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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-02
(54)【発明の名称】癌を治療するための組み合わせ療法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/496 20060101AFI20231026BHJP
A61K 33/243 20190101ALI20231026BHJP
A61K 31/282 20060101ALI20231026BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20231026BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20231026BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20231026BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20231026BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231026BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20231026BHJP
【ＦＩ】
A61K31/496
A61K33/243
A61K31/282
A61P15/00
A61P13/08
A61P11/00
A61P1/00
A61P35/00
A61P35/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023521357
(86)(22)【出願日】2021-10-07
(85)【翻訳文提出日】2023-04-06
(86)【国際出願番号】 EP2021077703
(87)【国際公開番号】W WO2022074124
(87)【国際公開日】2022-04-14
(31)【優先権主張番号】63/089,195
(32)【優先日】2020-10-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】391008951
【氏名又は名称】アストラゼネカ・アクチエボラーグ
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】レオ，エリザベッタ
【テーマコード（参考）】
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB09
4C086HA12
4C086HA24
4C086HA26
4C086HA28
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZA59
4C086ZA66
4C086ZA81
4C086ZB26
4C086ZB27
4C206AA01
4C206AA02
4C206JB16
4C206KA01
4C206MA02
4C206MA04
4C206NA05
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4C206ZA66
4C206ZA81
4C206ZB26
4C206ZB27
(57)【要約】
本開示は、概して、治療的組み合わせ並びに対応する治療方法、医薬組成物及びキットに関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
癌の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記ヒト対象に、第１の量のＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩と、第２の量の白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩とを投与することを含み、前記第１の量及び前記第２の量は、合わせて治療有効量を構成する、方法。
【請求項2】
前記癌は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、血液癌、胃癌及び大腸癌などの消化器癌並びに肺癌から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記白金化学療法剤は、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンのいずれか１つから選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記癌は、相同組換え修復欠損（ＨＲＤ）癌である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記癌は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＡＴＭ、ＢＲＩＰ１、ＢＡＲＤ１、ＣＤＫ１２、ＣＨＥＫ１、ＣＨＥＫ２、ＦＡＮＣＬ、ＰＡＬＢ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ａ、ＲＡＤ５１Ｂ、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＡＤ５１Ｄ及びＲＡＤ５４Ｌから選択されるＨＲＲ遺伝子において変異を有する１つ以上の細胞を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記変異したＨＲＲ遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２及びＡＴＭから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
キットであって、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む第１の医薬組成物と、
白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む第２の医薬組成物と、
使用説明書と
を含むキット。
【請求項8】
対象の癌の治療に使用するためのＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩であって、前記治療は、ｉ）前記ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容できる塩と、ｉｉ）白金化学療法剤又はその薬学的に許容できる塩との、前記対象への別々の、逐次的な又は同時の投与を含む、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩。
【請求項9】
前記癌は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、血液癌、胃癌及び大腸癌などの消化器癌並びに肺癌から選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項10】
前記白金化学療法剤は、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンのいずれか１つから選択される、請求項８又は９に記載の化合物。
【請求項11】
前記癌は、相同組換え修復欠損（ＨＲＤ）癌である、請求項８～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項12】
前記癌は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＡＴＭ、ＢＲＩＰ１、ＢＡＲＤ１、ＣＤＫ１２、ＣＨＥＫ１、ＣＨＥＫ２、ＦＡＮＣＬ、ＰＡＬＢ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ａ、ＲＡＤ５１Ｂ、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＡＤ５１Ｄ及びＲＡＤ５４Ｌから選択されるＨＲＲ遺伝子において変異を有する細胞を含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項13】
前記変異したＨＲＲ遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２及びＡＴＭから選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項14】
ｉ）ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩と、ｉｉ）白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬品。
【請求項15】
ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び前記白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩は、単一の剤形で存在する、請求項１４に記載の医薬品。
【請求項16】
ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び前記白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩は、別々の剤形で存在する、請求項１４に記載の医薬品。
【請求項17】
前記白金化学療法剤は、カルボプラチンを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法、化合物又は医薬組成物。
【請求項18】
前記白金化学療法剤は、カルボプラチンである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法、化合物又は医薬組成物。
【請求項19】
前記ＡＺＤ５３０５は、遊離塩基である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法、化合物又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
癌の治療において大きい進歩がなされているが、患者は、新規の有効な療法を必要とし続けている。
【0002】
ＡＺＤ５３０５（５－［４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド）は、ＤＮＡ単細胞切断（ＳＳＢ）部位のＰＡＲＰ１を選択的に阻害し捕捉することによって作用する小分子薬である。これは、ＤＮＡの修復を妨げ、ＤＮＡ複製中、ＤＮＡ複製機構がＰＡＲＰ１－ＤＮＡ非共有結合複合体と衝突したとき、より有害なＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）の生成をもたらす。相同組換え修復（ＨＲＲ）が熟達している細胞のように、正確なＤＮＡ修復経路が有効である状況では、ＤＳＢは、正確に修復される。対照的に、ＢＲＣＡ遺伝子に病的変異を有するものなど、修復経路に欠陥を有する細胞では、ＡＺＤ５３０５での治療は、正常細胞を残しながら、最終的に癌細胞を選択的に死滅させるゲノム不安定性の選択的蓄積をもたらす。
【0003】
白金化学療法剤は、癌を治療するために使用される薬物であり、多くの場合、第一選択治療設定時に使用される。白金化学療法剤の例としては、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンが挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
いくつかの実施形態では、癌の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、ヒト対象に、第１の量のＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩と、第２の量の白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩とを投与することを含み、第１の量及び第２の量は、合わせて治療有効量を構成する、方法が開示される。
【0005】
いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、血液癌、胃癌及び大腸癌などの消化管癌又は肺癌である。
【0006】
いくつかの実施形態では、癌は、相同組換え修復欠損（ＨＲＤ）癌である。例えば、癌がＨＲＤ陽性であるかどうかは、Ｍｙｒｉａｄ ＧｅｎｅｔｉｃｓのｍｙＣｈｏｉｃｅ（登録商標）ＨＲＤ又はｍｙＣｈｏｉｃｅ（登録商標）ＨＲＤ Ｐｌｕｓアッセイによって決定することができる。
【0007】
特定の実施形態では、癌細胞は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＡＴＭ、ＢＲＩＰ１、ＢＡＲＤ１、ＣＤＫ１２、ＣＨＥＫ１、ＣＨＥＫ２、ＦＡＮＣＬ、ＰＡＬＢ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ａ、ＲＡＤ５１Ｂ、ＲＡＤ５１Ｃ、ＲＡＤ５１Ｄ及びＲＡＤ５４Ｌ遺伝子変異から選択されるＨＲＤ遺伝子変異を含む。特定の実施形態では、癌細胞は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２及び／又はＡＴＭ遺伝子変異を含む。特定の実施形態では、癌細胞は、ＢＲＣＡ１及び／又はＢＲＣＡ２遺伝子変異を含む。例えば、特定の実施形態では、癌細胞は、ｔＢＲＣＡ遺伝子変異を含む。
【0008】
本開示の方法の特定の実施形態では、癌は、病的な又は病的と疑われるＢＲＣＡ変異及び／又はゲノム不安定性によって定義される相同組換え修復欠損（ＨＲＤ）陽性状態を含む。
【0009】
本開示の方法の特定の実施形態では、癌は、卵巣癌又は乳癌である。本開示の方法の特定の実施形態では、癌は、卵巣癌である。特定の実施形態では、癌は、進行上皮性卵巣癌である。特定の実施形態では、癌は、高悪性度漿液性卵巣癌である。特定の実施形態では、癌は、高悪性度子宮内膜性卵巣癌である。特定の実施形態では、癌は、ｇＢＲＣＡ１又はｇＢＲＣＡ２変異を含む上皮性卵巣癌である。本開示の方法の特定の実施形態では、癌は、卵管癌である。本開示の方法の特定の実施形態では、癌は、原発性腹膜癌である。
【0010】
特定の実施形態では、癌は、卵巣癌（例えば、進行上皮性卵巣癌）、卵管癌又は原発性腹膜癌である。
【0011】
特定の実施形態では、癌は、卵巣癌（例えば、進行上皮性卵巣癌）、卵管癌又は原発性腹膜癌であり、癌は、病的な又は病的と疑われるＢＲＣＡ変異及び／又はゲノム不安定性によって定義される相同組換え修復欠損（ＨＲＤ）陽性状態を有する。
【0012】
特定の実施形態では、癌は、乳癌である。特定の実施形態では、癌は、トリプルネガティブ乳癌である。
【0013】
いくつかの実施形態では、癌は、白金抵抗性である。
【0014】
いくつかの実施形態では、キットであって、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む第１の医薬組成物と、白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩を含む第２の医薬組成物と、使用説明書とを含むキットが開示される。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】ＡＺＤ５３０５単剤療法、カルボプラチン単剤療法及び組み合わせ療法で治療したＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）のマウスの体重変化を示す。
【図2】ＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍活性を示す。
【図3】ＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍活性を示す。個々の動物のデータを示す。
【図4】ＡＺＤ５３０５フォームＡのＸ線粉末回折を示す。
【図5】ＡＺＤ５３０５単剤療法、カルボプラチン単剤療法及び組み合わせ療法で治療した異種移植モデル（ＳＵＭ１４９ＰＴ）のマウスの体重変化を示す。
【図6】異種移植モデル（ＳＵＭ１４９ＰＴ）におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍活性を示す。
【図7】ＡＺＤ５３０５単剤療法、カルボプラチン単剤療法及び組み合わせ療法で治療したＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）のマウスの体重変化を示す。
【図8】ＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍活性を示す。
【図9】ＡＺＤ５３０５単剤療法、カルボプラチン単剤療法及び組み合わせ療法で治療したＰＤＸモデル（ＨＢＣｘ－９）の治療停止後のカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【0016】
いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５と白金化学療法剤との組み合わせ療法によって癌を治療する方法が開示される。いくつかの実施形態では、本方法は、それを必要とする対象に、第１の量のＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩と、第２の量の白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩とを投与することを含み、第１の量及び第２の量は、合わせて治療有効量を構成する。いくつかの実施形態では、白金化学療法剤は、カルボプラチン、シスプラチン及びオキサリプラチンのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、白金化学療法剤は、カルボプラチンを含む。一実施形態では、白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩が第１に投与され、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩が第２に投与される。一実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩が第１に投与され、白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩が第２に投与される。
【0017】
「ＡＺＤ５３０５」という用語は、５－［４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミドという化学名と、以下に示す構造とを有する化合物を指す。
【化1】
【0018】
ＡＺＤ５３０５の調製は、本明細書に開示されている（実施例１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５の遊離塩基が対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５の薬学的に許容される塩が対象に投与される。いくつかの実施形態では、結晶性ＡＺＤ５３０５が対象に投与される。いくつかの実施形態では、結晶フォームＡのＡＺＤ５３０５が対象に投与される。
【0019】
「白金含有化学療法剤」という用語は、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンなどの金属白金を含有する薬物を含む。いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩は、別々に、逐次的に又は同時に投与される。一実施形態では、白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩が第１に投与され、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩が第２に投与される。一実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩が第１に投与され、白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩が第２に投与される。
【0020】
いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及びオラパリブ又はその薬学的に許容される塩は、治療サイクルにおいて別々に、逐次的に又は同時に投与される。
【0021】
「サイクル」、「治療サイクル」又は「投薬スケジュール」は、本明細書で使用する場合、規則的なスケジュールで繰り返される組み合わせ治療の期間を指す。例えば、治療は、１週間、２週間又は３週間なされる場合があり、ＡＺＤ５３０５及び白金化学療法剤は、協調的な様式で投与される。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、約１週～約３ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、約５日～約１ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、約１週～約３週である。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、約１週、約１０日、約２週、約３週、約４週、約２ヶ月又は約３ヶ月である。
【0022】
いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩は、１つ以上の治療サイクル、例えば治療過程においてヒト対象に投与される。「治療過程」は、複数の治療サイクルを含み、これらは、規則的なスケジュールで繰り返され得るか、又は患者の疾患進行が監視されるにつれて漸減スケジュールとして調整され得る。例えば、患者の治療サイクルは、より長い治療期間及び／又はより短い休止期間を治療過程の開始時（例えば、患者が最初に診断されるとき）に有し、癌が寛解に入ると、休止期間を長くすることにより、１つの治療サイクルの長さを長くすることができる。治療サイクルにおける治療及び休止の期間、治療サイクル数及び治療過程時間の長さは、患者の疾患進行、治療寛容性及び予後に基づいて、当業者により、治療過程の全体を通して決定及び調整され得る。いくつかの実施形態では、方法は、１～１０回の治療サイクルを含む。いくつかの実施形態では、方法は、２～８回の治療サイクルを含む。
【0023】
いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩は、経口投与される。いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩は、カプセル剤形中にある。いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩は、錠剤剤形中にある。
【0024】
「治療する」、「治療すること」及び「治療」という語は、対象におけるＰＡＲＰ若しくは癌に関連する酵素若しくはタンパク質活性の減少若しくは阻害、対象における癌の１つ以上の症状の改善又は対象における癌の進行の緩徐化若しくは遅延を含む。「治療する」、「治療すること」及び「治療」という語は、対象における腫瘍の成長又は癌性細胞の増殖の低下又は阻害も含む。
【0025】
「阻害する」、「阻害」又は「阻害すること」という語は、生物活性又はプロセスのベースライン活性の減少を含む。
【0026】
「癌」という用語は、身体の一部における異常な細胞の制御されない分裂によって引き起こされる疾患を含むが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、癌は、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ＡＺＤ５３０５）による治療に影響されやすい癌を含む。いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌及び前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、血液癌、胃癌及び大腸癌などの消化管癌又は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、再発性又は難治性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、白金耐性癌である。
【0027】
「医薬組成物」という語は、活性成分及び薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤を含む組成物を含み、活性成分は、ＡＺＤ５３０５若しくはその薬学的に許容される塩又は白金化学療法剤若しくはその薬学的に許容される塩である。
【0028】
本明細書において、特に明記しない限り、本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適である、妥当なリスク・ベネフィット比に見合う化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【0029】
「薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤」という語は、当業者によって確かめられるように、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適な化合物、材料、組成物及び／又は製剤を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、サシェ剤などの固形剤形である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、１つ以上の水性又は非水性の、非毒性の、非経口的に許容されるバッファ系、希釈剤、可溶化剤、共溶媒又は担体中の注射可能な滅菌溶液の形態である。無菌注射用製剤は、無菌注射用水性若しくは油性懸濁液又は非水性希釈剤、担体若しくは共溶媒中の懸濁液でもあり得、これは、１つ以上の適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、既知の手順に従って製剤化され得る。医薬組成物は、ｉｖボーラス／点滴注入のための溶液又は他の賦形剤を有する若しくは有しない緩衝系との還元のための凍結乾燥系（これのみ若しくは賦形剤を有する）とすることができる。凍結乾燥された冷凍乾燥物質は、非水性溶媒又は水性溶媒から調製され得る。剤形は、以降の点滴のためのさらなる希釈のための濃縮物でもあり得る。
【0030】
「対象」という用語は、恒温哺乳動物、例えば霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット及びマウスを含む。いくつかの実施形態において、対象は、霊長類であり、例えばヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌及び前立腺癌などの癌に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、癌、例えば血液癌、胃癌及び大腸癌などの消化器癌又は肺癌に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、卵巣癌又は乳癌に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、再発性又は難治性卵巣癌に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、再発性又は難治性乳癌に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、癌に罹患しており、未治療である（例えば、癌のための治療を全く受けていない）。いくつかの実施形態では、対象は、癌に罹患しており、白金抵抗性である。白金抵抗性疾患は、白金系レジメンが最後に施されてから６ヶ月以内の進行によって定義される。白金難治性疾患は、白金含有レジメンの間に少なくとも部分奏効がないことによって定義される。白金系レジメンは、シスプラチン及びカルボプラチンなどの金属白金を含有する薬物を含む。
【0031】
「治療有効量」という語は、両方を合わせて、対象において生物学的若しくは医学的応答、例えばＰＡＲＰ若しくは癌に関連する酵素若しくはタンパク質活性の低下若しくは阻害；癌の症状の寛解；又は癌の進行の緩徐化若しくは遅延を誘発することになるＡＺＤ５３０５の量及び白金化学療法剤の量を含む。いくつかの実施形態では、「治療有効量」という語は、両方を合わせて、少なくとも部分的に癌を軽減し、阻害し、且つ／若しくは回復させるか、又はＰＡＲＰを阻害し、且つ／又は対象における腫瘍の成長若しくは癌性細胞の増殖を低下させるか若しくは阻害するのに有効である、ＡＺＤ５３０５及び白金化学療法剤の量を含む。いくつかの実施形態では、「治療有効量」という語は、両方を合わせて、対象における腫瘍の成長若しくは癌性細胞の増殖を少なくとも部分的に低下させるか若しくは阻害するのに有効である、ＡＺＤ５３０５及び白金化学療法剤の量を含む。
【0032】
いくつかの実施形態では、ＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む第１の医薬組成物と；カルボプラチン又は薬学的に許容される塩を含む第２の医薬組成物と；第１の医薬組成物及び第２の医薬組成物を組み合わせて使用するための指示書とを含むキットが開示される。いくつかの実施形態では、第１の医薬組成物は、第１の量のＡＺＤ５３０５又はその薬学的に許容される塩を含み、及び第２の医薬組成物は、第２の量の白金化学療法剤又はその薬学的に許容される塩を含み、第１の量及び第２の量は、合わせて治療有効量を構成する。
【実施例】
【0033】
ここで、以下の非限定的な実施例を参照して、本明細書に開示される組み合わせ療法をさらに説明する。
【0034】
実施例１
ＡＺＤ５３０５の調製
一般的実験条件
１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、特に明記しない限り、Ｂｒｕｋｅｒ ３００ＭＨｚ、４００ＭＨｚ又は５００ＭＨｚ分光計を２７℃で使用して得た。化学シフトは、百万分率（ｐｐｍ、δ単位）で表し、溶媒の残留モノ１Ｈアイソトポログを基準としている（ＣＨＣｌ３：７．２４ｐｐｍ；ＣＨＤＣｌ２：５．３２ｐｐｍ；ＣＤ３Ｓ（＝Ｏ）ＣＤ２Ｈ：２．４９ｐｐｍ）。結合定数は、ヘルツ（Ｈｚ）の単位で与えられる。分裂パターンは、見かけの多重度を表し、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）及びｂｒ ｓ（幅広い一重線）として指定される。ＬＣ－ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ質量分析計を取り付けたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ又はＳｈｉｍａｄｚｕ２０２０質量分析計を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０ＡＤ ＬＣ－２０ＸＲ ＬＣ－３０ＡＤを使用して行った。報告される分子イオンは、特に明記しない限り、［Ｍ＋Ｈ］＋に相当し、複数の同位体パターンがある分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）では、報告される値は、特に明記しない限り、最低同位体質量で得られたものである。
ＡＺＤ５３０５の調製
一般的実験条件
１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、特に明記しない限り、Ｂｒｕｋｅｒ ３００ＭＨｚ、４００ＭＨｚ又は５００ＭＨｚ分光計を２７℃で使用して得た。化学シフトは、百万分率（ｐｐｍ、δ単位）で表し、溶媒の残留モノ１Ｈアイソトポログを基準としている（ＣＨＣｌ３：７．２４ｐｐｍ；ＣＨＤＣｌ２：５．３２ｐｐｍ；ＣＤ３Ｓ（＝Ｏ）ＣＤ２Ｈ：２．４９ｐｐｍ）。結合定数は、ヘルツ（Ｈｚ）の単位で与えられる。分裂パターンは、見かけの多重度を表し、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）及びｂｒ ｓ（幅広い一重線）として指定される。ＬＣ－ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ質量分析計を取り付けたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ又はＳｈｉｍａｄｚｕ２０２０質量分析計を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－２０ＡＤ ＬＣ－２０ＸＲ ＬＣ－３０ＡＤを使用して行った。報告される分子イオンは、特に明記しない限り、［Ｍ＋Ｈ］＋に相当し、複数の同位体パターンがある分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）では、報告される値は、特に明記しない限り、最低同位体質量で得られたものである。
【0035】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）製ＳＰ１（商標）精製システム、ＩＳＣＯ製ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ又はＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ製Ｇｉｌｓｏｎシステムにおいて、順相（ｎｏｒｍａｌ ｐｈａｓｅ）シリカＦＬＡＳＨ＋（商標）（４０Ｍ、２５Ｍ又は１２Ｍ）又はＳＮＡＰ（商標）ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ（３４０、１００、５０又は１０）、Ａｇｅｌａ製Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎシリカ－ＣＳカラムを、Ｃ１８フラッシュカラムとともに使用する順相（ｓｔｒａｉｇｈｔ ｐｈａｓｅ）フラッシュクロマトグラフィー又は標準フラッシュクロマトグラフィーを使用して実行した。概して、使用した溶媒の全ては、市販されている分析用のものとした。無水溶媒は、反応用に常用されているものとした。実施例で使用した相分離器は、ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒカラムである。以下に命名した中間体及び実施例は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．（ＡＣＤ／Ｌａｂｓ）製ＡＣＤ／Ｎａｍｅ１２．０１を使用して命名した。出発材料は、商業的供給源から得たか、又は文献経路で作製した。
【0036】
ＸＲＰＤ分析は、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ（商標）（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から市販されているＢｒｕｋｅｒ Ｄ８回折計を使用して実行した。ＸＲＰＤスペクトルは、シリコン単結晶ウェーハマウント（例えば、ＢｒｕｋｅｒシリコンゼロバックグラウンドＸ線回折試料ホルダー）に分析用の材料の試料（およそ１０ｍｇ）を載せ、顕微鏡スライドを用いて試料を薄層に広げることによって得た。試料を毎分３０回転で回転させ（計数統計を改善するため）、１．５４０６オングストローム（即ち、約１．５４オングストローム）の波長で、４０ｋＶ及び４０ｍＡで操作される銅製長微小焦点管によって生じるＸ線を照射した。試料を、シータ－シータモードで５度～４０度２シータの範囲にわたって、０．０２度２シータ増分当たり１秒間曝露した（連続スキャンモード）。操作時間は、Ｄ８で約１５分であった。
【0037】
ＸＲＰＤ ２θ値は、妥当な範囲で、例えば、±０．２°の範囲内で変わることがあり、そのＸＲＰＤ強度は、基本的に同じ結晶形態で測定される場合、例えば、好ましい配向を含む種々の理由で変動し得る。ＸＲＰＤの原理は、例えば、Ｇｉａｃｏｖａｚｚｏ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９５），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｒ．ａｎｄ Ｓｎｙｄｅｒ，Ｒ．Ｌ．（１９９６），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｘ－Ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；及びＫｌｕｇ，Ｈ．Ｐ．＆Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｌ．Ｅ．（１９７４），Ｘ－ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋなどの刊行物に記載されている。
【0038】
以下の略語を使用する。ａｑ＝水性；ＣＨ２Ｃｌ２＝ジクロロメタン；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＤＱ＝２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン；ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＤＭＳＯ－ｄ６＝重水素化ジメチルスルホキシド；ＥＳＩ＝エレクトロスプレーイオン化；ＭｅＣＮ若しくはＣＨ３ＣＮ＝アセトニトリル；ＮＭＲ＝核磁気共鳴；Ｐｄ／Ｃ＝パラジウム炭素；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー；ＨＣｌ＝塩酸；ＨＢｒ＝臭化水素酸；Ｃｓ２ＣＯ３＝炭酸セシウム；ＭｇＳＯ４＝硫酸マグネシウム；ＮａＨＣＯ３＝重炭酸ナトリウム；ＳＯＣｌ２＝塩化チオニル；ＮＨ４Ｃｌ＝塩化アンモニウム；Ｎａ２ＳＯ４＝硫酸ナトリウム；Ｈ２＝水素ガス。
【0039】
化学合成
中間体２：６－ホルミル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル
１，４－ジオキサン（５０ｍＬ）中に６－メチル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体１、１０ｇ、４７．５８ｍｍｏｌ）及び二酸化セレン（７．９２ｇ、７１．３６ｍｍｏｌ）を混合した混合物を１１０℃で２０ｈ間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ｃｅｌｉｔｅのパッドに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を合わせて濃縮し、得られた残渣をフラッシュシリカクロマトグラフィー、溶離液勾配０から７０％酢酸エチル（ヘキサン中）により精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、６－ホルミル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体２、９．７０ｇ、９１％）を褐色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）１．４８（３Ｈ，ｔ），４．５４（２Ｈ，ｑ），８．８１（１Ｈ，ｄ），９．５１（１Ｈ，ｄ），１０．３２（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ］＋＝２２４．
【化2】
１，４－ジオキサン（５０ｍＬ）中に６－メチル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体１、１０ｇ、４７．５８ｍｍｏｌ）及び二酸化セレン（７．９２ｇ、７１．３６ｍｍｏｌ）を混合した混合物を１１０℃で２０ｈ間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ｃｅｌｉｔｅのパッドに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を合わせて濃縮し、得られた残渣をフラッシュシリカクロマトグラフィー、溶離液勾配０から７０％酢酸エチル（ヘキサン中）により精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、６－ホルミル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体２、９．７０ｇ、９１％）を褐色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）１．４８（３Ｈ，ｔ），４．５４（２Ｈ，ｑ），８．８１（１Ｈ，ｄ），９．５１（１Ｈ，ｄ），１０．３２（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ］＋＝２２４．
【0040】
中間体３：６－［（Ｅ）－２－エトキシカルボニルブタ－１－エニル］－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（Ｅ／Ｚ異性体混合物）
水素化ナトリウム（９．６３ｇ、２４０．８９ｍｍｏｌ）（鉱油中６０％）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）撹拌溶液に、２－（ジエトキシホスホリル）ブタン酸エチル（６０．８ｇ、２４０．８９ｍｍｏｌ）を、添加漏斗を用いて０℃で滴下して、灰色の混合物を得た。得られた混合物を０℃で１０分間撹拌し、１０分間かけて室温まで加温し、４０℃で５分間撹拌した。反応混合物を－７８℃に冷却し、次いで、この冷却した反応混合物に、６－ホルミル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体２、２２．５ｇ、１００．３７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＴＨＦに溶解した溶液をゆっくり添加した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。得られた残渣をフラッシュシリカクロマトグラフィー、溶離液勾配０から５０％酢酸エチル（ヘキサン中）により精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、６－［（Ｅ）－２－エトキシカルボニルブタ－１－エニル］－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体３、２４．３０ｇ、７５％）を黄色油状物（Ｅ／Ｚ異性体の１：１及び混合物）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）１．１３（３Ｈ，ｔ），１．１８（３Ｈ，ｔ），１．２３（３Ｈ，ｔ），１．３７（３Ｈ，ｔ），１．４５（６Ｈ，ｑ），２．５７（２Ｈ，ｑｄ），２．６６（２Ｈ，ｑ），４．１１－４．２４（２Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｑ），４．４５－４．５６（４Ｈ，ｍ），７．０８（１Ｈ，ｓ），７．８５（１Ｈ，ｓ），８．８６（２Ｈ，ｄｄ），９．２６（１Ｈ，ｄ），９．４３（１Ｈ，ｄ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ］＋＝３２２
水素化ナトリウム（９．６３ｇ、２４０．８９ｍｍｏｌ）（鉱油中６０％）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）撹拌溶液に、２－（ジエトキシホスホリル）ブタン酸エチル（６０．８ｇ、２４０．８９ｍｍｏｌ）を、添加漏斗を用いて０℃で滴下して、灰色の混合物を得た。得られた混合物を０℃で１０分間撹拌し、１０分間かけて室温まで加温し、４０℃で５分間撹拌した。反応混合物を－７８℃に冷却し、次いで、この冷却した反応混合物に、６－ホルミル－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体２、２２．５ｇ、１００．３７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＴＨＦに溶解した溶液をゆっくり添加した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。得られた残渣をフラッシュシリカクロマトグラフィー、溶離液勾配０から５０％酢酸エチル（ヘキサン中）により精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、６－［（Ｅ）－２－エトキシカルボニルブタ－１－エニル］－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（中間体３、２４．３０ｇ、７５％）を黄色油状物（Ｅ／Ｚ異性体の１：１及び混合物）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）１．１３（３Ｈ，ｔ），１．１８（３Ｈ，ｔ），１．２３（３Ｈ，ｔ），１．３７（３Ｈ，ｔ），１．４５（６Ｈ，ｑ），２．５７（２Ｈ，ｑｄ），２．６６（２Ｈ，ｑ），４．１１－４．２４（２Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｑ），４．４５－４．５６（４Ｈ，ｍ），７．０８（１Ｈ，ｓ），７．８５（１Ｈ，ｓ），８．８６（２Ｈ，ｄｄ），９．２６（１Ｈ，ｄ），９．４３（１Ｈ，ｄ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ］＋＝３２２
【0041】
中間体４：７－エチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル
エタノール（３０ｍＬ）中に６－［（Ｅ）－２－エトキシカルボニルブタ－１－エニル］－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（Ｅ／Ｚ異性体の１：１混合物）（中間体３、３．７５ｇ、１１．６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１．８５７ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）（１０％）を混合した混合物を脱気し、Ｈ２（バルーン）で満たし、反応物をＨ２雰囲気下、室温で終夜撹拌した。混合物をｃｅｌｉｔｅ床に通して濾過し、ｃｅｌｉｔｅ床をエタノールで洗浄した。濃縮後、得られた残渣に４Ｍ ＨＣｌ（ジオキサン中）（１５ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をエーテルで希釈し、固形物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、７－エチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体４、２．２６０ｇ、７８％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）０．９４（３Ｈ，ｔ），１．３３（３Ｈ，ｔ），１．４１－１．５１（１Ｈ，ｍ），１．６９－１．８１（１Ｈ，ｍ），２．４１－２．４８（１Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｄｄ），３．２０（１Ｈ，ｄｄ），４．３５（２Ｈ，ｔ），７．６７（１Ｈ，ｄ），８．６１（１Ｈ，ｄ），１０．３２（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４９．
エタノール（３０ｍＬ）中に６－［（Ｅ）－２－エトキシカルボニルブタ－１－エニル］－５－ニトロ－ピリジン－３－カルボン酸エチル（Ｅ／Ｚ異性体の１：１混合物）（中間体３、３．７５ｇ、１１．６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１．８５７ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）（１０％）を混合した混合物を脱気し、Ｈ２（バルーン）で満たし、反応物をＨ２雰囲気下、室温で終夜撹拌した。混合物をｃｅｌｉｔｅ床に通して濾過し、ｃｅｌｉｔｅ床をエタノールで洗浄した。濃縮後、得られた残渣に４Ｍ ＨＣｌ（ジオキサン中）（１５ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物をエーテルで希釈し、固形物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、７－エチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体４、２．２６０ｇ、７８％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）０．９４（３Ｈ，ｔ），１．３３（３Ｈ，ｔ），１．４１－１．５１（１Ｈ，ｍ），１．６９－１．８１（１Ｈ，ｍ），２．４１－２．４８（１Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｄｄ），３．２０（１Ｈ，ｄｄ），４．３５（２Ｈ，ｔ），７．６７（１Ｈ，ｄ），８．６１（１Ｈ，ｄ），１０．３２（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４９．
【0042】
中間体５：７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル
７－エチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体４，２．２６ｇ，９．１０ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（４０ｍＬ）に溶解し、ＤＤＱ（２．２７３ｇ，１０．０１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を還流下で３ｈ間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、残渣を室温で１時間撹拌した。固体を濾別し、水、続いて１０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄した。得られた固体を真空下で乾燥させて、エチル７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体５、１．７３８ｇ、７８％）を淡褐色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１．１４－１．２８（３Ｈ，ｍ），１．３５（３Ｈ，ｔ），２．５８（２Ｈ，ｑ），４．３８（２Ｈ，ｑ），７．８３（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ），８．９０（１Ｈ，ｓ），１２．０５（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４７．
７－エチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体４，２．２６ｇ，９．１０ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（４０ｍＬ）に溶解し、ＤＤＱ（２．２７３ｇ，１０．０１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を還流下で３ｈ間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、残渣を室温で１時間撹拌した。固体を濾別し、水、続いて１０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄した。得られた固体を真空下で乾燥させて、エチル７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体５、１．７３８ｇ、７８％）を淡褐色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１．１４－１．２８（３Ｈ，ｍ），１．３５（３Ｈ，ｔ），２．５８（２Ｈ，ｑ），４．３８（２Ｈ，ｑ），７．８３（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ），８．９０（１Ｈ，ｓ），１２．０５（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４７．
【0043】
中間体６：３－エチル－７－（ヒドロキシメチル）－１Ｈ－１，５－ナフチリジン－２－オン
ＴＨＦ（２９．２ｍＬ、５８．４７ｍｍｏｌ）中２Ｍの水素化アルミニウムリチウムを、テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中の７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体５、７．２ｇ、２９．２４ｍｍｏｌ）に、窒素下４５分間にわたって、０℃で滴下した。得られた混合物を０℃で１．５時間撹拌した。１Ｍ ａｑＨＣｌ（２９ｍＬ）を滴下して反応混合物の反応を停止させた。反応混合物を濃縮し、固体を水（約１５０ｍＬ）及び１Ｍ ＨＣｌ溶液２９ｍＬで希釈して、黄色懸濁液を得た。固体を濾過によって収集し、水、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、粗生成物を黄色固体（何らかの無機塩によって汚染された）として得た。この固体をメタノール及びＤＣＭ（２：１）の混合物（４００ｍｌ）に懸濁し、加熱還流した。固体を濾別した。この固体をメタノール／ＤＣＭ混合物に再懸濁し、この手順を５回繰り返して、この混合物から大部分の生成物を得た。次いで、合わせた濾液を約１００ｍＬまで濃縮し、固体を濾過によって収集し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、３－エチル－７－（ヒドロキシメチル）－１Ｈ－１，５－ナフチリジン－２－オン（中間体６、４．３５ｇ、７２．８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１．１８（３Ｈ，ｔ），２．５２－２．５６（２Ｈ，ｍ），４．６１（２Ｈ，ｄ），５．４４（１Ｈ，ｔ），７．６１（１Ｈ，ｓ），７．７４（１Ｈ，ｓ），８．３７（１Ｈ，ｓ），１１．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０５．３
ＴＨＦ（２９．２ｍＬ、５８．４７ｍｍｏｌ）中２Ｍの水素化アルミニウムリチウムを、テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中の７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－カルボン酸エチル（中間体５、７．２ｇ、２９．２４ｍｍｏｌ）に、窒素下４５分間にわたって、０℃で滴下した。得られた混合物を０℃で１．５時間撹拌した。１Ｍ ａｑＨＣｌ（２９ｍＬ）を滴下して反応混合物の反応を停止させた。反応混合物を濃縮し、固体を水（約１５０ｍＬ）及び１Ｍ ＨＣｌ溶液２９ｍＬで希釈して、黄色懸濁液を得た。固体を濾過によって収集し、水、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、粗生成物を黄色固体（何らかの無機塩によって汚染された）として得た。この固体をメタノール及びＤＣＭ（２：１）の混合物（４００ｍｌ）に懸濁し、加熱還流した。固体を濾別した。この固体をメタノール／ＤＣＭ混合物に再懸濁し、この手順を５回繰り返して、この混合物から大部分の生成物を得た。次いで、合わせた濾液を約１００ｍＬまで濃縮し、固体を濾過によって収集し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、３－エチル－７－（ヒドロキシメチル）－１Ｈ－１，５－ナフチリジン－２－オン（中間体６、４．３５ｇ、７２．８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１．１８（３Ｈ，ｔ），２．５２－２．５６（２Ｈ，ｍ），４．６１（２Ｈ，ｄ），５．４４（１Ｈ，ｔ），７．６１（１Ｈ，ｓ），７．７４（１Ｈ，ｓ），８．３７（１Ｈ，ｓ），１１．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０５．３
【0044】
実施例１：５－［４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチルリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
塩化チオニル（６．４１ｍＬ、８８．１４ｍｍｏｌ）を、３－エチル－７－（ヒドロキシメチル）－１，５－ナフチルリジン－２（１Ｈ）－オン（中間体６、３ｇ、１４．６９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．１１４ｍＬ、１．４７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）懸濁液に０℃で滴下し、得られた溶液を室温で６時間撹拌した。この混合物を濃縮乾固して、粗７－（クロロメチル）－３－エチル－１Ｈ－１，５－ナフチリジン－２－オンを得た。
【化3】
【0045】
ＤＩＰＥＡ（１２．８３ｍＬ、７３．４５ｍｍｏｌ）を、２０℃で、７－（クロロメチル）－３－エチル－１Ｈ－１，５－ナフチリジン－２－オン（上記からの粗製物）、ヨウ化カリウム（０．４８８ｇ、２．９４ｍｍｏｌ）及びＮ－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピリジン－２－カルボキサミド、２ＨＣｌ（中間体７、４．３１ｇ、１４．６９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０．００ｍＬ）撹拌溶液に添加した。得られた溶液を８０℃で２時間撹拌した。真空下で溶媒を除去した。粗製物質を水で希釈し、ａｑ．ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得た。得られた残渣を、フラッシュシリカクロマトグラフィー、溶離液勾配０から１５％ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中）により精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、５－［（４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチルリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド（実施例１、３．９３ｇ、６５．８％）をオフホワイト色の部分的に結晶化した固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１．１９（３Ｈ，ｔ），２．５３－２．５９（６Ｈ，ｍ），２．７９（３Ｈ，ｄ），３．３３－３．３９（４Ｈ，ｍ），３．６６（２Ｈ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄｄ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．７６（１Ｈ，ｓ），７．８３（１Ｈ，ｄ），８．２７（１Ｈ，ｄ），８．３６－８．４０（１Ｈ，ｍ），８．４１（１Ｈ，ｄ），１１．８５（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ（ＥＳ＋）［Ｍ］＋＝４０６．
【0046】
実施例１ － フォームＡ
実施例１では、メタノール／ジクロロメタン溶液を減圧下で蒸発させることにより、５－［４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミドを部分的に結晶化した固体として得た。このように得られた結晶性物質を結晶フォームＡとして特徴付けた。
実施例１では、メタノール／ジクロロメタン溶液を減圧下で蒸発させることにより、５－［４－［（７－エチル－６－オキソ－５Ｈ－１，５－ナフチリジン－３－イル）メチル］ピペラジン－１－イル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミドを部分的に結晶化した固体として得た。このように得られた結晶性物質を結晶フォームＡとして特徴付けた。
【0047】
結晶化度が低い場合、２０ｍｇの粗試料を０．２０ｍｌの水、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル又は他の溶媒中に周囲温度又は５０℃で１日懸濁させることによって結晶フォームＡを得た。
【0048】
フォームＡをＸＲＰＤにより分析し、結果を以下に表にし（表１）、また図４に示す。
【0049】
【表1】
【0050】
フォームＡは、ＣｕＫα放射線を用いて測定される以下の２θ値の少なくとも１つを示すことを特徴とする：８．３°、１２．４°及び１９．４°。
【0051】
実施例２
このｉｎ ｖｉｖｏ試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ野生型腫瘍モデルであるＨＢＣｘ－９におけるカルボプラチン（白金化学療法剤）と組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
このｉｎ ｖｉｖｏ試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ野生型腫瘍モデルであるＨＢＣｘ－９におけるカルボプラチン（白金化学療法剤）と組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
【0052】
材料及び方法
【0053】
【表2】
【0054】
生体相
ＨＢＣｘ－９は、事前にｉｎ ｖｉｔｒｏ培養を行わずにＸｅｎＴｅｃｈで樹立した患者腫瘍移植（ＰＤＸ）モデルである。腫瘍片をドナーマウスに皮下（ＳＣ）移植した。腫瘍容積が７００～１７６４ｍｍ３に達したとき、ドナーマウスを屠殺し、腫瘍を無菌的に切除し解剖した。壊死領域を除去した後、腫瘍を約２０ｍｍ３の断片に切断し、培養培地に移した後、レシピエント（実験用）のヌード雌マウスにＳＣ移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約１００ｍｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口（ＰＯ）治療した。ＡＺＤ５３０５は、１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、５０ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）腹腔内（ＩＰ）投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
ＨＢＣｘ－９は、事前にｉｎ ｖｉｔｒｏ培養を行わずにＸｅｎＴｅｃｈで樹立した患者腫瘍移植（ＰＤＸ）モデルである。腫瘍片をドナーマウスに皮下（ＳＣ）移植した。腫瘍容積が７００～１７６４ｍｍ３に達したとき、ドナーマウスを屠殺し、腫瘍を無菌的に切除し解剖した。壊死領域を除去した後、腫瘍を約２０ｍｍ３の断片に切断し、培養培地に移した後、レシピエント（実験用）のヌード雌マウスにＳＣ移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約１００ｍｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口（ＰＯ）治療した。ＡＺＤ５３０５は、１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、５０ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）腹腔内（ＩＰ）投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
【0055】
治療開始からの腫瘍成長阻害は、対照群及び治療群の腫瘍容積の平均変化量の比較により評価し、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ、ＴＶ≧開始ＴＶの場合）又は退縮率（ＲＥＧ、ＴＶ＜開始ＴＶの場合）として表した。また、治療開始からの平均体重変化率も全群について算出した。統計的有意性は、１標本ｔ検定を使用して評価した。統計的有意性は、以下のように示される：＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。
【0056】
５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ ＱＷのカルボプラチンと組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＱＤのＡＺＤ５３０５を使用する耐性試験を、有効性試験の開始前にＳＣＩＤ雌マウスで行い、動物の状態に対する悪影響も体重に対する有意な変化も示さなかった。
【0057】
試験材料の配合
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
【0058】
１Ｎ ＨＣｌ又は１Ｎ ＮａＯＨにより溶液のｐＨを３．５～４に調節した。注射用滅菌水又は脱イオン水を用いて最終体積とし、最終ｐＨを測定し記録した。投薬製剤は、週１回処方し、光から保護した。
【0059】
カルボプラチン（Ｔｅｖａ（登録商標））は、５０ｍｇ／ｋｇ用量（０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積）にするために０．９％ＮａＣｌ中で原液を５ｍｇ／ｍｌに希釈することにより、投薬日毎に新たに配合した。
【0060】
結果
ＨＢＣｘ－９は、フランスのＸｅｎＴｅｃｈで入手可能なＴＮＢＣ ＰＤＸモデルである。これは、ＢＲＣＡ１メチル化を伴うＢＲＣＡ ｗｔモデルとして報告されている［１］。ＨＢＣｘ－９は、オラパリブ単剤療法に対して中等度の感受性を有することも示された［２］。
ＨＢＣｘ－９は、フランスのＸｅｎＴｅｃｈで入手可能なＴＮＢＣ ＰＤＸモデルである。これは、ＢＲＣＡ１メチル化を伴うＢＲＣＡ ｗｔモデルとして報告されている［１］。ＨＢＣｘ－９は、オラパリブ単剤療法に対して中等度の感受性を有することも示された［２］。
【0061】
有効性試験において、１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤのＡＺＤ５３０５並びに５０ｍｇ／ｋｇ ＱＷのカルボプラチンを単剤療法として且つ組み合わせで試験した。治療期間は、２８日間であった。いずれの治療も試験期間中に良好な耐性を示し、有意な体重減少は見られなかった（図１及び図７）。ＡＺＤ５３０５単剤療法は、用量依存的な抗腫瘍有効性を示し、７２％のＴＧＩをもたらし、カルボプラチン単剤療法群では８８％のＴＧＩが観察された。ＡＺＤ５３０５及びカルボプラチンを一緒に投薬すると、８８％の腫瘍退縮をもたらすことによって明らかな組み合わせ効果を示した（図２及び表２）。さらに、組み合わせ群の全動物（８／８）が完全寛解（ＣＲ：ＴＶ＜１４ｍｍ３と定義される）に達した（図３）。
【0062】
結論として、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＨＢＣｘ－９ ＰＤＸモデルにおいて、それぞれの単剤療法と比較して向上した抗腫瘍効果を示していた。ＡＺＤ５３０５とカルボプラチンとの組み合わせは、動物の１００％において完全寛解をもたらし、マウスにおいて良好な耐性であった。
【0063】
【表3】
【0064】
［１］Ｃｏｕｓｓｙ Ｆ，ｄｅ Ｋｏｎｉｎｇ Ｌ，Ｌａｖｉｇｎｅ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｌａｒｇｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｇｅｎｏｍｉｃａｌｌｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｉｎｇ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２０１９；１４５（７）：１９０２‐１９１２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｉｊｃ．３２２６６
［２］ＬＣ Ｒｉｃｈｅｓ（２０２０）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０２０；１９：１３－２５
［２］ＬＣ Ｒｉｃｈｅｓ（２０２０）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０２０；１９：１３－２５
【0065】
実施例３
この試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ１変異腫瘍モデルであるＳＵＭ１４９ＰＴにおけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
この試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ１変異腫瘍モデルであるＳＵＭ１４９ＰＴにおけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
【0066】
材料及び方法
ＳＵＭ１４９ＰＴ細胞（２×１０６）を５０％マトリゲルと共に雌ＳＣＩＤマウス（体重１８ｇ超）の乳房脂肪体（ＭＦＰ）に移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約０．３ｃｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は、無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口（ＰＯ）治療し、ＰＢＳを週１回（ＱＷ）腹腔内（ＩＰ）治療した。ＡＺＤ５３０５は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、３７．５ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）ＩＰ投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
ＳＵＭ１４９ＰＴ細胞（２×１０６）を５０％マトリゲルと共に雌ＳＣＩＤマウス（体重１８ｇ超）の乳房脂肪体（ＭＦＰ）に移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約０．３ｃｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は、無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口（ＰＯ）治療し、ＰＢＳを週１回（ＱＷ）腹腔内（ＩＰ）治療した。ＡＺＤ５３０５は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、３７．５ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）ＩＰ投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
【0067】
治療開始からの腫瘍成長阻害は、対照群及び治療群の腫瘍容積の平均変化量の比較により評価し、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ、ＴＶ≧開始ＴＶの場合）又は退縮率（ＲＥＧ、ＴＶ＜開始ＴＶの場合）として表した。また、治療開始からの平均体重変化率も全群について算出した。統計的有意性は、１標本ｔ検定を使用して評価した。統計的有意性は、以下のように示される：＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。
【0068】
５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ ＱＷのカルボプラチンと組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＱＤのＡＺＤ５３０５を使用する耐性試験を、有効性試験の開始前にＳＣＩＤ雌マウスで行い、動物の状態に対する悪影響も体重に対する有意な変化も示さなかった。
【0069】
試験材料の配合
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
【0070】
１Ｎ ＨＣｌ又は１Ｎ ＮａＯＨにより溶液のｐＨを３．５～４に調節した。注射用滅菌水又は脱イオン水を用いて最終体積とし、最終ｐＨを測定し記録した。投薬製剤は、週１回処方し、光から保護した。カルボプラチン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）は、３７．５ｍｇ／ｋｇ用量（０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積）にするために０．９％ＮａＣｌ中で原液を３．７５ｍｇ／ｍｌに希釈することにより、投薬日毎に新たに配合した。
【0071】
結果
ＳＵＭ１４９ＰＴ ＴＮＢＣ ＢＲＣＡ１ｍ異種移植モデルの有効性試験において、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤのＡＺＤ５３０５並びに３７．５ｍｇ／ｋｇ ＱＷのカルボプラチンを単剤療法として且つ組み合わせで試験した。いずれの治療も試験期間中（２８日間）、良好な耐性を示し、有意な体重減少は見られなかった（図５）。ＡＺＤ５３０５単剤療法は、用量依存的な抗腫瘍有効性を示し、０．１ｍｇ／ｋｇのＱＤで２４％のＴＧＩ、０．０３ｍｇ／ｋｇのＱＤで９％のＴＧＩをもたらした。０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤで投薬したＡＺＤ５３０５は、腫瘍の成長を阻害しなかった。カルボプラチン単剤療法により６１％のＴＧＩが得られた。０．１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５とカルボプラチンとの組み合わせは、組み合わせ効果を示し、８６％のＴＧＩをもたらした。この抗腫瘍効果は、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の用量レベルを０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇに減少させた場合（それぞれ７５％のＴＧＩ及び７９％のＴＧＩ）でも維持された（図６及び表３）。
ＳＵＭ１４９ＰＴ ＴＮＢＣ ＢＲＣＡ１ｍ異種移植モデルの有効性試験において、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤのＡＺＤ５３０５並びに３７．５ｍｇ／ｋｇ ＱＷのカルボプラチンを単剤療法として且つ組み合わせで試験した。いずれの治療も試験期間中（２８日間）、良好な耐性を示し、有意な体重減少は見られなかった（図５）。ＡＺＤ５３０５単剤療法は、用量依存的な抗腫瘍有効性を示し、０．１ｍｇ／ｋｇのＱＤで２４％のＴＧＩ、０．０３ｍｇ／ｋｇのＱＤで９％のＴＧＩをもたらした。０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤで投薬したＡＺＤ５３０５は、腫瘍の成長を阻害しなかった。カルボプラチン単剤療法により６１％のＴＧＩが得られた。０．１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５とカルボプラチンとの組み合わせは、組み合わせ効果を示し、８６％のＴＧＩをもたらした。この抗腫瘍効果は、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の用量レベルを０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇに減少させた場合（それぞれ７５％のＴＧＩ及び７９％のＴＧＩ）でも維持された（図６及び表３）。
【0072】
結論として、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＳＵＭ１４９ＰＴ異種移植モデルにおいて、単剤療法と比較して向上した抗腫瘍効果を示していた。カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の用量レベルを１０分の１（０．１ｍｇ／ｋｇから０．０１ｍｇ／ｋｇ）に減少させても、腫瘍増殖阻害効果に影響はなかった。
【0073】
【表4】
【0074】
実施例４
この試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ１／２野生型腫瘍モデルであるＨＢＣｘ－９におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の投薬範囲の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
この試験は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＲＣＡ１／２野生型腫瘍モデルであるＨＢＣｘ－９におけるカルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の投薬範囲の抗腫瘍効果を調べるために実施した。ＡＺＤ５３０５単剤療法アーム及びカルボプラチン単剤療法アームを、対照として試験設計に含めた。
【0075】
材料及び方法
ＨＢＣｘ－９は、事前にｉｎ ｖｉｔｒｏ培養を行わずにＸｅｎＴｅｃｈで樹立した患者腫瘍移植（ＰＤＸ）モデルである。腫瘍片をドナーマウスに皮下（ＳＣ）移植した。腫瘍容積が１００８～１７６４ｍｍ３に達したとき、ドナーマウスを屠殺し、腫瘍を無菌的に切除し解剖した。壊死領域を除去した後、腫瘍を約２０ｍｍ３の断片に切断し、培養培地に移した後、レシピエント（実験用）のヌード雌マウスにＳＣ移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約１１０ｍｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は、無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口治療（ＰＯ）した。ＡＺＤ５３０５は、１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、５０ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）ＩＰ投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
ＨＢＣｘ－９は、事前にｉｎ ｖｉｔｒｏ培養を行わずにＸｅｎＴｅｃｈで樹立した患者腫瘍移植（ＰＤＸ）モデルである。腫瘍片をドナーマウスに皮下（ＳＣ）移植した。腫瘍容積が１００８～１７６４ｍｍ３に達したとき、ドナーマウスを屠殺し、腫瘍を無菌的に切除し解剖した。壊死領域を除去した後、腫瘍を約２０ｍｍ３の断片に切断し、培養培地に移した後、レシピエント（実験用）のヌード雌マウスにＳＣ移植した。腫瘍を両側ノギス測定によって週２回測定し（長さ×幅）、腫瘍容積は楕円の公式（π／６×幅×幅×長さ）を使用して計算した。動物の体重及び腫瘍の状態は、試験中にわたってモニタした。腫瘍容積が約１１０ｍｍ３に達したとき、マウスを無作為に治療群に振り分けた。動物は、無作為化の翌日から治療を受けた。対照動物には、ビヒクル（ＨＣｌでｐＨ３．５～４に酸性化した脱イオン水）を１日１回（ＱＤ）経口治療（ＰＯ）した。ＡＺＤ５３０５は、１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇでＰＯ ＱＤ投薬した。カルボプラチンは、５０ｍｇ／ｋｇで週１回（ＱＷ）ＩＰ投薬した。組み合わせ群では、マウスにまずカルボプラチンを投薬し、その後、１０分以内にＡＺＤ５３０５を投与した。
【0076】
治療開始からの腫瘍成長阻害は、対照群及び治療群の腫瘍容積の平均変化量の比較により評価し、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ、ＴＶ≧開始ＴＶの場合）又は退縮率（ＲＥＧ、ＴＶ＜開始ＴＶの場合）として表した。また、治療開始からの平均体重変化率も全群について算出した。統計的有意性は、１標本ｔ検定を使用して評価した。統計的有意性は、以下のように示される：＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。
【0077】
５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ ＱＷのカルボプラチンと組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＱＤのＡＺＤ５３０５を使用する耐性試験を、有効性試験の開始前にＳＣＩＤ雌マウスで行い、動物の状態に対する悪影響も体重に対する有意な変化も示さなかった。
【0078】
血漿ＰＫ用の試料は、キシラジン－ケタミン麻酔下の心臓内穿刺によって４００～６００μＬの全血を採取することによって得た。血液を、セパレータゲルチューブを備えたＢＤ Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ Ｈｅｐ－Ｌｉに移し、５０００ＲＰＭで５～１０分間、４℃で遠心分離した。分離した血漿を採取し、－８０℃で保存した。血漿試料中の化合物レベルを測定するために、各血漿試料（２５μｌ）を、適切な希釈係数を用いて調製し、ＤＭＳＯ中で調製し、ブランク血漿中にスパイクした１１点標準検量線（１～１００００ｎＭ）と比較した。アセトニトリル（１００μｌ）を内部標準と共に添加し、続いて３０００ＲＰＭで１０分間遠心分離した。次いで、上清（５０μｌ）を３００μｌの水で希釈し、ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。
【0079】
試験材料の配合
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
ＡＺＤ５３０５を、０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積で投与されるように、水／ＨＣｌ（ｐＨ３．５～４）ビヒクル中で経口投薬用に配合した。固形物は、適切な体積の１Ｎ ＨＣｌを約１：１．２５の薬物／ＨＣｌモル比まで添加し、溶液が得られるまで撹拌／ボルテックス／超音波処理しながら最終体積の８０％の滅菌脱イオン水を添加することによって希釈した。必要な１Ｎ ＨＣｌの体積は、以下の式に従って計算した：
添加した１Ｎ ＨＣｌの体積（ｍｌ）＝１．２５×［濃度（ｍｇ／ｍｌ）÷４０６．４８（ｇ／モル）÷１Ｍ］×最終体積（ｍｌ）。
【0080】
１Ｎ ＨＣｌ又は１Ｎ ＮａＯＨにより溶液のｐＨを３．５～４に調節した。注射用滅菌水又は脱イオン水を用いて最終体積とし、最終ｐＨを測定し記録した。投薬製剤は、週１回配合し、光から保護した。カルボプラチン（Ｓａｎｄｏｚ）は、５０ｍｇ／ｋｇ用量（０．１ｍｌ／１０ｇの用量体積）にするために０．９％ＮａＣｌ中で原液を５ｍｇ／ｍｌに希釈することにより、投薬日毎に新たに配合した。
【0081】
結果
ＨＢＣｘ－９は、フランスのＸｅｎＴｅｃｈで入手可能なＴＮＢＣ ＰＤＸモデルである。これは、ＢＲＣＡ１メチル化並びに「ＢＲＣＡｎｅｓｓ特徴」を伴うＢＲＣＡ１／２ ｗｔモデルとして報告されている［１］。ＨＢＣｘ－９は、オラパリブ単剤療法に対して中等度の感受性を有することも示された［２］。
ＨＢＣｘ－９は、フランスのＸｅｎＴｅｃｈで入手可能なＴＮＢＣ ＰＤＸモデルである。これは、ＢＲＣＡ１メチル化並びに「ＢＲＣＡｎｅｓｓ特徴」を伴うＢＲＣＡ１／２ ｗｔモデルとして報告されている［１］。ＨＢＣｘ－９は、オラパリブ単剤療法に対して中等度の感受性を有することも示された［２］。
【0082】
有効性試験において、１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇ ＱＤのＡＺＤ５３０５並びに５０ｍｇ／ｋｇ ＱＷのカルボプラチンを単剤療法として且つ組み合わせで試験した。いずれの治療も試験期間中（２８日間）に良好な耐性を示し、有意な体重減少は見られなかった（エラー！参照元見つからず）。ＡＺＤ５３０５単剤療法は、用量依存的な抗腫瘍有効性を示し、１ｍｇ／ｋｇのＱＤで６６％のＴＧＩ、０．１ｍｇ／ｋｇのＱＤで４４％のＴＧＩ、０．０１ｍｇ／ｋｇのＱＤで７％のＴＧＩをもたらした。カルボプラチン単剤療法により６８％のＴＧＩが得られた。１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５及びカルボプラチンを用いた治療は、組み合わせ効果を示し、９０％の退縮をもたらした。この抗腫瘍効果は、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の用量レベルを０．１ｍｇ／ｋｇに減少させた場合でも維持された（８６％の退縮）。カルボプラチンを０．０１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５と組み合わせた場合、効果は、わずかに低下した（４９％のＴＧＩ）。しかし、この群でも、いずれかの単剤療法アームと比較して組み合わせ効果が得られる（エラー！参照元見つからず、及び表）。
【0083】
この実験では、治療を２８日間継続し、その後、治療を中止して寛解の持続時間をモニタした。エラー！参照元見つからずのグラフは、最も有効な群（１ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５と組み合わせたカルボプラチン）において、腫瘍は４９日目（治療中止後３週間）頃に再成長し始め、その再成長速度は２群間で同様であったことを表す。さらに、カルボプラチン＋０．０１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ５３０５群では、治療中止から約２週間後に腫瘍が再成長し始めた。エラー！参照元見つからず。
【0084】
結論として、カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＨＢＣｘ－９ ＰＤＸモデルにおいて、単剤療法と比較して向上した抗腫瘍効果を示していた。カルボプラチンと組み合わせたＡＺＤ５３０５の投薬レベルを１０分の１（１ｍｇ／ｋｇから０．１ｍｇ／ｋｇ）に減少させても、腫瘍退縮効果に影響はなかった。
【0085】
【表5】
【0086】
本明細書は、本発明を開示し、いかなる当業者も本発明を実行すること（例えば、本開示の塩、物質又は組成物のいずれかを製造及び使用すること及び本開示の方法又はプロセスのいずれかを実施すること）ができるように実施例を用いる。本発明の特許取得の対象となる範囲は、特許請求の範囲によって定義され、当業者が認識する他の実施例を含み得る。そのような他の実施例は、それらが特許請求の範囲の逐語的な文言と異ならない要素を有する場合又はそれらが特許請求の範囲の逐語的な文言と非実質的な相違を有する均等な要素を含む場合、特許請求の範囲内であることが意図される。本明細書では、本発明の好ましい実施形態が示され、説明されているが、そのような実施形態は、例示としてのみ提供されるものであり、本発明の範囲を別途限定することを意図しない。本発明を実施する際、記載されている本発明の実施形態に対する様々な代替形態が採用され得る。本節及び本開示全体に使用される節の表題は、限定することを意図しない。
【0087】
上記で引用された全ての参考文献（特許及び非特許）は、参照により本特許出願に組み込まれる。これらの参考文献の説明は、それらの著者によりなされた主張を単に要約することを意図するものである。任意の参考文献（又は任意の参考文献の一部）が、関連する先行技術（又はあらゆる先行技術）であることを認めるものではない。本出願人は、引用された参考文献の正確性及び妥当性に異議を唱える権利を有する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【国際調査報告】