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特表2023-545462前頭側頭型認知症を治療及びモニタリングするための方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-30
(54)【発明の名称】前頭側頭型認知症を治療及びモニタリングするための方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/50 20060101AFI20231023BHJP
G01N 33/92 20060101ALI20231023BHJP
G01N 33/66 20060101ALI20231023BHJP
【ＦＩ】
G01N33/50 Z
G01N33/92 Z
G01N33/66 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023522802
(86)(22)【出願日】2021-10-13
(85)【翻訳文提出日】2023-05-08
(86)【国際出願番号】 US2021071835
(87)【国際公開番号】W WO2022082178
(87)【国際公開日】2022-04-21
(31)【優先権主張番号】63/091,815
(32)【優先日】2020-10-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/182,567
(32)【優先日】2021-04-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518086619
【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】アスタリータ ジュゼッペ
(72)【発明者】
【氏名】デヴォス サラ エル．
(72)【発明者】
【氏名】ディ パオロ ギルバート
(72)【発明者】
【氏名】ファン メン
(72)【発明者】
【氏名】ホアン フェン
(72)【発明者】
【氏名】ローガン トッド ピー．
(72)【発明者】
【氏名】サイモン マシュー ジェイ．
【テーマコード（参考）】
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA25
2G045CA26
2G045CB01
2G045CB03
2G045CB07
2G045DA30
2G045DA61
2G045FB06
2G045FB07
(57)【要約】
本開示は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を治療するために、化合物をスクリーニングするための、または化合物もしくは投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法及び材料を提供する。また、ＦＴＤを有する対象を特定及び治療するための方法及び材料もまた提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する、または有するリスクのある対象を特定するための方法であって、（ａ）対象由来の試験試料中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の存在量を測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定された前記ＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）前記比較から、前記対象がＦＴＤを有するか、または有するリスクがあるかを判定することと、
を含む、方法。
【請求項2】
前記対象に、ＦＴＤを治療するために、ＧｌｃＳｐｈレベルを改善するための化合物を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を治療するために、化合物を評価するための方法、または、化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法であって、（ａ）ＦＴＤを有する対象由来の試験試料においてＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することであって、前記試験試料または前記対象が、前記化合物またはその医薬組成物で治療されている、測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定された前記ＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）ＦＴＤを治療するために、前記化合物、前記医薬組成物、またはそれらの投与レジメンが、ＧｌｃＳｐｈレベルを改善させるかどうかを前記比較から判定することと、
を含む、方法。
【請求項4】
別の試験試料または対象を別の化合物で治療することと、前記ＧｌｃＳｐｈレベルを改善させる候補化合物を選択することと、をさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
（ｄ）前記化合物を前記試験試料または前記対象に投与する量または頻度を維持または調整することと、（ｅ）前記化合物を前記試験試料または前記対象に投与することと、
をさらに含む、請求項３または４に記載の方法。
【請求項6】
前記化合物が、ＰＧＲＮ、ＰＧＲＮ誘導体、またはそれらの医薬組成物である、請求項２～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記化合物が、ソルチリン阻害剤である、請求項２～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ソルチリン阻害剤が、抗ソルチリン抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象が、前記参照値と比較して増加したＧｌｃＳｐｈレベルを有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の前記試験試料中の前記ＧｌｃＳｐｈの前記存在量が、前記参照値と比較して少なくとも約１．２倍～約５倍高い、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記改善されたＧｌｃＳｐｈレベルが、治療前の前記ＧｌｃＳｐｈレベルから改善されたものであり、前記改善されたＧｌｃＳｐｈレベルは、前記治療前のＧｌｃＳｐｈレベルよりも前記参照値により近い、請求項２～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記改善されたＧｌｃＳｐｈレベルが、前記参照値と比較して、１５％、１０％、または５％未満の差を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記参照値が、前記対象が治療を受ける前の前記対象の試験試料中のＧｌｃＳｐｈレベルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記参照値が、参照対象または参照対象集団から得た参照試料において測定される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記参照対象または前記参照対象集団が、健常対照である、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記参照対象または前記参照対象集団が、ＦＴＤを有さないか、またはＰＧＲＮレベルが低下していない、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項17】
工程（ａ）が、１種以上のビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種の前記存在量を測定することをさらに含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記１種以上のＢＭＰ種が、ＢＭＰ（１６：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：０）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：３）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：２）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１６：０＿２２：５）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：５）、ＢＭＰ（１８：２＿１８：２）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：２＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）、及び／またはＢＭＰ（１８：３＿２２：５）を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記試験試料または前記１つ以上の参照値が、全血、血漿、細胞、組織、血清、脳脊髄液、間質液、唾液、尿、リンパ液、またはそれらの組み合わせを含むか、またはそれらに関連する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記試験試料または前記１つ以上の参照値が、血漿を含むか、または血漿に関連する、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記細胞が、血液細胞、脳細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、赤血球、白血球、神経細胞、ミクログリア細胞、大脳皮質細胞、脊髄細胞、骨髄細胞、肝細胞、腎細胞、脾細胞、皮膚細胞、線維芽細胞、心臓細胞、リンパ節細胞、またはそれらの組み合わせである、請求項１９に記載の方法。
【請求項22】
前記組織が、リンパ節、骨髄、皮膚組織、血管組織、肺組織、脾臓組織、弁組織、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項23】
前記試験試料が、エンドソーム、リソソーム、細胞外小胞、エクソソーム、微小胞、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記ＧｌｃＳｐｈの前記存在量が、液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＧＣ－ＭＳ／ＭＳ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、またはそれらの組み合わせを使用して測定される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記ＧｌｃＳｐｈの前記存在量を測定する場合、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質が使用される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質が、前記対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈ種を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質が、重水素標識ＧｌｃＳｐｈを含む、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項28】
前記対象が、グラニュリン（ＧＲＮ）遺伝子において１つ以上の突然変異を有する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記ＦＴＤが、ＰＧＲＮの発現、処理、グリコシル化、細胞取り込み、輸送、及び／または機能に関連する、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記ＦＴＤが、ＰＧＲＮレベルの低下に関連する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記対象及び／または前記参照対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記対象がＰＧＲＮノックアウトマウスまたはＰＧＲＮノックアウトラットである、請求項３～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
対象のＦＴＤを治療するための化合物またはその投与レジメンを試験するためのキットであって、前記対象由来の試験試料においてＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するためのＧｌｃＳｐｈ標準物質を含む、キット。
【請求項34】
前記ＧｌｃＳｐｈ標準物質が、前記対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈ種を含む、請求項３３に記載のキット。
【請求項35】
前記ＧｌｃＳｐｈ標準物質が、重水素標識ＧｌｃＳｐｈを含む、請求項３３または３４に記載のキット。
【請求項36】
前記対象から前記試験試料を得るための試薬、前記試験試料を処理するための試薬、前記ＧｌｃＳｐｈの前記存在量を測定するための試薬、またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項３３～３５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項37】
使用説明書をさらに含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１０月１４日に出願された米国仮出願第６３／０９１，８１５号及び２０２１年４月３０日に出願された米国仮出願第６３／１８２，５６７号の利益を主張し、それらの開示は、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１０月１４日に出願された米国仮出願第６３／０９１，８１５号及び２０２１年４月３０日に出願された米国仮出願第６３／１８２，５６７号の利益を主張し、それらの開示は、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
背景
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、認知症を有する全患者の５～１０％、及び６５歳前に認知症を発症した患者の１０～２０％を占める、進行性の神経変性障害である（Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．８（８）：４２３－３４，２０１２（非特許文献１））。いくつかの遺伝子がＦＴＤに関連付けられているが、ＦＴＤにおいて最も頻繁に変異する遺伝子のうちの１つは、ヒト染色体１７ｑ２１に位置し、システインリッチなタンパク質であるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）（プロエピセリン及びアクログラニンとしても知られる）をコードするＧＲＮである。ＧＲＮにおける浸透性の高い突然変異は、家族性ＦＴＤの常染色体優性形態の原因として、２００６年に最初に報告された（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４４２（７１０５）：９１６－９，２００６（非特許文献２）、Ｃｒｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ Ａｕｇ ２４；４４２（７１０５）：９２０－４（非特許文献３）、Ｇａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１５（２０）：２９８８－３００１，２００６（非特許文献４））。最近の推定では、ＧＲＮ変異は、家族歴が陽性であるＦＴＤ患者の５～２０％、及び孤発性症例の１～５％を占めると示唆されている（Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．、上掲）。ＦＴＤを治療するための化合物及び関連する療法を評価するための新しい方法（そのような治療に対する患者の応答をモニタリングすることを含む）、ならびにこれらの障害の治療から利益を得ることができる対象を特定するための新しい方法に対する必要性が存在する。
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、認知症を有する全患者の５～１０％、及び６５歳前に認知症を発症した患者の１０～２０％を占める、進行性の神経変性障害である（Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．８（８）：４２３－３４，２０１２（非特許文献１））。いくつかの遺伝子がＦＴＤに関連付けられているが、ＦＴＤにおいて最も頻繁に変異する遺伝子のうちの１つは、ヒト染色体１７ｑ２１に位置し、システインリッチなタンパク質であるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）（プロエピセリン及びアクログラニンとしても知られる）をコードするＧＲＮである。ＧＲＮにおける浸透性の高い突然変異は、家族性ＦＴＤの常染色体優性形態の原因として、２００６年に最初に報告された（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４４２（７１０５）：９１６－９，２００６（非特許文献２）、Ｃｒｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ Ａｕｇ ２４；４４２（７１０５）：９２０－４（非特許文献３）、Ｇａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１５（２０）：２９８８－３００１，２００６（非特許文献４））。最近の推定では、ＧＲＮ変異は、家族歴が陽性であるＦＴＤ患者の５～２０％、及び孤発性症例の１～５％を占めると示唆されている（Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．、上掲）。ＦＴＤを治療するための化合物及び関連する療法を評価するための新しい方法（そのような治療に対する患者の応答をモニタリングすることを含む）、ならびにこれらの障害の治療から利益を得ることができる対象を特定するための新しい方法に対する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．８（８）：４２３－３４，２０１２
【非特許文献2】Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４４２（７１０５）：９１６－９，２００６
【非特許文献3】Ｃｒｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ Ａｕｇ ２４；４４２（７１０５）：９２０－４
【非特許文献4】Ｇａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１５（２０）：２９８８－３００１，２００６
【発明の概要】
【0004】
概要
一態様では、本開示は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する、または有するリスクのある対象を特定するための方法を提供し、本方法は、
（ａ）対象由来の試験試料中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の存在量を測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定されたＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）比較から対象がＦＴＤを有するか、または有するリスクがあるかを判定することと、
を含む。
一態様では、本開示は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する、または有するリスクのある対象を特定するための方法を提供し、本方法は、
（ａ）対象由来の試験試料中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の存在量を測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定されたＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）比較から対象がＦＴＤを有するか、または有するリスクがあるかを判定することと、
を含む。
【0005】
この態様のいくつかの実施形態では、方法はさらに、対象に、ＦＴＤを治療するためにＧｌｃＳｐｈレベルを改善するための化合物を投与することを含む。
【0006】
別の態様では、本開示は、ＦＴＤを治療するために、化合物を評価するための方法、または化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法を提供し、本方法は、
（ａ）ＦＴＤを有する対象由来の試験試料においてＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することであって、試験試料または対象が、化合物またはその医薬組成物で治療されている、測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定されたＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）ＦＴＤを治療するために、化合物、医薬組成物、またはそれらの投与レジメンが、ＧｌｃＳｐｈレベルを改善させるかどうかを比較から判定することと、
を含む。
（ａ）ＦＴＤを有する対象由来の試験試料においてＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することであって、試験試料または対象が、化合物またはその医薬組成物で治療されている、測定することと、
（ｂ）（ａ）で測定されたＧｌｃＳｐｈと１つ以上の参照値との間の存在量の差を比較することと、
（ｃ）ＦＴＤを治療するために、化合物、医薬組成物、またはそれらの投与レジメンが、ＧｌｃＳｐｈレベルを改善させるかどうかを比較から判定することと、
を含む。
【0007】
この態様のいくつかの実施形態では、方法は、別の試験試料または対象を別の化合物で治療することと、ＧｌｃＳｐｈレベルを改善させる候補化合物を選択することと、をさらに含む。
【0008】
この態様のいくつかの実施形態では、方法は、
（ｄ）化合物を試験試料または対象に投与する量または頻度を維持または調整することと、
（ｅ）化合物を試験試料または対象に投与することと、
をさらに含む。
（ｄ）化合物を試験試料または対象に投与する量または頻度を維持または調整することと、
（ｅ）化合物を試験試料または対象に投与することと、
をさらに含む。
【0009】
本明細所に記載される方法のいくつかの実施形態では、化合物はソルチリン阻害剤である。ある特定の実施形態では、ソルチリン阻害剤は、抗ソルチリン抗体である。
【0010】
いくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象は、参照値と比較して増加したＧｌｃＳｐｈレベルを有する。ある特定の実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の試験試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量は、参照値と比較して少なくとも約１．２倍～約５倍高い。いくつかの実施形態では、改善されたＧｌｃＳｐｈレベルは、治療前のＧｌｃＳｐｈレベルから改善されたものであり、改善されたＧｌｃＳｐｈレベルは、治療前のＧｌｃＳｐｈレベルよりも参照値により近い。特定の実施形態では、改善されたＧｌｃＳｐｈレベルは、参照値と比較して、１５％、１０％、または５％未満の差を有する。
【0011】
いくつかの実施形態では、参照値は、対象が治療を受ける前の対象の試験試料中のＧｌｃＳｐｈレベルである。いくつかの実施形態では、参照値は、参照対象または参照対象集団から得た参照試料において測定される。ある特定の実施形態では、参照対象または参照対象集団は、健常対照である。特定の実施形態では、参照対象または参照対象集団は、ＦＴＤを有さないか、またはＰＧＲＮレベルが低下していない。
【0012】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法の工程（ａ）は、１つ以上のビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種の存在量を測定することをさらに含む。ある特定の実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（１６：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：０）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：３）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：２）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１６：０＿２２：５）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：５）、ＢＭＰ（１８：２＿１８：２）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：２＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）、及び／またはＢＭＰ（１８：３＿２２：５）を含む。
【0013】
いくつかの実施形態では、試験試料、または、１つ以上の参照値は、全血、血漿、細胞、組織、血清、脳脊髄液、間質液、唾液、尿、リンパ液、またはそれらの組み合わせを含むか、またはそれらに関連する。特定の実施形態では、試験試料、または、１つ以上の参照値は、血漿を含むか、または血漿に関連する。ある特定の実施形態では、細胞は、血球、脳細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、赤血球、白血球、神経細胞、ミクログリア細胞、大脳皮質細胞、脊髄細胞、骨髄細胞、肝細胞、腎細胞、脾細胞、皮膚細胞、線維芽細胞、心臓細胞、リンパ節細胞、またはそれらの組み合わせである。ある特定の実施形態では、組織は、リンパ節、骨髄、皮膚組織、血管組織、肺組織、脾臓組織、心臓弁膜組織、またはそれらの組み合わせを含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、試験試料は、エンドソーム、リソソーム、細胞外小胞、エクソソーム、微小胞、またはそれらの組み合わせを含む。
【0015】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量は、液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＧＣ－ＭＳ／ＭＳ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、及びそれらの組み合わせを使用して測定される。
【0016】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定する場合に、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質が使用される。ある特定の実施形態では、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈ種を含む。特定の実施形態では、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、重水素標識ＧｌｃＳｐｈを含む。
【0017】
いくつかの実施形態では、対象は、グラニュリン（ＧＲＮ）遺伝子に１つ以上の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、ＦＴＤは、ＰＧＲＮの発現、処理、グリコシル化、細胞取り込み、輸送、及び／または機能に関連する。いくつかの実施形態では、ＦＴＤは、減少したＰＧＲＮレベルに関連している。
【0018】
いくつかの実施形態では、対象及び／または参照対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＧＲＮノックアウトマウスまたはＰＧＲＮノックアウトラットである。
【0019】
別の態様では、本開示は、対象のＦＴＤを治療するための化合物またはその投与レジメンを試験するためのキットを提供し、本キットは、対象由来の試験試料においてＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するためのＧｌｃＳｐｈ標準物質を含む。
【0020】
この態様のいくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈ種を含む。特定の実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、重水素標識ＧｌｃＳｐｈを含む。
【0021】
いくつかの実施形態では、キットは、対象から試験試料を得るための試薬、試験試料を処理するための試薬、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するための試薬、またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、使用説明書をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】遺伝子変異のない臨床的正常対照と比較して、ＧＲＮ関連ＦＴＤ患者由来の血漿試料中で有意なＧｌｃＳｐｈの増加を示しているが、非ＧＲＮ ＦＴＤ患者では示されない。
【図2】ＰＧＲＮ誘導体（Ｆｕｓｉｏｎ１）による治療の後、ＰＧＲＮ誘導体を受けていないＧｒｎＫＯマウスにおけるＧｌｃＳｐｈレベルと比較して、ＧｒｎＫＯマウスの血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルが有意に減少した。
【図3A】６週間の薬物投与後、Ｆｕｓｉｏｎ１は、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの脳中のＧｌｃＳｐｈレベルを回復したが、Ｆｕｓｉｏｎ２は部分的な効果のみを示した。使用投与量は、５ｍｐｋの注射を週１回６週間であった。統計解析は、ダネット多重比較試験を用いたＯｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ（ｎ＝７～１０マウス）であった。＊＊はＰ＜０．０１、＊＊＊＊はＰ＜０．０００１である。
【図3B】６週間の薬物投与後、Ｆｕｓｉｏｎ１とＦｕｓｉｏｎ２の両方が、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの肝臓中のＧｌｃＳｐｈレベルを完全に回復したことを示す。使用投与量は、５ｍｐｋの注射を週１回６週間であった。統計解析は、ダネット多重比較試験を用いたＯｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ（ｎ＝７～１０マウス）であった。＊＊はＰ＜０．０１、＊＊＊＊はＰ＜０．０００１である。
【図3C】６週間の薬物投与後、Ｆｕｓｉｏｎ１とＦｕｓｉｏｎ２の両方が、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルを回復したことを示す。使用投与量は、５ｍｐｋの注射を週１回６週間であった。統計解析は、ダネット多重比較試験を用いたＯｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ（ｎ＝７～１０マウス）であった。＊＊はＰ＜０．０１、＊＊＊＊はＰ＜０．０００１である。
【発明を実施するための形態】
【0023】
発明の詳細な説明
Ｉ．導入
ＧＲＮ遺伝子内の機能損失の突然変異は前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の一般的な形態に関連している。ＧＲＮは、神経突起伸長、神経細胞生存、リソソーム機能、及び炎症に関係している可溶性タンパク質プログラニュリン（ＰＧＲＮ）をコードする。主にＰＧＲＮの脳レベルを向上させることに焦点を当てたＧＲＮ－関連ＦＴＤのために治療手段が開発されているので、候補の治療の発見を促進させるためには、血漿及びＣＳＦなどの体液中の疾患関与バイオマーカーを特定することが重要である。ＦＴＤのケースにおいては、一般的にＦＴＤに関連しているか、またはＧＲＮ－関連ＦＴＤに特異的であるかのいずれかであるバイオマーカーを調査することが重要である。さらに重要なことには、バイオマーカーの発見は、ＰＧＲＮ及び／またはその機能損失に関連した新規の生物学及び生化学の経路を啓発することによって疾患メカニズムを報告することもできる。
Ｉ．導入
ＧＲＮ遺伝子内の機能損失の突然変異は前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の一般的な形態に関連している。ＧＲＮは、神経突起伸長、神経細胞生存、リソソーム機能、及び炎症に関係している可溶性タンパク質プログラニュリン（ＰＧＲＮ）をコードする。主にＰＧＲＮの脳レベルを向上させることに焦点を当てたＧＲＮ－関連ＦＴＤのために治療手段が開発されているので、候補の治療の発見を促進させるためには、血漿及びＣＳＦなどの体液中の疾患関与バイオマーカーを特定することが重要である。ＦＴＤのケースにおいては、一般的にＦＴＤに関連しているか、またはＧＲＮ－関連ＦＴＤに特異的であるかのいずれかであるバイオマーカーを調査することが重要である。さらに重要なことには、バイオマーカーの発見は、ＰＧＲＮ及び／またはその機能損失に関連した新規の生物学及び生化学の経路を啓発することによって疾患メカニズムを報告することもできる。
【0024】
発明者らは、ＬＣ－ＭＳによるターゲットリピドミクス／メタボロミクス分析を実施し、遺伝子変異のない臨床的正常対照と比較して、ＧＲＮ関連ＦＴＤ患者（Δ２５％、ｐ＜０．０１）由来の生体試料中（例えば、血漿試料）でグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）が有意に増加するが、孤発性ＦＴＤ患者では増加しないことを発見し、これは、ＧｌｃＳｐｈが、ＧＲＮ関連ＦＴＤに関係する疾患バイオマーカーであり、かつＰＧＲＮ機能回復の経路バイオマーカーであることを示している。これらの結果は、約２０％のＧｌｃＳｐｈレベルの減少は、臨床的正常対照と比較して、ＧＲＮ関連ＦＴＤ患者の試料に見られる増加したＧｌｃＳｐｈレベルを正常化するであろうことを示している。
【0025】
ＩＩ．定義
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞」への言及は、２つ以上のそのような細胞などを含み得る。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞」への言及は、２つ以上のそのような細胞などを含み得る。
【0026】
本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または範囲で指定された量を修正するために使用される場合、その数値及び当業者に公知の値からの妥当な偏差、例えば、±２０％、±１０％または±５％が、記載された値の意図する意味の範囲内であることを示す。
【0027】
用語「存在量」は、分子、化合物、または作用物質（例えば、ＧｌｃＳｐｈ）の量または濃度を指す。この用語には、絶対量または絶対濃度、ならびに相対量または相対濃度が含まれる。いくつかの実施形態では、参照標準物質（例えば、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質）は、（例えば、試料中に）存在する分子、化合物、もしくは作用物質の絶対量もしくは絶対濃度を決定するために較正に使用され、及び／または存在する分子、化合物、もしくは作用物質の相対量もしくは相対濃度を決定するために対照に正規化される。
【0028】
用語「グルコシルスフィンゴシン」または「ＧｌｃＳｐｈ」は、式Ｉ：
に示される構造を有するリソグリコスフィンゴリピドを指す。
【0029】
用語「ビス（モノアシルグリセロ）リン酸」または「ＢＭＰ」は、式ＩＩ：
に示される構造を有する（例えば、後期エンドソーム及びリソソーム内に通常存在するｐＨで）負に荷電したグリセロリン脂質を指す。
ＢＭＰ分子は、２つの脂肪酸側鎖を含む。式ＩＩのＲ及びＲ’は、独立して選択された飽和または不飽和脂肪族鎖を表し、脂肪族鎖の各々は、典型的には、１４、１６、１８、２０、または２２個の炭素原子を含有する。脂肪酸側鎖が不飽和の場合、脂肪酸側鎖は、１、２、３、４、５、または６つ以上の炭素－炭素二重結合を含有することができる。さらに、ＢＭＰ分子は１つまたは２つのアルキルエーテル置換基を含有することができ、ここで、一方または両方の脂肪酸側鎖のカルボニル酸素は２つの水素原子で置き換えられている。特定のＢＭＰ種を説明するために本明細書で使用される命名法は、２つの脂肪酸側鎖を有する種を示し、脂肪酸側鎖の構造をＢＭＰ形式の括弧内に示す（例えば、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１））。数字は、「脂肪酸炭素原子の数：二重結合の数」の標準的な脂肪酸の表記形式に従う。接頭辞「ｅ－」は、アルキルエーテル置換基の存在を示すために使用され、脂肪酸側鎖のカルボニル酸素は、２つの水素原子で置き換えられている。例えば、「ＢＭＰ（１６：０ｅ＿１８：０）」中の「ｅ」は、１６個の炭素原子を有する側鎖がアルキルエーテル置換基であることを示す。
ＢＭＰ分子は、２つの脂肪酸側鎖を含む。式ＩＩのＲ及びＲ’は、独立して選択された飽和または不飽和脂肪族鎖を表し、脂肪族鎖の各々は、典型的には、１４、１６、１８、２０、または２２個の炭素原子を含有する。脂肪酸側鎖が不飽和の場合、脂肪酸側鎖は、１、２、３、４、５、または６つ以上の炭素－炭素二重結合を含有することができる。さらに、ＢＭＰ分子は１つまたは２つのアルキルエーテル置換基を含有することができ、ここで、一方または両方の脂肪酸側鎖のカルボニル酸素は２つの水素原子で置き換えられている。特定のＢＭＰ種を説明するために本明細書で使用される命名法は、２つの脂肪酸側鎖を有する種を示し、脂肪酸側鎖の構造をＢＭＰ形式の括弧内に示す（例えば、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１））。数字は、「脂肪酸炭素原子の数：二重結合の数」の標準的な脂肪酸の表記形式に従う。接頭辞「ｅ－」は、アルキルエーテル置換基の存在を示すために使用され、脂肪酸側鎖のカルボニル酸素は、２つの水素原子で置き換えられている。例えば、「ＢＭＰ（１６：０ｅ＿１８：０）」中の「ｅ」は、１６個の炭素原子を有する側鎖がアルキルエーテル置換基であることを示す。
【0030】
「ＰＧＲＮレベル」という用語は、対象内または試料（例えば、対象から得た試料）中のいずれかに存在するプログラニュリンの量、濃度、及び／または活性レベルを指す。ＰＧＲＮレベルは、存在するＰＧＲＮの絶対量、絶対濃度、及び／または絶対活性レベルを指すことができるか、あるいは相対量、相対濃度、及び／または相対活性レベルを指すことができる。この用語はまた、存在するＰＧＲＮポリペプチド及び／またはＰＧＲＮ ｍＲＮＡ（例えば、ＧＲＮ遺伝子から発現されるもの）の量または濃度も指す。
【0031】
「プログラニュリン」または「ＰＧＲＮ」という用語（「プロエピセリン」及び「アクログラニン」としても既知）は、ヒト染色体１７ｑ２１に位置する遺伝子ＧＲＮによってコードされる、システインリッチなタンパク質である。ＰＧＲＮは、リソソームタンパク質であるとともに、保存されたグラニュリンペプチドの７．５回のタンデム反復からなる分泌タンパク質であり、その各々は、約６０アミノ酸長であり、様々な細胞外プロテアーゼ（例えば、エラスターゼ）及びリソソームプロテアーゼ（例えば、カテプシンＬ）による切断によって放出され得る（Ｋａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８（６）：３２５－３３３，２０１７）。一般に、ＰＧＲＮは、先天免疫の制御において、ならびにＰＧＲＮが様々なカテプシン及び他の加水分解酵素の活性及びレベルを調節するリソソームの機能において、細胞自律的役割及び細胞非自律的役割の両方を果たすと考えられている（Ｋａｏ ｅｔ ａｌ．、上掲）。ＰＧＲＮはまた、神経栄養性機能を有し、神経突起伸長及び神経細胞生存を促進する（Ｋａｏ ｅｔ ａｌ．、上掲）。ＰＧＲＮポリペプチドは、ヒトＰＧＲＮ配列を含み得る。ＰＧＲＮポリペプチドは、例えば、最初の１７個のアミノ酸がシグナルペプチドを構成する、未成熟ＰＧＲＮであり得る。ＰＧＲＮポリペプチドはまた、例えば、１７個のアミノ酸のシグナルペプチドが切断されている、成熟ＰＧＲＮでもあり得る。他の非限定的な例として、ＰＧＲＮポリペプチドは、未成熟または成熟した形態のいずれかで、マウス（ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３２２０１．２）、ラット（ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０５８８０９．２またはＮＰ＿００１１３９３１４．１）、またはチンパンジー（ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿０１６７８７１４４．１またはＸＰ＿０１６７８７１４５．１）などの非ヒト種からの配列を含み得る。
【0032】
「プログラニュリン誘導体」または「ＰＧＲＮ誘導体」という用語は、修飾されたＰＧＲＮを指す。ＰＧＲＮに体内の特定の領域を標的とさせる修飾などの、ＰＧＲＮのドラッガビリティを高めるための修飾、及び／またはその薬物動態学的もしくは薬力学的特性を改善するための修飾を行うことができる。他の修飾を行って、その製造及び／または貯蔵寿命を支援することができる。ＰＧＲＮ誘導体は、Ｆｃポリペプチドの二量体に付着したＰＧＲＮを含む、Ｆｃ融合タンパク質を含むことができる。
【0033】
「骨髄由来マクロファージ」または「ＢＭＤＭ」という用語は、哺乳動物の骨髄（例えば、対象から得た骨髄）からインビトロで生成されるかまたはそれに由来する、マクロファージ細胞を指す。非限定的な例として、ＢＭＤＭは、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）などのサイトカインの存在下で、未分化骨髄細胞を培養することによって生成することができる。
【0034】
「治療」、「治療すること」等の用語は、本明細書では、一般に所望の薬理作用及び／または生理作用を得ることを意味するために使用される。「治療すること」または「治療」は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の治療または改善の奏功を示す任意の兆候を指し得、緩和、寛解、患者生存の改善、生存時間もしくは生存率の増大、症状の軽減、または障害に対する患者の忍容性を高めること、変性もしくは衰退の速度を遅くすること、または患者の身体的もしくは精神的健康を改善することなどの任意の客観的または主観的パラメータを含む。症状の治療または改善は、客観的または主観的パラメータに基づくことができる。治療の効果は、その治療を受けていない個体もしくは個体のプールと、または、治療前もしくは治療中の異なる時点での同じ患者と比較することができる。
【0035】
本明細書で互換的に使用される場合、「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、イヌ、ウシ、ブタ、ウマ、及び他の哺乳動物種を含むがこれらに限定されない、哺乳動物を指す。一実施形態では、対象は、ヒトである。
【0036】
本明細書で使用される場合、作用物質の「治療量」または「治療有効量」は、対象において疾患の症状を治療する作用物質の量である。
【0037】
「投与する」という用語は、所望の生物作用点に作用物質、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、皮下送達、髄腔内送達、経口送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【0038】
ＩＩＩ．本開示の方法
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、進行性の神経変性障害である。ＦＴＤは、前頭葉及び側頭葉に選択的な影響を呈する、臨床的、病理学的、及び遺伝的に不均一である疾患の範囲を含む（Ｇａｚｚｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８１７：７６－８５，２０１７）。ＦＴＤの臨床症状には、行動及び性格の変化、前頭部の実行障害、及び言語機能障害が挙げられる。臨床表現型の相違に基づいて、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、及び非流暢／失文法型ＰＰＡ（ａｖＰＰＡ）または意味型ＰＰＡ（ｓｖＰＰＡ）のいずれかであり得る原発性進行性失語（ＰＰＡ）などの、異なる症状が特定されている。これらの臨床症状はまた、大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの非定型パーキンソニズムと重複する場合がある（Ｇａｚｚｉｎａ ｅｔ ａｌ．、上記参照）。ＦＴＤは、神経細胞及びアストロサイト中のタウ病変、または神経細胞中の細胞質ユビキチン封入体を含む、様々な神経病理学的特徴を伴う。４３ｋＤａの分子量を有するトランス活性化ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ－４３）は、ＦＴＤの症例の大部分ならびにＡＬＳにおいて蓄積する、最も顕著なユビキチン化タンパク質病変である（Ｐｅｔｋａｕ ａｎｄ Ｌｅａｖｉｔｔ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３７（７）：３８８－９８，２０１４）。ＦＴＤは、早発性認知症の重大な原因であり、症例の最大８０％が４５～６４歳の間に発症する。この疾患はまた、顕著な家族性要素を呈し、約３０～５０％の症例で疾患の家族歴が報告されている（Ｐｅｔｋａｕ ａｎｄ Ｌｅａｖｉｔｔ、上掲）。
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、進行性の神経変性障害である。ＦＴＤは、前頭葉及び側頭葉に選択的な影響を呈する、臨床的、病理学的、及び遺伝的に不均一である疾患の範囲を含む（Ｇａｚｚｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８１７：７６－８５，２０１７）。ＦＴＤの臨床症状には、行動及び性格の変化、前頭部の実行障害、及び言語機能障害が挙げられる。臨床表現型の相違に基づいて、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、及び非流暢／失文法型ＰＰＡ（ａｖＰＰＡ）または意味型ＰＰＡ（ｓｖＰＰＡ）のいずれかであり得る原発性進行性失語（ＰＰＡ）などの、異なる症状が特定されている。これらの臨床症状はまた、大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの非定型パーキンソニズムと重複する場合がある（Ｇａｚｚｉｎａ ｅｔ ａｌ．、上記参照）。ＦＴＤは、神経細胞及びアストロサイト中のタウ病変、または神経細胞中の細胞質ユビキチン封入体を含む、様々な神経病理学的特徴を伴う。４３ｋＤａの分子量を有するトランス活性化ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ－４３）は、ＦＴＤの症例の大部分ならびにＡＬＳにおいて蓄積する、最も顕著なユビキチン化タンパク質病変である（Ｐｅｔｋａｕ ａｎｄ Ｌｅａｖｉｔｔ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３７（７）：３８８－９８，２０１４）。ＦＴＤは、早発性認知症の重大な原因であり、症例の最大８０％が４５～６４歳の間に発症する。この疾患はまた、顕著な家族性要素を呈し、約３０～５０％の症例で疾患の家族歴が報告されている（Ｐｅｔｋａｕ ａｎｄ Ｌｅａｖｉｔｔ、上掲）。
【0039】
ＦＴＤは家族性及び散発性の両方の形態で発生する。家族性ＦＴＤの形態のいくつかは、原因が不明であるが、その他のものは遺伝子変異により発生する。多数の遺伝子中の突然変異はＦＴＤに関連している。ＧＲＮ、ＭＡＰＴ及びＣ９ＯＲＦ７２などの遺伝子中の突然変異が最も一般的な遺伝的ＦＴＤの原因である。ＶＣＰ、ＴＡＲＤＢＰ、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＳＱＳＴＭ１、ＵＢＱＬＮ１、ＵＢＱＬＮ２、ＴＢＫ１、及びＣＨＣＨＤ１０などその他の遺伝子中にまれな突然変異が確認されている。ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＣＴＳＦ、ＣＹＰ２７Ａ１などＦＴＤに一般的に関連していない神経変性の疾患遺伝子中の突然変異もまたＦＴＤ対象において確認されている（Ｂｌａｕｗｅｎｄｒａａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０：２４０－２４９，２０１８）。
【0040】
グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する、もしくは有するリスクのある対象を特定するための方法、及び／または、ＦＴＤを治療するために、化合物を評価するための方法、または化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法を提供し、これらの方法は、対象由来の試験試料中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の存在量を測定することを含む。
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する、もしくは有するリスクのある対象を特定するための方法、及び／または、ＦＴＤを治療するために、化合物を評価するための方法、または化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法を提供し、これらの方法は、対象由来の試験試料中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の存在量を測定することを含む。
【0041】
ＧｌｃＳｐｈはグルコセレブロシダーゼ（ＧＣａｓｅ）の基質であり、減少したＧＣａｓｅ活性を示す、ヒトゴーシェ病患者及びマウスモデルの細胞及び組織中に蓄積することが分かっている。ＧｌｃＳｐｈの蓄積は、ゴーシェ病に観察される内臓及び神経の病理に関係があるとされる。
【0042】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量は参照値と比較することができる。いくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象は、参照値と比較して増加したＧｌｃＳｐｈレベルを有し、例えば、対象の試験試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量は、参照値の少なくとも約１．２倍～約５倍、または少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、５倍、５．１倍、５．２倍、５．３倍、５．４倍、５．５倍、５．６倍、５．７倍、５．８倍、５．９倍、６倍、６．１倍、６．２倍、６．３倍、６．４倍、６．５倍、６．６倍、６．７倍、６．８倍、６．９倍、７倍、７．１倍、７．２倍、７．３倍、７．４倍、７．５倍、７．６倍、７．７倍、７．８倍、７．９倍、８倍、８．１倍、８．２倍、８．３倍、８．４倍、８．５倍、８．６倍、８．７倍、８．８倍、８．９倍、９倍、９．１倍、９．２倍、９．３倍、９．４倍、９．５倍、９．６倍、９．７倍、９．８倍、９．９倍、または１０倍であり得る。いくつかの実施形態では、参照値は、治療を受ける前の、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の試験試料中のＧｌｃＳｐｈレベルである。
【0043】
本開示の方法のいくつかの実施形態では、参照値は、参照対象または参照対象集団から得た参照試料において測定される。参照対象または参照対象集団は、健常対照対象または健常対照対象集団であり得る。参照対象または参照対象集団は、ＦＴＤを有さないか、またはＰＧＲＮレベルが低下していない対象または対象集団であり得る。いくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象が治療を受けた後、対象由来の試験試料中のＧｌｃＳｐｈレベルは、対象がなんらかの治療を受ける前の対象由来の試験試料中のＧｌｃＳｐｈレベルよりも向上している可能性がある。いくつかの実施形態では、向上したＧｌｃＳｐｈレベルは、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の、対象が治療を受ける前のＧｌｃＳｐｈレベルよりも参照値（例えば、健常対照対象または健常対照対象集団から得た参照試料で測定した参照値）により近く、例えば、向上したＧｌｃＳｐｈレベルは、参照値と比較して１５％、１０％、または５％未満の差異を有する。
【0044】
場合によっては、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象において、参照値と比較して増加したＧｌｃＳｐｈレベルは、例えば、対象の全血、血漿、細胞、組織、血清、脳脊髄液、間質液、唾液、尿、リンパ液、またはそれらの組み合わせに見出すことができる。特定の実施形態では、増加したＧｌｃＳｐｈレベルは対象の血漿に見出すことができる。本開示の方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象から得た試験試料、または１つ以上の参照値は、血漿を含む、または血漿に関連している可能性がある。
【0045】
さらには、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象において、参照値と比較して増加したＧｌｃＳｐｈレベルは、対象の脳、例えば、脳の前頭葉及び／または側頭葉に見出すことができる。特定の実施形態では、増加したＧｌｃＳｐｈレベルは、前頭葉の１つ以上の領域、例えば、上前頭回、中前頭回、下前頭回、及び／または、中心前回に見出すことができる。
【0046】
本明細書に記載の方法で使用される、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象から得た試験試料は、血液細胞、脳細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、赤血球、白血球、神経細胞、ミクログリア細胞、大脳皮質細胞、脊髄細胞、骨髄細胞、肝細胞、腎細胞、脾細胞、肺細胞、眼細胞、絨毛膜絨毛細胞、筋細胞、皮膚細胞、線維芽細胞、心臓細胞、リンパ節細胞またはそれらの組み合わせなどの細胞を含むことができる。いくつかの実施形態では、試験試料は、血液細胞を含む。いくつかの実施形態では、試験試料は、脳細胞を含む。
【0047】
本明細書に記載の方法で使用される、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象から得た試験試料は、脳組織、大脳皮質組織、脊髄組織、肝組織、腎組織、筋組織、心臓組織、眼組織、網膜組織、リンパ節、骨髄、皮膚組織、血管組織、肺組織、脾組織、弁組織、またはそれらの組み合わせなどの組織を含むことができる。いくつかの実施形態では、試験試料は、対象の脳の前頭葉または側頭葉由来の脳組織などの脳組織を含む。特定の実施形態では、試験試料に使用される脳組織は、上前頭回、中前頭回、下前頭回、及び／または、中心前回由来であり得る。
【0048】
本明細書に記載の方法で使用される、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象から得た試験試料は、エンドソーム、リソソーム、細胞外小胞、エクソソーム、マイクロベシクル、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【0049】
ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象由来の試験試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するため、及び／または参照値（例えば、参照試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量を測定する）を決定するために、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質が使用される。例えば、既知量の内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質を試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）に添加して、較正点として機能させることができ、それによって試料中に存在するＧｌｃＳｐｈの量を決定することができる。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈを試料から抽出または単離するのに使用する試薬（例えば、メタノール）を、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質で「スパイク」する。典型的には、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、対象内で天然に生じないものである。いくつかの実施形態では、内部ＧｌｃＳｐｈは、実施例に使用されるＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）などの重水素標識ＧｌｃＳｐｈである。
【0050】
ＧｌｃＳｐｈを使用した、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の特定
いくつかの実施形態では、対象由来の試験試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量が参照値よりも高い場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。参照値は、参照対象または参照対象集団、例えば、健常対照、または、ＦＴＤを有さない、またはＰＧＲＮレベルが低下していない対象から得た参照試料にて測定することができる。さらなる実施形態では、対象が、グラニュリン（ＧＲＮ）遺伝子中に１つ以上の突然変異を有する場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。いくつかの実施形態において、対象由来の試験試料は、血漿試料であり得る。
いくつかの実施形態では、対象由来の試験試料中のＧｌｃＳｐｈの存在量が参照値よりも高い場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。参照値は、参照対象または参照対象集団、例えば、健常対照、または、ＦＴＤを有さない、またはＰＧＲＮレベルが低下していない対象から得た参照試料にて測定することができる。さらなる実施形態では、対象が、グラニュリン（ＧＲＮ）遺伝子中に１つ以上の突然変異を有する場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。いくつかの実施形態において、対象由来の試験試料は、血漿試料であり得る。
【0051】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量（例えば、試験試料中で測定される）が、参照値（例えば、参照対象または参照対象集団から得た参照試料中で測定した参照値）の少なくとも約１．２倍（例えば、約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍以上）である場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0052】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量（例えば、試験試料中で測定される）が、参照値（例えば、参照対象または参照対象集団から得た参照試料中で測定した参照値）の少なくとも約１．２倍～約５倍（例えば、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５倍）である場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量が、参照値（例えば、参照対象または参照対象集団から得た参照試料中で測定した参照値）の約２倍～約３倍（例えば、約２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、または３倍）ある場合に、対象はＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0053】
ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象を特定するための方法、及び／または、ＦＴＤを治療するために、化合物を評価するための方法、または化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法において、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することに加え、方法は、対象由来の試験試料中の１つ以上のビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種の存在量を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、ＦＴＤを治療するために１種以上のＢＭＰ種レベルを改善させるための化合物を対象に投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象を特定するための方法、及び／または、ＦＴＤを治療するために、化合物を評価するための方法、または化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答をモニタリングするための方法において、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することに加え、方法は、対象由来の試験試料中の１つ以上のビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種の存在量を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、ＦＴＤを治療するために１種以上のＢＭＰ種レベルを改善させるための化合物を対象に投与することをさらに含む。
【0054】
方法のいくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量及び１つ以上のＢＭＰ種の存在量の両方を、対象由来の同じ試験試料で測定することができる。他の実施形態では、２つの試験試料（例えば、同時に取得した２つの試験試料）を対象から取得することができ、一方の試験試料をＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するために使用し、もう一方の試験試料を１つ以上のＢＭＰ種の存在量を測定するために使用することができる。２つの試験試料は、対象の同じ流体、細胞、または組織（例えば、全血、血漿、細胞、組織、血清、脳脊髄液、間質液、唾液、尿、またはリンパ液）から取得することができる。他の実施形態では、２つの試験試料は、対象の異なる流体、細胞、または組織から（例えば、一方の試料を血漿から、もう一方の試料を脳組織から）取得することができる。
【0055】
いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定することに加え、シングルＢＭＰ種の存在量が測定される。いくつかの実施形態では、２種以上のＢＭＰ種の存在量が測定される。いくつかの実施形態では、表１のＢＭＰ種のうちの少なくとも２、３、４、または５種以上の存在量が測定される。２種以上のＢＭＰ種の存在量が測定される場合、異なるＢＭＰ種の任意の組み合わせを使用することができる。
【0056】
いくつかの実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、２種以上のＢＭＰ種を含む。いくつかの実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（１６：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：０）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：３）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：２）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１６：０＿２２：５）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：５）、ＢＭＰ（１８：２＿１８：２）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：３＿２２：５）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：２＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）、またはそれらの組み合わせを含む。
【0057】
いくつかの実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：３＿２２：５）、またはそれらの組み合わせを含む。
【0058】
いくつかの実施形態では、試験試料は、培養細胞を含み、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）を含む。いくつかの実施形態では、試験試料は、血漿、組織、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び／または脳組織もしくは肝組織を含み、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）を含む。いくつかの実施形態では、試験試料は、肝組織を含み、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：３＿２２：５）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、試験試料はＣＳＦまたは尿を含み、１種以上のＢＭＰ種はＢＭＰ（２２：６＿２２：６）を含む。いくつかの実施形態では、試験試料は、ミクログリアを含み、１種以上のＢＭＰ種は、ＢＭＰ（１８：３＿２２：５）を含む。
【0059】
いくつかの実施形態では、２種以上のＢＭＰ種の存在量を合計することができ、総存在量を参照値と比較することになる。例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、または１４７種以上のＢＭＰ種（例えば、表１に列挙されているＢＭＰ種）の各々の存在量を合計し、次いで、総存在量を参照値と比較することができる。
【0060】
場合によっては、１種以上のＢＭＰ種は、ある種類の試料において、例えば、組織ベースの試料または血液試料に対する細胞ベースの試料（例えば、培養細胞）などのように、別の試料と比較した場合、差次的に（例えば、より豊富なまたはより少ない存在量で）発現され得る。したがって、いくつかの実施形態では、１種以上のＢＭＰ種の選択（すなわち、存在量の測定のための選択）は、試料の種類に依存する。いくつかの実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、例えば、試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）が骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）である場合、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）を含む。他の実施形態では、１種以上のＢＭＰ種は、例えば、試料が組織（例えば、脳組織、肝組織）、または血漿、尿、もしくはＣＳＦを含む場合、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）を含む。
【0061】
いくつかの実施形態では、内部ＢＭＰ標準物質（例えば、ＢＭＰ（１４：０＿１４：０））を使用して、試料において１種以上のＢＭＰ種の存在量を測定、及び／または参照値を決定（例えば、参照試料において１種以上のＢＭＰ種の存在量を測定）する。例えば、既知量の内部ＢＭＰ標準物質を試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）に添加して、較正点として機能させることができ、それによって試料中に存在する１種以上のＢＭＰ種の量を判定することができる。いくつかの実施形態では、ＢＭＰを試料から抽出または単離するのに使用する試薬（例えば、メタノール）を、内部ＢＭＰ標準物質で「スパイク」する。典型的には、内部ＢＭＰ標準物質は、対象内で天然に生じないものである。
【0062】
ＢＭＰ種を使用した、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象の特定
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象を特定するためにＧｌｃＳｐｈの存在量を使用することに加えて、１種以上のＢＭＰ種の存在量も係る対象を特定するために使用することができる。対象は、試験試料における少なくとも１種（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、または１４５種以上）のＢＭＰ種（例えば、表１に列挙されているＢＭＰ種）の存在量が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値よりも高い場合（試験試料がＢＭＤＭである場合）、または低い場合（試験試料が肝臓、脳、脳脊髄液、血漿、もしくは尿である場合）、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象を特定するためにＧｌｃＳｐｈの存在量を使用することに加えて、１種以上のＢＭＰ種の存在量も係る対象を特定するために使用することができる。対象は、試験試料における少なくとも１種（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、または１４５種以上）のＢＭＰ種（例えば、表１に列挙されているＢＭＰ種）の存在量が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値よりも高い場合（試験試料がＢＭＤＭである場合）、または低い場合（試験試料が肝臓、脳、脳脊髄液、血漿、もしくは尿である場合）、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0063】
いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＰ（１６：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：０）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：３）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：２）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１６：０＿２２：５）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：５）、ＢＭＰ（１８：２＿１８：２）、ＢＭＰ（１６：０＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿１８：２）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：０ｅ＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：２＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）、及びＢＭＰ（１８：３＿２２：５）からなる群から選択されるＢＭＰ種のうちの少なくとも１種（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３種すべて）の存在量が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値と比較してＢＭＤＭにおいて上昇している場合、または肝臓、脳、脳脊髄液、血漿、もしくは尿において減少している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0064】
いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）、ＢＭＰ（１８：０＿２０：４）、ＢＭＰ（２０：４＿２０：４）、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）、ＢＭＰ（２０：４＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２２：６）、ＢＭＰ（１８：１＿２０：４）、ＢＭＰ（１８：０＿２２：６）及びＢＭＰ（１８：３＿２２：５）からなる群から選択されるＢＭＰ種のうちの少なくとも１種（例えば、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種または８種すべて）の存在量が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値と比較して、ＢＭＤＭにおいて上昇している場合、または肝臓、脳、脳脊髄液、血漿もしくは尿において減少している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0065】
いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＰ（１８：１＿１８：１）レベルが、参照対象または参照対象集団から取得した対応するＢＭＤＭ参照試料で測定された参照値と比較して、ＢＭＤＭにおいて上昇している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。他の実施形態では、対象は、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値と比較して、血漿、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び／または脳もしくは肝臓組織において減少している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。他の実施形態では、対象は、ＢＭＰ（２２：６＿２２：６）レベル及び／またはＢＭＰ（１８：３＿２２：５）レベルが肝組織において低下している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。他の実施形態では、対象は、ＢＭＰ（１８：３＿２２：５）レベルがミクログリアにおいて低下している場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0066】
いくつかの実施形態では、対象は、少なくともＢＭＰ種のうちの１つの存在量（例えば、試験試料中で測定される）が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値と比較して、少なくとも約１．２倍（例えば、約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または１０倍以上））ＢＭＤＭにおいて高い場合、または肝臓、脳、脳脊髄液、血漿、もしくは尿において低い場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0067】
いくつかの実施形態では、対象は、少なくともＢＭＰ種のうちの１つの存在量（例えば、試験試料中で測定される）が、参照値（例えば、参照対象または参照対象集団から得た対応する細胞、組織または体液参照試料中で測定された対応する参照値）の少なくとも約１．２倍～約５倍（例えば、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５倍）である場合に、ＦＴＤを有する、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。いくつかの実施形態では、対象は、少なくともＢＭＰ種のうちの１つの存在量が、参照対象または参照対象集団から取得した対応する細胞、組織、または体液参照試料で測定された参照値と比較して、約２倍～約３倍（例えば、約２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、または３倍）ＢＭＤＭにおいて高い場合、または肝臓、脳、脳脊髄液、血漿、もしくは尿において低い場合、ＦＴＤを有するか、またはＰＧＲＮレベルが低下していると判定される。
【0068】
検出技術
いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って、質量分析法（ＭＳ）を使用して、ＧｌｃＳｐｈの存在量及び／またはＢＭＰを検出及び／または測定する。任意の好適なＭＳ技術を使用することができる。係る技術としては、限定されないが、単一の質量分析計（例えば、四重極）を使用する単一質量分析法（ＭＳ）、及び、一連の質量分析計（例えば、３つの質量分析計）を使用して、複数のラウンドの質量分析法を実施し、典型的には、ラウンドの間に分子断片化ステップを有するタンデム質量分析法（ＭＳ／ＭＳ）が挙げられる。ＭＳ及びＭＳ／ＭＳ技術は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ））またはガスクロマトグラフィー（ＧＣ）技法と組み合わせることができる。そのような液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）、及びガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＧＣ－ＭＳ／ＭＳ）の方法により、典型的にはＭＳまたはＭＳ／ＭＳ単独で可能であるものよりも強化された質量分解及び質量測定が可能となる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って、質量分析法（ＭＳ）を使用して、ＧｌｃＳｐｈの存在量及び／またはＢＭＰを検出及び／または測定する。任意の好適なＭＳ技術を使用することができる。係る技術としては、限定されないが、単一の質量分析計（例えば、四重極）を使用する単一質量分析法（ＭＳ）、及び、一連の質量分析計（例えば、３つの質量分析計）を使用して、複数のラウンドの質量分析法を実施し、典型的には、ラウンドの間に分子断片化ステップを有するタンデム質量分析法（ＭＳ／ＭＳ）が挙げられる。ＭＳ及びＭＳ／ＭＳ技術は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ））またはガスクロマトグラフィー（ＧＣ）技法と組み合わせることができる。そのような液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー－質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）、及びガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析法（ＧＣ－ＭＳ／ＭＳ）の方法により、典型的にはＭＳまたはＭＳ／ＭＳ単独で可能であるものよりも強化された質量分解及び質量測定が可能となる。
【0069】
いくつかの実施形態では、抗体ベースの方法を使用して、ＧｌｃＳｐｈ及び／またはＢＭＰ種の存在量を検出及び／または測定する。好適な方法の非限定的な例としては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光法、及び放射免疫測定法（ＲＩＡ）技法が挙げられる。ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光法、及びＲＩＡ技法を実施するための方法は、当該技術分野において既知である。
【0070】
本開示の方法において、試料が検出に十分な量のＧｌｃＳｐｈ及び／またはＢＭＰを含み、それによりその存在量を測定することができる限り、任意の数の試料の種類を試験試料及び／または参照試料として使用することができる。非限定的な例としては、血液（例えば、全血、血漿、血清）、細胞、組織、体液（例えば、脳脊髄液、尿、気管支肺胞洗浄液、リンパ液、精液、母乳、羊水）、大便、唾液、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。好適な細胞の種類の非限定的な例としては、血液細胞（例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、赤血球、白血球）、神経細胞（例えば、脳細胞、大脳皮質細胞、脊髄細胞）、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、骨髄細胞、肝細胞、腎細胞、脾細胞、肺細胞、眼細胞（例えば、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞などの網膜細胞）、絨毛膜絨毛細胞、筋細胞、皮膚細胞、線維芽細胞、心臓細胞、リンパ節細胞、またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、試料は、細胞の一部を含む。いくつかの実施形態では、試料は、細胞または組織から精製されている。精製試料の非限定的な例としては、エンドソーム、リソソーム、細胞外小胞（例えば、エクソソーム、微小胞）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【0071】
いくつかの実施形態では、試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）は、血漿を含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）は、脳細胞または組織を含む。脳細胞または組織は、脳の前頭葉または側頭葉由来であり得る。特定の実施形態では、脳細胞または組織は、脳の前頭葉の上前頭回、中前頭回、下前頭回、または、中心前回由来であり得る。
【0073】
いくつかの実施形態では、試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）は、培養細胞である細胞を含む。非限定的な例としては、ＢＭＤＭ及びＲＰＥ細胞が挙げられる。ＢＭＤＭは、例えば、ＰＢＭＣを含む試料を入手し、その中に含有される単球を培養することによって得ることができる。
【0074】
好適な組織試料の種類の非限定的な例としては、神経組織（例えば、脳組織、大脳皮質組織、脊髄組織）、肝組織、腎組織、筋組織、心臓組織、眼組織（例えば、網膜組織）、リンパ節、骨髄、皮膚組織、血管組織、肺組織、脾組織、弁組織、及びそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、試験試料及び／または参照試料は、脳組織または肝組織を含む。
【0075】
治療に対する応答のモニタリング
一態様では、本開示は、対象におけるＰＧＲＮレベルをモニタリングするための方法を提供する。別の態様では、ＦＴＤを治療するために、化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答、または任意の療法もしくは治療薬に対する応答をモニタリングするための方法が提供される。
一態様では、本開示は、対象におけるＰＧＲＮレベルをモニタリングするための方法を提供する。別の態様では、ＦＴＤを治療するために、化合物、医薬組成物、もしくはそれらの投与レジメンに対する対象の応答、または任意の療法もしくは治療薬に対する応答をモニタリングするための方法が提供される。
【0076】
典型的には、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象由来の試験試料におけるＧｌｃＳｐｈの存在量は、１つ以上の参照値（例えば、対応する参照値）と比較することができる。ＧｌｃＳｐｈの存在量に加えて、ＦＴＤを有する、または有するリスクのある対象由来の試験試料における１種以上のＢＭＰ種の存在量もまた測定し、１つ以上の参照値（例えば、対応する参照値）と比較することができる。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ値及び／またはＢＭＰ値は、対象が治療を受ける前に、及び対象が治療を受けた後の１つ以上のより後の時点で測定される。治療後のより後の時点で測定された存在量の値を、治療前の値と比較して、対象が療法に対してどのように応答しているかを判定することができる。より後の時点で測定された存在量の値はまた、健常対照などの参照値と比較して、対象が療法に対してどのように応答しているかを判定することができる。参照値は、対象由来の試験試料の細胞、組織、または体液に対応する、健常対照の細胞、組織、または体液からのものであり得る。
【0077】
いくつかの実施形態では、参照値は、参照試料において測定されたＧｌｃＳｐｈの存在量である。いくつかの実施形態では、参照値は、参照試料において測定された１種以上のＢＭＰ種の存在量である。参照値は、測定された存在量の値（例えば、参照試料において測定された存在量の値）である場合もあれば、または測定された存在量の値から導出もしくは外挿される場合もある。いくつかの実施形態では、参照値は、例えば、参照値を複数の試料または対象集団から得る場合、値の範囲である。さらに、参照値は、単一の値（例えば、測定された存在量の値、平均値、もしくは中央値）として、または標準偏差もしくは標準誤差を伴うかもしくは伴わない値の範囲として、表すことができる。
【0078】
２つ以上の試験試料を（例えば、対象から）得る場合、それらを得る時点は、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０分間以上；約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間以上；約１、２、３、４、５、６、もしくは７日間以上；約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０週間以上；またはさらに長い期間、間隔を空けることができる。３つ以上の試験試料を得る場合、各試験試料を得るときの間の時間間隔は、すべて同じであってもよく、間隔はすべて異なっていてもよく、またはそれらの組み合わせであってもよい。
【0079】
いくつかの実施形態では、第１の試験試料を、対象がＦＴＤについて治療される前に得（すなわち、治療前の試験試料）、第２の試験試料を、対象がＦＴＤについて治療された後に得る（すなわち、治療後の試験試料）。いくつかの実施形態では、第１の試験試料と第２の試験試料の両方を、対象が治療された後に対象から得る。すなわち、第１の試験試料を、第２の試験試料よりも、治療中のより早い時点で対象から得る。いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上）の治療前及び／または治療後の試験試料を対象から得る。さらに、得る治療前及び治療後の試験試料の数は、同じである必要はない。
【0080】
方法のいくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈの存在量及び１つ以上のＢＭＰ種の存在量の両方を、対象由来の同じ試験試料で測定することができる。他の実施形態では、２つの試験試料（例えば、同時に取得した２つの試験試料、または異なる時間に取得した２つの試験試料）を対象から取得することができ、一方の試験試料をＧｌｃＳｐｈの存在量を測定するために使用し、もう一方の試験試料を１つ以上のＢＭＰ種の存在量を測定するために使用することができる。２つの試験試料は、対象の同じ流体、細胞、または組織（例えば、全血、血漿、細胞、組織、血清、脳脊髄液、間質液、唾液、尿、またはリンパ液）から取得することができる。他の実施形態では、２つの試験試料は、対象の異なる流体、細胞、または組織（例えば、一方の試料を血漿から、もう一方の試料を脳細胞または脳組織から）から取得することができる。
【0081】
いくつかの実施形態では、測定されたＧｌｃＳｐｈの存在量が、対象がいずれの治療も受ける前の対象由来の参照試料から取得した参照値の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％以内である場合、対象は治療に応答していないと判定され得る。
【0082】
いくつかの実施形態では、測定されたＧｌｃＳｐｈの存在量が、健常対照対象由来の参照試料から取得した参照値の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％以内である場合、対象は治療に応答していると判定され得る。
【0083】
いくつかの実施形態では、測定された１種以上のＢＭＰ種の存在量が、対象がいずれの治療も受ける前の対象由来の参照試料から取得した参照値の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％以内である場合、対象は治療に応答していないと判定され得る。
【0084】
いくつかの実施形態では、測定された１種以上のＢＭＰ種の存在量が、健常対照対象由来の参照試料から取得した参照値の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％以内である場合、対象は治療に応答していると判定され得る。
【0085】
いくつかの実施形態では、測定された１種以上のＢＭＰ種の存在量が、参照値よりも約３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％以上高いか、または低い場合、対象は治療に応答していないと判定され得る。
【0086】
対象が、ＦＴＤの治療に応答していない場合、いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤（例えば、ＰＧＲＮ）の投与量を変更（例えば、増加）及び／または投与間隔を変更する（例えば、投与間の時間を短縮する）。いくつかの実施形態では、対象が治療に応答していない場合、異なる治療剤が選択される。いくつかの実施形態では、対象が治療に応答していない場合、１つ以上の治療剤を中止する。
【0087】
ＦＴＤを治療するための化合物
本明細所に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを治療するための化合物は、ＰＧＲＮまたはＰＧＲＮ誘導体であり得る。ＰＧＲＮ誘導体は、ＰＧＲＮの修飾された形態を指し、これは、ＰＧＲＮのドラッガビリティを増加させる、体内の特定の領域にＰＧＲＮを標的させる、その薬物動態または薬力学的特性を向上する、その製造及び／または貯蔵寿命を援助するために修飾される。
本明細所に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを治療するための化合物は、ＰＧＲＮまたはＰＧＲＮ誘導体であり得る。ＰＧＲＮ誘導体は、ＰＧＲＮの修飾された形態を指し、これは、ＰＧＲＮのドラッガビリティを増加させる、体内の特定の領域にＰＧＲＮを標的させる、その薬物動態または薬力学的特性を向上する、その製造及び／または貯蔵寿命を援助するために修飾される。
【0088】
ＰＧＲＮ誘導体は、Ｆｃポリペプチドの二量体に付着したＰＧＲＮを含む、Ｆｃ融合タンパク質を含むことができる。係る融合タンパク質中に、いくつかの実施形態では、融合タンパク質は１つのＰＧＲＮ分子及びＦｃポリペプチドの二量体を含むことができる。例えば、ＰＧＲＮは、直接またはリンカーを介して、ＦｃポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に二量体中で融合することができる。他の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＰＧＲＮ分子及びＦｃポリペプチドの二量体を含むことができる。例えば、第１のＰＧＲＮは、直接またはリンカーを介して、第１のＦｃポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に二量体中で融合することができ、第２のＰＧＲＮは、直接またはリンカーを介して、第２のＦｃポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に二量体中で融合することができる。係る融合タンパク質は、国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号に詳しく記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0089】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＦＴＤを治療するための化合物は、１つ以上の突然変異をグラニュリン（ＧＲＮ）遺伝子に有する対象におけるＰＧＲＮレベルを増加させることができる、遺伝子治療アプローチにおける野生型ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む発現構築物であり得る。例えば、発現構築物を含む組み換え型アデノ関連ウイルスベクターを使用して、いかなる突然変異も含まない野生型ＧＲＮ遺伝子を対象に送達することができる。係る遺伝子治療は、例えば、米国特許公開第ＵＳ２０２０／００７１６８０号に記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0090】
いくつかの実施形態では、ＦＴＤを治療するための化合物は、ソルチリン阻害剤、例えば、抗ソルチリン抗体であり得る。ソルチリンは、いくつかのリガンドのレセプターであり、かつまた、分解のためにトランスゴルジネットワークから後期エンドソーム及びリソソームにカーゴを分別選別するよう機能するＩ型膜貫通タンパク質である。ソルチリンはＰＧＲＮに結合し、リソソーム分解のためにそれを標的にすることによって、ＰＧＲＮのレベルをネガティブに調製する。ＦＴＤを治療するために使用されるソルチリン阻害剤とは、ソルチリンとＰＧＲＮとの間の相互作用を阻害し、ソルチリンがＰＧＲＮに結合することを防止し、及び／またはソルチリンのレベルを減少させることができる化合物を指す。いくつかの実施形態では、ソルチリン阻害剤は、抗ソルチリン抗体であり得る。抗ソルチリン抗体及びそのバリアントは、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１６／１６４６３７号及び同ＷＯ２０２０／０１４６１７号に記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＷＯ２０１６／１６４６３７に記載される特定の抗体には、Ｓ－２、Ｓ－５、Ｓ－６、Ｓ－８、Ｓ－１４、Ｓ－１５、Ｓ－１５－１０－７、Ｓ－１５－６、Ｓ－１８、Ｓ－１９、Ｓ－２０、Ｓ－２１、Ｓ－２２、Ｓ－２９、Ｓ－３０、Ｓ－４５、Ｓ－４９、Ｓ－５１、Ｓ－５７、Ｓ－６０、Ｓ－６０－１、Ｓ－６０－２、Ｓ－６０－３、Ｓ－６０－４、Ｓ－６０－５、Ｓ－６０－６、Ｓ－６０－７、６０－８、Ｓ－６０－９、Ｓ－６１、Ｓ－６３、Ｓ－６４、Ｓ－６５、Ｓ－７２、Ｓ－８２、及びＳ－８３と称すクローンが含まれる。ＷＯ２０２０／０１４６１７に記載される特定の抗ソルチリン抗体には、Ｓ－６０、Ｓ－６０－１、Ｓ－６０－２、Ｓ－６０－３、Ｓ－６０－４、Ｓ－６０－７、Ｓ－６０－８、Ｓ－６０－１０、Ｓ－６０－１１、Ｓ－６０－１２、Ｓ－６０－１３、Ｓ－６０－１４、Ｓ－６０－１５［Ｎ３３（ｗｔ）］、Ｓ－６０－１５．１［Ｎ３３Ｔ］、Ｓ－６０－１５．２［Ｎ３３Ｓ］、Ｓ－６０－１５．３［Ｎ３３Ｇ］、Ｓ－６０－１５．４［Ｎ３３Ｒ］、Ｓ－６０－１５．５［Ｎ３３Ｄ］、Ｓ－６０－１５．６［Ｎ３３Ｈ］、Ｓ－６０－１５．７［Ｎ３３Ｋ］、Ｓ－６０－１５．８［Ｎ３３Ｑ］、Ｓ－６０－１５．９［Ｎ３３Ｙ］、Ｓ－６０－１５．１０［Ｎ３３Ｅ］、Ｓ－６０－１５．１１［Ｎ３３Ｗ］、Ｓ－６０－１５．１２［Ｎ３３Ｆ］、Ｓ－６０－１５．１３［Ｎ３３Ｉ］、Ｓ－６０－１５．１４［Ｎ３３Ｖ］、Ｓ－６０－１５．１５［Ｎ３３Ａ］、Ｓ－６０－１５．１６［Ｎ３３Ｍ］、Ｓ－６０－１５．１７［Ｎ３３Ｌ］、Ｓ－６０－１６；Ｓ－６０－１８、Ｓ－６０－１９、Ｓ－６０－２４と称すクローン、及び末端リジン（例えば、Ｓ－６０－１５．１［Ｎ３３Ｔ］）を有するまたは有さないＦｃＬＡＬＡＰＳを有する重鎖を有するバリアントが含まれる。いくつかの実施形態では、抗ソルチリン抗体は、ＡＬ１０１またはＡＬ１００である。
【0091】
ＩＶ．キット
別の態様では、本開示は、対象（例えば、試験対象及び／または参照対象もしくは参照対象集団）においてＰＧＲＮレベルをモニタリングする際に使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、対象から得た試験試料において、及び／または参照対象もしくは参照対象集団から得た参照試料において）ＧｌｃＳｐｈの存在量の測定または較正に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、試験試料及び／または参照試料などの試料において）ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定または較正するために使用することができる、ＧｌｃＳｐｈ標準物質（例えば、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質）を含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ、及び／またはブタにおいて天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、ヒトにおいて天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、実施例に使用されるＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）などの重水素標識ＧｌｃＳｐｈである。
別の態様では、本開示は、対象（例えば、試験対象及び／または参照対象もしくは参照対象集団）においてＰＧＲＮレベルをモニタリングする際に使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、対象から得た試験試料において、及び／または参照対象もしくは参照対象集団から得た参照試料において）ＧｌｃＳｐｈの存在量の測定または較正に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、試験試料及び／または参照試料などの試料において）ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定または較正するために使用することができる、ＧｌｃＳｐｈ標準物質（例えば、内部ＧｌｃＳｐｈ標準物質）を含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、対象において天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ、及び／またはブタにおいて天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、ヒトにおいて天然に存在しないＧｌｃＳｐｈを含む。いくつかの実施形態では、ＧｌｃＳｐｈ標準物質は、実施例に使用されるＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）などの重水素標識ＧｌｃＳｐｈである。
【0092】
さらに、ＧｌｃＳｐｈの存在量を測定または較正することに加えて、いくつかの実施形態では、キットはまた、（例えば、対象から得た試験試料において、及び／または参照対象もしくは参照対象集団から得た参照試料において）１種以上のビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種の存在量を測定または較正するために使用するためのものである。いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、試験試料及び／または参照試料などの試料において）１種以上のＢＭＰ種の存在量を測定または較正するために使用することができる、ＢＭＰ標準物質（例えば、内部ＢＭＰ標準物質）を含む。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ標準物質は、対象において天然に存在しないＢＭＰ種を含む。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ標準物質は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ、及び／またはブタにおいて天然に存在しないＢＭＰ種を含む。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ標準物質は、ヒトにおいて天然に存在しないＢＭＰ種を含む。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ標準物質は、ＢＭＰ（１４：０＿１４：０）を含む。
【0093】
いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の試薬をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、対象から）試験試料及び／または（例えば、参照対象または参照対象集団から）参照試料を得るための試薬、試料を処理する（例えば、試験試料及び／または参照試料からＧｌｃＳｐｈ及び／またはＢＭＰを単離または精製する）ための試薬、試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）においてＧｌｃＳｐｈ及び／またはＢＭＰの存在量を測定するための試薬、及び／または試料（例えば、試験試料及び／または参照試料）においてＧｌｃＳｐｈ及び／またはＢＭＰの存在量を較正するための試薬を含む。
【0094】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法を実践するための指示（例えば、プロトコール）を含有する説明用資料（例えば、対象（例えば、試験対象及び／または参照対象もしくは参照対象集団）におけるＰＧＲＮレベルをモニタリングするキットを使用するための説明書）をさらに含む。該説明用資料は通常、書かれた資料または印刷物を含むが、それに限定されない。かかる説明を保存し、それらをエンドユーザーに伝えることが可能な任意の媒体が、本開示によって企図される。かかる媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）等が挙げられるがこれらに限定されない。かかる媒体は、かかる説明用資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含む場合がある。
【実施例】
【0095】
Ｖ．実施例
以下の実施例は例示目的のためのみに提供され、いかなる方法によっても本開示を限定することを意図しない。
以下の実施例は例示目的のためのみに提供され、いかなる方法によっても本開示を限定することを意図しない。
【0096】
一般的な手順：ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを使用したヒト血漿中のグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｐｈ）の定量化
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析のための試料を調製するために、２０μＬのアリコートの較正標準物質（ＳＴＤ）、品質管理試料（ＱＣ）、及び未知の血漿試料を清潔な９６－ウェルプレートに移す。水溶液中の２０μＬの１％ウシ血清アルブ（ＢＳＡ）をＳＴＤ及びＱＣに添加する一方で、２０μＬのメタノールを血漿試料及び血漿マトリックスＱＣに添加する。１０μＬの内部標準使用液（０．５％ギ酸及び５ｍＭギ酸アンモニウムを有するアセトニトリル／イソプロピルアルコール／水９２．５／５／２．５中の５ｎｇ／ｍＬのＧｌｃＳｐｈ－ｄ５）を各試料に添加し、その後、水中の１５０μＬの１％水酸化アンモニウムを添加してｐＨを調製する。混合した後、試料をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＬＥ＋２００μＬ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ Ｌｉｑｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｌａｔｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）に装填する。試料がプレート吸収剤に完全に吸収されたら、酢酸エチルを使用して分析物を清潔な収集プレートに溶離する。溶離液を４０℃の浄化窒素ガス流の存在下で完全に乾燥させ、０．５％ギ酸及び５ｍＭギ酸アンモニウムを有する１５０μＬのアセトニトリル／イソプロピルアルコール／水９２．５／５／２．５中で再構成した後、分析のために試料をＬＣ－ＭＳ／ＭＳに注入した。
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析のための試料を調製するために、２０μＬのアリコートの較正標準物質（ＳＴＤ）、品質管理試料（ＱＣ）、及び未知の血漿試料を清潔な９６－ウェルプレートに移す。水溶液中の２０μＬの１％ウシ血清アルブ（ＢＳＡ）をＳＴＤ及びＱＣに添加する一方で、２０μＬのメタノールを血漿試料及び血漿マトリックスＱＣに添加する。１０μＬの内部標準使用液（０．５％ギ酸及び５ｍＭギ酸アンモニウムを有するアセトニトリル／イソプロピルアルコール／水９２．５／５／２．５中の５ｎｇ／ｍＬのＧｌｃＳｐｈ－ｄ５）を各試料に添加し、その後、水中の１５０μＬの１％水酸化アンモニウムを添加してｐＨを調製する。混合した後、試料をＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＬＥ＋２００μＬ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ Ｌｉｑｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｌａｔｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）に装填する。試料がプレート吸収剤に完全に吸収されたら、酢酸エチルを使用して分析物を清潔な収集プレートに溶離する。溶離液を４０℃の浄化窒素ガス流の存在下で完全に乾燥させ、０．５％ギ酸及び５ｍＭギ酸アンモニウムを有する１５０μＬのアセトニトリル／イソプロピルアルコール／水９２．５／５／２．５中で再構成した後、分析のために試料をＬＣ－ＭＳ／ＭＳに注入した。
【0097】
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を、Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ６５００ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを備えたＥｘｉｏｎＬＣ ＡＤ ＵＨＰＬＣシステム（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ，Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）にて実施する。ＧｌｃＳｐｈ及びＧｌｃＳｐｈ－ｄ５のＭＲＭ移行はそれぞれ４６２．３～２８２．１及び４６７．６～２８７．４である。陽イオンモードでエレクトロスプレイイオン化を実施した。デクラスタリング電位は６０ｖであり、衝突エネルギーは３１ｖである。ＨＰＬＣクラマトグラフィーをＡｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ ＨＩＬＩＣカラム（１．７μｍ、１００×２．１ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）で確立し、カラムを実施中は５５℃に維持する。
【0098】
マトリックス干渉からＧｌｃＳｐｈをＬＣ分離するために、水中の０．１％ギ酸及び１０ｍＭギ酸アンモニウム（移動相１）及びアセトニトリル中の０．１％ギ酸（移動相２）の２つの移動相を使用する。流量は０．４ｍＬ／分である。移動相Ｂ濃度を９３％に初期設定し、６．５分間維持した後、６．５１分に５０％に減少させ、０．９９分間維持した後、７．５１分に９３％に増加させる。２．４９分間９３％で維持した後、勾配は１０分に終了する。
【0099】
実施例１．ＧＲＮ関連ＦＴＤのためのバイオマーカーとしてのＧｌｃＳｐｈ
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ（ＮＩＡ）により付与される共同契約助成（Ｕ２４ＡＧ２１８８６）の下で政府支援を受けている、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＣＲＡＤ）からの試料を、この研究に用いた。孤発性ＦＴＤ患者（ｎ＝２６）、ＧＲＮ突然変異ＦＴＤ患者（ｎ＝１６）、及び臨床的正常対照対象（ｎ＝２０）から血漿試料を得た。
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ａｇｉｎｇ（ＮＩＡ）により付与される共同契約助成（Ｕ２４ＡＧ２１８８６）の下で政府支援を受けている、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＣＲＡＤ）からの試料を、この研究に用いた。孤発性ＦＴＤ患者（ｎ＝２６）、ＧＲＮ突然変異ＦＴＤ患者（ｎ＝１６）、及び臨床的正常対照対象（ｎ＝２０）から血漿試料を得た。
【0100】
血漿試料を匿名にし、ランダム化し、メタノールで代謝産物／脂質抽出に供し、量的ＬＣ－ＭＳ／ＭＳプラットフォームで分析した。検体の同一性を標準化合物で確認し、各検体のシグナルを、対応する内部標準物質に対して正規化した。生物統計学者がバイオマーカーデータを分析した。
【0101】
図１に示されるように、遺伝子変異のない臨床的正常対照と比較して、ＧＲＮ関連ＦＴＤ患者（Ｐ＜０．０１）由来の血漿試料中でＧｌｃＳｐｈの有意な増加がみられるが、非ＧＲＮ ＦＴＤ患者にはみられない。
【0102】
実施例２．様々な試料におけるＧｌｃＳｐｈの液体クロマトグラフィー質量（ＬＣ－ＭＳ）分析
組織試料を計量し（２０ｍｇ）、次いで、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒホモジナイザー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、重水素標識ＧｌｃＳｐｈ、ＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）でスパイクした２００ｍＬのメタノール中でホモジナイズした。ホモジネートを、４℃で２０分間、１４，０００ｒｐｍで回転させた。次いで、さらなる分析のために、上清をＬＣ－ＭＳバイアルに移した。次いで、ＬＣ－ＭＳによるさらなる分析のために、メタノール抽出物を、窒素流存在下で４時間乾燥させ、５ｍＭのギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する１００μＬの９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ中に再懸濁した。
組織試料を計量し（２０ｍｇ）、次いで、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒホモジナイザー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、重水素標識ＧｌｃＳｐｈ、ＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）でスパイクした２００ｍＬのメタノール中でホモジナイズした。ホモジネートを、４℃で２０分間、１４，０００ｒｐｍで回転させた。次いで、さらなる分析のために、上清をＬＣ－ＭＳバイアルに移した。次いで、ＬＣ－ＭＳによるさらなる分析のために、メタノール抽出物を、窒素流存在下で４時間乾燥させ、５ｍＭのギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する１００μＬの９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ中に再懸濁した。
【0103】
生体液（１０μＬ）を、１００μＬのＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）含有メタノールでタンパク質沈殿させ、４℃で２０分間、１４，０００ｒｐｍで回転させた。次いで、さらなる分析のために、上清をＬＣ－ＭＳバイアルに移した。次いで、ＬＣ－ＭＳによるさらなる分析のために、メタノール抽出物を、窒素流存在下で４時間乾燥させ、５ｍＭのギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する１００μＬの９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ中に再懸濁した。
【0104】
細胞をＰＢＳでしっかりと洗浄し、内部標準物質としてＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）でスパイクした水：メタノール［１：９、ｖｏｌ：ｖｏｌ］の混合物でＧｌｃＳｐｈを抽出した。試料をボルテックス混合し、１４，０００ｒｐｍで２０分間、４℃で遠心分離した。次いで、さらなる分析のために、上清をＬＣ－ＭＳバイアルに移した。次いで、ＬＣ－ＭＳによるさらなる分析のために、メタノール抽出物を、窒素流存在下で４時間乾燥させ、５ｍＭのギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する１００μＬの９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ中に再懸濁した。
【0105】
エレクトロスプレー質量分析（ＱＴＲＡＰ ６５００＋）とカップリングされた液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ Ｎｅｘｅｒａ Ｘ２）によってＧｌｃＳｐｈ分析を実施した。各分析について、２～５μＬの試料を、４５℃で０．４８ｍＬ／分の流速を使用して、ＨＡＬＯ ＨＩＬＩＣ２．０μｍ、３．０×１５０ｍｍカラム（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＰＮ９１８１３－７０１）に注入した。移動相Ａは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏで構成された。移動相Ｂは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ Ｈ２Ｏ／ＩＰＡ／ＡＣＮで構成された。勾配を次のようにプログラムした：０．０～２．０分は１００％Ｂ、２．１分に９５％Ｂ、４．５分に８５％Ｂ、８５％Ｂで６．０分まで維持、６．１分に０％Ｂに低下させ、７．０分まで維持、７．１分に１００％まで再度上昇させ、８．５分まで維持。エレクトロスプレイイオン化を陽イオンまたは陰イオンモードで実施した。次の設定を適用した：カーテンガス３０ｐｓｉ；衝突気体を中に設定；イオンスプレー電圧５５００Ｖ；温度４００℃；イオン源ガス１ ５０ｐｓｉ；イオン源ガス２ ６０ｐｓｉ；入口電位１０Ｖ；及び衝突セル出口電位１２．５Ｖ。表２は、ＧｌｃＳｐｈ及びＧａｌＳｐｈ種のＬＣ－ＭＳ分析の取得パラメータ及び保持時間（ＲＴ）情報を示す。
【0106】
ＧｌｃＳｐｈを、保持時間及び市販の参照標準物質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）のＭＲＭ特性に基づいて同定した。定量化を、ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔ３．０２（Ｓｃｉｅｘ）を使用して内部標準物質ＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）に対して実施した。代謝産物を、総タンパク質量、組織重量、または体積のいずれかに対して正規化した。
【0107】
実施例３．ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの血漿中のＧｌｃＳｐｈの分析
血漿採取ならびに脂質抽出及びＧｌｃＳｐｈ分析のための処理
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスを、国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号に記載されるように生成した。
血漿採取ならびに脂質抽出及びＧｌｃＳｐｈ分析のための処理
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスを、国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号に記載されるように生成した。
【0108】
Ｆｕｓｉｏｎ１を尾静脈を介してＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスに注入した。致死量のトリブロモエタノールを使用してＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスを麻酔状態にし、２５ゲージ針（参照番号ＳＳ－０１Ｔ２５１６）に取り付けられた１ｍＬテルモツベルクリン注射器を使用して、全血を心臓穿刺によって採取した。次いで、血液をＥＤＴＡコーティングチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ５００ Ｋ３Ｅ、参照番号２０１３４１１０２）に移し、約１０回反転させた。次に、試料を４℃及び１２７００ＲＰＭで７分間回転させた。次に、上清を、低タンパク質結合を有する新しいチューブに移し、急速に冷凍した。脂質を抽出するために、血漿を氷上で解凍し、１０μＬを９６ウェルＶ型ボトムハーフディープウェルプレート（Ｗａｔｅｒｓ、参照番号１８６００５８３７）に移した。内部標準物質を含む、２００μＬのＬＣ－ＭＳグレードメタノールを血漿試料に添加し、血漿試料を室温で６５０ｒｍｐで、５分間振盪した。次に、試料を－２０℃で１時間保管し、タンパク質を沈殿させた。このインキュベーションの後、プレートを２０分間、４℃で４，０００ｘｇで回転させた。次いで、５０μＬの上清を抽出しガラスインサートを備えた９６ウェルプレート（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｌｅｓ＆Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、参照番号２７３５０）に移した。次に、試料を窒素流存在下で約２時間乾燥させ、５ｍＭのギ酸アンモニウム及び０．５％のギ酸を有する１００μＬアセトニトリル／イソプロパノール／水（９２．５／５／２．５、ｖ／ｖ／ｖ）中で再懸濁させた。
【0109】
ＧｌｃＳｐｈのためのＬＣ－ＭＳ測定法
ＧｌｃＳｐｈ分析を、エレクトロスプレー質量分析法（Ｓｃｉｅｘ ＱＴＲＡＰ６５００＋、Ｓｃｉｅｘ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）と連結した液体クロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ Ｘ２ システム、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ，ＵＳＡ）により実施した。各分析について、１０μＬの試料を、４５℃で０．４５ｍＬ／分の流速を使用して、ＨＡＬＯ ＨＩＬＩＣ２．０μｍ、３．０×１５０ｍｍカラム（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＰＮ９１８１３－７０１）に注入した。移動相Ａは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏで構成された。移動相Ｂは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ Ｈ２Ｏ／ＩＰＡ／ＡＣＮで構成された。勾配を次のようにプログラムした：０．０～３．１分は１００％Ｂ、３．２分に９５％Ｂ、５．７分に８５％Ｂ、８５％Ｂで７．１分まで維持、７．２５分に０％Ｂに低下させ、８．７５分まで維持、１０．６５分に１００％まで再度上昇させ、１１分まで維持。エレクトロスプレイイオン化を陽イオンモードで、次の設定を適用して実施した：カーテンガス２５；衝突気体を中に設定；イオンスプレー電圧５５００；温度３５０℃；イオン源ガス１ ５５；イオン源ガス２ ６０。Ａｎａｌｙｓｔ１．６．（Ｓｃｉｅｘ）を、多重反応モニタリングモード（ＭＲＭ）で使用して、以下のパラメータを用いデータ取得を実施した：滞留期間（ミリ秒）及びコリジョンエネルギー（ＣＥ）；入口電位（ＥＰ）１０；及びコリジョンセル出口電位（ＣＸＰ）１２．５。ＧｌｃＳｐｈを、同位体標識内部標準物質ＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）を使用して定量化した。ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔ３．０２（Ｓｃｉｅｘ）を使用して定量化を実施した。
ＧｌｃＳｐｈ分析を、エレクトロスプレー質量分析法（Ｓｃｉｅｘ ＱＴＲＡＰ６５００＋、Ｓｃｉｅｘ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）と連結した液体クロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ Ｘ２ システム、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ，ＵＳＡ）により実施した。各分析について、１０μＬの試料を、４５℃で０．４５ｍＬ／分の流速を使用して、ＨＡＬＯ ＨＩＬＩＣ２．０μｍ、３．０×１５０ｍｍカラム（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＰＮ９１８１３－７０１）に注入した。移動相Ａは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ ＡＣＮ／ＩＰＡ／Ｈ２Ｏで構成された。移動相Ｂは、５ｍＭギ酸アンモニウム及び０．５％ギ酸を有する９２．５／５／２．５ Ｈ２Ｏ／ＩＰＡ／ＡＣＮで構成された。勾配を次のようにプログラムした：０．０～３．１分は１００％Ｂ、３．２分に９５％Ｂ、５．７分に８５％Ｂ、８５％Ｂで７．１分まで維持、７．２５分に０％Ｂに低下させ、８．７５分まで維持、１０．６５分に１００％まで再度上昇させ、１１分まで維持。エレクトロスプレイイオン化を陽イオンモードで、次の設定を適用して実施した：カーテンガス２５；衝突気体を中に設定；イオンスプレー電圧５５００；温度３５０℃；イオン源ガス１ ５５；イオン源ガス２ ６０。Ａｎａｌｙｓｔ１．６．（Ｓｃｉｅｘ）を、多重反応モニタリングモード（ＭＲＭ）で使用して、以下のパラメータを用いデータ取得を実施した：滞留期間（ミリ秒）及びコリジョンエネルギー（ＣＥ）；入口電位（ＥＰ）１０；及びコリジョンセル出口電位（ＣＸＰ）１２．５。ＧｌｃＳｐｈを、同位体標識内部標準物質ＧｌｃＳｐｈ（ｄ５）を使用して定量化した。ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔ３．０２（Ｓｃｉｅｘ）を使用して定量化を実施した。
【0110】
血漿中のＧｌｃＳｐｈについての結果
ＧｌｃＳｐｈのレベルを、５ｍｇ／ｋｇのＦｕｓｉｏｎ１（図２のＧｒｎＫＯ＋Ｆｕｓ．１）のＩＶ投与を受けたＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図２のＧｒｎＫＯ）、同腹仔の対照（図２のＧｒｎＷＴ）、及びＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの血漿中で評価した。Ｆｕｓｉｏｎ１は、Ｆｃポリペプチドの二量体に融合されたＰＧＲＮ分子を含むＰＧＲＮ誘導体である。特に、Ｆｕｓｉｏｎ１は、（１）（Ｇ４Ｓ）２リンカーを介して二量体中の第１のＦｃポリペプチドのＣ末端に融合したＰＧＲＮ分子、及び（２）二量体中の第２のＦｃポリペプチドを含む。Ｆｕｓｉｏｎ１中の第１のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化ならびにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（ＥＵ番号付けスキームに従った）を促進してエフェクター機能を低減するために、穴突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付けスキームに従った）で修飾され、第２のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）結合、ノブ突然変異Ｔ３６６Ｗ、並びにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を可能にする突然変異で修飾される。Ｆｕｓｉｏｎ１は、国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号（そこでのＦｕｓｉｏｎ１１に対応）に詳しく記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＧｌｃＳｐｈのレベルを、５ｍｇ／ｋｇのＦｕｓｉｏｎ１（図２のＧｒｎＫＯ＋Ｆｕｓ．１）のＩＶ投与を受けたＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図２のＧｒｎＫＯ）、同腹仔の対照（図２のＧｒｎＷＴ）、及びＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの血漿中で評価した。Ｆｕｓｉｏｎ１は、Ｆｃポリペプチドの二量体に融合されたＰＧＲＮ分子を含むＰＧＲＮ誘導体である。特に、Ｆｕｓｉｏｎ１は、（１）（Ｇ４Ｓ）２リンカーを介して二量体中の第１のＦｃポリペプチドのＣ末端に融合したＰＧＲＮ分子、及び（２）二量体中の第２のＦｃポリペプチドを含む。Ｆｕｓｉｏｎ１中の第１のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化ならびにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（ＥＵ番号付けスキームに従った）を促進してエフェクター機能を低減するために、穴突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付けスキームに従った）で修飾され、第２のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）結合、ノブ突然変異Ｔ３６６Ｗ、並びにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を可能にする突然変異で修飾される。Ｆｕｓｉｏｎ１は、国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号（そこでのＦｕｓｉｏｎ１１に対応）に詳しく記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0111】
ＧｒｎＫＯマウスにおいて、血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルが、ＧｒｎＷＴマウスよりも２．４倍高かった。（それぞれ０．４５６±０．０６５ｎｇ／μＬ＆０．１９０±０．０２１ｎｇ／μＬ、ｐ＝０．００２）。しかし、Ｆｕｓｉｏｎ１治療を受けた７日後、ＧｒｎＫＯマウスの血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルが、Ｆｕｓｉｏｎ１を受けていないＧｒｎＫＯマウスのＧｌｃＳｐｈレベルと比較して、７１％減少した（０．２６６１±０．０５２１８ｎｇ／μＬ、ｐ＝０．０３０）。
【0112】
実施例４．ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの脳及び肝臓中のＧｌｃＳｐｈの分析
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにおけるＧｌｃＳｐｈの発現増加が血漿に特有のものであるのか、または組織でも見出されるのかを判定するために、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにＦｕｓｉｏｎ１またはＦｕｓｉｏｎ２を週１回の注射で５ｍｐｋで６週間投与した、インビボ実験を実施した。Ｆｕｓｉｏｎ１は、上記実施例３、及び国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号（そこでのＦｕｓｉｏｎ１１に対応）に記載されている。Ｆｕｓｉｏｎ２は、Ｆｕｓｉｏｎ１と同様であるが、Ｆｕｓｉｏｎ２中の第２のＦｃポリペプチドはＴｆＲに結合するように修飾されていない。Ｆｕｓｉｏｎ２は、（１）（Ｇ４Ｓ）２リンカー（第１のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化ならびにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（ＥＵ番号付けスキームに従った）を促進してエフェクター機能（国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号における配列番号２１５）を低減するために、穴突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付けスキームに従った）で修飾される）を介して第１のＦｃポリペプチドのＣ末端に融合したＰＧＲＮ分子、及び（２）ノブ突然変異Ｔ３６６Ｗ、並びにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号における配列番号２６２）で修飾された第２のＦｃポリペプチドを含む。Ｆｕｓｉｏｎ１がヒトＴｆＲに結合することができるのに対し、Ｆｕｓｉｏｎ２はできない。ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの脳、肝臓及び血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルを測定し、Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２のこの表現型を回復する能力を試験した。
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにおけるＧｌｃＳｐｈの発現増加が血漿に特有のものであるのか、または組織でも見出されるのかを判定するために、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにＦｕｓｉｏｎ１またはＦｕｓｉｏｎ２を週１回の注射で５ｍｐｋで６週間投与した、インビボ実験を実施した。Ｆｕｓｉｏｎ１は、上記実施例３、及び国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号（そこでのＦｕｓｉｏｎ１１に対応）に記載されている。Ｆｕｓｉｏｎ２は、Ｆｕｓｉｏｎ１と同様であるが、Ｆｕｓｉｏｎ２中の第２のＦｃポリペプチドはＴｆＲに結合するように修飾されていない。Ｆｕｓｉｏｎ２は、（１）（Ｇ４Ｓ）２リンカー（第１のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化ならびにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（ＥＵ番号付けスキームに従った）を促進してエフェクター機能（国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号における配列番号２１５）を低減するために、穴突然変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付けスキームに従った）で修飾される）を介して第１のＦｃポリペプチドのＣ末端に融合したＰＧＲＮ分子、及び（２）ノブ突然変異Ｔ３６６Ｗ、並びにＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異（国際特許公開第ＷＯ２０１９／２４６０７１号における配列番号２６２）で修飾された第２のＦｃポリペプチドを含む。Ｆｕｓｉｏｎ１がヒトＴｆＲに結合することができるのに対し、Ｆｕｓｉｏｎ２はできない。ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスの脳、肝臓及び血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルを測定し、Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２のこの表現型を回復する能力を試験した。
【0113】
血漿採取及びＧｌｃＳｐｈ分析のための調製を実施例３に記載の通りに実行した。脳及び肝臓組織の採取及びＧｌｃＳｐｈ分析のための調製は以下に記載の通りである。
【0114】
脳及び肝臓組織収集ならびにＧｌｃＳｐｈ分析のための処理
組織ＬＣ－ＭＳ調製について、組織採取中に、約２０ｍｇ（すなわち、２０±２ｍｇ）の大脳皮質または肝臓組織を解剖し、秤量し、急速凍結した。内部標準物質でスパイクした４００μＬのメタノールを各試料に添加し、２５Ｈｚで３０秒間振盪することによって、３ｍｍタングステンカーバイドビーズで均質化した。次いで、メタノール画分を１４，０００ｇ、４℃、２０分間の遠心分離を介して単離し、その後、上清を９６ウェルプレートに移し、－２０℃で１時間インキュベートし、その後、さらに４，０００ｇ、４℃、２０分間の遠心分離にかけ、ＬＣ－ＭＳ分析のためにガラスバイアルに移した。
組織ＬＣ－ＭＳ調製について、組織採取中に、約２０ｍｇ（すなわち、２０±２ｍｇ）の大脳皮質または肝臓組織を解剖し、秤量し、急速凍結した。内部標準物質でスパイクした４００μＬのメタノールを各試料に添加し、２５Ｈｚで３０秒間振盪することによって、３ｍｍタングステンカーバイドビーズで均質化した。次いで、メタノール画分を１４，０００ｇ、４℃、２０分間の遠心分離を介して単離し、その後、上清を９６ウェルプレートに移し、－２０℃で１時間インキュベートし、その後、さらに４，０００ｇ、４℃、２０分間の遠心分離にかけ、ＬＣ－ＭＳ分析のためにガラスバイアルに移した。
【0115】
ＧｌｃＳｐｈの分析について、メタノール画分のアリコートをＮ２ガス存在下で乾燥させ、次に、５ｍＭのギ酸アンモニウム（ＭＳグレード）及び０．５％のギ酸（ＭＳグレード）を有する１００μＬの９２．５／５／２．５ ＣＡＮ／ＩＰＡ／Ｈ２（ＭＳグレード）中で再懸濁させた。試料をボルテックスし、その後、遠心分離にかけガラスバイアルに移した。ＧｌｃＳｐｈについてのＬＣ－ＭＳ測定法を実施例３に記載の通りに実施した。
【0116】
脳、肝臓及び血漿中のＧｌｃＳｐｈについての結果
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスは、血漿について観察されたように、対照マウスと比較してより高いＧｌｃＳｐｈの脳及び肝臓レベルを有することが見出された。５ｍｐｋで６週間融合タンパク質を週１回投与した後、Ｆｕｓｉｏｎ１がＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにおける脳中のＧｌｃＳｐｈレベルを完全に回復したことが見出された一方で、Ｆｕｓｉｏｎ２は、この表現型（図３Ａ）を部分的にのみ回復しており、このことは、ＴｆＲに結合する能力がＦｕｓｉｏｎ１のインビボでの効果を増加させることを示している。対照的に、Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２の両方が、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図３Ｂ）の肝臓中（末梢組織）ＧｌｃＳｐｈレベルを同程度に回復することができた。Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２の両方はまた、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図３Ｃ）の血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルを回復した。
ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスは、血漿について観察されたように、対照マウスと比較してより高いＧｌｃＳｐｈの脳及び肝臓レベルを有することが見出された。５ｍｐｋで６週間融合タンパク質を週１回投与した後、Ｆｕｓｉｏｎ１がＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウスにおける脳中のＧｌｃＳｐｈレベルを完全に回復したことが見出された一方で、Ｆｕｓｉｏｎ２は、この表現型（図３Ａ）を部分的にのみ回復しており、このことは、ＴｆＲに結合する能力がＦｕｓｉｏｎ１のインビボでの効果を増加させることを示している。対照的に、Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２の両方が、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図３Ｂ）の肝臓中（末梢組織）ＧｌｃＳｐｈレベルを同程度に回復することができた。Ｆｕｓｉｏｎ１及びＦｕｓｉｏｎ２の両方はまた、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス（図３Ｃ）の血漿中のＧｌｃＳｐｈレベルを回復した。
【0117】
これらのデータを合わせると、脳細胞を含む、ＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス中でＧｌｃＳｐｈレベルの増加が広く観察され、ヒトＴｆＲに結合することができる組換えＰＧＲＮ融合タンパク質が、慢性投与後にＧｒｎＫＯ／ｈＴｆＲ．ＫＩマウス中の血漿、肝臓、及び脳におけるこの異常を訂正することがきることを示す。
【0118】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は、例示目的のためのみであり、それらを考慮した様々な修正または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。本明細書に引用される配列アクセッション番号の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【国際調査報告】