(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-16
(54)【発明の名称】治療用ｐＨ応答性組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 38/02 20060101AFI20231109BHJP
A61K 38/19 20060101ALI20231109BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20231109BHJP
A61K 38/21 20060101ALI20231109BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231109BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231109BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231109BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20231109BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20231109BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20231109BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20231109BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20231109BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20231109BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20231109BHJP
A61P 13/10 20060101ALI20231109BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20231109BHJP
A61P 13/02 20060101ALI20231109BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20231109BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231109BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20231109BHJP
A61K 9/107 20060101ALI20231109BHJP
A61K 9/50 20060101ALI20231109BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20231109BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20231109BHJP
A61K 49/00 20060101ALI20231109BHJP
C08F 220/36 20060101ALI20231109BHJP
【ＦＩ】
A61K38/02
A61K38/19
A61K38/20
A61K38/21
A61K39/395 D
A61P43/00 105
A61P35/00
A61P15/00
A61P1/02
A61P11/02
A61P11/04
A61P35/04
A61P11/00
A61P13/08
A61P13/10
A61P13/12
A61P13/02
A61P1/04
A61P25/00
A61P17/00
A61K9/107
A61K9/50
A61K47/32
A61K47/34
A61K49/00
C08F220/36
A61K39/395 N
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023526535
(86)(22)【出願日】2021-11-03
(85)【翻訳文提出日】2023-06-29
(86)【国際出願番号】 US2021072215
(87)【国際公開番号】W WO2022099268
(87)【国際公開日】2022-05-12
(31)【優先権主張番号】63/109,220
(32)【優先日】2020-11-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522176078
【氏名又は名称】オンコナノ・メディスン・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ，ティアン
(72)【発明者】
【氏名】バラドワジ，ガウラブ
(72)【発明者】
【氏名】ディン，シンリャン
(72)【発明者】
【氏名】グタウスキー，スティーブン
(72)【発明者】
【氏名】ミラー，ジェイソン
(72)【発明者】
【氏名】ロビンソン，ドルー
(72)【発明者】
【氏名】キャンベル，アシュリー
(72)【発明者】
【氏名】スウ，チンタイ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4J100
【Ｆターム（参考）】
4C076AA17
4C076AA61
4C076CC01
4C076CC10
4C076CC15
4C076CC16
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4C085HH11
4C085KA27
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4J100AL08P
4J100AL08Q
4J100AL08R
4J100AL08S
4J100BA08S
4J100BA29Q
4J100BA31P
4J100BA34R
4J100FA03
4J100FA19
4J100JA53
(57)【要約】
本明細書に記載されているのは、ブロックコポリマー及びがんの処置に有用な治療薬を含む治療的なｐＨ応答性組成物である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：【化1】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ８及びＲ９は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセルであって、
前記治療薬が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、
ミセル。
【請求項2】
Ｒ８及びＲ９が、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキルである、請求項１に記載のミセル。
【請求項3】
Ｒ８及びＲ９が、各々独立して、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１又は２に記載のミセル。
【請求項4】
Ｒ８及びＲ９が、各々－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１～３のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項5】
Ｒ８及びＲ８が、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成する、請求項１に記載のミセル。
【請求項6】
Ｒ８及びＲ９が一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２－、－ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２－又は－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である、請求項１又は５に記載のミセル。
【請求項7】
ｘ３が、５０～２００、６０～１６０、又は９０～１４０の整数である、請求項１～６のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項8】
ｘ３が、９０～１４０である、請求項７に記載のミセル。
【請求項9】
ｙ３が、１～６、１～５、１～４又は１～３の整数である、請求項１～８のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項10】
ｙ３が０である、請求項１～８のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項11】
ｚ３が、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４又は１～３の整数である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項12】
ｚ３が０である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項13】
ｎ３が、６０～１５０又は１００～１４０の整数である、請求項１～１２のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項14】
ｎ３が、１００～１４０である、請求項１３に記載のミセル。
【請求項15】
Ｘ３がハロゲンである、請求項１～１４のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項16】
Ｘ３が－Ｂｒである、請求項１５に記載のミセル。
【請求項17】
タンパク質が、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である、請求項１～１６のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項18】
サイトカインが、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子であり、任意選択的にＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である、請求項１７に記載のミセル。
【請求項19】
抗体又はその断片が、二重特異性抗体若しくはその断片又は融合タンパク質であり、任意選択的に二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である、請求項１７に記載のミセル。
【請求項20】
蛍光色素が、約４００ｎｍ～約９００ｎｍ、又は約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００若しくは８５０ｎｍの励起スペクトルを有し、任意選択的にクマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である、請求項１～１９のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項21】
（ｉ）式（ＩＶ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：【化2】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧであり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセルであって、
前記治療薬剤が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、
ミセル。
【請求項22】
ｘ３が、９０～１４０である、請求項２１に記載のミセル。
【請求項23】
ｙ３が０である、請求項２１又は２２に記載のミセル。
【請求項24】
ｚ３が０である、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項25】
ｎ３が、１００～１４０である、請求項２１～２４のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項26】
Ｘ３がハロゲンである、請求項２１～２５のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項27】
治療薬が、サイトカイン若しくはその断片、又は工学操作された抗体若しくはその断片である、請求項２１～２６のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項28】
サイトカインが、ＩＬ－２又はその断片である、請求項２７に記載のミセル。
【請求項29】
蛍光色素が、約４００ｎｍ～約９００ｎｍ、又は約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００若しくは８５０ｎｍの励起スペクトルを有し、任意選択的にクマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である、請求項２１～２８のいずれか一項に記載のミセル。
【請求項30】
ｐＨ転移点及び発光スペクトルを有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。
【請求項31】
ｐＨ転移点が、４～８、６～７．５、又は４．５～５．５の間である、請求項３０に記載のｐＨ応答性組成物。
【請求項32】
０．２５又は０．１５未満のｐＨ単位のｐＨ応答を有する、請求項３０又は３１に記載のｐＨ応答性組成物。
【請求項33】
発光スペクトルが、約７００～約９００ｎｍである、請求項３０～３２のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。
【請求項34】
請求項１～２９のいずれか一項に記載のミセルの治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法。
【請求項35】
がんが固形腫瘍である、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
がんが、乳がん、頭頚部扁平細胞癌（ＮＨＳＣＣ）、腹膜転移、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿道がん、食道がん、結腸直腸がん、脳がん又は皮膚がんである、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項37】
ミセル中への治療薬のカプセル化を増加させるための方法であって、治療薬を蛍光色素にコンジュゲートすることを含む、方法。
【請求項38】
コンジュゲートされている治療薬をブロックコポリマーに接触させてミセルを形成することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
治療薬が、約５～約２０ＫＤａのタンパク質である、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項40】
タンパク質が、サイトカイン又はその断片である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
サイトカインが、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子である、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
治療薬が、抗体又はその断片である、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項44】
抗体又はその断片が、二重特異性抗体又はその断片である、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
二重特異性抗体又はその断片が、融合タンパク質である、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
融合タンパク質が、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である、請求項４５に記載の方法。
【請求項47】
蛍光色素が、約４００ｎｍ～約９００ｎｍの励起スペクトルを有する、請求項３７～４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
蛍光色素が、約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００若しくは８５０ｎｍの励起スペクトルを有する、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
蛍光色素が、クマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である、請求項４７又は４８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
優先権
この出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年１１月３日に出願され、「治療用ｐＨ応答性組成物（ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ ＰＨ ＲＥＳＰＯＮＳＩＶＥ ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ）」と題される米国仮特許出願第６３／１０９，２００号に対して主張するものである。
この出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年１１月３日に出願され、「治療用ｐＨ応答性組成物（ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ ＰＨ ＲＥＳＰＯＮＳＩＶＥ ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ）」と題される米国仮特許出願第６３／１０９，２００号に対して主張するものである。
【背景技術】
【0002】
多機能ナノ粒子は、バイオセンサー、診断用ナノプローブ及び標的化薬物送達系など広範囲の用途において注目を受けている。これらの努力は、様々な生理学系における薬剤送達の正確な時空間的制御を介する診断及び治療における副作用の低減とともに生物学的な特異性を改善する必要性によって大幅に推進されてきた。この目標を達成するため、努力は、刺激応答性ナノプラットフォームを開発することに向けられている。送達効率に照準を定めるために利用されている環境刺激としては、ｐＨ、温度、酵素発現、レドックス反応及び光誘発が挙げられる。これらの活性化シグナルの中で、ｐＨトリガーは、２つの型のｐＨ差異：（ａ）病的組織（例えば腫瘍）対正常組織、及び（ｂ）酸性細胞内区画に基づく最も広範に研究された刺激の１つである。
【0003】
例えば、腫瘍細胞外微小環境（ｐＨ約６．５）の通常でない酸性度により、いくつかのｐＨ応答性ナノ系は、腫瘍画像化の感受性又は治療の効力を増加させることが報告されている。しかしながら、酸性環境において加水分解によって薬物を放出するポリマーミセル組成物について、薬物の放出に数日かかることがある。その時間期間において、身体がミセルを排泄又は分解することがある。
【0004】
酸性エンド－／リソソーム区画を標的化するため、ｐＨ切断可能リンカーを有するナノベクターが、ペイロード生物学的利用能を改善するために調査されている。さらに、ｐＨ誘発電荷変換を有するいくつかのスマートナノベクターが、薬効性を増加させるように設計されている。エンドサイトーシス系は、内部移行されたカーゴの選別、加工及び劣化において特有の役割を有する一連の区画から構成されている。ｐＨ感受性ナノ粒子による異なるエンドサイトーシス区画の選択的な標的化は、短いナノ粒子残留時間（＜分）及びこれらの区画における小さいｐＨ差異（例えば、早期のエンドソームとリソソームとの間の＜１ｐＨ単位）により、特に困難である。
【0005】
免疫療法は、がん処置にとって強力な戦略となってきている。インターロイキン－２（ＩＬ－２）などの免疫モジュレーターは、抗腫瘍性免疫応答を誘発し得るが、それらの臨床的な適用は、重篤な用量制限毒性（例えば、血管漏出症候群）を引き出すことがある好ましくない薬物動態学的特性によって制限されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
必要とされているものは、治療用途のための改善されたｐＨ応答性ミセル組成物、特に、増加された薬物ペイロード、延長された血液循環時間、標的部位での薬物の急速な送達、及び特定の狭いｐＨ範囲内の応答性（例えば、腫瘍又は特定の小器官の標的化のため）を有する組成物である。
【課題を解決するための手段】
【0007】
（発明の要旨）
本明細書に記載されているブロックコポリマーは、原発性及び転移性腫瘍組織（リンパ節を含める）の処置に有用な治療薬である。本明細書において表されているブロックコポリマー及びミセル組成物は、がん性組織と正常組織との間のこのユビキタスなｐＨ差異を利用し、細胞によって取り込まれた後に高感受性及び特異的応答を提供することによって、腫瘍組織への治療的ペイロードの配置を可能にする。
本明細書に記載されているブロックコポリマーは、原発性及び転移性腫瘍組織（リンパ節を含める）の処置に有用な治療薬である。本明細書において表されているブロックコポリマー及びミセル組成物は、がん性組織と正常組織との間のこのユビキタスなｐＨ差異を利用し、細胞によって取り込まれた後に高感受性及び特異的応答を提供することによって、腫瘍組織への治療的ペイロードの配置を可能にする。
【0008】
一態様において、本明細書に記載されているのは、
（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0009】
【化1】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ８及びＲ９は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセルであって、治療薬が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、ミセルである。
【0010】
別の態様において、そこに表されているのは、
（ｉ）式（ＩＶ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＶ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0011】
【化2】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧであり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセル組成物であって、治療薬が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、ミセル組成物である。
【0012】
一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ１０は水素である。一部の実施形態において、Ｒ１０はＩＣＧである。一部の実施形態において、ｘ３は、５０～２００、６０～１６０又は９０～１４０の整数である。一部の実施形態において、ｘ３は９０～１４０である。一部の実施形態において、ｙ３は、１～６、１～５、１～４又は１～３の整数である。一部の実施形態において、ｙ３は０である。一部の実施形態において、ｚ３は、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４又は１～３の整数である。一部の実施形態において、ｚ３は０である。一部の実施形態において、ｎ３は、６０～１５０又は１００～１４０の整数である。一部の実施形態において、ｎ３は１００～１４０である。一部の実施形態において、Ｘ３はハロゲンである。一部の実施形態において、Ｘ３は－Ｂｒである。一部の実施形態において、タンパク質は、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子であり、任意選択的にＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体若しくはその断片又は融合タンパク質であり、任意選択的に二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００ｎｍ～約９００ｎｍ、又は約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００若しくは８５０ｎｍの励起スペクトルを有し、任意選択的にクマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である。
【0013】
別の態様は、本明細書に記載されている通りの治療薬を含むミセル組成物の有効量を投与することを含む、それを必要とする個体におけるがんを処置するための方法である。一部の実施形態において、がんは固形腫瘍である。一部の実施形態において、がんは固形腫瘍を含む。一部の実施形態において、腫瘍はがんの腫瘍であり、ここで、がんは、乳房、卵巣、前立腺、腹膜転移、結腸直腸、膀胱、腎臓、食道、頭頚部（ＨＮＳＳＣ）、肺、脳又は皮膚（黒色腫及び肉腫を含める）のがんである。
【0014】
別の態様は、ミセル中への治療薬のカプセル化を増加させるための方法であって、治療薬を蛍光色素にコンジュゲートすることを含む方法である。一部の実施形態において、方法は、コンジュゲートされている治療薬をブロックコポリマーに接触させてミセルを形成することをさらに含む。一部の実施形態において、治療薬は、約５～約２０ＫＤａのタンパク質である。一部の実施形態において、タンパク質は、サイトカイン又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。一部の実施形態において、治療薬は、抗体又はその断片である。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体又はその断片である。一部の実施形態において、二重特異性抗体又はその断片は、融合タンパク質である。一部の実施形態において、融合タンパク質は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００ｎｍ～約９００ｎｍの励起スペクトルを有する。一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００又は８５０ｎｍの励起スペクトルを有する。一部の実施形態において、蛍光色素は、クマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である。
【0015】
本明細書に記載されているブロックコポリマー、ミセル組成物及び方法の他の目的、特色及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになる。しかしながら、詳細な説明及び具体例は、特定の実施形態を示していると同時に、例示のためにのみ提示されているにすぎないと理解されるべきである。なぜなら、当開示の趣旨及び範疇内の様々な変形及び改変が、この詳細な説明から当業者に明らかになるからである。
【0016】
参考文献の援用
本明細書において記述されている全ての公報、特許及び特許出願は、各個々の公報、特許又は特許出願が、参照により組み込まれていると具体的に及び個々に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書において記述されている全ての公報、特許及び特許出願は、各個々の公報、特許又は特許出願が、参照により組み込まれていると具体的に及び個々に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【0017】
本開示の様々な態様は、添付の請求項において詳細に説明されている。本開示の特色及び利点のより良好な理解は、本開示の原理が用いられる例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、及び下記の添付の図面への言及によって得られる。
【図面の簡単な説明】
【0018】
【図1】ペイロード（例えばＩＬ－２）のｐＨ依存性放出を可能にする超ｐＨ感受性ナノ粒子プラットフォームの模式を示す図である。ｐＨ＞ｐＨｔである場合、ブロックコポリマーはナノ粒子として存在し；一旦ｐＨ＜ｐＨｔとなると、ナノ粒子はユニマーに分解し、それによって、カプセル化されたペイロードを放出する。
【図2】単純混合によるミセル及び８００ＣＷ ＩＬ－２を有する非共有結合性製剤のためのスキームを示す図である。
【図3】ＰＥＧｎ－ＰＤＢＡ１６０ミセルを使用してＩＬ－２（非修飾）とＩＬ－２（８００ＣＷ）の両方の製剤を調製することができることを示す図である。修飾ＩＬ－２（８００ＣＷ）製剤は、ＩＬ－２製剤よりも良好なカプセル化効率を有する。（ＩＬ－２に対するドットブロットによって評価したときに、ＩＬ－２では１１％であったのに対し、回収されたＩＬ－２（８００ＣＷ）の９７％がミセル画分に付随していたことが見出された。）
【図4】カプセル化製剤をｒｈＩＬ－２（非修飾）と修飾ＩＬ－２（８００ＣＷ）の両方の生物活性で示す図である。ミセルは、中性状態のＩＬ－２（８００ＣＷ）（黒い四角）では、ＩＬ－２（黒い逆三角）と比較して良好に保護されるが、製剤は両方とも、酸性化されると同様の生物活性を示す。ミセルは、ＩＬ－２とＩＬ－２（８００ＣＷ）の両方をｐＨ応答的にカプセル化し、放出する。
【図5】ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＡ１６Ｋは、ＰＥＧ－ＰＤＢＡと比較して、ＩＬ－２（修飾又は非修飾）のカプセル化において効果的でないことを示す図である。８００ＣＷ修飾は、ＩＬ－２の充填を増加させるために、本明細書に記載されているｐＨ感受性ミセルと対にしなければならない。８００ＣＷで修飾されたときであっても、ＰＥＧ－ＰＬＡのような非ｐＨ感受性ミセルは、ＩＬ－２を効果的にカプセル化することができない。
【図6】ＩＬ－２又はＩＬ－２（８００ＣＷ）で作製された非ｐＨ感受性ミセル製剤からの、ミセルでカプセル化されたＩＬ－２のピーク及び遊離ＩＬ－２のピークのクーマシー染色を示す図である。ＩＬ－２（８００ＣＷ）のカプセル化においてＰＤＢＡ＞＞ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＡ１５Ｋであり、これはカプセル化されていない遊離ＩＬ－２プール中のＩＬ－２（８００ＣＷ）の割合が大きいことによって証明される。このことから、高イオン強度条件でＰＤＢＡ ＩＬ－２（８００ＣＷ）の製剤化を行うとカプセル化効率が減弱するのかを見ることによって、静電相互作用の重要性が確認される。非標識化ＩＬ－２と８００ＣＷ標識化ＩＬ－２は両方とも、ＰＥＧ－ＰＬＡナノ粒子中に約２０％ＥＥ、２％ＤＬで充填された。それと比較して、ＰＤＢＡの場合は約８０％ＥＥ、８％ＤＬであった。
【図7】Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラムでのＦＰＬＣによる非共有結合性ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）製剤の精製を示す図である。（上）：非共有結合性製剤のＦＰＬＣクロマトグラム及び（下）：ＦＰＬＣ画分のＩＬ－２についてのドットブロットは、最小限の遊離ＩＬ－２を示す。
【図8】ＦＰＬＣの再注入後に精製された製剤から遊離ＩＬ－２（８００ＣＷ）が漏出していないことから、ＩＬ－２（８００ＣＷ）の充填が複合体中で安定であることを示す図である。（上パネル）：ＦＰＬＣクロマトグラム、右：ＦＰＬＣ画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び（下パネル）：クーマシー染色。ＩＬ－２は、約１５ｋＤａで移動する。
【図9】ｐＨ依存性ＩＬ－２放出特性を示す図である。（左パネル）酸性緩衝液トリガーＩＬ－２ペイロード放出の定量的測定。（右パネル）：ＤＬＳによって試験された酸性緩衝液条件下のナノ粒子のサイズ変化。
【図10】ＩＬ－２（８００ＣＷ）バイオアッセイにおける非共有結合性製剤の生物活性を示す図である。ＩＬ－２（８００ＣＷ）をカプセル化するナノ粒子は、中性ｐＨで生物活性を有効に減じる（白抜きの丸）。酸性化されると、ＩＬ－２（８００ＣＷ）の生物活性は、野生型レベルの近くに戻る（灰色の三角）。
【図11】ＰＤＢＡ－ＩＬ－２（８００ＣＷ）非共有結合性製剤の生物活性の安定性を示す図である。ＰＤＢＡミセルの生物活性を、バイオアッセイにおいて３カ月間にわたってＩＬ－２（８００ＣＷ）の生物活性について評価したところ、それは一貫したＯＮ／ＯＦＦ特性及び一貫した生物活性を示した。
【図12】ミセルカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）製剤が、複数の保存条件において良好な保存性を示すことを示す図である。ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）製剤は、示した条件で少なくとも３カ月間保存する間、サイズが安定である。
【図13】ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）製剤が、複数の保存条件において良好な保存性を示すことを示す図である。ＰＤＢＡ－ＩＬ－２（８００ＣＷ）の安定性は、ＦＰＬＣトレース及びドットブロット／ウエスタンブロットの定量化によって、ナノ粒子から漏出するＩＬ－２（８００ＣＷ）について評価した。（上パネル）：ＰＢＳ ４Ｃ試料についての代表的な一連のトレース（２１４ｎｍ）から、いかなる条件下でも、保存期間が長くなっても１７ｍＬの溶出量付近に予想される遊離ＩＬ－２（８００ＣＷ）が存在しない一方で、ミセルのピークは形状又は溶出時間が変化しないことが示される。（下パネル）：ＩＬ－２についての免疫ブロットの定量化から、いかなる保存条件下でも遊離タンパク質として溶出するＩＬ－２（８００ＣＷ）が＜１％であることが示される。
【図14A】ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、異なる化学構造を有するブロックコポリマーミセル中に非共有結合的にカプセル化され得ることを示す図である。ＰＥＰＡミセルは、ＩＬ－２（８００ＣＷ）を効果的に充填する。精製は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅカラムが備えられているＡｋｔａ Ｐｕｒｅで行った。各画分のＩＬ－２（８００ＣＷ）含有量は、ウエスタンブロットによって確認した。
【図14B】ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、異なる化学構造を有するブロックコポリマーミセル中に非共有結合的にカプセル化され得ることを示す図である。ＰＤＢＡ－ＩＣＧミセルは、ＩＬ－２（８００ＣＷ）を効率的に充填する。精製は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅカラムが備えられているＡｋｔａ Ｐｕｒｅで行った。各画分のＩＬ－２（８００ＣＷ）含有量は、ウエスタンブロットによって確認した。
【図15】ＩＣＧ－コンジュゲートＰＤＢＡミセルがＩＬ－２（８００ＣＷ）を有効に充填し、放出することができることを示す図である。ＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＣＧは、生物学的に活性なＩＬ－２（８００ＣＷ）を有効にｐＨ応答的に放出することができる（上のグラフ）：オレンジ色の棒対青色の棒、右のグラフ 白抜きの丸対黒塗りの四角）。（下のグラフ）：は、新鮮な製剤の特徴付けを示し、右のパネルは、ＰＢＳ中４Ｃで約６カ月保存した後の粒子の特徴付けを示す。
【図16】様々な非共有結合性製剤方法によってミセルにＩＬ－２（８００ＣＷ）を充填することができることを示す図である。充填は、酸／塩基滴定、単純混合、及び二重エマルジョン溶媒蒸発法によって行った。（左パネル）：残余分画分中のＩＬ－２（８００ＣＷ）の充填は、スピンカラム精製後にＳＤＳ－ＰＡＧＥによって確認した。検出は、８００ＣＷの蛍光によって、ＬＩ－ＣＯＲ ｐｅａｒｌを使用して行った。（右パネル）：様々な製剤方法でＩＬ－２ ８００ＣＷと製剤化されたＰＥＧ５Ｋ－ＰＤＢＡ１６０の代表的な試料のＤＬＳでの特徴付け。
【図17】様々なサイズのナノ粒子がＩＬ－２（８００ＣＷ）を効果的にカプセル化することを示す図である。ＣＳＴ抗ＩＬ－２Ａｂクローン（Ｄ７Ａ５）（１：４０００希釈）及びＬｉｃｏｒ ＨＲＰ－抗ウサギ二次（１：２０００希釈）を用いた、ＩＬ－２についてのＷＢ。
【図18】ＰＤＢＡ非共有結合性製剤が、マウスにおいてＩＬ－２を頭頚部同所性腫瘍に送達することを示す図である。
【図19-1】ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、複数の腫瘍モデルにおいてがん増殖を阻害することを示す図である。
【図19-2】ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、複数の腫瘍モデルにおいてがん増殖を阻害することを示す図である。
【図20-1】ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、動物においてがん増殖を阻害し、生存時間を延長することを示す図である。
【図20-2】ＰＤＢＡカプセル化ＩＬ－２（８００ＣＷ）が、動物においてがん増殖を阻害し、生存時間を延長することを示す図である。
【図21】ＰＤＢＡミセルが、８００ＣＷで修飾された二重特異性抗体（ＢｉＴＥ）を成功裏にカプセル化したことを示す図である。
【図22】タンパク質修飾部分を示す図である。
【図23】ＩＬ－２のＡｌｅｘａ（登録商標）４８８／５１５／６４７又はＴＭＥ修飾が、ｐＨ感受性ミセルでの充填を増加させることができることを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0019】
本明細書において提供されているのは、治療薬にコンジュゲートされているブロックコポリマーである。他の実施形態において、本明細書において提供されているのは、治療薬を含むミセル組成物である。
【0020】
Ｉ．ブロックコポリマー及びミセル組成物
ミセル
本明細書に記載されている１つ以上のブロックコポリマーは、ｐＨ感受性ミセル組成物を形成するために使用することができる。一部の実施形態において、組成物は、単一型のミセルを含む。一部の実施形態において、２つ以上の異なる型のミセルは、混合ミセル組成物を形成するために組み合わせることができる。一部の実施形態において、ミセルは、治療薬に共有結合的にコンジュゲートされているブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、治療薬を非共有結合的にカプセル化する１つ以上のブロックコポリマーを含む。
ミセル
本明細書に記載されている１つ以上のブロックコポリマーは、ｐＨ感受性ミセル組成物を形成するために使用することができる。一部の実施形態において、組成物は、単一型のミセルを含む。一部の実施形態において、２つ以上の異なる型のミセルは、混合ミセル組成物を形成するために組み合わせることができる。一部の実施形態において、ミセルは、治療薬に共有結合的にコンジュゲートされているブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、治療薬を非共有結合的にカプセル化する１つ以上のブロックコポリマーを含む。
【0021】
一態様において、本明細書において表されているのは、
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0022】
【化3】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールである；
又はＲ８及びＲ９は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセルであって、治療薬が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、ミセルである。
【0023】
ミセルの一部の実施形態において、式（ＩＩＩ）のブロックコポリマーは、式（ＩＩＩ－ｃ）の構造、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を有する：
【0024】
【化4】
【0025】
一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は、同じ基である。一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は、異なる基である。
【0026】
一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは、直鎖又は分枝アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは直鎖アルキルである。一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、独立して、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、独立して、任意選択的に置換されているＣ３～Ｃ１０シクロアルキル又はアリールである。一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、独立して、任意選択的に置換されているシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルである。一部の実施形態において、各Ｒ８及びＲ９は、独立して、任意選択的に置換されているフェニルである。
【0027】
一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ８は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成する。一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２－、－ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２－又は－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である。一部の実施形態において、Ｒ８及びＲ９は一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である。
【0028】
一部の実施形態において、Ｒ１０は水素である。一部の実施形態において、Ｒ１０はＩＣＧである。
【0029】
治療薬は、当技術分野において公知の方法を使用してミセルに組み込むことができる。一部の実施形態において、治療薬はタンパク質である。一部の実施形態において、タンパク質は、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子であり、任意選択的にＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体若しくはその断片又は融合タンパク質であり、任意選択的に二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。
【0030】
別の態様において、そこに表されているのは、
（ｉ）式（ＩＶ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＶ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0031】
【化5】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧであり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。）及び
（ｉｉ）ブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬
を含むミセルであって、
治療薬が、蛍光色素にコンジュゲートされているタンパク質である、
ミセルである。
【0032】
別の態様では、本明細書に表されているのは、
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0033】
【化6】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ８及びＲ９は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧである。）及び
（ｉｉ）式（Ｉ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0034】
【化7】
ｎ１は、１０～２００の整数であり；
ｘ１は、４０～３００の整数であり；
ｙ１は、０～６の整数であり；
ｚ１は、０～１０の整数であり；
Ｘ１は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ１及びＲ２は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ３は、独立して、水素、アシル又はＩＣＧであり；
Ｌ１は、結合若しくは－Ｃ（Ｏ）－、又は任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０リンカー若しくはＰＥＧリンカーであり、ここで、各々は、マレイミド残基で任意選択的に置換されており；
Ｙは、治療薬である。）又は
（ｉｉ）式（ＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0035】
【化8】
ｎ２は、２～２００の整数であり；
ｘ２は、４０～３００の整数であり；
ｙ２は、０～６の整数であり；
Ｘ２は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ５及びＲ６は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ５及びＲ６は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ７は、独立して、水素、アシル又はＩＣＧであり；
Ｚ１は、－ＮＨ－又は－Ｏ－であり；
Ｚ２は、－ＮＨ－、－Ｏ－又は置換トリアゾールであり；
Ｌ２は、結合若しくは－Ｃ（Ｏ）－、又は任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０リンカー若しくはＰＥＧリンカーであり、ここで、各々は、マレイミド残基で任意選択的に置換されており；
Ｙは、治療薬である。）
を含む、ミセルである。
【0036】
別の態様は、
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0037】
【化9】
ｎ３は、１０～２００の整数であり；
ｘ３は、４０～３００の整数であり；
ｙ３は、０～６の整数であり；
ｚ３は、０～１０の整数であり；
Ｘ３は、ハロゲン、－ＯＨ又はＣ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ８及びＲ９は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ８及びＲ９は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ１０は、独立して、水素又はＩＣＧである。）；
（ｉｉ）式（Ｉ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0038】
【化10】
ｎ１は、１０～２００の整数であり；
ｘ１は、４０～３００の整数であり；
ｙ１は、０～６の整数であり；
ｚ１は、０～１０の整数であり；
Ｘ１は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ１及びＲ２は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ３は、独立して、水素、アシル又はＩＣＧであり；
Ｌ１は、結合若しくは－Ｃ（Ｏ）－、又は任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０アルキレンリンカー若しくはＰＥＧリンカーであり、ここで、各々は、マレイミド残基で任意選択的に置換されており；
Ｙは、治療薬である。）及び
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物：
【0039】
【化11】
ｎ２は、２～２００の整数であり；
ｘ２は、４０～３００の整数であり；
ｙ２は、０～６の整数であり；
Ｘ２は、ハロゲン、－ＯＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ５及びＲ６は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル若しくはアリールであるか；
又はＲ５及びＲ６は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成し；
各Ｒ７は、独立して、水素、アシル又はＩＣＧであり；
Ｚ１は、－ＮＨ－又は－Ｏ－であり；
Ｚ２は、－ＮＨ－、－Ｏ－又は置換トリアゾール残基であり；
Ｌ２は、結合若しくは－Ｃ（Ｏ）－、又は任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０アルキレンリンカー若しくはＰＥＧリンカーであり、ここで、各々は、マレイミド残基で任意選択的に置換されており；
Ｙは、治療薬である。）
を含むミセルである。
【0040】
式（Ｉ）の一部の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は、同じ基である。一部の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は、異なる基である。
【0041】
一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは、直鎖又は分枝アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは直鎖アルキルである。一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。
【0042】
一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、任意選択的に置換されているＣ３～Ｃ１０シクロアルキル又はアリールである。一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、任意選択的に置換されているシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルである。一部の実施形態において、各Ｒ１及びＲ２は、独立して、任意選択的に置換されているフェニルである。
【0043】
一部の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成する。一部の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２－、－ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２－又は－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である。一部の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である。
【0044】
一部の実施形態において、各Ｒ３は、独立して、アシル又はＩＣＧである。一部の実施形態において、各Ｒ３は、独立して、アシルである。一部の実施形態において、各Ｒ３は、独立して、ＩＣＧである。一部の実施形態において、各Ｒ３は、独立して、水素である。
【0045】
一部の実施形態において、Ｌ１は、ブロックコポリマーに及び治療薬に結合できる任意選択的に置換されている二官能性リンカーである。一部の実施形態において、Ｌ１は、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０アルキレンリンカーである。一部の実施形態において、Ｌ１は、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、任意選択的に置換されているＰＥＧリンカーである。
【0046】
一部の実施形態において、Ｌ１は、
【0047】
【化12】
である。
【0048】
一部の実施形態において、式（Ｉ）のブロックコポリマーは、式（Ｉ－ａ）の構造、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
【0049】
【化13】
ｍ１は、２～２００の整数であり；
Ａは、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、結合又は－Ｃ（Ｏ）－である。）
式（Ｉ）又は（Ｉ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、ｍ１は、２～２０の整数又はその中の任意の整数である。式（Ｉ）又は（Ｉ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、ｍ１は、２～５、６～９、１０～１４若しくは１５～２０の整数、又はその中の任意の整数である。
【0050】
式（Ｉ）又は（Ｉ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、Ａは結合である。一部の実施形態において、Ａは、マレイミド残基で任意選択的に置換されている－Ｃ（Ｏ）－である。
【0051】
一部の実施形態において、式（Ｉ）のブロックコポリマーは、式（Ｉ－ｃ）の構造、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を有する：
【0052】
【化14】
【0053】
式（ＩＩ）の一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、同じ基である。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、異なる基である。
【0054】
一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは、直鎖又は分枝アルキルである。一部の実施形態において、アルキルは直鎖アルキルである。一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、独立して、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。
【0055】
一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、独立して、任意選択的に置換されているＣ３～Ｃ１０シクロアルキル又はアリールである。一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、独立して、任意選択的に置換されているシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルである。一部の実施形態において、各Ｒ５及びＲ６は、独立して、任意選択的に置換されているフェニルである。
【0056】
一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している対応する窒素と一緒になって、任意選択的に置換されている５～７員環を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は一緒になって、－ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２－、－ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２－又は－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－である。
【0057】
一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立して、アシル又はＩＣＧである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立して、アシルである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立して、ＩＣＧである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立して、水素である。
【0058】
一部の実施形態において、Ｚ１は－Ｏ－である。一部の実施形態において、Ｚ１は－ＮＨ－である。
【0059】
一部の実施形態において、Ｚ２は、－ＮＨ－又は－Ｏ－である。一部の実施形態において、Ｚ２は－Ｏ－である。一部の実施形態において、Ｚ２は－ＮＨ－である。一部の実施形態において、Ｚ２は置換トリアゾールである。
【0060】
一部の実施形態において、Ｌ２は、ブロックコポリマーに及び治療薬に結合できる任意選択的に置換されている二官能性リンカーである。一部の実施形態において、Ｌ２は、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、任意選択的に置換されているＣ１～Ｃ１０アルキレンリンカーである。一部の実施形態において、Ｌ２は、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、任意選択的に置換されているＰＥＧリンカーである。一部の実施形態において、Ｌ２は、
【0061】
【化15】
である。
【0062】
一部の実施形態において、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、式（ＩＩ－ａ）の構造、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
【0063】
【化16】
ｍ２は、２～２００であり；
Ａは、マレイミド残基で任意選択的に置換されている、結合又は－Ｃ（Ｏ）－である。）
式（ＩＩ）又は（ＩＩ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、ｍ２は、２～２０の整数である。式（ＩＩ）又は（ＩＩ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、ｍ２は、２～５、６～９、１０～１４若しくは１５～２０の整数、又はその中の任意の整数である。
【0064】
式（ＩＩ）又は（ＩＩ－ａ）のブロックコポリマーの一部の実施形態において、Ａは結合である。一部の実施形態において、Ａは、マレイミド残基で任意選択的に置換されている－Ｃ（Ｏ）－である。
【0065】
一部の実施形態において、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、式（ＩＩ－ｃ）の構造、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を有する：
【0066】
【化17】
【0067】
一部の実施形態において、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、式（ＩＩ－ａ２）の構造、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
【0068】
【化18】
Ｚ１は、－Ｏ－である。）。
【0069】
一部の実施形態において、タンパク質は、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子であり、任意選択的にＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体若しくはその断片又は融合タンパク質であり、任意選択的に二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。
【0070】
ブロックコポリマー
一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマーである。一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含む。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）を含む。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約２ｋＤ～約１０ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約２ｋＤ～約５ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約３ｋＤ～約８ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約４ｋＤ～約６ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約５ｋＤである。
一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマーである。一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含む。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）を含む。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約２ｋＤ～約１０ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約２ｋＤ～約５ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約３ｋＤ～約８ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約４ｋＤ～約６ｋＤである。一部の実施形態において、親水性ポリマーセグメントは、サイズが約５ｋＤである。
【0071】
一部の実施形態において、各ｎ１、ｎ２及びｎ３は、独立して、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、８５～９０、９０～９５、９５～９９、１００～１０９、１１０～１１９、１２０～１２９、１３０～１３９、１４０～１４９、１５０～１５９、１６０～１６９、１７０～１７９、１８０～１８９、１９０～１９９の整数又はその中で誘導可能な任意の範囲である。一部の実施形態において、各ｎ１、ｎ２及びｎ３は、独立して、６０～１５０、１００～１４０又は１１０～１２０の整数である。一部の実施形態において、各ｎ１、ｎ２及びｎ３は、独立して、１００～１４０である。
【0072】
一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、疎水性ポリマーセグメントを含む。一部の実施形態において、疎水性ポリマーセグメントは、第３級アミンを含む。一部の実施形態において、疎水性ポリマーセグメントは、以下から選択される：
【0073】
【化19】
【0074】
一部の実施形態において、疎水性セグメントは、ジブチルアミンを含む。一部の実施形態において、疎水性セグメントは、
【0075】
【化20】
【0076】
一部の実施形態において、各ｘ１、ｘ２及びｘ３は、独立して、整数１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、８５～９０、９０～９５、９５～９９、１００～１０９、１１０～１１９、１２０～１２９、１３０～１３９、１４０～１４９、１５０～１５９、１６０～１６９、１７０～１７９、１８０～１８９、１９０～１９９又はその中で誘導可能な任意の範囲である。一部の実施形態において、各ｘ１、ｘ２及びｘ３は、独立して、５０～２００、６０～１６０又は９０～１４０の整数である。一部の実施形態において、各ｘ１、ｘ２及びｘ３は、独立して、９０～１４０である。
【0077】
一部の実施形態において、各ｙ１、ｙ２及びｙ３は、独立して、１～６、１～５、１～４若しくは１～３の整数、又はその中で誘導可能な任意の範囲である。一部の実施形態において、各ｙ１、ｙ２及びｙ３は、独立して、１、２、３、４、５又は６である。一部の実施形態において、各Ｙ１、ｙ２及びｙ３は、独立して、０である。
【0078】
一部の実施形態において、各ｚ１及びｚ２は、独立して、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４若しくは１～３の整数、又はその中で誘導可能な任意の範囲である。一部の実施形態において、各ｚ１及びｚ２は、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。一部の実施形態において、各ｚ１及びｚ２は、独立して、０である。
【0079】
「ｒ」という用語は、異なるブロックコポリマー単位／セグメント（例えば、ｘ１、ｙ１及びｚ１によって表される）の間の接続を示す。一部の実施形態において、各ｒは、独立して、該単位／セグメントの炭素原子を接続する結合、又はｎが１～１０であるアルキル基－（ＣＨ２）ｎ－である。一部の実施形態において、コポリマーブロックセグメント／単位（例えば、ｘ１、ｙ１及びｚ１によって表される）は、任意の順序、配列又は立体配置で生じ得る。一部の実施形態において、コポリマーブロック単位は、式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ－ａ）、（ＩＩ－ｃ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）に記載されている通りに順次に生じる。
【0080】
一部の実施形態において、各ｍ１及びｍ２は、独立して、２～２００の整数である。一部の実施形態において、各ｍ１及びｍ２は、独立して、２～２０の整数である。
【0081】
一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、末端基である。一部の実施形態において、末端キャッピング基は、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）反応の生成物である。例えば、末端キャッピング基は、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）が使用される場合、－Ｂｒなどのハロゲンであり得る。一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して、Ｂｒである。一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して、－ＯＨである。一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して、酸である。一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して、－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一部の実施形態において、各Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して、Ｈである。該端部基は、任意選択的に、適切な部分との重合に続いてさらに修飾されていてよい。
【0082】
一部の実施形態において、リンカーＬ１及びＬ２は、ブロックコポリマー及び治療薬と反応する基を有する二官能性リンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、マレイミド－ＰＥＧ－ＮＨＳ、ＮＨＳ－カーボネート（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドカーボネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート）、又はＣＤＩ（カルボニルジイミダゾール）において使用される構成成分である。
【0083】
一部の実施形態において、リンカーは、治療薬にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、リンカーは、治療薬に共有結合的にコンジュゲートされている。当技術分野において公知の方法は、治療薬を、例えば、疎水性ポリマーセグメントにコンジュゲートするために使用することができる。
【0084】
一部の実施形態において、ブロックコポリマーは、アミンを介してコンジュゲートされている蛍光色素を含む。一部の実施形態において、蛍光色素は、シアニン色素又はその誘導体である。一部の実施形態において、蛍光色素は、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）又はその誘導体である。インドシアニングリーン（ＩＣＧ）は、医療診断において使用される。一部の実施形態において、ＩＣＧ誘導体の構造は、以下である：
【0085】
【化21】
【0086】
一態様において、本明細書に記載されている化合物は、薬学的に許容される塩の形態である。同様に、同じ型の活性を有するこれらの化合物の活性代謝物は、本開示の範疇に含まれる。加えて、本明細書に記載されている化合物は、非溶媒和形態、並びに薬学的に許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどを用いる溶媒和形態で存在することができる。本明細書において表されている化合物の溶媒和形態は、その上、本明細書において開示されていると考えられる。
【0087】
治療薬
一部の実施形態において、治療薬はタンパク質である。一部の実施形態において、タンパク質は、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である。一部の実施形態において、治療薬は、サイトカイン若しくはその断片、又は工学操作された抗体断片である。
一部の実施形態において、治療薬はタンパク質である。一部の実施形態において、タンパク質は、任意選択的にサイトカイン若しくはその断片である約５～約２０ＫＤａのタンパク質であり、又は任意選択的に工学操作された抗体である抗体若しくはその断片である。一部の実施形態において、治療薬は、サイトカイン若しくはその断片、又は工学操作された抗体断片である。
【0088】
一部の実施形態において、治療薬は、サイトカイン又はその断片である。サイトカインは、細胞シグナリングにおいて重要である広い及び緩いカテゴリーの小さいタンパク質である。サイトカインはペプチドであり、細胞の脂質二重層を横切って細胞質に進入することができない。サイトカインは、免疫モジュレート剤として自己分泌、傍分泌及び内分泌シグナル伝達に関与することが示された。インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、免疫系におけるサイトカインシグナル伝達分子の型、インターロイキンである。それは、免疫を担う白血球細胞の活性を調節する１５．５～１６ｋＤａのタンパク質である。インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、インターロイキン－２との構造上の相似点を有するサイトカインである。ＩＬ－２のように、ＩＬ－１５は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体ベータ鎖及び共通ガンマ鎖で構成された複合体に結合し、それを介してシグナル伝達する。ＩＬ－１５は、ウイルスによる感染に続いて単核貪食細胞によって分泌される。インターロイキン－２１は、ウイルス感染された細胞又はがん性細胞を破壊するナチュラルキラー細胞及び細胞毒性Ｔ細胞を含めて、免疫系の細胞に対して強力な調節効果を有するサイトカインである。インターロイキン１２（ＩＬ－１２）は、抗原刺激に応答して樹状細胞、マクロファージ、好中球、及びヒトＢ－リンパ芽球様細胞（ＮＣ－３７）によって天然に産生されるインターロイキンである。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、モノカイン、コロニー刺激因子又は腫瘍壊死因子であり、任意選択的にＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２若しくはＩＬ－１５又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２若しくはＩＬ－１５又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１５又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１２又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、Ｆａｂ又はその断片である。
【0089】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、病原体を根絶するのを助ける免疫系の保護的防御をトリガーする細胞間のコミュニケーションのために使用される分子である、サイトカインとして公知のタンパク質のクラスに属するシグナル伝達タンパク質のグループである。一部の実施形態において、サイトカインは、インターフェロンα、インターフェロンβ若しくはインターフェロンγ又はその断片である。
【0090】
コロニー刺激因子２としても公知の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子は、サイトカインとして機能する、マクロファージ、Ｔ細胞、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、内皮細胞及び線維芽細胞によって分泌されるモノマー性糖タンパク質である。一部の実施形態において、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子ＧＭ－ＣＳＦである。
【0091】
一部の実施形態において、治療薬は、工学操作された抗体断片である。一部の実施形態において、工学操作された抗体断片は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）は、抗がん薬としての使用について調査されている人工的な二特異性モノクローナル抗体のクラスである。それらは、がん細胞に対して、宿主の免疫系、より具体的にはＴ細胞の細胞毒性活性を指向する。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体若しくはその断片又は融合タンパク質であり、任意選択的に二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。
【0092】
タンパク質の修飾
ある特定の実施形態において、治療薬は、蛍光色素にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、治療薬は、ブロックコポリマーによってカプセル化される前に蛍光色素にコンジュゲートされる。
ある特定の実施形態において、治療薬は、蛍光色素にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、治療薬は、ブロックコポリマーによってカプセル化される前に蛍光色素にコンジュゲートされる。
【0093】
一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００ｎｍ～約９００ｎｍ、又は約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００若しくは８５０ｎｍの励起スペクトルを有する。
【0094】
一部の実施形態において、蛍光色素は、クマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である。
【0095】
一部の実施形態において、蛍光色素は、８００ＣＷ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５１４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８、又はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７である。一部の実施形態において、蛍光色素は８００ＣＷである。一部の実施形態において、蛍光色素は、図２２からの化合物である。
【0096】
一部の実施形態において、蛍光色素は、以下である：
【0097】
【化22】
【0098】
ミセル組成物
一部の実施形態において、ミセルは、様々なユニマーからのブロックコポリマー構成成分の１つ以上の異なる型を含む。一部の実施形態において、ミセルは、（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー及び（ｉｉ）式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）対（ｉｉ）を１：９９～９９：１の比；又はその中の任意の比で含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）を１：９９、１０：９０、２０：８０、３０：７０、４０：５０又は５０：５０の比で含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）を１：１の比で含む。
一部の実施形態において、ミセルは、様々なユニマーからのブロックコポリマー構成成分の１つ以上の異なる型を含む。一部の実施形態において、ミセルは、（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー及び（ｉｉ）式（Ｉ）又は式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）対（ｉｉ）を１：９９～９９：１の比；又はその中の任意の比で含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）を１：９９、１０：９０、２０：８０、３０：７０、４０：５０又は５０：５０の比で含む。一部の実施形態において、ミセルは、構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）を１：１の比で含む。
【0099】
一部の実施形態において、ミセルは、１：９９の式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー対式（Ｉ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、９９：１の式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー対式（Ｉ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、１：９９の式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー対式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、９９：１の式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー対式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。
【0100】
一部の実施形態において、ミセルは、（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー；（ｉｉ）式（Ｉ）のブロックコポリマー；及び（ｉｉｉ）式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態において、ミセルは、均等部の構成成分（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）を含む。一部の実施形態において、ミセルは、不均等部の構成成分（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）を含む。
【0101】
一部の実施形態において、各異なる型のブロックコポリマーは、異なる治療薬にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、各異なる型のブロックコポリマーは、同じ治療薬にコンジュゲートされている。
【0102】
別の態様において、本明細書において表されているのは、以下を含むミセルである：（ｉ）式（ＩＩＩ）のブロックコポリマー；（ｉｉ）式（Ｉ）のブロックコポリマー及び／又は式（ＩＩ）のブロックコポリマー；並びに（ｉｉｉ）該ブロックコポリマーによって非共有結合的にカプセル化された治療薬。一部の実施形態において、治療薬は、ミセル内に非共有結合的にカプセル化されている。
【0103】
がん治療におけるミセルの使用は、ミセルのサイズにより部分的に、抗腫瘍効力を増強するとともに健常組織に対する毒性を低減することができる。ある特定の化学療法剤などの小分子が正常及び腫瘍組織の両方に進入することができる一方で、非標的化ミセルナノ粒子は、優先的に、漏出性腫瘍脈管構造を横切ることができる。ミセルのサイズは、典型的に、ナノメートルスケールである（すなわち、直径が約１ｎｍ～１μｍの間）。一部の実施形態において、ミセルは、約１０～約２００ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態において、ミセルは、約２０～約１００ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態において、ミセルは、約３０～約５０ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態において、ミセルは、約１μｍ未満の直径を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約１００ｎｍ未満の直径を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約５０ｎｍ未満の直径を有する。
【0104】
ｐＨ応答性組成物
別の態様において、本明細書において表されているのは、ｐＨ応答性組成物である。本明細書において開示されているｐＨ応答性組成物は、ブロックコポリマー及び治療薬を含む１つ以上のｐＨ応答性ミセル及び／又はナノ粒子を含む。各ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含み、ここで、疎水性ポリマーセグメントは、ｐＨ感受性にするイオン化可能なアミン基を含む。このｐＨ感受性は、薬物－コンジュゲート治療薬として適当な組成物を提供するために利用される。
別の態様において、本明細書において表されているのは、ｐＨ応答性組成物である。本明細書において開示されているｐＨ応答性組成物は、ブロックコポリマー及び治療薬を含む１つ以上のｐＨ応答性ミセル及び／又はナノ粒子を含む。各ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含み、ここで、疎水性ポリマーセグメントは、ｐＨ感受性にするイオン化可能なアミン基を含む。このｐＨ感受性は、薬物－コンジュゲート治療薬として適当な組成物を提供するために利用される。
【0105】
該ミセルは、特定の細胞又は微小環境を標的化するために生理学範囲内で異なるｐＨ転移値を有することができる。一部の実施形態において、ミセルは、約５～約８、又はその中の任意の値のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約５～約６のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約６～約７のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約７～約８のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約６．３～約６．９のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約５．０～約６．２のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約５．９～約６．２のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約５．０～約５．５のｐＨ転移値を有する。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４又は５．５である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約４．８である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約４．９である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．０である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．１である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．２である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．３である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．４である。一部の実施形態において、ｐＨ転移点は、約５．５である。
【0106】
本開示のｐＨ感受性ミセル組成物は、有利には、ｐＨ応答が非常に広い（すなわち、２ｐＨ単位）他のｐＨ感受性組成物と対照的に、狭いｐＨ転移範囲を有することができる。一部の実施形態において、ミセルは、約１未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。各種実施形態において、ミセルは、約０．９未満、約０．８未満、約０．７未満、約０．６未満、約０．５未満、約０．４未満、約０．３未満、約０．２未満、約０．１未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約０．５未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約０．２５未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。狭いｐＨ転移範囲は、有利なことに、ｐＨのわずかな変化でフルオロフォアの完全な作動をもたらすことができる、より鋭いｐＨ応答を提供する。
【0107】
一部の実施形態において、ｐＨ応答性組成物は、発光スペクトルを有する。一部の実施形態において、発光スペクトルは、６００～８００ｎｍである。一部の実施形態において、発光スペクトルは、７００～８００ｎｍである。
【0108】
ＩＩ．使用の方法
がん細胞がグルコースを優先的に取り込み、それを乳酸又は他の酸に変換するワールブルク効果として公知の好気性解糖が、全ての固体がんにおいて生じる。乳酸又は他の酸は、モノカルボキシレート輸送体又は他の輸送体により細胞外空間に優先的に蓄積する。細胞外空間の結果として得られた酸性化は、さらなる腫瘍侵襲及び転移のために細胞外マトリックスのリモデリングを促進する。
がん細胞がグルコースを優先的に取り込み、それを乳酸又は他の酸に変換するワールブルク効果として公知の好気性解糖が、全ての固体がんにおいて生じる。乳酸又は他の酸は、モノカルボキシレート輸送体又は他の輸送体により細胞外空間に優先的に蓄積する。細胞外空間の結果として得られた酸性化は、さらなる腫瘍侵襲及び転移のために細胞外マトリックスのリモデリングを促進する。
【0109】
本明細書において提供されている一部の実施形態は、生理的ｐＨ（７．３５～７．４５）でミセルを形成する化合物を記載している。一部の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、治療薬に共有結合的に又は非共有結合的にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、ミセルは、２×１０７ダルトンよりも大きい分子量を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約２．７×１０７ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態において、治療薬は、生理的ｐＨ（７．３５～７．４５）でミセルコア内に捕捉される（例えば、血液循環中）。一部の実施形態において、ミセルが酸性環境（例えば、腫瘍組織）に遭遇する場合、ミセルは、約３．７×１０４ダルトンの平均分子量を有する個々の化合物に解離し、治療薬の放出を可能にする。一部の実施形態において、ミセルは、ｐＨ転移点より低いｐＨ（例えば、腫瘍微小環境の酸性状態）で解離する。
【0110】
一部の実施形態において、治療薬は、ミセルの内部に組み込むことができる。特定のｐＨ条件（例えば、腫瘍及びエンドサイトーシス区画中にみられる酸性ｐＨ）は、急速なプロトン化及びユニマーへのミセルの解離に至り、それによって、治療薬（例えば、薬物）を放出することができる。一部の実施形態において、ミセルは、生理学的ｐＨ（ｐＨ７．４）で安定な薬物カプセル化を提供するが、酸性環境において薬物を迅速に放出することができる。
【0111】
一部の例において、本明細書に記載されているｐＨ感受性ミセル組成物は、狭いｐＨ転移範囲を有する。一部の実施形態において、本明細書に記載されているミセルは、１未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲（ΔｐＨ１０～９０％）を有する。各種実施形態において、ミセルは、約０．９未満、約０．８未満、約０．７、未満約０．６未満、約０．５未満、約０．４未満、約０．３未満、約０．２未満、約０．１未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。一部の実施形態において、ミセルは、約０．５未満のｐＨ単位のｐＨ転移範囲を有する。一部の実施形態において、ｐＨ転移範囲は、０．２５未満のｐＨ単位である。一部の実施形態において、ｐＨ転移範囲は、０．１５未満のｐＨ単位である。この鋭い転移点は、ミセルが腫瘍微小環境の酸ｐＨで解離するのを可能にする。
【0112】
これらのミセルは、薬物送達剤として使用することができる。薬物を含むミセルは、例えばがん、又は薬物が局在化ｐＨ差異（例えば、生理学的ｐＨ（７．４）と異なるｐＨ）により適切な位置に送達され得る他の疾患を処置するために使用することができる。一部の実施形態において、処置される障害は、がんである。一部の実施形態において、がんは、固形腫瘍を含む。一部の実施形態において、腫瘍は、原発腫瘍（単数以上）の転移からの続発性腫瘍である。一部の実施形態において、薬物送達は、リンパ節に又は腹膜若しくは胸膜表面に対するものであり得る。
【0113】
一部の実施形態におけるのは、本明細書において開示されているブロックコポリマー、ミセル又は組成物のいずれかの治療有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象においてがんを処置する方法である。
【0114】
一部の実施形態において、がんは、癌、肉腫、リンパ腫、白血病、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫又は精上皮腫である。
【0115】
一部の実施形態において、腫瘍は、がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、頭頸部扁平細胞癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿道がん、食道がん、結腸直腸がん、腹膜転移、又は脳、皮膚（黒色腫及び肉腫を含める）である。一部の実施形態において、がんは、乳がん、頭頸部扁平細胞癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、腎がん又は結腸直腸がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がんである。一部の実施形態において、がんは、頭頸部扁平細胞癌（ＮＨＳＣＣ）である。一部の実施形態において、がんは、食道がんである。一部の実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。
【0116】
一部の実施形態において、がんは固形腫瘍である。
【0117】
一部の実施形態において、腫瘍は、約５％、約１０％、約１５％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約５０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約６０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約７０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約７５％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約８０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約８５％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約９０％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約９５％低減される。一部の実施形態において、腫瘍は、約９９％低減される。
【0118】
一部の実施形態において、がんは、固形腫瘍ではない。
【0119】
投薬の方法及び処置レジメン
本開示の医薬組成物は、投与の意図される方法又は経路と適合性のあるように製剤化することができ；例証的な投与経路は、本明細書において説明されている。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、経口、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、皮下、腫瘍内又は皮内注射による投薬又は投与のための形態である。一部の実施形態において、医薬組成物は、経口、筋肉内、皮下又は静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）投与のための水溶液又は懸濁液として製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、単一用量として投与するために製剤化される。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、ＩＶによってボーラスとして投与するために製剤化される。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、腫瘍中への注射によって投与するために製剤化される。
本開示の医薬組成物は、投与の意図される方法又は経路と適合性のあるように製剤化することができ；例証的な投与経路は、本明細書において説明されている。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、経口、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、皮下、腫瘍内又は皮内注射による投薬又は投与のための形態である。一部の実施形態において、医薬組成物は、経口、筋肉内、皮下又は静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）投与のための水溶液又は懸濁液として製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、単一用量として投与するために製剤化される。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、ＩＶによってボーラスとして投与するために製剤化される。一部の実施形態において、本明細書において開示されている医薬組成物は、腫瘍中への注射によって投与するために製剤化される。
【0120】
一部の実施形態において、本明細書において開示されている化合物を含有する組成物は、予防的及び／又は治療的処置のために投与される。ある特定の治療用途において、組成物は、疾患又は状態をすでに患う患者に、疾患又は状態の症状の少なくとも１つを治癒する又は少なくとも部分的に停止するのに十分な量で投与される。この使用に有効な量は、疾患又は状態の重症度及び過程、前の治療、患者の健康状態、体重及び薬物への応答、並びに処置する医師の判断に依存する。治療有効量は、任意選択的に、以下に限定されないが用量漸増臨床試験を含めた方法によって決定される。
【0121】
典型的な投与量は、１用量当たり約０．００１ｍｇ～約１００ｍｇ／ｋｇを範囲とする。一部の実施形態において、用量範囲は、約０．０１ｍｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、用量のさらなる範囲は、１用量当たり約０．０５ｍｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、用量は、約５０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、用量は、約１００ｍｇ／ｋｇである。正確な投与量は、投与の頻度及びモード、処置される対象の性別、年齢、体重及び全般的な健康、処置される状態の性質及び重症度及び処置される任意の付随疾患、並びに当業者に明らかな他の因子に依存する。
【0122】
ある特定の実施形態において、投与されている組成物の用量は、一時的に低減する又は時間のある特定の長さの間一時的に中止する（すなわち、「休薬日」）ことができる。
【0123】
一部の実施形態において、方法は、組成物を１回投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、組成物を２回以上投与することを含む。一部の実施形態において、組成物は、１日当たり１回投与される。
【0124】
一部の実施形態において、対象は、哺乳動物である。一部の実施形態において、対象はヒトである。
【0125】
組合せ治療
別の態様において、本明細書において開示されている組成物は、１つ以上の追加の治療とともに投与される。一部の実施形態において、方法は、第２の抗がん治療をさらに含む。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、外科手術、化学療法、放射線治療、遺伝子治療又は免疫療法である。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、免疫療法である。一部の実施形態において、免疫療法は、チェックポイント治療である。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、放射線治療である。一部の実施形態において、第２の治療は、外科手術である。
別の態様において、本明細書において開示されている組成物は、１つ以上の追加の治療とともに投与される。一部の実施形態において、方法は、第２の抗がん治療をさらに含む。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、外科手術、化学療法、放射線治療、遺伝子治療又は免疫療法である。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、免疫療法である。一部の実施形態において、免疫療法は、チェックポイント治療である。一部の実施形態において、第２の抗がん治療は、放射線治療である。一部の実施形態において、第２の治療は、外科手術である。
【0126】
ＩＩＩ．カプセル化の方法
別の態様において、本明細書に記載されているのは、ミセル中への治療薬のカプセル化を増加させるための方法であって、治療薬を蛍光色素にコンジュゲートすることを含む方法である。
別の態様において、本明細書に記載されているのは、ミセル中への治療薬のカプセル化を増加させるための方法であって、治療薬を蛍光色素にコンジュゲートすることを含む方法である。
【0127】
一部の実施形態において、方法は、コンジュゲートされている治療薬をブロックコポリマーに接触させてミセルを形成することをさらに含む。
【0128】
一部の実施形態において、治療薬は、約５～約２０ＫＤａのタンパク質である。
【0129】
一部の実施形態において、タンパク質は、サイトカイン又はその断片である。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７若しくはＩＬ－１８タンパク質又はその断片である。
【0130】
一部の実施形態において、治療薬は、抗体又はその断片である。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、二重特異性抗体又はその断片である。一部の実施形態において、二重特異性抗体又はその断片は、融合タンパク質である。一部の実施形態において、融合タンパク質は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）である。
【0131】
一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００ｎｍ～約９００ｎｍの励起スペクトルを有する。一部の実施形態において、蛍光色素は、約４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００又は８５０ｎｍの励起スペクトルを有する。
【0132】
一部の実施形態において、蛍光色素は、クマリン、ローダミン、シアニン、キサンテン、フルオレセイン、又はそのスルホン化若しくは負に帯電した形態、又は図２２からの化合物である。
【0133】
定義
以下の記載において、様々な実施形態の徹底的な理解を提供するために、ある特定の具体的な詳細が説明される。しかしながら、当業者は、本発明がこれらの詳細なく実践することができることを理解されよう。他の例において、周知の構造は、実施形態の不必要に不明瞭な記載を回避するために、示されていない又は詳細に記載されていない。文脈が別段に必要としない限り、以下に続く本明細書及び請求項の全体にわたって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語及びその変動、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープンな包含的な意味で、すなわち、「以下に限定されないが、を含めて」として解釈されるべきである。さらに、本明細書において提供されている見出しは、便宜だけのためであり、請求項に係る発明の範疇又は意味を解釈するものでない。
以下の記載において、様々な実施形態の徹底的な理解を提供するために、ある特定の具体的な詳細が説明される。しかしながら、当業者は、本発明がこれらの詳細なく実践することができることを理解されよう。他の例において、周知の構造は、実施形態の不必要に不明瞭な記載を回避するために、示されていない又は詳細に記載されていない。文脈が別段に必要としない限り、以下に続く本明細書及び請求項の全体にわたって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語及びその変動、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープンな包含的な意味で、すなわち、「以下に限定されないが、を含めて」として解釈されるべきである。さらに、本明細書において提供されている見出しは、便宜だけのためであり、請求項に係る発明の範疇又は意味を解釈するものでない。
【0134】
本明細書及び添付の請求項において使用されている場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、内容が別段に明らかに指示していない限り、複数の参照対象を含む。「又は」という用語は、内容が別段に明らかに指示していない限り、「及び／又は」を含めたそれの意味で一般に用いられることも注記されるべきである。
【0135】
下記の用語は、本明細書で使用される場合、別段に表示されていない限り以下の意味を有する：
「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。
「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。
【0136】
「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を指す。
【0137】
「アルキル」は、１～２０個の炭素原子を有するとともに単結合によって分子の残りに結合している直鎖又は分岐の炭化水素鎖基を指す。最大１０個までの炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１～Ｃ１０アルキルと称され、同様に、例えば、最大６個までの炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（及び本明細書において定義されている他の部分）は、同様に表される。アルキル基としては、以下に限定されないが、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ９アルキル、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ７アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ５アルキル、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ２～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８アルキル及びＣ４～Ｃ８アルキルが挙げられる。代表的なアルキル基としては、以下に限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（ｉ－プロピル）、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシル、１－エチル－プロピルなどが挙げられる。一部の実施形態において、アルキルは、メチル、エチル、ｓ－ブチル又は１－エチル－プロピルである。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、アルキル基は、下に記載されている通り任意選択的に置換されていてよい。「アルキレン」又は「アルキレン鎖」は、分子の残りをラジカル基に連結する直鎖又は分岐の二価の炭化水素鎖を指す。一部の実施形態において、アルキレンは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態において、アルキレンは、－ＣＨ２－である。一部の実施形態において、アルキレンは、－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態において、アルキレンは、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。
【0138】
「アルコキシ」は、Ｒが定義されている通りのアルキル基である式－ＯＲの基を指す。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、アルコキシ基は、下に記載されている通り任意選択的に置換されていてよい。代表的なアルコキシ基としては、以下に限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシが挙げられる。一部の実施形態において、アルコキシはメトキシである。一部の実施形態において、アルコキシはエトキシである。
【0139】
「ヘテロアルキレン」は、アルキルの１個以上の炭素原子がＯ、Ｎ又はＳ原子と置き換えられる上に記載されている通りのアルキル基を指す。「ヘテロアルキレン」又は「ヘテロアルキレン鎖」は、分子の残りをラジカル基に連結する直鎖又は分岐の二価のヘテロアルキル鎖を指す。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、ヘテロアルキル基又はヘテロアルキレン基は、下に記載されている通り任意選択的に置換されていてよい。代表的なヘテロアルキル基としては、以下に限定されないが、－ＯＣＨ２ＯＭｅ、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ又は－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２が挙げられる。代表的なヘテロアルキレン基としては、以下に限定されないが－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－又は－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－が挙げられる。
【0140】
「アルキルアミノ」は、各Ｒが独立して、上記で定義されている通りのアルキル基である式－ＮＨＲ又は－ＮＲＲの基を指す。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、アルキルアミノ基は、下に記載されている通り任意選択的に置換されていてよい。
【0141】
「芳香族」という用語は、ｎが整数である４ｎ＋２π電子を含有する非局在化π電子系を有する平面環を指す。芳香族は、任意選択的に置換されていてよい。「芳香族」という用語は、アリール基（例えば、フェニル、ナフタレニル）及びヘテロアリール基（例えば、ピリジニル、キノリニル）の両方を含む。
【0142】
「アリール」は、環を形成する原子の各々が炭素原子である芳香族環を指す。アリール基は、任意選択的に置換されていてよい。アリール基の例としては、以下に限定されないが、フェニル及びナフタレニルが挙げられる。一部の実施形態において、アリールはフェニルである。構造に依存して、アリール基は、モノラジカル又はジラジカル（すなわち、アリーレン基）であり得る。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、「アリール」という用語又は接頭辞「ａｒ－」（例えば、「アラルキル」における）は、任意選択的に置換されているアリール基を含むと意味される。
【0143】
「カルボキシ」は、－ＣＯ２Ｈを指す。一部の実施形態において、カルボキシ部分は、カルボン酸部分と同様の物理的及び／又は化学的な特性を呈する官能基又は部分を指す「カルボン酸生物学的等価体」と置き換えることができる。カルボン酸生物学的等価体は、カルボン酸基のものと同様の生物学的特性を有する。カルボン酸部分を有する化合物は、カルボン酸生物学的等価体と交換されたカルボン酸部分を有し、カルボン酸含有化合物と比較した場合に同様の物理的及び／又は生物学的特性を有することができる。例えば、一実施形態において、カルボン酸生物学的等価体は、生理学的ｐＨでカルボン酸基とおおよそ同じ程度にイオン化する。カルボン酸の生物学的等価体の例としては、限定されないが、以下が挙げられる：
【0144】
【化23】
【0145】
「シクロアルキル」は、環を形成する原子の各々（すなわち、骨格原子）が炭素原子である、単環式又は多環式の非芳香族基を指す。シクロアルキルは、飽和又は部分不飽和されていてよい。シクロアルキルは、芳香族環と縮合されていてよい（この場合、シクロアルキルは、非芳香族環炭素原子を介して結合されている）。シクロアルキル基は、３～１０個の環原子を有する基を含む。一部の実施形態において、シクロアルキルは、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、シクロアルキルは、３～６員シクロアルキルである。代表的なシクロアルキルとしては、以下に限定されないが、３～１０個の炭素原子、３～８個の炭素原子、３～６個の炭素原子、又は３～５個の炭素原子を有するシクロアルキルが挙げられる。単環式シクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。一部の実施形態において、単環式シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルである。多環式基としては、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニル、及び３，４－ジヒドロナフタレン－１（２Ｈ）－オンが挙げられる。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、シクロアルキル基は、任意選択的に置換されていてよい。
【0146】
「縮合されている」は、存在する環構造に縮合されている、本明細書に記載されている任意の環構造を指す。縮合環がヘテロシクリル環又はヘテロアリール環である場合、縮合ヘテロシクリル環又は縮合ヘテロアリール環の一部となる存在する環構造上の任意の炭素原子は、窒素原子と置き換えることができる。
【0147】
「ハロ」又は「ハロゲン」は、ブロモ、クロロ、フルオロ又はヨードを指す。
【0148】
「ハロアルキル」は、上記で定義されている通りの１個以上のハロ基によって置換されている上記で定義されている通りのアルキル基、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、１，２－ジフルオロエチル、３－ブロモ－２－フルオロプロピル、１，２－ジブロモエチルなどを指す。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、ハロアルキル基は、任意選択的に置換されていてよい。
【0149】
「ハロアルコキシ」は、上記で定義されている通りの１個以上のハロ基によって置換されている上記で定義されている通りのアルコキシ基、例えば、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、フルオロメトキシ、トリクロロメトキシ、２，２，２－トリフルオロエトキシ、１，２－ジフルオロエトキシ、３－ブロモ－２－フルオロプロポキシ、１，２－ジブロモエトキシなどを指す。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、ハロアルコキシ基は、任意選択的に置換されていてよい。
【0150】
「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクリル」又は「複素環式環」は、２～１３個の炭素原子並びに窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１～６個のヘテロ原子を含む安定な３～１４員非芳香族環基を指す。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ２～Ｃ７ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ２～Ｃ６ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ２～Ｃ５ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、３～８員ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、３～７員ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、３～６員ヘテロシクロアルキルである。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、３～５員ヘテロシクロアルキルである。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、ヘテロシクロアルキル基は、縮合環系（アリール又はヘテロアリール環と縮合されている場合、ヘテロシクロアルキルは非芳香族環原子を介して結合されている）又は架橋環系を挙げることができる単環式又は二環式環系であってよい。ヘテロシクリル基における窒素、炭素又は硫黄原子は、任意選択的に酸化することができる。窒素原子は、任意選択的に四級化することができる。ヘテロシクロアルキル基は、部分的又は完全に飽和されている。こうしたヘテロシクロアルキル基の例としては、以下に限定されないが、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２－オキソピペラジニル、２－オキソピペリジニル、２－オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１－オキソ－チオモルホリニル、１，１－ジオキソ－チオモルホリニルが挙げられる。ヘテロシクロアルキルという用語は、以下に限定されないが単糖類、二糖類及びオリゴ糖類を含めて、炭水化物の全ての環形態も含む。別段に注記されていない限り、ヘテロシクロアルキルは、環中に２～１０個の炭素を有する。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、環中に２～８個の炭素を有する。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、環中に２～８個の炭素、及び１個又は２個のＮ原子を有する。ヘテロシクロアルキルにおける炭素原子の数について言及する場合、ヘテロシクロアルキルにおける炭素原子の数は、ヘテロシクロアルキル（すなわち、ヘテロシクロアルキル環の骨格原子）を構成する原子の合計数（ヘテロ原子を含める）と同じではないと理解される。本明細書において具体的に別段に明記されていない限り、ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的に置換されていてよい。
【0151】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１個以上の環ヘテロ原子を含むアリール基を指す。ヘテロアリールは、単環式又は二環式である。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、５員又は６員のヘテロアリールである。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、５員ヘテロアリールである。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、６員ヘテロアリールである。単環式ヘテロアリールの例示的な例としては、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピリダジニル、トリアジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、インドリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、プリン、キノリジン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、１，８－ナフチリジン及びプテリジンが挙げられる。単環式ヘテロアリールの例示的な例としては、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピリダジニル、トリアジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル及びフラザニルが挙げられる。二環式ヘテロアリールの例示的な例としては、インドリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、プリン、キノリジン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、１，８－ナフチリジン及びプテリジンが挙げられる。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、チエニル、チアジアゾリル又はフリルである。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、環中に０～４個のＮ原子を含有する。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、環中に１～４個のＮ原子を含有する。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、環中に０～４個のＮ原子、０～１個のＯ原子、及び０～１個のＳ原子を含有する。一部の実施形態において、ヘテロアリールは、環中に１～４個のＮ原子、０～１個のＯ原子、及び０～１個のＳ原子を含有する。
【0152】
「任意選択的に置換されている」又は「置換されている」という用語は、参照されている基が、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、－ＯＨ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルスルホン、アリールスルホン、－ＣＮ、アルキン、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルキン、ハロゲン、アシル、アシルオキシ、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯ２アルキル、ニトロ並びに一置換及び二置換アミノ基（例えば、－ＮＨ２、－ＮＨＲ、－Ｎ（Ｒ）２）を含めたアミノ、並びにその保護誘導体から個々に及び独立して選択される１個以上の追加の基（単数以上）で置換されていてよいことを意味する。一部の実施形態において、任意選択の置換基は、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、シクロアルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ３）、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＯＨ、－ＣＯ２Ｈ及び－ＣＯ２アルキルから独立して選択される。一部の実施形態において、任意選択の置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＯＣＨ３及び－ＯＣＦ３から独立して選択される。一部の実施形態において、任意選択の置換基は、フルオロ、クロロ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＯＣＨ３及び－ＯＣＦ３から独立して選択される。一部の実施形態において、置換されている基は、先行する基の１個又は２個で置換されている。一部の実施形態において、脂肪族炭素原子上の任意選択の置換基（芳香族炭素原子を除外する、非環式又は環式の飽和又は不飽和の炭素原子）は、オキソ（＝Ｏ）を含む。
【0153】
「互変異性体」は、分子の１個の原子から同じ分子の別の原子へのプロトンシフトを指す。本明細書において表されている化合物は、互変異性体として存在することができる。互変異性体は、単結合及び隣接する二重結合の切り換えを伴う水素原子の移動によって相互変換可能である化合物である。互変異性化が可能である結合配置において、互変異性体の化学平衡が存在する。本明細書において開示されている化合物の全ての互変異性体形態が企図される。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒及びｐＨを含めて、いくつかの因子に依存する。互変異性の相互変換の一部の例としては、以下が挙げられる：
。
。
【0154】
【化24】
【0155】
「同時投与」という用語などは、本明細書で使用される場合、単一患者への選択された治療薬の投与を包含することが意味され、薬剤が同一若しくは異なる投与経路によって又は同一若しくは異なる時間で投与される処置レジメンを含むことが意図される。
【0156】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、処置されている疾患又は状態の症状の１つ以上をある程度緩和する、投与される薬剤又は化合物の十分な量を指す。結果は、疾患の兆候、症状若しくは原因の低減及び／若しくは軽減、又は生物系の任意の他の所望の変更であり得る。例えば、治療的使用のための「有効量」は、疾患症状の臨床的に著しい減少を提供するのに必要とされる、本明細書において開示されている通りの化合物を含む組成物の量である。任意の個々の場合における適切な「有効」量は、用量漸増研究などの技法を使用して決定することができる。
【0157】
別段に明記されていない限り、この出願において使用される以下の用語は、下記に与えられている定義を有する。「含めて（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定するものでない。本明細書において使用されているセクション見出しは、組織化の目的だけのためであり、記載されている対象物を限定していると解釈されるべきでない。
【0158】
「薬学的に許容される」は、本明細書で使用される場合、ブロックコポリマーの生物学的活性又は特性を抑制しないとともに相対的に非毒性である担体又は希釈液などの材料に参照し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的影響を引き起こすこと又はそれが含有される組成物の構成成分のいずれかと有害な方式で相互作用することなく、個体に投与される。
【0159】
「薬学的に許容される塩」という用語は、適当なアニオンとの組合せにおける治療的に活性な薬剤のカチオン形態、又は代替実施形態において、適当なカチオンとの組合せにおける治療的に活性な薬剤のアニオン形態からなる治療的に活性な薬剤の形態を指す。Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ。国際純正応用化学連合、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ ２００２。Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ、Ｌ．Ｄ．Ｂｉｇｈｌｅｙ、Ｄ．Ｃ．Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７、６６、１～１９。Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ及びＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ、編集、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ／Ｚｕｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ／ＶＨＣＡ、２００２。医薬塩は、典型的に、胃及び腸液中で非イオン種よりも可溶性及び急速に可溶性であり、そのため、固体剤形において有用である。さらに、それらの可溶度がしばしばｐＨの関数であるので、消化管の１つの又は別の部分における選択的な溶解が可能であり、これは遅延及び徐放の挙動の一態様として操作することができる。その上、塩形成分子が中性形態と平衡状態であり得るので、生物学的膜を介する通過は調整することができる。
【0160】
一部の実施形態において、薬学的に許容される塩は、ブロックコポリマーを酸と反応させることによって得られる。一部の実施形態において、本明細書において開示されているブロックコポリマー（すなわち、遊離塩基形態）は、塩基性であり、有機酸又は無機酸と反応される。無機酸としては、以下に限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸及びメタリン酸が挙げられる。有機酸／としては、以下に限定されないが、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸；２，２－ジクロロ酢酸；２－ヒドロキシエタンスルホン酸；２－オキソグルタル酸；４－アセトアミド安息香酸；４－アミノサリチル酸；酢酸；アジピン酸；アスコルビン酸（Ｌ）；アスパラギン酸（Ｌ）；ベンゼンスルホン酸；安息香酸；ショウノウ酸（＋）；カンファー－１０－スルホン酸（＋）；カプリン酸（デカン酸）；カプロン酸（ヘキサン酸）；カプリル酸（オクタン酸）；炭酸；ケイ皮酸；クエン酸；シクラミン酸；ドデシル硫酸；エタン－１，２－ジスルホン酸；エタンスルホン酸；ギ酸；フマル酸；ガラクタル酸；ゲンチジン酸；グルコヘプタン酸（Ｄ）；グルコン酸（Ｄ）；グルクロン酸（Ｄ）；グルタミン酸；グルタル酸；グリセロリン酸；グリコール酸；馬尿酸；イソ酪酸；乳酸（ＤＬ）；ラクトビオン酸；ラウリン酸；マレイン酸；リンゴ酸（－Ｌ）；マロン酸；マンデル酸（ＤＬ）；メタンスルホン酸；ナフタレン－１，５－ジスルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；ニコチン酸；オレイン酸；シュウ酸；パルミチン酸；パモ酸；リン酸；プロピオン酸；ピログルタミン酸（－Ｌ）；サリチル酸；セバシン酸；ステアリン酸；コハク酸；硫酸；酒石酸（＋Ｌ）；チオシアン酸；トルエンスルホン酸（ｐ）；及びウンデシレン酸が挙げられる。
【0161】
一部の実施形態において、本明細書において開示されているブロックコポリマーは、塩化物塩、サルフェート塩、臭化物塩、メシレート塩、マレエート塩、シトレート塩又はホスフェート塩として調製される。
【0162】
一部の実施形態において、薬学的に許容される塩は、本明細書において開示されているブロックコポリマーを塩基と反応させることによって得られる。一部の実施形態において、本明細書において開示されているブロックコポリマーは、酸性であり、塩基と反応される。こうした状況において、本明細書において開示されているブロックコポリマーの酸性プロトンは、金属イオン、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム又はアルミニウムイオンによって置き換えられる。一部の場合において、本明細書に記載されているブロックコポリマーは、以下に限定されないが、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、メグルミン、Ｎ－メチルグルカミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどの有機塩基と配位する。他の場合において、本明細書に記載されているブロックコポリマーは、アミノ酸、例えば、以下に限定されないが、アルギニン、リジンなどと塩を形成する。酸性プロトンを含むブロックコポリマーと塩を形成するために使用される許容可能な無機塩基としては、以下に限定されないが、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムなどが挙げられる。一部の実施形態において、本明細書において提供されているブロックコポリマーは、ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メラミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩又はアンモニウム塩として調製される。
【0163】
薬学的に許容される塩への言及は、溶媒付加形態を含むと理解されるべきである。一部の実施形態において、溶媒和物は、溶媒の化学量論量又は非化学量論量のいずれかを含有し、薬学的に許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどとの結晶化のプロセス中に形成される。水和物は、溶媒が水である場合に形成される、又はアルコラートは、溶媒がアルコールである場合に形成される。本明細書に記載されている化合物の溶媒和物は、好都合には、本明細書に記載されているプロセス中に調製又は形成される。加えて、本明細書において提供されている化合物は、任意選択的に、非溶媒和並びに溶媒和の形態で存在する。
【0164】
本明細書に記載されている方法及び製剤は、Ｎ－オキシド（適切な場合）、又は本明細書に記載されているブロックコポリマーの薬学的に許容される塩、並びに同じ型の活性を有するこれらの化合物の活性代謝物の使用を含む。
【0165】
別の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、同位体的に（例えば、放射性同位体で）、又は以下に限定されないが、発色団若しくは蛍光性部分、生物発光標識、若しくは化学発光標識の使用を含めて、別の他の手段によって標識化される。
【0166】
本明細書に記載されている化合物は、１個以上の原子が、自然界に通常見出される原子質量又は質量数と異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられるという事実を別にすれば、本明細書において表されている様々な式及び構造に列挙されているものと同一である同位体標識化化合物を含む。本化合物に組み込むことができる同位体の例としては、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ及び３３Ｐなど、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄、フッ素塩素、ヨウ素、リンの同位体が挙げられる。一態様において、本明細書に記載されている同位体標識化化合物、例えば、３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位元素が組み込まれているものは、薬物及び／又は基質組織分布アッセイにおいて有用である。一態様において、重水素などの同位体での置換は、例えば、インビボ半減期の増加又は投与量要求の低減など、より大きな代謝安定性に起因するある特定の治療的利点を与える。
【0167】
本明細書で使用される場合、「ｐＨ応答性系」、「ｐＨ応答性組成物」、「ミセル」、「ｐＨ応答性ミセル」、「ｐＨ感受性ミセル」、「ｐＨ活性化可能ミセル」及び「ｐＨ活性化可能ミセル（ｐＨＡＭ）ナノ粒子」は、ｐＨ（例えば、ある特定のｐＨの上又は下）に依存して解離する、１種以上の化合物を含むミセルを示すために本明細書において相互交換可能に使用される。非限定的な例として、ある特定のｐＨで、式（ＩＩＩ）のブロックコポリマーは、実質的にミセル形態である。ｐＨが変化（例えば、減少）すると、ミセルは解離し始め、ｐＨがさらに変化（例えば、さらに減少）すると、式（ＩＩＩ）のブロックコポリマーは、実質的に解離（非ミセル）形態で存在する。
【0168】
本明細書で使用される場合、「ｐＨ転移範囲」は、ミセルが解離するｐＨ範囲を示す。
【0169】
本明細書で使用される場合、「ｐＨ転移値」（ｐＨ）は、ミセルの半分が解離されるｐＨを示す。
【0170】
「ナノプローブ」は、画像化標識化部分を含むｐＨ感受性ミセルを示すために本明細書で使用される。一部の実施形態において、標識化部分は、蛍光色素である。一部の実施形態において、蛍光色素は、インドシアニングリーン色素である。
【0171】
「投与する」、「投与すること」、「投与」などという用語は、本明細書で使用される場合、生物学的作用の所望の部位への化合物又は組成物の送達を可能にするために使用することができる方法を指す。これらの方法としては、以下に限定されないが、経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内又は注入を含める）、局所及び直腸投与が挙げられる。当業者は、本明細書に記載されている化合物及び方法で用いることができる投与技法に精通している。一部の実施形態において、本明細書に記載されている化合物及び組成物は、経口的に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている組成物は、静脈内に投与される。
【0172】
「同時投与」などという用語は、本明細書で使用される場合、単一患者への選択された治療薬の投与を包含すると意味され、薬剤が同一若しくは異なる投与経路によって又は同一若しくは異なる時間に投与される処置レジメンを含むと意図される。
【0173】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、処置されている疾患又は状態の症状の１つ以上をある程度緩和する、投与される薬剤又は化合物の十分な量を指す。結果としては、疾患の兆候、症状若しくは原因の低減及び／若しくは軽減、又は生物系の任意の他の所望の変更が挙げられる。例えば、治療的使用についての「有効量」は、疾患症状の臨床的に著しい減少を提供するのに必要とされる本明細書において開示されている通りの化合物を含む組成物の量である。任意の個々の場合における適切な「有効」量は、任意選択的に、用量漸増研究などの技法を使用して決定される。
【0174】
「増強する」又は「増強すること」という用語は、本明細書で使用される場合、効力又は持続期間のいずれかにおいて所望の効果を増加又は延長することを意味する。したがって、治療薬の効果を増強することに関して、「増強すること」という用語は、効力又は持続期間のいずれかにおいて、系に対する他の治療薬の効果を増加又は延長する能力を指す。「増強有効量」は、本明細書で使用される場合、所望の系において別の治療薬の効果を増強するのに適切な量を指す。
【0175】
「対象」又は「患者」という用語は、哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、以下に限定されないが、哺乳動物クラスの任意のメンバー：ヒト、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジー、及び他の類人猿及びモンキー種；農場動物、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；家畜、例えば、ウサギ、イヌ及びネコ；げっ歯類、例えば、ラット、マウス及びモルモットなどを含めた実験室動物が挙げられる。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
【0176】
「処置する」、「処置すること」又は「処置」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患若しくは状態の少なくとも１つの症状を軽減すること、弱めること若しくは寛解させること、追加の症状を防止すること、疾患若しくは状態を阻害すること、例えば、疾患若しくは状態の発症を抑止すること、疾患若しくは状態を緩和すること、疾患若しくは状態の後退を引き起こすこと、疾患若しくは状態によって引き起こされる状態を緩和すること、又は予防的に及び／若しくは治療的にのいずれかで疾患若しくは状態の症状を阻止することを含む。
【0177】
請求項における「又は」という用語の使用は、開示が代替物のみ及び「及び／又は」を指す定義を支持しても、代替物のみを指すことが明白に示されていない限り又は代替物が相互排他的でない限り「及び／又は」を意味するために使用される。この願書の全体にわたって、「約」という用語は、値を決定するために用いられている装置又は方法についての誤差の標準偏差、例えば、言及される値の±１０％を値が含むことを示すために使用される。長年にわたる特許法に従って、「ａ」及び「ａｎ」という単語は、請求項又は明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語と併せて使用される場合、具体的に注記されていない限り１つ以上を示す。
【実施例】
【0178】
［実施例１］ ブロックコポリマーの合成
一般的合成方法
本明細書に記載されているブロックコポリマー及びミセルは、標準合成技術を使用して、又は当技術分野において公知の方法を使用して合成される。
一般的合成方法
本明細書に記載されているブロックコポリマー及びミセルは、標準合成技術を使用して、又は当技術分野において公知の方法を使用して合成される。
【0179】
別段に表示されていない限り、質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術及び薬理学の従来の方法が用いられる。ブロックコポリマーは、例えば、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第６版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．に記載されているものなど標準的な有機化学技法を使用して調製される。
【0180】
本明細書において使用されている一部の略語は、以下の通りである：
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＦ－ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール
ＥＤＣＩ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＩＣＧ－ＯＳｕ：インドシアニングリーンスクシンアミドエステル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＰＭＤＥＴＡ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－ペンタメチルジエチレントリアミン
ＣＤＩ カルボニルジイミダゾール
ＮＨＳ－カーボネート Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドカーボネート
ＳＰＤＢ Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート
ＴＥＡ：トリエチルアミン
Ｈｒ 時間（単数以上）
ＩＳＲ 試料再分析の発生
ＩＶ 静脈内
ｋｇ キログラム
ｍｇ ミリグラム（単数以上）
ｍＬ ミリリットル（単数以上）
μｇ マイクログラム（単数以上）
ＮＣ 算出されず
ＮＲ 報告されず
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＦ－ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール
ＥＤＣＩ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＩＣＧ－ＯＳｕ：インドシアニングリーンスクシンアミドエステル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＰＭＤＥＴＡ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－ペンタメチルジエチレントリアミン
ＣＤＩ カルボニルジイミダゾール
ＮＨＳ－カーボネート Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドカーボネート
ＳＰＤＢ Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート
ＴＥＡ：トリエチルアミン
Ｈｒ 時間（単数以上）
ＩＳＲ 試料再分析の発生
ＩＶ 静脈内
ｋｇ キログラム
ｍｇ ミリグラム（単数以上）
ｍＬ ミリリットル（単数以上）
μｇ マイクログラム（単数以上）
ＮＣ 算出されず
ＮＲ 報告されず
【0181】
適当なＰＥＧポリマーは、（例えば、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから）購入することができる、又は当技術分野において公知の方法に従って合成することができる。一部の実施形態において、親水性ポリマーは、ブロックコポリマーを形成するために疎水性モノマーの重合のための開始剤として使用することができる。例えば、ＭＰＣポリマー（例えば、狭く分布されたＭＰＣポリマー）は、市販で利用可能な小分子開始剤、例えば、エチル２－ブロモ－２－メチルプロパノエート（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）との原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）によって調製することができる。これらの結果として得られたＭＰＣポリマーは、ブロックポリマーを形成するために他のモノマーとさらに共重合するための巨大分子ＡＴＲＰ開始剤として使用することができ、ブロックポリマーは、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）又は可逆的付加－断片化連鎖移動（ＲＡＦＴ）方法を使用して合成することができる。
【0182】
一部の実施形態において、適当なブロックコポリマー及びミセルは、標準合成技術を使用して、又は参照によりそれら全体で本明細書に組み込まれる特許公報番号ＷＯ２０１２０３９７４１及びＷＯ２０１５１８８１５７に記載されている方法との組合せにおいて当技術分野で公知の方法を使用して合成することができる。
【0183】
［実施例２］ ミセル形成
一般的方法
メタノールは、ガラス丸底フラスコ中でブロックコポリマーに添加され、超音波処理浴を利用して溶解させる。溶解後、結果として得られた溶液は、撹拌子を含有するＨＤＰＥ瓶に定量的に移され、氷浴を用いて０℃に冷却される。水は、ぜん動ポンプを使用してＨＤＰＥ瓶中でメタノールポリマー溶液に、撹拌しながら滴下により添加される。ポリマー溶液を含有するＨＤＰＥ瓶は、氷浴中で維持され、ミセルの形成をもたらす。メタノールは、１００ｋのＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ Ｍｉｎｉ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅを介して５サイクルのタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）を使用してミセル溶液から除去される。
一般的方法
メタノールは、ガラス丸底フラスコ中でブロックコポリマーに添加され、超音波処理浴を利用して溶解させる。溶解後、結果として得られた溶液は、撹拌子を含有するＨＤＰＥ瓶に定量的に移され、氷浴を用いて０℃に冷却される。水は、ぜん動ポンプを使用してＨＤＰＥ瓶中でメタノールポリマー溶液に、撹拌しながら滴下により添加される。ポリマー溶液を含有するＨＤＰＥ瓶は、氷浴中で維持され、ミセルの形成をもたらす。メタノールは、１００ｋのＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ Ｍｉｎｉ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅを介して５サイクルのタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）を使用してミセル溶液から除去される。
【0184】
単純混合することによって調製されるＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤
水中のポリマーミセル溶液を注射用水（ＷＦＩ）で希釈した。リン酸緩衝液中１０％（ｗ／ｗ）のＩＬ－２（ポリマーの％）を添加することで、ピペット混合することによって１ｍｇ／ｍＬのミセル及び０．１ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２の溶液を作製した。溶液を室温で１０分間インキュベートした。次いで、試料を高速度で微量遠心機中にて周囲温度で遠心分離した（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、２１，１３０×ｇ、１０分）。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を全て除去した。次いで、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
水中のポリマーミセル溶液を注射用水（ＷＦＩ）で希釈した。リン酸緩衝液中１０％（ｗ／ｗ）のＩＬ－２（ポリマーの％）を添加することで、ピペット混合することによって１ｍｇ／ｍＬのミセル及び０．１ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２の溶液を作製した。溶液を室温で１０分間インキュベートした。次いで、試料を高速度で微量遠心機中にて周囲温度で遠心分離した（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、２１，１３０×ｇ、１０分）。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を全て除去した。次いで、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
【0185】
ＦＰＬＣによるＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤の精製
方法（例えば、単純混合すること、酸－塩基滴定など）の１つによるＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２非共有結合性製剤又はコンジュゲート。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬカラム（ＧＥ）が備えられているＡｋｔａ Ｐｕｒｅ ２５Ｍ（ＧＥ）システムを使用するＦＰＬＣによって、粗製ＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤を精製した。平衡化を０．７５ｍＬ／分で１×ＰＢＳ中にて行った。適切化サイズ化された試料ループ又はスーパーループを使用して、試料注射を行った。複数の波長（例えば、２１４ｎｍ、２８０ｎｍ、７００ｎｍ）で吸光度をモニタリングしながら、均一溶媒溶出を１×ＰＢＳ中にて０．５ｍＬ／分の流量で行った。画分（０．５ｍＬ）を１．５ｍＬチューブ中に回収した。クロマトグラムによって示された通りの製剤及び遊離タンパク質を含有する画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウエスタンブロット又はドットブロットによって分析した。製剤中にＩＬ－２を含有する画分をプールした。
方法（例えば、単純混合すること、酸－塩基滴定など）の１つによるＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２非共有結合性製剤又はコンジュゲート。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬカラム（ＧＥ）が備えられているＡｋｔａ Ｐｕｒｅ ２５Ｍ（ＧＥ）システムを使用するＦＰＬＣによって、粗製ＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤を精製した。平衡化を０．７５ｍＬ／分で１×ＰＢＳ中にて行った。適切化サイズ化された試料ループ又はスーパーループを使用して、試料注射を行った。複数の波長（例えば、２１４ｎｍ、２８０ｎｍ、７００ｎｍ）で吸光度をモニタリングしながら、均一溶媒溶出を１×ＰＢＳ中にて０．５ｍＬ／分の流量で行った。画分（０．５ｍＬ）を１．５ｍＬチューブ中に回収した。クロマトグラムによって示された通りの製剤及び遊離タンパク質を含有する画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウエスタンブロット又はドットブロットによって分析した。製剤中にＩＬ－２を含有する画分をプールした。
【0186】
ＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤二重エマルジョン溶媒蒸発（ＤＥＳＥ）
ジクロロメタン（ＤＣＭ）中の１．０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液及びリン酸緩衝液中の１．０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２を氷水浴中にて５分間冷やした。ＩＬ－２溶液を氷水浴中にて超音波処理条件下で１０％（ｗ／ｗ、ＩＬ－２／ポリマー）総量で滴下によりポリマー溶液に添加することで、第１のエマルジョン溶液を形成した。第１のエマルジョンを冷水中にて超音波処理条件下で、冷やしたＰＶＡ／ＴＨＬ溶液に滴下により添加することで、第２のエマルジョン溶液を形成した。第２のエマルジョン溶液を終夜室温で撹拌した。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を除去した。次いで、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
ジクロロメタン（ＤＣＭ）中の１．０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液及びリン酸緩衝液中の１．０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２を氷水浴中にて５分間冷やした。ＩＬ－２溶液を氷水浴中にて超音波処理条件下で１０％（ｗ／ｗ、ＩＬ－２／ポリマー）総量で滴下によりポリマー溶液に添加することで、第１のエマルジョン溶液を形成した。第１のエマルジョンを冷水中にて超音波処理条件下で、冷やしたＰＶＡ／ＴＨＬ溶液に滴下により添加することで、第２のエマルジョン溶液を形成した。第２のエマルジョン溶液を終夜室温で撹拌した。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を除去した。次いで、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
【0187】
酸－塩基滴定によるＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２製剤
ｐＨ４．４７のリン酸緩衝液中のポリマー溶液に、リン酸緩衝液中の１０％（ｗ／ｗ）ＩＬ－２を添加し、室温でボルテックスした。１Ｍ ＮａＯＨ溶液を超音波処理条件下で溶液に添加した。溶液をＷＦＩにより最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬのポリマー及び０．１ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２で希釈した。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を除去した。次に、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
ｐＨ４．４７のリン酸緩衝液中のポリマー溶液に、リン酸緩衝液中の１０％（ｗ／ｗ）ＩＬ－２を添加し、室温でボルテックスした。１Ｍ ＮａＯＨ溶液を超音波処理条件下で溶液に添加した。溶液をＷＦＩにより最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬのポリマー及び０．１ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２で希釈した。溶液を膜限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、０．５ｍＬ、ＭＷＣＯ １００ｋＤａ）によって精製することで、非カプセル化ＩＬ－２を除去した。次に、０．５ｍＬの製剤をＡｍｉｃｏｎ超遠心分離装置に添加し、５，０００ｒｃｆで２～３分間遠心分離した。透過物を捨て、ミセル－ＩＬ－２製剤を含有した残余分を注射用水中にて０．５ｍＬに希釈した。このプロセスを１０回反復した。製剤中のＩＬ－２濃度を標準曲線に対するウエスタンブロット又はドットブロットによって決定した。
【0188】
ドットブロットによる製剤中のＩＬ－２及びミセルの定量化
製剤のＩＬ－２含有量及びミセル含有量をドットブロットによって決定した。Ｄｏｔ－Ｂｌｏｔ器具に０．２μｍのニトロセルロース膜を組み入れた。各ウェルを真空下にて２００μＬの１×ＰＢＳで洗浄し、続いて、１００μＬのＰＢＳで再水和した。試料及び標準物（１０～１００μＬ）を添加し、膜に真空を適用した。膜をＰＢＳで２×洗浄した。
製剤のＩＬ－２含有量及びミセル含有量をドットブロットによって決定した。Ｄｏｔ－Ｂｌｏｔ器具に０．２μｍのニトロセルロース膜を組み入れた。各ウェルを真空下にて２００μＬの１×ＰＢＳで洗浄し、続いて、１００μＬのＰＢＳで再水和した。試料及び標準物（１０～１００μＬ）を添加し、膜に真空を適用した。膜をＰＢＳで２×洗浄した。
【0189】
ＩＬ－２免疫ブロッティングを、プローブすることによって、及び２％ ＢＳＡが補充されたＰＢＳ－Ｔ（ＰＢＳとともに０．０５％ツイーン－２０）でブロックし、抗ＩＬ－２ウサギモノクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、２Ｈ２０Ｌ７、ＰＢＳ－Ｔ中１：１０００希釈、１時間）でプローブし、ＰＢＳ－Ｔで４回洗浄し、続いて、ＩＲＤｙｅ（登録商標）６８０ＲＤ（ＬＩ－ＣＯＲ、ＰＢＳ－Ｔ中１：５０００希釈）で標識化されたロバ－抗ウサギＩｇＧでプローブすることによって行った。ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用することによって検出を行い、ＩｍａｇｅＬａｂ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデンシトメトリー分析によって画像を定量化した。標準曲線にフィットさせることによって、ＩＬ－２含有量を決定した。
【0190】
ポリマー標準曲線に対してポリ－エチレングリコールについて免疫ブロッティングすることによって、ポリマー含有量を決定した。免疫ブロッティングを、２％ ＢＳＡが補充されたＰＢＳで膜をブロックし、ＴＨＥ（商標）抗－ＰＥＧ ＩＧＭ ｍＡｂ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、ＰＢＳ中１：１０００希釈）でプローブし、ＰＢＳで４回洗浄し、ＩＲＤｙｅ（登録商標）６８０ＲＤ（ＬＩ－ＣＯＲ、ＰＢＳ中１：５０００希釈）で標識化されたヤギ抗マウスＩｇＭ（μ鎖特異的）でプローブすることによって行った。ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用することによって検出を行い、ＩｍａｇｅＬａｂ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデンシトメトリー分析によって画像を定量化した。ＰＥＧ－ＰＤＢＡ標準曲線にフィットさせることによって、ポリマー含有量を決定した。
【0191】
［実施例３］ インビボ腫瘍マウスモデルについての一般的手順
およそ６～８週齢の雌性ＮＯＤ ｓｃｉｄマウス（Ｓｔｒａｉｎ ＮＯＤ．ＣＢ１７－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊ）に、顎下三角中にて５０μＬの１×ＰＢＳ中の１．５×１０６のＨＮ５腫瘍細胞を播種し、腫瘍が約１週間成長するのを可能にした。ＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２又はＰＥＧ－ＰＤＢＡ－Ｆａｂ製剤を、ＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ＣＷ（ＬｉＣＯＲ）で蛍光標識化されたｒｈＩＬ－２で調製し、プレートリーダーを使用する８００ＣＷ蛍光（λＥｘ７６０ｎｍ、λＥｍ７８０ｎｍ）によって、投薬を正規化した。非カプセル化蛍光標識化タンパク質を対照として使用した。ミセル－ＩＬ－２製剤又はタンパク質を、尾静脈注射を介して投与した。イソフルランを使用して動物に麻酔をかけ、試験物品投与後１時間、３時間、及び２４時間に白色光及び８００ｎｍチャネルでＰｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用して、インビボ小動物画像化を行った。最終のインビボ画像化時点後、動物をＣＯ２窒息及び頸椎脱臼によって屠殺し、主要な臓器のエクスビボ画像化を行った。ＩｍａｇｅＳｔｕｄｉｏソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用するＲＯＩ分析によって、蛍光を定量化した。
およそ６～８週齢の雌性ＮＯＤ ｓｃｉｄマウス（Ｓｔｒａｉｎ ＮＯＤ．ＣＢ１７－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊ）に、顎下三角中にて５０μＬの１×ＰＢＳ中の１．５×１０６のＨＮ５腫瘍細胞を播種し、腫瘍が約１週間成長するのを可能にした。ＰＥＧ－ＰＤＢＡ－ＩＬ－２又はＰＥＧ－ＰＤＢＡ－Ｆａｂ製剤を、ＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ＣＷ（ＬｉＣＯＲ）で蛍光標識化されたｒｈＩＬ－２で調製し、プレートリーダーを使用する８００ＣＷ蛍光（λＥｘ７６０ｎｍ、λＥｍ７８０ｎｍ）によって、投薬を正規化した。非カプセル化蛍光標識化タンパク質を対照として使用した。ミセル－ＩＬ－２製剤又はタンパク質を、尾静脈注射を介して投与した。イソフルランを使用して動物に麻酔をかけ、試験物品投与後１時間、３時間、及び２４時間に白色光及び８００ｎｍチャネルでＰｅａｒｌ Ｔｒｉｌｏｇｙ（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用して、インビボ小動物画像化を行った。最終のインビボ画像化時点後、動物をＣＯ２窒息及び頸椎脱臼によって屠殺し、主要な臓器のエクスビボ画像化を行った。ＩｍａｇｅＳｔｕｄｉｏソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用するＲＯＩ分析によって、蛍光を定量化した。
【0192】
［実施例４］ インビトロＩＬ－２生物活性アッセイのための一般的手順
解凍及び使用ＩＬ－２ Ｂｉｏａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してマニュアルに従って、製剤中のＩＬ－２生物活性を測定した。ＩＬ－２をカプセル化している又はＩＬ－２にコンジュゲートされているミセルを、用量－応答アッセイにおいて酸放出状態又はカプセル化状態のいずれかで評価した。２０μＬの製剤を２０μＬのプールヒト血清、続いて、４０μＬの酸性の酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ酢酸ナトリウム、０．９％生理食塩水、ｐＨ約４．５）と混合し、１５分間室温でインキュベートすることによって、酸放出を行い、引き続いて、４０μＬの２０×ＰＢＳを添加した。カプセル化試料について、酸性の酢酸緩衝液を中性の酢酸緩衝液（０．１Ｍ酢酸ナトリウム、０．９％生理食塩水、ｐＨ７～７．６）と置き換え、同様のプロセスを使用して混合した。放出製剤又はカプセル化製剤の３倍系列希釈を、アッセイ緩衝液（９０％ ＲＰＭＩ １６４０／１０％ウシ胎児血清）中で調製した。製剤希釈物（２５μＬ）を、白色の不透明な９６ウェルマイクロプレート又は半ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に前播種されたＩＬ－２バイオアッセイ細胞を含有するウェルに、製造者推奨に従って添加した。アッセイ緩衝液単独及び処置なし細胞を陰性対照として使用し、他方、ＩＬ－２単独を陽性対照として使用した。プレートを覆い、加湿インキュベーター（３７℃、５％のＣＯ２）において６時間の間インキュベートした。インキュベーション後、７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、１０分間インキュベートし、プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｍ２００ Ｐｒｏ）を使用して生物発光を読んだ。データをＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）からプロットし、ＥＤ５０を非線形フィットによって算出した。
解凍及び使用ＩＬ－２ Ｂｉｏａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してマニュアルに従って、製剤中のＩＬ－２生物活性を測定した。ＩＬ－２をカプセル化している又はＩＬ－２にコンジュゲートされているミセルを、用量－応答アッセイにおいて酸放出状態又はカプセル化状態のいずれかで評価した。２０μＬの製剤を２０μＬのプールヒト血清、続いて、４０μＬの酸性の酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ酢酸ナトリウム、０．９％生理食塩水、ｐＨ約４．５）と混合し、１５分間室温でインキュベートすることによって、酸放出を行い、引き続いて、４０μＬの２０×ＰＢＳを添加した。カプセル化試料について、酸性の酢酸緩衝液を中性の酢酸緩衝液（０．１Ｍ酢酸ナトリウム、０．９％生理食塩水、ｐＨ７～７．６）と置き換え、同様のプロセスを使用して混合した。放出製剤又はカプセル化製剤の３倍系列希釈を、アッセイ緩衝液（９０％ ＲＰＭＩ １６４０／１０％ウシ胎児血清）中で調製した。製剤希釈物（２５μＬ）を、白色の不透明な９６ウェルマイクロプレート又は半ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に前播種されたＩＬ－２バイオアッセイ細胞を含有するウェルに、製造者推奨に従って添加した。アッセイ緩衝液単独及び処置なし細胞を陰性対照として使用し、他方、ＩＬ－２単独を陽性対照として使用した。プレートを覆い、加湿インキュベーター（３７℃、５％のＣＯ２）において６時間の間インキュベートした。インキュベーション後、７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、１０分間インキュベートし、プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｍ２００ Ｐｒｏ）を使用して生物発光を読んだ。データをＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）からプロットし、ＥＤ５０を非線形フィットによって算出した。
【0193】
［実施例５］ 製剤のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のための一般的手順
ミセル－ＩＬ－２製剤をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価することで、ミセル中へのＩＬ－２充填及びＩＬ－２統合性を確認した。レーン当たり１００～２００ｎｇローディングされたタンパク質を標的化するように、試料を調製した。ＦＰＬＣによるＩＬ－２充填製剤精製の特徴付けのため、充填試料は、全く精製することない粗製の製剤を構成し、スピンされた充填試料は、凝集体及び大きい粒子を排除するための高速遠心分離による精製後に製剤を構成し、ミセルプールは、ミセルを含有する画分を組み合わせることによって調製され、遊離ＩＬ－２試料は、非カプセル化タンパク質を含有する画分を含有する。製剤試料を還元要件に依存してβ－メルカプトエタノールの有無において４×Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）中に希釈し、６５℃で５分間変性させた。試料を５０Ｖで３０分間スタックし、続いて、１００Ｖで９０分間分離させることによって、Ａｎｙ ｋＤ（商標）又は４～２０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ勾配Ｍｉｎｉ－Ｐｒｏｔｅａｎゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）にローディングした。ＩＬ－２の検出をＳｉｍｐｌｙ Ｂｌｕｅ Ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって行った。ＩＬ－２をその上、抗ＩＬ－２Ａｂクローン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｌｏｎｅ Ｄ７Ａ５、１：４０００希釈）、続いて、ＨＲＰ－コンジュゲート抗ウサギ二次（ＬＩ－ＣＯＲ、１：２０００希釈）を用いてプローブすることによって０．２μｍニトロセルロース膜に移した後にウエスタンブロットによって決定し、ＥＣＬ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）によって検出し、化学ルミネッセンスをＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰイメージャ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）で捕捉した。ＩｍａｇｅＬａｂ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、画像処理及びデンシトメトリー分析を行った。必要とされる場合、ＩＬ－２の定量化をＩＬ－２標準曲線にフィットさせることによって行った。
ミセル－ＩＬ－２製剤をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価することで、ミセル中へのＩＬ－２充填及びＩＬ－２統合性を確認した。レーン当たり１００～２００ｎｇローディングされたタンパク質を標的化するように、試料を調製した。ＦＰＬＣによるＩＬ－２充填製剤精製の特徴付けのため、充填試料は、全く精製することない粗製の製剤を構成し、スピンされた充填試料は、凝集体及び大きい粒子を排除するための高速遠心分離による精製後に製剤を構成し、ミセルプールは、ミセルを含有する画分を組み合わせることによって調製され、遊離ＩＬ－２試料は、非カプセル化タンパク質を含有する画分を含有する。製剤試料を還元要件に依存してβ－メルカプトエタノールの有無において４×Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）中に希釈し、６５℃で５分間変性させた。試料を５０Ｖで３０分間スタックし、続いて、１００Ｖで９０分間分離させることによって、Ａｎｙ ｋＤ（商標）又は４～２０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ勾配Ｍｉｎｉ－Ｐｒｏｔｅａｎゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）にローディングした。ＩＬ－２の検出をＳｉｍｐｌｙ Ｂｌｕｅ Ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって行った。ＩＬ－２をその上、抗ＩＬ－２Ａｂクローン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｌｏｎｅ Ｄ７Ａ５、１：４０００希釈）、続いて、ＨＲＰ－コンジュゲート抗ウサギ二次（ＬＩ－ＣＯＲ、１：２０００希釈）を用いてプローブすることによって０．２μｍニトロセルロース膜に移した後にウエスタンブロットによって決定し、ＥＣＬ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）によって検出し、化学ルミネッセンスをＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰイメージャ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）で捕捉した。ＩｍａｇｅＬａｂ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、画像処理及びデンシトメトリー分析を行った。必要とされる場合、ＩＬ－２の定量化をＩＬ－２標準曲線にフィットさせることによって行った。
【0194】
［実施例６］ 処置の方法
がん（例えば、固形腫瘍がん）を患うヒト対象は、注射によって、例えば静脈内注射によって（例えば、ミセルの形態で）本明細書において開示されている通りのブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬の治療有効量を、又は１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲で、投与される。
がん（例えば、固形腫瘍がん）を患うヒト対象は、注射によって、例えば静脈内注射によって（例えば、ミセルの形態で）本明細書において開示されている通りのブロックコポリマーによってカプセル化された治療薬の治療有効量を、又は１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲で、投与される。
【0195】
本発明の好ましい実施形態が示され、本明細書に記載されているが、こうした実施形態が単に一例として提供されることは、当業者に明白である。多数の変動、変化及び置換が、ここで、本発明から逸脱することなく当業者に想起されよう。本明細書に記載されている本発明の実施形態に対する様々な代替が、本発明を実践する際に用いられ得ると理解されるべきである。以下の請求項が本発明の範疇を定義すること、並びにこれらの請求項の範疇内の方法及び構造並びにそれらの等価物がそれによって包含されることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14A】
【図14B】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19-1】
【図19-2】
【図20-1】
【図20-2】
【図21】
【図22】
【図23】
【国際調査報告】