特表 2023-547196 皮膚症状を治療するための新規組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-09

(54)【発明の名称】皮膚症状を治療するための新規組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/744 20150101AFI20231101BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20231101BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20231101BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20231101BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20231101BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20231101BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20231101BHJP

   A61K 8/99 20170101ALI20231101BHJP

【ＦＩ】

A61K35/744

A61P17/00

A61Q19/00

A61P17/10

A61P37/08

A61P17/06

A61P17/02

A61K8/99

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023525966

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2023-06-09

(86)【国際出願番号】 EP2021080640

(87)【国際公開番号】W WO2022096573

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】PA202001248

(32)【優先日】2020-11-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK

(31)【優先権主張番号】PA202100281

(32)【優先日】2021-03-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521292984

【氏名又は名称】ラクトバイオ アー／エス

【氏名又は名称原語表記】ＬＡＣＴＯＢＩＯ Ａ／Ｓ

【住所又は居所原語表記】Ｌｅｒｓｏ Ｐａｒｋａｌｌｅ ４２，２．，２１００ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ｏ（ＤＫ）

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ヴェデル，シャーロット

(72)【発明者】

【氏名】オルセン，カチャ ビレコップ

(72)【発明者】

【氏名】キャエルフ，セーレン

(72)【発明者】

【氏名】クリステンセン，シグール

【テーマコード（参考）】

4C083

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C083AA031

4C083AA032

4C083EE13

4C083EE14

4C083FF01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC55

4C087BC56

4C087CA10

4C087MA63

4C087NA14

4C087ZA89

4C087ZB13

4C087ZC52

(57)【要約】

本発明は、細菌の発酵から産生された上清を含む、皮膚症状を改善するための組成物に関し、上清は、発酵中に細菌によって産生された少なくとも３つの代謝産物を含み、少なくとも３つの代謝産物は、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸のうちの少なくとも１つを含み、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸のうちの少なくとも１つは、乳酸菌の発酵によって産生される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

皮膚症状を改善するための組成物であって、細菌の発酵から産生された上清を含み、前記上清が、発酵中に前記細菌によって産生された少なくとも３つの代謝産物を含み、前記少なくとも３つの代謝産物が、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸のうちの少なくとも１つを含み、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸のうちの少なくとも１つが、乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【請求項2】

前記少なくとも３つの代謝産物が、バクテリオシン、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

バクテリオシン産生細菌の発酵から産生された上清を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、その細菌が、以下の代謝産物、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの少なくとも２つを産生する、組成物。

【請求項4】

サリチル酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、前記サリチル酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【請求項5】

コハク酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、前記コハク酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【請求項6】

２－ヒドロキシイソカプロン酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、前記２－ヒドロキシイソカプロン酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【請求項7】

アゼライン酸及びサリチル酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、前記アゼライン酸及び前記サリチル酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【請求項8】

過酸化水素、フェニル乳酸、３－ヒドロキシフェニル乳酸、４－ヒドロキシフェニル乳酸、３－ヒドロキシプロパンアルデヒド、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、コハク酸、エタノール、酢酸、炭酸、プロパン酸、酪酸、環状ジペプチド、シクロ（Ｌ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）、シクロ（Ｌ Ｐ－Ｔｒａｐｓ－４－ＯＨ－Ｌ－Ｐｒｏ）、３－（Ｒ）－ヒドロキシデカン酸、３－ヒドロキシ－５－ｃｉｃドデカン酸、３－（Ｒ）－ヒドロキシドデカン酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸及び３－（Ｒ）－ヒドロキシテトラデカン酸を含む群から選択される少なくとも１つの抗菌性細菌代謝産物を更に含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記バクテリオシン産生細菌が、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ラハムノースス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒａｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ラクトバチルス・サリバルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・デルブリッキィ亜種ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｅｋｉｉ ｓｐｐ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・セレビオスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｉｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｓｅｎｔｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｕｍ）、エンテロコッカス・ファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・ジアセチラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ストレブトコッカス・サーモフィレス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ｓｕｂｓｐ．Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、プロピオニバクテリア・フロイデンライチー（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｅｕｎｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（有胞子性乳酸菌（Ｌ．ｓｐｏｒｅｇｅｎｅｓ））、オキサロバクター・フォルマジェネス（Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｏｒｍａｇｅｎｅｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｓ）、及びロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）を含む群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

化粧品又は医薬品である、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物を含む局所製剤。

【請求項11】

皮膚症状を治療又は予防するための、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬品。

【請求項12】

前記皮膚症状が、炎症性若しくは感染性の疾患若しくは皮膚損傷又は機能不全の皮膚微生物叢である、請求項１１に記載の医薬品。

【請求項13】

前記皮膚症状が、座瘡、酒さ、湿疹、アトピー性皮膚炎及び乾癬から選択される、請求項１１に記載の医薬品。

【請求項14】

前記皮膚症状が、光損傷、老化、皮膚線条及び瘢痕から選択される、請求項１１に記載の医薬品。

【請求項15】

単離された乳酸菌の発酵を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物を産生する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、皮膚症状の治療のための組成物及びその使用に関し、特に局所組成物及び使用に関する。本発明は、微生物の発酵によって産生される組成物に関する。特に、本発明は、機能不全の微生物叢の調節、皮膚症状の予防又は皮膚症状の治療に有用な微生物起源組成物に関する。本発明は、微生物代謝産物を含む新規組成物に関する。

【0002】

特に、本発明は、１回の発酵によって少なくとも３つの機能的代謝産物を産生する微生物によって得られる新規組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

本発明は、炎症、感染、機能不全の微生物叢、老化、光損傷又は瘢痕化に関連する皮膚症状を予防又は治療するための組成物、当該組成物の使用及び使用方法に関する。微生物の発酵によって得られた機能性代謝産物、特に少なくとも３つの機能性代謝産物を産生する細菌の発酵からの上清を含む組成物。

【0004】

特に、機能的代謝産物を産生する細菌の発酵からの未精製上清を含む組成物。

【0005】

いくつかの皮膚症状は、機能不全の微生物叢、感染、炎症、損傷又はそれらの任意の組み合わせを引き起こすか、又はそれらの結果であってもよい。

【0006】

座瘡は、炎症性丘疹、膿疱、並びに嚢胞及び非炎症性面皰を伴う脂腺異常である。座瘡は主に十代の若者及び若年成人が罹患し、病原性キューティバクテリウム・アクネス（Ｃｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）に関連する（非特許文献１）。酒さは、高い血管反応を特徴とする顔の紅潮領域の慢性疾患である。酒さは、顕著な間欠性紅潮として始まり、永続的になり、その後に毛細血管拡張が続く。後に丘疹及び膿疱が生じるが、面疹は生じない。酒さは、３０歳以上の女性に最も一般的に起こる。口囲皮膚炎は、主に若年女性に発症し、紅斑、丘疹、丘疹－小胞、並びに顎、鼻唇溝、及び上唇の間欠性湿疹斑を特徴とする。痒み及び灼熱感が存在することが多い。通常の治療は、抗生物質及びコルチコステロイドからなる。脂漏性皮膚炎は、組織病理学的に湿疹性の皮膚病であり、黄色がかった脂っぽい鱗片を有する境界が不明瞭な鱗状の紅斑性斑点を特徴とする。「フケ」は、頭皮に局在するこの状態の軽度の形態である。この疾患は、以下の部位、頭皮、眉毛、眉間、鼻の溝及び顎の溝、耳及び後耳介溝、胸骨前肩甲間領域、恥骨領域及び臀裂のうちの１つ、いくつか、又は全てを含み得る。タール、硫黄、又は抗生物質を含むコルチコステロイドは、場合によっては一時的な制御をもたらす。

【0007】

乾癬は、ケラチノサイト表皮通過時間が９倍増加することを特徴とする一般的な慢性増殖性表皮疾患である。病変は、明確に境界付けられた厚い紅斑であり、豊富な白色鱗片を有する。最も一般的に関与する部位には、肘、膝、頭皮、生殖器、及び臀裂が含まれる。治療は、局所タール、アンスラリン、及びコルチコステロイドから全身メトトレキサート、ソラレン並びに紫外線Ａ光、及び紫外線Ｂ光に及ぶ。湿疹性皮膚炎は、様々な疾患の最終的な結果である表皮海綿状態の病的状態である。これらには、アトピー性皮膚炎、アトピー体質、アレルギー性及び刺激性接触反応、光アレルギー性及び光毒性反応、薬疹並びに重度の脂肪症が含まれる。発疹の部位は、傷害性疾患に依存する。現在の治療は、局所及び全身のコルチコステロイド並びに局所タールからなる。これらの皮膚症状に関連する感染性生物は、他の皮膚領域に広がる可能性があり、他の人々に伝染する可能性さえあり、天然の皮膚微生物叢の変化をもたらし、疾患を更に悪化させる機能不全の微生物叢を引き起こす可能性がある。本治療は、局所及び全身抗生物質からなる。

【0008】

これらの症状に共通しているのは、効果的で穏やかな治療法がないことであり、ほとんどの利用可能な治療法は、有害な副作用を有するホルモン又は抗生物質に基づいており、より機能不全の微生物叢をもたらす。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｆｉｔｚ－Ｇｉｂｂｏｎら、２０１３、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３３：２１５２－６０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｊｉｄ．２０１３．２１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

多くの市販の治療法にもかかわらず、特に座瘡、酒さ及び湿疹は、治療が困難な状態のままであり、多くの患者は様々な試みられた治療法に反応せず、多くの場合に治療を予測不可能にする。

【0011】

これらは、本発明が局所的に適用される場合に有効な治療法となる症状の例である。

【課題を解決するための手段】

【0012】

微生物は、驚くべきことに、発酵中に、単一の代謝産物を精製することなく皮膚症状を予防又は治療するのに有用な発酵からの上清中の所望の微生物阻害量の濃度で代謝産物、バクテリオシン及び有機酸を産生すると同定された。したがって、いくつかの乳酸菌は、発酵中に、皮膚症状の治療に適した上清中に、バクテリオシン、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及び／又はＮ－アセチルアスパラギン酸を含む複数の機能的代謝産物を産生することが同定された。

【0013】

本発明の上清は、皮膚症状の予防若しくは治療又は機能不全の微生物叢の調節のための治療用又はスキンケア用組成物において、スキンケア製品として直接使用するために、又はスキンケア製品に製剤化するために好適であることが観察された。

【0014】

本発明の微生物は、フィブリリン及びコラーゲン合成の活性化による皮膚のハリに対する広範囲の抗菌活性、抗炎症活性、剥離効果、保湿効果又は機能効果を提供するのに十分な発酵において、ある収量の機能的代謝産物を発酵させることができる。１回の発酵で複数の機能的代謝産物を産生することができる微生物を同定することは驚くべきことであり、上清は単一の代謝産物を更に精製することなく局所適用に即座に役立つ。

【0015】

更に、代謝産物間の相乗効果を決定し、それによって精製した代謝産物で必要とされる機能的濃度よりも各代謝産物の機能的濃度を低くすることを可能にすることは驚くべきことであった。

【0016】

本発明に特に関連する代謝産物は、バクテリオシン、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸である。

【0017】

しかしながら、皮膚に対する剥離、剥脱効果を有する乳酸、酢酸及びグリコール酸、抗炎症活性を有するコハク酸、座瘡治療剤として有用な剥離剤としてのサリチル酸、座瘡や酒さの治療用のアゼライン酸が、発酵プロセスによって機能的効果を伴って収率よく産生できることは知られていない。炎症性成分として知られているインドール－３－ラクチド酸及びインドール－３－酢酸、乾燥肌や湿疹の保湿剤として知られている２－ヒドロキシブチル酸、皺を軽減するためのＮ－アセチルトリプトファン、抗酸化剤としてコラーゲンの生合成効果を有するＮ－アセチルグルタミン、フィブリリンやコラーゲンの合成の活性化が知られており、老化防止成分として及び皮膚のハリの改善に有用なＮ－アセチルアスパラギン酸（ＮＡＡ）（Ｇｉｌｌｂｒｏ ＪＭ、Ｍｅｒｉｎｖｉｌｌｅ Ｅ、Ｃａｔｔｌｅｙ Ｋ、Ａｌ－Ｂａｄｅｒ Ｔ、Ｈａｇｆｏｒｓｅｎ Ｅ、Ｎｉｌｓｓｏｎ Ｍ、Ｍａｖｏｎ Ａ、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｓｍｅｔ Ｓｃｉ．２０１５ Ｏｃｔ；３７ Ｓｕｐｐｌ １：４１－６．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｉｃｓ．１２２５０．ＰＭＩＤ：２６１３２５０８）。

【0018】

バクテリオシン及びいくつかの有機酸、例えば乳酸、酢酸、コハク酸及び２－ヒドロキシイソカプロン酸は、抗菌活性が知られている。

【0019】

有機酸の抗菌活性は、高濃度の酸で得られ、これらの高濃度の酸は皮膚に著しい損傷を引き起こす可能性があるため、哺乳動物の皮膚への使用が制限される。

【0020】

本発明は、発酵によって産生された活性成分を含み、生細胞材料を含まない上清を含む組成物を含む。皮膚症状を予防又は治療するためのそのような組成物の使用。代謝産物が単一成分として使用される場合に必要とされる濃度よりもはるかに低い濃度の単一代謝産物で皮膚症状に対する効果が得られるので、組成物によって相乗効果が得られる。例えば、アゼライン酸は、２～２０％（ｗ／ｗ）の高濃度で酒さに使用されるが、複数の代謝産物を含む組成物中でアゼライン酸を使用すると、全てが相乗的機能効果に寄与するため、使用濃度を大幅に減らすことができ、これらの代謝産物を２％（ｗ／ｗ）を超える高濃度で使用する場合に観察され得る副作用及び毒性又は刺激を低下させる。

【0021】

発明の概要
したがって、本発明の目的は、皮膚症状に対して有効な代謝産物を含む、単離された乳酸菌からの上清に関する。

【0022】

本発明は、発酵によって産生された活性成分を含む上清に関する。

【0023】

活性成分は、機能性酸及びバクテリオシンである。

【0024】

特に、本発明は、少なくとも２種の有機酸及び少なくとも１種の発酵副生成物を含む上清に関する。

【0025】

特に、本発明の目的は、先行技術の上述の問題を解決する組成物を提供することである。

【0026】

本発明の一態様では、組成物は、尋常性座瘡、酒さ、アトピー性皮膚炎、湿疹又は乾癬を治療又は予防するためのものである。

【0027】

本発明の一態様では、組成物は、皮膚老化、光損傷、皮膚線条又は瘢痕化を治療又は予防するためのものである。

【0028】

本発明の一態様では、有機酸は、アゼライン酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルアスパラギン酸、コハク酸及び乳酸から選択される。

【0029】

本発明の一態様では、活性成分はバクテリオシンである。

【0030】

したがって、本発明の一態様は、バクテリオシン及び少なくとも１種の有機酸を含む組成物に関する。

【0031】

したがって、本発明の一態様は、プランタリシン及び少なくとも１種の有機酸を含む組成物に関する。

【0032】

本発明の更に別の態様では、少なくとも２種の異なるバクテリオシンが組成物中に存在する。

【0033】

本発明の組成物は、少なくとも以下の成分であるバクテリオシン及び有機酸を含み、有機酸は、サリチル酸及び／又は乳酸及び／又は２－ヒドロキシイソカプロン酸及び／又はアゼライン酸及び／又はコハク酸及び／又はインドール－３－乳酸及び／又は２－ヒドロキシブチル酸及び／又はＮ－アセチルアスパラギン酸及び／又はインドール－３－酢酸である。

【0034】

本発明の別の態様では、上清は、１種の乳酸菌の発酵から産生された２種の異なるバクテリオシンを含み、乳酸菌は、バクテリオシンを産生するように遺伝子改変されていない。

【0035】

また、本発明の更に別の態様では、組成物は皮膚症状を治療又は予防するためのものである。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【0037】

以下、本発明をより詳細に説明する。

【発明を実施するための形態】

【0038】

発明の詳細な説明
定義
本発明を更に詳細に論じる前に、以下の用語及び慣習を最初に定義する。

【0039】

「皮膚症状」という用語は、酒さ、尋常性座瘡、口囲皮膚炎、湿疹、脂漏性皮膚炎、乾癬、及び股部白癬などの皮膚病並びに病原性細菌、酵母、真菌又はダニによって引き起こされる微生物感染を含む、付属器、真皮及び表皮の炎症を含む状態を含む、感染又は炎症によって引き起こされる状態を指す。

【0040】

「バクテリオシン」という用語は、微生物に対して活性であるが産生細菌に害を及ぼさない細菌によって産生される抗菌ペプチド又はタンパク質を指す。本発明の目的のために、バクテロシン又はバクテロシン源は、一般に、化粧品又は医薬品としての製剤での使用に適した抗菌剤を含む。特に好ましい抗菌剤としては、「抗生物質」（すなわち、ランチオニン及びベータ－メチルランチオニンを含有するポリペプチド）が挙げられる。そのような抗生物質の非限定的な例は、ナイシン、例えばナイシンＡ若しくはナイシンＺ、又はナイシン類似体又は関連するランチオニン含有ペプチド、例えばペディオシン、ラクトシン、ラクタシン（例えば、ラクティシンＡ、ラクティシンＢ、ラクタシンＦ）、カモシン、エンテロシン、プランタリシン、サブチリシン、エピデルミン、シンナマイシン、デュラマイシン、アンコベニン、Ｐｅｐ５などであり、個々に又はそれらの任意の組み合わせである。本発明で有用な他のバクテロシンとしては、例えば、ラクトコッシン（例えば、ラクトコッシンＡ、ラクトコッシンＢ、ラクトコッシンＭ）、ロイココイン（ｌｅｕｃｏｃｏｉｎ）、ヘルベチカン（ｈｅｌｖｅｔｉｃａｎ）、アシドフィルシン、カゼイシンなどが個別に又は任意の組み合わせで挙げられる。

【0041】

「プランタリシン」という用語は、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）由来のバクテリオシンを指し、プランタリシンの主な種類としては、プランタリシンＡ、プランタリシンＥ、プランタリシンＦ、プランタリシンＪ、プランタリシンＫ、プランタリシンＣ、プランタリシンＤ、プランタリシンＷ、プランタリシンＴ及びプランタリシンＳが挙げられる。他のプランタリシン、例えばプランタリシン３５ｄ、プランタリシンＭＧ、プランタリシン４２３、プランタリシン１５４、プランタリシン１４９、プランタリシン１６３、プランタリシンＬＣ７４、プランタリシンＫ２５、プランタリシンＳＴ３１、プランタリシンＳＡ６も挙げられる。特に、広範囲のプランタリシン、例えばプランタリシンＦ、プランタリシンＤＬ３、プランタリシンＺＪ００８、プランタリシンＭＧ、プランタリシンＱ７、プランタリシンＫＬ－１Ｙ、プランタリシン１６３、プランタリシン１５４。

【0042】

本明細書で使用される場合、「発酵」という用語は、乳酸発酵、すなわち、かなりの量の乳酸及び／又は他の有機酸を形成する炭水化物の酵素分解を意味する。「乳酸菌」という用語は、ラクトバチルス科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、アエロコックス科（Ａｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ビフィドバクテリウム科（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、カルノバクテリウム科（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、エンテロコッカス科（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ロイコノストック科（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃａｃｅａｅ）及びレンサ球菌科（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）の種を含む。これらは非病原性であると考えられ、胃腸内細菌叢を改善するため、及び胃腸症状の治療において一般にプロバイオティクス細菌として使用される。

【0043】

「上清」という用語は、乳酸菌の発酵からの発酵ブロスを指す。上清は、発酵産物、発酵ブロスからの基質、及び細胞材料の両方を含む未精製品であってもよい。

【0044】

「無細胞上清」という用語は、生細胞が除去された上清を指す。無細胞上清（ＣＦＳ）は、１０００生存ＣＦＵ／ｍｌ未満を含む。ＣＦＳは、死細胞からの細胞材料を含むことができる。

【0045】

「発酵副産物」は、ソルビン酸、プロピオン酸、安息香酸、乳酸、酢酸を含む群から選択される少なくとも１つのメンバーを含むことができ、かつ／又はフェニル乳酸、３－ヒドロキシフェニル乳酸、４－ヒドロキシフェニル乳酸、３－ヒドロキシプロパンアルデヒド、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、過酸化水素、エタノール、二酸化炭素、炭酸、プロパン酸、酪酸、環状ジペプチド、シクロ（Ｌ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）、シクロ（Ｌ Ｐ－Ｔｒａｐｓ－４－ＯＨ－Ｌ－Ｐｒｏ）、３－（Ｒ）－ヒドロキシデカン酸、３－ヒドロキシ－５－ｃｉｃドデカン酸、３－（Ｒ）－ヒドロキシドデカン酸、及び３－（Ｒ）－ヒドロキシテトラデカン酸を含む群から選択される少なくとも１種の抗菌性乳酸産生細菌代謝産物を含むことができる。発酵副産物はまた、リポテコン酸（ｌｉｐｏｔｅｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）、テイコ酸、ペプチドグリカン、ムシン、細胞外多糖類及び細胞壁に関連するタンパク質を含む発酵微生物からの細胞壁材料あってもよい。

【0046】

本教示の更に別の実施形態によれば、発酵副産物は、抗生物質及び／又は非抗生物質である少なくとも１種のバクテリオシンを含む。本教示の別の実施形態によれば、発酵副産物は、ナイシンＡ、ナイシンＺ、ナイシンＱ、ナイシンＦ、ナイシンＵ、ナイシンＵ２、サリバルシンＸ、ラクティシンＪ４６、ラクティシン４８１、ラクティシン３１４７、サリバルシンＡ、サリバルシンＡ２、サリバルシンＡ３、サリバルシンＡ４、ＢＨＴ－Ａａ、ＢＨＴ Ａｂ、サリバルシンＡ５、サリバルシンＢ、ストレプチン、サリバリシンＡｌ、ストレプチン、ストレプトコッシンＡ－ＦＦ２２、ミュータシンＢＮＹ２６６、ミュータシン１１４０、ミュータシンＫ８、ミュータシンＩＩ、ｓｍｂＡＢ、ボビシンＨＪ５０、ボビシンＨＣ５、マセドシン、ロイコシンＣ、サカシン５Ｘ、エンテロシンＣＲＬ３５／ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ、アビシンＡ、ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ Ｉ、エンテロシンＨＦ、ババリシンＡ、ウベリシンＡ、ロイコシンＡ、メセンテリシンＹ１０５、サカシンＧ、キュアバシンＡ／サカシンＡ、ラクトシン５、サイトリシン、エンテロシンＡ、ディベルシンＶ４１、ダイバシンＭ３５、ババリシン、コアグリン、ペディオシンＰＡ－１、ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ、ピシコシンＣＳ５２６、ピシコシン１２６／Ｖｌａ、サカシン、プカルノバクテリオシン（Ｐｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ）ＢＭ１、エンテロシンＰ、ピシコインＶｌｂ、ペノシンＡ、バクテリオシン３１、バクテリオシンＲＣ７１４、ヒラシンＪＭ７９、バクテリオシンＴ８、エンテロシンＳＥ－Ｋ４、カルノバクテリオシンＢ２及びプランタリシンを含む群から選択される少なくとも１種の更なるバクテリオシンを含む。

【0047】

本発明は、生存している及び／又は死んでいる（死滅）細菌株からの上清に関し、両方の形態が本発明の範囲内に含まれ得る。

【0048】

本発明の好ましい実施形態では、細菌は発酵後に不活性化（死滅）される。

【0049】

適切な死滅方法（例えば、生物学的、化学的又は物理的死滅方法）は、当業者に十分に公知である。微生物の死滅形態は、ライセート発酵組成物中の上清及び任意の存在する代謝産物を含むことができる。

【0050】

「死滅した」又は「死んだ」という用語は、細胞分裂が不可能であり、代謝活性を有さない不活性化乳酸菌に関する。死んだ又は死滅した乳酸菌は、無傷又は破裂した細胞膜及び細胞壁を有し得る。

【0051】

「ライセート」（Ｌｙｓａｔｅｓ）、「誘導体」、「類似体」、「画分」又は「抽出物」は、死んだ又は死滅した乳酸菌から得ることができる。これらのライセート、画分、誘導体、類似体、及び抽出物は、好ましくは、病原性細菌と結合又は共凝集することができ、それによって病原体の増殖及び／又はバイオフィルム形成を防止する特性を有し、「ライセート」及び「抽出物」という用語は、特に、本発明による微生物の細胞の水性媒体中の溶液又は懸濁液を指し、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチド、脂質、炭水化物などの巨大分子、並びに細胞破片を含む。ライセートは、好ましくは、共凝集のための結合受容体を含む細胞壁又は細胞壁成分を含む。ライセートを生成する方法は、当業者に十分に公知であり、例えば、「フレンチプレス」又は酵素溶解、ガラスビーズ又は鉄ビーズを有するボールミルの使用を含む。細胞は、酵素的、物理的又は化学的方法によって破壊することができる。酵素細胞溶解の例としては、個々の酵素並びに酵素カクテル、例えばプロテアーゼ、プロテイナーゼＫ、リパーゼ、グリコシダーゼを挙げることができ、化学的溶解は、イオノフォア、ＳＤＳなどの界面活性剤、酸又は塩基によって誘導することができ、物理的方法はまた、フレンチプレスなどの高圧、オスモル濃度、温度、又は熱と冷との交互を使用することによって実施することもできる。更に、化学的、物理的及び酵素的方法を当然組み合わせることができる。

【0052】

好ましい実施形態では、本発明による組成物及び／又は上清は、哺乳動物における病原性微生物感染に関連する疾患を治療、緩和、抑制、予防に適している。

【0053】

本発明は、微生物によって引き起こされる皮膚の問題を制御する方法に関する。本発明はまた、座瘡感染症患者の皮膚上のキューティバクテリウム・アクネス（Ｃｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を阻害する方法に関する。

【0054】

本明細書で使用される「阻害」又は「阻害する」という用語は、望ましくない細菌などの微生物の死滅、又は当該微生物の増殖の制御を意味する。

【0055】

対象の処置方法に関する化合物の「治療有効量」は、所望の投与計画の一部として（哺乳動物、好ましくはヒトに）投与された場合に、治療される障害若しくは状態又は美容目的のための臨床的に許容され得る基準に従って、例えば、任意の治療に適用可能な合理的な利益リスク比で、症状を緩和するか、状態を改善するか、又は疾患状態の発症を遅らせる調製物中の化合物の量を指す。

【0056】

本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療」という用語は、対象の状態を改善又は安定化する方法で、状態の症状、臨床徴候、及び基礎病理を逆転、低減、又は停止することを含む。

【0057】

ここでも、「約（ａｂｏｕｔ）」又は「ほぼ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」などの用語によって特徴付けられる本発明で与えられる範囲の全ての記述と同様に、正確な数値範囲が「約（ａｂｏｕｔ）」又は「ほぼ（ａｐｐｒｏｘ．）」又は「ほぼ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」などの表現で示される必要はなく、代わりに、示された数に関して上下のわずかなずれさえも依然として本発明の範囲内であることは当業者には明らかであろう。

【0058】

「哺乳動物」には、ヒト、霊長類、家畜、スポーツ動物、げっ歯類及びペットが含まれるが、これらに限定されない。非ヒト動物対象の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスター及びモルモットなどのげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、子ブタ、雌ブタ、家禽、シチメンチョウ、ブロイラー、ミンク、ヤギ、ウシ、ウマ、並びに類人猿及びサルなどの非ヒト霊長類が挙げられる。
別の態様では、本教示は、生存微生物を実質的に含まない発酵組成物を開示する。組成物は、死細胞を含む細胞材料を含むことができる。

【0059】

本発明の一態様では、組成物は、発酵からの上清及び更なる機能的効果を有する細胞材料を含む。

【0060】

本発明の一態様では、細胞材料は皮膚病原体と共凝集することができる。

【0061】

本発明の一態様では、細胞材料は、キューティバクテリウム・アクネス（Ｃｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）又は黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）と共凝集することができる。

【0062】

いくつかの実施形態では、皮膚症状は、座瘡、接触皮膚炎、光線性皮膚炎、微生物感染によって引き起こされる皮膚炎、湿疹、又は酒さである。好ましい実施形態では、皮膚症状は座瘡である。いくつかの実施形態では、皮膚は、顔、頭皮、首、胸、又は背中の皮膚である。好ましい実施形態では、皮膚は顔の皮膚である。

【0063】

局所適用のための組成物は、好ましくは、エマルジョン、ミスト、ペースト、タルク、粉末、ローション、カスタード、フォーム、クリーム、油、血清、軟膏、スプレー又は半固体製剤に製剤化することができる。

【0064】

上清の好ましいｐＨはｐＨ２．５～ｐＨ７であり、より好ましくはｐＨ３～ｐＨ６であり、更により好ましくはｐＨ３～ｐＨ５．５である。発酵によって生成された酸に起因する上清の低ｐＨは、皮膚に適用されると、高ｐＨの皮膚表面の酸性化を引き起こす。健康な皮膚はｐＨが約４．５であり、発酵によって産生される代謝産物は、別の有益な効果として、皮膚の健康なｐＨを維持するのを助ける。

【0065】

本発明は、乳酸菌のいくつかの種が、たとえ乳酸菌がもはや存在せず、皮膚上で発酵がないとしても、皮膚病原体の増殖を阻害するのに有効な量のバクテリオシンを上清中に産生するという発見に基づく。

【0066】

本発明によれば、好ましいバクテリオシン産生乳酸菌は、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ラハムノースス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒａｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ラクトバチルス・サリバルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・デルブリッキィ亜種ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｅｋｉｉ ｓｐｐ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・セレビオスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｉｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｓｅｎｔｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｕｍ）、エンテロコッカス・ファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・ジアセチラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ストレブトコッカス・サーモフィレス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ｓｕｂｓｐ．Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、プロピオニバクテリア・フロイデンライチー（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｅｕｎｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（有胞子性乳酸菌（Ｌ．ｓｐｏｒｅｇｅｎｅｓ））、オキサロバクター・フォルマジェネス（Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｏｒｍａｇｅｎｅｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｓ）、又はロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、より好ましくはラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）である。

【0067】

本発明の一実施形態では、好ましい微生物は、単離された野生型乳酸菌である。

【0068】

本発明の一実施形態では、好ましい微生物は、１回の発酵で本発明の代謝産物を産生することができるように操作された遺伝子改変細菌である。

【0069】

本発明によれば、好ましい乳酸菌は、発酵中に上清中に、少なくとも０．５％（ｗ／ｗ）の以下の代謝産物、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及び／又はＮ－アセチルアスパラギン酸の少なくとも１つを産生することができるラクトバチルス・プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）である。

【0070】

本発明の一実施形態では、本発明による乳酸菌、特にラクトバチルス・プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）は、発酵中の上清中に、少なくとも０．０５％（ｗ／ｗ）、例えば少なくとも０．１％（ｗ／ｗ）、例えば少なくとも０．２５％（ｗ／ｗ）、例えば少なくとも０．５％（ｗ／ｗ）の以下の代謝産物、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及び／又はＮ－アセチルアスパラギン酸の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、更により好ましくは少なくとも４つ、更により好ましくは少なくとも５つを産生することができる。好ましくは、言及された量で産生される代謝産物としては、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、及び／又は２－ヒドロキシイソカプロン酸が挙げられる。

【0071】

本発明による組成物は、驚くべきことに、皮膚症状を改善できることが見出された。細菌の発酵から産生された上清を含む組成物であって、上清が発酵中に細菌によって産生された少なくとも３つの代謝産物を含む、組成物。

【0072】

本発明の一実施形態では、少なくとも３つの代謝産物は、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸のうちの少なくとも１つ、例えば代謝産物の少なくとも２つを含むことができ、例えば少なくとも３つの代謝産物は、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及びサリチル酸を含む。好ましくは、コハク酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、アゼライン酸及び／又はサリチル酸は、乳酸菌の発酵によって産生される。

【0073】

上清は、単発酵から、又はいくつかの発酵から得られた上清の混合物から産生することができる。

【0074】

上清が単発酵から提供される場合、単発酵は、以下の代謝産物、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの少なくとも２つ、例えば少なくとも３つの代謝産物、例えば少なくとも４つの代謝産物、例えば少なくとも５つの代謝産物、例えば少なくとも６つの代謝産物、例えば少なくとも７つの代謝産物、例えば少なくとも８つの代謝産物を含む上清をもたらした可能性がある。

【0075】

上清は、様々な発酵からの２つ以上の上清の混合物から生成することができる。この場合、混合された上清のそれぞれは、以下の代謝産物、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの１つ又は複数、例えば少なくとも３つの代謝産物、例えば少なくとも４つの代謝産物、例えば少なくとも５つの代謝産物、例えば少なくとも６つの代謝産物を含むことができる。好ましくは、混合された上清は、同じ代謝産物又は同じ濃度の様々な代謝産物を含まなくてもよい。］

【0076】

バクテリオシンは、一般に、Ｔｗｏｍｅｙ，Ｄ．ら、Ｌａｎｔａｂｉｏｔｉｃｓ Ｐｒｏｄｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｌａｃｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｎｔｏｎｉｅ ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ、８２：１５－１８５、２００２、及びＣｌｅｖｅｌａｎｄ，Ｊ．ら「Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ：Ｓａｆｅ，Ｎａｔｕｒａｌ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ」、Ｉｎｔ´ｌ Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏ．、７１（２００１）１－２０に記載されているように、一般に、食品中の病原性微生物や腐敗性微生物の抑制に有効であることが知られているバクテリオシンは、一般に、細胞質膜に細孔を形成することによって感受性細胞に作用すると理解されている。これは、上記のＴｗｏｍｅｙら及びＣｌｅｖｅｌａｎｄらによって記載されているように、プロトン駆動力の消失並びにグルタミン酸及びＡＴＰのような小さな細胞内分子の放出をもたらす。これにより、細胞は透過性になるが、その環境における生化学的プロセスに依然として関与することができる。そのような「漏れやすい」細胞の生成を助けるための界面活性剤による細胞の処理は、国際公開第０１／４７３６６号に記載されている。この活性は、典型的には、精製したバクテリオシンによって、又はバクテリオシン産生細菌と病原性及び腐敗性微生物との共増殖によって得られる。

【0077】

本発明では、少なくとも１つの二次抗菌剤がバクテロシンと組み合わせて上清に含まれる。そのような二次抗菌剤の例としては、例えば、金属キレート剤（例えば、クエン酸など）、有機酸、短鎖遊離脂肪酸、プロトンイオノフォア（例えば、ソルビン酸、安息香酸など）、乳由来抗菌剤（例えば、ラクトフェリン、ラクト脂質など）、モノグリセリド（例えば、モノリノレニン、モノラウリンなど）、ホップ酸などが挙げられる。使用される場合、これらの二次抗菌剤は、一般に、約０．０１～約０．５％の量で存在する。有機酸の場合、ＣＦＳ中の濃度は約０．５～７％とより高い。

【0078】

特に好ましい組み合わせとしては、バクテリオシン及び有機酸が挙げられる。

【0079】

発酵副産物としては、バクテリオシン、プランタリシン、過酸化水素、リポテイコン酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、テイコン酸、塩、糖タンパク質、及び酸性ムチンを含む群から選択される少なくとも１つのメンバーを含むことができる。

【0080】

本教示の一実施形態によれば、発酵副産物は、２－ヒドロキシイソカプロン酸、フェニル乳酸、３－ヒドロキシフェニル乳酸、４－ヒドロキシフェニル乳酸、３－ヒドロキシプロパンアルデヒド、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、過酸化水素、エタノール、酢酸、二酸化炭素、炭酸、プロパン酸、酪酸、環状ジペプチド、シクロ（Ｌ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）、シクロ（Ｌ Ｐ－Ｔｒａｐｓ－４－ＯＨ－Ｌ－Ｐｒｏ）、３－（Ｒ）－ヒドロキシデカン酸、３－ヒドロキシ－５ｃｉｃドデカン酸、３－（Ｒ）－ヒドロキシドデカン酸及び３－（Ｒ）－ヒドロキシテトラデカン酸を含む群から選択される細菌代謝産物を産生する少なくとも１つの抗菌性乳酸を含む。

【0081】

本教示の別の実施形態によれば、発酵副産物は、ランチビオティック（クラスＩＩ）又は非ランチビオティック（クラスＩＩ）である少なくとも１つのバクテリオシンを含む。本教示の更に別の実施形態によれば、発酵副産物は、プランタリシンＡ、プランタリシンＥ、プランタリシンＦ、プランタリシンＪ、プランタリシンＫ、プランタリシンＣ、プランタリシンＤ、プランタリシンＷ、プランタリシンＴ、プランタリシンＳ、プランタリシン３５ｄ、プランタリシンＭＧ、プランタリシン４２３、プランタリシン１５４、プランタリシン１４９、プランタリシン１６３、プランタリシンＬＣ７４、プランタリシンＫ２５、プランタリシンＳＴ３１、プランタリシンＳＡ６を含む群から選択される少なくとも１つのバクテリオシンを含む。特に、広範囲のプランタリシン、例えばプランタリシンＦ、プランタリシンＤＬ３、プランタリシンＺＪ００８、プランタリシンＭＧ、プランタリシンＱ７、プランタリシンＫＬ－１Ｙ、プランタリシン１６３、プランタリシン１５４、ナイシンＡ、ナイシンＺ、ナイシンＱ、ナイシンＦ、ナイシンＵ、ナイシンＵ２、サリバルシンＸ、ラクティシンＪ４６、ラクティシン４８１、ラクティシン３１４７、サリバルシンＡ、サリバルシンＡ２、サリバルシンＡ３、サリバルシンＡ４、サリバルシンＡ５、サリバルシンＢ、ストレプチン、サリバリシンＡｌ、ストレプチン、ストレプトコッシンＡ－ＦＦ２２、ＢＨＴ－Ａａ、ＢＨＴ Ａｂ、ミュータシンＢＮＹ２６６、ミュータシン１１４０、ミュータシンＫ８、ミュータシンＩＩ、ｓｍｂＡＢ、ボビシンＨＪ５０、ボビシンＨＣ５、マセドシン、プランタリシンＷ、ラクトシン５、シクトリシン、エンテロシンＡ、ディベルシンＶ４１、ダイバシンＭ３５、ババリシン、コアグリン、ペディオシンＰＡ－１、ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ、ピシコシンＣＳ５２６、ピシコシン１２６／Ｖｌａ、サカシン、ロイコシンＣ、サカシン５Ｘ、エンテロシンＣＲＬ３５／ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ、アビシンＡ、ｍｕｎｄｔｉｃｉｎ Ｉ、エンテロシンＨＦ、ババリシンＡ、ウベリシンＡ、ロイコシンＡ、メセンテリシンＹ１０５、サカシンＧ、プランタリシン４２３、プランタリシンＣ１９、キュアバシンＡ／サカシンＡ、カルノバクテリオシンＢＭ１、エンテロシンＰ、ピシコインＶｌｂ、ペノシンＡ、バクテリオシン３１、バクテリオシンＲＣ７１４、ヒラシンＪＭ７９、バクテリオシンＴ８、エンテロシン、又はカルノバクテリオシン。

【0082】

好ましい一実施形態では、ＣＦＳは、プランタリシンＡ、プランタリシンＥ、プランタリシンＦ、プランタリシンＪ、プランタリシンＫ、プランタリシンＣ、プランタリシンＤ、プランタリシンＷ、プランタリシンＴ、プランタリシンＳ、プランタリシン３５ｄ、プランタリシンＭＧ、プランタリシン４２３、プランタリシン１５４、プランタリシン１４９、プランタリシン１６３、プランタリシンＬＣ７４、プランタリシンＫ２５、プランタリシンＳＴ３１、プランタリシンＳＡ６の群から選択される少なくとも２つのプランタリシンを含む。

【0083】

特に、広範囲のプランタリシン、例えばプランタリシンＦ、プランタリシンＤＬ３、プランタリシンＺＪ００８、プランタリシンＭＧ、プランタリシンＱ７、プランタリシンＫＬ－１Ｙ、プランタリシン１６３、プランタリシン１５４の群から選択される少なくとも１つのプランタリシン。

【0084】

一実施形態では、本発明において使用される好ましいバクテリオシンは、以下の細菌、ワイセラ・ビリデスセンス（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）ＬＢ１０Ｇ（ＤＳＭ３２９０６）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１３Ｒ（ＤＳＭ３２９０７）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ３２９９６）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１６Ｒ（ＤＳＭ３２９０８）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）ＬＢ１５２Ｇ（ＤＳＭ３２９９５）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ２８Ｒ（ＤＳＭ３２９９４）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）ＬＢ２７６Ｒ（ＤＳＭ３２９９７）、ロイコノストック・メセンテリオデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）ＬＢ３４９Ｒ（ＤＳＭ３３０９３）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１６Ｒ（ＤＳＭ３３０９１）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ３３０９４）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１２Ｒ（ＤＳＭ３３０９８）、及び／又は本明細書中の任意の組み合わせのうちの１つの発酵からのものである。
本発明で使用される好ましいバクテリオシンはプランタリシンＦである。プランタリシンＦは、例えばラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ３２９９６）及び例えばラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ３３０９４）によって産生される。

【0085】

受託の詳細
・ワイセラ・ビリデスセンス（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）ＬＢ１０Ｇ－２０１８年８月２８日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９０６で寄託

【0086】

・ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１３Ｒ－２０１８年８月２８日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９０７で寄託

【0087】

・ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ２４４Ｒ－２０１８年１２月１３日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９９６で寄託

【0088】

・ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１６Ｒ－２０１８年８月２８日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９０８で寄託

【0089】

・ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）ＬＢ１５２Ｇ－２０１８年１２月１３日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９９５で寄託

【0090】

・ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ２８Ｒ－２０１８年１２月１３日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９９４で寄託

【0091】

・エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）ＬＢ２７６Ｒ－２０１８年１２月１３日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３２９９７で寄託

【0092】

・ロイコノストック・メセンテリオデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）ＬＢ３４９Ｒ－２０１９年４月１０日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３３０９３で寄託

【0093】

・ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１６Ｒ－２０１９年４月１０日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３３０９１で寄託

【0094】

・ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３５６Ｒ－２０１９年４月１０日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３３０９４で寄託

【0095】

・ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１２Ｒ－２０１９年４月１０日付で、ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｅ ７Ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに受託番号ＤＳＭ３３０９８で寄託

【0096】

プランタリシンなどのバクテリオシンを含むＣＦＳを提供する最も簡単な方法は、発酵後にバクテリオシンを含むＣＦＳを乾燥させて粉末又は濃縮スラリーを生成することである。

【0097】

固体材料は、発酵後に濾過又は増殖培地からの遠心分離によって除去することができる。低分子量化合物は、膜濾過、特に逆浸透によって除去することができる。バクテリオシンはタンパク質性材料であり、沈殿又は逆浸透などの他の周知の技術によって増殖培地から分離することもでき、次いで純粋な形態で乾燥させることができる。

【0098】

本発明の一実施形態では、ＣＦＳは濃縮される。

【0099】

濃縮することは、濾過、沈降、遠心分離、真空化、デカント、乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥及び蒸発を含む群から選択される少なくとも１つの技術を使用して、発酵増殖培養物からある量の流体部分を分離することを含むことができる。この無細胞上清の生成方法は、発酵無細胞上清を乾燥させることを更に含むことができる。

【0100】

好ましい一実施形態では、ＣＦＳは、水を除去することによって濃縮される。

【0101】

好ましい一実施形態では、ＣＦＳは、水を除去することによって２倍濃縮される。

【0102】

好ましい一実施形態では、ＣＦＳは、水を除去することによって３倍濃縮される。

【0103】

好ましい一実施形態では、ＣＦＳは、水を除去することによって２倍超に濃縮される。

【0104】

バクテリオシンは、好ましくは、バクテリオシンの１～１，０００，０００任意単位（ＡＵ）の間の量で最終製剤に使用される。バクテリオシンのＡＵが、寒天プレート上の指標株の菌叢による明確な増殖阻害ゾーンをもたらす培養上清の最大希釈の５マイクロリットルとして定義された。

【0105】

有機酸は、約０．１～２０％の重量濃度で最終製剤に使用されることが好ましい。例えば、１～５重量％の乳酸及び１．５～３％重量の酢酸。有機酸は、乳酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、プロピオン酸及びコハク酸から選択されることが好ましい。

【0106】

コハク酸、サリチル酸、アゼライン酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸は、最終局所組成物中、０．００１～２０％（ｗ／ｗ）の濃度で、例えば０．００５～１５％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば０．００７５～１０（ｗ／ｗ）の範囲、例えば０．０１～５（ｗ／ｗ）の範囲、例えば０．０２５～２（ｗ／ｗ）の範囲、例えば０．０５～１（ｗ／ｗ）の範囲、例えば０．０７５～０．５（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約０．１％（ｗ／ｗ）で使用されることが好ましい。

【0107】

ＣＦＳ中の２－ヒドロキシイソカプロン酸の濃度は、好ましくは５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは３０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１２５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２００μｇ／ｍｌ超である。

【0108】

ＣＦＳ中のコハク酸の濃度は、好ましくは５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは３０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１２５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは５００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１０００μｇ／ｍｌ超である。

【0109】

ＣＦＳ中のサリチル酸の濃度は、好ましくは５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは３０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１２５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１５０μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１７５μｇ／ｍｌ超、より好ましくは２００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは５００μｇ／ｍｌ超、より好ましくは１０００μｇ／ｍｌ超である。

【0110】

本発明の好ましい実施形態
細菌の発酵から産生された上清を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、上清が発酵中に細菌によって産生された少なくとも３つの代謝産物を含む、組成物。

【0111】

少なくとも３つの代謝産物を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、少なくとも３つの代謝産物が、バクテリオシン、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸から選択される、組成物。

【0112】

バクテリオシン産生細菌の発酵から産生された上清を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、その細菌が、以下の代謝産物、乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの少なくとも２つを産生する、組成物。

【0113】

バクテリオシン産生細菌の発酵から産生された上清を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、その細菌が、以下の代謝産物、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン及びＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの少なくとも２つを産生する、組成物。

【0114】

以下の代謝産物、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、グリコール酸、Ｎ－アセチルグルタミン又はＮ－アセチルアスパラギン酸のうちの少なくとも２つを含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、代謝産物が、乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0115】

インドール－３－乳酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、インドール－３－乳酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0116】

サリチル酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、サリチル酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0117】

２－ヒドロキシイソカプロン酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、２－ヒドロキシイソカプロン酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0118】

２－ヒドロキシブチル酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、２－ヒドロキシブチル酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0119】

Ｎ－アセチルアスパラギン酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、Ｎ－アセチルアスパラギン酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0120】

アゼライン酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、アゼライン酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0121】

コハク酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、コハク酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0122】

インドール－３－乳酸を含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、インドール－３－乳酸が乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0123】

Ｎ－アセチルグルタミンを含む、皮膚症状を改善するための組成物であって、Ｎ－アセチルグルタミンが乳酸菌の発酵によって産生される、組成物。

【0124】

乳酸菌の発酵によって産生されたアゼライン酸とインドール－３－乳酸とを含む、皮膚症状を改善するための組成物。

【0125】

乳酸菌の発酵によって産生されたアゼライン酸とサリチル酸とを含む、皮膚症状を改善するための組成物。

【0126】

乳酸菌の発酵によって産生された２－ヒドロキシイソカプロン酸とサリチル酸とを含む、皮膚症状を改善するための組成物。

【0127】

組成物が発酵副生成物を更に含む、上記の組成物のいずれか１つによる組成物。

【0128】

組成物が乳酸及び少なくとも１つのバクテリオシンを含む、上記の組成物のいずれか１つによる組成物。

【0129】

バクテリオシン、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシブチル酸及びＮ－アセチルアスパラギン酸を含む組成物。

【0130】

バクテリオシン、２－ヒドロキシイソカプロン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシブチル酸及びＮ－アセチルアスパラギン酸を含む組成物。

【0131】

単離された乳酸菌の単発酵によって生成される、上記の組成物のいずれかによる組成物。

【0132】

過酸化水素、フェニル乳酸、３－ヒドロキシフェニル乳酸、４－ヒドロキシフェニル乳酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸、３－ヒドロキシプロパンアルデヒド、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、コハク酸、エタノール、酢酸、炭酸、プロパン酸、酪酸、環状ジペプチド、シクロ（Ｌ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）、シクロ（Ｌ Ｐ－Ｔｒａｐｓ－４－ＯＨ－Ｌ－Ｐｒｏ）、３－（Ｒ）－ヒドロキシデカン酸、３－ヒドロキシ－５－ｃｉｃドデカン酸、３－（Ｒ）－ヒドロキシドデカン酸及び３－（Ｒ）－ヒドロキシテトラデカン酸を含む群から選択される少なくとも１つの抗菌性細菌代謝産物を更に含む、上記の組成物のいずれかによる組成物。

【0133】

水、発酵副産物、有機酸、脂肪酸、増殖培地、培養エネルギー源、緩衝液及び／又は細菌細胞塊を含む群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む部分を更に含む、上記の組成物のいずれかによる組成物。

【0134】

バクテリオシン産生細菌が、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ラハムノースス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒａｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ラクトバチルス・サリバルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・デルブリッキィ亜種ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｅｋｉｉ ｓｐｐ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・セレビオスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｉｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｓｅｎｔｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｕｍ）、エンテロコッカス・ファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・ジアセチラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ストレブトコッカス・サーモフィレス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ｓｕｂｓｐ．Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、プロピオニバクテリア・フロイデンライチー（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｅｕｎｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（有胞子性乳酸菌（Ｌ．ｓｐｏｒｅｇｅｎｅｓ））、オキサロバクター・フォルマジェネス（Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｏｒｍａｇｅｎｅｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｓ）、及びロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）を含む群から選択される、上記の組成物のいずれかによる組成物。

【0135】

バクテリオシンがプランタリシンである、上記の組成物のいずれかによる組成物。

【0136】

上記の組成物のいずれかによる組成物を含む哺乳動物に適した局所製剤。

【0137】

局所製剤がエマルジョン、ミスト、ペースト、タルク、粉末、ローション、カスタード、フォーム、クリーム、油、血清又は軟膏である、上記の組成物による局所製剤。

【0138】

局所製剤が化粧品又は医薬品である、上記の組成物による局所製剤。

【0139】

皮膚症状の治療又は予防のための上記組成物のいずれかによる組成物の使用。

【0140】

皮膚症状が炎症性若しくは感染性疾患又は皮膚損傷又は機能不全の皮膚微生物叢である、皮膚症状の治療又は予防のための上記の組成物のいずれかによる組成物の使用。

【0141】

皮膚症状が座瘡、酒さ、湿疹、アトピー性皮膚炎及び乾癬から選択される、皮膚症状の治療又は予防のための上記の組成物のいずれかによる組成物の使用。

【0142】

皮膚症状が光損傷、老化、皮膚線条及び瘢痕から選択される、皮膚症状の治療又は予防のための上記の組成物のいずれかによる組成物の使用。

【0143】

上記の組成物のいずれか１つに記載の組成物を産生する方法。

【0144】

本出願で引用された全ての特許及び非特許文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0145】

本発明を、以下の非限定的な実施例において更に詳細に説明する。

【実施例】

【0146】

実施例１
増殖阻害を、位相差顕微鏡及びｏＣｅｌｌｏｓｃｏｐｅ（ＢｉｏＳｅｎｓｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、デンマーク）を用いた画像分析によって測定した。選択された病原体に対する無細胞上清（ＣＦＳ）の阻害効果を測定し、様々な乳酸菌（ＬＡＢ）株を、修正を加えてＦｒｅｄｂｏｒｇらに従って試験した（Ｆｒｅｄｂｏｒｇ，Ｍ．，Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｋ．Ｒ．，Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｅ．，Ｄｒｏｃｅ，Ａ．，Ｏｌｅｓｅｎ，Ｔ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ｂ．Ｂ．ら（２０１３）「Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｏｐｔｉｃａｌ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５１（７），ｐｐ．２０４７－２０５３．ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＣＭ．００４４０－１３．）。病原性試験生物の一晩培養物を約１０^４ＣＦＵ／ｍｌの濃度に希釈した。ＬＡＢの一晩培養物（１０^９ＣＦＵ／ｍｌ）を０．２μｍフィルターで濾過して全ての細胞を除去した。ＣＦＳを７５％、５０％、２５％及び１０％に希釈した。希釈した病原体細胞懸濁液の１００μＬアリコートを、９６ウェルプレート中の１００μＬの未希釈又は希釈したＣＦＳと混合した。プレートを酸素透過性フィルムカバー（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で密封し、ｏＣｅｌｌｏＳｃｏｐｅ装置（ＢｉｏＳｅｎｓｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、デンマーク）中、３７℃で１８時間インキュベートした。病原体の増殖を、表面積の分割及び抽出（ＳＥＳＡ）として２０分ごとに測定する。

【0147】

以下の試験病原体／腐敗微生物を使用した。

【0148】

黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００

【0149】

抗菌活性を有する以下の乳酸菌からのＣＳＦを試験した。

【0150】

ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ２４４Ｒ（ＤＳＭ３２９９６）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１６Ｒ（ＤＳＭ３３０９１）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３５６Ｒ（ＤＳＭ３３０９４）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３１２Ｒ（ＤＳＭ３３０９８）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１６Ｒ（ＤＳＭ３２９０８）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ１１３Ｒ（ＤＳＭ３２９０７）、ラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＢ２８Ｒ（ＤＳＭ３２９９４）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）ＬＢ２７６Ｒ（ＤＳＭ３２９９７）、ロイコノストック・メセンテリオデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｏｄｅｓ）ＬＢ３４９Ｒ（ＤＳＭ３３０９３）、ワイセラ・ビリデスセンス（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）ＬＢ１０Ｇ（ＤＳＭ３２９０６）及びラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）ＬＢ１５２Ｇ（ＤＳＭ３２９９５）。

【0151】

最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、それぞれの病原体を依然として成長阻害することができる、最も希釈された濃度のＣＦＳとして決定された（表１）。

【0152】

【表1】

【0153】

実施例２
メタボロミクスを３つの異なる培地発酵で行った。オオムギ又はホエイのいずれかから７５℃で１時間、炭水化物水抽出物に基づいて、種々の増殖培地（１：オオムギ麦芽、２：コムギ、３：オオムギ、４：オオムギ短時間抽出２５分）で乳酸菌を増殖させ、オートクレーブ処理によって滅菌し、濾過した。異なる条件（１：３０℃で４８時間、２：３０℃で４８時間、続いて保存、３：３０℃で４８時間、ｐＨ５．５に調整）で発酵させた。上清を半極性代謝産物法によって分析した。試料分析は、ＭＳ－Ｏｍｉｃｓ（Ｖｅｄｂａｅｋ、デンマーク）により以下のように行った。

【0154】

試料を、０．１％ギ酸を含む１０ｍＭギ酸アンモニウムで１０倍希釈した。

【0155】

ＬＣ－ＭＳ法
分析は、高分解能四重極オービトラップ質量分析計（Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）ＨＦ Ｈｙｂｒｉｄ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と組み合わせたＵＰＬＣシステム（Ｖａｎｑｕｉｓｈ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して行った。エレクトロスプレーイオン化インターフェイスをイオン化源として使用した。分析は、負及び正のイオン化モードで行った。化合物の同定のためにＱＣ試料をＭＳ／ＭＳモードで分析した。Ｃａｔａｌｉｎらによって記載されたプロトコルをわずかに修正したバージョンを使用してＵＰＬＣを実施した（ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ Ｗａｔｅｒ－Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉａ ｉｎ Ｍｉｎｕｔｅｓ、Ｗａｔｅｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏｔｅ ２０１１、７２０００４０４２ｅｎ）。

【0156】

データ処理
データは、化合物Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ ３．１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＴｒａｃｅＦｉｎｄｅｒ ４．１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して処理した。

【0157】

化合物抽出
１つの化合物は、多くの場合、（例えば、天然に存在するＣ１３同位体、付加物、及び／又は断片に起因して）２つ以上の質量トレースにおいてシグナルを生じさせるので、化合物は、ほぼ常に、同じ保持時間であるが質量が異なる２つ以上の特徴によって表される。Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒによって行われる化合物抽出は、以下の４つの工程からなる。
１）まず、生データから特徴を抽出する。
２）特徴検出の後に、同じ化合物に属する特徴のグループ化が行われる。
３）次いで、この追加情報（例えば同位体パターン）を正確な質量と共に使用して、分子式を決定する。
４）次いで、各化合物について収集された全情報は、以下の同定工程で使用される。

【0158】

分析は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ ＨＦ ＭＳに連結されたＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｖａｎｑｕｉｓｈ ＬＣを使用して行った。エレクトロスプレーイオン化インターフェイスをイオン化源として使用した。分析は、負及び正のイオン化モードで行った。Ｃａｔａｌｉｎらによって記載されたプロトコルをわずかに修正したバージョンを使用してＵＰＬＣを実施した（ＵＰＬＣ／ＭＳ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ Ｗａｔｅｒ－Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉａ ｉｎ Ｍｉｎｕｔｅｓ、Ｗａｔｅｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏｔｅ ２０１１、７２０００４０４２ｅｎ）。ピーク面積は、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ ３．１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して抽出した。化合物の同定は４つのレベルで実施した。レベル１：保持時間（社内の真正な標準と比較）、正確な質量（許容される偏差は３ｐｐｍ）、及びＭＳ／ＭＳスペクトルによる同定、レベル２ａ：保持時間（社内の真正な標準と比較）、正確な質量（許容偏差３ｐｐｍ）による同定。レベル２ｂ：正確な質量（許容される偏差は３ｐｐｍ）、及びＭＳ／ＭＳスペクトルによる同定、レベル３：正確な質量（許容される偏差は３ｐｐｍ）のみによる同定。

【0159】

試料中に合計１６０６個の化合物が検出された。そのうちの２７１個はレベル３に注釈が付けられ、１０３個はレベル２ｂに、１１３個はレベル２ａに、６０個はレベル１に注釈が付けられた。

【0160】

乳酸、酢酸、コハク酸、アゼライン酸、サリチル酸、インドール－３－乳酸、インドール－３－酢酸、２－ヒドロキシブチル酸、２－ヒドロキシイソカプロン酸及びＮ－アセチルアスパラギン酸は全て、２つの株ＬＢ３５６Ｒ及びＬＢ２４４Ｒについて、有意な量で、レベル１で注釈付けされた。

【0161】

ＬＢ３５６Ｒ及びＬＢ２４４Ｒの全ての発酵について、有機酸は３％（ｗ／ｗ）を超える濃度であった。

【0162】

サリチル酸、インドール－３－乳酸、２－ヒドロキシブチル酸及びＮ－アセチルアスパラギン酸を、ＬＢ３５６Ｒ株の対照と比較して図１に示す。発酵には４つの異なる基質が使用され、ＬＢ３５６Ｒ株の場合、４つの官能性酸は４つの基質全てで有意な量で産生される。図１に示す試料の符号化は以下の通りである。

【0163】

図１の符号：
１ 対照（発酵前の増殖培地１）
２ 増殖培地１、発酵条件１
３ 増殖培地１、発酵条件２
４ 増殖培地１、発酵条件３
５ 増殖培地１、発酵条件３
６ 対照（発酵前の増殖培地２）
７ 増殖培地２、発酵条件１
８ 増殖培地２、発酵条件１
９ 増殖培地２、発酵条件１
１０ 対照（発酵前の増殖培地３）
１１ 増殖培地３、発酵条件１
１２ 増殖培地３、発酵条件１
１３ 増殖培地３、発酵条件１
１４ 対照（発酵前の増殖培地４）
１５ 増殖培地４、発酵条件１

【0164】

実施例３
２つの最も活性な株のバクテリオシンを配列決定によって同定した。潜在的なバクテリオシンをコードする遺伝子及び病原性又は疾患をコードする遺伝子を明らかにするために、Ｂａｓｅｃｌｅａｒ（オランダ、ライデン）によって配列決定され、Ｒａｐｉｄ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｓｕｂｓｙｓｔｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＲＡＳＴ）サーバ（ｈｔｔｐ：／／ｒａｓｔ．ｎｍｐｄｒ．ｏｒｇ／）などのサーバ及び注釈付けプログラムＢａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ Ｇｅｎｏｍｅ ｍｉｎｉｎｇ ｔｏｏｌ、ＢＡＧＥＬ４（ｈｔｔｐ：／／ｂａｇｅｌ４．ｍｏｌｇｅｎｒｕｇ．ｎｌ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ）によって注釈付けされた全ゲノム。続いて、ＬＢ２４４Ｒ及びＬＢ３５６Ｒのゲノム配列をＢａｓｅｃｌｅａｒによって注釈付けした。

【0165】

バクテリオシン産生に関与するいくつかの遺伝子がＬＢ２４４Ｒ及びＬＢ３５６Ｒゲノム配列において同定された（表２）。

【0166】

【表2】

【0167】

実施例４：
３つの異なる方法を用いて細菌ライセートを生成した。

【0168】

ＬＡＢ分離株（ＬＢ３５６Ｒ）をＭＲＳブロス中３７℃で一晩増殖させた。

【0169】

ライセート１：１５ｍｌの一晩培養物を含むチューブを氷バッチに入れ、Ｑ１２５超音波処理器（ＱＳｏｎｉｃａ）を使用して３０分間の超音波処理によって細胞を溶解した。
ライセート２：１５ｍｌの一晩培養物を０．１Ｍ ＨＣｌでｐＨ３に調整し、４５℃で２日間インキュベートした。
ライセート３：１５ｍｌの一晩培養物を５％ＳＤＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｌ３７７１）に添加し、－２０℃で１時間保存し、５０℃で１時間インキュベートした。温度を－２０℃から＋５０℃に変更するサイクルを２×８時間行った。

【0170】

各ライセートを、ライセートプロセス後の生細胞についてそれぞれ評価した。

【0171】

ライセートを、２種の皮膚病原体に対する維持された活性について評価した。

【0172】

黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００（ＡＴＣＣ ＢＡＡ－１７１７）及びキューティバクテリウム・アクネス（Ｃｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）（ＡＴＣＣ標準ＨＭ－５１２）を、接種したＨＭ－５１２又はＵＳＡ３００のいずれかと各ライセートを１：１でＢＨＩ中、約１０^４ＣＦＵ／ｍｌまで共インキュベートし、分光光度計を使用してＯＤ（６００ｎｍ）を測定することによって増殖及び増殖阻害を追跡して、増殖阻害活性について試験した。３つ全てのライセートが、ＨＭ－５１２及びＵＳＡ３００の両方を増殖阻害することが示された。

【0173】

実施例５：
ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＢ３５６Ｒ由来の上清を５％の上清の単純水希釈で使用することによって座瘡皮膚に対する評価試験を行った。１７歳の少年の左肩を１４日間毎日１回、上清で処置した。座瘡に対する生存可能な効果が１４日後に観察された（図２）。図２Ａは処置前であり、図２Ｂは１４日後であった。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】