特表 2023-546534 生体細胞と共に使用するための磁性粒子処理システム及び関連する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-02

(54)【発明の名称】生体細胞と共に使用するための磁性粒子処理システム及び関連する方法

(51)【国際特許分類】

   C12M 1/00 20060101AFI20231026BHJP

   C12N 5/071 20100101ALI20231026BHJP

   C12N 1/02 20060101ALI20231026BHJP

   C12N 15/10 20060101ALI20231026BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20231026BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20231026BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20231026BHJP

【ＦＩ】

C12M1/00 A

C12N5/071

C12N1/02

C12N15/10 Z

A61K39/00 A

C12N5/0783

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023547326

(86)(22)【出願日】2021-10-12

(85)【翻訳文提出日】2023-06-05

(86)【国際出願番号】 US2021054490

(87)【国際公開番号】W WO2022081519

(87)【国際公開日】2022-04-21

(31)【優先権主張番号】63/090,399

(32)【優先日】2020-10-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/137,389

(32)【優先日】2021-01-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523135746

【氏名又は名称】ライフ・テクノロジーズ・アクシェセルスカプ

【氏名又は名称原語表記】Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＡＳ

(71)【出願人】

【識別番号】514078933

【氏名又は名称】ライフ テクノロジーズ コーポレイション

(71)【出願人】

【識別番号】520468106

【氏名又は名称】ライフ テクノロジーズ ホールディングス プライベート リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100189555

【弁理士】

【氏名又は名称】徳山 英浩

(74)【代理人】

【識別番号】100100479

【弁理士】

【氏名又は名称】竹内 三喜夫

(72)【発明者】

【氏名】ルーハー，モルテン

(72)【発明者】

【氏名】ゴードン，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】シア，ミン ティオン

(72)【発明者】

【氏名】チョン，コック ション

(72)【発明者】

【氏名】ソー，ウーン リアン テレンス

(72)【発明者】

【氏名】リム，セン レオン

(72)【発明者】

【氏名】シュレーダー，イーダ キャロライン

(72)【発明者】

【氏名】アルフスネス，ケイトリン

(72)【発明者】

【氏名】リム，テリー ジャンホイ

(72)【発明者】

【氏名】ボスネス，マリー

(72)【発明者】

【氏名】ノイラウター，アクセル アロイス

(72)【発明者】

【氏名】ペーダシェン，ケティル ヴィンテル

(72)【発明者】

【氏名】ウィルバー，オータム デイ

(72)【発明者】

【氏名】ジマーマン，ショーン

【テーマコード（参考）】

4B029

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B029AA27

4B029BB11

4B029CC01

4B029DG08

4B029GA08

4B029GB10

4B065AA94X

4B065AB10

4B065AC20

4B065BA30

4B065CA46

4C085AA03

4C085BB11

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA65

(57)【要約】

磁気ビーズを生体細胞および他の生物学的材料に付着させ、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞および他の生物学的材料から分離する際に使用するためのビーズ処理アセンブリであって、ハウジングと、ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、を備えるベースアセンブリを含む。ロッカアセンブリが、ベースアセンブリ上に支持され、ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを繰り返し揺動させるためのロッカドライバと、を含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

磁気ビーズを生体細胞に付着させ、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離する際に使用するためのビーズ処理アセンブリであって、
ベースアセンブリであって、
ハウジングと、
ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、
該支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、
該支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、を備えるベースアセンブリと、
該ベースアセンブリ上に支持されるロッカアセンブリであって、
該ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、
該マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、
該マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されたロッカドライバと、を備えるロッカアセンブリと、
を備えるビーズ処理アセンブリ。

【請求項2】

ベースアセンブリは、ハウジングアセンブリにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、
該カバーパネルは、支持パネルの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルが支持パネルの前面を覆う閉位置との間で移動可能である、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項3】

カバーパネルは、ハウジングにヒンジ式に取り付けられ、開口を取り囲む外周フレームと、
開口内に配置される透明窓と、を備える請求項２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項4】

支持パネルは、前面を有するベースパネルであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプがベースパネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出するようにベースパネルに取り付けられる、ベースパネルと、
ベースパネルの前面に配置されるオーバーレイパネルであって、該オーバーレイパネルは、それを貫通して延びる開口を有し、該開口を通じて第１ピンチバルブ及び第１ポンプの少なくとも一部が突出する、オーバーレイパネルと、を備える請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項5】

支持パネルの前面は、ハウジングアセンブリが水平面上に載置されている場合に３０°～７０°の範囲の角度で配置される、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項6】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、
複数のピンチバルブは、少なくとも２つ、３つ、４つ、６つ、又は８つのピンチバルブを備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項7】

第１ポンプは、蠕動ポンプを備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項8】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項9】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数の気泡センサを更に備え、
複数の気泡センサは、少なくとも２つ、３つ、又は４つの気泡センサを備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項10】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する圧力センサを更に備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項11】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、
支持パネルに取り付けられる第１回転アセンブリと、を更に備え、
該第１回転アセンブリは、
キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、
受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータと、を備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項12】

ベースアセンブリは、ビーズバイアルリテーナを更に備え、
該ビーズバイアルリテーナは、
バイアルを受けるように構成される本体と、
本体から延在する長尺アームと、
ベースアセンブリのハウジング内に少なくとも部分的に配置され、アームの自由端に接続されるモータであって、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度に渡って垂直に往復回転させるように構成される、モータと、を含む、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項13】

ビーズバイアルリテーナの本体は、Ｃ字形チャネルを境界付ける内面と、
該内面から径方向内側に突出する肩部と、を備える、請求項１２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項14】

ロッカアセンブリのマウントアセンブリは、ベースアセンブリに取り付けられた第１ライザ及び離間した第２ライザを備え、
プラットフォームアセンブリは、第１ライザ及び第２ライザに回動可能に結合され、第１ライザと第２ライザとの間に少なくとも部分的に配置される、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項15】

ロッカドライバは、クランクと、
該クランクを選択的に回転させるモータと、
該クランクからプラットフォームアセンブリまで延在する接続アームと、を備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項16】

プラットフォームアセンブリは、区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、
該ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、
該ハウジングアセンブリと該プラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、
作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるように構成されたリフトと、を備える、請求項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項17】

リフトは、ハウジングアセンブリの区画室内に少なくとも部分的に配置されたシザーリフトと、
該シザーリフトを動作させるモータと、を備える、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項18】

シザーリフトは、磁石アセンブリが上に配置される棚と、
ハウジングアセンブリと棚との間で延在する第１シザーアーム対と、
ハウジングアセンブリと棚との間で延在して第１シザーアーム対から離間される第２シザーアーム対と、
モータに結合されるねじ付きシャフトと、
カラーであって、モータによるねじ付きシャフトの回転がねじ付きシャフトに沿うカラーの直線動作を容易にするようにねじ付きシャフトと係合するとともに、第１シザーアーム対及び第２シザーアーム対とも係合する、カラーと、を備える、請求項１７に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項19】

上面及び反対側の底面を有する支持プレートを備えるプラットフォームを更に備え、
磁石アセンブリが作動位置まで持ち上げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から１ｃｍ、０．５ｃｍ、又は０．２ｃｍ以内にある、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項20】

磁石アセンブリが非作動位置まで下げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から少なくとも４ｃｍ、５ｃｍ、又は６ｃｍ離れている、請求項１９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項21】

プラットフォームは、
ハウジングアセンブリに固定されるとともに、導電性材料で形成され、上面を有する支持プレートと、
連続ループを形成するとともに、支持プレートの少なくとも一部を取り囲むように支持プレートの上面に配置され、電気絶縁材料で形成される絶縁シールと、
連続ループを形成するとともに、支持プレートから離間されるように絶縁シールの上に配置された接点とを備え、
支持プレート及び接点は、接点と支持プレートとの間に電位を生み出すことができる電気回路と電気的に連通している、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項22】

プラットフォームは、上面を有し、ハウジングアセンブリに固定される支持プレートと、
支持プレートの上面の上方に位置決めされる抑制部と、を備え、
該抑制部は、
支持プレートの上面を部分的に取り囲むとともに、対向する端部間で延在する境界壁と、
該境界壁の対向する端部間で延在するトレイと、を備え、
該トレイは、境界壁から外方に突出する上向きに傾斜した床と、床から上方に突出する一対の離間したポストとを有する、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項23】

プラットフォームは、支持ハウジングに固定された保持フレームであって、開口を取り囲む環状内壁と、内壁を取り囲む環状外壁とを備える保持フレームと、内壁と外壁との間に形成されるスロットと、
保持フレームのスロット内に固定され、チャネルを境界付けるガイドと、
ガイドのチャネル内に摺動可能に配置された電気ラッチと、を備える、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項24】

磁石アセンブリは、磁石を備える、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項25】

磁石アセンブリは、外周縁部まで延在する上面及び反対側の底面を有する非磁性ケーシングであって、凹部が上面に形成されて外周縁部を有する、非磁性ケーシングと、
ケーシングの凹部内に配置される磁石と、を備える、請求項２４に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項26】

磁石は、ハルバッハ配列を生成するように複数の交互の向きに配置された複数の別個の離散した磁石を備える、請求項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項27】

凹部の外周縁部は、ケーシングの外周縁部から少なくとも０．５ｃｍ、１ｃｍ、１．５ｃｍ又は２ｃｍ挿入されている、請求項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項28】

ケーシング及び磁石は、それぞれ長方形の形態を有する、請求項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項29】

プラットフォームアセンブリは、プラットフォームを少なくとも部分的に覆うとともにプラットフォームに対して移動可能なカバーアセンブリを更に備える、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項30】

カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、プラットフォームの少なくとも一部がカバーハウジングの開口内に位置合わせされる、カバーハウジングと、
開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられた蓋であって、閉位置にある場合にカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋と、を備える、請求項２９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項31】

蓋は、カバーハウジングにヒンジ式に取り付けられる、請求項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項32】

蓋は、開口を取り囲むとともに上端及び反対側の下端を有する外周壁と、
上面及び反対側の底面を有し、開口の上に延在するように外周壁の下端に固定された蓋板であって、外周壁の少なくとも一部が蓋板の上面の上方に直立して、蓋板によって部分的に境界付けられて外周壁によって囲まれる上側キャビティが形成されている、蓋板とを備える、請求項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項33】

外周壁は、上側キャビティと連通するように蓋板の上面に隣接して外周壁を貫通して延在するチャネルを有する、請求項３２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項34】

蓋が閉位置にある場合、蓋をカバーハウジングに固定するための第１ラッチを更に備える、請求項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項35】

プラットフォームから離れるカバーアセンブリの移動を弾性的に抑制するための手段を更に備える、請求項２９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項36】

移動を弾性的に抑制するための手段は、第１端部及び反対側の第２端部を有するロッドであって、第１端部は、カバーアセンブリに固定されてカバーアセンブリから突出している、ロッドと、
該ロッドと係合されるばねであって、カバーアセンブリをプラットフォームから離れるように移動させる力が使用されると、ばねは、カバーアセンブリをプラットフォームに向けて後方に弾性的に付勢するようにした、ばねとを備える、請求項３５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項37】

抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に備え、
抑制位置において、ストッパは、プラットフォームに対するロッドのいくらかの移動を妨げるように位置決めされ、
非抑制位置において、ストッパは、ロッドの移動を妨げない、請求項３６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項38】

ハウジングアセンブリに取り付けられたソレノイドバルブを更に備え、
ソレノイドバルブは、ストッパを抑制位置と非抑制位置との間で移動させる、請求項３７に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項39】

ハウジングアセンブリに形成された穴であって、ロッドは、穴の内部に摺動可能に配置される、穴と、
ロッドの第２端部から外向きに突出するフランジと、を更に備え、
ばねは、フランジとハウジングアセンブリとの間で延在し、ロッドがカバーアセンブリと同時に持ち上げられると、ばねは弾性的に圧縮される、請求項３６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項40】

抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に備え、
抑制位置において、ストッパは、フランジと位置合わせされて、フランジ及びフランジに取り付けられたロッドのいくらかの動きを阻止し、
非抑制位置において、ストッパは、フランジと位置合わせされず、フランジ又はフランジに取り付けられたロッドの動きを妨げない、請求項３９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項41】

カバーハウジングに形成され、カバーハウジングの開口と連通する凹部と、
凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリと、を更に備え、
該クランプアセンブリは、
下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、
上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、
上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるように、クランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具と、を備える、請求項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項42】

カバーハウジングは、凹部の対向する各端部に形成されたＵ字形チャネルを更に備え、クランプアセンブリの対向する端部は、Ｕ字形チャネルと共に摺動可能に配置される、請求項４１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項43】

プラットフォームは、上面及び反対側の底面を有する支持プレートと、
該支持プレートから離れて突出するとともに、ハウジングアセンブリに固定される側壁とを備え、
支持プレート及び側壁は、磁石アセンブリが上昇作動位置にある場合に磁石アセンブリが受け入れられるキャビティを少なくとも部分的に結合する、請求項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【請求項44】

磁気ビーズを生体細胞に付着させるため、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムであって、
ビーズ処理アセンブリであって、
ハウジングと、
ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、
該支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、
該支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、を備えるベースアセンブリと、
該ベースアセンブリ上に支持されるロッカアセンブリであって、
該ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、
該マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、
該マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されたロッカドライバと、を備えるロッカアセンブリと、を備えるビーズ処理アセンブリと、
消耗キットであって、
前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプが複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出するように支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にされるトレイと、
トレイの前面に固定されたラインセットであって、
トレイの前面に固定されるとともに第１ピンチバルブ及び第１ポンプと係合する可撓性チューブと、
チューブに結合された複数の可撓性バッグ流体であって、複数の可撓性バッグがプラットフォームアセンブリのプラットフォーム上に支持された処理バッグを備える、複数の可撓性バッグ流体と、を備えるラインセットと、
を備える消耗キットと、
を備えるビーズ処理システム。

【請求項45】

ベースアセンブリは、ハウジングアセンブリにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、
カバーパネルは、トレイの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルがトレイの前面を覆う閉位置との間で移動可能である、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項46】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、
複数のピンチバルブは、少なくとも２つ、３つ、４つ、６つ、又は８つのピンチバルブを備え、
複数のピンチバルブのそれぞれは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出して可撓性チューブと係合する、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項47】

ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備え、
第１気泡センサは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じ突出して可撓性チューブと係合する、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項48】

支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、
支持パネルに取り付けられた第１回転アセンブリと、を更に含み、
該第１回転アセンブリは、
キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、
受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータと、
ラインセットのチューブに結合されたストップコック流体であって、ストップコックが受け部のキー付きソケット内に受けられる回転可能なハンドルを有する、ストップコック流体と、
ストップコックと結合されたエアフィルタ流体と、を備える、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項49】

ビーズバイアルリテーナを更に備え、
該ビーズバイアルリテーナは、
バイアルを受けるように構成されるチャネルを有する本体と、
本体から延在する長尺アームと、
ベースアセンブリのハウジングアセンブリ内に少なくとも部分的に配置されるとともにアームの自由端に接続されるモータであって、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度にわたって垂直に往復回転させるように構成される、モータと、
本体のチャネル内に受けられるバイアルであって、磁気ビーズ及び媒体を収容し、ラインセットのチューブがバイアルと流体結合されているバイアルと、を含む、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項50】

プラットフォームアセンブリは、
区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、
ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、
ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、
作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるためにハウジングアセンブリの区画室内に配置されるリフトと、を備える、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項51】

プラットフォームアセンブリは、プラットフォーム及びプラットフォーム上の処理バッグを少なくとも部分的に覆うカバーアセンブリを更に備え、
該カバーアセンブリは、処理バッグが拡張するときにプラットフォームに対して移動可能である、請求項５０に記載のビーズ処理システム。

【請求項52】

プラットフォームから離れるカバーアセンブリの移動を弾性的に抑制するための手段を更に備える、請求項５１に記載のビーズ処理システム。

【請求項53】

カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、処理バッグが少なくとも部分的にカバーハウジングの開口内に配置される、カバーハウジングと、
開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられた蓋であって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋と、を備える、請求項５１に記載のビーズ処理システム。

【請求項54】

カバーハウジングに形成されてカバーハウジングの開口と連通する凹部と、
凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリと、を更に備え、
該クランプアセンブリは、
下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、
上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、
上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるようにクランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具と、を備え、
プラットフォーム上に配置された処理バッグは、位置合わせされた上側クランプ溝及び下側クランプ溝の中に少なくとも部分的に配置されるとともにベースクランプとクランプクロージャとの間にクランプされるポートを有する、請求項５３に記載のビーズ処理システム。

【請求項55】

ラインセットのチューブに結合され、媒体を収容する第１媒体バッグ流体を更に備える、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項56】

ビーズ処理アセンブリは、ベースアセンブリから直立するとともにそこから外側に突出するキャッチを有するスタンドを更に備え、
媒体バッグは、該キャッチ上に支持される、請求項５５に記載のビーズ処理システム。

【請求項57】

ラインセットのチューブは、生体細胞分離器と流体結合される、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項58】

ラインセットのチューブは、生体細胞増殖システムと流体結合される、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項59】

処理バッグは、ビーズ分離バッグを備え、
該ビーズ分離バッグは、
ポリマーフィルムから構成されるとともに区画室を境界付ける折り畳み可能な袋体と、
袋体に結合されて区画室と連通する一対の離間したポートと、
一対の離間したポート間の位置で袋体の区画室内に配置される仕切りであって、ポートの一方に入る流体が他方のポートを通じて出ることができる前に、仕切りの周りを流れるように袋体に固定される、仕切りと、を備える、請求項４４に記載のビーズ処理システム。

【請求項60】

磁気ビーズ処理アセンブリと共に使用するための消耗キットであって、
前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイと、
トレイの前面に固定されるラインセットと、を備え、
該ラインセットは、
複数の開口の少なくとも幾つかと位置合わせするように、トレイの前面に固定される可撓性チューブと、
チューブと結合された複数の可撓性バッグ流体と、
チューブに結合されたエアフィルタと、を備える、消耗キット。

【請求項61】

チューブに結合されたエアフィルタアセンブリをさらに備え、
該エアフィルタアセンブリは、
チューブと結合されるストップコック流体であって、該ストップコックは、
トレイの前面から外側に突出するスリーブと、
スリーブ内に回転可能に配置されるバルブと、
バルブを選択的に回転させるためにバルブに固定され、トレイの背面から外側に突出するハンドルと、を備える、ストップコック流体と、
スリーブと結合されるエアフィルタ流体と、を備える、請求項６０に記載の消耗キット。

【請求項62】

トレイの前面に配置され、チューブと流体結合される混合バッグを更に備える、請求項６１に記載の消耗キット。

【請求項63】

ラインセットのチューブに結合されたビーズバイアルカプラ流体と、
ビーズバイアルカプラに固定され、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容するバイアルと、を更に備える、請求項６１に記載の消耗キット。

【請求項64】

マウントアセンブリと、
該マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、
該マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されるロッカドライバと、を備え、
該プラットフォームアセンブリは、
区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、
該ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、
該ハウジングアセンブリと該プラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリと、
作動位置と非作動位置との間で磁石アセンブリをプラットフォームに対して選択的に上昇及び下降させるように構成されたリフトと、
プラットフォームを少なくとも部分的に覆うとともにプラットフォームに対して移動可能であるカバーアセンブリとを備える、ロッカアセンブリ。

【請求項65】

カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、プラットフォームの少なくとも一部がカバーハウジングの開口内に位置合わせされる、カバーハウジングと、
開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられる蓋であって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋とを備える、請求項６４に記載のロッカアセンブリ。

【請求項66】

磁気ビーズを生体細胞に付着させるのに、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離するのに用いるビーズ処理アセンブリであって、
ベースアセンブリを備え、
該ベースアセンブリは、
ハウジングと、
ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、を備える、ビーズ処理アセンブリ。

【請求項67】

磁気ビーズを生体細胞に付着させるため、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムを動作させるための方法であって、
第１ピンチバルブ及び支持パネルから突出する第１ポンプがトレイに形成された対応する開口を通過するようにトレイをビーズ処理アセンブリの支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にするステップと、
トレイ上に配置されたラインセットのチューブを第１ピンチバルブ及び第１ポンプに係合させるステップと、
ラインセットと結合された処理バッグ流体をビーズ処理アセンブリのプラットフォーム上に配置するステップと、を含む方法。

【請求項68】

バイアル又は可撓性バッグをラインセットのチューブに結合する流体を更に備え、
バイアル又は可撓性バッグは、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容する、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

ビーズ処理アセンブリのバッグスタンド上に液体媒体を収容する媒体バッグを支持するステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項70】

ラインセットのチューブを生体細胞分離器に流体結合するステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項71】

ラインセットのチューブを生体細胞増殖システムに流体結合するステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項72】

ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームの揺動をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項73】

ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームに対する磁石の上昇及び下降をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項74】

ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、プラットフォーム上の処理バッグに流体を配送するために第１ピンチバルブ及び第１ポンプの制御をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項75】

ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、ラインセットのチューブと結合されたバイアル流体の移動をコンピュータプロセッサが促進してバイアル内に配置された懸濁液を混合するように作動させるステップを更に含み、
懸濁液は、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む、請求項６７に記載の方法。

【請求項76】

生体細胞は、Ｔ細胞である、請求項６７に記載の方法。

【請求項77】

生体細胞は、抗原－抗体相互作用を介して磁気ビーズに付着される、請求項６７に記載の方法。

【請求項78】

生体細胞は、抗原－抗体相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

抗原－抗体相互作用の破壊は、抗体の切断によって媒介される、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

抗体を磁気ビーズから分離することによって、生体細胞は、磁気ビーズから分離される、請求項７７に記載の方法。

【請求項81】

抗体は、リガンドによって磁気ビーズに連結される、請求項７７に記載の方法。

【請求項82】

生体細胞は、抗体又は磁気ビーズとのリガンド相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される、請求項８１に記載の方法。

【請求項83】

生体細胞は、Ｔ細胞である、請求項６７に記載の方法。

【請求項84】

ビーズ処理システムを使用して第１細胞型の生体細胞を第２細胞型の生体細胞から分離するための方法であって、
ａ．第１細胞型及び第２細胞型の生体細胞を含む試料を、磁気ビーズが抗体結合を介して第１細胞型の生体細胞に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズが、プラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、
ｂ．プラットフォームに対して磁石を上昇させて、プラットフォームに対して所定の位置に磁気ビーズを強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１細胞型の生体細胞が付着される、ステップと、
ｃ．磁気ビーズに磁場が印加された状態で流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップであって、第１細胞型の生体細胞から第２細胞型の生体細胞を洗い流すのに十分強い力で流体が通過する、ステップと、
ｄ．第１細胞型の生体細胞が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないようにプラットフォームに対して磁石を下降させるステップと、を含む方法。

【請求項85】

抗体は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７及びＣＤ２７８から成るグループから選択されるタンパク質に対する結合親和性を有する、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

抗体は、ＣＤ３又はＣＤ２８を含むタンパク質に対して結合親和性を有する、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

第１細胞型は、Ｔ細胞である、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから分離するステップと、
磁気ビーズを定位置に強固に固定するために磁気ビーズに磁場を印加するステップと、
磁場が印加されている間に磁気ビーズ及び第１細胞型の分離された生体細胞に流体を通過させるステップであって、磁気ビーズの少なくとも大部分が磁場によって定位置に固定されたままの状態で第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから洗い流すのに十分強い力で流体が通過する、ステップと、を更に含む請求項８４に記載の方法。

【請求項89】

第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分が磁気ビーズから洗い流される間に、９５％を超える磁気ビーズが磁場によって定位置に保持される、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

９５％を超える磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

第１細胞型の生体細胞から分離された９５％を超える磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される、請求項８４に記載の方法。

【請求項92】

磁気ビーズは、直径が約０．５μｍ～約３μｍである、請求項８４に記載の方法。

【請求項93】

処理バッグが載置されているプラットフォームを水平に対して第１方向に傾けるステップを更に含み、
磁場は、プラットフォームが第１方向に傾けられる間に、処理バッグ内の磁気ビーズに印加される、請求項８４に記載の方法。

【請求項94】

磁石は、プラットフォームが第１方向に傾けられた後に持ち上げられる、請求項９３に記載の方法。

【請求項95】

プラットフォームが第１方向に傾斜される間に、処理バッグのポートを通じて気体又は液体を注入するステップを更に含む、請求項９３に記載の方法。

【請求項96】

処理バッグが載置されているプラットフォームが水平に対して傾斜されるように、プラットフォームを第１方向とは反対の第２方向に傾けるステップと、
プラットフォームが第２方向に傾けられる間に、処理バッグから液体を取り出すステップと、を更に含む請求項９３に記載の方法。

【請求項97】

ビーズ処理システムを使用して第１生物学的材料を第２生物学的材料から分離する方法であって、
ａ．第１生物学的材料及び第２生物学的材料を含む試料を、磁気ビーズが親和性結合を介して第１生物学的材料に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズは、プラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、
ｂ．プラットフォームに対して磁石を上昇させて、プラットフォームに対して磁気ビーズを所定の位置に強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１生物学的材料が付着される、ステップと、
ｃ．磁場が磁気ビーズに印加される状態で、試料及び磁気ビーズに第１流体を通過させることにより、第１生物学的材料を第２生物学的材料から分離するステップと、を含む方法。

【請求項98】

ｄ．磁場が磁気ビーズに印加される間に、第２流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップを更に含み、
第２流体は、磁気ビーズからの第１生物学的材料の放出を誘導する、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

ｄ．第１生物学的材料が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないように、プラットフォームに対して磁石を下降させるステップを更に含む、請求項９７に記載の方法。

【請求項100】

第２生物学的材料は、細胞溶解物又は培地である、請求項９７に記載の方法。

【請求項101】

第１生物学的材料は、
ａ．核酸分子、
ｂ．タンパク質、
ｃ．細胞、
ｄ．細胞外小胞、および
ｅ．ウイルス様粒子（ＶＬＰ）から成るグループから選択される、請求項９７に記載の方法。

【請求項102】

核酸分子は、リボ核酸（ＲＮＡ）分子である、請求項１０１に記載の方法。

【請求項103】

細胞は、哺乳動物細胞である、請求項１０１に記載の方法。

【請求項104】

細胞は、Ｔ細胞である、請求項１０３に記載の方法。

【請求項105】

タンパク質は、抗体である、請求項１０１に記載の方法。

【請求項106】

抗体との親和性結合は、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、又はこれらのタンパク質のうちの１つの機能的変異体によって形成される、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

細胞外小胞は、エキソソームである、請求項１０１に記載の方法。

【請求項108】

エキソソームは、Ｔ細胞によって生成される、請求項１０７に記載の方法。

【請求項109】

Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作される、項１０８に記載の方法。

【請求項110】

エキソソームとの親和性結合は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体によって形成される、請求項１０７に記載の方法。

【請求項111】

抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体は、ビオチン又はビオチン誘導体結合によって磁気ビーズに付着される、請求項１１０に記載の方法。

【請求項112】

抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体のうちの１つ以上が、ＶＨＨ(variable heavy-heavy)抗体である、請求項１１０に記載の方法。

【請求項113】

精製リボ核酸（ＲＮＡ）分子を製造するための方法であって、
ａ．磁場によって第１磁気ビーズを適所に固定するステップであって、インビトロ転写（ＩＶＴ）鋳型が第１磁気ビーズに連結される、ステップと、
ｂ．ＩＶＴが起こる条件下で、ステップ（ａ）の第１磁気ビーズを鋳型のＩＶＴに適した試薬混合物と接触させて、ＲＮＡ分子を生成するステップと、
ｃ．第１磁気ビーズからＲＮＡ分子を分離して、精製ＲＮＡ分子を生成するステップと、を含む方法。

【請求項114】

（ｄ）洗浄中に精製ＲＮＡ分子が第２磁気ビーズと会合したままであることを可能にする条件下で、ステップ（ｃ）の精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズと接触させるステップと、
（ｅ）第２磁石ビーズが磁場によって適所に固定される間に第２磁気ビーズを洗浄するステップと、
（ｆ）精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズとの会合から放出することによって高度に精製されたＲＮＡ分子を生成するステップと、を更に含む請求項１１３に記載の方法。

【請求項115】

ＩＶＴ鋳型は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成される、請求項１１３に記載の方法。

【請求項116】

１つ以上のビオチン化プライマーが、ＰＣＲに使用されて、ビオチン化ＩＶＴ鋳型の形成をもたらす、請求項１１５に記載の方法。

【請求項117】

ビオチン化ＩＶＴ鋳型は、ビオチン化ＩＶＴ鋳型のビオチンと、ビオチンに対する親和性を有する磁気ビーズ上の基との間の相互作用を介して磁気ビーズに付着される、請求項１１６に記載の方法。

【請求項118】

ＩＶＴ鋳型は、タンパク質をコードするオープンリーディングフレームと、オープンリーディングフレームに作動可能に接続されたプロモータとを含む、請求項１１３に記載の方法。

【請求項119】

遊離カルボン酸基が、第２磁気ビーズの表面に存在する、請求項１１４に記載の方法。

【請求項120】

精製ＲＮＡ又は高度に精製されたＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、請求項１１３又は１１４に記載の方法。

【請求項121】

ｍＲＮＡは、病原体のタンパク質をコードする、請求項１２０に記載の方法。

【請求項122】

請求項１２１に記載のｍＲＮＡ又はこのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含むワクチン組成物。

【請求項123】

１つ以上のプログラムを記憶する非一時的コンピュータ可読記憶媒体であって、
該１つ以上のプログラムは、ディスプレイを有する電子デバイスによって実行される場合に、電子デバイスに、
ディスプレイ上に、少なくとも１つの一次仮想バイオプロセスパラメータ入力を含む一次選択領域と、一次仮想バイオプロセスパラメータ入力をオーバーライド又は複製する少なくとも１つの二次仮想入力を含む二次選択領域とを備えるグラフィカルユーザインタフェースを表示させる、命令を含む、非一時的コンピュータ可読記憶媒体。

【請求項124】

二次仮想入力は、キャンセルステップ、一時停止ステップ、停止ステップ、スキップステップ、又は重複ステップの入力を含む、請求項１２３に記載の記憶媒体。

【請求項125】

一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、請求項１から４３及び６６のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、請求項１２３に記載の記憶媒体。

【請求項126】

一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、請求項４４～５９のいずれか一項に記載のビーズ処理システムの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、請求項１２３に記載の記憶媒体。

【請求項127】

一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、請求項６４～６５のいずれか一項に記載のロッカアセンブリの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、請求項１２３に記載の記憶媒体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、部分的には、生体細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えばＴ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞）を選択的に単離及び／又は活性化するための精選された使い捨て消耗キットと共に動作可能な磁気支持（例えば、ビーズ）処理装置、並びに他の生物学的材料の精製に関する。また、本発明は、例えば、磁気ビーズを使用してＴ細胞を選択的に単離及び／又は活性化するための、又はＴ細胞の活性化後にＴ細胞から磁気ビーズを分離するための精選された使い捨て消耗キットと共に動作可能な磁気ビーズ処理装置に関する。

【背景技術】

【0002】

細胞の単離及び／又は活性化のために磁気引力を使用する多くのデバイス、方法及び試薬が開発されている。多くの場合、ワークフローのある時点で磁性材料を細胞から分離することが望ましい。

【0003】

部分的には、磁性材料（例えば、ビーズなどの磁性支持体）の使用を伴う細胞関連ワークフローの改善を可能にするデバイス及び試薬が本明細書で提供される。

【0004】

本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムの幾つかの利点は、それらがステップに関して柔軟であり、スケーラブルで自動化されたワークフローで使用できることである。更に、これらの磁気処理システムは、閉鎖システム及び使い捨てワークフロー用に設計される場合もある。本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムが他の多くのタイプの磁気処理システムに優る１つの更なる利点は、本明細書に記載のアセンブリ及びシステムの磁石を磁性粒子に近づけることができる点である。これらの利点により、これらの磁気処理システムは商業的製造によく適している。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

（発明の概要）
本開示の１つの独立した態様では、磁気ビーズを生体細胞に付着させ、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離する際に使用するためのビーズ処理アセンブリが提供され、ビーズ処理アセンブリは、
ベースアセンブリであって、
ハウジングアセンブリと、
ハウジングアセンブリ上に配置されて前面を有する支持パネルと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、
を備えるベースアセンブリと、
ベースアセンブリ上に支持されるロッカアセンブリであって、
ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、
マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、
マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを繰り返し揺動させるための手段と、
を備えるロッカアセンブリと、を備える。

【0006】

１つの代替の実施形態において、ベースアセンブリは、ハウジングアセンブリにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、カバーパネルは、支持パネルの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルが支持パネルの前面を覆う閉位置との間で移動可能である。

【0007】

他の代替のノズル実施形態において、カバーパネルは、
ハウジングにヒンジ式に取り付けられ、開口を取り囲む外周フレームと、
開口内に配置される透明窓と、を備える。

【0008】

他の代替の実施形態において、支持パネルは、
前面を有するベースパネルであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプがベースパネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出するようにベースパネルに取り付けられる、ベースパネルと、
ベースパネルの前面に配置されるオーバーレイパネルであって、該オーバーレイパネルは、それを貫通して延びる開口を有し、該開口を通じて第１ピンチバルブ及び第１ポンプの少なくとも一部が突出する、オーバーレイパネルと、を備える。

【0009】

他の代替の実施形態において、支持パネルの前面は、ハウジングアセンブリが水平面上に載置されている場合に３０°～７０°の範囲の角度で配置される。

【0010】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、複数のピンチバルブは、少なくとも２つ、３つ、４つ、６つ又は８つのピンチバルブを備える。

【0011】

他の代替の実施形態では、第１ポンプは、蠕動ポンプを備える。

【0012】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備える。

【0013】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数の気泡センサを更に備え、複数の気泡センサは、少なくとも２つ、３つ、又は４つの気泡センサを備える。

【0014】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する圧力センサを更に備える。

【0015】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、
支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、
支持パネルに取り付けられる第１回転アセンブリと、
を更に備え、第１回転アセンブリは、
キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、
受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータと、を備える。

【0016】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、ビーズバイアルリテーナを更に備え、ビーズバイアルリテーナは、
バイアルを受けるように構成される本体と、
本体から延在する長尺アームと、
ベースアセンブリのハウジングアセンブリ内に少なくとも部分的に配置され、アームの自由端に接続されるモータであって、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度に渡って垂直に往復回転させるように構成される、モータと、を含む。

【0017】

他の代替の実施形態において、ビーズバイアルリテーナの本体は、
Ｃ字形チャネルを境界付ける内面と、
内面から径方向内側に突出する肩部と、を備える。

【0018】

他の代替の実施形態において、ロッカアセンブリのマウントアセンブリは、ベースアセンブリに取り付けられた第１ライザ及び離間した第２ライザを備え、プラットフォームアセンブリは、第１ライザ及び第２ライザに回動可能に結合され、第１ライザと第２ライザとの間に少なくとも部分的に配置される。

【0019】

他の代替の実施形態において、マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを繰り返し揺動させるための手段は、
クランクと、
クランクを選択的に回転させるモータと、
クランクからプラットフォームアセンブリまで延在する接続アームと、を備える。

【0020】

他の代替の実施形態において、プラットフォームアセンブリは、
区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、
ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、
ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、
作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるためにハウジングアセンブリの区画室内に少なくとも部分的に配置される手段と、を備える。

【0021】

他の代替の実施形態において、磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるため手段は、
ハウジングアセンブリの区画室内に少なくとも部分的に配置されたシザーリフトと、
シザーリフトを動作させるモータと、を備える。

【0022】

他の代替の実施形態において、シザーリフトは、
磁石アセンブリが上に配置される棚と、
ハウジングアセンブリと棚との間で延在する第１シザーアーム対と、
ハウジングアセンブリと棚との間で延在して第１シザーアーム対から離間される第２シザーアーム対と、
モータに結合されるねじ付きシャフトと、
カラーであって、モータによるねじ付きシャフトの回転がねじ付きシャフトに沿うカラーの直線動作を容易にするようにねじ付きシャフトと係合するとともに、第１シザーアーム対及び第２シザーアーム対とも係合する、カラーと、を備える。

【0023】

他の代替の実施形態は、上面及び反対側の底面を有する支持プレートを備えるプラットフォームを更に備え、
磁石アセンブリが作動位置まで持ち上げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から１ｃｍ、０．５ｃｍ、又は０．２ｃｍ以内にある。

【0024】

他の代替の実施形態において、磁石アセンブリが非作動位置まで下げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から少なくとも４ｃｍ、５ｃｍ、又は６ｃｍ離れている。

【0025】

他の代替の実施形態では、磁石アセンブリが磁石を備える。

【0026】

他の代替の実施形態において、磁石アセンブリは、
外周縁部まで延在する上面及び反対側の底面を有する非磁性ケーシングを備え、凹部が上面に形成されて外周縁部を有し、
磁石がケーシングの凹部内に配置される。

【0027】

他の代替の実施形態において、磁石は、ハルバッハ配列を生成するように複数の交互の向きに配置された複数の別個の離散した磁石を備える。

【0028】

他の代替の実施形態において、凹部の外周縁部がケーシングの外周縁部から少なくとも０．５ｃｍ、１ｃｍ、１．５ｃｍ又は２ｃｍ挿入されている。

【0029】

他の代替の実施形態では、ケーシング及び磁石がそれぞれ長方形の形態を有する

【0030】

他の代替の実施形態において、プラットフォームアセンブリは、プラットフォームを少なくとも部分的に覆うとともにプラットフォームに対して移動可能なカバーアセンブリを更に備える。

【0031】

他の代替の実施形態において、カバーアセンブリは、
開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、プラットフォームが少なくとも部分的にカバーハウジングの開口内に配置される、カバーハウジングと、
開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられた蓋であって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う、蓋と、を備える。

【0032】

他の代替の実施形態において、カバープレートは、カバーハウジングにヒンジ式に取り付けられる。

【0033】

他の代替の実施形態は、カバープレートが閉位置にあるときにカバープレートをカバーハウジングに固定するための第１ラッチを更に含む。

【0034】

他の代替の実施形態は、プラットフォームから離れるカバーアセンブリの動作を弾性的に抑制するための手段を更に含む。

【0035】

他の代替の実施形態において、動作を弾性的に抑制する手段は、
第１端部及び反対側の第２端部を有し、第１端部がカバーアセンブリに固定されてカバーアセンブリから突出するロッドと、
ロッドと係合されるばねであって、カバーアセンブリをプラットフォームから離れるように移動させるべく力が使用される際にばねがカバーアセンブリをプラットフォームに向けて弾性的に付勢するようになっている、ばねと、を備える。

【0036】

他の代替の実施形態は、抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に備え、抑制位置において、ストッパは、プラットフォームに対するロッドのいくらかの移動を妨げるように位置され、非抑制位置では、ストッパがロッドの移動を妨げない。

【0037】

他の代替の実施形態は、ハウジングアセンブリに取り付けられたソレノイドバルブを更に備え、ソレノイドバルブは、ストッパを抑制位置と非抑制位置との間で移動させる。

【0038】

他の代替の実施形態は、ハウジングアセンブリに形成された穴であって、ロッドが穴内に摺動可能に配置されている、穴と、
ロッドの第２端部から外向きに突出するフランジと、
を更に備え、ばねは、ロッドがカバーアセンブリと同時に持ち上げられるときにばねが弾性的に圧縮されるように、フランジとハウジングアセンブリとの間で延在する。

【0039】

他の代替の実施形態は、抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に含み、抑制位置において、ストッパは、フランジ及びフランジに取り付けられたロッドのいくらかの動きを阻止するようにフランジと位置合わせされ、非抑制位置において、ストッパは、フランジと位置合わせされず、したがってフランジ又はフランジに取り付けられたロッドの動きを妨げない。

【0040】

他の代替の実施形態は、カバーハウジングに形成されてカバーハウジングの開口と連通する凹部と、
凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリと、
を更に備え、クランプアセンブリは、
下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、
上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、
上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるようにクランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具と、を備える。

【0041】

他の代替の実施形態において、カバーハウジングは、凹部の対向する各端部に形成されたＵ字形チャネルを更に備え、クランプアセンブリの対向する端部が、Ｕ字形チャネルと共に摺動可能に配置されている。

【0042】

他の代替の実施形態において、プラットフォームは、
上面及び反対側の底面を有する支持プレートと、
支持プレートから離れて突出するとともにハウジングアセンブリに固定される側壁と、
を備え、支持プレート及び側壁は、磁石アセンブリが上昇作動位置にあるときに磁石アセンブリが受けられるキャビティを少なくとも部分的に結合する。

【0043】

本開示の第２独立した態様は、磁気ビーズを生体細胞に付着させるため、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムを含み、ビーズ処理システムは、
ビーズ処理アセンブリであって、
ハウジングアセンブリと、
ハウジングアセンブリ上に配置されて前面を有する支持パネルと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、
支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプと、
を備えるベースアセンブリと、
ベースアセンブリ上に支持されるとともに、
ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、
マウントアセンブリに回動可能に固定されてプラットフォームを備えるプラットフォームアセンブリと、
マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを繰り返し揺動させるための手段と、
を備えるロッカアセンブリと、
を備える、ビーズ処理アセンブリと、
消耗キットであって、
前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプが複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出するように支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にされるトレイと、
トレイの前面に固定されたラインセットであって、
トレイの前面に固定されるとともに第１ピンチバルブ及び第１ポンプと係合する可撓性チューブと、
チューブに結合された複数の可撓性バッグ流体であって、複数の可撓性バッグがプラットフォームアセンブリのプラットフォーム上に支持された処理バッグを備える、複数の可撓性バッグ流体と、
を備えるラインセットと、
を備える、消耗キットと、を備える。

【0044】

１つの代替の実施形態において、ベースアセンブリは、ハウジングアセンブリにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、カバーパネルは、トレイの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルがトレイの前面を覆う閉位置との間で移動可能である。

【0045】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、複数のピンチバルブは、少なくとも２、３、４、６、又は８つのピンチバルブを備え、複数のピンチバルブのそれぞれは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出して可撓性チューブと係合する。

【0046】

他の代替の実施形態において、ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備え、第１気泡センサは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じ突出して可撓性チューブと係合する。

【0047】

他の代替の実施形態は、支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、
支持パネルに取り付けられた第１回転アセンブリと、
を更に含み、第１回転アセンブリは、
キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、
受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータと、
ラインセットのチューブに結合されたストップコック流体であって、ストップコックが受け部のキー付きソケット内に受けられる回転可能なハンドルを有する、ストップコック流体と、
ストップコックと結合されたエアフィルタ流体と、を備える。

【0048】

他の代替の実施形態は、ビーズバイアルリテーナを更に備え、該ビーズバイアルリテーナは、
バイアルを受けるように構成されるチャネルを有する本体と、
本体から延在する長尺アームと、
ベースアセンブリのハウジングアセンブリ内に少なくとも部分的に配置されるとともにアームの自由端に接続されるモータであって、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度にわたって垂直に往復回転させるように構成される、モータと、
本体のチャネル内に受けられるバイアルであって、磁気ビーズ及び媒体を収容し、ラインセットのチューブがバイアルと流体結合されている、バイアルと、を含む。

【0049】

他の代替の実施形態において、プラットフォームアセンブリは、
区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、
ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、
ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、
作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるためにハウジングアセンブリの区画室内に少なくとも部分的に配置される手段と、を備える。

【0050】

他の代替の実施形態において、プラットフォームアセンブリは、プラットフォーム及びプラットフォーム上の処理バッグを少なくとも部分的に覆うカバーアセンブリを更に備え、カバーアセンブリは、処理バッグが拡張するときにプラットフォームに対して移動可能である。

【0051】

他の代替の実施形態は、プラットフォームから離れるカバーアセンブリの動作を弾性的に抑制するための手段を更に含む。

【0052】

他の代替の実施形態において、カバーアセンブリは、
開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、処理バッグが少なくとも部分的にカバーハウジングの開口内に配置される、カバーハウジングと、
開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられたカバープレートであって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆うカバープレートと、を備える。

【0053】

他の代替の実施形態は、
カバーハウジングに形成されてカバーハウジングの開口と連通する凹部と、
凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリと、
を更に備え、クランプアセンブリは、
下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、
上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、
上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるようにクランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具と、
を備え、プラットフォーム上に配置された処理バッグは、位置合わせされた上側クランプ溝及び下側クランプ溝の中に少なくとも部分的に配置されるとともにベースクランプとクランプクロージャとの間にクランプされるポートを有する。

【0054】

他の代替の実施形態は、ラインセットのチューブに結合され、媒体を収容する第１媒体バッグ流体を更に含む。

【0055】

他の代替の実施形態において、ビーズ処理アセンブリは、ベースアセンブリから直立するとともにそこから外側に突出するキャッチを有するスタンドを更に備え、媒体バッグがキャッチ上に支持される。

【0056】

他の代替の実施形態において、ラインセットのチューブは、生体細胞分離器と流体結合される。

【0057】

他の代替の実施形態において、ラインセットのチューブは、生体細胞増殖システムと流体結合される。

【0058】

他の代替の実施形態では、処理バッグがビーズ分離バッグを備え、ビーズ分離バッグは、
ポリマーフィルムから構成されるとともに区画室を境界付ける折り畳み可能な袋体と、
袋体に結合されて区画室と連通する一対の離間したポートと、
一対の離間したポート間の位置で袋体の区画室内に配置される長尺な仕切りであって、ポートの一方に入る流体が他方のポートを通じて出ることができる前に仕切りの周りを流れなければならないように袋体に固定される、仕切りと、を備える。

【0059】

本開示の第３の独立した態様においては、磁気ビーズ処理アセンブリと共に使用するための消耗キットが提供され、消耗キットは、
前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイと、
トレイの前面に固定されるラインセットと、
を備え、ラインセットは、
トレイの前面に固定される可撓性チューブと、
チューブと結合された複数の可撓性バッグ流体と、
チューブに結合されたエアフィルタアセンブリと、を備える。

【0060】

１つの代替の実施形態において、エアフィルタアセンブリは、
チューブと結合されるストップコック流体であって、ストップコックは、
トレイの前面から外側に突出するスリーブと、
スリーブ内に回転可能に配置されるバルブと、
バルブを選択的に回転させるためにバルブに固定され、トレイの背面から外側に突出するハンドルと、を備える、ストップコック流体と、
スリーブと結合されるエアフィルタ流体と、を備える。

【0061】

他の代替の実施形態は、トレイの前面に配置され、チューブと流体結合される混合バッグを更に含む。

【0062】

他の代替の実施形態は、ラインセットのチューブに結合されたビーズバイアルカプラ流体と、
ビーズバイアルカプラに固定され、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容するバイアルと、を更に含む。

【0063】

本開示の第３の独立した態様は、磁気ビーズを生体細胞に付着させるため及び／又は磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムを動作させるための方法を含み、該方法は、
第１ピンチバルブ及び支持パネルから突出する第１ポンプがトレイに形成された対応する開口を通過するようにトレイをビーズ処理アセンブリの支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にするステップと、
トレイ上に配置されたラインセットのチューブを第１ピンチバルブ及び第１ポンプに係合させるステップと、
ラインセットと結合された処理バッグ流体をビーズ処理アセンブリのプラットフォーム上に配置するステップと、
を含む。

【0064】

他の代替の実施形態は、バイアルをラインセットのチューブに結合する流体を更に含み、バイアルは、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容する。

【0065】

他の代替の実施形態は、液体媒体を収容する媒体バッグをビーズ処理アセンブリのバッグスタンド上に支持することを更に含む。

【0066】

他の代替の実施形態は、ラインセットのチューブを生体細胞分離器に結合する流体を更に含む。

【0067】

他の代替の実施形態は、ラインセットのチューブを生体細胞増殖システムに結合する流体を更に含む。

【0068】

他の代替の実施形態は、ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームの揺動をコンピュータプロセッサが容易にするように作動させるステップを更に含む。

【0069】

他の代替の実施形態は、ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームに対する磁石の上昇及び下降をコンピュータプロセッサが容易にするように作動させるステップを更に含む。

【0070】

他の代替の実施形態は、ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、プラットフォーム上の処理バッグに流体を送達するために第１ピンチバルブ及び第１ポンプの制御をコンピュータプロセッサが容易にするように作動させるステップを更に含む。

【0071】

他の代替の実施形態は、ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、ラインセットのチューブと結合されたバイアル流体の移動をコンピュータプロセッサが容易にしてバイアル内に配置された懸濁液を混合するように作動させるステップを更に含み、懸濁液が磁気ビーズ及びキャリア液体を含む。

【0072】

他の代替の実施形態は、Ｔ細胞である生体細胞を更に含む。

【0073】

他の代替の実施形態では、生体細胞が抗原－抗体相互作用を介して磁気ビーズに付着される。

【0074】

他の代替の実施形態では、生体細胞が抗原－抗体相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される

【0075】

他の代替の実施形態では、抗原－抗体相互作用の破壊は、抗体の切断によって媒介される。

【0076】

他の代替の実施形態では、抗体を磁気ビーズから分離することによって生体細胞が磁気ビーズから分離される。

【0077】

他の代替の実施形態では、抗体がリガンドによって磁気ビーズに連結される。

【0078】

他の代替の実施形態において、生体細胞は、抗体又は磁気ビーズとのリガンド相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される。

【0079】

他の代替の実施形態では、生体細胞がＴ細胞である。

【0080】

本開示の第５の独立した態様では、ビーズ処理システムを使用して第１細胞型の生体細胞を第２細胞型の生体細胞から分離するための方法が提供され、該方法は、
第１細胞型及び第２細胞型の生体細胞を含む試料を、磁気ビーズが抗体結合を介して第１細胞型の生体細胞に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズが、プラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、
プラットフォームに対して磁石を上昇させて、プラットフォームに対して所定の位置に磁気ビーズを強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１細胞型の生体細胞が付着される、ステップと、
磁気ビーズに磁場が印加された状態で流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップであって、第１細胞型の生体細胞から第２細胞型の生体細胞を洗い流すのに十分強いが第１細胞型の生体細胞を磁気ビーズから分離するには不十分な力で流体が通過する、ステップと、
第１細胞型の生体細胞が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないようにプラットフォームに対して磁石を下降させるステップと、を含む。

【0081】

１つの代替の実施形態において、抗体は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７及びＣＤ２７８から成るグループから選択されるタンパク質に対する結合親和性を有する。

【0082】

他の代替の実施形態において、抗体は、ＣＤ３又はＣＤ２８を含むタンパク質に対する結合親和性を有する

【0083】

他の代替の実施形態において、第１細胞型は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞である。

【0084】

他の代替の実施形態は、第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから分離するステップと、
磁気ビーズを定位置に強固に固定するために磁気ビーズに磁場を印加するステップと、
磁場が印加されている間に磁気ビーズ及び第１細胞型の分離された生体細胞に流体を通過させるステップであって、磁気ビーズの少なくとも大部分が磁場によって定位置に固定されたままの状態で第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから洗い流すのに十分強い力で流体が通過する、ステップと、を含む。

【0085】

他の代替の実施形態では、第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分が磁気ビーズから洗い流されている間に、９５％を超える（例えば、約９５％～約９９．９９９９９９％、約９５％～約９９．９９９９％、約９８％～約９９．９９９９９９％、約９９％～約９９．９９９９９９％、約９９．５％～約９９．９９９９９９％、約９９．９％～約９９．９９９９９９％など）磁気ビーズが磁場によって定位置に保持される。

【0086】

他の代替の実施形態では、９５％を超える（例えば、約９５％～約９９．９９９９９９％、約９５％～約９９．９９９９％、約９８％～約９９．９９９９９９％、約９９％～約９９．９９９９９９％、約９９．５％～約９９．９９９９９９％、約９９．９％～約９９．９９９９９９％など）磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される。

【0087】

他の代替の実施形態では、第１細胞型の生体細胞から分離された９５％を超える（例えば、約９５％～約９９．９９９９９９％、約９５％～約９９．９９９９％、約９８％～約９９．９９９９９９％、約９９％～約９９．９９９９９９％、約９９．５％～約９９．９９９９９９％、約９９．９％～約９９．９９９９９９％など）磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される。

【0088】

他の代替の実施形態において、磁気ビーズは、直径が約０．０１μｍ～約３μｍ、約０．０１μｍ～約１μｍ、約０．０２μｍ～約２μｍ、約０．０４μｍ～約３μｍ、約０．４μｍ～約１．５μｍ、約０．５μｍ～約３μｍ、約０．１μｍ～約３μｍ、約０．２μｍ～約３μｍ、約０．１μｍ～約２０μｍ、約０．１μｍ～約１０μｍ、約０．２μｍ～約５μｍ、約０．３μｍ～約１５μｍ、約０．３μｍ～約１０μｍ、又は約０．５μｍ～約３μｍである。

【0089】

本明細書では、部分的に、ビーズ処理システムを使用して第１生物学的材料（例えば、核酸分子、タンパク質、細胞、細胞外小胞、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）など）を第２生物学的材料（例えば、細胞溶解物、培地、ＩＶＴ反応混合物など）から分離するための組成物及び方法が更に提供される。ある場合には、そのような方法は、（ａ）第１生物学的材料及び第２生物学的材料を含む試料を、磁気ビーズが親和性結合を介して第１生物学的材料に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズがプラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、（ｂ）プラットフォームに対して磁石を移動させて（例えば、上昇させて）、プラットフォームに対して磁気ビーズを所定の位置に強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１生物学的材料が付着される、ステップと、（ｃ）磁場が磁気ビーズに印加される状態で試料及び磁気ビーズに第１流体を通過させることにより、第１生物学的材料を第２生物学的材料から分離するステップとを含んでもよい。多くの場合、第１流体は、第１生物学的材料から第２生物学的材料を洗い流すのに十分強い力で通過され得る。

【0090】

上記のような方法は、（ｄ）磁場が磁気ビーズに印加される間に第２流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップを更に含み、第２流体が磁気ビーズからの第１生物学的材料の放出を誘導する。

【0091】

上記のような方法は、（ｄ）第１生物学的材料が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないようにプラットフォームに対して磁石を下降させるステップを更に含んでもよい。幾つかの例では、次いで、磁気ビーズを収集することができる。

【0092】

更に、第１生物学的材料が核酸分子である場合、核酸分子は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、無細胞ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡなど。）又はリボ核酸（ＲＮＡ）分子（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、ガイドＲＮＡ、ｔｒａｃｒ ＲＮＡ、ｃｒＲＮＡなど）であってもよい。更に、第１生物学的材料がｍＲＮＡ分子である場合、ｍＲＮＡ分子は、病原体の１つ以上のタンパク質（例えば、ウイルス）をコードし得る。病原体剤の１つ以上のタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子は、ワクチン組成物の成分であり得る。したがって、本明細書では、ワクチンを産生するために使用され得るｍＲＮＡ分子の産生方法が提供される。

【0093】

第１生物学的材料が１つ又は複数の細胞である場合、これらの細胞は、Ｂ細胞、赤血球、単球、幹細胞、総Ｔ細胞、ヘルパーＴヘルパー細胞、制御性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、血小板、並びに他の細胞型であり得る。更に、細胞は哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシ、ゴリラ、ラマ、ラクダ、チンパンジーなど）に由来し得る。

【0094】

第１生物学的材料がタンパク質である場合、タンパク質は、抗体、酵素、受容体（例えば、細胞表面受容体）などであり得る。更に、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、又はこれらのタンパク質の１つの機能的変異体を使用して、本明細書に記載の方法を使用して精製された抗体と親和性結合を形成することができる。

【0095】

第１生物学的材料が細胞外小胞である場合、この小胞は、エキソソーム、微小胞、アポトーシス小体などであり得る。更に、小胞（例えば、エキソソーム）は、キメラ抗原受容体（例えば、ＣＤ１９－ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞などのＴ細胞によって生成され得る。そのような小胞（例えば、エキソソーム）は、特定の細胞（例えば、腫瘍細胞）に対して細胞傷害性を示し得る。

【0096】

Ｔ細胞によって生成された小胞（例えば、エキソソーム）は、ＣＤ３、ＣＤ４及び／又はＣＤ８受容体と親和性結合を形成する磁気ビーズを使用して他の生物学的材料から分離され得る。多くの場合、そのような方法は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体を使用し得る。更に、そのような抗体は、例えば、モノクローナル抗体又は可変重（ＶＨＨ）抗体であり得る。更に、そのような抗体は、ビオチン又はビオチン誘導体ベースの結合によって磁気ビーズに付着され得る。

【0097】

精製リボ核酸（ＲＮＡ）分子を生成するための組成物及び方法を、本明細書中に更に提供する。そのような方法は、（ａ）磁場によって第１磁気ビーズを適所に固定するステップであって、インビトロ転写（ＩＶＴ）鋳型が第１磁気ビーズに連結される、ステップと、（ｂ）ＩＶＴが起こる条件下でステップ（ａ）の第１磁気ビーズを鋳型のＩＶＴに適した試薬混合物と接触させることによってＲＮＡ分子を生成するステップと、（ｃ）第１磁気ビーズからＲＮＡ分子を分離することによって精製ＲＮＡ分子を生成するステップとを含む。

【0098】

ある場合には、（ｄ）洗浄中に精製ＲＮＡ分子が第２磁気ビーズと会合したままであることを可能にする条件下で、ステップ（ｃ）の精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズと接触させるステップと、（ｅ）第２磁石ビーズが磁場によって適所に固定される間に第２磁気ビーズを洗浄するステップと、（ｆ）精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズとの会合から放出することによって高度に精製されたＲＮＡ分子を生成するステップとを更に含む方法が提供される。

【0099】

幾つかの例では、ＩＶＴ鋳型はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって産生され得る。更に、１つ以上のビオチン化プライマーをＰＣＲに使用して、ビオチン化ＩＶＴ鋳型を形成することができる。更に、ビオチン化ＩＶＴ鋳型は、ビオチン化ＩＶＴ鋳型のビオチンと、ビオチンに対する親和性を有する磁気ビーズ上の基との間の相互作用を介して磁気ビーズに付着され得る。

【0100】

ある場合には、ＩＶＴ鋳型は、タンパク質をコードするオープンリーディングフレームと、オープンリーディングフレームに作動可能に接続されたプロモータとを含んでもよい。

【0101】

第２磁気ビーズは、幾つかの異なる方法でＲＮＡと会合し得るが、幾つかの例では、遊離カルボン酸基がこれらのビーズの表面に存在し得る。

【0102】

更に、本明細書に記載のように生成される精製ＲＮＡ又は高度に精製されたＲＮＡは、病原体の１つ以上のタンパク質をコードするｍＲＮＡなどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。そのようなｍＲＮＡ又はそのようなｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含むワクチン組成物を、本明細書中に更に提供する。

【0103】

そのようなワクチン組成物に使用されるｍＲＮＡは、例えば、脂質ナノ粒子に含まれ得る（例えば、国際公開第２０２１／１５９１３０号パンフレット参照）

【図面の簡単な説明】

【0104】

次に、本発明の様々な実施形態を、添付図面を参照して説明する。これらの図面は、本発明の典型的な実施形態のみを示しており、したがって、その範囲を限定するものと見なされるべきではないことが理解される。

【0105】

【図1】所望のＴ細胞の産生に使用するための機器ワークフローシステムのフロー図である。

【図2】図１のシステムで使用される磁気ビーズ処理装置の正面斜視図である。

【図3】図２に示される装置の背面斜視図である。

【図4】図２に示される装置の分解図である。

【図5】フロントカバーを取り外した状態の図２に示される装置の正面斜視図である。

【図6】図５の装置に示されるピンチバルブの斜視図である。

【図7】図５の装置と共に使用するための回転アセンブリ及びエアフィルタアセンブリの斜視図である。

【図8】図７に示される構成要素の分解図である。

【図9】装置と共に動作する使い捨て消耗キットを伴う図５に示される装置の斜視図である。

【図10】図９に示される消耗キットの分解図である。

【図11】図９に示される装置の支持パネルに取り付けられた消耗キットの上面図である。

【図12】図２に示される装置のビーズバイアルリテーナの斜視図である。

【図13】回転位置にある図１２に示されるビーズバイアルリテーナの斜視図である。

【図14】図１０の消耗キットと共に使用されるビーズバイアルカプラに取り付けられたビーズバイアルの斜視図である。

【図15】図２に示される装置のロッカアセンブリの斜視図である。

【図16】図１５に示されるロッカアセンブリのロッカドライバの斜視図である。

【図17】磁石アセンブリを示す１５に示されるロッカアセンブリの部分分解図である。

【図18A】図１７に示される磁石アセンブリの磁石の一部の一実施形態の斜視図である。

【図18B】ハルバッハ配列、及びそのような配列を生成するために使用される磁石が互いに対してどのように配置され得るかの概略図である。

【図19】図１５に示されるロッカアセンブリのリフトアセンブリの上面斜視図である。

【図20】第１位置にあるリフトアセンブリを示す図１５に示されるロッカアセンブリの断面側面図である。

【図21】第２位置にあるリフトアセンブリを示す図２０に示されるロッカアセンブリの断面側面図である。

【図22】そのカバーアセンブリが分解された図１５に示されるロッカアセンブリの部分分解図である。

【図23】図２２に示されるばねアセンブリの拡大斜視図である。

【図24】そのフランジがストッパに当接した図２３に示されるばねアセンブリの斜視図である。

【図25】ストッパがフランジから引き込まれた図２４に示されるばねアセンブリの斜視図である。

【図26】バッグが第１拡張位置にある図１５に示されるロッカアセンブリの断面側面図である。

【図27】図２２に示されるクランプアセンブリの拡大斜視図である。

【図28】単離バッグと結合された図２７に示されるクランプアセンブリの斜視図である。

【図29】図２８に示される単離バッグの上面図である。

【図30】図２９に示される単離バッグの上面図であり、横方向に延びるシールラインを有する。

【図31】図２９に示される単離バッグの上面図であり、長手方向に横切って延びる一対の平行なシール線を有する。

【図32】一対のシールラインが外側に広がる、図３１に示される単離バッグの上面図である。

【図33】図５に示される磁気ビーズ処理装置と共に使用することができる別の消耗キットの上面図である。

【図34】図３３に示される消耗キットのビーズ分離バッグの上面図である。

【図35】図５に示される装置の支持パネルに取り付けられた図３３に示される消耗キットの上面図である。

【図36】図３４に示されるビーズ分離バッグと共に使用するためのクランプアセンブリの拡大斜視図である。

【図37】ビーズ分離バッグと結合された図３６に示されるクランプアセンブリの斜視図である。

【図38】多くの場合自動化されたワークフロー（したがって、点線ボックス）の一部ではない採血から始まり、ワークフロー中に生成された細胞の製剤化で終わる一連のステップを含む例示的な細胞処理ワークフローの概略図である。ステップ３とステップ４のボックスは、それらの別々のステップが幾つかのワークフローで単一のステップに組み合わされ得るので、点線で接続される。

【図39】ビーズに結合した細胞の概略図を示す。この概略図では、抗体は、抗体の抗原結合部位によって細胞の表面受容体（「Ｒ」と標識される）に結合される。更に、抗体のＦｃ領域は、抗体をビーズに接続するリンカー（「Ｌ」と標識される）に連結される。「切断部位」は、抗体を切断し、それによってリンカーに関連する抗体の領域から抗体結合部位を分離するために使用され得る抗体中の位置を指す。

【図40】図３３に示される消耗キットのビーズ分離バッグ６００の上面図である。

【図41】図２に示されるビーズ処理装置の別の実施形態の正面斜視図である。

【図42】図４１に示されるビーズ処理装置の背面斜視図である。

【図43】マウントアセンブリ及びそのロッカドライバを示す、図４１に示されるビーズ処理装置のロッカアセンブリの部分分解背面図である。

【図44】そのハウジングアセンブリ、リフト、棚、及び磁石アセンブリを示す、図４３のロッカアセンブリの部分分解斜視図である。

【図45】図４３に示されるロッカアセンブリのプラットフォームの分解斜視図である。

【図46】図４３に示されるロッカアセンブリの上端の横断面図である。

【図47】図４３に示されるロッカアセンブリのカバーハウジングの分解斜視図である。

【図48】図４３に示されるロッカアセンブリの蓋の分解斜視図である。

【図49】図４３に示されるロッカアセンブリの上端の前後断面図である。

【図50】蓋が取り外され、その上にバッグが取り付けられた、図４３に示されるロッカアセンブリの上面斜視図である。

【図51】図４１に示されるビーズ処理装置のバッグスタンドの上端の斜視図である。

【図52】図４１に示されるビーズ処理装置と共に使用することができる消耗キットの一実施形態の上面図である。

【図53】図４１に示されるビーズ処理装置に取り付けられた図５２に示される消耗キットの正面図である。

【図54】図４１に示されるビーズ処理装置のチューブ抑制の斜視図である。

【図55】図５３に示される消耗キットと共に使用することができるビーズを有するビーズバッグの正面図である。

【図56】図４１に示されるビーズ処理装置と共に使用することができる消耗キットの他の実施形態の平面図である。

【図57】図４１に示されるビーズ処理装置に取り付けられた図５６に示される消耗キットの正面図である。

【図58】本明細書に開示される処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェースを示す。

【図59】本明細書に開示される処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェースを示す。

【図60】本明細書に開示される処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェースを示す。

【図61】本明細書に開示される処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェースを示す。

【図62】本明細書に開示される処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェースを示す。

【図63】実施例５に記載のワークフローの一部の概略図であり、ストレプトアビジン（ＳｔＡ）ビーズへの鋳型固定化に関する。

【図64】実施例５に記載されるワークフローの一部の概略図であり、固相インビトロ転写（ＩＶＴ）に関する。

【図65】実施例５に記載されたワークフローの一部の概略図であり、一般的な取り込みに関する。

【発明を実施するための形態】

【0106】

本開示を詳細に説明する前に、本開示は、当然のことながら変化し得る特に例示された装置、システム、方法、又はプロセスパラメータに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される用語は、本開示の特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、本開示の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。

【0107】

本明細書で引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、上記であろうと下記であろうと、個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。更に、以下の米国特許文献が参照により具体的に組み込まれる：米国仮特許出願第６３／０９０，３９９号（２０２０年１０月１２日出願）及び第６３／１３７，３８９号（２０２１年１月１４日出願）；米国特許出願公開第２０１７／０３１３７７２号明細書；２０１９年１月１０日に公開された米国特許公開第２０１９／００１０４３５号、並びに米国特許第９，５６７，３４６号及び第１０，１９６，６３１号、並びにＰＣＴ公開ＷＯ２０２１／１５９１３０Ａ２。

【0108】

用語「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」又は「特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義であり、包括的又はオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素又は方法ステップを排除しない。

【0109】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポート」への言及は、１つ、２つ、又はそれ以上のポートを含む。

【0110】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、「上端（ｔｏｐ）」、「下端（ｂｏｔｔｏｍ）」、「左（ｌｅｆｔ）」、「右（ｒｉｇｈｔ）」、「上方（ｕｐ）」、「下方（ｄｏｗｎ）」、「上側（ｕｐｐｅｒ）」、「下側（ｌｏｗｅｒ）」、「内側（ｉｎｎｅｒ）」、「外側（ｏｕｔｅｒ）」、「内部（ｉｎｔｅｒｎａｌ）」、「外部（ｅｘｔｅｒｉｏｒ）」、「近位（ｐｒｏｘｉｍａｌ）」、「遠位（ｄｉｓｔａｌ）」などの方向を表す用語は、本明細書では相対的な方向を示すためにのみ使用され、本開示又は特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。

【0111】

本明細書で使用される「支持体」は、抗体を付着させることができる任意の非水溶性材料を指し、金属、ガラス、プラスチック、コポリマー、コロイド、脂質などが含まれるが、これらに限定されない。本質的に、結合又は付着した抗体を保持することができる任意の非水溶性材料。

【0112】

本明細書で使用される場合、「磁性支持体」という用語は、磁場に引き付けられることが可能な構造材料を指す。多くの場合、磁性支持体は、１つ以上の磁性金属（例えば、鉄、コバルト、ニッケルなど）を含む。多くの場合、磁性支持体は磁気ビーズである。市販の磁気ビーズの例は、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．１１１４１Ｄ）、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．４０２０３Ｄ）、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｔｒｅｇ Ｘｐａｎｄｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．４６０００Ｄ号）、及びＭＡＣＳ（商標）ＧＭＰ ＥｘｐＡｃｔ Ｔｒｅｇ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号．第１７０－０７６－１１９号）に含まれる粒子である。

【0113】

本明細書で使用される場合、「リガンド」という用語は、１つ以上の定義された細胞集団（例えば、Ｔ細胞亜集団のメンバー）に結合する分子を指す。リガンド結合は、それが結合する細胞の単離のために使用され得るか、単独で又は１つもしくはそれを超える更なるリガンドと組み合わせて結合した場合に細胞応答を誘導し得る。例えば、ＣＤ３及びＣＤ２８受容体に結合するリガンドを使用して、Ｔ細胞を活性化することができる

【0114】

リガンドは、任意の細胞表面部分、例えば、受容体、抗原決定基、又は標的細胞集団上に存在する他の結合部位に結合し得る。薬剤は、タンパク質、ペプチド、抗体及びその抗体断片、融合タンパク質、合成分子、有機分子（例えば、小分子）などであり得る。本明細書内及びＴ細胞刺激の文脈において、抗体は、そのような薬剤のプロトタイプの例として使用される。

【0115】

本明細書で使用される場合、「分離」という用語は、混合物の１つの成分を同じ混合物の別の成分から分割することを指す。

【0116】

本明細書で使用される場合、「精製」は、別の材料との関係で増加した材料の量を意味する。例として、タンパク質Ｘの元の濃度が１μｇ／ｍｌであり、プロセスの終わりにタンパク質Ｘの最終濃度が依然として１μｇ／ｍｌであるが、タンパク質Ｙの濃度が２μｇ／ｍｌから２μｇ／ｍｌになったようにタンパク質Ｘが処理される場合、タンパク質Ｘは精製されている。更に、「精製」は、材料（例えば、タンパク質、核酸など。）が精製されるプロセスを指す。

【0117】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、（ａ）免疫グロブリン（例えば、任意の動物、例えば、従来使用されている任意の動物、例えば、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、マウス、ラクダ科動物、又は卵黄に由来するＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ又はＩｇＥ）の様々なクラス又はサブクラスのいずれか、（ｂ）モノクローナル又はポリクローナル抗体、（ｃ）インタクトな抗体又は抗体の断片、モノクローナル又はポリクローナルであり、断片は、抗体の結合領域を含むもの、例えば、Ｆｃ部分を欠く断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｖ_ＨＨ抗体、ＶＨＨ抗体断片、並びに他の単一ドメイン抗体）、インタクトな抗体の重鎖成分を連結するジスルフィド結合の還元的切断によって得られるいわゆる「半分子」断片（Ｆｖは、二本鎖として発現される軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域を含む断片として定義され得る）、及び（ｄ）組換えＤＮＡ又は他の合成技術によって産生又は改変された抗体、例えばモノクローナル抗体、抗体の断片、「ヒト化抗体」、キメラ抗体、又は合成的に作製又は改変された抗体様構造を含む。

【0118】

本明細書に記載の組成物及び方法で使用され得る抗ＣＤ３抗体には、以下のクローンによって発現されるものが含まれる：ＯＫＴ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号．１４－００３７－８２）、ＢＣ３（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，寄託番号ＨＢ－１０１６６）、ＨＩＴ３ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号．１６－００３９－８１）、Ｆ７．２．３８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．番号ＭＡ５－１２５７７）、ＭＥＭ－５７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．ＭＡ１－１９４５４）、及びＵＣＨＴ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号．１６－００３８－８１）。本明細書に記載の組成物及び方法で使用され得る抗ＣＤ２８抗体には、以下のクローンによって発現されるものが含まれる：ＩＣ６（Ｇｒａｖｅｓら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，９１：８３３－８４０（２０１１）、ＣＤ２８．６（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１６－０２８８－８１）、ＣＤ２８．２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＭＡ１－１０１６６）、１０Ｆ３（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＣＤ２８００）、及びＢＴ３（ｍＩｇＧ２ａ、ａｎｔｉｈｕＣＤ２８、Ｄｉａｃｌｏｎｅ、ベサンコン、フランス）。

【0119】

本明細書で使用される場合、「ＶＨＨ抗体」という用語は、２つの重鎖のみからなり、したがって軽鎖を欠く抗体を指す。このタイプの抗体は、軟骨魚類及びラクダ科動物（例えば、アルパカ、ヒトコブラクダ、ラクダ、ラマ）によって産生され得る

【0120】

ＶＨＨ抗体は、両方の重鎖ドメインが同じタンパク質分子内にあり（一本鎖抗体）、定常領域を含まないように操作されることが多い。操作されたＶＨＨ抗体は、モノクローナル抗体（例えば、Ｈａｒｍｓｅｎ ａｎｄ Ｄｅ Ｈａａｒｄ，「ラクダ科の単一ドメイン抗体断片の特性、産生、及び用途」Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７７：１３－２２（２００７）、米国特許第９，０４０，６６６号参照）と比較してサイズが比較的小さい（例えば、１２から１５ｋＤａ、約１２０アミノ酸）場合がある。そのような抗体は、本明細書ではＶＨＨ抗体とも呼ばれる。ＶＨＨ抗体は、１つ又は２つの抗原結合部位を有してもよく、一価又は二価であり得る。二価とは、２つの異なるエピトープに対する結合親和性を有することを指す。

【0121】

本明細書で使用される「プロテインＡ」という用語は、５つの非常に類似したドメイン（ドメインＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ及びＣ）から構成される黄色ブドウ球菌の細胞表面タンパク質を指し、各ドメインは約５８アミノ酸、並びにその機能的変異体及び機能的誘導体（ドメインＺを含む）から構成される。プロテインＡは、抗体（例えば、ＩｇＧ分子）に結合する機能活性を有し、抗体精製に使用することができる。

【0122】

多くの場合、プロテインＡは、抗体精製に使用される場合、固体支持体（例えば、ビーズ）に連結される。これにより、固体支持体に結合した抗体を未結合材料から分離することが可能になる。更に、多くの場合（例えば、商業規模の抗体産生）、固体支持体に結合したプロテインＡを定位置（ＣＩＰ）で洗浄できることが望ましい。多くの場合、ＣＩＰは水酸化ナトリウム（例えば、０．５Ｍ ＮａＯＨ）を用いて行われる。

【0123】

全長の野生型プロテインＡは、アルカリ条件に対してある程度の耐性を示すが、アルカリ耐性を増強するための様々なプロテインＡドメインに対する幾つかの改変を示す（例えば、Ｌｉｎｈｕｌｔ等、“Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ａｎａｌｏｇｕｅ ｔｏ Ｒｅｐｅａｔｅｄ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｅｘｐｏｓｕｒｅｓ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｂｙｐａｓｓ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，５５：４０７－４１６（２００４）参照）。更に、アルカリ感受性／耐性は個々のプロテインＡドメインによって異なる。これらの線に沿って、ドメインＣはかなり耐アルカリ性であることが分かっている。

【0124】

ドメインごとに野生型プロテインＡ分子の結合容量の少なくとも５０％を保持する１つ以上のプロテインＡドメイン（例えば、野生型ドメインＢの５回の反復）のリピートを含むタンパク質も、プロテインＡ分子であると見なされる。また、プロテインＡ分子であると見なされるのは、野生型プロテインＡドメインＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ及びＣのいずれか１つの任意の２０アミノ酸のストレッチに対して少なくとも９０％の配列決定された同一性を共有し、ドメインごとに野生型プロテインＡ分子の結合容量の少なくとも５０％を保持するドメインを含有するタンパク質である。例として、野生型プロテインＡ分子が指定された一連の条件下で５０単位の抗体に結合し、４つの反復ドメインを有するプロテインＡ誘導体が同じ条件下で２０単位の抗体に結合する場合、プロテインＡ誘導体は野生型プロテインＡ分子の結合容量の５０％を有すると言われる。

【0125】

本明細書で使用される場合、「ウイルス様粒子」又はＶＬＰという用語は、ウイルスに似ているが複製欠損であるウイルスタンパク質複合体を指す。ＶＬＰは、核酸分子を細胞に送達するために使用することができ、アデノ随伴ウイルスなどの天然に存在する複製欠損ウイルスタンパク質複合体を含む。ＶＬＰは、エンベロープされていてもエンベロープされていなくてもよい。エンベロープレンチウイルス粒子の一例は、ＢＬＯＣＫ－ｉＴ（商標）Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ＲＮＡｉ Ｚｅｏ Ｇａｔｅｗａｙ（商標）Ｖｅｃｔｏｒ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．Ｖ４８８２０）を使用して産生されたものである。

【0126】

本明細書で使用される場合、「ハルバッハ配列」は、配列の一方の側で増強された磁場を示し、配列の他方の側で磁場をゼロ付近まで少なくとも部分的に相殺する磁石の配列（図１８Ａ及び図１８Ｂを参照）である。ハルバッハ配列の幾つかの利点は、磁場が配列の一方の側で強く、配列の他方の側で弱いことである。これにより、より小型でより軽量な磁石アセンブリを使用して、所望の磁力を達成することが可能になる。ハルバッハ配列の片側に磁場を集束させることにより、磁場を「閉じ込める」ことが可能になり、それによって磁場干渉が減少し、磁場勾配がもたらされて磁性粒子の捕捉が促進される。

【0127】

可能であれば、様々な図において同様の要素の番号付けが使用されている。更に、特定の要素の代替構成はそれぞれ、要素番号に付加された別個の文字を含むことができる。したがって、添付の文字を使用して、添付の文字なしの要素又は特徴の代替の設計、構造、機能、実装、及び／又は実施形態を指定することができる。例えば、要素「８０」は、代替構成で具体化され、「８０ａ」と指定されてもよい。同様に、親要素の要素及び／又はサブ要素の複数のインスタンスはそれぞれ、要素番号に付加された別個の文字を含むことができる。いずれの場合も、要素ラベルは、要素の全てのインスタンス又は代替要素のいずれか１つを一般的に参照するために、添字なしで使用され得る。添付の文字を含む要素ラベルは、要素の特定のインスタンスを参照するために、又は要素の複数の使用を区別又は注意を引くために使用することができる。

【0128】

本デバイス、システム、及び方法の様々な態様は、１つ以上の例示的な実施形態を参照して説明することができる。本明細書で使用される場合、用語「実施形態」は「例、事例、又は例示としての役割を果たすこと」を意味し、本明細書に開示される他の実施形態よりも好ましい又は有利であると必ずしも解釈されるべきではない。

【0129】

本デバイス及びシステムの様々な態様は、互いに結合、取り付け、及び／又は接合された構成要素を説明することによって例示することができる。本明細書で使用される場合、「結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）」、「取り付けられた（ａｔｔａｃｈｅｄ）」、「接続された（ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ）」、及び／又は「接合された（ｊｏｉｎｅｄ）」という用語は、２つの構成要素間の直接的な接続、又は適切な場合には、介在又は中間の構成要素を介した互いに間接的な接続のいずれかを示すために使用される。対照的に、ある構成要素が別の構成要素に「直接結合される」、「直接取り付けられる」、「直接接続される」、及び／又は「直接接合される」と言及される場合、介在する要素は存在しない。

【0130】

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似又は同等の多数の方法及び材料を本開示の実施に使用することができるが、好ましい材料及び方法を本明細書に記載する。

【0131】

図１には、所望のＴ細胞の産生に使用するための機器ワークフローシステム８の一実施形態が示されている。最初に、所望のＴ細胞を含む生体試料１０が提供される。生体試料１０は、典型的には、ヒト血液試料、又は細胞と増殖媒体との混合物からなる調製された生物学的懸濁液を含む。生物学的懸濁液中の細胞は、バイオリアクタなどで増殖されていてもよく、又は他の方法で処理されていてもよい。最初に、望ましくない細胞の少なくとも一部を除去するために、生体試料１０を細胞分離器１２を通して処理することができる。例えば、生体試料１０がヒト血液試料である場合、細胞分離器１２は、所望のＴ細胞を含む白血球を赤血球から分離することができる。細胞分離器１２の一例は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手可能なＧｉｂｃｏ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｒｏｔｅａ（商標）Ｃｏｕｎｔｅｒｆｌｏｗ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍである。生体試料１０の組成に応じて、他の細胞分離プロセス及び機器も使用することができる。更に、細胞分離器はまた、例えば、磁性粒子から放出された細胞を洗浄するために、及び／又は細胞が付着したもしくは付着していない磁性粒子を洗浄するために、後のステップで使用され得る。他の実施形態では、生物学的懸濁液の形態に応じて、細胞分離器１２は必要とされない場合がある。

【0132】

次いで、細胞分離器１２を出る細胞培養物は、所望のＴ細胞の単離及び活性化のために第１ビーズ処理システム１４を介して処理される。すなわち、以下に詳細に論じるように、第１ビーズ処理システム１４は、細胞培養物を、特異的抗体（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ１３７など）と共有結合した磁石ビーズと混合するように機能し、その結果、磁気ビーズは所望のＴ細胞に自動的に結合して活性化する。次いで、磁気ビーズに結合したＴ細胞を磁場によって単離バッグに保持し、残りの不要な細胞を洗い流す。

【0133】

次いで、磁気ビーズに結合した単離Ｔ細胞を洗浄し、磁場から解放し、細胞増殖システム１６に移す。細胞増殖システム１６は、Ｔ細胞が予め確立された条件下で増殖媒体中で増殖される従来のバイオリアクタシステムを含むことができる。細胞増殖システム１６は、ロッカもしくは連続撹拌バイオリアクタ、又は細胞を増殖させることができるガス透過性バッグを使用するものなどの任意の他のバイオリアクタシステムを含むことができる。Ｔ細胞が所望の密度まで成長するか、又は別の予め確立された条件に達すると、Ｔ細胞は磁気ビーズから自動的に分離するか、又はＴ細胞からの磁気ビーズの分離を引き起こす分離試薬を懸濁液に添加することができる。例えば、活性化Ｔ細胞は、自然にＣＤ３を下方制御し、したがって、典型的には約５日で磁気ビーズから分離する。幾つかの態様では、Ｔ細胞、磁気ビーズ、及び媒体の懸濁液は、磁気ビーズからのＴ細胞の分離を促進するのを助けるために、バッグ内などで手動又は機械的に操作することができる。次いで、Ｔ細胞、磁気ビーズ及び媒体の懸濁液は、第２ビーズ処理システム１８に移送され、そこで以下により詳細に記載されるように、所望のＴ細胞が磁気ビーズから分離される。以下で更に詳細に説明するように、一実施形態では、ビーズ処理システム１８は、ビーズ処理システム１４の装置を異なる消耗キットで再使用することを含むことができる。

【0134】

最後に、磁気ビーズから分離されたＴ細胞を、必要に応じて細胞を遺伝子改変するための遺伝子編集システム２０に移すことができる。例えば、ＤＮＡは、例えば、相同組換え及び／又は非相同末端結合によって細胞に組み込まれ得る。遺伝子編集は、細胞内核酸（例えば、染色体核酸）の部位特異的切断によって媒介され得る。Ｔ細胞の更なる下流処理及び／又はパッケージングも提供することができる。

【0135】

機器ワークフローシステム８は、生体試料が滅菌条件下でシステムの各構成要素間を連続的に流れることができる閉鎖滅菌システムを含むことができる。或いは、生体試料は、システム８の各又は選択された構成要素間で別々に移送することができる。システム８の各構成要素は、自動的に実行されるようにプログラムすることができ、又は手動で操作することができる。特定の条件に応じて、機器ワークフローシステム８の特定の構成要素を排除することができ、又は追加の構成要素を追加することができる。

【0136】

次に、ビーズ処理システム１４、１８の構成要素及び動作について詳細に説明する。一実施形態では、ビーズ処理システム１４及び１８は、同じ再使用可能なハードウェアを備えることができるが、それらの異なる意図された機能を達成するために異なる使い捨ての消耗可能な構成要素を使用することができる。この設計は、設備コストを削減し、必要な保管スペースを最小限に抑えるという利点を有する。しかしながら、他の実施形態では、別個のタイプのビーズ処理システムを使用することができる。

【0137】

ビーズ処理システム１４は、図２及び図３に示すように、図９に示すように、使い捨て消耗キット１７０Ａと共に使用することができる再使用可能なビーズ処理装置２２を備える。図２及び図３に戻ると、一般に、ビーズ処理装置２２は、ベースアセンブリ３２と、ベースアセンブリ３２に取り付けられ、ベースアセンブリ３２に対して選択的に揺動するように構成されたロッカアセンブリ３４と、ロッカアセンブリ３４の両側でベースアセンブリ３２から直立した一対のバッグスタンド３６Ａ及び３６Ｂとを含む。

【0138】

ベースアセンブリ３２は、前端部４０と反対側の後端部４２との間に延在し、区画室４４（図５）を境界付けるハウジング３８を備える。ハウジング３８は様々な異なる構成を有することができるが、一実施形態では、図４に示すように、ハウジング３８は、使用中に典型的には水平に配置され、対向する端部４０と４２との間に延在する上面５１を有する床パネル５０を含む。ビーズ処理装置２２の動作を制御し、プログラム可能なコンピュータプロセッサ５５及び非一時的メモリを含む電気回路５３が、区画室４４内に収容されるように上面５１上に配置されている。ビーズ処理装置２２の動作に使用される他の従来の電子機器も、床パネル５０上に配置することができる。例えば、ビーズ処理装置２２に送達される電気を受け取って変換するために、床パネル５０上に変圧器５７を配置することができる。

【0139】

ハウジング３８は、床パネル５０の対向する側面から直立し、対向する側面に沿って延在する対向する側面パネル５２Ａ及び５２Ｂを更に含む。フロントパネル５４は、床パネル５０の前端部４０に配置され、サイドパネル５２Ａと５２Ｂとの間に延在する。一実施形態では、フロントパネル５４は、典型的には約２５°～６５°の範囲、より一般的には３５°～５５°の範囲の水平に対してある角度で傾斜している。他の角度も使用することができる。スクリーン５６は、フロントパネル５４上に配置され、電気回路５３と電気的に連通している。一実施形態では、スクリーン５６は、ビーズ処理装置２２を操作するためのユーザ入力を可能にするタッチスクリーンを含むことができる。代替的な実施形態では、スクリーン５６は、ビーズ処理装置２２の動作を表示するための表示スクリーンを単に備えることができる。任意選択的に、電気インタフェースポート５８及び作動スイッチ６０（図２）をフロントパネル５４に配置し、電気回路５３と通信することができる。電気インタフェースポート５８は、電気回路５３からのデータを制御、プログラミング、及び／又は収集するために使用することができる。作動スイッチ６０は、ビーズ処理装置２２をオン及びオフにするため、及び／又はビーズ処理装置２２を異なる動作モード又は動作段階の間で切り替えるために使用することができる。代替的な実施形態では、インタフェースポート５８及び／又は作動スイッチ６０は、ビーズ処理装置２２又はハウジング３８上の他の位置に配置することができる。

【0140】

引き続き図３及び図４を参照すると、ハウジング３８は、後端部４２で床パネル５０から直立し、サイドパネル５２の間に延在するバックパネル６２を更に含む。通気開口６４は、バックパネル６２を貫通して延び、電気回路５３及び区画室４４内の他の構成要素を冷却するために使用される。図４にも示すように、ファン８０は、通気開口６４に隣接する区画室４４内に配置することができる。ファン８０は、電気回路５３に電気的に結合され、ビーズ処理装置２２の電気部品を冷却するのを助けるために使用される

【0141】

バックパネル６２には、ビーズ処理装置２２に電力を供給するための電気ケーブルと結合するように構成された電力入口６６も形成されている。バックパネル６２の上端部において前端部４０に向かって前方に突出するのが棚パネル６８である。棚パネル６８は、典型的には、水平に配置され、したがって、一般に、床パネル５０に平行に、及び／又はバックパネル６２に垂直に配置される。棚パネル６８は、ロッカアセンブリ３４が配置される開口７０を貫通している。棚パネル６８の前方端部から直立しているのは、ライザパネル７２である。ライザパネル７２は、ビーズ処理装置２２の上縁部７４で終端し、サイドパネル５２の間に延在する。一実施形態では、ライザパネル７２は、バックパネル６２に平行及び／又は棚パネル６８に垂直になるように垂直に配置することができる。

【0142】

バッグスタンド３６Ａ及び３６Ｂは、ロッカアセンブリ３４の両側で棚パネル６８から直立している。各バッグスタンド３６は、上端に複数の留め具９９が形成されたポール９８を備える。ポール９８は、固定長を有することができ、又は伸縮自在に長く又は短くするように構成することができる。留め具９９は、流体を収容する可撓性バッグを保持及び支持するように構成され、バッグを保持することができるフック又は他の構造の形態とすることができる。

【0143】

スタンド８２は、区画室４４内に配置され、床パネル５０に取り付けられる。一実施形態では、スタンド８２は、Ｕ字形であり、床パネル５０上に配置された変圧器５７又は他の構成要素にまたがるように配置することができる。ロッカアセンブリ３４は、棚パネル６８の開口７０を通過するようにスタンド８２に配置されている。更に、区画室４４内に配置され、一対の三角ブラケット８４Ａ及び８４Ｂが床パネル５０に取り付けられる。ブラケット８４は、スタンド８２の前方に配置され、前端部４０まで又は前端部４０に向かって延在する。一実施形態では、各ブラケット８４は、垂直後部レール８６と、床パネル５０に固定された水平基部レール８８と、基部レール８８の前端部と後部レール８６の上端部との間の角度で延在する前部レール９０とを含む。以下でより詳細に説明するように、ブラケット８４の間、より具体的には前部レール９０の間にまたがるのが支持パネル９２である。支持パネル９２は、典型的には、水平に対して、典型的には約２５°～６５°の範囲、より一般的には３５°～５５°の範囲の角度で配置される。他の角度も使用することができる。

【0144】

図２～図４を参照すると、ビーズ処理装置２２はまた、ヒンジ１０２Ａ及び１０２Ｂによってサイドパネル５２Ｂにヒンジ式に取り付けられ、支持パネル９２上に延びる任意選択のカバーパネル１００を含む。一実施形態では、カバーパネル１００は、対向するサイドパネル５２の間にまたがり、フロントパネル５４とライザパネル７２の上縁部７４との間に配置される。カバーパネル１００は、フロントパネル５４に関して前述したのと同じ角度範囲内に配置することができ、フロントパネル５４と同じ平面内に配置することができる。一実施形態では、カバーパネル１００は、透明窓１０６を取り囲む外周フレーム１０４を含む。窓１０６は、典型的には透明ポリマー材料から構成されるが、ガラスから形成することもできる。カバーパネル１００は、図２に示すように、カバーパネル１００が支持パネル９２を覆う閉位置と、支持パネル９２が自由にかつ開いて露出する開位置との間で自由に回転することができる。

【0145】

説明を容易にするために、図５は、支持パネル９２が自由に露出されるようにカバーパネル１００及びフロントパネル５４が取り外されたビーズ処理装置２２を示す。この図に示すように、ラッチ１０７を使用して、カバーパネル１００を閉位置に固定することができる。図４及び図５に示すように、一実施形態では、支持パネル９２は、ブラケット８４の間に延在し、ブラケットに固定されるベースパネル９３と、ベースパネル９３の上に位置し、ベースパネルに固定されるオーバーレイパネル９４とを備える。ベースパネル９３は、オーバーレイパネル９４が配置される上面７６を有する。オーバーレイパネル９４は、支持パネル９２の上面も形成する上面７７を有する。図示のように、複数のピンチバルブ、ポンプ、及び他の機構が、支持パネル９２に取り付けられ、支持パネルから直立している。より具体的には、ピンチバルブ、ポンプ、及び他の機構は、ベースパネル９３に直接取り付けられ、オーバーレイパネル９４に形成された開口を通して突出する。例えば、図５に示すように、第１ポンプ１２４Ａ及び第２ポンプ１２４Ｂがベースパネル９３に取り付けられ、そこから突出している。ポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂは、それぞれ、オーバーレイパネル９４の上面７７を越えて突出するように、オーバーレイパネル９４の開口１２６Ａ及び１２６Ｂを通って突出する。一実施形態では、ポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂは、流体に直接接触することなくチューブを通して液体を圧送することができる蠕動ポンプ又は他のタイプのポンプである。複数の離間したピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋもベースパネル９３に取り付けられ、そこから突出している。ピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋは、オーバーレイパネル９４の上面７７を越えて突出するように、オーバーレイパネル９４上の対応する開口１３０Ａ～１３０Ｋをそれぞれ通って突出する。

【0146】

図６には、ピンチバルブ１２８Ａの拡大図が示されている。ピンチバルブ１２８Ａは、電気回路５３（図４）によって制御され、締結具１０９によってベースパネル９３の底面、すなわち支持パネル９２の底面に取り付けられたソレノイドバルブ１０８を含む。典型的には円筒形の構成を有する本体１１０は、ソレノイドバルブ１０８と結合され、ベースパネル９３及びオーバーレイパネル９４を外向きに通過する。本体１１０は、側面１１１内に陥凹し、本体１１０を横方向に貫通するスロット１１２を有する包囲側面１１１を有する。スロット１１２は、本体１１０の中央に形成されたＣ字形チャネル１１３と、Ｃ字形チャネル１１３から側面１１１まで延在する外側に広がる口１１４とを含む。後述するように、口１１４のフレアは、チューブをチャネル１１３内に案内するのに役立つ。ボア１１５は、ソレノイドバルブ１０８からＣ字形チャネル１１３まで本体１１０を中央で通過する。シャフト１１６は、ボア１１５内に配置され、丸みを帯びたヘッド１１７で終端する。ソレノイドバルブ１０８は、ボア１１５内のシャフト１１６の動きを制御する。したがって、以下で更に詳細に説明するように、可撓性チューブがＣ字形チャネル１１３内に配置され、それを通過するとき、ソレノイドバルブ１０８は、シャフト１１６を下降位置と上昇位置との間で選択的に移動させることができる。下降位置では、シャフト１１６は、流体がチューブを通過することを可能にするように、Ｃ字形チャネル１１３から少なくとも部分的に除去される。上昇位置では、シャフト１１６がＣ字形チャネル１１３内に前進し、シャフト１１６が丸みを帯びたヘッド１１７とＣ字形チャネル１１３の上面１１９との間でチューブを挟み込み、それによってチューブを閉じ、流体がそこを通って流れるのを防止する。可撓性チューブを選択的に開閉することができる他の従来のタイプのピンチバルブも使用できることが理解される。例えば、Ｅｍｅｒｓｏｎ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｃｏ．から入手可能なような空気圧ピンチバルブも使用することができる。残りのピンチバルブ１２８Ｂ～１２８Ｋは、典型的にはピンチバルブ１２８Ａと同一であり、したがって、異なるピンチバルブ間の同様の要素は、同様の参照符号によって識別される。

【0147】

図５に戻ると、対応するエアフィルタアセンブリ２１８Ａ及び２１８Ｂをそれぞれ受け入れて動作させるように構成された一対の回転アセンブリ１３２Ａ及び１３２Ｂが、支持パネル９２に更に取り付けられている（図１１）。図７及び図８には、エアフィルタアセンブリ２１８Ａに結合された回転アセンブリ１３２Ａが示されている。回転アセンブリ１３２Ａは、駆動シャフト９５を選択的に回転させる駆動モータ１６０を備える。多くの場合、使用されるエアフィルタは、フィルタの片側で滅菌環境を維持するために生物学的薬剤の通過を防止するように設計される。駆動モータ１６０は、電気回路５３（図４）によって制御される。一実施形態では、駆動モータ１６０は、駆動シャフト９５を反対方向に選択的に回転させることができるステッパモータである。駆動シャフト９５の自由端には、キー付きソケット９７が形成された受け部９６が取り付けられている。

【0148】

エアフィルタアセンブリ２１８Ａは、エアフィルタ２２１が結合されたストップコック２２０を備える。図示の実施形態では、ストップコック２２０は、そこから外側に突出するポート２２３Ａ、２２３Ｂ、及び２２３Ｃと、それに結合された流体とを有するステム２２２を含む二方向ストップコックを備える。バルブ２２４は、ステム２２２内に回転可能に配置され、その中に配置された外側に突出するハンドル２２５を有する。ハンドル２２５の第１位置への回転は、流体がポート２２３Ａとポート２３３Ｂとの間を流れることができるようにバルブ２２４を方向付ける。ハンドル２２５の第２位置への回転は、流体がポート２２３Ａと２３３Ｃとの間でのみ流れることができるようにバルブ２２４を配向させる。エアフィルタ２２１は、ポート２２３Ｃに結合され、典型的には空気殺菌フィルタを備える。一実施形態では、エアフィルタ２２１は、０．２μ以下の平均孔径を有することができる。以下でより詳細に説明するように、ハンドル２２５は、それらの間に確実な係合が形成されるように、受け部９６のキー付きソケット９７内に取り外し可能に嵌合するように構成される。結果として、駆動モータ１６０による受け部９６の回転は、２つの動作位置の間のステム２２２に対するハンドル２２５の回転を容易にすることができる。回転アセンブリ１３２Ｂは、回転アセンブリ１３２Ａと同じ構成及び動作を有することができ、エアフィルタアセンブリ２１８Ｂは、エアフィルタアセンブリ２１８Ａと同じ構成及び動作を有することができる。したがって、構成要素間の同様の要素は、同様の参照文字によって識別される。

【0149】

組み立て中、回転アセンブリ１３２Ａ及び１３２Ｂの駆動モータ１６０は、受け部９６がオーバーレイパネル９４の対応する開口１３４Ａ及び１３４Ｂ内にそれぞれ受け入れられるように、ベースパネル９３／支持パネル９２に固定することができる。この実施形態では、図５に示すように、受け部９６は、必ずしも必要ではないが、オーバーレイパネル９４／支持パネル９２の上面７７を越えて突出することができる。

【0150】

引き続き図５を参照すると、気泡センサ１３６Ａ、１３６Ｂ、及び１３６Ｃは、ポンプ１２４Ａと１２４Ｂとの間の支持パネル９２に取り付けられている。各気泡センサ１３６には、チューブを確実に受け入れるように構成された溝１３７が形成されている。一実施形態では、溝１３７は、Ｃ字形又はＵ字形の構成を有することができる。気泡センサ１３６は、ベースパネル９３に取り付けられ、オーバーレイパネル９４、支持パネル９２の上面を越えて突出するように、オーバーレイパネル９４上の対応する開口１３８Ａ、１３８Ｂ、及び１３８Ｃをそれぞれ通って突出する。以下により詳細に説明するように、気泡センサ１３６は、電気回路５３によって制御され、ビーズ処理システム１４の動作に使用されるチューブ内のガス流と液体流とを識別する。本開示において使用され得る気泡センサの例には、ＩＮＴＲＯＴＥＫ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ製のＩｎｔｒｏｔｅｋ ＡＤ９－００７５－Ｅ０４及びＳｏｎｏｔｅｃ ＧＭＢＨから入手可能なものなどの超音波気泡検出器が含まれる。他の気泡センサも使用することができる。

【0151】

最後に、圧力センサ１４０は、支持パネル９２／ベースパネル９３に取り付けられ、オーバーレイパネル９４の対応する開口１４２を通って突出するか、又は位置合わせされ得る。圧力センサ１４０は、気泡センサ１３６Ａと１３６Ｃとの間に配置されて示されているが、他の場所に配置することもできる。また、以下により詳細に論じるように、圧力センサ１４０は、ビーズ処理システム１４のチューブ内の流体の圧力を検出するために使用される。圧力を監視することは、動作障害を検出し、消耗キット１７０Ａのチューブ及び／又はバッグが過剰に加圧されるのを防ぐのに役立ち得る。本開示で使用できる圧力センサの一例は、ＩＮＴＲＯＴＥＫ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ製のＰＲＯ－３０００－９０４である。

【0152】

オーバーレイパネル９４は、主に、通常動作中にアクセスする必要がないベースパネル９３上に配置された締結具及び／又は他の要素を覆うように機能することに留意されたい。したがって、代替の実施形態では、図９に示すように、オーバーレイパネル９４を省略することができる。したがって、支持パネル９２は、ベースパネル９３のみ、又はベースパネル９３とオーバーレイパネル９４との組み合わせを含むことができる

【0153】

引き続き図９を参照すると、単回使用の使い捨て消耗キット１７０Ａは、ビーズ処理装置２２に供給されたＴ細胞を単離し活性化するためにビーズ処理装置２２と共に使用することができる。消耗キット１７０Ａは、トレイ１７２Ａと、それに取り付けられたラインセット１７４Ａとを備える。消耗性キット１７０Ａは、ラインセット１７４Ａが前述のように支持パネル９２上に配置された様々な機械的構成要素と係合又は相互作用することができるように、支持パネル９２の上に取り外し可能に入れ子になるべく構成される。そのために、図１０に示すように、トレイ１７２Ａは、典型的には平行に整列して配置され、典型的には０．２ｃｍ～１ｃｍの範囲にある厚さをそれらの間に有する上面１７６及び反対側の底面１７８を有し、０．２ｃｍ～０．６ｃｍがより一般的である。トレイ１７２Ａは、典型的には剛性であり、例えば、ラインセット１７４Ａのチューブよりも剛性が高く、一般に、ポリカーボネート－ＡＢＳ（ＰＣ／ＡＢＳ）、アクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）、又はポリプロピレン（ＰＰ）などのポリマーで作られる。複数の開口１８５は、面１７６と１７８との間でトレイ１７２Ａを貫通して延在する。例えば、そのような開口１８５は、支持トレイ１７２Ａが支持パネル９２上に配置されたときにピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋ（図１１）が開口１８０Ａ～１８０Ｋと整列して通過するように、トレイ１７２Ａ上に配置され構成された開口１８０Ａ～１８０Ｋを含む。同様に、開口１８２Ａ及び１８２Ｂは、トレイ１７２Ａを通って延び、トレイ１７２Ａが支持パネル９２上に配置されたときにポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂ（図１１）がそれぞれ整列して通過するように配置及び構成される。更に、開口１８３Ａ及び１８３Ｂは、トレイ１７２Ａを通って延び、回転アセンブリ１３２Ａ及び１３２Ｂと整列するように配置及び構成され、一方、開口１３３Ａ～１３３Ｃは、バブルセンサ１３６Ａ～１３６Ｃとそれぞれ整列するように配置及び構成される。最後に、開口１３４がトレイ１７２Ａを通って延在し、圧力センサ１４０と整列するように配置され構成される。

【0154】

トレイ１７２Ａはまた、上面１７６に取り付けられ、上面から外側に突出する複数の離間したチューブ抑制部１８６を含む。チューブ抑制部１８６は様々な異なる構成を有することができるが、図示の実施形態では、各チューブ抑制部１８６は、貫通するスロット１９０を有する基部１８８を備える。スロット１９０は、典型的には、ラインセット１７４Ａのチューブ２００をぴったりと、しかし取り外し可能に受け入れるように構成されたＣ字形又はＵ字形の横断面を有する。チューブ抑制部１９０は、チューブ２００を輪郭付けて保持するように機能し、ラインセット１７４Ａが移動するトレイ１７２Ａ上の任意の所望の位置に形成することができる。しかしながら、チューブ抑制部１８６は、最も一般的には、チューブ２００が曲げられているか操作されている場所に配置されるか、又はそれに隣接する。トレイ１７２Ａはまた、トレイ１７２Ａから中央に直立したバッグ抑制部１９２を含む。図示の実施形態では、バッグ抑制部１９２は、トレイ１７２Ａから直立し、受け取り領域１９６を取り囲む外周壁１９４を含む。受け入れ領域１９６は、混合バッグ２１０が外周壁１９４によって支持され保持されるように、ラインセット１７４Ａの混合バッグ２１０を受け入れるように構成される。

【0155】

図１０及び図１１に示すように、ラインセット１７４Ａは、一般に、複数のバッグ及びエアフィルタアセンブリ２１８Ａ及び２１８Ｂと結合された可撓性チューブ２００流体を含む。製造中、ラインセット１７４Ａ及びトレイ１７２Ａは、ユニットとして予め組み立てられ、滅菌され得る。或いは、ラインセット１７４Ａ及びトレイ１７２Ａを独立して滅菌し、次いで互いに結合することができる。製造中、ラインセット１７４Ａは密閉されるように形成されることが理解される。次いで、トレイ１７２Ａの有無にかかわらず、ラインセット１７４Ａを照射プロセスによって滅菌することができる。次に、生産システム８（図１）の他の構成要素との流体結合は、無菌流体接続によってもたらされる。

【0156】

使用中、組み立てられた消耗キット１７０Ａは、支持パネル９２上の機械的構成要素がトレイ１７２Ａ上に形成された関連開口と整列するように、支持パネル９２の上に配置される。以下でより詳細に説明するように、チューブ２００は、その後、エアフィルタアセンブリ２１８が回転アセンブリ１３２に取り付けられている間に、ピンチバルブ１２８、ポンプ１２４、気泡センサ１３６及び圧力センサ１４０のそれぞれと連結するように操作される。

【0157】

チューブ２００は、様々な異なる構成を有することができる。一実施形態では、チューブ２００は、２．０ｍｍ～５．０ｍｍの範囲、又は２．５ｍｍ～５．０ｍｍの範囲、又はより一般的には３．０ｍｍ～５．０ｍｍの範囲の内径を有する。他の範囲も使用することができる。チューブ２００は、チューブ２００が塑性変形せずに容易に曲げられることを可能にし、チューブ２００が（ピンチバルブ１２８を使用するなどして）選択的に挟持されて閉じられて流体の流れを防止することを可能にするが、挟持力が解放されたときに流体がそれを通って流れることを可能にするために開放位置に弾性的にリバウンドする材料で作られる。一般に、チューブ２００は、塑性変形なしに少なくとも９０°、１８０°又は３６０°の角度にわたって曲げることができる。チューブを構成することができる材料の例には、シリコーン、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、及びＣ－ＦＬＥＸ配合物３７４チューブなどの熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）が含まれる。チューブ２００の異なる部分はまた、それらの意図された機能に応じて異なる材料で作製することができる。本実施形態では、チューブ２００は、前述したように、シャフト１１６の移動によって閉状態及び開状態を選択的に挟むために、ピンチバルブ１２８（図６）のスロット１１２内に受け入れることができるようなサイズになっている。

【0158】

チューブ２００は、一体的に互いに接続されているか、又は継手によって互いに接続されている複数のセクションを含む。例えば、図１１を参照すると、チューブ２００は、入口端２０２で終端する第１端部を有するチューブセクション２０４Ａを含む。入口端２０２は、細胞分離器１２（図１）又は所望のＴ細胞を含む細胞培養物をラインセット１７４Ａに送達するための何らかの他の供給源と連結することを意図している。例えば、入口端２０２は、無菌コネクタなどの閉鎖コネクタ２０３がそこに形成され得るか、又は入口端２０２が切断され、次いで、細胞培養物が送達される別のチューブセクション上に封止され得るように、溶着などによって単純に封止され得る。セクション２０４Ａは、それに結合されたエアフィルタアセンブリ２１８Ａを有する。使用のための組み立て中、セクション２０４Ａはピンチバルブ１２８Ａと結合され、エアフィルタアセンブリ２１８Ａは前述のように回転アセンブリ１３２Ａ（図５）と結合される。図１０を参照すると、狭いスロット２０７Ａ及び２０７Ｂが、それぞれ開口１８３Ａ及び１８３Ｂに隣接するトレイ１７２Ａ上に形成されていることに留意されたい。スロット２０７は、ハンドル２２５が回転アセンブリ１３２によって回転されるときにエアフィルタ２２１及びステム２２０（図８）が回転するのを防止するのに役立つように、エアフィルタ２２１を受け入れるように形成される。

【0159】

図１１に戻ると、ラインセット１７４Ａはまた、単離バッグ２０６に接続されてこれと連通する第１端部を有するチューブセクション２０４Ｂを含む。単離バッグ２０６は、通常、チューブセクション２０４Ｂに恒久的に固定されるが、コネクタを介して結合することができる。いずれの場合も、単離バッグ２０６及びチューブセクション２０４Ｂは、典型的には、照射前に互いに結合される。単離バッグ２０６の構成は、以下でより詳細に説明されるが、ロッカアセンブリ３４（図２）に固定されるように構成される。単離用バッグは加工用バッグの一例である。使用のための組み立て中、チューブセクション２０４Ｂはピンチバルブ１２８Ｂと結合される。チューブ２００のチューブセクション２０４Ｃは、ビーズバイアルカプラ２０８と接続される第１端部と、継手を使用して両方のチューブセクション２０４Ａ及び２０４Ｂと接続する反対側の第２端部とを有する。ビーズバイアルカプラ２０８については、以下でより詳細に説明する。チューブセクション２０４Ｃは、ピンチバルブ１２８Ｃ及び１２８Ｄと結合する。

【0160】

チューブ２００はまた、バッグ抑制部１９２内に配置された混合バッグ２１０と流体結合された第１端部をそれぞれ有するチューブセクション２０４Ｄ及び２０４Ｅを含む。混合バッグ２１０は、チューブセクション２０４Ｄ及び２０４Ｅに恒久的又は取り外し可能に流体結合され得るが、それらは全て典型的には閉じた状態で一緒に滅菌される。チューブセクション２０４Ｄは、ピンチバルブ１２８Ｅと結合する。チューブセクション２０４Ｅは、気泡センサ１３６Ｂ、ピンチバルブ１２８Ｆ及びエアフィルタアセンブリ２１８Ｂと結合する。

【0161】

チューブ２００のチューブセクション２０４Ｆは、出口端２１１で終端する。出口端２１１は、典型的には、単離されたＴ細胞の増殖のために細胞増殖システム１６（図１）と結合することが意図されている。しかしながら、他の実施形態では、出口端２１１は、容器又は他の何らかの下流処理システムと結合することができる。結合を容易にするために、出口端２１１は、滅菌コネクタなどの閉鎖コネクタ２０５がそこに形成されていてもよく、又は溶着などによって単純に封止されて閉じていてもよく、その結果、出口端２１１を切断し、次いで別のライン上に封止して単離された細胞を送達することができる。チューブセクション２０４Ｆは、ピンチバルブ１２８Ｋと連結されている。

【0162】

チューブ２００のチューブセクション２０４Ｇは、収集バッグ２１２に結合された第１端部を有する。収集バッグ２１２は、単離バッグ２０６内の所望のＴ細胞及び他の陰性画分から洗浄された不要な細胞を収集するために使用される。チューブセクション２０４Ｇは、ピンチバルブ１２８Ｊと結合され、チューブセクション２０４Ｅの第２端部と接続する。チューブ２００のチューブセクション２０４Ｈ、２０４Ｉ、及び２０４Ｊはそれぞれ、別個の媒体バッグ２１６Ａ、２１６Ｂ、及び２１６Ｃにそれぞれ恒久的又は取り外し可能に結合された第１端部と、チューブセクション２０４Ｇに直接的又は間接的に流体結合された対向する送出端部とを有する。媒体バッグ２１６は、後述するように、細胞の洗浄及び他の処理に使用される媒体を収容する。チューブセクション２０５Ｈ、２０５Ｉ、及び２０５Ｊは、それぞれピンチバルブ１２８Ｇ、１２８Ｈ、及び１２８Ｉに結合されている。使用される媒体バッグ２１６の数は、バッグ２１６の用途及びサイズに依存し得ることが理解される。したがって、他の実施形態では、３つの媒体バッグ２１６を有するのではなく、１つ、２つ、又は４つ以上の媒体バッグ２１６をチューブ２００の対応する部分と共に使用することができる。

【0163】

チューブ２００のチューブセクション２０４Ｋは、チューブセクション２０４Ａ、２０４Ｂ、２０４Ｄ、２０４Ｆ及び２０４Ｇの第２端部と結合する。使用のための組み立て中、チューブセクション２０４Ｋは、ポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂ、並びに気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｃ並びに圧力センサ１４０と結合される。ポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂは、ラインセット１７４Ａを通る流体の制御された流れを容易にするために使用される。

【0164】

前述のように、チューブセクション２０４Ｃの第１端部は、ビーズバイアルカプラ２０８に接続される。図１４を参照すると、第１端部１６４及び反対側の第２端部１６５を有するビーズバイアルカプラ２０８の一実施形態が示されている。第２端部１６５は、チューブセクション２０４Ｃの第１端部に流体結合されている。バイアル１６６は、ビーズバイアルカプラ２０８の第１端部１６４に取り付けられて示されている。バイアル１６６は、円筒形本体１６７と、開口を取り囲む狭窄ネック１６８と、ネック１６８から本体１６７まで径方向外側に広がる環状肩部１６９とを含む。バイアル１６６は、ビーズ混合物１７７が配置されている区画室１７５を境界付けている。ビーズ混合物１７７は、複数のビーズ１７９と、キャリア液体１８１とを含む。キャリア液体１８１は、ビーズ１７９がバイアル１６６からラインセット１７４Ａを通って流れることを可能にするように機能する。キャリア液体１８１は、細胞培地又は細胞に悪影響を及ぼさない他の自由流動液体を含むことができる。代替実施形態では、バイアル１６６は、可撓性バッグ又はビーズ混合物１７７を収容する他のタイプの容器と交換することができる。バイアル及び可撓性バッグは、ビーズ混合物１７７を収容するための代替的な利点を有する。例えば、剛性バイアルは、ビーズの再懸濁のために容易に揺動され、穿刺のリスクが低い。しかしながら、可撓性バッグの使用は、以下で更に論じるように、ビーズ混合物１７７が取り出されるときの容器内の負圧の形成を排除する。

【0165】

以下により詳細に論じるように、ビーズ１７９は、所望のＴ細胞の単離及び活性化に使用される。ビーズ１７９は、典型的には、磁性材料及びポリマーから構成される。ビーズの実際の構造は大きく変化し得るが、ビーズは、例として、磁性コア及びポリマー外装を有してもよく、又は磁性粒子が埋め込まれたポリマー材料から構成されてもよい。例示的な磁気ビーズは、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４０２０３Ｄ）である。例えば、一実施形態では、ビーズ１７９は、ナノ粒子又はマイクロ粒子などの磁性粒子が埋め込まれたポリマーマトリックスを含むことができる。他の実施形態では、ビーズ１７９は、磁性シェルによって覆われたポリマーコアを含むことができる。磁性材料は、磁性金属（例えば、鉄、コバルト、ニッケルなど。）を含むことができる。他の構成も使用することができる。一実施形態では、ビーズ１７９は、常磁気ビーズ又は超常磁気ビーズを含むことができる。ビーズ１７９はまた、コアに結合された１つ以上の抗体（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２８、及び／又は抗ＣＤ１３７）を含む。抗体は、治療機能又は他の目的のために所望のＴ細胞と結合し、それを活性化する。ビーズ１７９は、典型的には、５０ｎｍ～１ｍｍ、１００ｎｍ～１ｍｍ、５００ｎｍ～１００μｍ、１μｍ～１０μｍ、１μｍ～５μｍ、又は４μｍ～５μｍの範囲の平均直径を有する実質的に球形の構成を有する。ビーズ１７９の例は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＤＹＮＡＢＥＡＤＳである。市販の磁気ビーズの具体例としては、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４１Ｄ）、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４０２０３Ｄ）、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｔｒｅｇ Ｘｐａｎｄｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４６０００Ｄ号）、ＭＡＣＳ（商標）ＧＭＰ ＥｘｐＡｃｔ Ｔｒｅｇ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１７０－０７６－１１９号）に含まれる粒子などが挙げられる。

【0166】

ビーズバイアルカプラ２０８は、第１端部１６４と対向する第２端部１６５との間に延在する管状ステム１７３を備える。第１端部１６４は、バイアル１６６のネック１６８と結合するように構成され、それにより、バイアル１６６の区画室１７５と第１端部１６４との間に確実な流体結合が形成される。第２端部１６５は、チューブ２００のチューブセクション２０４Ｃと流体結合されている。図示の実施形態では、ビーズバイアルカプラ２０８は、ステム１７３から外側に突出する拡張チャンバ１７１を更に含む。ビーズ混合物１７７がラインセット１７４Ａ内に分配されると、拡張チャンバ１７１は、バイアル１６６の区画室１７５内の圧力を自動的に等しくするように構成され、それによって流体の流れを妨げる可能性があるチャンバ１７１内の真空の形成を防止する。拡張チャンバ１７１を組み込んだビーズバイアルカプラ２０８の二例は、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎによって製造されたＰＨＡＳＥＡＬ（商標）薬物バイアルアクセスデバイス及びＯｒｉＧｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（カタログ番号．ＶＳＶ）から入手可能な無針バイアルスパイクバルブである。代替的な実施形態では、ビーズバイアルカプラ２０８は拡張チャンバ１７１を含む必要はなく、他の構成のビーズバイアルカップリングを使用することができる。

【0167】

図５を参照すると、スロット１４４は、区画室１４６と連通するようにパネル５２Ｂと並んで支持パネル９２を貫通する。区画室１４６は、ビーズバイアルカプラ２０８を受け入れるように構成される。より具体的には、ビーズバイアルリテーナ１４８が区画室１４６内に配置されている。図５及び図１２に示すように、ビーズバイアルリテーナ１４８は、上面１５２と、反対側の底面１５４と、それらの間に延在するＣ字形チャネル１５６を境界付ける内面１５５とを有する本体１５０を有する。肩部１５７は、チャネル１５６の直径を収縮させるように、内面１５５から底面１５４に向かって内側に突出している。スロット１５９は、チャネル１５６と連通するように上面１５２と底面１５４との間で本体１５０の前面を貫通する。ビーズバイアルリテーナ１４８は、本体１５０に接続された第１端部と、底面１５４の下に下方に突出する対向する第２端部１６１とを有する長尺アーム１５８を更に含む。

【0168】

ビーズ処理装置２２の区画室４４内には、電気回路５３（図４）によって制御され、駆動シャフト１６３を回転させる駆動モータ１６２が支持されている。一実施形態では、駆動モータ１６２は、駆動シャフト１６３を反対方向に選択的に回転させることができるステッパモータを備える。駆動シャフト１６３の自由端は、アーム１５８の第２端部１６１に連結され、支持する。駆動シャフト１６３及びアーム１５８は、典型的には直交して延びる。このように、駆動モータ１６２による駆動シャフト１６３の選択的な回転は、ビーズバイアルリテーナ１４８を駆動シャフト１６３の回転軸の周りに選択的に回転させる。

【0169】

組み立て及び使用中、バイアル１６６が取り付けられたビーズバイアルカプラ２０８は、バイアル１６６（図１４）の肩部１６９がビーズバイアルリテーナ１４８の肩部１５７上に載置されるまで、ビーズバイアルリテーナ１４８のチャネル１５６を通って下方に前進する。ビーズバイアルリテーナ１４８の本体１５０は、摩擦係合下でチャネル１５６内にバイアル１６６をぴったりと強固に受容するように構成される。この組み立て中、拡張チャンバ１７１は、ビーズバイアルリテーナ１４８のスロット１５９を通って突出することができる。

【0170】

ビーズ混合物１７７は、ビーズ１７９がキャリア液体１８１に懸濁されている場合、バイアル１６６からラインセット１７４Ａにより効率的に分注される。しかしながら、ビーズバイアルリテーナ１４８に取り付けられた反転バイアル１６６が一定期間垂直方向に静止したままである場合、ビーズ１７９はバイアル１６６のネック１６８に沈降し、それによってバイアル１６６からの流れを制限又は遮断することができる。したがって、バイアル１６６を備えたビーズバイアルカプラ２０８がビーズバイアルリテーナ１４８に取り付けられ、ビーズ混合物１７７をラインセット１７４Ａ内に分配することが所望されると、駆動モータ１６２を作動させて駆動シャフト１６３を回転させることができ、その結果、ビーズバイアルリテーナ１４８は、図１３に示すように前方位置に回転し、次いで、図１２に示すように直立位置に戻るように回転する。バイアル１６６のこの回転により、ビーズ１７９が混合され、効率的な分注のためにキャリア液体１８１内に再懸濁される。一実施形態では、バイアル１６６を前方位置に回転させ、バイアルが直立位置に回転して戻される前に、ビーズ１７９がバイアル１６６の底端部、すなわちネック１６８の反対側の端部に向かって沈降するのに十分な期間放置することができる。他の実施形態では、バイアル１６６は、所望の再懸濁を容易にするために、前方位置と直立位置との間で迅速に及び／又は繰り返し前後に移動することができる。直立位置にあるとき、バイアル１６６は、典型的には反転されるが、垂直方向にある。バイアル１６６が前方位置に移動すると、バイアル１６６は、典型的には、垂直に対して９０°、１２０°、１６０°又は１８０°の角度にわたって、又は前述のいずれか２つの間の範囲で回転する。他の角度も使用することができる。

【0171】

消耗キット１７０Ａの更なる使用及び動作は、ロッカアセンブリ３４を説明した後に後述する。図１５を参照すると、ロッカアセンブリ３４は、ビーズ処理装置２２の残りの部分から分離され、スタンド８２上に載置されている。一般に、ロッカアセンブリ３４は、スタンド８２上に配置されたマウントアセンブリ２３０と、マウントアセンブリ２３０に移動可能に結合されたプラットフォームアセンブリ２３２と、マウントアセンブリ２３０に対してプラットフォームアセンブリ２３２を選択的に揺動させるために使用されるロッカドライブ２３４（図１６）とを備える。マウントアセンブリ２３０は、スタンド８２上に配置され、ロッカドライブ２３４を部分的に覆う外側ハウジング２３６を含む。図１６を参照すると、外側ハウジング２３６及び他の構成要素は、マウントアセンブリ２３０がスタンド８２から上方に延在する第１ライザ２３８Ａ及び離間した第２ライザ２３８Ｂを更に含むことをよりよく明らかにするために取り外されている。図１５を参照すると、ライザ２３８Ａは、スタンド８２に固定された下端２４０Ａと、対向する上端２４２Ａとを有する。

【0172】

プラットフォームアセンブリ２３２は、上端２４２Ａに回動可能に接続されている。より具体的には、プラットフォームアセンブリ２３２は、前壁２５０Ａ及び対向する後壁２５０Ｂを有し、それらの間に対向する側壁２４８Ａ及びＢが延在するハウジングアセンブリ２４６を部分的に含む。壁２４０及び２５０は、床２５２（図１６）から立ち上がっており、区画室２５４を境界付けている。図示の実施形態では、ライザ２３８Ａの上端２４２Ａは、ハウジングアセンブリ２４６に中心に回転可能に結合される。より具体的には、上端２４２Ａは、側壁２４８Ａに中心に回転可能に結合される。一実施形態では、軸２５８Ａは、側壁２４８Ａから外側に突出し、ライザ２３８Ａの上端２４２に回転可能に結合される。軸受２６０Ａは、車軸２５８Ａを受け入れて容易に回転させるために、ライザ２３８Ａの上端２４２Ａに配置することができる。当然のことながら、ハウジングアセンブリ２４６／プラットフォームアセンブリ２３２をライザ２３８Ａに回転可能に取り付けることができる様々な代替方法があることが理解される。

【0173】

図１６に戻ると、ライザ２３８Ｂはまた、スタンド８２及び対向する上端２４２Ｂに固定された下端２４０Ｂを有する。再び、プラットフォームアセンブリ２３２は、上端２４２Ｂに回動可能に接続され、より具体的には、上端２４２Ｂは、ハウジングアセンブリ２４６／側壁２４８Ｂに中央に回動可能に接続される。車軸２５８Ｂは、側壁２４８Ｂから突出し、ベアリング２６０Ｂを使用するなどして上端２４２Ｂに回転可能に取り付けることができる。車軸２５８Ａ及び２５８Ｂは、プラットフォームアセンブリ２３２がライザ２３８に対して回転する共通の回転軸上に配置される。

【0174】

引き続き図１６を参照すると、ロッカドライブ２３４は、スタンド８２（図１３）に取り付けられたモータ２７０を含む。モータ２７０は、電気回路５３（図４）によって制御され、駆動シャフト２７２を回転させる。リンク２７６は、駆動シャフト２７２と直交して延び、回転する。図示の実施形態では、リンク２７６は、駆動シャフト２７２に接続された第１端部２７４と、長尺接続アーム２８２上の第１端部２８０に接続された対向する第２端部２７８とを有する長尺形状である。代替的な実施形態では、リンク２７６は円形であってもよく、又は他の形状を有してもよい。接続アーム２８２が取り付けられたクランク２７３からの駆動シャフト２７２及びリンク２７６。接続アーム２８２は、プラットフォームアセンブリ２３２に回転可能に接続された対向する第２端部２８４を有する。より具体的には、第２端部２８４は、側壁２４８Ｂの一端で、又は側壁２４８Ｂの一端に向かってハウジングアセンブリ２４６に回転可能に結合される。したがって、モータ２７０が作動すると、駆動シャフト２７２及びリンク２７６、すなわちクランク２７３が回転する。次に、リンク２７６の回転により、接続アーム２８２が選択的に上昇及び下降し、これにより、プラットフォームアセンブリ２３２／ハウジングアセンブリ２４６が、車軸２５８Ａ及び２５８Ｂを通る共通軸を中心に前後に揺動する。揺動動作は、駆動シャフト２７２を連続的に又は往復動作で回転させることによって促進することができる。

【0175】

本発明の一実施形態では、プラットフォームアセンブリ２３２／ハウジングアセンブリ２４６を選択的に揺動させるための手段が設けられる。揺動手段の一例は、ロッカドライブ２３４である。代替的な実施形態では、ロッカドライブ２３４は、同じ機能を達成する様々な異なる機械的機構で置き換えることができる。例えば、ロッカドライブ２３４は、モータ２７０がカムを回転させ、カムに接続された従動子がカムが回転するにつれて上昇及び下降し、プラットフォームアセンブリ２３２／ハウジングアセンブリ２４６の端部を回転させるカムフォロアシステムと置き換えることができる。他の実施形態では、モータ２７０は、プラットフォームアセンブリ２３２／ハウジングアセンブリ２４６の端部を選択的に上昇及び下降させるウォームギヤを往復駆動することができる。他の実施形態では、油圧又は空気圧システムを使用してピストンを上昇又は下降させることができ、ピストンはプラットフォームアセンブリ２３２／ハウジングアセンブリ２４６の端部を選択的に上昇及び下降させる。他の従来のシステムも使用することができる。

【0176】

図１７を参照すると、プラットフォームアセンブリ２３２は、一般に、単離バッグ２０６（図１０）が取り外し可能に支持されるプラットフォーム２９０と、前述したように、プラットフォーム２９０が固定及び支持されるハウジングアセンブリ２４６と、ハウジングアセンブリ２４６の区画室２５４内に少なくとも部分的に配置されるリフトアセンブリ２９２と、リフトアセンブリ２９２によって支持及び昇降される磁石アセンブリ２９４と、単離バッグ２０６を少なくとも部分的に覆う抑制アセンブリ２９６（図２２に示す）とを備える。これらの様々な構成要素については、これ以上詳細には説明しない。

【0177】

引き続き図１７を参照すると、プラットフォーム２９０は、それぞれが外周縁部３８６まで延在する上面３８２及び反対側の底面３８４を有する支持プレート３８０を備える。支持プレート３８０は、典型的には、面３８２及び３８４が平行に整列して配置された長方形の構成を有する。磁石アセンブリ２９４は支持プレート３８０を介して磁力を生成する必要があるので、支持プレート３８０は、典型的には、５ｍｍ、３ｍｍ、２ｍｍ又は１ｍｍ未満であるか、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲内であり得る面３８２と３８４との間の厚さを有する。外周縁部３８６から下方に突出しているのは側壁３８８である。支持プレート３８０の側壁３８８及び底面３８４は、キャビティ３９０（図２１）を少なくとも部分的に境界付けている。側壁３８８は、キャビティ３９０を完全に取り囲むことができ、又は図示のように、キャビティ３９０を部分的にのみ取り囲むように、角部などに貫通するスロット３９２を有することができる。側壁３８８は、前壁３９４及び対向する後壁３９６を含み、それらの間に対向する側壁３９８及び４００が延在する。側壁３８８の下端にはフランジ４０１が配置されている。側壁３８８は、ハウジングアセンブリ２４６の上部外周縁部３８９に位置し、その区画室２５４を横切って少なくとも部分的に覆う。フランジ３９１はまた、フランジ３９１及び４０１を貫通するか又は互いに接続するねじ、ボルト、クリップなどの締結具によるハウジングアセンブリ２４６とプラットフォーム２９０との間の取り付けを容易にするために、ハウジングアセンブリ２４６の外周縁部３８９に形成することができる。プラットフォーム２９０は、典型的には、磁石アセンブリ２９４に取り付けられない材料で作られる。例えば、プラットフォーム２９０は、一般に、アルミニウム又はポリマーで作られる。

【0178】

引き続き図１７を参照すると、磁石アセンブリ２９４は、典型的には正方形又は長方形の構成を有するプレートの形態で示されている。一実施形態では、磁石アセンブリ２９４は、磁石２９９が配置された非磁性ケーシング２９７を含む。ケーシング２９７は、周囲の側壁３０２まで延在する上面２９８及び反対側の底面３００を有する正方形又は長方形の構成を有する。上面２９８及び底面３００は、典型的には平坦であり、平行に整列して配置される。磁石２９９が配置されて固定される凹部３０１（図２０）が上面２９８に形成される。凹部３０１は、上面２９８の中心にあり、ケーシング２９７と相補的であるがそれよりも小さい正方形又は長方形の構成を有する。磁石２９９は、凹部３０１の全体を実質的に占めるように、凹部３０１と相補的な正方形又は長方形の構成を有する。磁石２９９は、典型的にはケーシング２９７の上面２９８と同じ平面内に配置される平坦な上面３０３を有する。この組み立てられた構成では、磁石２９９を取り囲むケーシング２９７によって非磁性縁部３０４が形成される。すなわち、ケーシング２９７／上面２９８は外周縁部３０８を有し、凹部３０１／磁石２９９は外周縁部３０９を有する。非磁性縁部３０４は、典型的には０．２ｃｍ～２ｃｍの範囲、より一般的には０．３ｃｍ～１．５ｃｍ又は０．４ｃｍ～１ｃｍの範囲である外周縁部３０８と３０９との間に延びる厚さＴを有する。磁石２９９は、その正又は引力の磁力が上面３０３からプラットフォーム２９０に向かって上方に延びるように配置される。後述するように、これにより、磁石は、プラットフォーム２０９上に配置された単離バッグ２０６内に配置されたときにビーズ１７９（図１４）を引き付けることができる。

【0179】

一実施形態では、磁石２９９は、単一の連続磁石を含むことができる。代替的な実施形態では、磁石２９９は、凹部３０１と隣接して配置された複数の別個の磁石を含むことができる。例えば、一実施形態では、磁石２９９は、ハルバッハ配列を形成するように隣接して配置された複数の磁石を含むことができる。ハルバッハ配列は、配列の一方の側で磁場を増強し、他方の側で磁場をゼロ付近に打ち消す永久磁石の特別な配置である。これは、磁化の空間的に回転するパターンを有することによって達成される。永久磁石（前面に；左、上、右、下）の回転パターンは、無期限に継続することができ、同じ効果を有する。図１８Ａには、底部から見た磁石２９９の一部の例が示されており、隣接して配置された複数の別個の磁石３０５Ａ～３０５Ｅからなる。磁石３０５は、ハルバッハ配列の形態で配置されている。各磁石３０５に示される矢印は、各磁石３０５の磁場の向きを識別する。図示の向きは、上面３０３からプラットフォーム２９０に向かって上方に延びる強い磁場を生成するが、磁石３０５の下の磁場は相殺される。凹部３０１を占有し、磁石３０５の形成を完了するために、同じ繰り返しパターンで追加の磁石２９９を追加することができる。磁石２９９をハルバッハ配列として形成することにより、磁石２９９の下の磁場を除去しながら、ビーズ処理装置２２の構成要素又は動作に潜在的に干渉する可能性があり、ビーズ１７９をより良好に引き付けるための磁力が増加する。しかしながら、ハルバッハ配列を達成するために磁石３０５を回転パターンに配置すると、磁石３０５は互いに押しのけることを望む。ケーシング２９７は、磁石３０５を機械的に一緒に保持するのを助けるために使用することができる。代替的又は追加的に、磁石３０５は、接着剤によって、又は他の結合技術を使用することによって互いに固定することができる。図１８Ｂは、本開示と共に使用することができ、磁石の向き並びに強磁場及び弱磁場の相対位置の両方を特定するハルバッハ配列の概略図である。

【0180】

図１７に戻ると、リフトアセンブリ２９２は、ハウジングアセンブリ２４６の区画室２５４内に少なくとも部分的に配置され、磁石アセンブリ２９４を支持し、また上昇及び下降させるために使用される。リフトアセンブリ２９２は、前端部３１６と対向する後端部３１８との間に延在する上面３１２及び反対側の底面３１４を有する棚３１０を含む。磁石アセンブリ２９４を棚３１０の上面３１２に固定するために、複数の離間した締結具３１９が使用される。シザーリフト３２１は、棚３１０の底面３１４に固定され、下方に突出している。

【0181】

図１９を参照すると、シザーリフト３２１は、第１シザーアーム対３２０と、離間した第２シザーアーム対３２２とを備える。第１シザーアーム対３２０は、中心に交差し、第２アーム３２６Ａに回動可能に連結された第１アーム３２４Ａを含む。第１アーム３２４Ａ及び第２アーム３２６Ａは、第２シザーアーム対３２２に直交して延びる軸３７７によって互いに回動可能に連結されている。第１アーム３２４Ａは、第１端部３２８Ａ及び対向する第２端部３２９Ａを有する。第１端部３２８Ａは、その前端部でヒンジジョイント３３０Ａによってハウジングアセンブリ２４６の床２５２にヒンジ結合される。第２端部３２９Ａは、ガイド３３２Ａによって後端部３１８で棚３１０の底面３１４に摺動可能及びヒンジ結合される。（図２０の対応するガイド３３２Ｂの第２シザーアーム３２２での使用を参照されたい。）すなわち、ガイド３３２Ａは、後端部３１８において棚３１０の底面３１４に強固に固定され、長尺水平に延びるスロット３３６Ａを有する下方に突出するフランジ３３４Ａを含む。ガイドバー３３８は、第１アーム３２４Ａの第２端部３２９Ａからスロット３３６Ａを通って第２シザーアーム対３２２に向かって直角に突出している。この構成では、第１アーム３２４Ａの第２端部３２９Ａは、スロット３３６内で摺動するガイドバー３３８によって棚３１０に対して水平に摺動することができ、所望の構成に応じて、スロット３３６内で回転するガイドバー３３８及び／又はガイドバー３３８に対して回転する第２端部３２９Ａのいずれかによって自由に回転することができる。

【0182】

第２アーム３２６Ａはまた、第１端部３４２Ａ及び対向する第２端部３４４Ａを有する。第１端部３４２Ａは、ヒンジ結合部３４５Ａによって前端部３１６で棚３１０の底面３１４にヒンジ結合される。第２アーム３２６Ａの第２端部３４４Ａは、ガイド３４６Ａによって後端でハウジングアセンブリ２４６の床２５２に摺動可能かつヒンジ結合される。すなわち、ガイド３３２Ａは、後端で床２５２の２５２の内面に強固に固定され、長尺水平に延びるスロット３５０Ａが形成された上方に突出するフランジ３４８Ａを含む。ガイドピン３５２Ａは、第２アーム３２６Ａの第２端部３４４Ａからスロット３５０Ａを通って第２シザーアーム対３２２に向かって直角に突出する。この構成では、第２アーム３２６Ａの第２端部３４４Ａは、スロット３５０Ａ内で摺動するガイドピン３５２Ａによって床２５２に対して水平に摺動することができ、スロット３５０Ａ内で回転するガイドピン３５２Ａ及び／又はガイドピン３５２Ａに対して回転する第２端部３４４Ａのいずれかによって自由に回転することができる。

【0183】

第２シザーアーム対３２２は、第１シザーアーム対３２０と同じ構成、構造要素及び床２５２及び棚３１０への取り付け部を有する。したがって、上記の説明は、第２シザーアーム対３２２にも適用可能であり、第１シザーアーム対３２０と第２シザーアーム対３２２との間の同様の要素は、第２シザーアーム対３２２の参照符号が添え字「Ｂ」を含むことを除いて同様の参照符号によって識別される。

【0184】

引き続き図１９を参照すると、リフトアセンブリ２９２は、ベアリング３６２Ａ及び３６２Ｂによって床２５２に対向する端部に回転可能に取り付けられたねじ付きシャフト３６０を更に含む。シャフト３６０にはカラー３６４がねじ式に取り付けられている。カラー３６４は、シャフト３６０が反対方向に回転すると、カラー３６４がシャフト３６０の長さに沿って反対方向に移動するように構成され取り付けられる。シャフト３６０は、床２５２に取り付けられ、電気回路（図４）に電気的に結合され、電気回路５３によって制御されるモータ３６６によって選択的に回転される。図示の実施形態では、モータ３６６は、ユニオン３７０を介してシャフト３６０に結合された駆動シャフト３６８を回転させる。ユニオン３７０は、駆動シャフト３６８とシャフト３６０との間の適切な位置合わせを容易にする遊びを提供する。しかしながら、他の実施形態では、ユニオン３７０を排除することができ、駆動シャフト３６８をシャフト３６０に直接接続することができる。カラー３６４は、第１シザーアーム３２０のガイドピン３５２Ａ及び第２シザーアーム３２２のガイドピン３５３Ｂに接続される。より具体的には、一実施形態では、第１延在部３７２Ａはカラー３６４とガイドピン３５２Ａとの間に延在し、第２延在部３７２Ｂはカラー３６４とガイドピン３５２Ｂとの間に延在する。必要に応じて、カラー３６４とガイドピン３５２との間の適切な位置合わせを容易にするために、延在部３７２を調整することができる。代替的な実施形態では、カラー３６４は、ガイドピン３５２に直接結合することができる。

【0185】

モータ３６６の制御された動作により、リフトアセンブリ２９２を使用して、上昇位置と下降位置との間で移動棚３１０／磁石アセンブリ２９４を選択的に制御することができる。例えば、図２０に示すように、リフトアセンブリ２９２は、作動位置においてプラットフォーム２９０に対して持ち上げられた磁石アセンブリ２９４を有する。すなわち、第１シザーアーム対３２０及び第２シザーアーム対３２２は、磁石アセンブリ２９４の上面２９８が支持プレート３８０／プラットフォーム２９０の底面３８４に対して又はそれに直接隣接して配置されるように配置される。一実施形態では、磁石アセンブリ２９４が作動位置まで上昇したときの磁石アセンブリ２９４の上面２９８と支持プレート３８０／プラットフォーム２９０の底面３８４との間の距離は、１０ｍｍ、７ｍｍ、４ｍｍ、又は２ｍｍ未満、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲である。すなわち、以下で更に説明するように、磁石アセンブリ２９４は、単離バッグ２０６がプラットフォーム２９０によって支持されているときに、単離バッグ２０６内に配置されたビーズ１７９を引き付けて保持するために、プラットフォーム２９０に十分に接近していなければならない。

【0186】

磁石アセンブリ２９４をプラットフォーム２９０に対して下方に非作動位置に移動させるために、モータ３６６は、カラー３６４をモータ３６６から離れるように水平に前進させるねじ付きシャフト３６０を回転させるように作動される。次に、カラー３６４は、延在部３７２及びガイドピン３５２をガイド３４６に沿って水平に後方に同時に移動させ、次に、第１アーム３２４の第２端部３４４Ａを第２アーム３２６Ａの第１端部３２８Ａから水平に離れるように移動させる。端部３４４Ａ及び３２８Ａが水平方向に分離すると、アーム３２４及び３２６は軸３７７において互いに対して回動し、これにより、アーム３２４及び３２６の上端が水平方向に分離して下方に移動し、それにより、図２１に示すように、棚３１０及び磁石アセンブリ２９４が支持プレート３８０に対して下降する。リフトアセンブリが磁石アセンブリ２９４を下降した非作動位置に移動させたときの磁石アセンブリ２９４の上面２９８と支持プレート３８０／プラットフォーム２９０の底面３８４との間の距離は、典型的には、３ｃｍ、３．５ｃｍ、４ｃｍ、４．５ｃｍ、５ｃｍ又は６ｃｍよりも大きく、或いは前述の値のいずれか２つの間の範囲内である。モータ３６６が駆動シャフト３６８を回転させる方向を逆にすることによって、上記のプロセスは逆になり、リフトアセンブリ２９２を上昇位置に戻すことができる。

【0187】

本発明の一実施形態は、上昇した作動位置と下降した非作動位置との間でプラットフォーム２９０に対して磁石アセンブリ２９４を選択的に上昇及び下降させるために、ハウジングアセンブリ２４６の区画室内に少なくとも部分的に配置された手段を含む。そのような手段の一例は、前述のようなシザーリフト３２１を含む。代替実施形態では、シザーリフト２１は、同じ機能を達成することができる様々な代替機構で置き換えることができる。限定ではなく例として、棚３１０は、棚３１０が水平に配置されたままでプラットフォーム２９０に対して上下に垂直に摺動することを可能にするトラックに取り付けることができる。次いで、様々な機械的システムを使用して、棚３１０をトラックに沿って移動させることができる。一例として、モータ３６６を使用して、棚３１０に接続された接続アームを昇降させるクランクを回転させることができる。或いは、カムが回転すると、モータ３６６がカムを回転させ、カムに接続され、棚３１０に延びる従動子が棚３１０を昇降させるカムフォロアシステムを使用することができる。他の実施形態では、モータ３６６は、棚３１０を選択的に昇降させるウォームギヤを往復駆動することができる。他の実施形態では、油圧、空気圧、ケーブル又はチェーンシステムを使用して、棚３１０をトラックに沿って上昇及び下降させることができる。他の従来のシステムも使用することができる。

【0188】

図２２を参照すると、抑制アセンブリ２９６は、一般に、ハウジングアセンブリ２４６上に配置された４つの離間したばねアセンブリ４２０Ａ～４２０Ｄと、それに結合されたカバーアセンブリ４２１とを含む。カバーアセンブリ４２１は、ばねアセンブリ４２０のそれぞれに結合され、プラットフォーム２９０を取り囲むカバーハウジング４２２と、プラットフォーム２９０とカバーハウジング４２２との間に配置された任意選択のスリーブ４２４と、カバーハウジング４２２にヒンジ式に取り付けられた蓋４２６とを備える。次に、抑制アセンブリ２９６の様々な構成要素について説明する。

【0189】

ばねアセンブリ４２０Ａは、ハウジングアセンブリ２４６に取り付けられ、ハウジングアセンブリから外向きに突出するブラケット４３０Ａを備える。ブラケット４３０Ａはまた、ハウジングアセンブリ２４６の一部を形成することができる。ブラケット４３０Ａは、垂直に貫通する穴４３２Ａを有する。ロッド４３４Ａは、孔４３２Ａ内に摺動可能に受容され、第１端部４３６Ａと対向する第２端部４３８Ａとの間に延在する。第１端部４２６Ａは、ブラケット４３０Ａの上方に突出し、ブラケット４３０Ａに強固に結合されたカラー４４０Ａを有する。カラー４４０の外径は孔４３２Ａの外径よりも大きく、カラー４４０によってロッド４３４Ａが孔４３２Ａを通過することが防止される。フランジ４４２Ａは、ロッド４３４Ａの第２端部４３８Ａから外向きに突出する。ばね４４４Ａは、フランジ４４２Ａとブラケット４３０Ａの底面との間に延在し、ロッド４３４Ａが穴４３２Ａを通って上方に押されると、ばね４４４Ａは、ロッド４３４Ａを下方に付勢するように弾性的に圧縮される。ロッド４３４Ａの第１端部４３６Ａは、ねじ付きソケット４４８Ａが形成された端面４４６Ａで終端する。以下により詳細に説明するように、ソケット４４８Ａは、ねじ締結具４５０Ａを受け入れるように構成される。ばねアセンブリ４２０Ｂ、４２０Ｃ、及び４２０Ｄは、ばねアセンブリ４２０Ａと同一であり、それぞれカバーハウジング４２２の対応する角に隣接して配置される。したがって、ばねアセンブリ４２０Ａの上記の説明は、ばねアセンブリ４２０Ｂ～４２０Ｄにも同様に適用可能である。更に、ばねアセンブリ４２０Ａ及びばねアセンブリ４２０Ｂ～４２０Ｄの同様の要素は、ばねアセンブリ４２０Ｂ～４２０Ｄの参照符号のそれぞれがそれぞれ添え字Ｂ、Ｃ、及びＤを含むことを除いて、同様の参照符号によって識別される。

【0190】

カバーハウジング４２２は、上縁部４６０と対向する下縁部４６２との間に延在する内面４５６及び対向する外面４５８を有する環状外周壁４５４を含む。内面４５６は、上縁部４６０と下縁部４６２との間で外周壁４５４を貫通する開口４６４を取り囲む。開口４６４は、プラットフォーム２９０を受け入れるように構成される。外周壁４５４は、前壁４６６と、側壁４７０及び４７２がその間に延在する対向する後壁４６８とを備える。カバーハウジング４２２の外面４５８から外側に突出するのは、４つのマウント４７４Ａ～４７４Ｄである。マウント４７４Ａ及び４７４Ｂは、それぞれその前端及び後端において側壁４７０から外側に突出している。同様に、マウント４７４Ｃ及び４７４Ｄは、それぞれその前方端部及び後方端部において側壁４７２の外面４５８から外側に突出する。マウント４７４は、カバーハウジング４２２がプラットフォーム２９０上に受け入れられたときにばねアセンブリ４２０と整列するように配置される。マウント４７４Ａは、ロッド４３４Ａの第１端部４３６Ａと結合するように構成される。例えば、一実施形態では、マウント４７４Ａは、上面４７８Ａ及び反対側の底面４８０Ａを有する。凹部４８２Ａは、底面４８０Ａに形成され、ロッド４３４Ａの第１端部４３６Ａを受け入れるように構成される。上面４７８Ａには、凹部４８２Ａに連通する開口４８４Ａが形成されている。開口４８４Ａの直径は、第１端部４３６Ａであるロッド４３４Ａの外径よりも小さい。締結具４５０Ａは、ロッド４３４Ａの第１端部４３６Ａをマウント４７４Ａに固定するように、開口４８４Ａを通過してソケット４４８Ａにねじ込まれるように構成される。ロッド４３４Ａとマウント４７４Ａとを互いに固定するために、様々な代替技術を使用できることが理解される。例えば、構造は、圧入接続、接着剤、溶着、又は様々な他の種類の機械的締結具によって互いに固定することができる。マウント４７４Ｂ～４７４Ｄは全て、マウント４７４Ａと同じ構造要素及び構成を有し、ばねアセンブリ４２０Ｂ～４２０Ｄのロッド４３４Ｂ～４３４Ｄとそれぞれ結合するように同様に構成される。マウント４７４Ａとマウント４７４Ｂ～４７４Ｄとの間の同様の要素は、マウント４７４Ｂ～４７４Ｄの参照文字がそれぞれ添え字Ｂ、Ｃ、及びＤを含むことを除いて、同様の参照文字によって識別される。

【0191】

カバーハウジング４２２の前壁４６６には、上縁部４６０から下方に延びる凹部４８６が形成されている。後述するように、凹部４８６は、クランプアセンブリ４０２を受け入れるように構成される。

【0192】

スリーブ４２４はまた、プラットフォーム２９０を取り囲み、カバーハウジング４２２の開口４６４内に受け入れられるように構成された外周壁４９０を含む。スリーブ４２４は、スリーブ４２４がカバーハウジング４２２と同時に移動するように、締結具及び他の従来技術などによってカバーハウジング４２２に結合される。スリーブ４２４はまた、凹部４８６と整列し、クランプアセンブリ４０２を受け入れるように構成された凹部４９２をその中に形成している。スリーブ４２４は、部分的に、構造的完全性カバーハウジング４２２を増加させるように機能することができる。例えば、一実施形態では、カバーハウジング４２２はプラスチックで作ることができ、スリーブ４２４はアルミニウムなどの金属で形成される。この設計は、コストを削減するが、所望の強度を達成する。代替的な実施形態では、カバーハウジング４２２の構造的完全性を高めることができ、スリーブ４２４を排除することができる。

【0193】

蓋４２６は、前縁５０４、後縁５０６、及び対向する側縁５０８及び５１０の間に延在する内面５００及び対向する外側面５０２を有する蓋板４９９を備える。一対の離間したヒンジ５１２Ａ及び５１２Ｂは、蓋板４９９の側縁５０８とカバーハウジング４２２の側壁４７０との間に延在する。これにより、蓋４２６／蓋板４９９がカバーハウジング４２２にヒンジ式に取り付けられる。蓋４２６は、側縁部５１０において又はそれに向かって蓋板４９９から上方に延在するハンドル５１４を更に含む。図１５によりよく示されるように、一対のラッチ５１８Ａ及び５１８Ｂは、カバーハウジング４２２の側壁４７２に取り付けられ、一対の対応するキャッチ５２０Ａ及び５２０Ｂは、蓋板４９９の側縁部５１０に取り付けられる。ラッチ５１８Ａ及びＢは、キャッチ５２０に解放可能に係合して、蓋４２６／蓋板４９９を閉位置に選択的に保持するように構成される。すなわち、カバーハウジング４２２がばねアセンブリ４２０に固定された状態で、蓋４２６は、蓋板４９９がヒンジ５１２を中心にして回転されて、プラットフォーム２９０が開放的に露出され、自由にアクセス可能である開放位置と、蓋板４９９の内面５００がプラットフォーム２９０の支持プレート３８０の上面３８２に対して又はそれに隣接して配置される閉鎖位置との間で選択的に移動することができる。一実施形態では、蓋板４９９の内面５００は、支持プレート３８０の上面３８２と平行に整列して配置することができる。閉位置にあるとき、ラッチ５１８は、蓋４２６を閉位置に固定するためにキャッチ５２０に固定することができる。

【0194】

図２３を参照すると、抑制アセンブリ２９６は、ばねアセンブリ４２０Ａと共に動作する停止アセンブリ５２６Ａを更に含むことができる。停止アセンブリ５２６Ａは、電気回路（図４）と電気的に連通し、電気回路５３によって操作されるソレノイドバルブ５２８Ａを備える。ソレノイドバルブ５２８Ａは、ハウジング５３０Ａと、ハウジング５３０Ａに対して選択的に移動されるピストン５３２Ａとを含む。ピストン５３２Ａにはストッパ５３４Ａが取り付けられている。図示の実施形態では、ストッパ５３４Ａは長尺プレートの形態である。他の実施形態では、ストッパ５３４は異なる構成を有することができる。更に他の実施形態では、ストッパ５３４を排除することができ、ピストン５３２Ａはストッパとして機能することができる。ストッパ５３４Ａは、ロッド４３４と平行に整列して配置され、ブラケット４３０Ａとフランジ４４２Ａとの間に配置される。ソレノイドバルブ５２８Ａがピストン５３２Ａを内外に移動させることにより、ストッパ５３４Ａを前進抑制位置と後退非抑制位置との間で移動させることができる。前進抑制位置では、図２３に示すように、ストッパ５３４Ａはフランジ４４２Ａと垂直に位置合わせされる。結果として、ロッド４３４Ａは、図２４に示すように、フランジ４４２Ａがストッパ５３４Ａと接触するまで、垂直上方にのみ移動することができる。図２５に示すように、ストッパ５３４Ａが後退した非抑制位置に移動すると、ストッパ５３４Ａはフランジ４４２Ａから水平方向にオフセットされる。したがって、ロッド４３４Ａ及びフランジ４４２Ａは、ストッパ５３４Ａによる制限なしに上方に自由に前進することができる。

【0195】

停止アセンブリ５２６は、各ばねアセンブリ４２０又は選択されたばねアセンブリのみに関連付けることができる。図示の本実施形態では、図１５に示すように、停止アセンブリ５２６Ｂがばねアセンブリ４２０Ｄに関連付けられている。停止アセンブリ５２６Ｂは、停止アセンブリ５２６Ａがばねアセンブリ４２０Ａと共に動作するのと同じように、ばねアセンブリ４２０Ｄの全ての要素を含み、ばねアセンブリ４２０Ｄと同じように動作する。したがって、停止アセンブリ５２６Ａと５２６Ｂとの間の同様の要素は、停止アセンブリ５２６Ｂの要素が添え字Ｂを含むことを除いて、同様の参照符号によって識別される。

【0196】

以下で更に詳細に説明するように、動作中、単離バッグ２０６はプラットフォーム２９０の上に配置される。その後、蓋４２６は閉位置に移動され、ラッチ５２８は、蓋４２６を閉位置にロックするために使用される。この位置では、流体は単離バッグ２０６の中に送られ、そこから取り出される。単離バッグ２０６を出入りする流体によって単離バッグ２０６が拡張及び収縮すると、カバーアセンブリ４２１はプラットフォーム２９０に対して異なる位置の間を移動する。例えば、単離バッグ２０６が空であるとき、ばね４４４は、各ばねアセンブリ４２０のカラー４４０がブラケット４３０の上に載るように、ロッド４３４をブラケット４３０から離れるように下方に弾性的に付勢する。この構成では、蓋板４９９とプラットフォーム２９０との間に最小隙間が形成される。流体が単離バッグ２０６に入ると、単離バッグ２０６は拡張し始め、これにより、カバーアセンブリ４２１及びロッド４３４を上方にかつプラットフォーム２９０から離れるように押す力が生じる。ロッド４３４が持ち上げられると、ばね４４４は、単離バッグ２０６の拡張及びカバーアセンブリ４２１の上方への移動にますます抵抗するように圧縮される。単離バッグ２０６が拡張及び収縮するときにカバーアセンブリ４２１とプラットフォーム２９０との間で単離バッグ２０６を弾性的に圧縮するためにばね４４４を使用することは、中央で膨らむのとは対照的に、単離バッグ２０６をより均一な厚さに維持するのに役立つ。結果として、単離バッグ２０６内に配置されたビーズ１７９は、プラットフォーム２９０の近くに、したがって磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場の近くに維持され、それによって磁石アセンブリ２９４によるビーズ１７９の保持が改善される。

【0197】

ストッパ５３４Ａが前進抑制位置にある場合、カバーアセンブリ４２１は、図２４に関して前述したように、フランジ４４４がストッパ５３４に当接するプラットフォーム２９０に対して第１上昇位置までしか上昇することができない。その結果、蓋４２６／蓋板４９９とプラットフォーム２９０との間の単離バッグ２０６の拡張が制限される。これは、磁石アセンブリ２９４によってその中のビーズ１７９に印加される磁場を更に増加させるように、単離バッグ２０６又はその中に配置された他のバッグが拡張することができる厚さを更に最小限に抑えるのに役立つ。図２５に示すように、ストッパ５３４が後退した非抑制位置に移動すると、カバーアセンブリ４２１の上方への移動はストッパ５３４によって抑制されない。したがって、単離バッグ２０６は、単離バッグ２０６が充填容量に達するまで、又はばね４４４の圧縮が単離バッグ２０６に入る流体によって生じる外向きの拡張力よりも大きくなるまで、蓋板４９９とプラットフォーム２９０との間で拡張し続けることができる。

【0198】

本開示の一実施形態は、カバーアセンブリ４２１のプラットフォーム２９０から離れる動きを弾性的に抑制するための手段を含む。そのような手段の一例は、前述のばねアセンブリ４２０及びその代替例である。しかしながら、様々な他の構造が同じ機能を達成することができることが理解される。例えば、一代替形態では、ばね４４４は、ロッド４３４又は他の形態のエラストマー材料を取り囲むエラストマースリーブで置き換えることができる。別の代替形態では、フランジ４４２とブラケット４３０の底部との間で各ばね４４４を圧縮するのとは対照的に、ばね４４４は、ロッド４３４が垂直上方に移動するにつれてばね４４４が弾性的に引き伸ばされるように、カラー４４０とブラケット４３０の上部との間に延在し、それらに接続することができる。他の実施形態では、弾性部材は、カバーアセンブリ４２１とハウジングアセンブリ２４６との間に延在し、それらに離間した位置で直接的又は間接的に接続することができる。したがって、弾性部材は、カバーアセンブリがプラットフォーム２９０に対して持ち上げられると、再び弾性的に伸張する。弾性部材は、ばね、弾性バンド、又は他の形態のエラストマー材料を含むことができる。他の構成も使用することができる。

【0199】

図２２に戻ると、クランプアセンブリ４０２は、カバーハウジング４２２の前壁４６６に取り外し可能に配置される。クランプアセンブリ４０２は、単離バッグ２０６をプラットフォーム２９０の上に固定してセンタリングするために部分的に使用される。より具体的には、図２７を参照すると、上縁部４６０から下方に延在するカバーハウジング４２２の前壁４６６の中央に凹部４８６が形成されている。凹部４８６は、床５４０と、床５４０から立ち上がる対向する側面５４２Ａ及び５４２Ｂとによって境界を定められる長尺Ｕ字形の構成を有する。Ｕ字形チャネル５４４Ａ及び５４４Ｂは、それぞれ各側面５４２Ａ及び５４２Ｂ内に垂直に窪んでいる。

【0200】

クランプアセンブリ４０２は、対向する端部５５２Ａと５５２Ｂとの間に延在する上面５４８及び反対側の底面５５０を有する長尺クランプベース４０３を備える。端部５５２Ａ及び５５２Ｂは、それぞれカバーハウジング４２２のチャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ内に摺動可能に受け入れられ、クランプベース４０３は、チャネル５４４内で垂直に摺動することができるが、横方向の動きから再訓練される。クランプベース４０３の上面５４８の中央に凹んでいるのは、下側捕捉溝５５４である。クランプアセンブリ４０２はまた、クランプベース４０３に取り外し可能に結合することができるクランプクロージャ４０７を含む。クランプクロージャ４０７は、上面５５６及び反対側の底面５５８を有する。上側捕捉溝５５５は、底面５５８の中央に凹んでいる。ねじ又はボルトなどの締結具４１０Ａ及び４１０Ｂは、上側捕捉溝５５５の両側のクランプクロージャ４０７を通過し、ねじ又は他の係合によってクランプベース４０３に選択的に固定することができる。上側捕捉溝５５５は、クランプクロージャ４０７がクランプベース４０３に固定されたときに下側捕捉溝５５４と整列する。下側捕捉溝５５４及び上側捕捉溝５５５はそれぞれ、典型的には、同じサイズ及び形状とすることができる半円筒形の構成を有する。したがって、整列した捕捉溝５５４，５５５は、円筒状開口を形成することができる。他の実施形態では、捕捉溝５５４，５５５は、半多角形構成などの他の形状であってもよい。

【0201】

前述のように、クランプアセンブリ４０２は、単離バッグ２０６をプラットフォーム２９０の上部にセンタリングして固定するために部分的に使用される。図２９は、単離バッグ２０６の一実施形態を示す。単離バッグ２０６は、それに結合されたポート４１６を有する袋体４１１を含む。袋体４１１は、典型的には、底部シート４１３を覆う上部シート４１２からなる折り畳み式ピロー型の袋である。シート４１２及び４１３は、外周シール４１４を形成するためにそれらの外周縁部の周りで互いに接合される。接合は、熱エネルギー、高周波（ＲＦ）エネルギー、音波エネルギーもしくは音波、又は他の封止エネルギーによる溶着、又は接着剤の使用などの当技術分野で公知の方法を使用することを含むことができる。外周縁部は、前縁部４２７Ａ、後縁部４２７Ｂ、及びそれらの間に延在する対向する側縁部４２８Ａ及び４２８Ｂを含むことができる。区画室４１５が、シート４１２と４１３との間に境界付けられ、外周シール４１４によって実質的に囲まれる。また、前縁４２７Ａ上のシート４１２と４１３との間で部分的にシールされているのは、筒状であり、区画室４１５と連通しているポート４１６である。図示の実施形態では、ポート４１６は、カラー４１７と、そこから外側に突出するステム４１８とを含む。ステム４１８は、典型的には有刺され、使用中、ラインセット１７４Ａと単離バッグ２０６の区画室４１５との間の流体連通を提供するように、ラインセット１７４Ａ（図１１）のチューブセクション２０４Ｂへの端部と結合される。区画室４１５のサイズは、意図される用途に依存し、典型的には、少なくとも１０ｍＬ、４０ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、４００ｍＬ、６００ｍＬ、８００ｍＬ、１，２００ｍＬ、１，４００ｍＬ以下の体積を有するか、又は前述の体積のいずれか２つの間の範囲にある。意図される用途に応じて、他の体積も使用することができる。

【0202】

シート４１２及び４１３は、典型的には可撓性ポリマーフィルムから構成される。フィルムは単層であってもよいが、より一般的には、積層又は共押出された複数の層を含む。例えば、各シートは３～９層を含むことができる。シート４１２及び４１３用のフィルムは、一般に、４ミル～１５ミルの範囲の厚さを有し、４ミル～１０ミルがより一般的である。更に、フィルムは、典型的には、十分に可撓性であり、塑性変形せずにチューブに圧延することができ、及び／又は塑性変形せずに少なくとも９０°、１８０°、２７０°、又は３６０°の角度にわたって折り畳むことができる。フィルムは、典型的には、生細胞との接触が承認されており、照射によって滅菌することができる。本発明で使用することができる押出材料の一例は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手可能なＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＸ３－９フィルムである。Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＸ３－９フィルムは、ｃＧＭＰ設備で製造された３層９ミルキャストフィルムである。外層は、超低密度ポリエチレン製品接触層と共押出されたポリエステルエラストマーである。別の例は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからも入手可能なＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＸ５－１４キャストフィルムである。Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＸ５－１４キャストフィルムは、ポリエステルエラストマー外層、超低密度ポリエチレン接触層、及びそれらの間に配置されたエチレンビニルアルコール（ＥＶＯＨ）バリア層を含む。

【0203】

単離バッグ２０６の形成、材料及び特性に関する上記の議論は、混合バッグ２１０、収集バッグ２１２及び媒体バッグ２１６を含む本明細書に開示される他のバッグにも適用可能である。しかしながら、バッグ及び意図される用途に応じて、バッグはまた、複数のポート及び異なるポート構成を有することができる。更に、幾つかの用途では、バッグは、ピロータイプのバッグとは対照的に三次元バッグとなることができ、異なる容積を有し得る。

【0204】

単離バッグ２０６は、典型的にはプラットフォーム２９０の支持プレート３８０の外周縁部３８６に匹敵するサイズ及び形状を有する外周縁部４１９を有する。この同様の構成を有することにより、単離バッグ２０６を支持プレート３８０上に適切に位置決めして位置合わせすることが容易になる。例えば、一実施形態では、単離バッグ２０６が支持プレート３８０上の中心にあるとき、外周縁部３８６と外周縁部４１９との間の任意の間隙は、典型的には１０ｍｍ、８ｍｍ、６ｍｍ、４ｍｍ又は２ｍｍ未満である。しかしながら、他のギャップも使用することができる。

【0205】

組み立て中、図２８に示すように、単離バッグ２０６は、カラー４１７／ポート４１６がクランプベース４０３の下側捕捉溝４０５Ａ内に受け入れられている間に、プラットフォーム２９０／支持プレート３８０上に配置される。カラー４１７／ポート４１６の後部は、プラットフォーム２９０上の単離バッグ２０６の適切なセンタリング及び位置合わせを確保するのを助けるために、プラットフォーム２９０の前壁３９４の面に突き当たることができる。次に、クランプクロージャ４０７は、前述のようにクランプベース４０３に固定され、カラー４１７／ポート４１６がクランプクロージャ４０７とクランプベース４０３との間に強固にクランプされ、それにより、単離バッグ２０６をプラットフォーム２９０上にセンタリングし、使用中の望ましくない動きを制限するのに役立つ。単離バッグ２０６をプラットフォーム２９０上に適切にセンタリングすることは、磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場が単離バッグ２０６内のビーズ１７９に印加される効率を改善するのに役立つ。

【0206】

単離バッグ２０６がプラットフォーム２９０上に適切に配置され、クランプアセンブリ４０２に固定されると、蓋４２６は、図２に示すように、閉位置に移動され、ラッチ５１８によって定位置に固定される。突起４３１Ａ及び４３１Ｂは、図１５に示すように、蓋板４９９から突出し、クランプアセンブリ４０２を凹部４８６内にロックするようにチャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ（図２８）の上部にわたって延在する。単離バッグ２０６が流体で満たされると、単離バッグ２０６が拡張し、カラー４１７／ポート４１６がプラットフォーム２９０に対して上昇する。単離バッグ２０６が充填され空にされるときにクランプアセンブリ４０２がカバーハウジング４２２のチャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ内で垂直に上下に自由に摺動する能力は、ポート４１６が単離バッグ２０６の残りの部分に対して適切に配向されたままであることを可能にし、例えば、単離バッグのねじれ又は折り畳みを防止するのに役立つ。これは、流体が単離バッグ２０６に適切に流入及び流出できることを確保するのに役立つ。前述したように、カバーハウジング４２２／カバーアセンブリ４２１はまた、単離バッグ２０６が充填及び空にされるときに上下に調整するが、ポート４１６は、単離バッグ２０６の重なり合うシート４１２及び４１３の間の中央に維持されるため、ポート４１６は、カバーハウジング４２２／カバーアセンブリ４２１とは異なる速度で垂直に移動する。

【0207】

気泡センサ５６２Ａ及び５６２Ｂなどの１つ以上の気泡センサも、カバーハウジング４２２の前壁４６６に固定することができる。気泡センサ５６２は、電気回路５３（図４）と通信し、Ｕ字形チャネル５６６が貫通した本体５６４を有する。チャネル５６６は、単離バッグ２０６から延びるチューブセクション２０４Ｂなどのチューブ２００をぴったりと取り外し可能に受け入れるように構成され、空気又は液体が、単離バッグ２０６に流入及び／又はそこから流出する流体の量を計算する際に使用するために、チューブセクション２０４Ｂを通って流れているときを検出するように機能する。

【0208】

幾つかの用途では、より小さい容積を有する単離バッグを使用することが望ましい場合がある。例えば、少量の細胞培養物が処理されている場合、状況によっては、単離バッグ２０６よりも小さい体積を有する単離バッグに細胞を濃縮することが望ましい場合がある。処理される細胞培養物の容量を小さくするためにより小さいバッグを使用することにより、バッグ内の細胞培養物の流れを制御することがより容易になり、それにより、以下で論じられるように、細胞とビーズとの混合が最適化される。より小さいバッグの使用はまた、バッグからの細胞培養物の流れを制御するのを助けることができる。更に、細胞に損傷を与える可能性があるバッグ内のデッドスペースのリスクが低い。

【0209】

より小さい容積及び対応するより小さい全体形状を有する単離バッグを使用することができるが、そのようなバッグは、プラットフォーム２９０上に適切に中心合わせして保持することが困難であり得るという点で問題となり得る。更に、異なるサイズのバッグを設計し、製造し、保管することは費用がかかる可能性がある。したがって、本開示の一実施形態の特有の特徴の１つは、単離バッグの全てが同じ外寸及びジオメータを有するが、バッグの一部が区画室４１５の内部容積を減少させるために更に処理されている単離バッグの形態である。例えば、図３０には、代替的な単離バッグ２０６Ａが示されており、単離バッグ２０６と２０６Ａとの間の同様の要素は、同様の参照符号によって識別される。単離バッグ２０６Ａは、シート４１２及び４１３を一緒にシールし、区画室４１５を横切って横方向に延びる追加のシールライン４２３が形成されていることを除いて、サイズ、形状、材料、及び特性が単離バッグ２０６と同一である。具体的には、シールライン４２３は、シールされた側縁４２８Ａと４２８Ｂとの間で横方向に延在する。シールライン４２３は、区画室４１５を活性区画室４５１と不活性区画室４５２とに分割する。すなわち、シールライン４２３の結果として、ポート４１６を通って単離バッグ２０６Ａに入る流体は、シールライン４２３と前縁部４２７Ａとの間で境界付けられた活性区画室４５１のみを占有することができる。流体は、シールライン４２３によって不活性区画室４５２内への通過が防止される。活性区画室４５１は、区画室４１５の一部のみを含み、したがってそれよりも小さい。

【0210】

シールライン４２３は、単離バッグ２０６の外周縁部をシールすることに関して前述したような従来のフィルム接着技術を使用して形成することができる。更に、シールライン４２３は、単離バッグ２０６Ａを形成する最初の製造プロセスの一部として形成することができ、又は最初の単離バッグ２０６が形成された後に後に追加することができる。単離バッグ２０６Ａはまた、シート４１２及び／又は４１３を通過して不活性区画室４５２に入る１つ以上の通気孔４２９を含む。通気孔４２９は、製造中に不活性区画室４５２内に捕捉された可能性のある空気が逃げることを可能にし、その結果、単離バッグ２０６Ａは平らになる。意図される用途に応じて、活性区画室４５１の容積は、シールライン４２３を前縁４２７Ａ又は後縁４２７Ｂに向かって移動させることによって、製造中に選択的に調整することができる。

【0211】

他の代替的な単離バッグも、１つ以上のシールラインを異なる位置として配置することによって形成することができる。例えば、図３１には、単離バッグ２０６と２０６Ｂとの間の同様の要素が同様の参照符号によって識別される単離バッグ２０６Ｂが示されている。ここでも、単離バッグ２０６Ｂは、サイズ、形状、材料、及び特性において、シート４１２及び４１３を一緒にシールし、ポート４１６の両側でシールされた前縁部４２７Ａとシールされた後縁部４２７Ｂとの間に延在する追加の離間したシールライン４２３Ａ及び４２３Ｂが形成されていることを除いて、単離バッグ２０６と同一であり得る。シールライン４２３Ａ及び４２３Ｂは、区画室４１５を活性区画室４５１と２つの非活性区画室４５２Ａ及び４５２Ｂとに分割する。活性区画室は、シールライン４２３Ａと４２３Ｂとの間で境界付けられている。不活性区画室４５２Ａは、シールライン４２３Ａと側縁４２８Ａとの間で境界付けられ、不活性区画室４５２Ｂは、シールライン４２３Ｂと側縁４２８Ｂとの間で境界付けられる。シールライン４２３Ａ及び４２３Ｂの結果として、ポート４１６を通って単離バッグ２０６Ｂに入る流体は、活性区画室４５１のみを占有することができ、非活性区画室４５２Ａ及び４５２Ｂにアクセスすることができない。

【0212】

単離バッグ２０６Ｂはまた、シート４１２及び／又は４１３を通過して不活性区画室４５２Ａに入る少なくとも１つの通気孔４２９Ａと、シート４１２及び／又は４１３を通過して不活性区画室４５２Ｂに入る少なくとも１つの通気孔４２９Ｂとを含む。通気孔４２９は、製造中に不活性区画室４５２Ａ及び４５２Ｂ内に捕捉された可能性のある空気が、単離バッグ２０６Ｂが平らになるように逃げることを可能にする。意図される用途に応じて、活性区画室４５１の容積は、シールライン４２３Ａ及び４２３Ｂを互いに向かって、又は側縁４２８Ａ及び４２８Ｂに向かって横方向外側に移動させることによって、製造中に選択的に調整することができる。

【0213】

単離バッグ２０６Ｂの図示の実施形態では、シールライン４２３Ａ及び４２３Ｂは平行に整列して配置される。図３２には、単離バッグ２０６Ｂと２０６Ｃとの間の同様の要素が同様の参照符号によって識別される、単離バッグ２０６Ｃの別の代替実施形態が示されている。単離バッグ２０６Ｃは、平行であるのとは対照的に、シールライン４２３Ａ及び４２３Ｂが、ここではそれらが前縁部４２７Ａから後縁部４２７Ｂまで延在するにつれて互いに外方に傾斜することを除いて、単離バッグ２０６Ｂと同一である。したがって、単離バッグ２０６Ｂに関する上記の議論の残りの部分は、単離バッグ２０６Ｃにも適用可能である。他の実施形態では、区画室４１５の容積を減少させるように、前述のシールラインの組み合わせを使用することができ、又はシールラインを他の向き又は構成で形成することができる。しかしながら、各実施形態では、典型的には、バッグに印加することができる磁石アセンブリ２９４によって生成される磁場の効果を最大にするのを助けるために、活性区画室をバッグの中心に保つことが好ましい。

【0214】

上記に加えて、様々な開示された単離バッグはまた、幾つかの他の固有の特徴を有する。例えば、幾つかの実施形態では、各単離バッグは、２つ以上のポートを有するのとは対照的に、単一のポート４１６のみで形成される。全ての流体が流入及び流出する単一のポートを有することは、液体、ビーズ、及び／又は細胞が望ましくないときに停滞及び／又は潜在的に放出する可能性がある未使用のポートに液体、ビーズ、及び／又は細胞が集まっていないことを確保するのに役立つ。更に、シールライン、特に図３２に示すＶ字形構成を有するものは、液体、ビーズ、及び細胞をポート４１６に案内して、材料の全てがバッグから容易かつ効率的に除去されることを確保するのに役立つ。単離バッグ及び他のバッグとして使用され得る市販の製品は、ＯｒｉＧｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（カタログ番号．ＣＳＤ４００Ｙ９、ＣＳＤ２５００Ｙ１４号）から入手可能である。そのようなバッグの利点の１つは、ビーズ及び流体が集まることができるポート４１６の近くにコーナー空間が殆ど又は全くないことであり、潜在的にバッグ内に保持される。

【0215】

ビーズ処理システム１４の構成要素に関する上記の議論に照らして、ビーズ処理システム１４を使用する方法の一例をここで説明する。まず、ビーズ処理装置２２のカバーパネル１００を開放位置に移動させて支持パネル９２を露出させる。次いで、滅菌消耗キット１７０Ａを支持パネル９２上に入れ子にする。この入れ子プロセスの一部として、ラインセット１７４Ａのチューブ２００は、ピンチバルブ１２８、ポンプ１２４及び気泡センサ１３６と係合する。同様に、エアフィルタアセンブリ２１８は、回転アセンブリ１３２に結合される。ビーズ混合物１７７を含むバイアル１６６は、ビーズバイアルカプラ２０８と流体結合され、ビーズバイアルリテーナ１４８に取り付けられる。ロッカドライブ２３４の蓋４２６も開放位置に移動され、単離バッグ２０６はプラットフォーム２９０／支持プレート３８０上に配置され、クランプアセンブリ４０２に固定されてその上に適切にセンタリングされる。その後、蓋４２６は閉位置に移動され、ラッチ５１８によって閉じられて固定される。カバーパネル１００は、消耗キット１７０Ａを覆うように閉位置に移動することもできる。以前に行われていない場合、媒体を含む所望の数の媒体バッグ２１６は、チューブセクション２０４Ｈ～２０４Ｊに流体結合され、バッグスタンド３６の留め具９９から吊り下げられるか、そうでなければ吊り下げられ得る。最後に、チューブセクション２０４Ａの入口端２０２は、細胞培養物をラインセット１７４Ａに送達するための供給源に流体結合することができる。供給源は、細胞分離器１２又は何らかの他の容器もしくは供給源であり得る。流体が細胞増殖システム１６、容器、又はビーズ処理システム１４によって産生された単離及び活性Ｔ細胞を回収又は処理するための他の何らかの下流処理システムと結合される場合の、チューブセクション２０４Ｆの出口端２１１。前述の組み立てステップのそれぞれは、様々な異なる順序で実行することができることが理解される。

【0216】

次に、ビーズ処理装置２２は、ディスプレイスクリーン５６又は何らかの他のユーザインタフェースなどを介して起動される。以下のプロセスステップのそれぞれは、予めプログラムされた電気回路５３の制御によって自動的に実行することができ、又はユーザインタフェースへの手動入力によって手動で制御することができる。ビーズ処理装置２２の起動時に、ピンチバルブ１２８の全ては、典型的には、ピンチバルブと連結されたチューブセクションを通る流体の流れを妨げるように閉位置に動かされる。選択ピンチバルブが開かれることが議論される以下の方法ステップでは、ラインセット１７４Ａを通る流体の流れを制御するために、残りのピンチバルブは閉じたままであることが理解される。以下のステップは、主に図１１を参照して行われる。

【0217】

ステップ１：部分的に拡張させるために単離バッグ２０６内に空気を注入する。これは、ピンチバルブ１２８Ｂ及びエアフィルタアセンブリ２１８Ａを開き、ポンプ１２４Ａを作動させることによって達成することができる。ポンプ１２４Ａは、エアフィルタ２２１Ａを通ってチューブセクション２０４Ａに空気を引き込み、次いで、チューブセクション２０４Ｂを通って単離バッグ２０６に空気を送り込む。単離バッグ２０６内に空気を注入することは、液体と単離バッグ２０６の表面との間の接触を減少させることによって、単離バッグ２０６内の液体の流れ及び動きを実質的に改善することができる。したがって、注入された空気は、後述するように、細胞と磁気ビーズとの混合を助けることができる。

【0218】

異なるピンチバルブ１２８の動作に基づいて、流体は、意図された機能を達成するために様々な異なる経路を通って移動することができることが理解される。したがって、本明細書に記載のプロセスステップは単なる例であり、他のプロセスステップを使用して同じ機能を達成することができる。

【0219】

ステップ２：チューブ及び単離バッグ２０６を媒体でプライミングする。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇは、ポンプ１２４Ｂを使用して媒体を媒体バッグ２１６Ｃからポンプ１２４Ｂ、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｃを通ってチューブセクション２０４Ｂを介して上方へと単離バッグ２０６に送る間に開くことができる。

【0220】

ステップ３：混合バッグ２１０に空気を注入する。エアフィルタアセンブリ２１８Ｂ及びピンチバルブ１２８Ｅを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用してエアフィルタ２２１Ｂからポンプ１２４Ｂ及びピンチバルブ１２８Ｅを介して混合バッグ１２０に空気を圧送することができる。やはり、混合バッグ１２０内に空気を注入することは、その中の流体の混合を容易にするのに役立ち得る。

【0221】

ステップ４：ビーズ１７９をバイアル１６６内に懸濁する。これは、前述のように、モータ１６２を作動させてバイアルリテーナ１４８及びバイアル１６６の回転を容易にすることによって達成することができる。ビーズ１７９が懸濁バッグ又は他の容器内に保持される場合などの他の実施形態では、注入前に手動又は機械的にビーズ１７９を懸濁する必要はない場合がある。

【0222】

ステップ４：懸濁ビーズ１７９をバイアル１６６から混合バッグ２１０に注入する。ピンチバルブ１２８Ｃ、１２８Ｄ、及び１２８Ｆを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して、ビーズ混合物１７７をバイアル１６６からピンチバルブ１２８Ｃ、１２８Ｄ、及び１２８Ｆを通って混合バッグ２１０に送り込むことができる。

【0223】

ステップ５：混合バッグ２１０に媒体を注入する。ピンチバルブ１２８Ｇ及び１２８Ｅを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して、媒体バッグ２１６Ｃからピンチバルブ１２８Ｇ及び１２８Ｅを通って混合バッグ２１０に媒体を送り込むことができる。媒体は、媒体バッグ２１６Ａ～２１６Ｃのいずれか又はそれらの任意の組み合わせから引き出され得ることが理解される。簡単にするために、本ステップにおける媒体は、同様に媒体バッグ２１６Ａ～２１６Ｃのいずれかから引き出すことができるという理解の下で、媒体バッグ２１６Ｃから引き出される。

【0224】

流体又は懸濁液がチューブを通過してバッグ又は容器に入る本明細書に開示される各ステップでは、送達される流体／懸濁液の量は、チューブの長さ、チューブのサイズ、ポンプ動作の持続時間、及びチューブを通る気体の流れと液体の流れとの間の移行に関して気泡センサによって行われる検出などの既知の要因に基づいて測定することができる。これらの要因に基づいて、フィルタリングされた空気をチューブ内に分配するためにエアフィルタアセンブリのうちの１つをいつ開くかを決定することができる。次いで、１つ以上のポンプを使用して空気を圧送して、容器内の流体／懸濁液の測定量を押すと同時に管から液体を除去するのを助けることができる。チューブから液体を除去するために空気を使用することは、チューブを通過してバッグ又は容器に入る液体／懸濁液の将来の量の正確な測定を容易にするのに役立つ。

【0225】

ステップ６：混合バッグ１２０内でビーズ１７９を混合する。ピンチバルブ１２８Ｅ及び１２８Ｆを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して、混合バッグ２１０内の混合物を連続的なループでチューブセクション２０４Ｅを通って流出させ、ポンプ１２４Ｂを通って流出させ、チューブセクション２０４Ｄを通って混合バッグ１２０に戻すことができる。この流れは、ビーズ１７９を媒体に均一に懸濁させる。

【0226】

ステップ７：ビーズ１７９を混合ループから単離バッグ２０６に移す。ピンチバルブ１２８Ｆ及び１２８Ｂを開くことができ、使用されるポンプ１２４Ｂは、ビーズ１７９を含む懸濁液を混合バッグ２１０からピンチバルブ１２８Ｆ及びピンチバルブ１２８Ｂを介して単離バッグ２０６に移送する。単離バッグ２０６内に分配されるビーズ１７９の数は、細胞分離器１２又は他の容器から単離バッグ２０６内に送達される細胞の数に依存し得ることに留意されたい。したがって、混合バッグ２１０及び／又はバイアル１６６内のビーズ１７９の全てが単離バッグ２０６内に配置されるわけではない。むしろ、一実施形態では、単離バッグ２０６内に送達されるビーズ１７９の数は、単離バッグ２０６内に送達される細胞の数と実質的に等しいか、わずかに大きいだけであり得る。更に、代替の一実施形態では、混合バッグ２１０を排除することができ、ビーズ１７９をバイアル１６６から、又はビーズ１７９及びチューブに結合された流体を収容する何らかの他のバッグ又は容器から単離バッグ２０６に直接分配することができる。単離バッグ２０６が流体で満たされ始めると、単離バッグ２０６は、カバーアセンブリ４２１を持ち上げるように、カバーアセンブリ４２１とプラットフォーム２９０／支持プレート３８０との間で拡張する。

【0227】

ステップ８：ビーズ１７９を含むチューブを単離バッグにフラッシングする。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して、媒体を媒体バッグ２１６Ｃからチューブを通って単離バッグ２０６に送ることができる。

【0228】

ステップ９：磁石アセンブリ２９４を上昇した作動位置に移動させ、揺動を作動させる。リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４をプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して上昇した作動位置に上昇させるように作動される。磁石アセンブリ２９４の移動と同時に又は連続して、ロッカドライブ２３４が作動されて、その上に取り付けられた単離バッグ２０６を有するプラットフォームアセンブリ２３２の反復的な揺動を容易にする。ビーズ１７９が揺動によって単離バッグ２０６内で混合すると、それらは磁石アセンブリ２９４に生成された磁力によってプラットフォーム２９０／単離バッグ２０６に引き付けられ、それに対して保持される。必要に応じて、ストッパ５３４Ａは、単離バッグ２０６を充填する前に前進抑制位置に移動させることができる。これは、ビーズ１７９がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に引き付けられる速度を増加させ得るが、単離バッグ２０６内で処理することができる流体の量も制限し得る。

【0229】

１つの動作方法では、揺動の完了後に磁場を印加することができる。例えば、媒体を単離バッグ２０６内に圧送する前に、圧送するのと同時に、又は圧送した後に、ロッカドライブ２３４を作動させて、単離バッグ２０６が取り付けられたプラットフォームアセンブリ２３２の繰り返しの揺動を容易にすることができる。この揺動は、ビーズ１７９のいかなる凝集も結合解除し、あらゆる望ましくない物質を懸濁させるのに役立ち得る。次いで、ロッカドライブ２３４を停止させ、リフトアセンブリ２９２を作動させて、磁石アセンブリ２９４をプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して上昇した作動位置に上昇させることができる。ビーズ１７９は重力下で沈降し、磁石アセンブリ２９４に生成された磁力によって単離バッグ２０６／／支持プレート３８０に引き付けられ、それに対して保持される。一実施形態では、ロッカドライブ２３４は、単離バッグ２０６のポート４１６が上昇するように、プラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を後方又は負に傾斜させることができる。次いで、ビーズ１７９がポート４１６内に保持されないことを確保するのを助けるために、少量の空気又は媒体をポート４１６を通過させて単離バッグ２０６に入れることができる。次いで、この後方傾斜位置にある間に磁場を単離バッグ２０６に印加することができる。

【0230】

ステップ１０：液体を単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に移す。ロッカドライブ２３４は、ポート４１６が単離バッグ２０６の残りの部分よりも低く配置されるように、傾斜プラットフォーム２９０を前方又は正にするように制御することができる。この向きは、流体がポート４１６を通って単離バッグ２０６から自由に流出することを確保するのに役立つ。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｊを開くことができ、ポンプ１２４を使用して単離バッグ２０６内からピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｊを通って収集バッグ２１２内に流体を移送することができる。ビーズ１７９は、磁石アセンブリ２９４の磁力下で単離バッグ２０６内に保持される。上記のステップは、ビーズ１７９に共有結合していない混合物中の遊離抗体を除去するための予備洗浄ビーズ１７９として使用される。ビーズ１７９の上記洗浄は、必要に応じて繰り返すことができる。

【0231】

ステップ１１：媒体を単離バッグ２０６に移す。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開き、ビーズ１７９が所望の濃度に希釈されるように、規定量の媒体を媒体バッグ２１６Ｃから単離バッグ２０６に移送するためにポンプ１２４Ｂを使用することができる。

【0232】

ステップ１２：単離バッグ２０６内でビーズ１７９を混合する。リフトアセンブリ２９２を作動させて磁石アセンブリ２９４を非作動位置まで下降させ、ロッカドライブ２３４を作動させてプラットフォーム２９０／支持プレート３８０及びその上に配置された単離バッグ２０６を繰り返し揺動させ、それによって媒体内でビーズ１７９を均一に混合する。

【0233】

ステップ１３：細胞培養物を単離バッグ２０６に移す。ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｂを開き、ポンプ１２４Ａを使用して、細胞培養物を細胞分離器１２又は入口端２０２に接続された他の何らかの容器又は供給源から単離バッグ２０６に移送することができる。

【0234】

ステップ１４：所望のＴ細胞の単離及び活性化を促進する。ロッカドライブ２３４は、ビーズ１７９を所望のＴ細胞を含有する細胞培養物と混合するプラットフォーム２９０／支持プレート３８０及びその上の単離バッグ２０６の揺動を容易にするために、ステップ１２から活性化され得るか、又は活性化されたままであり得る。その上に所望の抗体を有するビーズ１７９は、ビーズ１７９が混合プロセス中に所望のＴ細胞と接触すると、所望のＴ細胞に結合して活性化する。そのような混合は、長期間にわたって起こり得る。限定ではなく例として、混合は、１５分～６０分、より一般的には２０分～４０分であり得る。他の持続時間も使用することができる。

【0235】

ステップ１５：洗浄ポート４１６。ロッカドライブ２３４が停止されると、ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して媒体バッグ２１６から単離バッグ２０６に少量の媒体を圧送し、ポート４１６内に捕捉された可能性のある細胞及び／又はビーズ１７９を除去することができる。ポート４１６のこのフラッシングは、ポート４１６が上昇するようにロッカドライブ２３４がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０及び単離バッグ２０６を後方に傾斜させている間に起こり得る。

【0236】

ステップ１６：ビーズ１７９と結合したＴ細胞を捕捉する。次いで、リフトアセンブリ２９２を作動させて、プラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して磁石アセンブリ２９４を作動位置まで上昇させることができる。磁石アセンブリ２９４によって生成された磁力により、ビーズ１７９及びビーズ１７９に結合したＴ細胞は、単離バッグ２０６内に保持されながらプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して保持される。

【0237】

ステップ１７：液体を単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に移す。ロッカドライブ２３４は、ポート４１６が下方に配置されるようにプラットフォーム２９０を積極的に傾けることができる。ビーズ１７９及びそれに付着した細胞が磁石アセンブリ２９４によって生成された磁力下で単離バッグ２０６内に強固に保持されたままである間に、ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｊを開き、単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に流体を圧送するためにポンプ１２４Ｂを使用することができる。このステップは、単離バッグ２０６から陰性細胞画分、すなわちビーズに結合しなかった細胞を除去することである。

【0238】

ステップ１８：媒体を単離バッグ２０６に送達する。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して媒体を媒体バッグ２１６から単離バッグ２０６に送り込むことができる。

【0239】

ステップ１９：洗浄細胞をビーズ１７９と結合させた。リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４を非作動位置まで下方に移動させるように作動される。連続的に又は同時に、ロッカドライブ２３４を作動させて、ビーズ１７９と新たに送達された媒体中の結合Ｔ細胞との混合を促進する。この混合は、長期間にわたって再び起こり得る。しかしながら、この揺動／混合の主な目的は、単離バッグ２０６内に意図せずに捕捉された可能性のある細胞又は他の生物学的材料を除去して除去することである。

【0240】

ステップ２０：単離バッグ２０６から液体を除去する。リフトアセンブリ２９２を作動させて、磁石アセンブリ２９４を活性化位置まで移動させて、ビーズ１７９及びそれに結合したＴ細胞を再び捕捉する。ロッカドライブ２３４は、ポート４１６が下方に配置されるようにプラットフォーム２９０を積極的に傾ける。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開き、ポンプ１２４Ｂを使用して単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に液体を圧送することができる。ステップ１８～２０に記載の洗浄は、所望の回数繰り返すことができる。

【0241】

ステップ２１：媒体を単離バッグ２０６内に送達する。ロッカドライブ２３４は、チルトを係合解除するように制御され、リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４を係合解除位置に下げるように作動される。ピンチバルブ１２８Ｂ及び１２８Ｇを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して媒体を媒体バッグ２１６から単離バッグ２０６に送り込むことができる。送達される媒体の量は、Ｔ細胞が系から分注されるときのＴ細胞の所望の濃度に依存する。

【0242】

ステップ２２：単離バッグ２０６内の細胞を混合する。ロッカドライブ２３４を作動させて、ビーズ１７９とそれに付着したＴ細胞とを新たに送達された媒体内で混合し、均一な混合物を生成する。

【0243】

ステップ２３：単離バッグ２０６内の懸濁液を細胞増殖システム１６又は他の下流処理機器又は収集容器に移す。ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｋを開き、ポンプ１２４Ｂを使用して、単離バッグ２０６内の懸濁液を、チューブセクション２０４Ｆを介して細胞増殖システム１６又は他の下流の処理機器又は収集容器に移送することができる。更に別の代替法では、懸濁液は、ビーズと混合する前に細胞培養物を元々保持していた容器に戻され、その後、細胞増殖システム１６に移され得る。上記のステップ２１～２３は、下流機器内の細胞濃度が所望のレベルに達するまで繰り返すことができる。

【0244】

図１に戻ると、細胞が所望の密度まで増殖した後、又は細胞増殖システム１６内の他の所定の条件に達した後、１つ以上の剥離試薬を細胞培養物に添加して、細胞をビーズ１７９から剥離させることができる。或いは、前述のように、細胞は、細胞がビーズ１７９から自動的に分離するまで増殖させることができる。この場合、剥離試薬は不要である。他の実施形態では、ビーズ１７９を有する細胞は、ビーズ１７９からの細胞の剥離を容易にするのを助けるために、バッグ内などで手動又は機械的に撹拌することができる。次いで、ビーズ、細胞及び媒体の得られた懸濁液をビーズ処理システム１８に移して、細胞からビーズ１７９を分離する。一実施形態では、ビーズ処理システム１８は、ビーズ処理システム１４が消耗キット１７０Ａに対して変更された消耗キット１７０Ｂと共に使用されることを除いて、ビーズ処理システム１８と同じである。しかしながら、同じビーズ処理装置２２を依然として使用することができる。例えば、懸濁液は、異なる消耗キット１７０Ｂが取り付けられた同じビーズ処理システム１４にループバックされ得るか、又は同一のビーズ処理装置２２を含むが消耗キット１７０Ｂが取り付けられた異なるビーズ処理システム１８に移送され得る。他の実施形態では、ビーズ処理システム１８は、ビーズ処理システム１４に対して別の方法で変更することができる。

【0245】

図３３に示すように、消耗キット１７０Ｂは、トレイ１７２Ｂ及びラインセット１７４Ｂを含む。トレイ１７２Ｂは、トレイ１７２Ａと実質的に同様であり、トレイ１７２Ａとトレイ１７２Ｂとの間の同様の要素は、同様の参照文字によって識別される。トレイ１７２Ｂは、やはり、支持パネル９２（図４）の上に入れ子になるように構成されたプレートの形態である。したがって、トレイ１７２Ｂは、上面１７６と、ピンチバルブ１２８を受け入れるための開口１８０、ポンプ１２４を受け入れるための開口１８２、回転アセンブリ１３２を受け入れるための開口１８３、気泡センサ１３６を受け入れるための開口１３３、及び圧力センサ１４０を受け入れるための開口１３４を有する反対側の底面１７８とを有する。ここでも、支持パネル９２及びその上に取り付けられた構成要素が変更されると、トレイ１７２も同様に変更することができる。トレイ１７２Ｂは、上面１７６から直立するバッグ抑制部１９２を含まないという点でトレイ１７２Ａとは異なり、ラインセットの変化のために、チューブ抑制部１８６の位置が変更されている。

【0246】

ラインセット１７４Ｂもラインセット１７４Ａと実質的に同様であり、ラインセット１７４Ａと１７４Ｂとの間の同様の要素は同様の参照文字によって識別される。ラインセット１７４Ｂは、入口端２０２とチューブセクション２０４Ｋとの間に延在するチューブセクション２０４Ａを含む。入口端２０２にはコネクタ２０３Ｃが配置されており、この場合、コネクタ２０３Ｃは、細胞増殖システム１６、例えばバイオリアクタ又はその容器と結合することができ、又は細胞、ビーズ１７９及び液体媒体で構成される培養物を受け入れるための別個の容器又は別個の供給源と結合することができる。エアフィルタアセンブリ２１８Ａは、チューブセクション２０４Ａに配置される。ここで、チューブセクション２０４Ｂは、液体媒体を収容する媒体バッグ２１６Ｄに結合された第１端部と、チューブセクション２０４Ｋに結合された反対側の第２端部とを有する。同様に、チューブセクション２０４Ｃは、液体媒体を収容する媒体バッグ２１６Ｅと結合された第１端部と、チューブセクション２０４Ｂではなくチューブセクション２０４Ｋと直接結合されている反対側の第２端部とを有する。

【0247】

ラインセット１７４Ｂはまた、他の新しいチューブセクションも含む。具体的には、ラインセット１７４Ｂは、ビーズ分離バッグ５７０の第１ポート５６８に接続する第１端部と、チューブセクション２０４Ｋの端部に接続された反対側の第２端部とを有するチューブセクション２０４Ｌを含む。チューブセクション２０４Ｍは、ビーズ分離バッグ５７０の第２ポート５６９に接続された第１端部と、チューブセクション２０４Ｌとの接続の上流でチューブセクション２０４Ｋに接続された反対側の第２端部とを有する。ビーズ分離バッグ５７０は、以下により詳細に説明され、処理バッグの別の例である。チューブセクション２０４Ｎは、ビーズ廃棄バッグ５７２に接続された第１端部と、チューブセクション２０４Ｍに接続された対向する第２端部とを有する。最後に、チューブセクション２０４Ｏ及び２０４Ｐが設けられる。チューブセクション２０４Ｐは、コネクタ２０３Ｄに結合された第１端部と、チューブセクション２０４Ｌに結合された対向する第２端部とを有し、チューブセクション２０４Ｐは、コネクタ２０３Ｅに結合された第１端部と、チューブセクション２０４Ｌに結合された対向する第２端部とを有する。コネクタ２０３Ｃ～２０３Ｄは、コネクタ２０３Ａに関して前述したコネクタのいずれかを含むことができる。コネクタ２０３Ｄ及びＥは、ビーズ１７９から分離された細胞を受容することが望ましい遺伝子編集システム２０、容器、又は他の下流処理装置と連結することができる。代替的な実施形態では、チューブセクション２０４Ｏ及び２０４Ｐの一方のみが必要とされ得る。ラインセット１７４Ａと同様に、ラインセット１７４Ｂは、典型的には、チューブ２００とバッグ２１６，５７０及び５７２と事前に組み立てられ、照射などによって閉鎖系として滅菌される。トレイ１７２Ｂは、滅菌前又は滅菌後にラインセット１７４Ｂに取り付けることができる。使用中、無菌接続プロセスを使用して、コネクタ２０３Ｃ～２０３Ｅをそれらの対応する容器又は機器に接続することができる。代替的な実施形態では、チューブ２００が滅菌された後、滅菌接続プロセスを使用して、バッグ２１６，５７０，５７２のうちの１つ以上をチューブ２００に取り付けることができる。バッグ２１６，５７０及び５７２は、同じ特性を有することができ、単離バッグ２０６に関して前述したのと同じ材料及びプロセスを使用して製造することができる。

【0248】

図３４を参照すると、ビーズ分離バッグ５７０は、袋体５７６と、ポート５６８及び５６９と、仕切り５７８とを備える。ビーズ分離バッグ５７０の袋体５７６は、単離バッグ２０６の袋体４１１と同じ又は実質的に同じサイズ、構成、材料、特性及び代替物であり得る。したがって、袋体４１１と５７６との間の同様の要素は、同様の参照符号によって識別される。例えば、袋体５７６は、典型的には、底部シート４１３を覆う上部シート４１２からなる折り畳み式のピロータイプのバッグである。シート４１２及び４１３は、外周シール４１４を形成するためにそれらの外周縁部の周りで互いに接合される。外周縁部は、前縁部４２７Ａ、後縁部４２７Ｂ、及びそれらの間に延在する対向する側縁部４２８Ａ及び４２８Ｂを含むことができる。接合は、熱エネルギー、高周波（ＲＦ）エネルギー、音波エネルギーもしくは音波、又は他の封止エネルギーでの溶着、又は接着剤の使用などの当技術分野で公知の方法を使用することを含むことができる。区画室４１５が、シート４１２と４１３との間に境界付けられ、外周シール４１４によって実質的に囲まれる。

【0249】

前縁４２７Ａ上のシート４１２と４１３との間で部分的にシールされているのは、ポート５６８とポート５６９である。ポート５６８及び５６９は、離間され、仕切り５７８の両側に配置される。更に、ポート５６８及び５６９は管状であり、区画室４１５と連通している。図示の実施形態では、各ポート５６８及び５６９は、カラー４１７と、そこから外側に突出するステム４１８とを含む。各ステム４１８は、典型的にはバーブ付きであるが、必須ではない。使用中、ラインセット１７４Ｂとビーズ分離バッグ５７０の区画室４１５との間の流体連通を提供するように、ポート５６８のステム４１８はチューブセクション２０４Ｌと結合され、ポート５６９のステム４１８はラインセット１７４Ｂ（図３３）のチューブセクション２０４Ｍと結合される。ポート５６８及び５６９のみが袋体５７６上に示されているが、他の実施形態では、３つ、４つ、又はそれ以上のポートを、区画室４１５と連通するように袋体５７６上に配置することができる。

【0250】

仕切り５７８は、前縁４２７Ａの外周シール４１４に接続され、後縁４２７Ｂに向かって終端の第２端部５８２まで延在する第１端部５８０を有する。一実施形態では、仕切り５７８は直線状であり、側縁４２８Ａと４２８Ｂとの間の中央に配置され、区画室４１５を二分する直線軸５８４に沿って延在する。仕切り５７８は、対向する端部５８０と５８２との間の仕切りの長さＬ_１に沿って延在する対向する側面５８６及び５８８を有する。一実施形態では、対向する側面５８６及び５８８の少なくとも一部は、平行に整列して配置される。別の実施形態では、仕切りの長さＬ_１の少なくとも大部分について、対向する側面５８６及び５８８は平行に整列して配置される。第２端部５８２は、仕切り５７８に対して垂直に突出する拡大領域５９０を含むことができ、この拡大領域は、拡大領域５９０から離間した対向する側面５８６と５８８との間の幅よりも少なくとも７５％、１００％、１５０％、２００％又は２５０％広い。拡大領域５９０は、仕切り５７８の長さに沿って移動する流体を区画室４１５の中心から離れるように偏向させるように設計されている。この撓みは、流体がポート５６８と５６９との間を移動する必要がある距離を増加させる。説明のために図３４の概略図を使用すると、ポート５６８と５６９の中心間の距離が２５ｍｍであり、仕切り５７８の長さが３０ｍｍであると仮定すると、流体がポート５６８と５６９の間のビーズ分離バッグ５７０の区画室４１５内を移動することができる最短距離は、仕切り５７８が存在しない場合は２５ｍｍであるが、仕切り５７８が存在する場合は約６６ｍｍである。したがって、仕切り５７８は、流体がポート５６８と５６９との間の区画室４１５内を移動することができる最短距離を２．６４倍増加させる。拡大領域５９０の使用は、流体がポート５６８と５６９との間を通過するために移動しなければならない最小距離を更に増加させる。仕切り５７８は、流体がポート５６８と５６９との間の区画室４１５内を移動することができる最短距離の増加をもたらす任意の数の形状とすることができる。流体がポート５６８と５６９との間の区画室４１５内を移動することができる最短距離のそのような増加は、約１～約５０倍（例えば、約１～約５０倍、約２～約５０倍、約３～約５０倍、約４～約５０倍、約８～約５０倍、約２～約２０倍、約２～約３０倍、約２．５～約１０倍、約８～約３０倍、約１０～約５０倍などで）であり得る。

【0251】

仕切り５７８の長さＬ_１は、流体流量、ポート５６８及び５６９のサイズ、並びに区画室４１５のサイズなどの幾つかの要因に依存し得る。Ｌ_１は、少なくとも５ｍｍ、１０ｍｍ、２０ｍｍ、４０ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍ、６５ｍｍ、７０ｍｍ、７５ｍｍ、８０ｍｍ、１００ｍｍ、１５０ｍｍ、１７５ｍｍ、もしくは２００ｍｍであるか、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲にある。別の実施形態では、区画室４１５は、前縁４２７Ａの外周シール４１４と後縁４２７Ｂの外周シール４１４との間に延在する長さＬ_２を有する。仕切り５７８の長さＬ_１は、Ｌ_２の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、もしくは６０％、又は前述のいずれか２つの間の範囲であり得る。他の実施形態では、仕切り５７８の長さＬ_１は、区画室４１５の長さＬ_２の約１０％～約９０％（例えば、約２５％～約８５％、約２５％～約８０％、約２５％～約７５％、約２５％～約７０％、約２５％～約６５％、約２５％～約６０％、約２５％～約５５％、約２５％～約５０％、約２５％～約４５％、約２５％～約４０％、約２５％～約３５％、約４０％～約９０％、約４０％～約８０％、約４０％～約７０％、約５０％～約９０％、約５５％～約８５％など）まで延在してもよい。

【0252】

一実施形態では、仕切り５７８は、外周シール４１４を形成するための前述のプロセスのうちの１つ以上を使用して、重なり合うシート４１２及び４１３を互いに溶着することによって形成される。代替的な実施形態では、ポリマーインサートなどのインサートを、重なり合うシート４１２と４１３との間に配置することができる。次いで、シート４１２及び４１３は、仕切り５７８を形成するように、溶着又は接着剤などによってインサートの対向する側面に固定することができる。仕切り５７８はまた、シート４１２と４１３との間に密封係合を形成するように、仕切り５７８の位置でシート４１２及び４１３を互いに解放可能に押圧することによって形成することができる。例えば、これはクランプの使用によって達成することができる。特定の構成にかかわらず、仕切り５７８は、ポート５６８とポート５６９との間の流体連通を制限するように構成される。具体的には、仕切り５７８は、ビーズ１７９が通過できないように構成され、より一般的な実施形態では、仕切り５７８は、区画室４１５内に配置されたビーズ１７９、細胞、液体媒体及び他の生物学的成分が仕切り５７８を通過できないように液密である。代わりに、入口ポート５６８を通って区画室４１５に流入する流体又は他の構成要素は、ポート５６９を通って区画室５７８を出るために、仕切り４１５（例えば、第２端部５８２）の周りを通過し（又は流れ）なければならない。したがって、ポート５６８とポート５６９との間の直接的な線形アクセスは、仕切り５７８によって防止される。

【0253】

仕切り５７８の結果として、区画室４１５は、ポート５６８から、仕切り５７８の第２端部５８２の周りに、ポート５６９まで延在する流体経路を有するか、又は形成する。前述のように、仕切り５７８の追加によって引き起こされる流体経路の延長された長さは、仕切り５７８を含まないバッグと比較して、区画室４１５内の流体の保持又は滞留時間を増加させる。以下により詳細に説明するように、この滞留時間の増加は、区画室４１５内の磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場への流体中に配置されたビーズ１７９の曝露を誘発及び／又は増加させ、したがってビーズ分離バッグ５７０内のビーズ１７９の捕捉を増加させる。ビーズ分離バッグ５７０及びその仕切り５７８は、様々な異なる構成を有し、様々な異なる方法で使用することができることが理解される。ビーズ分離バッグ５７０の代替的な構成、材料、特性、設計、及び使用の例は、２０１９年１月１０日に公開された米国特許出願公開第２０１９／００１０４３５号明細書に開示されている。

【0254】

図４０は、図３４と同様であるが、バッグを通る蛇行流路６０３を有するビーズ分離バッグ６００を示す。蛇行流路６０３は、２つの下部流路仕切部６０１と、２つの上部流路仕切部６０７と、中央流路仕切部６０９とが組み合わされて構成されている。ビーズ分離バッグ６００は、第１ポート５６８から第２ポート５６９に行くためにバッグを通って長い距離を移動する材料を必要とする設計である。

【0255】

図４０に示すタイプのビーズ分離用バッグの蛇行流路６０３の最小距離は、長さＤ２の２倍、長さＤ３の２倍、長さＤ４の５倍、長さＤ２の４倍で算出できる。これは、蛇行流路６０３ビーズ分離バッグ６００は、５つの流路仕切りによって生成されるからである。

【0256】

図４０に示すタイプの実施形態を使用して、滞留時間を増加させ、流体中に配置されたビーズの区画室内の磁石アセンブリによって生成された磁場への曝露を誘導及び／又は増加させ、したがってビーズ分離バッグ内のビーズの捕捉を増加させることができる。図４０に示す実施形態は、ビーズ分離バッグ６００を通過する材料が、Ｄ１よりも大きい第１ポート５６８から第２ポート５６９までの最小距離を移動することを可能にする。材料が移動する必要がある距離は、バッグ内の仕切りの数及びそれらの仕切りの長さによって決定される。仕切りの数は、約１～約５０（例えば、約２～約５０、約３～約５０、約４～約５０、約５～約５０、約６～約５０、約７～約５０、約８～約５０、約３～約３０、約４～約２０、約５～約１０、約５～約１２、約５～約２５、約１０～約２０、約１０～約３０、約１５～約４０など）まで変動し得る。仕切りの長さは、独立して、ビーズ分離バッグの内部長さの約６０％～約９８％（例えば、約６０％～約９８％、約７０％～約９８％、約７５％～約９８％、約８０％～約９８％、約８５％～約９８％、約９０％～約９８％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約８０％～約９０％、約６０％～約８０％、約７０％～約８０％など）で変化し得る。

【0257】

更に、ビーズ分離バッグは、蛇行流路６０３による第１ポート５６８と第２ポート５６９との間の蛇行流路６０３の最小距離が、Ｄ１の距離の少なくとも２０（例えば、約２０～約１０００、約３０～約１０００、約４０～約１０００、約５０～約１０００、約６０～約１０００、約７０～約１０００、約８０～約１０００、約８０～約５００、約６０～約３００、約６０～約２００など）倍であるように設計されてもよい。

【0258】

図３５を参照すると、使用中、消耗キット１７０Ｂは、前述したように、消耗キット１７０Ａが支持パネル９２に取り付けられたのと同じ態様で支持パネル９２の上に入れ子にされる。ラインセット１７４Ｂは、支持パネル９２の機械的構成要素と結合される。例えば、チューブセクション２０４Ａはピンチバルブ１２８Ａと結合され、エアフィルタアセンブリ２１８Ａは回転アセンブリ１３２Ａと結合される（図５）。コネクタ２０３Ｃは、細胞増殖システム１６、又は前述のように、細胞及び分離されたビーズ１７９を含む培養物を受け入れるための別の供給源に接続される。チューブセクション２０４Ｂは、媒体バッグ２１６Ｄがバッグスタンド３６の一方で支持されているか、そうでなければ支持されている間、ピンチバルブ１２８Ｆ内に結合される。チューブセクション２０４Ｃは、媒体バッグ２１６Ｅがスタンド３６の一方で同様に支持されているか、別の方法で支持されている間、ピンチバルブ１２８Ｃ及び１２８Ｄと結合される。チューブセクション２０４Ｋは、ポンプ１２４Ａ及び１２４Ｂ、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｃ、並びに圧力センサ１４０に結合される。チューブセクション２０４Ｌはピンチバルブ１２８Ｇに連結され、チューブセクション２０４Ｍはピンチバルブ１２８Ｆに連結される。以下で更に論じるように、ビーズ分離バッグ５７０の流体は、チューブセクション２０４Ｌ及び２０４Ｍと結合され、プラットフォーム２９０に取り付けられる。最後に、チューブセクション２０４Ｏ及び２０４Ｐは、それぞれピンチバルブ１２８Ｈ及び１２８Ｉと連結され、そのコネクタ２０３Ｄ及び２０３Ｅは、遺伝子編集システム２０又は何らかの他の下流の容器又は処理システムと連結される。

【0259】

図３６を参照すると、クランプアセンブリ６０５が、カバーハウジング４２２の前壁４６６に取り外し可能に配置されている。クランプアセンブリ６０５は、図２７に関して前述したクランプアセンブリ４０２と設計が類似しているが、ビーズ分離バッグ５７０と係合するように特に設計されている。クランプアセンブリ６０５は、ビーズ分離バッグ５７０をプラットフォーム２９０の上に固定してセンタリングするために部分的に使用される。より具体的には、クランプアセンブリ６０５は、対向する端部６０８Ａと６０８Ｂとの間に延在する上面６０４及び反対側の底面６０６を有する長尺クランプベース６０２を含む。端部６０８Ａ及び６０８Ｂは、それぞれカバーハウジング４２２のチャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ内に摺動可能に受け入れられ、クランプベース６０２は、チャネル５４４内で垂直に摺動することができるが、横方向の動きから再訓練される。クランプベース６０２の上面６０４には、第１下側捕捉溝６１０Ａ及び離間した第２下側捕捉溝６１０Ｂが凹んでいる。

【0260】

クランプアセンブリ６０５はまた、クランプベース６０２に取り外し可能に結合することができるクランプクロージャ６１２を含む。クランプクロージャ６１２は、上面６１４及び反対側の底面６１６を有する。第１上側捕捉溝６１８Ａ及び離間した第２上側捕捉溝６１８Ｂは底面５５８内に陥凹している。締結具６２０Ａ及び６２０Ｃは、上側捕捉溝６１８Ａ及び６１８Ｂの両側のクランプクロージャ６１２を通過し、ねじ又は他の係合によってクランプベース６０２に選択的に固定することができる。同様に、締結具６２０Ｂは、上側捕捉溝６１８Ａと６１８Ｂとの間のクランプクロージャ６１２を通過し、ねじ又は他の係合によってクランプベース６０２に選択的に固定することができる。締結具６２０は、ボルト、ねじ、クランプ、ピン、又は他の種類の取り外し可能な締結具を含むことができる。組み立て中、クランプクロージャ６１２がクランプベース６０２に固定されると、上側捕捉溝６１８Ａ及び６１８Ｂはそれぞれ下側捕捉溝６１０Ａ及び６１０Ｂと整列する。下側捕捉溝６１０及び上側捕捉溝６１８はそれぞれ、典型的には、同じサイズ及び形状とすることができる半円筒形の構成を有する。したがって、整列した捕捉溝６１０及び６１８は、円筒状開口を形成することができる。他の実施形態では、捕捉溝６１０及び６１８は、半多角形構成などの他の形状であってもよい。

【0261】

クランプアセンブリ６０５の全体は、チャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ内で自由に摺動可能であることが理解される。したがって、クランプアセンブリ６０５は、カバーハウジング４２２から容易に取り外され、プラットフォーム２９０上に配置されているバッグの構成に応じてクランプアセンブリ４０２などの異なるクランプアセンブリと交換することができる。

【0262】

組み立て中、図３７に示すように、ポート５６８及びポート５６９のカラー４１７がクランプベース６０２の下部捕捉溝６１０Ａ及び６１０Ｂ内にそれぞれ受け入れられている間に、ビーズ分離バッグ５７０がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０上に配置される。この例示的な実施形態ではビーズ分離バッグ５７０が使用されているが、ビーズ分離バッグ６００又は本明細書で論じられる任意の他のビーズ分離バッグも同様に使用できることが理解される。カラー４１７の後部を前壁３９４の面に突き当てて、プラットフォーム２９０／支持プレート３８０上のビーズ分離バッグ５７０の適切なセンタリング及び位置合わせを確保するのを助けることができる。次に、クランプクロージャ６１２は、前述のようにクランプベース６０２に固定され、それにより、カラー４１７がクランプクロージャ６１２とクランプベース６０２との間に強固にクランプされ、それにより、ビーズ分離バッグ５７０をプラットフォーム２９０／支持プレート３８０上にセンタリングし、使用中の望ましくない動きを制限するのに役立つ。ビーズ分離バッグ５７０が流体で満たされると、ビーズ分離バッグ５７０が拡張し、カラー４１７／ポート５６８，５６９がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して上昇する。ビーズ分離バッグ５７０が充填され空にされるときにクランプアセンブリ６０５がカバーハウジング４２２のチャネル５４４Ａ及び５４４Ｂ内で垂直に上下に自由に摺動する能力は、ポート５６８及び５６９がビーズ分離バッグ５７０の残りの部分に対して適切に配向されたままであることを可能にし、例えば、ビーズ分離バッグ５７０のねじれ又は折り畳みを防止するのに役立つ。これは、流体がビーズ分離バッグ５７０に適切に流入及び流出できることを確保するのに役立つ。カバーハウジング４２２はまた、ビーズ分離バッグ５７０が充填され空になるにつれて上下に調整するが、前述のように、ポート５６８及び５６９はビーズ分離バッグ５７０の重なり合うシート４１２及び４１３の間の中央に維持されるので、ポート５６８，５６９はカバーハウジング４２２とは異なる速度で垂直に移動する。組み立てられた位置では、ポート５６８及び５６９にそれぞれ結合されたチューブセクション２０４Ｌ及び２０４Ｍは、気泡センサ５６２Ａ及び５６２Ｂに取り外し可能に固定することができる。分離バッグ５７０がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０上に適切に配置されると、蓋４２６が閉じられ、ラッチ５１８（図１５）によって所定の位置に固定される。

【0263】

前述のように、消耗キット１７０Ｂがビーズ処理装置２２に結合されると、ビーズ処理システム１８は、ディスプレイスクリーン５６又は何らかの他のユーザインタフェースなどを介して起動される。以下のプロセスステップのそれぞれは、予めプログラムされた電気回路５３の制御によって自動的に実行することができ、又はユーザインタフェースへの手動入力によって手動で制御することができる。ビーズ処理システム１８の起動時に、ピンチバルブ１２８の全ては、典型的には、ピンチバルブと連結されたチューブセクションを通る流体の流れを妨げるように閉位置に動かされる。選択ピンチバルブが開かれることが議論される以下の方法ステップでは、ラインセット１７４Ｂを通る流体の流れを制御するために、残りのピンチバルブは閉じたままであることが理解される。

【0264】

ステップ１：磁石アセンブリ２４１を持ち上げる。リフトアセンブリ２９２は、プラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して上昇した作動位置まで磁石アセンブリ２９４を上昇させるために使用される。ストッパ５３４Ａは、カバーアセンブリ４２１がプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対して上昇する能力を制限するように、高度な再訓練位置に移動することができる。

【0265】

ステップ２：細胞、ビーズ１７９及び媒体からなる懸濁液をビーズ分離バッグ５７０に移す。図３５を参照すると、ピンチバルブ１２８Ａ、１２８Ｆ、１２８Ｇ、及び１２８Ｈを開くことができる。次いで、ポンプ１２４Ａを使用して、細胞、ビーズ１７９及び媒体で構成される培養物を、チューブセクション２０４Ａ、２０４Ｋ及び２０４Ｍを介してコネクタ２０３Ｃに連結された細胞増殖システム１６又は他の容器内に収容し、ポート５６９を介してビーズ分離バッグ５７０に移すことができる。図３４を参照すると、次いで懸濁液は、仕切り５７８の第２端部５８２の周りでビーズ分離バッグ５７０の区画室４１５内を流れ、次いでポート５６８を通って区画室４１５から出る。懸濁液が区画室４１５を通過するとき、ビーズ１７９は、磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場によってプラットフォーム２９０／支持プレート３８０に引き付けられ、それに対して固定される。一実施形態では、懸濁液の混合は、磁場によってより良好に捕捉されるプラットフォーム２９０／支持プレート３８０にビーズ１７９を近づけるのを助けることができるロッカドライブ２３４の作動によってもたらすことができる。しかしながら、他の実施形態では、デビーディングは、ロッカドライブ２３４を作動させることなく実行することができる。ストッパ５３４Ａを前進抑制位置に位置決めすることにより、ビーズ１７９に対する磁場の力を更に最適化するようにビーズ分離バッグ５７０の拡張を制限する。上記により、懸濁液がビーズ分離バッグ５７０を連続的に流れる際に、プラットフォーム２９０／支持プレート３８０に対するビーズ１７９の効率的な収集が可能になる。ポート５６８を通って分離バッグ５７０を出る媒体及び細胞は、チューブセクション２０４Ｌに沿って移動し、次いでチューブセクション２０４Ｏを通って遺伝子編集システム２０又は他の何らかの容器又はシステムに移動する。

【0266】

ステップ２の１つの修正バージョンでは、ピンチバルブ１２８Ｇ及び１２８Ｈは、ビーズ分離バッグ５７０が細胞、ビーズ１７９及び媒体の混合物で少なくとも３０％、４０％、又は５０％満たされるまで閉じたままであり得る。次いで、ロッカドライブ２３４は、ポート５６８及び５６９が上方に傾斜するようにプラットフォーム２９０／支持プレート３８０を傾斜させる。その後、ピンチバルブ１２８Ｇ及び１２８Ｈが開かれる。追加の懸濁液がポート５６９を通ってビーズ分離バッグ５７０に送り込まれると、ビーズ分離バッグ５７０内の任意の空気がポート５６８を通って流出する。空気の全てが除去されると、ロッカドライブ２３４はプラットフォーム２９０／支持プレート３８０を水平に傾ける。次いで、懸濁液の残りは、ビーズ分離バッグ５７０を通してポンプ輸送され、ビーズ除去された流体が遺伝子編集システム２０又は他の何らかの容器に流入する。

【0267】

ステップ３：出力する流動媒体。ピンチバルブ１２８Ｃ、１２８Ｆ、１２８Ｇ及び１２８Ｈを開くことができる。ポンプ１２４Ａを使用して、媒体を媒体バッグ２１６Ｅからビーズ分離バッグ５７０を通して、遺伝子編集システム２０又は細胞が収集された他の何らかの容器もしくはシステムに圧送することができる。このプロセスは、ビーズ分離バッグ５７０及び／又はチューブ内の残りの細胞を洗い流すのに役立つ。

【0268】

ステップ４：ビーズ１７９をビーズ廃棄バッグ５７２に移送する。リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４を下降した非作動位置まで下降させる。ピンチバルブ１２８Ｅ、１２８Ｇ及び１２８Ｂが開かれ、ポンプ１２４Ｂを使用して、媒体を媒体バッグ２１６Ｄからポンプ１２４Ｂを介してチューブセクション２０４Ｌに沿って、ポート５６８を介してビーズ分離バッグ５７０に移送する。次いで、媒体は、仕切り５７８の第２端部５８２の周りのビーズ分離バッグ５７０の区画室４１５内を流れ、次いでポート５６９を通って区画室４１５から出る。媒体が区画室４１５を通過するとき、ビーズ１７９はもはや磁力下でプラットフォーム２９０に固定されない。したがって、ビーズ１７９は、流動媒体と共にポート５６９を通って運び出される。ビーズ分離バッグ５７０を出る媒体及びビーズ１７９は、チューブセクション２０４Ｎを通ってビーズ廃棄バッグ５７２に流れ続ける。一動作方法では、媒体がビーズ分離バッグ５７０を通って圧送されるときにプラットフォーム２９０／プラットフォームアセンブリ２３２及びビーズ分離バッグ５７０が連続的に揺動するようにロッカドライブ２３４を作動させることができ、それによってビーズ１７９をビーズ分離バッグ５７０から取り外して除去するのを助けることができる。更に、媒体がビーズ分離バッグ５７０を通って圧送され終わると、エアフィルタアセンブリ２１８Ａからの濾過された空気をビーズ分離バッグ５７０を通って圧送して、ビーズ１７９を更に除去するのを助けることができる。

【0269】

追加の任意選択のステップとして、一実施形態では、回収容器がコネクタ２０３Ｄ及び２０３Ｅに結合され、そこでビーズ除去細胞が回収される。上記ステップ４が完了すると、ピンチバルブ１２８Ｉ、１２８Ｄ及び１２８Ａを開くことができ、ポンプ１２４Ｂを使用して細胞を回収容器からコネクタ２０３Ｃに結合された元の容器に戻すことができる。次いで、上記のプロセスステップ１～４を繰り返して、細胞と混合された残留ビーズ１７９を除去することができる。

【0270】

本開示の実施形態は、従来のシステムを超える幾つかの固有の利点を有する。例として、細胞の活性化及び単離を達成するために磁気ビーズ及び／又は細胞を複数の異なる装置を通して処理又は移送しなければならない従来のシステムとは対照的に、本開示の一実施形態は、単一の装置内でＴ細胞の単離及び活性化を達成する。更に、幾つかの従来のシステムは、細胞の単離及び活性化を達成するためにビーズ及び／又は細胞の反復手動操作を必要とする。対照的に、本開示の一実施形態は、システムのロード及び始動以外の手動操作又は入力なしに起動及び分離に必要な全てのステップを達成する。

【0271】

本開示の一実施形態はまた、例えば、磁気ビーズからのＴ細胞の分離に対するＴ細胞の活性化及び単離などの異なる機能を達成するために、複数の異なる使い捨て消耗性キットを有する単一のビーズ処理装置を使用する。そのようなシステムは、同じ装置に対して複数の異なる用途を有することによってコスト及び記憶要件を最小化する。更に、廃棄することができる使い捨て消耗性キットは、洗浄又は滅菌の必要性を排除し、交差汚染のリスクを回避する。

【0272】

更に、本開示の一実施形態は、装置の必要な構成要素が消耗キットを通過する間に装置のフロントパネル上に簡単かつ容易に入れ子になるように消耗キットを設計することによって、使い捨て消耗キットを処理装置と組み合わせる簡単で洗練された解決策を提供する。組み立ては簡単で直感的であり、それによって組み立ての誤差を制限し、使用効率を改善する。更に、消耗キットを通過する構成要素、例えばピンチバルブ、ポンプ、及びセンサは、容易にアクセス及び検査され、消耗キットのラインセットと容易に結合することができる。

【0273】

本開示は、特にバイアルが長期間セットされている場合に、バイアルから分注しようとするときに磁気ビーズが詰まるという一般的な問題に対する固有の解決策を提供する。すなわち、分配の直前に開示されたバイアル保持システムを使用してバイアルを自動的に又は選択的に回転させ、磁気ビーズを再懸濁し、目詰まりを排除するのに役立つ。

【0274】

本開示の自動リフトアセンブリはまた、手動操作又はビーズを異なる装置に移送する必要なく、磁石ビーズの最適な処理のために磁石の容易な作動及び非作動を可能にするという点で独特であり、利点である。

【0275】

カバーアセンブリと共に使用される開示された抑制装置はまた、不規則なビーズ分離を妨げるか又は生じさせる可能性がある処理バッグの膨らみを受動的に抑制するという点で、既知の技術よりも大幅に改善されている。すなわち、幾つかの用途では、バッグを通過するビーズが磁石によって生成される十分な磁場にさらされることを確保するために、ばねはバッグを特定の最大高さに保つのに役立つ。更に、システムにおけるばねの使用は、バッグの拡張が増加するにつれて抑制力が増加するという点で、幾つかの実施形態において有益である。更に、ばねの弾力性は、バッグから流体を分配するのに役立つ力をバッグに加えるのを助ける。更に、バッグ内の全ての流体が磁気ビーズを内部に引き付けるのに十分な磁力にさらされることを確保するために、ばねを使用してバッグを指定の最大高さに保つことができる。

【0276】

ストッパを選択的に作動させる能力は、幾つかの実施形態においても特に有用である。状況及び処理条件に応じて、ストッパの使用は、ビーズへの磁力の印加を最適化するようにバッグ拡張を所定の厚さに制限するか、又は処理可能な流体の量を最適化するようにバッグの自由な拡張を可能にするかをオペレータが迅速かつ容易に選択することを可能にすることによって、システムに著しい汎用性を提供することができる。

【0277】

本開示のクランプアセンブリはまた、バッグの拡張及び収縮によるバッグ及びポートの動きを考慮するために自由に浮動し、磁力の最適な印加のためにバッグをプラットフォーム上にセンタリングするための単純な機構を提供し、異なるバッグで使用するように設計された他のクランプアセンブリと共に使用するために容易に切り替えることができるという点で独特である。

【0278】

開示されたシステム及び部品並びにそれらの使用には、他にも多くの利点がある。

【0279】

図５３には、ビーズ処理システム１４（図１）の代替として使用することができるビーズ処理システム１４Ａの代替の例示的な実施形態が示されている。ビーズ処理システム１４Ａと１４との間の同様の要素は、同様の参照文字によって識別される。ビーズ処理システム１４Ａは、再使用可能なビーズ処理装置６４２と、それと共に使用される使い捨て消耗キット８９０Ａとを備える。図４１及び図４２を参照すると、ビーズ処理装置６４２は、前述のビーズ処理装置２２（図２及び図３）の代替の例示的な実施形態である。ビーズ処理装置６４２とビーズ処理装置２２との間の同様の要素も同様の参照符号で識別される。更に、ビーズ処理装置６４２で使用されるビーズ処理装置２２の同様の要素は、ビーズ処理装置２２に関して前述したように、構成要素、代替物、及び機能的使用の全てを含むことができる。一般に、ビーズ処理装置６４２は、ベースアセンブリ６４６と、ベースアセンブリ６４６に取り付けられ、それに対して選択的に揺動するように構成されたロッカアセンブリ６４８と、ベースアセンブリ６４６から直立した一対のバッグスタンド６５０Ａ及び６５０Ｂとを含む。

【0280】

ベースアセンブリ６４６は、区画室を境界付けるハウジング６５２を備える。ビーズ処理装置２２のハウジング３８内に配置された電気回路５３（図４）を含む同じ電気部品及び他のハードウェアを、ハウジング６５２の区画室内に配置することができる。ハウジング６５２は、一般に、主ハウジング６５４と、そこから外側に突出するステージ６５６とを備える。より具体的には、主ハウジング６５４は、前端部６５８と反対側の後端部６６０との間に延在する。前端部６５８には、支持パネル６６２が配置されている。支持パネル６６２は、同じ構成要素を有することができ、支持パネル９２（図４）と同じ角度で配置することができる。後端部６６０には、ビーズ処理装置２２に関して前述したように、電力入口６６、通気開口６４及び電気インタフェースポート５８を配置することができるバックパネル６６４が配置されている。対向するサイドパネル６６６Ａ及び６６６Ｂは、支持パネル６６２とバックパネル６６４との間に延在する。

【0281】

ステージ６５６は、サイドパネル６６６Ｂから外側に突出している。ステージ６５６は、ユーザインタフェース５６及び作動スイッチ６０が配置される前面６６８を含む。スクリーン５６及び作動スイッチ６０は、ビーズ処理装置２２で前述したのと同じ設計、代替、及び機能を有することができる。一般に、ユーザインタフェース５６（図５８～図６２に関して説明したディスプレイ及びグラフィカルユーザインタフェースを有する）は、ビーズ処理装置６４２の動作の制御及び／又はその動作特徴及びバイオプロセスパラメータの表示に使用することができる。緊急遮断スイッチ６７０はまた、前面６６８に配置することができ、或いはハウジング６５２に配置することができる。図４３によりよく示されているように、ステージ６５６はまた、間に棚パネル６７４が延在するバックパネル６７２を含む。ステージ６５６／棚パネル６７４は、サイドパネル６６６Ｂから外側に突出し、典型的には水平に配置される。以下に説明するように、ロッカアセンブリ６４８は、棚パネル６７４／ステージ６５６から立ち上がるか、そうでなければ上方に突出する。ロッカアセンブリ６４８の一部は、棚パネル６７４の下のステージ６５６内に延在してもよい。

【0282】

ビーズ処理装置２２は、ステージが突出する主ハウジングを有することに関して同様に説明することができることが理解される。具体的には、図２～図４を参照すると、ビーズ処理装置２２は、支持パネル９２とライザパネル７２（本明細書ではバックパネルとも呼ぶことができる）とを含みそれらの間に延在する主ハウジング３９と、棚パネル６８と、ライザ／バックパネル７２から後方に突出するハウジング３８のリマインダとを含むステージ４１とを含むことができる。ここでも、ロッカアセンブリ３４は、棚パネル６８／ステージ４１から立ち上がるか、そうでなければ上方に突出する。したがって、用途に応じて、ビーズ処理装置は、主ハウジングの後方又は主ハウジングの側方に突出するステージで形成することができる。幾つかの実施形態では、主ハウジングの側面から突出するステージを有することは、利点をもたらすことができる。例えば、ステージ／ロッカアセンブリを主ハウジングの側面に対して横方向に有することにより、そこからバッグを出し入れすることを含む、ロッカアセンブリを操作するためのより容易なアクセスが提供される。更に、主ハウジングの側方にステージを有することにより、スクリーン５６をその前面に取り付けることができ、これにより、システム全体のサイズを増大させることなく支持パネルを拡大することができる。支持パネルのサイズを大きくすると、以下で更に説明するように、その上の使い捨てキットの取り付け、取り外し、及び操作を簡単にすることができる。

【0283】

図４３に示すように、ロッカアセンブリ６４８は、ステージ６５６上に配置されたマウントアセンブリ２３０と、マウントアセンブリ２３０に移動可能に結合されたプラットフォームアセンブリ６７８と、マウントアセンブリ２３０に対してプラットフォームアセンブリ６７８を選択的に揺動させるために使用されるロッカドライブ２３４とを備える。マウントアセンブリ２３０及びロッカドライブ２３４は、ビーズ処理装置２２に関して前述したのと同じ構成要素、代替物、及び動作機能を有することができる。外側ハウジング６７９を使用して、マウントアセンブリ２３０、ロッカドライブ２３４、及びプラットフォームアセンブリ６７８の少なくとも一部を取り囲んで、偶発的な損傷から保護するのを助けることができる。

【0284】

図４３及び図４４を参照すると、プラットフォームアセンブリ６７８は、ロッカアセンブリ３４に関して前述したように、ハウジングアセンブリ２４６、リフトアセンブリ２９２、及び磁石アセンブリ２９４を部分的に含む。ここでも、ハウジングアセンブリ２４６、リフトアセンブリ２９２、及び磁石アセンブリ２９４は、ロッカアセンブリ３４で前述したのと同じ構成要素、代替物、及び動作機能を有することができる。したがって、ハウジングアセンブリ２４６は、前述のようにマウントアセンブリ２３０に旋回可能／回転可能に取り付けられ、区画室２５４を境界付ける。同様に、ロッカアセンブリ６４８のリフトアセンブリ２９２は、棚３１０と、棚３１０をマウントアセンブリ２３０に対して選択的に上昇及び下降させるシザーリフト３２１と、前述のようにリフトアセンブリ２９２の他の構成要素とを含む。図示のように、シザーリフト３２１は、ハウジングアセンブリ２４６の区画室２５４内に少なくとも部分的に配置される。磁石アセンブリ２９４は、棚３１０（図４５）に取り付けられ、したがってリフトアセンブリ２９２によってマウントアセンブリ２３０に対して選択的に昇降させることができる。具体的には、前述したように、磁石アセンブリ２９４は、上昇した作動位置と下降した非作動位置との間で移動することができる。

【0285】

図４５を参照すると、プラットフォームアセンブリ６７８（図４３）は、単離バッグ２０６（図１０）を取り外し可能に支持することができ、かつハウジングアセンブリ２４６に固定されるプラットフォーム６８２を更に含む。図示の例示的な実施形態では、プラットフォーム６８２は、抑制部６８６、接点６８８、絶縁シール６９０、支持プレート６９２、及び保持フレーム６９４を含む。保持フレーム６９４は、連続ループを形成することができる内壁７１０と、スロット７１４がその間に形成されるように内壁７１０を取り囲む外壁７１２とを備える。床７１６（図４９）は、外壁７１２の下端と内壁７１０とを互いに接続するようにそれらの間に延在する。内壁７１０は、保持フレーム６９４を通過する開口７１９を取り囲む内面７１８を有する。フランジ７２１は、内面７１８から開口７１９内に内向きに突出する。

【0286】

以下で更に詳細に説明するように、離間した管状スリーブ７２０がスロット７１４内に配置され固定される。図４６に示すように、各管状スリーブ７２０は、下端で開口し、対向する上端で端壁７２４によって閉栓された通路７２２を境界付けている。狭窄開口７２６は、通路７２２と連通するように端壁７２４を通って延在する。図示の実施形態では、保持フレーム６９４の各対向する側に２つずつ、四つの管状スリーブ７２０が形成されている。他の実施形態では、他の数のスリーブ７２０を形成することができる。保持フレーム６９４はまた、保持フレーム６９４の前端で内壁７１０の上端を通過する通路７２７を含む。ガイド７２９Ａ及び７２９Ｂは、通路７２７の両側に隣接してスロット７１４内に形成される。各ガイド７２９Ａ及び７２９Ｂは、それぞれ下方に延在するチャネル７３１Ａ及び７３１Ｂを取り囲む。

【0287】

組み立て中、保持フレーム６９４は、開口７１９が磁石アセンブリ２９４と整列するようにハウジングアセンブリ２４６に固定される。例えば、床７１６又は保持フレーム６９４の他の部分は、ハウジングアセンブリ２４６のフランジ３９１に固定することができる。

【0288】

支持プレート６９２は、保持フレーム６９４の開口７１９内に固定され、使用目的に応じて単離バッグ２０６（図２９）又はビーズ分離バッグ５７０（図３４）を直接支持するために使用される。例えば、支持プレート６９２は、開口７１９内に配置されるように、保持フレーム６９４のフランジ７２１上に配置することができる。溶着、締結具又は接着剤などの従来の締結技術を使用して、支持プレート６９２をフランジ７２１に固定することができる。例示的な一実施形態では、支持プレート６９２は、典型的には、導電性金属などの導電性材料で作られる。しかしながら、支持プレート６９２は、磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場が通過することを可能にしなければならない。支持プレート６９２は、前述の支持プレート３８０の特性、寸法、及び／又は代替形態の全部又は一部を有することができる。

【0289】

図４５及び図４６を参照すると、絶縁シール６９０は、連続ループの形態であり、支持プレート６９２の外周縁部の上に配置される。絶縁シール６９０は、典型的には、支持プレート６９２に対して液密シールを形成することができる非導電性材料から作製される。例えば、絶縁シール６９０は、エラストマー材料、ゴム、又は同様の特性を有する他の材料から形成することができる。必要に応じて、絶縁シール６９０と絶縁シール６９０との間に接着剤又はシーラントを配置して、それらの間に液密シールを形成することができる。一実施形態では、１つ以上の保持リブ７２８は、絶縁シール６９０の上面から上方に突出することができる。

【0290】

接点６８８は、支持プレート６９２から離間するように、より具体的には、支持プレートの上方に上昇するように、絶縁シール６９０の上に配置される。接点６８８も連続ループを形成し、絶縁シール６９０と同様の構成を有することができる。例えば、接点６８８は、典型的には、絶縁シール６９０の幅と同じ又はそれよりも小さい幅を有し、それにより、配置されたときに接点６８８が絶縁シール６９０を越えて突出しないようになっている。接点６８８はまた、支持プレート６９２を作製することができる同じ種類の材料などの導電性材料から作製される。絶縁シール６９０と接点６８８との間に液密シールを形成することもできる。絶縁シール６９０と接点６８８との間のシールは、絶縁シール６９０及び／又はそれらの間に配置された接着剤又はシーラントの材料特性の結果であり得る。

【0291】

接点６８８を貫通して延在する１つ以上のスロット７３０を形成することができる。スロット７３０は、接点６８８が絶縁シール６９０の上に配置されたときに、絶縁シール６９０の上に接点６８８を固定するようにリブ７２８がスロット７３０を通過するか、又はそれを通って押圧され、それによって絶縁シール６９０に対する接点６８８の横方向の移動を防止又は制限するように構成することができる。図４６は、フランジ７２１上に支持された支持プレート６９２と、支持プレート６９２の外周に配置された絶縁シール６９０及び接点６８８とのアセンブリを示す。

【0292】

図４５及び図４６にも示すように、抑制部６８６は、絶縁シール６９０及び接点６８８の上に配置される。抑制部６８６は、典型的には「ｈ」字形の構成を有し、開口７３６を部分的に取り囲む境界壁７３４を備える。より具体的には、境界壁７３４は、内側脚部７３８と、外側に離間した外側脚部７４０と、外側脚部７４０の上部から内側脚部７３８の中央部分まで延在する座部７４４とを有する。外側脚部７４０は、内側脚部７３８よりも下方に突出する。抑制部６８６はまた、開口７３６から外向きに突出する境界壁７３４の対向する端部の間に延在する７４６を含む。図４９に示すように、トレイ７４６は、開口７３６から外方に離れて突出する上向きに傾斜した床７４８を備える。床７４８は、境界壁７３４に接続された直立側壁７５０Ａと７５０Ｂとの間で横方向に延在する。リップ７５２は、床７４８の終端部から直立し、側壁７５０Ａと７５０Ｂとの間に延在する。一対の離間したポスト７５４Ａ及び７５４Ｂは、それぞれ側壁７５０Ａ及び７５０Ｂに隣接するが、側壁７５０Ａ及び７５０Ｂから離間して、床７４８の内側端部から上方に突出する。トレイ７４６の機能については後述する。

【0293】

抑制部６８６は、絶縁シール６９０及び接点６８８を適切に位置決めして固定するように部分的に機能する。図４６に示すように、外側脚部７４０は、絶縁シール６９０及び／又は接点６８８が外側脚部７４０の内面に当接又は隣接した状態で支持プレート６９２上に直接着座する。抑制部６８６／外側脚部７４０の間の係合は、液密シールを形成することができる。外側脚部７４０は、絶縁シール６９０及び接点６８８の外側への移動を抑制するように機能する。内側脚部７３８は、接点６８８を通過したリブ７２８の内側で接点６８８の上に位置する。リブ７２８は、絶縁シール６９０及び／又は接点６８８が内側への移動を抑制されるように、内側脚部７３８に当接又は隣接する。抑制部６８６はまた、トレイ７４６が保持フレーム６９４の通路７２７を通って突出するように配置される。これにより、トレイ７４６の両側にガイド７２９Ａ、７２９Ｂが配置される。

【0294】

図５７に示すように、プラットフォーム６８２は、単離バッグ２６０及びビーズ分離バッグ５７０を受容するように構成されたキャビティ６９６を境界付ける。具体的には、以下で更に説明するように、キャビティ６９６は、支持プレート６９２と、そこから取り囲んで直立する抑制部６８６とによって少なくとも部分的に境界付けられる。

【0295】

プラットフォームアセンブリ６７８はまた、その上に配置されたときに支持プレート６９２及び単離バッグ２０６／ビーズ分離バッグ５７０を少なくとも部分的に覆う抑制アセンブリ７６０（図４８に示す）を含む。抑制アセンブリ７６０は、一般に、４つの離間したばねアセンブリ７６２Ａ～７６２Ｄ（図４５）と、それに結合されたカバーアセンブリ７６４（図４８）とを備える。カバーアセンブリ７６４は、ばねアセンブリ７６２のそれぞれに結合されたカバーハウジング７６６（図４７）と、カバーハウジング７６６にヒンジ式に取り付けられた蓋７６８（図４８）とを備える。次に、抑制アセンブリ２９６のこれらの様々な構成要素について更に詳細に説明する。

【0296】

図４６を参照すると、各ばねアセンブリ７６２は、コイルばね７７２によって囲まれた長尺ロッド７７０を含む。フランジ７７４は、ロッド７７０の下端から外向きに突出し、ばね７７２をロッド７７０の下端に固定する。組み立て中、各ばねアセンブリ７６２は、各ロッド７７０の上端が対応する狭窄開口７２６を通過するように、保持フレーム６９４の対応する管状スリーブ７２０内に受け入れられる。しかしながら、ばね７７２は、狭窄開口７２６よりも大きい直径を有し、したがって、ばね７７２は、スリーブ７２０の通路７２２内に捕捉され、端壁７２４に対して付勢する。一実施形態では、フランジ７７４は、ロッド７７０が通路７２２内を摺動するときに通路７２２内を自由に摺動することができるが、狭窄開口７２６を通過することができないようなサイズである。したがって、ロッド７７０が狭窄開口７２６を通って引き上げられると、ばね７７２が端壁７２４に対して圧縮され、それによってロッド７７０に対する弾性付勢力が生じる。

【0297】

図４７を参照すると、カバーハウジング７６６は、上部カバー７７８と、下部カバー７８０と、それらの間に配置された中間カバー７８２とを含む。下部カバー７８０は、中央開口７８６を部分的に取り囲み、典型的には水平に配置される座部７８４と、座部７８４の外側縁部から垂直に突出するサイドパネル７８８とを含む。取付穴７９０は、座部７８４を貫通している。組み立て中、図４６に示すように、下部カバー７８０は、各ロッド７００の上端が対応する取付穴７９０を通過するように、保持フレーム６９４の上に配置される。この位置では、支持プレート６９２は中央開口７８６と位置合わせされる。次に、締結具又は別の取り付け機構を使用して、ロッド７００の上端を下部カバー７８０に固定する。例えば、図示の実施形態では、Ｃクリップ７９２Ａ及びＢは、下部カバー７８０に対するロッド７００の移動を排除又は少なくとも制限するように、座部７８４の上方及び下方の位置でロッド７００に固定される。スロット７８７は、前端下部カバー７８０において座部７８４及びサイドパネル７８８を貫通して延在する。トレイ７４６は、下部カバー７８０が保持フレーム６９４上に配置され固定されると、スロット７８７内に受け入れられる。組み立てられた構成では、下部カバー７８０（及びそれに接続された他の構成要素）は、ロッド７００が狭窄開口７２６を通って上方に摺動することによって、保持フレーム６９４に対して手動で上昇させることができる。しかしながら、ロッド７００が上昇すると、前述したようにばね７７２が圧縮され、それにより、下部カバー７８０を保持フレーム６９４に向かって戻したい弾性付勢力が生じる。

【0298】

図４７にも示すように、電子ラッチ７９６Ａ及び７９６Ｂは、それぞれガイド７２９Ａ及び７２９Ｂのチャネル７３１Ａ及び７３１Ｂ内に着座している。各電子ラッチ７９６は、チャネル７３１内で自由に並べられ得る長尺下端７９５と、上端７９９がガイド７２９の上部に載るようにチャネル７３１よりも大きい寸法を有する拡大上端７９９とを有する。ラッチ要素７９８は、以下に説明するように、蓋７６８を選択的にロック及び解放するために電子的に開閉することができる上端７９９に配置される。上記を考慮して、電子ラッチ７９６は、ガイド７２９によって案内されながらチャネル７３１内で上下に自由に摺動することができる。しかしながら、ラッチ７９６は、チャネル７３１を完全に通過することが停止される。電子ラッチ７９６Ａ及び７９６Ｂは、ハウジング６５２内の電気回路５３に結合され、所望に応じて動作するようにプログラムすることができる。

【0299】

中間カバー７８２は、開口８０１を部分的に取り囲むレール８００を含む。レール８００は、その底部に形成されたチャネル８０７を境界付けるＵ字形横断面を有する（図４６）。レール８００の両端部には、ラッチカバー８１１Ａ、８１１Ｂが配置されている。スロット８１３は、ラッチカバー８１１Ａと８１１Ｂとの間に形成され、トレイ７４６を受け入れるように構成される。レール８００上には、ハウジング６５２内の電気回路５３と電気的に結合され、蓋７６８が開位置にあるか閉位置にあるかを決定するために使用される近接センサ８１６が配置される。組み立て中、中間カバー７８２は、取付穴７９０を覆うように下部カバー７８０の座部７８４の上に配置される。この位置では、ロッド７７０の上端はチャネル８０７内に配置される。中間カバー７８２は、従来の締結技術を使用して下部カバー７８０に固定することができる。ラッチカバー８１１Ａ及び８１１Ｂは、トレイ７４６がそれらの間のスロット８１３内に配置されている間、電子ラッチ７９６の一部を覆う。

【0300】

引き続き図４６及び図４７を参照すると、上部カバー７７８は、開口８０９を部分的に取り囲むキャップレール８０８を含む。スロット８１０は、上部カバー７７８の前端部でキャップレール８０８を貫通して延在し、一方、後部パネル８１２は、上部カバー７７８の後部でキャップレール８０８から下方に突出する。キャップレール８０８はまた、その底部に形成されたチャネル８１４を境界付ける実質的にＵ字形の横断面を有する。図４６に示すアセンブリでは、キャップレール８０８は、中間カバー７８２を覆うように下部カバー７８０の座部７８４の上に位置する。上部カバー７７８は、下部カバー７８０に固定され、それにより、上部カバー７７８、中間カバー７８２、及び下部カバー７８０は、互いに接合され、前述したように、ロッド７７０の移動によって一体に上下に垂直に移動することができる。

【0301】

図４８を参照すると、蓋７６８は、ヒンジ８１８Ａ及び８１８Ｂによって上部カバー７７８にヒンジ式に取り付けられる。このように、蓋７６８は、支持プレート６９２が露出する開位置と、支持プレート６９２が蓋７６８によって覆われる閉位置との間で回動することができる（図４１）。蓋７６８は、蓋体８２０と、蓋板８２２と、キャッチ８２４とを有する。蓋板８２２は、典型的には長方形の形状を有し、蓋体８２０とは別個かつ別個のフラットパネルを備える。一実施形態では、蓋板８２２は、ガラス又は透光性ポリマーなどの透光性材料から作製される。他の実施形態では、蓋板８２２は、半透明である必要はなく、蓋体８２０と一体要素として一体的に形成することができる。

【0302】

蓋体８２０は、貫通する開口８２８を取り囲む連続ループに形成された外周壁８２６を備える。図４６に示すように、例示的な一実施形態では、外周壁８２６は、開口８２８を取り囲む内壁８３０と、内壁８３０を取り囲む離間した外壁８３２と、それらの間に延在する移行壁８３４とを含む実質的にＵ字形の横断面を有する。外周壁８２６は、カバーハウジング７６６及び抑制部６８６を受容及び／又は覆う凹部チャネル８３５を境界付ける。必須ではないが、移行壁８３４は、外壁８３２から内側に突出する環状上壁８３６と、上壁８３６から内壁８３０に下方に傾斜する環状保持壁８３８とを含むことができる。蓋板８２２は、開口８２８を覆うように、蓋体８２０の中央に取り付けられている。より具体的には、一実施形態では、蓋板８２２は、開口８２８を覆うように、ねじ又は他の締結具又は締結技術などによって内壁８３０の下端に固定される。組み立てられた蓋７６８は、蓋板８２２及びそこから直立する外周壁８２６によって境界付けられた上側キャビティ８２９を形成する。図４９に示すように、複数の離間したチャネル８４０は、上側キャビティ８２９と連通するように、内壁８３０の底縁に沿って、すなわち蓋板８２２に対して直接、内壁８３０を通過する。

【0303】

図４８に戻ると、スロット８４２は、蓋体８２０の前端で外壁８３２の下端を通って延在する。キャッチ８２４は、蓋体８２０の前端でスロット８４２内の外周壁８２６に固定されている。キャッチ８２４は、その対向する端部に配置されたキャッチ要素８４４Ａ及び８４４Ｂを有するキャッチ本体８４３を備える。キャッチ要素８４４Ａ及び８４４Ｂは、それぞれラッチ７９６Ａ及び７９６Ｂのラッチ要素７９８に係合して、閉位置にあるときに蓋７６８の選択的ロックを容易にするように構成される。

【0304】

蓋７６８が閉位置にあるとき、図１に示すように、出口７７６は、蓋７６８とキャビティ６９６と連通するトレイ７４６との間を通過して形成される。保持フレーム６９４の外側には、長尺トラック７７７が固定されている。図５０によりよく示されているように、一対の溝付きチャネル７７９Ａ及び７７９Ｂは、その長さに沿って延在する。トラック７７７の一端はトレイ７４６と位置合わせされて交差し、反対側の端部は主ハウジング６５４に向かって配置されている。

【0305】

ロッカアセンブリ６４８は、前述のロッカアセンブリ３４と実質的に同じ方法で動作する。例えば、最初に蓋７６８が開放位置に移動され、図５０に示すように、単離バッグ２０６が、支持プレート６９２上に直接載置され、抑制部６８６によって取り囲まれるように、キャビティ６９６内に配置される。使用目的に応じて、単離バッグ２０６をビーズ分離バッグ５７０に置き換えることができる。しかしながら、この実施形態では、単離バッグ２０６は、ポート４１６の両側の外周シール４１４又は外周シール４１４の外側で袋体４１１を貫通する穴８５０Ａ及び８５０Ｂを有する。支柱７５４Ａ及び７５４Ｂは、それぞれ穴８５０Ａ及び８５０Ｂを通過して、支持プレート６９２上に単離バッグ２０６を適切に位置決めし、強固に保持する。バッグ８４８のポート４１６から延在するチューブ２００は、トレイ７４６上に支持されている間に出口７６７を通ってキャビティ９６９から出る。次いで、チューブ２００は、トラック７７７の溝付きチャネル７７９Ａ及び７７９Ｂの一方の中に受け入れられ、それに沿って主ハウジング６５４に向かって延びる。

【0306】

単離バッグ２０６が適切に位置決めされると、蓋７６８は手動で閉位置に移動され、それにより、単離バッグ２０６は、蓋７６８と支持プレート６９２との間、より具体的には、蓋７６８の蓋板８２２と支持プレート６９２との間に位置決めされる。ロッカアセンブリ６４８は、蓋７６８が閉位置に移動したときに自動的にロックするように構成することができ、又はロックするために手動の作動を必要とすることができる。例示的な実施形態では、ロックは、キャッチ８２４と係合するラッチ７９６、より具体的には、キャッチ要素８４４と係合するラッチ要素７９８によって達成される。代替の実施形態では、単一のラッチ要素７９８及びキャッチ要素８４４を使用することができ、又は代替のロック構造を使用することができる。

【0307】

蓋７６８がロック位置になると、液体は、チューブ２００を通って単離バッグ２０６内に送達され得る。単離バッグ２０６が液体で拡張すると、カバーアセンブリ７６４及びトラック７７７が支持プレート６９２に対して上昇する。具体的には、蓋７６８が閉位置にある状態で、単離バッグ２０６を支持プレート６９２と蓋板８２２との間に押し込むか、又はそれらに直接隣接して配置することができる。したがって、単離バッグ２０６が液体で拡張すると、単離バッグ２０６は蓋７６８／蓋板８２２を外側に押し、ロッド７７０が上方に移動することによって、カバーアセンブリ７６４／トラック７７７の全てを支持プレート６９２に対して上昇させる。しかしながら、前述したように、ロッド７７０が上方に移動すると、ばね７７２が圧縮され、これにより、蓋７６８／蓋板８２２によって単離バッグ２０６上に弾性的な下向きの力が生じる。この下向きの力は、単離バッグ２０６を固定して移動を制限することと、単離バッグ２０６を平らにする、すなわち中央の膨らみを制限することとの両方に役立ち、その結果、単離バッグはより均一な厚さを有する。ロッカアセンブリ３４に関して前述したように、単離バッグ２０６のこの平坦化は、単離バッグ２０６内の液体への磁場の印加に役立つことができる。

【0308】

ロッカアセンブリ６４８の例示的な一実施形態では、抑制アセンブリ７６０はまた、各ばねアセンブリ７６２Ａ～Ｄと共にそれぞれ動作するロッカアセンブリ３４（図２２～図２５）の停止アセンブリ５２６Ａ～Ｄを含むことができる。具体的には、ロッカアセンブリ３４で前述したのと同じ態様で、停止アセンブリ５２６Ａ～５２６Ｄを管状スリーブ７２０に隣接して保持フレーム６９４に取り付けて、管状スリーブ７２０を通して選択的に突出させることによってばねアセンブリ７６２（図４６）のフランジ７７４と選択的に係合することができる。ロッカアセンブリ３４と同様に、停止アセンブリ５２６は、ばねアセンブリ７６２のフランジ７７４に選択的に係合するか、又は係合しないように電子的に制御することができる。停止アセンブリ５２６とフランジ７７４との係合は、ロッド７７０及びカバーアセンブリ７６４の上方への移動を制限し、それによって単離バッグ２０６／ビーズ分離バッグ５７０の拡張を制限する。或いは、停止アセンブリ５２６がフランジ７７４と係合しないとき、ロッド７７０及びカバーアセンブリ７６４は、ばね７７２によって提供される制限を除いて、抑制されずに自由に上方に移動する。

【0309】

ロッカアセンブリ６４８は、クランプアセンブリ４０２（図２８）が排除されているという点でロッカアセンブリ３４とは部分的に異なる。具体的には、一実施形態では、交差するトラック７７７を有するトレイ７４６は、クランプアセンブリ４０２の必要性を排除するために、単離バッグ２０６のポート４１６及びそこから延びるチューブ２００の十分な支持及び整列を維持し、それによってロッカアセンブリの設計及び動作を単純化する。

【0310】

ロッカアセンブリ３４に関して前述したのと同じ態様で、ロッカアセンブリ６４８のロッカドライブ２３４は、意図された用途に必要に応じて、マウントアセンブリ２３０に対してプラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を傾けるように、及び／又はプラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を繰り返し揺動させるように選択的又は自動的に作動させることができる。更に、ロッカアセンブリ３４に関して前述したのと同じ態様で、ロッカアセンブリ６４８のリフトアセンブリ２９２を選択的又は自動的に作動させて、意図する用途に必要に応じて、磁石アセンブリ２９４を支持プレート６９２に対して上昇及び下降させることができる。

【0311】

例示的な一実施形態では、ロッカアセンブリ６４８のカバーアセンブリ７６４は、支持プレート６９２上に配置された単離バッグ２０６又は任意の他のバッグからの液体の漏れを自動的に検出し、そこから漏れている液体を捕捉することができる。例えば、図４６を参照すると、使用中、単離バッグ２０６（図５０）は、支持プレート６９２と蓋板８２２との間に配置される。絶縁シール６９０及び接点６８８は、単離バッグ２０６に隣接して配置される。前述のように、接点６８８は、支持プレート６９２から電気的に絶縁され、支持プレートよりも高い高さで離間するように絶縁シール６９０の上に位置する。絶縁シール６９０は支持プレート６９２を取り囲んで液密シールを形成するので、液体が単離バッグ２０６から漏れ始めると、液体は絶縁シール６９０によって取り囲まれたキャビティ、すなわちキャビティ９６９内に捕捉され、液体が漏れ続けると、高さ絶縁シール６９０に沿って上昇し始める。前述のように、支持プレート６９２及び接点６８８はそれぞれ、ハウジング６５２内の電気回路５３に別々に電子的に接続される。絶縁シール６９０から漏れる液体は導電性になる。したがって、漏れた液体があるレベルまで上昇するか、又はプラットフォームアセンブリ６７８の揺動などによって他の方法で操作され、その結果、液体が接点６８８と接続すると、電気回路５３に信号を提供する電気的短絡／電気回路が生成され、それによって漏れが発生していることを知らせる。次に、電気回路５３は、ビーズ処理装置２２の全ての動作を停止するか、又は動作を選択するように、及び／又は漏れをオペレータに通知する可聴及び／又は視覚インジケータを提供するように自動的にプログラムすることができる。

【0312】

漏れ検出構成要素は任意選択であり、排除することができることが理解される。その場合、絶縁シール、接触、及び／又は抑制部６８６を排除することができる。更に、漏れ検出構成要素が除去される場合、支持プレート６９２は、導電性材料から作製される必要はなく、プラスチック又は複合材料などの他の材料から作製することができる。液体がバッグ８４８から漏れ続けると、液体は、抑制部６８６によって横方向に抑制されることによってキャビティ９６９内に捕捉される。蓋板８２２が半透明であることにより、蓋板８２２の下方において漏れた液体を視認することができる。液体がキャビティ９６９と共に上昇し続けると、液体が蓋板８２２の上部、すなわち上側キャビティ８２９内に配置されるように最終的にチャネル８４０を通って流れるように、蓋７６８の内壁８３０を通してチャネル８４０が形成される。その結果、漏れた流体をより容易に視認することができる。蓋板８２２の上方に突出する蓋体８２０は、上側キャビティ８２９の外部への漏れ液のこぼれを抑制する。保持壁８３８の傾斜は、漏れた液体を検出するために上側キャビティ８２９に改善された視認性を提供する一方で、保持壁８３８上に跳ね返り得る液体を蓋板８２２に向けて戻す。

【0313】

図４１及び図４２に戻ると、各バッグスタンド６５０は、ハウジング６５２に接続された下端及び対向する上端を有するポール８６０を備える。ポール８６０は固定長とすることができるが、図示の実施形態では、ポール８６０は、下部ポール８６２と、下部ポール８６２内に摺動可能に配置された上部ポール８６４とを含む調整可能な伸縮ポールである。クランプなどの解放可能な締結具８６６は、下部ポール８６２に配置され、上部ポール８６４を下部ポール８６２に対して選択的に抑制するように機能する。キャッチ８６８は、ポール８６０の上端にヒンジ式に取り付けられている。より具体的には、図４８に示すように、アーム８７６は、ポール８６０の上端から外側に突出している。例示的な一実施形態では、アーム８７６は、ポール８６０から径方向又は直交して外向きに突出することができる。アーム８７６は、ポール８６０に中心的に接続されたＵ字形本体８７８を有することができ、ステム８８０Ａ及び８８０Ｂは、本体８７８の対向する端部から外向きに突出する、例えば直角に突出する。

【0314】

キャッチ８６８は、上端８８２及び反対側の下端８８４を有するプレート８７０を備える。一対の離間したＣ字形フィンガ８８６Ａ及び８８６Ｂは、プレート８７０の上端８８６から突出している。フィンガ８８６Ａ及び８８６Ｂは、ステム８８０Ａ及び８８０Ｂに解放可能にスナップ嵌合するように構成される。この結合は、以下に説明するように、キャッチ８６８がアーム８７６に解放可能に固定されて、キャッチ８６８からのバッグの取り付け及び／又は取り外しを簡単にすることを可能にし、また、キャッチ８６８がアーム８７６上に保持されている間にキャッチ８６８がアーム８７６上で旋回して、キャッチ８６８上のバッグの取り付け、取り外し、又は操作を容易にすることを可能にする。キャッチ８６８の下端８８４は、その中に上方に窪んだ複数の離間した切り欠き８７２を有する底縁部８８８で終端する。プレート８７０はまた、複数のＬ字形フィンガ８７４を含み、各フィンガ８７４は対応する切り欠き８７２内に突出している。使用中、ゴミ袋、収集袋、及び／又は媒体、生物学的生成物、ビーズ及び／又は他の生成物を含む袋など、ビーズ処理装置６４２の動作に使用される袋は、対応するフィンガ８７４上で袋のハンガーを支持することによってキャッチ８６８上に隣接して支持することができる。ハンガーは、バッグから延びるか、又はバッグの外周を通って延びる穴によって形成されてもよい。各プレート８７０は、その中に対応するフィンガ８７４を有する少なくとも２、４、６、８、１０又はそれ以上の切り欠き８７２を有することができる。他の数も使用することができる。

【0315】

図４１に戻ると、ビーズ処理装置２２の前述の支持パネル９２と同様に、支持パネル６６２は、支持パネル９２で前述したのと同じように機能するベースパネル及びオーバーリー（ｏｖｅｒｌｙ）パネルを含むことができる。更に、ビーズ処理装置２２と同様に、複数の機械的構成要素が支持パネル６６２に接続されているか、そうでなければ外側に突出している。この例示的な実施形態では、機械的構成要素は、ピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋ、ポンプ１２４、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｂ、並びに圧力センサ１４０Ａ及び１４０Ｂを含む。ビーズ処理装置６４２のピンチバルブ１２８、ポンプ１２４、気泡センサ１３６、及び圧力センサ１４０は、前述のビーズ処理装置２２のピンチバルブ１２８、ポンプ１２４、気泡センサ１３６、及び圧力センサ１４０と同じ設計、機能、及び代替形態を有することができることが理解される。しかしながら、ビーズ処理装置６２４における機械的構成要素のレイアウト及び数は、設計及び動作を単純化するためにビーズ処理装置２２におけるものに対して変更されている。例えば、ビーズ処理装置６２４の機械的構成要素は、単一のポンプ１２４のみを必要とする。更に、回転アセンブリ１３２は排除され、追加のピンチバルブ１２８と交換されている。したがって、管を通るガス流及び液体流は、ここでピンチバルブ１２８を使用して対応する管を選択的にピンチ及び解放することによってのみ制御することができる。

【0316】

図５２を参照すると、単回使用使い捨て消耗キット８９０Ａをビーズ処理装置６４２と共に使用して、供給されたＴ細胞を単離し活性化するためのビーズ処理システム１４Ａ（図５３）を形成することができる。消耗キット８９０Ａは、トレイ８９２Ａと、その上に取り付けられたラインセット８９４Ａとを備える。消耗性キット８９０Ａは、前述したように、ラインセット８９４Ａが支持パネル６６２上に配置された様々な機械的構成要素と係合又は相互作用することができるように、支持パネル６６２（図５３）の上に取り外し可能に入れ子になるように構成される。以下に述べることを除いて、トレイ８９２Ａ及びラインセット８９４Ａは、同じ要素、同じ特性を有し、同じ材料で作られ、同じ寸法を有し、トレイ１７２Ａ及びラインセット１７４Ａで前述したのと同じ方法で使用することができる。トレイ８９２Ａは、その対向する上面と底面との間に延在する複数の開口８９５を有する。しかしながら、トレイ１７２Ａの開口１８５とは対照的に、開口８９５は、支持パネル６６２の上及び外側に突出して配置されるように、ピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋ、ポンプ１２４、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｂ、並びに圧力センサ１４０Ａ及び１４０Ｂを受け入れるように配置及び構成される。

【0317】

トレイ８９２Ａはまた、その上面に取り付けられ、その上面から外側に突出する前述のチューブ抑制部１８６を含む。チューブ抑制部１８６は、ラインセット８９４Ａのチューブを支持し固定する。トレイ１７２Ａとは対照的に、トレイ８９２Ａは、バッグ抑制部１９２を含まない。

【0318】

図５２及び図５３に示すように、ラインセット８９４Ａは、一般に、複数のバッグと、前述のエアフィルタ２２１Ａ及び２２１Ｂとに結合された可撓性チューブ２００流体を含む。前のラインセット１７４Ａのストップコック２２０及び混合バッグ２１０は、製造及び操作を単純化するためにラインセット８９４Ａから排除されている。可撓性チューブ２００は、支持パネル６６２から突出する選択された機械的構成要素と係合するように、トレイ８９２Ａ上の選択開口８９５と整列するべく配置される。具体的には、使用中、図５３に示すように、組み立てられた消耗キット８９０Ａは、支持パネル６６２上の機械的構成要素がトレイ８９２Ａ上に形成された対応する開口８９５と整列するように、支持パネル６６２の上に配置される。次いで、チューブ２００は、ピンチバルブ１２８Ａ～１２８Ｋ、ポンプ１２４、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｂ、並びに圧力センサ１４０Ａ及び１４０Ｂのそれぞれと結合するように操作される。

【0319】

ラインセット８９４Ａは、トレイ８９２と対応するバッグとの間に延在するチューブセクション９０８Ａ～９０８Ｉを含む。例えば、チューブセクション９０８Ａは単離バッグ２０６に接続し、チューブセクション９０８Ｂ、９０８Ｃ、９０８Ｅ及び９０８Ｆはそれぞれ媒体バッグ２１６Ａ～２１６Ｄに接続し、チューブセクション９０８Ｄは排出バッグ９２８に接続し、チューブセクション９０８Ｇは投入バッグ９３０に接続し、チューブセクション９０８Ｈはビーズバッグ９３２に接続し、チューブセクション９０８Ｉは排出バッグ９３４に接続する。

【0320】

ビーズ処理装置６４２はまた、チューブセクション９０８Ａ～９０８Ｉを解放可能に固定及び編成するために使用されるチューブ抑制部９１０を含む。チューブ抑制部９１０は、支持パネル６６２の上方でハウジング６５２の上端に固定される。より具体的には、図５４を参照する。一対のマウント９１２Ａ、９１２Ｂは、支持パネル６６２の上方においてハウジング６５２から外方に突出している。チューブ抑制部９１０は、ハウジング６５２からわずかに離間するようにマウント９１２Ａ及び９１２Ｂに解放可能に接続する。チューブ抑制部９１０は、ハウジング６５２に面する内側縁部９１６と、反対側の外側縁部９１８とを有する長尺ブレース９１４を含む。ハンドル９２０Ａ及び９２０Ｂは、ブレース９１４の対向する端部に形成することができる。一実施形態では、ブレース９１４は、対向する縁部９１６及び９１８を有する平坦なストリップを含むことができる。必要に応じて、補強フランジ９２３は、ブレース９１４の頂面及び／又は底面からその長さに沿って外側に延在して、ブレース９１４を補強して、故障又は過度の屈曲を防止するのを助けることができる。切り欠き９２２は、ブレース９１４の上面と反対側の底面との間に延在するように、ブレース９１４の縁部９１６及び／又は９１８内に陥凹している。切り欠き９２２は、チューブセクション９０８Ａ～９０８Ｉを選択的に受け入れ、解放可能に固定するように構成される。例示的な一実施形態では、各切り欠き９２２は、狭窄口９２６を介してアクセスされる丸みを帯びた頭部９２４を含む。

【0321】

ビーズ処理装置６４２はまた、ビーズ処理装置２２がビーズバイアルリテーナ１４８並びにバイアル１６６及びビーズバイアルカプラ２０８の関連する使用を排除するという点で、ビーズ処理装置６４２を区別する。バイアル１６６及び関連するハードウェアの使用とは対照的に、ラインセット８９４Ａは、上記で参照したように、チューブセクション９０８Ｈと結合されたビーズバッグ９３２の使用を組み込んでいる。図５５を参照すると、一例示的実施形態では、ビーズバッグ９３２は、単離バッグ２０６に関して前述したものなどのポリマーフィルムの１つ以上のシートからなる可撓性袋体９３６を含む。袋体９３６は、上端９４０と反対側の下端９４２との間で延在する区画室９３８を境界付ける。下端９４２には、出口ポート９４４が形成されており、区画室９３８と連通している。出口ポート９４４はまた、チューブセクション９０８Ｈと直接的又は間接的に連通する。１つ以上の入口ポート９４６又は入口チューブ９４８は、袋体９３６の上端９４０に結合され、区画室９３８と連通する。区画室９３８内には、バイアル１６６で前述したように、ビーズ１７９及びキャリア液体１８１が配置されている。本明細書に開示される他のバッグと同様に、袋体９３６は、典型的には、区画室９３８を接合する外周シールを形成するように互いに接合された上にある上部シート及び下部シートから構成されるピロータイプのバッグである。本実施形態では、外周シールは、上縁部から出口ポート９４４まで延在する対向する側縁部４２８Ａ及び４２８Ｂを含む。対向する側縁部４２８Ａ及び４２８Ｂ、又は少なくともその下部は、それらが出口ポート９４４に延びるにつれて互いに向かって内向きに傾斜する。したがって、実質的にＶ字形の構成としての区画室の少なくとも下端は、出口ポート９４４への漏斗ビーズ１７９である。対向する側縁部４２８Ａ及び４２８Ｂは、それらが出口ポート９４４に向かって内側に傾斜するにつれて直線状又は湾曲し得ることが理解される。

【0322】

ビーズ処理システム１４Ａの動作の前に、単離バッグ２０６（又は本明細書に開示される任意の他の単離バッグ）がロッカアセンブリ６４８内に封入され、残りのバッグは通常、前述のようにバッグスタンド６５０Ａ及び／又は６５０Ｂに固定される。組み立てられたビーズ処理システム１４Ａの動作は、ビーズ処理システム１４の前述の動作と同様である。例えば、主に図５３を参照すると、一実施形態では、ビーズ処理システム１４Ａは、以下のステップを使用して操作することができる。以下のプロセスステップのそれぞれは、予めプログラムされた電気回路５３の制御によって自動的に実行することができ、及び／又はユーザインタフェースへの手動入力によって手動で制御することができる。ビーズ処理システム１４Ａの起動時に、ピンチバルブ１２８の全ては、典型的には、ピンチバルブと連結されたチューブセクションを通る流体の流れを妨げるように閉位置に動かされる。選択ピンチバルブが開かれることが議論される以下の方法ステップでは、ラインセット８９４Ｂを通る流体の流れを制御するために、残りのピンチバルブは閉じたままであることが理解される。幾つかの実施形態では、幾つかのステップを省略することができ、他のステップを追加することができ、ステップの順序を変更することができることが理解される。

【0323】

ステップ１：部分的に拡張させるために単離バッグ２０６内に空気を注入する。これは、ピンチバルブ１２８Ｊを開き、ポンプ１２４を作動させてエアフィルタアセンブリ２１８Ｂ単離バッグ２０６から空気を送り出すことによって達成することができる。単離バッグ２０６内に空気を注入することは、液体と単離バッグ２０６の表面との間の接触を減少させることによって、単離バッグ２０６内の液体の流れ及び動きを実質的に改善することができる。したがって、注入された空気は、後述するように、細胞と磁気ビーズとの混合を助けることができる。

【0324】

異なるピンチバルブ１２８の動作に基づいて、流体は、意図された機能を達成するために様々な異なる経路を通って移動することができることが理解される。したがって、本明細書に記載のプロセスステップは単なる例であり、他のプロセスステップを使用して同じ機能を達成することができる。

【0325】

ステップ２：チューブ及び単離バッグ２０６を媒体でプライミングする。ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｆは、ポンプ１２４を使用して媒体を媒体バッグ２１６Ｄからポンプ１２４Ｂを通って単離バッグ２０６に送る間に開くことができる。媒体は、媒体バッグ２１６Ａ、２１６Ｂ、２１６Ｃ又は２１６Ｄのいずれかから提供され得ることが理解される。したがって、本明細書では、媒体は主に媒体バッグ２１６Ｄから引き出されるものとして説明されているが、他の媒体バッグのうちの１つ以上から一般的に引き出すことができることが理解される。一般に、媒体は、空になるまで、又は空に近づくまで１つの媒体バッグから引き出され、次いで別の媒体バッグから引き出される。

【0326】

ステップ３：ビーズをビーズバッグ９３２内に懸濁させる。図５５に示すように、ビーズバッグ９３２が静止しているとき、ビーズ１７９は下端９４２に向かって沈降する。ビーズ１７９がキャリア液体１８１内に懸濁されている場合、ビーズ１７９はビーズバッグ９３２からより容易に流出し、ラインセット８９４Ａを通って流れる。したがって、選択ピンチバルブ１２８を開くことにより、ポンプ１２４を使用して、エアフィルタ２２１Ａからビーズバッグ９３２内に空気を圧送し、及び／又は媒体バッグ２１６Ａからビーズバッグ９３２内に媒体を圧送することができる。空気又は媒体をビーズバッグ９３２に送り込むことは、キャリア液体１８１内にビーズ１７９を懸濁させるように機能する。代替的な実施形態では、ビーズ１７９は、ビーズバッグ９３２の機械的又は手動操作によってキャリア液体１８１内に懸濁させることができる。

【0327】

ステップ４：ビーズバッグ９３２から単離バッグ２０６に懸濁ビーズ１７９を注入する。ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｈを開き、ポンプ１２４を使用して懸濁ビーズ１７９をビーズバッグ９３２から単離バッグ２０６に送り込むことができる。幾つかの実施形態では、一定量の懸濁ビーズ１７９がビーズバッグ９３２から送り出されると、追加の媒体をビーズバッグ９３２に送り込み、ビーズバッグ９３２内に保持されていてもよい任意のビーズ１７９を再懸濁することができる。次いで、この新しい懸濁液を単離バッグ２０６に送り込むことができる。ビーズバッグ９３２に媒体を添加する上記のプロセスは、ビーズ１７９の全てがビーズバッグ９３２及び関連するチューブから単離バッグ２０６に確実に洗い流されるように、複数回繰り返すことができる。

【0328】

ステップ５：単離バッグ２０６内の洗浄前ビーズ１７９。一実施形態では、単離バッグ２０６内から不要な物質を除去するのを助けるために、ビーズ１７９を単離バッグ２０６内で予備洗浄することができる。例えば、このステップは、ビーズ１７９に共有結合していない混合物中の遊離抗体を除去するために使用することができる。例示的な一実施形態では、ポンプ１２４を使用して、媒体バッグ２１６の一方から単離バッグ２０６内に媒体を圧送することができる。単離バッグ２０６内に媒体を圧送する前、圧送するのと同時に、又は圧送した後に、ロッカドライブ２３４を作動させて、単離バッグ２０６が取り付けられたプラットフォームアセンブリ２３２の繰り返しの揺動を容易にする。この揺動は、ビーズ１７９のいかなる凝集も結合解除し、あらゆる望ましくない物質を懸濁させるのに役立ち得る。次いで、ロッカドライブ２３４を停止させ、リフトアセンブリ２９２を作動させて、磁石アセンブリ２９４を支持プレート６９２に対して上昇した作動位置に上昇させることができる。ビーズ１７９は重力下で沈降し、磁石アセンブリ２９４に生成された磁力によって単離バッグ２０６／支持プレート６９２に引き付けられ、それに対して保持される。一実施形態では、ロッカドライブ２３４は、単離バッグ２０６のポート４１６が上昇するように、プラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を後方又は負に傾斜させることができる。次いで、ビーズ１７９がその中に保持されないことを確保するのを助けるために、少量の空気又は媒体をポート４１６に通過させることができる。次いで、この後方傾斜位置にある間に磁場を単離バッグ２０６に印加することができる。磁石アセンブリ２９４が依然として上昇作動位置にあり、それによってビーズ１７９が単離バッグ２０６に対して固定されている状態で、ロッカドライブ２３４は傾斜プラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を前方／積極的に動かすことができ、それによってポート４１６がここで下降される。この向きは、流体がポート４１６を通って単離バッグ２０６から自由に流出することを確保するのに役立つ。次に、ポンプ１２４を使用して、ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｄを開くなどして、単離バッグ２０６から排出バッグ９２８又は他の容器に液体を圧送する。ビーズ１７９の上記の前洗浄プロセスは、少なくとも１回、２回、３回又はそれ以上など、任意の所望の回数繰り返すことができる。

【0329】

ステップ６：媒体を単離バッグ２０６に移す。ポンプ１２４は、ビーズ１７９が所望の濃度に希釈されるように、規定量の媒体を単離バッグ２０６に圧送するために使用される。例えば、ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｆを開くことができ、ポンプ１２４を使用して媒体を媒体バッグ２１６Ｄから単離バッグ２０６に送り込むことができる。

【0330】

ステップ７：ビーズ１７９を単離バッグ２０６内に懸濁する。リフトアセンブリ２９２が作動されて磁石アセンブリ２９４を非作動位置まで下降させ、ロッカドライブ２３４が作動されてプラットフォーム２９０及びその上に配置された単離バッグ２０６を繰り返しロックし、それによって媒体内にビーズ１７９を均一に懸濁させる。

【0331】

ステップ８：細胞培養物を単離バッグ２０６に移す。ポンプ１２４は、細胞分離器１２から生成された細胞培養物を単離バッグ２０６内に圧送するために使用される。図示の実施形態では、細胞培養物は投入バッグ９３０内に配置される。したがって、ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｇを開き、ポンプ１２４を使用して細胞培養物を投入バッグ９３０から単離バッグ２０６に圧送することができる。他の実施形態では、ポンプ１２４を使用して、細胞分離器１２又は他の何らかの容器から細胞培養物を直接圧送することができる。

【0332】

ステップ９：所望のＴ細胞の単離及び活性化を促進する。ロッカドライブ２３４は、ステップ８から活性化されるか、又は活性化されたままであり、プラットフォーム２９０及びその上の単離バッグ２０６の揺動を容易にし、ビーズ１７９を所望のＴ細胞を含む細胞培養物と混合する。所望の抗体をその上に有するビーズ１７９は、ビーズ１７９が混合プロセス中に所望のＴ細胞と接触すると、所望のＴ細胞に結合して活性化する。そのような混合は、長期間にわたって起こり得る。限定ではなく例として、混合は、１５分～６０分、より一般的には２０分～４０分であり得る。他の持続時間も使用することができる。

【0333】

ステップ１０：ビーズ１７９と結合したＴ細胞を捕捉する。リフトアセンブリ２９２は、支持プレート６９２に対して磁石アセンブリ２９４を起動位置まで上昇させるように起動される。磁石アセンブリ２９４によって生成された磁力により、ビーズ１７９及びビーズ１７９に結合したＴ細胞は、単離バッグ２０６内に保持されながら、単離バッグ２０６／支持プレート６９２に対して保持される。予備洗浄ステップと同様に、例示的な一実施形態では、ロッカドライブ２３４は、まず、単離バッグ２０６のポート４１６が上昇するように、プラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を後方に傾斜させることができる。次いで、ビーズ１７９／細胞がその中に保持されないことを確保するのを助けるために、少量の空気又は媒体をポート４１６に通過させることができる。次いで、この後方傾斜位置にある間に磁場を単離バッグ２０６に印加することができる。

【0334】

ステップ１１：液体を単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に移す。ロッカドライブ２３４は、ポート４１６が下方に配置されるようにプラットフォーム２９０を積極的に傾けることができる。次いで、ポンプ１２４Ｂを使用して、磁石アセンブリ２９４によって生成された磁力下でビーズ１７９及びそれに取り付けられた細胞が単離バッグ２０６内に強固に保持されたままで、流体を単離バッグ２０６から排出バッグ９２８に圧送することができる。例えば、ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｄを開くことができ、ポンプ１２４を使用して単離バッグ２０６から排出バッグ９２８に液体を圧送することができる。このステップは、単離バッグ２０６から陰性細胞画分、すなわちビーズ１７９に結合しなかった細胞を除去することである。

【0335】

ステップ１２：洗浄細胞をビーズ１７９と結合させた。ポンプ１２４を使用して、媒体バッグ２１６の一方から単離バッグ２０６内に媒体を圧送することができる。リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４を非作動位置まで下方に移動させるように作動される。連続的に又は同時に、ロッカドライブ２３４を作動させて、新たに送達された媒体中のＴ細胞と結合したビーズ１７９の混合を促進する。この混合は、長期間にわたって再び起こり得る。しかしながら、この揺動／混合の主な目的は、単離バッグ２０６内に意図せずに捕捉された可能性のある細胞又は他の生物学的材料を除去して除去することである。リフトアセンブリ２９２を作動させて、磁石アセンブリ２９４を活性化位置まで移動させて、ビーズ１７９及びそれに結合したＴ細胞を再び捕捉する。ここでも、一実施形態では、ロッカドライブ２３４は、単離バッグ２０６のポート４１６が上昇するように、プラットフォームアセンブリ２３２／単離バッグ２０６を後方又は負に傾斜させることができる。次いで、ビーズ１７９／細胞がその中に保持されないことを確保するのを助けるために、少量の空気又は媒体をポート４１６に通過させることができる。次いで、この後方傾斜位置にある間に磁場を単離バッグ２０６に印加することができる。次いで、ロッカドライブ２３４は、ポート４１６が下方に配置されるようにプラットフォーム２９０を正に傾斜させる。次いで、ポンプ１２４を使用して、単離バッグ２０６から収集バッグ２１２に液体を圧送する。この洗浄ステップは、少なくとも１回、２回、３回又はそれ以上など、必要に応じて何回でも繰り返すことができる。

【0336】

ステップ１３：ビーズ１７９を結合細胞と共に再懸濁する。ロッカドライブ２３４は、チルトを係合解除するように制御され、リフトアセンブリ２９２は、磁石アセンブリ２９４を係合解除位置に下げるように作動される。ポンプ１２４Ｂは、媒体バッグ２１６から単離バッグ２０６内に媒体を圧送するために使用される。送達される媒体の量は、Ｔ細胞が系から分注されるときのＴ細胞の所望の濃度に依存する。ロッカドライブ２３４を作動させて、ビーズ１７９とそれに付着したＴ細胞とを新たに送達された媒体内で混合し、均一な混合物を生成する。

【0337】

ステップ１４：単離バッグ２０６内の懸濁液を排出バッグ９３４に、又は細胞増殖システム１６もしくは他の下流処理機器もしくは回収容器に直接移送する。例えば、ピンチバルブ１２８Ａ及び１２８Ｋを開き、ポンプ１２４を使用して単離バッグ２０６内の懸濁液を排出バッグ９３４に移送するか、又は他の下流の機器又は容器に直接移送することができる。更に別の代替例では、懸濁液を投入バッグ９３０に戻すことができる。単離された細胞の全てが除去され、及び／又は下流のバッグ／機器内の細胞濃度が所望のレベルに達するまで、上記のステップ１３及び１４を繰り返すことができる。

【0338】

上記のプロセスでは、ビーズ処理装置２２は、磁気ビーズ１７９を使用して所望のＴ細胞を単離及び活性化する。しかし、代替的な実施形態では、ビーズ処理装置２２は、反対のプロセスで磁気ビーズ１７９と共に使用することができる。すなわち、ビーズ１７９を所望の細胞に結合させるのとは対照的に、ビーズ１７９は、細胞の混合物内に望ましくない細胞に結合するように設計することができる。結果として、上記のプロセスを使用することによって、望ましくない細胞をビーズ１７９に結合させ、磁石アセンブリ２９４によって単離バッグ２０６内に固定することができ、一方、所望の細胞は単離バッグ２０６から洗い流され、更なる処理のために収集バッグ又は他の下流装置に移される。

【0339】

ビーズ処理装置２２と同様に、ビーズ処理装置６４２は、代替的なビーズ処理システム１８（図１）であるビーズ処理システム１８Ａの形成に使用することもできる。図５６及び図５７を参照すると、ビーズ処理システム１８Ａは、ビーズ処理装置６４２を消耗キット８９０Ａに対して変更された消耗キット８９０Ｂと組み合わせることによって形成することができる。消耗キット８９０Ｂは、トレイ８９２Ｂと、ラインセット８９４Ｂとを含む。トレイ８９２Ｂは、トレイ８９２Ａと同じ特性を有し、同じ材料で作ることができる。必須ではないが、図示の実施形態では、トレイ８９２Ｂは、トレイ８９２Ａと同じ構成及び要素を有する。したがって、トレイ８９２Ｂは、対応する機械的構成要素を受け入れるために貫通する開口８９５に面する上面及び対向する底部を有し、その上にラインセット８９４Ｂを固定するためのチューブ抑制部１８６を有する。

【0340】

図５６及び図５７に示すように、ラインセット８９４Ｂは、一般に、複数のバッグ及び前述のエアフィルタ２２１Ａに結合された可撓性チューブ２００流体を含む。可撓性チューブは、支持パネル６６２から突出する選択された機械的構成要素と係合するように、トレイ８９２Ｂ上の選択開口８９５と整列するように配置される。具体的には、使用中、図５６に示すように、組み立てられた消耗キット８９０Ｂは、支持パネル６６２上の機械的構成要素がトレイ８９２Ａ上に形成された関連開口８９５と整列するように、支持パネル６６２の上に配置される。その後、チューブ２００は、ピンチバルブ１２８Ａ、１２８Ｂ、１２８Ｄ、１２８Ｅ、１２８Ｇ、１２８Ｈ、１２８Ｉ、１２８Ｊ、及び１２８Ｋのそれぞれ、ポンプ１２４、気泡センサ１３６Ａ及び１３６Ｂ、及び圧力センサ１４０Ａ及び１４０Ｂと結合するように操作される。

【0341】

ラインセット８９４Ｂは、トレイ８９２Ｂと対応するバッグとの間に延在するチューブセクション９５４Ａ～９５４Ｆを含む。例えば、チューブセクション９５４Ａ及び９５４Ｂは両方ともビーズ分離バッグ５７０（又は本明細書に開示される任意の他のビーズ分離バッグ）に接続し、チューブセクション９５４Ｃ及び９５４Ｅはそれぞれ媒体バッグ２１６Ａ及び２１６Ｂに接続し、チューブセクション９５４Ｄは排出バッグ９２８に接続し、チューブセクション９５４Ｆは投入バッグ９５８に接続する。

【0342】

ビーズ処理システム１８Ａの動作前に、ビーズ分離バッグ５７０（又はビーズ分離バッグ６００などの任意の他のビーズ分離バッグ）は、単離バッグ２０６で前述したのと同じロッカアセンブリ６４８内に封入され、残りのバッグは、前述したように、通常、バッグスタンド６５０Ａ及び／又は６５０Ｂに固定される。組み立てられたビーズ処理システム１８Ａの動作は、ビーズ処理システム１８の前述の動作と同様である。例えば、主に図５７を参照すると、一実施形態では、ビーズ処理システム１８Ａは、以下のステップを使用して操作することができる。以下のプロセスステップのそれぞれは、予めプログラムされた電気回路５３の制御によって自動的に実行することができ、及び／又はユーザインタフェースへの手動入力によって手動で制御することができる。ビーズ処理システム１８Ａの起動時に、ピンチバルブ１２８の全ては、典型的には、ピンチバルブと連結されたチューブセクションを通る流体の流れを妨げるように閉位置に動かされる。選択ピンチバルブが開かれることが議論される以下の方法ステップでは、ラインセット８９４Ｂを通る流体の流れを制御するために、残りのピンチバルブは閉じたままであることが理解される。幾つかの実施形態では、幾つかのステップを省略することができ、他のステップを追加することができ、ステップの順序を変更することができることが理解される。

【0343】

ステップ１：磁石アセンブリ２４１を持ち上げる。リフトアセンブリ２９２は、プラットフォーム２９０／支持プレート６９２に対して上昇した作動位置まで磁石アセンブリ２９４を上昇させるために使用される。一実施形態では、停止アセンブリ５２６Ａ～５２６Ｄは、ロッド７７０が上昇する能力を制限し、それによってカバーアセンブリ４２１／蓋板８２２がプラットフォーム２９０／支持プレート６９２に対して上昇する能力を制限する前進再訓練位置に移動するように作動させることができる。

【0344】

ステップ２：細胞、ビーズ１７９及び媒体からなる懸濁液をビーズ分離バッグ５７０に移す。ポンプ１２４は、細胞、ビーズ１７９及び細胞増殖システム１６で処理された媒体からなる培養物を分離バッグ５７０を通して移送するために使用される。図示の実施形態では、処理された細胞、ビーズ１７９及び媒体は、投入バッグ９５８から分配されている。しかしながら、他の実施形態では、それらは、細胞増殖システム１６又はチューブセクション９５４Ｆに結合された他の何らかの容器から直接分配することができる。懸濁液は、ポート５６９を通ってビーズ分離バッグ５７０に圧送される。次いで、懸濁液は、仕切り５７８の第２端部５８２の周りでビーズ分離バッグ５７０（図３４）の区画室４１５内を流れ、次いでポート５６８を通って区画室４１５から出る。懸濁液が区画室４１５を通過するとき、ビーズ１７９は、磁石アセンブリ２９４によって生成された磁場によってプラットフォーム２９０に引き付けられ、プラットフォームに固定される。一実施形態では、懸濁液の混合は、磁場によってより良好に捕捉されるプラットフォーム２９０／支持プレート６９２にビーズ１７９を近づけるのを助けることができるロッカドライブ２３４の作動によってもたらすことができる。しかしながら、他の実施形態では、デビーディングは、ロッカドライブ２３４を作動させることなく実行することができる。停止アセンブリ５２６Ａ～５２６Ｄを前進抑制位置に任意選択的に配置することにより、ビーズ分離バッグ５７０の拡張が制限され、その中のビーズ１７９に対する磁場の力が更に最適化される。上記により、懸濁液がビーズ分離バッグ５７０を連続的に流れる際に、プラットフォーム２９０／支持プレート６９２に対するビーズ１７９の効率的な収集が可能になる。ポート５６８を通って分離バッグ５７０を出る媒体及び細胞は、チューブ２００に沿って排出バッグ９５６に移動するか、又はチューブセクション９５４Ｄを通って遺伝子編集システム２０もしくは他の何らかの容器もしくはシステムに直接移動する。

【0345】

ステップ２の１つの修正バージョンでは、ピンチバルブ１２８Ｂ、１２８Ｉ、及び／又は１２８Ｅは、ビーズ分離バッグ５７０が細胞、ビーズ１７９、及び媒体の混合物で少なくとも３０％、４０％、又は５０％満たされるまで閉じたままであり得る。次いで、ロッカドライブ２３４は、ポート５６８及び５６９が上方に傾斜するようにプラットフォーム２９０を後方に傾斜させる。その後、ピンチバルブ１２８Ｂ、１２８Ｉ、及び／又は１２８Ｅが開かれる。追加の懸濁液がポート５６９を通ってビーズ分離バッグ５７０に送り込まれると、ビーズ分離バッグ５７０内の任意の空気がポート５６８を通って流出する。空気の全てが除去されると、ロッカドライブ２３４はプラットフォーム２９０を水平に傾ける。次いで、懸濁液の残りは、ビーズ分離バッグ５７０を通ってポンプ輸送され、ビーズ除去された流体が排出バッグ９５６又は他の何らかの容器又は機械に流入する。

【0346】

ステップ３：出力する流動媒体。次いで、ポンプ１２４を使用して、媒体を媒体バッグ２１６Ｂからビーズ分離バッグ５７０を通って排出バッグ９５６に送り込む。このプロセスは、ビーズ分離バッグ５７０及び／又はチューブ内の残りの細胞を洗い流すのに役立つ。

【0347】

ビーズ１７９は、分離バッグ５７０内に収容されたままとなることができ、ラインセット８９４Ｂで廃棄されるか、そうでなければ更に処理され得る。ビーズ処理装置６４２は、ビーズ処理装置２２に関して前述したのと同じ利点及び機能特性を有する。しかし、ビーズ処理装置６４２は、ビーズ処理装置２２に比べて、設計が簡単であり、運転が安全であり、運転が容易である。

【0348】

図５８は、細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェース７０１を示す。ユーザインタフェース７０１は、制御機能及びプロトコル入力を容易にするために入力／出力制御部７０３を表示する画面及びディスプレイ７０２並びにグラフィカルユーザインタフェース７０４を含むことができる。ユーザインタフェース７０１は、タッチスクリーン／ディスプレイ７０２又は他の物理的なオペレータ入力を含むことができる。ユーザインタフェース７０１を用いて、オペレータは、磁気ビーズ（例えば、キャリア流体と共に）の流れを選択し、特定の機器、バイオプロセス容器又はフローラインに導くことができる。グラフィカルユーザインタフェース７０４は、例示的な細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける機器、バイオプロセスコンテナ、フローライン及び／又はプロセスパラメータ入力を表す１つ以上の仮想入力を示す一次選択領域７０５を含む。この実施形態では、一次選択領域７０５は、四つの媒体／緩衝液バッグ（媒体１緩衝液、媒体１緩衝液１、媒体１ ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）及び媒体３）、単離バッグ、排出バッグ、細胞分離器、ビーズバッグ及び廃棄物バッグを表す９個の仮想入力を含む。他の機器、バイオプロセスコンテナ、及びプロセスパラメータ入力の仮想表示もまた、一次選択領域７０５に含めることができる。オペレータは、一次選択領域７０４内の特定の仮想入力７０３を選択して、磁気ビーズの位置を示すか、又はプロセスワークフロー内の特定の機器又はバイオプロセス容器に磁気ビーズの流れを導くことができる。これにより、「ＲＵＮ」プロトコル中の正確なビーズ計算が可能になる。グラフィカルユーザインタフェース７０４はまた、プロトコル設定及びワークフロー機器の動作のための追加の仮想入力を含む二次選択領域７０６を含むことができる。本実施形態では、二次選択領域７０６は、一次選択領域７０５で行われた入力をキャンセルするための「キャンセル(CANCEL)」入力を含む。二次選択領域７０６に入力された「キャンセル」はまた、プロトコル作成プロセスのキャンセル及び終了を確認するためのオペレータへのプロンプトをトリガすることができる。二次選択領域７０６はまた、「体積を入力(ENTER VOLUME)」入力を含み、これは、細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける選択された機器、バイオプロセス容器及びフローライン内の培養及び他のプロセス流体体積を入力するために次のユーザインタフェース８０１（図５９にて説明）に移動させる。他の入力を二次選択領域７０６に含めることができる。

【0349】

図５９は、細胞処理ワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器、並びに本明細書に開示される他のワードフローを制御するための例示的なユーザインタフェース８０１を示す。ユーザインタフェース８０１は、制御機能及びプロトコル入力を容易にするために入力／出力制御部８０３を表示する画面及びディスプレイ８０２並びにグラフィカルユーザインタフェース８０４を含むことができる。ユーザインタフェース８０１は、タッチスクリーン／ディスプレイ８０２又は他の物理的なオペレータ入力を含むことができる。ユーザインタフェース８０１を用いて、オペレータは、本明細書に開示される細胞培養液、生物学的流体又は他のプロセス流体を特定の機器、バイオプロセス容器又はフローラインに圧送するためのプロトコルボリュームを選択することができる。グラフィカルユーザインタフェース８０４は、特定の流量又は体積でプロセス流体を流すための機器、バイオプロセスコンテナ、フローライン及び／又はプロセスパラメータ入力を表す１つ以上の仮想入力８０３を示す一次選択領域８０５を含む。この実施形態では、一次選択領域８０５は、オペレータによって入力され、４つの媒体／緩衝液バッグ（媒体１緩衝液、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）及び媒体３）、単離バッグ、排出バッグ、及び細胞分離器に圧送されるプロセス流体量を表す６つの仮想入力８０３を含む。他の機器、バイオプロセスコンテナ、及びプロセスパラメータ入力の仮想表示もまた、一次選択領域８０５に含めることができる。オペレータは、その選択された量のプロセス流体を機器又は容器に流すために、プロセスプロトコル内の機器又はバイオプロセス容器の各ピースの特定の量を入力することを選択することができる。グラフィカルユーザインタフェース８０４はまた、プロトコル設定及びワークフロー機器の動作のための追加の仮想入力を含む二次選択領域８０６を含むことができる。本実施形態では、二次選択領域８０６は、ボリュームプロトコルを解除するための「キャンセル」入力又は一次選択領域８０５で行われた入力を含む。二次選択領域８０６に入力された「キャンセル」はまた、プロトコル作成プロセスのキャンセル及び終了を確認するためのオペレータへのプロンプトをトリガすることができる。二次選択領域８０６はまた、プロトコル作成プロセスにおける次のステップに移動するための「ステップを生成(CREATE STEPS)」入力を含む。標的細胞収率に入り、図５８のプロトコル設定ステップで行われた入力にも基づいてビーズ対細胞比及びビーズストック又はビーズ担体濃度を計算するための「ビーズ計算器(BEAD CALCULATOR)」入力を含む他の入力を二次選択領域８０６に含めることができる。

【0350】

図６０は、細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェース９０１を示す。ユーザインタフェース９０１は、制御機能及びプロトコル入力を容易にするために、入力／出力制御部９０３Ａ～９０３Ｉ及び流体流路９０７Ａ～９０７Ｈを表示する画面及びディスプレイ９０２並びにグラフィカルユーザインタフェース９０４を含むことができる。ユーザインタフェース９０１は、タッチスクリーン／ディスプレイ９０２又は他の物理的入力を含むことができる。グラフィカルユーザインタフェース９０４は、特定のワークフロープロトコルのための機器、バイオプロセスコンテナ、フローライン及び／又はプロセス入力パラメータを表す１つ以上の仮想入力９０３Ａ～９０３Ｅを示す一次選択領域９０５を含む。この実施形態では、一次選択領域９０５は、プロセスワークフローにおいてロッカ、磁石、及びポンプを動作させるための堅牢な仮想入力９０３Ａ～９０３Ｅ、Ｉのセットを含む。例えば、仮想入力９０３Ａは、ロッカの揺動の角度範囲、速度、及び持続時間に入り、制御するためのプロセスパラメータ入力である。仮想入力９０３Ｃは、ロッカをオンにするように作動させることができ、ロッカがオンであることを示すこともできる。仮想入力９０３Ｂは、磁石を回転させるように作動させることができ、磁石がオンであることを示すこともできる。仮想入力９０３Ｄは、強調表示された対応する流路９０７Ｂ、９０７Ｃを介してポンプでバルブを開閉し、プロセス流体を流すように作動させることができる。他の流体流路９０７Ａ～９０７Ｈもまた、流体流路９０７Ａ～９０７Ｈを通る同じ種類のバルブ作動及び流体流制御を容易にするように示されている。仮想入力９０３Ｅは、強調表示された流体経路９０７Ｂ、９０７Ｃを介して指定された流量及び体積で流体を処理するようにポンプを制御するための、流量及び流体体積を含むプロセスパラメータ入力である。仮想入力９０３Ｉは、ポンプの仮想表示の左にある仮想ペンアイコンである。そのペンアイコン／ボタン９０３Ｉは、バブルセンサと係合するように作動させることができる。オペレータは、ポンプが使用されているときに気泡センサを作動させるかどうかを決定して、乾燥時に気泡センサを停止させる（湿潤から乾燥）か、又は湿潤時に気泡センサを停止させる（乾燥から湿潤）かを選択することができる。気泡センサが作動している場合、気泡センサは、ポンプがいつ停止するかを制御し、したがって、ポンプフィールド９０３Ｅの入力を無効にする。一次選択領域９０５はまた、ロッカ、磁石、及びポンプハードウェアの虚像を提供することができる。他の機器、バイオプロセスコンテナ、及びプロセスパラメータ入力の仮想表示もまた、一次選択領域９０５に含めることができる。グラフィカルユーザインタフェース９０４はまた、プロトコル設定及びワークフロー機器の動作のための追加の仮想入力９０３Ｆ～９０３Ｈを含む二次選択領域９０６を含むことができる。この実施形態では、二次選択領域９０６は、プロトコルが開始される前に一次選択領域９０５で行われた入力を検討するための９０３Ｇ「検討(REVIEW)」入力を含む。二次選択領域９０６はまた、一次選択領域９０５で行われたプロトコル又は入力をキャンセルするための９０３Ｆ「キャンセル」入力を含む。二次選択領域９０６に入力された９０３Ｇ「キャンセル」はまた、キャンセルを確認してプロトコル作成プロセスから出るようにオペレータに促すプロンプトをトリガすることができる。ユーザインタフェース９０１を介して構成された図示のプロトコルステップを複製するための９０３Ｈ「複製(DUPLICATE)」入力を含む他の入力を、二次選択領域９０６に含めることができる。

【0351】

図６１は、細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェース１００１を示す。ユーザインタフェース１００１は、制御機能及びプロトコル入力を容易にするために入力／出力制御１００３Ａ～１００３Ｃ及びプロトコルパラメータ１００８Ａ～１００８Ｂを表示する画面及びディスプレイ１００２並びにグラフィカルユーザインタフェース１００４を含むことができる。ユーザインタフェース１００１は、タッチスクリーン／ディスプレイ１００２又は他の物理的入力を含むことができる。グラフィカルユーザインタフェース１００４は、特定のワークフロープロトコルのための機器、バイオプロセスコンテナ、フローライン及び／又はプロセス入力パラメータを表す１つ以上の仮想入力を示す一次選択領域１００５を含む。この実施形態では、一次選択領域１００５は、プロセスパラメータのセット１００８Ａ～１００８Ｂを含む。例えば、時間プロセスパラメータ１００８Ａは、実行中の分離プロトコルの一次選択領域１００５内の開始時間、ステップタイマ、及び終了時間を示すことができる。機器プロセスパラメータ１００８Ｂは、ロッカ角度範囲、ロッカ速度、磁石オン／オフ状態、並びに一次選択領域１００５内のポンプ流量及び流体量設定点を示すことができる。一次選択領域１００５はまた、使用されているロッカ、磁石、ポンプ及び関連する流路Ｂ～Ｃの虚像に加えて、実行されているプロトコルのステップ（例えば、ステップ０１又はステップ０２）を示すことができる。他の機器、バイオプロセスコンテナ、及びプロセスパラメータ入力の仮想表示もまた、一次選択領域１００５に含めることができる。グラフィカルユーザインタフェース１００４はまた、プロトコル設定及びワークフロー機器の動作のための追加の仮想入力を含む二次選択領域１００６を含むことができる。この実施形態では、二次選択領域１００６は、分離プロトコル又はプロトコルステップを停止するための１００３Ａ「実行を停止(STOP RUN)」入力、現在のステップのプロトコルを一時停止するための１００３Ｂ「実行を一時停止(PAUSE RUN)」入力、及び分離プロトコルをスキップするための１００３Ｃ「ステップをスキップ(SKIP STEP)」入力を含む。１００３Ａ「実行を停止」入力はまた、操作者が運転及びプロトコルを停止及び終了したいことを確認するための操作者へのプロンプトをトリガすることができる。他の入力を二次選択領域１００６に含めることができる。

【0352】

図６２は、細胞処理ワークフロー並びに本明細書に開示される他のワークフローにおける例示的な磁気ビーズ処理装置、システム及び機器を制御するための例示的なユーザインタフェース１１０１を示す。ユーザインタフェース１１０１は、制御機能及びプロトコル入力を容易にするために、入力／出力制御部１１０３Ａ～１１０３Ｃ、プロトコルパラメータ１１０８Ａ～１１０８Ｂ及び流体流路１１０７Ａ～１１０７Ｈを表示する画面及びディスプレイ１１０２並びにグラフィカルユーザインタフェース１１０４を含むことができる。ユーザインタフェース１１０１は、タッチスクリーン／ディスプレイ１１０２又は他の物理的入力を含むことができる。グラフィカルユーザインタフェース１１０４は、特定のワークフロープロトコルのための機器、バイオプロセスコンテナ、フローライン及び／又はプロセス入力パラメータを表す１つ以上の仮想入力１１０８Ａ～１１０８Ｂを示す一次選択領域１１０５を含む。この実施形態では、一次選択領域１１０５は、一組のプロセスパラメータ１１０８Ａ～１１０８Ｂと、プロセス流体が圧送される一組の仮想流路１１０７Ａ～１１０７Ｈとを含む。例えば、プロセスパラメータ１１０８Ａは、ロッカ及び磁石アセンブリの仮想表示、ロッカ角度範囲、揺動の速度及び持続時間、並びに磁石及びロッカがオン／オフであるかどうかを含む。一次選択領域１１０５内の機器プロセスパラメータ１１０８Ｂはまた、ポンプの仮想表示、圧送されるプロセス流体の体積、及び分離プロトコルの流体流量を示す。一次選択領域１１０５はまた、プロセス流体を圧送するために使用されている関連する流体流路１１０７Ａ、Ｃ、及びワークフロー内の機器、容器、及びフローラインにプロセス流体を圧送するために使用することができる他の流体流路１１０７Ａ～１１０７Ｈを示すことができる。他の機器、バイオプロセスコンテナ、及びプロセスパラメータ入力の仮想表示もまた、一次選択領域１１０５に含めることができる。グラフィカルユーザインタフェース１１０４はまた、プロトコル設定及びワークフロー機器の動作のための追加の仮想入力を含む二次選択領域１１０６を含むことができる。この実施形態では、二次選択領域１１０６は、分離プロトコルステップを停止するための１１０３Ａ「ＳＴＯＰ ＲＵＮ」入力、現在のプロトコルステップを一時停止するための１１０３Ｂ「ＰＡＵＳＥ ＲＵＮ」入力、及び分離プロトコルステップをスキップするための１１０３Ｃ「ＳＫＩＰ ＳＴＥＰ」入力を含む。１１０３Ａ「ＳＴＯＰ ＲＵＮ」入力はまた、オペレータが運転及びプロトコルを停止及び終了したいことを確認するためのオペレータへのプロンプトをトリガすることができる。他の入力を二次選択領域１１０６に含めることができる。

【0353】

図５８～６２は、生体材料又は細胞単離プロトコルを設定及び実行するためのユーザインタフェースを示す。同様のユーザインタフェースを使用して、本明細書に開示される生物学的ワークフローに記載されるビーズ除去プロトコルを設定及び実行することができる。本明細書で開示されるユーザインタフェースは、ディスプレイと、タッチ感知面と、１つ以上のプロセッサと、メモリと、メモリに記憶され、１つ以上のプロセッサによって実行されるように構成された１つ以上のプログラムとを備える電子デバイスを含むことができる。１つ以上のプログラムは、ディスプレイ上に、本明細書に開示された１つ以上のグラフィカルユーザインタフェースを表示し、グラフィカルユーザインタフェースの機能を実行するための命令を含む。

【0354】

本明細書では、細胞処理（例えば、図１参照）のための機器及びワークフローが提供される。図３８は、本明細書で提供される例示的なワークフローの概略図である。一実施形態では、図３８及び図３９を参照して以下に説明する生物学的ワークフローは、本明細書で前述し、図１で具体的に特定されたハードウェアを使用して実行することができることが理解される。図３８に記載の概略的に表されたワークフローのステップは、細胞が異なる時点で異なる条件下で、場合によっては異なる種類の機器を使用して処理される場合に実行することができる。したがって、本明細書では、例えば、一連のステーションとして、及び／又は２つ以上の異なる機器を使用して、細胞を処理することができるモジュール式細胞処理ワークフローが提供される。

【0355】

更に、場合によっては、図３８に示すステップの順序を変更することができ、幾つかのステップをワークフロー内の連続的に又は別の場所で繰り返すことができる。例として、場合によっては、幾つかのワークフローは、以下のステップを順番に実行することを含むことができる。（Ａ）ステップ３、ステップ４、ステップ５、ステップ６、及びステップ７；（Ｂ）ステップ３、ステップ５、ステップ６、ステップ７；又は（Ｃ）ステップ３、ステップ４、ステップ５、ステップ６、及びステップ８。更に、細胞が活性化される時間の長さに起因して、ステップ３及びステップ４は重複してもよく、又は同一であってもよい。これは、多くの場合、細胞が活性化されると増殖し始めるためである。更に、細胞は、長期間にわたって活性化刺激と接触したままであり得る。これは、多くの場合、活性化刺激（例えば、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）がステップ５まで細胞と接触したままである場合に当てはまる。

【0356】

更に、図３８に示されている全てのステップのうちの幾つかは、閉鎖システムとして実行されてもよい。閉鎖系とは、単一のプロセス又は複数のプロセス中に細胞が閉鎖容器内に留まることを意味する。例えば、ステップ１～ステップ５において、細胞はバッグ間で移送され得るが、各バッグの内部は滅菌環境であってもよく、細胞は滅菌チューブ及びコネクタを使用してバッグ間で移送され得る。そのような場合、ステップ１からステップ５は閉鎖系と見なされ、更に滅菌閉鎖系と見なされる。場合によっては、ステップ２～ステップ９（又はそのようなステップのサブセット）は、閉じたシステムで実行される。

【0357】

多くの場合、本明細書中に記載されるワークフローは、ＣＡＲ－Ｔ細胞集団の生成に向けられ得る。

【0358】

図３８のワークフロー（ステップ１）における最初のステップは、個体（例えば、患者）からの血液の採取である。この個体は、採血に関連する治療的処置を必要としない場合がある。或いは、この個体は、例えば、処置がステップ９の製剤の投与を伴う症状に罹患している可能性がある。個体から得られた血液は、例えば、血液を個体の身体から取り出し、白血球を収集し、未収集の血液成分を個体に戻す白血球搬出法によって処理することができる。全血からのＰＭＢＣ単離に使用され得る機器は、Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ（商標）５＋自家血液回収システム（Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州ボストン）である。

【0359】

所望の数の白血球が採取されたら、得られた細胞集団を一般に洗浄して（ステップ２）、例えば抗凝固薬を除去する。初期段階では、例えば、サイズ及び密度によって細胞を分離することができる逆流遠心分離溶出システム（例えば、Ｇｉｂｃｏ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｒｏｔｅａ（商標）カウンターフロー遠心分離システム、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、細胞集団をリンパ球について濃縮することができる（ステップ２）。

【0360】

所望の細胞型（ステップ３）（例えば、総Ｔ細胞及びＴ細胞サブセット、ＣＤ３４＋幹細胞、ナチュラルキラー細胞、並びに他の細胞型）の単離は、細胞表面受容体に対する結合親和性を有するリガンドを使用して行われ得る。そのような細胞表面受容体の例としては、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７及びＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）が挙げられる。更に、単離及び活性化が同時に起こり得る。一例として、白血球の混合集団は、Ｔ細胞が他の白血球から分離され、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の組み合わせがＴ細胞活性化をもたらす条件下で、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体に曝露され得る。

【0361】

具体的な例として、Ｔ細胞は、ＣＤ３マーカーの表面上の存在に基づいて単離され得る。幾つかの単離方法は、所望の表面マーカーを有する細胞の陽性単離を使用する。Ｔ細胞単離のための例示的な方法は以下の通りである。混合白血球集団を、ビーズが集団中のＴ細胞と会合するのに十分な時間、ビーズ表面（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄ（商標）ＣＤ３、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１５１Ｄ）に位置する抗ＣＤ３抗体を有する磁気ビーズと共に培養（インキュベート）する（例えば、４℃で２０～３０分）。次いで、ビーズに結合した細胞を保持し、ビーズに結合していない細胞を除去できる条件下で、細胞を磁場と接触させる（例えば、洗浄によって）。これにより、白血球集団の非Ｔ細胞からＴ細胞が分離される。

【0362】

多くの場合、Ｔ細胞が単離されると、これらの細胞は、ＣＤ２８受容体を刺激することができる抗ＣＤ２８抗体と接触し、Ｔ細胞活性化をもたらす。抗ＣＤ２８抗体は、磁気ビーズに結合され得る。更に、上記のように、幾つかの例では、抗ＣＤ３抗体によるＴ細胞の捕捉と、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の組み合わせによるＴ細胞の刺激とが同時に起こり得る。Ｔ細胞の単離及び活性化の両方に使用され得る市販の製品は、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４０２０３Ｄ）と題される。これらのビーズは、ヒトＴ細胞（例えば、ヒトＴ細胞）のエクスビボ単離、活性化及び増殖のために使用されてもよく、個々のビーズ上で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を組み合わせ得る。したがって、他の細胞型からのＴ細胞の分離を可能にすることに加えて、これらのビーズは、Ｔ細胞の活性化及び増殖に必要な一次刺激シグナル及び共刺激シグナルの両方を提供する。

【0363】

抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体に曝露されたＴ細胞の試料を、活性化レベルについて分析することができる。活性化を測定するための１つのタイプのアッセイは、ＣＤ２５（ＩＬ－２受容体のアルファ鎖）発現レベルについてスクリーニングされたＴ細胞に基づく。ＣＤ２５マーカーは幾つかの末梢血リンパ球（例えば、調節性及び静止期メモリーＴ細胞）上に見られるが、ＣＤ２５発現は一般に、顕著なＴ細胞活性化マーカーであると考えられている。したがって、本明細書で提供される方法は、集団中の活性化Ｔ細胞の割合を測定する方法を含む。このパーセンテージは、非活性化Ｔ細胞の数を活性化Ｔ細胞の数と比較することによって計算される。当然のことながら、活性化Ｔ細胞のパーセンテージは、活性化シグナルへの曝露の期間とともに、また、活性化Ｔ細胞が拡大するにつれて変化し得る。

【0364】

磁気ビーズは、任意の数の手段によって生体細胞の試料に添加され得る。多くの場合、ビーズは、装置とビーズバイアルとの相互作用によって生体細胞を含む容器に導入される。しかしながら、ビーズは、他の手段によって容器に導入されてもよい。例えば、バッグポートに接続されたシリンジを介した注入によってビーズをバッグに導入することができる。磁気ビーズがバイアルを使用しない手段によって生体細胞と接触する場合、ビーズバイアルカプラ２０８、並びに装置の他のビーズバイアル機構は存在しなくてもよい。

【0365】

図３８の例示的なワークフローにおけるステップ４は、細胞増殖である。多くの場合、このステップはステップ３（細胞単離及び活性化）と重複する。これは、細胞が長期間（例えば、約１日間～約２０日間、約２日間～約２０日間、約４日間～約２０日間、約４日間～約１５日間、約４日間～約１４日間、約６日間～約１４日間など）活性化シグナルで曝露されることが多いためである。更に、この期間中、活性化された細胞はしばしば拡大し始める。

【0366】

増殖条件は条件を変化させ得るが、活性化Ｔ細胞は、細胞培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ｍｅｄｉａ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ ｐｌｕｓ ２－５％ ＣＴＳ登録商標Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ３７０５００１及び１５７１０－０４９））中、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で培養され得る。更に、サイトカイン及び新鮮な媒体を１～３日毎に添加して、０．５～２×１０^６細胞／ｍｌの細胞濃度を維持することができる。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、１００ｎｇ／ｍｌのラパマイシン（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＨＺ１２３５）及び３００ＩＵのＩＬ－２／ｍｌ（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＨＣ００２７）を含有する媒体中で増殖させ得る。ＣＭＶ刺激Ｔ細胞は、１００ＩＵのＩＬ２／ｍｌで増殖させることができる。Ｔｈ１７細胞は、Ｐａｕｌｏｓら（Ｐａｕｌｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｉ．Ｍｅｄ５５：５５ｒａ７８（２０１０））に記載されているように、抗ＩＬ－４及び抗ＩＦＮ－γ中和抗体（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＣＡ ＵＳからの両方）の存在下で、分極性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３及びＴＧＦ－１３、全て、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣＡ ＵＳＡ製）を含有する媒体中で増殖させ得る。更に、活性化後３日目に１００ＩＵのＩＬ－２／ｍｌを添加することができる。ＩＬ２はまた、例えば単離バッグから排出物への細胞の希釈中に、０日目に添加され得る。

【0367】

細胞の増殖（ステップ４及び７）は、一般に、細胞分裂に適した条件下で行われる。増殖に使用され得る媒体としては、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ細胞増殖ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ３７０５００１）及びＬｙｍｐｈｏＯＮＥ（商標）Ｔ細胞増殖ゼノフリー媒体（タカラバイオ、カタログ番号．ＷＫ５５２Ｓ）が挙げられる。

【0368】

幾つかの例では、磁性支持体を細胞から分離することは必要又は望ましくない場合がある。そのような場合、図３８に示すステップ５は省略されてもよい。

【0369】

一般に、ワークフローのある時点で、細胞から磁性支持体を分離することが望ましいであろう。幾つかの場合において、支持体が細胞に結合するとき、支持体の細胞への結合を破壊することが必要又は望ましいであろう。例えば、細胞及び磁性支持体は、抗体の磁性支持体へのコンジュゲーションによって互いに会合し得る。図３９は、支持体（すなわち、ビーズ）に結合した細胞の概略図を示す。「Ｒ」と標識された細胞表面受容体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ９１、ＣＤ１１４、ＣＤ１１７、ＣＤ１８２など）に結合した抗体を図３９に示す。更に、抗体によって結合される細胞型は、任意の数の細胞型（例えば、幹細胞、白血球一般、顆粒球、単球、総Ｔ細胞、ヘルパーＴヘルパー細胞、制御性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、血小板など）のうちの１つ以上であり得る。

【0370】

細胞からの磁性支持体の会合の破壊は、幾つかの手段によって達成され得る。幾つかの例示的な細胞放出特徴を図３９に示す。１つは、細胞又は支持体との抗体会合の破壊を可能にする切断部位を抗体に含めることである。幾つかの例では、抗体会合の破壊は、ある部分が抗原結合ドメインを含み、別の部分が支持体と会合している異なる部分への抗体の切断に基づくことができる。例示的な切断機構は、抗体切断を含む。抗体切断は、例えば、天然に存在するプロテアーゼ切断部位又は抗体に導入されたプロテアーゼ切断部位によって媒介され得る。使用され得るプロテアーゼとしては、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ、Ｓ２１９Ｖ修飾を有するＴＥＶプロテアーゼ（例えば、ＡｃＴＥＶ（商標）プロテアーゼ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１２５７５０１５）、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ、ＴＶＭＶプロテアーゼ、プラムポックスウイルスプロテアーゼ、並びにカブモザイクウイルスプロテアーゼ、エンテロペプチダーゼ、トロンビン及び第Ｘａ因子が挙げられる。したがって、本明細書中に記載される方法には、細胞及び支持体が、１つ又はそれを超えるプロテアーゼによって媒介される切断によって互いに解離される方法が含まれる。そのような方法（例えば、１つ以上のプロテアーゼ切断部位を含有するように操作された抗体）を行うための組成物も本明細書に含まれる。上記に関連する幾つかの方法は、米国特許出願公開第２０１７／０３１３７７２号明細書に記載されている。

【0371】

細胞からの磁性支持体の会合の破壊が達成され得る別の方法は、競合的放出によるものである。例えば、図３９の「Ｌ」は、互いに非共有結合している２つの成分から構成され得る。１つの具体例は、ビオチン（又はビオチン誘導体）及びストレプトアビジンである。ビオチンとストレプトアビジンは、高い親和性（解離定数（Ｋｄ）４×１０^－１４Ｍ）で互いに非共有結合する。本明細書に記載の方法には、細胞がビオチンとストレプトアビジンとの相互作用を介して支持体と会合しているものが含まれる（又はアビジンなどの類似のタンパク質）。幾つかの特定の方法では、ストレプトアビジンを支持体に共有結合させ、ビオチン（又はビオチン誘導体）を抗体に共有結合させる。幾つかの例では、ビオチンは、４×１０^－１４Ｍ（例えば、約４×１０^－１３Ｍ～約４×１０^－７Ｍ、約４×１０^－１２Ｍ～約４×１０^－７Ｍ、約４×１０^－１０Ｍ～約４×１０^－７Ｍ、約４×１０^－１３Ｍ～約４×１０^－８Ｍ、約４×１０^－１３Ｍ～約４×１０^－９Ｍなど）より低いＫｄでストレプトアビジンと会合するビオチン誘導体である。例示的なビオチン誘導体には、Ｎ－エチルビオチン及びデスチオビオチンが含まれる。本明細書に記載の方法で使用され得る幾つかのビオチン誘導体は、米国特許第９，５６７，３４６号に記載されている。

【0372】

細胞及び支持体の解離に使用され得る１つのプロセスは、抗ビオチン抗体を利用する。例えば、細胞表面タンパク質（例えば、受容体）に対する結合親和性を有する第１ビオチン化抗体が使用される場合、２つの抗体連結系を使用することができる。第２抗ビオチン抗体は、支持体にコンジュゲートされ得る。したがって、細胞は、部分的には、ビーズに結合した第２抗体（抗ビオチン抗体）と第１抗体（ビオチン化抗細胞表面タンパク質抗体）との結合を介して、支持体と会合する。支持体と細胞との間の会合の破壊は、第１抗体のビオチンへの第２抗体の結合の破壊によって媒介され得る。これは、細胞／ビーズ複合体を放出剤（例えば、ビオチン又はビオチン誘導体）と接触させることによって達成され得る。上記に関連する組成物及び方法は、米国特許第１０，１９６，６３１号に含まれている。

【0373】

ビーズが抗体を介して細胞の表面に結合すると、ビーズ上の抗体に結合した細胞表面マーカーの下方制御の結果として、細胞が増殖するにつれてビーズが細胞によって放出されることが多いことが分かった。したがって、多くの場合、細胞は、活性解離ステップの実施なしにビーズから分離され得る。多くのそのような例では、ビーズからの細胞の分離は、細胞（例えば、Ｔ細胞）を約４～約２１日間（例えば、約４～約２１、約５～約２１、約６～約２１、約５～約１４、約５～約１２、約５～約１０、約６～約１４、約６～約１２、約６～約１０日など）増殖させた後に行われる。また、多くのそのような例において、ビーズからの細胞の分離は、７０％を超える（例えば、約７０％～約９９％、約７０％～約９８％、約７０％～約９５％、約７０％～約９０％、約７０％～約８５％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約８５％～約９５％、約８５％～約９０％、約９０％～約９９％、約９０％～約９７％など）細胞がビーズから解離した後に細胞（例えば、Ｔ細胞）の後に起こり得る。勿論、ユーザは、任意の時点で細胞からビーズを分離することができる。しかしながら、多くの場合、初期時点での細胞からのビーズの分離は、ビーズが後の時点で分離される場合よりも低い細胞収率で行われることになる。これは、より早い時点でより多くのビーズが磁石によって捕捉されることが多いためである。したがって、多くの場合、ビーズからの細胞の分離は、細胞収量が８０％を超える（例えば、約８０％～約９９．５％、約８５％～約９９．５％、約８８％～約９９．５％、約９０％～約９９．５％、約９５％～約９９．５％、約９８％～約９９．５％、約８０％～約９８％、約８５％～約９８％、約９０％～約９８％など）時点で起こり得る。細胞収量は、そのような場合、存在する細胞の総数のパーセンテージがビーズから分離されることによって測定される。

【0374】

磁性支持体に結合又は会合していない細胞は、細胞が磁性材料と会合していない条件下で支持体を捕捉するために磁場を使用してこれらの支持体から分離され得る。以下の実施例は、磁気ビーズを使用した実験及びデータを示している。更に、本明細書に記載のものなどの機器を使用して、ビーズ／細胞混合物中に存在する磁気ビーズの９９％超を除去することが可能であることが示されている。したがって、本明細書では、ビーズ／細胞混合物中に存在する細胞から磁気ビーズを分離する方法であって、最初に存在する９５％を超える（例えば、約９５％～約９９．９９９９％、約９７％～約９９．９９９９％、約９８％～約９９．９９９９％、約９９％～約９９．９９９９％、約９８％～約９９．９５％、約９８％～約９９．９０％など）ビーズが細胞から分離される方法を提供する。

【0375】

以下の実施例に示すように、ビーズ／細胞混合物の脱ビーズは、本明細書で前述したように、例えば図３４に示す種類のバッグと共にビーズ処理システム１８を使用して実施することができる。そのようなバッグは、通過する流体がデバイス磁石に「短絡」しないようにする。したがって、流体は、バッグを出る前に磁石のかなりの長さにわたって通過しなければならない。

【0376】

バッグを通る流量もまた、脱ビーズ効率に影響を及ぼすパラメータである。より遅い流速は、より効率的な脱ビーズ化をもたらし、したがって、脱ビーズ化後に存在するビーズの数に関してより高い細胞純度をもたらすことが見出された。

【0377】

流量は、約１０ｍｌ／分～４００ｍｌ／分（例えば、約１０ｍｌ／分～４００ｍｌ／分、約２０ｍｌ／分～４００ｍｌ／分、約３０ｍｌ／分～４００ｍｌ／分、約４０ｍｌ／分～４００ｍｌ／分、約４０ｍｌ／分～３００ｍｌ／分、約４０ｍｌ／分～２００ｍｌ／分、約４０ｍｌ／分～１００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～３００ｍｌ／分、約５０ｍｌ／分～２００ｍｌ／分、約４５ｍｌ／分～１５０ｍｌ／分など）で変動し得る。多くの場合、流量は、ビーズの少なくとも９９％（約９９％～約９９．９９９９％、約９９％～約９９．９９％、約９９．５％～約９９．９９９９％、約９９．８％～約９９．９９９９％、約９９％～約１００％など）の除去を可能にするように選択される。したがって、本明細書において、ビーズ／細胞混合物中に存在するビーズの少なくとも９９％を分離するための方法が提供される。多くの場合、そのような分離方法により、ビーズ対細胞比を少なくとも７のファクタ（例えば、約２～約７、約３～約７、約４～約７、約２～約７、約５～約７、約２～約６、約３～約６、約４～約６、約５～約６、約２～約５、約３～約５、約３～約５のファクタなど）減少させることができる。例として、３：１のビーズ対細胞比から０．３：１のビーズ対細胞比に移行することは、１ファクタの減少となり得る。更に、３：１のビーズ対細胞比から０．０３：１のビーズ対細胞比に移行することは、２ファクタの減少となり得る。

【0378】

実施例３は、本明細書に記載のビーズ処理システム及び方法を使用して生成されたデータを示す。これらのデータは、９９．９９％を超えるビーズがデビーディングプロセスで除去されたことを示している。更に、元のビーズ４５万個当たり１個のビーズのみが、ビーズ除去細胞と共局在化して存在すると推定された。実施例３のものと同様であるが流速が２００ｍｌ／分である条件を使用した３回の反復からの結果は、０、１及び２個の総ビーズであり、したがって、３×１０^６個の溶解細胞あたり０個（０個のビーズ）、１３個（１個のビーズ）、２７個（２個のビーズ）の共局在化ビーズであった。したがって、幾つかの例では、細胞は、最初に存在する細胞の１００％程度から分離され得る。

【0379】

図３８に示されるステップ６は、細胞工学である。場合によっては、このステップは実行されない。更に、このステップが実施される場合、操作される細胞型及び細胞操作の目的によって大きく異なり得る。

【0380】

Ｔ細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作され得る。ＣＡＲは、標的細胞上の細胞表面タンパク質（例えば、ヒト白血球抗原抗原抗原）に結合するように設計された受容体である。更に、Ｔ細胞は、それらの表面上にＣＡＲを発現するように操作されてもよく、それらが特異的抗原（例えば、腫瘍抗原）を認識することを可能にする。次いで、これらのＣＡＲ Ｔ細胞を本発明の方法によって増殖させ、患者に注入することができる。典型的には、これは、Ｔ細胞を洗浄し（図３８のステップ８）、患者投与のために製剤化した（図３８のステップ９）後に行われる。

【0381】

幾つかの例では、細胞（例えば、Ｔ細胞）を、ＣＡＲを発現するように操作することができ、ここで、ＣＡＲ Ｔ細胞は抗腫瘍特性を示す。ＣＡＲは、Ｔ細胞抗原受容体複合体ζ鎖（例えば、ＣＤ３ゼータ）の細胞内シグナル伝達ドメインに融合した抗原結合ドメインを有する細胞外ドメインを含むように設計することができる。そのようなＣＡＲは、Ｔ細胞で発現された場合、抗原結合特異性に基づいて抗原認識を再誘導することができる。

【0382】

ＣＡＲの抗原結合部分は、抗原結合部分とも呼ばれる標的特異的結合要素を含み得る。使用される部分の選択は、標的細胞の表面を規定するリガンドの種類及び数に依存することが多い。例えば、抗原結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。したがって、ＣＡＲ中の抗原部分ドメインは、ウイルス感染、細菌感染及び寄生虫感染、自己免疫疾患及び癌細胞に関連し得る。

【0383】

ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチド又はその一部をコードする核酸をプロモータに作動可能に連結し、構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成される。ベクターは、真核生物の複製及び組込みに適し得る。典型的なクローニングベクターは、転写ターミネーター及び翻訳ターミネーター、開始配列、並びに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモータを含む。

【0384】

細胞を操作するために使用される幾つかの方法は、複製欠損レンチウイルスベクターを使用して核酸を細胞に送達する。例えば、ＣＡＲをコードする核酸分子は、多くの場合、そのようなベクターを使用して細胞に導入される。特に、ＶＳＶ－Ｇシュードタイプを有するレンチウイルスベクターは、自動化された製造方法の下で効率的な形質導入を可能にする。更に、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、ネコ内因性レトロウイルス（ＦＥＲＶ）、ヒヒ内因性レトロウイルス（ＢａＥＶ）、及び様々なガンマ又はアルファレトロウイルスベクターなどの幾つかのウイルス系を使用して細胞工学を行うことができる。

【0385】

細胞工学はまた、エレクトロポレーションのトランスフェクションによる細胞への核酸分子の導入によって実施され得る。そのような方法において使用され得る１つの機器は、Ｎｅｏｎ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＭＰＫ１００２５）トランスフェクションシステムであり、これは、トランスフェクションが困難な細胞で最大９０％のトランスフェクションを可能にすることが見出されており、反応あたり６×１０^６個の細胞をトランスフェクションするために使用され得る。

【0386】

細胞への核酸分子は、エピソームのままであってもよく、又は細胞核酸分子（例えば、染色体ＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡなど）に組み込まれてもよい。多くの場合、核酸分子の組込みは、非相同末端結合又は相同組換えによって媒介される。更に、多くの場合、核酸分子が「セーフハーバー」などの特定の遺伝子座で細胞核酸に組み込まれることが望ましい。そのような場合、核酸中に一本鎖又は二本鎖の部位切断をもたらすことができる「核酸切断実体」を使用することができる。幾つかの核酸切断実体が当技術分野で公知である。例えば、幾つかの態様において、核酸切断実体は、１つ以上のジンクフィンガータンパク質、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、ＣＲＩＳＰＲ複合体（例えば、Ｃａｓ９又はＣＰＦ１）、ホーミングエンドヌクレアーゼもしくはメガヌクレアーゼ、アルゴンオート核酸複合体又はマクロヌクレアーゼを含む。

【0387】

核酸分子の支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）に基づく精製は、液相及び固定相に基づくことができ、核酸分子を互いに及び他の種類の分子から選択的に分離することを可能にする。

【0388】

核酸分子を精製するための組成物及び方法が本明細書で提供される。多くの場合、そのような方法は、核酸分子と支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）との会合を伴いえる。次いで、これらの支持体は、支持体に関連する材料を支持体に関連しない材料から分離することを可能にする磁場によって定位置に保持され得る。

【0389】

核酸分子（並びに他の種類の分子、及び時としてそのような分子を含む細胞）は、例えば、共有結合、非共有結合（例えば、イオン相互作用）、沈殿、又はそのようなプロセスの組み合わせによって支持体と会合し得る。核酸精製のための例示的な方法は、（１）シリカ、（２）ガラス、（３）珪藻土、（４）陰イオン交換材料、（５）細胞ロース及び（６）親和性会合材料（例えば、オリゴｄＴ、ビオチン－ストレプトアビジンなど）で構成されるか又はそれを含有する支持体の使用を含む。

【0390】

様々な材料及び基との核酸分子会合機構は様々である。例えば、シリカは、負に帯電した核酸分子の基と負に帯電したシリカの基との間の引力によって核酸分子と会合すると考えられている。作用機序は完全には知られていないが、負に帯電した基及び／又はシリカ表面とＤＮＡとの間に塩架橋が形成されると考えられている。

【0391】

シリカと同様に、陰イオン交換材料は、負に帯電した基（例えば、カルボン酸基）を介して負に帯電した核酸分子と会合する。更に、支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）と会合して、核酸分子（並びにタンパク質などの他の種類の分子）を沈殿させて、支持体との会合を増強することができる。沈殿は、支持体を例えば高塩アルコール溶液（例えば、７０％エタノール）と接触させ、続いてアルコール溶液で洗浄して塩を除去することによって媒介され得る。核酸分子沈殿の１つの利点は、可溶化（例えば、エタノールを含まない水溶液による可溶化）による核酸放出の前に、支持体に結合した核酸分子から溶質（例えば、塩）を除去できることである。幾つかの例では、これは、塩を除去する必要がない低塩可溶性核酸分子溶液をもたらす（例えば、透析によって）。そのようなプロセスの例は、実施例４及び５において以下に示される。

【0392】

核酸分子が支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）と会合し、他の材料から分離されると、一般に、会合した核酸分子を支持体から分離することが望ましい。これは、通常、支持体からの核酸分子の放出、それに続く核酸分子からの支持体の物理的分離を含む。放出は、ｐＨ、イオン強度、及び／又は重量オスモル濃度の変化を含む任意の数の方法で媒介され得る。放出はまた、金属イオンキレート化（例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡなどによって媒介される。）及び競合的リガンド結合の使用によって媒介され得る。

【0393】

試料中の全核酸の精製が望まれる場合、核酸分子は、多くの場合、核酸タイプ又は配列特異的ではない機構によって支持体と会合する。試料中の特定の種類の核酸の精製が所望される場合、核酸分子は、所望の核酸分子の１つ以上の特定の特徴との関連をもたらす機構によって支持体と会合することが多い。例として、ｍＲＮＡは、３’ポリＡ領域の存在によって、他の核酸分子（例えば、ゲノムＤＮＡ分子、プラスミドＤＮＡ分子、リボソームＲＮＡ分子、ｔＲＮＡ分子など）を含む他の材料から分離され得る。したがって、ｍＲＮＡは、ポリＡ核酸領域に結合することができる支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）と接触させ、続いて支持体及び結合したｍＲＮＡを洗浄し、次いで支持体からｍＲＮＡを放出し、次いでｍＲＮＡから支持体を分離することによって精製され得る。そのようなプロセスで使用され得る多くの支持体が市販されている（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ｍＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、カタログ番号６１００６及びＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｍａｇｎｅｔｉｃ ｍＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、カタログ番号Ｓ１５５０Ｓ）。

【0394】

ｍＲＮＡの産生及び精製のための方法を実施例４及び５に示す。最初に、これらの例において、ビオチン化ＤＮＡ分子は、ビオチン化プライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって産生される。得られたビオチン化ＤＮＡ分子は、Ｔ７プロモータに作動可能に連結され、表面結合ストレプトアビジンを有する磁気ビーズに結合したｍＲＮＡ分子をコードする。磁気ビーズに結合すると、ＤＮＡ分子／ビーズ複合体はＰＣＲ反応混合物成分から分離される。次いで、ビーズに結合したＤＮＡをインビトロ転写（ＩＶＴ）反応混合物によって転写する。得られたｍＲＮＡは磁気ビーズと会合せず、したがって、ビーズが磁場によって所定の位置に保持されることによってビーズから分離され得る。次いで、ｍＲＮＡ分子は、カルボン酸基を含む磁気ビーズとの会合によってＩＶＴ反応混合物成分から分離される。この場合、ＩＶＴ反応混合物成分を洗浄によって除去しながら、ｍＲＮＡ分子を所定の位置に保持する。したがって、第１分離はネガティブ選択であり、第２分離はポジティブ選択である。

【0395】

更に、多くの場合、ＩＶＴ転写鋳型は何度も再利用され得る。例えば、支持体に結合したＴ７プロモータ駆動ＩＶＴ転写鋳型は、新鮮なＩＶＴ反応混合物成分を再添加することによって複数回（例えば、約２～約１５回、約３～約１５回、約４～約１５回、約５～約１５回、約２～約１０回、約２～約８回など）再使用され得ることが見出された。

【0396】

本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムは、上記並びに実施例４及び５に記載のプロセス、並びに本明細書に記載の他のプロセスなどのプロセスを含むワークフローの全部又は一部に使用することができる。ここでも、例示のために実施例４及び５に記載されたプロセスを使用して、単一の溶液容器（例えば、バッグ）をｍＲＮＡの初期精製のために使用することができた。これは、精製のための転写鋳型を有する磁性支持体（ストレプトアビジンビーズ）が最初に適所に保持され、次いで転写鋳型が転写産物から分離されるときに再び適所に保持されるからである（すなわち、ｍＲＮＡ分子）。ｍＲＮＡの更なる精製が望まれる場合、第２容器（例えば、バッグ）がしばしば使用される。これは、磁性支持体から放出され、容器から取り出されたｍＲＮＡ分子が、他の磁性支持体（カルボン酸ビーズ）と会合することによって更に精製されてもよく、多くの場合、これらの他の磁性支持体は、ｍＲＮＡ分子の洗浄及び放出後に適所に保持され得るからである。

【0397】

多くの場合、試薬の添加及び除去は、本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用して再度実行することができる。更に、固体支持体からの放出の増強及び／又は精製後の分子（例えば、沈殿した核酸分子）の可溶化を含む様々な目的のために反応温度を変更するために、本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムに加熱パッド又は要素を追加することもできる。加熱はまた、他の目的にも有用であり得る。例えば、本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムがインビトロ転写に使用される場合、一般に、反応混合物を３７℃又は他の適切な温度に加熱することが有利であろう。更に、より高い温度（例えば、６５℃）を使用して、固体支持体（例えば、カルボン酸基を有する磁気ビーズからのｍＲＮＡ）から核酸分子を放出することができる。

【0398】

これらの線に沿って、本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムは、容器（例えば、バッグ）の温度を上昇又は低下させるための加熱及び／又は冷却要素を収容することができる。これらの加熱及び／又は冷却要素は、例えば、反応を加速し、反応を減速し、材料を可溶化し、又は材料を沈殿させるために使用することができる。

【0399】

更に、インライン又はリザーバ加熱及び／又は冷却は、本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムと共に、又はその一部として使用することができる。加熱及び冷却要素は、容器への導入前又は材料が容器から出た後のいずれかで材料の加熱又は冷却を可能にする。説明のために図１１に示す概略図を使用すると、バッグ２１６Ａは加熱要素と接触するように収容することができ、バッグ２１６Ｂは冷却要素と接触するように収容することができ、バッグ２１６Ｃは室温に維持することができる。更に、混合バッグ２１０は、加熱又は冷却要素と接触するものを含んでもよい。更に、収集バッグ２１２はまた、加熱又は冷却要素と接触するものを含んでもよい。

【0400】

幾つかの例では、精製されることが求められる生物学的材料はタンパク質であり得る。そのような精製には、例えば、共有結合、非共有結合（例えば、イオン相互作用）、沈殿、又はそのようなプロセスの組み合わせを含む任意の数の方法を使用することができる。幾つかの例では、結合パートナー親和性を使用することができ、結合パートナー（リガンド）は、精製しようとするタンパク質によって変化する。

【0401】

本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用してタンパク質を精製する場合、一方の結合パートナーは固体支持体（例えば、磁気ビーズ）と会合することが多く、他方の結合パートナーは精製されるタンパク質と会合する。

【0402】

本明細書に記載の方法によって精製され得るタンパク質は、大きく異なり得る。本明細書に記載の方法によって精製されたタンパク質はまた、タンパク質の天然に存在する領域又は外因的に付加されたタグのいずれかにタンパク質に結合する親和性試薬に結合され得る。抗体へのプロテインＡ結合などの例に加えて、そのような方法には、精製されるタンパク質に対する特異性を有する抗体を固体支持体に連結する方法が含まれる。例えば、タンパク質が抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＥなど）又は抗体の混合物（例えば、血清中に存在するＩｇＧ抗体など）である場合、リガンドは、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、又はこれらのタンパク質の１つ以上の１つもしくは複数の機能的変異体であり得る。

【0403】

したがって、タンパク質精製方法はまた、外因的に付加された親和性タグとの会合に基づいてもよい。これは、アフィニティタグが天然に存在するタンパク質中に通常存在しないことを意味する。組成物中に存在し、本明細書に記載の方法で使用され得る例示的なタグ及び結合パートナーとしては、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）／アミロース、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）／グルタチオンタグ、ポリヒスチジン（Ｈｉｓ）／金属イオン（例えば、銅及びコバルト）、ストレプトアビジン／ビオチン（例えば、Ｎ－エチル－ビオチン）、及び抗原抗体反応（エピトープ）タグ（例えば、ｃ－Ｍｙｃタグ／抗ｃ－Ｍｙｃ抗体、ＦＬＡＧ／抗ＦＬＡＧ抗体、及びヘマグルチニン（ＨＡ）タグ／抗ＨＡ抗体が挙げられる。

【0404】

タンパク質精製ワークフローにおける方法、並びに他のワークフローは、広く変化し得るが、場合によっては、磁性粒子（例えば、磁気ビーズ）などの固体支持体を磁場によって所定の位置に保持し、次いでタンパク質結合パートナーと接触させることができる。他の例では、磁性粒子（例えば、磁気ビーズ）などの支持体をタンパク質結合パートナーと接触させ、次いで磁場によって定位置に保持することができる。そのような両方の場合において、支持体は、所定の位置に保持され、洗浄され得る。

【0405】

例えば、タンパク質が他の材料（例えば、細胞片）から分離されたプロセスの後に、支持体からタンパク質を放出することが望ましい場合がある。タンパク質が支持体から放出されるプロセスは、タンパク質及び／又はタンパク質と支持体との間の会合の性質によって決定される。

【0406】

支持体からのタンパク質放出は、タンパク質内又はタンパク質と外因的に付加されたタグとの間のプロテアーゼ切断の使用によって媒介され得る。使用され得る例示的なプロテアーゼとしては、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ、ＴＶＭＶプロテアーゼ、プラムポックスウイルスプロテアーゼ、カブモザイクウイルスプロテアーゼ、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ、トロンビン、第Ｘａ因子、及びエンテロペプチダーゼが挙げられる。

【0407】

支持体からのタンパク質の精製及び放出の両方を可能にするタンパク質精製方法の１つのタイプは、ビオチン及びビオチン誘導体（例えば、ビオチン、デスチオビオチン、Ｎ－エチル－ビオチンなど）を併用し、ビオチン結合タンパク質を使用する。

【0408】

タンパク質は、化学的及び酵素的方法を含む幾つかの方法によってビオチン化され得る。化学的タンパク質のビオチン化は、アミン、カルボン酸及びスルフヒドリル基の非特異的ビオチン化をもたらすことが多い。酵素的タンパク質ビオチン化は、タンパク質内の特定の基のビオチン化をもたらすように設計され得る。タンパク質ビオチン化に使用され得る酵素の一例は、大腸菌ビオチンホロ酵素シンテターゼ、ビオチンリガーゼ（ＢｉｒＡ）である。この酵素は、アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼビオチンカルボキシルキャリアタンパク質（ＢＣＣＰ）サブユニットの特定のリジンのアミノ基へのビオチンの転移を触媒する。

【0409】

幾つかの例において、リガンド結合活性を有する抗体又は他のタンパク質は、低親和性ビオチン誘導体（例えば、デスチオビオチン、Ｎ－エチル－ビオチンなど）／ビオチン結合タンパク質（例えば、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンなど）の会合によって支持体と会合する。ビオチン結合タンパク質からの低親和性ビオチン誘導体の放出は、高親和性ビオチン（例えば、ｄ－ビオチン）との競合によって媒介される。

【0410】

タンパク質精製並びに細胞、ウイルス、ウイルス様粒子及び他の生物学的分子のために使用され得る細胞捕捉及び放出方法は、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｎ－エチルビオチン（ＮＥＢ）抗ＣＤ４コンジュゲート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７１１３７６２１００）及びＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｎ－エチルビオチン（ＮＥＢ）抗ＣＤ８コンジュゲート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７１１３７７２１００）を使用する方法である。この場合、ビオチン化抗ＣＤ４抗体又は抗ＣＤ８抗体は、ビオチン／ストレプトアビジン会合を介して磁気ビーズに結合される。要約すると、この製品領域に記載された方法が以下に続く。最初に、ＮＥＢでビオチン化された抗ＣＤ４抗体又は抗ＣＤ８抗体をストレプトアビジン被覆磁気ビーズと接触させる。次いで、ＮＥＢ／ストレプトアビジン会合を介したＴ細胞の結合を可能にする条件下で、ビーズをＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞と接触させる。次いで、短時間のインキュベーション後にビーズを洗浄する。多くの場合、ビーズは洗浄中に磁場によって定位置に保持される。洗浄後、ビーズをｄ－ビオチンを含む放出試薬と接触させる。次いで、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞を含む上清を除去する。多くの場合、ビーズは洗浄中に磁場によって定位置に保持される。結果は、ビーズが殆ど又は全く存在しないＣＤ４＋Ｔ又はＣＤ８＋Ｔ細胞の精製集団である。

【0411】

上記のような方法は、多くの場合、閉鎖系で実行され、自動化され、閉鎖系で実行される。自動化に関して、全ての反応ステップは、試薬の添加及び除去のために接続されたチューブを有する１つ以上の容器（例えば、バッグ）で実行することができる。例として、本明細書に記載のものなどのビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用して、ビーズの添加及び放出試薬とのインキュベーション後にビーズを定位置に保持することができる。

【0412】

細胞／ウイルス表面ディスプレイ法も本明細書で提供される。酵母（例えば、サッカロミセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））表面ディスプレイを例として使用すると、目的のタンパク質又はその一部をコードする核酸は、目的のタンパク質又はその一部が酵母細胞の外部に存在する条件下で、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞表面タンパク質との融合物として発現され得る。この目的のために使用され得る１つの酵母遺伝子は、Ａ－アグルチニン結合サブユニット（Ａｇａ２ｐ）細胞表面タンパク質をコードする。結果として、発現後、目的のタンパク質又はその一部が、細胞表面融合タンパク質の成分として酵母細胞の表面に位置する。次いで、これらの細胞を、結合パートナーが結合している支持体と接触させ、その後、結合していない酵母細胞を洗浄によって除去する。次いで、関心のある潜在的なタンパク質をコードする核酸を単離し、クローニング及び／又は配列決定することができる。多くの場合、目的のタンパク質は、支持体に結合した抗原に対する特異性を有する抗体のライブラリーから単離された抗体である。

【0413】

同様のファージディスプレイ法を、本明細書中に提供されるビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用して行うこともできる。

【0414】

本明細書で提供されるビーズ処理アセンブリ及びシステムはまた、ウイルス及びウイルス様粒子を精製するために使用され得る。本明細書に記載の方法を使用して精製されたウイルス及びウイルス様粒子は、エンベロープを持たないウイルス及びウイルス様粒子にエンベロープされ得る。

【0415】

ウイルス及びウイルス様粒子は、支持体（例えば、磁気ビーズ）との会合によって単離され得る。ウイルス及びウイルス様粒子が支持体と会合する様式は、個々のウイルス及びウイルス様粒子の構造によって異なり得る。例として、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はエンベロープを持たず、ＡＡＶカプシドタンパク質に対する結合親和性を有する抗体が開発されている。更に、ＡＡＶキャプシド変異（血清型）が知られており、異なる細胞及び組織特異性を有する異なるＡＡＶ血清型をもたらす。

【0416】

１つの市販のＡＡＶキャプシド結合抗体は、ＡＡＶＸ抗体（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｂｉｏｔｉｎ Ａｎｔｉ－ＡＡＶＸ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号７１０３５２２５００参照）と呼ばれるＶＨＨ抗体である。ＡＡＶＸ抗体は、複数のキャプシド血清型に対して結合親和性を有する単一の抗体である。ＡＡＶＸ抗体、並びにＡＡＶキャプシドタンパク質に対する特異性を有する他の抗体を使用して、ＡＡＶウイルス様粒子を精製することができる。勿論、他のＡＡＶ抗体も使用することができ、その多くは特異的ＡＡＶキャプシド（例えば、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｂｉｏｔｉｎ Ａｎｔｉ－ＡＡＶ８ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、カタログ番号７１０３３８２５００；ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｂｉｏｔｉｎ Ａｎｔｉ－ＡＡＶ９ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、カタログ番号７１０３３３２５００；等）に対してより指向する活性を有する。多くのそのような方法では、ＡＡＶウイルス様粒子を含有する組成物は、ＡＡＶ粒子の支持体への結合を可能にするのに十分な期間にわたって支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）に結合する抗ＡＡＶキャプシド抗体を含み得る。多くの場合、支持体は、固体支持体を未結合材料から分離するために洗浄され、その後、ＡＡＶ粒子が固体支持体から放出される。ＡＡＶ粒子放出のために使用され得る一試薬は、５０ｍＭクエン酸、ｐＨ３．０である。次いで、ＡＡＶ粒子を含有する得られた溶液を、例えば１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ９．０を使用して中和することができる。

【0417】

幾つかのＡＡＶ血清型（例えば、ＡＡＶ２及びＡＡＶ６）の精製のための支持体はまた、ヘパリン（Ａｕｒｉｃｃｈｉｏら、「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｎｄ ｐｕｒｅ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２ ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｅｐ ｇｒａｖｉｔｙ－ｆｌｏｗ ｃｏｌｕｍｎ」、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１２：７１－７６（２００１））を含み得る。したがって、ヘパリンを含む支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）を、本明細書に記載の方法で使用することができる。

【0418】

エンベロープウイルス及びウイルス様粒子はまた、本明細書で提供される組成物、方法及びデバイスを使用して精製され得る。エンベロープウイルス及びウイルス様粒子、並びに細胞及びエキソソームは、例えば親和性剤の使用によって精製され得る。そのような方法の一部として、エンベロープウイルス及びウイルス様粒子は、精製しようとするウイルス及びウイルス様粒子のエンベロープに存在するタンパク質とリガンドとの会合に基づいて精製されることが多い。そのような方法の一例は、Ｍｅｋｋａｏｕｉらの“Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｃｏｄｅｄ Ｂｉｏｔｉｎ Ｍｉｍｉｃ ｉｎ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ”、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．，１１：１５５－１６５（２０１８）に記載される。この方法では、パッケージング細胞を、ｃＴａｇ８と呼ばれるＣＤ８ａアミノ酸配列に融合したビオチン模倣ペプチドを発現するように遺伝子操作した。出芽によって生成されたレンチウイルス粒子は、ｃＴａｇ８を含むエンベロープを獲得する。次いで、エンベロープされたレンチウイルス粒子は、ビオチン結合パートナー（例えばストレプトアビジン）を含む支持体との会合によって得ることができる。そのような方法の１つの利点は、使用されるビオチン結合パートナー（例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ニトロ化アビジン、ニトロ化ストレプトアビジン）からの親和性がビオチン又はビオチン誘導体（例えば、デスチオビオチン、Ｎ－エチル－ビオチン、抗ビオチン抗体など。）よりも低いビオチン模倣ペプチドを使用できることである。ニトロ化アビジン及びストレプトアビジンは、それぞれの未修飾タンパク質（Ｍｏｒａｇら、「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｎｉｔｒｏ－ａｖｉｄｉｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｏ－ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ａｓ ｒｅｕｓａｂｌｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ａｖｉｄｉｎ－ｂｉｏｔｉｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、Ａｎａｌ。Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４３：２５７－２６３（１９９６））よりも穏やかな条件下でリガンド放出を可能にする修飾タンパク質（例えば、ニトロ基がチロシンに付加されている）である。したがって、ビオチン及び／又はビオチン誘導体を使用して、競合的結合によってレンチウイルス粒子を放出することができる。勿論、そのようなタグはまた、それらが結合している分子を精製するために使用され得る（例えば、タンパク質）。

【0419】

ウイルス、ウイルス様粒子及び小胞（例えば、エキソソーム）の精製のための機器、組成物、方法及びワークフローが本明細書で提供される。多くの場合、そのような方法は、ウイルス及び／又はウイルス様粒子が支持体と会合することを可能にする条件下で、ウイルス、ウイルス様粒子及び小胞（例えば、エキソソーム）が会合する支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）と組成物（例えば、細胞培養物、細胞培養上清、馴化細胞媒体、細胞溶解物など）を接触させ、続いて支持体を洗浄し、次いでウイルス及び／又はウイルス様粒子の支持体からの解離を誘導することを含む。

【0420】

ウイルス、ウイルス様粒子及び／又は小胞（例えば、エキソソーム）は、イオン性相互作用及び抗体／抗原相互作用などのリガンド／結合パートナー相互作用を含む任意の数の方法で媒介され得る。

【0421】

上記のように、支持体に関連するウイルス、ウイルス様粒子及び／又は小胞（例えば、エキソソーム）の放出は、幾つかの方法で媒介され得る。これらには、ｐＨ、イオン強度、イオン電荷、温度（例えば、温度を上昇させること、）及び溶液極性を変えることによって解離を誘導することが含まれる。

【0422】

多くの場合、支持体は、洗浄中及びウイルス、ウイルス様粒子及び／又は小胞（例えば、エキソソーム）の支持体からの解離後に磁場によって定位置に保持される。

【0423】

細胞外小胞（例えば、エキソソーム、微小胞、アポトーシス小体など）及びリポソームは、エンベロープウイルス及びウイルス様粒子について本明細書に記載される方法と同様の方法を用いて精製され得る。

【0424】

細胞外小胞は、殆ど全てのタイプの細胞から放出される複製欠損脂質二重層粒子である。細胞外小胞の大部分は２００ｎｍ未満であるが、細胞外小胞のサイズは約２０から１０ミクロン以上の大きさの範囲である。

【0425】

エキソソームは細胞外小胞の一種であり、典型的には３０ｎｍ～１５０ｎｍである。エキソソームは、多数の哺乳動物細胞による多小胞体と細胞膜との融合時に放出されると考えられている。多種多様な分子が細胞外小胞及びエキソソームなどの細胞外小胞に関連することが見出されており、細胞間コミュニケーション及び標的細胞シグナル伝達経路の活性化などの目的のために核酸、タンパク質及び脂質を輸送すると考えられている。

【0426】

癌において、エキソソームなどの細胞外小胞は、免疫応答の調節及び血管新生の促進などの過程に関与すると考えられている。患者試料（例えば、血液）に由来するエキソソームなどの細胞外小胞は、がんの非侵襲的な早期検出及び診断に使用することができる。エキソソームなどの更なる細胞外小胞は、例えば癌治療のための天然薬物送達ビヒクルとして使用され得る。

【0427】

エキソソームなどの細胞外小胞は、支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）との会合（例えば、非親和性又は親和性会合）によって精製され得る。非アフィニティーエキソソーム精製方法の一例は、イオン交換基の使用によるものである。核酸分子精製に使用されるものと同様の陰イオン交換基を細胞外小胞（例えば、エキソソーム）精製に使用することができる。

【0428】

Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｉｎｔａｃｔ Ｖｉｒｕｓ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２用に最適化された）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１０７００Ｄ）市販品を使用してエキソソームを精製できることが分かっている。この製品中のＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）は、負に帯電した小胞及び分子に結合する１μｍ陰イオン交換磁気ビーズである。この実施例によって示されるように、本明細書に示される多くの精製方法は、異なる種類の生物学的材料（例えば、核酸分子、タンパク質、ウイルス様粒子、細胞など）を精製するために使用され得る。

【0429】

エキソソームの精製のために、幾つかの親和性に基づく方法が開発されている。１つのタイプの方法は、しばしばエキソソーム表面に濃縮されるテトラスパニンタンパク質（例えば、ＣＤ９、ＣＤ６３及びＣＤ８１）を標的とする抗体を使用する（Ｌｉａｎｇｓｕｐｒｅｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｄｅｒｎ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓ”、Ｊ．ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ １６３６：４６１７７３（２０２１）を参照）。エキソソームの免疫親和性精製の２つの利点は、（１）精製選択性及び（２）異なる細胞型に由来するエキソソームを精製する能力である。例えば、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ ＣＤ３２６）は、肺癌細胞、胃癌細胞、結腸癌細胞、前立腺癌細胞及び卵巣癌細胞を含む特定の癌細胞において高度に発現されることが見出されている。

【0430】

幾つかの例では、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の親和性媒介精製は、以下のタンパク質、すなわち、ＣＤ１（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ及びＣＤ１ｅ）、ＣＤ２、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｅ及びＣＤ３ｇ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８ａ及びＣＤ８ｂ）、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２１（補体受容体２）、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９（インテグリンベータ１）、ＣＤ３０、ＣＤ４２（例えば、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４２ｃ及びＣＤ４２ｄ）、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ５１、ＣＤ６３、ＣＤ７９（例えば、ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ）、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ９４（ＫＬＲＤ１）、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ１１４（Ｇ－ＣＳＦ受容体）、ＣＤ１１５（ＣＳＦ１受容体）、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０（例えば、ＣＤ１２０ａ及びＣＤ１２０ｂ）、ＣＤ１２１（例えば、ＣＤ１２１ａ及びＣＤ１２１ｂ）、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２８、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０（例えば、ＣＤ１４０ａ及びＣＤ１４０ｂ）、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８（例えば、ＣＤ１５８ａ，ＣＤ１５８ｂ１，ＣＤ１５８ｂ２，ＣＤ１５８ｂ，ＣＤ１５８ｃ，ＣＤ１５８ｄ，ＣＤ１５８ｅ１，ＣＤ１５８ｅ２，ＣＤ１５８ｆ１，ＣＤ１５８ｆ２，ＣＤ１５８ｇ，ＣＤ１５８ｈ，ＣＤ１５８ｉ，ＣＤ１５８ｊ，及びＣＤ１５８ｋ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６７（例えば、ＣＤ１６７ａ及びＣＤ１６７ｂ）、ＣＤ１７２（例えば、ＣＤ１７２ａ，ＣＤ１７２ｂ，及びＣＤ１７２ｇ）、ＣＤ１７９（例えば、ＣＤ１７９ａ，ＣＤ１７９ｂ，ＣＤ１７９ｃ，及びＣＤ１７９ｄ）、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１９１、ＣＤ１９４、ＣＤ２００、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２１２、ＣＤ２１５、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８（例えば、ＣＤ２１８ａ及び２１８ｂ）、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２３５ａ（Ｇｌｙ Ａ）、ＣＤ２４４、ＣＤ２４７（ＣＤ３－Ｚｅｔａ）、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５６（ＡＰＲＩＬ）、ＣＤ２５７（ＢＡＦＦ）、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３１４、ＣＤ３２６、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３５、ＣＤ３３６、ＣＤ３３７、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０及びＣＤ３６６のうちの１つ以上における結合親和性を有する親和性試薬（例えば、抗体）によって媒介され得る。

【0431】

エキソソームを精製するために使用され得る親和性精製試薬の例は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号１０６１６Ｄ号）から入手可能なＥｘｏｓｏｍｅ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ８１ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（細胞培養由来）製品である。

【0432】

培養で成長させた細胞から細胞外小胞（例えば、エキソソーム）を生成及び精製するための組成物及び方法が本明細書で提供される。幾つかのこのような方法では、細胞は、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）形成のために十分な期間培養で増殖させ、次いで、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）を細胞から分離する（例えば、遠心分離によって）。細胞から分離されると、次いで、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）は、支持体（例えば、磁気ビーズ）との会合及び本明細書に記載のビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用した処理によって周囲の物質（例えば、タンパク質、媒体など）から分離され得る。当然ながら、ビーズ処理アセンブリ及びシステムは、上記のようなワークフロー又はそのようなワークフローの少なくとも幾つかのステップなどのワークフローを自動化するように設計されてもよい。

【0433】

幾つかの例では、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の生成及び精製に使用される細胞は、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）に含まれるか又はその成分である１つ以上の分子を含有又は発現する。そのような細胞は、（１）分子を天然に産生し得るか、（２）分子が細胞に取り込まれる条件下で分子に曝露され得るか、又は（３）分子（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのタンパク質）を産生するように操作され得る。

【0434】

幾つかの例では、エキソソームが治療剤を含む、培養で増殖させた細胞のためのエキソソームの生成及び精製のための方法が本明細書で提供される。そのような方法の一例は、細胞が細胞によって取り込まれる治療剤に細胞を曝露し、続いてこれらの細胞によって生成されたエキソソームを精製することである。

【0435】

細胞外小胞（例えば、エキソソーム）には、エレクトロポレーション（例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｆｏｒ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ Ｓｉｎ．Ｂ．，１０：１５６３－１５７５（２０２０）参照）によって分子（例えば、パクリタキ細胞、ｓｉＲＮＡ、タンパク質などの抗癌剤）を負荷することもできる。細胞外小胞（例えば、エキソソーム）には、トランスフェクションによって分子を負荷することもできる（例えば、脂質媒介性トランスフェクション）。更に、エキソソームは、支持体（例えば、ビーズなどの磁性支持体）媒介精製の前又は後に負荷され得る。

【0436】

特定の生物学的分子を含有又は含むように細胞工学から得られた細胞外小胞（例えば、エキソソーム）を精製する方法が本明細書で提供される。幾つかの例では、生物学的物質は、ゲノム編集複合体、又はそのような複合体（例えば、Ｃａｓ９タンパク質及び／又はガイドＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ又はＲＮＡ）を含む及び／又はそのような複合体をコードする核酸を含む１つ以上の成分（例えば、Ｃａｓ９タンパク質、ガイドＲＮＡ分子／Ｃａｓ９タンパク質複合体など）であり得る。幾つかの例では、生物学的物質はＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ分子、マイクロＲＮＡ分子、ｍＲＮＡ分子など）であり得る。

【0437】

細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の１つの治療適用は、癌処置である。キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）によって放出されたエキソソームは、その表面にＣＡＲを有するエキソソームを放出することが示されている。これらのエキソソームは、細胞傷害性分子及び腫瘍に対する細胞傷害活性を含有することが見出されている（Ｆｕら，“ＣＡＲ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ ｈａｖｅ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ”、Ｎａｔ。Ｃｏｍｍｕｎ．，１０：４３５５（２０１９）及びＹａｎｇら、“Ｔｈｅ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｔａｒｇｅｔ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｇｒｏｗｔｈ”、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３６０：１０４２６２（２０２１））。更に、そのようなエキソソームは、ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、それらが投与される個体（例えば、癌患者）において誘導される副作用が少ないと考えられている。

【0438】

Ｔ細胞によって生成された細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の精製方法が本明細書で部分的に提供される。そのような方法は、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の生成に十分な期間にわたって媒体中でＴ細胞を維持し、続いてこれらの細胞外小胞（例えば、エキソソーム）上で精製することを含み得る。多くの場合、Ｔ細胞によって生成された細胞外小胞（例えば、エキソソーム）は、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の生成前にＣＡＲを発現するように操作される。幾つかの例において、そのような細胞外小胞（例えば、エキソソーム）は、個体（例えば、癌患者）に投与されるであろう。

【0439】

場合によっては、機器、組成物、方法及び／又はワークフローは、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の試料の枯渇を含み得る。そのような枯渇の一例は、試料が赤血球由来のエキソソームを含有する場合である。そのような場合、ＣＤ２３５ａに対する結合親和性を有する支持体（Ｇｌｙ Ａ）を使用して、赤血球及び／又は赤血球によって形成された細胞外小胞（例えば、エキソソーム）を試料から除去することができる。そのようなワークフローで使用され得る市販の製品は、ＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ，Ｈｕｍａｎ（ミルテニー、カタログ番号．１３０－０５０－５０１）である。

【0440】

上記のような方法は、多くの場合、閉鎖系で実行され、自動化され、閉鎖系で実行される。自動化に関して、全ての反応ステップは、試薬の添加及び除去のために接続されたチューブを有する１つ以上の容器（例えば、バッグ）で実行することができる。一例として、本明細書に記載のものなどのビーズ処理アセンブリ及びシステムを使用して、バッグ内の条件を変更してウイルス及び／又はウイルス様粒子の支持体からの放出を誘導した後にビーズを定位置に保持することができる。

【実施例】

【0441】

本明細書に記載の主題は、例示として提供され、限定することを意図しない以下の実施例を参照することによって更に理解することができる。更に、以下の実験の一部は、図に例示された器具及び材料を使用して実施した。例えば、揺動条件下で行われる以下のＴ細胞の単離及び活性化は、前述のように、消耗キット１７０Ａを備えたビーズ処理装置２２を使用して達成された（図９及び図１１）。同様に、以下に説明する脱ビーズは、前述のように、消耗キット１７０Ｂ（図９及び図３５）を備えたビーズ処理装置２２を使用して達成された。

【0442】

実施例１：Ｔ細胞単離及び生存性評価

【0443】

２５０×１０^６個のＣＤ３＋細胞を、ＣＴＳ（商標）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．４０２０３Ｄ）と共に、ＰＢＳ／１％ヒト血清アルブミン中、室温で３０分間培養した。細胞－ビーズインキュベーション中の細胞密度は１０×１０^６ ＣＤ３＋細胞／ｍＬであり、ビーズ対細胞比は３：１であった。この間、細胞及びビーズを揺動（１０度、５ＲＰＭ）させながら混合した。同じ混合手順を使用して、ＣＤ３＋単離後に細胞を洗浄し、未結合細胞を除去した。

【0444】

単離効率についてＰＢＭＣからのＣＤ３＋枯渇を分析するために、上記のアプローチに従って、単離前のＰＢＭＣ及び陰性画分から試料を収集した。試料を蛍光標識抗ＣＤ３抗体で染色し、インプット画分及び陰性画分中のＣＤ３＋細胞の数をフローサイトメトリーによって分析した。単離効率（陰性画分からのＣＤ３＋細胞の枯渇）は、陰性画分中のＣＤ３＋細胞の画分を１から減算し、１００％を掛けることによって計算した。

【0445】

実験実行の２つのレプリケートからの平均単離効率は９３％であった（標準偏差（ＳＤ）０．４７）。

【0446】

ＣＤ３＋細胞単離後、Ｔ細胞をバイオリアクタに移し、１００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＨＣ００２１）を補充したＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４８５０１）中で６日間増殖させた。生存率を評価するために、バイオリアクタから試料（２ｍｌ）を無菌的に収集し、再懸濁し、脱ビーズし、Ｓｙｔｏｘ（商標）Ｂｌｕｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｓ３４８５７）及びフローサイトメトリーを用いて生存率パーセントについて分析した。

【0447】

【表1】

【0448】

実施例２：Ｔ細胞純度評価

【0449】

増殖の１日目及び６日目のＴ細胞純度をフローサイトメトリーによって評価した。

【0450】

Ｔ細胞は抗ＣＤ３＋抗体を用いて染色し、単球は抗ＣＤ１４抗体を用いて染色し、Ｂ細胞は抗ＣＤ１９抗体を用いて染色し、ナチュラルキラー（ＮＫ）ＮＫ細胞は抗ＣＤ５６抗体を用いて染色した。全ての抗体を蛍光色素に直接コンジュゲートさせ、フローサイトメトリーによる直接検出を可能にした。

【0451】

実験実行の２回の反復から得られたデータを以下の表２に示す。これらのデータは、揺動及び振盪条件下で培養した細胞を使用して生成した。

【0452】

【表2】

【0453】

実施例３：デビーディング効率

【0454】

６日間の増殖後、図３４に示すものと同様のバッグ及び図３５に記載のフローシステムを使用して、４６の連続流量での連続フローアプローチによって細胞を脱ビーズした。バイオリアクタからの細胞は、細胞を通過させながら、磁石上を通過して磁気ビーズを収集する。脱ビーズ細胞を排出バッグに収集する。

【0455】

ビーズ除去後、３×１０^６個のＣＤ３＋細胞を含有する試料を排出バッグから取り出し、溶解し、次いで、少量（２０μＬ）に濃縮する。３×１０^６個のＣＤ３＋細胞あたりのビーズの数を推定するために、全溶解物中のビーズを計数する。ビーズは、製造業者のプロトコルに従って、光学顕微鏡及びＫＯＶＡ（商標）ガラススライド計数チャンバ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２－２７０１４１）を使用して計数している。実験実行の２回の反復から得られたデータを表３に示す。

【0456】

【表3】

【0457】

ビーズが細胞と３：１の比で混合されることに基づいて、脱ビーズプロセスの前に存在するビーズの数は９×１０^６個であると推定される。したがって、４６ｍｌ／分の流速では、９９．９９％を超えるビーズが脱ビーズプロセスで除去されたと推定される。平均して、最初に存在した推定９００万個のビーズのうち、４５万個当たり１個のビーズのみが脱ビーズ細胞と共局在したと推定される。

【0458】

実施例４：固相インビトロ転写（ＩＶＴ）

【0459】

パート１：ＩＶＴ鋳型／磁気ビーズ複合体の製造

【0460】

材料及び方法：

【0461】

Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｃ１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５００２）、２ｘＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｗａｓｈｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）１ｍＭ ＥＤＴＡ ２Ｍ ＮａＣｌ）、ヌクレアーゼフリー水、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７－８）、Ｔｒｉｓ－ＥＤＴＡ（ｐＨ７－８）（ＴＥ）、ＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１２３２１Ｄ）、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｍｉｘｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１２３２１Ｄ）。

【0462】

Ｄｙｎａｂｅａｄ（商標）ストレプトアビジンへのビオチン化ＰＣＲ産物（鋳型）の固定化

【0463】

ビオチン化ＰＣＲ産物の調製：

【0464】

ＵＴＲ及びＯＲＦの上流にＴ７プロモータを含み、場合により末端に所定のポリＡテールを有するビオチン化ＰＣＲ産物を調製した。フォワードプライマーはビオチン化されており、少なくとも５０～１００塩基対のＴ７プロモータまでの距離を有していた。次いで、ＰＣＲ産物を１×ストレプトアビジン結合及び洗浄緩衝液で２０ｎｇ／μＬに希釈した（２×Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ストレプトアビジン結合及び洗浄緩衝液は、使用前にヌクレアーゼフリー水中で１：１に希釈した）。反応条件は以下に示す通りであった。

【0465】

【表4】

【0466】

ストレプトアビジンビーズの調製は以下のように行う：

【0467】

１．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズをボルテックスによってチューブに懸濁した。

【0468】

２．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズを含むチューブをローラー上に少なくとも２０分間置いた。

【0469】

３．１００μＬ（１ｍｇ）の再懸濁したＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズをＲＮａｓｅフリーチューブに移した。

【0470】

４．再懸濁したＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズを含むチューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に１分間置き、次いで上清を除去した。

【0471】

５．ピペット又は短時間ボルテックスを使用して再懸濁することによって、１００μＬの１×ストレプトアビジン結合及び洗浄緩衝液中でビーズを１回洗浄した。

【0472】

６．チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に１分間置いた。

【0473】

７．上清をチューブから取り出した。

【0474】

８．ビーズを５０μＬストレプトアビジン緩衝液に懸濁した。

【0475】

ＤＮＡ固定化：

【0476】

１．ビオチン化ＰＣＲ産物５０μＬ（１×ストレプトアビジン結合及び洗浄緩衝液で希釈した１μｇ）を、洗浄及び再懸濁したＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズに添加した。

【0477】

２．チューブを、サーマルミキサー１５００ＲＰＭで室温（ＲＴ）にて３０分間培養した。

【0478】

３．チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に１分間置き、次いで上清を除去した（任意選択：Ｑｕｂｉｔ（商標）１ｘ ｄｓＤＮＡ ＨＳ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｑ３３２３０）を使用して、この上清中にどれだけ多くの未結合ＤＮＡが残っているかを定量する）。

【0479】

４．ＤＮＡ－ビーズ複合体を、ピペット又は短時間ボルテックスを使用して、１００μＬのＴＥ緩衝液（ｐＨ８）に再懸濁することによって４回洗浄した。

【0480】

５．チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に１分間置き、次いで上清を廃棄した。

【0481】

６．洗浄を３回繰り返し、合計４回洗浄した。最後の洗浄ステップでは、上清を廃棄しなかった。

【0482】

７．固定化鋳型を有するＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズを、以下に示すようにＩＶＴのために保持した

【0483】

パート２：固定化鋳型ＩＶＴ

【0484】

材料及び方法：

【0485】

ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ（商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＡＭＢ１３３４）、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ８、ストレプトアビジン緩衝液（５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）０．５ｍＭ ＥＤＴＡ １Ｍ ＮａＣｌ）、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５０１２）、ヌクレアーゼフリー水

【0486】

固定化ＩＶＴ鋳型：１μｇのビオチン化ＤＮＡ鋳型が固定化された１ｍｇのＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１ビーズ（上記ステップ６／７から）

【0487】

ＩＶＴ反応混合物：以下に示す１００μＬ反応にスケールアップされたＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ（商標）キット試薬：

【0488】

【表5】

【0489】

１．固定されたＩＶＴ鋳型を有するチューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、上清を廃棄した（上記のステップ７）。

【0490】

２．固定化されたＩＶＴ鋳型を２００μＬの１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８）に再懸濁することによって洗浄した。

【0491】

３．固定されたＩＶＴ鋳型を有するチューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、上清を廃棄した。

【0492】

４．固定化されたＩＶＴ鋳型を１００μＬのＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ（商標）反応混合物に再懸濁した。

【0493】

５．チューブを１５００ＲＰＭのサーマルミキサー上で３７℃で１～３時間（１００μＬ）培養した。

【0494】

６．固定されたＩＶＴ鋳型を有するチューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、インビトロ転写物を含有する上清を新しいＲＮａｓｅ非含有チューブに移した。

【0495】

７．上清を含むチューブを氷上に置くか、将来の使用のために－７０℃で凍結した。

【0496】

８．必要に応じて、次いで、ｍＲＮＡ濃度を、Ｑｕｂｉｔ（商標）ＲＮＡ ＨＳ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｑ３２８５２）を使用して測定する。１００μＬ、２時間の反応では、典型的には約４μｇ／μＬのｍＲＮＡが得られ、反応当たり最大４００μｇが得られる。

【0497】

ｍＲＮＡクリーンアップ

【0498】

Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズ上への沈殿によるｍＲＮＡ捕捉を以下のように行う：

【0499】

１．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズを、ビーズを１０秒間ボルテックスすることによって混合し、次いで、室温（ＲＴ）で２０分間ローラー上に置いた。

【0500】

２．３０μＬ（３００μｇ（濃度：１０ｍｇ／ｍＬ））のビーズ懸濁液を各清浄なヌクレアーゼフリーチューブに添加した。

【0501】

３．溶液が透明に見えるまで（約３０～６０秒）チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、上清を廃棄した。

【0502】

４．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズを１００μＬのヌクレアーゼ非含有水中で１回洗浄し、ＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、上清を捨てた。

【0503】

５．最大１５０μｇのＲＮＡを含有する１００μＬのｍＲＮＡ溶液をチューブに添加し、ビーズが十分に再懸濁されるまで混合した。

【0504】

６．２００μＬの１．５×ＲＮＡ結合緩衝液（ＲＢＢ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３７０３５Ｄ）を添加し、均一な懸濁液が形成されるまでピペッティングによって混合した。

【0505】

７．次いで、１０００ｒｐｍの室温のサーマルミキサー上での１０分間のインキュベーションを行った。

【0506】

８．溶液が透明に見えるまでチューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き（溶液は非常に粘性であるため、約２～３分）、上清を廃棄した。

【0507】

９．５００μＬのＷＢ溶液（ヌクレアーゼフリー水中７０％ＥｔＯＨ）を添加し、ビーズをボルテックスによって再懸濁した。

【0508】

１０．溶液が透明に見えるまで（およそ３０～６０秒）チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置き、上清を捨てた。

【0509】

１１．ステップ９～１０を２回繰り返し、合計３回洗浄し、次いで、全ての残留ＷＢ溶液を除去した。

【0510】

１２．ＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上でビーズを室温で１０分間乾燥させた。

【0511】

１３．チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石との接触から外し、１００μＬの溶出緩衝液（ＴＥバッファｐＨ７～８、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ７～８）又はヌクレアーゼフリー水を加え、その後、ピペッティングによってビーズを再懸濁し、１０００ｒｐｍのＴｈｅｒｍａｌ ｍｉｘｅｒ上で６５℃で５分間培養した。

【0512】

１４．インキュベーション後、場合により、チューブを短時間遠心分離し、蓋から液体を回収する

【0513】

１５．溶液が透明になるまで（約３０～６０秒）、チューブをＤｙｎａＭａｇ（商標）－２磁石上に置いた。

【0514】

１６．上清を回収し、ヌクレアーゼフリーのチューブを洗浄するために移し、将来の使用のために氷上又は凍結に置いた。

【0515】

実施例５：大規模ｍＲＮＡ生産及び精製

【0516】

パート１．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５００２）、ビーズへの鋳型固定化：

【0517】

初期設定のために、緩衝液及び試薬をガラス製バイオリアクタに装填する。バッグはまた、反応器に移す前にＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＣ１を完全に再懸濁するために使用され得る。適切に再懸濁されるまでビーズをボルテックスし、ローラー上に２０分間以上置く。また、１０ｍｇのビオチン化鋳型ＤＮＡ／ＰＣＲ産物を１Ｘストレプトアビジン結合及び洗浄緩衝液（５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）０．５ｍＭ ＥＤＴＡ １Ｍ ＮａＣｌ）中に総容量０．５リットル（Ｌ）まで希釈する。バッグが使用される場合、主区画室内の反応バッグ及び大きな廃棄物処理バッグを有するチューブ及びバッグの回路は、互いに溶着されてもよい。

【0518】

この例で説明したワークフローの概要を図６３～図６５に示す。

【0519】

１．Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）Ｃ１ストレプトアビジンビーズ（１リットル、１０ｍｇ／ｍＬ）１０ｇを反応バッグに移す。

【0520】

２．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0521】

３．洗浄：磁石を取り出し、１×ストレプトアビジン結合緩衝液１リットルを反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を加えて混合を助ける。

【0522】

４．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0523】

５．磁石を取り出し、０．５リットルの１Ｘストレプトアビジン結合緩衝液を反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を加えて混合を補助する。

【0524】

６．０．５リットルの１０ｍｇビオチン化鋳型ＤＮＡ希釈物（１×ストレプトアビジン結合緩衝液で予備希釈）を移す。

【0525】

７．十分に揺動させながら室温で３０分間培養する。

【0526】

８．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清を収集バッグに移し、４℃で保存する。上清を使用して、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｍ－２８０ストレプトアビジンビーズ上に固定化されたビオチン化鋳型ＤＮＡの程度を定量することができる。

【0527】

９．洗浄：磁石を取り出し、１リットルの１Ｘストレプトアビジン結合洗浄緩衝液を反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を加えて混合を助ける。

【0528】

１０．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0529】

１１．ステップ９～１０を更に３回繰り返す（合計４回洗浄）。

【0530】

１２．磁石を取り外し、ビーズ－鋳型複合体を１リットルの洗浄緩衝液に再懸濁し、少量の空気を添加して混合を助ける。

【0531】

パート２．固相インビトロ転写：

【0532】

緩衝液及び試薬をバッグに入れ、ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ ＭＩＸを調製し、バッグに移す前に氷上に保つ。ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ（商標）キット試薬は、実施例４に記載の成分の比を使用するまでスケールアップされる。

【0533】

１．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0534】

２．洗浄：磁石を取り外し、１リットルの洗浄緩衝液を反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を加えて混合を助ける。

【0535】

３．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0536】

４．磁石を取り出し、１リットルのＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ（商標）反応混合物を反応バッグに移す。

【0537】

５．十分に揺動させながら３７℃の温度で培養し、転写されたｍＲＮＡの目標濃度が達成されるまで混合を助けるために少量の空気を添加する。

【0538】

６．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、転写されたｍＲＮＡを収集バッグに移す。

【0539】

７．鋳型結合ビーズは複数回再使用することができる：ステップ３～６を更に５回まで繰り返す。

【0540】

パート３．一般的な捕捉、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズによるｍＲＮＡ精製：

【0541】

緩衝液及び試薬をバッグに入れ、バッグに移す前にＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５０１２）を完全に再懸濁する。適切に再懸濁されるまでビーズをボルテックスし、ローラー上に２０分間以上置く。３３３ｍｇのＩＶＴ粗ｍＲＮＡを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液のＴＥ緩衝液中で総体積３３３ｍＬまで希釈する。大きな廃棄物処理バッグを有するチューブ及びバッグの回路を一緒に溶着する

【0542】

１． １ｇのＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズ（１００ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ）を反応バッグに移す。

【0543】

２．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0544】

３．洗浄：磁石を取り外し、１リットルのヌクレアーゼフリー水を反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を添加して混合を助ける。

【0545】

４．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0546】

５．磁石を取り外し、３３３ｍＬ、３３３ｍｇのＩＶＴ粗ｍＲＮＡ混合物（１ｍｇ ｍＲＮＡ／ｍＬ希釈）を反応バッグに移し、十分に揺らしながら１分間混合し、少量の空気を添加して混合を助ける。

【0547】

６． ６６７ｍＬの１．５×ＲＮＡ結合緩衝液を反応バッグに移す。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）カルボン酸ビーズ上へのｍＲＮＡの最適な沈殿を確保するために、結合緩衝液が可能な限り迅速に反応バッグに移されることを確保するために、ポンプに高ｒｐｍ設定を適用する。

【0548】

７．十分に揺動させながら室温で１０分間培養し、少量の空気を添加して混合を助ける。

【0549】

８．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0550】

９．洗浄：磁石を取り外し、１リットルの洗浄緩衝液を反応バッグに移し、穏やかに揺らしながら１分間混合し、少量の空気を加えて混合を助ける。

【0551】

１０．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、上清をゴミ袋に移す。

【0552】

１１．ステップ８～９を更に２回繰り返す（合計３回洗浄）。

【0553】

１２．ビーズが完全に乾燥するまで、室温で１０～２０分間、ビーズを乾燥させる。濾過した空気を反応バッグを通してポンプ輸送して乾燥プロセスを助ける。

【0554】

１３． ３３３ｍＬの溶出緩衝液を反応バッグに移す。

【0555】

１４．十分に揺動させながら室温６５℃で５分間培養し、少量の空気を添加して混合を助ける。

【0556】

１５．上清が完全に半透明になるまで磁石を適用し、精製ｍＲＮＡを収集バッグに移す。

【0557】

本明細書に示されている本発明の特徴の様々な変更及び／又は修正、及び本明細書に示されている原理の追加の適用は、当業者が想到し、本開示を有するであろうものであり、特許請求の範囲によって定義される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、示されている実施形態に対して行うことができ、本開示の範囲内であると見なされるべきである。したがって、様々な態様及び実施形態が本明細書に開示されているが、他の態様及び実施形態も企図される。本明細書に記載されたものと類似又は同等の幾つかの方法及び構成要素を使用して本開示の実施形態を実施することができるが、特定の構成要素及び方法のみが本明細書に記載されている。

【0558】

本開示の特定の実施形態によるシステム、プロセス、及び／又は製品は、本明細書に開示及び／又は記載された他の実施形態に記載された特性特徴（例えば、構成要素、部材、要素、部品、及び／又は部分）を含む、組み込む、又は含むことができることも理解され得る。したがって、特定の実施形態の様々な特徴は、本開示の他の実施形態と互換性があり、本開示の他の実施形態と組み合わせられ、本開示の他の実施形態に含まれ、及び／又は本開示の他の実施形態に組み込まれ得る。したがって、本開示の特定の実施形態に対する特定の特徴の開示は、特定の実施形態への前記特徴の適用又は包含を限定すると解釈されるべきではない。むしろ、本開示の範囲から必ずしも逸脱することなく、他の実施形態も前記特徴を含むことができることが理解され得る。

【0559】

更に、特徴がそれと組み合わせて別の特徴を必要とすると記載されていない限り、本明細書の任意の特徴は、本明細書に開示された同じ又は異なる実施形態の任意の他の特徴と組み合わせることができる。更に、例示的なシステム、プロセス、製品などの様々な周知の態様は、例示的な実施形態の態様を不明瞭にすることを避けるために、本明細書では特に詳細に説明されない。しかしながら、そのような態様も本明細書で企図される。

【0560】

本開示は、その思想又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化されてもよい。記載された実施形態は、全ての点で例示的なものにすぎず、限定的なものではないと見なされるべきである。したがって、本発明の範囲は、上記の説明ではなく添付の特許請求の範囲によって示される。本開示の実施形態を例示する目的で、特定の実施形態及び詳細が本明細書及び添付の開示に含まれているが、当業者であれば分かるように、添付の特許請求の範囲で定義される本開示又は本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される方法、製品、デバイス、及び装置の様々な変更を行うことができる。特許請求の範囲の均等物の意味及び範囲内にある全ての変更は、それらの範囲内に包含されるべきである。

【0561】

本発明の典型的な主題は、以下の項によって表される。
項１：磁気ビーズを生体細胞に付着させ、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離する際に使用するためのビーズ処理アセンブリであって、ハウジングと、ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプとを備えるベースアセンブリと、ベースアセンブリ上に支持されるとともに、ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されるロッカドライバとを備えるロッカアセンブリとを備える、ビーズ処理アセンブリ。

【0562】

項２：ベースアセンブリは、ハウジングにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、カバーパネルは、支持パネルの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルが支持パネルの前面を覆う閉位置との間で移動可能である、項１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0563】

項３：カバーパネルは、ハウジングにヒンジ式に取り付けられ、開口を取り囲む外周フレームと、開口内に配置される透明窓とを備える、項２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0564】

項４：支持パネルは、前面を有するベースパネルであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプがベースパネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出するようにベースパネルに取り付けられる、ベースパネルと、ベースパネルの前面に配置されるオーバーレイパネルであって、該オーバーレイパネルは、それを貫通して延びる開口を有し、該開口を通じて第１ピンチバルブ及び第１ポンプの少なくとも一部が突出する、オーバーレイパネルとを備える、項１から３のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0565】

項５：支持パネルの前面は、ハウジングが水平面上に載置されている場合に３０°～７０°の範囲の角度で配置される、項１から４のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0566】

項６：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、複数のピンチバルブは、少なくとも２つ、３つ、４つ、６つ、又は８つのピンチバルブを備える、項１から５のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0567】

項７：第１ポンプは、蠕動ポンプを備える、項１から６のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0568】

項８：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備える、項１から７のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0569】

項９：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数の気泡センサを更に備え、複数の気泡センサは、少なくとも２つ、３つ、又は４つの気泡センサを備える、項１から８のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0570】

項１０：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する圧力センサを更に備える、項１から９のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0571】

項１１：ベースアセンブリは、支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、支持パネルに取り付けられる第１回転アセンブリとを更に備え、第１回転アセンブリは、キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータとを備える、項１から１０のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0572】

項１２：ベースアセンブリは、ビーズバイアルリテーナを更に備え、ビーズバイアルリテーナは、
バイアルを受けるように構成される本体と、本体から延在する長尺アームと、ベースアセンブリのハウジング内に少なくとも部分的に配置され、アームの自由端に接続されるモータとを含み、モータは、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度に渡って垂直に往復回転させるように構成される、項１から１１のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0573】

項１３：ビーズバイアルリテーナの本体は、Ｃ字形チャネルを境界付ける内面と、内面から径方向内側に突出する肩部とを備える、項１２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0574】

項１４：ロッカアセンブリのマウントアセンブリは、ベースアセンブリに取り付けられた第１ライザ及び離間した第２ライザを備え、プラットフォームアセンブリは、第１ライザ及び第２ライザに回動可能に結合され、第１ライザと第２ライザとの間に少なくとも部分的に配置される、項１から１３のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0575】

項１５：ロッカドライバは、クランクと、クランクを選択的に回転させるモータと、クランクからプラットフォームアセンブリまで延在する接続アームとを備える、項１から１４のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0576】

項１６：プラットフォームアセンブリは、区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるように構成されたリフトとを備える、項１から１５のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0577】

項１７：リフトは、ハウジングアセンブリの区画室内に少なくとも部分的に配置されたシザーリフトと、シザーリフトを動作させるモータとを備える、項１６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0578】

項１８：シザーリフトは、磁石アセンブリが上に配置される棚と、ハウジングアセンブリと棚との間で延在する第１シザーアーム対と、ハウジングアセンブリと棚との間で延在して第１シザーアーム対から離間される第２シザーアーム対と、モータに結合されるねじ付きシャフトと、カラーであって、モータによるねじ付きシャフトの回転がねじ付きシャフトに沿うカラーの直線動作を容易にするようにねじ付きシャフトと係合するとともに、第１シザーアーム対及び第２シザーアーム対とも係合する、カラーとを備える、項１７に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0579】

項１９：上面及び反対側の底面を有する支持プレートを備えるプラットフォームを更に備え、磁石アセンブリが作動位置まで持ち上げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から１ｃｍ、０．５ｃｍ、又は０．２ｃｍ以内にある、項１６から１８のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0580】

項２０：磁石アセンブリが非作動位置まで下げられた場合、支持プレートの底面は、磁石アセンブリの上面から少なくとも４ｃｍ、５ｃｍ、又は６ｃｍ離れている、項１９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0581】

項２１：プラットフォームは、ハウジングアセンブリに固定されるとともに、導電性材料で形成され、上面を有する支持プレートと、連続ループを形成するとともに、支持プレートの少なくとも一部を取り囲むように支持プレートの上面に配置され、電気絶縁材料で形成される絶縁シールと、連続ループを形成するとともに、支持プレートから離間されるように絶縁シールの上に配置された接点とを備え、支持プレート及び接点は、接点と支持プレートとの間に電位を生み出すことができる電気回路と電気的に連通している、項１６から２０のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0582】

項２２：プラットフォームは、上面を有し、ハウジングアセンブリに固定される支持プレートと、支持プレートの上面の上方に位置決めされる抑制部とを備え、抑制部は、
支持プレートの上面を部分的に取り囲むとともに、対向する端部間で延在する境界壁と、境界壁の対向する端部間で延在するトレイとを備え、トレイは、境界壁から外方に突出する上向きに傾斜した床と、床から上方に突出する一対の離間したポストとを有する、項１６から２１のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0583】

項２３：プラットフォームは、支持ハウジングに固定された保持フレームであって、開口を取り囲む環状内壁と、内壁を取り囲む環状外壁とを備える保持フレームと、内壁と外壁との間に形成されるスロットと、保持フレームのスロット内に固定され、チャネルを境界付けるガイドと、ガイドのチャネル内に摺動可能に配置された電気ラッチとを備える、項１６から２２のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0584】

項２４：磁石アセンブリは、磁石を備える、項１６から２３のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0585】

項２５：磁石アセンブリは、外周縁部まで延在する上面及び反対側の底面を有する非磁性ケーシングであって、凹部が上面に形成されて外周縁部を有する、非磁性ケーシングと、ケーシングの凹部内に配置される磁石とを備える、項２４に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0586】

項２６：磁石は、ハルバッハ配列(Halbach array)を生成するように複数の交互の向きに配置された複数の別個の離散した磁石を備える、項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0587】

項２７：凹部の外周縁部は、ケーシングの外周縁部から少なくとも０．５ｃｍ、１ｃｍ、１．５ｃｍ又は２ｃｍ挿入されている、項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0588】

項２８：ケーシング及び磁石は、それぞれ長方形の形態を有する、項２５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0589】

項２９：プラットフォームアセンブリは、プラットフォームを少なくとも部分的に覆うとともにプラットフォームに対して移動可能なカバーアセンブリを更に備える、項１６から２８のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0590】

項３０：カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、プラットフォームの少なくとも一部がカバーハウジングの開口内に位置合わせされる、カバーハウジングと、開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられた蓋であって、閉位置にある場合にカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋と、を備える、項２９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0591】

項３１：蓋は、カバーハウジングにヒンジ式に取り付けられる、項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0592】

項３２：蓋は、開口を取り囲むとともに上端及び反対側の下端を有する外周壁と、上面及び反対側の底面を有し、開口の上に延在するように外周壁の下端に固定された蓋板であって、外周壁の少なくとも一部が蓋板の上面の上方に直立して、蓋板によって部分的に境界付けられて外周壁によって囲まれる上側キャビティが形成されている、蓋板とを備える、項３０に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0593】

項３３：外周壁は、上側キャビティと連通するように蓋板の上面に隣接して外周壁を貫通して延在するチャネルを有する、項３２に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0594】

項３４：蓋が閉位置にある場合、蓋をカバーハウジングに固定するための第１ラッチを更に備える、項３０から３３のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0595】

項３５：プラットフォームから離れるカバーアセンブリの移動を弾性的に抑制するための手段を更に備える、項２９から３４のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0596】

項３６：移動を弾性的に抑制するための手段は、第１端部及び反対側の第２端部を有するロッドであって、第１端部は、カバーアセンブリに固定されてカバーアセンブリから突出している、ロッドと、ロッドと係合されるばねであって、カバーアセンブリをプラットフォームから離れるように移動させる力が使用されると、ばねは、カバーアセンブリをプラットフォームに向けて後方に弾性的に付勢するようにした、ばねとを備える、項３５に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0597】

項３７：抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に備え、抑制位置において、ストッパは、プラットフォームに対するロッドのいくらかの移動を妨げるように位置決めされ、非抑制位置において、ストッパは、ロッドの移動を妨げない、項３６に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0598】

項３８：ハウジングアセンブリに取り付けられたソレノイドバルブを更に備え、ソレノイドバルブは、ストッパを抑制位置と非抑制位置との間で移動させる、項３７に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0599】

項３９：ハウジングアセンブリに形成された穴であって、ロッドは、穴の内部に摺動可能に配置される、穴と、ロッドの第２端部から外向きに突出するフランジとを更に備え、ばねは、フランジとハウジングアセンブリとの間で延在し、ロッドがカバーアセンブリと同時に持ち上げられると、ばねは弾性的に圧縮される、項３６から３８のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0600】

項４０：抑制位置と非抑制位置との間で移動可能なストッパを更に備え、抑制位置において、ストッパは、フランジと位置合わせされて、フランジ及びフランジに取り付けられたロッドのいくらかの動きを阻止し、非抑制位置において、ストッパは、フランジと位置合わせされず、フランジ又はフランジに取り付けられたロッドの動きを妨げない、項３９に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0601】

項４１：カバーハウジングに形成され、カバーハウジングの開口と連通する凹部と、凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリとを更に備え、クランプアセンブリは、下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるように、クランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具と、を備える、項３０から４０のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0602】

項４２：カバーハウジングは、凹部の対向する各端部に形成されたＵ字形チャネルを更に備え、クランプアセンブリの対向する端部は、Ｕ字形チャネルと共に摺動可能に配置されている、項４１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0603】

項４３：プラットフォームは、上面及び反対側の底面を有する支持プレートと、支持プレートから離れて突出するとともに、ハウジングアセンブリに固定される側壁とを備え、支持プレート及び側壁は、磁石アセンブリが上昇作動位置にある場合に磁石アセンブリが受け入れられるキャビティを少なくとも部分的に結合する、項１６から４２のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0604】

項４４：磁気ビーズを生体細胞に付着させるため、及び／又は、磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムであって、該ビーズ処理システムがビーズ処理アセンブリを備え、ビーズ処理アセンブリは、ハウジングと、ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプとを備えるベースアセンブリと、ベースアセンブリ上に支持されるとともに、ベースアセンブリ上に支持されるマウントアセンブリと、マウントアセンブリに回動可能に固定されてプラットフォームを備えるプラットフォームアセンブリと、マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されたロッカドライバとを備えるロッカアセンブリとを備え、ビーズ処理システムが消耗キットを備え、該消耗キットは、前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイであって、第１ピンチバルブ及び第１ポンプが複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出するように支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にされるトレイと、トレイの前面に固定されたラインセットであって、トレイの前面に固定されるとともに第１ピンチバルブ及び第１ポンプと係合する可撓性チューブと、チューブに結合された複数の可撓性バッグ流体とを備え、複数の可撓性バッグがプラットフォームアセンブリのプラットフォーム上に支持された処理バッグを備える、ラインセットとを備える、ビーズ処理システム。

【0605】

項４５：ベースアセンブリは、ハウジングアセンブリにヒンジ式に取り付けられたカバーパネルを更に備え、カバーパネルは、トレイの前面が開放的に露出される開位置と、カバーパネルがトレイの前面を覆う閉位置との間で移動可能である、項４４に記載のビーズ処理システム。

【0606】

項４６：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する複数のピンチバルブを更に備え、複数のピンチバルブは、少なくとも２つ、３つ、４つ、６つ、又は８つのピンチバルブを備え、複数のピンチバルブのそれぞれは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じて突出して可撓性チューブと係合する、項４４又は４５に記載のビーズ処理システム。

【0607】

項４７：ベースアセンブリは、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１気泡センサを更に備え、第１気泡センサは、トレイ上の複数の開口のうちの対応する開口を通じ突出して可撓性チューブと係合する、項４４から４６のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0608】

項４８：支持パネルの前面を貫通して延びる開口と、支持パネルに取り付けられた第１回転アセンブリとを更に備え、第１回転アセンブリは、キー付きソケットが形成された受け部であって、キー付きソケットが開口と位置合わせされる、受け部と、受け部に結合され、受け部を両方向に選択的に回転させるように構成される駆動モータと、ラインセットのチューブに結合されたストップコック流体であって、ストップコックが受け部のキー付きソケット内に受けられる回転可能なハンドルを有する、ストップコック流体と、ストップコックと結合されたエアフィルタ流体とを備える、項４４から４７のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0609】

項４９：ビーズバイアルリテーナを更に備え、該ビーズバイアルリテーナは、バイアルを受けるように構成されるチャネルを有する本体と、本体から延在する長尺アームと、ベースアセンブリのハウジングアセンブリ内に少なくとも部分的に配置されるとともにアームの自由端に接続されるモータであって、モータに取り付けられた本体を少なくとも６０°の角度にわたって垂直に往復回転させるように構成される、モータと、本体のチャネル内に受けられるバイアルであって、磁気ビーズ及び媒体を収容し、ラインセットのチューブがバイアルと流体結合されている、バイアルとを含む、項４４から４８のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0610】

項５０：プラットフォームアセンブリは、区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリであって、上面及び反対側の底面を有する磁石アセンブリと、作動位置と非作動位置との間でプラットフォームに対して磁石アセンブリを選択的に上昇及び下降させるためにハウジングアセンブリの区画室内に配置されるリフトとを備える、項４４から４９のいずれか一項に記載のビーズ処理システム

【0611】

項５１：プラットフォームアセンブリは、プラットフォーム及びプラットフォーム上の処理バッグを少なくとも部分的に覆うカバーアセンブリを更に備え、カバーアセンブリは、処理バッグが拡張するときにプラットフォームに対して移動可能である、項５０に記載のビーズ処理システム。

【0612】

項５２：プラットフォームから離れるカバーアセンブリの移動を弾性的に抑制するための手段を更に備える、項５１に記載のビーズ処理システム。

【0613】

項５３：カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、処理バッグが少なくとも部分的にカバーハウジングの開口内に配置される、カバーハウジングと、開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられた蓋であって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋とを備える、項５１に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0614】

項５４：カバーハウジングに形成されてカバーハウジングの開口と連通する凹部と、凹部内に摺動可能に配置されるクランプアセンブリとを更に備え、クランプアセンブリは、下側クランプ溝が形成されたベースクランプと、上側クランプ溝が形成されたクランプクロージャと、上側クランプ溝が下側クランプ溝と位置合わせされるようにクランプクロージャをベースクランプに選択的に固定する締結具とを備え、プラットフォーム上に配置された処理バッグは、位置合わせされた上側クランプ溝及び下側クランプ溝の中に少なくとも部分的に配置されるとともにベースクランプとクランプクロージャとの間にクランプされるポートを有する、項５３に記載のビーズ処理アセンブリ。

【0615】

項５５：ラインセットのチューブに結合されて媒体を収容する第１媒体バッグ流体を更に備える、項４４から５４のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0616】

項５６：ビーズ処理アセンブリは、ベースアセンブリから直立するとともにそこから外側に突出するキャッチを有するスタンドを更に備え、媒体バッグがキャッチ上に支持される、項５５に記載のビーズ処理システム。

【0617】

項５７：ラインセットのチューブが生体細胞分離器と流体結合される、項４４から５６のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0618】

項５６：ラインセットのチューブが生体細胞増殖システムと流体結合される、項４４から５７のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0619】

項５８：処理バッグは、ビーズ分離バッグを備え、ビーズ分離バッグは、ポリマーフィルムから構成されるとともに区画室を境界付ける折り畳み可能な袋体と、袋体に結合されて区画室と連通する一対の離間したポートと、一対の離間したポート間の位置で袋体の区画室内に配置される仕切りであって、ポートの一方に入る流体が他方のポートを通じて出ることができる前に、仕切りの周りを流れるように袋体に固定される、仕切りとを備える、項４４から５８のいずれか一項に記載のビーズ処理システム。

【0620】

項６０：磁気ビーズ処理アセンブリと共に使用するための消耗キットであって、前面及び反対側の背面を有し、それらの面間で複数の開口が延在するトレイと、トレイの前面に固定されるラインセットとを備え、ラインセットは、複数の開口の少なくとも幾つかと位置合わせするように、トレイの前面に固定される可撓性チューブと、チューブと結合された複数の可撓性バッグ流体と、チューブに結合されたエアフィルタとを備える、消耗キット。

【0621】

項６１：チューブに結合されたエアフィルタアセンブリを更に備え、エアフィルタアセンブリは、チューブと結合されるストップコック流体を備え、ストップコックは、トレイの前面から外側に突出するスリーブと、スリーブ内に回転可能に配置されるバルブと、バルブを選択的に回転させるためにバルブに固定され、トレイの背面から外側に突出するハンドルとを備え、エアフィルタ流体がスリーブと結合される、項６０に記載の消耗キット。

【0622】

項６２：トレイの前面に配置されてチューブと流体結合される混合バッグを更に備える、項６１に記載の消耗キット。

【0623】

項６３：ラインセットのチューブに結合されたビーズバイアルカプラ流体と、ビーズバイアルカプラに固定され、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容するバイアルとを更に備える、項６１又は６２に記載の消耗キット。

【0624】

項６４：マウントアセンブリと、マウントアセンブリに回動可能に固定されるプラットフォームアセンブリと、マウントアセンブリに対してプラットフォームアセンブリを揺動させるように構成されるロッカドライバとを備え、プラットフォームアセンブリは、区画室を境界付けるハウジングアセンブリと、ハウジングアセンブリに取り付けられたプラットフォームと、ハウジングアセンブリとプラットフォームとの間に配置された磁石アセンブリと、作動位置と非作動位置との間で磁石アセンブリをプラットフォームに対して選択的に上昇及び下降させるように構成されたリフトと、プラットフォームを少なくとも部分的に覆うとともにプラットフォームに対して移動可能であるカバーアセンブリとを備える、ロッカアセンブリ。

【0625】

項６５：カバーアセンブリは、開口を少なくとも部分的に取り囲むカバーハウジングであって、プラットフォームの少なくとも一部がカバーハウジングの開口内に位置合わせされる、カバーハウジングと、開位置と閉位置との間で移動可能にカバーハウジングに取り付けられる蓋であって、閉位置にあるときにカバーハウジングの開口を少なくとも実質的に覆う蓋とを備える、項６４に記載のロッカアセンブリ。

【0626】

項６６：磁気ビーズを生体細胞に付着させるのに及び／又は磁気ビーズを生体細胞から分離するのに用いるビーズ処理アセンブリであって、ベースアセンブリを備え、該ベースアセンブリは、ハウジングと、ハウジング上に配置されて前面を有する支持パネルと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ピンチバルブと、支持パネルの前面から少なくとも部分的に外側に突出する第１ポンプとを備える、ビーズ処理アセンブリ。

【0627】

項６７：磁気ビーズを生体細胞に付着させるため及び／又は磁気ビーズを生体細胞から分離するためのビーズ処理システムを動作させるための方法であって、第１ピンチバルブ及び支持パネルから突出する第１ポンプがトレイに形成された対応する開口を通過するようにトレイをビーズ処理アセンブリの支持パネルの前面に取り外し可能に入れ子にするステップと、トレイ上に配置されたラインセットのチューブを第１ピンチバルブ及び第１ポンプに係合させるステップと、ラインセットと結合された処理バッグ流体をビーズ処理アセンブリのプラットフォーム上に配置するステップとを含む方法。

【0628】

項６８：バイアル又は可撓性バッグをラインセットのチューブに結合する流体を更に備え、バイアル又は可撓性バッグが磁気ビーズ及びキャリア液体を含む懸濁液を収容する、項６６に記載の方法。

【0629】

項６９：ビーズ処理アセンブリのバッグスタンド上に液体媒体を収容する媒体バッグを支持するステップを更に含む、項６６又は６７に記載の方法。

【0630】

項７０：ラインセットのチューブを生体細胞分離器に流体結合するステップを更に含む、項６７から６９のいずれか一項に記載の方法。

【0631】

項７１：ラインセットのチューブを生体細胞増殖システムに流体結合するステップを更に含む、項６７から７０のいずれか一項に記載の方法。

【0632】

項７２：ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームの揺動をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、項６７から７１のいずれか一項に記載の方法。

【0633】

項７３：ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、処理バッグが配置されるプラットフォームに対する磁石の上昇及び下降をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。

【0634】

項７４：ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、プラットフォーム上の処理バッグに流体を配送するために第１ピンチバルブ及び第１ポンプの制御をコンピュータプロセッサが促進するように作動させるステップを更に含む、項６７から７３のいずれか一項に記載の方法。

【0635】

項７５：ビーズ処理アセンブリのコンピュータプロセッサを、ラインセットのチューブと結合されたバイアル流体の移動をコンピュータプロセッサが促進してバイアル内に配置された懸濁液を混合するように作動させるステップを更に含み、懸濁液は、磁気ビーズ及びキャリア液体を含む、項６７から７４のいずれか一項に記載の方法。

【0636】

項７６：生体細胞は、Ｔ細胞である、項６７から７５のいずれか一項に記載の方法。

【0637】

項７７：生体細胞は、抗原－抗体相互作用を介して磁気ビーズに付着される、項６７から７６のいずれか一項に記載の方法。

【0638】

項７８：生体細胞は、抗原－抗体相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される、項７７に記載の方法。

【0639】

項７９：抗原－抗体相互作用の破壊は、抗体の切断によって媒介される、項７８に記載の方法。

【0640】

項８０：抗体を磁気ビーズから分離することによって、生体細胞は、磁気ビーズから分離される、項７７から７９のいずれか一項に記載の方法。

【0641】

項８１：抗体は、リガンドによって磁気ビーズに連結される、項７７から８０のいずれか一項に記載の方法。

【0642】

項８２：生体細胞は、抗体又は磁気ビーズとのリガンド相互作用の破壊によって磁気ビーズから分離される、項８１に記載の方法。

【0643】

項８３：生体細胞は、Ｔ細胞である、項６７から８２のいずれか一項に記載の方法。

【0644】

項８４：ビーズ処理システムを使用して第１細胞型の生体細胞を第２細胞型の生体細胞から分離するための方法であって、（ａ）第１細胞型及び第２細胞型の生体細胞を含む試料を、磁気ビーズが抗体結合を介して第１細胞型の生体細胞に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズが、プラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、（ｂ）プラットフォームに対して磁石を上昇させて、プラットフォームに対して所定の位置に磁気ビーズを強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１細胞型の生体細胞が付着される、ステップと、（ｃ）磁気ビーズに磁場が印加された状態で流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップであって、第１細胞型の生体細胞から第２細胞型の生体細胞を洗い流すのに十分強い力で流体が通過する、ステップと、（ｄ）第１細胞型の生体細胞が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないようにプラットフォームに対して磁石を下降させるステップと、を含む方法。

【0645】

項８５：抗体は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７及びＣＤ２７８から成るグループから選択されるタンパク質に対する結合親和性を有する、項８４に記載の方法。

【0646】

項８６：抗体は、ＣＤ３又はＣＤ２８を含むタンパク質に対して結合親和性を有する、項８５に記載の方法。

【0647】

項８７：第１細胞型は、Ｔ細胞である、項８６に記載の方法。

【0648】

項８８：第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから分離するステップと、磁気ビーズを定位置に強固に固定するために磁気ビーズに磁場を印加するステップと、磁場が印加されている間に磁気ビーズ及び第１細胞型の分離された生体細胞に流体を通過させるステップであって、磁気ビーズの少なくとも大部分が磁場によって定位置に固定されたままの状態で第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分を磁気ビーズから洗い流すのに十分強い力で流体が通過する、ステップとを更に含む、項８４から８７のいずれか一項に記載の方法。

【0649】

項８９：第１細胞型の生体細胞の少なくとも大部分が磁気ビーズから洗い流される間に９５％を超える磁気ビーズが磁場によって定位置に保持される、項８８に記載の方法。

【0650】

項９０：９５％を超える磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される、項８９に記載の方法。

【0651】

項９１：第１細胞型の生体細胞から分離された９５％を超える磁気ビーズが、第１細胞型の生体細胞から分離される、項８８から９０のいずれか一項に記載の方法。

【0652】

項９２：磁気ビーズは、直径約０．５μｍ～約３μｍである、項８４から９１のいずれか一項に記載の方法。

【0653】

項９３：処理バッグが載置されているプラットフォームを水平に対して第１方向に傾けるステップを更に含み、磁場は、プラットフォームが第１方向に傾けられる間に処理バッグ内の磁気ビーズに印加される、項８４から９２のいずれか一項に記載の方法。

【0654】

項９４：磁石は、プラットフォームが第１方向に傾けられた後に持ち上げられる、項９３に記載の方法。

【0655】

項９５：プラットフォームが第１方向に傾斜される間に、処理バッグのポートを通じて気体又は液体を注入するステップを更に含む、項９３又は９４に記載の方法。

【0656】

項９６：処理バッグが載置されているプラットフォームが水平に対して傾斜されるようにプラットフォームを第１方向とは反対の第２方向に傾けるステップと、プラットフォームが第２方向に傾けられる間に、処理バッグから液体を取り出すステップとを更に含む、項９３から９５のいずれか一項に記載の方法。

【0657】

項９７：ビーズ処理システムを使用して第１生物学的材料を第２生物学的材料から分離する方法であって、（ａ）第１生物学的材料及び第２生物学的材料を含む試料を、磁気ビーズが親和性結合を介して第１生物学的材料に付着するように磁気ビーズと接触させるステップであって、試料及び磁気ビーズがプラットフォーム上に載置された処理バッグ内に配置される、ステップと、（ｂ）プラットフォームに対して磁石を上昇させて、プラットフォームに対して磁気ビーズを所定の位置に強固に固定する磁場を磁石が生成するようにするステップであって、磁気ビーズには第１生物学的材料が付着される、ステップと、（ｃ）磁場が磁気ビーズに印加される状態で試料及び磁気ビーズに第１流体を通過させることにより、第１生物学的材料を第２生物学的材料から分離するステップとを含む方法。

【0658】

項９８：（ｄ）磁場が磁気ビーズに印加される間に第２流体を試料及び磁気ビーズに通過させるステップを更に含み、第２流体は、磁気ビーズからの第１生物学的材料の放出を誘導する、項９７に記載の方法。

【0659】

項９９：（ｄ）第１生物学的材料が付着された磁気ビーズがもはや磁石の磁場によってプラットフォームに対して定位置に強固に固定されないようにプラットフォームに対して磁石を下降させるステップを更に含む、項９７又は９８に記載の方法。

【0660】

項１００：第２生物学的材料は、細胞溶解物又は培地である、項９７から９９のいずれか一項に記載の方法。

【0661】

項１０１：第１生物学的材料は、（ａ）核酸分子、（ｂ）タンパク質、（ｃ）細胞、（ｄ）細胞外小胞、（ｅ）ウイルス様粒子（ＶＬＰ）から成るグループから選択される、項９７から１００のいずれか一項に記載の方法。

【0662】

項１０２：核酸分子は、リボ核酸（ＲＮＡ）分子である、項１０１に記載の方法。

【0663】

項１０３：細胞は、哺乳動物細胞である、項１０１又は１０２に記載の方法。

【0664】

項１０４：細胞は、Ｔ細胞である、項１０１又は１０３に記載の方法。

【0665】

項１０５：タンパク質は、抗体である、項１０１に記載の方法。

【0666】

項１０６：抗体との親和性結合は、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、又はこれらのタンパク質のうちの１つの機能的変異体によって形成される、項１０５に記載の方法。

【0667】

項１０７：細胞外小胞は、エキソソームである、項１０１に記載の方法。

【0668】

項１０８：エキソソームは、Ｔ細胞によって生成された、項１０７に記載の方法。

【0669】

項１０９：Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作される、項１０８に記載の方法。

【0670】

項１１０：エキソソームとの親和性結合は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体によって形成される、項１０７に記載の方法。

【0671】

項１１１：抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体は、ビオチン又はビオチン誘導体結合によって磁気ビーズに付着される、項１１０に記載の方法。

【0672】

項１１２：抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び／又は抗ＣＤ８抗体のうちの１つ以上が、ＶＨＨ(variable heavy-heavy)抗体である、項１１０に記載の方法。

【0673】

項１１３：精製リボ核酸（ＲＮＡ）分子を製造するための方法であって、（ａ）磁場によって第１磁気ビーズを適所に固定するステップであって、インビトロ転写（ＩＶＴ）鋳型が第１磁気ビーズに連結される、ステップと、（ｂ）ＩＶＴが起こる条件下でステップ（ａ）の第１磁気ビーズを鋳型のＩＶＴに適した試薬混合物と接触させて、ＲＮＡ分子を生成するステップと、（ｃ）第１磁気ビーズからＲＮＡ分子を分離して、精製ＲＮＡ分子を生成するステップとを含む方法。

【0674】

項１１４：（ｄ）洗浄中に精製ＲＮＡ分子が第２磁気ビーズと会合したままであることを可能にする条件下で、ステップ（ｃ）の精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズと接触させるステップと、（ｅ）第２磁石ビーズが磁場によって適所に固定される間に第２磁気ビーズを洗浄するステップと、（ｆ）精製ＲＮＡ分子を第２磁気ビーズとの会合から放出することによって高度に精製されたＲＮＡ分子を生成するステップとを更に含む、項１１３に記載の方法。

【0675】

項１１５：ＩＶＴ鋳型は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成される、項１１３又は１１４に記載の方法。

【0676】

項１１６：１つ以上のビオチン化プライマーが、ＰＣＲに使用されて、ビオチン化ＩＶＴ鋳型の形成をもたらす、項１１５に記載の方法。

【0677】

項１１７：ビオチン化ＩＶＴ鋳型は、ビオチン化ＩＶＴ鋳型のビオチンと、ビオチンに対する親和性を有する磁気ビーズ上の基との間の相互作用を介して磁気ビーズに付着される、項１１６に記載の方法。

【0678】

項１１８：ＩＶＴ鋳型は、タンパク質をコードするオープンリーディングフレームと、オープンリーディングフレームに作動可能に接続されたプロモータとを含む、項１１３から１１７のいずれか一項に記載の方法。

【0679】

項１１９：遊離カルボン酸基が第２磁気ビーズの表面に存在する、項１１４から１１８のいずれか一項に記載の方法。

【0680】

項１２０：精製ＲＮＡ又は高度に精製されたＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、項１１３又は１１４に記載の方法。

【0681】

項１２１：ｍＲＮＡは、病原体のタンパク質をコードする、項１２０に記載の方法。

【0682】

項１２２：項１１３から１２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ又はこのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含むワクチン組成物。

【0683】

項１２３：１つ以上のプログラムを記憶する非一時的コンピュータ可読記憶媒体であって、１つ以上のプログラムは、ディスプレイを有する電子デバイスによって実行される場合に、電子デバイスに、
ディスプレイ上に、少なくとも１つの一次仮想バイオプロセスパラメータ入力を含む一次選択領域と、一次仮想バイオプロセスパラメータ入力をオーバーライド又は複製する少なくとも１つの二次仮想入力を含む二次選択領域とを備えるグラフィカルユーザインタフェースを表示させる、
命令を含む、非一時的コンピュータ可読記憶媒体。

【0684】

項１２４：二次仮想入力は、キャンセルステップ、一時停止ステップ、停止ステップ、スキップステップ、又は重複ステップの入力を含む、項１２３に記載の記憶媒体。

【0685】

項１２５：一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、項１から４３及び項６６のいずれか一項に記載のビーズ処理アセンブリの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、項１２３に記載の記憶媒体。

【0686】

項１２６：一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、項４４～５９のいずれか一項に記載のビーズ処理システムの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、項１２３に記載の記憶媒体。

【0687】

項１２７：一次仮想バイオプロセスパラメータ入力は、項６４から６５のいずれか一項に記載のロッカアセンブリの動作を制御するバイオプロセスパラメータを含む、項１２３に記載の記憶媒体。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49】

【図50】

【図51】

【図52】

【図53】

【図54】

【図55】

【図56】

【図57】

【図58】

【図59】

【図60】

【図61】

【図62】

【図63】

【図64】

【図65】

【国際調査報告】