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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-10-30
(54)【発明の名称】カンプトテシン系誘導体及びそのリガンド－薬物複合体
(51)【国際特許分類】
C07D 491/22 20060101AFI20231023BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20231023BHJP
A61K 31/4745 20060101ALI20231023BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231023BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20231023BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231023BHJP
【ＦＩ】
C07D491/22 CSP
A61K47/68
A61K31/4745
A61P35/00
A61P35/02
A61K39/395 E
A61K39/395 L
A61K39/395 C
A61K39/395 T
A61K39/395 Y
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023546378
(86)(22)【出願日】2021-10-09
(85)【翻訳文提出日】2023-06-07
(86)【国際出願番号】 CN2021122823
(87)【国際公開番号】W WO2022078260
(87)【国際公開日】2022-04-21
(31)【優先権主張番号】202011086123.3
(32)【優先日】2020-10-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523135920
【氏名又は名称】シーチュアン バイリ ファーム シーオー． エルティーディー
(71)【出願人】
【識別番号】522263714
【氏名又は名称】バイリ－バイオ（チェンドゥ）ファーマスーティカル シーオー．，エルティーディー．
【住所又は居所原語表記】１３９ Ｂａｉｌｉ Ｒｏａｄ， Ｗｅｎｊｉａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｅｎｇｄｕ， Ｓｉｃｈｕａｎ ６１１１３０， ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001139
【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人
(74)【代理人】
【識別番号】100130328
【弁理士】
【氏名又は名称】奥野 彰彦
(74)【代理人】
【識別番号】100130672
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 寛之
(72)【発明者】
【氏名】ツー， イ
(72)【発明者】
【氏名】ワン， ワイリィ
(72)【発明者】
【氏名】ツー， ギリ
(72)【発明者】
【氏名】ユウ， ティエンジ
(72)【発明者】
【氏名】ジョー， シー
(72)【発明者】
【氏名】ヤン， ショウワン
【テーマコード（参考）】
4C050
4C076
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C050AA01
4C050BB04
4C050CC07
4C050DD08
4C050EE02
4C050FF05
4C050GG04
4C050HH01
4C076AA95
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF31
4C076FF68
4C085AA13
4C085AA14
4C085CC22
4C085CC23
4C085EE01
4C085EE05
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB22
4C086GA13
4C086GA14
4C086GA16
4C086MA02
4C086MA05
4C086NA10
4C086NA13
4C086ZB26
4C086ZB27
(57)【要約】
本発明は、カンプトテシン系誘導体及びそのリガンド－薬物複合体を開示する。本発明は、より優れた抗腫瘍カンプトテシン系ＡＤＣ薬物を開示し、より高い安全性、有効性を有し、臨床ニーズをより適切に満たすことができる。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式Ｄで表されるカンプトテシン系誘導体、その薬学的に許容される塩、又は溶媒和物。【化1】
【化2】
Ｒは、水素、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。）
【請求項2】
Ｒ１は、Ｃ１－３アルキルから選択される、請求項１に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項3】
Ｒ２は、Ｃ１－３アルキル又はフッ素原子から選択される、請求項１に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項4】
前記カンプトテシン系誘導体は、下式Ｄ１で表される構造を有する、請求項１から３のいずれか１項に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。【化3】
【化4】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。）
【請求項5】
前記Ｒは、Ｃ１－３アルキルから選択される、請求項４に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項6】
前記Ｘは、非制限的に【化5】
ここで、左側の波線はカンプトテシン系誘導体に結合され、右側の波線は結合ユニットに結合される、請求項４に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項7】
前記化合物は、非制限的に【化6】
ここで、Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される、請求項１に記載のカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項8】
前記化合物は、非制限的に、【化7】
【請求項9】
請求項１から８のいずれか１項に記載のカンプトテシン系誘導体を含むリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物。【化8】
【化9】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択され、
Ｌは、－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－である。）
【請求項10】
－Ｌ－は、－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－であり、ここで、Ｌ１端は、リガンドＡｂに結合され、Ｌ４端は、Ｘに結合される、請求項９に記載のリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項11】
Ｌ１は、非制限的に【化10】
【請求項12】
Ｌ２は、－ＮＣ（Ｒ５Ｒ６）Ｃ（Ｏ）、－ＮＲ７（ＣＨ２）ｏＣ（Ｏ）－、－ＮＲ７（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｏＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）－又は化学結合から選択され、ここで、ｏは、０－２０の整数から選択され、ｐは、０－２０の整数から選択され、Ｒ５、Ｒ６は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、ヘテロアルキル、カルボキシル、アミノ、置換アミノから選択され、
Ｒ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｌ１とＬ２は、Ｎ原子を共用する、請求項９又は１０に記載のリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項13】
Ｌ３は、アミノ酸からなるペプチド残基から選択され、ここで、アミノ酸は、さらに重水素原子、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、ニトロ、カルボキシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、シクロアルキル又は置換シクロアルキルから選択される１つ又は複数の置換基で置換されていてもよい、請求項９又は１０に記載のリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項14】
Ｌ３は、好ましくは、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）から選択される１つ、２つ又は複数のアミノ酸からなるペプチド残基である、請求項９又は１０に記載のリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項15】
Ｌ４は、－ＮＲ８（ＣＲ９Ｒ１０）ｑ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８（ＣＨ２）ｑ－又は化学結合から選択され、ｑは、０－６の整数から選択され、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される、請求項９又は１０に記載のリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項16】
前記結合ユニットＬ－は、非制限的に【化11】
【請求項17】
前記リンカー－薬物複合体は、非制限的に【化12】
【請求項18】
前記リガンド－薬物複合体は、下記式Iで表される構造を含む、請求項９から１７のいずれか１項に記載のリンカー－薬物複合体を含むリガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。【化13】
【化14】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ａｂは、リガンドユニットであり、抗体、抗体断片、標的タンパク質、Ｆｃ－融合タンパク質などから選択され、
Ｌは、Ａｂに結合されるユニットであり、Ｘは、薬物部分修飾ユニットであり、
ｍは、０－４の整数から選択され、ｎは、１－２０の整数又は小数から選択される。）
【請求項19】
Ａｂは、抗体であり、そのヘテロ原子を介して結合ユニットと連結結合を形成可能であり、前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗体断片、二重特異性抗体及び多重特異性抗体から選択される、請求項１８に記載のリガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項20】
前記抗体又はその抗原結合断片は、非制限的に、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＤＬＬ－３抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＭＵＣ１６抗体、抗ＥＮＰＰ３抗体、抗ＴＤＧＦ１抗体、抗ＥＴＢＲ抗体、抗ＭＳＬＮ抗体、抗ＴＩＭ－１抗体、抗ＬＲＲＣ１５抗体、抗ＬＩＶ－１抗体、抗ＣａｎＡｇ／ＡＦＰ抗体、抗ｃｌａｄｉｎ １８．２抗体、抗Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ抗体、抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ｃ－ＭＥＴ抗体、抗ＳＬＩＴＲＫ６抗体、抗ＫＩＴ／ＣＤ１１７抗体、抗ＳＴＥＡＰ１抗体、抗ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１抗体、抗ＮａＰｉ２Ｂ／ＳＬＣ３４Ａ２抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＭＵＣ１／ＣＤ２２７抗体、抗ＡＸＬ抗体、抗ＣＤ１６６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗ＰＴＫ７／ＣＣＫ４抗体、抗ＰＲＬＲ抗体、抗ＥＦＮＡ４抗体、抗５Ｔ４抗体、抗ＮＯＴＣＨ３抗体、抗Ｎｅｃｔｉｎ ４抗体、抗ＴＲＯＰ－２抗体、抗ＣＤ１４２抗体、抗ＣＡ６抗体、抗ＧＰＲ２０抗体、抗ＣＤ１７４抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗ＬＹＰＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗ＦＧＦＲ３抗体、抗ＦＲα抗体、抗ＣＥＡＣＡＭｓ抗体、抗ＧＣＣ抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ａｖ抗体、抗ＣＡＩＸ抗体、抗Ｐ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体、抗ＧＤ３抗体、抗Ｃａｄｈｅｒｉｎ ６抗体、抗ＬＡＭＰ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３５２抗体、抗ＣＤ２５抗体又は抗ＣＤ１２３抗体から選択される、請求項１９に記載のリガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項21】
前記リガンド－薬物複合体は、非制限的に【化15】
１位炭素原子は、Ｒ絶対配置又はＳ絶対配置を有する、請求項１９又は２０に記載のリガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物。
【請求項22】
請求項９から１７のいずれか１項に記載のリンカー－薬物複合体、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、その薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の製造方法であって、前記製造方法は、結合ユニットＬａと、一般式Ｄ１で表される化合物との置換反応により、一般式Ｌａ－Ｘ－Ｄ１で表されるリンカー－薬物複合体を含むステップを含み、前記置換反応の反応式は、
【化16】
【化17】
Ｌ２、Ｌ３、Ｒ、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ｑ及びＸは、一般式Ｌ－Ｘ－Ｄにおけるものと同じである、製造方法。
【請求項23】
請求項１８から２１のいずれか１項に記載のリガンド－薬物複合体、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、その薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の製造方法であって、前記製造方法は、還元された抗体、抗体断片又はその抗原結合断片と、一般式Ｌ－Ｘ－Ｄ１とをカップリング反応させることにより、一般式 Ａｂ－Ｌ－Ｘ－Ｄ１で表されるリガンド－薬物複合体を得るステップを含み、前記カップリング反応の反応式は、
【化18】
【化19】
Ａｂ、Ｌ、Ｘ、Ｒ及びｎは、一般式Iにおけるものと同じである、製造方法。
【請求項24】
前記薬学的に許容される塩は、構造式中の酸性官能基と形成したナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩若しくはマグネシウム塩など；又は構造中の塩基性官能基と形成した酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、硝酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、乳酸塩、オレイン酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩、ギ酸塩、グルタミン酸塩、メシル酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩若しくはｐ－トルエンスルホン酸塩を含む、請求項１から２３のいずれか１項に記載のカンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項25】
治療有効量の請求項１から２４のいずれか１項に記載のカンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項26】
腫瘍を治療又は予防するための薬物の製造における、請求項１から２４のいずれか１項に記載のカンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、その薬学的に許容される塩若しくは溶媒化合物、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤の使用。
【請求項27】
前記腫瘍は、固形腫瘍及び血液腫瘍である、請求項２６に記載の使用。
【請求項28】
前記腫瘍は、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、前立腺がん、腎臓がん、尿路がん、膀胱がん、肝臓がん、胃がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、食道がん、肺がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、甲状腺がん、膵臓がん、黒色腫、神経膠腫、神経芽腫、多形神経膠芽腫、肉腫、リンパ腫又は白血病である、請求項２７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、カンプトテシン系誘導体及びそのリガンド－薬物複合体に関する。
【背景技術】
【0002】
標的薬の新しい形態として、リガンド－薬物複合体（ａｎｔＩｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＡＤＣ）は通常、抗体又は抗体系リガンド、低分子薬、及びリガンドと薬物とを結合する結合ユニットの３つの部分で構成される。抗体薬物複合体は、抗体の抗原に対する特異的識別を利用し、薬物分子を標的細胞に輸送し、薬物分子を効果的に放出し、治療目的を達成する。２０１１年８月、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、ホジキンリンパ腫及び再発性変性大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）の治療のためにＳｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔＩｃｓによって開発された新しいＡＤＣ薬であるＡｄｃｅｔｒＩｓＴＭの市販を承認した。この薬物の安全性及び有効性は、臨床使用によって実証されている。
【0003】
抗腫瘍特性を有する小分子化合物であるカンプトテシン（イリノテカン、エキサテカン、ＳＮ３８などを含む）は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩを阻害することによって抗腫瘍効果を示す。多くのカンプトテシン薬は臨床現場で広く使用されており、主な適応症は骨がん、前立腺がん、乳がん、膵臓がんなどである。現在臨床使用中のイリノテカンとは異なり、エキサテカンは酵素により活性化する必要がない。また、イリノテカンの薬効本体であるＳＮ－３８や、臨床で使用されているトポテカンと比較して、エキサテカンのポイソメラーゼＩに対してより強い阻害活性を有し、インビトロで様々ながん細胞に対してより強い損傷を与える。特に、Ｐ糖タンパク質の発現は、ＳＮ－３８などに耐性のあるがん細胞にも効果を示している。エキサテカンは、単独の化学療法薬としては成功に販売されておらず、その高い細胞活性により治療域が狭くなることが推測されている。
【0004】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）類薬物の優位性は、水溶性の増大、標的性の改善、抗原への特異的結合、標的細胞の周囲への薬物の輸送、標的細胞近傍への薬物の放出による腫瘍細胞の死滅、毒副作用の低減にある。カンプトテシン系薬物は、ＡＤＣ薬物においｔかなりな見込みを有する。現在、エキサテカンを毒素とする抗体結合薬物ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ（商品名：Ｅｎｈｅｒｔｕ）は、２０１９年１２月２０日に米国ＦＤＡによって市販を承認されており、最初の市販カンプトテシン系ＡＤＣ薬物として、ＡＤＣ分野におけるこのような薬物の創薬能力及び応用見通しは十分に証明されている。
【0005】
Ｅｎｈｅｒｔｕは、ＨＥＲ２標的に対するＡＤＣ薬物であり、単一の抗体に約８つのエキサテカン誘導体（ＤＡＲ＝８）が結合されている。しかし、その研究開発会社である第一三共も、安全性のため、ＤＡＲ値を減少させる必要があることを認識した。第一三共が発表した臨床中のＡＤＣ ：ＤＳ－１０６２は、ＤＡＲ値が４に減少した。ＤＡＲ値の減少により、治療効果が低下する可能性がある。そのため、より安全なカンプトテシン系誘導体を開発する必要がある。
【0006】
ＡＤＣ薬物では、安全性を保証するために、薬物のＤＡＲ値を減少させる。その結果、治療効果が低下する。薬物の溶解性は、ＤＡＲ値に影響を与える要因の一つであり、ＡＤＣ薬物の傍観者効果に影響を与える要因でもある。カンプトテシン系薬物は、臨床に広く使用されているが、その低い水溶性は、依然として解決すべき問題である。水溶性が低い薬物について、薬物の水溶性を向上させることにより薬物の物理性質及び体内での代謝状況を改善することができ、これによって、薬効を向上させ、治療効果を強化し、薬物の用量を減少させ、コストを削減することができる。低い水溶性により、ＡＤＣの凝集度が増加するため、正常細胞によってエンドサイトーシスされやすく、毒・副作用が発生するか、又は代謝されやすく、半減期が短くなる。
【0007】
本社の研究過程において、エキサテカンのアミノ鏡像異性体化合物は、エキサテカンよりも顕著に優れた水溶性を有することを意外と見出した。それにより合成した誘導体は、同様により優れた水溶性を有し、より優れた抗腫瘍カンプトテシン系ＡＤＣ薬物を製造することができ、より高い安全性、有効性を有し、臨床ニーズをより適切に満たすことができる。
【発明の概要】
【0008】
本発明によれば、一般式Ｄで表されるカンプトテシン系誘導体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物が提供される。
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルから選択され、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。
【化1】
【化2】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルから選択され、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。
【0009】
好ましくは、Ｒ１は、Ｃ１－３アルキルから選択される。
【0010】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１－３アルキル又はフッ素原子から選択される。
【0011】
カンプトテシン系誘導体は、下式Ｄ１で表される構造を有する。
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。
【化3】
【化4】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂ は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択される。
【0012】
好ましくは、前記Ｒは、Ｃ１－３アルキルから選択される。
【0013】
好ましくは、前記Ｘは、非制限的に
から選択され、ここで、左側の波線はカンプトテシン系誘導体部分に結合され、右側の波線は結合ユニットに結合される。
【化5】
【0014】
好ましくは、前記化合物は、非制限的に
から選択され、ここで、Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される。
【化6】
【0015】
さらに好ましくは、前記化合物は、非制限的に
から選択される。
【化7】
【0016】
本発明は、カンプトテシン系誘導体を含むリンカー－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物を提供する。
8
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリール；
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルから選択され、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択され、
Ｌは、－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－である。
【化8】
ここで、
【化9】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリール；
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルから選択され、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
ｍは、０－４の整数から選択され、
Ｌは、－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－である。
【0017】
好ましくは、－Ｌ－は、－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－であり、ここで、Ｌ１端はリガンドＡｂに結合され、Ｌ４端はＸに結合される。
【0018】
さらに好ましくは、Ｌ１非制限的に
から選択される。
【化10】
【0019】
さらに好ましくは、Ｌ２は、－ＮＣ（Ｒ５Ｒ６）Ｃ（Ｏ）、－ＮＲ７（ＣＨ２）ｏＣ（Ｏ）－、－ＮＲ７（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｏＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）－又は化学結合から選択され、ここで、ｏは０－２０の整数から選択され、ｐは０－２０の整数から選択される。
Ｒ５、Ｒ６は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、ヘテロアルキル、カルボキシル、アミノ、置換アミノから選択される。
Ｒ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される。
Ｌ１とＬ２はＮ原子を共用する。
Ｒ５、Ｒ６は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、ヘテロアルキル、カルボキシル、アミノ、置換アミノから選択される。
Ｒ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される。
Ｌ１とＬ２はＮ原子を共用する。
【0020】
さらに好ましくは、Ｌ３は、アミノ酸からなるペプチド残基から選択される。選択的に、アミノ酸は、さらに重水素原子、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、ニトロ、カルボキシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ及びシクロアルキル或者置換シクロアルキルから選択される１つ又は複数の置換基で置換され、好ましくは、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）から選択される１つ、２つ又は複数のアミノ酸から形成されるペプチド残基から選択される。
【0021】
さらに好ましくは、Ｌ４は、－ＮＲ８（ＣＲ９Ｒ１０）ｑ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８（ＣＨ２）ｑ－又は化学結合から選択され、ｑは、０－６の整数から選択される。
Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される。
Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択される。
【0022】
好ましくは、前記結合ユニットＬ－は、非制限的に
から選択され、ここで、左側の波線はリガンド部分に結合され、右側の波線はＸに結合される。
【化11】
【0023】
さらに好ましくは、前記リンカー－薬物複合体は、非制限的に
から選択され、ここで、１位炭素原子は、Ｒ絶対配置又はＳ絶対配置を有する。
【化12】
【0024】
本発明は、リンカー-薬物複合体を含むリガンド-薬物複合体、その薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物をさらに提供する。前記リガンド-薬物複合体は、式Iで表される構造を有する。
式 I
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ａｂは、リガンドユニットであり、抗体、抗体断片、標的タンパク質、Ｆｃ－融合タンパク質などから選択され、
Ｌは、Ａｂに結合されるユニットであり、Ｘは、薬物部分修飾ユニットであり、
ｍは、０－４の整数から選択され、ｎは、１－２０の整数又は小数から選択される。
【化13】
ここで、
【化14】
Ｒは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、重水素化アルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－ＮＨ－又は－Ｃ（Ｏ）－ＣＲａＲｂ－（ＣＲ３Ｒ４）ｍ－Ｓ－から選択され、
Ｒａは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒｂは、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、重水素化アルキル、ハロゲン化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリール、置換アリール又はヘテロアリールから選択され、或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ｒ３、Ｒ４は、同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロゲン化アルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、或いは
Ｒ３、Ｒ４及びそれらに結合した炭素原子は、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロアルキルアルキル又はヘテロシクリルを構成し、
Ａｂは、リガンドユニットであり、抗体、抗体断片、標的タンパク質、Ｆｃ－融合タンパク質などから選択され、
Ｌは、Ａｂに結合されるユニットであり、Ｘは、薬物部分修飾ユニットであり、
ｍは、０－４の整数から選択され、ｎは、１－２０の整数又は小数から選択される。
【0025】
好ましくは、前記リガンドは、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗体断片、二重特異性抗体及び多重特異性抗体から選択される。
【0026】
さらに好ましくは、前記抗体又はその抗原結合断片は、非制限的に、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＤＬＬ－３抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＭＵＣ１６抗体、抗ＥＮＰＰ３抗体、抗ＴＤＧＦ１抗体、抗ＥＴＢＲ抗体、抗ＭＳＬＮ抗体、抗ＴＩＭ－１抗体、抗ＬＲＲＣ１５抗体、抗ＬＩＶ－１抗体、抗ＣａｎＡｇ／ＡＦＰ抗体、抗ｃｌａｄｉｎ １８．２抗体、抗Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ抗体、抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ｃ－ＭＥＴ抗体、抗ＳＬＩＴＲＫ６抗体、抗ＫＩＴ／ＣＤ１１７抗体、抗ＳＴＥＡＰ１抗体、抗ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１抗体、抗ＮａＰｉ２Ｂ／ＳＬＣ３４Ａ２抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＭＵＣ１／ＣＤ２２７抗体、抗ＡＸＬ抗体、抗ＣＤ１６６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗ＰＴＫ７／ＣＣＫ４抗体、抗ＰＲＬＲ抗体、抗ＥＦＮＡ４抗体、抗５Ｔ４抗体、抗ＮＯＴＣＨ３抗体、抗Ｎｅｃｔｉｎ ４抗体、抗ＴＲＯＰ－２抗体、抗ＣＤ１４２抗体、抗ＣＡ６抗体、抗ＧＰＲ２０抗体、抗ＣＤ１７４抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗ＬＹＰＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗ＦＧＦＲ３抗体、抗ＦＲα抗体、抗ＣＥＡＣＡＭｓ抗体、抗ＧＣＣ抗体、抗Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ａｖ抗体、抗ＣＡＩＸ抗体、抗Ｐ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体、抗ＧＤ３抗体、抗Ｃａｄｈｅｒｉｎ ６抗体、抗ＬＡＭＰ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３５２抗体、抗ＣＤ２５抗体或抗ＣＤ１２３抗体から選択される。
【0027】
さらに好ましくは、前記リガンド－薬物複合体は、非制限的に
から選択される。ここで、Ａｂはリガンドユニットであり、ｎは１－２０の整数又は小数から選択され、１位炭素原子は、Ｒ絶対配置又はＳ絶対配置を有する。
【化15】
【0028】
本発明は、リンカー－薬物複合体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の製造方法をさらに提供する。以下のステップを含む。
結合ユニットＬａと、一般式Ｄ１で表される化合物との置換反応により、一般式Ｌａ－Ｘ－Ｄ１で表されるリンカー－薬物複合体を得る。
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、Ｌ２、Ｌ３、Ｒ、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ｑ及びＸは、一般式Ｌ－Ｘ－Ｄにおけるものと同じである。
【化16】
ここで、
【化17】
【0029】
本発明は、リガンド－薬物複合体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の製造方法をさらに提供し、以下のステップを含む。
還元された抗体、抗体断片又はその抗原結合断片と、一般式（Ｌ－Ｘ－Ｄ１）とのカップリング反応により、一般式Ａｂ－Ｌ－Ｘ－Ｄ１で表されるリガンド－薬物複合体を得る。
ここで、
に結合した不斉炭素原子は、Ｒ絶対配置を有し、Ａｂ、Ｌ、Ｘ、Ｒ及びｎは、一般式Iにおけるものと同じである。
【化18】
ここで、
【化19】
【0030】
カンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物において、前記薬学的に許容される塩は、構造式中の酸性官能基と形成したナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩若しくはマグネシウム塩など；又は構造中の塩基性官能基と形成した酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、硝酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、乳酸塩、オレイン酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩、ギ酸塩、グルタミン酸塩、メシル酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩若しくはｐ－トルエンスルホン酸塩を含む。
【0031】
本発明は、治療有効量の前記カンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0032】
本発明は、腫瘍を治療又は予防するための薬物の製造における、カンプトテシン系誘導体、リンカー－薬物複合体、リガンド－薬物複合体、その互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー若しくはそれらの混合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒化合物、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤の使用を提供する。
【0033】
好ましくは、前記腫瘍は、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、前立腺がん、腎臓がん、尿路がん、膀胱がん、肝臓がん、胃がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、食道がん、肺がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、甲状腺がん、膵臓がん、黒色腫、神経膠腫、神経芽腫、多形神経膠芽腫、肉腫、リンパ腫又は白血病などの固形腫瘍又は血液腫瘍である。
【発明を実施するための形態】
【0034】
発明の詳細な説明
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の通常の技術者によって一般的に理解されるものと同じである。本明細書に記載されているものと類似又は同等の任意の方法及び材料もまた、本開示の実施又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料は、本明細書に記載されている。本発明を説明及び主張する際に、以下の用語は、以下の定義に従って使用される。
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の通常の技術者によって一般的に理解されるものと同じである。本明細書に記載されているものと類似又は同等の任意の方法及び材料もまた、本開示の実施又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び材料は、本明細書に記載されている。本発明を説明及び主張する際に、以下の用語は、以下の定義に従って使用される。
【0035】
本明細書に商品名称が使用される際に、この商品名称に係る製品の製剤、ジェネリック医薬品、及び有効成分の部分を含めることを意図している。
【0036】
反対に述べられていない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される用語は、以下に記載されるのと同じ意味を有する。
【0037】
「リガンド」という用語は、標的細胞に関連する抗原又は受容体を認識して結合することができる高分子化合物を指す。リガンドの役割は、リガンドが結合する標的細胞集団に薬物を提示することである。このようなリガンドは、タンパク質ホルモン、レクチン、成長因子、抗体、又は細胞に結合できる他の分子を含むが、これらに限定されない。本発明の実施形態において、リガンドはＡｂで表される。リガンドは、リガンド上のヘテロ原子を介して結合ユニットに結合することができる。好ましくは抗体又はその抗原結合断片である。前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体及びマウス抗体から選択され、好ましくはモノクローナル抗体である。
【0038】
リガンドユニットは、標的部分に特異的に結合する標的化剤である。リガンドは、細胞成分に特異的に結合するか、又は細胞成分若しくは他の目の標的分子に結合することができる。標的部分又は標的は通常、細胞表面上である。いくつかの実施形態において、リガンドユニットの機能は、リガンドユニットと相互作用する特定の標的細胞集団に薬物ユニットを送達することである。リガンドは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、及び糖などの非タンパク質を含むが、これらに限定されない。適切なリガンドユニットは、例えば、全長（無傷）抗体及びその抗原結合断片などの抗体を含む。リガンドユニットは、非抗体標的化剤である実施形態において、ペプチド若しくはポリペプチド、又は非タンパク質分子であってもよい。このような標的化剤の例には、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長及びコロニー刺激因子、ビタミン、栄養素輸送分子、又は他の任意の細胞結合分子若しくは物質が含まれる。いくつかの実施形態において、結合ユニットは、リガンドの硫黄原子に共有結合する。いくつかの態様では、硫黄原子は、システイン残基の硫黄原子であり、抗体の鎖間ジスルフィド結合を形成する。別の態様では、硫黄原子は、リガンドユニットが導入されたシステイン残基の硫黄原子であり、抗体の鎖間ジスルフィド結合を形成する。別の態様では、硫原子は、リガンドユニットが（例えば、部位特異的変異誘発又は化学反応により）導入されたシステイン残基の硫黄原子である。別の態様では、結合ユニットに結合した硫黄原子は、抗体の鎖間ジスルフィド結合のシステイン残基及びリガンドユニットが（例えば、部位特異的変異誘発又は化学反応により）導入されたシステイン残基から選択される。いくつかの実施形態において、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅＩｎｓ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇＩｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ＦＩｆｔｈ ＥｄＩｔＩｏｎ， ＮＩＨ ｐｕｂｌＩｃａｔＩｏｎ ９１－３２４２．２記載のＥＵインデックス番号システムが使用される。
【0039】
本明細書において、「抗体」又は「抗体ユニット」という用語は、それが属する範囲内において、抗体構造の任意の部分を含む。このユニットは、受容体、抗原、又は標的細胞集団が保有する他の受容体ユニットと結合し、反応的に関連し、或いは複合体を形成することができる。抗体は、治療又は生物学的修飾される細胞集団の一部と結合し、複合体を形成し、又は反応することができるいかなるタンパク質又はタンパク質様分子であってもよい。本発明において、抗体薬物複合体を構成する抗体は、元の野生状態の抗原結合能力を維持することができる。したがって、本発明の抗体は、好ましくは、抗原に特異的に結合することができる。係る抗原は、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体タンパク質及び他の細胞表面分子、細胞生存の調節因子、細胞増殖の調節因子、組織の成長と分化に関連する分子（既知又は予測可能な機能性があるもの）、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与する分子、血管新生に関与する分子、及び血管新生に関連する分子（既知又は予測可能な機能性があるもの）。本明細書に記載のように、腫瘍関連因子は、クラスター分化因子（ＣＤタンパク質など）であってもよい。
【0040】
抗体薬物複合体に使用される抗体には、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原に対する抗体が含まれるが、これらに限定されない。このような腫瘍関連抗原は当技術分野で周知であり、抗体を調製するための当技術分野で周知の方法及び情報によって調製することができる。がんの診断と治療のための効果的な細胞レベルの標的を開発するために、研究者は膜貫通型又は他の腫瘍関連ポリペプチドを見つけている。これらの標的は、１つ又は複数の非がん細胞の表面ではほとんど又はまったく発現しないが、１つ又は複数のがん細胞の表面で特異的に発現することができる。通常、このような腫瘍関連ポリペプチドは、非がん細胞の表面と比較して、がん細胞の表面でより過剰発現されている。このような腫瘍関連因子を特定することで、抗体によるがん治療の特異的標的特性を大幅に改善することができる。便宜上、当該技術分野でよく知られている抗原関連の情報（名前、その他の名称、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号など）を以下に示す。腫瘍関連抗原に対応する核酸及びタンパク質配列は、Ｇｅｎｂａｎｋなどの公開データベースで見つけることができる。抗体標的に対応する腫瘍関連抗原は、全てのアミノ酸配列変異体及びアイソタイプを含み、参考文献に確認された配列と少なくとも７０％，８０％，８５％，９０％，又は９５％の同一性を有し、或いは参考文献に記載の腫瘍関連抗原の配列と完全に一致する生物学的特性及び特徴を有する。
【0041】
「阻害」又は「抑制」という用語は、検出可能な量を減少させること、又は完全に防ぐことを指す。
【0042】
「がん」という用語は、無秩序な細胞増殖を特徴とする生理学的状態又は疾患を指す。「腫瘍」にはがん細胞が含まれます。
【0043】
「自己免疫疾患」という用語は、個人自身の組織又はタンパク質を標的とすることに起因する疾患又は障害である。
【0044】
「薬物」という用語は、Ｄとして示され得る細胞毒性薬物を指し、腫瘍細胞の正常な成長を強力に妨害することができる化学分子である。細胞毒性薬は、原則として、十分に高い濃度で腫瘍細胞を殺すことができるが、特異性がないため、腫瘍細胞を殺す一方で、正常細胞のアポトーシスを引き起こし、深刻な副作用を引き起こす恐れがある。この用語は、細菌、真菌、植物若しくは動物に由来の小分子毒素又は酵素活性毒素などの毒素、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、ＢＩ２１２、Ｐ３２及びＬｕ１７６の放射性同位元素）、毒性薬物、化学療法薬、抗生物質、及びリボリシンを含むが、毒性薬物であることが好ましい。
【0045】
「結合ユニットユニット」、「結合ユニット断片」又は「結合ユニット」という用語は、片端がリガンドに結合し、他端が薬物に結合する化学構造断片又は結合であり、他の結合ユニットに結合してから薬物に結合してもよい。
【0046】
結合ユニットは、ストレッチャ、スペーサ及びアミノ酸ユニットを含み、当該技術分野に既知の方法（例えば、ＵＳ２００５－０２３８６４９Ａ１に記載の方法）に従って合成することができる。結合ユニットは、細胞内での薬物の放出を促進する「切断可能な結合ユニット」であり得る。例えば、酸に不安定な結合ユニット（例えば、ヒドラゾン）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）結合ユニット、光に不安定な結合ユニット、ジメチル結合ユニット、又はジスルフィド含有結合ユニットを使用することができる（ＣｈａｒＩ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７－１３１，１９９２；Ｕ．Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．５，２０８，０２０）。
【0047】
細胞内の薬物放出のメカニズムによって、本明細書に記載の「結合ユニット」又は「抗体薬物複合体の結合ユニット」は、切断不可な結合ユニットと切断可能な結合ユニットの２種類に分けられる。切断不可な結合ユニットを含む抗体薬物複合体の薬物放出メカニズムは、以下の通りである。複合体が抗原に結合して細胞に取り込まれた後、抗体はリソソーム内で酵素的に加水分解され、低分子薬、結合ユニット及び抗体アミノ酸残基からなる活性分子を放出する。これによる薬物分子構造の変化は、その細胞毒性を低下させることがないとともに、活性分子が帯電しているため（アミノ酸残基）、近隣する細胞に浸透することがない。従って、このような薬物は、標的抗原（抗原陰性細胞）を発現しない隣接する腫瘍細胞を殺さない（傍観者効果；ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｅｆｆｅｃｔ）（Ｄｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＢＩｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２１：５－１３）。
【0048】
「リガンド薬物複合体」という用語は、抗体が安定した結合ユニットを介して生物活性を有する薬に結合することをいう。本発明において、「リガンド薬物複合体」は、抗体薬物複合体（ａｎｔＩｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＡＤＣ）は、好ましくはモノクローナル抗体又は抗体断片を安定した結合ユニットにより生物活性を有する毒性薬物に結合することをいう。
【0049】
本明細書で使用されるアミノ酸の３文字コード及び１文字コードは、Ｊ．ｂｏｙ．Ｃｈｅｍ．１９６８，２４３，３５５８に記載されているとおりである。
【0050】
「アルキル」という用語は、飽和脂肪族炭化水素基を指し、炭素数１－２０の直鎖又は分岐状基、好ましくは炭素数１－１２のアルキル基、より好ましくは炭素数１－１０のアルキル基、最も好ましくは炭素数１－６のアルキル基を含む。非限定的な例として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチル、ｎ－ヘプチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、４－メチルヘキシル、５－メチルヘキシル、２，３－ジメチルペンチル、２，４－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル、３－エチルペンチル、ｎ－オクチル、２，３－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、４，４－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル、３－エチルヘキシル、４－エチルヘキシル、２－メチル－２－エチルペンチル、２－メチル－３－エチルペンチル、ｎ－ノニル、２－メチル－２－エチルヘキシル、２－メチル－３－エチルヘキシル、２，２－ジエチルペンチル、ｎ－デシル、３，３－ジエチルヘキシル、２，２－ジエチルヘキシル、及びその分岐異性体等が挙げられる。より好ましくは炭素数１－６の低級アルキル基であり、非限定的な例として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチルなどが挙げられる。アルキル基は、置換又は非置換であってもよい。置換されている場合、置換基は、いずれかの使用可能な結合点で置換され得る。前記置換基は、好ましくはそれぞれ独立してアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基、オキシ基から選択される１つ又は複数である。
【0051】
「置換アルキル」という用語は、アルキル基における水素が置換基で置換されることをいう。文脈で別段の定めがない限り、アルキル基の置換基は、－ハロゲン、－ＯＲ'、－ＮＲ'Ｒ''、－ＳＲ'、－ＳＩＲ'Ｒ''Ｒ'''、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ'、－Ｃ（Ｏ）Ｒ'、－ＣＯ２Ｒ'、－ＣＯＮＲ'Ｒ''、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ'Ｒ''、－ＮＲ''Ｃ（Ｏ）Ｒ'、－ＮＲ'－Ｃ（Ｏ）ＮＲ''Ｒ'''、－ＮＲ''Ｃ（Ｏ）２Ｒ'、－ＮＨ－Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、－ＮＲ'Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、－ＮＨ－Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ'、－Ｓ（Ｏ）Ｒ'、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ'、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ'Ｒ''、－ＮＲ'Ｓ（Ｏ）２Ｒ''、－ＣＮ和－ＮＯ２から選択される。置換基の数は０－（２ｍ'＋１）であり、ここで、ｍ'はこの基における炭素原子の合計である。Ｒ'、Ｒ''及びＲ'''はそれぞれ独立して水素、非置換Ｃ１－８アルキル基、非置換アリール基、１－３個のハロゲンで置換されたアリール基、非置換Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルコキシ基若しくはＣ１－８チオアルコキシ基、又は非置換アリール基－Ｃ１－４アルキル基である。Ｒ'及びＲ''が同一の窒素原子に結合した場合、この窒素原子と一緒に３－，４－，５－，６－又は７－員環を形成することができる。例えば、－ＮＲ'Ｒ''は、１－ピロリジニル基及び４－モルホリニル基を含む。
【0052】
「ヘテロアルキル」という用語は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ又は複数のヘテロ原子を含むアルキル基を指す。アルキル基は、上記と同義である。
【0053】
「アルキレン」という用語は、主体アルカンの同じ炭素原子又は異なる炭素原子から２つの水素原子を除去して得られた２つの残基を有する飽和直鎖又は分岐脂肪族炭化水素基を指し、炭素数１－２０の直鎖又は分岐状基、好ましくは炭素数１－１２、より好ましくは炭素数１－６のアルキレン基を含む。アルキレン基の非限定的な例は、メチレン基（－ＣＨ２－）、１，１－エチレン基（－ＣＨ（ＣＨ３）－）、１，２－エチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２）－、１，１－プロピレン基（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）－）、１，２－プロピレン基（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－）、１，３－プロピレン基（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、１，４－ブチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）及び１，５－ブチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）を含むが、これらに限定されない。アルキレン基は置換でも非置換でもよい。置換されている場合、置換基は、いずれかの使用可能な結合点で置換され得る。前記置換基は、好ましくはそれぞれ独立してアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基、オキシ基から選択される１つ又は複数である。
【0054】
「アルコキシ」という用語は、－Ｏ－（アルキル）及び－Ｏ－（シクロアルキル）基を指す。アルキル基又はシクロアルキル基は上記と同義である。アルコキシ基の例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが含まれるが、これらに限定されない。アルコキシ基は置換でも非置換でもよい。置換されている場合、置換基は、いずれかの使用可能な結合点で置換され得る。前記置換基は、好ましくはそれぞれ独立してアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基から選択される１つ又は複数である。
【0055】
「シクロアルキル」という用語は、飽和又は一部が不飽和の単環式又は多環式環状炭化水素置換基を指す。シクロアルキル環は、３－２０、好ましくは３－１２、より好ましくは３－１０、最も好ましくは３－８個の炭素原子を含む。単環式シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチルなどを含むが、これらに限定されない。単環式シクロアルキル基は、スピロ、縮合又はブリッジ環のシクロアルキル基を含む。
【0056】
「ヘテロシクリル」という用語は、飽和又は一部が不飽和の単環式又は多環式環状炭化水素置換基を指し、３－２０個の環構成原子を含み、そのうちの１つ又は複数の環構成原子は窒素、酸素及びＳ（Ｏ）ｍ（ｍは０－２の整数である）から選択されるヘテロ原子であるが、－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－又は－Ｓ－Ｓ－の環部分が除かれ、残りの環構成原子は炭素である。好ましくは３－１２個の環構成原子を含み、そのうちの１～４個はヘテロ原子である。より好ましくはシクロアルキル環は３－１０個の環構成原子を含む。単環式ヘテロシクリル基の例は、ピロリジニルアルキル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ホモピペラジニル基を含むがこれらに限定されない。多環式ヘテロシクリル基は、スピロ、縮合又はブリッジ環のヘテロシクリル基を含む。
【0057】
「スピロヘテロシクリル」という用語は、５員から２０員の単環の間で１つの原子（スピロ原子と呼ばれる）を共有する多環式複素環基を指し、その１つまたは複数の環原子は、窒素、酸素又はＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは０から２の整数である）から選択されるヘテロ原子であり、他の環原子は、炭素である。１つ以上の二重結合を含んでもよいが、いずれの環も完全に共役電子系を持っていない。好ましくは６から１４員、より好ましくは７から１０員である。環間に共有されるスピロ原子の数によって、スピロヘテロシクリルは、モノヘテロシクリル、ジスピロヘテロシクリル又はポリスピロヘテロシクリルに分けられ、好ましくはモノスピロヘテロシクリル又はジスピロヘテロシクリルであり、より好ましくは４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員又は５員／６員モノスピロヘテロシクリルである。
【0058】
「シクロアルキルアルキル」という用語は、アルキル基が１つ又は複数、好ましくは１つのシクロアルキルで置換されたものを指す。アルキル基及びシクロアルキル基は上記と同義である。
【0059】
「ハロゲン化アルキル」という用語は、アルキル基が１つ又は複数のハロゲンで置換されたものを指す。アルキル基は上記と同義である。
【0060】
「重水素化アルキル」という用語は、アルキル基が１つ又は複数の重水素原子で置換されていることをいう。アルキル基は上記と同義である。
【0061】
「ヒドロキシル」という用語は、－ＯＨ基を指す。
【0062】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。
【0063】
「アミノ」という用語は、－ＮＨ２を指す。「ニトロ」という用語は、－ＮＯ２を指す。
【0064】
「アミド」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｎ－（アルキル）又は（シクロアルキル）基を指し、アルキル基、シクロアルキルは上記と同義である。
【0065】
「カルボン酸エステル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－（アルキル）又は（シクロアルキル）基を指し、アルキル基、シクロアルキルは上記と同義である。
【0066】
本発明は、重水素化形態をさらに含む。炭素原子に結合した各水素原子は、それぞれ独立して重水素原子で置換することができる。当業者は、関連文献に従って重水素化化合物を合成することができる。重水素化化合物を合成する際に、市販の重水素化出発物質を使用してもよく、常法により重水素化試薬を用いて合成してもよい。重水素化試薬には、重水素化メタノール、重水素水、重水素化ボラン、トリ重水素化ボランテトラヒドロフラン溶液、重水素化アルミニウムリチウム、重水素化ヨードエタン及び重水素化ヨードメタンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【0067】
「抗体」という用語は、鎖間ジスルフィド結合によって連結した２本の同じ重鎖及び２本の同じ軽鎖からなるテトラペプチド鎖構造である免疫グロブリンを指す。免疫グロブリンの重鎖定常領域におけるアミノ酸の組成と配列が異なるため、その抗原性も異なる。これによって、免疫グロブリンは、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥの５つの種類又はアイソタイプに分けられる。対応する重鎖は、それぞれμ鎖、δ鎖、γ鎖、α鎖及びε鎖である。同じタイプのＩｇは、そのヒンジ領域のアミノ酸組成の違い、及び重鎖のジスルフィド結合の数と位置に応じて、異なるサブクラスに分類することができる。例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分けられる。軽鎖は、定常領域の違いにより、κ鎖又はλ鎖に分類される。５種類のＩｇのそれぞれにはκ鎖又はλ鎖を有することができる。本発明に記載の抗体は、好ましくは標的細胞上の細胞表面抗原に対する特異的な抗体である。非制限的な実施例において、抗体は、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＤＬＬ－３抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＭＵＣ１６抗体、抗ＥＮＰＰ３抗体、抗ＴＤＧＦ１抗体、抗ＥＴＢＲ抗体、抗ＭＳＬＮ抗体、抗ＴＩＭ－１抗体、抗ＬＲＲＣ１５抗体、抗ＬＩＶ－１抗体、抗ＣａｎＡｇ／ＡＦＰ抗体、抗ｃｌａｄＩｎ １８．２抗体、抗ＭｅｓｏｔｈｅｌＩｎ抗体、抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ｃ－ＭＥＴ抗体、抗ＳＬＩＴＲＫ６抗体、抗ＫＩＴ／ＣＤ１１７抗体、抗ＳＴＥＡＰ１抗体、抗ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１抗体、抗ＮａＰＩ２Ｂ／ＳＬＣ３４Ａ２抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＭＵＣ１／ＣＤ２２７抗体、抗ＡＸＬ抗体、抗ＣＤ１６６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗ＰＴＫ７／ＣＣＫ４抗体、抗ＰＲＬＲ抗体、抗ＥＦＮＡ４抗体、抗５Ｔ４抗体、抗ＮＯＴＣＨ３抗体、抗ＮｅｃｔＩｎ ４抗体、抗ＴＲＯＰ－２抗体、抗ＣＤ１４２抗体、抗ＣＡ６抗体、抗ＧＰＲ２０抗体、抗ＣＤ１７４抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗ＬＹＰＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗ＦＧＦＲ３抗体、抗ＦＲα抗体、抗ＣＥＡＣＡＭｓ抗体、抗ＧＣＣ抗体、抗ＩｎｔｅｇｒＩｎ Ａｖ抗体、抗ＣＡＩＸ抗体、抗Ｐ－ｃａｄｈｅｒＩｎ抗体、抗ＧＤ３抗体、抗ＣａｄｈｅｒＩｎ ６抗体、抗ＬＡＭＰ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３５２抗体、抗ＣＤ２５抗体又は抗ＣＤ１２３抗体のうちの１つ又は複数である。好ましくは、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ，商品名ＨｅｒｃｅｐｔＩｎ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ；２Ｃ４とも呼ばれる。商品名Ｐｅｒｊｅｔａ）、ニモツズマブ（ＮＩｍｏｔｕｚｕｍａｂ，商品名：泰欣生）、ＥｎｏｂｌＩｔｕｚｕｍａｂ、ＥｍＩｂｅｔｕｚｕｍａｂ、Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ、ＰＩｎａｔｕｚｕｍａｂ、ＢｒｅｎｔｕｘＩｍａｂ、Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ、ＢＩｖａｔｕｚｕｍａｂ、Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ、ｃＢＲ９６及びＧｌｅｍａｔｕｍａｍａｂである。
【0068】
「溶媒和物」という用語は、本発明のリガンド薬物複合体と１種又は複数種の溶媒分子から形成された薬学的に許容される溶媒和物を指す。溶媒分子の例には、水、エタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチルが含まれるが、これらに限定されない。
【0069】
「薬物担持量」という用語は、式Ｉ分子中の各抗体に担持される細胞毒性薬の平均数量を指し、薬物量と抗体量との比として示されてもよい。薬物担持量の範囲として、各抗体（Ａｂ）に０－１２、好ましくは１－１０個の細胞毒性薬（Ｄ）が結合することができる。本発明の実施形態において、薬物担持量はｎで示され、例えば１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０の平均値であってもよい。ＵＶ／可視光分光法、質量分析、ＥＬＩＳＡ試験及びＨＰＬＣなどの常法によりカップリング反応後のそれぞれのＡＤＣ分子上の薬物の平均数を測定することができる。
【0070】
本発明の一実施形態において、細胞毒性薬物は、結合ユニットを介してリガンドのＮ端アミノ及び／又はリジン残基のε－アミノに結合される。一般的に、カップリング反応において抗体に結合可能な薬物分子の数は、理論上の最大値よりも小さい。
【0071】
以下の非制限的な方法によりリガンド細胞毒性薬複合体の担持量を制御することができる。
（１）結合ユニット試薬とモノクローナル抗体とのモル比を制御する。
（２）反応時間及び温度を制御する。
（３）異なる反応試薬を選択する。
通常の医薬組成物の製造は、中国薬局方を参照されたい。
（１）結合ユニット試薬とモノクローナル抗体とのモル比を制御する。
（２）反応時間及び温度を制御する。
（３）異なる反応試薬を選択する。
通常の医薬組成物の製造は、中国薬局方を参照されたい。
【0072】
「薬学的に許容される塩」又は「製薬上に許容される塩」という用語は、本発明のリガンド薬物複合体の塩又は本発明に記載の化合物の塩を指す。このような塩は、哺乳動物に使用されるときに安全性及び有効性を有するとともに、適切な生物活性を有する。本発明のリガンド薬物複合体は、少なくとも１つのカルボキシルを有するため、塩基と塩を形成することができる。薬学的に許容される塩の非制限的な例には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などが含まれる。
【0073】
「薬学的に許容される塩」又は「製薬上に許容される塩」という用語は、本発明のリガンド薬物複合体の塩又は本発明に記載の化合物の塩を指す。このような塩は、哺乳動物に使用されるときに安全性及び有効性を有するとともに、適切な生物活性を有する。本発明の抗体薬物複合体化合物は、少なくとも１つのアミノ基を含むため、酸と塩を形成することができる。薬学的に許容される塩の例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、シュウ酸塩、硝酸塩、ソルビン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、サリチル酸塩、クエン酸水素塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メシル酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。
【0074】
「酸性アミノ酸」とは、アミノ酸の等電点が７未満のアミノ酸を指す。酸性アミノ酸の分子には、通常、１以上のカルボキシル基などの酸性基を有し、構造的には、効果的にイオン化されて 負イオンになることで親水性を向上させることができる。酸性アミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸に分けられ得る。
【0075】
「天然アミノ酸」とは、生合成により得られるアミノ酸を指す。天然アミノ酸は、一般的にＬ型であるが、例外があり、例えば、グリシンであり、天然に存在するものと生体内で合成されるものを含む。
【0076】
「非天然アミノ酸」とは、合成により得られるアミノ酸を指す。
【0077】
以下、具体的な実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定することを意図するものではないことを理解されたい。以下の実施例において特定の条件が示されていない試験方法は、通常、従来の条件に従うか、又は製造業者によって提案された条件に従う。特に明記しない限り、すべてのパーセンテージ、割合、比率又は部は重量によるものである。
【0078】
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての専門的及び科学的用語は、当技術分野でよく知られているものと同じ意味を有する。また、記載されたものと類似又は同等の任意の方法及び材料は、全て本発明の方法に適用できる。本明細書に記載の好ましい実施方法及び材料は例示的なものに過ぎない。
【0079】
実施例１：エキサテカン鏡像異性体化合物１の合成
１Ｌの丸底フラスコに化合物ＳＭ－１（Ｎ－（８－アミノ－６－フルオロ－５－メチル－１－オキソ－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－２－イル）アセトアミド；購入）（６．２５ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）、ＳＭ－２（（Ｓ）－４－エチル－４－ヒドロキシ－７，８－ジヒドロ－１Ｈ－ピランＯ［３，４－Ｆ］インドキサジン－３，６，１０（４Ｈ）－ケトン；購入）（７．２５ｇ，２７．５ｍｍｏｌ）、ｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウム（１．２６ｇ，５．０ｍｍｏｌ）を入れ、５００ｍＬトルエンを加え、加熱還流しながら５時間反応させ、ＳＭ－２が１０％未満になるまでＨＰＬＣにより反応を監視し、反応を停止させた。降温し、溶液体積が半分になるまで減圧濃縮し、氷水浴中で撹拌しながら２時間晶析し、ろ過し、３０ｍＬトルエンで３回分けて濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥し、化合物Ａｃ－１（１０．６８ｇ，８９％）を得た。ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：４７８．２であった。
【化20】
【0080】
Ａｃ－１（１０．６８ｇ，２２．５ｍｍｏｌ）、メタンスルホン酸（５５ｍＬ）、水（１１０ｍＬ）及びトルエン（５５ｍＬ）を１Ｌ丸底フラスコに混合し、加熱還流した。４時間後、ＴＬＣにより反応を監視し、原料が完全に反応した後、反応系を室温に冷却した。室温下で反応系に５００ｍＬメタノールをゆっくりと滴下し、撹拌し続け、滴下終了後に、一晩撹拌し、反応系をそのまま吸引濾過し、メタノールで濾過ケーキを洗浄し、濾液を収集し、濾過ケーキを乾燥させ、灰白色固体化合物である化合物１の異性体エキサテカンを得た。濾液を減圧濃縮し、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥し、淡茶色固体（５．０７ｇ，４１％）を得た。ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：４３６．２であった。
【0081】
実施例２：化合物２の合成
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（１００．０ｍｇ，０．１８８ｍｍｏｌ）、グリコール酸（４３．０ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．２ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．１ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを入れ、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌し、その後、ＤＩＥＡ（９４ｕＬ，０．５６５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約３時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液を分取分離し、分取液を３５℃で真空濃縮し、凍結乾燥し、白色固体化合物２（６３．８ｍｇ，収率６９．７％）を得た。ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：４９３．９であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39(d, J=9.0 Hz, 1H), 7.68(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.51(s, 1H), 5.53(dt, J=9.1, 6.0 Hz, 1H), 5.41(s, 2H), 5.12(d, J=19.1 Hz, 1H), 4.92(d, J=18.9 Hz, 1H), 3.99(s, 2H), 3.10(qt, J=16.7, 6.1 Hz, 2H), 2.29(d, J=1.8 Hz, 3H), 2.16(q, J=6.4 Hz, 2H), 2.00-1.81(m, 2H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H).
【化21】
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39(d, J=9.0 Hz, 1H), 7.68(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.51(s, 1H), 5.53(dt, J=9.1, 6.0 Hz, 1H), 5.41(s, 2H), 5.12(d, J=19.1 Hz, 1H), 4.92(d, J=18.9 Hz, 1H), 3.99(s, 2H), 3.10(qt, J=16.7, 6.1 Hz, 2H), 2.29(d, J=1.8 Hz, 3H), 2.16(q, J=6.4 Hz, 2H), 2.00-1.81(m, 2H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H).
【0082】
実施例３：化合物３の合成
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（１００．０ｍｇ，０．１８８ｍｍｏｌ）、Ｌ－乳酸（５６．６ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．２ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．１ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを入れ、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌し、その後、ＤＩＥＡ（９４ｕＬ，０．５６５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約３時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、吸引濾過により淡黄色の粗生成物を得た。粗生成物をＴＬＣ分取用プレートにより掻き取って分離し、４２．０ｍｇ淡黄色固体化合物３（収率４６．１％）を得た。
【化22】
【0083】
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.46(d, J=9.2 Hz, 1H), 7.71(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.53(s, 1H), 5.68(d, J=4.9 Hz, 1H), 5.54(q, J=7.3 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.20(d, J=19.0 Hz, 1H), 4.93(d, J=18.9 Hz, 1H), 4.20-4.08(m, 1H), 3.25-3.01(m, 2H), 2.32(s, 3H), 2.14(q, J=6.5 Hz, 2H), 1.96-1.80(m, J=7.1 Hz, 2H), 1.42(d, J=6.8 Hz, 3H), 0.90(t, J=7.2 Hz, 3H).
【0084】
実施例４：化合物４の合成
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（１００．０ｍｇ，０．１８８ｍｍｏｌ）、Ｄ－乳酸（５６．６ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．２ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．１ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを加え、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌した後、ＤＩＥＡ（９４ｕＬ，０．５６５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約３時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、吸引濾過により淡黄色の粗生成物を得た。粗生成物をＴＬＣ分取用プレートにより掻き取って分離した後、ジクロロメタン及びメタノールで固体をスラリー化して精製し、１６．８ｍｇ淡黄色固体化合物４（収率１８．４％）を得た。ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５０８．２であった。
【化23】
【0085】
実施例５：化合物５及び化合物６の合成
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（２００ｍｇ，０．３７７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ乳酸（１６２．８ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２１４．８ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７６．３ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを入れ、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌した後、ＤＩＥＡ（１８７ｕＬ，１．１３ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約６時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液を分取液体クロマトグラフィーにより分離精製し、分取液を３５℃で真空濃縮し、凍結乾燥し、４９．７ｍｇ淡黄色固体化合物５（収率４８．７％）及び６０．５ｍｇ淡黄色固体化合物６（収率５９．３％）を得た。
【化24】
【0086】
化合物５：
ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５６２．２であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00(d, J=8.7 Hz, 1H), 7.78(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 7.19(d, J=6.9 Hz, 1H), 6.54(s, 1H), 5.59(dt, J=10.1, 5.3 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 5.16(q, J=19.2 Hz, 2H), 4.63(p, J=7.6 Hz, 1H), 3.14(s, 2H), 2.38(s, 3H), 2.16(p, J=7.1 Hz, 2H), 1.87(hept, J=7.1 Hz, 2H), 0.88(t, J=7.3 Hz, 3H).
ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５６２．２であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 9.00(d, J=8.7 Hz, 1H), 7.78(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 7.19(d, J=6.9 Hz, 1H), 6.54(s, 1H), 5.59(dt, J=10.1, 5.3 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 5.16(q, J=19.2 Hz, 2H), 4.63(p, J=7.6 Hz, 1H), 3.14(s, 2H), 2.38(s, 3H), 2.16(p, J=7.1 Hz, 2H), 1.87(hept, J=7.1 Hz, 2H), 0.88(t, J=7.3 Hz, 3H).
【0087】
化合物６：
ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５６２．２であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.97(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.78(d, J=11.0 Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 7.26(d, J=6.7 Hz, 1H), 6.54(s, 1H), 5.57(dt, J=9.5, 5.3 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 5.24-5.03(m, 2H), 4.63(p, J=7.4 Hz, 1H), 3.14(t, J=6.5 Hz, 2H), 2.38(d, J=1.9 Hz, 3H), 2.28-2.07(m, 2H), 1.95-1.78(m, J=7.1 Hz, 2H), 0.88(t, J=7.3 Hz, 3H).
ＬＣ－ＭＳの結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５６２．２であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.97(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.78(d, J=11.0 Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 7.26(d, J=6.7 Hz, 1H), 6.54(s, 1H), 5.57(dt, J=9.5, 5.3 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 5.24-5.03(m, 2H), 4.63(p, J=7.4 Hz, 1H), 3.14(t, J=6.5 Hz, 2H), 2.38(d, J=1.9 Hz, 3H), 2.28-2.07(m, 2H), 1.95-1.78(m, J=7.1 Hz, 2H), 0.88(t, J=7.3 Hz, 3H).
【0088】
実施例６：化合物７及び化合物８の合成
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（２００ｍｇ，０．３７７ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシシクロプロパンカルボン酸（１３１．２ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２１４．８ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７６．３ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを加え、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌した後、ＤＩＥＡ（１８７ｕＬ，１．１３ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約６時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液に水を加えて固体を析出させ、飽和塩化アンモニウム水溶液で２回洗浄し、純水で１回洗浄し、吸引乾燥した後、ジクロロメタン及びメタノールで固体を溶解した。ＴＬＣ分取用プレートにより掻き取って分離し、８１．０ｍｇ淡黄色固体化合物７（収率８２．４％）及び６０．０淡黄色固体化合物８（収率６１．８％）を得た。
【化25】
【0089】
化合物７：
ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５３４．２であった。
1H NMR(400 MHz, d6DMSO) δ 8.40(d, J=9.0 Hz, 1H), 7.78-7.62(m, 1H), 7.29(s, 1H), 6.52(s, 1H), 5.58(dt, J=5.3, 1.4 Hz, 1H), 5.53(q, J=7.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.26-4.91(m, 2H), 3.62(t, J=5.8 Hz, 1H), 3.23-3.02(m, 2H), 2.30(d, J=3.2 Hz, 3H), 2.14(q, J=7.9, 7.0 Hz, 2H), 1.90(p, J=7.0 Hz, 2H), 1.29-1.19(m, 3H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H), 0.57-0.37(m, 4H).
化合物８：
ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５３４．２であった。
ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５３４．２であった。
1H NMR(400 MHz, d6DMSO) δ 8.40(d, J=9.0 Hz, 1H), 7.78-7.62(m, 1H), 7.29(s, 1H), 6.52(s, 1H), 5.58(dt, J=5.3, 1.4 Hz, 1H), 5.53(q, J=7.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.26-4.91(m, 2H), 3.62(t, J=5.8 Hz, 1H), 3.23-3.02(m, 2H), 2.30(d, J=3.2 Hz, 3H), 2.14(q, J=7.9, 7.0 Hz, 2H), 1.90(p, J=7.0 Hz, 2H), 1.29-1.19(m, 3H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H), 0.57-0.37(m, 4H).
化合物８：
ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５３４．２であった。
【0090】
実施例７：化合物９の合成
【化26】
【0091】
２５ｍｌ丸底フラスコに化合物１（トリフルオロ酢酸塩の形態）（１００．０ｍｇ，０．１８８ｍｍｏｌ）、１－（ヒドロキシメチル）シクロブタンカルボン酸（４３．０ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．２ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．１ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌ超乾燥ＤＭＦを入れ、フラスコ口を液封した。フラスコを氷水浴に置いて１０分間撹拌した後、ＤＩＥＡ（９４ｕＬ，０．５６５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約６時間反応させた。反応が完全に終了した後、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて固体を析出させ、吸引乾燥して個体を得た。固体を２回水洗し、酢酸エチルで１回洗浄し、ジクロロメタンで１洗浄した。１００．０ｍｇ灰白色固体化合物９（収率９８．０％）を得た。ＬＣ－ＭＳ結果は、［Ｍ＋Ｈ］＋：５４８．２であった。
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.69(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.52(s, 1H), 5.53(dt, J=8.7, 5.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.21-4.93(m, 3H), 3.63(d, J=4.8 Hz, 2H), 3.10(t, J=6.2 Hz, 2H), 2.39-2.24(m, 5H), 2.12(q, J=6.3 Hz, 2H), 1.99-1.70(m, 6H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H).
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.69(d, J=10.9 Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.52(s, 1H), 5.53(dt, J=8.7, 5.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.21-4.93(m, 3H), 3.63(d, J=4.8 Hz, 2H), 3.10(t, J=6.2 Hz, 2H), 2.39-2.24(m, 5H), 2.12(q, J=6.3 Hz, 2H), 1.99-1.70(m, 6H), 0.91(t, J=7.3 Hz, 3H).
【0092】
実施例８：化合物Ｍ１の合成
５０００ｍＬ一ツ口フラスコにＮ－フルオレニルメチルオキシカルボニル－グリシン－グリシン（１００ｇ，２８２ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ；購入）、四酢酸鉛（１７５ｇ，５５３ｍｍｏｌ，１．４ｅｑ）、２０００ｍＬ乾燥テトラヒドロフラン及び６７０ｍＬトルエンを加え、均一に撹拌し、窒素ガス保護下で８５℃に加熱し、２．５ｈ反応させた。ＴＬＣにより監視し、原料が完全に反応した後、室温に冷却し、濾過し、濾液を減圧濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物Ｍ１（９１ｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋ＮＨ４］＋３８６．０。
【化27】
【0093】
実施例９：化合物Ｍ２の合成
１０００ｍＬ一ツ口フラスコに化合物ＳＭ－３（４９．９ｇ，１００．０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ，本社の特許出願ＣＮ１０８４５２３２１に開示された方法により合成）、ペンタフルオロフェノール（１８．５ｇ，１１０．０ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）、ＤＣＣ（２０．６４ｇ，１１０．０ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）及びＴＨＦ（５００ｍＬ）を加え、室温で１ｈ反応させ（ＴＬＣにより完全に反応したことを監視する）、濾過により不溶物を除去し、得られた濾液を濾液Ａとして記録し、２－８℃で保存し、使用に備えた（溶媒を直接取って使用する。０．２Ｍで計算して使用する）。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋５６５．２。
【化28】
【0094】
実施例１０：化合物Ｌｎ－Ｄ１の合成
【化29】
【0095】
ステップ１：化合物１ａの合成
５００ｍｌ丸底フラスコにＭ１（１５．００ｇ，４０．７５ｍｍｏｌ）及び１５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（７７５．０ｍｇ，４．０８ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、グリコール酸ベンジル（１１．６ｍｌ，８１．５０ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約３時間完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離した。分離して９．０６ｇ白色固体を得た（収率４６．９％）。
５００ｍｌ丸底フラスコにＭ１（１５．００ｇ，４０．７５ｍｍｏｌ）及び１５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（７７５．０ｍｇ，４．０８ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、グリコール酸ベンジル（１１．６ｍｌ，８１．５０ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約３時間完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離した。分離して９．０６ｇ白色固体を得た（収率４６．９％）。
【0096】
ステップ２：化合物１ｂの合成
１号５０ｍｌ丸底フラスコに１ａ（５．３４ｇ，１１．２６ｍｍｏｌ）及び２５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。トリエチルアミン（１８５４ｕＬ，１２．３９ｍｍｏｌ）を滴下し、約５ｈ反応させた後、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号１００ｍｌ丸底フラスコにＭ４（４．６５ｇ，１１．２５ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（７．０３ｇ，１３．５２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２２２６ｕＬ，１３．５６ｍｍｏ）及び２０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコ中に滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して製品である４．８３ｇ白色固体（収率６６．３％）を得た。
１号５０ｍｌ丸底フラスコに１ａ（５．３４ｇ，１１．２６ｍｍｏｌ）及び２５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。トリエチルアミン（１８５４ｕＬ，１２．３９ｍｍｏｌ）を滴下し、約５ｈ反応させた後、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号１００ｍｌ丸底フラスコにＭ４（４．６５ｇ，１１．２５ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（７．０３ｇ，１３．５２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２２２６ｕＬ，１３．５６ｍｍｏ）及び２０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコ中に滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して製品である４．８３ｇ白色固体（収率６６．３％）を得た。
【0097】
ステップ３：化合物１ｃの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに１ｂ（５００．０ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）、５％のＰｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＣＭを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得た。粗製品１ｃを得てそのまま次の反応に使用した。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに１ｂ（５００．０ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）、５％のＰｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＣＭを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得た。粗製品１ｃを得てそのまま次の反応に使用した。
【0098】
ステップ４：化合物１ｄの合成
粗製品１ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ，０．８２ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得た後、凍結乾燥して３７０．２ｍｇ白色固体（収率５９．７％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］+８０４．４。
粗製品１ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ，０．８２ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得た後、凍結乾燥して３７０．２ｍｇ白色固体（収率５９．７％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］+８０４．４。
【0099】
ステップ５：化合物１ｅの合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに１ｄ（２６０．０ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ）、化合物１（１４９．３ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６０．４ｍｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５７．０ｍｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して３６８．０ｍｇ黄色固体（収率９７．３％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２２１．５
１０ｍｌ一ツ口フラスコに１ｄ（２６０．０ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ）、化合物１（１４９．３ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６０．４ｍｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５７．０ｍｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して３６８．０ｍｇ黄色固体（収率９７．３％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２２１．５
【0100】
ステップ６：化合物Ｌｎ－Ｄ１の合成
２５ｍｌ一ツ口フラスコ加入１ｅ（３６８ｍｇ，０．２８９ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１３０１．０ｍｇ，５．７８ｍｍｏｌ）及び１５ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、１２０ｍｇ黄色固体（収率３８．５％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０６５．４。
２５ｍｌ一ツ口フラスコ加入１ｅ（３６８ｍｇ，０．２８９ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１３０１．０ｍｇ，５．７８ｍｍｏｌ）及び１５ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、１２０ｍｇ黄色固体（収率３８．５％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０６５．４。
【0101】
実施例１１：化合物Ｌｎ－Ｄ２の合成
【化30】
【0102】
ステップ１：化合物２ａの合成
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（７．４５ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）及び１２０ｍｌのＴＨＦを加え、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（３８５．０ｍｇ，２．０３ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、グリコール酸ベンジル（６．０ｍｌ，４１．５ｍｍｏｌ）を滴下し、速度を２秒１滴に制御した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約３時間完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して４．８２白色固体（収率４９％）を得た。
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（７．４５ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）及び１２０ｍｌのＴＨＦを加え、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（３８５．０ｍｇ，２．０３ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、グリコール酸ベンジル（６．０ｍｌ，４１．５ｍｍｏｌ）を滴下し、速度を２秒１滴に制御した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約３時間完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して４．８２白色固体（収率４９％）を得た。
【0103】
ステップ２：化合物２ｂの合成
１号２５ｍｌ丸底フラスコに２ａ（２．５３ｇ，５．２０ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（９００ｕＬ，６．０ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（２．３１ｇ，５．６ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．５０ｇ，６．８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１１１５ｕＬ，６．８ｍｍｏ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、待反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して２．５３ｇ白色固体（収率７４％）を得た。
１号２５ｍｌ丸底フラスコに２ａ（２．５３ｇ，５．２０ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（９００ｕＬ，６．０ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（２．３１ｇ，５．６ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．５０ｇ，６．８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１１１５ｕＬ，６．８ｍｍｏ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、待反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して２．５３ｇ白色固体（収率７４％）を得た。
【0104】
ステップ３：化合物２ｃの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに２ｂ（５００．０ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＣＭを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得た。粗製品２ｃをそのまま次の反応に使用した。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに２ｂ（５００．０ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＣＭを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得た。粗製品２ｃをそのまま次の反応に使用した。
【0105】
ステップ４：化合物２ｄの合成
粗製品２ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．７０ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥し、３７８．２ｍｇ白色固体（収率６２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８１８．３。
粗製品２ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．７０ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥し、３７８．２ｍｇ白色固体（収率６２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８１８．３。
【0106】
ステップ５：化合物２ｅの合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに２ｄ（２２８ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、化合物１（１４８．３ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６０．１ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５７．２ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１４０ｕＬ，０．８４ｍｍｏｌ）を滴下し、引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２６９．５ｍｇ黄色固体（収率７８％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２３５．５。
１０ｍｌ一ツ口フラスコに２ｄ（２２８ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、化合物１（１４８．３ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６０．１ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５７．２ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１４０ｕＬ，０．８４ｍｍｏｌ）を滴下し、引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２６９．５ｍｇ黄色固体（収率７８％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２３５．５。
【0107】
ステップ６：化合物Ｌｎ－Ｄ２の合成
２５ｍｌ一ツ口フラスコに２ｅ（２６９．５ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１０１２．９ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液凍結乾燥し、９６．３ｍｇ黄色固体（収率４１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０７９．４。
２５ｍｌ一ツ口フラスコに２ｅ（２６９．５ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１０１２．９ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液凍結乾燥し、９６．３ｍｇ黄色固体（収率４１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０７９．４。
【0108】
実施例１２：化合物Ｌｎ－Ｄ３の合成
実施例１１の合成経路及び方法により化合物Ｌ－Ｄ３（９３．８ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０７９．４。
【化31】
【0109】
実施例１３：化合物Ｌｎ－Ｄ４及びＬｎ－Ｄ５の合成
【化32】
【0110】
ステップ１：化合物３ａの合成
１００ｍｌ丸底フラスコにＭ１（２．８７ｇ，７．７９ｍｍｏｌ）、トリフルオロ乳酸ベンジル（３．６５ｇ，１５．５９ｍｍｏｌ）、無水酢酸亜鉛（２．８６ｇ，１５．５９ｍｍｏｌ）及び３０ｍｌトルエンを加え、窒素ガス保護下、１００℃で反応させた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約５ｈ反応させた。完全に反応した後、濾過し、濾液を濃縮して粗生成物である油状物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体１．５１ｇ（収率３５．７％）を得た。
１００ｍｌ丸底フラスコにＭ１（２．８７ｇ，７．７９ｍｍｏｌ）、トリフルオロ乳酸ベンジル（３．６５ｇ，１５．５９ｍｍｏｌ）、無水酢酸亜鉛（２．８６ｇ，１５．５９ｍｍｏｌ）及び３０ｍｌトルエンを加え、窒素ガス保護下、１００℃で反応させた。ＴＬＣにより反応の進行を監視し、約５ｈ反応させた。完全に反応した後、濾過し、濾液を濃縮して粗生成物である油状物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体１．５１ｇ（収率３５．７％）を得た。
【0111】
ステップ２：化合物３ｂの合成
１号５０ｍｌ丸底フラスコに３ａ（２．８２ｇ，５．２０ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（０．９４９ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（（２．３６ｇ，５．７１ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．２５ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８４ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１０００ｕＬ，６．２４ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。ＤＣＭで分取液を３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を濃縮し、真空乾燥して２．３２ｇ白色固体（収率６２％）を得た。
１号５０ｍｌ丸底フラスコに３ａ（２．８２ｇ，５．２０ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（０．９４９ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（（２．３６ｇ，５．７１ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．２５ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８４ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１０００ｕＬ，６．２４ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。ＤＣＭで分取液を３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を濃縮し、真空乾燥して２．３２ｇ白色固体（収率６２％）を得た。
【0112】
ステップ３：化合物３ｃの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに３ｂ（５００．０ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得、粗製品３ｃをそのまま次の反応に使用した。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに３ｂ（５００．０ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得、粗製品３ｃをそのまま次の反応に使用した。
【0113】
ステップ４：化合物３ｄの合成
粗製品３ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．７０ｍｍｏｌ）を加え、さらに入化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して２８０．０ｍｇ白色固体（収率４６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８７２．３。
粗製品３ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．７０ｍｍｏｌ）を加え、さらに入化合物Ｍ２（４．０ｍＬ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して２８０．０ｍｇ白色固体（収率４６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８７２．３。
【0114】
ステップ５：化合物３ｅの合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに３ｄ（２８０．０ｍｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）、化合物１（１４２．２ｍｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１３７．６ｍｇ，０．３６２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．９ｍｇ，０．３６２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１２０ｕＬ，０．７２３ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して１５４．１ｍｇ黄色固体３ｅ（収率７３．６％；ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２８９．５）、６２．５ｍｇ黄色固体ｉｓｏ－３ｅ（収率２９．８％、ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２８９．５）を得た。
１０ｍｌ一ツ口フラスコに３ｄ（２８０．０ｍｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）、化合物１（１４２．２ｍｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１３７．６ｍｇ，０．３６２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．９ｍｇ，０．３６２ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１２０ｕＬ，０．７２３ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して１５４．１ｍｇ黄色固体３ｅ（収率７３．６％；ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２８９．５）、６２．５ｍｇ黄色固体ｉｓｏ－３ｅ（収率２９．８％、ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２８９．５）を得た。
【0115】
ステップ６：化合物Ｌｎ－Ｄ４及びＬｎ－Ｄ５の合成
２５ｍｌ一ツ口フラスコに３ｅ（１５４．１ｍｇ，０．１１８ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（５３２．５ｍｇ，２．３６ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、８２．０ｍｇ黄色固体（収率６０％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１３３．４。
２５ｍｌ一ツ口フラスコに３ｅ（１５４．１ｍｇ，０．１１８ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（５３２．５ｍｇ，２．３６ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、８２．０ｍｇ黄色固体（収率６０％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１３３．４。
【0116】
２５ｍｌ一ツ口フラスコにｉｓｏ－３ｅ（６２．５ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（２１６．０ｍｇ，０．９５９ｍｍｏｌ）及び７ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより原料が完全に反応したことを確認した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、９６．３ｍｇ黄色固体（収率４１％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１３３．４。
【0117】
実施例１４：化合物Ｌｎ－Ｄ６及びＬｎ－Ｄ７の合成
【化33】
【0118】
ステップ１：化合物４ａの合成
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（３．７５ｇ，１０．１９ｍｍｏｌ）及び５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１９４．０ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、２－シクロプロピル－２－ヒドロキシ酢酸ベンジル（４．３４ｇ，２０．４ｍｍｏｌ）を滴下して約６ｈで完全に反応させた。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して２．１３ｇ白色固体（収率４１％）を得た。
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（３．７５ｇ，１０．１９ｍｍｏｌ）及び５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１９４．０ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、２－シクロプロピル－２－ヒドロキシ酢酸ベンジル（４．３４ｇ，２０．４ｍｍｏｌ）を滴下して約６ｈで完全に反応させた。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して２．１３ｇ白色固体（収率４１％）を得た。
【0119】
ステップ２：化合物４ｂの合成
１号５０ｍｌ丸底フラスコに４ａ（２．８０ｇ，５．３８ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＩＥＡ（０．９８１ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号１００ｍｌ丸底フラスコにＭ４（２．２２ｇ，５．３８ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．３５ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８７ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１０００ｕＬ，６．４５ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して２．６３ｇ白色固体（収率６１％）を得た。
１号５０ｍｌ丸底フラスコに４ａ（２．８０ｇ，５．３８ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＩＥＡ（０．９８１ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号１００ｍｌ丸底フラスコにＭ４（２．２２ｇ，５．３８ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（３．３５ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８７ｇ，６．４５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１０００ｕＬ，６．４５ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して２．６３ｇ白色固体（収率６１％）を得た。
【0120】
ステップ３：化合物４ｃの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに４ｂ（１００３．１ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１００４．２ｍｇ，１００％ｍ）及び１５ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得、粗製品４ｃをそのまま次の反応に使用した。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに４ｂ（１００３．１ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１００４．２ｍｇ，１００％ｍ）及び１５ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、濾過して濾液を得、粗製品４ｃをそのまま次の反応に使用した。
【0121】
ステップ４：化合物４ｄの合成
粗製品４ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．２６ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（８．０ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、その後、室温に昇温させて２ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して９４５．１ｍｇ白色固体（収率７６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８４４．４。
粗製品４ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．２６ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、さらに化合物Ｍ２（８．０ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、その後、室温に昇温させて２ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して９４５．１ｍｇ白色固体（収率７６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８４４．４。
【0122】
ステップ５：化合物４ｅの合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに４ｄ（４２２．０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、化合物１（２６５．５ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２８５．１ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１０１．３ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（２４８ｕＬ，１．５０ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２６８．０ｍｇ黄色固体（収率４２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２６１．５。
１０ｍｌ一ツ口フラスコに４ｄ（４２２．０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、化合物１（２６５．５ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２８５．１ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１０１．３ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（２４８ｕＬ，１．５０ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２６８．０ｍｇ黄色固体（収率４２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２６１．５。
【0123】
ステップ６：化合物Ｌｎ－Ｄ６及びＬｎ－Ｄ７の合成
５０ｍｌ一ツ口フラスコに４ｄ（（２６８．０ｍｇ，０．２０４ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１１６８．１ｍｇ，５．１８７ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより監視し、完全に反応した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥してＬｎ－Ｄ６黄色固体６８．０ｍｇ（収率２８％，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１０５．４）、Ｌｎ－Ｄ７黄色固体８２．０ｍｇ（収率３５％，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１０５．４）を得た。
５０ｍｌ一ツ口フラスコに４ｄ（（２６８．０ｍｇ，０．２０４ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（１１６８．１ｍｇ，５．１８７ｍｍｏｌ）及び１０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより監視し、完全に反応した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥してＬｎ－Ｄ６黄色固体６８．０ｍｇ（収率２８％，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１０５．４）、Ｌｎ－Ｄ７黄色固体８２．０ｍｇ（収率３５％，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１０５．４）を得た。
【0124】
実施例１５：化合物Ｌｎ－Ｄ８の合成
【化34】
【0125】
ステップ１：化合物５ａの合成
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（３．７４ｇ，１０．１６ｍｍｏｌ）及び５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１９３．１ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、１－（ヒドロキシメチル）シクロブタンカルボン酸ベンジル（４．５９ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約５ｈで完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して４．６０ｇ白色固体（収率８２％）を得た。
２５０ｍｌ丸底フラスコにＭ１（３．７４ｇ，１０．１６ｍｍｏｌ）及び５０ｍｌのＴＨＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１９３．１ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を加え、引き続き１０ｍｉｎ撹拌した。フラスコの上部に定圧滴下漏斗を取り付け、１－（ヒドロキシメチル）シクロブタンカルボン酸ベンジル（４．５９ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後に、氷水浴下で引き続き撹拌し、約５ｈで完全に反応した。ＴＬＣにより原料がなくなったことを確認した後、炭酸水素ナトリウムで反応をクエンチし、混合液を酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離して４．６０ｇ白色固体（収率８２％）を得た。
【0126】
ステップ２：化合物５ｂの合成
１号５０ｍｌ丸底フラスコに５ａ（４．３８ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）及び２０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（１３６３ｕＬ，９．１１ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（３．４２ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（５．１７ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．３４ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１６４０ｕＬ，９．９５ｍｍｏｌ）及び３０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して４．６０ｇ白色固体（収率６８％）を得た。
１号５０ｍｌ丸底フラスコに５ａ（４．３８ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）及び２０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌した。ＤＢＵ（１３６３ｕＬ，９．１１ｍｍｏｌ）を滴下し、約０．５ｈ反応させ、ＴＬＣにより原料がなくなったかを監視し、完全に反応した後に使用に備えた。２号５０ｍｌ丸底フラスコにＭ４（３．４２ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（５．１７ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．３４ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１６４０ｕＬ，９．９５ｍｍｏｌ）及び３０ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１５ｍｉｎ撹拌し、完全に反応した１号フラスコ中の反応液を２号反応フラスコに滴下した。ＨＰＬＣにより原料がなくなったかを監視し、反応が完全に終了した後、ＨＰＬＣ分取により分離した。凍結乾燥して４．６０ｇ白色固体（収率６８％）を得た。
【0127】
ステップ３：化合物５ｃの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに５ｂ（１０４１．５ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１０５６．７ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより監視し、反応が完全に終了した後、超音波で水素ガスを除去した。濾過して濾液を得、粗製品５ｃをそのまま次の反応に使用した。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに５ｂ（１０４１．５ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（１０５６．７ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより監視し、反応が完全に終了した後、超音波で水素ガスを除去した。濾過して濾液を得、粗製品５ｃをそのまま次の反応に使用した。
【0128】
ステップ４：化合物５ｄの合成
粗製品５ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、さらに入化合物Ｍ２（７．０ｍＬ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して８０３．５ｍｇ白色固体（収率６４％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８５８．４。
粗製品５ｃを氷水浴に置き、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、さらに入化合物Ｍ２（７．０ｍＬ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させた。ＨＰＬＣにより反応終了を監視し、液相を精製し、分取液を得て凍結乾燥して８０３．５ｍｇ白色固体（収率６４％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋８５８．４。
【0129】
ステップ５：化合物５ｅの合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに５ｄ（２０１．３ｍｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）、Ｍ２アミノ異性体（１００．０ｍｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．４ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．２ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（２４８ｕＬ，１．５０ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２１９．１ｍｇ黄色固体（収率８４％）を得た，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２７５．５。
１０ｍｌ一ツ口フラスコに５ｄ（２０１．３ｍｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）、Ｍ２アミノ異性体（１００．０ｍｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０７．４ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３８．２ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（２４８ｕＬ，１．５０ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２１９．１ｍｇ黄色固体（収率８４％）を得た，ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１２７５．５。
【0130】
ステップ６：化合物Ｌｎ－Ｄ８の合成
５０ｍｌ一ツ口フラスコに５ｄ（２１９．１ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（７６５．３ｍｇ，３．４０ｍｍｏｌ）及び２０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより監視し、完全に反応した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、黄色固体１２０．２ｍｇ（収率６２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１１９．４。
５０ｍｌ一ツ口フラスコに５ｄ（２１９．１ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ）、臭化亜鉛（７６５．３ｍｇ，３．４０ｍｍｏｌ）及び２０ｍｌニトロメタンを入れ、室温下で撹拌した。ＨＰＬＣにより監視し、完全に反応した後、反応液を濃縮した後、ＨＰＬＣ分取により精製し、分取液を凍結乾燥し、黄色固体１２０．２ｍｇ（収率６２％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１１１９．４。
【0131】
実施例１６：化合物Ｌｎ－Ｄ９の合成
【化35】
【0132】
ステップ１：化合物１ｆの合成
５０ｍＬ一ツ口フラスコに１ｂ（５００．０ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより監視し、反応が完全に終了した後、超音波で水素ガスを除去した。濾過して濾液を得て粗製品１ｃを得た。氷水浴下で濾液に順にＭＣ（２８０．１ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ），ＤＩＥＡ（２３５ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させ、ＨＰＬＣにより監視し、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥して化合物１ｆ（２６８．９ｍｇ，８６％）を得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋６１７．２。
５０ｍＬ一ツ口フラスコに１ｂ（５００．０ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）、５％Ｐｄ／Ｃ（５００．０ｍｇ，１００％ｍ）及び１０ｍｌのＤＭＦを入れ、水素バルーンを添加して水素置換し、室温下で約３時間反応させた。ＨＰＬＣにより監視し、反応が完全に終了した後、超音波で水素ガスを除去した。濾過して濾液を得て粗製品１ｃを得た。氷水浴下で濾液に順にＭＣ（２８０．１ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ），ＤＩＥＡ（２３５ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で加えた後、室温に昇温させて１ｈ反応させ、ＨＰＬＣにより監視し、分取液体クロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥して化合物１ｆ（２６８．９ｍｇ，８６％）を得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋６１７．２。
【0133】
ステップ２：化合物Ｌｎ－Ｄ９の合成
１０ｍｌ一ツ口フラスコに１ｆ（２６８．９ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、エキサテカンメシル酸塩（２３３．８ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ，購入）、ＨＡＴＵ（１９０．５ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６７．８ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１４０ｕＬ，０．８４ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２５４．３ｍｇ黄色固体（収率５６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０３４．４。
１０ｍｌ一ツ口フラスコに１ｆ（２６８．９ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、エキサテカンメシル酸塩（２３３．８ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ，購入）、ＨＡＴＵ（１９０．５ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６７．８ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）及び５ｍｌのＤＭＦを入れ、氷水浴下で１０ｍｉｎ撹拌し、ＤＩＥＡ（１４０ｕＬ，０．８４ｍｍｏｌ）を滴下して引き続き反応させ、ＨＰＬＣにより完全に反応したことを確認した後、分取分離し、分取液を凍結乾燥して２５４．３ｍｇ黄色固体（収率５６％）を得た。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１０３４．４。
【0134】
実施例１７：対照化合物の合成
特許ＣＮ１１１６８９９８０及びＷＯ２０２００６３６７６に記載の方法により以下の化合物を合成した
特許ＣＮ１１１６８９９８０及びＷＯ２０２００６３６７６に記載の方法により以下の化合物を合成した
【表1】
【0135】
実施例１８：カップリング（結合）によるＡＤＣ薬物の一般製造方法
予備精製後のモノマー率が９５％を超える抗体Abを、限外濾過遠心分離チューブによりリン酸緩衝液（濃度１０ｍｇ／ｍＬ）に移した。抗体モル数の２０倍のＴＣＥＰを加え、室温で１０ｈ反応させて抗体鎖間のジスルフィド結合を断裂させた。抗体モル数の２０倍の結合ユニット毒素を加え、室温で２ｈ反応させた。反応終了後に、カットオフ分子量３０ＫＤａの限外濾過遠心分離チューブを用いて溶液をＰＢＳに交換し、結合していないペイロードを除去した。液交換後のＡＤＣサンプルを０．２２ミクロン滅菌フィルターで濾過し、使用まで保存した。
予備精製後のモノマー率が９５％を超える抗体Abを、限外濾過遠心分離チューブによりリン酸緩衝液（濃度１０ｍｇ／ｍＬ）に移した。抗体モル数の２０倍のＴＣＥＰを加え、室温で１０ｈ反応させて抗体鎖間のジスルフィド結合を断裂させた。抗体モル数の２０倍の結合ユニット毒素を加え、室温で２ｈ反応させた。反応終了後に、カットオフ分子量３０ＫＤａの限外濾過遠心分離チューブを用いて溶液をＰＢＳに交換し、結合していないペイロードを除去した。液交換後のＡＤＣサンプルを０．２２ミクロン滅菌フィルターで濾過し、使用まで保存した。
【0136】
カップリング用ｐａｙｌｏａｄ化合物Ｌｎ－Ｄ１、Ｌｎ－Ｄ２、Ｌｎ－Ｄ４、Ｌｎ－Ｄ５、Ｌｎ－Ｄ６、Ｌｎ－Ｄ７、Ｌｎ－Ｄ８及びＬｎ－Ｄ９を、本実施例１８に記載のカップリング一般法により抗体分子Ａｂ（抗体分子Ａｂは、それぞれＡ：Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ抗体、Ｂ：Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ抗体であってもよい）とカップリングした。カップリング生成物に対して、逆相高速液体クロマトグラフィーにより、その平均薬物／抗体比（ＤＡＲ）値を測定した。得られたＡＤＣ薬物分子の関連情報及びｐａｙｌｏａｄ分子の対応状況を下表に示す。
【表2】
【0137】
実施例１９：カンプトテシンキラル誘導体のｌｏｇＰ値試験
ｌｏｇＰ 値は、化合物の水溶性、膜透過性、体内ＡＤＭＥ過程、及び化合物の受容体に対する親和性に密接に関係し、化合物が生物膜を透過する過程において重要な作用を有する。カンプトテシン薬物のｎ－オクタン（油）及び水中での分布係数を測定してｌｏｇＰ値を得た。薬物を研究した結果を下表に示す。
ｌｏｇＰ 値は、化合物の水溶性、膜透過性、体内ＡＤＭＥ過程、及び化合物の受容体に対する親和性に密接に関係し、化合物が生物膜を透過する過程において重要な作用を有する。カンプトテシン薬物のｎ－オクタン（油）及び水中での分布係数を測定してｌｏｇＰ値を得た。薬物を研究した結果を下表に示す。
【表3】
【0138】
以上のＬｏｇＰ結果から分かるように、本発明の化合物は、より低いＬｏｇＰ値を有し、水溶性がより良好である。
【0139】
実施例２０：ＡＤＣの血漿凝集、分解試験
無菌で特定量のＡＤＣサンプルを取り、血漿におけるＡＤＣの最終濃度が０．６ｍｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＧが除去されたヒト血漿に加えた。各ＡＤＣは、それぞれ３チューブ調製し、３７℃水浴に置いてインキュベートし、それぞれ０ｈ、７２ｈ、７ｄインキュベートした後、ＡＤＣサンプルを取り出し、各チューブにＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＴＭＬＸ Ｌｏｔ：＃１０２２１４７９ＧＥ，ＰＢＳで洗浄したものを取り）１００μＬを加え、縦型ミキサーで揺動して２ｈ吸着し、洗浄、溶出及びＴｒｉｓ－ＨＣｌ中和のステップを行い、インキュベートした後のＡＤＣが得られ、特定の時間インキュベートしたＡＤＣサンプルをＳＥＣ検出し、凝集分解状況を測定した。
無菌で特定量のＡＤＣサンプルを取り、血漿におけるＡＤＣの最終濃度が０．６ｍｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＧが除去されたヒト血漿に加えた。各ＡＤＣは、それぞれ３チューブ調製し、３７℃水浴に置いてインキュベートし、それぞれ０ｈ、７２ｈ、７ｄインキュベートした後、ＡＤＣサンプルを取り出し、各チューブにＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＴＭＬＸ Ｌｏｔ：＃１０２２１４７９ＧＥ，ＰＢＳで洗浄したものを取り）１００μＬを加え、縦型ミキサーで揺動して２ｈ吸着し、洗浄、溶出及びＴｒｉｓ－ＨＣｌ中和のステップを行い、インキュベートした後のＡＤＣが得られ、特定の時間インキュベートしたＡＤＣサンプルをＳＥＣ検出し、凝集分解状況を測定した。
【表4】
【0140】
ＡＤＣ－１のｐａｙｌｏａｄは、市販抗腫瘍薬物Ｅｎｈｅｒｔｕと一致する。ＡＤＣ薬物の血漿中での凝集及び分解の試験から分かるように、カンプトテシンキラル誘導体ＡＤＣの凝集及び分解は、ＡＤＣ－１よりも顕著に低く、より優れた物理的及び化学的特性を有し、血漿中でより安定して存在することができる。
【0141】
実施例２１：カンプトテシンキラル誘導体の細胞活性試験
以下の実験過程によりカンプトテシンキラル誘導体の細胞毒性活性を測定した。
カンプトテシンのキラル誘導体化薬物をそれぞれＡ４３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３、Ｂｘｐｃ－３及びＳＷ６２０腫瘍細胞に加え、７２時間後に、細胞の生存率を測定した。細胞のインビトロ実験に基づいて細胞の生存率、細胞毒性、及び本発明のカンプトテシン薬物によって誘導されるプログラム細胞死を測定した。
以下の実験過程によりカンプトテシンキラル誘導体の細胞毒性活性を測定した。
カンプトテシンのキラル誘導体化薬物をそれぞれＡ４３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３、Ｂｘｐｃ－３及びＳＷ６２０腫瘍細胞に加え、７２時間後に、細胞の生存率を測定した。細胞のインビトロ実験に基づいて細胞の生存率、細胞毒性、及び本発明のカンプトテシン薬物によって誘導されるプログラム細胞死を測定した。
【0142】
細胞増殖試験によりカンプトテシン薬物のインビトロ有効性を測定した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙは市販品（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（ａ）は、比色法により細胞増殖及び細胞毒性試験における生細胞数を検出する検出試薬である。この試薬は、新しいテトラゾール化合物［３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム， 内塩；ＭＴＳ］及び電子カップリング剤（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ ｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ；ＰＥＳ）を含む。ＰＥＳは、強化された化学安定性を有することで、ＭＴＳと混合して安定した溶液を形成する。試薬中のＭＴＳ（Ｏｗｅｎ'ｓ ｒｅａｇｅｎｔ）は、細胞によって生物還元されて色があるホルマザン生成物になり、そのまま培地に溶解することができる。このような変換は、代謝が活発する細胞のデヒドロゲナーゼによるＮＡＤＰＨ又はＮＡＤＨの作用下で完成する可能性がある。検出する際に、適量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔをそのまま培養プレートウェルの培地に入れ、１-４時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーにより４９０ｎｍでの吸光度の値を読み取ればよい。
【0143】
４９０ｎｍで検出されたホルマザン生成物の量は、培養中の生細胞数と比例する。ＭＴＳのホルマザン生成物が組織培地に可溶であるため、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ａｓｓａｙは、ＭＴＴ又はＩＮＴ法と比較して操作ステップが少ない。
【0144】
本発明において、Ａ４３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３、Ｂｘｐｃ－３及びＳＷ６２０をインビトロ有効性検出の研究系として使用する。９６ウェルプレートにおいて、適切な細胞密度で均一に接種し、ＣＯ２インキュベーター（３７℃）でインキュベートした。２４時間後、顕微鏡下で細胞状態が正常であることを確認し、カンプトテシン薬物を加えた。培地でカンプトテシン薬物（初期濃度１ｕＭ、７倍希釈、８つの濃度点；最後の２列はそれぞれ対照群（即ち、細胞＋培地，薬物処理なし）及びブランク群（即ち、細胞なし、培地のみ含有；バックグラウンド除去用））を希釈し、薬物を均一に混合した後、薬物を対応する細胞ウェルに加え、ＣＯ２インキュベーター（３７℃）に入れて３日間インキュベートした。３日間後、各ウェルに２０ｕｌのＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇｍ，Ｇ３５８１）を加えて２時間反応させ、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ，型番：ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ１９０）により４９０ｎＭで読み取った。ミトコンドリア内のデヒドロゲナーゼの活性を検出することでＩＣ５０を計算して細胞の増殖に対するカンプトテシン薬物の阻害作用を評価した。対応するカンプトテシンキラル誘導体ＩＣ５０（ｎＭ）の測定結果を下表に示す。
【表5】
【0145】
Ｄｘｄは、市販された抗がんＡＤＣ薬物Ｅｎｈｅｒｔｕの活性成分であり、高活性のカンプトテシン系薬物である。本発明者らは、細胞活性実験により本発明に記載のカンプトテシンキラル誘導体が代表的な腫瘍細胞ＢＸＰＣ－３、Ａ４３１、ＳＷ６２０、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＳＫ－ＢＲ－３のいずれにもＤｘｄ以上の細胞活性を示すことを実証した。
【0146】
実施例２２：ＡＤＣのインビトロ血漿安定性
無菌で特定量のＡＤＣサンプルを取り、ＡＤＣの最終濃度が０．６ｍｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＧが除去された無菌ヒト血漿に入れた。各ＡＤＣは、３チューブ調製し、３７℃水浴に置いてインキュベートし、それぞれ０ｈ、７２ｈ、７ｄ時間インキュベートした後、ＡＤＣサンプルを取り出し、各チューブにＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＴＭＬＸ Ｌｏｔ：＃１０２２１４７９ＧＥ，ＰＢＳで洗浄したものを取る）１００μＬを入れ、縦型ミキサーで揺動して２ｈ吸着し、洗浄、溶出及びＴｒｉｓ－ＨＣｌ中和のステップを行った後、インキュベートされたＡＤＣを得た。特定時間インキュベートされたＡＤＣサンプルについてＲＰ－ＨＰＬＣによりＤＡＲ値を測定し、サンプルの血漿安定性を判定した。実験の結果から分かるように、本発明のＡＤＣは、血漿インキュベーションの過程においてほとんど損失しないか、又は損失が非常に少なく、血漿中で良好な安定性を有する。早期分解により毒性が発生する可能性が低い。
無菌で特定量のＡＤＣサンプルを取り、ＡＤＣの最終濃度が０．６ｍｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＧが除去された無菌ヒト血漿に入れた。各ＡＤＣは、３チューブ調製し、３７℃水浴に置いてインキュベートし、それぞれ０ｈ、７２ｈ、７ｄ時間インキュベートした後、ＡＤＣサンプルを取り出し、各チューブにＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＴＭＬＸ Ｌｏｔ：＃１０２２１４７９ＧＥ，ＰＢＳで洗浄したものを取る）１００μＬを入れ、縦型ミキサーで揺動して２ｈ吸着し、洗浄、溶出及びＴｒｉｓ－ＨＣｌ中和のステップを行った後、インキュベートされたＡＤＣを得た。特定時間インキュベートされたＡＤＣサンプルについてＲＰ－ＨＰＬＣによりＤＡＲ値を測定し、サンプルの血漿安定性を判定した。実験の結果から分かるように、本発明のＡＤＣは、血漿インキュベーションの過程においてほとんど損失しないか、又は損失が非常に少なく、血漿中で良好な安定性を有する。早期分解により毒性が発生する可能性が低い。
【0147】
【表6】
【0148】
実施例２３：ＡＤＣ抗腫瘍細胞活性試験
本発明において、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＢＴ４７４をインビトロ有効性検出の研究系として使用する。適量の腫瘍細胞系を９６ウェルプレートに均一に接種し、ＣＯ２インキュベーターに入れてインキュベートした。２４時間後に、顕微鏡下で細胞状態が正常であることを確認した後、薬物を加えて処理した。培地で薬物（ＡＤＣ薬物の初期濃度が５００ｎＭ、希釈倍数が７倍で、合計８つの濃度点あり、毒素と抗体との理論カップリング比（ＤＡＲ）が８：１で、実際なカップリング比が約７．５：１であるため、毒素の初期濃度は４．０μＭで、７倍の濃度勾配で希釈し、８つの濃度点ある）を希釈し、均一に混合した後、対応する細胞ウェルに加え、その後の２列はそれぞれ対照群（即ち、細胞＋培地，薬物処理なし）及びブランク群（即ち、細胞なし、培地のみ含有、バックグラウンド除去用）であった。ＣＯ２インキュベーター（３７℃）に入れて５日間インキュベートした。５日間後、各ウェルに２０μＬのＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｇ３５８１）を加え、２時間反応させ、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ，型番：ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ１９０）により波長４９０ｎｍでの吸光の値を読み取った。ミトコンドリア内のデヒドロゲナーゼの活性を検出することでＩＣ５０を計算して腫瘍細胞の増殖に対するＡＤＣ薬物の阻害作用を評価した。
本発明において、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＢＴ４７４をインビトロ有効性検出の研究系として使用する。適量の腫瘍細胞系を９６ウェルプレートに均一に接種し、ＣＯ２インキュベーターに入れてインキュベートした。２４時間後に、顕微鏡下で細胞状態が正常であることを確認した後、薬物を加えて処理した。培地で薬物（ＡＤＣ薬物の初期濃度が５００ｎＭ、希釈倍数が７倍で、合計８つの濃度点あり、毒素と抗体との理論カップリング比（ＤＡＲ）が８：１で、実際なカップリング比が約７．５：１であるため、毒素の初期濃度は４．０μＭで、７倍の濃度勾配で希釈し、８つの濃度点ある）を希釈し、均一に混合した後、対応する細胞ウェルに加え、その後の２列はそれぞれ対照群（即ち、細胞＋培地，薬物処理なし）及びブランク群（即ち、細胞なし、培地のみ含有、バックグラウンド除去用）であった。ＣＯ２インキュベーター（３７℃）に入れて５日間インキュベートした。５日間後、各ウェルに２０μＬのＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｇ３５８１）を加え、２時間反応させ、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ，型番：ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ１９０）により波長４９０ｎｍでの吸光の値を読み取った。ミトコンドリア内のデヒドロゲナーゼの活性を検出することでＩＣ５０を計算して腫瘍細胞の増殖に対するＡＤＣ薬物の阻害作用を評価した。
【0149】
【表7】
【0150】
ＡＤＣ－１は、市販抗腫瘍薬物Ｅｎｈｅｒｔｕである。上記のＡＤＣ細胞活性試験により分かるように、本発明に記載のカンプトテシンキラル誘導体薬物は、結合ユニットＬを介して抗体にカップリングされた後、多くの腫瘍細胞系においても良好な抗腫瘍活性を示し、ＡＤＣ－１と比較して、一部のＡＤＣ活性はより優れ、臨床応用価値は非常に高い。
【0151】
実施例２４：ＡＤＣインビボ薬効実験
本発明において、単一腫瘍ＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍担持ヌードマウスモデルを構築してＡＤＣカップリング薬物のインビボ有効性を評価した。即ち、５×１０６個のＮＣＩ－Ｎ８７細胞を４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右肩に皮下接種し、マウス腫瘍の平均体積が１６２ｍｍ３になった後、腫瘍のサイズによって５匹／群でランダムに群分けし、０、７、１４、２１日目にそれぞれブランク対照（緩衝液ブランク）及び３ｍｇ／ｋｇ用量の抗体薬物複合体ＡＤＣ－１、ＡＤＣ－２、ＡＤＣ－３、ＡＤＣ－５、ＡＤＣ－６、ＡＤＣ－７を静脈注射した。腫瘍体積の測定データは、測定時の腫瘍平均体積であり、マウスの体重変化を記録し、ＡＤＣ薬物のインビボ有効性及び初期毒性を観察した。
本発明において、単一腫瘍ＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍担持ヌードマウスモデルを構築してＡＤＣカップリング薬物のインビボ有効性を評価した。即ち、５×１０６個のＮＣＩ－Ｎ８７細胞を４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右肩に皮下接種し、マウス腫瘍の平均体積が１６２ｍｍ３になった後、腫瘍のサイズによって５匹／群でランダムに群分けし、０、７、１４、２１日目にそれぞれブランク対照（緩衝液ブランク）及び３ｍｇ／ｋｇ用量の抗体薬物複合体ＡＤＣ－１、ＡＤＣ－２、ＡＤＣ－３、ＡＤＣ－５、ＡＤＣ－６、ＡＤＣ－７を静脈注射した。腫瘍体積の測定データは、測定時の腫瘍平均体積であり、マウスの体重変化を記録し、ＡＤＣ薬物のインビボ有効性及び初期毒性を観察した。
【0152】
【表8】
【0153】
ＡＤＣ－１は、市販された抗腫瘍薬物Ｅｎｈｅｒｔｕである。上記のＡＤＣマウスインビボ薬効実験により、本発明に記載のカンプトテシンキラル誘導体薬物は、結合ユニットＬを介して抗体にカップリングされた後、腫瘍担持マウスにおいて明らかな抗腫瘍活性を示し、平均腫瘍体積がブランク対照よりも顕著に小さいことが実証された。ＡＤＣ－１と比較して、ＡＤＣ－２の活性は同じレベルであり、ＡＤＣ－５はより高く、ＡＤＣ－７は優れた活性を示した。マウスの体重は、投薬期間中で顕著な変化がなく、群内でマウスの死亡がないため、本発明に記載のカンプトテシンキラル誘導体薬物は、良好な安全性を有し、研究応用価値は非常に高い。
【国際調査報告】