(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-10
(54)【発明の名称】疾患の治療におけるヒト血清アルブミンの使用
(51)【国際特許分類】
A61K 38/38 20060101AFI20231102BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20231102BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20231102BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20231102BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20231102BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20231102BHJP
【ＦＩ】
A61K38/38
A61P3/10
A61P3/04
A61P9/10 101
A61P25/28
A61P25/16
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023526318
(86)(22)【出願日】2021-11-01
(85)【翻訳文提出日】2023-06-23
(86)【国際出願番号】 CN2021127957
(87)【国際公開番号】W WO2022089639
(87)【国際公開日】2022-05-05
(31)【優先権主張番号】202011200484.6
(32)【優先日】2020-10-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518389990
【氏名又は名称】シェンチェン、プロトゲン、リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＥＮＺＨＥＮ ＰＲＯＴＧＥＮ ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(72)【発明者】
【氏名】ルオ，ヨンチァン
(72)【発明者】
【氏名】フー，ヤン
(72)【発明者】
【氏名】リウ，ホンイ
(72)【発明者】
【氏名】ジュー，アンジ
(72)【発明者】
【氏名】タン，ジアゾ
(72)【発明者】
【氏名】ジアン，イー
(72)【発明者】
【氏名】マー，ボユアン
(72)【発明者】
【氏名】ジアン，シャオチン
(72)【発明者】
【氏名】フェン，ユー
(72)【発明者】
【氏名】チャン，グオドン
(72)【発明者】
【氏名】リー，フイ
【テーマコード（参考）】
4C084
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084BA44
4C084CA36
4C084CA53
4C084DA36
4C084DA37
4C084NA14
4C084ZA02
4C084ZA16
4C084ZA45
4C084ZA70
4C084ZC35
(57)【要約】
糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病などの疾患を治療するための医薬品の製造におけるヒト血清アルブミンの使用を提供する。好ましい実施形態において、前記ヒト血清アルブミンは、組換えにより製造された若い無傷ヒト血清アルブミンであり、糖尿病患者の血糖値などの低下に優れた効果を奏する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される疾患を治療するための医薬品の製造におけるヒト血清アルブミンの使用。
【請求項2】
前記ヒト血清アルブミンは、ヒト血液で製造されたヒト血清アルブミンである、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記ヒト血清アルブミンは、若い無傷ヒト血清アルブミンである、請求項１に記載の使用。
【請求項4】
若い個体の血漿で製造された内因性ヒト血清アルブミン製剤と比較した場合、前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、
（１）Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が高く、（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、（３）カルボニル化のレベルが低く、及び（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す、請求項３に記載の使用。
【請求項5】
前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、（１）Ｅｌｌｍａｎ方法で測定されたＣｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が５０％超、例えば７０％、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％であり、
（２）ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定された終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満であり、
（３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔキットにより測定されたカルボニルのレベルが１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満であり、及び
（４）ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）で測定されたホモシステインのレベルが５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満であるという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す、請求項３に記載の使用。
【請求項6】
Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超える、請求項３～５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項7】
ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満である、請求項３～６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項8】
カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満である、請求項３～７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項9】
ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である、請求項３～８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項10】
Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超え、ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満、カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である、請求項３～９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項11】
前記ヒト血清アルブミンは組換えにより生産される、請求項３～１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項12】
治療有効量のヒト血清アルブミンを被験者に投与することを含み、前記疾患は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される、疾患を治療する方法。
【請求項13】
糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される疾患を治療するためのヒト血清アルブミンの使用。
【請求項14】
疾患を治療するための医薬組成物の使用であって、前記医薬組成物は、ヒト血清アルブミンと、薬学的に許容される担体と、を含み、前記疾患は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される、使用。
【請求項15】
前記ヒト血清アルブミンは、ヒト血液で製造されたヒト血清アルブミンである、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項16】
前記ヒト血清アルブミンは、若い無傷ヒト血清アルブミンである、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項17】
若い個体の血漿で製造された内因性ヒト血清アルブミン製剤と比較した場合、前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、
（１）Ｃｙｓ－３４残基の遊離チオールの割合が高く、
（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、
（３）カルボニル化のレベルが低く、及び
（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す、請求項１６に記載の方法又はその使用。
【請求項18】
前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、（１）Ｅｌｌｍａｎ方法で測定されたＣｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が５０％超、例えば７０％、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％であり、
（２）ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定された終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満であり、
（３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔキットにより測定されたカルボニルのレベルが１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満であり、
（４）ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）で測定されたホモシステインのレベルが５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満であるという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す、請求項１６に記載の方法又は使用。
【請求項19】
Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超える、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項20】
前記ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満である、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項21】
カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満である、請求項１６～２０のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項22】
ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である、請求項１６～２１のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項23】
Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超え、ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満、カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である、請求項１６～２２のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項24】
前記ヒト血清アルブミンは組換えにより生産される、請求項１６～１３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【0001】
本願は、２０２０年１０月３０日に出願された中国特許出願ＣＮ２０２０１１２００４８４．６の優先権を主張しており、当該出願のすべての内容は引用により本明細書に組み込んでいる。
【技術分野】
【0002】
本発明は、バイオ医薬の分野に関し、より具体的には、糖尿病、アルツハイマー病などの治療におけるヒト血清アルブミンの使用に関する。
【背景技術】
【0003】
ヒト血清アルブミン（Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ、略してＨＳＡ；ＣＡＳ：７００２４－９０－７）はヒト血漿中の重要な成分であり、分子量は６６ｋＤである。ヒト血清アルブミンは、血漿中の濃度が４２ｇ／Ｌであり、血漿中のタンパク質総含有量の６０％を占めている。重要なキャリアタンパク質として、ヒト血清アルブミンは脂肪酸、胆汁色素、アミノ酸、ステロイドホルモン、金属イオン、多くの治療分子などを輸送する役割を担い、また、血液の正常な浸透圧を維持する。臨床では、ヒト血清アルブミンは血漿相溶化剤として、手術、事故あるいは大出血による血液損失を補充するのに用いられる。
【0004】
近年、血液由来の不足と血液伝染病のリスクの存在により、組換えヒト血清アルブミンは日増しに注目されている。ヒト血清アルブミンの臨床投与量は非常に多く、１日１０グラムから数十グラムに達し、応用の将来性が期待できる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明者らは、驚くことに、ヒト血清アルブミン、特に若い無傷組換えヒト血清アルブミンが、多くの疾患に対して明らかな治療効果を有することを発見した。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される疾患を治療するための医薬品の製造におけるヒト血清アルブミンの使用を提供する。
【0007】
本発明は、また、治療有効量のヒト血清アルブミンを被験者に投与することを含み、前記疾患は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される、疾患を治療する方法を提供する。
【0008】
本発明は、また、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される疾患を治療するためのヒト血清アルブミンの使用を提供する。
【0009】
本発明は、また、疾患を治療するための医薬組成物の使用であって、
前記医薬組成物は、ヒト血清アルブミンと、薬学的に許容される担体と、を含み、前記疾患は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される、使用を提供する。
前記医薬組成物は、ヒト血清アルブミンと、薬学的に許容される担体と、を含み、前記疾患は、糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病からなる群から選択される、使用を提供する。
【0010】
いくつかの実施形態では、本発明は、また、被験者の血糖値を調節する方法、及び被験者の血液中の遊離脂肪酸又はコレステロールのレベルを調節する方法であって、有効量のヒト血清アルブミンを被験者に投与することを含む方法を提供する。前記被験者は、健康な被験者であってもよいし、糖尿病又はアテローム性動脈硬化症のような疾患に罹患している被験者であってもよい。
【0011】
いくつかの実施形態では、前記ヒト血清アルブミンは、ヒト血液で製造されたヒト血清アルブミンである。
【0012】
いくつかの実施形態では、前記ヒト血清アルブミンは、若い無傷ヒト血清アルブミンである。
【0013】
好ましくは、若い個体の血漿で製造された内因性ヒト血清アルブミン製剤と比較した場合、前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、
（１）Ｃｙｓ－３４残基の遊離チオールの割合が高く、
（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、
（３）カルボニル化のレベルが低く、及び
（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
（１）Ｃｙｓ－３４残基の遊離チオールの割合が高く、
（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、
（３）カルボニル化のレベルが低く、及び
（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
【0014】
好ましくは、前記若い無傷ヒト血清アルブミンは、
（１）Ｅｌｌｍａｎ方法で測定されたＣｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が５０％超、例えば７０％、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％超であり、
（２）ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定された終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満であり、
（３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔキットで測定されたカルボニルのレベルが１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満であり、及び
（４）ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）で測定されたホモシステインのレベルが５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満であるという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
（１）Ｅｌｌｍａｎ方法で測定されたＣｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が５０％超、例えば７０％、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％超であり、
（２）ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定された終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満であり、
（３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔキットで測定されたカルボニルのレベルが１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満であり、及び
（４）ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）で測定されたホモシステインのレベルが５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満であるという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
【0015】
本発明の好ましい実施形態では、Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超え、ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満、カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である。
【0016】
好ましくは、前記ヒト血清アルブミンは組換えにより生産される。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】ＩＩ型糖尿病マウスの血糖の変化を示している。Ｆａｓｔｉｎｇ ｇｌｙｃｅｍｉは空腹時血糖、ｉｎｊｅｃｔｉｏｎは矢印で一回注射投与を指すもの、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ＷＴは野生型マウス、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｓａｌｉｎｅ ＷＴとｒＭＳＡ ＷＴ群は、マウス５匹ずつとし、Ｓａｌｉｎｅ ｄｂとｒＭＳＡ ｄｂ群は、マウス７匹ずつとした。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1B】マウスの膵臓切片のＨＥ染色結果を示している。Ｂｅｔａ ｃｅｌｌ ｆａｉｌｕｒｅは膵島β細胞不全、Ｎｏ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ ｆａｉｌｕｒｅは膵島β細胞不全無し、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。
【図1C】２群のマウスで膵島β細胞不全が発生した割合を示している。＊は、フィッシャー正確検定を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。
【図1D】ｄｂマウスの膵臓切片のＨＥ染色とセグメントの結果を示している。Ｈ＆ＥはＨＥ染色、Ｓｅｇｍｅｎｔはセグメント、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。
【図1E】膵臓全体に占めるマウスの膵島面積の割合を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ＷＴは野生型マウス、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1F】マウスの膵島の相対的な大きさを示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ＷＴは野生型マウス、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1G】ｄｂマウスの膵臓切片の免疫蛍光及びＴＵＮＥＬ染色結果を示している。Ｉｎｓｕｌｉｎはインシュリン、ＴＵＮＥＬは末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼを介したニックエンド標識、ＤＡＰＩはジアミノフェニルインドール、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。
【図1H】ｄｂマウスの膵臓切片においてｉｎｓｕｌｉｎ陽性細胞に占めるＴＵＮＥＬ陽性細胞の割合を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1I】ｄｂマウスの膵臓切片のＣＣ３免疫蛍光染色結果を示している。Ｉｎｓｕｌｉｎはインシュリン、ＣＣ３はカットされたカスパーゼ３、ＭｅｒｇｅはＩｎｓｕｌｉｎ（図中赤）、ＣＣ３（図中緑）、ＤＡＰＩ（ジアミノフェニルインドール、図中青）の統合画像を含むもの、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。
【図1J】ｄｂマウスの膵臓切片においてｉｎｓｕｌｉｎ陽性細胞に占めるＣＣ３陽性細胞の割合を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1K】マウスのブドウ糖負荷試験結果を示している。Ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅは血糖、ｔｉｍｅは時間、ｍｉｎは分、Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ＷＴは野生型マウス、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1L】図４Ｋの曲線下面積を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ＷＴは野生型マウス、ｄｂはＩＩ型糖尿病モデルマウスである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1M】ｄｂマウスの総重量に占める脂肪質量の割合を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1N】ｄｂマウスの総重量に占める筋肉質量の割合を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図1O】ＩＩ型糖尿病患者の血糖の変化を示している。Ｆａｓｔｉｎｇ ｇｌｙｃｅｍｉは空腹時血糖、ｉｎｊｅｃｔｉｏｎは矢印で一回注射投与を指すものである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図2A】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）のＦＦＡ結合能を示している。
【図2B】２つのＨＳＡ製剤におけるＦＦＡ含有量の比較を示している。ｐＨＳＡは市販の血液由来ＨＳＡ製剤、ｒＨＳＡは組換えＨＳＡ製剤（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図3A】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）がコレステロールに結合した蛍光発光スペクトルを示している。
【図3B】市販の血液由来ＨＳＡ－１がコレステロールに結合した蛍光発光スペクトルを示している。
【図3C】市販の血液由来ＨＳＡ－２がコレステロールに結合した蛍光発光スペクトルを示している。
【図4A】２つのＨＳＡ製剤のＡβペプチドセグメントへの凝集抑制能力を示している。ＲＦＵは相対蛍光単位、ｐＨＳＡは血液由来ＨＳＡ製剤、ｒＨＳＡは組換えＨＳＡ製剤（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）である。
【図4B】マウスのＹ迷路での挙動を示している。Ｒｉｇｈｔ ｒａｔｉｏは正解率、Ｔｏｔａｌ ａｒｍ ｅｎｔｒｉｅｓは総アーム選択数である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図5A】ＭＰＰ＋誘導ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞のＲＯＳ産生レベルに対する若い無傷ｒＨＳＡと市販の血液由来ＨＳＡの影響を示している。ｐＨＳＡは市販の血液由来ＨＳＡ製剤、ｒＨＳＡは組換えＨＳＡ製剤（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図5B】ｒＨＳＡが低用量ＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスの握力レベルを増加させたことを示している。
【図5C】ｒＨＳＡが高用量ＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスの握力レベルを増加させたことを示している。
【図5D】ｒＨＳＡがＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスのビーム通過時間を有意に短縮したことを示している。
【図5E】ｒＨＳＡがＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスのビーム通過時間を有意に短縮したことを示している。
【図5F】ｒＨＳＡがＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスのポールクライミング時間を有意に短縮したことを示している。
【図5G】ｒＨＳＡがＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスのポールクライミング時間を有意に短縮したことを示している。
【図6A】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）と血液由来ＨＳＡ製品のブランド別の年齢関連４指標で比較したものを示している。Ｆｒｅｅ ｔｈｉｏｌｓは遊離値オール含有量（図６Ａ）、Ｃａｂｏｎｙｌはカルボニル含有量（図６Ｂ）、ＡＧＥは終末糖化産物のレベル（図６Ｃ）、ＨＣＹはホモシステイン含有量（図６Ｄ）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図6B】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）と血液由来ＨＳＡ製品のブランド別の年齢関連４指標で比較したものを示している。Ｆｒｅｅ ｔｈｉｏｌｓは遊離値オール含有量（図６Ａ）、Ｃａｂｏｎｙｌはカルボニル含有量（図６Ｂ）、ＡＧＥは終末糖化産物のレベル（図６Ｃ）、ＨＣＹはホモシステイン含有量（図６Ｄ）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図6C】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）と血液由来ＨＳＡ製品のブランド別の年齢関連４指標で比較したものを示している。Ｆｒｅｅ ｔｈｉｏｌｓは遊離値オール含有量（図６Ａ）、Ｃａｂｏｎｙｌはカルボニル含有量（図６Ｂ）、ＡＧＥは終末糖化産物のレベル（図６Ｃ）、ＨＣＹはホモシステイン含有量（図６Ｄ）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図6D】ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）と血液由来ＨＳＡ製品のブランド別の年齢関連４指標で比較したものを示している。Ｆｒｅｅ ｔｈｉｏｌｓは遊離値オール含有量（図６Ａ）、Ｃａｂｏｎｙｌはカルボニル含有量（図６Ｂ）、ＡＧＥは終末糖化産物のレベル（図６Ｃ）、ＨＣＹはホモシステイン含有量（図６Ｄ）である。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図7】組換えマウス血清アルブミン（ｒＭＳＡ）又は生理食塩水を異なるマウスの体内に戻す場合の低密度リポタンパク質コレステロールのレベルを示している。ＡＫＯはアルブミン遺伝子ノックアウトマウス、ＷＴは野生型マウス、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミンである。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8A】肥満マウスの酸素消費量を示している。Ｓａｌｉｎｅは生理食塩水対照群、ｒＭＳＡは組換えマウス血清アルブミン処理群、ｏｂは肥満モデルマウスである。Ｏｂ／ｏｂ ＳａｌｉｎｅとＯｂ／ｏｂ ｒＭＳＡ群はマウス４匹ずつとした。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8B】肥満マウスの二酸化炭素発生量を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8C】マウスの呼吸交換比を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8D】マウスの筋肉質量を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8E】マウスの筋肉割合を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8F】マウスの脂肪質量を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8G】マウスの脂肪割合を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8H】野生型マウスの引張力値を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【図8I】肥満モデルマウスの引張力値を示している。Ｅｒｒｏｒ ｂａｒはＳＥＭを表す。
【発明を実施するための形態】
【0018】
本明細書で使用される「ヒト血清アルブミン」（Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ、略してＨＳＡ）という用語は、その分野で公知の意味を有し、ＣＡＳ ＮＯは７００２４－９０－７であり、分子量は６６ｋＤである。
【0019】
「ヒト血清アルブミン」又は「ＨＳＡ」という用語は、野生型ヒト血清アルブミンを含むが（例えば、Gene name: ALB; NCBI ID:213; UniProtKB-P02768を参照）、その機能的変異体又は修飾体も含む。当業者であれば、野生型ヒト血清アルブミンは、その生物学的機能に実質的に影響を与えることなく、例えば１又は数個のアミノ酸残基の付加、欠失又は置換等の一定の修飾を施すことができることが理解される。したがって、本明細書で使用される「ヒト血清アルブミン」という用語は、このように修飾されたヒト血清アルブミン変異体又は修飾体も含む。
【0020】
ヒト血清アルブミンの製造方法は様々である。一般的な市販ＨＳＡはヒト血液で製造されるものであり、そのほかにも組換え方法によって製造されてもよい。異なるプロセスで製造したＨＳＡ製品には、酸化程度、糖化程度、生物学的活性などを含め、性能に一定の差がある。
【0021】
若い無傷ヒト血清アルブミン
本明細書で使用される「若い無傷ヒト血清アルブミン」又は「若い無傷ＨＳＡ」という用語は、ＨＳＡが顕著な損傷を受けずに新鮮な状態であることを意味している。ここでの「損傷」には、酸化、糖化、カルボニル化などが含まれる。
本明細書で使用される「若い無傷ヒト血清アルブミン」又は「若い無傷ＨＳＡ」という用語は、ＨＳＡが顕著な損傷を受けずに新鮮な状態であることを意味している。ここでの「損傷」には、酸化、糖化、カルボニル化などが含まれる。
【0022】
技術者は、「若い無損傷」ＨＳＡという用語は、ＨＳＡが絶対的に無損傷であることを厳密には要求しないことを理解する。いかなる損傷もないＨＳＡを製造することは非常に困難である。本発明の目的のために、限定された損傷を含むＨＳＡも許容可能で、若い無傷ＨＳＡと考えられる。
【0023】
「若い無傷」ＨＳＡは、通常、（１）Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が高く、（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、（３）カルボニル化のレベルが低く、及び（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。若い無傷ＨＳＡは、通常、遊離チオールの割合が高く、ＡＧＥ、カルボニル、ホモシステイン（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）のレベルが低い。
【0024】
いくつかの実施形態では、「若い無傷」ＨＳＡは、（１）Ｅｌｌｍａｎ方法で測定されたＣｙｓ－３４残基の遊離チオールの割合が５０％超、例えば７０％、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％超であり、（２）ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定された終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが、６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満であり、（３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔキットで測定されたカルボニルのレベルが１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満であり、及び（４）ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）で測定されたホモシステインのレベルが、５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満であるという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
【0025】
いくつかの実施形態では、本発明は、若い無傷ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の製剤を提供し、この製剤は、若い個体の血漿で製造された内因性ＨＳＡ製剤と比較した場合、（１）Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合が高く、（２）終末糖化産物（ＡＧＥ）のレベルが低く、（３）カルボニル化のレベルが低く、及び（４）ホモシステイン化のレベルが低いという４つの特性のうちの少なくとも１つ、例えば、２つ、３つ、好ましくは４つを示す。
【0026】
「若い個体」という用語は、通常、３０歳未満、好ましくは１８歳未満、より好ましくは３歳未満、さらに１歳未満の人々を指す。
【0027】
「製剤」（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）という用語は、あるプロセスで製造された材料を意味する。例えば、ＨＳＡ製剤は、ヒト血清アルブミン分子集団を含む、特定の個体又は複数の個体から製造されたＨＳＡサンプルであってもよい。「製剤」は、包装された商品であってもよいし、溶液や凍結乾燥粉末の形態で製造された粗製品であってもよい。
【0028】
遊離値オール：野生型ＨＳＡには、Ｃｙｓ－３４残基に位置している１つの遊離値オールしかない。当業者には容易に理解できるように、ＨＳＡの機能的変異体には野生型ＨＳＡとは若干異なるアミノ酸配列が含まれていることがあり、この場合、Ｃｙｓ－３４残基は３４番位とは若干異なる位置にある可能性がある。これは、相同性比較などの方法で容易に決定することができる。
【0029】
いくつかの実施形態では、Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合はＥｌｌｍａｎ方法で測定される。好ましくは、遊離チオールの割合は７０％超、特に８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％超である。
【0030】
ＡＧＥ：血清アルブミンは糖化作用（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）に敏感な血漿タンパク質である。このプロセスは、メイラード反応（Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）とも呼ばれ、ブドウ糖又は誘導体がアルブミンの遊離アミン基に結合して可逆的なシッフ塩基生成物を形成し、Ａｍａｄｏｒｉ転位後に安定なフルクトサミン残基（ケトアミン）を形成することを伴う、緩慢な非酵素反応である。Ａｍａｄｏｒｉ生成物はその後環化されてピラノース又はフラノース付加物を形成することができる。転位、酸化、重合、切断などの早期糖化生成物のさらなる修飾は、最終糖化生成物（ＡＧＥ：Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）と呼ばれる不可逆結合体を生成する。ＡＧＥの質量濃度は、ＥＬＩＳＡ（ＥＬＩＳＡ）キットを使用して製造業者の取扱説明書（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）に従って測定される。結果は、各反応のＨＳＡ濃度で正規化され、タンパク質１ｇ当たりのＡＧＥマイクログラムの形で表現される。
【0031】
いくつかの実施形態では、ＡＧＥのレベルは、ＥＬＩＳＡ（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）で測定される。好ましくは、ＡＧＥのレベルは、６０μｇ／ｇタンパク質未満、好ましくは４０μｇ／ｇタンパク質未満、より好ましくは３０μｇ／ｇタンパク質未満である。
【0032】
カルボニル：ここでカルボニル化とは、ＨＳＡのアミノ酸残基にカルボニルを形成することである。ＨＳＡ中のカルボニルの定量には、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ａｂ１２６２８７）を用いる。この方法は、ＤＮＰヒドラゾン（ＤＮＰ ｈｙｄｒａｚｏｎｅｓ）を形成するタンパク質のカルボニルとＤＮＰＨとの反応に基づいており、マイクロプレートリーダを用いて３７５ｎｍの吸光度で定量することができる。マニュアルによると、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ，ａｂ１２６２８７）を用いてカルボニルのモル濃度を定量する。結果は、各反応のＨＳＡ濃度で正規化され、タンパク質１ｍｇ当たりのカルボニルｎｍｏｌの形で表現される。
【0033】
いくつかの実施形態では、カルボニルのレベルは、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（タンパク質カルボニル含有量測定キット）によって決定される。好ましくは、カルボニルのレベルは１．７ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、好ましくは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満である。
【0034】
ホモシステイン（ＨＣＹ）：ホモシステイン（ＨＣＹ）は必須アミノ酸Ｍｅｔが代謝したもので、タンパク質翻訳後修飾（ＰＴＭ）に関与することが明らかになった。ＨＣＹは、リジン（Ｌｙｓ）残基とのイソペプチド結合（Ｎ－Ｈｃｙ－ｐｒｏｔｅｉｎ）を介して、又はＣｙｓ－３４残基とのジスルフィド結合（Ｓ－Ｈｃｙ－ｐｒｏｔｅｉｎ）を介してタンパク質に連結していてもよい。Ｎ－ホモシステイン化は重要な翻訳後修飾であり、タンパク質の構造と機能に影響し、タンパク質の損傷を引き起こす。Ｎ－ホモシステイン化は、Ｈｃｙのみから産生されるＨｃｙ－チオラクトンにより測定することができる。Ｈｃｙのモル濃度はＥＬＩＳＡとＨＰＬＣにより定量できる。我々の研究では、製造業者の取扱説明書（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）に基づいてＨｃｙモル濃度をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果は、各反応のＨＳＡ濃度で正規化され、タンパク質１ｇ当たりのＨｃｙ ｎｍｏｌの形で表現される。
【0035】
いくつかの実施形態では、ホモシステインのレベルは、ＥＬＩＳＡ（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）によって決定される。好ましくは、ホモシステインのレベルは、５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、好ましくは３．５ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満、より好ましくは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である。
【0036】
当業者であれば、上記の４つのパラメータは、他の公知の方法によって測定されてもよく、方法が異なると、測定されたパラメータの数値の結果は異なる場合があることを理解する。当業者は、限られた実験によって異なる方法で測定された結果を容易に比較することができる。
【0037】
好ましい実施形態では、Ｃｙｓ－３４残基における遊離チオールの割合は８０％を超え、ＡＧＥのレベルは３０μｇ／ｇタンパク質未満、カルボニルのレベルは１．５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満、ホモシステインのレベルは２ｎｍｏｌ／ｇタンパク質未満である。
【0038】
若い無傷ＨＳＡ製剤は、組換えにより生産されるか、又はヒト血漿から精製することができる。好ましくは、ＨＳＡ製剤は組換えにより生産される。
【0039】
免疫反応を避けるため、本研究では、動物実験はｒＭＳＡ（組換えマウス血清アルブミン）を用いて行われる。本研究で用いたｒＭＳＡは、異なる年齢のマウス由来の内因性ＭＳＡの４つのパラメータと比較して、若くて無傷である。本研究で用いたｒＭＳＡとｒＨＳＡはいずれもＰｒｏｔｇｅｎ社製であり、組み換えにより生産されたものである。
【0040】
医薬組成物
本発明の別の態様は、本明細書に記載の若い無傷ＨＳＡと、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。
本発明の別の態様は、本明細書に記載の若い無傷ＨＳＡと、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【0041】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、固体又は液体の希釈剤、充填剤、抗酸化剤、安定化剤などの、安全に投与することができる物質を意味する。投与経路によれば、糖類、デンプン、セルロース及びその誘導体、マルトース、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、多価アルコール、アルギン酸、リン酸緩衝液、乳化剤、等張食塩水、及び／又は発熱物質を含まない水などを含むがこれらに限定されない、当業者に周知の種々の担体を投与することができる。
【0042】
本明細書に記載の「治療」には、治癒、症状の軽減、生存期間の延長などが含まれる。
【0043】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、臨床医が期待する生物学的又は医学的反応を被験者の体内に引き起こすのに十分な活性物質の量を意味する。「治療有効量」は、投与経路、被験者の体重、年齢、病状等の要素に基づいて当業者が決定することができる。例えば、一般的な１日投与量の範囲は、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１００ｍｇ有効成分であってもよい。
【0044】
本発明により提供される医薬品は、注射剤のような臨床的に許容される剤形とすることができる。本発明の医薬組成物は、任意の適切な経路を使用して被験者に投与することができ、例えば、静脈内注入などの経路を介して投与することができる。
【0045】
「被験者」という用語は、治療を必要とするヒト被験者、及び霊長類、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌなどの非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物である。被験者には健常者も含まれていてもよい。
【0046】
別段の記載がない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者が通常理解する意味を有する。通常、本明細書で使用される細胞及び組織培養、分子生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学に関連する命名及びその技術は、当業者に公知であり、常用されるものである。
【0047】
本発明をより詳細に説明するために、以下では、図面を参照して本発明の実施例を示す。これらの実施例は、単に解釈及び説明の目的のためのものであり、本発明の範囲を限定するものとして理解されるべきではない。
【0048】
実施例１：若い無傷組換えアルブミンを注射すると、ヒトとマウスの血糖を正常に戻すことができる。
【0049】
糖尿病は多病因による慢性高血糖を特徴とする終身代謝性疾患である。長期的に血糖値が上昇すると、大血管、微小血管が損傷し、心、脳、腎臓、末梢神経、目、足などを危険にさらし、世界保健機関の統計によると、糖尿病の合併症は１００余種に達し、現在知られている合併症の最も多い疾患である。糖尿病による死亡者の半数以上は心脳血管、１０％は腎臓病変によるものである。糖尿病で足を切断する患者は、非糖尿病の１０～２０倍に上る。臨床データによると、糖尿病発症後１０年程度で３０～４０％の患者が少なくとも１種類の合併症を発症するとされ、合併症がいったん生じた場合、薬物治療では逆転が難しいことから、糖尿病合併症を早期に予防することが重要である。
【0050】
正常な場合、人体はホルモン調節と神経調節という２大調節システムにより血糖の発生と代謝のバランスを確保し、血糖を一定レベルに維持することができる。しかし、遺伝的要因（糖尿病の家族歴など）と環境的要因（不合理な食事、肥満など）が相まって、２大調節機能が乱れ、血糖値の上昇が見られる。
【0051】
長期的な高血糖は全身の各組織器官に病変を発生させ、急性慢性合併症の発生を招く。例えば、水分喪失、電解質障害、栄養不足、抵抗力低下、腎機能損傷、神経病変、眼底病変、心脳血管疾患、糖尿病性足などである。高血糖値をコントロールすることが必要である。
【0052】
若い無傷ヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）が血糖を下げる効果があるかどうかを調べるため、２型糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ）と野生型マウス（ＷＴ）に、若い無傷マウス血清アルブミン（ｒＭＳＡ）又は生理食塩水対照を用いて３週間ごとに尾静脈内注射を行い、マウスの空腹時血糖を毎週モニターした。その結果から、３回の注射投与では、ｒＭＳＡが２型糖尿病マウスの空腹時血糖を効果的に下げたことがわかった（図１Ａ）。その後、膵臓切片をＨ＆Ｅ染色したところ、塩水注射群では多くのマウスに膵島萎縮とβ細胞不全が認められたが、ｒＭＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）注射群では認められなかった（図１Ｂ及び図１Ｃ）。また、ｄｂマウスでは、ｒＭＳＡ治療群の膵島の割合と膵島の相対的な大きさが生理食塩水群より有意に大きいことがわかった（図１Ｄ～Ｆ）。その後、マウスの膵臓切片をＴＵＮＥＬ染色し膵島β細胞死を解析した。その結果、ｒＭＳＡ治療群では、ＴＵＮＥＬシグナル陽性β細胞が生理食塩水治療群より有意に少ないことを認めた。これは、生理食塩水群でより多くの膵島β細胞死が発生することを示している（図１Ｇ及び図１Ｈ）。さらに、ｄｂマウスの膵島切片で切断したカスパーゼ３（ＣＣ３）レベルを検出し、膵島β細胞のアポトーシスレベルを決定した。その結果、ｄｂマウスの生理食塩水群はｒＭＳＡ群より多くの膵島β細胞にアポトーシスが発生した（図１Ｉ及び図１Ｊ）。
【0053】
２型糖尿病の遅延におけるｒＭＳＡの役割をさらに検証するために、腹腔内ブドウ糖負荷試験（ＩＰＧＴＴ）も行った。ＩＰＧＴＴの結果、ｒＭＳＡを２回注射したｄｂマウスは、生理食塩水対照群のｄｂマウスよりも優れたグルコース耐性を示した（図１Ｋ及び図１Ｌ）。さらに、２回の注射処理後、ＥｃｏＭＲＩを用いてｄｂマウスの体組成を測定したところ、ｒＭＳＡを注射したｄｂマウスは、生理食塩水を注射したｄｂマウスと比較して、脂肪の割合が著しく低下し、筋肉の割合が著しく上昇することがわかった（図１Ｍ及び図１Ｎ）。
【0054】
若い無傷ヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）が血糖値を下げる効果があるかどうかをさらに調べるために、ＩＩ型糖尿病患者を募集し、この患者に若い無傷ヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）を静脈内注射し、この患者の空腹時血糖を毎週モニターした。その結果、ｒＨＳＡは２型糖尿病患者の空腹時血糖を効果的に下げることがわかった（図１Ｏ）。
【0055】
実施例２：若い無傷ｒＨＳＡ製剤は、遊離脂肪酸に結合することができ、それ自体は市販の血液由来ＨＳＡ製剤よりも少ない遊離脂肪酸を含む。
【0056】
血漿遊離脂肪酸（ＦＦＡ：Ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ）のレベルの上昇は、ＩＩ型糖尿病肥満患者におけるインスリン抵抗性の重要な原因の１つである可能性がある。
【0057】
若い無傷ｒＨＳＡ製剤のＦＦＡ結合能を調べるために、アルブミンとＦＦＡを混合した３６０ｎｍにおける吸光値を観察することにより、ＨＳＡ製剤のＦＦＡ結合能を測定した結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）製剤は６８３μＭ（パルミチン酸：ステアリン酸：オレイン酸：リノール酸＝２７：１０：３２：１５）のＦＦＡ結合能を有することが明らかになった。ＦＦＡの濃度と各種脂肪酸の割合は、健常人の血清中のＦＦＡの濃度及び割合と一致している［１］）（図２Ａ）。
【0058】
遊離脂肪酸（ＦＦＡ）含有量検出キット（ｂｏｘｂｉｏ、ＡＫＦＡ００８Ｍ）を用いて、２種類のＨＳＡが持つＦＦＡの量を測定した。遊離脂肪酸は銅イオンと結合して脂肪酸銅を形成し、クロロホルムに溶解し、銅イオンは発色液と反応して赤紫色錯体を形成し、生成物は５５０ｎｍに特徴的な吸収ピークを有し、遊離脂肪酸の含有量は吸光値の変化により定量的に検出することができる。その結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）製剤自体がＦＦＡを保有している量は、市販の血液由来ＨＳＡ製剤が保有している量よりも少ないことがわかった（図２Ｂ）。
【0059】
実施例３：若い無傷組換えヒトアルブミンは、コレステロールに結合することができ、かつ市販の血液由来ヒトアルブミンよりも構造安定性が高い。
【0060】
脂質代謝障害はアテローム性動脈硬化の病変の基礎であり、コレステロールはアテローム性動脈硬化プラークの主要な成分であり、血管内皮下におけるコレステロールの蓄積はアテローム性動脈硬化の全過程に伴う。臨床研究によると、血漿コレステロールのレベルが高いほど、心脳血管疾患のリスクが高まる。そのため、組換えヒトアルブミンにコレステロール結合能があるかどうかを探究し、コレステロールの蓄積を軽減するために、以下のように実験を設計した。
【0061】
１．水溶液中で、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）の濃度（３０μＭ）を固定し、コレステロールの濃度を（０、３０、６０μＭ）に調整し、３７℃の水浴で１０分間反応させた。室温に降温した後、２９５ｎｍ励起下で３００～４００ｎｍの蛍光発光スペクトルを走査した（図３Ａ）。
【0062】
２．水溶液中で、２種類の市販の血液由来ＨＳＡの濃度（３０μＭ）をそれぞれ固定し、コレステロールの濃度をそれぞれ（０、３０、６０μＭ）に調整し、３７℃の水浴で１０分間反応させた。室温に降温した後、２９５ｎｍ励起下で３００～４００ｎｍの蛍光発光スペクトルを走査した（図３Ｂ～Ｃ）。
【0063】
実験結果は以下のように分析される。
【0064】
１．図３Ａによれば、コレステロール濃度の上昇に伴い、ｒＨＳＡの蛍光発光強度が低下し、Ｔｒｐ２１４の励起光強度が抑制され、コレステロールがｒＨＳＡ分子に結合していることが明らかになった。
【0065】
２．図３Ｂによれば、コレステロール濃度の上昇に伴い、第１種の市販の血液由来ヒトアルブミン（ＨＳＡ－１）の発光蛍光強度が上昇してから低下し、コレステロール濃度が低い場合にはこの市販の血液由来ヒトアルブミンとの結合が十分ではなく（赤線）、両者の結合能力は組換えヒトアルブミンよりも弱いことが証明された。図３Ｃによれば、コレステロール濃度の上昇に伴い、第２種の市販の血液由来ヒトアルブミン（ＨＳＡ－２）の蛍光発光強度は徐々に低下しているが、高濃度では（青線）曲線の上下変動が著しく大きく、高濃度では組換えヒトアルブミンよりも両方の結合能が弱いことが証明された。
【0066】
３．図３Ａ～Ｃによれば、最大蛍光発光強度のある波長を分析した結果、ｒＨＳＡは、波長が３３８ｎｍに位置しており、文献報告と一致している［２－３］。しかし、２種類の市販の血液由来ＨＳＡはいずれも３５０ｎｍに位置し、明らかに３３８ｎｍより高く、その分子構造がもっと緩く、安定性が悪いことが証明された。
【0067】
上記の実験結果から、以下の結論が得られた。
【0068】
１．組換えヒトアルブミンは、コレステロールと結合する能力を有する。
【0069】
２．組換えヒトアルブミンは、市販の血液由来ヒトアルブミンよりもコレステロール結合能が高い。
【0070】
３．組換えヒトアルブミンの構造は市販の血液由来ヒトアルブミンよりも安定性が強い。
【0071】
実施例４：若い無傷ｒＨＳＡを注射することでアルツハイマー症を治療できる。
【0072】
アルツハイマー病は認知症を引き起こす最もよく見られる神経変性疾患の１つであり、その発病率は加齢とともに急激に増加する。全世界の高齢化の深刻化に伴い、アルツハイマー病は、よりよく見られる致命的な疾患になり、しかも、予防・治癒、さらに緩和することもできない。現在最も主流のアルツハイマー病の発病機序に関するＡβカスケード仮説によれば、アルツハイマー病の発生はＡβの異常な凝集から始まり、それによって神経線維の交絡、シナプスの損失やニューロンの死亡など一連のカスケード反応を引き起こすと考えている。
【0073】
アルブミンはヒト血清中の含有量が最も豊富なタンパク質であり、血漿のコロイド浸透圧を維持する以外に、遊離脂肪酸、金属イオン及びＡβペプチドなどの血液中の多くの物質を結合し、輸送することができる。
【0074】
若い無傷ｒＨＳＡの静脈内注射がアルツハイマー病を治療できることを証明するために、チオフラビン染色法を用いて、若い無傷ｒＨＳＡと血液由来ＨＳＡのＡβペプチドセグメントの凝集をインビトロで抑制する能力を比較した。チオフラビンはベンゾチアゾール系の小分子化合物であり、アミロイドフィブリンに特異的に結合し、４５０ｎｍ付近の励起光照射下で４８５ｎｍ付近に強い発光波を検出することができ、その発光波の蛍光信号の強弱は形成されるアミロイドフィブリン量に比例する。
【0075】
その結果（図４）、Ａβ濃度が１０ｍｇ／ｍｌ、ｒＨＳＡと血液由来ＨＳＡがいずれも生理的濃度の５０ｍｇ／ｍｌの場合、実験中の各時点において、ｒＨＳＡが血液由来ＨＳＡよりも有意にＡβペプチドセグメントの凝集を抑制する能力が高いことを示した。０ｈ時点では、市販の血液由来ＨＳＡ製剤自体がアミロイドフィブリンを含有しており、その含有量はｒＨＳＡ製剤（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）の６．１６倍（ｐ＜０．０００１）であり、２４ｈ時点では、ｒＨＳＡ製剤（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）は、Ａβペプチドセグメントの凝集を抑制する能力が、市販の血液由来ＨＳＡの６．１２倍（ｐ＝０．００５５）であることが示された。
【0076】
この結果を踏まえると、アルブミンはアルツハイマーの疾患進行に重要な役割を果たしていると考えられる。そこで、既存のＡｌｂノックアウトモデルマウスとアルツハイマー病トランスジェニックモデルマウスを用いて５×ＦＡＤハイブリダイゼーションによりＡｌｂ－／－，５×ＦＡＤマウスを構築した。Ｙ迷路実験室では、縦３０ｃｍ、横１５ｃｍ、高さ１５ｃｍ、３本のアームが１２０°の角度をなすアクリル製迷路にマウスを入れ、８分間自由に探索させ、各アームに入った回数を記録した。マウスが３回連続して異なるアームに入ることを１回の正解と定義し、正解率を計算して、マウスの空間的、瞬間的な記憶レベルを評価した。図４Ｂに示すように、３月齢Ａｌｂ－／－，５×ＦＡＤマウスは、Ｙ迷路で同窩Ａｌｂ＋／－
，５×ＦＡＤマウスと同窩Ａｌｂ＋／－マウスよりも表現が有意に劣り、このことから、アルブミンがアルツハイマー病の初期に疾患の進行を抑制する作用を持つことを明らかにした。
【0077】
実施例５：若い無傷組換えアルブミンを注射すると、パーキンソン病を遅らせることができる。
【0078】
パーキンソン病（ＰＤ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）は一般的な神経変性疾患で、中脳黒質ドーパミン（ＤＡ：ｄｏｐａｍｉｎｅ）作動性ニューロンの変性死によって線条体ＤＡの有意な減少が引き起こされることが原因とされる。ＰＤ患者の臨床表現は、主に静止振戦、運動遅延、筋強直及び姿勢歩行障害であり、また、抑うつ、嗅覚機能減退、便秘や睡眠障害などの非運動症状も伴うことがある。統計によると、中国では、３００万人近くのパーキンソン病患者がいて、世界のパーキンソン病患者の約半分を占め、罹患率が最も高い国である。ＰＤは６０歳以上の高齢者に多発し、中国では毎年患者が約１０万人増え、６５歳以上の発病率は１．７％に達する。ＰＤと診断されると、患者の脳黒質ニューロンは通常５０％以上壊死しており、ＰＤは加齢とともに重症化することもあり、パーキンソン病は「不死のがん」と呼ばれることが多い。
【0079】
ＰＤの正確な病因は今まで明らかではなく、遺伝と環境要素、年齢老化、酸化ストレスなどはすべて黒質ドーパミン作動性ニューロンの変性死亡過程に参与する可能性がある。現在、ＰＤに対する治療は薬物治療と手術治療を含むが、症状を改善するだけで、疾病を根治することはできず、疾病の進展を阻止することもできない。
【0080】
近年、ＰＤ患者の神経系の酸化ストレスレベルが著しく上昇し、黒質神経細胞中の活性酸素（ＲＯＳ：ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ）のレベルが明らかに高いことが、ＰＤ患者の病状をさらに悪化させる主な要因である可能性を示す研究が増えている。
【0081】
若い無傷ｒＨＳＡがＲＯＳによる神経細胞への損傷を阻止できるかどうかを調べるために、１－メチル－４－フェニルピリジニウムイオン（ＭＰＰ＋）を用いて、ヒト由来神経芽細胞腫細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）による神経毒性の産生を誘導し、ＰＤ患者の黒質ニューロンの損傷過程を細胞レベルでシミュレートした後、若い無傷ｒＨＳＡと市販の血液由来ＨＳＡを用いて、ＭＰＰ＋により神経毒性産生を誘導したＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞をそれぞれインキュベートした。
【0082】
図５Ａに示すように、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を７０～８０％密度まで培養し、ＭＰＰ＋（０．５ｍＭ）を加えた直後、各濃度のｒＨＳＡ又は市販の血液由来ＨＳＡを加え、正常な細胞培養条件下で２４ｈ処理し、その後、ＤＣＦＨ－ＤＡ（１０μＭ、３７℃インキュベータで３０分間処理）を用いて細胞のＲＯＳレベルを検出した。その結果、若い無傷ｒＨＳＡと市販の血液由来ＨＳＡはいずれもＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞のＲＯＳレベルを著しく下げることができた。また、同じ投与濃度では、若い無傷ｒＨＳＡは、市販のＨＳＡよりも細胞ＲＯＳレベルを低下させる効果が有意に優れていた。
【0083】
動物モデル研究では、ＭＰＴＰを用いてマウスにＰＤ様病変を誘導した後、ｒＭＳＡを静脈内注射した。マウスの握力レベルを検出することにより、外因性ｒＭＳＡがマウスの握力レベルを増加させ、しかも、異なるＭＰＴＰ用量で誘導された異なる病変程度のＰＤ様病変マウスに対して有効であることを発見した（図５Ｂ及び図５Ｃ）。
【0084】
通常マウスの運動機能をテストする行動学実験には、主にビームトラバーサル実験とポールクライミング実験がある。その結果、外因性ｒＭＳＡがＭＰＴＰ誘導型ＰＤ様病変マウスの運動機能を増強していることが確認された（図５Ｄ～Ｇ）。
【0085】
実験方法と材料は以下の通りである。
【0086】
活性酸素（ＲＯＳ）テスト：ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞培養は１０％ＦＢＳと１％ストレプトマイシン／ペニシリンを含むＲＰＭＩ１６４０培地を使用し、培養条件は３７℃、５％ＣＯ２で、培地は２～３日ごとに交換した。実験の群分けは以下の通りである。対照群（未処理）、ＰＤモデル群（０．５ｍＭ ＭＰＰ＋誘導）、ＭＰＰ＋誘導＋商業化ＨＳＡ処理群（５、１０及び２０ｍｇ／ｍＬ）、及びＭＰＰ＋誘導＋ｒＨＳＡ処理群（５、１０及び２０ｍｇ／ｍＬ）。ＤＣＦＨ－ＤＡを蛍光プローブとして細胞のＲＯＳレベルを検出した。細胞をＭＰＰ＋誘導とｒＨＳＡで２４時間処理した後、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞を無血清培地で３回洗浄し、１０μｍｏｌ／Ｌ ＤＣＦＨ－ＤＡを用いて３７℃で３０分間処理した後、無血清培地で細胞を２回洗浄した。その後、マイクロプレートリーダを用いてＤＣＦ蛍光を検出し、励起波長を４８５ｎｍ、発光波長を５３８ｎｍとした。検出結果は、３回の反復実験の平均値±標準誤差であった。
【0087】
動物処理：成体オスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（３月齢、２５～３０ｇ）をマウスケージで飼育し、毎日１２ｈの光を当て、自由に摂食、飲水させた。マウス２ロットを用い、それぞれ３群（４～８匹ずつ）に分けた。第１ロットの３群は、それぞれ、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）とＭＰＴＰ（２０ｍｇ／ｋｇ／日）を７日間連続して腹腔内注射し、第２ロットの３群は、それぞれ、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）又はＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ／日）を７日間連続して腹腔内注射した。１週間の腹腔注射後、３週間ごとに生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）又はｒＭＳＡ（マウス１ｇあたり１．５ｍｇ注射）をマウスに静脈内注射した。８回静脈内注射した後、マウスについて、握力実験、ビームトラバーサル実験、ポールクライミング実験を含む行動学実験・テストを行った。
【0088】
握力実験：ラット・マウスグリップテスターを使い、マウスに金属メッシュをつかんでもらい、マウスがメッシュをつかむことができなくなるまで、その尾をつかんで一定の速度で軽く後ろに引いた。マウスごとはテストを５回繰り返し、平均値をとった。実験は無作為二重盲検法を用いて行った。
【0089】
ビームトラバーサル実験：長さ１ｍの有機ガラスビームを平均的に４つの長さ０．２５ｍのセグメントに分け、各セグメントの幅をそれぞれ３．５ｃｍ、２．５ｃｍ、１．５ｃｍ及び０．５ｃｍとした。最も広い部分は動物の荷台に、最も狭い部分はケージに接続されている。テストの前に、まず、動物にビーズを通り抜ける訓練を２日間行い、毎日の訓練において、動物は３～５回の試験を受け、ビームの上を前方に移動する過程で協力を必要としないようにした。３日目までに、荷台からビームを通ってケージまでの時間をテストする正式な実験を行い、１匹につき３回のテストで平均値を取った。動物の前肢が２．５ｃｍのセグメントに到達する時刻から計時し始め、片方の前肢がケージに到達した時点で終了した。
【0090】
ポールクライミング実験：長さ０．５ｍ、直径１ｃｍのポールをケージの中に入れ、ポールの表面を滑り止めマットで包んで動物が握りやすいようにした。実験の前に、動物を２日間訓練した。訓練の初日、動物は３回の試験を受け、１回目の試験では、ケージの上の１／３の距離に動物を頭を下にして置き、２回目の試験では、２／３の距離から置き、３回目の試験では、ポールの先端に動物を置き、ケージの中に下りるようにした。２日目の訓練では、動物がポールの先端から下に下がる試験を３回行った。試験日には、動物をポールの先端に頭を下にして置き、ケージの底に降下するまでの時間をテストし、１匹につき３回テストして平均値をとった。被験者が動物をポールの先部に置く時刻から計時し始め、動物の１本の後肢がケージの底に到達した時点で終了した。
【0091】
実施例６：若い無傷ｒＨＳＡは、市販の血液由来ＨＳＡと年齢関連の４つの指標が異なる。
【0092】
若い無傷ｒＨＳＡと血液由来ＨＳＡを区別するために、メーカーの異なる３種類のＨＳＡ製品を購入し、遊離チオール含有量、カルボニル化のレベル、ＡＧＥのレベル、ホモシステイン修飾レベルを比較した結果を以下に示した。
【0093】
第一に、Ｅｌｌｍａｎ方法で遊離チオール（Ｆｒｅｅ ｔｈｉｏｌｓ）の絶対量を検出し、次に、ＨＳＡの量（理論的には、ＨＳＡ分子あたり遊離チオールは１つだけ）で割って、残りの遊離チオールの含有率を算出した。その結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）は、完全な遊離チオールを含み、血液由来ＨＳＡ中の遊離チオールは深刻に破壊された（１０２．８％ｖ．ｓ．１７．６％、ｐ＜０．０００１）（図６Ａ）。
【0094】
第二に、「タンパク質カルボニル含有量検出キット」（Ａｂｃａｍ、ａｂ１２６２８７）を用いて、説明取扱書に従ってカルボニル（Ｃａｒｂｏｎｙｌ）のモル濃度を検出し、各反応におけるＨＳＡ濃度を用いて正規化した結果を、タンパク質ｍｇ当たりカルボニルｎｍｏｌ（ｎｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）と表現した。その結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）のカルボニルのレベルは血液由来ＨＳＡより低かった（１．４６ｖ．ｓ．１．８０ｎｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐ＝０．００７２）（図６Ｂ）。
【0095】
第三に、酵素結合免疫吸着測定法キット（ＣＬＯＵＤ－ＣＬＯＮＥ Ｃｏ．，ＣＥＢ３５３Ｇｅ）を用いて、その説明取扱書に従って、最終糖化産物（ＡＧＥ：Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の質量濃度を検出し、各反応におけるＨＳＡの濃度を用いて結果を正規化した結果を、タンパク質（μｇ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）ｍgあたりμｇ ＡＧＥと表現した。その結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）のＡＧＥのレベルは、血液由来ＨＳＡ（２１．４ｖ．ｓ．６６．８μｇ／ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐ＜０．０００１）よりも著しく低いことが明らかになった（図６Ｃ）。
【0096】
第四に、酵素結合免疫吸着検定法キット（Ｊｉａｎｇｌａｉ、ＪＬ１００２２）を使用して、その説明取扱書に従って、ホモシステイン（Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、ＨＣＹ）のモル濃度を検出し、各反応におけるＨＳＡの濃度を用いて、結果を正規化した結果を、タンパク質ｇあたりホモシステインｎｍｏｌ（ｎｍｏｌ／ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）と表現した。その結果、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）のホモシステインのレベルは、血液由来ＨＳＡ（１．４６ｖ．Ｓ．５．５６ｎｍｏｌ／ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐ＝０．００６３）よりもはるかに低いことがわかった（図６Ｄ）。
【0097】
表１は、ｒＨＳＡ（Ｐｒｏｔｇｅｎ社）と３種類の市販の血液由来ＨＳＡの４つの指標を比較したものである。
【0098】
実施例７：若い無傷組換えアルブミンが血中コレステロールのレベルとアテローム性動脈硬化のリスクを低下させる。
【0099】
低アルブミン血症患者の血中総コレステロールと低密度リポタンパク質コレステロールは正常人より有意に高かった。西洋の食事を与えたアルブミンノックアウト（ＡＫＯ）マウスでは、血中総コレステロールと低密度リポタンパク質コレステロールは野生型（ＷＴ）マウスより明らかに高かった。ＡＫＯマウスの体内にｒＭＳＡを戻すと、低密度リポタンパク質コレステロールのレベルを有意に低下させることができた（図７）。対照群は同体積の生理食塩水を注射した。また、ＷＴマウスをベースラインとして対照した。ｒＭＳＡを戻す方式は、尾静脈内注射とした。周期と用量については、実験開始１、２、４週目に注射し、１．５ｇ／ｋｇ体重とした。
【0100】
実験方法と材料は以下の通りである。
【0101】
マウスモデル：アルブミンノックアウト（ＡＫＯ）マウスはＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、品番は０２５２００である。通常の飼育過程でマウスは自由に摂食、飲水した。飼育環境は、１２時間明るい／１２時間暗いとした。温度は２３～２５℃である。
【0102】
飼料：西洋の食事はＲｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｅｔ．から購入し、品番はＤ１２０７９Ｂであり、成分は４０％ｋｃａｌ脂肪と０．１５％コレステロールを含む。正常な食事は、協同生物社から購入し、品番はＳＷＣ９１０２で、成分は１２％ｋｃａｌ脂肪を含み、コレステロールがない。
【0103】
血中脂質検出：断食モードは１２時間断食であった。血液サンプルはマウスの尾の先端から採取し、室温で２時間放置して凝固させた後、３０００ｒｐｍ、４℃で１５分間遠心分離し、血清を採取した。血清総コレステロール及び低密度リポタンパク質コレステロールをキットにより検出した。キットは南京建成社から購入し、品番はＡ１１１－１－１、Ａ１１３－１－１であった。
【0104】
実施例８：若い無傷組換えアルブミンは肥満を治療できる。
【0105】
肥満は、ある程度の明らかな過体重と脂肪層が厚すぎることを指し、体脂肪、特にトリグリセリドが蓄積しすぎることによって引き起こされた状態である。単純な体重増加ではなく、体に脂肪組織が過剰に蓄積されている状態を指す。食物の摂取過多或いは生体代謝の変化による体内脂肪の蓄積過多は体重の過剰増加をもたらし、人体の病理、生理の変化や潜伏を引き起こす。肥満は体形美に影響を与えるだけでなく、生活にも不便をもたらす。そのほかに、関節軟組織損傷、生殖能力低下及び心理障害、心臓病、糖尿病、アテローム性動脈硬化、脂肪肝、胆石、浮腫、痛風などももたらす。
【0106】
ｒＭＳＡの肥満治療効果を調べるために、肥満疾患モデルマウスであるｏｂマウスを用いた。ｒＭＳＡを注射したマウスとＳａｌｉｎｅを注射したマウスの呼吸モニタリングをＴＳＥ代謝ケージシステムで試みた。その結果、ｒＭＳＡは、ｏｂマウスの酸素消費、二酸化炭素の発生、呼吸交換比ＲＥＲを有意に上昇させた（図８Ａ～Ｃ）。
【0107】
Ｅｃｈｏ ＭＲＩ－１００装置を用いて、筋肉と脂肪の含有量を重点として、マウスの体組成を測定した。その結果、ｒＭＳＡ処理マウスは、Ｓａｌｉｎｅ処理マウスに比べて、筋肉含有量が多く、脂肪含有量が少ないことがわかった（図８Ｄ～Ｇ）。また、マウスの引張力を引張力試験システムで測定した結果、ｒＭＳＡ処理マウスはＳａｌｉｎｅ処理マウスに比べて強い引張力を示した（図８Ｈ～Ｉ）。
【0108】
表１：ｒＨＳＡと異なるメーカーの血液由来ＨＳＡの４つの指標の比較
【0109】
【表1】
【0110】
参考文献
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図1H】
【図1I】
【図1J】
【図1K】
【図1L】
【図1M】
【図1N】
【図1O】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図5E】
【図5F】
【図5G】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【図8G】
【図8H】
【図8I】
【国際調査報告】