特表 2023-548181 ＡＴＸ阻害剤の重水素化誘導体及びその応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-15

(54)【発明の名称】ＡＴＸ阻害剤の重水素化誘導体及びその応用

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20231108BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20231108BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231108BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231108BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20231108BHJP

【ＦＩ】

C07D471/04 106A

C07D471/04 CSP

A61P3/00

A61P11/00

A61P43/00 105

A61K31/496

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023526670

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2023-06-30

(86)【国際出願番号】 CN2021128735

(87)【国際公開番号】W WO2022095930

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】202011213775.9

(32)【優先日】2020-11-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202011562922.3

(32)【優先日】2020-12-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202110085643.0

(32)【優先日】2021-01-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515230637

【氏名又は名称】四川海思科制▲薬▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】100098729

【弁理士】

【氏名又は名称】重信 和男

(74)【代理人】

【識別番号】100206911

【弁理士】

【氏名又は名称】大久保 岳彦

(74)【代理人】

【識別番号】100204467

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 好文

(74)【代理人】

【識別番号】100148161

【弁理士】

【氏名又は名称】秋庭 英樹

(74)【代理人】

【識別番号】100195833

【弁理士】

【氏名又は名称】林 道広

(72)【発明者】

【氏名】リー，ヤオ

(72)【発明者】

【氏名】ヂァン，グゥオピィアォ

(72)【発明者】

【氏名】ヂァン，シャオボー

(72)【発明者】

【氏名】タン，ピンミン

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ヤシュー

(72)【発明者】

【氏名】ユ，イェン

(72)【発明者】

【氏名】ヂァン，チェン

(72)【発明者】

【氏名】イエン，パンク

【テーマコード（参考）】

4C065

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C065AA03

4C065BB05

4C065CC01

4C065DD02

4C065EE02

4C065HH01

4C065JJ02

4C065KK02

4C065LL07

4C065PP03

4C065PP08

4C065PP15

4C065PP17

4C065QQ04

4C065QQ05

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC82

4C086GA13

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA34

4C086MA52

4C086MA66

4C086NA11

4C086NA14

4C086ZA59

4C086ZB21

4C086ZC21

(57)【要約】

本発明は、（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、又はそれらを含む薬物組成物、及びその関連疾患を処置する薬物の製造におけるＡＴＸ阻害剤とする用途を開示し、式（Ｉ）：

に示す各基は、明細書に定義されたとおりである。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

に示す化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶であって、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、それぞれ独立して水素又は重水素から選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０のうちの少なくとも１つが重水素原子から選択され、且つ式（Ｉ）の化合物が

の構造ではないことを条件とする、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項2】

Ｒ_２２は、Ｈから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項3】

Ｒ_１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２とＲ_３は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６とＲ_７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４とＲ_１５は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１６は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２３とＲ_２４は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項4】

Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６とＲ_１７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項5】

前記化合物は、

の構造のうちの１つから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項6】

式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉであって、

Ｃｕ－Ｋα放射線を用いて、そのＸ－線粉末回折パターンは、９．３５±０．２°、１０．３２±０．２°、１２．０８±０．２°と１５．１０±０．２°の２θ位置に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項7】

そのＸ－線粉末回折パターンは、１７．２９±０．２°、１８．２６±０．２°と２０．５８±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する、請求項６に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項8】

そのＸ－線粉末回折パターンは、６．９２±０．２°、７．２３±０．２°、１３．４６±０．２°、１９．４７±０．２°と２４．８５±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する、請求項７に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項9】

そのＸ－線粉末回折パターンは、基本的に図１に示される、請求項８に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項10】

そのＴＧＡ曲線は、基本的に図２に示され、そのＤＳＣ図は、基本的に図３に示される、請求項６に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項11】

に示す式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ－Ｂ）、式（ＩＩ－Ｃ）の化合物。

【請求項12】

式（Ａ）：

の化合物を製造する方法であって、
式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を有機溶媒Ａに溶解し、２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン、塩基とを７０～９０°Ｃで反応させて、式（Ａ）の化合物を得るステップを含む、ことを特徴とする式（Ａ）の化合物を製造する方法。

【請求項13】

前記有機溶媒Ａは、アセトニトリルと、２－メチルテトラヒドロフランと、エチルベンゼンと、ホルミルギ酸エチルメチルと、ジエチレングリコール－ｔ－ブチルエーテルとのうちの少なくとも１つから選択され、前記塩基は、炭酸カリウムと炭酸ナトリウムとのうちの少なくとも１つである、ことを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。

【請求項14】

式（Ａ）の化合物の製造方法は、

式（ＩＩ－Ｄ）の化合物、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ、２，６－ジメチルピリジンと非プロトン性極性溶媒を６０～８０°Ｃで反応させて、化合物（ＩＩ－Ａ）を得るステップｉと、
ステップｉで得られた化合物（ＩＩ－Ａ）を有機溶媒Ｂに溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、還元剤を加え、反応終了後にヨウ化メタン－ｄ_３を加えて、化合物（ＩＩ－Ｂ）を得るステップｉｉと、
ステップｉｉで得られた化合物（ＩＩ－Ｂ）を有機溶媒Ｃに溶解し、トリフルオロ酢酸を加え、反応させて式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を得るステップｉｉｉとをさらに含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。

【請求項15】

前記非プロトン性極性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、ヘキサメチルホスホアミドと、アセトニトリルと、アセトンと、ジメチルスルホキシドとのうちの少なくとも１つであり、前記有機溶媒Ｂは、テトラヒドロフランと、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、アセトニトリルと、アセトンとのうちの少なくとも１つであり、前記還元剤は、水素化ナトリウムであり、前記有機溶媒Ｃは、ジクロロメタンと、酢酸メチルと、炭酸ジメチルと、プロピレングリコールメチルエーテルアセテートと、ナイロン酸ジメチルとのうちの少なくとも１つである、ことを特徴とする請求項１４に記載の製造方法。

【請求項16】

薬物組成物であって、請求項１乃至５のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶を含み、又は請求項６乃至１０のいずれかに記載の結晶形Ｉ、及び薬学的に許容されるベクター及び／又は賦形剤を含む、ことを特徴とする薬物組成物。

【請求項17】

請求項１乃至５のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、又は請求項６乃至１０のいずれかに記載の結晶形Ｉを含み、又は請求項１６に記載の組成物のＡＴＸ介在性疾患を処置する薬物の製造における応用。

【請求項18】

前記ＡＴＸ介在性疾患は、特発性肺線維症である、ことを特徴とする請求項１７に記載の応用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、薬物分野に属し、特にＡＴＸ阻害剤の重水素化誘導体、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、及びその関連疾患を処置する薬物の製造における用途に関する。

【背景技術】

【0002】

Ａｕｔｏｔａｘｉｎ （ＡＴＸ） は、細胞外セクレターゼ （ ＥＮＰＰ２とも呼ばれる）である。その主な生理機能は、リゾホスファチジルコリン （ＬＰＣ） を加水分解して生物学的活性のあるリゾホスファチジン酸 （ＬＰＡ） とコリン（ｃｈｏｌｉｎｅ）を生成することである。ＡＴＸによるＬＰＣの加水分解は、血中ＬＰＡの最も主要な供給源である。ＬＰＡは、ＬＰＡ受容体 （少なくとも６種のＬＰＡ_１－６がある） に作用することにより、細胞増殖、生存、運動などを含む一連の生理活性が発生する。多くの病理過程においてＡＴＸ－ＬＰＡ 信号経路の関与が存在し、血管新生、自己免疫性疾患、炎症、繊維化、神経変性病変と疼痛を含む。その中で最も広く研究されているのは、繊維化と腫瘍、特に特発性肺線維症 （ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ、ＩＰＦ）である。２０１４年にＦＤＡに承認されたＰｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ （ピルフェニドン） とトリプルアンジオキナーゼ阻害剤Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ （ニンテダニブ）の２つの新薬は、ＩＰＦの治療に用いられ、 主な役割は、ＩＰＦのさらなる進行と悪化を防止することであり、ＩＰＦ自体の治療に明らかな効果がないため、ＩＰＦ治療により有効な薬物を探すことに取り組んでいる。ＡＴＸ阻害剤薬物ＧＬＰＧ－１６９０は、臨床進展が先進的（臨床三期）であり、ＩＰＦの治療に用いられ、その二期臨床は、すでに良好な治療効果を示した。

【発明の概要】

【0003】

本発明の目的は、新規な構造、良好な有効性、高いバイオアベイラビリティー、低い副作用、速い作用発現と長い作用持続時間などの利点を有する重水素化ＡＴＸ阻害剤を提供することである。

【0004】

本発明は、式（Ｉ）：

【化1】

に示す化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶に関し、
ここで、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、それぞれ独立して水素又は重水素から選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０のうちの少なくとも１つ基が重水素から選択され、且つ式（Ｉ）の化合物が

【化2】

の構造ではないことを条件とする。

【0005】

いくつかの実施形態において、Ｒ_２２は、Ｈから選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２、Ｒ_３は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_６、Ｒ_７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１６は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２３、Ｒ_２４は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７のうちの少なくとも１つは、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_１、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７は、重水素から選択され、
いくつかの実施形態において、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０は、重水素から選択される。

【0006】

本発明に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶であって、前記化合物は、

【化3】

【化4】

の構造のうちの１つから選択される。

【0007】

本発明は、より具体的な式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉをさらに提供し、該結晶形は、純度が高く、吸湿性が低く、溶解性が良く、高温、高湿および強い光照射に耐えられ、安定性が高く、粒径が適切で、濾過しやすく、流動性が良く、薬物用剤形の製造に適している。

【化5】

【0008】

式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、Ｃｕ－Ｋα放射線を用いて、そのＸ－線粉末回折パターンは、９．３５±０．２°、１０．３２±０．２°、１２．０８±０．２°、１５．１０±０．２°の２θ位置に特徴的な回折ピークを有する。

【0009】

さらに、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、そのＸ－線粉末回折パターンが、１７．２９±０．２°、１８．２６±０．２°、２０．５８±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する。

【0010】

さらに、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、そのＸ－線粉末回折パターンが、６．９２±０．２°、７．２３±０．２°、１３．４６±０．２°、１９．４７±０．２°、２４．８５±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する。

【0011】

さらに、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、そのＸ－線粉末回折パターンが基本的に図１に示される。

【0012】

さらに、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、そのＸ－線粉末回折ピークが基本的に表１に示される。

【0013】

さらに、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、そのＴＧＡ曲線が基本的に図２に示し、そのＤＳＣ図が基本的に図３に示される。

【0014】

さらに、本発明の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉは、その結晶粒径が１００ μｍ未満であり、いくつかの実施例において、結晶粒径は、９０ μｍ未満であり、いくつかの実施例において、結晶粒径は、８０ μｍ未満であり、いくつかの実施例において、結晶粒径は、７０ μｍ未満であり、いくつかの実施例において、結晶粒径は、６０ μｍ未満であり、いくつかの実施例において、結晶粒径は、５０ μｍ未満である。

【0015】

本発明は、式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉの製造方法をさらに提供し、前記方法は、粗化合物（Ａ）をアルコール系溶媒に加え、昇温して攪拌し、溶解後に室温まで冷却し、晶析し、濾過して得られることを含む。

【0016】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記アルコール系溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール又はそれらの組み合わせから選択される。

【0017】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、化合物（Ａ）とアルコール系溶媒との比は、１：５－８ ｇ／ｍＬである。いくつかの実施例において、化合物（Ａ）とアルコール系溶媒との比は、１：５－６ ｇ／ｍＬである。

【0018】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記昇温は、６０－９０°Ｃまで昇温することである。いくつかの実施例において、７０－８０°Ｃまで昇温する。いくつかの実施例において、７５°Ｃまで昇温する。

【0019】

本発明の化合物（Ａ）の結晶形Ｉは、生薬の約５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約１０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約１５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約２０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約２５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約３０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約３５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約４０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約４５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約５０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約５５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約６０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約６５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約７０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約７５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約８０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約８５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約９０重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約９５重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約９８重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、生薬の約９９重量％～約１００重量％で存在し、いくつかの実施形態において、基本的にすべての生薬は、本発明の化合物（Ａ）の結晶形Ｉであり、即ち生薬は、基本的に相純結晶である。

【0020】

本発明は、

【化6】

に示す式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ－Ｂ）、式（ＩＩ－Ｃ）の化合物をさらに提供する。

【0021】

（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ－Ｂ）、式（ＩＩ－Ｃ）の化合物は、化合物（Ａ）の中間体とする。

【0022】

本発明は、式（Ａ）の化合物を製造する方法をさらに提供し、

【化7】

式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を有機溶媒Ａに溶解し、２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン、塩基とを７０～９０°Ｃで反応させ、式（Ａ）の化合物を得るステップを含む。

【0023】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を有機溶媒Ａに溶解し、好ましくは２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン、塩基とを７２～８８°Ｃで３～１０時間反応させ、さらに好ましくは７５～８５°Ｃで４～８ｈ反応させ、より好ましくは８０°Ｃで６時間反応させる。

【0024】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記有機溶媒Ａは、アセトニトリルと、２－メチルテトラヒドロフランと、エチルベンゼンと、ホルミルギ酸エチルメチルと、ジエチレングリコール－ｔ－ブチルエーテルとのうちの少なくとも１つから選択される。

【0025】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記有機溶媒Ａは、アセトニトリルから選択される。

【0026】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記塩基は、炭酸カリウムと、炭酸ナトリウムとのうちの少なくとも１つである。

【0027】

いくつかの実施形態において、上記製造方法では、前記塩基は、炭酸カリウムである。

【0028】

さらに、式（Ａ）の化合物の製造方法は、

【化8】

化合物（ＩＩ－Ｂ）を有機溶媒Ｃに溶解し、トリフルオロ酢酸を加え、反応させて式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を得るステップをさらに含む。

【0029】

さらに、式（Ａ）の化合物の製造方法は、

【化9】

化合物（ＩＩ－Ａ）を有機溶媒Ｂに溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、還元剤を加え、反応終了後にヨウ化メタン－ｄ_３を加えて、化合物（ＩＩ－Ｂ）を得るステップをさらに含む。

【0030】

さらに、式（Ａ）の化合物の製造方法は、

【化10】

式（ＩＩ－Ｄ）の化合物、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ、２，６－ジメチルピリジンと非プロトン性極性溶媒を６０～８０°Ｃで反応させて、化合物（ＩＩ－Ａ）を得るステップをさらに含む。

【0031】

本発明の式（Ａ）の化合物の製造は、

【化11】

式（ＩＩ－Ｄ）の化合物、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ、２，６－ジメチルピリジンと非プロトン性極性溶媒を６０～８０°Ｃで反応させて、化合物（ＩＩ－Ａ）を得るステップｉと、
ステップｉで得られた化合物（ＩＩ－Ａ）を有機溶媒Ｂに溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、還元剤を加え、反応終了後にヨウ化メタン－ｄ_３を加えて、化合物（ＩＩ－Ｂ）を得るステップｉｉと、
ステップｉｉで得られた化合物（ＩＩ－Ｂ）を有機溶媒Ｃに溶解し、トリフルオロ酢酸を加え、反応させて式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を得るステップｉｉｉとをさらに含む。

【0032】

本発明の式（Ａ）の化合物の製造方法は、

【化12】

ステップを含む。

【0033】

さらに、上記製造方法では、前記非プロトン性極性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、ヘキサメチルホスホアミドと、アセトニトリルと、アセトンと、ジメチルスルホキシドとのうちの少なくとも１つである。

【0034】

よりさらに、前記非プロトン性極性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドである。

【0035】

さらに、上記製造方法では、前記有機溶媒Ｂは、テトラヒドロフランと、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、アセトニトリルと、アセトンとのうちの少なくとも１つである。

【0036】

よりさらに、前記有機溶媒Ｂは、テトラヒドロフランである。

【0037】

さらに、上記製造方法では、前記還元剤は、水素化ナトリウムである。

【0038】

さらに、上記製造方法では、前記有機溶媒Ｃは、ジクロロメタンと、酢酸メチルと、炭酸ジメチルと、プロピレングリコールメチルエーテルアセテートと、ナイロン酸ジメチルとのうちの少なくとも１つである。

【0039】

よりさらに、前記有機溶媒Ｃは、ジクロロメタンである。

【0040】

本発明の別の技術案として、本発明は、薬物組成物を提供し、それは、前述のいずれか一項の技術案に記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、又は式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ、及び薬学的に許容されるベクター及び／又は賦形剤を含む。

【0041】

本発明の更なる技術案として、本発明は、前述のいずれか一項の技術案に記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、又は前述組成物のＡＴＸ介在性疾患を処置する薬物の製造における応用を提供した。前記ＡＴＸ介在性疾患は、特発性肺線維症である。

【0042】

理解できることとして、熱重量分析（ＴＧＡ）と示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、当分野で良く知られており、ＴＧＡ曲線とＤＳＣ曲線の溶融ピークの高さは、サンプル製造と装置の幾何に関連する多くの要因に依存し、ピーク位置は、実験の詳細に敏感ではない。そのため、いくつかの実施形態において、本発明の結晶性化合物は、特徴的なピーク位置のＴＧＡ図とＤＳＣ図を有し、本発明の図面によるＴＧＡ図とＤＳＣ図と実質的に同じ特性を有し、測定値誤差許容範囲は±５°Ｃ以内であり、一般的に±３°Ｃ以内であることが要求される。

【0043】

理解できることとして、本発明で記述されて保護される数値は、近似値である。数値内の変化は、機器の校正、機器の誤差、結晶の純度、結晶の大きさ、検体の大きさ及びその他の要因に起因する可能性がある。

【0044】

理解できることとして、本発明の結晶形は、本発明の開示した図面に記載された特性スペクトルと全く同じである特性スペクトル、例えばＸＲＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＤＶＳ、等温吸着曲線図に限定されず、図面に記載されたスペクトルと基本的に同じ又は本質的に同じである特性スペクトルを有する任意の結晶形は、いずれも本発明の範囲内に含まれる。

【0045】

用語
「治療有効量」とは、組織、系統又は被験者の生理的又は医学的反応を引き起こす化合物の量であり、この量は、求められたものであり、被治療者に投与される時に、治療された疾患又は病症の１つ又は複数の症状の発生を予防し又はある程度まで軽減するのに十分な化合物の量を含む。

【0046】

「室温」：１０°Ｃ－３０°Ｃ、＞３０％ＲＨである。

【0047】

「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物が遊離酸又は遊離塩基の生物学的有効性と特性を維持し、且つ前記の遊離酸が無毒な無機塩基又は有機塩基と反応させ、前記の遊離塩基が無毒な無機酸又は有機酸と反応させて得られる塩である。

【0048】

「薬物組成物」は、１つ又は複数の本発明の前記化合物又はその立体異性体、溶媒和物、薬学的に許容される塩、共結晶、重水素化物と、他の構成成分との混合物を表し、ここで、他の成分は、生理学的／薬学的に許容されるベクター及び／又は賦形剤を含む。

【0049】

「ベクター」とは、生体に明らかな刺激を与えることなく、与えられた化合物の生物学的活性および特性を除去することなく、人体への薬物の侵入方式および体内での分布を変更し、薬物の放出速度を制御して薬物を標的器官に送達することができる系であって、非限定的な実例としては、マイクロカプセルおよびマイクロスフェア、ナノ粒子、リポソームなどを含む。

【0050】

「賦形剤」とは、それ自体が治療剤ではなく、希釈剤、補助剤、接着剤及び／又は媒体として使用され、薬物組成物に添加してその処置又は貯蔵性質を改善し、又は、化合物又は薬物組成物が投与用の単位剤形を形成することを許可又は促進するためのものである。当業者に知られているように、医薬用賦形剤は、様々な機能を提供することができ且つ湿潤剤、緩衝剤、懸濁補助剤、潤滑剤、乳化剤、崩壊剤、吸収剤、防腐剤、界面活性剤、着色剤、矯味剤及び甘味料として記述されることができる。医薬用賦形剤の実例としては、以下を含むが、それらに限らない。（１） 糖、例えば乳糖、ブドウ糖及びショ糖、（２）澱粉、例えばコーンスターチ及びポテトスターチ、（３） セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース及び架橋カルボキシメチルセルロース（例えば架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、（４） トラガントガム粉末、（５） 麦芽、（６） ゼラチン、（７） タルク、（８） 賦形剤、例えばカカオ脂及び坐剤ワックス、（９） 油、例えばピーナッツ油、綿実油、紅花油、ごま油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油、（１０） ジオール、例えばプロピレングリコール、（１１） ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール、（１２） エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル、（１３） 寒天、（１４） 緩衝剤、例えば 水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム、（１５） アルギン酸、（１６） 非加熱原水、（１７） 等張食塩水、（１８） リンゲル液 （Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、（１９）エタノール、（２０） ｐＨ 緩衝液、（２１） ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ無水物、及び（２２） 医薬製剤に使用されるその他の非毒性相溶性物質。

【0051】

「立体異性体」とは、分子内の原子の空間的配置の違いから生じる異性体であり、シス－トランス異性体、エナンチオマーとコンフォメーション異性体を含む。

【0052】

「溶媒和物」とは、本発明の化合物又はその塩が化学量論的又は非化学量論的溶媒と分子間の非共有結合力で結合して形成される物質である。溶媒が水である場合、水合物である。

【0053】

「共結晶」とは、活性薬物成分（ＡＰＩ）と共結晶形成物（ＣＣＦ）とが水素結合又はその他非共有結合の作用で結合した結晶であり、そのうちのＡＰＩとＣＣＦのニートは、室温でいずれも固体であり、且つ各成分間には一定の化学量論比が存在する。共結晶は、多成分結晶であり、２つの中性固体の間で形成される二元共結晶を含み、中性固体と塩又は溶媒和物によって形成される多元共結晶も含む。

【図面の簡単な説明】

【0054】

【図1】化合物Ａ結晶形ＩがＣｕ－Ｋα放射線を用いるＸ－線粉末回折パターンである。

【図2】化合物Ａ結晶形ＩのＴＧＡ曲線図である。

【図3】化合物Ａ結晶形ＩのＤＳＣ曲線図である。

【図4】化合物Ａ結晶形ＩのＰＬＭ図である。

【図5】化合物Ａ結晶形ＩのＤＶＳ図である。

【発明を実施するための形態】

【0055】

以下では、実施例によって本発明の内容を詳細に記述する。実施例に具体的な条件が明記されていない場合、通常の条件の実験方法に従って行う。例示された実施例は、本発明の内容をより良く説明するためのものであるが、本発明の内容が例示されたものに限定されるものであるとは理解されない。当業者が上記発明内容に基づいて実施形態に対して行った本質的でない改良と調整は、依然として本発明の保護範囲に属する。

【0056】

特別の説明がない限り、原料は、泰坦科技、安耐吉化学、上海徳默、成都科龍化工、韶遠化学科技、南京薬石、薬明康徳と百霊威科技などの会社から購入される。

【0057】

機器情報と方法
化合物の構造は、核磁気共鳴 （ＮＭＲ） 又は （及び） 質量分析 （ＭＳ） によって確定される。ＮＭＲ シフト （δ） は、１０－６ （ｐｐｍ） の単位で与えられる。ＮＭＲの測定は、 （Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ４００とＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００） 核磁気計を用い、測定溶媒は、重水素化ジメチルスルホキシド （ＤＭＳＯ－ｄ６）、重水素化クロロホルム （ＣＤＣｌ_３）、重水素化メタノール （ＣＤ_３ＯＤ）であり、内部標準は、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）であり、
ＭＳの測定は、（Ａｇｉｌｅｎｔ ６１２０Ｂ（ＥＳＩ） とＡｇｉｌｅｎｔ ６１２０Ｂ（ＡＰＣＩ））を用い、
ＨＰＬＣの測定は、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ＤＡＤ高圧液体クロマトグラフ （Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ １００ × ４．６ ｍｍ、 ３．５ μＭ）を用い、
薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートは、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４又は青島ＧＦ２５４ シリカゲルプレートを用いて、薄層クロマトグラフィー （ＴＬＣ） に使用されるシリカゲルプレートは、０．１５ ｍｍ－０．２０ ｍｍの仕様を採用し、薄層クロマトグラフィーで分離して精製製品は、０．４ ｍｍ － ０．５ ｍｍの仕様を採用し、
カラムクロマトグラフィーは、一般的にベクターとして煙台黄海シリカゲル２００－３００メッシュのシリカゲルを用いる。

【0058】

粉末Ｘ 線回折
ＸＲＰＤ 図は、ＰＡＮａｌｙｔａｃａｌ 製の粉末Ｘ 線回折分析装置で採取され、スキャンパラメータは、次の表に示す。

【0059】

熱重量分析（ＴＧＡ）と示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＴＧＡとＤＳＣ図は、それぞれＴＡ Ｑ５０００／５５００熱重量分析装置とＴＡ ２５００示差走査熱量測定装置で採取され、次の表は、試験パラメータを示す。

【0060】

動的水分吸着（ＤＶＳ）
動的水分吸着（ＤＶＳ）曲線は、ＳＭＳ（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ）のＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃで採取される。２５°Ｃでの相対湿度は、ＬｉＣｌ、Ｍｇ（ＮＯ_３）_２とＫＣｌの潮解点で補正される。ＤＶＳ試験パラメータは、次の表に示される。

【0061】

偏光顕微鏡（ＰＬＭ）
偏光顕微データは、Ａｘｉｏ Ｌａｂ． Ａ１正立型顕微鏡により室温で採取される。

【0062】

略語の説明：
ＮＭＰ：Ｎ－メチルピロリドン、
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、
ＨＡＴＵ： ２－（７－アザベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、
ＰＥ：石油エーテル、
ＥＡ：酢酸エチル、
ＤＣＭ：ジクロロメタン、
ＭｅＯＨ：メタノール、
Ａｃｅｔｏｎｅ：アセトン、
ＥｔＯＨ：エタノール、
ＡＣＮ：アセトニトリル、
Ｈ_２Ｏ：水。

【0063】

中間体１：
（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）トリメチルシラン （中間体１）

【化13】

室温条件でトリメチルシリルアセチレン （１ａ） （１０．０７ｇ、１０２．５ ｍｍｏｌ） を乾燥したテトラヒドロフラン（４５ ｍＬ） に溶解し、系を－７８°Ｃまで冷却した後にその中にｎ－ブチルリチウム （４５ ｍＬ、２Ｍ ｎ－ヘキサン溶液）を滴下し、滴下完了後に氷水浴に移して２０分間反応を続けた。その後－７８°Ｃまで冷却し、ヘキサメチルリン酸トリアミド （１８．３７ ｇ、１０２．５ ｍｍｏｌ） を滴下し、この条件で３０分間攪拌を続けた後にヨードエタン－ｄ５ （１ｂ） （１５．００ ｇ、９３．２ ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後に自然に室温まで上昇して一晩反応させた。反応液に水 （２０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、分液し、水相をジエチルエーテル （２０ ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水 （２０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を常圧蒸留し、８０°Ｃから１００°Ｃまでの留分を採取した。表題化合物（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）トリメチルシラン （中間体１）を得、無色透明液体 （１０．０ ｇ、収率７４％）となった。

【0064】

中間体２：
２－クロロ－１－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）エチル－１－オン （中間体２）

【化14】

ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル ３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボン酸エステル－３－ｄ （２ｂ）

【化15】

１－Ｂｏｃ－３－アゼチジノン （２ａ） （５．１３ ｇ、３０ ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン （５０ ｍＬ）に溶解し、均一に攪拌した後に、水素化ホウ素ナトリウム－ｄ４ （１．２６ ｇ、３０ ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、室温で１時間反応させた。水 （２０ ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、１０分間攪拌した後に、酢酸エチル （１００ ｍＬ） と飽和炭酸水素ナトリウム （１００ ｍＬ）を加え、抽出して層別化し、有機相を飽和食塩水 （１００ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル ３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボン酸エステル－３－ｄ （２ｂ）を得、透明油状物 （４．６ ｇ、収率８７％）となった。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．１４ （ｄ， ２Ｈ）， ３．７９ （ｄ， ２Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）。

【0065】

ステップ２：
アゼチジン－３－ｄ－３－オール （２ｃ）

【化16】

化合物ｔｅｒｔ－ブチル ３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボン酸エステル－３－ｄ （２ｂ） （４．６ ｇ、２６．３ ｍｍｏｌ） をジクロロメタン （２４ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （８ ｍＬ）を滴下し、滴下完了後に、室温で１ｈ反応させ、減圧濃縮してアゼチジン－３－ｄ－３－オール （２ｃ） のトリフルオロ酢酸塩を得、褐色の油状物（４．９４ ｇ、収率１００％）であり、粗製品は、そのまま次の反応を行った。

【0066】

ステップ３：
２－クロロ－１－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）エチル－１－オン （中間体２）

【化17】

アゼチジン－３－ｄ－３－オール （２ｃ） のトリフルオロ酢酸塩 （４．９４ ｇ、２６．３ ｍｍｏｌ） を水 （４０ ｍＬ） に溶解し、均一に攪拌した後に、炭酸カリウム （１２．４ ｇ、６０ ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、系が泡立たなくなった後にジクロロメタン （４０ ｍＬ）を加えた。氷浴条件でクロロアセチルクロライド （３．３９ ｇ、３０ ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後に室温で２時間反応させた。酢酸エチル （１００ ｍＬ） と水 （１００ ｍＬ）を加え、抽出して層別化し、水相を酢酸エチル （１００ ｍＬ） で抽出した。有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水（１００ ｍＬ）で洗浄し 、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して目的化合物２－クロロ－１－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）エチル－１－オン （中間体２）を得、白色固体 （０．８５ ｇ、収率２１％）となった。

【0067】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．４９ （ｄ， １Ｈ）， ４．３０ （ｄ， １Ｈ）， ４．１５ （ｄ， １Ｈ）， ３．９４ （ｄ， １Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．０１ （ｓ， １Ｈ）。

【0068】

中間体３：
エチル２－ブロモ酢酸エステル－ｄ２ （中間体３）

【化18】

酢酸－ｄ４ （３ａ） （１．０ ｇ、１５．６ ｍｍｏｌ） を無水トリフルオロ酢酸 （６ ｍＬ） に溶解し、均一に攪拌した後に、４－ジメチルアミノピリジン （３０ ｍｇ、０．２５ ｍｍｏｌ）を加え、系を６０°Ｃまで加熱し、この条件でブロモ素 （０．９８ ｍＬ）をゆっくりと滴下し、滴下時間は、１時間である。滴下完了後にこの条件で反応を１時間続けてから室温まで冷却し、系の体積が約１ｍＬ程度に減少するまで、系に窒素ガスを導入した。エタノール （２０ ｍＬ）を加え、６０°Ｃ条件で一晩反応させた後に室温まで冷却した。減圧濃縮し、ジエチルエーテル （１００ ｍＬ）を加え、飽和食塩水 （１００ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮してエチル２－ブロモ酢酸エステル－ｄ２ （中間体３）を得、淡黄色液体 （１．６５ ｇ、収率６２．６％）となった。

【0069】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．２４ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）。

【0070】

中間体４：

【化19】

ステップ１：
４－フルオロ安息香酸メチル－２，３，５，６－ｄ４ （４ｂ）

【化20】

４－フルオロ安息香酸－－２，３，５，６－ｄ４ （４ａ） （１．０ ｇ、６．９４ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （１０ ｍＬ） に溶解し、０°Ｃまで冷却し、炭酸カリウム （１．９２ ｇ、１３．９ ｍｍｏｌ）を加え、この条件で５分間反応させた後に、系に硫酸ジメチル （１．０５ ｇ、８．３３ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で１時間反応させた。水 （２０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （５０ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （石油エーテル：酢酸エチル（ｖ／ｖ）＝ ８：１） で分離して目的化合物４－フルオロ安息香酸メチル－２，３，５，６－ｄ４ （４ｂ）を得、透明液体 （０．９６ ｇ、収率８７％）となった。

【0071】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ３．９１ （ｓ， ３Ｈ）。

【0072】

ステップ２：
３－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）－３－オキソプロパンニトリル （４ｃ）

【化21】

４－フルオロ安息香酸メチル－２，３，５，６－ｄ４ （４ｂ） （０．９６ ｇ、６．１ ｍｍｏｌ） をトルエン （８ ｍＬ） に溶解し、窒素ガス保護で－１０°Ｃまで冷却し、アセトニトリル （１．４６ ｇ、３６．３ ｍｍｏｌ）を加え、系にジ（トリメチルシリル）アミノナトリウム （６ ｍＬ、 １２ ｍｍｏｌ、 ２Ｍ ｉｎ ＴＨＦ）をゆっくりと滴下した。滴下完了後に、塩酸 （２０ ｍＬ、１Ｎ水溶液） で反応をクエンチした。室温に昇温し、酢酸エチル （５０ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物３－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）－３－オキソプロパンニトリル （４ｃ）を得、淡黄色固体 （０．９２ ｇ、収率９１％）となった。

【0073】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．０５ （ｓ， ２Ｈ）。

【0074】

ステップ３：
２－アミノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （４ｄ）

【化22】

３－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）－３－オキソプロパンニトリル （４ｃ） （０．９２ ｇ、５．５ ｍｍｏｌ） をエタノール （１２ ｍＬ） に溶解し、ピリジン （０．４４ ｇ、５．５ ｍｍｏｌ） を加えた後に７０°Ｃまで昇温して１５分間反応させた。室温まで冷却し、系にチオ尿素 （０．８４ ｇ、１１ ｍｍｏｌ） とヨウ素単体 （１．４ ｇ、５．５ ｍｍｏｌ） のエタノール懸濁液 （８ ｍＬ）をゆっくりと滴下した 。滴下完了後に、室温で１時間反応させた。チオ硫酸ナトリウム （１０ ｍＬ、１Ｎ水溶液） で反応をクエンチした。濾過し、濾過ケーキを乾燥して目的化合物２－アミノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （４ｄ）を得、白色固体 （０．８２ ｇ、収率６７％）となった。

【0075】

ステップ４：
２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル（中間体４）

【化23】

塩化銅 （０．６０ ｇ、４．５ ｍｍｏｌ） をアセトニトリル （８ ｍＬ） に溶解し、系に亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （０．６７ ｇ、５．６ ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で３０分間攪拌した後に、系に２－アミノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （４ｄ） （０．８２ ｇ、３．６７ ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。加え完了後に、室温で反応を１時間続けた。塩酸（１０ ｍＬ、 １Ｎ水溶液）で反応をクエンチした。酢酸エチル（８０ ｍＬ）を加え、飽和食塩水 （５０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン） で分離して目的化合物２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （中間体４）を得、淡黄色固体 （０．６８ ｇ、収率７６％）となった。

【0076】

実施例１：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１）

【化24】

ステップ１：
４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｃ）

【化25】

反応フラスコ５００ｍＬに、ＮＭＰ （２２０ ｍＬ）を加え、攪拌を開始し、さらに２－クロロ－５－フルオロ－４－ヨードピリジン （１Ａ） （４４．００ ｇ、１７０．９ ｍｍｏｌ）、１－Ｂｏｃ－ピペラジン （１Ｂ） （４７．７５ ｇ、２５６．４ ｍｍｏｌ） と炭酸カリウム （４７．２４ ｇ、３４１．８ ｍｍｏｌ）を順次加え、１５０°Ｃまで昇温して３時間反応させた後に反応を停止した。反応液を室温まで冷却し、反応物を氷水 （５００ ｍＬ） にゆっくりと加え、白色固体を析出させ、０．５時間攪拌し、濾過した。濾過ケーキを水で洗浄した後にｎ－ヘキサン （２００ ｍＬ） でスラリー化し、濾過し、乾燥して目的化合物４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｃ）を得、白色固体 （５０ ｇ、収率６４％）となった。

【0077】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３１６．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0078】

ステップ２：
４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｄ）

【化26】

４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｃ） （２３．１８ ｇ、７１．６ ｍｍｏ）、（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）トリメチルシラン（中間体１） （９．４ ｇ、１３１．３ ｍｍｏｌ）、ビストリフェニルホスフェート二塩化パラジウム （５．０３ ｇ、７．２ ｍｍｏｌ）、１，３－ビス（ジフェニルホスフィン）プロパン （４．４３ ｇ、１０．７ ｍｍｏｌ） とフッ化セシウム （２２．８ ｇ、１４３．３ ｍｍｏｌ） をジメチルスルホキシド （１８４ ｍＬ） に順次加え、系を窒素ガスで３回置換し、９５°Ｃで４時間反応させた。反応終了後に室温まで冷却し、水 （２００ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル （２００ ｍＬ×３） で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液 （２００ ｍＬ） で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ＰＥ：ＥＡ＝２０：１～５：１） で分離して４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｄ）を得、淡褐色の粘稠液体 （１０．１５ ｇ、収率４１．９％）となった。

【0079】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３３９．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0080】

ステップ３：
４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｆ）

【化27】

反応フラスコ２５０ ｍＬに、エタノール （１００ ｍＬ） と４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル－ｄ５）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｄ） （１０．１５ ｇ、３０．０ ｍｍｏｌ）を加え、０°Ｃまで冷却し、２－［（アミノオキシ）スルホニル］－１，３，５－トリメチルベンゼン （１Ｅ） （１１．００ ｇ、５１．１ ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、さらに炭酸水素ナトリウム （５．０４ ｇ、６０．０ ｍｍｏｌ） を反応に加え、加え完了後に室温で２時間反応させてから炭酸カリウム （８．２９ ｇ、６０．０ ｍｍｏｌ） を反応に加え、室温で一晩反応させた。反応液に水 （１５０ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル （２００ ｍＬ×２ ）で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム （１００ ｍＬ） で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して精製し、目的化合物４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｆ）を得、白色固体 （７．５３ ｇ、収率７１％）となった。

【0081】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３５４．３ ［Ｍ ＋１］^＋。

【0082】

ステップ４：
４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｇ）

【化28】

４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｆ） （７．５０ ｇ、２１．２ ｍｍｏｌ） をメタノール （３７．５ ｍＬ） と酢酸 （７．５ ｍＬ）に溶解し、５°Ｃまで温度を下げ、さらに亜硝酸ナトリウム （２．９３ ｇ、４２．４ ｍｍｏｌ） を水 （１０ ｍＬ）に溶解し、反応液に滴下し、加え完了後に、室温で１６時間反応させた。反応液に水 （３０ ｍＬ）を滴下し、加え完了後に、濾過し、濾過ケーキを水 （１０ ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥して目的化合物４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｇ） の粗製物を得、濃い緑色固体 （１１．５ｇ）となった。

【0083】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３８３．３ ［Ｍ ＋１］^＋。

【0084】

ステップ５：
４－（３－アミノ－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｈ）

【化29】

４－（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｇ） （１１．５ ｇ、粗製物） をエタノール （４０ ｍＬ） と水 （２０ ｍＬ） に溶解し、さらに塩化アンモニウム （１５．７８ ｇ、２９５ ｍｍｏｌ） と鉄粉 （８．２３ ｇ、１４７ ｍｍｏｌ） を反応に加え、６５°Ｃで２０分間反応させ、濾過した。濾液をジクロロメタン （５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物４－（３－アミノ－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｈ） の粗製物を得、黄色固体 （７．８５ ｇ）となった。

【0085】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３６９．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0086】

ステップ６：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｊ）

【化30】

４－（３－アミノ－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｈ） （７．８５ ｇ、２１．３ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ （１Ｉ） （６．１ ｇ、２５．６ ｍｍｏｌ） （参考文献Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１７， ６０， ３５８０－３５９０，ＤＯＩ： １０．１０２１／ａｃｓ．ｊｍｅｄｃｈｅｍ．７ｂ０００３２）、２，６－ジメチルピリジン （３．４２ ｇ、３１．９ ｍｍｏｌ） とＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド （４０ ｍＬ）を、７０°Ｃまで昇温して４時間反応させた。１０％塩化ナトリウム溶液 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｊ） の粗製物を得、黄褐色の粘稠物 （１５．５０ ｇ）となった。

【0087】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５７１．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0088】

ステップ７：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｋ）

【化31】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｊ） の粗製物 （１５．５０ ｇ） をテトラヒドロフラン （６０ ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、ナトリウム水素 （１．３ ｇ、３２．６ ｍｍｏｌ、 ６０％ ｗｔ）を少しずつ加え、加え完了後に、この条件で１０分間反応させた後に、系にヨウ化メタン （４．６３ ｇ、３２．６ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｋ）を得、黄色固体 （１１．５６ ｇ、４ステップの収率９３％）となった。

【0089】

ステップ８：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル塩酸塩 （１Ｌ）

【化32】

化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｋ） （１１．５６ ｇ、１９．８ ｍｍｏｌ） をジクロロメタン （１１０ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （３５ ｍＬ）を滴下し、約３時間反応させた後に、減圧濃縮した。残留物にジクロロメタン （２００ ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調節し、分液し、水相をジクロロメタン （２００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （３００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル塩酸塩 （１Ｌ）を得、黄色固体 （１０．７ ｇ）となった。

【0090】

ステップ９：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１）

【化33】

２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル塩酸塩 （１Ｌ） （１０．７ ｇ） をアセトニトリル （１００ ｍＬ） に溶解し、系に２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン （１Ｍ） （３．６３ ｇ、２４．３ｍｍｏｌ、参考文献Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１７， ６０， ３５８０－３５９０の方法で合成される）、炭酸カリウム （６．１１ ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して一晩反応させた。水 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０：１）で分離して表題化合物２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１） （６．２ ｇ、２ステップ５３％ ）を得た。

【0091】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１８ ‐ ８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ － ４．０７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９３ － ３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．３０ － ３．２０ ｍ， ４Ｈ）， ３．１９ ‐ ３．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８５ － ２．６７ （ｍ， ５Ｈ）。

【0092】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９８．１［Ｍ ＋１］^＋。

【0093】

実施例２：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物２）

【化34】

ステップ１：
ｔｅｒｔ－ブチル ４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （２Ａ）

【化35】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１Ｊ） の粗製物 （９．２ ｇ、１６．１ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン （６０ ｍＬ） に溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、ナトリウム水素 （０．７７ ｇ、１９．３ ｍｍｏｌ， ６０％ ｗｔ）を少しずつ加え、加え完了後に、この条件で１０分間反応させた後に、 系にヨウ化メタン－ｄ３ （２．８０ ｇ、１９．３ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（１００ ｍＬ×２）で抽出し 、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル ４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （２Ａ）を得、黄色固体 （８．０ ｇ、収率８４．５％）となった。

【0094】

ステップ２：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （２Ｂ）

【化36】

化合物ｔｅｒｔ－ブチル ４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （２Ａ） （８．０ ｇ、１３．６ ｍｍｏｌ） をジクロロメタン （９０ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （３０ ｍＬ）を滴下し、約３時間反応させた後に、減圧濃縮した。残留物にジクロロメタン （１００ ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調節し、分液し、水相をジクロロメタン （１００ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （２Ｂ）を得、黄色固体 （６．４０ ｇ、収率９６．３％）となった。

【0095】

ステップ３：
２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物２）

【化37】

【0096】

２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （２Ｂ） （６．４０ ｇ、１３．１ｍｍｏｌ） をアセトニトリル （１００ ｍＬ） に溶解し、系に２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン （１Ｍ） （２．１６ ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム （３．６２ ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して５時間反応させた。水 （６０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１００ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０：１）で分離して表題化合物２－（（２－（エチル－ｄ５）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物２） （５．１ ｇ、２ステップ６４．８％ ）を得た。

【0097】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．２０ ‐ ８．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４０（ ｍ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ － ４．０７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８６ （ｍ， １Ｈ）， ３．３１ ‐ ３．０６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．８６ ‐ ２．６６ （ｍ， ５Ｈ）。

【0098】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝６０１．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0099】

実施例３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物３）

【化38】

【化39】

ステップ１：
４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ａ）

【化40】

４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （１Ｃ） （２０．１ ｇ、６２ ｍｍｏ）、（ブタン－１－イン－１－イル）トリメチルシラン （９．３ ｇ、７４ ｍｍｏｌ）、ビストリフェニルホスフェート二塩化パラジウム （４．４ ｇ、６．３ ｍｍｏｌ）、１，３－ビス（ジフェニルホスフィン）プロパン （３．８４ ｇ、９．３ ｍｍｏｌ） とフッ化セシウム （１９．０ ｇ、１２５ ｍｍｏｌ） をジメチルスルホキシド （１６０ ｍＬ） に順次加え、系を窒素ガスで３回置換し、９５°Ｃで４時間反応させた。反応終了後に室温まで冷却し、水 （１６０ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル （２００ｍＬ×３） で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で （２００ｍＬ） 洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１～５：１）で分離して４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ａ）を得、淡褐色の粘稠液体 （１１．０ ｇ、収率５３％）となった。

【0100】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３３４．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0101】

ステップ２：
４－（２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｂ）

【化41】

反応フラスコ２５０ ｍＬに、エタノール （１００ ｍＬ） と４－（２－（ブタン－１－イン－１－イル）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ａ） （１１．０ ｇ、３３ ｍｍｏｌ）を加え、０°Ｃまで冷却し、２－［（アミノオキシ）スルホニル］－１，３，５－トリメチルベンゼン （１Ｅ） （１０．７ ｇ、４９．５ ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、さらに炭酸水素ナトリウム （５．５ ｇ、６６ ｍｍｏｌ） を反応に加え、加え完了後に室温で２時間反応させてから炭酸カリウム （９．１２ ｇ、６６ ｍｍｏｌ） を反応に加え、室温で一晩反応させた。反応液に水 （２００ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル （２００ ｍＬ×２） で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム （１００ ｍＬ） で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して目的化合物４－（２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｂ）を得、白色固体 （７．８ ｇ、収率６８％）となった。

【0102】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３４９．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0103】

ステップ３：
４－（２－エチル－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｃ）

【化42】

４－（２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｂ） （７．４０ ｇ、２２．４ ｍｍｏｌ） をメタノール （４０ ｍＬ） と酢酸 （８ ｍＬ）に溶解し、５°Ｃまで温度を下げ、さらに亜硝酸ナトリウム （３．０９ ｇ、４４．８ ｍｍｏｌ） を水 （１０ ｍＬ） に溶解し、ゆっくりと反応液に滴下し、加え完了後に、室温で１６時間反応させた。反応液に水 （３０ ｍＬ）を滴下し、滴下完了後に、濾過し、濾過ケーキを水で （１０ ｍＬ×２） 洗浄し、乾燥して目的化合物４－（２－エチル－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｃ） の粗製物を得、濃い緑色固体 （１０．８ ｇ）となった。

【0104】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３７８．３ ［Ｍ ＋１］^＋。

【0105】

ステップ４：
４－（３－アミノ－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｄ）

【化43】

４－（２－エチル－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾロ［１，５－ａ］ピリジル－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｃ） （１０．８ ｇ、粗製物） をエタノール （４０ ｍＬ） と水 （２０ ｍＬ） に溶解し、さらに塩化アンモニウム （１４．９８ ｇ、０．２８ ｍｏｌ）と鉄粉 （７．８４ ｇ、０．１４ ｍｏｌ） を反応に加え、６５°Ｃで２０分間反応させ、濾過した。濾液をジクロロメタン （６０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物４－（３－アミノ－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｄ） の粗製物を得、黄色固体 （７．１２ ｇ、２ステップの収率８７．５％）となった。

【0106】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３６４．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0107】

ステップ５：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｅ）

【化44】

４－（３－アミノ－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｄ） （７．１２ ｇ、１９．６ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ （１Ｉ） （５．６１ ｇ、２３．５ ｍｍｏｌ）、２，６－ジメチルピリジン （３．１５ ｇ、２９．４ ｍｍｏｌ） とＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド （４０ ｍＬ）を、７０°Ｃまで昇温して５時間反応させた。１０％塩化ナトリウム溶液 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｅ）を得、黄褐色の固体 （１０．０ ｇ、収率９０．３％）となった。

【0108】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５６６．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0109】

ステップ６：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｆ）

【化45】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｅ） （１０．０ ｇ、１７．７ ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン （６０ ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、ナトリウム水素 （０．８５ ｇ、２１．２ ｍｍｏｌ、 ６０％ ｗｔ）を少しずつ加え、加え完了後に、この条件で１０分間反応させた後に、 系にヨウ化メタン－ｄ３ （３．０７ ｇ、２１．２ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｆ） の粗製物を得、黄色固体 （１１．７ ｇ）となった。

【0110】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８３．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0111】

ステップ７：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （３Ｇ）

【化46】

化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｆ） の粗製物 （１１．７ ｇ） をジクロロメタン （１００ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （３３ ｍＬ）を滴下し、約３時間反応させた後に、減圧濃縮した。残留物にジクロロメタン （２００ ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調節し、分液し、水相をジクロロメタン （２００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （３００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （３Ｇ） の粗製物を得、黄色固体 （１０．０ ｇ）となった。

【0112】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝４８３．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0113】

ステップ８：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物３）

【化47】

２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （３Ｇ） の粗製物 （１０．０ ｇ） をアセトニトリル （１００ ｍＬ） 中に溶解し、系に２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン （１Ｍ） （３．３５ ｇ、２２．４ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム （５．５５ ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して６時間反応させた。水 （１００ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（１５０ ｍＬ×３）で抽出し 、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール＝２０：１） で分離して表題化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物３） （７．６ ｇ、３ステップ７２．１％ ）を得た。

【0114】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．２０ ‐ ８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ － ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８６ （ｍ， １Ｈ）， ３．２９ ‐ ３．０７ （ｍ， ６Ｈ）， ２．７８（ ｓ， ４Ｈ）， ２．７２ （ｑ， ２Ｈ）， ２．５８ （ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0115】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９６．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0116】

実施例４：
２－（（２－（エチル）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（化合物４）

【化48】

【化49】

ステップ１：
ｔｅｒｔ－ブチル ４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｂ）

【化50】

反応フラスコ２５０ｍＬに、ＮＭＰ（９３ ｍＬ）を加え、さらに２－クロロ－５－フルオロ－４－ヨードピリジン（１Ａ）（９．３ ｇ、３６．２ ｍｍｏｌ）、ピペラジン－１炭酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－重水素８ （４Ａ）（４．５ ｇ、２４．２ ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（６．７ ｇ、４８．３ ｍｍｏｌ）を順次加え、１５０°Ｃまで昇温して３時間反応させた後に反応を停止した。反応液を室温まで冷却し、反応物をゆっくりと氷水（２００ ｍＬ）に加え、白色固体を析出させ、０．５時間攪拌し、濾過した。濾過ケーキを水で洗浄した後にｎ－ヘキサン（１００ ｍＬ）でスラリー化し、濾過し、乾燥して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル ４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｂ）を得、白色固体（１０．０１ ｇ、収率８５％）となった。

【0117】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３２４．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0118】

ステップ２：
４－（２－（ｔｅｒｔ－－１－イン－１－イル）－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｃ）

【化51】

４－（２－クロロ－５－フルオロピリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （４Ｂ） （２．００ ｇ、６．２ ｍｍｏ）、（ブタン－１－イン－１－イル）トリメチルシラン（０．９４ ｇ、７．４ ｍｍｏｌ）、ビストリフェニルホスフェート二塩化パラジウム（０．４４ ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、１，３－ビス（ジフェニルホスフィン）プロパン（０．３８ ｇ、０．９ ｍｍｏｌ）とフッ化セシウム（１．８９ ｇ、１２．４ ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１６ ｍＬ）に順次加え、系を窒素ガスで３回置換し、９５°Ｃで５時間反応させた。反応終了後に室温まで冷却し、水（２０ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１５：１～５：１）で分離して４Ｃ （１．２０ ｇ、収率５７％）を得た。

【0119】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３４２．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0120】

ステップ３：
４－（２－エチル－６－フルオロピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｄ）

【化52】

反応フラスコ１００ ｍＬに、エタノール（１２ ｍＬ）と４Ｃ（１．２０ ｇ、３．５ ｍｍｏｌ）を加え、０°Ｃまで冷却し、２－［（アミノオキシ）スルホニル］－１，３，５－トリメチルベンゼン（１Ｅ） （１．１４ ｇ、５．３ ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、さらに炭酸水素ナトリウム（０．５９ ｇ、７．０ ｍｍｏｌ）を反応に加え、加え完了後に室温で２時間反応させてから炭酸カリウム（０．９７ ｇ、７．０ ｍｍｏｌ）を反応に加え、室温で一晩反応させた。反応液に水（１５０ ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（２００ ｍＬ×２）で抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム（１００ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、４Ｄ粗製物（２．０ ｇ）を得た。

【0121】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３５７．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0122】

ステップ４：
４－（２－エチル－６－フルオロ－３－ニトロソピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｅ）

【化53】

前ステップの４Ｄ粗製物（２．０ ｇ、約５．６ ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ ｍＬ）と酢酸（２．０ ｍＬ）に溶解し、温度を５－１０°Ｃに下げ、さらに亜硝酸ナトリウム（０．７７ ｇ、１１．２ ｍｍｏｌ）の水溶液（２．０ ｍＬ）を反応液に滴下し、加え完了後に、室温で１６時間反応させた。反応液に水（２０ ｍＬ）を滴下し、加え完了後に、濾過し、濾過ケーキを水（５ ｍＬ×２）で洗浄し、抜いて４Ｅの粗製物（２．００ ｇ）を得た。

【0123】

ステップ５：
４－（３－アミン基－２－エチル－６－フルオロピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｆ）

【化54】

前ステップの４Ｅ粗製物 （２．００ ｇ、約５．２ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ ｍＬ）と水（１０ ｍＬ）に溶解し、さらに塩化アンモニウム（２．７８ ｇ、５２．０ ｍｍｏｌ）と鉄粉（１．４６ ｇ、２６．０ ｍｍｏｌ）を反応に加え、６５°Ｃで２ｈ反応させ、濾過した。濾液をＥＡ（１０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（１０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮した後にカラムクロマトグラフィーで（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１）精製し、４Ｆ（０．９２ ｇ、収率４８％）を得た。

【0124】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３７２．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0125】

ステップ６：
４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミン基）－２－エチル－６－フルオロピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｇ）

【化55】

４Ｆ （０．９２ ｇ、２．５ ｍｍｏｌ） 、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（１Ｉ）（０．７２ ｇ、３．０ ｍｍｏｌ） 、２，６－ジメチルピリジン（０．４０ ｇ、３．８ ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（５ ｍＬ）を、７０°Ｃまで昇温して一晩反応させた。１０％塩化ナトリウム溶液（２０ ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル（２０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮した後にカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（ｖ／ｖ）＝３０：１）により、４Ｇ（１．００ ｇ、収率７０％）を得た。

【0126】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５７４．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0127】

ステップ７：
４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミン基）－２－エチル－６－フルオロピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－ギ酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８（４Ｈ）

【化56】

４Ｇ （１５．５０ ｇ）をテトラヒドロフラン（１０ ｍＬ）に溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、水素化ナトリウム（０．１０ ｇ、２．１ ｍｍｏｌ、 ６０％ ｗｔ）を少しずつ加え、加え完了後に、この条件で１０分間反応させた後に、 系にヨウ化メタン （０．１６ ｍＬ、 ２．１ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に自然に室温まで上昇して１ｈ反応させた。１０ ｍＬメタノールを加えて反応をクエンチし、反応液をスピンドライして４Ｈ粗製物（１．２０ ｇ）を得、精製することなく、そのまま次の反応を行った。

【0128】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８８．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0129】

化合物４Ｈは、以下の方法によって合成されてもよい。

【化57】

【0130】

室温で原料４Ｊ （ＷＯ ２０１９２２８４０３Ａ１参照、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ３合成）（９４８ ｍｇ、２．０ ｍｍｏｌ）、Ｎ－Ｂｏｃ－ピペラジン－ｄ８ （５８０ ｍｇ、３．０ ｍｍｏｌ）、トリジベンジリデンアセトンジパラジウム （１８３ ｍｇ、０．２ ｍｍｏｌ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィン）－９，９－ジメチルキサンチン （２３０ ｍｇ、０．４ ｍｍｏｌ） とナトリウム－ ｔｅｒｔ －ブトキシド （５７６ ｍｇ、６．０ ｍｍｏｌ） を乾燥した１，４－ジオキサン（２０ ｍＬ）に加え、窒素ガスで３回置換し、そして１０５°Ｃまで昇温して２ｈ反応させた。室温に冷却した後にスピンドライし、直接カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１～２：１）により、褐色の泡状固体４Ｈ （５３０ ｍｇ、収率４５％）を得た。

【0131】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８８．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0132】

ステップ８：２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８）ピラゾール［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミン基）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（４Ｉ）

【化58】

０°Ｃ窒素ガス保護でトリフルオロ酢酸（５．０ ｍＬ）を前ステップで化合物４Ｈ（１．２０ ｇ 粗製物）を得たジクロロメタン（１５．０ ｍＬ）溶液に滴下し、そして自然に室温まで昇温し、攪拌を２ｈ続けた。反応液をスピンドライした後に１０ ｍＬジクロロメタンを加え、そして飽和炭酸ナトリウムでｐＨ＝８まで中和し、ジクロロメタン（１０ ｍＬ×２）で抽出し、水洗し（１０ ｍＬ×１）、飽和塩化ナトリウム（１０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮した後に４Ｉの粗製物（０．９０ ｇ）を得、精製することなく、そのまま次の反応に投入された。

【0133】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝４８８．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0134】

ステップ９：
２－（（２－（エチル）－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル－２，２，３，３，５，５，６，６－ｄ８）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（化合物４）

【化59】

室温で化合物４Ｉの粗製物（８６０ ｍｇ、約１．８ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－１－（３－ヒドロキシアクリジン－１－イル）エチル－１－オン（２９６ ｍｇ、 ２．０ ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（５００ ｍｇ、 ３．６ ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ ｍＬ）に加え、そして８０°Ｃまで昇温して５ｈ反応させた。室温に冷却した後に吸引濾過し、ジクロロメタンで濾過ケーキ（３０ ｍＬ×２）を洗浄し、濾液濃縮後にカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１）により、化合物４（８８０ ｍｇ、収率８１％）を得た。

【0135】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１９ ‐ ８．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４４ （ｄ，１Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４． ３２ － ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ ‐ ４．０９ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８６ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２４ ‐ ３．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７２ （ｑ， ２Ｈ）， ２．５９ （ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0136】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝６０１．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0137】

実施例５：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５カルボニトリル （化合物５）

【化60】

【化61】

ステップ１：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （５Ａ）

【化62】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （３Ｅ） （２．８ ｇ、５．０ ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン （３０ ｍＬ） に溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、ナトリウム水素 （０．２４ ｇ、６．０ ｍｍｏｌ、 ６０％ ｗｔ）を少しずつ加え、加え完了後に、この条件で１０分間反応させた後に、 系にヨウ化メタン （１．４２ ｇ、１０ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （５０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （５０ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （５Ａ） の粗製物を得、黄色固体 （２．８ ｇ）となった。

【0138】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８０．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0139】

ステップ２：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （５Ｂ）

【化63】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （５Ａ） の粗製物 （２．８ ｇ） をジクロロメタン （３０ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （１５ ｍＬ）を滴下し、約３時間反応させた後に、減圧濃縮した。残留物にジクロロメタン （１００ ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調節し、分液し、水相をジクロロメタン （１００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （５Ｂ）を得、黄色固体 （２．０ ｇ、２ステップの収率８３．３％）となった。

【0140】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝４８０．１［Ｍ ＋１］^＋。

【0141】

ステップ３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物５）

【化64】

２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （０．３１ ｇ、０．６５ ｍｍｏｌ） をアセトニトリル （１０ ｍＬ） に溶解し、系に２－クロロ－１－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）エチル－１－オン （中間体２） （０．１５ ｇ、１．０ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム （０．２７ ｇ、２．０ ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して６時間反応させた。水 （５０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、ジクロロメタン （５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール＝２０：１）で分離して表題化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル－３－ｄ）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物５） （９０ ｍｇ、２３％ ）を得た。

【0142】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１８ ‐ ８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．４３ （ｄ， １Ｈ）， ４．２５ （ｄ， １Ｈ）， ４．１１ （ｄｄ， １Ｈ）， ３．８９ （ｄ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２８ ‐ ３．０６ （ｍ， ７Ｈ）， ２．８１ ‐ ２．６６ （ｍ， ６Ｈ）， １．３１ （ｔ， ３Ｈ）。

【0143】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９４．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0144】

実施例６：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物６）

【化65】

ステップ１：
エチル ２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸エステル－ｄ２ （６Ａ）

【化66】

２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－ ５－カルボニトリル （５Ｂ） （０．３１ ｇ、０．６５ ｍｍｏｌ） 的アセトニトリル（１０ ｍＬ）溶液に炭酸カリウム （０．１４ ｇ、１ ｍｍｏｌ） とエチル２－ブロモ酢酸エステル－ｄ２ （中間体３） （０．１７ ｇ、１ ｍｍｏｌ）を順次添加し、混合物を室温で１時間攪拌した。反応終了後に、混合物を飽和食塩水 （３０ｍＬ） で希釈し、且つ酢酸エチル （３０ｍＬ×２） で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （酢酸エチル：石油エーテル＝１：１） で精製してエチル ２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸エステル－ｄ２ （６Ａ）を得、淡黄色固体 （０．３２ ｇ、８６．７％）となった。

【0145】

ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ） ： ｍ／ｚ ＝５６８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0146】

ステップ２：
２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （６Ｂ）

【化67】

エチル ２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸エステル－ｄ２ （６Ａ） （０．３２ ｇ、０．５６ ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン （６ ｍＬ）に溶解し、メタノール （２ ｍＬ） と水 （２ ｍＬ）を加え、均一に攪拌した後に水酸化リチウム一水合物 （８４ ｍｇ、２ ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間反応させ、塩酸 （１Ｎ水溶液） でｐＨを５に調整し、酢酸エチル （５０ ｍＬ × ２）で抽出し、有機相を合わせ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （６Ｂ）を得、淡黄色固体 （０．２４ ｇ、収率７９％）となった。

【0147】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５４０．２ ［Ｍ＋１］^＋。

【0148】

ステップ３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物６）

【化68】

２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （６Ｂ） （０．２４ ｇ、０．４５ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （５ ｍＬ） に溶解し、系にトリエチルアミン （０．１５ ｇ、１．５ ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ （０．１９ ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間攪拌した後に、４－ヒドロキシアゼチジン塩酸塩 （０．７ｍｍｏｌ、７６ｍｇ） のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （５ ｍＬ） 溶液を加え、室温で１時間反応させた。水 （３０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、ジクロロメタン （５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール＝２０：１） で分離して表題化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（化合物６） （０．１２ ｇ、４５％ ）を得た。

【0149】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１９ ‐ ８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ ‐ ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ ‐ ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ ‐ ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９６ ‐ ３．８７ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２６ （ｓ， ４Ｈ）， ２．８４ （ｓ， ４Ｈ）， ２．７２ （ｑ， ２Ｈ）， ２．５９ （ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0150】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９５．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0151】

実施例７：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシ－アゼチジニル－１－イル－３－ｄ）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミン基）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル（化合物７）

【化69】

２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （３Ｇ） の粗製物 （３００ ｍｇ） をアセトニトリル （５ ｍＬ） に溶解し、系に中間体２ （１０３ ｍｇ、０．７ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム （１７２ ｍｇ、１．３ ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して６時間反応させた。水 （１０ ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （１０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（ｖ／ｖ）＝２０：１）で分離して白色固体化合物７ （２００ ｍｇ、５４％ ）を得た。

【0152】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１７－８．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１８－７．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．４６－４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．２９－４．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１４－４．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．９２－３．８９ （ｍ， １Ｈ）， ３．２６－３．１５ （ｍ， ６Ｈ）， ２．８３（ ｓ， ４Ｈ）， ２．７５－２．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５４（ ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0153】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９７．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0154】

実施例８：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物８）

【化70】

ステップ１：
エチル ２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸エステル－ｄ２ （８Ａ）

【化71】

化合物３Ｇ （０．３５ ｇ、０．７３ ｍｍｏｌ） のアセトニトリル（１０ ｍＬ）溶液に炭酸カリウム （０．２１ ｇ、１．５ ｍｍｏｌ） とエチル２－ブロモ酢酸エステル－ｄ２ （中間体３） （０．１７ ｇ、１ ｍｍｏｌ）を順次添加し、混合物を室温で１時間攪拌した。反応終了後に、混合物を飽和食塩水 （３０ｍＬ） で希釈し、且つ酢酸エチル （３０ｍＬ×２） で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル（ｖ／ｖ）＝１：１）で精製し、淡黄色固体（０．３８ ｇ、収率９２％）を得た。

【0155】

ステップ２：
２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （８Ｂ）

【化72】

エチル ２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸エステル－ｄ２ （８Ａ） （０．３８ ｇ、０．６７ ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン （９ ｍＬ）に溶解し、メタノール （３ ｍＬ） と水 （３ ｍＬ）を加え、均一に攪拌した後に水酸化リチウム一水合物 （１２６ ｍｇ、３ ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間反応させ、塩酸 （１Ｎ水溶液） でｐＨを５に調整し、酢酸エチル （５０ ｍＬ × ２）で抽出し、有機相を合わせ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （８Ｂ）を得、淡黄色固体 （０．３２ ｇ、収率８８％）となった。

【0156】

ステップ３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物８）

【化73】

２－（４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピペリジン－５－イル）ピペラジン－１－イル）酢酸－２，２－ｄ２ （８Ｂ） （０．３２ ｇ、０．５９ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （１０ ｍＬ） に溶解し、系にトリエチルアミン （０．２０ ｇ、２．０ ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ （０．２７ ｇ、０．７ ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間攪拌した後に、４－ヒドロキシアゼチジン塩酸塩 （１ ｍｍｏｌ、０．１１ ｇ） のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （５ ｍＬ） 溶液を加え、室温で１時間反応させた。水 （３０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、ジクロロメタン （５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０：１）で分離して２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル－１，１－ｄ２）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物８） （０．２８ ｇ、７９％ ）を得た。

【0157】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ８．１９ ‐ ８．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ ‐ ７．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４４ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ ‐ ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ ‐ ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ ‐ ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ ‐ ３．８４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２３ （ｓ， ４Ｈ）， ２．７９ ‐ ２．６６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．６２ （ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0158】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９８．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0159】

実施例 ９：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物９）

【化74】

ステップ１：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ａ）

【化75】

４－（３－アミノ－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル （３Ｄ） （１．０２ ｇ、２．８ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （中間体４） （０．６８ ｇ、２．８ ｍｍｏｌ） と２，６－ジメチルピリジン （０．６０ ｇ、５．６ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド （２０ ｍＬ） に順次加え、７０°Ｃまで昇温して５時間反応させた。１０％塩化ナトリウム溶液 （６０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （６０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （６０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （石油エーテル：酢酸エチル（ｖ／ｖ）＝３：１） で分離して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ａ）を得、黄褐色の固体 （１．０２ ｇ、収率６４％）となった。

【0160】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５７０．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0161】

ステップ２：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ｂ）

【化76】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ａ） （０．５１ ｇ、０．８９ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （１０ ｍＬ） に溶解し、炭酸カリウム （０．２７ ｇ、２ ｍｍｏ）を加えた。系にヨウ化メタン （０．１９ ｇ、１．３４ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （５０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （５０ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ｂ）を得、黄色固体 （０．５２ ｇ、収率１００％）となった。

【0162】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８４．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0163】

ステップ３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－ ５－カルボニトリル （９Ｃ）

【化77】

化合物（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ｂ） （０．５２ ｇ、 ０．８９ ｍｍｏｌ） をジクロロメタン （１０ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （３ ｍＬ）を滴下し、約２時間反応させた後に、減圧濃縮して目的化合物９Ｃのトリフルオロ酢酸塩（０．５８ ｇ、褐色の粘稠物）を得、粗製品は、そのまま次の反応を行った。

【0164】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝４８４．２［Ｍ ＋１］^＋。

【0165】

ステップ４：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物９）

【化78】

化合物９Ｃのトリフルオロ酢酸塩 （０．５８ ｇ） をアセトニトリル （１５ ｍＬ） に溶解し、系に炭酸カリウム （０．４１ ｇ、３ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン （１Ｍ） （０．２２ ｇ、１．５ ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して３時間反応させた。水 （５０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （５０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （５０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール＝２０：１） で分離して表題化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物９） （０．３９ ｇ、２ステップ７３％ ）を得た。

【0166】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ４．６７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ ‐ ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．２４ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ ‐ ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ － ３．８６ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２２ （ｓ， ４Ｈ）， ３．１７ ‐ ３．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７８ （ｓ， ４Ｈ）， ２．７２ （ｑ， ２Ｈ）， ２．６５ （ｓ， １Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0167】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５９７．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0168】

実施例１０：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１０）

【化79】

ステップ１：
ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１０Ａ）

【化80】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （９Ａ） （０．５１ ｇ、０．８９ ｍｍｏｌ） をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド （１０ ｍＬ） に溶解し、炭酸カリウム （０．２７ ｇ、２ ｍｍｏ）を加え、系にヨウ化メタン－ｄ３（０．１９ ｇ、１．３４ ｍｍｏｌ）を滴下した。加え完了後に、室温で３０分間反応させた。水 （５０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （５０ ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （１００ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して目的化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１０Ａ）を得、黄色固体 （０．５１ ｇ、収率９８％）となった。

【0169】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝５８７．２［Ｍ ＋１］^＋。
ステップ２：

【0170】

２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－ ５－カルボニトリル （１０Ｂ）

【化81】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（（５－シアノ－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－２－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－２－エチル－６－フルオロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－５－イル）ピペラジン－１－カルボン酸エステル （１０Ａ） （０．５１ ｇ、０．８８ ｍｍｏｌ） をジクロロメタン （１０ ｍＬ） に溶解し、系にトリフルオロ酢酸 （３ ｍＬ）を滴下し、約２時間反応させた後に、減圧濃縮して目的化合物１０Ｂのトリフルオロ酢酸塩（０．６２ ｇ、褐色の粘稠物）を得、粗製品は、そのまま次の反応を行った。

【0171】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝４８７．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0172】

ステップ３：
２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１０）

【化82】

化合物１０Ｂのトリフルオロ酢酸塩（０．６２ ｇ） をアセトニトリル （１５ ｍＬ） に溶解し、系に炭酸カリウム （０．４６ ｇ、３．３ ｍｍｏｌ）、２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン （１Ｍ） （０．２２ ｇ、１．５ ｍｍｏｌ）を順次加え、８０°Ｃまで昇温して４時間反応させた。水 （６０ ｍＬ） を加えて反応をクエンチし、酢酸エチル （６０ ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水 （６０ ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧濃縮して、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ジクロロメタン／メタノール（ｖ／ｖ）＝２０：１） で分離して表題化合物２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル－２，３，５，６－ｄ４）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物１０） （０．３５ ｇ、２ステップ６６％ ）を得た。

【0173】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２７ （ｄ， １Ｈ）， ６．４４ （ｄ， １Ｈ）， ４．６６ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ ‐ ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ ‐ ４．２２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ ‐ ４．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．９３ ‐ ３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ４Ｈ）， ３．１８ ‐ ３．０４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９０ （ｓ， １Ｈ）， ２．７７ ‐ ２．６６ （ｍ， ６Ｈ）， １．３２ （ｔ， ３Ｈ）。

【0174】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝６００．３［Ｍ ＋１］^＋。

【0175】

実施例１１：化合物Ａ結晶形Ｉの製造
実施例３で製造された２－（（２－エチル－６－フルオロ－５－（４－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）（メチル－ｄ３）アミノ）－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－カルボニトリル （化合物Ａ即ち化合物３）の遊離塩基 （９．１ ｇ、１５．３ ｍｍｏｌ） をエタノール （５０ ｍＬ） に加え、７５°Ｃまで昇温して２ｈ攪拌した後に溶解し、ゆっくりと攪拌しながら室温まで徐々に冷却し、大量の白色固体を析出した。吸引濾過し、濾過ケーキをエタノール （１０ ｍＬ ）で洗浄した後に４０ °Ｃで２４ｈ真空乾燥して化合物Ａの結晶形Ｉを得、白色固体（６．２ ｇ、収率６８％ ）となった。そのＸＲＰＤ図を図１に示し、ＸＲＰＤ回折ピークアウトリストを表１に示す。ＴＧＡ図を図２に示し、ＤＳＣ図を図３に示し、結果によると、サンプルを１５０°Ｃまで加熱すると１．３％の重量減少が見られ、且つ１７８．７°Ｃ （開始温度）に１つの熱吸収ピークがあった。動的水分吸着器（ＤＶＳ）図を図４に示し、２５°Ｃ／８０％ＲＨで水分吸着は０．２０％である。ＰＬＭ図を図５に示し、結果によると、結晶粒径は、５０ μｍ未満である。

【表1】

【0176】

試験例
１． 溶解性試験
化合物Ａ結晶形Ｉ（実施例１１）の水と３種類の生物溶媒における動的溶解度を評価した。５～１０ ｍｇ／ｍＬの試料濃度で３７°Ｃ条件で回転混合の方式（２５ ｒｐｍ）を利用して、サンプルの水、ＳＧＦ、ＦａＳＳＩＦとＦｅＳＳＩＦの４種類の溶媒系における動的溶解度（１、２、４と２４時間）を測定した。各時点のサンプルを遠心分離（１２０００ ｒｐｍ、５ ｍｉｎ）で濾過し（０．４５ μｍ ＰＴＦＥフィルターヘッド）、濾液のＨＰＬＣ濃度とｐＨ値を測定した。溶解度試験の結果を表２にまとめる。

【表2】

【0177】

Ｓ：溶解度（ｍｇ／ｍＬ）、
ＬＯＱ：０．０３ μｇ／ｍＬ
Ｈ_２Ｏ、ＳＧＦ、ＦａＳＳＩＦとＦｅＳＳＩＦの開始ｐＨは、それぞれ６．９、１．８、６．５と５．０である。

【0178】

生物溶媒の調製
模擬胃液の調製（ＳＧＦ）： ０．１ ｇのＮａＣｌと０．０５ ｇのトラウナトンＸ－１００を秤量してメスフラスコ５０ ｍＬに入れ、精製水を加えて溶解した。６７．５ μＬの濃塩酸（１２Ｍ）を加え、１Ｍの塩酸又は１ＭのＮａＯＨ溶液でｐＨを１．８に調整した。精製水を加えて定容した。

【0179】

絶食状態を模擬した腸液の調製（ＦａＳＳＩＦ）： ０．１７ ｇの無水ＮａＨ_２ＰＯ_４、０．０２１ ｇのＮａＯＨと０．３１ ｇ のＮａＣｌを秤量してメスフラスコ５０ ｍＬに入れた。約４８ ｍＬの精製水を加えて溶解し、１Ｍの塩酸又は１ＭのＮａＯＨ溶液でｐＨを６．５に調製した。精製水を加えて定容し、且つ０．１１ ｇのＳＩＦ粉末を入れて溶解した。

【0180】

摂食状態を模擬した腸液の調製（ＦｅＳＳＩＦ）： ０．４１ ｍＬの氷醋酸、０．２０ ｇのＮａＯＨと０．５９ ｇのＮａＣｌを取ってメスフラスコ５０ ｍＬに入れた。約４８ ｍＬの精製水を加えて溶解し、１Ｍの塩酸又は１ＭのＮａＯＨ溶液でｐＨを５．０に調製した。精製水を加えて定容し、且つ０．５６ ｇのＳＩＦ粉末を秤量して溶解した。

【0181】

２． 安定性試験
結晶形Ｉ（実施例１１）を２５°Ｃ／６０％ＲＨと４０°Ｃ／７５％ＲＨ条件で１２日放置した後に、サンプルの純度を検出して結晶形の変態を観察し、結果を表３に示す。

【表3】

【0182】

結論：本発明の化合物Ａの結晶形Ｉは、優れた安定性を有した。

【0183】

生物実験
１． 生物学的インビトロ実験
オートクリン運動因子は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）をリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）に変換する血漿ホスホジエステラーゼであるため、ＬＰＡ形成を用いてオートクリン運動因子阻害剤の効力を評価する。化合物の効力は、混合したエクスビボヒト血漿で評価された。

【0184】

ヘパリンを採取して抗凝固全血を遠心分離した後に血漿を採取した。９５－μＬの血漿に５－μＬ 勾配希釈した被検化合物又はＤＭＳＯを加え、３７°Ｃで２ｈインキュベートした後に終了液（４０ ｍＭ リン酸水素二ナトリウムｂｕｆｆｅｒ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３０ ｍＭ クエン酸、ｐＨ＝４）を加えた。インキュベート前後の血漿中のＬＰＡは、ＬＣ－ＭＳＭＳで検出した。研究血漿中のＬＰＡ１８：２又は２０：４濃度を確定するために、ブタンオールで一連の希釈を行うことによってＬＰＡ １８：２又は２０：４の校正標準品として、２００００、１００００、５０００、２０００、１０００、５００、２００、１００、５０、２０と１０ｎｇ／ｍＬを製造した。１．５ｍＬの微量遠心分離管の中の２７．０μＬのブランク血漿に３μＬの校正標準溶液を加え、１Ｘ校正標準品を生成した。１．５ｍＬの微量遠心分離管に３０．０μＬの標準品又は研究血漿を添加した。研究血漿又は校正標準品を入れた１．５ｍＬの微量遠心分離管１個につき、２００μＬのブタンオール（内部制御用２５．０ｎｇ／ｍＬＬＰＡ１７：０を含む）を加えた。１分間ボルテックス振とうして１００００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離した後に、１８０μＬの上清を９６ウェルプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて標準品とともに血漿中のＬＰＡ１８：２濃度を定量した。簡単に言えば、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（２．１ｘ５０ｍｍ、１．７μｍ）を用いてＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行うために８μＬの溶液を注入し、ここで流動相Ａ［２０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡＣ水溶液（０．１％ＦＡ）］と流動相Ｂ［５ｍＭ ＮＨ_４ＯＡＣ水溶液／ＡＣＮ中の０．２％ＦＡ＝５：９５］を用いた。ＬＰＡ１８：２に対する質量分析計パラメータの最適化は、脱プロトン化分子イオンによって行われ、ＬＰＡ１８：２についてｍ／ｚ ４３３．２（［Ｍ－Ｈ］－）で、ＬＰＡ２０：４について４５７．２で、ＬＰＡ１８：２とＬＰＡ２０：４についていずれもｍ／ｚ １５２．８で豊富な生成物イオンが得られた。多重反応モニタリング（ＭＲＭ）負噴射イオン化モードで定量データを取得した。

【0185】

インキュベートされた血漿とインキュベートされない血漿中のＬＰＡのレベル変化を比較することにより、異なる濃度の化合物によるＬＰＡ生成の抑制率を確定し、抑制率として化合物ＩＣ_５０を計算し、各ウェルの相対濃度＝各ウェルの濃度－ベースラインの平均濃度である。

【0186】

抑制率％＝（対照ウェルの平均相対濃度－被検ウェルの平均相対濃度）／対照ウェルの平均相対濃度×１００％であり、曲線を抑制率（ｙ軸）と化合物濃度（ｘ軸）でプロットし、且つＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０により対数（阻害剤）と正規化応答（可変傾き）でフィッティングした。

【表4】

【0187】

２、薬物動態試験
２．１ラットの薬物動態試験
実験目的：単回静脈内と強制経口により被験物をＳＤラットに投与し、ラット血漿中の被験物の濃度を測定し、被験物のラット体内における薬物動態特性と生物利用度を評価した。

【0188】

実験対象：本発明の実施例３の化合物。

【0189】

実験動物：雄性ＳＤラット、 ２２０ ｇ程度、６～８週齢、６匹／化合物。成都達碩実験動物有限公司から購入された。

【0190】

実験方法：試験当日、６匹のＳＤラットを体重に応じて無作為に群を分けた。投与１日前に禁水なしで１２～１４ｈ絶食させ、投与後４ｈに給食した。表５に従って投与した。

【表5】

【0191】

＊用量は遊離塩基とする。

【0192】

２．２生物サンプル採取
投与前及び投与後にイソフルラン麻醉で眼窩から０．１ ｍＬ採血し、ＥＤＴＡＫ２遠心分離管に入れた。５０００ｒｐｍ、４°Ｃで１０ｍｉｎ遠心分離し、血漿を採取した。

【0193】

Ｇ１群のサンプル採取時点：０、 ５、 １５、 ３０ ｍｉｎ、 １、 ２、 ４、 ６、 ８、２４ ｈ。

【0194】

Ｇ２群のサンプル採取時点：０、 １５、 ３０ ｍｉｎ、 １、 ２、 ４、 ６、 ８、２４ ｈ。

【0195】

分析検出前に、すべてのサンプルは－８０°Ｃに保存されていた。

【0196】

２．３サンプルの前処理
３０μＬの血漿サンプル、標準品と対照サンプルを取り、２００μＬ の内部標準アセトニトリル含有溶液を加え、ボルテックスして均一に混合した後に、４°Ｃ、１２０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離した。１７０μＬの上清を９６ウェルプレートに入れ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、サンプル注入量は２ μＬである。

【0197】

主な薬物動態パラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ８．０ソフトウェア非コンパートメントモデルで分析した。実験結果を表６に示す。

【表6】

【0198】

結論：本発明の化合物、特に化合物２、９、１０は、ラットにおいて良好な薬物動態、高いバイオアベイラビリティーを有し、化合物５、６、７は、速やかに効果を発揮する。

【0199】

２．２マウスの薬物動態試験
試験目的：被験物のマウス体内における薬物動態特性と生物利用度を評価した。

【0200】

試験動物：Ｃ５７マウス、～２５ ｇ、雄性、６～８週齢、３６匹、成都達碩実験動物有限公司から購入され、生産許可証番号：ＳＣＸＫ（川）２０２０－０３０。

【0201】

試験対象：化合物Ｉ－１（特許ＷＯ ２０１９２２８４０３Ａ１化合物１０１）と化合物３。

【0202】

試験設計：

【表7】

静脈内投与溶媒：５％ＤＭＡ＋５％Ｓｏｌｕｔｏｌ＋９０％Ｓａｌｉｎｅ、強制経口投与溶媒：０．５％ＭＣ
投与前及び投与後にイソフルラン麻醉で眼窩から０．０６ ｍＬ採血し、ＥＤＴＡＫ２遠心分離管に入れ、５０００ ｒｐｍ、４°Ｃで１０ｍｉｎ遠心分離し、血漿を採取した。採血時点：０、５、１５、３０ｍｉｎ、１、２、４、６、８、１０、２４ｈ。分析検出前に、すべての血漿サンプルは、－８０°Ｃに保存されていた。実験結果を表８に示す。

【表8】

【0203】

結論：本発明の化合物、特に化合物３は、マウスにおいて良好な薬物動態、高いバイオアベイラビリティーを有した。

【0204】

２．３ 犬の薬物動態試験
試験目的：被験物の犬体内における薬物動態特性と生物利用度を評価した。

【0205】

試験動物：Ｂｅａｇｌｅ犬、８～１０ ｋｇ、雄性、０．５～１．５歳、１２匹、北京瑪斯生物技術有限公司から購入され、生産許可証番号：ＳＣＸＫ（京）２０１６－００１。

【0206】

試験対象：化合物Ｉ－１（特許ＷＯ ２０１９２２８４０３Ａ１化合物１０１）と化合物３。

【0207】

試験設計：

【表9】

静脈内投与溶媒：５％ＤＭＳＯ＋５％Ｓｏｌｕｔｏｌ＋９０％Ｓａｌｉｎｅ、
強制経口投与溶媒：１％ＤＭＳＯ＋１％Ｓｏｌｕｔｏｌ＋９８％（０．５％ＭＣ）、
投与前及び投与後に前肢静脈から１．０ ｍＬ採血し、ＥＤＴＡＫ２遠心分離管に入れ、５０００ ｒｐｍ、４°Ｃで１０ ｍｉｎ遠心分離し、血漿を採取した。採血時点：０、５、１５、３０ｍｉｎ、１、２、４、６、８、１０、１２、２４ｈ。分析検出前に、すべての血漿サンプルは、－８０°Ｃに保存されていた。実験結果を表１０に示す。

【表10】

【0208】

結論：本発明の化合物、特に化合物３は、犬において良好な薬物動態、高いバイオアベイラビリティーを有した。

【0209】

２．４ サルの薬物動態試験
試験目的：被験物のサル体内における薬物動態特性と生物利用度を評価した。

【0210】

試験動物：カニクイザル、２．４～５．９ ｋｇ、雄性、３～５．５週齢、１２匹、蘇州西山中科実験動物有限公司から購入され、生産許可証番号：ＳＣＸＫ（蘇） ２０１８－０００１。

【0211】

試験対象：化合物Ｉ－１（特許ＷＯ ２０１９２２８４０３Ａ１化合物１０１）と化合物３。

【0212】

試験設計：

【表11】

静脈内投与溶媒：５％ＤＭＳＯ＋５％Ｓｏｌｕｔｏｌ＋９０％Ｓａｌｉｎｅ、
強制経口投与溶媒：１％ＤＭＳＯ＋１％Ｓｏｌｕｔｏｌ＋９８％（０．５％ＣＭＣ－Ｎａ）
投与前及び投与後に前肢静脈から１．０ ｍＬ採血し、ＥＤＴＡＫ２遠心分離管に入れ、５０００ ｒｐｍ、４°Ｃで１０ ｍｉｎ遠心分離し、血漿を採取した。採血時点：０、５、１５、３０ｍｉｎ、１、２、４、６、８、１０、１２、２４ｈ。分析検出前に、すべての血漿サンプルは、－８０°Ｃに保存されていた。実験結果を表１２に示す。

【表12】

【0213】

結論：本発明の化合物、特に化合物３は、サルにおいて良好な薬物動態、高いバイオアベイラビリティーを有した。

【0214】

２．５ ｈＥＲＧカリウムチャネル作用試験
試験化合物：化合物Ｉ－１（特許ＷＯ ２０１９２２８４０３Ａ１化合物１０１）及び実施例の化合物３。

【0215】

電気生理学的手動パッチクランプ法を用いて実施例の化合物の ｈＥＲＧ カリウムチャネル （ｈｕｍａｎ Ｅｔｈｅｒ－a－ｇｏ－ｇｏ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ） 電流に対する影響を試験した。

【表13】

【0216】

細胞株及び細胞培養：
ｈＥＲＧイオンチャネルを安定に発見するＨＥＫ２９３細胞株は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から購入された。該細胞株は、８５％ＤＭＥＭ、１０％透析ウシ胎児血清、０．１ ｍＭ ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、１００ Ｕ／ｍＬペニシリン－ストレプトマイシン溶液、２５ ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ μｇ／ｍＬブラストサイジンと４００ μｇ／ｍＬ遺伝子マイシン（Ｇ４１８）の培地で培養された。細胞密度が培養皿の底面積の４０％～８０％に成長した時点で、トリプシンにより消化し、週に３回継代した。実験前に、細胞を５×１０^５の密度で６ ｃｍの培養皿に培養し、１ μｇ／ｍＬドキシサイクリンを加えて４８時間誘導し、そして細胞を消化し、その後の手動パッチクランプの実験に備えてスライドに接種した。

【0217】

溶液の調製：
細胞外液（ｍＭ単位）：１３２塩化ナトリウム、４塩化カリウム、３塩化カルシウム、０．５塩化マグネシウム、１１．１ブドウ糖、１０ ＨＥＰＥＳ （水酸化ナトリウムを用いてｐＨを７．３５に調製した）。

【0218】

被検化合物溶液の調製：
試験化合物は、まずＤＭＳＯで溶解して最終濃度３０ ｍＭの原液に調製した。原始原液はその後、一定の比率でＤＭＳＯを用いてその他の４つのグラジエント系溶液に希釈し、濃度は、それぞれ１０、３．３３、１．１１と０．３７ ｍＭである。実験開始前に、細胞外液を用いて被検化合物グラジエント系溶液を再び１：１０００の比率で一連のグラジエント濃度の作業溶液に希釈し、その最終濃度は、それぞれ３０、１０、３．３３、１．１１と０．３７ μＭである。５つの異なるグラジエント濃度の作業溶液は、化合物によるｈＥＲＧカリウムイオンチャネルの潜在的抑制作用を測定し、且つ用量効果曲線をフィッティングし、ＩＣ_５０を計算するためのものである。

【0219】

実験ステップ：
１． 培養皿にＨＥＫ２９３細胞を乗せた小型スライドを顕微操作台の灌流槽に置いた。

【0220】

２． Ｏｌｙｍｐｕｓ ＩＸ５１、ＩＸ７１又はＩＸ７３倒立顕微鏡下で適切な細胞を視野の中央に調整し、×１０倍対物レンズを用いてガラス電極の先端を見つけ、視野の中央に置いた。そしてマイクロマニピュレーターを用いて電極を下方に移動させ、同時に、電極が徐々に細胞に近づくように、粗フォーカススパイラルを調整した。

【0221】

３． 細胞にほぼ近づく時に、×４０倍の対物レンズに切り替えて観察し、マイクロマニピュレーターにより、電極を細胞の表面に徐々に近づけるようにノッチを微調整した。

【0222】

４． 電極先端と細胞膜との間に１ＧΩよりも高い抵抗を有する封着が形成されるように負圧を与えた。

【0223】

５． 電圧クランプモードで瞬時容量電流Ｃ_ｆａｓｔを補償した。そして短時間の負圧を繰り返し与えて膜を破り、最終的に全細胞記録モードを形成した。

【0224】

６． 膜電位を－６０ ｍＶにクランプした条件で、低速容量電流Ｃ_ｓｌｏｗ、細胞膜容量（Ｃｍ）と入力膜抵抗（Ｒａ）をそれぞれ補償した。

【0225】

７． 細胞が安定した後に、クランプ電圧を－９０ ｍＶに変更し、サンプリング周波数を２０ ｋＨｚに、濾過周波数を１０ ｋＨｚに設定した。リーク電流の検出条件は、クランプ電圧を－８０ ｍＶに変更し、時間を５００ ｍｓとしたことである。

【0226】

８． ｈＥＲＧ電流試験方法は、次のとおりである。脱分極指令電圧を４．８秒印加して膜電位を－８０ ｍＶから＋３０ ｍＶに脱分極させ、そして瞬間的に再分極電圧を５．２秒印加して膜電位を－５０ ｍＶに下げ、チャネル非活性化を除去することでｈＥＲＧテール電流を観察した。テール電流のピーク値は、ｈＥＲＧ電流の大きさである。

【0227】

９． 被検化合物を検出するためのｈＥＲＧ電流は、投与前にいずれも１２０秒間継続して記録されて被験細胞のｈＥＲＧ電流生成の安定性を評価した。評価基準の許容範囲内にある安定化細胞のみが、その後の化合物検出に進むことができる。

【0228】

１０． 被検化合物によるｈＥＲＧ電流抑制作用の試験：まず０．１％ＤＭＳＯを含む細胞外液で測定して得られたｈＥＲＧ電流を検出ベースラインとした。ｈＥＲＧ電流を少なくとも５分間安定させた後に、被検化合物を含む溶液を低濃度から高濃度へ順に細胞周辺に灌流した。各灌流終了後に、化合物が細胞に十分に作用するように約５分間待ち、同時にｈＥＲＧ電流を記録した。記録された電流が安定した後に、最後の５つのｈＥＲＧ電流値を記録し、その平均値を最終的に特定濃度での電流値とした。化合物試験が完了した後に、１５０ ｎＭドフェチリドを同一細胞に加え、その電流を完全に抑制し、該細胞の陽性対照とした。同時に、陽性化合物ドフェチリドは、試験薬の実験終了前後に同一のパッチクランプシステムを用いて同期検出を行うことによって、検出システム全体の信頼性と感度を確保した。

【0229】

データ分析：電流抑制率は、以下の式で計算され、データは、ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒ又はＣｌａｍｐｅｘ１０．２ソフトウェアによって出力され、用量効果曲線は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウェアによってフィッティングされてＩＣ_５０値を計算した。実験結果を表１１に示す。

【数1】

【表14】

【0230】

化合物がｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対して抑制作用を有するかどうかを評価し、広く認められて使用される判断基準は、以下のとおりである。有意でない抑制作用：ＩＣ_５０＞１０μＭ、中程度の抑制：１μＭ＜ＩＣ_５０＜１０μＭ、有意な抑制作用：ＩＣ_５０＜１μＭである。試験結果から見ると、化合物３のｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する抑制作用は、有意ではなかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【手続補正書】

【提出日】2023-07-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

に示す化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶であって、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、それぞれ独立して水素又は重水素から選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０のうちの少なくとも１つが重水素原子から選択され、且つ式（Ｉ）の化合物が

の構造ではないことを条件とする、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項2】

Ｒ_２２は、Ｈから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項3】

Ｒ_１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２とＲ_３は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６とＲ_７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４とＲ_１５は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１６は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２３とＲ_２４は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項4】

Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６とＲ_１７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９、Ｒ_３０、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２５、Ｒ_２６、Ｒ_２７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０とＲ_２１は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_１、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２５、Ｒ_２６とＲ_２７は、重水素から選択され、又は、
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_２３、Ｒ_２４、Ｒ_２８、Ｒ_２９とＲ_３０は、重水素から選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項5】

前記化合物は、

の構造のうちの１つから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶。

【請求項6】

式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉであって、

Ｃｕ－Ｋα放射線を用いて、そのＸ－線粉末回折パターンは、９．３５±０．２°、１０．３２±０．２°、１２．０８±０．２°と１５．１０±０．２°の２θ位置に特徴的な回折ピークを有する、ことを特徴とする式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項7】

そのＸ－線粉末回折パターンは、１７．２９±０．２°、１８．２６±０．２°と２０．５８±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する、請求項６に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項8】

そのＸ－線粉末回折パターンは、６．９２±０．２°、７．２３±０．２°、１３．４６±０．２°、１９．４７±０．２°と２４．８５±０．２°の２θ位置にも特徴的な回折ピークを有する、請求項７に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項9】

そのＸ－線粉末回折パターンは、基本的に図１に示される、請求項８に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項10】

そのＴＧＡ曲線は、基本的に図２に示され、そのＤＳＣ図は、基本的に図３に示される、請求項６に記載の式（Ａ）の化合物の結晶形Ｉ。

【請求項11】

に示す式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ－Ｂ）、式（ＩＩ－Ｃ）の化合物。

【請求項12】

式（Ａ）：

の化合物を製造する方法であって、
式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を有機溶媒Ａに溶解し、２－クロロ－１－（３ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エタノン、塩基とを７０～９０°Ｃで反応させて、式（Ａ）の化合物を得るステップを含む、ことを特徴とする式（Ａ）の化合物を製造する方法。

【請求項13】

前記有機溶媒Ａは、アセトニトリルと、２－メチルテトラヒドロフランと、エチルベンゼンと、ホルミルギ酸エチルメチルと、ジエチレングリコール－ｔ－ブチルエーテルとのうちの少なくとも１つから選択され、前記塩基は、炭酸カリウムと炭酸ナトリウムとのうちの少なくとも１つである、ことを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。

【請求項14】

式（Ａ）の化合物の製造方法は、

式（ＩＩ－Ｄ）の化合物、２－クロロ－４－（４－フルオロフェニル）チアゾール－５－シアノ、２，６－ジメチルピリジンと非プロトン性極性溶媒を６０～８０°Ｃで反応させて、化合物（ＩＩ－Ａ）を得るステップｉと、
ステップｉで得られた化合物（ＩＩ－Ａ）を有機溶媒Ｂに溶解し、窒素ガス保護で０°Ｃまで冷却し、還元剤を加え、反応終了後にヨウ化メタン－ｄ_３を加えて、化合物（ＩＩ－Ｂ）を得るステップｉｉと、
ステップｉｉで得られた化合物（ＩＩ－Ｂ）を有機溶媒Ｃに溶解し、トリフルオロ酢酸を加え、反応させて式（ＩＩ－Ｃ）の化合物を得るステップｉｉｉとをさらに含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。

【請求項15】

前記非プロトン性極性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、ヘキサメチルホスホアミドと、アセトニトリルと、アセトンと、ジメチルスルホキシドとのうちの少なくとも１つであり、前記有機溶媒Ｂは、テトラヒドロフランと、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドと、ジメチルホルムアミドと、アセトニトリルと、アセトンとのうちの少なくとも１つであり、前記還元剤は、水素化ナトリウムであり、前記有機溶媒Ｃは、ジクロロメタンと、酢酸メチルと、炭酸ジメチルと、プロピレングリコールメチルエーテルアセテートと、ナイロン酸ジメチルとのうちの少なくとも１つである、ことを特徴とする請求項１４に記載の製造方法。

【請求項16】

薬物組成物であって、請求項１乃至５のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶を含み、又は請求項６乃至１０のいずれかに記載の結晶形Ｉ、及び薬学的に許容されるベクター及び／又は賦形剤を含む、ことを特徴とする薬物組成物。

【請求項17】

請求項１乃至５のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、薬学的に許容される塩又は共結晶、又は請求項６乃至１０のいずれかに記載の結晶形Ｉ、又は請求項１６に記載の組成物のＡＴＸ介在性疾患を処置する薬物の製造における応用。

【請求項18】

前記ＡＴＸ介在性疾患は、特発性肺線維症である、ことを特徴とする請求項１７に記載の応用。

【国際調査報告】