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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-02
(54)【発明の名称】組み合わせ処置
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20231026BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20231026BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20231026BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20231026BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231026BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231026BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20231026BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T
C07K16/46 ZNA
C07K16/18
C07K16/28
A61K39/395 U
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K47/64
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023523055
(86)(22)【出願日】2021-10-21
(85)【翻訳文提出日】2023-06-06
(86)【国際出願番号】 EP2021079184
(87)【国際公開番号】W WO2022084440
(87)【国際公開日】2022-04-28
(31)【優先権主張番号】20203110.0
(32)【優先日】2020-10-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520119851
【氏名又は名称】ヌマブ セラピューティックス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】110003395
【氏名又は名称】弁理士法人蔦田特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユレク， デヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】グンデ， テア
(72)【発明者】
【氏名】シモニン， アレクサンダー
(72)【発明者】
【氏名】チャタジー， ビティ
(72)【発明者】
【氏名】スネル， ダニエル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF63
4C085AA14
4C085BB01
4C085BB44
4C085DD61
4C085EE03
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）およびＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）と；腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）およびＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイ（ＣＤ３－ＢＤ）を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）と；薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。本発明は、さらに、前記の第１の多重特異性抗体ＭＡ１と前記の第２の多重特異性抗体ＭＡ２とを含むキットに関する。本発明は、さらに、前記の医薬組成物または前記のキットの使用および使用の方法に関する。最後に、本発明は、癌を患う患者を処置するための方法に関し、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）およびＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）と腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）およびＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）とを投与するステップを含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下を含む医薬組成物であって：１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体、
前記のＭＡ１が免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない、
医薬組成物。
【請求項2】
以下を含むキットであって：１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
前記のＭＡ１が免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない、
キット。
【請求項3】
前記のＭＡ１または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方がさらに１つのヒト血清アルブミン結合ドメイン（ｈＳＡ－ＢＤ）を含む、請求項１に記載の医薬組成物または請求項２に記載のキット。
【請求項4】
前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含み（ａ）配列番号４のＶＨ配列および配列番号１１のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号５のＶＨ配列および配列番号１２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号６のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号７のＶＨ配列および配列番号１４のＶＬ配列；
（ｅ）配列番号２２のＶＨ配列および配列番号２６のＶＬ配列；
（ｆ）配列番号３１のＶＨ配列および配列番号３７のＶＬ配列；
（ｇ）配列番号３２のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列；もしくは
（ｈ）配列番号３３のＶＨ配列および配列番号３９のＶＬ配列；
ならびに／または前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含み
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号４７のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号６０のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列；
（ｅ）配列番号６１のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列；もしくは
（ｆ）配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列；
ならびに前記のｈＳＡ－ＢＤが存在する場合には以下を含み
（ａ）配列番号７４のＶＨ配列および配列番号７８のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８７のＶＬ配列；
具体的には、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含み
（ｆ）配列番号３１のＶＨ配列および配列番号３７のＶＬ配列；
（ｇ）配列番号３２のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列；もしくは
（ｈ）配列番号３３のＶＨ配列および配列番号３９のＶＬ配列；
前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含み
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号４７のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；もしくは
（ｃ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列；
ならびに前記のｈＳＡ－ＢＤが存在する場合には以下を含む
（ａ）配列番号７４のＶＨ配列および配列番号７８のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８７のＶＬ配列、
請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項5】
前記のＭＡ１が、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、および１１１のｓｃＤｂならびに配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、および１３０のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから選択され、好ましくは、前記のＭＡ１が配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、および１３０のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから選択され、より好ましくは、前記のＭＡ１が配列番号１２５、１２６、１２７、および１３０のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから選択され、具体的には、前記のＭＡ１が配列番号１２５、１２７、および１３０のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項6】
腫瘍細胞関連抗原（ＴＡＡ）が、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＴＰＢＧ（５Ｔ４）、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６）、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＬＥＣ１２Ａ（ＣＬＬ１）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、ＣＤ３３、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ２７６、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＦＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＤ１３３、ＥＰＨＡ２、ＨＬＡ－Ａ２、ＩＬ１３ＲＡ２、ＲＯＲ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＤ１３５、ＧＤ－２、ＧＡ７３３、ＣＤ１３５（ＦＬＴ３）、ＣＳＰＧ４、およびＴＡＧ－７２からなる群から選択され、好ましくは、ＴＡＡが、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＥＡ、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＬＥＣ１２ａ、およびＲＯＲ１からなる群から選択され、
具体的には、ＴＡＡが、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択される、
請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項7】
前記のＭＡ２が１つのＴＡＡ－ＢＤを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項8】
ＴＡＡ－ＢＤが以下である、請求項７に記載の医薬組成物またはキットメソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）、具体的には、以下を含むＭＳＬＮ－ＢＤ
（ｉ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には、配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には、配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む、
具体的には、以下を含むＭＳＬＮ－ＢＤ
ａ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１４２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１４６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ＨＥＲ２（ＨＥＲ２）に特異的に結合するＨＥＲ２結合ドメイン（ＨＥＲ２－ＢＤ）、具体的には、以下を含むＨＥＲ２－ＢＤ
（ｉ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には、配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には、配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む、
具体的には、以下を含むＨＥＲ２－ＢＤ
ａ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１６８または１６９と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１７３または１７４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）、具体的には、以下を含むＲＯＲ１－ＢＤ
（ｉ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には、配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には、配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む、
具体的には、以下を含むＲＯＲ１－ＢＤ
ａ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号２２１または２２２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号２２３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
【請求項9】
ＭＡ２が、２つのＴＡＡ－ＢＤ、具体的には同じ抗原に結合する２つのＴＡＡ－ＢＤを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項10】
前記のＴＡＡ－ＢＤが以下である、請求項９に記載の医薬組成物またはキットメソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）、具体的には、以下を含むＭＳＬＮ－ＢＤ
（ｉ）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；またはそれぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；またはそれぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には、配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には、配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む；
具体的には、以下を含むＭＳＬＮ－ＢＤ
ａ．１）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号１５０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号１５２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．３）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．３）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．３）アミノ酸配列配列番号１６０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．３）アミノ酸配列配列番号１６４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．４）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．４）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．４）アミノ酸配列配列番号１９４または１９５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．４）アミノ酸配列配列番号１９６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．５）それぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．５）それぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．５）アミノ酸配列配列番号２０３または２０４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．５）アミノ酸配列配列番号２０５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
【請求項11】
前記のＴＡＡ－ＢＤが以下である、請求項９に記載の医薬組成物またはキットＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）、具体的には、以下を含むＲＯＲ１－ＢＤ
（ｉ）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には、配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む、
具体的には、以下を含むＲＯＲ１－ＢＤ
ａ．１）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号２１２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号２１３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、および
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
【請求項12】
前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含み（ｉ）配列番号１３１、１３２、および１３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号１３５、１３６、および１３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む；
具体的には、前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号１３４または１８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
（ｉｉ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、
請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項13】
前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；または
（ｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；または
（ｉｉｉ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；または
（ｉｖ）配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；または
（ｖ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
【請求項14】
前記のＭＡ２が以下からなる群から選択される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット：配列番号１７５、１８０、１８１、２３６、および２３７のｓｃＭＡＴＣＨ３に基づく抗体；ならびに
配列番号１７６および１７７、１７８および１７９、２２４および２２５、２２６および２２７、２２８および２２９、２３０および２３１、２３２および２３３、２３４および２３５、２３８および２３９、ならびに２４０および２４１のＭＡＴＣＨ４に基づくヘテロ二量体抗体。
【請求項15】
疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患、具体的には中皮腫、膵臓癌、胃癌、肺癌、乳癌、および卵巣癌から選択される癌、炎症性および自己免疫性疾患の処置における使用のための、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項16】
疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患、具体的には中皮腫、膵臓癌、胃癌、肺癌、乳癌、および卵巣癌から選択される癌の処置のための方法であって、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物またはキットを投与するステップを含む、方法。
【請求項17】
癌、具体的にはメラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌を患う患者を処置するための方法であって、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）およびＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）と、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）およびＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）とを前記の患者に投与するステップを含み、前記のＭＡ１およびＭＡ２が請求項１～１４に記載される通りである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）およびＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）と；腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）およびＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）と；薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。本発明は、さらに、前記の第１の多重特異性抗体ＭＡ１と前記の第２の多重特異性抗体ＭＡ２とを含むキットに関する。本発明は、さらに、前記の医薬組成物または前記のキットの使用および使用の方法に関する。最後に、本発明は、癌を患う患者を処置するための方法に関し、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）およびＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）と腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）およびＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）とを投与するステップを含む。
【背景技術】
【0002】
癌は、その処置においてなされた相当の進歩にもかかわらず、主要なアンメットメディカルニーズを呈し続けている。癌処置において近年なされた最も実質的な進歩のいくつかは：モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）、組み換え蛋白質、およびキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）治療を包含するがこれらに限定されない種々の分子クラスの免疫療法の出現に伴って到来した。かかる治療は：ａ）免疫エフェクター細胞を腫瘍常在型細胞に積極的に指向させること、および／またはｂ）免疫エフェクター細胞を刺激すること、および／またはｃ）腫瘍によって媒介される免疫抑制を和らげることによって、抗腫瘍免疫を誘導する。これらの免疫療法は、普通は、腫瘍外の場所と比較して腫瘍常在型細胞（例えば悪性細胞、腫瘍血管系の細胞、間質細胞、免疫細胞など）による特異的な抗原の過剰発現を活用して、それらの薬理学的活性を腫瘍へと標的化する。これらの抗原のうち、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は悪性細胞によって選択的に過剰発現される細胞表面蛋白質を含む。高い親和性でＴＡＡに結合することによって、免疫療法は、ある度合いまで、それらの免疫調節活性を腫瘍細胞および免疫エフェクター細胞の間の免疫シナプスに制限し得る。
【0003】
ＴＡＡ結合免疫治療薬の普通のクラスは、腫瘍細胞をオプソニン化すること、およびＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）発現細胞、主としてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による抗体依存的な細胞によって媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘発することによって、抗腫瘍免疫を誘起するｍＡｂである。他のＴＡＡ結合免疫療法は、悪性細胞の標的化された枯渇化を誘導するための細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、およびＴ細胞抗原ＣＤ３に同時に係合するｂｓＡｂ（ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂ）を活用する。
【0004】
ＴＡＡ指向性の（リダイレクト）ＣＴＬおよび従来のＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂの治療有用性は臨床的に検証されているが、用量制限毒性（ＤＬＴ）が、多くの場合には最大有効量（ＭＥＤ）での投与を不可能にするか、または処置の打ち切りに至り、限定された効力をもたらす。
【0005】
ＤＬＴの１つの理由は、推定上は抗ＣＤ３ドメインの過剰な活性を原因として、従来のＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂがサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）にもまた普通に関連するということである。免疫療法の腫瘍外活性は健康な組織における炎症性サイトカインの分泌をもたらし、これは望ましくない安全性プロファイルをもたらし得る。さらにその上、ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂはＴＡＡ過剰発現細胞を強力に枯渇化するが、それらは、かかる細胞が腫瘍抗原（単数または複数）を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するかどうか（すなわち、腫瘍反応性Ｔ細胞）にかかわらずＣＴＬを動員および刺激することによってそうする。よって、ホストのネイティブな抗腫瘍免疫を刺激または再活性化するよりもむしろ、ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂはＣＴＬをやや無差別に刺激し、可能性として安全性リスクを呈する。
【0006】
かかるＤＬＴが生起する厳密な経路は様々であり得るが、免疫療法に関連する毒性のリスクは、典型的には、薬理学的活性の腫瘍局在を増強することによって最小化または消失させられ得る。
【0007】
ほぼ専ら癌細胞上に発現されるＴＡＡ、例えば癌胎児腫瘍抗原は、クリーンなＴＡＡと言われる。典型的には癌細胞と比較してより低いレベルで正常な非癌細胞上にもまた発現されるＴＡＡは、クリーンでないＴＡＡと考えられる。ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂアプローチの非常に高い力価を原因として、それらはＴＡＡを発現する非腫瘍細胞をもまた損傷するので、クリーンでないＴＡＡは難題である。メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、およびＨＥＲ２は、クリーンでないＴＡＡの例である；それらは腫瘍細胞上のみならずより低いレベルではあるが種々の他の組織においてもまた発現される。よって、クリーンでないＴＡＡを標的化するときには、腫瘍組織に対するＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂアプローチの選択性を改善してオフ腫瘍／オンターゲット効果を最小化する新規の治療が必要とされる。これは、具体的にはＭＳＬＮ／ＣＤ３－ｂｓＡｂおよびＨＥＲ２／ＣＤ３－ｂｓＡｂアプローチに当てはまる。
【0008】
ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂアプローチの効率および選択性を増大させるためには、異なる戦略が追求される。
【0009】
１つの戦略には、所望のＴＡＡに対して二価である多重特異性Ｔ細胞係合抗体、すなわち、同じＴＡＡに対して特異的である２つ以上の結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、例えば２つのＭＳＬＮ－ＢＤまたは２つのＨＥＲ２－ＢＤとＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを有するＴ細胞係合多重特異性抗体を提供することによるアビディティ効果の使用が関わり、２つ以上のＴＡＡ－ＢＤの結合親和性は良好に均衡化された範囲にある。この二価の結合戦略は、高いＴＡＡ発現レベルを有する腫瘍細胞の効率的なアビディティによって駆動される標的化を許しながら、健康すなわち低ＴＡＡ発現細胞ははるかに影響されない。かかる多重特異性抗体は理論上は高い腫瘍局在および改善された選択性を誘起することができ、これらは種々の癌のためのより安全なかつより有効な治療を提供し得る。しかしながら、治療使用のための多重特異性抗体の実装は、それらの分子アーキテクチャ、それらのコンポーネントの抗原結合ドメインの特性、それらの製造性および／または不良な生物物理学的特性の問題を原因として複雑化している。それゆえに、限定された数のかかる多重特異性分子のみがこれまでのところ開発されている。
【0010】
例えば、特許文献１は２つの低親和性抗ＨＥＲ２結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性の１Ｆａｂ－ＩｇＧに基づく抗体を記載し、これらは高ＨＥＲ２発現細胞株に対して改善されたインビトロ選択性を見せる。
【0011】
非特許文献１は２つの低親和性抗ＭＳＬＮ結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性抗体を記載している。この二重特異性抗体はＩｇＧに基づき、ＭＳＬＮおよびＣＤ３εに対する特異性を有する２つのｓｃＦａｂアームと、ＣＤ３ε特異的なｓｃＦａｂのＮ末端に融合された１つの追加のＭＳＬＮ特異的なｓｃＦａｂ断片とを有する。
【0012】
別の戦略には、ＴＡＡ指向性の（リダイレクト）免疫療法に対する患者応答を増強する狙いを有する追加の免疫治療抗体の併用投与が関わる。例えば、腫瘍によって媒介される免疫抑制を和らげること、および／または補助刺激受容体をさらに活性化することによってだが副作用を増大させることなしに免疫応答を増大させることによる。理想的には、このアプローチは、ＤＬＴにとって重大なＴＡＡ／ＣＤ３二重特異性抗体コンポーネントの有効用量レベルの縮減を許し、治療ウインドウの幅広化をもたらすべきである。
【0013】
腫瘍によって媒介される免疫抑制は多くの場合に免疫チェックポイントリガンド／受容体（例えばＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ－４）の発現によって誘導される。免疫チェックポイントは免疫系の制御因子であり、癌における自己寛容または免疫抑制などのプロセスに関わる。免疫抑制性の抗原、例えばＣＴＬＡ－４（例えばイピリムマブ）、ＰＤ－１（例えばニボルマブ、ペムブロリズマブ）、およびＰＤＬ１（例えばアベルマブ、アテゾリズマブ）をブロックするモノクローナル抗体は、種々の腫瘍組織学表現型を見せる患者において印象的な奏功率を誘起している。
【0014】
ＰＤＬ１（ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ１）は４０ｋＤａのＩ型膜貫通蛋白質である。ＰＤＬ１は、活性化ＴおよびＢ細胞によって発現される鍵の免疫チェックポイント受容体ＰＤ－１にとっての表面糖蛋白質リガンドであり、免疫抑制を媒介する。ＰＤＬ１は慢性の感染、妊娠、組織アログラフト、自己免疫性疾患、および癌の間の免疫系応答の抑制に関連づけられている。ＰＤＬ１は、抗原提示細胞およびヒト癌細胞両方、例えば頭頸部の有棘細胞癌、メラノーマ、および脳、甲状腺、胸腺、食道、肺、乳部、胃腸管、大腸、肝臓、膵臓、腎臓、副腎皮質、膀胱、尿路上皮、卵巣、および皮膚腫瘍上に見出される（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。ＰＤＬ１は正常組織上には滅多に発現されないが、腫瘍部位上には誘導的に発現される（非特許文献９；非特許文献１０）。ＰＤＬ１はＰＤ－１に結合することによってＴ細胞活性化およびサイトカイン分泌を下方制御する（非特許文献１１；非特許文献１２）。ＰＤＬ１によって活性化されたＰＤ－１は、可能性として、腫瘍発生および成長のための免疫寛容な環境を提供する。ＰＤＬ１は別の受容体Ｂ７．１（Ｂ７－１、ＣＤ８０）との相互作用によってもまたＴ細胞機能を負に制御する。
【0015】
ＰＤ－１シグナル伝達を遮断するいくつもの抗体が臨床開発に入っている。これらの抗体は次の２つの主なカテゴリーに属する：ＰＤ－１を標的化するもの（ニボルマブ、ブリストルマイヤーズスクイブ；ペムブロリズマブ、メルク、ホワイトハウス・ステーション、ＮＪ；ピジリズマブ、キュアテック（CureTech）、ヤブネ、イスラエル）およびＰＤＬ１を標的化するもの（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ジェネンテック、サウスサンフランシスコ、ＣＡ；ＭＥＤＩ４７３６、メディミューン／アストラゼネカ；ＢＭＳ－９３６５５９、ブリストルマイヤーズスクイブ；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＥＭＤセローノ、ロックランド、ＭＡ）（総説は非特許文献１３を参照）。ＰＤＬ１を標的化することは、ＰＤ－１を標的化することに対して、異なるバイオロジクス効果をもたらし得る。ＰＤ－１抗体はそのリガンドのＰＤＬ１およびＰＤＬ２両方とのＰＤ－１の相互作用を妨げる。この相互作用の効果は未知のままに残っているが、ＰＤＬ１抗体はＰＤ－１がＰＤＬ２と相互作用することを妨げない。しかしながら、ＰＤＬ１抗体は、ＰＤ－１のみならず、Ｔ細胞に対して負のシグナルを行使すると思われているＢ７－１とのＰＤＬ１の相互作用をもまた妨げる（非特許文献１４）。ＰＤＬ１をブロックすることは有望な初期データを実証しており、現行では、４つの臨床抗ＰＤＬ１ｍＡｂが試験中である：アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６（両方ともヒトＩｇＧ１のＦｃヌルバリアントである）、ＭＳＢ００１０７８Ｃ（ＩｇＧ１）、ならびにＢＭＳ－９３６５５９（ＩｇＧ４）（非特許文献１５）。
【0016】
新たなおよび新興しつつある併用投与処置は、高頻度で、抗ＰＤＬ１／ＰＤ１抗体をＴＡＡ指向性の（リダイレクト）ＣＴＬに基づく免疫療法と組み合わせている。
【0017】
特許文献２は、例えば、腫瘍の成長を処置または阻害するための方法を記載し、ＣＤ２０に特異的に結合する第１の抗原結合アームとＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合アームとを含む二重特異性抗体との組み合わせで、抗ＰＤ－１抗体の投与を含む。
【0018】
特許文献３は、ＨＥＲ２陽性の癌を処置するための方法を記載し、ＨＥＲ２およびＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体との組み合わせで抗ＰＤ－１抗体の投与を含む。
【0019】
加えて、Ｔ細胞補助刺激受容体（例えば、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ）が、癌におけるＴ細胞の治療的な刺激のための標的として現行で臨床評価されつつある。かかる標的を介する抗腫瘍Ｔ細胞刺激の１つの推定上の利点は、それらがＴＣＲシグナル伝達によって一過的に発現されるということである。そのため、それらの発現は、炎症性の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）において、具体的には、それらのＴＣＲが悪性細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって発現される主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）との相互作用による継続的刺激を受けている腫瘍反応性Ｔ細胞上において、選択的に増大する傾向がある。よって、補助刺激受容体を例えばｍＡｂおよびｂｓＡｂによって標的化することは、例えばＣＤ３標的化アプローチよりも選択的に既存の抗腫瘍Ｔ細胞を刺激および増殖し、可能性として、かかるバイオロジクスをより安全に、それらの効果をより耐久的にするはずである。
【0020】
補助刺激受容体のうち、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー９、ＴＮＦＲＳＦ９）は、その発現プロファイルおよび抗腫瘍免疫の多能的メディエーターとしてのその役割を原因として、とりわけ有望だと判明している（非特許文献１６；非特許文献１７）。ＣＤ１３７は誘導性のＴ細胞補助刺激受容体である。その発現は活性化依存的であり、免疫細胞の幅広いサブセットを包摂し、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｔｒｅｇ、濾胞ＤＣを包含する樹状細胞（ＤＣ）、刺激されたマスト細胞、分化して行く骨髄系細胞、単球、好中球、好酸球（非特許文献１８）、および活性化Ｂ細胞（非特許文献１９）を包含する。加えて、ＣＤ１３７発現は腫瘍血管系（非特許文献２０；非特許文献２１）およびアテローム硬化性内皮（非特許文献２２）でもまた実証されている。
【0021】
ＣＤ１３７はＴ細胞を補助刺激して、樹立した腫瘍の根絶などのエフェクター機能を実行させ、一次ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を幅広化し、抗原特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞のメモリープールを増強する。マウスにおけるインビボの効力研究は、単剤療法としておよび組み合わせレジメンのコンポーネントとして投与されたＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは両方とも、複数の腫瘍モデルにおいて抗腫瘍の保護的なＴ細胞メモリー応答および腫瘍退縮に至るということを明らかにした。
【0022】
それゆえに、ＣＤ１３７アゴニストｍＡｂをＴＡＡ指向性の（リダイレクト）ＣＴＬ免疫療法と組み合わせるいくつかの併用投与処置が現行で検討中である。
【0023】
例えば、特許文献４および特許文献５は癌の進行を処置または遅延するための方法を記載し、ＣＤ１３７アゴニスト抗体が、ＴＡＡおよびＣＤ３に、具体的にはＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体との組み合わせで適用される。
【0024】
ＣＤ１３７アゴニストｍＡｂの利用は非常に有望な処置戦略であるが、これまでに集められた臨床データは、ＣＤ１３７刺激のためのｍＡｂに基づくアプローチは効力および安全性の間のトレードオフをもたらすということを示唆する。つまり、高度に活性なＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは処置の効力を減弱させる用量制限毒性（ＤＬＴ）を誘起し、弱く活性なＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは良好に忍容されるが、それらの予測される最小有効用量（ＭＥＤ）を包含して高度に効力があるようには見えない。
【0025】
高度に活性なＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは免疫系および臓器機能の変調に至り、毒性のリスクを増大させる。高い用量のかかるｍＡｂは、肝臓炎症と整合して、ナイーブなおよび腫瘍を持つマウスにおける肝臓へのＴ細胞浸潤ならびにアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼの上昇（非特許文献２３；非特許文献２４；非特許文献２５）、ならびに野生型マウスの肝臓におけるＦｃγＲによって誘導される免疫細胞蓄積を誘導することが報告されている（非特許文献２６）。ＣＤ１３７アゴニストｍＡｂのヒト治療使用の当初の臨床試験は、肝臓酵素の上昇および肝炎の増大した発生率をもまた実証した（非特許文献２７；非特許文献２８；非特許文献１５）。可能性として致死性の肝炎が、先に処置されたステージＩＩＩ／ＩＶメラノーマについてのブリストルマイヤーズスクイブ（ＢＭＳ）第ＩＩ相抗ＣＤ１３７研究、国内治験（ＮＣＴ）００６１２６６４において観察された。この研究およびいくつかの他のもの（ＮＣＴ００８０３３７４、ＮＣＴ００３０９０２３、ＮＣＴ００４６１１１０、ＮＣＴ００３５１３２５）は有害事象を原因として中止された（非特許文献１５）。かかる有害事象は最も疑わしくはＴ細胞の全身的な過剰刺激を原因とする。ＣＤ１３７によって媒介される肝臓傷害性は、肝臓における骨髄系細胞のオンターゲット活性化、次に、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の動員によって引き起こされると思われ、これらが活性化され、損傷を引き起こす。
【0026】
追加の架橋機能を増加させ、特定のレベルのＴＮＲＳＦ、具体的にはＣＤ１３７活性化を達成するために、ＰＤＬ１およびＴＮＲＳＦ構成員または葉酸受容体アルファ（ＦＲα）およびＴＮＲＳＦ構成員に結合する多価かつ多重特異性の融合ポリペプチドを用いることが最近示唆されており、ＰＤＬ１またはＦＲαの結合は追加の架橋機能を提供することができる（特許文献６）。エッケルマン（Eckelman）らは、ＣＤ１３７の二価の係合が、２つのＰＤＬ１結合ドメインと２つのＣＤ１３７結合ドメインとＦｃ領域とを有する多重特異性かつ多価のポリペプチドのＩＮＢＲＸ－１０５のケースのように、外因性のクラスター化事象の非存在下において有効にクラスター化し生産的なＣＤ１３７シグナル伝達を媒介するには不十分であるということを、レポーターＴ細胞株に対する分子の効果を特定するアッセイを用いて実証している。対照的に、ＰＤＬ１陽性細胞の存在下における第２の細胞表面抗原ＰＤＬ１に対する係合は、ＣＤ１３７のさらなるクラスター化および生産的なシグナル伝達を可能化する（特許文献６）。
【0027】
最近、Ｔ細胞活性化および増殖に対するＰＤＬ１およびＣＤ１３７に結合する多価かつ多重特異性の融合ポリペプチドの効果がインビトロで評価された。未成熟ＤＣおよびドナーのマッチしたＴ細胞を実装する自家インビトロ共培養系を用いて、２つのＰＤＬ１結合ドメインと２つのＣＤ１３７結合ドメインとＦｃ領域とを有する多重特異性かつ多価のポリペプチドのＩＮＢＲＸ－１０５が、一重特異性ＰＤＬ１ｓｄ－Ａｂ－Ｆｃ融合蛋白質、ＣＤ１３７ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合蛋白質、２つの組み合わせ、抗ＰＤＬ１抗体アテゾリズマブ、抗ＣＤ１３７抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）、または抗ＰＤＬ１抗体プレムブロリズマブ、およびそれらの組み合わせと比較したときに、インターフェロンガンマ（ＩＮＦγ）産生を誘導することまたはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖および活性化を媒介することにおいて優れているということが実証された（特許文献６）。
【0028】
かかる多価ＣＤ１３７アゴニストおよびＰＤ－１／ＰＤＬ１アンタゴニスト二重特異性抗体はＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂとの組み合わせで最近試験されている。
【0029】
非特許文献２９は、ＲＫＯ腫瘍マウスモデルにおけるＦｃ領域を含む二価の二重特異性の抗５Ｔ４×ＣＤ３二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ（登録商標））抗体との１つのＰＤＬ１結合ドメインと２つのＣＤ１３７結合ドメインとＦｃ領域とを有する三価の二重特異性のＴＲＩＤＥＮＴ（登録商標）抗体の併用投与を記載している。これらの２つの二重特異性抗体の組み合わせ投与は、個々の二重特異性のコンポーネント単独の投与と比較されるときに、Ｔ細胞によって媒介される癌細胞の殺細胞の強い改善をもたらすということが実証された。
【0030】
ＣＤ１３７アゴニスト作用性のおよびＰＤＬ１アンタゴニスト作用性の二重特異性抗体の単独適用および／または併用適用に関する上で言及された研究において開示されているデータは、ＣＤ１３７の効率的なクラスター化および生産的なシグナル伝達、ならびに翻って癌細胞のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）Ｔ細胞によって媒介される殺細胞の効力の適度に高い増大を保証するためには、これらの二重特異性抗体が少なくとも２つのＣＤ１３７結合ドメインを含むということが高度に好都合であるかまたはさらには要求されるということを含意する。また、これまでのところ開発された全てのＣＤ１３７アゴニスト作用性のおよびＰＤＬ１アンタゴニスト作用性の二重特異性抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域を有する。しかしながら、２つのＣＤ１３７結合ドメインを有する多重特異性抗体とのＣＤ３を標的化する二重特異性抗体の組み合わせは、かかる併用処置アプローチの安全性についての懸念を提起する。これらの懸念は、適用される分子上のＦｃ領域の存在によってさらに強められる。これらは一般的にはＴ細胞の系統的な活性化などのオフ腫瘍効果を引き起こす。これは、具体的には、ＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂがクリーンでないＴＡＡ、すなわち具体的な腫瘍細胞よりも低い程度でだが健康な細胞にもまた発現されるＴＡＡを指向するケースにおいて真である。
【0031】
そればかりでなく、かかる併用処置アプローチの開発は難しい仕事である。それにおいて適用される多重特異性抗体の生物物理学的および機能的キャラクタリゼーションならびに生物学的試験は、それが単独であっても組み合わせであっても、それらの多重特異性アーキテクチャおよび生物学的な系におけるそれらの相互作用の複雑さを原因として、典型的には困難かつ手間がかかる。それゆえに、かかる併用処置戦略は、一般的には、それらのより高い開発、承認、および産生コストを原因として、単一コンポーネント治療と比べて有意な経済的および商業的欠点を有する。結果的に、リスク対ベネフィットの増加が達成され得る併用処置戦略であっても、かかる改善はより高い開発労力および開発コストという欠点を上回らなければならない。
【0032】
概括として、同時に忍容可能な毒性学的プロファイルを有する増大した腫瘍細胞局在および有効なＴ細胞活性化を有する新規のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）免疫療法、すなわち改善されたリスク対ベネフィット比を有する免疫療法の、具体的にはクリーンでないＴＡＡを標的化する新規のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）免疫療法の明瞭な必要が残っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0033】
【特許文献1】国際公開第２０１９／１５７３０８号パンフレット
【特許文献2】国際公開第２０１７／１１２７７５号パンフレット
【特許文献3】国際公開第２０１５／０９５４１８号パンフレット
【特許文献4】国際公開第２０１８／１１４７５４号パンフレット
【特許文献5】国際公開第２０１８／１１４７４８号パンフレット
【特許文献6】国際公開第２０１７／１２３６５０号パンフレット
【非特許文献】
【0034】
【非特許文献1】ユン（Yoon）ら，バイオモレキュールズ（Biomolecules），２０２０年，第１０巻（３），ｐ．３９９
【非特許文献2】カツヤ（Katsuya）Ｙら，ラングキャンサー（Lung Cancer），第８８巻（２）：ｐ．１５４－１５９（２０１５年）
【非特許文献3】ナカニシ（Nakanishi）Ｊら，キャンサーイミュノロジーイミュノセラピー（Cancer Immunology, Immunotherapy），第５６巻（８）：ｐ．１１７３－１１８２（２００７年）
【非特許文献4】ノミ（Nomi）Ｔら，クリニカル・キャンサー・リサーチ（Clinical Cancer Research），第１３巻（７）：ｐ．２１５１－２１５７（２００７年）
【非特許文献5】フェイ（Fay）ＡＰら，ザ・ジャーナル・フォー・イミュノセラピー・オブ・キャンサー（The Journal for ImmunoTherapy of Cancer），第３巻：ｐ．３（２０１５年）
【非特許文献6】ストローム（Strome）ＳＥら，キャンサー・リサーチ（Cancer Research），第６３巻（１９）：ｐ．６５０１－６５０５（２００３年）
【非特許文献7】ジェイコブス（Jacobs）ＪＦら，ニューロオンコロジー（Neuro－Oncology），第１１巻（４）：ｐ．３９４－４０２（２００９年）
【非特許文献8】ウィルモット（Wilmotte）Ｒら，ニューロレポート（Neuroreport），第１６巻（１０）：ｐ．１０８１－１０８５（２００５年）
【非特許文献9】ドン（Dong）Ｈら，ネイチャー・メディシン（Nature Medicine），第８巻（８）：ｐ．７９３－８００（２００２年）
【非特許文献10】ワン（Wang）ら，オンコターゲッツ・アンド・セラピー（OncoTargets and Therapy），第９巻：ｐ．５０２３－５０３９（２０１６年）
【非特許文献11】フリーマン（Freeman）ら，２０００年
【非特許文献12】ラッチマン（Latchman）ら，２００１年
【非特許文献13】ポストウ（Postow）ＭＡら，ジャーナル・オブ・クリニカルオンコロジー（Journal of Clinical Oncology），Ｊｕｎ１０；第３３巻（１７）：ｐ．１９７４－８２（２０１５年）
【非特許文献14】ビュート（Butte）ＭＪら，イミュニティー（Immunity），第２７巻：ｐ．１１１－１２２，（２００７年）
【非特許文献15】チェスター（Chester）Ｃら，キャンサーイミュノロジーイミュノセラピー（Cancer Immunology, Immunotherapy），Ｏｃｔ；第６５巻（１０）：ｐ．１２４３－８（２０１６年）
【非特許文献16】バルトコヴィアク（Bartkowiak）およびクラン（Curran），フロンティアズ・イン・オンコロジー（Frontiers in Oncology），２０１５年，第５巻，ｐ．１１７
【非特許文献17】ヨネザワ（Yonezawa）ら，クリニカル・キャンサー・リサーチ（Clinical Cancer Research），２０１５年，第２１巻，ｐ．３１１３－２０
【非特許文献18】ワン（Wang）ら，イミュノロジカル・レビューズ（Immunological Reviews），第２２９巻（１）：ｐ．１９２－２１５（２００９年）
【非特許文献19】ツァン（Zhang）ら，ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（The Journal of Immunology），第１８４巻（２）：ｐ．７８７－７９５（２０１０年）
【非特許文献20】ブロイル（Broil）Ｋら，アメリカン・ジャーナル・オブ・クリニカル・パソロジー（American Journal of Clinical Pathology），第１１５巻（４）：ｐ．５４３－５４９（２００１年）
【非特許文献21】シーマン（Seaman）ら，キャンサー・セル（Cancer Cell），第１１巻（６）：ｐ．５３９－５５４（２００７年）
【非特許文献22】オロフソン（Olofsson）ら，サーキュレーション（Circulation），第１１７巻（１０）：ｐ．１２９２－１３０１（２００８年）
【非特許文献23】ニウ（Niu）Ｌら，ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（The Journal of Immunology），第１７８巻（７）：ｐ．４１９４－４２１３（２００７年）
【非特許文献24】デュブロー（Dubrot）Ｊら，インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー（International Journal of Cancer），第１２８巻（１）：ｐ．１０５－１１８（２０１１年）
【非特許文献25】シーガル（Segal）ＮＨら，クリニカル・キャンサー・リサーチ（Clinical Cancer Research）：ｐ．１９２９－１９３６（２０１６年）
【非特許文献26】クラウス（Claus）ら，サイエンス・トランスレーショナル・メディシン（Science Translational Medicine）（１１）：ｐ．１－１２（２０１９年）
【非特許文献27】スノル（Sznol）Ｍら，ジャーナル・オブ・クリニカルオンコロジー（Journal of Clinical Oncology），第２６巻（１１５Ｓ）：ｐ．３００７（２００８年）
【非特許文献28】アシエルト（Ascierto）ＰＡら，セミナーズ・イン・オンコロジー（Seminars in Oncology），第３７巻（５）：ｐ．５０８－５１６（２０１０年）
【非特許文献29】ベレズノイ（Berezhnoy）ら，ポスターＰＢ－０６７，第３０回ＥＯＲＴＣ／ＡＡＣＲ／ＮＣＩシンポジウム発表，２０１８年，ダブリン
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0035】
増殖性疾患、具体的には癌の処置を改善するための医薬を提供することが本発明の目的である。より具体的には、増大したオンターゲット効力および忍容可能な毒性学的プロファイルを有する新規のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）免疫療法を提供することが本発明の目的であった。
【0036】
本発明者は、１つのＣＤ１３７結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）と１つのＰＤＬ１結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む一連の多重特異性抗体を先に同定し得た。前記の多重特異性抗体は、標的化された様式で、すなわち専らＰＤＬ１陽性細胞の存在下において、例えばＰＤＬ１陽性の腫瘍微小環境において、クラスター化し、ＣＤ１３７シグナル伝達にアゴニスト作用する能力があり、それゆえにＣＤ１３７の全身的な活性化を回避する。同時に、前記の多重特異性抗体は、ＰＤＬに対するＰＤＬ１の結合をブロックする。これらの多重特異性抗体、ならびにそれらの医薬組成物および使用の方法は、その全体が参照によってここに組み込まれる特許出願ＷＯ２０１９／０７２８６８に開示されている。
【0037】
ここで、驚くべきことに、本発明者は、ＴＡＡおよびＣＤ３を特異的に標的化する多重特異性抗体との本明細書において定義されるかかるＣＤ１３７アゴニスト作用性のかつＰＤＬ１ブロック性の多重特異性抗体の組み合わせ適用が、前記の個々の多重特異性抗体単独の適用に対して相対的に、ＴＡＡ指向性の（リダイレクト）標的細胞の殺細胞における有意に多大な効力（インビトロ）および実質的に増大した腫瘍成長阻害（インビボ）をもたらすということを見出した。これらのＣＤ１３７アゴニスト作用性のかつＰＤＬ１ブロック性の多重特異性抗体は、１つのＣＤ１３７結合ドメインのみ、１つのＰＤＬ１結合ドメインのみを有し、また、免疫グロブリンＦｃ領域を含まないという事実にもかかわらずである。
【0038】
同時に、抗ＴＡＡ×ＣＤ３多重特異性抗体との本明細書に記載されるＰＤＬ１／ＣＤ１３７結合多重特異性抗体の組み合わせ適用の毒性学的プロファイルは、ＴＡＡ×ＣＤ３多重特異性抗体単独の適用の毒性学的プロファイルよりも悪くはなかった。
【課題を解決するための手段】
【0039】
従って、第１の態様において、本発明は以下を含む医薬組成物に関する：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
【0040】
第２の態様において、本発明は以下を含むキットに関する：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
【0041】
第３の態様において、本発明は医薬としての使用のための本発明の医薬組成物またはキットに関する。
【0042】
第４の態様において、本発明は、疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患の処置における使用のための本発明の医薬組成物またはキットに関する。
【0043】
第５の態様において、本発明は、疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患の処置のための方法に関し、本発明の医薬組成物またはキットを投与するステップを含む。
【0044】
第６の態様において、本発明は、癌を患う患者を処置するための方法に関し、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）、および腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）を投与するステップを含む。
【0045】
第７の態様において、本発明は、増殖性疾患、具体的には癌を患う対象の処置における使用のための、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１に関し、前記の多重特異性抗体ＭＡ１は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２との組み合わせで前記の対象に投与される。
【0046】
第８の態様において、本発明は、増殖性疾患、具体的には癌を患う対象の処置における使用のための、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２に関し、前記の多重特異性抗体ＭＡ２は、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１との組み合わせで前記の対象に投与される。
【0047】
次の項目において概括される本発明の態様、有利な特徴、および好ましい実施形態は、それぞれ単独でまたは組み合わせで、さらに、本発明の目的を解決することに寄与する：
１． 以下を含む医薬組成物：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
２． 以下を含むキット：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
３． 項目１の医薬組成物または項目２のキットであって、前記のＭＡ２が１つまたは２つのＴＡＡ－ＢＤ（単数または複数）を含む。
４． 項目１もしくは３の医薬組成物または項目２もしくは３のキットであって、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物であって、前記の医薬組成物が以下を含み：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
６． 先行する項目のいずれか１つのキットであって、前記のキットが以下を含み：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
７． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１もしくはＭＡ２または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が、さらに１つのヒト血清アルブミン結合ドメイン（ｈＳＡ－ＢＤ）を含む。
８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメイン、例えばＰＤＬ１－ＢＤ、ＣＤ１３７－ＢＤ、ＴＡＡ－ＢＤ、ＣＤ３－ＢＤ、またはｈＳＡ－ＢＤが、互いから独立して、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｄＡｂ、ＳＴＡＢ、ならびにアンキリンに基づくドメイン、フィノマー（fynomer）、アビマー（avimer）、アンティカリン（anticalin）、フィブロネクチン、および抗体の定常領域上に構築された結合部位（例えばｆ－ｓｔａｒテクノロジー）を包含するがこれらに限定されない代替的な骨格に基づく結合ドメインからなる群から選択され、具体的には、ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは、互いから独立して、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｄＡｂ、およびＳＴＡＢからなる群から選択され、より具体的には、ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは、互いから独立して、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、およびＳＴＡＢからなる群から選択される。
９． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方がＣＨ１および／またはＣＬ領域を含まず、具体的には、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が専ら免疫グロブリン可変ドメインを含む。
１０． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ１およびＭＡ２に含まれる前記の結合ドメインのそれぞれが独立して以下から選択される
（ａ）ＶＬドメインおよびＶＨドメインの対応するペア（Ｆｖ断片）；あるいは
（ｂ）ポリペプチドリンカー（ｓｃＦｖ断片）および／またはジスルフィド結合によって連結されたＶＬドメインおよびＶＨドメインの対応するペア。
１１． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１の結合ドメインがそれらのそれぞれの抗原に同時に結合することができる。
１２． 項目７から１１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が１つのＣＤ１３７－ＢＤ、１つのＰＤＬ１－ＢＤ、および１つのｈＳＡ－ＢＤからなる。
１３． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１がＰＤＬ１陽性細胞の存在下においてＣＤ１３７のアゴニストとして作用する。
１４． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、具体的には競合ＥＬＩＳＡによって測定されるときに、ＣＤ１３７およびそのリガンドＣＤ１３７Ｌの間の相互作用を阻害しない。
１５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが：
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、１０-２ｓ-１以下の、より具体的には１０-２ｓ-１から１０-６ｓ-１の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-５ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-４ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０６Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． ウレルマブおよびウトミルマブと交差競合しない；および／または
ｅ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＣＤ１３７と交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には、０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；および／または
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５０℃の、好ましくは少なくとも５５℃の、より好ましくは少なくとも６０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、７％未満、例えば６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
１６． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）よりも少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、例えば少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００倍高い一価解離定数（ＫＤ）で、ヒトＣＤ１３７に結合する。
１７． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）よりも２０から１０００倍、好ましくは３０から８００倍、具体的には５０から５００倍高い一価解離定数（ＫＤ）で、ヒトＣＤ１３７に結合する。
１８． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１、２、および３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８、９、および１０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
１９． 項目１８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１、２、および３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号８、９、および１０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号４、５、６、または７と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１１、１２、１３、または１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
２０． 項目１８または１９の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
２１． 項目１８から２０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号４、５、６、および７のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；ならびに配列番号１１、１２、１３、および１４のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
２２． 項目２１の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ａ）配列番号４のＶＨ配列および配列番号１１のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号５のＶＨ配列および配列番号１２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号６のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列；または
（ｄ）配列番号７のＶＨ配列および配列番号１４のＶＬ配列。
２３． 項目１８から２０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：アミノ酸配列配列番号７と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列；およびアミノ酸配列配列番号１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列であって、前記のＶＨドメインはシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインはシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番に含む。
２４． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１９、２０、および２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２３、２４、および２５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
２５． 項目２４の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；および配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
２６． 項目２４または２５の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインまたはＶＨ配列がシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインまたはＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
２７． 項目２４から２６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが：配列番号２２のＶＨ配列および配列番号２６のＶＬ配列を含む。
２８． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２８、２９、および３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３４、３５、および３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
２９． 項目２８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号３１、３２、および３３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号３７、３８、および３９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
３０． 項目２８または２９の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨ配列またはＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインまたはＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
３１． 項目２８から３０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号３１のＶＨ配列および配列番号３７のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号３２のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列；または
（ｃ）配列番号３３のＶＨ配列および配列番号３９のＶＬ配列。
３２． 項目２８から３１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：アミノ酸配列配列番号３３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列；ならびにアミノ酸配列配列番号３９と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列であって、前記のＶＨ配列がシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
３３． 先行する項目のいずれかの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤがＰＤＬ１のブロッカーである。
３４． 項目３３の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが：
ａ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、１０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．０５ｐＭから１０ｎＭの、より具体的には０．１ｐＭから５ｎＭの、より具体的には０．２ｐＭから１ｎＭ、より具体的には０．５ｐＭから５００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから２００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから１００ｐＭの一価ＫＤで結合する；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、５×１０-３ｓ-１以下の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-７ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-６ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から１０-６ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０８Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には５×１０５Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＰＤＬ１と交差反応性である；
ｅ． ムス・ムスクルスＰＤＬ１と非交差反応性である；および／または
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５５℃、例えば少なくとも６０℃、好ましくは少なくとも６５℃、より好ましくは少なくとも７０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片は、ｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、好ましくは３％未満、より好ましくは１％未満の、５回続けての凍結融解サイクル後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１５％未満、例えば１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
３５． 項目３３または３４の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号４３、４４、および４５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４９、５０、および５１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
３６． 項目３３または３４の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号５７、５８、および５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号６３、６４、および６５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
３７． 項目３３から３６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：配列番号４６、４７、４８、６０、６１、および６２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号５２、５３、６６、および６７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
３８． 項目３３から３６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号４７のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号６０のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列；
（ｅ）配列番号６１のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列；または
（ｆ）配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列。
３９． 項目３８の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列。
４０． 項目３８の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号６１のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列。
４１． 項目７から４０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号７１、７２、および７３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号７５、７６、および７７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＬフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む；
あるいは
（ｉ）配列番号８０、８１、および８２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号８４、８５、および８６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む。
４２． 項目４１の医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む：配列番号７４、８３、１８９、１９０、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号７８、８７、１９２、および１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
４３． 項目４１または４２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号７４のＶＨ配列および配列番号７８のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８７のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号１９０のＶＨ配列および配列番号１９２のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号１９１のＶＨ配列および配列番号１９２のＶＬ配列；または
（ｅ）配列番号１８９のＶＨ配列および配列番号１９３のＶＬ配列。
４４． 項目４２または４３の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
４５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ１が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：ｓｃＤＢ；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（tribody）（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであってヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ならびにＭＡＴＣＨ。
４６． 項目１から６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、および１１１のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂである。
４７． 項目１から６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、および１３０のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであり、好ましくは、前記のＭＡ１は配列番号１２５、１２６、１２７、および１３０から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであり、より好ましくは、前記のＭＡ１は配列番号１２５、１２７、および１３０から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖである。
４８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２の前記のＣＤ３－ＢＤがＣＤ３εに結合しようとする。
４９． 項目４８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ＣＤ３εに、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には０．５から５０ｎＭの、具体的には１から４０ｎＭの、具体的には２から３５ｎＭの、具体的には３から３０ｎＭの一価ＫＤで結合する。
５０． 項目４８または４９の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号１３１、１３２、および１３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号１３５、１３６、および１３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む。
５１． 項目５０の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号１３４または１８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
（ｉｉ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
５２． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、腫瘍細胞関連抗原（ＴＡＡ）が、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＴＰＢＧ（５Ｔ４）、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６）、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＬＥＣ１２Ａ（ＣＬＬ１）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、ＣＤ３３、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ２７６、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＦＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＤ１３３、ＥＰＨＡ２、ＨＬＡ－Ａ２、ＩＬ１３ＲＡ２、ＲＯＲ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＤ１３５、ＧＤ－２、ＧＡ７３３、ＣＤ１３５（ＦＬＴ３）、ＣＳＰＧ４、およびＴＡＧ－７２からなる群から選択され、
好ましくは、ＴＡＡが、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＥＡ、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＬＥＣ１２ａ、およびＲＯＲ１からなる群から選択され、
具体的には、ＴＡＡが、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択される。
５３． 項目１から５２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ２が１つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
５４． 項目５３の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、５０ｎＭ未満、具体的には２０ｎＭ未満、具体的には１０ｎＭ未満、具体的には５ｎＭ未満の、具体的には０．０１から２ｎＭの、具体的には０．０２から１ｎＭの、具体的には０．０３から０．５ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
５５． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）である。
５６． 項目５５の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
５７． 項目５５または５６の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１４２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１４６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
５８． 項目５５から５７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが：
ａ． 具体的にはＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＭＳＬＮに、１０ｎＭ未満の、具体的には０．０１から５ｎＭの、具体的には０．０２から１ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである；および／または
ｂ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＭＳＬＮと交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＭＳＬＮに、１５ｎＭ未満の、具体的には０．０１から１０ｎＭの、具体的には０．０２から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
５９． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＨＥＲ２（ＨＥＲ２）に特異的に結合するＨＥＲ２結合ドメイン（ＨＥＲ２－ＢＤ）である。
６０． 項目５５の医薬組成物またはキットであって、前記のＨＥＲ２－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
６１． 項目５５または５６の医薬組成物またはキットであって、前記のＨＥＲ２－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１６８または１６９と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１７３または１７４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
６２． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）である。
６３． 項目６２の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
６４． 項目６２または６３の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号２２１または２２２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号２２３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
６５． 項目１から５２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２が２つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
６６． 項目６５の医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２上の２つのＴＡＡ－ＢＤが同じ抗原に結合する。
６７． 項目６５または６６の医薬組成物またはキットであって、ＴＡＡがＲＯＲ１、ＨＥＲ２、および腫瘍細胞関連抗原からなる群から選択され、それらの細胞外部分は患者の血清中に可溶性形態でもまた生起し、具体的には、ＴＡＡはＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択され、ならびに／またはＴＡＡはＲＯＲ１および腫瘍細胞関連抗原からなる群から選択され、これらは、抗原結合能測定によって決定されるときに、癌細胞の表面上の具体的なＴＡＡ密度の１０～７５％に対応する量で健康な細胞の表面にもまた発現される。
６８． 項目６５から６７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、０．１から５０ｎＭの、具体的には０．２から３０ｎＭの、具体的には０．３から２０ｎＭの、具体的には０．４から１０ｎＭの範囲の一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
６９． 項目６５から６８のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、メソテリン（ＭＳＬＮ）、具体的にはヒトメソテリンに特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）である。
７０． 項目６９の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、メソテリン（ＭＳＬＮ）に、０．４から５０ｎＭの、好ましくは０．４から４０ｎＭの、より好ましくは０．５から３０ｎＭの、さらにはより好ましくは０．５から２０ｎＭの範囲の一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
７１． 項目６９または７０の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが、マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＭＳＬＮと交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＭＳＬＮに、３から７５ｎＭの範囲の、具体的には３から６０ｎＭの、具体的には４から５０ｎＭの、具体的には５から４０ｎＭの範囲の一価ＫＤで結合し、このときにＳＰＲによって測定され、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
７２． 項目６９から７１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；あるいはそれぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；あるいはそれぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
７３． 項目７２の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
ａ．１）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号１５０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号１５２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．３）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．３）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．３）アミノ酸配列配列番号１６０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．３）アミノ酸配列配列番号１６４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
あるいは
ａ．４）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．４）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．４）アミノ酸配列配列番号１９４または１９５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．４）アミノ酸配列配列番号１９６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．５）それぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．５）それぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．５）アミノ酸配列配列番号２０３または２０４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．５）アミノ酸配列配列番号２０５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
７４． 項目６５から６８のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＲＯＲ１、具体的にはヒトＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）である。
７５． 項目７４の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
７６． 項目７４の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
ａ．１）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号２１２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号２１３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
７７． 項目７２、７３、７５、または７６の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
７８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：ｓｃＤＢ；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）；タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；テトラボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｄｉ－ダイアボディ；ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体（ＡＤＡＰＴＩＲ）；ＤＶＤ－Ｉｇ；ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばＣＯＤＶ－ＩｇＧ、モリソン（Morrison）（ＩｇＧ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）またはＩｇＧ－ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、ｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖および軽鎖両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、およびＴｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）；ＤＡＲＴ（商標）；ＴＲＩＤＥＮＴ（商標）；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであってヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ＭＡＴＣＨ、ならびにデュオボディ（DuoBody）。
７９． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：モリソンＬ、モリソンＨ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、およびＭＡＴＣＨフォーマット、好ましくはモリソンＬおよびＭＡＴＣＨフォーマット；具体的には、前記のＭＡ２はＭＡＴＣＨフォーマットである；具体的には、ここで、前記のＭＡ２はｓｃＭＡＴＣＨ３、ＭＡＴＣＨ３、またはＭＡＴＣＨ４である。
８０． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が一本鎖蛋白質である。
８１． 項目８０の医薬組成物またはキットであって、前記の一本鎖蛋白質が、以下からなるアミノ酸配列を含み：
（ｉ）第１のＶＬドメイン、
（ｉｉ）第１のポリペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）第１のＶＨドメイン、
（ｉｖ）第２のポリペプチドリンカー、
（ｖ）第２のＶＬドメイン、
（ｖｉ）第３のポリペプチドリンカー、および
（ｖｉｉ）第２のＶＨドメイン、
であって、申し立てられた順序で相次いで配置され、
前記の第１のＶＬドメインは前記の第２のＶＨドメインと会合して第１の結合ドメインを形成し、前記の第２のＶＬドメインは前記の第１のＶＨドメインと会合して第２の結合ドメインを形成し、
前記の一本鎖蛋白質はさらに以下を含み
（ｖｉｉｉ）第３の結合ドメインであって、第４のポリペプチドリンカーを介して接続されている第３のＶＬドメインおよび第３のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第３の結合ドメインは第５のポリペプチドリンカーを介して前記のアミノ酸配列にＣ末端でまたはＮ末端で融合される、
前記の３つの結合ドメインは次の特異性を有する：
ａ）第１の結合ドメインが、ＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合するか、またはｈＳＡに特異的に結合するか（ｈＳＡ－ＢＤ）どちらか；
ｂ）第２の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）第３の結合ドメインが、ＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する。
８２． 項目８０または８１の医薬組成物またはキットであって、前記の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７５から選択されるアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には、配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７５からなる。
８３． 項目１から７９のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、第１のおよび第２の一本鎖蛋白質を含むＭＡＴＣＨ３またはＭＡＴＣＨ４フォーマットのヘテロ二量体蛋白質であり、
前記の第１の一本鎖蛋白質は、（ＮからＣ末端に）以下からなる第１のアミノ酸配列を含み：
（ｉａ）第１のＶＬドメイン、
（ｉｉａ）第１のポリペプチドリンカー、および
（ｉｉｉａ）第２のＶＬドメイン、
前記の第２の一本鎖蛋白質は、（ＮからＣ末端に）以下からなる第２のアミノ酸配列を含み：
（ｉｂ）第１のＶＨドメイン、
（ｉｉｂ）第２のポリペプチドリンカー、および
（ｉｉｉｂ）第２のＶＨドメイン、
前記の第１のＶＬドメインは前記の第１のまたは前記の第２のＶＨドメインどちらかと会合して第１の結合ドメインを形成し、前記の第２のＶＬドメインは前記のＶＨドメインの他方と会合して第２の結合ドメインを形成し、
前記の第１のおよび前記の第２の一本鎖蛋白質の少なくとも１つはさらに以下を含み
（ｉｖ）第３の結合ドメインであって、これは、第３のポリペプチドリンカーを介して接続されている第３のＶＬドメインおよび第３のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第３の結合ドメインは第４のポリペプチドリンカーを介して前記の第１のまたは前記の第２のアミノ酸配列に融合され、
任意に、ＭＡＴＣＨ４フォーマットでは、前記の第１のおよび前記の第２の一本鎖蛋白質の少なくとも１つはさらに以下を含み
（ｖ）第４の結合ドメインであって、これは、第５のポリペプチドリンカーを介して接続されている第４のＶＬドメインおよび第４のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第４の結合ドメインは第６のポリペプチドリンカーを介して前記の第１のまたは前記の第２のアミノ酸配列に融合され、
前記の３つの（ＭＡＴＣＨ３）または任意に４つの（ＭＡＴＣＨ４）結合ドメインは次の特異性を有する：
３つの結合ドメインが存在するときに（ＭＡＴＣＨ３）、
ａ）結合ドメインの１つがＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する；
ｂ）別の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）残りの結合ドメインが、同じＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）、またはヒト血清アルブミンに（ｈＳＡ－ＢＤ）どちらかで特異的に結合する；
あるいは、任意の第４の結合ドメインが存在するときに（ＭＡＴＣＨ４）、
ａ）２つの結合ドメインが同じＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する；
ｂ）別の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）残りの結合ドメインがヒト血清アルブミンに特異的に結合する（ｈＳＡ－ＢＤ）。
８４． 項目８３の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在せず、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの１つがＣＤ３－ＢＤであり、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの他方の１つがＴＡＡ－ＢＤである。
８５． 項目８３の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在し、第３の結合ドメインが第１のまたは第２のアミノ酸配列どちらかに融合され、第４の結合ドメインが前記の２つのアミノ酸配列の他方の１つに融合される。
８６． 項目８３または８５の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在し、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの１つがＣＤ３－ＢＤであり、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの他方の１つがｈＳＡ－ＢＤである。
８７． 項目８３から８６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のヘテロ二量体蛋白質が、前記の第１のおよび第２のＶＬおよびＶＨドメイン以外の第１のおよび第２の蛋白質相互作用ドメインの対応するペアを含まず、前記の第１の蛋白質相互作用ドメインは前記の第１の一本鎖蛋白質に含まれ、前記の第２の蛋白質相互作用ドメインは前記の第２の一本鎖蛋白質に含まれる。
８８． 項目８３から８７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の第１の一本鎖蛋白質および前記の第２の一本鎖蛋白質が平行の向きでヘテロ二量体化し、すなわち、前記の第１のＶＬドメインが前記の第１のＶＨドメインと会合し、前記の第２のＶＬドメインが前記の第２のＶＨドメインと会合する。
８９． 項目８３から８７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の第１の一本鎖蛋白質および前記の第２の一本鎖蛋白質が逆平行の向きでヘテロ二量体化し、すなわち、前記の第１のＶＬドメインが前記の第２のＶＨドメインと会合し、前記の第２のＶＬドメインが前記の第１のＶＨドメインと会合する。
９０． 項目８３から８９のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７６のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７６からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７７のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７７からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７８のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７８からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７９のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７９からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２４のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２４のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２４からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２５のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２５からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２６のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２６のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２６からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２７のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２７のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２７からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２８のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２８からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２９のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２９からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３０のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３０からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３１のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３１からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３２のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３２からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３３のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３３からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３４のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３４のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３４からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３５のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３５からなる。
９１． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ１およびＭＡ２の前記の抗体可変ドメインの少なくとも１つが、親のウサギ抗体に由来するＣＤＲ領域を含む。
９２． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤ、または２つのＴＡＡ－ＢＤの少なくとも１つおよびＣＤ３－ＢＤが、それらのそれぞれの抗原に同時に結合することができ、具体的には、ＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤ、または２つのＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤがそれらのそれぞれの抗原に同時に結合することができる。
９３． 医薬としての使用のための、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキット。
９４． 疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患の処置における使用のための、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキット。
９５． 項目９４に従う疾患の処置における使用のための項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
９６． 疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には、癌から選択されるヒト疾患の処置のための方法であって、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキットを投与するステップを含む。
９７． 項目９６の方法であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
９８． 疾患を患う患者を処置するための方法であって、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）、および腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）を投与するステップを含み、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は項目１から９４のいずれかにおいて定義される通りである。
９９． 項目９８の方法であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
１００． 疾患を患う対象の処置における使用のための、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１であって、前記の多重特異性抗体ＭＡ１が、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２との組み合わせで前記の対象に投与され、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
１０１． 疾患を患う対象の処置における使用のための、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２であって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、ＣＤ１３７に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１との組み合わせで前記の対象に投与され、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
１０２． 項目１００に従う使用のための多重特異性抗体ＭＡ１、または項目１０１に従う使用のための多重特異性抗体ＭＡ２であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
１． 以下を含む医薬組成物：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
２． 以下を含むキット：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
３． 項目１の医薬組成物または項目２のキットであって、前記のＭＡ２が１つまたは２つのＴＡＡ－ＢＤ（単数または複数）を含む。
４． 項目１もしくは３の医薬組成物または項目２もしくは３のキットであって、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物であって、前記の医薬組成物が以下を含み：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
６． 先行する項目のいずれか１つのキットであって、前記のキットが以下を含み：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
７． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１もしくはＭＡ２または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が、さらに１つのヒト血清アルブミン結合ドメイン（ｈＳＡ－ＢＤ）を含む。
８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメイン、例えばＰＤＬ１－ＢＤ、ＣＤ１３７－ＢＤ、ＴＡＡ－ＢＤ、ＣＤ３－ＢＤ、またはｈＳＡ－ＢＤが、互いから独立して、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｄＡｂ、ＳＴＡＢ、ならびにアンキリンに基づくドメイン、フィノマー（fynomer）、アビマー（avimer）、アンティカリン（anticalin）、フィブロネクチン、および抗体の定常領域上に構築された結合部位（例えばｆ－ｓｔａｒテクノロジー）を包含するがこれらに限定されない代替的な骨格に基づく結合ドメインからなる群から選択され、具体的には、ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは、互いから独立して、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｄＡｂ、およびＳＴＡＢからなる群から選択され、より具体的には、ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは、互いから独立して、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、およびＳＴＡＢからなる群から選択される。
９． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方がＣＨ１および／またはＣＬ領域を含まず、具体的には、前記のＭＡ１もしくは前記のＭＡ２、または抗体ＭＡ１およびＭＡ２両方が専ら免疫グロブリン可変ドメインを含む。
１０． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ１およびＭＡ２に含まれる前記の結合ドメインのそれぞれが独立して以下から選択される
（ａ）ＶＬドメインおよびＶＨドメインの対応するペア（Ｆｖ断片）；あるいは
（ｂ）ポリペプチドリンカー（ｓｃＦｖ断片）および／またはジスルフィド結合によって連結されたＶＬドメインおよびＶＨドメインの対応するペア。
１１． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１の結合ドメインがそれらのそれぞれの抗原に同時に結合することができる。
１２． 項目７から１１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が１つのＣＤ１３７－ＢＤ、１つのＰＤＬ１－ＢＤ、および１つのｈＳＡ－ＢＤからなる。
１３． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１がＰＤＬ１陽性細胞の存在下においてＣＤ１３７のアゴニストとして作用する。
１４． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、具体的には競合ＥＬＩＳＡによって測定されるときに、ＣＤ１３７およびそのリガンドＣＤ１３７Ｌの間の相互作用を阻害しない。
１５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが：
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、１０-２ｓ-１以下の、より具体的には１０-２ｓ-１から１０-６ｓ-１の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-５ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-４ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０６Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． ウレルマブおよびウトミルマブと交差競合しない；および／または
ｅ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＣＤ１３７と交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には、０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；および／または
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５０℃の、好ましくは少なくとも５５℃の、より好ましくは少なくとも６０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、７％未満、例えば６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
１６． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）よりも少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、例えば少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００倍高い一価解離定数（ＫＤ）で、ヒトＣＤ１３７に結合する。
１７． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）よりも２０から１０００倍、好ましくは３０から８００倍、具体的には５０から５００倍高い一価解離定数（ＫＤ）で、ヒトＣＤ１３７に結合する。
１８． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１、２、および３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８、９、および１０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
１９． 項目１８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１、２、および３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号８、９、および１０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号４、５、６、または７と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１１、１２、１３、または１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
２０． 項目１８または１９の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
２１． 項目１８から２０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号４、５、６、および７のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；ならびに配列番号１１、１２、１３、および１４のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
２２． 項目２１の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ａ）配列番号４のＶＨ配列および配列番号１１のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号５のＶＨ配列および配列番号１２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号６のＶＨ配列および配列番号１３のＶＬ配列；または
（ｄ）配列番号７のＶＨ配列および配列番号１４のＶＬ配列。
２３． 項目１８から２０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：アミノ酸配列配列番号７と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列；およびアミノ酸配列配列番号１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列であって、前記のＶＨドメインはシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインはシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番に含む。
２４． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１９、２０、および２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２３、２４、および２５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
２５． 項目２４の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；および配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
２６． 項目２４または２５の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインまたはＶＨ配列がシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインまたはＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
２７． 項目２４から２６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが：配列番号２２のＶＨ配列および配列番号２６のＶＬ配列を含む。
２８． 項目１３から１７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２８、２９、および３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３４、３５、および３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
２９． 項目２８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：配列番号３１、３２、および３３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号３７、３８、および３９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
３０． 項目２８または２９の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨ配列またはＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインまたはＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
３１． 項目２８から３０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号３１のＶＨ配列および配列番号３７のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号３２のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列；または
（ｃ）配列番号３３のＶＨ配列および配列番号３９のＶＬ配列。
３２． 項目２８から３１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ１３７－ＢＤが以下を含む：アミノ酸配列配列番号３３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列；ならびにアミノ酸配列配列番号３９と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列であって、前記のＶＨ配列がシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬ配列がシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
３３． 先行する項目のいずれかの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤがＰＤＬ１のブロッカーである。
３４． 項目３３の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが：
ａ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、１０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．０５ｐＭから１０ｎＭの、より具体的には０．１ｐＭから５ｎＭの、より具体的には０．２ｐＭから１ｎＭ、より具体的には０．５ｐＭから５００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから２００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから１００ｐＭの一価ＫＤで結合する；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、５×１０-３ｓ-１以下の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-７ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-６ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から１０-６ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０８Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には５×１０５Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＰＤＬ１と交差反応性である；
ｅ． ムス・ムスクルスＰＤＬ１と非交差反応性である；および／または
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５５℃、例えば少なくとも６０℃、好ましくは少なくとも６５℃、より好ましくは少なくとも７０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片は、ｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、好ましくは３％未満、より好ましくは１％未満の、５回続けての凍結融解サイクル後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１５％未満、例えば１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
３５． 項目３３または３４の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号４３、４４、および４５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４９、５０、および５１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
３６． 項目３３または３４の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号５７、５８、および５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号６３、６４、および６５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
３７． 項目３３から３６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：配列番号４６、４７、４８、６０、６１、および６２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号５２、５３、６６、および６７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
３８． 項目３３から３６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号４７のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号６０のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列；
（ｅ）配列番号６１のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列；または
（ｆ）配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列。
３９． 項目３８の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号４６のＶＨ配列および配列番号５２のＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号４８のＶＨ配列および配列番号５３のＶＬ配列。
４０． 項目３８の医薬組成物またはキットであって、前記のＰＤＬ１－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号６１のＶＨ配列および配列番号６７のＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号６２のＶＨ配列および配列番号６６のＶＬ配列。
４１． 項目７から４０のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号７１、７２、および７３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号７５、７６、および７７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＬフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む；
あるいは
（ｉ）配列番号８０、８１、および８２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号８４、８５、および８６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む。
４２． 項目４１の医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む：配列番号７４、８３、１８９、１９０、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＨ配列；ならびに配列番号７８、８７、１９２、および１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一であるＶＬ配列。
４３． 項目４１または４２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のｈＳＡ－ＢＤが以下を含む：
（ａ）配列番号７４のＶＨ配列および配列番号７８のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８７のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号１９０のＶＨ配列および配列番号１９２のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号１９１のＶＨ配列および配列番号１９２のＶＬ配列；または
（ｅ）配列番号１８９のＶＨ配列および配列番号１９３のＶＬ配列。
４４． 項目４２または４３の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
４５． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ１が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：ｓｃＤＢ；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（tribody）（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであってヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ならびにＭＡＴＣＨ。
４６． 項目１から６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、および１１１のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂである。
４７． 項目１から６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ１が、配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、および１３０のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであり、好ましくは、前記のＭＡ１は配列番号１２５、１２６、１２７、および１３０から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであり、より好ましくは、前記のＭＡ１は配列番号１２５、１２７、および１３０から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖである。
４８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２の前記のＣＤ３－ＢＤがＣＤ３εに結合しようとする。
４９． 項目４８の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、ＣＤ３εに、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には０．５から５０ｎＭの、具体的には１から４０ｎＭの、具体的には２から３５ｎＭの、具体的には３から３０ｎＭの一価ＫＤで結合する。
５０． 項目４８または４９の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号１３１、１３２、および１３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒトＶＨ３フレームワーク上に埋め込まれる、ならびに
（ｉｉ）配列番号１３５、１３６、および１３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列であって、抗体ＶＨフレームワーク上に、具体的にはヒト抗体ＶＬフレームワーク上に埋め込まれ、ＶＬフレームワークは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含む。
５１． 項目５０の医薬組成物またはキットであって、前記のＣＤ３－ＢＤが以下を含む
（ｉ）配列番号１３４または１８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および
（ｉｉ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
５２． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、腫瘍細胞関連抗原（ＴＡＡ）が、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＴＰＢＧ（５Ｔ４）、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６）、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＬＥＣ１２Ａ（ＣＬＬ１）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、ＣＤ３３、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ２７６、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＦＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＤ１３３、ＥＰＨＡ２、ＨＬＡ－Ａ２、ＩＬ１３ＲＡ２、ＲＯＲ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＤ１３５、ＧＤ－２、ＧＡ７３３、ＣＤ１３５（ＦＬＴ３）、ＣＳＰＧ４、およびＴＡＧ－７２からなる群から選択され、
好ましくは、ＴＡＡが、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＥＡ、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＬＥＣ１２ａ、およびＲＯＲ１からなる群から選択され、
具体的には、ＴＡＡが、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択される。
５３． 項目１から５２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＡ２が１つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
５４． 項目５３の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、５０ｎＭ未満、具体的には２０ｎＭ未満、具体的には１０ｎＭ未満、具体的には５ｎＭ未満の、具体的には０．０１から２ｎＭの、具体的には０．０２から１ｎＭの、具体的には０．０３から０．５ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
５５． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）である。
５６． 項目５５の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
５７． 項目５５または５６の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１３９、１４０、および１４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１４３、１４４、および１４５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１４２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１４６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
５８． 項目５５から５７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが：
ａ． 具体的にはＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＭＳＬＮに、１０ｎＭ未満の、具体的には０．０１から５ｎＭの、具体的には０．０２から１ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである；および／または
ｂ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＭＳＬＮと交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＭＳＬＮに、１５ｎＭ未満の、具体的には０．０１から１０ｎＭの、具体的には０．０２から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
５９． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＨＥＲ２（ＨＥＲ２）に特異的に結合するＨＥＲ２結合ドメイン（ＨＥＲ２－ＢＤ）である。
６０． 項目５５の医薬組成物またはキットであって、前記のＨＥＲ２－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
６１． 項目５５または５６の医薬組成物またはキットであって、前記のＨＥＲ２－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号１６５、１６６、および１６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号１７０、１７１、および１７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号１６８または１６９と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号１７３または１７４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
６２． 項目５３または５４の医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）である。
６３． 項目６２の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
６４． 項目６２または６３の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
ａ）それぞれ配列番号２１５、２１６、および２１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ）それぞれ配列番号２１８、２１９、および２２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ）アミノ酸配列配列番号２２１または２２２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ）アミノ酸配列配列番号２２３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
６５． 項目１から５２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２が２つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
６６． 項目６５の医薬組成物またはキットであって、ＭＡ２上の２つのＴＡＡ－ＢＤが同じ抗原に結合する。
６７． 項目６５または６６の医薬組成物またはキットであって、ＴＡＡがＲＯＲ１、ＨＥＲ２、および腫瘍細胞関連抗原からなる群から選択され、それらの細胞外部分は患者の血清中に可溶性形態でもまた生起し、具体的には、ＴＡＡはＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択され、ならびに／またはＴＡＡはＲＯＲ１および腫瘍細胞関連抗原からなる群から選択され、これらは、抗原結合能測定によって決定されるときに、癌細胞の表面上の具体的なＴＡＡ密度の１０～７５％に対応する量で健康な細胞の表面にもまた発現される。
６８． 項目６５から６７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、０．１から５０ｎＭの、具体的には０．２から３０ｎＭの、具体的には０．３から２０ｎＭの、具体的には０．４から１０ｎＭの範囲の一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
６９． 項目６５から６８のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、メソテリン（ＭＳＬＮ）、具体的にはヒトメソテリンに特異的に結合するメソテリン結合ドメイン（ＭＳＬＮ－ＢＤ）である。
７０． 項目６９の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが、ＳＰＲによって測定されるときに、メソテリン（ＭＳＬＮ）に、０．４から５０ｎＭの、好ましくは０．４から４０ｎＭの、より好ましくは０．５から３０ｎＭの、さらにはより好ましくは０．５から２０ｎＭの範囲の一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
７１． 項目６９または７０の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが、マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＭＳＬＮと交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＭＳＬＮに、３から７５ｎＭの範囲の、具体的には３から６０ｎＭの、具体的には４から５０ｎＭの、具体的には５から４０ｎＭの範囲の一価ＫＤで結合し、このときにＳＰＲによって測定され、具体的には前記のＭＳＬＮ－ＢＤはｓｃＦｖである。
７２． 項目６９から７１のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；あるいはそれぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；あるいはそれぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；具体的にはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
７３． 項目７２の医薬組成物またはキットであって、前記のＭＳＬＮ－ＢＤが以下を含む
ａ．１）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号１５０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号１４７、１４８（または１５１）、および１４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号１５３、１５４、および１５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号１５２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号１５６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．３）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．３）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．３）アミノ酸配列配列番号１６０と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．３）アミノ酸配列配列番号１６４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
あるいは
ａ．４）それぞれ配列番号１５７、１５８、および１５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．４）それぞれ配列番号１６１、１６２、および１６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．４）アミノ酸配列配列番号１９４または１９５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．４）アミノ酸配列配列番号１９６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．５）それぞれ配列番号１９７、１９８、および１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．５）それぞれ配列番号２００、２０１、および２０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．５）アミノ酸配列配列番号２０３または２０４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．５）アミノ酸配列配列番号２０５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
７４． 項目６５から６８のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のＴＡＡ－ＢＤが、ＲＯＲ１、具体的にはヒトＲＯＲ１に特異的に結合するＲＯＲ１結合ドメイン（ＲＯＲ１－ＢＤ）である。
７５． 項目７４の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
（ｉ）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｉ）ＶＨ３またはＶＨ４ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；好ましくはＶＨ３ドメインフレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ４；ならびに
（ｉｉｉ）ＶＬドメインであって、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３（これらは、Ｖκサブタイプから、具体的にはＶκ１およびＶκ３サブタイプから選択され、具体的にはＶκ１サブタイプである）、ならびにフレームワークＦＲ４（これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４から選択され、具体的には、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性、具体的には少なくとも９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかに対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４、より具体的には配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるＶλ－ＦＲ４、具体的には配列番号９４または１０１に従うＶλ－ＦＲ４である）を含むＶＬフレームワークを含む。
７６． 項目７４の医薬組成物またはキットであって、前記のＲＯＲ１－ＢＤが以下を含む
ａ．１）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．１）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．１）アミノ酸配列配列番号２１２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．１）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列；
あるいは
ａ．２）それぞれ配列番号２０６、２０７、および２０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、
ｂ．２）それぞれ配列番号２０９、２１０、および２１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列、
ｃ．２）アミノ酸配列配列番号２１３と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＨ配列、ならびに
ｄ．２）アミノ酸配列配列番号２１４と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一のＶＬ配列。
７７． 項目７２、７３、７５、または７６の医薬組成物またはキットであって、前記のＶＨドメインがシステインを位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインがシステインを位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
７８． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：ｓｃＤＢ；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）；タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；テトラボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｄｉ－ダイアボディ；ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体（ＡＤＡＰＴＩＲ）；ＤＶＤ－Ｉｇ；ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばＣＯＤＶ－ＩｇＧ、モリソン（Morrison）（ＩｇＧ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）またはＩｇＧ－ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、ｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖および軽鎖両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、およびＴｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）；ＤＡＲＴ（商標）；ＴＲＩＤＥＮＴ（商標）；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであってヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ＭＡＴＣＨ、ならびにデュオボディ（DuoBody）。
７９． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、以下からなる群から選択されるフォーマットである：モリソンＬ、モリソンＨ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、およびＭＡＴＣＨフォーマット、好ましくはモリソンＬおよびＭＡＴＣＨフォーマット；具体的には、前記のＭＡ２はＭＡＴＣＨフォーマットである；具体的には、ここで、前記のＭＡ２はｓｃＭＡＴＣＨ３、ＭＡＴＣＨ３、またはＭＡＴＣＨ４である。
８０． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が一本鎖蛋白質である。
８１． 項目８０の医薬組成物またはキットであって、前記の一本鎖蛋白質が、以下からなるアミノ酸配列を含み：
（ｉ）第１のＶＬドメイン、
（ｉｉ）第１のポリペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）第１のＶＨドメイン、
（ｉｖ）第２のポリペプチドリンカー、
（ｖ）第２のＶＬドメイン、
（ｖｉ）第３のポリペプチドリンカー、および
（ｖｉｉ）第２のＶＨドメイン、
であって、申し立てられた順序で相次いで配置され、
前記の第１のＶＬドメインは前記の第２のＶＨドメインと会合して第１の結合ドメインを形成し、前記の第２のＶＬドメインは前記の第１のＶＨドメインと会合して第２の結合ドメインを形成し、
前記の一本鎖蛋白質はさらに以下を含み
（ｖｉｉｉ）第３の結合ドメインであって、第４のポリペプチドリンカーを介して接続されている第３のＶＬドメインおよび第３のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第３の結合ドメインは第５のポリペプチドリンカーを介して前記のアミノ酸配列にＣ末端でまたはＮ末端で融合される、
前記の３つの結合ドメインは次の特異性を有する：
ａ）第１の結合ドメインが、ＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合するか、またはｈＳＡに特異的に結合するか（ｈＳＡ－ＢＤ）どちらか；
ｂ）第２の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）第３の結合ドメインが、ＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する。
８２． 項目８０または８１の医薬組成物またはキットであって、前記の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７５から選択されるアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には、配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７５からなる。
８３． 項目１から７９のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、第１のおよび第２の一本鎖蛋白質を含むＭＡＴＣＨ３またはＭＡＴＣＨ４フォーマットのヘテロ二量体蛋白質であり、
前記の第１の一本鎖蛋白質は、（ＮからＣ末端に）以下からなる第１のアミノ酸配列を含み：
（ｉａ）第１のＶＬドメイン、
（ｉｉａ）第１のポリペプチドリンカー、および
（ｉｉｉａ）第２のＶＬドメイン、
前記の第２の一本鎖蛋白質は、（ＮからＣ末端に）以下からなる第２のアミノ酸配列を含み：
（ｉｂ）第１のＶＨドメイン、
（ｉｉｂ）第２のポリペプチドリンカー、および
（ｉｉｉｂ）第２のＶＨドメイン、
前記の第１のＶＬドメインは前記の第１のまたは前記の第２のＶＨドメインどちらかと会合して第１の結合ドメインを形成し、前記の第２のＶＬドメインは前記のＶＨドメインの他方と会合して第２の結合ドメインを形成し、
前記の第１のおよび前記の第２の一本鎖蛋白質の少なくとも１つはさらに以下を含み
（ｉｖ）第３の結合ドメインであって、これは、第３のポリペプチドリンカーを介して接続されている第３のＶＬドメインおよび第３のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第３の結合ドメインは第４のポリペプチドリンカーを介して前記の第１のまたは前記の第２のアミノ酸配列に融合され、
任意に、ＭＡＴＣＨ４フォーマットでは、前記の第１のおよび前記の第２の一本鎖蛋白質の少なくとも１つはさらに以下を含み
（ｖ）第４の結合ドメインであって、これは、第５のポリペプチドリンカーを介して接続されている第４のＶＬドメインおよび第４のＶＨドメインによって形成され、ここで、前記の第４の結合ドメインは第６のポリペプチドリンカーを介して前記の第１のまたは前記の第２のアミノ酸配列に融合され、
前記の３つの（ＭＡＴＣＨ３）または任意に４つの（ＭＡＴＣＨ４）結合ドメインは次の特異性を有する：
３つの結合ドメインが存在するときに（ＭＡＴＣＨ３）、
ａ）結合ドメインの１つがＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する；
ｂ）別の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）残りの結合ドメインが、同じＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）、またはヒト血清アルブミンに（ｈＳＡ－ＢＤ）どちらかで特異的に結合する；
あるいは、任意の第４の結合ドメインが存在するときに（ＭＡＴＣＨ４）、
ａ）２つの結合ドメインが同じＴＡＡに（ＴＡＡ－ＢＤ）、具体的にはメソテリンに（ＭＳＬＮ－ＢＤ）特異的に結合する；
ｂ）別の結合ドメインがヒトＣＤ３に特異的に結合する（ＣＤ３－ＢＤ）；および
ｃ）残りの結合ドメインがヒト血清アルブミンに特異的に結合する（ｈＳＡ－ＢＤ）。
８４． 項目８３の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在せず、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの１つがＣＤ３－ＢＤであり、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの他方の１つがＴＡＡ－ＢＤである。
８５． 項目８３の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在し、第３の結合ドメインが第１のまたは第２のアミノ酸配列どちらかに融合され、第４の結合ドメインが前記の２つのアミノ酸配列の他方の１つに融合される。
８６． 項目８３または８５の医薬組成物またはキットであって、任意の第４の結合ドメインが存在し、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの１つがＣＤ３－ＢＤであり、前記の第１のおよび第２の結合ドメインの他方の１つがｈＳＡ－ＢＤである。
８７． 項目８３から８６のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記のヘテロ二量体蛋白質が、前記の第１のおよび第２のＶＬおよびＶＨドメイン以外の第１のおよび第２の蛋白質相互作用ドメインの対応するペアを含まず、前記の第１の蛋白質相互作用ドメインは前記の第１の一本鎖蛋白質に含まれ、前記の第２の蛋白質相互作用ドメインは前記の第２の一本鎖蛋白質に含まれる。
８８． 項目８３から８７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の第１の一本鎖蛋白質および前記の第２の一本鎖蛋白質が平行の向きでヘテロ二量体化し、すなわち、前記の第１のＶＬドメインが前記の第１のＶＨドメインと会合し、前記の第２のＶＬドメインが前記の第２のＶＨドメインと会合する。
８９． 項目８３から８７のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の第１の一本鎖蛋白質および前記の第２の一本鎖蛋白質が逆平行の向きでヘテロ二量体化し、すなわち、前記の第１のＶＬドメインが前記の第２のＶＨドメインと会合し、前記の第２のＶＬドメインが前記の第１のＶＨドメインと会合する。
９０． 項目８３から８９のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７６のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７６からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７７のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７７からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７８のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７８からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号１７９のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号１７９からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２４のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２４のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２４からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２５のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２５からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２６のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２６のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２６からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２７のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２７のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２７からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２８のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２８のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２８からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２２９のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２２９のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２２９からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３０のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３０のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３０からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３１のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３１のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３１からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３２のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３２のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３２からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３３のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３３のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３３からなるか；あるいは
前記の第１の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３４のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３４のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３４からなり、
前記の第２の一本鎖蛋白質が、少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を配列番号２３５のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含み、より具体的には配列番号２３５のアミノ酸配列を含み、とりわけアミノ酸配列配列番号２３５からなる。
９１． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＭＡ１およびＭＡ２の前記の抗体可変ドメインの少なくとも１つが、親のウサギ抗体に由来するＣＤＲ領域を含む。
９２． 先行する項目のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、ＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤ、または２つのＴＡＡ－ＢＤの少なくとも１つおよびＣＤ３－ＢＤが、それらのそれぞれの抗原に同時に結合することができ、具体的には、ＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤ、または２つのＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤがそれらのそれぞれの抗原に同時に結合することができる。
９３． 医薬としての使用のための、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキット。
９４． 疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には癌から選択されるヒト疾患の処置における使用のための、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキット。
９５． 項目９４に従う疾患の処置における使用のための項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキットであって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
９６． 疾患、具体的にはヒト疾患、より具体的には、癌から選択されるヒト疾患の処置のための方法であって、項目１から９２のいずれか１つの医薬組成物またはキットを投与するステップを含む。
９７． 項目９６の方法であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
９８． 疾患を患う患者を処置するための方法であって、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）、および腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）を投与するステップを含み、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は項目１から９４のいずれかにおいて定義される通りである。
９９． 項目９８の方法であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
１００． 疾患を患う対象の処置における使用のための、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１であって、前記の多重特異性抗体ＭＡ１が、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２との組み合わせで前記の対象に投与され、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
１０１． 疾患を患う対象の処置における使用のための、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２であって、前記の多重特異性抗体ＭＡ２が、ＣＤ１３７に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１との組み合わせで前記の対象に投与され、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
１０２． 項目１００に従う使用のための多重特異性抗体ＭＡ１、または項目１０１に従う使用のための多重特異性抗体ＭＡ２であって、前記の疾患が、増殖性疾患、具体的には癌、具体的には、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】図１は、本発明において適用される多重特異性抗体によるＴ細胞補助刺激受容体の標的細胞依存的な活性化を示す。二価のモノクローナル抗体によるＣＤ１３７の架橋はＴ細胞の全身的な補助刺激を誘発し、これはＦｃγＲ結合によって媒介される架橋によってさらに押し上げられれる（Ａ）。本発明に用いられる安定な二／三重特異性の一価分子は、枯渇化のために標的化されようとする細胞型の非存在下においては、Ｔ細胞上の補助刺激受容体を架橋し（またはひいてはアゴニスト作用し）得ない（Ｂ）。本発明に用いられる安定な二／三重特異性の一価分子は、枯渇化のために標的化されようとする細胞型の存在下においては、Ｔ細胞上の補助刺激受容体を架橋する（またはひいてはアゴニスト作用する）（Ｃ）。ＰＤＬ１およびＣＤ１３７に対する同時的な結合は腫瘍反応性Ｔ細胞の選択的活性化を誘発し、同時にＰＤ－１シグナル伝達をブロックする（Ｄ）。
【図2】図２は、ジャーカット（Jurkat）レポーター細胞におけるＮＦ－ｋＢシグナル伝達の濃度依存的な活性化（黒記号）およびＮＦＡＴレポーター細胞におけるＰＤＬ１活性の阻害（白記号）を示す：ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ＫＤのものよりも多大な（悪い）ＰＤＬ１結合親和性（ＫＤ）を有するＰＲＯ１１２４（Ａ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）のＫＤのものよりも小さい（良好な）ＰＤＬ１のＫＤを有するＰＲＯ８８５（Ｂ）、およびＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ＫＤのものよりも相当小さい（良好な）ＰＤＬ１のＫＤを有するＮＭ２１－１４８０（ＰＲＯ１４８０）（Ｃ）。灰色矢印および灰色破線は、最大のＰＤＬ１アンタゴニズムが到達される濃度を指示する。その濃度におけるＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニズムの対応するレベル、ならびにＰＤＬ１ブロックおよびＣＤ１３７（４－１ＢＢ）刺激両方の最大の活性が観察される濃度の幅は、（Ｃ）の網掛けの灰色の囲みによって指示される通り、最適用量設定にとって重要である。ＰＤＬ１に対するＰＤＬ１－ＢＤのＫＤをＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に対するＣＤ１３７－ＢＤのＫＤよりも有意に低いレベルまで変調させることによって、それぞれの機能的な活性についてのＥＣ５０およびＩＣ５０値はより密接にマッチするようになり、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）刺激のプラトーはより幅広くなる。ＮＭ２１－１４８０（ＰＲＯ１４８０）は、精巧に最適化されたＰＤＬ１およびＣＤ１３７（４－１ＢＢ）結合ドメインを有して、同じ最適用量においてＰＤＬ１ブロックおよびＣＤ１３７（４－１ＢＢ）活性化両方の活性を許し、最大のＣＤ１３７（４－１ＢＢ）シグナル伝達の濃度範囲を展延する。
【図3】図３は、ヒト血清アルブミンの存在下におけるＰＲＯ２０００およびＰＲＯ１８７２のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化に対する細胞傷害性活性および効果を示す。（Ａ）高ＭＳＬＮ発現癌細胞（Ｈ２２６細胞）の特異的殺細胞。高いレベルのメソテリンを発現する癌細胞ではＰＲＯ２０００で観察される標的細胞の殺細胞力価はＰＲＯ１８７２よりも７５倍良好である。（Ｂ）低ＭＳＬＮ発現癌細胞（ＭｅＴ－５Ａ細胞）の特異的殺細胞。低いメソテリンレベルを発現する健康な中皮組織に由来する細胞（ＭｅＴ－５Ａ；ＡＴＣＣ－ＣＲＬ－９４４４）に対して、一価メソテリン結合蛋白質ＰＲＯ１８７２は最も良好な細胞力価を示す。（Ｃ）Ｈ２２６細胞の存在下におけるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化および（Ｄ）ＭｅＴ－５Ａ細胞の存在下におけるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化。類似のデータがＣＤ８＋Ｔ細胞活性化について観察された。ドナー＃１からのＰＢＭＣが用いられた。標的細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が、それぞれの分子とのそれらのインキュベーションの始まりの４０ｈ後にフローサイトメトリーによって分析され、データはシグモイド４ＰＬフィット（グラフパッドプリズム（GraphPad Prism））を用いてフィッティングされた。
【図4】図４は、ｓＭＳＬＮの非存在下または存在下におけるＰＲＯ２０００およびＰＲＯ１８７２のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化に対する細胞傷害性活性および効果を示す。（ＡからＣ）Ｈ２２６標的細胞に対するＰＲＯ２０００およびＰＲＯ１８７２の細胞傷害活性。ｓＭＳＬＮの非存在下における（Ａ）、５０ｎｇ／ｍｌのｓＭＳＬＮの存在下における（Ｂ）、または５００ｎｇ／ｍｌのｓＭＳＬＮの存在下における（Ｃ）Ｈ２２６細胞の特異的殺細胞。ＰＲＯ２０００の殺細胞力価は、ＰＲＯ１８７２と比較して、増大して行く濃度のｓＭＳＬＮによって、より影響されない。（ＤからＦ）類似のデータが、対応する条件におけるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化について観察される。ｓＭＳＬＮなしのＨ２２６細胞の存在下における（Ｄ）、５０ｎｇ／ｍｌのｓＭＬＳＮの存在下における（Ｅ）、または５００ｎｇ／ｍｌのｓＭＬＳＮの存在下における（Ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化。ドナー＃２からのＰＢＭＣが用いられた。標的細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が、それぞれの分子とのそれらのインキュベーションの４０ｈ後にフローサイトメトリーによって分析され、データはシグモイド４ＰＬフィット（グラフパッドプリズム）を用いてフィッティングされた。
【図5】図５は、分子ＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ．ＣＤ３）によるＭＳＬＮ発現ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞ゼノグラフト実験を示し、コントロール条件に対して相対的にＰＲＯ２０００処置について腫瘍成長阻害を明らかにする。（Ａ）処置の存在下または非存在下における腫瘍成長の縦断分析。線はメジアンを図示する。動物が１×１０７のＨ２９２ＭＳＬＮ発現ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞および１×１０７のＰＢＭＣを皮下に共移植され、処置が静脈内投与された。第５日に始まり、実験の終わりまで５日毎に反復された。（Ｂ）散布図として示された第４０日のデータ。各点は１匹の動物に対応し、データは平均および標準偏差と共に示されている。二元配置反復測定ＡＮＯＶＡ後に、テューキーの多重比較検定が行われた。各データセットの有意性がパリビズマブコントロール（Ｃｔｒｌ、下側の線）または処置なし（上側の線）に対して相対的に図示されている。ｎｓ＝有意でない；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１、＊＊＊、ｐ＜０．００１。灰色の点線はｙ軸上の０を指示する。
【図6】図６は、分子ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ．ＣＤ３）およびＰＲＯ１６０１（ＰＤＬ１．ＣＤ１３７）単独によるならびにＰＲＯ１６０１＋ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ．ＣＤ３）の組み合わせによるＭＳＬＮ発現ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞ゼノグラフト実験を示し、ＰＲＯ１８７２およびＰＲＯ１６０１単剤処置に対して相対的に、組み合わせ処置について有意に増強された腫瘍成長阻害を明らかにする。（Ａ）処置の存在下または非存在下における腫瘍成長の縦断分析。線はメジアンを図示する。動物が１×１０７のＨ２９２ＭＳＬＮ発現ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞および１×１０７のＰＢＭＣを皮下に共移植され、処置が静脈内投与された。第５日に始まり、実験の終わりまで５日毎に反復された。（Ｂ）ＰＲＯ１６０１単剤処置の０から２８日のセクションの拡大表示。コントロール条件に対して相対的に、ＰＲＯ１６０１単独について有意な腫瘍成長阻害を明らかにする。二元配置反復測定ＡＮＯＶＡ後に、テューキーの多重比較検定が行われた。それぞれ、ＰＲＯ１６０１単独に対して相対的なＰＲＯ１６０１＋ＰＲＯ１８７２組み合わせおよびパリビズマブコントロールに対して相対的なＰＲＯ１６０１単独の腫瘍成長阻害の有意性が、図示されている（＊、ｐ＜０．００１）。灰色の点線はｙ軸上の０を指示する。
【図7A】図７は、分子ＰＲＯ２７４６（ＭＳＬＮ．ＣＤ３）およびＰＲＯ１６０１（ＰＤＬ１．ＣＤ１３７）単独によるならびにＰＲＯ１６０１＋ＰＲＯ２７４６（ＭＳＬＮ．ＣＤ３）の組み合わせによるＭＳＬＮ発現ＨＰＡＣ腫瘍細胞ゼノグラフト実験を示し、ＰＲＯ２７４６およびＰＲＯ１６０１単剤処置に対して相対的に組み合わせ処置について有意に増強された腫瘍成長阻害を明らかにする。（Ａ）処置の存在下または非存在下における腫瘍成長の縦断分析。線はメジアンを図示する。
【図7B】（Ｂ）散布図として示された第４０日のデータ。各点は１匹の動物に対応し、データは平均および標準偏差と共に示されている。
【図7C】（Ｃ）は各群の個々の動物についての縦断的傾向を示す。処置単独どちらかと比較して、０．２ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ２７４６および１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１の組み合わせでは、腫瘍成長退縮が動物間で一様に観察された。
【図7D】（Ｄ）は各群の個々の動物についての縦断的傾向を示す。処置単独どちらかと比較して、０．２ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ２７４６および１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１の組み合わせでは、腫瘍成長退縮が動物間で一様に観察された。
【発明を実施するための形態】
【0049】
公知のＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂに基づく免疫療法は、典型的には用量制限毒性および限定されたインビボの効力を患う。それゆえに、現行で利用可能なアプローチよりも高い効力だが、同時に類似のまたはさらには低い毒性学的プロファイルを有する改善されたＴＡＡ／ＣＤ３－ｂｓＡｂに基づく免疫療法の医学分野における必要がある。
【0050】
本発明は、医薬組成物またはキットを提供し、１つのＣＤ１３７アゴニスト作用性の結合ドメインと１つのＰＤＬ１アンタゴニスト作用性の結合ドメインとを含むが免疫グロブリンＦｃ領域を含まない第１の多重特異性抗体、およびＴＡＡおよびＣＤ３に特異的に結合する第２の多重特異性抗体を含む。これらの多重特異性抗体組み合わせは、ＴＡＡ指向性の（リダイレクト）標的細胞の殺細胞および腫瘍成長阻害において、個々の多重特異性抗体コンポーネント単独よりも有意に多大な効力を見せる。
【0051】
本発明の医薬組成物またはキットにおける多重特異性のＣＤ１３７／ＰＤＬ１結合抗体はＣＤ１３７について一価であるが、しかしながら、それらは、厳格にＰＤＬ１陽性細胞の存在下においてクラスター化しＣＤ１３７にアゴニスト作用する能力があり、それゆえにＣＤ１３７の全身的な活性化を回避する。多重特異性抗体の一価のＣＤ１３７結合およびＦｃなしの構造は、抗体が標的細胞の表面上のＰＤＬ１に同時的に結合するときにのみ、エフェクター細胞に対するＣＤ１３７のアゴニズムが生起し得るということを保証する。同時に、本発明の医薬組成物またはキットの毒性学的プロファイルは、それに含まれるそれぞれの抗ＴＡＡ×ＣＤ３多重特異性抗体コンポーネント単独よりも悪くはない。従って、本発明の医薬組成物またはキットの適用は、個々の抗ＴＡＡ×ＣＤ３多重特異性抗体の単独適用と比較されるときに有意なリスク対ベネフィットの増加を提供する。
【0052】
これらの多重特異性のＣＤ１３７／ＰＤＬ１結合抗体が、同じＴＡＡ標的について中ほどから低い結合親和性を有する２つのＴＡＡ－ＢＤを含む抗ＴＡＡ×ＣＤ３多重特異性抗体と組み合わせられるときに、このアプローチは、具体的には、クリーンでないＴＡＡ、すなわち健康な細胞においてもまた有意に高い量で発現されるＴＡＡ、例えばメソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、およびＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）標的細胞の殺細胞を許す。本発明の医薬組成物またはキットのこれらの具体的なバリアントの適用は、抗ＴＡＡ×ＣＤ３抗体単剤治療と比較されるときに、クリーンでないＴＡＡを発現する腫瘍細胞のＴＡＡ指向性の（リダイレクト）標的細胞の殺細胞についてもまた、有意なリスク対ベネフィットの増加を提供する。
【0053】
さらにその上、半減期を展延する抗ｈＳＡドメインの任意の追加は、便利な投薬を可能化するのみならず、腫瘍微小環境への分子の送達をもまた促進するはずである。
【0054】
それゆえに、本発明の医薬組成物またはキットは、従来の組成物および治療と比べてはっきりした治療上の利点を提供する。
【0055】
別様に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、本発明が関係する分野の業者によって普通に理解される同じ意味を有する。
【0056】
用語「含む」および「包含する」は、それらの開放的なかつ限定しない意味で本明細書において用いられる。別様に注記されない限りであり、それゆえに、かかる後者の実施形態に関して、用語「含む」はより狭い用語「からなる」を包含する。
【0057】
本明細書において別様に指示されないかまたは文脈によって明瞭に否定されない限り、用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」および類似の参照は、本発明を記載する文脈において（とりわけ次の請求項の文脈において）、単数および複数両方をカバーすると解釈されるべきである。例えば、用語「細胞」は複数の細胞を包含し、それらの混合物を包含する。複数形が化合物、塩、および同類について用いられるところでは、これは単一の化合物、塩、または同類をもまた意味すると取られる。
【0058】
１つの態様において、本発明は、以下を含む医薬組成物に関する：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体。
【0059】
別の態様において、本発明は、以下を含むキットに関する：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）。
【0060】
具体的な実施形態において、前記の第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）は１つまたは２つのＴＡＡ－ＢＤ（単数または複数）を含む。
【0061】
具体的な実施形態において、前記の多重特異性抗体ＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
【0062】
具体的な態様において、本発明は、以下を含む医薬組成物に関し：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
３）薬学的に許容される担体、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
【0063】
別の具体的な態様において、本発明は、以下を含むキットに関し：
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
１）以下を含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）
ａ）ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）、および
ｂ）ＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）、ならびに
２）以下を含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）
ａ）腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つまたは２つの結合ドメイン（単数または複数）（ＴＡＡ－ＢＤ）、および
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）、
前記のＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
【0064】
本明細書において用いられる用語「抗体」および同類は、全抗体またはその一本鎖；およびいずれかの抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）またはその一本鎖；および抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域、またはＶＬ領域を含む分子を包含する（限定なしに、多重特異性抗体を包含する）。天然に生起する「全抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖蛋白質である。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書においてはＶＨと略称される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてはＶＬと略称される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称される超可変性の領域にさらに細分され得、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼称されるより保存されている領域が点在する。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから組成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１のコンポーネント（Ｃｌｑ）を包含するホストの組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【0065】
本明細書において用いられる用語「免疫グロブリンＦｃ領域」は、重鎖定常領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを言う。
【0066】
本明細書において用いられる抗体の用語「結合ドメイン」、「その抗原結合断片」、「抗原結合部分」、および同類は、所与の抗原（例えば、ＰＤＬ１、ＣＤ１３７、ＴＡＡ、ＣＤ３、ｈＳＡ）に特異的に結合する能力を保持するインタクトな抗体の１つ以上の断片を言う。抗体の抗原結合機能はインタクトな抗体の断片によって果たされ得る。いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体の結合ドメインは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片のＦａｂ断片；ヒンジ領域においてジスルフィド橋かけによって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片のＦ（ａｂ）２断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるシングルドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（ウォード（Ward）ら，１９８９年，ネイチャー（Nature）第３４１巻：ｐ．５４４－５４６）；単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、ならびにアンキリンに基づくドメイン、フィノマー、アビマー、アンティカリン、フィブロネクチン、および抗体の定常領域上に構築された結合部位（例えばｆ－ｓｔａｒテクノロジー（Ｆ－ｓｔａｒのモジュラー抗体テクノロジー（商標）））を包含するがこれらに限定されない代替的な骨格に基づく結合ドメインからなる群から選択される。好適には、本発明において適用される抗体の結合ドメインは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）または単一の抗体可変ドメインである。好ましい実施形態において、本発明において適用される抗体の結合ドメインは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。具体的な実施形態において、抗原結合断片の２つの可変ドメインはＦｖまたはｓｃＦｖ断片のようにドメイン間ジスルフィド結合によって安定化され、具体的には、前記のＶＨドメインは単一のシステイン残基を位置５１（ＡＨｏ付番）に含み、前記のＶＬドメインは単一のシステイン残基を位置１４１（ＡＨｏ付番）に含む。
【0067】
用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、カバット（Kabat）ら（１９９１年），「免疫学的な対象の蛋白質の配列（Sequences of Proteins of Immunological Interest）」，第５版，公衆衛生局，国立衛生研究所，ベセスダ，ＭＤによって記載されているもの（「カバット」付番スキーム）；アルラジカニ（Al－Lazikani）ら（１９９７年），ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biology），第２７３巻，ｐ．９２７－９４８（「チョティア（Chothia）」付番スキーム）；ＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）付番（ルフラン（Lefranc），Ｍ．－Ｐ．，ザ・イミュノロジスト（The Immunologist），第７巻，ｐ．１３２－１３６（１９９９年）；ルフラン（Lefranc），Ｍ．－Ｐ．ら，デベロップメンタル＆コンパラティブ・イミュノロジー（Developmental & Comparative Immunology），第２７巻，ｐ．５５－７７（２００３年））（「ＩＭＧＴ」付番スキーム）；およびホネガー（Honegger）＆プラクサン（Pluckthun），ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biology），第３０９巻（２００１年）ｐ．６５７－６７０に記載されている付番スキーム（「ＡＨｏ」付番）を包含するいくつもの周知のスキームのいずれかを用いて決定される境界を有するアミノ酸配列を言う。例えば、古典的なフォーマットでは、カバットでは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）上のＣＤＲアミノ酸残基は３１－３５（ＨＣＤＲ１）、５０－６５（ＨＣＤＲ２）、および９５－１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）上のＣＤＲアミノ酸残基は２４－３４（ＬＣＤＲ１）、５０－５６（ＬＣＤＲ２）、および８９－９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。チョティアでは、ＶＨ上のＣＤＲアミノ酸は２６－３２（ＨＣＤＲ１）、５２－５６（ＨＣＤＲ２）、および９５－１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；ＶＬ上のアミノ酸残基は２４－３４（ＬＣＤＲ１）、５０－５６（ＬＣＤＲ２）、および８９－９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。カバットおよびチョティア両方のＣＤＲ定義を組み合わせることによって、ＣＤＲは、ヒトＶＨ上のアミノ酸残基２６－３５（ＨＣＤＲ１）、５０－６５（ＨＣＤＲ２）、および９５－１０２（ＨＣＤＲ３）ならびにヒトＶＬ上のアミノ酸残基２４－３４（ＬＣＤＲ１）、５０－５６（ＬＣＤＲ２）、および８９－９７（ＬＣＤＲ３）からなる。ＩＭＧＴでは、ＶＨ上のＣＤＲアミノ酸残基はおよそ２６－３５（ＨＣＤＲ１）、５１－５７（ＨＣＤＲ２）、および９３－１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、ＶＬ上のＣＤＲアミノ酸残基はおよそ２７－３２（ＬＣＤＲ１）、５０－５２（ＬＣＤＲ２）、および８９－９７（ＬＣＤＲ３）と付番される（「カバット」に従う付番）。ＩＭＧＴでは、抗体のＣＤＲはプログラムのＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎを用いて決定され得る。
【0068】
本発明の文脈においては、別様に具体的に言及されない限り、ホネガー（Honegger）＆プラクサン（Pluckthun）によって示唆されている付番システム（「ＡＨｏ」）が用いられる（ホネガー（Honegger）＆プラクサン（Pluckthun），ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal ofMolecular Biology），第３０９巻（２００１年）ｐ．６５７－６７０）。具体的には、次の残基がＡＨｏ付番スキームに従うＣＤＲとして定義される：ＬＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１ともまた言われる）：Ｌ２４－Ｌ４２；ＬＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２ともまた言われる）：Ｌ５８－Ｌ７２；ＬＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３ともまた言われる）：Ｌ１０７－Ｌ１３８；ＨＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１ともまた言われる）：Ｈ２７－Ｈ４２；ＨＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２ともまた言われる）：Ｈ５７－Ｈ７６；ＨＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３ともまた言われる）：Ｈ１０８－Ｈ１３８。明瞭性のために、ホネガー（Honegger）＆プラクサン（Pluckthun）に従う付番システムは、天然に生起する抗体において、異なるＶＨおよびＶＬサブファミリー両方において、具体的にはＣＤＲにおいて見出される長さの多様性を考慮に入れ、配列上のギャップを認める。それゆえに、所与の抗体可変ドメイン上では、通常は、全ての位置１から１４９までがアミノ酸残基によって占有されるわけではないであろう。
【0069】
本明細書において用いられる用語「結合特異性」は、１つの抗原決定基とは反応し異なる抗原決定基とは反応しない個々の抗体の能力を言う。本明細書において用いる用語「特異的に結合する」または「特異的である」は、生物学的な分子を包含する分子の不均一な集団の存在下において標的の存在の決定力がある標的および抗体の間の結合などの測定可能なかつ再現性ある相互作用を言う。例えば、標的（これはエピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、それが他の標的に結合するよりも多大な親和性、アビディティで、容易く、および／または多大な持続時間でこの標的に結合する抗体である。その最も一般的な形態において（かつ明確な参照が言及されないときに）、「特異的結合」は、例えば当分野において公知の特異性アッセイ方法に従って決定されるときに、目当ての標的および無関係の分子を見分ける抗体の能力を言う。かかる方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＣＬ、ＩＲＭＡ、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）試験、およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイが実行され得る。スコア付けは標準的な発色によって実行され得る（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼを有する二次抗体および過酸化水素によるテトラメチルベンジジン）。特定のウェルの反応が例えば４５０ｎｍにおける光学密度によってスコア付けされる。典型的なバックグラウンド（＝反応陰性）は約０．１ＯＤであり得る；典型的な反応陽性は約１ＯＤであり得る。これは、陽性および陰性のスコアの間の比が１０倍またはより高くあり得るということを意味する。さらなる例においては、ＳＰＲアッセイが実行され得、バックグラウンドおよびシグナルの間の少なくとも１０倍、具体的には少なくとも１００倍の違いが特異的結合を指示する。典型的には、結合特異性の決定は、単一の参照分子ではなく、約３つから５つの無関係の分子のセット、例えばミルクパウダー、トランスフェリン、または同類を用いることによって行われる。
【0070】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される抗体は、単離された抗体である。本明細書において用いられる用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に不含である抗体を言う（例えば、ＰＤＬ１およびＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体は、ＰＤＬ１およびＣＤ１３７以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に不含であり、ＰＤＬ１、ＣＤ１３７、およびｈＳＡに特異的に結合する単離された抗体は、ＰＤＬ１、ＣＤ１３７、およびｈＳＡ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に不含であり、ＭＳＬＮ、ＣＤ３、およびｈＳＡに特異的に結合する単離された抗体は、ＭＳＬＮ、ＣＤ３、およびｈＳＡ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に不含である）。その上、単離された抗体は他の細胞性の材料および／または化学物質を実質的に不含であり得る。
【0071】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される抗体はモノクローナル抗体である。本明細書において用いられる用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、アミノ酸配列まで実質的に同一であるかまたは同じ遺伝子源に由来する抗体を言う。モノクローナル抗体組成物は、具体的なエピトープに対する結合特異性および親和性、または具体的なエピトープ（複数）に対する結合特異性（複数）および親和性（複数）を示す。
【0072】
本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される抗体は、キメラ、ヒト、およびヒト化抗体を包含するが、これらに限定されない。
【0073】
用語「キメラ抗体」（あるいはその抗原結合断片）は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なるかもしくは変調したクラス、エフェクター機能、および／もしくは種の定常領域、または新たな特性をキメラ抗体に授ける全く異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるようにして、定常領域またはその部分が変調、置き換え、または交換されている；あるいは（ｂ）可変領域またはその部分が、異なるかまたは変調した抗原特異性を有する可変領域によって変調、置き換え、または交換されている抗体分子（あるいはその抗原結合断片）である。例えば、マウス抗体は、ヒト免疫グロブリンからの定常領域によってその定常領域を置き換えることにより改変され得る。ヒト定常領域による置き換えを原因として、キメラ抗体は、元々のマウス抗体と比較してヒトにおいて縮減された抗原性を有しながら、抗原を認識することにおけるその特異性を保持し得る。
【0074】
本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」（またはその抗原結合断片）は、フレームワークおよびＣＤＲ領域両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体（およびそれらの抗原結合断片）を包含することが意図される。さらにその上、抗体が定常領域を含有する場合には、定常領域もまたかかるヒト配列、例えばヒト生殖細胞系列配列またはヒト生殖細胞系列配列の変異バージョンに由来する。本発明のヒト抗体およびそれらの抗原結合断片は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基を包含し得る（例えば、インビトロのランダムもしくは部位特異的変異導入によってまたはインビボの体細胞変異によって導入される変異）。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを包含する当分野において公知の種々の技術を用いて産生され得る（フーゲンブーム（Hoogenboom）およびヴィンター（Winter），ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biology），第２２７巻：ｐ．３８１（１９９１年）；マークス（Marks）ら，ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal ofMolecular Biology），第２２２巻：ｐ．５８１（１９９１年））。コール（Cole）ら，モノクローナルアンティボディーズ・アンド・キャンサーセラピー（Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy），アランＲリス（Alan R. Liss），ｐ．７７（１９８５年）；ベーマー（Boemer）ら，ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Journal of Immunology），第１４７巻（ｌ）：ｐ．８６－９５（１９９１年）に記載されている方法もまたヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である。ファンダイク（van Dijk）およびファンデウィンケル（van de Winkel），カレント・オピニオン・イン・ファーマコロジー（Current Opinion in Pharmacology），第５巻：ｐ．３６８－７４（２００１年）も参照。ヒト抗体は、抗原負荷に応答してかかる抗体を産生するように改変されているが、その内在性の座位が不能化されているトランスジェニック動物、例えば免疫化されたゼノマウスに抗原を投与することによって調製され得る（例えば、ゼノマウス（商標）テクノロジーについてはＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，０７５，１８１および６，１５０，５８４を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーによって生成されるヒト抗体については、例えば、リ（Li）ら，米国科学アカデミー紀要，第１０３巻：ｐ．３５５７－３５６２（２００６年）も参照。
【0075】
本明細書において用いられる「ヒト化」抗体（またはその抗原結合断片）は、非ヒト抗体の反応性を保持しながら、ヒトにおいてより免疫原性でない抗体（またはその抗原結合断片）である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持することおよび抗体の残りの部分をそれらのヒトカウンターパート（すなわち、定常領域および可変領域のフレームワーク部分）によって置き換えることによって達成され得る。追加のフレームワーク領域改変が、ヒトフレームワーク配列上におよび別の哺乳類種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列上になされ得る。本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用されるヒト化抗体ＭＡ１およびＭＡ２は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基を包含し得る（例えば、インビトロのランダムもしくは部位特異的変異導入によってまたはインビボの体細胞変異によって導入される変異、あるいは安定性または製造を促進するための保存的置換）。例えば、モリソン（Morrison）ら，米国科学アカデミー紀要，第８１巻：ｐ．６８５１－６８５５，１９８４年；モリソン（Morrison）およびオイ（Oi），アドバンシズ・イン・イミュノロジー（Advances in Immunology），第４４巻：ｐ．６５－９２，１９８８年；ヴァーホワイエン（Verhoeyen）ら，サイエンス（Science），第２３９巻：ｐ．１５３４－１５３６，１９８８年；パドラン（Padlan），モレキュラー・イミュノロジー（Molecular Immunology），第２８巻：ｐ．４８９－４９８，１９９１年；ならびにパドラン（Padlan），モレキュラー・イミュノロジー（Molecular Immunology），第３１巻：ｐ．１６９－２１７，１９９４年を参照。ヒト工学テクノロジーの他の例は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，７６６，８８６に開示されているＸｏｍａテクノロジーを包含するが、これに限定されない。
【0076】
本明細書において用いられる用語「組み換えヒト化抗体」は、組み換え手段によって調製、発現、作出、または単離される全てのヒト抗体、例えば、ヒト化抗体を発現するように形質転換されたホスト細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離される抗体、および他のＤＮＡ配列に対するヒト免疫グロブリン遺伝子配列の全てまたは部分のスプライシングが関わるいずれかの他の手段によって調製、発現、作出、または単離される抗体を包含する。
【0077】
好ましくは、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される抗体はヒト化される。より好ましくは、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される抗体はヒト化され、ウサギ由来ＣＤＲを含む。
【0078】
本明細書において用いられる用語「多重特異性抗体」は、少なくとも２つ以上の異なる標的（例えば、ＣＤ１３７およびＰＤＬ１）上の２つ以上の異なるエピトープに結合する抗体を言う。用語「多重特異性抗体」は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、五重特異性、および六重特異性を包含する。本明細書において用いられる用語「二重特異性抗体」は、２つの異なる標的（例えば、ＣＤ１３７およびＰＤＬ１）上の少なくとも２つの異なるエピトープに結合する抗体を言う。本明細書において用いられる用語「三重特異性抗体」は、３つの異なる標的（例えば、ＣＤ１３７、ＰＤＬ１、およびｈＳＡ）上の少なくとも３つの異なるエピトープに結合する抗体を言う。
【0079】
用語「エピトープ」は、抗体に対する特異的結合ができる蛋白質決定基を意味する。エピトープは、通常はアミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基群からなり、通常は特定の三次元構造特徴および特定の電荷特徴を有する。「立体配座」および「直線状」エピトープは、後者ではなく前者に対する結合が変性溶媒の存在下において失われるということにおいて区別される。
【0080】
本明細書において用いられる用語「立体配座エピトープ」は、ポリペプチド鎖がフォールディングしてネイティブ蛋白質を形成するときに表面上で一緒に集まる抗原のアミノ酸残基を言う。
【0081】
用語「直線状エピトープ」は、蛋白質および相互作用分子（例えば抗体）の間の全ての相互作用点が（連続的な）蛋白質の一次アミノ酸配列上に直線状に生起するエピトープを言う。
【0082】
用語「遠位エピトープ」は、細胞表面から遠い細胞に結合した抗原の細胞外部分の領域に含まれるエピトープを言う。
【0083】
用語「近位エピトープ」は、細胞表面に近い細胞に結合した抗原の細胞外部分の領域に含まれるエピトープを言う。
【0084】
本明細書において用いられる用語「認識する」は、その立体配座エピトープを見出し、それと相互作用する（例えば、結合する）抗体のその抗原結合断片を言う。
【0085】
本明細書において用いられる用語「アビディティ」は、抗体－抗原複合体の総体的な安定性または強さの情報を提供する尺度を言う。それは、３つの主要な因子：抗体エピトープ親和性；抗原および抗体両方の価数；ならびに相互作用する部分の構造的な配置によってコントロールされる。最終的に、これらの因子は、抗体の特異性、つまり、具体的な抗体が精確な抗原エピトープに結合しようとする蓋然性を定義する。
【0086】
好適には、ＭＡ１のＣＤ１３７－ＢＤは次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、１０-２ｓ-１以下の、より具体的には１０-２ｓ-１から１０-６ｓ-１の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-５ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-４ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０６Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． ウレルマブおよびウトミルマブと交差競合しない；
ｅ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＣＤ１３７と交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである。
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、１０-２ｓ-１以下の、より具体的には１０-２ｓ-１から１０-６ｓ-１の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-５ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-４ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＣＤ１３７に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０６Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． ウレルマブおよびウトミルマブと交差競合しない；
ｅ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＣＤ１３７と交差反応性であり、具体的には、ＳＰＲによって測定されるときに、カニクイＣＤ１３７に、５０ｎＭ未満の一価ＫＤで、具体的には０．００５から５０ｎＭの、より具体的には０．０１から３０ｎＭの、より具体的には０．０１から１０ｎＭの、より具体的には０．１から５ｎＭの一価ＫＤで結合し、具体的には前記のＣＤ１３７－ＢＤはｓｃＦｖである。
【0087】
本明細書において用いられる用語「親和性」は、単一の抗原部位における抗体および抗原の間の相互作用の強さを言う。各抗原部位上で、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位において弱い非共有結合的な力によって抗原と相互作用する；相互作用が多いほど親和性は強い。
【0088】
「結合親和性」は、一般的に、分子の（例えば抗体の）単一の結合部位およびその結合パートナー（例えば抗原、またはより具体的には抗原上のエピトープ）の間の非共有結合的な相互作用の総計の強さを言う。別様に指示されない限り、本明細書において用いられる「結合親和性」、「結合する（bind to）」、「結合する（binds to）」、または「結合する（binding to）」は、結合ペアの構成員（例えば、抗体断片および抗原）の間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を言う。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は一般的に解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載されるものを包含する当分野において公知の普通の方法によって測定され得る。低親和性抗体は一般的にはゆっくり抗原に結合し、容易く解離する傾向があり、高親和性抗体は一般的にはより速く抗原に結合し、より長く結合したままに残る傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法が当分野において公知であり、それらのいずれかは本発明の目的に用いられ得る。結合親和性、すなわち結合強さを測定するための具体的な例証的なかつ例示的な実施形態が次に記載されている。
【0089】
本明細書において用いられる用語「Ｋａｓｓｏｃ」、「Ｋａ」、または「Ｋｏｎ」は、具体的な抗体－抗原相互作用の会合速度を言うことを意図され、本明細書において用いられる用語「Ｋｄｉｓ」、「Ｋｄ」、または「Ｋｏｆｆ」は、具体的な抗体－抗原相互作用の解離速度を言うことが意図される。１つの実施形態において、本明細書において用いられる用語「ＫＤ」は解離定数を言うことが意図され、これはＫａに対するＫｄの比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表現される。本発明に従う「ＫＤ」または「ＫＤ値」あるいは「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、１つの実施形態では、表面プラズモン共鳴アッセイを用いることによって測定される。ＣＤ１３７に対する親和性は、ＥＰ２０１６４９１３．４およびＥＰ２０１７７３３７．１に記載されている通り表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定によって決定された。ＰＤＬ１に対する親和性は、ＥＰ２０１６４９１３．４およびＥＰ２０１７７３３７．１に記載されている通りＳＰＲによって測定された。組み換えヒトメソテリン（ヒトＭＳＬＮ）および組み換えカニクイＭＳＬＮ（カニクイＭＳＬＮ）に対する親和性は、ＥＰ２０１６４９１３．４およびＥＰ２０１７７３３７．１に記載されている通り表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定によって決定された。組み換えヒトＣＤ３に対する親和性は、ＥＰ２０１６４９１３．４およびＥＰ２０１７７３３７．１に記載されている通りＳＰＲによって測定された。
【0090】
好適には、第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）はＣＤ１３７およびＰＤＬ１特異性について一価である。
【0091】
好適には、ＭＡ１はＰＤＬ１陽性細胞の存在下においてＣＤ１３７アゴニストとして作用する。「活性化因子」または「活性化抗体」または「アゴニスト」または「アゴニスト抗体」は、通常はその天然リガンドに対する抗原の結合によって誘発されるそれが結合する抗原の本来の活性、具体的には抗原によるシグナル伝達を増強または開始するものである。本発明の文脈において、用語「ＣＤ１３７アゴニスト」は、そのＣＤ１３７抗原結合断片のクラスター化によってＣＤ１３７シグナル伝達を活性化することができる本発明に用いられるＭＡ１を包摂し、例えば、前記のＣＤ１３７抗原結合断片の少なくとも２つの結合は、結合したＣＤ１３７分子のマルチマー化およびそれらの活性化を許す。いくつかの実施形態において、アゴニスト抗体は天然のリガンドの存在なしにシグナル伝達を活性化する。
【0092】
ＭＡ１のための好適なＣＤ１３７－ＢＤは、本開示において提供される結合ドメインである。本発明に用いられるＣＤ１３７－ＢＤは、それらの配列が表１に挙げられているヒト化ＣＤ１３７結合ドメインを包含するが、これらに限定されない。本明細書に記載されるＭＡ１およびその結合ドメインの生成およびキャラクタリゼーションについての追加の詳細は、その全体が参照によってここに組み込まれる特許出願ＷＯ２０１９／０７２８６８に開示されている。
【0093】
用語「多価抗体」は、１つ超の価数を有する単一の結合分子を言い、ここで、「価数」は標的分子上のエピトープに結合する抗原結合部分の数として記載される。そのため、対応する抗原結合部分の１つ超のコピーの存在を原因として、単一の結合分子が標的分子上の１つ超の結合部位におよび／または１つ超の標的分子に結合し得る。多価抗体の例は、二価抗体、三価抗体、四価抗体、五価抗体、および同類を包含するが、これらに限定されない。
【0094】
本明細書において用いられる用語「一価抗体」は、単一の標的分子に、より具体的にはＣＤ１３７などの標的分子上の単一のエピトープに結合する抗体を言う。また、本明細書において用いられる用語「結合ドメイン」または「一価結合ドメイン」は、ＣＤ１３７などの標的分子上の単一のエピトープに結合する結合ドメインを言う。
【0095】
本明細書において用いられる用語「二価抗体」は、（ｉ）２つの標的に結合する２つの異なる抗原結合部分を含む二重特異性の抗体、（ｉｉ）ＣＤ１３７標的分子などの２つの同一の標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する２つの異なる抗原結合部分を含む抗体、または（ｉｉｉ）ＣＤ１３７標的分子などの２つの同一の標的分子に結合する２つの同一の抗原結合部分を含む抗体を言う。
【0096】
本発明の発明者は、（ａ）１つのみのＣＤ１３７結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）と（ｂ）１つのＰＤＬ１結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体が、標的化された様式でＣＤ１３７シグナル伝達を有効に活性化する能力があるということを先に見出した。これらの多重特異性抗体は、ＰＤＬ１結合ドメインによって認識される別の細胞型の非存在下においては、Ｔ細胞上のＣＤ１３７にアゴニスト作用することができない（図１Ａ）。ＰＤＬ１陽性細胞の表面に露出したＰＤＬ１分子に対するこれらの多重特異性抗体の抗ＰＤＬ１ドメインの結合を原因として、ＣＤ１３７の有効な活性化はＰＤＬ１陽性細胞の存在下においてのみ起こる（図１Ｂおよび１Ｃ）。これは、特定の場所における多重特異性抗体の増大した密度、それゆえにＣＤ１３７結合ドメインの増大した密度に至る。それゆえに、ＣＤ１３７－ＢＤは有効にクラスター化しＣＤ１３７にアゴニスト作用し得る。ＰＤＬ１およびＣＤ１３７に対するこの同時的な結合は腫瘍反応性Ｔ細胞の選択的活性化を誘発し、同時にＰＤ－１シグナル伝達をブロックする（図１Ｃ）。腫瘍細胞上のＰＤＬ１の高い過剰発現を原因として、ＣＤ１３７シグナル伝達は前記の腫瘍細胞の存在下において局所的にのみ活性化され、これは縮減された全身毒性に至る。それゆえに、これらの多重特異性抗体は、現行の処置オプションと比較していくつかの有益な効果、例えば（ｉ）免疫に関連する有害事象のより低い率および（ｉｉ）用量制限毒性のより低い率を有することが予想される。
【0097】
本発明の発明者は、さらに、互いに対して相対的なＣＤ１３７－ＢＤおよびＰＤＬ１－ＢＤの親和性の特定の均衡化、すなわち、ＣＤ１３７に対するＣＤ１３７－ＢＤの親和性に対して相対的なＰＤＬ１に対するＰＤＬ１－ＢＤの有意な高い親和性が、ＰＤＬ１／ＰＤ－１相互作用の最大の阻害が達成される有効濃度（ＩＣ１００）がＣＤ１３７によって駆動されるＮＦ－κＢシグナル伝達の最大の活性化が達成される濃度範囲内に良好に収まるということを保証するために必要であるということを見出した。それによって、最大の活性の濃度ウインドウは有意に展延され（例えば図２Ｃを図２Ａと比較せよ）、これは治療的な適用にとって有益であることが予測され、多重特異性抗体または多重特異性抗体を含む医薬組成物を投薬することにおけるより高いフレキシビリティーを許す。それらのそれぞれの結合標的に対するＰＤＬ１－ＢＤおよびＣＤ１３７－ＢＤの親和性が類似であるかまたはＰＤＬ１に対するＰＤＬ＋－ＢＤの親和性（ＫＤ）がＣＤ１３７に対するＣＤ１３７－ＢＤ親和性（ＫＤ）よりもわずかにのみ小さい（良好）場合には、最大のＰＤＬ１ブロックおよび最大のＣＤ１３７によって媒介されるシグナル伝達を達成するための有効濃度はオーバーラップしない（図２Ａおよび２Ｂ）、これはかかる抗体の総体的な効力および治療的な適用性を減少させると思われる。それゆえに、１つの実施形態において、本発明に用いられる多重特異性抗体は少なくとも１つのＣＤ１３７－ＢＤと少なくとも１つのＰＤＬ１－ＢＤとを含み、前記のＣＤ１３７－ＢＤは、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）に対して相対的に少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、例えば少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００倍高い一価解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ１３７に結合し、具体的には、前記のＣＤ１３７－ＢＤは、ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に対する結合についての前記のＰＤＬ１－ＢＤの一価解離定数（ＫＤ）よりも２０から１０００倍、好ましくは３０から８００倍、具体的には５０～５００倍高い一価解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ１３７に結合する。
【0098】
重要なことに、ＣＤ１３７特異性について一価である本発明に用いられる多重特異性抗体ＭＡ１は、その抗原に対するＰＤＬ１－ＢＤの結合によって引き起こされるクラスター化の非存在下におけるＣＤ１３７活性化の欠如を原因として、ＣＤ１３７シグナル伝達を全身的に誘導することはできない。
【0099】
１つの実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ１は１つのＣＤ１３７－ＢＤおよび１つのＰＤＬ１－ＢＤからなる。
【0100】
用語「ＣＤ１３７」は、具体的には、配列番号８９として本明細書に転載されるＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｑ０７０１１を有するヒトＣＤ１３７を言う。好適には、本発明のＣＤ１３７－ＢＤは、ＣＤ１３７、具体的には配列番号８９として本明細書に転載されるＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｑ０７０１１で示されるヒトＣＤ１３７を標的化する。好適には、本発明に用いられる多重特異性抗体は、ヒトおよびカニクイ（マカカ・ファシキュラリス）ＣＤ１３７を標的化するＣＤ１３７－ＢＤを含む。好ましくは、本発明に用いられる多重特異性抗体は、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ相互作用をブロックしないＣＤ１３７－ＢＤを含む。
【0101】
１つの実施形態において、ＣＤ１３７－ＢＤは結合がウレルマブと交差競合しない。それゆえに、ＣＤ１３７－ＢＤはウレルマブとは異なるエピトープに結合する。ＢＭＳ－６６３５１３ともまた言われるウレルマブは、ブリストルマイヤーズスクイブからの完全ヒト化ＩｇＧ４－ｍＡｂであり、ＷＯ２００４／０１０９４７、ＵＳ６，８８７，６７３、およびＵＳ７，２１４，４９３に記載されている。別の実施形態において、本発明に用いられるＣＤ１３７－ＢＤは結合がウレルマブと交差競合する。
【0102】
１つの実施形態において、ＣＤ１３７－ＢＤは結合がウトミルマブと交差競合しない。それゆえに、ＣＤ１３７－ＢＤはウトミルマブとは異なるエピトープに結合する。ＰＦ－０５０８２５６６ともまた言われるウトミルマブは、ファイザーからの完全ヒトＩｇＧ２－ｍＡｂであり、ＷＯ２０１２／０３２４３３およびＵＳ８，８２１，８６７に記載されている。別の実施形態において、本発明に用いられるＣＤ１３７－ＢＤは結合がウトミルマブと交差競合する。
【0103】
さらなる実施形態において、ＣＤ１３７－ＢＤは結合がウレルマブともウトミルマブとも交差競合しない。それゆえに、ＣＤ１３７－ＢＤはウレルマブおよびウトミルマブとは異なるエピトープに結合する。
【0104】
用語「競合」または「交差競合」および関連する用語は、本明細書においては交換可能に用いられて、標準的な競合結合アッセイにおいてＣＤ１３７に対する他の抗体または結合剤の結合に干渉する抗体または他の結合剤の能力を意味する。
【0105】
本明細書において用いられる用語「同じエピトープ」は、抗体に対する特異的結合ができる同じ蛋白質上の個々の蛋白質決定基を言い、ここで、これらの個々の蛋白質決定基は同一であり、すなわち、同一の三次元構造特徴および同一の電荷特徴を有するアミノ酸または糖側鎖などの分子の同一の化学的に活性な表面基群からなる。特定の蛋白質標的に関して本明細書において用いられる用語「異なるエピトープ」は、抗体に対する特異的結合ができる同じ蛋白質上の個々の蛋白質決定基を言い、ここで、これらの個々の蛋白質決定基は同一ではなく、すなわち、異なる三次元構造特徴および異なる電荷特徴を有するアミノ酸または糖側鎖などの分子の非同一の化学的に活性な表面基群からなる。これらの異なるエピトープはオーバーラップするかまたはオーバーラップせずにあり得る。
【0106】
好適には、ＭＡ１のＣＤ１３７－ＢＤはさらに次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５０℃の、好ましくは少なくとも５５℃、より好ましくは少なくとも６０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、７％未満、例えば６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５０℃の、好ましくは少なくとも５５℃、より好ましくは少なくとも６０℃の示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、７％未満、例えば６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
【0107】
ＤＳＦは以前に記載されている（イーガン（Egan）ら，ＭＡｂｓ，第９巻（１）（２０１７年），ｐ．６８－８４；ニーゼン（Niesen）ら，ネイチャー・プロトコールズ（Nature Protocols），第２巻（９）（２００７年）ｐ．２２１２－２２２１）。ｓｃＦｖコンストラクトの熱的アンフォールディング遷移中点が、示差走査蛍光定量法によって蛍光色素ＳＹＰＲＯ（登録商標）オレンジを用いて決定される（ウォン（Wong）＆レイリー（Raleigh），プロテインサイエンス（Protein Science），第２５巻（２０１６年）ｐ．１８３４－１８４０を参照）。ｐＨ６．４のリン酸－クエン酸緩衝液中のサンプルが５０μｇ／ｍｌの蛋白質終濃度で調製され、１００μｌの総体積中に５×ＳＹＰＲＯ（登録商標）オレンジの終濃度を含有している。２５マイクロリットルの調製されたサンプルが白色壁のＡＢジーンＰＣＲプレートに三重で追加される。アッセイはサーマルサイクラーとして用いられるｑＰＣＲマシンによって行われ、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素キャリブレーションルーチンを用いて検出される。試験サンプルを含有するＰＣＲプレートは、１℃のインクリメントで２５℃から９６℃までの温度傾斜に付され、各温度インクリメント後に３０ｓのポーズを有する。総アッセイ時間は約２ｈである。Ｔｍはソフトウェアのグラフパッドプリズムによって数学的２階微分法を用いて計算されて、曲線の変曲点を計算する。報告されるＴｍは３つの測定の平均である。
【0108】
モノマー含量の損失はＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラムの曲線下面積計算によって決定される通りである。ＳＥ－ＨＰＬＣは、ＵＳＰ第６２１章によって概説されている通り固体の固定相および液体の移動相に基づく分離技術である。この方法は分子をそれらのサイズおよび形状に基づいて分離し、疎水性の固定相および水性の移動相を利用する。分子の分離は特定のカラムのボイドボリューム（Ｖ０）および全浸透体積（ＶＴ）の間で生起する。ＳＥ－ＨＰＬＣによる測定は、自動サンプル注入および２８０ｎｍの検出波長に設定されたＵＶ検出器を備えたクロムマスターＨＰＬＣシステム（日立ハイテクノロジーズコーポレーション）によって行われる。装置はソフトウェアＥＺＣｈｒｏｍエリート（アジレント・テクノロジー、バージョン３．３．２、ＳＰ２）によってコントロールされ、これはもたらされるクロマトグラムの分析をもまたサポートする。蛋白質サンプルが遠心によって清澄化され、注入に先立ってオートサンプラー上で４～６℃の温度に保たれる。ｓｃＦｖサンプルの分析のためには、カラムのＳｈｏｄｅｘＫＷ４０３－４Ｆ（昭和電工Ｉｎｃ．、＃Ｆ６９８９２０２）が、標準化された緩衝生理食塩水の移動相（５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．５、３００ｍＭ塩化ナトリウム）によって、０．３５ｍｌ／ｍｉｎの推奨流量で使用される。注入あたりのターゲットサンプルロードは５μｇであった。サンプルはＵＶ検出器によって２８０ｎｍの波長で検出され、データは好適なソフトウェアスイートによって記録される。もたらされるクロマトグラムはＶ０からＶＴの範囲で分析され、それによって、＞１０ｍｉｎ溶出時間を有するマトリックス関連ピークを排除する。
【0109】
本発明に用いられる多重特異性抗体ＭＡ１は１つのＰＤＬ１結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）を含む。
【0110】
用語「ＰＤＬ１」は、具体的には、配列番号９０として本明細書に転載されるＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｑ９ＮＺＱ７を有するヒトＰＤＬ１を言う。好適には、本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤは、ＰＤＬ１、具体的には配列番号９０として本明細書に転載されるＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｑ９ＮＺＱ７で示されるヒトＰＤＬ１を標的化する。好適には、本発明に用いられる抗体ＭＡ１はＰＤＬ１－ＢＤを含み、これはヒトおよびカニクイ（マカカ・ファシキュラリス）ＰＤＬ１を標的化し、好ましくはムス・ムスクルスＰＤＬ１とは交差反応しない。本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤはヒトＰＤＬ１蛋白質に特異的に結合する。
【0111】
本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤはＰＤＬ１阻害剤である。用語「ブロッカー」または「阻害剤」または「アンタゴニスト」は、それが結合する抗原の生物活性を阻害または縮減する抗体またはその結合ドメインを言う。本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤはその結合パートナーに対するＰＤＬ１の結合能力を標的化し、減少させるかまたは阻害し、それによってＰＤＬ１機能に干渉する。具体的には、本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤは、その受容体との、具体的にはＰＤ－１とのＰＤＬ１の相互作用をブロックする。具体的には、本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤは、その受容体（単数または複数）との、具体的にはＰＤ－１および／またはＢ７－１とのＰＤＬ１の相互作用をブロックする。
【0112】
好適には、本発明に用いられるＭＡ１のＰＤＬ１－ＢＤは、本開示において提供される結合ドメインである。本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤは、それらの配列が表２に挙げられているヒト化ＰＤＬ１－ＢＤを包含するが、これらに限定されない。
【0113】
好適には、本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤは次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ａ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、１０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．０５ｐＭから１０ｎＭの、より具体的には０．１ｐＭから５ｎＭの、より具体的には０．２ｐＭから１ｎＭ、より具体的には０．５ｐＭから５００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから２００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから１００ｐＭの一価ＫＤで結合する；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、５×１０-３ｓ-１以下の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-７ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-６ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から１０-６ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０８Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には５×１０５Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＰＤＬ１と交差反応性である；
ｅ． ムス・ムスクルスＰＤＬ１と非交差反応性である。
ａ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、１０ｎＭ未満の一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には０．０５ｐＭから１０ｎＭの、より具体的には０．１ｐＭから５ｎＭの、より具体的には０．２ｐＭから１ｎＭ、より具体的には０．５ｐＭから５００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから２００ｐＭの、より具体的には１ｐＭから１００ｐＭの一価ＫＤで結合する；
ｂ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、５×１０-３ｓ-１以下の、より具体的には５×１０-３ｓ-１から１０-７ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から５×１０-６ｓ-１の、より具体的には１０-３ｓ-１から１０-６ｓ-１のＫｏｆｆ速度で結合する；
ｃ． ＳＰＲによって測定されるときに、ヒトＰＤＬ１に、少なくとも１０４Ｍ-１ｓ-１またはより多大な、より具体的には１０４Ｍ-１ｓ-１から１０８Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には１０５Ｍ-１ｓ-１から５×１０７Ｍ-１ｓ-１の、より具体的には５×１０５Ｍ-１ｓ-１から１０７Ｍ-１ｓ-１のＫｏｎ速度で結合する；
ｄ． マカカ・ファシキュラリス（カニクイ）ＰＤＬ１と交差反応性である；
ｅ． ムス・ムスクルスＰＤＬ１と非交差反応性である。
【0114】
好適には、本発明に用いられるＰＤＬ１－ＢＤはさらに次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５５℃、例えば少なくとも６０℃、好ましくは少なくとも６５℃、より好ましくは少なくとも７０℃の、示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、好ましくは３％未満、より好ましくは１％未満の、５回続けての凍結融解サイクル後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１５％未満、例えば１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
ｆ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、少なくとも５５℃、例えば少なくとも６０℃、好ましくは少なくとも６５℃、より好ましくは少なくとも７０℃の、示差走査蛍光定量法によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記の抗体またはその抗原結合断片はｐＨ６．４、１５０ｍＭのＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤され、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｇ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、５％未満、好ましくは３％未満、より好ましくは１％未満の、５回続けての凍結融解サイクル後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｈ． ｓｃＦｖフォーマットであるときに、前記の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１５％未満、例えば１２％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満の、少なくとも２週の、具体的には少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記の抗体は、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
【0115】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ１は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。それゆえに、本発明に用いられる多重特異性抗体ＭＡ１は、典型的には、コンパクトなマルチドメインかつ低分子量の抗体アーキテクチャを有する。本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられ、ネイティブな配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域を包含する。ネイティブな配列のＦｃ領域はヒトｌｇＧ１、ｌｇＧ２（ｌｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ｌｇＧ３、およびｌｇＧ４を包含する。「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は抗体のＦｃ領域に結合する受容体を言い表す。具体的には、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するネイティブな配列のヒトＦｃＲ（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を包含し、これらの受容体のアレルバリアントおよび選択的スプライシング形態を包含する。ＦｃγＲＩＩ受容体はＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を包含し、これらは、主としてそれらの細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受容体のチロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をその細胞質ドメイン上に含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体のチロシンに基づく阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）をその細胞質ドメイン上に含有する（Ｍ．デロン（Daeron），アニュアル・レビュー・オブ・イミュノロジー（Annual Reviewof Immunology），第５巻：ｐ．２０３－２３４（１９９７年）を参照。ＦｃＲはラヴェッチ（Ravetch）およびキネ（Kinet），アニュアル・レビュー・オブ・イミュノロジー（Annual Reviewof Immunology），第９巻：ｐ．４５７－９２（１９９１年）；カペー（Capet）ら，イミュノメソッズ（ImmunoMethods），第４巻：ｐ．２５－３４（１９９４年）；ならびにドハース（deHaas）ら，ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカルメディシン（Journal ofLaboratory and Clinical Medicine），第１２６巻：ｐ．３３０－４１（１９９５年）において総説されている。将来同定されるべきものを包含する他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」によって包摂される。用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、新生児受容体のＦｃＲｎをもまた包含し、これは胎児への母性ＩｇＧの移入を担う。ガイヤー（Guyer）ら，ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Journal ofImmunology），第１１７巻：ｐ．５８７（１９７６年）、およびキム（Kim）ら，ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Journal of Immunology），第２４巻：ｐ．２４９（１９９４年）。ＦｃＲｎに対する結合を測定する方法は公知である（例えば、ギティー（Ghetie）およびウォード（Ward），イミュノロジー・トゥデイ（Immunology Today），第１８巻：（１２）：ｐ．５９２－８（１９９７年）；ギティー（Ghetie）ら，ネイチャー・バイオテクノロジー（NatureBiotechnology），第１５巻（７）：ｐ．６３７－４０（１９９７年）；ヒントン（Hinton）ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー（Journal of Biological Chemistry）ＴＪＩ（第８巻）：ｐ．６２１３－６（２００４年）；ＷＯ２００４／９２２１９（ヒントン（Hinton）ら）を参照。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボのＦｃＲｎに対する結合および血清中半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクションヒト細胞株において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイされ得る。ＷＯ２００４／４２０７２（プレスタ（Presta））は、ＦｃＲに対する結合を改善または逓減させた抗体バリアントを記載している。例えば、シールズ（Shields）ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー（Journal ofBiological Chemistry），第９巻（２）：ｐ．６５９１－６６０４（２００１年）も参照。
【0116】
同じまたはより低い分子量において特異性／機能性の数を増大させるためには、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片、ならびに他の抗体断片などの抗体断片を含む抗体を用いることが有利である。これらのより小さい分子は全抗体の抗原結合活性を保持し、全免疫グロブリン分子と比較して改善された組織透過および薬物動態特性をもまた見せ得る。かかる断片は全免疫グロブリンと比べていくつもの利点を見せるように見えるが、それらはインビボで長い半減期を付与するＦｃドメインを欠くので、それらは血清からの増大したクリアランス速度をもまた患う（メダサン（Medasan）ら，１９９７年，ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Journal ofImmunology），第１５８巻：ｐ．２２１１－２２１７）。より低い分子量を有する分子は、より効率的に標的組織（例えば固形癌）中に透過し、それゆえに同じまたはより低い用量で改善された効力の有望さを保有する。
【0117】
本発明者は、本発明において適用される多重特異性抗体ＭＡ１へのヒト血清アルブミン結合ドメイン（ｈＳＡ－ＢＤ）の追加が、それらのそれぞれの標的に結合する他の結合ドメインの能力に干渉しないということを見出した。複雑な複数標的の複数細胞のインビボの状況において互いを立体的にまたは別様に阻害することなしに、全ての３つの結合ドメインが機能的なままに残るということが先験的に予想され得ない限り、この知見は驚くべきである。
【0118】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ１は、ヒト血清アルブミンに対する特異性を有するさらなる結合ドメインを含み得る。
【0119】
１つの実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ１は：（ｉ）１つのＣＤ１３７－ＢＤ；（ｉｉ）１つのＰＤＬ１－ＢＤ；および（ｉｉｉ）１つのｈＳＡ－ＢＤを含む。
【0120】
用語「ｈＳＡ」は、具体的には、ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｐ０２７６８を有するヒト血清アルブミンを言う。ヒト血清アルブミン（ｈＳＡ）は、５８５アミノ酸から組成されるヒト血清中の６６．４ｋＤａの豊富な蛋白質（トータル蛋白質の５０％）である（スギオ（Sugio），プロテインエンジニアリング・デザイン・アンド・セレクション（ProteinEngineering, Design and Selection），Ｖｏｌ．１２，１９９９年，ｐ．４３９－４４６）。多機能性のｈＳＡは、いくつもの代謝物、例えば脂肪酸、金属イオン、ビリルビン、およびいくつかの薬物を輸送し得る（ファナーリ（Fanali），モレキュラー・アスペクツ・オブ・メディシン（Molecular Aspectsof Medicine），Ｖｏｌ．３３，２０１２年，ｐ．２０９－２９０）。血清中のｈＳＡ濃度は大体３．５～５ｇ／ｄｌである。アルブミン結合抗体およびそれらの断片は、例えば、薬物またはそれらにコンジュゲート化された蛋白質のインビボの血清中半減期を展延するために用いられ得る。
【0121】
いくつかの実施形態において、ｈＳＡ－ＢＤはモノクローナル抗体または抗体断片に由来する。
【0122】
多重特異性抗体ＭＡ１のための好適なｈＳＡ－ＢＤは、本開示において提供される結合ドメインである。多重特異性抗体ＭＡ１のｈＳＡ－ＢＤは、それらの配列が表３に挙げられているヒト化ｈＳＡ結合ドメインを包含するが、これらに限定されない。好適なｈＳＡ結合ドメインの追加の配列は表７に挙げられている。
【0123】
具体的には、多重特異性抗体ＭＡ１のｈＳＡ－ＢＤはヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
【0124】
多重特異性抗体ＭＡ１における使用のための別の好適なｈＳＡ－ＢＤは、以下からなる群から選択される結合ドメインを含むか、またはそれに由来する：（ｉ）血清アルブミンに結合するポリペプチド（例えば、スミス（Smith）ら，２００１年，バイオコンジュゲート・ケミストリー（BioconjugateChemistry），第１２巻：ｐ．７５０－７５６；ＥＰ０４８６５２５；ＵＳ６，２６７，９６４；ＷＯ２００４／００１０６４；ＷＯ２００２／０７６４８９；およびＷＯ２００１／４５７４６を参照）；（ｉｉ）ホルト（Holt）ら，プロテインエンジニアリング、デザイン＆セレクション（ProteinEngineering, Design & Selection），ｖｏｌ２１，第５号，ｐｐ２８３－２８８、ＷＯ２００４／００３０１９、ＷＯ２００８／０９６１５８、ＷＯ２００５／１１８６４２、ＷＯ２００６／０５９１０５６、およびＷＯ２０１１／００６９１５に記載されている抗血清アルブミン結合単一可変ドメイン；（ｉｉｉ）ＷＯ２００９／０４０５６２、ＷＯ２０１０／０３５０１２、およびＷＯ２０１１／０８６０９１に記載されている抗血清アルブミン抗体。
【0125】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２はＣＤ３特異性について一価である。
【0126】
多重特異性抗体ＭＡ２における使用のための好適なＣＤ３－ＢＤは、本開示において提供される結合ドメインである。本発明のＣＤ３－ＢＤは、それらの配列が表６に挙げられているヒト化ＣＤ３結合ドメインを包含するが、これらに限定されない。
【0127】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は、少なくとも１つのＴＡＡ－ＢＤを含む。２つ以上のＴＡＡ－ＢＤを有するＭＡ２は、同じＴＡＡに対するまたは２つの異なるＴＡＡに対する特異性を有し得る。
【0128】
用語「腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）」は、腫瘍細胞の表面に発現される抗原を言う。具体的な実施形態において、ＴＡＡは、非腫瘍細胞と比較されるときに腫瘍細胞上に選好的に発現される抗原であり、具体的には、腫瘍細胞上のＴＡＡの発現は、同じ生物または患者からの非腫瘍細胞よりも少なくとも５倍超、少なくとも１０倍超、少なくとも２０倍超、少なくとも５０倍超、または少なくとも１００倍超高い。具体的には、ＴＡＡは以下の群から取られる：ＡＤＲＢ３、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＣＭＡ、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６）、ＣＡＩＸ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３５（ＦＬＴ３）、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７６、ＣＤ３３、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ（ＣＬＬ１）、ＣＳＰＧ４、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＨＡ２、エフリンＢ２、ＥＲＢＢ（例えばＥＲＢＢ２）、ＦＡＰ、ＦＧＦＲ１、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、Ｆｏｓ関連抗原、ＧＡ７３３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＦＲアルファ４、ｇｌｏｂｏＨ、ＧＰＣ３、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＨＡＶＣＲ１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＨＥＲ２）、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶＥ６またはＥ７、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＬ－１１Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＭＰ２、Ｌｙ６ｋ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ｍｕｔ－ｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＣＡＭ、好中球エラスターゼ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＮＸ３、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ１、ＲＯＲ１、ｓＬｅ、精子蛋白質１７、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＴＲ２、ｓＴｎ抗原、ｓＴｎ－Ｏ－グリコペプチド、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、サイログロブリン、Ｔｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－グリコペプチド、ＴＰＢＧ（５Ｔ４）、ＴＲＰ－２、ＴＳＨＲ、ＵＰＫ２、およびＶＥＧＦＲ２。
【0129】
具体的な実施形態において、ＴＡＡは、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＴＰＢＧ（５Ｔ４）、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６）、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＬＥＣ１２Ａ（ＣＬＬ１）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、ＣＤ３３、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ２７６、ＣＤＨ３（カドヘリン３）、ＦＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＤ１３３、ＥＰＨＡ２、ＨＬＡ－Ａ２、ＩＬ１３ＲＡ２、ＲＯＲ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＤ１３５、ＧＤ－２、ＧＡ７３３、ＣＤ１３５（ＦＬＴ３）、ＣＳＰＧ４、およびＴＡＧ－７２からなる群から選択され、具体的には、ＣＤ１３８、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＥＡ、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＬＥＣ１２ａ、およびＲＯＲ１からなる群から選択される。特別な実施形態において、ＴＡＡはＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、およびＲＯＲ１からなる群から選択される。
【0130】
１つの実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は１つのＴＡＡ－ＢＤを含み、すなわちＴＡＡ特異性について一価である。
【0131】
具体的な実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２はクリーンなＴＡＡ、すなわちほぼ専ら癌細胞上に発現されるＴＡＡ、例えば癌胎児腫瘍抗原、例えばＲＯＲ１に結合する１つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
【0132】
本発明の文脈において、用語「クリーンなＴＡＡ」は、健康細胞の表面には発現されないか、または癌細胞の表面のそれぞれのＴＡＡ密度の１０％未満、具体的には５％未満、具体的には１％未満、具体的には０．５％未満に対応する量で健康細胞の表面に発現されるＴＡＡを言う。
【0133】
他の具体的な実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は、クリーンでないＴＡＡ、すなわち健康な細胞の表面にもまた有意な量で発現されるＴＡＡ、例えばメソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、およびＨＥＲ２に結合する１つのＴＡＡ－ＢＤを含む。
【0134】
本発明の文脈において、用語「クリーンなＴＡＡ」は、癌細胞の表面のそれぞれのＴＡＡ密度の１０～９０％、具体的には１０～８０％、具体的には１０～７５％に対応する量で健康細胞の表面に発現されるＴＡＡを言う。
【0135】
これらの実施形態において、前記の単一のＴＡＡ－ＢＤは、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、５０ｎＭ未満、具体的には２０ｎＭ未満、具体的には１０ｎＭ未満、具体的には５ｎＭ未満の、具体的には０．０１から２ｎＭの、具体的には０．０２から１ｎＭの、具体的には０．０３から０．５ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
【0136】
１つのＴＡＡ－ＢＤと１つのＣＤ３－ＢＤとを含むＭＡ２の具体例は、ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ低ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）、ＰＲＯ２５１０（ＲＯＲ１×ＣＤ３×ｈＳＡ）、ＰＲＯ２６６８（ＲＯＲ１×ＣＤ３×ｈＳＡ）、ＰＲＯ１７６６（ＨＥＲ２×ＣＤ３×ｈＳＡ）、およびＰＲＯ１７６７（ＨＥＲ２×ＣＤ３×ｈＳＡ）であり、これらの配列は表１１に挙げられている。
【0137】
別の実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は、２つまたは３つのＴＡＡ－ＢＤ、具体的には２つのＴＡＡ－ＢＤを含み、これらは同じＴＡＡに対する特異性を有する。
【0138】
尚も別の実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は、２つの、３つの、または４つのＴＡＡ－ＢＤ、具体的には２つのＴＡＡ－ＢＤを含み、これらは２つの異なるＴＡＡに対して特異性を有する。
【0139】
これらの実施形態において、ＴＡＡ－ＢＤは、互いから独立して、クリーンなおよびクリーンでないＴＡＡに結合する。
【0140】
具体的な実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は２つのＴＡＡ－ＢＤを含み、これらは同じＴＡＡに対して特異性を有し、ＴＡＡはクリーンでないＴＡＡから選択される。
【0141】
具体的な実施形態において、医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は２つのＴＡＡ－ＢＤを含み、これらは同じＴＡＡに対して特異性を有し、ＴＡＡは腫瘍細胞関連抗原から選択され、それらの細胞外部分は可溶性形態で患者の血清中にもまた生起する。
【0142】
本発明の文脈において、用語「患者の血清中に可溶性形態で生起する」は、目当ての具体的な蛋白質、すなわちＴＡＡの細胞外部分の濃度が血清中において少なくとも１ｎｇ／ｍｌであるということを意味する。
【0143】
同じＴＡＡに対する特異性を有する多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＴＡＡ－ＢＤは、前記のＴＡＡ標的分子の細胞外部分の同じまたは異なるエピトープどちらかに結合する。好ましくは、同じＴＡＡに対する特異性を有する多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＴＡＡ－ＢＤは、ＴＡＡ標的分子上の同じエピトープに結合する。
【0144】
これらの実施形態において、同じＴＡＡに対する特異性を有する多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＴＡＡ－ＢＤは、ＳＰＲによって測定されるときに、前記のＴＡＡに、０．１から５０ｎＭの、具体的には０．２から３０ｎＭの、具体的には０．３から２０ｎＭの、具体的には０．４から１０ｎＭの範囲の一価解離定数（ＫＤ）で結合し、具体的には前記のＴＡＡ－ＢＤはｓｃＦｖである。
【0145】
健康な低ＴＡＡ発現細胞と比べて高ＴＡＡ発現細胞に対してこれらの多重特異性抗体ＭＡ２の力価の有意な増大を引き起こすアビディティ効果を原因として、２つの低親和性ＴＡＡ－ＢＤを含むこれらの多重特異性抗体ＭＡ２は、クリーンでないＴＡＡ、例えばメソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、およびＨＥＲ２により安全に対処することを許す。さらにその上、典型的にはＴＡＡ結合薬物の有効濃度の有意な縮減を引き起こすそれらの細胞外部分が癌患者の血清中に脱落するＴＡＡ（可溶性ＴＡＡ）に対するこれらの多重特異性抗体ＭＡ２の結合は、有意な量のかかる可溶性ＴＡＡの存在によってあまり影響されない。かかるＴＡＡの例はＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、およびＭＵＣ１である。
【0146】
具体的な実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＴＡＡ－ＢＤは、メソテリン（ＭＳＬＮ）、具体的にはヒトメソテリンに特異的に結合するＭＳＬＮ－ＢＤである。２つのＭＳＬＮ－ＢＤは、ＭＳＬＮの細胞外部分のいずれかの領域に、例えばＭＳＬＮの領域Ｉ、領域ＩＩ、および／または領域ＩＩＩに結合する。好ましくは、この特定の実施形態の多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＭＳＬＮ－ＢＤは、ＭＳＬＮの領域Ｉおよび／または領域ＩＩに、具体的には領域Ｉに結合する。領域Ｉは、ＭＳＬＮが取り付けられている細胞表面から最も遠位であるＭＳＬＮの部分である。
【0147】
この特定の実施形態の多重特異性抗体ＭＡ２の２つのＭＳＬＮ－ＢＤは、ＭＳＬＮ標的分子上の同じまたは異なるエピトープどちらかに結合する。好ましくは、２つのＭＳＬＮ－ＢＤはＭＳＬＮ標的分子上の同じエピトープに結合する。
【0148】
多重特異性抗体ＭＡ２における使用のための好適なＭＳＬＮ－ＢＤは、本開示において提供される結合ドメインである。本発明において適用されるＭＳＬＮ－ＢＤは、それらの配列が表８に挙げられているヒト化ＭＳＬＮ結合ドメインを包含するが、これらに限定されない。
【0149】
好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は、ヒト血清アルブミンに対する特異性を有するさらなる結合ドメインを含み得る。
【0150】
多重特異性抗体ＭＡ２のための好適なｈＳＡ－ＢＤは、上で定義されている通り本開示において提供される結合ドメインである。多重特異性抗体ＭＡ２のｈＳＡ－ＢＤは、それらの配列が表３および表７に挙げられているヒト化ｈＳＡ結合ドメインを包含するが、これらに限定されない。
【0151】
２つの低親和性ＭＳＬＮ－ＢＤと１つのＣＤ３－ＢＤとを含むＭＡ２（例えばｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の具体例は、ＰＲＯ２０００、ＲＰＯ２１００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、ＰＲＯ２５６７、ＰＲＯ２６６０、ＰＲＯ２７４１、およびＰＲＯ２７４６であり、これらの配列は表１１に挙げられている。それらの製造および機能的特性についてのさらなる詳細は、参照によってここに組み込まれる未公開の特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０６４４２７に開示されている。
【0152】
本発明の発明者は、三重特異性分子（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６５、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７が、フローサイトメトリーによって決定されるときに健康なＭｅＴ－５Ａ細胞（ＡＴＣＣ－ＣＲＬ－９４４４）よりもおよそ７倍高いＭＳＬＮ発現レベルを有する標的細胞を、前記の標的細胞および前記のＭｅＴ－５Ａ細胞に対するＴ細胞によって駆動される細胞傷害性アッセイによって決定されるときに、高い効率で、かつ前記のＭｅＴ－５Ａ細胞を殺すことについてのＥＣ５０よりも少なくとも２５倍低いＥＣ５０で殺すことができるということを先に見出した。それゆえに、ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７は高ＭＳＬＮ発現標的細胞については非常に高い殺細胞力価を見せるが、健康な細胞に対するそれらの殺細胞力価はずっと低く、ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７を用いる処置について、可能性として大きい治療ウインドウを指示している。それらとは対照的に、ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７のＭＳＬＮ－ＢＤよりも５倍超良好な結合親和性（ＫＤ）を有する１つのＭＳＬＮ－ＢＤを含む三重特異性の参照分子ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ低ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の力価は、前記の高ＭＳＬＮ発現標的細胞および前記の健康なＭｅｔ－５Ａ細胞を殺すことについて、有意には異ならない。この知見は、癌患者の処置における本発明の多重特異性抗体の使用の治療ウインドウが有意に増大しているということを指示している。加えて、本発明の発明者は、驚くべきことに、フローサイトメトリーによって決定されるときに前記の健康なＭｅＴ－５Ａ細胞よりもおよそ７倍高いＭＳＬＮ発現レベルを有する標的細胞を殺すことについて、三重特異性分子ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）のＥＣ５０値が、前記の標的細胞に対してＴ細胞によって駆動される細胞傷害性アッセイによって決定されるときに、５０ｎｇ／ｍｌの可溶性メソテリン（ｓＭＳＬＮ）の存在下において６倍超、５００ｎｇ／ｍｌの可溶性メソテリン（ｓＭＳＬＮ）の存在下において４０倍を超えずに増大しないということを見出した。他方で、前記の標的細胞を殺すことについて、三重特異性参照分子ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ低ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）のＥＣ５０値は、５０ｎｇ／ｍｌのｓＭＳＬＮの存在下においてほぼ８倍、５００ｎｇ／ｍｌのｓＭＳＬＮの存在下において７５倍超増大した。それゆえに、高ＭＳＬＮ発現標的細胞についての三重特異性分子ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、およびＰＲＯ２５６７の高い殺細胞力価は、高い濃度のｓＭＳＬＮによってわずかにのみ影響される。
【0153】
特定の実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ２のＴＡＡ－ＢＤ（単数または複数）はＲＯＲ１に特異的に結合する。
【0154】
用語「ＲＯＲ１」は、具体的には、ＵｎｉＰｒｏｔＩＤ番号Ｑ０１９７３を有するヒトＲＯＲ１を言う。好適には、本発明のＲＯＲ１－ＢＤは、ヒトＲＯＲ１、具体的にはＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を標的化する。具体的な実施形態において、ＲＯＲ１－ＢＤはＲＯＲ１のＩｇ様および／またはｆｒｉｚｚｌｅｄドメインに結合する。他の具体的な実施形態において、ＲＯＲ１－ＢＤはＲＯＲ１に対するＷｎｔ５αの結合をブロックしない。
【0155】
好適には、ＲＯＲ１－ＢＤは、ｓｃＦｖフォーマットであるときに、次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに、１ｐＭから２ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には２ｐＭから１ｎＭの、具体的には５から５００ｐＭのＫＤで結合する；
ｂ． ヒトＲＯＲ１発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、５ｐＭから１０ｎＭのＥＣ５０で、具体的には１０ｐＭから５ｎＭのＥＣ５０で、具体的には２０ｐＭから４ｎＭのＥＣ５０で、具体的には３０ｐＭから３ｎＭのＥＣ５０で結合する。
ａ． 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるときに、ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに、１ｐＭから２ｎＭの一価解離定数（ＫＤ）で、具体的には２ｐＭから１ｎＭの、具体的には５から５００ｐＭのＫＤで結合する；
ｂ． ヒトＲＯＲ１発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、５ｐＭから１０ｎＭのＥＣ５０で、具体的には１０ｐＭから５ｎＭのＥＣ５０で、具体的には２０ｐＭから４ｎＭのＥＣ５０で、具体的には３０ｐＭから３ｎＭのＥＣ５０で結合する。
【0156】
好適には、ＲＯＲ１－ＢＤは、ｓｃＦｖフォーマットであるときに、さらに次のパラメータの１つ以上を特徴とする：
ｃ． 少なくとも５８℃の、具体的には少なくとも５９℃の、具体的には少なくとも６０℃の、具体的には少なくとも６１℃の、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖはｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｄ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、３％未満、具体的には２％未満、具体的には１％未満の、少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｅ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１０％未満の、少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｆ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１％未満の、少なくとも４週の４℃または４０℃における保存後の蛋白質含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
ｃ． 少なくとも５８℃の、具体的には少なくとも５９℃の、具体的には少なくとも６０℃の、具体的には少なくとも６１℃の、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定される融解温度（Ｔｍ）を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖはｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；
ｄ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、３％未満、具体的には２％未満、具体的には１％未満の、少なくとも４週の４℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｅ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１０％未満の、少なくとも４週の４０℃における保存後のモノマー含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される；および／または
ｆ． 前記のｓｃＦｖが１０ｍｇ／ｍｌの出発濃度であるときに、１％未満の、少なくとも４週の４℃または４０℃における保存後の蛋白質含量の損失を有し、具体的には、前記のｓｃＦｖは、ｐＨ６．４の１５０ｍＭのＮａＣｌを有する５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって製剤される。
【0157】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ２において適用されるＲＯＲ１－ＢＤは、それらの配列が表１０に挙げられているヒト化ＲＯＲ１－ＢＤを包含するが、これらに限定されない。
【0158】
１つの具体的な実施形態において、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まない。
【0159】
別の具体的な実施形態において、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ２は免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含む。
【0160】
本発明に用いられる他の可変ドメインは、変異させられているが尚も表１から３および６から１０に記載されている配列上の図示されるＣＤＲ領域に対するＣＤＲ領域の少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を有するアミノ酸配列を包含する。本発明に用いられる他の可変ドメインは、表１から３および６から１０に記載されている配列上の図示されるＣＤＲ領域と比較されるときに、１、２、３、４、または５を超えないアミノ酸がＣＤＲ領域上で変異させられている変異体アミノ酸配列を包含する。
【0161】
好適には、本発明に用いられる結合ドメインのＶＨドメインはＶＨ３またはＶＨ４ファミリーに属する。１つの実施形態において、本発明に用いられる結合ドメインは、ＶＨ３ファミリーに属するＶＨドメインを含む。本発明の文脈において、用語「ＶＨｘファミリー（またはＶＬxファミリー）に属する」は、フレームワーク配列ＦＲ１からＦＲ３が前記のＶＨｘファミリー（またはそれぞれＶＬｘ）に対して最も高い度合いの相同性を示すということを意味する。ＶＨおよびＶＬファミリーの例はナピック（Knappik）ら，ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal ofMolecular Biology），第２９６巻（２０００年）ｐ．５７－８６またはＷＯ２０１９／０５７７８７において与えられている。ＶＨ３ファミリーに属するＶＨドメインの具体例は配列番号９１によって表され、ＶＨ４ファミリーに属するＶＨドメインの具体例は配列番号９２によって表される。具体的には、配列番号９１から取られるフレームワーク領域ＦＲ１からＦＲ３はＶＨ３ファミリーに属する（表４、非ボールドで記されている領域）。好適には、本明細書において用いられるＶＨ３ファミリーに属するＶＨは、少なくとも８５％、具体的には少なくとも９０％、より具体的には少なくとも９５％の配列同一性を配列番号９１のＦＲ１からＦＲ３に対して有するＦＲ１からＦＲ３を含むＶＨである。ＶＨ３およびＶＨ４配列の代替的な例ならびに他のＶＨｘ配列の例はナピック（Knappik）ら，ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal ofMolecular Biology），第２９６巻（２０００年）ｐ．５７－８６またはＷＯ２０１９／０５７７８７に見出され得る。好適には、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用されるＭＡ１およびＭＡ２に含まれるＰＤＬ１－ＢＤ、ＣＤ１３７－ＢＤ、ｈＳＡ－ＢＤ、ＣＤ３－ＢＤ、ＭＳＬＮ－ＢＤ、およびＨＥＲ２－ＢＤは以下を含む：ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３、具体的にはＶκ１またはＶκ３フレームワーク、具体的にはＶκ１フレームワークＦＲ１から３、ならびにフレームワークＦＲ４であって、これはＶκ－ＦＲ４およびＶλ－ＦＲ４、具体的にはＶλ－ＦＲ４から選択される。好適なＶκ１フレームワークＦＲ１からＦＲ３および例示的なＶλ－ＦＲ４は配列番号９３で提出される（表４、ＦＲ領域は非ボールドで記されている）。Ｖκ１配列の代替的な例およびＶκ２、Ｖκ３、またはＶκ４配列の例は、ナピック（Knappik）ら，ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal ofMolecular Biology），第２９６巻（２０００年）ｐ．５７－８６に見出され得る。好適なＶκ１フレームワークＦＲ１から３は、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性を配列番号９３から取られるＦＲ１からＦＲ３に対応するアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列を含む（表４、ＦＲ領域は非ボールドで記されている）。好適なＶλ－ＦＲ４は配列番号９４から配列番号１００および配列番号１０１で提出され、単一のシステイン残基を含み、具体的には、あるケースにおいては、ここで、第２の単一のシステインが、対応するＶＨ鎖上に、具体的にはＶＨの位置５１（ＡＨｏ付番）に、ドメイン間ジスルフィド結合の形成のために存在する。１つの実施形態において、本発明に用いられるＶＬドメインは、少なくとも７０、８０、９０パーセントの同一性を配列番号９４から配列番号１０１のいずれかから選択されるアミノ酸配列に対して、具体的には配列番号９４または１０１に対して有するアミノ酸配列を含むＶλ－ＦＲ４を含む。
【0162】
本発明に用いられる結合ドメインは、表１から３および６から１０に挙げられているＶＨドメインを含む。好適には、本発明に用いられる結合ドメインは、表１から３および６から１０の１つに挙げられているＶＨアミノ酸配列を含み、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）上の２０を超えないアミノ酸が変異させられている（変異は、種々の限定しない例において追加、置換、または欠失である）。好適には、本発明に用いられる結合ドメインは、表１から３および６から１０の１つに挙げられているＶＨアミノ酸配列を含み、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）上の１５を超えないアミノ酸、具体的には１０を超えないアミノ酸、具体的には５を超えないアミノ酸が変異させられている（変異は、種々の限定しない例において追加、置換、または欠失である）。本発明に用いられる他の結合ドメインは、変異させられているが尚も表１から３および６から１０の１つに記載されている対応する配列上の図示されるＶＨ領域に対するＶＨ領域の少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を包含する。表１から３および６から１０に示されている配列の１つの少なくとも位置５から１４０（ＡＨｏ付番）、具体的には少なくとも位置３から１４５を含むＶＨドメインを包含する。
【0163】
具体的には、本発明に用いられる結合ドメインは表１から３および６から１０の１つに挙げられているＶＬドメインを含む。好適には、本発明に用いられる結合ドメインは表１から３および６から１０の１つに挙げられているＶＬアミノ酸配列を含み、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）上の約１０を超えないアミノ酸が変異させられている（変異は、種々の限定しない例において、追加、置換、または欠失である）。好適には、本発明に用いられる結合ドメインは、表１から３および６から１０の１つに挙げられているＶＬアミノ酸配列を含み、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）上の約２０を超えないアミノ酸が変異させられている（変異は、種々の限定しない例において、追加、置換、または欠失である）。本発明に用いられる他の結合ドメインは、変異させられているが尚も表１から３および６から１０に記載されている配列上の図示されるＶＬ領域に対するＶＬ領域の少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を包含する。表１から３および６から１０に示されている配列の１つの少なくとも位置５から１４０（ＡＨｏ付番）、具体的には少なくとも位置３から１４５を含むＶＬドメインを包含する。
【0164】
本発明の文脈において、用語「本発明に用いられる結合ドメイン」は、そのものの、すなわち多重特異性の文脈とは独立の結合ドメインに、具体的には、多重特異性のコンストラクトに含まれる結合ドメイン、例えば、二重特異性の、三重特異性の、または四重特異性のコンストラクトに含まれる結合ドメインの１つに関する。
【0165】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは以下からなる群から選択される：Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、およびＳＴＡＢ。
【0166】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインは作動可能に連結される。多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２の結合ドメインはそれらのそれぞれの抗原または受容体に同時に結合することができる。これに関しておよびＭＡ１に関して用いられる用語「同時に」は、ＣＤ１３７－ＢＤおよびＰＤＬ１－ＢＤの同時の結合を言う。類似に、ＭＡ２に関して用いられる用語「同時に」は、ＴＡＡ－ＢＤの少なくとも１つおよびＣＤ３－ＢＤの同時の結合を言う。特定のケースでは、例えば、適用されるＭＡ２が同じＴＡＡに対して特異的である２つ以上のＴＡＡ－ＢＤを有し、かつ標的細胞が高い密度の前記のＴＡＡを細胞表面に有するケースでは、３つの結合ドメイン、すなわち２つのＴＡＡ－ＢＤおよびＣＤ３－ＢＤが同時に結合するということもまた可能であり得る。
【0167】
多重特異性抗体ＭＡ１は１つのＣＤ１３７－ＢＤおよび１つのＰＤＬ１－ＢＤを含み、前記のＣＤ１３７－ＢＤおよび前記のＰＤＬ１－ＢＤは互いに作動可能に連結される。
【0168】
多重特異性抗体ＭＡ１は、少なくとも１つのＴＡＡ－ＢＤおよび１つのＣＤ３－ＢＤを含み、前記の少なくとも１つのＴＡＡ－ＢＤおよび前記のＣＤ３－ＢＤは互いに作動可能に連結される。
【0169】
本明細書において用いられる用語「作動可能に連結される」は、各分子が機能的な活性を保持するやり方で、２つの分子（例えば、ポリペプチド、ドメイン、結合ドメイン）が取り付けられるということを指示する。それらが直接的にまたは間接的に（例えば、リンカーを介して、部分を介して、リンカーを介して部分に）取り付けられるかどうかにかかわらず、２つの分子は「作動可能に連結」され得る。用語「リンカー」は、本発明に用いられる結合ドメインまたは抗体断片の間に任意に所在するペプチドまたは他の部分を言う。分子を一緒に共有結合的に連結するためのいくつもの戦略が用いられ得る。これらは、蛋白質または蛋白質ドメインのＮおよびＣ末端の間のポリペプチド連結、ジスルフィド結合を介する連結、ならびに化学架橋試薬を介する連結を包含するが、これらに限定されない。この実施形態の１つの態様において、リンカーは組み換え技術またはペプチド合成によって生成されるペプチド結合である。２つのポリペプチド鎖が接続されるべき具体的なケースのための好適なリンカーを選ぶことは、２つのポリペプチド鎖の性質（例えば、それらが天然にオリゴマー化するかどうか）、既知の場合には接続されるべきＮおよびＣ末端の間の距離、ならびに／または蛋白質分解および酸化に対するリンカーの安定性を包含するがこれらに限定されない種々のパラメータに依存する。さらにその上、リンカーはフレキシビリティーを提供するアミノ酸残基を含有し得る。
【0170】
本発明の文脈において、用語「ポリペプチドリンカー」は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸残基の鎖からなるリンカーを言い、これは、それぞれがリンカーの一端に取り付けられる２つのドメインを接続している。ポリペプチドリンカーは、それらが所望の活性を保持するようにしてそれらが互いに対して相対的に正しい立体配座をとるようなやり方で、２つの分子を連結するために充分である長さを有するべきである。具体的な実施形態において、ポリペプチドリンカーは２および３０アミノ酸残基の間の連続的な鎖を有する（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸残基）。加えて、ポリペプチドリンカー上の包含のために選択されるアミノ酸残基は、ポリペプチドの活性に有意には干渉しない特性を見せるべきである。それゆえに、リンカーペプチドは、全体として、ポリペプチドの活性と不整合であるか、または内部のフォールディングに干渉するか、または受容体モノマードメインの結合を深刻に妨害するであろうモノマーの１つ以上のアミノ酸残基との結合もしくは他の相互作用を形成するであろう電荷を見せるべきではない。具体的な実施形態において、ポリペプチドリンカーは非構造化ポリペプチドである。有用なリンカーはグリシン－セリンまたはＧＳリンカーを包含する。「Ｇｌｙ－Ｓｅｒ」または「ＧＳ」リンカーによって、連なったグリシンおよびセリンのポリマー（例えば、（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを包含し、ここでｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および他のフレキシブルリンカー、例えばシェーカー型カリウムチャネルの係留鎖、および当業者には了解されるであろう様々な他のフレキシブルリンカーが意味される。グリシン－セリンポリマーは好ましい。なぜなら、これらのアミノ酸を含むオリゴペプチドは比較的非構造的であり、よって、コンポーネント間の中性の係留鎖としての用をなす能力があり得るからである。第２に、セリンは親水性であり、よって、球状のグリシン鎖であり得るものを可溶化する能力がある。第３に、類似の鎖が、一本鎖抗体などの組み換え蛋白質のサブユニットを繋ぎ合わせることに有効であることが示されている。
【0171】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ１は、当分野において公知のいずれかの好適な多重特異性のフォーマット、すなわち少なくとも二重特異性でありかつ免疫グロブリンＦｃ領域（単数または複数）を含まないいずれかのフォーマットから選択されるフォーマットであり、限定しない例として以下を包含する。一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）；タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであって、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ならびにＭＡＴＣＨ（ＷＯ２０１６／０２０２４５７；イーガン（Egan）Ｔら，ＭＡＢＳ，第９巻（２０１７年）ｐ．６８－８４に記載されている）およびデュオボディ。具体的には、ｓｃＤｂ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＭＡＴＣＨ３、およびＭＡＴＣＨ３、とりわけｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＭＡＴＣＨ３、およびＭＡＴＣＨ３が本明細書における使用にとって好適である。
【0172】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を言い、これらの断片は、同じポリペプチド鎖上のＶＬに接続されたＶＨ（ＶＨ－ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間のペア形成を許すには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは、２つの抗原結合部位を作出するように別の鎖の相補的なドメインとペア形成することを強いられる。ダイアボディは二価または二重特異性であり得る。ダイアボディは、例えばＥＰ４０４０９７、ＷＯ９３／０１１６１、ハドソン（Hudson）ら，ネイチャー・メディシン（Nature Medicine），第９巻：ｐ．１２９－１３４（２００３年）、およびホリガー（Holliger）ら，米国科学アカデミー紀要，第９０巻：ｐ．６４４４－６４４８（１９９３年）により詳しく記載されている。トライアボディ（triabody）およびテトラボディ（tetrabody）もまたハドソン（Hudson）ら，ネイチャー・メディシン（Nature Medicine），第９巻：ｐ．１２９－１３４（２００３年）に記載されている。
【0173】
二重特異性ｓｃＤｂ、具体的には二重特異性のモノマーｓｃＤｂは、具体的には、リンカーＬ１、Ｌ２、およびＬ３によって順序ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＨＢ、またはＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢで接続された２つの可変重鎖ドメイン（ＶＨ）またはそれらの断片および２つの可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）またはそれらの断片を含み、ＶＬＡおよびＶＨＡドメインは連帯して第１の抗原のための抗原結合部位を形成し、ＶＬＢおよびＶＨＢは連帯して第２の抗原のための抗原結合部位を形成する。
【0174】
リンカーＬ１は、具体的には、２～１０アミノ酸、より具体的には３～７アミノ酸、最も具体的には５アミノ酸のペプチドであり、リンカーＬ３は、具体的には、１～１０アミノ酸、より具体的には２～７アミノ酸、最も具体的には５アミノ酸のペプチドである。具体的な実施形態において、リンカーＬ１および／またはＬ３は４つの（４）グリシンアミノ酸残基および１つの（１）セリンアミノ酸残基（ＧＧＧＧＳ）ｎの１つまたは２つのユニットを含み、式中、ｎ＝１または２、具体的にはｎ＝１である。
【0175】
真ん中のリンカーＬ２は、具体的には、１０～４０アミノ酸、より具体的には１５～３０アミノ酸、最も具体的には２０～２５アミノ酸のペプチドである。具体的な実施形態において、前記のリンカーＬ２は４つの（４）グリシンアミノ酸残基および１つの（１）セリンアミノ酸残基（ＧＧＧＧＳ）ｎの２つ以上のユニットを含み、式中、ｎ＝２、３、４、５、６、７、または８、具体的にはｎ＝４または５である。
【0176】
１つの実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ１はｓｃＤｂ－ｓｃＦｖである。用語「ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ」は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片がフレキシブルＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーによって一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）に融合されている抗体フォーマットを言う。１つの実施形態において、前記のフレキシブルＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーは、２～４０アミノ酸、例えば２～３５、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０アミノ酸、具体的には１０アミノ酸のペプチドである。具体的な実施形態において、前記のリンカーは４つの（４）グリシンアミノ酸残基および１つの（１）セリンアミノ酸残基（ＧＧＧＧＳ）ｎの１つ以上のユニットを含み、式中、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、または８、具体的にはｎ＝２である。
【0177】
別の実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ１は、ＷＯ２０１６／０２０２４５７；イーガン（Egan）Ｔら，ＭＡＢＳ，第９巻（２０１７年）ｐ．６８－８４に記載されているｓｃＭＡＴＣＨ３またはＭＡＴＣＨ３フォーマットである。
【0178】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ１はＣＨ１および／またはＣＬ領域を含まない。
【0179】
本発明の医薬組成物またはキットにおいて好適に適用され得る多重特異性抗体ＭＡ１の具体的だが限定しない例は、ｓｃＤｂに基づく抗体ＰＲＯ８８５、ＰＲＯ９５１、ＰＲＯ１１２３、ＰＲＯ１１２４、ＰＲＯ１１２５、ＰＲＯ１１２６、ＰＲＯ１１３４、およびｓｃＤｂ－ｓｃＦｖに基づく抗体ＰＲＯ９６３、ＰＲＯ９６６、ＰＲＯ１０５７、ＰＲＯ１０５８、ＰＲＯ１１７５、ＰＲＯ１１８６、ＰＲＯ１４３０、ＰＲＯ１４７９、ＰＲＯ１４８２、ＰＲＯ１４３１、ＰＲＯ１４３２、ＰＲＯ１４７３、ＰＲＯ１４７６、ＰＲＯ１４８０、ＰＲＯ１４８１、ＰＲＯ１４８０ｄｉＳ、ＰＲＯ１５９９、ＲＰＯ１６００、ＲＰＯ１６０１であり、それらの配列は表５に挙げられている。具体的には、多重特異性抗体ＭＡ１として、ＰＲＯ１４８０、ＰＲＯ１４８１、ＰＲＯ１４８０ｄｉＳ、およびＲＰＯ１６０１が好適である。
【0180】
これらの多重特異性抗体ＭＡ１、具体的にはＰＲＯ１４８０、ＰＲＯ１４８１、ＰＲＯ１４８０ｄｉＳ、およびＰＲＯ１６０１は、非常に有利な安全性特性を見せる。例えば、ＰＲＯ１４８０は、雌のカニクイザルで試験されたときに、最高で２０ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１４８０シングルドーズ投与後に、以下があった：
－ ウレルマブによって引き起こされる肝毒性の鍵の臨床病理指標である肝臓酵素（ＡＬＴ／ＡＳＴ／ＧＧＴ／ＣＫ）の上昇なし；
－ 臨床におけるウレルマブの適用によって観察されている好中球減少または血小板減少なし；
－ アベルマブと比較されるときに変わった肝臓重量なし；
－ 全身的な中枢およびエフェクターメモリーＴ細胞の有意な増殖なし（良好に忍容されるウトミルマブの報告された値未満）。専らＴＭＥにおける４－１ＢＢに対する特異的活性を確認；
－ ５～５．５日の延長された血清中半減期。ヒトのおよそ２週に対応。
－ ウレルマブによって引き起こされる肝毒性の鍵の臨床病理指標である肝臓酵素（ＡＬＴ／ＡＳＴ／ＧＧＴ／ＣＫ）の上昇なし；
－ 臨床におけるウレルマブの適用によって観察されている好中球減少または血小板減少なし；
－ アベルマブと比較されるときに変わった肝臓重量なし；
－ 全身的な中枢およびエフェクターメモリーＴ細胞の有意な増殖なし（良好に忍容されるウトミルマブの報告された値未満）。専らＴＭＥにおける４－１ＢＢに対する特異的活性を確認；
－ ５～５．５日の延長された血清中半減期。ヒトのおよそ２週に対応。
【0181】
さらにその上、カニクイザルにおけるＰＲＯ１４８０による第２の４週反復投与毒性学研究では、以下があった：
－ 臓器重量、肉眼観察、および組織切片の顕微組織病理学的評価の変調において、処置に関連する知見なし；
－ 毒性の徴候なし、具体的には、肝毒性のマーカーのトランスアミナーゼまたは肝臓炎症の上昇なし；
－ 臨床化学、血液学、および尿検査において、被験品に関連する効果なし；
－ ＰＲＯ１４８０のプレドーズ、第１の投与、および第４の投与後に、サイトカインＧＭ－ＣＳＦ、インターロイキン１８、ＩＬ１Ｂ、ＩＦＮｇ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＧＭ－ＣＳＦの放出なし；
－ ＰＲＯ１４８０の投薬後の低および中用量動物のいくつかにおいて、サイトカインＩＬ－６、ＭＣＰ－１、およびＩＬ－１０の中等度の誘導のみ。これはＡＤＡ応答と整合する。
－ 臓器重量、肉眼観察、および組織切片の顕微組織病理学的評価の変調において、処置に関連する知見なし；
－ 毒性の徴候なし、具体的には、肝毒性のマーカーのトランスアミナーゼまたは肝臓炎症の上昇なし；
－ 臨床化学、血液学、および尿検査において、被験品に関連する効果なし；
－ ＰＲＯ１４８０のプレドーズ、第１の投与、および第４の投与後に、サイトカインＧＭ－ＣＳＦ、インターロイキン１８、ＩＬ１Ｂ、ＩＦＮｇ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＧＭ－ＣＳＦの放出なし；
－ ＰＲＯ１４８０の投薬後の低および中用量動物のいくつかにおいて、サイトカインＩＬ－６、ＭＣＰ－１、およびＩＬ－１０の中等度の誘導のみ。これはＡＤＡ応答と整合する。
【0182】
具体的には、ＰＲＯ１４８０の静注は一般的に良好に忍容され、カニクイザルにおいては最高で１４０ｍｇ／ｋｇ／投与まで、毒性のいずれかの徴候に関連しなかった。かかる優良な毒性学的プロファイルは、Ｆｃドメインの存在を原因として、従来技術のいずれかの対応する抗ＣＤ１３７×ＰＤＬ１抗体治療薬では見られていない。
【0183】
好適には、多重特異性抗体ＭＡ２は、当分野において公知のいずれかの好適な多重特異性の、例えば少なくとも二重特異性のフォーマットから選択されるフォーマットであり、限定しない例として以下を包含する。タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）；タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ；Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）；ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ；トライボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２）；Ｆａｂ２；Ｆａｂ－Ｆｖ２；ダイアボディ；トライアボディ；テトラボディ；ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ；ｄｉ－ダイアボディ；ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体（ＡＤＡＰＴＩＲ）；ＤＶＤ－Ｉｇ；ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばＣＯＤＶ－ＩｇＧ、モリソン（ＩｇＧ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）、またはＩｇＧ－ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、ｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖および軽鎖両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、およびＴｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）；ＤＡＲＴ（商標）；ＴＲＩＤＥＮＴ（商標）；ｓｃＤｂ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ２、Ｆａｂ－Ｆｖ２、ダイアボディ、またはｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであって、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン以外のヘテロ二量体化ドメインのＮおよび／またはＣ末端に融合される；ＭＡＴＣＨ（ＷＯ２０１６／０２０２４５７；イーガン（Egan）Ｔら，ＭＡＢＳ，第９巻（２０１７年）ｐ．６８－８４に記載されている）ならびにデュオボディ（デュオボディテクノロジーによって調製される二重特異性ＩｇＧ）（ＭＡｂｓ，２０１７年，Ｆｅｂ／Ｍａｒ；第９巻（２）：ｐ．１８２－２１２．ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２６８３０７）。
【0184】
１つの実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ２は、ＷＯ２０１６／０２０２４５７；イーガン（Egan）Ｔら，ＭＡＢＳ，第９巻（２０１７年）ｐ．６８－８４に記載されているＭＡＴＣＨフォーマットである。具体的には、多重特異性抗体ＭＡ２はＭＡＴＣＨ３またはＭＡＴＣＨ４フォーマットである。
【0185】
別の実施形態において、多重特異性抗体ＭＡ２は、ＣＯＤＶ－ＩｇＧ、モリソン（ＩｇＧ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）またはＩｇＧ－ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、ｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖および軽鎖両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ＤＡＲＴ（商標）、およびＴＲＩＤＥＮＴ（商標）から選択されるＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合フォーマットである。
【0186】
本発明の医薬組成物またはキットにおいて好適に適用され得る多重特異性抗体ＭＡ２の具体的だが限定しない例は、ｓｃＭＡＴＣＨ３に基づく抗体ＰＲＯ１７６６、ＰＲＯ１７６７、ＰＲＯ１８７２、ＰＲＯ２５１０、ＰＲＯ２６６８ならびにＭＡＴＣＨ４に基づく抗体ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２１００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、ＰＲＯ２５６７、ＰＲＯ２５９０、ＰＲＯ２６６０、ＰＲＯ２６７０、ＰＲＯ２７４１、およびＰＲＯ２７４６であり、それらの配列は表１１に挙げられている。
【0187】
本発明の医薬組成物またはキットにおいてＭＡ２として好適に適用され得るさらなる抗体は、本明細書において定義される通り１つまたは２つのＴＡＡ－ＢＤと１つのＣＤ３－ＢＤとを含む従来技術に記載されている抗体である。ＭＡ２として好適に適用され得る従来技術に記載されている抗体の限定しない例は、以下である：
－ ＷＯ２０１５／０９５４１８に開示されているノブ・イントゥ・ホール（knob－into－whole）テクノロジーに基づく二重特異性の一価抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体；
－ ＷＯ２０１９／１５７３０８（ジェネンテック）、具体的にはＢＴＲＣ－４０１７Ａに開示されている２つの低親和性ＨＥＲ２結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性の１Ｆａｂ－ＩｇＧに基づく抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体；
－ グレンマークからの二重特異性の一価抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体ＧＢＲ－１３０２；
－ ２つの低親和性ＭＳＬＮ結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性抗ＭＳＬＮ×ＣＤ３抗体ＭＧ１１２２－Ａ、および２つの低親和性ＭＳＬＮ結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有するＭＧ１１２２－Ｂであって、ユン（Yoon）ら（バイオモレキュールズ（Biomolecules），２０２０年，第１０巻（３），ｐ．３９９）に開示される通り；
－ アプテボ（Aptevo）からの（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ－（ｓｃＦｖ）２融合体（ＡＤＡＰＴＩＲ）二重特異性抗ＲＯＲ１×ＣＤ３抗体ＡＰＶＯ－４２５；
－ ＷＯ２０１７／１４２９２８（マクロジェニクス（Macrogenics））に開示されている抗ＴＡＡ×ＣＤ３（ＲＯＲ１×ＣＤ３）ＤＡＲＴ（商標）抗体ＤＡＲＴ－１からＤＡＲＴ－３３およびＤＡＲＴ－ＡからＤＡＲＴ－Ｄ。
－ ＷＯ２０１５／０９５４１８に開示されているノブ・イントゥ・ホール（knob－into－whole）テクノロジーに基づく二重特異性の一価抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体；
－ ＷＯ２０１９／１５７３０８（ジェネンテック）、具体的にはＢＴＲＣ－４０１７Ａに開示されている２つの低親和性ＨＥＲ２結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性の１Ｆａｂ－ＩｇＧに基づく抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体；
－ グレンマークからの二重特異性の一価抗ＨＥＲ２×ＣＤ３抗体ＧＢＲ－１３０２；
－ ２つの低親和性ＭＳＬＮ結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有する二重特異性抗ＭＳＬＮ×ＣＤ３抗体ＭＧ１１２２－Ａ、および２つの低親和性ＭＳＬＮ結合ドメインと１つの抗ＣＤ３ε結合ドメインとを有するＭＧ１１２２－Ｂであって、ユン（Yoon）ら（バイオモレキュールズ（Biomolecules），２０２０年，第１０巻（３），ｐ．３９９）に開示される通り；
－ アプテボ（Aptevo）からの（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ－（ｓｃＦｖ）２融合体（ＡＤＡＰＴＩＲ）二重特異性抗ＲＯＲ１×ＣＤ３抗体ＡＰＶＯ－４２５；
－ ＷＯ２０１７／１４２９２８（マクロジェニクス（Macrogenics））に開示されている抗ＴＡＡ×ＣＤ３（ＲＯＲ１×ＣＤ３）ＤＡＲＴ（商標）抗体ＤＡＲＴ－１からＤＡＲＴ－３３およびＤＡＲＴ－ＡからＤＡＲＴ－Ｄ。
【0188】
本発明の医薬組成物またはキットにおいて適用される多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は、当分野において公知のいずれかの便利な抗体製造方法を用いて産生され得る（例えば、二重特異性のコンストラクトの産生については、フィッシャー（Fischer），Ｎ．＆レジェ（Leger），Ｏ．，パソバイオロジー（Pathobiology），第７４巻（２００７年）ｐ．３－１４；二重特異性のダイアボディおよびタンデムｓｃＦｖについては、ホーニグ（Hornig），Ｎ．＆ファーバー・シュワルツ（Farber－Schwarz），Ａ．，メソッズ・イン・モレキュラーバイオロジー（Methods inMolecular Biology），第９０７巻（２０１２年）ｐ．７１３－７２７、およびＷＯ９９／５７１５０を参照）。二重特異性のコンストラクトの調製のための好適な方法の具体例は、さらに、中でも、Ｇｅｎｍａｂ（ラブリン（Labrijn）ら，米国科学アカデミー紀要，第１１０巻（２０１３年）ｐ．５１４５－５１５０を参照）およびＭｅｒｕｓ（デクライフ（de Kruif）ら，バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリング（Biotechnologyand Bioengineering），第１０６巻（２０１０年）ｐ．７４１－７５０を参照）テクノロジーを包含する。機能的な抗体Ｆｃ部分を含む二重特異性抗体の産生のための方法は当分野において公知である（例えば、ズー（Zhu）ら，キャンサー・レターズ（Cancer Letters），第８６巻（１９９４年）ｐ．１２７－１３４）；およびスレッシュ（Suresh）ら，メソッズ・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），第１２１巻（１９８６年）ｐ．２１０－２２８を参照）。
【0189】
これらの方法には、典型的には、例えば、ハイブリドーマテクノロジーを用いて、所望の抗原によって免疫化されたマウスからの脾臓細胞をミエローマ細胞と融合させるという手段によるか（例えば、ヨコヤマ（Yokoyama）ら，カレントプロトコールズ・イン・イミュノロジー（CurrentProtocols in Immunology），第２章，ユニット２．５，２００６年を参照）または組み換え抗体工学（レパートリークローニングまたはファージディスプレイ／酵母ディスプレイ）の手段による（例えば、チャムズ（Chames）＆ベイティ（Baty），ＦＥＭＳマイクロバイオロジー・レターズ（FEMS Microbiology Letters）第１８９巻（２０００年）ｐ．１－８を参照）モノクローナル抗体の生成と、公知の分子クローニング技術を用いて二重特異性のまたは多重特異性のコンストラクトを与えるための２つ以上の異なるモノクローナル抗体の抗原結合ドメインもしくは断片またはそれらの部分の組み合わせとが関わる。
【0190】
本発明に用いられる多重特異性分子ＭＡ１およびＭＡ２は、当分野において公知の方法を用いて構成要素の結合特異性をコンジュゲート化することによって調製され得る。例えば、二重特異性の分子の各結合特異性は別々に生成され、それから他方（単数または複数）にコンジュゲート化され得る。結合特異性が蛋白質またはペプチドであるときには、種々のカップリングまたは架橋剤が、共有結合的なコンジュゲート化のために用いられ得る。架橋剤の例は、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、o－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン（cyclohaxane）－ｌ－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）を包含する（例えば、カルポフスキー（Karpovsky）ら，１９８４年，ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Journalof Experimental Medicine），第１６０巻：ｐ．１６８６；リウ（Liu），ＭＡら，１９８５年，米国科学アカデミー紀要，第８２巻：ｐ．８６４８を参照）。他の方法は、パウルス（Paulus），１９８５年，ベーリング研究所報告（Behring InstituteMitteilungen），Ｎｏ．７８，ｐ．１１８－１３２；ブレナン（Brennan）ら，１９８５年，サイエンス（Science），第２２９巻：ｐ．８１－８３）、およびグレニー（Glennie）ら，１９８７年，ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Journal of Immunology），第１３９巻：ｐ．２３６７－２３７５）に記載されているものを包含する。コンジュゲート化剤はＳＡＴＡおよびスルホ－ＳＭＣＣであり、両方ともピアースケミカル（Pierce Chemical）Ｃｏ．（ロックフォード、１１１）から利用可能である。
【0191】
結合特異性が抗体であるときに、それらは２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲート化され得る。具体的な実施形態において、コンジュゲート化に先立って、ヒンジ領域は奇数のスルフヒドリル残基、例えば１つを含有するように改変される。
【0192】
代替的には、２つ以上の結合特異性は、同じベクター上にコードされ、ならびに同じホスト細胞によって発現およびアセンブリされ得る。この方法は、二重特異性の分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２、またはリガンド×Ｆａｂ融合蛋白質であるところにおいて特に有用である。本発明に用いられる多重特異性抗体は、少なくとも２つの結合決定基を含む一本鎖多重特異性抗体であり得る。本発明に用いられる多重特異性抗体は前記の一本鎖分子の少なくとも２つをもまた含み得る。多重特異性抗体および分子を調製するための方法は例えばＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，２６０，２０３；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，４５５，０３０；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８８１，１７５；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，１３２，４０５；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，０９１，５１３；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，４７６，７８６；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，０１３，６５３；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，２５８，４９８；およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，４８２，８５８に記載されている。
【0193】
それらの特異的標的に対する多重特異性抗体の結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウエスタンブロットアッセイによって確認され得る。これらのアッセイのそれぞれは、一般的に、目当ての複合体に特異的な標識された試薬（例えば抗体）を使用することによって、具体的な目当ての蛋白質－抗体複合体の存在を検出する。
【0194】
好適には、医薬組成物はさらに薬学的に許容される担体を含む。
【0195】
「薬学的に許容される担体」は、抗体の構造に干渉しない媒体または希釈剤を意味する。薬学的に許容される担体は、組成物を増強もしくは安定化するか、または組成物の調製を容易化する。かかる担体（carries）の特定のものは、医薬組成物が、例えば、対象による経口摂取のための錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、およびロゼンジとして製剤されることを可能化する。かかる担体の特定のものは、医薬組成物が注射、輸液、または外用投与のために製剤されることを可能化する。例えば、薬学的に許容される担体は無菌水溶液であり得る。
【0196】
薬学的に許容される担体は、生理学的に適合性である溶媒、緩衝溶液、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張化および吸収遅延剤、ならびに同類を包含するが、これらに限定されない。
【0197】
本発明の医薬組成物は、当分野において周知のかつ日常的に実施される方法に従って調製され得る。例えば、「レミントン：薬学の科学と実践（Remington：The Science and Practice ofPharmacy）」，マック出版Ｃｏ．，第２０版，２０００年；および「徐放およびコントロールドリリース薬物送達系（Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems）」，Ｊ．Ｒ．ロビンソン（Robinson）編，マルセル・デッカー（Marcel Dekker）Ｉｎｃ．，ニューヨーク，１９７８年を参照。医薬組成物は好ましくはＧＭＰ条件において製造される。典型的には、治療上有効な用量または効力がある用量の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２が本発明の医薬組成物に使用される。多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は当業者に公知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤される。薬量のレジメンは最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、シングルボーラスが投与され得るか、いくつかの分割された用量が経時的に投与され得るか、または用量は治療状況の緊急によって指示される通り相応に縮減もしくは増大させられ得る。投与の容易さおよび薬量の一様性のためには、非経口組成物をユニット剤形で製剤することがとりわけ有利である。本明細書において用いられるユニット剤形は、処置されるべき対象のためのまとまった薬量として適した物理的に分かれたユニットを言う；各ユニットは、所望の治療効果を産生するように計算された所定の数量の活性化合物を、要求される医薬担体と共に含有する。
【0198】
医薬組成物またはキット中の活性成分の実際の薬量レベルは、患者にとって毒性であることなしに、具体的な患者、組成物、および投与モードについて所望の治療応答を達成するために有効である量の活性成分を得るように変えられ得る。選択される薬量レベルは、使用される本発明に用いられる具体的な組成物またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与の経路、投与の時間、使用されようとする具体的な化合物の排泄速度、処置の持続時間、使用される具体的な組成物との組み合わせで用いられる他の薬物、化合物、および／または材料、処置されようとする患者の年齢、性別、体重、状態、全般的健康、および医学的既往、ならびに同類の因子を包含する種々の薬物動態学的因子に依存する。
【0199】
本発明の医薬組成物またはキットは、当分野において公知の種々の方法によって投与され得る。キットの多重特異性抗体コンポーネントを投与するケースにおいて、投与は同時的にまたは逐次的にされ得る。逐次投与のケースにおいて、多重特異性抗体コンポーネントは、個々に調整された投与スキームおよびレジメンに基づいて投与され得る。投与の経路および／またはモードは所望の結果に依存して様々である。投与は静脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下である得るか、または標的の部位の近位に投与され得る。薬学的に許容される担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与にとって好適であるべきである（例えば注射または輸液による）。投与の経路に依存して、本発明の医薬組成物において適用される活性化合物、すなわち多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は、化合物を不活性化し得る酸の作用および他の天然条件から化合物を保護するための材料によってコーティングされ得る。
【0200】
本発明の医薬組成物またはキットは通常は複数の機会に投与される。一回の薬量間の間隔は毎週、毎月、または毎年であり得る。間隔は、患者における多重特異性抗体の血中レベルを測定することによって指示される通りに不定期でもまたあり得る。代替的には、本発明の医薬組成物は徐放製剤として投与され得、このケースにおいては、より高頻度でない投与が要求される。薬量および頻度は患者における抗体ＭＡ１およびＭＡ２の半減期に依存して様々である。一般的に、ヒト化抗体はキメラ抗体および非ヒト抗体よりも長い半減期を示す。投与の薬量および頻度は、処置が予防的または治療的であるかどうかに依存して様々であり得る。予防的な適用では、比較的低い薬量が比較的低頻度の間隔で長期間に渡って投与される。いくつかの患者はそれらの一生の残りに渡って処置を受け続ける。治療的な適用では、疾患の進行が縮減または中止されるまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的なまたは完全な寛解を示すまで、場合によっては、比較的高い薬量が比較的短い間隔で要求される。その後に、患者は予防的なレジメンを投与され得る。
【0201】
１つの態様において、本発明は医薬としての使用のための本発明の医薬組成物またはキットに関する。好適な実施形態において、本発明は、その必要がある対象における増殖性疾患、具体的には癌の処置における使用のための医薬組成物またはキットを提供する。
【0202】
別の態様において、本発明は、増殖性疾患、具体的には癌の処置のための医薬の製造における使用のための医薬組成物を提供する。
【0203】
別の態様において、本発明は、その必要がある対象の増殖性疾患、具体的には癌を処置するための医薬組成物またはキットの使用に関する。
【0204】
別の態様において、本発明は、対象を処置する方法に関し、対象に治療上有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む。好適な実施形態において、本発明は、対象の増殖性疾患、具体的には癌を処置する方法に関し、対象に治療上有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む。
【0205】
尚も別の態様において、本発明は、増殖性疾患、具体的には癌を患う対象を処置するための方法に関し、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む第１の多重特異性抗体（ＭＡ１）、および腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体（ＭＡ２）を前記の対象に投与するステップを含み、前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
【0206】
別の態様において、本発明は、（ｉ）増殖性疾患、具体的には癌を患う対象の処置における使用のための、ＣＤ１３７に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ１－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ１に関し、前記の多重特異性抗体ＭＡ１は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体ＭＡ２との組み合わせで前記の対象に投与されるか、または（ｉｉ）増殖性疾患、具体的には癌を患う対象の処置における使用のための、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＴＡＡ－ＢＤ）とＣＤ３に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＣＤ３－ＢＤ）とを含む多重特異性抗体ＭＡ２に関し、前記の多重特異性抗体ＭＡ２は、ＣＤ１３７に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン（ＣＤ１３７－ＢＤ）とＰＤＬ１に特異的に結合する１つの結合ドメイン（ＰＤＬ－ＢＤ）とを含む第２の多重特異性抗体ＭＡ１との組み合わせで前記の対象に投与され；前記の多重特異性抗体ＭＡ１およびＭＡ２は本明細書において定義される通りである。
【0207】
用語「対象」はヒトおよび非ヒト動物を包含する。
【0208】
用語「動物」は、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト哺乳動物および非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、羊、犬、牛、鶏、両生類、および爬虫類を包含する。注記されるときを例外として、用語「患者」または「対象」は本明細書においては交換可能に用いられる。
【0209】
本明細書において用いられる用語「処置」、「処置すること」、「処置する」、「処置される」、および同類は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを言う。効果は、疾患および／もしくは疾患に帰せられ得る有害な効果の部分的なもしくは完全な治癒、または疾患進行を遅延させることの点から、治療的であり得る。本明細書において用いられる「処置」は、哺乳動物、例えばヒトにおける疾患のいずれかの処置をカバーし：（ａ）疾患を阻害すること、すなわちその発生を停止させること；および（ｂ）疾患を和らげること、すなわち疾患の退縮を引き起こすことを包含する。
【0210】
用語「治療上有効量」または「効力がある量」は、疾患を処置するために哺乳動物または他の対象に投与されるときに、疾患のためのかかる処置に影響するために十分である薬剤の量を言う。「治療上有効量」は、薬剤、疾患およびその重症度、ならびに処置されるべき対象の年齢、体重などに依存して様々であろう。
【0211】
１つの実施形態において、増殖性疾患は癌である。用語「癌」は、異常な細胞の急速なかつコントロールされない成長を特徴とする疾患を言う。癌細胞は局所的にまたは血流およびリンパ系から体の他の部分に進展し得る。用語「腫瘍」および「癌」は本明細書においては交換可能に用いられ、例えば、両方の用語は固形および液性、例えばびまん性のまたは循環性の腫瘍を包摂する。本明細書において用いられる用語「癌」または「腫瘍」は、前癌性および悪性の癌および腫瘍を包含する。用語「癌」は、全ての固形および血液悪性物を包含する幅広い範囲の腫瘍を意味するために本明細書において用いられる。かかる腫瘍の例は以下を包含するが、これらに限定されない：良性のまたはとりわけ悪性の腫瘍、固形腫瘍、中皮腫、脳腫瘍、腎臓癌、肝臓癌、副腎癌、膀胱癌、乳癌、胃癌（例えば、胃の腫瘍）、食道癌、卵巣癌、子宮頚癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌（例えば非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、膣癌、甲状腺癌、メラノーマ（例えば、切除不能または転移メラノーマ）、腎細胞癌、肉腫、膠芽腫、多発性骨髄腫、または消化管癌、とりわけ結腸癌腫または大腸腺腫、頭頸部の腫瘍、子宮内膜癌、カウデン症候群、レルミット・ダクロス病、バナヤン・ゾナナ症候群、前立腺肥大、とりわけ上皮性の新生物、好ましくは乳腺癌または有棘細胞癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（例えば、フィラデルフィア染色体陽性の慢性骨髄性白血病）、急性リンパ芽球性白血病（例えば、フィラデルフィア染色体陽性の急性リンパ芽球性白血病）、非ホジキンリンパ腫、形質細胞骨髄腫、ホジキンリンパ腫、白血病、およびそれらのいずれかの組み合わせ。好ましい実施形態において、癌は、メラノーマ、中皮腫、膵臓癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および肺癌から選択される癌である。
【0212】
本発明の医薬組成物またはキットは、固形腫瘍および液性腫瘍の成長をもまた阻害する。さらなる実施形態において、増殖性疾患は固形腫瘍である。用語「固形腫瘍」は、とりわけ、中皮腫、乳癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、胃（stomach）癌（とりわけ胃（gastric）癌）、子宮頚癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、膵臓癌、および頭頸部の腫瘍を意味する。さらに、腫瘍の型および用いられる具体的な組み合わせに依存して、腫瘍体積の減少が得られ得る。本発明の医薬組成物またはキットは、癌を有する対象における腫瘍の転移進展および微小転移の成長または発生を妨げるためにもまた適する。
配列表（別様に規定されない限り、変異はＡＨｏ付番スキームに従って名付けられ；ＣＤＲはＮｕｍａｂのＣＤＲ定義に従って定義される）
配列表（別様に規定されない限り、変異はＡＨｏ付番スキームに従って名付けられ；ＣＤＲはＮｕｍａｂのＣＤＲ定義に従って定義される）
【0213】
【表1-a】
【表1-b】
【表1-c】
【表1-d】
【表1-e】
【0214】
【表2-a】
【表2-b】
【表2-c】
【0215】
【表3-a】
【表3-b】
【0216】
【表4】
【0217】
【表5-a】
【表5-b】
【表5-c】
【表5-d】
【表5-e】
【表5-f】
【表5-g】
【表5-h】
【表5-i】
【表5-j】
【表5-k】
【表5-l】
【0218】
【表6】
【0219】
【表7】
【0220】
【表8-a】
【表8-b】
【表8-c】
【表8-d】
【0221】
【表9】
【0222】
【表10-a】
【表10-b】
【0223】
【表11-a】
【表11-b】
【表11-c】
【表11-d】
【表11-e】
【表11-f】
【表11-g】
【表11-h】
【0224】
本願の文中において、明細書の文（例えば、表１から１１）および配列表の間に矛盾がある場合には、明細書の文が優先される。
【0225】
明瞭性のために別々の実施形態の文脈において記載される本発明の具体的な特徴は、組み合わせで単一の実施形態としてもまた提供され得るということは了解される。反対に、簡潔のために単一の実施形態の文脈において記載される本発明の種々の特徴は、別々にまたはいずれかの好適なサブコンビネーションとしてもまた提供され得る。本発明に関係する実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包摂され、どの組み合わせもそれぞれが個々にかつ明示的に開示される場合のように本明細書において開示される。加えて、種々の実施形態およびそれらの要素の全てのサブコンビネーションもまた本発明によって具体的に包摂され、どのかかるサブコンビネーションもそれぞれが個々にかつ明示的に本明細書において開示される場合のように本明細書において開示される。
【0226】
本発明は本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲を限定されるべきではない。実に、本明細書に記載されるものに加えて、本発明の種々の改変は前述の記載から当業者に明らかになるであろう。かかる改変は添付の請求項の範囲内に収まることが意図される。
【0227】
それぞれの特許法の下で可能な程度まで、本明細書において引用される全ての特許、出願、公開、試験方法、文献、および他の材料は参照によってここに組み込まれる。
【0228】
次の実施例は上で記載された本発明を例証するが、しかしながら、本発明の範囲を限定することは決して意図されない。当業者にそのものが公知の他の試験モデルもまた、請求される発明の有益な効果を決定し得る。
【実施例】
【0229】
例１：ＣＤ１３７を発現するトランスジェニックＮＦ－ｋＢジャーカットレポーター細胞株の細胞に基づくアッセイを用いることによる、抗ＰＤＬ１×ＣＤ１３７分子（ＭＡ１）のＣＤ１３７アゴニスト効果の評価：
ジャーカット細胞においてＣＤ１３７シグナル伝達を活性化する二重特異性のｓｃＤｂに基づく抗体ＰＲＯ８８５、ＰＲＯ９５１、ＰＲＯ１１２３、ＰＲＯ１１２４、ＰＲＯ１１２５、ＰＲＯ１１２６、ＰＲＯ１１３４、および三重特異性のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖに基づく抗体ＰＲＯ９６３、ＰＲＯ９６６、ＰＲＯ１０５７、ＰＲＯ１０５８、ＰＲＯ１１７５、ＰＲＯ１１８６、ＰＲＯ１４３０、ＰＲＯ１４７９、ＰＲＯ１４８２、ＰＲＯ１４３１、ＰＲＯ１４３２、ＰＲＯ１４７３、ＰＲＯ１４７６、ＰＲＯ１４８０、ＰＲＯ１４８１、ＰＲＯ１４８０ｄｉＳ、ＰＲＯ１５９９、ＲＰＯ１６００、ＲＰＯ１６０１の能力が、ＣＤ１３７を発現するトランスジェニックＮＦ－ｋＢジャーカットレポーター細胞株の細胞に基づくアッセイを用いることによって評価された。測定は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ（クローンＡ２）およびＨＣＣ８２７細胞の存在下において、ならびに負のコントロールとしてＰＤＬ１発現なしのＣＨＯ－ＷＴ細胞の存在下において行われた。
測定は、二重特異性のｓｃＤｂに基づく抗体および三重特異性のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖに基づく抗体が、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞の存在下においてウレルマブよりも効率的なＣＤ１３７シグナル伝達を活性化するということを実証した。ＰＤＬ１の非存在下では、これらの抗体のどちらもレポーター細胞においてＣＤ１３７を活性化し得なかったが、ウレルマブはＰＤＬ１とは独立してＣＤ１３７シグナル伝達の活性化を示した。より低い量のＰＤＬ１を発現する細胞の存在下において評価が反復されたときには、同じ結果が得られ得た。
ジャーカット細胞においてＣＤ１３７シグナル伝達を活性化する二重特異性のｓｃＤｂに基づく抗体ＰＲＯ８８５、ＰＲＯ９５１、ＰＲＯ１１２３、ＰＲＯ１１２４、ＰＲＯ１１２５、ＰＲＯ１１２６、ＰＲＯ１１３４、および三重特異性のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖに基づく抗体ＰＲＯ９６３、ＰＲＯ９６６、ＰＲＯ１０５７、ＰＲＯ１０５８、ＰＲＯ１１７５、ＰＲＯ１１８６、ＰＲＯ１４３０、ＰＲＯ１４７９、ＰＲＯ１４８２、ＰＲＯ１４３１、ＰＲＯ１４３２、ＰＲＯ１４７３、ＰＲＯ１４７６、ＰＲＯ１４８０、ＰＲＯ１４８１、ＰＲＯ１４８０ｄｉＳ、ＰＲＯ１５９９、ＲＰＯ１６００、ＲＰＯ１６０１の能力が、ＣＤ１３７を発現するトランスジェニックＮＦ－ｋＢジャーカットレポーター細胞株の細胞に基づくアッセイを用いることによって評価された。測定は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ（クローンＡ２）およびＨＣＣ８２７細胞の存在下において、ならびに負のコントロールとしてＰＤＬ１発現なしのＣＨＯ－ＷＴ細胞の存在下において行われた。
測定は、二重特異性のｓｃＤｂに基づく抗体および三重特異性のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖに基づく抗体が、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞の存在下においてウレルマブよりも効率的なＣＤ１３７シグナル伝達を活性化するということを実証した。ＰＤＬ１の非存在下では、これらの抗体のどちらもレポーター細胞においてＣＤ１３７を活性化し得なかったが、ウレルマブはＰＤＬ１とは独立してＣＤ１３７シグナル伝達の活性化を示した。より低い量のＰＤＬ１を発現する細胞の存在下において評価が反復されたときには、同じ結果が得られ得た。
【0230】
本発明において適用される多重特異性抗体ＭＡ１およびそれに含まれる結合ドメインについてのさらなる情報および詳細、例えば：
－ それらの全般的な記載、
－ それらの製造、
－ それらの生物物理学的キャラクタリゼーション、例えば安定性研究およびモノマー含量の評価、または
－ ヒト細胞株由来肺癌ゼノグラフトモデルＨＣＣ８２７におけるそれらの抗腫瘍効力の評価を包含するそれらの完全な機能的キャラクタリゼーション、
は、その全体が参照によってここに組み込まれる特許出願ＷＯ２０１９／０７２８６８、具体的には上で言及された追加の情報に詳細に開示されている。
例２：例示的な抗ＭＳＬＮ多重特異性抗体ＭＡ２の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーション：
－ それらの全般的な記載、
－ それらの製造、
－ それらの生物物理学的キャラクタリゼーション、例えば安定性研究およびモノマー含量の評価、または
－ ヒト細胞株由来肺癌ゼノグラフトモデルＨＣＣ８２７におけるそれらの抗腫瘍効力の評価を包含するそれらの完全な機能的キャラクタリゼーション、
は、その全体が参照によってここに組み込まれる特許出願ＷＯ２０１９／０７２８６８、具体的には上で言及された追加の情報に詳細に開示されている。
例２：例示的な抗ＭＳＬＮ多重特異性抗体ＭＡ２の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーション：
【0231】
例示的な抗ＭＳＬＮ多重特異性抗体ＰＲＯ１８７２、ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２１００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、ＰＲＯ２５６７、ＰＲＯ２６６０、ＰＲＯ２７４１、およびＰＲＯ２７４６の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーションは、未公開の特許出願ＥＰ２０１６４９１３．４（ＰＲＯ１８７２）およびＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０６４４２７（ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ２１００、ＰＲＯ２５６２、ＰＲＯ２５６６、ＰＲＯ２５６７、ＰＲＯ２６６０、ＰＲＯ２７４１、およびＰＲＯ２７４６）に詳細に開示されている。これらは参照によってここに組み込まれる。その上、ＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０６４４２７に開示されている細胞傷害性アッセイ（Ｔ細胞によって駆動される標的細胞枯渇化）データは、例えば、２つの低親和性ＭＳＬＮ－ＢＤと１つのＣＤ３－ＢＤとを含む二価の抗ＭＳＬＮ抗体ＰＲＯ２０００およびＰＲＯ２１００（例えばｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）が、アビディティ効果を利することによって抗原密度依存的な様式で標的細胞を殺すことができるということを実証している。一価抗ＭＳＬＮ抗体ＰＲＯ１８７２（ＭＳＬＮ低ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）はこれをし得なかった（図３）。さらにその上、データは、例えば、Ｔ細胞によって駆動される標的細胞の殺細胞を開始するＰＲＯ２０００およびＰＲＯ２１００の力価が、５００ｎｇ／ｍｌの可溶性ＭＳＬＮ（ｓＭＳＬＮ）の存在下においてあまり影響されず、すなわち１７倍のみ減少するということを実証している（図４）。
例３：例示的な抗ＨＥＲ２多重特異性抗体ＭＡ２の生成、生物物理学的キャラクタリゼーション：
例３：例示的な抗ＨＥＲ２多重特異性抗体ＭＡ２の生成、生物物理学的キャラクタリゼーション：
【0232】
例示的な抗ＨＥＲ２多重特異性抗体ＰＲＯ１７６６およびＰＲＯ１７６７に用いられるＨＥＲ２－ＢＤは、トラスツズマブの抗ＨＥＲ２－ＢＤのＶＨおよびＶＬＣＤＲ配列に基づき、ＶＬ配列のＦＷ４は配列番号９５のＶλの生殖細胞系列に基づくＦＲ４によって置き換えられた（ＡＨｏ付番）。さらにその上、ｓｃＦｖコンストラクトを生成するために、リンカー配列が前記のＶＨおよびＶＬドメインの間に導入された。加えて、ＶＨ配列の位置５１およびＶＬ配列のＶλ－ＦＲ４の位置１４１のグリシン残基（ＡＨｏ付番）がシステインによって置き換えられて、最終的なｓｃＦｖフォーマットにおける内部のジスルフィド橋かけの形成を許した。最後に、このトラスツズマブに基づくＨＥＲ２ｓｃＦｖが、ＣＤ３－ＢＤ（２８－２１－Ｄ０９－ｓｃ０４またはジスルフィド安定化バリアント２８－２１－Ｄ０９－ｓｃ０４－ｄｉＳ）とｈＳＡ－ＢＤ（１９－０１－Ｈ０４－ｓｃ０３）とを含むｓｃＤＢと、さらなるリンカーによって組み合わせられて、ｓｃＭＡＴＣＨ３フォーマットを生成した。最終的な抗（ＨＥＲ２×ＣＤ３ｄｉＳ×ｈＳＡ）ｓｃＭＡＴＣＨ３分子ＰＲＯ１７６６およびＰＲＯ１７６７の配列は表１１に挙げられている。
【0233】
ＭＡＴＣＨはＮｕｍａｂによって発明されたフォーマットであり、これは、専ら、マッチするドメインペアの特異的なペア形成のみを許す異なるリンカーによって接続された可変ドメインからなる（イーガン（Egan）ＴＪら，「可変ドメイン断片のモジュラーアセンブリを許す新規の多重特異性のヘテロ二量体抗体フォーマット（Novel multi－specific heterodimeric antibodyformat allowing modular assembly of variable domain fragments）」，ＭＡｂｓ，２０１６年Ｏｃｔ２７：０．［ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２４８０１２］）。このフォーマットは、具体的には、最適な協働性のための抗原結合ドメインの異なる組み合わせの便利なスクリーニングに良好に適する。ＭＡＴＣＨ、例えばｓｃＭＡＴＣＨ３およびＭＡＴＣＨ４は、哺乳類細胞から組み換え発現され得る。精製のためには、従来のアフィニティクロマトグラフィーステップが用いられ得る。
【0234】
抗（ＨＥＲ２×ＣＤ３ｄｉＳ×ｈＳＡ）ｓｃＭＡＴＣＨ３分子ＰＲＯ１７６６およびＰＲＯ１７６７が、例えば未公開の特許出願ＥＰ２０１６４９１３．４に記載されている標準的な蛋白質産生方法を用いて哺乳類細胞から産生された。
【0235】
ＰＲＯ１７６６および具体的にはＰＲＯ１７６７は、１５０ｍＭのＮａＣｌを有するｐＨ６．４の５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液によって１０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤されるときに、ＤＳＦによって決定される５５℃よりも上の高いアンフォールディング遷移中点（Ｔｍ）を見せ、実質的に蛋白質含量およびモノマー含量の損失なしで、４℃および２５℃における４週の保存後の優良な安定性をもまた示した。
例４：ＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ 高ＫＤ ×ＣＤ３×ｈＳＡ）によるインビボ腫瘍成長阻害：
序
例４：ＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ 高ＫＤ ×ＣＤ３×ｈＳＡ）によるインビボ腫瘍成長阻害：
序
【0236】
コントロール動物に対して相対的に腫瘍成長を有効にコントロールするＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の能力を決定するために、インビボのメソテリン発現細胞株ゼノグラフト実験がチャールズ・リバー・ラボラトリーズにおいて行われた。
方法
動物
方法
動物
【0237】
チャールズ・リバー・ラボラトリーズからの雌ＮＣＧマウスがヒト化マウス作業に好適な条件で飼育された。動物は８～１２週齢の間で用いられた。
研究のデザイン
研究のデザイン
【0238】
処置群の動物（群あたりｎ＝５～６）は、１×１０７のＨ２９２ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞および１×１０７のＰＢＭＣを脇腹に皮下に共移植された。５日後に、動物は目当ての分子を静脈内投薬され、実験の終わりまで５日毎に追加の投与を有した。実験の間に、動物は定期的な間隔でキャリパー測定を用いて腫瘍成長についておよび体重低下についてモニタリングされた。動物は、コントロール群の平均腫瘍体積が８００ｍｍ３であるときにまたは４０日にどちらか、最初に来るどちらかで安楽死させられた。動物はチャールズ・リバー・ラボラトリーズの動物健康福祉規則に従ってモニタリングおよび安楽死させられた。
結果
結果
【0239】
我々は、方法に記載されている通りＰＢＭＣ／Ｈ２９２共移植モデルを用いて、腫瘍成長阻害を促進することにおけるＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の効力を評価した。Ｈ２９２細胞は中等度のレベルのＭＳＬＮを発現し、非小細胞肺癌腫から樹立される。ＰＲＯ２０００の複数の投与レベルが図５に示される通り静脈内投与された。比較として、我々は、コントロールＩｇＧ処置としてのパリビズマブ（抗ＲＳＶ抗体）、およびＰＢＭＣの非存在下においてグラフトされた腫瘍細胞（処置なし）を用いた。我々はコントロール条件が腫瘍の伸長をもたらすということを観察した（明灰色線、図５Ａ）。ＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）分子による処置は、コントロールに対して相対的に１および５ｍｇ／ｋｇにおいて腫瘍成長阻害をもたらした（図５Ａのそれぞれ黒色線および暗灰色線）。我々は処置の有意性を二元配置ＡＮＯＶＡ、次にテューキーの多重比較検定を用いて調べた；第４０日のデータが図５Ｂに示され、各点は個々の動物を表す。２つのより高い用量（１ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）は、パリビズマブ処置された動物（ｃｔｒｌ）および無処置の動物に対して相対的に有意に低い腫瘍体積をもたらした。これらの比較はパリビズマブ処置された動物と比較して有意でなかったので、最も低い用量（０．２ｍｇ／ｋｇ）は準最適であるように見えた。動物の体重は実験の間に比較的安定であったので、総体的な動物の健康に対する有害な効果はないように見えた（データは示さない）。一緒にすると、これらのデータは、多重特異性抗体ＰＲＯ２０００（ｂｉＭＳＬＮ高ＫＤ×ＣＤ３×ｈＳＡ）がインビボの腫瘍成長阻害活性を有し、本発明の医薬組成物またはキットのための好適なＭＡ２であるということを指示している。
例５：インビボ組み合わせ研究：単独またはメソテリン標的化分子との組み合わせでのＰＲＯ１６０１の効果を比較する：
実験の説明
例５：インビボ組み合わせ研究：単独またはメソテリン標的化分子との組み合わせでのＰＲＯ１６０１の効果を比較する：
実験の説明
【0240】
コントロール動物に対して相対的に腫瘍成長を有効にコントロールするＰＲＯ１６０１（抗ＰＤＬ１×ＣＤ１３７×ｈＳＡ）、ＰＲＯ１８７２（抗ＭＳＬＮ×ＣＤ３×ｈＳＡ）、およびＰＲＯ１８７２とのＰＲＯ１６０１の組み合わせの能力を決定するために、インビボのメソテリン発現細胞株ゼノグラフト実験がチャールズ・リバー・ラボラトリーズにおいて行われた。
方法
動物
方法
動物
【0241】
チャールズ・リバー・ラボラトリーズからの雌ＮＣＧマウスがヒト化マウス作業に好適な条件で飼育された。動物は８～１２週齢の間で用いられた。
研究のデザイン
研究のデザイン
【0242】
処置群の動物（群あたりｎ＝７～８）は１×１０７Ｈ２９２ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞および１×１０７ＰＢＭＣを脇腹に皮下に共移植された。５日後に、動物は目当ての分子を静脈内投薬され、実験の終わりまで５日毎に追加の投与を有した。実験の間に、動物は定期的な間隔でキャリパー測定を用いて腫瘍成長についておよび体重低下についてモニタリングされた。動物は、コントロール群の平均腫瘍体積が１０００ｍｍ３であるときにまたは５０日にどちらか、最初に来るどちらかで安楽死させられた。動物はチャールズ・リバー・ラボラトリーズの動物健康福祉規則に従ってモニタリングおよび安楽死させられた。
データ分析
データ分析
【0243】
データ分析はグラフパッドプリズムを用いて行われた。群は二元配置ＡＮＯＶＡおよびテューキーの多重比較事後検定を用いて比較された。ｐ＜０．０５の値は統計的に有意と考えられた。＊はｐ＜０．０５を指示する。
結果および考察
結果および考察
【0244】
我々は、方法に記載されている通りＰＢＭＣ／Ｈ２９２共移植モデルを用いて、腫瘍成長阻害を促進することにおける４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＰＤＬ１標的化分子ＰＲＯ１６０１ならびにＭＳＬＮおよびＣＤ３特異的な多重特異性分子ＰＲＯ１８７２の効力を評価した。Ｈ２９２細胞は中等度のレベルのＭＳＬＮを発現し、非小細胞肺癌腫から樹立される。この細胞株は中程度のレベルのＰＤＬ１であって、それをＰＲＯ１６０１の潜在的標的にもする。ＰＲＯ１６０１（１ｍｇ／ｋｇ）およびＰＲＯ１８７２（０．２ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）ならびに２つの分子の組み合わせが、図６Ａに示される通り静脈内投与された。比較として、我々はパリビズマブ（抗ＲＳＶ抗体）をコントロールＩｇＧ処置として用いた。
【0245】
我々はコントロール条件が腫瘍の伸長をもたらすということを観察した（三角形付きの並の灰色線、図６Ａ）。ＰＲＯ１６０１分子による処置は、図６Ｂに示される通り、パリビズマブに対して相対的に複数の時点における有意な腫瘍成長阻害をもたらした（菱形付きの暗灰色線ｖｓ．三角形付きの並の灰色線）。ＰＲＯ１６０１＋ＰＲＯ１８７２の組み合わせによる処置は、実験の終わりまでにＰＲＯ１６０１単独に対して相対的に有意な腫瘍成長阻害をもたらした（黒色線ｖｓ．菱形付きの暗灰色線、図６Ａ）。０．２ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１８７２単独による処置（丸付きの明灰色破線）は、第２８日にＰＲＯ１６０１＋ＰＲＯ１８７２と比較して有意に不良な腫瘍成長阻害をもたらした（両方の投与、黒色線、ｐ＜０．００１）。
【0246】
動物の体重は実験の間に比較的安定であったので、処置に関連する総体的な動物の健康に対する有害な効果はないように見えた（データは示さない）。一緒にすると、これらのデータは、インビボの腫瘍成長活性を阻害するためにＰＲＯ１６０１およびＰＲＯ１８７２を用いる組み合わせ治療の有望さを指示し、癌免疫療法の有望なコンセプトの候補である。
例６：ＰＲＯ２７４６およびＰＲＯ１６０１の組み合わせによるインビボ腫瘍成長阻害
序
例６：ＰＲＯ２７４６およびＰＲＯ１６０１の組み合わせによるインビボ腫瘍成長阻害
序
【0247】
個々の分子単独およびコントロールの動物に対して相対的に、組み合わせで腫瘍成長を有効にコントロールするＰＲＯ１６０１（４－１ＢＢ×ＰＤＬ－１×ｈＳＡ）およびＰＲＯ２７４６（ｂｉＭＳＬＮ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の能力を決定するために、インビボのメソテリン発現細胞株ヒトゼノグラフト実験がチャールズ・リバー・ラボラトリーズにおいて行われた。
方法
動物
方法
動物
【0248】
チャールズ・リバー・ラボラトリーズからの雌ＮＣＧマウスがヒト化マウス作業に好適な条件で飼育された。動物は８～１２週齢の間で用いられた。
研究のデザイン
研究のデザイン
【0249】
処置群の動物（群あたりｎ＝８）は、１×１０７ＨＰＡＣ腫瘍細胞および２．５×１０６ＰＢＭＣを脇腹に皮下に共移植された。５日後に、動物は目当ての分子を静脈内投薬され、実験の終わりまで５日毎に追加の投与を有した。実験の間に、動物は定期的な間隔でキャリパー測定を用いて腫瘍成長についておよび体重低下についてモニタリングされた。動物は、コントロール群の平均腫瘍体積が１５００ｍｍ３であるときにまたは４０日にどちらか、最初に来るどちらかで安楽死させられた。動物はチャールズ・リバー・ラボラトリーズの動物健康福祉規則に従ってモニタリングおよび安楽死させられた。
結果
結果
【0250】
我々は、方法に記載されている通りＰＢＭＣ／ＨＰＡＣ共移植モデルを用いて、腫瘍成長阻害を促進することにおけるＰＲＯ１６０１（４－１ＢＢ×ＰＤＬ－１×ｈＳＡ）およびＰＲＯ２７４６（ｂｉＭＳＬＮ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の組み合わせの効力を評価した。ＨＰＡＣ細胞は中程度から高いレベルのＭＳＬＮを発現し、膵腺癌から樹立される。ＰＲＯ２７４６（ｂｉＭＳＬＮ×ＣＤ３×ｈＳＡ）の複数の投与レベルが、図７に示される通りＰＲＯ１６０１ありまたはなしで静脈内投与された。我々はパリビズマブ（抗ＲＳＶ抗体）を負のコントロールのＩｇＧ処置として用いた。我々はコントロール条件が経時的な腫瘍の伸長をもたらすということを観察した（逆三角形、暗灰色の線、図７Ａ）。１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ２７４６によって処置するときには腫瘍退縮が観察され（灰色丸）、腫瘍成長はＰＲＯ２７４６の減少して行く用量ではより良好でなくコントロールされた（破線）。１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１処置単独は腫瘍成長阻害をもたらさず、腫瘍はコントロール条件に類似に成長した。１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１との０．２ｍｇ／ｋｇの準最適用量のＰＲＯ２７４６の組み合わせは、その用量のＰＲＯ２７４６単独（暗灰色正方形、破線）に対して相対的に腫瘍退縮をもたらし（暗灰色正方形、実線）、有意に改善された腫瘍成長阻害が、処置単独（三角形、破線）と比較して、０．０４ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ２７４６および１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１の組み合わせで観察された（三角形、実線）。実験の終わりのデータが図７Ｂに示されている。各個々の点は１匹の動物を表す。図７Ｃおよび７Ｄは各群の個々の動物について縦断的傾向を示す。処置単独どちらかと比較して、０．２ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ２７４６および１ｍｇ／ｋｇのＰＲＯ１６０１の組み合わせでは、腫瘍成長退縮が動物間で一様に観察された。動物の体重は実験の間に比較的安定であり、減少しなかったので、総体的な動物の健康に対する有害な効果はないように見えた（データは示さない）。
【0251】
一緒にすると、これらのデータは、準最適用量の多重特異性抗体ＰＲＯ２７４６（ｂｉＭＳＬＮ×ＣＤ３×ｈＳＡ）が、ＰＲＯ１６０１との組み合わせで、ＰＲＯ２７４６単独と比較して高度に改善されたインビボの腫瘍成長阻害活性を有するということを指示している。ＰＲＯ２７４６によるＴ細胞および腫瘍細胞の当初の係合は、蓋然的には、ＰＲＯ１６０１の作用によってさらに係合され、より効率的な腫瘍細胞の殺細胞を媒介し得るＴ細胞をもたらすと思われる。これらのデータは、これが癌免疫療法のための有望なコンセプトであるということを指示している。
例７：ＰＲＯ２６６８およびＰＲＯ１６０１の組み合わせによるインビトロ細胞リシス
序
例７：ＰＲＯ２６６８およびＰＲＯ１６０１の組み合わせによるインビトロ細胞リシス
序
【0252】
個々の分子単独および処置なしのコントロールに対して相対的に、組み合わせで細胞を有効にリシスするＰＲＯ１６０１（４－１ＢＢ×ＰＤＬ－１×ｈＳＡ）およびＰＲＯ２６６８（ＲＯＲ１×ＣＤ３×ｈＳＡ）の能力を決定するために、インビトロのＲＯＲ１発現細胞株リアルタイム生細胞イメージング実験が行われた。
方法
研究のデザイン
方法
研究のデザイン
【0253】
ＲＯＲ１発現乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１が、健康な同種他家Ｔ細胞と５：１のエフェクター対標的比で、０．４ｎＭのＮＭ２１－１４８０もしくは０．４ｎＭのＮＭ３２－２６６８どちらか、またはそれらの組み合わせの存在下において共培養された。ウェルは定期的な間隔で実験の終わりまでイメージングされた。緑色の死んで行く細胞数が赤色の残りの標的細胞数によって除算された。曲線の下向きの傾きは細胞成長を指示する。
結果
結果
【0254】
図８に示される通り、コンストラクトなしコントロール（明灰色）は残りの標的細胞に対して相対的に死んで行く細胞の欠如を実証し、ＮＭ２１－１４８０の追加では、類似の傾向が観察された。０．４ｎＭのＮＭ３２－２６６８という準最適濃度が先の実験から決定された。コントロールまたは０．４ｎＭのＮＭ２１－１４８０よりも多くの死んで行く細胞をもたらした０．４ｎＭのＮＭ３２－２６６８単独（最暗灰色）と比較して、ＮＭ２３－２６６８－ＮＭ２１－１４８０の組み合わせは、全ての条件の残りの標的細胞に対して相対的に最も大きい程度の死んで行く細胞をもたらした。これらのデータは、ＮＭ２１－１４８０などの補助刺激分子と一緒のＴ細胞エンゲージャーの組み合わせが、改善された細胞リシスをもたらすということを指示している。
例８：例示的な抗ＲＯＲ１多重特異性抗体ＭＡ２の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーション：
例８：例示的な抗ＲＯＲ１多重特異性抗体ＭＡ２の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーション：
【0255】
例示的な抗ＲＯＲ１多重特異性抗体ＰＲＯ２５１０およびＰＲＯ２５９０の生成、薬力学的キャラクタリゼーション、および機能的キャラクタリゼーションは、参照によってここに組み込まれる未公開の特許出願ＥＰ２１１５４７８６．４に詳細に開示されている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8】
【配列表】
【国際調査報告】