特表 2023-544251 新規医薬化合物、その方法および使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-23

(54)【発明の名称】新規医薬化合物、その方法および使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/08 20060101AFI20231016BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231016BHJP

   A61K 31/439 20060101ALI20231016BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231016BHJP

   A61P 15/14 20060101ALI20231016BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20231016BHJP

【ＦＩ】

C07D471/08 CSP

A61P43/00 111

A61K31/439

A61P35/00

A61P15/14

A61K45/00

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023516234

(86)(22)【出願日】2021-09-10

(85)【翻訳文提出日】2023-04-13

(86)【国際出願番号】 IB2021058241

(87)【国際公開番号】W WO2022053998

(87)【国際公開日】2022-03-17

(31)【優先権主張番号】116714

(32)【優先日】2020-09-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】PT

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513303795

【氏名又は名称】ウニベルシダージ ド ポルト

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＤＡＤＥ ＤＯ ＰＯＲＴＯ

(71)【出願人】

【識別番号】523087777

【氏名又は名称】ファクルダージ ジ ファルマシア ダ ウニベルシダージ ジ リズボア

【氏名又は名称原語表記】ＦＡＣＵＬＤＡＤＥ ＤＥ ＦＡＲＭＡＣＩＡ ＤＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＤＡＤＥ ＤＥ ＬＩＳＢＯＡ

(71)【出願人】

【識別番号】523087788

【氏名又は名称】ウニベルシダージ ペダゴージカ

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＤＡＤＥ ＰＥＤＡＧＯＧＩＣＡ

(71)【出願人】

【識別番号】523087799

【氏名又は名称】インスティトゥート ジ パトロジア イ イムノロジア モレクラール ダ ウニベルシダージ ド ポルト － アイピーエイティーアイエムユーピー

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴＯ ＤＥ ＰＡＴＯＬＯＧＩＡ Ｅ ＩＭＵＮＯＬＯＧＩＡ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＤＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＤＡＤＥ ＤＯ ＰＯＲＴＯ － ＩＰＡＴＩＭＵＰ

(74)【代理人】

【識別番号】100147485

【弁理士】

【氏名又は名称】杉村 憲司

(74)【代理人】

【識別番号】230118913

【弁護士】

【氏名又は名称】杉村 光嗣

(74)【代理人】

【識別番号】100173473

【弁理士】

【氏名又は名称】高井良 克己

(72)【発明者】

【氏名】ルシーリア ヘレナ アタイジ サライヴァ

(72)【発明者】

【氏名】マリア ジョゼ ウンベリーノ フェヘイラ

(72)【発明者】

【氏名】シウヴァ ファビオ ムルホヴォ

(72)【発明者】

【氏名】ジョゼ ルイス ダ シウヴァ ボルジス コスタ

(72)【発明者】

【氏名】リリアナ ソフィア ゴメス ライムンド

(72)【発明者】

【氏名】アンジェラ パテルナ

(72)【発明者】

【氏名】ジュリアナ メイシェド カルヘイロス

【テーマコード（参考）】

4C065

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C065AA09

4C065AA19

4C065BB04

4C065CC09

4C065DD02

4C065EE02

4C065HH08

4C065HH09

4C065JJ01

4C065KK01

4C065LL01

4C065PP01

4C065PP03

4C065PP12

4C065PP15

4C084AA19

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA81

4C084ZB26

4C084ZC41

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB05

4C086GA13

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZB26

4C086ZC41

4C086ZC75

(57)【要約】

本開示は、一般式Ｉによる新規化合物または薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩、水和物、溶媒和物、Ｎ－オキシド、立体化学的異性体形態、特にジアステレオ異性体、鏡像異性体もしくはアトロプ異性体、またはそれらの混合物、その多形体もしくはエステルに関する。本開示はまた、相同組換えＤＮＡ修復経路によって、ならびに野生型、変異、および他のＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２の欠損によって影響を受ける状態の治療において、すなわち癌の療法または治療において使用するための、式Ｉの化合物またはそのプロドラッグを含む医薬組成物に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

医学または獣医学における使用のための、一般式（１）の化合物、または薬学的に許容される塩、立体異性体、ジアステレオ異性体、鏡像異性体、アトロプ異性体、多形体。

【化1】

（式中、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに独立して選択され；
Ｒ^１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニルであり；
Ｒ^２は、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６、ＣＨ_２ＯＲ^６、ＣＯＮＲ^６Ｒ^７またはＣＨ_２ＮＲ^６Ｒ^７であり；
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニルであり；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。）

【請求項2】

ＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２経路の阻害によって改善される疾患の療法または治療における使用のための、先行する請求項に記載の化合物。

【請求項3】

ＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２経路の破壊を介する相同組換えＤＮＡ修復のインヒビターとしての使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項4】

ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊を介する相同組換えＤＮＡ修復のインヒビターとしての使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項5】

癌または腫瘍の予防、療法、または治療に、好適には固形腫瘍の療法、または治療における使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項6】

乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、肺癌、膠芽細胞腫、または神経芽細胞腫の予防、療法、または治療における使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項7】

トリプルネガティブ乳癌の予防、療法、または治療における使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項8】

ただし、メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートおよびメチル（５，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートは除外される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項9】

Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルケニルまたはＣ_１－Ｃ_６アルキニルから選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項10】

Ｒ^２は、ヘテロアリールである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項11】

Ｒ^２は、ピリジンである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項12】

Ｒ^２は、置換ハロゲン有するピリジンである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物

【請求項13】

Ｒ^２は、５－ブロモピリジンである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項14】

Ｒ^３は、Ｈであり、Ｒ^４は、エチルである、先行する請求項に記載の使用のための化合物。

【請求項15】

Ｒ^３は、エチルであり、Ｒ^４は、Ｈである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項16】

Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６、ＣＯＮＲ^６Ｒ^７から選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項17】

Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルケニルまたはＣ_１－Ｃ_６アルキニルから選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項18】

Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニルまたはアルキニルから選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項19】

Ｒ^７は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルケニルまたはＣ_１－Ｃ_６アルキニルから選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項20】

Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６であり、Ｒ^６は、メチルである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項21】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに独立して選択され、
Ｒ^１は、Ｈであり；
Ｒ^２は、ヘテロアリールであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６またはＣＯＮＲ^６Ｒ^７であり、
Ｒ^６は、Ｈまたはアルキルであり；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである、
先行する請求項に記載の使用のための化合物。

【請求項22】

Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニルである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項23】

メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートまたはメチル（５，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートである、先行する請求項の何れか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項24】

化学保護剤としての使用のための、先行する請求項の何れか一項に記載の化合物。

【請求項25】

薬学的に有効な担体および治療有効量の請求項１～２４の何れか一項に記載の化合物を含む、医薬組成物。

【請求項26】

化学療法剤を更に含む、先行する請求項に記載の医薬組成物。

【請求項27】

局所、経口、非経口、または注射可能な経路を介して投与される、先行する請求項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、一般式Ｉによる新規化合物または薬学的に許容される酸もしくは塩基付加塩、水和物、溶媒和物、Ｎ－オキシド、立体化学的異性体形態、特にジアステレオ異性体、鏡像異性体もしくはアトロプ異性体、またはそれらの混合物、その多形体もしくはエステルに関する。本開示はまた、相同組換えＤＮＡ修復経路によって、ならびに野生型、変異、および他のＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２の欠損によって影響を受ける状態の治療において、すなわち癌の療法または治療において使用するための、式Ｉの化合物またはそのプロドラッグを含む医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

標的療法は、個別化された癌治療の基礎を示し、抗癌剤開発のこの分野への世界的な投資を正当化する。標的療法は、通常の化学療法とは異なり、急速に分裂しているすべての正常細胞および癌細胞に無差別に作用することによって非特異的な方法で細胞死を誘導するのではなく、特定の分子標的に作用する。したがって、従来の化学療法と比較して、標的療法は、正常細胞に対して低い毒性を呈し、患者に対する不所望な副作用を減少させる。標的ＤＮＡ修復療法は、合成致死性の概念を介するＤＮＡ修復経路における欠陥を探索することによって、化学増感剤または放射線増感剤として使用される有望な戦略として出現している。このアプローチは、癌細胞における変異によって誘導される表現型に類似した、生存性と対応する、特定の遺伝子産物の存在に依存する。特定の遺伝子産物は、異なる遺伝子における第２の機能不全と組み合わされると、細胞死をもたらす。したがって、これらの治療は、健康な細胞に対する副作用を最小限に抑えて、癌細胞を特異的に標的とする。

【0003】

ＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２（ＢＲＣＡ１／２）腫瘍抑制遺伝子は、分子リスクシグネチャーおよびいくつかの癌タイプにおける予後バイオマーカーの両方として、関連する役割を有する。実に、ゲノムの完全性の維持におけるそれらの重要な役割のために、変異または低発現レベルのいずれかによる、機能不全のＢＲＣＡ１／２活性は、多様な遺伝性癌および散発性癌タイプ、すなわち乳癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、喉頭癌、および卵管癌を発症する高いリスクと関連する。実際、ＢＲＣＡ１／２は、いくつかの細胞プロセスを調和させ、相同組換えによるＤＮＡ修復に重要な役割を果たしている。特に、ＢＲＣＡ１は、その結合パートナーであるＢＡＲＤ１と関連してこれらの役割を果たす。ＢＡＲＤ１は、ＢＲＣＡ１を安定化させて、核に閉じ込め、主に相同組換えによってＤＮＡ二本鎖切断の修復を促進する。そのようなものとして、ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１ヘテロ二量体が破壊されると、ＢＲＣＡ１の正常な機能が失われて、ＢＲＣＡ１、ＢＡＲＤ１、および他の主なＤＮＡ修復因子の発現が減少する。

【0004】

腫瘍形成における機能的なＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２経路の関連性にもかかわらず、確立された腫瘍では、これが、ＤＮＡ損傷修復経路の継続的な活性化による予後不良および療法抵抗性と関連している。実際、ＤＮＡ修復の障害は発癌の主要な促進因子ではあるが、機能している修復経路が、癌患者の予後がより不良となることと関連していた。これと矛盾なく、欠陥のあるＤＮＡ修復経路は、細胞死を誘導するためにＤＮＡ損傷の誘導に依存する化学療法および放射線療法に対する癌細胞の感受性に、プラスに影響することができる。実に、ＢＲＣＡ１欠損癌は、鎖間架橋剤（例えば、白金およびアルキル化剤）およびアントラサイクリンなどの二本鎖切断誘導剤、ならびにポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼインヒビター（ＰＡＲＰｉ；例えば、オラパリブ、タラゾパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ）などの他のＤＮＡ標的剤に対して、高い感受性を有することが示された。実際、ＰＡＲＰｉは、変異ＢＲＣＡ１形成を有する患者において、進行性および化学療法抵抗性の卵巣癌と、転移性のＨＥＲ２陰性の乳癌の治療のために、既に承認されている。これにもかかわらず、ＤＮＡ損傷修復因子の調節不全および過剰発現によって、細胞はＰＡＲＰｉの致死効果を回避する傾向がある。したがって、初期の反応は良好であるにもかかわらず、これらの治療は、抵抗性の発現により失敗する傾向がある。実際、ヘテロ接合性の変異ＢＲＣＡ１の形成を、またはヘテロ接合の喪失を伴う腫瘍は、ＤＮＡ損傷修復活性（またはＩＴＳ修復）、特に機能的な相同組換え経路が残存することに起因して、通常、ＰＡＲＰｉおよびＤＮＡ損傷剤に対する抵抗性と関連している。

【0005】

臨床現場において、ＰＡＲＰｉは、現在、ＢＲＣＡ１欠損癌の臨床研究の最前線にある。したがって、特に、治療抵抗性を回避するために、癌細胞をＤＮＡ損傷剤の効果に対して感作させる、より有効なＤＮＡ修復阻害剤が求められている。この分野において、ＢＲＣＡ１／２経路のインヒビターは、相同組換えＤＮＡ修復を不活性化し、抵抗性のある治療困難な癌に対して有望であることが明らかである。しかしながら、腫瘍形成におけるこれらのタンパク質の関連する役割にもかかわらず、それらの活性の有効なレギュレータは、依然として欠けている。

【0006】

これらの事実は、本開示によって対処される技術的問題を説明するために開示されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本開示は、医学または獣医学における使用のための、一般式（１）の化合物、または薬学的に許容される塩、立体異性体、ジアステレオ異性体、鏡像異性体、アトロプ異性体、多形体に関する。

【化1】

式中、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに独立して選択され；
Ｒ^１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルであり；
Ｒ^２は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６、ＣＨ_２ＯＲ^６、ＣＯＮＲ^６Ｒ^７またはＣＨ_２ＮＲ^６Ｒ^７であり；
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールであり、好適には、ＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２媒介の相同組換えＤＮＡ修復経路に関連する状態の治療において、特にＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ１２の阻害を介する相同組換えのディスラプタとして使用される。

【0008】

一実施形態では、本開示の化合物は、ＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ１２経路の阻害によって改善される疾患の療法または治療に使用することができる。

【0009】

一実施形態では、Ｒ^１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、またはアルキニルから選択され、好適には、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルケニルまたはＣ１－Ｃ６アルキニルから選択される。

【0010】

一実施形態では、Ｒ^２は、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルから選択され、好適には、Ｒ^２はヘテロアリールである。

【0011】

一実施形態では、Ｒ^２はピリジンであり、より好適にはＲ^２は置換ハロゲンを有するピリジンであり、より好適にはＲ^２は５－ブロモピリジンである。

【0012】

一実施形態では、Ｒ^３はＨであり、Ｒ^４はエチルである。

【0013】

一実施形態では、Ｒ^３はエチルであり、Ｒ^４はＨである。

【0014】

一実施形態では、Ｒ^５は、ＣＯＯＲ６、ＣＯＮＲ６Ｒ７から選択される。

【0015】

一実施形態では、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルケニルまたはＣ１－Ｃ６アルキニルから選択される。

【0016】

一実施形態では、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニルまたはアルキニルから選択される。

【0017】

一実施形態では、Ｒ^７は、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルケニルまたはＣ１－Ｃ６アルキニルから選択される。

【0018】

一実施形態では、Ｒ^５はＣＯＯＲ６であり、Ｒ^６はメチルである。

【0019】

一実施形態では、化合物は、メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ（ｍｅｔｈａｎｏａｚｅｃｉｎｏ）［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートまたはメチル（５，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートである。

【0020】

一実施形態では、本開示の化合物は、ＢＲＣＡ１／２経路の破壊を介する相同組換えＤＮＡ修復のインヒビターとして使用することができる。

【0021】

一実施形態では、本開示の化合物は、ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊を介する相同組換えＤＮＡ修復のインヒビターとして使用することができる。

【0022】

一実施形態では、本開示の化合物は、癌または腫瘍の予防、療法、または治療に使用することができる。

【0023】

一実施形態では、本開示の化合物は、固形腫瘍の予防、療法、または治療に使用することができる。

【0024】

一実施形態では、本開示の化合物は、乳癌の予防、療法、または治療に使用することができる。

【0025】

一実施形態では、本開示の化合物は、トリプルネガティブ乳癌の予防、療法、または治療に使用することができる。

【0026】

一実施形態では、本開示の化合物は、化学保護剤として使用することができる。

【0027】

本開示の別の態様は、薬学的に有効な担体および治療有効量の本開示の化合物を含む医薬組成物に関する。

【0028】

一実施形態では、本開示の医薬品は、化学療法剤を更に含むことができる。

【0029】

一実施形態では、本開示の医薬品は、局所、経口、非経口、または注射可能な経路を介して投与することができる。

【0030】

本開示の別の態様は、一般式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容される塩、立体異性体、ジアステレオ異性体、鏡像異性体、アトロプ異性体、多形体に関する。
ここで、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに独立して選択され；
Ｒ^１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルであり；
Ｒ^２は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６、ＣＨ２ＯＲ^６、ＣＯＮＲ^６Ｒ^７またはＣＨ_２ＮＲ^６Ｒ^７であり；
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ただし、メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，４，６，５，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボンキシレートおよびメチル（５，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレートは除外され、好適には医療に使用される。

【0031】

一実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに独立して選択され：
Ｒ^１は、Ｈであり；
Ｒ^２は、ヘテロアリールであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルであり；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６またはＣＯＮＲ^６Ｒ^７であり；
Ｒ^６は、Ｈまたはアルキルであり；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。

【0032】

本開示は、これまでに記載されたものとは全く異なる化学構造の相同組換えインヒビター、化合物の類似体に関する。

【0033】

一実施形態では、本開示は、ＢＲＣＡ１／２経路を阻害する能力、特にＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用を破壊することによって阻害する能力を有する化合物（５Ｒ，および５Ｓ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－５－エチル－８－ヒドラゾノ－３，１４－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール（以下ＣＯＭＰ）に関する。

【0034】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、ヒト癌細胞および異種移植マウスモデルの両方において強力な抗腫瘍活性を示す。特に、ＣＯＭＰは、依然として有効な治療選択肢を欠く治療困難な腫瘍、すなわちトリプルネガティブ乳癌および膵臓癌、予後不良および治療抵抗性と頻繁に関連する癌に対して、有望な抗腫瘍効果を示す。追加的に、ＣＯＭＰは、正常細胞において毒性が低く、動物モデルでは毒性の副作用を示さなかった。ＣＯＭＰは、特にＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊、細胞周期停止の誘導、ＤＮＡ修復因子のダウンレギュレーション、およびその後のＤＮＡ損傷および細胞死の増加によって、ＢＲＣＡ１／２経路の阻害を介して、相同組換えを不活性化する。ＣＯＭＰはまた、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞をシスプラチンおよびオラパリブの効果に感作させ、それらのアポトーシス潜在性を増加させながら、それらの有効量を減少させる。重要なことに、ＣＯＭＰは、卵巣癌細胞の異種移植マウスにおいて有望なｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示し、明らかな不所望な毒性はない。これらの特性により、この化合物は、現在利用可能な他のＤＮＡ修復阻害剤と比較して、優れた分子プローブおよび抗癌剤候補となっている。最も重要なことは、ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用を阻害するその能力によって、広範囲の癌患者、特に有効な治療選択肢がまだ欠ける癌患者の個別化治療のためのＣＯＭＰの有望な臨床応用を予測できる、全く新しい分子的アプローチが可能となることである。

【0035】

本開示の化合物の利点は、以下を含む：ｉ）癌治療に一般的に関連する不所望な毒性の副作用を伴わずに、より効果的かつ選択的な化学薬品を使用することにより、抗癌治療ならびに患者の生活の質を改善する；ｉｉ）ＢＲＣＡ１／２経路を阻害することができ、その結果、癌細胞がＤＮＡ損傷を修復して成長する能力を阻害できる新しい分子を使用することによって、癌治療の恩恵を受けることができる癌患者の集団を拡大する可能性。

【0036】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、相同組換えにおける、および他の癌関連プロセスにおけるＢＲＣＡ１／２の関与を研究するために、癌研究分野における化学プローブとして使用される。

【0037】

一実施形態では、活性成分としてＣＯＭＰを含有する製剤は、ＤＮＡ修復に依存するいくつかの耐性癌を治療するための有効な戦略であり得る。

【0038】

一実施形態では、本開示の化合物は、ＢＲＣＡ１／２経路の阻害、特にＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１ヘテロ二量体の破壊による、完全に新しい作用モードを有する、相同組換えインヒビターの新しい化学ファミリーである。

【0039】

一実施形態では、本開示の化合物は、現在臨床使用が承認されている他のＤＮＡ修復標的療法よりも、高い抗腫瘍効果を提示する。

【0040】

一実施形態では、本開示の化合物は、トリプルネガティブ乳癌および膵臓癌のような、依然として効果的な治療レジメンを欠く治療困難な癌に対する有望な抗腫瘍組成物である。

【0041】

一実施形態では、本開示の化合物は、従来の化学療法剤およびＰＡＲＰｉと組み合わせて有望な相乗効果を有する。

【0042】

一実施形態では、本開示の化合物は、従来の化学療法とは異なり、正常細胞において低い毒性を有し、明らかな不所望な毒性の副作用を有さない。

【0043】

用語「アルキル」は、本明細書において、飽和直鎖状、分岐状、または環状アルキル基を意味するために使用される。

【0044】

用語「アルケニル」は、本明細書において、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和の直鎖または分枝鎖炭化水素を意味するために使用される。

【0045】

用語「アルキニル」は、本明細書において、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する不飽和の直鎖または分枝鎖炭化水素を意味するために使用される。

【0046】

用語「アリール」は、本明細書において、ベンゼン、ナフタレンなどを含むがこれらに限定されない任意の炭素ベースの芳香族基である。アリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン化物、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、カルボン酸、ケトンまたはアルコキシを含むがこれらに限定されない１つまたは複数の基で置換され得る。

【0047】

用語「ヘテロアルキル」は、本明細書において、少なくとも１つの炭素原子がヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ原子）で置換されたアルキル基を意味するために使用される

【0048】

用語「アロイル」は、本明細書において、アリールカルボニル基を意味するために使用される。

【0049】

用語「ヘテロアリール」は、本明細書において、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含むアリール基を意味するために使用される。

【0050】

用語「ヘテロアリールカルボニル」は、本明細書において、ヘテロアリールカルボニル基を意味するために使用される。

【0051】

以下の図は、開示を説明するための好適な実施形態を提供するものであり、本発明の範囲を限定するものとして見なされるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】（５Ｒ，および５Ｓ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－５－エチル－８－ヒドラゾノ－３，１４－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール（ＣＯＭＰ）の一般構造である。

【図2】ヒト不死化正常（ＭＣＦ１０ａおよびＨＦＦ－１）および癌細胞株（Ｔ４７Ｄ，ＭＣＦ－７，ＭＤＡ－ＭＢ－２３１，ＭＤＡ－ＭＢ－４６８，ＳＫ－ＢＲ－３およびＨＣＣ１９３，ＯＣＶＡＲ，ＳＫＯＶ－３，ＳＫ－ＢＲ－３，ＩＧＲＯＶ－１およびＨｅＬａ，ＰＡＮＣ－１，ＭＩＡＰＡＣＡ，ＳＨＳＹ－５Ｙ，ＮＣＩ－Ｈ４６０，ＶＣａＰ，Ａ３７５，ＳＫＩ－ＭＥＬ－５およびＳＦ－２０８）のパネルにおけるＣＯＭＰの成長阻害効果を示す。ＩＣ５０値は、ＣＯＭＰで４８時間の処理後に、ＳＲＢアッセイで決定した。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）である。

【図3】４８時間の処理後にＳＲＢアッセイによって決定された、正常（ＭＣＦ１０ａおよびＨＦＦ１）細胞と比較した、卵巣およびトリプルネガティブ乳癌細胞に対するＣＯＭＰの成長阻害効果についての濃度－反応曲線の間の有意差を示す。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）である；ＤＭＳＯで得られた成長を１００％とした；正常細胞から得られた値は、癌細胞と有意に異なる；^＊＊＊Ｐ＜０．００１（一元配置分散分析およびその後のダネット検定）。

【図4】処理の８日後（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＩＧＲＯＶ－１）および１６日（ＨＣＣ１９３７）後の、（Ａ－Ｂ）癌細胞のコロニー形成に対するＣＯＭＰの効果を示す。Ａに、代表的な実験を示す。Ｂに、コロニー形成の定量化を示す；ＤＭＳＯで得られた成長を１００％とした；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）である；^＊Ｐ＜０．０５および^＊＊＊Ｐ＜０．００１は、ＤＭＳＯと有意に異なる（二元配置分散分析およびその後のシダック検定）。

【図5】ＣＯＭＰでの７２時間の処理後の、（Ａ－Ｂ）ＨＣＣ１９３７マンモスフェア形成に対する、ＣＯＭＰの効果を示す；処理は、最長１１日間の処理のために、ＨＣＣ１９３７細胞の播種時、または（Ｃ－Ｄ）３日齢のＨＣＣ１９３７マンモスフェアで行った。ＡおよびＣは、代表的な画像（スケールバー＝５０μｍ、１００×倍率）である。ＢおよびＤは、処理終了時のマンモスフェア領域を示す；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）；^＊Ｐ＜０．０５および^＊＊＊Ｐ＜０．００１は、ＤＭＳＯと有意に異なる（スチューデントｔ検定）。

【図6】トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞において、４８時間の処理後に、相同組換え、増殖および化学療法抵抗性に関与する重要なタンパク質の発現（Ａ－Ｂ）に対する、１２μＭのＣＯＭＰの効果を示す。Ａは、ウェスタンブロット分析によって検出された代表的な免疫ブロットを示す；ＧＡＰＤＨをローディングコントロールとして使用した。Ｂは、ＤＭＳＯに対するタンパク質発現レベルの定量化を示す；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）；^＊Ｐ＜０．０５は、ＤＭＳＯと有意に異なる（スチューデントｔ検定）。

【図7】６および１２μＭのＣＯＭＰが、（Ａ）細胞周期進行、（Ｂ）アポトーシス、および（Ｃ）ＲＯＳ生成に及ぼす影響を、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞において、４８時間の処理後に示す；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）；数値は、ＤＭＳＯと有意に異なる：^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊Ｐ＜０．００１（二元配置分散分析およびその後のダネット検定）。細胞周期の期を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用したフローサイトメトリーによって分析し、ＦｌｏｗＪｏソフトウエアを使用して定量化した。アポトーシスおよびＲＯＳは、それぞれ、ＦＩＴＣ－アネキシンＶ／ＰＩおよび２´，７´－ジクロロジヒドロフルオレセイン ジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ）を使用して、フローサイトメトリーによって分析した。

【図8】６および１２μＭのＣＯＭＰの、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞のＤＮＡ損傷に対する効果を示すものであり、４８時間の処理後に、コメットアッセイによって測定した。Ａは、代表的な画像である（スケールバー＝２０μｍ；２００×倍率）。Ｂは、テールＤＮＡの割合（テールに５％を超えるＤＮＡを有するコメット陽性細胞の割合）の定量化を示す。Ｃは、ＴｒｉＴｅｋ Ｃｏｍｅｔ ＳｃｏｒｅイメージングソフトウエアＶ２．０を使用したテールモーメント（テールの長さとテールのＤＮＡの％の積）の定量化を示す；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３－４；試料あたり２００細胞）；^＊Ｐ＜０．０５は、ＤＭＳＯと有意に異なる（二元配置分散分析およびその後のダネット検定）。

【図9】染色体ＤＲ－ＧＦＰアッセイを使用した、ＭＣＦ７ ＤＲ－ＧＦＰ細胞における相同的組換え活性に対する、４８時間の処理後の、２および６μＭのＣＯＭＰの効果を示す。７２時間の二本鎖切断誘導の後、ＭＣＦ７ ＤＲ－ＧＦＰ細胞をフローサイトメトリーによって分析し、ＧＦＰ陽性細胞の割合を定量化した。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４）；^＊Ｐ＜０．０５は、ＤＭＳＯと有意に異なる：（一元配置分散分析とその後のダネット検定）。

【図10】１２μＭのＣＯＭＰの、４８時間の処理後の、（Ａ）γＨ２ＡＸ発現レベルと、（Ｂ）γＨ２ＡＸおよびＲＡＤ５１病巣形成、ならびにＢＲＣＡ１病巣形成および細胞局在に対する効果と、を示す。Ａは、実施された３つの独立した実験のうちの１つの免疫ブロットを示す；ローディングコントロールとしてＧＡＰＤＨを使用した。Ｂは、Ｆｉｊｉソフトウエアを使用して作成された代表的な画像である（スケールバー＝１００μｍ；４００×倍率）。γＨ２ＡＸ（Ｃ）、ＲＡＤ５１（Ｄ）およびＢＲＣＡ１（Ｅ）の病巣形成の定量化；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３；試料あたり１００細胞）；^＊Ｐ＜０．０５は、ＤＭＳＯと有意に異なる（スチューデントｔ検定）。

【図11】トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞における、ＣＯＭＰによるＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊を示す。１２および２０μＭのＣＯＭＰで、１８時間（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＨＣＣ１９３７細胞において）および２４時間（ＩＧＲＯＶ－１細胞において）処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ａ）、ＨＣＣ１９３７（Ｂ）およびＩＧＲＯＶ－１（Ｃ）細胞において、（Ａ～Ｄ）Ｃｏ－ＩＰを実施した。Ｐｉｅｒｃｅ ｃｌａｓｓｉｃ ｍａｇｎｅｔｉｃ ＩＰおよびキットを使用してアッセイを行い、その後ウェスタンブロット検出を行った。Ａ～Ｃに、代表的な免疫ブロットを示す；全細胞ライセート（インプット）。Ｄは、ＤＭＳＯ（１として）に対するＢＡＲＤ１の定量化を示す；ＩＰからのＢＲＣＡ１を、ローディングコントロールとして使用した；データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）；^＊Ｐ＜０．０５はＤＭＳＯと有意に異なる（スチューデントｔ検定）。

【図12】ＣＯＭＰによるＨＣＣ１９３７細胞移動の防止を示す。コンフルエントな細胞を、１．９μＭのＣＯＭＰまたはＤＭＳＯで処理し、創傷治癒アッセイにおいて異なる時間ポイントで観察した（スケールバー＝５０μｍおよび倍率＝１００×）。

【図13】ＣＯＭＰが、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞を、シスプラチン（ＣＤＤＰ）およびオラパリブの効果に対して感作させることを示す。細胞を、ＣＤＤＰおよびオラパリブ単独の濃度で処理し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ａ）、ＨＣＣ１９３７（Ｂ）およびＩＧＲＯＶ－１（Ｃ）中の単一濃度のＣＯＭＰ（細胞の成長に有意な影響なし）と組み合わせて処理した。４８時間の処理後に、ＳＲＢアッセイで細胞増殖を測定した；コントロール（ＤＭＳＯ）で得た成長を１００％とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）；^＊Ｐ＜０．０５は、化学療法薬単独と有意に異なる（二元配置分散分析およびその後のシダック検定）。各併用処理に対する併用指数（ＣＩ）および用量減少指数（ＤＲＩ）は、ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウエアを使用して計算した（ＣＩ＜１、相乗効果；１＜ＣＩ＜１．１、相加効果；ＣＩ＞１．１、拮抗効果）；データは、６つの独立した実験の平均値効果を使用して計算した。

【図14】ＣＯＭＰのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す。ＩＧＲＯＶ－１細胞を担持する、Ｃ５７ＢＬ／６－Ｒａｇ２－／－ＩＬ２ｒｇ－／－異種移植マウスを、ビヒクル（コントロール）、または２ｍｇ／ｋｇのＣＯＭＰもしくは５０ｍｇ／ｋｇのオラパリブで、週３回腹腔内注射（計７回投与）によって処理した。触知可能な腫瘍が確立した時点で、処理を開始した（～１００ｍｍ３）。Ａは、ＣＯＭＰ、オラパリブまたはビヒクルで処理した異種移植マウスの、腫瘍量曲線を示す；各データポイントの腫瘍量を開始腫瘍量で除することによって、対照群と処理群に対する相対腫瘍量をプロットした；値は、ビヒクルと有意に異なる：^＊Ｐ＜０．０００１（チューキー多重比較検定による二元配置分散分析）。Ｂは、各条件下で処理中に測定されたマウスの体重を示しており、ビヒクル処理マウスとＣＯＭＰ処理マウスの体重間に有意差は認めなかった（ｐ＞０．０５；対応のないスチューデントｔ検定）。Ｃは、ＣＯＭＰまたビヒクルで処理した動物の脾臓、肝臓、心臓および腎臓の重量を示す。Ａ－Ｃでは、データは平均±ＳＥＭ、ｎ＝１３匹である。ＢおよびＣでは、値はビヒクルと有意差がない：Ｐ＞０．０５（チューキー多重比較検定による二元配置分散分析）。

【発明を実施するための形態】

【0053】

本開示は、ＢＲＣＡ－１および／またはＢＲＣＡ１－２経路の不活性化を介して、特にＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊およびＢＲＣＡ２活性の破壊によって、相同組換えＤＮＡ修復を阻害する化合物に関する。

【0054】

一実施形態では、本開示の化合物は、一般式（１）での、（５Ｒ，および５Ｓ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－５－エチル－８－ヒドラゾノ－３，１４－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール（ＣＯＭＰ）である。

【化2】

式中、
Ｒ^１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルから選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アロイル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールカルボニルから選択され；
Ｒ^３は、Ｈまたはエチルから選択され；
Ｒ^４は、Ｈまたはエチルから選択され；
Ｒ^５は、ＣＯＯＲ^６、ＣＨ２ＯＲ^６、ＣＯＮＲ^６Ｒ^７またはＣＨ_２ＮＲ^６Ｒ^７から選択され；ここで、
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールから選択され；
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールから選択され、
ＢＲＣＡ１／Ａ２媒介の相同組換えＤＮＡ修復経路において使用する。

【0055】

一実施形態では、５Ｒエピマーは、Ｒ^３はＨであり、Ｒ^４はエチルであることによって表される。

【0056】

一実施形態では、５Ｓエピマーは、Ｒ^３はエチルであり、Ｒ^４はＨであることによって表される。

【0057】

一実施形態では、化合物（５Ｒ，および５Ｓ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－５－エチル－８－ヒドラゾノ－３，１４－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドールの類似体は、ＤＮＡ修復経路およびＢＲＣＡ１／２の研究分野における分子プローブとして使用することができ、化学予防として、腫瘍形成を抑制し、または化学療法として、腫瘍の進行を抑制し、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、肺癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫を含むいくつかの癌の種類の播種を抑制する。この化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＤＮＡ修復阻害剤、特に相同組換え修復経路の、完全に新しい化学ファミリーを表し、抗癌剤として高い効力を有する。最も興味深いのは、ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊を介する、ＢＲＣＡ１阻害の新しい作用機序を提示し、癌細胞に対する高い選択性を有することである。さらに、本明細書において開示される化合物は、明らかな不所望な毒性副作用を有さない。全体として、この技術によって、抗癌療法と患者の生活の質が向上し、特に有効な治療法がまだ欠ける癌患者に対して、癌治療の恩恵を受けることができる癌患者を増やすことが可能である。

【0058】

好適な一実施形態では、メチル（５Ｒ，および５Ｓ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－５－エチル－８－ヒドラゾノ－３，１４－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドールは、ＢＲＣＡ１／２媒介のＤＮＡ修復に、特に相同的ＤＮＡ組換えに関連する状態の治療用に使用される。

【0059】

一実施形態では、本開示はまた、治療有効量の本開示の化合物を含み、薬学的に有効な担体を更に含む医薬組成物に関する。

【0060】

一実施形態では、本開示の化合物を含む医薬組成物は、化学療法剤を更に含む。

【0061】

実施形態では、本開示の化合物、または本開示の化合物を含む医薬組成物は、化学保護剤として使用することもできる。

【0062】

一実施形態では、本開示の化合物、または本開示の化合物を含む医薬組成物は、局所、経口、非経口または注射可能な経路を介して投与される。

【0063】

一実施形態では、ＣＯＭＰ「メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレート」は、アフリカの薬用植物、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｅｌｅｇａｎｓ（キョウチクトウ科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ））のアルカロイド画分から得られる天然物である、モノテルペン インドール アルカロイド ドレガミン（ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅ ｉｎｄｏｌｅ ａｌｋａｌｏｉｄ ｄｒｅｇａｍｉｎｅ）を、スキーム１にしたがって誘導体化することにより調製した。

【0064】

一実施形態では、ドレガミン（１ｍｍｏｌ）を、５－ブロモ－２－ヒドラジノピリジン（３ｍｍｏｌ）および触媒量の酢酸を含むＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶解した。混合物を還流下で２４時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合わせて乾燥した（Ｎａ_２ＳＯ_４）。溶媒を真空下４０℃で除去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（酸化アルミニウム、ｎ－ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２ １：０～１：１）により精製して化合物１を得た。
ＩＲ （ＮａＣｌ） ｖｍａｘ ３６０１， １７２８， １６３７ ｃｍ^－１；
ＨＲＴＯＦＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ ５４６．１４７３ ［Ｍ ＋ Ｎａ］ ＋ （ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ３０ＢｒＮ５Ｏ２Ｎａ， ５４６．１４８１）；
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．８８ （１Ｈ， ｓ， Ｎ－Ｈ）， ８．１５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， Ｈ－６′）， ７．６４ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ２．１ Ｈｚ， Ｈ－４′）， ７．５７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， Ｈ－９）， ７．２７ （１Ｈ， ｍ， Ｈ－１２）， ７．２２ （１Ｈ， ｍ， Ｈ－１１）， ７．１８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， Ｈ－３′） ７．０９ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， Ｈ－１０）， ３．９６ （１Ｈ， ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， ３．０ Ｈｚ， Ｈ－５）， ３．２０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １４．６， ８．３ Ｈｚ， Ｈ－６ａ）， ３．０１ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １４．６， ８．３ Ｈｚ， Ｈ－６ｂ）， ２．７５ （４Ｈ， ｍ， Ｈ－１４， Ｈ－１５， Ｈ－１６）， ２．６０ （３Ｈ， ｓ， －ＣＯＯＭｅ）， ２．５４ （３Ｈ， ｓ， Ｎ－Ｍｅ）， ２．５０ （１Ｈ， ｍ， Ｈ－２１ａ）， ２．４３ （１Ｈ， ｍ， Ｈ－２１ｂ）， １．８１ （１Ｈ， ｍ， Ｈ－２０）， １．４１ （２Ｈ， ｍ， Ｈ－１９）， １．０２ （３Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， Ｈ－１８） ｐｐｍ．
１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７１．１ （－ＣＯＯＭｅ）， １５５．６ （Ｃ－３）， １４８．１ （Ｃ－６′）， １４２．１ （Ｃ－２′）， １４０．５ （Ｃ－４′）， １３５．８ （Ｃ－１３）， １３３．０ （Ｃ－２）， １２９．８ （Ｃ－８）， １２４．２ （Ｃ－１１）， １１９．６ （Ｃ－１０）， １１８．８ （Ｃ－９）， １１４．２ （Ｃ－７）， １１０．５ （Ｃ－１２）， １０９．９ （Ｃ－５′）， １０９．２ （Ｃ－３′）， ５８．０ （Ｃ－５）， ５０．４ （－ＣＯＯＭｅ）， ４８．９ （Ｃ－１６）， ４８．２ （Ｃ－２１）， ４３．３ （Ｃ－２０）， ４２．５ （Ｎ－Ｍｅ）， ３２．１ （Ｃ－１４）， ３１．２ （Ｃ－１５）， ２４．０ （Ｃ－１９）， １９．８ （Ｃ－６）， １２．２ （Ｃ－１８） ｐｐｍ．

【0065】

スキーム１
試薬および条件：ｉ）ＭｅＯＨ中の５－ブロモ－２－ヒドラジノピリジン（３当量）、酢酸（触媒）、還流、２４時間。

【化3】

【0066】

【化4】

【0067】

【表1-1】

【表1-2】

【0068】

一実施形態では、化合物、メチル（５Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）－８－（２－（５－ブロモピリジン－２－イル）ヒドラジンイリデン）－５－エチル－３－メチル－２，３，４，５，６，７，８，９－オクタヒドロ－１Ｈ－２，６－メタノアゼシノ［５，４－ｂ］インドール－１４－カルボキシレート（ＣＯＭＰ；図１）は、異なるＢＲＣＡ１／２の状態（野生型、変異およびヘテロ接合性の喪失）を発現する腫瘍細胞の成長を阻害した。しかしながら、この化合物は、正常細胞に対する増殖抑制効果は、はるかに低い（表２、図２）。

【0069】

一実施形態では、ＣＯＭＰ化合物の活性を、ヒト正常細胞株および癌細胞株のアレイにおいて試験した（表２、図２）。化合物のＩＣ_５０（５０％の成長阻害を起こす化合物の濃度）値は、乳癌細胞（Ｔ４７Ｄ、ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３およびＨＣＣ１９３７）では、４．４μＭ～１２μＭの範囲であり、卵巣および子宮頸癌細胞（ＯＣＶＡＲ、ＳＫＯＶ－３、ＳＫ－ＢＲ－３、ＩＧＲＯＶ－１およびＨｅＬａ）では４．６～１３．９μＭ、膵臓癌細胞（ＰＡＮＣ－１およびＭＩＡＰＡＣＡ）では４．５μＭ、および神経芽細胞腫細胞（ＳＨＳＹ－５Ｙ）では４．５μＭであった（表２）。得られた結果は、乳癌（特にトリプルネガティブ乳癌）、卵巣癌、膵臓癌、神経芽細胞腫、肺癌、前立腺癌、皮膚癌、膠芽細胞腫を含む、個別のタイプの癌に対する化合物の有望な抗腫瘍活性を示した（表２、図２）。さらに、本化合物のＩＣ５０値は、正常なヒト細胞では、ＭＣＦ１０ａおよびＨＦＦ－１において各々２９．５および３３．６μＭのＩＣ５０値を示し、有意により高い（図３）。追加的に、患者由来の卵巣癌細胞に対するＣＯＭＰのＩＣ_５０値も評価し（表２）、２．６８μＭ～１５．１μＭの範囲であった。

【0070】

乳癌細胞および卵巣癌細胞に対するＣＯＭＰの有効性は、シスプラチン（ＣＤＤＰ、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌患者に臨床的に使用される）およびオラパリブ（変異ＢＲＣＡ１関連乳癌および卵巣癌に対して承認されている）と比較した場合に、証明される。さらに、ＣＤＤＰとは異なり、ＣＯＭＰの抗増殖効果は、癌細胞の選択性が高いと思われ、正常細胞に対する効果は明らかにより低い（表１）。重要なことに、ＣＯＭＰは、ＢＲＣＡ１の状態にかかわらず、検査したすべての癌細胞において、オラパリブよりもはるかに有効であることが示されている（表２）。

【0071】

表２は、ヒト不死化乳癌細胞（Ｔ４７Ｄ、ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３およびＨＣＣ１９３７）、卵巣および子宮頸癌細胞（ＯＣＶＡＲ、ＳＫＯＶ－３、ＳＫ－ＢＲ－３、ＩＧＲＯＶ－１およびＨｅＬａ）、膵臓癌細胞（ＰＡＮＣ－１およびＭＩＡＰＡＣＡ）、神経芽細胞腫細胞（ＳＨＳＹ－５Ｙ）、肺癌細胞（ＮＣＩ－Ｈ４６０）、前立腺癌細胞（ＶＣａＰ）、黒色腫細胞（Ａ３７５およびＳＫ－ＭＥＬ－５）および膠芽細胞腫細胞（ＳＦ－２０８）、不死化正常ＭＣＦ１０ａおよびＨＦＦ１ヒト細胞、ならびに患者由来の卵巣（ＰＤ－ＯＶＣＡ＃１、＃９、＃４１、＃４９および＃６２）癌細胞のパネルにおける、ＣＯＭＰ、オラパリブおよびシスプラチン（ＣＤＤＰ）の成長阻害効果を示す。半最大阻害濃度（ＩＣ５０）値は、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイまたはＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ ｏｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ （ＭＴＳ）アッセイによって、不死化またはＰＤ－ＯＶＣＡ細胞に対して各々、ＣＯＭＰでの４８時間の処理後に測定した。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）である。

【0072】

【表2】

【0073】

一実施形態では、ＩＣ_５０値は、不死化細胞およびＰＤ－ＯＶＣＡ細胞において各々、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）またはＭＴＳ［３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルフォフェニル）－２Ｈテトラゾリウム］アッセイによって決定した。癌細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、２４時間インキュベートした。その後、細胞を化合物の連続希釈液に４８時間曝露した。これらのアッセイで使用した最大濃度（０．０２５％）に相当する溶媒ＤＭＳＯは、コントロールとして含まれた。結果は、３～５回の独立した実験の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。

【0074】

一実施形態では、コロニー形成アッセイが実施された。トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞の生存性に対するＣＯＭＰの顕著な阻害効果は、コロニー形成アッセイによって更に実証された。ここでも、ＢＢＴＩ２０は、癌細胞のコロニー形成能力を有意に低下させた（図４Ａ～Ｂ）。

【0075】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、ＨＣＣ１９３７細胞から生成された３Ｄ－マンモスフェアモデルにおけるマンモスフェア形成を有意に阻害し、播種時に添加すると、６μＭでスフェロイド形成の完全な消滅をもたらした（図５Ａ～Ｂ）。さらに、６μＭおよび１２μＭのＣＯＭＰは、３日経過したスフェロイドにおけるマンモスフェアの成長を顕著に減少させ、１２μＭでマンモスフェアの崩壊を誘発した（図５Ｃ～Ｄ）。

【0076】

一実施形態では、ＣＯＭＰ化合物は、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞において、相同ＤＮＡ修復、増殖、化学療法抵抗性、誘導された細胞周期停止、アポトーシスおよびＲＯＳ生成に関与する重要なタンパク質の発現を調節した。１２μＭのＣＯＭＰは、ＤＮＡ損傷修復に関連するタンパク質、特にＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＲＡＤ５１、ＲＡＤ５２、ＦＡＮＣＤ２、ｐＡＴＭ、ｐＡＴＲの発現レベル、ならびに治療抵抗性に関連するタンパク質（すなわち、ＣＤＫ２、サバイビン、ＢＡＲＤ１、ＲＡＤ５１およびＦＡＮＤ２；図６Ａ～Ｂ）を有意に減少させたと示された。さらに、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞におけるＣＯＭＰ抗増殖効果は、４８時間の処理後に、Ｇ０／Ｇ１－（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において）、Ｓ－およびＧ２／Ｍ－（ＨＣＣ１９３７およびＩＧＲＯＶ－１細胞において）相（図７Ａ）での、細胞周期停止の誘導、およびｐ２１（図６Ａ～Ｂ）の発現増加と関連していたと示された。

【0077】

一実施形態では、ＣＯＭＰ処理細胞は、ＰＵＭＡおよび切断型ＰＡＲＰタンパク質発現レベル（図６Ａ～図６Ｂ）およびアネキシンＶ陽性細胞（図７Ｂ）の増加によって明らかなように、アポトーシス細胞死において有意な増加を示した。

【0078】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、ＣＯＭＰ処理癌細胞におけるＲＯＳ生成を、用量依存的に増加させる（図７Ｃ）。

【0079】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、相同組換えＤＮＡ修復を減少させ、ＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用を破壊した。６μＭおよび１２μＭのＣＯＭＰは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９３７およびＩＧＲＯＶ－１細胞において、特にテールＤＮＡ（図８ＡおよびＢ）およびテールモーメント（図８ＡおよびＣ）で、コメット陽性細胞の割合を有意に増加させた。ＣＯＭＰ処理細胞は、相同組換えに対して、２μＭおよび６μＭのＣＯＭＰで処理したＭＣＦ７ ＤＲ－ＧＦＰ癌細胞で観察されたように、相同組換えＤＮＡ修復能の顕著な低下を呈した（図９）。

【0080】

一実施形態では、１２μＭのＣＯＭＰは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９３７およびＩＧＲＯＶ－１細胞において、リン酸化（Ｓｅｒ１３９）ヒストンＨ２ＡＸ（γＨ２ＡＸ）の量（図１０Ａ）およびγＨ２ＡＸ陽性病巣形成数（図１０ＢおよびＣ）を増加させた。

【0081】

一実施形態では、ＲＡＤ５１病巣形成の著しい減少もまた、ＣＯＭＰ処理癌細胞における免疫蛍光分析によって観察できた（図１０ＢおよびＤ）。

【0082】

一実施形態では、１２μＭのＣＯＭＰは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９３７およびＩＧＲＯＶ－１細胞において、ＢＲＣＡ１の核細胞質転座（ｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）を誘発した（図１０ＢおよびＤ）。この結果は、１２および２０μＭのＣＯＭＰで処理した場合の、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１１ＡおよびＤ）、ＨＣＣ１９３７（図１１ＢおよびＤ）、およびＩＧＲＯＶ－１（図１１ＣおよびＤ）細胞におけるＢＲＣＡ１－ＢＡＲＤ１相互作用の破壊に起因する可能性がある。

【0083】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、トリプルネガティブ乳癌細胞の細胞遊走を防止した。ＨＣＣ１９３７細胞の遊走能に対するＣＯＭＰの効果も研究した。創傷治癒アッセイにおいて、１．９μＭ（細胞の生存性に有意な影響を与えない濃度）で、ＣＯＭＰは、ＨＣＣ１９３７細胞の創傷閉鎖を有意に減少させた（図１２）。

【0084】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、成長阻害効果の増強およびＣＯＭＰとＣＤＤＰまたはオラパリブとの間の有望な相乗効果（ＣＩ＜１）によって示されるように、トリプルネガティブ乳癌および卵巣癌細胞をＣＤＤＰおよびオラパリブの効果に対して感作させ、それに伴って、化学療法剤の有効用量を顕著に減少させる（図１３Ａ～Ｃ）。

【0085】

一実施形態では、ＣＯＭＰは、卵巣癌細胞の異種移植マウスモデルにおいて抗腫瘍活性を示した。異種移植マウスモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ研究は、２ｍｇ／ｋｇのＣＯＭＰを７回投与した後、ビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇのオラパリブ投与と比較して、ＩＧＲＯＶ－１腫瘍の成長が有意に阻害されることを示した（図１４Ａ）。追加的に、体重（図１４Ｂ）および臓器重量（図１４Ｃ）の有意な変化は、ビヒクルと比較して、ＣＯＭＰ処理マウスにおいて観察されなかった。

【0086】

【表3】

【0087】

本発明の好適な実施形態は、説明のために開示されてきた。しかしながら、当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、多様な変更、追加および置換が可能であることを理解するであろう。したがって、本発明は、上記の実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲とその均等範囲とによって定義される。

【0088】

本明細書で使用される用語「含む」は、記載の特徴、整数、工程、構成要素の存在を示すことを意図しているが、1つまたは複数の他の特徴、整数、工程、構成要素、またはそれらの群の存在または追加を排除するものではない。

【0089】

本明細書で別段の指示がない限り、記載された工程の特定の順序は例示にすぎず、本開示から逸脱することなく変更することができることが、当業者には理解されよう。したがって、特に明記しない限り、記載された工程は順序付けされておらず、可能であれば、工程は、任意の都合のよい、または望ましい順序で実施することができることを意味する。

【0090】

特に除外されない場合には、特許請求の範囲の記載において単数形の要素または特徴が使用される場合、複数形もまた含まれるものであり、逆もまた同様である。例えば、用語「化合物」または「前記化合物」は、複数形「化合物」または「前記化合物」も含み、逆もまた同様である。特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、１つまたは複数を意味することができる。群の１つまたは複数の要素間で、「または」を含む特許請求の範囲または記載は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、その群の要素の１つ、２つ以上、または全てが、所定のプロダクトまたはプロセスに存在し、採用され、または関連している場合に、満足するとみなされる。本発明はまた、群の要素の２つ以上、または全てが、所定のプロダクトまたはプロセスに存在し、採用され、または関連する実施形態を含む。

【0091】

さらに、本発明は、１つまたは複数の請求項から、または明細書の関連部分からの１つまたは複数の制限、要素、条項、記述用語などが別の請求項に導入される、全ての変形、組み合わせ、および置換を含むことを理解されたい。例えば、別の請求項を引用する請求項は、同じ基本となる請求項を引用する他の請求項に見られる１つまたは複数の限定を含むように変更することができる。

【0092】

さらに、特許請求の範囲に組成物が記載されている場合、別段の指示がない限り、または矛盾または不整合が生じることが当業者にとって明らかでない限り、本明細書に開示されている目的のいずれかのために組成物を使用する方法、および本明細書に開示されている作成方法のいずれかにしたがってこの組成物を作成する方法、または当該技術分野において既知の他の方法が含まれる、と理解されるべきである。

【0093】

範囲が与えられている場合は、終点が含まれる。さらに、別段の指示がない限り、または文脈および／または当業者の理解から明らかでない限り、また文脈上明らかにそうでない場合を除き、範囲として表された値は、本発明の異なる実施形態において記載された範囲内の任意の特定の値を、範囲の下限の単位の１０分の１まで想定できることが理解される。また、別段の指示がない限り、または文脈および／または当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表された値は、与えられた範囲内の任意のサブレンジを想定することができ、サブレンジの終点は、範囲の下限の単位の１０分の１と同じ程度の精度で表現されることが理解される。

【0094】

本開示は、記載された実施形態に限定されるとみなされるべきではない。当業者は、それらの変更に対する多くの可能性を予測するであろう。

【0095】

上述の実施形態は、組み合わせ可能である。

【0096】

以下の請求項は、本開示の特定の実施形態を更に記載する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【国際調査報告】