特表 2023-547712 アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-13

(54)【発明の名称】アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/741 20150101AFI20231106BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 36/82 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 36/258 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 36/45 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 36/752 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 36/185 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 8/9789 20170101ALI20231106BHJP

   A61K 8/99 20170101ALI20231106BHJP

   A61K 8/9728 20170101ALI20231106BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 8/67 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 8/19 20060101ALI20231106BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20231106BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20231106BHJP

   A23L 33/105 20160101ALI20231106BHJP

   C12N 1/20 20060101ALN20231106BHJP

【ＦＩ】

A61K35/741

A61P1/00

A61P3/06

A61P3/10

A61P3/04

A61P29/00

A61P3/00

A61P43/00 111

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K36/82

A61K45/06

A61K36/258

A61K36/45

A61K36/752

A61K36/185

A61K9/48

A61K8/9789

A61K8/99

A61K8/9728

A61Q19/00

A61K47/46

A61K8/67

A61K8/19

A61K47/22

A23L33/135

A23L33/105

C12N1/20 E

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023527702

(86)(22)【出願日】2021-11-03

(85)【翻訳文提出日】2023-05-12

(86)【国際出願番号】 EP2021080505

(87)【国際公開番号】W WO2022096501

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】20205802

(32)【優先日】2020-11-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】BE

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523163794

【氏名又は名称】ザ アッケルマンシア カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】110002516

【氏名又は名称】弁理士法人白坂

(72)【発明者】

【氏名】カニ，パトリース

(72)【発明者】

【氏名】ブロシェ，アマンディーヌ

【テーマコード（参考）】

4B018

4B065

4C076

4C083

4C084

4C087

4C088

【Ｆターム（参考）】

4B018LB10

4B018MD01

4B018MD23

4B018MD52

4B018MD54

4B018MD59

4B018MD60

4B018MD79

4B018MD81

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4B018ME01

4B018ME03

4B018ME04

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4B018MF02

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4B065AA01X

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4C084ZC222

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4C088MA37

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4C088NA05

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4C088ZA66

4C088ZA70

4C088ZB11

4C088ZC21

4C088ZC33

4C088ZC35

4C088ZC75

(57)【要約】

アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物を開示する。体重減少の促進、内臓脂肪の減少、または腸管（消化管）バリア機能の向上のための組成物の使用について、さらに開示する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む、組成物。

【請求項2】

前記アッカーマンシア・ムシニフィラが低温殺菌される、請求項１記載の組成物。

【請求項3】

肥満、メタボリックシンドローム、インスリン欠乏症またはインスリン抵抗性関連障害、糖尿病、耐糖能異常、脂質代謝異常、高血糖症、脂質異常症、バリア機能障害（炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、過敏性腸症候群、腸収縮障害、高コレステロール血症、およびアテローム性脂質異常症を含む群から選択される代謝障害の予防または治療に使用するための、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項4】

前記代謝障害が、肥満または腸管バリア機能障害である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

プロバイオティクス、細菌、酵母、微生物、プレバイオティクス、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の成分をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

前記組成物が、ミネラルまたはビタミンまたはそれらの組み合わせをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記組成物が、薬学的に許容される担体または食品グレード担体をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物が経口投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィが、１×１０^４～１×１０^１２細胞／日、より好ましくは１×１０^５～１×１０^１１細胞／日、さらに好ましくは１×１０^６～１×１０^１０細胞／日の量で投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記緑茶抽出物が、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）の３０～３００ｍｇ／日、好ましくは１００～２００ｍｇ／日の量で投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記組成物が、美容組成物、栄養組成物、食品、栄養補助食品、メディカルフード、または医薬品である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物が、第２植物抽出物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記第２植物抽出物が、アロニア・メラノカルパ（Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ）、エンブリカ・オフィシナリス（Ｅｍｂｌｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、オレア・エウロパ（Ｏｌｅａ Ｅｕｒｏｐａ）、ベルガモット（Ｃｉｔｒｕｓ ｂｅｒｇａｍｉａ）、オオミツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）、カモカモ（Ｍｙｒｃｉａｒｉａ ｄｕｂｉａ）、赤いパナックスジンセン（Ｒｅｄ Ｐａｎａｘ Ｇｉｎｓｅｎｇ：赤い朝鮮人参）、ツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）、オオミツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

ａ．アッカーマンシア属の細胞を培養するステップと、
ｂ．ステップａ）で得られた培養細胞を低温殺菌するステップと、
ｃ．凍結保護剤およびｐＨバッファーを添加するステップと、
ｄ．ステップｃ）の低温殺菌された細胞を凍結乾燥するステップと、
ｅ．凍結乾燥粉末を緑茶抽出物と混合するステップと、
ｆ．必要に応じて、ステップｅ）の混合物からカプセル、ゲルカプセルまたはソフトゲルカプセルを製造するステップと、
を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。

【請求項15】

被験体における、体重減少の促進、内臓脂肪の減少、または腸管バリア機能の向上のための、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物の用途。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｉｎｉｐｈｉｌａ）及び緑茶抽出物を含む組成物に関する。特に、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物に関するもので、アッカーマンシア・ムシニフィラは、低温殺菌されている。本発明の組成物は、肥満、メタボリックシンドローム、インスリン欠乏症またはインスリン抵抗性関連障害、糖尿病、耐糖能異常、脂質代謝異常、高血糖症、脂質異常症、バリア機能障害（炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、過敏性腸症候群、腸収縮障害、高コレステロール血症、およびアテローム性脂質異常症（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）、特に肥満を含む群から選択される代謝障害（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の予防または治療に有用である。さらに、本発明の組成物は、体重減少の促進、内臓脂肪の減少、または腸管（消化管）バリア機能の向上に有用である。

【背景技術】

【0002】

肥満や過体重は世界的な傾向であり、肥満の成人の推定数は約６億人とされる。この肥満に関連する疾患、例えば、糖尿病、高血圧、心臓病および肝疾患などの有病率が高い。これらの極めて生活に支障を来す病状に起因して、肥満症は現在、西洋で最も重要な公衆衛生上の問題の１つとして見なされている。

【0003】

肥満は、例えば、グルコース恒常性および脂質代謝に影響を及ぼす代謝機能不全に関連する。別の併存疾患は、代謝性内毒素血症とも呼ばれる、高い血中リポ多糖類（ＬＰＳ）レベルに関連する軽度の炎症状態である。

【0004】

肥満のさらなる併存疾患は、腸管バリア機能の障害または低下である。腸管透過性の増大は、細菌（ｂａｃｔｅｒｉａ）および／または微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）成分の血流および肝臓または脂肪組織などの臓器へのトランスロケーションをもたらす。腸炎症、ＬＰＳおよび細菌トランスロケーションも、炎症性腸疾患の際に観察される。例えば、クローン病、大腸炎、潰瘍性大腸炎、腸痛または疝痛（ｃｏｌｉｃ ｐａｉｎ）、および他の腸炎症性疾患が挙げられる。興味深いことに、炎症性腸疾患と肥満関連疾患との両方が、腸内マイクロバイオータ組成物の変化に関連している。

【0005】

ヒトの腸内には、１０００種を超える異なる種を代表する多様で複雑かつダイナミックな微生物群集が定着し、宿主と継続的に相互作用する。腸内マイクロバイオータは、年齢、性別、遺伝的背景などの宿主の特性に依存する。他の要因としては、ストレス、薬物、胃腸手術、感染性および毒性物質、ならびに日々の食習慣（ｄｉｅｔａｒｙ ｃｈａｎｇｅ）の変化などの環境条件が挙げられる。

【0006】

腸内マイクロバイオータは、肥満および関連障害、過体重および腸炎症、または腸の痛みの発症に影響を与え、マイクロバイオータの腸内毒素症（ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ）は、臓器間のクロストーク及び腸バリアの完全性をさらに混乱させ、病状を引き起こす可能性がある。

【0007】

緑茶（Ｇｒｅｅｎ Ｔｅａ）は、肥満や血糖症の治療に用いられることが記載されている。例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２０００）（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｐｄｆ／１０．１０２１／ｊｆ０００６８３２）には、緑茶ポリフェノールがグルコースの取り込みを阻害することが開示されている。しかし、この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物は開示されていない。

【0008】

Ｋａｐｌａｎの国際公開第２０１３１３０７７３号には、肥満およびメタボリックシンドロームの治療のために、実質的に精製されたＶｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａから本質的になる組成物の有効量を被験体（対象）に投与することを含む、被験体におけるマイクロバイオータの相対的存在量を変化させる方法が開示されている。

【0009】

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｃａｔｈｏｌｉｑｕｅ ｄｅ ＬｏｕｖａｉｎおよびＷａｇｅｎｉｎｇｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔの国際公開第２０１４０７６２４６号には、肥満および関連障害の治療のためのアッカーマンシア・ムシニフィラの使用が記載されている。しかし、この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が開示されていない。

【0010】

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｃａｔｈｏｌｉｑｕｅ ｄｅ ＬｏｕｖａｉｎおよびＷａｇｅｎｉｎｇｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔの欧州特許出願公開第３３４７０３０号明細書には、必要とする被験体における代謝障害の治療に使用されるアッカーマンシア・ムシニフィラが記載されており、ここで、アッカーマンシア・ムシニフィラは低温殺菌されている。この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラと植物抽出物との組み合わせについては記載されていない。

【0011】

Ｕｓｈｉｒｏａｄｅ２０１９には、緑茶化合物であるエピガロカテキン－３－ガレートの投与後の高脂肪食マウスのＶｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａにおけるアッカーマンシア（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ）属の増加が開示されている。この文献は、Ｕｓｈｉｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ）ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｇｕｔ ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｂｉｌｅ ａｃｉｄｓ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｉｇｈｆａｔ ｄｉｅｔ ｆｅｄ ｍｏｕｓｅ：緑茶ポリフェノール（エピガロカテキン－３－ｇａｌｌａｔｅ）は、高脂肪食マウスにおける腸内毒素症および血清胆汁酸の調節異常を改善する）（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｏ．｜２０１９年７月｜６５巻｜Ｎｏ．１｜３４－４６，ｄｏｉ：１０．３１６４／ｊｃｂｎ．１８１１６）に掲載されている。しかしながら、この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物については開示されていない。

【0012】

Ｓｈｅｎｇ２０１８には、エピガロカテキン－３－ガレート（ＥＧＣＧ）によって促進されるアッカーマンシア・ムシニフィラの増加が、食餌増加型肥満、内臓脂肪、およびインスリン抵抗性を効果的に低減することが記載されている。この文献には、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物については記載されていない。この文献は、Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｏｂｅｓｉｔｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ｅｐｉｇａｌｌｏｃｈｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｎｒｉｃｈｅｄ Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ，：エピガロカテキン－３－ガレートが制御する胆汁酸シグナルとその濃縮アッカーマンシア・ムシニフィラによる肥満治療）（ＦＡＳＥＢ Ｊ．２０１８年１２月；３２（１２）：６３７１－６３８４，ｄｏｉ：１０．１０９６／ｆｊ．２０１８００３７０Ｒ．）に掲載されている。

【0013】

Ｐｌｅｘｕｓ Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅの米国特許出願公開第２０１８３１８３２３号明細書には、アッカーマンシアの増殖を刺激するための緑茶を含む腸内マイクロバイオーム調節組成物が開示されている。しかし、この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物については開示されていない。

【0014】

Ｚｈａｎｇ Ｑｕｉｎｇｙｕの中国特許出願公開第１０８５４１９５３号明細書には、盲腸および回腸におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促進するプレバイオティクスとしての茶ポリフェノールが開示されている。この文献には、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物については開示されていない。

【0015】

しかしながら、代謝障害、特に肥満を治療し、かつ体重減少を促進するための改善された組成物を提供することが、依然として緊急を要する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0016】

本発明者らは、驚くべきことに、アッカーマンシア・ムシニフィラと緑茶抽出物との組み合わせが、他の植物抽出物と比較して優れた体重減少結果を提供し、したがって相乗効果を発揮することを見出した。これは特に、アッカーマンシア・ムシニフィラが低温殺菌された場合に当てはまる。

【0017】

したがって、本発明の第１態様は、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物である。

【0018】

本発明の別の態様において、アッカーマンシア・ムシニフィラは低温殺菌される。

【0019】

本発明の別の態様は、肥満、メタボリックシンドローム、インスリン欠乏症またはインスリン抵抗性関連障害、糖尿病、耐糖能異常、脂質代謝異常、高血糖症、脂質異常症、バリア機能障害（炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、過敏性腸症候群、腸収縮障害、高コレステロール血症、腸管バリア機能障害、およびアテローム性脂質異常症を含む群から選択される、代謝障害の予防または治療に使用するための組成物である。

【0020】

本発明の別の態様において、代謝障害は、肥満または腸管バリア機能障害である。

【0021】

本発明の別の態様において、組成物は、非処置対象と比較して、脂肪量、特に内臓脂肪組織の発生を低減する。

【0022】

本発明の別の態様において、組成物は、プロバイオティクス、細菌、酵母、微生物、プレバイオティクス、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される１種以上の成分をさらに含む。

【0023】

本発明の別の態様において、組成物は、ミネラル、ビタミン、またはそれらの組み合わせをさらに含む。

【0024】

本発明の別の態様において、組成物は、薬学的に許容される担体または食品グレード担体をさらに含む。

【0025】

本発明の別の態様において、組成物は、経口投与される。

【0026】

本発明の別の態様において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラは、好ましくはフローサイトメトリーによるＴＦＵで表されるように、１×１０^４～１×１０^１２細胞／日、より好ましくは１×１０^５～１×１０^１１細胞／日、さらに好ましくは１×１０^６～１×１０^１０細胞／日の量で投与される。

【0027】

本発明の別の態様において、緑茶抽出物は、３０ｍｇ～６００ｍｇ／日の量で投与される。別の実施形態において、緑茶抽出物は、最大１０００ｍｇ／日、またはさらに最大２０００ｍｇ／日の量で投与される。

【0028】

本発明の別の態様において、緑茶は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）を５～１０重量％、好ましくは５０重量％以上含有する。

【0029】

本発明の別の態様において、緑茶抽出物は、１日当たり１００～６００ｍｇのＥＧＣＧを送達する量で投与される。本発明の別の態様において、緑茶抽出物は、１日当たり２００～３００ｍｇのＥＧＣＧを送達する量で投与される。

【0030】

本発明の別の態様において、組成物は、
美容組成物、栄養組成物、食品、栄養補助食品、メディカルフード、または医薬品である。

【0031】

本発明の別の態様において、組成物は、第２植物抽出物をさらに含む。

【0032】

本発明の別の態様において、第２植物抽出物は、アロニア・メラノカルパ（Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ）、エンブリカ・オフィシナリス（Ｅｍｂｌｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、オレア・エウロパ（Ｏｌｅａ Ｅｕｒｏｐａ）、ベルガモット（Ｃｉｔｒｕｓ ｂｅｒｇａｍｉａ）、オオミツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）、カモカモ（Ｍｙｒｃｉａｒｉａ ｄｕｂｉａ）、赤いパナックスジンセン（Ｒｅｄ Ｐａｎａｘ Ｇｉｎｓｅｎｇ：赤い朝鮮人参）、ツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）、オオミツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）からなる群から選択される。

【0033】

本発明の別の態様は、
ａ．アッカーマンシア属の細胞を培養するステップと、
ｂ．ステップａ）で得られた培養細胞を低温殺菌するステップと、
ｃ．凍結保護剤およびｐＨバッファーを添加するステップと、
ｄ．ステップｃ）の低温殺菌された細胞を凍結乾燥するステップと、
ｅ．凍結乾燥粉末を緑茶抽出物と混合するステップと、
ｆ．必要に応じて、ステップｅ）の混合物からカプセル、ゲルカプセルまたはソフトゲルカプセルを製造するステップと、
を含む、本発明の組成物の製造方法である。

【0034】

本発明の別の態様は、必要とする被験体（対象）における体重減少または腸管バリア機能を促進するための、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物である。

【0035】

本発明の別の態様は、必要とする被験体における代謝障害を処置(治療)または予防する方法であって、前記方法は、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物の有効量を、特に、治療を制限する副作用なしに前記被験体に投与することを含む。好ましい実施態様において、アッカーマンシア・ムシニフィラは低温殺菌される。

【0036】

定義
「治療／処置／投与（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、疾患、障害または症状の少なくとも１つの悪影響または症状を軽減または緩和することを意味する。したがって、この用語は、治療的処置および予防的または防止的措置の両方を指す。

【0037】

「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」とは、疾患や症状が生じないようにする、または疾患や症状のリスクを減らすという意味で予防することを意味する。

【0038】

「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」または「治療上の有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、ターゲットに対して重大な負の副作用または有害な副作用を引き起こすことなく、代謝障害の発症を遅延または予防し、代謝障害の１つ以上の症状の進行、加重または悪化を遅らせまたは止めること；代謝障害の症状の改善をもたらすこと；代謝障害の重症度または発生率を低下させること；代謝障害を治療すること；または治療対象の腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの量および／または割合を正常に回復させること；を目的とする薬剤のレベルまたは量のことを指す。

【0039】

「アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）」とは、Ｄｅｒｒｉｅｎ（Ｄｅｒｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｅｖｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５４：１４６９－１４７６）によって同定されたムチン分解菌のことを指す。細胞は楕円形で運動性がなく、グラム陰性を染色する。アッカーマンシア・ムシニフィラは、アッカーマンシア種またはアッカーマンシア様細菌とも呼ばれてもよい。これは、ウェルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ ｐｈｙｌｕｍ）に属する。一般に、ＤＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーションにより実験的に決定されたヌクレオチドの類似度が約７０％の菌株は、同じ種とみなすことができるとされており、これは、約９５％の平均ヌクレオチド同一性（ＡＮＩ）に相当する。

【0040】

一実施形態において、アッカーマンシア・ムシニフィラは、アッカーマンシア・ムシニフィラの断片も含んでいる。

【0041】

「低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ」とは、加熱処理に供されたアッカーマンシア・ムシニフィラを指す。一実施態様において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラとは、５０°Ｃ～１００°Ｃの温度で少なくとも１０分間加熱されたアッカーマンシア・ムシニフィラを指す。

【0042】

「ＴＦＵ」または「総蛍光単位（Ｔｏｔａｌ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｕｎｉｔｓ）」とは、染色後の蛍光放射輝度によって決定される細胞数を意味する。好ましい実施形態において、ＴＦＵは、フローサイトメトリーで測定される。例えば、第１ステップにおいて、バイオマスバッチのアリコートをＰＢＳ中で再水和し、製造業者のプロトコルにより、Ｓｙｔｏ９およびヨウ化プロピジウムで染色する（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）ＢａｃＬｉｇｈｔ（商標）Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）。次いで、ＴＦＵは、染色済みサンプルをＡｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーターで分析することにより得られる。一般に、ＴＦＵは、１グラム当たりまたは１ｍｌ当たり、好ましくは１グラム当たりの総蛍光単位として表される。

【0043】

「緑茶抽出物（Ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｅｘｔｒａｃｔ）」とは、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓ植物の葉または芽から抽出されたものをいう。緑茶抽出物は、一般にポリフェノール、 特にエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、エピカテキンガレート、エピカテキン、フラバノールを豊富に含んでいる。緑茶抽出物は、アルコール抽出または水抽出によって得られ、濃縮または非濃縮で、液体または粉末に加工することができる。
「緑茶抽出物（Ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｅｘｔｒａｃｔ）」とは、カメリアシネンシスの植物の葉または芽の任意の抽出物を意味する。緑茶抽出物は、一般にポリフェノール類、特にエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、エピカテキンガレート、エピカテキン、およびフラバノールを豊富に含む。緑茶抽出物は、アルコール抽出または水抽出により得られ、濃縮または非濃縮して液体または粉末状に加工されてもよい。

【0044】

「プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）」とは、有効量を投与すると、被験体（対象）の健康または福利に有益な効果をもたらす生きた微生物（生菌）を指す。一実施形態において、これらの健康上の利点は、胃腸管におけるヒトまたは動物のマイクロバイオータのバランスを改善すること、または正常なマイクロバイオータを回復することに関連している。

【0045】

「プレバイオティック（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）」とは、例えば、ヒトでは消化されないかもしれないが、腸内微生物による代謝によって腸内マイクロバイオータの組成及び／又は活性を調節し、宿主に有益な生理作用を与える物質をいう。
「プレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）」とは、例えば、ヒトによって消化されない可能性があるが、腸内での微生物による代謝によって腸内マイクロバイオータの組成および／または活性を調節し、これにより宿主に有益な生理的な効果を与える物質などの物質を指す。

【0046】

「被験体／対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトまたは動物のことを指す。

【0047】

「過体重（ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ）」とは、前記被験体（対象）が２５以上のボディマス指数（ＢＭＩ：Ｂｏｄｙ Ｍａｓｓ Ｉｎｄｅｘ）を有する被験体の状況を指す。本明細書で使用する場合、ＢＭＩは、個人の体重（ｋｇ）を身長（メートル）の２乗で割ったものとして定義される。

【0048】

「肥満（ｏｂｅｓｉｔｙ）」とは、３０以上のＢＭＩを有する被験体の状況を指す。

【0049】

「断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」とは、アッカーマンシア・ムシニフィラなどの代謝から生じる細胞成分、代謝物、分泌分子、小胞および化合物を指すことができる。断片は、例えば、アッカーマンシア・ムシニフィラの培養物の上澄液（上清）を回収することにより、またはアッカーマンシア・ムシニフィラの培養物から細胞成分または細胞画分、代謝産物または分泌化合物を抽出することにより得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1】図１は、ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、植物抽出物を補充したかまたは補充していない、ビヒクルまたは低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラを経口投与した場合、１２週目の体重増加量を示す。^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ ＨＦＤビヒクル；^＃＃＃ｐ＜０．００１、^＃＃＃＃ｐ＜０．００１ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ（ｐ値は、一元配置分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用い、続いてボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）の事後検定を用いて得られた）。

【図2A】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独または植物抽出物との併用が、体重および体重増加量に及ぼす影響を示す。

【図2B】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独または植物抽出物との併用が、体重および体重増加量に及ぼす影響を示す。

【図3A】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独または植物抽出物との併用が、体重および体重増加量に及ぼす影響を示す。

【図3B】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独または植物抽出物との併用が、体重および体重増加量に及ぼす影響を示す。

【図2】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、ビヒクル（円）を、または低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独（四角）を、または低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶（三角）を経口投与する間、経時的な体重増加を示す。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ ＨＦＤビヒクル；^＃ｐ＜０．０５、^＃＃ｐ＜０．０１、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ．（ｐ値は、一元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた）。

【図3】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、ビヒクル（円）を、または低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独（四角）を、または低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶（三角）を経口投与する間、経時的な体重増加を示す。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ ＨＦＤ ビヒクル；^＃ｐ＜０．０５、^＃＃ｐ＜０．０１、^＃＃＃ｐ＜０．０００１ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ．（ｐ値は、一元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた）。

【図4】食物摂取の際に、緑茶を補充したかまたは補充していない、ビヒクルまたは低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラを経口投与する間、摂食量（食物摂取量）を示す。^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ ＨＦＤ ビヒクル；^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ．（ｐ値は、一元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた）。

【図4A】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムキニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が、腸管バリア機能に及ぼす影響を示す。

【図4B】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムキニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が、腸管バリア機能に及ぼす影響を示す。

【図4C】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムキニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が、腸管バリア機能に及ぼす影響を示す。

【図4D】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムキニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が、腸管バリア機能に及ぼす影響を示す。

【図4E】ＤＩＯモデル（脂質４５ｋｃａｌ％、１２週間）において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムキニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物が、腸管バリア機能に及ぼす影響を示す。

【図5】結腸の腸バリア完全性の各種マーカーにおいて、１２週目に緑茶を補充したかまたは補充していない、ビヒクルまたは低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラを経口投与する間、結腸における腸バリア完全性のバイオマーカーの遺伝子発現を示す（ＨＦＤビヒクル群についての倍率変化のＰＣＲ分析）（Ａ）ＺＯ－１発現、（Ｂ）インテクチン発現、（Ｃ）オクルディン発現、（Ｄ）クローディン３発現。^＊ｐ＜０．０５ ｖｓ ＨＦＤビヒクル；^＃ｐ＜０．０５ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ．（ｐ値は、一元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた）。

【図6】１週間の処置後の体重増加量を示す。緑茶抽出物を補充したかまたは補充していない、ビヒクルまたは低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ（ｐＡｋｋ）の経口投与が、１週間の処置後の体重に及ぼす影響を示す。＆＆＆＆ｐ＜０．００１ ＨＦＤ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ＨＦＤ ｖｓ ＨＦＤ＋緑茶、＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ ＨＦＤ ｖｓ ｐＡｋｋ＋緑茶、ｐ＜０．０５ ｐＡｋｋ ｖｓ ｐＡｋｋ＋緑茶、§ｐ＜０．０５ 緑茶 ｖｓ ｐＡｋｋ＋緑茶。関連するｐ値は、二元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた。その他の有意な比較は示されていない。関連するｐ値は、二元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた。その他の有意な比較は示されていない。

【図7】１２週間の治療期間中の体重のモニタリングを示す。緑茶抽出物を補充したか補充していない、ビヒクルまたは低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ（ｐＡｋｋ）の経口投与が、（Ａ）体重の経時変化、（Ｂ）体重増加の経時変化に及ぼす影響を示す。＆ｐ＜０．０５、＆＆ｐ＜０．０１、＆＆＆ｐ＜０．００１ ＨＦＤビヒクル ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ＨＦＤ ｖｓ ＨＦＤ＋緑茶、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ ＨＦＤ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ＋緑茶、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．００１，ｐ＜０．０００１ ＨＦＤ ｐＡｋｋ ｖｓ ＨＦＤ ｐＡｋｋ＋緑茶、＄ｐ＜０．０５、＄＄ｐ＜０．０１ ＨＦＤ、＄＄＄ｐ＜０．００１、＄＄＄＄ｐ＜０．０００１ ｐＡｋｋ ｖｓ ＨＦＤ 緑茶。関連するｐ値は、二元配置分散分析法を用い、続いてボンフェローニの事後検定を用いて得られた。その他の有意な比較は示されていない。

【発明を実施するための形態】

【0051】

本出願人は、本明細書において、アッカーマンシア・ムシニフィラの実施例で示すように、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物の投与後に観察される代謝に対する有益な効果を示す。

【0052】

したがって、本発明は、必要とする被験体における代謝障害を治療するため、または治療に使用するための、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び緑茶抽出物を含む組成物に関する。

【0053】

本明細書で使用される用語「代謝障害（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」は、例えば、グルコースまたは脂質の恒常性の変化など、代謝の恒常性の変化に関連する障害である。

【0054】

本発明の一実施形態において、前記代謝障害は、肥満である。

【0055】

他の代謝障害の例としては、メタボリックシンドローム、インスリン欠乏症またはインスリン抵抗性関連障害、糖尿病（１型糖尿病または２型糖尿病を含む）、耐糖能異常、脂質代謝異常、アテローム性動脈硬化、高血圧、子癇前症、心臓病、脳卒中、非アルコール性脂肪性肝疾患、高血糖症、肝脂肪症、脂質異常症、過体重および肥満に伴う免疫系機能不全、肝疾患（例えば、肥満に伴う線維症、または胆汁産生の変化を含む肝機能異常など）、炎症性、免疫性、バリア機能障害（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、ならびに過敏性腸症候群）、心血管疾患、高コレステロール、トリグリセリド上昇、喘息、睡眠時無呼吸症、変形性関節症、神経変性、胆嚢疾患、症候群Ｘ、炎症性および免疫障害、アテローム性脂質異常症、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0056】

一実施形態において、高コレステロール血症は、２ｇ／Ｌまたは５ｍｍｏｌ／Ｌ以上の血漿コレステロール濃度に相当する。別の実施形態において、高コレステロール血症は、総コレステロールの血漿濃度：ＨＤＬ（高密度リポタンパク質コレステロール）の血漿濃度の比が４．５：１、好ましくは５：１以上であることに相当する。

【0057】

一実施形態において、本発明の低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラは、生存不能細胞である。本明細書で使用される用語「生存不能細胞（ｎｏｎ－ｖｉａｂｌｅ ｃｅｌｌｓ）」とは、増殖できない細胞を意味する。アッカーマンシア・ムシニフィラの細胞を視覚化またはカウントする例は、２００４年にＤｅｒｒｉｅｎらによって提供された（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７４：１６４６－８）、Ｄｅｒｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１６６－１７５）またはＲｅｕｎａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８１（１１）：３６５５－６２）。

【0058】

本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤または食品グレード担体、例えば、溶剤、分散媒体、コーティング、等張剤および吸収遅延剤などを含んでいてもよい。ヒトへの投与の場合、調製剤は、ＦＤＡ当局の生物基準（ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ｓｔａｎｄａｒｄｓ）によって要求される一般安全性及び純度基準を満たさなければならない。

【0059】

本発明はまた、有効量のアッカーマンシア・ムシニフィラまたはその断片および緑茶抽出物を含む医薬品、メディカルフード、食品または栄養補助食品に関する。

【0060】

本発明はまた、必要とする被験体における代謝障害を治療または予防する方法であって、有効量のアッカーマンシア・ムシニフィラまたはその断片及び緑茶抽出物を、必要とする被験体に投与することを含む方法に関する。

【0061】

本発明の別の目的は、必要とする被験体の腸内におけるアッカーマンシア・ムシニフィラ、その断片またはその他の活性化合物の割合を正常に回復させる方法であって、有効量のアッカーマンシア・ムシニフィラまたはその断片及び緑茶抽出物を被験体に投与することを含む方法である。

【0062】

本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも週に１回、好ましくは少なくとも週に２回、より好ましくは少なくとも週に３回、さらに好ましくは少なくとも週に４回投与される。別の実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１日に１回、好ましくは少なくとも１日２回投与される。

【0063】

一実施形態において、本発明の組成物は、１週間、好ましくは２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間以上、あるいは永久的に投与される。

【0064】

一実施形態において、本発明の組成物は、所望の結果、例えば、体重減少、代謝障害治療、またはコレステロール血漿レベルの低下が達成されるまで継続する期間にわたって投与される。

【0065】

本発明の一実施形態において、投与されるアッカーマンシア・ムシニフィラの１日の投与量は、１×１０^２～約１×１０^１５ＴＦＵ／日、好ましくは約１×１０^４～約１×１０^１２ＴＦＵ／日、より好ましくは約１×１０^５ 約１×１０^１１ＴＦＵ／日、さらに好ましくは約１×１０^６～約１×１０^１０ＴＦＵ／日である。

【0066】

本発明の別の実施態様において、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラの１日の投与量は、１×１０^６～約１×１０^１２細胞／日、好ましくは約１×１０^８～約１×１０^１０細胞／日、より好ましくは約１×１０^９～約１×１０^１０細胞／日である。

【0067】

本発明はまた、被験体の体重減少を促進するための、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラまたはその断片の美容上の使用に関する。

【0068】

したがって、本発明の別の目的は、美容上有効な量の、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラまたはその断片および緑色茶抽出物を含む美容組成物（ｃｏｓｍｅｔｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）、ならびに被験体の体重減少を促進するためのその使用である。本明細書で使用される用語「美容上有効な量（ｃｏｓｍｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、例えば、被験者の体重減少を誘導するなど、美容効果を促進するのに必要かつ十分な美容組成物の量を指す。

【0069】

本発明の一実施形態において、組成物、医薬組成物、美容組成物または薬剤は、例えば、細菌プロバイオティクス菌株または種などの追加のプロバイオティクス菌株または種をさらに含む。別の実施形態において、さらなる菌株は低温殺菌される。これらのプロバイオティクスは、細菌、または真菌の菌株または種、好ましくは酵母の菌株または種を含む。一実施形態において、前記追加のプロバイオティクス菌株または種は、被験体の腸内に、好ましくはヒトの腸内に、より好ましくは健常者の腸内に、自然に存在するものから選択される。

【0070】

本発明で用いられ得る細菌プロバイオティクス菌株または種の例としては、ラクトバチルス、ラクトコッカス、ビフィドバクテリウム、ベイロネラ、デセムジア、クリステンセネラ、アロバキュラム、コプロコッカス、コリンゼラ、シトロバクター、ツリシバクター、ステレラ、サブドリグラヌルム、ストレプトコッカス、スポロバクター、スポラセチゲニウム、ルミノコッカス、ロゼブリア、プロテウス、プロピオノバクテリウム、リューコノストック、ワイセラ、ペディオコッカス、ストレプトコッカス、プレボテラ、パラバクテロイデス、パピリバクター、オスシロスピラ、メリソコッカス、ドレア、ジアリスター、クロストリジウム、セデセア、カテニバクテリウム、ブチリビブリオ、ブチアウキセラ、ブレイジア、ビロフィラ、バクテロイデス、アナエロボラックス、アナエロスティペス、アナエロフィルム、エンテロバクター、ファーミキューテス、アトポビウム、アリスティペス、アシネトバクター、スラッキー、シゲラ、シェワネラ、セラチア、マヘラ、ラクノスピラ、クレブシエラ、イディオマリナ、フソバクテリウム、フィーカリバクテリウム、ユーバクテリウム、エンテロコッカス、エンテロバクター、エガセラ、ディソスモバクター、またはアナエロバクテリウムが挙げられるが、これらに限定されない。

【0071】

好ましいプロバイオティクス菌株は、ラクトバチルス、ラクトコッカス、ビフィドバクテリウム、クリステンセネラ、クロストリジウム、アナエロスティペス、フィーカリバクテリウム、ユーバクテリウム、エンテロコッカス、エンテロバクター、エガセラ、ディソスモバクター、またはアナエロバクテリウムである。

【0072】

本発明で用いられ得る原核生物株または種の例としては、古細菌、ファーミキューテス、ベルコミクロビア、クリステンセネラ、バクテロイデス（例えば、アリスティペス、バクテロイデス・オバタス、バクテロイデス・スプランクニクス、バクテロイデス・ステルコリス、パラバクテロイデス、プレボテラ・ルミニコラ、ポルフィロモナス科、および関連の属など）、プロテオバクテリア、β－プロテオバクテリア（例えば、アクアバクテリウムおよびバークホルデリアなど）、γ－プロテオバクテリア（例えば、キサントモナス科など）、アクチノバクテリア（例えば、アクチノミセス科およびアトポビウムなど）、フソバクテリア、メタノバクテリア、スピロヘータ、フィブロバクター、デフェリバクター、デイノコッカス、サーマス、シアノバクテリア、メタノブレビバクテリア、ペプトストレプトコッカス、ルミノコッカス、コプロコッカス、サブドリグラヌルム、ドレア、ブレイジア、アナエロフスティス、ゲメラ、ロゼブリア、ジアリスター、アナエロツルンカス、スタフィロコッカス、ミクロコッカス、プロピオノバクテリア、腸内細菌科、フィーカリバクテリウム、バクテロイデス、パラバクテロイデス、プレボテラ、ユーバクテリウム、バチルス（例えば、ラクトバチルス・サリヴァリウスおよび関連の種、アエロコッカス、グラヌリカテラ、ストレプトコッカス・ボビスおよび関連の属、ならびにストレプトコッカス・インターメジウスおよび関連の属など）、クロストリジウム（例えば、アナエロブチリクム・ハリイ、ユーバクテリウム・リモスム、アナエロブチリクム・ショーンゲニイおよび関連の属など）、およびブチリビブリオが挙げられるが、これらに限定されない。

【0073】

本発明で用いられ得る真菌のプロバイオティクス菌株または種、好ましくは酵母のプロバイオティクス菌株または種の例としては、子嚢菌類、接合菌類、および不完全菌類、好ましくはアスペルギルス、トルロプシス、ザイゴサッカロマイセス、ハンゼヌラ、カンジダ、サッカロマイセス、クラビスポラ、ブレタノマイセス、ピキア、アミロマイセス、ザイゴサッカロマイセス、エンドマイセス、ハイフォピキア、ザイゴサッカロマイセス、クルイベロマイセス、ムコール、リゾプス、ヤロウイア、エンドマイセス、デバリオミケス、および／またはペニシリウム群が挙げられるが、これらに限定されない。

【0074】

本発明の一実施形態において、該組成物、医薬組成物、美容組成物または薬剤中に含まれる唯一の微生物株または種、好ましくは細菌株または種は、アッカーマンシア・ムシニフィラである。

【0075】

本発明の一実施形態においては、該組成物、医薬組成物、美容組成物または薬剤は、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラからなる。

【0076】

本発明の一実施形態において、該組成物、医薬組成物、美容組成物または薬剤は、プレバイオティクスをさらに含む。

【0077】

本発明で用いられ得るプレバイオティクスの例としては、イヌリンおよびイヌリン型フルクタン、オリゴフルクトース、β－グルカン、キシロース、アラビノース、アラビノキシラン、リボース、ガラクトース、ラムノース、セロビオース、フルクトース、ラクトース、サリシン、スクロース、グルコース、エスクリン、Ｔｗｅｅｎ ８０、トレハロース、マルトース、マンノース、メリビオース、
粘液（ｍｕｃｕｓ）またはムチン、ラフィノース、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、アミノ酸、アルコール、発酵性炭水化物、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0078】

プレバイオティクスの他の非限定的な例としては、水溶性セルロース誘導体、水不溶性セルロース誘導体、未加工オートミール、メタムシル、フスマ、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0079】

水溶性セルロース誘導体の例としては、メチルセルロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースが挙げられるが、これらに限定されない。

【0080】

本発明の組成物は、経口投与、直腸投与、食道胃十二指腸内視鏡検査による投与、大腸内視鏡検査による投与、経鼻胃管または経口胃管を用いた投与により投与され得る。

【0081】

本組成物は、錠剤、丸薬、カプセル、軟ゼラチンカプセル、糖衣錠、分散錠、発泡錠、または他の他の固形物として経口投与され得る。

【0082】

本組成物は、液体、飲用可能な溶液、またはリポソームとして経口投与され得る。

【0083】

一実施形態において、本発明の組成物は、意図される投与経路に関係して選択される賦形剤、希釈剤および／または担体をさらに含む。賦形剤、希釈剤および／または担体の例としては、水、リン酸緩衝生理食塩水、無酸素性（嫌気性）リン酸緩衝生理食塩水、炭酸水素（重炭酸）ナトリウム、搾汁、ミルク、ヨーグルト、乳児用調製乳（乳児用調整粉乳）、乳性製品、着色剤（例えば、二酸化チタン（Ｅ１７１）、二酸化鉄（Ｅ１７２）、およびブリリアントブラックＢＮ（Ｅ１５１）など）；香味剤；増粘剤（例えば、グリセロールモノステアラートなど）；甘味剤；コーティング剤（例えば、精製ナタネ油、大豆油、落花生油、大豆レシチンまたは魚ゼラチンなど）；希釈剤（例えば、ラクトース、一水和物のラクトースまたはデンプン；結合剤（例えば、ポビドン、α化デンプン、ガム、サッカロース、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４０００またはＰＥＧ６０００など）；崩壊剤（例えば、微結晶セルロースまたはカルボキシメチルデンプンナトリウム（例えば、カルボキシメチルデンプンＡ型ナトリウムなど））；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムなど）；流動剤（ｆｌｏｗ ａｇｅｎｔ）（例えば、コロイド状無水シリカなど）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0084】

本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、医薬組成物である。

【0085】

別の実施形態において、本発明の組成物は、食品添加剤、飲料添加剤、栄養補助食品、栄養製品、メディカルフード、または栄養補助（食品）組成物である。

【0086】

肥満および関連障害は、被験体（対象）による腸管（消化管）透過性の増大、ならびに粘液産生障害、上皮バリア障害、免疫系および／または抗菌化合物の産生障害に関連している。

【0087】

したがって、本発明の組成物は、腸管透過性の低下、粘液産生障害の回復、上皮バリアの回復、免疫系の回復、または抗菌化合物の産生の回復、あるいはそれらの組み合わせに使用することができる。

【0088】

さらに、本発明の組成物は、腸管バリア機能の制御に有用であり得る。したがって、別の態様は、本発明の組成物の有効量または美容上有効な量を、それを必要とする被験体に投与することを含む、腸管バリア機能の制御方法である。

【0089】

一実施形態において、本発明の組成物は、肥満または他の代謝障害において減少し得る粘液層の厚さを調節する。別の実施形態において、本発明の組成物の投与は、例えばＲｅｇＩＩＩγなどの結腸抗菌ペプチドの産生を誘導する。別の実施形態において、本発明の組成物の投与は、例えば、２－オレオイルグリセロール、２－パルミトイルグリセロールおよび２－アラキドノイルグリセロールを含む群から選択されるアシルグリセロールなどのエンドカンナビノイドファミリーの化合物の産生を誘導する。別の実施形態において、本発明の組成物の投与は、粘液のターンオーバーを調節する。

【0090】

一実施形態において、被験体への本発明の組成物の投与は、前記被験体における満腹度を増加させる。その結果、この実施形態によれば、本発明の方法は、被験体における満腹感を増加させたり、食物摂取を減少させたりして、被験体において持続的な体重減少を誘導し、それにより、例えば、肥満関連の代謝障害などの、被験体の代謝障害を治療する。

【0091】

図１、図２、図３、図４及び図５は、高脂肪食餌マウス（以下「ＨＦＤ」）において、低温殺されたアッカーマンシア・ムシニフィラ（図中、「ｐＡｋｋ」と表記）単独または植物抽出物との併用が、マウスにおける、体重、体重増加、飼料摂取、及び腸管バリア機能に及ぼす生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での影響を示す。

【0092】

９週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌ’Ａｒｂｒｅｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）に、到着後に少なくとも５日間の馴化期間を与えた。実験期間中、動物を、換気されたエンリッチドケージ（４８×３７．５×ージのリターを週に１回交換した。マウスを、通常のライトサイクル（午後７時消灯）、２２±２℃、５０±１０％の相対湿度で５匹のグループに分けて収容した。飼育パラメータ（Ｈｏｕｓｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒ）を毎日記録した。馴化期には、標準食（ＲＭ１（Ｅ）８０１４９２、ＳＤＳ）および水道水を自由摂取させた。実験期（１２週間）には、高脂肪食４５ｋｃａｌ％（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ＃１２４５１）（ＨＦＤグループ）及び水道水を自由摂取させた。ＨＦＤ処置（投与）１２週間、マウスに毎日、ビヒクル１８０μＬ、アッカーマンシア・ムシニフィラ溶液単独１８０μＬ、アッカーマンシア・ムシニフィラ溶液±各植物抽出物（Ｂｅｒｇａｍｏｔｅ：１２５ｍｇ／ｋｇ、Ｇｉｎｓｅｎｇ：５０ｍｇ／ｋｇ、Ｇｒｅｅｎ ｔｅａ：３００ｍｇ／ｋｇ）１８０μＬを、経口ガベージにより投与した。

【0093】

体重、食物摂取量および水分摂取量を毎週評価した。

【0094】

近位結腸を個別にホモジナイズし、ＴＲＩＲｅａｇｅｎｔ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＲＮｅａｓｙ ９６ ＱＩＡｃｕｂｅ ＨＴキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて組織からの総ＲＮＡを調製した。全ＲＮＡの定量分析は、各サンプル１μｌをＮａｎｏｄｒｏｐ（Ｏｚｙｍｅ）で分析することにより行った。ｃＤＮＡは、ＲＴ ｉＳｃｒｉｐｔキット（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて１μｇの全ＲＮＡを逆転写することにより調製した。リアルタイムＰＣＲは、検出のために、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘｅｓ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用し、Ｖｉａ７リアルタイムＰＣＲシステム及びソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて行った。ハウスキーピング遺伝子としてＲＰＬ１９を選択した。すべてのサンプルは二重に行い、データを２ΔΔＣＴ法に従って分析した。増幅産物の同定と純度は、増幅終了時の融解曲線解析により評価した。

【0095】

驚くべきことに、植物抽出物の中で緑茶は、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラと組み合わせることで、体重、体重増加（図１、２、３）、および腸管バリア機能（図５）について優れた結果を示した。実際、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラと緑茶抽出物との組み合わせでは、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ単独の場合よりも体重増加率が有意に低かった。この結果から、緑茶抽出物を低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラと組み合わせた場合、増強効果または相乗効果を示すことがわかる。

【0096】

また、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラと緑茶抽出物の関連性は、ＺＯ－１、インテクチン、オクルディング、クローディン－３に対してより顕著な効果を示し、バリア機能を改善した（図５参照）。
低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラと緑茶抽出物との組み合わせはまた、ＺＯ－１、インテクチン、閉塞およびクローディン３に対してより顕著な効果を有するバリア機能を改善した（図５を参照のこと）。

【0097】

図６、図７Ａ及び図７Ｂは、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ（図中では「ｐＡｋｋ」と表記）の単独または緑茶との併用が、高脂肪食餌マウス（Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ－ｆｅｄ ｍｉｃｅ、以下、「ＨＦＤ」という）の体重又は体重増加に及ぼす生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での影響を示す。

【0098】

９週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）に、到着後に少なくとも５日間の馴化期間を与えた。実験期間中、動物を、換気されたエンリッチドケージ（４８×３７．５×ージのリターを週に１回交換した。マウスを、通常のライトサイクル（午後７時消灯）、２２±２℃、５０±１０％の相対湿度で５匹のグループに分けて収容した。飼育パラメータを毎日記録した。馴化期には、標準食（ＲＭ１（Ｅ）８０１４９２、ＳＤＳ）および水道水を自由摂取させた。実験期（１２週間）には、高脂肪食４５ｋｃａｌ％（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ ＃１２４５１）（ＨＦＤグループ）及び水道水を自由摂取させ、対照マウスには、通常食（ＲＭ１（Ｅ）８０１４９２、ＳＤＳ）（ＮＣＤグループ）を与えた。ＨＦＤ投与（処置）１２週間、マウスに毎日、ビヒクル１８０μＬ、低温殺菌されたアッカーマンシア・ムシニフィラ溶液（２．１０８ＴＦＵ／日）単独、または緑茶抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせたものを、経口ガベージにより投与した。

【0099】

プロトコルの開始時に、強制給餌や戦闘による死亡の可能性を考慮し、１グループあたり１３匹のマウスを注文した。ｐＡｋｋグループとｐＡｋｋ＋緑茶グループでは、強制給餌により３～９匹と５～３匹が死亡した以外は、すべてのマウスが統計解析に使用された。

【0100】

投与１週間後、ＨＦＤ＋ｐＡｋｋ、ＨＦＤ＋緑茶抽出物、およびＨＦＤ＋ｐＡｋｋ＋緑茶は、ＨＦＤビヒクルグループよりも低い体重増加を示した（図１）。さらに、ｐＡｋｋと緑茶との組み合わせは、単一剤投与と比較して有意に低下した体重増加と共に効力の増加を示した（組み合わせでは１，２４ｇ減少、ｐＡｋｋおよびＧＴグループではそれぞれ０，３６および０，４４ｇ減少、ｐ＜０．０５）（図１）。この効果から、ｐＡｋｋと緑茶との組み合わせが、それぞれの成分の合計よりも大きな効果を達成したため、実際に相乗効果を示すことが分かる（Ｗｏｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。

【0101】

時間が経過しても、ｐＡｋｋ＋緑茶の組み合わせは、体重または体重の増加に関してｐＡｋｋまたは緑茶のみよりも依然として効果が高く、体重増加については２週目からプロトコル終了まで有意な効果が認められた（図２）。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【国際調査報告】