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特表2023-545925抗ＨＥＲ３抗体と抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体及びその医薬用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-01
(54)【発明の名称】抗ＨＥＲ３抗体と抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体及びその医薬用途
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20231025BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20231025BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20231025BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20231025BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231025BHJP
C12Q 1/00 20060101ALI20231025BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20231025BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231025BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20231025BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20231025BHJP
A61K 31/4745 20060101ALI20231025BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20231025BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231025BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N1/15
C12N1/19
C12N5/10
C12Q1/00 Z
C12N1/21
A61K39/395 N
A61K39/395 T
A61K31/7088
A61K48/00
A61K39/395 L
A61K31/4745
A61K47/68
A61P35/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023518435
(86)(22)【出願日】2021-10-14
(85)【翻訳文提出日】2023-03-22
(86)【国際出願番号】 CN2021123733
(87)【国際公開番号】W WO2022078425
(87)【国際公開日】2022-04-21
(31)【優先権主張番号】202011097383.0
(32)【優先日】2020-10-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202111171200.X
(32)【優先日】2021-10-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】516174219
【氏名又は名称】江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司
(71)【出願人】
【識別番号】516174208
【氏名又は名称】上海恒瑞医薬有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＧＲＵＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ
【住所又は居所原語表記】ＮＯ． ２７９ ＷＥＮＪＩＮＧ ＲＯＡＤ， ＭＩＮＨＡＮＧ ＤＩＳＴＲＩＣＴ， ＳＨＡＮＧＨＡＩ ２００２４５， ＣＨＩＮＡ
(74)【代理人】
【識別番号】100101454
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 卓二
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100138911
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻井 陽子
(74)【代理人】
【識別番号】100218268
【弁理士】
【氏名又は名称】及川 健太郎
(72)【発明者】
【氏名】楊 陽
(72)【発明者】
【氏名】于 佳
(72)【発明者】
【氏名】陶 維康
【テーマコード（参考）】
4B063
4B065
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QQ13
4B063QQ96
4B063QR66
4B063QS05
4B063QS33
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065AC15
4B065BA01
4B065BC01
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC27
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA13
4C084NA14
4C084ZB26
4C085AA14
4C085AA26
4C085BB01
4C085CC23
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB22
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
抗ＨＥＲ３抗体と抗ＨＥＲ３抗体薬物複合体及びその医薬用途を提供する。具体的に、当該抗ＨＥＲ３抗体は、一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗ＨＥＲ３抗体－薬物複合体であり、そのうち、Ｐｃは抗ＨＥＲ３抗体であり、Ｌ、Ｙ及びｎは明細書に定義された通りである。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、前記抗ＨＥＲ３抗体は、ａ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、前記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、前記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、好ましくは、ＤＴ３Ｃ抗体エンドサイトーシス実験により前記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、好ましくは、ｐＨｒｏｄｏ抗体エンドサイトーシス実験により前記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、
単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項2】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、１）配列番号７で示される重鎖可変領域に含まれるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、２）配列番号８で示される軽鎖可変領域に含まれるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を含み、好ましくは、前記抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
ａ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、前記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定され、或いは
ｂ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、前記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定され、或いは
ｃ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、前記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される、
請求項１に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項3】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、ａ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定され、或いは
ｂ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定され、或いは
ｃ．前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項4】
前記抗ＨＥＲ３抗体はヒト抗体又は抗原結合断片である、請求項１～３の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項5】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７と少なくとも９０％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８と少なくとも９０％の配列同一性を有し、
好ましくは、前記抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７で示され、及び前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８で示される、
請求項１～４の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項6】
配列番号２７と少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖、及び／又は配列番号２８と少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖を含み、好ましくは、前記抗ＨＥＲ３抗体は、
配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む、
請求項１～５の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項7】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、ａ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、前記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、前記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、好ましくは、ＤＴ３Ｃ抗体エンドサイトーシス実験により前記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．前記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、好ましくは、ｐＨｒｏｄｏ抗体エンドサイトーシス実験により前記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、
請求項１～６の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項8】
請求項１～７の何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体と競合してヒトＨＥＲ３に結合する、単離した抗ＨＥＲ３抗体。
【請求項9】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体をコードする、核酸分子。
【請求項10】
請求項９に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項11】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体と、前記抗ＨＥＲ３抗体にカップリングされるエフェクター分子と、を含み、好ましくは、前記エフェクター分子は、抗腫瘍剤、免疫調節剤、生物反応修飾剤、レクチン、細胞毒性薬剤、発色団、蛍光団、化学発光化合物、酵素、金属イオン、及びそれらの任意の組み合わせから選ばれる、
免疫複合体。
【請求項12】
免疫検出又はＨＥＲ３の測定に用いられる方法であって、請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体を対象又は対象からの試料に接触させるステップを含む、方法。
【請求項13】
一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、【化1】
Ｐｃは請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体であり、
ｍは０～４の整数であり、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
Ｗは、Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、前記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、前記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、前記アミノ酸残基はフェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸及びアスパラギン酸のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒ５は水素原子、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれる、
一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
前記抗体－薬物複合体は、【化2】
ｎは１～８で、ｎは小数又は整数であり、好ましくは、ｎは３～８で、ｎは小数又は整数であり、
ＨＥＲ３－２９は、配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む抗ＨＥＲ３抗体である、
請求項１３に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
請求項１３に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、【化3】
そのうち、
Ｐｃ’はＰｃを還元して得られ、Ｐｃ、ｎ、ｍ、Ｗ、Ｌ２、Ｌ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は請求項１３に定義された通りである、
方法。
【請求項16】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体、又は請求項９に記載の核酸分子、又は請求項１３若しくは１４に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩と、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又はベクターと、を含む、医薬組成物。
【請求項17】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体、又は請求項９に記載の核酸分子、又は請求項１３若しくは１４に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は請求項１６に記載の医薬組成物の、ＨＥＲ３仲介性の疾患又は病状を治療するための薬剤の調製における用途。
【請求項18】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体、又は請求項９に記載の核酸分子、又は請求項１３若しくは１４に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は請求項１６に記載の医薬組成物の、腫瘍を治療及び／又は予防するための薬剤の調製における用途であって、好ましくは、前記腫瘍は、乳がん、非小細胞肺がん、胃がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、大腸がん、頭頸部扁平上皮がん及び黒色腫から選ばれる、
用途。
【請求項19】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離した抗ＨＥＲ３抗体、又は請求項９に記載の核酸分子、又は請求項１３若しくは１４に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は請求項１６に記載の医薬組成物を含む、試薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は抗ＨＥＲ３抗体、抗ＨＥＲ３抗体－エキサテカン類似体複合体、その調製方法、それを含む医薬組成物、及びそのＨＥＲ３仲介性の疾患又は病状を治療する薬剤の調製に用いられる用途、特に、抗がん剤の調製に用いられる用途に関する。
【背景技術】
【0002】
ここでの記載は、必ずしも従来技術を構成するものではなく、本開示に関連する背景情報のみを提供する。
【0003】
ＨＥＲ３（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ３、ＥｒｂＢ－３又はＨＥＲ３）は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーメンバーの一つである。当該ファミリーは、ＨＥＲ１（ｅｒｂＢ１、ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ２（ｅｒｂＢ２、ＮＥＵ）、ＨＥＲ３（ｅｒｂＢ３）及びＨＥＲ４（ｅｒｂＢ４）を含む。これらの受容体は、何れも細胞外領域、膜貫通領域及び細胞内領域という３つの部分を含み、そのうち、細胞外領域は４つのドメインを含み、細胞内領域は、１つのシグナル伝達用の細胞内チロシンキナーゼドメインと、１つの細胞質内にあるチロシンリン酸化残基付きの尾部と、を含む。リガンドが細胞外ドメインＩとＩＩＩに結合すると、細胞シグナル伝達が開始する。正常な場合、これらの受容体は、細胞の分裂、移動、生存と器官の発達を仲介する。ＥＧＦＲファミリーメンバーが突然変異すると、それによる異常シグナル伝達により細胞の生存が刺激され、がんの進行に繋がる。ＨＥＲ３受容体が活性化されて生理作用を発生する基本原理は、他のファミリーメンバーと似ているが、そのリガンドがニューレグリン１（ＮＲＧ－１）及びニューレグリン２（ＮＲＧ－２）を含み、且つ活性化後にＨＥＲ３がホモ多量体を形成できず、ＥＧＦＲ又はＨＥＲ２と共にヘテロ二量体しか形成できないことにおいて異なっている。ＨＥＲ３は、ヘテロ二量体の形成中に、その細胞内ドメイン部分が比較的高いチロシンホスホリラーゼ活性を示しており、構造解析によると、ＨＥＲ３細胞内ドメインに６つのＰ８５（ＰＩ－３Ｋサブユニット）結合部位があることが発見され、当該特定の構造があってこそ、ＨＥＲ３はＰ８５調節サブユニットと互いに作用する時に、調節サブユニット部位にＰＩ－３Ｋを６つも動員することができ、ＰＩ－３Ｋシグナル伝達経路が強く活性化される。実際には、ＨＥＲ３／ＨＥＲ２二量体は、ＨＥＲ二量体のうち、活性の最も強いものである。ＥＧＦＲは、哺乳動物の上皮細胞、線維芽細胞、膠細胞、角化細胞などの細胞表面に広く分布している。ＥＧＦＲシグナル伝達経路は、細胞の成長、増殖及び分化などの生理的過程において重要な役割を果たしている。
【0004】
ＨＥＲ３は、例えば、乳がん、胃がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、大腸がん、頭頸部扁平上皮がん及び黒色腫など、よく見られる様々な悪性腫瘍に高く発現している。ＥＧＦＲ遺伝子の突然変異による高レベルの発現又は過剰な活性化とは異なり、ＨＥＲ３遺伝子は突然変異率が低く、その高発現は主に、ｍＲＮＡ転写が増加され、タンパク質の翻訳が多くなるためであり、且つよくＨＥＲ２と共に高く発現しており、ＨＥＲ３の高発現は、多種の腫瘍の発生、進行及び対象の生存期間に密接に関連しているため、ＨＥＲ３を標的とする抗腫瘍剤の研究は重要な意味を持っている。
【発明の概要】
【0005】
本開示は、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＨＥＲ３抗体－エキサテカン類似体複合体及びその用途に関する。
【0006】
本開示は、単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、そのうち、
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能である、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能である、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
【0007】
本開示は、単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、そのうち、
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例３の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例４の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例３の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例４の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する、単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
【0008】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、（１）配列番号７で示される重鎖可変領域に含まれるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、（２）配列番号８で示される軽鎖可変領域に含まれるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を含む。
【0009】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
ａ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定される。
ａ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定される。
【0010】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
ｂ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定される。
ｂ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定される。
【0011】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
ｃ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される。本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、
ａ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
ｃ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される。本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、
ａ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
【0012】
本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、
ｂ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
ｂ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＩＭＧＴ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
【0013】
本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む単離した抗ＨＥＲ３抗体であって、
ｃ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
ｃ．上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
そのうち、上記ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付け規則によって決定される、
単離した抗ＨＥＲ３抗体を提供する。
【0014】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、ヒト抗体又は抗原結合断片である。
【0015】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し、
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７で示され、且つ上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８で示され、又は
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、抗体重鎖定常領域と軽鎖定常領域を更に含み、好ましくは、上記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３とＩｇＧ４定常領域及びその通常の変異体から選ばれ、上記軽鎖定常領域は、ヒト抗体κとλ鎖定常領域及びその通常の変異体から選ばれ、より好ましくは、上記抗体は、配列番号５で示される重鎖定常領域及び配列番号６で示される軽鎖定常領域を含む。
上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し、及び／又は上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有し、
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、そのうち、
上記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７で示され、且つ上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８で示され、又は
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、抗体重鎖定常領域と軽鎖定常領域を更に含み、好ましくは、上記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３とＩｇＧ４定常領域及びその通常の変異体から選ばれ、上記軽鎖定常領域は、ヒト抗体κとλ鎖定常領域及びその通常の変異体から選ばれ、より好ましくは、上記抗体は、配列番号５で示される重鎖定常領域及び配列番号６で示される軽鎖定常領域を含む。
【0016】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、
配列番号２７と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖、及び／又は配列番号２８と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖を含み、
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、
配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む。
配列番号２７と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖、及び／又は配列番号２８と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖を含み、
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、
配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む。
【0017】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能である、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する。
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能である、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する。
【0018】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体は、
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例３の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例４の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する。
ａ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．５ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、
ｂ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、０．２ ｎＭよりも小さい見かけの親和性ＥＣ５０でＭＣＦ７細胞に発現したＨＥＲ３タンパク質に結合し、上記見かけの親和性ＥＣ５０はＦＡＣＳ方法により測定され、
ｃ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例３の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＩＣ５０は２ ｎＭよりも小さく、
ｄ．上記抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３を発現した細胞によりエンドサイトーシス可能であり、試験例４の方法により上記抗ＨＥＲ３抗体を測定する時に、そのＦＩＴＣシグナルは３００よりも大きい、
という特徴のうちの１つ又は複数を有する。
【0019】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体と競合してヒトＨＥＲ３に結合する、単離した抗ＨＥＲ３抗体を更に提供する。
【0020】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体をコードする核酸分子を更に提供する。
【0021】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の核酸分子を含む宿主細胞を更に提供する。
【0022】
幾つかの実施形態において、本開示は、治療有効量の上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記核酸分子と、１種又はそれ以上の薬学的に許容されるベクター、希釈剤又は賦形剤と、を含む医薬組成物を更に提供する。
【0023】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体と、上記抗ＨＥＲ３抗体にカップリングされるエフェクター分子と、を含み、好ましくは、上記エフェクター分子は、放射性同位体、抗腫瘍剤、免疫調節剤、生物反応修飾剤、レクチン、細胞毒性薬剤、発色団、蛍光団、化学発光化合物、酵素、金属イオン、及びそれらの任意の組み合わせから選ばれる免疫複合体を更に提供する。
【0024】
幾つかの実施形態において、本開示は、免疫検出又はＨＥＲ３の測定に用いられる体内又は体外の方法であって、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体を対象又は対象からの試料に接触させるステップを含む方法を更に提供する。
【0025】
幾つかの実施形態において、本開示は、一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩を更に提供し、
そのうち、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ１Ｒ２－（ＣＲａＲｂ）ｍ－、－Ｏ－ＣＲ１Ｒ２－、－ＮＨ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－及び－Ｓ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
ＲａとＲｂは相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシアルキル基、シクロアルキル基及びヘテロシクリル基から選ばれ、或いは、ＲａとＲｂは、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
或いは、ＲａとＲ２は、それに連結される炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
ｍは０～４の整数であり、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、
Ｌは、リンカーユニットであり、
Ｐｃは、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体である。
【化1】
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ１Ｒ２－（ＣＲａＲｂ）ｍ－、－Ｏ－ＣＲ１Ｒ２－、－ＮＨ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－及び－Ｓ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
ＲａとＲｂは相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシアルキル基、シクロアルキル基及びヘテロシクリル基から選ばれ、或いは、ＲａとＲｂは、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
或いは、ＲａとＲ２は、それに連結される炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
ｍは０～４の整数であり、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、
Ｌは、リンカーユニットであり、
Ｐｃは、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体である。
【0026】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、ｎは１～８で、ｎは小数又は整数である。幾つかの実施形態において、ｎは３～８で、ｎは小数又は整数である。
【0027】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、
そのうち、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－であり、
ＲａとＲｂは相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、重水素原子、ハロゲン及びＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ１は、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基又はＣ３－６シクロアルキル基であり、
Ｒ２は、水素原子、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれ、
或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にＣ３－６シクロアルキル基を形成し、
ｍは、０又は１である。
そのうち、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲａＲｂ）ｍ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ）－であり、
ＲａとＲｂは相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、重水素原子、ハロゲン及びＣ１－６アルキル基から選ばれ、
Ｒ１は、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基又はＣ３－６シクロアルキル基であり、
Ｒ２は、水素原子、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれ、
或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にＣ３－６シクロアルキル基を形成し、
ｍは、０又は１である。
【0028】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、Ｙは、
から選ばれ、
そのうち、ＹのＯ末端は、リンカーユニットＬに連結される。
【化2】
そのうち、ＹのＯ末端は、リンカーユニットＬに連結される。
【0029】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、リンカーユニット－Ｌ－は－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－であり、
Ｌ１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ３－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－と－Ｃ（Ｏ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、そのうち、Ｗは、Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ４は、－ＮＲ５（ＣＲ６Ｒ７）ｔ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ５、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ５（ＣＨ２）ｔ－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｔは１～６の整数であり、
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれる。
Ｌ１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ３－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－と－Ｃ（Ｏ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、そのうち、Ｗは、Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ４は、－ＮＲ５（ＣＲ６Ｒ７）ｔ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ５、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ５（ＣＨ２）ｔ－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｔは１～６の整数であり、
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれる。
【0030】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、リンカーユニット－Ｌ－は－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｌ４－であり、
Ｌ１は
であり、ｓ１は２～８の整数であり、
Ｌ２は化学結合であり、
Ｌ３はテトラペプチド残基であり、
Ｌ４は、－ＮＲ５（ＣＲ６Ｒ７）ｔ－であり、Ｒ５、Ｒ６又はＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、ｔは１又は２であり、
そのうち、上記Ｌ１末端はＰｃに連結され、Ｌ４末端はＹに連結される。
Ｌ１は
【化3】
Ｌ２は化学結合であり、
Ｌ３はテトラペプチド残基であり、
Ｌ４は、－ＮＲ５（ＣＲ６Ｒ７）ｔ－であり、Ｒ５、Ｒ６又はＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、ｔは１又は２であり、
そのうち、上記Ｌ１末端はＰｃに連結され、Ｌ４末端はＹに連結される。
【0031】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、Ｌ３はＧＧＦＧのテトラペプチド残基である。
【0032】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、－Ｌ－は、
である。
【化4】
【0033】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、そのうち、－Ｌ－Ｙ－は、任意選択的に、
から選ばれる。
【化5】
【0034】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、それは、一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であり、
そのうち、
Ｐｃは、上記抗ＨＥＲ３抗体であり、
ｍは０～４の整数であり、例えば、ｍは０、１、２、３及び４から選ばれ、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
ＷはＣ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－８アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基とＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒ５は水素原子、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれる。
【化6】
Ｐｃは、上記抗ＨＥＲ３抗体であり、
ｍは０～４の整数であり、例えば、ｍは０、１、２、３及び４から選ばれ、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル基、重水素化アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アルコキシアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にシクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
ＷはＣ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－８アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基とＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、アルキル基、クロロアルキル基、重水素化アルキル基、アルコキシ基及びシクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒ５は水素原子、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、重水素化アルキル基及びヒドロキシアルキル基から選ばれる。
【0035】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、それは、一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であり、そのうち、
Ｐｃは、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体であり、
ｍは０～４の整数であり、例えば、ｍは０、１、２、３及び４から選ばれ、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ３－６シクロアルキルＣ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ３－６シクロアルキルＣ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にＣ３－６シクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
Ｗは、Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒ５は水素原子、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
上記ヘテロシクリル基は３個～６個の環原子を含み、そのうち、１個～３個は窒素、酸素及び硫黄から選ばれるヘテロ原子である。
Ｐｃは、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体であり、
ｍは０～４の整数であり、例えば、ｍは０、１、２、３及び４から選ばれ、
ｎは１～１０で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
Ｒ１は、ハロゲン、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ３－６シクロアルキルＣ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ３－６シクロアルキルＣ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれ、或いは、Ｒ１とＲ２は、それらに連結された炭素原子と共にＣ３－６シクロアルキル基又はヘテロシクリル基を形成し、
Ｗは、Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基から選ばれ、上記１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる１個～３個のヘテロ原子を含み、そのうち、上記Ｃ１－８アルキル基、Ｃ１－８アルキル基－Ｃ３－６シクロアルキル基及び１個～８個の鎖原子を持つ直鎖ヘテロアルキル基は、それぞれ独立的に任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｌ２は－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ１ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ２）ｐ１Ｃ（Ｏ）－及び化学結合から選ばれ、そのうち、ｐ１は１～２０の整数であり、
Ｌ３は、２個～７個のアミノ酸残基からなるペプチド残基であり、そのうち、上記アミノ酸残基はフェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｑ）及びアスパラギン酸（Ｄ）のうちのアミノ酸からなるアミノ酸残基から選ばれ、且つ任意選択的に更にハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ１－６アルキル基、クロロＣ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基及びＣ３－６シクロアルキル基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換され、
Ｒ５は水素原子、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
Ｒ６とＲ７は相同又は相異であり、且つそれぞれ独立的に水素原子、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－６アルキル基、重水素化Ｃ１－６アルキル基及びＣ１－６ヒドロキシアルキル基から選ばれ、
上記ヘテロシクリル基は３個～６個の環原子を含み、そのうち、１個～３個は窒素、酸素及び硫黄から選ばれるヘテロ原子である。
【0036】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、上記抗体－薬物複合体は、
であり、そのうち、
ｎは１～８で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
ＨＥＲ３－２９は、配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む抗ＨＥＲ３抗体である。
【化7】
ｎは１～８で、ｎは小数又は整数であり、具体的に、ｎは２～８の間の小数又は整数であり、２つの端点値を含み、より具体的に、ｎは２～７の小数又は整数であり、端点値を含み、選択的に、ｎは２～３、３～４、４～５、５～６、６～７又は７～８の間の小数又は整数であり、端点値を含み、
ＨＥＲ３－２９は、配列番号２７で示される重鎖及び配列番号２８で示される軽鎖を含む抗ＨＥＲ３抗体である。
【0037】
幾つかの実施形態において、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩であって、好ましくは、ｎは３～８で、ｎは小数又は整数である。
【0038】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、
Ｐｃ’を一般式（Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される化合物とカップリング反応させ、一般式（Ｐｃ－Ｌａ－Ｙ－Ｄ）で示される化合物を得るステップを含み、
そのうち、
Ｐｃ’はＰｃを還元して得られ、
ｎ、ｍ、Ｗ、Ｌ２、Ｌ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は上記何れか一項に定義された通りである、
方法を更に提供する。
【化8】
そのうち、
Ｐｃ’はＰｃを還元して得られ、
ｎ、ｍ、Ｗ、Ｌ２、Ｌ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は上記何れか一項に定義された通りである、
方法を更に提供する。
【0039】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記何れか一項に記載の核酸分子、又は上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩と、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又はベクターと、を含む医薬組成物を更に提供する。
【0040】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記何れか一項に記載の核酸分子、又は上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は上記何れか一項に記載の医薬組成物の、ＨＥＲ３仲介性の疾患又は病状を治療するための薬剤の調製における用途を更に提供する。
【0041】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記何れか一項に記載の核酸分子、又は上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は上記何れか一項に記載の医薬組成物の、腫瘍とがんを治療及び／又は予防するための薬剤の調製における用途であって、上記腫瘍とがんは乳がん、非小細胞肺がん、胃がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、大腸がん、頭頸部扁平上皮がん及び黒色腫から選ばれる、用途を更に提供する。
【0042】
幾つかの実施形態において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記何れか一項に記載の核酸分子、又は上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は上記何れか一項に記載の医薬組成物を含む試薬キットを更に提供する。
【0043】
幾つかの実施形態において、本開示は、疾患又は病状を予防又は治療する方法であって、対象に治療有効量の上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、又は上記何れか一項に記載の核酸分子、又は上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又は上記何れか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法を更に提供する。幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状は、腫瘍、自己免疫疾患又は感染性疾患が好ましく、幾つかの実施形態において、上記疾患又は病状はＨＥＲ３に関連する疾患又は病状である。
【0044】
別の態様において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体、抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩と、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又はベクターと、を含む医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、上記単位用量の医薬組成物は、０．１ ｍｇ～３０００ ｍｇ又は１ ｍｇ～１０００ ｍｇの上記抗ＨＥＲ３抗体又は上記抗体薬物複合体を含む。
【0045】
別の態様において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物の薬剤としての用途を提供する。
【0046】
別の態様において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物の、ＨＥＲ３仲介性の疾患又は病状を治療するための薬剤の調製における用途を提供し、幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ３仲介性の疾患又は病状は、ＨＥＲ３高発現がん、中等度発現がん又は低発現がんである。
【0047】
別の態様において、本開示は、上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物の、がんを治療又は予防するための薬剤の調製における用途を提供し、幾つかの実施形態において、上記腫瘍又はがんは、乳がん、非小細胞肺がん、胃がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、大腸がん、頭頸部扁平上皮がん及び黒色腫から選ばれる。
【0048】
別の態様において、本開示は、更に、腫瘍を治療及び／又は予防するための方法であって、それを必要とする対象に治療有効用量の上記何れか一項に記載の抗体－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関し、幾つかの実施形態において、そのうち、上記腫瘍はＨＥＲ３高発現関連がん、中等度発現がん又は低発現がんである。
【0049】
別の態様において、本開示は、更に、腫瘍又はがんを治療又は予防するための方法であって、それを必要とする対象に治療有効用量の上記何れか一項に記載の抗体薬物複合体又はその薬学的に許容される塩又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関し、そのうち、上記腫瘍とがんは幾つかの実施形態において、そのうち、上記腫瘍とがんは、乳がん、非小細胞肺がん、胃がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、大腸がん、頭頸部扁平上皮がん及び黒色腫から選ばれる。
【0050】
別の態様において、本開示は、更に、上記何れか一項に記載の抗ＨＥＲ３抗体又はその抗体－薬物複合体を、薬剤として、幾つかの実施形態では、がん又は腫瘍を治療する薬剤として、より好ましくはＨＥＲ３仲介性のがんを治療する薬剤として提供する。
【0051】
活性化合物（例えば、本開示に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、本開示に記載のリガンド－薬物複合体又はその薬学的に許容される塩）を任意の適切な経路での投与に適する形態にすることができ、活性化合物は単位用量の形態、又は対象が単剤で自己投与可能な形態であってもよい。本開示に記載される活性化合物又は組成物の単位用量の表現形態は、錠剤、カプセル、カシェ剤、瓶詰めの薬液、ドラッグパウダー、顆粒剤、外用錠剤、坐剤、再生粉末又は液体製剤であってもよい。
【0052】
本開示に係る治療法に使用される活性化合物又は組成物の投与量は、一般的に、疾患の重症度、対象の体重及び活性化合物の相対的効能によって変化する。但し、一般的な目安として、好適な単位用量は０．１ ｍｇ～１０００ ｍｇであってもよい。
【0053】
本開示に係る医薬組成物は、活性化合物の他に、１種又は複数種の添加物が含まれてもよく、上記添加物は、充填剤、希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤又は賦形剤などの成分から選ばれる。組成物は、投与方法によって、０．１重量％～９９重量％の活性化合物を含んでもよい。
【0054】
本開示により提供されるＨＥＲ３抗体及び抗体薬物複合体は、細胞表面抗原との良好な親和性、良好な細胞エンドサイトーシス効率及び強い腫瘍阻害効率を有すると共に、より広い薬剤応用用途を有し、臨床的な薬剤応用に適する。
【図面の簡単な説明】
【0055】
【図1】本開示に係る抗体及び陽性抗体のＨＥＲ３タンパク質との結合活性である。
【図2】本開示に係る抗体及び陽性抗体のＭＣＦ７細胞との結合活性である。
【図3】ＤＴ３Ｃによる本開示に係る抗体及び陽性抗体の細胞エンドサイトーシス活性の試験である。
【図4】ｐＨｒｏｄｏによる本開示に係る抗体及び陽性抗体の細胞エンドサイトーシス活性の試験である。
【図5】本開示に係るＡＤＣ試料の担腫瘍ヌードマウスＳＷ６２０移植腫瘍への治療効果である。
【発明を実施するための形態】
【0056】
用語
別途に制限のない限り、本願に使用される全ての技術と科学用語は、当業者により一般的に理解されているものと一致している。本願中の記載と類似又は同等の任意の方法と材料により本開示を実施又は試験してもよいが、本願には、好ましい方法と材料が記載されている。本開示を記載及び特許請求する時には、以下の定義に従って下記の用語を使用する。
別途に制限のない限り、本願に使用される全ての技術と科学用語は、当業者により一般的に理解されているものと一致している。本願中の記載と類似又は同等の任意の方法と材料により本開示を実施又は試験してもよいが、本願には、好ましい方法と材料が記載されている。本開示を記載及び特許請求する時には、以下の定義に従って下記の用語を使用する。
【0057】
本開示において商品名が使用される時には、当該商品名の製品の製剤、当該商品名の製品の薬剤及び活性薬物部分を含むことが意図されている。
【0058】
「抗体－薬物複合体」（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）という用語は、抗体を生物活性を有する薬物に連結したものを指す。そのうち、抗体は、直接的に、又は連結ユニットを介して薬物にカップリングすることができる。
【0059】
「薬物担持量」という用語は、抗体－薬物複合体群において、それぞれの抗体－薬物複合体分子に担持された薬物の平均数量を指し、薬物量と抗体量の比率で示してもよい。薬物担持量の範囲は、それぞれの抗体が０個～１２個、例示的に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個の薬物に連結してもよく、当該数値は小数であってもよく、整数であってもよい。ある実施形態において、それぞれの抗体には１個～約１０個の薬物が担持されており、ある実施形態において、それぞれの抗体には約１個～約９個、１個～約８個、約３個～約７個、約３個～約６個、約３個～約５個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個の薬物が担持されており、当該数値は小数であってもよく、整数であってもよい。薬物担持量は、ＵＶ／可視分光法、質量分析、ＥＬＩＳＡ試験及びＨＰＬＣ特徴などの通常の方法により同定することができる。
【0060】
本開示の一実施形態において、細胞毒性薬剤は、連結ユニットにより抗体のメルカプト基にカップリングされている。
【0061】
リガンド細胞毒性薬剤複合体の担持量は、
（１）連結試薬とモノクローナル抗体とのモル比を制御することと、
（２）反応時間と温度を制御することと、
（３）異なる反応試薬を選択することと、
を含む非限定的な方法で制御することができる。
（１）連結試薬とモノクローナル抗体とのモル比を制御することと、
（２）反応時間と温度を制御することと、
（３）異なる反応試薬を選択することと、
を含む非限定的な方法で制御することができる。
【0062】
本開示に用いられるアミノ酸の３文字コードと１文字コードは、Ｊ．ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ、２４３、ｐ３５５８（１９６８）に記載された通りである。
【0063】
本開示の「抗体」という用語は、所望の抗原結合活性が示されれば、最も広い意味で使用され、種々の抗体構造をカバーしており、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、全長抗体又はその抗原結合断片（「抗原結合部分」とも呼ばれる）を含むが、これらに限定されない。全長抗体は、ジスルフィド結合で互いに連結される少なくとも２つの重鎖と２つの軽鎖を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）である。免疫グロブリンは、重鎖定常領域のアミノ酸組成と配列順序が異なるので、その抗原性も異なる。これにより、免疫グロブリンは、５種類に分けることができ、又は、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥという免疫グロブリンのアイソタイプと呼ばれ、その対応する重鎖はそれぞれμ鎖、δ鎖、γ鎖、α鎖及びε鎖である。同一種類のＩｇは、そのヒンジ領域のアミノ酸組成及び重鎖ジスルフィド結合の数と位置の違いによって、更に異なるサブクラスに分けることができ、例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分けられてもよい。軽鎖は、定常領域によって、κ鎖又はλ鎖に分けられる。５種類のＩｇのそれぞれは、κ鎖又はλ鎖を有してもよい。
【0064】
全長抗体の重鎖及び軽鎖は、Ｎ末端に近い約１１０個のアミノ酸配列の変化が大きくて、可変領域（Ｆｖ領域と略す）となり、Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列が比較的安定的で、定常領域となる。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨと略す）と重鎖定常領域（ＣＨと略す）からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３という３つのドメインを含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬと略す）と軽鎖定常領域（ＣＬと略す）からなる。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、超可変領域（相補性決定領域とも呼ばれ、ＣＤＲ又はＨＶＲと略す）と、配列が比較的保存的な骨格領域（フレームワーク領域とも呼ばれ、ＦＲと略す）と、を含む。それぞれのＶＬとＶＨは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４という順に配列される３つのＣＤＲと４つのＦＲからなる。軽鎖の３つのＣＤＲ領域は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を指す。
【0065】
本開示に記載されるヒト抗体重鎖定常領域及びヒト抗体軽鎖定常領域の「通常変異体」は、従来技術に開示された抗体可変領域の構造と機能を変更しないヒト由来の重鎖定常領域又は軽鎖定常領域の変異体を指し、例示的な変異体は、重鎖定常領域に対して部位特異的改変とアミノ酸置換を行ったＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４重鎖定常領域変異体を含み、具体的な置換は、例えば、従来技術における既知のＹＴＥ変異、Ｌ２３４Ａ及び／又はＬ２３５Ａ変異、Ｓ２２８Ｐ変異、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）及び／又は２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）、及び／又はｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ構造を得た変異（抗体重鎖にｋｎｏｂ－Ｆｃとｈｏｌｅ－Ｆｃの組み合わせを付与する）であり、これらの変異は、抗体可変領域の機能を変更せずに、抗体に新しい性能を付与することが確認された。
【0066】
本開示における「ヒト抗体」（ＨｕＭＡｂ）、「ヒト抗体」、「全ヒト抗体」、「完全ヒト抗体」は、互いに交換して使用されてもよく、そのアミノ酸配列は、ヒト又はヒト細胞から産生された抗体のアミノ酸配列に対応し、又は、ヒト抗体ライブラリーや他のヒト抗体で配列がコードされた非ヒト由来のアミノ酸配列から誘導される。当該ヒト抗体についての定義には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体が明確に除外されている。
【0067】
「抗原結合断片」又は「機能断片」又は「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力が保たれた完全な抗体の１つ又はそれ以上の断片を指す。全長抗体の断片により抗体の抗原結合機能を果たすことができる。例示的に、「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片と、（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片と、（ｉｉｉ）ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、（ｉｖ）抗体の単アームのＶＨとＶＬドメインからなるＦｖ断片と、（ｖ）ＶＨとＶＬにより鎖間ジスルフィド結合で形成された安定的な抗原結合断片であるｄｓＦｖと、（ｖｉ）ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂなどの断片を含む二重抗体、二重特異性抗体及び多重特異性抗体と、を含む。なお、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬとＶＨは、分離した遺伝子でコードされるが、組換え法により、この２つのドメインは、それらを単一のタンパク質鎖にすることが可能な人工ペプチドリンカーにより結合することができ、そのうち、ＶＬとＶＨ領域はペアになって１価分子を形成し、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３～４２６、及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ８５：５８７９～５８８３）を参照）。このような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる。このような抗体断片は、当業者に知られている通常の技術により得られ、且つ、完全抗体と同じように、断片が機能性によってスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術により、又は、完全な免疫グロブリンを酵素的若しくは化学的に切断することにより産生することができる。抗体は、異なるアイソタイプの抗体であってもよく、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソフォーム）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ抗体である。
【0068】
「アミノ酸差異」又は「アミノ酸変異」という用語は、元のタンパク質又はポリペプチドと比べて、元のタンパク質又はポリペプチドを基にして発生された１つ、２つ、３つ又はそれ以上のアミノ酸の挿入、欠失又は置換を含む、変異体タンパク質又はポリペプチドにアミノ酸の変化又は変異があることを指す。
【0069】
「抗体フレームワーク領域」又は「ＦＲ領域」という用語は、可変ドメインＶＬ又はＶＨの一部を指し、当該可変ドメインの抗原結合環（ＣＤＲ）のステントとして用いられる。実質的に、それは、ＣＤＲを有しない可変ドメインである。
【0070】
「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」又は「超可変領域」という用語は、抗体の可変ドメインにおいて抗原結合を促進する主な６つの超可変領域の１つを指す。通常、それぞれの重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、それぞれの軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、「Ｋａｂａｔ」番号付け規則（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤを参照）、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付け規則、「ＡＢＭ」番号付け規則、「ｃｏｎｔａｃｔ」番号付け規則（Ｍａｒｔｉｎ、ＡＣＲ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ［Ｊ］． ２００１を参照）及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け規則（Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｍ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．、Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７、５５～７７（２００３）を参照）などを含む種々の公知の方法の何れか１つによって決定することができる。例えば、典型的な書式では、Ｋａｂａｔ規則によれば、上記重鎖可変領域（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基の番号は３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）であり、軽鎖可変領域（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基の番号は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）である。Ｃｈｏｔｈｉａ規則によれば、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸の番号は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）であり、ＶＬ中のアミノ酸残基の番号は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）である。ＩＭＧＴ規則によれば、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基の番号は、大体、２７～３８（ＨＣＤＲ１）、５６～６５（ＨＣＤＲ２）及び１０５～１１７（ＨＣＤＲ３）であり、ＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基の番号は、大体、２７～３８（ＬＣＤＲ１）、５６～６５（ＬＣＤＲ２）及び１０５～１１７（ＬＣＤＲ３）である。ＡｂＭ規則によれば、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸の番号は、２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～５８（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）であり、ＶＬ中のアミノ酸残基の番号は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）である。
【0071】
「エピトープ」又は「抗原決定基」という用語は、抗原における抗体に結合される部位（例えば、ＨＥＲ３分子における特定部位）を指す。エピトープは通常、独特な空間配座で少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個の連続的又は非連続的なアミノ酸を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ ｉｏｌｏｇｙ、第６６巻、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｅｄ．（１９９６）が参照される。
【0072】
「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合」及び「特異的に結合」という用語は、抗体又は抗原結合断片の、予め決定された抗原におけるエピトープに対する結合を指す。通常、抗体又は抗原結合断片は、約１０－８ Ｍ未満、例えば、約１０－９ Ｍ、１０－１０ Ｍ、１０－１１ Ｍ、１０－１２ Ｍ未満又はそれ以下の親和性（ＫＤ）で結合される。
【0073】
「競合」という用語は、同じエピトープの抗原結合タンパク質の競合（例えば、抗原結合タンパク質の中和又は抗体の中和）に利用される場合に、抗原結合タンパク質間の競合を指し、下記の測定法により測定される：上記測定法において、検出待ちの抗原結合タンパク質（例えば、抗体又はその免疫学的機能断片）により、参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンド又は参照抗体）と共通抗原（例えば、ＨＥＲ３抗原又はその断片）との特異的結合を防止又は阻害（例えば、低減）する。様々な競合的結合測定は、１つの抗原結合タンパク質が別の抗原結合タンパク質と競合しているかを確定するために利用することができ、これらの測定は、例えば、固相直接又は間接放射免疫測定（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合測定（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．、１９８３、Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２～２５３を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．、１９８６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４～３６１９を参照）、固相直接標識測定、固相直接標識サンドイッチ測定（例えば、ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（抗体、実験マニュアル）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）、Ｉ－１２５マーカーを用いる固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．、１９８８、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．、１９９０、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６～５５２を参照）、及び直接標識するＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．、１９９０、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７～８２）である。通常、上記測定法は、未標識の検出抗原結合タンパク質及び標識した参照抗原結合タンパク質の何れか１つを担持した固相表面又は細胞に結合する精製した抗原の使用に関わっている。測定される抗原結合タンパク質の存在下で固相表面又は細胞に結合する標識量を測定することにより、競合的阻害を測定する。通常、測定される抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合的測定（競合的抗原結合タンパク質）により同定される抗原結合タンパク質は、参照抗原結合タンパク質と同一のエピトープに結合する抗原結合タンパク質と、参照抗原結合タンパク質の結合エピトープに十分に近い隣接エピトープに結合する抗原結合タンパク質とを含み、上記２つのエピトープは空間的に互いに干渉し合いながら結合を行う。本願の実施例には、競合的結合を測定するための方法についての他の詳細な資料が提供される。通常、競合的抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合に、参照抗原結合タンパク質と共通抗原との特異的結合は、少なくとも４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％又は７５％以上阻害（例えば、低減）される。結合は、少なくとも８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、９５％～９７％又は９７％以上阻害される場合がある。
【0074】
本願に使用される「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子を指す。核酸分子は、単鎖又は二重鎖であってもよく、二重鎖ＤＮＡ又は単鎖ｍＲＮＡ又は修飾されたｍＲＮＡが好ましい。核酸が別の核酸配列と共に機能的関係に置かれる場合、核酸は「効果的に連結されている」。例えば、プロモーター又はエンハンサーがコード配列の転写に影響を与えると、プロモーター又はエンハンサーは、上記コード配列に効果的に連結されている。
【0075】
アミノ酸配列の「同一性」とは、配列同一性の百分率が最も大きく達成されるように、アミノ酸配列のアラインメント及び必要な時に間隙を入れ、且つ、何れの保存的置換も配列同一性の一部とは見なされずに、第１配列における第２配列中のアミノ酸残基と同様のアミノ酸残基の百分率である。アミノ酸の配列同一性の百分率を測定するために、アラインメントは、この分野の技術的範囲における種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に取得可能なコンピュータソフトウェアにより、実現することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、測定アラインメントに適用されるパラメータを決定することができる。
【0076】
「抗体依存性細胞仲介性の細胞毒性」又は「ＡＤＣＣ」は、細胞仲介性の反応を指し、そのうち、ＦｃＲを発現した非特異的細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ細胞）は、標的細胞に結合された抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす。ＡＤＣＣを調節する初代細胞、ＮＫ細胞はＦｃｙＲＩＩＩしか発現しないが、単核細胞はＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ及びＦＣＹＲＩＩＩを発現する。標的分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳＵＳＡ ９５：６５２～６５６（１９９８））、米国特許番号ＵＳ５５００３６２、ＵＳ５８２１３３７などに記載されたように、体内外のＡＤＣＣの測定を行うことができる。
【0077】
「抗体依存性細胞貪食作用」又は「ＡＤＣＰ」とは、貪食細胞（例えば、マクロファージ細胞、好中球及び樹状細胞）の内在化により、抗体で被覆された標的細胞又はビリオンを取り除くメカニズムを指す。内在化された抗体で被覆された標的細胞又はビリオンは、ファゴソームという小嚢に含まれ、上記小嚢はその後、１つ又は複数のリソソームと融合することで、ファゴリソソームを形成する。ＡＤＣＰは、マクロファージ細胞をエフェクター細胞として使用する体外細胞毒性測定とビデオ顕微鏡法（ｖｉｄｅｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）により評価することができる（例えば、ｖａｎ ＢｉｊらによるＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、第５３巻、第４号、２０１０年１０月、６７７～６８５ページ）。「補体依存性細胞毒性」又は「ＣＤＣ」は、補体が関与する細胞毒性作用を指し、即ち、抗体と細胞又はビリオンにおける対応する抗原との結合により、複合体を形成して補体を活性化する古典的経路であり、形成された細胞膜傷害複合体は、標的細胞に対して溶解効果を果たす。ＣＤＣは、体外測定により（例えば、正常なヒト血清を補体源とするＣＤＣ測定）又はＣ１ｑ濃度シリーズで評価することができる。ＣＤＣ活性の低下（例えば、ポリペプチド又は抗体への第２変異の導入によるＣＤＣ活性の低下）は、同じ測定法でポリペプチド又は抗体のＣＤＣ活性と、第２変異を有しない親ポリペプチド又は抗体のＣＤＣ活性とを比較することにより測定することができる。抗体によるＣＤＣの誘導能力を評価するために、例えば、Ｒｏｍｅｕｆらにより記載された測定方法（Ｒｏｍｅｕｆ ｅｔ ａｌ．、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２００８Ｍａｒ、１４０（６）：６３５－４３）により測定することができる。
【0078】
本開示に記載される抗体又は抗体断片は、任意の方式によりエフェクター分子にカップリングされてもよい。例えば、抗体又は抗体断片は、化学的方式又は組換えの方式により細胞毒性薬剤に取り付けられてもよい。融合物又は複合体を調製する化学的方式は、この分野で知られており、且つ、免疫複合体の調製に用いることができる。抗体又は抗体断片と薬物をカップリングするための方法は、抗体又は抗体断片の標的分子との結合能力を妨害することなく、抗体と細胞毒性薬剤を連結することができなければならない。
【0079】
一実施形態において、抗体と細胞毒性薬剤は何れもタンパク質であり、且つこの分野でよく知られている技術によりカップリングすることができる。この分野で開示された、２つのタンパク質をカップリング可能な架橋剤が数百種ある。架橋剤は、一般的に、抗体又は細胞毒性薬剤における使用又は挿入可能な反応官能基によって選択される。また、反応基がない場合、光反応性架橋剤を使用することができる。抗体と細胞毒性薬剤との間にイントロンを備えなければならない場合がある。この分野で知られている架橋剤は、グルタルアルデヒド、アジピミド酸ジメチルとビス（ジアゾベンジジン）のようなホモ二官能性剤、及びｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドとスルホ－ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドのようなヘテロ二官能性剤を含む。
【0080】
エフェクター分子を抗体断片にカップリングすることに利用可能な架橋剤は、例えば、ＴＰＣＨ（Ｓ－（２－チオピリジニル）－Ｌ－システインヒドラジド）及びＴＰＭＰＨ（Ｓ－（２－チオピリジニル）メルカプト－プロピオニルヒドラジド）を含む。ＴＰＣＨとＴＰＭＰＨは、この前に既に適度な過ヨウ素酸塩処理により酸化された糖タンパク質の炭水化物と部分反応を行ったので、架橋剤のヒドラジド部分と過ヨウ素酸塩によるアルデヒドとの間にヒドラゾン結合が形成される。ヘテロ二官能性架橋剤であるＧＭＢＳ（Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）－スクシンイミド）とＳＭＣＣ（スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミド－メチル）シクロヘキサン）は第一アミンと反応するので、マレイミド基が成分に導入される。このマレイミド基は、その後、別の成分における、架橋剤により導入可能なスルフヒドリル基と反応することができるので、成分間に安定的なチオエーテル結合が形成される。成分間の立体障害が何れか１つの成分の活性を妨害する場合、３－（２－ピリジニルジチオ）プロピオン酸ｎ－スクシンイミジルエステル（ＳＰＤＰ）などの架橋剤により、長いスペーサーアームを成分間に導入することができる。従って、利用できる適当な架橋剤が多くあり、それぞれその最適な免疫複合体の収量への影響によって選択される。
【0081】
「発現ベクター」という用語は、それに連結された別の核酸を輸送可能な核酸分子を指す。一実施形態において、ベクターは、他のＤＮＡセグメントをそれに連結可能な環状二本鎖ＤＮＡ環を指す「プラスミド」である。別の実施形態において、ベクターは、他のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結可能なウイルスベクターである。本願に開示されるベクターは、それらを導入した宿主細胞において自己複製することができ（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーマル哺乳動物ベクター）、又は、宿主細胞に導入された後、宿主細胞のゲノムに整合されることで、宿主ゲノムと共に複製することができる（例えば、非エピソーマル哺乳動物ベクター）。
【0082】
従来技術においてよく知られている抗体及び抗原結合断片の産生・精製方法は、例えば、冷泉港の抗体実験技術マニュアルの５章～８章及び１５章の通りである。開示に記載される抗体又は抗原結合断片は、遺伝子工学的方法により、非ヒトのＣＤＲ領域に１つ又はそれ以上のヒトＦＲ領域が加えられる。ヒトＦＲ生殖細胞系配列は、ＩＭＧＴヒト抗体可変領域生殖細胞系遺伝子データベースとＭＯＥソフトウェアをアラインメントすることにより、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）のホームページであるｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒから取得し、又は免疫グロブリン雑誌である２００１ＩＳＢＮ０１２４４１３５１から得ることができる。
【0083】
「宿主細胞」という用語は、その中に発現ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞は、細菌、微生物、植物又は動物の細胞を含んでもよい。形質転換しやすい細菌は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）やサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の菌株などの腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）のメンバー、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などのバシラス科（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）及びインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）を含む。好適な微生物は、出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及びピキア酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）を含む。好適な動物宿主細胞株は、ＣＨＯ（中国ハムスター卵巣細胞株）、２９３細胞及びＮＳ０細胞を含む。幾つかの実施形態において、本開示における宿主細胞は、ヒト胚由来の細胞を含まない。
【0084】
本開示に係る工学的な抗体又は抗原結合断片は、通常の方法により調製・精製することができる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、クローンニングしてＧＳ発現ベクターに組換えることができる。組換えた免疫グロブリン発現ベクターは、ＣＨＯ細胞を安定してトランスフェクションすることができる。更に好ましい従来技術の一つとして、哺乳類発現系は、特にＦｃ領域の高度に保存的なＮ末端部位において、抗体のグリコシル化を引き起こすことになる。ヒトＨＥＲ３に特異的に結合する抗体を発現することにより、安定的なクローンが得られる。陽性のクローンは、バイオリアクターの無血清培地において培養を拡大することで、抗体を産生する。抗体が分泌された培養液は、通常の技術により精製することができる。例えば、調整された緩衝液を含むＡ又はＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラムで精製が行われる。非特異的に結合した成分を洗い流す。更に、ｐＨ勾配法により、結合した抗体を溶離し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで抗体断片を検出し、収集する。抗体は、通常の方法によりろ過濃縮することができる。可溶性の混合物及び多量体は、分子ふるい、イオン交換などの通常の方法により除去されてもよい。得られた生成物は、直ちに例えば、－７０℃で凍結し、又は凍結乾燥しなければならない。
【0085】
「保存的修飾」又は「保存的置換又は置換」は、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、主鎖の立体配座と剛性など）を有する他のアミノ酸でタンパク質中のアミノ酸を置換することで、タンパク質の生物学的活性を変えずに頻繁に変化可能にすることを意味する。当業者に知られているように、一般的に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換によって、基本的に生物学的活性を変えることはない（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、２２４ページ、（第４版）を参照）。また、構造又は機能が類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換は、以下の通りである。
【0086】
【0087】
「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド配列間又は２つのポリペプチド間の配列の類似性である。２つの比較される配列における位置が何れも同じ塩基又はアミノ酸モノマーサブユニットに占められる場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンに占められる場合、上記分子が当該位置で相同である。２つの配列間の相同性百分率は、２つの配列の共有するマッチング又は相同位置数を比較される位置数で割って１００をかける関数である。例えば、配列の最適アラインメントを行う際に、２つの配列中の１０個の位置のうち、６個がマッチングしており、又は相同である場合は、２つの配列が６０％相同であり、２つの配列中の１００個の位置のうち、９５個がマッチングしており、又は相同である場合は、２つの配列が９５％相同である。通常、２つの配列をアライメントする際に、最大百分率の相同性が得られるように、比較を行う。例えば、各参照配列の全長にわたって各配列間の最大マッチングが得られるようにアルゴリズムのパラメータを選択するＢＬＡＳＴアルゴリズムにより、比較を実行することができる。下記の参考文献は、配列分析によく用いられるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関し、即ち、ＢＬＡＳＴアルゴリズム（ＢＬＡＳＴ ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ）：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．、（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６～２７２；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．、（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１～１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．、（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９～６５６である。その他、例えば、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴにより提供される通常のＢＬＡＳＴアルゴリズムも、当業者によく知られている。
【0088】
本願に使用される「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養物」という表現は互いに交換して使用してもよく、このような名称の全ては子孫を含む。従って、「形質転換体」及び「形質転換細胞」という単語は、移転数を考慮せずに、初代被験細胞及びそれより誘導された培養物を含む。また、意図する又は意図しない変異のために、あらゆる子孫は、ＤＮＡ含有量において精確に同じであり得ないと理解すべきである。最初の形質転換細胞からスクリーニングされたものと同様の機能又は生物学的活性を有する変異子孫が含まれる。異なる名称を指す場合は、文脈から明らかになる。
【0089】
本願に使用される「ポリメラーゼ連鎖反応」又は「ＰＣＲ」は、その中の微量の特定部分の核酸、ＲＮＡ及び／又はＤＮＡが、例えば米国特許番号４，６８３，１９５に記載されたように増幅するプログラム又は技術を指す。一般的に、オリゴヌクレオチドプライマーの設計が可能になるように、目標領域末端からの配列情報又はそれ以外の配列情報を取得する必要があり、これらのプライマーは配列において、増幅すべきテンプレートの対応する鎖と同様又は類似である。２つのプライマーの５'末端ヌクレオチドは、増幅待ち材料の末端に一致してもよい。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡからの特定ＤＮＡ配列、及び全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、ファージ又はプラスミド配列などの増幅に用いることができる。一般的に、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｏｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：２６３、ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｅｒｌｉｃｈ、（１９８９）ＰＣＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．）を参照する。本願に用いられるＰＣＲは、核酸試験試料を増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の一例とされるが、唯一の例ではなく、上記方法は、核酸の特定部分を増幅又は産生するために、プライマーとなる既知の核酸及び核酸ポリメラーゼを用いることを含む。
【0090】
「単離した」とは、精製状態であり、且つ、この場合、指定された分子に、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物などの他の生物分子、又は、細胞破片や成長培地などの他の材料を実質的に含まないことを意味する。通常、「単離した」という用語は、例えば、本願に記載される化合物の実験や治療的用途を顕著に干渉する量で存在しない限り、これらの材料が全然存在しない、又は水、緩衝液や塩が存在しないことを意味する意図はない。
【0091】
「薬物」という用語は、体の生理学的機能及び病理学的状態を変更又は究明することができ、疾患の予防、診断及び治療に適用可能な化学物質を指す。薬物は、細胞毒性薬物を含む。薬物と毒物の間には厳格な境界がなく、毒物とは、比較的小さい用量だけで体に毒害作用を及ぼし、人体の健康に損傷を与える化学物質を指し、何れの薬物も用量が大きすぎると、毒性反応を生じ得る。
【0092】
細胞毒性薬物とは、細胞の機能を阻害又は防止し、及び／又は細胞の死亡若しくは破壊を引き起こす物質である。細胞毒性薬物は原則的に、十分に高い濃度であれば、腫瘍細胞を殺すことができるが、特異性の欠如のため、腫瘍細胞を殺すと同時に、正常な細胞のアポトーシスを引き起こし、重篤な副作用になることもある。細胞毒性薬物は、例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の小分子毒素や酵素活性毒素のような毒素、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法薬、抗生物質及び核酸分解酵素を含む。
【0093】
幾つかの実施形態において、毒素は、細菌、真菌、植物や動物由来の小分子毒素及びその誘導体であってもよく、エキサテカンなどのカンプトテシン誘導体、メイタンシンアルカロイド及びその誘導体（ＣＮ１０１５７３３８４）、例えばＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ（ＡＦ）及びその誘導体、例えばＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、３０２４（ＷＯ ２０１６／１２７７９０ Ａ１、化合物７）、ジフテリア毒素、外毒素、リシン（ｒｉｃｉｎ）Ａ鎖、アブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、ｍｏｄｅｃｃｉｎ、α－サルシナ（ｓａｒｃｉｎ）、アレウライツ・フォルディイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）毒性タンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）毒性タンパク質、フィトラッカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）毒性タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩとＰＡＰ－Ｓ）、モモルディカ・キャランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコセセンス（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む。
【0094】
「化学療法薬」という用語は、腫瘍の治療に利用可能な化学化合物である。この定義は、がんの成長を促進可能なホルモン効果作用を調節、低減、遮断又は阻害する抗ホルモン剤を更に含み、且つ常に系統的又は全身的治療の形式である。それ自体はホルモンであってもよい。化学療法薬の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、インプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）とピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）などのスルホン酸アルキル、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）とウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン（ａｚｉｒｉｄｉｎｅ）、アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドとトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むアジリジンとｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ、クロラムブシル、クロルナファジン、チョロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メクロレタミンオキシド塩酸塩などのナイトロジェンマスタード（ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｍｕｓｔａｒｄｓ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシンＣ（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ｃａｒａｂｉｃｉｎ、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン、ウベニメクス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）などの葉酸類似体、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体、アンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｔｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン、５－ＦＵなどのピリミジン類似体、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｇ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン（ｍｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）などのアンドロゲン類、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、トリロスタン（ｔｒｉｌｏｓｔａｎｅ）などの抗アドレナリン類、葉酸補給剤、例えば、ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）、アミノレブリン酸（ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ、デメコルシン、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ、酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅ）、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）、ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）、ペントスタチン（ｐｉｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ｐｈｅｎａｍｅｔ、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、２－アセチルヒドラジン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ＰＳＫ（登録商標）、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｉｒａｎ）、スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）、テニュアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン（ｔｒｉｃｈｌｏｒｒｏｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎ）、ビンデシン、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、マンノムスチン、ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）、ミトラクトール、ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）とｄｏｃｅｔａｘｅｌ（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）などのタキサン、クロラムブシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチンとカルボプラチンなどのプラチナ類似体、ビンブラスチン、プラチナ、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ－１６）、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ナベルビン（ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ダウノルビシン、アミノプリン、ｘｅｌｏｄａ、イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）、ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、トレチノインｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎｓ、ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ、及び上記何れかの物質の薬学的に許容される塩、酸又は誘導体を含む。この定義は、ホルモンによる腫瘍への作用を調節又は阻害可能な抗ホルモン製剤、例えば、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、アロマターゼ阻害剤４（５）－イミダゾリル、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ、ＬＹ１１７０１８、ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅとフェアストン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン製剤、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）とゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）などの抗アンドロゲン製剤、及び上記何れかの物質の薬学的に許容される塩、酸又は誘導体などを更に含む。
【0095】
「アルキル基」という用語は、１個～２０個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖基である飽和脂肪族炭化水素基を指し、好ましくは１個～１２個（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個及び１２個）の炭素原子を含むアルキル基であり、より好ましくは１個～６個の炭素原子を含むアルキル基である。その非限定的な例は、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、１－エチルプロピル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ｎ－ヘキシル基、１－エチル－２－メチルプロピル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、２，３－ジメチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、４－メチルヘキシル基、５－メチルヘキシル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２－エチルペンチル基、３－エチルペンチル基、ｎ－オクチル基、２，３－ジメチルヘキシル基、２，４－ジメチルヘキシル基、２，５－ジメチルヘキシル基、２，２－ジメチルヘキシル基、３，３－ジメチルヘキシル基、４，４－ジメチルヘキシル基、２－エチルヘキシル基、３－エチルヘキシル基、４－エチルヘキシル基、２－メチル－２－エチルペンチル基、２－メチル－３－エチルペンチル基、ｎ－ノニル基、２－メチル－２－エチルヘキシル基、２－メチル－３－エチルヘキシル基、２，２－ジエチルペンチル基、ｎ－デシル基、３，３－ジエチルヘキシル基、２，２－ジエチルヘキシル基、及びその種々の分岐鎖異性体などを含む。より好ましくは１個～６個の炭素原子を含む低級アルキル基を含み、その非限定的な実施例はメチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、１－エチルプロピル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ｎ－ヘキシル基、１－エチル－２－メチルプロピル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基及び２，３－ジメチルブチル基などを含む。アルキル基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的にＨ原子、Ｄ原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
【0096】
「ヘテロアルキル基」という用語は、Ｎ、Ｏ又はＳから選ばれる１つ又は複数のヘテロ原子を含むアルキル基を指し、そのうち、アルキル基は、上記に定義された通りである。
【0097】
「アルキレン基」という用語は、親アルカンの同じ炭素原子又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去して誘導された２つの残基を有する、飽和の直鎖又は分岐鎖の脂肪族炭化水素基を指し、１個～２０個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖基であり、好ましくは１個～１２個（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個と１２個）の炭素原子を含み、より好ましくは１個～８個の炭素原子を含むアルキレン基であり、最も好ましくは１個～６個の炭素原子を含むアルキレン基である。アルキレン基の非限定的な例は、メチレン（－ＣＨ２－）、１，１－エチレン（－ＣＨ（ＣＨ３）－）、１，２－エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２）－、１，１－プロピレン（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）－）、１，２－プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－）、１，３－プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、１，４－ブチレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）などを含むが、これらに限定されない。アルキレン基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合、任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的に、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基及びオキソ基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
【0098】
「アルケニル基」という用語は、分子に炭素－炭素二重結合が含まれるアルキル基化合物を指し、そのうち、アルキル基の定義は上記の通りである。アルケニル基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は、独立的に水素原子、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0099】
「アルキニル基」という用語は、分子に炭素－炭素三重結合が含まれるアルキル化合物を指し、そのうち、アルキル基の定義は上記の通りである。アルキニル基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は、独立的に水素原子、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0100】
「シクロアルキル基」という用語は、飽和又は部分的に不飽和の単環式又は多環式の環状炭化水素置換基を指し、シクロアルキル環は３個～２０個の炭素原子を含み、好ましくは３個～１２個の炭素原子を含み、好ましくは３個～８個（例えば、３個、４個、５個、６個、７個と８個）の炭素原子を含み、更に好ましくは３個～６個の炭素原子を含む。単環式シクロアルキル基の非限定的な例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロペンテニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサジエニル基、シクロヘプチル基、シクロヘプタトリエニル基及びシクロオクチル基などを含み、多環式シクロアルキル基は、スピロ環、縮合環及び架橋環のシクロアルキル基を含む。
【0101】
「スピロシクロアルキル基」という用語は、５員～２０員で、単環同士が１つの炭素原子（スピロ原子と称する）を共有する多環式基を指し、１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもない。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。スピロシクロアルキル基は、環同士の共有するスピロ原子の数によって、モノスピロシクロアルキル基、ビススピロシクロアルキル基又はポリスピロシクロアルキル基に分けられ、好ましくはモノスピロシクロアルキル基及びビススピロシクロアルキル基である。より好ましくは、４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員又は５員／６員のモノスピロシクロアルキル基である。スピロシクロアルキル基の非限定的な例は、
を含む。
【化9】
【0102】
「縮合シクロアルキル基」という用語は、５員～２０員で、系内の各環が系内の他の環と、隣接する１対の炭素原子を共有する全炭素多環式基を指し、そのうち、１つ又は複数の環は１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもない。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。構成する環の数によって二環式、三環式、四環式又は多環式の縮合シクロアルキル基に分けることができ、好ましくは二環式又は三環式であり、より好ましくは５員／５員又は５員／６員の二環式アルキル基である。縮合シクロアルキル基の非限定的な例は、
を含む。
【化10】
【0103】
「架橋シクロアルキル基」という用語は、５員～２０員で、何れか２つの環が直接連結されていない２つの炭素原子を共有する全炭素多環式基を指し、１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもない。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。構成する環の数によって、二環式、三環式、四環式又は多環式の架橋シクロアルキル基に分けることができ、好ましくは二環式、三環式又は四環式であり、より好ましくは二環式又は三環式である。架橋シクロアルキル基の非限定的な例は、
上記シクロアルキル環は、上記のシクロアルキル基（単環式環、スピロ環、縮合環及び架橋環を含む）がアリール基、ヘテロアリール基又はヘテロシクロアルキル環に縮合されており、そのうち、母体構造に連結された環がシクロアルキル基であるものを含み、その非限定的な例は、インダニル基、テトラヒドロナフチル基及びベンゾシクロヘプタニル基などを含み、好ましくはベンゾシクロペンチル基又はテトラヒドロナフチル基である。
【化11】
【0104】
シクロアクリル基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合、置換基は任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
【0105】
「アルコキシ基」という用語は、－Ｏ－（アルキル基）及び－Ｏ－（非置換のシクロアルキル基）を指し、そのうち、アルキル基、シクロアルキル基の定義は上記の通りである。アルコキシ基の非限定的な例は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基及びシクロヘキシルオキシ基を含む。アルコキシ基は任意選択的に置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は、独立的にＨ原子、Ｄ原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の基であることが好ましい。
【0106】
「ヘテロシクリル基」という用語は、飽和又は部分的に不飽和の単環式又は多環式の環状炭化水素置換基を指し、３個～２０個の環原子を含み、そのうち、１つ又は複数の環原子は窒素、酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）又はＳ（Ｏ）２から選ばれるヘテロ原子であるが、－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－又は－Ｓ－Ｓ－の環部分が含まれず、残りの環原子は炭素である。好ましくは３個～１２個（例えば３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個及び１２個）の環原子を含み、そのうち、１個～４個（例えば１個、２個、３個及び４個）はヘテロ原子であり、より好ましくは３個～８個（例えば３個、４個、５個、６個、７個及び８個）の環原子を含み、そのうち、１個～３個（例えば１個、２個及び３個）はヘテロ原子であり、より好ましくは３個～６個の環原子を含み、そのうち、１個～３個はヘテロ原子であり、最も好ましくは５個又は６個の環原子を含み、そのうち、１個～３個はヘテロ原子である。単環式ヘテロシクリル基の非限定的な例は、ピロリジニル基、テトラヒドロピラニル基、１，２，３，６－テトラヒドロピリジル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基及びホモピペラジニル基などを含む。多環式ヘテロシクリル基は、スピロ環、縮合環及び架橋環のヘテロシクリル基を含む。
【0107】
「スピロヘテロシクリル基」という用語は、５員～２０員で、単環同士が１つの原子（スピロ原子と称する）を共有する多環式ヘテロシクリル基を指し、そのうち、１つ又は複数の環原子は窒素、酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）又はＳ（Ｏ）２から選ばれるヘテロ原子で、残りの環原子は炭素である。それは、１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもない。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。スピロヘテロシクリル基は、環同士の共有するスピロ原子の数によって、モノスピロヘテロシクリル基、ビススピロヘテロシクリル基又はポリスピロヘテロシクリル基に分けられ、好ましくはモノスピロヘテロシクリル基及びビススピロヘテロシクリル基である。より好ましくは、４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員又は５員／６員のモノスピロヘテロシクリル基である。スピロヘテロシクリル基の非限定的な例は、
を含む。
【化12】
【0108】
「縮合ヘテロシクリル基」という用語は、５員～２０員で、系内の各環が系内の他の環と、隣接する１対の原子を共有する多環式ヘテロシクリル基を指し、１つ又は複数の環は１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもなく、そのうち、１つ又は複数の環原子が窒素、酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）又はＳ（Ｏ）２から選ばれるヘテロ原子で、残りの環原子は炭素である。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。構成する環の数によって、二環式、三環式、四環式又は多環式の縮合ヘテロシクリル基に分けることができ、好ましくは二環式又は三環式であり、より好ましくは５員／５員又は５員／６員の二環式縮合ヘテロシクリル基である。縮合ヘテロシクリル基の非限定的な例は、
を含む。
【化13】
【0109】
「架橋ヘテロシクリル基」という用語は、５員～１４員で、何れか２つの環が直接連結されていない２つの原子を共有する多環式ヘテロシクリル基を指し、１つ又は複数の二重結合を含んでもよいが、完全に共役したπ電子系を有する環が１つもなく、そのうち、１つ又は複数の環原子は、窒素、酸素、硫黄、Ｓ（Ｏ）又はＳ（Ｏ）２から選ばれるヘテロ原子で、残りの環原子は炭素である。好ましくは６員～１４員、より好ましくは７員～１０員（例えば、７員、８員、９員又は１０員）である。構成する環の数によって、二環式、三環式、四環式又は多環式の架橋ヘテロシクリル基に分けることができ、好ましくは二環式、三環式又は四環式であり、より好ましくは二環式又は三環式である。架橋ヘテロシクリル基の非限定的な例は、
を含む。
【化14】
【0110】
上記ヘテロシクリル環は、上記のヘテロシクリル基（単環、スピロヘテロ環、縮合ヘテロ環及び架橋ヘテロ環を含む）がアリール基、ヘテロアリール基又はシクロアルキル環に縮合されており、そのうち、母体構造に連結された環がヘテロシクリル基であるものを含み、その非限定的な例は、
などを含む。
【化15】
【0111】
ヘテロシクリル基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合、置換基は任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
【0112】
「アリール基」という用語は、共役したπ電子系を有する６員～１４員全炭素単環式又は縮合多環式（縮合多環は、隣接する炭素原子対を共有する環である）基であり、好ましくは６員～１０員であり、例えば、フェニル基及びナフチル基である。上記アリール環は、上記のアリール環がヘテロアリール基、ヘテロシクリル基又はシクロアルキル環に縮合されており、そのうち、母体構造に連結された環がアリール環であるものを含み、その非限定的な例は、
を含む。
【化16】
【0113】
アリール基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
「ヘテロアリール基」という用語は、１個～４個のヘテロ原子、５個～１４個の環原子を含む複素芳香族系を指し、そのうち、ヘテロ原子は酸素、硫黄及び窒素から選ばれる。ヘテロアリール基は、５員～１０員（例えば５員、６員、７員、８員、９員又は１０員）であることが好ましく、５員又は６員であることがより好ましく、例えば、フラニル基、チエニル基、ピリジル基、ピロリル基、Ｎ－アルキルピロリル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基などである。上記ヘテロアリール環は、上記のヘテロアリール基がアリール基、ヘテロシクリル基又はシクロアルキル環に縮合されており、そのうち、母体構造に連結された環がヘテロアリール環であるものを含み、その非限定的な例は、
を含む。
「ヘテロアリール基」という用語は、１個～４個のヘテロ原子、５個～１４個の環原子を含む複素芳香族系を指し、そのうち、ヘテロ原子は酸素、硫黄及び窒素から選ばれる。ヘテロアリール基は、５員～１０員（例えば５員、６員、７員、８員、９員又は１０員）であることが好ましく、５員又は６員であることがより好ましく、例えば、フラニル基、チエニル基、ピリジル基、ピロリル基、Ｎ－アルキルピロリル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基などである。上記ヘテロアリール環は、上記のヘテロアリール基がアリール基、ヘテロシクリル基又はシクロアルキル環に縮合されており、そのうち、母体構造に連結された環がヘテロアリール環であるものを含み、その非限定的な例は、
【化17】
【0114】
ヘテロアリール基は置換されても、置換されなくてもよく、置換される場合に、置換基は任意の利用可能な連結点で置換されてもよく、上記置換基は、独立して任意選択的に水素原子、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、ハロアルキル基、ハロアルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、ヘテロシクリルオキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、シアノ基、アミノ基、ニトロ基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基及びヘテロアリール基から選ばれる１つ又は複数の置換基が好ましい。
【0115】
「アミノ保護基」という用語は、分子の他の部位が反応する時に、アミノ基が変化されないように、除去され易い基でアミノ基を保護するものである。非限定的な実施例は、（トリメチルシリコン）エトキシメチル、テトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、アセチル基、ベンジル基、アリル基及びｐ－メトキシベンジル基などを含む。これらの基は、任意選択的にハロゲン、アルコキシ基又はニトロ基から選ばれる１個～３個の置換基で置換可能である。
【0116】
「ヒドロキシ保護基」という用語は、この分野で知られているヒドロキシ基の保護に適用される基を指し、文献（「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、５Ｔｈ Ｅｄ．Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ＆Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ）におけるヒドロキシ保護基が参照される。例として、好ましくは、上記ヒドロキシ保護基は、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基などの（Ｃ１－１０アルキル又はアリール）３シラン基であってもよく、Ｃ１－１０アルキル基又は置換アルキル基であってもよく、好ましくはアルコキシ基又はアリール基で置換されたアルキル基で、より好ましくはＣ１－６アルコキシ基で置換されたＣ１－６アルキル基又はフェニル基で置換されたＣ１－６アルキル基で、最も好ましくはＣ１－４アルコキシ基で置換されたＣ１－４アルキル基で、例えば、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、アリル基、ベンジル基、メトキシメチル基（ＭＯＭ）、エトキシエチル基、２－テトラヒドロピラニル基（ＴＨＰ）などであり、ホルミル基、アセチル基、ベンゾイル基、ｐ－ニトロベンゾイルなどの（Ｃ１－１０アルキル又はアリール）アシル基であってもよく、（Ｃ１－６アルキル又はＣ６－１０アリール）スルホニル基であってもよく、（Ｃ１－６アルコキシ又はＣ６－１０アリールオキシ）カルボニル基であってもよい。
【0117】
「シクロアルキルオキシ基」という用語は、シクロアルキル－Ｏ－を指し、そのうち、シクロアルキル基は上記に定義された通りである。
【0118】
「ヘテロシクリルオキシ基」という用語は、ヘテロシクリル－Ｏ－を指し、そのうち、ヘテロシクリル基は上記に定義された通りである。
【0119】
「アルキルチオ基」という用語は、アルキル－Ｓ－を指し、そのうち、アルキル基は上記に定義された通りである。
【0120】
「ハロアルキル基」という用語は、アルキル基が１つ又は複数のハロゲンで置換されたものを指し、そのうち、アルキル基は上記に定義された通りである。
【0121】
「ハロアルコキシ基」という用語は、アルコキシ基が１つ又は複数のハロゲンで置換されたものを指し、そのうち、アルコキシ基は上記に定義された通りである。
【0122】
「重水素化アルキル基」という用語は、アルキル基が１つ又は複数の重水素原子で置換されたものを指し、そのうち、アルキル基は上記に定義された通りである。
【0123】
「ヒドロキシアルキル基」という用語は、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指し、そのうち、アルキル基は上記に定義された通りである。
【0124】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。
【0125】
「ヒドロキシ基」という用語は、－ＯＨを指す。
【0126】
「メルカプト基」という用語は、－ＳＨを指す。
【0127】
「アミノ基」という用語は、－ＮＨ２を指す。
【0128】
「シアノ基」という用語は、－ＣＮを指す。
【0129】
「ニトロ基」という用語は、－ＮＯ２を指す。
【0130】
「オキソ基」という用語は、「＝Ｏ」を指す。
【0131】
「カルボニル基」という用語は、Ｃ＝Ｏを指す。
【0132】
「カルボキシ基」という用語は、－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
【0133】
「カルボン酸エステル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（シクロアルキル）、（アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ－又は（シクロアルキル）Ｃ（Ｏ）Ｏ－を指し、そのうち、アルキル基、シクロアルキル基は上記に定義された通りである。
【0134】
本開示に係る化合物には、その同位体誘導体が含まれる。「同位体誘導体」という用語は、１種又は複数種の同位体に富む原子が存在するだけにおいて構造が異なる化合物を指す。例えば、本開示に係る構造を備え、水素が「重水素」又は「三重水素」によって置き換えられ、又はフッ素が１８Ｆ－フッ素標識（１８Ｆ同位体）によって置き換えられ、又は炭素原子が１１Ｃ－、１３Ｃ－、又は１４Ｃ－に富む炭素（１１Ｃ－、１３Ｃ－又は１４Ｃ－炭素標識、１１Ｃ－、１３Ｃ－又は１４Ｃ－同位体）によって置き換えられた化合物は、本開示の範囲内にある。このような化合物は例えば、生物測定における分析ツール又はプローブとして使用されてもよく、又は疾患のインビボ診断のためのイメージングトレーサーとして使用されてもよく、又は薬力学的、薬物動態学的又は受容体研究のトレーサーとされてもよい。本開示に係る各種の重水素化形態の化合物は、炭素原子に連結された各利用可能な水素原子が独立的に重水素原子で置換可能であることを意味する。当業者は、関連文献を参照して重水素化形態の化合物を合成することができる。重水素化形態の化合物は、調製する場合、市販の重水素化出発物質を使用してもよく、又は、通常の技術により重水素化試薬で合成されてもよく、重水素化試薬は、重水素化ボラン、三重水素化ボランテトラヒドロフラン溶液、重水素化水素化アルミニウムリチウム、重水素化ヨードエタン及び重水素化ヨードメタンなどを含むが、これらに限定されない。重水素化物は、一般的に、非重水素化の化合物に相当する活性を保つことができると共に、重水素化がある特定の部位にある時に、より優れた代謝安定性を得て、幾つかの治療上の利点を得ることができる。
【0135】
「任意選択」又は「任意選択的に」は、その後に記載される事象又は状況が生じてもよいが、生じなくてもよいことを意味し、この説明は、当該事象又は状況が生じる場合と生じない場合を含む。例えば、「任意選択的にアルキル基で置換されるヘテロシクリル基」とは、アルキル基が存在してもよいが、存在しなくてもよいことを意味し、この説明は、ヘテロシクリル基がアルキル基で置換される場合と、ヘテロシクリル基がアルキル基で置換されない場合とを含む。
【0136】
「置換される」とは、基における１つ又は複数の水素原子、好ましくは１個～５個、より好ましくは１個～３個の水素原子が互いに独立的に対応する数の置換基で置換されることを指す。当業者は、それほど努力をせずに（実験又は理論で）可能又は不可能な置換を決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノ基又はヒドロキシ基は、不飽和（例えば、オレフィン）結合を有する炭素原子に結合する場合、不安定になる可能性がある。
【0137】
「医薬組成物」は、１種又は複数種の本願に記載される化合物又はその生理学的／薬学的に許容される塩又はプロドラッグと他の化学成分の混合物と、生理学的／薬学的に許容されるベクター及び賦形剤などの他の成分とを含むものを表す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与して更に生物活性を発揮するためのものである。
【0138】
本願に使用される「薬学的に許容される」という用語は、これらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形が合理的な医学的判断範囲において、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応や他の問題又は合併症がなく、対象の組織との接触に適用され、合理的な損益比を有すると共に、所望の用途に有効であることを意味する。
【0139】
本願に使用される単数形である「１つ」、「１種」と「当該」は、文脈で特に明記のない限り、複数の引用を含み、その逆も同様である。
【0140】
用語「約」は、例えば、ｐＨ、濃度、温度などのパラメータに用いられる時に、当該パラメータが±１０％変化されてもよく、場合によっては、±５％以内が更に好ましいことを示す。当業者に理解されるように、パラメータは肝心なものではない場合、一般的に、制限ではなく、ただ説明のために数字が示されている。
【0141】
「リンカーユニット」、「連結ユニット」又は「連結断片」という用語は、一端がリガンド（本開示では抗体）に連結され、他端が薬物に連結される化学構造断片又は結合を指し、その他のリンカーに連結されてから薬物に連結されてもよい。
【0142】
リンカーは、１種又は複数種のリンカー要素を含んでもよい。例示的なリンカー要素は、６－マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロピオニル（「ＭＰ」）、バリン－シトルリン（「ｖａｌ－ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン－フェニルアラニン（「ａｌａ－ｐｈｅ」）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、及びＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート（「ＳＭＣＣ」、本願では、「ＭＣＣ」とも呼ばれる）及びＮ－スクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート（「ＳＩＡＢ」）のようなリンカー試薬とのカップリングに由来するものを含む。リンカーは、伸長体、スペーサー及びアミノ酸ユニットを含み、例えば、ＵＳ２００５－０２３８６４９Ａ１に記載された方法など、この分野での既知の方法により合成することができる。リンカーは、細胞において薬物を放出しやすくする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７～１３１（１９９２）、米国特許Ｎｏ．５， ２０８， ０２０）を使用してもよい。
【0143】
リンカー要素は、下記のものを含むが、これらに限定されない：
次のような構造を持つ、ＭＣ＝６－マレイミドカプロイル：
Ｖａｌ－Ｃｉｔ又は「ｖｃ」＝バリン－シトルリン（プロテアーゼ切断可能なリンカーにおける例示的なジペプチド）
シトルリン＝２－アミノ－５－ウレイドペンタン酸
ＰＡＢ＝ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「自己犠牲」リンカー要素の例示）
Ｍｅ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ＝Ｎ－メチル－バリン－シトルリン（そのうち、リンカーペプチド結合は、カテプシンＢにより切断されないように修飾された）
ＭＣ（ＰＥＧ）６－ＯＨ＝マレイミドカプロイル－ポリエチレングリコール（抗体システインに付着可能）
ＳＰＰ＝Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエ一卜
ＳＰＤＰ＝Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート
ＳＭＣＣ＝スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート
ＩＴ＝イミノチオラン
通常の医薬組成物の調製は、中国薬典に示されている。
次のような構造を持つ、ＭＣ＝６－マレイミドカプロイル：
【化18】
シトルリン＝２－アミノ－５－ウレイドペンタン酸
ＰＡＢ＝ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「自己犠牲」リンカー要素の例示）
Ｍｅ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ＝Ｎ－メチル－バリン－シトルリン（そのうち、リンカーペプチド結合は、カテプシンＢにより切断されないように修飾された）
ＭＣ（ＰＥＧ）６－ＯＨ＝マレイミドカプロイル－ポリエチレングリコール（抗体システインに付着可能）
ＳＰＰ＝Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエ一卜
ＳＰＤＰ＝Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート
ＳＭＣＣ＝スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート
ＩＴ＝イミノチオラン
通常の医薬組成物の調製は、中国薬典に示されている。
【0144】
「ベクター」という用語は、本開示の薬物に利用されるものとして、薬物の人体への入り方と体内での分布を変更し、薬物の放出速度を制御し、薬物を標的器官に輸送することができる系を指す。薬物ベクターの放出と標的系により、薬物の分解と損失を低減し、副作用を低下させ、生物学的利用能を向上させることができる。例えば、ベクターとされる高分子界面活性剤は、その独特な両親媒性構造のため、自己集合して様々な形態の凝集体を形成することができ、好ましい例として、例えば、ミセル、マイクロエマルジョン、ゲル、液晶、ベシクルなどである。これらの凝集体は、薬物分子を封入する能力を有すると共に、膜に対して良好な透過性を有し、良い薬物ベクターとすることができる。
【0145】
「賦形剤」という用語は、薬物製剤における主薬以外の付加物であり、添加物と呼ばれてもよい。例えば、錠剤中の結合剤、充填剤、崩壊剤と潤滑剤、半固体製剤である軟膏剤、クリーム剤中の基質部分、液体製剤中の防腐剤、酸化防止剤、矯味剤、芳香剤、共溶媒、乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整剤と着色剤などは、何れも賦形剤と呼ぶことができる。
【0146】
「希釈剤」という用語は充填剤とも呼ばれ、錠剤の重量及び体積を増加させることがその主な用途である。希釈剤の加入により、一定の体積の大きさが確保されるだけでなく、主成分の用量偏差が低減され、薬剤の圧縮成形性などが改善される。錠剤の薬物に油性成分が含まれる場合、「乾燥」状態を維持して錠剤への調製に寄与するために、吸収剤を加えて油性物質を吸収する必要がある。例えば、澱粉、乳糖、カルシウムの無機塩と微結晶セルロースなどである。
【0147】
「医薬組成物」という用語は、１種又は複数種の本願に記載される化合物又はその生理学的／薬学的に許容される塩又はプロドラッグと他の化学成分の混合物と、生理学的／薬学的に許容されるベクター及び賦形剤などの他の成分とを含むものを表す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与して更に生物活性を発揮するためのものである。
【0148】
医薬組成物は、滅菌注射用水溶液の形態であってもよい。使用される許容可能な溶媒と溶剤には、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液があってもよい。滅菌注射用製剤は、その中の活性成分が油相に溶解された滅菌注射用水中油型マイクロエマルジョンであってもよい。例えば、活性成分を大豆油とレシチンとの混合物に溶解する。次に、油溶液を水とグリセリンとの混合物に加え、処理してマイクロエマルジョンを形成する。局所で大量に注射することにより、注射液又はマイクロエマルジョンを対象の血流に注入することができる。又は、本開示に係る化合物の一定のサイクル濃度を維持可能な方法により、溶液及びマイクロエマルジョンを投与することが好ましい。このような一定の濃度を維持するために、連続静脈内投与装置を使用することができる。このような装置の例は、Ｄｅｌｔｅｃ ＣＡＤＤ－ＰＬＵＳ． ＴＭ． ５４００型の静脈注射ポンプである。
【0149】
医薬組成物は、筋肉内及び皮下投与に使用される滅菌注射水又は油懸濁液の形態であってもよい。当該懸濁液は、既知の技術に従って、上記適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて調製することができる。滅菌注射用製剤は、無毒の胃腸外に許容可能な希釈剤又は溶剤において調製された滅菌注射溶液又は懸濁液であってもよく、例えば、１，３－ブタンジオールにおいて調製された溶液である。また、滅菌固定油を溶剤又は懸濁媒体として便利に用いることができる。このために、合成されたモノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の配合用固定油を用いることができる。また、油酸などの脂肪酸も、注射剤を調製することができる。
【0150】
「投与」、「与える」及び「処理」は、動物、ヒト、実験の対象、細胞、組織、器官や生物流体に適用される場合に、外因性薬剤、治療剤、診断薬又は組成物の、動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官や生物流体との接触を意味する。「投与」、「与える」及び「処理」は例えば、治療、薬物代謝動態、診断、研究と実験方法を意味してもよい。細胞の処理は、試薬と細胞との接触、及び試薬と流体との接触を含み、ここで、上記流体は細胞と接触する。「投与」、「与える」及び「処理」はまた、試薬、診断、結合組成物により、又は別種の細胞を通じて、体外及びインビトロで例えば細胞を処理することを意味する。「処理」はヒト、獣医学又は研究対象に適用される場合に、治療的処理、予防又は予防的措置、研究と診断的応用を意味する。
【0151】
「薬学的に許容される塩」又は「薬学的に利用可能な塩」という用語は、本開示に係る抗体－薬物複合体の塩、又は本開示に記載される化合物の塩を指し、このような塩は、哺乳動物の体内に用いられる場合、安全性と有效性を有すると共に、所望の生物活性を有し、本開示に係る抗体薬物複合体は、少なくとも１つのアミノ基を含むため、酸と一緒に塩を形成することができ、薬学的に利用可能な塩の非限定的な例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、クエン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、シュウ酸塩、硝酸塩、ソルビン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、サリチル酸塩、クエン酸水素塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩及びｐ－トルエンスルホン酸塩を含む。
【0152】
「治療」は、対象に内用又は外用治療剤、例えば、本開示の何れか１つの結合化合物を含む組成物を与えることを意味し、上記対象は１種又は複数種の疾患症状を有するが、既知の上記治療剤は、これらの症状に対して治療作用を有する。通常、治療される対象又はグループには、１種又は複数種の疾患症状を効果的に緩和する量で治療剤を与えることにより、これらの症状の解消を誘導し、又は臨床的に測定可能な任意の程度まで進行しないようにこれらの症状を抑制する。任意の具体的な疾患症状を効果的に緩和する治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、対象の疾患状態、年齢と体重、及び対象に必要な治療効果を発生させる薬剤の能力など、種々の要因によって変化することができる。当該症状の重症度や進行状況の評価に医者や他のプロのヘルスケアプロバイダによく用いられる任意の臨床的検出方法により、疾患症状が低減されたか否かを評価することができる。本開示の実施形態（例えば、治療方法又は製品）は、それぞれの目標疾患症状の緩和において無効な可能性があるが、この分野で知られている任意の統計学的検定方法、例えばＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定、カイ二乗検定、Ｍａｎｎ及びＷｈｉｔｎｅｙによるＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ－Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定とＷｉｌｃｏｘｏｎ検定により、統計学的に有意な数の対象において目標疾患症状を低減可能なことが確認される。
【0153】
以上の明細書には、本開示に係る１つ又は複数の実施形態の詳細が提出されている。本開示は、本願の記載と類似又は同様の任意の方法と材料により実施又は試験することができるが、以下、好ましい方法と材料を説明する。明細書と特許請求の範囲により、本開示の他の特徴、目的及び利点は明らかになる。明細書と特許請求の範囲において、文脈で特に明記のない限り、単数形は複数の指示対象のことを含む。特に定義のない限り、本願に用いられる技術・科学用語の全ては、本開示に属する分野の当業者により理解されている一般的な意味を持っている。明細書に引用される特許と出版物の全ては、引用により組み込まれている。以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態をより全面的に説明するために提出される。これらの実施例は、何れかの方式で、本開示の範囲を限定するものと理解すべきではなく、本開示の範囲は、特許請求の範囲により限定される。
【0154】
以下、実施例と合わせて本発明を更に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【0155】
本開示の実施例又は試験例における具体的な条件が明示されていない実験方法は、通常、一般的な条件、又は原料や商品メーカに勧められた条件に従う。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、分子クローニング、実験室マニュアル、冷泉港実験室、及び現代分子生物学方法、Ａｕｓｕｂｅｌら著、Ｇｒｅｅｎｅ出版協会、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ＮＹが参照される。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販される通常の試薬である。
【実施例】
【0156】
実施例１：ＨＥＲ３高発現細胞株の構築
ｐＣＤＨ－Ｈｅｒ３レンチウイルス発現ベクタープラスミド及びｐＶＳＶ－Ｇ、ｐＣＭＶ－ｄＲ８．９１レンチウイルス系パッケージングベクター用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００トランスフェクション試薬を、ウィルスパッケージング細胞２９３Ｔにトランスフェクションし、ウィルスを含む培地上清を収集し、ろ過して超高速で遠心分離し、濃縮されたウィルスでチャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ－Ｋ１を感染させ、ピューロマイシンで２週間～３週間選別してから、ＦＡＣＳシングルセルソーティングを行った。
ｐＣＤＨ－Ｈｅｒ３レンチウイルス発現ベクタープラスミド及びｐＶＳＶ－Ｇ、ｐＣＭＶ－ｄＲ８．９１レンチウイルス系パッケージングベクター用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００トランスフェクション試薬を、ウィルスパッケージング細胞２９３Ｔにトランスフェクションし、ウィルスを含む培地上清を収集し、ろ過して超高速で遠心分離し、濃縮されたウィルスでチャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ－Ｋ１を感染させ、ピューロマイシンで２週間～３週間選別してから、ＦＡＣＳシングルセルソーティングを行った。
【0157】
ＦＡＣＳによりレンチウイルスに感染したＣＨＯ－Ｋ１細胞表面のＨＥＲ３発現を検出することにより、ＨＥＲ３発現量の高いモノクローナル細胞株を選び出した。
【0158】
選び出されたモノクローナル細胞株を拡大培養し、貯蔵して後続の実験に備えた。
【0159】
ＨｕＭａｎ ＥｒｂＢ３アミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ － Ｐ２１８６０－１、ＡＡ Ｓｅｒ ２０－Ｔｈｒ ６４３）
ＳＥＶＧＮＳＱＡＶＣＰＧＴＬＮＧＬＳＶＴＧＤＡＥＮＱＹＱＴＬＹＫＬＹＥＲＣＥＶＶＭＧＮＬＥＩＶＬＴＧＨＮＡＤＬＳＦＬＱＷＩＲＥＶＴＧＹＶＬＶＡＭＮＥＦＳＴＬＰＬＰＮＬＲＶＶＲＧＴＱＶＹＤＧＫＦＡＩＦＶＭＬＮＹＮＴＮＳＳＨＡＬＲＱＬＲＬＴＱＬＴＥＩＬＳＧＧＶＹＩＥＫＮＤＫＬＣＨＭＤＴＩＤＷＲＤＩＶＲＤＲＤＡＥＩＶＶＫＤＮＧＲＳＣＰＰＣＨＥＶＣＫＧＲＣＷＧＰＧＳＥＤＣＱＴＬＴＫＴＩＣＡＰＱＣＮＧＨＣＦＧＰＮＰＮＱＣＣＨＤＥＣＡＧＧＣＳＧＰＱＤＴＤＣＦＡＣＲＨＦＮＤＳＧＡＣＶＰＲＣＰＱＰＬＶＹＮＫＬＴＦＱＬＥＰＮＰＨＴＫＹＱＹＧＧＶＣＶＡＳＣＰＨＮＦＶＶＤＱＴＳＣＶＲＡＣＰＰＤＫＭＥＶＤＫＮＧＬＫＭＣＥＰＣＧＧＬＣＰＫＡＣＥＧＴＧＳＧＳＲＦＱＴＶＤＳＳＮＩＤＧＦＶＮＣＴＫＩＬＧＮＬＤＦＬＩＴＧＬＮＧＤＰＷＨＫＩＰＡＬＤＰＥＫＬＮＶＦＲＴＶＲＥＩＴＧＹＬＮＩＱＳＷＰＰＨＭＨＮＦＳＶＦＳＮＬＴＴＩＧＧＲＳＬＹＮＲＧＦＳＬＬＩＭＫＮＬＮＶＴＳＬＧＦＲＳＬＫＥＩＳＡＧＲＩＹＩＳＡＮＲＱＬＣＹＨＨＳＬＮＷＴＫＶＬＲＧＰＴＥＥＲＬＤＩＫＨＮＲＰＲＲＤＣＶＡＥＧＫＶＣＤＰＬＣＳＳＧＧＣＷＧＰＧＰＧＱＣＬＳＣＲＮＹＳＲＧＧＶＣＶＴＨＣＮＦＬＮＧＥＰＲＥＦＡＨＥＡＥＣＦＳＣＨＰＥＣＱＰＭＥＧＴＡＴＣＮＧＳＧＳＤＴＣＡＱＣＡＨＦＲＤＧＰＨＣＶＳＳＣＰＨＧＶＬＧＡＫＧＰＩＹＫＹＰＤＶＱＮＥＣＲＰＣＨＥＮＣＴＱＧＣＫＧＰＥＬＱＤＣＬＧＱＴＬＶＬＩＧＫＴＨＬＴ
配列番号１
ＨｕＭａｎ ＥｒｂＢ３ヌクレオチド配列
ＡＧＣＧＡＡＧＴＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＣＣＧＴＣＴＧＴＣＣＣＧＧＣＡＣＡＣＴＣＡＡＴＧＧＡＣＴＧＴＣＣＧＴＧＡＣＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＡＣＡＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＡＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＧＣＣＡＴＡＡＣＧＣＣＧＡＴＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＴＴＡＧＧＧＡＡＧＴＧＡＣＴＧＧＣＴＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＣＣＡＴＧＡＡＴＧＡＧＴＴＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＣＡＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＣＡＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＴＴＣＧＣＣＡＴＴＴＴＣＧＴＣＡＴＧＣＴＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＧＣＣＣＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＡＧＧＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＡＣＡＧＡＡＡＴＴＣＴＧＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＡＣＧＡＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＡＴＣＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＧＧＧＡＴＡＧＧＧＡＴＧＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＡＴＧＡＧＧＴＣＴＧＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＡＧＡＣＴＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＴＣＧＧＣＣＣＡＡＡＴＣＣＡＡＡＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＡＡＴＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＡＴＡＣＡＧＡＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＴＴＣＡＡＴＧＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＴＣＧＴＧＴＡＣＡＡＣＡＡＧＣＴＣＡＣＴＴＴＴＣＡＧＣＴＣＧＡＧＣＣＴＡＡＣＣＣＴＣＡＣＡＣＴＡＡＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＧＧＣＧＧＡＧＴＣＴＧＣＧＴＣＧＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＡＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＡＧＣＴＧＣＧＴＧＡＧＡＧＣＴＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＡＴＡＡＡＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＣＧＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＧＴＧＡＧＣＣＴＴＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＧＡＣＴＣＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＴＴＧＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＴＡＡＧＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＴＧＡＴＣＡＣＴＧＧＣＣＴＣＡＡＣＧＧＣＧＡＴＣＣＴＴＧＧＣＡＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＴＧＡＧＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＴＣＡＡＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＣＡＣＡＡＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＡＣＡＡＴＣＧＧＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣＣＴＣＴＡＴＡＡＴＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＴＣＣＧＣＣＧＧＡＡＧＧＡＴＴＴＡＣＡＴＣＴＣＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＣＡＧＣＴＣＴＧＴＴＡＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＣＴＧＧＡＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＧＧＧＧＡＣＣＴＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＧＧＡＣＡＴＴＡＡＡＣＡＣＡＡＴＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＧＧＡＴＴＧＣＧＴＣＧＣＴＧＡＧＧＧＣＡＡＡＧＴＧＴＧＴＧＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＡＧＴＧＴＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＧＧＡＡＴＴＡＴＴＣＴＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＡＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣＧＧＣＧＡＡＣＣＴＡＧＧＧＡＡＴＴＣＧＣＣＣＡＴＧＡＡＧＣＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＡＧＴＧＴＣＡＧＣＣＴＡＴＧＧＡＧＧＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＴＣＡＧＴＧＴＧＣＣＣＡＣＴＴＴＡＧＧＧＡＴＧＧＡＣＣＴＣＡＴＴＧＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＡＣＡＣＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＣＧＡＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＣＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＴＣＧＧＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＣＴＣＡＴＣＴＣＡＣＴ
配列番号２
実施例２：抗ヒトＨＥＲ３モノクローナル抗体の産生
ＳＥＶＧＮＳＱＡＶＣＰＧＴＬＮＧＬＳＶＴＧＤＡＥＮＱＹＱＴＬＹＫＬＹＥＲＣＥＶＶＭＧＮＬＥＩＶＬＴＧＨＮＡＤＬＳＦＬＱＷＩＲＥＶＴＧＹＶＬＶＡＭＮＥＦＳＴＬＰＬＰＮＬＲＶＶＲＧＴＱＶＹＤＧＫＦＡＩＦＶＭＬＮＹＮＴＮＳＳＨＡＬＲＱＬＲＬＴＱＬＴＥＩＬＳＧＧＶＹＩＥＫＮＤＫＬＣＨＭＤＴＩＤＷＲＤＩＶＲＤＲＤＡＥＩＶＶＫＤＮＧＲＳＣＰＰＣＨＥＶＣＫＧＲＣＷＧＰＧＳＥＤＣＱＴＬＴＫＴＩＣＡＰＱＣＮＧＨＣＦＧＰＮＰＮＱＣＣＨＤＥＣＡＧＧＣＳＧＰＱＤＴＤＣＦＡＣＲＨＦＮＤＳＧＡＣＶＰＲＣＰＱＰＬＶＹＮＫＬＴＦＱＬＥＰＮＰＨＴＫＹＱＹＧＧＶＣＶＡＳＣＰＨＮＦＶＶＤＱＴＳＣＶＲＡＣＰＰＤＫＭＥＶＤＫＮＧＬＫＭＣＥＰＣＧＧＬＣＰＫＡＣＥＧＴＧＳＧＳＲＦＱＴＶＤＳＳＮＩＤＧＦＶＮＣＴＫＩＬＧＮＬＤＦＬＩＴＧＬＮＧＤＰＷＨＫＩＰＡＬＤＰＥＫＬＮＶＦＲＴＶＲＥＩＴＧＹＬＮＩＱＳＷＰＰＨＭＨＮＦＳＶＦＳＮＬＴＴＩＧＧＲＳＬＹＮＲＧＦＳＬＬＩＭＫＮＬＮＶＴＳＬＧＦＲＳＬＫＥＩＳＡＧＲＩＹＩＳＡＮＲＱＬＣＹＨＨＳＬＮＷＴＫＶＬＲＧＰＴＥＥＲＬＤＩＫＨＮＲＰＲＲＤＣＶＡＥＧＫＶＣＤＰＬＣＳＳＧＧＣＷＧＰＧＰＧＱＣＬＳＣＲＮＹＳＲＧＧＶＣＶＴＨＣＮＦＬＮＧＥＰＲＥＦＡＨＥＡＥＣＦＳＣＨＰＥＣＱＰＭＥＧＴＡＴＣＮＧＳＧＳＤＴＣＡＱＣＡＨＦＲＤＧＰＨＣＶＳＳＣＰＨＧＶＬＧＡＫＧＰＩＹＫＹＰＤＶＱＮＥＣＲＰＣＨＥＮＣＴＱＧＣＫＧＰＥＬＱＤＣＬＧＱＴＬＶＬＩＧＫＴＨＬＴ
配列番号１
ＨｕＭａｎ ＥｒｂＢ３ヌクレオチド配列
ＡＧＣＧＡＡＧＴＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＣＣＧＴＣＴＧＴＣＣＣＧＧＣＡＣＡＣＴＣＡＡＴＧＧＡＣＴＧＴＣＣＧＴＧＡＣＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＧＡＣＡＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＡＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＴＧＧＣＣＡＴＡＡＣＧＣＣＧＡＴＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＴＴＡＧＧＧＡＡＧＴＧＡＣＴＧＧＣＴＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＣＣＡＴＧＡＡＴＧＡＧＴＴＴＴＣＣＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＣＡＡＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＣＡＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＴＴＣＧＣＣＡＴＴＴＴＣＧＴＣＡＴＧＣＴＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＧＣＣＣＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＡＧＧＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＡＣＡＧＡＡＡＴＴＣＴＧＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＡＣＧＡＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＡＴＣＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＧＧＧＡＴＡＧＧＧＡＴＧＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＣＡＴＧＡＧＧＴＣＴＧＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＡＧＡＣＴＡＴＣＴＧＣＧＣＣＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＴＣＧＧＣＣＣＡＡＡＴＣＣＡＡＡＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＡＣＧＡＣＧＡＡＴＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＡＴＡＣＡＧＡＣＴＧＣＴＴＣＧＣＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＴＴＣＡＡＴＧＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＴＣＧＴＧＴＡＣＡＡＣＡＡＧＣＴＣＡＣＴＴＴＴＣＡＧＣＴＣＧＡＧＣＣＴＡＡＣＣＣＴＣＡＣＡＣＴＡＡＧＴＡＣＣＡＡＴＡＣＧＧＣＧＧＡＧＴＣＴＧＣＧＴＣＧＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＡＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＡＧＣＴＧＣＧＴＧＡＧＡＧＣＴＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＡＴＡＡＡＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＣＧＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＧＴＧＡＧＣＣＴＴＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＧＡＣＴＣＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＴＴＴＧＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＴＡＡＧＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＣＴＴＴＣＴＧＡＴＣＡＣＴＧＧＣＣＴＣＡＡＣＧＧＣＧＡＴＣＣＴＴＧＧＣＡＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＴＧＡＧＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＴＣＡＡＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＣＡＣＡＡＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＡＣＡＡＴＣＧＧＣＧＧＣＡＧＡＴＣＣＣＴＣＴＡＴＡＡＴＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＣＴＴＣＡＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＴＣＣＧＣＣＧＧＡＡＧＧＡＴＴＴＡＣＡＴＣＴＣＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＣＡＧＣＴＣＴＧＴＴＡＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＣＴＧＧＡＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＧＧＧＧＡＣＣＴＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＧＧＡＣＡＴＴＡＡＡＣＡＣＡＡＴＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＧＧＡＴＴＧＣＧＴＣＧＣＴＧＡＧＧＧＣＡＡＡＧＴＧＴＧＴＧＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＡＧＴＧＴＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＧＧＡＡＴＴＡＴＴＣＴＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＡＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣＧＧＣＧＡＡＣＣＴＡＧＧＧＡＡＴＴＣＧＣＣＣＡＴＧＡＡＧＣＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＡＧＴＧＴＣＡＧＣＣＴＡＴＧＧＡＧＧＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＴＣＡＧＴＧＴＧＣＣＣＡＣＴＴＴＡＧＧＧＡＴＧＧＡＣＣＴＣＡＴＴＧＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＡＣＡＣＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＣＧＡＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＣＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＴＣＧＧＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＣＴＣＡＴＣＴＣＡＣＴ
配列番号２
実施例２：抗ヒトＨＥＲ３モノクローナル抗体の産生
【0160】
２．１陽性対照抗体の調製
陽性対照抗体Ｕ３は、ＷＯ２００７０７７０２８Ａ２（１１８ページ、Ｕ１－５９）を参照して調製した。そのうち、Ｕ３の重鎖と軽鎖アミノ酸配列は、以下の通りである。
陽性対照抗体Ｕ３は、ＷＯ２００７０７７０２８Ａ２（１１８ページ、Ｕ１－５９）を参照して調製した。そのうち、Ｕ３の重鎖と軽鎖アミノ酸配列は、以下の通りである。
【0161】
Ｕ３重鎖：
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＥＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＫＷＴＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３
Ｕ３軽鎖：
ＤＩＥＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＶＬＹＳＳＳＮＲＮＹＬＡＷＹＱＱＮＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＥＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＫＷＴＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３
Ｕ３軽鎖：
ＤＩＥＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＶＬＹＳＳＳＮＲＮＹＬＡＷＹＱＱＮＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４
【0162】
２．２本開示に係る抗体の調製
全ヒト天然ファージ抗体ライブラリーと抗原Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ＨｕＭａｎ ＥｒｂＢ３（北京ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ股分有限公司から購入、製品番号：ＥＲ３－Ｈ８２Ｅ６）を利用し、スクリーニングした後、ＥＬＩＳＡ方法によりファージの検出を行い、陽性クローンを得た。陽性クローンをシークエンシングし、配列を得た後、陽性クローン配列をタンパク質発現ベクターＰｈｒ－ＩｇＧに挿入し、そしてＨＥＫ２９３とＥｘｐｉ－ＣＨＯ－Ｓ細胞で発現した。精製後にＦＡＣＳとエンドサイトーシス活性検証実験を行い、全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９を得た。
全ヒト天然ファージ抗体ライブラリーと抗原Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ＨｕＭａｎ ＥｒｂＢ３（北京ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ股分有限公司から購入、製品番号：ＥＲ３－Ｈ８２Ｅ６）を利用し、スクリーニングした後、ＥＬＩＳＡ方法によりファージの検出を行い、陽性クローンを得た。陽性クローンをシークエンシングし、配列を得た後、陽性クローン配列をタンパク質発現ベクターＰｈｒ－ＩｇＧに挿入し、そしてＨＥＫ２９３とＥｘｐｉ－ＣＨＯ－Ｓ細胞で発現した。精製後にＦＡＣＳとエンドサイトーシス活性検証実験を行い、全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９を得た。
【0163】
全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９の抗体の定常領域：
ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５
ヒトκ軽鎖定常領域：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号６
全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の配列は、以下の通りである。
ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５
ヒトκ軽鎖定常領域：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号６
全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の配列は、以下の通りである。
【0164】
ＨＥＲ３－２９重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＥＧＬＰＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７
ＨＥＲ３－２９軽鎖可変領域：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＨＶＧＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＴＰＫＬＬＩＳＧＡＡＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＮＴＰＰＦＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８
様々な番号付け規則によって得られたＣＤＲ配列は、以下の通りである。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＥＧＬＰＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７
ＨＥＲ３－２９軽鎖可変領域：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＨＶＧＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＴＰＫＬＬＩＳＧＡＡＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＮＴＰＰＦＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８
様々な番号付け規則によって得られたＣＤＲ配列は、以下の通りである。
【0165】
【表1】
【0166】
【表2】
【0167】
【表3】
【0168】
全ヒト抗体分子ＨＥＲ３－２９の重鎖配列と軽鎖配列は、以下の通りである。
ＨＥＲ３－２９重鎖：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＥＧＬＰＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２７
ＨＥＲ３－２９軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＨＶＧＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＴＰＫＬＬＩＳＧＡＡＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＮＴＰＰＦＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２８
実施例３：ＡＤＣの調製
ＨＥＲ３－２９重鎖：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＥＧＬＰＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２７
ＨＥＲ３－２９軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＨＶＧＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＴＰＫＬＬＩＳＧＡＡＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＮＴＰＰＦＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２８
実施例３：ＡＤＣの調製
【0169】
ＡＤＣのＤＡＲ値の測定
本開示に係るＡＤＣのＤＡＲ値の算出方法は、ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）を採用し、具体的には、以下の通りである。
本開示に係るＡＤＣのＤＡＲ値の算出方法は、ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）を採用し、具体的には、以下の通りである。
【0170】
１、測定方法：
裸の抗体と試験待ちのＡＤＣ試料（濃度は１ ｍｇ／ｍＬ）に４ μＬのＤＤＴ（ｓｉｇｍａ）を加えて還元し、３７℃で１時間水浴し、終了後にインナーチューブに取り出した。高速液体クロマトグラフＡｇｉｌｅｎｔ １２００で検出し、カラムとしてＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ－Ｓ １０００Ａ ８ μｍ ４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍを選択し、カラムの温度：８０℃、ＤＡＤ検出器の波長：２８０ ｎｍ、流速：１ ｍＬ／ｍｉｎ、注入量：４０ μＬであり、その後、試料と裸の抗体とのスペクトル比較により、軽重鎖の位置を区別し、そして検出待ち試料のスペクトルに対して積分を行い、ＤＡＲ値を算出した。
裸の抗体と試験待ちのＡＤＣ試料（濃度は１ ｍｇ／ｍＬ）に４ μＬのＤＤＴ（ｓｉｇｍａ）を加えて還元し、３７℃で１時間水浴し、終了後にインナーチューブに取り出した。高速液体クロマトグラフＡｇｉｌｅｎｔ １２００で検出し、カラムとしてＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ－Ｓ １０００Ａ ８ μｍ ４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍを選択し、カラムの温度：８０℃、ＤＡＤ検出器の波長：２８０ ｎｍ、流速：１ ｍＬ／ｍｉｎ、注入量：４０ μＬであり、その後、試料と裸の抗体とのスペクトル比較により、軽重鎖の位置を区別し、そして検出待ち試料のスペクトルに対して積分を行い、ＤＡＲ値を算出した。
【0171】
２、溶液の調製
１）０．２５ ＭのＤＴＴ溶液：
調製例：５．７８ ｍｇのＤＴＴを取り、１５０ μＬの精製水を加えて十分に溶解した後、０．２５ ＭのＤＴＴ溶液に調製し得て、－２０℃で保存した。
１）０．２５ ＭのＤＴＴ溶液：
調製例：５．７８ ｍｇのＤＴＴを取り、１５０ μＬの精製水を加えて十分に溶解した後、０．２５ ＭのＤＴＴ溶液に調製し得て、－２０℃で保存した。
【0172】
２）移動相Ａ（０．１％のＴＦＡ水溶液）：
調製例：メスシリンダーで１０００ ｍＬの精製水を量り取り、１ ｍＬのＴＦＡ（ｓｉｇｍａ）を加え、十分に均一に混合した後に使用し、２℃～８℃で１４日間保存した。
調製例：メスシリンダーで１０００ ｍＬの精製水を量り取り、１ ｍＬのＴＦＡ（ｓｉｇｍａ）を加え、十分に均一に混合した後に使用し、２℃～８℃で１４日間保存した。
【0173】
３）移動相Ｂ（０．１％のＴＦＡアセトニトリル溶液）：
調製例：メスシリンダーで１０００ ｍＬのアセトニトリルを量り取り、１ ｍＬのＴＦＡを加え、十分に均一に混合した後に使用し、２℃～８℃で１４日間保存した。
調製例：メスシリンダーで１０００ ｍＬのアセトニトリルを量り取り、１ ｍＬのＴＦＡを加え、十分に均一に混合した後に使用し、２℃～８℃で１４日間保存した。
【0174】
３、データの分析
試料と裸の抗体とのスペクトル比較により、軽鎖と重鎖の位置を区別し、そして検出試料のスペクトルに対して積分を行い、ＤＡＲ値を算出した。
試料と裸の抗体とのスペクトル比較により、軽鎖と重鎖の位置を区別し、そして検出試料のスペクトルに対して積分を行い、ＤＡＲ値を算出した。
【0175】
計算式は、次の通りである。
【0176】
ＨＣピーク総面積＝ＨＣピーク面積＋ＨＣ＋１ピーク面積＋ＨＣ＋２ピーク面積＋ＨＣ＋３ピーク面積
ＬＣ ＤＡＲ＝Σ（連結薬物数×ピーク面積百分率）／ＬＣピーク総面積
ＨＣ ＤＡＲ＝Σ（連結薬物数×ピーク面積百分率）／ＨＣピーク総面積
ＤＡＲ＝ＬＣ ＤＡＲ＋ＨＣ ＤＡＲ
薬物
本開示に係る複合体の薬物部分は、任意の適切な薬物であってもよい。特に好適な薬物は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０２００６３６７６Ａ１（援用により全て本願に組み込まれた）に記載されている。本開示に係る化合物９Ａ（即ち、ＷＯ２０２００６３６７６ Ａ１実施例９の化合物９－Ａ）は、Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミドであり、以下の構造を有する。
【0177】
【化19】
【0178】
【化20】
３７℃の条件下で、抗体ＨＥＲ３－２９のＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、１０．０ ｍｇ／ｍＬ、１１．８ ｍＬ、７９７ ｎｍｏｌ）に、調製されたトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の水溶液（１０ ｍＭ、２０８．２ μＬ、２．０８２ μＭｏｌ）を加え、水浴振とう機に置き、３７℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液を水浴で２５℃に降温した。
【0179】
化合物９Ａ（ＷＯ２０２００６３６７６を参照し、実施例９の化合物９－Ａから調製して得られたもので、当該出願の全ての内容が本開示に組み込まれている）（８．６ ｍｇ、８．００６ μｍｏｌ）を５００ μＬのＤＭＳＯに溶け、上記反応液に加え、水浴振とう器に置き、２５℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ゲルカラムで脱塩精製し（溶離相：ｐＨが６．５である０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、０．００１ ＭのＥＤＴＡ含有）、複合体ＨＥＲ３－２９－９Ａの例示的な生成物ＡＤＣ－１のＰＢＳ緩衝液（４．０２ ｍｇ／ｍＬ、２７．９ ｍＬ）を得て、４℃で貯蔵した。ＲＰ－ＨＰＬＣにより平均値を算出した：ＤＡＲ＝４．１９。
実施例３－２ ＡＤＣ－２
実施例３－２ ＡＤＣ－２
【0180】
３７℃の条件下で、抗体ＨＥＲ３－２９のＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、１０．０ ｍｇ／ｍＬ、１１．８ ｍＬ、７９７ ｎｍｏｌ）に、調製されたトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の水溶液（１０ ｍＭ、１２８ μＬ、１．２８１ μｍｏｌ）を加え、水浴振とう機に置き、３７℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液を水浴で２５℃に降温した。
【0181】
化合物９Ａ（６．８８ ｍｇ、６．４０５ μｍｏｌ）を４００ μＬのＤＭＳＯに溶け、上記反応液に加え、水浴振とう機に置き、２５℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ゲルカラムで脱塩精製し（溶離相：ｐＨが６．５である０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、０．００１ ＭのＥＤＴＡ含有）、複合体ＨＥＲ３－２９－９Ａの例示的な生成物ＡＤＣ－２のＰＢＳ緩衝液（４．２４ ｍｇ／ｍＬ、２７．２ ｍＬ）を得て、４℃で貯蔵した。ＲＰ－ＨＰＬＣにより平均値を算出した：ＤＡＲ＝２．９１。
実施例３－３ ＡＤＣ－３
実施例３－３ ＡＤＣ－３
【0182】
３７℃の条件下で、抗体ＨＥＲ３－２９のＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、１０．０ ｍｇ／ｍＬ、３．１ ｍＬ、２０９ ｎｍｏｌ）に、調製されたトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の水溶液（１０ ｍＭ、１１１ μＬ、１．１１１ μＭｏｌ）を加え、水浴振とう機に置き、３７℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液を水浴で２５℃に降温した。
【0183】
化合物９Ａ（３．３７ ｍｇ、３．１３７ μｍｏｌ）を１２０ μＬのＤＭＳＯに溶け、上記反応液に加え、水浴振とう機に置き、２５℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ゲルカラムで脱塩精製し（溶離相：ｐＨが６．５である０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、０．００１ ＭのＥＤＴＡ含有）、複合体ＨＥＲ３－２９－９Ａの例示的な生成物ＡＤＣ－３のＰＢＳ緩衝液（１．４８ ｍｇ／ｍＬ、１２．８ ｍＬ）を得て、４℃で貯蔵した。ＲＰ－ＨＰＬＣにより平均値を算出した：ＤＡＲ＝７．２７。
実施例３－４ ＡＤＣ－４
実施例３－４ ＡＤＣ－４
【0184】
【化21】
【0185】
化合物９Ａ（３．３７ ｍｇ、３．１３７ μｍｏｌ）を１２０ μＬのＤＭＳＯに溶け、上記反応液に加え、水浴振とう機に置き、２５℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ゲルカラムで脱塩精製し（溶離相：ｐＨが６．５である０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、０．００１ ＭのＥＤＴＡ含有）、複合体Ｕ３－９Ａの例示的な生成物ＡＤＣ－４のＰＢＳ緩衝液（１．４８ ｍｇ／ｍＬ、１２．８ ｍＬ）を得て、４℃で貯蔵した。ＲＰ－ＨＰＬＣにより平均値を算出した：ＤＡＲ＝６．７６。
実施例３－５ ＡＤＣ－５
実施例３－５ ＡＤＣ－５
【0186】
【化22】
【0187】
化合物１４０２（３．６７ ｍｇ、３．５４ μｍｏｌ）を１８０ μＬのＤＭＳＯに溶け、上記反応液に加え、水浴振とう機に置き、２５℃で３時間振とうしながら反応させ、反応を止めた。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ゲルカラムで脱塩精製し（溶離相：ｐＨが６．５である０．０５ ＭのＰＢＳ緩衝水溶液、０．００１ ＭのＥＤＴＡ含有）、複合体Ｕ３－１４０２の例示的な生成物ＡＤＣ－５のＰＢＳ緩衝液（１．５３ ｍｇ／ｍＬ、１５．４ ｍＬ）を得て、４℃で貯蔵した。ＲＰ－ＨＰＬＣにより平均値を算出した：ＤＡＲ＝６．９７。
試験例
試験例
【0188】
試験例１：抗体の遊離ＨＥＲ３タンパク質との結合実験
ｐＨ７．４のＰＢＳ（源培生物、Ｂ３２０）緩衝液でＨＥＲ３タンパク質を１ μｇ／ｍＬまで希釈し、１００ μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートリーダーに加え、４℃で一晩インキュベートした。液体を捨てた後、各ウェルにＰＢＳで希釈された５％の脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）３００ μＬを加えてブロッキングし、３７℃で２時間インキュベートした。ブロッキング終了後、ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．４のＰＢＳに０．１％のｔｗｅｅｎ－２０が含まれる）でプレートを３回洗浄した後、各ウェルに勾配希釈された抗体溶液１００ μＬを加え、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート終了後、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、各ウェルに１００ μＬのマウス抗ヒト（Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－ＨｕＭａｎ）ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、２０９－０３５－０８８、１：８０００で希釈）を加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、各ウェルに１００ μＬのＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５１２０－００７７）を加え、室温で１０分間～１５分間インキュベートし、各ウェルに１ ＭのＨ２ＳＯ４ ５０ μＬを加えて反応を止め、マイクロプレートリーダーにより４５０ ｎｍでの吸収値を読み取り、ソフトフェアにより抗体と抗原の結合曲線を図１に示すようにフィッティングした。ＥＣ５０値を算出し、結果は表４に示されている。
ｐＨ７．４のＰＢＳ（源培生物、Ｂ３２０）緩衝液でＨＥＲ３タンパク質を１ μｇ／ｍＬまで希釈し、１００ μＬ／ウェルの体積で９６ウェルプレートリーダーに加え、４℃で一晩インキュベートした。液体を捨てた後、各ウェルにＰＢＳで希釈された５％の脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）３００ μＬを加えてブロッキングし、３７℃で２時間インキュベートした。ブロッキング終了後、ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．４のＰＢＳに０．１％のｔｗｅｅｎ－２０が含まれる）でプレートを３回洗浄した後、各ウェルに勾配希釈された抗体溶液１００ μＬを加え、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート終了後、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、各ウェルに１００ μＬのマウス抗ヒト（Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－ＨｕＭａｎ）ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、２０９－０３５－０８８、１：８０００で希釈）を加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、各ウェルに１００ μＬのＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５１２０－００７７）を加え、室温で１０分間～１５分間インキュベートし、各ウェルに１ ＭのＨ２ＳＯ４ ５０ μＬを加えて反応を止め、マイクロプレートリーダーにより４５０ ｎｍでの吸収値を読み取り、ソフトフェアにより抗体と抗原の結合曲線を図１に示すようにフィッティングした。ＥＣ５０値を算出し、結果は表４に示されている。
【0189】
【表4】
試験例２：抗体のＨＥＲ３発現細胞との結合実験
【0190】
ＭＣＦ７細胞（ＡＴＣＣ、ＨＴＢ－２２）をＦＡＣＳ緩衝液（２％のウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、１００９９１４１）ｐＨ ７．４のＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｐ４４１７－１００ＴＡＢ））で１×１０６細胞／ｍＬの細胞懸濁液に調製し、１００ μＬ／ウェルで９６ウェル丸底プレートに加えた。上清を遠心分離して除去した後、５０ μＬ／ウェルでＦＡＣＳ緩衝液で希釈された様々な濃度の検出待ち抗体を加え、４℃の冷蔵庫に置いて暗所で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液３００ ｇで３回遠心分離して洗浄した後、作業濃度のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗ヒト（Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ＨｕＭａｎ）ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ－１１０１３）を加え、４℃の冷蔵庫に置いて暗所で４０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液３００ ｇで３回遠心分離して洗浄した後、図２に示すように、フローサイトメーターＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩにて幾何平均蛍光強度を検出した。ＥＣ５０値は表５に示されている。
【0191】
【表5】
試験例３：ＤＴ３Ｃ抗体のエンドサイトーシス実験
【0192】
本実験は、ＤＴ３Ｃタンパク質が細胞に侵入した後、活性化されたジフテリア毒素（ＤＴ）による細胞への傷害によって、ＨＥＲ３抗体のエンドサイトーシス状況を間接的に反映するためである。ＩＣ５０及びＩｍａｘによって抗体の体外エンドサイトーシス活性を評価した。
【0193】
ＤＴ３Ｃは、組換え発現した融合タンパク質であり、ジフテリア毒素のＦｒａｇｍｅｎｔ Ａ（毒素部分のみ）とＧ群レンサ球菌の３Ｃ断片（ＩｇＧ結合部分）を融合してなるものである。当該タンパク質は、抗体のＦｃ構造と高度に親和可能で、抗体のエンドサイトーシス時に一緒に細胞に侵入する。細胞内フーリンの作用下で、毒性を有するＤＴが放出される。ＤＴは、ＥＦ２－ＡＤＰリボシル化の活性を抑制し、タンパク質の翻訳プロセスを遮断し、最終的に細胞の死亡を引き起こすことができる。細胞に侵入していないＤＴ３Ｃは、細胞を傷害する活性を有しない。細胞傷害状況によって抗体のエンドサイトーシス活性を評価した。
【0194】
２０％のｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳを含む新鮮な細胞培地でＨＥＲ３を組換え発現したＣＨＯＫ１細胞懸濁液を調製し、細胞密度が２×１０４細胞／ｍＬであり、５０ μＬ／ウェルで細胞培養プレートに加え、５％の二酸化炭素、３７℃で１６時間培養した。
【0195】
無血清培地で４×濃度のＤＴ３Ｃを調製し、０．２２ μｍの小型フィルターで滅菌溶液となるようにろ過した。無血清培地で４×濃度の抗体を調製し、８０ μＬのＤＴ３Ｃ（４００ ｎＭ）及び８０ μＬの抗体（６６ ｎＭ）を１：１の体積で均一に混合し、室温で静置して３０分間インキュベートした。５０ μＬの希釈された抗体を取って５０ μＬの細胞に加え、インキュベーターで３日間インキュベートした。各ウェルに５０ μＬのＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標）試薬、Ｇ７５７３）を加え、室温で暗所にて１０分間インキュベートし、Ｖｉｃｔｏｒ３で化学発光を読み取り、結果は図３及び表６に示されている。
【0196】
【表6】
試験例４：ｐＨｒｏｄｏ抗体のエンドサイトーシス実験
【0197】
本実験は、染料が内在化された後の蛍光シグナルの変化によってＨＥＲ３抗体のエンドサイトーシス状況を反映するためである。蛍光シグナルの強さによって抗体の体外エンドサイトーシス活性を評価した。
【0198】
ｐＨ感受性のｐＨｒｏｄｏ ｉＦＬ染料にカップリング結合したＦａｂ断片は、抗体の抗原認識に影響を与えずに、ＨＥＲ３抗体のＦｃ領域に直接結合可能である。ｐＨｒｏｄｏ ｉＦＬ染料は、中性のｐＨ値である場合にほとんど蛍光を発光せず、ＨＥＲ３抗体のエンドサイトーシスと同時に、染料は内在化されることになり、ｐＨの低下につれて、蛍光シグナルは次第に強くなる。蛍光シグナルの強化状況によって抗体のエンドサイトーシス活性を評価した。
【0199】
ＨＥＲ３／ＣＨＯＫ１細胞を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ＋１０ μｇ／ｍＬのピューロマイシンで培養し、実験の初日に新鮮な細胞を含む培地により細胞懸濁液を調製し、密度が２×１０５細胞／ｍＬであり、１００μＬ／ウェルで９６ウェル細胞培養プレートに入れ、５％の二酸化炭素、３７℃で２４時間培養した。
【0200】
プレートにおける細胞液から５０ μＬ吸い出し、各ウェルに５０ μＬの抗体及びｐＨｒｏｄｏ染料混合液を加え、各抗体試料も２つの平行ウェルを設置した。染料単剤群とホモＩｇＧ１対照群を設置した。
【0201】
インキュベーターで２４時間培養した後、培地を吸い出し、各ウェルに５０ μＬのパンクレアチンを加え、２分間消化させ、５０ μＬの新鮮な培地で消化を止めた。マルチチャンネルピペットにより同じ試料の平行ウェルの細胞を丸底プレートの同じウェルに移転した。１５００ ｒｐｍで２分間遠心分離し、培養液を捨て、ＦＡＣＳ Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＢＳ＋２．５％ＦＢＳ）により細胞を１回洗浄し、１５００ ｒｐｍで２分間遠心分離した。２００ μＬのＦＡＣＳ Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＢＳ＋２．５％ＦＢＳ）を加え、細胞を再懸濁し、フローサイトメーターによりＦＩＴＣシグナルを検出した。Ｆｌｏｗｊｏ ７．６によりデータを分析し、結果は図４及び表７に示されている。
【0202】
【表7】
試験例５：ＡＤＣ分子の細胞活性実験
【0203】
本実験は、ＡＤＣ試料の細胞への傷害作用を検出し、ＩＣ５０とＩｍａｘによってＨｅｒ３－ＡＤＣの体外活性を評価するためである。
【0204】
ＭＣＦ７細胞（ヒト乳がん細胞）、ＳＷ６２０細胞（ヒト結腸がん細胞、南京科佰、ＣＢＰ６００３６）、ＷｉＤｒ細胞（ヒト大腸がん細胞）をパンクレアチンで消化し、新鮮な培地で中和し、１０００ ｒｐｍで遠心分離した後に培養液で再懸濁し、カウントした後に細胞懸濁液の密度を５００細胞／ウェルに調整し、９６ウェル細胞培養プレートに加え、１１列目に細胞を播種せずに１３５ μＬの培地のみを加え、５％の二酸化炭素、３７℃で１６時間培養した。
【0205】
ＡＤＣ試料をＰＢＳで１５ μＭ（１０×濃度）に希釈した。これを初期濃度として、ＰＢＳで５倍希釈し、合計８つの濃度にした。各ウェルに１５ μＬの１０×濃度溶液を加えた。５％の二酸化炭素、３７℃で６日間培養した。
【0206】
各ウェルに７０ μＬのＣＴＧを加え、室温で暗所にて１０分間インキュベートし、白い底膜を細胞培養プレートの底部に貼り付け、Ｖｉｃｔｏｒ３に置いて化学発光を読み取った。本実験のデータは、データ処理ソフトフェアＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ５．０によるもので、表８に示されている。
【0207】
【表8】
体内活性の生物学的評価
【0208】
試験例６：ＨＥＲ３高発現ＣＤＸモデルの体内薬効の評価
ＳＷ６２０細胞（５×１０６個／匹）をＢａｌｂ／ｃヌードマウスの右側肋骨部の皮下に接種し、７日間後に９群に分け、８匹／群で、合計９群にした。平均群分けの体積は１３４．７５ ｍｍ３であった。ＡＤＣを腹腔内に注射し、合計で３回投与し、５日おきに１回投与した。１匹に体重で０．１ ｍＬ／１０ ｇ注射した。腫瘍の体積と体重を週２回計測し、データを記録した。平均値がａｖｇで算出され、ＳＤ値がＳＴＤＥＶで算出され、ＳＥＭ値がＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴ（各群の動物数）で算出されるように、Ｅｘｃｅｌ統計ソフトウェアでデータを記録し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアでプロットし、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ又はＯｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡでデータの統計的分析を行った。
ＳＷ６２０細胞（５×１０６個／匹）をＢａｌｂ／ｃヌードマウスの右側肋骨部の皮下に接種し、７日間後に９群に分け、８匹／群で、合計９群にした。平均群分けの体積は１３４．７５ ｍｍ３であった。ＡＤＣを腹腔内に注射し、合計で３回投与し、５日おきに１回投与した。１匹に体重で０．１ ｍＬ／１０ ｇ注射した。腫瘍の体積と体重を週２回計測し、データを記録した。平均値がａｖｇで算出され、ＳＤ値がＳＴＤＥＶで算出され、ＳＥＭ値がＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴ（各群の動物数）で算出されるように、Ｅｘｃｅｌ統計ソフトウェアでデータを記録し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアでプロットし、Ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ又はＯｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡでデータの統計的分析を行った。
【0209】
腫瘍体積（Ｖ）の計算式：Ｖ＝１／２×Ｌ長×Ｌ短
２
相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｃ０）１００％で、そのうち、Ｔ、Ｃは実験終了時の治療群及び対照群の腫瘍体積であり、Ｔ０、Ｃ０は実験開始時の腫瘍体積である。
相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｃ０）１００％で、そのうち、Ｔ、Ｃは実験終了時の治療群及び対照群の腫瘍体積であり、Ｔ０、Ｃ０は実験開始時の腫瘍体積である。
【0210】
腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）＝１－Ｔ／Ｃ（％）。結果は図５及び表９に示されている。
【0211】
【表9】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】