特表 2023-549115 アテローム硬化性心血管疾患をＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体により処置する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-22

(54)【発明の名称】アテローム硬化性心血管疾患をＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体により処置する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7105 20060101AFI20231115BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20231115BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20231115BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20231115BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231115BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20231115BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20231115BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7105

A61P9/00

A61P9/10

A61P9/10 101

A61P9/04

A61P3/06

A61K48/00

A61K47/34

C12N15/113 Z ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023526961

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2023-06-20

(86)【国際出願番号】 US2021058012

(87)【国際公開番号】W WO2022098841

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】63/110,309

(32)【優先日】2020-11-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500203709

【氏名又は名称】アムジェン インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ソーン， ウィニー

(72)【発明者】

【氏名】ジョーンズ， ザカリー

(72)【発明者】

【氏名】カサフン， ヘリナ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB16

4C076CC11

4C076EE23A

4C076EE59

4C084AA13

4C084MA55

4C084MA66

4C084ZA36

4C084ZA45

4C084ZC33

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA55

4C086MA66

4C086NA05

4C086ZA36

4C086ZA45

4C086ZC33

(57)【要約】

本発明は、リポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））のレベルの上昇と関連するアテローム硬化性心血管疾患及び他の症状を、Ｌｐ（ａ）粒子の構成要素であるアポリポタンパク質（ａ）をコードするＬＰＡ遺伝子を標的とするＲＮＡｉ構築体を用いて処置するか、又は予防する方法に関する。特に、本発明は、Ｌｐ（ａ）のレベルが上昇した患者において、血清Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げ、且つ心血管系イベントのリスクを引き下げる方法であって、特定の投与計画に従ってＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む方法に関する。また、当該方法に用いられるＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体を含む医薬組成物も開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者において、アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防する方法であって、前記患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、方法。

【請求項2】

血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げることを必要とする患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げる方法であって、前記患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、方法。

【請求項3】

前記患者は、心血管疾患と診断されるか、又はこのリスクがある、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記患者は、冠状動脈疾患と診断される、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記患者は、心筋梗塞の履歴がある、請求項２に記載の方法。

【請求項7】

前記患者は、急性冠動脈症候群と診断される、請求項２に記載の方法。

【請求項8】

心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者において、心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防する方法であって、前記患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、方法。

【請求項9】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げる方法であって、前記患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、方法。

【請求項11】

前記心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、脳卒中、及び／又は冠状動脈血管再生である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記患者は、冠状動脈血管再生の履歴、冠状動脈バイパス移植の履歴、冠状動脈疾患の診断、アテローム硬化性脳血管疾患の診断、末梢動脈疾患の診断、及び／又は心筋梗塞の履歴がある、請求項１０又は１１に記載の方法。

【請求項13】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の１年以内に心筋梗塞を経験している、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記患者は、急性冠動脈症候群又は不安定狭心症のために入院している、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記投与間隔は約１２週である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記投与間隔は約２４週である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの用量にて投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約７５ｍｇの用量にて投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項28】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇの用量にて投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項29】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項30】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記患者は、脂質引下げ療法を受けている、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記脂質引下げ療法は、スタチン、エゼチミブ、ＰＣＳＫ９阻害剤、ベンペド酸、又はそれらの組合せである、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約１００ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約７０ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の推定糸球体濾過速度が約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以上である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１６０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約１００ｍｍＨｇ未満である、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前のグリコヘモグロビンＡ１ｃレベルが約８．５％未満である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約４００ｍｇ／ｄＬ未満である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号３の配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号４の配列を含むか、又はこれからなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号５に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号６に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなる、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記標的化部分は：

【化2】

の構造を有する、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体はオルパシランである、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、５０％超引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、８０％超引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、９０％超引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、リン酸カリウム及び塩化ナトリウムを含む医薬組成物内に入れられて投与される、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、皮下注射によって前記患者に投与される、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記注射の容量は、約１ｍＬ以下である、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてアテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防する方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体であって、前記方法は、前記患者に前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項54】

血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げることを必要とする患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げる方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体であって、前記方法は、前記患者に前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項55】

前記患者は、心血管疾患と、又はこのリスクがあると診断される、請求項５４に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項56】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項５５に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項57】

前記患者は、慢性腎疾患と診断される、請求項５４に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項58】

前記患者は、心筋梗塞の履歴がある、請求項５４に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項59】

前記患者は、急性冠動脈症候群と診断される、請求項５４に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項60】

心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者において、心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防する方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体であって、前記方法は、前記患者に前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項61】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項６０に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項62】

アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げる方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体であって、前記方法は、前記患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含み、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項63】

前記心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、脳卒中、及び／又は冠状動脈血管再生である、請求項６２に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項64】

前記患者は、冠状動脈血管再生の履歴、冠状動脈バイパス移植の履歴、冠状動脈疾患の診断、アテローム硬化性脳血管疾患の診断、末梢動脈疾患の診断、及び／又は心筋梗塞の履歴がある、請求項６２又は６３に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項65】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の１年以内に心筋梗塞を経験している、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項66】

前記患者は、急性冠動脈症候群又は不安定狭心症のために入院している、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項67】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項68】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項69】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項70】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項71】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項72】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項73】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５３～６６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項74】

前記投与間隔は約１２週である、請求項５３～７３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項75】

前記投与間隔は約２４週である、請求項５３～７３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項76】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項５３～７３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項77】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの用量にて投与される、請求項７６に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項78】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項７６に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項79】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約７５ｍｇの用量にて投与される、請求項７６に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項80】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇの用量にて投与される、請求項７６に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項81】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、１２週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項７６に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項82】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与される、請求項５３～７３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項83】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与される、請求項８２に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項84】

前記患者は、脂質引下げ療法を受けている、請求項５３～８３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項85】

前記脂質引下げ療法は、スタチン、エゼチミブ、ＰＣＳＫ９阻害剤、ベンペド酸、又はそれらの組合せである、請求項８４に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項86】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約１００ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項５３～８５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項87】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約７０ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項５３～８５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項88】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の推定糸球体濾過速度が約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以上である、請求項５３～８７のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項89】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１６０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約１００ｍｍＨｇ未満である、請求項５３～８８のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項90】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前のグリコヘモグロビンＡ１ｃレベルが約８．５％未満である、請求項５３～８９のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項91】

前記患者は、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約４００ｍｇ／ｄＬ未満である、請求項５３～９０のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項92】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号３の配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号４の配列を含むか、又はこれからなる、請求項５３～９１のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項93】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号５に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号６に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなる、請求項５３～９２のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項94】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記標的化部分は：

【化3】

の構造を有する、請求項５３～９３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項95】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体はオルパシランである、請求項５３～９４のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項96】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、５０％超引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項97】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、８０％超引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項98】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、９０％超引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項99】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項100】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項101】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項５３～９５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項102】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、前記患者に、リン酸カリウム及び塩化ナトリウムを含む医薬組成物内に入れられて投与される、請求項５３～１０１のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項103】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、皮下注射によって前記患者に投与される、請求項５３～１０２のいずれか一項に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項104】

前記注射の容量は、約１ｍＬ以下である、請求項１０３に記載の使用のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体。

【請求項105】

アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてアテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防するための薬剤の調製のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用であって、前記薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されており、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、使用。

【請求項106】

血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げることを必要とする患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げるための薬剤の調製のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用であって、前記薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されており、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、使用。

【請求項107】

前記患者は、心血管疾患と、又はこのリスクがあると診断される、請求項１０６に記載の使用。

【請求項108】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項１０７に記載の使用。

【請求項109】

前記患者は、慢性腎疾患と診断される、請求項１０６に記載の使用。

【請求項110】

前記患者は、心筋梗塞の履歴がある、請求項１０６に記載の使用。

【請求項111】

前記患者は、急性冠動脈症候群と診断される、請求項１０６に記載の使用。

【請求項112】

心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者において、心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防するための薬剤の調製のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用であって、前記薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されており、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、使用。

【請求項113】

前記心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である、請求項１１２に記載の使用。

【請求項114】

アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げるための薬剤の調製のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用であって、前記薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されており、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖、配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖、及びアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、前記標的化部分は、前記センス鎖の５’末端に共有結合されている、使用。

【請求項115】

前記心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、脳卒中、及び／又は冠状動脈血管再生である、請求項１１４に記載の使用。

【請求項116】

前記患者は、冠状動脈血管再生の履歴、冠状動脈バイパス移植の履歴、冠状動脈疾患の診断、アテローム硬化性脳血管疾患の診断、末梢動脈疾患の診断、及び／又は心筋梗塞の履歴がある、請求項１１４又は１１５に記載の使用。

【請求項117】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の１年以内に心筋梗塞を経験している、請求項１１４～１１６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項118】

前記患者は、急性冠動脈症候群又は不安定狭心症のために入院している、請求項１１４～１１６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項119】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項120】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項121】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項122】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項123】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項124】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項125】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１０５～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項126】

前記投与間隔は約１２週である、請求項１０５～１２５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項127】

前記投与間隔は約２４週である、請求項１０５～１２５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項128】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１０５～１２５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項129】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１２８に記載の使用。

【請求項130】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１２８に記載の使用。

【請求項131】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１２８に記載の使用。

【請求項132】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約１５０ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１２８に記載の使用。

【請求項133】

前記薬剤は、前記患者に、１２週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１２８に記載の使用。

【請求項134】

前記薬剤は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１０５～１２５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項135】

前記薬剤は、前記患者に、２４週毎に１回、約２２５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている、請求項１３４に記載の使用。

【請求項136】

前記患者は、脂質引下げ療法を受けている、請求項１０５～１３５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項137】

前記脂質引下げ療法は、スタチン、エゼチミブ、ＰＣＳＫ９阻害剤、ベンペド酸、又はそれらの組合せである、請求項１３６に記載の使用。

【請求項138】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約１００ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項１０５～１３７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項139】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが約７０ｍｇ／ｄＬ以下である、請求項１０５～１３７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項140】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の推定糸球体濾過速度が約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以上である、請求項１０５～１３９のいずれか一項に記載の使用。

【請求項141】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１６０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約１００ｍｍＨｇ未満である、請求項１０５～１４０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項142】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前のグリコヘモグロビンＡ１ｃレベルが約８．５％未満である、請求項１０５～１４１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項143】

前記患者は、前記薬剤の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約４００ｍｇ／ｄＬ未満である、請求項１０５～１４２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項144】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号３の配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号４の配列を含むか、又はこれからなる、請求項１０５～１４３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項145】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記センス鎖は、配列番号５に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなり、且つ前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記アンチセンス鎖は、配列番号６に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなる、請求項１０５～１４４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項146】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の前記標的化部分は：

【化4】

の構造を有する、請求項１０５～１４５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項147】

前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体はオルパシランである、請求項１０５～１４６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項148】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、５０％超引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項149】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、８０％超引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項150】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、前記患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、９０％超引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項151】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項152】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項153】

前記薬剤の投与が、前記患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる、請求項１０５～１４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項154】

前記薬剤は、前記患者に、リン酸カリウム及び塩化ナトリウムを含む医薬組成物内に入れられて投与されるか、又は前記患者への、そのような医薬組成物内に入れられての投与用に製剤化されている、請求項１０５～１５３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項155】

前記薬剤は、皮下注射によって前記患者に投与されるか、又は皮下注射による前記患者への投与用に製剤化されている、請求項１０５～１５４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項156】

前記注射の容量は、約１ｍＬ以下である、請求項１５５に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１１月５日出願の米国仮特許出願第６３／１１０，３０９号明細書の利益を主張しており、この出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子提出されたテキストファイルの説明
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０２１年１１月１日に作成したコンピュータ可読フォーマットの配列表のコピーは、名称がＡ－２６９４－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＴ２５であり、サイズが３．５キロバイトである。

【0003】

本発明は、アテローム硬化性心血管疾患、及びリポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））の上昇と関連する他の症状を処置する医薬組成物及び方法に関する。特に、本発明は、Ｌｐ（ａ）が上昇した患者において、特定の投与計画に従ってＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体を投与することによって、Ｌｐ（ａ）の血清レベルを引き下げ、且つ心血管系イベント、例えば、心血管死、心筋梗塞、脳卒中、及び冠状動脈血管再生のリスクを引き下げる方法に関する。

【背景技術】

【0004】

アテローム硬化性心血管疾患は非常に一般的であり、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）引下げ療法の広く行き渡った使用にも拘わらず、全世界の死亡率で最も高い原因であり続けている。ＬＤＬ引下げ療法は、メジャーな心イベントのリスクを引き下げるが、ＬＤＬレベルが低い一部の患者が直面する残りの心血管リスクは、他の機構の心血管病理を暗示している。ここ数十年にわたって、疫学的研究及びメタアナリシス、メンデルのランダム化解析、並びにゲノムワイド関連解析からの説得力に富む証拠により、血清Ｌｐ（ａ）濃度が上昇するにつれ、冠状動脈疾患及びアテローム性硬化症関連障害のリスクが高くなることが示されてきた（Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３６１：２５１８－２５２８，２００９；Ｋａｍｓｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，Ｖｏｌ．３０１：２３３１－２３３９，２００９；Ｎｏｒｄｅｓｔｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．３１：２８４４－２８５３，２０１０；Ｈｅｌｇａｄｏｔｔｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ，Ｖｏｌ．６０：７２２－７２９，２０１２；Ｔｈａｎａｓｓｏｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．５５：２４９１－２４９８，２０１０；Ｋａｍｓｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６３：４７０－４７７，２０１４；Ｋｒａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１１８：６５６－６６１，２０１６；Ｔｈａｎａｓｓｏｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：９１７－９２４，２０１６；Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６９：６９２－７１１，２０１７）。特に、Ｌｐ（ａ）レベルと、冠状動脈疾患、心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患、及び大動脈弁狭窄症との関係は、いくつかの遺伝的研究及び観察に基づく研究において説明されてきた（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：１３３９－１３５９，２０１６においてレビューされている）。このリスクの関係は連続的なものであり、Ｌｐ（ａ）レベルが高いほど、それに比例して影響が大きくなることが知られている。他の脂質パラメータについての補正後も、この関連性は存続する（Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ，ＪＡＭＡ，Ｖｏｌ．３０２：４１２－４２３，２００９）。

【0005】

Ｌｐ（ａ）は、ＬＤＬ粒子、及びジスルフィド結合によってＬＤＬ粒子のアポリポタンパク質Ｂに連結した糖タンパク質のアポリポタンパク質（ａ）（ａｐｏ（ａ））からなる低密度リポタンパク質である（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．、前掲）。ａｐｏ（ａ）は、ＬＰＡ遺伝子によってコードされており、ヒトが挙げられる霊長類においてほぼ排他的に発現される。ａｐｏ（ａ）は、プラスミノーゲンと相同性を示し、可変数のクリングルＩＶ２型（ＫＩＶ－２）ドメインリピートに起因する遺伝子内のサイズ多型に起因して、種々のアイソフォームで存在する（Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｕｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２７３：６－３０，２０１３参照）。ａｐｏ（ａ）アイソフォームのサイズとＬｐ（ａ）粒子の血漿レベルとの間で、逆相関関係が観察されている（Ｓａｎｄｈｏｌｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，Ｖｏｌ．８６；６０７－６１４，１９９１）。Ｌｐ（ａ）は、そのアテローム発生作用に寄与する炎症誘発性酸化リン脂質を含有する（Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６３：１７２４－１７３４，２０１４）。

【0006】

高い血漿Ｌｐ（ａ）濃度は、遺伝的に定義され、安定したレベルにて保持され、習慣の変更（食事、運動、又は他の環境要因）によって調節され得ず、そして現在利用可能な脂質低減薬のいずれによっても効果的に調節されない。現在、Ｌｐ（ａ）を引き下げることによって心血管系イベントのリスクを引き下げることを示す、承認された療法は存在しない。プロタンパク質転換酵素であるサブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤、ナイアシン、又はミポメルセンにより、Ｌｐ（ａ）が穏やかに引き下げられる（約２０～３０％）ことが観察されている（Ｓａｎｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．３５：６８９－６９９，２０１５；Ｙｅａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，Ｖｏｌ．２６：１６９－１７８，２０１５；及びＬａｎｄｒａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３７１：２０３－２１２，２０１４）。アフェレーシスは、Ｌｐ（ａ）を低下させるのに有効ではあるが、現在、アクセスが制限付きの数カ国でしか用いられていない（Ｊｕｌｉｕｓ，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｅｖ．Ｄｉｓ．，Ｖｏｌ．５：２７－３７，２０１８）。加えて、アフェレーシスは侵襲性であり、頻繁な来院が必要となる極めて高価な手技であるため、生涯にわたる治療を必要とする対象は、長期処置として利用することができない（Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．，Ｖｏｌ．３８：１５６１－１５６９，２０１７；Ｒｏｅｓｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．３６：２０１９－２０２７，２０１６；Ｌｅｅｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１２８：２５６７－２５７６，２０１３；Ｓａｆａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．Ｓｕｐｐｌ．，Ｖｏｌ．１４：９３－９９，２０１３）。

【0007】

ａｐｏ（ａ）メッセンジャーＲＮＡ転写産物を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＫＣＥＡ－ＡＰＯ（ａ）－ＬＲｘ；ＩＳＩＳ ６８１２５７及びＴＱＪ２３０としても知られている）が開発されており、現在臨床研究中である（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：３４０－３５１，２０１６においてレビューされている）。ベースラインＬｐ（ａ）レベルが７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である健康な対象に、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇの用量にて１、３、５、８、１５、及び２２日目に投与される場合、この分子は、Ｌｐ（ａ）濃度を、３６日目にそれぞれ平均６６％、８０％、及び９２％、そして１１３日目にそれぞれ平均３９％、５３％、及び５８％低くすることが報告された（Ｖｉｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，Ｖｏｌ．３８８：２２３９－２２５３，２０１６）。以降の第２相研究において、ＡＫＣＥＡ－ＡＰＯ（ａ）－ＬＲｘは、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である、心血管疾患が確立された患者において、患者に、２０ｍｇ、４０ｍｇ、又は６０ｍｇの用量にて、４週毎に１回投与された場合、Ｌｐ（ａ）レベルを、２５週目にそれぞれ平均３５％、５６％、及び７２％引き下げた（Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３８２：２４４－２５５，２０２０）。当該分子が８０ｍｇの用量にて毎月投与される第３相心血管アウトカムトライアルが継続中である（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０４０２３５５２）。
しかしながら、アテローム硬化性心血管疾患の処置及び予防のための低用量、低頻度の投与計画を可能にする、Ｌｐ（ａ）濃度を長期間強力に低くする新しい治療剤が、当該技術においてなお必要とされている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３６１：２５１８－２５２８，２００９

【非特許文献2】Ｋａｍｓｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，Ｖｏｌ．３０１：２３３１－２３３９，２００９

【非特許文献3】Ｎｏｒｄｅｓｔｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．３１：２８４４－２８５３，２０１０

【非特許文献4】Ｈｅｌｇａｄｏｔｔｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ，Ｖｏｌ．６０：７２２－７２９，２０１２

【非特許文献5】Ｔｈａｎａｓｓｏｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．５５：２４９１－２４９８，２０１０

【非特許文献6】Ｋａｍｓｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６３：４７０－４７７，２０１４

【非特許文献7】Ｋｒａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１１８：６５６－６６１，２０１６

【非特許文献8】Ｔｈａｎａｓｓｏｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：９１７－９２４，２０１６

【非特許文献9】Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６９：６９２－７１１，２０１７

【非特許文献10】Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：１３３９－１３５９，２０１６

【非特許文献11】Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ，ＪＡＭＡ，Ｖｏｌ．３０２：４１２－４２３，２００９

【非特許文献12】Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｕｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２７３：６－３０，２０１３

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、部分的に、アテローム硬化性心血管疾患の処置のために循環Ｌｐ（ａ）レベルを効果的に引き下げるための、ＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体、特にオルパシランの治療計画の特定に基づく。従って、一部の実施形態において、本発明は、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げることを必要とする患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げる方法であって、患者に、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む方法を提供する。一部のそのような実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、心血管疾患、例えば、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断されるか、又はこれを発症するリスクがある。患者は、心筋梗塞の履歴若しくは家族歴を有し得、且つ／又は急性冠動脈症候群と診断され得る。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、慢性腎疾患と診断される。

【0010】

特定の実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、若しくは予防することを必要とする患者において、アテローム性動脈硬化症を処置するか、和らげるか、若しくは予防し、又は心血管疾患を処置するか、和らげるか、若しくは予防することを必要とする患者において、心血管疾患を処置するか、和らげるか、若しくは予防する方法を提供する。そのような実施形態において、方法は、患者に、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む。本発明の方法により処置されるか、寛解するか、和らげられるか、又は予防されることとなる心血管疾患として、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症が挙げられ得る。

【0011】

また、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げる方法を含む。一部の実施形態において、当該方法は、患者に、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む。心血管系イベントは、大きな心血管系イベント、例えば、心血管死、非致死性心筋梗塞、非致死性脳卒中、又は不安定狭心症のための入院であり得る。一部の実施形態において、心血管系イベントは、大きな有害四肢イベント、例えば、急性四肢虚血、大きな切断手術、又は虚血のための末梢血管再生であり得る。特定の実施形態において、心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、脳卒中、及び／又は冠状動脈血管再生である。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなるアテローム硬化性心血管疾患患者は、冠状動脈血管再生の履歴、冠状動脈バイパス移植の履歴、冠状動脈疾患の診断、アテローム硬化性脳血管疾患の診断、末梢動脈疾患の診断、及び／又は心筋梗塞の履歴があり得る。一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、心筋梗塞イベントを最近経験しており、例えば、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の１年以内に心筋梗塞を経験している。別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、急性冠動脈症候群又は不安定狭心症のために入院している。

【0012】

本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、Ｌｐ（ａ）の血清又は血漿レベルが上昇している。一部の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である。他の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上である。特定の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上である。特定の他の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルが約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上である。

【0013】

本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、例えば患者のＬＤＬ－ＬＣレベルを引き下げるために、脂質引下げ療法を受けている。脂質引下げ療法は、ＰＣＳＫ９阻害剤、例えば、ＰＣＳＫ９アンタゴニストモノクローナル抗体（例えば、エボロクマブ、アリロクマブ）、スタチン（例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、コレステロール吸収阻害剤（例えばエゼチミブ）、ベンペド酸、ニコチン酸（例えばナイアシン）、フィブリン酸（例えば、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート）、胆汁酸吸着剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ＬＤＬアフェレーシス、又はそれらの組合せであり得る。これらの、そして他の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清ＬＤＬ－Ｃレベルが約１００ｍｇ／ｄＬ以下又は約７０ｍｇ／ｄＬ以下であり得る。

【0014】

本発明の方法の特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量が、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回、患者に投与される。一部のそのような実施形態において、固定用量は、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇ、約７５ｍｇ～約２２５ｍｇ、約５０ｍｇ～約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇであり得る。一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回、約１０ｍｇの固定用量にて投与される。別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回、約７５ｍｇの固定用量にて投与される。さらに別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回、約１５０ｍｇの固定用量にて投与される。さらに別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回、約２２５ｍｇの固定用量にて投与される。

【0015】

本発明の方法の特定の他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量が、患者に、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与される。一部のそのような実施形態において、固定用量は、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇ、約２２５ｍｇ～約４５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ～約３００ｍｇであり得る。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回、約２２５ｍｇの固定用量にて投与される。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回、約３００ｍｇの固定用量にて投与される。特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回、約４５０ｍｇの固定用量にて投与される。特定の他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回、約６７５ｍｇの固定用量にて投与される。

【0016】

本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、長期間、患者の血漿又は血清Ｌｐ（ａ）を実質的に引き下げる。例えば、本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、又は少なくとも２４週間、８０％超引き下げる。本発明の方法の他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルと比較して、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、又は少なくとも２４週間、９０％超引き下げる。特定の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者の血漿又は血清Ｌｐ（ａ）レベルを、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。一部の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者の血漿又は血清Ｌｐ（ａ）レベルを、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。他の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者の血漿又は血清Ｌｐ（ａ）レベルを、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。

【0017】

本明細書中で開示される方法のいずれの実施形態においても、患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡ分子等の二本鎖ＲＮＡ分子であり得、アンチセンス鎖は、ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列と相補的な配列を有する領域を含む。好ましくは、センス鎖は、約１５～約３０塩基対長の二重鎖領域を形成するほど十分にアンチセンス鎖の配列と相補的な配列を含む。本発明の方法の特定の実施形態において、患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、これらは各々、約１９～約２３のヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列と相補的な配列を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖の配列と相補的な配列を含む。そのような一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、各々２１ヌクレオチド長であり得、そして互いにハイブリダイズして、ＲＮＡｉ構築体が２つの平滑末端を有するように、２１塩基対長の二重鎖領域を形成することができる。別のそのような実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、各々１９ヌクレオチド長であり得、そして互いにハイブリダイズして、ＲＮＡｉ構築体が２つの平滑末端を有するように、１９塩基対長の二重鎖領域を形成することができる。

【0018】

本発明の方法の一部の実施形態において、患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体はさらに、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分を含み、標的化部分は、センス鎖に、例えば、センス鎖の５’末端に共有結合されている。標的化部分は、三価ＧａｌＮＡｃ部分、例えば、本明細書中に記載される構造１の構造を有する部分を含み得る。特定の実施形態において、本発明の方法に従って患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号１の配列を含むセンス鎖及び配列番号２の配列を含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号３の配列を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び配列番号４の配列を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含む。特定の好ましい実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。そのような実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、配列番号５に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び配列番号６に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の方法に従って患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、オルパシランである。

【0019】

また、本発明は、本明細書中に記載される本発明の方法に用いられる、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、例えばオルパシランを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、担体、又は賦形剤を含み得る。特定の実施形態において、医薬組成物は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、リン酸カリウムバッファ、及び塩化ナトリウムを含み、組成物は、ｐＨが約６．６～約７．０、好ましくは約６．８である。本明細書中に記載されるいずれの医薬組成物も、本明細書中に記載される方法に従う患者への投与（例えば皮下投与）のために、注射デバイス、例えば、プレフィルドシリンジ、オートインジェクタ、インジェクションポンプ、オンボディインジェクタ、及びインジェクションペン中に組み込まれ得る。一部の実施形態において、本発明の方法に従う患者への、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、又はＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）を含む医薬組成物の投与は、皮下注射による。そのような実施形態において、注射容量は、約２ｍＬ以下又は約１ｍＬ以下、例えば約１ｍＬである。

【0020】

本明細書中で開示される方法のいずれかでの、又は本明細書中で開示される方法のいずれかに従う投与用の薬剤の調製のためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用が、具体的に意図される。例えば、本発明は、アテローム性動脈硬化症又は心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてアテローム性動脈硬化症又は心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防する方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含み、方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む。また、本発明は、患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げる方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含み、方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む。特定の実施形態において、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者において心血管系イベントのリスクを引き下げる方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を提供し、方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与することを含む。

【0021】

また、本発明は、アテローム性動脈硬化症又は心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてアテローム性動脈硬化症又は心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防するための薬剤の調製におけるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用を包含し、薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている。一部の実施形態において、本発明は、患者において血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げるための薬剤の調製におけるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用を提供し、薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている。他の実施形態において、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げるための薬剤の調製におけるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の使用を提供し、薬剤は、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの用量にて投与されるか、又はその用量での投与用に製剤化されている。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、オルパシランの構造を概略的に示す。５’から３’への方向に列記される上側の鎖はセンス鎖（配列番号５）であり、３’から５’への方向に列記される下側の鎖はアンチセンス鎖（配列番号６）である。黒色の円は、２’－Ｏ－メチル修飾を有するヌクレオチドを表し、白色の円は、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾を有するヌクレオチドを表し、灰色の円は、３’－３’結合を介して隣接ヌクレオチドに連結された（すなわち逆位）デオキシアデノシンヌクレオチドを表す。円を連結する灰色の線は、ホスホジエステル結合を表すが、円を連結する黒色の線は、ホスホロチオアート結合を表す。示す構造を有する三価ＧａｌＮＡｃ部分は、Ｒ１によって表されており、ホスホロチオアート結合によってセンス鎖の５’末端に共有結合されている。

【図2】研究日の全体にわたるコホート１～７の各々における、示される用量でのプラセボ又はオルパシランの単回の皮下用量後のヒト対象内での血漿Ｌｐ（ａ）レベルのベースラインからの変化パーセントを示す線グラフである。ベースライン値は、スクリーニングＬｐ（ａ）及び投与１日前（ｄａｙ １ ｐｒｅｄｏｓｅ）Ｌｐ（ａ）レベルの平均であった。１つの値しか入手可能でないならば、当該値をベースラインとして用いた。

【図3-1】ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ（図３Ａ）、３０ｍｇ（図３Ｂ）、５０ｍｇ（図３Ｃ）、７５ｍｇ（図３Ｄ）、１５０ｍｇ（図３Ｅ）、及び２２５ｍｇ（図３Ｆ）の用量でのオルパシランの四半期毎（Ｑ３Ｍ）の投与についてのベースラインの予測Ｌｐ（ａ）レベルをパーセンテージとして示す。各グラフ内の横線は、ベースラインからのＬｐ（ａ）レベルの８０％引下げを表す。予測Ｌｐ（ａ）レベルは、１０，０００人の対象についてのＰＫ／ＰＤモデルシミュレーションに基づく。予測データを、メジアン値（実線）として示し、９５％予測区間を陰影によって表す。図３Ｄ内の黒塗りの円は、実施例１に記載されるコホート７の観察データを表す。

【図3-2】ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ（図３Ａ）、３０ｍｇ（図３Ｂ）、５０ｍｇ（図３Ｃ）、７５ｍｇ（図３Ｄ）、１５０ｍｇ（図３Ｅ）、及び２２５ｍｇ（図３Ｆ）の用量でのオルパシランの四半期毎（Ｑ３Ｍ）の投与についてのベースラインの予測Ｌｐ（ａ）レベルをパーセンテージとして示す。各グラフ内の横線は、ベースラインからのＬｐ（ａ）レベルの８０％引下げを表す。予測Ｌｐ（ａ）レベルは、１０，０００人の対象についてのＰＫ／ＰＤモデルシミュレーションに基づく。予測データを、メジアン値（実線）として示し、９５％予測区間を陰影によって表す。図３Ｄ内の黒塗りの円は、実施例１に記載されるコホート７の観察データを表す。

【図4-1】ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ（図４Ａ）、７５ｍｇ（図４Ｂ）、１５０ｍｇ（図４Ｃ）、２２５ｍｇ（図４Ｄ）、４５０ｍｇ（図４Ｅ）、及び６７５ｍｇ（図４Ｆ）の用量でのオルパシランの年２回（Ｑ６Ｍ）の投与についてのベースラインの予測Ｌｐ（ａ）レベルをパーセンテージとして示す。各グラフ内の横線は、ベースラインからのＬｐ（ａ）レベルの８０％引下げを表す。予測Ｌｐ（ａ）レベルは、１０，０００人の対象についてのＰＫ／ＰＤモデルシミュレーションに基づく。予測データを、メジアン値（実線）として示し、９５％予測区間を陰影によって表す。図４Ｂ内の黒塗りの円は、実施例１に記載されるコホート７の観察データを表す。

【図4-2】ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ（図４Ａ）、７５ｍｇ（図４Ｂ）、１５０ｍｇ（図４Ｃ）、２２５ｍｇ（図４Ｄ）、４５０ｍｇ（図４Ｅ）、及び６７５ｍｇ（図４Ｆ）の用量でのオルパシランの年２回（Ｑ６Ｍ）の投与についてのベースラインの予測Ｌｐ（ａ）レベルをパーセンテージとして示す。各グラフ内の横線は、ベースラインからのＬｐ（ａ）レベルの８０％引下げを表す。予測Ｌｐ（ａ）レベルは、１０，０００人の対象についてのＰＫ／ＰＤモデルシミュレーションに基づく。予測データを、メジアン値（実線）として示し、９５％予測区間を陰影によって表す。図４Ｂ内の黒塗りの円は、実施例１に記載されるコホート７の観察データを表す。

【発明を実施するための形態】

【0023】

Ｌｐ（ａ）は、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患、及び大動脈弁狭窄症が挙げられる心血管疾患の種々の形態の原因となる危険因子であることが報告されている。Ｌｐ（ａ）濃度は、遺伝的に決定され、そしてＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）濃度とは異なり、食事、運動、又は他のライフスタイルの変化によって変更され得ない。現在、ａｐｏ（ａ）を選択的に標的として、Ｌｐ（ａ）レベルを実質的に引き下げる認可された治療法はない。本発明は、アテローム性硬化症及び関連する心血管症状の処置又は予防のためにＬｐ（ａ）レベルの抑制を持続するための、ａｐｏ（ａ）タンパク質をコードするＬＰＡ遺伝子から転写されるｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉ構築体の新規の投与計画を提供する。特定のＬＰＡ標的ＲＮＡｉ構築体、オルパシランが、単回用量後に、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧７０ｎｍｏｌ／Ｌのヒト対象においてＬｐ（ａ）濃度を７１％～９６％引き下げることが観察され、最大パーセント引下げは＞９０％であり、効果は、９ｍｇ以上の単回用量にて６ヵ月超の間存続した（実施例１参照）。具体的には、９ｍｇもの低いオルパシランの単回用量が、ヒト対象において３ヵ月超の間、Ｌｐ（ａ）レベルを８０％超引き下げるが、７５ｍｇ及び２２５ｍｇの単回オルパシラン用量が、６ヵ月超の間、Ｌｐ（ａ）レベルを８０％超抑制した。また、オルパシランは、これらの用量にて十分耐容性であり、重篤な処置関連有害事象はなかった（実施例１参照）。この投薬量範囲のＬｐ（ａ）のロバストな、且つ持続される抑制は、予想外であった。というのも、カニクイザルにおいて評価されるオルパシラン用量のアロメトリックスケーリングに基づいて、１ヵ月間のＬｐ（ａ）の８０％引下げをもたらすのに、８倍高い用量（例えば７５ｍｇ対９ｍｇ）が必要とされると予測されたからである。

【0024】

また、オルパシランによるヒト対象におけるＬｐ（ａ）抑制の深さ及び期間は、ａｐｏ（ａ）を標的とする他の核酸治療薬によりヒト対象において報告される結果を考慮すると、驚くべきであった。ａｐｏ（ａ）を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであるＡＫＣＥＡ－ＡＰＯ（ａ）－ＬＲｘは、処置の６ヵ月後にヒト対象においてＬｐ（ａ）レベルを３５％～８０％引き下げることが報告されている。しかしながら、Ｌｐ（ａ）レベルのそれぞれ８０％引下げ及び７２％引下げを達成するには、ＡＫＣＥＡ－ＡＰＯ（ａ）－ＬＲｘの２０ｍｇの毎週用量又は６０ｍｇの毎月用量が必要とされた（Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３８２：２４４－２５５，２０２０参照）。これに対し、本明細書中に記載されるように、オルパシランの単回用量は、６ヵ月よりも長い間、Ｌｐ（ａ）レベルの８０％超の引下げをもたらすことによって、より低い用量且つより長い投与間隔、例えば、３ヵ月毎に１回又は６ヵ月毎に１回でのオルパシランの投与を可能にした。ゆえに、本発明の方法は、アテローム硬化性心血管疾患について、例えば、患者の厳守の向上、薬物のコストの引下げ、並びに注射の容量及び回数の引下げが挙げられる、ヒト処置におけるかなりの向上を実現する。従って、特定の実施形態において、本発明は、心血管疾患を処置するか、予防するか、又は発症するリスクを引き下げることを必要とする患者においてそうする方法であって、本明細書中に記載される特定の投与計画に従って患者に有効量のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む方法を提供する。

【0025】

アテローム性硬化症は、脂肪物質、コレステロール、カルシウム、フィブリン、及び細胞老廃物で構成されるプラークが、体内の種々の動脈内で構築される疾患である。経時的に、プラークは、動脈のルーメンを硬化させて狭めることによって、体内で臓器及び組織への血流を制限する。アテローム性硬化症は、アテローム硬化性プラーク蓄積によって影響される特定の動脈に基づく、心血管疾患、脳血管疾患、又は慢性腎疾患等のいくつかの他の疾患の発症に至る虞がある。例えば、プラークが冠状動脈内で構築されて、心臓への血流を部分的にブロックする場合に冠状動脈疾患が生じ、これが狭心症及び心筋梗塞に至る虞がある。酸素に富んだ血液を脳に供給する頸動脈内でのアテローム硬化性プラーク構築は、頸動脈疾患をもたらし、そして血流が引き下げられるか、又はブロックされるならば、一過性脳虚血発作又は脳卒中を引き起こす虞がある。プラークが、血液を四肢及び骨盤に供給する主幹動脈内で構築される場合に、末梢動脈疾患が生じて、腹部の大動脈瘤及び四肢虚血（麻痺及び疼痛を引き起こす）に至る虞がある。アテローム硬化性プラークが腎動脈内で蓄積する場合、慢性腎疾患が発症し、そして腎機能低下に経時的に至る虞があり、これが腎不全を生じさせる虞がある。Ｌｐ（ａ）は、アテローム発生リポタンパク質である。そのレベルの上昇は、特に、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、及び脳卒中のリスクの増大と関連してきた。本発明の方法は、循環Ｌｐ（ａ）レベルを引き下げることによって、患者におけるアテローム性硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防するのに有用である。ゆえに、一部の実施形態において、本発明は、アテローム性硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてそうする方法であって、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って患者に有効量のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、アテローム性硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてそうするための薬剤の調製のための本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかの使用を含み、薬剤は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って投与されるか、又はそれに従う投与用に製剤化されている。別の実施形態において、本発明は、アテローム性硬化症を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてそうする方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、例えば本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかを提供し、当該方法は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む。

【0026】

特定の実施形態において、本発明はまた、心血管疾患を処置するか、和らげるか、寛解させるか、又は予防することを必要とする患者においてそうする方法であって、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って患者に有効量のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてそうするための薬剤の調製のための本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかの使用を含み、当該薬剤は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って投与されるか、又はそれに従う投与用に製剤化されている。他の実施形態において、本発明は、心血管疾患を処置するか、和らげるか、又は予防することを必要とする患者においてそうする方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、例えば本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかを提供し、当該方法は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む。心血管疾患は、血管又は心臓を襲う疾患及び症状のクラスであり、以下に限定されないが、心筋梗塞、心不全、一過性脳虚血発作、脳卒中（虚血性及び出血性）、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈疾患、末梢血管疾患（例えば末梢動脈疾患）、動脈瘤（例えば腹部大動脈瘤）、頸動脈疾患、脳血管疾患、安定又は不安定狭心症、心房細動、高脂血症、家族性高コレステロール血症（ヘテロ接合性及びホモ接合性）、不安定プラーク、及び大動脈弁狭窄症が挙げられる。ゆえに、特定の実施形態において、本発明の方法に従って処置されることとなる患者は、心血管疾患と、又はこれを発症するリスクがあると診断される。心血管疾患を発症するリスクがある患者は、心血管疾患の家族歴があり得、且つ／又は心血管疾患の１つ以上のリスク因子を有し得る。そのようなリスク因子として、高血圧、非ＨＤＬコレステロールのレベルの上昇、トリグリセリドのレベルの上昇、糖尿病、肥満症、又は喫煙が挙げられるが、これらに限定されない。アテローム性動脈硬化症及び心血管疾患の診断は、当業者に知られている種々の方法を用いて行うことができ、以下の１つ以上が挙げられ得る：患者の健康診断及び家族歴、患者のリスク因子、身体検査、脂質濃度（例えばＬＤＬ－Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）、グリコヘモグロビンＡ１Ｃ、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、心トロポニンＴ、その他）等の種々のバイオマーカーを測定する血液試験、心電図、心エコー図、ストレステスト、胸部Ｘ線、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン（例えば心ＣＴスキャン）、並びに血管造影法。

【0027】

一部の実施形態において、本発明の方法に従って処置されるか、和らげられるか、寛解するか、又は予防されることとなる心血管疾患は、冠状動脈疾患である。冠状動脈疾患の徴候及び症候として、胸痛（例えば狭心症）、息切れ、心筋梗塞、１つ以上の冠状動脈の狭窄、腕又は肩の痛み又は不快感、弱化、めまい、吐き気、並びに冠状動脈バイパス及び／又は経皮的冠状動脈インターベンションの履歴が挙げられ得る。関連の実施形態において、本発明の方法に従って処置されるか、和らげられるか、寛解するか、又は予防されることとなる心血管疾患は、心筋梗塞である。

【0028】

他の実施形態において、本発明の方法に従って処置されるか、和らげられるか、寛解するか、又は予防されることとなる心血管疾患は、冠状動脈疾患、特にアテローム硬化性脳血管疾患である。脳血管疾患は、大脳血管の１つ以上の機能不全又は合併症に起因して、脳の領域が虚血又は出血によって一時的又は恒久的に冒される障害を指す。脳血管疾患として、以下に限定されないが、一過性脳虚血発作、脳卒中（虚血性又は出血性）、頸動脈狭窄症、椎骨動脈狭窄症、頭蓋内動脈狭窄症、動脈瘤、及び血管奇形が挙げられる。脳血管疾患の徴候及び症候として、目眩、吐き気、嘔吐、非常に重度の頭痛、混乱、見当識障害、記憶喪失、腕、脚、又は顔の麻痺又は弱化（とりわけ片側）、異常な、又は不明瞭に発音される言語、理解の困難、視野の喪失又は見ることの困難、平衡感覚、調整、又は歩く能力の喪失、頸動脈狭窄症、並びに一過性脳虚血発作及び／又は頸動脈血管再生の履歴が挙げられ得る。一実施形態において、本発明の方法に従って処置されるか、和らげられるか、寛解するか、又は予防されることとなる心血管疾患は、脳卒中である。

【0029】

特定の他の実施形態において、本発明の方法に従って処置又は予防される心血管疾患は、末梢動脈疾患である。末梢動脈疾患の徴候及び症候として、歩行の間の脚若しくは腕における痛み若しくは筋けいれん（跛行）、脚の麻痺若しくは弱化、下腿若しくは足の冷え、つま先の痛み、治癒しない足若しくは脚、脚の色の変化、足及び脚の脱毛若しくはより遅い毛成長、足の爪のより遅い成長、脚のテカテカの皮膚、脚若しくは足の脈なし若しくは弱い脈、足関節上腕指数≦０．９０、並びに腹部大動脈瘤の履歴、腹大動脈処置（経皮的又は外科的）、並びに／又は末梢動脈血管再生（経皮的又は外科的）が挙げられ得る。

【0030】

一部の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、アテローム性硬化症、並びに他の心血管疾患及び症状の処置のためのものである。本明細書中で用いられる用語「処置」又は「処置する」は、アテローム性硬化症又は他の心血管疾患を有するか、又はこれと診断され、アテローム性硬化症又は他の心血管疾患の徴候があり、アテローム性硬化症又は他の心血管疾患を発症するリスクがあり、或いはアテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患を治すか、治癒するか、緩和するか、軽減するか、改変するか、寛解させるか、若しくは向上させる目的で、アテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患になりやすい体質、アテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患の１つ以上の症候、アテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患を発症するリスク、又はアテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患になりやすい傾向がある患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の施用又は投与を指す。用語「処置」は、患者におけるアテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患の進行の減速若しくは停止、アテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患の徴候の数若しくは重症度の低下、又は患者にアテローム性硬化症若しくは他の心血管疾患の徴候がない期間の頻度若しくは長さの増大が挙げられる、患者における疾患のあらゆる改善を包含する。本明細書中で用いられる用語「患者」は、ヒトが挙げられる哺乳動物を指し、用語「対象」と互換的に用いられ得る。好ましい実施形態において、患者はヒト患者である。

【0031】

特定の好ましい実施形態において、本発明の方法のいずれかに従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与前の患者における循環Ｌｐ（ａ）レベル（例えばベースラインＬｐ（ａ）レベル／濃度）と比較して、又はＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない患者における循環Ｌｐ（ａ）レベル／濃度と比較して、患者における循環Ｌｐ（ａ）レベル又は濃度（例えば、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル／濃度）を引き下げる。従って、一部の実施形態において、本発明は、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を引き下げることを必要とする患者においてそうする方法であって、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を患者に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を引き下げることを必要とする患者において、そうするための薬剤の調製のための本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかの使用を含み、薬剤は、本明細書中に記載される投与計画のいずれか従って投与されるか、又はそれに従う投与用に製剤化されている。別の実施形態において、本発明は、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を引き下げることを必要とする患者においてそうする方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、例えば本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかを提供し、当該方法は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む。一部の実施形態において、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）の引下げが必要な患者は、心血管疾患、例えば上述の心血管疾患のいずれかと、又はこのリスクがあると診断される患者である。一部のそのような実施形態において、心血管疾患は、冠状動脈疾患、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、脳卒中、大動脈弁狭窄症、安定若しくは不安定狭心症、心房細動、心不全、高脂血症、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症、又はホモ接合性家族性高コレステロール血症である。特定の一実施形態において、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）の引下げが必要な患者は、心筋梗塞の履歴があるか、又は心筋梗塞の家族歴がある。

【0032】

特定の実施形態において、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）の引下げが必要な患者は、急性冠症候群と診断される。急性冠症候群は、アテローム硬化性プラークの破壊、及び冠状動脈の部分的又は完全な血栓症によって多くの場合引き起こされる、心臓への血流の突然の引下げと関連する症状を指す。急性冠動脈症候群として、急性的な心筋虚血又は梗塞、例えば、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）及びＳＴ上昇型ＭＩ（ＳＴＥＭＩ）、並びに不安定狭心症が挙げられる。たとえ急性冠動脈症候群が最初に梗塞部をもたらさないとしても、これは、梗塞部が生じる高いリスクの徴候であり、速やかに診断且つ処置されなければならない。急性冠動脈症候群の徴候及び症候は、典型的には急に始まり、胸痛（狭心症）又は不快感、胸から肩、腕、上腹部、背中、首、又は顎への痛み拡散、吐き気又は嘔吐、消化不良、息切れ、突然の大量の発汗、朦朧、目眩、又は失神、普通でないか、又は不可解な疲労感、及び落ち着きがないか、又は不安の感情が挙げられ得る。

【0033】

特定の他の実施形態において、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）の引下げが必要な患者は、慢性腎疾患と診断される。慢性腎疾患は一般に、腎臓への漸進的損傷、及び機能喪失を指す。慢性腎疾患は経時的に悪化して、患者は、他の心血管疾患のリスクが高くなり得る。一実施形態において、本発明の方法に従って処置されることとなる患者は、ステージ３の慢性腎疾患を有する。腎疾患の病期は、血液中のクレアチニンの量に基づく値である推定の糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）によって決定される。ステージ３の慢性腎疾患は、約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２～約５９ｍＬ／分／１．７３ｍ^２のｅＧＦＲによって特徴付けられ、正常であるよりも多かれ少なかれ、何らかの最初の徴候、例えば手及び足におけるむくみ、背中の痛み、並びに排尿を伴い得る。また、ステージ３の慢性腎疾患患者は、他の健康関連問題、例えば、高血圧、貧血、及び骨疾患を有する場合がある。別の実施形態において、本発明の方法に従って処置されることとなる患者は、ステージ４の慢性腎疾患を有する。ステージ４の慢性腎疾患患者は、ｅＧＦＲが約１５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２～約２９ｍＬ／分／１．７３ｍ^２であり、典型的には、正常であるよりも多かれ少なかれ、症候様の、手及び足におけるむくみ、背中の痛み、並びに排尿を示すこととなる。

【0034】

一部の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿中のＬｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、ＲＮＡｉ構築体の投与前の患者における血清若しくは血漿中のＬｐ（ａ）レベル（又は濃度）（例えばベースラインＬｐ（ａ）レベル又は濃度）と比較して、又はＲＮＡｉ構築体を受けていない患者における血清若しくは血漿中のＬｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、又は少なくとも約９５％引き下げる。これらの、そして他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量の投与）後、循環Ｌｐ（ａ）レベル又は濃度は、患者において、少なくとも４週、少なくとも６週、少なくとも８週、少なくとも１０週、少なくとも１２週、少なくとも１４週、少なくとも１６週、少なくとも１８週、少なくとも２０週、少なくとも２２週、少なくとも２４週、少なくとも２６週、少なくとも２８週、少なくとも３０週、少なくとも３２週、少なくとも３６週、又は少なくとも４８週間、引き下げられる。

【0035】

本発明の方法の一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも１２週間、５０％超引き下げる。ベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（すなわち前処置レベル又は濃度）の投与前の患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を指す。ベースラインレベル／濃度は、患者がＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受ける前にとられた単一の測定値であってもよいし、ベースラインレベル／濃度は、患者がＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受ける前にとられた２つ以上の測定値の平均であってもよい。本発明の方法の別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも２４週間、５０％超引き下げる。本発明の方法のさらに別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも１２週間、８０％超引き下げる。本発明の方法のさらに別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも２４週間、８０％超引き下げる。本発明の方法の特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも３２週間、８０％超引き下げる。本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも１２週間、９０％超引き下げる。本発明の方法の他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の単回用量）の投与は、患者における血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、患者のベースライン血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）と比較して、少なくとも１６週間、９０％超引き下げる。

【0036】

特定の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内の絶対Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約６５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約６０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約５５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ、約４５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約４０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、約３５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、又は約３０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。一実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内の絶対Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。別の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内の絶対Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。別の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内の絶対Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。さらに別の実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内の絶対Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下に引き下げる。

【0037】

粒子濃度の単位（例えばｎｍｏｌ／Ｌ）でＬｐ（ａ）レベル／濃度を測定する優先傾向があるが（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３；３７４－３９２，２０１９参照）、Ｌｐ（ａ）レベルは、質量濃度の単位（例えばｍｇ／ｄＬ）で測定されてもよい。そのような実施形態において、本発明の方法に従う患者へのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の投与は、患者における血清又は血漿内のＬｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、約１００ｍｇ／ｄＬ以下、約９０ｍｇ／ｄＬ以下、約８０ｍｇ／ｄＬ以下、約７０ｍｇ／ｄＬ以下、約６０ｍｇ／ｄＬ以下、約５０ｍｇ／ｄＬ以下、約４５ｍｇ／ｄＬ以下、約４０ｍｇ／ｄＬ以下、約３５ｍｇ／ｄＬ以下、約３０ｍｇ／ｄＬ以下、約２５ｍｇ／ｄＬ以下、約２０ｍｇ／ｄＬ以下、又は約１５ｍｇ／ｄＬ以下に引き下げ得る。

【0038】

血漿又は血清サンプル内のＬｐ（ａ）レベルを、商業的に入手可能なキット、例えば、Ｍｅｒｃｏｄｉａ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）のＬｐ（ａ）ＥＬＩＳＡアッセイキット、Ｒａｎｄｏｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．（Ｃｒｕｍｌｉｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）のＬｐ（ａ）免疫比濁アッセイ、若しくはＦ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌｔｄ．（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のＴｉｎａ－ｑｕａｎｔ（登録商標）Ｌｐ（ａ）Ｇｅｎ．２アッセイを用いて、又は当該技術において知られている他の方法、例えば、Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ａｎｄ Ａｌｂｅｒｓ，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：５２６－５３７，２０１６に記載されるものを用いて測定することができる。特定の実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルは、ａｐｏ（ａ）アイソフォームサイズから独立したＬｐ（ａ）粒子を検出且つ定量化するように規格化されている比濁免疫アッセイを用いて測定される。これらの、そして他の実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを測定するのに用いられるアッセイは、ｎｍｏｌ／Ｌについて、ＩＦＣＣ参照材料ＳＲＭ２Ｂに対して規格化されている（Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４６：１９４６－１９６７，２０００）。

【0039】

先に記載されるように、循環Ｌｐ（ａ）のレベルの上昇は、心血管疾患のリスクの増大と関連する。ゆえに、本発明の方法はまた、Ｌｐ（ａ）の血清又は血漿レベルが上昇した患者における心血管系イベントのリスクを引き下げるのに有用である。従って、特定の実施形態において、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げる方法であって、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の有効量を投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げるための薬剤の調製のための本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかの使用を含み、当該薬剤は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従って投与されるか、又はそれに従う投与用に製剤化されている。別の実施形態において、本発明は、アテローム硬化性心血管疾患患者における心血管系イベントのリスクを引き下げる方法に用いられる、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、例えば本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のいずれかを提供し、当該方法は、本明細書中に記載される投与計画のいずれかに従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む。

【0040】

一部の実施形態において、心血管系イベントは、以下の１つ以上である：心血管死、心筋梗塞、脳卒中（例えば虚血性脳卒中）、冠状動脈血管再生、不安定狭心症のための入院、心不全のための入院、末梢血管再生、急性四肢虚血、一過性脳虚血発作、虚血のための大きな四肢切断手術、脳血管再生（全て死亡を引き起こす）。特定の実施形態において、心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、脳卒中（例えば虚血性脳卒中）、及び／又は冠状動脈血管再生である。一部のそのような実施形態において、心血管系イベントは、心血管死、心筋梗塞、及び／又は冠状動脈血管再生である。他のそのような実施形態において、心血管系イベントは、心筋梗塞及び／又は冠状動脈血管再生である。他の実施形態において、心血管系イベントは、心血管死、非致死性心筋梗塞、非致死性脳卒中、及び不安定狭心症のための入院から選択される大きな心血管系イベントである。さらに他の実施形態において、心血管系イベントは、急性四肢虚血、大きな切断手術、及び虚血のための末梢血管再生から選択される大きな有害四肢事象である。一実施形態において、心血管系イベントは心血管死である。別の実施形態において、心血管系イベントは非致死性心筋梗塞である。さらに別の実施形態において、心血管系イベントは、非致死性脳卒中（例えば虚血性脳卒中）である。さらに別の実施形態において、心血管系イベントは冠状動脈血管再生である。

【0041】

特定の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない患者と比較して、上述の心血管系イベントのいずれかについて、相対リスク引下げが少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、又は少なくとも３０％である。一実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない患者と比較して、心血管死、心筋梗塞、及び虚血性脳卒中のいずれか１つについて、相対リスク引下げが約１５％～約２５％である。別の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない患者と比較して、心血管死、心筋梗塞、及び虚血性脳卒中のいずれか１つについて、相対リスク引下げが約２０％～約３０％である。

【0042】

特定の他の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、上述の心血管系イベントのいずれかについて、絶対リスク引下げが少なくとも１．５％、少なくとも１．８％、少なくとも２．０％、少なくとも２．２％、少なくとも２．５％、少なくとも２．８％、少なくとも３．０％、少なくとも３．２％、又は少なくとも３．５％である。一実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、心血管死、心筋梗塞、及び虚血性脳卒中のいずれか１つについて、絶対リスク引下げが約１．５％～約３．０％である。別の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、心血管死、心筋梗塞、及び虚血性脳卒中のいずれか１つについて、絶対リスク引下げが約２．０％～約３．５％である。さらに別の実施形態において、本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与された患者は、心血管死、心筋梗塞、及び虚血性脳卒中のいずれか１つについて、絶対リスク引下げが約２．０％～約３．０％である。

【0043】

上記の実施形態のいずれにおいても、心血管系イベントを減らすために本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、冠状動脈血管再生の履歴、冠状動脈バイパス移植の履歴、冠状動脈疾患の診断、アテローム硬化性脳血管疾患の診断、末梢動脈疾患の診断、及び／又は心筋梗塞の履歴があり得る。特定の実施形態において、心血管系イベントを減らすために本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、心筋梗塞を経験している。例えば、一部のそのような実施形態において、心血管系イベントを減らすために本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与を受ける１年、２年、３年、４年、又は５年以内に心筋梗塞を経験している。そのような一実施形態において、心血管系イベントを減らすために本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与を受ける１年以内に心筋梗塞を経験している。特定の他の実施形態において、心血管系イベントを減らすために本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される患者は、急性冠動脈症候群又は不安定狭心症のために入院しているか、又は最近入院した。

【0044】

特定の好ましい実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、Ｌｐ（ａ）の循環レベル又は濃度が上昇した（例えば、Ｌｐ（ａ）の血清又は血漿レベル／濃度が上昇した）患者である。本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースライン循環Ｌｐ（ａ）レベル又は濃度が約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約５５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約６０ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約６５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上、約２２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上、又は約２５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上であり得る。一実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約７０ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。さらに別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約１２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。さらに別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。一部の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約１７５ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。他の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。特定の他の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約２２５ｎｍｏｌ／Ｌ以上であれば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与される。

【0045】

循環Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が質量濃度単位で測定されるあまり好ましくない実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、循環Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約３０ｍｇ／ｄＬ以上、約３５ｍｇ／ｄＬ以上、約４０ｍｇ／ｄＬ以上、約４５ｍｇ／ｄＬ以上、約５０ｍｇ／ｄＬ以上、約５５ｍｇ／ｄＬ以上、約６０ｍｇ／ｄＬ以上、約６５ｍｇ／ｄＬ以上、約７０ｍｇ／ｄＬ以上、約７５ｍｇ／ｄＬ以上、約９０ｍｇ／ｄＬ以上、又は約１００ｍｇ／ｄＬ以上であり得る。一実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約５０ｍｇ／ｄＬ以上であれば、本発明のＲＮＡｉ構築体が投与される。別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約６０ｍｇ／ｄＬ以上であれば、本発明のＲＮＡｉ構築体が投与される。さらに別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約７０ｍｇ／ｄＬ以上であれば、本発明のＲＮＡｉ構築体が投与される。さらに別の実施形態において、患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベル（又は濃度）が約９０ｍｇ／ｄＬ以上であれば、本発明のＲＮＡｉ構築体が投与される。

【0046】

先で考察されるように、血漿又は血清サンプル内のＬｐ（ａ）レベル（又は濃度）を、商業的に入手可能なキット、例えば、Ｍｅｒｃｏｄｉａ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）のＬｐ（ａ）ＥＬＩＳＡアッセイキット、Ｒａｎｄｏｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．（Ｃｒｕｍｌｉｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）のＬｐ（ａ）免疫比濁アッセイ、若しくはＦ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌｔｄ．（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のＴｉｎａ－ｑｕａｎｔ（登録商標）Ｌｐ（ａ）Ｇｅｎ．２アッセイを用いて、又は当該技術において知られている他の方法、例えば、Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ａｎｄ Ａｌｂｅｒｓ，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：５２６－５３７，２０１６に記載されるものを用いて測定することができる。特定の実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルは、ａｐｏ（ａ）アイソフォームサイズから独立したＬｐ（ａ）粒子を検出且つ定量化するように規格化されている比濁免疫アッセイを用いて測定される。これらの、そして他の実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを測定するのに用いられるアッセイは、ｎｍｏｌ／Ｌについて、ＩＦＣＣ参照材料ＳＲＭ２Ｂに対して規格化されている（Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４６：１９４６－１９６７，２０００）。

【0047】

一部の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルが、１つ以上の脂質引下げ療法による処置を通して正常範囲内であり得、又は正常範囲内に調節され得る。例えば、一実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清ＬＤＬ－Ｃレベルが約１００ｍｇ／ｄＬ以下である。別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清ＬＤＬ－Ｃレベルが約７０ｍｇ／ｄＬ以下である。関連する実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、１つ以上の脂質引下げ療法を受けている。脂質引下げ療法として、以下に限定されないが、ＰＣＳＫ９阻害剤、例えば、ＰＣＳＫ９アンタゴニストモノクローナル抗体（例えば、エボロクマブ、アリロクマブ）及びＰＣＳＫ９標的ｓｉＲＮＡ（例えばインクリシラン）、スタチン（例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、コレステロール吸収阻害剤（例えばエゼチミブ）、ベンペド酸、ニコチン酸（例えばナイアシン）、フィブリン酸（例えば、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート）、胆汁酸吸着剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ＬＤＬアフェレーシス、又はそれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＰＣＳＫ９アンタゴニストモノクローナル抗体、スタチン、エゼチミブ、ベンペド酸、又はそれらの組合せからなる群から選択される脂質引下げ療法を受けている。

【0048】

特定の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約５００ｍｇ／ｄＬ未満である。例えば、患者は、ベースラインでの（例えばＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）血清トリグリセリドレベルが、約４００ｍｇ／ｄＬ未満、約３７５ｍｇ／ｄＬ未満、約３５０ｍｇ／ｄＬ未満、約３２５ｍｇ／ｄＬ未満、約３００ｍｇ／ｄＬ未満、約２７５ｍｇ／ｄＬ未満、約２５０ｍｇ／ｄＬ未満、約２２５ｍｇ／ｄＬ未満、約２００ｍｇ／ｄＬ未満、約１７５ｍｇ／ｄＬ未満、又は約１５０ｍｇ／ｄＬ未満であり得る。一実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約４００ｍｇ／ｄＬ未満である。別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ～約４００ｍｇ／ｄＬである。さらに別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の血清トリグリセリドレベルが約１５０ｍｇ／ｄＬ～約３７５ｍｇ／ｄＬである。

【0049】

ＬＤＬ－Ｃ、トリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、及び他の脂質バイオマーカー、例えば、アポリポタンパク質Ａ１及びアポリポタンパク質Ｂの測定値が、患者由来の血液サンプルを用いて、標準的な脂質パネルにより測定され得る。一部の実施形態において、患者は、サンプルが採血される前に、少なくとも９時間、好ましくは１２時間、断食する。ゆえに、上述の脂質バイオマーカー（例えばＬＤＬ－Ｃ、トリグリセリド）のレベル／濃度は、空腹時レベルであり得る。

【0050】

一部の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、グリコヘモグロビンＡ１Ｃレベルが、未処置であるか、又は十分に管理されていない２型糖尿病を示さない。例えば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）グリコヘモグロビンＡ１Ｃレベルが、約１０．０％未満、約９．５％未満、約９．０％未満、約８．５％未満、約８．０％未満、約７．５％未満、約７．０％未満、約６．５％未満、約６．０％未満、又は約５．５％未満である。一実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前のグリコヘモグロビンＡ１Ｃレベルが約８．５％未満である。別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前のグリコヘモグロビンＡ１Ｃレベルが約７．０％未満である。

【0051】

他の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、収縮期血圧及び／又は拡張期血圧が管理不良高血圧を示さない。例えば、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）平均安静時収縮期血圧が、約１８０ｍｍＨｇ未満、約１６０ｍｍＨｇ未満、約１４０ｍｍＨｇ未満、約１３５ｍｍＨｇ未満、約１３０ｍｍＨｇ未満、約１２５ｍｍＨｇ未満、又は約１２０ｍｍＨｇ未満であり、そしてベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）平均安静時拡張期血圧が、約１２０ｍｍＨｇ未満、約１１０ｍｍＨｇ未満、約１００ｍｍＨｇ未満、約８５ｍｍＨｇ未満、約９０ｍｍＨｇ未満、又は約８０ｍｍＨｇ未満である。一実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１８０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約１１０ｍｍＨｇ未満である。別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１６０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約１００ｍｍＨｇ未満である。さらに別の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の安静時の平均収縮期血圧が約１４０ｍｍＨｇ未満であり、且つ平均拡張期血圧が約９０ｍｍＨｇ未満である。

【0052】

一部の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、重度の腎機能不全の徴候がない。ゆえに、特定の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）ｅＧＦＲが、少なくとも約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、少なくとも約４５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、少なくとも約６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、少なくとも約７５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、又は少なくとも約９０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２である。特定の一実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前のｅＧＦＲが約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以上である。

【0053】

他の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、活動性肝疾患又は肝機能不全の徴候がない。活動性肝疾患は、アルブミン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、ビリルビン、及び乳酸脱水素酵素（ＬＤ）が挙げられる、肝機能検査又は肝臓パネルに含まれるもの等の肝機能の１つ以上のバイオマーカーを測定することによって判定され得る。特定の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）ＡＬＴレベルが、正常上限（ＵＬＮ）の３倍以下である。関連する実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）ＡＬＴレベルが、ＵＬＮの３倍以下である。これらの、そして他の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインでの（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前の）総ビリルビンレベルが、ＵＬＮの２倍以下である。一部の実施形態において、本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が投与されることとなる患者は、ベースラインにて（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の投与前に）：（ｉ）血清のＡＳＴレベルが約１７０ユニット／Ｌ未満、（ｉｉ）血清のＡＳＴレベルが約１５０ユニット／Ｌ未満、且つ／又は（ｉｉｉ）総ビリルビンレベルが約２．０ｍｇ／ｄＬ未満である。

【0054】

一態様において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の有効量を投与することを含む。「有効量」は、心血管疾患、若しくは心血管疾患の１つ以上の症候、特に、心血管疾患と関連する状態若しくは症候を処置するか、和らげるか、若しくは寛解させるのに、又はそうでなければ、心血管疾患、若しくは心血管疾患と関連する他の不所望なあらゆる症候の進行を、いかなる形であれ予防するか、妨げるか、遅延させるか、若しくは食い止めるのに十分な量を指す。また、有効量は、心血管疾患から生じる後遺症の発生又は重症度を引き下げるのに十分な量を指し得る。例えば、一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の有効量は、アテローム性動脈硬化症又は他の心血管疾患を有する患者における心血管系イベント、例えば、冠状動脈、大脳動脈、又は末梢動脈の心筋梗塞、脳卒中、又は血管再生の発生又は重症度を引き下げるのに十分な量である。

【0055】

本発明の方法の特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、固定用量にて患者に投与される。「固定用量」は、患者に特有の要因、例えば体重に拘わらず、全ての患者に投与される用量を指す。ゆえに、固定用量は、患者の体重に基づいて、患者によって調整されない。本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、患者に、少なくとも８週の投与間隔で、約９ｍｇ～約６７５ｍｇの固定量にて投与され得る。例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、又は約６７５ｍｇであり得、用量は、少なくとも８週の投与間隔で投与される。また、これらのエンドポイントのいずれか、そして全ての間の範囲が意図され、例えば、本発明の方法において患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇ、約５０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇ、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇ、約７５ｍｇ～約１５０ｍｇ、約２２５ｍｇ～約４５０ｍｇ、約７５ｍｇ～約２２５ｍｇ、約１０ｍｇ～約７５ｍｇ、又は約２００ｍｇ～約３００ｍｇであり得、用量は、少なくとも８週の投与間隔で投与される。

【0056】

本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の用量のいずれかが、好ましくは、少なくとも８週の投与間隔で投与される（すなわち、用量は、８週毎に１回（又は２ヵ月毎に１回）よりも高頻度で患者に投与されない）。例えば、投与間隔は、約８週、約１２週、約１６週、約２０週、約２４週、約２８週、又は約３２週であってよい。特定の実施形態において、投与間隔は約１２週であり、例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、１２週毎に１回（又は３ヵ月毎に１回）患者に投与される。特定の他の実施形態において、投与間隔は約２４週であり、例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、２４週毎に１回（又は６ヵ月毎に１回）患者に投与される。

【0057】

ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、単回のボーラス投与として（例えば、単回の皮下注射により）、又は２回以上の連続ボーラス投与（例えば、２回以上の皮下注射）として、各投与間隔で投与され得る。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量の全体量が、例えば、本明細書中にさらに記載されるプレフィルドシリンジ又は注射デバイスを用いて、単回のボーラス注射により、各投与間隔で患者に投与される。例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の２２５ｍｇの固定用量が、２２５ｍｇの単回のボーラス注射として、場合によっては、２２５ｍｇ用量を含有するオートインジェクタ、ペンインジェクタ、又はプレフィルドシリンジにより、各投与間隔（例えば、１２週毎に１回）で患者に投与され得る。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量の全体量が、２回以上の連続ボーラス注射として患者に投与される。一例として、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の２２５ｍｇの固定用量が、各々７５ｍｇの３回の連続注射により、場合によっては、各々７５ｍｇ用量を含有する３台の注射デバイス（例えば、オートインジェクタ、ペンインジェクタ、又はプレフィルドシリンジにより、各投与間隔（例えば、１２週毎に１回）で患者に投与され得る。単日の期間内に与えられる連続注射は、本発明の文脈の範囲内の単回の投与であると考えられる。言い換えると、一例として、１２週毎に１回の２２５ｍｇの固定用量の投与が、１２週毎に１回患者に投与される２２５ｍｇの単回のボーラス注射として、又は１２週毎に１回、１日の期間内に患者にそれぞれ投与される７５ｍｇの３回の連続ボーラス注射として与えられ得る。

【0058】

本発明の方法の特定の実施形態において、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与される。一部のそのような実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１０ｍｇ～約２２５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに他の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約７５ｍｇ～約２２５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに他の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１５０ｍｇ～約２２５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。一実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１０ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約３０ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約７５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１００ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１２５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１５０ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約１７５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２００ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２２５ｍｇの固定用量にて１２週毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することを含む。

【0059】

本発明の方法の特定の他の実施形態において、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の固定用量は、２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与される。一部のそのような実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２２５ｍｇ～約６７５ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。他の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２２５ｍｇ～約４５０ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに他の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２００ｍｇ～約３００ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。一実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約２２５ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約３００ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約４５０ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。さらに別の実施形態において、本発明の方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を、約６７５ｍｇの固定用量にて２４週毎に１回又は６ヵ月毎に１回投与することを含む。

【0060】

本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、一セットの処置期間にわたって患者に投与される。「処置期間」は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最初の用量の投与から始まって、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の最終の用量の投与にて終わる。処置期間は、約１２週～約２４０週、約２４週～約１４４週、約３ヵ月～約６０ヵ月、約６ヵ月～約４８ヵ月、例えば、約１２週、約２４週、約３６週、約４８週、約６０週、約７２週、約８４週、約９６週、約１０８週、約１２０週、約１３２週、約１４４週、約１５６週、約１６８週、約１８０週、約１９２週、約２０４週、約２１６週、約２２８週、約２４０週、約３ヵ月、約６ヵ月、約９ヵ月、約１２ヵ月、約１５ヵ月、約１８ヵ月、約２１ヵ月、約２４ヵ月、約２７ヵ月、約３０ヵ月、約３３ヵ月、約３６ヵ月、約３９ヵ月、約４２ヵ月、約４５ヵ月、約４８ヵ月、約５１ヵ月、約５４ヵ月、約５７ヵ月、又は約６０ヵ月であってよい。一部の実施形態において、処置期間は約４８週である。他の実施形態において、処置期間は約１９２週である。さらに他の実施形態において、処置期間は約１２ヵ月である。さらに他の実施形態において、処置期間は約４８ヵ月である。特定の実施形態において、処置期間は、２４０週又は６０ヵ月よりも長くなり得、例えば、処置期間は、５年超、例えば、６、７、８、９、又は１０年以上であり得る。特定の一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、少なくとも約３６週の処置期間の間投与されて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない対象と比較して、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルのベースラインからの統計学的に有意な引下げパーセントをもたらす。別の特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、少なくとも約４８週の処置期間の間投与されて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を受けていない対象と比較して、血清又は血漿Ｌｐ（ａ）レベルのベースラインからの統計学的に有意な引下げパーセントをもたらす。

【0061】

本明細書中に記載される方法は、患者にＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を投与することを含む。本明細書中で用いられる用語「ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体」は、細胞中に導入されると、ＲＮＡ干渉機構を介してＬＰＡ遺伝子の発現を下方制御することができるＲＮＡ分子を含む剤を指す。ＲＮＡ干渉は、核酸分子が、例えば、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介して、配列特異的に標的ＲＮＡ分子（例えば、メッセンジャーＲＮＡ又はｍＲＮＡ分子）の切断及び分解を誘導するプロセスである。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、ハイブリダイズして二重鎖領域を形成するほど互いに十分に相補的な、連続したヌクレオチドの２本の逆平行鎖を含む二本鎖ＲＮＡ分子を含む。「ハイブリダイズする」又は「ハイブリダイゼーション」は、典型的には２つのポリヌクレオチドにおける相補的な塩基間の水素結合（例えば、ワトソン－クリック、フーグスティーン又は逆フーグスティーン水素結合）を介した、相補的なポリヌクレオチドの対形成を指す。標的ＬＰＡ配列（例えば、標的ＬＰＡ ｍＲＮＡ）と実質的に相補的な配列を有する領域を含む鎖は、「アンチセンス鎖」と称される。「センス鎖」は、アンチセンス鎖のある領域に対して実質的に相補的な領域を含む鎖を指す。一部の実施形態において、センス鎖は、標的配列と実質的に同一の配列を有する領域を含み得る。

【0062】

二本鎖ＲＮＡ分子は、リボヌクレオチドのリボース糖、塩基、又は本明細書中に記載されるもの若しくは当該技術において知られているもの等の骨格構成要素への修飾が挙げられる、リボヌクレオチドへの化学修飾を含み得る。二本鎖ＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ等）に用いられるようなあらゆる修飾が、本開示の目的のための用語「二本鎖ＲＮＡ」によって包含される。

【0063】

本明細書中で用いられる第１の配列は、生理的条件等のある種の条件下で、第１の配列を含むポリヌクレオチドが、第２の配列を含むポリヌクレオチドにハイブリダイズして二重鎖領域を形成することができるならば、第２の配列に「相補的」である。他のそのような条件として、当業者に知られている中程度の、又はストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が挙げられ得る。第１の配列は、第１の配列を含むポリヌクレオチドが、第２の配列を含むポリヌクレオチドと、一方又は双方のヌクレオチド配列の全長にわたって、いかなるミスマッチもなく塩基対形成するならば、第２の配列に対して完全に相補的（１００％相補的）であるとみなされる。配列は、標的配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％相補的であるならば、標的配列と「実質的に相補的」である。相補性パーセントは、第２の配列又は標的配列内の対応する位置の塩基に対して相補的な、第１の配列内の塩基の数を、第１の配列の全長で割ることによって算出することができる。また、２つの配列がハイブリダイズする場合に、３０塩基対の二重鎖領域の全体にわたって５、４、３、又は２つ以下のミスマッチが存在するならば、一方の配列が、もう一方の配列に対して実質的に相補的であると言うことができる。一般に、何らかのヌクレオチドオーバーハングが本明細書中で定義されるように存在するならば、そのようなオーバーハングの配列は、２つの配列間の相補性の程度を判定する際に、考慮されない。例として、ハイブリダイズして各鎖の３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを有する１９塩基対の二重鎖領域を形成する、２１ヌクレオチド長のセンス鎖及び２１ヌクレオチド長のアンチセンス鎖は、当該用語が本明細書中で用いられる場合、完全に相補的であるとみなされることとなる。

【0064】

一部の実施形態において、アンチセンス鎖の一領域が、標的ＬＰＡ ＲＮＡ配列（例えば、ＬＰＡ ｍＲＮＡ）の領域に対して実質的に、又は完全に相補的な配列を含む。そのような実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の配列に対して完全に相補的な配列を含み得る。他のそのような実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の配列に対して実質的に相補的な配列、例えばセンス鎖及びアンチセンス鎖によって形成される二重鎖領域内に１、２、３、４、又は５つのミスマッチを有する配列を含み得る。特定の実施形態において、何らかのミスマッチが、末端領域内（例えば、鎖の５’末端及び／又は３’末端の６、５、４、３、又は２ヌクレオチド以内）に生じることが好ましい。一実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖から形成される二重鎖領域内の何らかのミスマッチは、アンチセンス鎖の５’末端の６、５、４、３、又は２ヌクレオチド以内に生じる。

【0065】

特定の実施形態において、二本鎖ＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、ハイブリダイズして二重鎖領域を形成するが、そうでなければ分離している別々の２つの分子であり得る。２つの別々の鎖から形成されるそのような二本鎖ＲＮＡ分子は、「低分子干渉ＲＮＡ」又は「短干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）と称される。ゆえに、一部の実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、ｓｉＲＮＡを含む。

【0066】

他の実施形態において、ハイブリダイズして二重鎖領域を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖は、単一ＲＮＡ分子の一部であり得、すなわち、センス鎖及びアンチセンス鎖は、単一ＲＮＡ分子の自己相補的領域の一部である。そのような場合、単一ＲＮＡ分子は、二重鎖領域（ステム領域とも称される）及びループ領域を含む。センス鎖の３’末端は、不対ヌクレオチドの隣接配列によってアンチセンス鎖の５’末端に連結されており、これによりループ領域が形成されることとなる。ループ領域は、典型的には、アンチセンス鎖がセンス鎖と塩基対を形成して二重鎖又はステム領域を形成し得るように、ＲＮＡ分子それ自体が再度折り畳まれることが可能なほど十分に長い。ループ領域は、約３～約２５、約５～約１５、又は約８～約１２個の不対ヌクレオチドを含み得る。少なくとも部分的に自己相補的な領域を有するそのようなＲＮＡ分子は、「低分子ヘアピン型ＲＮＡ」（ｓｈＲＮＡ）と称される。特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、ｓｈＲＮＡを含む。単一の、少なくとも部分的に自己相補的なＲＮＡ分子の長さは、約４０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド～約８５ヌクレオチド、又は約５０ヌクレオチド～約６０ヌクレオチドであり得、本明細書中に記載される長さを各々有する二重鎖領域及びループ領域を含み得る。

【0067】

本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、ＬＰＡ メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列に対して実質的に、又は完全に相補的な配列を有する領域を含む。本明細書中で用いられる「ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列」は、あらゆる種（例えば、非ヒト霊長類、ヒト）由来のａｐｏ（ａ）タンパク質のバリアント又はアイソフォームが挙げられる、ａｐｏ（ａ）タンパク質をコードする対立遺伝子バリアント及びスプライスバリアントが挙げられるメッセンジャーＲＮＡ配列を指す。ＬＰＡ遺伝子（ＡＫ３８、ＡＰＯＡ、及びＬＰとしても知られている）は、リポタンパク質（ａ）又はＬｐ（ａ）として知られている低密度リポタンパク質粒子の主要な構成要素であるａｐｏ（ａ）タンパク質をコードする。ヒトにおいて、ＬＰＡ遺伝子は、第６染色体上で遺伝子座６ｑ２５．３－ｑ２６にて見出される。ＬＰＡ遺伝子は、遺伝子の対立遺伝子が、２～４０超コピーに及び得るクリングルＩＶ２型（ＫＩＶ－２）ドメインのコピー数が個体間で異なることにより、高度の多型性を有する（例えば、Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｕｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２７３：６－３０，２０１３参照）。

【0068】

また、ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列として、その相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列として表される転写産物配列が挙げられる。ｃＤＮＡ配列は、ＲＮＡ塩基（例えば、グアニン、アデニン、ウラシル、及びシトシン）ではなく、ＤＮＡ塩基（例えば、グアニン、アデニン、チミン、及びシトシン）として表される、ｍＲＮＡ転写産物の配列を指す。ゆえに、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のアンチセンス鎖は、標的ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列又はＬＰＡ ｃＤＮＡ配列に対して実質的に、又は完全に相補的な配列を有する領域を含み得る。ＬＰＡ ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ配列として、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００５５７７．４（ヒト）、ＸＭ＿０１５４４８５２０．１（カニクイザル）、ＸＭ＿０２８８４７００１．１（アカゲザル）、ＸＭ＿０２４３５７４８９．１（チンパンジー）、及びＸＭ＿０３１０１２２４４．１（ゴリラ）から選択されるあらゆるＬＰＡ ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ配列が挙げられ得るが、これらに限定されない。特定の実施形態において、ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列は、参照配列ＮＭ＿００５５７７．４としてＮＣＢＩデータベースに記載されるヒト転写産物である。

【0069】

ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖は、典型的に、生理的条件下で２本の鎖がハイブリダイズして二重鎖領域を形成するように、アンチセンス鎖の配列に対して十分に相補的な配列を含む。「二重鎖領域」は、ワトソン－クリック塩基対形成又は他の水素結合相互作用のいずれかによって互いに塩基対を形成して、２つのポリヌクレオチド間で二重鎖を作出する２つの相補的又は実質的に相補的なポリヌクレオチド内の領域を指す。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の二重鎖領域は、例えば、Ｄｉｃｅｒ酵素及び／又はＲＩＳＣ複合体が結合することによって、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体がＲＮＡ干渉経路に入ることを可能にするほどの十分な長さのものであるべきである。例えば、一部の実施形態において、二重鎖領域は、約１５～約３０塩基対長である。また、この範囲内の二重鎖領域の他の長さ、例えば約１５～約２８塩基対、約１５～約２６塩基対、約１５～約２４塩基対、約１５～約２２塩基対、約１７～約２８塩基対、約１７～約２６塩基対、約１７～約２４塩基対、約１７～約２３塩基対、約１７～約２１塩基対、約１９～約２５塩基対、約１９～約２３塩基対、又は約１９～約２１塩基対が適している。特定の実施形態において、二重鎖領域は、約１７～約２６塩基対長である。他の実施形態において、二重鎖領域は、約１９～約２１塩基対長である。一実施形態において、二重鎖領域は、約１９塩基対長である。別の実施形態において、二重鎖領域は、約２１塩基対長である。

【0070】

センス鎖及びアンチセンス鎖が２つの別々の分子である（例えば、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体がｓｉＲＮＡを含む）実施形態について、センス鎖及びアンチセンス鎖は、二重鎖領域の長さと同じ長さである必要はない。例えば、一方又は双方の鎖は、二重鎖領域よりも長く、且つ二重鎖領域の側面に位置する１つ以上の不対ヌクレオチド又はミスマッチを有し得る。ゆえに、一部の実施形態において、ＲＮＡｉ構築体は、少なくとも１つのヌクレオチドオーバーハングを含む。本明細書中で用いられる「ヌクレオチドオーバーハング」は、鎖の末端にて、二重鎖領域を越えて延在する不対ヌクレオチド又はヌクレオチドを指す。ヌクレオチドオーバーハングは、典型的に、一方の鎖の３’末端が他方の鎖の５’末端を越えて延在する場合に、又は一方の鎖の５’末端が他方の鎖の３’末端を越えて延在する場合に作出される。ヌクレオチドオーバーハングの長さは、一般に、１～６ヌクレオチド、１～５ヌクレオチド、１～４ヌクレオチド、１～３ヌクレオチド、２～６ヌクレオチド、２～５ヌクレオチド、又は２～４ヌクレオチドである。一部の実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、１、２、３、４、５、又は６つのヌクレオチドを含む。特定の一実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、１～４つのヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、２つのヌクレオチドを含む。特定の他の実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、単一のヌクレオチドを含む。ヌクレオチドオーバーハングがアンチセンス鎖内に存在する場合、オーバーハング内のヌクレオチドは、標的遺伝子配列に対して相補的であり得るか、標的遺伝子配列とミスマッチを形成し得るか、又は何らかの他の配列を含み得る（例えば、ポリピリミジン配列又はポリプリン配列、例えば、ＵＵ、ＴＴ、ＡＡ、ＧＧ、その他）。

【0071】

ヌクレオチドオーバーハングは、一方又は双方の鎖の５’末端又は３’末端に存在し得る。例えば、一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、アンチセンス鎖の５’末端及び３’末端にてヌクレオチドオーバーハングを含む。別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖の５’末端及び３’末端にてヌクレオチドオーバーハングを含む。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖の５’末端及びアンチセンス鎖の５’末端にてヌクレオチドオーバーハングを含む。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の３’末端にてヌクレオチドオーバーハングを含む。

【0072】

ＲＮＡｉ構築体は、二本鎖ＲＮＡ分子の一方の末端にてヌクレオチドオーバーハングを、そして他方にて平滑末端を含み得る。「平滑末端」は、センス鎖及びアンチセンス鎖が分子の末端にて完全に塩基対形成されており、且つ二重鎖領域を越えて延在する不対ヌクレオチドが存在しないことを意味する。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖の３’末端にてヌクレオチドオーバーハングを、そしてセンス鎖の５’末端及びアンチセンス鎖の３’末端にて平滑末端を含む。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、アンチセンス鎖の３’末端にてヌクレオチドオーバーハングを、そしてアンチセンス鎖の５’末端及びセンス鎖の３’末端にて平滑末端を含む。特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、二本鎖ＲＮＡ分子の双方の末端にて平滑末端を含む。そのような実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は同じ長さを有し、二重鎖領域は、センス鎖及びアンチセンス鎖と同じ長さである（すなわち、分子は、その全長にわたって二本鎖である）。

【0073】

本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体中のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、約１５～約３０ヌクレオチド長、約１９～約３０ヌクレオチド長、約１８～約２８ヌクレオチド長、約１９～約２７ヌクレオチド長、約１９～約２５ヌクレオチド長、約１９～約２３ヌクレオチド長、約１９～約２１ヌクレオチド長、約２１～約２５ヌクレオチド長、又は約２１～約２３ヌクレオチド長であり得る。特定の実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、又は約２５ヌクレオチド長である。一部の実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が２つのヌクレオチドオーバーハングを有するように、同じ長さを有するが、これらの鎖よりも短い二重鎖領域を形成する。例えば、一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、（ｉ）各々２１ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖、（ｉｉ）１９塩基対長の二重鎖領域、並びに（ｉｉｉ）センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の３’末端の双方にて２つの不対ヌクレオチドのヌクレオチドオーバーハングを含む。別の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、（ｉ）各々２３ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖、（ｉｉ）２１塩基対長の二重鎖領域、並びに（ｉｉｉ）センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の３’末端の双方にて２つの不対ヌクレオチドのヌクレオチドオーバーハングを含む。他の実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さを有し、それらの全長にわたって、二本鎖分子のいずれの末端にもヌクレオチドオーバーハングが存在しないように二重鎖領域を形成する。特定の一実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、平滑末端であり、（ｉ）各々２１ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖、並びに（ｉｉ）２１塩基対長の二重鎖領域を含む。別の特定の実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、平滑末端であり、（ｉ）各々１９ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖、並びに（ｉｉ）１９塩基対長の二重鎖領域を含む。

【0074】

他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体が少なくとも１つのヌクレオチドオーバーハングを含むように、センス鎖又はアンチセンス鎖は、他方の鎖よりも長く、且つこの２本の鎖は、短い方の鎖の長さに等しい長さを有する二重鎖領域を形成する。例えば、一実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、（ｉ）１９ヌクレオチド長のセンス鎖、（ｉｉ）２１ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、（ｉｉｉ）１９塩基対長の二重鎖領域、及び（ｉｖ）アンチセンス鎖の３’末端にて２つの不対ヌクレオチドのヌクレオチドオーバーハングを含む。別の実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、（ｉ）２１ヌクレオチド長のセンス鎖、（ｉｉ）２３ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、（ｉｉｉ）２１塩基対長の二重鎖領域、及び（ｉｖ）アンチセンス鎖の３’末端にて２つの不対ヌクレオチドのヌクレオチドオーバーハングを含む。

【0075】

本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み得る。「修飾ヌクレオチド」は、ヌクレオシド、核酸塩基、ペントース環、又はリン酸基への１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。本明細書中で用いられる修飾ヌクレオチドは、アデノシン一リン酸、グアノシン一リン酸、ウリジン一リン酸、及びシチジン一リン酸を含有するリボヌクレオチドを包含しない。しかしながら、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、修飾ヌクレオチド及びリボヌクレオチドの組合せを含み得る。二本鎖ＲＮＡ分子の一方又は双方の鎖中への修飾ヌクレオチドの組込みは、例えば、ヌクレアーゼ及び他の分解プロセスに対する分子の感受性を引き下げることによって、ＲＮＡ分子のインビボ安定性を向上させることができる。また、ＬＰＡ遺伝子の発現を引き下げるためのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の効力を、修飾ヌクレオチドの組込みによって増強させることができる。

【0076】

特定の実施形態において、修飾ヌクレオチドは、リボース糖の修飾を有する。当該糖修飾として、ペントース環の２’位及び／又は５’位での修飾、並びに二環式糖修飾が挙げられ得る。２’修飾ヌクレオチドは、ＯＨ以外の置換基を２’位に有するペントース環を有するヌクレオチドを指す。そのような２’修飾として、２’Ｈ（例えばデオキシリボヌクレオチド）、２’－Ｏ－アルキル（例えば、Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_１０又はＯ－Ｃ_１～Ｃ_１０置換アルキル）、２’－Ｏ－アリル（Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）、２’－Ｃ－アリル、２’－デオキシ－２’－フルオロ（２’－Ｆ又は２’－フルオロとも称される）、２’－Ｏ－メチル（－ＯＣＨ_３）、２’－Ｏ－メトキシエチル（Ｏ－（ＣＨ_２）_２ＯＣＨ_３）、２’－ＯＣＦ_３、２’－Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、２’－Ｏ－アミノアルキル、２’－アミノ（例えばＮＨ_２）、２’－Ｏ－エチルアミン、及び２’－アジドが挙げられるが、これらに限定されない。ペントース環の５’位での修飾として、５’－メチル（Ｒ又はＳ）；５’－ビニル、及び５’－メトキシが挙げられるが、これらに限定されない。

【0077】

「二環式糖修飾」は、環の２個の原子を架橋により連結して第２の環を形成して二環式糖構造を生じさせる、ペントース環の修飾を指す。一部の実施形態において、二環式糖修飾は、ペントース環の４’炭素と２’炭素との間の架橋を含む。二環式糖修飾を有する糖部分を含むヌクレオチドは、本明細書中で二環式核酸又はＢＮＡと称される。例示的な二環式糖修飾として、α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）二環式核酸（ＢＮＡ）；β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）ＢＮＡ（ロックド核酸又はＬＮＡとも称される）；エチレンエオキシ（４’－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－２’）ＢＮＡ；アミノオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ；オキシアミノ（４’－ＣＨ_２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ；メチル（メチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（コンストレインド（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）エチル又はｃＥｔとも称される）；メチレン－チオ（４’－ＣＨ_２－Ｓ－２’）ＢＮＡ；メチレン－アミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ；メチル炭素環（４’－ＣＨ_２－ＣＨ（ＣＨ_３）－２’）ＢＮＡ；プロピレン炭素環（４’－（ＣＨ_２）_３－２’）ＢＮＡ；及びメトキシ（エチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ_２ＯＭｅ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（コンストレインドＭＯＥ又はｃＭＯＥとも称される）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体中に組み込まれ得るこれらの、そして他の糖修飾ヌクレオチドは、米国特許第９，１８１，５５１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７６１号明細書、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１９：９３７－９５４，２０１２に記載されている。

【0078】

一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾ヌクレオチド、二環式核酸（ＢＮＡ）、デオキシリボヌクレオチド、又はそれらの組合せを含む。特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はそれらの組合せを含む。特定の一実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はそれらの組合せを含む。一部のそのような実施形態において、デオキシリボヌクレオチドは、センス鎖又はアンチセンス鎖の３’末端及び／又は５’末端にて末端ヌクレオチドであり得る。デオキシリボヌクレオチドが末端ヌクレオチドであるような実施形態において、末端ヌクレオチドは、逆位ヌクレオチドであり得、すなわち天然の３’－５’ヌクレオチド間結合ではなく、３’－３’ヌクレオチド間結合（鎖の３’末端上にある場合）を介して、又は５’－５’ヌクレオチド間結合（鎖の５’末端上にある場合）を介して、隣接するヌクレオチドに連結され得る。

【0079】

ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及びアンチセンス鎖は双方とも、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含み得る。例えば、一部の実施形態において、センス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の修飾ヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、センス鎖内の全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の修飾ヌクレオチドを含む。他の実施形態において、アンチセンス鎖内の全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。特定の他の実施形態において、センス鎖内の全てのヌクレオチド及びアンチセンス鎖内の全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。これらの、そして他の実施形態において、修飾ヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、又はそれらの組合せであり得る。

【0080】

特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の鎖の一方又は双方中に組み込まれる修飾ヌクレオチドは、核酸塩基（本明細書中で「塩基」とも称される）の修飾を有する。「修飾核酸塩基」又は「修飾塩基」は、天然に存在するプリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）以外の塩基を指す。修飾核酸塩基は、合成又は天然に存在する修飾であり得、これとして、ユニバーサル塩基、５ーメチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン（Ｘ）、ヒポキサンチン（Ｉ）、２－アミノアデニン、６－メチルアデニン、６－メチルグアニン、並びにアデニン及びグアニンの他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン、及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン、及びチミン、５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル、並びに他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル、並びに他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニン、並びに３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0081】

一部の実施形態において、修飾塩基はユニバーサル塩基である。「ユニバーサル塩基」は、結果として生じる二重鎖領域の二重らせん構造を変えることなく、ＲＮＡ及びＤＮＡ内の天然の塩基の全てと無差別に塩基対を形成する塩基類似体を指す。ユニバーサル塩基は、当業者に知られており、これとして、イノシン、Ｃ－フェニル、Ｃ－ナフチル、及び他の芳香族誘導体、アゾールカルボキサミド、並びに３－ニトロピロール、４－ニトロインドール、５－ニトロインドール、及び６－ニトロインドール等のニトロアゾール誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0082】

ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体中に組み込まれ得る他の適切な修飾塩基として、Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．１０：２９７－３１０，２０００及びＰｅａｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．７６：７２９５－７３００，２０１１に記載されているものが挙げられる。グアニン、シトシン、アデニン、チミン、及びウラシルは、上述の修飾核酸塩基等の他の核酸塩基によって置換され得る（但し、そのような置換核酸塩基を有するヌクレオチドを含むポリヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に変えない）ことを当業者は十分に認識している。

【0083】

一部の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、１つ以上の脱塩基ヌクレオチドを含み得る。「脱塩基ヌクレオチド」又は「脱塩基ヌクレオシド」は、リボース糖の１’位にて核酸塩基を欠いているヌクレオチド又はヌクレオシドである。特定の実施形態において、脱塩基ヌクレオチドは、ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖の末端に組み込まれている。一実施形態において、センス鎖は、その３’末端、その５’末端、又はその３’末端及び５’末端の双方にて、末端ヌクレオチドとして脱塩基ヌクレオチドを含む。別の実施形態において、アンチセンス鎖は、その３’末端、その５’末端、又はその３’末端及び５’末端の双方にて、末端ヌクレオチドとして脱塩基ヌクレオチドを含む。脱塩基ヌクレオチドが末端ヌクレオチドであるような実施形態において、末端ヌクレオチドは、逆位ヌクレオチドであり得、すなわち天然の３’－５’ヌクレオチド間結合ではなく、３’－３’ヌクレオチド間結合（鎖の３’末端上にある場合）を介して、又は５’－５’ヌクレオチド間結合（鎖の５’末端上にある場合）を介して、隣接するヌクレオチドに連結され得る。また、脱塩基ヌクレオチドは、上述の糖修飾のいずれか等の糖修飾を含み得る。特定の実施形態において、脱塩基ヌクレオチドは、２’修飾を含み、例えば、２’－フルオロ修飾、２’－Ｏ－メチル修飾、又は２’－Ｈ（デオキシ）修飾を含む。一実施形態において、脱塩基ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチル修飾を含む。別の実施形態において、脱塩基ヌクレオチドは、２’－Ｈ修飾（すなわちデオキシ脱塩基ヌクレオチド）を含む。

【0084】

また、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。本明細書中で用いられる用語「修飾ヌクレオチド間結合」は、天然の３’～５’ホスホジエステル結合以外のヌクレオチド間結合を指す。一部の実施形態において、修飾ヌクレオチド間結合は、リン含有ヌクレオチド間結合、例えば、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホナート（例えば、メチルホスホナート、３’－アルキレンホスホナート）、ホスフィナート、ホスホロアミダート（例えば、３’－アミノホスホロアミダート及びアミノアルキルホスホロアミダート）、ホスホロチオアート（Ｐ＝Ｓ）、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、及びボラノホスファートである。一実施形態において、修飾ヌクレオチド間結合は、２’～５’ホスホジエステル結合である。他の実施形態において、修飾ヌクレオチド間結合は、リン非含有ヌクレオチド間結合であるので、修飾ヌクレオシド間結合と称され得る。そのようなリン非含有結合として、モルホリノ結合（一部はヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサン結合（－Ｏ－Ｓｉ（Ｈ）_２－Ｏ－）；スルフィド、スルホキシド、及びスルホン結合；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル結合；アルケン含有骨格；スルファマート骨格；メチレンメチルイミノ（－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｏ－ＣＨ_２－）及びメチレンヒドラジノ結合；スルホナート及びスルホンアミド結合；アミド結合；並びにＮ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ_２構成要素部分が混合された他のものが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、米国特許第５，５３９，０８２号明細書、米国特許第５，７１４，３３１号明細書、及び米国特許第５，７１９，２６２号明細書に記載されているもの等のペプチド核酸又はＰＮＡを作出するためのペプチドベースの結合（例えばアミノエチルグリシン）である。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体に使用され得る他の適切な修飾ヌクレオチド間及びヌクレオシド間結合が、米国特許第６，６９３，１８７号明細書、米国特許第９，１８１，５５１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７６１号明細書、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１９：９３７－９５４，２０１２に記載されている。

【0085】

特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、１つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。ホスホロチオアートヌクレオチド間結合は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖、アンチセンス鎖、又は双方の鎖内に存在し得る。例えば、一部の実施形態において、センス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。他の実施形態において、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。さらに他の実施形態において、双方の鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖、アンチセンス鎖、又は双方の鎖の３’末端、５’末端、又は３’末端及び５’末端の双方にて、１つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含み得る。例えば、特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖、アンチセンス鎖、又は双方の鎖の３’末端にて、約１～約６つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、６つ以上）の連続したホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、センス鎖、アンチセンス鎖、又は双方の鎖の５’末端にて、約１～約６つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、６つ以上）の連続したホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。一方又は双方の鎖が１つ以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む実施形態のいずれにおいても、鎖内の残りのヌクレオチド間結合は、天然の３’～５’ホスホジエステル結合であり得る。例えば、一部の実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖の各ヌクレオチド間結合は、ホスホジエステル及びホスホロチオアートから選択され、少なくとも１つのヌクレオチド間結合はホスホロチオアートである。

【0086】

本発明のＲＮＡｉ構築体の一部の実施形態において、センス鎖、アンチセンス鎖、又はアンチセンス鎖及びセンス鎖の双方の５’末端は、ホスファート部分を含む。本明細書中で用いられる用語「ホスファート部分」は、非修飾ホスファート（－Ｏ－Ｐ＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨ）及び修飾ホスファートを含む末端ホスファート基を指す。修飾ホスファートとして、Ｏ及びＯＨ基の１つ以上が、Ｈ、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ）、又はアルキル（ここで、Ｒは、Ｈ、アミノ保護基、又は非置換若しくは置換アルキルである）で置換されているホスファートが挙げられる。例示的なホスファート部分として、５’－モノホスファート；５’－ジホスファート；５’－トリホスファート；５’－グアノシンキャップ（７－メチル化又は非メチル化）；５’－アデノシンキャップ、又は他のあらゆる修飾若しくは非修飾ヌクレオチドキャップ構造；５’－モノチオホスファート（ホスホロチオアート）；５’－モノジチオホスファート（ホスホロジチオアート）；５’－アルファ－チオトリホスファート；５’－ガンマ－チオトリホスファート；５’－ホスホロアミダート；５’－ビニルホスファート；５’－アルキルホスホナート（例えば、アルキル＝メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、その他）；５’－シクロプロピルホスホナート、及び５’－アルキルエーテルホスホナート（例えば、アルキルエーテル＝メトキシメチル、エトキシメチル、その他）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

本発明の方法での使用に適したＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体中に組み込まれ得る修飾ヌクレオチドは、本明細書中に記載される複数の化学修飾を有し得る。例えば、修飾ヌクレオチドは、リボース糖への修飾及び核酸塩基への修飾を有し得る。例として、修飾ヌクレオチドは、２’糖修飾（例えば、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチル）を含み得、そして修飾塩基（例えば、５－メチルシトシン又はシュードウラシル）を含み得る。他の実施形態において、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドがポリヌクレオチド中に組み込まれた場合に、修飾ヌクレオチド間又はヌクレオシド間結合をもたらすこととなる、５’ホスファートへの修飾と組み合わされた糖修飾を含み得る。例えば、一部の実施形態において、修飾ヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾、２’－Ｏ－メチル修飾、又は二環式糖修飾、及び５’ホスホロチオアート基等の糖修飾を含み得る。従って一部の実施形態において、本発明のＲＮＡｉ構築体の一方又は双方の鎖は、２’修飾ヌクレオチド又はＢＮＡ及びホスホロチオアートヌクレオチド間結合の組合せを含む。特定の実施形態において、本発明のＲＮＡｉ構築体のセンス鎖及びアンチセンス鎖は双方とも、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、及びホスホロチオアートヌクレオチド間結合の組合せを含む。

【0088】

ＬＰＡ遺伝子は、主に肝臓内で発現される。ゆえに、特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を肝臓細胞に特異的に送達することが望ましい。従って、一部の実施形態において、本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、以下でより詳細に解説されるような種々のアプローチを用いて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を肝臓細胞（例えば肝細胞）に特異的に向けるような標的化部分を含み得る。特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、表面発現アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＲ）又はその構成要素（例えば、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２）に結合するリガンドを含む標的化部分を含む。

【0089】

一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、肝臓細胞の表面上に発現されるタンパク質に結合するか、又はこれと相互作用するリガンドを使用することによって、肝臓に特異的に標的化され得る。例えば、特定の実施形態において、リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体及びＬＤＬ受容体等の、肝細胞上に発現される受容体に特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体又はその結合断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ））を含み得る。特定の一実施形態において、リガンドは、ＡＳＧＲ１及び／又はＡＳＧＲ２に特異的に結合する抗体又はその結合断片を含む。別の実施形態において、リガンドは、ＡＳＧＲ１及び／又はＡＳＧＲ２に特異的に結合する抗体のＦａｂ断片を含む。「Ｆａｂ断片」は、１つの免疫グロブリン軽鎖（すなわち軽鎖可変領域（ＶＬ）及び定常領域（ＣＬ））、並びに１つの免疫グロブリン重鎖のＣＨ１領域及び可変領域（ＶＨ）で構成される。別の実施形態において、リガンドは、ＡＳＧＲ１及び／又はＡＳＧＲ２に特異的に結合する抗体の単鎖可変抗体断片（ｓｃＦｖ断片）を含む。「ｓｃＦｖ断片」は、抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、これらの領域は、単一のポリペプチド鎖内に存在し、場合によっては、Ｆｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするペプチドリンカーを、ＶＨ領域とＶＬ領域との間に含む。本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の標的化部分においてアシアロ糖タンパク質受容体として用いられ得る、ＡＳＧＲ１に特異的に結合する例示的な抗体及びその結合断片は、国際公開第２０１７／０５８９４４号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体における標的化部分としての使用に適した、ＡＳＧＲ１、ＬＤＬ受容体、又は他の肝臓表面発現タンパク質に特異的に結合する他の抗体又はその結合断片は、市販されている。

【0090】

特定の実施形態において、標的化部分は、炭水化物を含む。「炭水化物」は、酸素、窒素、又は硫黄原子が各炭素原子に結合されている少なくとも６つの炭素原子を有する１つ以上の単糖単位（直鎖状、分岐鎖状、又は環状であり得る）で構成される化合物を指す。炭水化物として、糖（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、及び約４、５、６、７、８、又は９つの単糖単位を含有するオリゴ糖）、並びに多糖、例えば、デンプン、グリコーゲン、セルロース、及び多糖ガムが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、標的化部分中に組み込まれる炭水化物は、ペントース、ヘキソース、又はヘプトースから選択される単糖、並びにそのような単糖単位を含む二糖及び三糖である。他の実施形態において、標的化部分中に組み込まれる炭水化物は、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、及びＮ－アセチルグルコサミン等のアミノ糖である。

【0091】

一部の実施形態において、標的化部分は、グルコース、ガラクトース、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、又は前述のいずれかの誘導体を含むアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。特定の実施形態において、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）又はその誘導体を含む。グルコース、ガラクトース、及びＧａｌＮＡｃを含むリガンドは、化合物を肝臓細胞に向けるのに特に有効である。なぜなら、そのようなリガンドは、肝細胞の表面上に発現されるＡＳＧＲに結合するからである。例えば、Ｄ’Ｓｏｕｚａ ａｎｄ Ｄｅｖａｒａｊａｎ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏｌ．２０３：１２６－１３９，２０１５参照。本発明の方法に使用されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の標的化部分中に組み込まれ得るＧａｌＮＡｃ含有又はガラクトース含有リガンドの例が、米国特許第７，４９１，８０５号明細書；米国特許第８，１０６，０２２号明細書；米国特許第８，８７７，９１７号明細書；及び米国特許第１０，２４６，７０９号明細書；米国特許出願公開第２００３０１３０１８６号明細書；並びに国際公開第２０１３１６６１５５号パンフレットに記載されており、これらの文献は全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0092】

特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体内の標的化部分は、多価炭水化物部分を含む。本明細書中で用いられる「多価炭水化物部分」は、他の分子と独立して結合又は相互作用することができる２つ以上の炭水化物単位を含む部分を指す。例えば、多価炭水化物部分は、２つ以上の異なる分子、又は同じ分子上の２つ以上の異なる部位に結合することができる、炭水化物で構成される２つ以上の結合ドメインを含む。炭水化物部分の価数は、炭水化物部分内の個々の結合ドメインの数を示す。例えば、炭水化物部分に関する用語「一価」、「二価」、「三価」、及び「四価」は、それぞれ１、２、３、及び４つの結合ドメインを有する炭水化物部分を指す。多価炭水化物部分は、多価ラクトース部分、多価ガラクトース部分、多価グルコース部分、多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分、多価Ｎ－アセチル－グルコサミン部分、多価マンノース部分、又は多価フコース部分を含み得る。一部の実施形態において、標的化部分は、多価ガラクトース部分を含む。他の実施形態において、標的化部分は、多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む。これらの、そして他の実施形態において、多価炭水化物部分は、二価、三価、又は四価であり得る。そのような実施形態において、多価炭水化物部分は、二分岐又は三分岐であり得る。特定の一実施形態において、多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分は、三価又は四価である。別の特定の実施形態において、多価ガラクトース部分は、三価又は四価である。

【0093】

標的化部分は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のＲＮＡ分子に直接的又は間接的に結合又はコンジュゲートされ得る。例えば、一部の実施形態において、標的化部分は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖又はアンチセンス鎖に直接共有結合されている。他の実施形態において、標的化部分は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖又はアンチセンス鎖に、リンカーを介して共有結合されている。標的化部分は、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のポリヌクレオチド（例えば、センス鎖又はアンチセンス鎖）の核酸塩基、糖部分、又はヌクレオチド間結合に結合され得る。プリン核酸塩基又はその誘導体へのコンジュゲーション又は結合は、環内原子及び環外原子が挙げられるあらゆる位置にて起こり得る。特定の実施形態において、プリン核酸塩基の２位、６位、７位、又は８位が標的化部分に結合される。また、ピリミジン核酸塩基又はその誘導体へのコンジュゲーション又は結合は、あらゆる位置にて起こり得る。一部の実施形態において、ピリミジン核酸塩基の２位、５位、及び６位が、標的化部分に結合され得る。ヌクレオチドの糖部分へのコンジュゲーション又は結合は、あらゆる炭素原子にて起こり得る。標的化部分に結合され得る糖部分の例示的な炭素原子として、２’、３’、及び５’炭素原子が挙げられる。また、例えば脱塩基ヌクレオチドでは、１’位が標的化部分に結合され得る。また、ヌクレオチド間結合は、標的化部分の結合を支援することができる。リン含有結合（例えば、ホスホジエステル、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロアミダート等）について、標的化部分は、リン原子に直接、又はリン原子に結合しているＯ原子、Ｎ原子、若しくはＳ原子に結合され得る。アミン含有又はアミド含有ヌクレオシド間結合（例えばＰＮＡ）について、標的化部分は、アミン若しくはアミドの窒素原子に、又は隣接する炭素原子に結合され得る。

【0094】

一部の実施形態において、標的化部分は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの３’末端又は５’末端に結合され得る。特定の好ましい実施形態において、標的化部分は、センス鎖の５’末端に共有結合されている。そのような実施形態において、標的化部分は、センス鎖の５’末端ヌクレオチドに結合されている。これらの、そして他の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の５’末端ヌクレオチドの５’位にて結合されている。逆位脱塩基ヌクレオチド又は逆位デオキシリボヌクレオチドが、センス鎖の５’末端ヌクレオチドであり、且つ５’－５’ヌクレオチド間結合を介して隣接ヌクレオチドに連結されている実施形態において、標的化部分は、逆位脱塩基ヌクレオチド又は逆位デオキシリボヌクレオチドの３’位にて結合され得る。他の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の３’末端に共有結合されている。例えば、一部の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の３’末端ヌクレオチドに結合されている。特定のそのような実施形態において、標的化部分は、センス鎖の３’末端ヌクレオチドの３’位にて結合されている。逆位脱塩基ヌクレオチド又は逆位デオキシリボヌクレオチドが、センス鎖の３’末端ヌクレオチドであり、且つ３’－３’ヌクレオチド間結合を介して隣接ヌクレオチドに連結されている実施形態において、標的化部分は、逆位脱塩基ヌクレオチド又は逆位デオキシリボヌクレオチドの５’位にて結合され得る。代替の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の３’末端近傍であるが、１つ以上の末端ヌクレオチドの前（すなわち、１、２、３、又は４つの末端ヌクレオチドの前）で結合されている。一部の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の３’末端ヌクレオチドの糖の２’位にて結合されている。他の実施形態において、標的化部分は、センス鎖の５’末端ヌクレオチドの糖の２’位にて結合されている。

【0095】

特定の実施形態において、標的化部分は、センス鎖又はアンチセンス鎖にリンカーを介して結合されている。「リンカー」は、リガンドをＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のポリヌクレオチド構成要素に共有結合させる原子又は原子の基である。リンカーは、約１～約３０原子長、約２～約２８原子長、約３～約２６原子長、約４～約２４原子長、約６～約２０原子長、約７～約２０原子長、約８～約２０原子長、約８～約１８原子長、約１０～約１８原子長、及び約１２～約１８原子長であり得る。一部の実施形態において、リンカーは、２つの官能基を有するアルキル部分を一般に含む、二官能性結合部分を含み得る。官能基の一方は、注目する化合物（例えば、ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖又はアンチセンス鎖）に結合するように選択され、そして他方は、本明細書中に記載される標的化部分又はその構成要素等の任意の選択された基に本質的に結合するように選択される。特定の実施形態において、リンカーは、エチレングリコール単位又はアミノ酸単位等の反復単位からなる鎖構造又はオリゴマーを含む。二官能性結合部分に典型的に使用される官能基の例として、求核性基と反応させるための求電子剤、及び求電子性基と反応させるための求核剤が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、二官能性結合部分として、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和（例えば、二重結合又は三重結合）等が挙げられる。

【0096】

標的化部分を、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体内のセンス鎖又はアンチセンス鎖に結合させるのに用いられ得るリンカーとして、ピロリジン、８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート、６－アミノヘキサン酸、置換Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル、置換若しくは非置換Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル、又は置換若しくは非置換Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニルが挙げられるが、これらに限定されない。そのようなリンカーにとって好ましい置換基として、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルが挙げられるが、これらに限定されない。標的化部分を、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体内のセンス鎖又はアンチセンス鎖に結合させるのに適した他の種類のリンカーが、当該技術において知られており、米国特許第７，７２３，５０９号明細書；米国特許第８，０１７，７６２号明細書；米国特許第８，８２８，９５６号明細書；米国特許第８，８７７，９１７号明細書；及び米国特許第９，１８１，５５１号明細書に記載されるリンカーが挙げられ得る。

【0097】

特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合される標的化部分は、ＧａｌＮＡｃ部分、例えば多価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。一部の実施形態において、多価ＧａｌＮＡｃ部分は、三価ＧａｌＮＡｃ部分であり、センス鎖の３’末端に結合されている。他の実施形態において、多価ＧａｌＮＡｃ部分は、三価ＧａｌＮＡｃ部分であり、センス鎖の５’末端に結合されている。さらに他の実施形態において、多価ＧａｌＮＡｃ部分は、四価ＧａｌＮＡｃ部分であり、センス鎖の３’末端に結合されている。さらに他の実施形態において、多価ＧａｌＮＡｃ部分は、四価ＧａｌＮＡｃ部分であり、センス鎖の５’末端に結合されている。

【0098】

特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、以下の構造［構造１］を有する標的化部分を含む。

【化1】

好ましい実施形態において、この構造を有する標的化部分は、ホスホロチオアート又はリン酸ジエステル結合を介してセンス鎖の５’末端に共有結合されている。

【0099】

特定の実施形態において、本発明の方法での使用に適したＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は：
センス鎖及びアンチセンス鎖であって、各々、約１９～約２３ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、ＬＰＡ ｍＲＮＡ配列と相補的な配列を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖の配列と相補的な配列を含む、センス鎖及びアンチセンス鎖と；
アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的化部分であって、センス鎖の５’末端に共有結合されている標的化部分と
を含む。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、２つの平滑末端を有する。例えば、一部のそのような実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々２１ヌクレオチド長であり、そして互いにハイブリダイズして、２１塩基対長の二重鎖領域を形成する。他のそのような実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々１９ヌクレオチド長であり、そして互いにハイブリダイズして、１９塩基対長の二重鎖領域を形成する。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、２つのヌクレオチドオーバーハングを有する。そのような一実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、（ｉ）各々２１ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖、（ｉｉ）１９塩基対長の二重鎖領域、並びに（ｉｉｉ）センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の３’末端の双方にて２つの不対ヌクレオチドのヌクレオチドオーバーハングを含む。

【0100】

一部の実施形態において、標的化部分は、三価染色体ＧａｌＮＡｃ部分、例えば米国特許第１０，２４６，７０９号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるいずれかの三価染色体ＧａｌＮＡｃ部分を含む。好ましい一実施形態において、標的化部分は、上述の構造１の構造を有する。

【0101】

特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のアンチセンス鎖は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００５５７７．４に示されるヒトＬＰＡ ｍＲＮＡ転写産物のヌクレオチド２７０６～２７２６、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００５５７７．４に示されるヒトＬＰＡ ｍＲＮＡ転写産物のヌクレオチド２６９７～２７２６、又はＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００５５７７．４に示されるヒトＬＰＡ ｍＲＮＡ転写産物のヌクレオチド２７０８～２７２５と実質的に相補的であるか、又は完全に相補的な配列を含む。そのような実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、この領域を標的とするアンチセンス鎖と実質的に相補的であるか、又は完全に相補的なセンス鎖を含み得る。ゆえに、これらの実施形態において、センス鎖は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００５５７７．４に示されるヒトＬＰＡ ｍＲＮＡ転写産物のヌクレオチド２７０６～２７２６、ヌクレオチド２６９７～２７２６、又はヌクレオチド～２７２５ ２７０８と同一の配列を含み得る。

【0102】

一部の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のセンス鎖は、５’－ＧＣＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＧ－３’の配列（配列番号１）を含む。関連する実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のアンチセンス鎖は、５’－ＣＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣ－３’の配列（配列番号２）を含む。

【0103】

本発明の方法での使用に適したＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体の例が、国際公開第２０１７／０５９２２３号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。国際公開第２０１７／０５９２２３号パンフレットに記載される二重鎖ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、及びＡＤ０３５３６が、本発明の方法に特に有用である。特定の好ましい実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、５’－ＣＡＧＣＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＧＡ－３’の配列（配列番号３）を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び５’－ＵＣＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣＵＧ－３’の配列（配列番号４）を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含む。関連する実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、５’－ｃｓａｇｃｃｃｃｕＵｆＡｆＵｆｕｇｕｕａｕａｃｇｓ（ｉｎｖｄＡ）－３’の配列（配列番号５）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び５’－ｕｓＣｆｓｇＵｆａＵｆａａｃａａＵｆａＡｆｇＧｆｇＧｆｃｓＵｆｓｇ－３’の配列（配列番号６）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｇ、ｃ、及びｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンであり；Ａｆ、Ｇｆ、Ｃｆ、及びＵｆは、それぞれ２’－デオキシ－２’－フルオロ（「２’－フルオロ」）アデノシン、２’－フルオログアノシン、２’－フルオロシチジン、及び２’－フルオロウリジンであり；ｉｎｖｄＡは逆位デオキシアデノシン（３’－３’連結ヌクレオチド）であり、ｓはホスホロチオアート結合である。一部のそのような実施形態において、本明細書中に記載される構造１の構造を有する標的化部分は、センス鎖の５’末端にホスホロチオアート結合を介して共有結合されている。

【0104】

他の実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、５’－ＧＣＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＧＡＵＵ－３’の配列（配列番号７）を含むセンス鎖、及び５’－ＵＣＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣＵＵ－３’の配列（配列番号８）を含むアンチセンス鎖を含む。関連する実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、５’－ｇｓｃｃｃｃｕＵｆＡｆＵｆｕｇｕｕａｕａｃｇａｕｕｓ（ｉｎｖＡｂ）－３’の配列（配列番号９）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び５’－ｕｓＣｆｓｇＵｆａＵｆａａｃａａＵｆａＡｆｇＧｆｇＧｆｃｓｕｓｕ－３’の配列（配列番号１０）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｇ、ｃ、及びｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンであり；Ａｆ、Ｇｆ、Ｃｆ、及びＵｆは、それぞれ２’－デオキシ－２’－フルオロ（「２’－フルオロ」）アデノシン、２’－フルオログアノシン、２’－フルオロシチジン、及び２’－フルオロウリジンであり；ｉｎｖＡｂは逆位脱塩基ヌクレオチド（３’－３’連結ヌクレオチド）であり、ｓはホスホロチオアート結合である。一部のそのような実施形態において、本明細書中に記載される構造１の構造を有する標的化部分は、センス鎖の５’末端にホスホロチオアート結合を介して共有結合されている。他の関連する実施形態において、本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、５’－（ｉｎｖＡｂ）ＧｆｃＣｆｃＣｆｕＵｆＡｆＵｆｕＧｆｕＵｆａＵｆａＣｆｇａｕｓｕ（ｉｎｖＡｂ）－３’の配列（配列番号１１）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるセンス鎖、及び５’－ｕｓＣｆｓｇｓＵｆａＵｆａＡｆＣｆＡｆａｕａＡｆｇＧｆｇＧｆｃｕｓｕ－３’の配列（配列番号１２）に従う修飾ヌクレオチドの配列を含むか、又はこれからなるアンチセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｇ、ｃ、及びｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンであり；Ａｆ、Ｇｆ、Ｃｆ、及びＵｆは、それぞれ２’－デオキシ－２’－フルオロ（「２’－フルオロ」）アデノシン、２’－フルオログアノシン、２’－フルオロシチジン、及び２’－フルオロウリジンであり；ｉｎｖＡｂは逆位脱塩基ヌクレオチドであり（鎖の５’末端上にある場合、５’－５’連結ヌクレオチド、鎖の３’末端上にある場合、３’－３’連結ヌクレオチド）、ｓはホスホロチオアート結合である。これらの実施形態の一部において、本明細書中に記載される構造１の構造を有する標的化部分は、センス鎖の５’末端にホスホジエステル結合を介して共有結合されている。

【0105】

特定の好ましい実施形態において、本発明の方法に従う患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、オルパシランである。また、オルパシランの構造は、図１に概略的に示されており、そして国際公開第２０１７／０５９２２３号パンフレットに記載されており、オルパシランは二重鎖ｎｏ．ＡＤ０３８５１と表される。オルパシランは、２つの別々の鎖、センス鎖及びアンチセンス鎖（各々２１ヌクレオチド長である）を含む二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である。センス鎖及びアンチセンス鎖の核酸塩基配列は、互いに対して完全に相補的であり、そしてハイブリダイズして２１塩基対長の二重鎖を形成する。オルパシランのセンス鎖及びアンチセンス鎖についてのヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号３及び配列番号４に示されている。オルパシランのセンス鎖及びアンチセンス鎖は双方とも、修飾ヌクレオチドで構成され、鎖毎の修飾配列は、配列番号５（センス鎖）及び配列番号６（アンチセンス鎖）に示されている。構造１の構造を有する（そして、図１においてＲ１として表される）三価ＧａｌＮＡｃ部分は、ホスホロチオアート結合によってオルパシランのセンス鎖の５’末端に共有結合されている。用語オルパシランは、図１に示される化合物の遊離酸、及びその薬学的に許容される塩、例えばナトリウム塩を指す。

【0106】

本発明の方法に用いられるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、当該技術において知られている技術を用いて、例えば従来の核酸固相合成を用いて、容易に作製され得る。ＲＮＡｉ構築体のポリヌクレオチドは、標準的なヌクレオチド又はヌクレオシド前駆体（例えばホスホラミダイト）を利用して、適切な核酸合成装置でアセンブルすることができる。自動核酸合成装置が、いくつかのベンダーによって市販されており、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のＤＮＡ／ＲＮＡ合成装置、ＢｉｏＡｕｔｏｍａｔｉｏｎ（Ｉｒｖｉｎｇ，ＴＸ）のＭｅｒＭａｄｅ合成装置、及びＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）のＯｌｉｇｏＰｉｌｏｔ合成装置が挙げられる。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を合成し、且つ標的化部分を選択する例示的な方法が、国際公開第２０１７／０５９２２３号パンフレット及び米国特許第１０，２４６，７０９号明細書の実施例に記載されており、これらの文献は双方とも、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0107】

２’シリル保護基が、リボヌクレオシドの５’位にて酸に不安定なジメトキシトリチル（ＤＭＴ）と併せて用いられて、ホスホラミダイト化学を介してオリゴヌクレオチドを合成することができる。最終脱保護条件は、ＲＮＡ産物を著しく分解しないことが知られている。全ての合成は、任意の自動又は手動合成装置により、大規模、中規模、又は小規模で行うことができる。また、合成は、複数のウェルプレート、カラム、又はスライドガラスにおいて実行することができる。

【0108】

２’－Ｏ－シリル基は、フッ化物イオンへの曝露を介して除去され得、フッ化物イオンとして、フッ化物イオンの何らかの供給源、例えば無機対イオンと対になるフッ化物イオンを含有する塩、例えばフッ化セシウム及びフッ化カリウム、又は有機対イオンと対になるフッ化物イオンを含有する塩、例えばフッ化テトラアルキルアンモニウムが挙げられ得る。クラウンエーテル触媒が、脱保護反応において無機フッ化物と組み合わせて利用され得る。好ましいフッ化物イオン供給源として、フッ化テトラブチルアンモニウム又はアミノヒドロフルオリド（例えば、双極性非プロトン溶媒、例えばジメチルホルムアミド中での水性ＨＦの、トリエチルアミンとの組合せ）がある。

【0109】

亜リン酸トリエステル及びホスホトリエステルに用いられる保護基の選択により、フッ化物に対するトリエステルの安定性を改変することができる。ホスホトリエステル又は亜リン酸トリエステルのメチル保護は、フッ化物イオンに対する結合を安定化させ、且つプロセス収率を向上させることができる。

【0110】

リボヌクレオシドは、反応性の２’ヒドロキシル置換基を有するので、ＲＮＡ中の反応性の２’位を、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル保護基に対して直交性である保護基（例えば、酸処理に対して安定な保護基）で保護することが望ましい場合がある。シリル保護基が、この条件を満たしており、最終的なフッ化物脱保護工程において容易に除去され得、これにより、ＲＮＡ分解を最小減に抑えることが可能となる。

【0111】

テトラゾール触媒を、標準的なホスホラミダイトカップリング反応に用いることができる。好ましい触媒として、例えば、テトラゾール、Ｓ－エチル－テトラゾール、ベンジルチオテトラゾール、ｐ－ニトロフェニルテトラゾールが挙げられる。

【0112】

当業者によって理解され得るように、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を合成する更なる方法が当業者に明らかであろう。加えて、種々の合成工程を、代替の順番又は順序で実行して、所望の化合物を得ることができる。ＲＮＡｉ構築体の合成に有用な他の合成化学変換、保護基（例えば、塩基に存在するヒドロキシル、アミノ、その他用）及び保護基の方法論（保護及び脱保護）が、当該技術において知られており、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９４）；及びＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）、並びにそれらの後続版に記載されるようなものが挙げられる。また、ＲＮＡｉ剤のカスタム合成が、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）、Ｎｉｔｔｏ Ｄｅｎｋｏ Ａｖｅｃｉａ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ）、ＡｘｏＬａｂｓ ＧｍｂＨ（Ｋｕｌｍｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、及びＡｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）が挙げられるいくつかの民間のベンダーから利用可能である。

【0113】

ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、通常、患者に、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤を含み得る医薬組成物内に入れられて投与される。ゆえに、本発明はまた、本明細書中に記載される本発明の方法に用いられる、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体及び薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤を含む医薬組成物及び製剤を含む。臨床用途について、医薬組成物及び製剤は、意図される用途に適切な形態で調製されることとなる。一般に、このことは、パイロジェンだけでなく、ヒト又は動物に有害となる虞のある他の不純物も本質的にない組成物の調製を伴うこととなる。

【0114】

語句「薬学的に許容される」又は「薬理学的に許容される」は、動物又はヒトに投与される場合の有害な、アレルギー性の、又は他の不都合な反応をもたらさない分子実体及び組成物を指す。本明細書中で用いられる「薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤」として、ヒトへの投与に適した医薬等の医薬の製剤化における使用に許容される溶媒、バッファ、溶液、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤、並びに吸収遅延剤等が挙げられる。薬学的に活性な物質に対するそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術において周知である。従来のあらゆる媒体又は剤は、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体と適合しない場合を除いて、治療用組成物での使用が意図される。また、補助的な活性成分は、それらが組成物のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を不活化しないという条件で、組成物中に組み込まれ得る。

【0115】

医薬組成物の製剤化のための組成物及び方法は、投与経路、処置されることとなる疾患若しくは障害の種類及び程度、又は投与されることとなる用量が挙げられるがこれらに限定されない、いくつかの基準に依存する。一部の実施形態において、医薬組成物は、意図される送達経路に基づいて製剤化される。例えば、特定の実施形態において、医薬組成物は、非経口送達用に製剤化される。非経口の送達形態として、静脈内、動脈内、皮下、髄腔内、腹腔内、又は筋肉内の注射又は注入が挙げられる。一実施形態において、医薬組成物は、静脈内送達用に製剤化される。別の実施形態において、医薬組成物は、皮下送達用に製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、有効量のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含む。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、特にオルパシランの有効量は、本明細書中に記載される用量のいずれであってもよい。

【0116】

本発明の方法に従うＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含む医薬組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用できる限り、一般的なあらゆる経路を介するものであり得る。そのような経路として、非経口（例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、又は静脈内）、経口、経鼻、頬側、皮内、経皮、及び舌下経路、又は肝臓組織中への直接注射若しくは肝門脈を介する送達が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法の一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、又はＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含む医薬組成物は、患者に非経口的に投与される。例えば、特定の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、又はＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含む医薬組成物は、静脈内に投与される。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、又はＬＰＡ ＲＮＡｉ医薬組成物を含む医薬組成物は、皮下に、例えば皮下注射によって投与される。そのような実施形態において、皮下注射容量は、約２ｍＬ以下、例えば、約２ｍＬ、約１．８ｍＬ、約１．７ｍＬ、約１．６ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．４ｍＬ、約１．３ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．１ｍＬ、約１ｍＬ、約０．９ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．６ｍＬ、又は約０．５ｍＬである。一実施形態において、皮下注射容量は約１ｍＬ以下である。別の実施形態において、皮下注射容量は約１ｍＬである。さらに別の実施形態において、皮下注射容量は約１．５ｍＬである。

【0117】

医薬組成物が非経口注射によって投与される実施形態において、医薬組成物は、シリンジにより患者に投与され得る。一部の実施形態において、シリンジは、医薬組成物で予め充填されている。医薬組成物が患者に非経口注射、例えば皮下注射によって投与される他の実施形態において、医薬組成物は、自己投与用のデバイスが挙げられる注射デバイスにより投与される。そのようなデバイスは、市販されており、オートインジェクタ、投与ペン、微量注入ポンプ、オンボディインジェクタ、及びプレフィルドシリンジが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法に従ってＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）の有効量を含む医薬組成物を投与するための例示的なデバイスとして、オートインジェクタ（例えば、ＳｕｒｅＣｌｉｃｋ（登録商標）、ＥｖｅｒＧｅｎｔｌｅ（登録商標）、Ａｖａｎｔｉ（登録商標）、ＤｏｓｅＰｒｏ（登録商標）、Ｍｏｌｌｙ（登録商標）、及びＬｅｖａ（登録商標））、ペン注射デバイス（例えば、Ｍａｄｉｅ（登録商標）ペンインジェクタ、ＤＣＰ（商標）ペンインジェクタ、ＢＤ Ｖｙｓｔｒａ（商標）ディスポーザブルペン、ＢＤ（商標）再利用可能ペン）、及びプレフィルドシリンジ（ＢＤ Ｓｔｅｒｉｆｉｌｌ（商標）、ＢＤ Ｈｙｐａｋ（商標）、Ｂａｘｔｅｒのプレフィルドシリンジ）が挙げられる。一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）の有効量を含む医薬組成物は、プレフィルドシリンジにより患者に投与される。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）の有効量を含む医薬組成物は、オートインジェクタにより患者に投与される。特定のそのような実施形態において、シリンジ、オートインジェクタ、又は他の注射デバイスの注射容量は、約２ｍＬ以下、例えば、約２ｍＬ、約１．８ｍＬ、約１．７ｍＬ、約１．６ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．４ｍＬ、約１．３ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．１ｍＬ、約１ｍＬ、約０．９ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．６ｍＬ、又は約０．５ｍＬである。一実施形態において、シリンジ、オートインジェクタ、又は他の注射デバイスの注射容量は、約１ｍＬ以下である。別の実施形態において、シリンジ、オートインジェクタ、又は他の注射デバイスの注射容量は、約１ｍＬである。さらに別の実施形態において、シリンジ、オートインジェクタ、又は他の注射デバイスの注射容量は、約１．５ｍＬである。

【0118】

水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームが挙げられる、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、及び脂質ベースの系等のコロイド分散系が、本発明のＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体用の送達ビヒクルとして用いられ得る。本発明の核酸を送達するのに適した市販の脂肪エマルションとして、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）（Ａｂｂｏｔｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）ＩＩ（Ｈｏｓｐｉｒａ）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）ＩＩＩ（Ｈｏｓｐｉｒａ）、Ｎｕｔｒｉｌｉｐｉｄ（Ｂ．Ｂｒａｕｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｃ．）、及び他の類似の脂質エマルションが挙げられる。インビボ送達ビヒクルとして用いられる好ましいコロイド系として、リポソーム（すなわち人工膜小胞）がある。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、リポソーム内に封入されていてもよいし、リポソーム、特にカチオン性リポソームに対して複合体を形成していてもよい。これ以外にも、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、脂質、特にカチオン性脂質に対して複合体形成され得る。適切な脂質及びリポソームとして、中性（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、及びジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ））、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ））、そしてカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピル（ＤＯＴＡＰ）及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＴＭＡ））が挙げられる。そのようなコロイド分散系の調製及び使用は、当該技術において周知である。また、例示的な製剤は、米国特許第５，９８１，５０５号明細書、米国特許第６，２１７，９００号明細書；米国特許第６，３８３，５１２号明細書；米国特許第５，７８３，５６５号明細書；米国特許第７，２０２，２２７号明細書；米国特許第６，３７９，９６５号明細書；米国特許第６，１２７，１７０号明細書；米国特許第５，８３７，５３３号明細書；米国特許第６，７４７，０１４号明細書、及び国際公開第０３／０９３４４９号パンフレットに開示されている。

【0119】

一部の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、脂質製剤内に完全に封入されて、例えばＳＮＡＬＰ又は他の核酸－脂質粒子を形成する。本明細書中で用いられる用語「ＳＮＡＬＰ」は、安定な核酸－脂質粒子を指す。ＳＮＡＬＰは、典型的に、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及び粒子の凝集を妨げる脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含有する。ＳＮＡＬＰは、全身投与に極めて有用である。というのも、静脈内注射後に長期間の循環寿命を示し、且つ遠位部位（例えば、投与部位から物理的に隔てられた部位）にて蓄積するからである。核酸－脂質粒子は、典型的に、平均直径が約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、又は約７０ｎｍ～約９０ｎｍであり、実質的に非毒性である。加えて、核酸－脂質粒子内に存在する場合の核酸は、水溶液中で、ヌクレアーゼによる分解に対して耐性がある。核酸－脂質粒子及びその調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号明細書、米国特許第５，９８１，５０１号明細書、米国特許第６，５３４，４８４号明細書、米国特許第６，５８６，４１０号明細書、米国特許第６，８１５，４３２号明細書、及び国際公開第９６／４０９６４号パンフレットに開示されている。

【0120】

注射用途に適したＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体を含む医薬組成物として、例えば、滅菌水溶液又は分散系、及び注射用滅菌溶液又は分散系の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。一般に、これらの調製物は、滅菌済みであり、容易に注射可能である程度の流体である。調製物は、製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用から保護されていなければならない。適切な溶媒又は分散媒体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、それらの好適な混合液、及び植物油を含有し得る。例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散系の場合に必要とされる粒径を維持することによって、且つ界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によってもたらされ得る。多くの場合、等張化剤、例えば糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの、組成物中での使用によってもたらすことができる。

【0121】

滅菌注射溶液は、活性化合物を適切な量で、必要に応じて（例えば、先で列挙されるような）他の任意の成分と共に溶媒中に組み込んでから濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散系は、塩基性分散媒体及び所望の他の成分、例えば先で列挙される成分を含有する滅菌ビヒクル中に、滅菌された種々の活性成分を組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法として、その予め滅菌濾過した溶液から活性成分プラス任意の追加の所望の成分の粉末が得られる、真空乾燥技術及び凍結乾燥技術が挙げられる。

【0122】

本発明の方法に用いられる組成物は、一般に、中性形態又は塩形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩として、例えば、無機酸（例えば、塩酸又はリン酸）又は有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等）から誘導される酸付加塩（遊離アミノ基と共に形成される）が挙げられる。また、遊離カルボキシル基と共に形成される塩は、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第二鉄）から、又は有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等）から誘導され得る。ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体のナトリウム塩は、ヒト対象への治療的投与に特に有用である。ゆえに、特定の好ましい実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体、特にオルパシランは、ナトリウム塩の形態である。他の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）は、カリウム塩の形態である。

【0123】

水溶液による非経口投与のために、例えば、溶液は通常、適切に緩衝化され、そして液体希釈剤は最初に、例えば、十分な生理食塩水又はグルコースにより等張にされる。そのような水溶液は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に用いられ得る。特に本開示を考慮して、当業者に知られているような滅菌水性媒体を使用することが好ましい。実例として、単回用量を等張ＮａＣｌ溶液１ｍｌ中に溶解させて、皮下注入液１０００ｍｌに添加してもよいし、注入又は注射の候補部位に注射してもよい（例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ １０３５－１０３８及び１５７０－１５８０参照）。ヒト投与について、調製物は、ＦＤＡ基準によって要求される無菌性、発熱性、一般的安全性、及び純度の基準を満たさなければならない。特定の実施形態において、本発明の方法に用いられる医薬組成物は、滅菌生理食塩水、及び本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）を含むか、又はそれらからなる。他の実施形態において、本発明の方法に用いられる医薬組成物は、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）及び滅菌水（例えば、注射用水、ＷＦＩ）を含むか、又はそれらからなる。さらに他の実施形態において、本発明の方法に用いられる医薬組成物は、本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含むか、又はそれらからなる。

【0124】

特定の実施形態において、本発明の方法に従って心血管疾患を処置するか、寛解させるか、予防するか、又はそのリスクを引き下げるのに有用な医薬組成物は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）の有効量、リン酸カリウムバッファ、及び塩化ナトリウムを含む。一部のそのような実施形態において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約５ｍＭ～約３０ｍＭリン酸カリウム、及び約２０ｍＭ～約１６０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。他の実施形態において、医薬組成物は、約６５ｍｇ／ｍＬ～約８５ｍｇ／ｍＬのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約１５ｍＭ～約２５ｍＭリン酸カリウム、及び約７０ｍＭ～約９０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。さらに他の実施形態において、医薬組成物は、約１４０ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約１５ｍＭ～約２５ｍＭリン酸カリウム、及び約３０ｍＭ～約５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。これらのあらゆる医薬組成物のｐＨは、約６．４～約７．２（例えば、約６．４、約６．６、約６．８、約７．０、又は約７．２のｐＨ）の範囲内であり得る。

【0125】

一部の実施形態において、本発明の方法に従って投与されることとなる医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約５ｍＭ～約１５ｍＭリン酸カリウム、及び約１３５ｍＭ～約１５５ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８±０．２にて含む。一実施形態において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約１０ｍＭリン酸カリウム、及び約１４５ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８にて含む。他の実施形態において、本発明の方法に従って投与されることとなる医薬組成物は、約７５ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約１５ｍＭ～約２５ｍＭリン酸カリウム、及び約７０ｍＭ～約９０ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８±０．２にて含む。そのような一実施形態において、医薬組成物は、約７５ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約２０ｍＭリン酸カリウム、及び約８０ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８にて含む。特定の実施形態において、本発明の方法に従って投与されることとなる医薬組成物は、約１５０ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約１５ｍＭ～約２５ｍＭリン酸カリウム、及び約３０ｍＭ～約５０ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８±０．２にて含む。特定の一実施形態において、医薬組成物は、約１５０ｍｇ／ｍｌのＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体（例えばオルパシラン）、約２０ｍＭリン酸カリウム、及び約４０ｍＭ塩化ナトリウムをｐＨ６．８にて含む。

【0126】

本明細書中に記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体はいずれも、上述のいずれの医薬組成物にも組み込まれ得、そして本発明の方法に従って患者に投与され得る。特定の実施形態において、上述のいずれの医薬組成物にも組み込まれて、本発明の方法に従って患者に投与されるＬＰＡ ＲＮＡｉ構築体は、オルパシランである。

【0127】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、投与用のデバイス、例えば上述のあらゆる注射デバイス（例えば、プレフィルドシリンジ、オートインジェクタ、インジェクションポンプ、オンボディインジェクタ、及びインジェクションペン）によりパッケージされるか、又はその内部に保存される。エアロゾル化製剤又は粉末製剤用のデバイスとして、インヘラー、通気器、吸引器等が挙げられるが、これらに限定されない。ゆえに、本発明は、本明細書中に記載される障害又は疾患の１つ以上を処置又は予防するための本発明の医薬組成物を含む投与デバイスを含む。

【0128】

実施された実験及び達成された結果を含む以下の実施例は、例示の目的のためにのみ提供されるものであり、添付の特許請求の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0129】

実施例１．血漿リポタンパク質（ａ）が上昇した対象においてオルパシランの安全性、耐容性、薬物動態、及び薬力学を評価するための、第１相ランダム化二重盲検プラセボ対照単回用量漸増研究
メンデルの、そして疫学的ランダム化研究は、最近、心筋梗塞及び他のアテローム硬化性合併症の強い原因リスク因子としてリポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））を確立した。Ｌｐ（ａ）を選択的に標的として、心血管系イベントの引下げを実証した、認可されている医薬品は現在存在しない。オルパシラン（ＡＭＧ ８９０としても知られている）は、ＬＰＡ遺伝子から転写されるｍＲＮＡを標的とすることによってＬｐ（ａ）の生成を引き下げるように設計されたｓｉＲＮＡである。オルパシランの構造を、図１に示す。

【0130】

この第１相研究は、米国及び豪州における８つの場所にて行った、血漿リポタンパク質（ａ）が上昇した対象におけるランダム化二重盲検プラセボ対照単回用量漸増研究であった。約８０人の対象を、９つの単回用量漸増コホートにおける登録について計画した；各コホートにおいて、対象を、オルパシラン又はプラセボを受けるように３：１にランダム化した。

【0131】

資格のある対象は、生殖能のない女性、及び男性であり、双方とも、コホート１～５について１８～６０歳（両端含む）の年齢であり；コホート６～９について１８～６５歳（両端含む）の年齢であった。コホート１～５について、血漿Ｌｐ（ａ）濃度は、スクリーニング時に≧７０ｎｍｏｌ／Ｌ且つ≦１９９ｎｍｏｌ／Ｌであった；コホート６～９について、血漿Ｌｐ（ａ）濃度は、スクリーニング時に≧２００ｎｍｏｌ／Ｌであった；コホート６～９について、各コホートにおける少なくとも６人の対象は、登録の時点にて少なくとも６週間、スタチンの用量が安定していた。対象について、ランダム化の時点にて、医療履歴の何らかの臨床的に重要な異常はなかった。

【0132】

インフォームドコンセントを提供した後に、対象を、２８日にわたる適格基準に関してスクリーニングして、－１日目に研究施設に入れた。投与前手順の完了後、対象は、研究薬（オルパシラン又はプラセボ）の投与を受けた。コホート１～５の対象は、－１日目から４日目まで研究施設で過ごして、研究の終わりまで評価のために施設に戻った。対象は、コホート１～５について、それぞれ３ｍｇ、９ｍｇ、３０ｍｇ、７５ｍｇ、及び２２５ｍｇの単回皮下用量；そしてコホート６～９について、それぞれ９ｍｇ、７５ｍｇ、２２５ｍｇ、及び６７５ｍｇを受けた（以下の表１参照）。

【0133】

【表1】

【0134】

コホート１～５及びコホート９について、各コホートにおける最初の２人の登録対象をランダム化して、オルパシラン又はプラセボを１：１の比率（センチネル対）で受けさせて、同研究場所にて同日に盲検化様式で投与した。調査者により安全であると考え、且つセンチネル対投与の２４時間以上の後に、同用量を残りのコホート対象に投与した。コホート１～５への登録は、少しずつずらした（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ）。先行するコホートにおける投与計画が、用量レベルレビューチーム（ＤＬＲＴ）によって安全且つ適度に十分に耐容性であると見出された後に、全ての対象について、研究１５日目までの入手可能な安全性データに基づいて、以降のコホートに投与した。コホート５～７への登録は、コホート４における投与計画が、研究１５日目までの入手可能な安全性データに基づいて、ＤＬＲＴによって安全且つ適度に十分に耐容性であると見出された後に、開始した。対象は、処置終了後評価のために、コホート１及び２について１１３日目に、そしてコホート３～７について２２５日目に施設に戻った。対象は、Ｌｐ（ａ）濃度が、ベースラインの少なくとも８０％となるまで、経過観察のために戻った（コホート１及び２については約２週毎に、そしてコホート３～７については毎月）。血液サンプル及び尿サンプルを、研究の全体を通して、オルパシラン薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）の評価のために収集した。また、安全性変数を定期的に評価した。

【0135】

プライマリエンドポイントは、処置により発生した有害事象（ＴＥＡＥ）、安全性ラボ分析物、バイタルサイン、及び心電図（ＥＣＧ）によって測定される安全性及び耐容性であった。セカンダリエンドポイントは、最大観察濃度（Ｃ_ｍａｘ）、最大観察濃度の時点（ｔ_ｍａｘ）、及び濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）が挙げられるがこれらに限定されないオルパシランＰＫパラメータ；並びに各予定来院時の血漿Ｌｐ（ａ）レベルの変化及び変化パーセンテージが挙げられるＰＤパラメータであった。Ｌｐ（ａ）についてのベースライン値を、スクリーニング及び投与１日前の平均と定義した。何らかの理由で、１つの値しか入手可能でないならば、当該値をベースラインとして用いた。探査エンドポイントは、各予定来院時の低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）及び総アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）の変化パーセンテージを含んだ。

【0136】

６４人の対象を研究に登録して、オルパシラン又はプラセボを投与した（コホート１～５：オルパシラン、ｎ＝３０、用量：３ｍｇ、９ｍｇ、３０ｍｇ、７５ｍｇ、２２５ｍｇ；プラセボ、ｎ＝１０；コホート６～７：オルパシラン、ｎ＝１８、用量：９ｍｇ及び７５ｍｇ；プラセボ、ｎ＝６）。コホート１～５においてオルパシランが投与された対象（ｎ＝３０）について、対象は、平均（ＳＤ）年齢が４３．９（１３．５）歳であり、３０．０％が女性であり、６３．３％がヒスパニック系又はラテンアメリカ系人種集団であり、３０．０％が黒人又はアフリカ系アメリカ人であり、７０．０％が白人であった。コホート１～５においてプラセボが投与された対象（ｎ＝１０）について、対象は、平均（ＳＤ）年齢が４６．３（８．５）歳であり、３０．０％が女性であり、５０．０％がヒスパニック系又はラテンアメリカ系人種集団であり、３０．０％が黒人又はアフリカ系アメリカ人であり、７０．０％が白人であった。コホート６及び７においてオルパシランが投与された対象（ｎ＝１８）について、対象は、平均（ＳＤ）年齢が５２．７（９．４）歳であり、３３．３％が女性であり、２７．８％がヒスパニック系又はラテンアメリカ系人種集団であり、８８．９％が白人であった。コホート６及び７においてプラセボが投与された対象（ｎ＝６）について、対象は、平均（ＳＤ）年齢が５７．８（５．８）歳であり、６６．７％が女性であり、３３．３％がヒスパニック系又はラテンアメリカ系人種集団あり、８３．３％が白人であった。コホート６及び７（ｎ＝２４）において登録した全対象の６７％が、スタチンをベースラインにて用いた。対象は、ほとんど共存症がなかった。コホート１～５において、脂質調節医薬品の使用はなかったが、コホート６及び７において、かなり大きな割合の対象が、スタチン及び／又はエゼチミブを服用した。メジアン（Ｑ１、Ｑ３）ベースラインＬｐ（ａ）濃度は、コホート１～５のプラセボを受けた対象において１２４ｎｍｏｌ／Ｌ（１０４、１３７）であり、コホート１～５においてオルパシランを受けた対象について１２２ｎｍｏｌ／Ｌ（９７、１４６）であった。メジアン（Ｑ１、Ｑ３）ベースラインＬｐ（ａ）濃度は、コホート６及び７のプラセボを受けた対象において２７２ｎｍｏｌ／Ｌ（２３３、３０７）であり、コホート６及び７においてオルパシランを受けた対象について２５３ｎｍｏｌ／Ｌ（２２４、３３４）であった。

【0137】

オルパシランは、十分に耐容性であるように見えた。処置に関連する重篤な有害事象はなかった。１人のプラセボ対象は、重篤な非心臓性胸痛の有害事象を有し、これは処置とは無関係であると考えられた。コホート１～５において、最も共通したＴＥＡＥは、上部気道感染（１０％プラセボ、１３％オルパシラン）であった。以下の表２参照。コホート６～７において、最も共通したＴＥＡＥは、頭痛（５０％プラセボ、２８％オルパシラン）及び上部気道感染（１７％プラセボ、１７％オルパシラン）であった（表２）。研究において１人の対象だけが、注射部位反応を経験した。有害事象の頻度との見掛けの用量関係はなかった。肝臓試験、血小板若しくは凝固パラメータ、又は腎機能の臨床的に関連する変化は観察されなかった。

【0138】

【表2】

【0139】

Ｌｐ（ａ）抑制は、用量応答的に起こった。図２に示すように、コホート１～５において、オルパシランの単回用量は、平均Ｌｐ（ａ）レベルをベースラインから４３日目に７１～９６％（用量に基づく）、そして１１３日目（コホート２～５）に８０～９４％効果的に引き下げた。コホート６及び７において、オルパシランの単回用量は、平均Ｌｐ（ａ）レベルをベースラインから４３日目にそれぞれ７５％及び８９％、そして１１３日目にそれぞれ６１％及び８０％効果的に低くした（図２）。Ｌｐ（ａ）の急落が１５日目から観察され、最大Ｌｐ（ａ）抑制が４３～７１日目に観察された。Ｌｐ（ａ）濃度は徐々に回復したが、２２５日目にプラセボレベルを十分に下回ったままであった。９ｍｇ以上の単回用量が、３～６ヵ月間存続するＬｐ（ａ）の引下げの原因となった。

【0140】

７つの投与コホートの各々におけるオルパシランの薬物動態学的パラメータを、以下の表３に示す。３、９、３０、７５、及び２２５ｍｇ（コホート１～５）の単回用量の後に、オルパシランは迅速に吸収され、幾何平均Ｃ_ｍａｘは、投与後の７．５時間以内に起こった。幾何平均半減期（ｔ_１／２）値は３～８時間に及び、大多数のオルパシランが２～３日以内に血清から一掃された。全身曝露は、最大２２５ｍｇの用量にておおよそ用量比例的に増大した。ベースラインがＬｐ（ａ）≧２００ｎｍｏｌ／Ｌ（コホート６及び７）の対象におけるオルパシランＡＵＣ曝露は、ベースラインＬｐ（ａ）≧７０～≦１９９ｎｍｏｌ／Ｌ（コホート２及び４）の対象におけるよりも約１８～３３％低かった。

【0141】

【表3】

【0142】

第１相研究の結果は、Ｌｐ（ａ）が上昇した成人において、オルパシランの単回用量処置が、十分に耐容性であり、且つＬｐ（ａ）を有意に引き下げたことを実証しており、おおよその観察メジアンパーセント引下げは＞９０％であり、効果は、９ｍｇ以上の用量にて３～６ヵ月間存続した。高Ｌｐ（ａ）群（Ｌｐ（ａ）≧７０～≦１９９ｎｍｏｌ／Ｌ）における７５及び２２５ｍｇ用量は、Ｌｐ（ａ）濃度に及ぼす効果に関して、ほぼ重なり得た（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｌｅ）；同様に、９及び３０ｍｇの用量は、ほぼ重なり得た。しかしながら、超高Ｌｐ（ａ）群（Ｌｐ（ａ）≧２００ｎｍｏｌ／Ｌ）における９及び７５ｍｇ用量は、高Ｌｐ（ａ）コホートにおける同じ用量と比較して、ベースラインからのＬｐ（ａ）の抑制パーセントの引下げを示した。

【0143】

オルパシランのこの低い単回用量により観察されたＬｐ（ａ）レベルの抑制の深さ及び期間は、カニクイザルにおけるオルパシランの研究に基づいて、計画ヒト用量から予想されるよりも有意に良かった。カニクイザルにけるオルパシランについての有効性データ（例えば、国際公開第２０１７／０５９２２３号パンフレットにおける実施例１８参照）に基づいて、７５ｍｇの計画ヒト用量は、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも１ヵ月間約８０％引き下げると予測された。注目すべきことに、先に述べたように、オルパシランの９ｍｇもの低い単回用量が、ヒト対象におけるＬｐ（ａ）レベルを、３ヵ月超の間８０％超引き下げた。７５ｍｇ及び２２５ｍｇの単回オルパシラン用量は、Ｌｐ（ａ）レベルを６ヵ月超の間８０％超抑制した。ゆえに、オルパシランを、より低用量且つより長い投与間隔（最大、６ヵ月毎に１回が挙げられる）にて、Ｌｐ（ａ）の引下げが必要なヒト患者に投与することができる。そのような投与計画は、いくつかの異なる利益、例えば、患者の忠誠の向上、薬物コストの引下げ、並びに注射の容量及び回数の引下げを有する。

【0144】

実施例２．最適なＬｐ（ａ）引下げのための投与計画の設計用のオルパシランＰＫ／ＰＤモデル
実施例１に記載する第１相データに基づいて、血漿Ｌｐ（ａ）が上昇した（コホート１～５について≧７０ｎｍｏｌ／Ｌ～＜２００ｎｍｏｌ／Ｌ、コホート６～７について≧２００ｎｍｏｌ／Ｌ）健康なボランティアにおけるオルパシラン薬物動態及びＬｐ（ａ）抑制を特徴付けるための数学モデルを開発した。オルパシランの薬物動態（ＰＫ）を、皮下投与部位から循環系への第１のオーダーの吸収、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）吸収を介した肝臓への分配、肝臓から循環系に戻るオルパシランのリサイクル、並びに体循環及び肝臓からの分解を介した除去があるＰＫモデルを用いて記載した。オルパシラン血清曝露が、ベースラインＬｐ（ａ）と相関することが見出された。ゆえに、オルパシラン生物学的利用能をベースラインＬｐ（ａ）によって調節する機能もまた、モデル内に含めた。ベースラインからのＬｐ（ａ）の抑制を、ＰＫ／ＰＤモデルを用いて記載することによって、モデル予測オルパシラン肝臓濃度は、ＬＰＡ ｍＲＮＡの分解を促進して、肝臓におけるオルパシラン濃度が十分な期間中、Ｌｐ（ａ）の生成及び抑制の低下の原因となった。オルパシラン肝臓濃度とＬＰＡ ｍＲＮＡ分解との関係を、Ｅ_ｍａｘモデルを用いてモデル化した。ＬＰＡ ｍＲＮＡ濃度の変化を、Ｌｐ（ａ）抑制の程度に基づいて推測した。ベースラインＬｐ（ａ）レベルによって、Ｌｐ（ａ）の合成及び分解率を通知した。ベースライン値が高くなるにつれて、より大きな生成率と関連した。

【0145】

モデル開発の間に、そして臨床投与計画シミュレーションのために、以下の仮定をした：
ａ）第２相用量選択のためのシミュレーションを、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの標的集団について実行した。しかしながら、モデルパラメータを、ベースラインＬｐ（ａ）値が≧７０ｎｍｏｌ／Ｌ～＜２００ｎｍｏｌ／Ｌ、そして≧２００ｎｍｏｌ／Ｌの対象から推定した；
ｂ）第２相集団についての複数回用量後の対象間変動性及び対象内変動性を、第１相研究対象について推定したものと同じであると仮定した；そして
ｃ）Ｌｐ（ａ）抑制の継続は、肝臓におけるモデル予測オルパシランＰＫ／ＰＤ半減期に基づき、そして複数回用量後の応答の推定は、第１相研究からの観察抑制、及び投与間隔の終了時の効果の蓄積に基づく。

【0146】

このモデルは、ベースラインＬｐ（ａ）がより高い（≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌ）対象におけるオルパシラン曝露の有意な観察低下を十分に予測することができた。このことは、より高い用量のオルパシランが、この患者集団において、標的Ｌｐ（ａ）抑制を達成するのに必須であり得ることを示唆した。このモデルのシミュレーションを実行して、Ｑ３Ｍ及びＱ６Ｍ投与計画を探査し、且つオルパシランの複数回用量後の予測Ｌｐ（ａ）抑制を外挿した。候補投与計画毎に、標的Ｌｐ（ａ）抑制（ベースラインからの≧８０％引下げ）を達成する対象の割合、及び投与間隔の終了時に絶対Ｌｐ（ａ）値≦５０ｎｍｏｌ／Ｌを達成する対象の割合を算出した。

【0147】

図３Ａ～３Ｆは、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ、３０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１５０ｍｇ、及び２２５ｍｇの用量でのオルパシランのＱ３Ｍ投与についてのベースラインのパーセンテージとして、予測Ｌｐ（ａ）レベルを示す。モデルは、１０ｍｇ以上の用量が、３ヵ月の投与間隔の全体を通して、Ｌｐ（ａ）レベルを８０％以上抑制することとなると予測する。以下の表４は、各投与間隔にて３ヵ月毎に１回投与される（Ｑ３Ｍ投与）オルパシランの用量が異なるＬｐ（ａ）レベルのベースラインからの少なくとも８０％の引下げを達成する対象の予測割合を示す一方、表５は、同じオルパシラン投与計画により５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対Ｌｐ（ａ）レベルを達成する対象の予測割合を示す。

【0148】

【表4】

【0149】

【表5】

【0150】

第１相データに基づくモデルシミュレーションは、四半期毎（Ｑ３Ｍ）に投与される１０ｍｇのオルパシランの用量により、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象の約４２％が、１２ヵ月目までにベースラインからのＬｐ（ａ）の少なくとも８０％引下げを達成することとなると予測する。四半期毎に投与される７５ｍｇ以上のオルパシランの用量は、オルパシランの単回用量を受けた早くも３ヵ月後に、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象の少なくとも９０％において、８０％以上のＬｐ（ａ）抑制を実現すると予測される。類似した割合の対象が、これらの同じ投与計画による５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対Ｌｐ（ａ）値を達成すると予測された。

【0151】

また、シミュレーションを、オルパシランの年２回（Ｑ６Ｍ）投与計画モデルに行った。図４Ａ～４Ｆは、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象について、１０ｍｇ、７５ｍｇ、１５０ｍｇ、２２５ｍｇ、４５０ｍｇ、及び６７５ｍｇの用量でのオルパシランのＱ６Ｍ投与についてのベースラインのパーセンテージとして、予測Ｌｐ（ａ）レベルを示す。モデルは、少なくとも７５ｍｇの用量が、６ヵ月の投与間隔の全体を通して、Ｌｐ（ａ）レベルを８０％以上抑制することとなると予測する。以下の表６は、各投与間隔にて６ヵ月毎に１回投与される（Ｑ６Ｍ投与）オルパシランの用量が異なるＬｐ（ａ）レベルのベースラインからの少なくとも８０％の引下げを達成する対象の予測割合を示す一方、表７は、同じオルパシラン投与計画により５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対Ｌｐ（ａ）レベルを達成する対象の予測割合を示す。

【0152】

【表6】

【0153】

【表7】

【0154】

モデリングデータは、６ヵ月毎に１回（Ｑ６Ｍ）投与される少なくとも７５ｍｇのオルパシランの用量が、２回のみの用量後（すなわち処置の１２ヵ月後）に、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象の約５０％において、ベースラインからＬｐ（ａ）レベルを少なくとも８０％引き下げると予測されることを示す。また、同じ割合の患者は、処置の１年後、６ヵ月毎に１回投与される７５ｍｇのオルパシランにより、５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満の絶対Ｌｐ（ａ）レベルを達成すると予測される。６ヵ月毎に１回投与される２２５ｍｇのオルパシランの用量は、処置の１年後、対象の約７６％において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも８０％抑制すると予測されるが、６ヵ月毎に１回投与される４５０ｍｇ以上の用量は、処置の１年後、対象の約９０％において、Ｌｐ（ａ）レベルをこの閾値よりも大きく抑制すると予測される。

【0155】

最近のメンデルの無作為化研究に基づいて、ベースラインからの８０％以上のＬｐ（ａ）レベルの引下げは、アテローム硬化性心血管疾患患者において、臨床的に意味のある心血管利益をもたらすと予想される（Ｂｕｒｇｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．３：６１９－６２７，２０１８；Ｌａｍｉｎａ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．４：５７５－５７９，２０１９；及びＭａｄｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，４０：２５５－２６６，２０２０）。ゆえに、オルパシランＰＫ／ＰＤモデリングは、Ｌｐ（ａ）レベルをこの閾値よりも大きく引き下げることができるオルパシランの投与計画の特定に集中した。オルパシランＰＫ／ＰＤモデリングの結果、及び本実施例に記載するシミュレーションは、以下のことを示す：
・３ヵ月毎に１回、又は１２週毎に１回投与される１０ｍｇの用量は、１２ヵ月目までに、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが≧１５０ｎｍｏｌ／Ｌの対象の約半分（４２％）において、≧８０％Ｌｐ（ａ）引下げを実現し、そして６及び１２ヵ月目に約７７％のベースラインからのメジアンＬｐ（ａ）％引下げを実現する；
・３ヵ月毎に１回、又は１２週毎に１回投与される７５ｍｇの用量は、対象の大多数（９４％）において、２～３回用量の範囲内でベースラインからの≧８０％Ｌｐ（ａ）引下げを実現すると予想され、そして対象の約９０％は、この投与計画により５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対Ｌｐ（ａ）濃度を達成すると予想される；
・３ヵ月毎に１回、又は１２週毎に１回投与される２２５ｍｇの用量は、対象の９８％において≧８０％Ｌｐ（ａ）引下げを実現し、そして対象の９６％において、Ｌｐ（ａ）レベルを５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対濃度に引き下げると予想される；
・１０ｍｇ以上の用量について、３ヵ月毎に１回又は１２週毎に１回の投与頻度は、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以上の対象の大多数（≧９０％）において、３ヵ月の投与間隔の全体を通して、ベースラインの２０％未満のＬｐ（ａ）レベルの抑制をもたらす；そして
・６ヵ月毎に１回、又は２４週毎に１回投与される２２５ｍｇの用量は、８８％のベースラインからのメジアンＬｐ（ａ）引下げをもたらすこととなり、対象の約７４％が、５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下の絶対Ｌｐ（ａ）濃度を達成する。

【0156】

実施例３．リポタンパク質（ａ）が上昇した対象におけるオルパシランの有効性、安全性、及び耐容性を評価するための二重盲検ランダム化プラセボ対照第２相研究
この第２相研究の主な目的は、アテローム硬化性心血管疾患の、そしてＬｐ（ａ）が上昇した対象における処置の３６週後に、Ｌｐ（ａ）レベルのベースラインからの変化パーセントに及ぼす、プラセボと比較した、１２週毎に１回（Ｑ１２Ｗ）のオルパシランの皮下投与の効果を評価することである。研究の第２の目的は、以下におけるベースラインからの変化パーセントに及ぼす、プラセボと比較した、Ｑ１２Ｗで皮下投与されるオルパシランの効果：（ｉ）処置の４８週後のＬｐ（ａ）レベル、（ｉｉ）処置の３６及び４８週後の低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベル、並びに（ｉｉｉ）処置の３６及び４８週後のアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）レベル、並びにオルパシランの薬物動態学的特性の特性評価を含む。また、２４週毎に１回（Ｑ２４Ｗ）のオルパシランの投与が評価される。

【0157】

約２４０人の対象を、１：１：１：１：１の比率でランダム化する。４つのアームをオルパシランにより、そして１つのアームをプラセボにより処置する。ランダム化を、Ｌｐ（ａ）≦２００ｎｍｏｌ／Ｌ対＞２００ｎｍｏｌ／Ｌに関するスクリーニングによって、そして地域（日本対非日本）によって階層化する。研究処置期間は４８週であり、１日目、１２週目、２４週目、及び３６週目に投与がある。４８週目の後に、安全性経過観察を、≧４０週間のオルパシラン又はプラセボの更なる投与なしに持続して、Ｌｐ（ａ）は、ベースラインの８０％に戻る（いずれか遅い方）。対象は、処置期間及び長期の安全性経過観察期間の間に、局所ガイドラインに従う標準治療（安定した脂質変化療法が挙げられる）を続ける。

【0158】

インフォームドコンセントに署名した後に、対象は、スクリーニング相（最大４週）に入り、その間に、対象の適格基準を評価する。資格のある対象として、スクリーニングの間、Ｌｐ（ａ）が＞１５０ｎｍｏｌ／Ｌであるアテローム硬化性心血管疾患を有する１８～８０歳の成人が挙げられる。具体的には、以下の重要な採用基準の全てを満たすならば、対象を研究に登録する：
・年齢１８～８０歳
・中央ラボによるスクリーニングの間、Ｌｐ（ａ）＞１５０ｎｍｏｌ／Ｌ
・以下の１つに基づくアテローム硬化性心血管疾患：
・経皮的冠動脈介入（ＰＣＩ）若しくは冠状動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）による冠状動脈血管再生の履歴；
・以前の心筋梗塞の有無に拘わらない冠状動脈疾患の診断；
・アテローム硬化性脳血管疾患の診断；又は
・末梢動脈疾患の診断
・（適格基準に必要とされない）脂質変化療法を受けていない対象について、スタチン用量を含む脂質変化療法は、スクリーニング前の≧４週間で、そしてスクリーニングの間に、局所ガイドラインに従って安定したままでなければならない
対象は、以下の重要な除外基準のいずれかを満たすならば、研究から排除する：
・スクリーニングの間の推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ^２と定義される重度の腎機能不全
・スクリーニングの間のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）若しくはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×正常上限（ＵＬＮ）、又は総ビリルビン（ＴＢＬ）＞２×ＵＬＮと定義される肝臓機能不全の履歴又は臨床所見
・１日目前の過去５年以内の悪性腫瘍（非黒色腫皮膚癌、子宮頸部上皮内癌、乳管上皮内癌、又は第１期前立腺癌を除く）
・１日目の管理不良高血圧（安静時の≧１６０ｍｍＨｇの平均収縮期血圧又は≧１００ｍｍＨｇの平均拡張期血圧と定義される）
・スクリーニングの間の≧４００ｍｇ／ｄＬ（４．５ｍｍｏｌ／Ｌ）の空腹時トリグリセリド
・スクリーニング時の中心ラボによって判定される≧８．５％のグリコヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）によって判定される１型糖尿病又は管理不良２型糖尿病

【0159】

研究の資格がある対象は、ベースラインＬｐ（ａ）が＞１５０ｎｍｏｌ／Ｌである。この閾値は、Ｌｐ（ａ）＞１２５ｎｍｏｌ／Ｌが、一般的な集団データから上昇したと考えられることを示す入手可能な疫学データに基づく（Ａｖｅｒｎａ ｅｔ ａｌ．，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ Ｓｕｐｐｌ．，Ｖｏｌ．２６：１６－２４，２０１７；Ｎｏｒｄｅｓｔｇａａｒｄ ａｎｄ Ｌａｎｇｓｔｅｄ，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７：１９５３－７５，２０１６；Ｏｈｒｏ－Ｍｅｌａｎｄｅｒ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２７８：４３３－４６，２０１５；Ｌｅｅｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１２８：２５６７－２５７６，２０１３）。加えて、心血管系イベントに及ぼす対応する効果を実証するのに必須の絶対Ｌｐ（ａ）引下げの程度に基づいて、登録集団は、ベースラインＬｐ（ａ）が高い必要がある。従って、Ｌｐ（ａ）＞１５０ｎｍｏｌ／Ｌの登録基準は、メジアンＬｐ（ａ）が約２００ｎｍｏｌ／Ｌの研究集団を生じさせ、且つＬｐ（ａ）が非常に高い対象におけるオルパシランの有効性及び安全性の評価を可能にする。

【0160】

資格のある登録対象を、以下の５つの処置群（各群において約４８人の対象を有する）の１つに、１：１：１：１：１の比率でランダム化する：
群１：１０ｍｇオルパシランＱ１２Ｗ
群２：７５ｍｇオルパシランＱ１２Ｗ
群３：２２５ｍｇオルパシランＱ１２Ｗ
群４：２２５ｍｇオルパシランＱ２４Ｗ
群５：プラセボＱ１２Ｗ
実施例２に記載するように、これらのオルパシラン投与計画は、ベースラインＬｐ（ａ）レベルが＞１５０ｎｍｏｌ／Ｌのヒト対象において、投与間隔（３ヵ月又は６ヵ月）の全体を通して、Ｌｐ（ａ）レベルをベースラインから少なくとも８０％抑制すると予測される。オルパシランを、割り当てた処置群に応じて、１０ｍｇ、７５ｍｇ、又は２２５ｍｇの用量にて、１２週毎に１回（処置群１～３）又は２４週毎に１回（処置群４）、皮下注射によって投与する。血清Ｌｐ（ａ）、ＬＤＬ－Ｃ、及びＡｐｏＢ、並びに他の臨床ラボ分析物を評価するためのサンプルを、スクリーニングの間に、オルパシランの最初の用量の投与前に、そして１２、２４、３６、及び４８週目に、そして研究の間の他の種々の時点にて、登録対象から収集する。血液サンプルを、研究の間の種々の時点でのオルパシランの血清濃度の測定のために収集して、オルパシラン薬物動態学的パラメータを評価する。

【0161】

Ｌｐ（ａ）に関するスクリーニングを、中央ラボにて、ａｐｏ（ａ）アイソフォームサイズから独立したＬｐ（ａ）粒子を検出且つ定量化するように規格化されている、認可されているか、又は調査中の比濁免疫アッセイ、例えばＲｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手可能なＴｉｎａ－ｑｕａｎｔ（登録商標）リポタンパク質（ａ）Ｇｅｎ．２アッセイを用いて行う。アッセイは、検出限界が７ｎｍｏｌ／Ｌの血清サンプル中のＬｐ（ａ）のｎｍｏｌ／Ｌでの測定について有効と認められており、ＩＦＣＣ参照材料ＳＲＭ２Ｂに対して、ｎｍｏｌ／Ｌについて規格化されている（Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４６：１９４６－１９６７，２０００）。他の臨床分析物、例えば、ＡｐｏＢ、ヘモグロビンＡ１Ｃ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びビリルビンについての脂質パネル及びアッセイを、標準的な方法を用いて中央ラボによって行う。

【0162】

ランダム化された全対象が、３６週目の評価を完了する機会があったか、又は早く終了した場合、一次分析をする。全対象が、４８週目の評価を完了する機会があったか、又は早く終了した場合、処置期間分析を終了する。最終分析は、最後の対象が長期の安全性経過観察を完了し、且つ研究を終えたか、又は研究から早く終了した後に、行う。一次エンドポイント（３６週目のＬｐ（ａ）のベースラインからの変化パーセント）を、群間で、処置群の期間、層別因子、予定の来院、及び予定の来院との処置の相互作用を含む反復尺度一次効果モデル（ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｌｉｎｅａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｍｏｄｅｌ）を用いて比較する。Ｈｏｃｈｂｅｒｇ手順を用いて、活性アームとプラセボアームとの多重比較のために第一種過誤を制御する。４８週目のＬｐ（ａ）、３６及び４８週目のＡｐｏＢ及びＬＤＬ－Ｃのベースラインからの第２のエンドポイント変化パーセントを、一次エンドポイントと同様に分析する。安全性エンドポイント（例えば、処置により発生した有害事象）を説明的に要約する。ベースラインＬｐ（ａ）を、研究１日目の前に、又は研究１日目に中央ラボにより測定される２つの最近の非欠測Ｌｐ（ａ）値の平均と定義する。何らかの理由で、１つの値しか入手可能でないならば、当該値をベースラインとして用いる。

【0163】

ベースラインからの８０％以上のＬｐ（ａ）引下げが、３ヵ月を超える間続くオルパシランの単回用量により観察された（実施例１参照）。Ｌｐ（ａ）の持続するこのレベルの引下げは、アテローム硬化性心血管疾患患者において、心血管系イベントのリスクを引き下げることによって、臨床的に意味がある心血管利益をもたらし得ると予想される。最近のメンデルの無作為化研究は、ベースラインＬｐ（ａ）濃度が非常に高い個体において、Ｌｐ（ａ）の８０％～９０％引下げが、心血管系イベントのリスクの臨床的に意味のある引下げに変わると予想されることを示唆している（Ｂｕｒｇｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．３：６１９－６２７，２０１８；Ｌａｍｉｎａ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．，Ｖｏｌ．４：５７５－５７９，２０１９；及びＭａｄｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，４０：２５５－２６６，２０２０）。ゆえに、この研究の成績は、オルパシランが、プラセボと比較して、試験した全ての用量にて、アテローム硬化性心血管疾患の、Ｌｐ（ａ）が上昇した対象において、ベースラインからの有意なＬｐ（ａ）引下げパーセントをもたらすこととなることを示すと予想される。特に、オルパシランが、１２週毎に１回投与される１０ｍｇもの低い用量にて、大多数の対象において、５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満までＬｐ（ａ）レベルを効果的に引き下げることとなることが予想される。これは、そのような対象における心血管系イベントのリスクの引下げをもたらすと予想される。１２週毎に１回７５ｍｇの用量にて投与されるオルパシランは、実施例２に記載するＰＫ／ＰＤモデリングに基づいて、特に効果的な投与計画であると予想される。

【0164】

本明細書において論じ、且つ引用してきた全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。開示した本発明は、記載された特定の方法論、プロトコル、及び材料に限定されず、これらは変化し得ることが理解される。また、本明細書中で用いられる専門用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではないことが理解される。

【0165】

当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を、単なる日常的な実験を用いて認識するか、又は確認可能であろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【配列表】

2023549115000001.app

【国際調査報告】