特表 2023-545926 プログラム死受容体１（ＰＤ－１）抗体とヒアルロニダーゼ変異体とそれらのフラグメントとの安定製剤およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-01

(54)【発明の名称】プログラム死受容体１（ＰＤ－１）抗体とヒアルロニダーゼ変異体とそれらのフラグメントとの安定製剤およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20231025BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20231025BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20231025BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20231025BHJP

   C07K 16/30 20060101ALN20231025BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20231025BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 U

A61P35/00

A61P35/04

A61P11/00

A61K39/395 N

A61K39/395 D

A61K9/10

A61K47/22

A61K47/26

A61K47/20

A61K9/19

A61P15/00

A61P7/00

A61P13/02

A61P1/00

A61K31/519

A61K31/282

C07K16/30 ZNA

C12N15/13

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023518480

(86)(22)【出願日】2021-09-23

(85)【翻訳文提出日】2023-05-16

(86)【国際出願番号】 US2021051641

(87)【国際公開番号】W WO2022066832

(87)【国際公開日】2022-03-31

(31)【優先権主張番号】63/082,888

(32)【優先日】2020-09-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522242018

【氏名又は名称】メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100172683

【弁理士】

【氏名又は名称】綾 聡平

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100203208

【弁理士】

【氏名又は名称】小笠原 洋平

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】クリシュナマチャリ，ヨギタ

(72)【発明者】

【氏名】ミッタル，サチン

(72)【発明者】

【氏名】サンガニ，サヒル・エス

(72)【発明者】

【氏名】フォレスト，ウィリアム・ピー・ジュニア

(72)【発明者】

【氏名】スー，ヨンチャオ

(72)【発明者】

【氏名】チャオ，シィ

(72)【発明者】

【氏名】スミス，ケイトリン・ジーン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C086

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA16

4C076BB16

4C076CC27

4C076DD09F

4C076DD55S

4C076DD60Z

4C076DD67

4C076FF16

4C076FF51

4C076FF61

4C076GG06

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG04

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB05

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA21

4C086MA66

4C086NA03

4C086ZA51

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA81

4C086ZB26

4C206AA01

4C206AA02

4C206JB16

4C206MA03

4C206MA05

4C206MA41

4C206MA86

4C206NA03

4C206ZA51

4C206ZA59

4C206ZA66

4C206ZA81

4C206ZB26

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明はヒトプログラム死受容体ＰＤ－１に対する抗体またはその抗原結合性フラグメントとＰＨ２０変異体またはその断片との安定製剤に関する。本発明は更に、本発明の製剤を使用する種々の癌の治療方法を提供する。本発明の方法の幾つかの実施形態においては、製剤を皮下投与により対象に投与する。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのバッファー、
ｄ）スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される約３％～約１０％［重量／体積（ｗ／ｖ）］の非還元二糖、
ｅ）約０．００５％～約０．１０％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約１ｍＭ～約３０ｍＭの抗酸化剤
を含む製剤。

【請求項2】

製剤が約５．２～約５．８のｐＨを有する、請求項１記載の製剤。

【請求項3】

製剤が約５．０～約６．０のｐＨを有する、請求項１記載の製剤。

【請求項4】

バッファーがヒスチジンバッファーである、請求項１～３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項5】

バッファーが、約８ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファーである、請求項１～３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項6】

スクロースまたはトレハロースが、約６％～約８％［重量／体積（ｗ／ｖ）］である、請求項１～５のいずれか１項記載の製剤。

【請求項7】

非還元二糖が、約７％ ｗ／ｖで存在するスクロースである、請求項１～５のいずれか１項記載の製剤。

【請求項8】

非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０、６０、４０または２０である、請求項１～７のいずれか１項記載の製剤。

【請求項9】

非イオン性界面活性剤が約０．００５～０．０２％ ｗ／ｖで存在する、請求項８記載の製剤。

【請求項10】

非イオン性界面活性剤が約０．０２％ ｗ／ｖで存在する、請求項９記載の製剤。

【請求項11】

抗酸化剤が、Ｌ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１～１０のいずれか１項記載の製剤。

【請求項12】

抗酸化剤が、約５ｍＭ～約２０ｍＭの濃度で存在するＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１～１０のいずれか１項記載の製剤。

【請求項13】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１８５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項14】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項15】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項16】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約５０、７５、１５０、１６５または１８５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項17】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約１３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項18】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約１６５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項19】

ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度が、約０．００６ｍｇ／ｍＬまたは１０００Ｕ／ｍｌである、請求項１～１８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項20】

ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度が、約０．００９ｍｇ／ｍＬまたは１５００Ｕ／ｍｌである、請求項１～１８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項21】

ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度が、約０．０１２ｍｇ／ｍＬまたは２０００Ｕ／ｍｌである、請求項１～１８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項22】

ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度が、約７５０、１０００、１５００、３０００、５０００または６０００Ｕ／ｍＬである、請求項１～１８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項23】

ａ）約１００ｍｇ／ｍＬ～約１８５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００６～０．０４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、
ｅ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項24】

ａ）約１００ｍｇ／ｍＬ～約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００６～０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、
ｅ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項25】

ａ）約１００ｍｇ／ｍＬ～約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００６～０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項26】

ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００６ｍｇ／ｍｌまたは１０００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項27】

ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００９ｍｇ／ｍｌまたは１５００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項28】

ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約２０００Ｕ／ｍｌまたは０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項29】

ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００６ｍｇ／ｍｌまたは１０００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項30】

ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．００９ｍｇ／ｍｌまたは１５００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項31】

ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約２０００Ｕ／ｍｌまたは約０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい、約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、および
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む、請求項１記載の製剤。

【請求項32】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬである、請求項２３～３１のいずれか１項記載の製剤。

【請求項33】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬである、請求項２３～３１のいずれか１項記載の製剤。

【請求項34】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの濃度が、約５０、７５、１５０、１６５または１８５ｍｇ／ｍＬである、請求項２３～３１のいずれか１項記載の製剤。

【請求項35】

液体である、請求項１～３４のいずれか１項記載の製剤。

【請求項36】

凍結乾燥製剤から再構成された溶液である、請求項１～３４のいずれか１項記載の製剤。

【請求項37】

製剤がガラスバイアルまたは注射装置内に含有されている、請求項１～３６のいずれか１項記載の製剤。

【請求項38】

製剤が皮下投与用である、請求項１～３７のいずれか１項記載の製剤。

【請求項39】

製剤の粘度が５℃で７～９０ｃＰの範囲である、請求項３８記載の製剤。

【請求項40】

製剤の粘度が５℃で７～３０ｃＰの範囲である、請求項３８記載の製剤。

【請求項41】

製剤の粘度が２０℃で７～５０ｃＰの範囲である、請求項３８記載の製剤。

【請求項42】

製剤の粘度が２０℃で７～２０ｃＰの範囲である、請求項３８記載の製剤。

【請求項43】

製剤を５℃で３ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによって測定されたＨＭＷ（％）が２％未満である、請求項１～４２のいずれか１項記載の製剤。

【請求項44】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域とを含む、請求項１～４３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項45】

抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、請求項１～４３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項46】

抗ヒトＰＤ－１抗体が、配列番号５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、請求項１～４３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項47】

抗ヒトＰＤ－１抗体がペンブロリズマブである、請求項１～４３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項48】

抗ヒトＰＤ－１抗体がペンブロリズマブ変異体である、請求項１～４３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項49】

ＰＨ２０変異体またはその断片が、Ｔ３４１Ａ、Ｔ３４１Ｃ、Ｔ３４１Ｄ、Ｔ３４１Ｇ、Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４ＮおよびＮ３６３Ｇからなる群から選択される１以上のアミノ酸残基置換を更に含む、請求項１～４８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項50】

ＰＨ２０変異体またはその断片が、以下のアミノ酸残基置換の群、すなわち、
（ａ）Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｂ）Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｃ）Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９Ｄ、Ｉ３６１ＴおよびＮ３６３Ｇ；
（ｄ）Ｔ３４１Ｇ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｅ）Ｔ３４１Ａ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｆ）Ｔ３４１Ｃ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｇ）Ｔ３４１Ｄ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｈ）Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；ならびに
（ｉ）Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ
から選択されるアミノ酸残基置換を有する、請求項１～４８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項51】

ＰＨ２０変異体またはその断片が、Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔからなるアミノ酸残基置換を有する、請求項１～４８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項52】

配列番号２１のアミノ酸残基１～３６、１～３７、１～３８、１～３９または１～４０のＮ末端欠失を有するＰＨ２０変異体断片を含む、請求項１～５１のいずれか１項記載の製剤。

【請求項53】

アミノ酸残基４５５～５０９、４５８～５０９、４６１～５０９、４６４～５０９、４６５～５０９、４６６～５０９、４６７～５０９、４６８～５０９、４７０～５０９、４７１～５０９、４７２～５０９、４７３～５０９、４７４～５０９、４７５～５０９、４７６～５０９、４７８～５０９、４８０～５０９、４８２～５０９、４８４～５０９、４８６～５０９、４８８～５０９または４９０～５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失を有するＰＨ２０変異体断片を含む、請求項１～５１のいずれか１項記載の製剤。

【請求項54】

アミノ酸残基４６８～５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失を有するＰＨ２０変異体断片を含む、請求項１～５３のいずれか１項記載の製剤。

【請求項55】

配列番号２３に示されているアミノ酸配列からなるＰＨ２０変異体断片を含む、請求項１～４８のいずれか１項記載の製剤。

【請求項56】

請求項１～５５のいずれか１項記載の製剤の有効量を患者に投与することを含む、慢性感染の治療を要するヒト患者における慢性感染の治療方法。

【請求項57】

請求項１～５５のいずれか１項記載の製剤の有効量を患者に投与することを含む、癌の治療を要するヒト患者における癌の治療方法。

【請求項58】

癌が、メラノーマ、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃癌、胃食道接合部腺癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、メルケル細胞癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、有棘細胞癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌、唾液腺癌、前立腺癌、神経膠芽腫、腫瘍遺伝子変異量－高またはＭＳＩ－Ｈ癌である、請求項５７記載の方法。

【請求項59】

癌が、トリプルネガティブ乳癌またはＥＲ＋／ＨＥＲ２－ 乳癌である乳癌である、請求項５８記載の方法。

【請求項60】

癌が、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である非ホジキンリンパ腫である、請求項５８記載の方法。

【請求項61】

癌が、マイクロサテライト不安定性－高（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損固形腫瘍である、請求項５８または５９記載の方法。

【請求項62】

癌が、尿路上皮癌、頭頸部癌、胃癌、子宮頸癌または食道癌である、請求項５８記載の方法。

【請求項63】

患者が、１％以上のＰＤ－Ｌ１発現ＣＰＳを有する腫瘍を有する、請求項５８～６２のいずれか１項記載の方法。

【請求項64】

癌が転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項５８記載の方法。

【請求項65】

患者が、高いＰＤ－Ｌ１発現［腫瘍比率スコア（Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ）（ＴＰＳ）≧５０％）］を有する腫瘍を有し、白金含有化学療法で過去に治療されなかった、請求項６４記載の方法。

【請求項66】

患者が、１％以上のＰＤ－Ｌ１発現ＴＰＳを有する腫瘍を有し、白金含有化学療法で過去に治療された、請求項６４記載の方法。

【請求項67】

患者の腫瘍がＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム異常を有さない、請求項６４～６６のいずれか１項記載の方法。

【請求項68】

該方法が、ペメトレキセドおよびカルボプラチンを患者に投与することを更に含む、請求項６４記載の方法。

【請求項69】

有効量が、約１．０、３．０および１０ｍｇ／ｋｇ患者体重からなる群から選択される抗ヒトＰＤ－１抗体の用量を含む、請求項５６～６８のいずれか１項記載の方法。

【請求項70】

製剤の有効量が、２００～４００ｍｇの抗ヒトＰＤ－１抗体の用量を含む、請求項５６～６８のいずれか１項記載の方法。

【請求項71】

製剤を皮下投与によって投与する、請求項５６～６８のいずれか１項記載の方法。

【請求項72】

ヒト患者における癌の治療のための、請求項１～５５のいずれか１項記載の製剤の使用。

【請求項73】

癌が、メラノーマ、非小細胞肺癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌、胃癌、胃食道接合部腺癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、メルケル細胞癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、有棘細胞癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、中皮腫、卵巣癌、小細胞肺癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌、唾液腺癌、前立腺癌、神経膠芽腫、腫瘍遺伝子変異量－高またはＭＳＩ－Ｈ癌である、請求項７２記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。２０２１年９月１７日付で作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、２５１０６ＷＯＰＣＴ－ＳＥＱＬＩＳＴ－２１ＳＥＰ２０２１．ｔｘｔと称され、３２，１７１バイトのサイズを有する。

【0002】

発明の分野
本発明は、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントとヒアルロン酸加水分解酵素およびその変異体とを含む安定製剤に関する。また、本発明の製剤を使用する種々のがん（以下、癌と表記される）および慢性感染症の治療方法も提供する。

【背景技術】

【0003】

プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）系を標的とする免疫チェックポイント療法は、複数のヒト癌における臨床応答の画期的な改善をもたらしている（Ｂｒａｈｍｅｒら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１２，３６６：２４５５－６５；Ｇａｒｏｎら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５，３７２：２０１８－２８；Ｈａｍｉｄら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３，３６９：１３４－４４；Ｒｏｂｅｒｔら，Ｌａｎｃｅｔ ２０１４，３８４：１１０９－１７；Ｒｏｂｅｒｔら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５，３７２：２５２１－３２；Ｒｏｂｅｒｔら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５，３７２：３２０－３０；Ｔｏｐａｌｉａｎら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１２，３６６：２４４３－５４；Ｔｏｐａｌｉａｎら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１４，３２：１０２０－３０；Ｗｏｌｃｈｏｋら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３，３６９：１２２－３３）。Ｔ細胞上のＰＤ－１受容体と腫瘍および免疫浸潤細胞上のそのリガンド（すなわち、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）との相互作用はＴ細胞媒介性免疫応答を調節し、ヒト腫瘍による免疫逃避における役割を果たしうる（Ｐａｒｄｏｌｌ ＤＭ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２，１２：２５２－６４）。ＰＤ－１の、そのリガンドのいずれかへの結合は、Ｔ細胞への抑制性刺激の運搬をもたらす。ＰＤ－１系を標的とする免疫療法には、ＰＤ－１受容体に対するモノクローナル抗体［ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標）（ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）），Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪおよびＯＰＤＩＶＯ（商標）（ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）），Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ］、そしてまた、ＰＤ－Ｌ１リガンドに結合するもの［ＭＰＤＬ３２８０Ａ；ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）（アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ］が含まれる。どちらの治療アプローチも多数の癌型において抗腫瘍効果を示している。

【0004】

ヒアルロニダーゼは、細胞外マトリックスに存在するヒアルロン酸を分解する酵素である。ヒトにおいては、６種類のヒアルロニダーゼ、すなわち、Ｈｙａｌｌ、Ｈｙａｌ２、Ｈｙａｌ３、Ｈｙａｌ４、ＨｙａｌＰＳ１、ＰＨ２０／ＳＰＡＭ１が存在することが公知である。ＰＨ２０／ＳＰＡＭ１（以下、ＰＨ２０と称される）は精子形質膜および先体膜において発現される。

【0005】

ヒアルロニダーゼはヒアルロン酸を加水分解し、それにより、細胞外マトリックスにおけるヒアルロン酸の粘度を低下させ、組織（皮膚）内へのその透過性を増加させる。皮膚の皮下領域は、約７．０～７．５の中性ｐＨを有する。したがって、種々の種類のヒアルロニダーゼのなかで、ＰＨ２０が広範に使用されている（Ｂｏｏｋｂｉｎｄｅｒら，２００６）。ＰＨ２０が使用される例においては、ＰＨ２０は、しばしば、皮下注射される抗体治療用物質と共投与される（Ｂｏｏｋｂｉｎｄｅｒら，２００６）。

【0006】

抗体と酵素との製剤の安定性は複雑であり、共製剤マトリックス中の個々の酵素または抗体の安定性の関数、追加的な賦形剤の存在の影響、および抗体と酵素との特異的な相互作用のような複数の要因によって複雑化されうる。しばしば、酵素と共に製剤化される抗体の高濃度は、望ましくない他の製品特性（例えば、凝集の増加および生理的浸透圧より高くなることおよび粘度増加による注射可能性の低下）の原因となりうる。結果として、皮下投与のための抗ＰＤ－１抗体とＰＨ２０またはＰＨ２０変異体との安定製剤が必要とされている。そのような安定製剤は、好ましくは、自己投与用の薬物の貯蔵に典型的な条件下、すなわち、シリンジ、容器または他の装置における冷蔵温度で、数ヶ月から数年にわたって安定性を示して、対応医薬品の長い貯蔵寿命をもたらす。

【発明の概要】

【0007】

発明の概括
本発明は、ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）約０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、ｃ）バッファー、ｄ）非還元二糖、ｅ）非イオン性界面活性剤、および所望により含まれていてもよいｆ）抗酸化剤を含む製剤を提供する。

【0008】

１つの実施形態においては、製剤は、
ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのバッファー、
ｄ）スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される約３％～約１０％［重量／体積（ｗ／ｖ）］の非還元二糖、
ｅ）約０．００５％～約０．１０％の非イオン性界面活性剤、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約１ｍＭ～約３０ｍＭの抗酸化剤
を含む。

【0009】

驚くべきことに、本発明の製剤の特定の実施形態は、光ストレス下およびステンレス鋼ストレス下、２５℃で１または３ヶ月間の貯蔵の後、５℃で６ヶ月間の貯蔵の後および２５℃で３ヶ月間の貯蔵の後、同じ製剤における対応するＰＨ２０変異体またはその断片のみの場合と比較して、ＰＨ２０変異体またはその断片のヒアルロニダーゼ活性を増強した。本発明は、液体製剤、または凍結乾燥製剤から再構成（還元）された液体製剤でありうる。

【0010】

本発明の特定の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブまたはペンブロリズマブの抗原結合性フラグメントである。本発明の特定の実施形態においては、ＰＨ２０の変異体または断片は、配列番号２３のアミノ酸配列に示されているＰＨ２０変異体断片２である。

【0011】

また、本明細書は、本発明の製剤の有効量を患者に投与することを含む、それを要するヒト患者における癌の治療方法および慢性感染（慢性感染症）の治療方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）を含有する製剤に関する５℃および２５℃における温度依存性粘度プロファイル。

【図2】それぞれ初期、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月における５、２５および４０℃における製剤ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）のＵＰ－ＳＥＣによって測定された高分子量種（ＨＭＷＳ）の割合（％）。

【図3】それぞれ初期、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月における５、２５および４０℃における製剤ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）のＨＰ－ＩＥＸによって測定された酸性変異体。

【図4】それぞれ初期、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月における５、２５および４０℃における製剤ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）のＨＰ－ＩＥＸによって測定された主要変異体。

【図5】それぞれ初期、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月における５、２５および４０℃における製剤ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）のＨＰ－ＩＥＸによって測定された塩基性変異体。

【図6】それぞれ初期、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月における５、２５および４０℃における製剤ＡＫ０３（１００ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブのみ）およびＡＫ１０～ＡＫ１５（種々の濃度のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）のペンブロリズマブにおけるＭｅｔ［１０５］酸化種（プレピーク１＋２）。

【図7】活性アッセイ検量線の例。プロットを二次多項式としてフィットさせ、得られたフィットの式を用いて、活性標準および試験サンプルのヒアルロニダーゼ活性を決定した。

【図8】製剤およびＰＨ２０変異体断片２対照の活性。５℃で３ヶ月間（灰色バー）および６ヶ月間（白色バー）貯蔵した後の活性はＴ０サンプル（黒色バー）と同等である。

【図9】５℃（灰色バー）および２５℃（格子縞のバー）で３ヶ月間貯蔵した後の製剤およびＰＨ２０変異体断片２対照の活性。ＰＨ２０変異体断片２対照サンプル（ＡＫ０５およびＡＫ０６）のみが２５℃での貯蔵の際の活性の低下を示している。

【図10】ペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２のＤＳＣサーモグラム。

【図11】ＳＳストレスの存在下の酵素活性は５℃で６ヶ月間で上昇した。

【図12】ＳＳストレスおよびそれに続く２５℃で３ヶ月間のインキュベーションの後のペンブロリズマブ＋ＰＨ２０変異体断片２サンプルの酵素活性。

【図13】光ストレス下のペンブロリズマブ（白色バー）または粘性代用物（黒色バー）の存在下のＰＨ２０変異体断片２の活性。ＬＳは光ストレスを表す。ＬＳ ＤＣは光ストレスの暗制御を表し、この場合、バイアルをアルミホイルで包み、光によるストレスを受けたものと一緒に明室内に配置した。

【図14】ＰＨ２０変異体断片２のみ（ＡＫ０５）と比較した場合の、ある範囲の賦形剤濃度にわたるペンブロリズマブの存在下のＰＨ２０変異体断片２酵素活性の保持。初期時点、１ヶ月および３ヶ月（２５℃）におけるデータ。

【図15】ＰＨ２０変異体断片２のみ（ＡＫ０５）と比較した場合の、ある範囲の賦形剤濃度にわたるペンブロリズマブの存在下のＰＨ２０変異体断片２の酵素活性の保持。初期時点、１ヶ月および３ヶ月（２５℃）におけるデータ。

【図16】熱ストレスの際のＰＨ２０変異体断片２の酵素活性に対するペンブロリズマブ濃度の影響。

【図17】ＰＨ２０変異体断片２の活性に対するｐＨの影響。初期時点、１ヶ月および３ヶ月（２５℃）におけるデータ。

【図18】活性アッセイ検量線の例。線形フィットをデータに適用し、得られたフィットの式を用いて、活性標準および試験サンプルの酵素活性を決定した。

【0013】

発明の詳細な説明
本発明は、抗ＰＤ－１抗体、またはヒトＰＤ－１に結合するその抗原結合性フラグメントと、ＰＨ２０変異体またはその断片とを含む安定な製剤または組成物を提供し、これらは、それを要する患者への投与による、癌または免疫障害もしくは免疫病態の治療方法に有用である。本発明の特定の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブまたはペンブロリズマブの抗原結合性フラグメントである。本発明の特定の実施形態においては、本発明の製剤は皮下投与用である。驚くべきことに、前記の製剤および組成物は、２５℃で１または３ヶ月間の貯蔵の後、同じ製剤中の対応するＰＨ２０変異体またはその断片のみの場合と比較して、ＰＨ２０変異体またはその断片のヒアルロニダーゼ活性を増強した。本発明の製剤は、それを要する患者への皮下送達に有用である。

【0014】

本発明の製剤の特定の実施形態は、５℃または２５℃で６ヶ月間の時点で、ＰＨ２０変異体またはその断片を含有しない同じ製剤と比較して低いペンブロリズマブ・メチオニン－１０５酸化レベル（これは重鎖のＣＤＲ３に位置する）を維持する。ペンブロリズマブの主要分解経路は過酸化物ストレスの際の重鎖ＣＤＲにおけるメチオニン１０５（Ｍｅｔ１０５）の酸化ならびに光にさらされた際のＭｅｔ１０５およびＦｃメチオニン残基の酸化を含む。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、過酸化物ストレスサンプルに関して、ＰＤ－１へのアフィニティの低下が観察された。露出メチオニン残基または抗体のＣＤＲ内のメチオニン残基は酸化によって抗体の生物活性に影響を及ぼす可能性がある。

【0015】

本発明の製剤の特定の実施形態は、５～４０℃で６ヶ月間の時点で、ＰＨ２０変異体またはその断片を含有しない同じ製剤と比較して低いペンブロリズマブ凝集レベルを維持する。

【0016】

Ｉ．定義および略語
本明細書および添付の特許請求の範囲の全体において、以下の略語を用いる。
ＡＰＩ： 活性医薬成分
ＣＤＲ： 免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域
ＣＥ－ＳＤＳ： キャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム
ＣＨＯ： チャイニーズハムスター卵巣
ＣＩ： 信頼区間
ＤＳ： 原薬
ＥＣ５０： ５０％の有効性または結合をもたらす濃度
ＥＬＩＳＡ： 酵素結合免疫吸着アッセイ
ＦＦＰＥ： ホルマリン固定パラフィン包埋
ＦＲ： フレームワーク領域
ＨＣ： 重鎖
ＨＮＳＣＣ： 頭頸部扁平上皮癌
ＨＰ－ＨＩＣ： 高速疎水性相互作用クロマトグラフィー
ＨＰ－ＩＥＸ： 高速イオン交換クロマトグラフィー
ＨＰ－ＳＥＣ： 高速サイズ排除クロマトグラフィー
ＩＣ５０： ５０％の阻害をもたらす濃度
ＩｇＧ： 免疫グロブリンＧ
ＩＨＣ： 免疫組織化学または免疫組織化学的
ｍＡｂ： モノクローナル抗体
ＮＣＢＩ： Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ＮＳＣＬＣ： 非小細胞肺癌
ＰＣＲ： ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＤ－１： プログラム死１（別名：プログラム細胞死－１およびプログラム死受容体１）
ＰＤ－Ｌ１： プログラム細胞死１リガンド１
ＰＤ－Ｌ２： プログラム細胞死１リガンド２
ＰＳ８０またはＰＳ－８０： ポリソルベート８０
ＳＷＦＩ： 注射用滅菌水
ＴＮＢＣ： トリプルネガティブ乳癌
Ｖ_Ｈ： 免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＫ： 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
Ｖ_Ｌ： 免疫グロブリン軽鎖可変領域
ＶＰ－ＤＳＣ： バレリアン－プロトニコフ（Ｖａｌｅｒｉａｎ－Ｐｌｏｔｎｉｋｏｖ）示差走査熱量測定
ｖ／ｖ： 体積／体積
ＷＦＩ： 注射用水
ｗ／ｖ： 重量／体積

【0017】

本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる全ての他の科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。

【0018】

本明細書の全体および添付の特許請求の範囲において用いる単数形は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。

【0019】

「または」なる語は、示されている可能性の一方を文脈が明らかに定める場合を除き、示されている可能性の一方または両方を示す。幾つかの場合においては、一方または両方の可能性を強調するために「および／または」を用いた。

【0020】

本明細書中で用いる、癌の「治療」または癌を「治療する」は、免疫病態もしくは癌状態を有する対象、または癌もしくは病原性感染（例えば、ウイルス、細菌、真菌）を有すると診断された対象に本発明の製剤を投与して、例えば癌細胞数の減少、腫瘍サイズの減少、末梢器官への癌細胞浸潤速度の低下または腫瘍転移もしくは腫瘍成長の速度の低下のような少なくとも１つの正の治療効果を得ることを意味する。「治療」は以下のものの１以上を含みうる：抗腫瘍免疫応答の誘導／増強、病原体、毒素および／または自己抗原に対する免疫応答の刺激、ウイルス感染に対する免疫応答の刺激、１以上の腫瘍マーカーの数値の減少、腫瘍または血液癌の成長の停止または遅延あるいはＰＤ－１のそのリガンドＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２への結合に関連した疾患（「ＰＤ－１関連疾患」）、例えば癌の進行の停止または遅延、ＰＤ－１関連疾患の安定化、腫瘍細胞の成長または生存の抑制、１以上の癌性病変または腫瘍の排除またはそのサイズの縮小、１以上の腫瘍マーカーのレベルの低下、ＰＤ－１関連疾患の臨床症状の改善、抑制、ＰＤ－１関連疾患、例えば癌の臨床症状の重症度または持続期間の低減、類似した未治療患者の予想生存期間と比較した場合の患者の生存期間の延長、癌性状態または他のＰＤ－１関連疾患の完全または部分的な寛解の誘導。

【0021】

「免疫病態」または「免疫障害」は、例えば、病的炎症、炎症性障害および自己免疫障害または疾患を含む。「免疫病態」はまた、感染（感染症）、持続感染、ならびに増殖状態、例えば癌、腫瘍および血管新生をも含み、例えば、免疫系による根絶に抵抗する感染、腫瘍および癌をも含む。「癌性症状」は、例えば、癌、癌細胞、腫瘍、血管新生、および前癌性状態、例えば異形成を含む。

【0022】

癌における正の治療効果は幾つかの方法で測定されうる（Ｗ．Ａ．Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５０：１Ｓ－１０Ｓ（２００９）を参照されたい）。例えば、腫瘍成長抑制に関しては、ＮＣＩ標準に従い、Ｔ／Ｃ≦４２％が抗腫瘍活性の最小レベルである。
Ｔ／Ｃ＜１０％は高い抗腫瘍活性レベルとみなされ、ここで、Ｔ／Ｃ（％）＝治療された腫瘍体積中央値／対照の腫瘍体積中央値×１００である。幾つかの実施形態においては、本発明の製剤の投与により達成される治療は無進行生存（ＰＦＳ）、無疾患生存（ＤＦＳ）または全生存（ＯＳ）のいずれかである。ＰＦＳは「腫瘍進行までの時間」とも称され、癌が成長（増殖）しない、治療中または治療後の時間の長さを示し、完全な応答または部分的な応答を患者が経験した時間の長さ、および安定な疾患を患者が経験した時間の長さを含む。ＤＦＳは、患者が無疾患状態のままである、治療中または治療後の時間の長さを意味する。ＯＳは、無処置または未治療の個体または患者と比較した場合の寿命の延長を意味する。本発明の製剤、治療方法および使用の実施形態は、全ての患者において正の治療効果を達成するのに有効でありうるとは限らないが、当技術分野で公知のいずれかの統計的検定、例えばスチューデントｔ検定、カイ２乗検定、マンおよびホイットニーによるＵ検定、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ検定）、ヨンケーレ－テルプストラ検定およびウィルコクソン検定により判定された場合に、統計的に有意な数の対象においては有効であるべきである。

【0023】

「患者」（あるいは、本明細書においては「対象」または「個体」とも称される）は、本発明の製剤または組成物で治療されうる哺乳動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）、最も好ましくはヒトを意味する。幾つかの実施形態においては、患者は成体患者である。他の実施形態においては、患者は小児患者である。「治療を要する」者には、本発明の製剤または組成物での治療から利益を受けうる患者、例えば、癌または免疫病態に罹患している患者が含まれる。

【0024】

「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す、抗体の任意の形態を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体（これらに限定されるものではない）を含む。

【0025】

一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして、抗体のイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。

【0026】

典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインはＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５^ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に基づいている。

【0027】

特定の標的タンパク質に「特異的に結合する」抗体または抗原結合性フラグメントは、他のタンパク質と比較してその標的への優先的結合を示す抗体であるが、この特異性は絶対的な結合特異性を要しない。抗体がその意図される標的に「特異的」だとみなされるのは、その結合が、例えば偽陽性のような望ましくない結果をもたらすことなく、サンプル中の標的タンパク質の存在を決定するものである場合である。本発明において有用な抗体またはその結合性フラグメントは、非標的タンパク質に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍大きなアフィニティで標的タンパク質に結合するであろう。本明細書中で用いる抗体が、与えられたアミノ酸配列、例えば成熟ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１分子のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合すると言えるのは、それが、その配列を含むポリペプチドには結合するが、その配列を欠くタンパク質には結合しない場合である。

【0028】

「キメラ抗体」は、所望の生物活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種（例えば、ヒト）に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である一方で、該鎖の残部が、別の種（例えば、マウス）に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを意味する。

【0029】

「薬学的有効量」または「有効量」なる語は、十分な治療用組成物または製剤が患者に導入されて疾患または病態を治療する量を意味する。このレベルは患者の特徴、例えば年齢、体重などに応じて変動しうる、と当業者に認識されている。

【0030】

「約」なる語は、物質または組成物の量（例えば、ｍＭまたはＭ）、製剤成分の百分率（ｖ／ｖまたはｗ／ｖ）、溶液／製剤のｐＨ、あるいは方法における工程を特徴づけるパラメータの値などを修飾している場合には、例えば、該物質または組成物の製造、特徴づけおよび／または使用に伴う典型的な測定、取り扱いおよびサンプリング操作により生じるうる数量における変動；これらの操作における偶発的エラーにより生じうる数量における変動；該組成物を製造または使用するために或いは該操作を行うために使用される成分の製造、起源または純度における差異により生じうる数量における変動などを意味する。
特定の実施形態においては、「約」は、±０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％または１０％の変動を意味しうる。

【0031】

本明細書中で用いる「ｘ％（ｗ／ｖ）」はｘｇ／１００ｍｌと同等である（例えば、５％ ｗ／ｖは５０ｍｇ／ｍｌに等しい）。

【0032】

「癌」、「癌性」または「悪性」なる語は、無制御な細胞増殖により典型的に特徴づけられる、哺乳動物における生理学的状態を意味し又は示す。癌の例には、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような癌の更に詳細な例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃腸（管）癌、腎癌、卵巣癌、肝臓癌、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ（黒色腫）、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、脳癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌および頭頸部癌が含まれる。

【0033】

「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。抗ＰＤ－１抗体は任意の１以上の適切な化学療法剤と共に使用されうる。そのような化学療法剤の例には以下のものが含まれる：アルキル化剤、例えばチオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）およびシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホナート、例えばブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）［特にブルラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブルラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ）］；カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）［合成類似体トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）を含む］；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ－１０６５［そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む］；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；ドュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体ＫＷ－２１８９およびＣＢＩ－ＴＭＩを含む）；エリューテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；窒素マスタード、例えばクロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロルエタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メクロルエタミンオキシド塩酸塩、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ ｍｕｓｔａｒｄ）；ニトロソウレア、例えばカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質［例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシン・ガンマ１Ｉおよびカリケアマイシン・ファイＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、例えばダイネマイシンＡ；ビスホスホナート、例えばクロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；ならびにネオカルジノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団］、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）および５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリン類似体、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロクスリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）プロピオナート、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン（ｍｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗アドレナール、例えばアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、トリロスタン（ｔｒｉｌｏｓｔａｎｅ）；葉酸補充物、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；トリアジクオン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）［特にＴ－２毒素、ベルラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）］；ウレタン；ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）；タキソイド、例えばパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６－チオグアニン；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；白金類似体、例えばシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）およびカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）；白金；エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ－１６）；イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）；キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；ならびに前記のいずれかのものの薬学的に許容される塩、酸または誘導体。また、例えば以下のような、腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するように作用する抗ホルモン剤も含まれる：抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびトレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、酢酸メゲストロール
（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎ）、ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）、ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）およびアナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；ならびに抗アンドロゲン、例えばフルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）およびゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）；ならびに前記のいずれかのものの薬学的に許容される塩、酸または誘導体。

【0034】

「Ｃｈｏｔｈｉａ」は、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，ＪＭＢ ２７３：９２７－９４８（１９９７）に記載されている抗体番号付けシステムを意味する。

【0035】

本明細書中で用いる「Ｋａｂａｔ」は、Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ（（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）により創始された免疫グロブリンアライメントおよび番号付けシステムを意味する。

【0036】

本明細書中で用いる「増殖抑制物質」は、インビトロまたはインビボにおいて、本明細書において特定されている遺伝子のいずれかを過剰発現する細胞、特に癌細胞の増殖を抑制する化合物または組成物を意味する。したがって、増殖抑制物質は、Ｓ期においてそのような遺伝子を過剰発現する細胞の比率を有意に減少させるものである。増殖抑制物質の例には、（Ｓ期以外の位置で）細胞周期の進行を阻止する物質、例えば、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘導する物質が含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ［ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）およびビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）］、タキサン（ｔａｘａｎｅ）およびトポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えばドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）およびエトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）が含まれる。Ｇ１を停止させる物質、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばデカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）およびシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）は、Ｓ期停止にまでも影響を及ぼす。更なる情報はＴｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編，Ｃｈａｐｔｅｒ １，タイトル“Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”，Ｍｕｒａｋａｍｉら（ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）に見出されうる。

【0037】

「ＰＤ－１結合性フラグメント」、「その抗原結合性フラグメント」、「その結合性フラグメント」または「そのフラグメント」なる語は、抗体のフラグメントまたは誘導体であって、抗原（ヒトＰＤ－１）に結合する及びその活性を抑制する（例えば、ＰＤＬ１およびＰＤＬ２へのＰＤ－１の結合を遮断する）その生物活性を尚も実質的に保有するものを含む。したがって、「抗体フラグメント」またはＰＤ－１結合性フラグメントなる語は、完全長抗体の一部分、一般に、その抗原結合性または可変領域を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖフラグメントが含まれる。典型的には、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＰＤ－１抑制活性の少なくとも１０％を保有する。幾つかの実施形態においては、所望の生物学的効果を発揮するのに十分なアフィニティを有するいずれの結合性フラグメントも有用であるが、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＰＤ－１抑制活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％（またはそれ以上）を保有する。幾つかの実施形態においては、抗原結合性フラグメントは、無関係な抗原に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍大きなアフィニティで、その抗原に結合する。１つの実施形態においては、該抗体は、例えばスキャッチャード分析により測定された場合、約１０^９ リットル／モルより大きなアフィニティを有する。Ｍｕｎｓｅｎら（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０－２３９。ＰＤ－１結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に変化させない保存的アミノ酸置換を有する変異体を含みうると意図される。

【0038】

「ヒト化抗体」は、非ヒト（例えば、マウス）抗体およびヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を意味する。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、所望により免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分を含んでいてもよい。アフィニティーを増加させるために、またはヒト化抗体の安定性を増強するために、または他の理由により、あるアミノ酸置換が含まれうるが、げっ歯類抗体のヒト化形態は、一般に、該親げっ歯類抗体の同一ＣＤＲ配列を含む。

【0039】

本発明の抗体は、改変されたエフェクター機能をもたらすための修飾（または遮断）されたＦｃ領域を有する抗体をも含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２；Ｐｒｅｓｔａ（２００６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．５８：６４０－６５６を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する変化はまた、治療用抗体における抗体の半減期を改変することが可能であり、より長い半減期は、それほど頻繁でない投与ならびにそれによる簡便さの向上および物資の使用の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４－３５を参照されたい。

【0040】

「完全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。
完全ヒト抗体は、マウスにおいて、マウス細胞においてあるいはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、ヒトにおいて、ヒト免疫グロブリン生殖系列配列を有するトランスジェニック動物において、ファージディスプレイまたは他の分子生物学的方法により作製されうる。

【0041】

「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」［例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）により決定された場合の、軽鎖可変ドメインにおける残基２４～３４（ＣＤＲＬ１）、５０～５６（ＣＤＲＬ２）および８９～９７（ＣＤＲＬ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１～３５（ＣＤＲＨ１）、５０～６５（ＣＤＲＨ２）および９５～１０２（ＣＤＲＨ３）］からのアミノ酸残基、および／または「超可変ループ」［すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）および９１～９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）および９６～１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７）］からのアミノ酸残基を含む。
本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。ＣＤＲおよびＦＲ残基は、Ｋａｂａｔの標準的な配列定義（Ｋａｂａｔら（１９８７）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．）に従い決定される。

【0042】

「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、ポリペプチドの必須領域においてさえも生じる分子の生物活性を一般に変化させることなく行われうる、当業者に公知のアミノ酸の置換を意味する。そのような典型的な置換は、好ましくは、以下の表１に記載されているものに従い行われうる。

【0043】

【表1】

【0044】

また、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している。例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照されたい。

【0045】

本明細書および特許請求の範囲の全体において用いられている「から実質的になる」およびその変形表現、例えば「から実質的になり」または「から実質的になっており」は、挙げられている要素または要素群の包含、および特定されている投与レジメン、方法または組成物の基本的または新規特性を実質的に変化させない、挙げられている要素と類似した又は異なる性質の他の要素の随意的包含（すなわち、包含されても包含されなくてもよいこと）を示す。非限定的な一例として、挙げられているアミノ酸配列から実質的になる結合性化合物は、該結合性化合物の特性に実質的に影響を及ぼさない、１以上のアミノ酸残基の置換を含む１以上のアミノ酸をも含みうる。

【0046】

「含む」、またはその変形表現、例えば、「含み」、「含んでいて」もしくは「含まれる」は、明示的表現または必然的暗示ゆえに文脈が他の解釈を要しない限り、本明細書および特許請求の範囲の全体において包括的な意味で用いられ、すなわち、本発明の実施形態のいずれかの実施または有用性を実質的に促進しうる更なる特徴の存在または付加を排除することなく、示されている特徴の存在を特定するために用いられる。

【0047】

「単離された抗体」および「単離された抗体フラグメント」は精製状態を意味し、そのような文脈においては、示されている分子が、他の生物学的分子、例えば核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質を実質的に含有しないことを意味する。一般に、「単離（された）」なる語はそのような物質の完全な非存在を意味するとは意図されず、また、水、バッファーまたは塩の非存在を意味するとも意図されない。ただし、それらは、本明細書に記載されている結合性化合物の実験的または治療的使用を実質的に妨げる量で存在してはならない。

【0048】

本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」または「Ｍａｂ」は、実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる可能な自然突然変異以外はアミノ酸配列において同一である。対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープにしばしば特異的である可変ドメイン（特にＣＤＲ）内に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による該抗体の製造を要すると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２２２：５８１－５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。

【0049】

「腫瘍」は、癌を有すると診断された又は癌を有する疑いのある対象に適用される場合には、任意のサイズの悪性または潜在的に悪性の新生物または組織塊を意味し、原発腫瘍および続発性新生物を含む。固形（充実性）腫瘍は、嚢胞または液体領域を通常は含有しない組織の異常成長または塊を意味する。種々のタイプの固形腫瘍が、それらを形成する細胞のタイプにちなんで命名されている。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫およびリンパ腫が挙げられる。白血病（血液の癌）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ）。

【0050】

「腫瘍サイズ」なる語は、腫瘍の長さおよび幅として測定されうる腫瘍の全サイズを意味する。腫瘍サイズは、当技術分野で公知の種々の方法により決定可能であり、例えば、被験者からの摘除に際して例えばカリパスを使用して、あるいはイメージング技術、例えば骨スキャン、超音波、ＣＴまたはＭＲＩスキャンを用いて、体内において腫瘍の寸法を測定することにより決定されうる。

【0051】

「腫瘍比率スコア（Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ）（ＴＰＳ）」は、任意の強度（弱、中等度または強）で細胞膜上でＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍細胞の比率を意味する。線形の部分的または完全な細胞膜染色はＰＤ－Ｌ１に関して陽性と解釈される。

【0052】

「単核炎症密度スコア（Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｅｎｓｉｔｙ ｓｃｏｒｅ）（ＭＩＤＳ）」は、腫瘍に浸潤または隣接するＰＤ－Ｌ１発現単核炎症細胞（ＭＩＣ）（腫瘍巣および隣接細胞支持間質内の小型および大型のリンパ球、単球およびマクロファージ）の数の、腫瘍細胞総数に対する比率を意味する。ＭＩＤＳは０～４のスケールで示され、ここで、０は、無しを意味し、１は、存在するが腫瘍細胞１００個当たり１ ＭＩＣ未満（＜１％）を意味し、２は、腫瘍細胞１００個当たり少なくとも１ ＭＩＣであるが、腫瘍細胞１０個当たり１ ＭＩＣ未満（１～９％）を意味し、３は、腫瘍細胞１０個当たり少なくとも１ ＭＩＣであるが、腫瘍細胞より少ないＭＩＣ（１０～９９％）を意味し、４は、腫瘍細胞と少なくとも同数のＭＩＣ（≧１００％）を意味する。

【0053】

「複合陽性スコア（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｃｏｒｅ）（ＣＰＳ）」は、腫瘍細胞の合計数（分数における分母；すなわち、ＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞およびＰＤ－Ｌ１陰性腫瘍細胞の数）に対する、腫瘍巣および隣接支持間質内のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞およびＰＤ－Ｌ１陽性単核炎症細胞（ＭＩＣ）の数（分数における分子）の比率を意味する。任意の強度のＰＤ－Ｌ１発現が、陽性、すなわち、弱（１＋）、中等度（２＋）または強（３＋）と見なされる。

【0054】

「ＰＤ－Ｌ１発現陽性」は、少なくとも１％の腫瘍比率スコア、単核炎症密度スコアまたは複合陽性スコアを意味する。ＡＩＳは５以上であり、あるいは、適切な対照と比較した場合の、悪性細胞によるおよび／または腫瘍内の浸潤免疫細胞による、ＰＤ－Ｌ１発現（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のレベルの上昇である。

【0055】

「マイクロサテライト不安定性（Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ）（ＭＳＩ）」は、腫瘍における欠損ＤＮＡミスマッチ修復に関連するゲノム不安定性の形態を意味する。Ｂｏｌａｎｄら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８，５２５８－５２５７，１９９８を参照されたい。１つの実施形態においては、ＭＳＩ分析は、米国国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＮＣＩ）が推奨している５つのマイクロサテライトマーカーであるＢＡＴ２５（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号９８３４５０８）、ＢＡＴ２６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号９８３４５０５）、Ｄ５Ｓ３４６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１８１１７１）、Ｄ２Ｓ１２３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１８７９５３）、Ｄ１７Ｓ２５０（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１７７０３０）を使用して行われうる。追加的なマーカー、例えば、ＢＡＴ４０、ＢＡＴ３４Ｃ４、ＴＧＦ－β－ＲＩＩおよびＡＣＴＣが使用されうる。ＭＳＩ分析用の商業的に入手可能なキットには、例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ ＭＳＩマルチプレックスＰＣＲアッセイ、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）ＣＤｘ（Ｆ１ＣＤｘ）次世代シーケンシングベースインビトロ診断装置（ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍組織標本から単離されたＤＮＡを使用する）が含まれる。

【0056】

「高頻度マイクロサテライト不安定性」または「マイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－Ｈ）」は、前記の５つのＮＣＩマーカーのうち２以上が不安定性を示す場合または全マーカーの３０～４０％以上が不安定性（すなわち、挿入／欠失突然変異を有する）を示す場合を意味する。

【0057】

本明細書中で用いる「非ＭＳＩ－Ｈ癌」は、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）および低頻度ＭＳＩ（ＭＳＩ－Ｌ）癌を意味する。

【0058】

「マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）」は、前記の５つのＮＣＩマーカーのいずれもが不安定性（すなわち、挿入／欠失突然変異を有する）を示さない場合を意味する。

【0059】

「ミスマッチ修復無欠損（Ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｓｍａｔｃｈ ｒｅｐａｉｒ）（ｐＭＭＲ）癌」は、ＩＨＣによる腫瘍標本におけるＭＭＲタンパク質（ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＭＳＨ２およびＭＳＨ６）の正常発現を意味する。ＭＭＲ分析用の商業的に入手可能なキットには、Ｖｅｎｔａｎａ ＭＭＲ ＩＨＣアッセイが含まれる。

【0060】

「ミスマッチ修復欠損（Ｍｉｓｍａｔｃｈ ｒｅｐａｉｒ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）（ｄＭＭＲ）癌」は、ＩＨＣによる腫瘍標本における１以上のＭＭＲタンパク質（ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＭＳＨ２およびＭＳＨ６）の低発現を意味する。

【0061】

本明細書中で用いる「可変領域」または「Ｖ領域」は、異なる抗体間で配列において可変性のＩｇＧ鎖のセグメントを意味する。それは軽鎖においてはＫａｂａｔ残基１０９まで、そして重鎖においては１１３まで伸長している。

【0062】

「バッファー」なる語は、本発明の製剤の溶液ｐＨを許容範囲に維持する物質、あるいは、本発明の凍結乾燥製剤に関しては凍結乾燥前に許容されうる溶液ｐＨをもたらす物質を包含する。

【0063】

「凍結乾燥」、「凍結乾燥された」および「凍結乾燥した」なる語は、乾燥される物質が、まず凍結され、ついで真空環境中で昇華により氷または凍結溶媒が除去されるプロセスを意味する。貯蔵時の凍結乾燥製品の安定性を増強するために、凍結乾燥前の製剤中に賦形剤を含有させることが可能である。

【0064】

「医薬製剤」なる語は、有効成分が有効となることを可能にするような形態の製剤であって、該製剤が、投与される対象に対して毒性である追加的成分を含有しない製剤を意味する。「製剤」および「医薬製剤」なる語は、本明細書の全体にわたって互換的に用いられる。

【0065】

「薬学的に許容される」は、使用される有効成分の有効量を与えるために対象に合理的に投与されうる、そしてヒトに投与された場合に、「安全であると一般にみなされている」、例えば、生理的に許容され、典型的にはアレルギーまたは類似の望ましくない反応（例えば、胃の異常など）を引き起こさない賦形剤（ビヒクル、添加剤）および組成物に関するものである。もう１つの実施形態においては、この用語は、動物における使用、より詳しくはヒトにおける使用に関して、連邦もしくは州政府の規制機関により承認された又は米国薬局方もしくは他の一般に認められている薬局方に収載されている分子および組成物に関するものである。

【0066】

「再構成（された）」製剤は、凍結乾燥タンパク質製剤を希釈剤中に溶解させて該タンパク質を再構成製剤中に分散させることにより調製された製剤である。再構成製剤は、投与、例えば非経口投与または静脈内投与に適しており、皮下投与に適している場合もありうる。

【0067】

「再構成時間」は、凍結乾燥製剤を溶液で再水和させて粒子非含有清澄化溶液にするのに必要な時間である。

【0068】

「安定」製剤は、それに含まれるタンパク質が、貯蔵に際して、その物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術が当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で、選択された期間にわたって測定されうる。例えば、１つの実施形態においては、安定製剤は、冷蔵温度（２～８℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、冷蔵温度（２～８℃）で少なくとも１８ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも３ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも６ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも１８ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。抗体製剤の安定性に関する基準は以下のとおりである。典型的には、ＳＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した場合、抗体単量体の１０％以下、好ましくは５％以下しか分解されない。典型的には、製剤は、視覚分析によれば、無色、または透明ないし僅かに乳白色である。典型的には、製剤の濃度、ｐＨおよび浸透圧は、＋／－１０％以下の変化を示すに過ぎない。効力は、典型的には、対照または参照体の６０～１４０％、好ましくは８０～１２０％の範囲内である。
典型的には、抗体のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）、すなわち、低分子量種（％）は、例えばＨＰ－ＳＥＣによる測定で、１０％以下、好ましくは５％以下しか観察されない。典型的には、抗体の凝集、すなわち、高分子量種（％）は、例えばＨＰ－ＳＥＣによる測定で、１０％以下、好ましくは５％以下しか観察されない。

【0069】

医薬製剤において抗体が「その物理的安定性を保持する」と言えるのは、それが、色および／または透明度の目視検査で、あるいはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱により測定された場合に、凝集、沈殿および／または変性の有意な増加を示さない場合である。タンパク質のコンホメーションの変化は、タンパク質の三次構造を決定する蛍光分光法、およびタンパク質の二次構造を決定するＦＴＩＲ分光法によって評価されうる。

【0070】

医薬製剤において抗体が「その化学的安定性を保持する」と言えるのは、それが有意な化学的変化を示さない場合である。化学的安定性は、化学的に変化したタンパク質形態を検出および定量することにより評価されうる。タンパク質の化学構造をしばしば変化させる分解プロセスには、加水分解またはクリッピング（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥのような方法により評価される）、酸化（質量分析またはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組合されたペプチドマッピングのような方法により評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定のような方法により評価される）および異性化（イソアスパラギン酸含量、ペプチドマッピングなどを測定することにより評価される）が含まれる。

【0071】

医薬製剤において抗体が「その生物活性を保持する」と言えるのは、所定の時点における抗体の生物活性が、医薬製剤の調製時に示された生物活性の所定範囲内にある場合である。抗体の生物活性は、例えば、抗原結合アッセイにより決定されうる。本発明の製剤は、再構成された際または液体形態において、生物学的に活性な抗体およびそのフラグメントを含む。

【0072】

「等張」なる語は、関心のある製剤がヒトの血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張製剤は、一般に、約２７０～３２８ｍＯｓｍの浸透圧を有する。僅かに低張の圧力は２５０～２６９であり、僅かに高張の圧力は３２８～３５０ｍＯｓｍである。
浸透圧は、例えば、蒸気圧または氷結型浸透圧計を使用して測定されうる。

【0073】

「非還元二糖」は、遊離アルデヒド基もしくは遊離ケトン基を含有せず又は含有するように変換され得ないため、還元剤として作用し得ない二糖である。非還元二糖の例には、スクロースおよびトレハロースのような二糖が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0074】

「ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）」（以前はＭＫ－３４７５、ＳＣＨ ９００４７５およびランブロリズマブとして公知であった）は、本明細書においては「ペンブロ」とも称され、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．２，ｐ．１６１－１６２（２０１３）に記載されている構造を有し、表２に記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列ならびにＣＤＲを含むヒト化ＩｇＧ４ ｍＡｂである。ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標）に関する処方情報（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ ＵＳＡ；初回米国承認２０１４）に記載されているとおり、ペンブロリズマブは、米国ＦＤＡにより承認されている。

【0075】

本明細書中で用いる「ペンブロリズマブ変異体」は、軽鎖ＣＤＲの外部に位置する位置の３、２または１個の保存的アミノ酸置換および重鎖ＣＤＲの外部に位置する６、５、４、３、２または１個の保存的アミノ酸置換（例えば、変異位置はＦＲ領域または定常領域内に位置する）を有すること以外はペンブロリズマブにおけるものと実質的に同じ重鎖および軽鎖配列を含むモノクローナル抗体であって、所望により、重鎖のＣ末端リジン残基の欠失を有していてもよいモノクローナル抗体を意味する。換言すれば、ペンブロリズマブおよびペンブロリズマブ変異体は、同一ＣＤＲ配列を含むが、それぞれ、それらの完全長軽鎖および重鎖配列における３または６個以下の他の位置における保存的アミノ酸置換を有する点でそれぞれとは異なる。ペンブロリズマブ変異体は、以下の特性、すなわち、ＰＤ－１に対する結合アフィニティ、ならびにＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２のそれぞれの結合を遮断する能力の点で、ペンブロリズマブと実質的に同じである。

【0076】

「ＰＨ２０」は、配列番号２１の野生型ＰＨ２０ヒアルロニダーゼを意味する。

【0077】

本明細書中で用いる「ＰＨ２０変異体」は、配列番号２１におけるＭ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔを含むアミノ酸残基置換を有するＰＨ２０の変異体である。

【0078】

「ＰＨ２０変異体断片」または「そのＰＨ２０変異体断片」または「ＰＨ２０変異体の断片」は、配列番号２１のアミノ酸残基１～３６、１～３７、１～３８、１～３９、１～４０、１～４１もしくは１～４２のＮ末端欠失、および／またはアミノ酸残基４５５～５０９、４５６～５０９、４５７～５０９、４５８～５０９、４５９～５０９、４６０～５０９、４６１～５０９、４６２～５０９、４６３～５０９、４６４～５０９、４６５～５０９、４６６～５０９、４６７～５０９、４６８～５０９、４６９～５０９、４７０～５０９、４７１～５０９、４７２～５０９、４７３～５０９、４７４～５０９、４７５～５０９、４７６～５０９、４７７～５０９、４７８～５０９、４７９～５０９、４８０～５０９、４８１～５０９、４８２～５０９、４８３～５０９、４８４～５０９、４８５～５０９、４８６～５０９、４８７～５０９、４８８～５０９、４８９～５０９、４９０～５０９、４９１～５０９、４９２～５０９、４９３～５０９、４９４～５０９、４９５～５０９、４９６～５０９、４９７～５０９、４９８～５０９、４９９～５０９、５００～５０９、５０１～５０９、５０２～５０９、５０３～５０９、５０４～５０９、５０５～５０９、５０６～５０９、５０７～５０９、５０８～５０９もしくは５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失のいずれかを有するＰＨ２０変異体である。

【0079】

「ユニット」または「Ｕ」は、ヒアルロニダーゼ活性の１単位を意味し、これは、ヒアルロン酸と該酵素との反応に適した条件で６００ｎｍでの光学密度の変化を引き起こすＰＨ２０変異体またはその断片の量であり、活性標準を使用して検量曲線に従い算出される。アッセイの一例は実施例４に記載されている。ヒアルロン酸（ＨＡ）はアルブミンに結合し、アルブミン－ＨＡ複合体は濁りを生じさせる。ＨＡがヒアルロニダーゼによって加水分解されると、アルブミン－ＨＡ複合体の濁度が低下する。したがって、このアッセイは濁度を測定して、ＰＨ２０変異体またはその断片のヒアルロニダーゼ酵素活性を決定する。ヒアルロニダーゼ活性は以下の反応に基づいている。

【0080】

ヒアルロン酸――――＞二糖および単糖＋より小さいヒアルロン酸断片。
ヒアルロニダーゼ１ｍｇ当たりのユニットで表されたヒアルロニダーゼ活性はヒアルロニダーゼの純度、製造プロセスなどによって変動しうる、と当業者は理解している。１つの実施形態においては、２０００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体断片２は約０．０１２ｍｇ／ｍｌであり、４０００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体断片２は約０．０２４ｍｇ／ｍｌであり、５０００Ｕ／ｍｌのＰＨ２０変異体断片２は約０．０３０ｍｇ／ｍｌである。

【0081】

本発明の製剤
本発明は、後記に更に詳細に記載されているとおり、ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントと、ＰＨ２０変異体またはその断片との種々の製剤を含む。例えば、本発明は、（ｉ）抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、およびＰＨ２０変異体またはその断片、（ｉｉ）バッファー（例えば、ヒスチジンまたはアセタート）、（ｉｉｉ）非還元二糖（例えば、スクロースまたはトレハロースのような非還元二糖）、（ｉｖ）非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）、ならびに（ｖ）抗酸化剤（例えば、メチオニン）を含む製剤を含む。

【0082】

１つの態様においては、本発明は、
ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０００９～０．０３５ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのバッファー、
ｄ）スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される約１％～約１０％［重量／体積（ｗ／ｖ）］の非還元二糖、
ｅ）約０．００１％～約０．１０％の非イオン性界面活性剤、ならびに、所望により含まれていてもよい、
ｆ）約１ｍＭ～約３０ｍＭの抗酸化剤
を含む製剤を提供する。

【0083】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１００ｍｇ／ｍＬ～約１８５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０１～０．０４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、
ｅ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩
を含む製剤を提供する。

【0084】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１００ｍｇ／ｍＬ～約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０１２～０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、
ｅ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０、ならびに、
所望により含まれていてもよい、
ｆ）約５ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩
を含む製剤を提供する。

【0085】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0086】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０２４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0087】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0088】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１６０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0089】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０２４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0090】

もう１つの態様においては、本発明は、
ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０もしくはＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約８ｍＭ～約１２ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約５ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約６％～約８％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0091】

本発明の前記態様の１つの実施形態においては、製剤は約５．０～約６．０のｐＨを有する。１つの実施形態においては、製剤は５．３～５．８のｐＨを有する。１つの実施形態においては、製剤は約５．５のｐＨを有する。

【0092】

本発明の前記態様の１つの実施形態においては、バッファーはヒスチジンバッファーである。もう１つの実施形態においては、ヒスチジンバッファーは約５ｍＭ～約２０ｍＭの濃度で存在する。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、ヒスチジンバッファーは約８ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で存在する。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、ヒスチジンバッファーはＬ－ヒスチジンである。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、バッファーは約１０ｍＭのヒスチジンである。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、バッファーは約１０ｍＭのＬ－ヒスチジンである。

【0093】

本発明の前記態様の１つの実施形態においては、抗酸化剤はＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、抗酸化剤は約１ｍＭ～約３０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、抗酸化剤は約１ｍＭ～約２０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である。もう１つの実施形態において、抗酸化剤は、約５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で存在するＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である。もう１つの実施形態においては、Ｌ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩は約１０ｍＭの濃度で存在する。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、Ｌ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩はＬ－メチオニン－ＨＣｌである。

【0094】

本発明の前記態様の１つの実施形態においては、非還元二糖はスクロースまたはトレハロースである。１つの実施形態においては、スクロースまたはトレハロースは約３％～約１０％［重量／体積（ｗ／ｖ）］である。もう１つの実施形態においては、スクロースまたはトレハロースは約６％～約８％［重量／体積（ｗ／ｖ）］である。１つの実施形態においては、スクロースは約７％ｗ／ｖで存在する。

【0095】

本発明の前記態様のもう１つの実施形態においては、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０、６０、４０または２０である。もう１つの実施形態においては、非イオン性界面活性剤は約０．００５～０．１０％ ｗ／ｖで存在する。もう１つの実施形態においては、非イオン性界面活性剤は約０．００５～０．０２％ ｗ／ｖで存在する。もう１つの実施形態においては、非イオン性界面活性剤は、約０．０２％ ｗ／ｖで存在するポリソルベート８０である。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、非イオン界面活性剤は約０．０１％～約０．０４％ ｗ／ｖのポリソルベート８０である。本発明の前記態様の１つの実施形態においては、非イオン界面活性剤は約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０である。

【0096】

抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合性フラグメント
本発明は、ヒトＰＤ－１（例えば、ヒトまたはヒト化抗ＰＤ－１抗体）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントと、ＰＨ２０変異体またはその断片とを含む安定な生物学的製剤、ならびに本発明の製剤の使用方法を提供する。特定の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブおよびニボルマブから選択される。特定の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブである。別の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体はニボルマブである。表２は、典型的な抗ヒトＰＤ－１抗体であるペンブロリズマブおよびニボルマブのアミノ酸配列を示す。

【0097】

幾つかの実施形態においては、本発明の製剤において使用される抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域と、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域とを含む。

【0098】

本発明の１つの実施形態においては、ＣＤＲＬ１は、配列番号１または配列番号１の変異体であり、ＣＤＲＬ２は、配列番号２または配列番号２の変異体であり、ＣＤＲＬ３は、配列番号３または配列番号３の変異体である。

【0099】

１つの実施形態においては、ＣＤＲＨ１は、配列番号６または配列番号６の変異体であり、ＣＤＲＨ２は、配列番号７または配列番号７の変異体であり、ＣＤＲＨ３は、配列番号８または配列番号８の変異体である。

【0100】

１つの実施形態においては、３つの軽鎖ＣＤＲは、配列番号１、配列番号２および配列番号３であり、３つの重鎖ＣＤＲは、配列番号６、配列番号７および配列番号８である。

【0101】

本発明のもう１つの実施形態においては、ＣＤＲＬ１は、配列番号１１または配列番号１１の変異体であり、ＣＤＲＬ２は、配列番号１２または配列番号１２の変異体であり、ＣＤＲＬ３は、配列番号１３または配列番号１３の変異体である。

【0102】

１つの実施形態においては、ＣＤＲＨ１は、配列番号１６または配列番号１６の変異体であり、ＣＤＲＨ２は、配列番号１７または配列番号１７の変異体であり、ＣＤＲＨ３は、配列番号１８または配列番号１８の変異体である。

【0103】

もう１つの実施形態においては、３つの軽鎖ＣＤＲは、配列番号１１、配列番号１２および配列番号１３であり、３つの重鎖ＣＤＲは、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８である。

【0104】

本発明の製剤の抗ＰＤ－１結合性フラグメントは軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態においては、軽鎖可変領域は、配列番号４または配列番号４の変異体を含み、重鎖可変領域は、配列番号９または配列番号９の変異体を含む。他の実施形態においては、軽鎖可変領域は、配列番号１４または配列番号１４の変異体を含み、重鎖可変領域は、配列番号１９または配列番号１９の変異体を含む。そのような実施形態においては、変異体軽鎖または重鎖可変領域配列は、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換を有すること以外は参照配列と同一である。幾つかの実施形態においては、該置換はフレームワーク領域内（すなわち、ＣＤＲの外部）に存在する。幾つかの実施形態においては、アミノ酸置換の１、２、３、４または５個は保存的置換である。

【0105】

本発明の製剤の１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号４を含む又はそれからなる軽鎖可変領域と、配列番号９を含む又はそれからなる重鎖可変領域とを含む。もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号１４を含む又はそれからなる軽鎖可変領域と、配列番号１９を含む又はそれからなる重鎖可変領域とを含む。

【0106】

もう１つの実施形態においては、本発明の製剤は、前記のＶ_ＬドメインまたはＶ_Ｈドメインの１つに対して少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％の配列相同性を有するＶ_Ｌドメインおよび／またはＶ_Ｈドメインを有する、ＰＤ－１への特異的結合を示す抗体または抗原結合性フラグメントを含む。もう１つの実施形態においては、本発明の製剤の抗体または抗原結合性フラグメントは、最大１、２、３、４または５個以上のアミノ酸置換を有するＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを含み、ＰＤ－１への特異的結合を示す。

【0107】

前記実施形態のいずれかにおいては、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する全長抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントでありうる。特定の実施形態においては、全長抗ＰＤ－１抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラスから選択される。好ましくは、抗体はＩｇＧ抗体である。ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３およびＩｇＧ_４を含む、ＩｇＧの任意のアイソタイプが使用されうる。本明細書に記載されているＶ_ＬおよびＶ_Ｈ領域に異なる定常ドメインが付加されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグメント）の特定の意図される使用がエフェクター機能の改変を要する場合、ＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用されうる。
ＩｇＧ１抗体は、長い半減期、およびエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は抗体の全ての用途に望ましいわけではない。そのような場合、例えばＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる。

【0108】

本発明の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号５に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号１０に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む。他の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１５に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号２０に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む。本発明の幾つかの製剤においては、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブ、ペンブロリズマブのバイオシミラー、またはペンブロリズマブ変異体である。本発明の幾つかの製剤においては、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブまたはニボルマブのバイオシミラーである。

【0109】

通常、本発明の抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性フラグメントのアミノ酸配列変異体は、参照抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、重鎖、軽鎖、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌまたはヒト化配列）のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５、９８または９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
配列に関する同一性または相同性は、本明細書においては、配列を整列（アライメント）させ、配列同一性の一部としていずれの保存的置換をも考慮せずに、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一性の割合を得た後で抗ＰＤ－１残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の百分率として定義される。抗体配列へのＮ末端、Ｃ末端または内部の伸長、欠失もしくは挿入はいずれも、配列の同一性または相同性に影響を及ぼさないと解釈されるものとする。

【0110】

配列同一性は、２つの配列が最適にアライメントされた場合に２つのポリペプチドのアミノ酸が同等位置において同一である度合を意味する。配列同一性は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定可能であり、この場合、該アルゴリズムのパラメーターは、それぞれの参照配列の長さ全体にわたってそれぞれの配列間で最大マッチを与えるように選択される。以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するものである：ＢＬＡＳＴ ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６－２７２；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら，（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１－１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ら，（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９－６５６；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．ら，（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９－１６３；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら，（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７－７０；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ ＳＣＯＲＩＮＧ ＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら，“Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”．Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３４５－３５２，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ”．Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．“Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３５３－３５８，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５－５６５；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら，（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３：６６－７０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．ら，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５－１０９１９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，（１９９３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０－３００；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら，（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－２２６８；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８７７；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら，（１９９４）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２－２０３９；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編），（１９９７）ｐｐ．１－１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。

【0111】

同様に、本明細書における組成物および方法においては、いずれかのクラスの軽鎖が使用されうる。特に、カッパ、ラムダまたはそれらの変異体が本組成物および方法において有用である。

【0112】

本発明における使用が想定される追加的な抗ＰＤ－１抗体には以下のものが含まれる：ＭＥＤＩ０６８０（米国特許第８６０９０８９号）、ＢＧＢ－Ａ３１７（米国特許公開第２０１５／００７９１０９号）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（ＳＨＲ－１２１０）（ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ２０１５／０８５８４７）、ＲＥＧＮ－２８１０（ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ２０１５／１１２８００）、ＰＤＲ００１（ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ２０１５／１１２９００）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ０１１）（ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ２０１４／１７９６６４）およびＳＴＩ－１１１０（ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ２０１４／１７９６６４）、ヒト化抗体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７（これらはＷＯ２０１４／１９４３０２に記載されている）、ならびにＡＭＰ－５１４（これはＭｅｄＩｍｍｕｎｅによって現在開発中である）（ここにおける刊行物の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）、セミプリマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、ならびにトリパリマブ。

【0113】

【表2】

【0114】

本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約９０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１８５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。他の実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６５ｍｇ／ｍＬ、約１６７ｍｇ／ｍＬ、約１８５ｍｇ／ｍＬおよび約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0115】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１６５～約１７０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0116】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１６５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0117】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１３０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0118】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0119】

１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0120】

もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブ）は、約７５ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、または約２５ｍｇ／ｍＬから２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0121】

ＰＨ２０変異体およびその断片
１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、Ｔ３４１、Ｌ３４２、Ｓ３４３、Ｉ３４４およびＮ３６３からなる群から選択される１以上の位置にアミノ酸残基置換を更に含む。１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、Ｔ３４１Ａ、Ｔ３４１Ｃ、Ｔ３４１Ｄ、Ｔ３４１Ｇ、Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４ＮおよびＮ３６３Ｇからなる群から選択される１以上のアミノ酸残基置換を更に含む。

【0122】

ＰＨ２０変異体またはその断片の１つの実施形態においては、アミノ酸残基置換は以下のアミノ酸残基置換群から選択される：
（ａ）Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｂ）Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｃ）Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９Ｄ、Ｉ３６１ＴおよびＮ３６３Ｇ；
（ｄ）Ｔ３４１Ｇ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｅ）Ｔ３４１Ａ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｆ）Ｔ３４１Ｃ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｇ）Ｔ３４１Ｄ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；
（ｈ）Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ；ならびに
（ｉ）Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔ。

【0123】

ＰＨ２０変異体またはその断片の１つの実施形態においては、アミノ酸残基置換は、Ｔ３４１Ｓ、Ｌ３４２Ｗ、Ｓ３４３Ｅ、Ｉ３４４Ｎ、Ｍ３４５Ｔ、Ｓ３４７Ｔ、Ｍ３４８Ｋ、Ｋ３４９Ｅ、Ｌ３５２Ｑ、Ｌ３５３Ａ、Ｌ３５４Ｉ、Ｄ３５５Ｋ、Ｎ３５６Ｅ、Ｅ３５９ＤおよびＩ３６１Ｔからなる。

【0124】

ＰＨ２０変異体断片の前記実施形態の１つの態様においては、ＰＨ２０変異体断片は、配列番号２１のアミノ酸残基１～３６、１～３７、１～３８、１～３９、１～４０、１～４１または１～４２のＮ末端欠失を有する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体断片は、配列番号２１のアミノ酸残基１～３６のＮ末端欠失を有する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体断片は、配列番号２１のアミノ酸残基１～３７のＮ末端欠失を有する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体断片は、配列番号２１のアミノ酸残基１～３８のＮ末端欠失を有する。

【0125】

ＰＨ２０変異体断片の前記実施形態のもう１つの態様においては、ＰＨ２０変異体断片は、アミノ酸残基４５５～５０９、４５６～５０９、４５７～５０９、４５８～５０９、４５９～５０９、４６０～５０９、４６１～５０９、４６２～５０９、４６３～５０９、４６４～５０９、４６５～５０９、４６６～５０９、４６７～５０９、４６８～５０９、４６９～５０９、４７０～５０９、４７１～５０９、４７２～５０９、４７３～５０９、４７４～５０９、４７５～５０９、４７６～５０９、４７７～５０９、４７８～５０９、４７９～５０９、４８０～５０９、４８１～５０９、４８２～５０９、４８３～５０９、４８４～５０９、４８５～５０９、４８６～５０９、４８７～５０９、４８８～５０９、４８９～５０９、４９０～５０９、４９１～５０９、４９２～５０９、４９３～５０９、４９４～５０９、４９５～５０９、４９６～５０９、４９７～５０９、４９８～５０９、４９９～５０９、５００～５０９、５０１～５０９、５０２～５０９、５０３～５０９、５０４～５０９、５０５～５０９、５０６～５０９、５０７～５０９、５０８～５０９、または５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失を有する。１つの実施形態においては、そのＰＨ２０変異体断片は、アミノ酸残基４５５～５０９、４５８～５０９、４６１～５０９、４６４～５０９、４６５～５０９、４６６～５０９、４６７～５０９、４６８～５０９、４７０～５０９、４７１～５０９、４７２～５０９、４７３～５０９、４７４～５０９、４７５～５０９、４７６～５０９、４７８～５０９、４８０～５０９、４８２～５０９、４８４～５０９、４８６～５０９、４８８～５０９、または４９０～５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失を有する。
１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体断片は、アミノ酸残基４６８～５０９（ここで、番号付けは配列番号２１に基づく）のＣ末端欠失を有する。

【0126】

１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体断片は、配列番号２２または２３に示されているアミノ酸配列からなる。他の実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、ＥＰ３６３６７５２の表１１に開示されている配列のいずれかである。

【0127】

【表3】

【0128】

本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、約０．００６ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００９ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０１２ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０１８ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０２４ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０３０ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０３６ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００６～０．０３６ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０１２～０．０３０ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００６～０．０３０ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００６～０．０１２ｍｇ／ｍＬである。

【0129】

本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、約１０００Ｕ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約１５００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約２０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約３０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約４０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約５０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約６０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約１０００～６０００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約２０００～５０００Ｕ／ｍｌである。

【0130】

本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、約０．０００９ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００１８ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００３６ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．００４５ｍｇ／ｍＬである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約０．０００９～０．０３０ｍｇ／ｍＬである。

【0131】

本発明の製剤の幾つかの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片は、約１５０Ｕ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約３００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約６００Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約７５０Ｕ／ｍｌである。もう１つの実施形態においては、ＰＨ２０変異体またはその断片の濃度は、約１５０～５０００Ｕ／ｍｌである。

【0132】

製剤賦形剤
本発明の実施形態においては、非還元二糖はスクロースである。追加的な実施形態においては、非還元二糖はトレハロースである。

【0133】

幾つかの実施形態においては、非還元二糖は、約６％～約８％ｗ／ｖのスクロースである。幾つかの実施形態においては、非還元二糖は、約６％～約８％ｗ／ｖのトレハロースである。

【0134】

更にもう１つの実施形態においては、スクロース、トレハロースは、約６％ｗ／ｖ、約６．２５％ｗ／ｖ、約６．５％ｗ／ｖ、約６．７５％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約７．２５％ｗ／ｖ、約７．５％ｗ／ｖ、約７．７５％ｗ／ｖまたは約８％ｗ／ｖの量で存在する。

【0135】

前記の量／濃度の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、およびＰＨ２０変異体またはその断片、および非還元二糖に加えて、本発明の製剤は、バッファーも含みうる。幾つかの実施形態においては、バッファーは、約５ｍＭ～約２０ｍＭの量で存在する。もう１つの実施形態においては、バッファーは、約５．０～約６．０の範囲のｐＨを有する。更にもう１つの実施形態においては、ｐＨは、約５．３～約５．８である。他の実施形態においては、ｐＨは、約６．０～約６．４である。

【0136】

特定の実施形態においては、バッファーは、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．２または約６．４のｐＨを有する。本発明の特定の実施形態においては、バッファーは、約５．０～約６．０のｐＨのヒスチジンまたはアセタートである。幾つかの実施形態においては、バッファーは、Ｌ－ヒスチジンバッファーである。製剤が凍結乾燥される実施形態においては、アセタートバッファー系は凍結乾燥プロセスに適合しないため、バッファーはアセタートではないことが好ましい。

【0137】

「ｐＨ５．５～６．０のｐＨ」のようにｐＨ値の範囲が記載されている場合、該範囲は、記載されている値を含むと意図される。特に示されていない限り、凍結乾燥製剤に関しては、ｐＨは、本発明の凍結乾燥製剤の再構成後のｐＨを意味する。ｐＨは、典型的には、標準的なガラスバルブｐＨメーターを使用して２５℃で測定される。本明細書中で用いる「ｐＨ Ｘのヒスチジンバッファー」を含む溶液は、ヒスチジンバッファーを含むｐＨ Ｘの溶液を意味し、すなわち、ｐＨは溶液のｐＨを意味すると意図される。

【0138】

前記の量／濃度の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントおよびＰＨ２０変異体またはその断片、非還元二糖およびバッファーに加えて、本発明の製剤は、抗酸化剤をも含みうる。本発明の実施形態においては、抗酸化剤はメチオニンである。本発明の実施形態においては、抗酸化剤はＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩である。
もう１つの実施形態においては、メチオニンはＬ－メチオニンである。他の実施形態においては、抗酸化剤はＬ－メチオニンＨＣｌである。

【0139】

幾つかの実施形態においては、抗酸化剤（例えば、Ｌ－メチオニン）は、本発明の製剤中に１ｍＭ～約２０ｍＭの量で存在する。もう１つの実施形態においては、抗酸化剤は、約５ｍＭ～約２０ｍＭの量で存在する。もう１つの実施形態においては、抗酸化剤は、約５ｍＭ～約１５ｍＭで存在する。もう１つの実施形態においては、抗酸化剤は、約５ｍＭ～約１０ｍＭで存在する。追加的な実施形態においては、抗酸化剤は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭまたは約２０ｍＭの量で存在する。

【0140】

前記の量／濃度の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ＰＨ２０変異体またはその断片、非還元二糖、バッファーおよび抗酸化剤に加えて、本発明の製剤は、界面活性剤をも含みうる。本発明の製剤において有用でありうる界面活性剤には、非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル［商品名Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（Ｕｎｉｑｕｅｍａ Ａｍｅｒｉｃａｓ ＬＬＣ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）として販売されているポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）］、例えばポリソルベート２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミタート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレンソルビタンモノステアラート）およびポリソルベート８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0141】

本発明の製剤中に含まれる界面活性剤の量は、所望の機能をもたらすのに十分な量、すなわち、製剤中で活性医薬成分（すなわち、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、またはＰＨ２０変異体もしくはその断片）を安定化するのに必要な最小量である。典型的には、界面活性剤は、約０．００５％～約０．１％ｗ／ｖの濃度で存在する。
本発明のこの態様の幾つかの実施形態においては、界面活性剤は、製剤中に約０．０１％～約０．０４％、約０．０１％～約０．０３％、約０．０１％～約０．０２％、約０．０１５％～約０．０４％、約０．０１５％～約０．０３％、約０．０１５％～約０．０２％、約０．０２％～約０．０４％、約０．０２％～約０．０３５％、または約０．０２％～約０．０３％の量で存在する。特定の実施形態においては、界面活性剤は、約０．０２％の量で存在する。もう１つの実施形態においては、界面活性剤は、約０．０１％、約０．０１５％、約０．０２５％、約０．０３％、約０．０３５％または約０．０４％の量で存在する。

【0142】

本発明の典型的な実施形態においては、界面活性剤は、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。好ましい実施形態においては、界面活性剤はポリソルベート８０である。

【0143】

特定の実施形態においては、本発明の製剤は、約０．０１％～約０．０４％のＰＳ８０を含む。他の実施形態においては、本発明の製剤は、約０．００８％、約０．０１％、約０．０１５％、約０．０２％、約０．０２５％、約０．０３％、約０．０３５％、約０．０４％または約０．０４５％の量のＰＳ８０を含む。特定の実施形態においては、本発明の製剤は、約０．０２％のＰＳ８０を含む。

【0144】

本発明はまた、製剤がガラスバイアルまたは注射器（例えば、注射器）内に含有されている、本明細書に記載されている製剤を提供する。１つの態様においては、製剤は皮下投与用である。１つの実施形態においては、製剤の粘度は、５℃で７～９０ｃＰの範囲である。もう１つの実施形態においては、製剤の粘度は、５℃で７～３０ｃＰの範囲である。
もう１つの実施形態においては、製剤の粘度は、２０℃で７～５０ｃＰの範囲である。もう１つの実施形態においては、製剤の粘度は、２０℃で７～２０ｃＰの範囲である。１つの実施形態においては、粘度は、Ｇｒａｂｎｅｒ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓによるＭｉｎｉＶｉｓＩＩ粘度計を使用するＵＳＰ＜９１３＞技術を用いて測定される。

【0145】

追加的な実施形態においては、本発明は、製剤を２～８℃で３または６ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、高分子量種の割合（％）が１％以下または０．５％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0146】

追加的な実施形態においては、本発明は、製剤を２５℃で６、３または１ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、高分子量種の割合（％）が２％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0147】

追加的な実施形態においては、本発明は、製剤を４０℃で３ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、高分子量種の割合（％）が４％以下または５．０％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0148】

追加的な実施形態においては、本発明は、製剤を４０℃で６ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、高分子量種の割合（％）が１１％以下または１２．０％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0149】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を５℃で１、３または６ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、単量体の割合（％）が９９．５％以上である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0150】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を２５℃で１、３または６ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、単量体の割合（％）が９８％以上である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0151】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を４０℃で３ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ－ＳＥＣによる測定で、単量体の割合（％）が９５％以上である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0152】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を５℃で１、３または６ヶ月間貯蔵した後、ＩＥＸによる測定で、酸変異体の割合（％）が２０％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0153】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を２５℃で３ヶ月間貯蔵した後、ＩＥＸによる測定で、酸変異体の割合（％）が２４％以下または２５％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0154】

他の実施形態においては、本発明は、製剤を４０℃で３ヶ月間貯蔵した後、ＩＥＸによる測定で、酸変異体の割合（％）が５５％以下である、本明細書に記載されている製剤を提供する。

【0155】

本発明の特定の態様および実施形態
１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１００～約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
ｂ）約０．０１２～０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0156】

１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0157】

１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０２４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0158】

もう１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１３０ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0159】

もう１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０１２ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0160】

もう１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０２４ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0161】

もう１つの実施形態においては、本発明は、
ａ）約１６５ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント、 ｂ）約０．０３０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片、
ｃ）約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、
ｄ）所望により含まれていてもよい約１０ｍＭのＬ－メチオニンまたはその薬学的に許容される塩、
ｅ）約７％ ｗ／ｖのスクロース、ならびに
ｆ）約０．０２％ ｗ／ｖのポリソルベート８０
を含む製剤を提供する。

【0162】

本明細書に記載されている特定の態様および実施形態のいずれかにおいては、任意の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメント（すなわち、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗体または抗原結合性フラグメント、例えばペンブロリズマブまたはその抗原結合性フラグメント）が使用されうる。特定の実施形態においては、本明細書に記載されている抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの１つ、例えば、題名「抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合性フラグメント」の節に記載されているものが使用される。

【0163】

本明細書に記載されている特定の態様および実施形態のいずれかにおいては、任意のＰＨ２０変異体またはその断片が使用されうる。特定の実施形態においては、例えば、題名「ＰＨ２０変異体またはその断片」の節に記載されているＰＨ２０変異体またはその断片の１つが使用される。

【0164】

本発明の幾つかの実施形態においては、本明細書に記載されている製剤のいずれかは水溶液である。別の実施形態においては、本発明は、後記で更に詳細に記載されているとおり、水性製剤を凍結乾燥して本発明の再構成製剤を得ることにより製造される凍結乾燥製剤を提供する。

【0165】

凍結乾燥医薬組成物
治療用タンパク質の凍結乾燥製剤は幾つかの利点をもたらす。凍結乾燥製剤は、一般に、溶液製剤より良好な化学的安定性をもたらし、したがって、半減期の増加をもたらす。
また、凍結乾燥製剤は、投与経路または投与量のような臨床的要因に応じて種々の濃度で再構成されうる。例えば、凍結乾燥製剤は、皮下投与に必要な場合には高濃度（すなわち、小容量）で、あるいは静脈内投与の場合にはより低い濃度で再構成されうる。また、個々の対象に高用量が必要な場合、特に、注射体積を最小にしなければならない皮下投与の場合には、高濃度が必要となりうる。１つのそのような凍結乾燥抗体製剤は米国特許第６，２６７，９５８号に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。別の治療用タンパク質の凍結乾燥製剤は米国特許第７，２４７，７０７号に開示されており、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。

【0166】

典型的には、医薬品（ＤＰ）の高濃度での再構成を想定して、すなわち、小さな体積の水における再構成を意図して、凍結乾燥製剤は製造される。ついで、より低い濃度へとＤＰを希釈するために、水または等張バッファーでの後続希釈が容易に行われうる。典型的には、例えば皮下投与用に高いＤＰ濃度で再構成された場合にほぼ等張性の製剤を与えるレベルの賦形剤が本発明の凍結乾燥製剤に製剤される。より低いＤＰ濃度を得るための、より大きな体積の水での再構成は、再構成溶液の張度を必然的に低下させるが、そのような低下は、非皮下投与、例えば静脈内投与においてはほとんど意味がないかもしれない。
より低いＤＰ濃度において等張性が望ましい場合には、凍結乾燥粉末を標準的な低容量の水で再構成し、ついで、等張性希釈剤、例えば０．９％ 塩化ナトリウムで更に希釈することが可能である。

【0167】

本発明の１つの実施形態においては、ヒト化抗ＰＤ－１抗体（またはその抗原結合性フラグメント）とＰＨ２０変異体またはその断片とを含む製剤は、皮下投与用の再構成および使用のための凍結乾燥粉末として製剤化される。特定の実施形態においては、凍結乾燥製剤は使用前に注射用滅菌水で再構成される。所望により、再構成溶液は、滅菌ＩＶ容器内の０．９％ 塩化ナトリウム注射液ＵＳＰで無菌的に希釈されうる。幾つかの実施形態においては、再構成製剤の目標ｐＨは５．５±０．５である。種々の実施形態においては、本発明の凍結乾燥製剤は、抗ＰＤ－１抗体を例えば約２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、１００、１２５、１３０、１５０、１６５、１７５、１８５または２００ｍｇ／ｍＬのような高濃度に再構成することを可能にする。

【0168】

凍結乾燥製剤は、定義上、本質的に乾燥しており、したがって、それを記述するのに濃度の概念は有用ではない。凍結乾燥製剤を単位用量バイアル内の成分の重量に関して記述することはより有用であるが、それは用量またはバイアルサイズによって変動するため、問題である。本発明の凍結乾燥製剤を記述する際には、同じサンプル（例えば、バイアル）内の原薬（ＤＳ）の重量に対する成分の重量の比として成分の量を表すことが有用である。この比は百分率として表されうる。そのような比は、バイアルサイズ、投与量および再構成法には無関係に、本発明の凍結乾燥製剤の固有の特性を反映する。

【0169】

他の態様においては、抗ヒトＰＤ－１抗体または抗原結合性フラグメントとＰＨ２０変異体またはその断片との凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤を調製するために使用される凍結乾燥前溶液、例えば凍結乾燥前溶液に関して定義される。１つの実施形態においては、凍結乾燥前溶液は、約２５～２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体またはその抗原結合性フラグメントと、０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体またはその断片とを含む。そのような凍結乾燥前溶液は、ｐＨ４．４～６．０、例えば、好ましくはｐＨ約５．０～６．０またはｐＨ約５．５でありうる。

【0170】

更に他の実施形態においては、抗ヒトＰＤ－１抗体または抗原結合性フラグメントとＰＨ２０変異体またはその断片との凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤から得られる再構成溶液に関して定義される。本発明は、凍結乾燥製剤から再構成される液体製剤を提供する。再構成溶液は、約２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０、１００、１２０、１３０、１５０、１６５、１６７、１８５または２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントと、０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌ（１５０、３００、６００、９００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００または５０００Ｕ／ｍｌ）のＰＨ２０変異体またはその断片とを含みうる。そのような再構成溶液は、約ｐＨ５．５、またはｐＨ約５．０～約６．０の範囲でありうる。

【0171】

本発明の凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前溶液の凍結乾燥（冷凍乾燥）により形成される。
凍結乾燥は、製剤を凍結し、ついで一次乾燥（初乾）に適した温度で水を昇華させることにより達成される。この条件下、製品温度は、製剤の共晶点または崩壊温度より低い。典型的には、一次乾燥の棚温度は、典型的には約５０～２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で約－３０～２５℃（ただし、一次乾燥中に製品は凍結したままである）の範囲である。サンプルを収容する容器（例えば、ガラスバイアル）の製剤、サイズおよびタイプならびに液体の体積が乾燥に要する時間を決定し、これは数時間～数日間（例えば、４０～６０時間）の範囲でありうる。主に容器のタイプおよびサイズならびに使用されるタンパク質のタイプに応じて、約０～４０℃で二次乾燥段階が行われうる。二次乾燥時間は、製品中の望ましい残留水分レベルによって決まり、典型的には、少なくとも約５時間を要する。典型的には、凍結乾燥製剤の水分含有量は約５％未満であり、好ましくは約３％未満である。圧力は、一次乾燥工程中に用いられる圧力と同じでありうる。凍結乾燥条件は製剤およびバイアルサイズによって異なりうる。

【0172】

幾つかの場合には、移し替えの工程を回避するために、タンパク質の再構成が行われる容器内でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましいかもしれない。この場合の容器は、例えば、３、５、１０、２０、５０または１００ｃｃのバイアルでありうる。

【0173】

再構成は、一般に、完全な水和を確保するために約２５℃の温度で行われるが、所望により他の温度も用いられうる。再構成に要する時間は、例えば、希釈剤のタイプ、賦形剤の量およびタンパク質に左右される。典型的な希釈剤には、滅菌水、静菌性注射水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。

【0174】

液体医薬組成物
液体抗体製剤は、原薬（例えば、抗ヒト化ＰＤ－１および／またはＰＨ２０変異体もしくはその断片）の液体形態（例えば、水性医薬製剤中のペンブロリズマブまたはＰＨ２０変異体断片１もしくは２）を得、それを所望のバッファー中にバッファー交換することにより製造されうる。この実施形態においては凍結乾燥工程は存在しない。最終バッファー中の原薬は所望の濃度に濃縮される。スクロース、メチオニンおよびポリソルベート８０のような賦形剤が原薬に添加され、それは、適切なバッファーを使用して最終タンパク質濃度に希釈される。最終的に製剤化された原薬は、例えば０．２２μｍフィルターを使用して濾過され、最終容器（例えば、ガラスバイアルまたはシリンジ）内に充填される。そのような液体製剤は、１０ｍＭ ヒスチジン（ｐＨ５．５）、７％ スクロース、０．０２％ ポリソルベート８０、２５～２００ｍｇ／ｍＬ ペンブロリズマブおよび０．０００９～０．０５０ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体断片１または２を含む最終液体製剤によって例示される。

【0175】

使用方法
本発明はまた、本発明の製剤のいずれか、すなわち、本明細書（本明細書中の「本発明の特定の態様および実施形態」の節を含む）に記載されているいずれかの製剤の有効量を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法に関する。この方法の幾つかの実施形態においては、製剤は、皮下投与により対象に投与される。

【0176】

本発明の方法のいずれかにおいては、癌は、メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、メルケル細胞癌、有棘細胞癌、リンパ腫、腎癌、中皮腫、卵巣癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、甲状腺癌、唾液腺癌、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、膵臓癌、結腸癌、肝臓癌、甲状腺癌、膠芽腫、神経膠腫および他の腫瘍性悪性疾患からなる群から選択されうる。

【0177】

幾つかの実施形態においては、肺癌は非小細胞肺癌である。

【0178】

別の実施形態においては、肺癌は小細胞肺癌である。

【0179】

幾つかの実施形態においては、リンパ腫はホジキンリンパ腫である。

【0180】

他の実施形態においては、リンパ腫は非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態においては、リンパ腫は縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。幾つかの実施形態においては、リンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。

【0181】

幾つかの実施形態においては、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。

【0182】

他の実施形態においては、乳癌はＥＲ＋／ＨＥＲ２－ 乳癌である。

【0183】

幾つかの実施形態においては、膀胱癌は尿路上皮癌である。

【0184】

幾つかの実施形態においては、頭頸部癌は鼻咽頭癌である。幾つかの実施形態においては、癌は甲状腺癌である。他の実施形態においては、癌は唾液腺癌である。他の実施形態においては、癌は頭頸部の扁平上皮癌である。

【0185】

幾つかの実施形態においては、癌は、高レベルのマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を伴う転移性結腸直腸癌である。

【0186】

幾つかの実施形態においては、癌は、高レベルのマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を伴う固形腫瘍である。

【0187】

幾つかの実施形態においては、癌は、高い突然変異負荷（腫瘍遺伝子変異量）を伴う固形腫瘍である。

【0188】

幾つかの実施形態においては、癌は、メラノーマ、非小細胞肺癌、再発性または難治性古典的ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮癌、食道癌、胃癌、ＤＬＢＣＬおよび肝細胞癌からなる群から選択される。

【0189】

前記治療方法の他の実施形態においては、癌はヘム悪性疾患である。特定の実施形態においては、ヘム悪性疾患は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ＤＬＢＣＬ、ＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、原発性縦隔大細胞Ｂリンパ腫、Ｔ細胞／組織球リッチ大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄細胞白血病－１タンパク質（Ｍｃｌ－１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。

【0190】

生検または外科的物質における腫瘍浸潤リンパ球の存在に関連した無病生存率および全生存率の改善を示す悪性疾患、例えばメラノーマ、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌、胃／食道癌、乳癌、膵臓癌および卵巣癌が、本明細書に記載されている方法および治療に含まれる。そのような癌亜型は、Ｔリンパ球による免疫制御を受けやすいことが公知である。また、本明細書に記載されている抗体を使用して成長が抑制されうる難治性または再発性悪性疾患も含まれる。

【0191】

幾つかの実施形態においては、本発明の製剤は、卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、食道癌およびメラノーマを含む、試験組織サンプルにおけるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２の発現の上昇により特徴づけられる癌を有する対象に投与される。抗ＰＤ－１抗体、例えばヒト化抗ＰＤ－１抗体ペンブロリズマブでの治療から利益が得られうる追加的な癌には、例えばカポジ肉腫、肝臓癌、鼻咽頭癌、リンパ腫、子宮頸癌、外陰癌、肛門癌、陰茎癌および口腔癌に因果関係があることが公知であるウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルスクラスＡ、ＢおよびＣ、エプスタインバーウイルス、ヒトパピローマウイルスの持続感染に関連した癌が含まれる。

【0192】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明のいずれかの製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における癌の治療方法を含む。

【0193】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明のいずれかの製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における切除不能または転移性メラノーマの治療方法を含む。

【0194】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は、高いＰＤ－Ｌ１発現［腫瘍比率スコア（Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ）（ＴＰＳ）≧５０％）］を有する腫瘍を有し、白金含有化学療法で過去に治療されなかった。他の実施形態においては、患者は、ＰＤ－Ｌ１発現（ＴＰＳ≧１％）を有する腫瘍を有し、白金含有化学療法で過去に治療された。更に他の実施形態においては、患者は、ＰＤ－Ｌ１発現（ＴＰＳ≧１％）を有する腫瘍を有し、白金含有化学療法で過去に治療されなかった。特定の実施形態においては、患者は、白金含有化学療法を受けた際または後に疾患進行を示した。

【0195】

特定の実施形態においては、ＰＤ－Ｌ１ ＴＰＳは、ＦＤＡ承認試験により決定される。

【0196】

特定の実施形態においては、患者の腫瘍は、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム異常を有さない。

【0197】

特定の実施形態においては、患者の腫瘍は、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム異常を有し、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントの投与の前にＥＧＦＲまたはＡＬＫ異常に対する治療を受けた際または後に疾患進行を示した。

【0198】

１つの実施形態においては、本発明は、（１）本発明の製剤を患者に投与すること、ならびに（２）ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）およびカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）を患者に投与することを含む、ヒト患者における転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は、本発明の製剤、ペメトレキセドおよびカルボプラチンでの併用治療レジメンを開始する前に抗癌治療薬で過去に治療されなかった。

【0199】

特定の実施形態においては、患者は非扁平上皮非小細胞肺癌を有する。

【0200】

特定の実施形態においては、ペメトレキセドを５００ｍｇ／ｍ^２の量で患者に投与する。従属実施形態においては、ペメトレキセドを２１日ごとに静脈内注入により患者に投与する。特定の実施形態においては、注入時間は約１０分間である。

【0201】

ペメトレキセドと組合された本発明の製剤で患者を治療する本発明の実施形態においては、本発明は、患者へのペメトレキセドの投与の約７日前から、１日１回、約４００μｇ～約１０００μｇの葉酸を患者に投与し、患者へのペメトレキセドの最終用量の投与の約２１日後までそれを継続することを更に含む。特定の実施形態においては、葉酸を経口投与する。幾つかの実施形態においては、本発明は、ペメトレキセドの初回投与の約１週間前およびペメトレキセド投与の約３サイクルごと（すなわち、約９週間ごと）に、約１ｍｇのビタミンＢ_１２を患者に投与することを更に含む。特定の実施形態においては、ビタミンＢ_１２を筋肉内投与する。特定の実施形態においては、本発明は、ペメトレキセド投与の前日、当日および翌日に、約４ｍｇのデキサメタゾンを患者に１日２回投与することを更に含む。特定の実施形態においては、デキサメタゾンを経口投与する。

【0202】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明のいずれかの製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性または転移性頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は、白金含有化学療法で過去に治療された。
特定の実施形態においては、患者は、白金含有化学療法の際または後に疾患進行を示した。特定の実施形態においては、患者の腫瘍はＰＤ－Ｌ１を発現する［複合陽性スコア（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｃｏｒｅ）（ＣＰＳ）≧１］。

【0203】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における難治性古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は、ｃＨＬに対する一連の３以上の治療の後で再発を示した。特定の実施形態においては、患者は成人患者である。別の実施形態においては、患者は小児患者である。

【0204】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における局所進行性または転移性尿路上皮癌の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者はシスプラチン含有化学療法に適さない。特定の実施形態においては、患者は、白金含有化学療法の途中もしくは後で、または白金含有化学療法とのネオアジュバントもしくはアジュバント治療の１２ヶ月以内に疾患進行を示す。特定の実施形態においては、患者の腫瘍はＰＤ－Ｌ１を発現する［複合陽性スコア（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｃｏｒｅ）（ＣＰＳ）≧１］。

【0205】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における切除不能または転移性マイクロサテライト不安定性－高（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損固形腫瘍の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は事前の抗癌治療の後で疾患進行を示した。

【0206】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における切除不能または転移性マイクロサテライト不安定性－高（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損結腸直腸癌の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者は、フルオロピリミジン、オキサリプラチンおよびイリノテカンでの事前の治療の後で疾患進行を示した。

【0207】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性局所進行性または転移性胃癌の治療方法を含む。

【0208】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性局所進行性または転移性胃食道接合部腺癌の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者の腫瘍は、ＰＤ－Ｌ１を発現する［複合陽性スコア（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｃｏｒｅ）（ＣＰＳ）≧１］。特定の実施形態においては、患者は、フルオロピリミジンおよび白金含有化学療法を含む一連の２以上の事前の治療の際または後に疾患進行を示す。特定の実施形態においては、患者は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ標的化療法を含む一連の２以上の事前の治療の際または後に疾患進行を示す。

【0209】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性局所進行性または転移性子宮頸癌の治療方法を含む。特定の実施形態においては、患者の腫瘍は、ＰＤ－Ｌ１を発現する［複合陽性スコア（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｃｏｒｅ）（ＣＰＳ）≧１］。

【0210】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における肝細胞癌の治療方法を含む。１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性局所進行性または転移性メルケル細胞癌の治療方法を含む。１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における再発性または転移性有棘細胞癌の治療方法を含む。

【0211】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤およびアキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）を患者に投与することを含む、ヒト患者における進行性腎細胞癌の治療方法を含む。１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤およびレンバチニブ（ｌｅｎｖａｔｉｎｉｂ）を患者に投与することを含む、ヒト患者における進行性子宮内膜癌の治療方法を含む。１つの実施形態においては、子宮内膜癌はＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲではない。

【0212】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における癌の治療方法を含み、患者は、メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、乳癌、胃腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌、リンパ腫、腎臓癌、中皮腫、卵巣癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌および唾液腺癌からなる群から選択される癌を有する。

【0213】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における小細胞肺癌の治療方法を含む。

【0214】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における非ホジキンリンパ腫の治療方法を含む。特定の実施形態においては、非ホジキンリンパ腫は縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。特定の実施形態においては、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。

【0215】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における乳癌の治療方法を含む。特定の実施形態においては、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。特定の実施形態においては、乳癌は、ＥＲ＋／ＨＥＲ２－ 乳癌である。

【0216】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における鼻咽頭癌の治療方法を含む。

【0217】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における甲状腺癌の治療方法を含む。

【0218】

１つの実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト患者における唾液腺癌の治療方法を含む。

【0219】

アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体または抗体フラグメントは、感染および感染症を予防または治療するためにも使用されうる。したがって、本発明は、本発明の製剤の有効量を対象に投与することを含む、哺乳動物対象における慢性感染の治療方法を提供する。この方法の幾つかの特定の実施形態においては、製剤を皮下投与により対象に投与する。

【0220】

これらの物質は、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激するために、単独で、またはワクチンと組合せて使用されうる。抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルスクラスＡ、ＢおよびＣ、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルスおよびヘルペスウイルス（これらに限定されるものではない）を含む、ヒトに対して感染性であるウイルスに対する免疫応答を刺激するために使用されうる。アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体または抗体フラグメントは、細菌または真菌寄生生物および他の病原体による感染に対する免疫応答を刺激するために使用されうる。Ｂ型およびＣ型肝炎ならびにＨＩＶによるウイルス感染は、慢性ウイルス感染と見なされるものの１つである。

【0221】

本発明の製剤は、１以上の「追加的な治療用物質」と組合せて患者に投与されうる。追加的な治療用物質は、生物療法剤（ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ－４０Ｌ、ＯＸ－４０、４－ＩＢＢおよびＩＣＯＳに対する抗体を含むが、これらに限定されるものではない）、増殖抑制物質、免疫原性物質［例えば、弱毒化癌細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞（例えば、腫瘍由来抗原または核酸でパルスされた樹状細胞）、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮα２、ＧＭ－ＣＳＦ）、および免疫刺激性サイトカイン、例えばＧＭ－ＣＳＦ（これに限定されるものではない）をコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞］でありうる。

【0222】

前記のとおり、本発明の方法の幾つかの実施形態においては、該方法は、追加的な治療用物質を投与することを更に含む。特定の実施形態においては、追加的な治療用物質は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、追加的な治療用物質は、ＩＬ－１２を発現するニューカッスル病ウイルスベクターである。もう１つの実施形態においては、追加的な治療用物質はジナシクリブ（ｄｉｎａｃｉｃｌｉｂ）である。更に他の実施形態においては、追加的な治療用物質はＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態においては、追加的な治療用物質はコクサッキーウイルスＣＶＡ２である。

【0223】

追加的な治療用物質のための適切な投与経路には、例えば非経口送達、例えば筋肉内、皮下、および髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内が含まれうる。薬物は、種々の通常の方法で、例えば腹腔内、非経口、動脈内または静脈内注射により投与されうる。

【0224】

追加的な治療用物質の投与量の選択は、該物質の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、該物質の免疫原性、および治療される個体における標的細胞、組織または器官の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。追加的な治療用物質の投与量は、許容レベルの副作用をもたらす量であるべきである。したがって、各追加的治療用物質（例えば、生物療法または化学療法剤）の用量および投与頻度は、部分的には、個々の治療用物質、治療される癌の重症度、および患者の特性に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際の指針が利用可能である。例えば、以下のものを参照されたい：Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；第５７版（２００２年１１月）。適切な投与レジメンの決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で公知である若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされることが可能であり、例えば、患者の臨床履歴（例えば、過去の治療）、治療される癌のタイプおよび病期、ならびに該併用療法における治療用物質の１以上に対する応答のバイオマーカーに左右される。

【0225】

追加的な治療用物質のための薬学的に許容される担体または賦形剤の選択を容易にするための種々の参考文献が利用可能である。例えば、以下のものを参照されたい：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）；Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．。

【0226】

医薬抗体製剤は、連続注入により、または例えば１日間隔、週１～７回、１週間隔、２週間隔、３週間隔、毎月、隔月などの間隔の投与により投与されうる。好ましい投与プロトコルは、有意な望ましくない副作用を回避する最大用量または投与頻度を含むものである。合計週用量は、一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ体重以上である。例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－１４４を参照されたい。小分子治療用物質、例えばペプチド模倣物、天然物または有機化合物の望ましい用量は、モル／ｋｇベースの抗体またはポリペプチドの場合とほぼ同じである。

【0227】

特定の実施形態においては、投与は、治療経過にわたって、医薬製剤、すなわちペンブロリズマブを含む製剤の１．０、３．０および１０ｍｇ／ｋｇの漸増用量を対象に投与することを含む。ペンブロリズマブを含む製剤は再構成液体製剤でありうる。あるいは、それは、未だ凍結乾燥されていない液体製剤でありうる。時間経過は変動可能であり、所望の効果が得られるまで継続されうる。特定の実施形態においては、用量の漸増は約１０ｍｇ／ｋｇの用量まで継続される。特定の実施形態においては、対象は、メラノーマまたは他の形態の固形腫瘍の組織学的または細胞学的診断を有し、ある場合においては、対象は測定不可能な疾患を有しうる。特定の実施形態においては、対象は他の化学療法剤で治療されており、一方、他の実施形態においては、対象は治療を受けていない。

【0228】

更に追加的な実施形態においては、投与レジメンは、治療経過全体にわたって、本明細書に記載されている医薬製剤（すなわち、ペンブロリズマブを含む製剤）のいずれかの１、３または１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することを含む。そのような投与レジメンでは、投与間隔は約１４日（±２日）である。特定の実施形態においては、投与間隔は約２１日（±２日）である。

【0229】

特定の実施形態においては、投与レジメンは、患者内の用量増加を伴って、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することを含む。特定の実施形態においては、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの用量を３週間ごと又は２週間ごとの間隔で投与する。更なる追加的な実施形態においては、メラノーマ患者または他の固形腫瘍を有する患者に３週間隔で３ｍｇ／ｋｇの用量を投与する。これらの実施形態においては、患者は切除不能な疾患を有するべきであるが、患者は過去に手術を受けていてもよい。

【0230】

特定の実施形態においては、本明細書に記載されている医薬製剤のいずれかの３０分間のＩＶ注入を対象に投与する。漸増用量の特定の実施形態においては、投与間隔は第１投与と第２投与との間で約２８日（±１日）である。特定の実施形態においては、第２投与と第３回投与との間の間隔は約１４日（±２日）である。特定の実施形態においては、投与間隔は第２投与の後の投与に関しては約１４日（±２日）である。特定の実施形態においては、投与間隔は第２投与の後の投与に関しては約３週間である。特定の実施形態においては、投与間隔は第２投与の後の投与に関しては約６週間である。

【0231】

特定の実施形態においては、ＷＯ２０１２／０１８５３８またはＷＯ２００８／１５６７１２に記載されている細胞表面マーカーおよび／またはサイトカインマーカーの使用が、モニタリングのためのバイオアッセイ、診断、患者の選択および／または治療レジメン（ＰＤ－１経路の遮断を含むもの）において利用される。皮下投与は、シリンジを使用してあるいは他の注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（登録商標）装置）、インジェクターペン；または無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒおよびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））を使用して、注射によって行われうる。

【0232】

本発明の実施形態はまた、（ｉ）以下の（ａ）～（ｏ）における使用のための、（ｉｉ）以下の（ａ）～（ｏ）のための医薬または組成物としての使用のための、あるいは（ｉｉｉ）以下の（ａ）～（ｏ）のための医薬の製造における使用のための、本明細書に記載されている生物学的製剤の１以上を含む：（ａ）治療（例えば、人体の治療）、（ｂ）医薬、（ｃ）抗腫瘍免疫応答の誘導または増強、（ｄ）患者における１以上の腫瘍マーカーの数値の減少、（ｅ）腫瘍または血液癌の成長の阻止または遅延、（ｆ）ＰＤ－１関連疾患の進行の阻止または遅延、（ｇ）癌の進行の阻止または遅延、（ｈ）ＰＤ－１関連疾患の安定化、（ｉ）腫瘍細胞の成長または生存の抑制、（ｊ）１以上の癌性病変または腫瘍のサイズの排除または縮小、（ｋ）ＰＤ－１関連疾患の進行、開始または重症度の低減、（ｌ）癌のようなＰＤ－１関連疾患の臨床症状の重症度または持続期間の低減、（ｍ）類似未治療患者の予想生存期間と比較した場合の患者の生存期間の延長、（ｎ）癌性状態または他のＰＤ－１関連疾患の完全または部分的な寛解の誘導、あるいは（ｏ）癌の治療。

【0233】

一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３^ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。

【0234】

免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５－８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。
リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。

【0235】

モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９－２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１－２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。

【0236】

ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９－３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７－８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１－３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７－３９９）。

【0237】

抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで該免疫化動物から脾細胞を単離し、該脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３－２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３－２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７－５１６４を参照されたい）。

【0238】

抗体は、例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば、色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９－１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１－３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４－２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３－８８９を参照されたい）。

【0239】

蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２^ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓｙ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。

【0240】

免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。

【0241】

例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１－７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１－７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７－１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７－２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３－４６９０を参照されたい）。

【0242】

分析方法
製品安定性の評価に適した分析方法には、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、動的光散乱試験（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、イソ（ｉｓｏ）－ａｓｐ定量、効力、３４０ｎｍのＵＶ、ＵＶ分光法およびＦＴＩＲが含まれる。ＳＥＣ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８３：１６４５－１６５０，（１９９４）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１１：４８５（１９９４）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１５：１９２８（１９９７）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１４：１１３３－１１４０（１９８６））は、製品中の単量体の割合を測定し、可溶性凝集物の量の情報を提供する。ＤＳＣ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１５：２００（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，９：１０９（１９８２））は、タンパク質変性温度およびガラス転移温度の情報を提供する。ＤＬＳ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌａｂ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ（１９９１））は、平均拡散係数を測定し、可溶性凝集物および不溶性凝集物の量に関する情報を提供する。３４０ｎｍのＵＶは、３４０ｎｍの散乱光強度を測定し、可溶性凝集物および不溶性凝集物の量に関する情報を提供する。ＵＶ分光法は、２７８ｎｍの吸光度を測定し、タンパク質濃度の情報を提供する。ＦＴＩＲ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，４５：２３１（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１２：１２５０（１９９５）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８５：１２９０（１９９６）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８７：１０６９（１９９８））はアミド１領域のＩＲスペクトルを測定し、タンパク質の二次構造の情報を提供する。

【0243】

サンプルにおけるイソ－ａｓｐ含有量は、イソクワント・イソアスパルタート検出系（Ｉｓｏｑｕａｎｔ Ｉｓｏａｓｐａｒｔａｔｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定される。このキットは、酵素タンパク質イソアスパルチルメチルトランスフェラーゼ（ＰＩＭＴ）を使用して、標的タンパク質中のイソアスパラギン酸残基の存在を特異的に検出する。ＰＩＭＴは、アルファ－カルボキシル位におけるイソアスパラギン酸へのＳ－アデノシル－Ｌ－メチオニンからのメチル基の転移を触媒して、その過程でＳ－アデノシル－Ｌ－ホモシステイン（ＳＡＨ）を生成する。これは比較的小さな分子であり、通常は、キットで提供されるＳＡＨ ＨＰＬＣ標準を使用する逆相ＨＰＬＣにより単離および定量されうる。

【0244】

抗体の効力または生体同一性は、その抗原に結合するその能力により測定されうる。抗体のその抗原への特異的結合は、当業者に公知の任意の方法、例えばＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）のようなイムノアッセイにより定量されうる。

【0245】

添付図面を参照して本発明の種々の実施形態が本明細書に記載されているが、本発明はそれらの厳密な実施形態に限定されるものではなく、それにおいては、添付の特許請求の範囲において定義される本発明の範囲または精神から逸脱することなく、種々の変更および修飾が当業者によって施されうると理解されるべきである。

【0246】

実施例１：ペンブロリズマブと組換えヒトヒアルロニダーゼとの相互作用の評価
ペンブロリズマブと組換えヒトヒアルロニダーゼ酵素ＰＨ２０変異体断片２との間の初期の相互作用評価を、バレリアン－プロトニコフ（Ｖａｌｅｒｉａｎ－Ｐｌｏｔｎｉｋｏｖ）示差走査熱量測定を用いて行った。プロセス希釈液［１０ｍＭ ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中の７％ ｗ／ｖ（７０ｍｇ／ｍＬ）スクロース、０．０２％ ｗ／ｖ（０．２ｍｇ／ｍＬ）ポリソルベート－８０（ＰＳ８０）、１０ｍＭ（１．４９ｍｇ／ｍＬ）Ｌ－メチオニン］でペンブロリズマブ原薬（１６５ｍｇ／ｍＬ）および酵素原薬［ヒスチジンバッファー（２０ｍＭ）中にＰＨ２０変異体断片２（１０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｋＩＵ／ｍｇ）および塩化ナトリウム（１４５ｍＭ）を含む溶液］を希釈して、溶液中の目標濃度としての１ｍｇ／ｍＬのペンブロリズマブおよび１ｍｇ／ｍＬの組換えヒトヒアルロニダーゼ酵素ＰＨ２０変異体断片２とすることにより、共製剤を調製した。図１０に示されているとおり、同じ製剤中のペンブロリズマブおよび酵素の熱安定性プロファイルを、同じバッファーマトリックス中の単一物と比較した。表４に示されているとおり、共製剤中のペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２の融解温度は、同じバッファーマトリックス中の単一物と同じである。

【0247】

【表4】

【0248】

実施例２：材料および分析方法
ＨＰ－ＩＥＸ：高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ－ＩＥＸ）を用いて、電荷プロファイルを評価した。Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ－１０カラムおよび２８０ｎｍのＵＶ検出器を使用して、イオン交換ＨＰＬＣ法を行った。サンプルを精製水で希釈し、分析のために８０μｇを注入した。ＩＥＸ分析に使用した移動相は以下の移動相の勾配であった（移動相Ａ：２４ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６、４％ アセトニトリル（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：２０ｍＭ リン酸、９５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８、４％ アセトニトリル（ｖ／ｖ））。主要ピークはクロマトグラムの主要成分であり、それは酸性および塩基性変異体の特徴づけのための対照として用いられる。酸性変異体は主要ピークより早く溶出し、酸性変異体の形成の主な原因は、主要メインピークにおけるＡｓｎの脱アミド化、および主要ピークと比較した場合のシアル酸の存在によるものである。塩基性変異体は主要ピークより遅く溶出し、塩基性変異体の形成の主な原因は、主要ピークからのＣ末端Ｌｙｓの不完全な除去によるものである。他の原因は、軽鎖または重鎖または両方のピロＧｌｕへのＮ末端グルタミン（Ｇｌｎ）の不完全な環化、そしてまた、主要ピークにおけるＡｓｐの、イソＡｓｐへの異性化によるものである。

【0249】

ＵＰ－ＳＥＣ：サンプルの純度をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。ＨＭＷ種の存在はタンパク質凝集物を示し、ＬＭＷ種の存在はタンパク質断片を示す。超高性能－サイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ－ＳＥＣ）は、サンプル希釈剤（移動相、５０ｍＭ ホスファート、４５０ｍＭ アルギニンモノＨＣｌ、ｐＨ７±０．２）でサンプルを５．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより行った。Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ２００ ＳＥＣカラムとＵＶ検出器とを備えたＵＰＬＣ内に希釈サンプル（６μＬ）を注入した。サンプル中のタンパク質をサイズ別に分離し、２８０ｎｍのＵＶ吸収により検出した。

【0250】

Ａ３５０：濁度の指標として、９６ウェルプレートＳｐｅｃｔｒａｍａｘリーダーを使用して、３５０ｎｍでのＵＶ吸収を測定した。吸収測定値を空プレート測定値に対してブランク化し、サンプル経路長に関して正規化した。

【0251】

ＨＰ－ＨＩＣ：
高速疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＰ－ＨＩＣ）を用いて、非酸化分子からの酸化生成物を評価した。事前の分析特徴づけにより１つの重鎖上に重鎖Ｍｅｔ１０５酸化を含む酸化種であると判定されたプレピークの割合、ならびに主要ピークの割合およびポストピークの割合を決定した。サンプルを精製水中で５．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、ＨＰ－ＨＩＣ法を行った。ついでサンプルを、Ｔｏｓｏｈ Ｐｈｅｎｙｌ－５ＰＷカラムと２８０ｎｍのＵＶ検出器とを備えたＨＰＬＣ内に注入した（１０μＬ）。ＨＩＣ分析には、以下の成分の勾配を含む移動相（移動相Ａ：２％ アセトニトリル中の５ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：２％ アセトニトリル中の４００ｍＭ 硫酸アンモニウム、５ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ６．９）を用いた。

【0252】

サンプルを水で希釈し、９６ウェルプレートＳｐｅｃｔｒａｍａｘリーダーを使用して２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収を測定する重量法を用いて、抗体濃度を決定した。９６ウェルプレートにおいて迅速ｐＨ（Ｒａｐｉｄ＿ｐＨ）自動ｐＨメーターを使用して、ｐＨを測定した。ｐＨメーターは、ｐＨ４．０、ｐＨ７．０およびｐＨ１０．０の校正標準を使用して校正した。

【0253】

Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＤＭＡ密度計を使用して、密度を測定した。Ｇｒａｂｎｅｒ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓによるＭｉｎｉＶｉｓＩＩ粘度計を使用して、ＵＳＰ＜９１３＞技術に従い、粘度を測定した。５℃および２０℃におけるそれぞれの密度を用いて、５℃および２０℃における粘度を測定した。

【0254】

実施例３：組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２を含有するペンブロリズマブ製剤の安定性の評価
ペンブロリズマブ（２５～２００ｍｇ／ｍＬ）と組換えヒトヒアルロニダーゼ酵素ＰＨ２０変異体断片２（約１２５～５０００Ｕ／ｍＬ）とを含む製剤の安定性を評価するために、初期製剤研究を行った。ペンブロリズマブ原薬（１６５ｍｇ／ｍＬ）と酵素原薬［ヒスチジンバッファー（２０ｍＭ）中にＰＨ２０変異体断片２（１０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｋＩＵ／ｍｇ）および塩化ナトリウム（１４５ｍＭ）を含む溶液］とを一緒にし、ついで、必要に応じて、プロセス希釈液［１０ｍＭ ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中の７％ ｗ／ｖ（７０ｍｇ／ｍＬ）スクロース、０．０２％ ｗ／ｖ（０．２ｍｇ／ｍＬ）ポリソルベート－８０（ＰＳ８０）、１０ｍＭ（１．４９ｍｇ／ｍＬ）Ｌ－メチオニン］で希釈することにより、製剤を調製した。

【0255】

ペンブロリズマブとＰＨ２０変異体断片２との試験製剤（ＡＫ０１～ＡＫ１５）を、表５に示されている体積で、ＰＥＴＧボトル（３０または１２５ｍＬ）内で調製した。配合順序はＰＨ２０変異体断片２、ペンブロリズマブ、ついでプラセボ（必要な場合）であった。全ての製剤を、０．２２μｍ ＰＥＳフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＲＥＦ４３１０９６）を使用して濾過し、５ｍＬの充填量で６Ｒバイアル内に充填した。２～８℃［本明細書および実施例の全体にわたって用いる「５℃」なる語は「２～８℃」と互換的に用いられ、これは５℃±３℃（標準偏差）を示す］、２５℃および４０℃における安定性（光から防護されている）に関して、最大６ヶ月間にわたって、サンプルを段階付けして、製剤の熱安定性を評価した。濁度（Ａ３５０）、ｐＨ、タンパク質濃度（Ａ２８０）、可溶性凝集体（ＵＰ－ＳＥＣ）、電荷変異体（ＨＰ－ＩＥＸ）、メチオニン［１０５］酸化（ＨＰ－ＨＩＣ）および酵素活性（比濁アッセイ）に関して、製剤を評価した。

【0256】

表５における試験製剤のそれぞれを、着色または沈殿形成の変化に関して視覚的に検査した（データ非表示）。製剤ＡＫ０４～ＡＫ０６は酵素のみの製剤であり、安定性に関しては段階づけされなかった。これらの製剤は酵素活性のみに関して試験された。製剤ＡＫ０３およびＡＫ１０～ＡＫ１５の物理化学的特性（密度および粘度）を測定し、結果を表６に示す。試験した各製剤の密度は、類似したペンブロリズマブのみの製剤（ＰＨ２０変異体断片２を含有しないもの）に匹敵し、このことはＰＨ２０変異体断片２とペンブロリズマブタンパク質との適合性を裏付けるものである。更に、表６および図１に示されているとおり、ペンブロリズマブ製剤（１００、１３０または１６５ｍｇ／ｍｌ）におけるＰＨ２０変異体断片２（約２０００または５０００Ｕ／ｍＬ）の存在は、生じる温度依存的粘度（５℃および２０℃）に影響を及ぼさなかった。

【0257】

【表5】

【0258】

【表6】

【0259】

ｐＨ、タンパク質（ペンブロリズマブ）濃度、ＵＰ－ＳＥＣ、ＨＰ－ＩＥＸ、ＨＩＣ、濁度および酵素活性の結果（表７～１２）によって支持されるとおり、全ての製剤が、６ヶ月間の安定性期間にわたって、５℃の貯蔵条件において安定であると見なされた。２５℃においては、安定性期間にわたって、ｐＨ、ペンブロリズマブ濃度、濁度、電荷変異体（ＩＥＸ）、Ｍｅｔ［１０５］酸化または酵素活性において、変化は観察されなかった。
図２に示されているとおり、対照（ＡＫ０３；ＰＨ２０変異体断片２非含有製剤）と比較して、可溶性凝集体［高分子種（％）、ＨＭＷＳ（％）］の僅かな増加および単量体（％）の対応する減少が、試験期間にわたってＵＰ－ＳＥＣによって観察された。可溶性凝集体［ＨＭＷＳ（％）］におけるより顕著な変化が、試験した全ての製剤に関して４０℃で観察され（図２）、ペンブロリズマブの濃度が（１００ｍｇ／ｍＬから１６５ｍｇ／ｍＬへと）増加した場合に最大の変化が観察された。全製剤に関する濁度（Ａ３５０）の結果（表７）もＵＰ－ＳＥＣの結果を実証しており、４０℃で１ヶ月以上貯蔵された全製剤の物理安定性の低下を示している。また、４０℃においては、試験した全て製剤に関して、電荷変異体（図３～５）およびメチオニン［１０５］酸化（図６）において、より顕著な変化が観察されたが（表１０および１２）、製剤における約５０００Ｕ／ｍＬまでのＰＨ２０変異体断片２の存在は、対照（ＡＫ０３；ＰＨ２０変異体断片２非含有製剤）と比較して、試験した製剤特性のいずれにも影響を及ぼさない。５、２５または４０℃における６ヶ月間の安定性期間にわたって、ペンブロリズマブ濃度または製剤ｐＨにおける変化は観察されず、このことは、ＰＨ２０変異体断片２（約２０００～５０００Ｕ／ｍＬ）を含有する製剤を包含する全製剤におけるペンブロリズマブの化学的安定性を実証している。

【0260】

【表7】

【0261】

【表8】

【0262】

【表9】

【0263】

【表10】

【0264】

【表11】

【0265】

【表12】

１Ｍ、３Ｍおよび６Ｍは、それぞれ、１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月を意味する。

【0266】

５Ｃ、２５Ｃおよび４０Ｃは、それぞれ、５℃、２５℃および４０℃を意味する。

【0267】

実施例４：ペンブロリズマブおよびヒアルロニダーゼ変異体断片を含有する製剤におけるヒアルロニダーゼ活性の測定
ヒアルロニダーゼ活性アッセイ
一連の製剤（表１３）における酵素活性を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５ｅマイクロプレートリーダーでの比濁アッセイによって決定した。

【0268】

【表13】

【0269】

冷却した酵素希釈剤（２０ｍＭ リン酸ナトリウム、７７ｍＭ 塩化ナトリウム、０．０１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ｐＨ７．０、２５℃）での希釈により、以下の表に示されている実施濃度にすることにより、検量線標準、活性標準および試験サンプルを調製した。

【0270】

【表14】

【0271】

調製中、サンプルを氷上で維持した。各サンプルの５０μＬを透明底９６ウェルプレート（プレート１）（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３８３５）に３通りで移した。５０μＬの酵素希釈溶液をブランク対照としてプレートの専用ウェルに加えた。プレートを密封し、３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベーション後、５０μＬの３７℃のヒアルロン酸溶液（０．０６％ ヒアルロン酸、３００ｍＭ ホスファート、ｐＨ５．３５、３７℃）を、溶液を含有する各ウェルに、マルチ・チャネル・ピペットで加えた。プレートを密封し、ついで、６００ｒｐｍで振盪しながら３７℃で厳密に４５分間インキュベートした。
インキュベーションからプレート１を取り出す前に、プレート１と同じウェルレイアウトとなるように、各ウェルにおいて、２００μＬの酸性アルブミン溶液（２４ｍＭ 酢酸ナトリウム、７９ｍＭ 酢酸、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ３．７５、２５℃）で第２のプレート（プレート２）を調製した。プレート１を厳密に４５分間インキュベートした後、４０μＬの溶液を各ウェルからマルチ・チャネル・ピペットで取り出し、（酸性アルブミン溶液を含有する）プレート２の対応ウェルに加えた。プレート２をマイクロプレート・リーダーのプレート・チャンバー内で２５℃で２０分間インキュベートした。５秒間の振盪の後で６００ｎｍにおける吸光度を読み取るようにマイクロプレート・リーダーを設定した。２０分間のインキュベーションの後、各ウェルに関して６００ｎｍにおける吸光度を読み取った。

【0272】

検量線の作成
検量線標準からの３通りの吸光度値を平均し、ブランクの平均吸光度から差し引いた。
得られた補正吸光度の絶対値を検量線の標準体積活性（ｓｔａｎｄａｒｄ ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）値（例えば、２０、１５、１２、１０、８および６ユニット／ｍＬ）に対してプロットした。プロットを二次多項式としてフィットさせ（図７）、得られたフィットの式を用いて、活性標準および試験サンプルの酵素活性を決定した。また、線形フィットでプロットを行うことも可能であり、これを実施例５～１０における酵素活性計算に適用した（図１８）。

【0273】

標準および試験サンプルの酵素活性の計算
３通りの吸光度値を平均し、ブランクの平均吸光度から差し引いた。得られた補正吸光度の絶対値を検量線からのフィット式に代入して、標準および試験サンプルのアッセイ体積活性を決定した。検量線の外側の補正吸光度値を破棄した。溶液を調製するために用いた希釈係数をアッセイ体積活性に掛け算することによって値を希釈度に関して補正した。
（例えば、製剤または標準ストック溶液の推定酵素活性が１５００ユニット／ｍＬであり、分析のために１５、１２および１０ユニット／ｍＬに希釈された場合、希釈係数はそれぞれ１００、１２５および１５０となる）。最終的な体積酵素活性値を平均し、図８および図９に示されているとおり、ユニット／ｍＬで表した。

【0274】

酵素活性は、５℃および２５℃での貯蔵の後、表１３に挙げられている共製剤化サンプル（ペンブロリズマブおよびＰＨ２０変異体断片２）およびＰＨ２０変異体断片２対照サンプルにおいて評価されている。全ての製剤における酵素活性が６ヶ月間／５℃の貯蔵にわたって保持され、初期サンプルと同等であった（図８）。３ヶ月間／２５℃の貯蔵の後、酵素のみの対照は、５℃で貯蔵されたサンプルと比較して低下した活性を示した（図９）。驚くべきことに、共製剤化サンプルにおける酵素活性は３ヶ月間／２５℃で影響を受けず、このことは、ペンブロリズマブの存在下の酵素の安定性および活性の増強を示している。

【0275】

実施例５：ステンレス鋼（ＳＳ）ストレス下の製剤におけるペンブロリズマブの存在下の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性の評価
ペンブロリズマブとＰＨ２０変異体断片２との試験製剤（ＳＳ０１～ＳＳ０６）を、表１５に示されている組成で、ＰＥＴＧボトル（１２５ｍＬ）において調製した。製剤ＳＳ０２、ＳＳ０４およびＳＳ０６をＳＳ固体シリンダーに室温で２４時間さらした。製剤ＳＳ０１、ＳＳ０３およびＳＳ０５を対照として室温で２４時間配置した。０．２２μｍ ＰＥＳフィルターを使用して、全ての製剤を濾過した。ＰＨ２０変異体断片２の活性を評価するために、５℃で最大６ヶ月間および２５℃で最大３ヶ月間における安定性（光から防護されている）に関してサンプルを段階分けした。

【0276】

【表15】

【0277】

共製剤化サンプル（ＳＳ０１～ＳＳ０４）における酵素活性は、６ヶ月間／５℃およびで３ヶ月間／２５℃の貯蔵にわたって保持され、初期サンプルの場合と同等であった（図１１および図１２）。６ヶ月／５℃および３ヶ月／２５℃での貯蔵の後、ＳＳストレスの存在下の酵素のみのサンプル（ＳＳ０６）は、ＳＳストレスの非存在下のサンプル（ＳＳ０５）と比較して低下した活性を示した（図１１および図１２）。共製剤化サンプルにおける酵素活性は全ての温度および時点にわたって影響を受けず、このことはペンブロリズマブの存在下の酵素の安定性および活性の増強を示している。

【0278】

実施例６：光ストレス下のペンブロリズマブおよびペンブロリズマブ粘性代用物の存在下の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性の評価
１０ｍＭ ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中の１６５ｍｇ／ｍＬ ペンブロリズマブ、２０００ユニット／ｍＬ 組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２（７％ スクロース、０．２ｍｇ／ｍＬ ＰＳ－８０中）、１０ｍＭ メチオニンとして、共製剤化サンプルを調製した。ペンブロリズマブによって引き起こされる溶液中の高粘度を模倣するために、２０００ユニット／ｍＬの組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２を、５２％（ｗ／ｗ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｗ）ＰＳ－８０中で製剤化した。サンプルを５ｍＬの充填量で６Ｒバイアル内に充填した。１バイアルの各サンプルを、０．２５×ＩＣＨ ＣＷＬ（１ＩＣＨ＝１２００ｋｌｕｘ^＊時間）に相当する３００Ｋｌｕｘ－ｈｒ ＣＷＬの累積光曝露にさらした。また、各サンプルに関する第２セットのバイアルを、暗対照として、明室内での曝露中にアルミホイルで覆った。光ストレス下の該粘性代用物における酵素安定性を評価するために、酵素活性試験を行った。どちらのサンプルも、対照サンプルと比較して、光ストレス下で酵素活性の低下を示している。粘性代用物溶液における酵素活性は、同じ光ストレス条件下のペンブロリズマブの存在下の酵素活性と比較して、更に減少した（図１３）。

【0279】

実施例７：
ペンブロリズマブの存在下の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性に対する賦形剤濃度の影響の評価
ペンブロリズマブ（１６５ｍｇ／ｍＬ）およびＰＨ２０変異体断片２（２０００ユニット／ｍＬ）、１０ｍＭ ヒスチジン（ｐＨ５．５）の試験製剤（ＥＲ０１～ＥＲ１３）を、賦形剤であるポリソルベート８０、Ｌ－メチオニンおよびスクロースの濃度が異なるように設計された表１６に示されている組成で調製した。酵素活性に対する賦形剤濃度の影響をモニターするために、サンプルを２５℃で３ヶ月間インキュベートした。

【0280】

【表16】

【0281】

図１４に示されているとおり、賦形剤濃度またはインキュベーション時間の関数としての酵素活性における観察可能な差異はない。２５℃で最大３ヶ月間貯蔵したペンブロリズマブとＰＨ２０変異体断片２との試験共製剤は、ＰＨ２０変異体断片２のみのサンプル（ＡＫ０５）と比較して、活性の保持を示しており、このことはペンブロリズマブの存在下の該酵素の安定化を実証している。

【0282】

実施例８：ペンブロリズマブと共に種々の比率でインキュベートした場合の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性の評価
ペンブロリズマブとＰＨ２０変異体断片２との試験製剤を、抗体：酵素比が異なる表１７に示されている組成で調製した。全ての試験製剤は、１０ｍＭ ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中の０．０２％ ポリソルベート８０、７％ スクロース、１０ｍＭ メチオニン中で調製した。酵素活性に対するペンブロリズマブ：ＰＨ２０変異体断片２の比の影響をモニターするために、サンプルを２５℃で最大３ヶ月間インキュベートした。

【0283】

【表17】

【0284】

ＰＨ２０変異体断片２の濃度範囲に基づいて、図１５は各サンプルの目標活性レベルに対する酵素活性を示している。データにより示されているとおり、０．０００９～０．０５ｍｇ／ｍｌのＰＨ２０変異体断片２を含有するサンプルの酵素活性は、ＰＨ２０変異体断片２のみを使用して調製されたサンプル（ＡＫ０５）とは対照的に、２５～１７５ｍｇ／ｍｌのペンブロリズマブの存在下の２５℃で３ヶ月間のインキュベーションの後、目標値の近くに保持される。

【0285】

実施例９：熱ストレス下のペンブロリズマブの存在下の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性の評価
１０ｍＭ ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中の或る濃度範囲のペンブロリズマブ（５ｍｇ／ｍＬ～１６５ｍｇ／ｍＬ）、２０００ユニット／ｍＬ 組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２（７％ スクロース中）、１０ｍＭ メチオニンにおいて、共製剤化サンプルを調製した。各サンプルを３５℃で１週間インキュベートした後、活性を測定した（図１６）。データは、５～１６５ｍｇ／ｍＬのペンブロリズマブ濃度において、ＰＨ２０変異体断片２のみのサンプルと比較して、ペンブロリズマブの存在下、熱ストレス後に、ＰＨ２０変異体断片２の酵素活性および安定性が増強したことを示している。また、熱ストレスの際のＰＨ２０変異体断片２活性の保持は、ペンブロリズマブ濃度に対する依存性を示している。データは、７５ｍｇ／ｍＬ以上のペンブロリズマブ濃度においては、ＰＨ２０変異体断片２の酵素活性の増強が、より低い濃度のペンブロリズマブと比較して予想外に高かったことを示している。

【0286】

実施例１０：ペンブロリズマブの存在下の組換えヒトヒアルロニダーゼＰＨ２０変異体断片２の安定性に対するｐＨの影響
１０ｍＭ ヒスチジン、１０ｍＭ メチオニン、７％ ｗ／ｖ スクロース、０．０２％ ｗ／ｖ ＰＳ－８０中のペンブロリズマブ（１６５ｍｇ／ｍＬ）とＰＨ２０変異体断片２（２０００ユニット／ｍＬ）との試験製剤を、ｐＨ５．０、ｐＨ５．５およびｐＨ６．０において調製した。サンプルを２５℃で最大３ヶ月間インキュベートして、ＰＨ２０変異体断片２の安定性に対する製剤ｐＨの影響をモニターした。図１７は、ＰＨ２０変異体断片２の酵素活性が、調べたｐＨ範囲にわたって同等であり、２５℃で３ヶ月間のインキュベーションの後に活性を維持することを示している。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【配列表】

2023545926000001.app

【国際調査報告】