡＬＤ－Ｘ８０（ｘ８０）と共に、ＡＡＶ２９３細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子（Ｐ３１－Ｐ４０Ｈ又はＰ３１－Ｘ８０）を産生する。ウイルス収率は、目的の遺伝子（ＧＯＩ）増幅するプライマー、Ｐ３１プラスミド及びＩＴＲ領域に特異的なプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって決定される。リバースパッケージングプライマーは、非特異的パッケージングを評価するために使用される。Ｘ８０ヘルパープラスミドでは、Ｐ４０Ｈヘルパープラスミドと比較して、ウイルス産生の増加が観察される（図９）。

【0286】

実施例１８．ラットアストロサイト初代培養の樹立の成功
皮質及び線条体の組織を、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの脳から単離する。組織を、パパインで処理して、単一細胞懸濁液を生成し、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたフラスコに播種する。細胞を、ＧＦＡＰ抗体及びＳＯＸ９抗体で免疫染色する。細胞を、ＤＡＰＩ抗体で対比染色する。ＧＦＡＰ及びＳＯＸ９染色によって同定された細胞の９５％超がアストロサイトである（図１０）。左端のパネルは、ＧＦＡＰ染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＳＯＸ９染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞の画像を提示する。右端のパネルは、ＧＦＡＰ、ＳＯＸ９、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。

【0287】

実施例１９．プラスミドのトランスフェクションの比較
初代ラットアストロサイトを播種し、実施例１８に記載されるように、発現ベクターであるＰ１４（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ｈＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ３１（ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１－Ｐ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、及びＰ６３（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１－ＧＳＧＰ２Ａ－Ｄｌｘ２：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）でトランスフェクションして、トランスフェクトされた細胞におけるＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２のトランスフェクション効率を試験する。Ｐ１４は、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色及びＤｌｘ２染色によって示されるＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２の発現をもたらした（図１１；上部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色を示し、中央のパネルは、細胞のＤｌｘ２染色を示し、下部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１、Ｄｌｘ２、及びＤＡＰＩ染色の重ね合わせを示す）。

【0288】

実施例２０．初代ラットアストロサイトへのＡＡＶウイルス粒子の形質導入の成功
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、９６ウェルプレートに播種された初代ラットアストロサイトに、ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）を、３×１０^１０ｖｇ／ウェル、１×１０^１０ｖｇ／ウェル、２．５×１０^９ｖｇ／ウェルのいずれかの様々な用量で形質導入する。継代５～７のＲＣＡを、形質導入の２４時間前に、５０％コンフルエントで、９６ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞は、新鮮なアストロサイト培地中で、指定された力価のウイルスで形質導入される。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。ＧＦＰ陽性細胞の形質導入から６日後に取得した画像は、ウイルス力価が高い場合に形質導入率が高いことを示す（図１２）。

【0289】

実施例２１．初代ラットアストロサイトへのＡＡＶウイルス粒子の形質導入の定量分析
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、２４ウェルプレート又は９６ウェルプレートに播種した初代ラットアストロサイトに、ウイルス粒子ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）で形質導入する。感染の７日後、細胞をトリプシン処理によって回収する。細胞を、固定し、洗浄し、ＰＢＳに懸濁する。全ての細胞と比較して、ＧＦＰ陽性細胞をカウントするために、フローサイトメトリーを使用してウイルス形質導入率を分析する（図１３Ａ及び１３Ｂ）。図１３Ａは、異なるＭＯＩでの形質導入率（％）を示す。１×１０^５個の細胞／ウェルで２４ウェルプレートに播種された細胞を、５×１０^５ｖｇ／細胞、２×１０^５ｖｇ／細胞、及び５×１０^４ｖｇ／細胞のいずれかのＭＯＩで感染させる。ウイルス形質導入率は、ＭＯＩが減少するにつれて低下する。図１３Ｂは、２×１０^４細胞／ウェル、１．５×１０^４細胞／ウェル、１×１０^４細胞／ウェル、及び５×１０^３細胞／ウェルの一連の密度で９６ウェルプレートに播種され、１００μＬの培地中、一連の量のウイルス（２μＬ、１μＬ、０．５μＬ、０．２５μＬ、０．１２５μＬの１×１０^１３ｖｇ／ｍｌのウイルス）に感染した細胞におけるＡＡＶウイルス粒子の形質導入率を示す。これは、それぞれ、２×１０^１０ｖｇ、１×１０^１０ｖｇ、５×１０^９ｖｇ、２．５×１０^９ｖｇ、及び１．２５×１０^９ｖｇ各ウェルに相当する。ウイルス形質導入率は、ウェル当たりの細胞数が減少しても変化しない。

【0290】

実施例２２．インビトロでのＮｅｕｒｏＤ１ベクターによって誘導された導入遺伝子の発現及びアストロサイトからニューロンへの変換
材料及び方法
初代ラットアストロサイト培養：ラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）は、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの皮質組織から単離される。細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンで補充されたＤＭＥＭからなるアストロサイト培地（ＡＭ）中で維持される。細胞は、残存する前駆細胞の分化を促進するために、低細胞密度で、最初の２回の継代について１：３～１：４の比率で継代培養される。その後の継代培養は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：２又は１：３の比である。継代５～７の細胞は、トランスフェクション及び形質導入に使用される。ＧＦＡＰ抗体による免疫染色は、９０％超の細胞がＧＦＡＰ陽性アストロサイトであることを示す。培養アストロサイトは、継代６でアストロサイトのマーカーであるＧＦＡＰ及びＳｏｘ９で免疫染色される（図１４）。

【0291】

ベクター：ＡＡＶは、選択されたベクターで生成され、ラットアストロサイトを使用してインビトロで試験される：
●ＮＸＬ－Ｐ９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３７（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１０７（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０８（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３６（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３８（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）

【0292】

ウイルスの生産：インビトロ試験に使用されるウイルスは、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いた三重トランスフェクション（ＧＯＩ、ヘルパー、及びＲｅｐ／Ｃａｐプラスミド）によって、付着性ＡＡＶ２９３細胞を使用して産生される。ウイルスの回収及び精製は、超遠心分離又は市販の精製キットの使用によって達成される。

【0293】

具体的には、トランスフェクションの２４時間前に、ＡＡＶ２９３細胞（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、カタログ番号ＡＡＶ－１００）を、１５ｃｍの培養皿に播種する。７０～８５％コンフルエントの細胞を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、１：４のＤＮＡ：ＰＥＩ比で、ディッシュ当たり１０ｕｇのＧＯＩ、１０ｕｇのＲｅｐ／Ｃａｐ、及び１４ｕｇのｐＡＬＤ－Ｘ８０（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）又はｐＨｅｌｐｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）でトランスフェクトする。産生のために、必要なスケールに基づいて、複数のディッシュをトランスフェクトする。培養培地を、毎日交換する。トランスフェクションの７２時間後、細胞を、回収し、溶解して、製造元のプロトコルに従ってＡＡＶｐｒｏ精製キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６６６６、６６７５、６２３５）を使用してウイルスを採取する。

【0294】

ウイルス力価は、ＩＴＲ領域のプライマー対、目的の遺伝子（ＧＯＩ）を増幅するプライマー、又はベクターに特異的なプライマーを使用して、リアルタイムの定量ＰＣＲによって決定される。標準物質として、プラスミドＤＮＡを使用する。産生収率は、約１０^３～１０^４ｖｇ／細胞レベルである。図３５は、ｑＰＣＲによって測定されるように、Ｐ１３４、Ｐ１３０、Ｐ１３８及びＰ２１プラスミドの各々を、血清型９カプシドタンパク質を発現するＲｅｐ－Ｃａｐプラスミド及び組換えＡＡＶウイルス粒子を産生したヘルパープラスミドｐＡＬＤ－Ｘ８０（Ｘ８０）で、ＡＡＶ２９３細胞に共トランスフェクトした方法を示す。

【0295】

トランスフェクション及び免疫蛍光：継代５～７のラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）を、トランスフェクションの２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、製造業者のプロトコルに従って、リポフェクタミン試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５３３８）を使用して、３００ｎｇのベクターＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクションの２４～４８時間後、細胞を、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮｅｕｒｏＤ１（抗ＮＤ１）抗体（Ａｂｃａｍ カタログ番号ａｂ６０７０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色する。画像は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下でキャプチャされる。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。

【0296】

形質導入及び免疫蛍光：継代５～７のＲＣＡを、形質導入の２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、新鮮なアストロサイト培地中２～６×１０^１０ウイルスゲノム（ｖｇ）／ｍｌのＡＡＶで形質導入する。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。形質導入の３～６日後、細胞をＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮＤ１抗体（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ６０７０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色し、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、ＺｅｎＢｌｕｅ）下で観察し、画像をキャプチャする。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。

【0297】

アストロサイトからニューロンへの変換の評価形質導入の２４～４８時間前、継代５～７のＲＣＡを、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、５００ｕｌの新鮮なアストロサイト培地（１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ）中２～６×１０^１０ｖｇ／ｍｌのウイルスで形質導入する。形質導入の４８時間後、培地を、５％ ＦＢＳのアストロサイト培地に交換する。その後、１００ｕｌの変換培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１％のＦＢＳ＋Ｂ２７＋Ｎ２及び１ｕＭのＲｏｃｋ阻害剤及び１０ｎｇ／ｍｌのＢＤＮＦ）を４日間毎日添加する。４日後、培地を、変換培地に完全に置き換える。

【0298】

細胞を、様々な所望の時点（３日間、形質導入の１～５週間後）で、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、ＮＤ１（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ６０７０４）、ＮｅｕＮ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＡＢＮ７８）、Ｍａｐ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＡ５－１７６４６）に対する抗体で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色し、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下で観察及び撮像する。

【0299】

インビトロ試験の結果：
試験したＮｅｕｒｏＤ１（ＮＤ１）プラスミドは全て、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を駆動するのに有効である（図１６～３１）。ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルは、ベクターのエレメントによって影響を受ける。ＧＦＡプロモーターの３つのバージョンのうち、６８１ｂｐプロモーターは、最も高いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示し、１．６ｋｂプロモーターは、最も弱いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示す。プロモーターエンハンサーエレメントは、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルに大幅に影響を及ぼす。ＣＭＶエンハンサーは、ｅｆ１αエンハンサーよりも、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。キメライントロン及びＷＰＲＥもまた、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。

【0300】

試験したＮＤ１含有ＡＡＶは全て、ＮｅｕＮ及び／又はＭＡＰ２の陽性染色によって示されるように、ＮＤ１の発現を駆動し、培養ラットアストロサイトにおいてアストロサイトからニューロンへの変換を誘導するのに有効である（図１７、３０、２２、２５、及び２８）。アストロサイトがより高いＮＤ１発現を駆動するベクターによって形質導入されると、変換率がより高い。ベクターＮＸＬ－Ｐ１３４及びＮＸＬ－Ｐ１３８、並びにこれらのベクターを使用して生成されたウイルス（すなわち、それぞれＡＡＶ９－Ｐ１３４及びＡＡＶ９－Ｐ１３８）は、ＮＤ１の発現を駆動し、アストロサイトからニューロンへの変換を誘導するのに最も有効であり、ＡＡＶ－Ｐ１３４が最も有効である（図１５～２０）。ＮＤ１配列を含まないプラスミドＡＡＶ９－Ｐ２１（ＣＥ－ｐＧＦＡ６８１－ＣＩ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）を対照として使用し、これは、ＮｅｕＮ及び／又はＭａｐ２の陽性染色の欠如によって示されるように、アストロサイトからニューロンへの変換を誘導しない（図１４）。

【0301】

ＮｅｕＮ／ＲＢＦＯＸ３（ニューロン核タンパク質）は、ニューロンの核及び核周囲の細胞質を染色するニューロン分化マーカーである。ＭＡＰ２（微小管関連タンパク質２）は、ニューロンの樹状突起を含む細胞質の微小管を染色する別のニューロンマーカーである。

【0302】

ＮＤ１含有ＡＡＶによる形質導入の１週間後、少数のＮｅｕＮ及びＭＡＰ２陽性細胞（ニューロン）が観察される。２～３週間で、より多くのＮｅｕＮ／ＭＡＰ２陽性細胞が観察される。いくつかのＮｅｕＮ／ＭＡＰ２陽性細胞は、典型的なニューロン形態を示す。

【0303】

実施例２３．インビボでのＮｅｕｒｏＤ１ウイルスベクターによって誘導された導入遺伝子の発現及びアストロサイトからニューロンへの変換
インビボ試験には、ＡＡＶ９－Ｐ１３４及びＡＡＶ９－Ｐ１３８ウイルスが使用される。ＧＦＡＰプロモーター下でＧＦＰ単独の発現を駆動する（ＮＤ１を含まない）ＡＡＶ９－Ｐ１２を、対照用に、かつＧＦＡＰを発現する細胞（アストロサイト）を同定するために使用する。

【0304】

一本鎖アデノウイルス関連ウイルス（ｓｓＡＡＶ、略してＡＡＶ）ベクターであるＮＸＬ－Ｐ１２、ＮＸＬ－Ｐ１３４、及びＮＸＬ－Ｐ１３８は、ＡＡＶ、血清型９（ＡＡＶ９）にパッケージングされ、続いて、イオジキサノール勾配の超遠心分離及び濃縮される。精製されたＡＡＶウイルスは、定量ＰＣＲベースの方法を使用して滴定される。本試験で使用される全てのＡＡＶを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ １８８溶液、ＰＦＬ０１－１００ＭＬ、Ｃａｉｓｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｍｉｔｈｆｉｅｌｄ、ＵＴ、ＵＳＡ）で調製される。

【0305】

８週齢を超える正常なＣ５７ＢＬ／６マウスに、以下のようにＡＡＶ９－Ｐ１３４、ＡＡＶ－Ｐ１３８、及びＡＡＶ９－Ｐ１２ウイルスを注入する。
●Ｐ１２対照群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３８群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）

【0306】

マウスを犠牲にし、感染後１０日（ｄｐｉ）及び３０ｄｐｉで脳皮質組織を分析する。動物を１．２５％のＡｖｅｒｔｉｎで麻酔し、次いで、最初に生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）、次いで、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で順次心内灌流した。脳を採取し、４％のＰＦＡ中で一晩固定し、２０％及び３０％のスクロースに、組織が沈むまで４℃で順次入れる。脱水された脳を、Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ｔｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ（登録商標）Ｏ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド、Ｓａｋｕｒａ（登録商標）Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）に包埋し、次いで、３０μｍ厚で、クライオスタット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）で、冠状面で連続的に薄片作製した。免疫蛍光の場合、浮遊脳切片を最初にＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中で調製された５％の正常ロバ血清、３％のウシ血清アルブミン、及び０．３％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００中で、室温（ＲＴ）で１時間ブロックし、次いで、ブロッキング溶液に希釈された一次抗体と、４℃で一晩インキュベートする。０．２％のＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．２％のＴｗｅｅｎ－２０）で更に洗浄した後、試料を、０．５μｇ／μＬの４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ；Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ、Ｎａｔｌｅｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５５５にコンジュゲートされた適切なロバ抗マウス／ウサギ二次抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートされたヤギ抗ニワトリ二次抗体（１：１０００、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５００）にコンジュゲートされたヤギ抗ラット（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）／モルモット（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ）二次抗体と、室温で２時間インキュベートし、続いて、ＰＢＳで十分に洗浄する。試料を、最終的に、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）封入剤（ＶＥＣＴＯＲ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）で試料を封入し、マニキュアで密封する。代表的な画像は、共焦点顕微鏡（ＬＳＭ８８０、Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で撮影される。使用した一次抗体は、以下の通りである：ラット抗ＧＦＡＰ（アストロサイトのマーカー、１：１０００、カタログ番号１３－０３００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、モルモット抗ＮｅｕＮ（ニューロンのマーカー、１：１０００、カタログ番号ＡＢＮ９０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、マウス抗ＮｅｕｒｏＤ１（１：５００、カタログ番号ａｂ６０７０４、Ａｂｃａｍ）、及びニワトリ抗ＧＦＰ（１：１０００、カタログ番号ａｂ１３９７０、Ａｂｃａｍ）。代表的な画像は、Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｌａｎ蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏ Ｉｍａｇｅｒ Ｚ２、Ｚｅｉｓｓ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又は共焦点顕微鏡（ＬＳＭ８８０、Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のいずれかによってキャプチャされる。１匹のマウス当たり３つの脳切片（１群当たり３匹のマウス）から、４つの無作為に選択された視野（２１２μｍ×２１２μｍ、ＬＳＭ８８０共焦点顕微鏡から４００倍で取得）に基づいて定量分析を行う。データは、平均値±ＳＥＭとして示される。

【0307】

ＧＦＰレポーターのみを発現する対照ウイルスであるＰ１２は、最初に、ＮｅｕｒｏＤ１を発現するウイルスであるＰ１３４及びＰ１３８（両方とも、Ｐ１２を一緒に添加して、変換されたニューロンを追跡する）と比較される。対照ウイルスＰ１２を無傷のマウス皮質に注入する場合、感染細胞は、１０ｄｐｉ（注入後の日数）では、主に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を伴わないアストロサイトである（図３６）。対照的に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現は、Ｐ１３４及びＰ１３８の両群で明らかに検出される。１０ｄｐｉでは、Ｐ１３８群のほとんどのＮｅｕｒｏＤ１発現細胞は、依然としてアストロサイトであるが、Ｐ１３４群のＮｅｕＲｏＤ１発現細胞の一部分は既にＮｅｕＮ＋ニューロンであり（図３６）、Ｐ１３４がＰ１３８よりも優れた変換能力を有し得ることを示唆している。加えて、１０ｄｐｉでは、Ｐ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、ＧＦＰ陽性細胞における長い突起の存在などの形態変化によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの高いレベルの変換を示す（図３２）。Ｐ１３８群は、より低いレベルの変換を示す。

【0308】

ウイルス注入の３０日後、対照群（Ｐ１２）の感染細胞は、アストロサイトとして残っているが、Ｐ１３４群のＧＦＰ陽性細胞のほとんどは、ＮｅｕＮを発現するニューロンである（図３７）。しかしながら、Ｐ１３８群の変換率は、Ｐ１３４群よりも低い。この段階でのＰ１３８群におけるほとんどの感染細胞は、まだアストロサイトであり、変換されたニューロンにおけるＧＦＰシグナルは弱い（図３７）。加えて、３０ｄｐｉでは、Ｐ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、ＧＦＰ陽性細胞における長いプロセスの存在によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの更に高いレベルの変換を示す（図３０）。

【0309】

ＡＡＶ９－Ｐ１３４ウイルスはまた、両側傷害マウスモデルにおいても有効である。虚血性脳卒中は、皮質の各側に１μＬのエンドフィリン１，１－３１ａａ（１μｇ／μＬ）を注入することによって、正常なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢超）において誘導される。マウスを、腹腔内注入によって２０ｍｇ／ｋｇの１．２５％のＡｖｅｒｔｉｎ（１２．５ｍｇ／ｍＬの２，２，２－トリブロモエタノールと２５μＬ／ｍＬの２－メチル－２－ブタノール（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）の混合物）で麻酔し、次いで、定位フレームに伏臥位で配置する。エンドセリン－１（ＥＴ－１）及びウイルスは、ガラスピペットを通して、座標＋０．２ｍｍ前側－後側（ＡＰ、ブレブマから）、－１．５ｍｍ内側－外側（ＭＬ、ブレグマから、左側）、－０．７ｍｍ背側－外側（ＤＶ硬膜から）の運動皮質に注入される。注入速度は、８０ｎＬ／分である。注入後、ピペットを約１０分間そのままにした後、ゆっくりと引き抜く。エンドセリン１の注入の７日後、マウスに以下のようにＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１３４ウイルスを注入する。
●Ｐ１２群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）
●Ｐ１４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）

【0310】

ウイルスの注入（ｄｐｉ）の１０日後、マウスを犠牲にし、脳皮質組織を分析した。対照ウイルスＰ１２をＥＴ－１損傷マウス皮質に注入する場合、感染細胞は、１０ｄｐｉ（注入後の日数、図３８）では、主に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を伴わないアストロサイトである。対照的に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現は、Ｐ１３４群で検出される（図３８）。ウイルスの注入（ｄｐｉ）の１０日後、マウスを犠牲にし、脳皮質組織を分析した。１０ｄｐｉでのＰ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、長い突起の存在などのＧＦＰ陽性細胞で観察される形態変化によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの高いレベルの変換を示す（図３４）。

【0311】

実施例２４．インビトロでのＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２の発現によって誘導された導入遺伝子の発現及びアストロサイトからニューロンへの変換
材料及び方法
ベクター：ベクターは、ラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）のトランスフェクションを介して試験される。加えて、ＡＡＶは、選択されたベクターで産生され、形質導入を介してラットアストロサイトを使用してインビトロで試験される：
●ＮＸＬ－Ｐ２０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＤＬＸ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３１（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１１１（ＣＥ－ｐＧｆａ１６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１１２（ＣＥ－ｐＧｆａ１６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１１３（ＥＥ－ｐＧｆａ１６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１２３（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＤｌｘ２－Ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１２４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－Ｐ２Ａ－ｈＤｌｘ２－ｂＧＨｐＡ）

【0312】

図４０は、構築物の２つの一般的なマップを示す。

【0313】

細胞培養：継代５～７のラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）を、形質導入の２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。

【0314】

形質導入及び免疫蛍光：細胞を、５００ｕｌの新鮮なアストロサイト培地（１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ）中２～６×１０^１０ｖｇ／ｍｌのウイルスで形質導入する。形質導入の４８時間後、培地を、５％ ＦＢＳのアストロサイト培地に交換する。次の４日間、１００ｕｌの変換培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１％のＦＢＳ＋Ｂ２７＋Ｎ２及び１ｕＭのＲｏｃｋ阻害剤及び１０ｎｇ／ｍＬのＢＤＮＦ）を毎日添加する。次いで、培地を、変換培地に完全に置き換える。

【0315】

細胞を、様々な所望の時点（３日、形質導入の１～５週間後）で、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、ＮＤ１（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ６０７０４）、Ｄｌｘ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＡＢ５７２６）、ＮｅｕＮ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＡＢＮ７８）、Ｍａｐ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＡ５－１７６４６）に対する抗体で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色する。画像は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下でキャプチャされる。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。

【0316】

インビトロ試験の結果：
試験されたＮＤ１－Ｄｌｘ２構築物は、これらの細胞におけるＮＤ１及びＤｌｘ２の陽性染色によって示されるように、培養ラットアストロサイトのトランスフェクション及び／又は形質導入によってＮＤ１及びＤｌｘ２の発現を駆動するのに有効である（図４１～５６）。加えて、ＮＤ１／Ｄｌｘ２含有ＡＡＶ（ＡＡＶ９－Ｐ１２２、ＡＡＶ－Ｐ１２２、ＡＡＶ－Ｐ１２４及び ＡＡＶ－Ｐ２０）は、ＮｅｕＮ及び／又はＭＡＰ２の陽性染色によって示されるように、ＮＤ１、Ｄｌｘ２の発現を駆動し、培養ラットアストロサイトにおいてアストロサイトからニューロンへの変換を誘導するのに有効である（図４３、４６、４９、及び５２）。いくつかのＮｅｕＮ／ＭＡＰ２陽性細胞は、典型的なニューロン形態を示す。

【0317】

実施例２５．インビボでの導入遺伝子の発現並びにＮｅｕｒｏＤ１及びＤｌｘ２の発現によって誘導されたアストロサイトからニューロンへの変換
インビボ試験には、ＡＡＶ９－Ｐ１１２及びＡＡＶ９－Ｐ１２２ウイルスが使用される。ＧＦＡＰプロモーター下でＧＦＰ単独の発現を駆動する（ＮＤ１もＤｌｘ２も含まない）ＡＡＶ９－Ｐ１２を、対照用に、かつＧＦＡＰを発現する細胞（アストロサイト）を同定するために使用する。

【0318】

８週齢を超える正常なＣ５７ＢＬ／６マウスに、以下のようにＡＡＶ－Ｐ１２、ＡＡＶ９－Ｐ１１２、及びＡＡＶ９－Ｐ１２２ウイルスを注入する。
●Ｐ１２対照群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、２μＬ、線条体に１回の注入（ｎ＝６）
●Ｐ１１２群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、２μＬ、皮質に１回の注入（ｎ＝６）
●Ｐ１２２群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１２２ ２．５×１０^１１ＧＣ／ｍｌ、２μＬ、線条体に１回の注入（ｎ＝６）

【0319】

マウスを犠牲にし、感染後１０日（ｄｐｉ）及び３０ｄｐｉで脳皮質組織を分析する。ＡＡＶ９－Ｐ１２によるマウスの線条体の感染は、ＧＦＰ蛍光の存在によって１０ｄｐｉで確認される。３０ｄｐｉでは、ＡＡＶ９－Ｐ１２感染細胞は依然としてＧＦＡＰ陽性のアストロサイトであり、ＡＡＶ９－Ｐ１２がアストロサイトの感染に特異的であることを示唆する（図５７Ａ～Ｂ）。Ｐ１１２群では、ＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１１２に同時感染した細胞の大部分は、１０ｄｐｉでＧＦＡＰ陽性染色アストロサイトである（図５８）。ウイルス感染後３０日までに、ＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１１２ に同時感染した多くの細胞は、ＮｅｕＮ陽性ニューロンになる（図５９、白色の矢印）。Ｐ１２２群では、ＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１２２に同時感染した細胞の大部分は、１０ｄｐｉでＧＦＡＰ陽性染色アストロサイトである（図６０）。ウイルス感染後３０日までに、ＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１２２に同時感染した多くの細胞は、ＮｅｕＮ陽性ニューロンになる（図６１、白色の矢印）。

【0320】

実施例１９．インビトロでのＤｌｘ２の導入遺伝子発現
ベクター：ベクターは、ラット皮質アストロサイト（ＲＡＣ）のトランスフェクションを介して試験される。加えて、ＡＡＶは、選択されたベクターで生成され、形質導入を介してインビトロで試験される：ＮＸＬ－Ｐ４４： ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ６０： ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－Ｄｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ７５： ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１０４： ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｂＧＨｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１０５： ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１３１： ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１３３： ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１３７： ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＧＲＩ－Ｄｌｘ２－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ

【0321】

ＮＸＬ－Ｐ１０４及びＮＸＬ－Ｐ１０５構築物は、これらの細胞における陽性Ｄｌｘ２染色によって実証されるように、培養ＲＡＣのトランスフェクションの２４時間後、Ｄｌｘ２の発現を駆動するのに有効である（図６２）。ＮＸＬ－Ｐ１３３、ＮＸＬ－Ｐ１３７、及びＮＸＬ－Ｐ１３１構築物は、これらの細胞における陽性Ｄｌｘ２染色によって実証されるように、培養ＲＡＣのトランスフェクションの２４時間後、Ｄｌｘ２の発現を駆動するのに有効である（図６３）。ＡＡＶ９－Ｐ１３３（ＮＬＸ－Ｐ１３３で産生されるＡＡＶ）は、これらの細胞における陽性Ｄｌｘ２染色によって実証されるように、培養ＲＡＣをこのウイルスで形質導入した後、Ｄｌｘ２の発現を駆動するのに有効である（図６４）。

【0322】

本開示の組成物及び方法の様々な更なる修正及び改善は、当業者には明らかであろう。以下の非限定的な実施形態が想定される。
１． 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
２．配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列と、配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列とを含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
３．神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）タンパク質をコードするＤｌｘ２核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該Ｄｌｘ２コード配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該Ｄｌｘ２コード配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
４．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を有するヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
５．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
６．治療を必要とする対象における治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該Ｄｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、組成物。
７．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
８．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
９．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１０．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１１．当該グリア細胞が、反応性アストロサイトである、実施形態４又は５に記載の組成物。
１２．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態４又は５に記載の組成物。
１３．当該ヒトが、神経学的状態を有する、実施形態４又は５に記載の組成物。
１４．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１５．当該Ｄｌｘ２が、ヒトＤｌｘ２（ｈＤｌｘ２）である、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１６．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１７．当該Ｄｌｘ２が、チンパンジーＤｌｘ２、ボノボＤｌｘ２、オランウータンＤｌｘ２、ゴリラＤｌｘ２、マカクＤｌｘ２、マーモセットＤｌｘ２、オマキザルＤｌｘ２、ヒヒＤｌｘ２、テナガザルＤｌｘ２、及びキツネザルＤｌｘ２からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１８．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１９．当該ｈＤｌｘ２が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２０．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２１．当該ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２２．当該リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
２３．当該リンカーが、当該Ｐ２Ａである、実施形態２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２４．当該リンカーが、当該Ｔ２Ａである、実施形態２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２５．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１５及び１８からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２６．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号１６及び１９からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２７．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
２８．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
２９．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、先行実施形態のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３０．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３１．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３２．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３３．当該エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３４．当該ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３３に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３５．当該ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３３に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３６．当該キメライントロンが、配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３７．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３８．当該ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ｈＧＨポリアデニル化シグナル、及びｂＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３９．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４０．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４１．当該ｂＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４２．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４３．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
４４．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
４５．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
４６．当該ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
４７．当該ＡＡＶベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
４８．組成物を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態６に記載の組成物。
４９．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態４８に記載の組成物。
５０．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態４８に記載の組成物。
５１．組成物を必要とする当該対象が、神経学的状態を有する、実施形態６に記載の組成物。
５２．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５３．当該神経学的状態が、ＣＮＳへの傷害を含む、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５４．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５５．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５６．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５７．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５８．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
５９．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態１３又は５１に記載の組成物。
６０．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態５９に記載の組成物。
６１．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態５９に記載の組成物。
６２．当該組成物が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態５１に記載の組成物。
６３．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態６２に記載の組成物。
６４．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態６２に記載の組成物。
６５．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態６２に記載の組成物。
６６．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態６２に記載の組成物。
６７．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態６２に記載の組成物。
６８．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態６２に記載の組成物。
６９．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロンである、実施形態６８に記載の組成物。
７０．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態６に記載の組成物。
７１．当該組成物が、局所送達用に製剤化される、実施形態７０に記載の組成物。
７２．当該組成物が、全身送達用に製剤化される、実施形態７０に記載の組成物。
７３．当該組成物が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を介した送達用に製剤化される、実施形態７０～７２のいずれか１つに記載の組成物。
７４．実施形態６に記載の組成物を、それを必要とする当該対象に送達することを含む、方法。
７５．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態７４に記載の方法。
７６．当該送達が、局所投与を含む、実施形態７４に記載の方法。
７７．当該送達が、全身投与を含む、実施形態７４に記載の方法。
７８．当該送達が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を含む、実施形態７４～７７のいずれか１つに記載の方法。
７９．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、方法。
８０．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及びｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号４、１２、及び２６からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
８１．グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、
当該ＡＡＶベクターが、それを必要とする当該対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、方法。
８２．神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及びｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（Ｄｌｘ２）配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及びＤｌｘ２配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）それを必要とする当該対象へのポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
８３．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
８４．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態８３に記載の方法。
８５．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態８３に記載の方法。
８６．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態８３に記載の方法。
８７．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンである、実施形態７９又は８０に記載の方法。
８８．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態８１又は８２に記載の方法。
８９．当該Ｄｌｘ２が、ヒトＤｌｘ２（ｈＤｌｘ２）である、実施形態８１又は８２に記載の方法。
９０．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
９１．当該Ｄｌｘ２が、チンパンジーＤｌｘ２、ボノボＤｌｘ２、オランウータンＤｌｘ２、ゴリラＤｌｘ２、マカクＤｌｘ２、マーモセットＤｌｘ２、オマキザルＤｌｘ２、ヒヒＤｌｘ２、テナガザルＤｌｘ２、及びキツネザルＤｌｘ２からなる群から選択される、実施形態７５又は７６に記載の方法。
９２．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸コード配列をコードするアミノ酸配列を含む、実施形態８８に記載の方法。
９３．当該ｈＤｌｘ２が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を含む、実施形態８９に記載の方法。
９４．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８８に記載の方法。
９５．当該ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８９に記載の方法。
９６．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態８１又は８２に記載の方法。
９７．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
９８．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態７９～９７のいずれか１つに記載の方法。
９９．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９６に記載の方法。
１００．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９６に記載の方法。
１０１．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９６に記載の方法。
１０２．当該リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１０３．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１５及び１８からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０２に記載の方法。
１０４．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号１６及び１９からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０２に記載の方法。
１０５．当該エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１０６．当該ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。
１０７．当該ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。
１０８．当該キメライントロンが、配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１０９．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１１０．当該ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル及びｈＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１１１．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１０に記載の方法。
１１２．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１０に記載の方法。
１１３．当該ベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１１４．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１５．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１６．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１７．当該ベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１８．当該ベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１９．当該変換が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系において生じる、実施形態８１に記載の方法。
１２０．当該変換が、ＣＮＳにおいて生じる、実施形態８１に記載の方法。
１２１．方法を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１２２．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態１２１に記載の方法。
１２３．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態１２１に記載の方法。
１２４．当該送達が、局所投与を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１２５．当該送達が、全身投与を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１２６．当該送達が、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、髄腔内投与、脳内投与、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内投与、鼻腔内投与、及び経口投与からなる群から選択される投与を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１２７．当該注入が、腹腔内注入、筋肉内注入、静脈内注入、髄腔内注入、脳内注入、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内注入、鼻腔内注入、及び経口注入からなる群から選択される注入を含む、実施形態７９又は８０に記載の方法。
１２８．当該送達が、注入を含む、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１２９．当該注入が、１０^１０粒子／ｍＬ～１０^１４粒子／ｍＬの濃度で行われる、実施形態７９、８０、又は１２８のいずれか１つに記載の方法。
１３０．当該注入が、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分の流量を更に含む、実施形態１２９に記載の方法。
１３１．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイト及び少なくとも１つのＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態８１に記載の方法。
１３２．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイトである、実施形態１３１に記載の方法。
１３３．当該少なくとも１つのアストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１３１又は１３２に記載の方法。
１３４．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態８１に記載の方法。
１３５．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態７９、８０、及び１３４のいずれか１つに記載の方法。
１３６．当該対象が、当該送達前の当該対象と比較して、少なくとも１つの神経学的状態の症状の改善を示す、実施形態８１に記載の方法。
１３７．当該改善が、当該送達の１年以内に測定される、実施形態１３６に記載の方法。
１３８．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脳に直接注入することを含む、実施形態７９、８０、又は１２８のいずれか１つに記載の方法。
１３９．当該変換が、当該脳の線条体におけるものである、実施形態７９又は８０に記載の方法。
１４０．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脊髄に直接注入することを含む、実施形態７９、８０、又は１２８のいずれか１つに記載の方法。
１４１．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態８２に記載の方法。
１４２．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態８２に記載の方法。
１４３．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態８２に記載の方法。
１４４．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態８２に記載の方法。
１４５．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態８２に記載の方法。
１４６．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態８２に記載の方法。
１４７．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態８２に記載の方法。
１４８．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態１４７に記載の方法。
１４９．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態１４７に記載の方法。
１５０．当該方法が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態８２に記載の方法。
１５１．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態１５０に記載の方法。
１５２．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態１５０に記載の方法。
１５３．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１５２に記載の方法。
１５４．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態１５０に記載の方法。
１５５．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態１５０に記載の方法。
１５６．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態１４５に記載の方法。
１５７．治療有効用量の当該ＡＡＶベクターが、当該対象に注入される、実施形態７９又は８０に記載の方法。
１５８．治療有効用量の当該ＡＡＶが、当該対象に送達される、実施形態８１又は８２に記載の方法。
１５９．当該治療有効用量が、薬学的に許容される担体と共に投与される、実施形態１４７又は１４８に記載の方法。
１６０．（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１６１．（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１６２．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３の核酸配列を含む当該ｈＤｌｘ２配列を含むＡＡＶベクターを含む、実施形態１６０又は１６１に記載の組成物。
１６３．（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１６４．（ｉ）配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及び（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
ｈＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする核酸配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号２７の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１６５．（ｉｉ）が、当該ｈＤｌｘ２タンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含み、当該核酸が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び２９からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル配列、配列番号１７の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化配列、又は配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、実施形態１６３又は１６４に記載の組成物。
１６６．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１６７．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１６８．配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１６９．配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、（ｉ）配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号１６及び１９からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２９の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７０．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列及び配列番号１３の核酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該ｈＤｌｘ２配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７１．配列番号１０のアミノ酸コード配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸配列及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス２（ｈＤｌｘ２）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、配列番号１５及び１８からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該ｈＤｌｘ２コード配列が、
（ａ）配列番号２６の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１１の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化配列と、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39A】

【図39B】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49】

【図50】

【図51】

【図52】

【図53】

【図54】

【図55】

【図56】

【図57A】

【図57B】

【図58】

【図59】

【図60】

【図61】

【図62】

【図63】

【図64】

【配列表】

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【国際調査報告】