2023-546514 タンパク質凝集性疾患におけるタンパク質毒性を処置および／または予防するための硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-02

(54)【発明の名称】タンパク質凝集性疾患におけるタンパク質毒性を処置および／または予防するための硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモン

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/568 20060101AFI20231026BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20231026BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20231026BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 31/404 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 31/5685 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 31/18 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 31/37 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 31/566 20060101ALI20231026BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20231026BHJP

   C12N 9/99 20060101ALN20231026BHJP

【ＦＩ】

A61K31/568

A61P25/28

A61P25/16

A61P43/00 121

A61K31/404

A61K31/5685

A61K31/18

A61K31/37

A61K31/566

A23L33/10

C12N9/99 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023525495

(86)(22)【出願日】2021-10-26

(85)【翻訳文提出日】2023-06-16

(86)【国際出願番号】 EP2021079710

(87)【国際公開番号】W WO2022090247

(87)【国際公開日】2022-05-05

(31)【優先権主張番号】20382931.2

(32)【優先日】2020-10-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520497612

【氏名又は名称】ウニベルシダ パブロ デ オラビデ

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ムニョス マヌエル ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】ペレス－ヒメネス メルセデス エム．

(72)【発明者】

【氏名】カリオン アンヘル エム．

【テーマコード（参考）】

4B018

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4B018MD07

4B018MD08

4B018MD18

4B018ME14

4B018MF10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA19

4C086DA09

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA16

4C086ZC20

4C086ZC41

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206JA11

4C206MA01

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA72

4C206NA14

4C206ZA02

4C206ZA16

4C206ZC20

4C206ZC41

4C206ZC75

(57)【要約】

本発明は医学の分野に包含され、タンパク質凝集性疾患の処置および／または予防に使用するための組成物を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

テストステロンサルフェート（ＴＳ）、またはその任意の塩もしくはエステル、またはエピテストステロンサルフェート（ＥＳ）、またはその任意の塩もしくはエステルからなる群から選択される硫酸化Ｃ１９アンドロゲンを含む組成物であって、前記硫酸化Ｃ１９アンドロゲンが、タンパク質凝集性疾患におけるタンパク質毒性の処置および／または予防に使用するためのものであり、前記タンパク質凝集性疾患がアルツハイマー病またはパーキンソン病である、組成物。

【請求項2】

テストステロンサルフェート（ＴＳ）、またはその任意の塩もしくはエステル、またはエピテストステロンサルフェート（ＥＳ）、またはその任意の塩もしくはエステルからなる群から選択される硫酸化Ｃ１９アンドロゲンを含む組成物であって、前記硫酸化Ｃ１９アンドロゲンが、タンパク質凝集体の形成を阻害することによってタンパク質凝集性疾患の進行を遅らせる、および／またはタンパク質凝集体の形成を阻害することによってタンパク質凝集性疾患の発症を遅延させるのに使用するためのものであり、前記タンパク質凝集性疾患がアルツハイマー病またはパーキンソン病である、組成物。

【請求項3】

前記組成物が、２－（ヒドロキシフェニル）インドールサルフェート、５－アンドロステン－３β、ＤＵ－１４（ＣＡＳ番号１８６３０３－５５－９）、ＣＯＵＭＡＴＥ（４－メチルクマリン－７－Ｏ－スルファメート）、ＥＭＡＴＥ（ＣＡＳ番号：１４８６７２－０９－７）からなるリストから選択されるスルファターゼ阻害剤、または式（Ｉ）：

【化1】

（式中、
Ｒ^１～Ｒ^６は、独立して、水素、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素またはアスタチン）、ヒドロキシル、スルファメート（ＯＳＯ２ＮＨ２）、アルキルおよびそれらの塩から選択され、
Ｒ^１～Ｒ^６のうちの少なくとも１つはスルファメート基であり、
Ｒ^１～Ｒ^６のうちの２つ以上が互いに連結して付加環状構造を形成する）のスルファターゼ阻害剤と同時にまたは続けて使用される、請求項１～２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。

【請求項4】

前記スルファターゼ阻害剤が、式（ＩＩ）

【化2】

の化合物ＳＴＸ６４、またはその任意の塩である、請求項３に記載の使用のための組成物。

【請求項5】

前記組成物が、請求項１から４までのいずれか一項に記載のＣ１９アンドロゲンと、必要に応じて薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤とを含む医薬組成物である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。

【請求項6】

前記組成物が、請求項１から４までのいずれか一項に記載のＣ１９アンドロゲンを含む機能性食品組成物である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。

【請求項7】

前記組成物が、請求項１から４までのいずれか一項に記載のＣ１９アンドロゲンを含む栄養補助食品である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。

【請求項8】

前記組成物が経口投与される、請求項１から７までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は医学の分野に包含され、タンパク質凝集性疾患の処置および／または予防に使用するための組成物を提供する。

【背景技術】

【0002】

動物は、さまざまな遺伝的経路を活性化することによって寿命を延ばすことができる。この寿命の延長は、さまざまな組織および環境シグナルの協調を中継する調節されたプロセスである。ホルモンは、組織および細胞コミュニケーションにおいて重要な役割を果たす。その結果、ホルモンは、少なくともモデル生物カエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）において寿命に影響を及ぼすと説明されているインスリンおよびインスリン様成長因子、ＴＧＦβまたはダファクロン酸の中で、寿命を調節する異なる経路に関与している。生殖腺は、ステロイドホルモンを産生して、寿命を含む生物のさまざまな生理学的側面を調節する内分泌組織である。Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）では、生殖細胞系列の除去は、完全には理解されていないメカニズムによって寿命を延ばす。体細胞生殖腺によるダファクロン酸の合成だけでなく、ｄａｆ－１６によってコードされる転写因子、ヒトＦＯＸＯに対するホモログ、ならびにｄａｆ－１２、ｎｈｒ－８０およびｎｈｒ－４９２をコードする核受容体を含む、いくつかの因子が寿命の延長に必要である。

【0003】

ステロイドホルモンの古典的な機能は、その標的遺伝子を転写するホルモン受容体の活性化であると考えられている。ステロイドホルモンは、生殖腺だけでなく、他の組織でも産生される。神経系で産生されるものは、神経ステロイドとして知られている。神経ステロイドは、ホルモン受容体に結合することに加えて、神経伝達物質受容体との直接相互作用または他のメカニズムのいずれかによって神経伝達を調節する。ステロイドホルモンは、スルホトランスフェラーゼ酵素によって硫酸化され得、ホルモン受容体活性化因子としてのその機能を損なうホルモンの化学的特徴に大きな変化を生じさせる。これらの硫酸化ホルモンは、ホルモンスルファターゼの活性によって硫酸部分が除去されると活性化され得るホルモンの不活性なリザーバーであると考えられている。硫酸化ステロイドホルモンはまた、神経伝達を調節する神経ステロイドとして活性であり得る。

【0004】

いくつかの硫酸化ステロイドホルモン、例えばデヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）は、古くから老化に関連している。このホルモンのレベルは、加齢およびサルコペニアまたはアルツハイマー病などの加齢性疾患で低下し、このことが、原因となる可能性があるという推測を生み出した。

【0005】

ここで、ステロイドスルファターゼの阻害は、硫酸化ホルモンの割合の増加をもたらし、それに関連して、寿命の増加およびタンパク質凝集性疾患に関連する症状の改善をもたらすことを示す。この寿命の増加は、主に生殖細胞系列の除去によって引き起こされる寿命について説明されたのと同じ因子に依存する。ステロイドスルファターゼ酵素の特異的阻害剤であるＳＴＸ６４による処置は、変異体で観察される寿命およびタンパク質凝集性疾患における有益な効果を模倣する。興味深いことに、ＳＴＸ６４による処置はまた、アルツハイマー病の哺乳動物モデルにおいて認知症状およびプラーク形成を改善する。最後に、観察された表現型は、硫酸化Ｃ１９アンドロゲンステロイドホルモンでの処置によって再現されるが、非硫酸化形態または硫酸化Ｃ２１プレグネノロンホルモンでの処置では再現されず、これは、ｓｕｌ－２阻害の原因となる有益な効果が、非硫酸化形態の減少ではなく、硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンの増加に起因することを示している。したがって、本発明は、ＳＴＸ６４または特定の硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンが加齢および／または加齢性疾患の可能な処置であり、より具体的には、特定の硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンが寿命を延ばし、加齢に伴うタンパク質毒性から保護することを実証する。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1】ｓｕｌ－２の活性の低下が、寿命を増加させ、硫酸化ステロイドホルモンのレベルに影響を及ぼすことを示す図である。Ａ）ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）点突然変異対立遺伝子は、野生型よりも長く生存する。Ｂ）ヌル対立遺伝子ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）も寿命を増加させる。Ｃ）哺乳動物スルファターゼおよび３つのＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）スルファターゼの系統樹。ＳＵＬ－２は、とりわけステロイドスルファターゼ（Ｃ型）と青色でクラスターを形成することに留意されたい。他のＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）スルファターゼとの系統関係を灰色で示す。Ｄ）ＳＴＸ６４（１μｇ／ｍｌ）によるステロイドホルモンスルファターゼの阻害は、野生型動物の寿命を増加させるが、ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）バックグラウンドでは増加させない。ワーム（Ｗｏｒｍｓ）をＵＶ殺菌Ｅ．ｃｏｌｉ（大腸菌）で培養した。Ｅ）ｓｕｌ－２の欠失は、硫酸化段階におけるステロイドホルモンの割合の増加を生じさせる。３回の独立したアッセイからのデータを示す。片側マン・ホイットニーｔ検定。

【図2】遺伝子相互作用およびｓｕｌ－２発現の細胞位置を示す図である。遺伝子分析は、生殖細胞系列を持たない動物について説明された遺伝子相互作用のほとんどをｓｕｌ－２が模倣するが、生殖力に影響を及ぼさないことを示す。ａ．ｓｕｌ－２は、ｄａｆ－２（ｅ１３７０）バックグラウンドで寿命を高める。ｂ．ｄａｆ－１６転写因子は、ｓｕｌ－２の寿命に必要である。ｃ，ｄ，ｅ．生殖細胞系列喪失寿命の必須因子ｋｒｉ－１（ｏｋ１２５１）、ｔｃｅｒ－１（ｔｍ１４５２）、および部分的にｎｈｒ－８０（ｔｍ１０１１）が、ｓｕｌ－２寿命に必要である。ｆ．ｎｈｒ－４９（ｎｒ２０４１）は、ｓｕｌ－２の寿命増加を抑制しない。ｇ，ｈ．ｓｕｌ－２欠失は、生殖細胞系列の少ない変異体ｇｌｐ－１（ｅ２１４１）およびｍｅｓ－１（ｂｎ７）において寿命の有意な増加を有しない。ｉ．ｓｕｌ－２変異体の一腹子数は、野生型と有意に異ならない。平均±ＳＥＭ；一元配置ＡＮＯＶＡ検定；ｎｓ。ｊ．ｓｕｌ－２変異体の生殖期間は影響を受けない（２５℃）。ｋ．食餌制限条件（ＤＲ）は、ｓｕｌ－２欠失バックグラウンドにおいて向上した寿命を示す。ｌ．ｄａｆ－１２転写因子は、ｓｕｌ－２の寿命に必要である。ｍ．Ｒｉｅｓｋｅ様オキシゲナーゼｄａｆ－３６は、ステロイドホルモンスルファターゼＳＴＸ６４（１μｇ／ｍｌ）の阻害による寿命の延長に必要である。ｎ．ｓｕｌ－２は、感覚神経細胞、主に頭部のＡＤＦおよびＡＳＥ、ならびに尾部のＰＨＡおよびＰＨＢで転写発現される。スケールバー１０μｍ。

【図3】ステロイドホルモンスルファターゼ活性の低下が、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）およびマウスモデルにおけるタンパク質毒性モデルの症候を改善する図を示す。ａ．細胞においてα－シヌクレインを発現するＮＬ５９０１株は、ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）バックグラウンドにおいてより遅い速度で年齢とともに運動性を低下させる（１日当たりｎ≧１７）。統計的検定対α－シヌクレイン対照。ｂ．またはＳＴＸ６４（１μｇ／ｍｌ）での処置下（ｎ≧９／日）。追加の生物学的複製アッセイを図１２ａおよびｃに示す。ｃ，ｄ．ヒトα－シヌクレインを発現するＵＡ４４株におけるドーパミン作動性（ＤＡ）神経細胞の神経変性は、ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）バックグラウンドで低下する。９日目の各症状の代表的な画像および生存神経細胞の定量化。スケール５０μｍ。２回の生物学的複製からのデータを表示する（ｎ＝３７）。ｅ．ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）バックグラウンド（ｎ≧６）、８日齢のワームでＱ３５凝集体が減少している。ｆ．またはＱ４０バックグラウンド（ｎ≧１２）、５日齢のワームでＳＴＸ６４（１μｇ／ｍｌ）による処置。それぞれ株ＡＭ１４０およびＡＭ１４１。ｇ．筋肉におけるヒトβ－アミロイドの発現は、ＧＭＣ１０１株のＬ４若齢成体段階で熱依存性麻痺を引き起こし、麻痺表現型は、ｓｕｌ－２欠失変異体で改善される。データは４回の独立した生物学的複製から得られ、ｎ＝１２５である。ｈ．またはＳＴＸ６４（１μｇ／ｍｌ）処置による。データは６回の独立した生物学的複製から得られ、ｎ≧２１５である。ｉ，ｊ：海馬にβ－アミロイドオリゴマーを注射した野生型マウスにおける受動的回避試験におけるＳＴＸ６４の海馬内投与および経口投与の効果。各群のマウスの数は＞５であった。ｋ．賦形剤またはＳＴＸ６４摂取（飲料水中で０．００５ｍｇ／ｍｌ）の３～４週間後に１５月齢を超えるＡＰＰ－ＰＳ１マウスの前頭皮質および海馬において評価した代表的なβアミロイド免疫反応性画像。ｌ－ｎ．ＳＴＸ６４またはＶｅｈｉｃｌｅによる３～４週間の経口投与後の＞１５月齢のＡＰＰ－ＰＳ１マウスの前頭皮質および海馬におけるβ－アミロイド領域の割合（ｃ）、沈着密度（ｄ）および平均プラークサイズ（ｅ）の定量化。１群当たりｎ＝４のマウス。ｏ．ＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるβ－アミロイド沈着の時間経過、ならびに前頭皮質（上のパネル）および海馬（下のパネル）におけるβ－アミロイド領域に及ぼす３～４週間のＳＴＸ６４経口処置の影響。使用した顕微鏡写真の数は、使用したすべてのマウスにおいて３枚を超えた。ｐ．受動的回避試験における１５月齢を超えるＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるＳＴＸ６４の経口投与の効果、ならびに１５月齢を超えるＡＰＰ－ＰＳ１マウスと野生型マウスとの比較。各群のマウスの数は＞５であった。組織学的分析において、＊は、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与ＡＰＰ－ＰＳ１マウスとＳＴＸ６４投与ＡＰＰ－ＰＳ１マウスとの間の有意差を表す。行動試験において、＊は、同じ実験群における短期記憶セッションおよび長期記憶セッション（それぞれＳＴＭおよびＬＴＭ）と訓練セッションとの間の有意差を表し、＋は、各実験群とβアミロイド群との間のＳＴＭセッションとＬＴＭセッションとの間の有意差を表す。１個の記号でｐ＜０．０５、２個の記号で＜０．０１、３個の記号でｐ＜０．００１。

【図4】硫酸化Ｃ１９アンドロゲンステロイドホルモンがｓｕｌ－２不活性化を模倣することを示す図である。筋肉細胞においてα－シヌクレインを発現するＮＬ５９０１株は、年齢とともに運動性を低下させる。ＤＨＥＡＳ、ＴＳまたはＥＳによる処置は運動性を改善する（１μｇ／ｍｌ）。３回の生物学的複製からのデータを表示する（ｎ＝３０）。ｂ．ＧＭＣ１０１アルツハイマー病モデルの麻痺はＴＳおよびＥＳで改善される。６回の生物学的複製からのデータを表示する（ｎ≧２００）。標準的なＮＧＭプレートにおけるさらなるアッセイを図１３ａに示す。ｃ，ｄ．パーキンソン病モデル、ＮＬ５９０１株（１μｇ／ｍｌ）において、非硫酸化ステロイドホルモンＤＨＥＡまたはテストステロン（Ｔ）でも、硫酸化Ｃ２１ステロイドホルモン、硫酸プレグネノロン（ＰｒｅｇＳ）でも効果が観察されない。３回の生物学的複製からのデータを表示する（ｎ＝３０）。ｅ．アビラテロン（Ａｂｉ）（１μｇ／ｍｌ）による処置は、ＮＬ５９０１株の運動性表現型に影響を及ぼさないが、ｓｕｌ－２欠失対立遺伝子の有益な効果を抑制する。３回の生物学的複製からのデータを表示する（ｎ≧３０）。ｆ．ＥＳ（１μｇ／ｍｌ）による処置は、野生型バックグラウンドで寿命を増加させるが、ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）はさらに増加させない。ｇ．ＤＨＥＡＳまたはＴＳ（１μｇ／ｍｌ）は寿命に影響を及ぼさない。追加の生物学的複製アッセイを図１３ｃおよびｄに示す。

【図5】ｓｕｌ－２およびｄａｆ－２との遺伝的相互作用の寿命アッセイを示す図である。ｓｕｌ－２変異体は目に見える表現型を示さないが、長寿命であり、ｄａｆ－２変異体の発達表現型を高める。ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）は長寿命であり、ｆｅｒ－１５（ｂ２６）はそれらの寿命に影響を及ぼさない。ｂ．ｓｕｌ－２変異体は、２０℃および２５℃で長寿命である。ｄ．ｓｕｌ－２変異体のポンピング速度は、成体１日目では野生型に類似しているが、ｐｖ１７対立遺伝子は、成体６日目段階では野生型よりも高いポンピング速度を維持する。ワームは、Ｌ４まで１６℃で成長し、その後、この成体期０日目を考慮して２５℃に移行した。Ｌｅｉｃａステレオスコープ下、倍率１００倍で３０秒間ポンピングをカウントした。データは、２回の独立した生物学的アッセイから示された（ｎ＝３０／日）。両側マン・ホイットニーｔ検定、＊＊＊ｐ＝０．０００６。ｅ．ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）のスラッシングは野生型と類似しているが、成体期の１日目に２５℃でｓｕｌ－２（ｐｖ１７）がわずかに低い。成体期の２５℃で６日目に、ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）に対するトラッシングは、野生型およびｓｕｌ－（ｐｖ１７）よりも低く、これらの最後の株の間では差がない。６日目のｓｕｌ－２（ｇｋ１７）の集団は、２つの異なる集団に分布するようであり、一方はほとんどスラッシングを有さず、他方は野生型ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）と同様の値を有する。データは、２回の独立した生物学的アッセイから示された（ｎ＝２０／日）。ｆ．ｓｕｌ－１（ｇｋ １５１）およびｓｕｌ－３（ｔｍ ６１７９）は寿命を増加させない。ｇ．わずかな割合のｄａｆ－２（ｅ９７９）動物が１６℃でダウアー幼虫の発生を停止させ、ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）変異体は幼虫の停止を示さないが、ｄａｆ－２のダウアー停止を高める（ｅ９７９）。ｈ．ほとんどのｄａｆ－２（ｅ１３７０）動物は、２５℃で成長するとダウアー期で停止するが、Ｌ１期ではわずかな割合で停止する。この条件では、ｄａｆ－２（ｅ１３７０）；ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）二重変異体のすべての動物はＬ１期で停止する。同様に、５０％を超える動物が、ｄａｆ－２（ｍ５７７）；ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）バックグラウンドにおいてＬ１期で停止するが、単一変異体はいずれもこの表現型を示さない。ｉ．２５℃におけるｓｕｌ－２（ｐｖ１７）幼虫、ｄａｆ－２のダウアー幼虫停止（ｅ１３７０）またはｄａｆ－２（ｅ１３７０）；ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）およびｄａｆ－２（ｅ１３７０）；ｓｕｌ－２（ｇｋ１８７）のＬ１停止。動物を１６℃でＬ４まで成長させ、次いで２５℃に移行し、子孫を７２時間後にスコア化または画像化した。写真はＬｅｉｃａスコープで撮影した。

【図6】ｐｖ１７対立遺伝子およびＳＵＬ－２のキュレート配列の同定を示す図である。ａ．ｐｖ１７対立遺伝子は、アスタリスクで示したグリシンをアスパラギン酸残基に変化させるミスセンス突然変異である。突然変異は、進化的に制約された領域（ＥＣＲ）の近くに位置し、下部にバーが示され、スルファターゼの触媒コアの近くにも位置する（緑色）。ｂ．本発明者らが野生型ｓｕｌ－２で同定したＤＮＡ配列は、ｗｏｒｍｂａｓｅ（ＳＵＬ－２＿ｗｏｒｍｂａｓｅ）で公開され、ＡＲＳＡのオルソログとして同定されたもの（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｏｒｍｂａｓｅ．ｏｒｇ）とは異なり、この配列は４５９ｂｐを欠いており、これもまた最近Ｌｉら（２０１５）によって記載され、ＲＮＡｓｅｑデータ（ＳＵＬ－２＿ｍｏｄｉｆｉｅｄ）に基づいて新しいエクソン［ｗｏｒｍｂａｓｅ＿１７０８１８ｇｗ３］の一部として予測された。ｙｋ３８７ｈ１０クローン（ＳＵＬ－２＿ｃｕｒａｔｅｄ）のｃＤＮＡ配列決定によって得られたタンパク質配列は、３つのアミノ酸で予測されたもの（太字）とは異なる。この配列で同定された３つのアミノ酸は、他の種（ＣＲＥ：Ｃ．ｒｅｍａｎｅｉ、ＣＢＲ：Ｃ．ｂｒｉｇｓｓａｅ）にも存在することに留意されたい。ｃ．野生型ｓｕｌ－２のエクソンイントロン組成およびｇｋ１８７対立遺伝子において欠失された領域（赤色）。突然変異病変は、ｗｏｒｍｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｏｒｍ－ｂａｓｅ．ｏｒｇ／ｓｐｅｃｉｅｓ／ｃ＿ｅｌｅｇａｎｓ／ｖａｒｉａｔｉｏｎ／ＷＢＶａｒ００１４５５９４＃０２－４５－３）で入手可能である。この対立遺伝子は、スルファターゼの触媒コア（緑色）をコードする配列を欠失し、フレームシフトを生じ、元の配列の４個の第１のアミノ酸のみを保存する。したがって、本発明者らは、ｇｋ１８７をヌル対立遺伝子と見なす。ｐｖ１７対立遺伝子の位置はアスタリスクで示され、新しいＤＮＡ断片は黄色で識別され、新しいエクソンは紫色で示される。

【図7】ＳＴＸ６４表現型模写による処置の寿命およびｓｕｌ－２変異体の遺伝的相互作用を示す図である。非ＵＶ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＳＴＸ６４は野生型の寿命を増加させる。ｂ，ｃ．非ＵＶ大腸菌におけるＳＴＸ６４の用量曲線は、１μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌにおいて有意な効果を示す。ｄ．２５℃での野生型およびｄａｆ－２（ｅ１３７０）の写真。ＤＭＳＯ（ＳＴＸ６４ Ｖｅｈｉｃｌｅ）は野生型の成長に影響せず、ＳＴＸ６４処置でもなく、ｄａｆ－２（ｅ１３７０）は主に２５℃でダウアー期で停止するが、ＳＴＸ６４で処置した場合には主にＬ１で停止し、同様の相互作用がｓｕｌ－２変異体でも観察される。写真はＬｅｉｃａスコープで撮影した。矢印の先：ダウアー、矢印：Ｌ１ｓ。

【図8】ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）対立遺伝子の遺伝的相互作用を示す図である。ｓｕｌ－２点突然変異対立遺伝子ｐｖ１７は、ｇｌｐ－１バックグラウンドを除いて、ｓｕｌ－２欠失としてアッセイされた寿命相互作用において類似の表現型を示す。ａ，ｂ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）は、２つのｄａｆ－２対立遺伝子ｅ１３７０およびｍ５７７の寿命を高める。ｃ，ｄ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）寿命は、ｄａｆ－１６、ｍｕ８６およびｍ２６の２つの対立遺伝子によって抑制される。ｅ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）寿命はｔｃｅｒ－１（ｔｍ１４５２）によって抑制される。ｆ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）寿命は、ｎｈｒ－８０（ｔｍ１０１１）によって部分的に抑制される。ｇ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）寿命は、ｎｈｒ－４９（ｎｒ２０４１）によって抑制されない。ｈ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）は、ｇｌｐ－１バックグラウンドにおいて寿命を高めない。ｉ．ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）寿命は、ｄａｆ－１２（ｍ２０）によって抑制される。

【図9】ｓｕｌ－２変異体は、腸細胞におけるＤＡＦ－１６位置に影響を及ぼすが、生殖または生殖腺形態には影響を及ぼさない。ａ顕微鏡写真は、野生型（左パネル）およびｓｕｌ－２変異体（中央パネルおよび右パネル）におけるＰｄａｆ－１６：：ｇｆｐ：：ｄａｆ－１６位置の代表的な画像を示す。両方のｓｕｌ－２変異体は、生殖細胞系列の少ない動物と同様に、腸細胞におけるＤＡＦ－１６の核位置を増加させる。スケール２０μｍ。ｂ．前部腸細胞における核蛍光の定量化。２回の独立したアッセイからのデータ、条件当たりｎ≧３４の核。一元配置ＡＮＯＶＡ検定。ｃ．ｓｕｌ－２変異体は、２０℃で対照と同様の一腹子数を有する。一元配置ＡＮＯＶＡ検定；ｎｓ。ｄ．ｓｕｌ－２変異体の生殖期間は２０℃で影響を受けない。ｅ．ｓｕｌ－２変異体は、標準的な生殖腺形態を示す。各株の後期Ｌ４の１つの代表的な性腺アームの顕微鏡写真を示す。

【図10】アンフィドおよびファスミド感覚神経細胞でｓｕｌ－２が発現されることを示す図である。染色体外遺伝子組換えワームは、少数の感覚神経細胞においてのみ、ｓｕｌ－２プロモーターおよびその３’ＵＴＲ下でｍＣｈｅｒｒｙを発現する。ｓｕｌ－２の転写レポーターは感覚神経細胞において発現される。蛍光で画像化し、明視野とマージした。ｂ．アンフィドにおけるｓｕｌ－２の染色体外発現の代表的な画像であり、ほとんどのトランスジェニック動物は、２対のアンフィド神経においてｓｕｌ－２を発現し（左のパネル）、一部はそれら以外の他の神経における発現を示し（右のパネル）、ｎ＝６４である。ｃ．ＦｉＴＣ染色によるｓｕｌ－２神経細胞の共局在性。上のパネルは、最も前方の対のアンフィド（おそらくＡＳＫ、ＡＤＦまたはＡＤＬ神経細胞）との頭部における共局在性を示すが、最も後方の対のＡＳＧまたはＡＳＥとは共局在性を示さない。尾部の下のパネルでは、ｓｕｌ－２が発現されている４つの神経細胞は、ＰＨＡおよびＰＨＢファスミド神経細胞においてＦｉＴＣ染色と共局在化する。ｄ．上のパネルであるＡＤＦのｔｐｈ－１神経細胞特異的プロモーターとの共局在化によってｓｕｌ－２が発現される２つの主要なアンフィド対、および下のパネルであるｆｌｐ－６プロモーター、ＡＳＥアンフィドによって発現される後方の神経細胞の同定。スケールバー２０μｍ。腸では、画像化された条件（シアンの矢印の先）での自家蛍光からのシグナルが非特異的である。

【図11】ｓｕｌ－２は性腺組織で発現されず、神経機能に影響を受けない。ｓｕｌ－２転写単位の統合型ｍＣＨＥＲＲＹレポーターは感覚神経でのみ発現され、他の組織では発現されない。蛍光で画像化し、明視野画像とマージする。ｂ．組み込まれたワームの挿入図、ｉ）頭部では、ｓｕｌ－２は少数のアンフィド神経細胞で発現される（白い矢印）。腸では、画像化された条件（シアンの矢印の先）での自家蛍光からのシグナルが非特異的である。ｉｉ）外陰部、胚または増殖性生殖細胞系列ゾーンには特異的なシグナルはない。ｉｉｉ）生殖腺または成熟卵母細胞には特異的なシグナルはない。ｉｖ）尾部では、ファスミドに有意なシグナルは存在しない。スケールバー５０μｍ。ｃ．Ｃｌ^－およびＮａ^＋感知神経細胞（ＡＳＥ）において発現されていることは別として、ｓｕｌ－２変異体は、野生型と同様にＣｌ^－に応答する。３回の独立した反復からのデータ。ｄ．ｓｕｌ－２変異体は、野生型と同様にＮａ＋に応答する。ｔａｘ－４（ｐ ６７８）は陰性対照である。３回の独立した反復からのデータ。すべてのグラフにおいて、平均±ＳＥＭが表示されている。ｅ．ｓｕｌ－２欠失は、感覚神経細胞において影響を受ける長寿命ｄａｆ－１０（ｍ７９）変異体の寿命を高める。

【図12】ステロイドスルファターゼ機能が低下し、α－シヌクレイン凝集が減少すると、神経変性表現型が老化中に改善されることを示す図である。ｓｕｌ－２は、筋性パーキンソン病モデルにおいて成人期に有益な効果を有する。データは、２回の独立した生物学的複製、１日当たりｎ≧３１および条件から表示される。ｂ．およびｓｕｌ－２は、同じ実験条件、１日当たりｎ≧１５および条件（２０℃）で野生型対照に対する身体屈曲数がより少ない。ｃ．筋性パーキンソン病モデルにおけるＳＴＸ６４の保護効果が、老化を通して存在する。データは、２回の独立した生物学的複製物、１日当たりｎ≧１２および条件から表示される。ｄ，ｅ．ｓｕｌ－２は、７日齢の筋肉におけるα－シヌクレイン凝集体の数を有意に減少させる。動物および定量化の例をそれぞれ写真撮影し、ｎ＝１８である。スケールバー２５μｍ。ｆ．筋肉におけるヒトβ－アミロイドの発現は、年齢とともに麻痺を引き起こし（ＣＬ２００６株）、これは、ｓｕｌ－２欠失変異体において改善される。ｇ．またはＳＴＸ６４処置による。Ｓｕｌ－２欠失ｐ＝０．００２７およびＳＴＸ処置ｐ＝０．００７についてのログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定。

【図13】硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモン表現型模写ｓｕｌ－２不活性化による処置を示す図である。ＧＭＣ１０１株、アルツハイマー病モデルの麻痺表現型は、ＴＳおよびＥＳでは減少するが、ＤＨＥＡＳでは減少しない（１μｇ／ｍｌ）。アッセイは、標準的なＮＧＭプレートを用いて行った。データは、３回の独立した生物学的複製から表示され、ｎ＞１３０である。ｂ．ｄａｆ－２（ｅ１３７０）；ｓｕｌ－２と同様に、ｄａｆ－２におけるＬ１停止率（ｅ１３７０）は、ＤＨＥＡＳ、ＴＳまたはＥＳで増加する。ｃ／ｄ．硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンによる寿命曲線の追加の生物学的複製。ＥＳ（１μｇ／ｍｌ）は野生型バックグラウンドで寿命を増加させるが、ｓｕｌ－２（ｐｖ１７）ではそれ以上増加せず、一方、ＤＨＥＡＳおよびＴＳは影響を及ぼさない（１μｇ／ｍｌ）。

【図14】ＳＵＬ－２による寿命調節モデルを示す図である。スルファターゼＳＵＬ－２およびスルホトランスフェラーゼ（おそらくｓｓｕ－１）は、硫酸化ステロイドホルモンのレベルを調節する。高レベルの硫酸化ステロイドホルモンは寿命の増加を引き起こすが、これは生殖細胞系列の減少によって生じる寿命と同じ因子に依存している（ｄａｆ－１６、ｄａｆ－１２、ｋｒｉ－１、ｔｃｅｒ－１）。スルファターゼとスルホトランスフェラーゼとの両方が感覚神経細胞で発現されるという事実は、ホルモンの硫酸化状態と環境シグナルとの協調を示唆している。

【図15】アンドロステロンサルフェート（ＡＳ）での処置が、カエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）におけるアルツハイマーモデルの症状を改善することを示す図である。ＧＭＣ１０１株は、ヒトβ－アミロイドを筋細胞に発現し、加齢に伴い麻痺を生じさせる。１ｍｇ／ｍｌまたは５ｍｇ／ｍｌでの処置は、この効果を減少させる。５回の生物学的複製からのデータ。麻痺を成人期にモニターした。白金ピックで刺激した後、線形動物が動かなかった場合、麻痺と見なした。２００を超える線形動物を分析した。線形動物を同期させ、２０℃でアッセイした。

【発明の詳細な説明】

【0007】

定義
「個体」、「患者」または「対象」という用語は、本出願ではヒトを指定するために互換的に使用され、決して限定することを意味するものではない。「個体」、「患者」または「対象」は、任意の年齢、性別および体調のものであり得る。本出願で使用される「動物」という用語は、ヒトではない任意の多細胞真核従属栄養生物を指す。好ましい実施形態では、動物は、ネコ、イヌ、ブタ、フェレット、ウサギ、スナネズミ、ハムスター、モルモット、ウマ、ワーム、ラット、マウス、ウシ、ヒツジ、ヤギ、アルパカ、ラクダ、ロバ、ラマ、ヤク、キリン、ゾウ、ミーアキャット、キツネザル、ライオン、トラ、カンガルー、コアラ、コウモリ、サル、チンパンジー、ゴリラ、クマ、ジュゴン、マナティー、アザラシおよびサイからなる群から選択される。

【0008】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る担体」または「薬学的に許容され得る希釈剤とは、薬学的投与に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤を意味する。「薬学的に許容され得る賦形剤」という用語は、長期安定化の目的で、少量の強力な有効成分を含有する固体製剤を増量するために、または薬物吸収の促進、粘度の低下、もしくは溶解性の向上などの最終剤形中の有効成分に治療増強を与えるために含まれる、医薬品の有効成分と共に製剤化される任意の物質を指す。賦形剤はまた、予測される保管寿命にわたる変性または凝集の防止などのインビトロ安定性を助けることに加えて、粉末流動性または非粘着特性を促進することなどによって、関連する有効物質の取り扱いを助けるために、製造プロセスにおいて有用であり得る。薬学的に有効な物質に対するそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、本発明の範囲を限定するものではないが、以下が含まれる：追加の緩衝剤；防腐剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ポリエステルなどの生分解性ポリマー；ナトリウム、多価糖アルコールなどの塩形成対イオン；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、およびトレオニンなどのアミノ酸；ラクチトール、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ｍｙｏ－イニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ｍｙｏ－イニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、［α］－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質；ならびにポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｓｓ（２０１２），ＩＳＢＮ－１３：９７８０８５７１１０６２６に記載されているものなどの他の薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤も含まれ得る。

【0009】

本出願で使用される場合、「処置」および「治療」という用語は、健康問題を改善する目的で疾患および／または症候を治癒および／または緩和する目的で使用される衛生的、薬理学的、外科的および／または物理的手段のセットを指す。「処置」および「治療」という用語は、両方とも個体または動物の健康の維持および／または再確立を指向するため、予防的および治癒的方法を含む。症候、疾患および障害の原因にかかわらず、健康問題を緩和および／または治癒するための適切な医薬の投与は、本出願の文脈内の処置または治療の形態として解釈されるべきである。

【0010】

本出願で使用される「予防」という用語は、疾患および／または症候の発症および／または発生を予防するために使用される衛生的、薬理学的、外科的および／または物理的手段のセットを指す。「予防」という用語は、予防的方法を包含する、というのも、これらが動物または個体の健康を維持するために使用されるからである。

【0011】

「スルファターゼ阻害剤」という用語は、硫酸エステルの加水分解を触媒するエステラーゼクラスの酵素の活性を低下させることができる任意の物質を指す。物質は、以下の要素：スルファターゼ酵素をコードする遺伝子、前述の遺伝子の転写因子、前述の遺伝子の発現産物のいずれか、例えば以下のものに限定されないが、メッセンジャーＲＮＡもしくはスルファターゼ酵素のいずれかに結合し、それが結合する分子の発現および活性、ならびに／またはその細胞内もしくは細胞外シグナル伝達を減少もしくは阻害し、それによってスルファターゼ酵素の活性の完全もしくは部分的な阻害をもたらす分子であり得る。阻害剤は、以下のものに限定されないが、スルファターゼ酵素に対するアンタゴニスト（好ましくは化学物質）、サイレンシングＲＮＡまたはスルファターゼ酵素に対する特異的抗体（好ましくは、抗体はモノクローナルである）からなるリストから選択され得る。本発明において、この抗体は、スルファターゼ酵素の作用に対する中和抗体と定義することができる。スルファターゼ酵素の活性の化学的阻害剤の例は、以下のものに限定されないが、代替基質、例えば、５－アンドロステン－３β、１７β－ジオール－３－サルフェートなどのＳＴＳに対する阻害活性を示す２－（ヒドロキシフェニル）インドールサルフェート、合成もしくは天然ステロイド、Ｅ１－ＭＴＰもしくはＥＭＡＴＥなどの競合的阻害剤、ＤＵ－１４（ＣＡＳ番号１８６３０３－５５－９）、ＣＯＵＭＡＴＥ（４－メチルクマリン－７－Ｏ－スルファメート）もしくはＳＴＸ６４（すなわち、国際公開第２０１９２４３４５３号に記載されている式（ＩＩ）の化合物）などの非エストロゲン性阻害剤、またはスルファターゼ酵素に対するＩＣ５０が異なる研究で決定されているＫＷ－２５８１もしくはＳＴＸ２１３などの他の基質である（Ｐｕｒｏｈｉｔ＆Ｆｏｓｔｅｒ，２０１２，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２１２（２）：９９－１１０）。

【0012】

「ステロイドホルモンスルファターゼ」（「ＳＴＳ」）という用語は、ステロイドの代謝に関与する任意のスルファターゼ酵素を指す。特に、酵素は、硫酸化ステロイド前駆体の遊離ステロイドへの変換を触媒する。ヒトにおいて見出された例示的なＳＴＳは配列決定され、特徴付けられ、そのデータは受託番号Ｐ０８８４２でＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースに寄託されている。「ステロイドホルモンスルファターゼ阻害剤」という用語は、ステロイドホルモンスルファターゼの活性を低下させることができる任意の物質を指す。当該物質は、以下の要素：ＳＴＳ酵素をコードする遺伝子、前述の遺伝子の転写因子、前述の遺伝子の発現産物のいずれか、例えば以下のものに限定されないが、メッセンジャーＲＮＡまたはＳＴＳ酵素のいずれかに結合し、それが結合する分子の発現および活性、ならびに／またはその細胞内シグナル伝達を減少もしくは阻害し、それによってＳＴＳ酵素の活性の完全もしくは部分的な阻害をもたらす分子であり得る。阻害剤は、以下のものに限定されないが、ＳＴＳ酵素に対するアンタゴニスト（好ましくは化学物質）、サイレンシングＲＮＡまたはＳＴＳ酵素に対する特異的抗体（好ましくは、抗体はモノクローナルである）からなるリストから選択され得る。本発明において、この抗体は、ＳＴＳ酵素の作用に対する中和抗体と定義することができる。ＳＴＳ酵素の活性の化学的阻害剤の例は、以下のものに限定されないが、代替基質、例えば、５－アンドロステン－３β、１７β－ジオール－３－サルフェートなどのＳＴＳに対する阻害活性を示す２－（ヒドロキシフェニル）インドールサルフェート、合成もしくは天然ステロイド、Ｅ１－ＭＴＰもしくはＥＭＡＴＥなどの競合的阻害剤、ＤＵ－１４、ＣＯＵＭＡＴＥ（４－メチルクマリン－７－Ｏ－スルファメート）もしくはＳＴＸ６４（すなわち、国際公開第２０１９２４３４５３号に記載されている式（ＩＩ）の化合物）などの非エストロゲン性阻害剤、またはスルファターゼ酵素に対するＩＣ５０が異なる研究で決定されているＫＷ－２５８１もしくはＳＴＸ２１３などの他の基質である（Ｐｕｒｏｈｉｔ＆Ｆｏｓｔｅｒ，２０１２，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２１２（２）：９９－１１０）。

【0013】

「タンパク質凝集性疾患」、「プロテオパチー」、「プロテイノパチー」または「タンパク質ミスフォールディング疾患」という用語は、特定のタンパク質が構造的に異常になり、それによって身体の細胞、組織および器官の機能を破壊する任意の疾患を指す。多くの場合、タンパク質は、その通常の構成に折り畳まれない。このミスフォールド状態では、タンパク質は何らかの形で毒性になる可能性があるか、またはその正常な機能を失う可能性がある。タンパク質凝集性疾患の非限定的な例としては、全身性ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝達性海綿状脳症、例えば、ウシ海綿状脳症、致死性家族性不眠症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈内側アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイドポリニューロパチー、遺伝性非神経障害性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、散発性封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、プリオン関連または海綿状脳症、例えばクロイツフェルト・ヤコブ病、レビー小体型認知症、パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、非神経障害性限局性疾患、例えばＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様癌、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス、大動脈内側アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生症を伴った角膜アミロイドーシス、白内障、石灰化上皮性歯原性腫瘍、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシス、および非神経障害性全身性アミロイドーシス、例えばＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイドーシス、ならびに複数の組織に発生する全身性アミロイドーシス、例えば軽鎖アミロイドーシス、および他のさまざまな神経変性障害が挙げられる。

【0014】

「タンパク質凝集体」という用語は、タンパク質凝集性疾患の負の進行を引き起こすおよび／またはそれに関連する異常に折り畳まれたタンパク質の任意の蓄積を指す。

【0015】

「アミロイド」という用語は、コンゴーレッドに結合し、次いで交差偏光子間で見たときに緑色の複屈折を示す非分枝繊維を形成するタンパク質凝集体の一形態を指す（例えば、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ＆Ｊｕｃｋｅｒ，２０１２．Ｃｅｌｌ．１４８（６）：１１８８－２０３およびＳｉｐｅら、２０１２．Ａｍｙｌｏｉｄ．１９（４）：１６７－７０を参照のこと）。

【0016】

「オリゴマー」という用語は、タンパク質凝集性疾患の負の進行を引き起こすおよび／またはそれに関連し、アミロイドの定義を満たさない異常に折り畳まれたタンパク質の任意の蓄積を指す。例えば、ポリグルタミンオリゴマーは、ハンチントン病の負の進行を引き起こすおよび／またはそれに関連する（Ｈｏｆｆｎｅｒ＆Ｄｉｊａｎ，２０１４．Ｂｒａｉｎ Ｓｃｉ．４（１）：９１－１２２を参照）。

【0017】

説明
生殖腺は、寿命の調節における重要な組織である。生殖細胞系列は、体細胞生殖腺におけるダファクロン酸の産生を阻害することによって寿命を調節する。一貫して、生殖細胞系列の発生を無効にする生殖細胞系列の除去または突然変異は、ダファクロン酸合成の活性化によって寿命を増加させる。生殖腺はまた、性ステロイドを産生する古典的な組織であるが、唯一の組織ではない。本発明者らのデータは、突然変異またはＳＴＸ６４のいずれかによるスルファターゼ活性の阻害が非常に特異的なセットの硫酸化ステロイドホルモンのレベルを上昇させ、これが実際に寿命の増加をもたらすことを示している。この寿命の増加は、生殖細胞系列の喪失によってもたらされる寿命延長に関与する共通の因子に依存し、両方のプロセスが実際に関係していることを示唆している。本発明者らは、硫酸化ステロイドホルモンの延命効果が同じ経路に関与しているか、またはこの経路のいくつかの要素を共有する生殖細胞系列の寿命と並行して作用しているのかを区別することができない。ｓｕｌ－２阻害がＮＨＲ－４９に依存しないか、または生殖細胞系列媒介性の寿命にとって必須であるＮＨＲ－８０に部分的にのみ依存するという事実は、第２の選択肢を指し示す。

【0018】

本発明者らはまた、生殖細胞系列の少ないｇｌｐ－１変異体における硫酸化ステロイドホルモンのレベルを研究しており、硫酸化ホルモンの増加は観察されない。これらのデータは、生殖腺がステロイドホルモンを産生し、当該ステロイドホルモンが硫酸化によって修飾されるという考えを支持する。おそらく神経伝達を変化させるこれらの硫酸化ステロイドホルモンは、生殖細胞系列の少ない動物に共通の因子を介して寿命の増加をもたらす。ステロイドホルモンの硫酸塩修飾に関与する酵素（スルファターゼＳＵＬ－２およびスルホトランフェラーゼＳＳＵ－１）が感覚神経で発現されるという事実は、ホルモンの硫酸塩状態の変化が、栄養利用能などの環境キューと生殖状態との統合という２つの関係したプロセスにおいて作用し得ることを示唆している。

【0019】

Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）では、体細胞の細胞増殖は発生期と幼生期とでのみ起こるが、成体期では起こらない。したがって、寿命の増加は、有糸分裂後の細胞の維持に起因する。Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）成体細胞で観察されるストレスの１つは、内因性タンパク質の凝集であり、これは細胞の機能不全を引き起こす。この凝集体の加齢性形成は、β－アミロイドまたはα－シヌクレインのような凝集しやすいタンパク質の異所性発現時にも観察される。ｄａｆ－２またはｇｌｐ－１などの長寿命変異体は、シャペロン発現およびプロテアソームまたはオートファジーによる分解を含むさまざまなメカニズムを介して凝集毒性を遅延させる。本発明者らは、スルファターゼ活性の阻害またはいくつかの特定の硫酸化Ｃ１９アンドロゲンホルモンによる処置が、寿命に影響を及ぼすだけでなく、タンパク質凝集およびタンパク質凝集性疾患のＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）モデルにおけるその毒性結果も減少させることを本明細書で示す。

【0020】

硫酸化によるステロイドホルモンの調節は保存されたプロセスである。哺乳動物では、スルホトランスフェラーゼおよびスルファターゼは、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）で観察されるものと同様に、神経系を含むさまざまな組織で発現される。ヒトでは、Ｃ１９ステロイドホルモンも寿命に関与している。例えば、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）は年齢とともに減少し、老化のマーカーとして使用されており、サルコペニア、認知機能の低下、およびアルツハイマー病を含む他の加齢に伴う疾患６に及ぼす原因となる可能性があるという推測が高まっている。本発明者らのデータは、突然変異またはＳＴＸ６４処置によるステロイドスルファターゼの阻害がＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）において寿命を延ばし、線形動物における加齢に伴うタンパク質毒性から保護することを示す。興味深いことに、いくつかの特定の硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンによる処置で同様の効果が観察された。

【0021】

より具体的には、前述の特定の硫酸化Ｃ１９ステロイドホルモンに関連して、哺乳動物では、硫酸化ホルモンは、主にリザーバーとして機能し、ステロイドスルファターゼによって活性化される不活性形態であると長い間考えられてきた。本発明では、ｓｕｌ－２阻害の有益な効果が非硫酸化ホルモンの減少によるものか、硫酸化ホルモンの増加によるものかを分類するために、本発明者らは、変異体に高度に提示される市販の硫酸化ステロイドホルモンを試験した（表１）。本発明者らは、Ｃ１９アンドロゲンであるデヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）、テストステロンサルフェート（ＴＳ）およびエピテストステロンサルフェート（ＥＳ）が、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）のパーキンソンモデルにおいて運動性を改善することを観察し、ＥＳについて顕著な結果が得られた（図４ａ）。同様の結果が、ＴＳおよびＥＳを用いたアルツハイマーモデルにおいて得られたが、ＤＨＥＡＳでは得られなかった（図４ｂおよび図１３ａ）。非硫酸化ＤＨＥＡまたは非硫酸化テストステロンは効果を示さず、ステロイドホルモンのＣ２１群に属するプレグネノロンサルフェートも効果を示さなかった（図４ｃ～ｄ）。これらの結果は、少なくともいくつかの硫酸化Ｃ１９アンドロゲンがタンパク質凝集性疾患に対する保護効果に関与していることを示し、ｓｕｌ－２阻害の有益な効果がこのタイプのホルモンのレベルの増加に起因することを強く示唆している。これらの結果と一致して、抗アンドロゲン性化合物であるアビラテロン（Ａｂｉ）３６による処置は、野生型動物に影響を及ぼさなかったが、ｓｕｌ－２突然変異の有益な効果を抑制した（図４ｅ）。

【0022】

次いで、本発明者らは、それらのホルモンが、ｓｕｌ－２変異体で観察される他の表現型にも関与するかどうかを試験した。それらの硫酸化ホルモンのいずれかによる処置は、ｓｕｌ－２またはＳＴＸ６４処置動物で観察されるように、ｄａｆ－２（ｅ１３７０）バックグラウンドでＬ１停止の増加を生じさせた（図１３ｂ）。興味深いことに、ＴＳまたはＤＨＥＡＳではなくＥＳでの処置は、野生型バックグラウンドでの寿命を増加させ、ｓｕｌ－２変異体バックグラウンドでの寿命をさらに増加させず（図４ｆ～図４ｇおよび図１３ｃ～図１３ｄ）、両方の介入が同じ分子メカニズムを共有することを示した。したがって、ＥＳの添加は、ｓｕｌ－２阻害について記載されたすべての表現型を再現し、ｓｕｌ－２突然変異の原因となる可能性がＥＳに関連するＣ１９アンドロゲン硫酸化ホルモンの増加に起因することを強く示唆した。

【0023】

したがって、第１の態様では、本発明は、タンパク質凝集性疾患の処置および／または予防に使用するための硫酸化Ｃ１９アンドロゲンを含む医薬組成物もしくは機能性食品組成物または栄養補助食品を含む組成物を提供する。

【0024】

第２の態様では、本発明は、（ｉ）硫酸化Ｃ１９アンドロゲン；ならびに（ｉｉ）薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤を含む、タンパク質凝集性疾患の処置および／または予防のための医薬品の製造に使用するためのキットを提供する。好ましい実施形態では、キットは、薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む。

【0025】

本発明のキットおよび組成物の好ましい実施形態を以下に提供する。

【0026】

本発明の硫酸化Ｃ１９アンドロゲン
好ましい実施形態では、硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）、テストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）である。より好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤は、テストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）からなる群から選択される。

【0027】

テストステロンサルフェート（ＴＳ）（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｏｍｐｏｕｎｄ／Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ－ｓｕｌｆａｔｅ）は、内因性の天然に存在するステロイドおよびテストステロンの少量の尿中代謝産物であって、化学名［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１０，１３－ジメチル－３－オキソ－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］硫酸水素塩、および式：

【化1】

を有する。
その他の名称テストステロン１７β－サルフェート；テストステロン１７β－硫酸；１７β－（スルホオキシ）アンドロスタ－４－エン－３－オン。

【0028】

エピテストステロンがテストステロンと構造的に異なるのは、ヒドロキシ基を持つ炭素Ｃ１７の配置のみである。テストステロン１７α－サルフェートとしても知られているエピテストステロンサルフェート（ＥＳ）は、以下の化学名Ｎ，Ｎ－ジエチルエタンアミン；［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－３－オキソ－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］硫酸水素塩、および式：

【化2】

を有する。
３α－ヒドロキシ－５α－アンドロスタン－１７－オン３α－サルフェートとしても知られているアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）は、内因性の天然に存在するステロイドであり、アンドロゲンの主要な尿中代謝産物の１つである。これは、ステロイドスルホトランスフェラーゼＳＵＬＴ２Ａ１によるアンドロステロンの硫酸化から形成され、ステロイドスルファターゼによって脱硫酸されてアンドロステロンに戻すことができる、化学名［（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソ－１，２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル］硫酸水素塩、および式：

【化3】

を有するステロイドサルフェートである。
上記の硫酸化Ｃ１９アンドロゲンのいずれも、その対応する塩およびエステルを含むことに本明細書で留意されたい。好ましくは、上記の硫酸化Ｃ１９アンドロゲンのいずれかには、対応する薬学的に許容され得る塩、薬学的に許容され得る溶媒和物、同位体別形（好ましくは１３Ｃを有する重水素原子および／または１個以上の炭素原子を含む）、異なる結晶形態、例えばその多形、薬学的に許容され得るエステル、立体異性体、互変異性体、類似体および誘導体が含まれる。

【0029】

溶媒和物、例えば（Ａ）または（Ｂ）（式中、Ｒ＝Ｈ、アルキルまたはアリールであり、水またはアルコールを親化合物に加えることによって形成される）。

【化4】

例えば、１個以上の原子が同じ原子の安定同位体で置き換えられている同位体別形、例えば、１個以上の水素原子を重水素原子で置き換えたもの、例えば（Ｃ）、または１個以上の炭素原子を１３Ｃで置き換えたもの、例えば（Ｄ）。この可能性は、構造内の任意の原子に適用することができ、組み合わせも考慮することができることが理解されよう。

【化5】

【0030】

タンパク質凝集性疾患
アミロイドおよびオリゴマーなどのタンパク質凝集体は、多くの疾患に関連している。場合によっては、これらのタンパク質凝集体は毒性になり得、細胞および組織に著しい損傷を引き起こし得る。この毒性は、タンパク質凝集性疾患を引き起こすおよび／またはその病態に寄与する寄与因子の１つと考えられている。

【0031】

さらに、タンパク質凝集性疾患に関係するタンパク質の異常なプロセシングおよびフォールディングは、タンパク質凝集性疾患の表立った症候が観察され得る数十年前に始まり得る（Ｊａｃｋら、２０１０．Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．９（１）：１１９－２８）。したがって、好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれか１つ、好ましくは医薬組成物もしくは機能性食品組成物または栄養補助食品を含む任意の組成物を投与した結果として、アミロイドおよび／またはオリゴマーが除去され、ならびに／またはそれらの形成が患者および／または動物において防止される。さらに、好ましい実施形態では、硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、タンパク質凝集性疾患におけるタンパク質毒性を処置および／または予防する。「タンパク質毒性」という用語は、タンパク質のミスフォールディングによって引き起こされる細胞機能の任意の障害を指す。

【0032】

タンパク質凝集体の形成を直接標的とすることによって、本発明の組成物およびキットは、タンパク質凝集性疾患の初期段階にあるが、依然として表立った症候を示さない患者および／または動物においてタンパク質凝集性疾患を処置および／または予防することができる。さらに、本発明の組成物およびキットはまた、タンパク質凝集性疾患の進行段階を処置する。

【0033】

好ましい実施形態では、患者および／または動物は、タンパク質凝集を引き起こす病態生理学的変化を受けているが、表立った症候が観察され得る疾患の段階にはまだ達していない。換言すれば、患者および／または動物は疾患の初期段階にある。「表立った症候」という用語は、任意の非侵襲的手技を使用して医師が観察することができる任意の症候を指す。

【0034】

好ましい実施形態では、硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、タンパク質凝集体の形成を阻害することによってタンパク質凝集性疾患の進行を遅らせ、および／または硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、タンパク質凝集体の形成を阻害することによってタンパク質凝集性疾患の発症を遅延させる。

【0035】

好ましい実施形態では、タンパク質凝集性疾は、全身性ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝達性海綿状脳症、例えば、ウシ海綿状脳症、致死性家族性不眠症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈内側アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイドポリニューロパチー、遺伝性非神経障害性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、散発性封入体筋炎、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、プリオン関連または海綿状脳症、例えばクロイツフェルト・ヤコブ病、レビー小体型認知症、パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、非神経障害性限局性疾患、例えばＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様癌、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス、大動脈内側アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生症を伴った角膜アミロイドーシス、白内障、石灰化上皮性歯原性腫瘍、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシス、および非神経障害性全身性アミロイドーシス、例えばＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイドーシス、ならびに複数の組織に発生する全身性アミロイドーシス、例えば軽鎖アミロイドーシス、および他のさまざまな神経変性障害からなるリストから選択される。好ましくは、タンパク質凝集性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病からなるリストから選択される。好ましい実施形態では、タンパク質凝集性疾患は、アルツハイマー病および／または癌の一種ではない。

【0036】

好ましい実施形態では、タンパク質凝集性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病からなるリストから選択され、本発明の硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、好ましくはテストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）からなるリストから選択される。より好ましくは、前述の硫酸化Ｃ１９アンドロゲンは、医薬組成物もしくは機能性食品組成物の形態または栄養補助食品の形態である。

【0037】

好ましい実施形態では、タンパク質凝集性疾患は、中枢神経系限局性タンパク質凝集性疾患である。好ましい実施形態では、タンパク質凝集性疾患は神経変性疾患でもある。「神経変性疾患」という用語は、神経細胞の死を含む、神経細胞の構造または機能の進行性消失を特徴とする任意の障害を指す。例えば、アルツハイマー病は、タンパク質凝集性疾患の一例であり、神経変性疾患の一例である。

【0038】

スルファターゼ阻害剤とタンパク質凝集性疾患とを組み合わせた実施形態
好ましい実施形態では、本発明は、本発明の硫酸化Ｃ１９アンドロゲン、好ましくはテストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）と、２－（ヒドロキシフェニル）インドールサルフェート、５－アンドロステン－３β、ＤＵ－１４、１７β－ジオール－３－サルフェート、Ｅ１－ＭＴＰ、ＥＭＡＴＥ、ＣＯＵＭＡＴＥ、ＳＴＸ６４、ＫＷ－２５８１、ＳＴＸ２１３、モルホリン、サイレンシングＲＮＡおよびＳＴＳ酵素に対する特異的抗体からなるリストから選択されるスルファターゼ阻害剤；または式（Ｉ）のスルファターゼ阻害剤との組み合わせ：

【化6】

（式中、
（ａ）Ｒ^１～Ｒ^６は、独立して、水素、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素またはアスタチン）、ヒドロキシル、スルファメート（ＯＳＯ_２ＮＨ_２）、アルキルおよびそれらの塩から選択され、
（ｂ）Ｒ^１～Ｒ^６のうちの少なくとも１つはスルファメート基であり、
Ｒ^１～Ｒ^６のうちの２つ以上が互いに連結して付加環状構造を形成する）であって、
好ましくはアルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病からなるリストから選択される、タンパク質凝集性疾患の予防または処置に使用するための組み合わせを指す。

【0039】

好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤はＳＴＸ６４（すなわち、国際公開第２０１９２４３４５３号に記載されている式（ＩＩ）の化合物）であり、組み合わせは、アルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病からなるリストから選択されるタンパク質凝集性疾患の予防または処置に使用するためのものである。好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤はＳＴＸ６４であり、タンパク質凝集性疾患はアルツハイマー病である。好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤はＳＴＸ６４であり、タンパク質凝集性疾患はハンチントン病である。好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤はＳＴＸ６４であり、タンパク質凝集性疾患はパーキンソン病である。

【0040】

国際公開第２０１９２４３４５３号に記載されている式（ＩＩ）のスルファターゼ阻害剤（ＳＴＸ６４）は、式：

【化7】

を有し、その任意の塩、好ましくはその任意の薬学的に許容され得る塩を含む。

【0041】

医薬組成物
好ましい実施形態では、組成物は、必要に応じて薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤をさらに含む医薬組成物である。好ましくは、医薬組成物は、薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含み得る。

【0042】

本明細書に記載の医薬組成物はまた、他の物質を含有してもよい。これらの物質には、抗凍結剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、増量剤、界面活性剤、抗酸化剤、および安定化剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は凍結乾燥され得る。

【0043】

本明細書で使用される「凍結乾燥保護剤」という用語は、凍結誘発ストレスに対して組成物に安定性をもたらす薬剤を含む。凍結乾燥保護剤はまた、一次および二次乾燥ならびに長期生成物保管中の保護を提供し得る。凍結乾燥保護剤の非限定的な例としては、スクロース、グルコース、トレハロース、マンニトール、マンノースおよびラクトースなどの糖；デキストラン、ヒドロキシエチルデンプンおよびポリエチレングリコールなどのポリマー；ポリソルベート（例えば、ＰＳ－２０またはＰＳ－８０）などの界面活性剤；ならびにグリシン、アルギニン、ロイシンおよびセリンなどのアミノ酸が挙げられる。生体系において低い毒性を示す凍結乾燥保護剤が、一般的に使用される。

【0044】

一実施形態では、凍結乾燥保護剤が、本明細書に記載の医薬組成物に加えられる。本明細書で使用される「凍結乾燥保護剤」という用語は、凍結乾燥または脱水プロセス（一次および二次凍結乾燥サイクル）中に組成物に安定性を提供する薬剤を含む。これは、凍結乾燥サイクル中の生成物分解を最小限に抑え、長期生成物安定性を改善するのに役立つ。凍結乾燥保護剤の非限定的な例としては、スクロースまたはトレハロースなどの糖、グルタミン酸一ナトリウム、非結晶グリシンまたはヒスチジンなどのアミノ酸；ベタインなどのメチルアミン；硫酸マグネシウムなどのリオトロピック塩；例えば、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどの三価以上の糖アルコールなどのポリオール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；プルロニクス（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）；およびそれらの組み合わせが挙げられる。医薬組成物に添加される凍結乾燥保護剤の量は、一般に、医薬組成物が凍結乾燥されるときに許容できない量の分解をもたらさない量である。

【0045】

いくつかの実施形態では、増量剤が医薬組成物に含まれる。本明細書で使用される「増量剤」という用語は、医薬品と直接相互作用することなく、凍結乾燥製品の構造を提供する薬剤を含む。薬学的に洗練されたケーキを提供することに加えて、増量剤はまた、崩壊温度の変更、凍結融解保護の提供、および長期保管にわたる安定性の向上に関して有用な品質を付与し得る。増量剤の非限定的な例としては、マンニトール、グリシン、ラクトースおよびスクロースが挙げられる。増量剤は、結晶性（例えばグリシン、マンニトールもしくは塩化ナトリウム）または非晶質（例えばデキストラン、ヒドロキシエチルデンプン）であってもよく、一般に０．５％～１０％の量で製剤に使用される。

【0046】

他の薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定化剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２２^ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｓｓ（２０１２），ＩＳＢＮ－１３：９７８０８５７１１０６２６に記載されているものはまた、医薬組成物の所望の特徴に悪影響を及ぼさないという条件で、本明細書に記載の医薬組成物に含まれてもよい。

【0047】

固体医薬組成物の場合、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどを含む従来の非毒性固体担体を使用することができる。注射用溶液の場合、医薬組成物は、抗凍結剤、凍結乾燥保護剤、増量剤、抗酸化剤、安定化剤および薬学的に許容され得る担体をさらに含み得る。エアロゾル投与の場合、医薬組成物は、一般に、界面活性剤および推進剤と共に細かく分割された形態で供給される。界面活性剤はもちろん無毒でなければならず、一般に推進剤に可溶である。そのような薬剤の代表例は、６～２２個の炭素原子を含有する脂肪酸、例えばカプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン（ｏｌｅｓｔｅｒｉｃ）酸およびオレイン酸と、脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルまたは部分エステルである。混合エステル、例えば混合または天然グリセリドを用いることができる。所望に応じて、例えば鼻腔内送達用のレシチンと同様に、担体を含めることもできる。坐剤の場合、伝統的な結合剤および担体には、例えば、ポリアルカレングリコールまたはトリグリセリドが含まれ得る。

【0048】

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、経口、舌下、頬側、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腹腔内および／または吸入媒介投与のために調製される。

【0049】

機能性食品組成物または栄養補助食品を含む医薬組成物以外の組成物も本発明の一部であることに留意されたい。

【0050】

投与
医薬組成物または機能性食品組成物または栄養補助食品を含む本発明の組成物は、当業者に公知の任意の経路を使用して投与することができる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、経皮的に、舌下に、静脈内に、鼻腔内に、脳室内に、動脈内に、脳内に、筋肉内に、腹腔内に、経口、または吸入によって投与される。

【0051】

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、経皮、舌下、静脈内、腹腔内、経口、または吸入によって投与される。組成物が吸入によって投与される場合、組成物はエアロゾル化され、例えば麻酔マスクを介して投与され得る。

【0052】

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、経皮、舌下、静脈内、皮下、経口、または吸入によって投与される。好ましくは、組成物は経口投与または舌下投与される。

【0053】

好ましい実施形態では、組成物は、治療有効量の本発明の硫酸化Ｃ１９アンドロゲン、好ましくはテストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）を含む。「治療有効量」という用語は、治療効果を有し、タンパク質凝集性疾患を処置および／または予防することができる組成物中の本発明の硫酸化Ｃ１９アンドロゲン、好ましくはテストステロンサルフェート（ＴＳ）、エピテストステロンサルフェート（ＥＳ）またはアンドロステロンサルフェート（ＡＳ）の量を指す。

【0054】

好ましい実施形態では、組成物は、タンパク質凝集性疾患を処置および／または予防するために一般的に使用される任意の他の処置または療法との併用療法で使用される。好ましい実施形態では、組成物は、２－（ヒドロキシフェニル）インドールサルフェート、５－アンドロステン－３β、ＤＵ－１４、１７β－ジオール－３－サルフェート、Ｅ１－ＭＴＰ、ＥＭＡＴＥ、ＣＯＵＭＡＴＥ、ＳＴＸ６４、ＫＷ－２５８１、ＳＴＸ２１３、モルホリン、サイレンシングＲＮＡおよびＳＴＳ酵素に対する特異的抗体からなるリストから選択されるスルファターゼ阻害剤；または式（Ｉ）のスルファターゼ阻害剤との併用療法で使用される：

【化8】

（式中、
（ａ）Ｒ^１～Ｒ^６は、独立して、水素、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素またはアスタチン）、ヒドロキシル、スルファメート（ＯＳＯ_２ＮＨ_２）、アルキルおよびそれらの塩から選択され、
（ｂ）Ｒ^１～Ｒ^６のうちの少なくとも１つはスルファメート基であり、
Ｒ^１～Ｒ^６のうちの２つ以上が互いに連結して付加環状構造を形成する）。

【0055】

好ましい実施形態では、スルファターゼ阻害剤はＳＴＸ６４（すなわち、国際公開第２０１９２４３４５３号に記載されている式（ＩＩ）の化合物）である。

【0056】

本発明の組成物は、１回または複数回投与され得る。当業者は、患者にとって最も効果的な投薬計画を確認することができるであろう。例えば、最も効果的な投薬計画は、患者が組成物を１日２回、１日１回、３日に１回、週に１回、月に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回または１年に１回投与されるものであり得る。

【0057】

以下の実施例は、本発明を例示するにすぎず、本発明を限定するものではない。

【実施例】

【0058】

寿命の調節因子としてのｓｕｌ－２の同定
加齢の遺伝的制御を司る新しい因子を解明することは、この複雑な生物学的プロセスの理解を深め、ヒトの健康寿命を改善するために重要である。この目的のために、本発明者らは、カエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）耐熱性変異体を単離し、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）スルファターゼファミリー８の３つのメンバーのうちの１つをコードするｓｕｌ－２遺伝子の対立遺伝子ｐｖ１７を同定した。

【0059】

ｓｕｌ－２の単離された（ｐｖ１７）対立遺伝子またはヌル対立遺伝子（ｇｋ１８７）のいずれかを有するワームは、野生型よりも長く生存したが、ｇｋ１８７対立遺伝子は、早期死亡率を有する亜集団を有する二峰性曲線を示した（図１ａ～ｂ、および図５ａ）。加齢中のポンピング頻度および運動性は、ｐｖ１７対立遺伝子では全体的に野生型と同様または野生型よりも遅く低下し、より健康的な寿命を示唆した（図５ｄ～図５ｅ）。他の２つのスルファターゼ遺伝子、ｓｕｌ－１およびｓｕｌ－３の欠失は寿命を増加させず、スルファターゼｓｕｌ－２が寿命の調節において主要な役割を有することを示した（図５ｆ）。ｓｕｌ－２における突然変異はまた、インスリン／インスリン様成長因子（ＩＧＦ）受容体ｄａｆ－２（図５ｇ～ｉ）における変異体の発生表現型を増強し、これを遺伝子マッピングおよび同定に使用した。ｐｖ１７対立遺伝子は、機能表現型の減少をもたらす単一アミノ酸置換（Ｇ４６Ｄ）を導入する。キュレート配列は、公開されたものとはわずかに異なる（図６）。

【0060】

ｓｕｌ－２はステロイドホルモンのスルファターゼをコードする
スルファターゼは、さまざまな生物学的プロセスに関与し、広範囲の基質を有する大きなタンパク質ファミリーである。スルファターゼ系統樹におけるキュレートされたｓｕｌ－２の配置は不確かではあるが、哺乳動物スルファターゼと比較した場合、おそらく共通の祖先遺伝子に由来するアリールスルファターゼＨ型、Ｆ型、Ｅ型、Ｄ型およびステロイドスルファターゼＣ型（図１ｃ）により近いｓｕｌ－２クラスターを有する。ｓｕｌ－１およびｓｕｌ－３はスルファターゼの異なるファミリーに属する（図１ｃ）。本発明者らは、ｓｕｌ－２が硫酸化ステロイドホルモンを修飾することによってその活性を発揮し得ると仮定した。ステロイドホルモンスルファターゼは、数あるプロセスの中でも、ホルモン依存性癌における増殖の刺激に関与する保存されたタンパク質である。ホルモン依存性癌を有する患者を処置するために使用されているＳＴＸ６４１０など、このタイプの酵素の特異的阻害剤が生成されている。本発明者らは、野生型動物をＳＴＸ６４で処置し、寿命の増加を観察した（図１ｄおよび図７ａ～図７ｃ）。ＳＴＸ６４処置はまた、他のｓｕｌ－２変異体表現型を表現型模写する（図７ｄ）。ＳＴＸ６４は、ＳＵＬ－２欠失変異体の寿命をさらに増加させず、ＳＴＸ６４がＳＵＬ－２のスルファターゼ活性を阻害することによって寿命を増加させることを示唆している（図１ｄ）。

【0061】

本発明者らは、ｓｕｌ－２変異体において高分解能ＨＰＬＣ－ＴＯＦ－ＭＳによって硫酸化ステロイドホルモンレベルを測定し、野生型ワームと比較して、この株においてより高い割合の硫酸化ホルモンを見出した（図１ｅ）。これらのデータはすべて、ＳＵＬ－２がステロイドホルモンスルファターゼとして作用することができ、１つまたはいくつかのステロイドホルモンの硫酸化状態の変化を通じて寿命を調節することを示唆している。ｓｕｌ－２の増加した寿命は、生殖腺の寿命を媒介する遺伝子に依存する。ｓｕｌ－２が既知の寿命経路で作用するかどうかを調べるために、本発明者らは、寿命に影響を及ぼす既知の対立遺伝子との遺伝的相互作用研究を行った。ＩＧＦ受容体ｄａｆ－２の突然変異は、転写因子ＤＡＦ－１６／ＦＯＸＯ１２を介して寿命を増加させる。ｓｕｌ－２突然変異は、機能型変異体（図２ａ、図８ａ～図８ｂ）のｄａｆ－２減少の寿命をさらに延ばし、ｓｕｌ－２が異なる経路で作用して寿命を調節することを示唆している。しかしながら、ｓｕｌ－２変異体の増加した寿命は、主にＤＡＦ－１６機能喪失によって抑制される（図２ｂおよび図８ｃ～図８ｄ）。生殖細胞系列の欠如によって付与される寿命はまた、主に腸細胞において核に移行するＤＡＦ－１６１２，１３を必要とする。しかしながら、インスリンシグナル伝達変異体では、ＤＡＦ－１６はほとんどの細胞の核に局在する。ｓｕｌ－２変異体では、ＤＡＦ－１６は主に腸核（図９ａ～ｂ）に局在し、生殖細胞系列媒介性寿命におけるｓｕｌ－２の役割を示唆している。腸管アンキリンリピートタンパク質ＫＲＩ－１／ＫＲＩＴ－１および転写伸長因子ＴＣＥＲ－１／ＴＣＥＲＧ１などの生殖細胞系列媒介性寿命のための他の必須因子もまた、ｓｕｌ－２変異体の完全に増加した寿命に必要であるが、核ホルモン受容体ＮＨＲ－８０では軽度の効果が観察され、生殖細胞系列媒介性寿命にも必要なＮＨＲ－４９では効果は観察されなかった（図２ｃ～ｆおよび図８ｅ～ｇ）。さらに、ｓｕｌ－２の欠失は、生殖細胞系列の少ない突然変異体ｇｌｐ－１またはｍｅｓ－１の寿命１８の寿命にほとんど影響を及ぼさない（図２ｇ～ｈ）。しかしながら、本発明者らは、ｇｌｐ－１バックグラウンド（図８ｈ）における機能対立遺伝子ｐｖ１７の減少における相加効果を観察し、これは変異タンパク質の何らかの追加の効果を示唆し得る。

【0062】

これらのデータはすべて、ｓｕｌ－２が生殖腺からのシグナル伝達を媒介して寿命を調節することを示唆している。興味深いことに、ｓｕｌ－２突然変異は、生殖力、生殖年齢または生殖腺形態に影響を及ぼさない（図２ｉ～ｊおよび図９ｃ～ｅ）。まとめると、本発明者らの知見は、ｓｕｌ－２が、生殖腺機能に影響を及ぼすことなく、寿命を生殖状態に整えるために寿命を調節するシグナルに影響を及ぼすことを示唆している。生殖細胞系列の除去と同様に、本発明者らはまた、ｓｕｌ－２変異体が食餌制限において寿命をさらに延ばすことを観察し、これは、寿命に影響を及ぼすこの介入においてｓｕｌ－２が関与していないことが示唆されている（図２ｋ）。生殖細胞系列の少ない動物では、ダファクロン酸（ＤＡ）と呼ばれる胆汁酸様ステロイドによる核内受容体ＤＡＦ－１２の活性化が寿命の増加を引き起こす２０。本発明者らは、ｄａｆ－１２がｓｕｌ－２変異体の寿命増加にも必要であることを観察し（図２ｌおよび図８ｉ）、これは、ｓｕｌ－２不活性化が硫酸化ステロイドホルモンプールの変化を引き起こし、生殖腺枯渇動物の寿命シグナルを模倣するＤＡＦ－１２の上流のシグナルを生成することを示している。ＤＡＦ－３６は、Δ７－ＤＡ２１，２２の生合成経路の第一段階でコレステロールを７－デヒドロコレステロールに変換する。したがって、ＤＡＦ－３６は、生殖細胞系列の少ない動物の寿命を延ばすためにも必要である２３。同様に、ＤＡＦ－３６は、硫酸化ステロイドホルモンによって生成されたシグナルをＤＡの生合成の上流または並列に置くステロイドスルファターゼ阻害剤ＳＴＸ６４（図２ｍ）によって与えられる寿命に必要である。

【0063】

ｓｕｌ－２は感覚神経細胞で発現される
本発明者らは、染色体外アレイおよび単一コピー挿入遺伝子導入株からのｓｕｌ－２発現の解剖学的位置を研究した。本発明者らは、主にアンフィドＡＤＦおよびＡＳＥ、ならびにファスミドＰＨＡおよびＰＨＢにおいて、いくつかの感覚神経細胞においてのみｓｕｌ－２が発現されることを見出した。遺伝子導入株のいずれにおいても生殖細胞系列における検出可能な発現はない（図２ｎおよび図１０、１１ａ～ｂ）。ＡＳＥ神経細胞は、とりわけ、Ｎａ＋およびＣｌ－の誘引応答を担う。臭気感知の欠陥は寿命に影響を及ぼす。したがって、本発明者らは、Ｃｌ－またはＮａ＋に応答するｓｕｌ－２変異体の能力を試験し、野生型動物と比較して差がないことを見出した（図１１ｃ～ｄ）。さらに、ｓｕｌ－２突然変異は、感覚繊毛形成を欠損した長寿命変異体であるｄａｆ－１０（ｍ７９）の寿命を増加させる２５（図１１ｅ）。これらの結果は、ｓｕｌ－２変異体で観察された寿命表現型が、感覚神経の機能障害によるものではないことを示している。ｓｕｌ－２の減少が、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）における加齢に伴う疾患を改善する。加齢は、パーキンソン病、ハンチントン病、またはアルツハイマー病のような神経変性障害の発症の主な危険因子であると考えられている。これらの障害は、細胞機能を損なうタンパク質凝集をもたらし、最終的に細胞死を引き起こす、プロテアシスの進行性低下によって引き起こされる。生殖細胞系列欠損Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）は、異所性発現されたヒトβ－アミロイド（βＡ）のタンパク質毒性に由来する症候を遅延させる。本発明者らは、ｓｕｌ－２突然変異またはＳＴＸ６４処置が神経変性疾患のＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）モデルの症候を改善するかどうかを試験した。筋細胞におけるヒトα－シヌクレイン発現が加齢性麻痺、ｓｕｌ－２突然変異またはＳＴＸ６４による処置を引き起こすＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）パーキンソン病モデルでは、運動性が有意に改善された（図３ａ～ｂ、図１２ａ～ｃ）。

【0064】

ＳＵＬ－２の機能喪失はα－シヌクレイン凝集体の数を減少させ（図１２ｄ～ｅ）、ステロイドスルファターゼ活性が低下したワームにおけるタンパク質凝集体のより良好な取り扱いを示唆した。低下したｓｕｌ－２活性の神経保護効果をさらにアッセイするために、本発明者らは、ドーパミン作動性神経細胞においてα－シヌクレインを発現する株を試験した。このモデルでは、ＧＦＰ標識ドーパミン作動性神経細胞は、α－シヌクレイン毒性のために死滅する。一貫して、ｓｕｌ－２変異体は、対照ウォームと比較して神経細胞生存率の増加を示し、ステロイド－ホルモンスルファターゼ活性の減少の神経保護作用を示した（図３ｃ～ｄ）。成体ワームにおいて凝集する構築物であるＹＦＰに融合したポリグルタミン反復を発現するハンチントン神経変性モデルにおいて、本発明者らは、ｓｕｌ－２突然変異およびＳＴＸ６４による処置の両方が凝集体の数を減少させることを見出した（図３ｅ～ｆ）。本発明者らはまた、不動性状態が筋肉細胞におけるβＡタンパク質の発現によって引き起こされる、ワームにおけるアルツハイマー病（ＡＤ）の２つの異なる株を試験した。一貫して、ｓｕｌ－２突然変異およびＳＴＸ６４処置は麻痺を遅延させた（図３ｇ～ｈおよび図１２ｆｇ）。これらのすべてのデータは、ｓｕｌ－２の阻害が、老化に関連するタンパク質毒性から線形動物を保護することを示している。

【0065】

ｓｕｌ－２の活性の低下は哺乳動物モデルにおいてアルツハイマーを改善する
ＳＴＸ６４がＣ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）モデルにおいて神経変性を改善したので、本発明者らは、急性ＡＤ哺乳動物モデルである海馬内βＡオリゴマー注入によって誘発される認知変化に対するこの薬物の効果を試験した（図３ｉ）。以前に、ステロイドホルモンスルファターゼの阻害剤であるＤＵ－１４の局所投与が、哺乳動物モデルにおけるβＡオリゴマーの海馬内投与によって引き起こされる記憶喪失を軽減し得ることが報告されている。本発明者らは、局所ＳＴＸ６４処置および全身ＳＴＸ６４処置の両方が、受動的回避試験によって測定される、βＡオリゴマーの海馬内投与によって引き起こされる認知欠損を回復させることを観察した（図３ｊ）。慢性ＡＤマウスモデルにおけるアミロイド病理に対するＳＴＸ６４経口処置の効果を評価するために、本発明者らは、＞１５月齢のＡＰＰ－ＰＳ１マウス（図４ｋ）の新皮質（大脳皮質および海馬）におけるアミロイド沈着に対する３～４週間のＳＴＸ６４経口処置の効果を評価した。ＡＰＰ２１８ＰＳ１モデルの新皮質におけるアミロイド沈着の後期段階に対応するこの年齢では、βＡプラーク密度およびサイズの分析により、ＳＴＸ６４で処置したマウスにおいて、海馬におけるプラークサイズを除いて、有意な減少が明らかにされた。さらに、βＡ免疫反応性領域は、両方の組織で減少する（図４ｋ～ｎ）。興味深いことに、本発明者らは、ＳＴＸ６４で処置された高齢（＞１５月齢）ＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるβＡ沈着を、未処置ＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるアミロイド沈着の正常な時間経過と比較した場合、ＳＴＸ６４が、１０～１２月齢のＡＰＰ－ＰＳ１マウスで観察されたβＡ沈着と比較して、１５月齢を超えるＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるβＡ沈着を減少させることを観察した（図４ｏ）。これらの結果はすべて、ＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおけるＳＴＸ６４処置がβＡ沈着を減少させることを示している。本発明者らは、この組織学的改善が認知行動障害の改善と相関するかどうかを考えた。そのために、本発明者らは、ｖｅｈｉｃｌｅまたはＳＴＸ６４で３～４週間処置した１５月齢を超えるＡＰＰ－ＰＳ１マウスにおける認知能力を比較した。ｖｅｈｉｃｌｅ処置ＡＰＰ－ＰＳ１マウスは受動的回避試験（図４ｐ）において欠損を示したが、ＳＴＸ６４で処置したマウスは認知欠損を完全に回復させ、＜１５月齢の野生型マウスと同様のレベルに達した。これらの結果はすべて、ＳＴＸ６４によって誘発されるβＡ代謝の変化が急性および慢性ＡＤマウスモデルにおいてβＡ蓄積によって誘発される認知行動欠損を減少させることを指摘しており、神経変性疾患に対する薬理学的療法としてのＳＴＸ６４の可能性を示唆している。

【0066】

硫酸化Ｃ１９アンドロゲンホルモンは、ｓｕｌ－２活性の減少の有益な効果を再現する
哺乳動物では、硫酸化ホルモンは主にリザーバーとして機能し、ステロイドスルファターゼ６によって活性化される不活性形態と長い間考えられてきたが、生殖系および神経系における硫酸化ホルモンの直接作用が観察されている。この最後の組織では、これらのホルモンは神経ステロイドと呼ばれ、その主な機能は神経伝達の調節である。ｓｕｌ－２阻害の有益な効果が非硫酸化ホルモンの減少または硫酸化ホルモンの増加に起因するかどうかを分類するために、本発明者らは、変異体に高度に提示される市販の硫酸化ステロイドホルモンを試験した（表１）。本発明者らは、Ｃ１９アンドロゲンであるデヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）、テストステロンサルフェート（ＴＳ）およびエピテストステロンサルフェート（ＥＳ）が、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）のパーキンソンモデルにおいて運動性を改善することを観察し、ＥＳについてより良好な結果が得られた（図４ａ）。同様の結果が、ＴＳおよびＥＳを用いたアルツハイマーモデルにおいて得られるが、ＤＨＥＡＳでは得られない（図４ｂおよび図１３ａ）。非硫酸化ＤＨＥＡまたは非硫酸化テストステロンは効果を示さず、ステロイドホルモンのＣ２１群に属するプレグネノロンサルフェートも効果を示さなかった（図４ｃ～ｄ）。これらの結果は、少なくともいくつかの硫酸化Ｃ１９アンドロゲンがタンパク質凝集性疾患に対する保護効果に関与していることを示し、ｓｕｌ－２阻害の有益な効果がこのタイプのホルモンのレベルの増加に起因することを強く示唆している。これらの結果と一致して、抗アンドロゲン性化合物であるアビラテロン（Ａｂｉ）３６による処置は、野生型動物に影響を及ぼさなかったが、ｓｕｌ－２突然変異の有益な効果を抑制した（図４ｅ）。

【0067】

次いで、本発明者らは、それらのホルモンが、ｓｕｌ－２変異体で観察される他の表現型にも関与するかどうかを試験した。それらの硫酸化ホルモンのいずれかによる処置は、ｓｕｌ－２またはＳＴＸ６４処置動物で観察されるように、ｄａｆ－２（ｅ１３７０）バックグラウンドでＬ１停止の増加を生じさせた（図１３ｂ）。興味深いことに、ＴＳまたはＤＨＥＡＳではなくＥＳでの処置は、野生型バックグラウンドでの寿命を増加させ、ｓｕｌ－２変異体バックグラウンドでの寿命をさらに増加させず（図４ｆ～図４ｇおよび図１３ｃ～図１３ｄ）、両方の介入が同じ分子メカニズムを共有することを示した。したがって、ＥＳの添加は、ｓｕｌ－２阻害について記載されたすべての表現型を再現し、ｓｕｌ－２突然変異の原因となる可能性がＥＳに関連するＣ１９アンドロゲン硫酸化ホルモンの増加に起因することを強く示唆した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

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【国際調査報告】