(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-02
(54)【発明の名称】細菌多糖を精製する方法
(51)【国際特許分類】
C12P 19/04 20060101AFI20231026BHJP
【ＦＩ】
C12P19/04 C
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023524078
(86)(22)【出願日】2021-10-19
(85)【翻訳文提出日】2023-06-01
(86)【国際出願番号】 IB2021059619
(87)【国際公開番号】W WO2022084852
(87)【国際公開日】2022-04-28
(31)【優先権主張番号】63/104,180
(32)【優先日】2020-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】エリザベス バーラニ
(72)【発明者】
【氏名】ウェイ チェン
(72)【発明者】
【氏名】ツェチェン チェン
(72)【発明者】
【氏名】ジャスティン キース モラン
(72)【発明者】
【氏名】ヨングイ ユーアン
【テーマコード（参考）】
4B064
【Ｆターム（参考）】
4B064AF11
4B064CA02
4B064CE03
4B064CE06
4B064DA01
(57)【要約】
本発明は、細菌多糖を精製する方法、より詳細には、多糖を産生する細菌の細胞溶解液から不純物を除去する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を、前記多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液から精製する方法であって、塩基処理ステップを含む方法。
【請求項2】
溶液を、８．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
塩基が、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、またはＫＯｔＢｕのうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
塩基処理後、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする、請求項２から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を濾過し、それによって、さらに清澄にされた溶液を生成する、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をデプス濾過ステップによって処理する、請求項４に記載の方法。
【請求項7】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、請求項４から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を、凝結剤を溶液に加えることを含む凝結ステップによってさらに処理する、請求項２から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記凝結剤が多価陽イオンである、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記多価陽イオンが、アルミニウム、鉄、カルシウム、またはマグネシウムのうちの少なくとも１つを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記凝結ステップを７．０未満のｐＨで行う、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記凝結ステップ後、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記凝結ステップおよび／または前記デカンテーション、沈降、濾過、もしくは遠心分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、５．０を超えるｐＨまで調節する、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
多糖含有溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄にする、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
精製多糖の溶液を標的分子量にサイジングする、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
精製多糖の溶液を滅菌濾過する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を精製する方法、より詳細には細胞溶解液から不純物を除去する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
細菌多糖、具体的には莢膜多糖は、様々な細菌病に関与している、細菌の表面上に見つかる重要な免疫原である。これにより、これらがワクチンの設計における重要な構成要素となっている。これらは、特に担体タンパク質と連結されている場合に、免疫応答を誘発するために有用であることが証明されている。
【0003】
生物である肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌としても知られる）によって引き起こされる浸潤性疾患の防止に向けた多価コンジュゲート肺炎球菌ワクチンの調製において、選択された肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を増殖させて、ワクチンを生成するために必要な多糖を供給させる。その後、莢膜多糖を精製する。担体タンパク質とコンジュゲートさせた後、多糖は最終ワクチン生成物中に含まれ、ワクチンの標的集団において、選択された肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に対する免疫を与える。
【0004】
出発物質はＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、および残留培地構成要素を含む大量の細胞細片も含有するため、多糖を精製する必要がある。夾雑物質の高い負荷が、ある特定の血清型の種類の中で特に問題となっている。一部の血清型、具体的には肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３は、大きく粘稠な多糖鎖（たとえば、３型では、２～３百万ダルトンのグルコース／グルクロン酸の鎖）を生じる。その粘度によりその取扱いが困難となり、精製プロセスが不十分または手間がかかるものとなっており、多糖の損失をもたらし、それによって収率を低下させている可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
したがって、現在の精製プロセスの効率の悪さを排除し、ワクチン内への取り込みに適した実質的に精製された細菌糖類を生成するための、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）３型多糖の簡易化された精製プロセスの必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、単純、拡張可能、かつ対費用効果の高い、肺炎球菌３型多糖精製プロセスを提供する。
【0007】
本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を、前記多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液から精製する方法であって、塩基処理ステップを含む方法を提供する。
【0008】
出発物質は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３の細菌培養物、具体的には、その元の培養培地中の懸濁液または湿細胞ペースト中にある肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細胞であり得る。その後、多糖が放出されるように、溶液を溶解剤、具体的には洗剤で処理し得る。その後、８．０を超えるｐＨ、好ましくは１０．０を超えるｐＨを達成するために、溶液を塩基で処理することができる。塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、またはＫＯｔＢｕであり得る。一実施形態では、塩基処理ステップは約４℃～約３０℃の温度で行う。
【0009】
塩基処理に次いで、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にすることができ、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を、濾過またはデプス濾過によってさらに清澄にしてよい。
【0010】
その後、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を、限外濾過および／もしくはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、ならびに／または凝結ステップによってさらに処理することができる。
【0011】
凝結後、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にすることができる。
【0012】
凝結ステップおよび／またはデカンテーション、沈降、濾過、もしくは遠心分離ステップに次いで、多糖含有溶液のｐＨを、５．０を超えるｐＨまで、好ましくはｐＨ５．０～９．０まで調節してよく、溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄にしてよい。
【0013】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にして、精製された肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖溶液を得てよい。
【0014】
精製多糖の溶液を標的分子量にサイジングし得る、および／または精製多糖の溶液を滅菌濾過し得る。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】多糖を精製するためのプロセスを示す流れ図である。
【図2】屈折率（ＲＩ）およびＵＶ２８０ｎｍによってモニタリングした、本発明のプロセスのそれぞれの精製ステップ後の、ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムの比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0016】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を溶解ブロスから精製するために従来技術のプロセスを適用する際、本発明者らは、清澄化中の困難に気づいた。酸性ｐＨへの調節のステップを含むプロセス（たとえばＷＯ２００８１１８７５２Ａ２を参照）を使用した際に非常に細かい粒子が観察され、これらの粒子は、遠心分離、デプス濾過、またはさらには０．２２μｍ濾過のいずれによっても多糖溶液から除去することができなかった。これらの細かい粒子は次のステップを通して持ち越され、これは、予想より高いレベルのタンパク質および核酸不純物を有する、かすみがかった最終原薬中間体溶液をもたらした。
【0017】
当分野で知られている他のプロセスは、非常に長く冗長なプロセスであり得る。
【0018】
本発明は、以下を提供する：
（Ｉ）はるかにより短く、効率的、拡張可能、かつ対費用効果の高い精製プロセス。
（ＩＩ）より高い多糖収率。多糖収率は従来技術プロセスよりも高く、これは全体的な生成費用を下げる。
（ＩＩＩ）より高い生成物品質。タンパク質／多糖比は約０．３％である場合があり、従来技術プロセスからのものと比較して同様の核酸およびＣポリレベルを有する。
（Ｉ）はるかにより短く、効率的、拡張可能、かつ対費用効果の高い精製プロセス。
（ＩＩ）より高い多糖収率。多糖収率は従来技術プロセスよりも高く、これは全体的な生成費用を下げる。
（ＩＩＩ）より高い生成物品質。タンパク質／多糖比は約０．３％である場合があり、従来技術プロセスからのものと比較して同様の核酸およびＣポリレベルを有する。
【0019】
本発明は、タンパク質と多糖との間の会合を破壊するために、塩基処理（たとえば水酸化ナトリウム）を施用して発酵ブロスを処理し、したがってタンパク質が続く下流の精製において除去されることを可能にする。これは３つの明白に異なる利点を提供する：（ｉ）分離効率を改善させ、それ故、下流の清澄化（たとえばデプス濾過を介するもの）のためにより清澄な遠心分離溶液が得られること、（ｉｉ）多糖に付着している可能性のある脂質様不純物はこのステップで除去されること、ならびに（ｉｉｉ）塩基処理（たとえば水酸化ナトリウム）は内毒素、タンパク質、および核酸を分解することができ、これらの不純物が低下するため、かなりの量のタンパク質および核酸不純物が除去されること。
【0020】
要約すると、本発明は、単純、拡張可能、かつ対費用効果の高い精製プロセスを提供する。精製多糖は非常に低い不純物レベルを有しており、構造は、ＮＭＲスペクトルによって既知の参照標準に一致する。
【0021】
１．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖の精製プロセス
１．１ 出発物質
本発明の方法は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を、前記多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液から精製するために使用することができる。一実施形態では、夾雑物質は細胞細片である。一実施形態では、夾雑物質はタンパク質および核酸である。一実施形態では、夾雑物質はタンパク質、Ｃ多糖、および核酸である。
１．１ 出発物質
本発明の方法は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を、前記多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液から精製するために使用することができる。一実施形態では、夾雑物質は細胞細片である。一実施形態では、夾雑物質はタンパク質および核酸である。一実施形態では、夾雑物質はタンパク質、Ｃ多糖、および核酸である。
【0022】
１．１．１ 細菌細胞
本発明に従って精製しようとする細菌多糖の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌細胞である。
本発明に従って精製しようとする細菌多糖の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌細胞である。
【0023】
精製に所望される多糖は、細胞壁などの細胞構成要素と会合していてよい。細胞壁との会合とは、多糖が、細胞壁自体の構成要素である、および／または直接もしくは中間分子を介して間接的にのいずれかで細胞壁に付着している、または細胞壁の一過性コーティングである（たとえば、ある特定の細菌株は、当分野で「菌体外多糖」としても知られている莢膜多糖を滲出する）ことを意味する。
【0024】
本発明において使用する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を精製するために使用する細菌株は、確立された培養物コレクションまたは臨床検体から得られ得る。
【0025】
１．１．２ 肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３の細菌細胞増殖
典型的には、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖は、細菌を培地（たとえば固体または好ましくは液体培地）中で増殖させることによって生成される。その後、細菌細胞を処理することによって多糖を調製する。
典型的には、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖は、細菌を培地（たとえば固体または好ましくは液体培地）中で増殖させることによって生成される。その後、細菌細胞を処理することによって多糖を調製する。
【0026】
したがって、一実施形態では、本発明の方法のための出発物質は、細菌培養物および好ましくは液体細菌培養物（たとえば発酵ブロス）である。一実施形態では、本発明の方法のための出発物質は液体細菌培養物である。
【0027】
細菌培養物は、典型的にはバッチ培養、流加培養、または連続培養によって得られる（たとえばＷＯ２００７／０５２１６８またはＷＯ２００９／０８１２７６を参照）。連続培養中、新鮮な培地を培養物に固定速度で加え、細胞および培地を、一定の培養体積を維持する速度で取り除く。
【0028】
生物の集団は、しばしば種バイアルから種ボトルへと拡大させ、生産規模の発酵体積に達するまで、漸増体積の１つまたは複数の種発酵槽を通じて継代する。
【0029】
１．１．３ 出発物質を得るための肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌細胞の前処理
一般に、少量の多糖が細菌増殖中に培養培地内に放出され、したがって、出発物質は、遠心分離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌培養物からの上清であり得る。
一般に、少量の多糖が細菌増殖中に培養培地内に放出され、したがって、出発物質は、遠心分離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌培養物からの上清であり得る。
【0030】
しかし、典型的には、出発物質は、多糖が放出されるように細菌自体を処理することによって調製される。
【0031】
細胞増殖後、細菌細胞を不活性化させてもよい。不活性化のために適切な方法は、たとえばＦａｔｔｏｍら（１９９０）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ．５８（７）：２３６７～７４に記載されている、たとえばフェノール：エタノールを用いた処理である。以下の実施形態では、細菌細胞は、事前に不活性化させるまたは不活性化させなくてよい。
【0032】
多糖は、化学的、物理的、または酵素的処理を含む様々な方法によって細菌から放出させることができる（たとえば、ＷＯ２０１０１５１５４４、ＷＯ２０１１／０５１９１７、またはＷＯ２００７０８４８５６を参照）。
【0033】
一実施形態では、細菌細胞（不活性化させたまたは不活性化させていない）は、その元の培養培地中の懸濁液中において処理する。したがって、プロセスは、その元の培養培地中の懸濁液中にある細胞を用いて開始し得る。
【0034】
別の実施形態では、細菌細胞は莢膜多糖の放出の前に遠心分離する。したがって、プロセスは、湿細胞ペーストの形態にある細胞を用いて開始し得る。あるいは、細胞を乾燥形態で処理する。しかし、典型的には、遠心分離後、細菌細胞をプロセスの次のステップに適切な水性媒体中、たとえば緩衝液中または蒸留水中に再懸濁させる。細胞を再懸濁前にこの媒体で洗浄し得る。
【0035】
一実施形態では、細菌細胞（たとえば、その元の培養培地中の懸濁液中にあるもの、湿細胞ペーストの形態にあるもの、乾燥形態のもの、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁させたもの）を溶解剤で処理する。一実施形態では、その元の培養培地中の懸濁液中にある細菌細胞を溶解剤で処理する。一実施形態では、遠心分離後に水性媒体中に再懸濁させた細菌細胞を溶解剤で処理する。「溶解剤」とは、細胞壁の分解を助ける任意の薬剤である。
【0036】
一実施形態では、溶解剤は洗剤である。本明細書中で使用する用語「洗剤」とは、細菌細胞の溶解を誘導することができる任意の陰イオンまたは陽イオン性洗剤をいう。本発明の方法内で使用するためのそのような洗剤の代表的な例としては、デオキシコール酸ナトリウム（ＤＯＣ）、Ｎ－ラウリルサルコシン（ＮＬＳ）、ケノデオキシコール酸ナトリウム、およびサポニンが挙げられる（ＷＯ２００８／１１８７５２、１３頁１４行目～１４頁１０行目を参照）。本発明の一実施形態では、細菌細胞を溶解するために使用する溶解剤はＤＯＣである。本発明の一実施形態では、細菌細胞を溶解するために使用する溶解剤はＮＬＳである。
【0037】
一実施形態では、溶解剤は非動物由来の溶解剤である。一実施形態では、非動物由来の溶解剤は、デカンスルホン酸、ｔｅｒｔ－オクチルフェノキシ５ポリ（オキシエチレン）エタノール（たとえばＩｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ－６３０、ＣＡＳ＃：９００２－９３－１、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能）、オクチルフェノール酸化エチレン縮合物（たとえばＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能）、Ｎ－ラウリルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）、ラウリルイミノジプロピオネート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケノデオキシコレート、ヒオデオキシコレート、グリコデオキシコレート、タウロデオキシコレート、タウロケノデオキシコレート、およびコレートからなる群から選択される。一実施形態では、非動物由来の溶解剤は、デカンスルホン酸、ｔｅｒｔ－オクチルフェノキシ５ポリ（オキシエチレン）エタノール（たとえばＩｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ－６３０、ＣＡＳ＃：９００２－９３－１、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能）、オクチルフェノール酸化エチレン縮合物（たとえばＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能）、Ｎ－ラウリルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）、ラウリルイミノジプロピオネート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケノデオキシコレート、ヒオデオキシコレート、グリコデオキシコレート、タウロデオキシコレート、タウロケノデオキシコレート、またはコレートである。一実施形態では、非動物由来の溶解剤はＮＬＳである。
【0038】
一実施形態では、細菌細胞（たとえば、その元の培養培地中の懸濁液中にあるもの、湿細胞ペーストの形態にあるもの、乾燥形態のもの、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁させたもの）は、多糖が放出されるように酵素処理する。一実施形態では、細菌細胞を、リゾスタフィン、ムタノリシンβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、およびムタノリシンとβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼとの組合せからなる群から選択される酵素によって処理する。一実施形態では、細菌細胞を、リゾスタフィン、ムタノリシンβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、またはムタノリシンとβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼとの組合せによって処理する。これらは、細菌ペプチドグリカンに作用して本発明で使用するための莢膜糖を放出させるが、群に特異的な炭水化物抗原の放出ももたらす。一実施形態では、細菌細胞をＩＩ型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ２）によって処理する。多糖放出後、酵素を不活性化させてもよい。不活性化のために適切な方法は、たとえば熱処理または酸処理である。
【0039】
一実施形態では、細菌細胞（たとえば、その元の培養培地中の懸濁液中にあるもの、湿細胞ペーストの形態にあるもの、乾燥形態のもの、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁させたもの）は、多糖が放出されるようにオートクレーブする。
【0040】
さらなる実施形態では、細菌細胞（たとえば、その元の培養培地中の懸濁液中にあるものまたは遠心分離後に水性媒体中に再懸濁させたもの）は、多糖が放出されるように化学処理する。そのような実施形態では、化学処理は、たとえば塩基または酸を使用した加水分解であり得る（たとえばＷＯ２００７０８４８５６を参照）。
【0041】
一実施形態では、細菌細胞の化学処理は塩基抽出である（たとえば水酸化ナトリウムを使用する）。塩基抽出は、莢膜糖とペプチドグリカン主鎖との間のリン酸ジエステル連結を切断することができる。一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される。一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、またはＫＯｔＢｕのうちの少なくとも１つを含む。塩基処理後、反応混合物を中和し得る。これは酸の添加によって達成し得る。一実施形態では、塩基処理後、反応混合物を、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される酸によって中和する。一実施形態では、塩基処理後、反応混合物を、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、または硫酸によって中和する。
【0042】
一実施形態では、細菌細胞の化学処理は酸処理である（たとえば硫酸）。一実施形態では、酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される。一実施形態では、酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、または硫酸のうちの少なくとも１つを含む。酸処理に次いで、反応混合物を中和し得る。これは塩基の添加によって達成し得る。一実施形態では、酸処理後、反応混合物を、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される塩基によって中和する。一実施形態では、酸処理後、反応混合物を、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、ＫＯｔＢｕによって中和する。
【0043】
１．２ 塩基処理
本発明の方法は塩基処理ステップを含む。本発明者らは、驚くべきことに、本プロセスが、夾雑がより少ない精製多糖をもたらすことを見出した。本発明者のプロセスは単純かつ効率的である。
本発明の方法は塩基処理ステップを含む。本発明者らは、驚くべきことに、本プロセスが、夾雑がより少ない精製多糖をもたらすことを見出した。本発明者のプロセスは単純かつ効率的である。
【0044】
本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、８．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、８．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、９．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、９．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１０．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１０．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１１．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１１．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１２．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１２．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１３．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１３．５を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、１４．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ８．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ９．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１０．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１１．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１２．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１３．０～１４．０を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１３．０～１３．５を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１２．０～１３．５を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１１．０～１３．５を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ１０．０～１３．５を達成するために塩基で処理する。本発明の特定の実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、ｐＨ９．０～１３．５を達成するために塩基で処理する。
【0045】
本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５、約１０．０、約１０．５、約１１．０、約１１．５、約１２．０、約１２．５、約１３．０、約１３．５、または約１４．０のｐＨを達成するために塩基で処理する。
【0046】
本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、約１３．０のｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、約１３．５のｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、約１２．５のｐＨを達成するために塩基で処理する。本発明の一実施形態では、セクション１．１の方法のうちの任意のものによって得られた溶液を、約１２．０のｐＨを達成するために塩基で処理する。
【0047】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0048】
一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される。一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、またはＫＯｔＢｕのうちの少なくとも１つを含む。
【0049】
一実施形態では、塩基はＫＯＨである。一実施形態では、塩基はＬｉＯＨである。一実施形態では、塩基はＮａＨＣＯ３である。一実施形態では、塩基はＮａ２ＣＯ３である。
【0050】
好ましい実施形態では、塩基はＮａＯＨである。
【0051】
本発明の一部の実施形態では、塩基の添加に次いで、溶液を下流の加工の前にしばらくの間保持する。
【0052】
本発明の一部の実施形態では、塩基処理した溶液を、数秒間（たとえば２～１０秒間）から約１日間の間保持する。好ましくは、保持時間は、少なくとも約２、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約９０、少なくとも約１２０、または少なくとも約１６０分間である。好ましくは、保持時間は１週間未満であるが、保持時間はより長くてよい。
【0053】
したがって、ある特定の実施形態では、保持時間は約１分間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約５分間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１５分間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約３０分間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約２時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約４時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約６時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約８時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１０時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１２時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約２４時間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約２日間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約４日間～１週間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約５日間～１週間である。
【0054】
本発明の一部の実施形態では、保持時間は数秒間（たとえば１～１０秒間）から約１カ月間の間である。一部の実施形態では、保持時間は約２秒間～約２週間である。本発明の一部の実施形態では、保持時間は約１分間～約１週間である。一部の実施形態では、保持時間は、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、または約２４時間から、約２日間の間である。
【0055】
したがって、ある特定の実施形態では、保持時間は約１分間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約５分間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１５分間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約３０分間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約２時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約４時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約６時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約８時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１０時間～１日間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約１２時間～１日間である。
【0056】
ある特定の実施形態では、保持時間は約１５分間～約３時間である。ある特定の実施形態では、保持時間は約３０分間～約１２０分間である。
【0057】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0058】
ある特定の実施形態では、保持時間は、約２秒間、約１０秒間、約３０秒間、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１０５分間、約１１０分間、約１１５分間、約１２０分間、約１２５分間、約１３０分間、約１３５分間、約１４０分間、約１４５分間、約１５０分間、約１５５分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約３．５時間、約４時間、約４．５時間、約５時間、約５．５時間、約６時間、約６．５時間、約７時間、約７．５時間、約８時間、約８．５時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、または約１５日間である。
【0059】
保持時間は約１時間であり得る。保持時間は約２時間であり得る。保持時間は約３時間であり得る。保持時間は約４時間であり得る。保持時間は約５時間であり得る。保持時間は約６時間であり得る。保持時間は約７時間であり得る。保持時間は約８時間であり得る。保持時間は約９時間であり得る。保持時間は約１０時間であり得る。保持時間は約１１時間であり得る。保持時間は約１２時間であり得る。保持時間は約１３時間であり得る。保持時間は約１４時間であり得る。保持時間は約１５時間であり得る。保持時間は約１６時間であり得る。保持時間は約１７時間であり得る。保持時間は約１８時間であり得る。保持時間は約１９時間であり得る。保持時間は約２０時間であり得る。保持時間は約２１時間であり得る。保持時間は約２２時間であり得る。保持時間は約２３時間であり得る。保持時間は約２４時間であり得る。
【0060】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0061】
一実施形態では、任意選択の保持ステップは、撹拌なしで実施する。一実施形態では、任意選択の保持ステップは、撹拌下で実施する。別の実施形態では、任意選択の保持ステップは、穏やかな撹拌下で実施する。別の実施形態では、任意選択の保持ステップは、激しい撹拌下で実施する。
【0062】
本発明の一実施形態では、塩基処理ステップは約４℃～約３０℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、または約３０℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約４℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約５℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約１０℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約１５℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約２０℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約２５℃の温度で行う。一実施形態では、塩基処理ステップは約３０℃の温度で行う。好ましい実施形態では、塩基処理ステップは約２０℃の温度で行う。
【0063】
１．３ 固体／液体分離
塩基処理した材料は、任意の適切な固体／液体分離方法によって目的の多糖から分離することができる。
塩基処理した材料は、任意の適切な固体／液体分離方法によって目的の多糖から分離することができる。
【0064】
したがって、本発明の一実施形態では、塩基処理後、懸濁液（上記セクション１．２で得られたもの）を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする。一実施形態では、その後、多糖含有溶液を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0065】
本発明の一実施形態では、塩基処理後、懸濁液（上記セクション１．２で得られたもの）をデカンテーションによって清澄にする。綿状塊が沈殿するために液体間に十分な密度の差異が存在する場合に、デカンターを使用して液体を分離させる。作動中のデカンターでは、３つの明白に異なるゾーンが存在するであろう：透明な重い液体、分離する分散液体（分散体ゾーン）、および透明な軽い液体。きれいな溶液を生成するために、一般に少量の溶液を容器中に残さなければならない。デカンターを連続操作用に設計することができる。
【0066】
本発明の一実施形態では、塩基処理後、懸濁液（上記セクション１．２で得られたもの）を沈降（沈殿）によって清澄にする。沈降は、透明な流体およびより高い固体含有量のスラリーへの、重力沈殿による、懸濁した固体粒子の液体混合物からの分離である。沈降は、濃縮器、清澄器、または分級器において行うことができる。濃化および清澄化は、大量の液体の処理に使用した場合に比較的安価なプロセスであるため、これらを、濾過への供給物の予備濃縮のために使用することができる。
【0067】
本発明の一実施形態では、塩基処理後、懸濁液（上記セクション１．２で得られたもの）を遠心分離によって清澄にする。一実施形態では、前記遠心分離は連続遠心分離である。一実施形態では、前記遠心分離はバケット遠心分離である。一実施形態では、その後、多糖含有上清を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0068】
一部の実施形態では、懸濁液を、約１，０００ｇ、約２，０００ｇ、約３，０００ｇ、約４，０００ｇ、約５，０００ｇ、約６，０００ｇ、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、約２５，０００ｇ、約３０，０００ｇ、約３５，０００ｇ、約４０，０００ｇ、約５０，０００ｇ、約６０，０００ｇ、約７０，０００ｇ、約８０，０００ｇ、約９０，０００ｇ、約１００，０００ｇ、約１２０，０００ｇ、約１４０，０００ｇ、約１６０，０００ｇ、または約１８０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、または約２５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約２，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約７，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約８，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約９，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１１，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１２，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１３，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１４，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約２０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約２５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約３０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約３５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約４０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約５０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約７５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１００，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１２０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１４０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１６０，０００ｇで遠心分離する。
【0069】
一部の実施形態では、懸濁液を約５，０００ｇ～約２５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約８，０００ｇ～約２０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１０，０００ｇ～約１５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１０，０００ｇ～約１２，０００ｇで遠心分離する。
【0070】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0071】
一部の実施形態では、懸濁液を、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０５、少なくとも１１０、少なくとも１１５、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５、または少なくとも１６０分間の間、遠心分離する。好ましくは、遠心分離時間は２４時間未満である。
【0072】
したがって、ある特定の実施形態では、懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０分間から、約３８０分間の間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約５～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約２０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約３０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約６０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約９０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１２０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１５０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１８０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約２１０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約２４０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約２７０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約３００～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約３３０～約３８０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約３６０～約３８０分間の間、遠心分離する。
【0073】
好ましくは懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、または約５４０分間から、約６００分間の間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約５分間～約３時間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約５分間～約１２０分間の間、遠心分離する。
【0074】
ある特定の実施形態では、懸濁液を約５～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約２０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約３０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約６０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約９０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１２０～約１６０分間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約１５０～約１６０分間の間、遠心分離する。
【0075】
懸濁液を約１分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約５分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１５分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２５分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約３０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約４０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約５０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約３時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約４時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約５時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１０時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１５時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２０時間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２４時間の間、遠心分離し得る。
【0076】
懸濁液を約２分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約５分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１０分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１５分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約２０分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約３０分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約４５分間～約６０分間の間、遠心分離し得る。
【0077】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0078】
本発明の一実施形態では、遠心分離は連続遠心分離である。前記実施形態では、供給速度は、５０～５０００ｍｌ／分であり得る。
【0079】
一実施形態では、供給速度は、１００～４０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、１５０～３０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２５０～２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、３００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、３００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、４００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、１０００～２５００ｍｌ／分であり得る。
【0080】
一実施形態では、供給速度は、約１０ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２５ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５０ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約７５ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約４００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約７００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約４０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５０００ｍｌ／分であり得る。
【0081】
上述の固体／液体分離方法は、独立型形式で、任意の順序の２つのものの組合せで、または任意の順序の３つのものの組合せで使用することができる。
【0082】
１．４ 濾過（たとえばデプス濾過）
溶液を上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した後、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液（たとえば上清）を任意選択でさらに清澄にすることができる。
溶液を上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した後、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液（たとえば上清）を任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0083】
一実施形態では、溶液を濾過し、それによって、さらに清澄にされた溶液を生成する。一実施形態では、濾過は、上記セクション１．３の方法のうちの任意のものによって得られた溶液に直接適用する。
【0084】
一実施形態では、溶液を、デプス濾過、活性炭を通す濾過、およびサイズ濾過からなる群から選択される濾過ステップによって処理する。一実施形態では、溶液を、デプス濾過、活性炭を通す濾過、またはサイズ濾過によって処理する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理する。
【0085】
デプスフィルターは、多孔性濾過媒体を使用して、粒子を、媒体の表面上だけであるよりむしろ媒体全体にわたって保持する。濾過媒体の蛇行状およびチャネル様の性質のおかげで、粒子は、表面上とは対照的に、媒体全体にわたってその構造内に保持される。
【0086】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターの設計は、カセット、カートリッジ、ディープベッド（たとえば砂濾過器）、およびレンズ状フィルターからなる群から選択される。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターの設計は、カセット、カートリッジ、ディープベッド（たとえば砂濾過器）、またはレンズ状フィルターである。
【0087】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約８～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１０～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２０～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３０～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約４０～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５０～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約７５～１００ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0088】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約８～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１０～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１５～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２０～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３０～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約４０～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５０～７５ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0089】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約８～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１０～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２０～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３０～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約４０～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0090】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約８～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１０～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１５～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２０～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0091】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約８～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0092】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～８ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約５～８ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0093】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約２～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約３～５ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0094】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．２５～２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約１．５～２ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0095】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０１～１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．５～１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．８～１ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0096】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．０５～５０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～２５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～１０、ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．１～１０ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２～５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは約０．２５～１ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0097】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0098】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは４００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは７５０～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２０００～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0099】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは７５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0100】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５０～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２００～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５０～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５００～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0101】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは３００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは４００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0102】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５０～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２００～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５０～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0103】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１００～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１５０～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0104】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５０～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは７５～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0105】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１～５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは５～５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは１０～５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターは２５～５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0106】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0107】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１～１０００ＬＭＨ（リットル／ｍ２／時間）である。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１０～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は５０～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１２５～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１５０～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は３００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は４００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は５００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は６００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は７００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は８００～１０００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は９００～１０００ＬＭＨである。
【0108】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１０～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は５０～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１００～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１２５～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２００～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は３００～５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は４００～５００ＬＭＨである。
【0109】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１０～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は５０～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１００～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１５０～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２００～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５０～４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は３００～４００ＬＭＨである。
【0110】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１０～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２５～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は５０～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１００～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１２５～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は１５０～２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は２００～２５０ＬＭＨである。
【0111】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0112】
一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約２ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約５ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約２５ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約７５ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１２５ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１７５ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約２００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約２５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約３００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約３５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約４００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約５００ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約７５０ＬＭＨである。一実施形態では、溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度は約１０００ＬＭＨである。
【0113】
１．５ 限外濾過および／またはダイアフィルトレーション
上で得られた溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって、任意選択でさらに清澄にすることができる。本発明の一実施形態では、上記セクション１．２の方法のうちの任意のものによる塩基処理後に得られた溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって清澄にする。一実施形態では、その後、多糖含有溶液を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
上で得られた溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって、任意選択でさらに清澄にすることができる。本発明の一実施形態では、上記セクション１．２の方法のうちの任意のものによる塩基処理後に得られた溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって清澄にする。一実施形態では、その後、多糖含有溶液を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0114】
本発明の別の実施形態では、上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする。一実施形態では、セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液を、上記セクション１．４に開示されているようにさらに濾過し、その後、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする。
【0115】
限外濾過（ＵＦ）は、希薄な生成物流を濃縮するためのプロセスである。ＵＦは、膜孔サイズまたは分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）に基づいて溶液中の分子を分離する。
【0116】
本発明の一実施形態では、溶液（すなわち、上記セクション１．２の方法のうちの任意のものによって得られた塩基処理した溶液、上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液、またはセクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理し、上記セクション１．４に開示されているようにさらに濾過した溶液）を限外濾過によって処理する。
【0117】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～７５０ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５０ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～３０ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２５０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。
【0118】
一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２５０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。
【0119】
一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。
【0120】
一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０００ｋＤａである。
【0121】
一実施形態では、限外濾過ステップの濃縮係数は約１．５～１０である。一実施形態では、濃縮係数は約２～８である。一実施形態では、濃縮係数は約２～５である。
【0122】
一実施形態では、濃縮係数は約１．５である。一実施形態では、濃縮係数は約２．０である。一実施形態では、濃縮係数は約３．０である。一実施形態では、濃縮係数は約４．０である。一実施形態では、濃縮係数は約５．０である。一実施形態では、濃縮係数は約６．０である。一実施形態では、濃縮係数は約７．０である。一実施形態では、濃縮係数は約８．０である。一実施形態では、濃縮係数は約９．０である。一実施形態では、濃縮係数は約１０．０である。
【0123】
本発明の一実施形態では、溶液（すなわち、上記セクション１．２の方法のうちの任意のものによって得られた塩基処理した溶液、上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液、またはセクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理し、上記セクション１．４に開示されているようにさらに濾過した溶液）をダイアフィルトレーションによって処理する。
【0124】
本発明の一実施形態では、本セクションで上記開示した限外濾過（ＵＦ）の後に得られた溶液を、ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ処理）によってさらに処理する。
【0125】
ダイアフィルトレーション（ＤＦ）は、生成物を所望の緩衝溶液（または水のみ）内へと交換するために使用する。一実施形態では、ダイアフィルトレーションは、一定の体積下の保持された溶液の化学特性を変えるために使用する。望まない粒子は膜を通過する一方で、供給流の構成は、交換溶液（緩衝溶液、生理食塩溶液、緩衝生理食塩溶液、または水）の添加を通じてより望ましい状態へと変わる。
【0126】
一実施形態では、交換溶液は水である。
【0127】
一実施形態では、交換溶液は生理食塩水である。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、またはその組合せのうちの少なくとも１つを含む。具体的な一実施形態では、塩は塩化マグネシウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化カリウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、または約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。具体的な一実施形態では、交換溶液は、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約６０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約７０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約８０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約９０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１１０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１２０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。
【0128】
本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は１～５０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～３０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～２０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～１０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約６である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約７である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約８である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約９である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１１である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１２である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１３である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１４である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約５０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約６０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約７０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約８０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約９０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１００である。
【0129】
１．６ 凝結
本発明の方法は凝結ステップを含み得る。本発明者らは、本プロセスが、夾雑が少ない精製多糖をもたらすことを見出した。
本発明の方法は凝結ステップを含み得る。本発明者らは、本プロセスが、夾雑が少ない精製多糖をもたらすことを見出した。
【0130】
本発明者のプロセスは、素早く単純であり得る。
【0131】
したがって、本発明の一実施形態では、上記セクション１．２の方法のうちの任意のものによる塩基処理後に得られた溶液を、凝結によって処理する。一実施形態では、その後、多糖含有溶液を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0132】
本発明の別の実施形態では、上記セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液を、凝結によってさらに処理する。一実施形態では、セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液を、上記セクション１．４に開示されているようにさらに濾過し、その後、凝結によってさらに処理する。一実施形態では、セクション１．３の固体／液体分離ステップによって処理した溶液を、セクション１．４に開示されているようにさらに濾過し、上記セクション１．５に開示されているように限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にし、その後、凝結によってさらに処理する。
【0133】
本発明において、用語「凝結」とは、凝結剤の添加が原因でコロイドが綿状塊または薄片の形態で懸濁液から出てくるプロセスをいう。
【0134】
凝結ステップは、「凝結剤」を、細菌多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液に加えることを含む。一実施形態では、夾雑物質は、細菌細胞細片、細菌細胞タンパク質、および核酸を含む。一実施形態では、夾雑物質は細菌細胞タンパク質および核酸を含む。
【0135】
以下にさらに開示するように、凝結ステップは、凝結剤の添加の前または後のいずれかに、ｐＨの調節をさらに含み得る。具体的には、溶液を酸性化し得る。
【0136】
さらに、凝結剤の添加および／またはｐＨの調節および／または沈殿は、望ましいレベルに調節した温度で行い得る。
【0137】
したがって、一実施形態では、凝結ステップは、凝結剤を溶液に加えること、ｐＨの調節、および温度の調節を含む。
【0138】
これらのステップを任意の順序で行うことができる：
－凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、次いで温度の調節、または
－凝結剤の添加、次いで温度の調節、次いでｐＨの調節、または
－ｐＨの調節、次いで凝結剤の添加、次いで温度の調節、または
－ｐＨの調節、次いで温度の調節、次いで凝結剤の添加、または
－温度の調節、次いで凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、または
－温度の調節、次いでｐＨの調節、次いで凝結剤の添加。
－凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、次いで温度の調節、または
－凝結剤の添加、次いで温度の調節、次いでｐＨの調節、または
－ｐＨの調節、次いで凝結剤の添加、次いで温度の調節、または
－ｐＨの調節、次いで温度の調節、次いで凝結剤の添加、または
－温度の調節、次いで凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、または
－温度の調節、次いでｐＨの調節、次いで凝結剤の添加。
【0139】
さらに、凝結剤の添加および／またはｐＨの調節に次いで、綿状塊を沈殿させるために、溶液を下流の加工の前にしばらくの間保持し得る。
【0140】
本発明において「凝結剤」とは、目的の多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液中において、コロイドおよび他の懸濁粒子が綿状塊または薄片の形態で凝集する一方で、目的の多糖は著しく溶液中に留まることを引き起こすことによって、凝結を促進することを可能にすることができる薬剤をいう。
【0141】
本発明の一実施形態では、凝結剤は多価陽イオンを含む。一実施形態では、凝結剤は多価陽イオンである。好ましい実施形態では、前記多価陽イオンは、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる群から選択される。好ましい実施形態では、前記多価陽イオンは、アルミニウム、鉄、カルシウム、またはマグネシウムのうちの少なくとも１つを含む。一実施形態では、凝結剤は、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも２つの多価陽イオンの混合物である。一実施形態では、凝結剤は、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも３つの多価陽イオンの混合物である。一実施形態では、凝結剤は、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる４つの多価陽イオンの混合物である。
【0142】
一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤を含む。一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、もしくはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウム、またはケイ酸ナトリウムのうちの少なくとも１つを含む。一実施形態では、凝結剤は、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、塩化マグネシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される。一実施形態では、凝結剤は、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、もしくはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、塩化マグネシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、またはケイ酸ナトリウムのうちの少なくとも１つを含む。一実施形態では、凝結剤は硫酸アルミニウムである。一実施形態では、凝結剤は酸化カルシウムである。一実施形態では、凝結剤は水酸化カルシウムである。一実施形態では、凝結剤は硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）である。一実施形態では、凝結剤は塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）である。一実施形態では、凝結剤はポリアクリルアミドである。一実施形態では、凝結剤はポリＤＡＤＭＡＣである。一実施形態では、凝結剤はアルミン酸ナトリウムである。一実施形態では、凝結剤はケイ酸ナトリウムである。一実施形態では、凝結剤はアルミニウムクロロハイドレートである。一実施形態では、凝結剤はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。一実施形態では、凝結剤はミョウバンを含む。一実施形態では、凝結剤は塩化マグネシウムを含む。一実施形態では、凝結剤はミョウバンである。一実施形態では、凝結剤は塩化マグネシウムである。一実施形態では、凝結剤はカリウムミョウバンを含む。一実施形態では、凝結剤はカリウムミョウバンである。一実施形態では、凝結剤はナトリウムミョウバンを含む。一実施形態では、凝結剤はナトリウムミョウバンである。一実施形態では、凝結剤はアンモニウムミョウバンを含む。一実施形態では、凝結剤はアンモニウムミョウバンである。
【0143】
一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤（たとえば、２、３、または４つの薬剤）の混合物である。一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される。一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、もしくはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、またはケイ酸ナトリウムである。
【0144】
一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される２つの薬剤の混合物である。一実施形態では、凝結剤は、塩化マグネシウム、ミョウバン（たとえば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバン、またはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される少なくとも３つの薬剤の混合物である。
【0145】
一実施形態では、凝結剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（ｍｏｒｉｎｇａ ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｔｒｅｅ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリ（Ｎｉｒｍａｌｉ）ナッツの木）、グアルガム、およびアルギン酸塩（たとえば褐海藻抽出物）からなる群から選択される薬剤を含む。一実施形態では、凝結剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（ｍｏｒｉｎｇａ ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｔｒｅｅ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアルガム、またはアルギン酸塩（たとえば褐海藻抽出物）のうちの少なくとも１つを含む。一実施形態では、凝結剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（ｍｏｒｉｎｇａ ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｔｒｅｅ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアルガム、およびアルギン酸塩（たとえば褐海藻抽出物）からなる群から選択される。一実施形態では、凝結剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（ｍｏｒｉｎｇａ ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｔｒｅｅ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアルガム、またはアルギン酸塩（たとえば褐海藻抽出物）のうちの少なくとも１つを含む。
【0146】
凝結剤の濃度は、使用する薬剤、目的の多糖、および凝結ステップのパラメータ（たとえば温度など）に依存し得る。
【0147】
凝結剤が塩化マグネシウムを含む実施形態では、約５～５００ｍＭの凝結剤濃度を使用することができる。凝結剤が塩化マグネシウムである実施形態では、約５～５００ｍＭの凝結剤濃度を使用することができる。
【0148】
好ましくは、約１０～２００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。さらにより好ましくは、約１５～１５０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。
【0149】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0150】
一実施形態では、約５ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約７ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約１０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約１５ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約２０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約３０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約５０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約７５ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約１００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約１５０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約２００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約２５０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約３００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約４００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約４５０ｍＭの凝結剤濃度を使用する。一実施形態では、約５００ｍＭの凝結剤濃度を使用する。
【0151】
本発明の一部の実施形態では、凝結剤を、一定期間をかけて加える。本発明の一部の実施形態では、凝結剤を、数秒間（たとえば１～１０秒間）から約１カ月間の間の期間をかけて加える。一部の実施形態では、凝結剤を約２秒間～約２週間の期間をかけて加える。本発明の一部の実施形態では、凝結剤を約１分間～約１週間の期間をかけて加える。一部の実施形態では、凝結剤を、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、または約２４時間から、約２日間の間の期間をかけて加える。
【0152】
したがって、ある特定の実施形態では、凝結剤を約５分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約１０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約２０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約３０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約６０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約１２０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約１８０分間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約５時間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約１０時間～約１日間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約１２時間～約１日間の期間をかけて加える。
【0153】
好ましくは凝結剤を、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、または約１２時間から、約１日間の間の期間をかけて加える。
【0154】
ある特定の実施形態では、凝結剤を約１５分間～約３時間の期間をかけて加える。ある特定の実施形態では、凝結剤を約３０分間～約１２０分間の期間をかけて加える。
【0155】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0156】
凝結剤を約２秒間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１０秒間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約３０秒間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約５分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約２０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約３０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約６０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約９０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１２０分間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約３時間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約６時間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１２時間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約２４時間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約４８時間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約３日間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約７日間の期間をかけて加え得る。凝結剤を約１４日間の期間をかけて加え得る。
【0157】
一実施形態では、凝結剤を撹拌なしで加える。別の実施形態では、凝結剤を撹拌下で加える。別の実施形態では、凝結剤を穏やかな撹拌下で加える。別の実施形態では、凝結剤を激しい撹拌下で加える。
【0158】
本発明者らは、さらに驚くべきことに、酸性ｐＨで行った場合に凝結が改善されることに気づいた。
【0159】
したがって、本発明の一実施形態では、凝結ステップは７．０未満のｐＨで行う。本発明の特定の実施形態では、凝結ステップは６．０未満のｐＨで行う。本発明の特定の実施形態では、凝結ステップは５．０未満のｐＨで行う。本発明の特定の実施形態では、凝結ステップは４．０未満のｐＨで行う。本発明の特定の実施形態では、凝結ステップはｐＨ７．０～１．０で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．５～２．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．０～２．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．５～２．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．０～２．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．５～３．０で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．０～３．０で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．５～３．０で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．０～３．０で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．５～３．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ５．０～３．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．５～３．５で行う。一実施形態では、凝結ステップはｐＨ４．０～３．５で行う。一実施形態では、凝結ステップは約５．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約５．０のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約４．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約４．０のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約３．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約３．０のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約２．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約２．０のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約１．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約１．０のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約４．０、約３．５、約３．０、または約２．５のｐＨで行う。一実施形態では、凝結ステップは約３．５のｐＨで行う。
【0160】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0161】
一実施形態では、前記酸性ｐＨは、溶液を酸で酸性化することによって得られる。一実施形態では、前記酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される。一実施形態では、前記酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、または硫酸である。一実施形態では、前記酸はアミノ酸である。一実施形態では、前記酸は、グリシン、アラニン、およびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸である。一実施形態では、前記酸は、グリシン、アラニン、またはグルタミン酸である。一実施形態では、前記酸はＨＣｌ（塩酸）である。一実施形態では、前記酸は硫酸である。
【0162】
一実施形態では、酸は撹拌なしで加える。好ましくは、酸は撹拌下で加える。一実施形態では、酸は穏やかな撹拌下で加える。一実施形態では、酸は激しい撹拌下で加える。
【0163】
本発明の一部の実施形態では、凝結剤の添加（および任意選択の酸性化）に次いで、綿状塊を沈殿させるために、溶液を下流の加工の前にしばらくの間保持する。
【0164】
本発明の一部の実施形態では、凝結ステップは、数秒間（たとえば２～１０秒間）から約１分間の間の沈殿時間で行う。好ましくは、沈殿時間は、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５、または少なくとも約１６０分間である。好ましくは、沈殿時間は１週間未満である。しかし、沈殿時間はより長くてよい。
【0165】
したがって、ある特定の実施形態では、沈殿時間は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０、約１４４０分間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、または約６日間から１週間の間である。
【0166】
本発明の一部の実施形態では、沈殿時間は数秒間（たとえば１～１０秒間）から約１カ月間の間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約２秒間～約２週間である。本発明の一部の実施形態では、沈殿時間は約１分間～約１週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約５分間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１０分間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１５分間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３０分間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４５分間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約２時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約６時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１２時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約２４時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３６時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４８時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約７２時間～約２週間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約９６時間～約２週間である。
【0167】
一部の実施形態では、沈殿時間は、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、または約２４時間から、約２日間の間である。
【0168】
したがって、ある特定の実施形態では、沈殿時間は、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、または約１２時間から、約１日間の間である。
【0169】
好ましくは、沈殿時間は、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１１０分間、約１２０分間、約１３０分間、約１４０分間、約１５０分間、約１６０分間、約１７０分間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、または約１２時間から、約１日間の間である。
【0170】
一部の実施形態では、沈殿時間は約２秒間～約１日間である。本発明の一部の実施形態では、沈殿時間は約１分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約５分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１０分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１５分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３０分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４５分間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１時間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約２時間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３時間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４時間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約６時間～約１日間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１２時間～約１日間である。
【0171】
一部の実施形態では、沈殿時間は約２秒間～約１２時間である。本発明の一部の実施形態では、沈殿時間は約１分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約５分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１０分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１５分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３０分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４５分間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約１時間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約２時間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約３時間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約４時間～約１２時間である。一部の実施形態では、沈殿時間は約６時間～約１２時間である。
【0172】
ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１５分間～約３時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３０分間～約１２０分間である。
【0173】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0174】
ある特定の実施形態では、沈殿時間は約２秒間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１０秒間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３０秒間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約５分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１５分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約２０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約２５分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約４５分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約６０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約９０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１２０分間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約４時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約６時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約８時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１２時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１８時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約２４時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３０時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は４８時間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約３日間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約５日間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約７日間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１０日間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約１５日間である。
【0175】
好ましくは、沈殿時間は、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０、または約１４４０分間から、２日間の間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約５分間～約１日間である。ある特定の実施形態では、沈殿時間は約５分間～約１２０分間である。
【0176】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0177】
一実施形態では、任意選択の沈殿ステップは、撹拌なしで実施する。一実施形態では、任意選択の沈殿ステップは、撹拌下で実施する。別の実施形態では、任意選択の沈殿ステップは、穏やかな撹拌下で実施する。別の実施形態では、任意選択の沈殿ステップは、激しい撹拌下で実施する。
【0178】
本発明の一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４℃～約３０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、または約３０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約２０℃の温度で行う。
【0179】
一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約１５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約２５℃の温度で行う。
【0180】
本発明者らは、驚くべきことに、高温で行った場合に凝結をさらに改善させることができることに気づいた。したがって、本発明の特定の実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約３０℃～約９５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約３５℃～約８０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４０℃～約７０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４５℃～約６５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約５０℃～約６０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約５０℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４５℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約４５℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃、または約８０℃の温度で行う。一実施形態では、凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節は、約５０℃の温度で行う。
【0181】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0182】
一実施形態では、凝結剤の添加は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0183】
一実施形態では、凝結剤の添加後の溶液の沈殿は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0184】
一実施形態では、ｐＨの調節は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0185】
一実施形態では、凝結剤の添加および凝結剤の添加後の溶液の沈殿は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0186】
一実施形態では、凝結剤の添加およびｐＨの調節は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0187】
一実施形態では、凝結剤（ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ）の添加、凝結剤の添加後の溶液の沈殿、およびｐＨの調節は、上述の温度のうちの任意のもので行う。
【0188】
一実施形態では、凝結ステップは、ｐＨ調節なしで凝結剤を加えることを含む（上記開示したように）。
【0189】
一実施形態では、凝結ステップは、ｐＨ調節なしで凝結剤を加えることおよび溶液を沈殿させることを含む（上記開示したように）。
【0190】
一実施形態では、凝結ステップは、凝結剤を加えること、ｐＨを調節すること、および溶液を沈殿させることを含む（上記開示したように）。一実施形態では、ｐＨを調節する前に凝結剤を加える。別の実施形態では、凝結剤を加える前にｐＨを調節する。
【0191】
一実施形態では、凝結ステップは、凝結剤を加えること、溶液を沈殿させること、およびｐＨを調節することを含む（上記開示したように）。一実施形態では、凝結剤の添加および溶液の沈殿は、ｐＨを調節する前に実施する。別の実施形態では、凝結剤を加えることおよび溶液を沈殿させることの前に、ｐＨを調節する。一実施形態では、凝結剤の添加およびｐＨを調節することは、溶液を沈殿させる前に実施する。別の実施形態では、凝結剤を加えることおよび溶液を沈殿させることの前に、ｐＨを調節する。
【0192】
一実施形態では、凝結ステップは、凝結剤を加えること、ｐＨを調節すること、および温度の調節を含む（上記開示したように）。
【0193】
これらのステップを任意の順序で行うことができる：
－凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、次いで温度の調節、または
－凝結剤の添加、次いで温度の調節、次いでｐＨの調節、または
－ｐＨの調節、次いで凝結剤の添加、次いで温度の調節、または
－ｐＨの調節、次いで温度の調節、次いで凝結剤の添加、または
－温度の調節、次いで凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、または
－温度の調節、次いでｐＨの調節、次いで凝結剤の添加。
－凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、次いで温度の調節、または
－凝結剤の添加、次いで温度の調節、次いでｐＨの調節、または
－ｐＨの調節、次いで凝結剤の添加、次いで温度の調節、または
－ｐＨの調節、次いで温度の調節、次いで凝結剤の添加、または
－温度の調節、次いで凝結剤の添加、次いでｐＨの調節、または
－温度の調節、次いでｐＨの調節、次いで凝結剤の添加。
【0194】
さらに、凝結剤の添加および／またはｐＨの調節に次いで、綿状塊を沈殿させるために、溶液を下流の加工の前にしばらくの間保持し得る。
【0195】
１．７ 固体／液体分離
凝結した材料は、任意の適切な固体／液体分離方法によって目的の多糖から分離することができる。
凝結した材料は、任意の適切な固体／液体分離方法によって目的の多糖から分離することができる。
【0196】
したがって、本発明の一実施形態では、凝結後、懸濁液（上記セクション１．６で得られたもの）を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする。一実施形態では、その後、多糖含有溶液を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0197】
本発明の一実施形態では、凝結後、懸濁液（上記セクション１．６で得られたもの）をデカンテーションによって清澄にする。綿状塊が沈殿するために液体間に十分な密度の差異が存在する場合に、デカンターを使用して液体を分離させる。作動中のデカンターでは、３つの明白に異なるゾーンが存在するであろう：透明な重い液体、分離する分散液体（分散体ゾーン）、および透明な軽い液体。きれいな溶液を生成するために、一般に少量の溶液を容器中に残さなければならない。デカンターを連続操作用に設計することができる。
【0198】
本発明の一実施形態では、凝結後、懸濁液（上記セクション１．６で得られたもの）を沈降（沈殿）によって清澄にする。沈降は、透明な流体およびより高い固体含有量のスラリーへの、重力沈殿による、懸濁した固体粒子の液体混合物からの分離である。沈降は、濃縮器、清澄器、または分級器において行うことができる。濃化および清澄化は、大量の液体の処理に使用した場合に比較的安価なプロセスであるため、これらを、濾過への供給物の予備濃縮のために使用することができる。
【0199】
本発明の一実施形態では、凝結後、懸濁液（上記セクション１．６で得られたもの）を遠心分離によって清澄にする。一実施形態では、前記遠心分離は連続遠心分離である。一実施形態では、前記遠心分離はバケット遠心分離である。一実施形態では、その後、多糖含有上清を貯蔵および／または追加の加工のために収集する。
【0200】
一部の実施形態では、懸濁液を、約１，０００ｇ、約２，０００ｇ、約３，０００ｇ、約４，０００ｇ、約５，０００ｇ、約６，０００ｇ、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、約２５，０００ｇ、約３０，０００ｇ、約３５，０００ｇ、約４０，０００ｇ、約５０，０００ｇ、約６０，０００ｇ、約７０，０００ｇ、約８０，０００ｇ、約９０，０００ｇ、約１００，０００ｇ、約１２０，０００ｇ、約１４０，０００ｇ、約１６０，０００ｇ、または約１８０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、または約２５，０００ｇで遠心分離する。
【0201】
一部の実施形態では、懸濁液を約５，０００ｇ～約２５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約８，０００ｇ～約２０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１０，０００ｇ～約１５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を約１０，０００ｇ～約１２，０００ｇで遠心分離する。
【0202】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0203】
一部の実施形態では、懸濁液を、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０５、少なくとも１１０、少なくとも１１５、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５、または少なくとも１６０分間の間、遠心分離する。好ましくは、遠心分離時間は２４時間未満である。
【0204】
したがって、ある特定の実施形態では、懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、または約１３８０分間から１４４０分間の間の間、遠心分離する。
【0205】
好ましくは懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、または約５４０分間から、約６００分間の間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約５分間～約３時間の間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を約５分間～約１２０分間の間、遠心分離する。
【0206】
懸濁液を、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１０５分間、約１１０分間、約１１５分間、約１２０分間、約１２５分間、約１３０分間、約１３５分間、約１４０分間、約１４５分間、約１５０分間、または約１５５分間から、約１６０分間の間の間、遠心分離し得る。
【0207】
懸濁液を、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、または約５５分間から、約６０分間の間の間、遠心分離し得る。
【0208】
懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０分間、または約１４４０分間の間、遠心分離し得る。
【0209】
懸濁液を、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、約８５分間、約９０分間、約９５分間、約１００分間、約１０５分間、約１１０分間、約１１５分間、約１２０分間、約１２５分間、約１３０分間、約１３５分間、約１４０分間、約１４５分間、約１５０分間、約１５５分間、または約１６０分間の間、遠心分離し得る。
【0210】
懸濁液を、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、または約６０分間の間、遠心分離し得る。
【0211】
懸濁液を約５分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１５分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約３０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約６０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約９０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１２０分間の間、遠心分離し得る。懸濁液を約１６０分間の間、遠心分離し得る。
【0212】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0213】
本発明の一実施形態では、遠心分離は連続遠心分離である。前記実施形態では、供給速度は、５０～５０００ｍｌ／分であり得る。
【0214】
一実施形態では、供給速度は、１００～４０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、１５０～３０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２５０～２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、３００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、３００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、２００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、４００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、５００～２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、１０００～２５００ｍｌ／分であり得る。
【0215】
一実施形態では、供給速度は、約１０ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２５ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５０ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約７５ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約４００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約７００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約１５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約２５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約３５００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約４０００ｍｌ／分であり得る。一実施形態では、供給速度は、約５０００ｍｌ／分であり得る。
【0216】
上述の固体／液体分離方法は、独立型形式で、任意の順序の２つのものの組合せで、または任意の順序の３つのものの組合せで使用することができる。
【0217】
１．８ 中和
溶液を上記セクション１．６の凝結ステップによっておよび／または上記セクション１．７の固体／液体分離ステップによって処理した後、多糖含有溶液（たとえば上清）の酸性ｐＨを上昇させる。
溶液を上記セクション１．６の凝結ステップによっておよび／または上記セクション１．７の固体／液体分離ステップによって処理した後、多糖含有溶液（たとえば上清）の酸性ｐＨを上昇させる。
【0218】
したがって、本発明の一実施形態では、多糖含有溶液のｐＨを、５．０を超えるｐＨまで調節する。本発明の一実施形態では、多糖含有溶液のｐＨを、６．０を超えるｐＨまで調節する。本発明の一実施形態では、多糖含有溶液のｐＨを、７．０を超えるｐＨまで調節する。本発明の一実施形態では、多糖含有溶液のｐＨを、８．０を超えるｐＨまで調節する。本発明の一実施形態では、多糖含有溶液のｐＨを、９．０を超えるｐＨまで調節する。本発明の特定の実施形態では、溶液をｐＨ５．０～９．０まで調節する。本発明の特定の実施形態では、溶液をｐＨ６．０～８．０まで調節する。本発明の特定の実施形態では、溶液をｐＨ６．５～７．５まで調節する。一実施形態では、溶液を約５．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約５．５のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約６．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約６．５のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約７．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約７．５のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約８．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約８．５のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約９．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、または約８．０のｐＨまで調節する。一実施形態では、溶液を約７．０のｐＨまで調節する。
【0219】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0220】
一実施形態では、前記ｐＨは、塩基の添加によって上昇させる。一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される。
【0221】
一実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、またはＫＯｔＢｕのうちの少なくとも１つを含む。
【0222】
一実施形態では、塩基はＫＯＨである。一実施形態では、塩基はＬｉＯＨである。一実施形態では、塩基はＮａＨＣＯ３である。一実施形態では、塩基はＮａ２ＣＯ３である。
【0223】
一実施形態では、塩基はＮａＯＨである。
【0224】
一実施形態では、ｐＨは、０．１Ｎ～１０Ｎの濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。一実施形態では、ｐＨは、０．５Ｎ～５Ｎの濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。一実施形態では、ｐＨは、１Ｎ～３Ｎの濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。一実施形態では、ｐＨは、１Ｎ～２Ｎの濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。
【0225】
一実施形態では、ｐＨは、０．１Ｎ、０．５Ｎ、１Ｎ、２Ｎ、３Ｎ、４Ｎ、５Ｎ、６Ｎ、７Ｎ、８Ｎ、９Ｎ、および１０Ｎからなる群から選択される濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。一実施形態では、ｐＨは、約０．１Ｎ、約０．５Ｎ、約１Ｎ、約２Ｎ、約３Ｎ、約４Ｎ、約５Ｎ、約６Ｎ、約７Ｎ、約８Ｎ、約９Ｎ、または約１０Ｎの濃度を有する塩基の添加によって上昇させる。
【0226】
一実施形態では、塩基は撹拌なしで加える。好ましくは、塩基は撹拌下で加える。一実施形態では、塩基は穏やかな撹拌下で加える。一実施形態では、塩基は激しい撹拌下で加える。
【0227】
１．９ 活性炭濾過
溶液を上記セクション１．６の凝結ステップによって処理した後、多糖を含有する溶液を、活性炭濾過ステップによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
溶液を上記セクション１．６の凝結ステップによって処理した後、多糖を含有する溶液を、活性炭濾過ステップによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0228】
一実施形態では、セクション１．７の固体／液体分離ステップによってさらに処理した、セクション１．６の溶液（たとえば上清）を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄にする。一実施形態では、上記セクション１．８の中和ステップによってさらに中和した溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄にする。
【0229】
活性炭濾過のステップは、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに有色不純物をさらに除去することを可能にする（ＷＯ２００８／１１８７５２を参照）。
【0230】
一実施形態では、活性炭（活性チャコールとも呼ばれる）を、タンパク質および核酸夾雑物質の大部分を吸収するために十分な量で溶液に加え、その後、夾雑物質が活性炭上に吸着された後に除去する。一実施形態では、活性炭は、粉末の形態で、粒状炭素床として、押し型炭素ブロックまたは押出し炭素ブロック（たとえばＮｏｒｉｔ活性チャコールを参照）として加える。一実施形態では、活性炭は粉末の形態で加える。一実施形態では、活性炭は粒状炭素床の形態で加える。一実施形態では、活性炭は押し型炭素ブロックまたは押出し炭素ブロックの形態で加える。一実施形態では、活性炭は約０．１～２０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約１～１５％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約１～１０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約２～１０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約３～１０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約４～１０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約５～１０％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約１～５％（重量体積）の量で加える。一実施形態では、活性炭は約２～５％（重量体積）の量で加える。その後、混合物を撹拌し、静置する。一実施形態では、混合物を約５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０分間、またはそれより長く静置する。一実施形態では、混合物を約５分間静置する。一実施形態では、混合物を約１５分間静置する。一実施形態では、混合物を約３０分間静置する。
【0231】
一実施形態では、混合物を約４５分間静置する。一実施形態では、混合物を約６０分間静置する。一実施形態では、混合物を約９０分間静置する。一実施形態では、混合物を約１２０分間静置する。一実施形態では、混合物を約１８０分間静置する。一実施形態では、混合物を約２４０分間静置する。一実施形態では、混合物を２４０分間より長くかつ１日間未満、静置する。一実施形態では、混合物を２４０分間より長くかつ１週間未満、静置する。その後、活性炭を除去する。活性炭は、たとえば遠心分離または濾過によって除去することができる。
【0232】
好ましい実施形態では、溶液を、マトリックス中に固定した活性炭を通して濾過する。マトリックスは、溶液が透過できる任意の多孔性フィルター媒体であり得る。マトリックスは支持体材料および／または結合剤材料を含み得る。支持体材料は合成ポリマーであり得る。支持体材料は天然由来のポリマーであり得る。適切な合成ポリマーとしては、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、およびポリメチルメタクリレートを挙げ得る。天然由来のポリマーとしては、セルロース、多糖およびデキストラン、アガロースを挙げ得る。典型的には、ポリマー支持体材料は、機械的強剛性を提供するために繊維状ネットワークの形態である。結合剤材料は樹脂であり得る。マトリックスは膜シートの形態を有し得る。一実施形態では、マトリックス中に固定した活性炭は、フロースルー炭素カートリッジの形態である。カートリッジは、マトリックス中に固定した粉末活性炭を含有する自己充足的な実体であり、膜シートの形態で調製する。膜シートは、プラスチック製の透過性支持体中に捕捉させて、ディスクを形成し得る。
【0233】
あるいは、膜シートはらせん巻きであり得る。フィルター表面積を増加させるために、いくつかのディスクを互いの上に積み重ね得る。具体的には、互いの上に積み重ねたディスクは、炭素処理した試料をフィルターから収集および除去するための中心コアパイプを有する。積み重ねたディスクの立体配置はレンズ状であり得る。
【0234】
炭素フィルター中の活性炭は、様々な原材料、たとえば、泥炭、褐炭、木材、またはココナツ殻に由来し得る。
【0235】
蒸気または化学処理などの当分野で知られている任意のプロセスを使用して炭素を活性化させ得る（たとえば木質リン酸活性炭）。
【0236】
本発明において、マトリックス中に固定した活性炭を筺体内に配置して独立したフィルターユニットを形成し得る。それぞれのフィルターユニットはそれぞれ自身の、精製しようとする溶液のための入口および出口を有する。本発明において使用可能なフィルターユニットの例は、Ｃｕｎｏ Ｉｎｃ．（米国Ｍｅｒｉｄｅｎ）またはＰａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌ）製の炭素カートリッジである。具体的には、ＣＵＮＯゼータ炭素フィルターが、本発明における使用に適している。これらの炭素フィルターはセルロースマトリックスを含み、それ内に活性炭粉末が捕捉され、樹脂で定位置に固定されている。
【0237】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～１００ミクロン、約０．７～１００ミクロン、約０．８～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは、間の公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約６～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約７～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１０～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２０～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３０～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約４０～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約５０～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約７５～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0238】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～５０ミクロン、約０．７～５０ミクロン、約０．８～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約６～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約７～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１０～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２０～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２５～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３０～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約４０～５０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0239】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～２５ミクロン、約０．７～２５ミクロン、約０．８～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約６～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約７～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１０～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１５～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２０～２５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0240】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～１０ミクロン、約０．７～１０ミクロン、約０．８～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約５～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約６～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約７～１０ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0241】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～５ミクロン、約０．７～５ミクロン、約０．８～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約２～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約３～５ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0242】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～２ミクロン、約０．７～２ミクロン、約０．８～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．２５～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．５～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約１．７５～２ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0243】
一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０１～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．０５～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．１～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．２～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．３～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．４～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．５～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．６～１ミクロン、約０．７～１ミクロン、約０．８～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。一実施形態では、上記開示した活性炭フィルターは約０．９～１ミクロンの公称ミクロン定格を有する。
【0244】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0245】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５０～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１００～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１５０～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２００～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３００～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、４００～５００ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0246】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１５～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、４０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１００～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１５０～２００ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0247】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１５～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２５～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５０～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１００～１５０ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0248】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１５～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、４０～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５０～１００ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0249】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２５～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、４０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、６０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、７０～７５ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0250】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、５～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、１０～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２０～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、２５～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、３０～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。一実施形態では、活性炭濾過ステップは、４０～５０ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0251】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0252】
一実施形態では、活性炭濾過ステップは、約１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２２５、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約９５０、または約１０００ＬＭＨの供給速度で実施する。
【0253】
一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは５～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは１０～７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは１５～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは２０～４００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは２５～３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは３０～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは４０～２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは３０～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0254】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0255】
一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約１０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約１５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約２０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約２５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約３０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約４０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約７５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約１５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約４００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターは約１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0256】
１回目の活性炭濾過ステップの後に夾雑物質の含有量が固定閾値を超えている場合、前記ステップを繰り返すことができる。本発明の一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、１、２、または３回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、１または２回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、２回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、３回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、４回の活性炭濾過ステップを行う。本発明の一実施形態では、５回の活性炭濾過ステップを行う。
【0257】
本発明の一実施形態では、１回の活性炭濾過ステップを行う。
【0258】
一実施形態では、溶液を、直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、２、３、４、または５個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、２個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、３個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、４個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。一実施形態では、溶液を、５個の直列にした活性炭フィルターによって処理する。
【0259】
一実施形態では、活性炭濾過ステップを単一通過モードで行う。
【0260】
別の実施形態では、活性炭濾過ステップを再循環モードで行う。前記実施形態（再循環モード）では、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０サイクルの活性炭濾過を行う。別の実施形態では、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０サイクルの活性炭濾過を行う。一実施形態では、２または３サイクルの活性炭濾過を行う。一実施形態では、２サイクルの活性炭濾過を行う。一実施形態では、３サイクルの活性炭濾過を行う。一実施形態では、４サイクルの活性炭濾過を行う。一実施形態では、５サイクルの活性炭濾過を行う。
【0261】
１．１０ 限外濾過および／またはダイアフィルトレーション
一実施形態では、溶液を上記セクション１．７の方法のうちの任意のものによって清澄にした後、得られた溶液（すなわち上清）を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
一実施形態では、溶液を上記セクション１．７の方法のうちの任意のものによって清澄にした後、得られた溶液（すなわち上清）を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0262】
別の実施形態では、溶液を上記セクション１．８の方法のうちの任意のものによって中和した後、得られた溶液を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0263】
別の実施形態では、溶液を上記セクション１．９の方法のうちの任意のものによってさらに清澄にした後、得られた溶液（すなわち濾液）を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0264】
別の実施形態では、溶液を上記セクション１．８の方法のうちの任意のものによって中和し、上記セクション１．９の濾過ステップによって清澄にした後、得られた溶液（すなわち濾液）を、限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって任意選択でさらに清澄にすることができる。
【0265】
限外濾過（ＵＦ）は、希薄な生成物流を濃縮するためのプロセスである。ＵＦは、膜孔サイズまたは分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）に基づいて溶液中の分子を分離する。
【0266】
本発明の一実施形態では、溶液（たとえば、上記セクション１．７、１．８、または１．９で得られた溶液）を限外濾過によって処理する。
【0267】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～７５０ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５０ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～３０ｋＤａの範囲内である。
【0268】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１５０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５００ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５０ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である。
【0269】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１５０ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４００ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲内である。
【0270】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２００ｋＤａ～３００ｋＤａの範囲内である。
【0271】
一実施形態では、溶液を限外濾過によって処理し、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲内である。
【0272】
一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約６０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約８０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約９０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１１０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１２０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１３０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１４０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約２５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約３００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約４００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５００ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約５ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約７５０ｋＤａである。一実施形態では、膜の分子量カットオフは約１０００ｋＤａである。
【0273】
一実施形態では、限外濾過ステップの濃縮係数は約１．５～１０である。一実施形態では、濃縮係数は約３～９である。一実施形態では、濃縮係数は約５～９である。一実施形態では、濃縮係数は約２～８である。一実施形態では、濃縮係数は約２～５である。
【0274】
一実施形態では、濃縮係数は約１．５である。一実施形態では、濃縮係数は約２．０である。一実施形態では、濃縮係数は約３．０である。一実施形態では、濃縮係数は約３．５である。一実施形態では、濃縮係数は約４．０である。一実施形態では、濃縮係数は約４．５である。一実施形態では、濃縮係数は約５．０である。一実施形態では、濃縮係数は約５．５である。一実施形態では、濃縮係数は約６．０である。一実施形態では、濃縮係数は約６．５である。一実施形態では、濃縮係数は約７．０である。一実施形態では、濃縮係数は約７．５である。一実施形態では、濃縮係数は約８．０である。一実施形態では、濃縮係数は約８．５である。一実施形態では、濃縮係数は約９．０である。一実施形態では、濃縮係数は約９．５である。一実施形態では、濃縮係数は約１０．０である。
【0275】
本発明の一実施形態では、溶液（たとえば、上記セクション１．７、１．８、または１．９で得られた溶液）をダイアフィルトレーションによって処理する。
【0276】
本発明の一実施形態では、本セクションで上記開示した限外濾過（ＵＦ）の後に得られた溶液を、ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ処理）によってさらに処理する。
【0277】
ダイアフィルトレーション（ＤＦ）は、生成物を所望の緩衝溶液（または水のみ）内へと交換するために使用する。一実施形態では、ダイアフィルトレーションは、一定の体積下の保持された溶液の化学特性を変えるために使用する。望まない粒子は膜を通過する一方で、供給流の構成は、交換溶液（緩衝溶液、生理食塩溶液、緩衝生理食塩溶液、または水）の添加を通じてより望ましい状態へと変わる。
【0278】
一実施形態では、交換溶液は水である。
【0279】
一実施形態では、交換溶液は生理食塩水である。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、またはその組合せである。具体的な一実施形態では、塩は塩化マグネシウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化カリウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、または約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。具体的な一実施形態では、交換溶液は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、または約３００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約６０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約７０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約８０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約９０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１１０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１２０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約１５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約２５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約３５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４００ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約４５０ｍＭの塩化ナトリウムである。一実施形態では、交換溶液は約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。
【0280】
一実施形態では、交換溶液は緩衝溶液である。一実施形態では、交換溶液は緩衝溶液であり、緩衝液は、Ｎ－（２－アセトアミド）－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸塩（アセテート）、Ｎ－（２－アセトアミド）－イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２－アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール（ＡＭＰ）、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール ＡＭＰＤ、アメジオール、Ｎ－（１，１－ジメチル－２－ヒドロキシエチル）－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ビス－（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（バイカーボネート）、Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシエチル）－グリシン（ビシン）、［ビス－（２－ヒドロキシエチル）－イミノ］－トリス－（ヒドロキシメチルメタン）（ビス－トリス）、１，３－ビス［トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］プロパン（ビス－トリス－プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジレート）、３－（シクロヘキシルアミノ）－プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３－（シクロヘキシルアミノ）－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（カーボネート）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸塩（シトレート）、３－［Ｎ－ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸塩（ホルメート）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－３－プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸塩（マレート）、マレイン酸塩（マレエート）、２－（Ｎ－モルホリノ）－エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）－プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸塩（ホスフェート）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸塩（スクシネート）、３－｛［トリス（ヒドロキシメチル）－メチル］－アミノ｝－プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２－［トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］－エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）－メチル］－グリシン（トリシン）、およびトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン（トリス）からなる群から選択される。一実施形態では、交換溶液は緩衝溶液であり、緩衝液は、Ｎ－（２－アセトアミド）－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸塩（アセテート）、Ｎ－（２－アセトアミド）－イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２－アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール（ＡＭＰ）、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール ＡＭＰＤ、アメジオール、Ｎ－（１，１－ジメチル－２－ヒドロキシエチル）－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ビス－（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（バイカーボネート）、Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシエチル）－グリシン（ビシン）、［ビス－（２－ヒドロキシエチル）－イミノ］－トリス－（ヒドロキシメチルメタン）（ビス－トリス）、１，３－ビス［トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］プロパン（ビス－トリス－プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジレート）、３－（シクロヘキシルアミノ）－プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３－（シクロヘキシルアミノ）－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（カーボネート）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸塩（シトレート）、３－［Ｎ－ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸塩（ホルメート）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－３－プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－ピペラジン－Ｎ’－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸塩（マレート）、マレイン酸塩（マレエート）、２－（Ｎ－モルホリノ）－エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）－プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸塩（ホスフェート）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸塩（スクシネート）、３－｛［トリス（ヒドロキシメチル）－メチル］－アミノ｝－プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２－［トリス（ヒドロキシメチル）－メチルアミノ］－エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）－メチル］－グリシン（トリシン）、またはトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン（トリス）である。
【0281】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、酢酸塩（アセテート）、クエン酸塩（シトレート）、ギ酸塩（ホルメート）、リンゴ酸塩（マレート）、マレイン酸塩（マレエート）、リン酸塩（ホスフェート）、およびコハク酸塩（スクシネート）からなる群から選択される。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、酢酸塩（アセテート）、クエン酸塩（シトレート）、ギ酸塩（ホルメート）、リンゴ酸塩（マレート）、マレイン酸塩（マレエート）、リン酸塩（ホスフェート）、またはコハク酸塩（スクシネート）である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液はクエン酸塩（シトレート）である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液はコハク酸塩（スクシネート）である。一実施形態では、前記塩はナトリウム塩である。一実施形態では、前記塩はカリウム塩である。
【0282】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約４．０～１１．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約５．０～１０．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約５．５～９．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．０～８．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．０～７．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．５～７．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．５～７．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．０～７．５である。上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0283】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約４．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約４．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約５．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約５．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約６．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約７．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約７．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約８．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約８．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約９．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約９．５である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約１０．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約１１．０である。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは約７．０である。
【0284】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１５ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約３０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約４０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約７５ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約８０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約８５ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約９０ｍＭ～１００ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約９５ｍＭ～１００ｍＭである。
【0285】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１０ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１５ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２０ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２５ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約３０ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約４０ｍＭ～５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約４５ｍＭ～５０ｍＭである。
【0286】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１０ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１５ｍＭ～２５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２０ｍＭ～２５ｍＭである。
【0287】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭ～１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭ～１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭ～１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭ～１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭ～１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１０ｍＭ～１５ｍＭである。
【0288】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭ～１０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭ～１０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭ～１０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭ～１０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭ～１０ｍＭである。
【0289】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0290】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０１ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．０５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．１ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約０．５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約３０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約４０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約５０ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約７５ｍＭである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約１００ｍＭである。
【0291】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度は約２０ｍＭである。
【0292】
一実施形態では、交換溶液はキレート化剤を含む。一実施形態では、交換溶液はミョウバンキレート化剤を含む。一部の実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸（ＥＤＴＡ－ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２－シクロヘキサンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３－ジアミノプロパン－２－オール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＰＴＡ－ＯＨ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジプロピオン酸二塩酸塩（ＥＤＤＰ）、エチレンジアミン－テトラキス（メチレンスルホン酸）（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＰＯ）、イミノ－二酢酸（ＩＤＡ）、ヒドロキシイミノ－二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ－三酢酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラミン－六酢酸（ＴＴＨＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３－ジメルカプト－１－プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、アルファリポ酸（ＡＬＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド（ＴＴＦＤ）、ジメルカプロール、ペニシラミン、デフェロキサミン（ＤＦＯＡ）、デフェラシロクス、ホスホネート、クエン酸塩（シトレート）、およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸（ＥＤＴＡ－ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２－シクロヘキサンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３－ジアミノプロパン－２－オール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＰＴＡ－ＯＨ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジプロピオン酸二塩酸塩（ＥＤＤＰ）、エチレンジアミン－テトラキス（メチレンスルホン酸）（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＰＯ）、イミノ－二酢酸（ＩＤＡ）、ヒドロキシイミノ－二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ－三酢酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラミン－六酢酸（ＴＴＨＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３－ジメルカプト－１－プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、アルファリポ酸（ＡＬＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド（ＴＴＦＤ）、ジメルカプロール、ペニシラミン、デフェロキサミン（ＤＦＯＡ）、デフェラシロクス、ホスホネート、クエン酸塩（シトレート）、またはこれらの組合せである。
【0293】
一部の実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸（ＥＤＴＡ－ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２－シクロヘキサンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３－ジアミノプロパン－２－オール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＰＴＡ－ＯＨ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、クエン酸塩（シトレート）、およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸（ＥＤＴＡ－ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２－シクロヘキサンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３－ジアミノプロパン－２－オール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＰＴＡ－ＯＨ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、クエン酸塩（シトレート）、またはこれらの組合せである。
【0294】
一部の実施形態では、キレート化剤はＮ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸（ＥＤＴＡ－ＯＨ）である。一部の実施形態では、キレート化剤はヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）である。一部の実施形態では、キレート化剤はエチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）である。
【0295】
一部の実施形態では、キレート化剤は１，２－シクロヘキサンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣｙＤＴＡ）である。一部の実施形態では、キレート化剤はジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）である。一部の実施形態では、キレート化剤は１，３－ジアミノプロパン－２－オール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＰＴＡ－ＯＨ）である。一部の実施形態では、キレート化剤はエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）である。
【0296】
一部の実施形態では、キレート化剤はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。
【0297】
一部の実施形態では、キレート化剤はクエン酸塩（シトレート）である。一部の実施形態では、キレート化剤はクエン酸ナトリウムである。
【0298】
一般に、キレート化剤は１～５００ｍＭの濃度で用いる。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は２～４００ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は１０～４００ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は１０～２００ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は１０～１００ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は１０～５０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は１０～３０ｍＭである。
【0299】
一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約０．０１ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約０．０５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約０．１ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約０．５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約１ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約１０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約１５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約２０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約２５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約３０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約４０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約５０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約６０ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約７５ｍＭである。一実施形態では、交換溶液中のキレート化剤の濃度は約１００ｍＭである。
【0300】
一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、またはその組合せである。具体的な一実施形態では、塩は塩化マグネシウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化カリウムである。具体的な一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、または約５００ｍＭで含む。
【0301】
具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約１ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約５ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約１０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約２０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約３０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約４０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約４５ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約５０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約５５ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約６０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約７５ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約１００ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約１５０ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約２００ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約３００ｍＭで含む。具体的な一実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝溶液は塩化ナトリウムを約５０ｍＭで含む。
【0302】
本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～３０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～２０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は５～１０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約６である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約７である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約８である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約９である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１１である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１２である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１３である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１４である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約２５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約３５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約４５である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約５０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約６０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約７０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約８０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約９０である。本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーション体積の数は約１００である。
【0303】
本発明の一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約２０℃～約９０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約３５℃～約８０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４０℃～約７０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約６５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約５０℃～約６０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約５０℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。
【0304】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0305】
一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約２０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約２５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約３０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約３５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約４５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約５０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約６０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約６５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約７０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約７５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約８０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過およびダイアフィルトレーションステップを約５０℃の温度で行う。
【0306】
本発明の一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約２０℃～約９０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約３５℃～約８０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約４０℃～約７０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約６５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約５０℃～約６０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約５０℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。
【0307】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0308】
一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約２０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約２５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約３０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約３５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約４０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約４５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約５０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約５５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約６０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約６５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約７０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約７５℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約８０℃の温度で行う。一実施形態では、ダイアフィルトレーションステップは約５０℃の温度で行う。
【0309】
本発明の一実施形態では、限外濾過ステップは約２０℃～約９０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約３５℃～約８０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約４０℃～約７０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約４５℃～約６５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約５０℃～約６０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約５０℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップを約４５℃～約５５℃の温度で行う。
【0310】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0311】
一実施形態では、限外濾過ステップは約２０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約２５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約３０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約３５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約４０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約４５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約５０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約５５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約６０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約６５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約７０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約７５℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約８０℃の温度で行う。一実施形態では、限外濾過ステップは約５０℃の温度で行う。
【0312】
１．１１ ホモジナイゼーション／サイジング
多糖は、精製手順中に大きさがわずかに小さくなる場合がある。
多糖は、精製手順中に大きさがわずかに小さくなる場合がある。
【0313】
一実施形態では、本発明の精製多糖の溶液（たとえば、セクション１．１０の限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって得られたもの）はサイジングされていない。
【0314】
一実施形態では、多糖を、サイジング技法によってホモジナイゼーションすることができる。機械的または化学的サイジングを用い得る。たとえば酢酸を使用した、化学的加水分解を実施し得る。高圧ホモジナイゼーション剪断を使用した機械的サイジングを実施し得る。
【0315】
したがって、一実施形態では、得られた精製多糖の溶液（たとえば、セクション１．１０の限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによって得られたもの）を、標的分子量にサイジングする。
【0316】
本明細書中で使用する用語、多糖の「分子量」とは、たとえば多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって計算した分子量をいう。
【0317】
一部の実施形態では、精製多糖を約５ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。他のそのような実施形態では、精製多糖を約１０ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。他のそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約３，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約２，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約２，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖をおよそ約５０ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５０ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａおよび約３，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａおよび約２，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａおよび約２，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約２，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。
さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約３，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約６００ｋＤａの分子量までサイジングする。
さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約４，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約３，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約２，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約２５０ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約３００ｋＤａ～約５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約７５０ｋＤａの分子量までサイジングする。さらなるそのような実施形態では、精製多糖を約５００ｋＤａ～約６００ｋＤａの分子量までサイジングする。
【0318】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0319】
１．１２ 滅菌濾過
一実施形態では、本発明の精製多糖の溶液を滅菌濾過する。
一実施形態では、本発明の精製多糖の溶液を滅菌濾過する。
【0320】
したがって、一実施形態では、セクション１．１０の限外濾過および／またはダイアフィルトレーションステップには、任意選択で滅菌濾過ステップが続くことができる。
【0321】
一実施形態では、実施する場合、セクション１．１１のホモジナイゼーション／サイジングステップには、任意選択で滅菌濾過ステップが続くことができる。
【0322】
一実施形態では、セクション１．２～１．９のステップのうちの任意のものには、任意選択で滅菌濾過ステップが続くことができる。
【0323】
一実施形態では、セクション１．２のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．３のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．４のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．５のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．６のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．７のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．８のステップには滅菌濾過ステップが続く。一実施形態では、セクション１．９のステップには滅菌濾過ステップが続く。
【0324】
一実施形態では、滅菌濾過は全量濾過（垂直濾過）である。一実施形態では、滅菌濾過はタンジェンシャル濾過である。
【0325】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．０１～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．０５～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．１～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．１５～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0326】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0327】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．０５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．１ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．１５ミクロンの公称保持範囲を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0328】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約０．２ミクロンの公称保持範囲を有する。
【0329】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約２５～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５０～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１００～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５０～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５００～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５０～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１０００～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１２５０～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0330】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは約２５～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは４００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５００～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５０～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0331】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５０～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは３００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは４００～５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0332】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５０～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１００～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは１５０～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２００～２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0333】
一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは２５～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは５０～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターは７５～１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0334】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0335】
一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約２５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約７５Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約１００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約１５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約２００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約２５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約３００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約４００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約７５０Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。一実施形態では、溶液を微量濾過ステップによって処理し、フィルターは約１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する。
【0336】
１．１３ 最終材料
精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を最後に液体溶液として調製することができる。
精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を最後に液体溶液として調製することができる。
【0337】
多糖は、さらに加工する（たとえば乾燥粉末として凍結乾燥する、ＷＯ２００６／１１０３８１を参照）ことができる。したがって、一実施形態では、多糖は乾燥粉末である。
【0338】
一実施形態では、多糖は凍結乾燥ケークである。
【0339】
２ 精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖の使用
本発明の方法によって精製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖は、抗原として使用し得る。そのままの多糖は、ワクチン中の抗原として使用される（２３価の非コンジュゲート肺炎球菌多糖ワクチンＰｎｅｕｍｏｖａｘを参照）。
本発明の方法によって精製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖は、抗原として使用し得る。そのままの多糖は、ワクチン中の抗原として使用される（２３価の非コンジュゲート肺炎球菌多糖ワクチンＰｎｅｕｍｏｖａｘを参照）。
【0340】
本発明の方法によって精製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖はまた、担体タンパク質とコンジュゲートさせて糖コンジュゲートを得てもよい。
【0341】
２．１ 糖コンジュゲート
本発明の方法によって精製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を担体タンパク質とコンジュゲートさせて、糖コンジュゲートを得てよい。
本発明の方法によって精製した肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を担体タンパク質とコンジュゲートさせて、糖コンジュゲートを得てよい。
【0342】
本発明の目的のために、用語「糖コンジュゲート」とは、担体タンパク質と共有的に連結した糖を示す。一実施形態では、糖は担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、糖はスペーサー／リンカーを通じて担体タンパク質と連結している。
【0343】
一般に、糖と担体との共有的コンジュゲーションは、糖をＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原へと変換し、したがって免疫記憶のためのプライミングを可能にするため、糖の免疫原性を増強させる。コンジュゲーションは小児ワクチンのために特に有用である。
【0344】
本発明の方法による精製多糖は、活性化（たとえば化学的に活性化）させて、（たとえばリンカーを用いてまたは担体タンパク質と直接）反応することができるようにし、その後、本明細書中にさらに記載するように、糖コンジュゲート内に取り込ませてよい。
【0345】
精製多糖は、たとえば上記セクション１．１１に開示した方法によって、コンジュゲーション前に標的分子量にサイジングし得る。したがって、一実施形態では、精製多糖をコンジュゲーション前にサイジングする。一実施形態では、本明細書中に開示した精製多糖をコンジュゲーション前にサイジングしてオリゴ糖を得てよい。オリゴ糖は低い数の反復単位（典型的には５～１５個の反復単位）を有しており、典型的には多糖のサイジング（たとえば加水分解）によって誘導する。
【0346】
しかし、好ましくは、コンジュゲーションのために使用する糖は多糖である。高分子量多糖は、抗原表面上に存在するエピトープが原因で、ある特定の抗体免疫応答を誘導することができる。高分子量多糖の単離および精製が、本発明のコンジュゲートにおける使用のために好ましくは企図される。
【0347】
したがって、一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖はサイジングされ、多糖のままである。
【0348】
一実施形態では、多糖はサイジングされていない。
【0349】
一部の実施形態では、コンジュゲーション前（サイジング後または未サイジング）の精製多糖は５ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、精製多糖は１０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、精製多糖は５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約３，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約２，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約１，７５０ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖はおよそ約５０ｋＤａ～約１，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約１，２５０ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、精製多糖は約５０ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの分子量を有する。
【0350】
上記範囲のうちの任意のもの内の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【0351】
必要な場合は任意の適切なリンカーを用いて任意の適切なコンジュゲーション反応を使用することができる。たとえばＷＯ２００７１１６０２８、１７～２２頁を参照されたい。
【0352】
本明細書中に記載した精製オリゴ糖または多糖を化学的に活性化させて、糖が担体タンパク質と反応できるようにする。
【0353】
一実施形態では、糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製する。
【0354】
還元的アミノ化は、２つのステップ、すなわち、（１）精製糖の酸化（活性化）のステップ、（２）活性糖および担体タンパク質（たとえば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴ、またはＰＤ）を還元して、糖コンジュゲートを形成するステップを含む（たとえば、ＷＯ２０１５１１０９４１、ＷＯ２０１５１１０９４０を参照）。
【0355】
上述のように、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングを行うことができる。機械的または化学的加水分解を用い得る。酢酸を使用した化学的加水分解を実施し得る。一実施形態では、精製多糖の大きさは機械的ホモジナイゼーションによって小さくなる。
【0356】
一実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖は、
（ａ）前記精製多糖またはオリゴ糖を酸化剤と反応させるステップと、
（ｂ）クエンチ剤の添加によって酸化反応を任意選択でクエンチするステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）または（ｂ）の活性多糖またはオリゴ糖を担体タンパク質と化合させるステップと、
（ｄ）化合させた活性多糖またはオリゴ糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて糖コンジュゲートを形成するステップと
を含むプロセスによって、担体タンパク質とコンジュゲートさせる。
（ａ）前記精製多糖またはオリゴ糖を酸化剤と反応させるステップと、
（ｂ）クエンチ剤の添加によって酸化反応を任意選択でクエンチするステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）または（ｂ）の活性多糖またはオリゴ糖を担体タンパク質と化合させるステップと、
（ｄ）化合させた活性多糖またはオリゴ糖および担体タンパク質を還元剤と反応させて糖コンジュゲートを形成するステップと
を含むプロセスによって、担体タンパク質とコンジュゲートさせる。
【0357】
酸化ステップ（ａ）の後、糖は活性化されたといわれ、「活性多糖またはオリゴ糖」と呼ぶ。
【0358】
酸化ステップ（ａ）はペリオデートとの反応を含み得る。本発明の目的のために、用語「ペリオデート」はペリオデートおよび過ヨウ素酸をどちらも含み、この用語はまた、メタペリオデート（ＩＯ４
－）およびオルトペリオデート（ＩＯ６
５－）をどちらも、ならびにペリオデートの様々な塩（たとえば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
【0359】
好ましい実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。一実施形態では、酸化に使用するペリオデートはメタペリオデートである。一実施形態では、酸化に使用するペリオデートはメタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
【0360】
酸化ステップ（ａ）は、ピペリジン－Ｎ－オキシまたはピロリジン－Ｎ－オキシ化合物などの安定したニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物と、前記多糖またはオリゴ糖の一級ヒドロキシルを選択的に酸化するための酸化剤の存在下において反応させて、アルデヒド基を含有する活性糖を生じることを含み得る（ＷＯ２０１４０９７０９９を参照）。一態様では、前記安定したニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、ＷＯ２０１４０９７０９９の３頁１４行目～４頁７行目に開示されている任意のものであり、酸化剤は、ＷＯ２０１４０９７０９９の４頁８～１５行目に開示されている任意のものである。一態様では、前記安定したニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）であり、酸化剤はＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。
【0361】
一実施形態では、クエンチ剤は、ＷＯ２０１５１１０９４１中に開示されている通りである（３０頁３～２６行目を参照）。
【0362】
一実施形態では、還元反応（ｄ）は水性溶媒中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｄ）は非プロトン溶媒中で実施する。一実施形態では、還元反応（ｄ）はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実施する。
【0363】
一実施形態では、還元剤は、ブロンステッドまたはルイス酸の存在下におけるシアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３、または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤はシアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
【0364】
還元反応の終わりに、未反応のアルデヒド基がコンジュゲート中に残っている場合があり、これらは適切なキャッピング剤を使用してキャッピングし得る。一実施形態では、このキャッピング剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
【0365】
担体タンパク質とのコンジュゲーションに次いで、当業者に知られている様々な技法によって糖コンジュゲートを精製することができる（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して濃縮されている）。これらの技法としては、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、タンジェンシャルフロー濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、およびデプス濾過が挙げられる。
【0366】
一実施形態では、糖コンジュゲートは、シアニル化化学を使用して調製する。
【0367】
一実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖を、臭化シアンを用いて活性化させる。活性化は、多糖またはオリゴ糖のヒドロキシル基のシアニル化に対応する。その後、活性多糖またはオリゴ糖を、直接またはスペーサー（リンカー）基を介して、担体タンパク質上のアミノ基とカップリングさせる。
【0368】
一実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖を、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）を用いて活性化させて、シアン酸エステルを形成する。その後、活性多糖またはオリゴ糖を、直接またはスペーサー（リンカー）基を介して、担体タンパク質上のアミノ基とカップリングさせる。
【0369】
一実施形態では、スペーサーはシスタミンまたはシステアミンであり得、チオール化された多糖またはオリゴ糖が得られ、これを、マレイミドで活性化させた担体タンパク質（たとえばＮ－［γ－マレイミドブチルオキシ（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｙｒｌｏｘｙ）］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を使用）またはハロアセチル化した担体タンパク質（たとえば、ヨードアセトイミド、Ｎ－スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ、ＳＩＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳｌＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（スルホ－ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、もしくはスクシンイミジル３－［ブロモアセトアミド］プロプリオン酸（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）（ＳＢＡＰ）を使用）との反応後に得られるチオエーテル連結を介して、担体とカップリングさせることができる。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製してもよい）をヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングさせ、アミノ誘導体化された糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介したカルボジイミド（たとえばＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して、担体タンパク質（たとえばＣＲＭ１９７）とコンジュゲートさせる。そのようなコンジュゲートは、たとえば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８、およびＷＯ９６／１２９０９４中に記載されている。
【0370】
一実施形態では、糖コンジュゲートは、ＷＯ２０１４０２７３０２に開示されている糖コンジュゲートを作製する方法によって調製する。生じる糖コンジュゲートは、二価のヘテロ二官能性スペーサー（２－（（２－オキソエチル）チオ）エチル）カルバメート（ｅＴＥＣ）を通じて担体タンパク質と共有的にコンジュゲートされた糖を含む。あるいは、糖コンジュゲートは、ＷＯ２０１５１２１７８３に開示されている糖コンジュゲートを作製する方法によって調製する。
【0371】
他の適切なコンジュゲーション技法は、カルボジイミド（たとえば、ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）、ＥＤＣ＋スルホＮＨＳ、ＣＭＣ（１－シクロヘキシル－３－（２－モルホリノエチル）カルボジイミド）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド）、またはＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド））を使用する。
【0372】
一実施形態では、多糖またはオリゴ糖は、リンカー、たとえば二官能性リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。リンカーは、たとえば、１つの反応性アミノ基および１つの反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基、または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、たとえば、４～２０、４～１２、５～１０個の炭素原子を有する。１つの可能なリンカーはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）である。他のリンカーとしては、Ｂ－プロピオンアミド（ＷＯ００／１０５９９）、ニトロフェニル－エチルアミン、ハロゲン化ハロアルキル）、グリコシド結合（ＵＳ４６７３５７４、ＵＳ４８０８７００）、ヘキサンジアミン、および６－アミノカプロン酸（ＵＳ４４５９２８６）が挙げられる。
【0373】
担体タンパク質
糖コンジュゲートの１つの構成要素は、精製多糖またはオリゴ糖がコンジュゲートしている担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書中で互換性があるように使用され得る。担体タンパク質は、標準のコンジュゲーション手順に従順であるべきである。
糖コンジュゲートの１つの構成要素は、精製多糖またはオリゴ糖がコンジュゲートしている担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書中で互換性があるように使用され得る。担体タンパク質は、標準のコンジュゲーション手順に従順であるべきである。
【0374】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性であるが抗原的に同一である変異体）、他のＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、またはＣＲＭ１０７など、ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）によって記載されている他の突然変異、Ｇｌｕ１４８からＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異、ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号に開示されている他の突然変異、少なくとも１つまたは複数の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０、および／またはＬｙｓ５３４の突然変異、ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号に開示されている他の突然変異、または米国特許第５，８４３，７１１号に開示されている断片、何らかの様式で解毒したｐｌｙを含む肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３）、たとえばｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ－ホルモル、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥを含むＰｈｔＸ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、またはＰｈｔＥの配列はＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）、ならびにＰｈｔタンパク質の融合物、たとえば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ Ａ－Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、通常は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０Ｂを参照）、または免疫学的に機能的なその均等物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子、またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７）などの様々な病原体由来抗原（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４）からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（具体的にはその無毒性の突然変異体（グルタミン酸５５３での置換を保有する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１））からなる群から選択される。一実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性であるが抗原的に同一である変異体）、他のＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、またはＣＲＭ１０７など、ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）によって記載されている他の突然変異、Ｇｌｕ１４８からＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異、ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号に開示されている他の突然変異、少なくとも１つまたは複数の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０、および／またはＬｙｓ５３４の突然変異、ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号に開示されている他の突然変異、または米国特許第５，８４３，７１１号に開示されている断片、何らかの様式で解毒したｐｌｙを含む肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３）、たとえばｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ－ホルモル、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥを含むＰｈｔＸ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、またはＰｈｔＥの配列はＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）、ならびにＰｈｔタンパク質の融合物、たとえば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ Ａ－Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、通常は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０Ｂを参照）、または免疫学的に機能的なその均等物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子、またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７）などの様々な病原体由来抗原（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４）からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、または組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（具体的にはその無毒性の突然変異体（グルタミン酸５５３での置換を保有する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１））である。卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。他の適切な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（たとえばＷＯ２００４／０８３２５１に記載）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａなどの、不活性化させた細菌毒素が挙げられる。
【0375】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特にＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載されているもの）、解毒したニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ、ならびにＰｓａＡからなる群から独立して選択される。別の好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特にＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載されているもの）、解毒したニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡもしくはＢ、またはＰｓａＡである。
【0376】
一実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質はＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質はＴＴ（破傷風トキソイド）である。
【0377】
別の実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質はＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０Ｂを参照）である。
【0378】
好ましい実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートしている。ＣＲＭ１９７タンパク質はジフテリア毒素の無毒性形態であるが、ジフテリア毒素とは免疫学的に識別不能である。ＣＲＭ１９７は、毒素産生コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異誘発によって作製された毒素非産生ファージβ１９７ｔｏｘ－によって感染させたジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１）。ＣＲＭ１９７タンパク質はジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一塩基変化（グアニンからアデニン）によって、それから異なる。この単一塩基変化は、成熟タンパク質においてアミノ酸置換（グルタミン酸でグリシンを置換）を引き起こし、ジフテリア毒素の毒性特性を排除する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖のための安全かつ有効なＴ細胞依存性担体である。ＣＲＭ１９７およびその生成に関するさらなる詳細は、たとえば米国特許第５，６１４，３８２号中に見つけることができる。
【0379】
一実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートしている（ＣＮ１０３４９５１６１を参照）。一実施形態では、精製多糖またはオリゴ糖は、遺伝子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られたＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートしている（ＣＮ１０３４９５１６１を参照）。
【0380】
好ましくは、糖コンジュゲート中の担体タンパク質対多糖またはオリゴ糖の比は、１：５～５：１、たとえば１：０．５～４：１、１：１～３．５：１、１．２：１～３：１、１．５：１～２．５：１、たとえば１：２～２．５：１または１：１～２：１（ｗ／ｗ）である。
【0381】
担体タンパク質とのコンジュゲーションに次いで、当業者に知られている様々な技法によって糖コンジュゲートを精製することができる（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して濃縮されている）。これらの技法としては、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、タンジェンシャルフロー濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、およびデプス濾過が挙げられる。
【0382】
組成物は少量の遊離担体を含み得る。所定の担体タンパク質が本発明の組成物中に遊離およびコンジュゲート形態の両方で存在する場合、コンジュゲートしていない形態は、好ましくは、組成物全体中の担体タンパク質の総量の５％を超えず、より好ましくは２重量％未満で存在する。
【0383】
２．２ 免疫原性組成物
一実施形態では、本発明は、本明細書中に開示した精製多糖および／または糖コンジュゲートのうちの任意のものを含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、本明細書中に開示した精製多糖および／または糖コンジュゲートのうちの任意のものを含む免疫原性組成物に関する。
【0384】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に開示した糖コンジュゲートのうちの任意のものを含む免疫原性組成物に関する。
【0385】
一実施形態では、本発明は、１～２５個の異なる糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【0386】
一実施形態では、本発明は、２６～４５個の異なる糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【0387】
一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの１～２５個の糖コンジュゲート（１～２５個の肺炎球菌コンジュゲート）を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の異なる血清型からの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１６または２０個の異なる血清型からの糖コンジュゲートを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１４、１５、１６、１７、１８、または１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0388】
一実施形態では、前記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの糖コンジュゲートを含む。
【0389】
一実施形態では、前記免疫原性組成物は、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの糖コンジュゲートを含む。
【0390】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａからの糖コンジュゲートを含む。
【0391】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆからの糖コンジュゲートを含む。
【0392】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂからの糖コンジュゲートを含む。
【0393】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２からの糖コンジュゲートを含む。
【0394】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎからの糖コンジュゲートを含む。
【0395】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆからの糖コンジュゲートを含む。
【0396】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものは、追加で肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０からの糖コンジュゲートを含む。
【0397】
好ましい実施形態では、糖は、それぞれ個々にタンパク質担体の異なる分子とコンジュゲートしている（タンパク質担体のそれぞれの分子は、１種類の糖のみがそれにコンジュゲートしている）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と個々にコンジュゲートしていると言われる。好ましくは、上記免疫原性組成物のすべての糖コンジュゲートが担体タンパク質と個々にコンジュゲートしている。
【0398】
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８からの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａからの糖コンジュゲートをＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせる。
【0399】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの糖コンジュゲートをすべてＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートさせる。
【0400】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆからの糖コンジュゲートをＰＤと個々にコンジュゲートさせる。
【0401】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃからの糖コンジュゲートをＴＴとコンジュゲートさせる。
【0402】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆからの糖コンジュゲートをＤＴとコンジュゲートさせる。
【0403】
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆからの糖コンジュゲートをＰＤと個々にコンジュゲートさせ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃからの糖コンジュゲートをＴＴとコンジュゲートさせ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆからの糖コンジュゲートをＤＴとコンジュゲートさせる。
【0404】
一実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の８～２０個の異なる血清型を含む。
【0405】
一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、少なくとも１、２、または３つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、１つのアジュバントをさらに含み得る。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物をいう。抗原は、主に送達系として作用し得る、主に免疫調節剤として作用し得る、または両方の強力な特長を有する。適切なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物における使用に適切なものが挙げられる。
【0406】
ヒトにおいて使用することができる既知の適切な送達系型のアジュバントの例としては、それだけには限定されないが、ミョウバン（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、０．５％ｗ／ｖのトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５））などの水中油乳濁液、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅなどの油中水乳濁液、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子またはナノ粒子が挙げられる。
【0407】
一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、アルミニウム塩（ミョウバン）をアジュバントとして含む（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）。好ましい実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをアジュバントとして含む。
【0408】
免疫原性組成物は、液体形態（すなわち溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で配合し得る。液体配合物は、有利にはこの包装された形態から直接投与してよく、したがって、そうでなければ本発明の凍結乾燥組成物では必要である、水性媒体中での復元を必要としない注射のために理想的である。
【0409】
本開示の免疫原性組成物の配合は、当分野で認識されている方法を使用して達成することができる。たとえば、個々の多糖および／またはコンジュゲートを、生理的に許容できるビヒクルを用いて配合して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、それだけには限定されないが、水、緩衝生理食塩水、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびデキストロース溶液が挙げられる。
【0410】
本開示は、本明細書中に開示した多糖または糖コンジュゲートの組合せのうちの任意のものと、薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤とを含む免疫原性組成物を提供する。
【0411】
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は液体形態、好ましくは水性液体形態である。
【0412】
本開示の免疫原性組成物は、緩衝液、塩、二価の陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結保護剤、およびフリーラジカル捕捉剤もしくはキレート化剤などの抗酸化剤のうちの１つもしくは複数、またはその任意の複数の組合せを含み得る。
【0413】
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は緩衝液を含む。一実施形態では、前記緩衝液は約３．５～約７．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝液は、ホスフェート、スクシネート、ヒスチジン、またはシトレートである。ある特定の実施形態では、緩衝液は１ｍＭ～１０ｍＭの最終濃度のスクシネートである。具体的な一実施形態では、スクシネート緩衝液の最終濃度は約５ｍＭである。
【0414】
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、またはその組合せである。具体的な一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。具体的な一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は塩化ナトリウムを１５０ｍＭで含む。
【0415】
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は界面活性剤を含む。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、ダイズレシチン、およびポロキサマーからなる群から選択される。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００、オクトキシノール（ｏｘｔｏｘｙｎｏｌ）４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、ダイズレシチン、またはポロキサマーである。具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８０重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。
【0416】
具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート２０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート２０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート２０重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。
【0417】
具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート４０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート４０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート４０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート４０重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、１％のポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。
【0418】
具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート６０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート６０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート６０重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート６０重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、１％のポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。
【0419】
具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート６５である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート６５重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート６５重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート６５重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート６５（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、１％のポリソルベート６５（ｗ／ｗ）である。
【0420】
具体的な一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８５重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８５重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８５重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート８５（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、１％のポリソルベート８５（ｗ／ｗ）である。
【0421】
ある特定の実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、５．５～７．５のｐＨ、より好ましくは５．６～７．０のｐＨ、さらにより好ましくは５．８～６．０のｐＨを有する。
【0422】
一実施形態では、本開示は、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものを満たした容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジ、および使い捨てのペンからなる群から選択される。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジ、または使い捨てのペンである。ある特定の実施形態では、容器をシリコン処理する。
【0423】
一実施形態では、本開示の容器は、ガラス、金属（たとえば、スチール、ステンレス鋼、アルミニウムなど）、および／またはポリマー（たとえば、熱可塑性プラスチック、エラストマー、熱可塑性エラストマー）から作製される。一実施形態では、本開示の容器はガラスから作製される。
【0424】
一実施形態では、本開示は、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものを満たしたシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジはシリコン処理されているおよび／またはガラスから作製される。
【0425】
注射用の本発明の免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬ、より好ましくは０．２ｍＬ～１ｍＬの体積、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの体積を有する。
【0426】
２．３ 抗原としての使用
本発明の方法によって精製した多糖または本明細書中に開示したコンジュゲートは、抗原として使用し得る。たとえば、これらはワクチンの一部であり得る。
本発明の方法によって精製した多糖または本明細書中に開示したコンジュゲートは、抗原として使用し得る。たとえば、これらはワクチンの一部であり得る。
【0427】
したがって、一実施形態では、本発明の方法によって精製した多糖または前記多糖を使用して得た糖コンジュゲートは、対象において免疫応答を生じさせることにおいて使用するためのものである。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。
【0428】
一実施形態では、本発明の方法によって精製した多糖、前記多糖を使用して得た糖コンジュゲートまたは本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ワクチンにおいて使用するためのものである。
【0429】
一実施形態では、本発明の方法によって精製した多糖、前記多糖を使用して得た糖コンジュゲートまたは本明細書中に開示した免疫原性組成物は、医薬品として使用するためのものである。
【0430】
本明細書中に記載した免疫原性組成物は、対象において細菌性の感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させるための、治療的または予防的方法において使用し得る。具体的には、本明細書中に記載した免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３の感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させるために使用し得る。
【0431】
したがって、一態様では、本開示は、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物（具体的には、対応する多糖またはその糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物）を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に関連する感染症、疾患、または状態を防止、処置、または軽快させる方法を提供する。
【0432】
一実施形態では、本開示は、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。
【0433】
一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書中に記載した免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３感染症を防止するために使用し得る。したがって、一態様では、本発明は、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３による感染症を防止する方法を提供する。
【0434】
一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。
【0435】
本開示の免疫原性組成物は、免疫原性組成物を全身性または粘膜経路を介して投与することによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３感染症に対して感受性のあるヒトを保護または処置するために使用することができる。一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下経路によって投与する。一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下注射によって投与する。一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、筋肉内または皮下注射によって投与する。
【0436】
一部の事例では、少なければ１回の用量の本開示による免疫原性組成物しか必要ないが、より高度な免疫不全の状態などの一部の状況下では、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る。初期ワクチン接種に次いで、対象は、十分な間隔の１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。
【0437】
一実施形態では、本開示による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは単一用量である。
【0438】
一実施形態では、本開示による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは複数用量のスケジュールである。
【0439】
３ 本発明はまた、以下の付番された段落１～１６９中に定義される以下の実施形態も提供する
【0440】
１．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を、前記多糖を夾雑物質と一緒に含む溶液から精製する方法であって、塩基処理ステップを含む方法。
【0441】
２．夾雑物質が細胞細片である、段落１に記載の方法。
【0442】
３．夾雑物質がタンパク質および核酸である、段落１から２のいずれか一項に記載の方法。
【0443】
４．夾雑物質がタンパク質、Ｃ多糖、および核酸である、段落１から２のいずれか一項に記載の方法。
【0444】
５．溶液が肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３の細菌培養物である、段落１から３のいずれか一項に記載の方法。
【0445】
６．溶液が液体細菌培養肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３である、段落１から５のいずれか一項に記載の方法。
【0446】
７．溶液が遠心分離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌培養物からの上清である、段落１から６のいずれか一項に記載の方法。
【0447】
８．溶液がその元の培養培地中の懸濁液中にある肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細胞である、段落１から７のいずれか一項に記載の方法。
【0448】
９．溶液が湿細胞ペーストである、段落１から７のいずれか一項に記載の方法。
【0449】
１０．溶液が水性媒体中に再懸濁させた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細胞である、段落１から７または９のいずれか一項に記載の方法。
【0450】
１１．溶液を溶解剤で処理する、段落１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【0451】
１２．溶解剤が洗剤である、段落１１に記載の方法。
【0452】
１３．洗剤が、デオキシコール酸ナトリウム（ＤＯＣ）、Ｎ－ラウリルサルコシン（ＮＬＳ）、ケノデオキシコール酸ナトリウム、およびサポニンからなる群から選択される、段落１２に記載の方法。
【0453】
１４．洗剤がＤＯＣである、段落１２に記載の方法。
【0454】
１５．溶解剤が非動物由来の溶解剤である、段落１１に記載の方法。
【0455】
１６．非動物由来の溶解剤が、デカンスルホン酸、ｔｅｒｔ－オクチルフェノキシ５ポリ（オキシエチレン）エタノール、オクチルフェノール酸化エチレン縮合物、Ｎ－ラウリルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）、ラウリルイミノジプロピオネート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケノデオキシコレート、ヒオデオキシコレート、グリコデオキシコレート、タウロデオキシコレート、タウロケノデオキシコレート、およびコレートからなる群から選択される、段落１５に記載の方法。
【0456】
１７．非動物由来の溶解剤がＮＬＳである、段落１５に記載の方法。
【0457】
１８．溶液を、多糖が放出されるように酵素処理する、段落１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【0458】
１９．細菌細胞を、リゾスタフィン、ムタノリシンβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、およびムタノリシンとβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼとの組合せからなる群から選択される酵素によって処理する、段落１８に記載の方法。
【0459】
２０．細菌細胞をＩＩ型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ２）によって処理する、段落１８に記載の方法。
【0460】
２１．細菌細胞を、多糖が放出されるようにオートクレーブする、段落１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【0461】
２２．細菌細胞を、多糖が放出されるように化学処理する、段落１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【0462】
２３．溶液を、８．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0463】
２４．溶液を、１０．０を超えるｐＨを達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0464】
２５．溶液を、ｐＨ８．０～１４．０を達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0465】
２６．溶液を、ｐＨ１０．０～１４．０を達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0466】
２７．溶液を、約１３．０のｐＨを達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0467】
２８．溶液を、約１２．０のｐＨを達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0468】
２９．溶液を、約１３．０のｐＨを達成するために塩基で処理する、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【0469】
３０．塩基が、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される、段落２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
【0470】
３１．塩基がＮａＯＨである、段落２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
【0471】
３２．塩基の添加に次いで、溶液を下流の加工の前にしばらくの間保持する、段落２３から３１のいずれか一項に記載の方法。
【0472】
３３．塩基処理ステップを約４℃～約３０℃の温度で行う、段落２３から３２のいずれか一項に記載の方法。
【0473】
３４．塩基処理後、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする、段落２３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【0474】
３５．塩基処理後、懸濁液を遠心分離によって清澄にする、段落２３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【0475】
３６．前記遠心分離が連続遠心分離である、段落３５に記載の方法。
【0476】
３７．前記遠心分離がバケット遠心分離である、段落３５に記載の方法。
【0477】
３８．懸濁液を約５，０００ｇ～約２５，０００ｇで遠心分離する、段落３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【0478】
３９．懸濁液を約５～約３８０分間の間、遠心分離する、段落３５から３８のいずれか一項に記載の方法。
【0479】
４０．塩基処理後、懸濁液をデカンテーションによって清澄にする、段落２３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【0480】
４１．塩基処理後、懸濁液を沈降（沈殿）によって清澄にする、段落２３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【0481】
４２．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をさらに清澄にする、段落３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【0482】
４３．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を濾過し、それによって、さらに清澄にされた溶液を生成する、段落３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【0483】
４４．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をデプス濾過ステップによって処理する、段落３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【0484】
４５．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターが約０．０１～１００ミクロンの公称保持範囲を有する、段落３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【0485】
４６．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をデプス濾過ステップによって処理し、デプスフィルターが１～２５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する、段落３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
【0486】
４７．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液をデプス濾過ステップによって処理し、供給速度が１～１０００ＬＭＨ（リットル／ｍ２／時間）である、段落３４から４６のいずれか一項に記載の方法。
【0487】
４８．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、段落３４から４７のいずれか一項に記載の方法。
【0488】
４９．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過およびダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、段落３４から４７のいずれか一項に記載の方法。
【0489】
５０．限外濾過の膜の分子量カットオフが約５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である、段落４８から４９のいずれか一項に記載の方法。
【0490】
５１．限外濾過の膜の分子量カットオフが約１０ｋＤａ～５０ｋＤａの範囲内である、段落４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【0491】
５２．限外濾過の膜の分子量カットオフが約３０ｋＤａである、段落４８から５１のいずれか一項に記載の方法。
【0492】
５３．限外濾過ステップの濃縮係数が約１．５～１０である、段落４８から５２のいずれか一項に記載の方法。
【0493】
５４．ダイアフィルトレーションステップの交換溶液が水である、段落４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【0494】
５５．ダイアフィルトレーションステップの交換溶液が生理食塩水である、段落４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【0495】
５６．塩が塩化ナトリウムである、段落５５に記載の方法。
【0496】
５７．交換溶液が、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭの塩化ナトリウムである、段落５５に記載の方法。
【0497】
５８．ダイアフィルトレーション体積の数が５～２０である、段落４８から５７のいずれか一項に記載の方法。
【0498】
５９．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を凝結ステップによってさらに処理する、段落２３から５８のいずれか一項に記載の方法。
【0499】
６０．前記凝結ステップが凝結剤を溶液に加えることを含む、段落５９に記載の方法。
【0500】
６１．前記凝結ステップがｐＨの調節を含む、段落５９から６０のいずれか一項に記載の方法。
【0501】
６２．ｐＨの調節を凝結剤の添加前に実施する、段落６１に記載の方法。
【0502】
６３．ｐＨの調節を凝結剤の添加後に実施する、段落６１に記載の方法。
【0503】
６４．凝結剤の添加および／またはｐＨの調節を、望ましいレベルに調節した温度で行う、段落６０から６３のいずれか一項に記載の方法。
【0504】
６５．凝結剤の添加およびｐＨの調節を、望ましいレベルに調節した温度で行う、段落６０から６３のいずれか一項に記載の方法。
【0505】
６６．前記凝結ステップが、凝結剤を溶液に加えること、ｐＨの調節、および温度の調節を含む、段落５９に記載の方法。
【0506】
６７．凝結剤の添加に次いでｐＨの調節、次いで温度の調節を行う、段落６６に記載の方法。
【0507】
６８．凝結剤の添加に次いで温度の調節、次いでｐＨの調節を行う、段落６６に記載の方法。
【0508】
６９．ｐＨの調節に次いで凝結剤の添加、次いで温度の調節を行う、段落６６に記載の方法。
【0509】
７０．ｐＨの調節に次いで温度の調節、次いで凝結剤の添加を行う、段落６６に記載の方法。
【0510】
７１．温度の調節に次いで凝結剤の添加、次いでｐＨの調節を行う、段落６６に記載の方法。
【0511】
７２．温度の調節に次いでｐＨの調節、次いで凝結剤の添加を行う、段落６６に記載の方法。
【0512】
７３．凝結剤の添加および／またはｐＨの調節に次いで、綿状塊を沈殿させるために溶液をしばらくの間保持する、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0513】
７４．前記凝結剤が多価陽イオンを含む、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0514】
７５．前記凝結剤が多価陽イオンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0515】
７６．前記凝結剤が、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる群から選択される多価陽イオンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0516】
７７．前記凝結剤が、アルミニウム、鉄、カルシウム、およびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも２つの多価陽イオンの混合物である、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0517】
７８．前記凝結剤が、塩化マグネシウム、ミョウバン、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤を含む、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0518】
７９．前記凝結剤が、ミョウバン、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、塩化マグネシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸第一鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化第二鉄）、ポリアクリルアミド、変性ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウム、およびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0519】
８０．前記凝結剤が硫酸アルミニウムである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0520】
８１．前記凝結剤がアルミン酸ナトリウムである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0521】
８２．前記凝結剤がアルミニウムクロロハイドレートである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0522】
８３．前記凝結剤がミョウバンを含む、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0523】
８４．前記凝結剤がミョウバンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0524】
８５．前記凝結剤がカリウムミョウバンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0525】
８６．前記凝結剤がナトリウムミョウバンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0526】
８７．前記凝結剤がアンモニウムミョウバンである、段落６０から７２のいずれか一項に記載の方法。
【0527】
８８．約１０～２００ｍＭの凝結剤濃度を使用する、段落６０から８７のいずれか一項に記載の方法。
【0528】
８９．前記凝結ステップを７．０未満のｐＨで行う、段落５９から８８のいずれか一項に記載の方法。
【0529】
９０．前記凝結ステップをｐＨ７．０～１．０で行う、段落５９から８８のいずれか一項に記載の方法。
【0530】
９１．前記凝結ステップをｐＨ５．５～３．５で行う、段落５９から８８のいずれか一項に記載の方法。
【0531】
９２．前記凝結ステップを酸性ｐＨで行い、前記酸性ｐＨが、溶液を酸で酸性化することによって得られる、段落５９から９１のいずれか一項に記載の方法。
【0532】
９３．前記酸が、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される、段落９２に記載の方法。
【0533】
９４．前記酸が塩酸である、段落９２に記載の方法。
【0534】
９５．前記酸が硫酸である、段落９２に記載の方法。
【0535】
９６．凝結剤の添加および存在する場合は酸性化に次いで、綿状塊を沈殿させるために溶液をしばらくの間保持する、段落５９から９５のいずれか一項に記載の方法。
【0536】
９７．凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節を、約４℃～約３０℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0537】
９８．凝結剤の添加、溶液の沈殿、および／またはｐＨの調節を、約４５℃～約６５℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0538】
９９．凝結剤の添加を約４℃～約３０℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0539】
１００．凝結剤の添加を約４５℃～約６５℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0540】
１０１．凝結剤の添加後の溶液の沈殿を約４℃～約３０℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0541】
１０２．凝結剤の添加後の溶液の沈殿を約４５℃～約６５℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0542】
１０３．ｐＨの調節を約４℃～約３０℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0543】
１０４．ｐＨの調節を約４５℃～約６５℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0544】
１０５．凝結剤の添加、溶液の沈殿、およびｐＨの調節を、約４℃～約３０℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0545】
１０６．凝結剤の添加、溶液の沈殿、およびｐＨの調節を、約４５℃～約６５℃の温度で行う、段落５９から９６のいずれか一項に記載の方法。
【0546】
１０７．凝結後、懸濁液を、デカンテーション、沈降、濾過、または遠心分離によって清澄にする、段落５９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【0547】
１０８．凝結後、懸濁液を遠心分離によって清澄にする、段落５９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【0548】
１０９．前記遠心分離が連続遠心分離である、段落１０８に記載の方法。
【0549】
１１０．前記遠心分離がバケット遠心分離である、段落１０８に記載の方法。
【0550】
１１１．懸濁液を約５，０００ｇ～約２５，０００ｇで遠心分離する、段落１０８から１１０のいずれか一項に記載の方法。
【0551】
１１２．懸濁液を約５～約６００分間の間、遠心分離する、段落１０８から１１１のいずれか一項に記載の方法。
【0552】
１１３．凝結後、懸濁液を濾過によって清澄にする、段落５９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【0553】
１１４．凝結後、懸濁液を沈降によって清澄にする、段落５９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【0554】
１１５．凝結後、懸濁液をデカンテーションによって清澄にする、段落５９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
【0555】
１１６．凝結ステップおよび／または固体／液体分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、５．０を超えるｐＨまで調節する、段落５９から１１５のいずれか一項に記載の方法。
【0556】
１１７．凝結ステップおよび／または固体／液体分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、ｐＨ５．０～９．０まで調節する、段落５９から１１５のいずれか一項に記載の方法。
【0557】
１１８．凝結ステップおよび／または固体／液体分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、ｐＨ６．０～８．０まで調節する、段落５９から１１５のいずれか一項に記載の方法。
【0558】
１１９．凝結ステップおよび／または固体／液体分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、ｐＨ６．５～７．５まで調節する、段落５９から１１５のいずれか一項に記載の方法。
【0559】
１２０．凝結ステップおよび／または固体／液体分離ステップ後、多糖含有溶液のｐＨを、約７．０のｐＨまで調節する、段落５９から１１５のいずれか一項に記載の方法。
【0560】
１２１．前記ｐＨを、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、ＫｚＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、ＨｚＮ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、およびＫＯｔＢｕからなる群から選択される塩基の添加によって上昇させる、段落１１６から１２０のいずれか一項に記載の方法。
【0561】
１２２．前記ｐＨをＫＯＨの添加によって上昇させる、段落１１６から１２０のいずれか一項に記載の方法。
【0562】
１２３．前記ｐＨをＮａＯＨの添加によって上昇させる、段落１１６から１２０のいずれか一項に記載の方法。
【0563】
１２４．多糖を含有する溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄にする、段落５９から１２３のいずれか一項に記載の方法。
【0564】
１２５．溶液を、マトリックス中に固定した活性炭を通して濾過する、段落１２４に記載の方法。
【0565】
１２６．マトリックス中に固定した活性炭がフロースルー炭素カートリッジの形態である、段落１２５に記載の方法。
【0566】
１２７．マトリックス中に固定した活性炭を筺体内に配置して独立したフィルターユニットを形成する、段落１２５または１２６に記載の方法。
【0567】
１２８．前記フィルターユニットがフィルターユニットＣＵＮＯゼータ炭素フィルターである、段落１２７に記載の方法。
【0568】
１２９．活性炭フィルターが約０．０１～１００ミクロンの公称ミクロン定格を有する、段落１２７から１２８のいずれか一項に記載の方法。
【0569】
１３０．活性炭濾過ステップを１～５００ＬＭＨの供給速度で実施する、段落１２４から１２９のいずれか一項に記載の方法。
【0570】
１３１．溶液を活性炭フィルターによって処理し、フィルターが５～１０００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する、段落１２４から１３０のいずれか一項に記載の方法。
【0571】
１３２．前記活性炭濾過ステップを繰り返す、段落１２４から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【0572】
１３３．１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の活性炭濾過ステップを行う、段落１２４から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【0573】
１３４．溶液を、直列にした活性炭フィルターによって処理する、段落１２４から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【0574】
１３５．溶液を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の直列にした活性炭フィルターによって処理する、段落１２４から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【0575】
１３６．活性炭濾過ステップを単一通過モードで行う、段落１２４から１３５のいずれか一項に記載の方法。
【0576】
１３７．活性炭濾過ステップを再循環モードで行う、段落１２４から１３５のいずれか一項に記載の方法。
【0577】
１３８．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過および／またはダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、段落１０７から１３７のいずれか一項に記載の方法。
【0578】
１３９．肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖含有溶液を限外濾過およびダイアフィルトレーションによってさらに清澄にする、段落１０７から１３７のいずれか一項に記載の方法。
【0579】
１４０．限外濾過の膜の分子量カットオフが約５ｋＤａ～１０００ｋＤａの範囲内である、段落１３８から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【0580】
１４１．限外濾過の膜の分子量カットオフが約１０ｋＤａ～５０ｋＤａの範囲内である、段落１３８から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【0581】
１４２．限外濾過の膜の分子量カットオフが約３０ｋＤａである、段落１３８から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【0582】
１４３．限外濾過ステップの濃縮係数が約１．５～１０である、段落１３８から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【0583】
１４４．ダイアフィルトレーションステップの交換溶液が水である、段落１３８から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【0584】
１４５．ダイアフィルトレーションステップの交換溶液が生理食塩水である、段落１３８から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【0585】
１４６．塩が塩化ナトリウムである、段落１４５に記載の方法。
【0586】
１４７．交換溶液が、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｍＭの塩化ナトリウムである、段落１４６に記載の方法。
【0587】
１４８．ダイアフィルトレーションステップの交換溶液が緩衝溶液である、段落１３８から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【0588】
１４９．ダイアフィルトレーション緩衝液が、酢酸塩（アセテート）、クエン酸塩（シトレート）、ギ酸塩（ホルメート）、リンゴ酸塩（マレート）、マレイン酸塩（マレエート）、リン酸塩（ホスフェート）、およびコハク酸塩（スクシネート）からなる群から選択される、段落１４８に記載の方法。
【0589】
１５０．ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨが約６．０～７．５である、段落１４８から１４９のいずれか一項に記載の方法。
【0590】
１５１．ダイアフィルトレーション緩衝液の濃度が約０．０１ｍＭ～１００ｍＭである、段落１４８から１４９のいずれか一項に記載の方法。
【0591】
１５２．交換溶液がキレート化剤を含む、段落１４４から１５１のいずれか一項に記載の方法。
【0592】
１５３．前記キレート化剤がエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である、段落１５２に記載の方法。
【0593】
１５４．キレート化剤を１～５００ｍＭの濃度で用いる、段落１５２から１５３のいずれか一項に記載の方法。
【0594】
１５５．ダイアフィルトレーション緩衝溶液が塩を含む、段落１４８から１５４のいずれか一項に記載の方法。
【0595】
１５６．塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される、段落１５５に記載の方法。
【0596】
１５７．ダイアフィルトレーション体積の数が５～２０である、段落１３８から１５６のいずれか一項に記載の方法。
【0597】
１５８．限外濾過および／またはダイアフィルトレーションステップを約２０℃～約９０℃の温度で行う、段落１３８から１５７のいずれか一項に記載の方法。
【0598】
１５９．精製多糖の溶液を標的分子量にサイジングする、段落１から１５８のいずれか一項に記載の方法。
【0599】
１６０．精製多糖の溶液を機械的サイジングによってサイジングする、段落１から１５９のいずれか一項に記載の方法。
【0600】
１６１．精製多糖の溶液を化学的加水分解によってサイジングする、段落１から１５９のいずれか一項に記載の方法。
【0601】
１６２．精製多糖の溶液を滅菌濾過する、段落１から１６１のいずれか一項に記載の方法。
【0602】
１６３．精製多糖の溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターが約０．０１～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する、段落１から１６１に記載の方法。
【0603】
１６４．精製多糖の溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターが約０．１５～０．２ミクロンの公称保持範囲を有する、段落１から１６１に記載の方法。
【0604】
１６５．精製多糖の溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターが約０．２ミクロンの公称保持範囲を有する、段落１から１６１に記載の方法。
【0605】
１６６．精製された溶液を滅菌濾過ステップによって処理し、フィルターが約２５～１５００Ｌ／ｍ２の濾過容量を有する、段落１から１６５に記載の方法。
【0606】
１６７．精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を液体溶液として調製する、段落１から１６６に記載の方法。
【0607】
１６８．精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖をさらに加工する、段落１から１６６に記載の方法。
【0608】
１６９．精製された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖を乾燥粉末として凍結乾燥する、段落１６８に記載の方法。
【0609】
本明細書中で使用する用語「約」とは、記述した濃度範囲、タイムフレーム、分子量、温度、またはｐＨなどの、統計的に有意義な値の範囲内を意味する。そのような範囲は、所定の値または範囲の一桁以内、典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内または１％以内であり得る。場合によっては、そのような範囲は、所定の値または範囲の測定および／または決定に使用される標準方法に典型的な実験誤差以内であり得る。用語「約」によって包含される許容される変動は、研究下の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解することができるであろう。本出願内で範囲が列挙されている場合はいつでも、範囲内のすべての数も、本開示の実施形態として企図される。
【0610】
すべての事例において、本明細書中における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、それぞれ用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」、および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」と任意選択で置換可能であることが、本発明者らによって意図される。
【0611】
そのそれぞれが本明細書中で互換性があるように使用される「免疫原性量」、「免疫学的に有効な量」、「治療上有効な量」、「予防上有効な量」、または「用量」とは、一般に、当業者に知られている標準アッセイによって測定して、細胞性（Ｔ細胞）または液性（Ｂ細胞もしくは抗体）の応答のいずれか、または両方の免疫応答を誘発するために十分な、抗原または免疫原性組成物の量をいう。
【0612】
本文書の範囲のうちの任意のもの内の任意の整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0613】
本特許明細書中に引用したすべての参考文献または特許出願は、本明細書中に参考として組み込まれている。
【0614】
本発明を添付の実施例中に例示する。以下の実施例は、そうでないと詳述されていない限りは、当業者に周知かつルーチン的である標準技法を使用して実施されている。実施例は例示的であるが、本発明を限定しない。
【実施例】
【0615】
【0616】
１．出発物質
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型３のＮ－ラウロイルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）で不活性化させた発酵ブロスで開始される。培養物をＨｙ－Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光学密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物をＮＬＳで不活性化させた（たとえばＥＰ２１２９６９３を参照）。
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型３のＮ－ラウロイルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）で不活性化させた発酵ブロスで開始される。培養物をＨｙ－Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光学密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物をＮＬＳで不活性化させた（たとえばＥＰ２１２９６９３を参照）。
【0617】
２．塩基処理
ＮＬＳ溶解ブロスを、１０ＮのＮａＯＨ溶液を用いて、０．５Ｍの最終ＮａＯＨ濃度まで処理した。このステップの主な目的は、負電荷の多糖を、タンパク質および核酸などの他の不純物の存在下でより可溶性とすることである。ＮａＯＨで処理したブロスを室温で終夜インキュベートした。
ＮＬＳ溶解ブロスを、１０ＮのＮａＯＨ溶液を用いて、０．５Ｍの最終ＮａＯＨ濃度まで処理した。このステップの主な目的は、負電荷の多糖を、タンパク質および核酸などの他の不純物の存在下でより可溶性とすることである。ＮａＯＨで処理したブロスを室温で終夜インキュベートした。
【0618】
３．遠心分離
上記ステップ２からの塩基処理したブロスを遠心分離に供し、これは不溶性の細胞細片および他の粒子を除去した。遠心分離は１０，０００×ｇで３０～６０分間、２０℃で実施した。
上記ステップ２からの塩基処理したブロスを遠心分離に供し、これは不溶性の細胞細片および他の粒子を除去した。遠心分離は１０，０００×ｇで３０～６０分間、２０℃で実施した。
【0619】
上清を収集した。
【0620】
４．任意選択のデプス濾過
遠心分離が第一の固体／液体分離単位操作であるが、これはすべての粒子を除去せず、デプス濾過単位操作を遠心分離と最初の限外濾過単位操作との間に組み込んだ。
遠心分離が第一の固体／液体分離単位操作であるが、これはすべての粒子を除去せず、デプス濾過単位操作を遠心分離と最初の限外濾過単位操作との間に組み込んだ。
【0621】
５．限外濾過／ダイアフィルトレーション－（ＵＦＤＦ－１）
精製はデプス濾液（上記ステップ４から）で開始される。
精製はデプス濾液（上記ステップ４から）で開始される。
【0622】
清澄にした細胞溶解液を濃縮し、ダイアフィルトレーションする（ＵＦＤＦする）。
【0623】
上記ステップ３または４からのアルカリ性遠心分離液を、３０ｋＤａのＭＷＣＯ膜を使用した限外濾過およびダイアフィルトレーションに供する。ブロスは約８～９倍濃縮され、その後、次の三つ組緩衝系を用いてダイアフィルトレーションする：最初に、０．１ＮのＮａＯＨ中に０．６ＭのＮａＣｌ、ｐＨ１２．５、次いで、多糖を可溶性（非複合体化）状態に保ち、不純物のさらなる除去を可能にするために、０．１ＮのＮａＯＨ中に５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ１２。最後に、バッチを水中にダイアフィルトレーションする。このステップは３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して行う。
【0624】
ダイアフィルトレーション後、フィルター装置から排出することによって濃縮水を回収した。
【0625】
６．酸性化／凝結
緩衝液交換の後、１ＭのＭｇＣｌ２を血清型３多糖含有溶液に、２０ｍＭの最終濃度まで加える。溶液のｐＨを、５ＮのＨ２ＳＯ４で約３．９まで調節する。
緩衝液交換の後、１ＭのＭｇＣｌ２を血清型３多糖含有溶液に、２０ｍＭの最終濃度まで加える。溶液のｐＨを、５ＮのＨ２ＳＯ４で約３．９まで調節する。
【0626】
白色沈殿物が形成された。凝結した溶液を清澄化の前に少なくとも１時間、室温で保持する。
【0627】
７．遠心分離
白色沈殿物を、１０，０００×ｇで３０分間、２０℃で実施した遠心分離によって除去した。上清を収集した。
白色沈殿物を、１０，０００×ｇで３０分間、２０℃で実施した遠心分離によって除去した。上清を収集した。
【0628】
任意選択ではあるが、残った濁り（存在する場合）を除去するために、０．２ミクロンのフィルターを一部の試料において使用した。
【0629】
８．中和
溶液のｐＨを０．５Ｎまたは０．１ＮのＮａＯＨで約７．０のｐＨまでゆっくりと調節し、０．２ミクロンのフィルターで濾過した。
溶液のｐＨを０．５Ｎまたは０．１ＮのＮａＯＨで約７．０のｐＨまでゆっくりと調節し、０．２ミクロンのフィルターで濾過した。
【0630】
９．炭素濾過
この単位操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに有色不純物のレベルを低下させる。ステップ８からの中和した遠心分離液を、１つの直径７インチのＲ３２ＳＰ炭素フィルターを通して、４０ＬＭＨの流速で濾過する。生成物を含有していた濾液を収集した。
この単位操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに有色不純物のレベルを低下させる。ステップ８からの中和した遠心分離液を、１つの直径７インチのＲ３２ＳＰ炭素フィルターを通して、４０ＬＭＨの流速で濾過する。生成物を含有していた濾液を収集した。
【0631】
１０．限外濾過／ダイアフィルトレーション－（ＵＦＤＦ－２）
この単位操作は、生成物を所望の濃度まで濃縮し、続く使用のために、ＭｇＣｌ２および他の塩を含有していた緩衝液を水へと交換する。このステップは３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して行う。濃縮水およびすすぎ液を合わせ、０．２μｍで濾過した。その後、最終の０．２μｍのバルク濾液を貯蔵ボトルに入れた。
この単位操作は、生成物を所望の濃度まで濃縮し、続く使用のために、ＭｇＣｌ２および他の塩を含有していた緩衝液を水へと交換する。このステップは３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して行う。濃縮水およびすすぎ液を合わせ、０．２μｍで濾過した。その後、最終の０．２μｍのバルク濾液を貯蔵ボトルに入れた。
【0632】
（実施例２）
精製された肺炎球菌多糖血清型３の分析
実施例１のプロセスは、既知のプロセスと比較してはるかにより短い精製プロセスをもたらすことが見出された。新しいプロセスは８つの単位操作のみを有する。
精製された肺炎球菌多糖血清型３の分析
実施例１のプロセスは、既知のプロセスと比較してはるかにより短い精製プロセスをもたらすことが見出された。新しいプロセスは８つの単位操作のみを有する。
【0633】
タンパク質／多糖比は約０．３％と低いことが見出された。本発明のプロセスは、従来技術のプロセスと比較して同様の核酸およびＣポリレベルを有する多糖を生じることが見出された。
【0634】
残留不純物を示す分析結果を表１に示す。３つのバッチすべてが、事前に定義された許容基準をすべて満たした。
【0635】
【表1】
【0636】
それぞれの単位操作後のＳＥＣ－ＨＰＬＣピークプロファイルを図２に示す。ＲＩ追跡は多糖ピークを示し、ＵＶ２８０追跡はタンパク質ピークを示す。最終（ＵＦ２）試料は、残った残留タンパク質が非常に低く、これは効率的なタンパク質除去を示す。また、ＲＩプロファイルは単一の対称ポリピークを示し、これは純度の指標である（図２を参照）。
【0637】
本明細書中で言及したすべての刊行物および特許出願は、本発明が関する技術分野の当業者のレベルの指標である。すべての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が参考として組み込まれていると具体的かつ個々に示されていた場合と同じ程度まで、本明細書中に参考として組み込まれている。
【0638】
理解を明確にする目的で前述の発明を例示および実施例によってある程度詳細に記述したが、ある特定の変更および改変を、添付の特許請求の範囲の範囲内で実施し得る。
【図1】
【図2】
【国際調査報告】