(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-10
(54)【発明の名称】抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20231102BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20231102BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231102BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20231102BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20231102BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20231102BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20231102BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231102BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20231102BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231102BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20231102BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231102BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20231102BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20231102BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20231102BHJP
A61P 31/10 20060101ALI20231102BHJP
A61P 33/00 20060101ALI20231102BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20231102BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20231102BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20231102BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C07K16/28
C12N5/10
C12N1/21
C12N1/19
C12N1/15
C12N5/0783
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K35/17
A61P35/00
A61P35/02
A61P43/00 121
A61P31/00
A61P31/12
A61P31/04
A61P31/10
A61P33/00
A61P31/18
G01N33/53 D
C12P21/08
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023526967
(86)(22)【出願日】2021-11-09
(85)【翻訳文提出日】2023-06-22
(86)【国際出願番号】 CN2021129562
(87)【国際公開番号】W WO2022100573
(87)【国際公開日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/127710
(32)【優先日】2020-11-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521543336
【氏名又は名称】レプ バイオファーマ カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ゴン， ウェンツ
(72)【発明者】
【氏名】トウ， イーウェイ
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA05
4B064DA14
4B065AA90X
4B065AB01
4B065AC14
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB42
4C085EE01
4C085EE03
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB37
4C087BB64
4C087CA04
4C087NA14
4C087ZB26
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA09
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA51
(57)【要約】
抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその断片を提供する。前述の抗体およびその断片は、ＴＩＧＩＴタンパク質に特異的に結合する。がんおよびウイルス感染などの疾患を処置および診断するための抗体または断片の使用方法も提供する。前記抗体またはその断片は、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗体またはその断片。
【請求項2】
Ｆｃ断片をさらに含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項3】
前記Ｆｃ断片がヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
【請求項4】
ヒト化された、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項5】
前記ＶＨが、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項6】
前記ＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその断片。
【請求項7】
前記ＶＨが配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその断片。
【請求項8】
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）成分である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載の断片および第２の特異性を有する第２の抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
【請求項10】
前記第２の特異性が、免疫細胞上の分子または腫瘍抗原に対する特異性である、請求項９に記載の二重特異性抗体。
【請求項11】
前記第２の特異性が、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７３、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ ＶＥＧＦ、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＩＧ、ＣＤ３、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分子に対する特異性である、請求項９に記載の二重特異性抗体。
【請求項12】
前記断片および前記第２の抗原結合断片の各々が、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片および薬学的に許容され得る担体を含む組成物。
【請求項14】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチド。
【請求項15】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチドを含む単離された細胞。
【請求項16】
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、前記患者に請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
【請求項17】
がんを処置するための医薬品を製造するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
【請求項18】
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法または請求項１７に記載の使用。
【請求項19】
前記患者が、第２の薬剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤でさらに処置される、請求項１６もしくは１８に記載の方法、または請求項１７もしくは１８に記載の使用。
【請求項20】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ、またはＢＴＬＡに特異的な抗体または抗原結合断片である、請求項１９に記載の方法または使用。
【請求項21】
感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害する方法であって、前記患者に請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
【請求項22】
感染を処置または阻害するための医薬品を製造するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
【請求項23】
前記感染が、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である、請求項２１に記載の方法または請求項２２の使用。
【請求項24】
前記感染がＨＩＶ感染である、請求項２１もしくは２３に記載の方法または請求項２２もしくは２３に記載の使用。
【請求項25】
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、インビトロで、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片で処置する工程；および（ｂ）前記処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞を前記患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項26】
工程（ａ）の前に、個体からＴ細胞またはＮＫ細胞を単離する工程をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記Ｔ細胞が、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせである、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項28】
ＮＫ細胞を処置する、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項29】
試料中のＴＩＧＩＴの発現を検出する方法であって、前記試料を、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と、前記抗体またはその断片が前記ＴＩＧＩＴに結合する条件下で接触させる工程、および前記試料中のＴＩＧＩＴの発現を示す前記結合を検出する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
背景
ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質は、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）タンパク質のＰＶＲ（ポリオウイルス受容体）ファミリーのメンバーである。これは、いくつかのＴ細胞クラス（濾胞ＢヘルパーＴ細胞（ＴＦＨ）が挙げられる）上に発現される。ＴＩＧＩＴは、高親和性でＰＶＲに結合することが示されており、この結合は、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞応答を制御するためのＴＦＨ細胞と樹状細胞との間の相互作用を補助すると考えられている。
ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質は、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）タンパク質のＰＶＲ（ポリオウイルス受容体）ファミリーのメンバーである。これは、いくつかのＴ細胞クラス（濾胞ＢヘルパーＴ細胞（ＴＦＨ）が挙げられる）上に発現される。ＴＩＧＩＴは、高親和性でＰＶＲに結合することが示されており、この結合は、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞応答を制御するためのＴＦＨ細胞と樹状細胞との間の相互作用を補助すると考えられている。
【背景技術】
【0002】
ＴＩＧＩＴは、細胞質側末端に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を有する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、活性化されたＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のサブセット上に発現される。ＴＩＧＩＴは、ＣＤ１５５（ＰＶＲおよびｎｅｃｌ－５とも称される）、ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２およびネクチン－２とも称される）、と相互作用し、おそらくＣＤ１１３（ＰＶＲＬ３およびネクチン－３とも称される）とも相互作用することが知られている。抗原提示細胞上に発現される高親和性リガンドＣＤ１５５とＴＩＧＩＴが結合すると、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の機能を抑制することが報告されている。また、ＴＩＧＩＴは、樹状細胞によるサイトカイン産生を調整することによってＴ細胞を間接的に阻害することが報告されている。
【0003】
腫瘍は、免疫応答を回避するために、ＰＤ－１およびＴＩＧＩＴなどのチェックポイント分子によって浸潤Ｔ細胞を疲労させ、ＮＫ細胞をサイレンシングする高抑制性の微小環境を構成する。ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴの高レベル発現は、ＡＭＬ対象の臨床転帰不良と相関することが報告されている。ＡＭＬ対象由来の疲弊したＴＩＧＩＴ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能的欠陥は、ＴＩＧＩＴ発現のｓｉＲＮＡ媒介性ノックダウンによって逆転されることが報告された。ＨＩＶ感染中の血中およびＳＩＶ感染中のリンパ系組織中のエフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞がより高レベルのＴＩＧＩＴを示すことも報告されている。
【0004】
また、ＴＩＧＩＴはウイルス感染に関与する。ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染中に、ＴＩＧＩＴ発現ＣＤ８＋Ｔ細胞は、多様なＨＩＶ感染個体群において拡大増殖し、ＨＩＶ疾患進行の臨床マーカーに関連することが示されている。ウイルス量が検出不可能である個体でさえＴＩＧＩＴが高レベルで維持され、ＨＩＶ特異性ＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分は、ＴＩＧＩＴおよび別の負のチェックポイント受容体であるプログラム死タンパク質１（ＰＤ－１）の両方を同時発現し、疲弊Ｔ細胞のいくつかの特徴を保持していた。標的化モノクローナル抗体でこれらの経路をブロックすると、ＨＩＶ特異性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を回復させることができる。この経路を、「ショック・アンド・キル」ＨＩＶ治癒アプローチ中のＨＩＶ感染細胞の死滅を強化するための標的にできる可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
要旨
本開示は、種々のがんおよび他の疾患（ウイルス感染など）の処置に使用することができるヒトＴＩＧＩＴタンパク質に特異的な抗体および抗原結合断片を提供する。
本開示は、種々のがんおよび他の疾患（ウイルス感染など）の処置に使用することができるヒトＴＩＧＩＴタンパク質に特異的な抗体および抗原結合断片を提供する。
【0006】
本開示の一実施形態は、抗体またはその断片であって、抗体またはその断片は、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗体またはその断片を提供する。
【0007】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨが配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
【0008】
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）成分である。
【0009】
方法も提供される。一実施形態では、がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、患者に本開示の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、処置方法または使用は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ、またはＢＴＬＡに特異的な抗体または抗原結合断片）などの第２の薬剤をさらに含む。
【0010】
別の実施形態では、感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害する方法であって、患者に本開示の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、感染は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である。いくつかの実施形態では、感染がＨＩＶ感染である。
【0011】
なおさらに、一実施形態は、がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞を、インビトロで、本開示の抗体またはその断片で処置する工程；および（ｂ）処置されたＴ細胞を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、工程（ａ）の前に、個体からＴ細胞を単離する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせである。
【0012】
また、一実施形態は、試料中のＴＩＧＩＴの発現を検出する方法であって、試料を、本開示の抗体またはその断片と、抗体またはその断片がＴＩＧＩＴに結合する条件下で接触させる工程、および試料中のＴＩＧＩＴの発現を示す結合を検出する工程を含む、方法が提供される。
【0013】
一実施形態では、がん患者から細胞を単離する工程および本開示の抗体またはその断片を使用してＴＩＧＩＴタンパク質の存在を検出する工程を含む、抗ＴＩＧＩＴ治療を用いた処置に好適な患者を同定する方法をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【0028】
【0029】
【発明を実施するための形態】
【0030】
定義
「ａ（１つの、ある）」または「ａｎ（１つの、ある）」実体という用語は、１またはそれを超えるその実体を指すことに留意されたい。例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１またはそれを超える抗体を表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１またはそれを超える」、および「少なくとも１つの」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
「ａ（１つの、ある）」または「ａｎ（１つの、ある）」実体という用語は、１またはそれを超えるその実体を指すことに留意されたい。例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１またはそれを超える抗体を表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１またはそれを超える」、および「少なくとも１つの」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
【0031】
本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識して結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体および任意の抗原結合断片またはその単鎖であり得る。したがって、「抗体」という用語は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。そのようなものの例としては、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域もしくはその任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも１つの部分が挙げられるが、これらに限定されない。
【0032】
本明細書で使用される「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの抗体の一部である。構造にかかわらず、抗体断片は、インタクトな抗体によって認識される同じ抗原と結合する。「抗体断片」という用語は、アプタマー、シュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）、およびダイアボディを含む。「抗体断片」という用語はまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質を含む。
【0033】
本明細書で使用される場合、抗体という用語は、生化学的に区別することができる様々な広範なクラスのポリペプチドを包含する。当業者は、重鎖がガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、またはε）として分類され、その中にいくつかのサブクラスがあることを十分に理解する（例えば、γ１～γ４）。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などは、十分に特徴付けられており、機能的特殊化を付与することが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾バージョンは、本開示を考慮して当業者に容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。すべての免疫グロブリンクラスが明らかに本開示の範囲内であり、以下の議論は一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスを対象とする。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量約２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、分子量約５３，０００～７０，０００ダルトンの２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４つの鎖は、典型的には、「Ｙ」配置でジスルフィド結合によって結合され、ここで、軽鎖が「Ｙ」の口から始まり可変領域を通って続く重鎖を支える。
【0034】
本開示の抗体、その抗原結合ポリペプチド、バリアント、または誘導体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、またはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫドメインもしくはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書中に開示のＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる））が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。
【0035】
軽鎖は、カッパまたはラムダ（Κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかと結合され得る。一般に、軽鎖および重鎖は互いに共有結合し、２つの重鎖の「テール」部分は、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作宿主細胞のいずれかによって生成された場合、共有結合性ジスルフィド結合および非共有結合性の連結によって互いに結合している。重鎖では、アミノ酸配列は、Ｙ配置のフォーク形の末端のＮ末端から各鎖の下部のＣ末端まで伸びている。
【0036】
軽鎖および重鎖の両方は、構造的および機能的な相同性領域に分割されている。用語「定常」および「可変」を機能について使用する。これに関して、軽鎖部分（ＶＫ）および重鎖部分（ＶＨ）の両方の可変ドメインが抗原に対する認識および特異性を決定することが認識されるであろう。逆に、軽鎖（ＣＫ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、および補体結合などの重要な生物学的性質を付与する。慣例により、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠くなるほど増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域であり；ＣＨ３およびＣＫドメインは、実際は、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。
【0037】
上記のように、可変領域により、抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識して特異的に結合することが可能である。すなわち、抗体のＶＫドメインとＶＨドメイン、すなわち相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットを組み合わせて三次元抗原結合部位を定義する可変領域を形成する。この四要素抗体構造は、Ｙの各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、各ＶＨ鎖およびＶＫ鎖上の３つのＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）によって定義される。いくつかの例（例えば、ラクダ科の種に由来するか、ラクダ科動物免疫グロブリンに基づいて操作されたある特定の免疫グロブリン分子）において、完全な免疫グロブリン分子は、重鎖のみからなることが可能であり、軽鎖を持たない。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）を参照のこと。
【0038】
天然に存在する抗体では、各抗原結合ドメイン中に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、前述の抗体が水性環境でその三次元配置を取るので、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置されたアミノ酸の短い不連続な配列である。「フレームワーク」領域と称される抗原結合ドメイン中のアミノ酸の残部は、分子間の変動性が低い。フレームワーク領域は主にβ－シート立体配座を取り、ＣＤＲはループを形成して、前述のβシート構造をつなぎ、場合によっては、前述のβシート構造の一部を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によってＣＤＲを正確な方向に配置させる足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲによって形成された抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を規定する。この相補性表面は、抗体のその同族エピトープへの非共有結合を促進する。当業者は、任意の所与の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＣＤＲおよびフレームワーク領域を含むアミノ酸をそれぞれ容易に同定することができ、これは、前述のアミノ酸が正確に定義されているからである（”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照のこと）。
【0039】
当該分野で使用されており、そして／または許容されている用語に２またはそれを超える定義が存在する場合、本明細書中で使用される用語の定義は、逆の意味が明確に述べられていない限り、全てのかかる意味を含むことが意図される。具体例としては、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出された不連続の抗原の組み合わせ部位を説明するために、用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）を使用する。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａに従ったＣＤＲの定義は、相互に比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲについて言及するためのいずれかの定義の適用は、本明細書中で定義し、使用される用語の範囲内にあることが意図される。上記の各引用文献によって定義されたＣＤＲを含む適切なアミノ酸残基を、比較のために以下の表に記載する。特定のＣＤＲを含む正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて変動するであろう。当業者は、抗体の可変領域のアミノ酸配列を考慮した場合にどの残基が特定のＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。
【表8】
【0040】
また、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．は、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列についてのナンバリングシステムを定義した。当業者は、配列自体を超えるいかなる実験データに頼ることなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」システムを任意の可変ドメイン配列に一義的に割り当てることができる。本明細書中で使用される場合、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）に記載のナンバリングシステムを指す。
【0041】
上記の表に加えて、Ｋａｂａｔナンバーシステムは、以下のＣＤＲ領域を記載している：ＣＤＲ－Ｈ１は、およそアミノ酸３１（すなわち、最初のシステイン残基のおよそ９残基後ろ）から始まり、およそ５～７アミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端から１５残基後ろから始まり、およそ１６～１９アミノ酸を含み、次のアルギニン残基またはリジン残基で終了する。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端からおよそ３３アミノ酸残基後ろから始まり；３～２５アミノ酸を含み；配列Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）で終了する。ＣＤＲ－Ｌ１は、およそ残基２４（すなわち、システイン残基の後ろ）から始まり；およそ１０～１７残基を含み；次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端からおよそ１６残基後ろから始まり、およそ７残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端からおよそ３３残基後ろ（すなわち、システイン残基の後ろ）から始まり；およそ７～１１残基を含み、配列ＦまたはＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）で終了する。
【0042】
本明細書中に開示の抗体は、任意の動物供給源（トリおよび哺乳動物が挙げられる）に由来し得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはトリの抗体である。いくつかの実施形態では、可変領域は、起源が、コンドリクトイドであり得る（例えば、サメ由来）であり得る。
【0043】
本明細書中で使用される場合、用語「重鎖定常領域」は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、少なくとも１つの以下を含む：ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央、および／または下部のヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアントもしくは断片。例えば、本開示で用いる抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含み得る。別の実施形態では、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示で用いる抗体は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠き得る。上記のように、当業者は、重鎖定常領域のアミノ酸配列が天然に存在する免疫グロブリン分子由来のアミノ酸配列と異なるように重鎖定常領域が修飾され得ることを理解するであろう。
【0044】
本明細書中に開示の抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子由来のＣＨ１ドメインおよびＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域を含み得る。別の例では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子に一部由来し、かつＩｇＧ３分子に一部由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例では、重鎖部分は、ＩｇＧ１分子に一部由来し、かつＩｇＧ４分子に一部由来するキメラヒンジを含むことができる。
【0045】
本明細書中で使用される場合、用語「軽鎖定常領域」は、抗体軽鎖由来のアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうちの少なくとも１つを含む。
【0046】
「軽鎖－重鎖対」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合を介して二量体を形成することができる軽鎖および重鎖の集合物を指す。
【0047】
前述したように、種々の免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元配置は周知である。本明細書中で使用される場合、用語「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の第１の（最もアミノ末端の）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端にある。
【0048】
本明細書中で使用される場合、用語「ＣＨ２ドメイン」は、例えば、従来のナンバリングスキームを使用して抗体の約残基２４４から残基３６０まで達する重鎖分子の一部を含む（残基２４４～３６０、Ｋａｂａｔナンバリングシステム；および残基２３１～３４０、ＥＵナンバリングシステム；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）を参照のこと）。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと緊密に対合しないという点で固有である。むしろ、２つのＮ結合分枝炭水化物鎖は、インタクトなナイーブＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入されている。ＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで達し、およそ１０８残基を含むことも十分に報告されている。
【0049】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結させる重鎖分子部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、柔軟性があり、したがって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して移動可能である。ヒンジ領域を、以下の３つの個別のドメインにさらに分割することができる：上部、中央、および下部のヒンジドメイン（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。
【0050】
本明細書中で使用される場合、用語「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子の間に形成された共有結合を含む。アミノ酸システインは、ジスルフィド結合を形成するか、第２のチオール基と架橋することができるチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域およびＣＫ領域は、ジスルフィド結合によって連結されており、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して２３９および２４２に対応する位置（２２６位または２２９位、ＥＵナンバリングシステム）で２つのジスルフィド結合によって連結されている。
【0051】
本明細書中で使用される場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性を示す領域または部位が第１の種から得られるか由来し、定常領域（本開示によれば、インタクトであり得るか、一部であり得るか、修飾され得る）が第２の種から得られる任意の抗体を意味すると考えられるであろう。一定の実施形態では、標的結合領域または標的結合部位は、非ヒト起源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域はヒトである。
【0052】
本明細書中で使用される場合、「ヒト化率」は、ヒト化ドメインと生殖系列ドメインとの間のフレームワークのアミノ酸の相違数（すなわち、非ＣＤＲのアミノ酸の相違数）を決定し、アミノ酸の総数から前述の数を差し引き、次いで、これをアミノ酸の総数で除し、１００を掛けることによって計算される。
【0053】
「特異的に結合する」または「特異性を有する」とは、一般に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間の何らかの相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、抗体は、その抗原結合ドメインを介して、ランダムな無関係のエピトープに結合するよりも容易に、そのエピトープに結合する場合、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書では、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対親和性を限定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープに対して高い特異性を有すると見なされ得るか、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」に対してそれが有するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われ得る。
【0054】
本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」という用語は、治療的処置および予防的または予防的手段の両方を指し、目的は、がんの進行などの望ましくない生理学的変化または障害を予防または減速（軽減）することである。有益なまたは所望の臨床結果には、検出可能であろうと検出不能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状況、疾患進行の遅延または遅延、病状の改善または緩和、および寛解（部分的であろうと全体的であろうと）が含まれるが、これらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けていない場合に予想される生存と比較して生存を延長することを意味し得る。処置を必要とする者には、既に状態もしくは障害を有する者、ならびに状態もしくは障害を有する傾向がある者、または状態もしくは障害を予防すべき者が含まれる。
【0055】
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象には、ヒト、飼育動物、農場動物および動物園動物、スポーツ動物またはペット動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛などが含まれる。
【0056】
本明細書で使用される場合、「処置を必要とする患者に」または「処置を必要とする対象」などの語句は、例えば検出のため、診断手順および／または処置のために使用される本開示の抗体または組成物の投与から利益を得るであろう対象、例えば哺乳動物対象（ヒト対象を含む）を含む。
抗ＴＩＧＩＴ抗体
抗ＴＩＧＩＴ抗体
【0057】
ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１と同様に、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）は、がん患者の免疫細胞上で頻繁に過剰発現される。ＴＩＧＩＴは免疫チェックポイントと見なされており、その遮断により、細胞増殖、サイトカイン産生、ならびにＴＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＴＩＬ ＣＤ８＋Ｔ細胞の脱顆粒を増大することができる。また、ＴＩＧＩＴの標的化は、ＨＩＶ感染細胞の死滅を増強すると考えられている。
【0058】
ＴＩＧＩＴを標的化する抗体が開発中であり、ある特定の臨床上の成果が得られている。Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙは、例えば、実験例における対照として使用した抗ＴＩＧＩＴ抗体２２Ｇ２を開示した（例えば、米国特許出願公開第２０１６０１７６９６３号を参照のこと）。比較のために使用された別の参照抗体は、チラゴルマブ（ＲＧ６０５８）であり、これはＲｏｃｈｅによって開発された非小細胞肺がん処置のための完全ヒトモノクローナル抗体である。しかしながら、ＴＩＧＩＴを標的化するいかなる分子も依然として承認されていない。
【0059】
本開示は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質に対して高い親和性および阻害活性を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。重要には、実施例７～８で実証するように、新規に開示された抗ＴＩＧＩＴ抗体は、対照抗体チラゴルマブを凌いでいた。チラゴルマブと同様に、本発明の抗体は、強力な結合親和性を有する。しかしながら、予想外に、本発明の抗体は、２２Ｇ２およびチラゴルマブの両方よりもＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用の阻害活性が有意に高かった（実施例８、図１３を参照のこと）。さらに、本発明の抗体は、チラゴルマブよりも高い抗体依存性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を示した（実施例１０～１１、図１５～１６を参照のこと）。したがって、本発明の抗体は、開発済みの抗体よりも優れた性質を有する。
【0060】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質に対する結合特異性を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、（ａ）配列番号１を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２を含むＶＨ ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３を含むＶＨ ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４を含むＶＬ ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５を含むＶＬ ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号６を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその断片は、（ａ）配列番号１のＶＨ ＣＤＲ１、または配列番号１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列番号１のバリアント；（ｂ）配列番号２のＶＨ ＣＤＲ２、または配列番号２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列番号２のバリアント；（ｃ）配列番号３のＶＨ ＣＤＲ３、または配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列番号３のバリアント；（ｄ）配列番号４のＶＬ ＣＤＲ１、または配列番号４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列番号４のバリアント；（ｅ）配列番号５のＶＬ ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号６のＶＬ ＣＤＲ３、または配列番号６と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列番号６のバリアントを含む。
【0061】
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその断片は、（ａ）配列番号１のＶＨ ＣＤＲ１、または配列番号１と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号１のバリアント；（ｂ）配列番号２のＶＨ ＣＤＲ２、または配列番号２と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号２のバリアント；（ｃ）配列番号３のＶＨ ＣＤＲ３、または配列番号３と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号３のバリアント；（ｄ）配列番号４のＶＬ ＣＤＲ１、または配列番号４と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号４のバリアント；（ｅ）配列番号５のＶＬ ＣＤＲ２、または配列番号５と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号５のバリアント；および（ｆ）配列番号６のＶＬ ＣＤＲ３、または配列番号６と比較して単一の置換、欠失、もしくは挿入を有する配列番号６のバリアントを含む。
【0062】
本明細書中に開示の置換は、いくつかの実施形態では、保存的置換である。
【0063】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置換される置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当該分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位に側鎖を有するもの（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、免疫グロブリンポリペプチド中の非必須アミノ酸残基は、同一の側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基と置換されることが好ましい。別の実施形態では、一連のアミノ酸を、構造的に類似するが側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる鎖と置換することができる。
【0064】
保存的アミノ酸置換の非限定的な例を、表Ａ～Ｂに提供し、表中、０またはそれを超える類似性スコア（表Ａを参照のこと）は、２つのアミノ酸の間の保存的置換を示す。
【表A】
【表B】
【0065】
抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号７および９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７および９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を有するものが挙げられる。かかる抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号８および１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８および１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を有するものが挙げられる。
【0066】
抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を有するものが挙げられる。かかる抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を有するものが挙げられる。
【0067】
抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号１１のアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を有するものが挙げられる。かかる抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を有するものが挙げられる。例示的な抗体は、Ｈｕ０２である。
【0068】
抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号１０のアミノ酸配列、または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を有するものが挙げられる。かかる抗体および断片の例としては、列挙したＣＤＲを保持しながら、配列番号１６のアミノ酸配列、または配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を有するものが挙げられる。例示的な抗体は、Ｈｕ０６である。
【0069】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体または断片のうちのいずれか１つと競合してＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体または断片も提供する。いくつかの実施形態では、競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴ抗体または断片とＴＩＧＩＴとの間の結合のＫｄは、約１０－５Ｍ～約１０－１２Ｍ（約１０－７Ｍ～約１０－１２Ｍ、または約１０－８Ｍ～約１０－１２Ｍなど）である。いくつかの実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴ抗体または断片は、キメラであるか、ヒトであるか、部分ヒト化されているか、または完全ヒト化されている。
【0070】
本明細書に開示される抗体は、それらが由来する天然に存在する結合ポリペプチドとアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも当業者によって理解される。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、類似していてもよく、例えば、出発配列と一定のパーセント同一性を有していてもよく、例えば、出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の同一であってもよい。
【0071】
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体と通常関連しないアミノ酸配列または１もしくはそれを超える部分を含む。例示的な変形形態を本明細書により詳細に記載する。例えば、本明細書に開示される抗体は、柔軟性リンカー配列を含み得るか、または機能性部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾され得る。
【0072】
本開示の抗体、またはそのバリアント、または誘導体としては、修飾された（すなわち、共有結合性の付着が抗体のエピトープへの結合を妨害しないような任意のタイプの分子の抗体への共有結合性の付着による）誘導体が挙げられる。例えば、制限されないが、抗体を、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって修飾することができる。多数の化学修飾のうちのいずれかを、公知の技術（特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などが挙げられるが、これらに限定されない）によって行ってよい。さらに、抗体は、１またはそれを超える非古典的アミノ酸を含み得る。
【0073】
いくつかの実施形態では、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。
【0074】
抗体は、検出可能な標識（放射性標識など）、免疫調節薬、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性を示す治療剤または診断剤、薬物または毒素であり得る細胞毒性剤、超音波増強剤、非放射性標識、これらの組み合わせ、および当該分野で公知の他のかかる薬剤が挙げられ得る治療剤にコンジュゲートされ得るか、融合され得る。
【0075】
抗体を、化学発光化合物にカップリングすることによって検出可能に標識することができる。次いで、化学発光性にタグ化した抗原結合ポリペプチドの存在を、一連の化学反応中に生じる発光の存在を検出することによって決定する。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、サロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。
【0076】
また、抗体を、蛍光発光金属（１５２Ｅｕまたはランタニド系の他の金属など）を使用して検出可能に標識することができる。これらの金属を、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート基を使用して抗体に付着させることができる。種々の部分を抗体にコンジュゲートする技術は周知である（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；”Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，”Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照のこと）。
二機能性分子および併用療法
二機能性分子および併用療法
【0077】
ＴＩＧＩＴは免疫チェックポイントである。免疫チェックポイント阻害剤として、ＴＩＧＩＴに特異的な抗体または抗原結合断片を、腫瘍細胞または免疫細胞に特異的な第２の抗原結合断片と組み合わせて、二重特異性抗体を生成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書中に開示の抗体または抗原結合断片を、第２の薬剤（腫瘍細胞または免疫細胞に特異的な第２の抗体または抗原結合断片など）と組み合わせて使用することができる。
【0078】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、および肥満細胞からなる群から選択される。標的化することができる免疫細胞上の分子としては、例えば、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７３、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ ＶＥＧＦ、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ４７、ＣＤ６４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＶＲＬ３、およびＰＶＲＩＧが挙げられる。他の例としては、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても公知）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても公知）、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても公知）、およびキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）が挙げられる。
【0079】
「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞中で産生される抗原性物質を指す（すなわち、この物質は、宿主における免疫応答を惹起する）。腫瘍抗原は、腫瘍細胞の同定で有用であり、がん治療で用いるための潜在的な候補である。体内の正常なタンパク質は、抗原性を示さない。しかしながら、ある特定のタンパク質は、腫瘍発生中に産生されるか過剰発現されるため、身体には「外来物」に見える。このタンパク質としては、免疫系から十分に隔離された正常なタンパク質、極めて少量で正常に産生されるタンパク質、ある特定の発生段階のみで正常に産生されるタンパク質、または変異によって構造が改変されたタンパク質が挙げられ得る。
【0080】
多数の腫瘍抗原が当該分野で公知であり、新規の腫瘍抗原を、スクリーニングによって容易に同定することができる。腫瘍抗原の非限定的な例としては、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ－７２、ＣＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン、αＶβ３、α５β１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、およびテネイシンが挙げられる。
【0081】
二重特異性の具体例としては、ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ４７、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１１２、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１１３、ＴＩＧＩＴ／ＰＶＲＬ３、ＴＩＧＩＴ／ＰＶＲＩＧ、およびＴＩＧＩＴ／ＣＤ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【0082】
異なる形式の二重特異性抗体も提供する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ断片および第２の断片の各々は、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。
【0083】
単純に抗体または抗原結合断片のみを含むわけではない二機能性分子も提供する。腫瘍抗原標的化分子として、ＴＩＧＩＴに特異的な抗体または抗原結合断片（本明細書中に記載のものなど）を、必要に応じてペプチドリンカーを介して、免疫サイトカインまたはリガンドと組み合わせることができる。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴ、およびＧＩＴＲＬが挙げられるが、これらに限定されない。かかる二機能性分子は、免疫チェックポイントブロッキング効果を腫瘍部位局所免疫調節と組み合わせることができる。
抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体の調製方法
抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体の調製方法
【0084】
本開示はまた、本開示の抗体、そのバリアントまたは誘導体をコードする単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上の抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域全体をコードし得る。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上の抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の一部をコードし得る。
【0085】
抗体を作製する方法は当技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。一定の実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域と定常領域の両方が完全にヒトである。完全ヒト抗体は、当分野で記載され、本明細書に記載される技術を使用して作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物に抗原を投与することによって調製することができる。
【0086】
一定の実施形態では、調製された抗体は、処置される動物（例えば、ヒト）において有害な免疫応答を誘発しないであろう。一実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチド、そのバリアント、または誘導体を、当該分野で認識された技術を使用して、その免疫原性を低下するように修飾する。例えば、抗体を、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化抗体、またはキメラ抗体にすることができる。これらの抗体型は、非ヒト抗体、典型的にはマウス抗体または霊長類抗体に由来し、親抗体の抗原結合特性を保持しているか、実質的に保持しているが、ヒトにおける免疫原性は低い。種々の方法（（ａ）非ヒト可変ドメイン全体をヒト定常領域上にグラフティングしてキメラ抗体を生成すること；（ｂ）非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）うちの少なくとも１つまたは複数の少なくとも一部を、ヒトのフレームワーク領域および重要なフレームワーク残基が保持されているか保持されていない定常領域にグラフティングすること；または（ｃ）非ヒト可変ドメイン全体であるが、表面残基の置換によってヒト様区域で「覆われた」非ヒト可変ドメイン全体の移植が挙げられる）によってこの免疫原性低下が行われる。
【0087】
また、脱免疫化を使用して、抗体の免疫原性を減少させることができる。本明細書中で使用される場合、用語「脱免疫化」としては、Ｔ細胞エピトープが改変されるような抗体の変化（例えば、国際出願公開番号ＷＯ／９８５２９７６Ａ１およびＷＯ／００３４３１７Ａ２を参照のこと）が挙げられる。例えば、出発抗体由来の可変重鎖配列および可変軽鎖配列を分析し、配列内の相補性決定領域（ＣＤＲ）および他の重要残基と比較したエピトープの位置を示す各Ｖ領域由来のヒトＴ細胞エピトープ「マップ」を作出する。最終抗体の活性の変動リスクの低い代替アミノ酸置換を同定するために、Ｔ細胞エピトープマップ由来の個別のＴ細胞エピトープを分析する。アミノ酸置換の組み合わせを含むある範囲の代替の可変重鎖配列および可変軽鎖配列をデザインし、これらの配列を、その後にある範囲の結合ポリペプチドに組み込む。典型的には、１２個と２４個の間のバリアント抗体を生成し、結合および／または機能について試験する。次いで、修飾された可変領域およびヒト定常領域を含む完全な重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を発現ベクターにクローニングし、その後にプラスミドを全抗体の産生のために細胞株に移入する。次いで、抗体を、適切な生化学的アッセイおよび生物学的で比較し、最適なバリアントを同定する。
【0088】
本開示の抗原結合ポリペプチドの結合特異性を、インビトロアッセイ（免疫沈降、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ）など）によって決定することができる。
【0089】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）および抗体を産生するために使用することができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６－８８（１９９１）；Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１９９５－１９９９（１９９３）；およびＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８－１０４０（１９８８）に記載の技術が挙げられる。いくつかの使用（ヒトにおける抗体のインビボ使用およびインビトロ検出アッセイが挙げられる）のために、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を使用することが好ましい場合がある。キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子（マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体など）である。キメラ抗体の産生方法は、当該分野で公知である。
【0090】
ヒト化抗体は、１またはそれを超える非ヒト種由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させる、好ましくは改善させるために、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基と置換されるであろう。これらのフレームワークの置換を、当該分野で周知の方法によって（例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリングおよび特定の位置の固有のフレームワーク残基を同定するための配列比較によって）同定する。
【0091】
所望のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを、従来の手技を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用によって）、容易に単離および配列決定することができる。単離およびサブクローニングされたハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源としての機能を果たす。単離された時点で、ＤＮＡを、発現ベクターに配置することが可能であり、次いで、原核生物または真核生物の宿主細胞（本来は免疫グロブリンを産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞など）にトランスフェクトする。
【0092】
さらに、日常的な組換えＤＮＡ技術を使用して、本開示の抗原結合ポリペプチドのＣＤＲのうちの１つまたは複数をフレームワーク領域内に（例えば、ヒトフレームワーク領域中に）挿入して、非ヒト抗体をヒト化し得る。フレームワーク領域は、天然に存在するフレームワーク領域またはコンセンサスフレームワーク領域、好ましくは、ヒトフレームワーク領域であり得る（例えば、ヒトフレームワーク領域のリストについてはＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７－４７９（１９９８）を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域とＣＤＲの組み合わせによって生成されたポリヌクレオチドは、所望のポリペプチド（例えば、ＬＩＧＨＴ）の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、１またはそれを超えるアミノ酸置換をフレームワーク領域内に作製してよく、好ましくは、アミノ酸置換は、抗体のその抗原への結合を改良する。さらに、かかる方法を使用して、鎖内ジスルフィド結合に関与する１またはそれを超える可変領域のシステイン残基のアミノ酸を置換または欠失して、１またはそれを超える鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体分子を生成し得る。ポリヌクレオチドに対する他の変更は、本開示および当業者の範囲内に含まれる。
処置
処置
【0093】
本明細書に記載されるように、本開示の抗体、バリアントまたは誘導体は、特定の処置および診断方法において使用され得る。
【0094】
本開示はさらに、本明細書中に記載される１またはそれを超える障害または症状を処置するために本開示の抗体を患者（例えば、動物、哺乳動物およびヒト）に投与することを伴う抗体に基づく治療を対象とする。本開示の治療用化合物には、本開示の抗体（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）および本開示の抗体をコードする核酸またはポリヌクレオチド（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
【0095】
いくつかの実施形態では、それを必要とする患者のがんを処置する方法が提供される。この方法は、一実施形態では、有効量の本開示の抗体を患者に投与することを伴う。いくつかの実施形態では、患者の少なくとも１つのがん細胞（例えば、間質細胞）は、ＴＩＧＩＴを過剰発現するか、またはＴＩＧＩＴを発現するように誘導される。
【0096】
がんの非例示的な例として、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺が挙げられる。
【0097】
細胞治療、より具体的にはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）およびＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ）治療も本開示で提供される。本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体と接触させる（または本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体を発現するように代替的に操作する）適切なＴ細胞およびＮＫ細胞を使用することができる。そのような接触または操作を行うと、次いで、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を、処置を必要とするがん患者に導入することができる。がん患者は、本明細書に開示される種類のいずれかのがんを有し得る。Ｔ細胞は、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得るが、これらに限定されない。
【0098】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、がん患者自身から単離されている。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、ドナーによって、または細胞バンクから提供されている。Ｔ細胞およびＮＫ細胞ががん患者から単離されると、望ましくない免疫反応を最小限に抑えることができる。
【0099】
本開示の抗体もしくはバリアント、またはそれらの誘導体を用いて処置、予防、診断および／または予後判定され得る、細胞生存の増加に関連するさらなる疾患または状態には、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病を含む）および慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む））、真性多血症、リンパ腫（例：ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、および、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫などの肉腫および癌を含むがこれらに限定されない固形腫瘍などの悪性腫瘍および関連障害の進行および／または転移が含まれるが、これらに限定されない。
【0100】
任意の特定の患者についての具体的な投薬レジメンおよび処置レジメンは、種々の要因（使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、健康全般、性別、および食事、および投与時期、排泄率、薬物の組み合わせ、ならびに処置される特定の疾患の重症度が含まれる）に依存するであろう。医療奉仕者によるかかる要因の判断は、当業者の範囲内にある。また、量は、処置される個別の患者、投与経路、製剤のタイプ、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および所望の効果に依存するであろう。使用量を、当該分野で周知の薬理学的原理および薬物動態学的原理によって決定することができる。
【0101】
抗体、バリアントの投与方法としては、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、鼻腔内投与、硬膜外投与、および経口投与が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、任意の都合の良い経路によって（例えば、注入またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収によって）投与され得、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与され得る。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含む医薬組成物は、経口、直腸、非経口、槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所（散剤、軟膏、点滴剤、または経皮貼布による）、頬側、または口内噴霧もしくは鼻内噴霧として投与され得る。
【0102】
本明細書中で使用される用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、および関節内への注射および注入が挙げられる投与様式を指す。
【0103】
投与は、全身または局所であり得る。さらに、任意の好適な経路（脳室内注射および髄腔内注射が挙げられる）によって中枢神経系中に本開示の抗体を導入することが好ましい場合がある；脳室内注射は、例えば、オマヤレザバーなどのリザーバに取り付けられた脳室内カテーテルによって容易にされ得る。例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤を用いた製剤によって肺投与を使用することもできる。
【0104】
処置を必要とする領域に局所的に本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を投与することが望ましい場合があり；例えば、決して制限されないが、手術中の局所注入、局所適用（例えば、術後の創傷包帯との併用）、注射、カテーテル、坐剤、または埋没物（前述の埋没物は、多孔質、無孔の、またはゼラチン質の材料（ｓｉａｌａｓｔｉｃメンブレンなどのメンブレンが挙げられる）、または繊維から構成される）によってこの投与が行われ得る。好ましくは、本開示のタンパク質（抗体が挙げられる）を投与する場合、タンパク質を吸収しない材料を使用することに注意すべきである。
【0105】
さらなる実施形態では、本開示の組成物を、抗新生物剤、抗ウイルス剤、抗菌剤もしくは抗生物質製剤、または抗真菌剤と組み合わせて投与する。当該分野で公知のこれらの薬剤のうちのいずれかは、本開示の組成物中に含めて投与され得る。
【0106】
別の実施形態では、本開示の組成物を、化学療法剤と組み合わせて投与する。本開示の組成物と共に投与され得る化学療法剤としては、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンアルファ－２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、および６－チオグアニン）；細胞毒性剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロールジホスファート、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メファレン、クロラムブシル（ｃｈｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、およびチオテパ）；ステロイドおよび組み合わせ（例えば、リン酸ベタメタゾンナトリウム（ｂｅｔｈａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ））；およびその他（例えば、ダカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトタン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0107】
さらなる実施形態では、本開示の組成物を、サイトカインと組み合わせて投与する。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αが挙げられるが、これらに限定されない。
【0108】
さらなる実施形態では、本開示の組成物を、他の治療レジメンまたは予防レジメン（例えば、放射線療法など）と組み合わせて投与する。
【0109】
本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体を、いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤と共に使用することができる。免疫チェックポイントは、シグナルを上昇させる（共刺激分子）かシグナルを低下させる免疫系の分子である。多数のがんは、Ｔ細胞シグナルを阻害することによって免疫系から自己防衛する。免疫チェックポイント阻害剤は、細胞によるかかる防御機序の停止を補助することができる。免疫チェックポイント阻害剤は、以下のチェックポイント分子のうちの任意の１つまたは複数を標的化し得る：ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても公知）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても公知）、またはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても公知）。
【0110】
プログラムＴ細胞死１（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞表面上に見出される膜貫通タンパク質であり、腫瘍細胞上のプログラムＴ細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に結合した場合に、Ｔ細胞活性を抑制し、Ｔ細胞媒介性細胞傷害を低下させる。したがって、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１は、免疫下方制御物質または免疫チェックポイントの「オフスイッチ」である。ＰＤ－１阻害剤の例としては、ニボルマブ、（Ｏｐｄｉｖｏ）（ＢＭＳ－９３６５５８）、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＢＭＳ－９３６５５９、およびＭＳＢ００１０７１８Ｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【0111】
表面抗原分類２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）としても公知のプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）は、ヒトにおいてＣＤ２７４遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＰＤ－Ｌ１阻害剤の非限定的な例としては、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ９３５５５９（ＭＤＸ－１１０５）、およびＡＭＰ－２２４が挙げられる。
【0112】
ＣＴＬＡ－４は、免疫系を下方制御するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ－４阻害剤の非限定的な例としては、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）（ＢＭＳ－７３４０１６、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１としても公知）、およびトレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）が挙げられる。
【0113】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）は、Ｔｒｅｇに対する作用およびＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接の影響によって免疫応答を抑制するように作用する細胞表面上の免疫チェックポイント受容体である。ＬＡＧ－３阻害剤としては、ＬＡＧ５２５およびＢＭＳ－９８６０１６が挙げられるが、これらに限定されない。
【0114】
ＣＤ２８は、ほとんど全てのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上および全ＣＤ８ Ｔ細胞のうちのおよそ半分に構成性に発現され、Ｔ細胞の拡大増殖を促進する。ＣＤ２８阻害剤の非限定的な例としては、ＴＧＮ１４１２が挙げられる。
【0115】
ＣＤ１２２は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖を増加させる。非限定的な例としては、ＮＫＴＲ－２１４が挙げられる。
【0116】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても公知）は、Ｔ細胞増殖に関与する。ＣＤ１３７媒介シグナル伝達は、Ｔ細胞、特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、活性化誘導細胞死から防御することも公知である。ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）、およびリポカリンは、ＣＤ１３７阻害剤の例である。
【0117】
上記併用処置のうちのいずれかのために、抗ＴＩＧＩＴ抗体を、他の抗癌剤と同時にまたは個別に投与することができる。個別に投与する場合、抗ＴＩＧＩＴ抗体を、他の抗癌剤の前または後に投与することができる。
【0118】
一実施形態では、感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害する方法であって、有効量の本開示の抗体またはその断片を患者に投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、感染は、ウイルス感染（ＨＩＶ感染など）、細菌感染、真菌感染、または寄生虫による感染である。
【0119】
感染は、病原体による生物のへ体組織の侵入、その増幅、およびこれらの生物およびこれらの生物が産生する毒素に対する宿主組織の反応である。感染は、感染性因子（ウイルス、ウイロイド、プリオン、細菌など）、線虫（寄生虫性の回虫および蟯虫など）、節足動物（ダニ、マダニ、ノミ、およびシラミなど）、真菌（白癬など）、および他の大寄生虫（条虫および他の蠕虫など）が原因であり得る。一態様では、感染性因子は、細菌（グラム陰性菌など）である。一態様では、感染性因子は、ウイルス（ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、および逆転写ウイルスなど）である。ウイルスの非限定的な例としては、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン・バーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルスが挙げられる。
【0120】
また、本開示の抗体を使用して、微生物および微生物を排除するための免疫細胞を標的化することによって微生物が原因の感染症を処置するか、微生物を死滅させることができる。一態様では、微生物は、ウイルス（ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスが挙げられる）、グラム陽性菌、グラム陰性菌、原生動物、または真菌である。
診断方法
診断方法
【0121】
ＴＩＧＩＴの過剰発現は、ある特定の腫瘍試料で認められ、ＴＩＧＩＴを過剰発現する細胞を有する患者は、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体での処置に反応する可能性が高い。したがって、本開示の抗体を、診断および予後の目的のために使用することもできる。
【0122】
細胞を含むことが好ましい試料を、がん患者または診断を望む患者であり得る患者から得ることができる。細胞は、腫瘍組織または腫瘍塊、血液試料、尿試料、または患者由来の任意の試料の細胞であり得る。必要に応じた試料の前処理の際に、本開示の抗体が試料中に存在する可能性があるＴＩＧＩＴタンパク質と相互作用可能な条件下で、試料を本開示の抗体とインキュベートすることができる。抗ＴＩＧＩＴ抗体を活用してＥＬＩＳＡなどの方法を使用して、試料中のＴＩＧＩＴタンパク質の存在を検出することができる。
【0123】
試料中のＴＩＧＩＴタンパク質の存在（必要に応じて、量または濃度を使用する）を、患者が抗体での処置に好適であることの指標、または患者ががん処置に応答したこと（応答しなかったこと）の指標として、がん診断のために使用することができる。予後法のために、処置の進行を示すために１回、２回、またはそれを超える回数、ある特定の病期、がん処置の開始の際に検出することができる。
組成物
組成物
【0124】
本開示はまた、医薬組成物を提供する。そのような組成物は、本明細書に開示される有効量の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその断片および薬学的に許容され得る担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。
【0125】
いくつかの実施形態では、「薬学的に許容され得る」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されていること、または動物、より具体的にはヒトでの使用のために米国薬局方もしくは他の一般に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。「薬学的に許容され得る担体」は、一般に、任意の種類の非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、封入材料または製剤補助剤である。
【0126】
「担体」という用語は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような医薬担体は、滅菌液体、例えば水および油、例えば石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などであり得る。医薬組成物を静脈内投与する場合、水が好ましい担体である。食塩水ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液も、特に注射液剤用の液体担体として使用することができる。適切な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。組成物は、所望であれば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩などのｐＨ緩衝剤も含有することができる。ベンジルアルコール、メチルパラベン等の抗菌剤、アスコルビン酸、重亜硫酸ナトリウム等の酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤、および、塩化ナトリウムまたはデキストロース等の張度を調整するための剤も想定される。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤・散剤（ｐｏｗｄｅｒ）、持続放出製剤などの形態をとることができる。組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドなどの担体と共に坐剤として製剤化することができる。経口製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。適切な医薬担体の例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。そのような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するために、治療有効量の抗原結合ポリペプチド、好ましくは精製形態の抗原結合ポリペプチドを適切な量の担体と共に含有する。製剤は投与様式に適するべきである。親製剤（ｐａｒｅｎｔａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
）は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与バイアルに封入することができる。
）は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与バイアルに封入することができる。
【0127】
いくつかの実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として日常的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、注射部位の痛みを和らげるために可溶化剤およびリグノカインなどの局所麻酔剤を含んでもよい。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉容器内の乾燥凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、別々に、または一緒に混合されて単位剤形で供給される。組成物が輸注によって投与される場合、組成物は、無菌医薬品グレードの水または食塩水を含有する輸液ボトルで投薬することができる。組成物が注射によって投与される場合、成分が投与前に混合され得るように、注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供することができる。
【0128】
本開示の化合物を、中性または塩の形態として製剤化することができる。薬学的に許容され得る塩としては、陰イオン（塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する陰イオンなど）を用いて形成された塩、および陽イオン（ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する陽イオンなど）を用いて形成された塩が挙げられる。
【実施例】
【0129】
実施例１：ヒトＴＩＧＩＴに対するマウスモノクローナル抗体の作製
この実施例は、ハイブリドーマ技術を用いた抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体の調製を記載する。
この実施例は、ハイブリドーマ技術を用いた抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体の調製を記載する。
【0130】
抗原：ヒトＴＩＧＩＴ－Ｆｃタンパク質およびヒトＴＩＧＩＴ過剰発現ＣＨＯＫ１細胞株（ＴＩＧＩＴ－ＣＨＯＫ１細胞株）。
【0131】
免疫：ヒトＴＩＧＩＴへのマウスモノクローナル抗体を作製するために、Ｂａｌｂ／ｃマウス、ＳＪＬマウスおよびＷｉｓｔａｒラットをＴＩＧＩＴ－Ｆｃタンパク質で初回免疫した。免疫したマウスおよびラットを、それぞれＴＩＧＩＴ－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＨＯ－Ｋ１／ＴＩＧＩＴ安定細胞およびＴＩＧＩＴ－Ｆｃタンパク質でブーストした。ＴＩＧＩＴタンパク質に結合する抗体を産生するマウスまたはラットを選択するために、免疫したマウスの血清をＥＬＩＳＡによる抗体価評価に供した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＥＬＩＳＡ被覆緩衝液中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴタンパク質、１００μｌ／ウェルで４℃にて一晩被覆し、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ ＢＳＡでブロックした。免疫マウス由来の血清の希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１～２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートした抗マウスＩｇＧ抗体またはＨＲＰとコンジュゲートした抗ラットＩｇＧ抗体とインキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ ４５０ｎｍで分光光度計によって分析した。３回の免疫の後、ｒｈＴＩＧＩＴタンパク質に対する血清ＥＬＩＳＡおよびＣＨＯ－Ｋ１親細胞株を陰性対照として用いたＣＨＯ－Ｋ１／ＴＩＧＩＴ安定細胞株に対するＦＡＣＳによっても免疫応答を試験した。十分な力価の抗ＴＩＧＩＴ ＩｇＧのマウスを、３回の免疫後に２５μｇのヒトＴＩＧＩＴ－Ｆｃタンパク質で追加免疫した。得られたマウスを融合に使用した。ハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによって抗ＴＩＧＩＴ ＩｇＧについて試験した。
【0132】
細胞融合およびハイブリドーマスクリーニング：電気融合によって融合を行った。融合した細胞を、各融合について５０個のプレートにプレーティングした。次いで、陽性クローンの上清を、細胞ベースの受容体ブロッキングアッセイによってＴＩＧＩＴのそのリガンドｈＣＤ１５５のブロッキングにおける機能をスクリーニングした。
【0133】
サブクローニングおよびスクリーニング：確実にサブクローンが単一の親細胞に由来するように、各融合由来の陽性一次クローンを限界希釈によってサブクローニングした。サブクローンの上清を、細胞ベースの受容体ブロッキングアッセイおよび親和性ランキングによってスクリーニングした。
【0134】
ハイブリドーマクローン７６Ｄ１２Ｂ１０を、さらなる分析のために選択した。７６Ｄ１２Ｂ１０の可変領域のアミノ酸配列を、以下の表１に提供する。
実施例２：抗ＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体の抗原結合特性
【表1】
【表1A】
【0135】
この実施例は、ＴＩＧＩＴタンパク質に対する抗ＴＩＧＩＴマウス抗体の結合特性を試験した。
【0136】
７６Ｄ１２Ｂ１０の結合活性を評価するために、これらのクローン由来のキメラｍＡｂをＥＬＩＳＡ試験に供した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで４℃、一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ ＢＳＡでブロッキングした。１０μｇ／ｍｌから開始する７６Ｄ１２Ｂ１０抗体の３倍希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ ４５０ｎｍで分光光度計によって分析した。図１に示すように、７６Ｄ１２Ｂ１０は、ヒトＴＩＧＩＴに高親和性で結合した（ＥＣ５０＝８．５６６ｎｇ／ｍｌ）。
種間活性
種間活性
【0137】
ＥＬＩＳＡ試験を行って、ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＰＤ－Ｌ１に対するキメラ抗体の結合をそれぞれ評価した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ－Ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで４℃、一晩、コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ ＢＳＡでブロッキングした。１０μｇ／ｍｌから開始する７６Ｄ１２Ｂ１０抗体の３倍希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ ４５０ｎｍで分光光度計によって分析した。７６Ｄ１２Ｂ１０抗体は、カニクイザルＴＩＧＩＴに高親和性で結合し（ＥＣ５０＝８．２９８ｎｇ／ｍｌ）、ラットまたはマウスのＴＩＧＩＴに結合しなかった（図２および表２）。
ＴＩＧＩＴ抗体のＢｉａｃｏｒｅ分析
【表2】
【0138】
７６Ｄ１２Ｂ１０抗体の組換えＴＩＧＩＴタンパク質（ヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタグ）への結合を、捕捉法を使用したＢＩＡＣＯＲＥ（商標）を用いて試験した。７６Ｄ１２Ｂ１０ ｍＡｂを、ＣＭ５チップを使用して捕捉した。ヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉抗体上に３０μｌ／分の流速で１分間注入した。抗原を３００秒間解離させた。全ての実験はＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を図３および下記表３に示す。
実施例３マウス抗体のヒト化
【表3】
【0139】
７６Ｄ１２Ｂ１０可変領域遺伝子を使用して、ヒト化ｍＡｂ（ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ Ｆｃ断片を有する）を作出した。このプロセスの第１の工程では、７６Ｄ１２Ｂ１０のＶＨおよびＶＬまたはＶＫのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最も適合するヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子配列を見出した。７６Ｄ１２Ｂ１０の軽鎖の場合、最も近いヒトマッチはＡ２０／ＪＫ２遺伝子であり、重鎖の場合、最も近いヒトマッチはＶＨ４－Ｂ／ＪＨ６遺伝子であった。
【0140】
次いで、７６Ｄ１２Ｂ１０のヒト化可変ドメイン配列を設計し、ＣＤＲＬ１、Ｌ２、およびＬ３をＡ２０／ＪＫ２遺伝子のフレームワーク配列にグラフティングし、ＣＤＲＨ１、Ｈ２、およびＨ３をＶＨ４－Ｂ／ＪＨ６遺伝子のフレームワーク配列にグラフティングした。次いで、３Ｄモデルを生成して、マウスアミノ酸をヒトアミノ酸で置き換えることが結合および／またはＣＤＲ立体配座に影響を及ぼし得る任意のフレームワーク位置があるかどうかを決定した。重鎖の場合、フレームワーク中のＶ２４Ａ、Ｓ３０Ｔ、Ｇ４５Ｋ、Ｉ４９Ｍ、Ｖ６８Ｉ、Ｖ７２Ｈ、およびＹ９５Ｆは、復帰変異に関与していた。軽鎖の場合、フレームワーク中のＶ４３Ｓ、Ｉ４８Ｖ、およびＹ４９Ｈは、復帰変異に関与していた（表４および５）。
実施例４：ヒト化抗体の抗原結合特性
組換えヒトＴＩＧＩＴへの結合
【表4】
【表5】
組換えヒトＴＩＧＩＴへの結合
【0141】
抗原結合活性を評価するために、ヒト化抗体をＥＬＩＳＡ試験に供した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタンパク質にて、１００μｌ／ウェルで、４℃、一晩コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。３μｇ／ｍｌから始まるヒト化抗体の３倍希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図４に示すように、全てのヒト化抗体は、キメラ抗体と同等のヒトＴＩＧＩＴへの結合有効性を示した。
Ｂｉａｃｏｒｅによるヒト化抗体の親和性ランキング
Ｂｉａｃｏｒｅによるヒト化抗体の親和性ランキング
【0142】
ヒト化抗体の結合動態を調べるために、この実施例では、Ｂｉａｃｏｒｅを用いて親和性ランキングを行った。表６に示されるように、Ｈｕ０２からＨｕ２０までの全てのヒト化抗体は、キメラ抗体と同等の優れた親和性を示した。
組換えヒトＴＩＧＩＴへの結合
【表6】
【0143】
抗原結合活性を評価するために、Ｈｕ０２およびＨｕ０６をＥＬＩＳＡ試験に供した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタンパク質にて、１００μｌ／ウェルで、４℃、一晩コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。３μｇ／ｍｌから始まるヒト化抗体の３倍希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と３７℃で０．５時間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図５に示すように、Ｈｕ０２およびＨｕ０６は、キメラ抗体と同等のヒトＴＩＧＩＴへの結合有効性を示した。
Ｂｉａｃｏｒｅによるヒト化抗体の完全速度論的親和性
Ｂｉａｃｏｒｅによるヒト化抗体の完全速度論的親和性
【0144】
ヒト化抗体の組換えＴＩＧＩＴタンパク質（ヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタグ）への結合を、捕捉法を使用したＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって試験した。Ｈｕ０２ ｍＡｂおよびＨｕ０６ ｍＡｂを、プロテインＡチップを使用して捕捉した。ヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタグタンパク質の段階希釈物を、捕捉抗体上に３０μｌ／分の流速で２分間注入した。抗原を１８００秒間解離させた。全ての実験はＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行い、図６および表７に示す。
実施例５：抗ＴＩＧＩＴヒト化抗体の機能特性
ＣＤ１５５へのヒトＴＩＧＩＴタンパク質結合の遮断
【表7】
ＣＤ１５５へのヒトＴＩＧＩＴタンパク質結合の遮断
【0145】
組換えヒトＴＩＧＩＴのその受容体ＣＤ１５５への結合に対するＨｕ０２およびＨｕ０６のブロッキング効果を評価するために、ＥＬＩＳＡベースの受容体ブロッキングアッセイを使用した。
【0146】
簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌのヒトＣＤ１５５－ｈＦｃタンパク質にて、１００μｌ／ウェルで、４℃、一晩コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。５０μｌのビオチン標識ヒトＴＩＧＩＴ－Ｆｃタンパク質、ならびに１０μｇ／ｍｌから出発して５０μｌで３倍希釈したＨｕ０２およびＨｕ０６抗体を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いでストレプトアビジン－ＨＲＰと共に３７℃で１０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ ４５０ｎｍで分光光度計によって分析した。図７に示すように、Ｈｕ０２およびＨｕ０６は、７６Ｄ１２Ｂ１０キメラ（ＩＣ５０＝１１１２ｎｇ／ｍｌ）と同様に、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質のヒトＣＤ１５５への結合を効率的に阻害した（Ｈｕ０２ ＩＣ５０＝１１２９ｎｇ／ｍｌ、Ｈｕ０６ ＩＣ５０＝８６６．０ｎｇ／ｍｌ）。
インビトロでの細胞ベースの機能アッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の効果
インビトロでの細胞ベースの機能アッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の効果
【0147】
Ｔ細胞活性化に対するＴＩＧＩＴシグナル伝達のブロッキングにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の機能活性を評価するために、インビトロでの細胞ベースの機能アッセイを使用した。
【0148】
Ｊｕｒｋａｔ Ｔ ＮＦＡＴ細胞を、ＴＣＲ活性化およびＣＤ２２６共刺激の両方に応答することができるヒトＴＩＧＩＴおよびＣＤ２２６を発現するように操作する。Ｒａｊｉ細胞を、ヒトＣＤ１５５を発現するように操作する。スーパー抗原（ブドウ球菌エンテロトキシン）を、抗原依存性様式でＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を活性化するように設計する。２つの細胞型を共培養する場合、ＴＩＧＩＴは、ＣＤ２２６活性化およびＮＦＡＴルシフェラーゼ産生を阻害する。抗ＴＩＧＩＴ抗体を添加するとＴＩＧＩＴのＣＤ１５５との相互作用がブロッキングされるか、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６ホモ二量体化を妨害する能力が阻害され、その結果ルシフェラーゼが産生される。図８に示すように、Ｈｕ０２およびＨｕ０６は、７６Ｄ１２Ｂ１０キメラ（ＥＣ５０＝１．２３７ｎＭ）と比較して、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を効率的に遮断た（Ｈｕ０２ ＥＣ５０＝１．７５７ｎＭ、Ｈｕ０６ ＥＣ５０＝１．６７１ｎＭ）。
実施例６：ＭＣ３８腫瘍マウスモデルにおける有効性
実施例６：ＭＣ３８腫瘍マウスモデルにおける有効性
【0149】
この実施例は、機能性分子のインビボ有効性を試験するために腫瘍マウスモデルを使用した。
【0150】
ＰＢＳに再懸濁したＭＣ３８細胞を、Ｂ－ｈＴＩＧＩＴヒト化マウスの右皮膚に、５×１０５細胞の濃度にて０．１ｍＬの容量で皮下投与した。平均腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積に従って、各群に６匹の動物を有する実験群に無作為に割り当てた。総ヒトＩｇＧ、Ｈｕ０２－ｍＩｇＧ２ａ（Ｈｕ０２－マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ）およびチラゴルマブ（Ｔｒｉａｇｏｌｕｍａｂ）－ｍＩｇＧ２ａ（チラゴルマブ（Ｔｒｉａｇｏｌｕｍａｂ）－マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ）を腹腔内注射によって２週間毎に２回投与した。用量を、実験動物の体重に基づいて３ｍｇ／ｋｇで計算した。マウスの体重および腫瘍サイズを週に２回試験した。
【0151】
結果を図９に示す。チラゴルマブ－ｍＩｇＧ２ａ群と比較して、Ｈｕ０２－ｍＩｇＧ２ａは、処置１１日目に３ｍｇ／ｋｇの用量レベルで腫瘍成長を有意により高く阻害した（ｐ＜０．０５）。
実施例７：ＴＩＧＩＴ抗体の比較
組換えヒトＴＩＧＩＴへの結合
実施例７：ＴＩＧＩＴ抗体の比較
組換えヒトＴＩＧＩＴへの結合
【0152】
抗原結合活性を評価するために、ＬＰ０１０－０２（Ｈｕ０２－ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）および対照抗体チラゴルマブ（ＲＧ６０５８、Ｒｏｃｈｅ）（同一のＩｇＧ１ Ｆｃを含む）を、ＥＬＩＳＡ試験に供した。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓタンパク質、１００μｌ／ウェルで、４℃、一晩コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ ＢＳＡでブロッキングした。３μｇ／ｍｌから始まるヒト化抗体の３倍希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と３７℃で０．５時間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図１０に示すように、ＬＰ０１０－０２およびチラゴルマブは、同等のヒトＴＩＧＩＴへの結合有効性を示した。
ＣＤ１５５へのヒトＴＩＧＩＴタンパク質結合の遮断
ＣＤ１５５へのヒトＴＩＧＩＴタンパク質結合の遮断
【0153】
組換えヒトＴＩＧＩＴのその受容体ＣＤ１５５への結合に対するＬＰ０１０－０２およびチラゴルマブのブロッキング効果を評価するために、ＥＬＩＳＡベースの受容体ブロッキングアッセイを使用した。
【0154】
簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌのヒトＣＤ１５５－ｈＦｃタンパク質にて、１００μｌ／ウェルで、４℃、一晩コーティングし、次いで、１５０μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。５０μｌのビオチン標識ヒトＴＩＧＩＴタンパク質およびＬＰ０１０－０２抗体およびチラゴルマブ抗体の１０μｇ／ｍｌから始まる３倍希釈物５０μｌを各ウェルに添加した。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で洗浄し、次いで、ストレプトアビジン－ＨＲＰと３７℃で１０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、分光光度計によってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図１１に示すように、ＬＰ０１０－０２およびチラゴルマブは、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質のヒトＣＤ１５５への結合を効率的に阻害した（ＬＰ０１０－０２ ＩＣ５０＝５３１．２ｎｇ／ｍｌ、チラゴルマブＩＣ５０＝５３１．３ｎｇ／ｍｌ）。
哺乳動物細胞上に過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴへの結合
哺乳動物細胞上に過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴへの結合
【0155】
抗原結合特性を評価するために、ヒト化抗体を、ＦＡＣＳによって哺乳動物細胞上に過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴへのそれらの結合について分析した。手短に言えば、ヒトＴＩＧＩＴ細胞を、最初に、５μｇ／ｍｌで開始する３倍段階希釈ヒト化抗体と共に４℃で４０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体を各ウェルに添加し、４℃で３０分間インキュベートした。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７のＭＦＩをＦＡＣＳＣａｎｔｏで評価した。図１２に示すように、ＬＰ０１０－０２は、チラゴルマブよりも哺乳動物細胞上に発現したヒトＴＩＧＩＴに対する結合有効性が高かった（ＬＰ０１０－０２ ＥＣ５０＝３２．８１ｎｇ／ｍｌ、チラゴルマブＥＣ５０＝３６．８２ｎｇ／ｍｌ）。
実施例８：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断のための機能アッセイ
実施例８：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断のための機能アッセイ
【0156】
ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用のブロッキングにおける機能性分子の活性を、この実施例では生物発光細胞ベースのアッセイを用いて測定した。
【0157】
このアッセイでは、ＴＩＧＩＴ－ＣＤ２２６－ＮＦＡＴエフェクター細胞およびＲａｊｉ－ＣＤ１５５標的細胞を共培養すると、ＴＩＧＩＴは、スーパー抗原の存在下で、ＣＤ１５５に高親和性で結合することができるか、ＣＤ２２６ホモ二量体化を破壊し、ＣＤ２２６シグナル伝達を阻害することができ、それにより、スーパー抗原によって活性化されたＮＦＡＴレポーター遺伝子を阻害することができる。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用をブロッキングする抗ＴＩＧＩＴ抗体（同一のヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含むＬＰ０１０－０２、チラゴルマブ、および２２Ｇ２）を添加すると、ＮＦＡＴ媒介シグナルが修復される。２２Ｇ２は、Ｔｈｅ Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙによって開発された抗ＴＩＧＩＴ抗体である（例えば、米国特許出願公開第２０１６０１７６９６３号を参照のこと）。
【0158】
図１３に示すように、ＬＰ０１０－０２は、チラゴルマブおよび２２Ｇ２より高い活性で、ＴＩＧＩＴおよびＣＤ１５５の相互作用を遮断した。
実施例９：ＰＤ－１抗体を用いた併用療法の有効性
実施例９：ＰＤ－１抗体を用いた併用療法の有効性
【0159】
この実施例は、ＨＸ００８（抗ＰＤ－１抗体）と組み合わせたＬＰ０１０－０２（Ｈｕ０２－ＷＴヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）のインビボ有効性を試験するために腫瘍マウスモデルを使用した。
【0160】
ＣＴ２６細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ－ｈＰＤ１－ｈＴＩＧＩＴヒト化マウスの右皮膚に、５×１０５細胞の濃度にて０．１ｍＬの容量で皮下投与した。平均腫瘍体積がおよそ８５ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積に従って、各群に８匹の動物を有する実験群に無作為に割り当てた。ＨＸ００８と組み合わせたＨＸ００８、ＬＰ０１０－０２、およびＬＰ０１０－０２を腹腔内注射によって１週間毎に１回投与した。ＨＸ００８およびＬＰ０１０－０２の用量を、実験動物の体重に基づいて１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇでそれぞれ計算した。マウスの体重および腫瘍サイズを週に２回または３回試験した。
【0161】
結果を図１４に示す。ＣＴ２６マウスモデルにおいて、ＨＸ００８とＬＰ０１０－０２の組み合わせは、ＨＸ００８のみまたはＬＰ０１０－０２のみよりも高い有効性で、腫瘍成長を有意に阻害した。
実施例１０：ＬＰ０１０－０２の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性
実施例１０：ＬＰ０１０－０２の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性
【0162】
この実施例は、インビトロでＬＰ０１０－０２のＡＤＣＣをチラゴルマブと比較した。
【0163】
この実験では、ＴＩＧＩＴ過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を標的細胞として使用し、ＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用し、チラゴルマブを対照として使用し、試験生成物はＬＰ０１０－０２であった。インビトロでのＬＰ０１０－０２のＡＤＣＣを評価するために、効果／標的比５０：１の条件下で用量応答実験を行った。
【0164】
図１５に示すように、ＬＰ０１０－０２は、チラゴルマブよりもＡＤＣＣ活性が高かった。
実施例１１：ＬＰ０１０－０２の補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性
実施例１１：ＬＰ０１０－０２の補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性
【0165】
この実施例は、インビトロでＬＰ０１０－０２とチラゴルマブのＣＤＣを比較した。
【0166】
この実験では、ＴＩＧＩＴ過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を標的細胞として使用し、補体タンパク質ＮＨＳＣをエフェクター分子として使用し（ＮＨＳＣ濃度を５％に設定した）、チラゴルマブを対照として使用した。試験生成物ＬＰ０１０－０２のインビトロＣＤＣ活性を評価するために、用量応答実験を行った。
【0167】
結果を図１６に示す。示すように、ＬＰ０１０－０２は、インビトロでチラゴルマブよりＣＤＣ活性が高かった。
＊ ＊ ＊
＊ ＊ ＊
【0168】
本開示は、本開示の個々の態様の単一の例示として意図される記載された特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではなく、機能的に等価な任意の組成物または方法が本開示の範囲内にある。本開示の精神または範囲から逸脱することなく、本開示の方法および組成物に様々な修正および変形を加えることができることは当業者には明らかである。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内に入る限り、本開示の修正および変形を包含することが意図されている。
【0169】
本明細書で言及されるすべての刊行物および特許出願は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-07-28
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗体またはその断片。
【請求項2】
Ｆｃ断片をさらに含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項3】
前記Ｆｃ断片がヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
【請求項4】
ヒト化された、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項5】
前記ＶＨが、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項6】
前記ＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその断片。
【請求項7】
前記ＶＨが配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその断片。
【請求項8】
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）成分である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載の断片および第２の特異性を有する第２の抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
【請求項10】
前記第２の特異性が、免疫細胞上の分子または腫瘍抗原に対する特異性である、請求項９に記載の二重特異性抗体。
【請求項11】
前記第２の特異性が、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７３、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ ＶＥＧＦ、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＩＧ、ＣＤ３、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分子に対する特異性である、請求項９に記載の二重特異性抗体。
【請求項12】
前記断片および前記第２の抗原結合断片の各々が、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片および薬学的に許容され得る担体を含む組成物。
【請求項14】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチド。
【請求項15】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチドを含む単離された細胞。
【請求項16】
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置するための組成物であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む、組成物。
【請求項17】
がんを処置するための医薬品を製造するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
【請求項18】
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物または請求項１７に記載の使用。
【請求項19】
前記患者が、第２の薬剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤でさらに処置される、請求項１６もしくは１８に記載の組成物、または請求項１７もしくは１８に記載の使用。
【請求項20】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ、またはＢＴＬＡに特異的な抗体または抗原結合断片である、請求項１９に記載の組成物または使用。
【請求項21】
感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害するための組成物であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む、組成物。
【請求項22】
感染を処置または阻害するための医薬品を製造するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
【請求項23】
前記感染が、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である、請求項２１に記載の組成物または請求項２２の使用。
【請求項24】
前記感染がＨＩＶ感染である、請求項２１もしくは２３に記載の組成物または請求項２２もしくは２３に記載の使用。
【請求項25】
処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞を含む、がんの処置を必要とする患者においてがんを処置するための組成物であって、前記処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞は、インビトロで、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片で処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞である、組成物。
【請求項26】
前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞が個体から単離されたものである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
前記Ｔ細胞が、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせである、請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項28】
ＮＫ細胞が処置されている、請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項29】
請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を含む、試料中のＴＩＧＩＴの発現を検出する方法における使用のための組成物であって、前記方法は、前記試料を、前記抗体またはその断片と、前記抗体またはその断片が前記ＴＩＧＩＴに結合する条件下で接触させる工程、および前記試料中のＴＩＧＩＴの発現を示す前記結合を検出する工程を含む、組成物。【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0013】
一実施形態では、がん患者から細胞を単離する工程および本開示の抗体またはその断片を使用してＴＩＧＩＴタンパク質の存在を検出する工程を含む、抗ＴＩＧＩＴ治療を用いた処置に好適な患者を同定する方法をさらに提供する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ
ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗体またはその断片。
（項目２）
Ｆｃ断片をさらに含む、項目１に記載の抗体またはその断片。
（項目３）
前記Ｆｃ断片がヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片である、項目２に記載の抗体またはその断片。
（項目４）
ヒト化された、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目５）
前記ＶＨが、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目６）
前記ＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、項目５に記載の抗体またはその断片。
（項目７）
前記ＶＨが配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目５に記載の抗体またはその断片。
（項目８）
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）成分である、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目９）
項目１～８のいずれか一項に記載の断片および第２の特異性を有する第２の抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
（項目１０）
前記第２の特異性が、免疫細胞上の分子または腫瘍抗原に対する特異性である、項目９に記載の二重特異性抗体。
（項目１１）
前記第２の特異性が、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７３、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ ＶＥＧＦ、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＩＧ、ＣＤ３、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分子に対する特異性である、項目９に記載の二重特異性抗体。
（項目１２）
前記断片および前記第２の抗原結合断片の各々が、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される、項目９～１１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
（項目１３）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片および薬学的に許容され得る担体を含む組成物。
（項目１４）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチド。
（項目１５）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチドを含む単離された細胞。
（項目１６）
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、前記患者に項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
（項目１７）
がんを処置するための医薬品を製造するための、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
（項目１８）
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、項目１６に記載の方法または項目１７に記載の使用。
（項目１９）
前記患者が、第２の薬剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤でさらに処置される、項目１６もしくは１８に記載の方法、または項目１７もしくは１８に記載の使用。
（項目２０）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ、またはＢＴＬＡに特異的な抗体または抗原結合断片である、項目１９に記載の方法または使用。
（項目２１）
感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害する方法であって、前記患者に項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
（項目２２）
感染を処置または阻害するための医薬品を製造するための、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
（項目２３）
前記感染が、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である、項目２１に記載の方法または項目２２の使用。
（項目２４）
前記感染がＨＩＶ感染である、項目２１もしくは２３に記載の方法または項目２２もしくは２３に記載の使用。
（項目２５）
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、インビトロで、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片で処置する工程；および（ｂ）前記処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞を前記患者に投与する工程を含む、方法。
（項目２６）
工程（ａ）の前に、個体からＴ細胞またはＮＫ細胞を単離する工程をさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記Ｔ細胞が、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせである、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
ＮＫ細胞を処置する、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２９）
試料中のＴＩＧＩＴの発現を検出する方法であって、前記試料を、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と、前記抗体またはその断片が前記ＴＩＧＩＴに結合する条件下で接触させる工程、および前記試料中のＴＩＧＩＴの発現を示す前記結合を検出する工程を含む、方法。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）タンパク質に対して特異性を有し、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ
ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗体またはその断片。
（項目２）
Ｆｃ断片をさらに含む、項目１に記載の抗体またはその断片。
（項目３）
前記Ｆｃ断片がヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片である、項目２に記載の抗体またはその断片。
（項目４）
ヒト化された、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目５）
前記ＶＨが、配列番号９～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１５～１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目６）
前記ＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、項目５に記載の抗体またはその断片。
（項目７）
前記ＶＨが配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目５に記載の抗体またはその断片。
（項目８）
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）成分である、先行する項目のいずれかに記載の抗体またはその断片。
（項目９）
項目１～８のいずれか一項に記載の断片および第２の特異性を有する第２の抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
（項目１０）
前記第２の特異性が、免疫細胞上の分子または腫瘍抗原に対する特異性である、項目９に記載の二重特異性抗体。
（項目１１）
前記第２の特異性が、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７３、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＥＡ ＶＥＧＦ、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＩＧ、ＣＤ３、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分子に対する特異性である、項目９に記載の二重特異性抗体。
（項目１２）
前記断片および前記第２の抗原結合断片の各々が、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される、項目９～１１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
（項目１３）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片および薬学的に許容され得る担体を含む組成物。
（項目１４）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチド。
（項目１５）
項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１またはそれを超えるポリヌクレオチドを含む単離された細胞。
（項目１６）
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、前記患者に項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
（項目１７）
がんを処置するための医薬品を製造するための、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
（項目１８）
前記がんが、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、項目１６に記載の方法または項目１７に記載の使用。
（項目１９）
前記患者が、第２の薬剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤でさらに処置される、項目１６もしくは１８に記載の方法、または項目１７もしくは１８に記載の使用。
（項目２０）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ、またはＢＴＬＡに特異的な抗体または抗原結合断片である、項目１９に記載の方法または使用。
（項目２１）
感染の処置または阻害を必要とする患者において感染を処置または阻害する方法であって、前記患者に項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を投与する工程を含む、方法。
（項目２２）
感染を処置または阻害するための医薬品を製造するための、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の使用。
（項目２３）
前記感染が、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である、項目２１に記載の方法または項目２２の使用。
（項目２４）
前記感染がＨＩＶ感染である、項目２１もしくは２３に記載の方法または項目２２もしくは２３に記載の使用。
（項目２５）
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、インビトロで、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片で処置する工程；および（ｂ）前記処置されたＴ細胞またはＮＫ細胞を前記患者に投与する工程を含む、方法。
（項目２６）
工程（ａ）の前に、個体からＴ細胞またはＮＫ細胞を単離する工程をさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記Ｔ細胞が、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせである、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
ＮＫ細胞を処置する、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２９）
試料中のＴＩＧＩＴの発現を検出する方法であって、前記試料を、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と、前記抗体またはその断片が前記ＴＩＧＩＴに結合する条件下で接触させる工程、および前記試料中のＴＩＧＩＴの発現を示す前記結合を検出する工程を含む、方法。
【国際調査報告】