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特表2023-543493ヒトクローディン１８．２を標的とする抗体及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-16
(54)【発明の名称】ヒトクローディン１８．２を標的とする抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20231006BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20231006BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20231006BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20231006BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20231006BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20231006BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20231006BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20231006BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20231006BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20231006BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20231006BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231006BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231006BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231006BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231006BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231006BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C07K16/46
C12N15/62 Z
C07K16/28
C07K19/00
C07K14/725
C12N15/12
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K39/395 E
A61K39/395 T
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023519819
(86)(22)【出願日】2021-09-29
(85)【翻訳文提出日】2023-03-30
(86)【国際出願番号】 CN2021121585
(87)【国際公開番号】W WO2022068854
(87)【国際公開日】2022-04-07
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/119648
(32)【優先日】2020-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/072534
(32)【優先日】2021-01-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】519241381
【氏名又は名称】ナンジン、ジェンスクリプト、バイオテック、カンパニー、リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＧＥＮＳＣＲＩＰＴ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】２８ Ｙｏｎｇｘｉ Ｒｏａｄ，Ｊｉａｎｇｎｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐａｒｋ， Ｎａｎｊｉｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ ２１１１００ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100123788
【弁理士】
【氏名又は名称】宮崎 昭夫
(74)【代理人】
【識別番号】100127454
【弁理士】
【氏名又は名称】緒方 雅昭
(72)【発明者】
【氏名】イン、 リュウソン
(72)【発明者】
【氏名】リ、 ヂョンダオ
(72)【発明者】
【氏名】ヂャオ、 ヂーフイ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72
4B065AA87X
4B065AA92Y
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC751
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085BB36
4C085BB42
4C085CC01
4C085CC08
4C085CC21
4C085EE01
4C085EE03
4H045AA11
4H045AA30
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
クローディン１８．２を標的とする、単離された抗体又はその抗原結合性部分。抗体は、単一ドメイン抗体であり得るか、又はその単量体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃなどの重鎖定常領域に融合され得る。抗体を含む医薬組成物及び疾患の処置での医薬組成物の使用方法も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域であって、（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換を含むそのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項2】
前記ＣＤＲ１領域、前記ＣＤＲ２領域及び前記ＣＤＲ３領域は、それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項3】
前記ＣＤＲ１領域、前記ＣＤＲ２領域及び前記ＣＤＲ３領域は、それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、又は
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１
のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項4】
クローディン１８．２、好ましくはヒトクローディン１８．２に特異的に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項5】
単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）又はＶＨＨドメインである、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項6】
ラクダ科、キメラ、ヒト又はヒト化のものである、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項7】
前記単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項8】
前記単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項9】
前記単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項10】
前記単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項11】
配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単量体可変ドメインを含む抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項12】
前記単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項13】
前記単量体可変ドメインに融合されたＩｇＧ Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項14】
前記ＩｇＧ Ｆｃ領域は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である、請求項１３に記載の抗体又はその抗原結合性部分。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性部分を含む、二重特異的分子、イムノコンジュゲート又はキメラ抗原受容体。
【請求項16】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性部分又は請求項１５に記載の二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体をコードする核酸分子。
【請求項17】
請求項１６に記載の核酸分子を含有する発現ベクター。
【請求項18】
請求項１７に記載の発現ベクターを含有する宿主細胞。
【請求項19】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性部分又は請求項１５に記載の二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項20】
細胞傷害剤をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項21】
対象における癌疾患を処置する方法であって、治療有効量の、請求項１９又は２０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項22】
前記癌疾患は、胃癌、膵癌、結腸癌、食道癌、肝癌、卵巣癌、肺癌及び膀胱癌からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
抗体療法は、広範な癌を処置するために各種の法域で承認されており、患者アウトカムを有意に改善してきた（Ｋｏｍｅｅｖ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８９：１２７－１３５）。癌抗原に結合すると、抗体は、抗体依存細胞媒介細胞傷害性の誘発、補体系の活性化又は受容体とそのリガンドとの相互作用の防止を行い得ると共に、それらは、すべて癌細胞死を誘導し得る。米国ＦＤＡ承認抗体薬剤としては、アレムツズマブ、ニボルマブ、リツキシマブ及びデュルバルマブが挙げられる。
【0002】
クローディン（ＣＬＤＮ）は、傍細胞バリアを形成する表面タンパク質ファミリーであり、細胞間の分子のフローを制御する。これまで、哺乳動物で２４種のクローディンメンバーが報告されている。異なる組織で異なるクローディンメンバーが発現され、それらの発現レベル及び機能は、癌に関連付けられてきた。
【0003】
クローディン１８は、２つのアイソフォームを有する。クローディン１８．１タンパク質（又は単にクローディン １８．１又はクローディン１８．１）は、正常な肺上皮及び胃上皮で選択的に発現される。クローディン１８．２タンパク質（又は単にクローディン １８．２又はクローディン１８．２）は、正常な組織できわめて制限された発現パターンを有する。クローディン１８．２の高レベル発現は、胃腺癌及び膵腺癌の有意な割合で観察されているため、クローディン１８．２は、胃腺癌及び膵腺癌の処置のための療法戦略の有望な標的になっている。
【0004】
抗クローディン１８．２抗体は、特定の癌の処置で試験されてきた。例えば、Ｇａｎｙｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＡＧにより開発されたキメラ抗クローディン１８．２ＩｇＧ１抗体のクラウディキシマブ（ＩＭＡＢ３６２）は、進行胃食道癌及び膵癌を処置するための臨床トライアルで治験が行われてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
望ましい治療効能を有するさらなる抗クローディン１８．２抗体の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域であって、
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、若しくは
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分を提供する。
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、若しくは
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分を提供する。
【0007】
抗体又はその抗原結合性部分のいくつかの実施形態では、
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、若しくは
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及び及びＣＤＲ３領域である。
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、若しくは
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及び及びＣＤＲ３領域である。
【0008】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号６４、６５及び６６、それぞれ配列番号７６、７７及び７８、それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７又はそれぞれ配列番号１９９、２００及び２０１の１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
【0009】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９及び５０のいずれかに示されるアミノ酸配列を有する単量体可変ドメイン内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、クローディン１８．２、好ましくはヒトクローディン１８．２に特異的に結合する。
【0011】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）又はＶＨＨドメインである。
【0012】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、ラクダ科、キメラ、ヒト又はヒト化のものである。
【0013】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0015】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0016】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0017】
他の一態様では、本開示は、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単量体可変ドメインを含む抗体又はその抗原結合性部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択される。
【0018】
さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合性部分のいずれかの抗体又はその抗原結合性部分を含む、二重特異的分子、イムノコンジュゲート又はキメラ抗原受容体を提供する。
【0019】
なおもさらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体（若しくはその抗原結合性部分）のいずれかの抗体若しくはその抗原結合性部分又は二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体をコードする核酸分子を提供する。この核酸分子を含有する発現ベクター及びこの発現ベクターを含有する宿主細胞も提供される。
【0020】
なおもさらなる態様では、本開示は、（１）本明細書に記載の抗体若しくはその抗原結合性部分又は本明細書に記載の二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体と、（２）薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、細胞傷害剤をさらに含み得る。
【0021】
なおもさらなる態様では、本開示は、対象における癌疾患を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。癌疾患は、胃癌、膵癌、結腸癌、食道癌、肝癌、卵巣癌、肺癌及び膀胱癌からなる群から選択され得る。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】コントロール抗体及び陰性コントロールと比較して、ヒトクローディン１８．２又はクローディン１８．１過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞での本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合曲線を示す。Ａ～Ｄは、本開示の抗体例からの結果を示す。Ｅ及びＦ：ＩＭＡＢ３６２抗体は、陽性コントロールとして使用され、及びＰＢＳは、陰性コントロールルとして使用される。
【図2】ヒトクローディン１８．１過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイでの用量－反応曲線を示す。
【図3】ヒトクローディン１８．２過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイデータでの用量－反応曲線を示す。
【図4】マウスクローディン１８．２過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイデータでの用量－反応曲線を示す。
【図5】本開示の抗体の特定の実施形態のＣＤＣアッセイ結果を示す。
【図6】本開示の抗体の特定の実施形態のＡＤＣＣアッセイ結果を示す。
【図7】ヒトクローディン１８．２過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイデータでの用量－反応曲線を示す。
【図8】ヒトクローディン１８．１過剰発現性ＨＥＫ２９３細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイでの用量－反応曲線を示す。
【図9】本開示の抗体の特定の実施形態のＡＤＣＣアッセイ結果を示す。
【図10】本開示の抗体の特定の実施形態のＣＤＣアッセイ結果を示す。
【図11】本開示の抗体の特定の実施形態のＡＤＣＣアッセイ結果を示す。
【図12】ヒトクローディン１８．２過剰発現性ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対する本開示の抗体の特定の実施形態のＦＡＣＳ結合アッセイデータでの用量－反応曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【0023】
本明細書で用いられる抗体の「抗原結合性部分」という用語は、抗原（例えば、クローディン１８．２タンパク質）への結合能を保持する１種以上の抗体フラグメントを意味する。これは、単一可変ドメインを含有する重鎖可変領域及びかかるドメインとそれに化学的に連結された別のポリペプチドセグメントとを含むより大きい分子を含み得る。かかる一本鎖抗体は、「抗原結合性部分」という用語にも包含されることが意図される。
【0024】
本明細書で用いられる「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する。クローディン１８．２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体は、クローディン１８．２タンパク質に結合しない抗体を実質的に含まない。ヒトクローディン１８．２に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトクローディン１８．１タンパク質又は他の種由来のクローディン１８．２タンパク質などの他の抗原にも特異的に結合し得る。単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【0025】
本明細書で用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を意味する。
【0026】
「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」という用語は、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドとの対合を伴うことなく抗原に結合する能力のある、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一単量体可変抗体ドメインを含む単一抗原結合性ポリペプチドを意味する。いくつかの場合、単一ドメイン抗体は、ラクダ科重鎖抗体（ＨＣＡｂ）から工学操作され、ＨＣＡｂのＶＨＨドメイン又はフラグメントとも呼ばれる。単一ドメイン抗体は、重鎖のみ抗体の抗原結合性部分の１種である。ＶＨＨは、ナノボディーとしても知られ得る。ラクダ科ｓｄＡｂは、最小級の既知の抗原結合性抗体フラグメントの１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－８（１９９３）、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７４：１６８－７３（１９９５）、Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ－Ｇｈａｓｓａｂｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３－２６（２０１３）を参照されたい）。例として、配列番号１～５０のアミノ酸配列を有する本開示の実施例中の特定の単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂ－１（又はｓｄａｂ－１）、ｓｄＡｂ－２（又はｓｄａｂ－２）、ｓｄＡｂ－３（又はｓｄａｂ－３）、．．．、ｓｄＡｂ－５０（又はｓｄａｂ－５０）に対して参照される。
【0027】
本明細書で用いられる場合、「ヒトクローディン１８．２に特異的に結合する」抗体又は分子とは、ヒトクローディン１８．２タンパク質に結合するが、非クローディン１８．２タンパク質に実質的に結合しない抗体又はポリペプチド分子を意味する。
【0028】
本明細書で用いられる場合、「融合されたタンパク質」、「融合タンパク質」、「融合抗体」又は「融合された抗体」という用語は、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）部分とＩｇＧ定常領域Ｆｃ（例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域）との両方を含む抗体分子を意味する。ただし、２つの部分は、組換え法などにより化学的に連結される。例えば、ｓｄＡｂは、ＩｇＧのネイティブヒンジ領域でＩｇＧ Ｆｃ領域に直接融合可能である。ｓｄＡｂは、融合抗体中ではＩｇＧ Ｆｃの上流、すなわちＮ末端のより近くに位置し、この場合、ｓｄＡｂ及びＩｇＧ Ｆｃ領域には、ヒンジ領域が介在する。融合抗体タンパク質は、本明細書では成分部分として参照され得、例えば、ｓｄａｂ－１－ｈＩｇＧ１Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（配列番号５１のアミノ酸配列を有する）に融合されたｓｄａｂ－２により構成される融合タンパク質又は抗体を意味し、ｓｄａｂ－２－ｈＩｇＧ１Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に融合されたｓｄａｂ－２により構成される融合タンパク質又は抗体を意味し、以下同様である。
【0029】
本明細書で用いられる「ラクダ科抗体」という用語は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がラクダ科生殖系重鎖のみ抗体配列に由来する可変領域を有する抗体（又はより具体的には単一ドメイン抗体若しくはＶＨＨフラグメント）を含むことを意図される。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もラクダ科生殖系抗体配列に由来し得る。本発明のラクダ科抗体は、ラクダ科生殖系抗体配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム若しくは部位特異的変異誘発により又はインビボで体細胞変異により導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で用いられる「ラクダ科抗体」という用語は、別の哺乳動物種の生殖系に由来するＣＤＲ配列がラクダ科フレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図されない。
【0030】
「キメラ抗体」という用語は、非ヒト（例えば、ラクダ科動物）源由来の遺伝物質と、ヒト由来の遺伝物質とを組み合わせることにより作製された抗体を意味する。又は、より一般的には、キメラ抗体は、異なる種の遺伝物質から生成された異なる部分を有する抗体である。
【0031】
本明細書で用いられる「ヒト化抗体」という用語は、ヒトにおいて天然に生成される抗体バリアントとの類似性を増加させるようにタンパク質配列が修飾された非ヒト（例えば、ラクダ科動物）種由来の抗体を意味する。
【0032】
２つ以上の核酸又はタンパク質／ペプチドに関連して本明細書で用いられるパーセント「同一性」という用語は、配列同一性の部分としていずれの保存的アミノ酸置換も考慮せずに最大の対応が得られるように比較及びアライメントしたとき（必要に応じてギャップを導入して）、特定のパーセントの同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基を有する２つ以上の配列又はサブ配列を意味する。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを用いて又は目視検査により測定され得る。アミノ酸配列又はヌクレオチド配列のアライメントを得るために使用可能な各種のアルゴリズム及びソフトウェアは、当技術分野で周知である。こうしたものとしては、限定されないが、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ及びそれらの変法が挙げられる。
【0033】
本明細書で用いられる場合、「対象」という用語は、いずれのヒト又は非ヒト動物も含む。「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば哺乳動物及び非哺乳動物を含む。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0034】
抗体のＣＤＲは、様々な方法／システムを用いて当業者により定義される。これらのシステム及び／又は定義は、長年にわたり開発及び精緻化されており、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ及びＣｏｎｔａｃｔを含む。Ｋａｂａｔ定義は、配列可変性に基づいており、通常使用される。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づく。ＩＭＧＴシステムは、配列可変性及び可変ドメイン構造内の位置に基づく。ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの折衷案である。Ｃｏｎｔａｃｔ定義は、利用可能な抗体結晶構造の解析に基づく。例示的なシステムは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの組合せである。別の例示的なシステムは、Ｋａｂａｔである。
【0035】
本明細書で用いられる場合、「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」という用語は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続抗原結合性部位を意味することが意図される。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）及びＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、定義には、互いに比較されるときのアミノ酸残基のオーバーラッピング又はサブセットが含まれる。それにも関わらず、抗体若しくは移植抗体のＣＤＲ又はそのバリアントを意味するいずれの定義の適用も、本明細書で定義され、用いられる用語の範囲内にあることが意図される。以上で引用された参照文献の各々により定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表１に示される。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）を含めて当技術分野で公知である。この段落で引用された参照文献の内容は、本願での使用のため及び本明細書の１つ以上の請求項への包含を可能にするために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0036】
【表1】
【0037】
ヒトクローディン１８．２を標的とする抗体（又は抗ヒトクローディン１８．２抗体）
一態様では、本開示は、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域であって、
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、若しくは
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分を提供する。
一態様では、本開示は、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域であって、
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、若しくは
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分を提供する。
【0038】
いくつかの実施形態では、
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、又は
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分である。
（１）それぞれ配列番号５２、５３及び５４、
（２）それぞれ配列番号５５、５６及び５７、
（３）それぞれ配列番号５８、５９及び６０、
（４）それぞれ配列番号６１、６２及び６３、
（５）それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
（６）それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
（７）それぞれ配列番号８２、８３及び８４、
（８）それぞれ配列番号８５、８６及び８７、
（９）それぞれ配列番号８８、８９及び９０、
（１０）それぞれ配列番号９１、９２及び９３、
（１１）それぞれ配列番号９４、９５及び９６、
（１２）それぞれ配列番号１０３、１０４及び１０５、
（１３）それぞれ配列番号１０６、１０７及び１０８、
（１４）それぞれ配列番号１１２、１１３及び１１４、
（１５）それぞれ配列番号１１５、１１６及び１１７、
（１６）それぞれ配列番号１２１、１２２及び１２３、
（１７）それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
（１８）それぞれ配列番号１２７、１２８及び１２９、
（１９）それぞれ配列番号１３３、１３４及び１３５、
（２０）それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
（２１）それぞれ配列番号１３９、１４０及び１４１、
（２２）それぞれ配列番号１４２、１４３及び１４４、
（２３）それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
（２４）それぞれ配列番号１４８、１４９及び１５０、
（２５）それぞれ配列番号１５１、１５２及び１５３、
（２６）それぞれ配列番号１５４、１５５及び１５６、
（２７）それぞれ配列番号１５７、１５８及び１５９、
（２８）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２、
（２９）それぞれ配列番号１６３、１６４及び１６５、
（３０）それぞれ配列番号１６９、１７０及び１７１、
（３１）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４、
（３２）それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、
（３３）それぞれ配列番号１７８、１７９及び１８０、
（３４）それぞれ配列番号１８１、１８２及び１８３、
（３５）それぞれ配列番号１８４、１８５及び１８６、
（３６）それぞれ配列番号１９０、１９１及び１９２、
（３７）それぞれ配列番号１９３、１９４及び１９５、
（３８）それぞれ配列番号１９６、１９７及び１９８、又は
（３９）それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域を含む単量体可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合性部分である。
【0039】
抗体又はその抗原結合性部分のいくつかの実施形態では、
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、若しくは
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、若しくは
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１、又は
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のいずれか１つ以上に最大で約３アミノ酸置換（例えば、１、２又は３アミノ酸置換）を含む、上記のいずれかのバリアント
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
【0040】
抗体又はその抗原結合性部分のいくつかの実施形態では、
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、又は
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
それぞれ配列番号６４、６５及び６６、
それぞれ配列番号７６、７７及び７８、
それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、
それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、
それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、
それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７、又は
それぞれ配列番号１９９、２００及び２０１
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
【0041】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号６４、６５及び６６、それぞれ配列番号７６、７７及び７８、それぞれ配列番号１２４、１２５及び１２６、それぞれ配列番号１３６、１３７及び１３８、それぞれ配列番号１４５、１４６及び１４７、それぞれ配列番号１７５、１７６及び１７７又はそれぞれ配列番号１９９、２００及び２０１の１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域である。
【0042】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９及び５０のいずれかに示されるアミノ酸配列を有する単量体可変ドメイン内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【0043】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、クローディン１８．２、好ましくはヒトクローディン１８．２に特異的に結合する。
【0044】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）又はＶＨＨドメイン、すなわち従来の重鎖定常領域を含まないものである。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は単一ドメイン抗体である。
【0045】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、ラクダ科、キメラ、ヒト又はヒト化のものである。
【0046】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１～５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0047】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１～５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0048】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0049】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0050】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0051】
いくつかの実施形態では、単量体可変ドメインは、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0052】
他の一態様では、本開示は、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単量体可変ドメインを含む抗体又はその抗原結合性部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択される。
【0053】
他の一態様では、本開示は、配列番号１、２、３、４、５、９、１１、１２、１３、１４、１５、１８、１９、２１、２２、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４７、４８、４９、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む単量体可変ドメインを含む抗体又はその抗原結合性部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号５、９、２５、２９、３２、４２、５０及び２０２～２１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む単量体可変ドメインを含む。
【0054】
細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体被覆粒子の貧食及び破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆標的細胞の溶解（抗体依存細胞傷害性又はＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症性メディエーターの放出、胎盤通過及びイムノグロブリン産生の制御をはじめとするいくつかの重要な様々な生物学的反応をトリガーする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合性部分は、Ｆｃ領域を含む。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列は、当業者に公知である。いくつかの場合、アミノ酸バリエーションを有するＦｃ領域がネイティブ抗体で同定されている。いくつかの実施形態では、修飾抗体（例えば、修飾Ｆｃ領域）は、改変エフェクター機能を提供し、したがって抗体の生物学的プロファイルに影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、定常領域修飾は、抗体の血清中半減期を増加させる。いくつかの実施形態では、定常領域修飾は、抗体のＡＤＣＣ及び／又は補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）を増加又は増強する。
【0055】
本明細書に記載の抗体又はその抗原結合性部分は、単量体可変ドメインに融合されたＩｇＧ Ｆｃ領域をさらに含み得る。例えば、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＮ末端に融合された抗体又はその抗原結合性部分（例えば、ｓｄＡｂ）である。
【0056】
さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合性部分を含む、二重特異的分子、イムノコンジュゲート（若しくは抗体薬剤コンジュゲート）又はキメラ抗原受容体を提供する。
【0057】
「二重特異的分子」という用語は、少なくとも１つの他の機能性分子、例えば別のペプチド又はタンパク質（例えば、別の抗体又は受容体に対するリガンド）に連結された本開示の抗体を意味する。二重特異的分子は、少なくとも２つの異なる結合性部位又は標的分子を有し得、且つ３特異性以上を有する分子を含み得る。
【0058】
「イムノコンジュゲート」という用語は、治療剤、例えば細胞毒素、アルキル化剤、ＤＮＡマイナーグルーブバインダー、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡクロスリンカー、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核エクスポート阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤などにコンジュゲートされた本開示の抗体を意味する。ＡＤＣでは、抗体及び治療剤は、ペプチジル、ジスルフィドなどの切断性リンカーを介してコンジュゲートされ得る。
【0059】
「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞、典型的にはＴ細胞上に規定の特異性を移植してＴ細胞機能を拡張する工学操作された受容体を意味する。新世代ＣＡＲは、単一ドメイン抗体を含む細胞外結合性ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナリングドメイン（主にＴ細胞活性化シグナルの主トランスミッターであるＣＤ３ゼータ細胞質ドメイン、さらに１つ以上の共刺激性ドメイン）を含む。ＣＡＲは、Ｔ細胞拡大、持続及び抗腫瘍活性を増強する因子、例えばサイトカイン及び共刺激性リガンドをさらに有し得る。
【0060】
なおもさらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体（若しくはその抗原結合性部分）のいずれかの抗体若しくはその抗原結合性部分又は二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体をコードする核酸分子を提供する。この核酸分子を含有する発現ベクターを含有する宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞若しくはリンパ球細胞又は微生物、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び真菌、例えば酵母）は、本開示の抗体、好ましくはモノクローナル抗体を産生するために使用され得る。
【0061】
一実施形態では、本開示の部分長又は全長抗体をコードするＤＮＡは、標準的分子生物学技術によって得て、遺伝子が転写及び翻訳調節配列に作動的に連結されるように１つ以上の発現ベクターに挿入することができる。「作動的に連結される」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写及び翻訳をレギュレートするその意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターにライゲートされることを意味することが意図される。「調節配列」という用語は、抗体遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。かかる調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０））に記載されている。哺乳動物宿主細胞発現に好ましい調節配列としては、哺乳動物細胞で高レベルのタンパク質発現を指令するウイルスエレメント、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルスメジャー後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））並びにポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーが挙げられる。代替的に、ユビキチンプロモーター又はβ－グロビンプロモーターなどの非ウイルス調節配列を使用し得る。なおもさらに、異なる源由来の配列で構成された調節エレメント、例えばＳＶ４０初期プロモーター及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長末端リピート由来の配列を含有するＳＲαプロモーターシステム（Ｔａｋｅｂｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６－４７２）である。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞に適合可能であるように選択される。
【0062】
抗体をコードするＤＮＡは、発現ベクターに挿入され得る。組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体をコードするＤＮＡは、抗体をコードするＤＮＡのアミノ末端にシグナルペプチドがインフレームで連結されるようにベクター中にクローニングされ得る。シグナルペプチドは、イムノグロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（すなわち非イムノグロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【0063】
ｓｄＡｂ（又はｓｄＡｂ－ＩｇＧＦｃ）の発現のために、抗体鎖をコードする発現ベクターは、標準的技術により宿主細胞中にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の各種の形態は、原核又は真核宿主細胞中への外因性ＤＮＡの導入に通常使用される多様な技術、例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。本開示の抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞としては、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入されたとき、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現、より好ましくは宿主細胞が成長する培養培地中への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたり宿主細胞を培養することにより産生される。抗体は、標準的タンパク質精製法を用いて培養培地から回収され得る。
【0064】
最大半量有効濃度としても知られる「ＥＣ５０」という用語は、特定の暴露時間後に最大半量反応を与える抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質若しくは抗クローディン１８．２ｓｄＡｂなどの抗体又はその抗原結合性部分の濃度を意味する。
【0065】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分（例えば、ｓｄＡｂ又はｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質）は、約１ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下又は約０．１ｎＭ以下の最大半量有効濃度（ＥＣ５０）でクローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約１ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下又は約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約４０ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約２０ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性部分は、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトクローディン１８．２に結合する。
【0066】
医薬組成物及び処置方法
他の一態様では、本開示は、従来技術に係る薬学的に許容可能な担体と共に本発明の１種以上の抗体又は本明細書に記載の二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体を含む医薬組成物を提供する。
他の一態様では、本開示は、従来技術に係る薬学的に許容可能な担体と共に本発明の１種以上の抗体又は本明細書に記載の二重特異的分子、イムノコンジュゲート若しくはキメラ抗原受容体を含む医薬組成物を提供する。
【0067】
組成物は、１種以上の追加の医薬活性成分、例えば別の抗体、薬剤、例えば細胞傷害剤又は抗腫瘍剤を含み得る。本発明の医薬組成物は、例えば、別の抗癌剤、別の抗炎症剤などとの組合せ療法でも投与され得る。本明細書で用いられる場合、「薬学的に許容可能な担体」は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定化剤を含む。こうしたものとしては、限定されないが、生理学的に適合可能な溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤、界面活性剤、増粘剤又は乳化剤、固形結合剤、ディスパージョン又はサスペンジョン助剤、可溶化剤、着色剤、風味剤、コーティング剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、保存剤、等張化剤などが挙げられる。好適な担体の選択は、当業者の知識の範囲内にある。
【0068】
医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、腸管外、表皮及び他の投与経路に好適であり得る。投与経路に依存して、活性成分は、それを不活性化するおそれのある酸及び他の自然条件の作用からそれを保護するための材料で被覆され得るか、又はさもなければそうした材料若しくは構造体にロードされ得る。本明細書で用いられる「腸管外投与」という語句は、経腸投与及び局所投与以外の投与モード、通常、注射によるものを意味し、こうしたものとしては、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、角質下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内の注射及び注入が挙げられる。代替的に、本発明の抗体は、非腸管外経路、例えば局所、表皮又は粘膜投与経路を介して、例えば鼻内、経口、膣、直腸、舌下又は局所で投与され得る。
【0069】
他の一態様では、本開示は、対象、例えばヒト又は非ヒト哺乳動物における疾患を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。疾患は、胃癌、膵癌、結腸癌、食道癌、肝癌、卵巣癌、肺癌及び膀胱癌からなる群から選択される癌であり得る。特定の実施形態では、癌は、胃癌である。特定の実施形態では、癌は、膵癌である。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0070】
対象への組成物の投与では、最適な所望の反応（例えば、治療反応）を提供するように投与レジメンを調整し得る。対象、処置される疾患などに基づいて単一ボーラス又は分割用量を投与し得る。本明細書で用いられるユニット製剤は、処置される対象に対するユニット投与量として適切な物理的に個別のユニットを意味する。各ユニットは、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算される、あらかじめ決められた量の活性成分を含有する。それほど頻繁でない投与が必要とされる場合、持続放出製剤を使用することができる。
【0071】
本開示の抗体の投与では、投与量は、対象の体重基準で約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。好適な処置レジームは、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月１回などであり得る。本発明の抗クローディン１８．２抗体に対する投与レジメン例は、静脈内投与を介して１ｍｇ／ｋｇ体重又は３ｍｇ／ｋｇ体重を含み得る。
【0072】
「治療有効量」又は「治療有効量」の、本発明のクローディン１８．２を標的とする抗体は、好ましくは、疾患症状の重症度の減少、疾患無症状期間の頻度及び／若しくは持続期間の増加、疾患罹患に起因する機能障害若しくは能力障害の可能性の予防若しくは低減又は疾患進行の阻害若しくは遅延をもたらす。例えば、腫瘍保有対象の処置では、「治療有効量」の抗体組成物は、未処置対象と比べて腫瘍成長を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、またさらにより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。
【実施例】
【0073】
以下の実施例は、単に本発明の例示であることが意図されるため、決して本発明を限定するものとみなされるべきでない。
【0074】
実施例１：抗クローディン１８．２ｓｄＡｂの発生
動物免疫化
現在の動物福祉規則に従って組換えヒトクローディン１８．２－Ｈｉｓタンパク質（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）でラマを免疫した。免疫化では、ＣＦＡ（完全フロイントアジュバント、一次免疫化）又はＩＦＡ（不完全フロイントアジュバント、ブースト免疫化）と共に抗原をＰＢＳ溶液中に投与したか又はエマルジョンとして配合した。抗原は、頸部の皮下に投与した。各動物は、ＣＦＡエマルジョン中の２００μｇの抗原による一次免疫化、１週間のインターバルでＩＦＡエマルジョン中の１００μｇの抗原による３回の後続ブースト及び１週間のインターバルでＩＦＡエマルジョン中の５０μｇの抗原による続く２回の注射を含めて、エマルジョンの注射を６回受けた。複数ラウンドの免疫化後、２００ｍｌの血液サンプルを採取した。ラマ重鎖抗体（ＨＣＡｂ）の遺伝源として末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を勾配遠心分離により血液サンプルから単離した。
動物免疫化
現在の動物福祉規則に従って組換えヒトクローディン１８．２－Ｈｉｓタンパク質（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）でラマを免疫した。免疫化では、ＣＦＡ（完全フロイントアジュバント、一次免疫化）又はＩＦＡ（不完全フロイントアジュバント、ブースト免疫化）と共に抗原をＰＢＳ溶液中に投与したか又はエマルジョンとして配合した。抗原は、頸部の皮下に投与した。各動物は、ＣＦＡエマルジョン中の２００μｇの抗原による一次免疫化、１週間のインターバルでＩＦＡエマルジョン中の１００μｇの抗原による３回の後続ブースト及び１週間のインターバルでＩＦＡエマルジョン中の５０μｇの抗原による続く２回の注射を含めて、エマルジョンの注射を６回受けた。複数ラウンドの免疫化後、２００ｍｌの血液サンプルを採取した。ラマ重鎖抗体（ＨＣＡｂ）の遺伝源として末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を勾配遠心分離により血液サンプルから単離した。
【0075】
ファージディスプレイライブラリー構築
製造業者のプロトコルに従ってＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５５９６０２６）を用いて、以上に記載の全ＲＮＡを単離されたリンパ球から抽出し、これをｓｄＡｂコード遺伝子断片の増幅のためにＲＴ－ＰＣＲのための出発材料として使用した。遺伝子増幅では、製造業者のプロトコルに従ってＰＲＩＭＥＳＣＲＩＰＴ第一鎖ｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６１１０Ａ）を用いて、単離されたＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）２０プライマーでｃＤＮＡに逆転写した。ＶＨＨフラグメントを増幅するために、６つのフォワード及び２つのリバース特異的縮重プライマーを設計した。
製造業者のプロトコルに従ってＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５５９６０２６）を用いて、以上に記載の全ＲＮＡを単離されたリンパ球から抽出し、これをｓｄＡｂコード遺伝子断片の増幅のためにＲＴ－ＰＣＲのための出発材料として使用した。遺伝子増幅では、製造業者のプロトコルに従ってＰＲＩＭＥＳＣＲＩＰＴ第一鎖ｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６１１０Ａ）を用いて、単離されたＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）２０プライマーでｃＤＮＡに逆転写した。ＶＨＨフラグメントを増幅するために、６つのフォワード及び２つのリバース特異的縮重プライマーを設計した。
【0076】
２工程ＰＣＲ法によりＶＨＨフラグメントの可変領域を増幅した。第２のＰＣＲの鋳型として第１のＰＣＲのＤＮＡ産物を使用した。ＶＨＨ ＰＣＲフラグメントを含有する増幅された第２のＰＣＲ産物をゲル精製し、酵素消化し、続いてファージミドプラスミド中に挿入した。組換えプラスミドをエレクトロポレーションにより大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞中に移し、１×１０９超のサイズでファージディスプレイライブラリーを生成した。標準的プロトコルに従ってライブラリーファージを調製し、濾過滅菌後にストックとして－８０℃で貯蔵した。
【0077】
ファージディスプレイパニング
ＧｅｎＳｃｒｉｐｔにより開発された標準的手順を用いて、最初に、構築されたファージライブラリーを、ヒトクローディン１８．１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞でカウンタースクリーニングし、続いてヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞でパニングした。２ラウンドの選択を実施し、富化係数（コントロールと比べて溶出液中に存在するファージの数）、多様性及びクローディン１８．２陽性クローンのパーセンテージに関して各選択アウトプットを解析した（ＦＡＣＳ）。これらのパラメーターに基づいて、さらなるスクリーニングのために最良クラスの選択肢を選択し、ハイスループットスクリーニングのためにプールとして可溶性発現ベクター中にサブクローニングした。ｓｄＡｂコード配列とインフレームで、ベクターは、Ｃ末端Ｈｉｓタグをコードした。コロニーを取り出して９６ディープウェルプレート（１ｍｌの体積）中で成長させ、上清中のｓｄＡｂ発現のためにＩＰＴＧ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎの添加により誘導した。
ＧｅｎＳｃｒｉｐｔにより開発された標準的手順を用いて、最初に、構築されたファージライブラリーを、ヒトクローディン１８．１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞でカウンタースクリーニングし、続いてヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞でパニングした。２ラウンドの選択を実施し、富化係数（コントロールと比べて溶出液中に存在するファージの数）、多様性及びクローディン１８．２陽性クローンのパーセンテージに関して各選択アウトプットを解析した（ＦＡＣＳ）。これらのパラメーターに基づいて、さらなるスクリーニングのために最良クラスの選択肢を選択し、ハイスループットスクリーニングのためにプールとして可溶性発現ベクター中にサブクローニングした。ｓｄＡｂコード配列とインフレームで、ベクターは、Ｃ末端Ｈｉｓタグをコードした。コロニーを取り出して９６ディープウェルプレート（１ｍｌの体積）中で成長させ、上清中のｓｄＡｂ発現のためにＩＰＴＧ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎの添加により誘導した。
【0078】
ＦＡＣＳによる抗クローディン１８．２特異的ｓｄＡｂリード同定
ｓｄＡｂの細胞表面抗原結合を検証するために、クローディン１８．２発現性ＨＥＫ２９３細胞への結合能に関して上清中の発現ｓｄＡｂをＦＡＣＳにより解析した。クローディン１８．１発現性ＨＥＫ２９３細胞への結合もＦＡＣＳにより評価した。ヒトクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞を採取し、本明細書に記載の抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ、続いてＦＩＴＣ標識抗Ｈｉｓタグ抗体（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ａ０１６２０）と共にインキュベートした。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。典型的結合図を図１に示した。抗クローディン１８．２ｍＡｂは、クローディン１８．１タンパク質発現性細胞（点線）ではなく、ヒトクローディン１８．２発現性細胞（実線）に特異的に結合する。陰性結合は、工学操作なしの親ＨＥＫ２９３細胞のバックグラウンド灰色曲線と実線とをマージしたものとして表された。標的結合パターンは、陽性コントロール抗体ＩＭＡＢ３６２（クラウディキシマブ）及びＰＢＳコントロールにより明確化され、ＩＭＡＢ３６２結合親和性は、フルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）により検出された。これらのｓｄＡｂをシーケンスし、さらなる特徴付けのためにユニーククローンを選択した。同定／試験されたｓｄＡｂ（又はクローン）の配列は、本明細書に添付の配列リストに示される。
ｓｄＡｂの細胞表面抗原結合を検証するために、クローディン１８．２発現性ＨＥＫ２９３細胞への結合能に関して上清中の発現ｓｄＡｂをＦＡＣＳにより解析した。クローディン１８．１発現性ＨＥＫ２９３細胞への結合もＦＡＣＳにより評価した。ヒトクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞を採取し、本明細書に記載の抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ、続いてＦＩＴＣ標識抗Ｈｉｓタグ抗体（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ａ０１６２０）と共にインキュベートした。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。典型的結合図を図１に示した。抗クローディン１８．２ｍＡｂは、クローディン１８．１タンパク質発現性細胞（点線）ではなく、ヒトクローディン１８．２発現性細胞（実線）に特異的に結合する。陰性結合は、工学操作なしの親ＨＥＫ２９３細胞のバックグラウンド灰色曲線と実線とをマージしたものとして表された。標的結合パターンは、陽性コントロール抗体ＩＭＡＢ３６２（クラウディキシマブ）及びＰＢＳコントロールにより明確化され、ＩＭＡＢ３６２結合親和性は、フルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）により検出された。これらのｓｄＡｂをシーケンスし、さらなる特徴付けのためにユニーククローンを選択した。同定／試験されたｓｄＡｂ（又はクローン）の配列は、本明細書に添付の配列リストに示される。
【0079】
ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質の産生
抗クローディン１８．２ｓｄＡｂとヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（ネイティブＩｇＧ１ヒンジ領域を含む）との融合により、抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質構築物を発生させた。ＣＨＯ－３Ｅ７細胞一過性発現で構築物のマキシプレップを調製した。プロテインＡアガロース樹脂を含有するカラムを介して、クロマトグラフィーにより発現抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質を精製した。
抗クローディン１８．２ｓｄＡｂとヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（ネイティブＩｇＧ１ヒンジ領域を含む）との融合により、抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質構築物を発生させた。ＣＨＯ－３Ｅ７細胞一過性発現で構築物のマキシプレップを調製した。プロテインＡアガロース樹脂を含有するカラムを介して、クロマトグラフィーにより発現抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質を精製した。
【0080】
実施例２：インビトロでの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂの特徴付け
ＦＡＣＳアッセイによるヒトクローディン１８．１細胞結合
ｓｄＡｂ－ｈＩｇＧ－Ｆｃ融合タンパク質の構築後、クローディン１８．１に結合せずにクローディン１８．２にのみ結合する抗体結合特異性をさらに調べるために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂと共に、ヒトクローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
ＦＡＣＳアッセイによるヒトクローディン１８．１細胞結合
ｓｄＡｂ－ｈＩｇＧ－Ｆｃ融合タンパク質の構築後、クローディン１８．１に結合せずにクローディン１８．２にのみ結合する抗体結合特異性をさらに調べるために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂと共に、ヒトクローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
【0081】
図２に示されるように、これらの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のうち、ｓｄａｂ－６－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－１０－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－１６－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２０－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２３－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－４６－ｈＩｇＧ１Ｆｃを含む６種のタンパク質のみがヒトクローディン１８．１への高い結合親和性を示した。他のｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトクローディン１８．１への結合親和性を示さなかったか又は弱い結合親和性を示した。ヒトクローディン１８．１とのそれらの結合特異性をさらに同定するために、ヒトクローディン１８．１との結合親和性を有しないか又は弱い結合親和性を有するｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてを、フローサイトメトリーによる第２ラウンドの結合アッセイのために選択した。図８に示されるように、それらのいずれもヒトクローディン１８．１に結合しない。
【0082】
ＦＡＣＳアッセイによるヒトクローディン１８．２細胞結合
ヒトクローディン１８．１への非特異的結合の解析後、クローディン１８．１結合親和性を有しない／弱い結合親和性を有するこれらの候補を選択して、ヒトクローディン１８．２へのそれらの結合親和性を確認した。抗体産物の細胞表面クローディン１８．２抗原結合を検証するために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共に、ヒトクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
ヒトクローディン１８．１への非特異的結合の解析後、クローディン１８．１結合親和性を有しない／弱い結合親和性を有するこれらの候補を選択して、ヒトクローディン１８．２へのそれらの結合親和性を確認した。抗体産物の細胞表面クローディン１８．２抗原結合を検証するために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共に、ヒトクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
【0083】
図３に示されるように、これらの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のうち、ｓｄａｂ－７－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－１７－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－３９－ｈＩｇＧ１Ｆｃを除いて、抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のほとんどは、高親和性でヒトクローディン１８．２発現性細胞に結合する。ヒトクローディン１８．２とのそれらの結合親和性をさらに同定するために、高結合親和性のｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてを、フローサイトメトリーによる第２ラウンドの結合アッセイのために選択した。図７に示されるように、ＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂと比較したとき、ｓｄＡｂ－４５－ｈＩｇＧ１Ｆｃを除いて、それらのすべてが類似の又はより高い結合親和性を有することが確認された。
【0084】
ＦＡＣＳアッセイによるマウスクローディン１８．２細胞結合
マウスクローディン１８．２へのこれらの融合タンパク質の結合親和性を確認するために、マウスクローディン１８．２を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を採取し、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
マウスクローディン１８．２へのこれらの融合タンパク質の結合親和性を確認するために、マウスクローディン１８．２を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を採取し、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌの抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共にインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－６０５－０９８）インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
【0085】
図４に示されるように、本開示の抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のうち、ｓｄａｂ－１７－ｈＩｇＧ１Ｆｃを除いて、抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のほとんどは、高親和性でマウスクローディン１８．２発現性細胞に結合する。
【0086】
抗クローディン１８．２抗体で誘導される補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイ
抗体依存細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）作用は、ヒト胃癌又は胃食道癌に対する抗ヒトクローディン１８．２治療用抗体の主要な作用機序である。候補抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤＣアッセイを用いて機能的にアセスされた。簡潔に述べると、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１を培養して採取し、それを９６ウェルプレートに播種した。それに応じて抗体サンプルをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。次いで、精製正常ヒト血清をプレートに添加し、プレートをさらに４時間インキュベートした。インキュベーターからプレートを取り出して上清を採取し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）で分析した。細胞生存能分析のためにＰｈｅｒａＳｔａｒ（ＡＭＧ）により発光データをキャプチャーした。ＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）及び３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３（国際公開第２０２０１３５６７Ａ１号パンフレットに開示される）を含む２つの陽性コントロールを比較用に使用した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＣＤＣアッセイ結果は、図５に示される。ｓｄａｂ－１７－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－２７－ｈＩｇＧ１Ｆｃを除いて、ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてがＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりも良好なＣＤＣ活性を示した。３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３と比較したとき、ｓｄａｂ－２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－９－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２９－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３３－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３６－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３８－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４０－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４３－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４４－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４８－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－５０－ｈＩｇＧ１Ｆｃを含めて、多くのｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質は、同程度の活性を呈した。
抗体依存細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）作用は、ヒト胃癌又は胃食道癌に対する抗ヒトクローディン１８．２治療用抗体の主要な作用機序である。候補抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤＣアッセイを用いて機能的にアセスされた。簡潔に述べると、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１を培養して採取し、それを９６ウェルプレートに播種した。それに応じて抗体サンプルをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。次いで、精製正常ヒト血清をプレートに添加し、プレートをさらに４時間インキュベートした。インキュベーターからプレートを取り出して上清を採取し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）で分析した。細胞生存能分析のためにＰｈｅｒａＳｔａｒ（ＡＭＧ）により発光データをキャプチャーした。ＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）及び３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３（国際公開第２０２０１３５６７Ａ１号パンフレットに開示される）を含む２つの陽性コントロールを比較用に使用した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＣＤＣアッセイ結果は、図５に示される。ｓｄａｂ－１７－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－２７－ｈＩｇＧ１Ｆｃを除いて、ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてがＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりも良好なＣＤＣ活性を示した。３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３と比較したとき、ｓｄａｂ－２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－９－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－２９－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３３－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３６－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－３８－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４０－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４２－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４３－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４４－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４５－ｈＩｇＧ１Ｆｃ、ｓｄａｂ－４８－ｈＩｇＧ１Ｆｃ及びｓｄａｂ－５０－ｈＩｇＧ１Ｆｃを含めて、多くのｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質は、同程度の活性を呈した。
【0087】
抗クローディン１８．２抗体で誘導されるＡＤＣＣアッセイ
抗クローディン１８．２ｓｄａｂ－Ｆｃ融合タンパク質のＡＤＣＣ作用を比較した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＡＤＣＣアッセイ結果は、図６に示される。アッセイ手順では、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１を培養して採取し、９６ウェルプレート中に播種した。サンプル又はＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）の同一アミノ酸配列でインハウスにおいて合成された陽性コントロールをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。エフェクター細胞としてＮＫ９２細胞を使用してプレートに添加し、同一条件で６時間インキュベートした。アッセイプレートを取り出して、短時間遠心分離した。上清を採取して、製造業者の説明書（Ｒｏｃｈｅ）に従ってＬＤＨ活性アッセイのために新しいプレートに移した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３により吸光度データをキャプチャーして、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０により分析した。ＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）及び３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３（国際公開第２０２０１３５６７Ａ１号パンフレット）を含む２つの陽性コントロールを比較用に使用した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＡＤＣＣアッセイ結果は、図６に示される。ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてがＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりも良好なＡＤＣＣ活性を示した。
抗クローディン１８．２ｓｄａｂ－Ｆｃ融合タンパク質のＡＤＣＣ作用を比較した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＡＤＣＣアッセイ結果は、図６に示される。アッセイ手順では、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１を培養して採取し、９６ウェルプレート中に播種した。サンプル又はＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）の同一アミノ酸配列でインハウスにおいて合成された陽性コントロールをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。エフェクター細胞としてＮＫ９２細胞を使用してプレートに添加し、同一条件で６時間インキュベートした。アッセイプレートを取り出して、短時間遠心分離した。上清を採取して、製造業者の説明書（Ｒｏｃｈｅ）に従ってＬＤＨ活性アッセイのために新しいプレートに移した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３により吸光度データをキャプチャーして、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０により分析した。ＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）及び３７０Ｅ２Ｂ１２Ｃ３（国際公開第２０２０１３５６７Ａ１号パンフレット）を含む２つの陽性コントロールを比較用に使用した。候補抗体濃度に対する％標的細胞溶解によるＡＤＣＣアッセイ結果は、図６に示される。ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべてがＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりも良好なＡＤＣＣ活性を示した。
【0088】
実施例３：抗体ヒト化及び分析
抗体ヒト化及び特徴付け
抗体可変ドメイン配列に基づいてＣＤＲ及びＦＲを分析し、相同性モデリングを実施してｓｄａｂ－０９、ｓｄａｂ－２５、ｓｄａｂ－２９、ｓｄａｂ－３２、ｓｄａｂ－４２及びｓｄａｂ－５０の親ラマ抗体のモデル構造を得た。以下の方法を介して抗体ヒト化を実施した。１）フレームワーク残基の溶媒アクセス可能表面積を計算する。２）結果に基づいて、埋め込まれたフレームワーク残基を同定する（すなわち溶媒アクセス可能表面積＜１５％）。３）ｓｄＡｂカウンターパートに対して高い配列同一性を共有するｓｄＡｂでヒトアクセプターを選択する。４）復帰変異を伴うことなく移植抗体の配列が得られるようにラマｓｄＡｂのＣＤＲをヒトアクセプターフレームワークに直接移植する。５）開発性アセスメントを介して、脱アミド化、異性化、酸化、グリコシル化などをはじめとする移植配列の翻訳後修飾及び化学分解を分析する。６）移植抗体の結合活性及び生産性に影響を及ぼし得るＮ－グリコシル化部位、異常プロリン残基、脱アミド化部位、異性化部位、酸化部位、不対システイン残基などのようなＰＴＭホットスポットを同定する。
抗体ヒト化及び特徴付け
抗体可変ドメイン配列に基づいてＣＤＲ及びＦＲを分析し、相同性モデリングを実施してｓｄａｂ－０９、ｓｄａｂ－２５、ｓｄａｂ－２９、ｓｄａｂ－３２、ｓｄａｂ－４２及びｓｄａｂ－５０の親ラマ抗体のモデル構造を得た。以下の方法を介して抗体ヒト化を実施した。１）フレームワーク残基の溶媒アクセス可能表面積を計算する。２）結果に基づいて、埋め込まれたフレームワーク残基を同定する（すなわち溶媒アクセス可能表面積＜１５％）。３）ｓｄＡｂカウンターパートに対して高い配列同一性を共有するｓｄＡｂでヒトアクセプターを選択する。４）復帰変異を伴うことなく移植抗体の配列が得られるようにラマｓｄＡｂのＣＤＲをヒトアクセプターフレームワークに直接移植する。５）開発性アセスメントを介して、脱アミド化、異性化、酸化、グリコシル化などをはじめとする移植配列の翻訳後修飾及び化学分解を分析する。６）移植抗体の結合活性及び生産性に影響を及ぼし得るＮ－グリコシル化部位、異常プロリン残基、脱アミド化部位、異性化部位、酸化部位、不対システイン残基などのようなＰＴＭホットスポットを同定する。
【0089】
ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質構築では、抗クローディン１８．２ヒト化ｓｄＡｂをヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＮ末端に融合した。これらのヒト化抗体融合タンパク質をＣＨＯ－３Ｅ７細胞中で発現させた。２４時間後、トリプトンＮ－１サプリメントで発現／分泌をブーストした。３７℃及び５％ＣＯ２で６日間の振盪培養後、上清を採取し、以上に記載のようにプロテインＡビーズでヒト化抗体を精製した。分析のためにヒト化抗体をＰＢＳ中に保存した。
【0090】
抗クローディン１８．２抗体で誘導されるＡＤＣＣアッセイ
すべてのヒト化抗体のＡＤＣＣ作用を比較した。アッセイ手順では、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１又はＫＡＴＯ ＩＩＩを培養して採取し、９６ウェルプレート中に１×１０４細胞で播種した。ヒト化抗体サンプル又はＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）の同一アミノ酸配列でインハウスにおいて合成された陽性コントロールをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。エフェクター細胞としてＮＫ９２細胞を使用してプレートに添加し、同一条件で６時間インキュベートした。アッセイプレートを取り出して、短時間遠心分離した。上清を採取して、製造業者の説明書（Ｒｏｃｈｅ）に従ってＬＤＨ活性アッセイのために新しいプレートに移した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３により吸光度データをキャプチャーして、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０により分析した。図９に示されるように、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１の標的細胞系をＡＤＣＣバイオアッセイに利用したとき、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－３．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ３２－１．２及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－１．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもかなり良好なＡＤＣＣ活性を呈した。また、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－２．２、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．３、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．３及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－２．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもわずかに高いＡＤＣＣ活性を示した。図１１に示されるように、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＫＡＴＯ ＩＩＩの標的細胞系をＡＤＣＣバイオアッセイに利用したとき、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－３．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ３２－１．２、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－１．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもかなり良好なＡＤＣＣ活性を呈した。
すべてのヒト化抗体のＡＤＣＣ作用を比較した。アッセイ手順では、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系ＣＨＯ－Ｋ１又はＫＡＴＯ ＩＩＩを培養して採取し、９６ウェルプレート中に１×１０４細胞で播種した。ヒト化抗体サンプル又はＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）の同一アミノ酸配列でインハウスにおいて合成された陽性コントロールをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。エフェクター細胞としてＮＫ９２細胞を使用してプレートに添加し、同一条件で６時間インキュベートした。アッセイプレートを取り出して、短時間遠心分離した。上清を採取して、製造業者の説明書（Ｒｏｃｈｅ）に従ってＬＤＨ活性アッセイのために新しいプレートに移した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３により吸光度データをキャプチャーして、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０により分析した。図９に示されるように、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１の標的細胞系をＡＤＣＣバイオアッセイに利用したとき、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－３．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ３２－１．２及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－１．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもかなり良好なＡＤＣＣ活性を呈した。また、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－２．２、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．３、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．３及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－２．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもわずかに高いＡＤＣＣ活性を示した。図１１に示されるように、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＫＡＴＯ ＩＩＩの標的細胞系をＡＤＣＣバイオアッセイに利用したとき、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－１．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－３．１、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ３２－１．２、ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－１．１のヒト化ｓｄＡｂリードは、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりもかなり良好なＡＤＣＣ活性を呈した。
【0091】
抗クローディン１８．２抗体で誘導される補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイ
抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のヒト化候補は、ＣＤＣアッセイを用いて機能的にアセスされた。簡潔に述べると、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系の５０００ＣＨＯ－Ｋ１細胞を培養して採取し、それを９６ウェルプレートに播種した。５０μｇ／ｍｌの濃度から始めて５×段階希釈で抗体サンプルをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。次いで、精製正常ヒト血清をプレートに添加し、プレートをさらに４時間インキュベートした。インキュベーターからプレートを取り出して上清を採取し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）で分析した。細胞生存能分析のためにＰｈｅｒａＳｔａｒ（ＡＭＧ）により発光データをキャプチャーした。参照抗体としてＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）を比較用に使用した。図１０にＣＤＣアッセイ結果を示した。ヒト化ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべては、ＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりもかなり高いＣＤＣ活性を示した。
抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のヒト化候補は、ＣＤＣアッセイを用いて機能的にアセスされた。簡潔に述べると、ヒトクローディン１８．２を過剰発現する標的細胞系の５０００ＣＨＯ－Ｋ１細胞を培養して採取し、それを９６ウェルプレートに播種した。５０μｇ／ｍｌの濃度から始めて５×段階希釈で抗体サンプルをプレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ２でプレートを３０分インキュベートした。次いで、精製正常ヒト血清をプレートに添加し、プレートをさらに４時間インキュベートした。インキュベーターからプレートを取り出して上清を採取し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７３）で分析した。細胞生存能分析のためにＰｈｅｒａＳｔａｒ（ＡＭＧ）により発光データをキャプチャーした。参照抗体としてＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ）を比較用に使用した。図１０にＣＤＣアッセイ結果を示した。ヒト化ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質のすべては、ＩＭＡＢ３６２の参照ｍＡｂよりもかなり高いＣＤＣ活性を示した。
【0092】
ＦＡＣＳによるヒトクローディン１８．２発現性細胞結合アッセイ
抗体産物の細胞表面クローディン１８．２抗原結合を検証するために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌのヒト化抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共に、ヒトクローディン１８．２を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
抗体産物の細胞表面クローディン１８．２抗原結合を検証するために、３００ｎＭの濃度から始めて３×段階希釈で１００μｌのヒト化抗クローディン１８．２ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質と共に、ヒトクローディン１８．２を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞をインキュベートし、続いてフルオロフォア（ｉＦｌｕｏｒ６４７）標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体インキュベーションを行った。次いで、サンプルをフローサイトメトリーで解析した。幾何平均値で抗体－抗原結合曲線を作成した。ＥＣ５０を解析するために、４パラメーター、最良当てはめ値プログラムを用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２ソフトウェアにより生のデータをプロットした。
【0093】
図１２に示されるように、ヒト化ｓｄＡｂリードのすべては、ＩＭＡＢ３６２の参照抗体よりも高い結合親和性を呈した。
【0094】
配列リスト
実施例中のクローンの全アミノ酸配列が以下に示される。下線付きアミノ酸配列は、それぞれ所与のクローンのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の指標となる。
＞ｓｄａｂ－１（配列番号１）
＞ｓｄａｂ－２（配列番号２）
＞ｓｄａｂ－３（配列番号３）
＞ｓｄａｂ－４（配列番号４）
＞ｓｄａｂ－５（配列番号５）
＞ｓｄａｂ－６（配列番号６）
＞ｓｄａｂ－７（配列番号７）
＞ｓｄａｂ－８（配列番号８）
＞ｓｄａｂ－９（配列番号９）
＞ｓｄａｂ－１０（配列番号１０）
＞ｓｄａｂ－１１（配列番号１１）
＞ｓｄａｂ－１２（配列番号１２）
＞ｓｄａｂ－１３（配列番号１３）
＞ｓｄａｂ－１４（配列番号１４）
＞ｓｄａｂ－１５（配列番号１５）
＞ｓｄａｂ－１６（配列番号１６）
＞ｓｄａｂ－１７（配列番号１７）
＞ｓｄａｂ－１８（配列番号１８）
＞ｓｄａｂ－１９（配列番号１９）
＞ｓｄａｂ－２０（配列番号２０）
＞ｓｄａｂ－２１（配列番号２１）
＞ｓｄａｂ－２２（配列番号２２）
＞ｓｄａｂ－２３（配列番号２３）
＞ｓｄａｂ－２４（配列番号２４）
＞ｓｄａｂ－２５（配列番号２５）
＞ｓｄａｂ－２６（配列番号２６）
＞ｓｄａｂ－２７（配列番号２７）
＞ｓｄａｂ－２８（配列番号２８）
＞ｓｄａｂ－２９（配列番号２９）
＞ｓｄａｂ－３０（配列番号３０）
＞ｓｄａｂ－３１（配列番号３１）
＞ｓｄａｂ－３２（配列番号３２）
＞ｓｄａｂ－３３（配列番号３３）
＞ｓｄａｂ－３４（配列番号３４）
＞ｓｄａｂ－３５（配列番号３５）
＞ｓｄａｂ－３６（配列番号３６）
＞ｓｄａｂ－３７（配列番号３７）
＞ｓｄａｂ－３８（配列番号３８）
＞ｓｄａｂ－３９（配列番号３９）
＞ｓｄａｂ－４０（配列番号４０）
＞ｓｄａｂ－４１（配列番号４１）
＞ｓｄａｂ－４２（配列番号４２）
＞ｓｄａｂ－４３（配列番号４３）
＞ｓｄａｂ－４４（配列番号４４）
＞ｓｄａｂ－４５（配列番号４５）
＞ｓｄａｂ－４６（配列番号４６）
＞ｓｄａｂ－４７（配列番号４７）
＞ｓｄａｂ－４８（配列番号４８）
＞ｓｄａｂ－４９（配列番号４９）
＞ｓｄａｂ－５０（配列番号５０）
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域：（配列番号５１）
下記タンパク質配列は、ヒト化ｓｄＡｂ配列である。
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３（配列番号２０２）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－１．１（配列番号２０３）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ４２－２．２（配列番号２０４）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－１．１及びＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．１（配列番号２０５） それらは、同一タンパク質配列を共有する。
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ５０－２．３（配列番号２０６）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－１．１（配列番号２０７）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．１（配列番号２０８）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－２．３（配列番号２０９）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２９－３．１（配列番号２１０）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ３２－１．２（配列番号２１１）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－１．１（配列番号２１２）
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ２５－２．１（配列番号２１３）
実施例中のクローンの全アミノ酸配列が以下に示される。下線付きアミノ酸配列は、それぞれ所与のクローンのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の指標となる。
＞ｓｄａｂ－１（配列番号１）
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【化16】
【化17】
【化18】
【化19】
【化20】
【化21】
【化22】
【化23】
【化24】
【化25】
【化26】
【化27】
【化28】
【化29】
【化30】
【化31】
【化32】
【化33】
【化34】
【化35】
【化36】
【化37】
【化38】
【化39】
【化40】
【化41】
【化42】
【化43】
【化44】
【化45】
【化46】
【化47】
【化48】
【化49】
【化50】
【化51】
＞ＣＬＤＮ１８．２－ｖｈｈ０９－１．３（配列番号２０２）
【化52】
【化53】
【化54】
【化55】
【化56】
【化57】
【化58】
【化59】
【化60】
【化61】
【化62】
【化63】
【0095】
下記の表は、それぞれのクローンのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を示す。
【0096】
【表2】
【0097】
【表3】
【0098】
【表4】
【0099】
１つ以上の実施形態に関連して本発明を以上で説明したが、本発明は、それらの実施形態に限定されず、記載内容は、添付の請求項の趣旨及び範囲に含まれ得るすべての代替形態、修正形態及び均等物を包含することが意図されることが理解されるべきである。
【0100】
本明細書で引用した参照文献は、すべてその全体が参照により組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【配列表】
【国際調査報告】