(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-23
(54)【発明の名称】固定化抗凝固剤を含む膜及び該膜を作るための方法
(51)【国際特許分類】
A61M 1/18 20060101AFI20231016BHJP
B01D 69/08 20060101ALI20231016BHJP
B01D 71/06 20060101ALI20231016BHJP
B01D 71/68 20060101ALI20231016BHJP
B01D 71/72 20060101ALI20231016BHJP
B01D 71/74 20060101ALI20231016BHJP
B01D 61/26 20060101ALI20231016BHJP
【ＦＩ】
A61M1/18 500
B01D69/08
B01D71/06
B01D71/68
B01D71/72
B01D71/74
B01D61/26
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023521861
(86)(22)【出願日】2021-10-04
(85)【翻訳文提出日】2023-06-05
(86)【国際出願番号】 EP2021077211
(87)【国際公開番号】W WO2022078785
(87)【国際公開日】2022-04-21
(31)【優先権主張番号】20201361.1
(32)【優先日】2020-10-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】501473877
【氏名又は名称】ガンブロ・ルンディア・エービー
【氏名又は名称原語表記】ＧＡＭＢＲＯ ＬＵＮＤＩＡ ＡＢ
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ベスリング，マティアス
(72)【発明者】
【氏名】アルダース，ミヒャエル
(72)【発明者】
【氏名】ローゼ，イルカ
(72)【発明者】
【氏名】カター，ミヒャエル
(72)【発明者】
【氏名】メンダ，ラルフ
(72)【発明者】
【氏名】クラウゼ，ベルント
(72)【発明者】
【氏名】シュトルアー，マルクス
(72)【発明者】
【氏名】レムプファー，マルティン
(72)【発明者】
【氏名】クルベル，ビビアン・シュテファン
【テーマコード（参考）】
4C077
4D006
【Ｆターム（参考）】
4C077AA05
4C077BB01
4C077KK05
4C077LL05
4C077LL23
4C077NN02
4C077PP07
4C077PP30
4D006GA06
4D006GA13
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4D006MB02
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4D006MC63X
4D006MC69X
4D006NA27
4D006NA28
4D006NA64
4D006NA75
4D006PA01
4D006PB09
4D006PC41
(57)【要約】
本開示は、血栓形成性の低下を示す、抗凝固剤被覆微多孔質中空繊維膜に関する。本開示はさらに、前記膜を製造する方法、並びに前記膜を含む濾過及び／又は拡散装置に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
その上に固定化された抗凝固剤を有する多孔質中空繊維膜であって、ｉ）ポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、ｉｉ）ポリビニルピロリドン、及びｉｉｉ）キトサンのブレンドを含む多孔質中空繊維膜。
【請求項2】
前記抗凝固剤がグリコサミノグリカンである、請求項１に記載の膜。
【請求項3】
前記抗凝固剤が未分画ヘパリンである、請求項２に記載の膜。
【請求項4】
多孔質中空繊維上の抗凝固剤の濃度が、１，０００～５，０００ＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項１～３のいずれか一項に記載の膜。
【請求項5】
膜の総重量に対し、０．１～５重量％のキトサンを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の膜。
【請求項6】
前記キトサンが、５～３７５ｋＤａの範囲の、ＧＰＣ分析によって決定される重量平均分子量Ｍｗを有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の膜。
【請求項7】
前記キトサンが、８５～９５％の範囲の脱アセチル化度を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の膜。
【請求項8】
その上に固定化された抗凝固剤を有する多孔質中空繊維膜を製造する方法であって、当該方法は、微多孔質中空繊維支持膜の製造及びその後の当該支持膜の少なくとも１つの表面に抗凝固剤をグラフト化することを含み、当該微多孔質中空繊維支持膜の製造が以下のステップ、すなわちａ） 少なくとも１種のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、少なくとも１種のポリビニルピロリドン、少なくとも１種のキトサン、及びＮ－メチル－２－ピロリドンを含むポリマー溶液を形成するステップ、
ｂ） ２つの同心円状の開口部を有するノズルの外輪スリットを通ってポリマー溶液を沈殿浴中に押し出すステップ、同時に
ｃ） ノズルの内側開口部から中心流体を押し出すステップ、
ｄ） 得られた膜を洗浄するステップ、その後
ｅ） 膜を乾燥させるステップ
を含み、ポリマー溶液が、ポリマー溶液の総重量に対して１０～１５重量％のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、及びポリマー溶液の総重量に対して１～１０重量％のポリビニルピロリドン、及び溶液の総重量に対して０．０５～０．６重量％のキトサンを含む、方法。
【請求項9】
前記キトサンが、７５％～１００％の脱アセチル化度及び５ｋＤａ～３７５ｋＤａの範囲の、ＧＰＣ分析によって決定される、重量平均分子量Ｍｗを有する、請求項６に記載の方法。
【請求項10】
前記ポリマー溶液を形成するステップが、キトサンを乳酸に溶解することを含む、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項11】
前記キトサンが乳酸の９０％ｗ／ｗ水溶液に溶解される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記抗凝固剤が、前記抗凝固剤の水溶液を前記支持膜の前記少なくとも１つの表面と接触させることによって、当該支持膜の当該少なくとも１つの表面にグラフト化される、請求項８～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記抗凝固剤が未分画ヘパリンである、請求項８～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
複数の多孔質中空繊維膜を含む濾過及び／又は拡散装置であって、当該多孔質中空繊維膜は請求項１～７のいずれか一項に記載の多孔質中空繊維膜である、濾過及び／又は拡散装置。
【請求項15】
血液透析、血液透析濾過、又は血液濾過における請求項１～７のいずれか一項に記載の多孔質中空繊維膜の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、血栓形成性が低下した抗凝固剤被覆微多孔質中空繊維膜に関する。本開示は、さらに、該膜を製造する方法並びに該膜を含む濾過及び／又は拡散装置に関する。
【背景技術】
【0002】
体外血液回路では、血液の凝固、すなわち微小血栓の形成及び血液凝固を防止するために全身性抗凝固が一般的に用いられる。ヘパリンは最も一般的に用いられる抗凝固剤である。ヘパリンを用いる全身抗凝固は出血リスクの増加と関連があり、ヘパリンはかなり高価である。したがって、ヘパリンを固定化する能力を有する膜は、ヘパリンの全身投与量の必要性を減少させるか、又は排除さえすることができるので、非常に望ましい。
【0003】
ＵＳ２００３／００２１８２６Ａ１は、本質的にアクリロニトリルと少なくとも１種のアニオン性又はアニオン化可能モノマーとのコポリマーから構成される半透性支持膜の表面への安定な方式での抗凝固剤の結合を提案する。抗凝固剤は、体外循環による治療中に血液又は血漿中に浸出することなくその抗凝固活性を発揮することができ、体外血液治療セッション中に患者において全身的に使用される抗凝固剤の量を低減することができる。血液又は血漿と接触するように意図された半透性支持膜の表面は、ポリアクリロニトリルのアニオン性又はアニオン化可能基とイオン結合を形成し得るカチオン性基を担持するカチオン性ポリマー、例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、及び前記カチオン性ポリマーのカチオン性基とイオン結合を形成し得るアニオン性基を担持する抗凝固剤（例えば、ヘパリン）で、連続して被覆される。
【0004】
ＵＳ５８４０１９０Ａは、表面改質生体適合性膜を開示する。この膜はポリスルホン、ポリビニルピロリドン及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）から構成される。膜の表面は、生物活性化合物及びカップリング剤と反応させることによって改質される。実施例では、カップリング剤としてシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて、亜硝酸によって部分的に分解されたヘパリンを膜表面に共有結合によりカップリングする。
【0005】
ＥＰ１０２４８８６Ａ１は、疎水性の支持膜上に親水性被覆層を有する複合膜の製造方法を開示し、ここで、疎水性の支持膜に反応剤の水溶液を含浸させて、疎水性の支持膜の表面上及び細孔内に反応剤を分散させ、親水性ポリマーを、親水性ポリマーと反応剤との間の反応により疎水性の支持膜上に薄く被覆させる。疎水性支持膜は、ポリスルホン又はポリエーテルイミドからなり、親水性ポリマーは、アルギン酸ナトリウム、キトサン又はポリビニルアルコールからなる。キトサンを親水性ポリマーとして用いる場合、反応剤は硫酸であり、水溶液中の反応剤の濃度は０．５～２０％の範囲である。
【0006】
ＵＳ１０５００５４９Ｂ２は、ポリスルホン及び少なくとも１種の孔形成親水性添加剤（これはポリビニルピロリドン、短鎖グリコール、トリエチレングリコール、プロピレングリコール、又はポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシドである）をベースとするベース膜、ベース膜上に配置され、ポリエチレンイミン、キトサン、ポリリシン、ポリアルギニン、又はポリオルニチンであるポリカチオン性結合剤の層から形成された官能性層、及び１５ｋＤａ～１ＭＤａの分子量（Ｍｗ）を有するデキストラン硫酸塩、３０ｋＤａ～７５０ｋＤａの分子量（Ｍｗ）を有する硫酸化キトサン、２０ｋＤａ～１ＭＤａの分子量（Ｍｗ）を有するの分子量（Ｍｗ）を有するセルロース硫酸塩、及びそれらの混合物から選択されるカルボキシル化多糖又は硫酸化多糖であるポリマーポリアニオンの別の層を含む多層複合透析膜を開示する。
【0007】
ＵＳ２０１９／０７６７８７Ａ１は、微多孔質中空繊維膜を形成するための方法を開示しており、これには、ポリマードープ溶液を、紡糸口金の外側のリング導管を通って押し出し、同時に、紡糸口金の内部中空コアに沈殿液を通すことが含まれる。ポリマードープ溶液は、ポリスルホン、ポリアリールスルホン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアクリロニトリル又はそれらのコポリマーから選択される膜形成ポリマー、及び任意にポリビニルピロリドン又はポリエチレングリコールのような親水性ポリマーを含む。沈殿液は、ポリウレタン、キトサン又は酸素含有部分を有する他のＮ－含有ポリマーのような限定された水溶性を有する添加剤を含む。キトサンを添加物として使用する場合は、キトサンは、酢酸、無水酢酸、乳酸、ギ酸、又はそれらの組合せなどの弱酸を用いて沈殿液に導入する前にプロトン化することができる。
【0008】
ＷＯ２０２０／１４４２４４Ａ１は、血栓形成性の低下を示す抗凝固剤被覆微多孔質中空繊維膜を開示する。この中空繊維膜は、ｉ）ポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、ｉｉ）ポリビニルピロリドン、及びｉｉｉ）アンモニウム基を有するポリビニルピリジン、及びビニルピリジンとアンモニウム基を有するスチレンとのコポリマーからなる群から選択されるアンモニウム基を有する少なくとも１種のポリマーのブレンドを含む。抗凝固剤は、膜の少なくとも１つの表面にグラフト化される。
【0009】
ＷＯ２００７／０６９９８３Ａ１は、病原微生物、炎症性細胞又は炎症性タンパク質を哺乳動物血液から体外除去するための方法に関する。この方法は、固体の基質上に固定化されたヘパリンを含む装置を使用する。調製例４は、アミノ化されたポリマー表面上へのヘパリンの共有結合的付着を開示する。このポリマー表面を酸化剤でエッチングし、続いてポリアミン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、又はキトサンで処理し、ヘパリンとのイオン架橋によりさらに安定化させる。
【0010】
Ｌｉｎｈａｒｄｔ、Ｒｏｂｅｒｔら、「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｐａｒｉｎ： Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、８巻、２号、２００８－０１－０１、ｐｐ．８０～１００は、ヘパリンの固定化に使用されてきた種々の技術及びこれらの固定化ヘパリンの用途を検討し、比較する。基質表面に存在する反応性基とヘパリン分子との間のリンカーとしてのキトサンの使用が開示される。ポリスルホン膜の表面をまずオゾンで処理し、次にＦｅＳＯ４を含むアクリル酸（ＡＡ）水溶液で処理して表面にカルボキシル基を生じ、キトサン分子を、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を用いて、このカルボキシル基にカップリングさせ、続いてヘパリンをグルタルアルデヒド（ＧＡ）を用いてキトサン分子に結合させた。
【0011】
現在では、ポリエーテルスルホン、ポリビニルピロリドン、及びキトサンを含む紡糸溶液から調製した膜上に、ヘパリンのような抗凝固剤を固定化することができることがわかっている。得られたヘパリン被覆微多孔質中空繊維膜は血栓形成性の低下を示す。ヘパリン被覆膜を含む濾過及び／又は拡散装置は、体外血液回路における全身抗凝固の必要性を減少させ、又は排除さえすることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0012】
【特許文献1】米国特許出願公開第２００３／００２１８２６号明細書
【特許文献2】米国特許第５８４０１９０号明細書
【特許文献3】欧州特許出願公開第１０２４８８６号明細書
【特許文献4】米国特許第１０５００５４９号明細書
【特許文献5】米国特許出願公開第２０１９／０７６７８７号明細書
【特許文献6】国際公開第２０２０／１４４２４４号
【特許文献7】国際公開第２００７／０６９９８３号
【非特許文献】
【0013】
【非特許文献1】Ｌｉｎｈａｒｄｔ、Ｒｏｂｅｒｔら、「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｐａｒｉｎ： Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、８巻、２号、２００８－０１－０１、ｐｐ．８０～１００
【発明の概要】
【0014】
本開示は、その上に固定化された抗凝固剤を有する多孔質中空繊維膜を提供する。この膜は、ｉ）ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、又はポルアリールエーテルスルホン、ｉｉ）ポリビニルピロリドン、及びｉｉｉ）キトサンを含む。また、本開示は、その上に固定化された抗凝固剤を有する前記多孔質中空繊維膜の製造方法を提供する。本開示は、さらに、その上に固定化された抗凝固剤を有する多孔質中空繊維膜を含む濾過及び／又は拡散装置を提供する。この濾過及び／又は拡散装置、例えば、血液透析装置は、例えば、血液透析、血液透析濾過、及び血液濾過における血液の体外処理に使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明の一態様では、その上に固定化された抗凝固剤を有する多孔質中空繊維膜が提供される。この膜は、ｉ）ポリスルホン（ＰＳＵ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳＵ）、又はポリアリールエーテルスル－ホン（ＰＡＥＳ）、ｉｉ）ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、及びｉｉｉ）キトサンのブレンドを含む。
【0016】
適切なポリスルホンの例には、約４０，０００～８０，０００Ｄａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）を有するポリスルホンが含まれる。一実施形態では、４５～６５ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリスルホンが使用される。一例は、５２ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）及び３．５の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリスルホンである。もう一つの例は、６０ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）及び３．７の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリスルホンである。
【0017】
適切なポリエーテルスルホンの例には、約４０，０００～１００，０００Ｄａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）を有するポリエーテルスルホンが含まれる。１実施形態では、５０～６０ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリエーテルスルホンが使用される。一例は、５８ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）及び３．３の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリエーテルスルホンである。別の実施形態では、６５～８０ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリエーテルスルホンが使用される。一例は、７５ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）及び３．４の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリエーテルスルホンである。さらに別の実施形態では、８０～１００ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリエーテルスルホンが使用される。一例は、９２ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ（ＧＰＣにより決定）及び３．０の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリエーテルスルホンである。
【0018】
適切なポリビニルピロリドンは、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有する、ビニルピロリドンのホモポリマーを含む。これらのホモポリマーは、一般に１４ｋＤａ～３７５ｋＤａの範囲の数平均分子量Ｍｎを有する。本発明の膜を調製するのに適したポリビニルピロリドンの例は、Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ３０、Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ９０、及びＬｕｖｉｔｅｃ（Ｒ）Ｋ９０ＨＭであり、全てＢＡＳＦ ＳＥから入手可能である。
【0019】
本開示の多孔質中空繊維膜の一実施形態は、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ、及び約２５０ｋＤａの数平均分子量Ｍｎを有するポリビニルピロリドンホモポリマーを含む。
【0020】
本開示の多孔質中空繊維膜のさらなる実施形態は、約１，４００ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ、及び約３２５ｋＤａの数平均分子量Ｍｎを有するポリビニルピロリドンホモポリマーを含む。
【0021】
キトサンは、ランダムに分布したβ－（１→４）結合Ｄ－グルコサミン（脱アセチル化単位）及びＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミン（アセチル化単位）から構成される直鎖多糖である。キトサンは、甲殻類（カニ及びエビなど）の外骨格及び菌類の細胞壁の構造要素であるキチンの脱アセチル化によって商業的に生産される。脱アセチル化度（％ＤＤ）はＮＭＲ分光法で決定でき、市販のキトサンの％ＤＤは６０～１００％の範囲である。商業的に生産されるキトサンの重量平均分子量Ｍｗは、一般に３ｋＤａ～４００ｋＤａの範囲である。
【0022】
本開示の多孔質中空繊維膜の一実施形態は、少なくとも７５％の脱アセチル化度を有する、すなわち、キトサンの水酸基の最大２５％がアセチル化されているキトサンを含む。別の実施形態は、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、又はさらに少なくとも９５％の脱アセチル化度を有するキトサンを含む。
【0023】
本開示の多孔質中空繊維膜の一実施形態は、５ｋＤａ～３７５ｋＤａの範囲、例えば、５０～１９０ｋＤａのＧＰＣ分析によって決定される重量平均分子量Ｍｗを有するキトサンを含む。
【0024】
一実施形態では、本開示の多孔質中空繊維膜は、多孔質中空繊維膜の総重量に対して０．１～５重量％のキトサンを含む。さらなる実施形態では、本開示の多孔質中空繊維膜は、多孔質中空繊維膜の総重量に対して０．５～３重量％のキトサンを含む。
【0025】
本開示の中空繊維膜は、対称の壁構造又は非対称の壁構造のいずれかを有する。一実施形態において、膜壁は対称の海綿構造を有する。別の実施形態では、膜壁は非対称の海綿構造を有し、すなわち、中空繊維壁の孔の大きさは、膜の内面から外面に向かって増大する。方法のさらに別の実施形態では、膜壁は非対称の壁構造を有し、指構造を有する層、すなわち体積等価直径が５μｍを超えるマクロボイドを特徴とする層を含む。
【0026】
一実施形態において、本開示の中空繊維膜は、１５０～２５０μｍ、例えば、１８０～２５０μｍの内径を有する。別の実施形態では、内径は１８５μｍ～１９５μｍの範囲にある。さらに別の実施形態では、内径は１９５μｍ～２０５μｍの範囲にある。さらに別の実施形態では、内径は２１０μｍ～２２０μｍの範囲にある。
【0027】
一実施形態において、中空繊維膜の壁厚さは、１５μｍ～６０μｍの範囲にある。一実施形態において、壁厚さは３３μｍ～３７μｍである。別の実施形態では、壁厚は３８～４２μｍである。さらに別の実施形態では、壁厚さは４３μｍ～４７μｍである。さらに別の実施形態では、壁厚さは４８μｍ～５２μｍである。
【0028】
一実施形態において、膜は、１．０のビタミンＢ１２について、１．０のイヌリンについて、少なくとも０．７のβ２－ミクログロブリンについて、及び０．０１未満のアルブミンについて、６０ｇ／ｌのタンパク質含量を有するウシ血漿中で、ＥＮ１２８３に従って３７℃で測定されたふるい係数を有する。
【0029】
一実施形態では、膜は、１０ｋＤａ～４０ｋＤａの範囲の全血中の分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有する。さらなる実施形態において、膜の選択的層における平均孔径は、２～５ｎｍの範囲である。
【0030】
一実施形態において、膜は、１０・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）～２８０・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）、例えば、１５・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）～１３０・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）、又は２０・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）～８０・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）の範囲にある水に対する透水率（Ｌｐ）を示す。
【0031】
本開示の中空繊維膜は、その表面にグラフト化された抗凝固剤を有する。一実施形態では、抗凝固剤は、中空繊維膜の管腔表面上にグラフト化される。別の実施形態では、抗凝固剤は、中空繊維膜の外面上にグラフト化される。さらに別の実施形態では、抗凝固剤は、中空繊維膜の管腔表面、外面、及び細孔チャネルの表面上にグラフト化される。抗凝固剤はプロトン化されたキトサンのアンモニウム基とイオン結合を形成する。抗凝固剤は、抗凝固活性を有するグリコサミノグリカン群の少なくとも１種の化合物を含み得、好ましくは、未分画ヘパリン、分画ヘパリン、ダナパロイド、ヘパリン誘導体、及び該生成物の混合物からなる群から選択される。一実施形態において、未分画ヘパリンが用いられる。堆積された抗凝固剤の表面濃度は、通常、１，０００～３０，０００ＩＵ／ｍ２の範囲、例えば、１，０００～１０，０００ＩＵ／ｍ２の範囲、又は１，０００～５，０００ＩＵ／ｍ２の範囲である。
【0032】
本開示はまた、本開示の複数の多孔質中空繊維膜を含む濾過及び／又は拡散装置を提供する。濾過及び／又は拡散装置は、血液の体外浄化のための装置、例えば、血液透析装置である。本開示の中空繊維膜を含む血液透析装置の表面積は様々であるが、通常、１．０～２．３ｍ２の範囲である。本開示の膜を含む血液透析装置は、当技術分野で知られているように組み立てることができる。
【0033】
装置の滅菌は、通常、蒸気滅菌、ガンマ線照射、又はＥＴＯの使用により行われる。一実施形態において、この装置は１２１℃の蒸気で少なくとも２０分間滅菌される。別の実施形態では、使用されるガンマ線量は２５～５０ｋＧｙの範囲、例えば、２５ｋＧｙである。さらに別の実施形態では、装置はＥＴＯで滅菌される。
【0034】
本開示はまた、血液透析、血液透析濾過、又は血液濾過における本開示の多孔質中空繊維膜の使用を提供する。
【0035】
本開示はまた、その表面にグラフト化された抗凝固剤を有する中空繊維膜を作製するための方法を提供する。この方法は、微多孔質中空繊維支持膜の製造、及びその後の支持膜の少なくとも１つの表面上への抗凝固剤のグラフト化を含む。
【0036】
一実施形態において、多孔質中空繊維支持膜は、以下のステップ、すなわち
ａ） 少なくとも１種のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、少なくとも１種のポリビニルピロリドン、少なくとも１種のキトサン、及びＮ－メチル－２－ピロリドンを含むポリマー溶液を形成するステップ、
ｂ） ２つの同心円状の開口部を有するノズルの外輪スリットを通ってポリマー溶液を沈殿浴中に押し出すステップ、同時に
ｃ） ノズルの内側の開口部から中心流体を押し出すステップ、
ｄ） 得られた膜を洗浄するステップ、その後
ｅ） 膜を乾燥させるステップ
を含み、ポリマー溶液が、ポリマー溶液の総重量に対して１０～１５重量％のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、及びポリマー溶液の総重量に対して１～１０重量％のポリビニルピロリドン、及び溶液の総重量に対して０．０５～０．６重量％のキトサンを含む連続的溶媒相反転紡糸方法によって製造される。
ａ） 少なくとも１種のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、少なくとも１種のポリビニルピロリドン、少なくとも１種のキトサン、及びＮ－メチル－２－ピロリドンを含むポリマー溶液を形成するステップ、
ｂ） ２つの同心円状の開口部を有するノズルの外輪スリットを通ってポリマー溶液を沈殿浴中に押し出すステップ、同時に
ｃ） ノズルの内側の開口部から中心流体を押し出すステップ、
ｄ） 得られた膜を洗浄するステップ、その後
ｅ） 膜を乾燥させるステップ
を含み、ポリマー溶液が、ポリマー溶液の総重量に対して１０～１５重量％のポリスルホン、ポリエーテルスルホン又はポリアリールエーテルスルホン、及びポリマー溶液の総重量に対して１～１０重量％のポリビニルピロリドン、及び溶液の総重量に対して０．０５～０．６重量％のキトサンを含む連続的溶媒相反転紡糸方法によって製造される。
【0037】
ポリマー溶液中のポリエーテルスルホンの濃度は、一般に１０～１５重量％、例えば、１２～１４重量％の範囲である。
【0038】
方法の一実施形態では、ポリマー溶液は、９０～９５ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリエーテルスルホンを含む。一例は、９２ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ及び３の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリエーテルスルホンである。別の実施形態では、ポリマー溶液は、７０～８０ｋＤａの範囲の重量平均分子量Ｍｗを有するポリエーテルスルホンを含む。一例は、７５ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗ及び３．４の多分散性Ｍｗ／Ｍｎを有するポリエーテルスルホンである。
【0039】
ポリマー溶液中のポリビニルピロリドンの濃度は、一般に１～１０重量％、例えば、２～８重量％の範囲である。
【0040】
前記方法の一実施形態では、ポリマー溶液は、１，１００ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗを有する１～５重量％のポリビニルピロリドンを含む。
【0041】
前記方法のさらなる実施形態では、ポリマー溶液は、５０ｋＤａの重量平均分子量Ｍｗを有する３～６重量％のポリビニルピロリドンを含む。
【0042】
前記方法の一実施形態では、ポリマー溶液は、溶液の総重量に対して、０．０５～０．６重量％、例えば、０．１～０．５重量％、又は０．２～０．４重量％のキトサンを含む。
【0043】
一実施形態では、キトサンは、７５％～１００％の脱アセチル化度、及び５ｋＤａ～３７５ｋＤａの範囲のＧＰＣによって決定される重量平均分子量を有する。
【0044】
特定の実施形態では、キトサンは、８５％～９５％、例えば、９０％の脱アセチル化の程度、及び５０ｋＤａ～１９０ｋＤａの範囲のＧＰＣ分析によって決定される重量平均分子量を有する。
【0045】
本方法の一実施形態では、ポリマー溶液の調製は、弱有機酸の水溶液にキトサンを溶解することによってキトサンの酸性水溶液を調製することを含む。一実施形態において、有機酸は乳酸である。さらなる実施形態において、乳酸の９０％ｗ／ｗ水溶液がキトサンを溶解するために使用される。別の実施形態では、有機酸はクエン酸である。さらに別の実施形態では、有機酸は酢酸である。さらに別の実施形態において、有機酸は酒石酸である。
【0046】
前記方法の別の実施形態では、ポリマー溶液の調製は、キトサンを純粋な乳酸に溶解することによってキトサンの酸性溶液を調製することを含む。
【0047】
乳酸は、酢酸、クエン酸、又は酒石酸のような他の弱い有機酸よりも有利であることがわかった。乳酸は室温で液体であるので、キトサン溶液を調製するために水を添加する必要はない。クエン酸を用いて製造されたポリマー溶液は、長期安定性に乏しく、ポリマー溶液を用いて製造された繊維は、紡糸方法で破損する傾向があることがわかった。水性酢酸中のキトサン溶液はポリビニルピロリドンの添加でゲルを形成し、ポリビニルピロリドンは水性酒石酸中のキトサン溶液に不溶である。
【0048】
一実施形態において、乳酸溶液中のキトサンの濃度は、０．２重量％～５重量％、例えば、１重量％～４重量％、又は１．５重量％～３重量％の範囲である。
【0049】
キトサン溶液をＮ－メチル－２－ピロリドンを混合し、ポリビニルピロリドンを加える。ポリビニルピロリドンが溶解した後、ポリエーテルスルホンを添加し、透明な溶液が形成されるまで混合物を撹拌する。
【0050】
一実施形態では、ポリマー溶液は、溶液の総重量に対して１～４重量％、例えば、１．５～３重量％の水を含む。別の実施形態では、ポリマー溶液は添加した水を含まない。
【0051】
膜を調製するための方法の一実施形態において、中心流体は、中心流体の総重量に対して、４０～６０重量％の水及び４０～６０重量％のＮＭＰ、例えば、５０～６０重量％の水及び４０～５０重量％のＮＭＰ、又は５２～５５重量％の水及び４５～４８重量％のＮＭＰ、例えば、５４重量％の水及び４６重量％のＮＭＰを含む。
【0052】
前記方法の一実施形態では、沈殿浴は水で構成される。方法の一実施形態では、沈殿浴は、１０～３０℃、例えば、１５～２５°の範囲の温度を有する。
【0053】
膜を調製するための方法の一実施形態では、紡糸口金の温度は、４０～６０℃、例えば、５２～５６℃の範囲である。
【0054】
前記方法の一実施形態では、ノズルの開口部と沈殿浴との間の距離は、１０～１２０ｃｍ、例えば、９０～１１０ｃｍの範囲である。
【0055】
前記方法の一実施形態では、紡糸速度は２０～８０ｍ／分、例えば、３０～５０ｍ／分の範囲である。
【0056】
その後、膜を洗浄して残留溶媒及び低分子量成分を除去する。膜を製造するための連続方法の特定の実施形態では、膜は、いくつかの水浴を通って導かれる。この方法の特定の実施形態では、個々の水浴は異なる温度を有する。例えば、各水浴は、先行する水浴よりも高い温度を有することができる。
【0057】
続いて、抗凝固剤を膜の少なくとも１つの表面にグラフト化する。一実施形態において、表面は膜の管腔表面、すなわち、その内壁表面である。別の実施形態では、表面は膜の外面、すなわちその外壁表面である。さらに別の実施形態では、内壁表面及び膜内の細孔チャネルの表面の両方に、抗凝固剤をグラフト化する。さらに別の実施形態では、外壁表面と膜内の細孔チャネルの表面の両方に、抗凝固剤をグラフト化する。さらに別の実施形態では、内壁表面、膜内の細孔チャネル、及び膜の外壁表面に、抗凝固剤をグラフト化する。
【0058】
抗凝固剤は膜表面に存在するアンモニウム基とイオン結合を形成する。抗凝固剤は、負に帯電した抗凝固剤と正に帯電した膜表面との間の静電相互作用によって膜表面に付着する。一実施形態において、抗凝固剤は抗凝固活性を有するグリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｅ）群の少なくとも１つの要素を含む。さらなる実施形態では、抗凝固剤は、未分画ヘパリン、分画ヘパリン、ダナパロイド、ヘパリン誘導体、及び該生成物の混合物からなる群から選択される。一実施形態において、抗凝固剤は未分画ヘパリンである。一実施形態において、グラフト化ステップ後の膜表面上の抗凝固剤の濃度は、１，０００～３０，０００ＩＵ／ｍ２の範囲、例えば、１，０００～１０，０００ＩＵ／ｍ２の範囲、又は１，０００～５，０００ＩＵ／ｍ２の範囲、例えば、１，５００～３，５００ＩＵ／ｍ２の範囲である。
【0059】
グラフト化は、抗凝固剤の水溶液を支持膜表面に接触させることによって行うことができる。一実施形態において、支持膜を抗凝固剤の水溶液で洗い流し、続いて水又は生理食塩水で洗浄して、過剰の抗凝固剤を除去する。別の実施形態では、支持膜を抗凝固剤の水溶液で洗い流し、続いて乾燥させて溶媒を蒸発させる。さらに他の実施形態では、支持膜は、中空繊維によって生成される毛細管力を利用して、抗凝固剤の水溶液に浸漬される。
【0060】
グラフト化は、膜が拡散及び／又は濾過装置に組み込まれる前又は後に行うことができる。換言すれば、グラフト化は、本開示の正電荷を有する多孔質中空繊維膜を含む拡散及び／又は濾過装置上でも行うことができる。例えば、正電荷を有する多孔質中空繊維膜の束を含む拡散及び／又は濾過装置、例えば、血液透析装置を、抗凝固剤の水溶液で洗い流して、グラフト化を行うことができ、その後、装置を水又は生理食塩水で洗浄して、過剰の抗凝固剤を除去する。別の実施形態では、装置を、抗凝固剤の水溶液で洗い流してグラフト化を行い、その後、装置内の膜を乾燥させ、溶媒を蒸発させる。
【0061】
グラフト化後、膜を後処理できる。後処理の例としては、ゆるく結合した抗凝固剤を除去するための膜の大がかりなすすぎ、膜を放射線処理して、抗凝固剤を膜中に存在する他のポリマーと架橋すること、膜の乾燥、膜を加熱することによって膜中に存在するポリマーのポリマー鎖を架橋することが挙げられる。
【0062】
したがって、本開示は、ヘパリンのような抗凝固剤で被覆された膜を製造するための簡単な方法を提供する。本開示の膜の利点は、ベース材料と抗凝固剤皮膜との間に中間層又は下塗り層が存在しないことであり、膜を作製するための方法は、このような下塗り層を形成するための追加のステップを必要としない。本開示の方法はまた、抗凝固剤を膜表面に共有結合によりカップリングするための追加の化学反応ステップを伴わず、その結果、さらなるカップリング剤の使用を伴わない。本開示は、ヘパリン被覆膜の低コストの製造のための簡単で拡大可能な手順を提供する。
【0063】
本開示の主題を、以下の実施例においてさらに記述する。
【0064】
方法
＜ミニモジュールの調製＞
ミニモジュール［＝ハウジング内の繊維］を、繊維を２０ｃｍの長さに切断し、繊維を４０℃及び１００ｍｂａｒ未満で１時間乾燥させ、その後繊維をハウジング内に移すことによって製造する。繊維の両端にはポリウレタンを埋め込む。ポリウレタンが硬化した後、埋め込んだ膜束の両端を切断して繊維を再び開く。ミニモジュールは、繊維の保護を保証する。本例では、３６０ｃｍ２の有効な膜（管腔）表面Ａを有するミニモジュールを使用した。
＜ミニモジュールの調製＞
ミニモジュール［＝ハウジング内の繊維］を、繊維を２０ｃｍの長さに切断し、繊維を４０℃及び１００ｍｂａｒ未満で１時間乾燥させ、その後繊維をハウジング内に移すことによって製造する。繊維の両端にはポリウレタンを埋め込む。ポリウレタンが硬化した後、埋め込んだ膜束の両端を切断して繊維を再び開く。ミニモジュールは、繊維の保護を保証する。本例では、３６０ｃｍ２の有効な膜（管腔）表面Ａを有するミニモジュールを使用した。
【0065】
＜ミニモジュールの透水率（Ｌｐ）＞
ミニモジュールの透水率は、一方の面が密封されたミニモジュールに、圧力をかけた規定量の水を押し込み、所要時間を測定することで求められる。透水率は、等式（１）に従い、決定した時間ｔ、有効膜表面積Ａ、加えた圧力ｐ及び膜Ｖを通過した水の体積から算出する。
Ｌｐ＝Ｖ／［ｐ・Ａ・ｔ］ （１）
ミニモジュールの透水率は、一方の面が密封されたミニモジュールに、圧力をかけた規定量の水を押し込み、所要時間を測定することで求められる。透水率は、等式（１）に従い、決定した時間ｔ、有効膜表面積Ａ、加えた圧力ｐ及び膜Ｖを通過した水の体積から算出する。
Ｌｐ＝Ｖ／［ｐ・Ａ・ｔ］ （１）
【0066】
有効膜表面積Ａは、等式（２）に従い、繊維の長さ及び繊維の内径から算出する。
Ａ＝π・ｄｉ・ｌ・［ｃｍ２］ （２）
ここで、
ｄｉ＝繊維の内径［ｃｍ］
ｌ＝有効繊維長［ｃｍ］
Ａ＝π・ｄｉ・ｌ・［ｃｍ２］ （２）
ここで、
ｄｉ＝繊維の内径［ｃｍ］
ｌ＝有効繊維長［ｃｍ］
【0067】
ミニモジュールは、Ｌｐ試験が実施される３０分前に湿らせる。この目的のために、ミニモジュールを５００ｍＬの超純水を入れた箱に入れる。３０分後、ミニモジュールを試験システムに移す。試験システムは、３７℃に維持される水浴及びミニモジュールを装着できる装置からなる。水浴の充填高さは、ミニモジュールが指定された装置の水面下に配置されるようにする必要がある。
【0068】
膜の漏れが誤った試験結果につながることを避けるため、ミニモジュール及び試験システムの完全性試験を予め実施する。完全性試験は、片側で閉じたミニモジュールに空気を押し込むことによって行われる。気泡はミニモジュール又は試験装置の漏れを示す。漏れが試験装置内のミニモジュールの誤った装着によるものか、膜が漏れているかを確認する必要がある。膜の漏れが検出された場合は、ミニモジュールを廃棄する必要がある。完全性試験で適用される圧力は、適用される圧力が高すぎるために透水率の決定中に漏れが発生することがないことを確実にするために、透水率の決定中に適用される圧力と少なくとも同じ値でなければならない。
【0069】
＜ミニモジュール中の中空繊維のヘパリン被覆＞
ｉ） ２００ＩＵ／ｍｌの濃度を有する、等張食塩水溶液（０．９％）中のヘパリン（ヘパリンナトリウム１９４ＩＵ／ｍｇ、Ｃｅｌｓｕｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、米国シンシナティ）の溶液を調製した。ミニモジュールの透析液側を閉じ、血液側から透析液側への濾過が起こらないようにした。２５ｍｌのヘパリン溶液をミニモジュールの血液側に通して３０分間流速１ｍｌ／分で再循環させた。被覆後、ミニモジュールをその後、２０ｍｌ／分の流速で、３００ｍｌの等張食塩水及び１００ｍｌの水ですすいだ。次いで、このモジュールを、ミニモジュールの血液側に圧縮空気を８０分間流すことによって乾燥させた。
ｉ） ２００ＩＵ／ｍｌの濃度を有する、等張食塩水溶液（０．９％）中のヘパリン（ヘパリンナトリウム１９４ＩＵ／ｍｇ、Ｃｅｌｓｕｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、米国シンシナティ）の溶液を調製した。ミニモジュールの透析液側を閉じ、血液側から透析液側への濾過が起こらないようにした。２５ｍｌのヘパリン溶液をミニモジュールの血液側に通して３０分間流速１ｍｌ／分で再循環させた。被覆後、ミニモジュールをその後、２０ｍｌ／分の流速で、３００ｍｌの等張食塩水及び１００ｍｌの水ですすいだ。次いで、このモジュールを、ミニモジュールの血液側に圧縮空気を８０分間流すことによって乾燥させた。
【0070】
ｉｉ） ２００ＩＵ／ｍｌの濃度を有する、超純水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ（Ｒ） Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ａ１０、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、独国ダルムシュタット）中のヘパリン（ヘパリンナトリウム１９４ＩＵ／ｍｇ、Ｃｅｌｓｕｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、米国シンシナティ）の溶液を調製した。ミニモジュールの透析液側を閉じ、血液側から透析液側への濾過が起こらないようにした。２５ｍｌのヘパリン溶液をミニモジュールの血液側に通して１２０分間流速１ｍｌ／分で再循環させた。被覆後、ミニモジュールをその後、２０ｍｌ／分の流速で３００ｍｌの等張食塩水及び１００ｍｌの水ですすいだ。次いで、このモジュールを、ミニモジュールの血液側に圧縮空気を８０分間流すことによって乾燥させた。
【0071】
＜固定化ヘパリンの定量測定＞
３．８４ｇ／ｌのグリシン（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、独国ダルムシュタット）、２．８ｇ／ｌのＮａＣｌ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、独国ダルムシュタット）及び水からグリシン緩衝液を調製した。ｐＨは３０％ ＮａＯＨ溶液（ＶＷＲ、独国ダルムシュタット）で１１±０．１に調整した。ミニモジュールを流速２．３ｍｌ／分でこのグリシン緩衝液ですすいだ。１０分後、ミニモジュールは完全に空になった。１０分後の抽出物から試料を採取し、Ａｚｕｒｅ Ａアッセイを用いて試料中のヘパリン濃度を決定した。
３．８４ｇ／ｌのグリシン（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、独国ダルムシュタット）、２．８ｇ／ｌのＮａＣｌ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、独国ダルムシュタット）及び水からグリシン緩衝液を調製した。ｐＨは３０％ ＮａＯＨ溶液（ＶＷＲ、独国ダルムシュタット）で１１±０．１に調整した。ミニモジュールを流速２．３ｍｌ／分でこのグリシン緩衝液ですすいだ。１０分後、ミニモジュールは完全に空になった。１０分後の抽出物から試料を採取し、Ａｚｕｒｅ Ａアッセイを用いて試料中のヘパリン濃度を決定した。
【0072】
Ａｚｕｒｅ Ａは、ヘパリンなどの硫酸化多糖に結合すると青色から紫赤色に変色する青色の異染性色素である。この色変化を６３０ｎｍの波長で測光法で測定する。ヘパリン濃度は、０ｍｇ／Ｌ～１２ｍｇ／Ｌのヘパリンの濃度範囲を包含する標準曲線に基づいて決定した。ヘパリンの既知濃度が１．２ｍｇ／ｌ、６ｍｇ／ｌ及び１０．８ｍｇ／ｌの対照試料を毎回同時に測定した。マイクロプレートウェル内の標準試料、対照試料及び測定試料１００μｌに、２５ｍｇ／ｌのＡｚｕｒｅ Ａの濃度を有する２００μｌのＡｚｕｒｅ Ａ水溶液（色素含有率 約８０％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、独国シュタインハイム）をそれぞれ添加した。マイクロプレートを暗所で１５分間保存した後、マイクロプレート光度計（ＥＬ ８０８ Ｕｌｔｒａ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、米国ウィノースキ）を用いて測定を行った。
【0073】
＜ヘパリン放出の決定＞
まず、ミニモジュールを３７℃で約１５０ｍｌの等張食塩水（０．９％）ですすいだ。次に、４５～７０ｇ／ｌのヒト血漿タンパク質、４．４～７．４ｇ／ｌのクエン酸ナトリウム二水和物、０．３～１．２ｇ／ｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び４．０～６．０ｇ／ｌのグリシンを含み、少なくとも０．５ＩＵ／ｍｌの凝固因子活性を示し（Ｏｃｔａｐｌａｓ（Ｒ） ＬＧ、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｋａ Ｐｒｏｄｕｋｔｉｏｎｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍＢＨ、Ａ－１１００オーストリア、ウィーン）を示す溶媒／界面活性剤処理したプールヒト血漿３０ｍｌのリザーバーを、流速９ｍｌ／分で１２０分間ミニモジュールに通して再循環させた。試料を０分、６０分、１２０分で採取した。ヘパリン抗Ｘａ発色アッセイ（Ｓｔａｃｈｒｏｍ（Ｒ） Ｈｅｐａｒｉｎ、Ｓｔａｇｏ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、４０４７４独国ドュッセルドルフ）を用いて、試料中のヘパリン濃度を決定した。
まず、ミニモジュールを３７℃で約１５０ｍｌの等張食塩水（０．９％）ですすいだ。次に、４５～７０ｇ／ｌのヒト血漿タンパク質、４．４～７．４ｇ／ｌのクエン酸ナトリウム二水和物、０．３～１．２ｇ／ｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び４．０～６．０ｇ／ｌのグリシンを含み、少なくとも０．５ＩＵ／ｍｌの凝固因子活性を示し（Ｏｃｔａｐｌａｓ（Ｒ） ＬＧ、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｋａ Ｐｒｏｄｕｋｔｉｏｎｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍＢＨ、Ａ－１１００オーストリア、ウィーン）を示す溶媒／界面活性剤処理したプールヒト血漿３０ｍｌのリザーバーを、流速９ｍｌ／分で１２０分間ミニモジュールに通して再循環させた。試料を０分、６０分、１２０分で採取した。ヘパリン抗Ｘａ発色アッセイ（Ｓｔａｃｈｒｏｍ（Ｒ） Ｈｅｐａｒｉｎ、Ｓｔａｇｏ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、４０４７４独国ドュッセルドルフ）を用いて、試料中のヘパリン濃度を決定した。
【0074】
＜血液適合性の判定＞
膜の血液適合性を、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＰＲＰ（μｌ当たり１００，０００個の血小板を含む血小板に富むヒト血漿）によるミニモジュールの潅流によって調べた。
膜の血液適合性を、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＰＲＰ（μｌ当たり１００，０００個の血小板を含む血小板に富むヒト血漿）によるミニモジュールの潅流によって調べた。
【0075】
まず、ミニモジュールの血液側を３７℃で約２５０ｍｌの等張食塩水溶液（０．９％）ですすいだ後、ミニモジュールの濾液側を３７℃で約１２０ｍｌの等張食塩水（０．９％）ですすぎ、続いてストッパーで閉じた。０．０５ＩＵ／ｍｌのヘパリンを含む５０ｍｌのＰＲＰのリザーバーを、流速９ｍｌ／分で１２０分間ミニモジュールに通して再循環させた。０分、１０分、２０分、４０分、６０分、９０分、１２０分で、４５０μｌ容量の２つの試料を採取した。いずれの場合も、５０μｌの１０重量％のクエン酸三ナトリウム溶液を含むマイクロチューブ（Ｍｉｃｒｏ Ｔｕｂｅ １，５ｍｌ ＥＡＳＹ ＣＡＰ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＡＧ ＆ Ｃｏ． ＫＧ、独国ニュンブレヒト）に２つの試料のうち１つを移し、試料のさらなる凝固を阻害し、氷浴中に保存した。もう一方の試料は、５０μｌのＣＴＡＤ（クエン酸－テオフィリン－アデノシン－ジピリダモール）溶液を含むマイクロチューブ（Ｍｉｃｒｏ Ｔｕｂｅ １，５ｍｌ ＥＡＳＹ ＣＡＰ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＡＧ ＆ Ｃｏ． ＫＧ、独国ニュンブレヒト）に移し、試料のさらなる凝固を阻害し、氷浴中に保存した。
【0076】
＜血小板液低下の決定＞
血漿試料の血小板含有量を細胞計数システム（ＸＰ－３００、Ｓｙｓｍｅｘ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、独国２２８４８ノルデルシュテット）を用いて分析した。開始濃度１００．０００ＴＨＲ／μＬ（１００％に相当）に対するデータを示す。
血漿試料の血小板含有量を細胞計数システム（ＸＰ－３００、Ｓｙｓｍｅｘ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、独国２２８４８ノルデルシュテット）を用いて分析した。開始濃度１００．０００ＴＨＲ／μＬ（１００％に相当）に対するデータを示す。
【0077】
＜ＰＦ－４の決定＞
ヒト血小板第４因子（ＰＦ－４）の形成を、サンドイッチ酵素連結免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ａｓｓｅｒａｃｈｒｏｍ（Ｒ） ＰＦ４、Ｓｔａｇｏ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、独国４０４７４ドュッセルドルフ）により調べた。
ヒト血小板第４因子（ＰＦ－４）の形成を、サンドイッチ酵素連結免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ａｓｓｅｒａｃｈｒｏｍ（Ｒ） ＰＦ４、Ｓｔａｇｏ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、独国４０４７４ドュッセルドルフ）により調べた。
【0078】
解凍後、ＣＴＡＤを含む分注した血漿試料をヒト血漿で希釈した。希釈係数は１：５０であった。標準試料（２～６０μｇ／ｌ）、対照試料及び希釈用血漿を２回分析したが、試料の単回測定で十分であった。５０μｌの希釈液及び５０μｌの試料をマイクロプレートのウェルに移し、ＰＦ－４をマイクロプレート上の抗体に結合させた。洗浄プロセス後、２番目の酵素コンジュゲート抗体１００μｌを添加し、３０分間のインキュベーション後に洗浄して除去した。３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）との反応を４５０ｎｍで測光法で（ＥＬ ８０８ Ｕｌｔｒａ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、米国ウィノースキ）測定した。
【0079】
＜ヒトＴＡＴ複合体の決定＞
サンドイッチ酵素連結免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ｅｎｚｙｇｎｏｓｔ（Ｒ） ＴＡＴ ｍｉｃｒｏ， Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＧｍｂＨ、独国）を用いて、ヒト血漿中のトロンビン－アンチトロンビンＩＩＩ複合体（ＴＡＴ）を定量決定することにより、膜表面による凝固の活性化を試験した。
サンドイッチ酵素連結免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ｅｎｚｙｇｎｏｓｔ（Ｒ） ＴＡＴ ｍｉｃｒｏ， Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＧｍｂＨ、独国）を用いて、ヒト血漿中のトロンビン－アンチトロンビンＩＩＩ複合体（ＴＡＴ）を定量決定することにより、膜表面による凝固の活性化を試験した。
【0080】
解凍後、クエン酸三ナトリウムを含む分注した血漿試料をヒト血漿で希釈した。希釈係数は、期待されたＴＡＴ濃度に応じて選択し、１：１～１：４０の間で変化させた。標準試料（２～６０μｇ／Ｌの範囲）、対照試料及び希釈用血漿を２回分析したが、試料の単回測定で十分であった。５０μｌの希釈液及び５０μｌの試料をマイクロプレートのウェルに移し、ＴＡＴ複合体をマイクロプレート上の抗体に結合させた。洗浄プロセス後、２番目の酵素コンジュゲート抗体１００μｌを添加し、３０分間のインキュベーション後に洗浄して除去した。色素原の添加によって起こる酵素反応を、１時間以内に４９０ｎｍで測光法で（ＥＬ ８０８ Ｕｌｔｒａ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、米国ウィノースキ）測定した。
【実施例】
【0081】
［比較例１］
ミニモジュールを、市販の透析装置（Ｒｅｖａｃｌｅａｒ（Ｒ）、Ｇａｍｂｒｏ Ｌｕｎｄｉａ ＡＢ）から採取した繊維を用いて作製した。繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有し、ポリアリールエーテルスルホンとポリビニルピロリドンとのブレンドから構成される。
ミニモジュールを、市販の透析装置（Ｒｅｖａｃｌｅａｒ（Ｒ）、Ｇａｍｂｒｏ Ｌｕｎｄｉａ ＡＢ）から採取した繊維を用いて作製した。繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有し、ポリアリールエーテルスルホンとポリビニルピロリドンとのブレンドから構成される。
【0082】
膜の血液適合性を上で記載したように調べた。９０分後、凝固が認められた。凝固により、実験は１１０分後に終了した。血小板低下、ＰＦ－４の形成及びヒトＴＡＴ複合体を上で記載したように決定した。結果を表１に要約する。
【0083】
【表1】
【0084】
［比較例２］
市販の透析装置（Ｅｖｏｄｉａｌ（Ｒ）、Ｇａｍｂｒｏ Ｌｕｎｄｉａ ＡＢ）から採取した繊維を、６０重量％のグリセロール及び４０重量％の水の混合液で、１００ｍｌ／分で６０分間再循環させて洗浄し、圧縮空気で２時間乾燥させたものを用いて、ミニモジュールを作製した。繊維は２１０μｍの内径及び４２μｍの壁厚さを有し、ポリエチレンイミンでグラフトしたアクリロニトリルとメタリルスルホン酸ナトリウムとのコポリマーで構成され、３，０００ＩＵ／ｍ２の未分画ヘパリンで被覆されている。
市販の透析装置（Ｅｖｏｄｉａｌ（Ｒ）、Ｇａｍｂｒｏ Ｌｕｎｄｉａ ＡＢ）から採取した繊維を、６０重量％のグリセロール及び４０重量％の水の混合液で、１００ｍｌ／分で６０分間再循環させて洗浄し、圧縮空気で２時間乾燥させたものを用いて、ミニモジュールを作製した。繊維は２１０μｍの内径及び４２μｍの壁厚さを有し、ポリエチレンイミンでグラフトしたアクリロニトリルとメタリルスルホン酸ナトリウムとのコポリマーで構成され、３，０００ＩＵ／ｍ２の未分画ヘパリンで被覆されている。
【0085】
膜の血液適合性は上で記載したように調べた。血小板低下、ＰＦ－４の形成及びヒトＴＡＴ複合体を上で記載したように決定した。結果を表２に要約する。
【0086】
【表2】
【0087】
＜ポリマー溶液の調製＞
４，５００ｇ（＝１００％ ｗ／ｗ）のポリマー溶液に対して、１１．２５ｇ（０．２５％ ｗ／ｗ）のキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）を乳酸の９０％ｗ／ｗ水溶液（ＧＰＲ Ｒｅｃｔａｐｕｒ（Ｒ）、ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ、独国６４２９５ダルムシュタット）７２０ｇ（１６％ ｗ／ｗ）に溶解した。このキトサン溶液を３，０４８．７５ｇ（６７．７５％ ｗ／ｗ)のＮ－メチル－２－ピロリドンと混合し、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有するポリビニルピロリドン（Ｌｕｂｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）９０．００ｇ（２％ ｗ／ｗ）を添加した。ポリビニルピロリドンが溶解した後、ポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）６３０．００ｇ（１４％ ｗ／ｗ）を加え、透明な溶液が形成されるまで混合物を撹拌した。また、ＰＶＰ及びポリエーテル－スルホンをＮＭＰに溶解した後、第２ステップでキトサンの乳酸溶液を加えることも可能である。
４，５００ｇ（＝１００％ ｗ／ｗ）のポリマー溶液に対して、１１．２５ｇ（０．２５％ ｗ／ｗ）のキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）を乳酸の９０％ｗ／ｗ水溶液（ＧＰＲ Ｒｅｃｔａｐｕｒ（Ｒ）、ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ、独国６４２９５ダルムシュタット）７２０ｇ（１６％ ｗ／ｗ）に溶解した。このキトサン溶液を３，０４８．７５ｇ（６７．７５％ ｗ／ｗ)のＮ－メチル－２－ピロリドンと混合し、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有するポリビニルピロリドン（Ｌｕｂｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）９０．００ｇ（２％ ｗ／ｗ）を添加した。ポリビニルピロリドンが溶解した後、ポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）６３０．００ｇ（１４％ ｗ／ｗ）を加え、透明な溶液が形成されるまで混合物を撹拌した。また、ＰＶＰ及びポリエーテル－スルホンをＮＭＰに溶解した後、第２ステップでキトサンの乳酸溶液を加えることも可能である。
【0088】
［実施例１］
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン溶液（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．２５％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．７５％のＮＭＰの溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから、水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内部オリフィスから押し出した。紡糸口金の温度は４８℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン溶液（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．２５％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．７５％のＮＭＰの溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから、水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内部オリフィスから押し出した。紡糸口金の温度は４８℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
【0089】
得られた繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有していた。膜は非対称海綿構造を示し、平均孔径は内壁表面から外壁表面に向かう方向に増大した。
【0090】
上で記載したようにミニモジュールを作製し、上で記載したように繊維の透水率を試験した。ミニモジュールのＬｐを（４５±５）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）と決定した（ｎ＝２）。
【0091】
多くのミニモジュールを１２１℃で２０分間蒸気で滅菌した。滅菌後、ミニモジュールのＬｐを（７０±３）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）（ｎ＝２）と決定した。滅菌膜のふるい係数はミオグロビンに対し（３１±１）％、アルブミンに対し（０．７±０．１）％であった（ｎ＝２）。
【0092】
上記の手順ｉ）に従い、３つのミニモジュールの膜をヘパリンで被覆し、膜上に固定化されたヘパリンの量を上で記載したように決定した。１０分間の抽出後、各ミニモジュール（ｎ＝３）から（９２±４）ＩＵのヘパリンを抽出した。
【0093】
３つのミニモジュール（ｎ＝３）からのヘパリン放出を、上で記載したように試験した。０分時の血漿中ヘパリン濃度は検出限界（＜０．１ＩＵ／ｍｌ）を下回っていた。６０分間の抽出後、血漿試料中のヘパリン濃度は、第１及び第２のミニモジュールでは検出限界（＜０．１ＩＵ／ｍｌ）を下回り、第３のミニモジュールでは０．１ＩＵ／ｍｌであった。１２０分の抽出後、血漿試料中のヘパリン濃度は、第１及び第３のミニモジュールでは検出限界（＜０．１ＩＵ／ｍｌ）を下回り、第２のミニモジュールでは０．３ＩＵ／ｍｌであった。
【0094】
ヘパリン被覆ミニモジュールのＬｐを（６５±２）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）（ｎ＝３））と決定した。ヘパリン被覆膜のふるい係数は、ｍｙ‐オグロビンに対し（３３±１）％、アルブミンに対し（０．８±０．１）％であった（ｎ＝３）。
【0095】
［実施例２］
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．２５％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．７５％ ｗ／ｗのＮＭＰの溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：７００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内部オリフィスから押し出した。紡糸口金の温度は４９℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を３０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．２５％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．７５％ ｗ／ｗのＮＭＰの溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：７００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内部オリフィスから押し出した。紡糸口金の温度は４９℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を３０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
【0096】
得られた繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有していた。膜は非対称海綿構造を示し、平均孔径は内壁表面から外壁表面に向かう方向に増大した。
【0097】
上で記載したようにミニモジュールを作製し、上で記載したように繊維の透水率を試験した。ミニモジュールのＬｐを（４４±１）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）と決定した（ｎ＝３）。膜のふるい係数は、ミオグロビンに対し（３１±０．５）％、アルブミンに対し（１．５±０．０）％であった（ｎ＝３）。
【0098】
多くのミニモジュールを１２１℃で２０分間蒸気で滅菌した。滅菌後、ミニモジュールのＬｐを（８２±４）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）（ｎ＝３）と決定した。滅菌膜のふるい係数はミオグロビンに対し（３９±２）％、アルブミンに対し（１．７±０．１）％であった（ｎ＝３）。
【0099】
ミニモジュールの膜を前記の手順ｉ）に従ってヘパリンで被覆し、膜の血液適合性を上で記載したように調べた。血小板低下、ＰＦ－４の形成及びヒトＴＡＴ複合体を上で記載したように決定した。結果を表３に要約する。
【0100】
【表3】
【0101】
［実施例３］
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．１％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．９％のＮＭＰを、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内口から押し出した。紡糸口金の温度は４９℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、続いて、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．１％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．９％のＮＭＰを、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外輪スリットから水を入れた凝固浴中に押し出した。５０％ ｗ／ｗの水及び５０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内口から押し出した。紡糸口金の温度は４９℃であり、紡糸シャフトの温度は４５℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、続いて、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
【0102】
得られた繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有していた。膜は非対称海綿構造を示し、平均孔径は内壁表面から外壁表面に向かう方向に増大した。
【0103】
ミニモジュールのＬｐを（７３±１）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）であった（ｎ＝３）。蒸気滅菌後、ミニモジュールのＬｐは（９１±１）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）であった（ｎ＝２）。滅菌膜のふるい係数は、ミオグロビンに対し（４４±１）％、アルブミンに対し（０．８±０．０）％であった（ｎ＝２）。
【0104】
上記の手順ｉｉ）に従って、３つのミニモジュールの膜をヘパリンで被覆し、膜上に固定化されたヘパリンの量を上で記載したように決定した。１０分間の抽出後、各ミニモジュール（ｎ＝３）から（４３±２）ＩＵのヘパリンを抽出した。
【0105】
ヘパリンで被覆したミニモジュールのＬｐを（８２±２）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）と決定した（ｎ＝２）。ヘパリンで被覆した膜のふるい係数は、ミオグロビンに対し（４２±１）％、アルブミンに対し（０．８±０．０）％であった（ｎ＝２）。
【0106】
［実施例４］
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．４％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．６％ ｗ／ｗのＮＭＰの溶液を調製した。ポリマー溶液の粘度を低下させるために、ポリマー溶液の総重量に対して３０重量％のＮＭＰを添加した。希釈したポリマー溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外側リングスリットから水を含む凝固浴中に押し出した。６０％ ｗ／ｗの水及び４０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内側開口部から押し出した。紡糸口金の温度は４５℃であり、紡糸シャフトの温度は４２℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
約７５ｋＤａの重量平均分子量を有する１４．０％ ｗ／ｗのポリエーテルスルホン（Ｕｌｔｒａｓｏｎ（Ｒ） Ｅ ６０２０、ＢＡＳＦ ＳＥ）、約１，１００ｋＤａの重量平均分子量を有する２．０％ ｗ／ｗのＰＶＰ（Ｌｕｖｉｔｅｃ（Ｒ） Ｋ８５、ＢＡＳＦ ＳＥ）、０．４％ ｗ／ｗのキトサン（キトサン９０／１００／Ａ１、Ｋｒａｅｂｅｒ ＆ Ｃｏ ＧｍｂＨ、独国２５４７４エレルベック）、１４．４％ ｗ／ｗの乳酸、１．６％の水及び６７．６％ ｗ／ｗのＮＭＰの溶液を調製した。ポリマー溶液の粘度を低下させるために、ポリマー溶液の総重量に対して３０重量％のＮＭＰを添加した。希釈したポリマー溶液を、２つの同心円状の開口部（リングスリットの外側境界直径：５００μｍ、リングスリットの内側境界直径：３５０μｍ、中心孔の直径：１８０μｍ）を有する紡糸口金の外側リングスリットから水を含む凝固浴中に押し出した。６０％ ｗ／ｗの水及び４０％ ｗ／ｗのＮＭＰを含む溶液を中心流体として用い、紡糸口金の内側開口部から押し出した。紡糸口金の温度は４５℃であり、紡糸シャフトの温度は４２℃であり、エアギャップは１００ｃｍであり、凝固浴は室温であった。繊維を４０ｍ／分の速度で紡糸した。繊維を、５０℃～７５℃の範囲の温度で、脱塩水を含む一連の水浴に通して誘導した。
【0107】
得られた繊維は１９０μｍの内径及び３５μｍの壁厚さを有していた。膜は指構造、すなわち外壁表面の方向に延びるマクロボイドを示した。
【0108】
ミニモジュールのＬｐは（９１±６）・１０－４ｃｍ３／（ｃｍ２・ｂａｒ・ｓｅｃ）（ｎ＝３）であった。膜のふるい係数はミオグロビンに対し（２１±２）％、アルブミンに対し（０．５±０．０）％であった（ｎ＝３）。
【0109】
上記の手順ｉｉ）に従って、３つのミニモジュールの膜をヘパリンで被覆し、膜上に固定化されたヘパリンの量を上で記載したように決定した。１０分間の抽出後、各ミニモジュールから（１８±１）ＩＵのヘパリンを抽出した（ｎ＝３）。
【国際調査報告】