特表 2023-544169 組換えＡＣＥ２－ＦＣ融合分子、その製造方法及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-20

(54)【発明の名称】組換えＡＣＥ２－ＦＣ融合分子、その製造方法及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/48 20060101AFI20231013BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20231013BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20231013BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231013BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20231013BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20231013BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231013BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20231013BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20231013BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20231013BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20231013BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20231013BHJP

   C12N 9/48 20060101ALN20231013BHJP

【ＦＩ】

A61K38/48

A61P31/12 ZNA

A61P31/14

A61P11/00

A61P9/12

A61K47/68

A61K39/395 Y

A61K9/08

A61K47/02

A61K47/14

C07K19/00

C07K16/00

C12N9/48

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023520067

(86)(22)【出願日】2021-10-01

(85)【翻訳文提出日】2023-05-29

(86)【国際出願番号】 US2021053052

(87)【国際公開番号】W WO2022072757

(87)【国際公開日】2022-04-07

(31)【優先権主張番号】63/086,593

(32)【優先日】2020-10-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517218697

【氏名又は名称】システィミューン， インク．

【氏名又は名称原語表記】ＳＹＳＴＩＭＭＵＮＥ， ＩＮＣ．

(71)【出願人】

【識別番号】522263714

【氏名又は名称】バイリ－バイオ（チェンドゥ）ファーマスーティカル シーオー．，エルティーディー．

【住所又は居所原語表記】１３９ Ｂａｉｌｉ Ｒｏａｄ， Ｗｅｎｊｉａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｅｎｇｄｕ， Ｓｉｃｈｕａｎ ６１１１３０， ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】ツァイ，ツング－アイ

(72)【発明者】

【氏名】ガレット，デニス アール．

(72)【発明者】

【氏名】マック，ガー シー アマンダ

(72)【発明者】

【氏名】ウェイト，アンドリュー

(72)【発明者】

【氏名】ランディ， スティーブン ケー．

(72)【発明者】

【氏名】ギルクリスト， マーク

(72)【発明者】

【氏名】ハリ， ジャハン

(72)【発明者】

【氏名】シャオ， サ

(72)【発明者】

【氏名】ディン， ミュラン

(72)【発明者】

【氏名】チョン， ヨン

(72)【発明者】

【氏名】ジョー， シー

(72)【発明者】

【氏名】ツー， ハイ

(72)【発明者】

【氏名】ツー， イ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA22

4C076BB15

4C076CC35

4C076CC41

4C076DD09

4C076DD23

4C076DD60

4C076DD67

4C076EE23

4C076EE59

4C084AA02

4C084BA44

4C084DC22

4C084MA23

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA421

4C084ZA591

4C084ZB331

4C084ZC192

4C085AA33

4C085BB42

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA89

4H045EA20

(57)【要約】

対象におけるウイルス感染を予防、リスク低減若しくは治療する方法、又はウイルスによって引き起こされる症状を予防若しくは治療する方法であって、前記方法は、前記対象に有効量の融合タンパク質を投与することを含み、前記融合タンパク質は、Ｆｃドメインに共有結合で融合したバリアントアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）ドメインを含む、方法。前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号１を有する全長野生型ＡＣＥ２と比較してＮ末端欠失及び／又はＣ末端欠失を含み、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＡＣＥ２活性を有する。前記ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はＭＥＲＳ－ＣｏＶであってもよい。前記症状は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、急性呼吸促拍症候群（ＡＲＤＳ）、肺動脈高血圧（ＰＡＨ）又はコロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を含む。
【選択図】図１７ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるウイルス感染を予防、リスク低減若しくは治療する方法、又はウイルスによって引き起こされる症状を予防若しくは治療する方法であって、
前記方法は、前記対象に有効量の融合タンパク質を投与することを含み、
前記融合タンパク質は、Ｆｃドメインに共有結合で融合したバリアントアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）ドメインを含み、
前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号１を有する全長野生型ＡＣＥ２と比較してＮ末端欠失及び／又はＣ末端欠失を含み、
前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＡＣＥ２活性を有し、
前記ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はＭＥＲＳ－ＣｏＶを含み、
前記症状は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、急性呼吸促拍症候群（ＡＲＤＳ）、肺動脈高血圧（ＰＡＨ）又はコロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を含む、方法。

【請求項2】

前記融合タンパク質は、配列番号１５、１６、１７又は１８と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

治療ごとに投与される前記融合タンパク質の用量は、約３ｍｇ／Ｋｇから約７０ｍｇ／Ｋｇ体重である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

１日あたりに投与される前記融合タンパク質の用量は、約１４０ｍｇ／Ｋｇ体重以下である、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記融合タンパク質は、約７０ｍｇ／Ｋｇ体重以下の用量で１日２回投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記融合タンパク質は、点滴によって毎日投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記融合タンパク質は、筋肉注射によって毎日投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記融合タンパク質は、液体製剤として投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記融合タンパク質は、塩と界面活性剤を含む溶液中の懸濁液として投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記液体製剤は、約５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記融合タンパク質を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

前記融合タンパク質の投与は、前記対象が前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染することを防止する、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記融合タンパク質の投与は、前記対象が前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染するリスクを減少させる、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象が入院することを防止する、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象が入院するリスクを減少させる、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の入院期間を短縮させる、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の酸素化と換気を防止する、請求項１に記載の方法。

【請求項17】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の酸素化と換気の必要を減少させる、請求項１に記載の方法。

【請求項18】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の死亡を防止する、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の死亡リスクを減少させる、請求項１に記載の方法。

【請求項20】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、実質的にδ株を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、スパイクタンパク質変異体を含み、前記変異体は、前記ＡＣＥ２ドメインに対するウイルスの結合親和性を向上させる構成される、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－Ｃｏ２－２ウイルス感染症を患っている対象のＣＯＶＩＤ症状の重症度を軽減する、請求項１に記載の方法。

【請求項23】

前記対象は、
６５歳以上の年齢、
中等度又は重度の免疫システムの低下、
メタボリックシンドローム、
ＣＯＶＩＤワクチンに対するアレルギー、
及びＣＯＶＩＤワクチン接種後に免疫反応が低い又はないこと、
からなる群より選択される少なくとも１つのリスク因子を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項24】

前記対象は、がん、慢性腎臓病、慢性肺疾患、糖尿病、又は心臓病を患っている、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記対象は、ヒトである、請求項１に記載の方法。

【請求項26】

融合タンパク質を含む液体組成物であって、
前記融合タンパク質は、Ｆｃドメインに共有結合で融合したバリアントアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）ドメインを含み、
前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号１を有する全長野生型ＡＣＥ２と比較してＮ末端欠失及び／又はＣ末端欠失を含み、
前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＡＣＥ２活性を有する、液体組成物。

【請求項27】

用量あたり前記融合タンパク質の含有量は、約１００ｍｇから約１０，０００ｍｇである、請求項２６に記載の液体組成物。

【請求項28】

前記融合タンパク質の濃度は、約０．５重量％から約１重量％である、請求項２６に記載の液体組成物。

【請求項29】

前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の液体組成物。

【請求項30】

前記Ｆｃドメインは、配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の液体組成物。

【請求項31】

前記融合タンパク質は、配列番号７、９、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９又は２１と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の液体組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）に基づいて２０２０年１０月１日に出願された米国仮出願第６３／０８６，５９３の優先権を主張し、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）が関与する疾患、症状又は病状（例えば、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９））及び関連病状の予防又は治療に関する。

【背景技術】

【0003】

本明細書で別段の指示がない限り、このセクションに記載されている資料は、本出願の特許請求の範囲に対する先行技術ではなく、このセクションに含めることによって先行技術であるとは認められない。

【0004】

ＣＯＶＩＤ－１９は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる感染性疾患であるである。ＣＯＶＩＤ－１９の合併症は、長期肺損傷、肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、末梢神経及び嗅神経損傷、多臓器不全、敗血症性ショック、及び死亡を含み得る。２０２０年１月にＴｈｅ Ｌａｎｃｅｔに掲載されたＣＯＶＩＤ－１９が確認された最初の４１例の研究では、症状の発症の最も早い日付は２０１９年１２月１日であると報告された。２０２０年３月１１日までに、世界保健機関（ＷＨＯ）はＣＯＶＩＤ－１９のアウトブレイクをパンデミックと宣言した。２０２０年９月２６日の時点で、１８８の国と地域で３，２６０万人以上の症例が報告されており、９９万人以上が死亡しており、そのうち７５０ 万人以上の症例と２０５，０００人の死亡者が米国から報告されている。

【0005】

２０２０年１２月２日、英国医薬品・ヘルスケア製品規制庁（ＭＨＲＡ）はファイザー・バイオのＮＴｅｃｈ ｍＲＮＡワクチンの一時的な規制当局の承認を与え、ワクチンを承認した最初の国、及び西側諸国で新型コロナウイルス感染症ワクチンの使用を承認した最初の国となった。それ以来、より多いタイプのワクチン（２種類のＲＮＡワクチン（それぞれＰｆｉｚｅｒ－ＢｉｏＮＴｅｃｈ、Ｍｏｄｅｒｎａ製）；３種類の従来の不活化ワクチン（それぞれＳｉｎｏｐｈａｒｍ、Ｂｈａｒａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｎｏｖａｃ製）；３種類のウイルスベクターワクチン（それぞれＳｐｕｔｎｉｋ Ｖ、Ｏｘｆｏｒｄ－ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｊａｎｓｓｅｎ製）；１種類のペプチドワクチン（ＥｐｉＶａｃＣｏｒｏｎａ））は、少なくとも１つの国の規制当局によって公的使用が承認されている。

【0006】

２０２１年８月１６日の時点で、ＣＤＣのワクチン有効性研究により、利用可能なＲＮＡ ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンが臨床試験環境と同様に現実世界の条件でも保護する証拠が提供される。このワクチンは、完全にワクチン接種を受けている人の新型コロナウイルス感染症、特に重篤な病気のリスクを軽減する。ワシントン州の研究では、ワクチン接種を完全に受けている人と比較して、ワクチン接種を受けていない人は新型コロナウイルス検査で陽性反応を示す可能性が６倍高く、入院する可能性が３７倍高く、死亡する可能性が６７倍高いことを示している。ＣＤＣのデータによると、ワクチン接種を受けていない人は、感染する可能性が５倍、入院する可能性が１０倍、死亡する可能性が１１倍高い。

【0007】

アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）は、主に肺胞細胞、小腸のエンテロサイト、動脈及び静脈の内皮細胞、動脈の平滑筋細胞、並びに肺、動脈、心臓、腎臓、腸及び他の組織の他の細胞系の細胞膜に存在する亜鉛含有金属酵素である。ＡＣＥ２は、心血管系、腎臓系、呼吸器系のアンギオテンシン変換酵素活性に対抗することにより、レニン－アンギオテンシン系を調節し、血圧を制御する重要な役割を示している。ＡＣＥ２は、高血圧、心機能、心機能及び糖尿病の生理学において保護的な役割を果たしている。急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）において、ＡＣＥ、ＡｎｇＩＩ及びＡＴ１Ｒ は疾患の発症を促進するのに対し、ＡＣＥ２及びＡＴ２Ｒ は ＡＲＤＳから保護する。また、ＡＣＥ２は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスの受容体として同定され、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）の発症において重要な役割を果たしている。コロナウイルスのファミリーのうち、少なくとも３つのウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、それらのウイルスタンパク質の一つ（スパイクとしても知られている）によりヒト宿主細胞の表面にあるＡＣＥ２タンパク質に結合し、ヒト細胞にウイルス侵入する。

【0008】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒトに感染する既知の７つのコロナウイルス（２００３年にアジア、２０１２年に中東でＳＡＲＳのアウトブレイクを引き起こしたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＭＥＲＳ ＣｏＶウイルス）の一つである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対する免疫応答には、細胞性免疫と抗体産生の組み合わせが含まれる。１億人以上の感染者がＣＯＶＩＤ－１９から回復したが（２０２１年１月現在）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対する自然免疫が個体内で長期間持続するかどうかはまだ不明である。ウイルスの継続的な突然変異の蓄積により、ウイルスの抗原性スペクトルが変化し、ウイルスの変異株による再感染が発生する懸念がある。２０２１年１月の時点で、ヨーロッパと南アフリカで特定されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの変異株が急速に広がっていたようである。これらの変異株は、最終的にウイルス認識と宿主細胞への感染を強化する変異を保有する可能性があることで、感染性及び/又は病原性が増加する。

【0009】

もう１つの懸念は、抗体依存性増強（ＡＤＥ）の現象に関する。ＡＤＥは、不適切な抗体の結合が宿主細胞へのウイルス侵入を促進する場合に発生する。コロナウイルスにおいて、ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質を標的とする抗体はＡＤＥを促進する（Ｗａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２０２０）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイルスの場合、ほとんどのバリアントを中和する抗体は、変異ウイルスの免疫細胞への侵入を強化できることが発見され、その結果、予防のためにワクチンがデザインされた疾患は悪化する場合がある。したがって、ワクチンが不適切な抗体の産生を引き起こす可能性があるため、ＡＤＥはワクチンの開発を妨げる恐れがある。このような状況において、ワクチン以外の予防戦略は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスへの暴露の前後にもかかわらず、ＡＤＥを回避する実行可能な代替手段と見なされる。

【0010】

パンデミックの初期には、感染者数が少なかったため、「変異」バリアントウイルスがほとんど存在しないことから、エスケープ変異が出現する機会が少なかった。時間が経つにつれて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は多くのバリアントに進化し始め、感染力が高くなった。いくつかのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントは、感染力の増加、毒性の増加、又はそれらに対するワクチンの有効性の低下を引き起こす可能性があるため、特に重要である（Ｐｌａｎａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０２０；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，ｂｉｏＲｘｉｖ，２０２１）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの分類では、祖先型は「Ａ」型、派生型は「Ｂ」型となる。Ｂ型は、主要な世界的バリアントの祖先であるＢ．１を含むさらなる型に変異した。ＷＨＯは、α（Ｂ．１．１．７，２０２０年１１月）、β（Ｂ．１．３５１、２０２１年１月）、γ（Ｐ．１、２０２１年１月）、κ（Ｂ．１．６１７．１）、δ（Ｂ．１．６１７．２、２０２１年５月）、λ（Ｃ．３７）及び他のバリアントに命名した。αバリアントとδバリアントはどちらも、２０２０年の初めに確認された元のウイルスよりも感染力が顕著に高い。

【0011】

δバリアントはαバリアントよりも感染力が約４０％高く、２０２１年春には優勢株となった。２０２１年８月下旬までに、米国の感染者数の９９％がδバリアントであり、ワクチン接種を受けていない人が重症化及び入院のリスクが２倍になることが発見され、ＲＮＡワクチンによるワクチン保護さえも９１％から６６％に低下した。ＣＤＣの調査によると、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンは、感染に対して５５％、症候性感染に対して８０％、入院に対して少なくとも９０％の防御効果をもたらした。最近の研究では、ワクチンの有効性が５３．１％、４２～７６％、又は６４．６％低下することが実証されており、この低下はおそらく免疫力の低下と感染性の高いδ株に対する防御力の低下によるものと考えられる（Ｎａｎｄｕｒｉ，ｅｔ ａｌ．，ＭＭＷＲ．２０２１；Ｐｕｒａｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，ｍｅｄＲｘｉｖ，２０２１；Ｓｅｐｐａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ，２０２１）。ＣＤＣは、米国でワクチン接種を完全に受けている７，５００万人以上の人のうち、５，８１４人がブレイクスルー感染（即ち、ワクチン接種を受けた人が、ワクチンが予防する筈のものと同じ病原体に感染してしまう）を発生し、７４人が死亡したことを報告した。ブレイクスルー感染とそれに関連する死亡率は非常に低い可能性があり、これは、ワクチンの有効性を実証している。一方、イスラエルで実証されているように、δウイルスのような新型ウイルス株では、ブレイクスルー感染がより頻繁に発生する可能性が高い。イスラエルでは、２０２１年８月の症例と入院の半数以上が完全にワクチン接種を受けた人に発生した（Ｗａｄｍａｎ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０２１）。ブレイクスルー感染に罹患している個々の患者、特に虚弱な高齢者では、重症化、せん妄、入院、死亡のリスクが非常に高い（Ａｎｔｏｎｅｌｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，２０２１）。

【0012】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の病原性を軽減するための２つの主要な医療介入には、能動免疫と受動免疫（即ち、ワクチン接種、モノクローナル抗体療法、及び以前に感染した患者からの回復期血漿を用いた治療）が含まれる（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０２１；Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．２０２１）。これらの戦略はそれぞれ、ウイルス抗原、特にＡＣＥ２受容体を持つ宿主細胞へのウイルスの侵入を媒介するスパイクタンパク質の受容体結合ドメインの抗体結合と中和に依存する。スパイクタンパク質の構造に影響を与えるウイルスの変異は、スパイクに結合して中和する抗体の能力に影響を与える可能性があり、これによって、ほとんどの既存のワクチンや治療薬の有効性が低下する可能性がある。

【0013】

したがって、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、特にそのより毒性の高い変異株）が関与する疾患又は病状のための効果的な治療又は予防は、依然として非常に必要とされている。

【発明の概要】

【0014】

以下の概要は説明のみを目的としており、制限を意図したものではない。上述の例示的な態様、実施形態、及び特徴に加えて、さらなる態様、実施形態、及び特徴は、図面及び以下の詳細な説明を参照することによって明らかになるであろう。

【0015】

本出願は、とりわけ、ウイルス感染を予防、リスク軽減、もしくは治療するための方法、又は対象におけるウイルスによって引き起こされる症状を予防もしくは治療するための方法を提供する。

【0016】

一実施形態において、前記ウイルスは、コロナウイルスであってもよい。一実施形態において、前記ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ又はそれらの組み合わせであってもよい。

【0017】

一実施形態において、前記症状は、コロナウイルスによって引き起こされるあらゆる症状であってもよい。一実施形態において、前記症状は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、急性呼吸促拍症候群（ＡＲＤＳ）、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）、又はそれらの組み合わせであってもよい。一実施形態において、前記症状（疾患又は病状）には、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）が関与する。一実施形態において、前記症状は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳスパイクタンパク質、コロナウイルス、ＳＡＲＳウイルス、それらの断片、又は組み合わせの感染などのウイルス感染であってもよい。

【0018】

一実施形態において、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、実質的にδ株を含む。一実施形態において、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、スパイクタンパク質変異を含む。一実施形態において、前記変異は、ＡＣＥ２ドメインに対するウイルスの結合親和性を向上させるように構成される。

【0019】

一実施形態において、前記方法は、前記対象に有効量の融合タンパク質又は融合タンパク質複合体を投与するステップを含む。一実施形態において、前記融合タンパク質は、Ｆｃドメインに共有結合で融合したバリアントアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）ドメインを含む。前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号１を有する全長野生型ＡＣＥ２と比較してＮ末端欠失及び／又はＣ末端欠失を含んでもよい。前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＡＣＥ２活性を有する。

【0020】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、Ｆｃドメインに共有結合したバリアントアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）ドメインを含む。一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、全長野生型ＡＣＥ２に対してＮ末端欠失及び／又はＣ末端欠失を含む。一実施形態において、前記全長野生型ＡＣＥ２ドメインは、配列番号１と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％又は９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＡＣＥ２活性を有する。

【0021】

一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、全長野生型ＡＣＥ２のアミノ酸配列セグメントと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、前記セグメントは、全長野生型ＡＣＥ２の残基１－１７から選択されるアミノ酸残基から始まり得る。一実施形態において、前記セグメントは、全長野生型ＡＣＥ２の残基６１５－７４０から選択されるアミノ酸残基で終わり得る。例えば、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、全長野生型ＡＣＥ２の残基１から残基６１５、残基２から残基６１８、残基２から残基７４０、残基４から残基６１５、残基１７から残基６１５、残基１８から残基７４０、又はこれらの開始残基と終了残基の他の組み合わせのアミノ酸配列セグメントと少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。

【0022】

一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0023】

一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳスパイクタンパク質に対する結合親和性が全長野生型ＡＣＥ２よりも高い。例えば、バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳスパイクタンパク質に対する結合親和性が０．１ｎＭから１００ｎＭ（ＫＤ）であり得る。

【0024】

一実施形態において、前記バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳスパイクタンパク質に対するアビディティが全長野生型ＡＣＥ２よりも高い。例えば、バリアントＡＣＥ２ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳスパイクタンパク質に対するアビディティが１０ｎＭ（ＫＤ）未満であってもよい。

【0025】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、κバリアントに対するアビディティが１．０Ｅ－１２未満である。一実施形態において、前記融合タンパク質は、δＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に対する結合親和性がＷｕｈａｎ－Ｈｕ－１株よりも高い。一実施形態において、δＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に対する結合親和性は、Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１株の少なくとも３倍である。

【0026】

一実施形態において、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンのＦｃドメインに由来する。免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１（ｄ－ＩｇＡ１、Ｓ－ＩｇＡ１）、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭであり得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃヒンジ領域を有し得る。一実施形態において、Ｆｃヒンジ領域は、Ｃ２２０Ｓとなるようにエンジニアリングされてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインに比べてＫ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａから選択されるヌル変異を含み得る。一実施形態において、野生型Ｆｃドメインは、配列番号５と少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0027】

一実施形態、Ｆｃドメインは、エフェクター機能を欠いていてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を欠いていてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。

【0028】

一実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号６と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0029】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、配列番号７、９、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９又は２１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。

【0030】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、分子量が約５０ｋＤａから２５０ｋＤａであり得る。一実施形態において、前記融合タンパク質は、分子量が５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７０ｋＤａ、８０ｋＤａ、９０ｋＤａ、１００ｋＤａ、１２０ｋＤａ、１５０ｋＤａ、１８０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２５０ｋＤａ又はそれらの間の任意の数字であり得る。

【0031】

一実施形態において、前記融合タンパク質複合体は、本明細書に開示の融合タンパク質のホモ二量体である。一実施形態において、前記融合タンパク質複合体は、２つのバリアントＡＣＥ２ドメインを含む。一実施形態において、前記融合タンパク質複合体は、少なくとも２つの融合タンパク質を含む。一実施形態において、２つの前記融合タンパク質は、１つ又は２つのジスルフィド結合を介してペアとなる。一実施形態において、前記ジスルフィド結合は、前記Ｆｃドメインのヒンジにある。

【0032】

一実施形態において、前記融合タンパク質又は融合タンパク質複合体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳスパイクタンパク質又はそれらの断片に対して結合親和性を有する。一実施形態において、前記結合親和性は、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、８０ｎＭ、又はそれらの間の任意の数字以下の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。

【0033】

一実施形態において、前記融合タンパク質又は融合タンパク質複合体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳスパイクタンパク質又はそれらの断片に対してアビディティを有する。一実施形態において、前記アビディティは、１．０Ｅ－１２、０．００１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、又はそれらの間の任意の数字以下の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。

【0034】

一実施形態において、前記融合タンパク質又は融合タンパク質複合体は、約５０ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／μｇから約５０００ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／μｇの特異的な酵素活性を有する。一実施形態において、前記融合タンパク質は、約５６８ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／μｇの特異的な酵素活性を有する。

【0035】

前記融合タンパク質は、本明細書に開示される感染症又は疾患を治療及び予防するための有効量で投与される。一実施形態において、治療ごとに投与される前記融合タンパク質の用量は、約１ｍｇ／Ｋｇから約２００ｍｇ／Ｋｇ、約５ｍｇ／Ｋｇから約１００ｍｇ／Ｋｇ、約３ｍｇ／Ｋｇから約７０ｍｇ／Ｋｇ、又は約１０ｍｇ／Ｋｇから約１５０ｍｇ／Ｋｇ体重である。

【0036】

一実施形態において、前記融合タンパク質の１日あたりの投与量は、約１００、１２０、１４０、１５０、１８０、２００ｍｇ／Ｋｇ体重以下である。一実施形態において、前記融合タンパク質は、約２５、５０、７０、９０、１００、１５０、２００ｍｇ／Ｋｇ体重以下の用量で１日２回投与される。

【0037】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、液体製剤として投与される。一実施形態において、前記融合タンパク質は、溶液中の懸濁液として投与される。一実施形態において、前記溶液は、塩、炭水化物、界面活性剤、又はそれらの組み合わせを含んでもよい。一実施形態において、前記塩は、塩化ナトリウム、塩酸ヒスチジン、又はそれらの組み合わせであってもよい。一実施形態において、前記炭水化物はスクロース、グルコース、又はそれらの組み合わせであってもよい。一実施形態において、前記界面活性剤はポリソルベート８０であってもよい。

【0038】

一実施形態において、前記液体製剤は、約２ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ又は約５ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記融合タンパク質を含んでもよい。

【0039】

本発明で開示される方法は、対象におけるウイルス感染、急性呼吸促拍症候群、肺動脈高血圧又は急性肺損傷の治療又は予防に使用できる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、前記対象がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染することを防止することができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、前記対象のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染のリスクを減少することができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染を有する前記対象が入院することを防止することができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の入院のリスクを減少させることができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の入院期間を短縮させることができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の酸素化と換気を防止することができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の酸素化と換気の必要を減少させることができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の死亡を防止することができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染した対象の死亡のリスクを減少させることができる。一実施形態において、前記融合タンパク質の投与は、ＳＡＲＳ－Ｃｏ２－２ウイルス感染を有する対象のＣＯＶＩＤ症状の重症度を軽減することができる。

【0040】

一実施形態において、前記方法は、前記融合タンパク質又は融合タンパク質複合体を静脈内、皮下、経鼻腔（例えば、点鼻薬）又は経肺腔投与するステップを含んでもよい。一実施形態において、前記融合タンパク質は、毎日の点滴によって投与されてもよい。一実施形態において、前記融合タンパク質は、毎日の筋肉内注射によって投与されてもよい。

【0041】

一実施形態において、前記融合タンパク質は、抗ウイルス剤、免疫調節試薬又はそれらの組み合わせと共投与されてもよい。一実施形態において、前記抗ウイルス剤は、ファビピラビル、リバビリン、ガリデシビル、レムデシビル、又はそれらの組み合わせであってもよい。

【0042】

一実施形態において、前記対象は、ヒトである。本発明で開示される方法は、６５歳以上の年齢、中等度又は重度の免疫システムの低下、メタボリックシンドローム、ＣＯＶＩＤワクチンに対するアレルギー、及びＣＯＶＩＤワクチン接種後に免疫反応が低い又はないことからなる群より選択される少なくとも１つのリスク因子を有する対象に使用できる。一実施形態において、前記対象は、がん、慢性腎臓病、慢性肺疾患、糖尿病、又は心臓病に罹患している。

【0043】

さらなる態様において、本発明は、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）が関与する疾患又は病状を治療するための医薬組成物を提供する。一実施形態において、前記医薬組成物は、本明細書で開示される融合タンパク質又は融合複合体と、薬学的に許容される担体とを含む。一実施形態において、前記医薬組成物は、抗ウイルス剤をさらに含む。一実施形態において、前記医薬組成物は、本明細書で開示されるタンパク質複合体と、薬学的に許容される担体とを含む。

【0044】

一実施形態において、本発明は、本明細書で開示される融合タンパク質を含む液体組成物を提供する。一実施形態において、前記液体組成物は、融合タンパク質の含有量が、用量ごとに約１００ｍｇから約２０，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１０，０００ｍｇ又は約５００ｍｇから約１０，０００ｍｇである。

【0045】

一実施形態において、前記液体組成物は、約０．１重量％から約１０重量％、約０．５重量％から約５重量％、約０．５重量％から約１重量％、又は約０．５重量％から約２重量％の濃度で前記融合タンパク質を含む。

【図面の簡単な説明】

【0046】

本開示の前述及び他の特徴は、添付の図面と併せて解釈される以下の説明及び添付の特許請求の範囲からより完全に明らかになるであろう。これらの図面は、本開示に従って構成されたいくつかの実施形態のみを示しており、したがって、その範囲を限定するものと見なされるべきではないことを理解して、本開示は、添付の図面を使用することにより、追加の具体性及び詳細とともに説明される。

【0047】

【図1】図１Ａは、ＡＣＥ２機能ドメインと改変されたＦｃ（ヌル）断片との組換え融合タンパク質（ＳＩ－６９Ｒ２及びＳＩ－６９Ｒ４）の図である。図１Ｂは、ＳＩ－Ｆ０１９融合タンパク質（Ｎ末端１７アミノ酸シグナルペプチドを欠く翻訳後修飾ＳＩ－６９Ｒ２）の配列を示す。図１Ｃは、ＳＩ－Ｆ０１９融合タンパク質複合体がホモ二量体であることを示すサイズ排除クロマトグラフィーである。図１Ｄは、ＳＩ－Ｆ０１９－スパイクタンパク質複合体の図である。

【0048】

【図2】ＳＩ－６９Ｒ４ではなく、ＳＩ－Ｆ０１９はＴＭＰＲＳＳ２依存性加水分解に耐性であること（２Ａ）、及びＳＩ－Ｆ０１９の酵素活性はインビトロ蛍光アッセイで定量化できること（２Ｂ）を示す。

【0049】

【図3】試験において、ＶｅｒｏＥ６細胞への生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のＳＩ－Ｆ０１９用量依存的遮断がウイルスの３つのＭＯＩ全てで１００％に達したことを示す。

【0050】

【図4】１０ｆＭ以上のＳＩ－Ｆ０１９の添加は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイルスを０．０１ＭＯＩで感染させた１時間後、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞の一部が細胞溶解を受けるのを防止したことを示す。

【0051】

【図5】シュードウイルスとプレインキュベーションした後、ＳＩ－Ｆ０１９はウイルス感染を用量依存的に阻害し、比較的高い濃度で完全な阻害を達成することを示す（ＩＣ５０＝３２．５６ｎＭ）。

【0052】

【図6】内在化／感染媒介アッセイの結果を示す。具体的には、試験した濃度のＳＩ－Ｆ０１９で前処理した場合、シュードウイルス（ＰｓＶ）の存在を示すＧＦＰシグナルの取り込みがない一方、低ＧＦＰシグナルはＳＩ－６９Ｃ１（抗Ｓ１抗体）及びＳＩ－６９Ｒ３（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＡＣＥ－２ Ｆｃ ＷＴ）、並びに培地、緩衝液（Ｂｕｆｆｅｒ）及びＡＣＥ２－ｈｉｓ（ＳＩ－６９Ｃ１）に関連した（４８時間後、ＴＨＰ１（ｐＨ７．２）（６Ａ）、ＴＨＰ１（ｐＨ６．０）（６Ｂ）及びＤａｕｄｉ（６Ｃ））。

【0053】

【図7】ＰｓＶ感染の兆候であるＧＦＰシグナルによって測定されるように、ＳＩ－Ｆ０１９は、天然抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体又はＡＣＥ２－Ｆｃ（野生型）融合タンパク質のいずれかと競合してＦｃ媒介抗体依存性増強（ＡＤＥ）をブロックすることができることを示す。

【0054】

【図8】抗スパイク抗体及び抗ヒトＦｃ抗体を用いて検出された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。

【0055】

【図9】幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって測定された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞へのＳＩ－Ｆ０１９の用量依存的結合を示す。

【0056】

【図10】抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイのＦＡＣＳ分析を示す。具体的には、カルセイン－ＡＭ及びヨウ化プロピジウム染色によって測定されるように、ヒト抗Ｓ１抗体（ＳＩ－６９Ｃ３）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞を標的とするようにヒトＮＫ細胞をダイレクトする。

【0057】

【図11】ヒト抗Ｓ１抗体（ＳＩ－６９Ｃ３）と比較した場合のＡＤＣＣアッセイにおけるＨＥＫ２９３－Ｔ細胞に対するＳＩ－Ｆ０１９及び対照分子の用量結合応答を示し（１１Ａ）、ＳＩ－Ｆ０１９は１００ｆＭから１００ｎＭの治療用量でＡＤＣＣを媒介しなかったのに対し、野生型Ｆｃを含むそのバリアント（ＳＩ－６９Ｒ３）は活性レベルが低いにもかかわらず、用量依存的に媒介したことを示す（１１Ｂ）。

【0058】

【図12】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞の生存率によって測定されるように、Ｆｃヌル（null）変異により、ＳＩ－Ｆ０１９はインビトロで血清媒介補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を減少させることを示す。

【0059】

【図13】様々な処理後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞の生存率を測定した結果、ＳＩ－Ｆ０１９はインビトロで血清補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しないこと（１３Ａ）、ＳＩ－Ｆ０１９のＦｃヌル変異はインビトロで処理した９６時間後の細胞増殖に影響を与えないこと（１３Ｂ）を示す。

【0060】

【図14】ＳＩ－Ｆ０１９は、可溶性又はプレート結合フォーマットのいずれにおいても、ＰＢＭＣ培養中でサイトカイン（（１４Ａ）ＩＦＮ、（１４Ｂ）ＴＮＦ、（１４Ｃ）ＧＭ－ＣＳＦ、（１４Ｄ）ＩＬ－２、（１４Ｅ）ＩＬ－１０、（１４Ｆ）ＩＬ－６、（１４Ｇ）ＩＬ－１、（１４Ｈ）ＩＬ－１２ｐ７０及び（１４Ｉ）ＭＣＰ－１）の放出を誘導しないことを示す。

【0061】

【図15】バイオレイヤー干渉法によるＣＯＶＩＤ－１９ ＲＢＤバリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９（１５ａ）及び中和抗体（バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）（１５ｂ）、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）（１５ｃ）、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）（１５ｄ）、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）（１５ｅ）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）（１５ｆ）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）（１５ｇ）を含む）の結合動力学（親和性）を示す。

【0062】

【図16】バイオレイヤー干渉法によるＲＢＤバリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９（１６ａ）及び中和抗体（バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）（１６ｂ）、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）（１６ｃ）、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）（１６ｄ）、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）（１６ｅ）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）（１６ｆ）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）（１６ｇ）を含む）の結合動力学（アビディティ）を示す。

【0063】

【図17】ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてＳタンパク質パッケージシュードウイルス（ＮＩＣＰＢＰ）のバリアントを用いてウイルス阻害からＡＣＥ２発現２９３Ｔ細胞を保護するＳＩ－Ｆ０１９の効力（１７ａ）、ＩＣ５０と結合親和性の線形相関（１７ｂ）、又はＳＩ－Ｆ０１９による競合阻害を示すアビディティ（１７ｃ）を実証する。

【発明を実施するための形態】

【0064】

以下の詳細な説明では、本明細書の一部を形成する添付の図面を参照する。図面において、類似の記号は、文脈上別段の指示がない限り、典型的には類似の構成要素を示す。詳細な説明、図面、及び特許請求の範囲に記載された例示的な実施形態は、限定的なものではない。本明細書に提示される主題の精神又は範囲から逸脱することなく、他の実施形態を利用することができ、他の変更を行うことができる。本明細書に一般的に記載され、図面に示される本開示の態様は、多種多様な異なる構成で配置、置換、結合、分離、及び設計することができ、その全てが本明細書で明示的に企図されることが容易に理解される。

【0065】

本発明は、特に、組換えヒトＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質などの融合タンパク質の生成と特性評価に関する。いくつかの実施形態において、これらの融合タンパク質は、ウイルス粒子又はウイルスからヒト宿主細胞の膜質ＡＣＥ２を保護することができる。一実施形態において、前記ウイルス粒子又はウイルスは、感染後にウイルススパイクタンパク質を利用して宿主細胞に侵入することができる。一実施形態において、前記ウイルス粒子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス、ＣＯＶＩＤ－１９ウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のバリアント、及び他のコロナウイルスを含むが、これらに限定されない。一実施形態において、前記ウイルスは、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすことができる。一実施形態において、ＳＡＲＳは、コロナウイルス感染症２０１９又はＣＯＶＩＤ－１９を含み得る。

【0066】

一実施形態において、前記組換えヒトＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＣＥ２亜鉛メタロペプチダーゼドメイン（ＡＣＥ２細胞外ドメイン， ＡＣＥ２－ＥＣＤとしても知られている）とＩｇＧ１ Ｆｃ断片との融合タンパク質であり得る。一実施形態において、前記融合タンパク質は、ＳＩ－Ｆ０１９である。ＳＩ－Ｆ０１９は、ＡＣＥ２－ＥＣＤと、Ｃ２２０Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＫ３２２Ａ（ＥＵナンバリングシステム）を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片との融合タンパク質である（表１及び図１）。アクティブＡＣＥ２－ＥＣＤは、ホスト受容体－ウイルス相互作用のための構造的立体配座を保持する。ＩｇＧ１ Ｆｃ断片における各変異は、特定の免疫応答を激減させることができる。変異Ｃ２２０Ｓは、重鎖と軽鎖をペアにするために不対システインを除去することができ、これによって、特に、タンパク質が凝集体を形成するのを回避し、タンパク質の安定性を改善し、製造効率とスケーラビリティを促進するという技術的利点を提供することができる。Ｌ２３４ＡとＬ２３５Ａの導入は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃのエフェクター機能を低下させることができる。Ｋ３２２Ａ変異は、Ｃ１ｑ結合によって引き起こされる補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低下させることができる。ＳＩ－Ｆ０１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを中和し、より少ないエフェクター応答をトリガーするように設計される。

【0067】

本明細書で使用される用語「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が不適切でない限り、「１つ又は複数」を意味し、複数を含むと定義される。

【0068】

用語「組換え融合タンパク質」とは、別々のタンパク質をコードするための２つ以上の遺伝子をコードする融合遺伝子の遺伝子工学によって製造されたタンパク質を指す。

【0069】

用語「ＡＣＥ２－Ｆｃ」とは、ヒトＡＣＥ２タンパク質断片と、ヒト免疫グロブリンの結晶性断片領域（Ｆｃ領域）の改変断片（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ）との組換え融合タンパク質を指す。前記ヒト免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１（ｄ－ＩｇＡ１、Ｓ－ＩｇＡ１）、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含むが、これらに限定されない。

【0070】

用語「スパイク」、「スパイクｓ」、「Ｓタンパク質」又はバリアントとは、ウイルスが（「Ｓ１サブユニット」又は「Ｓ１タンパク質」）に付着し、（「Ｓ２サブユニット」又は「Ｓ２タンパク質」）を宿主細胞の膜と融合することを可能にするタンパク質を指す。ＣＯＶＩＤ－１９の場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒト細胞上のＡＣＥ２受容体に対して十分な親和性を有し、それらを細胞侵入のメカニズムとして使用する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、元のＳＡＲＳウイルスよりもヒトＡＣＥ２に対して高い親和性を有する。

【0071】

用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ断片」及び「Ｆｃ領域」は、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体アイソタイプにおけるＦｃ領域（それぞれ「Ｆｃドメイン」及び「Ｆｃ断片」）の同一ドメイン又は断片を指し、抗体の２本の重鎖のヒンジ並びに第２及び第３定常ドメイン（ＣＨ２－ＣＨ３）に由来する。

【0072】

用語「親和性」とは、２つのポリペプチド（例えば、受容体／リガンド、ＡＣＥ２／スパイクタンパク質又はそのバリアント）間の引力の尺度を指す。２つのポリペプチド間の固有の引力は、特定の相互作用の結合親和性平衡定数（ＫＤ）として表すことができる。ＫＤ結合親和性定数は、例えば、バイオレイヤー干渉法によって測定することができる。

【0073】

用語「アビディティ」とは、個々の非共有結合相互作用（例えば、タンパク質受容体とそのリガンド）の複数の親和性の蓄積された強度を指し、一般的に機能的親和性と呼ばれる。そのため、アビディティは、単一の相互作用の強度を表す親和性と異なる。

【0074】

用語「抗原ドリフト」とは、抗原性がわずかに変化した新しいウイルス株が生じる感染性ウイルスのランダムな遺伝子変異を指し、前のウイルス株の感染を防止した抗体は、この新しいウイルス株に対して効果的ではない可能性がある。

【0075】

「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）という用語は、サイトカインやケモカイン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ１；ＣＣＬ２としても知られている）、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ（ＭＩＰ１α；ＣＣＬ３としても知られている）、ＣＸＣ－ケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、Ｃ反応性タンパク質、フェリチン及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に起因する中のＤ二量体）を含む炎症性メディエーターのレベルの上昇に関連するＣＯＶＩＤ－１９の重症例におけるＣＲＳを指す。

【0076】

「中和抗体」という用語は、病原体又は感染性粒子のあらゆる生物学的な影響を中和することによって病原体又は感染性粒子から細胞を防御する抗体を指す。中和により、粒子は感染性又は病原性がなくなる。中和抗体は、ウイルス、細胞内細菌、微生物毒素に対する養子免疫系の体液性応答の一部である。中和抗体は、感染性粒子の表面構造（抗原）に特異的に結合することにより、粒子とそれが感染して破壊する可能性のある宿主細胞との相互作用を防止する。中和抗体による免疫は、感染が起こる前に免疫系が感染粒子を排除するため、殺菌免疫（ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）としても知られている。

【0077】

「ワクチン」という用語は、特定の感染症に対する能動的獲得免疫を提供する生物学的製剤を指す。ワクチンは、予防的（自然若しくは「野生」病原体による将来の感染の影響を防止又は改善する）又は治療的（すでに発生した病気と戦う）であり得る。

【0078】

「ブレイクスルー感染」という用語は、ワクチン接種を受けた人が、ワクチンが予防するはずの病気と同じ病気にかかることを指す。ブレイクスルー感染の性質はウイルス自体に依存する。ワクチン接種を受けた人が感染した場合、自然に感染した場合よりも症状が軽くなり、感染期間も短くなる。ブレイクスルー感染の原因には、年齢、ウイルスや中和抗体の変異、ワクチンの不適切な投与や保管などが含まれる。

【0079】

「殺菌免疫」とは、病原体（例えば、すべてのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアント）に結合し、細胞侵入に必要な分子（すなわち、変異体によってコードされたスパイク）をブロックすることで感染力を阻害することができる中和抗体による免疫であり、感染を完全に防ぐものである。ブレイクスルー感染のため、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンも中和抗体も完全な殺菌免疫を提供しない。これらの定義によれば、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのバリアント及びＡＣＥ２を利用してヒト細胞に侵入する他のＳＡＲＳウイルスに対する治療的な殺菌免疫を達成するための治療ワクチンとして使用することができる。

【0080】

実施例

【0081】

実施例１：組換えＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質のクローニング、発現及び精製

【0082】

ヒト膜質ＡＣＥ－２は、ヒトの宿主細胞へのＳＡＲＳ－ＣｏＶウイルスの侵入を媒介するための重要な受容体である。ヒトＡＣＥ２タンパク質は、シグナルペプチド（残基１－１７）、亜鉛メタロペプチダーゼドメイン（残基１８－６１５）及びＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ切断部位（残基６９７－７１６）の少なくとも３つの機能ドメインを有する。配列番号１は、Ｇｅｎｂａｎｋ ｎｕｍｂｅｒ： ＮＰ＿００１３５８３４４．１からの全長ヒトＡＣＥ２タンパク質配列である。そのうち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶウイルスタンパク質であるスパイクは、亜鉛メタロペプチダーゼドメインと相互作用する（配列番号３は、残基１から６１５の短縮ＡＣＥ２のタンパク質配列である）。一方、ヒト抗体のＦｃ領域（配列番号５）は、多くの免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）及び補体系のいくつかのタンパク質と相互作用することができる。ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の各Ｆｃ断片は、Ｃ２２０（ＥＵナンバリングシステム）にシステインを含み、Ｃ２２０にあるシステインは、本質的にカッパ又はラムダ軽鎖のいずれかとジスルフィド結合を形成することができる。遊離システインを含むことでタンパク質が不安定化及び／又は不活性化されるリスクを減らすために、Ｃ２２０をセリン（Ｃ２２０Ｓ）又は他のアミノ酸に置換することができる。ＦｃγＲ及びＣ１ｑへのＦｃの結合を減らすには、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａなどの他の点変異を野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ断片に導入することができる。４つの変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１ Ｆｃヌル（配列番号６）とまとめて呼ばれる。

【0083】

組換えヒトＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質（表１）を、可溶性融合タンパク質が産生されるようにエンジニアリングした。そのうち、ＳＩ－６９Ｒ２（配列番号７）は、ＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ切断部位がない短縮ＡＣＥ２断片と、ＩｇＧ１ Ｆｃヌル断片との組換え融合タンパク質である。ＩｇアイソタイプのＦｃ断片（例えば、ＳＩ－６９Ｒ２－Ｇ４（ＩｇＧ４ Ｆｃ、配列番号９）、ＳＩ－６９Ｒ２－Ａ１（ＩｇＡ１ Ｆｃ、配列番号１１）、ＳＩ－６９Ｒ２－Ａ２（ＩｇＡ２ Ｆｃ、配列番号１３）又は野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ断片（ＩｇＧ１ Ｆｃ、配列番号１９））を提供するために、他の組換え融合タンパク質を作成した。さらに、３つのドメインを全て有する短縮ＡＣＥ２と、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ断片との組換え融合タンパク質を作成した（ＳＩ－６９Ｒ４、１－７４０、配列番号２１）。全ての組換えＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質のうち、シグナルペプチド（ＡＣＥ２残基１－１７）は、ヒトＡＣＥタンパク質又はＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質の他のドメインの機能に影響を与えることなく、長さが異なる他のシグナルペプチドに置き換えることができる。

【0084】

表１に示される融合タンパク質をコードする組換え融合遺伝子をｐＣＧＳ３．０（例えば、ＳＩ－６９Ｒ２）又はｐＴＴ５発現ベクター（例えば、ＳＩ－６９Ｒ４及びＳＩ－６９Ｒ１０）にクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞で発現させた。全ての融合タンパク質を標準的なタンパク質発現プロトコルに従って精製し、０．２２ｕｍフィルターで滅菌し、４℃の凍結保存液中で保存した。発現及び精製の過程において、各組換え融合タンパク質に対して、Ｎ－グリコシル化及びＮ末端シグナルペプチド（１７個のアミノ酸）の切断を含む翻訳後修飾を行ってもよい。ＳＩ－６９Ｒ２の場合、精製された融合タンパク質は、新たにＳＩ－Ｆ０１９と命名された。

【0085】

図１Ａ及び図１Ｂに示すように、ＳＩ－Ｆ０１９は、ヒトＡＣＥ２の亜鉛メタロペプチダーゼドメイン（残基１９－６１１）を含む短縮ＡＣＥ２断片（残基１８－６１５）を保持するが、ＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ切断部位は保持しない。また、ＳＩ－Ｆ０１９は、Ｆｃγ受容体への結合を欠くＩｇＧ１ Ｆｃヌル断片を保持する。このように、可溶型のＳＩ－Ｆ０１９は、末梢血中の標的細胞に結合しないと予想される。

【0086】

ＳＩ－Ｆ０１９融合タンパク質は、Ｎ－グリコシル化などの翻訳後修飾や、Ｆｃ領域の２つのジスルフィド結合によるホモ二量体化を受ける可能性がある。図１Ｃに示すように、ＳＩ－Ｆ０１９二量体の実際の分子量を評価するには、分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）と、多角度光散乱（ＭＡＬＳ）、吸光度（ＵＶ）及び／又は屈折率（ＲＩ）濃度検出器技術との組み合わせを用いた。この方法は、分子サイズによるクロマトグラフィー分離と、分子量標準キャリブレーションの制限がない光散乱（ＬＳ）による絶対モル質量の決定を組み合わせたものである。ＳＩ－Ｆ０１９の平均総分子量は２０９．６ｋＤａであり（メインピーク）、そのうち、ＳＩ－Ｆ０１９二量体及びその調節物質（ｍｏｄｉｆｉｅｒ）（即ち、グリカン）の分子量は、それぞれ１８９．３ｋＤａ及び２０．３ｋＤａであった。そのアミノ酸の理論計算では、ＳＩ－Ｆ０１９単量体の分子量は９５．１ｋＤａである。精製されたＳＩ－Ｆ０１９融合タンパク質複合体はホモ二量体である。ＳＩ－Ｆ０１９タンパク質複合は、単量体又は二量体としてのＳＩ－Ｆ０１９と、スパイクタンパク質及びエフェクタータンパク質などの他のタンパク質との間のタンパク質間相互作用を指す。ＳＩ－Ｆ０１９－スパイクタンパク質複合体の構成（図１Ｄ）は、メカニズムの根底にある。このメカニズムによれば、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスが膜質ＡＣＥ２にドッキングしてヒトの宿主細胞に侵入するのを防ぐ候補阻害剤である。

【0087】

実施例２：スパイク、Ｆｃ受容体及びＣ１ｑへのＳＩ－Ｆ０１９の結合

【0088】

ＳＩ－Ｆ０１９は、ヒト宿主細胞上の膜質ＡＣＥ２タンパク質へのスパイクタンパク質の結合を防止することによりヒトへのＳＡＲＳ－ＣｏＶウイルス侵入をブロックするように設計された。スパイクはコロナウイルスの最も特徴的な特徴であり、コロナ又はハローのような表面の原因となるノブ状構造である。スパイクタンパク質は、通常糖タンパク質から構成され、各スパイクは、Ｓタンパク質の三量体で構成され、スパイクタンパク質は、Ｓ１及びＳ２サブユニットから構成される。ホモ三量体スパイクタンパク質は、受容体結合及びウイルスと宿主細胞の間の膜融合を媒介する。Ｓ１サブユニットはスパイクの頭部を形成し、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を有する。Ｓ２サブユニットは、ウイルスエンベロープにスパイクを固定するステムを形成し、プロテアーゼ活性化により融合を可能にする。機能的に活性な状態では、Ｓ１とＳ２のサブユニット複合体は、プロテアーゼ（例えば、宿主細胞のカテプシンファミリーと膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２））の作用下でウイルスが結合して宿主細胞と融合するときに個々のサブユニットに分割される。スパイクは、コロナウイルスによる感染プロセスのウイルス侵入において重要な役割を果たす。ＣＯＶＩＤ－１９の場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、宿主細胞表面の膜結合ＡＣＥ２受容体にドッキングし、スパイクとＡＣＥ２の機能ドメインとの間の相互作用は、ウイルスエンベロープと宿主細胞膜との間の融合を引き起こすことにより、ウイルスヌクレオキャプシドの宿主細胞細胞質への放出をもたらす。

【0089】

ＳＩ－Ｆ０１９について、ウイルススパイクタンパク質へのＡＣＥ－Ｆｃ融合タンパク質の結合親和性及びアビディティを評価した。バイオレイヤー干渉分析において、スパイクタンパク質のサンプルには、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク三量体、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ１タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ１タンパク質ＲＢＤドメイン、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ ＲＢＤドメインが含まれる（表２）。これらの試薬は、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入された。結合親和性アッセイでは、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃキャプチャーバイオセンサーチップ（ＡＨＣ）表面に固定化されたＳＩ－Ｆ０１９の、溶液中のスパイクタンパク質又はそのサブユニットへの結合を測定した。アビディティアッセイでは、溶液中のＳＩ－Ｆ０１９へのストレプトアビジンバイオセンサーチップ（ＳＡ）表面に固定化されたビオチン化スパイクタンパク質の結合を測定した。データ分析では、１：１フィッティングモデルを利用して、結合親和性とアビディティの両方を計算した。結果は、これらのスパイクタンパク質、断片、又はドメインに対するＳＩ－Ｆ０１９の結合親和性及びアビディティが、それぞれナノモル（ｎＭ）スケール内のＫＤにあることを示している（表２）。この特徴的で有益なデータは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの中の潜在的な抗原ドリフトを示すウイルススパイクタンパク質のバリアントを有するＳＩ－Ｆ０１９タンパク質複合体を測定するための有用な参考資料になる可能性がある。実際、このタイプのウイルス変異は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの特定の株、例えば、膜性ＡＣＥ２に対するウイルスの親和性や宿主細胞へのウイルスの侵入を変化させるスパイクタンパク質のＤ６１４Ｇ（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０）で確認されている。

【0090】

スパイクへの結合と並行して、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙによりヒトＦｃγＲ、Ｃ１ｑ、ＦｃＲｎへのＳＩ－Ｆ０１９の結合を評価した。表３に示すように、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａを含むＦｃγＲへの結合は検出されず、Ｃ１ｑへの結合も検出されなかった。しかし、ＳＩ－Ｆ０１９はＦｃＲｎに結合し、結合親和性はヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に匹敵する３７．６ｎＭ（ＫＤ）であった。

【0091】

実施例３：ＳＩ－Ｆ０１９はＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性に耐性がある。

【0092】

ヒトＡＣＥ２は、ＴＭＰＲＳＳ２による膜プロテアーゼ加水分解を受け、単量体細胞外ＡＣＥ２が細胞から排出され、血清中で容易に検出できる。組換えＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質において、短縮ＡＣＥ２ドメインはＦｃ断片に融合されたが、ウイルススパイクタンパク質に対する結合親和性を依然として保持している。

【0093】

ＳＩ－Ｆ０１９は、短縮ＡＣＥ２ドメインにＴＭＰＲＳＳ２切断部位がないようにエンジニアリングされた。図１に示すように、ＳＩ－Ｆ０１９は、残基１８－６１５を含む一方、ＳＩ－６９Ｒ４は、ＴＭＰＲＳＳ２切断部位を含む全ての３つのＡＣＥ２ドメイン（残基１－７４０、配列番号２１）をコードする。ＳＩ－Ｆ０１９がＴＭＰＲＳＳ２特異的タンパク質分解を受けないことを証明するために、ＳＩ－６９Ｒ４を対照として使用した。ＴＭＰＲＳＳ２特異的加水分解のアッセイを実行するために、ＴＭＰＲＳＳ２（１０６－４９２）触媒ドメインをクローニングし、発現させ、Ｇｅｎｂａｎｋ：ＮＰ＿００１３５８３４４．１に従って精製した。図２Ａに示すように、ＴＭＰＲＳＳ２の非存在下では、ＳＩ－Ｆ０１９及びＳＩ－６９Ｒ４の両方は、それぞれの分子量（還元、変性条件下の単量体として）に安定して移動した。ＴＭＰＲＳＳ２を追加した場合、ＳＩ－Ｆ０１９はＴＭＰＲＳＳ２に対する耐性を示した一方、ＳＩ－６９Ｒ４はタンパク質分解を受け、予測どおりＴＭＰＲＳＳ２に対する感受性を示した。したがって、ＳＩ－Ｆ０１９は安定しており、ＴＭＰＲＳＳ２媒介プロテアーゼ活性に耐性を有する。

【0094】

実施例４：ＳＩ－Ｆ０１９は、ＡＣＥ２の酵素活性を発揮する。

【0095】

ＳＩ－Ｆ０１９は、短縮ＡＣＥ２（残基１８－６１５）とＩｇＧ１ ＦＣヌル断片との融合タンパク質である。短縮ＡＣＥ２は、亜鉛メタロペプチダーゼをコードし、その酵素活性は確立されたアッセイにより再評価することができる。ＭＣＡ（７－メトキシクマリン－４－酢酸）蛍光タグ付きＡＣＥ２のペプチド基質［ＭＣＡ－ＹＶＡＤＡＰＫ（Ｄｎｐ）－ＯＨ蛍光ペプチド基質］を用いてＳＩ－Ｆ０１９のＡＣＥ２酵素活性を測定した。ＭＣＡ分子を遊離フルオロフォア定量化のための標準曲線較正として調製し、基質をＤＭＳＯ中で０．９７ｍｇ／ｍｌに希釈した。ＳＩ－Ｆ０１９を１００、２００及び３００ｎｇ／ｍｌに希釈し、インビトロで蛍光ペプチドを切断して遊離ＭＣＡを放出するために使用した。アッセイを室温で２０分間インキュベートし、２分間隔の時点で蛍光シグナルについてデータを収集した。

【0096】

ＭＣＡ標準曲線を使用して切断されたＭＣＡをモルで定量化した。図２Ｂに示される線形曲線（時間に対するＭＣＡ数量）の傾きに基づいて酵素活性を決定した。ＳＩ－Ｆ０１９は、３つの濃度で良好な直線性（Ｒ２＞０．９９）を示し、ペプチドの安定した切断が濃度依存的であることを示している。酵素活性を計算するために、傾きをＳＩ－Ｆ０１９の質量数（μｇ）で割った。最終の特異的な酵素活性は、５６８ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／μｇであった。ＳＩ－Ｆ０１９が膜質ＡＣＥ２の酵素活性を保持するという事実は、ＡＣＥ２のこの独立したドメインが宿主受容体－ウイルス相互作用のための構造的立体配座も保持することを示している。

【0097】

実施例５：ＳＩ－Ｆ０１９は、ＶｅｒｏＥ６細胞への生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を阻害する。

【0098】

ＳＩ－Ｆ０１９について、生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及びＶｅｒｏＥ６（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－１５８６）細胞の溶解をインビトロで阻害する能力を試験した。試験濃度が１．５ｎＭから１２００ｎＭの範囲のＳＩ－Ｆ０１９を３つの濃度の生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス（ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株、感染多重度ＭＯＩの１００倍の範囲を表す）と１時間プレインキュベートした後、９０％コンフルエントの単層ＶｅｒｏＥ６細胞に加えた。１時間後、ウイルスを含む培地を除去し、試験濃度が一致するＳＩ－Ｆ０１９を含む培地と交換し、試験を３回実施した。細胞生存率は７２時間後のニュートラルレッド色素の取り込みにより測定され、溶菌性ウイルス感染の阻害率は各ＭＯＩでウイルスを添加したウェル（ＳＩ－Ｆ０１９なし）と比較して決定された。各ウイルス濃度（１ＭＯＩ＝４０，０００ウイルス粒子）の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより計算され、各グラフに示される。ＳＩ－Ｆ０１９と生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とのプレインキュベーションにより、３つの全てのＭＯＩで試験ウイルスに対する用量依存的な感染遮断は１００％に達した。図３に示すように、ＳＩ－Ｆ０１９は１．０ＭＯＩで４０，０００ものウイルス粒子を中和し、ＩＣ５０は９７．６２ｎＭであった。０．１及び０．０１ＭＯＩで、ＳＩ－Ｆ０１９はそれぞれ７９．９５ｎＭ及び３６．５ｎＭのＩＣ５０で感染を遮断することができた。

【0099】

実施例６：ＳＩ－Ｆ０１９はウイルスの複製と再感染を減少させる。

【0100】

ＳＩ－Ｆ０１９について、複製と再感染（即ち、以前に低ＭＯＩのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイルスで感染したＶｅｒｏＥ６細胞へのさらなる感染）を阻害する能力を試験した。９０％コンフルエントの単層（約２０，０００細胞）のＶｅｒｏＥ６細胞を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｓｔｒａｉｎ ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１（Ｓｔｒａｉｎ Ｕｒｂａｎｉ ２００３０００５９２）に０．０１ＭＯＩ（ウイルス感染粒子４００個として計算）で１時間曝露した。遊離ウイルス粒子を洗い流した後、ＳＩ－Ｆ０１９を１０ｆＭから１００ｎＭの範囲で細胞に添加（三重反復；ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅｓ）し、細胞培養を７２時間維持した。ニュートラルレッド染料の取り込みによって細胞生存率を決定し、ウイルス細胞傷害の阻害％を計算した。１００％の細胞生存率を表すウイルス又は薬剤を含まない（ＮＶＮＤ）条件での最大吸光度により各プレートで吸光度の値を標準化し、最大細胞死を確立するウイルス／薬物なし（ＶＮＤ）の平均吸光度値を下式により計算した。

【0101】

％細胞生存率＝［（Ｗｅｌｌ ＯＤ_５４０－ＶＮＤ ＯＤ_５４０）／（ＮＶＮＤ ＯＤ_５４０－ＶＮＤ ＯＤ_５４０）］＊１００

【0102】

図４に示すように、ＳＩ－Ｆ０１９を１０ｆＭの濃度で添加することにより、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞は二次感染から保護された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイルスを０．０１ＭＯＩで１時間感染させた培養により、細胞溶解は少なくとも２０％減少した。しかし、ＳＩ－Ｆ０１９の濃度を１０倍ずつ１００ｎＭまで増加させた場合、このアッセイでは保護の有意な向上は観察されなかった。この発見から分かるように、低力価のウイルスを感染させた細胞にＳＩ－Ｆ０１９を添加することで、低濃度でもウイルスの拡散と細胞毒性の程度を低下させることができる。

【0103】

実施例７：ＳＩ－Ｆ０１９は、ＨＥＫ２９３Ｔ－ＡＣＥ２細胞のシュードウイルス感染を阻害する。

【0104】

ヒトＡＣＥ２タンパク質のレンチウイルス形質導入によりＨＥＫ２９３Ｔ（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－３２１６）－３Ｄ４クローン細胞株を作成した。発現したヒトＡＣＥ２の機能は、酵素基質変換アッセイ及びＦＡＣＳによる特異的抗体による結合によって確認された。ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質パッケージシュードウイルスは、国立医薬品生物製品管理研究所から入手した。試験はメーカーの指示に従って実施された。３００ＴＣＩＤ５０／ウェルのウイルス負荷（ｖｉｒｕｓ ｌｏａｄ）を得るために、Ｓシュードウイルスストック溶液を培養培地において２０ＭＲＤで希釈した。濃度範囲０．０７ｎＭから１５００ｎＭのＳＩ－Ｆ０１９を希釈したウイルス溶液と１時間プレインキュベートした。ＨＥＫ２９３Ｔ－３Ｄ４細胞を９６ウェルプレートに分散させた。１時間後、混合物を細胞プレートに添加した。２４時間のインキュベーション後にルシフェラーゼ活性を試験することによって感染細胞を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより、定義されたウイルス負荷の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。図５に示すように、シュードウイルスとプレインキュベーションした後、ＳＩ－Ｆ０１９はウイルス感染を用量依存的に阻害し、より高い濃度で完全な阻害を達成する（ＩＣ５０＝３２．５６ｎＭ）。

【0105】

実施例８：ＳＩ－Ｆ０１９はＡＤＥの発生率を低下させる。

【0106】

抗体依存性増強（ＡＤＥ）は、不適切な抗体へのウイルスの結合が宿主細胞への侵入を増強する現象である。ＣＯＶＩＤ－１９の場合、一次感染に起因して抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を有する患者又はワクチン接種を受けた個体へのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの二次感染は、単球及びＢ細胞によるウイルスの取り込みの増強を引き起こす可能性がある。ウイルスと接触する抗ウイルス抗体は、特定の免疫細胞又はいくつかの補体タンパク質に発現されるＦｃ受容体に結合する可能性がある。後者の結合は、抗体のＦｃ領域に依存する。典型的には、ウイルスは食作用と呼ばれるプロセスにより分解され、このプロセスにより、ウイルス粒子は原形質膜を介して宿主細胞に飲み込まれる。しかし、ウイルスが抗体によって中和されていない場合、結合親和性が低いか、非中和エピトープを標的とするため、抗体の結合によってウイルスエスケープを引き起こす可能性がある。その結果、抗体により感染が増強する。

【0107】

自然免疫又はワクチン接種のいずれかによって産生された抗体は、野生型Ｆｃ領域を有する。ＳＩ－Ｆ０１９はアンチスパイク抗体と競合してＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルスに結合することができるが、ＩｇＧ１ Ｆｃヌル断片はＦｃ受容体又はＣ１ｑのいずれにも結合することができない（表３を参照）。ＡＤＥの影響を軽減する上での比較優位性性を実証するために、ＳＩ－Ｆ０１９の内在化、複製及び再感染における役割を評価した。

【0108】

Ｆｃ媒介内在化を測定するためのアッセイにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をＧＦＰ発現シュードウイルス（ＰｓＶ）にパッケージングし、Ｆｃ受容体と補体受容体２（ＣＲ２）を発現する２つの細胞株（ＴＨＰ１（単球）及びＤａｕｄｉ（Ｂ細胞））を使用して、ＦｃＲｇとＣＲ２媒介ＡＤＥメカニズムを試験した。ＳＩ－６９Ｒ３は、ＳＩ－Ｆ０１９の対照として使用され、野生型Ｆｃを有するのに対し、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＩｇＧ１ Ｆｃヌル修飾を有する（表１を参照）。ＰｓＶに４８時間さらされた後、細胞からの緑色蛍光シグナルをＰｓＶ感染の指標として定量化した。ＰｓＶ及びＳＩ－６９Ｃ１、抗Ｓ１抗体又はＳＩ－６９Ｒ３で処理した条件では、低レベルの緑色蛍光は、４８時間後にＴＨＰ１（ｐＨ７．２）（６Ａ）、ＴＨＰ１（ｐＨ６．０）（６Ｂ）及びＤａｕｄｉ（６Ｃ）細胞において測定された。この結果は、Ｆｃ受容体を介してＰｓＶの一部の転送が発生する可能性があることを示している。対照的に、指定濃度のＳＩ－Ｆ０１９を含む条件では、ＴＨＰ１又はＤａｕｄｉ細胞によるＰｓＶの取り込みは発生せず、アッセイメディア、処方緩衝液(formulation buffer)、ＳＩ－６９Ｃ１などの陰性対照条件で測定された緑色蛍光シグナルに匹敵した（図６）。１ｐＭから１００ｎＭの範囲の用量で細胞を処理した結果から分かるように、Ｆｃ媒介ＡＤＥの効果は用量依存的であった。これは、ＦｃγＲ又はＣＲ２メカニズムのいずれかを介してＰｓＶの取り込みが発生する可能性があることを示している。

【0109】

実施例９：ＳＩ－Ｆ０１９は、ＰｓＶのウイルス負荷を減少させる。

【0110】

ＳＩ－Ｆ０１９は、機能的なＦｃ断片がないため、Ｓタンパク質でパッケージングされたＧＦＰ発現シュードウイルス（ＰｓＶ）の内在化を媒介しない可能性がある。ＳＩ－Ｆ０１９がシュードウイルスの取り込みを阻害できるかどうかを確認するために、ＳＩ－６９Ｒ３又は天然抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体との共処理としてＳＩ－Ｆ０１９を競合モードで使用した。同じセットの標的細胞に感染する前に、ＰｓＶを１０ｐＭの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｓ１）抗体又は１０ｐＭのＳＩ－６９Ｒ３とともに、１ｐＭから１００ｎＭの用量範囲でＳＩ－Ｆ０１９と１時間インキュベートした。ＰｓＶ由来のＧＦＰシグナルを感染のウイルス負荷として検出した。ＳＩ－Ｆ０１９は、標的細胞内のＰｓＶのウイルス負荷を１０ｆＭから阻害することができた（図７）。

【0111】

抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｓ１）抗体などの抗体と、ＳＩ－６９Ｒ３の短縮ＡＣＥ２－野生型Ｆｃ断片の融合タンパク質の両方は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシュードタイプレンチウイルスの内在化を媒介できたのに対し、ＳＩ－Ｆ０１９は、機能的なＦｃ断片を有さないため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシュードタイプレンチウイルスの内在化を媒介できなかった。ここで、ＳＩ－Ｆ０１９は、１０ｐＭの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｓ１）抗体又は１０ｐＭのＳＩ－６９Ｒ３のいずれかの存在下で、１０ｆＭの低濃度であっても、ＰｓＶのウイルス負荷の減少に役に立った。これらの結果から分かるように、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＴＨＰ１単球及びＤａｕｄｉ Ｂ細胞のそれぞれにおいてＦｃＲｇ及びＣＲ２依存メカニズムによって誘導されるＡＤＥの発生率を低下させることができる。

【0112】

実施例１０：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞

【0113】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするｃＤＮＡ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＹＰ＿００９７２４３９０．１）でパッケージングしたレンチウイルスを形質導入すること、及び同じ発現コンストラクト（ＬＰＰ－ＣｏＶ２１９－Ｌｖ１０５－０５０，ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ）によって駆動されるピューロマイシン耐性に基づくＩＲＥＳ発現と選択により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を安定的に発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－３２１６）を樹立した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質「Ａｎｔｉ－Ｓｐｉｋｅ」（ＳＫＵ９３８７０１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に特異的なヒトＩｇＧクローンＡＭ００１４１４の結合によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の発現を確認し、ヒトＩｇＧアイソタイプが一致したクローンＱＡ１６Ａ１２（ＳＫＵ４０３５０２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を対照「アイソタイプ」として使用した。ポリクローナル抗ヒトＦｃ ＡＦ６４７ Ｆａｂ（ＳＫＵ１０９－６０７－００８，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）との二次インキュベーションにより、結合したタンパク質を定量化し、ＦＡＣＳ評価を図８に示す。

【0114】

いずれかのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞及び親ＨＥＫ２９３細胞を、内在化阻害剤アジ化ナトリウムの存在下、所定材料で３７℃で３０分間染色した。遊離ＳＩ－Ｆ０１９を除去した後、抗ヒトＦｃ ＡＦ６４７ ｆａｂ（ＳＫＵ１０９－６０７－００８、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）及びフローサイトメトリー分析によりＳＩ－Ｆ１０９を検出及び定量した。図９に示すように、幾何平均シグナル強度により、ＳＩ－Ｆ０１９と標的細胞株の結合を定量化した。いずれかのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞は、ＣＯＶＩＤ－１９感染細胞のモデルとして使用することができる。

【0115】

実施例１１：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対するＳＩ－Ｆ０１９の影響

【0116】

抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）は、ＣＯＶＩＤ－１９の場合のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの感染などのウイルス感染に対する重要な免疫応答の１つである。最初のウイルス感染の後に、抗ウイルス抗体はウイルス粒子に直接結合して中和及び凝集する。食細胞上のＦｃ受容体へのウイルス－抗体複合体の結合は、食作用を引き起こし、ウイルスを破壊することができ、単球、好中球、好酸球、ＮＫ細胞などの免疫エフェクター細胞上のＦｃ受容体への結合は、細胞傷害性因子（抗ウイルス性インターフェロンなど）の放出を引き起こし、ウイルス複製に対して敵対的な微小環境を形成することができる。

【0117】

ＳＩ－Ｆ０１９の効果を抗スパイク抗体と区別するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞にＣａｌｃｅｉｎ－ＡＭをロードし、５：１のエフェクター対ターゲット比で精製ヒトＮＫ細胞と共培養した。試験された処理には、ＳＩ－Ｆ０１９及びＳ１特異的ヒトＩｇＧクローンＳＩ－６９Ｃ３が含まれた。ＳＩ－６９Ｃ３は、入院中のＣＯＶＩＤ－１９患者から単離されたヒト抗体クローンＣＣ１２．３である（１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａｂｃ７５２０）。１２時間共培養した後、細胞をヨウ化プロピジウムで染色し、生存率を評価した。図１０に示すように、カルセイン－ＡＭ（Ｃａｌｃｅｉｎ－ＡＭ）の発現及びヨウ化プロピジウム染色に基づく生存標的細胞頻度（集団３）の減少を細胞溶解の尺度として評価した。

【0118】

ＮＫ細胞によって媒介されるＡＤＣＣは、Ｓ１特異的ヒトＩｇＧクローンＳＩ－６９Ｃ３（クローンＣＣ１２．３）暴露されると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞にダイレクトされる可能性がある。ＳＩ－Ｆ０１９は、１００ｎＭから１００ｆＭの治療範囲内でＳＩ－６９Ｃ３と比較してＡＤＣＣを媒介しなかった。これらのアッセイ条件下で、ｗｔ Ｆｃ（ＳＩ－６９Ｒ３）を含むＳＩ－Ｆ０１９薬物バリアントは、ＡＤＣＣを用量依存的に媒介することができたが、図１１及び図１２に示すように、活性のレベルはＳ１特異的ヒトＩｇＧクローンＣＣ１２．３よりも低かった。これらのデータから分かるように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ１特異的ヒトＩｇＧ抗体と異なり、ＳＩ－Ｆ０１９はＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣを媒介しない。

【0119】

実施例１２：補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に対するＳＩ－Ｆ０１９の効果

【0120】

ＣＯＶＩＤ－１９患者の抗体ベースの細胞及び組織損傷の媒介における補体カスケードの役割は、自然免疫応答と中和抗体ベースの治療の両方で明らかである（Ｐｅｒｉｃｏ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。ウイルスと特定のＩｇＧで形成された免疫複合体は、補体誘導性血液凝固、血栓塞栓症及び全身性微小血管障害を媒介する。ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるこれらの広範な合併症は、生命を脅かす可能性があり、ＩｇＧに結合する補体タンパク質に依存する。Ｃ１ｑを介して赤血球と、ＦｃγＲＩＩＡを有する血小板とを架橋するウイルス免疫複合体は、ＣＯＶＩＤ－１９患者の血栓塞栓症のメディエーターである（Ｎａｚｙ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。内皮血管壁への免疫複合体の固定及び補体媒介性凝固は、内皮細胞の活性化が血栓塞栓症カスケードの一部であるＣＯＶＩＤ－１９患者の主な懸念事項である。

【0121】

表３に示すように、天然ＩｇＧ抗体と異なり、ＳＩ－Ｆ０１９はＣ１ｑに結合することができない。この特徴により、表面にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を一過性に発現できる感染した上皮及び内皮の細胞死の誘導リスクが排除される。ＳＩ－Ｆ０１９のこの保護効果は、抗スパイクヒトＩｇＧ抗体と比較して実証されている。

【0122】

ＳＩ－Ｆ０１９の保護効果を実証するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するＨＥＫ２９３－Ｔ細胞を無血清培地（Ｏｐｔｉｍｅｍ）で培養し、３０分間処理した後、１：１０の血清対培地比でヒト血清補体を添加した。試験した処理には、ＳＩ－Ｆ０１９及びＳ１特異的ヒトＩｇＧクローンＡＭ００１４１４(ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ)が含まれた。細胞を３７℃で３時間培養した後、ヨウ化プロピジウム染色を行い、各ウェルの陽性染色細胞を計数した。図１２及び図１３に示すように、３時間後にＩｎｃｕｃｙｔｅ Ｚｏｏｍソフトウェアで計数した赤血球をＣＤＣ尺度として評価する。図１３に示すように、９６時間後の全細胞コンフルエンスをＣＤＣ影響の尺度として評価した。

【0123】

補体損傷からの組織細胞の保護は、ヒト血清補体攻撃後にこれらの細胞がさらに増殖する能力によってさらに確認される。Ｓ１特異的ヒトＩｇＧクローン（クローンＡＭ４１４１）にさらされた場合、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対して、無血清培地において１：１０の体積対体積比でヒト血清補体によって媒介されるＣＤＣは評価可能である。結果として、ヒト可溶性単量体ＡＣＥ２及びＳＩ－Ｆ０１９の両方はＣＤＣを媒介しなかったのに対し、ＳＩ－６９Ｒ３はヒトＩｇＧ抗体と比較して用量依存的にＣＤＣ活性を限定的に増加させた。処理した９６時間後の十分なコンフルエンスに基づいて、ＣＤＣ細胞溶解は細胞増殖の減少に反映された。

【0124】

実施例１３：ＰＢＭＣ培養における可溶性又はプレート結合ＳＩ－Ｆ０１９によって誘導されるサイトカイン放出

【0125】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、気道及び小腸のＡＣＥ２発現上皮に対して親和性を有する。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を示すＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロンγ誘導タンパク質１０（ＩＰ－１０）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ－１α）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）の上昇の臨床検査所見は、根底にある免疫病理学を示唆している。ＣＲＳは、生物製剤による治療の有用性を制限する可能性がある主な副作用であり、インビトロサイトカイン放出アッセイにより試験された。

【0126】

ＳＩ－Ｆ０１９は、ヒトＡＣＥ２と、Ｆｃγ受容体に結合できない変異型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃから構成される融合タンパク質である。したがって、ＳＩ－Ｆ０１９は、末梢血中の標的細胞に結合しないことやサイトカインの放出を誘導しないことが期待されている。５人の健康なドナーから単離された好中球を含む白血球（ＷＢＣ）を、２０００ｎＭ及び２００ｎＭ濃度のプレート結合又は可溶性ＳＩ－Ｆ０１９を含む培養ウェルに入れた。

【0127】

ＴＧＮ１４１２抗体は、このアッセイのプレート結合フォーマットでサイトカイン放出を誘導する能力が十分に実証されているため、陽性対照として同じ濃度及び同じフォーマットで使用された。ＳＩ－６９Ｒ３との比較により、ＩｇＧ１ Ｆｃヌル断片がサイトカイン放出を減少させる潜在的な寄与を評価した。ＳＩ－６９Ｒ３は、末梢血のいくつかの細胞型によって発現されるＦｃγ受容体に結合できる野生型Ｆｃ断片を有する。同様の希釈でＳＩ－Ｆ０１９の処方緩衝液のみを含むＷＢＣ培養物を陰性対照として使用した。培養上清を２４時間及び４８時間の時点で収集し、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームにより９つのサイトカインの存在は検出された。

【0128】

サイトカインパネルには、図１４Ａから１４Ｅに示すように、Ｔ細胞関連サイトカインＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２及びＩＬ－１０が含まれる。また、図１４Ｆから１４Ｉに示すように、炎症誘発性非Ｔ細胞関連サイトカインＩＬ－１β、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－６、単球走化性タンパク質ＭＣＰ－１のレベルも試験された。各供血者について各ウェルを二重測定し、得られた結果の平均値を算出し、ＪＭＰ１４ソフトウェアを使用して９５％信頼区間及び外れ値を示す箱ひげ図を作成した。

【0129】

結果から分かるように、ＳＩ－Ｆ０１９は、２００ｎＭ及び２０００ｎＭの濃度で、プレート結合又は可溶性フォーマットのいずれにおいても、試験したサイトカインのいずれもＷＢＣへの暴露を誘導しない。ＳＩ－Ｆ０１９処理サンプル中のサイトカインのレベルは、全ての条件で緩衝液対照と類似の濃度を示した。陽性対照ＴＧＮ１４１２は、可溶性フォーマットではなく、プレート結合フォーマットの場合、ほとんどのサイトカインを強く誘導しており、これは以前に公開された結果と一致している。プレート結合ＡＣＥ２－Ｆｃ野生型を使用して白血球を刺激した場合、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ及びＴＮＦαの中間生成が検出され、これはＳＩ－Ｆ０１９のＦｃヌル断片の向上した安全性を示している。

【0130】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対する体液性反応の病原性役割は、最近、介入的ＩｇＧ療法を受けている患者によって示唆されている（Ｗｅｉｎｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０２１；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。小血管の過炎症反応は、血小板増加症、そう痒症、発熱、高血圧などの有害事象の根底にある。本発明では、ＳＩ－Ｆ０１９は、機能障害の複数の経路から組織及び臓器を保護しながら、ＩｇＧ治療に匹敵するウイルス中和の効果を提供できることが実証されている。したがって、ＳＩ－Ｆ０１９は、ウイルス感染の治療、予防又は緩和に使用でき、特にＣＯＶＩＤ－１９の進行を予防及び管理し、臨床的合併症を軽減するために使用でき、さらに急性呼吸窮迫症候群、肺動脈性肺高血圧症又は急性肺損傷にも使用できる。

【0131】

実施例１４：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤバリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９の結合動力学（親和性）
パンデミックが続く中、変異と選択により、ＡＣＥ２に対するより高い結合親和性を獲得してウイルス伝播速度が向上するようにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの進化が促進され、その結果、新たに出現した感染力の強いδバリアントを含む変異株が生じる。実際、αバリアントとδバリアントはどちらも元のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスよりも感染力が高い。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの蔓延は、治療法と予防法を開発する上でまだ解決されていない課題である。ＳＩ－Ｆ０１９は中和剤の候補であるが、ＦＤＡは患者の治療用にｂ）バムラニビマブ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ'ｓ ＬＹ－ＣｏＶ５５５；ＳＩ－６９Ｃ４，配列番号２９及び３０）、ｃ）カシリビマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ'ｓ ＲＥＧＮ１０９３３；ＳＩ－６９Ｃ５，配列番号３１及び３２）、ｄ）エテセエビマブ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ'ｓ ＣＢ－６；ＳＩ－６９Ｃ６，配列番号３３及び３４）；ｅ）イムデビマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ'ｓ ＲＥＧＮ１０９８７；ＳＩ－６９Ｃ７，配列番号３５及び３６）；ｆ）シルガビマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ'ｓ ＡＺＤ１０６１；ＳＩ－６９Ｃ８，配列番号３７及び３８）、及びｇ）チサゲビマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ'ｓ ＡＺＤ８８９５；ＳＩ－６９Ｃ９，配列番号３９及び４０）を含むいくつかの中和抗体を承認している。

【0132】

それらの中和抗体に対する組換えＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質であるＳＩ－Ｆ０１９の比較優位性を判断するために、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４を使用して、バイオレイヤー干渉法により、ＣＯＶＩＤ－１９バリアントを模倣したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤバリアントへの結合相互作用の強度を定量化した。これらのバリアントタンパク質は、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入された。まず、アッセイバッファー（１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）中の１０μｇ／ｍｌのＳＩ－Ｆ０１９タンパク質をＡＨＣセンサーに１８０秒間ロードした。１８０秒のベースラインステップの後、ロードされたタンパク質をアッセイバッファー中のＲＢＤバリアントタンパク質の１：２連続希釈物（最高濃度５０ｎＭ）と１８０秒間会合させ、その後、アッセイバッファー中で３００秒の解離ステップを行った。再生は、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）で実行された。完全会合段階及び解離段階の最初の６０秒を用いてデータを１：１結合モデルにグローバルフィッティングし、動力学パラメータＫ_Ｄ、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｄｉｓを抽出した。表２と表４に示される同じバリアントと野生型ＲＢＤタンパク質の結合親和性は同等であり、ベンダーによって読み取り値は異なる可能性がある（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）。

【0133】

図１５（ａ－ｇ）は、ＲＢＤバリアントに結合したときのＳＩ－Ｆ０１９及び中和抗体のセンサーグラムであり、表４（ａ－ｇ）は、抽出された結合動力学（親和性）パラメータを示す。結果として、ＳＩ－Ｆ０１９（１５ａ）と比較して、バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）は、κ、γ、β及びλバリアント（１５ｂ）に結合できず、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）は、γ及びβバリアント（１５ｃ）に対する結合親和性の顕著な低下を示し、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）も、γ及びβバリアント（１５ｄ）に対する結合親和性の顕著な低下を示した。他のモノクローナル抗体、例えば、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）（４ｅ）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）（４ｆ）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）（４ｇ）は、それらの結合親和性に顕著な変化を示さない可能性があるが、センサーグラムにより、いくつかのバリアントでは結合応答の低下が明らかになった（図１５ｅ、１５ｆ及び１５ｇ）。中和抗体とは対照的に、ＳＩ－Ｆ０１９は、伝染性の高いδバリアントを含む新しいバリアント体に対して祖先野生型ＲＢＤよりも高い結合親和性を示した（図１５ａ、表４ａ）。この観察は、ＳＩ－Ｆ０１９のＡＣＥ２部分が、ウイルスがヒト細胞に侵入するための野生型全長ＡＣＥ２の立体構造（高親和性バリアントの選択の標的）を保持しているという概念を裏付けている。したがって、ＳＩ－Ｆ０１９はＦＤＡによって承認された中和抗体に対して比較優位性を有するため、結合剤及び遮断剤として使用することができる。

【0134】

実施例１５：バリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９及び中和抗体の結合動力学（アビディティ）
上記の結合親和性アッセイは、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃキャプチャーバイオセンサーチップ（ＡＨＣ）表面に固定化されたＳＩ－Ｆ０１９と溶液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤタンパク質バリアントの結合を測定する一方、アビディティアッセイは、ストレプトアビジンバイオセンサーチップ表面に固定化されたビオチン化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤタンパク質バリアントと溶液中のＳＩ－Ｆ０１９の結合を測定する。

【0135】

Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４を使用して、バイオレイヤーによりＳＩ－Ｆ０１９とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質バリアントＲＢＤドメイン間の結合相互作用の強度を定量した。試薬はＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入され、ＮＨＳエステル活性化反応によって化学的にビオチン化した（ビオチン／タンパク質の化学量論比は２：１）。まず、アッセイバッファー（１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）中の２μｇ／ｍｌのビオチン化ＲＢＤ又はそのバリアントタンパク質をＳＡセンサーに１８０秒間ロードした。１８０秒のベースラインステップの後、ロードされたタンパク質をアッセイバッファー中のＳＩ－Ｆ０１９タンパク質（ＧＭＰロット）の１：２連続希釈（最大濃度５０ｎＭ）と３００秒間会合させ、その後、アッセイバッファー中で解離ステップを６００秒間行った。再生は、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）で実行された。完全会合段階及び完全解離段階を用いて、データを１：１結合モデルにグローバルフィッティングし、動力学パラメータＫ_Ｄ、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｄｉｓを計算した。表２と表５に示される同じ変異体と野生型ＲＢＤタンパク質の結合親和性は同等であり、ベンダーによって読み取り値は異なる可能性がある（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）。

【0136】

図１６（ａ－ｇ）は、ＳＩ－Ｆ０１９に結合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤタンパク質バリアントのセンサーグラムを示し、表５（ａ－ｇ）は、抽出された結合動力学（アビディティ）パラメータを示す。特に、ＳＩ－Ｆ０１９は、野生型ＲＢＤと比較して、ＲＢＤのバリアント形態に対してより高いアビディティで結合し、アビディティの増加は主により遅い解離速度によって引き起こされる。結果は、野生型ＲＢＤと比較して、ＲＢＤ変異体に対するＳＩ－Ｆ０１９の結合親和性が増加し、解離速度が減少し、いくつかの中和抗体では有効性が低下又は減少したことを示している。

【0137】

実施例１６：中和抗体に対するＳＩ－Ｆ０１９の比較優位性
中和抗体に対するＳＩ－Ｆ０１９の比較優位性を証明するために、結合応答又は応答の値を使用した。応答は、図１５、１６に示すように干渉パターンにおけるｎｍシフトとして測定され、バイオセンサーの表面に結合した分子の数に比例する。応答は、最大濃度の分析物と会合したときに達成される最大結合シグナルであり、動力学結合パラメータ、タンパク質のサイズ、アッセイ条件に依存する複雑な機能であり、相互作用するタンパク質のサイズとフォーマットが類似している限り、特定のアッセイで同等であるべきである。応答の違いは、タンパク質間相互作用の効果的な強度の違いを示すことができ、高い応答は相互作用が強いことを示し、低い応答は相互作用が弱いことを示す。

【0138】

表６は、図１５及び図１６におけるＳＩ－Ｆ０１９及び中和抗体の結合親和性及びアビディティから抽出された応答（分析物の最大濃度）の値を示す。それぞれの中和剤及びバリアントの結合動力学の変化を評価するために、次の定義を適用した。１）応答＜ＷＴの１０％未満の場合、結合なし；２）応答＜ＷＴの３０％の場合、最小限の結合；３）応答＜ＷＴの７５％の場合、低い結合；４）複雑な動力学の場合、上昇の解離、非特異的結合を含む。これらの基準を各応答に適用する場合、各中和抗体は少なくとも１つの変異体に対して低い結合を示すか、まったく結合しない。特に、アビディティアッセイでは、バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）は、δ、κ、γ、β、λに対する結合応答が低下し、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）は、γ及びβに対する結合応答が低下し、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）は、全てβに対する結合応答が低下した。これに対し、ＳＩ－Ｆ０１９は、全てのバリアントに対して結合親和性及びアビディティを保持している。

【0139】

実施例１７：ＳＩ－Ｆ０１９は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）ＲＢＤバリアントのウイルス感染力を阻害できる遮断薬として機能する。
ウイルス感染を防ぐＳＩ－Ｆ０１９の能力を試験するために、ルシフェラーゼレポーターアッセイによりウイルス感染力を評価した。ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質パッケージシュードウイルス（ＮＩＣＰＢＰ）（野生型又は変異株、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を、ＡＣＥ２を過剰発現する２９３Ｔ細胞（クローン３Ｄ４）及びＳＩ－Ｆ０１９の１：３連続希釈物（３０μｇ／ｍｌから）と共インキュベートした。トランスフェクションされた細胞上のＡＣＥ２の発現は、酵素アッセイ及びＦＡＣＳアッセイによって確認された。シュードウイルスは、ＡＣＥ２に結合するＳタンパク質を介してＡＣＥ２陽性細胞に侵入することができ、これによって、ルシフェラーゼの発現が引き起こされる。したがって、発光はウイルスの感染力の読み取りとして使用される。

【0140】

特に、Ｓタンパク質シュードウイルスの１０×ストック溶液を培地中で最終ウイルス負荷が２２７～３９４ＴＣＩＤ５０／ウェルになるように調製した。培地中のＳＩ－Ｆ０１９を最大濃度１５０μｇ／ｍｌ（最終３０μｇ／ｍｌ）で３倍に連続希釈した。３Ｄ４細胞を、トリプシンを含まない解離バッファーを使用して収集した。シュードウイルス（２０μｌ）及びＳＩ－Ｆ０１９（３０μｌ）を９６ウェルプレートのウェル中で混合し、室温で１時間インキュベートした。次に、収集した３Ｄ４細胞１００μｌを各ウェルに添加し（２０，０００／ウェル）、３７℃、５％ＣＯ_２で１８時間インキュベートした。インキュベーション後、上清を除去し、５０μｌのルシフェラーゼ基質溶液を加え、混合し、室温で１分間インキュベートした。Ｉ３×プレートリーダーを使用して発光を読み取った。ＲＬＵ（相対発光単位）での発光シグナルは、Ｓタンパク質シュードウイルスの感染力を表す。

【0141】

ＳＩ－Ｆ０１９を含まない条件と比較した発光の減少を計算して、感染力の阻害パーセントを決定することができる。次に、このデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０のシグモイド関数に当てはめて、シュードウイルスがＳタンパク質の異なるバリアントを含む場合のシュードウイルス感染力を阻害するＳＩ－Ｆ０１９のＩＣ５０値を抽出した。ウイルス阻害データを図１７ａに示し、ＩＣ５０値を表７に示す。結果として、ＳＩ－Ｆ０１９は、野生型株に対する効力と比較して２～１５倍増加した効力ですべてのバリアントの感染力を阻害でき、親和性又はアビディティのＩＣ５０とＫＤ値との間の線形相関（図１７ｂ、１７ｃ）は、ＳＩ－Ｆ０１９による競合阻害を示している。インビトロ実験データにより、ＡＣＥ２タンパク質、例えば、膜結合型ＡＣＥ２タンパク質についてのＳＩ－Ｆ０１９融合タンパク質は、感染力及び伝播性の増加とともに進化するＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の増加した親和性で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのバリアントに強く結合するだけでなく、それを阻害することもできる。

【0142】

実施例１８：中国で健康な参加者を対象とした第Ｉ相臨床試験中のＳＩ－Ｆ０１９（ＮＣＴ０４８５１４４４）
現在、３つの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体製品は、入院していない患者の軽度から中等度のＣＯＶＩＤ－１９の治療のために食品医薬品局（ＦＤＡ）から緊急使用許可（ＥＵＡ）を取得している。これらの患者は、検査でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染が確認されかつ重症化や入院に進行するリスクが高い患者である。第一、バムラニビマブ＋エテセエビマブは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質ＲＢＤにおける異なるが重複するエピトープに結合する中和モノクローナル抗体である。第二、カシリビマブ＋イムデビマブは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質ＲＢＤにおける重複しないエピトープに結合する組換えヒトモノクローナル抗体である。第三、ソトロビマブは、２００３年にＳＡＲＳ－ＣｏＶ生存者から最初に同定されたモノクローナル抗体である。それは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の間で保存されているスパイクタンパク質のＲＢＤにおけるエピトープを標的とする。

【0143】

単一のエピトープに結合するモノクローナル抗体とは異なり、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質ＲＢＤのすべてのドッキング部位へ結合するためのヒト細胞上のＡＣＥ２タンパク質と競合するという技術的利点を有し、その一部はそれらのエピトープが重複する可能性がある。治療計画として２つ以上のモノクローナル抗体を組み合わせる負担と技術的困難を軽減するために、ＳＩ－Ｆ０１９は、現在臨床試験中であるが、重症のＣＯＶＩＤ－１９に進行するリスクが高い個体の軽度から中等度のＣＯＶＩＤ－１９の治療及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の暴露後予防（ＰＥＰ）に有効な単一の治療薬として作用するという利点を有する。ＳＩ－Ｆ０１９は、ヒト細胞上の膜結合型ＡＣＥ２タンパク質を標的とする他のコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）と競合することができる（図４）。ＣＯＶＩＤ－１９に加えて、ＳＩ－Ｆ０１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ウイスルに起因する重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶウイスルに起因する中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、急性呼吸促拍症候群（ＡＲＤＳ）、及び他の肺損傷の治療にも適用できる。そのような場合、ＳＩ－Ｆ０１９は必要に応じて他の治療薬と組み合わせて使用することもできる。

【0144】

第Ｉ相試験の目的は、ＳＩ－Ｆ０１９の単回静脈内投与の安全性、忍容性、薬物動態特性を試験することである。この試験は、ＳＩ－Ｆ０１９の用量を３ｍｇ／ｋｇから７０ｍｇ／ｋｇに漸増する二重盲検、プラセボ対照及びランダム化方式で設計されている（表８ａ、８ｂ）。融合タンパク質は、ヒスチジン／塩酸ヒスチジン、塩化ナトリウム、スクロース、及びポリソルベート８０中の懸濁液として投与される。合計３６人の参加者に１日目に単回投与が行われ、２９日目まで追跡調査が行われた。治療緊急有害事象（ＴＥＡＥ）、治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）、重症度、及び臨床検査値異常は、ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ｖ５．０によって捕捉され、等級付けされた。２０２１年９月１６日の時点では、電子データキャプチャ（ＥＤＣ）データベースはまだロックされていない。データの盲検下レヴューに基づいて、参加者３６人のうち、２１人が４４件の有害事象（ＡＥ）を経験し、そのうち１６人では３１件のＴＲＡＥが発生した。すべてのＡＥはグレード１であり、ＳＩ－Ｆ０１９用量との顕著な関連性は見出されなかった（表９ａ、９ｂ）。ＳＩ－Ｆ０１９の全体的な忍容性と安全性が良好であることは、ＣＯＶＩＤ－１９及びその他の関連疾患に対する予防薬及び治療薬としてのさらなる探求を裏付けている。

【0145】

表

【0146】

表１：組換えＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質のクローニング、発現、及び精製

【表1】

【0147】

表２：ウイルスタンパク質へのＳＩ－Ｆ０１９の親和性及びアビディティ

【表2】

【0148】

表３：Ｆｃ受容体への結合に対するＦｃヌル変異の影響

【表3】

【0149】

表４：Ｓタンパク質ＲＢＤのさまざまなバリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９（４ａ）及び中和抗体（バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）（４ｂ）、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）（４ｃ）、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）（４ｄ）、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）（４ｅ）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）（４ｆ）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）（４ｇ）を含む）の結合動力学（親和性）
ＳＩ－Ｆ０１９は野生型ＲＢＤと比較してＲＢＤの変異型に対して高い親和性で結合し、その主な原因は解離速度が遅いことによるものである。一方、少なくとも３つの中和抗体は少なくとも１つの変異型への結合を失った（Ｎ．Ｄ．）。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【0150】

表５：バイオレイヤー干渉法によりＳタンパク質ＲＢＤのさまざまなバリアントに対するＳＩ－Ｆ０１９（５ａ）と中和抗体（バムラニビマブ（ＳＩ－６９Ｃ４）（５ｂ）、カシリビマブ（ＳＩ－６９Ｃ５）（５ｃ）、エテセエビマブ（ＳＩ－６９Ｃ６）（５ｄ）、イムデビマブ（ＳＩ－６９Ｃ７）（５ｅ）、シルガビマブ（ＳＩ－６９Ｃ８）（５ｆ）及びチサゲビマブ（ＳＩ－６９Ｃ９）（５ｇ））の結合動力学（アビディティ）を定量化した。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【0151】

表６ａ：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスＲＢＤに対するＳＩ－Ｆ０１９と中和抗体の最大結合応答（親和性）の比較分析
これらの抗体のうち４つは少なくとも１つのバリアントに対して低応答から無応答の範囲であったのに対し、ＳＩ－Ｆ０１９はすべてのバリアントに対して増加した応答を示した。

【表6-1】

【0152】

表６ｂ：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスＲＢＤに対するＳＩ－Ｆ０１９又は中和抗体の結合応答（アビディティ）の比較分析
抗体は低応答から無応答の範囲であったのに対し、ＳＩ－Ｆ０１９は大きな変化を示さなかった。

【表6-2】

【0153】

表７：Ｓタンパク質パッケージドシュードウイルス（ＮＩＣＰＢＰ）を用いてＡＣＥ２発現２９３Ｔ細胞に感染させたルシフェラーゼレポーターアッセイにおけるウイルス感染性阻害のＩＣ５０値
より低いＩＣ５０値に基づいて、Ｓタンパク質の変異型を含むシュードウイルスのＳＩ－Ｆ０１９阻害は、野生型Ｓタンパク質を含むシュードウイルスの阻害よりも強力である。

【表7】

【0154】

表８ａ：ＳＩ－Ｆ０１９の第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０４８５１４４４）の人口統計概要（年齢、体重）

【表8-1】

【0155】

表８ｂ：ＳＩ－Ｆ０１９の第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０４８５１４４４）の用量漸増及び配分設計

【表8-2】

【0156】

表９ａ：ＳＩ－Ｆ０１９の第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０４８５１４４４）の臓器分類／優先用語（ＳＯＣ／ＰＴ）に基づくすべての有害事象（ＡＥ）の概要

【表9-1】

＊Ｎ：ＡＥを経験した患者の数．

【0157】

表９ｂ：ＳＩ－Ｆ０１９の第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０４８５１４４４）の臓器分類／優先用語（ＳＯＣ／ＰＴ）に基づくすべての治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）の概要

【表9-2】

＊Ｎ：ＴＲＡＥを経験した患者の数

【0158】

配列表

【表10】

【0159】

>Sequence ID 1: huACE2 full length protein sequence (Genbank_number:NP_001358344.1, TMPRSS2 protease cutting site)
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADQSIKVRISLKSALGDKAYEWNDNEMYLFRSSVAYAMRQYFLKVKNQMILFGEEDVRVANLKPRISFNFFVTAPKNVSDIIPRTEVEKAIRMSRSRINDAFRLNDNSLEFLGIQPTLGPPNQPPVSIWLIVFGVVMGVIVVGIVILIFTGIRDRKKKNKARSGENPYASIDISKGENNPGFQNTDDVQTSF

>Sequence ID 2: huACE2 full length DNA sequence
(Genbank_number: NM_021804.3)

ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCAAAGCATCAAAGTGAGGATAAGCCTAAAATCAGCTCTTGGAGATAAAGCATATGAATGGAACGACAATGAAATGTACCTGTTCCGATCATCTGTTGCATATGCTATGAGGCAGTACTTTTTAAAAGTAAAAAATCAGATGATTCTTTTTGGGGAGGAGGATGTGCGAGTGGCTAATTTGAAACCAAGAATCTCCTTTAATTTCTTTGTCACTGCACCTAAAAATGTGTCTGATATCATTCCTAGAACTGAAGTTGAAAAGGCCATCAGGATGTCCCGGAGCCGTATCAATGATGCTTTCCGTCTGAATGACAACAGCCTAGAGTTTCTGGGGATACAGCCAACACTTGGACCTCCTAACCAGCCCCCTGTTTCCATATGGCTGATTGTTTTTGGAGTTGTGATGGGAGTGATAGTGGTTGGCATTGTCATCCTGATCTTCACTGGGATCAGAGATCGGAAGAAGAAAAATAAAGCAAGAAGTGGAGAAAATCCTTATGCCTCCATCGATATTAGCAAAGGAGAAAATAATCCAGGATTCCAAAACACTGATGATGTTCAGACCTCCTTTTAG

>Sequence ID 3: huACE2 functional domain (residue:1-615) protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYAD

>Sequence ID 4: huACE2 functional domain (residue:1-615) DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGAC

>Sequence ID 5: Fc wild type IgG1 Fc (EU numbering 216-447)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 6: Fc null version (EU numbering 216-447, with mutations: C220S, L234A, L235A, and K322A)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 7: SI-69R2_huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgG1 Fc (null) protein sequence (EU numbering 216-447, with mutations: C220S, L234A, L235A, and K322A)
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 8:SI-69R2: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgG1 Fc (null) DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACGAGCCCAAATCTTCCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCGCGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG

>Sequence ID 9: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgG4 Fc protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK


>Sequence ID 10: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgG4 Fc DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACGAGTCCAAATATGGTCCCCCGTGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA


>Sequence ID 11: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgA1 Fc Protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY


>Sequence ID 12: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgA1 Fc DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACAGCCAGGATGTGACTGTGCCCTGCCCAGTTCCCTCAACTCCACCTACCCCATCTCCCTCAACTCCACCTACCCCATCTCCCTCATGCTGCCACCCCCGACTGTCACTGCACCGACCGGCCCTCGAGGACCTGCTCTTAGGTTCAGAAGCGAACCTCACGTGCACACTGACCGGCCTGAGAGATGCCTCAGGTGTCACCTTCACCTGGACGCCCTCAAGTGGGAAGAGCGCTGTTCAAGGACCACCTGAGCGTGACCTCTGTGGCTGCTACAGCGTGTCCAGTGTCCTGCCGGGCTGTGCCGAGCCATGGAACCATGGGAAGACCTTCACTTGCACTGCTGCCTACCCCGAGTCCAAGACCCCGCTAACCGCCACCCTCTCAAAATCCGGAAACACATTCCGGCCCGAGGTCCACCTGCTGCCGCCGCCGTCGGAGGAGCTGGCCCTGAACGAGCTGGTGACGCTGACGTGCCTGGCACGCGGCTTCAGCCCCAAGGACGTGCTGGTTCGCTGGCTGCAGGGGTCACAGGAGCTGCCCCGCGAGAAGTACCTGACTTGGGCATCCCGGCAGGAGCCCAGCCAGGGCACCACCACCTTCGCTGTGACCAGCATACTGCGCGTGGCAGCCGAGGACTGGAAGAAGGGGGACACCTTCTCCTGCATGGTGGGCCACGAGGCCCTGCCGCTGGCCTTCACACAGAAGACCATCGACCGCTTGGCGGGTAAACCCACCCATGTCAATGTGTCTGTTGTCATGGCGGAGGTGGACGGCACCTGCTACTGA


>Sequence ID 13: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgA2 Fc Protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCRVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTYAVTSILRVAAEDWKKGETFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHINVSVVMAEADGTCY


>Sequence ID 14: huACE2 functional domain (residue:1-615)- IgA2 Fc DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACAGCCAGGATGTGACTGTGCCCTGCCGAGTTCCCCCACCTCCCCCATGCTGCCACCCCCGACTGTCGCTGCACCGACCGGCCCTCGAGGACCTGCTCTTAGGTTCAGAAGCGAACCTCACGTGCACACTGACCGGCCTGAGAGATGCCTCTGGTGCCACCTTCACCTGGACGCCCTCAAGTGGGAAGAGCGCTGTTCAAGGACCACCTGAGCGTGACCTCTGTGGCTGCTACAGCGTGTCCAGTGTCCTGCCTGGCTGTGCCCAGCCATGGAACCATGGGGAGACCTTCACCTGCACTGCTGCCCACCCCGAGTTGAAGACCCCACTAACCGCCAACATCACAAAATCCGGAAACACATTCCGGCCCGAGGTCCACCTGCTGCCGCCGCCGTCGGAGGAGCTGGCCCTGAACGAGCTGGTGACGCTGACGTGCCTGGCACGTGGCTTCAGCCCCAAGGATGTGCTGGTTCGCTGGCTGCAGGGGTCACAGGAGCTGCCCCGCGAGAAGTACCTGACTTGGGCATCCCGGCAGGAGCCCAGCCAGGGCACCACCACCTATGCTGTGACCAGCATACTGCGCGTGGCAGCCGAGGACTGGAAGAAGGGGGAAACCTTCTCCTGCATGGTGGGCCACGAGGCCCTGCCGCTGGCCTTCACACAGAAGACCATCGACCGCATGGCGGGTAAACCCACCCATATCAATGTGTCTGTTGTCATGGCGGAGGCGGACGGCACCTGCTACTGA


>Sequence ID 15: SI-F019_huACE2 functional domain (residue:18-615)- IgG1 Fc (null) protein sequence (with mutations at C220S, L234A, L235A, and K322A, EU numbering)
QSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 16: huACE2 functional domain (residue:18-615)- IgG4 Fc protein sequence
QSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK


>Sequence ID 17: huACE2 functional domain (residue:18-615)- IgA1 Fc Protein sequence
QSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY


>Sequence ID 18: huACE2 functional domain (residue:18-615)- IgA2 Fc Protein sequence
QSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCRVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTYAVTSILRVAAEDWKKGETFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHINVSVVMAEADGTCY


>Sequence ID 19: SI-69R3_human ACE2-ECD-1-615-Fc-w2(EU numbering 216-447)-protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK


>Sequence ID 20: SI-69R3_human ACE2-ECD-1-615-Fc-w2-DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTCCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACGAGCCCAAATCTTCCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG


>Sequence ID 21: SI-69R4-human ACE2-ECD-1-740(TMPRSS2 protease cutting site)-Fc-w2(EU numbering 216-447)-protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADQSIKVRISLKSALGDKAYEWNDNEMYLFRSSVAYAMRQYFLKVKNQMILFGEEDVRVANLKPRISFNFFVTAPKNVSDIIPRTEVEKAIRMSRSRINDAFRLNDNSLEFLGIQPTLGPPNQPPVSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK


>Sequence ID 22: SI-69R4_human ACE2-ECD-1-740-Fc-w2-DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTCCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCAAAGCATCAAAGTGAGGATAAGCCTAAAATCAGCTCTTGGAGATAAAGCATATGAATGGAACGACAATGAAATGTACCTGTTCCGATCATCTGTTGCATATGCTATGAGGCAGTACTTTTTAAAAGTAAAAAATCAGATGATTCTTTTTGGGGAGGAGGATGTGCGAGTGGCTAATTTGAAACCAAGAATCTCCTTTAATTTCTTTGTCACTGCACCTAAAAATGTGTCTGATATCATTCCTAGAACTGAAGTTGAAAAGGCCATCAGGATGTCCCGGAGCCGTATCAATGATGCTTTCCGTCTGAATGACAACAGCCTAGAGTTTCTGGGGATACAGCCAACACTTGGACCTCCTAACCAGCCCCCTGTTTCCGAGCCCAAATCTTCCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG

>Sequence ID 23: SI-69R1_huACE2 functional domain (residue:1-615)- 6XHis protein sequence
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADHHHHHH


>Sequence ID 24: SI-69R1_huACE2 functional domain (residue:1-615)- 6XHis DNA sequence
ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCATCATCACCATCACCAC

>Sequence ID 25: SI-69R10_Human TMPRSS2 protein, His-tagged (106-492)- protein sequence
MYRMQLLSCIALSLALVTNSWKFMGSKCSNSGIECDSSGTCINPSNWCDGVSHCPGGEDENRCVRLYGPNFILQVYSSQRKSWHPVCQDDWNENYGRAACRDMGYKNNFYSSQGIVDDSGSTSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVNLNSSRQSRIVGGESALPGAWPWQVSLHVQNVHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNNPWHWTAFAGILRQSFMFYGAGYQVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLQKPLTFNDLVKPVCLPNPGMMLQPEQLCWISGWGATEEKGKTSEVLNAAKVLLIETQRCNSRYVYDNLITPAMICAGFLQGNVDSCQGDSGGPLVTSKNNIWWLIGDTSWGSGCAKAYRPGVYGNVMVFTDWIYRQMRADGHHHHHH


>Sequence ID 26: SI-69R10_Human TMPRSS2 protein, His-tagged (106-492)- DNA sequence
ATGTACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTTGTCACCAATTCGTGGAAGTTTATGGGTTCTAAATGCTCTAATAGCGGGATAGAATGTGACAGTAGTGGCACTTGCATTAACCCTTCAAACTGGTGTGATGGGGTAAGCCATTGCCCCGGGGGGGAAGATGAAAATAGATGTGTTAGGCTCTACGGTCCCAACTTTATACTCCAGGTATATTCAAGTCAACGCAAATCATGGCATCCAGTGTGTCAAGACGACTGGAACGAAAACTATGGACGCGCTGCATGTCGAGATATGGGATATAAGAATAACTTCTATAGTTCACAGGGAATCGTAGATGACTCTGGATCTACTAGTTTCATGAAACTGAACACCTCTGCCGGAAACGTAGATATATATAAAAAGCTTTACCACTCCGACGCTTGTAGCTCTAAGGCCGTAGTTAGCCTCAGATGCATCGCCTGCGGAGTAAACCTCAATTCATCTCGCCAGAGTAGGATCGTTGGCGGGGAAAGCGCCCTCCCAGGCGCTTGGCCTTGGCAAGTTTCCCTTCATGTCCAGAATGTTCATGTATGTGGCGGGTCTATAATCACCCCAGAATGGATCGTCACAGCTGCCCACTGCGTGGAGAAACCCCTCAACAATCCTTGGCATTGGACCGCATTTGCCGGAATACTGAGACAATCATTTATGTTCTATGGAGCCGGGTACCAAGTCGAAAAGGTCATTTCCCATCCCAATTATGATTCCAAAACCAAAAACAATGACATAGCCTTGATGAAACTCCAGAAGCCTTTGACATTTAATGACCTGGTCAAACCAGTGTGCCTCCCAAATCCTGGAATGATGTTGCAGCCTGAACAGTTGTGCTGGATCAGCGGTTGGGGTGCTACCGAGGAGAAGGGTAAGACAAGCGAGGTCCTTAACGCTGCAAAGGTTTTGCTGATAGAAACACAGAGATGTAACAGCCGCTATGTGTACGATAACCTGATCACCCCAGCTATGATTTGCGCCGGGTTTTTGCAAGGTAACGTCGATTCTTGCCAAGGTGACTCAGGCGGCCCTCTTGTTACATCAAAGAACAATATATGGTGGCTTATCGGCGATACATCATGGGGTTCTGGATGTGCTAAAGCCTATCGCCCAGGGGTGTATGGCAATGTAATGGTGTTTACAGACTGGATCTATAGGCAGATGCGGGCTGACGGTCACCATCATCACCATCACTGA


>Sequence ID 27: IgJ chain
MKNHLLFWGVLAVFIKAVHVKAQEDERIVLVDNKCKCARITSRIIRSSEDPNEDIVERNIRIIVPLNNRENISDPTSPLRTRFVYHLSDLCKKCDPTEVELDNQIVTATQSNICDEDSATETCYTYDRNKCYTAVVPLVYGGETKMVETALTPDACYPD


>Sequence ID 28: Secretory Component
KSPIFGPEEVNSVEGNSVSITCYYPPTSVNRHTRKYWCRQGARGGCITLISSEGYVSSKYAGRANLTNFPENGTFVVNIAQLSQDDSGRYKCGLGINSRGLSFDVSLEVSQGPGLLNDTKVYTVDLGRTVTINCPFKTENAQKRKSLYKQIGLYPVLVIDSSGYVNPNYTGRIRLDIQGTGQLLFSVVINQLRLSDAGQYLCQAGDDSNSNKKNADLQVLKPEPELVYEDLRGSVTFHCALGPEVANVAKFLCRQSSGENCDVVVNTLGKRAPAFEGRILLNPQDKDGSFSVVITGLRKEDAGRYLCGAHSDGQLQEGSPIQAWQLFVNEESTIPRSPTVVKGVAGGSVAVLCPYNRKESKSIKYWCLWEGAQNGRCPLLVDSEGWVKAQYEGRLSLLEEPGNGTFTVILNQLTSRDAGFYWCLTNGDTLWRTTVEIKIIEGEPNLKVPGNVTAVLGETLKVPCHFPCKFSSYEKYWCKWNNTGCQALPSQDEGPSKAFVNCDENSRLVSLTLNLVTRADEGWYWCGVKQGHFYGETAAVYVAVEERKAAGSRDVSLAKADAAPDEKVLDSGFREIENKAIQDPR


>Sequence ID 29: Bamlanivimab_Heavy_Chain
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYYEARHYYYYYAMDVWGQGTAVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 30: Bamlanivimab_Light_Chain
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

>Sequence ID 31: Casirivimab_Heavy_Chain
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYITYSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGTTMVPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 32: Casirivimab_Light_Chain
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISGLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

>Sequence ID 33: Etesevimab_Heavy_Chain
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSMNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARVLPMYGDYLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 34: Etesevimab_Light_Chain
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPEYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

>Sequence ID 35: Imdevimab_Heavy_Chain
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMYWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTEDTAVYYCASGSDYGDYLLVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

> Sequence ID 36: Imdevimab_Light_Chain
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQSEDEADYYCNSLTSISTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

>Sequence ID 37: Cilgavimab_Heavy_Chain
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFRDVWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKIDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTAGSYYYDTVGPGLPEGKFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 38: Cilgavimab_Light_Chain
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLMYWASTRESGVPDRFSGSGSGAEFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYYSTLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

>Sequence ID 39: Tixagevimab_Heavy_Chain
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFMSSAVQWVRQARGQRLEWIGWIVIGSGNTNYAQKFQERVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPYCSSISCNDGFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

>Sequence ID 40: Tixagevimab_Light_Chain
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSRGWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図1-4】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14-1】

【図14-2】

【図14-3】

【図14-4】

【図14-5】

【図14-6】

【図14-7】

【図14-8】

【図14-9】

【図15-1】

【図15-2】

【図15-3】

【図15-4】

【図15-5】

【図15-6】

【図15-7】

【図16-1】

【図16-2】

【図16-3】

【図16-4】

【図16-5】

【図16-6】

【図16-7】

【図17-1】

【図17-2】

【図17-3】

【配列表】

2023544169000001.app

【国際調査報告】